JP4147275B2

JP4147275B2 - 濃度測定用センサー

Info

Publication number: JP4147275B2
Application number: JP2007012859A
Authority: JP
Inventors: 武男大坂; 善則錦
Original assignee: Permelec Electrode Ltd; Tokyo Institute of Technology NUC
Current assignee: Tokyo Institute of Technology NUC; De Nora Permelec Ltd
Priority date: 1999-10-12
Filing date: 2007-01-23
Publication date: 2008-09-10
Anticipated expiration: 2020-10-11
Also published as: JP2007147643A

Description

本発明は、生体内の活性酸素であるスーパーオキシドイオン（Ｏ₂ ^-）の分解酵素であるスーパーオキシドジスムターゼ（Superoxide Dismutase、以下ＳＯＤという）の濃度測定用センサーに関し、より詳細には生体内にインビボ（in vivo)に適用できるほど微小化が可能なＳＯＤの濃度測定用センサーに関する。

活性酸素種は生体内では、生理活性物質の合成、殺菌作用、老化現像などに関連して重要な役割を有している。この活性酸素種は生体内ではキサンチン酸化酵素（ＸＯＤ）によるキサンチン及びヒポキサンチンなどの尿酸への酸化、酸素のヘモグロビンによる還元などにより生成する。
活性酸素種の１種であるスーパーオキシドイオンの生体内での濃度測定は各種疾患の特定などのために重要である。従来インビトロ（in vitro、体外) で、チトクロムＣ（３価、Ｆｅ³⁺）のスーパーオキシドイオンによる還元反応（式（１））により生ずるチトクロムＣ（２価）の550 nmの光吸収量を測定することにより前記スーパーオキシドイオンの定量、及びこれを応用するＳＯＤの濃度測定が試みられている。ＳＯＤの濃度測定はＳＯＤが活性であると式（１）の反応が進行せず、チトクロームＣ（２価）が生成しないことを利用する。しかし反応が遅くかつ操作が煩雑であるという問題があった。
cyt c （３価）＋Ｏ₂ ^- → cyt c （２価）＋Ｏ₂ （１）

その他にＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）の還元、ＴＮＭ（テトラニトロメタン）の還元、アドレナリンの酸化、ウミホタルルシフェリン誘導体（MCLA, Cypridina luciferinanalog, 2-methyl-6-[p-methoxyphenol]-3,7,dihydroimidazo-[1，2-a] pyrazine-3-one), 又はCLA (2-methyl-6-phenyl-3,7,dihydroimidazo-[1，2-a] pyrazine-3-one)) へのＯ₂ ^-の付加物の発光等を利用してスーパーオキシドイオンの濃度測定が試みられているが、いずれもインビトロでの分光学的手法である。

電気化学的な血液中のスーパーオキシドイオンの検出も従来から試みられている。Cooperらは金や白金の表面をＮ−アセチルシステインで修飾し、その上にチトクロムＣなどの蛋白質をＳ−Ａｕ結合させた酵素電極を作製し、チトクロムＣ（３価）のスーパーオキシドイオンによる還元で生じたチトクロムＣ（２価）を該チトクロムＣ（２価）が酸化されうる（式（２））程度に酵素電極の電位を保ち、これにより得られる酸化電流からスーパーオキシドイオンの濃度を測定する方法を提案している [J. Electroanal. Chem., 347, 267-275(1993)]。更にこの方法では間接的にＳＯＤ濃度を測定できる。
cyt c （２価）→ cyt c （３価）＋ｅ（２）

しかしながら式（１）の反応速度が遅いため（約10⁵Ｍ^-1s^-1) 、チトクロムＣとＯ₂ ^-との反応を用いるこの方法は実用的でなく、又この式（１）の反応はスーパーオキシドイオンに特有のものでなく、生体内の他の還元種でも還元されてスーパーオキシドイオン独自の電流以上の電流が流れるため、発生する電流とスーパーオキシドイオンとが正確に対応せず、間接的に測定されるＳＯＤに関しても同様であるという問題点がある。

