JP2546819B2 - DIA fragment - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒトアポリポプロテインＥ（Apolipoprote
in E）又はヒトアポリポプロテインと同様の生理活性を
有するヒトアポリポプロテインＥ様物心をコードするDN
Aを含有するDNA断片に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to human apolipoprotein E (Apolipoprote
in E) or DN encoding a human apolipoprotein E-like substance having physiological activity similar to that of human apolipoprotein
It relates to a DNA fragment containing A.
血漿中に存在する主要な脂質としては、コレステトー
ル、リン脂質、トリグリセリド及び遊離脂肪酸が挙げら
れるが、このうちの前三者は蛋白と結合して存在する。
水に不溶の脂質が可溶化されたこの脂質−蛋白複合体は
リポ蛋白と呼ばれ、脂質と蛋白の割合により、種々の重
さのものを形成する。このリポ蛋白は、球形粒子状の構
造をなし、中核部分に極性のないトリグリセリド、コレ
ステロールエステルが存在し、極性のあるリン脂質、遊
離コレステロールが蛋白とともに表層を形成すると考え
られている。The major lipids present in plasma include cholesterol, phospholipids, triglycerides and free fatty acids, the former three of which are associated with proteins.
This lipid-protein complex in which water-insoluble lipid is solubilized is called lipoprotein and forms various weights depending on the ratio of lipid to protein. It is considered that this lipoprotein has a spherical particle-like structure, nonpolar triglycerides and cholesterol esters are present in the core, and polar phospholipids and free cholesterol form the surface layer together with the protein.
このリポ蛋白中に含まれる蛋白は、アポリポプロテイ
ンと呼ばれ、現在10種類以上が知られている。アポリポ
プロテインは、リポ蛋白を構成するのに必要であるばか
りでなく、リポ蛋白の代謝においても重要な役割を果た
す。このアポリポプロテインのひとつとして、アポリポ
プロテインＥが知られている。そしてこのアポリポプロ
テインＥは体内の諸細胞がレセプターを介してリポ蛋白
をとし込む場合に、認識標となることが知られている。The protein contained in this lipoprotein is called apolipoprotein, and at least 10 types are currently known. Apolipoprotein is not only required to make lipoproteins, but also plays an important role in the metabolism of lipoproteins. Apolipoprotein E is known as one of the apolipoproteins. It is known that this apolipoprotein E serves as a recognition target when cells in the body take up lipoprotein through its receptor.
さらに、このアポリポプロテインＥの主要なサブクラ
スとしてE2、E3、E4が見出されており、E3が正常人由来
であるのに対し、E2及びE4はIII型高脂血症の患者から
見出され、非正常型であると考えられている（The Jour
nal of Biological Chemistry,Vol.255,No.5,1759−176
2,1980）。Furthermore, E2, E3, and E4 have been found as major subclasses of this apolipoprotein E. E3 is derived from a normal person, whereas E2 and E4 are found from patients with type III hyperlipidemia. , Considered to be abnormal (The Jour
nal of Biological Chemistry, Vol.255, No.5, 1759-176
2, 1980).
このアポリポプロテインE3を欠損するか、又はE2もし
くはE4を有する人は、高脂血症になり、さらに動脈硬化
に至る場合が多い。Those who lack this apolipoprotein E3 or have E2 or E4 often have hyperlipidemia and also arteriosclerosis.
このような場合、患者に正常なE3を投与することによ
り、正常なアポリポプロテインＥの機能を回復させるこ
とができる。In such a case, the normal apolipoprotein E function can be restored by administering normal E3 to the patient.
このアポリポプロテインＥを遺伝子工学的手法により
得るために、アポリポプロテインＥをコードするDANが
必要となる。しかしながら完全なアポリポプロテインＥ
を得るために必要な完全長のcDNA断片は、いまだに得ら
れていない。In order to obtain this apolipoprotein E by a genetic engineering method, DAN encoding apolipoprotein E is required. However complete apolipoprotein E
The full-length cDNA fragment required to obtain the gene has not yet been obtained.
そこで、本発明者らは、上記アポリポプロテインＥを
産生するために必要な完全長cDNA断片を得るべく検討し
た結果、本発明に到達した。Therefore, the present inventors have arrived at the present invention as a result of studies to obtain a full-length cDNA fragment necessary for producing the apolipoprotein E.
