JP2714629B2

JP2714629B2 - 粒子計数方法および装置

Info

Publication number: JP2714629B2
Application number: JP63068625A
Authority: JP
Inventors: 克彦木尾
Original assignee: 東亜医用電子株式会社
Priority date: 1988-03-23
Filing date: 1988-03-23
Publication date: 1998-02-16
Anticipated expiration: 2013-02-16
Also published as: JPH01240838A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、小粒子と大粒子とを懸濁させた測定用試料
を狭隘な通路で形成される検出領域に通過させ、その際
検出される粒子検出信号の個数をカウントし、測定用試
料中に含まれる粒子数を計数する方法および装置におい
て、小粒子と大粒子とが同時に検出領域を通過する場合
には、小粒子による検出信号は大粒子による検出信号に
よりマスキングされると言う現象を考慮して小粒子のカ
ウント数を補正し、測定用試料中に含まれる小粒子の真
の個数を算出する粒子計数方法および装置に関する。

〔従来の技術〕

微小サイズの粒子を懸濁させた測定用試料（液）を第
２図に示されるような狭隘な通路10に通過させ、図中の
ａ点で始まりｂ点で終わる区間に形成される検出領域12
を上記粒子が通過する際に発生する信号を検出する方法
は、公知の粒子検出装置あるいはフローサイトメーター
において実現されている。検出領域12は一般に電気的検
出手段もしくは光学的検出手段によって形成されてい
る。電気的検出手段による場合には、粒子懸濁用の液を
電解質液とし、通常、通路10の上流側および下流側にそ
れぞれ電極（図示せず）を配置し、電極間に電流を流
し、検出領域12付近で電流密度が著しく密になるような
検出部を構成し、粒子が検出領域12を通過する際に起こ
る検出領域12の電気インピーダンスの変化を検出する。
通過する粒子１個ごとに検出される検出信号の大きさ
は、その粒子の体積にほぼ比例することは良く知られて
いる。

粒子が１個ずつ離れて検出領域を通過する場合すなわ
ち、ある瞬間に検出領域内に粒子が１個のみ存在する場
合には、第３図中にＡで示されるような信号が検出され
る。検出信号を計数する際には、通常、第３図中にＣで
示される閾値レベルが設けられ、レベルＣ以上の波高値
を有する信号が粒子によるものとしてカウントされ、レ
ベルＣ以下の波高値の信号はノイズとして無視される。

ところで、粒子が２個以上接近して検出領域を通過す
る場合、すなわち、ある瞬間に検出領域内に粒子が２個
以上存在する場合には、たとえば第４図に示されるよう
な信号が検出される。第４図は２個の粒子が接近して通
過した場合の波形を示しており、ある１つの粒子による
信号Ａと他の１つの粒子による信号Ｂとが重なってい
る。この図の場合の閾値レベル以上の信号は１個とカウ
ントされる。すなわち、２個の粒子が検出領域を同時に
通過した場合には１個としてのみカウントされ、１個分
は数え落とされる。３個以上の粒子が同時に通過する場
合も同様に１個としてのみカウントされる。

このように粒子が２個以上同時に検出領域を通過する
場合には粒子数が数え落とされるため、測定用試料中に
存在する粒子の真の個数を求めるためには、この数え落
とし数を補正する必要がある。補正の方法としては、臼
井敏明：自動血球計数器におけるcritical volumeの測
定の同時通過による数え落し論理の展開、臨床病理、第
19巻（補冊）、73〜74頁、1971年に記載された方法が一
般的である。この文献には、検出領域の体積ｖ（文献中
ではcritical volumeと呼ばれている）中に存在する粒
子数がポアソン（poisson）分布に従うものとして、カ
ウント数N_Cより、検出領域を通過する測定用試料の体積
Ｖ中に存在する粒子の真の個数Ｎを求めるための補正式が記載されている。

上記補正式は、測定用試料中に存在する粒子が単一の
集団に属し、粒子の大きさもほぼ揃っている場合には適
用できるが、測定用試料中に複数の集団に属する粒子が
混雑し、ある集団の粒子の大きさが他の集団の粒子の大
きさよりも著しく小さい（たとえば十分の一以下）場合
に、この小さい粒子の真の個数を求めるためには使用で
きない。

