JP2026508317A - 多価抗スパイクタンパク質結合分子およびその使用 - Google Patents

多価抗スパイクタンパク質結合分子およびその使用

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Abstract

本開示は、多価抗スパイクタンパク質結合分子を提供する。本開示は、更に、多価抗スパイクタンパク質結合分子を生成する方法、多価抗スパイクタンパク質結合分子から構成される薬学的組成物、ならびにＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連する状態、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９を治療するための多価抗スパイクタンパク質結合分子の使用方法に関する。

Description

１．関連出願の相互参照
本出願は、米国仮出願第６３／４８７，４２４号（２０２３年２月２８日に出願）の優先権の利益を主張し、その内容は、その参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
２．配列表
本出願は、ＸＭＬ形式で電子的に提出されている配列表を含有し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。上述のＸＭＬ配列表は、２０２４年２月２７日に作成され、名称がＲＧＮ－０２９ＷＯ＿ＳＬ．ｘｍｌであり、サイズが６４１，２８８バイトである。
３．背景技術
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、Ｂｅｔａｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ属のエンベロープ型のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ヒトコロナウイルス（ＨＣｏＶ）－ＯＣ４３、およびＨＣｏＶ－ＨＫＵ１も含む（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０２２，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２３（１）：３－２０）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＣＯＶＩＤ－１９を引き起こし、ＣＯＶＩＤ－１９は、２０１９年後半に最初に特性決定され、２０２０年初頭に世界的なパンデミックへと拡大した、潜在的に生命を脅かす疾患である。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶと約８０％の同一性を共有し、両ウイルスは、細胞侵入のためのアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）との相互作用に依存し、ＡＣＥ２は、多くの細胞型の細胞外表面に発現する酵素である。
現在、重度の疾患の発現を予防するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するいくつかのワクチンを使用している。しかしながら、ワクチン接種率は、集団によって異なっており、ワクチン接種率の高い地域であっても、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫付与された個人において、ＣＯＶＩＤ－１９を引き起こすブレイクスルー感染が観察されている。一部の個人は、ＣＯＶＩＤ－１９であると複数回診断されているため、以前のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染も、将来の感染に対する完全な免疫を与えていないようである。更に、一部の個人におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、感染のクリアランスから数週間～数ヶ月にわたるＣＯＶＩＤ－１９の１つ以上の症状の持続に関連する長期間の疾患を引き起こす。これらの観察結果は、ＣＯＶＩＤ－１９が引き起こす深刻な集団の健康上の脅威および効果的な治療を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染と戦う必要性を強調するものである。
Ｐａｘｌｏｖｉｄ（経口抗ウイルス薬であるニルマトレルビルおよびリトナビルの組み合わせである）などの小分子治療は、入院を防ぐことができるが、これらは、ウイルスが再出現する「Ｐａｘｌｏｖｉｄリバウンド」効果に関連している（Ｃａｌｌａｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ（Ｎｅｗｓ），１１ Ａｕｇｕｓｔ ２０２２）。一方で、モノクローナル抗体などの生物学的治療は、ウイルス増殖を直接的に鈍らせることができ、強固かつ長く続く治療効果をもたらす。しかしながら、新たなＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントの急速な出現に起因して、患者から単離された抗体は、典型的には、株特異的であり、特定のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントに対してそれらを無効にする。したがって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して有効である中和治療を開発する必要性が依然として残っている。
４．概要
本開示は、コロナウイルスと宿主細胞との間の相互作用を阻害するのに適した、コロナウイルススパイクタンパク質に結合する多価抗原結合分子（一般的には本明細書で「多価抗スパイクタンパク質結合分子」と呼ばれる）に関する。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、典型的には、１個以上の多量体化部分（例えば、５個または６個の多量体化部分）によって作動可能に連結された複数のスパイクタンパク質抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）（例えば、１０個または１２個のスパイクタンパク質ＡＢＤ）を含む。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、付番された実施形態１～１０２に記載されている。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、典型的には十価または十二価であり、ＡＢＤを、例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖの形態で含む。いくつかの実施形態において、１０個または１２個のＡＢＤは、スパイクタンパク質ＡＢＤである。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、単一特異性（例えば、全てのＡＢＤが、スパイクタンパク質の同じ領域に結合し、任意選択で、全てが同じ配列を有する）または多重特異性（例えば、ＡＢＤのうちの少なくとも２個が、スパイクタンパク質の異なる領域またはバリアントに結合し、配列が異なっているか、またはスパイクタンパク質および別の標的に結合する）であることが可能である。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子への組み込みに好適なスパイクタンパク質ＡＢＤおよびスパイクタンパク質ＡＢＤフォーマットは、セクション６．２および６．３、ならびに付番された実施形態４～２７、３６、および３７に記載されている。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、１個以上の多量体化部分を含む。典型的には、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、各々がＦｃ二量体を含むか、またはそれらからなる、５個または６個の多量体化部分（例えば、５個または６個の二量体ＩｇＭ Ｆｃドメイン）を含む。特定の態様において、多価抗スパイクタンパク質結合分子は、ＩｇＭ Ｆｃドメインを接続するＪ鎖を更に含み、これを包含することで、典型的には、１０個のＡＢＤを含む分子を提供する（ＩｇＭ Ｆｃドメインを接続するＪ鎖を含まない分子における１２個のＡＢＤとは対照的に）。いくつかの実施形態において、Ｊ鎖は、Ｆｃドメイン（二量体化ＩｇＧドメイン、非二量体化Ｆｃドメイン、またはＦｃ １．５ドメインであることが可能である）、例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されている。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子への組み込みに好適な多量体化部分は、セクション６．４ならびに付番された実施形態３５、および３８～６６に記載されている。
本開示の多価抗スパイク結合タンパク質結合分子の２個以上の構成要素は、リンカー、例えば、ペプチドリンカーによって互いに接続することができる。例として、限定されないが、リンカーを使用して、スパイクタンパク質ＡＢＤを多量体化部分に接続することができる。本開示の多価抗スパイク結合タンパク質結合分子への組み込みに好適なリンカーは、セクション６．５に記載されている。
本開示は、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子をコードする核酸、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子を発現するように操作された宿主細胞、および本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子の生成のための組換え方法を更に提供する。そのような核酸、宿主細胞、および生成方法は、セクション６．６および付番された実施形態１０３～１０５に記載されている。
本開示は、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子を含む薬学的組成物、ならびに治療上の適応症および使用方法を更に提供する。薬学的組成物は、セクション６．７および付番された実施形態１０６に記載されている。多価抗スパイクタンパク質結合分子の使用方法は、セクション６．８および付番された実施形態１０７～１１９に記載されている。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子の態様の他の特徴および利点は、添付の図面と併せて、以下のより詳細な説明から明らかになるであろう。
５．図面の簡単な説明
本開示の例示的なＩｇＭ交互フォーマット（「ＡＦ」）抗体の五量体構築物および六量体構築物の構造を示す。ここで、 （１）は、Ｆａｂ部分を表し、 （２）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ２ドメインを表し、 （３）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ３ドメインを表し、 （４）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ４ドメインを表し、 （５）は、ＩｇＭのＪ鎖領域を表し、 （６）は、二量体化ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （７）は、Ｆｃ１．５ドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （８）は、非二量体化Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表す。 本開示の例示的なＩｇＭ交互フォーマット（「ＡＦ」）抗体の五量体構築物および六量体構築物の構造を示す。ここで、 （１）は、Ｆａｂ部分を表し、 （２）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ２ドメインを表し、 （３）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ３ドメインを表し、 （４）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ４ドメインを表し、 （５）は、ＩｇＭのＪ鎖領域を表し、 （６）は、二量体化ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （７）は、Ｆｃ１．５ドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （８）は、非二量体化Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表す。 本開示の例示的なＩｇＭ交互フォーマット（「ＡＦ」）抗体の五量体構築物および六量体構築物の構造を示す。ここで、 （１）は、Ｆａｂ部分を表し、 （２）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ２ドメインを表し、 （３）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ３ドメインを表し、 （４）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ４ドメインを表し、 （５）は、ＩｇＭのＪ鎖領域を表し、 （６）は、二量体化ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （７）は、Ｆｃ１．５ドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （８）は、非二量体化Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表す。 本開示の例示的なＩｇＭ交互フォーマット（「ＡＦ」）抗体の五量体構築物および六量体構築物の構造を示す。ここで、 （１）は、Ｆａｂ部分を表し、 （２）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ２ドメインを表し、 （３）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ３ドメインを表し、 （４）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ４ドメインを表し、 （５）は、ＩｇＭのＪ鎖領域を表し、 （６）は、二量体化ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （７）は、Ｆｃ１．５ドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （８）は、非二量体化Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表す。 本開示の例示的なＩｇＭ交互フォーマット（「ＡＦ」）抗体の五量体構築物および六量体構築物の構造を示す。ここで、 （１）は、Ｆａｂ部分を表し、 （２）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ２ドメインを表し、 （３）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ３ドメインを表し、 （４）は、ＩｇＭ－ＦｃのＣμ４ドメインを表し、 （５）は、ＩｇＭのＪ鎖領域を表し、 （６）は、二量体化ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （７）は、Ｆｃ１．５ドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表し、 （８）は、非二量体化Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を表す。 アフィニティー精製前（左のゲル）またはアフィニティー精製後（右のゲル）の、別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物の２つの代表的な還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。 別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイルを示す。図３Ａは、ＩｇＭ構築物１０９３３－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｂは、ＩｇＭ構築物１４２５６－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｃは、ＩｇＭ構築物１０９８７－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｄは、ＩｇＭ構築物１４３１５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｅは、ＩｇＭ構築物１０９８５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｆは、ＩｇＭ構築物１０９８９－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。 別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイルを示す。図３Ａは、ＩｇＭ構築物１０９３３－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｂは、ＩｇＭ構築物１４２５６－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｃは、ＩｇＭ構築物１０９８７－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｄは、ＩｇＭ構築物１４３１５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｅは、ＩｇＭ構築物１０９８５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｆは、ＩｇＭ構築物１０９８９－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。 別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイルを示す。図３Ａは、ＩｇＭ構築物１０９３３－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｂは、ＩｇＭ構築物１４２５６－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｃは、ＩｇＭ構築物１０９８７－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｄは、ＩｇＭ構築物１４３１５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｅは、ＩｇＭ構築物１０９８５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｆは、ＩｇＭ構築物１０９８９－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。 別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイルを示す。図３Ａは、ＩｇＭ構築物１０９３３－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｂは、ＩｇＭ構築物１４２５６－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｃは、ＩｇＭ構築物１０９８７－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｄは、ＩｇＭ構築物１４３１５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｅは、ＩｇＭ構築物１０９８５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｆは、ＩｇＭ構築物１０９８９－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。 別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイルを示す。図３Ａは、ＩｇＭ構築物１０９３３－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｂは、ＩｇＭ構築物１４２５６－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｃは、ＩｇＭ構築物１０９８７－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｄは、ＩｇＭ構築物１４３１５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｅは、ＩｇＭ構築物１０９８５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｆは、ＩｇＭ構築物１０９８９－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。 別個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ－タンパク質Ｆａｂ部分を有する６個の例示的なＩｇＭ構築物のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイルを示す。図３Ａは、ＩｇＭ構築物１０９３３－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｂは、ＩｇＭ構築物１４２５６－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｃは、ＩｇＭ構築物１０９８７－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｄは、ＩｇＭ構築物１４３１５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｅは、ＩｇＭ構築物１０９８５－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。図３Ｆは、ＩｇＭ構築物１０９８９－ＩｇＭのＳＥＣプロファイルを示す。 異なるＲＢＤを標的とする例示的なＩｇＭによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４ＧおよびＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図４Ａは、シュードウイルスＤ６１４Ｇの中和の程度を示す。図４Ｂおよび４Ｃは、それぞれ、ＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。全ての評価において、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）を対照として含めた。 異なるＲＢＤを標的とする例示的なＩｇＭによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４ＧおよびＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図４Ａは、シュードウイルスＤ６１４Ｇの中和の程度を示す。図４Ｂおよび４Ｃは、それぞれ、ＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。全ての評価において、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）を対照として含めた。 異なるＲＢＤを標的とする例示的なＩｇＭによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４ＧおよびＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図４Ａは、シュードウイルスＤ６１４Ｇの中和の程度を示す。図４Ｂおよび４Ｃは、それぞれ、ＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。全ての評価において、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）を対照として含めた。