JP3523207B2 - ＲＰ−ＨＰＬＣカラムを介してのＬｏｇＰ係数の測定 - Google Patents
ＲＰ−ＨＰＬＣカラムを介してのＬｏｇＰ係数の測定Info
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Description
【０００１】本発明の背景 本発明の分野
本発明は、医薬候補に関するｌｏｇ ＰOCT値の改良さ
れた測定方法に関する。
れた測定方法に関する。
【０００２】関連分野
オクタノール−水分配係数（ｌｏｇ ＰOCT）の重要性
は、例えば、高い親油性（ｌｏｇ ＰOCT＞４．５）と
低い溶解度の間の一般に観察される相関により、強調さ
れる 1。医薬分子に関する計算された値は、与えられた
化合物又は化合物のクラスに関して２だけのｌｏｇ Ｐ
OCT単位によっては、使用されるソフトウェアに依存し
て、しばしば不正確である。Ｌｉｐｉｎｓｋｉの“Ｒｕ
ｌｅ ｏｆ ５”2 の如きデータ分析及び警戒（ａｌｅ
ｒｔｓ）は、特にそれらが高速かつ高精度で作製される
ことができる場合、計測された値の導入により、かなり
利益を得るであろう。従って、可能な場合には常に、特
に上記方法がきわめて少量の新規化学物質だけを要求
し、かつ、いくつかの不純物を許容することができる場
合には、上記の計算された値は、計測された値により置
き替えられるべきである。
は、例えば、高い親油性（ｌｏｇ ＰOCT＞４．５）と
低い溶解度の間の一般に観察される相関により、強調さ
れる 1。医薬分子に関する計算された値は、与えられた
化合物又は化合物のクラスに関して２だけのｌｏｇ Ｐ
OCT単位によっては、使用されるソフトウェアに依存し
て、しばしば不正確である。Ｌｉｐｉｎｓｋｉの“Ｒｕ
ｌｅ ｏｆ ５”2 の如きデータ分析及び警戒（ａｌｅ
ｒｔｓ）は、特にそれらが高速かつ高精度で作製される
ことができる場合、計測された値の導入により、かなり
利益を得るであろう。従って、可能な場合には常に、特
に上記方法がきわめて少量の新規化学物質だけを要求
し、かつ、いくつかの不純物を許容することができる場
合には、上記の計算された値は、計測された値により置
き替えられるべきである。
【０００３】医薬候補の親油性は重要である。なぜな
ら、それは、吸収、沈着、及び排泄の予測において使用
されているからである 3。親油性の高い化合物は代謝の
ために“好ましい”標的であり、しばしば、高いクリア
ランス値を導き、そしてしばしば、高血漿タンパク質結
合に相関することが一般に認められている。多量の分布
が、おそらく（高フラクションの化合物が組織に結合す
ることに因り、親油性化合物の場合にしばしば観察され
る。従って、ｌｏｇ ＰOCT値を正確かつ迅速に作り出
すことができる方法は、物理化学特性スクリーニングの
ために利用できる実験ツールに対する重要な付加物であ
る。
ら、それは、吸収、沈着、及び排泄の予測において使用
されているからである 3。親油性の高い化合物は代謝の
ために“好ましい”標的であり、しばしば、高いクリア
ランス値を導き、そしてしばしば、高血漿タンパク質結
合に相関することが一般に認められている。多量の分布
が、おそらく（高フラクションの化合物が組織に結合す
ることに因り、親油性化合物の場合にしばしば観察され
る。従って、ｌｏｇ ＰOCT値を正確かつ迅速に作り出
すことができる方法は、物理化学特性スクリーニングの
ために利用できる実験ツールに対する重要な付加物であ
る。
【０００４】記載されている古典的な振とうフラスコ方
法、又はこの方法のバリエーション 4 は、中〜高処理量
適用のためには十分に堅固でも迅速でもなく、そしてそ
れらは一般に不純物に対し感受性であり、そして逆相高
性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）法より
も自動化になじみにくい 5。（ＲＰ−ＨＰＬＣ）保持デ
ータは、絶対及び相対親油性値とよく相関することが示
されているが、それらは、同時に振とうフラスコ値の真
の“代替物”ではないと批評されてきた 4。この批判の
一部は、多くの報告が、それらのスコープにおいて限定
され、かなり単純な１官能価の溶質６−８、又は制限さ
れたｌｏｇＰOCT範囲をもつアナログのクラス8 に集中
していたという事実に起因する。
法、又はこの方法のバリエーション 4 は、中〜高処理量
適用のためには十分に堅固でも迅速でもなく、そしてそ
れらは一般に不純物に対し感受性であり、そして逆相高
性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）法より
も自動化になじみにくい 5。（ＲＰ−ＨＰＬＣ）保持デ
ータは、絶対及び相対親油性値とよく相関することが示
されているが、それらは、同時に振とうフラスコ値の真
の“代替物”ではないと批評されてきた 4。この批判の
一部は、多くの報告が、それらのスコープにおいて限定
され、かなり単純な１官能価の溶質６−８、又は制限さ
れたｌｏｇＰOCT範囲をもつアナログのクラス8 に集中
していたという事実に起因する。
【０００５】さらに、いくつかの場合 4、溶媒の、ｌｏ
ｇ ＰOCT対ｌｏｇ Ｋ’又はｌｏｇ Ｋ'Wの勾配は、
１ではなく、上記２つの値の原因である異なる力のバラ
ンスについての疑いを投げかける。上記線形回帰分析に
おいては、Ｋ’は、所定濃度の有機溶媒における溶質の
能力係数（ｃａｐａｃｉｔｙ ｆａｃｔｏｒ）であり、
そしてＫ'Wは、上記有機溶媒の０％に外挿された能力係
数である。しかしながら、我々は、思慮深い条件選択に
より、ＲＰ−ＨＰＬＣ法が、Ｔａｙｌｏｒ9 に従って、
“それら自身のクラス内にあるものとして”、定められ
るかもしれない。
ｇ ＰOCT対ｌｏｇ Ｋ’又はｌｏｇ Ｋ'Wの勾配は、
１ではなく、上記２つの値の原因である異なる力のバラ