その理由を以下に説明する。測定用試料中に大きさの
異なる２種類の粒子が存在する場合を考える。たとえ
ば、測定用試料中に赤血球と血小板が存在するような場
合である。人の赤血球はその体積が健常人の場合、約40
fl（フェムリットル）以上に分布しており、平均体積は
約90flである。一方、人の血小板はその体積が健常人の
場合、約２〜30flの範囲に分布しており、平均体積は約
６〜9flである。赤血球および血小板がそれぞれ１個ず
つ検出領域を通過する場合には、第５図に示すような信
号が検出される。図中のＡは赤血球による信号であり、
Ｂは血小板による信号である。この場合、閾値は２レベ
ル設けられ、図中のC₁レベルより低い波高値の信号はノ
イズとして無視され、C₁レベル以上でC₂レベルより低い
波高値の信号は血小板としてカウントされ、C₂レベル以
上の波高値の信号は赤血球としてカウントされる。とこ
ろが、赤血球と血小板が同時に検出領域を通過する場合
には、第６図に示されるように赤血球による信号Ａと血
小板による信号Ｂとが重なるため、赤血球は１個とカウ
ントされるが、血小板はカウントされなくなる。このよ
うに小粒子による信号に大粒子による信号が重なるた
め、小粒子が数え落とされる現象をマスキングと呼ぶこ
ともある。このマスキング現象による小粒子の数え落と
し数は、測定試料中に存在する大粒子の個数にも依存し
ていることは当然推測される。健常人の血液（全血）中
には、概ね赤血球が500万個／μ、血小板が25万個／
μ存在しており、赤血球数は血小板数の10倍以上あ
る。自動血球計数装置においては、血液を数百倍ないし
は数万倍に希釈して測定用試料を作製し血球の計数を行
うが、この測定用試料においても赤血球数と血小板数の
比率は勿論変わらない。このように測定用試料中に大粒
子が小粒子よりも遥かに多く存在する場合には、小粒子
の個数を計数する上でのマスキング現象の影響は極めて
大きい。希釈倍率をさらに大きくし、大粒子と小粒子が
同時に検出領域を通過する確率をほとんど零とすること
も可能であるが、必要粒子数をカウントするための計数
時間が極端に長くなり実用的でない。

測定用試料を操作して、大粒子をある程度除去するこ
とが可能な場合には、マスキングの影響をある程度軽減
させることができる。血液の場合には、遠心分離操作等
によって血液中の赤血球数を血小板数と同程度までに落
とした血小板測定専用の試料を作製することが可能であ
り、この試料を使用してマスキングの影響を軽減させて
血小板を測定することも従来良く行われていた。しか
し、赤血球を完全には除去できないため、マスキングの
影響はある程度残る。また、大粒子を予め除去した試料
を作製する作業は一般に煩わしく難しい。また、測定装
置の自動化にも適さないため、この種の予備作業を行わ
ずに試料を測定できることが望ましい。自動血球計数装
置においても近年では、全血試料を単に希釈するだせで
赤血球数や血小板数が求められる装置が主流となってい
る。

そこで、大粒子の数に応じてマスキング現象の影響を
補正し、小粒子数の真値を求める方法が考えられた。以
下、その方法を大粒子としては赤血球、小粒子としては
血小板を例として説明する。

検出領域を通過する測定用試料の体積をＶ（μ）と
し、体積Ｖ中に存在する血小板数をｐ個、赤血球数をｒ
個とすると、検出領域を通過する全粒子数N_t（個）は
（１）式となる。

N_t＝ｐ＋ｒ（１）検出領域の体積ｖ（μ）中に血小板がｍ個存在する
確率P_p（ｍ）は、（２）式で示されるポアソン分布に従
う。

同様に検出領域の体積ｖ中に赤血球がｎ個存在する確
率P_r（ｎ）は、（３）式で示される。

検出領域の体積ｖ中に赤血球と血小板が合わせてｔ個
存在する確率P_Nt（ｔ）は、（４）式で示される。

一方、血小板としてカウントされる粒子数をN_C1、赤
血球としてカウントされる粒子数をN_C2とすると、血小
板または赤血球としてカウントされる個数の和N_Cは、
（５）式で計算される。

