JP4020449B2

JP4020449B2 - Labeling method with isocarbacycline derivative labeled compound

Info

Publication number: JP4020449B2
Application number: JP24312296A
Authority: JP
Inventors: 恭良渡辺; 篤夫羽里; 由美子渡辺; 正昭鈴木
Original assignee: Japan Science and Technology Agency; National Institute of Japan Science and Technology Agency
Current assignee: Japan Science and Technology Agency; National Institute of Japan Science and Technology Agency
Priority date: 1996-09-13
Filing date: 1996-09-13
Publication date: 2007-12-12
Anticipated expiration: 2016-09-13
Also published as: JPH1087608A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、イソカルバサイクリン誘導体標識化合物を用いる標識化方法に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、脳内におけるプロスタサイクリン受容体の機能探索、特に単離されていない新たな中枢型プロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化のプローブとして、同位体元素によって標識したイソカルバサイクリン誘導体標識化合物に用いる標識化方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、プロスタグランジン類は、強い血小板凝集抑制作用、血管拡張性血圧降下作用、胃酸分泌抑制作用、平滑筋収縮作用、細胞保護作用、利尿作用等多彩な生理活性を有しており、心筋梗塞、狭心症、動脈硬化、高血圧症、十二指腸潰瘍、分娩誘発、中絶等の治療または予防に有用な化合物であることが知られている。
【０００３】
ところで天然プロスタサイクリンは、生体内において、主として血管内皮で産生される局所ホルモンであり、その強力な生理活性、例えば血小板凝集抑制作用、血管拡張作用等を利用して、このものを直接医薬品として供する試みが行われてきた（P.J.Lewis, J.O.Grady, Clinical Pharmacology of Prosutaglangin)。しかしながら、天然プロスタサイクリンは分子内に加水分解されやすいエノールエーテル結合を有するために、中性または酸性条件下で容易に失活してしまうという問題がある。従って、医薬品としてはその化学的不安定性のために好ましい化合物とは云えない。このために天然プロスタサイクリンと同様の活性を示し、化学的に安定なプロスタサイクリン誘導体の合成研究が鋭意行われてきた(Synthesis, １９８４，４４９）。その課程において、プロスタサイクリンの６，９位の酸素原子をメチレン基（−ＣＨ＝）に置き換えることにより、化学的安定性を充分に満足するプロスタサイクリンである９（Ｏ）−メタノ−Δ⁶⁽⁹α⁾−プロスタグラジンＩ₁類（イソカルバサイクリン類）が合成された（特開昭５９−２１００４４号参照）。
【０００４】
このようにプロスタサイクリン誘導体の合成研究が進むなかで、プロスタサイクリンの受容体に関する研究も精力的に行われてきた。プロスタサイクリンの受容体はその生理活性から主に血管や血小板などに存在し、循環器作用の調節に重要な役割を担っているものとされてきた。
一方脳に関しては、ＰＧＤ₂，ＰＧＥ₂、ＰＧＦ₂α以外にもＰＧＩ₂やＴＸＡ₂の存在が知られていた。しかしながらこの両者は、脳神経系における作用とともに、脳実質細胞で産生されるか否かもあまり明らかで無く、脳内の血管や血小板に由来するものと考えられてきた。これに対し、１９８５年、Kellerら（Neurochem Int ７：６５５−６６５，１９８５）により、一次培養細胞アストログリア細胞が上記３者のＰＧ以外にＰＧＩ₂やＴＸＡ₂の代謝物を多く産生することが明らかとなった。また、渡辺ら（Neurosci. Res.１６，(Suppl) Ｓ２１，１９９１）は、ラベル化されたプロスタサイクリン誘導体（〔³Ｈ〕iloprost-Schering)を用いたニホンザル脳半球の大冠状切片でのin vitroオートラジオグラフィー評価を行った結果、プロスタサイクリン結合部位を線条体、扁桃核、海馬、大脳皮質の一部に見いだした。またここで見いだされた〔³Ｈ〕iloprostの結合部位は〔³Ｈ〕ＰＧＥ₂の結合部位とは局在が異なり、また、ＰＧＥ₂とＰＧＥ₁が同一の受容体を認識することが明らかになっている。血小板では、iloprostの結合部位はＰＧＥ₁とも反応し、ＰＧＥ₂の受容体とは全く異なることが知られている。以上の経緯からも、中枢神経系での新たなＰＧＩ₂受容体の存在がクローズアップされている。さらに、iloprostの神経系の作用としては、ドーパミンＤ₁受容体結合阻害、鎮静、抗けいれん、抗低酸素（低酸素での延命効果）やアンフェタミンで拮抗される脳波の同期化誘導作用などが知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
たとえば以上のように、従来は、プロスタサイクリン誘導体についての検討の目的は、その強力な生理活性、例えば血小板凝集抑制作用、血管拡張作用等を利用した循環器領域に対する医薬品の開発が主たるものであった。しかしながらこのような作用はこれら化合物を中枢神経系に適用しようとした場合には副作用となるという問題があった。そこでこの発明の発明者らは上述した諸点に着目し、脳内のプロスタサイクリン受容体についての検討を課題とし、まずなによりも、その受容体に対するプローブ、その受容体取得のためのフォトアフィニティーラベル用化合物、あるいは中枢神経系医薬品として有用な９（Ｏ）−メタノ−Δ⁶⁽⁹α⁾−プロスタグランジンＩ₁類（イソカルバサイクリン類）に着目してきた。
【０００６】
すなわち、この発明は、以上の通りの事情からなされたものであって、従来の技術知識の限界を越えて、脳内におけるプロスタサイクリン受容体の機能探索研究に有用なばかりでなく、中枢神経系におけるプロスタサイクリン誘導体の適用領域特定に関しても有用な化合物である、新規なイソカルバサイクリン誘導体標識化合物を用いる標識化方法を提供することを目的としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
この発明は、上記課題を解決する目的のために
下記式〔Ｉ〕
【０００８】
【化６】
【０００９】
〔式中、Ｒ^１は水素原子、アルキル基または１当量のカチオンを示し、Ｒ^２はアルキレン基を示し、Ｒ^３はメチル基を示す。〕で表されるイソカルバサイクリン誘導体が^３Ｈ標識されているイソカルバサイクリン誘導体標識化合物を、中枢神経系プロスタサイクリン受容体のプローブとする標識化方法を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
この発明は、上記のとおりの式〔Ｉ〕で表わされる新規なイソカルバサイクリン誘導体が^３Ｈ標識されているイソカルバサイクリン誘導体標識化合物を、中枢神経プロスタサイクリン受容体のプローブとする標識化方法を提供するものであるが、以下に詳しく発明の実施の形態について説明する。
化合物の構造
上記式〔Ｉ〕において、Ｒ¹は水素原子、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基または１当量のカチオンを示すものであるが、このうちアルキル基としては炭素数１〜５の低級アルキル基がより具体的に例示され、たとえば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基，ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基，ｎ−ペンチル基等を挙げることができる。なかでも炭素数１〜２のアルキル基が好ましい。１当量のカチオンとしては、例えば、Ｎａ⁺、Ｋ⁺、などのアルカリ金属カチオン；１／２Ｃａ²⁺、１／２Ｍｇ²⁺、１／３Ａｌ³⁺などの２価もしくは３価の金属カチオン；アンモニウムイオン、テトラメチルアンモニウムイオンなどのアンモニウムイオンが挙げられる。そして、このＲ¹としては、特に、水素原子、メチル基が好ましいものとして挙げることができる。
【００１１】
また上記〔Ｉ〕におけるＲ^２のアルキレン基としては、直鎖状あるいは分岐状のアルキレン基、たとえば−（ＣＨ_２）_ｎ−（ｎは１〜４の数を表す）で表されるものを例示することができ、このうち、好ましくはｎが１である。
また、上記式〔Ｉ〕において、オメガ鎖上のトリル基上のＲ ^３はメチル基を示すが、その置換位置はメタ位が好ましく、アジド基の置換位置はもう一方のメタ位が好ましい。
【００１２】
さらに、上記式〔Ｉ〕で表されるイソカルバサイクリン類の８位、９位、１１位、１２位、１５位の立体配置は天然プロスタサイクリンと同一である。また１５位はＲ体、Ｓ体いずれの立体配置でもかまわないが、特に、Ｒ体が好ましく、この立体配置を有するものが特に有用な異性体である。ただし、この発明に関わるイソカルバサイクリン誘導体は、こうした立体配置であるもの、またはその鏡像体、あるいはそれらの不斉炭素に由来するすべての異性体を含むものである。
【００１３】
この発明においてイソカルバサイクリン誘導体の好ましい具体例を挙げれば、次のとおりである。
（１）１６−（３−アジド−５−メチル）−１７，１８，１９，２０−テトラノル−９（Ｏ）−メタノ−Δ⁶⁽⁹α⁾−プロスタグランジンＩ₁
（２）１６−（３−アジド）−１７，１８，１９，２０−テトラノル−９（Ｏ）−メタノ−Δ⁶⁽⁹α⁾−プロスタグランジンＩ₁
（３）１７−（３−アジド−５−メチル））−１８，１９，２０−テトラノル−９（Ｏ）−メタノ−Δ⁶⁽⁹α⁾−プロスタグランジンＩ₁
（４）（１）〜（３）のメチルエステル
（５）（１）〜（３）の１５Ｒ体
もちろん、この発明は、これらに限定されるものではない。
製造法
そして、上記式〔Ｉ〕で表されるこの発明のイソカルバサイクリン誘導体は次のようにして製造される。
【００１４】
すなわち、下記式〔II〕