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９３３－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９３３親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図５Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図５Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図５Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９３３－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９３３親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図５Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図５Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図５Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９３３－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９３３親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図５Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図５Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図５Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８９－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８９親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図６Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図６Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図６Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。示し、図５Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８９－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８９親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図６Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図６Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図６Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。示し、図５Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８９－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８９親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図６Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図６Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図６Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図７Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図７Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図７Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図７Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図７Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図７Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図７Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図７Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図７Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８５－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８５親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図８Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図８Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図８Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８５－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８５親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図８Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図８Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図８Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１０９８５－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１０９８５親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図８Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図８Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図８Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１４３１５－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４３１５親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図９Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図９Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図９Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１４３１５－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４３１５親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図９Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図９Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図９Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび２個のオミクロンバリアントに対する１４３１５－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４３１５親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図９Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図９Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示し、図９Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび４個のオミクロンバリアントに対する１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１０Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１０Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｄは、ＢＡ．２．７５バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｅは、ＢＡ．４／ＢＡ．５バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび４個のオミクロンバリアントに対する１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１０Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１０Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｄは、ＢＡ．２．７５バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｅは、ＢＡ．４／ＢＡ．５バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび４個のオミクロンバリアントに対する１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１０Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１０Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｄは、ＢＡ．２．７５バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｅは、ＢＡ．４／ＢＡ．５バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび４個のオミクロンバリアントに対する１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１０Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１０Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｄは、ＢＡ．２．７５バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｅは、ＢＡ．４／ＢＡ．５バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４Ｇおよび４個のオミクロンバリアントに対する１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１０Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１０Ｂは、ＢＡ．１バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｃは、ＢＡ．２バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｄは、ＢＡ．２．７５バリアントの中和の程度を示す。図１０Ｅは、ＢＡ．４／ＢＡ．５バリアントの中和の程度を示す。 現在流行しているオミクロンバリアントＢＱ．１に対する１４３１５－ＩｇＭおよび１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。図１１Ａは、１４３１５－ＩｇＭ、１４２８７－ＩｇＭ、１０９３３－ＩｇＭ、および１０９８５－ＩｇＭによるＢＱ．１の中和を示す。ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶを対照として含めた。図１１Ｂは、１４３１５－ＩｇＭとＲＥＧＮ１４３１５ ＩｇＧとの間のＢＱ．１中和比較を示す。図１１Ｃは、１４２８７－ＩｇＭとＲＥＧＮ１４２８７ ＩｇＧとの間のＢＱ．１中和比較を示す。 現在流行しているオミクロンバリアントＢＱ．１に対する１４３１５－ＩｇＭおよび１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。図１１Ａは、１４３１５－ＩｇＭ、１４２８７－ＩｇＭ、１０９３３－ＩｇＭ、および１０９８５－ＩｇＭによるＢＱ．１の中和を示す。ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶを対照として含めた。図１１Ｂは、１４３１５－ＩｇＭとＲＥＧＮ１４３１５ ＩｇＧとの間のＢＱ．１中和比較を示す。図１１Ｃは、１４２８７－ＩｇＭとＲＥＧＮ１４２８７ ＩｇＧとの間のＢＱ．１中和比較を示す。 現在流行しているオミクロンバリアントＢＱ．１に対する１４３１５－ＩｇＭおよび１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。図１１Ａは、１４３１５－ＩｇＭ、１４２８７－ＩｇＭ、１０９３３－ＩｇＭ、および１０９８５－ＩｇＭによるＢＱ．１の中和を示す。ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶを対照として含めた。図１１Ｂは、１４３１５－ＩｇＭとＲＥＧＮ１４３１５ ＩｇＧとの間のＢＱ．１中和比較を示す。図１１Ｃは、１４２８７－ＩｇＭとＲＥＧＮ１４２８７ ＩｇＧとの間のＢＱ．１中和比較を示す。 ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子のプロテインＡ結合およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を示す。図１２Ａは、プロテインＡインキュベーション後の３個の例示的なＩｇＭ構築物の代表的なＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。図１２Ｂは、図１２Ａに示されるのと同じ３個の例示的なＩｇＭ構築物のＳＥＣプロファイルを示す。 ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子のプロテインＡ結合およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を示す。図１２Ａは、プロテインＡインキュベーション後の３個の例示的なＩｇＭ構築物の代表的なＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。図１２Ｂは、図１２Ａに示されるのと同じ３個の例示的なＩｇＭ構築物のＳＥＣプロファイルを示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４ＧおよびＸＢＢ１．５バリアントに対するＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧ、１４２８７－ＩｇＭ、およびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１３Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１３Ｂは、ＸＢＢ１．５バリアントの中和の程度を示す。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスＤ６１４ＧおよびＸＢＢ１．５バリアントに対するＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む１４２８７－ＩｇＭの中和効力を示す。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７親ＩｇＧ、１４２８７－ＩｇＭ、およびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。図１３Ａは、Ｄ６１４Ｇの中和の程度を示す。図１３Ｂは、ＸＢＢ１．５バリアントの中和の程度を示す。
６．詳細な説明
６．１．定義
本明細書で使用される場合、以下の用語は、以下の意味を有することを意図している。
約、およそ：「約」、「およそ」などの用語は、明細書全体を通して数値の前に使用され、（例えば、端数、測定精度および／または精度の変動、タイミングなどを考慮するために）数値が必ずしも正確ではないことを示す。Ｘがある数値である場合の「約Ｘ」または「およそＸ」の開示は、「Ｘ」の開示でもあることを理解されたい。したがって、例えば、ある配列が別の配列に対して「約Ｘ％の配列同一性」を有する実施形態の開示は、その配列が他の配列に対して「Ｘ％の配列同一性」を有する実施形態の開示でもある。
および、または：別段に示されない限り、接続詞「または」は、選択肢における特徴の選択（Ａの選択がＢから相互に排他的である場合の、ＡまたはＢ）と、結合した特徴の選択（ＡおよびＢの両方が選択される場合の、ＡまたはＢ）の両方を包含する、ブール論理演算子としてのその正しい意味で使用されることが意図される。本文のいくつかの箇所では、「および／または」という用語は同じ目的で使用され、「または」が相互に排他的な選択肢を参照して使用されることを意味すると解釈されるべきではない。
抗体：本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原に非共有結合的に、可逆的に、および特異的に結合することができる免疫グロブリンファミリーのポリペプチド（またはポリペプチドのセット）を指す。例えば、ＩｇＧ型の天然に存在する「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む四量体である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＶＨと略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＶＬと略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメインから構成される（本明細書でＣＬと略される）。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる）が点在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端に以下の順序で配置されている。ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の構成要素（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介してもよい。「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、二重特異性または多重特異性抗体、および抗イディオタイプ（抗ｉｄ）抗体を含むが、これらに限定されない。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）のものであることが可能である。軽鎖および重鎖の両方は、構造的および機能的な相同性の領域に分けられる。「定常」および「可変」という用語が、機能的に使用される。この点で、軽（ＶＬ）鎖部分および重（ＶＨ）鎖部分の両方の可変ドメインが、抗原認識および特異性を決定することが理解されるであろう。逆に、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖の定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、またはＣＨ３）は、分泌、胎盤通過移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣例により、定常領域ドメインの番号付けは、抗体の抗原結合ドメインまたはアミノ末端からより遠くなる方に増加していく。Ｎ末端は可変領域であり、Ｃ末端は定常領域であり、ＣＨ３ドメインおよびＣＬドメインは、それぞれ天然抗体の重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を表す。便宜上、および別段文脈が指示しない限り、抗体への言及はまた、抗体断片、ならびに天然に存在しない抗原結合ドメインおよび／または非天然構成を有する抗原結合ドメインを含む操作された抗体も指す。
抗原結合分子またはＡＢＭ：本明細書で使用される「抗原結合分子」または「ＡＢＭ」という用語は、２個の半抗体を含む分子（例えば、複数のポリペプチド鎖のアセンブリ）を指す。典型的には、各半抗体は、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗原は、コロナウイルススパイクタンパク質であり、したがって、本開示のＡＢＭは、一般に、「抗スパイクタンパク質結合分子」と称される。本開示のＡＢＭは、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であることが可能である。単一特異性結合分子における抗原結合ドメインは全て、同じエピトープに結合するが、多重特異性結合分子は、同じまたは異なる分子（例えば、異なるスパイクタンパク質バリアント）であることが可能である、異なるエピトープに結合する少なくとも２つの抗原結合部位を有する。
抗原結合ドメイン：本明細書で使用される「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」という用語は、抗原に非共有結合的に、可逆的に、および特異的に結合する能力を有する抗体または抗体断片の一部分を指す。ＡＢＤを含むことができる抗体断片の例としては、限定されないが、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。したがって、「抗体断片」という用語は、抗体のタンパク質分解断片（例えば、Ｆａｂ断片およびＦ（ａｂ）２断片）、ならびに抗体の１つ以上の部分（例えば、ｓｃＦｖ）を含む操作されたタンパク質の両方を包含する。抗体断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、およびビス－ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６を参照されたい）。
会合した：多価抗スパイクタンパク質結合分子の文脈における「会合した」という用語は、２つ以上のポリペプチド鎖間の機能的関係を指す。特に、「会合した」という用語は、２つ以上のポリペプチドが、機能的な多価抗スパイクタンパク質結合分子を生成するように、例えば、分子相互作用を通して非共有結合的に、または１つ以上のジスルフィド架橋もしくは化学的架橋を通して共有結合的に、互いに会合していることを意味する。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子に存在し得る会合の例には、Ｆｃ領域を形成するためのＦｃドメイン間の会合（例えば、セクション６．４．１に記載されているようなもの）が含まれる（がこれらに限定されない）。
二重特異性：本明細書で使用される「二重特異性」という用語は、２個以上の異なるＡＢＤを含む抗原結合分子を指す。例えば、二重特異性分子中のＡＢＤは、同じ標的抗原の２つの異なる部分（または、ウイルスタンパク質の場合、同じ標的抗原の異なるバリアント）に結合することができるか、または各ＡＢＤは、異なる標的抗原に結合することができる。
二価：本明細書で使用される「二価」という用語は、同じポリペプチド鎖中にあるか、または異なるポリペプチド鎖上にあるかにかかわらず、２つの抗原結合ドメインを含む結合分子を指す。
相補性決定領域：「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。例えば、概して、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）があり、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）がある。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，ＪＭＢ ２７３：９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）、およびＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付け（Ｌｅｆｒａｎｃ，１９９９，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）によって記載されるものを含む、いくつかの周知のスキームのうちのいずれかを使用して決定することができる。例えば、古典的なフォーマットについて、Ｋａｂａｔの下で、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０～６５（ＣＤＲ－Ｈ２）、および９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）に番号付けされ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５６（ＣＤＲ－Ｌ２）、および８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）に番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａ下では、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＣＤＲ－Ｈ１）、５２～５６（ＣＤＲ－Ｈ２）、および９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）に番号付けされ、ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６～３２（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および９１～９６（ＣＤＲ－Ｌ３）に番号付けされる。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲは、ヒトＶＨ中のアミノ酸残基２６～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０～６５（ＣＤＲ－Ｈ２）、および９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）、ならびにヒトＶＬ中のアミノ酸残基２４～３４（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５６（ＣＤＲ－Ｌ２）、および８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）からなる。ＩＭＧＴ下で、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、およそ２６～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５１～５７（ＣＤＲ－Ｈ２）、および９３～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）に番号付けされ、ＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基は、およそ２７～３２（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）に番号付けされる（「Ｋａｂａｔ」による番号付け）。ＩＭＧＴ下では、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ Ａｌｉｇｎを使用して決定することができる。