N_C＝N_C1＋N_C2 （５）また、N_Cは（４）式のｔを１から無限大まで変化させ
たものの総計にV/vを乗じて求めた（６）式で表わされ
る。

ゆえに全粒子数（真の個数）N_tは（７）式となる。

（７）式に（５）式で求めたN_Cを代入すれば、N_tが得
られる。

上記第１のカウンタのカウント数N_C1は、血小板のみ
によって構成されていると考えてよいので、検出領域内
に赤血球が存在しないときに、血小板が１個以上存在す
る確率を計算することにより、（８）式が得られる。

であるから、（８）式より血小板数ｐは（９）式のよう
に求まる。

なお、（６）式より、となるので、（９）式は（10）式のようになる。

また、（８）式の途中の式から血小板数ｐを（11）式のように求めることもでき
る。

（11）式は、さらに（12）のようにも書ける。

（10）式、（11）式、（12）式のいずれを用いても血
小板数ｐを求めることができるが、自動血球計数装置に
おいては、一般的に赤血球数を求めることも要求される
ので、まず赤血球数ｒを算出したのち、そのｒを（12）
式に代入して血小板数ｐを求める手順が実際的である。

赤血球数ｒは以下のように求める。赤血球としてカウ
ントされた粒子数N_C2は、検出領域内に赤血球が１個以
上存在して１個とカウントされる場合のカウント数と、
検出領域内に赤血球と血小板とが同時に存在して１個と
カウントされる場合のカウント数との和である。したが
って（13）式が得られる。

（13）式より測定用試料中に含まれる赤血球の真の個
数ｒが、（14）式により求められる。

（10）式、（11）式、（12）式のいずれを用いて血小
板数ｐを求める場合にも、検出領域の体積ｖが予め求め
られている必要があるが、ｖは、前述の臼井の論文中に
記載されているcritical volumeの測定理論に基づいて
下記のように求められる。

二つの血球（たとえば赤血球）希釈試料を作り、一方
が丁度他方の二倍の血球数を含むように調整し、血球計
数装置で測定する。低濃度血球液のカウント値および検
出領域を通過した真の血球数をそれぞれN_CrL、r_Lとし、
高濃度血球数のカウント値および真の血球数をそれぞれ
N_CrH、r_Hとして（14）式を適用すると、（15）式および
（16）式が得られる。

ここで、2r_L＝r_Hであるから、（15）式、（16）式か
ら（17）式が導出され、ｖが求められる上述の方法による小粒子数の求め方の妥当性につい
て、実際の血液試料を用いて検討した実施例を以下に示
す。本実施例に使用した血球計数装置は、血液を５万倍
に希釈した測定用試料を0.5ml定量し、検出領域に通過
させ赤血球数および血小板数を計数する装置である。こ
の希釈倍率および定量体積から計算されるように、赤血
球数500万個／μ、血小板数25万個／μの血液の場
合、検出領域を通過する赤血球数は50000個、血小板数
は2500個である。また、（17）式により予め求めた検出
領域の体積ｖは1.0nlであった。

まず、血液（全血）に遠心分離操作を施し、赤血球の
みを分離した試料および血小板のみを分離した試料を作
製する。次に、この血小板分離試料の適当量を所定量の
希釈液に添加し、希釈前の全血換算で血小板の濃度が約
20、約40、約60、約80（×10⁴個／μ）となるように
４種類の試料を作製する。各血小板濃度の試料を５本ず
つ作製し、一組とする。それぞれの組の５本の試料の内
の４本には、赤血球分離試料を適当量添加し、希釈前の
全血換算で赤血球の濃度が約200、約400、約600、約800
（×10⁴個／μ）となるようにする。残りの１本には
赤血球分離試料を添加しない。計４×５＝20本の測定用
試料を用意することになる。本実験は測定用試料中の赤
血球数が変化したとき、血小板計数値がどの程度変動す
るかを見るために行うものであり、各組内の試料の血小
板濃度は正確に同じとなるように、注意深く作製する必
要がある。しかし、赤血球濃度は上記の濃度の前後であ
れば良く、それほど厳密に作製する必要はない。

