JP4159629B2

JP4159629B2 - Digalactosylceramide derivatives

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Publication number: JP4159629B2
Application number: JP11919597A
Authority: JP
Inventors: 和孝中本
Original assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Current assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 1997-05-09
Filing date: 1997-05-09
Publication date: 2008-10-01
Anticipated expiration: 2017-05-09
Also published as: JPH10310596A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、医薬などとして有用な、β-ジガラクトシルセラミド誘導体の新規化合物、新規中間体および工業的に優れた新規製造方法に関する。
【０００２】
【従来技術】
天然由来のジガラクトシルセラミド(Gala1-4Galβ1-1Ceramide)は、下記化学式で表される側鎖が異なる３化合物の混合物であり、スーパー抗原(Staphylococcal enterotoxin B、以下 SEB)が、ヒト腎近位尿細管培養細胞に特異的に結合する際の結合部位であることが知られている［Glycobiology,5(3),327-333(1995).］。
【０００３】
【化１０】

【０００４】
ジガラクトシルセラミドはSEBと結合することから、SEBのT細胞活性化反応に何らかの影響を与えていることが推測され、スーパー抗原のT細胞阻害、サイトカインの産生抑制、あるいは好中球の増殖抑制等の薬理効果が期待されている。
さらに具体的には、例えば、以下の医薬用途等に有用である。
【０００５】
(1) 抗癌剤(抗癌、癌転移抑制)
最近、Phosphokinase C translocationをブロックすることによって、PhospholipaseA2を阻害し、抗癌活性を発現すると言われている物質が見つかっている(Eur.J.Pharmacol.Vol.294:555-563,1995.)。すでに、staurosporineやsphingosineなどはPhosphokinase Cを阻害することによって、carcinoma cell lineの浸潤や癌細胞のlaminineやcollagenへの接着を阻害することが知られている。これらのことはスフィンゴ糖脂質の癌転移抑制作用の可能性を示唆するものである。
糖脂質やスフィンゴミエリンの前駆物質あるいは代謝産物であるセラミドは、生体内で修飾分解され、スフィンゴシン、セラミド-1-リン酸、スフィンゴシン-1-リン酸等に変換されていく。これらの誘導体は細胞の分化、増殖に機能的に関与していることが示されつつある(薬学雑誌、Vol.114,655-668,1994.)。TNF-αによるアポトーシスの誘導のセカンドメッセンジャーとしてのセラミドの可能性が強く示唆されている(Science,Vol.259,1769,1993.)。スフィンゴ糖脂質がこれらの作用に代わる可能性により、抗癌剤としての有用性が期待される。
【０００６】
(2) 免疫抑制剤(臓器移植など)
Isalia sinclairii（ATCC No.24400）から発見されたスフィンゴシン類似構造を持つISP-1はサイクロスポリンAよりも強力な免疫抑制作用を示すことが示されている。その作用機序はIL-2産生経路を阻害するサイクロスポリンAとは異なり、細胞障害性T細胞のアポトーシスの誘導を起こすと考えられている。このアポトーシスの誘導はISP-1がスフィンゴ脂質生合成経路のセリンパルミトイルトランスフェラーゼを阻害することによって、スフィンゴ脂質を減少させた結果であると考えられている(生化学、Vol.68,444-452,1996.)。スフィンゴ糖脂質がこのスフィンゴ脂質生合成経路の調節に関与している可能性により、免疫抑制作用が期待される。
【０００７】
(3) 抗HIV剤
Galactosylceramide(GalCer)は神経ならびに結腸上皮のCD14negative細胞においてはhuman immunodeficiency virus(HIV)の侵入時のリセプターとなっている。GalCerは、HIV-1 surface envelope glycoprotein gp120のV3 regionを認識することが知られている。このV3 loopはHIV-1によるFusion processに重要な役割を担っている。
GalCerの可溶性アナローグ[CA52(N15)]が合成され、その抗HIV作用が検討された(J.Biol.Chem.Vol.272,7245-7252,1997.)。CA52(N15)はGalCerを発現するCD4 positive,negative細胞のいずれにおいてもHIVによる細胞fusionとHIVの侵入を阻害した。この結果はスフィンゴ糖脂質の抗HIV作用の可能性を示すものである。
【０００８】
(4) 抗毒素作用(Staphylococcus enterotoxin-B,Velo toxinなど)
Digalactosylceramide(GalGalCer)はヒト腎の近位尿細管においてStaphylococcus enterotoxin-B(SEB)のリセプターであることが示された(Glycobiology Vol,5;327-333,1995.)。このことはDigalactosylceramideならびにそのアナローグを可溶性リセプターとして使用すれば、Staphylococcus aureus感染にともなって遊離されるSEBの中和剤と成り得る可能性を示唆するものである。
また、スフィンゴ糖脂質Globotriaosylceramide(Gb3)はVerotoxinに結合することが知られており、母乳中に豊富に含まれて、乳児の感染に伴うVerotoxinによる下痢に対して防御的な作用を持つとの仮説も立てられている(J.Infect.Vol.166:832-836,1992.)。このようなことからGb3を含むスフィンゴ糖脂質はVerotoxinの有効な中和剤となり得る。
【０００９】
(5) ゴーシェ病
グルコシルセラミドの蓄積症であるゴーシェ病は、リソゾーム中に存在するグルコシルセラミドの分解酵素であるグルコシルセレブロシダーゼ遺伝子の変異によって発症する。この疾患では肝臓およびひ臓の肥大が主要な症状として現れるが病態によっては神経症状を呈する(ファルマシア、Vol.32:1365-1368,1996.)。従って、特異的なグルコシルセラミドの合成阻害剤はこの疾患に有効である。
【００１０】
【本発明が解決しようとする問題点】
しかし、従来は天然物からの抽出する以外にジガラクトシルセラミドを得る方法はなく、安価かつ大量に得ることはできなかった。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記問題点の改善を目指して鋭意研究を進めてきた。その結果、下記化学反応式で表される工程に従い、保護二糖類活性体(I)とアルコール誘導体(II)とを反応させて保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)とし、次いで脱保護することにより、目的とするβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)が、安価かつ大量に製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
【化１１】

【００１３】
（式中、Ｘ、R¹、Ｒ、R'は前記と同様の意味を有する。）
さらに本発明により、ジガラクトシルセラミドの新規誘導体も得ることができ、より優れた薬理活性と安全性を期待することができる。従って本発明は、医薬として優れた新規誘導体を提供するものであり、さらにその製造にあたり有用な新規中間体を提供するものである。
【００１４】
続いて本発明について、以下に詳述する。
まず、本発明にかかる保護二糖類活性体(I)は下記一般式で表される。
【００１５】
【化１２】

【００１６】
式中、R¹は水酸基の保護基を、Ｘはハロゲン原子をそれぞれ意味する。
ここで水酸基の保護基とは、通常有機合成において用いられる水酸基の保護基であれば限定されないが、具体的には、例えばアセチル基、ベンゾイル基等のアシル基、メチル基、ベンジル基等のエーテル残基等を挙げることができる。また２つのR¹がジメチルケタール(イソプロピリデン)基またはフェニルアセタール(ベンジリデン)基等の環状エーテルを形成してもよい。さらにそれぞれのR¹は、２種類以上の相異なる基であってもよい。
次にハロゲン原子とは具体的には、塩素原子、臭素原子、フッ素原子を意味し、フッ素原子がより好ましい。
なお、本発明にかかる保護二糖類活性体(I)には、２つのガラクトース残基間の(1→4)グリコシド結合において、α結合とβ結合の２種類の立体異性体が存在するが限定されず、いずれか一方の異性体あるいは混合物であってもよいが、α結合がより好ましい。
保護二糖類活性体(I)としてより具体的には、例えば次の化合物を挙げることができるが、これらには限定されない。
(1) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β/α-D-ガラクトピラノシル・フルオリド
(2) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β/α-D-ガラクトピラノシル・ブロミド
(3) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β/α-D-ガラクトピラノシル・クロリド
(4) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-ベンゾイル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンゾイル-β/α-D-ガラクトピラノシル・フルオリド
(5) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-ベンジル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンジル-β/α-D-ガラクトピラノシル・フルオリド
【００１７】
次に、アルコール誘導体(II)は一般式ＲＯＨで表される。
式中Ｒは下記一般式で表される基
【００１８】
【化１３】

【００１９】
（式中、R²はペンタデカニル基、ヘプタデカニル基または8-ヘプタデセニル基を、R³は水酸基の保護基を意味する。）
または下記一般式で表される基
【００２０】
【化１４】

【００２１】
（式中、R²、R³は前記と同様の意味を有する。）を意味する。
ここでR³の定義における水酸基の保護基とは、R¹における定義と同様である。
本発明にかかるアルコール誘導体(II)は、分子内に二重結合を有しており、(E)あるいは(Z)幾何異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれか一方あるいは混合物でもよいが、(E)体がより好ましい。さらにアルコール誘導体(II)は分子内に不斉炭素原子を有しており、(R)あるいは(S)光学異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれか一方あるいはラセミ体でもよいが、(2S,3R)異性体がより好ましい。
アルコール誘導体(II)としてより具体的には、例えば次の化合物を挙げることができるが、これらには限定されない。
(1) 1-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(2) 1-O-アセチル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(3) 1-O-ベンジル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(4) 3-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(5) 3-O-アセチル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(6) 3-O-ベンジル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
【００２２】
次に、保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)は、下記一般式で表される。本発明にかかる保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)は新規化合物であり、本発明において中間体として重要である。
【００２３】
【化１５】

