JP2951889B2 - Ｂ群溶血性連鎖球菌用培地 - Google Patents
Ｂ群溶血性連鎖球菌用培地Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ベータ型溶血性連
鎖球菌のうちのＢ群溶血性連鎖球菌用の培地に関するも
のであり、詳細には、Ｂ群溶血性連鎖球菌（以下、ＧＢ
Ｓと称することがある）を特異的に検出することがで
き、またＧＢＳを増菌することのできる培地に関するも
のである。
鎖球菌のうちのＢ群溶血性連鎖球菌用の培地に関するも
のであり、詳細には、Ｂ群溶血性連鎖球菌（以下、ＧＢ
Ｓと称することがある）を特異的に検出することがで
き、またＧＢＳを増菌することのできる培地に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】妊婦の膣内にＧＢＳが存在すると、出産
時に、新生児の約１〜２％が感染し、肺炎，敗血症，化
膿性髄膜炎等の疾病を発生して、重篤な場合には死に至
ったり、または後遺症を残すことがある。その死亡例や
後遺症を残す例は、罹患した新生児の約２５％にも及
ぶ。
時に、新生児の約１〜２％が感染し、肺炎，敗血症，化
膿性髄膜炎等の疾病を発生して、重篤な場合には死に至
ったり、または後遺症を残すことがある。その死亡例や
後遺症を残す例は、罹患した新生児の約２５％にも及
ぶ。
【０００３】ＧＢＳの検査法として現在汎用されている
方法は、血液寒天培地を用いた分離培養法であり、該方
法では、検体を採取してきたスワブを血液寒天培地に塗
布し、二酸化炭素暴露下で２４時間以上培養を行い、そ
の後グラム染色等によりコロニーが溶血性連鎖球菌か否
かを調べ、次にそれがＢ群か否かを同定している（従来
法）。他に、抗原抗体反応を利用したラテックス（La
tex ）凝集法（従来法）、或いはニューグラナダ培地
を用いる検査法（JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,A
pr.1992 年,1019 〜1021頁）（従来法）が知られてお
り、該従来法は検体をニューグラナダ培地で好気的に
約１２時間培養し、ＧＢＳが存在すればオレンジ色を呈
する。
方法は、血液寒天培地を用いた分離培養法であり、該方
法では、検体を採取してきたスワブを血液寒天培地に塗
布し、二酸化炭素暴露下で２４時間以上培養を行い、そ
の後グラム染色等によりコロニーが溶血性連鎖球菌か否
かを調べ、次にそれがＢ群か否かを同定している（従来
法）。他に、抗原抗体反応を利用したラテックス（La
tex ）凝集法（従来法）、或いはニューグラナダ培地
を用いる検査法（JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,A
pr.1992 年,1019 〜1021頁）（従来法）が知られてお
り、該従来法は検体をニューグラナダ培地で好気的に
約１２時間培養し、ＧＢＳが存在すればオレンジ色を呈
する。
【０００４】妊婦がＧＢＳを有するか否かの検査につい
ては、現在の医療現場では、妊娠２６週目及び３０週目
に妊婦の膣内からサンプルを採取し、上記従来法によ
ってＧＢＳの有無を同定しており、この２回の結果に基
づき出産時の菌の有無を予測し、新生児の発病予防の為
に抗生物質を注射または局所投与するか否かを決定して
いる。
ては、現在の医療現場では、妊娠２６週目及び３０週目
に妊婦の膣内からサンプルを採取し、上記従来法によ
ってＧＢＳの有無を同定しており、この２回の結果に基
づき出産時の菌の有無を予測し、新生児の発病予防の為
に抗生物質を注射または局所投与するか否かを決定して
いる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記２回の検
査結果では出産時の菌の有無を必ずしも正確に予測でき
る訳ではなく、例えば仮に妊娠２６週目及び３０週目に
陰性であったとしても、出産時に陽性となっている場合
もある。
査結果では出産時の菌の有無を必ずしも正確に予測でき
る訳ではなく、例えば仮に妊娠２６週目及び３０週目に
陰性であったとしても、出産時に陽性となっている場合
もある。
【０００６】従って、早い時期に検査をするというので
はなく、出産時（分娩直前）に検査をすることが望まれ
ているが、上記従来法では、前述の様に、検査に長時
間（２４時間以上）を要し、陣痛が起こってから検査を
行ったのでは、遅きに失する。通常、陣痛が起こってか
