JP2024518770A

JP2024518770A - ファンコニ貧血のための巨核球由来細胞外小胞に関する組成物及び方法

Info

Publication number: JP2024518770A
Application number: JP2023565428A
Authority: JP
Inventors: ソン、ジョナサン; ライザー、デイヴィッド; ゴールドバーグ、ローラ
Original assignee: ストームバイオインコーポレイテッド
Priority date: 2021-04-26
Filing date: 2022-04-26
Publication date: 2024-05-02
Also published as: AU2022264498A1; EP4329783A1; CA3213792A1; WO2022232193A1

Abstract

本明細書では、ヒト多能性幹細胞に由来する巨核球由来細胞外小胞に関する組成物及び方法を開示しており、巨核球由来細胞外小胞は、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療に利用され得る。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／１７９，８０８号、２０２１年６月１０日に出願された第６３／２０９，０８５号に対する優先権の利益を主張するものであり、これらの全内容を参照により本明細書で援用する。

分野
本開示は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療するためのヒト多能性幹細胞に由来する巨核球由来細胞外小胞に関連する組成物及び方法に関する。

ナノ送達担体を使用する治療は、とりわけ、腎クリアランスの減少、部位特異的送達の改善、複数の治療薬の同時送達、酵素分解からの保護、免疫回避、連続多段階放出、刺激応答活性化、及びセラノスティック能力を含むいくつかの利点を有し得る。しかし、これらの特徴の大部分は、まだ実際の臨床には用いられておらず、その原因の１つは、多機能性を実現するために複雑で費用のかかる製造が必要なことである。リポソームは、細胞または組織の標的化機構が限られた外的な合成物質であるため、標的非特異性及び治療薬の非効率的な搬出に加えて、免疫反応及び細胞毒性を含む有害作用を患者に引き起こす可能性がある。アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ＡＡＶベクター、及びレンチウイルスベクターは、現在、遺伝子治療用に最も普及しているウイルスベクターである。しかしながら、これらのモダリティは、標的化、製造の大規模化、免疫原性、及び安全性に懸念が残る。

ファンコニ貧血（ＦＡ）は、先天異常、骨髄不全、ならびに骨髄異形成症候群及び急性骨髄性白血病等の悪性腫瘍の素因を特徴とする常染色体性劣性疾患である。ほとんどの患者は、年齢中央値５歳で骨髄不全を経験する。低身長、橈骨無形成、尿路異常、色素過剰、及び発達遅延を含む、進行性汎血球減少症及び先天性奇形がよく見られる症状である。ファンコニ貧血は、がん、特に、急性骨髄性白血病の素因及び固形腫瘍の発症リスクの増加に関連している。

ＦＡ遺伝子産物はヒトゲノムの完全性の保護において重要な役割を果たしており、ＦＡ遺伝子のいかなる変異も、ＤＮＡ損傷を修復できないことによるゲノム不安定性を引き起こす。ここ１０年で、ＤＮＡ修復におけるファンコニ貧血遺伝子産物の役割が確立されている。しかしながら、ＦＡ患者において発達異常、ＢＭＦ、及び悪性腫瘍素因の表現型をもたらす過渡のゲノム不安定性を引き起こす原因及び化学物質は不明のままであり、ＦＡの治療は主に治癒ではなく症状に重点を置いている。

したがって、規模を拡大して費用効果的に生成することができ、患者に投与した場合の有害作用を排除または軽減する送達担体、及びＤＮＡ損傷を修復し、染色体の安定性を改善することができる新規のＦＡ治療も提供できる送達担体が必要とされている。

本明細書では、巨核球由来細胞外小胞に関する組成物及び方法を開示する。具体的には、とりわけ、本発明の巨核球由来細胞外小胞は、ファンコニ貧血（ＦＡ）の薬物送達及び治療に利用され得る。本明細書に開示される方法は、インビボまたはエクスビボで行い得る、例えば、遺伝子治療、遺伝子置換療法及び遺伝子編集で使用し得る。

一態様では、本開示は、細胞を修飾するための方法に関する。本開示の方法は、（ａ）細胞を、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）を含む組成物と接触させることであって、ＭｋＥＶ内腔は、細胞を修飾するのに適した薬剤を含むカーゴを含み、及び／または細胞を修飾するのに適した薬剤を含むカーゴはＭｋＥＶの表面と会合しており、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、または脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、接触させること、及び（ｂ）細胞を修飾して、細胞内で機能性ファンコニ貧血（ＦＡ）関連遺伝子を提供し、及び／または変異した機能性ＦＡ関連遺伝子を修復すること、を含む。

別の態様において、本発明は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法に関し、当該方法は、（ａ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を、治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させて、送達能を有する治療薬を生成することであって、治療薬は、ＦＡを治療することができる、培養すること、ならびに（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与することを含み、当該巨核球由来細胞外小胞は、実質的に精製されており、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、巨核球由来細胞外小胞内腔は、治療薬を含み、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しており、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、もしくは脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む。

別の態様では、本発明は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法に関し、当該方法は、（ａ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を取得することであって、巨核球由来細胞外小胞が、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、または脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、取得すること、（ｂ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を、治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させて、送達能を有する治療薬を生成することであって、治療薬は、ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増加もしくは回復させることができる、培養すること、ならびに（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与し、それにより、患者におけるＦＡ関連遺伝子発現を、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルに達するまで回復または増加させること、を含む。

