JP4348475B2

JP4348475B2 - Novel diterpene compounds

Info

Publication number: JP4348475B2
Application number: JP2003201339A
Authority: JP
Inventors: 進北中; 昇平宮田; 立岩王; 乃利王; 新生姚
Original assignee: Nihon University
Current assignee: Nihon University
Priority date: 2003-07-24
Filing date: 2003-07-24
Publication date: 2009-10-21
Anticipated expiration: 2023-07-24
Also published as: JP2005041799A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗悪性腫瘍剤として有用な、甘遂から単離された新規なジテルペン化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
甘遂（学名：Euphorbia kansui L.）は、トウダイグサ科の多年生の植物で、中国北西部に分布する。中国では甘遂を慢性気管支炎、気管支喘息等のアレルギー疾患の治療に使用するほか、食道癌、乳腺癌などの悪性腫瘍の治療にも用いている。甘遂の成分研究は１９４３年頃から始められ、現在までに十数種類のジテルペン及びトリテルペンが見出されている。これらの成分のうちジテルペン化合物のいくつかに抗癌作用、抗ウィルス作用、細胞毒性作用があることが見出され、注目されている。
カプチャン（S. M. Kupchan）らは、Euphorbia esula L. から抽出した下記の式（１）のインゲノール誘導体がマウスにおけるＰ−３８８リンパ性白血病に対する活性を有することを示している（非特許文献１）。

ウー（Tian-Shung Wu）らは、甘遂（Euphorbia kansui L.）の根から抽出したカンスイホリンＡ（下記の式（２））及びカンスイホリンＢ（下記の式（３））が、インビボ（Ｐ−３８８）アッセイにより、活性を有することを示している（非特許文献２）。

ブランコ−モリナ（Magdalena Blanco-Molina）らは、以下の式（４）のインゲノール誘導体がジュルカト（Jurkat）細胞にアポトーシスを誘導することを記載している（非特許文献３）。

しかしながら、いずれも本発明の化合物を開示していない。
【０００３】
【非特許文献１】
S. Morris Kupchan, et. al., Science, Vol. 191, pp. 571-572, 13, Feb., 1976
【非特許文献２】
Tian-Shung Wu, et. al., J. Nat. Prod., Vol. 54, No. 3, pp. 823-829, 1991
【非特許文献３】
Magdalena Blanco-Molina, et. al., Chemistry & Biology, 8/8, pp. 767-778, 2001
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、抗悪性腫瘍作用を有する新規なジテルペン化合物を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明の新規なジテルペン化合物は以下の一般式（Ｉ）を有する。