【００１５】
【化７】
【００１６】
〔式中、Ｒ^２はアルキレン基を示し、Ｒ ^３はメチル基を示す〕で表されるＨｏｒｎｅｒ−Ｅｍｍｏｎｓ試薬と下記式〔ＩＩＩ〕
【００１７】
【化８】
【００１８】
〔式中、Ｒ⁴は炭素数１〜５の低級アルキル基を示し、Ｒ⁵は水素原子またはテトラヒドロピラニル基を示す。〕
で表される化合物を塩基の存在下に反応させ、必要に応じて水酸基の保護基を脱保護し、下記式〔IV〕
【００１９】
【化９】
【００２０】
〔式中、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は上記定義に同じである。〕
で表される化合物に変換し、ついで還元反応、さらに必要に応じた加水分解反応に付すことを特徴とする下記式〔Ｉ〕
【００２１】
【化１０】
【００２２】
〔式中、Ｒ^１は水素原子、アルキル基または１当量のカチオンを示し、Ｒ^２はアルキレン基を示し、Ｒ ^３はメチル基を示す。〕で表されるイソカルバサイクリン誘導体を製造する。
【００２３】
ホスホネート化合物〔II〕に対しては、塩基は０．１〜１０倍当量、好ましくは０．９〜１．４倍当量、アルデヒド化合物〔III 〕は０．１〜１０倍当量、好ましくは０．９〜１．４倍当量用いればよい。反応温度は０℃〜１５０℃の範囲で行われ、好ましくは１０℃〜８０℃である。反応時間は化合物により異なるが１０分から２４時間程度である。反応終了後、抽出やカラムクロマトグラフィー等の通常の処理によって前記化合物〔IV〕が得られる。原料となるアルデヒド体〔III 〕は、下記反応式Ａに示すように、例えばイソカルバサイクリンメチルエステル（１）のシャープレス(Sharpless) 酸化、水酸基のアセチル化、エポキシの開裂、脱アセチル化によりテトラオール体（４）に変換し、このものをＮａＩＯ₄による酸化的開裂によってアルデヒド体（５）とすることができる。
【００２４】
【化１１】
【００２５】
Horner-Emmons 反応にはアルデヒド体を直接用いてもよいが、化合物（４）の酸化によって系内に生じたアルデヒド体（５）をそのまま単離せずに用いてもよい。
一方、前記式〔II〕のHorner-Emmons 試薬は、相当するエステル化合物より、例えば反応式Ｂに示すルートにて合成することができる。
【００２７】
【化１３】
【００２８】
【化１４】
【００２９】
たとえば以上のようにして原料合成された式〔II〕の化合物と式〔III 〕の化合物とのHorner-Emmons 反応によって、前記式〔IV〕で表される化合物が得ることができる。この化合物〔IV〕は次いで還元反応に付し、必要に応じて加水分解反応に付すことができる。
還元反応はそれ自体公知の方法で行うことができる。還元反応の試薬としては、金属水素錯化合物が用いられる。かかる金属水素錯化合物は、水素化アルミニウム錯化合物、水素化ホウ素錯化合物が挙げられる。水素化アルミニウム錯化合物としては、水素化アルミニウムリチウム、水素化ジエトキシアルミニウムリチウム、水素化トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウム、水素化アルミニウムマグネシウム、水素化アルミニウム塩化マグネシウム、水素化アルミニウムナトリウム、水素化トリエトキシアルミニウムナトリウム、水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム等が挙げられる。水素化ホウ素錯化合物としては、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリメトキシホウ素ナトリウム、硫化水素化ホウ素ナトリウム、シアン化水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、シアン化水素化ホウ素リチウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化ホウ素カルシウム、水素化ホウ素カリウム、水素化ホウ素亜鉛、水素化ホウ素テトラメチルアンモニウム等が挙げられる。還元反応の試薬としては、これら金属水素錯化合物のうち、水素化ホウ素錯化合物が好ましく、特に、水素化ホウ素ナトリウムが好ましいものとして例示される。
【００３０】
水素化ホウ素ナトリウムを用いる還元反応は塩化ランタニド類存在下でおこなうのが好ましい。かかる塩化ランタニド類としては三塩化セリウム、三塩化サマリウム、三塩化ユーロピウム等が挙げられ、特に、三塩化セリウムが好ましく用いられる。
還元反応は、上記式〔IV〕で表される合成中間体１当量に対し、金属水素錯化合物が発生しうる水素化物イオンにして１当量から１００当量、好ましくは１〜５０当量の範囲でおこなわれる。水素化ホウ素ナトリウムとともに用いられる塩化ランタニド類は、水素化ホウ素ナトリウム１当量に対して、塩化ランタニド類０．２〜５０当量、好ましくは０．５〜１０当量用いられる。
【００３１】
反応溶媒は、用いる還元反応試薬によって異なるが、通常メタノール、エタノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のアルコール類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジグライム等のエーテル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチルホスホリックトリアミド等の非プロトン性極性溶媒；水、アセトニトリル等を単一あるいは任意の割合に混合して用いる。好ましくはメタノール、エタノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のアルコール類が用いられ、特にメタノールが好ましい。
【００３２】
還元反応の反応温度は、用いる試薬、反応溶媒によって異なるが、好ましくは−１０℃から１００℃、特に好ましくは２０℃〜５０℃の範囲である。還元反応の反応時間は使用する試薬、反応溶媒、反応温度によって異なるが、通常５時間以内の範囲でおこなわれ、好ましくは１分〜１時間の範囲である。
エステル類の加水分解反応は、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムの水溶液もしくは水−アルコール混合溶媒、あるいはナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドを含むメタノール、エタノール溶液中で加水分解せしめることにより実施することができる。
【００３３】
目的物の単離精製は通常の方法、すなわち、抽出、クロマトグラフィー等の一般的な手段によって行うことができる。
作用
以上、詳しく説明したとおりの製造法によって提供されるこの発明のイソカルバサイクリン誘導体は脳内の視床や線条体のプロスタサイクリン受容体（ここで、中枢神経型という）に強く結合する。また、既に神経結紮実験などで脳外の組織（末梢神経組織）と考えられる結節核(Nodus ganglion)で生産されて延髄孤束核へ軸索輸送されているプロスタサイクリン受容体（ここで末梢神経系という）には、この発明のイソカルバサイクリン誘導体はあまり結合しない。特筆すべきは、天然のイソカルバサイクリンとは１５位の立体が反対の１５Ｒ−１６−（３−アジド−５−メチル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンや１５Ｒ−１６−（３−アジド）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンが脳内の視床のプロスタサイクリン受容体（中枢神経系）に強く結合したことである。従って、本発明によって提供されるイソカルバサイクリン誘導体は、脳内、特に中枢神経組織で産生されるプロスタサイクリン受容体の探索研究に有用であるばかりでなく、中枢神経系の疾患の治療薬として期待できる有用な化合物である。
【００３４】
このような作用の特徴を踏まえ、この発明では、前記の式〔Ｉ〕で表わされるイソカルバサイクリン誘導体がについて、^３Ｈ標識されていることを特徴とするイソカルバサイクリン誘導体標識化合物を、中枢神経プロスタサイクリン受容体のプローブとする標識化方法を提供する。
この標識化合物によって、脳内、特に中枢神経組織におけるプロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化のプローブとしての役割が果たされ、また、中枢神経系の疾患の治療への対応が容易となる。
【００３５】
標識化合物そのものは、サイクロトロン等の利用によって製造されることになる。
【００３６】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明により、脳内、特に中枢組織で産生されるプロスタサイクリン受容体の探索研究（特に、構造未知の中枢型プロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化による取得）や、中枢神経系の疾患の治療薬の開発に有用なイソカルバサイクリン誘導体標識化合物を用いる標識化方法が提供される。
【００３７】
【化１５】
【００３８】
１０ｍｌの丸底フラスコに２−オキソ−３−（３−アジドフェニル）プロピルホスホン酸ジメチル（５．３ｍｇ，１９μｍｏｌ）の０．４ｍｌＤＭＥ溶液を調製した。この溶液にＮａＨ（６０％ｉｎｏｉｌ，０．８ｍｇ，１９μｍｏｌ）を室温で加え、３０分間攪拌し、黄色サスペンジョンを得た。次いで、ここにメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−ヒドロキシビシクロ〔３．３．０〕−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（２．４ｍｇ，９．４μｍｏｌ）の０．４ｍｌＤＭＥ溶液を滴下し、１．５時間攪拌した。反応後飽和塩化アンモニウム水溶液（２ｍｌ）と酢酸エチル（１ｍｌ）を反応混合物に加え抽出操作を行った。水層をさらに３回酢酸エチル（１．５ｍｌ×３）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル７００ｍｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）に供し、１６−（３−アジドフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（４．３ｍｇ、９３％）を淡黄色油状物として得た。
【００３９】
【表１】
【００４０】
参考例２