巨核球由来細胞外小胞（「ＭｋＥＶ」または「ＭＶ」）の分化ステップを示す概略図であり、各段階の継続時間、採取のタイミング、及び関連する産出量が示される。巨核球由来細胞外小胞の産出量がインビトロの巨核球（Ｍｋ）分化中に経時的に増加することを示す実験データのグラフである。参考までに、最後の時点では、上から順に、ＭｋＥＶ、生存細胞、及び生存ＭＫである。培養下のＭｋＥＶの表現型を示す実験データである。上枠は、細胞表面マーカー発現の代表的なヒストグラムである。下枠は、巨核球（左）、及び採取されたＭｋＥＶ（右）の代表的な顕微鏡画像である。ＭｋＥＶバイオマーカー発現を示す実験データを示す。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した。フローサイトメトリーのゲーティングストラテジーを示す代表的なグラフである。ＭｋＥＶバイオマーカー発現を示す実験データを示す。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した。フローサイトメトリーのゲーティングストラテジーを示す代表的なグラフである。ＭｋＥＶバイオマーカー発現を示す実験データを示す。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した。ＣＤ４１＋本開示のＭＫＥＶ、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ、及びＣＤ４１＋ＰＬＴＥＶのマーカープロファイルを示す代表的なグラフである。本開示のＭＫＥＶは、天然に存在するＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶと比較して、異なる表面マーカー表現型を有する。ＣＤ４１＋天然起源無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ（ハッシュバー）及びＣＤ４１＋血小板由来ＥＶ（ドットバー）と比較した場合の、ＣＤ４１＋ＳＴＲＭＭｋＥＶ（黒バー）上に共発現される表面マーカーの差次的発現変動が示される。本開示のＭＫＥＶ、及びＰＦＰＭｋＥＶについては、バーは平均パーセント±標準偏差、ｎ＝２の生物学的複製を表す。倍率変化は、ＰＦＰＥＶと比べられる。ＭｋＥＶバイオマーカー発現を示す実験データを示す。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した。本開示のＭｋＥＶとＰＦＰＭｋＥＶとの間のマーカー発現における倍率変化を示す代表的なグラフである。ＣＤ３２ａ、ＧＰＶＩ、及びＣＤ１８については、値を０から０．０１に変化させることにより倍率変化の計算を行った。ＭｋＥＶバイオマーカー発現を示す実験データを示す。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した。本開示のＭｋＥＶとＰＬＴＥＶとの間のマーカー発現における倍率変化を示す代表的なグラフである。ＣＤ３２ａについては、値を０から０．０１に変化させることにより倍率変化の計算を行った。データは、本開示のＭｋＥＶがＰＦＰＭｋＥＶ及びＰＬＴＥＶと比較して異なる表面マーカーの発現を示すこと、ならびにＰＦＰＭｋＥＶ及びＰＬＴＥＶと相対的な本ＭｋＥＶのマーカープロファイルを確立することを示す。ＭｋＥＶバイオマーカー発現を示す実験データを示す。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した。細胞汚染がないことを示すＤＲＡＱ５陽性事象の最小限の存在を証明する代表的なグラフである。サイズ及びモルフォロジーを含むＭｋＥＶの特性評価を示す電子顕微鏡像である。Ａは、ＣＤ４１のイムノゴールド標識を伴う本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｂは、ホスファチジルセリンのイムノゴールド標識を伴う本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。低温ＥＭ像でＭｋＥＶを測定することから、ＭｋＥＶサイズの範囲が１００～５００ｎｍ、直径が平均して約２５０ｎｍであることが示された。Ｃは、ＣＤ４１（大きなドット）及びＰＳ（小さなドット）を共染色した、ＰＦＰ血漿から単離したＭｋＥＶの像である。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。Ａは、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布（ｎｍ）を示す。蛍光ＣＤ４１＋抗体標識によるフローサイトメトリー分析を使用した。Ｂは、ＣＤ４１＋ＰＦＰ（天然ＭｋＥＶ及び血小板ＣＤ４１＋ＥＶと比較した、ＣＤ４１＋本開示のＭｋＥＶのサイズ分布を示すグラフである。Ｃは、ＥＶ（ｎｍ）のパーセントサイズ分布を示すグラフである。Ｄ～Ｅは、ＰＦＰＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｆ～Ｋは、本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像である。Ｃｄ４１＋イムノゴールド標識が使用され、黒いドットとして見える。未ろ過産物から凝集物がサイズ排除ろ過によって効果的に除去されることを示す実験データのグラフである。Ａは、未ろ過のＭｋＥＶ産物を示す。Ｂは、６５０ｎｍでろ過されたＭｋＥＶ産物を示す。６５０ｎｍサイズ排除フィルターを使用した採取後のろ過により、（凍結ＭｋＥＶ試料においてＥＭによって観察された）大きな凝集物質の除去が成功していることが実証された。画像はフローサイトメトリー実験からのものである。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。ＥＶ特性評価を示す実験データのグラフである。ＥＶは、巨核球の単離及び精製の２４時間後に、成熟した培養ＭＫを含む培地から回収された。単離されたヒト血小板は、トロンビン（０．１Ｕ／ｍＬ）及びコラーゲン（１μｇ／ｍＬ）（従来の血小板アゴニスト）またはＬＰＳ（５μｇ／ｍＬ）のいずれかで刺激された。ＥＶ数／血小板及びサイズは、ナノ粒子追跡分析によって測定され（図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｅ、及び図６Ｆ）、ＣＤ４１受容体陽性及び量は、電子顕微鏡によって測定された（図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｇ、及び図６Ｈ）。平均ＭｋＥＶ／ｍＬ（Ａ、左側）及び総ＭｋＥＶ収率（Ａ、右側）で示したように、ＭｋＥＶ収率のバッチ間変動が最小であることを示す。また、ＭｋＥＶ表面マーカー発現は、バッチ間で類似していた（Ｂ）。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９リボ核タンパク質（ＲＮＰ）を搭載したＭｋＥＶと共培養したＨＳＰＣ（系統枯渇ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－マウス骨髄細胞）の共焦点顕微鏡画像を示す。カーゴを搭載したＭｋＥＶと共培養した細胞がＧＦＰ陽性であったことから、ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載したＭｋＥＶの細胞内への取り込みが示された。対照的に、細胞単独、及びＭｋＥＶ＋ＲＮＰと共培養した細胞（細胞との共培養前にＭＫＥＶをＲＮＰと混合したが、エレクトロポレーションによる搭載はされていない（ＥＰなし））を含む対照試料は、ＧＦＰ陽性を示さなかった。これらのデータは、ＲＮＰカーゴを搭載したＭｋＥＶのＨＳＰＣへの送達が成功したことを示している。エクスビボでの造血幹細胞及び前駆細胞に対するＭｋＥＶの優先的標的化を示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９タンパク質を搭載したＭｋＥＶ（図９Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図９Ｂ）のいずれかを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間の共培養後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤＩＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）である細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。さらに、系統陽性（Ｌｉｎ＋）、系統陰性（Ｌｉｎ－）、及び系統陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）細胞の割合を、系統陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージをＡに示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載したＭｋＥＶと共培養した細胞では（図９Ａ中、棒グラフで図示）、培養物中の細胞の大多数（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞のうち最大でも２３％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、細胞用量あたり３００ＥＶにおいて、これらの細胞のうちほぼ５０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、集団のわずか０．２５％を構成する、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞のＬＳＫ細胞では、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに関して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来の造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボでの優先的標的化を示している。同様に、図９Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞では、Ｌｉｎ＋細胞のうち２０％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、より稀な集団のＬｉｎ－細胞のうち３０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞（ＬＳＫ）では、この集団のうち４８％がＭＫＥＶに関して陽性であった。対照と比較した場合、ＭｋＥＶ共培養の全条件を通して全骨髄培養物中の総Ｌｉｎ＋細胞及び総Ｌｉｎ－細胞のパーセンテージに大きな変化はなかった（図９Ｃ）。エクスビボでの造血幹細胞及び前駆細胞に対するＭｋＥＶの優先的標的化を示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９タンパク質を搭載したＭｋＥＶ（図９Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図９Ｂ）のいずれかを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間の共培養後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤＩＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）である細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。さらに、系統陽性（Ｌｉｎ＋）、系統陰性（Ｌｉｎ－）、及び系統陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）細胞の割合を、系統陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージをＡに示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載したＭｋＥＶと共培養した細胞では（図９Ａ中、棒グラフで図示）、培養物中の細胞の大多数（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞のうち最大でも２３％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、細胞用量あたり３００ＥＶにおいて、これらの細胞のうちほぼ５０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、集団のわずか０．