すなわち本発明の要旨は、第２図の塩基配列で表わさ
れるヒトアポリポプロテインＥをコードするDNAを含有
するDNA断片に存する。That is, the gist of the present invention lies in a DNA fragment containing a DNA encoding human apolipoprotein E represented by the nucleotide sequence of FIG.
以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
まず、本発明に係るDNA断片は、次のような方法によ
つて調製される。すなわち、ヒト肝臓切片、小腸上皮細
胞、血液中のマクロフアージ又は肝臓切片等をグアニジ
ンイソチオシアネートとともにホモジナイズし、CsCl平
衡密度勾配超遠心によつて全RNAを分離する（Chirgwin
ら、Biochemistry,18,5294−5299,1797）。First, the DNA fragment according to the present invention is prepared by the following method. That is, human liver sections, small intestinal epithelial cells, macrophages in blood or liver sections are homogenized with guanidine isothiocyanate, and total RNA is separated by CsCl equilibrium density gradient ultracentrifugation (Chirgwin
Et al., Biochemistry, 18, 5294-5299, 1797).
ついで、常法によりこれをオリゴ（dT）セルロースカ
ラムクロマトグラフイーで精製し、ポリ（Ａ）含有RNA
を単離する（mRNA原料）。Then, this was purified by oligo (dT) cellulose column chromatography by a conventional method to obtain poly (A) -containing RNA.
Is isolated (mRNA raw material).
このmRNA原料より、岡山とバーグ（Berg）の方法（Mo
lecular and Cellular Biology,2,161−170,1982）によ
つて、cDNAライブラリーを得る。すなわち、pBR322とSV
40のハイブリツドプラスミドを用いて、ベクタープライ
マーとオリゴ（dG）テールリンカーを得る。このベクタ
ープライマーと上記mRNA共存下に逆転写酵素を作用させ
てcDNAを合成し、その後制限酵素Hind IIIで消化し、つ
いで上記リンカーを用いて環化させる。その後、mRNA部
分をDNAで置換して、cDNA断片含有プラスミドを得る。From this mRNA raw material, the method of Okayama and Berg (Mo
lecular and Cellular Biology, 2, 161-170, 1982) to obtain a cDNA library. That is, pBR322 and SV
Forty hybrid plasmids are used to obtain vector primers and oligo (dG) tail linkers. Reverse transcriptase is allowed to act in the presence of this vector primer and the above-mentioned mRNA to synthesize cDNA, which is then digested with the restriction enzyme Hind III and then cyclized using the above-mentioned linker. Then, the mRNA portion is replaced with DNA to obtain a cDNA fragment-containing plasmid.
ついで、常法により、これを大腸菌（Escherichia co
li）等に形質転換し、アンピシリン耐性株を取得する。
その後、プローブとして、アポリポプロテインＥのアミ
ノ酸配列218−222 Met−Glu−Glu−Met−Gly に相当する塩基配列の一部もしくは全部を含む合成オリ
ゴヌクレチド又は少くとも該塩基配列を含む合成オリゴ
ヌクレチドを用いて、これと相補性のある配列を含むク
ローンを選択する。こうして得られるクローン中より、
適切な制限酵素で切断して、最も長いcDNAが挿入されて
いるプラスミドを有するクローンを選択する。Then, according to a conventional method, this was transformed into E. coli (Escherichia co
li) etc. to obtain an ampicillin resistant strain.
Then, as a probe, using a synthetic oligonucleotide containing a part or all of the nucleotide sequence corresponding to the amino acid sequence 218-222 Met-Glu-Glu-Met-Gly of apolipoprotein E, or at least a synthetic oligonucleotide containing the nucleotide sequence. , A clone containing a sequence complementary thereto is selected. From the clones thus obtained,
Cut with the appropriate restriction enzymes to select the clones carrying the plasmid with the longest cDNA inserted.
そのクローンより得られるcDNA断片は、MaxamとGilbe
rtの方法（Methods in Enzy−mology,65,499−560,198
0）によつて塩基配列が決定される。The cDNA fragment obtained from the clone was Maxam and Gilbe.
rt method (Methods in Enzy-mology, 65,499-560,198
0) determines the base sequence.