上記のように作製された試料を、上記血球計数装置で
測定したときの結果を表１および第７図に示す。

表１の各数値は数を表わし、単位は×10²個である。
表１の縦第１欄には血小板としてカウントされた粒子数
N_C1が、縦第２欄には検出領域を通過した真の赤血球数
ｒが、縦第３欄には（12）式を用いて求めた血小板数ｐ
が、それぞれ記載されている。赤血球数ｒは（14）式を
用いて求めた。表１内の数値は、上述の希釈倍率および
定量体積の関係から、そのまま全血換算の赤血球または
血小板の濃度（単位：×10⁴/μ）としても読める。第
７図はその単位で記されている。第７図の横軸は赤血球
濃度を表し、表１のｒに対応する。縦軸は血小板濃度を
表し、第１の縦第３欄のｐに対応する。第７図において
は、血小板濃度約20の組の測定値を△印で、濃度約40の
組の測定値を▲印で、濃度約60の組の測定値を○印で、
濃度約80の組の測定値を●印で示している。図中の破線
は赤血球濃度が０のときの血小板測定値を通過するよう
に横軸に並行に引いた線であり、赤血球濃度が変化して
も、各組の測定値はこの破線上にあることが要求され
る。

〔発明が解決しようとする問題点〕第７図に示されるように、従来の補正方法を用いた場
合には、測定用試料中の赤血球濃度が増大したときに、
本来一定であるべき血小板濃度の測定値が減少してしま
う。

すなわち、従来の方法では、測定用試料中に大粒子が
小粒子にくらべて大量に存在する場合には、小粒子の正
確な個数が求められなかった。

本発明は、測定用試料中に大粒子が小粒子のたとえば
十倍以上も存在する場合であっても、小粒子の真の個数
を正確に求める方法および装置を提供することを目的と
するものである。

〔問題点を解決するための手段〕

上記の目的を達成するために、本発明の粒子計数方法
は、小粒子と大粒子との懸濁させた測定用試料を狭隘な
通路で形成される検出領域に通過させ、その際検出され
る粒子検出信号の個数をカウントし、測定用試料中に含
まれる粒子数を計数する粒子計数方法において、下記（ａ）で定義される検出領域v_M内に大粒子が存在
せず、下記（ｂ）で定義される検出領域v_P内に小粒子が
１個以上存在する確率を、ポアソン分布から計算するこ
とにより導出される関係式である、小粒子および大粒子
のカウント数と小粒子の真の個数との間の関係式を用い
て、測定用試料中に含まれる小粒子の真の個数を求める
ことを特徴としている。

また本発明の粒子計数装置は、小粒子と大粒子とを懸
濁させた測定用試料を狭隘な通路で形成される検出領域
に通過させ、その際検出される粒子検出信号の個数をカ
ウントし、測定用試料中に含まれる粒子数を計数する粒
子計数装置において、粒子検出信号を小粒子から検出される信号と大粒子か
ら検出される信号とに弁別する弁別回路と、弁別回路か
ら出力される小粒子による検出信号をカウントする第１
のカウンタと、弁別回路から出力される大粒子による検
出信号をカウントする第２のカウンタと、下記（ａ）で
定義される検出領域v_M内に大粒子が存在せず、下記
（ｂ）で定義される検出領域v_P内に小粒子が１個以上存
在する確率を、ポアソン分布から計算することにより導
出される関係式である、小粒子および大粒子のカウント
数と小粒子の真の個数との間の関係式が記憶されている
記憶手段と、記憶手段に記憶されている前記関係式と第
１のカウンタのカウント数と第２のカウンタのカウント
数とが入力され、前記関係式にしたがって第１のカウン
タおよび第２のカウンタのカウント数から測定用試料中
に含まれる小粒子の真の個数を算出する演算手段と、演
算手段で算出される小粒子の真の個数を表示する表示手
段とを包含することを特徴としている。

（ａ）検出領域v_Mとは、小粒子および大粒子が同時に
存在するときに、大粒子のみが１個とカウントされ、小
粒子がカウントされない領域のこと。

（ｂ）検出領域v_Pとは、小粒子が同時に複数個存在す
るときに、小粒子が１個とカウントされる領域のこと。

なお、上記粒子計数方法または装置における上記関係
式の具体例としては、（ここで、Ｖは検出領域を通過する測定用試料の体積、
ｐは体積Ｖ中に存在する小粒子の真の個数、ｒは体積Ｖ
中に存在する大粒子の真の個数、ｖは大粒子に対する検
出領域の体積、N_C1は小粒子のカウント数、N_C2は大粒子
のカウント数、l_nは自然対数、ｅは指数関数を表わす）がある。

また本発明において、小粒子数が同じで、一方が他方
の定数倍の大粒子数を含むように２つの希釈試料を作
り、上記粒子計数装置で測定することにより、上記検出
領域v_Mの体積を求めるように構成する場合もある。

