JP3210295B2 - リンパ球異常の測定方法 - Google Patents
リンパ球異常の測定方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はリンパ球異常の測定
方法に関し、さらに詳しくは膠原病およびその周辺疾患
の活動性の判断に有用なリンパ球異常を簡便に測定する
ことの可能なリンパ球異常の測定方法に関する。
方法に関し、さらに詳しくは膠原病およびその周辺疾患
の活動性の判断に有用なリンパ球異常を簡便に測定する
ことの可能なリンパ球異常の測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】従来
より、膠原病、あるいはリウマチ性疾患と総称される一
群の疾病が知られている。この膠原病は、１．免疫異常
を伴う、２．全臓器疾患である、３．ほぼ一生羅患状態
は続き、その間良くなったり（緩解、寛解）悪くなった
り（増悪）する、という一般的現象を有することを特徴
としている。これらの疾病が活動期にあるか否かは、疾
病の診断および見通しに非常に重要なものであるが、こ
れを評価する方法として従来知られているものは、各疾
病毎に、関節炎、皮疹、腎障害といった臓器障害と、リ
ウマチ因子の増加、抗ＤＮＡ抗体の増加、リンパ球数低
下、補体低下など免疫異常を反映する検査値異常とがあ
る。しかし、上記したような診断手法のうち、臓器障害
や検査値異常等については、顕在化せぬ場合もあり、ま
た、疾病の活動性の上昇によるものであるか、あるいは
感染症など合併症によるものであるかについての鑑別が
実際の臨床では難しいことが多かった。
より、膠原病、あるいはリウマチ性疾患と総称される一
群の疾病が知られている。この膠原病は、１．免疫異常
を伴う、２．全臓器疾患である、３．ほぼ一生羅患状態
は続き、その間良くなったり（緩解、寛解）悪くなった
り（増悪）する、という一般的現象を有することを特徴
としている。これらの疾病が活動期にあるか否かは、疾
病の診断および見通しに非常に重要なものであるが、こ
れを評価する方法として従来知られているものは、各疾
病毎に、関節炎、皮疹、腎障害といった臓器障害と、リ
ウマチ因子の増加、抗ＤＮＡ抗体の増加、リンパ球数低
下、補体低下など免疫異常を反映する検査値異常とがあ
る。しかし、上記したような診断手法のうち、臓器障害
や検査値異常等については、顕在化せぬ場合もあり、ま
た、疾病の活動性の上昇によるものであるか、あるいは
感染症など合併症によるものであるかについての鑑別が
実際の臨床では難しいことが多かった。
【０００３】一方、上記した免疫異常を反映する検査値
対象としてのリンパ球はすなわち免疫担当細胞であり、
免疫機構が活性化し、また鎮静化する過程で、リンパ球
も活性化したり、細胞死に至ったりするものであり、免
疫異常を直に反映する指標として有用である。このリン
パ球は未梢血や体液、培養液などで測定可能であるが、
通常は生のリンパ球そのものを用いて測定するため、採
取後、短時間のうちの処理を要し、かつ雑菌の混入を避
ける必要がある等、操作が煩雑であり、一度に大量の検
体の処理が困難である等の欠点がある。また、採取した
リンパ球を凍結した後、測定する凍結保存法が知られて
いるが、薬品を必要とし手間がかかると共に、熟練を要
するという欠点があった。本発明は上記したような従来
の事情に鑑みてなされたもので、合併症によるものでは
ない、膠原病の活動性診断に有用なリンパ球異常を測定
する方法を提供することを目的とする。
対象としてのリンパ球はすなわち免疫担当細胞であり、
免疫機構が活性化し、また鎮静化する過程で、リンパ球
も活性化したり、細胞死に至ったりするものであり、免
疫異常を直に反映する指標として有用である。このリン
パ球は未梢血や体液、培養液などで測定可能であるが、
通常は生のリンパ球そのものを用いて測定するため、採
取後、短時間のうちの処理を要し、かつ雑菌の混入を避
ける必要がある等、操作が煩雑であり、一度に大量の検
体の処理が困難である等の欠点がある。また、採取した
リンパ球を凍結した後、測定する凍結保存法が知られて
いるが、薬品を必要とし手間がかかると共に、熟練を要
するという欠点があった。本発明は上記したような従来
の事情に鑑みてなされたもので、合併症によるものでは