ら分娩までの時間は、１０〜２５時間であるから、１０
時間以内に検査結果の出る方法が望まれている。また切
迫早産や破水したときの様に、予めの検査をしておけな
い場合があることからも、短時間で結果の出る検査法が
望まれている。
はなく、出産時（分娩直前）に検査をすることが望まれ
ているが、上記従来法では、前述の様に、検査に長時
間（２４時間以上）を要し、陣痛が起こってから検査を
行ったのでは、遅きに失する。通常、陣痛が起こってか
ら分娩までの時間は、１０〜２５時間であるから、１０
時間以内に検査結果の出る方法が望まれている。また切
迫早産や破水したときの様に、予めの検査をしておけな
い場合があることからも、短時間で結果の出る検査法が
望まれている。
【０００７】また、一般に２５％の妊婦がＧＢＳを保菌
していると言われているにもかかわらず、従来法で
は、１０％の検出率を示すに止まるという検査施設もあ
り、テクニカル誤差が大きいという問題もある。
していると言われているにもかかわらず、従来法で
は、１０％の検出率を示すに止まるという検査施設もあ
り、テクニカル誤差が大きいという問題もある。
【０００８】一方、上記従来法は、検査結果を３分で
出すことができ、迅速な方法ではあるが、ＧＢＳが１０
6 個以上存在しないと陽性として表れず、感度が悪いと
いう問題がある。
出すことができ、迅速な方法ではあるが、ＧＢＳが１０
6 個以上存在しないと陽性として表れず、感度が悪いと
いう問題がある。
【０００９】新生児が垂直感染でＧＢＳ感染を起こした
症例について、妊婦膣内のＧＢＳ菌量（個／スワブ）を
調査した結果によると、感染例のうちの２５％がＧＢＳ
を１０6 個／スワブ有し、２５％が１０4 〜１０5 個／
スワブ有し、残る５０％が１０3 個／スワブ以下である
と出ており、この結果は、菌量の多寡と感染の危険の間
には必ずしも相関が認められないことを示している。
症例について、妊婦膣内のＧＢＳ菌量（個／スワブ）を
調査した結果によると、感染例のうちの２５％がＧＢＳ
を１０6 個／スワブ有し、２５％が１０4 〜１０5 個／
スワブ有し、残る５０％が１０3 個／スワブ以下である
と出ており、この結果は、菌量の多寡と感染の危険の間
には必ずしも相関が認められないことを示している。
【００１０】従って上記従来法の様に、ＧＢＳ１０6
個未満で、偽陰性という判定結果が出るときは、抗生物
質の投与を行わないので、却って感染を起こす恐れが強
いという問題がある。
個未満で、偽陰性という判定結果が出るときは、抗生物
質の投与を行わないので、却って感染を起こす恐れが強
いという問題がある。
【００１１】他方、上記従来法は呈色の有無により判
定するものであるが、発色が鈍く、判定し難いという問
題がある。加えて培地の安定性が悪く、約半年で使用不
可能となる上に、高価であるといった問題もある。ま
た、馬血清を使用していることから、ロット毎のばらつ
きが大きく、一定した判定基準を定め難いものであっ
た。
定するものであるが、発色が鈍く、判定し難いという問
題がある。加えて培地の安定性が悪く、約半年で使用不
可能となる上に、高価であるといった問題もある。ま
た、馬血清を使用していることから、ロット毎のばらつ
きが大きく、一定した判定基準を定め難いものであっ
た。
【００１２】本発明は以上の問題に鑑みてなされたもの
であり、ＧＢＳの検出感度が良く、且つ１０時間以内と
いう様に早く同定することができ、しかも判定が容易で
あり、加えて培地成分が一定しており、また安定性が良
く安価なＢ群溶血性連鎖球菌用培地を提供することを目
的とする。
であり、ＧＢＳの検出感度が良く、且つ１０時間以内と
いう様に早く同定することができ、しかも判定が容易で
あり、加えて培地成分が一定しており、また安定性が良
く安価なＢ群溶血性連鎖球菌用培地を提供することを目
的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明に係るＢ群溶血性
連鎖球菌用培地は、Ｄ−グルコース，ピルビン酸Ｎａ，
ＭｇＳＯ4 ，メトトレキサート，ＧＢＳに対して不活性
な抗菌剤，獣肉由来のペプトン，可溶性でんぷん，及び
リン酸ＭＯＰＳ緩衝液を含有し、馬血清を含まないもの
であることを要旨とする。
連鎖球菌用培地は、Ｄ−グルコース，ピルビン酸Ｎａ，
ＭｇＳＯ4 ，メトトレキサート，ＧＢＳに対して不活性
な抗菌剤，獣肉由来のペプトン，可溶性でんぷん，及び
リン酸ＭＯＰＳ緩衝液を含有し、馬血清を含まないもの
であることを要旨とする。
