JP4034011B2

JP4034011B2 - Cosmetics

Info

Publication number: JP4034011B2
Application number: JP22610699A
Authority: JP
Inventors: 弘田中
Original assignee: Naris Cosmetics Co Ltd
Current assignee: Naris Cosmetics Co Ltd
Priority date: 1999-08-10
Filing date: 1999-08-10
Publication date: 2008-01-16
Anticipated expiration: 2019-08-10
Also published as: JP2001048773A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
この発明は新規な化粧料、特に紫外線照射時に表皮のケラチノサイトから放出され、メラノサイトのメラニン産生を促進させる働きを持つＡＤＦ(adult T cell leukemia derived factor)の産生を抑制させることにより、メラノサイトでのメラニン産生を抑制すると共に、メラノサイトに直接作用してメラニン産生を抑制する物質を共に配合することにより、より効果の高い美白化粧料を提供するものである。さらに詳しくは、紫外線照射時に表皮のケラチノサイトから放出され、メラノサイトのメラニン産生を促進させる働きを持つＡＤＦ(adult T cell leukemia derived factor)の産生を抑制する物質として、トコフェロール類、アスコルビン酸誘導体、システイン誘導体、カロチン類、ユビキノン類、フラボノイド類およびその配糖体、フラボン類およびその配糖体、イソフラボン類およびその配糖体、フラバノン類およびその配糖体、フラボノール類およびその配糖体、カテキン類およびその配糖体、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドおよびその誘導体、グアバ葉抽出物、ひまわり種子抽出物、茶抽出物、エーデルワイス抽出物の群から1種又は2種以上と、メラノサイトに直接作用してメラニン産生を抑制する効果のあるパッシフローラ属植物、ビオラ属植物、クレマチス属植物、ユーコミア属植物の抽出物の群から1種又は2種以上を配合することにより、効果が高くかつ、安全性に優れた化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
私達の肌は、常に外的環境から様々なストレスを受けている。特に紫外線による皮膚への傷害は大きな問題であり、シミ、シワ、肌荒れなどの大きな原因になっている。従来、紫外線によるシミ、ソバカス、日焼けの対策としては、メラニン産生に影響を及ぼす酵素であるチロシナーゼを阻害する物質や、培養したメラノサイトに有効成分を添加して、メラノサイトのメラニン産生を抑制する物質を有効成分として配合する化粧料が利用されてきた。コウジ酸、ハイドロキノン誘導体および、桑白皮、甘草等種々の植物抽出物は、チロシナーゼ阻害作用や、メラノサイトのメラニン産生を抑制することにより美白作用を期待するものである。これらの物質は直接メラノサイトに働きかけ、その作用によりメラニン産生を抑制することにより美白効果を期待するものであった。
【０００３】
【発明が解決しようとする問題点】
紫外線が肌に照射されると炎症が生じた後、肌の黒化が始まる。しかし、紫外線が直接メラノサイトに作用してメラニン産生を刺激するのではない。まず紫外線がケラチノサイトに作用し、ケラチノサイトが各種のサイトカインを放出する。そして、これらのサイトカインがメラノサイトに作用しメラニン産生が亢進することになる。そのため、メラノサイトのメラニン産生だけを抑制する従来の美白剤では、その効果が充分ではないことが明らかになった。
【０００４】
【問題を解決する手段】
したがって、安全性が高く、かつ美白効果の高い化粧料の開発が望まれていた。
表皮のケラチノサイトは紫外線照射時に、ＡＤＦ(adult T cell leukemia derived factor：成人Ｔ細胞白血病由来因子)と言われる分子量13,000のタンパク質を産生する。産生されたＡＤＦはメラノサイトに働きかけ、メラノサイトの受容体の数を増やし、メラニン産生を促進させるということが神戸大の市橋等により報告されている。(Pigment Cell Res.1997; 10: 68-73) そこで、ケラチノサイトからのADF産生を抑制することによりメラニン産生を制御する素材を配合すると共に、直接メラノサイトに作用してメラニン産生を抑制する素材を併用することにより、従来の美白化粧料に比べ、効果の高い化粧料を提案するものである。
そこでこれらの観点から、人ケラチノサイトを試験管系で培養し、紫外線照射時に産生されるＡＤＦの産生量の確認を行った。その結果、ＡＤＦ(adult T cell leukemia derived factor)の産生を抑制する物質として、トコフェロール類、アスコルビン酸誘導体、システイン誘導体、カロチン類、ユビキノン類、フラボノイド類およびその配糖体、フラボン類およびその配糖体、イソフラボン類およびその配糖体、フラバノン類およびその配糖体、フラボノール類およびその配糖体、カテキン類およびその配糖体、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドおよびその誘導体、グアバ葉抽出物、ひまわり種子抽出物、茶抽出物、エーデルワイス抽出物に高い効果が確認された。また、メラノサイトに直接作用してメラニン産生を抑制する効果のある物質であるパッシフローラ属植物抽出物(特願平10-376084)、ビオラ属植物抽出物(特願平10-376085)、クレマチス属植物抽出物(特開平7-277944)、ユーコミア属植物抽出物(特顔平10-376086)を共に配合することにより、効果が高くかつ、安全性に優れた化粧料であることを見いだし、本発明の完成にいたった。
【０００５】
すなわち、本発明はＡＤＦ(adult T cell leukemia derived factor)の産生を抑制する物質として、トコフェロール類、アスコルビン酸誘導体、システイン誘導体、カロチン類、ユビキノン類、フラボノイド類およびその配糖体、フラボン類およびその配糖体、イソフラボン類およびその配糖体、フラバノン類およびその配糖体、フラバノール類およびその配糖体、カテキン類およびその配糖体、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドおよびその誘導体、グアバ葉抽出物、ひまわり種子抽出物、茶抽出物、エーデルワイス抽出物の群から選ばれる１種または２種以上の物質と、メラノサイトに直接作用してメラニン産生を抑制する効果のある物質であるパッシフローラ属植物抽出物(特願平10-376084)、ビオラ属植物抽出物(特願平10-376085)、クレマチス属植物抽出物(特開平7-277944)、ユーコミア属植物抽出物(特顔平10-376086)の群から選ばれる1種又は2種以上の抽出物を共に含有することを特徴とする化粧料を提供するものである。
【０００６】
本発明に用いられるパッシフローラ属の植物は、例えば、パッション・フラワー（Passiflora Incarnata L.）、クダモノトケイ（Passiflora edulis Sims）、ウォーターレモン（P. ligularis Juss）、トケイソウ（P. caerulea L.）、月葉西番蓮（Passiflora altebilobata Hemsl.）、蛇王藤（P. cochinchinensis Spr.）、杯葉西番蓮（P. cupiformis Mast.）等が挙げられる。
【０００７】
本発明に用いられるビオラ属の植物は、例えば、ワイルドパンジー(Viola tricolor L.ssp.Arvensis Murr.)、ニオイスミレ（Viola odorata L.）、スミレ（Voila mandshurica W. Becker）、コスミレ（V. japonica Langsd.）、ノジスミレ（V. yedoensis Makino）、ニョイスミレ（V. verecunda A. Gray）、ツクシスミレ（V. diffusa Gingins）、シロスミレ（V. patrinii DC.）、エゾノタチツボスミレ（V. acuminata Ledeb.）、ネパールスミレ（V. betonicifolia Smith subsp. Nepalensis W. Becker）、シロバナスミレ（V. patrinii DC ex Gingins）、マルバケスミレ（V. collina Bess.）、フキスミレ（V. diamantiaca Nakai）、タチツボスミレ（V. grypoceras A. Gray）、地草果（V. philippica Cav. Subsp. Malesica W. Becker）、スミレサイシン（V. vaginita Maxim.）、ツボスミレ（V. verecunda A. Gray）等が挙げられる。
【０００８】
本発明に用いられるクレマチス属の植物は、例えば、威霊仙(Clematis chinensis Osbeck.)、テッセン（Clematis florida Thunb.）、カザグルマ（Clematis patens Morr.et Decne）、センニンソウ（Sweet Autumn Clematis）等が挙げられる。
【０００９】
本発明に用いられるユーコミア属の植物は、例えば、杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)、トゲミノマサキ（E.trichocarpus Hayata）、ツリバナ（E.oxyphylla Miq.）等が挙げられる。
【００１０】
本発明に用いられるトコフェロール類は、例えば、α-トコフェロール、β- トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロールが挙げられこれらはｄ体ｌ体を問わない。
【００１１】
本発明に用いられるアスコルビン酸誘導体は、例えば、アスコルビン酸ステアレート、アスコルビン酸ジパルミテート等の脂肪酸誘導体、アスコルビン酸−３−リン酸マグネシウム等のリン酸エステル、アスコルビン酸グルコシド等の配糖体等が挙げられる。
【００１２】
本発明に用いられるシステイン誘導体は、例えば、システイン塩酸塩等の塩類、N-アセチル−システイン、カルボシステイン、システインの２量体であるシスチン等が挙げられる。
【００１３】
本発明に用いられるユビキノン類は、例えば、コエンザイムＱ_６（CoQ₆）、コエンザイムＱ₇（CoQ₇）、コエンザイムＱ₈（CoQ₈）、コエンザイムＱ₉（CoQ₉）、コエンザイムＱ₁₀（CoQ₁₀）等が挙げられる。
【００１４】