〔作用〕

本発明の粒子計数方法および装置においては、小粒子
が同時に複数個存在するときに、小粒子が１個とカウン
トされる領域として定義される検出領域v_Pおよび小粒子
および大粒子が同時に存在するときに、大粒子のみが１
個とカウントされ小粒子がカウントされない領域として
定義される検出領域v_Mの考え方を導入して、検出領域v_M
内に大粒子が存在せず、検出領域v_P内に小粒子が１個以
上存在する確率を、ポアソン分布から計算することによ
り導出される関係式、すなわち小粒子および大粒子のカ
ウント数と小粒子の真の個数との間の関係式を用いるこ
とにより、測定用試料中に含まれる小粒子の真の個数が
求められる。

〔実施例〕

本発明の方法および装置を、以下実施例に基づいて詳
述する。

本実施例においては、測定用試料は血液を希釈したも
のとし、測定用試料中の大粒子は赤血球であり、小粒子
は血小板であるとして説明する。なお、血液中に存在す
る赤血球および血小板以外の粒子は、数が少ないので無
視して考える。

第１図は本発明の粒子計数装置の要部を示すブロック
図である。赤血球または血小板が検出領域を通過したと
き検出される粒子検出信号は、弁別回路20へ入力され
る。弁別回路20においては第５図に示されるC₁レベルお
よびC₂レベルの２つの閾値が設定されている。前述のよ
うに、C₁レベルより低い波高値の信号はノイズとして無
視され、C₁レベル以上でC₂レベルより低い波高値の信号
は血小板として識別され、C₂レベル以上の波高値の信号
は赤血球として識別される。血小板として識別される信
号の中には、血小板が同時に２個以上検出領域を通過し
て１個の粒子として検出される信号も含まれる。赤血球
として識別される信号の中には、赤血球が同時に２個以
上検出領域を通過して１個の粒子として検出される信号
も含まれるし、また、赤血球と血小板が同時に検出領域
を通過して１個の赤血球として検出される信号も含まれ
る。なお、血小板が何個か固まって検出領域を同時に通
過してC₂レベルを越える波高値の信号となることもあり
得るが、その確率は極めて小さいので無視できる。

血小板として識別された信号は第１のカウンタ22へ送
られカウントされる。赤血球として識別された信号は第
２のカウンタ24へ送られカウントされる。体積Ｖの測定
用試料が検出領域を通過したとき、第１のカウンタでカ
ウントされる粒子数（血小板としてカウントされる個
数）をN_C1、第２のカウンタでカウントされる粒子数
（赤血球としてカウントされる個数）をN_C2とする。カ
ウント数N_C1およびN_C2はそれぞれ演算手段26へ入力され
る。

一方、記憶手段28には、カウント数N_C1およびN_C2を用
いて体積Ｖの測定用試料中に存在する血小板の真の個数
を求めるための関係式が記憶されている。演算手段26は
記憶手段28よりこの関係式を読み出し、体積Ｖの測定用
試料中に存在する血小板の真の個数を求めるための演算
を行う。演算結果は表示手段30により表示される。

記憶手段28に記載されている上記関係式について詳述
する。

従来技術の補正方法を用いた場合には、前述の通り、
測定用試料中の赤血球濃度が増大したときに、本来一定
であるべき血小板濃度の測定値が減少してしまうと言う
結果を考察し、本発明者は、（ａ）小粒子および大粒子が同時に存在するときに、
大粒子のみが１個とカウントされ小粒子がカウントされ
ない領域。

（ｂ）小粒子が同時に複数個存在するときに、小粒子
が１個とカウントされる領域。

の二つの領域は、実質的に大きさが異なると言う考えに
到達した。たの（ａ）、（ｂ）は従来、粒子検出装置に
て血球を測定する場合のように、対象とする粒子の体積
が検出領域の体積の数万分の一程度したない場合には、
疑いも無く同じ領域であると考えられていたものであ
り、共に検出領域ｖと表わされていた。何故なら、検出
領域の体積にとって血球の体積は無視し得るものであ
り、大粒子が存在する場合と小粒子が存在する場合と
で、検出領域の大きさが変わるとは考えられなかったか
らである。しかし、現象の物理学的な解釈はともかく、
粒子検出装置で大小の粒子を検出すると、検出原理ある
いは電気的信号処理技術にも依存するが、大粒子による
検出信号のパルス幅は、小粒子のそれよりも長くなる場
合があることも知られていた。本発明者はこの点を考察
し、大粒子が通過する場合には小粒子が通過する場合よ
りも、他の小粒子の検出を阻止する、すなわちマスキン
グする時間が長くなり、実質的に上記（ｂ）の場合の領
域よりも、（ａ）の場合の領域の方が大きくなると予想
した。そして（ａ）の領域を検出領域v_M、（ｂ）の領域
を検出領域v_Pと名付けた。ただし、以下に述べる式の導
出にあたっては、領域v_Mが領域v_Pよりも大きいことは仮
定していない。また、記号v_M、v_Pが領域の体積を表すこ
ともある。