【００１４】上記本発明に係るＢ群溶血性連鎖球菌用培
地は、ＧＢＳを良好に発育させることができ、且つＧＢ
Ｓの存在により、色素を産出してオレンジ〜赤橙色に発
色するものである。しかもこの発色による判定は、１０
時間以内に行うことができるものである。上記従来法
は、本発明のＢ群溶血性連鎖球菌用培地とよく似た培地
組成を有するが、本発明の培地は、従来法と異なり、
馬血清を含有しない。
地は、ＧＢＳを良好に発育させることができ、且つＧＢ
Ｓの存在により、色素を産出してオレンジ〜赤橙色に発
色するものである。しかもこの発色による判定は、１０
時間以内に行うことができるものである。上記従来法
は、本発明のＢ群溶血性連鎖球菌用培地とよく似た培地
組成を有するが、本発明の培地は、従来法と異なり、
馬血清を含有しない。
【００１５】そもそも培地は、発育させたい菌に夫々適
した組成とするものであり、発育させる対照であるＧＢ
Ｓが溶血性連鎖球菌であることから、何らかの血清を培
地に用いることが常識とされていた。そこで従来法で
は、血清のうち、比較的安価で入手し易い馬血清を用い
ていた。
した組成とするものであり、発育させる対照であるＧＢ
Ｓが溶血性連鎖球菌であることから、何らかの血清を培
地に用いることが常識とされていた。そこで従来法で
は、血清のうち、比較的安価で入手し易い馬血清を用い
ていた。
【００１６】ところが今回、馬血清を含有しない培地で
あっても、ＧＢＳが良好に発育することを見い出したの
である。またＧＢＳが存在する場合に発色するという点
に関しても、馬血清が不要であることを見い出した。一
般に、馬血清は、ペプトンに含まれる有害成分や、寒天
中の不飽和脂肪酸等といった培地の有害成分を中和する
働きがあると考えられていたが、この様な中和の働きも
ＧＢＳにとっては必要がないことが分かった。
あっても、ＧＢＳが良好に発育することを見い出したの
である。またＧＢＳが存在する場合に発色するという点
に関しても、馬血清が不要であることを見い出した。一
般に、馬血清は、ペプトンに含まれる有害成分や、寒天
中の不飽和脂肪酸等といった培地の有害成分を中和する
働きがあると考えられていたが、この様な中和の働きも
ＧＢＳにとっては必要がないことが分かった。
【００１７】しかも、本発明の培地は上記従来法に比
べて早期（４〜５時間）に明瞭な発色が表れ、また培地
本来の色と発色後の色との違いが明確であって判定し易
いものである。また、従来法の様に個々の馬血清の成
分の違いに左右されることがないから、ロット毎の変動
が少なく一定したの培地を提供できる様になった。加え
て、劣化し易い馬血清を含有しないので、１０カ月以上
もの長期間の保存にも耐え得る培地にすることができ
た。
べて早期（４〜５時間）に明瞭な発色が表れ、また培地
本来の色と発色後の色との違いが明確であって判定し易
いものである。また、従来法の様に個々の馬血清の成
分の違いに左右されることがないから、ロット毎の変動
が少なく一定したの培地を提供できる様になった。加え
て、劣化し易い馬血清を含有しないので、１０カ月以上
もの長期間の保存にも耐え得る培地にすることができ
た。
【００１８】＜実験１＞まず、本発明に係るＢ群溶血性
連鎖球菌用培地について、ＧＢＳの発育性及び発色性に
関する実験を以下に示す。実験１に用いる本発明に係る
培地は、下記の成分組成のものである（以下、培地No.
１と称す）。該培地No. １自身の色は透明の薄黄色であ
る。 Ｄ−グルコース：０．２５重量％ ピルビン酸Ｎａ：０．１重量％ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ：０．０４１重量％ メトトレキサート：０．０００６重量％ クリスタルバイオレット：０．００００２重量％ 硫酸コリスチン：０．０００５重量％ メトロニダゾール（Metronidazole ；2-メチル-5- ニト
ロイミダゾール-1-エタノール）：０．００１重量％ 寒天：０．３重量％ プロテオースペプトンNo. ３：２．５重量％ 可溶性でんぷん：２重量％ ＭＯＰＳ（4-Morpholinepropanesulfonic acid）：１．
１重量％ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ：０．８５重量％ イーストエキス：０．２重量％ 蒸留水：残部
連鎖球菌用培地について、ＧＢＳの発育性及び発色性に
関する実験を以下に示す。実験１に用いる本発明に係る
培地は、下記の成分組成のものである（以下、培地No.