ない、膠原病の活動性診断に有用なリンパ球異常を測定
する方法を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、アリ
ルアミダーゼ活性に依存しないアミノペプチダーゼ活性
値を膠原病に伴うリンパ球数低下の指標として用いるこ
とを特徴とするリンパ球異常の測定方法である。
ルアミダーゼ活性に依存しないアミノペプチダーゼ活性
値を膠原病に伴うリンパ球数低下の指標として用いるこ
とを特徴とするリンパ球異常の測定方法である。
【０００５】以下、本発明の構成について詳述する。本
発明において用いられるアリルアミダーゼ活性に依存し
ないアミノペプチダーゼ活性値は、基質としてＬ−ロイ
シンアミドまたはその塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）
から、基質として合成基質を用いた場合のＬＡＰ値
（Ｂ）を差し引いた値とするのが好適である。ここで、
合成基質としては、例えば、Ｌ−ロイシル−β−ナフチ
ルアミド、Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニリド、Ｌ−ロ
イシル−ｐ−ジエチルニトロアニリド、Ｌ−ロイシル−
３，５−ジブロム−４−ヒドロキシアニリド、Ｌ−ロイ
シル−ｐ−ジスルホプロピルアミノアニリドおよびＬ−
ロイシル−β−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリンが
挙げられる。
発明において用いられるアリルアミダーゼ活性に依存し
ないアミノペプチダーゼ活性値は、基質としてＬ−ロイ
シンアミドまたはその塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）
から、基質として合成基質を用いた場合のＬＡＰ値
（Ｂ）を差し引いた値とするのが好適である。ここで、
合成基質としては、例えば、Ｌ−ロイシル−β−ナフチ
ルアミド、Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニリド、Ｌ−ロ
イシル−ｐ−ジエチルニトロアニリド、Ｌ−ロイシル−
３，５−ジブロム−４−ヒドロキシアニリド、Ｌ−ロイ
シル−ｐ−ジスルホプロピルアミノアニリドおよびＬ−
ロイシル−β−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリンが
挙げられる。
【０００６】一般にＬＡＰ値とは、ヒトアミノペプチダ
ーゼ活性値を測定するものであり、ヒトアミノペプチダ
ーゼとしては、主として次の３種がよく知られている。
そして、これらのアミノペプチダーゼ活性値は、肝胆道
系疾患、肝癌、膵癌、妊娠等で上昇し、これらの診断の
指標として用いられているものである。 １．ロイシンアミノペプチダーゼ（leucinaminopeptida
se） ２．アリルアミダーゼ（ary1amidase） ３．シスチルアミノペプチダーゼ（cysty1 aminopeptid
ase） 一方、ＬＡＰ値の測定法としては、基質にＬ−ロイシン
−β−ナフチルアミド、Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニ
リド、Ｌ−ロイシル−β−カルボキシ−４−ヒドロキシ
アニリン等の合成基質や、Ｌ−ロイシンアミドのような
天然基質を用いる方法が知られている。これらのなかで
も合成其質を用いたＬＡＰ測定が最も一般的ではある
が、合成其質を用いた測定では上記のヒトアミノペプチ
ダーゼのうち、特にアリルアミダーゼが感度高く測られ
るという特徴がある。一方、天然基質であるＬ−ロイシ
ンアミドを基質として用いた場合には、ヒトアミノペプ
チダーゼがすべて測定される。
ーゼ活性値を測定するものであり、ヒトアミノペプチダ
ーゼとしては、主として次の３種がよく知られている。
そして、これらのアミノペプチダーゼ活性値は、肝胆道
系疾患、肝癌、膵癌、妊娠等で上昇し、これらの診断の
指標として用いられているものである。 １．ロイシンアミノペプチダーゼ（leucinaminopeptida
se） ２．アリルアミダーゼ（ary1amidase） ３．シスチルアミノペプチダーゼ（cysty1 aminopeptid
ase） 一方、ＬＡＰ値の測定法としては、基質にＬ−ロイシン