ンスについての疑いを投げかける。上記線形回帰分析に
おいては、Ｋ’は、所定濃度の有機溶媒における溶質の
能力係数（ｃａｐａｃｉｔｙ ｆａｃｔｏｒ）であり、
そしてＫ'Wは、上記有機溶媒の０％に外挿された能力係
数である。しかしながら、我々は、思慮深い条件選択に
より、ＲＰ−ＨＰＬＣ法が、Ｔａｙｌｏｒ9 に従って、
“それら自身のクラス内にあるものとして”、定められ
るかもしれない。
【０００６】ひじょうに重要な他の因子5 は、カラム〜
カラム間のデータの再現性である。すなわち、上記再現
性は、上記カラムの充填化学及び製造に依存するようで
ある。異なるカラムからのプーリング・データは難しく
はないであろうと議論されるかもしれない。但し、“ス
ケーリング・スタンダード”は必要かもしれない。しか
しながら、カラム〜カラム間の上記方法の再現性のテス
トは、上記議論から独立して、行われるべきである。
カラム間のデータの再現性である。すなわち、上記再現
性は、上記カラムの充填化学及び製造に依存するようで
ある。異なるカラムからのプーリング・データは難しく
はないであろうと議論されるかもしれない。但し、“ス
ケーリング・スタンダード”は必要かもしれない。しか
しながら、カラム〜カラム間の上記方法の再現性のテス
トは、上記議論から独立して、行われるべきである。
【０００７】上記測定の速度並びに多様な構造及び親油
性値を取り扱う能力は、もちろん、産業的研究環境にお
いては最も重要である。これらの局面は、かなり中程度
の資源をもって、かなり多数の化合物をもって、広いレ
ンジの親油性値を横切ってよい精度をもって、スクリー
ニング能力に翻訳される。さまざまな医薬様分子に適用
できるとともに、正確、迅速であり、かつ、良いダイナ
ミック・レンジをもつであろうｌｏｇ ＰOCTを測定す
る方法の長い間未解決であった必要性が存在する。
性値を取り扱う能力は、もちろん、産業的研究環境にお
いては最も重要である。これらの局面は、かなり中程度
の資源をもって、かなり多数の化合物をもって、広いレ
ンジの親油性値を横切ってよい精度をもって、スクリー
ニング能力に翻訳される。さまざまな医薬様分子に適用
できるとともに、正確、迅速であり、かつ、良いダイナ
ミック・レンジをもつであろうｌｏｇ ＰOCTを測定す
る方法の長い間未解決であった必要性が存在する。
【０００８】
【表２】
【０００９】
【表３】
【００１０】
【表４】
【００１１】
【表５】
【００１２】本発明の要約
本発明は、化学化合物について、本明細書中Ｅｌｏｇ
ＰOCTという実験的ｌｏｇ ＰOCTを測定する方法であっ
て：上記化学化合物を逆相高性能液体クロマトグラフの
カラムに導入し；上記カラムは埋め込まれたアミド官能
基カラムであり；又は低シラノール（ｓｉｌａｎｏｌ）
活性をもつＣ−１８結合カラムであり 35；そしてＭＯＰ
Ｓバッファー及びメタノール／オクタノール混合物を含
有する移動相であって及びメタノール／オクタノール混
合物対上記バッファーの比が７０〜１５％ｖ／ｖである
ものを用いて上記化合物を溶離させ；但し、上記移動相
は脂肪族アミンを含有せず；そして上記カラムから上記
サンプルを溶離させるために要求される保持時間を検出
し；そして上記サンプルの保持時間からＥｌｏｇＰOCT
を計算し；そして上記の合計時間を減少させる、ことを
含む前記方法を提供する。
ＰOCTという実験的ｌｏｇ ＰOCTを測定する方法であっ
て：上記化学化合物を逆相高性能液体クロマトグラフの
カラムに導入し；上記カラムは埋め込まれたアミド官能
基カラムであり；又は低シラノール（ｓｉｌａｎｏｌ）
活性をもつＣ−１８結合カラムであり 35；そしてＭＯＰ
Ｓバッファー及びメタノール／オクタノール混合物を含
有する移動相であって及びメタノール／オクタノール混
合物対上記バッファーの比が７０〜１５％ｖ／ｖである
ものを用いて上記化合物を溶離させ；但し、上記移動相
は脂肪族アミンを含有せず；そして上記カラムから上記
サンプルを溶離させるために要求される保持時間を検出
し；そして上記サンプルの保持時間からＥｌｏｇＰOCT
を計算し；そして上記の合計時間を減少させる、ことを
含む前記方法を提供する。
【００１３】好ましい方法においては、１回の計測時間
を最適化するために、それについてＥｌｏｇ ＰOCTが
測定されるところの化合物は、化学構造に基づく計算さ
れた親油性に従って複数群に分割される34。さらに好ま
しい方法においては、サンプルは、−０．５〜１；１〜
３；そして３より大きな、３つのｌｏｇ ＰOCTレンジ
に分割される。
を最適化するために、それについてＥｌｏｇ ＰOCTが
測定されるところの化合物は、化学構造に基づく計算さ
れた親油性に従って複数群に分割される34。さらに好ま
しい方法においては、サンプルは、−０．５〜１；１〜
３；そして３より大きな、３つのｌｏｇ ＰOCTレンジ
に分割される。
【００１４】カラム条件及びＭＯＰＳバッファー中の％
メタノールは、以下のように測定される：
メタノールは、以下のように測定される：
【００１５】
【表６】
【００１６】好ましくは、計算されたｌｏｇ ＰOCTの
所定レンジ内のサンプルの全体群を、そのカラムが次の
条件に平衡化される前に走らせる。さらに好ましい方法
は、プログラムされたコンピュータにより化学構造に基
づきｌｏｇ ＰOCT値を計算し、そしてプログラムされ
たコンピュータの制御下でロボット手段により上記カラ
ム内に定められたｌｏｇ ＰOCTレンジ内サンプルに導
入し、そして等式３により上記サンプルの保持時間から
ｌｏｇ ＰOCTを計算する。
所定レンジ内のサンプルの全体群を、そのカラムが次の
条件に平衡化される前に走らせる。さらに好ましい方法
は、プログラムされたコンピュータにより化学構造に基
づきｌｏｇ ＰOCT値を計算し、そしてプログラムされ
たコンピュータの制御下でロボット手段により上記カラ