【００２４】
式中、R¹、Ｒはそれぞれ前記と同様の意味を有する。
本発明にかかる保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)にも、２つのガラクトース残基間の(1→4)グリコシド結合において、α結合とβ結合の２種類の立体異性体が存在するが限定されず、いずれか一方の異性体あるいは混合物であってもよいが、α結合がより好ましい。また保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)は分子内に二重結合を有しており、(E)あるいは(Z)幾何異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれでもよいが、(E)がより好ましい。さらに保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)は分子内に不斉炭素原子を有しており、(R)あるいは(S)光学異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれでもあるいはラセミ体でもよいが、(2S,3R)異性体がより好ましい。
保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)としてより具体的には、例えば次の化合物を挙げることができるが、これらには限定されない。なおここでスフィンゴシンとは、R²がペンタデカニル基、ヘプタデカニル基または8-ヘプタデセニル基のいずれかである、2-アミノ-4-オクタデセン-1,3-ジオールを意味する。
(1) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-1-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(2) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-ベンゾイル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-1-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(3) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-ベンジル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-1-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(4) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-3-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(5) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-ベンゾイル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンゾイル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-3-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(6) O-(2',3',4',6'-テトラ-O-ベンジル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-3-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
【００２５】
次に、β-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)は、下記一般式で表される。
【００２６】
【化１６】

【００２７】
式中R'は下記一般式で表される基
【００２８】
【化１７】

【００２９】
（式中、R²は前記と同様の意味を有する。）または下記一般式で表される基
【００３０】
【化１８】

【００３１】
（式中、R²は前記と同様の意味を有する。）を意味する。
本発明にかかるβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)にも、２つのガラクトース残基間の(1→4)グリコシド結合において、α結合とβ結合の２種類の立体異性体が存在するが限定されず、いずれか一方の異性体あるいは混合物であってもよいが、α結合がより好ましい。またβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)も分子内に二重結合を有しており、(E)あるいは(Z)幾何異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれでもよいが、(E)がより好ましい。さらにβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)は分子内に不斉炭素原子を有しており、(R)あるいは(S)光学異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれでもあるいはラセミ体でもよいが、(2S,3R)異性体がより好ましい。
β-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)としてより具体的には、例えば次の化合物を挙げることができる（スフィンゴシンの定義は前記と同様である。）。
(1) O-(α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-O-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
(2) O-(α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-O-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→1)-2-N-パルミトイルスフィンゴシン
【００３２】
ここで、本発明にかかるβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(V)は下記一般式で表される新規化合物である。
【００３３】
【化１９】

【００３４】
式中、R ²はペンタデカニル基、ヘプタデカニル基または8-ヘプタデセニル基を、R³は水酸基の保護基を意味する。本発明にかかるβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(V)にも、２つのガラクトース残基間の(1→4)グリコシド結合において、α結合とβ結合の２種類の立体異性体が存在するが限定されず、いずれか一方の異性体あるいは混合物であってもよいが、α結合がより好ましい。β-ジガラクトシルセラミド誘導体(V)も分子内に二重結合を有しており、(E)あるいは(Z)幾何異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれでもよいが、(E)がより好ましい。さらにβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(V)は分子内に不斉炭素原子を有しており、(R)あるいは(S)光学異性体が存在するが、本発明においては限定されずいずれでもあるいはラセミ体でもよいが、(2S,3R)異性体がより好ましい。β-ジガラクトシルセラミド誘導体(V)としてより具体的には、例えば次の化合物を挙げることができる。
(1) O-(α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-O-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-2-N-パルミトイル-4-オクタデセン-1,3-ジオール
(2) O-(α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-O-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-2-N-ステアロイル-4-オクタデセン-1,3-ジオール
(3) O-(α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-O-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-2-N-オレオイル-4-オクタデセン-1,3-ジオール
【００３５】
続いて本発明にかかる製造方法について詳述する。
本発明においては、保護二糖類活性体(I)と一般式ＲＯＨで表されるアルコール誘導体(II)とを反応させて保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)を得る工程(工程１)、と保護β-ジガラクトシルセラミド誘導体(III)を脱保護し目的とするβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)を得る工程(工程２)からなる（前記化学反応式[化11]参照）。
【００３６】
(1) 工程１
本工程はグリコシド合成の定法により行うことができるが、より具体的には、例えば Tetrahedron Lett.,27,4753-4756(1986). 等に記載された方法に従って行うことができる。
【００３７】
(2) 工程２
本工程は、通常有機合成において用いられる保護基の脱離法、例えば加水分解、接触還元等により行うことができる。
【００３８】
次に、本発明にかかるβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(IV)あるいはβ-ジガラクトシルセラミド誘導体(V)は医薬として有用であるが、より具体的には、例えば以下の適応症を挙げることができるが、それらには限定されない。
(1) 抗癌剤(抗癌、癌転移抑制)
(2) 免疫抑制剤(臓器移植など)
(3) 抗HIV剤
(4) 抗毒素作用(Staphylococcus enterotoxin-B,Velo toxinなど)
(5) ゴーシェ病
【００３９】
続いて本発明を具体的に説明するため、以下に製造例および実施例を掲げるが、本発明がこれらに限定されないことは言うまでもない。
【製造例】
【００４０】
製造例１ O-(2',3',4',6'- テトラ -O- アセチル - α -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 4)-2,3,6- トリ -O- アセチル - β / α -D- ガラクトピラノースの合成
【００４１】
【化２０】

【００４２】
（式中Acは、アセチル基を意味する。）
無水酢酸(2.5ml)とピリジン(5.0ml)の混合物を氷水中で冷却し、ここに 4-O-α-D-ガラクトピラノシル-D-ガラクトピラノース 500mg(1.46mmol)と4-ジメチルアミノピリジン(DMAP, 1mg)を加え室温で17時間攪拌した。その後、反応溶媒を減圧下留去した。残査を氷水で洗浄後、塩化メチレン(100ml)に溶解し、2%クエン酸水溶液(20ml)と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(20ml)で洗浄後、乾燥し溶媒を減圧下留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で精製して、無色アモルファス状の標題化合物 970mg(α/β=1:1）を得た。（収率； 98%）
【００４３】
[α]_D ²⁸； +124.2°(c1.0, CHCl₃)
FAB-MS； [M+H]+ m/e 676、[M+Na]+ m/e701.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 6.38(d,1H,J=3.7Hz)、5.71(d,1H,J=8.1Hz)、5.59(dd,1H,J=1.3Hz,3.3Hz)、5.57(dd,1H,J=1.3Hz,3.3Hz)、5.41(dd,1H,J=10.8Hz,3.6Hz)、5.40(dd,1H,J=10.8Hz,7.6Hz)、5.38(dd,1H,J=10.8Hz,3.6Hz)、5.32(dd,1H,J=7.9Hz,10.6Hz)、5.23(dd,1H,J=7.5Hz,11.1Hz)、5.22(dd,1H,J=7.5Hz,11.0Hz)、5.02(d,1H,J=3.7Hz)、5.00(d,1H,J=3.7Hz)、4.87(dd,1H,J=2.6Hz,10.6Hz)、4.52(br-t,2H,J=7.0Hz)、4.41(dd,1H,J=7.0Hz,11.4Hz)、4.35(dd,1H,J=6.6Hz,11.0Hz)、4.22(br-t,1H,J=7.0Hz)、4.20(br-d,1H,J=2.8Hz)、4.17-4.10(m,7H)、4.07(dd,1H,J=11.2Hz,6.4Hz)、3.93(br-t,1H,J=7.0Hz)、2.16,2.15(6s,3H)、2.14(6s,3H)、2.12-2.10(12s,3H)、2.07(6s,3H)、2.05-2.03(12s,3H)、2.00(6s,3H).
【００４４】
製造例２ O-(2',3',4',6'- テトラ -O- アセチル - α -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 4)-2,3,6- トリ -O- アセチル - β / α -D- ガラクトピラノシル・フルオリドの合成
【００４５】
【化２１】

【００４６】
前製造例で得たO-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β/α-D-ガラクトピラノース 500mg(0.74mmol)のジメチルホルムアミド(5ml)溶液に、ヒドラジンアセテート 81mg(0.88mmol)を加え、50℃で2時間攪拌した。その後減圧下溶媒を留去し、得られた残査を酢酸エチル(100ml)で希釈した。有機層を水(20ml)、次いで飽和食塩水(20ml)で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で精製して、無色アモルファス状の1-ヒドロキシル体 420mgを得た。（収率； 90%）
続いて、得られた1-ヒドロキシル体 420mg(0.66mmol)を1,2-ジメトキシエタン(4.2ml)に溶解し、-30℃に冷却した。ここにすばやくジエチルアミノサルファートリフルオリド[DAST, 210ml(1.6mmol)]を加え、室温で50分攪拌した。その後、再び-30℃に冷却し、メタノール(0.1ml)を加え、その温度で数分間攪拌した。その後、減圧下溶媒を留去し、残査を塩化メチレン(100ml)で希釈した。これを飽和炭酸水素ナトリウム(20ml)で洗浄し、乾燥後、溶媒を減圧下留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で精製して、無色アモルファス状の標題化合物 350mg(α/β=2:1)を得た。（収率； 83%）
【００４７】
[α]_D ²⁸； +129.5°(c1.1, CHCl₃)
FAB-MS； [M+H]+ m/e 637、[M+Na]+ m/e 661.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 5.81(dd,1H,J=54.4Hz,2.4Hz)、5.72(dd,1H.J=52.0Hz,4.0Hz)、5.56(dd,1H,J=1.2Hz,3.2Hz)、5.36(dd,2H,J=10.8Hz,3.2Hz)、5.26(dd,2H,J=10.4Hz,7.2Hz)、5.22(br-d,1H,J=3.6Hz)、5.07(d,1H,J=3.6Hz)、5.01(d,1H,J=3.6Hz)、4.50(br-t,1H,J=7.6Hz)、4.37(dd,1H,J=10.8Hz,7.2Hz)、4.29(br-t,1H,J=6.8Hz)、4.17-4.09(m,3H)、2.14-2.00(14s,3H).
【００４８】
製造例３ (2S,3R,4E)-1-O-tert- ブチルジフェニルシリル -2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００４９】
【化２２】