ＣＯＶＩＤ－１９：「ＣＯＶＩＤ－１９」という用語は、「新型コロナウイルス感染症（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９）」の略であり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって引き起こされる感染症を指す。ＣＯＶＩＤ－１９を有する患者は、軽度から重度までの範囲の幅広い症状を経験する可能性がある。症状には、発熱、悪寒、咳、息切れ、呼吸困難、疲労、筋肉痛、体の痛み、頭痛、嗅覚喪失、味覚喪失、喉の痛み、うっ血、鼻水、吐き気、および下痢が含まれる可能性があるが、これらに限定されない。
十価：１０個のＡＢＤを含む抗原結合分子に関して、本明細書で使用される「十価」という用語。本開示の十価抗スパイクタンパク質結合分子は、単一特異性または多重特異性、例えば、二重特異性であることが可能である。いくつかの実施形態において、十価抗スパイクタンパク質結合分子は、１０個のスパイクタンパク質ＡＢＤを含む抗スパイクタンパク質結合分子を指す。１０個のスパイクタンパク質ＡＢＤは、同じ（すなわち、抗原結合分子は単一特異性である）、または異なることができる（すなわち、抗原結合分子は多重特異性であり、スパイクタンパク質の異なる領域および／またはバリアントに結合する）。いくつかの実施形態において、十価抗スパイクタンパク質結合分子は、５個のＩｇＭ Ｆｃ二量体の五量体アセンブリであり、各ＩｇＭ Ｆｃが、そのＮ末端にスパイクタンパク質ＡＢＤを含み、Ｊ鎖を介して接続されている。他の実施形態において、十価抗スパイクタンパク質結合分子は、複数のスパイクタンパク質ＡＢＤと、別の標的分子に結合する複数のＡＢＤと、を含む抗スパイクタンパク質を指す（すなわち、抗原結合分子は多重特異性である）。例えば、いくつかの実施形態において、十価抗スパイクタンパク質結合分子は、二重特異性であり、５個の抗スパイクタンパク質ＡＢＤと、別の標的に結合する５個のＡＢＤと、を含む。
十二価：１２個のＡＢＤを含む抗原結合分子に関して、本明細書で使用される「十二価」という用語。本開示の十二価抗スパイクタンパク質結合分子は、単一特異性または多重特異性、例えば、二重特異性であることが可能である。いくつかの実施形態において、十二価抗スパイクタンパク質結合分子は、１２個のスパイクタンパク質ＡＢＤを含む抗スパイクタンパク質結合分子を指す。１２個のスパイクタンパク質ＡＢＤは、同じ（すなわち、抗原結合分子は単一特異性である）、または異なることができる（すなわち、抗原結合分子は多重特異性であり、スパイクタンパク質の異なる領域および／またはバリアントに結合する）。いくつかの実施形態において、十二価スパイクタンパク質結合分子は、６個のＩｇＭ Ｆｃ二量体の六量体アセンブリであり、各ＩｇＭ Ｆｃが、そのＮ末端にスパイクタンパク質ＡＢＤを含み、Ｊ鎖接続を有しない。他の実施形態において、十二価抗スパイクタンパク質結合分子は、複数のスパイクタンパク質ＡＢＤと、別の標的分子に結合する複数のＡＢＤと、を含む抗スパイクタンパク質を指す（すなわち、抗原結合分子は多重特異性である）。例えば、いくつかの実施形態において、十二価抗スパイクタンパク質結合分子は、二重特異性であり、６個の抗スパイクタンパク質ＡＢＤと、別の標的に結合する６個のＡＢＤと、を含む。
ＥＣ５０：「ＥＣ５０」という用語は、指定された曝露時間後にベースラインと最大値との間の中間の応答を誘導する、分子（例えば多価抗スパイクタンパク質結合分子）の半数効果濃度（ｈａｌｆ ｍａｘｉｍａｌ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を指す。ＥＣ５０は本質的に、その最大効果の５０％が観察される多価抗スパイクタンパク質結合分子の濃度を表す。特定の実施形態において、ＥＣ５０値は、セクション８．１．２に記載のアッセイにおいて最大半量のウイルスまたはシュードウイルス中和を与える多価抗スパイクタンパク質結合分子の濃度に等しい。
エピトープ：エピトープ、または抗原決定基は、抗体またはその断片、例えば抗原結合ドメインによって認識される抗原の一部分である。エピトープは、線状または立体構造的であることが可能である。
Ｆａｂ：「Ｆａｂ」という用語は、一対のポリペプチド鎖を指し、第１のポリペプチド鎖は、第１の定常ドメイン（本明細書においてＣ１と称される）に（典型的には、Ｎ末端に）作動可能に連結された抗体の可変重（ＶＨ）ドメインを含み、第２のポリペプチド鎖は、第１の定常ドメインと対合することができる第２の定常ドメイン（本明細書ではＣ２と呼ばれる）に（典型的にはＮ末端に）作動可能に連結された抗体Ｎ末端の可変軽（ＶＬ）ドメインを含む。天然抗体において、ＶＨは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）のＮ末端にあり、ＶＬは、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）のＮ末端にある。本開示のＦａｂは、天然配向に従って配置することができるか、または正しいＶＨおよびＶＬの対合を促進するドメイン置換もしくはスワップを含むことができる。例えば、ヘテロ二量体分子において修飾された正しいＦａｂ－鎖対合を促進するために、ＦａｂにおけるＣＨ１およびＣＬドメイン対をＣＨ３ドメイン対に置き換えることが可能である。ＣＨ１をＶＬに付着させ、ＣＬをＶＨに付着させるように、ＣＨ１およびＣＬを逆にすることも可能であり、これは一般にＣｒｏｓｓｍａｂとして既知の構成である。「Ｆａｂ」という用語は、一本鎖Ｆａｂを包含する。
ＦｃドメインおよびＦｃ領域：「Ｆｃドメイン」という用語は、別の重鎖の対応する部分と対合する重鎖の一部分を指す。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメイン、続いてＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ２ドメインのＮ末端にヒンジ領域を有するか、または有しない。「Ｆｃ領域」という用語は、２つの重鎖Ｆｃドメインの会合によって形成される領域を指す。Ｆｃ領域内の２つのＦｃドメインは、互いに同じであってもよく、または異なってもよい。天然抗体において、Ｆｃドメインは、典型的には、同一であるが、一方または両方のＦｃドメインは、例えば、ノブ・イン・ホール相互作用を介して、ヘテロ二量体化を可能にするように修飾され得る。
Ｆｖ：「Ｆｖ」という用語は、完全な標的認識および結合部位を含む免疫グロブリンから誘導可能な最小抗体断片を指す。この領域は、密接な非共有性会合での１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。この構成では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位を画定する。多くの場合、６つのＣＤＲは、抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら、いくつかの例において、単一の可変ドメイン（または標的に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、標的を認識し、それに結合する能力を有することができる。本明細書におけるＶＨ－ＶＬ二量体への言及は、任意の特定の構成を伝達することを意図するものではない。単一のポリペプチド鎖（例えば、ｓｃＦｖ）上に存在する場合、ＶＨおよび、ＶＬのＮ末端またはＣ末端である。
宿主細胞：本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、本開示の核酸が導入された細胞を指す。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書で互換的に使用される。かかる用語が、特定の対象細胞、およびかかる細胞の子孫または潜在的な子孫も指すことが理解される。変異または環境影響のいずれかに起因して特定の修飾が後の世代で生じ得るため、かかる子孫は実際には親細胞と同一ではない場合があるが、依然として本明細書で使用される本用語の範囲内に含まれる。典型的な宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞などの、真核生物宿主細胞である。例示的な真核生物宿主細胞には、酵母および哺乳動物細胞、例えば、マウス、ラット、サル、またはヒト細胞株などの脊椎動物細胞、例えば、ＨＫＢ１１細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ＨＥＫ細胞、またはＣＨＯ細胞が含まれる。
免疫グロブリン：「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、２対のポリペプチド鎖（１対の軽（Ｌ）鎖および１対の重（Ｈ）鎖）からなり、４個全てがジスルフィド結合によって内部接続されていてもよい、構造的に関連する糖タンパク質のクラスを指す。免疫グロブリンの構造はよく特徴付けられている。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。各重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨまたはＶＨと略す）および重鎖定常領域（ＣＨまたはＣＨ）を含む。重鎖定常領域は、典型的には、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。ＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメインは、ヒンジによって連結される。Ｆｃ部分は、少なくともＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。
典型的には、免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けは、ＩＭＧＴ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に従うか、またはＫａｂａｔのＥＵ番号付けシステム（「ＥＵ番号付け」もしくは「ＥＵインデックス」としても知られる）によって、例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ ｅｄ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）におけるように従う。
リンカー：本明細書で使用される「リンカー」という用語は、２つの部分の間の接続ペプチドを指す。例えば、リンカーは、スパイクタンパク質ＡＢＤをＦｃドメインに接続することができる。
多重特異性：本明細書で使用される「多重特異性」という用語は、２個以上のＡＢＤを含む抗原結合分子を指す。例えば、多重特異性分子中のＡＢＤは、同じ標的抗原の２つ以上の異なる部分（または、ウイルスタンパク質の場合、スパイクタンパク質などの同じ標的抗原の異なるバリアント）に結合することができるか、または各ＡＢＤは、異なる標的抗原に結合することができる。
多価：本明細書で使用される「多価」という用語は、１つ、２つ、またはそれより多くのポリペプチド鎖上に２個以上のＡＢＤを含む抗原結合分子を指す。
中和、遮断：「中和」または「遮断」スパイクタンパク質ＡＢＤは、スパイクタンパク質への結合がスパイクタンパク質の活性を任意の検出可能な程度まで阻害し、例えば、スパイクタンパク質がＡＣＥ２などの受容体に結合する能力、ＴＭＰＲＳＳ２などのプロテアーゼによって切断される能力、または宿主細胞へのウイルス侵入もしくは宿主細胞におけるウイルス再生を媒介する能力を阻害する、ＡＢＤを指す。
作動可能に連結された：「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上のペプチドもしくはポリペプチドドメインまたは核酸（例えば、ＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。融合タンパク質または他のポリペプチドの文脈において、「作動可能に連結された」という用語は、機能的ポリペプチドを生成するために２つ以上のアミノ酸セグメントが連結されていることを意味する。例えば、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子の文脈において、別個の構成要素（例えば、スパイクタンパク質ＡＢＤおよびＦｃドメイン、Ｊ鎖およびＩｇＧ Ｆｃドメインなど）は、直接的に、またはペプチドリンカー配列を介して作動可能に連結することができる。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子などの融合タンパク質をコードする核酸の文脈において、「作動可能に連結された」とは、２つの核酸が、その２つの核酸によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように接続されていることを意味する。
ポリペプチド、ペプチド、およびタンパク質：「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書で互換的に使用される。
認識する：本明細書で使用される「認識する」という用語は、そのエピトープを見つけ、そのエピトープと相互作用する（例えば、結合する）抗体または抗体断片（例えば、スパイクタンパク質ＡＢＤ）を指す。
一本鎖ＦａｂまたはｓｃＦａｂ：本明細書で使用される「一本鎖Ｆａｂ」または「ｓｃＦａｂ」という用語は、抗体のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよびＣＬドメインを含むポリペプチド鎖を指し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。
一本鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ：本明細書で使用される「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むＡＢＤを指し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを更に含む。ｓｃＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．（１９９４），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい。ＶＨおよびＶＬ、ならびに典型的にはリンカーによって分離される、Ｎ末端からＣ末端の順序のＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨで配置される。
対象：「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物が含まれる。非ヒト動物には、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類が含まれる。記載されている場合を除き、「患者」または「対象」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
治療する、治療、治療すること：本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、本開示の１つ以上の多価抗スパイクタンパク質結合分子の投与から生じる疾患もしくは状態の進行、重症度、および／もしくは期間の減少もしくは改善、ならびに／または疾患もしくは状態の１つ以上の症状（好ましくは、１つ以上の識別可能な症状）の軽減を指す。
いくつかの実施形態において、疾患または状態は、コロナウイルス感染、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）。いくつかの実施形態において、疾患または状態は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染、または同様の感染に関連する任意の他の疾患である。これらの疾患および状態に言及しつつ、「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、本開示の１つ以上の多価抗スパイクタンパク質結合分子の投与から生じる疾患の進行、重症度、および／もしくは期間の減少もしくは改善、または疾患の１つ以上の症状（好ましくは、１つ以上の識別可能な症状）の軽減を指す。特定の実施形態において、「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、血中酸素飽和レベルなどのＣＯＶＩＤ－１９の少なくとも１つの測定可能な（必ずしも患者によって識別可能でなくてもよい）物理的パラメータの軽減を指す。他の実施形態において、「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、物理的に（例えば、識別可能な症状の安定化による）、生理学的に（例えば、物理的パラメータの安定化などによる）のいずれか、またはその両方のＣＯＶＩＤ－１９の進行の阻害を指す。他の実施形態において、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、感染の減少または排除を指す。
６．２．スパイクタンパク質抗原結合ドメイン
本開示は、複数のスパイクタンパク質抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子に関する。
いくつかの実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、１０個または１２個のスパイクタンパク質ＡＢＤを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、単一特異性であり、例えば、スパイクタンパク質上の同じエピトープに結合する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、抗スパイクタンパク質ＡＢＤは、同一である。
他の実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、多重特異性であり、例えば、異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、多重特異性抗スパイクタンパク質結合分子は、同じスパイクタンパク質上の異なるエピトープに結合する。他の実施形態において、多重特異性抗スパイクタンパク質結合分子は、異なるスパイクタンパク質バリアント上の異なるエピトープに結合する。異なるエピトープは、スパイクタンパク質における、または全く異なる領域における同じ領域の配列バリアントに対応することができる。
更なる実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子中の複数または全てのＡＢＤは、スパイクタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合し、かつ／またはスパイクタンパク質を遮断もしくは中和することができ、例えば、スパイクタンパク質が、ＴＭＰＲＳＳ２などのプロテアーゼによって切断されるＡＣＥ２などの受容体に結合する能力、または宿主細胞へのウイルス侵入もしくは宿主細胞におけるウイルス再生を媒介する能力を阻害する。
好適なスパイクタンパク質ＡＢＤフォーマットは、セクション６．３に記載されている。スパイクタンパク質ＡＢＤは、例えば、抗体または抗体の抗原結合部分、例えば、セクション６．３．１に記載されるようなＦａｂまたはセクション６．３．２に記載されるようなｓｃＦｖであることが可能である。
いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、スパイクタンパク質への結合について、例示的な抗体もしくは以下の表１に示された配列を有する抗体と競合する、および／または例示的な抗体もしくは表１に示された抗体配列を有する抗体の結合部分を含む。いくつかの態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、スパイクタンパク質への結合について表１に示される抗体と競合する。更なる態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表１に示される抗体のＣＤＲ配列を有するＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表１に記載される抗体の６個全てのＣＤＲ配列を含む。他の実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、ユニバーサル軽鎖の少なくとも重鎖ＣＤＲ配列（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３と、軽鎖ＣＤＲ配列と、を含む。更なる態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表１に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表１に示される抗体のＶＬのアミノ酸配列を含むＶＬを更に含む。他の実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、ユニバーサル軽鎖ＶＬ配列を更に含む。
いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、アミノ酸配列を含むか、または以下の表２に示されるヌクレオチド配列によってコードされる。特定の態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、以下の表２に示される抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの両方を含む。他の実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、ユニバーサル軽鎖の少なくとも重鎖ＣＤＲ配列と、軽鎖ＣＤＲ配列と、を含む。更なる態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表２に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を有するＶＨと、表２に示されるのと同じ抗体のＶＬのアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。他の態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表２に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を有するＶＨと、ユニバーサル軽鎖ＶＬ配列と、を含む。
更なる実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、以下の表３に示されるアミノ酸配列を含む。特定の態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、以下の表３に示される抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの両方を含む。他の実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、ユニバーサル軽鎖の少なくとも重鎖ＣＤＲ配列と、軽鎖ＣＤＲ配列と、を含む。更なる態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表３に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を有するＶＨと、表３に示されるのと同じ抗体のＶＬのアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。他の態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表３に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を有するＶＨと、ユニバーサル軽鎖ＶＬ配列と、を含む。表３の初期配列識別子は、ＷＯ２０２１／０４５８３６Ａ１の配列表に関連しており、配列識別子は参照により本明細書に組み込まれるが、括弧内に提示される配列識別子は、本開示のものである。
いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、以下の表４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、以下の表４に示される抗体の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲの両方を含む。特定の態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表４に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を有するＶＨと、表４に示されるのと同じ抗体のＶＬのアミノ酸配列を有するＶＬと、を含む。他の態様において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、表４に示される抗体のＶＨのアミノ酸配列を有するＶＨと、ユニバーサル軽鎖ＶＬ配列と、を含む。表４の初期配列識別子は、ＷＯ２０２３／２８７８７５Ａ１の配列表に関連しており、配列識別子は参照により本明細書に組み込まれるが、括弧内に提示される配列識別子は、本開示のものである。
いくつかの実施形態において、多価抗スパイクタンパク質結合分子のスパイクタンパク質ＡＢＤは、表４に示される抗体「ｍＡｂ１４２８７」の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。したがって、いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、それぞれ配列番号５７９、５８０、および５８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、それぞれ配列番号３９８、３７２、および５８３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、配列番号５７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、配列番号５８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬと、を含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、配列番号５７８のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号５８２のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態において、多価抗スパイクタンパク質結合分子のスパイクタンパク質ＡＢＤは、表４に示される抗体「ｍＡｂ１５１６０」の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。したがって、いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、それぞれ配列番号５０７、５０８、および５０９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、それぞれ配列番号５１１、４０７、および５１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、配列番号５０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、配列番号５１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬと、を含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号５１０のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態において、多価抗スパイクタンパク質結合分子のスパイクタンパク質ＡＢＤは、表４に示される抗体「ｍＡｂ１４３１５」の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。したがって、いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、それぞれ配列番号４５０、４５１、および４５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、それぞれ配列番号４５４、４１５、および４５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、配列番号４４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、配列番号４５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬと、を含む。いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、配列番号４４９のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号４５３のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む。
６．３．スパイクタンパク質抗原結合ドメインフォーマット
特定の態様において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、抗原決定基への特異的結合を保持する抗スパイクタンパク質抗体のＡＢＤを含む。一実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、免疫グロブリンの天然に存在する（例えば、プロテアーゼ切断による）または操作された断片である。抗体断片としては、限定されないが、ＶＨ（またはＶＨ）断片、ＶＬ（またはＶＬ）断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディが挙げられる。
いくつかの実施形態において、スパイクタンパク質ＡＢＤは、ＦａｂまたはｓｃＦｖの形態である。
６．３．１．Ｆａｂ
Ｆａｂドメインは、伝統的には、パパインなどの酵素を使用した免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生成された。Ｆａｂドメインは、任意の好適な種からの定常ドメイン配列および可変領域配列を含むことができ、したがって、マウス、キメラ、ヒト、またはヒト化されたものであることが可能である。
Ｆａｂドメインは、典型的には、ＶＨドメインに付着したＣＨ１ドメインを含み、これは、ＶＬドメインに付着したＣＬドメインと対合する。野生型免疫グロブリンにおいて、ＶＨドメインは、ＶＬドメインと対合してＦｖ領域を構成し、ＣＨ１ドメインは、ＣＬドメインと対合して結合部位を更に安定化する。２つの定常ドメイン間のジスルフィド結合は、Ｆａｂドメインを更に安定化することができる。
ホモ二量体ではない本開示の抗スパイクタンパク質結合抗体について、特に、抗スパイクタンパク質抗体の軽鎖が、一般的またはユニバーサル軽鎖ではない場合、Ｆａｂヘテロ二量体化戦略を使用して、同じ抗原結合ドメインに属するＦａｂドメインの正しい会合を可能にし、異なる抗原結合ドメインに属するＦａｂドメインの異常な対合を最小限に抑えることが有利である。例えば、以下の表５に示されるＦａｂヘテロ二量体化戦略を使用することができる：
したがって、特定の実施形態において、Ｆａｂの２個のポリペプチド間の正しい会合は、例えば、ＷＯ２００９／０８０２５１に記載されるように、ＦａｂのＶＬドメインおよびＶＨドメインを互いに交換するか、またはＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを互いに交換することによって促進される。
正しいＦａｂ対合はまた、ＦａｂのＣＨ１ドメインに１つ以上のアミノ酸修飾およびＣＬドメインに１つ以上のアミノ酸修飾を導入することによって、ならびに／またはＶＨドメインに１つ以上のアミノ酸修飾およびＶＬドメインに１つ以上のアミノ酸修飾を導入することによって、促進することができる。修飾されるアミノ酸は、典型的には、Ｆａｂ構成要素が、他のＦａｂの構成要素よりもむしろ互いと優先的に対合するようにＶＨ：ＶＬ界面およびＣＨ１：ＣＬ界面の一部である。
一実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾は、残基のＫａｂａｔ番号付けによって示されるように、可変（ＶＨ、ＶＬ）および定常（ＣＨ１、ＣＬ）ドメインの保存されたフレームワーク残基に限定される。Ａｌｍａｇｒｏ，２００８，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：１６１９－１６３３は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＩＭＧＴ番号付けスキームに基づくフレームワーク残基の定義を提供する。
一実施形態において、ＶＨおよびＣＨ１ならびに／またはＶＬおよびＣＬドメインにおいて導入される修飾は、互いに相補的である。重鎖および軽鎖界面における相補性は、立体的接触および疎水性接触、静電／電荷相互作用、または様々な相互作用の組み合わせに基づいて達成することができる。タンパク質表面間の相補性は、ロックおよびキー適合（ｌｏｃｋ ａｎｄ ｋｅｙ ｆｉｔ）、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ ｉｎｔｏ ｈｏｌｅ）、突起および空洞（ｐｒｏｔｒｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｃａｖｉｔｙ）、ドナーおよびアクセプターなどの観点から、文献において広く記載されており、これらは全て、２つの相互作用する表面間の構造的一致および化学的一致の性質を示唆している。
一実施形態において、１つ以上の導入された修飾は、Ｆａｂ構成要素の界面にわたって新しい水素結合を導入する。一実施形態において、１つ以上の導入された修飾は、Ｆａｂ構成要素の界面にわたって新しい塩架橋を導入する。例示的な置換は、ＷＯ２０１４／１５０９７３およびＷＯ２０１４／０８２１７９に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメインに１９２Ｅ置換と、ＣＬドメインに１１４Ａおよび１３７Ｋ置換と、を含み、これにより、ＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間に塩架橋が導入される（例えば、Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：３１９９－２１１を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメインに１４３Ｑおよび１８８Ｖ置換と、ＣＬドメインに１１３Ｔおよび１７６Ｖ置換と、を含み、これは、ＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間の疎水性接触領域および極性接触領域を交換するのに役立つ（例えば、Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：３１９９－２１１を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、Ｆａｂドメインは、Ｆａｂドメインの正しいアセンブリを促進する直交性Ｆａｂ界面を導入するための、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬドメインの一部または全部における修飾を含むことができる（Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３２：１９１－１９８）。ある実施形態において、３９Ｋ、６２Ｅ修飾がＶＨドメインに導入され、Ｈ１７２Ａ、Ｆ１７４Ｇ修飾がＣＨ１ドメインに導入され、１ Ｒ、３８Ｄ、（３６Ｆ）修飾がＶＬドメインに導入され、Ｌ１３５Ｙ、Ｓ１７６Ｗ修飾がＣＬドメインに導入される。別の実施形態において、３９Ｙ修飾がＶＨドメインに導入され、３８Ｒ修飾がＶＬドメインに導入される。
Ｆａｂドメインはまた、天然のＣＨ１：ＣＬジスルフィド結合を、操作されたジスルフィド結合で置き換えるように修飾することができ、それによって、Ｆａｂ構成要素の対合の効率を増加させる。例えば、操作されたジスルフィド結合は、ＣＨ１ドメインに１２６Ｃを導入し、ＣＬドメインに１２１Ｃを導入することによって導入することができる（例えば、Ｍａｚｏｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＭＡＢＤ ７：３７７－８９を参照されたい）。
Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを、正しいアセンブリを促進する代替ドメインで置き換えることによっても修飾することができる。例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＭＡＢＤ ７：３６４－７６では、ＣＨ１ドメインをＴ細胞受容体の定常ドメインで置換し、ＣＬドメインをＴ細胞受容体のｂドメインで置換し、これらのドメイン置換を、ＶＬドメインに３８Ｄ修飾を導入し、ＶＨドメインに３９Ｋ修飾を導入することによって、ＶＬドメインとＶＨドメインとの間の追加の電荷－電荷相互作用と対合することについて説明している。
６．３．２．ｓｃＦｖ
一本鎖Ｆｖまたは「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖内の抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、これらは一本鎖ポリペプチドとして発現することができ、それらの由来となる無傷の抗体の特異性を保持する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓｃＦｖが標的結合のために所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを更に含む。ｓｃＦｖのＶＨ鎖およびＶＬ鎖を接続するのに好適なリンカーの例は、セクション６．５で特定されるリンカーである。
本明細書で使用される場合、指定されない限り、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬ可変領域およびＶＨ可変領域を有していてもよく、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでいてもよく、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでいてもよい。
ｓｃＦｖは、マウス、ヒト、またはヒト化されたＶＨ配列およびＶＬ配列などの任意の好適な種からのＶＨ配列およびＶＬ配列を含むことができる。
ｓｃＦｖをコードする核酸を作成するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ断片を、リンカーをコードする別の断片、例えば、セクション６．５に記載のリンカー（典型的には、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３などのアミノ酸グリシンおよびセリンを含む配列の反復）のうちのいずれかをコードする断片に作動可能に連結し、その結果、ＶＨ配列およびＶＬ配列を、可撓性リンカーによって結合されたＶＬ領域およびＶＨ領域を有する連続した一本鎖タンパク質として発現させることができる（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４を参照されたい）。
６．４．多量体化部分
いくつかの実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、１個以上の多量体化部分、例えば、Ｆｃドメインであるか、またはそれを含む１個以上の多量体化部分を含む。特定の実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、単一の多量体化部分（例えば、単一のＦｃドメイン）を含み、かつ／または本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、２個以上の多量体化部分（例えば、会合してＦｃ領域を形成することができる２個以上のＦｃドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、ＡＣＥ融合タンパク質は、例えば、セクション６．４．１に記載されるように、５個または６個のＩｇＭ由来の二量体Ｆｃ領域の五量体または六量体である。
６．４．１．Ｆｃドメイン
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、ＡＣＥ２部分に作動可能に連結された任意の適切な種に由来する、Ｆｃドメイン、または会合してＦｃ領域を形成する一対のＦｃドメインを含むことができる。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインに由来する。好ましい実施形態において、ＡＣＥ２部分は、ＩｇＭ Ｆｃドメインに融合される。
多価抗スパイクタンパク質結合分子に組み込まれることができるＦｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、およびＩｇＭを含む、任意の好適なクラスの抗体に由来することができる。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭに由来する。
天然抗体において、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの重鎖Ｆｃドメインは、２つの重鎖定常ドメイン（Ｃμ２およびＣμ３）で構成されており、ＩｇＥおよびＩｇＭのドメインは、３つの重鎖定常ドメイン（Ｃμ２、Ｃμ３およびＣμ４）で構成されている。これらは二量体化して、Ｆｃ領域を作成する。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子において、Ｆｃ領域、および／またはその中のＦｃドメインは、１つ以上の異なるクラスの抗体、例えば、１つ、２つ、または３つの異なるクラスに由来する重鎖定常ドメインを含むことができる。
６．４．２．ＩｇＭ Ｆｃドメイン
いくつかの実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、ＩｇＭに由来するＦｃドメインを含む。ＩｇＭは、共通のＨ２Ｌ２抗体単位を形成する重鎖（Ｈ）軽鎖（Ｌ）アセンブリの共有結合性多量体としてヒトに天然に存在する。重鎖および軽鎖に加えて、ＩｇＭは、接続（Ｊ）鎖として知られる第３の鎖も有する（Ｋｅｙｔ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．９（４）：５３）。ＩｇＭは、Ｊ鎖が組み込まれている場合には五量体として存在し、Ｊ鎖を欠く場合には六量体として存在する。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子のためのＩｇＭ Ｆｃ領域の生成において使用するための重鎖定常ドメインは、上述の天然に存在する定常ドメインのバリアントを含んでいてもよい。一例において、本開示のＦｃ領域は、野生型定常ドメインとは配列が異なる少なくとも１つの定常ドメインを含む。バリアント定常ドメインは、それらの対応物である野生型定常ドメインよりも長くても、または短くてもよいことが理解されるであろう。
ＩｇＭの重鎖は、尾部として既知であるＣ末端定常ドメインへの１８アミノ酸の延長部分を有する。尾部は、ポリマー内の重鎖間にジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含み、重合において重要な役割を果たしていると考えられる。尾部はまた、グリコシル化部位を含む。特定の実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、尾部を含む。
ＩｇＭアセンブリは、典型的には、重（Ｈ）鎖と軽（Ｌ）鎖とをＨ－Ｌ配置に会合させて開始し、次いで、このＨ－Ｌ配置が、二量体化してＨ２Ｌ２サブユニットを形成する。このサブユニット内アセンブリの重要な部位は、Ｃｙｓ３３７であり、これは２つのＣμ２ドメイン間にジスルフィド結合を形成し、Ｈ２Ｌ２を安定化させる。次に、これらのサブユニットをジスルフィド架橋によって一緒に合わせ、多量体を形成する。この多量体化に関与する残基は、Ｃμ４の尾ドメイン上のＣｙｓ５７５であり、これがジスルフィド結合を形成し、非共有性Ｃμ４相互作用を可能にする。別の重要な残基は、Ｃμ３上のＣｙｓ４１４であり、これは、Ｃμ２のＣｙｓ３３７残基間のジスルフィド結合に直列に、隣接するＨ２Ｌ２サブユニットの２個のＣμ３ドメインを更に接続する。Ｊ鎖の存在下で、ＩｇＭアセンブリは、Ｃｙｓ３３７ジスルフィド結合が、Ｃｙｓ４１４ジスルフィド結合およびＣｙｓ５７５ジスルフィド結合の両方と直列である五量体をもたらす（Ｐａｓａｌｉｃ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ １１４（４１）Ｅ８５７５－Ｅ８５８４、Ｋｅｙｔ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．９（４）：５３、Ｃａｓａｌｉ，１９９８．Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２ｎｄ Ｅｄ），ｐ１２１２－１２１７）。ＩｇＭアセンブリがＪ鎖を含むためには、Ｊ鎖ポリペプチドを、Ｈ２Ｌ２サブユニットドメインをコードするポリペプチドと共発現させる必要がある。
特定の実施形態において、本開示によって提供される多量体化部分は、二量体ＩｇＭ重鎖定常領域またはその多量体化断片を含む五量体または六量体結合分子である。
全長ヒトＩｇＭ重鎖定常ドメインの例示的な配列を以下に再現する。
理論に拘束されることを望まないが、二量体ＩｇＭ Ｆｃ領域の五量体構造または六量体構造への組み立ては、少なくともＣμ４、および／または尾部（ＴＰ）ドメインを伴うと考えられる（Ｂｒａａｔｈｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，２００２．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：４２７５５－４２７６２）。したがって、ＩｇＭ Ｆｃドメインに基づく多量体化部分は、典型的には、少なくともＣμ４および／またはＴＰドメイン配列を含む。
ＩｇＭ重鎖定常ドメインは、更に、Ｃμ３ドメインもしくはその断片、Ｃμ２ドメインもしくはその断片、および／または他のＩｇＭもしくは他の免疫グロブリン重鎖ドメインを含むことができる。
ヒトＩｇＭ重鎖定常ドメインの例示的な配列は、以下の表６に再現される。
いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭのＣμ４ドメインのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭのＣμ４および尾部ドメインのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭのＣμ３およびＣμ４ドメインのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭのＣμ３およびＣμ４および尾部ドメインのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭのＣμ２、Ｃμ３およびＣμ４ドメインのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
なお更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＭのＣμ２、Ｃμ３、Ｃμ４および尾部ドメインのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
６．４．３．Ｊ鎖
Ｊ鎖は、小さな１３７残基ポリペプチドであり、Ｃμ４尾部とジスルフィド結合を形成することによってＩｇＭと会合している。五量体ＩｇＭへのＪ鎖の組み込みは、第１および第５の単量体単位を架橋することによって環構造を閉じ、それによって第６のＩｇＭモノマーの添加を排除する。
ヒト成熟野生型Ｊ鎖の例示的なアミノ酸配列を以下に再現する。
いくつかの実施形態において、操作されたＪ鎖は、ＩｇＭ五量体に組み込まれる。操作されたヒト成熟Ｊ鎖の例示的なアミノ配列を以下に再現する。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子（例えば、五量体多価抗スパイクタンパク質結合分子）は、ＣＨ４尾部に会合するＪ鎖ポリペプチドを更に含んでいてもよい。様々な実施形態において、Ｊ鎖ポリペプチドは、天然に存在する成熟Ｊ鎖ポリペプチドもしくは操作されたＪ鎖ポリペプチドのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、Ｊ鎖ポリペプチドは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性、少なくとも９９％の配列同一性、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
６．４．３．１．ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖
いくつかの実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、任意選択でポリペプチドリンカーを介して、ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖ポリペプチドを含む。Ｊ鎖およびＩｇＧ Ｆｃドメインを接続するのに好適なリンカーの例は、セクション６．５で特定されるリンカーである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、Ｊ鎖ポリペプチドのＮ末端に接続されている。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、Ｊ鎖ポリペプチドのＣ末端に接続されている。そのような多価抗スパイクタンパク質結合分子の例は、図１Ｃ～１Ｅに示されている。
一実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来する。一実施形態において、Ｆｃ ＩｇＧドメインは、ＩｇＧ１に由来する。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４に由来する。
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４からのＩｇＧ Ｆｃドメインの例示的な配列は、以下の表Ｙ－１に提供される。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号１０に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号１１に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号１２に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号１３に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、非二量体化（または「単量体」）Ｆｃドメインであり、これは、野生型Ｆｃドメインと比較して自己会合する能力が減少しているか、または例えば、Ｈｅｌｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：７４９４－７５００またはＹｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８７（２３）：１９３９９－１９４０８に記載されるように、完全に自己会合する能力を欠く、Ｆｃドメインを指す。非二量体化Ｆｃドメインの一例は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１９／０３６７６１１号に記載されるように、ＣＨ３におけるＴ３６６および／またはＹ４０７（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）に対応する位置にアミノ酸置換を含む。非二量体化Ｆｃドメインに含まれてもよい特定のアミノ酸置換には、例えば、Ｌ３５１Ｓ、Ｔ３６６Ｒ、Ｌ３６８Ｈ、Ｐ３９５Ｋ、Ｌ２４２Ｃ、Ｋ３３４Ｃ、Ｌ３５１Ｓ、Ｐ３４３Ｃ、Ａ４３１Ｃ、Ｌ３５１Ｙ、Ｔ３６６Ｙ、Ｌ３６８Ａ、Ｐ３９５Ｒ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｍ、Ｋ４０９Ａ、Ｆ４０５Ｅ、Ｙ４０７Ｋ、Ｌ３５１Ｋ、Ｔ３６６Ｓ、Ｐ３９５Ｖ、Ｙ４０７Ａ、およびＫ４０９Ｙ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）が含まれる。本開示の非二量体化Ｆｃドメインは、上述の置換のうちの任意の１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０、またはそれより多くを含んでいてもよい。
非二量体化Ｆｃドメインの例示的な配列を以下の表Ｙ－２に提供する。太字の残基は、野生型ヒトＩｇＧ配列に対するアミノ酸置換の位置を示す。
いくつかの実施形態において、非二量体化Ｆｃドメインは、配列番号１４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、非二量体化Ｆｃドメインは、配列番号１５に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、非二量体化Ｆｃドメインは、配列番号１６に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、非二量体化Ｆｃドメインは、配列番号１７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、非二量体化Ｆｃドメインは、配列番号１８に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、非二量体化Ｆｃドメインは、配列番号１９に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインに加えて、リンカー（例えば、セクション６．５に記載されるリンカー）を介して第１のＣＨ３ドメインに接続された追加のＣＨ３ドメインを更に含む。そのような構成を含むＦｃドメイン（ＣＨ２－ＣＨ３－リンカー－ＣＨ３）は、便宜上、本明細書では「Ｆｃ１．５ドメイン」または単に「Ｆｃ１．５」と呼ばれることがある。Ｆｃ１．５ドメインの第１のＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインとの間のリンカーは、好ましくは、第１のＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインとの二量体化を可能にするように、十分な長さおよび可撓性を有する。したがって、いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、第１のＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインを接続する、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸長のリンカーを含む。
Ｆｃ１．５ドメインの例示的な配列を以下の表Ｙ－３に提供する。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２０に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２１に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２２に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２３に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２４に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２５に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２６に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２７に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ＩｇＧ Ｆｃドメインに連結されたＪ鎖の例示的な配列を以下の表Ｙ－４に提供する。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖は、配列番号２８に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号２９に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号３０に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号３１に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ１．５ドメインは、配列番号３２に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
６．４．３．１．１．エフェクター機能が変化したＩｇＧ Ｆｃドメイン
いくつかの実施形態において、本開示のＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖のＩｇＧ Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合および／またはエフェクター機能を変化させる（例えば、減らす）１つ以上のアミノ酸置換を含む。
特定の実施形態において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。特定の実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体、より具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩａ、最も具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態において、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つ以上である。特定の実施形態において、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
一実施形態において、Ｆｃドメイン（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖のＦｃドメイン）は、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１、およびＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５およびＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含む。かかる一実施形態において、Ｆｃドメインまたは領域は、Ｉｇｄ Ｆｃドメインまたは領域、特に、ヒトＩｇｄ Ｆｃドメインまたは領域である。一実施形態において、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、位置Ｐ３２９にアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態において、アミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）である。一実施形態において、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、位置Ｐ３２９にアミノ酸置換、ならびにＥ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）から選択される位置に更なるアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態において、更なるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態において、ＦｃドメインまたはＦｃ領域は、位置Ｐ３２９、Ｌ２３４、およびＬ２３５にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。より特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）を含む。
典型的には、同じ１つ以上のアミノ酸置換が、Ｆｃ領域の２つのＦｃドメインの各々に存在する。したがって、特定の実施形態において、Ｆｃ領域の各Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）を含み、すなわち、Ｆｃ領域の第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインの各々において、位置２３４のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３４Ａ）、位置２３５のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられ（Ｌ２３５Ａ）、位置３２９のプロリン残基がグリシン残基で置き換えられる（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、エフェクター機能を減らすためのＤ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ変異（ＥＵ番号付け）を含むバリアントＩｇＧ１である。
別の実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合が減少したＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。Ｆｃ受容体への結合が減少した例示的なＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、以下の表Ｈから選択されるアミノ酸配列を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、以下に示される配列の太字部分のみを含む。
特定の実施形態において、減少したエフェクター機能を有するＩｇＧ４は、ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号３１のアミノ酸配列の太字部分を含み、本明細書ではＩｇＧ４またはｈＩｇＧ４と呼ばれることもある。
６．４．３．１．２．ヒンジドメイン
本開示のＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖は、そのＮ末端にヒンジドメインを含むＦｃドメインを含むことができる。ヒンジ領域は、天然のヒンジ領域または修飾されたヒンジ領域であることが可能である。ヒンジ領域は、典型的には、Ｆｃ領域のＮ末端に見出される。「ヒンジドメイン」という用語は、別段文脈が指示しない限り、単一または単量体のポリペプチド鎖の文脈において、単量体ヒンジドメインである天然に存在するヒンジ配列または天然に存在しないヒンジ配列を指し、二量体ポリペプチドの文脈では（例えば、２つのＦｃドメインの会合によってＦｃ領域）、別個のポリペプチド鎖上に２つの会合されたヒンジ配列を含むことができる。時として、２つの会合されたヒンジ配列は、「ヒンジ領域」と称される。ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖の特定の実施形態において、ヒンジ領域の追加の反復がポリペプチド配列に組み込まれてもよい。
天然のヒンジ領域は、通常、天然に存在する抗体におけるＦａｂドメインとＦｃドメインとの間に見出されるヒンジ領域である。修飾されたヒンジ領域は、天然のヒンジ領域とは長さおよび／または組成が異なる任意のヒンジである。かかるヒンジは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サメ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ、またはヤギのヒンジ領域などの他の種からのヒンジ領域を含むことができる。他の修飾されたヒンジ領域は、重鎖ＦｃドメインまたはＦｃ領域のものとは異なるクラスまたはサブクラスの抗体に由来する完全なヒンジ領域を含んでいてもよい。あるいは、修飾されたヒンジ領域は、天然ヒンジの一部または繰り返しユニットを含んでいてもよく、繰り返しの各ユニットは、天然ヒンジ領域に由来する。更なる代替において、天然ヒンジ領域は、１つ以上のシステインもしくは他の残基を、セリンもしくはアラニンなどの中性残基に変換することによって、または好適に配置された残基をシステイン残基に変換することによって、変更されてもよい。かかる手段によって、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を増加または減少させてもよい。他の修飾されたヒンジ領域は、完全に合成であってもよく、長さ、システイン組成、および可撓性などの所望の特性を有するように設計されてもよい。
いくつかの修飾されたヒンジ領域は、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号、ＷＯ９９／１５５４９、ＷＯ２００５／００３１７０、ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０、ＷＯ９８／２５９７１、およびＷＯ２００５／００３１７１に既に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖は、一方または両方のＦｃドメインがそのＮ末端に無傷のヒンジドメインを有するＦｃ領域を含む。
様々な実施形態において、ヒンジ領域内の位置２３３～２３６は、Ｇ、Ｇ、Ｇ、空きであってもよく、Ｇ、Ｇ、空き、空きであってもよく、Ｇ、空き、空き、空きであってもよく、または全てが空きであってもよく、位置は、ＥＵ番号付けによって番号付けされている。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖は、同じアイソタイプ（例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４）の野生型ヒンジ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合親和性が減少した、修飾されたヒンジ領域を含む。
一実施形態において、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖は、各ＦｃドメインがそのＮ末端に無傷のヒンジドメインを有するＦｃ領域を含み、各Ｆｃドメインおよびヒンジドメインは、ＩｇＧ４に由来し、各ヒンジドメインは、修飾された配列ＣＰＰＣを含む。ヒトＩｇＧ４のコアヒンジ領域は、配列ＣＰＰＣを含むＩｇＧ１と比較して、配列ＣＰＳＣを含む。ＩｇＧ４配列中に存在するセリン残基は、この領域における可撓性の増加をもたらし、したがって、ある割合の分子は、ＩｇＧ分子内の他の重鎖に架橋して鎖間ジスルフィドを形成するのではなく、同じタンパク質鎖内にジスルフィド結合（鎖内ジスルフィド）を形成する。（Ａｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０（１）：１０５－１０８）。セリン残基をプロリンに変更して、ＩｇＧ１と同じコア配列を得ることで、ＩｇＧ４ヒンジ領域内に鎖間ジスルフィドの完全な形成が可能になり、したがって、精製生成物中の不均一性が減る。この変化したアイソタイプは、ＩｇＧ４Ｐと呼ばれる。
６．４．３．１．２．１．キメラヒンジ配列
ヒンジドメインは、キメラヒンジドメインであることが可能である。「キメラ」ヒンジドメインは、第１の型のＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）からの第１の領域、および第２の異なる型のＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）からの第２の領域を含むヒンジドメインを説明する。
例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わせられたヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含んでいてもよい。
特定の実施形態において、キメラヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号８として以前に開示されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号９として以前に開示されている）を含む。このようなキメラヒンジ配列は、ＩｇＧ４ ＣＨ２領域に好適に連結することができる（例えば、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、例えば、ヒトＦｃドメインまたはマウスＦｃドメインに組み込むことによって、例えば、セクション６．４．３．１．１に記載されるように、エフェクター機能を減少させるためにＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインで更に修飾することができる）。
６．５．リンカー
特定の態様において、本開示は、２つ以上の構成要素がペプチドリンカーによって互いに接続されている多価抗スパイクタンパク質結合分子を提供する。例として、限定されないが、リンカーを使用して、スパイクタンパク質ＡＢＤを多量体化部分に接続することができる。
ペプチドリンカーは、２アミノ酸～６０アミノ酸以上の範囲とすることができ、特定の態様において、ペプチドリンカーは、３アミノ酸～５０アミノ酸、４～３０アミノ酸、５～２５アミノ酸、１０～２５アミノ酸、１０アミノ酸～６０アミノ酸、１２アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～５０アミノ酸、または２５アミノ酸～３５アミノ酸長の範囲とすることができる。
特定の態様において、ペプチドリンカーは、少なくとも５アミノ酸長、少なくとも６アミノ酸長、または少なくとも７アミノ酸長であり、任意選択で、最大３０アミノ酸長、最大４０アミノ酸長、最大５０アミノ酸長、または最大６０アミノ酸長である。
前述のいくつかの実施形態において、リンカーは、５アミノ酸～５０アミノ酸長の範囲、例えば、５～５０、５～４５、５～４０、５～３５、５～３０、５～２５、または５～２０アミノ酸長の範囲である。前述の他の実施形態において、リンカーは、６アミノ酸～５０アミノ酸長の範囲、例えば、６～５０、６～４５、６～４０、６～３５、６～３０、６～２５、または６～２０アミノ酸長の範囲である。前述の更に他の実施形態において、リンカーは、７アミノ酸～５０アミノ酸長の範囲、例えば、７～５０、７～４５、７～４０、７～３５、７～３０、７～２５、または７～２０アミノ酸長の範囲である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｇ４Ｓリンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、２個の連続するＧ４Ｓ配列、３個の連続するＧ４Ｓ配列、４個の連続するＧ４Ｓ配列、５個の連続するＧ４Ｓ配列、または６個の連続するＧ４Ｓ配列を含む。
６．６．核酸および宿主細胞
別の態様において、本開示は、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子をコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態において、多価抗スパイクタンパク質結合分子は、単一の核酸によってコードされる。他の実施形態において、多価抗スパイクタンパク質結合分子は、複数（例えば、２、３、４個、またはそれより多く）の核酸によってコードすることができる。
単一の核酸は、単一のポリペプチド鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子、２個以上のポリペプチド鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子、または２個より多いポリペプチド鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子の一部をコードすることができる（例えば、単一の核酸は、３個、４個、もしくはそれより多いポリペプチド鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子の２個のポリペプチド鎖、または４個以上のポリペプチド鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子の３個のポリペプチド鎖をコードすることができる）。発現を別々に制御するために、２個以上のポリペプチド鎖をコードするオープンリーディングフレームは、別々の転写調節エレメント（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）の制御下におくことができる。２個以上のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、同じ転写調節エレメントによって制御され、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、別々のポリペプチドへの翻訳を可能にすることもできる。
いくつかの実施形態において、２個以上のポリペプチド鎖を含む多価抗スパイクタンパク質結合分子は、２個以上の核酸によってコードされる。多価抗スパイクタンパク質結合分子をコードする核酸の数は、多価抗スパイクタンパク質結合分子中のポリペプチド鎖の数以下であることが可能である（例えば、２個以上のポリペプチド鎖が単一の核酸によってコードされる場合）。
本開示の核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であることが可能である。
別の態様において、本開示は、本開示の核酸を含む宿主細胞およびベクターを提供する。核酸は、本明細書において以下により詳細に記載されるように、単一のベクター中に存在してもよく、または同じ宿主細胞もしくは別個の宿主細胞中に存在する別個のベクター中に存在してもよい。
６．６．１．ベクター
本開示は、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子またはその構成要素（例えば、多価抗スパイクタンパク質結合分子のポリペプチド鎖のうちの１個または２個）をコードするヌクレオチド配列を含むベクターを提供する。ベクターは、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージ、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）を含むが、これらに限定されない。