１と称す）。該培地No. １自身の色は透明の薄黄色であ
る。 Ｄ−グルコース：０．２５重量％ ピルビン酸Ｎａ：０．１重量％ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ：０．０４１重量％ メトトレキサート：０．０００６重量％ クリスタルバイオレット：０．００００２重量％ 硫酸コリスチン：０．０００５重量％ メトロニダゾール（Metronidazole ；2-メチル-5- ニト
ロイミダゾール-1-エタノール）：０．００１重量％ 寒天：０．３重量％ プロテオースペプトンNo. ３：２．５重量％ 可溶性でんぷん：２重量％ ＭＯＰＳ（4-Morpholinepropanesulfonic acid）：１．
１重量％ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ：０．８５重量％ イーストエキス：０．２重量％ 蒸留水：残部
【００１９】尚、上記クリスタルバイオレットはグラム
陽性菌に対して抗菌性を示し、硫酸コリスチンはグラム
陰性菌に対して抗菌性を示し、またメトロニダゾールは
嫌気性菌に抗菌性を示すものであり、これらはもとより
ＧＢＳに対して不活性な抗菌剤である。また、プロテオ
ースペプトンNo. ３（Difco 社製）は獣肉由来のペプト
ンである。
陽性菌に対して抗菌性を示し、硫酸コリスチンはグラム
陰性菌に対して抗菌性を示し、またメトロニダゾールは
嫌気性菌に抗菌性を示すものであり、これらはもとより
ＧＢＳに対して不活性な抗菌剤である。また、プロテオ
ースペプトンNo. ３（Difco 社製）は獣肉由来のペプト
ンである。
【００２０】調製した上記培地No. １を試験管に入れ、
下記表１に示す菌株を１０5 個接種して培養し、これら
の菌の発育の有無、及び発色（オレンジ〜赤橙色）の有
無について調べた。その結果を表１に併せて示す。尚、
上記培養は３７℃で２４時間行った。本実験１では、菌
株No. １を２５株、菌株No. ２〜５を５株について実験
し、菌株No. ６〜１０は標準菌株であることから、その
１株について実験を行った。
下記表１に示す菌株を１０5 個接種して培養し、これら
の菌の発育の有無、及び発色（オレンジ〜赤橙色）の有
無について調べた。その結果を表１に併せて示す。尚、
上記培養は３７℃で２４時間行った。本実験１では、菌
株No. １を２５株、菌株No. ２〜５を５株について実験
し、菌株No. ６〜１０は標準菌株であることから、その
１株について実験を行った。
【００２１】
【表１】
【００２２】上記表１から分かる様に、ＧＢＳ以外の菌
類のうち、グラム陰性菌については発育が見られず、ま
たグラム陽性菌は発育するものの発色はしなかった。ま
たカンジダ（真菌）も発育するものの発色はしなかっ
た。またＧＢＳ以外の溶血性連鎖状球菌、例えばＡ群や
Ｄ群溶血性連鎖球菌についても、発育するが、発色しな
かった。以上の結果から、上記培地No. １は、ＧＢＳを
発育し、またＧＢＳにより特異的に発色することが分か
る。
類のうち、グラム陰性菌については発育が見られず、ま
たグラム陽性菌は発育するものの発色はしなかった。ま
たカンジダ（真菌）も発育するものの発色はしなかっ
た。またＧＢＳ以外の溶血性連鎖状球菌、例えばＡ群や
Ｄ群溶血性連鎖球菌についても、発育するが、発色しな
かった。以上の結果から、上記培地No. １は、ＧＢＳを
発育し、またＧＢＳにより特異的に発色することが分か
る。
【００２３】尚、上述の様に、発育しない菌がある理由
は、含有されている抗菌剤によるものである。上記の様
に、ＧＢＳに対して不活性な抗菌剤としては、クリスタ
ルバイオレット，硫酸コリスチン，メトロニダゾールが
推奨され、これら抗菌剤群から１種以上を選択して用い
ると良い。
は、含有されている抗菌剤によるものである。上記の様
に、ＧＢＳに対して不活性な抗菌剤としては、クリスタ
ルバイオレット，硫酸コリスチン，メトロニダゾールが
推奨され、これら抗菌剤群から１種以上を選択して用い
ると良い。
【００２４】＜実験２＞次に、本発明に係るＢ群溶血性
連鎖球菌用培地に関して、ＧＢＳの検出感度についての
実験を示す。実験２においては、上記実験１と同様の培
地No. １を用い、該培地No. １を試験管に入れ、下記表
２の通り１０6 個，１０5 個，１０4 個，１０3 個，１
０2個，１０個以下のＧＢＳを夫々の試験管に接種し、
３７℃で培養した。これらがオレンジないし赤橙色に発
色するまでの時間を表２に示す。
連鎖球菌用培地に関して、ＧＢＳの検出感度についての
実験を示す。実験２においては、上記実験１と同様の培
地No. １を用い、該培地No. １を試験管に入れ、下記表
２の通り１０6 個，１０5 個，１０4 個，１０3 個，１
０2個，１０個以下のＧＢＳを夫々の試験管に接種し、
３７℃で培養した。これらがオレンジないし赤橙色に発
色するまでの時間を表２に示す。
【００２５】
【表２】
【００２６】表２から分かる様に、１０3 個以上のＧＢ
Ｓが存在する場合には、１０時間の培養で判定すること
ができ、またたとえＧＢＳが１０個以下の場合であって
も、１５〜２４時間培養することにより検出することが