【００５０】
（式中TBDPSは、tert-ブチルジフェニルシリル基を意味する。）
(2S,3R,4E)-N-パルミトイルスフィンゴシン 280mg(0.52mmol)のジメチルホルムアミド(3ml)溶液に、tert-ブチルクロロジフェニルシラン 140ml(0.55mmol)とイミダゾール 89mg(1.3mmol)を加え、60℃で6時間攪拌した。その後、反応混合物を室温まで放冷後、直接シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精製して、無色透明油状の標題化合物 234mgを得た。（収率； 58%）
【００５１】
[α]_D ²⁰； +7.5°(c1.1, CHCl₃)
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 7.66-7.60(m,4H)、7.49-7.38(m,6H)、6.11(d,1H,J=7.6Hz)、5.78(dt,1H,J=15.2Hz,6.8Hz)、5.49(dd,1H,J=15.2Hz,6.0Hz)、4.21(m,1H)、3.98(ddd,1H,J=12.0Hz,7.6Hz,4.0Hz)、3.97(dd,1H,J=12.8Hz,4.0Hz)、3.78(dd,1H,J=10.4Hz,3.6Hz)、3.56(d,1H,J=8.0Hz)、2.16(t,2H,J=7.6Hz)、2.05(q,2H,J=6.8Hz)、1.61(m,2H)、1.30-1.26(m,46H)、1.09(s,9H)、0.90(t,6H,J=6.8Hz).
【００５２】
製造例４ (2S,3R,4E)-3-O- ベンゾイル -1-O-tert- ブチルジフェニルシリル -2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００５３】
【化２３】

【００５４】
（式中Bzは、ベンゾル基を意味する。）
前製造例で得た(2S,3R,4E)-1-O-tert-ブチルジフェニルシリル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン 234mg(0.30mmol)のピリジン(2ml)溶液を0℃に冷却し、ここに塩化ベンゾイル 42ml(0.36mmol)を加え、その温度で30分間攪拌した。その後、メタノール(2ml)を加えて5分間攪拌し、酢酸エチル(50ml)で希釈した。これを1N-塩酸水溶液(10ml)、飽和炭酸水素ナトリウム(10ml)、次いで飽和食塩水(10ml)で洗浄した。そして無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下溶媒を留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で精製して、無色透明油状の標題化合物 208mgを得た。（収率； 79%）
【００５５】
[α]_D ²⁰； +11.3°(c1.1, CHCl₃)
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 7.98(m,2H)、7.62(m,2H)、7.55(m,2H)、7.43-7.29(m,7H)、7.20(m,2H)、5.88(dt,1H,J=15.2Hz,6.8Hz)、5.74(d,1H,J=9.2Hz)、5.66(t,1H,J=7.6Hz)、5.50(dd,1H,J=15.2Hz,7.6Hz)、4.44(ddd,1H,J=12.8Hz,9.2Hz,3.6Hz)、3.89(dd,1H,J=10.4Hz,3.2Hz)、3.71(dd,1H,J=10.4Hz,4.0Hz)、2.10(td,2H,J=7.2Hz,2.8Hz)、2.01(q,2H,J=6.8Hz)、1.59(t,2H,J=7.2Hz)、1.30-1.23(m,46H)、1.05(s,9H)、0.88(t,6H).
【００５６】
製造例５ (2S,3R,4E)-1-O- ベンゾイル -2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００５７】
【化２４】

【００５８】
前製造例で得た(2S,3R,4E)-3-O-ベンゾイル-1-O-tert-ブチルジフェニルシリル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン 208mg(0.24mmol)のテトラヒドロフラン(2ml)溶液を0℃に冷却し、ここに 1.0M-(n-テトラブチル)アンモニウムフルオリド／テトラヒドロフラン溶液(0.2ml, 0.71mmol)を加え、室温で1時間攪拌した。その後、反応混合物を塩化メチレン(50ml)で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液(10ml)、次いで飽和食塩水(10ml)で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール系）で精製して、白色鑞状の標題化合物 102mgを得た。（収率； 67%）
【００５９】
[α]_D ²⁰； -3.0°(c1.0, CHCl₃)
FAB-MS； [M+Na]+ m/e 664.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 8.02(m,2H)、7.58(m,1H)、7.45(m,2H)、5.93(d,1H,J=7.6Hz)、5.77(dt,1H,J=15.2Hz,7.6Hz)、5.52(dd,1H,15.2Hz,6.4Hz)、4.57(dd,1H,J=12.8Hz,8.4Hz)、4.43-4.38(m,2H)、4.26(dt,1H,J=6.4Hz,5.2Hz)、2.81(d,1H,J=5.2Hz)、2.19(t,2H,J=7.2Hz)、2.01(q,2H,J=7.2Hz)、1.60-1.56(m,2H)、1.32-1.22(m,46H)、0.88(t,6H,J=6.4Hz).
【００６０】
製造例６ (2S,3R,4E)-1-O- トリチル -2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００６１】
【化２５】

【００６２】
（式中Trは、トリチル基を意味する。）
(2S,3R,4E)-N-パルミトイルスフィンゴシン 280mg(0.47mmol)をピリジン(5ml)に溶解し、塩化トリチル 260mg(0.93mmol)を加え、室温で24時間攪拌した。その後、さらに50℃で4時間攪拌した。反応混合物を室温まで放冷後、減圧下溶媒を溜去した。残査をクロロホルム(100ml)で希釈し、水(20ml)で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下溶媒を溜去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で精製して、無色透明油状の標題化合物 335mgを得た。（収率； 92%）
【００６３】
[α]_D ²⁰； -0.98°(c1.0, CHCl₃)
FAB-MS； [M+Na]+ m/e 802.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 7.41-7.39(m,5H)、7.33-7.29(m,5H)、7.27-7.23(m,5H)、6.09(d,1H,J=8.1Hz)、5.63(dt,1H,J=6.6Hz,15.4Hz)、5.25(dd,1H,J=6.2Hz,15.4Hz)、4.20-4.16(m,1H)、4.06(ddd,1H,J=4.0Hz,8.0Hz,12.0Hz)、3.42(d,1H,J=8.0Hz)、3.39(dd,1H,J=3.6Hz,9.6Hz)、3.30(dd,1H,J=4.0Hz,10.0Hz)、2.20(t,2H,J=7.6Hz)、1.91(m,2H)、1.64(m,2H)、1.31-1.26(m,46H)、0.88(t,6H,J=6.4Hz).
【００６４】
製造例７ (2S,3R,4E)-3-O- ベンゾイル -1-O- トリチル -2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００６５】
【化２６】

【００６６】
前製造例で得た(2S,3R,4E)-1-O-トリチル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン 321mg(0.41mmol)をピリジン(2ml)に溶解し、氷水冷却下、攪拌した。この溶液にDMAP 40mgと塩化ベンゾイル 95ml(0.82mmol)を加え、室温で24時間攪拌した。更に55℃で1時間攪拌した。反応混合物を室温まで放冷後、酢酸エチル(50ml)で希釈した。これを水(20ml)で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で精製して、無色透明油状の標題化合物 180mgを得た。（収率； 50%）
【００６７】
[α]_D ²³； +7.0°(c1.0, CHCl₃)
FAB-MS； [M+Na]+ m/e 906.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 7.95-7.92(m,2H)、7.57-7.53(m,2H)、7.42-7.36(m,7H)、7.31-7.26(m,5H)、7.23-7.14(m,5H)、5.87(dt,1H,J=6.8Hz,15.2Hz)、5.71(t,1H,J=7.2Hz)、5.67(d,1H,J=9.2Hz)、5.45(dd,1H,J=15.6Hz,8.0Hz)、4.49(ddd,1H,J=3.6Hz,7.2Hz,11.2Hz)、3.45(dd,H,J=3.6Hz,9.6Hz)、3.19(dd,1H,J=4.4Hz,10.0Hz)、2.10(t,2H,J=7.6Hz)、1.99(q,2H,J=6.8Hz)、1.57(m,2H)、1.30-1.23(m,46H)、0.88(t,6H,J=6.0Hz).
【００６８】
製造例８ (2S,3R,4E)-3-O- ベンゾイル -2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００６９】
【化２７】