上記第１のカウンタ22のカウント数N_C1は、血小板の
みによって構成されていると考えてよいので、検出領域
V_M内に赤血球が存在しないときに、検出領域v_P内に血小
板が１個以上存在する確率を計算することにより、（1
8）式が得られる。

（18）式より血小板数ｐは、（19）式のように求ま
る。

（19）式中のｒは前述の（14）式を用いてN_C2より求
められる。（14）式中のｖは前述の方法により予め求め
られている。

次に、検出領域v_P、v_Mの求め方について説明する。ま
ず、v_Pを求める際には、二つの血小板希釈試料（赤血球
粒子が入っていないもの）を作り、一方が丁度他方の二
倍の血小板数を含むように調整し、血球計数装置で測定
する。低濃度血小板液のカウント値および検出領域v_Pを
通過した真の血小板数をそれぞれN_CPL、p_Lとし、高濃度
血小板液のカウント値および真の血小板数をそれぞれN
_CPH、p_Hとし、2p_L＝p_Hの関係を用いて（17）式導出の際
と同様の計算を行うと、（20）式が得られる。

次に、v_Mを求める際には、血小板数が同じで、一方が
丁度他方の二倍の赤血球数を含むように二つの希釈試料
を作り、血球計数装置で測定する。このときの真の血小
板数をｐ（二種類の試料とも同一である）とし、低濃度
赤血球液の血小板カウント値および真の赤血球数をそれ
ぞれN_CP1、r_Lとし、高濃度赤血球液のカウント値および
真の赤血球数をそれぞれN_CP2、r_Hとすると、（19）式よ
り（21）、（22）式が得られる。

ここで、2r_L＝r_Hの関係を用いて整理すると、（23）
式が得られる。

従来技術の説明で述べた実験例と同一の血球計数装置
について、（20）式により求めたv_Pは1.0nlであり、前
述のように（17）式により、赤血球試料を用いて求めた
検出領域の体積ｖと一致した。したがって（14）式中の
ｖをv_Pとしてもよい。一方、（23）式により求めたv_Mは
1.35nlであり、予想通りv_Pよりも大きいことが確かめら
れた。

上記v_P、v_Mの数値および（19）式を用いて、表１の縦
第１欄に示した血小板としてカウントされた粒子数N_C1
を補正しなおした。表１の縦第４欄および第８図にその
結果を示す。第８図に明瞭に示されるように、本発明の
方法によれば、測定用試料中の赤血球濃度が増大したと
きにも、血小板濃度の測定値は殆ど赤血球濃度の影響を
受けずに一定となる。

〔発明の効果〕

本発明の粒子計数方法および装置においては、小粒子
が同時に複数個存在するときに、小粒子が１個とカウン
トされる領域として定義される検出領域v_P、および小粒
子および大粒子が同時に存在するときに、大粒子のみが
１個とカウントされ、小粒子がカウントされない領域と
して定義される検出領域v_Mの考え方を導入して、検出領
域v_M内に大粒子が存在せず、検出領域v_P内に小粒子が１
個以上存在する確率を、ポアソン分布から計算すること
により導出される関係式、すなわち小粒子および大粒子
のカウント数と小粒子の真の個数との間の関係式を用い
ることにより、測定用試料中に大粒子が小粒子数のたと
えば十倍以上も存在し、小粒子の相当数が大粒子によっ
てマスキングされる場合であっても、大粒子の影響を受
けずに、測定用試料中に含まれる小粒子の真の個数を求
めることが可能となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の粒子計数装置の要部の一実施例を示す
ブロック図、第２図は検出領域の説明図、第３図は検出
信号を示す説明図、第４図は粒子が２個同時通過した場
合の検出信号を示す説明図、第５図は赤血球信号および
血小板信号を示す説明図、第６図は赤血球と血小板とが
同時通過した場合の検出信号を示す説明図、第７図は従
来法における血小板濃度測定値に対する赤血球濃度の影
響程度を示す線図、第８図は本発明の方法における血小
板濃度測定値に対する赤血球濃度の影響程度を示す線図
である。 10……通路、12……検出領域、20……弁別回路、22……
第１のカウンタ、24……第２のカウンタ、26……演算手
段、28……記憶手段、30……表示手段

