JP3556757B2

JP3556757B2 - Absorption-promoting saccharide composition

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Publication number: JP3556757B2
Application number: JP02419396A
Authority: JP
Inventors: 宏紀早澤; 康夫福渡; 進寺口; 朋広尾形; 道子金岳; 光一郎新; 重雄露木; 英夫波平
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1996-02-09
Filing date: 1996-02-09
Publication date: 2004-08-25
Anticipated expiration: 2016-02-09
Also published as: JPH09215472A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、吸収促進性糖類組成物に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、低ナトリウム含量またはナトリウムを含まない組成においても組成物中の糖類が消化管等から良好に吸収される食品、医薬品または飼料等の糖類組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
食餌中の多糖類は、膵液中および小腸微絨毛膜表面の加水分解酵素によりグルコース、ガラクトース、フラクトース等の単糖に分解され、生成したグルコース、ガラクトースは能動輸送により、またフラクトースは促進拡散により消化管から吸収される。グルコース、ガラクトースの糖輸送担体は、ナトリウム依存型グルコース・トランスポーターと呼ばれ、小腸刷子縁膜上に存在する。ナトリウム依存型グルコース・トランスポーターは、腸管内腔と細胞内のナトリウムイオン濃度差により、ナトリウムイオン１分子とグルコース１分子を共輸送する。生体外においては、ナトリウム依存型グルコース・トランスポーターの糖輸送速度は細胞外液のナトリウムイオン濃度に依存する［アニュアル・レビュー・オブ・フィジオロジー（ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）、第５５巻、第５７５〜５８９ページ、１９９３年］。
【０００３】
しかしながら、生体内におけるグルコースの吸収は、ナトリウムイオン依存性がなく、グルコース濃度が０．１％（重量。以下、生存率を除き、特に断りのない限り同じ）以上ならば、ナトリウムイオンが存在しなくても吸収に大きな影響がないことが報告されている［ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ）、第４７巻、第１１３３ページ、１９６８年］。グルコースの吸収が、食餌中のナトリウム濃度に依存しないという同様の報告は多数存在するが、この発明の発明者らの研究によれば、グルコース濃度が高く、かつナトリウム濃度が低い組成物を動物に摂取させた場合、糖吸収の不良が生じることが判明した。このように、ナトリウム濃度が低いために糖吸収の不良が危惧される食品等としては、乳児が摂取する育児用調製粉乳、スポーツ用ドリンク、経腸栄養剤または流動食等を例示することができる。
【０００４】
たとえば、育児用調製粉乳の場合には、ナトリウム濃度は調乳時において２０ｍｇ／１００ｍｌ（０．０２％）程度と低値である。マクリーン（ＭａｃＬｅａｎ）らの研究によれば、市販の育児用粉乳を新生児に投与した場合、投与した乳糖の２／３は小腸で吸収されず、大腸で腸内細菌の発酵を受け、産生した短鎖脂肪酸として吸収される［ペディアトリクス・リサーチ（ＰｅｄｉａｔｒｉｃｓＲｅｓｅａｒｃｈ）、第１７巻、第６２９〜６３３ページ、１９８３年］。未熟児の場合も同様の報告がある［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ）、第９７巻、第３８９〜３９３ページ、１９８０年］。そのため、乳児はアミノ酸であるアラニンをグルコ−スに変換し、必要とする糖の５０％を補っている［バイオロジー・オブ・ザ・ネオネイト（ＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＮｅｏｎａｔｅ）、第５０巻、第２３７〜２５８ページ、１９８６年］。
【０００５】
この発明の発明者らの研究によれば、育児用調製粉乳にナトリウム塩を付加すれば糖吸収の向上が期待できるが、乳児の腎機能は未熟なためにミネラルの負荷は重篤な腎障害を惹起することが知られている。
また、スポーツ用ドリンクは運動中または運動直後の水分補給を目的とした清涼飲料であるが、糖を含有する水溶液が胃から排出される速度は水に比べて著しく遅く、運動中または運動直後の水分補給には不適当であると考えられている（小平修平監訳、「スポーツ指導者のためのスポーツ栄養学」、南江堂、１９９２年）。従って、スポーツ用ドリンクは、水分補給よりもむしろ、運動により消失したグリコーゲン、即ち、炭水化物の急速な補給を目的として運動直後またはゲーム中の休憩時間に利用される。このような炭水化物の補給は、次のゲームにおける運動能力の向上、疲労回復等に貢献するものと考えられている。
【０００６】
しかしながら、この発明の発明者らの研究によれば、市販のスポーツ用ドリンクの組成は、糖濃度が４〜７％であるのに対して、ナトリウム濃度は０．０１〜０．０３％と低く、急速な糖吸収は期待できず、また糖吸収の促進を考慮した市販製品も存在しない。
さらに、たとえば市販の流動食の組成は、糖質濃度が１５％前後と極めて高値であるが、ナトリウム濃度は５０〜１４０ｍｇ／１００ｍｌ（０．０５〜０．１４％）と低値であり、糖類の吸収は良好ではない。経腸栄養剤または流動食は、意識障害者または術後患者にとって貴重な栄養源であるが、これらの患者の多くはチューブ・フィーディングにより栄養剤または流動食を投与されており、その投与量には限界があるため、糖吸収の向上がもたらす栄養学的な意義は大きい。
【０００７】
また、経腸栄養剤または流動食における糖吸収を改善することにより、糖吸収不良による下痢の発生を防止することも可能となる。すなわち、既存の流動食はエネルギー密度が高く、栄養素の吸収不良による下痢を惹起する可能性が高いため、流動食を２〜３倍に希釈し、吸収不良を防止している病院もある。そこで、たとえば、管−供給されている患者における下痢防止のためにエネルギー密度の低い流動食を提供することを目的とした低カロリー密度の経腸調合物が提案されている（特開平６−５６６９３号公報）が、糖の吸収不良を改善できるならば、このような問題は根本から解決されるものと期待される。
【０００８】
このような状況から、糖吸収の向上がもたらす栄養学的、医学的恩恵は計り知れないものがある。この点について、インスリン、トリヨードチロニン等のホルモンが消化管を発達させて糖吸収を促進することが従来より知られている。しかしながら、育児用調製粉乳、スポーツ用ドリンク、経腸栄養剤または流動食等における用途・対象の特殊性を考慮した場合には、組成物中にこれらのホルモンを含有させることは効果がなく、またホルモンによって事前に使用者の消化管を発達させるための処置を施すことは現実的ではない。しかも、低ナトリウムによる糖吸収の不良は、消化管を発達させることによっては解決することができない。
【０００９】
従って、低ナトリウム含量の食品における糖吸収の不良を解決するためには、糖吸収そのものを促進する物質、または低ナトリウムによる糖吸収不良を改善する物質が求められているが、そのような物質は現在まで知られていない。
一方、ラクトフェリンは涙、唾液、抹消血、乳汁中に含まれている鉄結合性糖蛋白質であり、従来より、大腸菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すことが知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ）、第９４巻、第１〜９ページ、１９７９年］。そして、このラクトフェリンの加水分解物から得られる抗菌性ペプチドと、このペプチドを含有した抗菌剤が発明され、既に特許出願されている（特開平５−９２９９４号公報）。この抗菌性ペプチドは他の抗菌性物質と比較して副作用がないことから、今後広く応用されるものと考えられる。しかしながら、この抗菌性ペプチドは、５０ｍｇのウシ・ラクトフェリンから、僅か３ｍｇが調製されるにすぎず（特開平５−９２９９４号公報）、極めて高価であり、この抗菌性ペプチドを利用するうえでの大きな障害となっている。
【００１０】
従って、この抗菌性ペプチドを分離した残渣の用途が開発されるならば、ペプチド製造に要するコストが補償され、ラクトフェリン加水分解物の利用上の障害を除去し得るのである。このような観点から、この発明の発明者らは、ラクトフェリン加水分解物から抗菌性ペプチドを除去した残渣から感染防御作用を有する糖ペプチドを発明し、既に特許出願した（特願平７−９４８９３号）。
【００１１】
しかしながら、前記のラクトフェリン、その加水分解物、その加水分解物から単離された抗菌性ペプチドおよび糖ペプチドの生理作用はいずれも微生物に対する作用であり、これらの物質がヒトおよび動物の消化吸収を調節する作用を有するという報告は、従来皆無である。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