【００７０】
前製造例で得た(2S,3R,4E)-3-O-ベンゾイル-1-O-トリチル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン 180mg(0.20mmol)を塩化メチレン／メタノール(2:1,v/v)混合溶液 (8.3ml)に溶解し、パラトルエンスルホン酸・１水和物 18mgを加え、室温で24時間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール系）で精製して、白色鑞状の標題化合物 78mgを得た。（収率； 59%）
【００７１】
[α]_D ²³； +16.5°(c1.0, CHCl₃)
FAB-MS； [M+Na]+ m/e 664.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 8.05-8.03(m,2H)、7.62-7.58(m,1H)、7.48-7.44(m,2H)、6.10(br-d,1H,J=8.8Hz)、5.86(dt,1H,J=14.4Hz,6.8Hz)、5.61(dd,1H,J=7.6Hz,14.4Hz)、5.54(t,1H,J=7.6Hz)、4.29(m,1H)、3.75(dd,1H,J=3.6Hz,12.0Hz)、3.70(dd,1H,J=2.8Hz,11.6Hz)、2.22-2.17(m,2H)、2.08-2.02(m,2H)、1.64-1.58(m,2H)、1.38-1.20(m,46H)、0.90(m,6H).
【００７２】
【実施例】
実施例１ O-(2',3',4',6'- テトラ -O- アセチル - α -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 4)-2,3,6- トリ -O- アセチル - β -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 3)-(2S,3R,4E)-1-O- ベンゾイル 2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００７３】
【化２８】

【００７４】
過塩素酸銀 14mg(0.072mmol)、塩化錫(II) 14mg(0.069mmol)および粉末状モレキュラーシーブス4A 300mgを塩化メチレン(1ml)に溶解・縣濁し、0℃で攪拌した。ここに製造例２で得たO-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β/α-D-ガラクトピラノシル・フルオリド 20mg(0.031mmol)の塩化メチレン(2ml)溶液を加え攪拌した。10分後、製造例６で得た(2S,3R,4E)-1-O-トリチル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン 40mg(0.062mmol)の塩化メチレン(2ml)溶液を加え、17時間攪拌した。反応混合物を塩化メチレン(100ml)で希釈し、セライトを通して濾過した。濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(10ml)で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残査をシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で6回展開して精製し、無色透明油状の標題化合物 5mgを得た。（収率； 12%）
このものを精製することなく次反応に用いた。
【００７５】
実施例２ O-( α -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 4)-O- β -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 3)-(2S,3R,4E)-2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００７６】
【化２９】

【００７７】
前実施例で得たO-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→3)-(2S,3R,4E)-1-O-ベンゾイル2-N-パルミトイルスフィンゴシン 5.0mg(4.0mmol)をメタノール(0.25ml)とテトラヒドロフラン(0.25ml)の混合溶媒に溶解し、28%ナトリウムメトキシド／メタノール溶液 7.4ml(38.5mmol)を加え、室温で90分間攪拌した。反応溶液をメタノール(8ml)で希釈し、Dowex50W-8H(H⁺型)樹脂で中和した。樹脂を濾別し、濾液を減圧下溜去した。得られた残査を高分子ゲルSephadex LH-20カラムクロマトグラフィー（メタノール）で精製して、白色鑞状の標題化合物 2.5mgを得た。（収率； 72%）
【００７８】
[α]_D ²¹； +31.0°[c0.11, CHCl₃/MeOH(1:1)]
FAB-MS； [M+Na]+ m/e884,[M+K]+ m/e 900.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 5.68(dt,1H,J=15.2Hz,7.6Hz)、5.44(dd,1H,J=15.6Hz,7.6Hz)、4.97(d,1H,J=3.6Hz)、4.27(d,1H,J=6.8Hz)、4.28-4.25(m,1H)、4.18(dd,1H,J=10.4Hz,5.2Hz)、4.06(t,1H,J=7.6Hz)、3.99(br-d,1H,J=3.2Hz)、3.95(m,1H)、3.91(br-d,1H,J=3.2Hz)、3.83-3.47(m,10H)、2.17(t,2H,J=7.6Hz)、2.04(q,2H,J=7.6Hz)、1.58(m,2H)、1.40-1.28(m,46H)、0.89(t,6H,J=6.8Hz).
【００７９】
実施例３ O-(2',3',4',6'- テトラ -O- アセチル - α -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 4)-2,3,6- トリ -O- アセチル - β -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 1)-(2S,3R,4E)-3-O- ベンゾイル 2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００８０】
【化３０】

【００８１】
過塩素酸銀 14mg(0.072mmol)、塩化錫(II) 14mg(0.069mmol)および粉末状モレキュラーシーブス4A300mgを塩化メチレン(1ml)に溶解・縣濁し、0℃で攪拌した。ここに製造例２で得たO-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β/α-D-ガラクトピラノシル・フルオリド 20mg(0.031mmol)の塩化メチレン(2ml)溶液を加え攪拌した。10分後、製造例８で得た(2S,3R,4E)-3-O-ベンゾイル-2-N-パルミトイルスフィンゴシン 40mg(0.062mmol)の塩化メチレン(2ml)溶液を加え、18時間攪拌した。反応混合物を塩化メチレン(100ml)で希釈し、セライトを通して濾過した。濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(10ml)で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残査をシリカゲル薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル系）で6回展開して精製し、無色透明油状の標題化合物 8mgを得た。（収率； 17%）
【００８２】
[α]_D ²³； +62.2°(c0.49, CHCl₃)
FAB-MS； [M+Na]+ m/e 1283.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 8.04-8.02(m,2H)、7.58-7.53(m,1H)、7.46-7.42(m,2H)、5.90(dt,1H,J=15.4Hz,6.8Hz)、5.82(d,1H,J=9.5Hz)、5.59(dd,1H,J=1.3Hz,3.4Hz)、5.56(br-t,1H,J=7.0Hz)、5.48(dd,1H,J=7.1Hz,15.2Hz)、5.39(dd,1H,J=3.3Hz,11.0Hz)、5.22(br-d,1H,J=0.7Hz)、5.20(d,1H,J=7.6Hz,10.8Hz)、5.17(dd,1H,J=7.6Hz,10.8Hz)、5.02(d,1H,J=3.6Hz)、4.83(dd,1H,J=10.6Hz,2.8Hz)、4.50(m,2H)、4.44(d,1H,J=7.6Hz)、4.28(dd,1H,J=11.4Hz,7.0Hz)、4.14-4.01(m,4H)、3.74(br-t,1H,J=6.8Hz)、3.70(dd,1H,J=4.4Hz,10.4Hz)、2.15-2.08(m,2H)、2.04-1.97(m,2H)、1.59(m,2H)、1.30-1.23(m,46H)、0.88(t,6H,J=6.4Hz).
【００８３】
実施例４ O-(a-D- ガラクトピラノシル )-(1 → 4)-O- β -D- ガラクトピラノシル )-(1 → 1)-(2S,3R,4E)-2-N- パルミトイルスフィンゴシンの合成
【００８４】
【化３１】

【００８５】
前実施例で得たO-(2',3',4',6'-テトラ-O-アセチル-α-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-2,3,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシル)-(1→1)-(2S,3R,4E)-3-O-ベンゾイル2-N-パルミトイルスフィンゴシン 5.28mg(4.19mmol)をメタノール(0.35ml)／テトラヒドロフラン(0.35ml)混合溶媒に溶解し、28%ナトリウムメトキシド／メタノール溶液 7.8ml(40.2mmol)を加え、室温で90分間攪拌した。反応溶液をメタノール(8ml)で希釈し、Dowex50W-8H(H⁺型)樹脂で中和した。樹脂を濾別し、濾液を減圧下溜去した。得られた残査を高分子ゲルSephadex LH-20カラムクロマトグラフィー（メタノール）で精製して、白色鑞状の標題化合物 2.75mgを得た。（収率； 76%）
【００８６】
[α]_D ²¹； +32.3°[c0.27, CHCl₃/MeOH(1:1)]
FAB-MS； [M+Na]+ m/e 884.
¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)； δ(ppm) 5.70(dt,1H,J=7.1Hz,15.4Hz)、5.46(dd,1H,J=7.3Hz,15.2Hz)、5.50(d,1H,J=3.7Hz)、4.26(dd,2H,J=10.0Hz,7.6Hz)、4.22(dd,1H,J=10.0Hz,4.4Hz)、4.10(br-t,1H,J=7.6Hz)、4.02(br-d,1H,J=2.8Hz)、4.00(ddd,1H,J=12.0Hz,8.0Hz,3.6Hz)、3.94(dd,1H,J=4.0Hz,1.6Hz)、3.85(dd,1H,J=10.0Hz,3.6Hz)、3.82-3.77(m,5H)、3.72(dd,1H,J=11.2Hz,4.4Hz)、3.63(br-t,1H,J=7.2Hz)、3.57(dd,1H,J=10.4Hz,3.2Hz)、3.54-3.52(m,2H)、2.18(t,2H,J=8.0Hz)、2.03(q,2H,J=6.8Hz)、1.60(m,2H)、1.38-1.18(m,46H)、0.89(t,6H,J=6.8Hz).[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a novel compound, a novel intermediate of a β-digalactosylceramide derivative, and a novel industrially superior production method useful as a medicine.
[0002]
[Prior art]
Naturally-derived digalactosylceramide (Gala1-4Galβ1-1Ceramide) is a mixture of three compounds with different side chains represented by the following chemical formula. Superantigen (Staphylococcal enterotoxin B, hereinafter referred to as SEB) It is known to be a binding site for specific binding to cultured cells [Glycobiology,Five(3), 327-333 (1995).].
[0003]
[Chemical Formula 10]

