JP3879938B2

JP3879938B2 - Anti-inflammatory agent

Info

Publication number: JP3879938B2
Application number: JP08740494A
Authority: JP
Inventors: 康夫鈴木; 賢一四方; 善介太田; 博史槇野; 国驥叶; 淳一梶原; 和夫加藤
Original assignee: JCR Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: JCR Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 1994-03-31
Filing date: 1994-03-31
Publication date: 2007-02-14
Anticipated expiration: 2022-02-14
Also published as: JPH07278176A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ウイルス性及び薬物性肝炎等の肝炎及び慢性腎炎等を含む炎症性疾患を有する患者に対し、通院可能で安全な治療剤を供給する発明に関する。
【０００２】
【従来の技術】
炎症性疾患には種々のものがあるが、臨床的には肝炎と腎炎が多く見られ、それらに対する安全性の高い治療薬の開発が期待されている。肝炎にはウイルス性、薬物性のものがあるがウイルス性のものが大半を占めており、それらの治療薬としてはインターフェロン、インターロイキン２のような生物学的応答調節剤（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｍｏｄｉｆｉｅｒ；ＢＲＭ）、グリチルリチンの静注用注射剤であるネオミノファーゲンＣなどが用いられている。しかしながらＢＲＭには発熱等の副作用が見られることより長期投与には問題がある。またグリチルリチンは長期に使用する場合は血圧、電解質濃度の管理が必要となる。この他にも生薬成分であるサイコサポニン、サポニン、ゴミシンなどが知られているが、いずれも臨床応用されるには至っていない。
また腎炎に対してはこれまで有効な治療薬はないが、慢性腎炎の前段階であるネフローゼの治療薬としてステロイド剤や抗血小板薬であるジピリダモールがよく用いられている。しかし、これらは長期間使用しなくてはならず特に若年層に投薬する際には満月様顔貎、めまい、頭痛、嘔吐など、重篤な場合には感染症、消化管出血、代謝異常、骨粗症、血栓症などの副作用が懸念されている。
【０００３】
近年、細胞接着因子の中で糖鎖を認識するセレクチンファミリーと炎症との関係が注目されている。セレクチンには血管内皮細胞に存在するＥ−セレクチン（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ，Ｍ．Ｐ．ｅｔａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８４，９２３８−９２４３）、血小板に存在するＰ−セレクチン（Ｇｅｎｇ，Ｊ．Ｇ．ｅｔａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ．３４３，７５７−７６０）、白血球に存在するＬ−セレクチン（Ｌｅｙ，Ｋ．
ｅｔａｌ．（１９９１）Ｂｌｏｏｄ．７７，２５５３−２５５５）があるが、これらのリガンド糖鎖はシアリルＬｅ^XあるいはシアリルＬｅ^a（Ｌｏｗｅ，Ｊ．Ｂ．ｅｔａｌ．（１９９０）Ｃｅｌｌ．５３，４７５−４８４；Ｐｈｉｌｉｐｉｓ，Ｍ．Ｌ．ｅｔａｌ．（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ．２５０，１１３０−１１３２；Ｍａｇｎａｎｉ，Ｊ．Ｌ．（１９９１）ＧｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＪ．ｌ，３１８−３２０；Ｔａｋａｄａ，Ａ．ｅｔａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７９，７１３−７１９）と同定されている。またセレクチンとこれらの糖鎖を介した白血球と血管内皮細胞との接着が炎症反応のトリガーになっていると考えられていることからリガンドであるシアリルＬｅ^XやシアリルＬｅ^aを直接体内に投与して炎症を抑制しようとする試みが為されている。本発明者らは先にｉｎｖｉｔｒｏの実験により硫酸基を有する糖脂質スルファチドがＬ−セレクチンとシアリルＬｅ^X，Ｌｅ^aよりも強く結合すること、シアリルＬｅ^X，Ｌｅ^aの場合と異なり、これらとＬ−セレクチンとの結合はカルシウム非依存性であることを見いだした（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｙ．ｅｔａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９０，４２６−４３４．）。しかしながら、それが生体内の炎症にどのように作用するのか判っていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