＜１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルおよびその１５位のエピマーの合成＞
【００４１】
【化１６】
【００４２】
１０ｍｌのテストチューブに１６−（３−アジドフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（８．１ｍｇ、１９μｍｏｌ）の０．８ｍｌメタノール溶液を調製した。この溶液にＣｅＣｌ₃・７Ｈ₂Ｏ（９．０ｍｇ，２４μｍｏｌ）を室温で加え、この混合物を０℃に冷却後ＮａＢＨ₄（１．２ｍｇ，３２μｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）にあけ、このものを５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１．５ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：２，１：２）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｒ体、低極性、３．９ｍｇ，４８％）および１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｓ体、高極性、４．０ｍｇ，４９％）を無色油状物として得た。
【００４３】
【表２】
【００４４】
参考例３
＜１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンの合成＞
【００４５】
【化１７】
【００４６】
１０ｍｌのテストチューブに１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１．６ｍｇ，３．８μｍｏｌ）の０．５ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＮａＯＨ水溶液（５Ｎ溶液，０．１ｍｌ，０．５ｍｍｏｌ）を室温で加え１２時間攪拌した。反応混合物を１ｍｌの水で希釈し、ＮａＨＳＯ₄を加えてｐＨ４に調整した。得られた混合物を５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル７００ｍｇ，ジクロロメタン：メタノール＝９：１）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｒ体、１．５ｍｇ，９７％）を淡黄色油状物とした得た。
【００４７】
【表３】
【００４８】
同様にして１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１．３ｍｇ，３．０μｍｏｌ）より１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｓ体、１．２ｍｇ，９５％）を淡黄色油状物とした得た。
【００４９】
【化１８】
【００５０】
【表４】
【００５１】
実施例１
＜１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルの合成＞
【００５２】
【化１９】
【００５３】
１０ｍｌの丸底フラスコに２−オキソ−３−（３−アジド−５−メチルフェニル）プロピルホスホン酸ジメチル（９．８ｍｇ，３３μｍｏｌ）の０．５ｍｌＤＭＥ溶液を調製した。この溶液にＮａＨ（６０％ｉｎｏｉｌ，１．３ｍｇ，３３μｍｏｌ）を室温で加え、３０分間攪拌し、黄色サスペンジョンを得た。次いで、ここにメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−ヒドロキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（３．９ｍｇ，１５μｍｏｌ）の０．５ｍｌＤＭＥ溶液を滴下し、１時間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１．５ｍｌ）を加えて反応を終結させ、次いで酢酸エチル（１ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１．５ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル７００ｍｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）に供し、１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（５．７ｍｇ，８５％）を淡黄色油状物として得た。
【００５４】
【表５】
【００５５】
実施例２
＜１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルおよびその１５位のエピマーの合成＞
【００５６】
【化２０】
【００５７】
１０ｍｌのテストチューブに１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（４．３ｍｇ，９．８μｍｏｌ）の０．５ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＣｅＣｌ₃・７Ｈ₂Ｏ（６．７ｍｇ，１８μｍｏｌ）を室温で加え、この混合物を０℃に冷却後ＮａＢＨ₄（０．５ｍｇ，１３μｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）にあけ、このものを５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル０．５ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，１：１）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｒ体、低極性、２．２ｍｇ，５０％）および１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｓ体、高極性、２．２ｍｇ，５０％）淡黄色油状物とした得た。
【００５８】
【表６】
【００５９】
実施例３
＜１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンの合成＞
【００６０】
【化２１】
【００６１】
１０ｍｌのテストチューブに１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（２．０ｍｇ，４．６μｍｏｌ）の０．５ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＮａＯＨ水溶液（５Ｎ溶液，０．１ｍｌ，０．５μｍｏｌ）を室温で加え１８時間攪拌した。反応混合物を１ｍｌの水で希釈し、ＮａＨＳＯ₄を加えてｐＨ４に調整した。得られた混合物を５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル５００ｍｇ，ジクロロメタン：メタノール＝９：１）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｒ体、１．９ｍｇ，９８％）を得た。
【００６２】
【表７】
【００６３】
同様にして１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１．３ｍｇ，３．０μｍｏｌ）より１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｓ体、１．２ｍｇ，９５％）を得た。
【００６４】
【化２２】
【００６５】
【表８】
【００６６】
実施例４
＜１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステルの合成＞
【００６７】
【化２３】
【００６８】
１０ｍｌのシュレンクチューブにメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ヒドロキシメチル−７−テトラヒドロピラン−２−イルオキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（２６．２ｍｇ，７４．３μｍｏｌ）の０．８ｍｌＤＭＳＯ溶液を調製した。この溶液にトリエチルアミン（１０４μＬ，０．７４３μｍｏｌ）とＳＯ₃・ピリジン（５５．７ｍｇ，０．３７１μｍｏｌ）を常温で加え、混合物を３時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル（１．０ｍｌ）と冷水（１．５ｍｌ）にあけ、有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１．５ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥、濾別し、減圧下有機溶媒を留去しメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−テトラヒドロピラン−２−イルオキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（２２ｍｇ）を粗生成物として得た。これをアルゴン気下におき、精製せずに次の反応に用いた。
【００６９】
１０ｍｌの丸底フラスコに３−オキソ−４−（３−アジド−５−メチルフェニル）ブチルスルホン酸ジメチル（５９．３ｍｇ，０．２μｍｏｌ）の０．７ｍｌＤＭＥ溶液を調製した。この溶液にＮａＨ（６０％ｉｎｏｉｌ，８ｍｇ，０．２μｍｏｌ）を室温で加え、１時間攪拌し、黄色サスペンジョンを得た。次いで、ここに先に得られたメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−テトラヒドロピラン−２−イルオキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート粗生成物（２２ｍｇ）の０．７ｍｌＤＭＥ溶液を滴下し、１０時間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（（２ｍｌ）を加えて反応を終結させ、次いで酢酸エチル（１ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）に供し、１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１１−Ｏ−（テトラヒドロピラン−２−イル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（２７．１ｍｇ，８０．６％）を淡黄色油状物として得た。
【００７０】
【表９】
【００７１】
