JP4164608B2

JP4164608B2 - A fixing support for a biopsy sample comprising a modified derivative of glucomannan and a method for producing the same.

Info

Publication number: JP4164608B2
Application number: JP07684399A
Authority: JP
Inventors: 悌二竹崎
Original assignee: 悌二竹崎
Priority date: 1999-03-19
Filing date: 1999-03-19
Publication date: 2008-10-15
Anticipated expiration: 2019-03-19
Also published as: JP2000266744A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、臨床医が患者の病気の診断を行うとき、及びその病気の治療法を決める際に必要な、患者から採取した生検試料を、病理検査室等に移送して、そこで顕微鏡検査をすることのできる薄切り標本にするまでのいくつかの処理過程の内、上記患者から採取した生検試料を薄切り標本にするまでの間に腐敗等の変質を起こさないように、採取した時の当初の状態で定着すると共に、異なる患者の複数の生検試料の相互混入、または生検採取部位の相互入れ換わりや、生検試料の紛失が生じないように支持するための生検試料の定着支持剤の改良に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来の生検試料の定着支持剤は、黒皮部分を厚く剥いだこんにゃく芋の荒粉を搗いてそれを風選して得られる精製マンナン８．４ｇをホルマリン原液１００ｍｌ、第１リン酸ナトリウム(ＮａＨ_２ＰＯ_４・Ｈ_２Ｏ)４．０ｇ、無水第２リン酸ナトリウム(Ｎａ_２ＨＰＯ_４)６．５ｇ、蒸留水９００ｍｌからなる１０％中性緩衝ホルマリン１０００ｍｌの溶媒に溶解して得るものである。(特願平７−１６９０３号参照)
【０００３】
この定着支持剤は、上述のようにカセット内に収容した生検試料を定着支持剤で包埋した際、定着支持剤を介してその外側から埋設した生検試料を見えるようにするために、定着支持剤をより透明にすることが必要であると共に、これを臨床医室から病理室に移送する際、生検試料をカセット内で変位させないようにするため、定着支持剤をゲル化し易く、凝集力を強くし、ゲル化時の収縮率は小さくしておくことが望ましい。また、なるべく多くの染色色素、特に日常検査で使用するＨＥ染色、ＰＡＳ染色、アルシアン青染色、ムチカルミン染色や、ギムザ染色や、多くの繊維染色等には染まらない方が望ましい。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
この発明の目的は、生検試料を定着支持剤中に埋設した状態でミクロトームの刃で薄切りする際、その刃を傷めないようにするために、定着支持剤中にマンナンの殻や灰分等の不純物が混入する可能性をできる限り除去することである。
【０００５】
他の目的は、定着支持剤中に埋設した生検試料を定着支持剤の外側から、前記従来の定着支持剤の場合より、より見え易くするために、定着支持剤の透明度を一層高めて、生検試料のカセット内における姿勢を確認し易くすることである。
【０００６】
また他の目的は、生検試料を埋設した定着支持剤を従来のものよりゲル化しく、凝集力を強化し、ゲル化時の収縮率を小さくして、カセットに収容した状態で生検試料を移送する際、その生検試料の姿勢や位置がカセット内で変化しないようにし、且つゲル化時に試料が定着支持剤によって圧縮されないようにすることである。
【０００７】
生検試料と定着支持した周囲の定着支持剤(包埋支持剤)が薄切りされ標本スライド上の生検試料の周囲に残った場合、前記従来の定着支持剤より、より多くの染色色素、特にＨＥ染色、ギムザ染色等以外の例えばＰＡＳ染色やアルシアン青染色等にも染まらないようにする事である。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
この発明の生検試料の定着支持剤は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収することを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナン酸化物(グルコマンナンカルボン酸)からなるものである。
【０００９】
また、この発明の生検試料の定着支持剤は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収し、水酸化ナトリウム水溶液を代表とするアルカリ金属イオン又はアンモニウムイオンの水酸化物溶液の中で中和溶解し、それを濾過して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナンカルボン酸ナトリウム(アルカリ金属イオンまたはアンモニウムイオンＭ^＋での中和物)からなるものである。
【００１０】
さらに、この発明の生検試料の定着支待剤は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈殿させて回収してグルコマンナン酸化物を精製誘導し、乾燥後このグルコマンナン酸化物の中の酸化されずに残ったアルコール基(特にグリコール基:−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−)をピリジン(pyridine)(Ｃ_５Ｈ_５Ｎ)と無水酢酸(氷酢酸含む)系のアセチル・エステル反応させて水中で回収・洗浄・精製作製して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体である酸化グルコマンナンアセチル化物からなるものである。
【００１１】
さらにまた、この発明の生検試料の定着剤は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物 ( 酸化グルコマンナン : グルコマンナンカルボン酸 ) を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ - ル系とのエステル反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物からなるものである。
【００１２】
この発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈澱させてグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナン酸化物(グルコマンナンカルボン酸)からなる生検試料の定着支持剤を回収することである。
【００１３】
また、この発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収して、水酸化ナトリウム水溶液を代表とするアルカリ金属イオン又はアンモニウムイオンの水酸化物溶液の中で中和溶解し、それを濾過してグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナンカルボン酸ナトリウム(アルカリ金属イオンまたはアンモニウムイオンＭ^＋での中和物)からなる生検試料の定着支持剤を得ることである。
【００１４】
さらに、この発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈殿させて回収してグルコマンナン酸化物を精製誘導し、乾燥後このグルコマンナン酸化物の中の酸化されずに残ったアルコール基(特にグリコール基:−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−)をピリジン(pyridine)(Ｃ_５Ｈ_５Ｎ)と無水酢酸(氷酢酸含む)系のアセチル・エステル反応させて水中で回収・洗浄・精製作製してグルコマンナンの修飾誘導体である酸化グルコマンナンアセチル化物からなる生検試料の定着支持剤を得ることである。