本発明に用いられるカロチン類には、例えば、カロテン、ルテイン、ビオラキサンチン、スピリロキサンチン、スフェロイデンなどが挙げられ、これらはα体、β体、γ体を問わない。
【００１５】
本発明に用いられるフラボン類は、例えばフラボン及び／又はその配糖体、アピゲニン及び／又はその配糖体、ルテオリン及び／又はその配糖体等が挙げられる。
【００１６】
本発明に用いられるイソフラボン類は、例えば、イソフラボン及び／又はその配糖体等が挙げられる。
【００１７】
本発明に用いられるフラバノン類は、例えば、ナリンゲニン、エリオジクチオール、及びその配糖体であるナリンギン等が挙げられる。
【００１８】
本発明に用いられるカテキン類は、例えば、カテキン、カテキンガラート、ガロカテキン等が挙げられ、これらの異性体も使用できる。
【００１９】
本発明に用いられるフラボノール類は、例えば、ケンフェロール及び／又はその配糖体、クエルセチン及び／又はその配糖体、ミリセチン及び／又はその配糖体等が挙げられる。
【００２０】
本発明に用いられる還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドは、例えば、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド及び／又はその誘導体が挙げられる。
【００２１】
本発明の化粧料に用いるトコフェロール類、アスコルビン酸誘導体、システイン誘導体、カロチン類、ユビキノン類、フラボノイド類およびその配糖体、フラボン類およびその配糖体、イソフラボン類およびその配糖体、フラバノン類およびその配糖体、フラボノール類およびその配糖体、カテキン類およびその配糖体、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドおよびその誘導体の化合物、バンザクロ（Psidium）属植物抽出物、カメリア（Camellia）属植物抽出物、ヘリアンタス（Helianthus）属植物抽出物、レオントポディウム (Leontopodium)属植物抽出物、パッシフローラ属植物抽出物、ビオラ属植物抽出物、クレマチス属植物抽出物、ユーコミア属植物抽出物は独自に抽出してもよいし、精製してもよい。
【００２２】
例えば、抽出するにあたっては上記化合物は、種々の適当な有機溶媒を用いてそれぞれの化合物を豊富に含む植物類から低温下及び／又は加温下で抽出された物が使用できる。また、市販の試薬類をそのまま使用できる。
【００２３】
さらに、本発明の化粧料に用いる植物抽出物の調製も特に限定されるものではない。例えば、種々の適当な有機溶媒を用いてそれぞれの化合物を豊富に含む植物類から低温下及び／又は加温下で抽出された物が使用できる。
【００２４】
抽出溶媒としては、特に限定はされないが例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。就中、水、エチルアルコール、1,3-ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適である。
【００２５】
植物エキスの抽出は、生のままあるいは乾燥した植物体を重量比で１〜1000倍量、特に10〜100倍量の溶媒を用い、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。抽出部位は、どの部分を用いても良く、また全草を用いることもできる。
【００２６】
以上のような条件で得られる植物抽出液は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により濾過等の処理をして、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００２７】
本発明の化粧料における植物抽出液の配合量は、蒸発乾燥分に換算して一般的に0.0001〜20.0重量%が好ましく、特に0.01〜5.0重量%の範囲が最適である。
含有量が0.0001重量%未満であると充分な効果が発揮されず、20.0重量%以上加えても効果はほぼ一定である。
【００２８】
本発明の化粧料は、上記必須成分のほか、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、界面活性剤、油剤、アルコール、PH調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより調製される。本発明の化粧料の剤形は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤形とすることができる。
【００２９】
【実施例】
以下、本発明による有効物質の人ケラチノサイト、およびメラノサイトにかかわる試験、および動物での効果試験の実施例を示す。さらに、その素材を用いた化粧料への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。
【００３０】
【実施例１】
植物抽出液の調製
バンザクロ（Psidium）属植物抽出物、カメリア（Camellia）属植物抽出物、ヘリアンタス（Helianthus）属植物抽出物、レオントポディウム (Leontopodium)属植物抽出物、パッシフローラ属植物抽出物、ビオラ属植物抽出物、クレマチス属植物抽出物、ユーコミア属植物抽出物は、各種植物体乾燥物それぞれの5gに抽出溶剤100mlを加え、室温でときどき撹拌しながら７日間抽出し、濾過して各抽出液を得た。これら各抽出液を減圧濃縮し、下記測定方法による人ケラチノサイトによるＡＤＦ産生抑制作用および、メラノサイトによるメラニン産生抑制試験を測定する試料とした。また、トコフェロール類、アスコルビン酸誘導体、システイン誘導体、カロチン類、ユビキノン類、フラボノイド類およびその配糖体、フラボン類およびその配糖体、イソフラボン類およびその配糖体、フラバノン類およびその配糖体、フラボノール類およびその配糖体、カテキン類およびその配糖体、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドおよびその誘導体の化合物については、市販の試薬を用いた。
【００３１】
【実施例２】
人ケラチノサイトによるＡＤＦ産生抑制作用の測定
（１）試料溶液の調製
前記各種試料を、精製水により１0 mg/ml濃度に溶解したものを試料溶液として調製する。また、水に不溶の試料は、ポリオキシエチレン(50)硬化ひまし油、エタノール、またはジメチルスルホキシドにより可溶化させ、10mg/ml試料濃度に調製したものを試料溶液とする。
【００３２】
（２）人ケラチノサイトの培養
無菌的に採取した正常人包皮から真皮、皮下組織をできるだけ削除する。無菌シャーレに、トリプシン/EDTA(0.25%/0.05%)PBS(-)(リン酸緩衝液)を入れ、表皮を上にして室温で１日放置後、ピンセットで表皮と真皮を分離する。表皮細胞を採集し、遠心チューブにPBS(-)10mlを加え、ピペッテイングにより細胞を分散させ、1000回転、5分間遠心し、上清をすてる。 PBS(-)による細胞の洗浄を３回繰り返す。集まった細胞をケラチノサイト用無血清培地で分散し、コラーゲンコート（１型）シャーレにまき、37℃、5% CO２インキュベーター中で培養する。
培地：ブレットキットＥＧＭ (改変 MCDB 131 培地)
添加物：牛脳抽出物(BBE) 12μg/ml, h-EGF 0.01μg/ml, ハイドロコーチゾン 1μg/ml, ゲンタマイシン 50mg/ml, アンフォテリシン 50μg/ml
【００３３】
（３）人ケラチノサイトによるＡＤＦ産生量の測定
(a)人ケラチノサイトのＡＤＦ誘導
人ケラチノサイトを直径36mmシャーレにコンフルーエントになるまで細胞を培養する。これに(1)で調製した試料を添加し、ＣＯ２インキュベーター中で30分間インキュベートする。培地を除去し、PBS(-)を0.5ml添加し、UV-B 20mJ/cm2を照射し、ＡＤＦを誘導させる。 PBS(-)を除去し、ケラチノサイト用無血清培地2mlを添加し、3時間インキュベートしてＡＤＦの産生を行う。
インキュベート後、トリプシン/EDTA(0.25%/0.05%)PBS(-)1mlで細胞をはがし、3000回転、5分間で細胞を回収する。回収した細胞に lysis buffer (10% NP-40 2.5ml; 100mM Tris-HCl (PH7.5) 5.0ml; 3M−NaCl, 2.5ml; 200mM フェニルメチルスルフォニルフロライド(PMSF)/ジメチルホルムアミド(DMFA)250μl; 0.111 IU/ml アプロチニン 185μl; 10%アジ化ナトリウム 100μl; 蒸留水で 50ml) 30μl を添加し、良く撹拌して溶解する。細胞溶解液を3000回転、5分間、続いて15,000回転、5分間遠心し、上澄みを新しいエッペンチューブに取り、タンパク量を測定する。タンパク量は Bio Rad 社のprotein assay Kit を用いて行った。
【００３４】
(b)タンパク電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）
アクリルアミド15%濃度の lower gelおよび、4.5%濃度の stacking gel を作成する。タンパク量30μgの試料に、それと同量の２倍濃度サンプリングバッファー(0.5M-Tr is-HCl(PH6.8) 2ml; 10%SDS 4ml; β-メルカプトエタノール 1.2ml; グリセロール 2ml；蒸留水 0.8ml；1% BPB, 適量;)を添加し、100℃、5分間加熱し、ゲルに添加する試料を調製する。 Tris塩 30.3g; グリシン 144.0g; SDS 10.0g; 蒸留水で10Lにしたランニングバッファー中で、30mAで電気泳動を行った。
【００３５】
(c)ウエスタンブロッテイング
電気泳動を行ったゲルと PVDF 膜をトランスファーバッファー(グリシン, 72.25g; Tris-base, 15g; SDS, 3.75g; 蒸留水, 4L)中でセットし、500mAで90分間トランスファーを行った。
トランスファー後、PVDF 膜をブロッキング溶液（10g スキンミルク; 10ml 仔牛血清; 90ml 0.05%Tween20 PBS(-)溶液)に浸し、一晩冷蔵放置する。その後、ブロッキング溶液を除去し、0.05%Tween20 PBS(-)溶液で洗浄を3回行う。一次抗体としてADF抗体 (0.35μg/ml)を0.05%Tween20 PBS(-)溶液)で1μl/7mlに希釈し、PVDF膜を一時間処理する。次に二次抗体として抗マウス抗体 (10μl/6ml 0.05%Tween20 PBS(-)溶液)でPVDF膜を一時間処理する。その後0.05%Tween20 PBS(-)溶液で5回洗浄後ImmunoStar(和光純薬工業株式会社)で発色し、13,000ダルトンのバンドの濃淡でＡＤＦ量の確認を行った。
【００３６】
【表１】
ケラチノサイトのADF産生抑制作用