ム内に定められたｌｏｇ ＰOCTレンジ内サンプルに導
入し、そして等式３により上記サンプルの保持時間から
ｌｏｇ ＰOCTを計算する。
【００１７】本発明の詳細な説明
Ｍｉｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．7,11は、水相中少量のｎ−
デシルアミンの添加とともに、溶出液の両成分に１−オ
クタノールを添加して、ＭＣ−８カラムを使用した。Ｓ
ｕｐｅｌｃｏｓｉｌカラム、例えば、Ｓｕｐｅｌｃｏｓ
ｉｌ ＡＢＺ／ＡＢＺ＋及びＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ＲＰ
−アミド １６であって、埋め込まれたアミド官能基カ
ラムとしても知られるものは、改質剤、例えば、ｎ−デ
シルアミンを要求しない。オクタノールは、保持時間を
減少しながら、古典的な“振とう−バイアル（ｓｈａｋ
ｅ−ｖｉａｌ）”オクタノール／ブタノール分配測定に
おける溶質により経験される分子間相互作用を再現する
ために、有用であった。本発明は、Ｐａｇｌｉａｒａ
ｅｔ ａｌ．6 により使用されるカラムを、Ｍｉｎｉｃ
ｋ ｅｔ ａｌ．7 により使用される条件と、併合し、
但し、ｎ−デシルアミンの使用を除く、そして多様な医
薬様化合物のセットにその適用を拡大する。我々は、ま
た、各タイプの親油性に関して適切な流速を使用した。
この方法により作られた値を、Ｅｌｏｇ ＰOCTとい
う。
デシルアミンの添加とともに、溶出液の両成分に１−オ
クタノールを添加して、ＭＣ−８カラムを使用した。Ｓ
ｕｐｅｌｃｏｓｉｌカラム、例えば、Ｓｕｐｅｌｃｏｓ
ｉｌ ＡＢＺ／ＡＢＺ＋及びＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ＲＰ
−アミド １６であって、埋め込まれたアミド官能基カ
ラムとしても知られるものは、改質剤、例えば、ｎ−デ
シルアミンを要求しない。オクタノールは、保持時間を
減少しながら、古典的な“振とう−バイアル（ｓｈａｋ
ｅ−ｖｉａｌ）”オクタノール／ブタノール分配測定に
おける溶質により経験される分子間相互作用を再現する
ために、有用であった。本発明は、Ｐａｇｌｉａｒａ
ｅｔ ａｌ．6 により使用されるカラムを、Ｍｉｎｉｃ
ｋ ｅｔ ａｌ．7 により使用される条件と、併合し、
但し、ｎ−デシルアミンの使用を除く、そして多様な医
薬様化合物のセットにその適用を拡大する。我々は、ま
た、各タイプの親油性に関して適切な流速を使用した。
この方法により作られた値を、Ｅｌｏｇ ＰOCTとい
う。
【００１８】オフタノールの不存在下又は存在下、２７
化合物の開始セットに関して得たデータは、Ｆｉｇ．１
及びＦｉｇ．２により、そしてそれらの対応の等式によ
り示されるように、性能において明らかな差を指摘し
た。使用した化合物は、表１中に報告する最初の２７の
化合物である。Ｆｉｇ．１中に使用されたデータは、移
動相としてメタノールとモルフォリノ・プロパン・スル
ホン酸（ＭＯＰＳ）バッファーだけを用いて作製され
た。これに反し、図２においては、オクタノールがメタ
ノールに添加され、そしてオクタノール飽和水を使用し
て、バッファーが調製された。異なるカラムを上記ラン
のために使用したが、カラム間のバラツキをチェックし
（データを示さず）、そして優れた相関を、上記３つの
異なるカラムについて得た。１の場合には、同一のカラ
ムは、最初に、及び集中的な使用の４ヶ月後に、有意差
をもって、テストされた。これは、性能の差が、上記移
動相の両成分へのオクタノールの添加に因るものであっ
て、カラム充填の可能性のある差に因るものではなかっ
たことを証明した。
化合物の開始セットに関して得たデータは、Ｆｉｇ．１
及びＦｉｇ．２により、そしてそれらの対応の等式によ
り示されるように、性能において明らかな差を指摘し
た。使用した化合物は、表１中に報告する最初の２７の
化合物である。Ｆｉｇ．１中に使用されたデータは、移
動相としてメタノールとモルフォリノ・プロパン・スル
ホン酸（ＭＯＰＳ）バッファーだけを用いて作製され
た。これに反し、図２においては、オクタノールがメタ
ノールに添加され、そしてオクタノール飽和水を使用し
て、バッファーが調製された。異なるカラムを上記ラン
のために使用したが、カラム間のバラツキをチェックし
（データを示さず）、そして優れた相関を、上記３つの
異なるカラムについて得た。１の場合には、同一のカラ
ムは、最初に、及び集中的な使用の４ヶ月後に、有意差
をもって、テストされた。これは、性能の差が、上記移
動相の両成分へのオクタノールの添加に因るものであっ
て、カラム充填の可能性のある差に因るものではなかっ
たことを証明した。
【００１９】Ｆｉｇ．１とＦｉｇ．２は、明らかに、そ
の不存在下に作製されたデータに関して、上記移動相
（両成分）への１−オクタノールの添加の間に有意差を
もたらす。両場合において、上記勾配は１に近いが、そ
の誤差は、等式１と等式２により表されるように、１−
オクタノールの不存在下で２より大きい。両ケースにお
いては、６ ｌｏｇ ＰOCT単位のレンジは、上記実験
に包含される。
の不存在下に作製されたデータに関して、上記移動相
（両成分）への１−オクタノールの添加の間に有意差を
もたらす。両場合において、上記勾配は１に近いが、そ
の誤差は、等式１と等式２により表されるように、１−
オクタノールの不存在下で２より大きい。両ケースにお
いては、６ ｌｏｇ ＰOCT単位のレンジは、上記実験
に包含される。
【００２０】
【数１】
【００２１】上記勾配の値の問題が、Ｍｉｎｉｃｋ ｅ
ｔ ａｌ．11により強調されている。Ｍｅｌａｎｄｅｒ
ｅｔ ａｌ．12の研究によれば、上記著者は、ｌｏｇ
Ｋ'Wとｌｏｇ ＰOCTデータを相関付ける等式は、線
形自由エネルギー関係を表し、ここでは、その勾配は、
上記プロセスの自由エネルギーがいかに緊密に競うかに