２５％を構成する、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞のＬＳＫ細胞では、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに関して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来の造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボでの優先的標的化を示している。同様に、図９Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞では、Ｌｉｎ＋細胞のうち２０％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、より稀な集団のＬｉｎ－細胞のうち３０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞（ＬＳＫ）では、この集団のうち４８％がＭＫＥＶに関して陽性であった。対照と比較した場合、ＭｋＥＶ共培養の全条件を通して全骨髄培養物中の総Ｌｉｎ＋細胞及び総Ｌｉｎ－細胞のパーセンテージに大きな変化はなかった（図９Ｃ）。エクスビボでの造血幹細胞及び前駆細胞に対するＭｋＥＶの優先的標的化を示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９タンパク質を搭載したＭｋＥＶ（図９Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図９Ｂ）のいずれかを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間の共培養後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤＩＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）である細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。さらに、系統陽性（Ｌｉｎ＋）、系統陰性（Ｌｉｎ－）、及び系統陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）細胞の割合を、系統陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージをＡに示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載したＭｋＥＶと共培養した細胞では（図９Ａ中、棒グラフで図示）、培養物中の細胞の大多数（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞のうち最大でも２３％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、細胞用量あたり３００ＥＶにおいて、これらの細胞のうちほぼ５０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、集団のわずか０．２５％を構成する、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞のＬＳＫ細胞では、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに関して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来の造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボでの優先的標的化を示している。同様に、図９Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞では、Ｌｉｎ＋細胞のうち２０％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、より稀な集団のＬｉｎ－細胞のうち３０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞（ＬＳＫ）では、この集団のうち４８％がＭＫＥＶに関して陽性であった。対照と比較した場合、ＭｋＥＶ共培養の全条件を通して全骨髄培養物中の総Ｌｉｎ＋細胞及び総Ｌｉｎ－細胞のパーセンテージに大きな変化はなかった（図９Ｃ）。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボ生体内分布を示す。実験計画をＡに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、組織を採取して、注射後１６時間の蛍光について分析した。Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。それぞれのホモジナイズした組織の蛍光をマイクロプレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した（図１０Ｃ）。Ｄ及びＥは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；左枠、図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；右枠、図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）に変化がなかったことから、インビボ注射後に造血毒性がないことを示している。ＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡ（Ａ）及びＣａｓ９（Ｂ）のＭｋＥＶへの搭載成功を実証する実験データを示す。Ａは、野生型ＦＡＮＣＡをコードする９．８ｋｂのｐＤＮＡがＭｋＥＶにエレクトロポレーション（ＥＰ）されたことを実証する実験データのグラフを示す。エレクトロポレーション後、全ての試料は、ＤＮＡ抽出の前にＤＮａｓｅで処理され、内部移行しなかったｐＤＮＡカーゴは除去された。その後、ＤＮＡを抽出し、ｑＰＣＲを実施した。並行して実施された標準曲線に基づいて搭載ｐＤＮＡを定量し（ｎｇ）、ｐＤＮＡコピー数／ＭｋＥＶを計算した。Ｂは、ＭｋＥＶへのＣａｓ９搭載を実証する実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶをＣａｓ９でエレクトロポレーションし、プロテイナーゼＫで処理して内在化していないカーゴ（遊離カーゴ及び小胞表面会合カーゴ）を除去するか、またはろ過処理して遊離カーゴを除去し、その後、Ｃａｓ９の定量のためにウェスタンブロッティングで分析した。対照には、エレクトロポレーション±プロテイナーゼＫ±ろ過を行っていないＭｋＥＶとＣａｓ９が含まれていた。ろ過に続いて、Ｃａｓ９は、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照の非エレクトロポレーションＭｋＥＶには存在せず、タンパク質カーゴの小胞会合及び／または内部移行の成功を示している。プロテイナーゼＫ消化に続いて、Ｃａｓ９は、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照の非エレクトロポレーションＭｋＥＶには存在せず、エレクトロポレーション後の搭載タンパク質カーゴの内部移行及び保護の成功を示している。マウスの造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）への、野生型ＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したＭｋＥＶの送達成功を実証する実験データを示す。野生型マウスからのマウス骨髄系統枯渇ＨＳＰＣを、野生型ヒトＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したカーゴであるＭｋＥＶ（製剤（ＤＰ）－ＥＶ）と共培養した。４８時間の共培養後、ヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡ（アンプリコンの長さは４１３ｂｐ）をｑＰＣＲで定量した。Ａは、ＤＰ－ＥＶを２連で共培養した細胞が、ｐＤＮＡのＭｋＥＶ媒介送達からのヒトＦＡＮＣＡの強い発現を示すことを実証するゲルを示す。対照的に、モック対照（ｐＤＮＡカーゴは搭載せずに並行処理されたＭｋＥＶと共培養した細胞）はヒトＦＡＮＣＡ発現を示さなかった。Ｂは、濃度測定読み取り値のグラフを示し、モック処理した細胞と比較した、ＤＰ－ＥＶで処理した細胞におけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現の１８．５倍の増加を示している。野生型ＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したＭｋＥＶが、用量依存的にＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現をもたらすことに成功したことを実証する実験データを示す。野生型マウスから単離されたマウス骨髄系統枯渇細胞を、野生型ヒトＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したカーゴであるＭｋＥＶ（製剤（ＤＰ）－ＥＶ）と共培養した。４８時間の共培養後、ヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡ（アンプリコンの長さは４１３ｂｐ）をｑＰＣＲで定量した。Ａは、ＤＰ－ＥＶと共培養した細胞が、ｐＤＮＡのＭｋＥＶ媒介送達からヒトＦＡＮＣＡについて強い発現を示すことを実証するゲルを示す。対照的に、モック対照（ｐＤＮＡカーゴは搭載せずに並行処理されたＭｋＥＶと共培養した細胞）はＦＡＮＣＡ発現を示さなかった。Ｂは、濃度測定読み取り値のグラフを示し、モック処理した細胞と比較した場合に、低用量及び高用量のＤＰ－ＥＶで処理したそれぞれの細胞におけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現の１．３倍及び４．４倍の増加を示している。ＦＡＮＣＡ欠損マウスＨＳＰＣにおけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現の修復成功を実証する実験データを示す。野生型ＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したＭｋＥＶは、ＦＡＮＣＡ－／－の造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＰＣ）におけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現を修復する。ＦＡＮＣＡ－／－マウスから単離されたマウス骨髄系統枯渇細胞を、野生型ヒトＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したカーゴであるＭｋＥＶ（製剤（ＤＰ）－ＥＶ）と共培養した。４８時間の共培養後、ヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡ（アンプリコンの長さは４１３ｂｐ）をｑＰＣＲで定量した。Ａは、ＤＰ－ＥＶと共培養した細胞が、ｐＤＮＡのＭｋＥＶ媒介送達からのヒトＦＡＮＣＡの強い発現を示すことを実証するゲルを示す。対照的に、モック対照（ｐＤＮＡカーゴは搭載せずに並行処理されたＭｋＥＶと共培養した細胞）はＦＡＮＣＡ発現を示さなかった。Ｂは、濃度測定読み取り値のグラフを示し、モック処理した細胞と比較した、ＤＰ－ＥＶで処理した細胞におけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現の６０倍の増加を示している。ＦＡＮＣＡを修正するＲＮＰ搭載ＭｋＥＶと共培養したＦＡＮＣＡ欠損細胞における機能的利益を実証する実験データを示す。これらの実験ではＭｋＥＶに、ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９及びＦＡＮＣＡ変異を標的とするｇＲＮＡが搭載された（製剤（ＤＰ）－ＥＶ）。このＲＮＰ構築物は、変異ＦＡＮＣＡ遺伝子において治療的インデルを誘導することができる。ＲＮＰ搭載ＥＶ（ＤＰ－ＥＶ）を、ＦＡＮＣＡ欠損ヒト細胞（例えば、ＦＡ患者由来の不死化リンパ芽球細胞）と共培養した。細胞単独、及び並行して処理されたがＲＮＰカーゴを用いないＭｋＥＶで処理された細胞（モック）を対照とした。２４時間の共培養後、ＤＰ－ＥＶと共培養した細胞の１００％がＧＦＰ陽性であり、手付かずの細胞と比較した場合に生存率の変化は観察されなかったことから、無毒性であることを示している（データ図示せず）。ＤＰ－ＥＶと共培養した細胞は、細胞単独及びモック対照と比較した場合に、１４日間の培養後に細胞数の増加を示した。これらのデータは、ＤＰ－ＥＶ処理した細胞においてＦＡＮＣＡ発現修復が成功し、ＦＡＮＣＡ発現の修復成功の機能的利益であるそれらの細胞の増殖優位性をもたらすことを示している。