式中、
Ｒ¹ないしＲ³は、同一又は異なっていてもよく、水素原子、直鎖若しくは分岐した、飽和若しくは不飽和の、置換若しくは未置換の脂肪族基、又は一般式ＲＣＯ−で表される基を意味し、式中Ｒは直鎖若しくは分岐した、飽和若しくは不飽和の、置換若しくは未置換の脂肪族基、置換又は未置換の芳香族基又はヘテロ芳香族基を表す。
一般式（Ｉ）の化合物は、アフリカツメガエルの後期胞胚のアニマルキャップ細胞の細胞分裂阻害活性を示し、食道癌、乳腺癌などの悪性腫瘍の治療剤として使用することができる。
【０００６】
【発明の実施の形態】
一般式（Ｉ）の化合物のＲ¹ないしＲ³における、脂肪族基としては直鎖若しくは分岐した、飽和又は不飽和の１〜３０の炭素原子を含む芳香族基が好ましく、１〜１６の炭素原子を含む脂肪族基がより好ましい。脂肪族基の置換基としては、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、エーテル基、カルボニル基、カルボキシル基、アミノ基、アミド基を挙げることができる。
一般式ＲＣＯ−で表される基が誘導されるもとのカルボン酸のうち、Ｒがアルキル基であるものとしては酢酸、プロピオン酸、酪酸、２，３−ジメチルブタン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸等の炭素原子数１〜１６の飽和脂肪酸、２，４−デカジエン酸のような炭素原子数１〜１６の不飽和脂肪酸等を挙げることができる。Ｒが芳香族基であるものとしては、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、アントラニル酸等の芳香族カルボン酸を挙げることができる。Ｒがヘテロ芳香族基であるものとしては、フランカルボン酸、チオフェンカルボン酸、ピリジンカルボン酸、例えばニコチン酸、イソニコチン酸等のヘテロ芳香族カルボン酸を挙げることができる。芳香族基及びヘテロ芳香族基の置換基としては、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、エーテル基、カルボニル基、カルボキシル基、アミノ基、アミド基を挙げることができる。
【０００７】
本発明の一般式（Ｉ）においてＲ¹がＨ、Ｒ²がＨ、Ｒ³がＨである化合物（化合物３、化合物４）は、甘遂の根をそのま又は乾燥して、好ましくは粉砕し、有機溶媒（例えば、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール）で室温において抽出して得ることができ、得られた抽出物を自体公知の方法で処理し、精製することにより製造することができる。
これらの化合物を出発原料として本発明の一般式（Ｉ）で表される他の化合物を製造することができる。
例えば、化合物３を出発原料としてウイリアムソン合成を利用して、以下のようにナトリウムアルコキシドとハロゲン化アルキル（Ｒ'Ｘ：Ｒ'はＲ¹と同じ意味を有し、Ｘはハロゲン原子を表す）の反応により、本発明のエーテル化物を得ることができる。

また、化合物３を出発原料として、無水ピリジンの存在下に酸無水物（（Ｒ"ＣＯ）₂Ｏ）と以下のように反応させることによって、本発明のエステル化物を製造することができる。