[0004]
Since digalactosylceramide binds to SEB, it is presumed that it has some influence on the T cell activation reaction of SEB, such as inhibition of superantigen T cells, suppression of cytokine production, or suppression of neutrophil proliferation The pharmacological effect is expected.
More specifically, it is useful for, for example, the following pharmaceutical uses.
[0005]
(1) Anticancer drugs (anticancer, cancer metastasis suppression)
Recently, a substance that is said to inhibit Phospholipase A2 by blocking Phosphokinase C translocation and to express anticancer activity has been found (Eur. J. Pharmacol. Vol. 294: 555-563, 1995). Already, it is known that staurosporine, sphingosine and the like inhibit Phosphokinase C, thereby inhibiting invasion of carcinoma cell line and adhesion of cancer cells to laminine and collagen. These facts suggest the possibility of glycosphingolipids to suppress cancer metastasis.
Ceramide, which is a precursor or metabolite of glycolipid and sphingomyelin, is modified and decomposed in vivo and converted into sphingosine, ceramide-1-phosphate, sphingosine-1-phosphate, and the like. These derivatives are being shown to be functionally involved in cell differentiation and proliferation (Pharmaceutical Journal, Vol. 114, 655-668, 1994). The possibility of ceramide as a second messenger for induction of apoptosis by TNF-α has been strongly suggested (Science, Vol. 259, 1769, 1993). Glycosphingolipids are expected to be useful as anticancer agents due to the possibility of replacing these actions.
[0006]
(2) Immunosuppressants (such as organ transplants)
ISP-1 having a sphingosine-like structure discovered from Isalia sinclairii (ATCC No. 24400) has been shown to exhibit a stronger immunosuppressive effect than cyclosporin A. The mechanism of action is different from cyclosporin A, which inhibits the IL-2 production pathway, and is thought to induce apoptosis of cytotoxic T cells. This induction of apoptosis is thought to be the result of ISP-1 decreasing sphingolipids by inhibiting serine palmitoyltransferase in the sphingolipid biosynthesis pathway (Biochemistry, Vol. 68, 444-452, 1996. ). An immunosuppressive effect is expected due to the possibility that glycosphingolipids are involved in the regulation of this sphingolipid biosynthesis pathway.
[0007]
(3) Anti-HIV agent
Galactosylceramide (GalCer) is a receptor upon entry of human immunodeficiency virus (HIV) in CD14negative cells of nerve and colon epithelium. GalCer is known to recognize the V3 region of HIV-1 surface envelope glycoprotein gp120. This V3 loop plays an important role in the fusion process by HIV-1.
GalCer's soluble analog [CA52 (N15)] was synthesized and its anti-HIV activity was investigated (J. Biol. Chem. Vol. 272, 7245-7252, 1997.). CA52 (N15) inhibited cell fusion and HIV entry by HIV in both CD4 positive and negative cells expressing GalCer. This result indicates the possibility of glycosphingolipid anti-HIV action.
[0008]
(4) Antitoxin action (Staphylococcus enterotoxin-B, Velo toxin, etc.)
Digalactosylceramide (GalGalCer) has been shown to be a receptor for Staphylococcus enterotoxin-B (SEB) in the proximal tubule of the human kidney (Glycobiology Vol, 5; 327-333, 1995.). This suggests that if Digalactosylceramide and its analogs are used as soluble receptors, they can be neutralizing agents for SEB released with Staphylococcus aureus infection.
Also, the glycosphingolipid Globotriaosylceramide (Gb3) is known to bind to Verotoxin and is abundant in breast milk and hypothesized to have a protective effect against Verotoxin-induced diarrhea associated with infant infection (J. Infect. Vol. 166: 832-836, 1992). For these reasons, glycosphingolipids containing Gb3 can be effective neutralizers for Verotoxin.
[0009]
(5) Gaucher disease
Gaucher's disease, a glucosylceramide accumulation disease, is caused by a mutation in the glucosylcerebrosidase gene, which is a glucosylceramide degrading enzyme present in lysosomes. In this disease, enlargement of the liver and spleen appears as a major symptom, but depending on the condition, neurological symptoms are present (Pharmacia, Vol. 32: 1365-1368, 1996.). Therefore, specific glucosylceramide synthesis inhibitors are effective in this disease.
[0010]
[Problems to be solved by the present invention]
However, conventionally, there is no method for obtaining digalactosylceramide other than extraction from natural products, and it has not been possible to obtain a large amount at a low cost.
[0011]
[Means for Solving the Problems]
The inventors of the present invention have been diligently researching to improve the above problems. As a result, the protected disaccharide activator (I) and the alcohol derivative (II) are reacted to form a protected β-digalactosylceramide derivative (III) according to the process represented by the following chemical reaction formula, followed by deprotection. As a result, it was found that the desired β-digalactosylceramide derivative (IV) can be produced in a large amount at a low cost, and the present invention has been completed.
[0012]
Embedded image

[0013]
(Where X, R¹, R and R ′ have the same meaning as described above. )
Further, according to the present invention, a novel derivative of digalactosylceramide can be obtained, and more excellent pharmacological activity and safety can be expected. Therefore, the present inventionIsThe present invention provides a novel derivative excellent as a medicine, and further provides a novel intermediate useful for the production thereof.
[0014]
Next, the present invention will be described in detail below.
First, the protected disaccharide active substance (I) according to the present invention is represented by the following general formula.
[0015]
Embedded image

[0016]
Where R¹Represents a protecting group for a hydroxyl group, and X represents a halogen atom.
Here, the hydroxyl protecting group is not limited as long as it is a hydroxyl protecting group usually used in organic synthesis. Specifically, for example, acyl groups such as acetyl group and benzoyl group, ethers such as methyl group and benzyl group, etc. A residue etc. can be mentioned. Also two R¹May form a cyclic ether such as a dimethyl ketal (isopropylidene) group or a phenylacetal (benzylidene) group. Furthermore each R¹May be two or more different groups.
Next, the halogen atom specifically means a chlorine atom, a bromine atom, or a fluorine atom, and a fluorine atom is more preferable.
The protected disaccharide activator (I) according to the present invention has two types of stereoisomers, an α bond and a β bond, in the (1 → 4) glycosidic bond between two galactose residues. Any one of the isomers or a mixture may be used, but an α bond is more preferable.
More specific examples of the protected disaccharide active substance (I) include, but are not limited to, the following compounds.
(1) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Acetyl-β / α-D-galactopyranosyl fluoride
(2) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Acetyl-β / α-D-galactopyranosyl bromide
(3) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Acetyl-β / α-D-galactopyranosyl chloride
(4) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-benzoyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Benzoyl-β / α-D-galactopyranosyl fluoride
(5) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-benzyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Benzyl-β / α-D-galactopyranosyl fluoride
[0017]
Next, the alcohol derivative (II) is represented by the general formula ROH.
In the formula, R is a group represented by the following general formula
[0018]
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[0019]
(Where R²Represents a pentadecanyl group, a heptadecanyl group or an 8-heptadecenyl group, R^ThreeMeans a hydroxyl-protecting group. )
Or a group represented by the following general formula
[0020]
Embedded image

[0021]
(Where R², R^ThreeHas the same meaning as above. ).
Where R^ThreeThe hydroxyl protecting group in the definition of R is R¹The definition is the same as in.
The alcohol derivative (II) according to the present invention has a double bond in the molecule, and (E) or (Z) geometric isomer exists, but is not limited in the present invention, either one or a mixture However, the (E) form is more preferred. Further, the alcohol derivative (II) has an asymmetric carbon atom in the molecule, and (R) or (S) optical isomer exists, but is not limited in the present invention, and either one or a racemate may be used. However, the (2S, 3R) isomer is more preferred.
More specific examples of the alcohol derivative (II) include, but are not limited to, the following compounds.
(1) 1-O-benzoyl-2-N-palmitoyl sphingosine
(2) 1-O-acetyl-2-N-palmitoyl sphingosine
(3) 1-O-Benzyl-2-N-palmitoyl sphingosine
(4) 3-O-benzoyl-2-N-palmitoyl sphingosine
(5) 3-O-acetyl-2-N-palmitoyl sphingosine
(6) 3-O-Benzyl-2-N-palmitoyl sphingosine
[0022]
Next, the protected β-digalactosylceramide derivative (III) is represented by the following general formula. The protected β-digalactosylceramide derivative (III) according to the present invention is a novel compound and is important as an intermediate in the present invention.
[0023]
Embedded image

[0024]
Where R¹, R have the same meaning as described above.
The protected β-digalactosylceramide derivative (III) according to the present invention also has two stereoisomers, an α bond and a β bond, in the (1 → 4) glycosidic bond between two galactose residues. Any one of the isomers or a mixture may be used, but an α bond is more preferable. Further, the protected β-digalactosylceramide derivative (III) has a double bond in the molecule, and (E) or (Z) geometric isomer exists, but it is not limited in the present invention. And (E) are more preferred. Further, the protected β-digalactosylceramide derivative (III) has an asymmetric carbon atom in the molecule and (R) or (S) optical isomer exists, but in the present invention, it is not limited either or The racemate may be used, but the (2S, 3R) isomer is more preferable.
More specific examples of the protected β-digalactosylceramide derivative (III) include, but are not limited to, the following compounds. Here, sphingosine is R²Means 2-amino-4-octadecene-1,3-diol in which is either a pentadecanyl group, a heptadecanyl group or an 8-heptadecenyl group.
(1) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Acetyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -1-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine
(2) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-benzoyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Benzoyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -1-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine
(3) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-benzyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- (Benzyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -1-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine
(4) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Acetyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -3-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine
(5) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-benzoyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- Benzoyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -3-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine
(6) O- (2 ', 3', 4 ', 6'-Tetra-O-benzyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-tri-O- (Benzyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -3-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine
[0025]
Next, the β-digalactosylceramide derivative (IV) is represented by the following general formula.
[0026]
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[0027]
In the formula, R ′ is a group represented by the following general formula
[0028]
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[0029]
(Where R²Has the same meaning as above. ) Or a group represented by the following general formula
[0030]
Embedded image