ついての推定値である。１に近い勾配は、上記２つのプ
ロセスが同エネルギー（ｈｏｍｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃ）
であること、すなわち、自由エネルギー変化が同じであ
ることをほのめかす。本ケースにおいては、１に近似す
る勾配が、１−オクタノールの有無に拘らず得られた。
さらに、より大きな勾配は、ｌｏｇ Ｐ OCTの推定値が
最終目的であったとしたら、ｌｏｇ Ｋ'Wの測定におけ
る誤差の拡大をもたらすであろう。このｌｏｇ Ｋ'Wデ
ータは、親油性の自己矛盾しないスケールとして使用さ
れることができるであろうし、そして上記の場合、第２
の考慮は、あまり重要ではないであろう。１例は、Ｖａ
ｌｋｏ ｅｔ ａｌ．13の研究により表されるかもしれ
ない。これは、グラジエント・ランを介して得られた、
クロマトグラフィーの疎水性係数（ＣＨＩ）について記
載している。この場合、“古典的な”振とうフラスコの
ｌｏｇ ＰOCTとの相関は必ずしも求められず、そして
自己矛盾しないＣＨＩスケールが確立された。しかしな
がら、ｌｏｇＰOCT（又はｌｏｇ ＤOCT）データが、医
化学コミュニティーにより多くの相関において、かなり
広く使用されているので、“古典的” ｌｏｇ ＰOCT値
は望ましくないであろう。
ｔ ａｌ．11により強調されている。Ｍｅｌａｎｄｅｒ
ｅｔ ａｌ．12の研究によれば、上記著者は、ｌｏｇ
Ｋ'Wとｌｏｇ ＰOCTデータを相関付ける等式は、線
形自由エネルギー関係を表し、ここでは、その勾配は、
上記プロセスの自由エネルギーがいかに緊密に競うかに
ついての推定値である。１に近い勾配は、上記２つのプ
ロセスが同エネルギー（ｈｏｍｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃ）
であること、すなわち、自由エネルギー変化が同じであ
ることをほのめかす。本ケースにおいては、１に近似す
る勾配が、１−オクタノールの有無に拘らず得られた。
さらに、より大きな勾配は、ｌｏｇ Ｐ OCTの推定値が
最終目的であったとしたら、ｌｏｇ Ｋ'Wの測定におけ
る誤差の拡大をもたらすであろう。このｌｏｇ Ｋ'Wデ
ータは、親油性の自己矛盾しないスケールとして使用さ
れることができるであろうし、そして上記の場合、第２
の考慮は、あまり重要ではないであろう。１例は、Ｖａ
ｌｋｏ ｅｔ ａｌ．13の研究により表されるかもしれ
ない。これは、グラジエント・ランを介して得られた、
クロマトグラフィーの疎水性係数（ＣＨＩ）について記
載している。この場合、“古典的な”振とうフラスコの
ｌｏｇ ＰOCTとの相関は必ずしも求められず、そして
自己矛盾しないＣＨＩスケールが確立された。しかしな
がら、ｌｏｇＰOCT（又はｌｏｇ ＤOCT）データが、医
化学コミュニティーにより多くの相関において、かなり
広く使用されているので、“古典的” ｌｏｇ ＰOCT値
は望ましくないであろう。
【００２２】上記相関が、上記セットの物理化学的多様
性を拡大することを目的として、より多くの医薬化合物
を添加することにより、拡大された。さらに９つの化合
物が、表１中に報告するように、添加された。同時に、
周知のＡｂｒａｈａｍの溶媒和パラメーター14,15 を介
して、上記データ及びカラム性能の分析が、１に近似す
る勾配により推定されることができるものを超えて、上
記の古典的な振とうフラスコｌｏｇ ＰOCT値とＲＰ−
ＨＰＬＣ由来値の間の近似問題に答えるために行われ
た。
性を拡大することを目的として、より多くの医薬化合物
を添加することにより、拡大された。さらに９つの化合
物が、表１中に報告するように、添加された。同時に、
周知のＡｂｒａｈａｍの溶媒和パラメーター14,15 を介
して、上記データ及びカラム性能の分析が、１に近似す
る勾配により推定されることができるものを超えて、上
記の古典的な振とうフラスコｌｏｇ ＰOCT値とＲＰ−
ＨＰＬＣ由来値の間の近似問題に答えるために行われ
た。
【００２３】まず、等式３は、上記相関がすばらしいも
のであり、そして上記ｑ2 値により表される上記方法の
予測力もひじょうに良好であるということを示してい
る。Ｆｉｇ．３は、振とうフラスコのデータとＲＰ−Ｈ
ＰＬＣデータの間の相関を図示する。また、等式３によ
り示される勾配は、等式２中の勾配に酷似しており、こ
れはさらに、上記方法の精度を証明し、そして未知の化
合物の予測におけるそのたくましさの間接的な評価をも
たらす。クロス確認された測定係数、又はｑ2 値は、上
記方法の優れた予測力を示す。相関は、３つの異なるカ
ラムを用いて、各カラムについて、得られた値を平均す
ることにより得られた。
のであり、そして上記ｑ2 値により表される上記方法の
予測力もひじょうに良好であるということを示してい
る。Ｆｉｇ．３は、振とうフラスコのデータとＲＰ−Ｈ
ＰＬＣデータの間の相関を図示する。また、等式３によ
り示される勾配は、等式２中の勾配に酷似しており、こ
れはさらに、上記方法の精度を証明し、そして未知の化
合物の予測におけるそのたくましさの間接的な評価をも
たらす。クロス確認された測定係数、又はｑ2 値は、上
記方法の優れた予測力を示す。相関は、３つの異なるカ
ラムを用いて、各カラムについて、得られた値を平均す
ることにより得られた。
【００２４】
【数２】
【００２５】さらに、Ｆｉｇ．４に示すように、残差対
ｌｏｇ ＰOCT値のプロットは、その誤差分布がレンジ
全体にわたりきわめて一貫しており、そして極限値にお
いて曲率（より大きな誤差）が全く観察されないという
ことを示しているということは注目に値する。これは重
要である。なぜなら、それは、同様に正確な測定が、６
ｌｏｇ ＰOCT単位にわたり得られることができると
いうことを示している。日々のシステム好適性チェック