−β−ナフチルアミド、Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニ
リド、Ｌ−ロイシル−β−カルボキシ−４−ヒドロキシ
アニリン等の合成基質や、Ｌ−ロイシンアミドのような
天然基質を用いる方法が知られている。これらのなかで
も合成其質を用いたＬＡＰ測定が最も一般的ではある
が、合成其質を用いた測定では上記のヒトアミノペプチ
ダーゼのうち、特にアリルアミダーゼが感度高く測られ
るという特徴がある。一方、天然基質であるＬ−ロイシ
ンアミドを基質として用いた場合には、ヒトアミノペプ
チダーゼがすべて測定される。
【０００７】本発明者は今回、アリルアミダーゼ活性に
依存しないアミノペプチダーゼ活性値、即ち基質として
Ｌ−ロイシンアミドまたはその塩を用いた場合のＬＡＰ
値（Ａ）から、基質として合成基質を用いた場合のＬＡ
Ｐ値（Ｂ）を差し引いた値がヒトのリンパ球異常と密接
に相関しており、リンパ球異常の測定指標となり得るこ
とを新たに見出したものである。
依存しないアミノペプチダーゼ活性値、即ち基質として
Ｌ−ロイシンアミドまたはその塩を用いた場合のＬＡＰ
値（Ａ）から、基質として合成基質を用いた場合のＬＡ
Ｐ値（Ｂ）を差し引いた値がヒトのリンパ球異常と密接
に相関しており、リンパ球異常の測定指標となり得るこ
とを新たに見出したものである。
【０００８】基質としてＬ−ロイシンアミドまたはその
塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）は、ウルトレート・Ｌ
ＡＰ（商品名、小野薬品工業株式会社製）のキットを用
いて測定することができる。また、基質として合成基質
を用いた場合のＬＡＰ値（Ｂ）は、ＬＡＰ−ＨＡ（商品
名、和光純薬工業株式会社製）、アクアオートカイノス
ＬＡＰ（商品名、カイノス株式会社製）等のキットを用
いて測定することができる。
塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）は、ウルトレート・Ｌ
ＡＰ（商品名、小野薬品工業株式会社製）のキットを用
いて測定することができる。また、基質として合成基質
を用いた場合のＬＡＰ値（Ｂ）は、ＬＡＰ−ＨＡ（商品
名、和光純薬工業株式会社製）、アクアオートカイノス
ＬＡＰ（商品名、カイノス株式会社製）等のキットを用
いて測定することができる。
【０００９】
【実施例】次に本発明のリンパ球異常の測定方法の実施
例をあげて、本発明を具体的に明らかにする。本発明は
これにより限定されるものではない。
例をあげて、本発明を具体的に明らかにする。本発明は
これにより限定されるものではない。
【００１０】試験例１ ヒト血清(1)〜(17)を試料とし、下記の方法で、基質と
してＬ−ロイシンアミドまたはその塩を用いた場合のＬ
ＡＰ値（Ａ）、基質として合成基質を用いた場合のＬＡ
Ｐ値（Ｂ）、ＬＡＰ値（Ａ）−ＬＡＰ値（Ｂ）およびリ
ンパ球数を測定した。その結果を表１に示す。
してＬ−ロイシンアミドまたはその塩を用いた場合のＬ
ＡＰ値（Ａ）、基質として合成基質を用いた場合のＬＡ
Ｐ値（Ｂ）、ＬＡＰ値（Ａ）−ＬＡＰ値（Ｂ）およびリ
ンパ球数を測定した。その結果を表１に示す。
【００１１】基質としてＬ−ロイシンアミドまたはそ
の塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）の測定方法 小野薬品工業株式会社製の「ウルトレート・ＬＡＰ」
（基質試薬：Ｌ−ロイシンアミド塩酸、酵素試薬：ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元型，α−
ケトグルタル酸）を用いてＬＡＰ値（Ａ）を測定した。
の塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）の測定方法 小野薬品工業株式会社製の「ウルトレート・ＬＡＰ」
（基質試薬：Ｌ−ロイシンアミド塩酸、酵素試薬：ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元型，α−
ケトグルタル酸）を用いてＬＡＰ値（Ａ）を測定した。
【００１２】基質として合成基質を用いた場合のＬＡ
Ｐ値（Ｂ）の測定方法 和光純薬工業株式会社製の「ＬＡＰ−ＨＲ」（基質剤：
Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニリド塩酸塩）を用いてＬ
ＡＰ値（Ｂ）を測定した。
Ｐ値（Ｂ）の測定方法 和光純薬工業株式会社製の「ＬＡＰ−ＨＲ」（基質剤：
Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニリド塩酸塩）を用いてＬ
ＡＰ値（Ｂ）を測定した。
【００１３】リンパ球数の測定方法 シスメックス株式会社製の「ＳＥ−９０００」（ＲＦ／
ＤＣ検出方式）を用いてリンパ球数（／μｌ）を測定し
た。
ＤＣ検出方式）を用いてリンパ球数（／μｌ）を測定し
た。
【００１４】
【表１】 ―――――――――――――――――――――――――― 試料 LAP値(A) LAP値(B) (A)−(B) リンパ球数 No. (IU/l) (IU/l) （/μｌ） ―――――――――――――――――――――――――― (1) 120 159 -39 2889 (2) 114 128 -14 1176 (3) 323 160 163 630 (4) 230 161 69 798 (5) 106 111 -5 1140 (6) 111 124 -13 1085 (7) 134 101 33 288 (8) 171 125 46 270 (9) 276 357 -81 2040 (10) 107 123 -16 2575 (11) 136 171 -35 891 (12) 168 136 32 1487 (13) 110 129 -19 1032 (14) 103 139 -36 1236 (15) 164 218 -54 1582 (16) 167 145 22 864 (17) 131 30 101 876 ――――――――――――――――――――――――――
【００１５】表１の結果をもとに、ＬＡＰ値（Ａ）−Ｌ
ＡＰ値（Ｂ）と、リンパ球数との関係を示したのが図１
である。図１から、ＬＡＰ値（Ａ）−ＬＡＰ値（Ｂ）が
正の値をとる試料は、一例（試料(12)）を除いて負の値
をとる試料よりもリンパ球数が低下していることが分か
る。また、ＬＡＰ値（Ｂ）とリンパ球数との関係を図２
に示す。図２から、ＬＡＰ値（Ｂ）はリンパ球数と正の
相関を示すか、あるいは少なくともＬＡＰ値（Ｂ）の高
値はリンパ球数の低下を示唆するものではないことが分
かる。
ＡＰ値（Ｂ）と、リンパ球数との関係を示したのが図１
である。図１から、ＬＡＰ値（Ａ）−ＬＡＰ値（Ｂ）が
正の値をとる試料は、一例（試料(12)）を除いて負の値
をとる試料よりもリンパ球数が低下していることが分か
る。また、ＬＡＰ値（Ｂ）とリンパ球数との関係を図２
に示す。図２から、ＬＡＰ値（Ｂ）はリンパ球数と正の
相関を示すか、あるいは少なくともＬＡＰ値（Ｂ）の高
値はリンパ球数の低下を示唆するものではないことが分
かる。
【００１６】以上のことから、リンパ球の状態は、ＬＡ
Ｐ値（Ａ）とＬＡＰ値（Ｂ）の差異から測定することが
可能であることが分かる。
Ｐ値（Ａ）とＬＡＰ値（Ｂ）の差異から測定することが
可能であることが分かる。
【００１７】試験例２〜４ 下記のヒト血清(18)〜(20)を試料とし、上記した方法
で、基質としてＬ−ロイシンアミドまたはその塩を用い
た場合のＬＡＰ値（Ａ）、基質として合成基質を用いた
場合のＬＡＰ値（Ｂ）およびリンパ球数を経時で測定し
た。測定日数はそれぞれ、ヒト血清(18)については２４
０日、ヒト血清(19)については８０日、ヒト血清(20)に
ついては４０日とした。
で、基質としてＬ−ロイシンアミドまたはその塩を用い
た場合のＬＡＰ値（Ａ）、基質として合成基質を用いた
場合のＬＡＰ値（Ｂ）およびリンパ球数を経時で測定し
た。測定日数はそれぞれ、ヒト血清(18)については２４
０日、ヒト血清(19)については８０日、ヒト血清(20)に
ついては４０日とした。
【００１８】 ヒト血清(18)：２６歳，女，全身性エリテマトーデス ヒト血清(19)：４６歳，女，全身性エリテマトーデス ヒト血清(20)：４４歳，女，全身性エリテマトーデス
【００１９】得られたＬＡＰ値（Ａ）とリンパ球数との
関係を図３〜図５に示す。図３〜図５から、リンパ球数
の減少時には、ＬＡＰ値（Ａ）は顕著に増加しているこ
とが分かる。なお、ＬＡＰ値（Ｂ）については、いずれ