本開示は、一部は、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療に有用な組成物及び方法の発見に基づいている。実施形態では、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療は、ＦＡに関連した症状の治療及び／または患者がＦＡと関連する１つ以上の疾患及び障害を発症する可能性の処置も含む。実施形態では、組成物は、バイオマーカーの組成（例えば、バイオマーカーの存在、不在、または量）及びサイズなどの特定の物理的特性のセットによって特徴付けられ、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療に有用な治療薬のような薬剤の送達に用いるためのカーゴを内腔に持つことができる実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含む。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、全血から回収される（無血小板血漿）、または活性化血小板に由来する（血小板ＥＶ）天然起源産物とは異なる。したがって、態様において、本開示は、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療に有用な組成物及び方法を提供し、これは、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療のための望ましい特性を備えて一貫して産生され、特定のカーゴを持つ巨核球由来細胞外小胞を使用しており、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療のための治療的使用が成功する可能性を高める。

巨核球由来細胞外小胞を使用した細胞を修飾する方法
一態様では、本開示は、細胞を修飾するための方法に関し、当該方法は、（ａ）細胞を、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）を含む組成物と接触させることであって、ＭｋＥＶ内腔は、細胞を修飾するのに適した薬剤を含むカーゴを含み、及び／または、細胞を修飾するのに適した薬剤を含むカーゴは、ＭｋＥＶの表面と会合しており、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、または脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、接触させること、ならびに（ｂ）細胞を修飾して、細胞内で機能性ファンコニ貧血（ＦＡ）関連遺伝子を提供し、及び／または変異した機能性ＦＡ関連遺伝子を修復すること、を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあり、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。

一態様では、本開示は、細胞を修飾するための方法に関し、当該方法は、（ａ）細胞を、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）を含む組成物と接触させることであって、ＭｋＥＶは、細胞を修飾するのに適した薬剤を含むカーゴを含み、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、または脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、接触させること、ならびに（ｂ）細胞を修飾して、細胞内で機能性ファンコニ貧血（ＦＡ）関連遺伝子を提供し、及び／または変異した機能性ＦＡ関連遺伝子を修復すること、を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあるカーゴまたは巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあり、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。

実施形態では、細胞を修飾するための本開示の方法は、細胞の遺伝子発現を修飾するための方法である。

実施形態では、細胞を修飾するのに適したカーゴ及び／または薬剤は、１つ以上の治療薬を含む。

実施形態では、治療薬は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）またはそれらのフラグメントを含む、ＦＡ関連遺伝子またはそのフラグメントを含む。

実施形態では、治療薬は、１つ以上のＦＡ関連タンパク質のＦＡ関連遺伝子の発現及び／またはレベル及び／または機能を増大または回復させる。

実施形態では、ＦＡ関連タンパク質は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）を含む。

実施形態では、治療薬は、小分子治療薬、または生物製剤治療薬である。実施形態では、生物製剤治療薬は、遺伝子治療に使用される。実施形態では、生物製剤治療薬は、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする。実施形態では、機能性タンパク質または組換えタンパク質は、野生型タンパク質、融合タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチド、抗体または抗体フラグメントを含む。実施形態では、治療薬は、核酸治療薬である。実施形態では、核酸治療薬は、野生型機能性ＦＡ遺伝子を発現する、及び／または機能性ＦＡ関連遺伝子をコードする核酸、もしくはそのタンパク質産物、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体を含む。実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはＤＮＡフラグメントから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される。

実施形態では、１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物は、ベクター内に組み込まれる。

実施形態では、ベクターは、単離された核酸を含み、かつ、単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用され得る組成物である。多数のベクターが当技術分野で知られており、直鎖ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含むが、これらに限定されない。実施形態では、ベクターには、自己複製するプラスミド、またはウイルスが含まれる。実施形態では、ベクターには、例えば、ポリリジン化合物、リポソーム等のような、細胞への核酸の導入を促進するプラスミド以外及びウイルス以外の化合物が含まれる。ウイルスベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター等が挙げられるが、これらに限定されない。

例えば、ＦＡ関連遺伝子をコードする天然核酸または合成核酸の発現は、ＦＡ関連遺伝子またはそれらの一部をコードする核酸をプロモーターに機能的に連結させ、その構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成され得るが、これに限定されない。実施形態では、本発明に使用されるベクターは、真核細胞における複製、及び、任意に、組み込みに適している。典型的なベクターは、転写及び翻訳のターミネーター、開始配列、及び所望の核酸配列の発現の調節に有用なプロモーターを含有する。

実施形態では、本開示に使用されるベクターはまた、標準の遺伝子送達プロトコルを使用する、核酸免疫及び遺伝子治療に使用され得る。遺伝子送達のための方法は当技術分野で知られている。例えば、米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照されたい。これらの文献の全内容を、参照により本明細書で援用する。実施形態では、本開示は、遺伝子治療用ベクターを提供する。

実施形態では、本開示の核酸は、何種類ものベクターにクローニングが可能な、機能性ファンコニ貧血（ＦＡ）関連遺伝子またはそのフラグメントを提供する。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ派生物、動物ウイルス、及びコスミドを含むがこれらに限定されないベクターにクローニングされ得る。特に関心のあるベクターとして、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、及びシーケンシングベクターが挙げられる。さらに、ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当該技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（２００１，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ）、及び他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能する複製起点、プロモーター配列、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ以上の選択マーカーを含有する（例えば、ＷＯ０１／９６５８４；ＷＯ０１／２９０５８；及び米国特許第６，３２６，１９３号）。

実施形態では、機能的に連結された配列には、目的遺伝子に連続する発現制御配列、及びトランスで作用するかまたは離れて作用して目的遺伝子を制御する発現制御配列の両方が含まれる。実施形態では、発現制御配列には、適切な転写開始配列、終止配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；スプライシングシグナル及びポリアデニル化（ポリＡ）シグナル等の効率的ＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を増強させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強させる配列；及び必要に応じ、コード産物の分泌を増強させる配列が含まれる。天然、構成的、誘導性及び／または組織特異的なプロモーターを含め、実に多くの発現制御配列が当技術分野で知られており、また利用され得る。

追加のプロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは、開始部位の上流３０～１１０ｂｐの領域に位置するが、最近、開始部位の下流にも機能的要素が含有されることが多数のプロモーターで示されている。プロモーターエレメント間の間隔は柔軟であることが多く、そのため、エレメントが互いに反対になるかまたは移動した場合にプロモーター機能が保存される。適切なプロモーターの例の１つは、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、強い構成的プロモーター配列であり、それに機能的に連結されている任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を誘導することができる。適切なプロモーターの別の例は、伸長成長因子－１α（ＥＦ－１α）である。しかしながら、他の構成的プロモーター配列も使用され得、それらとして、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイスル最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにヒト遺伝子プロモーター、例えば、限定するわけではないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた本発明の一部として企図される。誘導性プロモーターの使用により、機能的に連結されているポリヌクレオチド配列の発現を、そのような発現が所望される場合にオンにすること、または発現が望ましくない場合にその発現をオフにすることができる分子スイッチが提供される。誘導性プロモーターの例としては、メタロチオニン（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｉｎｅ）プロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、及びテトラサイクリンプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。

