【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、生体内過酸化脂質生成抑制剤に関するもの
である。
更に詳細には、本発明は糖質とアミノ酸が加熱反応し
てなるアミノカルボニル反応生成物を有効成分とする生
体内過酸化脂質生成抑制剤に関するものである。
本発明の生体内過酸化脂質生成抑制剤は、ヒトの老化
や動脈硬化症に関連する過酸化脂質の生成蓄積を抑制す
る作用を有するので医薬界及び食品界に益するところ大
なるものがある。
（従来の技術）
一般に、生体内での過酸化脂質の生成蓄積は、ヒトの
老化（シワ、老人性色素、老眼、老人性白内障、白髪発
生）、動脈硬化症（脳卒中、狭心症、心筋梗塞）、各種
癌などに関連する傾向がみられ、その意味からも過酸化
脂質の生成蓄積を抑制する方法が注目されつつある。
従来、過酸化脂質生成抑制剤としては、ビタミンＥ、
ビタミンＣ、ビタミンＡ、尿酸などのラジカル消去剤や
カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、グルタチオンペルオキ
シダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼなどの酵素が
知られているが、脂質系での酸化反応を直接生体内で防
御している生体抗酸化剤としてはビタミンＥが認められ
るだけである。
（発明が解決しようとする問題点）
ビタミンＥは、すぐれた過酸化脂質生成抑制効果を有
するものであるが、ビタミンＥは脂溶性であり、水溶性
とはなり得ないものである。
従来、水溶性の生体内過酸化脂質生成抑制抗酸化剤は
見出されていないが、生体内過酸化脂質の生成を抑える
有効かつ安全な水溶性抗酸化剤が見出されれば、きわめ
て有用で、適用範囲が広がるものと推測される。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは、水溶性で安全な生体内過酸化脂質生成
抑制剤を求めて鋭意研究を進めてきたが、糖とアミノ酸
からなるアミノカルボニル反応生成物に生体内過酸化脂
質生成抑制作用のあることを見出し本発明を完成した。
本発明は、アミノカルボニル反応生成物を有効成分と
する生体内過酸化脂質生成抑制剤に関するものである。
本発明でいうアミノカルボニル反応生成物とは、アミ
ノ酸などのアミノ化合物と還元糖などのカルボニル化合
物との加熱反応生成物の総称である。
カルボニル化合物としては、グルコース、フラクトー
ス、キシロース、アラビノースなどの糖類があり、ま
た、アミノ酸としてはグリシン、ヒスチジン、アルギニ
ンなどがある。
反応は、糖類の１種または数種の組合せとアミノ酸の
１種または数種の組合せを混合し、水溶液とし、これに
重炭酸ソーダ等を少量添加し、加熱することによって、
反応液は褐変し、アミノカルボニル反応物を生成する。
加熱反応は、100℃、２時間程度でよい。
得られた反応液は凍結乾燥、噴霧乾燥等により粉末化
し、そのまま又は錠剤化して服用に供することができ
る。
次に本発明の実施例を示す。
実施例
（アミノカルボニル反応生成物の製造）
アルギニン（1M）、グルコース（1M）、NaHCO3（0.1
M）を混合液の100℃２時間加熱してから凍結乾燥、粉末
化しアミノカルボニル反応生成物（以下、AC生成物とい
う）を得た。
（生体内過酸化脂質生成抑制試験）
表１ ラット用飼料
カゼイン（ビタミン含有せず） 20.0（％）
コーン油（ビタミンＥ含有せず）＊ 5.0
セルロース 5.0
ミネラル混合物（ハーパー法による） 4.0
ビタミン混合物（ハーパー法による） 1.0
蔗糖 24.0
α化とうもろこし澱粉 35.0
AC生成物 6.0
100 ％
＊Ｅ群とEC群については、α−トコフェロールアセテー
トが20ppm添加される。
体重48〜50gのWistar系雄ラット20匹を下記４群に分
け、表１の飼料で約２ヶ月間、自由摂取飼育後解剖し赤
血球を分離、ジアルル酸溶血試験を行い、同時に肝臓中
の過酸化脂質量をTBA法で測定した。
なお、ジアルル酸溶血試験は次の方法で行う。
内筒をピストンと共にノボヘパリンに湿潤させた注射
器を用い、ラットの下大静脈又は腹大動脈より２〜3ml
を採血する。採血したノボヘパリン血を3,000rpm、10分
間遠沈し、血漿と赤血球を分離する。血漿を除去したの
ち、赤血球0.5mlをピペットでとる。これに生理食塩水2
0mlを加え混和し、3,000rpm、10分間遠沈後、上清を捨
てる。赤血球層の底部より赤血球0.2mlをとり、これに
3.8mlの生理食塩水を加え、５％浮遊液として使用す
る。
まず、0.05M燐酸緩衝液、ジアルル酸溶液（0.05M燐酸
緩衝液で1mg/mlとしたもの）、赤血球浮遊液を37℃の水
溶中で、それぞれを定温化させる。
次に試験管A,B,Cの３本を用意し、全ての試験管に５
％赤血球浮遊液を250μづつとる。ついで、0.05M燐酸
緩衝液300μをＡに、200μをB,Cに加える。B,Cには
さらにジアルル酸溶液を100μを加え、静かに混和
し、A,B,C全てを37℃30分間保温する。保温30分後、A,B
には混合溶液（0.05M燐酸緩衝液と生理食塩水の1:1混合
液）を5ml加え、Ｃには5mlの蒸溜水を加え混合し、3,00
0rpmで10分間遠沈し、上清を540nmで吸光度を測定す
る。
溶血率は次式で算出する。
なお、またTBA値の測定は、次の方法で行なう。5gの
ラット肝臓を0.1M燐酸緩衝液（pH7.4）で水中でホモゲ
ナイズし、最終容量を100mlとする。これを1,500rpm、1
0分遠心分離し、得られた上清2mlに10％TCA溶液1mlと１
％TBA溶液2mlを加え、37℃で１時間インキュベートし、
冷却後3,000rpm、10分間遠心分離し、上澄液について53
5nmで吸光度を測定する。
Ｎ群……対照（ビタミンＥなし）
Ｃ群……AC生成物６％添加
Ｅ群……ビタミンE20ppm添加
EC群……AC生成物６％添加＋ビタミンE20ppm添加
溶血率および肝臓のTBA値を表３に示した。なお、各
群のラットの体重増加量、飼料摂取量には、有意差はな
かった。
Ｎ群とＣ群では、溶血率、TBA値いずれも有意にＣ群
の方が低い値を示した（ｐ＜0.01）。Ｅ群とEC群では、
TBA値は有意にEC群の方が低い値を示した（ｐ＜0.0
1）。 次に、ビタミンＥの添加率を2ppmとした以外は同条件
でラットを２ヶ月間飼育した時の結果を表４に示した。
この場合も、Ｎ群とＣ群、Ｅ群とEC群では、溶血率はア
ミノカルボニル反応生成物を添加したＣ群、EC群の方が
有意に低い値を示した（ｐ＜0.05）。
以上の結果からビタミンＥ欠乏ラットにアミノカルボ
ニル反応生成物を投与することにより、赤血球の溶血率
および過酸化脂質の生成を抑制出来ることが明らかにな
った。また、ビタミンＥを20ppm添加した場合は、Ｅ
群、EC群とも溶血率は低かったが、ビタミンＥが微量
（2ppm）の場合はＥ群の赤血球溶血率は高く、アミノカ
ルボニル反応生成物を添加することにより、その溶血率
