JP3738042B2

JP3738042B2 - Parenteral antitumor agent

Info

Publication number: JP3738042B2
Application number: JP10310994A
Authority: JP
Inventors: 卓三郎海老名
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1994-05-17
Filing date: 1994-05-17
Publication date: 2006-01-25
Anticipated expiration: 2021-01-25
Also published as: JPH07309771A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
この発明は、非経口用抗腫瘍剤に関するものである。さらに詳しくは、この発明は特定のアミノ酸配列を有するラクトフェリン由来のペプチド等を有効成分とし、副作用のない新規な非経口用抗腫瘍剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、ペプチドを有効成分とする抗腫瘍剤として、シーピーエフ・ペプチド（特表平４−５０２９０１号公報）、マガイニン（特表平４−５０６８０１号公報）、１８個のアミノ酸残基からなるペプチド（特公平６−４６７５号公報）等が知られている。しかしながら、これらのペプチドは、この発明に係わるペプチドとは全く異なる別個のペプチドである。
【０００３】
一方、種々の微生物に対して抗菌作用を有するペプチドについては、多数の発明が開示されている。例えば、グラム陽性菌およびグラム陰性菌に有効なホスホノトリペプチド（特開昭５７−１０６６８９号公報）、ホスホノジペプチド誘導体（特開昭５８−１３５９４号公報）、環状ペプチド誘導体（特開昭５８−２１３７４４号公報）、抗菌および抗ウイルス作用を示すペプチド（特開昭５９−５１２４７号公報）、酵母に有効なポリペプチド（特開昭６０−１３０５９９号公報）、グラム陽性菌に有効な糖ペプチド誘導体（特開昭６０−１７２９９８号公報、特開昭６１−２５１６９９号公報および特開昭６３−４４５９８号公報）、グラム陽性菌に有効なオリゴペプチド（特開昭６２−２２７９８号公報）、ペプチド系抗生物質（特開昭６２−５１６９７号公報および特開昭６３−１７８９７号公報）、その他北米産カブトガニの血球から抽出した抗菌性ペプチド（特開平２−５３７９９号公報）、蜜蜂の血リンパから単離した抗菌性ペプチド（特表平２−５０００８４号公報）、ロイヤルゼリーから単離した抗菌ペプチド（特開平２−２６８１９８号公報）等がある。
【０００４】
ラクトフェリンは、乳汁および唾液、涙、粘膜分泌液等のヒトを含む哺乳動物の体液に存在する鉄結合性タンパク質であり、大腸菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すことが知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス(Journal of Pediatrics) 、第９４巻、第１ページ、１９７９年］。また、ブドウ球菌および腸球菌に対して、０．５〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で抗菌作用を有することが知られている［ジャーナル・オブ・デイリー・サイエンス(Journal of Dairy Science)、第６７巻、第６０６ページ、１９８４年］。
【０００５】
この発明の発明者らは、ラクトフェリンの抗菌性に着目し、哺乳類のラクトフェリン、アポラクトフェリン、および／または金属飽和ラクトフェリン（以下、これらをラクトフェリン類と記載することがある）を酸または酵素により加水分解した物質が、望ましくない副作用（例えば抗原性）等がなく、しかも未分解のラクトフェリン類よりも強い耐熱性および抗菌性を有することを見い出し、既に特許出願を行った（特開平５−３２００６８号公報）。
【０００６】
また、この発明の発明者らは、ラクトフェリンの分解物から強い抗菌活性を有するペプチドを単離、若しくはそれらのペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはそれらのペプチドの誘導体を合成し、２０個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−９２９９４号公報）、１１個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−７８３９２号公報）、６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９７号公報）、５個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４９８２９６号公報）、３〜６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９５号公報）を、それぞれ既に特許出願した。
【０００７】
さらに、乳汁の生理活性ペプチドには、成長ホルモン、細胞分化増殖因子等の他に、カルシウム吸収促進ペプチド（フードケミカル、第１１巻、第３３ページ、１９８８年）、オピオイドペプチド［ホッペ・ザイラーズ・ツァイトシュリフト・フュアー・フィジオロギッシェ・ヘミー(Hoppe-Seyler´s Zeitschrift fur Physiologische Chemie)、第３６０巻、第１２１１ページ、１９７９年およびザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカルケミストリー(The Journal of Biological Chemistry) 、第２５４巻、第２４４６ページ、１９７９年］、アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチド（フードケミカル、第１１巻、第３９ページ、１９８８年）、胃酸分泌抑制作用を有するペプチド（特開平５−２６２７９３号公報）等が知られている。
【０００８】
この発明の発明者らも、ラクトフェリン類を酸または酵素により加水分解した物質と同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはこれらペプチドの誘導体に脳の保護作用（特願平４−３２７７３８号公報）、ラクトフェリン加水分解物に上皮細胞増殖因子による繊維芽細胞増殖を促進する作用（特開平６−４８９５５号公報）および神経成長因子産生促進作用（特開平５−２３５５７号公報）があることを見い出し、それぞれ既に特許出願した。
【０００９】
しかしながら、これらのラクトフェリン由来のペプチドが抗腫瘍作用を有することは知られておらず、文献にも記載されていない。
さらに、第２鉄イオンを結合させたラクトフェリンに抗腫瘍作用があることは知られている（特公平５−８６９３２号公報）が、ラクトフェリンから得られるペプチドに抗腫瘍作用があることは知られていない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