【０００８】
製造例１
中国産の甘遂（学名：Euphorbia kansui L.）の根の乾燥品１５kgを粉砕し、これを６０％エタノール水溶液（ｖ／ｖ）４５Ｌに加えて、撹拌しながら室温で１２時間浸漬した。浸漬を同一条件で２回繰り返し、得られた浸出液をあわせて減圧下に４０℃で濃縮して１２００gのエキスを得た。これを水４Ｌに溶解し、クロロホルム、酢酸エチル及びブタノールの各４Ｌで、順次それぞれ３回ずつ抽出した。これらの画分を減圧下で濃縮して、クロロホルム画分からは１６５ｇ、酢酸エチル画分からは２３ｇ、ブタノール画分からは６４ｇの濃縮エキスを得た。
クロロホルム画分から得られた濃縮エキス１５０ｇをシリカゲルカラム（Wako gel C-200、和光純薬社製、１３×２２cm）にのせ、ヘキサン：酢酸エチル系の展開溶媒を使用し、酢酸エチル濃度を０％、２％、３％、５％、１０％、２０％、３０％、５０％及び１００％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第９の９画分に分画した。
【０００９】
製造例２
実施例１で得た第６画分（２０％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を、逆相カラム（ODS-7515-12A、SSC社製）により、水：メタノール系の展開溶媒を使用し、水濃度を７０％、５０％、４０％、３０％、１０％及び０％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第６の６画分に分画した。第４画分（水濃度３０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣにより分離した。シリカゲルのカラム（Shenshu-PEGASIL SILICA-60-5、２５０×１０mm）を使用し、移動相としてクロロホルム：ヘキサン：酢酸エチル＝２０：６５：１５（ｖ／ｖ／ｖ）を用い、流速４ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間１５分５７秒及び１７分２６秒にピークを示す溶出液を分取した。これらの流出液を減圧下に濃縮して、化合物３（収量５０．１mg）及び化合物４（収量１６．１mg）を無色蝋燭状物質として得た。
【００１０】
製造例３
製造例１で得た第６画分（２０％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を、逆相カラム（ODS-7515-12A、SSC社製）により、水：メタノール系の展開溶媒を使用し、水濃度を７０％、５０％、４０％、３０％及び１０％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第５の５画分に分画した。第５画分（水濃度１０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣにより分離した。逆相カラム（Shenshu-PEGASIL、ODS社製、２５０×１０mm）を使用し、移動相としてアセトニトリル：水＝１０：１（ｖ／ｖ）を用い、流速４ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＲＩ（shodex RI-101）で監視しつつ、保持時間３１分６秒及び３７分１２秒にピークを示す溶出液を分取した。これらの流出液を減圧下に濃縮して、化合物１（収量１２．１mg）及び化合物２（収量１０．１mg）を無色蝋燭状物質として得た。
第４画分（水濃度３０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）を順相ＨＰＬＣにより分離した。シリカゲルのカラム（Shenshu-PEGASIL SILICA-60-5、２５０×１０mm）を使用し、移動相としてクロロホルム：ヘキサン：酢酸エチル＝３０：１０：１０（ｖ／ｖ／ｖ）を用い、流速４ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２５４nm）で監視しつつ、保持時間８分３０秒及び９分１１秒にピークを示す溶出液を分取した。これらの流出液を減圧下に濃縮して、化合物３（収量１４．０mg）及び化合物４（収量１．３mg）を無色蝋燭状物質として得た。
【００１１】
製造例４
製造例１で得た第７画分（３０％の酢酸エチルを含むヘキサン溶媒によって溶出した画分）を、逆相カラム（ODS-7515-12A、SSC社製）により、水：メタノール系の展開溶媒を使用し、水濃度を７０％、５０％、４０％、３０％及び１０％とした溶媒を順次使用して展開し、第１〜第５の５画分に分画した。
第２画分（水濃度５０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）の溶媒を蒸発させて結晶を得た。メタノールから再結晶して化合物５（２００mg）の白色針状結晶を得た。
第１画分（水濃度７０％のメタノール溶液によって溶出した画分）を逆相ＨＰＬＣにより分離した。カラムとしてFluoFix(type: IEW205)を用い、移動相を４５％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝４５：５５（ｖ／ｖ））として流速６．０ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、保持時間１１分０秒及び１２分４０秒にピークを示す溶出液を分取した。それぞれの画分の溶媒を蒸発させ、メタノールから再結晶して、化合物６（２０．０mg）の白色粉末及び化合物７（１０．０mg）の白色針状結晶を得た。
第３画分（水濃度４０％のメタノール溶媒によって溶出した画分）をＨＰＬＣにより分離した。PEGASIL ODS-2（SSC社製、２５０×１０mm）カラムを使用し、移動相を６０％アセトニトリル（アセトニトリル：水＝６０：４０（ｖ／ｖ））として流速３ml／min（室温）で溶出させ、溶出液をＵＶ（２１０nm）で監視しつつ、保持時間２６分３秒にピークを示す溶出液を分取した。得られた画分の溶媒を蒸発させ、メタノールから再結晶して、化合物８（４０．１mg）の白色針状結晶を得た。
化合物１ないし化合物８のＭＳ、ＵＶ、ＩＲのデータを表１に、化合物１ないし化合物４の¹ＨＮＭＲデータを表２に、化合物１ないし化合物４の¹³ＣＮＭＲデータを表３に、化合物５ないし化合物７の¹ＨＮＭＲ、¹³ＣＮＭＲデータを表４に、化合物８の¹ＨＮＭＲ、¹³ＣＮＭＲデータを表５に示す。
【００１２】
【表１】