【００３７】
表１より、UV-B照射時のADF産生量を4、非照射のADF産生量を０とした場合、表１に示したdl-α-トコフェロールとラウロイルシステインは、それぞれ100ppmと0.1mＭでADF産生量が１となり、ADFの産生を顕著に抑制していた。また、Ｌ-アスコルビン酸リン酸Mgは100ppm、N-アセチルシステインは1mM、ユビキノンQ₉は10μＭ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドは50μＭ、グアバ葉抽出物、茶抽出物および、ひまわり種子抽出物はそれぞれ100ppmでADF産生量が２となり、ADF産生抑制が認められた。さらに、ミリセチン、ケンフェロール、クエルセチン、ルチンのフラボノール類、ナリンゲニン、ナリンギン、ヘスペリジンのフラバノン類、フラボンのフラボン類、ゲニステインノイソフラボン類、カテキン、エピガロカテキンガレートのカテキン類については、それぞれ50mＭでまた、エーデルワイス抽出物は200ppmでADF産生量が３となり、ADF産生抑制効果が弱いながらも認められた。
【００３８】
【実施例３】
メラノサイトによるメラニン産生抑制効果の測定
つぎにパッシフローラ属植物抽出物、ビオラ属植物抽出物、クレマチス属植物抽出物、ユーコミア属植物抽出物のメラニン産生抑制効果について、マウスメラノーマ細胞によるメラニン産生抑制試験について述べるが、ここに記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。
【００３９】
試料の調製
パッシフローラ属植物抽出物として、パッションフラワー抽出物 1ｍg/ml、又はビオラ属植物抽出物としてワイルドパンジー抽出物 1ｍg/ml、又はクレマチス属植物抽出物として威霊仙抽出物 1ｍg/ml、又はユーコミア属植物抽出物として杜仲抽出物 1ｍg/ml、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 500ppm、牛胎児血清10%の割合になるようにそれぞれの試料を秤取し、良く溶解した後、ダルベッコMEM培養液に加える。培養液を超音波処理により透明にした後、除菌濾過をし試料を調製する。
【００４０】
細胞培養
マウスメラノーマ細胞 B-16 株を用いて、実験を行った。培地にはダルベッコ MEM 培養液に牛胎児血清10%を添加した。パッションフラワー抽出物、ワイルドパンジー抽出物、威霊仙抽出物、杜仲抽出物は水抽出物、50%エタノール水溶液抽出物、100%エタノール抽出物を培地にそれぞれ100ppmの濃度になるように添加した。また、美白効果の陽性対照物質としてコウジ酸を用いた。メラニン量の測定は培養後細胞を2N-NaOHに溶解し、400nmの吸光度を測定した。また、細胞数は2N-NaOHに溶解した細胞溶解液の一部を Bio-Rad社のプロテインアッセイキットにより600nmの吸光度で測定し、タンパク量に換算した。メラニン産生量は、単位タンパク量あたりのメラニン量の割合で計算した。
【００４１】
実験結果
表２にマウスメラノーマ B-16 細胞に及ぼすパッションフラワー抽出物、ワイルドパンジー抽出物、威霊仙抽出物、杜仲抽出物のメラニン産生抑制効果を示した。陽性対照であるコウジ酸は、細胞毒性のかからない上限濃度である100ppm添加で22%のメラニン産生抑制度であった。一方、パッションフラワー抽出物は、細胞毒性がかからない濃度の300ppm添加で水抽出物が53%、50%エタノール水溶液抽出物が46%、100%エタノール抽出物が38%であり、パッションフラワー抽出物に高い美白効果が認められた。ワイルドパンジー抽出物は、細胞毒性がかからない濃度の300ppm添加で水抽出物が38%、50%エタノール水溶液抽出物が35%、100%エタノール抽出物が25%であり、ワイルドパンジー抽出物に高い美白効果が認められた。威霊仙抽出物は、細胞毒性がかからない濃度の100ppm添加で水抽出物が51%、50%エタノール水溶液抽出物が22%、100%エタノール抽出物が15%であり、威霊仙抽出物に高い美白効果が認められた。杜仲抽出物は、細胞毒性がかからない濃度の200ppm添加で水抽出物が46%、50%エタノール水溶液抽出物が33%、100%エタノール抽出物が36%であり、杜仲抽出物に高い美白効果が認められた。
【００４２】
【表２】
メラニン産生抑制効果