前記従来技術から明らかなように、副作用が少ない抗腫瘍剤が待望されていたが、その有効成分となる優れた物質は未だに知られていないのが現状であった。この発明は、以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであり、副作用が少なく、少量で有効な非経口用抗腫瘍剤を提供することを目的としている。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
この発明の発明者らは、上記の課題を解決するために種々の物質を検索した結果、ラクトフェリンを加水分解して得られるペプチドが、副作用が少なく、しかも優れた抗腫瘍作用を有することを見い出し、この発明を完成した。すなわち、この発明は、前記の課題を解決するものとして、配列番号２６に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、配列番号２６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドのカルボキシル基をアミド化またはアミノ基をアセチル化した誘導体、配列番号２６に記載のアミノ酸配列からなるペプチドの薬学的に許容される塩類（以下、これらをまとめてペプチド類と記載することがある）、またはこれらの２種以上の混合物を有効成分とする非経口用抗腫瘍剤を提供する。
【００１２】
以下、この発明の構成および好ましい態様について詳しく説明する。
この発明の非経口用抗腫瘍剤の有効成分であるペプチド類をラクトフェリン類から製造する場合、出発物質として使用するラクトフェリン類は、市販のラクトフェリン、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、またはこれらの乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から常法（例えば、イオン交換クロマトグラフィー）により分離したラクトフェリン、それらを塩酸、クエン酸等により脱鉄したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンを鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属でキレートした金属飽和または部分飽和ラクトフェリンであり、市販品または公知の方法により製造した調製品を使用することもできる。
【００１３】
この発明において使用するペプチド類は、ラクトフェリン類の分解物から分離手段によって得られるペプチド、このペプチドと同一のアミノ酸配列、相同なアミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される塩類またはこれらの任意の混合物であり、公知の方法により化学的に合成することもできる。これらのペプチド類は、例えば、前記特開平５−９２９９４号公報、特開平５−７８３９２号公報、特開平５−１４８２９７号公報、特開平５−１４９８２９６号公報および特開平５−１４８２９５号公報の各発明に記載された方法によって得ることができる。
【００１４】
前記の方法によって得られるペプチドは次のアミノ酸配列を有するペプチド、その誘導体または塩類を望ましい態様として例示できる。例えば、配列番号１、２および２７のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−７８３９２号公報）、配列番号３、４、５および６のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９７号公報）、配列番号７、８、９および３１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４９８２９６号公報）、配列番号１０から２１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９５号公報）、配列番号２２から２６、２８、２９および３０のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−９２９９４号公報）である。前記ペプチドの薬学的に許容される塩類としては、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の酸付加塩を例示でき、誘導体としては、カルボキシル基をアミド化またはアミノ基をアセチル化した誘導体を例示することができる。
【００１５】
この発明の非経口用抗腫瘍剤は、公知の方法により注射剤等に加工することができる。
この発明の抗腫瘍剤は、年齢、症状等により異なるが、体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇの割合で非経口的に投与できる。非経口的投与方法としては、腫瘍部位への局所投与の他、静脈内、動脈内、筋肉、皮下、胸腔、腹腔等への注射による全身投与も行うことができる。また、他の薬剤との併用投与、手術、放射線療法等との複合投与なども行うことができる。
【００１６】
次に試験例を示してこの発明を詳しく説明する。
試験例１
この試験は、ペプチド類の抗腫瘍効果を調べるために行った。
１）試験動物
７週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃマウス（東北大学医学部附属動物実験施設から購入）を、無作為に４群（１群７匹）に分けて使用した。腫瘍は、ＢＡＬＢ／ｃと同系のＭｅｔｈ−Ａ線維芽肉腫細胞を使用した。
２）試験方法
この試験は、海老名らの方法（癌と化学療法、第１９巻、第１０号、第１４２９〜１４３２ページ、１９９２年）を一部変更して次のとおり行なった。
【００１７】
ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹皮内に１×１０⁶個のＭｅｔｈ−Ａ線維芽肉腫細胞を移植し、大きな腫瘍（原発巣）が指で触れて確認できる状態となる３日目から、腫瘍内に参考例１と同一の方法により製造した配列番号２６のペプチドを１日１匹当たり１ｍｇ投与した群と１０ｍｇ投与した群、次の方法により精製したカゼインを１０ｍｇ投与した群、並びに対照として何も投与しない群の４群について、２２日目に腫瘍の大きさおよび重量を測定し、抗腫瘍効果を試験した。
【００１８】
カゼインの精製：新鮮な牛乳１リットルを脱脂し、水を添加して２倍に希釈し、２０℃に加温して１規定塩酸を添加し、ｐＨを４．６に調整して粗カゼインを沈殿させ、瀘過して粗カゼインを分離した。得られた粗カゼインを１リットルの水に分散し、１規定水酸化ナトリウムを添加してｐＨを６．８〜７．０に調整しながら攪拌し、粗カゼインを溶解した。溶液を瀘過して不溶物を除去し、瀘液に再度１規定塩酸を添加し、ｐＨを４．６に調整し、カゼインを沈殿させ、瀘過してカゼインを得た。この溶解、沈殿を５回反復し、得られた沈殿を冷却し、アルコールおよびエーテルで洗浄し、乾燥し、精製カゼイン約２２ｍｇを得た。
３）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から明らかなように、配列番号２６のペプチド投与群は、１０ｍｇの投与で完全に腫瘍を治癒させ、１ｍｇの投与群でもほぼ腫瘍を治癒させた。これに対してカゼイン投与群および対照群では腫瘍が治癒せず、全例が死亡した。
【００１９】
この試験結果から、ペプチドは腫瘍を治癒する効果があることが認められた。なお、他のペプチド類についても同様の試験を行ったがほぼ同じような結果が得られた。
【００２０】
【表１】