この発明の発明者らは、低ナトリウム含量の食品等における糖吸収の不良を解決するために、糖吸収そのものを促進する物質、または低ナトリウムによる糖吸収不良を改善する物質について鋭意研究を重ねた結果、ラクトフェリンの加水分解物から調製されるペプチド混合物が、糖吸収促進作用を有することを見い出した。
【００１３】
従って、この発明は、ラクトフェリンの加水分解物から調製されるペプチド混合物を利用することによって、低ナトリウム含量またはナトリウムを含まない組成おいても糖吸収が良好な新しい組成物を提供することを目的としている。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
この発明は、前記の課題を解決するものとして、低ナトリウム含量またはナトリウムを含まない組成においても組成中の糖類が生体内で良好に吸収される組成物であって、ラクトフェリン加水分解物から分画した次の性質を有するペプチド混合物を含有することを特徴とする吸収促進性糖類組成物を提供する。
ａ）ラクトフェリン加水分解物から抗菌性ペプチドを分離した残余のペプチド混合物であること。
ｂ）生体外で抗菌活性を示さないこと。
ｃ）生体内および生体外で糖類の吸収を促進する活性を有すること。
【００１５】
以下、この発明の実施の形態および好ましい態様について詳しく説明する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
この発明の組成物に使用する糖類は、ナトリウム依存型グルコーストランスポーターが運搬できる単糖類、それから構成される多糖類、またはそれらの混合物である。具体的には、グルコース、ガラクトース等の単糖類、グルコース、ガラクトースの少なくとも一方を構成成分とする多糖類であって、ヒトまたは動物に経口投与した際に消化酵素で分解されて、グルコースまたはガラクトースを遊離するものである。このような多糖類として、ラクトース、スクロース、マルトース、イソマルトース、デキストリン等を例示できる。
【００１７】
この発明の組成物は、これらの糖類を摂取時において少なくとも３％、好ましくは３〜２０％含有している。
この発明の組成物に含有されるペプチド混合物は、特開平５−９２９９４号に開示されている方法により、ラクトフェリン加水分解物から抗菌性ペプチドを分画した残渣であり、具体的には、次の方法で得ることができる。
【００１８】
先ず、ラクトフェリン加水分解物を調製する。すなわち、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、スイギュウ、ウマ、ヤギ、ヒツジ等）のラクトフェリンを０．５〜２０％の濃度で精製水に溶解し、次いで、ラクトフェリン水溶液のｐＨを加水分解に使用する酵素の至適ｐＨ付近に調整し、ラクトフェリン重量に対して０．１〜５．０％重量のエンドペプチダーゼ［例えば、豚ペプシン（１：１０，０００。和光純薬工業社製）、モルシンＦ（盛進製薬社製）、スミチームＡＰ（新日本化学社製）、アマノＡ（天野製薬社製）、トリプシン（ノボ社製）等］をラクトフェリン水溶液に添加し、３０〜６０℃で、３０〜６００分間保持してラクトフェリンを加水分解する。その後、反応液をそのまま、または中和し、常法により酵素を加熱失活させる。
【００１９】
次に、得られたラクトフェリン加水分解物から公知のクロマトグラフ法を用いて、抗菌性ペプチドと残渣とを分画する。具体的には、例えば、ＴＳＫゲルＯＤＳ１２０Ｔ（東ソー社製）を用いた高速液体クロマトグラフ法では、アセトニトリルのグラジエントで所定の分画に溶出させ、抗菌性ペプチドと残渣を分画できる。また、予め精製水により平衡化したブチルトヨパール（東ソー社製）を用いた疎水性クロマトグラフィー法では、抗菌性ペプチドをブチルトヨパールに吸着させ、未吸着の流出画分を残渣として得ることができる。
【００２０】
この発明の組成物は、以上のようにして得たペプチド混合物を、摂取時において少なくとも０．００１％、好ましくは０．０１〜０．５％含有している。
この発明の組成物は、食品、医薬品または飼料として加工することができ、具体的には、食品としては育児用調製粉乳、清涼飲料、乳飲料、流動食等、医薬品としては経腸栄養剤、成分栄養剤等、飼料としては家畜育成用調製粉乳（仔ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ等に投与する）等を例示することができる。
【００２１】
この発明の組成物は、組成中のナトリウム濃度が０．２１％以下、さらに詳しくは０．０２〜０．２１％の低ナトリウム含量であっても、糖類が消化管から良好に吸収される。もちろん、ナトリウムを含まない組成であっても糖類の吸収が損なわれることはない。なお、ナトリウムを含む場合には、例えば、食品学的または薬理学的に許容されるナトリウム塩、または、原料に由来するナトリウム塩等を前記の範囲で含有させることができる。
【００２２】
この発明の組成物は、そのままヒトまたは動物に摂取させることができる。具体的には、組成物が液状の場合はそのまま、また固体状の場合は液状に調製し、糖吸収部位である小腸に到達する投与方法、より具体的には経口または経管投与によって摂取させる。
次に、試験例を示してこの発明の組成物の効果を詳しく説明する。
試験例１
この試験は、ウシ・ラクトフェリンの酵素加水分解物から抗菌性ペプチドを分離した残余のペプチド混合物のグルコース吸収促進活性を調べるために行った。（１）材料
▲１▼反転小腸の調製
市販固形飼料Ｆ−２（船橋農場製）で飼育したＳＰＦマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）を屠殺し、小腸を摘出した。幽門部の５ｃｍ下から１０ｃｍまでの小腸を用いて反転小腸を調製した。両端を結紮し、内部に生理的食塩水０．５ｍｌを注入した。
▲２▼試料の調製
特開平５−９２９９４号に開示されている方法を用いて、ラクトフェリン加水分解物から抗菌性ペプチドおよび残渣からなるペプチド混合物を次のとおり調製した。
【００２３】
市販のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５００ｍｇを精製水９ｍｌに溶解し、０．１Ｍ塩酸でｐＨを２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社製）１０ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、透明な上清を得た。この上清を精製水により約２％に希釈し、その１００μｌを、予め、０．０５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む２０％アセトニトリル溶液で平衡化したＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（４．６×１５０ｍｍ）を用いたクロマトグラフィーにかけ、０．８ｍｌ／分の流速で１０分後から３０分間、０．０５％のＴＦＡを含む２０から６０％のアセトニトリルのリニアグラジエントで溶出し、溶出液採取後２４〜２５分の画分（抗菌性ペプチド画分）と、これ以外の画分（以下、残渣画分と記載する）を得た。この操作を反復し、両画分を真空乾燥し、抗菌性ペプチド画分約３０ｍｇおよび残渣画分約４００ｍｇを得た。
▲３▼被検液の調製
３０ｍＭ塩化ナトリウム、１２０ｍＭ塩化コリンおよび５ｍＭグルコースを含有する１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に、▲２▼で得た抗菌性ペプチドまたは残渣画分のペプチド混合物を１ｍｇ／ｍｌの濃度で添加し、被検液を調製した。
（２）試験方法
被検液１０ｍｌが入った５０ｍｌ容三角フラスコに反転小腸を入れ、９５％酸素、５％二酸化炭素混合気体を注入して密栓し、３７℃で１時間保持した。正確に１時間後、反転小腸を取り出し、生理食塩水で洗浄し、内液を取り出し、内液中のグルコース濃度をＦ−キット・グルコース（ベーリンガーマンハイム社製）を用いて測定し、反転小腸組織１ｇ当りのグルコース取込速度を算出した。
（３）試験結果
算出したグルコース取込速度は、試料を何も添加していない対照が３．４５±１．０２μｍｏｌ／時／ｇ小腸組織（平均値±標準偏差で示す。以下、単位は同じ。）であったのに対し、抗菌性ペプチドを添加した被検液中では３．３０±０．８５、残渣画分のペプチド混合物を添加した被検液中では７．０３±１．０６であり、残渣画分のペプチド混合物にのみグルコース吸収促進効果が認められた。なお、他の方法によって調製したペプチド混合物を用いた場合も、ほぼ同様の結果が得られた。
試験例２
この試験は、ウシ・ラクトフェリンの酵素加水分解物から抗菌性ペプチドを分離した残余のペプチド混合物の抗菌活性を調べるために行った。
（１）試料の調製
試験例１と同一の方法により調製した残渣画分のペプチド混合物を用いた。また、対照として同じく試験例１と同一の方法により調製した抗菌性ペプチドおよび未分解のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）を用いた。
（２）試験方法