前記のように肝炎は大別して、ウイルス性のものとアルコール等の薬物によるものがあるが、Ｂ型及びＣ型肝炎ウイルスによるものが圧倒的に多い。近年治療薬として特にインターフェロンがＣ型肝炎に対して有効であることが報告されており、使用頻度も高まってきている（飯野司郎ら：基礎と臨床、２６：３３９，１９９２；鈴木宏ら：肝・胆・膵、２３：１０６５，１９９１）。しかしながら、短期投与で発熱等のインフルエンザ様症状が表れ、長期投与でも体重減少、下痢、嘔吐、不整脈、脱毛、自己免疫異常等の副作用が見られる。従ってより安全性の高い新たな治療薬あるいはインターフェロン等との併用可能な補助薬の開発が望まれている。
また腎炎は大別して糸球体由来の原発性とそれ以外の疾患に由来する続発性に分類され、前者が約８０％を占め、低年齢層ほど多い。病理的には微小変化群、単状糸球体硬化症、膜性腎症、メサンギウム増殖性腎症、膜性増殖糸球体腎炎などに分類される。蛋白尿は臨床所見の特徴として共通して見られ、重篤な場合はネフローゼ症候群として診断されている。また近年腎臓疾患は老人にとどまらず若年層に増加しつつあるため副作用の少ない治療薬の開発が望まれている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは四塩化炭素で誘起した肝炎モデル及び尿管結さつにより作製した逆流性腎炎モデルを用いて鋭意検討した結果、スルファチドが両方のモデルにおいて有効であり、該物質が抗炎症剤として使用可能であることを見いだした。
【０００６】
本発明はこの新知見に基づくもので、スルアチドを有効成分とする腎炎症の改善剤に関する。
【０００７】
本発明に用いられるスルファチド、即ちセレブロシド硫酸エステルは下記一般式（１）で特定される公知の糖脂質であり、脳白質には比較的多く存在しミエリン構成脂質としての重要性も指摘されている。
【０００８】
【化１】

（式中、Ｒ−ＣＯ−は脂肪酸残基を示す）
【０００９】
本発明のスルファチドは常法に従って抽出精製することができ、例えばウシ脳より抽出精製する方法（Ｌｉｐｉｄｓ，２２（９）Ｐ．５８８−５９８（１９８５）；生化学実験講座、「脂質の化学」、３巻Ｐ．３６８−３８８，東京化学同人社）などが挙げられる。またスルファチドは化学合成により製造することもできる。ウシ脳からの精製物の調製方法の一例は実験例１に示される。
【００１０】
本発明においては、スルファチドが抗炎症、肝炎症状改善、腎炎症状改善の目的で患者に投与される。スルファチドは脳のミエリン構成脂質であり、毒性がほとんどないので、投与方法に特に限定はなく、内用、外用及び注射によることができる。注射剤は例えば静脈内、筋肉内、皮下、皮内等に投与し得る。
成人１人当り１日の投与量は、経口の場合約０．１ｇ〜１ｇ、静脈内の場合
約１０ｍｇ〜１００ｍｇ、筋肉内の場合５０ｍｇ〜３００ｍｇ、皮下、皮内の場合約３０ｍｇ〜１５０ｍｇで、１日１回または数回に分割して投与される。外用としては、たとえば軟膏として外皮局所に塗布し、またスプレー剤の形で外皮、咽喉、鼻腔に適用し、あるいは点眼液として点眼することもできる。外用剤中のスルファチドの好ましい濃度は剤形や適用部位によって異なるが通常約０．１〜１％（ｗ／ｗ）である。
【００１１】
以下に本発明の抗炎症剤スルファチドの効果をより一層明らかにするため、実験例と実施例を挙げて詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１２】
【実施例】
実験例１
（スルファチドの調製法）
新鮮なウシ脳灰白質１ｋｇに５倍容量のアセトンを加えてホモジナイズした後ろ過した。抽出液を凍結乾燥した後、５倍量のクロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）、次いでクロロホルム／メタノール（１：１，ｖ／ｖ）で抽出後エバポレートした。乾燥物を３倍量のアセトンで抽出した後、３倍量のジエチルエーテルで処理し、グリセロホスホリピドを除去した。次いで０．５ＮＮａＯＨ／メタノールで３７℃，３時間処理し、蒸留水に透析した後、凍結乾燥した。この粗分画をフォルチ分配法（Ｆｏｌｃｈｓｐａｒｔｉｔｉｏｎ）に供し、下層を集めた後、クロロホルム／メタノール／水（３０：６０：８，ｖ／ｖ／ｖ）で平衡化したＱ−セファロースカラムにかけ、酢酸ナトリウム０−４Ｍの直線グラジエントで溶出した。スルファテドは１Ｍから１．５Ｍ酢酸ナトリウム溶出画分に溶出された。各画分を薄層クロマトグラフにてスルファテド標準物質と比較確認後、溶媒をエバポレートした。残渣を蒸留水に溶解し、蒸留水に対して透析後、凍結乾燥した。９９％異常の純度のスルファテドの白色粉末を得た。
【００１３】
実施例１
四塩化炭素誘発肝炎モデルによるスルファチドの評価