【００２１】
試験例２
この試験は、ペプチドの急性毒性を調べるために行った。
１）使用動物
６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購入）の両性を用い、雄および雌を無作為にそれぞれ４群（１群５匹）に分けて使用した。
２）試験方法
参考例１と同一の方法で製造した配列番号２６のペプチドを体重１ｋｇ当り１０００、２０００または４０００ｍｇの割合で注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、体重１００ｇ当たり４ｍｌの割合で金属製玉付き針を用いて単回強制経口投与し、急性毒性を試験した。
３）試験結果
この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から明らかなように、このペプチドを１０００ｍｇ／ｋｇ体重および２０００ｍｇ／ｋｇ体重の割合で投与した群に死亡例は認められなかった。従って、このペプチドのＬＤ₅₀は、２０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であり、毒性は極めて低いことが判明した。なお、他のペプチド類についても同様の試験を行ったが、ほぼ同じような結果が得られた。
【００２２】
【表２】

【００２３】
試験例３
この試験は、ペプチド類の有効量を調べるために行った。
１）試験動物
７週齢の雄ＢＡＬＢ／ｃマウス（東北大学医学部附属動物実験施設から購入）を、無作為に４群（１群７匹）に分けて使用した。腫瘍は、ＢＡＬＢ／ｃと同系のＭｅｔｈ−Ａ線維芽肉腫細胞を使用した。
２）試験方法
試験例１と同一の配列番号２６のペプチドの投与量を表３のとおり変更したことを除き、試験例１と同一の方法により試験を行い、抗腫瘍効果を示す有効投与量を決定した。
３）試験結果
この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から明らかなように、配列番号２６のペプチド投与群は、１０μｇの投与で７例中２例の腫瘍を治癒させ、１００μｇの投与では７例中５例の腫瘍を治癒させた。
【００２４】
従って、１日１匹当たり１０μｇ以上のペプチドの投与は腫瘍を治癒するのに有効であることが認められた。なお、他のペプチド類についても同様の試験を行ったがほぼ同じような結果が得られた。
【００２５】
【表３】

【００２６】
参考例１
市販のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを精製水０．９ｍｌに溶解し、０．１規定の塩酸でｐＨを２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社製）１ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−にかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を集め、真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−にかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．５分の間に溶出する画分を集めた。上記の操作を２５回反復し、真空乾燥し、ペプチド約１．５ｍｇを得た。
【００２７】
上記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析した。同一の試料を気相シ−クェンサ−（アプライド・バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。またＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾイック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法［アナリティカル・バイオケミストリ−（Analytical Biochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］によりジスルフィド結合が存在することを確認した。
【００２８】
その結果、このペプチドは、２５個のアミノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合した、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有していることが確認された。
参考例２
ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用い、シェパ−ド等による固相ペプチド合成法［ジャ−ナル・オブ・ケミカル・ソサイエティ−・パ−キンＩ（Journal of Chemical Society Perkin Ｉ）、第５３８頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして合成した。
【００２９】
アミン官能基を９−フルオレニルメトキシカルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−アスパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアスパラギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、そのカルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−アルギニン無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定されたアルギニンの脱保護アミン官能基にカップリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、トリプトファン、グルタミン、およびフェニルアラニンを固定した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、所望のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４％ＴＦＡ、５％フェノ−ル、および１％エタンジオ−ルからなる溶媒でアセトアミドメチル以外の保護基の除去およびペプチドの脱離を行ない、高速液体クロマトグラフイ−によりペプチドを精製し、この溶液を濃縮し、乾燥して、ペプチド粉末を得た。
【００３０】
前記のペプチドについてアミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有することを確認した。
【００３１】
【実施例】
次に実施例を示してこの発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定されるものではない。
実施例１
注射用水（大塚製薬社製）１ｍｌに、参考例１と同一の方法により製造した配列番号２６のペプチド粉末１００μｇおよび塩化ナトリウム（和光純薬工業製）１０ｍｇの割合で溶解し、水酸化ナトリウム（和光純薬工業社製）および塩酸（和光純薬工業社製）でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１ｍｌずつアンプルに充填し、注射用の抗腫瘍剤を製造した。
実施例２
注射用水（大塚製薬製）１ｍｌに、参考例２と同一の方法により製造した配列番号１０のペプチド粉末１ｍｇおよびＤ−マンニット（和光純薬工業社製）４９ｍｇの割合で溶解し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社製）の水溶液でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１ｍｌずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注射用の抗腫瘍剤を製造した。
【００３２】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明は、ペプチド類を有効成分とする非経口用抗腫瘍剤に係るものであり、この発明は以下のとおりの優れた効果を有する。（１）副作用が少ない。
（２）耐熱性があり、水に可溶性で、水溶液中で安定なため、薬剤として安定である。
（３）ペプチドは抗菌作用を有するので、製剤化に当り防腐剤を使用する必要がない。
（４）正常細胞に対しては細胞毒性を示さず、腫瘍細胞に対してのみ細胞毒性を示す。
（５）ペプチドであるので体内で速やかに代謝される。
【００３３】
【配列表】
配列番号：１
配列の長さ：１１
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００３４】