【００４３】
【実施例４】
次に本発明の各種成分を配合した化粧料の処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４４】

製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜m)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００４５】

製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜ｌ)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００４６】

製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００４７】

製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。
【００４８】

製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。
50℃でm)を添加し、40℃まで冷却する。
【００４９】

製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。
50℃でm)を添加し、40℃まで冷却する。
【００５０】

製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。
50℃でm)を添加し、40℃まで冷却する。
【００５１】

製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜l)までを加熱溶解し、
80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。
50℃でm)を添加し、40℃まで冷却する。
【００５２】

製法 a)〜i)までを混合し、均一に溶解する。
【００５３】

製法 a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
【００５４】

製法 a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
【００５５】

製法 a)〜h)までを混合し、均一に溶解する。
【００５６】

製法 a)〜m)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【００５７】

製法 a)〜l)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【００５８】

製法 a)〜l)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【００５９】

製法 a)〜l)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【００６０】
【実施例４】に示した処方例＜処方例５：乳液１＞の処方例中、dl-α−トコフェロール1.0%、威霊仙水抽出物1.0%をそれぞれ表３の原料に置き換えて添加し、乳液を調製し効果試験に用いた。
例えば、表中18の乳液は、杜仲エキス1.0%、dl-α−トコフェロール1.0%を含む。
【００６１】
【表３】

【００６２】
有効性試験
黒色モルモットの背部に1cm×1cmの面積に紫外線を２MED照射し、照射後に試料を塗布する。これを1日に1回行い、合計3回繰り返し、皮膚に黒化を起こさせる。その後、1日1回照射部位に試料を塗布し、3週間後に皮膚の黒化度を判定した。判定は、コントロールである無塗布群と比較し、5段階評価にて黒化度を判定した。なお、1匹のモルモット背部には4区画塗布区をとり、一群10匹で試験を行った。有効性の判定はコントロール群と比較してより白かったものが70%以上の場合を◎、40-70%の場合を○、20-40%の場合を△、20%以下の場合を×とした。
表４からも分かるように従来の美白効果が高いといわれるコウジ酸の有効性が20-40%であった。また、直接メラノサイトに作用してメラニン産生を直接抑制する杜仲エキス、パッションフラワーエキス、ワイルドパンジーエキス、威霊仙エキス単独でも有効性は20-40%であった。しかし、ADF産生抑制剤とメラニン産生抑制剤を組み合わせたものでは、いずれも有効性が40%以上で高い有効性を示した。
【００６３】
【表４】