１）肝障害モデルの作成：Ｗｉｓｔａｒ系雌性ラット（９−１１週令、体重１６０ｇ前後）に対し、オリーブ油に等量の割合で混和した四塩化炭素（和光純薬製）溶液１．５ｍｌ／ｋｇを腹空内に１回投与することにより作成した。（炎症学書：炎症動物実験法、実験的肝繊維症，医学書院出版，２５３−２７７）
２）試料溶液の投与：四塩化炭素投与１５時間前にスルファチド０．３，１．０，３．０ｍｇ／ｋｇを各々１回ずつ筋肉内投与した。コントロール群には硫酸基を持たないガラクトシルセラミドを同じ量投与し、陰性対照群には注射用水を投与した。
３）血清生化学的検査：四塩化炭素投与２４時間後にエーテル麻酔下で開胸、心臓より２ｍｌの血液を採血し、常温に１時間静置後、遠心分離して血清を得た。血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ：ｇｌｕｔａｍｉｃｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ）と血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ：ｇｌｕｔａｍｉｃｐｙｒｕｖｉｃ
ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ）活性の測定は和光純薬製キットを用いて行った。
４）統計解析：それぞれの測定データはすべて平均±Ｓ．Ｅで示し、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓのｔ検定により統計解析した。
【００１４】
結果を表１に示したが、スルファチドの濃度依存的に血清ＧＯＴ，ＧＰＴの上昇抑制効果が見られ、特に１．０ｍｇ／ｋｇ以上で顕著な効果が見られた。またコントロールのガラクトシルセラミドにはそのような効果は認められなかった。
【００１５】

【００１６】
実施例２
上記方法によって作製した肝炎ラットにスルファチド１．０ｍｇ／ｋｇを四塩化炭素投与１５時間前に筋肉内投与し、その肝組織を顕微鏡にて観察したところ四塩化炭素のみ投与した場合に比べて顕著な肝細胞障害の抑制が確認された。（図１）
図１−１は正常ラット、図１−２は四塩化炭素のみ投与ラット、図１−３は四塩化炭素とスルファチド１．０ｍｇ／ｋｇ投与ラットの肝組織像を示している。
【００１７】
実施例３
逆流性腎炎モデルによるスルファチドの評価
４週令の雌性ウイスターラット５匹にスルファチド（１ｍｇ／ｂｏｄｙ）を投与し、直後に右尿管結さつを行った。コントロール群として５匹にガラクトシルセラミド（１ｍｇ／ｂｏｄｙ）を投与し、直後に右尿管結さつを行った。２４時間後にすべて屠殺し、右腎を摘出した。得られた腎組織を急速凍結し、４μｍの凍結切片を作製した後、抗ラット単球／マクロファージモノクローナル抗体（ＥＤ−１）及びビオチン標識抗ラットＩｇＧ抗体を用いて酵素抗体法により単球の浸潤を検討した。単球の数は両群をそれぞれ５匹についてＥＤ−１を用いた酵素抗体法により染色した切片を光学顕微鏡により４００倍で各２０視野観察し、ＥＤ−１により染色される単球の数を計測した。統計学的処理はＷｉｌｃｏｘｏｎ検定により行った。
【００１８】
結果を図２に示すが、ガラクトシルセラミド投与群では腎髄質の間質に多数の単球（１５９．２±１４．５／２０視野，ｎ＝５）が認められたのに対し、スルファチド投与群では単球数は有意に少なかった（８６．４±２４．４／２０視野，ｎ＝５）。統計学的にはＰ＜０．０００１で有意差を認めた。スルファチドは腎においては主に遠位尿細管上皮細胞に存在するが、逆流性腎炎症の尿細管障害に伴って間質及び尿細管周囲の小血管に再分布し、白血球浸潤を促進すると考えられる。スルファチドを投与することにより本モデルにおける白血球浸潤が著明に抑制されたことからスルファチドは腎疾患における間質への白血球浸潤を抑制するのに有効であることがわかった。
【００１９】
【発明の効果】
本発明によれば、内用、外用、注射等の各方法で投与できる無害な抗炎症剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】は実施例２における正常ラットの肝組織像を示す顕微鏡写真、
【図２】は同実施例における四塩化炭素のみを投与したラットの肝組織像を示す顕微鏡写真、
【図３】は同実施例における四塩化炭素とスルファチドを投与したラットの肝組織像を示す顕微鏡写真である。
【図４】は実施例３における結果を示すグラフで、ガラクトシルセラミド投与群では腎細胞の間質に多数の単球（ＥＤ−１陽性）が認められるが、スルファチド投与群では単球の数が遙かに少ない。[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to an invention for supplying a safe therapeutic agent to a patient having inflammatory diseases including hepatitis such as viral and drug-induced hepatitis and chronic nephritis.