配列番号：２
配列の長さ：１１
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００３５】

配列番号：３
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００３６】

配列番号：４
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００３７】

配列番号：５
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００３８】

配列番号：６
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００３９】

配列番号：７
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００４０】

配列番号：８
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００４１】

配列番号：９
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００４２】

配列番号：１０
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４３】

配列番号：１１
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４４】

配列番号：１２
配列の長さ：４
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４５】

配列番号：１３
配列の長さ：３
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４６】

配列番号：１４
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４７】

配列番号：１５
配列の長さ：４
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４８】

配列番号：１６
配列の長さ：４
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００４９】

配列番号：１７
配列の長さ：３
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００５０】

配列番号：１８
配列の長さ：６
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００５１】

配列番号：１９
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００５２】

配列番号：２０
配列の長さ：４
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００５３】

配列番号：２１
配列の長さ：３
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００５４】

配列番号：２２
配列の長さ：２０
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、２番の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。
【００５５】

配列番号：２３
配列の長さ：２０
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル基を化学的に修飾したシステインを示す。
【００５６】

配列番号：２４
配列の長さ：２０
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、２番の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。
【００５７】

配列番号：２５
配列の長さ：２０
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル基を化学的に修飾したシステインを示す。
【００５８】

配列番号：２６
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：下記配列において、３番の Cysと２０番の Cysがジスルフィド結合している。
【００５９】

配列番号：２７
配列の長さ：１１
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。
【００６０】

配列番号：２８
配列の長さ：３８
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、１６番の Cysと３３番の Cysとがジスルフィド結合している。
【００６１】

配列番号：２９
配列の長さ：３２
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、１０番の Cysと２７番の Cysとがジスルフィド結合している。
【００６２】

配列番号：３０
配列の長さ：４７
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、配列の長さ３６であって９番、２６番、及び３５番に Cysを有するペプチドの、９番の Cysと２６番の Cysとがジスルフィド結合し、上記配列の長さ３６のペプチドの３５番の Cysが、配列の長さ１１であって１０番に Cysを有するペプチドの１０番の Cysとがジスルフィド結合している。
【００６３】

配列番号：３１
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラグメントとして含むペプチド。下記配列において、R01 は Cysを除く任意のアミノ酸残基を示す。
【００６４】

