JP2777258B2 - Muramyl dipeptide-containing lipid membrane structure - Google Patents
Muramyl dipeptide-containing lipid membrane structureInfo
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Description
【発明の詳細な説明】 ＜産業上の利用分野＞ 本発明は、式（Ｉ） （式中、Ｑは総炭素数20〜60の脂肪酸残基を、ＡはＬ−
アラニン残基、Ｌ−セリン残基又はグリシン残基を、is
oG1nはイソグルタミン残基を意味する）で示されるムラ
ミルジペプチド誘導体、フォスファチジルグリセロール
及びコレステロールを膜構成成分として含有することを
特徴とする脂質膜構造体に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION <Industrial Application Field> The present invention relates to a compound of the formula (I) (Wherein Q represents a fatty acid residue having a total of 20 to 60 carbon atoms, and A represents L-
An alanine residue, an L-serine residue or a glycine residue is
oG1n means an isoglutamine residue), phosphatidylglycerol and cholesterol as the membrane constituents.
本発明の製剤は、脂質膜構造体としての安定性に優れ
たものである。The preparation of the present invention has excellent stability as a lipid membrane structure.
＜従来の技術＞ 式（Ｉ）のムラミルジペプチド誘導体を膜構成成分と
して含有する脂質膜構造体としては、特開昭61−282321
号のものが知られている。本製剤は、その膜中にインフ
ルエンザウイルスのHANA抗原も有しており、いわゆるビ
ロソームワクチンとして知られている。本製剤の膜構成
成分として具体的に開示されているものは、上記のHANA
抗原以外にはムラミルジペプチド誘導体にコレステロー
ル並びにレシチン又はジセチルフォスフェートの組合せ
が知られているのみで、式（Ｉ）のムラミルジペプチド
誘導体、フォスファチジルグリセロール及びコレステロ
ールの組合せは知られていない。<Prior Art> A lipid membrane structure containing a muramyl dipeptide derivative of the formula (I) as a membrane component is disclosed in JP-A-61-282321.
No. is known. This preparation also has the influenza virus HANA antigen in its membrane, and is known as a so-called virosome vaccine. What is specifically disclosed as a membrane component of the present formulation is the above HANA
Other than antigens, only combinations of cholesterol and lecithin or dicetyl phosphate to muramyl dipeptide derivatives are known, and combinations of muramyl dipeptide derivatives of formula (I), phosphatidylglycerol and cholesterol are not known. .
＜発明が解決しようとする問題点＞ 本発明者等は、式（Ｉ）のムラミルジペプチド誘導体
を膜構成成分として含有する脂質膜構造体について更に
安定なものを見出すべく鋭意検討した結果、本発明を完
成した。<Problems to be Solved by the Invention> The present inventors have conducted intensive studies to find a more stable lipid membrane structure containing the muramyl dipeptide derivative of the formula (I) as a membrane component. Completed the invention.
＜発明の構成＞ 本発明は、式（Ｉ）のムラミルジペプチド誘導体、フ
ォスファチジルグリセロール及びコレステロールを膜構
成成分として含有することを特徴とする脂質膜構造体に
関する。<Constitution of the Invention> The present invention relates to a lipid membrane structure comprising a muramyl dipeptide derivative of the formula (I), phosphatidylglycerol and cholesterol as membrane components.
式（Ｉ）の化合物中では、Ｑが総炭素数20〜40の分枝
状脂肪酸残基である化合物を好ましいものとしてあげる
ことができ、中でもＱが２−テトラデシルヘキサデカノ
イル基でＡがＬ−アラニン残基である化合物を特に好ま
しいものとしてあげることができる。Among the compounds of the formula (I), a compound in which Q is a branched fatty acid residue having a total of 20 to 40 carbon atoms can be mentioned as a preferable example, in which Q is a 2-tetradecylhexadecanoyl group and A is Compounds that are L-alanine residues are particularly preferred.
フォスファチジルグリセロールの使用量は、式（Ｉ）
の化合物に対し通常1/20〜20倍重量部、好ましくは1/4
〜２倍重量部であり、又コレステロールの使用量は式
（Ｉ）の化合物に対し通常1/20〜５倍重量部、好ましく
は1/4〜２倍重量部である。これらの三成分の組成比に
ついて最も好ましいいものは1:1:1（重量比）程度であ
る。The amount of phosphatidylglycerol used is determined by the formula (I)
Of the compound is usually 1/20 to 20 parts by weight, preferably 1/4
The amount of cholesterol is usually 1/20 to 5 parts by weight, preferably 1/4 to 2 parts by weight, relative to the compound of formula (I). The most preferable composition ratio of these three components is about 1: 1: 1 (weight ratio).