[0002]
[Prior art]
There are various inflammatory diseases, but clinically, hepatitis and nephritis are common, and development of highly safe therapeutic agents for these is expected. Hepatitis includes viral and drug-related ones, but most of them are viral. As therapeutic agents for these, biological response modifiers such as interferon and interleukin 2 (Biological response modifier; BRM) ), Neominophagen C, which is an injection for intravenous injection of glycyrrhizin, and the like are used. However, BRM has problems with long-term administration because side effects such as fever are observed. Moreover, when using glycyrrhizin for a long period of time, it is necessary to control blood pressure and electrolyte concentration. In addition, saikosaponins, saponins, trashins and the like, which are herbal medicine components, are known, but none of them has been clinically applied.
In addition, there is no effective therapeutic agent for nephritis, but steroidal drugs and antiplatelet drug dipyridamole are often used as therapeutic drugs for nephrosis, which is the pre-stage of chronic nephritis. However, they must be used for a long time, especially when administered to young people, such as full moon-like facial vertigo, dizziness, headache, vomiting, and in severe cases infection, gastrointestinal bleeding, metabolic abnormalities, There are concerns about side effects such as osteoporosis and thrombosis.
[0003]
In recent years, the relationship between inflammation and a selectin family that recognizes sugar chains among cell adhesion factors has attracted attention. Selectins include E-selectin (Bevilacqua, MP et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 84, 9238-9243) present in vascular endothelial cells, P-selectin present in platelets ( Geng, JG et al. (1990) Nature. 343, 757-760), L-selectin present in leukocytes (Ley, K. et al.
et al. (1991) Blood. 77, 2553-2555), and these ligand sugar chains are sialyl Le ^X or sialyl Le ^a (Lowe, JB et al. (1990) Cell. 53, 475-484; Philipis, ML. et al. (1990) Science. 250, 1130-1132; Magnani, JL (1991) Glycoconjugate J.1, 318-320; 179, 713-719). In addition, since adhesion between leukocytes and vascular endothelial cells via selectins and these sugar chains is thought to trigger the inflammatory reaction, ligands such as sialyl Le ^X and sialyl Le ^a are administered directly into the body. Attempts have been made to control inflammation. The inventors of the present invention have previously described that a glycolipid sulfatide having a sulfate group binds stronger than L-selectin and sialyl Le ^x , Le ^a by in vitro experiments, unlike sialyl Le ^x , Le ^a , The binding to L-selectin was found to be calcium independent (Suzuki, Y. et al. (1993) Biochem. Biophys, Res. Commun. 190, 426-434.). However, it is not known how it affects inflammation in vivo.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, hepatitis is roughly classified into viral ones and alcohol-related drugs, but the majority are caused by hepatitis B and C viruses. In recent years, interferon has been reported to be particularly effective against hepatitis C as a therapeutic agent, and the frequency of use has increased (Shiro Iino et al .: Basic and Clinical, 26: 339, 1992; Hiroshi Suzuki et al .: Liver・ Gall and pancreas, 23: 1065, 1991). However, influenza-like symptoms such as fever appear after short-term administration, and side effects such as weight loss, diarrhea, vomiting, arrhythmia, hair loss, and autoimmune abnormalities are observed even after long-term administration. Accordingly, development of a new therapeutic agent with higher safety or an auxiliary agent that can be used in combination with interferon or the like is desired.