１％バクトペプトン（ディフコ・ラボラトリー社製）の液体培地２ｍｌに、０〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で各試料を添加し、対数増殖期のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１１１（東京大学医科学研究所より分譲）を１０^６／ｍｌの生菌数濃度で接種し、３７℃で１６〜２０時間培養し、培養後の供試菌の発育状態を６６０ｎｍの吸光度で測定した。
（３）試験結果
抗菌性試験の結果、残渣画分のペプチド混合物は、いずれの濃度で添加した場合にも供試菌の増殖を抑制しなかった。一方、対照として用いた未分解のウシ・ラクトフェリンは２ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で供試菌の増殖を完全に阻止し、抗菌性ペプチド画分は５μｇ／ｍｌ以上の濃度で供試菌の増殖を完全に阻止した。
【００２４】
以上の結果から、ラクトフェリンの加水分解物から抗菌性ペプチドを分離した残余のペプチド混合物は、抗菌活性を示さないことが確認された。なお、他の方法によって調製したペプチド混合物を用いた場合も、ほぼ同様の結果が得られた。
試験例３
この試験は、ペプチド混合物の糖吸収促進活性と糖濃度との関係を調べるために行った。
（１）試料の調製
参考例と同一の方法により調製した残渣画分を２０％の濃度で精製水に溶解し、滅菌フィルター（コーニング社製）を用いて濾過滅菌した。育児用無糖粉乳ＭＣ−１（森永乳業社製）１７１ｇ、デキストリン（ナカライテスク社製）２９ｇ、８６ｇ、１４３ｇ、２８６ｇ、５７１ｇおよび８５７ｇを精製水１８００ｇ、１７４３ｇ、１６８６ｇ、１５４３ｇ、１２５８ｇおよび９７２ｇにそれぞれ溶解し、１５０ｋｇ／ｃｍ^２の圧力で均質化し、７００ｇづつ１リットル容三角フラスコに分注し、１２１℃で２０分間オートクレーブ滅菌した。この調製乳に、残渣画分が０％または２％の割合となるように前記の滅菌試料を添加し、さらに滅菌水を添加し、各試験飼料の全体の重量を１，０００ｇに調整し、デキストリン濃度１％、３％、５％、１０％、２０％および３０％の飼料を調製した。試料の調製はクリーンベンチ内で行い、微生物による汚染を防止した。
（２）試験方法
各試料を、ビニルアイソレーター内で飼育した５週齢の無菌マウス（Ｂａｌｂ／ｃ）、各５匹に１週間自由摂取させた。飼育１週間後、無菌マウスをビニルアイソレータから出し、屠殺し、盲腸内容物を摘出した。盲腸内容物に、９倍量の２％過塩素酸を添加してホモゲネートし、遠心分離し、上清中の糖含量を測定した。なお、グルコースはＦキットグルコース（ベーリンガーマンハイム社製）を用い、デキストリンはＦキットスターチ（ベーリンガーマンハイム社製）を用いてそれぞれ定量した。
（３）試験結果
各試験飼料を投与した無菌マウスの盲腸内容物中に残留した未吸収の糖濃度を測定した結果は、表１に示すとおりである。
【００２５】
この試験の結果から、ペプチド混合物は、同一組成中の糖濃度が３％以上の場合に糖の吸収を促進することが判明した。また、糖濃度が２０％を越えた場合には糖吸収促進作用が低下することが判明した。グルコース、ガラクトース、乳糖についても同様の試験を行い、ペプチド混合物は糖濃度３％以上、好ましくは３〜２０％で糖吸収を促進することが確認された。なお、他のペプチド混合物を用いた場合も、ほぼ同様の結果が得られた。
【００２６】
【表１】

【００２７】
試験例４
この試験は、ペプチド混合物の糖吸収促進活性とナトリウム濃度との関係を調べるために行った。
（１）試料の調製
５ｍＭグルコース、１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）、塩化ナトリウムを０〜１５０ｍＭに変化させ、イオン強度を一定に保つため塩化コリンを添加し、塩化ナトリウムおよび塩化コリンを合わせた濃度を常に１５０ｍＭに被検液を調製した。この被検液にペプチド混合物を１ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した。
（２）試験方法
試験例１と同一の方法によりグルコース吸収試験を行った。
（３）試験結果
各被検液についてグルコース吸収試験を行なった結果は、表２に示すとおりである。この結果、ペプチド混合物はナトリウム濃度０〜９０ｍＭ（０〜０．２１％）の範囲、特に１０〜９０ｍＭ（０．０２〜０．２１％）でグルコースの吸収を促進することが判明した。なお、他のペプチド混合物を用いた場合もほぼ同様の結果が得られた。
【００２８】
【表２】

【００２９】
試験例５
この試験は、ペプチド混合物の適切な添加量を調べるために行った。
（１）試料の調製
３０ｍＭ塩化ナトリウム、１２０ｍＭ塩化コリン、５ｍＭグルコース、１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）に、ペプチド混合物を０〜５ｍｇ／ｍｌの濃度で添加し、被検液を調製した。
（２）試験方法
試験例１と同一の方法によりグルコース吸収試験を行った。
（３）試験結果
各被検液についてグルコース吸収試験を行なった結果は、表３に示すとおりである。この結果、ペプチド混合物は少なくとも１０μｇ／ｍｌ（０．００１％）、好ましくは１００〜５０００μｇ／ｍｌ（０．０１〜０．５％）の濃度で、グルコース吸収を促進することが判明した。なお、他のペプチド混合物を用いた場合も、ほぼ同様の結果が得られた。
【００３０】
【表３】

【００３１】
試験例６
マウスに育児用調製粉乳を投与すると、激しい下痢を起こし死亡することが知られているので、この試験は、ペプチド混合物の糖吸収促進活性が、下痢を防止することを確認するために行った。
（１）試験方法
市販の育児用調製粉乳に、試験例１と同一の方法により調製したペプチド混合物を、最終濃度１００μｇ／ｍｌの割合いで添加し、調製乳（試験試料）を調製した。対照としてペプチド混合物を添加していない調製乳（対照試料）を用いた。
【００３２】
この２種類の試料を、５週齢のＳＰＦマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）、各５匹に１週間自由摂取させた。毎朝１０時にケージ内を点検し、糞便の状態を確認し、死亡したマウスを除去した。
（２）試験結果
試験の結果は、図１に示すとおりである。図１は、飼育期間と生存率との関係を示し、縦軸および横軸は、それぞれ飼育期間（日）および生存率（％）を示し、□および■は、それぞれ試験試料投与群および対照試料投与群を示す。図１から明らかなとおり、対照試料投与群では、激しい下痢を発生し、４日以内に全数死亡した。これに対して、試験試料投与群では、下痢を発生せず、全数正常であった。なお、他のペプチド混合物を用いた場合も、ほぼ同様の結果が得られた。試験例７
この試験は、健常者の血糖に与えるペプチド混合物の効果を調べるために行った。
（１）試料の調製
実施例１と同一の方法によりスポーツ用ドリンク（試験試料）を調製した。また、ペプチド混合物を含まないことを除き、実施例１と同一のスポーツ用ドリンク（対照試料）を調製した。
（２）試験方法
前記スポーツ用ドリンクを、ボランティアの健常成人５名に次の方法により投与し、経口糖負荷試験を行った。すなわち、一晩絶食した被験者に前記スポーツ用ドリンク３５０ｍｌを経口投与し、投与直後から６分間隔で採血し、血糖値を常法により測定した。さらに、１週間後に同一被験者に対照試料を経口投与し、血糖値を常法により測定した。
（３）試験結果
この試験の結果は図２に示すとおりである。図２は、試料摂取後の経時的血糖値の変化を示し、縦軸および横軸は、それぞれ血糖値（ｍｇ／ｄｌ）および時間（分）を示し、□および■は、それぞれ試験試料投与群および対照試料投与群を示す。図２から明らかなとおり、ペプチド混合物を含有するスポーツ用ドリンクは、対照のスポーツ用ドリンクと比較して速やかに血糖が上昇し、糖吸収を促進していることが確認された。なお、他のペプチド混合物を用いて同様の試験を行ったが、ほぼ同様な結果が得られた。
参考例
牛乳から分離した市販のラクトフェリン（森永乳業社製）１ｋｇを精製水９リットルに溶解し、１Ｎ塩酸を添加してｐＨを３．０に調整し、市販のブタペプシン（１：１０，０００。和光純薬工業社製）３０ｇを添加して均一に混合し、３７℃に４時間保持し、８５℃で１０分間加熱して酵素を失活させた。次いで１Ｎ水酸化ナトリウムを添加してｐＨを７．０に調整し、不溶物を濾過して除去し、ラクトフェリン分解物溶液を得た。このラクトフェリン分解物溶液を凍結乾燥し、ラクトフェリン分解物の粉末約９６０ｇを得た。前記粉末８００ｇを精製水２０ｌに溶解し、ブチルトヨパール（東ソー社製）６５０Ｍを充填し、予め精製水で平衡化したカラム（直径３６ｃｍ×高さ１５ｃｍ）に流速０．２リットル／分で通液し、流出液の２８０ｎｍにおける吸光度が０．０１以下になるまで０．６リットル／分の流速で精製水を通液して洗浄した。得られたブチルトヨパールに未吸着の流出画分約６０リットルを逆浸透膜（旭化成社製）により濃縮し、さらに凍結乾燥し、ペプチド混合物の粉末約７２０ｇを得た。
【００３３】
得られたペプチド混合物について、試験例１および試験例２と同様の方法によりグルコース吸収性試験と抗菌性試験を実施した結果、抗菌性は認めらなかったが、グルコース吸収促進効果は認められた。
次に実施例を示してこの発明をさらに詳しく説明するが、この発明は以下の例に限定されるものではない。