１０ｍｌのテストチューブに得られた１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１１−Ｏ−（テトラヒドロピラン−２−イル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１６．６ｍｇ，３０μｍｏｌ）の酢酸：ＴＨＦ：水＝３：２：１（１．２ｍｌ）混合溶媒溶液を調製し、４０℃にて２６時間攪拌した。室温に冷却後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）と酢酸エチル（１ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６００ｍｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１，５：１）に供し、１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１１．３ｍｇ，８０．８％）を淡黄色油状物として得た。
【００７２】
【表１０】
【００７３】
実施例５
＜１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステルおよびその１５位のエピマーの合成＞
【００７４】
【化２４】
【００７５】
１０ｍｌのテストチューブに１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１１．２ｍｇ，２４．８μｍｏｌ）の１．０ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＣｅＣｌ₃・７Ｈ₂Ｏ（１１．９ｍｇ，２９μｍｏｌ）を室温で加え、この混合物を０℃に冷却後ＮａＢＨ₄（１．１ｍｇ，２．９μｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）にあけ、このものを５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル０．７ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，２：１，１：２）に供し、１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｒ体、低極性、５．６ｍｇ，５０％）および１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｓ体、高極性、５．６ｍｇ，５０％）を無色油状物として得た。
【００７６】
【表１１】
【００７７】
実施例６
＜１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンの合成＞
【００７８】
【化２５】
【００７９】
１０ｍｌのテストチューブに１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（５．６ｍｇ，１２μｍｏｌ）の０．７ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＮａＯＨ水溶液（５Ｎ溶液，０．１ｍｌ，０．５μｍｏｌ）を室温で加え１８時間攪拌した。反応混合物を１ｍｌの水で希釈し、ＮａＨＳＯ₄を加えてｐＨ４に調整した。得られた混合物を５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル５００ｍｇ，ジクロロメタン：メタノール＝９：１）に供し、１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（１５Ｒ体、４．５ｍｇ，８３％）を得た。
【００８０】
【表１２】
【００８１】
同様にして１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（５．６ｍｇ，１２μｍｏｌ）より１７−（３−アジドフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（１５Ｓ体、４．５ｍｇ，８３％）を得た。
【００８２】
【化２６】
【００８３】
【表１３】
【００８４】
実施例７
＜^３Ｈ標識１６−ｍ−アジドフェニル体および１６−ｍ−アジドトリル体の製造例＞
１６−ｍ−アジドフェニル−イソカルバサイクリン、および１６−ｍ−アジドトリル−イソカルバサイクリンの１５−ケト、α−メチルエステル体をそれぞれ前駆体として、常法により、〔^３Ｈ〕ＮａＢＨ_４で１５−ケト基の還元反応を行い、１５−ＲＳ−ＯＨ−体の^３Ｈ標識混合物を得た。この混合物をＨＰＬＣ（条件１、下記に記載）を用いて、１５Ｒ−体と１５Ｓ−体に分離精製し（図１）、それぞれを分取した。各画分を酢酸エチルで抽出後、合わせた有機溶媒層を減圧下、有機溶媒を除去した。得られた生成物をエタノールに溶解し、約１／５量の５ＮＮａＯＨを加えて、約４時間加水分解反応を行った。加水分解物は、さらにＨＰＬＣを用いて精製し（条件２、下記に記載）、この精製画分を上記の抽出・乾固法によりエタノール溶液として保存し、実施例８の実験に供した。
ＨＰＬＣ条件１
カラム：コスモシール５Ｃ１８（ナカライテスク社）４．６×２５０ｍｍ
移動相：７５％メタノール
流速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
ＨＰＬＣ条件２
カラム：条件１と同一
移動相：５５％アセトニトリル＋０．０２％酢酸
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
実施例８
＜イソカルバサイクリン誘導体のトリチウムラベル１５Ｓ−（１６−メタ−トリル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンに対するｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ実験＞
ラット脳から全身生食灌流により血液成分を除去し、これを凍結して１０μｍ厚の凍結切片を作成した。これを５０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣｌｐＨ７．４，２０ｍＭＭｇＣｌ_２液中で１０ｎＭの、１５位にトリチウムが入っているトリチウムラベル１５Ｓ−（１６−メタ−トリル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンおよび種々の濃度のイソカルバサイクリン誘導体とともに４℃で２時間Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎした。Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ洗浄後、乾燥を行い、切片のオートラジオグラフィーのフィルムを作成した。このオートラジオグラフィー（ｎ＝４以上）の定量解析により、各イソカルバサイクリンのｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ値を算出した。
【００８５】
表１４に視床（中枢神経系）での結果を示した。
【００８６】
【化２７】
【００８７】
【化２８】
【００８８】
【化２９】
【００８９】
【化３０】
【００９０】
【化３１】
【００９１】
【化３２】
【００９２】
【化３３】
【００９３】
【化３４】
【００９４】
【表１４】
【００９５】
以上の結果より、視床でのプロスタサイクリン受容体（中枢神経系）に対して、この発明化合物（特に化合物Ａ、Ｃ）が非天然型立体配置（１５位）をもつにも関わらず強い活性を示すことがわかる。
【００９６】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明により、脳内、特に中枢組織で産生されるプロスタサイクリン受容体の探索研究（特に、構造未知の中枢型プロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化による取得）や、中枢神経系の疾患の治療薬として有用なイソカルバサイクリン誘導体が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ³Ｈ標識化合物のＨＰＬＣ分離ピーク図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a labeling method using an isocarbacycline derivative-labeled compound. More specifically, the present invention relates to isocarba labeled with isotopic elements as a probe for prostacyclin receptor function search in the brain, particularly as a probe for photoaffinity labeling of a new central prostacyclin receptor that has not been isolated. The present invention relates to a labeling method used for a cyclin derivative-labeled compound.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, prostaglandins have various physiological activities such as strong platelet aggregation inhibitory action, vasodilatory blood pressure lowering action, gastric acid secretion inhibitory action, smooth muscle contraction action, cytoprotective action, diuretic action, etc. It is known to be a compound useful for the treatment or prevention of infarction, angina pectoris, arteriosclerosis, hypertension, duodenal ulcer, labor induction, abortion and the like.