を有意に（約50％）低下出来ることが明らかとなった。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Field of Industrial Application) The present invention relates to an in vivo lipid peroxide production inhibitor. More specifically, the present invention relates to an in vivo lipid peroxide production inhibitor containing an aminocarbonyl reaction product obtained by heating a sugar and an amino acid as a reaction product. The in vivo lipid peroxide production inhibitor of the present invention has an action of suppressing the production and accumulation of lipid peroxide associated with human aging and arteriosclerosis, and thus has great advantages in the pharmaceutical and food industries. . (Prior Art) In general, the production and accumulation of lipid peroxides in vivo is caused by human aging (wrinkles, senile pigments, presbyopia, senile cataracts, gray hair development), arteriosclerosis (stroke, angina, myocardium). Infarction), various cancers and the like tend to be observed, and from that point of view, methods for suppressing the production and accumulation of lipid peroxides are drawing attention. Conventionally, as a lipid peroxide production inhibitor, vitamin E,
Although radical scavengers such as vitamin C, vitamin A, and uric acid, and enzymes such as catalase, peroxidase, glutathione peroxidase, and superoxide dismutase are known, bio-antibody that directly protects the oxidation reaction in lipid system in vivo. Vitamin E is the only recognized oxidant. (Problems to be Solved by the Invention) Vitamin E has an excellent lipid peroxide production inhibitory effect, but vitamin E is fat-soluble and cannot be water-soluble. So far, no water-soluble in vivo lipid peroxide production inhibiting antioxidant has been found, but if an effective and safe water-soluble antioxidant that suppresses in vivo lipid peroxide production is found, it will be extremely useful, It is speculated that the scope of application will expand. (Means for Solving the Problems) The inventors of the present invention have conducted earnest research in search of a water-soluble and safe lipid peroxidation lipid production inhibitor, but an aminocarbonyl reaction product composed of a sugar and an amino acid. The present invention has been completed by discovering that it has an action of inhibiting lipid peroxide production in vivo. The present invention relates to an in vivo lipid peroxide production inhibitor containing an aminocarbonyl reaction product as an active ingredient. The term "aminocarbonyl reaction product" as used in the present invention is a general term for a heating reaction product of an amino compound such as an amino acid and a carbonyl compound such as a reducing sugar. Carbonyl compounds include sugars such as glucose, fructose, xylose and arabinose, and amino acids include glycine, histidine and arginine. The reaction is carried out by mixing one or several kinds of saccharides and one or several kinds of amino acids into an aqueous solution, adding a small amount of sodium bicarbonate, etc., and heating the mixture.