[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a parenteral antitumor agent. More specifically, the present invention relates to a novel parenteral antitumor agent which contains a lactoferrin-derived peptide having a specific amino acid sequence as an active ingredient and has no side effects.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, as an antitumor agent containing a peptide as an active ingredient, CFP peptide (Japanese Patent Publication No. 4-502901), magainin (Japanese Patent Publication No. 4-506801), a peptide comprising 18 amino acid residues ( Japanese Patent Publication No. 6-4675) is known. However, these peptides are distinct peptides that are completely different from the peptides according to the invention.
[0003]
On the other hand, many inventions have been disclosed for peptides having antibacterial action against various microorganisms. For example, phosphonotripeptides (JP-A 57-106869), phosphonodipeptide derivatives (JP-A 58-13594), cyclic peptide derivatives (JP-A 58-58) effective against gram-positive and gram-negative bacteria. 213744), peptides exhibiting antibacterial and antiviral effects (Japanese Patent Laid-Open No. 59-51247), polypeptides effective for yeast (Japanese Patent Laid-Open No. 60-130599), and glycopeptide derivatives effective for Gram-positive bacteria (JP-A-60-172998, JP-A-61-251699, and JP-A-63-44598), an oligopeptide effective against Gram-positive bacteria (JP-A-62-2798), a peptide system Antibiotics (Japanese Patent Laid-Open Nos. 62-51697 and 63-17897) and other North American horseshoe crab blood cells Extracted antibacterial peptide (JP-A-2-53799), antibacterial peptide isolated from bee hemolymph (Japanese Patent Publication No.2-500084), antibacterial peptide isolated from royal jelly (JP-A-2 -268198).
[0004]
Lactoferrin is an iron-binding protein present in the body fluids of mammals including humans such as milk and saliva, tears, mucous secretions, and has antibacterial activity against harmful microorganisms such as Escherichia coli, Candida and Clostridium [Journal of Pediatrics, vol. 94, page 1, 1979]. It is also known to have an antibacterial action against staphylococci and enterococci at a concentration of 0.5 to 30 mg / ml [Journal of Dairy Science, Vol. 67, 606, 1984].
[0005]
The inventors of the present invention pay attention to the antibacterial properties of lactoferrin and hydrolyze mammalian lactoferrin, apolactoferrin, and / or metal saturated lactoferrin (hereinafter sometimes referred to as lactoferrins) with acid or enzyme. It has been found that the obtained substance has no undesirable side effects (for example, antigenicity) and the like, and has stronger heat resistance and antibacterial properties than undegraded lactoferrins, and a patent application has already been filed (JP-A-5-320068). ).
[0006]
In addition, the inventors of the present invention isolated peptides having strong antibacterial activity from a degradation product of lactoferrin, or synthesized peptides having the same amino acid sequence as those peptides or derivatives of these peptides. Antibacterial peptide consisting of amino acid residues (Japanese Patent Laid-Open No. 5-92994), antibacterial peptide consisting of 11 amino acid residues (Japanese Patent Laid-Open No. 5-78392), antibacterial peptide consisting of 6 amino acid residues (Unexamined-Japanese-Patent No. 5-148297) Antibacterial peptide which consists of 5 amino acid residues (Unexamined-Japanese-Patent No. 5-1498296), Antibacterial peptide which consists of 3-6 amino acid residues (Unexamined-Japanese-Patent No. 5-148295) Have already filed patent applications.
[0007]
Furthermore, in addition to growth hormones, cell differentiation and growth factors, and the like, physiologically active peptides in milk include calcium absorption promoting peptides (Food Chemical, Vol. 11, p. 33, 1988), opioid peptides [Hoppe Zylers Zeit. Hoppe-Seyler´s Zeitschrift fur Physiologische Chemie, Vol. 360, p. 1211, 1979 and The Journal of Biological Chemistry 254, 2446, 1979], angiotensin converting enzyme inhibitory peptide (Food Chemical, Vol. 11, page 39, 1988), peptide having gastric acid secretion inhibitory action (Japanese Patent Laid-Open No. 5-262793) Etc. are known.
[0008]
The inventors of the present invention also disclosed that a peptide having the same amino acid sequence as a substance obtained by hydrolyzing lactoferrins with an acid or an enzyme or a derivative of these peptides has a brain protective action (Japanese Patent Application No. 4-327738), lactoferrin hydrolysis. It has been found that the degradation product has an effect of promoting fibroblast proliferation by epidermal growth factor (Japanese Patent Laid-Open No. 6-48955) and an effect of promoting nerve growth factor production (Japanese Patent Laid-Open No. 5-23557), and each has already been patented. I applied.
[0009]
However, it is not known that these lactoferrin-derived peptides have an antitumor action, and are not described in the literature.
Furthermore, it is known that lactoferrin bound with ferric ions has an antitumor action (Japanese Patent Publication No. 5-8). 6 932) is not known to have antitumor activity in peptides obtained from lactoferrin.
[0010]
[Problems to be solved by the invention]
As is apparent from the prior art, an antitumor agent with few side effects has been awaited, but an excellent substance as an active ingredient has not yet been known. The present invention has been made in view of the circumstances as described above, and an object thereof is to provide a parenteral antitumor agent having few side effects and effective in a small amount.
[0011]
[Means for Solving the Problems]
As a result of searching for various substances in order to solve the above-mentioned problems, the inventors of the present invention have found that peptides obtained by hydrolyzing lactoferrin have few side effects and have an excellent antitumor action. The present invention has been completed. That is, the present invention solves the above problems by 26 Amino acid sequence described in Consist of peptide, Comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26 Peptide Carboxyl group was amidated or amino group was acetylated Derivatives, Comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26 Peptide Pharmaceutically acceptable Provided is a parenteral antitumor agent comprising as an active ingredient a salt (hereinafter, these may be collectively referred to as peptides), or a mixture of two or more thereof.