Nephritis is roughly classified into a primary type derived from glomerulus and a secondary type derived from other diseases. The former accounts for about 80%, and the age group is more common. Pathologically, it is classified into a small change group, monoglomerular sclerosis, membranous nephropathy, mesangial proliferative nephropathy, membranous glomerulonephritis, and the like. Proteinuria is commonly seen as a clinical feature, and in severe cases it is diagnosed as nephrotic syndrome. In recent years, kidney diseases are increasing not only for the elderly but also for young people, and therefore, development of therapeutic agents with few side effects is desired.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies using the hepatitis model induced by carbon tetrachloride and the reflux nephritis model prepared by ureter ligation, the present inventors have found that sulfatide is effective in both models, and the substance is an anti-inflammatory agent. Found to be usable as.
[0006]
The present invention is based on this new finding relates to improving agents of renal inflammatory shall be the active ingredient Suruachido.
[0007]
The sulfatide used in the present invention, that is, cerebroside sulfate, is a known glycolipid specified by the following general formula (1), and is relatively present in brain white matter, and its importance as a myelin constituent lipid has also been pointed out. .
[0008]
[Chemical 1]

(Where R—CO— represents a fatty acid residue)
[0009]
The sulfatide of the present invention can be extracted and purified according to a conventional method, for example, a method of extracting and purifying from bovine brain (Lipids, 22 (9) P. 588-598 (1985); Biochemistry Experiment Course, “Lipid Chemistry”, 3 P.368-388, Tokyo Chemical Doujinsha). Also, sulfatide can be produced by chemical synthesis. An example of a method for preparing a purified product from bovine brain is shown in Experimental Example 1.
[0010]
In the present invention, sulfatide is administered to a patient for the purpose of anti-inflammation, improvement of hepatitis symptoms, and improvement of renal inflammation. Since sulfatide is a brain myelin-constituting lipid and has almost no toxicity, there is no particular limitation on the administration method, and internal administration, external application, and injection can be used. The injection can be administered, for example, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, intradermally or the like.
The daily dose per adult is about 0.1 to 1 g for oral, about 10 to 100 mg for intravenous, 50 to 300 mg for intramuscular, about 30 to 150 mg for subcutaneous and intradermal, It is administered once a day or divided into several times. For external use, for example, it can be applied as an ointment locally to the outer skin, applied to the outer skin, throat, nasal cavity in the form of a spray, or instilled as an ophthalmic solution. The preferred concentration of sulfatide in the external preparation varies depending on the dosage form and application site, but is usually about 0.1 to 1% (w / w).
[0011]
Hereinafter, in order to further clarify the effect of the anti-inflammatory agent sulfatide of the present invention, it will be described in detail with reference to experimental examples and examples, but the present invention is not limited thereto.
[0012]
【Example】
Experimental example 1
(Preparation method of sulfatide)
To 1 kg of fresh bovine brain gray matter, 5 volumes of acetone was added and homogenized, followed by filtration. The extract was lyophilized, extracted with 5 volumes of chloroform / methanol (2: 1, v / v) and then with chloroform / methanol (1: 1, v / v) and then evaporated. The dried product was extracted with 3 volumes of acetone and then treated with 3 volumes of diethyl ether to remove glycerophospholipid. Subsequently, it was treated with 0.5N NaOH / methanol at 37 ° C. for 3 hours, dialyzed against distilled water, and freeze-dried. This crude fraction was subjected to a Forch partition method (Folchs partition), and the lower layer was collected, and then applied to a Q-Sepharose column equilibrated with chloroform / methanol / water (30: 60: 8, v / v / v). Elute with a linear gradient of sodium 0-4M. Sulfate was eluted in 1M to 1.5M sodium acetate elution fractions. Each fraction was compared with a sulfated standard substance by thin layer chromatography, and then the solvent was evaporated. The residue was dissolved in distilled water, dialyzed against distilled water and lyophilized. A white powder of sulfated with an abnormal purity of 99% was obtained.