も５０〜１０５の範囲内で推移した。
関係を図３〜図５に示す。図３〜図５から、リンパ球数
の減少時には、ＬＡＰ値（Ａ）は顕著に増加しているこ
とが分かる。なお、ＬＡＰ値（Ｂ）については、いずれ
も５０〜１０５の範囲内で推移した。
【００２０】
【発明の効果】以上説明したように、本発明のリンパ球
異常の測定方法によれば、リンパ球異常を液性成分を用
いて測定できるので、検体の処理は通常遠沈のみで、検
体量も少量でよく、保存も簡単で、一度に大量の検体を
簡便に測定することができる。
異常の測定方法によれば、リンパ球異常を液性成分を用
いて測定できるので、検体の処理は通常遠沈のみで、検
体量も少量でよく、保存も簡単で、一度に大量の検体を
簡便に測定することができる。
【図１】試料(1)〜(17)のＬＡＰ値（Ａ）−ＬＡＰ値
（Ｂ）と、リンパ球数との関係を示す図である。
（Ｂ）と、リンパ球数との関係を示す図である。
【図２】試料(1)〜(17)のＬＡＰ値（Ｂ）と、リンパ球
数との関係を示す図である。
数との関係を示す図である。
【図３】経時におけるＬＡＰ値（Ａ）とリンパ球数との
関係の一例を示す図である。
関係の一例を示す図である。
【図４】経時におけるＬＡＰ値（Ａ）とリンパ球数との
関係の別の一例を示す図である。
関係の別の一例を示す図である。
【図５】経時におけるＬＡＰ値（Ａ）とリンパ球数との
関係のさらに別の一例を示す図である。
関係のさらに別の一例を示す図である。
Claims (3)
- 【請求項１】 アリルアミダーゼ活性に依存しないアミ
ノペプチダーゼ活性値を膠原病に伴うリンパ球数低下の
指標として用いることを特徴とするリンパ球異常の測定
方法。 - 【請求項２】 アリルアミダーゼ活性に依存しないアミ
ノペプチダーゼ活性値が、基質としてＬ−ロイシンアミ
ドまたはその塩を用いた場合のＬＡＰ値（Ａ）から、基
質として合成基質を用いた場合のＬＡＰ値（Ｂ）を差し
引いた値であるものとする請求項１記載のリンパ球異常
の測定方法。 - 【請求項３】 合成基質が、Ｌ−ロイシル−β−ナフチ
ルアミド、Ｌ−ロイシル−ｐ−ニトロアニリド、Ｌ−ロ
イシル−ｐ−ジエチルニトロアニリド、Ｌ−ロイシル−
３，５−ジブロム−４−ヒドロキシアニリド、Ｌ−ロイ
シル−ｐ−ジスルホプロピルアミノアニリドまたはＬ−
ロイシル−β−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリンで
ある請求項２記載のリンパ球異常の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP37580398A JP3210295B2 (ja) | 1998-12-17 | 1998-12-17 | リンパ球異常の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP37580398A JP3210295B2 (ja) | 1998-12-17 | 1998-12-17 | リンパ球異常の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000175697A JP2000175697A (ja) | 2000-06-27 |
| JP3210295B2 true JP3210295B2 (ja) | 2001-09-17 |
Family
ID=18506090
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP37580398A Expired - Lifetime JP3210295B2 (ja) | 1998-12-17 | 1998-12-17 | リンパ球異常の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3210295B2 (ja) |
-
1998
- 1998-12-17 JP JP37580398A patent/JP3210295B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2000175697A (ja) | 2000-06-27 |
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