ベクター上に見られるエンハンサー配列はまた、ベクター内に含有されている遺伝子の発現を調節する。典型的には、エンハンサーは、遺伝子の転写を増強させるためにタンパク質因子と結合している。エンハンサーは、それが調節する遺伝子の上流に位置する場合も下流に位置する場合もある。エンハンサーは、特定の細胞型または組織型における転写を増強させるよう組織特異的でもあり得る。一実施形態では、本発明のベクターは、ベクター内に存在する遺伝子の転写が促進されるよう１つ以上のエンハンサーを含む。

実施形態では、ベクターは、ヌクレオチド配列に機能的に連結されている発現制御配列を含む発現ベクターである。実施形態では、ベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ派生物、コスミド、またはウイルスベクターである。実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、サイトメガロウイルスベクター、またはキメラウイルスベクターを含む。

実施形態では、治療薬は、ワクチン接種に有用な当技術分野で知られている任意の核酸送達系である。一実施形態では、核酸送達系は、ワクチンベクター、ＤＮＡプラスミド、またはｍＲＮＡワクチンである。実施形態では、治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である。

実施形態では、核酸治療薬は、遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質、及び／または関連エレメントをコードする。遺伝子編集タンパク質は、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回分配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される。実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ｘＣａｓ９、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１４、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、クラス１Ｃａｓタンパク質、クラス２Ｃａｓタンパク質、ＭＡＤ７、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される。

巨核球由来細胞外小胞を使用した治療方法
実施形態では、本開示は、本巨核球由来細胞外小胞でファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法に関する。実施形態では、本開示は、本巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内の、またはそれと会合している治療用カーゴ、例えば、遺伝子治療カーゴを送達することによってＦＡを治療するための方法に関する。

一態様では、本発明は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法に関する。本開示の方法は、（ａ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を、治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させて、送達能を有する治療薬を生成することであって、治療薬は、ＦＡを治療することができる、培養すること、ならびに（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与することを含み、当該巨核球由来細胞外小胞は、実質的に精製されており、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、巨核球由来細胞外小胞内腔は、治療薬を含み、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しており、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、もしくは脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む。

別の態様では、本発明は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法に関する。本開示の方法は、（ａ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を取得することであって、巨核球由来細胞外小胞が、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、または脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、取得すること、（ｂ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を、治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させて、送達能を有する治療薬を生成することであって、治療薬は、ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増加もしくは回復させることができる、培養すること、ならびに（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与し、それにより、患者におけるＦＡ関連遺伝子発現を、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルに達するまで回復または増加させること、を含む。

実施形態では、治療には、疾患または障害のための治療的処置及び予防措置または抑制措置が含まれる。実施形態では、用語「治療」ならびに「治療する」及び「治療すること」等の関連用語は、疾患状態もしくはその少なくとも１つの症状の進行、重症度及び／または罹患期間の低減を意味する。実施形態では、治療は、対象に有益となり得る任意のレジメンを指す。治療は、既存の状態についての場合もあれば、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）（予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）治療）の場合もある。治療には、治癒的、緩和的または予防的効果が含まれ得る。実施形態では、「治療的」及び「予防的」治療は、これらが持つ最も広い意味で捉えられる。実施形態では、用語「治療的」は、必ずしも対象が完全な回復まで治療されることを意味するものではない。実施形態では、用語「予防的」は、必ずしも対象が最終的に疾患状態にかからないことを意味するものではない。実施形態では、治療という用語には、疾患または障害の発症より前または後に薬剤を投与し、それにより、疾患または障害のあらゆる徴候を予防することまたは取り除くことが含まれる。実施形態では、疾患の臨床的徴候後の、疾患の症状と闘うための薬剤の投与は、疾患の「治療」に含まれる。

実施形態では、治療することには、発症の抑制、阻害、予防、治療、遅延、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。治療することは、とりわけ、持続的な進行までの時間の延長、寛解促進、寛解導入、寛解強化、回復加速、代替治療法の有効性増大もしくはそれに対する抵抗性の低下、またはそれらの組み合わせを指す。実施形態では、「抑制すること」または「阻害すること」は、とりわけ、症状の発症の遅延、疾患再発予防、再発エピソードの回数もしくは頻度の低減、症候性エピソード間の潜伏期の延長、症状の重症度の低減、急性エピソードの重症度の低減、症状の数の減少、疾患関連症状の発生率の低下、症状の潜伏の軽減、症状改善、二次的症状の軽減、二次感染の減少、患者生存の延長、またはそれらの組み合わせを指す。

実施形態では、本開示は、有効量の本明細書に開示の組成物を投与することを含む、ＦＡを治療するための方法であって、組成物が、カーゴを含む巨核球由来細胞外小胞を含む、方法に関する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔を囲む、ヒト多能性幹細胞に由来する脂質二重層膜を含み、巨核球由来細胞外小胞の内腔は、カーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、小胞の表面に会合する。実施形態では、カーゴは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、炭水化物、脂質、生体分子、及び小分子のうちの１つ以上から選択される。実施形態では、カーゴは、１つ以上の治療薬である。

実施形態では、本開示は、ＦＡを治療するための方法に関し、当該方法は、有効量の本明細書に記載の組成物を投与することを含み、当該組成物は、ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る、機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、本開示は、ＦＡを治療するための方法に関し、当該方法は、本明細書に記載の組成物とインビトロで接触させる細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物は、機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体、を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、本方法は、インビボまたはエクスビボで実施される。

実施形態では、本開示は、ＦＡを治療するための方法に関し、当該方法は、本明細書に記載の組成物とエクスビボで接触させる細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物は、機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体、を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、本開示は、ＦＡを治療するための方法に関し、当該方法は、本明細書に記載の組成物とインビボで接触させる細胞を含む有効量の組成物を投与することを含み、当該組成物は、機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体、を含む巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、組成物は、対象への注射により投与される。実施形態では、組成物は、対象への静脈内注射により投与される。

実施形態では、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法により、患者におけるＦＡ関連遺伝子発現を、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルに達するまで回復または増加させることが可能になる。

実施形態では、患者におけるＦＡ関連遺伝子発現のレベルは、ＦＡに罹患していない患者及び／またはＦＡ関連症状を何も示していない患者で測定されるＦＡ関連遺伝子発現の参照（すなわち、対照）レベルの発現と比較される。例えば、ＦＡに罹患していない患者には、健常対象が含まれ得る。好ましくは、健常対象は、本開示の方法に基づいてＦＡに対して治療される患者と年齢、性、人種が同様の対象である。

実施形態では、患者におけるＦＡ関連遺伝子発現のレベルは、対象がＦＡに罹患していない、及び／またはＦＡ関連症状を何も示していない正常集団におけるＦＡ関連遺伝子発現の平均または平均レベルに基づいたＦＡ関連遺伝子発現の参照（すなわち、対照）レベルの発現と比較される。実施形態では、ＦＡ関連遺伝子発現の平均または平均レベルは、当技術分野で知られている値に基づく。

遺伝子発現レベルの評価方法の例は当技術分野で知られており、それには、マイクロアレイ、ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ、定量ＰＣＲ、または次世代シーケンシング技術が挙げられるが、これらに限定されない。

実施形態では、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法により、患者におけるＦＡ関連遺伝子発現を、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの５％もしくは約５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの１０％もしくは約１０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの１５％もしくは約１５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの２０％もしくは約２０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの２５％もしくは約２５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの３０％もしくは約３０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの３５％もしくは約３５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの４０％もしくは約４０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの４５％もしくは約４５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの５０％もしくは約５０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの５５％もしくは約５５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの６０％もしくは約６０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの６５％もしくは約６５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの７０％もしくは約７０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの７５％もしくは約７５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの８０％もしくは約８０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの８５％もしくは約８５％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの９０％もしくは約９０％、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルの９５％もしくは約９５％、またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルの１００％もしくは約１００％に達するまで回復または増加させることが可能になる。