多数のベクター系を用いることができる。例えば、ベクターの１つのクラスは、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶもしくはＭＯＭＬＶ）、またはＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、およびフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡエレメントを利用する。
追加的に、ＤＮＡを染色体に安定的に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって選択することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に対するプロトトロピー（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｙ）、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅などの重金属に対する耐性などを提供してもよい。選択可能なマーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接連結されるか、または共形質転換によって同じ細胞内に導入されるかのいずれかであることが可能である。ｍＲＮＡの最適な合成のために、追加のエレメントも必要とされる場合がある。これらのエレメントは、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルを含んでいてもよい。
発現ベクターまたはＤＮＡ配列を含有する構築物が発現のために調製されると、発現ベクターを適切な宿主細胞にトランスフェクトするか、または導入することができる。これを達成するために、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクション、または他の従来の技術などの様々な技術が用いられてもよい。得られたトランスフェクトされた細胞を培養し、発現されたポリペプチドを回収するための方法および条件は、当業者に既知であり、本明細書に基づいて、用いられる特異的発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて変更または最適化されてもよい。
６．６．２．細胞
本開示はまた、本開示の核酸を含む宿主細胞を提供する。
一実施形態において、宿主細胞は、本明細書に記載される１つ以上の核酸を含むように遺伝子操作される。
一実施形態において、宿主細胞は、発現カセットを使用することによって遺伝子操作される。「発現カセット」という語句は、かかる配列と適合性の宿主における遺伝子の発現に影響を与えることができるヌクレオチド配列を指す。かかるカセットには、プロモーターと、イントロンを有するかまたは有しないオープンリーディングフレームと、終結シグナルと、が含まれてもよい。発現にもたらすのに必要な、または役立つ追加の因子、例えば、誘導性プロモーターも使用されてもよい。
本開示はまた、本明細書に記載のベクターを含む宿主細胞を提供する。
細胞は、限定されないが、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞、またはヒト細胞であることが可能である。好適な真核細胞としては、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、およびＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好適な昆虫細胞としては、限定されないが、Ｓｆ９細胞が挙げられる。
６．７．薬学的組成物
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、多価抗スパイクタンパク質結合分子と、１つ以上の担体、賦形剤および／または希釈剤とを含む組成物の形態であってもよい。組成物は、獣医学的使用またはヒトにおける薬学的使用などの特定の使用のために製剤化されてもよい。組成物の形態（例えば、乾燥粉末、液体製剤など）と、使用される賦形剤、希釈剤および／または担体は、多価抗スパイクタンパク質結合分子の意図される用途に、治療用途の場合は投与様式に依存するであろう。
治療用途の場合、組成物は、薬学的に許容される担体を含む滅菌の薬学的組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、（患者に投与する所望の方法に応じて）任意の好適な形態であることが可能である。薬学的組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、髄腔内、局部、または局所などの様々な経路によって患者に投与することができる。いずれかの所与の場合における投与のための最も好適な経路は、特定の抗体、対象、疾患の性質および重症度、ならびに対象の身体状態に依存するであろう。典型的には、薬学的組成物は、静脈内または皮下に投与されるであろう。
薬学的組成物は、簡便には、用量当たり所定量の本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子を含有する単位剤形で提示することができる。単位用量に含まれる多価抗スパイクタンパク質結合分子の量は、治療される疾患だけではなく、当該技術分野において周知である他の因子にも依存するであろう。そのような単位投薬量は、単回投与に適した量の多価抗スパイクタンパク質結合分子を含有する凍結乾燥された乾燥粉末の形態、または液体の形態であってもよい。乾燥粉末単位剤形は、シリンジ、好適な量の希釈剤、および／または投与に有用な他の構成要素とともにキットに包装されてもよい。液体形態の単位投薬量は、簡便には、単回投与に適した量の多価抗スパイクタンパク質結合分子を予め充填したシリンジの形態で供給されてもよい。
薬学的組成物はまた、複数回の投与に好適な量の多価抗スパイクタンパク質結合分子を含有するバルク形態で供給されてもよい。
薬学的組成物は、所望の純度を有する多価抗スパイクタンパク質結合分子を、当該技術分野で典型的に使用される任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（これらの全てを本明細書では「担体」と称する）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性洗剤、抗酸化剤、および他の様々な添加剤と混合することによって、凍結乾燥された製剤または水溶液として保存するために調製されてもよい。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｏｓｏｌ，ｅｄ．１９８０）を参照されたい。かかる添加剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であるべきである。
緩衝剤は、生理学的条件に近い範囲でｐＨを維持するのに役立つ。それらは、多種多様な濃度で存在してもよいが、典型的には、約２ｍＭ～約５０ｍＭの範囲の濃度で存在するであろう。本開示で使用するための好適な緩衝剤としては、有機酸および無機酸の両方ならびにその塩、例えば、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グリコン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｇｌｙｃｏｎａｔｅ）混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グリコン酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｇｌｙｃｏｎａｔｅ）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）、および酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）が挙げられる。追加的に、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、およびトリメチルアミン塩（例えば、Ｔｒｉｓ）を使用することができる。
保存剤は、微生物の成長を遅延させるために添加されてもよく、約０．２％～１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本開示で使用するのに好適な保存剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタ－クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウムハライド（ｂｅｎｚａｌｃｏｎｉｕｍ ｈａｌｉｄｅ）（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびアルキルパラベン（例えば、メチルまたはプロピルパラベン）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、および３－ペンタノールが挙げられる。時に「安定剤」として知られている等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確保するために添加されることができ、多価糖アルコール、例えば、三価以上の糖アルコール（例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなど）を含む。安定剤とは、機能において、増量剤から添加剤までの範囲であることが可能である幅広いカテゴリーの賦形剤を指し、治療薬を可溶化するか、変性もしくは容器壁への付着を防ぐのに役立つ。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上で列挙した）、アミノ酸（例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど）、有機糖または糖アルコール（例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクチトール、グリセロールなど、イノシトールなどのシクリトールを含む）、ポリエチレングリコール、アミノ酸ポリマー、含硫還元剤（例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、ａ－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウムなど）、低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基以下のペプチド）、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドンなど）、単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなど）、二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロースおよびトレハロースなど）、および三糖類（例えば、ラフィノースなど）、および多糖類（例えば、デキストランなど）であることが可能である。安定剤は、多価抗スパイクタンパク質結合分子の重量当たり０．５～１０重量％の範囲の量で存在してもよい。
非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても既知）を添加して、糖タンパク質の可溶化を助けるとともに、撹拌誘導性凝集から糖タンパク質を保護してもよく、これにより、タンパク質の変性を引き起こすことなく、製剤を負荷のかかる剪断面に曝露することも可能になる。好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、およびプルロニックポリオールが挙げられる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約０．０７ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ）の範囲で存在してもよい。
追加の種々の賦形剤としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が挙げられる。
本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子は、多価抗スパイクタンパク質結合分子を含み、例えば、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含有する、薬学的組成物として配合することができる。本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子を含む薬学的組成物または滅菌組成物を調製するために、多価抗スパイクタンパク質結合分子調製物を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または担体と組み合わせることができる。
例えば、多価抗スパイクタンパク質結合分子の製剤は、多価抗スパイクタンパク質結合分子を、例えば、凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローション、または懸濁液の形態での生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって調製することができる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ，２０００，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９３，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９０，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９０，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ，２０００，Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。
６．８．治療適応症および治療方法
本開示は、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子を使用および適用するための方法を提供する。
特定の態様において、本開示は、コロナウイルスのＲＢＤと細胞ＡＣＥ２との間の相互作用が関与する疾患または状態を予防または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、疾患または状態は、スパイクタンパク質の中和によって予防または治療される。様々な実施形態において、スパイクタンパク質の中和は、（ａ）ＡＣＥ２などの受容体に結合するスパイクタンパク質の能力を阻害すること、（ｂ）ＴＭＰＲＳＳ２などのプロテアーゼによるスパイクタンパク質の切断を阻害すること、（ｃ）スパイクタンパク質が（ｉ）宿主細胞へのウイルス侵入または（ｉｉ）宿主細胞におけるウイルス再生を媒介することを阻害すること、または（ｄ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）（ｉ）、および（ｃ）（ｉｉ）のうちの２つ、３つ、もしくは４つ全ての任意の組み合わせを含む。
したがって、いくつかの実施形態において、本開示の多価抗スパイクタンパク質結合分子および薬学的組成物を使用して、コロナウイルスのＲＢＤと細胞ＡＣＥ２との間の相互作用を阻害することができる。いくつかの実施形態において、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶのＲＢＤ間の相互作用を阻害する方法を提供する。他の実施形態において、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤ間の相互作用を阻害する方法を提供する。したがって、いくつかの実施形態において、本開示は、コロナウイルスのＲＢＤと細胞ＡＣＥ２との間の相互作用を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、コロナウイルスに曝露したが、感染症と診断されていない対象に、本明細書に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与する方法を提供する。他の実施形態において、対象は、コロナウイルスに対して陽性であるが、無症候性である。更に他の実施形態において、対象は、コロナウイルスに対して陽性であり、前症候性である。更なる実施形態において、対象は、コロナウイルスに対して陽性であり、症候性である。他の実施形態において、対象は、ＣＯＶＩＤ－１９または他のコロナウイルス媒介性疾患または病態を発症している。
いくつかの実施形態において、本開示は、コロナウイルス感染の重症度を減らす方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの他の実施形態において、本開示は、コロナウイルスのウイルス負荷を減らす方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
更なる実施形態において、本開示は、コロナウイルス感染を有する対象において疾患進行を予防する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示は、コロナウイルス感染の持続期間を減らす方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
他の実施形態において、本開示は、コロナウイルス感染を有する対象において重度の疾患または死のリスクを減らす方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載される多価抗スパイクタンパク質結合分子薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
７．付番された実施形態
様々な具体的な実施形態を説明し、記載してきたが、本開示（複数可）の趣旨および範囲から逸脱することなく様々な変更を行うことができることが理解されるであろう。本開示は、以下に記載されている付番された実施形態によって例示される。別段の定めのない限り、上記の詳細な説明に記載される概念、態様および／または実施形態のうちのいずれかの特徴は、以下の付番された実施形態のうちのいずれかに準用して適用可能である。
以下の付番された実施形態において、多量体化部分は、好ましくは、哺乳動物多量体化部分（例えば、ヒトＦｃドメイン）に由来し、抗原結合ドメインは、好ましくは、ヒトまたはヒト化抗体に由来し、対象は、好ましくは、哺乳動物（例えば、ヒト）である。
１．１個以上の多量体化部分によって作動可能に連結された少なくとも５個の抗スパイクタンパク質抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２．少なくとも１０個の抗スパイクタンパク質ＡＢＤを含む、実施形態１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３．十価または十二価である、実施形態１または実施形態２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４．抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）が、ヒトまたはヒト化されている、実施形態１～３のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５．抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）が、Ｆａｂである、実施形態１～４のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表１～３のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表１～４のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表１に示される抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表２に示される抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１０．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表３に示される抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１１．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表４に示される抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１２．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、
（ａ）それぞれ配列番号５７９、５８０、および５８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、
（ｂ）それぞれ配列番号３９８、３７２、および５８３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１３．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、
（ａ）それぞれ配列番号５０７、５０８、および５０９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、
（ｂ）それぞれ配列番号５１１、４０７、および５１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１４．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、
（ａ）それぞれ配列番号４５０、４５１、および４５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、
（ｂ）それぞれ配列番号４５４、４１５、および４５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１５．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表１～３のうちのいずれか１つに示されるＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１６．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表１～４のうちのいずれか１つに示されるＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１７．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表１に示される抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１８．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表２に示される抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１９．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表３に示される抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２０．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表４に示される抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２１．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、（ａ）配列番号５７８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｂ）配列番号５８２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２２．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、（ａ）配列番号５７８のアミノ酸配列を含むＶＨと、（ｂ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２３．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、（ａ）配列番号５０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｂ）配列番号５１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２４．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、（ａ）配列番号５０６のアミノ酸配列を含むＶＨと、（ｂ）配列番号５１０のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２５．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、（ａ）配列番号４４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＨと、（ｂ）配列番号４５３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２６．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、（ａ）配列番号４４９のアミノ酸配列を含むＶＨと、（ｂ）配列番号４５３のアミノ酸配列を含むＶＬと、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２７．１個以上の（または全ての）ＡＢＤが、中和する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントＢＡ．１を中和することができる、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