[0003]
By the way, natural prostacyclin is a local hormone produced mainly in the vascular endothelium in the living body, and its strong physiological activity, for example, platelet aggregation inhibitory action, vasodilator action, etc., is used as a direct medicine. Attempts have been made (PJLewis, JOGrady, Clinical Pharmacology of Prosutaglangin). However, since natural prostacyclin has an enol ether bond which is easily hydrolyzed in the molecule, there is a problem that it is easily deactivated under neutral or acidic conditions. Therefore, it cannot be said that it is a preferable compound as a pharmaceutical because of its chemical instability. For this reason, studies on the synthesis of prostacyclin derivatives that exhibit the same activity as natural prostacyclin and are chemically stable have been conducted (Synthesis, 1984, 449). In the course, 9 (O) -methano-Δ ^{6 (} which is a prostacycline that sufficiently satisfies the chemical stability by replacing the oxygen atom at the 6th and 9th positions of prostacyclin with a methylene group (—CH═). ⁹ α ⁾ -Prostaglandin I ₁ (isocarbacyclines) was synthesized (see JP 59-210044).
[0004]
As the synthesis of prostacyclin derivatives progresses in this way, research on the prostacyclin receptor has also been conducted energetically. Prostacyclin receptors are present mainly in blood vessels and platelets due to their physiological activities, and have been considered to play an important role in the regulation of cardiovascular action.
On the other hand, regarding the brain, the existence of PGI ₂ and TXA _{2 in} addition to PGD ₂ , PGE ₂ and PGF ₂ α has been known. However, it is not clear whether both of these are produced in brain parenchymal cells as well as the action in the cranial nervous system, and it has been thought that they originate from blood vessels and platelets in the brain. In contrast, in 1985, according to Keller et al. (Neurochem Int 7: 655-665, 1985), primary cultured cell astroglial cells produce many metabolites of PGI ₂ and TXA _{2 in} addition to the above three PGs. It became clear. In addition, Watanabe et al. (Neurosci. Res. 16, (Suppl) S21, 1991) described in vitro in a large coronal section of a Japanese monkey brain hemisphere using a labeled prostacyclin derivative ([ ³ H] iloprost-Schering). As a result of autoradiographic evaluation, prostacyclin binding sites were found in the striatum, amygdala, hippocampus, and part of the cerebral cortex. In addition, the binding site of [ ³ H] iloprost found here is localized differently from the binding site of [ ³ H] PGE ₂ , and it is clear that PGE ₂ and PGE ₁ recognize the same receptor. It has become. In platelets, the binding site of iloprost also reacts with PGE ₁ and is known to be completely different from the PGE ₂ receptor. From the above circumstances, the existence of a new PGI ₂ receptor in the central nervous system has been highlighted. In addition, iloprost's nervous system actions include dopamine D ₁ receptor binding inhibition, sedation, anticonvulsant, antihypoxia (prolongation effect in hypoxia), and induction of brain wave synchronization antagonized by amphetamine. It has been.
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
For example, as described above, conventionally, the purpose of studying prostacyclin derivatives has mainly been the development of pharmaceuticals for the cardiovascular region using their strong physiological activities such as platelet aggregation inhibitory action and vasodilatory action. It was. However, such an action has a problem that it causes a side effect when these compounds are applied to the central nervous system. Accordingly, the inventors of the present invention focused on the above-mentioned points, and studied the prostacyclin receptor in the brain. First of all, a probe for the receptor, and a photoaffinity label for acquiring the receptor. Attention has been focused on 9 (O) -methano-Δ ^{6 (9} α ⁾ -prostaglandin I ₁ classes (isocarbacyclines) useful as pharmaceutical compounds or central nervous system drugs.
[0006]
That is, the present invention has been made under the circumstances as described above, and beyond the limits of conventional technical knowledge, is not only useful for probing the function of prostacyclin receptors in the brain, but also the central nervous system. It is an object of the present invention to provide a labeling method using a novel isocarbacycline derivative-labeled compound, which is a useful compound for specifying the application area of a prostacyclin derivative.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above problems, the present invention provides the following formula [I]
[0008]
[Chemical 6]
[0009]
[Wherein, R ¹ represents a hydrogen atom, an alkyl group or 1 equivalent of a cation, R ² represents an alkylene group, and R ³ represents a methyl group. The isocarbacycline derivative labeled compound in which the isocarbacycline derivative represented by the above formula is labeled with ³ H is provided as a probe for the central nervous system prostacyclin receptor .
[0010]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The present invention provides a labeling method in which a novel isocarbacycline derivative represented by the formula [I] as described above is labeled with ³ H, and the isocarbacycline derivative-labeled compound is a probe for a central nervous prostacyclin receptor. Although provided, embodiments of the invention will be described in detail below.
Structure of Compound In the above formula [I], R ¹ represents a hydrogen atom, a linear or branched alkyl group or one equivalent of a cation, and among these, the alkyl group is a lower group having 1 to 5 carbon atoms. Examples of the alkyl group are more specific, and examples thereof include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an iso-propyl group, an n-butyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, and an n-pentyl group. be able to. Of these, an alkyl group having 1 to 2 carbon atoms is preferable. Examples of one equivalent cation include alkali metal cations such as Na ⁺ and K ⁺ ; divalent or trivalent metal cations such as 1 / 2Ca ²⁺ , 1 / 2Mg ²⁺ and 1 / 3Al ³⁺ ; ammonium And ammonium ions such as ions and tetramethylammonium ions. And as this R < ¹ >, a hydrogen atom and a methyl group can be mentioned especially as a preferable thing.
[0011]
Examples of the alkylene group represented by R ² in the above [I] include linear or branched alkylene groups such as those represented by — (CH ₂ ) _n — (n represents a number of 1 to 4). Of these, n is preferably 1.
In the above formula [I], R ³ on a tolyl group on the omega chain is a methyl group, the substitution position of its is preferably the meta position, the substitution position of the azido group and the other of the meta-position.
[0012]
Furthermore, the configuration of the 8-position, 9-position, 11-position, 12-position and 15-position of the isocarbacyclines represented by the above formula [I] is the same as that of natural prostacyclin. Further, the 15-position may be in the R-configuration or S-configuration, but the R-configuration is particularly preferred, and those having this configuration are particularly useful isomers. However, the isocarbacycline derivatives related to the present invention include those having such a configuration, or enantiomers thereof, or all isomers derived from their asymmetric carbons.
[0013]
Preferred specific examples of the isocarbacycline derivative in the present invention are as follows.
(1) 16- (3-Azido-5-methyl) -17,18,19,20-tetranor-9 (O) -methano-Δ ^{6 (9} α ⁾ -prostaglandin I ₁
(2) 16- (3-Azido) -17,18,19,20-tetranor-9 (O) -methano-Δ ^{6 (9} α ⁾ -prostaglandin I ₁
(3) 17- (3-Azido-5-methyl))-18,19,20-tetranor-9 (O) -methano-Δ ^{6 (9} α ⁾ -prostaglandin I ₁
(4) 15R isomers of methyl esters (5) (1) to (3) of (1) to (3) Of course, the present invention is not limited to these.
Production method The isocarbacycline derivative of the present invention represented by the above formula [I] is produced as follows.
[0014]
That is, the following formula [II]
[0015]
[Chemical 7]
[0016]
[Wherein R ² represents an alkylene group, R ³ represents a methyl group ] and Horner-Emmons reagent represented by the following formula [III]
[0017]
[Chemical 8]
[0018]
[Wherein, R ⁴ represents a lower alkyl group having 1 to 5 carbon atoms, and R ⁵ represents a hydrogen atom or a tetrahydropyranyl group. ]
The compound represented by formula (IV) is reacted in the presence of a base, and the protective group for the hydroxyl group is deprotected as necessary.