実施形態では、治療薬は、ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増大または回復させる

いかなるＦＡ関連遺伝子も本開示により企図される。ＦＡ関連遺伝子の非限定的な例には、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）が挙げられる。

実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内またはそれと会合している遺伝子治療カーゴが提供され、当該遺伝子治療カーゴは、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）から選択される、野生型、未変異及び／または機能性のＦＡ関連遺伝子をコードする核酸を含む。実施形態では、遺伝子治療カーゴは、ＤＮＡまたはＲＮＡである。

実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内またはそれと会合している遺伝子治療カーゴが提供され、当該遺伝子治療カーゴは、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＤ１、ＦＡＮＣＪ、ＦＡＮＣＮ及びＦＡＮＣＰから選択される、野生型、未変異及び／または機能性のＦＡ関連遺伝子をコードする核酸を含む。実施形態では、遺伝子治療カーゴは、ＤＮＡまたはＲＮＡである。

実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内またはそれと会合している遺伝子治療カーゴが提供され、当該遺伝子治療カーゴは、ＦＡ関連に対する遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質及び／または関連エレメントを含む。実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内またはそれと会合している遺伝子治療カーゴが提供され、当該遺伝子治療カーゴは、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）から選択される、ＦＡ関連遺伝子に対する遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質及び／または関連エレメントを含む。実施形態では、遺伝子編集タンパク質により、機能性ＦＡタンパク質を可能にする修正編集がもたらされる。

実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内またはそれと会合している遺伝子治療カーゴが提供され、当該遺伝子治療カーゴは、ＦＡ関連に対する遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質及び／または関連エレメントを含む。実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）内またはそれと会合している遺伝子治療カーゴが提供され、当該遺伝子治療カーゴは、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＤ１、ＦＡＮＣＪ、ＦＡＮＣＮ及びＦＡＮＣＰから選択される、ＦＡ関連遺伝子に対する遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質及び／または関連エレメントを含む。実施形態では、遺伝子編集タンパク質により、機能性ＦＡタンパク質を可能にする修正編集がもたらされる。

実施形態では、本開示は、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）の中に搭載されているかもしくはそれと会合している治療用カーゴ、例えば、遺伝子治療カーゴを送達することによって、例えば、標的細胞、例えば、造血幹細胞において、ファンコニ貧血タンパク質（ＦＡＮＣ）のレベル及び／または機能を増加または回復させるための方法に関する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルに達するまで回復する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルと実質的に同じレベル及び／または機能まで回復する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルの約１％～約９９％、約１％～約５％、約５％～約１０％、約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約７０％、約８０％～約９０％、約９０％～約９９％まで回復する。非限定的な例では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルの約５％～約１０％まで回復し、臨床的利益及び／または好ましいリスク／利益プロファイルをもたらす。

実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）による治療後、経時的に改善する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルと実質的に同じレベル及び／または機能に達するまで改善する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルと比較して約１％～約９９％、約１％～約５％、約５％～約１０％、約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約７０％、約８０％～約９０％、約９０％～約９９％改善する。非限定的な例では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能及び／またはＦＡに罹患していない患者の正常レベルと比較して約５％～約１０％まで改善し、臨床的利益及び／または好ましいリスク／利益プロファイルをもたらす。

実施形態では、本開示は、本発明の巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）の中に搭載されているかもしくはそれと会合している治療用カーゴ、例えば、遺伝子治療カーゴを送達することによって、例えば、標的細胞、例えば、造血幹細胞において、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能を増加または回復させるための方法に関する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能まで回復する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子のレベル及び／または機能は、非罹患レベル及び／または非罹患機能と実質的に同じレベル及び／または機能まで回復する。実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）から選択される。

実施形態では、ＦＡ経路の遺伝子のうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡコア複合体の遺伝子のうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）のうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、及びＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）のうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、及びＦＡＮＣＬのうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＤ１、ＦＡＮＣＪ、ＦＡＮＣＮ及びＦＡＮＣＰのうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＣ、及びＦＡＮＣＧのうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。

実施形態では、以下の遺伝子または遺伝子座のうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する：ＦＡＮＣＡ（１６ｑ２４．３）ＦＡＮＣＢ（Ｘｐ２２．３１）、ＦＡＮＣＣ（９ｑ２２．３）、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）（１３ｑ１２．３）、ＦＡＮＣＤ２（３ｐ２５．３）、ＦＡＮＣＥ（６ｐ２１．３）、ＦＡＮＣＦ（１１ｐ１５）、ＦＡＮＣＧ（ＸＲＣＣ９）（９ｐ１３）、ＦＡＮＣＩ（ＫＩＡＡ１７９４）（１５ｑ２５）、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）（１７ｑ２２．３）、ＦＡＮＣＬ（ＰＨＦ９／ＰＯＧ）（２ｐ１６．１）、ＦＡＮＣＭ（Ｈｅｆ）（１４ｑ２１．３）ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）（１６ｐ１２．１）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）（１７ｑ２５．１）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）（１６ｐ１３．３）、及びＦＡＮＣＱ（ＸＰＦ／ＥＲＣＣ４）（１６ｐ１３．１２）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）（１５ｑ１５）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）（１７ｑ２１．３１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）（１ｑ３２．１）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）（７ｑ３６．１）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）（１ｐ３６．２２）、及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）（１６ｑ２３．１）。

実施形態では、以下の遺伝子または遺伝子座のうちの１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する：ＦＡＮＣＡ（１６ｑ２４．３）ＦＡＮＣＢ（Ｘｐ２２．３１）、ＦＡＮＣＣ（９ｑ２２．３）、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）（１３ｑ１２．３）、ＦＡＮＣＤ２（３ｐ２５．３）、ＦＡＮＣＥ（６ｐ２１．３）、ＦＡＮＣＦ（１１ｐ１５）、ＦＡＮＣＧ（ＸＲＣＣ９）（９ｐ１３）、ＦＡＮＣＩ（ＫＩＡＡ１７９４）（１５ｑ２５）、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）（１７ｑ２２．３）、ＦＡＮＣＬ（ＰＨＦ９／ＰＯＧ）（２ｐ１６．１）、ＦＡＮＣＭ（Ｈｅｆ）（１４ｑ２１．３）ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）（１６ｐ１２．１）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）（１７ｑ２５．１）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）（１６ｐ１３．３）、及びＦＡＮＣＱ（ＸＰＦ／ＥＲＣＣ４）（１６ｐ１３．１２）。