２９．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２バリアントＢＡ．２を中和することができる、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３０．単一特異性である、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３１．抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）が、全て同じである、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３２．多重特異性である、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３３．二重特異性である、実施形態３２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３４．２つの型のＡＢＤを含む、実施形態３２または実施形態３３に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３５．１個以上の多量体化部分が、Ｆｃドメインを含む、実施形態１～３４のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３６．両方の型のＡＢＤがスパイクタンパク質に結合する、実施形態３４に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３７．一方の型のＡＢＤが、スパイクタンパク質に結合し、他方の型のＡＢＤが、異なる標的に結合する、実施形態３４に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３８．Ｆｃドメインが、ＩｇＭ Ｆｃドメインである、実施形態３５に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
３９．Ｆｃドメインが、Ｃμ３ドメインおよびＣμ４ドメインを含む、実施形態３８に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４０．Ｆｃドメインが、Ｃμ２ドメインを含む、実施形態３８または実施形態３９に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４１．五量体である、実施形態３８～４０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４２．５個の二量体の五量体であり、各二量体が、２個のポリペプチドを含み、各ポリペプチドが、抗スパイクタンパク質ＡＢＤおよびＩｇＭ Ｆｃドメインを含む、実施形態４１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４３．ホモ五量体である、実施形態４１または実施形態４２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４４．一部または全てのＣμ３および／またはＣμ４ドメインが、ジスルフィド連結されている、実施形態４１～４３のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４５．Ｊ鎖を含む、実施形態４１～４４のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４６．Ｊ鎖が、ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されている、実施形態４５に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４７．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｊ鎖のＮ末端である、実施形態４６に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４８．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｊ鎖のＣ末端である、実施形態４６に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
４９．ＩｇＧ ＦｃドメインおよびＪ鎖が、リンカーを介して接続されている、実施形態４６～４８のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５０．リンカーが、アミノ酸配列Ｇ４Ｓであるか、またはそれを含む、実施形態４９に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５１．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、実施形態４６～５０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５２．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１ドメインである、実施形態４６～５０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５３．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ４ドメインである、実施形態４６～５０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５４．Ｆｃドメインが、そのＮ末端にヒンジを含む、実施形態３３または実施形態５３に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５５．ヒンジが、キメラヒンジである、実施形態５４に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５６．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、非二量体化Ｆｃドメインである、実施形態４６～５５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５７．非二量体化Ｆｃドメインが、配列番号１４～１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５６に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５８．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｆｃ １．５ドメインである、実施形態４６～５１のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
５９．Ｆｃ １．５ドメインが、配列番号２０～２７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態５８に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６０．ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖が、配列番号２８～３２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態４６～５９のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６１．任意選択で、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子であり、図１Ａに示される構成を有する、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６２．六量体である、実施形態３８～４０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６３．６個の二量体の六量体であり、各二量体が、２個のポリペプチドを含み、各ポリペプチドが、抗スパイクタンパク質ＡＢＤおよびＩｇＭ Ｆｃドメインを含む、実施形態６２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６４．ホモ六量体である、実施形態６２または実施形態６３に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６５．一部または全てのＣμ３および／またはＣμ４ドメインが、ジスルフィド連結されている、実施形態６２～６４のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６６．Ｊ鎖を欠く、実施形態６２～６５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６７．任意選択で、実施形態１～４０および６２～６６のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子であり、図１Ｂに示される構成を有する、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６８．任意選択で、実施形態１～６１のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子であり、図１Ｃに示される構成を有する、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
６９．任意選択で、実施形態１～６１のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子であり、図１Ｄに示される構成を有する、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７０．任意選択で、実施形態１～６１のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子であり、図１Ｅに示される構成を有する、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７１．１個以上の多量体化部分によって作動可能に連結されたスパイクタンパク質を結合するための少なくとも５個の手段を含む、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７２．スパイクタンパク質を結合するための少なくとも１０個の手段を含む、実施形態７１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７３．スパイクタンパク質を結合するための手段のための十価または十二価である、実施形態７１または７２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７４．少なくとも５個のＦａｂを含み、各々がスパイクタンパク質を結合するための手段を含む、実施形態７１～７３のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７５．単一特異性である、実施形態７１～７４のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７６．スパイクタンパク質を結合するための少なくとも５個の手段が、同じである、実施形態７５に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７７．多重特異性である、実施形態７１～７３のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７８．二重特異性である、実施形態７７に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
７９．１個以上の多量体化部分が、Ｆｃドメインを含む、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８０．Ｆｃドメインが、ＩｇＭ Ｆｃドメインである、実施形態７９に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８１．Ｆｃドメインが、Ｃμ３ドメインおよびＣμ４ドメインを含む、実施形態８０に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８２．Ｆｃドメインが、Ｃμ２ドメインを含む、実施形態８０または実施形態８１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８３．五量体である、実施形態８０～８２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８４．５個の二量体の五量体であり、各二量体が、２個のポリペプチドを含み、各ポリペプチドが、スパイクタンパク質を結合するための手段およびＩｇＭ Ｆｃドメインを含む、実施形態８３に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８５．ホモ五量体である、実施形態８３または実施形態８４に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８６．一部または全てのＣμ３および／またはＣμ４ドメインが、ジスルフィド連結されている、実施形態８３～８５のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８７．Ｊ鎖を含む、実施形態８３～８６のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８８．Ｊ鎖が、ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されている、実施形態８７に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
８９．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｊ鎖のＮ末端である、実施形態８７に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９０．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｊ鎖のＣ末端である、実施形態８７に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９１．ＩｇＧ ＦｃドメインおよびＪ鎖が、リンカーを介して接続されている、実施形態８７～９０のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９２．リンカーが、アミノ酸配列Ｇ４Ｓであるか、またはそれを含む、実施形態９１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９３．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、実施形態８８～９２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９４．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１ドメインである、実施形態８８～９３のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９５．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ４ドメインである、実施形態８８～９４のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９６．Ｆｃドメインが、そのＮ末端にヒンジを含む、実施形態３３または実施形態９５に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９７．ヒンジが、キメラヒンジである、実施形態９６に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９８．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、非二量体化Ｆｃドメインである、実施形態８８～９７のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
９９．非二量体化Ｆｃドメインが、配列番号１４～１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態９８に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１００．ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｆｃ １．５ドメインである、実施形態８８～９７のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１０１．Ｆｃ １．５ドメインが、配列番号２０～２７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１００に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１０２．ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖が、配列番号２８～３２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態８８～１０１のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
１０３．実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子をコードする、核酸または複数の核酸。
１０４．実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０３に記載の核酸（複数可）を発現するように操作された、宿主細胞。
１０５．実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子を生成する方法であって、実施形態１０４に記載の宿主細胞を培養することと、それによって発現された多価抗スパイクタンパク質結合分子を回収することと、を含む、方法。
１０６．実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子と、賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
１０７．コロナウイルス疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１０８．コロナウイルスのＲＢＤと細胞ＡＣＥ２との間の相互作用を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１０９．インビボでコロナウイルススパイクタンパク質を中和する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１０．インビボでコロナウイルススパイクタンパク質のプロテアーゼ媒介性切断（例えば、ＴＭＰＲＳＳ２媒介性切断）を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１１．対象において宿主細胞へのコロナウイルスのウイルス侵入を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１２．対象において宿主細胞中のコロナウイルススパイクタンパク質の再生産を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１３．コロナウイルス感染の重症度を減らす方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１４．コロナウイルスのウイルス負荷を減らす方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１５．コロナウイルス感染を有する対象において疾患進行を予防する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１６．コロナウイルス感染の持続期間を減らす方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１７．コロナウイルス感染を有する対象において重度の疾患または死のリスクを減らす方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または実施形態１０６に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
１１８．コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶである、実施形態１０７～１１７のいずれか１つに記載の方法。
１１９．コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態１０７～１１７のいずれか１つに記載の方法。
８．実施例
８．１．材料および方法
８．１．１．抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭ構築物の構築および生成
ＩｇＭ重鎖構築物は、５’から３’末端に、ｍＲＯＲ１シグナル配列、重鎖可変領域、およびＩｇＭ重鎖の定常領域（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０１８７１）といった構成要素を有するＤＮＡ断片として設計した。全てのＩｇＭ抗体を、製造業者のプロトコルに従って、一過性トランスフェクションによって、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で発現させ、それによって、２５０ｍＬの細胞を、３個の鎖（Ｈ、Ｌ、Ｊ）を有する各ＩｇＭ抗体構築物について、１：１：１の比率でトランスフェクトした。
ＰＯＲＯＳ ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＭ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｒｉｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、上清から抗体を精製した。まず、カラムを５カラム体積（ＣＶ）のＰＢＳで平衡化した。次に、融合タンパク質を含有する滅菌濾過上清を、約２．０ｍＬ／分の流速で予め平衡化されたカラムに充填した。任意の非特異的に結合した物質を、５ＣＶについて２．０ｍＬ／分の流速で、５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５を使用してカラムから洗い流した。親和性結合した融合タンパク質を、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＩｇＧ Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ２．８、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してカラムから溶出させた。溶出後、タンパク質を１／１０（ｖ／ｖ）の１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０を使用して中和した。溶出画分材料を更に仕上げして、目的の種の純度をＳＥＣによって増加させた。したがって、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ ６ １０／３００ＧＬカラム（Ｃｙｔｉｖａ）を、１×ＤＰＢＳ、ｐＨ７．１泳動用緩衝液中、０．７５ｍＬ／分の流速で使用した。目的の画分をプールし、濃縮した。各画分プールをＵＶ－Ｖｉｓによって分析して、タンパク質濃度を決定した。各画分プールをＳＥ－ＵＰＬＣによって更に分析して、目的の種の相対純度を決定した。各画分プールから単離されたタンパク質を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して変性条件下で分析した。更に、試料を、１ウェルあたり２μｇの試料を充填した４～２０％のＴｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅゲル上で、２００Ｖの一定値で１時間実行した。
８．１．２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルス／バリアント中和アッセイ