【００３４】
【実施例】
実施例１
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成のスポーツ用ドリンクを常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００３５】
砂糖２．０００（％）
果糖ぶどう糖液糖４．０００
クエン酸０．１００
塩化ナトリウム０．０４０
ビタミンＣ０．０１５
塩化カリウム０．０４０
香料０．０１０
ペプチド混合物０．５００
水道水９３．２９５
実施例２
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の育児用調製粉乳を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００３６】
精製乳糖３４．０００（％）
ペプチド混合物０．０７７
カゼイン消化物６．０００
ホエー消化物２６．０００
精製調製脂肪３０．０００
ビタミンＡ_１脂肪酸エステル０．０１８
チアミン塩酸塩０．００１
リボフラビンリン酸エステルナトリウム０．００１
ピリドキシン塩酸塩０．００１
Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム０．２００
コレカルシフェノール０．０１０
ビタミンＥ０．０１０
ニコチン酸アミド０．０１０
葉酸０．００１
イノシット０．０５０
パントテン酸カルシウム０．０１０
タウリン０．０５０
大豆リン脂質１．２００
炭酸カルシウム１．０００
塩化マグネシウム０．５００
塩化カルシウム０．３００
塩化カリウム０．３００
リン酸水素二カリウム０．２００
硫酸第一鉄０．０５０
硫酸銅０．００１
硫酸亜鉛０．０１０
この育児用調製粉乳は使用時、１３％の濃度で水に溶解して使用した。なお、溶解時のペプチド混合物濃度は０．０１％であった。
実施例３
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の乳飲料を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００３７】
脱脂乳９９．６（％）
炭酸カルシウム０．２
ペプチド混合物０．１
増粘多糖類０．１
実施例４
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の経腸栄養剤を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００３８】
カゼインナトリウム３．０００（％）
大豆蛋白分解物２．０００
ペプチド混合物０．５００
デキストリン１４．０００
蔗糖３．０００
結晶セルロース０．５００
トウモロコシ油２．６００
ココナッツ油０．５００
大豆リン脂質０．１６０
ビタミンＡ_１脂肪酸エステル０．００１
酢酸トコフェロール０．００３
アスコルビン酸０．０１５
塩酸チアミン０．００１
リボフラビン０．００１
塩酸ピリドキシン０．００１
塩化コリン０．０５０
葉酸０．００１
ニコチン酸アミド０．００１
パントテン酸カルシウム０．００１
ビオチン０．００１
塩化マグネシウム０．１５０
クエン酸カリウム０．１５０
第三リン酸カルシウム０．１００
塩化カリウム０．１００
クエン酸ナトリウム０．１５０
硫酸亜鉛０．００８
硫酸鉄０．００６
塩化マンガン０．００１
硫酸銅０．００１
水酸化カリウム０．０１０
クエン酸０．０１０
蒸留水７２．９７８
実施例５
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の消化態経腸栄養剤を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００３９】
卵白加水分解物４．５００（％）
ペプチド混合物０．２００
デキストリン２０．０００
大豆油０．７００
トウモロコシ油０．７００
硫酸マンガン０．００１
硫酸亜鉛０．００２
グルコン酸鉄０．００７
塩化カリウム０．０３０
塩化マグネシウム０．１００
グリセロリン酸カルシウム０．３００
硫酸銅０．００１
アスコルビン酸０．０５０
ニコチン酸アミド０．００３
パントテン酸カルシウム０．００１
葉酸０．００１
塩化コリン０．００５
イノシトール０．００５
蒸留水７３．３９４
実施例６
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の成分栄養剤を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００４０】
Ｌ−グルタミン１．０００（％）
Ｌ−アルギニン塩酸塩０．４００
Ｌ−セリン０．４００
Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム０．３５０
Ｌ−ロイシン０．３００
Ｌ−フェニルアラニン０．３００
塩化リジン０．３００
Ｌ−アラニン０．３００
Ｌ−イソロイシン０．２００
Ｌ−メチオニン０．２００
Ｌ−バリン０．２００
Ｌ−ヒスチジン塩酸塩０．２００
アミノ酢酸０．２００
Ｌ−プロリン０．２００
Ｌ−トレオニン０．１５０
Ｌ−トリプトファン０．０５０
Ｌ−チロシン０．０２０
ペプチド混合物０．０１０
デキストリン３０．０００
トウモロコシ油０．３００
クエン酸ナトリウム０．１００
塩化カリウム０．０５０
グリセロリン酸カルシウム０．３００
グルコン酸鉄０．００５
硫酸亜鉛０．００２
硫酸マンガン０．００１
硫酸銅０．００１
パントテン酸カルシウム０．００１
ニコチン酸アミド０．００１
塩化コリン０．０１０
アスコルビン酸０．００５
酢酸レチノール０．００５
酢酸トコフェロール０．００７
蒸留水６４．４３２
実施例７
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の実験用マウス用液体飼料を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００４１】
カゼインナトリウム４．０００（％）
ペプチド混合物０．５００
Ｌ−システイン０．０５０
ＤＬ−メチオニン０．０３０
トウモロコシ油０．８５０
オリーブ油２．８５０
ビタミン混合０．５００
ミネラル混合１．０００
蔗糖１２．０００
カラギーナン０．０３０
酢酸トコフェロール０．００３
蒸留水７８．１８７
実施例８
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の哺乳期子牛育成用代用粉乳を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００４２】
脱脂粉乳７４．７３３（％）
ペプチド混合物０．０６７
動物性油脂２０．０００
フィッシュソリブル４．０００
ビタミン混合０．５００
ミネラル混合０．７００
この哺乳期子牛育成用代用粉乳は、１５％の濃度で水に溶解して使用した。なお、溶解時のペプチド混合物濃度は０．０１％であった。
実施例９
参考例と同一の方法により調製したペプチド混合物を用いて、次の組成の哺乳期子牛育成用代用粉乳を常法により製造した。なお、使用した原料は、ペプチド混合物を除き、いずれも市販品である。
【００４３】
脱脂粉乳８２．２６７（％）
ペプチド混合物１．３３３
動物性油脂１１．２００
フィッシュソリブル４．０００
ビタミン混合０．５００
ミネラル混合０．７００
この哺乳期子牛育成用代用粉乳は、１５％の濃度で水に溶解して使用した。なお、溶解時のペプチド混合物濃度は０．２０％であった。
【００４４】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明によって、低ナトリウム含量またはナトリウムを含まない組成であっても組成物中の糖類が良好に吸収される糖類組成物が提供される。この組成物は、ナトリウム摂取を制限される高血圧、心疾患、腎疾患患者用の食品および医薬品として利用することができる。また、元来ナトリウム濃度の低い育児用調製粉乳、家畜用粉乳、スポーツ用ドリンク等に利用することにより、糖の吸収を促進し、発育促進、疲労回復、糖吸収不良による下痢の防止等の効果を付与することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】マウスに育児用調製粉乳を投与した試験における生存率の経日変化を示す。
【図２】ヒトにスポーツ用ドリンクを投与した試験における血糖値の経時変化を示す。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to an absorption-promoting saccharide composition. More specifically, the present invention relates to a saccharide composition such as food, medicine or feed in which saccharide in the composition is well absorbed from a digestive tract or the like even in a composition having a low sodium content or containing no sodium.