できる。尚、ＧＢＳ菌株によっては早く発色する株があ
り、１０3 個未満であっても１０時間以内に判定が可能
であることが、他の実験により確認されている。
Ｓが存在する場合には、１０時間の培養で判定すること
ができ、またたとえＧＢＳが１０個以下の場合であって
も、１５〜２４時間培養することにより検出することが
できる。尚、ＧＢＳ菌株によっては早く発色する株があ
り、１０3 個未満であっても１０時間以内に判定が可能
であることが、他の実験により確認されている。
【００２７】＜実験３＞次に、本発明に係る培地成分中
の、獣肉由来のペプトンの作用に関する実験を示す。上
記培地No. １の成分のうちプロテオースペプトンNo. ３
（獣肉由来のペプトン）に代えて、下記表３に示す各種
ペプトン（Becton and Dickenson社製）を２５重量％含
有させて培地を調製した。尚、トリプチケースペプトン
は牛乳由来のペプトンで、ファイトンペプトンは大豆由
来のペプトンであり、ポリペプトンは獣肉及び牛乳の混
合物から得られたペプトンである。これら各培地にＧＢ
Ｓを夫々１０7 個，１０5 個，１０3 個接種し、３７℃
で１０時間培養した。その後、菌の発育及び呈色の状態
を観察し判定した。その結果を表３に示す。
の、獣肉由来のペプトンの作用に関する実験を示す。上
記培地No. １の成分のうちプロテオースペプトンNo. ３
（獣肉由来のペプトン）に代えて、下記表３に示す各種
ペプトン（Becton and Dickenson社製）を２５重量％含
有させて培地を調製した。尚、トリプチケースペプトン
は牛乳由来のペプトンで、ファイトンペプトンは大豆由
来のペプトンであり、ポリペプトンは獣肉及び牛乳の混
合物から得られたペプトンである。これら各培地にＧＢ
Ｓを夫々１０7 個，１０5 個，１０3 個接種し、３７℃
で１０時間培養した。その後、菌の発育及び呈色の状態
を観察し判定した。その結果を表３に示す。
【００２８】
【表３】
【００２９】表３から分かる様に、菌の発育に関して
は、培地No. ３は菌量１０3 個の場合にやや劣るもの
の、他は良好に発育した。しかし発色に関しては、培地
No. ４が菌量１０7 個の場合に少々発色するものの、培
地No. ２，３は全く発色しなかった。即ち、明瞭に発色
したものは培地No. １のみであった。
は、培地No. ３は菌量１０3 個の場合にやや劣るもの
の、他は良好に発育した。しかし発色に関しては、培地
No. ４が菌量１０7 個の場合に少々発色するものの、培
地No. ２，３は全く発色しなかった。即ち、明瞭に発色
したものは培地No. １のみであった。
【００３０】尚、３７℃での培養を更に１４時間行った
ところ（合計２４時間）、培地No.１では菌量１０3 個
の場合についても、鮮やかな赤橙色（判定：プラス３）
の程度にまで発色したが、培地No. ２〜４については上
記１０時間培養の場合（表３参照）と同じ発色状態のま
まであった。以上の結果から、獣肉由来のペプトンの存
在によって良好に発色することが分かる。
ところ（合計２４時間）、培地No.１では菌量１０3 個
の場合についても、鮮やかな赤橙色（判定：プラス３）
の程度にまで発色したが、培地No. ２〜４については上
記１０時間培養の場合（表３参照）と同じ発色状態のま
まであった。以上の結果から、獣肉由来のペプトンの存
在によって良好に発色することが分かる。
【００３１】＜実験４＞次に、本発明に係る培地成分中
の可溶性でんぷんの作用に関する実験を示す。上記培地
No. １の可溶性でんぷんの含有量は２重量％であるが、
これを１重量％にした培地（培地No. ５）、３重量％に
した培地（培地No. ６）、及び０重量％にした培地（培
地No. ７）を調製し、これらについて下記表４の通りＧ
ＢＳを接種し、３７℃で１０時間培養後、及び２４時間
培養後の発育及び発色について観察した。その結果を表
４に示す。
の可溶性でんぷんの作用に関する実験を示す。上記培地
No. １の可溶性でんぷんの含有量は２重量％であるが、
これを１重量％にした培地（培地No. ５）、３重量％に
した培地（培地No. ６）、及び０重量％にした培地（培
地No. ７）を調製し、これらについて下記表４の通りＧ
ＢＳを接種し、３７℃で１０時間培養後、及び２４時間
培養後の発育及び発色について観察した。その結果を表
４に示す。
【００３２】
【表４】
【００３３】以上の結果から、可溶性でんぷんは発色を
早く生じさせる為に有効な成分であることが分かる。可
溶性でんぷんの含有量としては、１〜３重量％が好まし
く、より好ましくは２重量％である。上記実験３，４か
ら分かる様に、獣肉由来のペプトン，及び可溶性でんぷ
んは、発色に関与する成分であり、またメトトレキサー
トも発色に関与する成分であって、これらの成分の存在
により、鮮明な発色が得られる。
早く生じさせる為に有効な成分であることが分かる。可
溶性でんぷんの含有量としては、１〜３重量％が好まし
く、より好ましくは２重量％である。上記実験３，４か
ら分かる様に、獣肉由来のペプトン，及び可溶性でんぷ
んは、発色に関与する成分であり、またメトトレキサー
トも発色に関与する成分であって、これらの成分の存在