のためのさらなる尺度として、我々は、ニフロキシム
（ｎｉｆｕｒｏｘｉｍｅ）に関してＦｉｇ．５中に示す
ように、レンジ全体にわたり好適に選ばれた１０の化合
物について作られた、対照チャートを使用した。
ｌｏｇ ＰOCT値のプロットは、その誤差分布がレンジ
全体にわたりきわめて一貫しており、そして極限値にお
いて曲率（より大きな誤差）が全く観察されないという
ことを示しているということは注目に値する。これは重
要である。なぜなら、それは、同様に正確な測定が、６
ｌｏｇ ＰOCT単位にわたり得られることができると
いうことを示している。日々のシステム好適性チェック
のためのさらなる尺度として、我々は、ニフロキシム
（ｎｉｆｕｒｏｘｉｍｅ）に関してＦｉｇ．５中に示す
ように、レンジ全体にわたり好適に選ばれた１０の化合
物について作られた、対照チャートを使用した。
【００２６】上記プロットにおける予想外のバラツキ
は、疑わしい結果を直ちに“フラッグ（ｆｌａｇ）”す
るであろう。等式３を介して得られた値を、Ｅｌｏｇ
ＰOCTと名付け、そして本明細書中、そのまま用いる。
溶媒和パラメーターに基づき、線形自由エネルギー関係
を用いて、上記現象の下にある力のバランスの分析を、
Ａｂｒａｈａｍ14-15 により記載されるように行った。
上記等式中、Ｒは過剰モル屈析であり、π2 Hは、双極性
／分極性であり、
は、疑わしい結果を直ちに“フラッグ（ｆｌａｇ）”す
るであろう。等式３を介して得られた値を、Ｅｌｏｇ
ＰOCTと名付け、そして本明細書中、そのまま用いる。
溶媒和パラメーターに基づき、線形自由エネルギー関係
を用いて、上記現象の下にある力のバランスの分析を、
Ａｂｒａｈａｍ14-15 により記載されるように行った。
上記等式中、Ｒは過剰モル屈析であり、π2 Hは、双極性
／分極性であり、
【００２７】
【数３】
【００２８】は、それぞれ、（総和）水素結合の酸性と
塩基性であり、そしてＶX は、ＭｃＧｏｗａｎ'ｓ 容積
である。特に、水素結合塩基性パラメーターに関して使
用される上付き文字“０”は、水飽和オクタノールの場
合におけるように、上記バイナリー・システムの有機部
分が部分的に混和性の溶媒であるとき、特定のタイプの
溶質のために有用である、特定のスケールの値をいう。
他の下付き文字と上付き文字は、普通の意味をもつ、す
なわち、それらは、水素結合スケールと溶質をいう15。
計算されたパラメーターを表２に報告し、そしてｌｏｇ
Ｋ'W又はＥｌｏｇ ＰOCT値が使用されるかどうかに
拘らず、それぞれの等式（等式４と５）のための係数
は、６１３の溶質について、Ａｂｒａｈａｍにより報告
されたように 15、振とうフラスコｌｏｇ ＰOCT値に基
づく等式（等式６）の係数に、（ｌｏｇ Ｋ'Wに関し
て）近似し、又は（Ｅｌｏｇ ＰOCTに関して）本質的
に同一である。しかしながら、ＶX 係数に正規化された
係数の比は、３つの等式の全てに関して、本質的に同一
である（データを示さず）。我々は、本明細書中に提供
する方法を使用して得、そして等式３により表される、
Ｅｌｏｇ ＰOCT値が振とうフラスコ値と同一である
が、それらは、より高い処理量において作製されること
ができ、そして操作の容易さを広いダイナミック・レン
ジと併合することができると結論する。他の分配データ
の欠如に因り、そしてたぶんニフロキシムの場合におけ
る可能性のあるプッシュ−プル（ｐｕｓｈ−ｐｕｌｌ）
効果によりもたらされる困難性に因り、我々は、上記化
合物と６−メルカプトプリンについて正確なパラメータ
ーを得ることができなかった。そして上記２つの溶質を
上記相関から除いた。
塩基性であり、そしてＶX は、ＭｃＧｏｗａｎ'ｓ 容積
である。特に、水素結合塩基性パラメーターに関して使
用される上付き文字“０”は、水飽和オクタノールの場
合におけるように、上記バイナリー・システムの有機部
分が部分的に混和性の溶媒であるとき、特定のタイプの
溶質のために有用である、特定のスケールの値をいう。
他の下付き文字と上付き文字は、普通の意味をもつ、す
なわち、それらは、水素結合スケールと溶質をいう15。
計算されたパラメーターを表２に報告し、そしてｌｏｇ
Ｋ'W又はＥｌｏｇ ＰOCT値が使用されるかどうかに
拘らず、それぞれの等式（等式４と５）のための係数
は、６１３の溶質について、Ａｂｒａｈａｍにより報告
されたように 15、振とうフラスコｌｏｇ ＰOCT値に基
づく等式（等式６）の係数に、（ｌｏｇ Ｋ'Wに関し
て）近似し、又は（Ｅｌｏｇ ＰOCTに関して）本質的
に同一である。しかしながら、ＶX 係数に正規化された
係数の比は、３つの等式の全てに関して、本質的に同一
である（データを示さず）。我々は、本明細書中に提供
する方法を使用して得、そして等式３により表される、
Ｅｌｏｇ ＰOCT値が振とうフラスコ値と同一である
が、それらは、より高い処理量において作製されること
ができ、そして操作の容易さを広いダイナミック・レン
ジと併合することができると結論する。他の分配データ
の欠如に因り、そしてたぶんニフロキシムの場合におけ
る可能性のあるプッシュ−プル（ｐｕｓｈ−ｐｕｌｌ）
効果によりもたらされる困難性に因り、我々は、上記化
合物と６−メルカプトプリンについて正確なパラメータ
ーを得ることができなかった。そして上記２つの溶質を
上記相関から除いた。
【００２９】
【数４】
【００３０】さらなる改良として、上記クロマトグラフ
ィーのデータ・ファイルから手作業の介在を含まないよ
うに、最終Ｅｌｏｇ ＰOCT値を得るために、社内ソフ
トウェアを通じて、上記計算手順を自動化した。この修
飾は、既に迅速である手順から出発して、高められた処
理量を可能にする。化合物についてのＥｌｏｇ ＰOC T
データを、１の装置上で、２０分以下の間で、平均値と
して、得る。
ィーのデータ・ファイルから手作業の介在を含まないよ