[0031]
(Where R²Has the same meaning as above. ).
The β-digalactosylceramide derivative (IV) according to the present invention also has two stereoisomers, α-bond and β-bond, in the (1 → 4) glycosidic bond between two galactose residues. Any one isomer or mixture may be used, but an α bond is more preferable. Further, β-digalactosylceramide derivative (IV) also has a double bond in the molecule, and (E) or (Z) geometric isomer exists, but in the present invention, it may be any, (E) is more preferable. Further, the β-digalactosylceramide derivative (IV) has an asymmetric carbon atom in the molecule, and (R) or (S) optical isomer exists, but is not limited in the present invention, and either or racemic The (2S, 3R) isomer is more preferable.
More specific examples of the β-digalactosylceramide derivative (IV) include the following compounds (the definition of sphingosine is the same as described above).
(1) O- (α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -O-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -2-N-palmitoylsphingosine
(2) O- (α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -O-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 1) -2-N-palmitoylsphingosine
[0032]
Here, the β-digalactosylceramide derivative (V) according to the present invention is a novel compound represented by the following general formula.
[0033]
Embedded image

[0034]
WhereR ²Represents a pentadecanyl group, a heptadecanyl group or an 8-heptadecenyl group, R^ThreeMeans a hydroxyl-protecting group. The β-digalactosylceramide derivative (V) according to the present invention also has two stereoisomers, α bond and β bond, in the (1 → 4) glycosidic bond between two galactose residues. Any one isomer or mixture may be used, but an α bond is more preferable. β-digalactosylceramide derivative (V) also has a double bond in the molecule, and there are (E) or (Z) geometric isomers, which are not limited in the present invention. E) is more preferred. Further, the β-digalactosylceramide derivative (V) has an asymmetric carbon atom in the molecule, and (R) or (S) optical isomer exists, but is not limited in the present invention, either or racemic The (2S, 3R) isomer is more preferable. More specific examples of the β-digalactosylceramide derivative (V) include the following compounds.
(1) O- (α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -O-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -2-N-palmitoyl-4-octadecene- 1,3-diol
(2) O- (α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -O-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -2-N-stearoyl-4-octadecene- 1,3-diol
(3) O- (α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -O-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3) -2-N-oleoyl-4-octadecene 1,3-diol
[0035]
Then, the manufacturing method concerning this invention is explained in full detail.
In the present invention, a process of obtaining a protected β-digalactosylceramide derivative (III) by reacting the protected disaccharide activator (I) with the alcohol derivative (II) represented by the general formula ROH (step 1); It comprises a step (Step 2) of deprotecting the protected β-digalactosylceramide derivative (III) to obtain the desired β-digalactosylceramide derivative (IV) (see the above chemical reaction formula [Chem. 11]).
[0036]
(1) Process 1
This step can be performed by a conventional method of glycoside synthesis. More specifically, this step can be performed according to the method described in, for example, Tetrahedron Lett., 27, 4753-4756 (1986).
[0037]
(2) Process 2
This step can be carried out by a protecting group elimination method usually used in organic synthesis, for example, hydrolysis, catalytic reduction and the like.
[0038]
Next, the β-digalactosylceramide derivative (IV) or β-digalactosylceramide derivative (V) according to the present invention is useful as a medicine, and more specifically, for example, the following indications can be mentioned. However, it is not limited to them.
(1) Anticancer drugs (anticancer, cancer metastasis suppression)
(2) Immunosuppressants (such as organ transplants)
(3) Anti-HIV agent
(4) Antitoxin action (Staphylococcus enterotoxin-B, Velo toxin, etc.)
(5) Gaucher disease
[0039]
Subsequently, in order to specifically describe the present invention, production examples and examples are given below, but it goes without saying that the present invention is not limited to these examples.
[Production example]
[0040]
Production Example 1 O- (2 ', 3', 4 ', 6'- Tetra -O- Acetyl - α -D- Galactopyranosyl )-(1 → 4) -2,3,6- bird -O- Acetyl - β / α -D- Synthesis of galactopyranose
[0041]
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[0042]
(In the formula, Ac means an acetyl group.)
A mixture of acetic anhydride (2.5 ml) and pyridine (5.0 ml) was cooled in ice water where 4-O-α-D-galactopyranosyl-D-galactopyranose 500 mg (1.46 mmol) and 4-dimethylamino Pyridine (DMAP, 1 mg) was added and stirred at room temperature for 17 hours. Thereafter, the reaction solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was washed with ice water, dissolved in methylene chloride (100 ml), washed with 2% aqueous citric acid solution (20 ml) and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (20 ml), dried and the solvent was evaporated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate system) to obtain 970 mg (α / β = 1: 1) of the colorless amorphous title compound. (Yield; 98%)
[0043]
[α]_D ²⁸; + 124.2 ° (c1.0, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + H] + m / e 676, [M + Na] + m / e701.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 6.38 (d, 1H, J = 3.7Hz), 5.71 (d, 1H, J = 8.1Hz), 5.59 (dd, 1H, J = 1.3Hz, 3.3Hz), 5.57 (dd, 1H) , J = 1.3Hz, 3.3Hz), 5.41 (dd, 1H, J = 10.8Hz, 3.6Hz), 5.40 (dd, 1H, J = 10.8Hz, 7.6Hz), 5.38 (dd, 1H, J = 10.8Hz) 3.6Hz), 5.32 (dd, 1H, J = 7.9Hz, 10.6Hz), 5.23 (dd, 1H, J = 7.5Hz, 11.1Hz), 5.22 (dd, 1H, J = 7.5Hz, 11.0Hz), 5.02 (d, 1H, J = 3.7Hz), 5.00 (d, 1H, J = 3.7Hz), 4.87 (dd, 1H, J = 2.6Hz, 10.6Hz), 4.52 (br-t, 2H, J = 7.0 Hz), 4.41 (dd, 1H, J = 7.0Hz, 11.4Hz), 4.35 (dd, 1H, J = 6.6Hz, 11.0Hz), 4.22 (br-t, 1H, J = 7.0Hz), 4.20 (br -d, 1H, J = 2.8Hz), 4.17-4.10 (m, 7H), 4.07 (dd, 1H, J = 11.2Hz, 6.4Hz), 3.93 (br-t, 1H, J = 7.0Hz), 2.16 , 2.15 (6s, 3H), 2.14 (6s, 3H), 2.12-2.10 (12s, 3H), 2.07 (6s, 3H), 2.05-2.03 (12s, 3H), 2.00 (6s, 3H).
[0044]
Production Example 2 O- (2 ', 3', 4 ', 6'- Tetra -O- Acetyl - α -D- Galactopyranosyl )-(1 → 4) -2,3,6- bird -O- Acetyl - β / α -D- Synthesis of galactopyranosyl fluoride
[0045]
Embedded image

[0046]
O- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-triglyceline obtained in the previous preparation To a solution of -O-acetyl-β / α-D-galactopyranose 500 mg (0.74 mmol) in dimethylformamide (5 ml) was added hydrazine acetate 81 mg (0.88 mmol), and the mixture was stirred at 50 ° C. for 2 hours. Thereafter, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was diluted with ethyl acetate (100 ml). The organic layer was washed with water (20 ml) and then with saturated brine (20 ml), dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate system) to obtain 420 mg of a colorless amorphous 1-hydroxyl compound. (Yield; 90%)
Subsequently, 420 mg (0.66 mmol) of the obtained 1-hydroxyl compound was dissolved in 1,2-dimethoxyethane (4.2 ml) and cooled to −30 ° C. Diethylaminosulfur trifluoride [DAST, 210 ml (1.6 mmol)] was quickly added thereto and stirred at room temperature for 50 minutes. Thereafter, the mixture was cooled again to −30 ° C., methanol (0.1 ml) was added, and the mixture was stirred at that temperature for several minutes. Thereafter, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was diluted with methylene chloride (100 ml). This was washed with saturated sodium hydrogen carbonate (20 ml) and dried, and then the solvent was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate system) to obtain 350 mg (α / β = 2: 1) of the colorless amorphous title compound. (Yield; 83%)
[0047]
[α]_D ²⁸; + 129.5 ° (c1.1, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + H] + m / e 637, [M + Na] + m / e 661.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 5.81 (dd, 1H, J = 54.4Hz, 2.4Hz), 5.72 (dd, 1H.J = 52.0Hz, 4.0Hz), 5.56 (dd, 1H, J = 1.2Hz, 3.2Hz) , 5.36 (dd, 2H, J = 10.8Hz, 3.2Hz), 5.26 (dd, 2H, J = 10.4Hz, 7.2Hz), 5.22 (br-d, 1H, J = 3.6Hz), 5.07 (d, 1H , J = 3.6Hz), 5.01 (d, 1H, J = 3.6Hz), 4.50 (br-t, 1H, J = 7.6Hz), 4.37 (dd, 1H, J = 10.8Hz, 7.2Hz), 4.29 ( br-t, 1H, J = 6.8Hz), 4.17-4.09 (m, 3H), 2.14-2.00 (14s, 3H).
[0048]
Production Example 3 (2S, 3R, 4E) -1-O-tert- Butyldiphenylsilyl -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0049]
Embedded image