により、鮮明な発色が得られる。
【００３４】＜寒天について＞本発明に係るＢ群溶血性
連鎖球菌用培地には、寒天を含有させることが好まし
く、例えば上記培地No. １の様に、寒天を含有させて半
流動の培地として用いることで、発色しているか否かの
観察・判定が容易となる。即ち、液体の培地では、発色
部分が全体の培地により薄められ、薄い色として表れる
ことから、発色の有無が見分け難いといった不具合があ
り、一方、流動性のない固形培地では、検体を採取した
スワブ全体を、培地に塗布するのが困難である為、採取
した菌を取り逃がす恐れがあるからである。
連鎖球菌用培地には、寒天を含有させることが好まし
く、例えば上記培地No. １の様に、寒天を含有させて半
流動の培地として用いることで、発色しているか否かの
観察・判定が容易となる。即ち、液体の培地では、発色
部分が全体の培地により薄められ、薄い色として表れる
ことから、発色の有無が見分け難いといった不具合があ
り、一方、流動性のない固形培地では、検体を採取した
スワブ全体を、培地に塗布するのが困難である為、採取
した菌を取り逃がす恐れがあるからである。
【００３５】＜実験５＞本発明に係るＢ群溶血性連鎖球
菌用培地は、イーストエキス及び／または肉エキスを含
有することが好ましく、これら成分に関する実験を以下
に示す。上記培地No. １の０．２重量％イーストエキス
に代えて、下記表５に示す様に、イーストエキスまたは
肉エキスを含有させた培地を調製した。これら各培地に
ＧＢＳを下記表５の通りを接種し、３７℃で１０時間培
養した後、菌の発育及び発色について観察した。
菌用培地は、イーストエキス及び／または肉エキスを含
有することが好ましく、これら成分に関する実験を以下
に示す。上記培地No. １の０．２重量％イーストエキス
に代えて、下記表５に示す様に、イーストエキスまたは
肉エキスを含有させた培地を調製した。これら各培地に
ＧＢＳを下記表５の通りを接種し、３７℃で１０時間培
養した後、菌の発育及び発色について観察した。
【００３６】
【表５】
【００３７】表５から分かる様に、イーストエキスを
０．２重量％以上、或いは肉エキスを０．５重量％以上
含有させることで、これらを含まないもの（培地No.
８）に比べ、発色がより明瞭に表れる様になり、ＧＢＳ
の有無の判定が一層容易となる。尚、心臓エキスや肝臓
エキスについても、上記肉エキスと同様に、０．５重量
％以上含有させることで、発色がより良好に表れること
を確認している。また、これらイーストエキスや肉エキ
スの両方を含有させた培地としても良い。
０．２重量％以上、或いは肉エキスを０．５重量％以上
含有させることで、これらを含まないもの（培地No.
８）に比べ、発色がより明瞭に表れる様になり、ＧＢＳ
の有無の判定が一層容易となる。尚、心臓エキスや肝臓
エキスについても、上記肉エキスと同様に、０．５重量
％以上含有させることで、発色がより良好に表れること
を確認している。また、これらイーストエキスや肉エキ
スの両方を含有させた培地としても良い。
【００３８】＜実験６＞次に、馬血清の有無による培地
の安定性に関する実験について示す。上記培地No. １の
イーストエキスに代えて、馬血清を５ml含有させた培地
（培地No. １４）、及びイーストエキス及び馬血清のい
ずれも含有しない培地（培地No. １５）を夫々調製し、
培地調製後１〜１０カ月経過したものを用いて、菌の発
育及び発色について観察した。尚、ＧＢＳの接種菌量は
１０5 個であり、３７℃で１０時間培養した。その結果
を下記表６に示す。
の安定性に関する実験について示す。上記培地No. １の
イーストエキスに代えて、馬血清を５ml含有させた培地
（培地No. １４）、及びイーストエキス及び馬血清のい
ずれも含有しない培地（培地No. １５）を夫々調製し、
培地調製後１〜１０カ月経過したものを用いて、菌の発
育及び発色について観察した。尚、ＧＢＳの接種菌量は
１０5 個であり、３７℃で１０時間培養した。その結果
を下記表６に示す。
【００３９】
【表６】
【００４０】表６から分かる様に、培地No. １４では、
菌の発育に関しては良好であるものの、発色に関して
は、３カ月経過後のものから呈色が鈍くなり、５カ月経
過後のものからは更に判定し難くなった。加えて、調製
直後の培地No. １４自身の色は半透明であるが、１カ月
経過後から透明感がなくなりはじめ、更に２カ月経過後
から白濁が培地全体に生じた為に、上述の如く呈色が鈍
くなったことに加え、呈色の有無の判定が一層困難なも
のであった。この様なことから培地No. １４の保存性が
悪いことが分かる。一方、培地No. １，１５は、菌の発
育及び発色共に、１０カ月経過後のものにおいても良好
であった。従って本発明のＢ群溶血性連鎖球菌用培地は
長期保存に耐え得るということが分かる。
菌の発育に関しては良好であるものの、発色に関して
は、３カ月経過後のものから呈色が鈍くなり、５カ月経
過後のものからは更に判定し難くなった。加えて、調製
直後の培地No. １４自身の色は半透明であるが、１カ月
経過後から透明感がなくなりはじめ、更に２カ月経過後
から白濁が培地全体に生じた為に、上述の如く呈色が鈍