[0019]
[Chemical 9]
[0020]
[Wherein R ² , R ³ and R ⁴ are the same as defined above. ]
The compound represented by the following formula [I], which is subjected to a reduction reaction, and further to a hydrolysis reaction as necessary
[0021]
Embedded image
[0022]
[Wherein, R ¹ represents a hydrogen atom, an alkyl group or 1 equivalent of a cation, R ² represents an alkylene group, and R ³ represents a methyl group . An isocarbacycline derivative represented by the formula:
[0023]
For the phosphonate compound [II], the base is 0.1 to 10 times equivalent, preferably 0.9 to 1.4 times equivalent, and the aldehyde compound [III] is 0.1 to 10 times equivalent, preferably 0. What is necessary is just to use 9-1.4 times equivalent. The reaction temperature is 0 to 150 ° C, preferably 10 to 80 ° C. The reaction time varies depending on the compound, but is about 10 minutes to 24 hours. After completion of the reaction, the compound [IV] can be obtained by a usual treatment such as extraction or column chromatography. As shown in the following reaction formula A, the aldehyde compound [III] as a raw material can be obtained by, for example, tetracarburic acid (Sharpless) oxidation, hydroxyl acetylation, epoxy cleavage, deacetylation of isocarbacycline methyl ester (1). This can be converted to the all form (4), which can be converted to the aldehyde form (5) by oxidative cleavage with NaIO ₄ .
[0024]
Embedded image
[0025]
In the Horner-Emmons reaction, the aldehyde form may be used directly, but the aldehyde form (5) generated in the system by the oxidation of the compound (4) may be used as it is without being isolated.
On the other hand, the Horner-Emmons reagent of the formula [II] can be synthesized from the corresponding ester compound, for example, by the route shown in Reaction Formula B.
[0027]
Embedded image
[0028]
Embedded image
[0029]
For example, the compound represented by the formula [IV] can be obtained by the Horner-Emmons reaction between the compound of the formula [II] synthesized as described above and the compound of the formula [III]. This compound [IV] can then be subjected to a reduction reaction and, if necessary, a hydrolysis reaction.
The reduction reaction can be carried out by a method known per se. A metal hydrogen complex compound is used as a reagent for the reduction reaction. Such metal hydride complex compounds include aluminum hydride complex compounds and borohydride complex compounds. Examples of the aluminum hydride complex compound include lithium aluminum hydride, lithium diethoxyaluminum hydride, lithium tri-t-butoxyaluminum hydride, magnesium aluminum hydride, magnesium aluminum hydride chloride, sodium aluminum hydride, hydrogenated triethoxy Examples include sodium aluminum and sodium bis (2-methoxyethoxy) aluminum hydride. Examples of borohydride complex compounds include sodium borohydride, sodium trimethoxyborohydride, sodium borohydride, sodium cyanoborohydride, lithium borohydride, lithium borohydride, lithium triethylborohydride, borohydride Examples include calcium, potassium borohydride, zinc borohydride, tetramethylammonium borohydride, and the like. As a reagent for the reduction reaction, among these metal hydride complex compounds, borohydride complex compounds are preferable, and sodium borohydride is particularly preferable.
[0030]
The reduction reaction using sodium borohydride is preferably performed in the presence of lanthanide chlorides. Examples of such lanthanide chlorides include cerium trichloride, samarium trichloride, europium trichloride, and cerium trichloride is particularly preferably used.
The reduction reaction is carried out in the range of 1 to 100 equivalents, preferably 1 to 50 equivalents, as hydride ions capable of generating a metal hydride complex with respect to 1 equivalent of the synthetic intermediate represented by the above formula [IV]. It is. The lanthanide chloride used together with sodium borohydride is used in an amount of 0.2 to 50 equivalents, preferably 0.5 to 10 equivalents, per 1 equivalent of sodium borohydride.
[0031]
The reaction solvent varies depending on the reduction reagent used, but usually alcohols such as methanol, ethanol, 2-propanol and t-butyl alcohol; ethers such as tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, dimethoxyethane, diglyme; dimethylformamide, dimethyl Aprotic polar solvents such as sulfoxide and hexamethylphosphoric triamide; water, acetonitrile and the like are used singly or in an arbitrary ratio. Preferably, alcohols such as methanol, ethanol, 2-propanol and t-butyl alcohol are used, and methanol is particularly preferable.
[0032]
The reaction temperature of the reduction reaction varies depending on the reagent and reaction solvent used, but is preferably in the range of −10 ° C. to 100 ° C., particularly preferably 20 ° C. to 50 ° C. The reaction time of the reduction reaction varies depending on the reagent used, the reaction solvent, and the reaction temperature, but is usually within 5 hours, preferably 1 minute to 1 hour.
The hydrolysis reaction of the ester may be carried out, for example, by using sodium hydroxide, lithium hydroxide, potassium hydroxide, calcium hydroxide aqueous solution or water-alcohol mixed solvent, or sodium methoxide, potassium methoxide, potassium methoxide, sodium ethoxide. It can carry out by making it hydrolyze in the methanol and ethanol solution containing.
[0033]
Isolation and purification of the target product can be carried out by a general method such as extraction, chromatography and the like.
Action As described above, the isocarbacycline derivative of the present invention, which is provided by the production method as described in detail, strongly acts on the prostacyclin receptor (herein referred to as the central nervous type) in the thalamus and striatum in the brain. Join. In addition, prostacyclin receptors (where peripheral nerves have been produced in the nodus ganglion, which is considered to be extra-cerebral tissue (peripheral nerve tissue) in nerve ligation experiments, etc., and are axon transported to the medullary solitary nucleus. The isocarbacycline derivative of this invention does not bind much to the system). It should be noted that 15R-16- (3-azido-5-methyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline or 15R-16, which is opposite to the natural isocarbacycline in the 15-position, is opposite. -(3-azido) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline strongly bound to the prostacyclin receptor (central nervous system) in the thalamus in the brain. Therefore, the isocarbacycline derivative provided by the present invention is not only useful for exploratory research of prostacyclin receptors produced in the brain, particularly in the central nervous tissue, but also expected as a therapeutic agent for diseases of the central nervous system. It is a useful compound that can be used.
[0034]
Based on such characteristics of the action, in this invention, isocarbacyclin derivative for represented by the formula [I], the isocarbacyclin derivatives labeled compound characterized in that it is ^{the 3 H-labeled,} central nervous the labeling method of a probe of the prostacyclin receptor provides.
This labeled compound serves as a probe for photoaffinity labeling of prostacyclin receptors in the brain, particularly in the central nervous tissue, and facilitates the treatment of diseases of the central nervous system.
[0035]
The labeling compound itself is manufactured by using a cyclotron or the like.
[0036]
【The invention's effect】
As described above in detail, according to the present invention, research on prostacyclin receptors produced in the brain, particularly in central tissues (especially, acquisition by photoaffinity labeling of central prostacyclin receptors with unknown structures) Provided is a labeling method using an isocarbacycline derivative-labeled compound useful for the development of a therapeutic agent for nervous system diseases.
[0037]
Embedded image
[0038]
A 0.4 ml DME solution of dimethyl 2-oxo-3- (3-azidophenyl) propylphosphonate (5.3 mg, 19 μmol) was prepared in a 10 ml round bottom flask. NaH (60% in oil, 0.8 mg, 19 μmol) was added to this solution at room temperature, and the mixture was stirred for 30 minutes to obtain a yellow suspension. Subsequently, methyl-5-{(1S, 5S, 6R, 7R) -6-formyl-7-hydroxybicyclo [3.3.0] -2-octen-3-yl} pentanoate (2.4 mg, 9 0.4 ml) of 0.4 ml DME was added dropwise and stirred for 1.5 hours. After the reaction, a saturated aqueous ammonium chloride solution (2 ml) and ethyl acetate (1 ml) were added to the reaction mixture, and an extraction operation was performed. The aqueous layer was extracted three more times with ethyl acetate (1.5 ml × 3), and the combined organic layers were dried over anhydrous sodium sulfate. The dried organic layer was separated by filtration, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 700 mg, hexane: ethyl acetate = 3: 1), and 16- (3-azidophenyl) -15-dehydro-17,18,19,20-tetranor. Isocarbacycline methyl ester (4.3 mg, 93%) was obtained as a pale yellow oil.