[0012]
Hereinafter, the configuration and preferred embodiments of the present invention will be described in detail.
When peptides that are active ingredients of the parenteral antitumor agent of the present invention are produced from lactoferrins, lactoferrins used as starting materials are commercially available lactoferrin, mammals (eg, humans, cows, sheep, goats, horses). ) Lactoferrin separated from colostrum, transitional milk, normal milk, terminal milk, etc., or skim milk, whey, etc., which are processed products of these milks by conventional methods (for example, ion exchange chromatography), Apo-lactoferrin that has been de-ironed with acid, etc., is metal-saturated or partially-saturated lactoferrin chelated with metals such as iron, copper, zinc, manganese, etc., and it is also possible to use commercial products or preparations prepared by known methods it can.
[0013]
Peptides used in the present invention are peptides obtained by separation means from degradation products of lactoferrin, peptides having the same amino acid sequence as this peptide, peptides having a homologous amino acid sequence, derivatives of these peptides, pharmaceuticals of these peptides Acceptable salts or any mixture thereof, and can be chemically synthesized by a known method. These peptides include, for example, each of the above-mentioned JP-A-5-92994, JP-A-5-78392, JP-A-5-148297, JP-A-5-1498296, and JP-A-5-148295. It can be obtained by the method described in the invention.
[0014]
Peptides obtained by the above method can be exemplified by peptides having the following amino acid sequences, derivatives or salts thereof as desirable embodiments. For example, peptides having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 27, salts thereof or derivatives thereof (JP-A-5-78392), peptides having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 3, 4, 5 and 6, salts thereof or Derivatives thereof (JP-A-5-148297), peptides having amino acid sequences of SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 31; salts thereof or derivatives thereof (JP-A-5-1498296); amino acids of SEQ ID NOs: 10 to 21 Peptides having a sequence, salts thereof or derivatives thereof (JP-A-5-148295), peptides having amino acid sequences of SEQ ID NOs: 22 to 26, 28, 29 and 30; salts thereof or derivatives thereof (JP-A-5-92994) Publication). Examples of the pharmaceutically acceptable salts of the peptide include acid addition salts such as hydrochloride, phosphate, sulfate, citrate, lactate, and tartrate, and derivatives include amidation of the carboxyl group. Or the derivative which acetylated the amino group can be illustrated.
[0015]
The parenteral antitumor agent of this invention can be processed into an injection or the like by a known method.
The antitumor agent of the present invention can be administered parenterally at a rate of at least 1 mg / kg body weight, although it varies depending on age, symptoms and the like. As a parenteral administration method, in addition to local administration to a tumor site, systemic administration by injection into intravenous, intraarterial, muscle, subcutaneous, thoracic cavity, abdominal cavity or the like can be performed. Further, combined administration with other drugs, combined administration with surgery, radiation therapy, and the like can also be performed.
[0016]
Next, the present invention will be described in detail with reference to test examples.
Test example 1
This test was conducted to examine the antitumor effect of peptides.
1) Test animals
Seven-week-old male BALB / c mice (purchased from Tohoku University School of Medicine Animal Experiment Facility) were randomly divided into 4 groups (7 per group). Tumors used Meth-A fibroblastoma cells syngeneic with BALB / c.
2) Test method
This test was performed as follows by partially changing the method of Ebina et al. (Cancer and chemotherapy, Vol. 19, No. 10, pp. 1429-1432, 1992).
[0017]
1 × 10 in the abdominal skin of BALB / c mice ⁶ From the 3rd day when individual Meth-A fibroblastic sarcoma cells are transplanted and a large tumor (primary focus) can be confirmed by touching with a finger, SEQ ID NO: 26 produced in the tumor by the same method as Reference Example 1 Tumors on day 22 in groups of 1 mg / day and 10 mg / day of the peptide, 10 mg of casein purified by the following method, and 4 groups of no administration as a control. Size and weight were measured and tested for anti-tumor effects.
[0018]
Casein purification: 1 liter of fresh milk is defatted, water is added to dilute it twice, warm to 20 ° C, 1N hydrochloric acid is added, pH is adjusted to 4.6, and crude casein is removed. Precipitation and filtration separated crude casein. The obtained crude casein was dispersed in 1 liter of water and stirred while adjusting the pH to 6.8 to 7.0 by adding 1 N sodium hydroxide to dissolve the crude casein. The solution was filtered to remove insolubles, 1N hydrochloric acid was added again to the filtrate, the pH was adjusted to 4.6, casein was precipitated, and filtered to obtain casein. This dissolution and precipitation was repeated 5 times, and the resulting precipitate was cooled, washed with alcohol and ether, and dried to obtain about 22 mg of purified casein.
3) Test results
The results of this test are as shown in Table 1. As is clear from Table 1, the group administered with the peptide of SEQ ID NO: 26 completely cured the tumor by administration of 10 mg, and almost cured the tumor even by the administration group of 1 mg. In contrast, in the casein administration group and the control group, the tumor did not heal and all cases died.
[0019]
From this test result, it was confirmed that the peptide had an effect of healing the tumor. Similar tests were performed on other peptides, but almost the same results were obtained.
[0020]
[Table 1]