くなったことに加え、呈色の有無の判定が一層困難なも
のであった。この様なことから培地No. １４の保存性が
悪いことが分かる。一方、培地No. １，１５は、菌の発
育及び発色共に、１０カ月経過後のものにおいても良好
であった。従って本発明のＢ群溶血性連鎖球菌用培地は
長期保存に耐え得るということが分かる。
【００４１】
【発明の実施の形態及び実施例】下記各成分を蒸留水１
リットルに溶解し、無菌的に培地No. １６を調製した。 Ｄ−グルコース：２．５ｇ ピルビン酸Ｎａ：１ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ：０．４１ｇ メトトレキサート：０．００６ｇ クリスタルバイオレット：０．０００２ｇ 硫酸コリスチン：０．００５ｇ メトロニダゾール（Metronidazole ）：０．０１ｇ 寒天：３ｇ プロテオースペプトンNo. ３：２５ｇ 可溶性でんぷん：２０ｇ ＭＯＰＳ（4-Morpholinepropanesulfonic acid）：１１
ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ：８．５ｇ イーストエキス：２ｇ
リットルに溶解し、無菌的に培地No. １６を調製した。 Ｄ−グルコース：２．５ｇ ピルビン酸Ｎａ：１ｇ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ：０．４１ｇ メトトレキサート：０．００６ｇ クリスタルバイオレット：０．０００２ｇ 硫酸コリスチン：０．００５ｇ メトロニダゾール（Metronidazole ）：０．０１ｇ 寒天：３ｇ プロテオースペプトンNo. ３：２５ｇ 可溶性でんぷん：２０ｇ ＭＯＰＳ（4-Morpholinepropanesulfonic acid）：１１
ｇ Ｎａ2 ＨＰＯ4 ：８．５ｇ イーストエキス：２ｇ
【００４２】上記培地No. １６は半流動状態のものであ
り、試験管に入れて用いることが推奨される。医療検査
現場での実際の使用にあたっては、検体を採取したスワ
ブを上記培地No. １６中に入れて引き上げることによっ
て、培地に菌を接種する。次に３７℃で１０時間培養
し、発色の有無を観察する。
り、試験管に入れて用いることが推奨される。医療検査
現場での実際の使用にあたっては、検体を採取したスワ
ブを上記培地No. １６中に入れて引き上げることによっ
て、培地に菌を接種する。次に３７℃で１０時間培養
し、発色の有無を観察する。
【００４３】培地No. １自身の色は透明の薄黄色であ
り、オレンジ〜赤橙色を呈していればＧＢＳ陽性であ
り、呈していなければＧＢＳ陰性である。この発色は明
瞭に表れ、また発色の有無を観察するという簡単な判定
であり、格別の熟練はいらない。この様に本発明に係る
培地を用いる検査手法は容易である。
り、オレンジ〜赤橙色を呈していればＧＢＳ陽性であ
り、呈していなければＧＢＳ陰性である。この発色は明
瞭に表れ、また発色の有無を観察するという簡単な判定
であり、格別の熟練はいらない。この様に本発明に係る
培地を用いる検査手法は容易である。
【００４４】尚、前述の様に、ＧＢＳは妊婦の約２５％
が保菌していると言われているが、上記培地No. １６を
用いて妊婦について検査したところ、同様に２５％のＧ
ＢＳ検出率であった。そして、本発明の培地で陽性とな
った検体を、更に抗原抗体反応による方法で詳細に同定
したところ、これらは全てＧＢＳであった。また陰性と
なった検体について、同じく抗原抗体反応による方法で
同定したところ、ＧＢＳは検出されなかった。従って本
発明に係る培地を用いた検査においては、偽陰性の恐れ
が少ないということが推定できる。
が保菌していると言われているが、上記培地No. １６を
用いて妊婦について検査したところ、同様に２５％のＧ
ＢＳ検出率であった。そして、本発明の培地で陽性とな
った検体を、更に抗原抗体反応による方法で詳細に同定
したところ、これらは全てＧＢＳであった。また陰性と
なった検体について、同じく抗原抗体反応による方法で
同定したところ、ＧＢＳは検出されなかった。従って本
発明に係る培地を用いた検査においては、偽陰性の恐れ
が少ないということが推定できる。
【００４５】
【発明の効果】本発明に係るＢ群溶血性連鎖球菌用培地
においては、Ｂ群溶血性連鎖球菌の検出感度が良く、し
かも発色が明瞭に表れるから判定が容易であり、加えて
陣痛が始まってから分娩までの間の短い時間（例えば１
０時間程度）で検査結果を出すことができる。従って、
陣痛が始まってから検査を行うことで、出産時点におけ
るＧＢＳの有無を確実に知ることができる。加えて、出
産時の１回の検査で十分とすることができることから、
従来の様に妊娠２６週目や３０週目の検査を不要にでき
る。
においては、Ｂ群溶血性連鎖球菌の検出感度が良く、し
かも発色が明瞭に表れるから判定が容易であり、加えて
陣痛が始まってから分娩までの間の短い時間（例えば１
０時間程度）で検査結果を出すことができる。従って、
陣痛が始まってから検査を行うことで、出産時点におけ
るＧＢＳの有無を確実に知ることができる。加えて、出
産時の１回の検査で十分とすることができることから、