【００１５】
また、さらにこの発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物 ( 酸化グルコマンナン : グルコマンナンカルボン酸 ) を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ - ル系とのエステル反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物からなる生検試料の定着支持剤を得ることである。
【００１６】
【発明の実施の形態】
黒皮部分を厚く剥いだこんにゃく芋の荒粉を搗いて、それを風選して得られるこんにゃく芋の精粉１０ｇを、１００〜２００ｍｌの水に溶解して５０〜８０℃に加熱し、これをメチルアルコールの中に入れて凝集・沈澱させて回収し、これを乾燥して精粉の主成分であるグルコマンナン以外の水溶性不純物をある程度除く。この際、凝集・沈澱せず水に溶出した例えば水溶性の蛋白、炭水化物等の不純物を除去する。
【００１７】
さらに乾燥して得られたグルコマンナン１０ｇを、硝酸を水で希釈して１０〜２５％の硝酸を含む希硝酸約１０００ｍｌ〜１５００ｍｌの中で酸化溶解した後、濾布又は濾紙やガラス繊維の濾紙等で濾過して、グルコマンナン酸化物以外の不溶物を除去し、マンナン酸化物をメチルアルコールで析出・凝集・沈澱させて回収し、それを蒸留水または精製水やメチルアルコール水等で洗浄し、さらに乾燥して、精製グルコマンナンカルボン酸を回収し、この精製グルコマンナンカルボン酸を例えば１０％ホルマリン水に溶解して生検試料の定着支持剤を得る。このときのホルマリン濃度は適時目的に合わせて選択し、１０％以下または以上でも差し支えない。
【００１８】
他の実施形態は、同こんにゃく芋の精粉１０ｇを、上記１０〜２５％の希硝酸で溶解・酸化し、メチルアルコール中に濾過し析出・凝集・沈殿して蒸留水(精製水)とメチルアルコール水で洗浄・回収して、乾燥した精製グルコマンナン力ルボン酸を例えば、ピリジン(pyridine)(Ｃ_５Ｈ_５Ｎ)２４ｍｌに対して無水酢酸(氷酢酸含む)１６ｍｌのアセチル・エステル化反応処理液のグルコマンナン酸化物が充分漬かる量の中に入れて、アセチル・エステル反応(室温で10数時間〜数日)させて目的に合わせて調整して、蒸留水または精製水中で回収・洗浄・精製・乾燥作製して酸化グルコマンナンアセチル化物を誘導作製して、これを例えば、乾燥酸化グルコマンナンアセチル化物１ｇを２０％ホルマリン水１０ｍｌ〜３０ｍｌに溶かしてゾル状溶液の定着支持剤を得る。この時のホルマリン濃度や定着支持剤の粘度及び濃度は適時目的に合わせて選択できる。
【００１９】
また他の実施形態は、同こんにやく芋の精粉１０ｇを、上記硝酸を水で希釈して１０％〜２５％の硝酸を含む希硝酸に加えて酸化溶解濾過し、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応させアルコール水中で沈殿・洗浄・濾過回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物を誘導作製して、これを洗浄・乾燥後例えば１０％ホルマリン水に溶解してなる生検試料の定着支持剤を得る。このときのホルマリン濃度は適時目的に合わせて選択できる。また上記２回の濾過のいずれか１回を省略しても差し支えない。
【００２０】
また他の実施形態は、同こんにやく芋の精粉１０ｇを、上記硝酸を水で希釈して１０〜２５％の硝酸を含む希硝酸に加えて酸化した後、メチルアルコール中に濾過し入れて凝集、沈澱させて、回収し、これをメチルアルコールと蒸留水(精製水)で洗浄し乾燥して、１０％〜３０％水酸化ナトリウム水に入れて中和、溶解し、その後濾紙等で濾過してグルコマンナンカルボン酸ナトリウム以外の不溶物を除去して再度メチルアルコール中で析出・凝集・沈殿させて取り出し、洗浄・乾燥後グルコマンナンの誘導体を例えば１０％ホルマリン水に溶解してなる生検試料の定着支持剤を得る。このときのホルマリン濃度は適時目的に合わせて選択できる。また上記２回の濾過のいずれか１回を省略しても差し支えない。
【００２１】
上記グルコマンナンの修飾誘導体からなる生検試料の各種定着支持剤を用いて、患者から採取した生検試料をカセット内に収容してそれを定着支持する際は、添付図面の図1に示す如く、包埋カセット１をシャーレ２の上に載置した状態で、この包埋カセット１の中に生検試料３を収容し、その上から定着支持剤容器４の中の定着支持剤５を矢印Ａ５の如く流し込んで、包埋カセット１内における生検試料３を定着支持剤５で包埋する。
【００２２】
この状態の包埋カセット１をシャーレ２から外に取り出して図２に示す如く包埋カセット１に蓋６を嵌め、それとゲル化剤７をカプセル８内に収容して、該カプセル８にカプセルの蓋９を嵌めるものであり、その状態で病理検査室等に移送する。
【００２３】
また、上記包埋カセット１とは別の、例えば本願の発明者の出願に係わる特願平９−３７９３４号の明細書と図面に示した皿状容器に生検試料を収容して、それを定着支持する際は、図３〜５、８、９に示す如く、皿状容器１０の中に、ゾル状の定着支持剤５を入れ、その上に生検試料３を載せてから、ゲル化(固定)剤７を注入して、ゲル状定着支持剤５で生検試料３をひとまとめにして、且つ生検試料３を生物学的に固定する。この際、定着支持剤５は、ゲル化した定着支持剤５ａになり、その後、皿状容器１０は、蓋１１で閉じられ、挟持用支持板１２にはめ込み、押え板１３で挟持して病理検査室等に移送される。なお、挟持用支持板１２と押え板１３とで、包埋カセット２１を形成する。また、図面符号１６は、通液孔を示す。
【００２４】
この場合、挟持用支持板１２の外側から生検試料３の状態や数量が観察でき、例えば透明なビニール袋に、生検試料３の収まった皿状容器１０の収まった(扁平容器)包埋カセット２１を収容して、患者氏名や属性データを記載し、同患者の病理検査依頼書とビニール袋に同一バーコードを貼ると、検査の受付が確実となり、受付・エントリーや検査の自動化が可能になる。
【００２５】
この時、布・紙・セロファン紙:[Ｃ_６Ｈ_７Ｏ_２（ＯＨ）_３]_ｎを裏打ち用紙１４に使用した場合は、分極している定着支持剤５の親水基(主に−ＣＯＯＨ)と裏打ち用紙１４の(−ＯＨ)基とが、ゾル状定着支持剤５のゲル化時に水素結合の分子問力が強く働き、生検試料３を裏打ち用紙１４に確実に定着・支持、即ち接着する。セロファン紙を裏打ち用紙１４に使用した場合は、生検試料３は裏打ち用紙１４の側からも観察可能である。この時、図４に示す如く、薄いスポンジ板１５でゲル状定着支持剤５ａを軽く押さえて移送すると、より観察しやすい。
【００２６】
また図示されていないが、裏打ち用紙１４として、薄いスポンジ板や、メッシュを用いた場合も接着理論の釘打ち(錨)理論の作用により、生検試料を裏打ち用紙１４に確実に定着・支持する。
【００２７】
上記の裏打ち用紙１４への生検試料３の確実な定着・支持は、生検試料３の包埋作業時にも良く働き、図示していない包埋皿に生検試料３を包埋して、裏打ち用紙１４をその包埋皿から剥がし取る時、生検試料以外の周囲の多くの定着支持剤５は、裏打ち用紙１４側に付着して剥がれて、生検試料３が包埋皿側に残って包埋される。
【００２８】
また、裏打ち用紙１４を使用しないで、図５、８、９に示す如く合成樹脂、例えばＰ．Ｐ．(ポリプロピレン)［−ＣＨ_２・ＣＨ・ＣＨ_３−］_ｎの皿状容器１０や、図７の多孔皿１０ａの底部で、定着支持剤５をゲル化(固定)剤７でゲル化して生検試料３をひとまとめに定着支持した場合は、ポリプロピレン(polypropylene)と分極している定着支持剤５とは、臨界表面張力(critical surface tension)のγc値や、溶解度因子(solubility parameter)のＳＰ値が離れていて、両者は接着性が弱く解離性が強い。
【００２９】