本発明に係るDNA断片は、アポリポプロテインＥ又は
アポリポプロテインＥと同様の生理活性を有するアポリ
ポプロテインＥ様物質をコードするDNAを含有するDNA断
片である。その一例を第２図に示すが、本発明に係るDN
A断片は必ずしもこれと同一の塩基配列を有することを
要求されず、該DNA断片に含まれるDNAによつてコードさ
れる物質が、アポリポプロテインＥと同様の生理活性を
有するアポリポプロテインＥ様物質であれば、該塩基配
列の一部が置換もしくは削除され、又は塩基が付加され
た塩基配列であつてもよい。The DNA fragment according to the present invention is a DNA fragment containing DNA encoding apolipoprotein E or an apolipoprotein E-like substance having a physiological activity similar to that of apolipoprotein E. An example of this is shown in FIG. 2, which is a DN according to the present invention.
The A fragment is not necessarily required to have the same nucleotide sequence as this, and the substance encoded by the DNA contained in the DNA fragment is an apolipoprotein E-like substance having the same physiological activity as apolipoprotein E. If present, a part of the base sequence may be replaced or deleted, or a base sequence may be added.
なお、非正常型サブクラスE2又はE4に対応するDNA断
片は、E2又はE4を有する患者由来の肝臓切片等を用いる
ことにより、得ることができる。The DNA fragment corresponding to the abnormal subclass E2 or E4 can be obtained by using a liver section derived from a patient having E2 or E4.
本発明に係るDNA断片は、常法により発現ベクターの
クローニング部位に導入することによつて、これを鋳型
とする翻訳によりアポリポプロテインＥ又はアポリポプ
ロテインＥ様物質、あるいはこれを含む融合蛋白を得る
ことができる。The DNA fragment according to the present invention is introduced into a cloning site of an expression vector by a conventional method to obtain apolipoprotein E or an apolipoprotein E-like substance or a fusion protein containing the same by translation using the DNA fragment as a template. You can
得られる蛋白（アポリポプロテインE2、E3又はE4な
ど）を抗原とし、常法により抗血清を得、これを用いて
アポリポプロテイン正常型E3の欠損又は非正常型（E2、
E4）の存在の検出を行なうことができる。Using the resulting protein (apolipoprotein E2, E3, E4, etc.) as an antigen, antiserum is obtained by a conventional method, and using this, normal or defective apolipoprotein E3 (E2,
The presence of E4) can be detected.
さらに、得られるアポリポプロテインE3を、抗高脂血
症剤、抗動脈硬化剤として用いることもできる。Further, the obtained apolipoprotein E3 can be used as an antihyperlipidemic agent or an antiarteriosclerotic agent.
以下、実施例により、本発明を更に具体的説明する
が、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例
により限定されない。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention is not limited to the following Examples as long as the gist thereof is not exceeded.
実施例１ （１） ヒト肝臓切片を液体窒素存在下で破砕した後グ
アニジンイソチオシアネート水溶液を添加しホモジナイ
ズした。得られたホモジネートを、Chirgwinらの方法
（Biochemistry,18,5294−5299,1979）にしたがつて、
塩化セシウム平衡密度勾配超遠心によつて全RNAを分離
した。ついで、常法によりこれをオリゴ（dT）セルロー
スカラムクロマトグラフイーで精製し、ポリ（Ａ）含有
RNAを単離し、mRNA原料とした。Example 1 (1) Human liver slices were crushed in the presence of liquid nitrogen, and then an aqueous guanidine isothiocyanate solution was added to homogenize. The resulting homogenate was subjected to the method of Chirgwin et al. (Biochemistry, 18, 5294-5299, 1979),
Total RNA was isolated by cesium chloride equilibrium density gradient ultracentrifugation. Then, this was purified by oligo (dT) cellulose column chromatography by a conventional method to contain poly (A).
RNA was isolated and used as a raw material for mRNA.
（２） 一方、岡山とBergの方法（Molecular and Cell
ular Biology 2,1617−170,1982）により,pBR322とSV40
のハイブリツドプラスミドを用いて、ベクタープライマ
ーとオリゴ（dG）テールリンカーを得た。すなわち、pB
R322とSV40（マツプユニツト0.71−0.86）のハイブリツ
ドプラスミド400ugを、ウシ血清アルブミンを含む緩衝
液中で制限酵素Kpn Iで37℃、４時間消化させた。(2) On the other hand, the method of Okayama and Berg (Molecular and Cell
ular Biology 2, 1617-170, 1982), pBR322 and SV40
Using the hybrid plasmid of, a vector primer and an oligo (dG) tail linker were obtained. That is, pB
400 ug of hybrid plasmid of R322 and SV40 (map unit 0.71-0.86) was digested with restriction enzyme Kpn I at 37 ° C. for 4 hours in a buffer containing bovine serum albumin.