【発明の効果】
以上詳述したごとく、本発明化粧料は、紫外線によるシミやくすにに対して優れた美白効果を示すことが分かった。また、本発明の化粧料は、安全性が高く、安心して使用することができる。[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a novel cosmetic, particularly melanin in melanocytes, by inhibiting the production of ADF (adult T cell leukemia derived factor), which is released from keratinocytes of the epidermis when irradiated with ultraviolet rays and has a function of promoting melanin production of melanocytes. It is intended to provide a whitening cosmetic with a higher effect by suppressing the production and blending together substances that directly act on melanocytes and suppress the production of melanin. More specifically, as substances that suppress the production of ADF (adult T cell leukemia derived factor), which is released from keratinocytes of the epidermis during ultraviolet irradiation and promotes melanin production of melanocytes, tocopherols, ascorbic acid derivatives, cysteine derivatives Carotenes, ubiquinones, flavonoids and glycosides thereof, flavones and glycosides thereof, isoflavones and glycosides thereof, flavanones and glycosides thereof, flavonols and glycosides thereof, catechins and One or more of the glycosides, reduced nicotinamide adenine dinucleotide and its derivatives, guava leaf extract, sunflower seed extract, tea extract, edelweiss extract, directly acting on melanocytes Passiflora plants that have the effect of suppressing melanin production Further, the present invention relates to a cosmetic that is highly effective and has excellent safety by blending one or more from the group of extracts of the genus Viola, Clematis, and Eucomia.
[0002]
[Prior art]
Our skin is always subjected to various stresses from the external environment. In particular, injuries to the skin due to ultraviolet rays are a major problem, and are a major cause of spots, wrinkles, and rough skin. Conventionally, as a countermeasure against ultraviolet rays stains, buckwheat, and sunburn, substances that inhibit tyrosinase, an enzyme that affects melanin production, and substances that suppress melanin production of melanocytes by adding active ingredients to cultured melanocytes Cosmetics formulated as active ingredients have been used. Kojic acid, hydroquinone derivatives, and various plant extracts such as mulberry bark and licorice are expected to have a whitening effect by inhibiting tyrosinase inhibitory activity and melanin production by melanocytes. These substances directly acted on melanocytes and expected whitening effect by suppressing melanin production by the action.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
When ultraviolet rays are applied to the skin, the skin begins to darken after inflammation occurs. However, ultraviolet rays do not directly act on melanocytes to stimulate melanin production. First, ultraviolet rays act on keratinocytes, and keratinocytes release various cytokines. These cytokines act on melanocytes, and melanin production is enhanced. Therefore, it became clear that the conventional whitening agent which suppresses only the melanin production of a melanocyte is not enough.
[0004]
[Means to solve the problem]
Therefore, development of cosmetics with high safety and high whitening effect has been desired.
The keratinocytes of the epidermis produce a protein with a molecular weight of 13,000 which is called ADF (adult T cell leukemia derived factor) when irradiated with ultraviolet rays. It has been reported by Kobe University's Ichihashi et al. That the produced ADF acts on melanocytes to increase the number of melanocyte receptors and promote melanin production. (Pigment Cell Res. 1997; 10: 68-73) Therefore, a material that controls melanin production by inhibiting ADF production from keratinocytes is combined, and a material that directly acts on melanocytes to inhibit melanin production is also used. By doing so, it proposes a cosmetic that is more effective than conventional whitening cosmetics.
Therefore, from these viewpoints, human keratinocytes were cultured in a test tube system, and the production amount of ADF produced during ultraviolet irradiation was confirmed. As a result, tocopherols, ascorbic acid derivatives, cysteine derivatives, carotenes, ubiquinones, flavonoids and their glycosides, flavones and their glycosides as substances that suppress the production of ADF (adult T cell leukemia derived factor) , Isoflavones and glycosides thereof, flavanones and glycosides thereof, flavonols and glycosides thereof, catechins and glycosides thereof, reduced nicotinamide adenine dinucleotide and derivatives thereof, guava leaf extract, High effects were confirmed for sunflower seed extract, tea extract and edelweiss extract. In addition, Pasiflora genus plant extract (Japanese Patent Application No. 10-376084), Viola genus plant extract (Japanese Patent Application No. 10-376085), Clematis genus, which are substances that act directly on melanocytes and suppress melanin production. By combining a plant extract (Japanese Patent Laid-open No. 7-277944) and a Eucomia plant extract (special face 10-376086) together, it has been found that the cosmetic is highly effective and safe. The invention was completed.
[0005]
That is, the present invention relates to substances that suppress the production of ADF (adult T cell leukemia derived factor) as tocopherols, ascorbic acid derivatives, cysteine derivatives, carotenes, ubiquinones, flavonoids and glycosides thereof, flavones and their Glycosides, isoflavones and their glycosides, flavanones and their glycosides, flavanols and their glycosides, catechins and their glycosides, reduced nicotinamide adenine dinucleotide and its derivatives, guava leaf extraction , Plants that are effective in inhibiting melanin production by directly acting on melanocytes and one or two or more substances selected from the group of sucrose, sunflower seed extract, tea extract, edelweiss extract Extract (Japanese Patent Application No. 10-376084), Viola plant extract (Japanese Patent Application No. 10-376085), Clematis Cosmetics characterized by containing together one or more extracts selected from the group of genus plant extracts (Japanese Patent Laid-Open No. 7-277944) and Eucomia genus plant extracts (special face 10-376086) Is to provide.
[0006]
The plants of the genus Passiflora used in the present invention are, for example, Passion flower (Passiflora Incarnata L.), Kudamonotokei (Passiflora edulis Sims), Water lemon (P. ligularis Juss), Passiflora (P. caerulea L.), Moon For example, Pasiflora altebilobata Hemsl., P. cochinchinensis Spr., P. cupiformis Mast.
[0007]
Viola plants used in the present invention include, for example, wild pansies (Viola tricolor L. ssp. Arvensis Murr.), Violets (Viola odorata L.), violets (Voila mandshurica W. Becker), cosme (V. japonica). Langsd.), V. yedoensis Makino, V. verecunda A. Gray, V. diffusa Gingins, V. patrinii DC., V. acuminata Ledeb. Nepal violet (V. betonicifolia Smith subsp. Nepalensis W. Becker), white violet (V. patrinii DC ex Gingins), quince violet (V. collina Bess.), Fuchsia violet (V. diamantiaca Nakai), Tachitsubo violet (V. grypoceras A. Gray), vegetation (V. philippica Cav. Subsp. Malesica W. Becker), violet saicin (V. vaginita Maxim.), Tubosumire (V. verecunda A. Gray), and the like.
[0008]
Examples of Clematis genus plants used in the present invention include Clematis chinensis Osbeck., Tessen (Clematis florida Thunb.), Kazaguruma (Clematis patens Morr. Et Decne), Senninsou (Sweet Autumn Clematis) and the like. .
[0009]
Examples of plants of the genus Eucomia used in the present invention include Eucommia ulmoides Oliv., E. trichocarpus Hayata, and E. oxyphylla Miq.
[0010]
Examples of the tocopherols used in the present invention include α-tocopherol, β-tocopherol, γ-tocopherol, and δ-tocopherol, and these do not matter in d-form.
[0011]
Examples of ascorbic acid derivatives used in the present invention include fatty acid derivatives such as ascorbic acid stearate and ascorbic acid dipalmitate, phosphate esters such as magnesium ascorbate-3-phosphate, and glycosides such as ascorbic acid glucoside. It is done.
[0012]
Examples of the cysteine derivative used in the present invention include salts such as cysteine hydrochloride, N-acetyl-cysteine, carbocysteine, cystine which is a dimer of cysteine, and the like.
[0013]
The ubiquinones used in the present invention include, for example, coenzyme Q ₆ (CoQ ₆ ), coenzyme Q ₇ (CoQ ₇ ), coenzyme Q ₈ (CoQ ₈ ), coenzyme Q ₉ (CoQ ₉ ), coenzyme Q ₁₀ (CoQ ₁₀ ). Etc.
[0014]
Examples of the carotenes used in the present invention include carotene, lutein, violaxanthin, spiriloxanthin, spheroidene and the like, and these may be α-form, β-form, γ-form.
[0015]
Examples of the flavones used in the present invention include flavone and / or its glycoside, apigenin and / or its glycoside, luteolin and / or its glycoside.
[0016]
Examples of the isoflavones used in the present invention include isoflavones and / or glycosides thereof.
[0017]
Examples of the flavanones used in the present invention include naringenin, eriodictyol, and naringin, which is a glycoside thereof.
[0018]
Examples of catechins used in the present invention include catechin, catechin gallate, gallocatechin and the like, and isomers thereof can also be used.
[0019]
Examples of the flavonols used in the present invention include kaempferol and / or its glycoside, quercetin and / or its glycoside, myricetin and / or its glycoside, and the like.