うに、最終Ｅｌｏｇ ＰOCT値を得るために、社内ソフ
トウェアを通じて、上記計算手順を自動化した。この修
飾は、既に迅速である手順から出発して、高められた処
理量を可能にする。化合物についてのＥｌｏｇ ＰOC T
データを、１の装置上で、２０分以下の間で、平均値と
して、得る。
【００３１】最近の方法は、目下のところ、中性又は弱
酸性又は弱塩基性の化合物に制限されるが、それは、妥
当なＰＨレンジ内で、意味のあるイオン化を欠いた化合
物の測定に係わる実施上の制限をカバーし、そしてそれ
故、周知の電位差計測技術16を介してのｌｏｇ ＰOCT
測定になじまない。移動相とＲＰ−ＨＰＬＣカラムの思
慮深い選択により、きわめて正確なｌｏｇＰOCT測定法
が開発されている。これは、医薬様化合物に関して、上
記序において言及した、迅速な処理量の、しっかりし
た、そして最小の手作業介在を特徴とする。ｌｏｇ Ｐ
OCTは、新規化学物質のＡＤＭＥ特性決定 3、例えば、
溶解度の推定、胃腸透過性、及びクリアランスの推定の
ための重要なパラメーターであるので、上記方法は、医
薬の発見及び開発環境における適用のために有用であ
る。
酸性又は弱塩基性の化合物に制限されるが、それは、妥
当なＰＨレンジ内で、意味のあるイオン化を欠いた化合
物の測定に係わる実施上の制限をカバーし、そしてそれ
故、周知の電位差計測技術16を介してのｌｏｇ ＰOCT
測定になじまない。移動相とＲＰ−ＨＰＬＣカラムの思
慮深い選択により、きわめて正確なｌｏｇＰOCT測定法
が開発されている。これは、医薬様化合物に関して、上
記序において言及した、迅速な処理量の、しっかりし
た、そして最小の手作業介在を特徴とする。ｌｏｇ Ｐ
OCTは、新規化学物質のＡＤＭＥ特性決定 3、例えば、
溶解度の推定、胃腸透過性、及びクリアランスの推定の
ための重要なパラメーターであるので、上記方法は、医
薬の発見及び開発環境における適用のために有用であ
る。
【００３２】材料及び方法。上記移動相は、全ての場合
において、pH７．４における２０mM ＭＯＰＳバッファ
ー、及び７０から１５％ｖ／ｖまで変化する割合におけ
るメタノールから成る。０．２５％（ｖ／ｖ）量のオク
タノールをメタノールに添加し、そしてオクタノール飽
和水を上記バッファーを調製するために使用した。但
し、上記相関は、上記移動相の成分中オクタノールを含
まずに得た（以下を見よ）。さまざまな量のメタノール
において得られた能力係数（ｃａｐａｃｉｔｙ ｆａｃ
ｔｏｒｓ）データ（Ｋ’＝（ｔR −ｔO ）／ｔO ）を、
次に、０％メタノールに外挿し、そして線形手順を用い
て、ｌｏｇ Ｋ'Wとして報告した。全ての場合におい
て、アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）を除き
（Ｒ2 ＝０．９６）、２乗相関の係数＝０．９９であっ
た。純メタノールのインジェクションを、ｔO 、すなわ
ち、不感時間（ｄｅａｄ ｔｉｍｅ）を測定するために
使用した。一方、ｔR は、上記アナライトについての保
持時間の普通の意味をもつ。
において、pH７．４における２０mM ＭＯＰＳバッファ
ー、及び７０から１５％ｖ／ｖまで変化する割合におけ
るメタノールから成る。０．２５％（ｖ／ｖ）量のオク
タノールをメタノールに添加し、そしてオクタノール飽
和水を上記バッファーを調製するために使用した。但
し、上記相関は、上記移動相の成分中オクタノールを含
まずに得た（以下を見よ）。さまざまな量のメタノール
において得られた能力係数（ｃａｐａｃｉｔｙ ｆａｃ
ｔｏｒｓ）データ（Ｋ’＝（ｔR −ｔO ）／ｔO ）を、
次に、０％メタノールに外挿し、そして線形手順を用い
て、ｌｏｇ Ｋ'Wとして報告した。全ての場合におい
て、アロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）を除き
（Ｒ2 ＝０．９６）、２乗相関の係数＝０．９９であっ
た。純メタノールのインジェクションを、ｔO 、すなわ
ち、不感時間（ｄｅａｄ ｔｉｍｅ）を測定するために
使用した。一方、ｔR は、上記アナライトについての保
持時間の普通の意味をもつ。
【００３３】上記クロマトグラフィーのランの全てを、
周囲温度で、ＨＰ−１１００ ＨＰＬＣ Ｃｈｅｍ Ｓ
ｔａｔｉｏｎ上で行った。使用したカラムは、Ｓｕｐｅ
ｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−ＡＢＺ，５μｍ，４．６×５０mm
であった。ダイオード・アレイ検出器を、２３５，２５
５，２６５、及び２７５nmにおけるシグナルをモニター
するために使用した。異なるシリカ結合ロットをもつカ
ラムを、テストして、再現性を保証した。サンプルを、
１０〜３０μｇ／mLの濃度で１：１メタノール／水に溶
解した。その流量は、上記親油性レンジに依存して、
０．５，１又は２mL／分であった。３つの親油性レンジ
を、全ての場合において、以下の表に記載するように、
Ｋ'Wへの外挿のための３点を用いて、確立した。
周囲温度で、ＨＰ−１１００ ＨＰＬＣ Ｃｈｅｍ Ｓ
ｔａｔｉｏｎ上で行った。使用したカラムは、Ｓｕｐｅ
ｌｃｏｓｉｌ ＬＣ−ＡＢＺ，５μｍ，４．６×５０mm
であった。ダイオード・アレイ検出器を、２３５，２５
５，２６５、及び２７５nmにおけるシグナルをモニター
するために使用した。異なるシリカ結合ロットをもつカ
ラムを、テストして、再現性を保証した。サンプルを、
１０〜３０μｇ／mLの濃度で１：１メタノール／水に溶
解した。その流量は、上記親油性レンジに依存して、
０．５，１又は２mL／分であった。３つの親油性レンジ
を、全ての場合において、以下の表に記載するように、
Ｋ'Wへの外挿のための３点を用いて、確立した。
【００３４】
【表７】
【００３５】上記サンプルを、与えられたクラスを用い
て計算された値を介してそれらの親油性を推定すること