[0013]
Example 1
Evaluation of sulfatide using carbon tetrachloride-induced hepatitis model 1) Creation of liver injury model: Wistar female rats (9-11 weeks old, body weight around 160 g) mixed with olive oil in an equal proportion of carbon tetrachloride It was prepared by administering 1.5 ml / kg of a solution (manufactured by Mitsui Pure) once into the abdominal cavity. (Inflammation Journal: Inflammatory Animal Experiments, Experimental Liver Fibrosis, Medical School Publishing, 253-277)
2) Administration of sample solution: Sulfatide 0.3, 1.0, and 3.0 mg / kg were intramuscularly administered once each 15 hours before carbon tetrachloride administration. The same amount of galactosylceramide having no sulfate group was administered to the control group, and water for injection was administered to the negative control group.
3) Serum biochemical test: 24 hours after administration of carbon tetrachloride, the chest was opened under ether anesthesia, 2 ml of blood was collected from the heart, left at room temperature for 1 hour, and centrifuged to obtain serum. Serum glutamate oxaloacetate transaminase (GOT) and serum glutamate pyruvate transaminase (GPT)
Transaminase) activity was measured using a Wako Pure Chemical kit.
4) Statistical analysis: All measured data are mean ± S. This is indicated by E and statistically analyzed by Student's t-test.
[0014]
The results are shown in Table 1. As a result, the serum GOT and GPT elevation-inhibiting effect was observed depending on the sulfatide concentration, and a remarkable effect was observed particularly at 1.0 mg / kg or more. No such effect was observed in the control galactosylceramide.
[0015]

[0016]
Example 2
Hepatitis rats prepared by the above method were intramuscularly administered with sulfatide 1.0 mg / kg 15 hours before administration of carbon tetrachloride, and the liver tissue was observed with a microscope. Suppression of hepatocellular injury was confirmed. (Figure 1)
1-1 is a normal rat, FIG. 1-2 is a rat treated with carbon tetrachloride alone, and FIG. 1-3 is a liver tissue image of a rat administered with carbon tetrachloride and sulfatide at 1.0 mg / kg.
[0017]
Example 3
Evaluation of sulfatide by reflux nephritis model Sulfatide (1 mg / body) was administered to 5 4-week-old female Wistar rats, and immediately after the right ureter was ligated. As a control group, galactosylceramide (1 mg / body) was administered to 5 animals, and right ureter ligation was performed immediately after. After 24 hours, all were sacrificed and the right kidney was removed. The obtained kidney tissue was rapidly frozen to prepare a 4 μm frozen section, and then infiltrated with monocytes by an enzyme antibody method using an anti-rat monocyte / macrophage monoclonal antibody (ED-1) and a biotin-labeled anti-rat IgG antibody. It was investigated. The number of monocytes was determined by observing 20 sections of each group stained with the enzyme antibody method using ED-1 at 20 times each in 5 fields, and the number of monocytes stained with ED-1. Measured. Statistical processing was performed by Wilcoxon test.
[0018]
The results are shown in FIG. 2. In the galactosylceramide administration group, a number of monocytes (159.2 ± 14.5 / 20 visual fields, n = 5) were observed in the renal medulla stroma, whereas the sulfatide administration group The number of monocytes was significantly less (86.4 ± 24.4 / 20 fields, n = 5). Statistically, a significant difference was recognized at P <0.0001. Sulfatide is present mainly in the distal tubular epithelial cells in the kidney, but is thought to redistribute to the interstitium and small blood vessels around the tubule and promote leukocyte infiltration with the renal tubule injury of reflux renal inflammation. . The administration of sulfatide markedly suppressed leukocyte infiltration in this model, indicating that sulfatide is effective in suppressing leukocyte infiltration into the interstitium in kidney disease.
[0019]
【The invention's effect】
According to the present invention, an innocuous anti-inflammatory agent that can be administered by various methods such as internal use, external use, and injection is provided.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a micrograph showing a liver tissue image of a normal rat in Example 2,
FIG. 2 is a micrograph showing a liver tissue image of a rat administered with only carbon tetrachloride in the same Example;
FIG. 3 is a photomicrograph showing liver tissue images of rats administered with carbon tetrachloride and sulfatide in the same Example.
FIG. 4 is a graph showing the results in Example 3. In the galactosylceramide administration group, a large number of monocytes (ED-1 positive) are observed in the renal cell stroma, whereas in the sulfatide administration group, the number of monocytes is Much less.

Claims

An inhibitor of leukocyte infiltration into the interstitium in renal inflammation containing sulfatide as an active ingredient .