従来の様に妊娠２６週目や３０週目の検査を不要にでき
る。
【００４６】更に、本発明に係る培地を用いて行う検査
手法は簡単であり、また判定が容易である。従ってテク
ニカル誤差がなくなるという効果もある。加えて、例え
ば従来法の様な特別な孵卵器（炭酸ガス孵卵器）を必
要とせず、病院等で通常使用されている孵卵器を用いて
培養を行うことができる。また、本発明に係る培地は、
ＧＢＳを良好に発育するから、増菌用培地としても用い
ることができる。
手法は簡単であり、また判定が容易である。従ってテク
ニカル誤差がなくなるという効果もある。加えて、例え
ば従来法の様な特別な孵卵器（炭酸ガス孵卵器）を必
要とせず、病院等で通常使用されている孵卵器を用いて
培養を行うことができる。また、本発明に係る培地は、
ＧＢＳを良好に発育するから、増菌用培地としても用い
ることができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:46） (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12N 1/20 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (6)
- 【請求項１】 Ｄ−グルコース，ピルビン酸Ｎａ，Ｍｇ
ＳＯ4 ，メトトレキサート，Ｂ群溶血性連鎖球菌に対し
て不活性な抗菌剤，獣肉由来のペプトン，可溶性でんぷ
ん，及びリン酸ＭＯＰＳ緩衝液を含有し、馬血清を含ま
ないものであることを特徴とするＢ群溶血性連鎖球菌用
培地。 - 【請求項２】 請求項１に記載の培地において、寒天を
含有し、前記抗菌剤が、クリスタルバイオレット，硫酸
コリスチン，メトロニダゾールよりなる群から選択され
る１種以上であるＢ群溶血性連鎖球菌用培地。 - 【請求項３】 請求項１または２に記載の培地に、イー
ストエキス及び／または肉エキスを含有するＢ群溶血性
連鎖球菌用培地。 - 【請求項４】 前記イーストエキスが０．２重量％以上
含有されるものである請求項３に記載のＢ群溶血性連鎖
球菌用培地。 - 【請求項５】 前記肉エキスが０．５重量％以上含有さ
れるものである請求項３または４に記載のＢ群溶血性連
鎖球菌用培地。 - 【請求項６】 前記可溶性でんぷんを１〜３重量％含有
する請求項１〜５のいずれかに記載のＢ群溶血性連鎖球
菌用培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13396096A JP2951889B2 (ja) | 1996-05-28 | 1996-05-28 | Ｂ群溶血性連鎖球菌用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13396096A JP2951889B2 (ja) | 1996-05-28 | 1996-05-28 | Ｂ群溶血性連鎖球菌用培地 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09313171A JPH09313171A (ja) | 1997-12-09 |
| JP2951889B2 true JP2951889B2 (ja) | 1999-09-20 |
Family
ID=15117109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13396096A Expired - Lifetime JP2951889B2 (ja) | 1996-05-28 | 1996-05-28 | Ｂ群溶血性連鎖球菌用培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2951889B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6130057A (en) * | 1999-09-28 | 2000-10-10 | Becton, Dickinson And Company | Method for differentiating microorganisms in a sample |
| CU23302A1 (es) | 2003-01-10 | 2008-07-24 | Ct Nac Biopreparados | Medio de cultivo selectivo para el aislamiento y detecciã"n de especies del gã0/00nero streptococcus |
| CN114645072B (zh) * | 2022-05-18 | 2022-08-30 | 江苏达伯药业有限公司 | 一种液态b群链球菌选择性显色培养基及其制备方法 |
-
1996
- 1996-05-28 JP JP13396096A patent/JP2951889B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09313171A (ja) | 1997-12-09 |
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