JP2590415B2 - マイコプラズマ様微生物の培養液並びに培養法 - Google Patents
マイコプラズマ様微生物の培養液並びに培養法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はマイコプラズマ様微生物
（ＭＬＯ）の培養法に関する。更に、詳しくは、ＭＬＯ
による病害防除のための薬剤スクリーニング、血清学的
手法等による診断技術等の確立、組替えＭＬＯによる有
用物質の生産及びＭＬＯ利用の生物防除技術の確立に不
可欠な基礎技術となるＭＬＯの培養法に関する。
（ＭＬＯ）の培養法に関する。更に、詳しくは、ＭＬＯ
による病害防除のための薬剤スクリーニング、血清学的
手法等による診断技術等の確立、組替えＭＬＯによる有
用物質の生産及びＭＬＯ利用の生物防除技術の確立に不
可欠な基礎技術となるＭＬＯの培養法に関する。
【０００２】
【従来の技術並びに発明が解決しようとする課題】ＭＬ
Ｏが植物病原体として初めて発見されて以来、現在では
２００種以上のＭＬＯ病が知られており、重要植物病原
微生物であるため、我が国を始め世界各国の研究者が様
々の方法で培養を試みているが、何れも不成功に終わっ
ている。このため、ＭＬＯの特性の解明、防除および診
断技術の開発が遅れている。
Ｏが植物病原体として初めて発見されて以来、現在では
２００種以上のＭＬＯ病が知られており、重要植物病原
微生物であるため、我が国を始め世界各国の研究者が様
々の方法で培養を試みているが、何れも不成功に終わっ
ている。このため、ＭＬＯの特性の解明、防除および診
断技術の開発が遅れている。
【０００３】従って、ＭＬＯの培養技術の開発が急務と
されている現状である。
されている現状である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者等は植
物体内のＭＬＯの主要存在場所は師管部であるので、こ
の師管液を取り出して師管液中のＭＬＯの存在を確認
し、更に採取した師管液中におけるＭＬＯの増殖を確認
することから始めて、師管液を主成分とする培養液を用
いた培養法を確立した。
物体内のＭＬＯの主要存在場所は師管部であるので、こ
の師管液を取り出して師管液中のＭＬＯの存在を確認
し、更に採取した師管液中におけるＭＬＯの増殖を確認
することから始めて、師管液を主成分とする培養液を用
いた培養法を確立した。
【０００５】即ち、本発明で用いるマイコプラズマ様微
生物の培養液は、培養しようとするマイコプラズマ様微
生物が寄生する植物と同じ植物の師管液を主成分とす
る。
生物の培養液は、培養しようとするマイコプラズマ様微
生物が寄生する植物と同じ植物の師管液を主成分とす
る。
【０００６】ここで、同じ植物とは、一般的には同一種
の植物となるが、ＭＬＯによっては種間にまたがり数種
の植物に感染するので、かならずしも同一種の植物に限
られない。例えば、イネの黄萎病はイネとその近縁のイ
ネ科雑草、例えばスズメノテッポウ、ミノゴメ、パニカ
ム等に感染し、マメ類てんぐす病はマメ科、キク科、ア
ブラナ科、ナス科の植物にも感染するので、広く、培養
しようとするＭＬＯが寄生する植物を意味するものであ
る。
の植物となるが、ＭＬＯによっては種間にまたがり数種
の植物に感染するので、かならずしも同一種の植物に限
られない。例えば、イネの黄萎病はイネとその近縁のイ
ネ科雑草、例えばスズメノテッポウ、ミノゴメ、パニカ
ム等に感染し、マメ類てんぐす病はマメ科、キク科、ア
ブラナ科、ナス科の植物にも感染するので、広く、培養
しようとするＭＬＯが寄生する植物を意味するものであ
る。
【０００７】例えば、イネ由来マイコプラズマ様微生物
の培養液の場合はイネの師管液を主成分とする。
の培養液の場合はイネの師管液を主成分とする。
【０００８】培養液は師管液そのものでもよいが、これ
に師管液の主要成分である糖、アミノ酸類、塩類等を溶
解してＰＨと浸透圧を調整した水溶液として用いてもよ
い。例えば、天然の師管液に０．５Ｍ（約１７％）のシ
ョ糖液を２０〜５０％混合したものを用いてもよい。
に師管液の主要成分である糖、アミノ酸類、塩類等を溶
解してＰＨと浸透圧を調整した水溶液として用いてもよ
い。例えば、天然の師管液に０．５Ｍ（約１７％）のシ
ョ糖液を２０〜５０％混合したものを用いてもよい。
【０００９】また、本発明のマイコプラズマ様微生物の
培養法は、培養しようとするマイコプラズマ様微生物が
寄生する植物と同じ植物の師管液を主成分とする培養液
を用いて培養することを特徴とする。