故に、定着支持剤５のゲル化・凝固が進むにつれて皿状容器１０や、図示していない多孔皿の底部より、定着支持剤５は生検試料と一緒に自然剥離しやすい。なお、図１〜９中、同一図面符号で示す部分は、その部分の名称及び機能についても同一である。
【００３０】
この定着支持剤(包埋支持剤)５は、グルコマンナンの修飾誘導体であり、そのホルマリン溶解液の粘度は、その溶解濃度と修飾誘導法によりいろいろと変化させることが出来る。例えば、生検試料組繊をより小型にしていくと細胞になるが、この細胞試料を遠心分離や濾過法により図９に示す如く皿状容器１０の底部や濾紙上に集め採集して、この集細胞試料３ａの周囲や上部からこの定着支持剤５を流し込み、アルコールやアルコールホルマリンやアセトンやアセトンアルコール等のゲル化(固定)剤７で一纏めに固め保持して、ゲル化した定着支持剤５ａで一纏めになった集細胞試料３ａを、包埋カセット２１の皿状容器１０を多孔皿に交換した包埋カセット２１に入れて処理後、薄切標本を作製すると、いわゆるセル・ブロック法が簡単に実施できる。この時、細胞試料は事前に固定を済ませておいても良く、定着支持剤７での処理工程の中で固定を実行しても良い。
【００３１】
また、酸化グルコマンナンアセチル化物は、各種濃度のホルマリン水に溶解し、その分子構造の中には、カルボキシル基(Ｒ・ＣＯＯＨ)とアセチル基(Ｒ−Ｏ・ＣＯＣＨ_３)は存在するが、ホルマリンの細胞組織の固定反応に主として働く組織内官能基であるアミノ基(例えば、Ｒ−ＮＨ_２）や水酸基(例えば、Ｒ−ＯＨまたはＲＣ_６Ｈ_４−ＯＨ)やメルカプト基(例えば、Ｒ−ＳＨ)は存在しない。故に、ホルマリンの生体細胞組織の固定反応を大きく阻害する反応基は存在せず、固定液(ホルマリン)の活発な分子間運動を緩やかにする働きが主な役割になる。
【００３２】
そこで、ホルマリンにこの酸化グルコマンナンアセチル化物や酸化グルコマンナンのカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物を溶解して適度の粘性を持たせると、粘性のある細胞組織のコーティング固定保護剤が出来上がる。これは、固定能力が有り細胞組織の固定速度を緩やかに進め維持して、生検試料３の乾燥や崩れを防止する。これは例えば本願の発明者の出願に係わる特願平８−３１６０７１号の支持剤や特願平９−３７９３４号のゾル状の保存液として使用するとよりその成果が上がり威力を発揮するものである。また、特願平９−３７９３４号の図６、７に示す如く、ゾル状保存液として用いる場合、事前にホルマリン水やホルマリンアルコール等の既存の固定液によって前固定処理をして置くと、その固定結果はより良くなる。
【００３３】
また、さらにグルコマンナンのアセチル化の方法には、無水酢酸(氷酢酸)と適当な触媒(硫酸・塩化亜鉛)とともに作用させる方法や、ホルムアミド中でピリジンと無水酢酸系の穏やかな条件下で反応させる方法や、酸ハロゲン化物と酢酸を反応させてから後に、グルコマンナンと反応させてエステル化させる方法も可能である。
【００３４】
さらにまた、遺伝子研究の技法の一つであるin situ hybridization(ISH法)等のホルマリン固定をあまり好まない標本作製時には、酸化グルコマンナンアセチル化物を例えば５％以下の低ホルマリン水に溶解調整して作製した定着支持剤５(包埋支持剤)で細胞組織試料を一纏めに支持保待して、ホルマリンの含まれていない例えばアルコール、アセトンや、アセトンアルコール等を定着支持剤５のゲル化剤７として用いることもできる。しかし、このような研究検査の目的のためには、グルコマンナンをアセチル化したアセチルグルコマンナンは、アセトンやクロロホルムの有機溶媒に溶解する。
【００３５】
この性格を利用すると、水中で沈殿回収したアセチルグルコマンナンをアセトン等に溶解して、(アセトンは水と溶け合うがアセチルグルコマンナンは水には溶解しないので、)水中に濾過析出精製回収したアセチルグルコマンナンを再度適度の濃度でアセトンに溶解して、この溶解液を生検試料３の定着支持剤５(包埋支持剤)として用いて、ゲル化剤７として水(生理食塩水や緩衝液)、アルコ-ルやアセトンアルコールを使用すると全くホルマリンの含まれない固定と定着支持(包埋支持)が可能となる。
【００３６】
また、アセチルグルコマンナンはアセトンやクロロホルムに溶解するとともに、アセチルグルコマンナンは、例えば水酸化ナトリウム水溶液等のアルカリ加水分解(ケン化)または、希塩酸、希硫酸等で加熱し加水分解して洗浄・精製すると、完全に不純物の含まれない精製グルコマンナンを作製・回収することができる。
【００３７】
酸化グルコマンナンアセチル化物は結果的には、グルコマンナンの分子式として［Ｃ_６Ｈ_７Ｏ_２（ＯＨ）_３］_ｎまたは［Ｃ_３Ｈ_３Ｏ_２（ＣＨＯＨ）_２（ＣＨ_２ＯＨ）］_ｎとも表記できるが、その最小分子単位中の３つのアルコール基（＝ＣＨＯＨ）のうち特にグリコール基（−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−）内の少なくとも１つ以上のアルコール基をアセチル化して、残りのアルコール基は希硝酸等の酸化剤で酸化してアルコール基をカルボキシル基に誘導作製している。
【００３８】
このアルコール基の特にグリコール基のアセチル化（−ＣＨＯ・ＣＯＣＨ_３−ＣＨＯＨ−または−ＣＨＯ・ＣＯＣＨ_３−ＣＨＯ・ＣＯＣＨ_３−）は、ＰＡＳ染色の Schiff aldehyde 反応に反応するグルコマンナンの官能基グリコール基を過よう素酸の酸化作用によりアルデヒド基に変化誘導されないように、予めアセチル基に変換誘導しておき、その他のアルコール基をゲル化力が強く、安定で親水性の付属基であるカルボキシル基(−ＣＯＯＨ)に変換誘導し濾過精製したものであり、この２つの付属基の変換誘導により、多くの色素に染まらないホルマリン水等に溶解するアセチルグルコマンナン酸化物や酸化グルコマンナンアセチル化物を修飾誘導した。故に、アセチルグルコマンナンはこのアセチルグルコマンナン酸化物を修飾誘導精製回収する工程の中問産物であり、この中問産物であるアセチルグルコマンナンを用いてホルマリンの含まれない定着支持剤５(包埋支持剤)を作製することは可能である。
【００３９】
また、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応、例えばメタノール１００ｍｌに対して濃塩酸０．８ｍｌのエステル化反応処理液のグルコマンナンカルボン酸が充分漬かる量の中に入れて６０℃程度の反応温度で２〜２４時問の中で反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製するとグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンメチル化物即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物が修飾誘導される。このメチル化を代表とするカルボキシル基部分のアルコール系のエステル化反応はアルシアン青を代表とする酸性粘液多糖類の染色反応の封鎖法としては有用であるが、アセチル化よりも化学反応が速くそれを定着支持剤として固定液に溶かし込んだ場合その溶液は白濁が強くゲル化時に白色不透明になり、ＰＡＳ反応のグリコール基の染色反応の封鎖には効力を発揮できない場合がある。
【００４０】
【発明の効果】
この発明の生検試料の定着支持剤は、上述の通りであるからグルコマンナンの修飾誘導体以外の不純物を除去することができるので、その中に包埋した状態の生検試料を顕微鏡検査のためにミクロトームで薄切りする際、その定着支持剤に含まれるマンナンの殻や灰分等の不純物によって、薄切りする刃物を傷めることがないため、その後、その傷んだ刃で該生検試料の切断面の組織を破壊して、検査の結果に支障を与えるおそれがない。
【００４１】