[0020]
Examples of the reduced nicotinamide adenine dinucleotide used in the present invention include reduced nicotinamide adenine dinucleotide and / or a derivative thereof.
[0021]
Tocopherols, ascorbic acid derivatives, cysteine derivatives, carotenes, ubiquinones, flavonoids and their glycosides, flavones and their glycosides, isoflavones and their glycosides, flavanones and the like used in the cosmetics of the present invention Its glycosides, flavonols and their glycosides, catechins and their glycosides, reduced nicotinamide adenine dinucleotide and its derivatives compounds, Psidium plant extract, Camellia plant extract , Helianthus plant extract, Leontopodium plant extract, Passiflora plant extract, Viola plant extract, Clematis plant extract, Eucomia plant extract Or may be purified.
[0022]
For example, in the extraction, the above compounds can be extracted from plants rich in the respective compounds using various appropriate organic solvents at a low temperature and / or under heating. Commercially available reagents can be used as they are.
[0023]
Furthermore, preparation of the plant extract used for the cosmetic of the present invention is not particularly limited. For example, the thing extracted from the plant which is rich in each compound using various suitable organic solvents under low temperature and / or under heating can be used.
[0024]
The extraction solvent is not particularly limited. For example, water; lower monohydric alcohols such as methyl alcohol and ethyl alcohol; liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol and 1,3-butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone Alkyl ethers such as ethyl acetate; hydrocarbons such as benzene and hexane; ethers such as diethyl ether; halogenated alkanes such as dichloromethane and chloroform; In particular, a mixed solvent of one or more of water, ethyl alcohol and 1,3-butylene glycol is particularly suitable.
[0025]
The extraction of the plant extract is performed using a raw or dried plant in a weight ratio of 1 to 1000 times, particularly 10 to 100 times the amount of solvent, 0 ° C. or more, particularly 20 ° C. to 40 ° C. for 1 hour or more, In particular, it is preferably performed for 3 to 7 days. Any part may be used as the extraction site, and whole plant can also be used.
[0026]
The plant extract obtained under the above conditions may be used as an extracted solution, but if necessary, it can be used by appropriately filtering and concentrating and pulverizing by filtration or the like. .
[0027]
The blending amount of the plant extract in the cosmetic of the present invention is generally preferably 0.0001 to 20.0% by weight, particularly in the range of 0.01 to 5.0% by weight in terms of the evaporated and dried content.
If the content is less than 0.0001% by weight, a sufficient effect cannot be exhibited, and the effect is almost constant even when added in an amount of 20.0% by weight or more.
[0028]
In addition to the above essential ingredients, the cosmetic composition of the present invention is an aqueous component, an oily component, a plant extract, an animal extract, a powder, a surfactant, an oil agent, an alcohol, and a pH adjuster. An agent, an antiseptic, an antioxidant, a thickener, a coloring matter, a fragrance, and the like are mixed as necessary and mixed appropriately. The dosage form of the cosmetic of the present invention is not particularly limited, and can be various dosage forms such as lotion, milky lotion, cream, pack, powder, spray, ointment, dispersion, and detergent.
[0029]
【Example】
In the following, there will be shown examples of tests relating to human keratinocytes and melanocytes of active substances according to the present invention, and effects tests on animals. Furthermore, although the application prescription example etc. to the cosmetics using the raw material are described, it cannot be overemphasized that it is not limited to the Example described here.
[0030]
[Example 1]
Preparation of plant extract: Psidium plant extract, Camellia plant extract, Helianthus plant extract, Leontopodium plant extract, Passiflora plant extract, Viola plant extract, Clematis plant extract, Eucomia plant extract, add 100ml of extraction solvent to 5g of each plant dry product, extract for 7 days with occasional stirring at room temperature, filter and extract each A liquid was obtained. Each of these extracts was concentrated under reduced pressure, and used as a sample for measuring an ADF production inhibitory action by human keratinocytes and a melanin production inhibition test by melanocytes by the following measurement method. In addition, tocopherols, ascorbic acid derivatives, cysteine derivatives, carotenes, ubiquinones, flavonoids and glycosides thereof, flavones and glycosides thereof, isoflavones and glycosides thereof, flavanones and glycosides thereof, Commercially available reagents were used for flavonols and their glycosides, catechins and their glycosides, reduced nicotinamide adenine dinucleotide and its derivatives.
[0031]
[Example 2]
Measurement of ADF production inhibitory action by human keratinocytes (1) Preparation of sample solution Samples prepared by dissolving the above various samples to a concentration of 10 mg / ml with purified water are prepared. A sample insoluble in water is a sample solution prepared by solubilizing with polyoxyethylene (50) hydrogenated castor oil, ethanol, or dimethyl sulfoxide and adjusting to a sample concentration of 10 mg / ml.
[0032]
(2) Culture of human keratinocytes Remove dermis and subcutaneous tissue as much as possible from normal human foreskin collected aseptically. Trypsin / EDTA (0.25% / 0.05%) PBS (-) (phosphate buffer) is put into a sterile petri dish, and the epidermis is left at room temperature for 1 day, and then the epidermis and dermis are separated with tweezers. Collect epidermal cells, add 10 ml of PBS (-) to a centrifuge tube, disperse the cells by pipetting, centrifuge at 1000 rpm for 5 minutes, and rinse the supernatant. Repeat washing of cells with PBS (-) three times. The collected cells are dispersed in a serum-free medium for keratinocytes, seeded in a collagen-coated (type 1) petri dish, and cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator.
Medium: Bullet kit EGM (modified MCDB 131 medium)
Additives: Bovine brain extract (BBE) 12μg / ml, h-EGF 0.01μg / ml, hydrocortisone 1μg / ml, gentamicin 50mg / ml, amphotericin 50μg / ml
[0033]
(3) Measurement of ADF production by human keratinocytes
(a) ADF induction of human keratinocytes Cells are cultured until the human keratinocytes become confluent in a 36 mm diameter petri dish. To this, add the sample prepared in (1) and incubate for 30 minutes in a CO2 incubator. The medium is removed, 0.5 ml of PBS (−) is added, and UV-B 20 mJ / cm 2 is irradiated to induce ADF. PBS (-) is removed, 2 ml of serum-free medium for keratinocytes is added and incubated for 3 hours to produce ADF.
After incubation, the cells are detached with 1 ml of trypsin / EDTA (0.25% / 0.05%) PBS (−), and the cells are collected at 3000 rpm for 5 minutes. Collected cells were treated with lysis buffer (10% NP-40 2.5 ml; 100 mM Tris-HCl (PH7.5) 5.0 ml; 3M-NaCl, 2.5 ml; 200 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) / dimethylformamide (DMFA) 250 μl. 0.111 IU / ml aprotinin 185 μl; 10% sodium azide 100 μl; 50 ml with distilled water) Add 30 μl) and mix well to dissolve. The cell lysate is centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes, followed by 15,000 rpm for 5 minutes, and the supernatant is placed in a new Eppendorf tube and the amount of protein is measured. The amount of protein was determined using Bio Rad protein assay Kit.
[0034]
(b) Protein electrophoresis (SDS-PAGE)
Make a 15% acrylamide lower gel and a 4.5% stacking gel. To a sample with 30 μg protein, double the same amount of sampling buffer (0.5 M-Tris-HCl (PH6.8) 2 ml; 10% SDS 4 ml; β-mercaptoethanol 1.2 ml; glycerol 2 ml; distilled water 0.8 ml) 1% BPB, appropriate amount;) is added and heated at 100 ° C. for 5 minutes to prepare a sample to be added to the gel. Tris salt 30.3 g; Glycine 144.0 g; SDS 10.0 g; Electrophoresis was performed at 30 mA in a running buffer adjusted to 10 L with distilled water.
[0035]
(c) Set the gel and PVDF membrane subjected to Western blotting electrophoresis in transfer buffer (glycine, 72.25g; Tris-base, 15g; SDS, 3.75g; distilled water, 4L), and transfer at 500mA for 90 minutes. Went.
After transfer, the PVDF membrane is soaked in blocking solution (10 g skin milk; 10 ml calf serum; 90 ml 0.05% Tween20 PBS (-) solution) and left refrigerated overnight. Thereafter, the blocking solution is removed, and washing is performed 3 times with 0.05% Tween20 PBS (−) solution. ADF antibody (0.35 μg / ml) is diluted to 1 μl / 7 ml with 0.05% Tween20 PBS (−) solution as a primary antibody, and the PVDF membrane is treated for 1 hour. Next, the PVDF membrane is treated with an anti-mouse antibody (10 μl / 6 ml 0.05% Tween20 PBS (−) solution) as a secondary antibody for 1 hour. Thereafter, the plate was washed 5 times with 0.05% Tween20 PBS (-) solution, developed with ImmunoStar (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the amount of ADF was confirmed by the density of a band of 13,000 Dalton.
[0036]
[Table 1]
Inhibitory effect of keratinocytes on ADF production