【００１３】
【表２】

【００１４】
【表３】

【００１５】
【表４】

【００１６】
【表５】

【００１７】
以上のデータから、化合物１ないし化合物８は以下の構造式を有することが確認された。

式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基を表す。

式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基を表す。

式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基を表す。

式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｚはベンゾイル基、Ｎｉはニコチノイル基を表す。
【００１８】
本発明の化合物は細胞増殖を阻害する作用を有し、この作用を以下に述べるアニマルキャップアッセイ法によって確認した。アニマルキャップアッセイ法の詳細は、Godsave, S. F. and Slack, J. M. W. (1989年), Dev. Biol. 134: 486-490を参照。
アフリカツメガエルの胞胚後期のアニマルキャップ細胞をピンセットで培養液中に分離する。分離したアニマルキャップ細胞の動物極組織から細胞を分離し、培養液中に移して細胞分散液を調製する。
０．２mg／mlのγ−グロブリンを含む５０％のアニマルメディウムを含むテラサキプレートに、得られた細胞分散液を入れる。本発明の化合物を１０μg／ml含む溶液をテラサキプレートに加え、翌日顕微鏡で個々の細胞が分裂しているかどうかを観察した。阻害率は（分裂していない細胞の数）／（細胞の総数）である。結果を表６に示す。

化合物の濃度は１０μg／mlである。
【００１９】
表６から明らかなように、本発明の化合物は細胞分裂の阻害作用を有することから、食道癌、乳腺癌などの悪性腫瘍の治療剤として有用である。
本発明の化合物を経口、非経口又は経皮投与することができる。投与量は成人一人の１日、体重１kg当たり０．１mg〜１００mgが適当である。
本発明の化合物を種々の剤形で投与することができ、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、座剤、軟膏剤、パップ剤等の形態で投与することができる。本発明の化合物をこれらの剤形に形成する場合、これらの製剤化に通常使用する担体や添加物、例えば溶剤、基剤、希釈剤、充填剤などの賦形剤、溶解補助剤、乳化剤、分散剤、崩壊剤、可溶化剤、増粘剤、滑沢剤等の補助剤、抗酸化剤、保存剤、芳香剤、甘味剤等の添加剤を常法に従って使用し、製剤化することができる。
【００２０】
【発明の効果】
本発明の化合物は、抗悪性腫瘍作用を有する新規なジテルペン化合物であり、抗悪性腫瘍剤として有用である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel diterpene compound isolated from Kansai which is useful as an antineoplastic agent.
[0002]
[Prior art]
Akan (Euphorbia kansui L.) is a perennial plant belonging to the family Euphorbiaceae and is distributed in northwestern China. In China, Ganjin is used for the treatment of allergic diseases such as chronic bronchitis and bronchial asthma, as well as malignant tumors such as esophageal cancer and breast cancer. Kansai's component research began around 1943, and to date, dozens of diterpenes and triterpenes have been found. Among these components, some diterpene compounds have been found to have anticancer activity, antiviral activity, and cytotoxic activity, and are attracting attention.
SM Kupchan et al. Have shown that ingenol derivatives of the following formula (1) extracted from Euphorbia esula L. have activity against P-388 lymphocytic leukemia in mice (Non-patent Document 1).

Tian-Shung Wu et al. Reported that Kansuiphorin A (Formula (2) below) and Kansuiphorin B (Formula (3) below) extracted from the roots of Euphorbia kansui L. P-388) assay shows activity (Non-Patent Document 2).

Blancale-Molina et al. Have described that the following ingenol derivative of formula (4) induces apoptosis in Jurkat cells (Non-patent Document 3).