またこの発明の生検試料の定着支持剤は、グルコマンナンの修飾誘導体からなっていて、前記従来のグルコマンナンからなる定着支持剤より、より透明度が優れているので、その中に包埋されている生検試料３の外観及び包埋カセット１または２１内における生検試料３の姿勢や位置及び数量を定着支持剤５の外側から見て確認することができるので、病理医や臨床医の望む薄切り面を薄切りすることができ、生検試料の検査の受付から標本作製工程での一貫した検査面(薄切平面)の提示を可能にして作業工程の自動化を前進させることができる。
【００４２】
さらにこの発明の生検試料の定着支持剤は、カプセル８に収容して病理検査室等に移送する際、前記従来の定着支持剤より、ゲル化剤によってゲル化し易く、凝集力が強いので移送の途中でカプセル全体が振動しても包埋カセット１内における生検試料３の姿勢が変化しにくいため上記薄切り面を当初の状態に維持することができる。また、前記グルコマンナンの修飾誘導体からなる生検試料の定着支持剤として、特に酸化グルコマンナンアセチル化物や、酸化グルコマンナンのカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物、或いはグルコマンナンカルボン酸（酸化グルコマンナン）の中和物を用いる場合は、それらが透明感を有し、かつ、染色色素によって最も染まりにくい点において、前記従来の定着支持剤より、最も優れている。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明の定着支持剤を用いて生検試料を定着支持する状態を示す縦断面図である。
【図２】図１の状態の次の作業状態を示す縦断面図である。
【図３】この発明の定着支持剤を用いて、図１と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。
【図４】図１〜３と異なる実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。
【図５】図１〜４と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。
【図６】図１〜５と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。
【図７】図１〜６と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。
【図８】図１〜７と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。
【図９】図１〜８と別の実施形態で別の生検試料(集細胞試料)を定着支持する際の縦断面図である。
【符号の説明】
１包埋カセット
３生検試料
５定着支持剤
７ゲル化剤[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention, when the clinician to diagnose the patient's disease, and required in determining the cure of the disease, the biopsy sample taken from a patient, then feeding transferred to pathology laboratory or the like, where the microscope Among several processing steps up to making a sliced specimen that can be examined, when taking a biopsy sample taken from the above patient so as not to cause deterioration such as spoilage before making a sliced specimen Of the biopsy sample to support the prevention of mutual contamination of multiple biopsy samples from different patients, interchange of biopsy collection sites, and loss of biopsy samples. The present invention relates to an improvement of a fixing support.
[0002]
[Prior art]
A conventional biopsy sample fixing support is 8.4 g of purified mannan obtained by scrubbing konjac koji with a thick black skin, and 100% formalin stock solution, monobasic sodium phosphate ( _{_{_{NaH 2 PO 4 · H 2 O}}} ) 4.0g, sodium secondary phosphate _(Na 2 HPO ₄ anhydrous) 6.5 g, those obtained by dissolving in a solvent a 10% neutral buffered formalin 1000ml consisting of distilled water 900ml is there. (See Japanese Patent Application No. 7-16903)
[0003]
In order to make the biopsy sample embedded from the outside through the fixing support agent visible when the biopsy sample accommodated in the cassette is embedded in the fixing support agent as described above, fixing together with the support agent it is necessary to be more transparent, when fed moves to the pathology chamber it from the clinician chamber, so that the biopsy sample is not displaced in the cassette, it is easy to gel the fixing support agent It is desirable to increase the cohesive force and reduce the shrinkage rate during gelation. Further, it is desirable that the dye is not dyed by as many dyes as possible, in particular, HE dye, PAS dye, Alcian blue dye, Mucicalmine dye, Giemsa dye, and many fiber dyes used in daily inspection.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
The object of the present invention is to prevent mannequin shells and ash from being contained in the fixing support so as not to damage the blade when the biopsy sample is embedded in the fixing support with a microtome blade. It is to remove as much as possible the possibility of contamination.