ＳＯＤを使用するスーパーオキシドイオン測定方法では、ＳＯＤを測定液に溶かし、式（３）のように測定対象であるスーパーオキシドイオンの還元反応（ＳＯＤによる分解）により生成する過酸化水素を、該過酸化水素が酸化分解されうる程度の電極電位に保ち（0.32Ｖ以上）、式（４）に示すような反応で分解させこの際に生ずる酸化電流を測定しその測定値からスーパーオキシドイオンの濃度を判定している〔C.J.McNeil et al., Free Rad. Res. Comms.,17, 399-406(1992)]。
２Ｏ₂ ^- ＋２Ｈ⁺ → Ｈ₂Ｏ₂ ＋Ｏ₂ （３）
Ｈ₂Ｏ₂→ Ｏ₂＋２Ｈ⁺ ＋２ｅ（４）

式（３）の反応速度は速い（ｐＨ４〜７で10⁷〜10⁵Ｍ^-1ｓ^-1）ため、電流と濃度の対応関係は良好であるが、過酸化水素の濃度測定による間接的な濃度測定となるため、例えば過酸化水素が他の生体内部位で生産され安定に血液中に存在している場合にはスーパーオキシドイオンに起因しない過酸化水素の濃度分だけ濃度が増加するため、不正確な濃度測定法になってしまうという欠点がある。
本発明は、スーパーオキシドイオン分解酵素の濃度測定を可能にする電極やセンサーを提供することを目的とする。

本発明は、導電性部材、該導電性部材表面に設けた、その表面をチオール基を含む炭化水素化合物で薄膜状に修飾した金下地層を含んで成る濃度測定用電極、対極及び基準電極を、スーパーオキシドイオン分解酵素を含む溶液に浸漬し、スーパーオキシドイオン分解酵素中の銅イオンの酸化還元反応に起因する電流を測定して前記スーパーオキシドイオン分解酵素濃度を測定することを特徴とする濃度測定用センサーであり、金下地層を形成する代わりに導電性部材として金を使用しても良い。

以下本発明を詳細に説明する。
本発明は、チオール基を含む炭化水素化合物とＳＯＤの相互作用による結合を利用してＳＯＤ濃度を測定する。そして本発明のセンサーはインビボ（in vivo 、生体内) への適用が可能である。

本発明ではチオール基を含む炭化水素化合物とＳＯＤの相互作用による結合を利用してＳＯＤ濃度を測定する。
検出される電流は、ＳＯＤに含まれるＣｕ−Ｚｎイオン系のうち、Ｃｕ⁺／Ｃｕ²⁺（0.15Ｖ）の酸化還元対による電流であると推定できる。
Ｃｕ²⁺＋ｅ^- → Ｃｕ⁺
このことは、銅イオンの酸化還元サイクルを含まないＳＯＤでは電流応答がないことからも立証される。このサイクルに含まれる銅イオンの酸化還元対はＳＯＤの表面より奥に存在し、前述のチオール基を含む炭化水素化合物とＳＯＤの相互作用による結合を通して電極との電子移動が可能になる（後述の図５参照）。

本発明に係るセンサーの導電性部材としては、カーボン、チタン、ニッケル、鉄あるいはそれらの酸化物を使用することが好ましく、特に該導電性部材の表面は金で被覆されて金下地層として存在することが望ましい。
金は熱分解法、樹脂による固着法、蒸着法、電気めっき法、無電解めっき法等により、10〜100 ｇ／ｍ²となるように形成させる。スーパーオキシドイオン測定の場合には、この導電性部材表面に形成した金下地層表面にはチオール基を有する有機化合物の薄層を形成させることが好ましい。該薄層はチオール成分を溶解させた水又は有機溶媒（例えばメタノールやアセトン）に金下地層を形成した導電性部材を浸漬し、取り出し乾燥することにより容易に形成できる。乾燥しても金下地層に固着しなかったチオール成分は有機溶媒のみの溶液に浸漬することにより容易に溶解除去できる。なお金下地層を形成する代わりに導電性部材として金を使用しても良い。
このような金下地層とチオール基を有する有機化合物の薄層を形成する理由は、金下地層とチオール基の硫黄との間に強固なＡｕ−Ｓ結合を形成するとともに、有機化合物の有する親油性により該有機化合物とＳＯＤの間にも強い相互作用を生じさせるためである。