Ｖｅｒｏ細胞を、ピルビン酸ナトリウムを含み、グルタミンを含まないＤＭＥＭ高グルコース培地中で培養し、１０％熱不活化ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミンを補充し（完全ＤＭＥＭ）、９６ウェル黒色／透明底細胞培養プレート中に２０，０００細胞／ウェルで播種した。アッセイ当日に、抗体を２倍のアッセイ濃度に希釈し、３倍に連続希釈して、合計１１の濃度（例えば、ＩｇＧ対照について４０ｎＭ～６７７．４ｆＭを得た。ＩｇＭ分子について、使用された濃度は、表７の実験では１３．３ｎＭ～２２５．８ｆＭ、表８および９の実験では１．３ｎＭ～２２．５ｆＭであった）。全ての希釈は、ピルビン酸ナトリウム、０．２％ＩｇＧフリーＢＳＡ、およびゲンタマイシンを追加した、ピルビン酸ナトリウムを含まない／グルタミンを含むＤＭＥＭ高グルコース培地からなる感染培地を使用して実施した。
本明細書で使用されるｐＶＳＶ－Ｌｕｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－Ｓシュードウイルスは、非複製ＶＳＶ－ＤＧであり、その天然糖タンパク質の代わりに二重ＧＦＰ／ホタルルシフェラーゼレポーターを発現し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクを伴って偽型化した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルスまたはバリアントを、感染培地中で１：４で希釈し、次いで、ＩｇＧ対照について１：８の最終シュードウイルス／バリアント希釈および２０ｎＭ～３３８．７ｆＭの最終試験物品濃度で、表７においてＩｇＭ分子について６．７ｎＭ～１１２．９ｆＭの濃度、表８および９においてＩｇＭ分子について２．０ｎＭ～３３．８ｆＭの濃度で、抗体希釈液と１：１で組み合わせた。組み合わせた抗体およびシュードウイルス／バリアントを、室温で３０分間インキュベートした。次に、培養培地を細胞から除去し、組み合わせた抗体および１００ｕＬ／ウェルのシュードウイルス／バリアントをウェルに２個組で添加し、次いで、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。感染後２４時間で、培地をウェルから除去し、細胞を、１００μＬ／ウェルのＧｌｏ－Ｌｙｓｉｓ緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して溶解した。Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ ｉ３Ｘプレートリーダーで発光を読み取る直前に、１００ｕＬの調製されたＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）を溶解物に添加した。結果をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにエクスポートし、中和％を、以下の方程式で計算した。中和％＝（（１－（ウェル値－培地対照）／（ウイルス対照－培地対照））×１００。次いで、中和％をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにプロットし、応答に対する非線形回帰：ｌｏｇ（阻害剤）－可変傾き（４パラメータ）を使用して分析して、ＩＣ５０値を計算する。
８．２．実施例１：抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭ構築物の生成
ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ Ｓタンパク質に対する異なるＦａｂ部分を用いて、合計７個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭ（ＲＥＧＮ１０９３３、１０９８５、１０９８７、１０９８９、１４２５６、１４３１５、１４２８７；それぞれ、表３および４に示されるような、ｍＡｂ１０９８５、ｍＡｂ１０９８７、ｍＡｂ１０９８９、ｍＡｂ１４２５６、ｍＡｂ１４３１５、およびｍＡｂ１４２８７からのＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む）を生成し、セクション８．１．１に記載のように精製した。アフィニティー精製は、予想される生成物サイズに対応する非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上のより厚いバンドに関連付けられた（図２）。更に、６個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ＩｇＭ構築物のＳＥＣ精製プロファイルは、様々なレベルの高分子量種を有する別個の主ピークを示した（図３）。
８．３．実施例２：ＲＢＤを標的とする抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭの中和活性
一連のウイルス中和アッセイを、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）と比較して、実施例１で特性決定された６個全ての抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ２シュードウイルスＤ６１４ＧおよびオミクロンバリアントＢＡ．１およびＢＡ．２に対するパーセント中和活性率を比較するために、セクション８．１．２に記載されるように実施した。
全ての抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ＩｇＭ分子は、異なる効力を有するにもかかわらず、シュードウイルスＤ６１４Ｇバリアントに対する中和活性を有していた（図４Ａおよび表７）。それにもかかわらず、全てのＩｇＭ分子は、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶよりも高いシュードウイルス中和効力と関連付けられた。
ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶは、ＢＡ．１に対して完全に中和活性を失い、ＢＡ．２に対して弱い中和のみを保持していた（図４Ｂおよび４Ｃ、ならびに表７）。しかしながら、ＢＡ．１およびＢＡ．２バリアントに対する個々の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭの中和活性は様々である。例えば、ＲＥＧＮ１０９３３ベースのＩｇＭは、Ｄ６１４Ｇ、ＢＡ．１、およびＢＡ．２バリアントにおいて、親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶよりも増強された中和を示した。しかしながら、１０９３３ ＩｇＭは、ＢＡ．１およびＢＡ．２に対する完全な効力（ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶによるＤ６１４Ｇに対するＩＣ５０として定義される）の回復に失敗した（図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃ）。１０９８９－ＩｇＭは、Ｄ６１４Ｇにおいて親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶよりも増強された中和を示した。１０９８９－ＩｇＭは、ＢＡ．１およびＢＡ．２に対する活性を完全に失った（図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃ）。１０９８７－ＩｇＭは、Ｄ６１４ＧおよびＢＡ．２バリアントに対する親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶよりも良好な中和を有していた。しかしながら、ＢＡ．１に対する活性はなかった（図７Ａ、７Ｂ、および７Ｃ）。１０９８５－ＩｇＭは、Ｄ６１４ＧおよびＢＡ．１バリアントにおいて、親ＩｇＧおよびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶよりも上昇した中和を示したが、中和活性は、ＢＡ．２に対して完全に消失した（図８Ａ、８Ｂ、および８Ｃ）。
１４３１５－ＩｇＭは、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶの完全な効力（Ｄ６１４Ｇに対する）よりも優れたＩＣ５０を有する両方のバリアントに対する高い中和効力に関連付けられた唯一のＲＢＤベースのＩｇＭであった（図９Ａ、９Ｂおよび９Ｃ、ならびに表７）。
８．４．実施例３：非ＲＢＤを標的とする抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭの中和活性
実施例１で生成された７個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭのうちの１つである１４２８７－ＩｇＭは、スパイクタンパク質上の非ＲＢＤエピトープに結合する親抗体に由来していた。これは、それぞれセクション８．１．１．およびセクション８．１．２．に記載されるように、ウイルス中和アッセイで生成され、試験された。シュードウイルスに基づく中和アッセイについては、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶとともに、ＲＥＧＮ１４２８７を、同じＦａｂ部分を有する親ＩｇＧ対照として含めた。
１４２８７－ＩｇＭは、Ｄ６１４ＧならびにオミクロンＢＡ．１、ＢＡ．２、ＢＡ．２．７５、およびＢＡ．４／ＢＡ．５にわたって所望の広範かつ強力な中和活性を示し、ＩＣ５０値は、３．２～９．６Ｅ－１２Ｍであり、Ｄ６１４Ｇに対してＲＥＧＥＮ－ＣＯＶより２～５倍強力であった。また、親ＲＥＧＮ１４２８７ ＩｇＧよりも１０倍の効力増強を示す（図１０Ａ～１０Ｅ、および表８）。
８．５．実施例４：現在流行しているオミクロンバリアントＢＱ．１に対する１４３１５－ＩｇＭおよび１４２８７－ＩｇＭの中和活性
所望の幅および効力を有するリードＩｇＭが、現在流行しているバリアントを中和することができるかどうかを調べるために、セクション８．１．２に記載の中和アッセイを使用して、オミクロンＢＱ．１バリアントを有する１４３１５－ＩｇＭおよび１４２８７－ＩｇＭの有効性を試験した。加えて、１０９３３－ＩｇＭ、１０９８５－ＩｇＭ、１４２８７－ＩｇＧ（ＲＥＧＮ１４２８７）、１４３１５－ＩｇＧ（ＲＥＧＮ１４３１５）、およびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶを対照として含めた。２個の広範なＩｇＭ中和剤である１４３１５－ＩｇＭおよび１４２８７－ＩｇＭは、シュードウイルスオミクロンＢＱ．１バリアントに対する強力な阻害を示し、ＩＣ５０は、それぞれ１．２Ｅ－１１および３．３Ｅ－１２Ｍであるが、１０９３３－ＩｇＭまたは１０９８５－ＩｇＭは、そうではなかった。親ＲＥＧＮ１４３１５およびＲＥＧＮ１４２８７ ＩｇＧは、それぞれ４．０Ｅ－１０Ｍおよび２．４Ｅ－１１Ｍの効力値でＢＱ．１バリアントを中和したが、Ｄ６１４Ｇに対するＲＥＧＥＮ－ＣＯＶの効力値よりも３４分の１および２分の１弱かった（図１１Ｂおよび１１Ｃ）。対応する１４３１５－ＩｇＭは、活性をＲＥＧＥＮ－ＣＯＶの完全な効力まで高め、１４２８７－ＩｇＭは、ＲＥＧＥＮ－ＣＯＶよりも３～４倍高い活性を示した（図１１Ａ、１１Ｂ、および１１Ｃ）。加えて、両方のＩｇＭは、ＢＱ．１に対する対応する親ＩｇＧよりも３～１２倍強力であった（図１１Ｂ、１１Ｃおよび表９）。
これらの知見は、ＩｇＭのフォーマットにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイクタンパク質上の多価および標的化エピトープの組み合わせが、対応するＦａｂ部分を有する親ＩｇＧよりも高い効力およびより広範な保護を達成する上で重要な役割を果たすことを示す。中和能力を弱体化したか、または失ったＩｇＧについての価数の増加のみでは、特定のバリアントに対する活性の増強を保証するものではない。活性の増加が観察された場合であっても、それが所望の効力まで完全に回復しない場合がある（例えば、Ｄ６１４Ｇに対するＲＥＧＥＮ－ＣｏＶのＩＣ５０）。
８．６．実施例５：ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む１４２８７－ＩｇＭのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス中和活性
１４２８７－ＩｇＭを出発点として使用して、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む３個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＩｇＭを生成し、セクション８．１．１に記載されるように精製した。構築物１４２８７－ＩｇＭ Ｊ－Ｆｃは、二量体化ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を含み、構築物１４２８７－ＩｇＭ Ｊ－Ｆｃ１．５は、Ｆｃ１．５ドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を含み、構築物１４２８７－ＩｇＭ Ｊ－ｍＦｃは、非二量体化Ｆｃドメインに作動可能に連結されたＪ鎖を含んでいた。精製された構築物は、プロテインＡに結合することができた（図１２Ａ）。３個の構築物全てのＳＥＣ精製プロファイルは、個別の主ピークを示した（図１２Ｂ）。
ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖、１４２８７－ＩｇＭ Ｊ－Ｆｃ、１４２８７－ＩｇＭ Ｊ－ｍＦｃ、および１４２８７－ＩｇＭ Ｊ－Ｆｃ１．５を含むＩｇＭ構築物を、セクション８．１．２に記載されるように、ウイルス中和アッセイで評価した。比較のために、ＲＥＧＮ１４２８７－ＩｇＧ、１４２８７－ＩｇＭ、およびＲＥＧＥＮ－ＣＯＶ（ＲＥＧＮ１０９８７／ＲＥＧＮ１０９３３）も含めた。結果は、ＩｇＧ Ｆｃ連結Ｊ鎖を含む３個全てのＩｇＭ構築物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードウイルス（図１３Ａおよび表１０）ならびにＸＢＢ１．５バリアント（図１３Ｂおよび表１０）に対して様々な程度の効力を示したことを示した。
９．参考文献の引用
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願、および他の文書は、各個々の刊行物、特許、特許出願、または他の文書が全ての目的のために参照によって組み込まれることが個別に示された場合と同程度に、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に組み込まれる参照のうちの１つ以上の教示と本開示との間に矛盾がある場合には、本明細書の教示が意図される。

Claims (50)

  1. １個以上の多量体化部分によって作動可能に連結された少なくとも５個の抗スパイクタンパク質抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む、多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  2. 少なくとも１０個の抗スパイクタンパク質ＡＢＤを含む、請求項１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  3. 十価または十二価である、請求項１または２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  4. 前記抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）が、ヒトまたはヒト化されている、請求項１～３のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  5. 前記抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）が、Ｆａｂである、請求項１～４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  6. １個以上（または全て）のＡＢＤが、中和する、請求項１～５のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  7. 単一特異性である、請求項１～６のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  8. 前記抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）が、全て同じである、請求項１～７のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  9. 多重特異性である、請求項１～６のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  10. 二重特異性である、請求項９に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  11. ２つの型のＡＢＤを含む、請求項９または１０に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  12. 前記１個以上の多量体化部分が、Ｆｃドメインを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  13. 両方の型のＡＢＤがスパイクタンパク質に結合する、請求項１１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  14. 一方の型のＡＢＤが、スパイクタンパク質に結合し、他方の型のＡＢＤが、異なる標的に結合する、請求項１１に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  15. 前記Ｆｃドメインが、ＩｇＭ Ｆｃドメインである、請求項１２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  16. 前記Ｆｃドメインが、Ｃμ３ドメインおよびＣμ４ドメインを含む、請求項１５に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  17. 前記Ｆｃドメインが、Ｃμ２ドメインを含む、請求項１５または１６に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  18. 五量体である、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  19. ５個の二量体の五量体であり、各二量体が、２個のポリペプチドを含み、各ポリペプチドが、抗スパイクタンパク質ＡＢＤおよびＩｇＭ Ｆｃドメインを含む、請求項１８に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  20. ホモ五量体である、請求項１８または１９に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  21. 一部または全てのＣμ３および／またはＣμ４ドメインが、ジスルフィド連結されている、請求項１８～２０のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  22. Ｊ鎖を含む、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  23. 前記Ｊ鎖が、ＩｇＧ Ｆｃドメインに作動可能に連結されている、請求項２２に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  24. 前記ＩｇＧ Ｆｃドメインおよび前記Ｊ鎖が、リンカーを介して接続されている、請求項２３に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  25. 前記ＩｇＧ Ｆｃドメインが、非二量体化Ｆｃドメインである、請求項２３または２４に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  26. 前記ＩｇＧ Ｆｃドメインが、Ｆｃ １．５ドメインである、請求項２３または２４に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  27. 六量体である、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  28. ６個の二量体の六量体であり、各二量体が、２個のポリペプチドを含み、各ポリペプチドが、抗スパイクタンパク質ＡＢＤおよびＩｇＭ Ｆｃドメインを含む、請求項２７に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  29. ホモ六量体である、請求項２７または２８に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  30. 一部または全てのＣμ３および／またはＣμ４ドメインが、ジスルフィド連結されている、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  31. Ｊ鎖を欠く、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  32. １個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表４に示される抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  33. １個以上の（または全ての）ＡＢＤが、表４に示される抗体のＶＨ配列およびＶＬ配列を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  34. １個以上の（または全ての）ＡＢＤが、
    （ａ）それぞれ配列番号５７９、５８０、および５８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨと、
    （ｂ）それぞれ配列番号３９８、３７２、および５８３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬと、を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子。
  35. 請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子をコードする、核酸または複数の核酸。
  36. 請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３５に記載の核酸（複数可）を発現するように操作された、宿主細胞。
  37. 請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子を生成する方法であって、請求項３６に記載の宿主細胞を培養することと、それによって発現された前記多価抗スパイクタンパク質結合分子を回収することと、を含む、方法。
  38. 請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子と、賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
  39. コロナウイルス疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  40. コロナウイルスのＲＢＤと細胞ＡＣＥ２との間の相互作用を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  41. インビボでコロナウイルススパイクタンパク質を中和する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  42. インビボでコロナウイルススパイクタンパク質のプロテアーゼ媒介性切断（例えば、ＴＭＰＲＳＳ２媒介性切断）を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  43. 対象において宿主細胞へのコロナウイルスのウイルス侵入を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  44. 対象において宿主細胞中のコロナウイルススパイクタンパク質の再生産を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  45. コロナウイルス感染の重症度を減らす方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  46. コロナウイルスのウイルス負荷を減らす方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  47. コロナウイルス感染を有する対象において疾患進行を予防する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  48. コロナウイルス感染の持続期間を減らす方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  49. コロナウイルス感染を有する対象において重度の疾患または死のリスクを減らす方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか一項に記載の多価抗スパイクタンパク質結合分子または請求項３８に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  50. 前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項３９～４９のいずれか一項に記載の方法。
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