[0037]
From Table 1, when the amount of ADF produced during UV-B irradiation is 4 and the amount of non-irradiated ADF produced is 0, dl-α-tocopherol and lauroylcysteine shown in Table 1 are 100 ppm and 0.1 mM, respectively. The production amount was 1, and the production of ADF was remarkably suppressed. L-ascorbic acid Mg is 100 ppm, N-acetylcysteine is 1 mM, ubiquinone Q ₉ is 10 μM, reduced nicotinamide adenine dinucleotide is 50 μM, guava leaf extract, tea extract and sunflower seed extract are ADF production was 2 at 100 ppm each, and ADF production inhibition was observed. Furthermore, myricetin, kaempferol, quercetin, rutin flavonols, naringenin, naringin, hesperidin flavanones, flavone flavones, genisteinoisoflavones, catechin, epigallocatechin gallate catechins, respectively, at 50 mM, The Edelweiss extract had an ADF production of 3 at 200 ppm, which was recognized although the ADF production inhibitory effect was weak.
[0038]
[Example 3]
Measurement of melanin production inhibitory effect by melanocytes Next, melanin production inhibitory effect of Pasciflora plant extract, Viola plant extract, Clematis plant extract, Eucomia plant extract, mouse melanoma cell inhibition test It will be appreciated that the present invention is not limited to the embodiments described herein.
[0039]
Sample preparation Passiflora genus extract, Passion flower extract 1 mg / ml, Viola genus plant extract 1 mg / ml, or Clematis genus plant extract 1 mg / ml, or Weigh each sample to a ratio of 1mg / ml of Tochu extract, 500ppm of polyoxyethylene hydrogenated castor oil, 10% fetal bovine serum as a Eucomia genus plant extract, dissolve well, and then add to Dulbecco's MEM culture solution. Add. The culture solution is clarified by ultrasonic treatment, and then subjected to sterilization filtration to prepare a sample.
[0040]
Experiments were performed using cell culture mouse melanoma cell line B-16. To the medium, 10% fetal calf serum was added to Dulbecco's MEM culture solution. The passion flower extract, wild pansy extract, Wei Sensen extract, and Tochu extract were added with a water extract, a 50% aqueous ethanol extract, and a 100% ethanol extract, respectively, to a concentration of 100 ppm in the medium. Kojic acid was used as a positive control substance for whitening effect. For measurement of the amount of melanin, the cells were dissolved in 2N-NaOH after the culture, and the absorbance at 400 nm was measured. In addition, the number of cells was determined by measuring a part of the cell lysate dissolved in 2N-NaOH with an absorbance at 600 nm using a protein assay kit manufactured by Bio-Rad, and converting it to the amount of protein. The amount of melanin production was calculated by the ratio of the amount of melanin per unit protein amount.
[0041]
Experimental Results Table 2 shows the melanin production inhibitory effect of passion flower extract, wild pansy extract, Wei Sensen extract and Tochu extract on mouse melanoma B-16 cells. Kojic acid, which is a positive control, had a melanin production suppression level of 22% when added at 100 ppm, which is an upper limit concentration that does not cause cytotoxicity. Passion flower extract, on the other hand, is 53% water extract, 46% 50% ethanol aqueous extract and 38% 100% ethanol extract with the addition of 300 ppm of non-cytotoxic concentration. A high whitening effect was observed. Wild pansy extract is highly whitening to wild pansy extract with 38% water extract, 35% 50% ethanol aqueous extract and 25% 100% ethanol extract at 300 ppm concentration that does not cause cytotoxicity. The effect was recognized. Wei Sensen extract is 51% water extract, 50% ethanol aqueous solution extract 22%, 100% ethanol extract 15% with 100ppm concentration that does not cause cytotoxicity. The effect was recognized. Tochu extract is 46% water extract, 33% 50% ethanol aqueous extract and 36% 100% ethanol extract with 200 ppm concentration that does not cause cytotoxicity, and it has a high whitening effect. Admitted.
[0042]
[Table 2]
Melanin production inhibitory effect