前記チオール基を有する有機化合物として次の化合物を例示できる。チオフェノール（Ｃ₆Ｈ₅−ＳＨ）、４−アミノチオフェノール（ｐ−Ｈ₂Ｎ−Ｃ₆Ｈ₄−ＳＨ）、４−メルカプトピリジン（ｐ―Ｃ₅Ｈ₄ＮＳＨ）、ビス（４−ピリジル）ジスルフィド（ｐ−Ｃ₅Ｈ₄Ｎ―Ｓ−Ｓ−Ｃ₅Ｈ₄Ｎ−ｐ）、メチオニン〔ＣＨ₃−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ（ＮＨ₂）ＣＯＯＨ〕、ｐ−チオクレゾール（ｐ−ＨＳ−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＨ₃）、２−メルカプトピリミジン（Ｃ₄Ｎ₂Ｈ₃−ＳＨ）、ブタンチオール（Ｃ₃Ｈ₇−ＳＨ）、２−アミノエタンチオール（ＨＳ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ₂）、シスチン〔ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＮＨ）−ＣＨ₂−Ｓ−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＮＨ）−ＣＯＯＨ〕、システイン〔ＨＳ―ＣＨ₂−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ₂〕、イソシステイン〔Ｈ₂Ｎ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＳＨ）−ＣＯＯＨ〕、Ｎ−アセチルシステアミン（ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＯＣＨ₃）、Ｎ−アセチルシステイン〔ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＮＨ−ＣＯＣＨ₃〕、システイニルグリシン〔ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＮＨ₂）−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ〕、α−ホモシステイン〔ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＨ₂ＣＨ（ＮＨ₂）−ＣＯＯＨ〕、β−ホモシステイン〔ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＨ（ＮＨ₂）−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ〕、α−メチルシステイン〔ＨＳ−ＣＨ₂−Ｃ（ＮＨ₂）（ＣＨ₃）−ＣＯＯＨ〕、３−メルカプトプロピオン酸（ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ）、メルカプト酢酸（ＨＳ−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ）。

この濃度測定用電極を実際に濃度測定に使用する際には対極が必要で、該対極は生体内に入ることが多いため、安全性の高い材料（例えば白金、チタン及びカーボン等）で構成することが好ましい。

電位を制御する基準電極（基準電極）は、通常、銀／塩化銀、水銀／塩化第二水銀が用いられるが、固体の基準電極を用いることもできる。電位を好ましい範囲に維持する際に検出限界濃度を向上させる目的で電位のパルスを与えることも好ましい。微小電極の場合、あるいは複数個の電極から構成される構造の場合は、濃度に対して一定の拡散電流が観察されることを利用しても良い。これらの工夫により流速の影響を排除できる。

なお参考としてＳＯＤを利用するスーパーオキシドイオン濃度の測定について説明する。
ＳＯＤの表面の一部には、上縁（入口）側が200〜300ｎｍ、底部（奥部）が40ｎｍ程度の逆向き截頭円錐状（断面は下向き台形状）の孔が存在する。ＳＯＤの反応部位はこの孔の底部に位置し、孔表面にはカチオン基が密集している。従って例えば血液中の成分のうちアニオンのみが選択的に前記孔内を移動でき、しかもスーパーオキシドイオンのような小さいアニオンのみが前記反応部位に到達でき、スーパーオキシドイオンの選択特異的な分解反応（特に不均化反応といわれる）が起こると考えられている。分解生成物である酸素と過酸化水素は反応部位から放出される。従ってＯ₂ ^-由来の電流のみを検出して正確な濃度測定を行える。

ＳＯＤによるスーパーオキシドイオンの酸素と過酸化水素への分解機構は、それに含まれるＣｕ−Ｚｎ系イオンのうち、Ｃｕ⁺−Ｃｕ²⁺（0.15Ｖ）の酸化還元対が寄与していると考えられている〔D.Klung et al., J. Biol. Chem., 247, 605-609(1972); H.J. Forman et al., Arch. Biochem. Biophys.,158, 396-400(1973)]。
つまりＳＯＤのＣｕ⁺はＯ₂ ^- と反応して自身がＣｕ²⁺に酸化されＯ₂ ^-をＨ₂Ｏ₂に還元する（式（５））。そして酸化されたＣｕ²⁺は更にＯ₂ ^-が存在するとＯ₂ ^-と反応して自身がＣｕ⁺に還元されるとともにＯ₂ ^-をＯ₂に酸化する（式（６））。このＣｕ⁺−Ｃｕ²⁺対による酸化還元反応（メディエーター反応）の状況を図１に示した。
Ｃｕ⁺ ＋２Ｈ⁺ ＋Ｏ₂ ^- → Ｃｕ²⁺＋Ｈ₂Ｏ₂ （５）
Ｃｕ²⁺ ＋Ｏ₂ ^- → Ｃｕ⁺ ＋Ｏ₂ （６）