本発明の脂質膜構造体の例としては、リポソーム、ミ
セル、マイクロエマルジョン等を上げることができる。Examples of the lipid membrane structure of the present invention include liposomes, micelles, microemulsions and the like.
次に、本発明の脂質膜構造体の製造法について説明す
る。Next, a method for producing the lipid membrane structure of the present invention will be described.
まず、本発明にかかわるリポソーム製剤を製するに
は、通常のリポソームの製造法［細胞工学２巻、９号、
1136頁（1983年）］にしたがえばよい。一般には、式
（Ｉ）のムラミルジペプチド誘導体、フォスファチジル
グリセロール及びコレステロールの三成分を混合し、所
望によりトコフェロールの如き抗酸化剤等の添加剤を加
え、これをクロロホルム等の有機溶媒に溶かし、次いで
溶媒を留去して得られるリピッドフィルムにリン酸緩衝
液等の緩衝液を加え撹拌すればよい。得られるリポソー
ム分散液のpHは通常6.5〜8.0程度の中性付近に調整すれ
ばよい。又、本製造法においては所望により得られたリ
ポソームの分散液に超音波処理やゲル濾過等の処理を加
え、得られるリポソームの粒径を或る範囲に揃えてもよ
く、その場合には一般に100〜300nm付近でよい。First, in order to produce a liposome preparation according to the present invention, a conventional liposome production method [Cell Engineering Vol. 2, No. 9,
1136 (1983)]. In general, the three components of the muramyl dipeptide derivative of the formula (I), phosphatidyl glycerol and cholesterol are mixed, if necessary, an additive such as an antioxidant such as tocopherol is added, and this is dissolved in an organic solvent such as chloroform. Then, a buffer such as a phosphate buffer may be added to the lipid film obtained by distilling off the solvent, followed by stirring. The pH of the obtained liposome dispersion may be usually adjusted to about neutral pH of about 6.5 to 8.0. In the present production method, if desired, the dispersion of the liposome obtained may be subjected to a treatment such as ultrasonic treatment or gel filtration to adjust the particle size of the obtained liposome to a certain range. It may be around 100 to 300 nm.
更に、本発明にかかわるミセル及びマイクロエマルジ
ョンの製造法についても、通常の製造法にしたがえばよ
い。Furthermore, the method for producing micelles and microemulsions according to the present invention may be in accordance with a usual production method.
又、本発明の脂質膜構造体の膜中には、上述のHANA抗
原の如きウイルスの抗原やその他の抗原を組込ませるこ
とができ、このような製剤を製するには、特開昭61−28
2321号公報に開示された方法にしたがえばよい。この場
合、使用される抗原量は式（Ｉ）の化合物に対し、通常
1/300〜10倍重量部程度でよい。In addition, a virus antigen such as the above-mentioned HANA antigen or other antigens can be incorporated into the membrane of the lipid membrane structure of the present invention. 28
What is necessary is just to follow the method disclosed in JP-A-2321. In this case, the amount of the antigen used is usually based on the compound of the formula (I).
It may be about 1/300 to 10 parts by weight.
更に、本発明の脂質膜構造体中には、通常の薬物を含
有させることも可能であり、これを製するには時開昭61
−112021号公報に開示された方法にしたがえばよい。Further, the lipid membrane structure of the present invention can contain a usual drug.
The method disclosed in JP-A-1112021 may be followed.
＜発明の効果＞ 本発明の脂質膜構造体は、その分散液中の浸透圧を広
範囲に変化させた場合でも、極めて優れた安定性を示し
た。従って、本発明は、式（Ｉ）のムラミルジペプチド
誘導体を膜構成成分とする安定な脂質膜構造体として、
優れたものである。<Effect of the Invention> The lipid membrane structure of the present invention exhibited extremely excellent stability even when the osmotic pressure in the dispersion was changed over a wide range. Accordingly, the present invention provides a stable lipid membrane structure comprising the muramyl dipeptide derivative of the formula (I) as a membrane component.
It is excellent.
以下、本発明を更に実施例及び試験例により説明する
が、本発明はこれらにより限定されるものではない。Hereinafter, the present invention will be further described with reference to Examples and Test Examples, but the present invention is not limited thereto.