[0005]
Another object is to further improve the transparency of the fixing support in order to make the biopsy sample embedded in the fixing support more visible from the outside of the fixing support than in the case of the conventional fixing support. This is to make it easier to confirm the posture of the biopsy sample in the cassette.
[0006]
Another purpose is to fix the biopsy sample in a state where it is housed in a cassette by making the fixing support embedded with the biopsy sample gelled, strengthening the cohesive force and reducing the shrinkage rate at the time of gelation. the time of transmission shifting is that the attitude and position of the biopsy sample is to avoid changes in the cassette, and so that the sample during gelation is not compressed by the fixing support agent.
[0007]
When the biopsy sample and the surrounding fixing support (embedding support) that is fixedly supported are sliced and remain around the biopsy sample on the specimen slide, more dyes than the conventional fixing support, especially For example, it should be prevented from being dyed by PAS dyeing or Alcian blue dyeing other than HE dyeing or Giemsa dyeing.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The fixing support for a biopsy sample according to the present invention is a glucomannan obtained by filtering glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac meal with an oxidizing agent such as dilute nitric acid, and precipitating, aggregating and precipitating in alcohol. It consists of glucomannan oxide (glucomannan carboxylic acid) which is a modified derivative of mannan.
[0009]
Further, the fixing support for the biopsy sample of the present invention is a glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac meal with an oxidizing agent such as dilute nitric acid. Sodium glucomannan carboxylate (alkali metal ion), which is a modified derivative of glucomannan obtained by neutralizing and dissolving in a representative alkali metal ion or ammonium ion hydroxide solution and filtering it. Or a neutralized product of ammonium ion M ⁺ ).
[0010]
Further, the biopsy sample fixing support agent of the present invention is a glucomannan obtained by filtering glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac koji fine powder with an oxidizing agent such as dilute nitric acid, and precipitating and agglomerating and precipitating in alcohol. the oxide was purified induction, dried alcohol group (especially glycol group: -CHOH-CHOH-) that remains without being oxidized in the glucomannan oxide pyridine _{(pyridine) (C 5 H 5} N) and anhydrous It comprises an oxidized glucomannan acetylated product, which is a modified derivative of glucomannan, which is obtained by performing an acetic acid (including glacial acetic acid) acetyl ester reaction to recover, wash and purify in water.
[0011]
Furthermore, a fixing agent of biopsy sample of this invention, the fine powder konjac tubers oxidized dissolved filtered through oxidizing agent, purified glucomannan oxide deposited coagulation sedimentation washing recovered in alcohol (oxide Glucomannan: Glucomannan the carboxylic acid) was purified induction, dried portion of the carboxyl group and the alcohol - ester reacted modified derivatives in which purified oxide glucomannan ester of glucomannan purified prepared precipitate, washing and recovery in water with Le system, That is, it consists of an esterified product of the carboxyl group of glucomannan carboxylic acid and an alcohol .
[0012]
According to the method for producing a fixing support for a biopsy sample of the present invention, glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac koji fine powder with an oxidizing agent is filtered, and precipitated and agglomerated and precipitated in alcohol to obtain a glucomannan modified derivative of glucomannan. It is to recover the fixing support of a biopsy sample consisting of mannan oxide (glucomannan carboxylic acid).
[0013]
In addition, the method for producing a fixing support for a biopsy sample according to the present invention comprises collecting glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac koji fine powder with an oxidizing agent , by precipitating and agglomerating and precipitating it in an alcohol, and an aqueous sodium hydroxide solution. And neutralized and dissolved in a hydroxide solution of an alkali metal ion or ammonium ion represented by sodium glucomannan, which is a modified derivative of glucomannan (with an alkali metal ion or ammonium ion M ⁺⁾ . To obtain a fixing support for a biopsy sample consisting of a neutralized product.
[0014]
Furthermore, the method for producing a fixing support for a biopsy sample according to the present invention comprises filtering glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac koji fine powder with an oxidizing agent such as dilute nitric acid, collecting the precipitate by aggregation and precipitation in alcohol. The glucomannan oxide is purified and induced, and after drying, the alcohol group remaining in the glucomannan oxide without being oxidized (particularly the glycol group: —CHOH—CHOH—) is converted into pyridine (C ₅ H ₅ N). Of acetyl ester of acetic anhydride and acetic anhydride (including glacial acetic acid), recovered in water, washed and purified to obtain a fixing support for biopsy samples consisting of oxidized glucomannan acetylated derivative of glucomannan It is.
[0015]
Furthermore, the method for producing a fixing support for a biopsy sample according to the present invention comprises a purified glucomannan oxide ( oxidized gluconate) obtained by subjecting konjac koji refined powder to oxidative dissolution filtration with an oxidant, and precipitating, coagulating, washing and recovering in alcohol. mannan: glucomannan carboxylic acid) was purified induction, dried and part of the carboxyl group alcohol - purified oxide gluco a modified derivative of the ester reacted glucomannan purified prepared precipitate, washing and recovery in water with Le system It is to obtain a fixing support for a biopsy sample comprising a mannan esterified product, that is, an esterified product of a carboxyl group of glucomannancarboxylic acid and an alcohol .
[0016]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
10g of konjac koji fine powder obtained by wind-cooking konjac koji crumbs with a thick black skin peeled off and dissolved in 100-200 ml of water, heated to 50-80 ° C. Is recovered by agglomeration and precipitation in methyl alcohol and dried to remove some water-soluble impurities other than glucomannan, which is the main component of the fine powder. At this time, impurities such as water-soluble proteins and carbohydrates eluted in water without aggregation / precipitation are removed.
[0017]
Further, 10 g of glucomannan obtained by drying is diluted with nitric acid with water and oxidized and dissolved in about 1000 ml to 1500 ml of dilute nitric acid containing 10 to 25% nitric acid, and then filter cloth or filter paper or glass fiber filter paper. The insoluble matter other than glucomannan oxide is removed by filtration, etc., and the mannan oxide is recovered by precipitation, aggregation and precipitation with methyl alcohol, and it is washed with distilled water or purified water or methyl alcohol water. Further, it is dried to recover purified glucomannan carboxylic acid, and this purified glucomannan carboxylic acid is dissolved in, for example, 10% formalin water to obtain a fixing support for a biopsy sample. The formalin concentration at this time is selected according to the purpose in a timely manner, and may be 10% or less or more.