[0002]
[Prior art]
Polysaccharides in the diet are degraded into monosaccharides such as glucose, galactose and fructose by hydrolytic enzymes in pancreatic juice and the surface of the small intestine microvillous membrane. Absorbed from tube. Glucose and galactose sugar transporters are called sodium-dependent glucose transporters, and are present on the small intestinal brush border membrane. The sodium-dependent glucose transporter co-transports one molecule of sodium ion and one molecule of glucose due to the difference in sodium ion concentration between the intestinal lumen and the cell. In vitro, the sugar transport rate of the sodium-dependent glucose transporter depends on the sodium ion concentration of the extracellular fluid [Annual Review of Physiology, Vol. 55, No. 575-575. 589, 1993].
[0003]
However, the absorption of glucose in the living body does not depend on sodium ions, and sodium ions are present if the glucose concentration is 0.1% (weight, hereinafter the same except for survival rate, unless otherwise specified). It has been reported that there is no significant effect on absorption even without it [Journal of Clinical Investigation, 47, 1133, 1968]. Although there are many similar reports that glucose absorption is not dependent on dietary sodium concentration, studies by the inventors of the present invention have shown that compositions with high and low sodium concentrations can be administered to animals. When ingested, it was found that poor sugar absorption occurred. In this way, examples of foods and the like that are feared to have poor sugar absorption due to a low sodium concentration include infant formulas, sports drinks, enteral nutritional supplements, and liquid foods to be taken by infants.
[0004]
For example, in the case of infant formula, the sodium concentration is as low as about 20 mg / 100 ml (0.02%) during formulating. According to a study by MacLean et al., When a commercially available infant formula is administered to a newborn, 2/3 of the administered lactose is not absorbed by the small intestine, and fermented by intestinal bacteria in the large intestine to produce short-term milk. It is absorbed as a chain fatty acid [Pediatrics Research, Vol. 17, pp. 629-633, 1983]. A similar report has been reported for premature babies [Journal of Pediatrics, Vol. 97, pp. 389-393, 1980]. Therefore, infants convert the amino acid alanine to glucose and make up for 50% of the required sugars [Biology of the Neonate, Vol. 50, 237- 258, 1986].
[0005]
According to the study of the inventors of the present invention, the addition of sodium salt to infant formula can be expected to improve sugar absorption, but the renal function of infants is immature and the burden of minerals is severe, resulting in severe renal impairment. It is known to cause
Sports drinks are soft drinks intended for hydration during or immediately after exercise.However, the rate at which the aqueous solution containing sugar is discharged from the stomach is significantly slower than water, and during sports or immediately after exercise. It is considered unsuitable for hydration (translated by Shuhei Kodaira, "Sports Nutrition for Sports Instructors", Nankodo, 1992). Thus, sports drinks are utilized immediately after exercise or during breaks during games for the purpose of rapidly replenishing glycogen, ie, carbohydrates, lost by exercise, rather than hydration. Such carbohydrate replenishment is considered to contribute to improvement of athletic performance, recovery from fatigue, and the like in the next game.
[0006]
However, according to the study of the inventors of the present invention, the composition of a commercially available sports drink has a low sugar concentration of 0.01 to 0.03%, while the sugar concentration is 4 to 7%. However, rapid sugar absorption cannot be expected, and there is no commercially available product that takes into consideration the promotion of sugar absorption.
Furthermore, for example, the composition of a commercially available liquid food has a very high sugar concentration of about 15%, but a low sodium concentration of 50 to 140 mg / 100 ml (0.05 to 0.14%). Is not good. Enteral nutrients or liquid diets are a valuable source of nutrients for people with impaired consciousness or post-operative patients, but many of these patients receive nutritional supplements or liquid diets by tube feeding, Because of its limitations, nutritional significance from improved sugar absorption is significant.
[0007]
In addition, by improving sugar absorption in enteral nutrition or liquid food, it becomes possible to prevent the occurrence of diarrhea due to poor sugar absorption. That is, existing liquid foods have high energy density and are highly likely to cause diarrhea due to poor absorption of nutrients. Therefore, some hospitals dilute liquid foods two to three times to prevent poor absorption. Thus, for example, an enteral formulation with a low caloric density has been proposed for the purpose of providing a liquid diet with a low energy density for preventing diarrhea in a tube-supplied patient (JP-A-6-56693). It is expected that such a problem will be solved fundamentally if the above-mentioned publication can improve the malabsorption of sugar.
[0008]
Under these circumstances, the nutritional and medical benefits of improved sugar absorption are enormous. In this regard, it has been conventionally known that hormones such as insulin and triiodothyronine develop the digestive tract and promote sugar absorption. However, in consideration of the specificity of use and target in infant formula, sports drinks, enteral nutrition or liquid food, etc., the inclusion of these hormones in the composition has no effect, and It is not practical to take measures to develop the user's digestive tract in advance with hormones. Moreover, poor sugar absorption due to low sodium cannot be solved by developing the digestive tract.
[0009]
Therefore, in order to solve poor sugar absorption in foods having a low sodium content, a substance which promotes sugar absorption itself or a substance which improves poor sugar absorption due to low sodium is required. Not known to date.
On the other hand, lactoferrin is an iron-binding glycoprotein contained in tears, saliva, peripheral blood, and milk, and has been known to exhibit antibacterial activity against harmful microorganisms such as Escherichia coli, Candida and Clostridium. [Journal of Pediatrics, Vol. 94, pp. 1-9, 1979]. An antimicrobial peptide obtained from the hydrolyzate of lactoferrin and an antimicrobial agent containing this peptide have been invented, and a patent application has already been filed (Japanese Patent Application Laid-Open No. 5-92994). Since this antimicrobial peptide has no side effects as compared with other antimicrobial substances, it is considered to be widely used in the future. However, only 3 mg of this antimicrobial peptide is prepared from 50 mg of bovine lactoferrin (Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 5-92994), which is extremely expensive, and is a significant factor in utilizing this antimicrobial peptide. It is an obstacle.
[0010]
Therefore, if the use of the residue obtained by separating the antimicrobial peptide is developed, the cost required for peptide production can be compensated and the obstacle to the use of the lactoferrin hydrolyzate can be eliminated. From such a viewpoint, the inventors of the present invention have invented a glycopeptide having an anti-infection activity from a residue obtained by removing an antibacterial peptide from a lactoferrin hydrolyzate, and have already filed a patent application (Japanese Patent Application No. 7-94893). ).
[0011]
However, the physiological actions of lactoferrin, its hydrolyzate, antimicrobial peptides and glycopeptides isolated from the hydrolyzate are all actions on microorganisms, and these substances regulate digestion and absorption in humans and animals. There has been no report that it has the effect of performing the above.
[0012]
[Problems to be solved by the invention]
The inventors of the present invention have intensively studied a substance that promotes sugar absorption itself or a substance that improves poor sugar absorption due to low sodium in order to solve poor sugar absorption in foods and the like having a low sodium content. As a result, they have found that a peptide mixture prepared from a lactoferrin hydrolyzate has a sugar absorption promoting action.
[0013]
Accordingly, an object of the present invention is to provide a new composition having good sugar absorption even in a composition having a low sodium content or a sodium-free composition by utilizing a peptide mixture prepared from a lactoferrin hydrolyzate. I have.