The reaction solution turns brown and produces an aminocarbonyl reaction product.
The heating reaction may be performed at 100 ° C. for about 2 hours. The obtained reaction solution can be powdered by freeze-drying, spray-drying, etc. and used as it is or after tableting. Next, examples of the present invention will be described. Example (Production of Aminocarbonyl Reaction Product) Arginine (1M), glucose (1M), NaHCO 3 (0.1M)
M) was heated at 100 ° C. for 2 hours, lyophilized and powdered to obtain an aminocarbonyl reaction product (hereinafter referred to as AC product). (In vivo lipid peroxide production inhibition test) Table 1 Rat feed casein (without vitamin) 20.0 (%) Corn oil (without vitamin E) * 5.0 Cellulose 5.0 Mineral mixture (by Harper method) 4.0 Vitamin mixture ( (By Harper method) 1.0 Sucrose 24.0 Pregelatinized corn starch 35.0 AC product 6.0 100% * For group E and EC, 20 ppm of α-tocopherol acetate is added. Twenty male Wistar rats weighing 48 to 50 g were divided into the following 4 groups, and the animals in the diet shown in Table 1 were dissected after free-feeding for about 2 months to separate erythrocytes, and a diallylic acid hemolysis test was performed. The amount of oxidized lipid was measured by the TBA method. The diallylic acid hemolysis test is performed by the following method. Use a syringe with the inner cylinder moistened with novoheparin together with a piston, and 2-3 ml from the rat inferior vena cava or abdominal aorta.
To collect blood. The collected blood of novoheparin is spun down at 3,000 rpm for 10 minutes to separate plasma and red blood cells. After removing the plasma, pipette 0.5 ml of red blood cells. Saline 2
Add 0 ml and mix, spin down at 3,000 rpm for 10 minutes, and discard the supernatant. Take 0.2 ml of red blood cells from the bottom of the red blood cell layer
Add 3.8 ml of physiological saline and use as a 5% suspension. First, a 0.05 M phosphate buffer solution, a dialuric acid solution (made to be 1 mg / ml with a 0.05 M phosphate buffer solution), and an erythrocyte suspension are allowed to incubate in water at 37 ° C. Next, prepare three test tubes A, B, and C, and add 5 to all test tubes.
Take 250% of each red blood cell suspension. Then, 300 μ of 0.05 M phosphate buffer is added to A, and 200 μ is added to B and C. To B and C, add 100 μl of dialylic acid solution, mix gently and keep all A, B and C at 37 ℃ for 30 minutes. After 30 minutes of heat retention, A, B
5 ml of a mixed solution (1: 1 mixture of 0.05 M phosphate buffer and physiological saline) was added to C, and 5 ml of distilled water was added to C and mixed,
Centrifuge at 0 rpm for 10 minutes, and measure the absorbance of the supernatant at 540 nm. The hemolysis rate is calculated by the following formula. The TBA value is measured by the following method. 5 g of rat liver is homogenized in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.4) in water to a final volume of 100 ml. This is 1,500 rpm, 1
Centrifuge for 0 minutes and add 2 ml of the resulting supernatant to 1 ml of 10% TCA solution.
Add 2 ml of% TBA solution and incubate at 37 ℃ for 1 hour,
After cooling, centrifuge at 3,000 rpm for 10 minutes, and collect the supernatant 53
Absorbance is measured at 5 nm. Group N: Control (no vitamin E) Group C: 6% AC product added Group E: Vitamin E 20 ppm added EC group: 6% AC product + Vitamin E 20 ppm added Hemolysis rate and liver TBA value table Shown in 3. In addition, there was no significant difference in the weight gain and the feed intake of the rats in each group. In the N group and the C group, both the hemolysis rate and the TBA value were significantly lower in the C group (p <0.01). In group E and group EC,
The TBA value was significantly lower in the EC group (p <0.0
1). Next, Table 4 shows the results when the rats were bred for 2 months under the same conditions except that the addition rate of vitamin E was 2 ppm.
Also in this case, in the N group and the C group, and in the E group and the EC group, the hemolysis rate was significantly lower in the C group and the EC group to which the aminocarbonyl reaction product was added (p <0.05). From the above results, it was revealed that the administration of the aminocarbonyl reaction product to vitamin E-deficient rats can suppress the hemolysis rate of red blood cells and the production of lipid peroxide. Also, if 20ppm of vitamin E is added, E
Although the hemolysis rate was low in both the EC and EC groups, when the amount of vitamin E was very small (2 ppm), the red blood cell hemolysis rate in the E group was high, and the hemolysis rate was significantly (about 50%).
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(56)参考文献 特開 昭56−55396（ＪＰ，Ａ)
特開 昭56−86198（ＪＰ，Ａ)
特開 昭56−95197（ＪＰ，Ａ)
特開 昭56−55397（ＪＰ，Ａ)
特開 昭56−113792（ＪＰ，Ａ)
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(56) References JP-A-56-55396 (JP, A)
JP-A-56-86198 (JP, A)
JP-A-56-95197 (JP, A)
JP-A-56-55397 (JP, A)
JP-A-56-113792 (JP, A)