However, none disclose the compounds of the present invention.
[0003]
[Non-Patent Document 1]
S. Morris Kupchan, et. Al., Science, Vol. 191, pp. 571-572, 13, Feb., 1976
[Non-Patent Document 2]
Tian-Shung Wu, et.al., J. Nat.Prod., Vol. 54, No. 3, pp. 823-829, 1991
[Non-Patent Document 3]
Magdalena Blanco-Molina, et.al., Chemistry & Biology, 8/8, pp. 767-778, 2001
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a novel diterpene compound having an antineoplastic action.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The novel diterpene compound of the present invention has the following general formula (I):

Where
R ¹ to R ³ may be the same or different and each represents a hydrogen atom, a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted aliphatic group, or a group represented by the general formula RCO—. In the formula, R represents a linear or branched, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted aliphatic group, substituted or unsubstituted aromatic group or heteroaromatic group.
The compound of the general formula (I) exhibits cell division inhibitory activity of animal cap cells of Xenopus late blastula, and can be used as a therapeutic agent for malignant tumors such as esophageal cancer and breast cancer.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
As the aliphatic group in R ¹ to R ³ of the compound of the general formula (I), a linear or branched, saturated or unsaturated aromatic group containing 1 to 30 carbon atoms is preferable, and 1 to 16 carbon atoms are preferable. An aliphatic group containing an atom is more preferable. Examples of the substituent of the aliphatic group include a halogen atom, a hydroxyl group, an ether group, a carbonyl group, a carboxyl group, an amino group, and an amide group.
Among the carboxylic acids from which the group represented by the general formula RCO- is derived, those in which R is an alkyl group include acetic acid, propionic acid, butyric acid, 2,3-dimethylbutanoic acid, caprylic acid, capric acid And saturated fatty acids having 1 to 16 carbon atoms such as lauric acid, myristic acid and palmitic acid, and unsaturated fatty acids having 1 to 16 carbon atoms such as 2,4-decadienoic acid. Examples of those in which R is an aromatic group include aromatic carboxylic acids such as benzoic acid, phthalic acid, salicylic acid, and anthranilic acid. Examples of those in which R is a heteroaromatic group include furan carboxylic acid, thiophene carboxylic acid, pyridine carboxylic acid such as nicotinic acid and isonicotinic acid. Examples of the substituent of the aromatic group and heteroaromatic group include a halogen atom, a hydroxyl group, an ether group, a carbonyl group, a carboxyl group, an amino group, and an amide group.
[0007]
In the general formula (I) of the present invention, the compound in which R ¹ is H, R ² is H, and R ³ is H (compound 3, compound 4) is preferably pulverized by leaving the root of sweetness as it is or drying. It can be obtained by extraction with an organic solvent (for example, chloroform, ethyl acetate, butanol) at room temperature, and can be produced by treating and purifying the obtained extract by a method known per se.
Using these compounds as starting materials, other compounds represented by the general formula (I) of the present invention can be produced.
For example, using Williamson synthesis using Compound 3 as a starting material, sodium alkoxide and alkyl halide as follows (R′X: R ′ has the same meaning as R ¹ , X represents a halogen atom) By the reaction, the etherified product of the present invention can be obtained.

Alternatively, the esterified product of the present invention can be produced by reacting compound 3 as a starting material with an acid anhydride ((R "CO) ₂ O) in the presence of anhydrous pyridine as follows.