[0014]
[Means for Solving the Problems]
The present invention solves the above-mentioned problems, and provides a composition in which saccharides in a composition are well absorbed in a living body even in a composition having a low sodium content or containing no sodium, and is separated from a lactoferrin hydrolyzate. An absorption-promoting saccharide composition characterized by containing a peptide mixture having the following properties:
a) The remaining peptide mixture obtained by separating the antimicrobial peptide from the lactoferrin hydrolyzate.
b) not exhibit antibacterial activity in vitro.
c) Having an activity to promote absorption of saccharides in vivo and in vitro.
[0015]
Hereinafter, embodiments and preferable aspects of the present invention will be described in detail.
[0016]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The saccharide used in the composition of the present invention is a monosaccharide capable of carrying a sodium-dependent glucose transporter, a polysaccharide composed of the monosaccharide, or a mixture thereof. Specifically, glucose, monosaccharides such as galactose, glucose, and polysaccharides having at least one of galactose as a component, when orally administered to humans or animals, are degraded by digestive enzymes to produce glucose or galactose. It is liberated. Examples of such polysaccharides include lactose, sucrose, maltose, isomaltose, dextrin and the like.
[0017]
The composition of the present invention contains at least 3%, preferably 3 to 20% of these saccharides when ingested.
The peptide mixture contained in the composition of the present invention is a residue obtained by fractionating an antibacterial peptide from a lactoferrin hydrolyzate by the method disclosed in JP-A-5-92994. Can be obtained in a way.
[0018]
First, a lactoferrin hydrolyzate is prepared. That is, lactoferrin of a mammal (eg, human, cow, buffalo, horse, goat, sheep, etc.) is dissolved in purified water at a concentration of 0.5 to 20%, and then the pH of an aqueous lactoferrin solution is used for hydrolysis. , And 0.1 to 5.0% by weight of lactoferrin [eg, pork pepsin (1: 10,000; Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), morsin F (Mori F) Susumu Pharmaceutical Co., Ltd.), Sumiteam AP (Nippon Chemical Co., Ltd.), Amano A (Amano Pharmaceutical Co., Ltd.), Trypsin (Novo Co., Ltd.) and the like are added to the aqueous solution of lactoferrin, and 30 to 60 ° C. for 30 to 600 minutes Hold and hydrolyze lactoferrin. Thereafter, the reaction solution is directly or neutralized, and the enzyme is heated and inactivated by a conventional method.
[0019]
Next, the antimicrobial peptide and the residue are fractionated from the obtained lactoferrin hydrolyzate using a known chromatographic method. Specifically, for example, in a high-performance liquid chromatography method using TSK gel ODS120T (manufactured by Tosoh Corporation), the antimicrobial peptide and the residue can be fractionated by eluting them in a predetermined fraction with an acetonitrile gradient. In the hydrophobic chromatography method using butyl toyopearl (manufactured by Tosoh Corporation) preliminarily equilibrated with purified water, the antibacterial peptide is adsorbed to butyl toyopearl, and the unadsorbed effluent fraction is obtained as a residue. it can.
[0020]
The composition of the present invention contains at least 0.001%, preferably 0.01 to 0.5% of the peptide mixture obtained as described above at the time of ingestion.
The composition of the present invention can be processed as food, medicine or feed, and specifically, as food, infant formula, soft drink, milk drink, liquid food, etc. Examples of feeds such as component nutrients and the like include milk powder for raising livestock (administered to calves, pigs, horses, dogs, cats, etc.) and the like.
[0021]
In the composition of the present invention, saccharides are well absorbed from the digestive tract even if the sodium concentration in the composition is 0.21% or less, more specifically, a low sodium content of 0.02 to 0.21%. Of course, even if the composition does not contain sodium, the absorption of saccharides is not impaired. When sodium is contained, for example, a sodium salt that is food- or pharmacologically acceptable or a sodium salt derived from a raw material can be contained in the above range.
[0022]
The composition of the present invention can be directly taken by humans or animals. Specifically, when the composition is liquid, it is prepared as it is, or when the composition is solid, it is prepared in a liquid form, and is ingested by an administration method reaching the small intestine which is a sugar absorption site, more specifically, by oral or tube administration. .
Next, the effects of the composition of the present invention will be described in detail with reference to test examples.
Test example 1
This test was performed to examine the glucose absorption promoting activity of the remaining peptide mixture obtained by separating the antimicrobial peptide from the enzymatic hydrolyzate of bovine lactoferrin. (1) Material
(1) Preparation of inverted small intestine
An SPF mouse (Balb / c) bred on a commercial solid feed F-2 (Funabashi Farm) was sacrificed, and the small intestine was removed. An inverted small intestine was prepared using a small intestine from 5 cm below the pylorus to 10 cm. Both ends were ligated, and 0.5 ml of physiological saline was injected inside.
(2) Preparation of sample
Using a method disclosed in JP-A-5-92994, a peptide mixture comprising an antimicrobial peptide and a residue was prepared from a lactoferrin hydrolyzate as follows.
[0023]
500 mg of commercially available bovine lactoferrin (manufactured by Sigma) is dissolved in 9 ml of purified water, the pH is adjusted to 2.5 with 0.1 M hydrochloric acid, and 10 mg of commercially available butapepsin (manufactured by Sigma) is added. Hydrolyzed for 6 hours. The pH was then adjusted to 7.0 with 0.1 N sodium hydroxide, heated at 80 ° C. for 10 minutes to inactivate the enzyme, cooled to room temperature, centrifuged at 15,000 rpm for 30 minutes, and the clear supernatant Got. The supernatant was diluted to about 2% with purified water, and 100 µl of the supernatant was previously equilibrated with a 20% acetonitrile solution containing 0.05% trifluoroacetic acid (TFA). X 150 mm), eluting with a linear gradient of 20 to 60% acetonitrile containing 0.05% TFA for 10 minutes and then 30 minutes at a flow rate of 0.8 ml / min. A fraction of 24 to 25 minutes (antibacterial peptide fraction) and other fractions (hereinafter, referred to as residue fraction) were obtained. This operation was repeated, and both fractions were vacuum-dried to obtain about 30 mg of an antimicrobial peptide fraction and about 400 mg of a residue fraction.
(3) Preparation of test solution
To the 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7.4) containing 30 mM sodium chloride, 120 mM choline chloride and 5 mM glucose, add the antimicrobial peptide obtained in (2) or the peptide mixture of the residue fraction at a concentration of 1 mg / ml. Then, a test solution was prepared.
(2) Test method
The inverted small intestine was placed in a 50 ml Erlenmeyer flask containing 10 ml of the test solution, a mixed gas of 95% oxygen and 5% carbon dioxide was injected, and the mixture was sealed and kept at 37 ° C. for 1 hour. After exactly 1 hour, the inverted small intestine was taken out, washed with physiological saline, the internal solution was taken out, and the glucose concentration in the internal solution was measured using F-kit glucose (Boehringer Mannheim), and the inverted small intestine tissue was obtained. The rate of glucose uptake per gram was calculated.
(3) Test results
The calculated glucose uptake rate of the control to which no sample was added was 3.45 ± 1.02 μmol / h / g small intestine tissue (indicated by the average value ± standard deviation; hereinafter, the unit is the same). On the other hand, it was 3.30 ± 0.85 in the test liquid to which the antimicrobial peptide was added, and 7.03 ± 1.06 in the test liquid to which the peptide mixture of the residual fraction was added. The effect of promoting glucose absorption was observed only in the peptide mixture. In addition, when the peptide mixture prepared by another method was used, almost the same results were obtained.
Test example 2
This test was performed to determine the antimicrobial activity of the remaining peptide mixture that separated the antimicrobial peptide from the enzymatic hydrolyzate of bovine lactoferrin.
(1) Sample preparation
The peptide mixture of the residue fraction prepared by the same method as in Test Example 1 was used. As a control, an antimicrobial peptide and undegraded bovine lactoferrin (manufactured by Sigma) similarly prepared in the same manner as in Test Example 1 were used.
(2) Test method
Each sample was added to 2 ml of a liquid medium of 1% bactopeptone (manufactured by Difco Laboratory Co., Ltd.) in a concentration range of 0 to 50 mg / ml, and Escherichia coli O111 (purchased from the Institute of Medical Science, The University of Tokyo) in a logarithmic growth phase was added. ⁶ Inoculation was performed at 37 ° C. for 16 to 20 hours, and the state of growth of the test bacteria after culture was measured by absorbance at 660 nm.