[0043]
[Example 4]
Next, although the formulation example of the cosmetics which mix | blended various components of this invention is shown, this invention is not limited to this.
[0044]

The process up to production methods a) to f) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. g) to m) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to f), and cool to 40 ° C. with stirring.
[0045]

The process up to production methods a) to f) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. g) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to f), and cool to 40 ° C. with stirring.
[0046]

The process up to production methods a) to f) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. g) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to f), and cool to 40 ° C. with stirring.
[0047]

The process up to production methods a) to f) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. g) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to f), and cool to 40 ° C. with stirring.
[0048]

The process up to production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. f) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to e), and cool to 50 ° C. with stirring.
Add m) at 50 ° C and cool to 40 ° C.
[0049]

The process up to production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. f) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to e), and cool to 50 ° C. with stirring.
Add m) at 50 ° C and cool to 40 ° C.
[0050]

The process up to production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. f) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to e), and cool to 50 ° C. with stirring.
Add m) at 50 ° C and cool to 40 ° C.
[0051]

The process up to production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. f) to l) are heated and dissolved,
Maintain at 80 ° C., emulsify in addition to a) to e), and cool to 50 ° C. with stirring.
Add m) at 50 ° C and cool to 40 ° C.
[0052]

Mix production methods a) to i) and dissolve uniformly.
[0053]

Mix production methods a) to h) and dissolve uniformly.
[0054]

Mix production methods a) to h) and dissolve uniformly.
[0055]

Mix production methods a) to h) and dissolve uniformly.
[0056]

Mix production methods a) to m), and stir and disperse well until uniform.
[0057]

Mix production methods a) to l), stir and disperse well to make uniform.
[0058]

Mix production methods a) to l), stir and disperse well to make uniform.
[0059]

Mix production methods a) to l), stir and disperse well to make uniform.
[0060]
Example 4 In the formulation example of <Prescription Example 5: Emulsion 1> shown in Example 4, 1.0% of dl-α-tocopherol and 1.0% Wei Sensen extract were added to the raw materials shown in Table 3, respectively, An emulsion was prepared and used for effect testing.
For example, the emulsion in Table 18 contains 1.0% Tochu extract and 1.0% dl-α-tocopherol.
[0061]
[Table 3]

[0062]
Efficacy test The back of a black guinea pig is irradiated with 2M ultraviolet rays in an area of 1cm x 1cm, and a sample is applied after the irradiation. This is done once a day and repeated a total of 3 times to cause skin darkening. Thereafter, a sample was applied to the irradiated site once a day, and the degree of skin darkening was determined after 3 weeks. The determination was compared with the non-application group as a control, and the degree of blackening was determined by a five-step evaluation. In addition, the test was conducted with 10 animals in a group of 4 guages applied on the back of one guinea pig. Evaluation of effectiveness is ◎ when 70% or more is whiter compared to the control group, ○ when 40-70%, △ when 20-40%, × when 20% or less did.
As can be seen from Table 4, the effectiveness of kojic acid, which is said to have a high whitening effect, was 20-40%. In addition, the effectiveness of the Tochu extract, the passion flower extract, the wild pansy extract and the Wei Sensen extract alone, which directly acts on melanocytes and directly suppresses melanin production, was 20-40%. However, the combination of an ADF production inhibitor and a melanin production inhibitor was highly effective at 40% or more.
[0063]
[Table 4]

【The invention's effect】
As described above in detail, it has been found that the cosmetic of the present invention exhibits an excellent whitening effect against stains caused by ultraviolet rays. The cosmetic of the present invention is highly safe and can be used with confidence.

Claims

An ADF (adult T cell leukemia derived factor) production inhibitor comprising one or more selected from sunflower (Helianthus annus L.) seed extract and edelweiss (Leontopodium alpinum) extract .

Tochu (Eucommiaulmoides Oliv.) Wild pansies (Viola tricolor L.ssp.ArvensisMurr.) , Passion flower ( Passiflora Incarnata L. ), Wei Sensen (Clematis chinensis Osbeck.)
Selected from extracts 1 Seed or 2 More than seeds and sunflower (Helianthus annus L.) Seed extract, Edelweiss (Leontopodiumalpinum) Selected from extracts 1 Seed or 2 Whitening agent characterized by blending more than seeds.