により、又は先の経験により、適切なレンジ内に置い
た。各場合において、サンプルの全群を、自動化された
やり方で、そのカラムが次の条件に平衡化される前に、
走らせ、そして最初の推定は、ひじょうに正確である必
要はない。上記データ分析を、社内ソフトウェアを介し
て自動化し、上記クロマトグラフィーのデータ・ファイ
ルから直接Ｅｌｏｇ ＰOCT値を作製した。
て計算された値を介してそれらの親油性を推定すること
により、又は先の経験により、適切なレンジ内に置い
た。各場合において、サンプルの全群を、自動化された
やり方で、そのカラムが次の条件に平衡化される前に、
走らせ、そして最初の推定は、ひじょうに正確である必
要はない。上記データ分析を、社内ソフトウェアを介し
て自動化し、上記クロマトグラフィーのデータ・ファイ
ルから直接Ｅｌｏｇ ＰOCT値を作製した。
【００３６】上記振とうフラスコｌｏｇ ＰOCTデータ
を、文献から拾い上げ、又は社内で測定した。但し、デ
ータが入手できず、又はその化合物の高い親油性に因り
実験的に測定できなかった場合を除く、社内で行う振と
うバイアル実験計測を全て、少なくとも２連で、褐色ガ
ラス・バイアル内で、そしていくつかの場合には、上記
実験前に互いに事前飽和されたオクタノールとＭＯＰＳ
バッファーの比を変えて、行った。一夜の振とうを使用
した。
を、文献から拾い上げ、又は社内で測定した。但し、デ
ータが入手できず、又はその化合物の高い親油性に因り
実験的に測定できなかった場合を除く、社内で行う振と
うバイアル実験計測を全て、少なくとも２連で、褐色ガ
ラス・バイアル内で、そしていくつかの場合には、上記
実験前に互いに事前飽和されたオクタノールとＭＯＰＳ
バッファーの比を変えて、行った。一夜の振とうを使用
した。
【００３７】遠心分離と上記相分離の後、異なる波長に
おけるＨＰＬＣ分析を、両相を用いて、定量分析のため
に使用した。全回帰分析を、ＪＭＰソフトウェア（v.3.
2.1, SAS Institute, SAS Campus Drive, Cary, NC 275
13）を介して行った。１０の化合物を、親油性の全レン
ジをカバーする、３６化合物のセットにわたって選択し
て、上記方法の日々の性能をモニターした。統計的な計
算は、１０の化合物の使用が、最終回帰式中の推定勾配
が真のものの±０．０９内にあるであろうということを
保証するであろうということを示した。上記ＪＭＰソフ
トウェアを品質モニタリングのためにも使用した。化合
物の標準セットに関して蓄積され、そして対照チャート
上に定期的にプロットされたデータは、傾向及び性能の
変化の検出のための強力な方法を構成する。選ばれた化
合物についての、ｌｏｇ Ｋ'W値のバラツキは、±３Ｋ
S を超えるべきではない。ここで、ＫS は、よく制御さ
れた実験の下で集められたデータに基づき推定された標
準偏差である。ニフロキシムについての対照チャート
を、Ｆｉｇ．５に示す。
おけるＨＰＬＣ分析を、両相を用いて、定量分析のため
に使用した。全回帰分析を、ＪＭＰソフトウェア（v.3.
2.1, SAS Institute, SAS Campus Drive, Cary, NC 275
13）を介して行った。１０の化合物を、親油性の全レン
ジをカバーする、３６化合物のセットにわたって選択し
て、上記方法の日々の性能をモニターした。統計的な計
算は、１０の化合物の使用が、最終回帰式中の推定勾配
が真のものの±０．０９内にあるであろうということを
保証するであろうということを示した。上記ＪＭＰソフ
トウェアを品質モニタリングのためにも使用した。化合
物の標準セットに関して蓄積され、そして対照チャート
上に定期的にプロットされたデータは、傾向及び性能の
変化の検出のための強力な方法を構成する。選ばれた化
合物についての、ｌｏｇ Ｋ'W値のバラツキは、±３Ｋ
S を超えるべきではない。ここで、ＫS は、よく制御さ
れた実験の下で集められたデータに基づき推定された標
準偏差である。ニフロキシムについての対照チャート
を、Ｆｉｇ．５に示す。
【００３８】
【表８】
【００３９】
【表９】
【００４０】
【表１０】
【００４１】
【表１１】
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｆｉｇ．１は、オクタノールの不存在下、２７
の溶質についての、ｌｏｇ Ｐ OCTとｌｏｇ Ｋ'Wの間
の相関を表す。
の溶質についての、ｌｏｇ Ｐ OCTとｌｏｇ Ｋ'Wの間
の相関を表す。
【図２】Ｆｉｇ．２は、オクタノールの存在下、２つの
溶質についての、ｌｏｇ ＰOC Tとｌｏｇ Ｋ'Wの間の
相関を表す。
溶質についての、ｌｏｇ ＰOC Tとｌｏｇ Ｋ'Wの間の
相関を表す。
【図３】Ｆｉｇ．３は、３６溶質についてのｌｏｇ Ｐ
OCTとｌｏｇ Ｋ'Wの間の相関を表す。
OCTとｌｏｇ Ｋ'Wの間の相関を表す。
【図４】Ｆｉｇ．４は、残差対ｌｏｇ ＰOCTのプロッ
トを表す。
トを表す。
【図５】Ｆｉｇ．５は、ニフロキシムについての対照プ
ロットを表す。
ロットを表す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 マリナ イェブゲニーブナ シャラエバ
アメリカ合衆国，コネチカット 06340,
グロトン，イースタン ポイント ロー
ド，ファイザー グローバル リサーチ
アンド ディベロップメント
(72)発明者 カール アンドリュー タッパー
アメリカ合衆国，イリノイ 60647，シ
カゴ，ノース モザート 2053，アパー
トメント シーエイチ２
(56)参考文献 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉ
ｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ.