(3) Test results
As a result of the antibacterial test, the peptide mixture in the residue fraction did not inhibit the growth of the test bacteria when added at any concentration. On the other hand, undegraded bovine lactoferrin used as a control completely inhibited the growth of the test bacterium at a concentration of 2 mg / ml or more, and the antimicrobial peptide fraction inhibited the growth of the test bacterium at a concentration of 5 μg / ml or more. Completely blocked.
[0024]
From the above results, it was confirmed that the remaining peptide mixture obtained by separating the antimicrobial peptide from the lactoferrin hydrolyzate did not exhibit antimicrobial activity. In addition, when the peptide mixture prepared by another method was used, almost the same results were obtained.
Test example 3
This test was performed to examine the relationship between the sugar absorption promoting activity of the peptide mixture and the sugar concentration.
(1) Sample preparation
The residue fraction prepared by the same method as in the Reference Example was dissolved in purified water at a concentration of 20%, and sterilized by filtration using a sterilizing filter (manufactured by Corning). 171 g of sugar-free milk powder for childcare MC-1 (manufactured by Morinaga Milk Products Co., Ltd.) and 29 g, 86 g, 143 g, 286 g, 571 g and 857 g of dextrin (manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) were added to 1800 g, 1743 g, 1686 g, 1543 g, 1258 g and 972 g of purified water, respectively. Dissolve, 150kg / cm ² The mixture was homogenized at a pressure of 700 g, dispensed in 700 g portions into a 1-liter Erlenmeyer flask, and sterilized by autoclaving at 121 ° C. for 20 minutes. To the prepared milk, the above-mentioned sterilized sample was added so that the residual fraction was 0% or 2%, and further sterilized water was added to adjust the total weight of each test feed to 1,000 g. Diets with dextrin concentrations of 1%, 3%, 5%, 10%, 20% and 30% were prepared. Sample preparation was performed in a clean bench to prevent microbial contamination.
(2) Test method
Each sample was allowed to freely ingest 5 weeks-old germ-free mice (Balb / c) each housed in a vinyl isolator for 5 weeks. One week after breeding, the germ-free mouse was taken out of the vinyl isolator, sacrificed, and the cecal contents were removed. The cecal contents were homogenized by adding 9 volumes of 2% perchloric acid, centrifuged, and the sugar content in the supernatant was measured. In addition, glucose was quantified using F kit glucose (Boehringer Mannheim), and dextrin was quantified using F kit starch (Boehringer Mannheim).
(3) Test results
The results of measuring the concentration of unabsorbed sugar remaining in the cecal contents of the sterile mice to which each test feed was administered are as shown in Table 1.
[0025]
From the results of this test, it was found that the peptide mixture promoted sugar absorption when the sugar concentration in the same composition was 3% or more. Further, it was found that when the sugar concentration exceeded 20%, the sugar absorption promoting action was reduced. The same test was performed for glucose, galactose, and lactose, and it was confirmed that the peptide mixture promoted sugar absorption at a sugar concentration of 3% or more, preferably 3 to 20%. When other peptide mixtures were used, almost the same results were obtained.
[0026]
[Table 1]

[0027]
Test example 4
This test was performed to examine the relationship between the sugar absorption promoting activity of the peptide mixture and the sodium concentration.
(1) Sample preparation
5 mM glucose, 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7.4), sodium chloride was changed to 0 to 150 mM, choline chloride was added to keep the ionic strength constant, and the combined concentration of sodium chloride and choline chloride was always 150 mM. A test solution was prepared. The peptide mixture was added to this test solution at a concentration of 1 mg / ml.
(2) Test method
A glucose absorption test was performed in the same manner as in Test Example 1.
(3) Test results
The results of a glucose absorption test performed on each test solution are as shown in Table 2. As a result, it was found that the peptide mixture promoted glucose absorption at a sodium concentration in the range of 0 to 90 mM (0 to 0.21%), particularly 10 to 90 mM (0.02 to 0.21%). In addition, almost the same results were obtained when other peptide mixtures were used.
[0028]
[Table 2]

[0029]
Test example 5
This test was performed to determine the appropriate amount of the peptide mixture to be added.
(1) Sample preparation
The peptide mixture was added at a concentration of 0 to 5 mg / ml to 30 mM sodium chloride, 120 mM choline chloride, 5 mM glucose, and 10 mM potassium phosphate buffer (pH 7.4) to prepare a test solution.
(2) Test method
A glucose absorption test was performed in the same manner as in Test Example 1.
(3) Test results
The results of a glucose absorption test performed on each test solution are as shown in Table 3. As a result, it was found that the peptide mixture promotes glucose absorption at a concentration of at least 10 μg / ml (0.001%), preferably 100 to 5000 μg / ml (0.01 to 0.5%). When other peptide mixtures were used, almost the same results were obtained.
[0030]
[Table 3]

[0031]
Test Example 6
Since it is known that administration of infant formula to mice causes severe diarrhea and death, this test was performed to confirm that the glucose absorption-promoting activity of the peptide mixture prevented diarrhea.
(1) Test method
A peptide mixture prepared by the same method as in Test Example 1 was added to a commercially available infant formula at a final concentration of 100 μg / ml to prepare a formula (test sample). As a control, a prepared milk without the peptide mixture (control sample) was used.
[0032]
These two types of samples were allowed to freely ingest 5 week-old SPF mice (Balb / c), 5 mice for 1 week each. Every morning at 10:00, the inside of the cage was inspected, the condition of feces was confirmed, and dead mice were removed.
(2) Test results
The results of the test are as shown in FIG. FIG. 1 shows the relationship between the breeding period and the survival rate. The ordinate and abscissa indicate the breeding period (days) and the survival rate (%), respectively, and □ and Δ indicate the test sample administration group and the control sample, respectively. The administration group is shown. As is clear from FIG. 1, in the control sample administration group, severe diarrhea occurred, and all the animals died within 4 days. On the other hand, in the test sample administration group, no diarrhea occurred and all the samples were normal. When other peptide mixtures were used, almost the same results were obtained. Test example 7
This test was performed to examine the effect of the peptide mixture on blood glucose in healthy subjects.
(1) Sample preparation
A sports drink (test sample) was prepared in the same manner as in Example 1. Also, the same sports drink (control sample) as in Example 1 was prepared except that the peptide mixture was not contained.
(2) Test method
The sports drink was administered to five healthy volunteers by the following method, and an oral glucose tolerance test was performed. That is, 350 ml of the above-mentioned sports drink was orally administered to a subject who had fasted overnight, and blood was collected at intervals of 6 minutes immediately after administration, and the blood glucose level was measured by a conventional method. One week later, a control sample was orally administered to the same subject, and the blood glucose level was measured by a conventional method.
(3) Test results
The results of this test are as shown in FIG. FIG. 2 shows changes in blood glucose level over time after sample intake, the vertical axis and horizontal axis represent blood glucose level (mg / dl) and time (minutes), respectively, and □ and Δ represent test sample administration groups, respectively. And a control sample administration group. As is clear from FIG. 2, it was confirmed that the sports drink containing the peptide mixture rapidly increased blood glucose and promoted glucose absorption as compared to the control sports drink. A similar test was performed using another peptide mixture, and almost the same results were obtained.
Reference example
1 kg of commercially available lactoferrin (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) separated from milk is dissolved in 9 liters of purified water, the pH is adjusted to 3.0 by adding 1N hydrochloric acid, and commercially available butapepsin (1: 10,000; Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). 30 g was added thereto, mixed uniformly, kept at 37 ° C. for 4 hours, and heated at 85 ° C. for 10 minutes to inactivate the enzyme. Then, the pH was adjusted to 7.0 by adding 1N sodium hydroxide, and insolubles were removed by filtration to obtain a lactoferrin hydrolyzate solution. This lactoferrin hydrolyzate solution was freeze-dried to obtain about 960 g of lactoferrin hydrolyzate powder. 800 g of the powder is dissolved in 20 l of purified water, filled with 650 M of butyl toyopearl (manufactured by Tosoh Corporation), and passed through a column (36 cm in diameter × 15 cm in height) equilibrated with purified water at a flow rate of 0.2 liter / min. The solution was washed by passing purified water at a flow rate of 0.6 L / min until the absorbance of the effluent at 280 nm became 0.01 or less. About 60 liters of the effluent fraction not adsorbed to the obtained butyl toyopearl was concentrated by a reverse osmosis membrane (manufactured by Asahi Kasei Corporation) and further freeze-dried to obtain about 720 g of a peptide mixture powder.