培養法は、培養しようとするマイコプラズマ様微生物が
寄生する植物と同じ植物の師管液を主成分とする培養液
を用いて培養することを特徴とする。
【００１０】例えば、イネ由来マイコプラズマ様微生物
を培養する場合はイネの師管液を主成分とする培養液を
用いて培養する。
を培養する場合はイネの師管液を主成分とする培養液を
用いて培養する。
【００１１】また、培養するマイコプラズマ様微生物は
明確に病徴が発現している植物の師管液や、培養するマ
イコプラズマ様微生物の保毒虫の唾液腺組織液を用いる
ことを一般とする。
明確に病徴が発現している植物の師管液や、培養するマ
イコプラズマ様微生物の保毒虫の唾液腺組織液を用いる
ことを一般とする。
【００１２】更に、具体的にイネ由来マイコプラズマ様
微生物の培養を例に説明すれば、まず、ＭＬＯ病である
イネ黄萎病に感染した病稲と健全稲から師管液を採取す
る。この採取は、両稲にトビイロウンカを寄生させ、ト
ビイロウンカが師管に口針を刺入して吸汁中にレ−ザ光
線を発射して口針を切断すると、師管中の液圧が高いた
め植物に突き刺さったままの口針先端部の切り口から師
管液が流出するので、かかる師管液を採取することによ
り行う。この場合、レ−ザ光線の照射により師管液の水
分が蒸発しているので、蒸留水を４０％程度加える。次
いで、得られた健全稲の師管液に、病稲から得られた師
管液を１／１００相当量程度混入し、２８℃前後に保て
ば、約３日間で約１０〜１００倍以上に増殖する。
微生物の培養を例に説明すれば、まず、ＭＬＯ病である
イネ黄萎病に感染した病稲と健全稲から師管液を採取す
る。この採取は、両稲にトビイロウンカを寄生させ、ト
ビイロウンカが師管に口針を刺入して吸汁中にレ−ザ光
線を発射して口針を切断すると、師管中の液圧が高いた
め植物に突き刺さったままの口針先端部の切り口から師
管液が流出するので、かかる師管液を採取することによ
り行う。この場合、レ−ザ光線の照射により師管液の水
分が蒸発しているので、蒸留水を４０％程度加える。次
いで、得られた健全稲の師管液に、病稲から得られた師
管液を１／１００相当量程度混入し、２８℃前後に保て
ば、約３日間で約１０〜１００倍以上に増殖する。
【００１３】培養は、ＭＬＯ源を含んだ培養液をガラス
細管に入れ、ガラス細管の両端をパラフィルム薄膜で簡
単に密閉し、前記の通り２８℃前後に保つて行う。
細管に入れ、ガラス細管の両端をパラフィルム薄膜で簡
単に密閉し、前記の通り２８℃前後に保つて行う。
【００１４】尚、ＭＬＯの確認は、ＭＬＯがＤＮＡを含
むため、ＤＮＡと結合して蛍光を発する蛍光色素、例え
ば、４´，６−ジアミノ−２フェニルインド−ル（ＤＡ
ＰＩ）で染色し、蛍光顕微鏡下で観察することにより行
う。染色がその後の利用に不適当であれば、位相差顕微
鏡あるいは微分干渉顕微鏡で観察することにより行うこ
とも可能である。
むため、ＤＮＡと結合して蛍光を発する蛍光色素、例え
ば、４´，６−ジアミノ−２フェニルインド−ル（ＤＡ
ＰＩ）で染色し、蛍光顕微鏡下で観察することにより行
う。染色がその後の利用に不適当であれば、位相差顕微
鏡あるいは微分干渉顕微鏡で観察することにより行うこ
とも可能である。
【００１５】
【実施例】健全稲の師管液３０μｌに蒸留水２０μｌを
加え、これに０．５μｌの病稲から採集したＭＬＯを多
数含む師管液を加え、よく撹拌したのち１００μｌ入り
のガラス細管に入れ、両端をパラフィルムで覆い、２８
℃下に３日間放置したところ、ＭＬＯの密度はほぼ病稲
からの師管液と同程度まで上昇した。具体的には約１０
9個／ｍｌから１０10個／ｍｌまで増加した。尚、師管
液は吸汁中のトビイロウンカの口針を介して採集したも
のを用いた。
加え、これに０．５μｌの病稲から採集したＭＬＯを多
数含む師管液を加え、よく撹拌したのち１００μｌ入り
のガラス細管に入れ、両端をパラフィルムで覆い、２８
℃下に３日間放置したところ、ＭＬＯの密度はほぼ病稲
からの師管液と同程度まで上昇した。具体的には約１０
9個／ｍｌから１０10個／ｍｌまで増加した。尚、師管
液は吸汁中のトビイロウンカの口針を介して採集したも
のを用いた。
【００１６】
【発明の効果】このように本発明によれば、今まで不可
能とされていたマイコプラズマ様微生物の培養を極めて
簡単に行える効果を有する。
能とされていたマイコプラズマ様微生物の培養を極めて
簡単に行える効果を有する。