[0050]
(In the formula, TBDPS means a tert-butyldiphenylsilyl group.)
To a solution of (2S, 3R, 4E) -N-palmitoylsphingosine 280 mg (0.52 mmol) in dimethylformamide (3 ml) was added tert-butylchlorodiphenylsilane 140 ml (0.55 mmol) and imidazole 89 mg (1.3 mmol) at 60 ° C. Stir for 6 hours. Thereafter, the reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then directly purified by silica gel column chromatography (chloroform) to obtain 234 mg of the title compound as a colorless transparent oil. (Yield; 58%)
[0051]
[α]_D ²⁰; + 7.5 ° (c1.1, CHCl_Three)
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 7.66-7.60 (m, 4H), 7.49-7.38 (m, 6H), 6.11 (d, 1H, J = 7.6Hz), 5.78 (dt, 1H, J = 15.2Hz, 6.8Hz) 5.49 (dd, 1H, J = 15.2Hz, 6.0Hz), 4.21 (m, 1H), 3.98 (ddd, 1H, J = 12.0Hz, 7.6Hz, 4.0Hz), 3.97 (dd, 1H, J = 12.8) Hz, 4.0Hz), 3.78 (dd, 1H, J = 10.4Hz, 3.6Hz), 3.56 (d, 1H, J = 8.0Hz), 2.16 (t, 2H, J = 7.6Hz), 2.05 (q, 2H) , J = 6.8Hz), 1.61 (m, 2H), 1.30-1.26 (m, 46H), 1.09 (s, 9H), 0.90 (t, 6H, J = 6.8Hz).
[0052]
Production Example 4 (2S, 3R, 4E) -3-O- Benzoyl -1-O-tert- Butyldiphenylsilyl -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0053]
Embedded image

[0054]
(In the formula, Bz means a benzol group.)
A solution of 234 mg (0.30 mmol) of (2S, 3R, 4E) -1-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-N-palmitoylsphingosine obtained in the previous preparation example in pyridine (2 ml) was cooled to 0 ° C., 42 ml (0.36 mmol) of benzoyl chloride was added and stirred at that temperature for 30 minutes. Thereafter, methanol (2 ml) was added, stirred for 5 minutes, and diluted with ethyl acetate (50 ml). This was washed with 1N-hydrochloric acid aqueous solution (10 ml), saturated sodium hydrogen carbonate (10 ml) and then saturated brine (10 ml). And after drying with anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate system) to give 208 mg of the title compound as a colorless transparent oil. (Yield; 79%)
[0055]
[α]_D ²⁰+ 11.3 ° (c1.1, CHCl_Three)
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 7.98 (m, 2H), 7.62 (m, 2H), 7.55 (m, 2H), 7.43-7.29 (m, 7H), 7.20 (m, 2H), 5.88 (dt, 1H, J = 15.2Hz, 6.8Hz), 5.74 (d, 1H, J = 9.2Hz), 5.66 (t, 1H, J = 7.6Hz), 5.50 (dd, 1H, J = 15.2Hz, 7.6Hz), 4.44 (ddd , 1H, J = 12.8Hz, 9.2Hz, 3.6Hz), 3.89 (dd, 1H, J = 10.4Hz, 3.2Hz), 3.71 (dd, 1H, J = 10.4Hz, 4.0Hz), 2.10 (td, 2H , J = 7.2Hz, 2.8Hz), 2.01 (q, 2H, J = 6.8Hz), 1.59 (t, 2H, J = 7.2Hz), 1.30-1.23 (m, 46H), 1.05 (s, 9H), 0.88 (t, 6H).
[0056]
Production Example 5 (2S, 3R, 4E) -1-O- Benzoyl -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0057]
Embedded image

[0058]
A solution of (2S, 3R, 4E) -3-O-benzoyl-1-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-N-palmitoylsphingosine 208 mg (0.24 mmol) obtained in the previous production example in tetrahydrofuran (2 ml) was added at 0 ° C. Then, 1.0 M- (n-tetrabutyl) ammonium fluoride / tetrahydrofuran solution (0.2 ml, 0.71 mmol) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 1 hour. Thereafter, the reaction mixture was diluted with methylene chloride (50 ml), washed with a saturated aqueous ammonium chloride solution (10 ml) and then with saturated brine (10 ml), and then dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (methylene chloride / methanol system) to obtain 102 mg of the title compound as a white bowl. (Yield; 67%)
[0059]
[α]_D ²⁰; -3.0 ° (c1.0, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + Na] + m / e 664.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 8.02 (m, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.45 (m, 2H), 5.93 (d, 1H, J = 7.6Hz), 5.77 (dt, 1H, J = 15.2Hz, 7.6Hz), 5.52 (dd, 1H, 15.2Hz, 6.4Hz), 4.57 (dd, 1H, J = 12.8Hz, 8.4Hz), 4.43-4.38 (m, 2H), 4.26 (dt, 1H, J = 6.4) Hz, 5.2Hz), 2.81 (d, 1H, J = 5.2Hz), 2.19 (t, 2H, J = 7.2Hz), 2.01 (q, 2H, J = 7.2Hz), 1.60-1.56 (m, 2H) , 1.32-1.22 (m, 46H), 0.88 (t, 6H, J = 6.4Hz).
[0060]
Production Example 6 (2S, 3R, 4E) -1-O- Trityl -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0061]
Embedded image

[0062]
(In the formula, Tr means a trityl group.)
280 mg (0.47 mmol) of (2S, 3R, 4E) -N-palmitoylsphingosine was dissolved in pyridine (5 ml), 260 mg (0.93 mmol) of trityl chloride was added, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Thereafter, the mixture was further stirred at 50 ° C. for 4 hours. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was diluted with chloroform (100 ml) and washed with water (20 ml). After drying over anhydrous magnesium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate system) to obtain 335 mg of the title compound as a colorless transparent oil. (Yield; 92%)
[0063]
[α]_D ²⁰; -0.98 ° (c1.0, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + Na] + m / e 802.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 7.41-7.39 (m, 5H), 7.33-7.29 (m, 5H), 7.27-7.23 (m, 5H), 6.09 (d, 1H, J = 8.1Hz), 5.63 (dt, 1H) , J = 6.6Hz, 15.4Hz), 5.25 (dd, 1H, J = 6.2Hz, 15.4Hz), 4.20-4.16 (m, 1H), 4.06 (ddd, 1H, J = 4.0Hz, 8.0Hz, 12.0Hz ), 3.42 (d, 1H, J = 8.0Hz), 3.39 (dd, 1H, J = 3.6Hz, 9.6Hz), 3.30 (dd, 1H, J = 4.0Hz, 10.0Hz), 2.20 (t, 2H, J = 7.6Hz), 1.91 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.31-1.26 (m, 46H), 0.88 (t, 6H, J = 6.4Hz).
[0064]
Production Example 7 (2S, 3R, 4E) -3-O- Benzoyl -1-O- Trityl -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0065]
Embedded image

[0066]
321 mg (0.41 mmol) of (2S, 3R, 4E) -1-O-trityl-2-N-palmitoylsphingosine obtained in the previous production example was dissolved in pyridine (2 ml), and stirred while cooling with ice water. To this solution, 40 mg of DMAP and 95 ml (0.82 mmol) of benzoyl chloride were added and stirred at room temperature for 24 hours. The mixture was further stirred at 55 ° C. for 1 hour. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and diluted with ethyl acetate (50 ml). This was washed with water (20 ml) and dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (hexane / ethyl acetate system) to obtain 180 mg of the title compound as a colorless transparent oil. (Yield; 50%)
[0067]
[α]_D ^{twenty three}; + 7.0 ° (c1.0, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + Na] + m / e 906.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 7.95-7.92 (m, 2H), 7.57-7.53 (m, 2H), 7.42-7.36 (m, 7H), 7.31-7.26 (m, 5H), 7.23-7.14 (m, 5H) , 5.87 (dt, 1H, J = 6.8Hz, 15.2Hz), 5.71 (t, 1H, J = 7.2Hz), 5.67 (d, 1H, J = 9.2Hz), 5.45 (dd, 1H, J = 15.6Hz) , 8.0Hz), 4.49 (ddd, 1H, J = 3.6Hz, 7.2Hz, 11.2Hz), 3.45 (dd, H, J = 3.6Hz, 9.6Hz), 3.19 (dd, 1H, J = 4.4Hz, 10.0 Hz), 2.10 (t, 2H, J = 7.6Hz), 1.99 (q, 2H, J = 6.8Hz), 1.57 (m, 2H), 1.30-1.23 (m, 46H), 0.88 (t, 6H, J = 6.0Hz).
[0068]
Production Example 8 (2S, 3R, 4E) -3-O- Benzoyl -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0069]
Embedded image

[0070]
180 mg (0.20 mmol) of (2S, 3R, 4E) -3-O-benzoyl-1-O-trityl-2-N-palmitoylsphingosine obtained in the previous production example was added to methylene chloride / methanol (2: 1, v / v ) Dissolved in a mixed solution (8.3 ml), added 18 mg of paratoluenesulfonic acid monohydrate, and stirred at room temperature for 24 hours. Thereafter, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (chloroform / methanol system) to obtain 78 mg of the title compound as a white bowl. (Yield; 59%)
[0071]
[α]_D ^{twenty three}+ 16.5 ° (c1.0, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + Na] + m / e 664.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 8.05-8.03 (m, 2H), 7.62-7.58 (m, 1H), 7.48-7.44 (m, 2H), 6.10 (br-d, 1H, J = 8.8Hz), 5.86 (dt , 1H, J = 14.4Hz, 6.8Hz), 5.61 (dd, 1H, J = 7.6Hz, 14.4Hz), 5.54 (t, 1H, J = 7.6Hz), 4.29 (m, 1H), 3.75 (dd, 1H, J = 3.6Hz, 12.0Hz), 3.70 (dd, 1H, J = 2.8Hz, 11.6Hz), 2.22-2.17 (m, 2H), 2.08-2.02 (m, 2H), 1.64-1.58 (m, 2H), 1.38-1.20 (m, 46H), 0.90 (m, 6H).
[0072]
【Example】
Example 1 O- (2 ', 3', 4 ', 6'- Tetra -O- Acetyl - α -D- Galactopyranosyl )-(1 → 4) -2,3,6- bird -O- Acetyl - β -D- Galactopyranosyl )-(1 → 3)-(2S, 3R, 4E) -1-O- Benzoyl 2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0073]
Embedded image