[0021]
Test example 2
This test was conducted to examine the acute toxicity of the peptides.
1) Animals used
Using both sexes of 6-week-old CD (SD) strain rats (purchased from Japan SLC), males and females were randomly divided into 4 groups (5 per group).
2) Test method
The peptide of SEQ ID NO: 26 produced by the same method as in Reference Example 1 was dissolved in water for injection (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) at a rate of 1000, 2000, or 4000 mg / kg body weight, and with metal balls at a rate of 4 ml per 100 g body weight A single oral gavage was performed using a needle to test acute toxicity.
3) Test results
The results of this test are as shown in Table 2. As is apparent from Table 2, no deaths were observed in the group administered with this peptide at a ratio of 1000 mg / kg body weight and 2000 mg / kg body weight. Therefore, the LD of this peptide ₅₀ Was 2000 mg / kg body weight or more, and the toxicity was found to be extremely low. In addition, although the same test was done about other peptides, the substantially same result was obtained.
[0022]
[Table 2]

[0023]
Test example 3
This test was conducted to determine the effective amount of peptides.
1) Test animals
Seven-week-old male BALB / c mice (purchased from Tohoku University School of Medicine Animal Experiment Facility) were randomly divided into 4 groups (7 per group). Tumors used Meth-A fibroblastoma cells syngeneic with BALB / c.
2) Test method
A test was conducted by the same method as in Test Example 1 except that the dose of the peptide of SEQ ID NO: 26, which was the same as in Test Example 1, was changed as shown in Table 3, and an effective dose showing an antitumor effect was determined.
3) Test results
The results of this test are as shown in Table 3. As is apparent from Table 3, the peptide administration group of SEQ ID NO: 26 cured 2 of 7 tumors by administration of 10 μg, and cured 5 of 7 tumors by administration of 100 μg.
[0024]
Therefore, it was found that administration of 10 μg or more of peptide per animal per day was effective in healing the tumor. Similar tests were performed on other peptides, but almost the same results were obtained.
[0025]
[Table 3]

[0026]
Reference example 1
50 mg of commercially available bovine lactoferrin (manufactured by Sigma) is dissolved in 0.9 ml of purified water, pH is adjusted to 2.5 with 0.1 N hydrochloric acid, and then 1 mg of commercially available pig pepsin (manufactured by Sigma) is added. And hydrolyzed at 37 ° C. for 6 hours. The pH is then adjusted to 7.0 with 0.1 normal sodium hydroxide, heated at 80 ° C. for 10 minutes to inactivate the enzyme, cooled to room temperature, centrifuged at 15,000 rpm for 30 minutes, and clear. A supernatant was obtained. 100 μl of this supernatant was subjected to high performance liquid chromatography using TSK gel ODS-120T (manufactured by Tosoh Corporation), and 0.05% TFA (trifluoroacetic acid) was added for 10 minutes after sample injection at a flow rate of 0.8 ml / min. Elution with 20% acetonitrile containing, followed by elution with a gradient of 20-60% acetonitrile containing 0.05% TFA for 30 minutes, fractions eluting between 24-25 minutes were collected and dried in vacuo. This dried product was dissolved in purified water at a concentration of 2% (W / V) and again subjected to high performance liquid chromatography using TSK gel ODS-120T (manufactured by Tosoh Corporation) at a flow rate of 0.8 ml / min. Elute with 24% acetonitrile containing 0.05% TFA for 10 minutes after sample injection, then elute with a gradient of 24-32% acetonitrile containing 0.05% TFA for 30 minutes, 33.5-35.5 minutes Fractions eluting in between were collected. The above operation was repeated 25 times and vacuum-dried to obtain about 1.5 mg of peptide.
[0027]
The above peptide was hydrolyzed with 6N hydrochloric acid, and the amino acid composition was analyzed by an ordinary method using an amino acid analyzer. The same sample was subjected to Edman degradation 25 times using a gas phase sequencer (Applied Biosystems), and the sequence of 25 amino acid residues was determined. Also, a disulfide bond analysis method using DTNB [5,5-dithio-bis (2-nitrobenzoic acid)] [Analytical Biochemistry, Vol. 67, p. 493, 1975] Thus, it was confirmed that a disulfide bond was present.
[0028]
As a result, this peptide consists of 25 amino acid residues, the 3rd and 20th cysteine residues are disulfide bonded, and 2 amino acid residues from the 3rd cysteine residue to the N-terminal side, It was confirmed to have the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26 in which 5 amino acids were bonded to the C-terminal side from the 20th cysteine residue.
Reference example 2
Using an automatic peptide synthesizer (Pharmacia LKB Biotechnology, Inc., LKBBiolynx 4170), a solid-phase peptide synthesis method by Shepard et al. [Journal of Chemical Society Perkin I), 538, 1981], the peptide was synthesized as follows.
[0029]
N, N-dicyclohexyl is an amino acid in which the amine functional group is protected with a 9-fluorenylmethoxycarbonyl group [hereinafter sometimes referred to as Fmoc-amino acid or Fmoc-specific amino acid name (eg, Fmoc-asparagine)]. Carbodiimide was added to produce the anhydride of the desired amino acid and this Fmoc-amino acid anhydride was used in the synthesis. In order to produce a peptide chain, Fmoc-asparagine anhydride corresponding to the C-terminal asparagine residue was immobilized on Ultrocin A resin (Pharmacia LKB Biotechnology) through carboxyamino group and dimethylaminopyridine as a catalyst. To do. The resin is then washed with dimethylformamide containing piperidine to remove the protecting group on the amine function of the C-terminal amino acid. Thereafter, Fmoc-arginine anhydride corresponding to the second from the C-terminal of the amino acid sequence was coupled to the deprotected amine functional group of arginine fixed to the resin via the C-terminal amino acid residue. Thereafter, glutamine, tryptophan, glutamine, and phenylalanine were sequentially fixed in the same manner. After the coupling of all amino acids is completed and a peptide chain of the desired amino acid sequence is formed, a protecting group other than acetamidomethyl is removed with a solvent consisting of 94% TFA, 5% phenol, and 1% ethanol. Removal and desorption of the peptide were performed, and the peptide was purified by high performance liquid chromatography. The solution was concentrated and dried to obtain peptide powder.
[0030]
About the said peptide, the amino acid composition was analyzed by the conventional method using the amino acid analyzer, and it confirmed having the amino acid sequence of sequence number 10.
[0031]
【Example】
EXAMPLES Next, the present invention will be described in more detail and specifically with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples.
Example 1
In 1 ml of water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), 100 μg of the peptide powder of SEQ ID NO: 26 produced by the same method as in Reference Example 1 and 10 mg of sodium chloride (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) were dissolved. The pH was adjusted to about 7 with hydrochloric acid (manufactured by Kojun Pharmaceutical Co., Ltd.) and hydrochloric acid (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), sterilized by filtration, and filled into ampoules 1 ml by a conventional method to produce an antitumor agent for injection.
Example 2
In 1 ml of water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical), 1 mg of the peptide powder of SEQ ID NO: 10 produced by the same method as in Reference Example 2 and 49 mg of D-mannit (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were dissolved in a phosphate buffer. The pH was adjusted to about 7 with an aqueous solution of an agent powder (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), sterilized by filtration, filled into vials 1 ml by a conventional method, and freeze-dried to produce an antitumor agent for injection.
[0032]
【The invention's effect】
As described above in detail, the present invention relates to a parenteral antitumor agent comprising peptides as active ingredients, and the present invention has the following excellent effects. (1) There are few side effects.
(2) Since it is heat resistant, soluble in water and stable in aqueous solution, it is stable as a drug.
(3) Since the peptide has an antibacterial action, it is not necessary to use a preservative for formulation.
(4) Not cytotoxic to normal cells but cytotoxic only to tumor cells.
(5) Since it is a peptide, it is rapidly metabolized in the body.
[0033]
[Sequence Listing]
SEQ ID NO: 1
Sequence length: 11
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0034]