[0033]
The resulting peptide mixture was subjected to a glucose absorption test and an antibacterial test in the same manner as in Test Examples 1 and 2, and as a result, no antibacterial activity was observed, but a glucose absorption promoting effect was observed.
Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples.
[0034]
【Example】
Example 1
Using the peptide mixture prepared by the same method as in the Reference Example, a sports drink having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0035]
Sugar 2.000 (%)
Fructose glucose liquid sugar 4,000
Citric acid 0.100
Sodium chloride 0.040
Vitamin C 0.015
Potassium chloride 0.040
Fragrance 0.010
Peptide mixture 0.500
Tap water 93.295
Example 2
Using the peptide mixture prepared by the same method as in the Reference Example, a powdered infant formula having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0036]
Purified lactose 34.000 (%)
Peptide mixture 0.077
Casein digest 6.000
Whey digest 26.000
Purified and prepared fat 30.000
Vitamin A ₁ Fatty acid ester 0.018
Thiamine hydrochloride 0.001
Riboflavin sodium phosphate 0.001
Pyridoxine hydrochloride 0.001
Sodium L-ascorbate 0.200
Cholecalciphenol 0.010
Vitamin E 0.010
Nicotinamide 0.010
Folic acid 0.001
Inosit 0.050
Calcium pantothenate 0.010
Taurine 0.050
Soybean phospholipid 1.200
Calcium carbonate 1.000
Magnesium chloride 0.500
Calcium chloride 0.300
Potassium chloride 0.300
Dipotassium hydrogen phosphate 0.200
Ferrous sulfate 0.050
Copper sulfate 0.001
Zinc sulfate 0.010
When used, this infant formula was dissolved in water at a concentration of 13% before use. The concentration of the peptide mixture upon dissolution was 0.01%.
Example 3
Using the peptide mixture prepared by the same method as the reference example, a milk drink having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0037]
99.6% skim milk
Calcium carbonate 0.2
Peptide mixture 0.1
Thickening polysaccharide 0.1
Example 4
Using the peptide mixture prepared by the same method as the reference example, an enteral nutritional supplement having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0038]
Sodium caseinate 3.000 (%)
Soy protein hydrolyzate 2.000
Peptide mixture 0.500
Dextrin 14.000
Sucrose 3000
Microcrystalline cellulose 0.500
Corn oil 2.600
Coconut oil 0.500
Soybean phospholipid 0.160
Vitamin A ₁ Fatty acid ester 0.001
Tocopherol acetate 0.003
Ascorbic acid 0.015
Thiamine hydrochloride 0.001
Riboflavin 0.001
Pyridoxine hydrochloride 0.001
Choline chloride 0.050
Folic acid 0.001
Nicotinamide 0.001
Calcium pantothenate 0.001
Biotin 0.001
Magnesium chloride 0.150
Potassium citrate 0.150
Tricalcium phosphate 0.100
Potassium chloride 0.100
Sodium citrate 0.150
Zinc sulfate 0.008
Iron sulfate 0.006
Manganese chloride 0.001
Copper sulfate 0.001
Potassium hydroxide 0.010
Citric acid 0.010
Distilled water 72.978
Example 5
Using the peptide mixture prepared by the same method as that of Reference Example, a digestive enteral nutritional supplement having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0039]
Egg white hydrolyzate 4.500 (%)
Peptide mixture 0.200
Dextrin 20.000
Soybean oil 0.700
Corn oil 0.700
Manganese sulfate 0.001
Zinc sulfate 0.002
Iron gluconate 0.007
Potassium chloride 0.030
Magnesium chloride 0.100
Calcium glycerophosphate 0.300
Copper sulfate 0.001
Ascorbic acid 0.050
Nicotinamide 0.003
Calcium pantothenate 0.001
Folic acid 0.001
Choline chloride 0.005
Inositol 0.005
Distilled water 73.394
Example 6
Using the peptide mixture prepared by the same method as in the Reference Example, a component nutrient having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0040]
L-glutamine 1.000 (%)
L-arginine hydrochloride 0.400
L-serine 0.400
Sodium L-aspartate 0.350
L-leucine 0.300
L-phenylalanine 0.300
Lysine chloride 0.300
L-alanine 0.300
L-isoleucine 0.200
L-methionine 0.200
L-valine 0.200
L-histidine hydrochloride 0.200
Aminoacetic acid 0.200
L-proline 0.200
L-threonine 0.150
L-tryptophan 0.050
L-tyrosine 0.020
Peptide mixture 0.010
Dextrin 30.000
Corn oil 0.300
Sodium citrate 0.100
Potassium chloride 0.050
Calcium glycerophosphate 0.300
Iron gluconate 0.005
Zinc sulfate 0.002
Manganese sulfate 0.001
Copper sulfate 0.001
Calcium pantothenate 0.001
Nicotinamide 0.001
Choline chloride 0.010
Ascorbic acid 0.005
Retinol acetate 0.005
Tocopherol acetate 0.007
Distilled water 64.432
Example 7
Using the peptide mixture prepared by the same method as the reference example, a liquid feed for experimental mice having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0041]
Sodium caseinate 4.000 (%)
Peptide mixture 0.500
L-cysteine 0.050
DL-methionine 0.030
Corn oil 0.850
Olive oil 2.850
Vitamin mixed 0.500
Mineral mixing 1.000
Sucrose 12,000
Carrageenan 0.030
Tocopherol acetate 0.003
Distilled water 78.187
Example 8
Using the peptide mixture prepared in the same manner as in the Reference Example, a milk powder for suckling calf rearing having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0042]
Skim milk powder 74.733 (%)
Peptide mixture 0.067
Animal fat 20.000
Fish Solivable 4,000
Vitamin mixed 0.500
Mineral mixture 0.700
The milk powder for suckling calf rearing was dissolved in water at a concentration of 15% and used. The concentration of the peptide mixture upon dissolution was 0.01%.
Example 9
Using the peptide mixture prepared in the same manner as in the Reference Example, a milk powder for suckling calf rearing having the following composition was produced by a conventional method. In addition, the raw materials used were all commercial products except for the peptide mixture.
[0043]
Skim milk powder 82.267 (%)
Peptide mixture 1.333
Animal fat 11.200
Fish Solivable 4,000
Vitamin mixed 0.500
Mineral mixture 0.700
The milk powder for suckling calf rearing was dissolved in water at a concentration of 15% and used. The concentration of the peptide mixture upon dissolution was 0.20%.
[0044]
【The invention's effect】
As described in detail above, the present invention provides a saccharide composition in which the saccharide in the composition is well absorbed even if the composition has a low sodium content or does not contain sodium. This composition can be used as foods and pharmaceuticals for patients with high blood pressure, heart disease and kidney disease in which sodium intake is restricted. In addition, it can be used for infant formula, livestock formula, sports drinks, etc., which originally have low sodium concentration to promote sugar absorption, promote growth, relieve fatigue, and prevent diarrhea due to poor sugar absorption. Can be provided.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the daily change in the survival rate in a test in which infant formula was administered to mice.
FIG. 2 shows the time course of blood glucose levels in a test in which a sports drink was administered to humans.

Claims

A composition in which the saccharide in the composition is well absorbed in the living body even in a composition having a low sodium content or containing no sodium, and contains a peptide mixture having the following properties fractionated from lactoferrin hydrolyzate: An absorption-promoting saccharide composition,
a) a residual peptide mixture obtained by separating an antimicrobial peptide from a lactoferrin hydrolyzate; b) no antimicrobial activity in vitro; and c) an activity to promote saccharide absorption in vivo and in vitro.

2. The absorption enhancing saccharide composition of claim 1, wherein the saccharide content is at least 3% (by weight).

3. The saccharide composition according to claim 1, wherein the content of the peptide mixture is at least 0.001% (by weight).

The saccharide composition according to claim 1, 2 or 3, which is a food, a pharmaceutical or a feed.