JP3947156B6 - 三塩基酵素に対応するアミノ酸の強い酵素活性の利用 - Google Patents
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Description
生化学的触媒
アミノ酸のような基本的な生化学化合物に弱いとはいえ酵素活性があるとはこれまで誰も考えていなかった。アミノ酸はそのエステルでも良い。
酵素を細胞から抽出するより上記化合物を使うほうが遥かに簡単であるからこの発明の属する技術分野での応用範囲が広い。
アミノ酸は既に市売されているので作成上の問題はない。
上記化合物の酵素活性は現在の酵素の一ないし十万分の一だが、酵素はもともと触媒なので少量あるだけでも良いと言う利点がある。上記化合物は分解前も分解後も無害である。
合成酵素についてはＡＴＰを用いてピルビン酸とカルボン酸からオキザル酢酸を合成するオキザロ酢酸合成反応活性を考える。反応条件を（ ）内に書く（以後の実験でも同様）。（ＡＴＰ １０ｍＭ，ピルビン酸 １０ｍＭ，炭酸ナトリウム １０ｍＭ，トリスｐＨ7.5 １００ｍＭ，ヒスチジン１００ｍＭ），１００μｌの溶液を摂氏３７度で１時間放置し反応を進ませる。その後でマロン酸ジヒドロゲナーゼを１０ユニットとＮＡＤＨ０．１２Ｍ １０μｌを加え３４０nｍの吸収を測定するとリフェレンス（自然反応に相当）にくらべヒスチジンで５８０倍の吸収増加が見られた。さらにオキザル酢酸の生成は反応溶液の薄層クロマトグラフィーでも確認できた。またacetyl CoA合成酵素やコハク酸合成酵素といった他の反応についても吸収実験でそれぞれ２９０および３００倍の効果があった。他のアミノ酸ではこれほど強い効果はなかった。
６）これまでにのべた５種の酵素群に関する実験は、すべてｉｎ ｖｉｔｒｏ（試験管内）実験であった。ｉｎ ｖｉｖｏ（細胞内）実験の一つとして遺伝子工学用に開発されたきわめて弱い大腸菌ＪＭ１０９のアミノ酸への反応をみるため、きわめて弱い大腸菌ＪＭ１０９培養液（トリプトン１６ｇ、酵母エクストラクト １０ｇ、食塩５ｇを１ｌの水に溶かす）５０μｌに１Ｍ上記アミノ酸溶液１０μｌを加え、培養液アガロースゲルに塗布。摂氏３７度で培養、３日後の生育度をみると、アミノ酸濃厚溶液添加の影響はまったくみられなかった。
人間の場合体内のヒスチジン量は健康状態や加年劣化作用で変化しており、その補助としての上記添加効果が期待される。また一般の生物の場合も同様である。
Claims (1)
- ヒスチジンを用いて、ＡＴＰの存在下で、ピルビン酸とカルボン酸からオキザル酢酸を合成する方法。
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| JP2003373468A JP3947156B6 (ja) | 2003-09-26 | 三塩基酵素に対応するアミノ酸の強い酵素活性の利用 |
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