ついで、常法によりエタノール沈澱によつてDNAを回
収し、これをdTTPを含む緩衝液に溶解し、ターミナルデ
オキシヌクレオチジルトランスフエラーゼを添加して、
37℃で30分間反応させて、制限酵素Kpn Iの消化部位に
約60個のdTテールを付加させた後、エタノール沈澱によ
りDNAを回収した。ついで、このDNAをウシ血清アルブミ
ンを含む緩衝液中で、制限酵素Hpa Iにより消化した（3
7℃、５時間）。大きい方のDNA断片を、アガロースゲル
電気泳動により精製し、ガラスパウダー法（Vogelsteln
ら、proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,76,615−619,1979）に
よつて回収した。その後、このDNAを０℃でオリゴ（d
A）セルロースカラムに付し、水で溶出させた後、エタ
ノールで回収し、オリゴ（dT）テールを有するベクター
プライマーを得た。Then, DNA was recovered by ethanol precipitation by a conventional method, dissolved in a buffer containing dTTP, and terminal deoxynucleotidyl transferase was added,
After reacting at 37 ° C. for 30 minutes, about 60 dT tails were added to the digestion site of the restriction enzyme Kpn I, and then DNA was recovered by ethanol precipitation. This DNA was then digested with the restriction enzyme Hpa I in a buffer containing bovine serum albumin (3
7 ° C, 5 hours). The larger DNA fragment was purified by agarose gel electrophoresis and the glass powder method (Vogelsteln
, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 76,615-619,1979). After that, this DNA was oligo (d
A) It was applied to a cellulose column, eluted with water, and then recovered with ethanol to obtain a vector primer having an oligo (dT) tail.
他方、pBR322とSV40（マツプユニツト0.19〜0.32）と
のハイブリツドプラスミド100ugをウシ血清アルブミン
を含む緩衝液中で、制限酵素Pst Iにより消化した（37
℃、１時間半）。ついで、DNAを回収し、dGTPを含む緩
衝液中に溶解し、ターミナルデオキシヌクレオチジルト
ランスフエラーゼを添加して、37℃で20分間反応させ、
約10〜15のdGテールを付加させた。回収したDNAを、ウ
シ血清アルブミンを含む緩衝液中で制限酵素Hind IIIに
より消化させ（37℃、１時間）、ついでアガロースゲル
（1.8％）電気泳動に付し、小さいオリゴ（dG）テール
リンカーDNAを抽出、回収した。On the other hand, 100 ug of hybrid plasmid of pBR322 and SV40 (map unit 0.19 to 0.32) was digested with restriction enzyme Pst I in a buffer containing bovine serum albumin (37
C, 1 hour and a half). Then, the DNA was recovered, dissolved in a buffer containing dGTP, added with terminal deoxynucleotidyl transferase and reacted at 37 ° C. for 20 minutes,
About 10 to 15 dG tails were added. The recovered DNA was digested with a restriction enzyme Hind III in a buffer containing bovine serum albumin (37 ° C, 1 hour), and then subjected to agarose gel (1.8%) electrophoresis to obtain a small oligo (dG) tail linker DNA. Was extracted and recovered.
（３） 岡山と、バーグ（Berg）の方法（Molecular an
d Cellular Biology 2,161−170,1982）により、cDNAラ
イブラリーを得た。(3) Okayama and Berg's method (Molecular an
d Cellular Biology 2, 161-170, 1982) to obtain a cDNA library.