又個々の電極ごとに見ると次のようになる。
ＳＯＤを有する電極を、そのＳＯＤ中のＣｕ²⁺が安定でＯ₂ ^-が不安定な電位範囲（例えば−0.2 〜＋0.3Ｖ）に維持すると、陽極に到達したＯ₂ ^-は式（６）に従って酸化されて酸素となりＣｕ²⁺はＣｕ⁺となる。生成したＣｕ⁺はＯ₂ ^-から奪った電子を陽極に与えて再びＣｕ²⁺となる。この様子を図２に示した。
他方ＳＯＤを有する電極を、そのＳＯＤ中のＣｕ⁺が安定でＯ₂ ^-が不安定で過酸化水素が安定な電位範囲（例えば−0.2 〜−0.3 Ｖ）に維持すると、陰極に到達したＯ₂ ^-は式（５）に従って還元されて過酸化水素となりＣｕ⁺はＣｕ²⁺となる。生成したＣｕ²⁺はＯ₂ ^-に移った電子を補うため陰極から電子を奪って再びＣｕ⁺となる。この様子を図３に示した。

この際に生ずる酸化還元電流はこの酸化還元電流で消費されるスーパーオキシドイオンの総量は比例するため、予め流れる電流とスーパーオキシドイオンの濃度の関係を求めておけば、電流値からスーパーオキシドイオンの濃度を測定できる。
導電性部材表面に薄膜状にＳＯＤを形成した電極では、酸化還元反応に寄与するＣｕ⁺及びＣｕ²⁺がＳＯＤの細孔内深い箇所に存在し、スーパーオキシドイオンとは反応するが過酸化水素とは反応しないという特質を有するため、この酸化還元系とは別個に生体内に過酸化水素が安定に存在してもこの過酸化水素が前記Ｃｕ⁺及びＣｕ²⁺と接触してこれに起因する電流が流れることがなく、正確なスーパーオキシドイオン濃度の測定が可能になる。

本発明は、導電性部材、該導電性部材表面に設けた、その表面をチオール基を含む炭化水素化合物で薄膜状に修飾した金下地層を含んで成る濃度測定用電極、対極及び基準電極を、ＳＯＤを含む溶液に浸漬し、ＳＯＤ中の銅イオンの酸化還元反応に起因する電流を測定して前記スーパーオキシドイオン分解酵素濃度を測定することを特徴とする濃度測定用センサーと、金製導電性部材、該導電性部材表面に設けた、その表面をチオール基を含む炭化水素化合物で薄膜状に修飾した下地層を含んで成る濃度測定用電極、対極及び基準電極を、ＳＯＤを含む溶液に浸漬し、ＳＯＤ中の銅イオンの酸化還元反応に起因する電流を測定して前記スーパーオキシドイオン分解酵素濃度を測定することを特徴とする濃度測定用センサーである。
このセンサーによると、ＳＯＤを簡便に測定でき、分析コストや分析時間を低減できる。更に生体内に電極系を挿入すると、直接的にかつオンタイムでＳＯＤを検出でき測定精度の向上も期待できる。

次に添付図面に基づいて本発明の濃度測定用センサーの一実施形態を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
図４は、スーパーオキシドイオン濃度測定用装置の一例を示す概略断面図、図５は図４の濃度測定用電極の拡大断面図である。本例は、溶液中のＳＯＤ濃度測定にも応用可能である。
図４において、濃度測定用装置１は、試料室２及び該試料室２に、スーパーオキシドイオンが溶解した試料溶液が供給される試料供給管３及び濃度測定後の試料溶液が排出される排出管４から成っている。試料室２内の試料溶液５中には濃度測定用電極６、カーボン製対極７及び基準電極８が浸漬されている。