43，Ｎｏ．15（Ｊｕｌｙ 2000） ｐ.
2922−2928
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
G01N 30/00 - 30/96
Claims (8)
- 【請求項１】 化学化合物についてのＥｌｏｇ ＰOCT
の測定方法であって： ａ）上記化学化合物を連続して、逆相高性能液体クロマ
トグラフのカラムに導入し；上記カラムは埋め込まれた
（ｅｍｂｅｄｄｅｄ）アミド官能基カラム；又は低シラ
ノール（ｓｉｌａｎｏｌ）活性を有するＣ−１８結合カ
ラムであり；そして ｂ）上記化合物を、ＭＯＰＳバッファー及びメタノール
／オクタノール混合物を含有する移動相であって、上記
メタノール／オクタノール混合物対上記バッファー比が
７０〜１５％ｖ／ｖであるものを用いて；かつ、０．５
〜２ml／分の間の流速を用いて溶離させ、但し、上記移
動相は脂肪族アミンを含有せず；そして ｃ）上記カラムから各サンプルを溶離させるために要求
される保持時間を計測し；そして ｄ）以下の等式３： 【数１】 を用いて、各サンプルの上記保持時間からＥｌｏｇ Ｐ
OCTを計算する、を含む、前記方法。 - 【請求項２】 Ｅｌｏｇ ＰOCTが測定される予定であ
るところの前記化合物が、化学構造に基いて計算された
親油性に従って複数群に分割され；そしてＥｌｏｇ Ｐ
OCTが、第１群内の全サンプルについて測定され；そし
て前記カラムが、第２群のための条件に平衡化される、
請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記化合物が、３群に分割され、ここで
上記第１群が０．５〜１の計算されたｌｏｇ ＰOCT範
囲をもち；上記第２群が１〜３の計算されたｌｏｇ Ｐ
OCT範囲をもち、そして上記第３群が３より大きな計算
されたｌｏｇ ＰOCTをもつ、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 メタノールの流速及び％が、各ｌｏｇ
ＰOCT範囲のための以下に示す条件： 【表１】 に調整される、請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】 前記ｌｏｇ ＰOCT値が、プログラムさ
れたコンピュータにより計算され、そして所定のｌｏｇ
ＰOCT範囲内のサンプルが、プログラムされたコンピ
ュータの制御下のロボット手段により、前記カラムに連
続的に（ｓｅｒｉａｔｉｍ）導入され、そして前記等式
３により、各サンプルの保持時間から各Ｅｌｏｇ Ｐ
OCTを計算し、そして記録する、請求項４に記載の方
法。 - 【請求項６】 ステップａ）〜ｄ）のそれぞれが、プロ
グラムされたコンピュータの制御下のロボット手段によ
り行われる、請求項１に記載の方法。 - 【請求項７】 前記カラムが、埋め込まれたアミド官能
基カラムである、請求項１に記載の方法。 - 【請求項８】 前記カラムが、低シラノール活性を有す
るＣ−１８結合カラムである、請求項１に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US18235300P | 2000-02-14 | 2000-02-14 | |
| US60/182353 | 2000-02-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001228130A JP2001228130A (ja) | 2001-08-24 |
| JP3523207B2 true JP3523207B2 (ja) | 2004-04-26 |
Family
ID=22668089
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001035882A Expired - Fee Related JP3523207B2 (ja) | 2000-02-14 | 2001-02-13 | ＲＰ−ＨＰＬＣカラムを介してのＬｏｇＰ係数の測定 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6548307B2 (ja) |
| EP (1) | EP1126277A3 (ja) |
| JP (1) | JP3523207B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7398161B2 (en) | 2004-09-15 | 2008-07-08 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Sampling method and sampling device, and logD measuring method and logD measuring system |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1239280A3 (en) * | 2001-02-26 | 2004-03-31 | Pfizer Products Inc. | ElogDoct:A tool for lipophilicity determination in drug discovery basic and neutral compounds |
| WO2011149872A1 (en) * | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Waters Technologies Corporation | Process for preparing liquid mixtures of known ph and salt concentration |
| CN102749417B (zh) * | 2012-06-05 | 2015-01-14 | 南京大学 | 一种预测离子液体的正辛醇/水分配系数的方法 |
| TWI659209B (zh) * | 2013-06-17 | 2019-05-11 | 地平線罕見醫學製藥有限責任公司 | 分析半胱胺組合物的方法 |
| US10422776B2 (en) * | 2014-05-09 | 2019-09-24 | Waters Technologies Corporation | Methods for preparing liquid mixtures |
| CN104749284B (zh) * | 2015-04-10 | 2016-08-24 | 中国石油大学(华东) | 一种测定表面活性剂在超临界co2和水两相中分配系数的装置及方法 |
-
2001
- 2001-02-13 JP JP2001035882A patent/JP3523207B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-13 US US09/782,428 patent/US6548307B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-13 EP EP01301277A patent/EP1126277A3/en not_active Withdrawn
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ．４３，Ｎｏ．１５（Ｊｕｌｙ ２０００） ｐ．２９２２−２９２８ |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7398161B2 (en) | 2004-09-15 | 2008-07-08 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Sampling method and sampling device, and logD measuring method and logD measuring system |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6548307B2 (en) | 2003-04-15 |
| US20020009388A1 (en) | 2002-01-24 |
| EP1126277A2 (en) | 2001-08-22 |
| JP2001228130A (ja) | 2001-08-24 |
| EP1126277A3 (en) | 2004-04-14 |
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