フロントページの続き (56)参考文献 ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＳＣＨ Ｅ ＺＥＩＴＳＣＨＲＩＦＩ，102（２) （1981（ＲＥＣＤ．1982））Ｐ．148− 152 Ｊ．ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬ．（ＢＥ ＲＬ．），123（３）（1988）Ｐ．273− 283 ＡＧＲＯＮＯＭＩＥ（ＰＡＲＩＳ）, ８（６）（1988）Ｐ．495−502 ぶんせき，ＮＯ．１（1987）Ｐ．92− 96 植物防疫，46（３）（1992）Ｐ．111 −113
Claims (2)
- 【請求項１】 イネの師管液を主成分とする培養液を用
いてイネ由来マイコプラズマ様微生物を嫌気的条件で培
養することを特徴とするマイコプラズマ様微生物の培養
法。 - 【請求項２】 培養するマイコプラズマ様微生物は明確
に病徴が発現しているイネの師管液から得ることを特徴
とする請求項１記載の培養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3049311A JP2590415B2 (ja) | 1991-03-14 | 1991-03-14 | マイコプラズマ様微生物の培養液並びに培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3049311A JP2590415B2 (ja) | 1991-03-14 | 1991-03-14 | マイコプラズマ様微生物の培養液並びに培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06169757A JPH06169757A (ja) | 1994-06-21 |
| JP2590415B2 true JP2590415B2 (ja) | 1997-03-12 |
Family
ID=12827413
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3049311A Expired - Lifetime JP2590415B2 (ja) | 1991-03-14 | 1991-03-14 | マイコプラズマ様微生物の培養液並びに培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2590415B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7765642B2 (en) | 2001-10-29 | 2010-08-03 | Nifco Inc. | Operating mechanism of movable member, and automobile storage apparatus |
-
1991
- 1991-03-14 JP JP3049311A patent/JP2590415B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ＡＧＲＯＮＯＭＩＥ（ＰＡＲＩＳ），８（６）（１９８８）Ｐ．４９５−５０２ |
| Ｊ．ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬ．（ＢＥＲＬ．），１２３（３）（１９８８）Ｐ．２７３−２８３ |
| ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＳＣＨＥ ＺＥＩＴＳＣＨＲＩＦＩ，１０２（２）（１９８１（ＲＥＣＤ．１９８２））Ｐ．１４８−１５２ |
| ぶんせき，ＮＯ．１（１９８７）Ｐ．９２−９６ |
| 植物防疫，４６（３）（１９９２）Ｐ．１１１−１１３ |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7765642B2 (en) | 2001-10-29 | 2010-08-03 | Nifco Inc. | Operating mechanism of movable member, and automobile storage apparatus |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06169757A (ja) | 1994-06-21 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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