[0039]
[Table 1]
[0040]
Reference example 2
<Synthesis of 16- (3-azidophenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester and its 15-position epimer>
[0041]
Embedded image
[0042]
A 0.8 ml methanol solution of 16- (3-azidophenyl) -15-dehydro-17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (8.1 mg, 19 μmol) was prepared in a 10 ml test tube. CeCl ₃ .7H ₂ O (9.0 mg, 24 μmol) was added to this solution at room temperature, and this mixture was cooled to 0 ° C., and NaBH ₄ (1.2 mg, 32 μmol) was added and stirred for 10 minutes. The reaction mixture was poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution (1 ml), and this was extracted 5 times with ethyl acetate (1 ml × 5). The combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate. The dried organic layer was separated by filtration, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 1.5 g, hexane: ethyl acetate = 3: 2, 1: 2) to give 15-epi-16- (3-azidophenyl) -17,18, 19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (15R form, low polarity, 3.9 mg, 48%) and 16- (3-azidophenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (15S form, high polarity, 4.0 mg, 49%) was obtained as a colorless oil.
[0043]
[Table 2]
[0044]
Reference example 3
<Synthesis of 15-epi-16- (3-azidophenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline>
[0045]
Embedded image
[0046]
In a 10 ml test tube, add 0.5 ml of a methanol solution of 15-epi-16- (3-azidophenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (1.6 mg, 3.8 μmol). Prepared. To this solution was added NaOH aqueous solution (5N solution, 0.1 ml, 0.5 mmol) at room temperature and stirred for 12 hours. The reaction mixture was diluted with 1 ml of water and adjusted to pH ₄ by adding NaHSO ₄ . The obtained mixture was extracted 5 times with ethyl acetate (1 ml × 5), and the combined organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered. The organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 700 mg, dichloromethane: methanol = 9: 1), and 15-epi-16- (3-azidophenyl) -17,18,19,20-tetranoriso. Carbacycline (15R isomer, 1.5 mg, 97%) was obtained as a pale yellow oil.
[0047]
[Table 3]
[0048]
Similarly, from 16- (3-azidophenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (1.3 mg, 3.0 μmol), 16- (3-azidophenyl) -17,18, 19,20-tetranorisocarbacycline (15S form, 1.2 mg, 95%) was obtained as a pale yellow oil.
[0049]
Embedded image
[0050]
[Table 4]
[0051]
Example 1
<Synthesis of 16- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester>
[0052]
Embedded image
[0053]
A 0.5 ml DME solution of dimethyl 2-oxo-3- (3-azido-5-methylphenyl) propylphosphonate (9.8 mg, 33 μmol) was prepared in a 10 ml round bottom flask. NaH (60% in oil, 1.3 mg, 33 μmol) was added to this solution at room temperature, and the mixture was stirred for 30 minutes to obtain a yellow suspension. Then, methyl-5-{(1S, 5S, 6R, 7R) -6-formyl-7-hydroxybicyclo [3.3.0] -2-octen-3-yl} pentanoate (3.9 mg, 15 μmol) ) Was added dropwise and stirred for 1 hour. A saturated aqueous ammonium chloride solution (1.5 ml) was added to the reaction mixture to terminate the reaction, and then ethyl acetate (1 ml) was added. The organic layer was separated and the aqueous layer was extracted three more times with ethyl acetate (1.5 ml × 3). The combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and the organic solvent was removed under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 700 mg, hexane: ethyl acetate = 3: 1) to give 16- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-17,18,19, 20-tetranorisocarbacycline methyl ester (5.7 mg, 85%) was obtained as a pale yellow oil.
[0054]
[Table 5]
[0055]
Example 2
<Synthesis of 16- (3-azido-5-methylphenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester and its 15-position epimer>
[0056]
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[0057]
0.5 ml of 16- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (4.3 mg, 9.8 μmol) in a 10 ml test tube A methanol solution was prepared. To this solution, CeCl ₃ .7H ₂ O (6.7 mg, 18 μmol) was added at room temperature, and the mixture was cooled to 0 ° C. After adding NaBH ₄ (0.5 mg, 13 μmol), the mixture was stirred for 10 minutes. The reaction mixture was poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution (1 ml), and this was extracted 5 times with ethyl acetate (1 ml × 5). The combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate. The dried organic layer was separated by filtration, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 0.5 g, hexane: ethyl acetate = 3: 1, 1: 1) to give 15-epi-16- (3-azido-5-methylphenyl)- 17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (15R form, low polarity, 2.2 mg, 50%) and 16- (3-azido-5-methylphenyl) -17,18,19,20 -Tetranorisocarbacycline methyl ester (15S form, high polarity, 2.2 mg, 50%) was obtained as a pale yellow oil.
[0058]
[Table 6]
[0059]
Example 3
<Synthesis of 15-epi-16- (3-azido-5-methylphenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline>
[0060]
Embedded image
[0061]
In a 10 ml test tube 0.5 ml of 15-epi-16- (3-azido-5-methylphenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (2.0 mg, 4.6 μmol) A methanol solution was prepared. To this solution was added NaOH aqueous solution (5N solution, 0.1 ml, 0.5 μmol) at room temperature and stirred for 18 hours. The reaction mixture was diluted with 1 ml of water and adjusted to pH ₄ by adding NaHSO ₄ . The obtained mixture was extracted 5 times with ethyl acetate (1 ml × 5), and the combined organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered. The organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 500 mg, dichloromethane: methanol = 9: 1) to give 15-epi-16- (3-azido-5-methylphenyl) -17,18,19,20. -Tetranorisocarbacycline (15R body, 1.9 mg, 98%) was obtained.
[0062]
[Table 7]
[0063]
Similarly, from 16- (3-azido-5-methylphenyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline methyl ester (1.3 mg, 3.0 μmol), 16- (3-azidophenyl)- 17,18,19,20-Tetranorisocarbacycline (15S form, 1.2 mg, 95%) was obtained.
[0064]
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[0065]
[Table 8]
[0066]
Example 4
<Synthesis of 17- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-18,19,20-trinorisocarbacycline methyl ester>
[0067]
Embedded image
[0068]
In a 10 ml Schlenk tube, methyl-5-{(1S, 5S, 6R, 7R) -6-hydroxymethyl-7-tetrahydropyran-2-yloxybicyclo [3.3.0] -2-octen-3-yl } A 0.8 ml DMSO solution of pentanoate (26.2 mg, 74.3 μmol) was prepared. To this solution, triethylamine (104 μL, 0.743 μmol) and SO ₃ · pyridine (55.7 mg, 0.371 μmol) were added at room temperature, and the mixture was stirred for 3 hours. The reaction mixture was poured into ethyl acetate (1.0 ml) and cold water (1.5 ml), the organic layer was separated, and the aqueous layer was further extracted three times with ethyl acetate (1.5 ml × 3). The combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure to obtain methyl-5-{(1S, 5S, 6R, 7R) -6-formyl-7-tetrahydropyran-2- Iroxybicyclo [3.3.0] -2-octen-3-yl} pentanoate (22 mg) was obtained as a crude product. This was put under argon and used in the next reaction without purification.