[0008]
Production Example 1
15 kg of a dried product of Chinese sweet potato (scientific name: Euphorbia kansui L.) was pulverized, added to 45 L of a 60% aqueous ethanol solution (v / v), and immersed for 12 hours at room temperature with stirring. Immersion was repeated twice under the same conditions, and the obtained leachate was combined and concentrated under reduced pressure at 40 ° C. to obtain 1200 g of extract. This was dissolved in 4 L of water, and extracted successively with 4 L each of chloroform, ethyl acetate and butanol three times each. These fractions were concentrated under reduced pressure to obtain a concentrated extract of 165 g from the chloroform fraction, 23 g from the ethyl acetate fraction, and 64 g from the butanol fraction.
150 g of the concentrated extract obtained from the chloroform fraction was placed on a silica gel column (Wako gel C-200, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, 13 × 22 cm), and a developing solvent of hexane: ethyl acetate was used, and the ethyl acetate concentration was 0%. The solvent was developed using 2%, 3%, 5%, 10%, 20%, 30%, 50% and 100% solvent in order, and fractionated into 1st to 9th fractions.
[0009]
Production Example 2
The sixth fraction obtained in Example 1 (fraction eluted with a hexane solvent containing 20% ethyl acetate) was developed in a water: methanol system using a reverse phase column (ODS-7515-12A, manufactured by SSC). The solvent was used, and the water concentrations were adjusted to 70%, 50%, 40%, 30%, 10%, and 0% in sequence, and developed into the first to sixth fractions. The fourth fraction (the fraction eluted with a 30% water concentration methanol solvent) was separated by normal phase HPLC. A silica gel column (Shenshu-PEGASIL SILICA-60-5, 250 × 10 mm) was used, chloroform: hexane: ethyl acetate = 20: 65: 15 (v / v / v) as a mobile phase, and a flow rate of 4 ml / min. Elution was performed at room temperature, and the eluate having peaks at retention times of 15 minutes 57 seconds and 17 minutes 26 seconds was collected while monitoring the eluate with UV (254 nm). These effluents were concentrated under reduced pressure to give compound 3 (yield 50.1 mg) and compound 4 (yield 16.1 mg) as colorless candles.
[0010]
Production Example 3
The sixth fraction obtained in Production Example 1 (fraction eluted with a hexane solvent containing 20% ethyl acetate) was developed in a water: methanol system using a reverse phase column (ODS-7515-12A, manufactured by SSC). The solvent was used, and the solvent was developed by successively using solvents with water concentrations of 70%, 50%, 40%, 30%, and 10%, and fractionated into five first to fifth fractions. The fifth fraction (fraction eluted with a 10% water concentration methanol solvent) was separated by normal phase HPLC. Using a reverse phase column (Shenshu-PEGASIL, manufactured by ODS, 250 × 10 mm), using acetonitrile: water = 10: 1 (v / v) as a mobile phase and eluting at a flow rate of 4 ml / min (room temperature) While monitoring the liquid with RI (shodex RI-101), an eluate having peaks at retention times of 31 minutes and 6 seconds and 37 minutes and 12 seconds was collected. These effluents were concentrated under reduced pressure to give Compound 1 (Yield 12.1 mg) and Compound 2 (Yield 10.1 mg) as colorless candles.
The fourth fraction (the fraction eluted with a 30% water concentration methanol solvent) was separated by normal phase HPLC. A silica gel column (Shenshu-PEGASIL SILICA-60-5, 250 × 10 mm) was used, chloroform: hexane: ethyl acetate = 30: 10: 10 (v / v / v) was used as the mobile phase, and a flow rate of 4 ml / min. Elution was carried out at room temperature, and the eluate having peaks at retention times of 8 minutes 30 seconds and 9 minutes 11 seconds was collected while monitoring the eluate with UV (254 nm). These effluents were concentrated under reduced pressure to give Compound 3 (Yield 14.0 mg) and Compound 4 (Yield 1.3 mg) as colorless candles.
[0011]
Production Example 4
Seventh fraction obtained in Production Example 1 (fraction eluted with hexane solvent containing 30% ethyl acetate) was developed with water: methanol system using a reverse phase column (ODS-7515-12A, manufactured by SSC). The solvent was used, and the solvent was developed by successively using solvents with water concentrations of 70%, 50%, 40%, 30%, and 10%, and fractionated into five first to fifth fractions.
Crystals were obtained by evaporating the solvent of the second fraction (fraction eluted with a 50% water concentration methanol solvent). Recrystallization from methanol gave a white needle crystal of Compound 5 (200 mg).
The first fraction (the fraction eluted with a 70% water concentration methanol solution) was separated by reverse phase HPLC. FluoFix (type: IEW205) was used as a column and the mobile phase was eluted with 45% acetonitrile (acetonitrile: water = 45: 55 (v / v)) at a flow rate of 6.0 ml / min (room temperature). 210 nm), the eluate having peaks at retention times of 11 minutes 0 seconds and 12 minutes 40 seconds was collected. The solvent of each fraction was evaporated and recrystallized from methanol to obtain a white powder of compound 6 (20.0 mg) and white needle crystals of compound 7 (10.0 mg).
The third fraction (fraction eluted with methanol solvent having a water concentration of 40%) was separated by HPLC. Using a PEGASIL ODS-2 (SSC, 250 × 10 mm) column, the mobile phase was eluted with 60% acetonitrile (acetonitrile: water = 60: 40 (v / v)) at a flow rate of 3 ml / min (room temperature). While monitoring the eluate with UV (210 nm), the eluate having a peak at a retention time of 26 minutes and 3 seconds was collected. The solvent of the obtained fraction was evaporated and recrystallized from methanol to obtain white needle crystals of compound 8 (40.1 mg).
MS, UV and IR data of Compound 1 to Compound 8 are shown in Table 1, ¹ H NMR data of Compound 1 to Compound 4 are shown in Table 2, ¹³ C NMR data of Compound 1 to Compound 4 are shown in Table 3, and Compound 5 ¹ H NMR and ¹³ C NMR data of Compound 7 are shown in Table 4, and ¹ H NMR and ¹³ C NMR data of Compound 8 are shown in Table 5.
[0012]
[Table 1]