[0074]
Silver perchlorate 14 mg (0.072 mmol), tin (II) chloride 14 mg (0.069 mmol) and powdered molecular sieves 4A 300 mg were dissolved and suspended in methylene chloride (1 ml) and stirred at 0 ° C. Here, O- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6 obtained in Production Example 2 A solution of 20 mg (0.031 mmol) of -tri-O-acetyl-β / α-D-galactopyranosyl fluoride in methylene chloride (2 ml) was added and stirred. Ten minutes later, a solution of (2S, 3R, 4E) -1-O-trityl-2-N-palmitoylsphingosine 40 mg (0.062 mmol) obtained in Preparation Example 6 in methylene chloride (2 ml) was added and stirred for 17 hours. The reaction mixture was diluted with methylene chloride (100 ml) and filtered through celite. The filtrate was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (10 ml) and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by silica gel thin layer chromatography (hexane / ethyl acetate system) six times to obtain 5 mg of the title compound as a colorless transparent oil. (Yield; 12%)
This was used in the next reaction without purification.
[0075]
Example 2 O- ( α -D- Galactopyranosyl )-(1 → 4) -O- β -D- Galactopyranosyl )-(1 → 3)-(2S, 3R, 4E) -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0076]
Embedded image

[0077]
O- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-triglyceline obtained in the previous example -O-acetyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 3)-(2S, 3R, 4E) -1-O-benzoyl 2-N-palmitoylsphingosine 5.0 mg (4.0 mmol) in methanol (0.25 ml) and tetrahydrofuran (0.25 ml), dissolved in 28% sodium methoxide / methanol solution (7.4 ml, 38.5 mmol), and stirred at room temperature for 90 minutes. The reaction solution was diluted with methanol (8 ml), and Dowex 50W-8H (H⁺Type) neutralized with resin. The resin was filtered off and the filtrate was distilled off under reduced pressure. The resulting residue was purified by polymer gel Sephadex LH-20 column chromatography (methanol) to give 2.5 mg of the title compound as a white bowl. (Yield; 72%)
[0078]
[α]_D ^{twenty one}; + 31.0 ° [c0.11, CHCl_Three/ MeOH (1: 1)]
FAB-MS; [M + Na] + m / e884, [M + K] + m / e 900.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 5.68 (dt, 1H, J = 15.2 Hz, 7.6 Hz), 5.44 (dd, 1H, J = 15.6 Hz, 7.6 Hz), 4.97 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 4.27 ( d, 1H, J = 6.8Hz), 4.28-4.25 (m, 1H), 4.18 (dd, 1H, J = 10.4Hz, 5.2Hz), 4.06 (t, 1H, J = 7.6Hz), 3.99 (br- d, 1H, J = 3.2Hz), 3.95 (m, 1H), 3.91 (br-d, 1H, J = 3.2Hz), 3.83-3.47 (m, 10H), 2.17 (t, 2H, J = 7.6Hz ), 2.04 (q, 2H, J = 7.6Hz), 1.58 (m, 2H), 1.40-1.28 (m, 46H), 0.89 (t, 6H, J = 6.8Hz).
[0079]
Example 3 O- (2 ', 3', 4 ', 6'- Tetra -O- Acetyl - α -D- Galactopyranosyl )-(1 → 4) -2,3,6- bird -O- Acetyl - β -D- Galactopyranosyl )-(1 → 1)-(2S, 3R, 4E) -3-O- Benzoyl 2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0080]
Embedded image

[0081]
Silver perchlorate 14 mg (0.072 mmol), tin (II) chloride 14 mg (0.069 mmol) and powdered molecular sieves 4A 300 mg were dissolved and suspended in methylene chloride (1 ml), and the mixture was stirred at 0 ° C. Here, O- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6 obtained in Production Example 2 A solution of 20 mg (0.031 mmol) of -tri-O-acetyl-β / α-D-galactopyranosyl fluoride in methylene chloride (2 ml) was added and stirred. Ten minutes later, a solution of (2S, 3R, 4E) -3-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine 40 mg (0.062 mmol) obtained in Preparation Example 8 in methylene chloride (2 ml) was added and stirred for 18 hours. The reaction mixture was diluted with methylene chloride (100 ml) and filtered through celite. The filtrate was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (10 ml) and then dried over anhydrous magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting residue was purified by silica gel thin layer chromatography (hexane / ethyl acetate system) six times to obtain 8 mg of the title compound as a colorless transparent oil. (Yield; 17%)
[0082]
[α]_D ^{twenty three}; + 62.2 ° (c0.49, CHCl_Three)
FAB-MS; [M + Na] + m / e 1283.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 8.04-8.02 (m, 2H), 7.58-7.53 (m, 1H), 7.46-7.42 (m, 2H), 5.90 (dt, 1H, J = 15.4Hz, 6.8Hz), 5.82 ( d, 1H, J = 9.5Hz), 5.59 (dd, 1H, J = 1.3Hz, 3.4Hz), 5.56 (br-t, 1H, J = 7.0Hz), 5.48 (dd, 1H, J = 7.1Hz, 15.2Hz), 5.39 (dd, 1H, J = 3.3Hz, 11.0Hz), 5.22 (br-d, 1H, J = 0.7Hz), 5.20 (d, 1H, J = 7.6Hz, 10.8Hz), 5.17 ( dd, 1H, J = 7.6Hz, 10.8Hz), 5.02 (d, 1H, J = 3.6Hz), 4.83 (dd, 1H, J = 10.6Hz, 2.8Hz), 4.50 (m, 2H), 4.44 (d , 1H, J = 7.6Hz), 4.28 (dd, 1H, J = 11.4Hz, 7.0Hz), 4.14-4.01 (m, 4H), 3.74 (br-t, 1H, J = 6.8Hz), 3.70 (dd , 1H, J = 4.4Hz, 10.4Hz), 2.15-2.08 (m, 2H), 2.04-1.97 (m, 2H), 1.59 (m, 2H), 1.30-1.23 (m, 46H), 0.88 (t, 6H, J = 6.4Hz).
[0083]
Example 4 O- (aD- Galactopyranosyl )-(1 → 4) -O- β -D- Galactopyranosyl )-(1 → 1)-(2S, 3R, 4E) -2-N- Synthesis of palmitoyl sphingosine
[0084]
Embedded image

[0085]
O- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-Tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-(1 → 4) -2,3,6-triglyceline obtained in the previous example -O-acetyl-β-D-galactopyranosyl)-(1 → 1)-(2S, 3R, 4E) -3-O-benzoyl-2-N-palmitoylsphingosine 5.28 mg (4.19 mmol) in methanol (0.35 ml) / tetrahydrofuran (0.35 ml) mixed solvent, 28% sodium methoxide / methanol solution 7.8 ml (40.2 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 90 minutes. The reaction solution was diluted with methanol (8 ml), and Dowex 50W-8H (H⁺Type) neutralized with resin. The resin was filtered off and the filtrate was distilled off under reduced pressure. The obtained residue was purified by polymer gel Sephadex LH-20 column chromatography (methanol) to obtain 2.75 mg of the title compound as a white bowl. (Yield; 76%)
[0086]
[α]_D ^{twenty one}; + 32.3 ° [c0.27, CHCl_Three/ MeOH (1: 1)]
FAB-MS; [M + Na] + m / e 884.
¹H-NMR (400MHz, CDCl_Three); Δ (ppm) 5.70 (dt, 1H, J = 7.1Hz, 15.4Hz), 5.46 (dd, 1H, J = 7.3Hz, 15.2Hz), 5.50 (d, 1H, J = 3.7Hz), 4.26 ( dd, 2H, J = 10.0Hz, 7.6Hz), 4.22 (dd, 1H, J = 10.0Hz, 4.4Hz), 4.10 (br-t, 1H, J = 7.6Hz), 4.02 (br-d, 1H, J = 2.8Hz), 4.00 (ddd, 1H, J = 12.0Hz, 8.0Hz, 3.6Hz), 3.94 (dd, 1H, J = 4.0Hz, 1.6Hz), 3.85 (dd, 1H, J = 10.0Hz, 3.6Hz), 3.82-3.77 (m, 5H), 3.72 (dd, 1H, J = 11.2Hz, 4.4Hz), 3.63 (br-t, 1H, J = 7.2Hz), 3.57 (dd, 1H, J = 10.4Hz, 3.2Hz), 3.54-3.52 (m, 2H), 2.18 (t, 2H, J = 8.0Hz), 2.03 (q, 2H, J = 6.8Hz), 1.60 (m, 2H), 1.38-1.18 (m, 46H), 0.89 (t, 6H, J = 6.8Hz).

Claims

A β-digalactosylceramide derivative (V) represented by the following general formula.

(In the formula, R ² has a pentadecanyl group, a heptadecanyl group , or an 8- heptadecenyl group .)

Protected β-digalactosylceramide derivative (VI) represented by the following general formula.

(Wherein R ¹ and R ³ represent an acyl group or a benzyl group, provided that two R ^{1 s} may form a dimethyl ketal group or a phenyl acetal group, and each R ¹ may be of two types. The above groups may be different from each other, and R ² has the same meaning as described above.)