すなわち、Tris−HCl（pH8.3）、MgCl2、KCl、ジチオ
スレイトール、dATP、dTTP、dGTP及び〔32P〕dCTPを含
む水溶液に上記（１）で得られたmRNA30ugと上記（２）
で得られたベクタープライマー10ugを添加して、逆転写
酵素の存在下に37℃、20分間、反応させ、プラスミドー
cDNA:mRNAを合成し、これをエタノール沈澱しペレツト
状で回収した。このペレツトをCoCl2、ジチオスレイト
ール、ポリ（Ａ）、〔32P〕dCTP及びターミナルデオキ
シヌクレオチジルトランスフエラーゼを含有する緩衝液
に溶解し、37℃、10分間反応させ、末端あたりdCMPの10
〜15の残基を付加させた。ついで、回収したオリゴ（d
C）テーブルプラスミド−cDNA:mRNAを含有するペレツト
をウシ血清アルブミンを含む緩衝液に溶解し、制限酵素
Hind IIIで37℃、１時間消化し、エタノール沈澱によ
り、Hind III消化オリゴ（dC）テールcDNA:mRNAプラス
ミドを回収した。これを前記（２）で得られたオリゴ、
（dG）テールリンカーDNAを含む緩衝液に溶解し、65
℃、２分間インキューペートし、さらに42℃、30分間保
持し、０℃に冷却した。ついで、β−NAD（ニコチンア
デニンジヌクレチド）存在下、大腸菌（E.coli）DNAリ
ガーゼを加えて、一夜インキュベートした。その後、dA
TP、dTTP、dGTP、dCTP、β−NAD、E.coli DNAリガー
ゼ、E.coli DNAポリメラーゼ及びE.coli RNase Hを添加
して、この混合物を12℃、１時間、次いで室温で１時間
インキュベートした後、冷却し、反応を停止させ目的と
するcDNA断片含有プラスミドを得た。That is, 30 ug of mRNA obtained in the above (1) and the above (2) in an aqueous solution containing Tris-HCl (pH 8.3), MgCl 2 , KCl, dithiothreitol, dATP, dTTP, dGTP and [ 32 P] dCTP.
Add 10 ug of the vector primer obtained in the above step, and allow it to react in the presence of reverse transcriptase for 20 minutes at 37 ℃.
cDNA: mRNA was synthesized, ethanol-precipitated and recovered in pellet form. This pellet was dissolved in a buffer solution containing CoCl 2 , dithiothreitol, poly (A), [ 32 P] dCTP and terminal deoxynucleotidyl transferase and allowed to react at 37 ° C. for 10 minutes to give 10 dCMP per terminal.
~ 15 residues were added. Then, the recovered oligo (d
C) A pellet containing table plasmid-cDNA: mRNA was dissolved in a buffer containing bovine serum albumin, and the restriction enzyme was added.
It was digested with Hind III at 37 ° C. for 1 hour, and the Hind III digested oligo (dC) tail cDNA: mRNA plasmid was recovered by ethanol precipitation. This is the oligo obtained in (2) above,
(DG) Dissolve in a buffer containing tail linker DNA,
Incubate at 2 ° C for 2 minutes, hold at 42 ° C for 30 minutes, and cool to 0 ° C. Then, in the presence of β-NAD (nicotine adenine dinucleotide), E. coli DNA ligase was added and incubated overnight. Then dA
TP, dTTP, dGTP, dCTP, β-NAD, E. coli DNA ligase, E. coli DNA polymerase and E. coli RNase H were added and the mixture was incubated at 12 ° C for 1 hour and then at room temperature for 1 hour. Then, it was cooled and the reaction was stopped to obtain the desired plasmid containing the cDNA fragment.
（４） ついで、このプラスミドを用いて常法により、
大腸菌（E.coli）HB101を形質転換させた。(4) Then, using this plasmid by a conventional method,
E. coli HB101 was transformed.
その後、プローブとして、アポリポプロテインＥのア
ミノ酸配列218−222 Met−Glu−Glu−Met−Gly に相当する４種類の合成オリゴヌクレオチド を用いて、ハナハン（Hanahan）らの方法（Gene,10,63
−67,1980）によつてスクリーニングを行ない、これと
相補性のある配列を含むクローンを選択した。約100,00
0の形質転換体中、約50個のクローンが選択され、この
うちの14個のクローンについて数種の制限酵素により処
理し、そのうちの３つのクローンが共通の制限酵素認識
部位をもつことが判明した。そのうちで最も大きなクロ
ーンpYAE10を選択し、このクローンの塩基配列をMaxam
とGilbertの方法により決定した。Then, as probes, four kinds of synthetic oligonucleotides corresponding to the amino acid sequence 218-222 Met-Glu-Glu-Met-Gly of apolipoprotein E were prepared. Using the method of Hanahan et al. (Gene, 10, 63
-67, 1980), and a clone containing a sequence complementary thereto was selected. About 100,00
Approximately 50 clones were selected from 0 transformants, and 14 clones among them were treated with several restriction enzymes, and it was revealed that 3 clones among them had a common restriction enzyme recognition site. did. The largest clone of them, pYAE10, was selected and the nucleotide sequence of this clone was
And Gilbert's method.