[0018]
In another embodiment, 10 g of the konjac koji refined powder is dissolved and oxidized with 10-25% dilute nitric acid, filtered into methyl alcohol, precipitated, agglomerated and precipitated, and distilled water (purified water) and methyl Purified glucomannan rubonic acid washed and recovered with alcohol water and dried, for example, acetyl esterification treatment of 16 ml of acetic anhydride (including glacial acetic acid) for 24 ml of pyridine (C ₅ H ₅ N) Put the solution in a sufficient amount of glucomannan oxide, adjust the acetyl ester reaction (at room temperature for 10 hours to several days) according to the purpose, and collect it in distilled or purified water. Purified and dried to produce an oxidized glucomannan acetylated product. For example, 1 g of dried oxidized glucomannan acetylated product is dissolved in 10 ml to 30 ml of 20% formalin water to prepare a sol-like solution. You get to wear support agent. The formalin concentration at this time and the viscosity and concentration of the fixing support can be selected according to the purpose at the appropriate time.
[0019]
In another embodiment, 10 g of konjac mash powder is diluted with water and diluted with nitric acid containing 10% to 25% nitric acid. Purified glucomannan oxide (oxidized glucomannan: glucomannan carboxylic acid) that has been recovered by precipitation washing is purified, dried, and then subjected to ester reaction between this carboxyl group and an alcohol system, and precipitated, washed, and collected by filtration in alcoholic water. Purified oxidized glucomannan ester, which is a modified derivative of purified glucomannan, that is, an esterified product of a carboxyl group portion of glucomannan carboxylic acid and an alcohol is induced and prepared, and after washing and drying, for example, 10% A fixing support for a biopsy sample dissolved in formalin water is obtained. The formalin concentration at this time can be selected according to the purpose in a timely manner. In addition, any one of the above two filtrations may be omitted.
[0020]
In another embodiment, 10 g of konjac mash powder is diluted with water and diluted with dilute nitric acid containing 10 to 25% nitric acid, and then filtered into methyl alcohol. It is then aggregated and precipitated, recovered, washed with methyl alcohol and distilled water (purified water), dried, neutralized and dissolved in 10% to 30% aqueous sodium hydroxide, and then filtered, etc. Insoluble substances other than sodium glucomannan carboxylate are removed by filtration, precipitated, agglomerated, and precipitated again in methyl alcohol. After washing and drying, a glucomannan derivative is dissolved in, for example, 10% formalin water. A fixing support for the test sample is obtained. The formalin concentration at this time can be selected according to the purpose in a timely manner. In addition, any one of the above two filtrations may be omitted.
[0021]
When a biopsy sample collected from a patient is housed in a cassette and supported by using various fixing support agents for biopsy samples composed of the above-mentioned modified derivatives of glucomannan, as shown in FIG. 1 of the accompanying drawings. In a state where the embedding cassette 1 is placed on the petri dish 2, the biopsy sample 3 is accommodated in the embedding cassette 1, and the fixing support 5 in the fixing support container 4 is indicated by an arrow from above. Then, the biopsy sample 3 in the embedding cassette 1 is embedded with the fixing support 5.
[0022]
The embedding cassette 1 in this state is taken out from the petri dish 2 and a lid 6 is fitted on the embedding cassette 1 as shown in FIG. 2, and the gelling agent 7 and the gelling agent 7 are accommodated in the capsule 8. It is intended to fit the lid 9, to send go to the pathology laboratory or the like in that state.
[0023]
The above-described separate from the embedding cassette 1, houses a biopsy specimen in a dish-like container shown in the specification and drawings of Japanese Patent Application No. 9-37934 according to the inventors of the present application filed For example, it 3 to 5, 8, and 9, the sol-like fixing support 5 is placed in the dish-like container 10, and the biopsy sample 3 is placed thereon, as shown in FIGS. The biopsy sample 3 is packed together with the gel-like fixing support 5 and the biopsy sample 3 is biologically fixed. At this time, the fixing support 5 becomes a gelated fixing support 5 a, and then the dish-like container 10 is closed with a lid 11, fitted into a holding support plate 12, and clamped with a presser plate 13 for pathological examination. It is sent moved to the chamber and the like. The sandwiching support plate 12 and the presser plate 13 form an embedding cassette 21. Reference numeral 16 denotes a liquid passage hole.
[0024]
In this case, the state and quantity of the biopsy sample 3 can be observed from the outside of the support plate 12 for clamping. For example, the dish-like container 10 in which the biopsy sample 3 is contained (flat container) is embedded in a transparent plastic bag. If cassette 21 is accommodated, patient name and attribute data are written, and the same barcode is attached to the patient's pathological examination request form and plastic bag, the acceptance of the examination will be ensured, and reception / entry and examination can be automated become.
[0025]
At this time, when the cloth / paper / cellophane paper: [C ₆ H ₇ O ₂ (OH) ₃ ] _n is used for the backing paper 14, the hydrophilic group (mainly —COOH) of the polarized fixing support 5. And the (—OH) group of the backing paper 14 have a strong molecular force of hydrogen bonding when the sol-type fixing support 5 is gelled, and the biopsy sample 3 is securely fixed and supported on the backing paper 14, that is, bonded. To do. When cellophane paper is used for the backing paper 14, the biopsy sample 3 can be observed from the backing paper 14 side. At this time, as shown in FIG. 4, when feed moves lightly pressing a gel-like fixing support agent 5a thin sponge plate 15, and easier to observe.
[0026]
Although not shown, even when a thin sponge plate or mesh is used as the backing paper 14, the biopsy sample is reliably fixed and supported on the backing paper 14 by the action of the nail (錨) theory of the adhesion theory. .
[0027]
The firm fixation / support of the biopsy sample 3 on the backing paper 14 works well during the embedding operation of the biopsy sample 3, and the biopsy sample 3 is embedded in an embedding dish (not shown), When the backing paper 14 is peeled off from the embedding dish, a lot of surrounding fixing support 5 other than the biopsy sample adheres to the backing paper 14 side and is peeled off, and the biopsy sample 3 remains on the embedding dish side. Embedded.
[0028]
Further, without using the backing paper 14, as shown in FIGS. P. (Polypropylene) [-CH ₂ · CH · CH _3- ] The biopsy by fixing the fixing support 5 with the gelling (fixing) agent 7 at the bottom of the dish-like container 10 of _n or the porous dish 10a of FIG. When sample 3 is fixedly supported together, polypropylene and polarized fixing support 5 have a critical surface tension γc value and a solubility parameter SP value. They are separated, and both have low adhesiveness and strong dissociation.
[0029]
Therefore, as the fixing support 5 is gelated and coagulated, the fixing support 5 is easily peeled off together with the biopsy sample from the dish-like container 10 or the bottom of the perforated dish (not shown). In addition, the part shown with the same drawing code | symbol in FIGS. 1-9 is also the same also about the name and function of the part.