[0069]
A 0.7 ml DME solution of dimethyl 3-oxo-4- (3-azido-5-methylphenyl) butylsulfonate (59.3 mg, 0.2 μmol) was prepared in a 10 ml round bottom flask. NaH (60% in oil, 8 mg, 0.2 μmol) was added to this solution at room temperature, and the mixture was stirred for 1 hour to obtain a yellow suspension. Next, methyl-5-{(1S, 5S, 6R, 7R) -6-formyl-7-tetrahydropyran-2-yloxybicyclo [3.3.0] -2-octene- obtained earlier is obtained. A 0.7 ml DME solution of a crude 3-yl} pentanoate product (22 mg) was added dropwise and stirred for 10 hours. Saturated aqueous ammonium chloride solution ((2 ml) was added to the reaction mixture to terminate the reaction, and then ethyl acetate (1 ml) was added. The organic layer was separated, and the aqueous layer was extracted three more times with ethyl acetate (1 ml × 3). The combined organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure, and the resulting crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 2 g, hexane: ethyl acetate = 10: 1-), 17- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-11-O- (tetrahydropyran-2-yl) -18,19,20-trinorisocarbacycline methyl ester (27 0.1 mg, 80.6%) was obtained as a pale yellow oil.
[0070]
[Table 9]
[0071]
17- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-11-O- (tetrahydropyran-2-yl) -18,19,20-trinorisocarbacycline methyl obtained in a 10 ml test tube A mixed solvent solution of ester (16.6 mg, 30 μmol) in acetic acid: THF: water = 3: 2: 1 (1.2 ml) was prepared and stirred at 40 ° C. for 26 hours. After cooling to room temperature, saturated aqueous ammonium chloride solution (1 ml) and ethyl acetate (1 ml) were added to the reaction mixture. The organic layer was separated and the aqueous layer was extracted three more times with ethyl acetate (1 ml × 3). The combined organic layers were washed with a saturated sodium hydrogen carbonate solution and then with saturated brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 600 mg, hexane: ethyl acetate = 10: 1, 5: 1) to give 17- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-18, 19,20-Trinorisocarbacycline methyl ester (11.3 mg, 80.8%) was obtained as a pale yellow oil.
[0072]
[Table 10]
[0073]
Example 5
<Synthesis of 17- (3-azido-5-methylphenyl) -18,19,20-trinorisocarbacycline methyl ester and its 15-position epimer>
[0074]
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[0075]
17 ml of 17- (3-azido-5-methylphenyl) -15-dehydro-18,19,20-trinorisocarbacycline methyl ester (11.2 mg, 24.8 μmol) in a 10 ml test tube A solution was prepared. CeCl ₃ .7H ₂ O (11.9 mg, 29 μmol) was added to this solution at room temperature, and the mixture was cooled to 0 ° C., NaBH ₄ (1.1 mg, 2.9 μmol) was added, and the mixture was stirred for 10 min. The reaction mixture was poured into a saturated aqueous ammonium chloride solution (1 ml), and this was extracted 5 times with ethyl acetate (1 ml × 5). The combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate. The dried organic layer was separated by filtration, and the organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 0.7 g, hexane: ethyl acetate = 3: 1, 2: 1, 1: 2) to give 15-epi-17- (3-azido-5- Methylphenyl) -18,19,20-trinorisocarbacycline methyl ester (15R form, low polarity, 5.6 mg, 50%) and 17- (3-azido-5-methylphenyl) -18,19,20 -Trinorisocarbacycline methyl ester (15S form, high polarity, 5.6 mg, 50%) was obtained as a colorless oil.
[0076]
[Table 11]
[0077]
Example 6
<Synthesis of 15-epi-17- (3-azido-5-methylphenyl) -18,19,20-trinorisocarbacycline>
[0078]
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[0079]
A 0.7 ml methanol solution of 15-epi-17- (3-azido-5-methylphenyl) -18,19,20-trinorisocarbacycline (5.6 mg, 12 μmol) was prepared in a 10 ml test tube. . To this solution was added NaOH aqueous solution (5N solution, 0.1 ml, 0.5 μmol) at room temperature and stirred for 18 hours. The reaction mixture was diluted with 1 ml of water and adjusted to pH ₄ by adding NaHSO ₄ . The obtained mixture was extracted 5 times with ethyl acetate (1 ml × 5), and the combined organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and filtered. The organic solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude product was subjected to silica gel column chromatography (silica gel 500 mg, dichloromethane: methanol = 9: 1) to give 15-epi-17- (3-azido-5-methylphenyl) -18,19,20-trino. Ruisocarbacycline (15R form, 4.5 mg, 83%) was obtained.
[0080]
[Table 12]
[0081]
Similarly, from 17- (3-azido-5-methylphenyl) -18,19,20-trinorisocarbacycline (5.6 mg, 12 μmol), 17- (3-azidophenyl) -18,19,20- Trinorisocarbacycline (15S form, 4.5 mg, 83%) was obtained.
[0082]
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[0083]
[Table 13]
[0084]
Example 7
<Production example of ³ H-labeled 16-m-azidophenyl and 16-m-azidotolyl>
16-m-azido-phenyl - isocarbacyclin, and 16-m-Ajidotoriru - isocarbacyclin of 15-keto, alpha-methyl ester as each precursor, by a conventional method, ^[3 H] with NaBH ₄ 15 The keto group was reduced to obtain a ³ H-labeled mixture of 15-RS-OH-form. This mixture was separated and purified into 15R-form and 15S-form using HPLC (condition 1, described below) (FIG. 1), and each was fractionated. Each fraction was extracted with ethyl acetate, and then the combined organic solvent layers were removed under reduced pressure. The obtained product was dissolved in ethanol, about 1/5 amount of 5N NaOH was added, and a hydrolysis reaction was performed for about 4 hours. The hydrolyzate was further purified using HPLC (Condition 2, described below), and the purified fraction was stored as an ethanol solution by the above extraction / drying method and subjected to the experiment of Example 8 .
HPLC condition 1
Column: Cosmo Seal 5C18 (Nacalai Tesque) 4.6 x 250 mm
Mobile phase: 75% methanol Flow rate: 0.7 ml / min
HPLC condition 2
Column: Same as condition 1 Mobile phase: 55% acetonitrile + 0.02% acetic acid Flow rate: 1.0 ml / min
Example 8
<Displacement experiment for tritium-labeled 15S- (16-meta-tolyl) -17,18,19,20-tetranorisocarbacycline of isocarbacycline derivative>
Blood components were removed from the rat brain by whole body perfusion and frozen to prepare 10 μm thick frozen sections. Tritium-labeled 15S- (16-meta-tolyl) -17,18,19,20-tetranoriso with 10 nM tritium at position 15 in 50 mM Tris / HCl pH 7.4, 20 mM MgCl ₂ solution. Incubation with carbacyclin and various concentrations of isocarbacycline derivatives for 2 hours at 4 ° C. After washing the incubation, it was dried to prepare an autoradiographic film of the section. Displacement values of each isocarbacycline were calculated by quantitative analysis of this autoradiography (n = 4 or more).
[0085]
Table 14 shows the results in the thalamus (central nervous system).
[0086]
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[0090]
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[0094]
[Table 14]
[0095]
From the above results, the compounds of the present invention (especially compounds A and C) have a strong activity against the prostacyclin receptor (central nervous system) in the thalamus even though it has a non-natural configuration (position 15). You can see that
[0096]
【The invention's effect】
As described above in detail, according to the present invention, research on prostacyclin receptors produced in the brain, particularly in central tissues (especially, acquisition by photoaffinity labeling of central prostacyclin receptors with unknown structures) Isocarbacycline derivatives useful as therapeutic agents for nervous system diseases are provided.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is an HPLC separation peak diagram of a ³ H-labeled compound.

Claims

The following formula [I] [wherein R ¹ represents a hydrogen atom, an alkyl group or 1 equivalent of a cation, R ² represents an alkylene group, and R ³ represents a methyl group. Labeling method isocarbacyclin derivative represented by] is the ^{3 H} isocarbacyclin derivative labeled compounds are labeled, as a probe of the central nervous system prostacyclin receptors.