[0013]
[Table 2]

[0014]
[Table 3]

[0015]
[Table 4]

[0016]
[Table 5]

[0017]
From the above data, it was confirmed that the compounds 1 to 8 have the following structural formula.

In the formula, Ac represents an acetyl group, and Bz represents a benzoyl group.

In the formula, Ac represents an acetyl group, Bz represents a benzoyl group, and Ni represents a nicotinoyl group.
[0018]
The compound of the present invention has an action of inhibiting cell proliferation, and this action was confirmed by the animal cap assay method described below. For details of the animal cap assay, see Godsave, SF and Slack, JMW (1989), Dev. Biol. 134: 486-490.
The animal cap cells in the late stage of Xenopus blastula are separated into the culture medium with forceps. Cells are separated from the animal polar tissue of the separated animal cap cells and transferred to a culture solution to prepare a cell dispersion.
The obtained cell dispersion is placed in a Terasaki plate containing 50% animal medium containing 0.2 mg / ml γ-globulin. A solution containing 10 μg / ml of the compound of the present invention was added to the Terasaki plate, and the next day, it was observed with a microscope whether individual cells were dividing. The inhibition rate is (number of non-dividing cells) / (total number of cells). The results are shown in Table 6.

The concentration of the compound is 10 μg / ml.
[0019]
As is apparent from Table 6, the compound of the present invention has an inhibitory action on cell division, and thus is useful as a therapeutic agent for malignant tumors such as esophageal cancer and breast cancer.
The compounds of the present invention can be administered orally, parenterally or transdermally. The dosage is suitably 0.1 mg to 100 mg per kg body weight per day per adult.
The compound of the present invention can be administered in various dosage forms such as tablets, powders, granules, capsules, injections, suppositories, ointments, poultices and the like. When the compound of the present invention is formed into these dosage forms, carriers and additives that are usually used in these formulations, such as solvents, bases, diluents, fillers and other excipients, solubilizers, emulsifiers, Additives such as dispersants, disintegrants, solubilizers, thickeners, lubricants, antioxidants, preservatives, fragrances, sweeteners, etc. can be formulated according to conventional methods. it can.
[0020]
【The invention's effect】
The compound of the present invention is a novel diterpene compound having an antineoplastic action and is useful as an antineoplastic agent.

Claims

Diterpene compounds represented by the following general formula (I):

Where
R ¹ to R ³ represent a hydrogen atom .

The diterpene compound according to claim 1, which is represented by the following formula (II):

The diterpene compound according to claim 1, which is represented by the following formula (III):