実施形態では、１つ以上のＦＡ関連遺伝子の１つ以上の変異が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する。変異の非限定的な例は、ＵＳ２０１４／００８７３９７及びＲｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦａｎｃｏｎｉＡｎｅｍｉａＭｕｔａｔｉｏｎＤａｔａｂａｓｅ（ｒｏｃｋｅｆｅｌｌｅｒ．ｅｄｕ／ｆａｎｃｏｎｉ／を参照されたい）に見出すことができ、これらの文献のそれぞれは、それらの全内容を参照により本明細書に援用する。実施形態では、以下の変異のうちの１つ以上が、ＦＡを引き起こす、及び／または治療を受けている対象がそれを有する、及び／または本方法がそれを修正する：
・ＦＡＮＣＣｃ．４５６＋４Ａ＞Ｔ（ＩＶＳ４）
・ＦＡＮＣＤ１ｃ．６１７４ｄｅｌＴ
・ＦＡＮＣＡｃ．３７８８＿３７９０ｄｅｌ
・ＦＡＮＣＧｃ．１０７７－２Ａ＞Ｇ
・ＦＡＮＣＣｃ．６７ｄｅｌＧ（３２２ｄｅｌＧ）
・ＦＡＮＣＧｃ．１４８０＋１Ｇ＞Ｃ
・ＦＡＮＣＡｃ．２１７２ｄｕｐＧ、４２７５ｄｅｌＴ、ｃ．２５７４Ｃ＞Ｇ、ｃ．８９０～８９３ｄｅｌ
・ＦＡＮＣＡｃ．２５４６ｄｅｌＣ、ｃ．３７２０＿３７２４ｄｅｌ
・ＦＡＮＣＣｃ．４５６＋４Ａ＞Ｔ
・ＦＡＮＣＧｃ．３０７＋１Ｇ＞Ｃ、ｃ．１０６６Ｃ＞Ｔ
・ＦＡＮＣＡｃ．２５４６ｄｅｌＣ、ｃ．３７２０＿３７２４ｄｅｌ
・ＦＡＮＣＧｃ．３０７＋１Ｇ＞Ｃ、ｃ．１０６６Ｃ＞Ｔ
・ＦＡＮＣＣｃ．１６５＋１Ｇ＞Ｔ
・ＦＡＮＣＡｃ．１００７－？＿３０６６＋？ｄｅｌ、ｃ．１００７－？＿１６２６＋？ｄｅｌ、ｃ．３３９８ｄｅｌＡ
・ＦＡＮＣＧｃ．６３７＿６４３ｄｅｌ
・ＦＡＮＣＡｃ．２９５Ｃ＞Ｔ
・ＦＡＮＣＤ２ｃ．１９４８－１６Ｔ＞Ｇ。

実施形態では、ＦＡ対象、すなわち、治療を受けている対象は、染色体不安定性に特徴付けられる。

実施形態では、ＦＡ対象、すなわち、治療を受けている対象は、ＢＲＣＡ２、ＢＲＩＰ１、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＩ、ＥＲＣＣ４、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＰＡＬＢ２、ＲＡＤ５１Ｃ、ＳＬＸ４、及びＵＢＥ２Ｔのうちの１つ以上の常染色体劣性遺伝に特徴付けられる。

実施形態では、ＦＡ対象、すなわち、治療を受けている対象は、ＦＡＮＣＢのＸ連鎖劣性遺伝に特徴付けられる。

実施形態では、ＦＡ対象、すなわち、治療を受けている対象は、ＲＡＤ５１の常染色体優性遺伝に特徴付けられる。

実施形態では、対象は、ＦＡに関する創始者変異を有することが既知の集団、例えば、アシュケナージ系ユダヤ人（ＦＡＮＣＣ、ＢＲＣＡ２／ＦＡＮＣＤ１）、北ヨーロッパ人（ＦＡＮＣＣ）、アフリカーナ人（ＦＡＮＣＡ）、サハラ以南の黒人（ＦＡＮＣＧ）、またはスペイン系ロマ民族（ＦＡＮＣＡ）の一人である。

実施形態では、治療薬は、機能性ＦＡ関連遺伝子またはそのタンパク質産物の発現を、非機能性及び／または欠失したＦＡ関連遺伝子もしくはタンパク質産物の発現と比較して、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約１８倍約２０倍、約３０倍、約４０倍約５０倍、約６０倍、約１００倍、約５００倍、または約１０００倍増加させることができる。

実施形態では、治療薬は、小分子治療薬、または生物製剤治療薬である。実施形態では、生物製剤治療薬は、遺伝子治療に使用される。実施形態では、生物製剤治療薬は、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする。実施形態では、機能性タンパク質または組換えタンパク質は、野生型タンパク質、融合タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチド、抗体または抗体フラグメントを含む。実施形態では、治療薬は、核酸治療薬である。実施形態では、核酸治療薬は、野生型機能性ＦＡ遺伝子を発現する、及び／または、機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体を含む。実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはＤＮＡフラグメントから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される。

実施形態では、本治療方法は、ＦＡの様々な症状または症候、例えば、骨髄機能不全、血液細胞の欠乏または異常細胞の産生を、低減、改善または消失させる。実施形態では、本治療方法は、患者の、白血球数、好中球数、網赤血球数、血小板数、及び赤血球数、骨髄、または正常細胞の産生のうちの１つ以上の欠乏を、低減、改善または消失させる。

実施形態では、本治療方法は、ＦＡの様々な症状または症状、例えば、貧血、血小板減少症、及び好中球減少症を、低減、改善または消失させる。

実施形態では、本治療方法は、ＦＡの様々な二次的合併症、例えば、限定するわけではないが、患者が、頭痛、めまい、疲労、息切れ、貧血、血小板減少症、好中球減少症、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、腎臓関連疾患及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のうちの１つ以上を発症する可能性等を、低減、改善または消失させる。

実施形態では、本方法は、染色体切断検査（任意に、ＤＥＢ（ジエポキシブタン）及び／またはＭＭＣ（マイトマイシンＣ）を添加）、末梢血リンパ球の細胞周期解析、全末梢血計算、マイトマイシンＣ耐性検査、及び変異解析（例えば、染色体変異、シーケンシング等）、全血球数の計測、及び／またはＦＡＮＣタンパク質の産生及び局在の回復もしくは部分的回復の測定、のうちの１つ以上を使用して検出されるかもしくは検出可能であるように、ＦＡを低減、改善または消失させる。

実施形態では、本方法は、アンドロゲン、造血成長因子、輸血による支持、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、及び手術（例えば、母指及び前腕骨を侵す奇形等の骨格奇形、心臓欠陥、ならびに気管食道瘻もしくは食道閉鎖等の胃腸異常、ならびに鎖肛を修正するため）から選択される、１つ以上のＦＡ治療薬または治療モダリティを補足するかまたはそれに取って代わる。

実施形態では、治療することにより、血液及び／または骨髄移植、アンドロゲン療法、合成増殖因子療法、化学療法及び／または手術の必要性がなくなる。

実施形態では、本発明のＦＡ治療では、本明細書に記載のＦＡ関連遺伝子のうちのいずれかの遺伝子置換が提供される。

巨核球由来細胞外小胞
一態様では、本開示は、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞であって、脂質二重層膜が、脂質二重層膜に会合された、または脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む組成物に関する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ヒト多能性幹細胞に由来する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞内腔が、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあるカーゴまたは巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあり、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、細胞を修飾するのに適したカーゴ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、細胞を修飾することには遺伝子治療が含まれ、これには、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする生物製剤治療薬の使用が含まれるが、これに限定されない。実施形態では、細胞を修飾することには、遺伝子編集が含まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、細胞を遺伝子編集するのに適したカーゴ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球に搭載されて細胞外小胞に包まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接搭載される。

別の態様では、本開示は、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞であって、脂質二重層膜が、脂質二重層膜に会合された、または脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む組成物に関する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ヒト多能性幹細胞に由来する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞が、小胞の表面に会合されたｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の核酸分子を含み、脂質二重層膜が、該脂質二重層膜に会合された、または脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質を含む。実施形態では、核酸分子は外因性に由来する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、細胞を修飾するのに適したカーゴ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、細胞を修飾することには遺伝子治療が含まれ、これには、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする生物製剤治療薬の使用が含まれるが、これに限定されない。実施形態では、細胞を修飾することには、遺伝子編集が含まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球に搭載されて細胞外小胞に包まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接搭載される。