[0030]
The fixing support (embedding support) 5 is a modified derivative of glucomannan, and the viscosity of the formalin solution can be changed variously depending on the concentration of the solution and the modification induction method. For example, if the biopsy sample fabric is made smaller, it becomes a cell, but this cell sample is collected and collected on the bottom of the dish-like container 10 or filter paper as shown in FIG. 9 by centrifugation or filtration. The fixing support 5 is poured from the periphery or upper part of the cell collection sample 3a, and is solidified and held together with a gelling (fixing) agent 7 such as alcohol, alcohol formalin, acetone, or acetone alcohol. When the collected cell sample 3a collected in step 1 is placed in the embedding cassette 21 in which the dish-like container 10 of the embedding cassette 21 is replaced with a perforated dish and then processed, a sliced sample is prepared. Can be implemented. At this time, the cell sample may be fixed in advance, or may be fixed in the processing step with the fixing support 7.
[0031]
The oxidized glucomannan acetylated product is dissolved in various concentrations of formalin water, and in its molecular structure, there are a carboxyl group (R · COOH) and an acetyl group (R—O · COCH ₃ ), but formalin. An amino group (for example, R—NH ₂ ), a hydroxyl group (for example, R—OH or RC ₆ H ₄ —OH), or a mercapto group (for example, R—SH), which is a functional group in the tissue that mainly functions in the fixation reaction of the cell tissue. ) Does not exist. Therefore, there is no reactive group that greatly inhibits the fixing reaction of formalin in living cell tissues, and the main role is to moderate the active intermolecular movement of the fixing solution (formalin).
[0032]
So, by dissolving the oxidized glucomannan acetylated product or the esterified product of the carboxyl group of oxidized glucomannan and alcohol in formalin to give an appropriate viscosity, a coating immobilization protective agent for viscous cell tissues is completed. . This has a fixing ability and prevents the biopsy sample 3 from drying and collapsing by slowly advancing and maintaining the cell tissue fixing speed. For example, when used as a support of Japanese Patent Application No. 8-316071 relating to the application of the present inventor or a sol-like preservation solution of Japanese Patent Application No. 9-37934, the results are more effective and more powerful. . In addition, as shown in FIGS. 6 and 7 of Japanese Patent Application No. 9-37934, when used as a sol preservation solution, if pre-fixed with an existing fixative such as formalin water or formalin alcohol, The fixed result is better.
[0033]
Furthermore, acetylation of glucomannan can be carried out by reacting with acetic anhydride (glacial acetic acid) and an appropriate catalyst (sulfuric acid / zinc chloride), or by reacting under mild conditions such as pyridine and acetic anhydride in formamide. Or a method of reacting an acid halide and acetic acid and then reacting with glucomannan to cause esterification.
[0034]
Furthermore, when preparing specimens that do not like formalin fixation, such as in situ hybridization (ISH method), which is one of the genetic research techniques, the dissolved glucomannan acetylated product is dissolved and adjusted in, for example, 5% or less of low formalin water. Cell tissue samples are collectively supported and held by the prepared fixing support 5 (embedding support). For example, alcohol, acetone, acetone alcohol or the like that does not contain formalin is used as a gelling agent 7 for the fixing support 5. Can also be used. However, for the purpose of such research and inspection, acetylglucomannan obtained by acetylating glucomannan is dissolved in an organic solvent such as acetone or chloroform.
[0035]
Using this character, acetylglucomannan precipitated and collected in water is dissolved in acetone and the like, and acetylglucomannan filtered and purified in water is collected (because acetone dissolves in water but acetylglucomannan does not dissolve in water). Mannan is dissolved again in acetone at an appropriate concentration, and this solution is used as the fixing support 5 (embedding support) of the biopsy sample 3 and water (physiological saline or buffer) as the gelling agent 7. When alcohol or acetone alcohol is used, fixing and fixing support (embedding support) containing no formalin becomes possible.
[0036]
In addition, acetylglucomannan is dissolved in acetone or chloroform, and acetylglucomannan is washed and purified by alkali hydrolysis (saponification) such as aqueous sodium hydroxide solution or hydrolysis by heating with dilute hydrochloric acid or dilute sulfuric acid, for example. Then, it is possible to produce and collect purified glucomannan that is completely free of impurities.
[0037]
As a result, the oxidized glucomannan acetylated product is also expressed as [C ₆ H ₇ O ₂ (OH) ₃ ] _n or [C ₃ H ₃ O ₂ (CHOH) ₂ (CH ₂ OH)] _n as the molecular formula of glucomannan. It is possible to acetylate at least one alcohol group in the glycol group (—CHOH—CHOH—) among the three alcohol groups (═CHOH) in the smallest molecular unit, and the remaining alcohol groups are diluted nitric acid. It is oxidized by an oxidizing agent such as an alcohol to produce a carboxyl group.
[0038]
Acetylation of particular glycol group of the alcohol group (-CHO _· COCH 3 -CHOH- or _{_{-CHO · COCH 3 -CHO · COCH 3}} -) , the functional groups glycol group of glucomannan to respond to Schiff Aldehyde reaction PAS staining In order not to be induced to change to an aldehyde group due to the oxidizing action of periodate, the other alcohol group has a strong gelling power and is a stable and hydrophilic auxiliary carboxyl group. It is converted to (-COOH), purified by filtration, and modified by acetylglucomannan oxide or oxidized glucomannan acetylated product that dissolves in formalin water that does not stain many pigments, by converting these two accessory groups. Induced. Therefore, acetylglucomannan is an intermediate product in the process of inducing, purifying and recovering this acetylglucomannan oxide, and using this intermediate product, acetylglucomannan, fixing support 5 (embedded) that does not contain formalin. It is possible to produce a support.
[0039]
In addition, the konjac koji refined powder is oxidatively dissolved and filtered with an oxidizing agent , and purified glucomannan oxide (oxidized glucomannan: glucomannan carboxylic acid) that has been collected, washed, and precipitated in alcohol is purified and induced after drying. Ester reaction between the group part and the alcohol system, for example, a reaction temperature of about 60 ° C. in an amount in which glucomannan carboxylic acid in an esterification reaction solution of 0.8 ml of concentrated hydrochloric acid is sufficiently immersed in 100 ml of methanol The reaction is carried out in 2 to 24 hours, and the product is precipitated, washed and recovered in water and purified to produce a purified oxidized glucomannan methylated product that is a modified derivative of glucomannan, ie, the carboxyl group portion of glucomannan carboxylic acid and the alcohol group. The esterified product is derivatized. This alcohol-based esterification reaction of the carboxyl group represented by methylation is useful as a blocking method for the dyeing reaction of acidic mucus polysaccharides represented by Alcian blue, but the chemical reaction is faster than acetylation. When dissolved in a fixing solution as a fixing support, the solution is strongly cloudy and becomes white opaque upon gelation, and may not be effective for blocking the glycol group dyeing reaction of the PAS reaction.