SEQ ID NO: 2
Sequence length: 11
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0035]

SEQ ID NO: 3
Sequence length: 6
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0036]

SEQ ID NO: 4
Sequence length: 6
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0037]

SEQ ID NO: 5
Sequence length: 6
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0038]

SEQ ID NO: 6
Sequence length: 6
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0039]

SEQ ID NO: 7
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0040]

SEQ ID NO: 8
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0041]

SEQ ID NO: 9
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0042]

SEQ ID NO: 10
Sequence length: 6
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0043]

SEQ ID NO: 11
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0044]

SEQ ID NO: 12
Sequence length: 4
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0045]

SEQ ID NO: 13
Sequence length: 3
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0046]

SEQ ID NO: 14
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0047]

SEQ ID NO: 15
Sequence length: 4
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0048]

SEQ ID NO: 16
Sequence length: 4
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0049]

SEQ ID NO: 17
Sequence length: 3
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0050]

SEQ ID NO: 18
Sequence length: 6
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0051]

SEQ ID NO: 19
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0052]

SEQ ID NO: 20
Sequence length: 4
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0053]

SEQ ID NO: 21
Sequence length: 3
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0054]

SEQ ID NO: 22
Sequence length: 20
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, Cys 2 and 19 are disulfide bonded.
[0055]

SEQ ID NO: 23
Sequence length: 20
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, Cys * indicates cysteine obtained by chemically modifying a thiol group in order to prevent formation of a disulfide bond.
[0056]

SEQ ID NO: 24
Sequence length: 20
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, Cys 2 and 19 are disulfide bonded.
[0057]

SEQ ID NO: 25
Sequence length: 20
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, Cys * indicates cysteine obtained by chemically modifying a thiol group in order to prevent formation of a disulfide bond.
[0058]

SEQ ID NO: 26
Sequence length: 25
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence features: under In the sequence, Cys 3 and Cys 20 are disulfide bonded.
[0059]

SEQ ID NO: 27
Sequence length: 11
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment.
[0060]

SEQ ID NO: 28
Sequence length: 38
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, Cys No. 16 and Cys No. 33 are disulfide-bonded.
[0061]

SEQ ID NO: 29
Sequence length: 32
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, Cys No. 10 and Cys No. 27 are disulfide bonded.
[0062]

SEQ ID NO: 30
Sequence length: 47
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequence, a peptide having a length of 36 and having Cys at positions 9, 26, and 35, Cys at number 9 and Cys at position 26 are disulfide-bonded, and Cys at the 35th position of the peptide has a sequence length of 11 and a Cys at the 10th position having a Cys at the 10th position is disulfide bonded.
[0063]

SEQ ID NO: 31
Sequence length: 5
Sequence type: amino acid
Topology: linear
Sequence type: Peptide
Sequence characteristics: this peptide, and a peptide comprising this peptide as a fragment. In the following sequences, R01 represents any amino acid residue except Cys.
[0064]

Claims

Peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, derivatives acetylated carboxyl group amidated or amino groups of the peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26, a peptide consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 26 A parenteral antitumor agent comprising a pharmaceutically acceptable salt or a mixture of two or more thereof as an active ingredient.