前記濃度測定用電極６は図５に示すように、カーボンやチタンからなる導電性部材９、該導電性部材９上に被覆された金下地層10、該金下地層10の金原子に結合したチオール基を有する有機化合物11及び該有機化合物11と相互作用するスーパーオキシドイオン分解酵素（ＳＯＤ）12から成っている。
このような構成から成る装置１の試料室２にスーパーオキシドイオンが溶解した試料溶液５を試料供給管３を通して供給すると、濃度測定用電極６のＳＯＤ12中の銅がＣｕ⁺であれば前述の式（５）により自身がＣｕ²⁺に酸化されるとともにスーパーオキシドイオンを還元して過酸化水素を生成する。又ＳＯＤ12中の銅がＣｕ²⁺であると前述の式（６）により自身がＣｕ⁺に還元されるとともにスーパーオキシドイオンを酸化して酸素ガスを生成する。

このときに流れる電流を対極７及び基準電極８を利用して測定すると、試料室２に供給された試料溶液５中に溶解しているスーパーオキシドイオン濃度を検出することができる。
更に前記濃度測定用電極６に担持されたＳＯＤ12の銅イオンは過酸化水素とは接触しにくく過酸化水素が存在しても該過酸化水素に起因する酸化電流が流れることは殆どなく、従来と異なり正確な濃度測定ができる。
ここに例示したスーパーオキシドイオンとは異なり、本発明でＳＯＤの濃度を測定する場合には、図５においてＳＯＤ12が結合していない電極を使用する。

図６は、本発明の濃度測定用センサーの一実施形態を示す概略断面図である。
濃度測定用センサー21は円筒状本体の下端部を縮径した中空状の形状を有し、この縮径部に作用極22が充填され、該作用極22への導線23がセンサー21の側壁に沿って配設されている。前記作用極22の上方には、離間して対極24と基準極25が配設され、それぞれ導線26、27によりセンサー本体の基部に嵌合されたストッパ28を通って外部に導かれている。
このような構成から成るセンサー21は、人体の要所に挿入され、図４及び５で説明した原理によりＳＯＤの濃度測定が行われる。

次に本発明に係る濃度測定用センサーによる濃度測定の実施例、比較例及び参考例を記載するが、これらは本発明を限定するものではない。

[参考例１]
電極面積0.8 mm²の金線の先端を電極とし、側面部位はシールした。システインを50ｍＭ溶かしたメタノールに該電極を１時間浸漬した。この金電極をシステインのメタノール溶液から取り出した後、メタノールのみの有機溶媒に浸漬して、表面に残っているシステインを除去してチオール修飾電極とした。このチオール修飾電極をＳＯＤを溶解したＥＤＣ溶液に１時間浸漬した後、取り出し、リン酸緩衝液（ｐＨ７）で浸漬して十分に洗浄して表面に残っているＳＯＤを除去して、濃度測定用電極とした。
対極として直径0.5 mmのカーボン棒を、基準電極としてＳＣＥ（銀／塩化銀電極）をそれぞれ前記濃度測定用電極に近接させて設置し、図６に示すような濃度測定用センサーを構成した。

このセンサー内にリン酸緩衝液（ｐＨ７）を満たし、得られた電流と電位の関係を図７のグラフ中に曲線(a) で示した。
この曲線(a) から、＋200 ｍＶ付近に活性部位であるＣｕ⁺のＣｕ²⁺への酸化反応の応答が観察され、又０ｍＶ付近にＣｕ²⁺のＣｕ⁺への還元反応の応答が観察されることが分かる。従って例えば電極電位を300 ｍＶに保持することにより、式（６）に従ってＣｕ²⁺とＯ₂ ^-との反応の結果生じるＣｕ⁺の酸化電流を測定することによりＯ₂ ^-の濃度を評価できる。同様に例えば−200 ｍＶに電極電位を保持すれば、式（５）に従ってＣｕ⁺とＯ₂ ^-の反応で生ずるＣｕ²⁺の還元電流を測定することによりＯ₂ ^-の濃度を評価できる。