[0040]
【The invention's effect】
Since the fixing support of the biopsy sample of the present invention is as described above, impurities other than the modified derivative of glucomannan can be removed, so that the biopsy sample embedded in the biopsy sample for microscopic examination can be removed. When cutting with a microtome, the blade to be sliced is not damaged by impurities such as mannan shells and ash contained in the fixing support, and then the tissue of the cut surface of the biopsy sample is damaged with the damaged blade. There is no risk of damage to the test results.
[0041]
Further, the fixing support for the biopsy sample of the present invention is composed of a modified derivative of glucomannan, and is more transparent than the conventional fixing support made of glucomannan, so that it is embedded therein. Since the appearance of the biopsy sample 3 and the posture, position and quantity of the biopsy sample 3 in the embedding cassette 1 or 21 can be confirmed from the outside of the fixing support 5, it is desired by a pathologist or clinician. The sliced surface can be sliced and the automation of the work process can be advanced by enabling the presentation of a consistent examination surface (thin sliced plane) in the specimen preparation process from acceptance of the examination of the biopsy sample.
[0042]
Further fixing the support agent biopsies of the invention, when the feed transfer to the pathology laboratory or the like accommodated in the capsule 8, the prior art of fixing the support agent, easily gelled by a gelling agent, because a strong cohesive force total capsules during the transfer feed can maintain the sliced plane for orientation of the biopsy sample 3 hardly changes in the embedding cassette 1 also vibrates in the initial state. In addition, as a fixing support for a biopsy sample comprising a modified derivative of glucomannan, an acetylated product of oxidized glucomannan, an esterified product of a carboxyl group of oxidized glucomannan and an alcohol , or glucomannan carboxylic acid (oxidized) When neutralized products of glucomannan) are used, they are superior to the conventional fixing support in that they have transparency and are most difficult to be dyed by a dye.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a longitudinal sectional view showing a state in which a biopsy sample is fixedly supported using the fixing support of the present invention.
FIG. 2 is a longitudinal sectional view showing a work state next to the state shown in FIG.
FIG. 3 is a longitudinal sectional view when a biopsy sample is fixedly supported by another embodiment of FIG. 1 using the fixing support of the present invention.
FIG. 4 is a longitudinal sectional view when a biopsy sample is fixedly supported in an embodiment different from FIGS.
FIG. 5 is a longitudinal sectional view when a biopsy sample is fixedly supported in another embodiment different from FIGS.
FIG. 6 is a longitudinal sectional view when a biopsy sample is fixedly supported in another embodiment different from FIGS.
FIG. 7 is a longitudinal sectional view when a biopsy sample is fixedly supported in another embodiment different from FIGS.
FIG. 8 is a longitudinal sectional view when a biopsy sample is fixedly supported in another embodiment different from FIGS.
FIG. 9 is a longitudinal sectional view when another biopsy sample (collected cell sample) is fixedly supported in another embodiment different from FIGS.
[Explanation of symbols]
1 Embedding cassette 3 Biopsy sample 5 Fixing support 7 Gelling agent

Claims

Glucomannan oxidized dissolved with an oxidizing agent to fine powder konjac tubers were filtered purified glucomannan oxide is modified derivatives of glucomannan recovered by precipitation aggregation and precipitation in alcohol, dried after the glucomannan oxide It is a modified derivative of glucomannan obtained by acetyl ester reaction between pyridine and acetic anhydride ( including glacial acetic acid ), and recovery, washing and purification in water. A fixing support for biopsy samples consisting of oxidized glucomannan acetylated product .

Glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac meal powder with an oxidizing agent is recovered by precipitation aggregation and precipitation in alcohol, and is collected in an alkali metal ion or ammonium ion hydroxide solution represented by an aqueous sodium hydroxide solution. Biopsy sample consisting of sodium glucomannan carboxylate (neutralized with alkali metal ion or ammonium ion M ⁺ ), which is a modified derivative of glucomannan, obtained by neutralizing and dissolving with Fixing support.

The fine powder konjac tubers oxidized dissolved filtered through oxidizing agent, purified glucomannan oxide deposited coagulating sedimentation washing recovered in alcohol (oxide Glucomannan: Glucomannan carboxylic acid) to induce purified, dried carboxyl group portion and alcohol and ester reaction precipitated, washed and collected in water by a modified derivatives and is purified oxide glucomannan ester le product of glucomannan purified prepared, i.e., a portion of the carboxyl groups of the glucomannan carboxylic acid A fixing support for a biopsy sample comprising an esterified product with an alcohol .

The a fine powder konjac potato glucomannan oxides oxidized dissolved with an oxidizing agent is filtered, the glucomannan oxide purified induced recovered by precipitation aggregation and precipitation in an alcohol, after drying the glucomannan oxide oxidized without remaining alcohol group of pyridine and acetic anhydride (including glacial acetic acid) system and by acetyl esterification reaction is a modified derivative of glucomannan produced collected, washed and purified with water oxidation glucomannan acetyl Le of in A method for producing a fixing support for a biopsy sample comprising a chemical.

The fine powder konjac tubers oxidized dissolved filtered through oxidizing agent, purified glucomannan oxide deposited coagulating sedimentation washing recovered in alcohol: (oxidative glucomannan glucomannan carboxylic acid) was purified induction, after drying the carboxyl group moiety and alcohol - Le system and esters reacted purified oxidized glucomannan ester is modified derivatives of glucomannan purified prepared precipitate, washing and recovery in water, i.e., partial and alcohol of the carboxyl groups of glucomannan carboxylic acid and A method for producing a fixing support for a biopsy sample comprising the above ester compound .

Glucomannan obtained by oxidizing and dissolving konjac meal powder with an oxidizing agent is recovered by precipitation aggregation and precipitation in alcohol, and is collected in an alkali metal ion or ammonium ion hydroxide solution represented by an aqueous sodium hydroxide solution. Biopsy sample consisting of sodium glucomannan carboxylate (neutralized with alkali metal ion or ammonium ion M ⁺ ), which is a modified derivative of glucomannan, obtained by neutralizing and dissolving with Manufacturing method of fixing support.