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】小粒子と大粒子とを懸濁させた測定用試料
を狭隘な通路で形成される検出領域に通過させ、その際
検出される粒子検出信号の個数をカウントし、測定用試
料中に含まれる粒子数を計数する粒子計数方法におい
て、下記（ａ）で定義される検出領域v_M内に大粒子が存在せ
ず、下記（ｂ）で定義される検出領域v_P内に小粒子が１
個以上存在する確率を、ポアソン分布から計算すること
により導出される関係式である、小粒子および大粒子の
カウント数と小粒子の真の個数との間の関係式を用い
て、測定用試料中に含まれる小粒子の真の個数を求める
ことを特徴とする粒子計数方法。（ａ）検出領域v_Mとは、小粒子および大粒子が同時に
存在するときに、大粒子のみが１個とカウントされ、小
粒子がカウントされない領域のこと。（ｂ）検出領域v_Pとは、小粒子が同時に複数個存在す
るときに、小粒子が１個とカウントされる領域のこと。
【請求項２】関係式が、（ここで、Ｖは検出領域を通過する測定用試料の体積、
ｐは体積Ｖ中に存在する小粒子の真の個数、ｒは体積Ｖ
中に存在する大粒子の真の個数、ｖは大粒子に対する検
出領域の体積、N_C1は小粒子のカウント数、N_C2は大粒子
のカウント数、l_nは自然対数、ｅは指数関数を表わす）
である請求項１記載の粒子計数方法。
【請求項３】小粒子数が同じで、一方が他方の定数倍の
大粒子数を含むように２つの希釈試料を作り、測定する
ことにより、検出領域v_Mの体積を求める請求項１または
２記載の粒子計数方法。
【請求項４】小粒子と大粒子とを懸濁させた測定用試料
を狭隘な通路で形成される検出領域に通過させ、その際
検出される粒子検出信号の個数をカウントし、測定用試
料中に含まれる粒子数を計数する粒子計数装置におい
て、粒子検出信号を小粒子から検出される信号と大粒子から
検出される信号とに弁別する弁別回路と、弁別回路から
出力される小粒子による検出信号をカウントする第１の
カウンタと、弁別回路から出力される大粒子による検出
信号をカウントする第２のカウンタと、下記（ａ）で定
義される検出領域v_M内に大粒子が存在せず、下記（ｂ）
で定義される検出領域v_P内に小粒子が１個以上存在する
確率を、ポアソン分布から計算することにより導出され
る関係式である、小粒子および大粒子のカウント数と小
粒子の真の個数との間の関係式が記憶されている記憶手
段と、記憶手段に記憶されている前記関係式と第１のカ
ウンタのカウント数と第２のカウンタのカウント数とが
入力され、前記関係式にしたがって第１のカウンタおよ
び第２のカウンタのカウント数から測定用試料中に含ま
れる小粒子の真の個数を算出する演算手段と、演算手段
で算出される小粒子の真の個数を表示する表示手段とを
包含することを特徴とする粒子計数装置。（ａ）検出領域v_Mとは、小粒子および大粒子が同時に
存在するときに、大粒子のみが１個とカウントされ、小
粒子がカウントされない領域のこと。（ｂ）検出領域v_Pとは、小粒子が同時に複数個存在す
るときに、小粒子が１個とカウントされる領域のこと。
【請求項５】関係式が、（ここで、Ｖは検出領域を通過する測定用試料の体積、
ｐは体積Ｖ中に存在する小粒子の真の個数、ｒは体積Ｖ
中に存在する大粒子の真の個数、ｖは大粒子に対する検
出領域の体積、N_C1は小粒子のカウント数、N_C2は大粒子
のカウント数、l_nは自然対数、ｅは指数関数を表わす）
である請求項４記載の粒子計数装置。