第１図は上記クローンの塩基配列決定のために作成し
た制限酵素切断地図を示す（ATG:翻訳開始コドン、TGA:
翻訳停止コドン）。また、第２図（a,b）に上記DNA断片
の塩基配列及びそれより想定されるアミノ酸配列を示す
（アミノ酸残基数:317）。FIG. 1 shows a restriction enzyme digestion map prepared for determining the nucleotide sequence of the above clone (ATG: translation initiation codon, TGA:
Translation stop codon). In addition, FIG. 2 (a, b) shows the nucleotide sequence of the above DNA fragment and the amino acid sequence assumed therefrom (the number of amino acid residues: 317).
このNA断片は、正常人由来のアポリポプロテインE3に
相当する。This NA fragment corresponds to apolipoprotein E3 derived from a normal person.
第１図は本発明に係るDNA断片が挿入されているプラス
ミドを有するクローンの制御酵素切断地図を示し、第２
図（a,b）は、本発明に係るDNA断片の塩基配列及びそれ
より想定されるアミノ酸配列を示す。FIG. 1 shows a control enzyme cleavage map of a clone having a plasmid into which the DNA fragment of the present invention has been inserted.
Diagrams (a, b) show the nucleotide sequence of the DNA fragment according to the present invention and the amino acid sequence assumed therefrom.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 松井 泰 横浜市緑区鴨志田町1000番地 三菱化成 工業株式会社総合研究所内 (72)発明者 木村 昌子 横浜市緑区鴨志田町1000番地 三菱化成 工業株式会社総合研究所内 (72)発明者 池田 康子 横浜市緑区鴨志田町1000番地 三菱化成 工業株式会社総合研究所内 (56)参考文献 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，257, 4171−4178（1982) Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌ ｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２，161 −170（1982) Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，257, 14639−14641（1982) ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Yasushi Matsui 1000 Kamoshida-cho, Midori-ku, Yokohama-shi Mitsubishi Kasei Kogyo Co., Ltd. (72) Masako Kimura 1000 Kamoshida-cho, Midori-ku, Yokohama Mitsubishi Kasei Kogyo Co., Ltd. Research Institute (72) Inventor Yasuko Ikeda 1000 Kamoshida-cho, Midori-ku, Yokohama Mitsubishi Chemical Industry Co., Ltd. (56) References Journal of Biological Chemistry, 257, 4171-4178 (1982) Molecular and Cellular Blue , 2, 161-170 (1982) Journal of Biological Chemistry, 257, 14639-14641 (1982)
Claims (2)
ードするDNAを含有するDNA断片1. DNA fragment containing DNA encoding human apolipoprotein E represented by the nucleotide sequence of
ロテインＥに対するmRNAから得られるcDNAを下記のヒト
アポリポプロテインＥのアミノ酸配列：218 Met−Glu−Glu−Met−Glyに相当する塩基配列の一部
もしくは全部を含むオリゴヌクレオチド又は少くとも該
塩基配列を含むオリゴヌクレオチドをプローブとして得
られる特許請求の範囲第１項記載のDNA断片2. A cDNA obtained from mRNA for human apolipoprotein E contained in human hepatocytes, which is a nucleotide sequence corresponding to the following amino acid sequence of human apolipoprotein E: 218 Met-Glu-Glu-Met-Gly The DNA fragment according to claim 1, which can be obtained by using an oligonucleotide containing a part or all or at least an oligonucleotide containing the base sequence as a probe.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP58224980A JP2546819B2 (en) | 1983-11-29 | 1983-11-29 | DIA fragment |
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| JP58224980A JP2546819B2 (en) | 1983-11-29 | 1983-11-29 | DIA fragment |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58224980A Expired - Lifetime JP2546819B2 (en) | 1983-11-29 | 1983-11-29 | DIA fragment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2546819B2 (en) |
-
1983
- 1983-11-29 JP JP58224980A patent/JP2546819B2/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２５７，１４６３９−１４６４１（１９８２） |
| ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２５７，４１７１−４１７８（１９８２） |
| ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２，１６１−１７０（１９８２） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60118189A (en) | 1985-06-25 |
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