実施例 ６−Ｏ−（２−テトラデキシルヘキサデカノイル）−
Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタ
ミン（以下、B30−MDP）50mg、コレステロール50mg及び
フォスファチジルグリセロール50mgを混合し、クロロホ
ルム10mlに溶解した。次いで、ロータリーエバポレータ
ーを用い室温でクロロホルムを留去した。得られたリピ
ッドフィルムに100mMのグルコースを含むトリスEDTA緩
衝液（pH＝7.5）2mlを加えリポソームの分散液を得た。Example 6-O- (2-tetradexylhexadecanoyl)-
50 mg of N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine (hereinafter, B30-MDP), 50 mg of cholesterol and 50 mg of phosphatidylglycerol were mixed and dissolved in 10 ml of chloroform. Then, chloroform was distilled off at room temperature using a rotary evaporator. 2 ml of Tris EDTA buffer (pH = 7.5) containing 100 mM glucose was added to the obtained lipid film to obtain a liposome dispersion.
対照例 B30−MDP及びコレステロールを等量混合し実施例と同
様にしてリポソームの分解液を得た。Control Example B30-MDP and cholesterol were mixed in equal amounts to obtain a liposome degradation solution in the same manner as in Example.
試験例 グルコース濃度が25、30、50、60、100、150、200、
又は300mM濃度の溶液を各3ml用意し、それぞれに実施例
又は対照例のリポソーム分散液0.2mlを加えた。得られ
た溶液を１時間放置したのち430nmで各溶液の濁度を測
定した。得られた吸光度（Ａ）より（1/A）3/2を計算
し、これを糖のリポソーム内外の濃度比［（1/Cout）XC
in］にたいしプロットした。該二数値の間に正の直線関
係が得られる場合には、得られたリポソームは浸透圧の
変化に対し安定なことを示す（Bichim.Biophys.Acta,73
5,397（1983）参照）。結果を下表に示した。Test example Glucose concentration 25, 30, 50, 60, 100, 150, 200,
Alternatively, 3 ml of a 300 mM solution was prepared, and 0.2 ml of the liposome dispersion of the example or control was added to each. After leaving the obtained solutions for 1 hour, the turbidity of each solution was measured at 430 nm. From the obtained absorbance (A), (1 / A) 3/2 was calculated, and this was calculated as the concentration ratio of sugar inside and outside the liposome [(1 / C out ) XC
in ]. If a positive linear relationship is obtained between the two values, it indicates that the obtained liposome is stable against changes in osmotic pressure (Bichim. Biophys. Acta, 73
5 , 397 (1983)). The results are shown in the table below.
上表から明らかなように、実施例のリポソームは低張
から高張な範囲において正の直線関係を示すことから幅
広い浸透圧の変化に対し極めて安定であることが確認さ
れた。一方、対照例のリポソームは等張から高張な範囲
においてのみ安定であった。 As is clear from the above table, the liposomes of the examples show a positive linear relationship in the range from hypotonic to hypertonic, confirming that they are extremely stable to a wide range of changes in osmotic pressure. On the other hand, the liposome of the control was stable only in the isotonic to hypertonic range.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭61−282321（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 9/107,9/127 A61K 47/26 B01J 13/00,13/02 ＣＡ（ＳＴＮ)──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of the front page (56) References JP-A-61-282321 (JP, A) (58) Fields investigated (Int. Cl. 6 , DB name) A61K 9/107, 9/127 A61K 47 / 26 B01J 13 / 00,13 / 02 CA (STN)
Claims (1)
アラニン残基、Ｌ−セリン残基又はグリシン残基を、is
oG1nはイソグルタミン残基を意味する）で示されるムラ
ミルジペプチド誘導体、フォスファチジルグリセロール
及びコレステロールを膜構成成分として含有することを
特徴とする脂質膜構造体(1) Formula (I) (Wherein Q represents a fatty acid residue having a total of 20 to 60 carbon atoms, and A represents L-
An alanine residue, an L-serine residue or a glycine residue is
oG1n represents an isoglutamine residue), comprising a muramyl dipeptide derivative represented by the formula: phosphatidylglycerol and cholesterol as membrane components.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2062149A JP2777258B2 (en) | 1990-03-13 | 1990-03-13 | Muramyl dipeptide-containing lipid membrane structure |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP2062149A JP2777258B2 (en) | 1990-03-13 | 1990-03-13 | Muramyl dipeptide-containing lipid membrane structure |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03264521A JPH03264521A (en) | 1991-11-25 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0688911B2 (en) * | 1985-06-06 | 1994-11-09 | 国立予防衛生研究所長 | Influenza vaccine and method for producing the same |
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1990
- 1990-03-13 JP JP2062149A patent/JP2777258B2/en not_active Expired - Fee Related
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