[参考例２]
ＳＯＤを被覆した参考例１と同じ濃度測定用センサーを使用し、電極電位を0.3 Ｖに固定した。キサンチンとキサンチン酸化酵素を添加したリン酸緩衝液（ｐＨ７）を試料溶液として６ｍｌ／分の割合で、前記濃度測定用センサーに供給した。キサンチンはキサンチン酸化酵素により尿酸に酸化され、この酸化の過程で中間種としてＯ₂ ^-が生成する。
その時に観察される定常電流値を試料溶液に含まれるキサンチン酸化酵素（つまりＯ₂ ^-）の濃度に対してプロットすると図８の通りであり、直線関係が得られた。

[実施例１]
参考例１で作製したチオール修飾電極を、ＳＯＤ0.56ｍＭ溶解したリン酸緩衝液（ｐＨ７）に浸漬した。対極をカーボン棒（直径0.5mm）とし、基準電極として銀／塩化銀電極をその近傍に設置したセルを構成した。―0.5Ｖから＋0.5Ｖまで100ｍＶ／Ｓで電位を走査したときの電流値を図９中にａで示した。およそ―0.1Ｖ（ＮＨＥでは0.1Ｖ）付近に還元電流ピークが、又0.1Ｖ（ＮＨＥでは0.3Ｖ）付近に酸化電流ピークが検出された。

[比較例１]
ＳＯＤを溶解しなかったこと以外は実施例１と同様の方法で電流を測定した結果を図９中にｂで示した。図示の通り顕著な電流ピークは検出されなかった。

[比較例２]
システインを修飾していない金電極を用いたこと以外は実施例１と同様の方法で電流を測定した結果を図９中にｃで示した。図示の通り顕著な電流ピークは検出されなかった。

[実施例２]
実施例１の電極系でＳＯＤの濃度を0.14ｍＭ、0.28ｍＭ及び0.56ｍＭとしたときの電流波形を図１０にそれぞれｃ、ｂ及びａとして示した。濃度の増加に伴い酸化及び還元電流波形ともその濃度に比例して増大した。

[実施例３]
酵素を結合した実施例１の電極を用い、電極電位を銀／塩化銀電極に対して0.1Ｖに固定して実施例１の液をセルに毎分６ｍｌとなるように供給した。その際に観察された定常電流値を液に含まれるＳＯＤ濃度に対してプロットしたところ図８に類似する直線関係が得られた。

ＳＯＤ中の銅イオンを使用するＯ₂ ^-の酸化還元サイクルを示す説明図。図１の陽極側のＯ₂ ^-の酸化状況を示す説明図。図１の陰極側のＯ₂ ^-の還元状況を示す説明図。濃度測定用装置の一実施形態を示す概略断面図。図１の濃度測定用電極の拡大図。本発明の濃度測定用センサーの一実施形態を示す概略断面図。参考例１の濃度測定用電極及びＳＯＤ修飾していない同様の電極の酸化還元応答を示すグラフ。参考例２における定常電流値とキサンチン酸化酵素濃度の関係を示すグラフ。実施例１及び比較例１及び２の電極の酸化還元応答を示すグラフ。実施例２においてＳＯＤ濃度を変えた場合の酸化還元応答を示すグラフ。

符号の説明

１濃度測定用装置
２試料室
３試料供給管
４排出管
５試料溶液
６濃度測定用電極
７対極
８基準電極
９導電性部材
10 金下地層
11 有機化合物
12 スーパーオキシドイオン分解酵素
21 濃度測定用センサー
22 作用極
24 対極
25 基準極

Claims

導電性部材、該導電性部材表面に設けた、その表面をチオール基を含む炭化水素化合物で薄膜状に修飾した金下地層を含んで成る濃度測定用電極、対極及び基準電極を、スーパーオキシドイオン分解酵素を含む溶液に浸漬し、スーパーオキシドイオン分解酵素中の銅イオンの酸化還元反応に起因する電流を測定して前記スーパーオキシドイオン分解酵素濃度を測定することを特徴とする濃度測定用センサー。
金製導電性部材、該導電性部材表面に設けた、その表面をチオール基を含む炭化水素化合物で薄膜状に修飾した下地層を含んで成る濃度測定用電極、対極及び基準電極を、スーパーオキシドイオン分解酵素を含む溶液に浸漬し、スーパーオキシドイオン分解酵素中の銅イオンの酸化還元反応に起因する電流を測定して前記スーパーオキシドイオン分解酵素濃度を測定することを特徴とする濃度測定用センサー。