一態様では、本開示は、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞であって、脂質二重層膜が、脂質二重層膜に会合された、または脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む組成物に関する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ヒト多能性幹細胞に由来する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にカーゴを搭載するのに適している。実施形態では、カーゴは、１つ以上の薬剤を含む。実施形態では、薬剤は、本明細書に記載した治療薬など、１つ以上の治療薬である。実施形態では、カーゴは、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあるカーゴまたは巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあり、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球に搭載されて細胞外小胞に包まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接搭載される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の表面に会合されるカーゴを搭載するのに適している。

別の態様では、本開示は、内腔を囲みヒト多能性幹細胞に由来する脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞であって、巨核球由来細胞外小胞の内腔がカーゴを含み、脂質二重層膜が、脂質二重層膜に会合した、または脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む組成物に関する。実施形態では、カーゴは、１つ以上の薬剤を含む。実施形態では、薬剤は、本明細書に記載した治療薬など、１つ以上の治療薬である。実施形態では、カーゴは、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあるカーゴまたは巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にあり、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しているカーゴを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球に搭載されて細胞外小胞に包まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に直接搭載される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の表面に会合されるカーゴを搭載するのに適している。

一態様では、本開示は、内腔を囲みヒト多能性幹細胞に由来する脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞であって、当該巨核球由来細胞外小胞内腔は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ならびにノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡから選択される１つ以上の巨核球由来核酸分子を含み、脂質二重層膜は、脂質二重層膜に会合した、または脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質を含む、巨核球由来細胞外小胞を含む組成物に関する。

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される巨核球由来細胞外小胞及び／または複数の巨核球由来細胞外小胞組成物及び薬学的に許容される賦形剤または担体を含む組成物を含む医薬組成物に関する。

別の態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するための方法に関し、当該方法は、（ａ）本明細書に開示される巨核球由来細胞外小胞及び／または複数の巨核球由来細胞外小胞を含む組成物の巨核球由来細胞外小胞を得ること；（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を治療薬と共に培養して、治療薬を巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させるようにし、送達能を有する治療薬を生成すること、及び（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を、ＦＡに苦しむ、ＦＡ関連症状を経験している、及び／またはＦＡを発症する可能性が高い患者に投与すること、を含む方法に関する。

別の態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するための方法に関し、当該方法は、（ａ）本明細書に開示される巨核球由来細胞外小胞を得ること；（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させ、及び／または巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させて、送達能を有する治療薬を生成すること、及び（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を、ＦＡに苦しむ、ＦＡ関連症状を経験している、及び／またはＦＡを発症する可能性が高い患者に投与すること、を含む方法に関する。

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される巨核球由来細胞外小胞を生成する方法であって、（ａ）ヒト多能性幹細胞を取得することであって、ヒト多能性幹細胞が、末梢血もしくは臍帯血または骨髄から供給される初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である、取得すること、（ｂ）エリスロポエチンを添加せず、トロンボポエチンを添加した状態で、ヒト多能性幹細胞を巨核球に分化させること、及び（ｃ）巨核球から巨核球由来細胞外小胞を単離すること、を含み、さらに、生成された巨核球由来細胞外小胞が、機能性ファンコニ貧血（ＦＡ）関連遺伝子を提供するよう、及び／または細胞内で変異した機能性ＦＡ関連遺伝子を修復するよう細胞を修飾するためのカーゴを含む、方法に関する。

バイオマーカープロファイルまたはフィンガープリント
様々な実施形態において、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、それを、例えば、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞から区別する独自のバイオマーカープロファイルまたはフィンガープリントに特徴付けられる。様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、同一性（例えば存在または非存在）または量（例えば、巨核球由来細胞外小胞集団におけるバイオマーカーの実質的な存在または実質的な非存在、あるいは集団中の巨核球由来細胞外小胞の大部分に存在することまたは存在しないこと、あるいはバイオマーカーを有する巨核球由来細胞外小胞のパーセンテージ）を含む、そのようなバイオマーカープロファイルまたはフィンガープリントに特徴付けられる。

実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、ヒト多能性幹細胞に由来し、脂質二重層膜は、脂質二重層膜に会合した、または、脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質（別名、バイオマーカー）を含む。

実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、脂質二重層膜は、脂質二重層膜に会合した、または、脂質二重層膜に埋設された１つ以上のタンパク質（別名、バイオマーカー）を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ヒト多能性幹細胞に由来する。

実施形態では、脂質二重層膜は、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ５４、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩから選択されるタンパク質を含む。

実施形態では、脂質二重層膜は、例えば、アネキシンＶの検査によって限定されることなく、ホスファチジルセリンを含む。

実施形態では、脂質二重層膜は、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、及びＣＤ６１から選択される１つ以上のタンパク質を含む。

実施形態では、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、脂質二重層膜にＣＤ６１をも含む。

実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、及びＣＬＥＣ－２のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ４３、ＣＤ３１、及びＣＤ１１ｂのうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、及びＣＤ６３のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、及びＣＤ３１のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、及びＣＤ６１のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、及びＣＬＥＣ－２のうちの１つ以上の実質的な発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、及びＣＤ６１のうちの１つ以上の実質的な発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、実質的な量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐを含まない、またはＣＤ６２Ｐを実質的に含まない。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ６２Ｐの発現が高いこと、及び／またはＣＤ６２Ｐが多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ６２Ｐを有する。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ６２Ｐの発現が低いこと、及び／またはＣＤ６２Ｐが少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約４分の１～約３２分の１、または約８分の１～約１６分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１５分の１、または約１６分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約３２分の１～約１２８分の１、約５０分の１～約７５分の１、または約６０分の１～約７０分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約６０分の１、約６４分の１、または約７０分の１の量のＣＤ６２Ｐを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４１を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４１の発現が高いこと、及び／またはＣＤ４１が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４１の発現が低いこと、及び／またはＣＤ４１が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約８倍、または約２倍～約４倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍、約３倍、または約４倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１倍～約２倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１倍または約１．２倍の量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ４１／ＣＤ６１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８５％～約９５％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ６１の発現が高いこと、及び／またはＣＤ６１が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ６１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ６１の発現が低いこと、及び／またはＣＤ６１が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ６１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約８倍、または約２倍～約４倍の量のＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍、約３倍、または約４倍の量のＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ６１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ６１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ５４の発現が高いこと、及び／またはＣＤ５４が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ５４を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約１０倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ５４を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約３倍の量のＣＤ５４を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１倍～約４倍または約１．１倍～約２倍の量のＣＤ５４を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．５倍の量のＣＤ５４を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ５４の発現が低いこと、及び／またはＣＤ５４が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ５４を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ１８の発現が高いこと、及び／またはＣＤ１８が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１８を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約１０倍、８倍～約６４倍、または約１６倍～約３２倍、または約１６倍～約２４倍の量のＣＤ１８を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２０倍の量のＣＤ１８を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１倍～約４倍または約１．１倍～約２倍の量のＣＤ１８を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．５倍の量のＣＤ１８を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ１８の発現が低いこと、及び／またはＣＤ１８が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ１８を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４３の発現が高いこと、及び／またはＣＤ４３が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４３を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約４倍～約６４倍、または約８倍～約３２倍、または約８倍～約１６倍の量のＣＤ４３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１０倍または約１２倍の量のＣＤ４３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．５倍～約８倍または約２倍～約４倍の量のＣＤ４３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約３倍または約４倍の量のＣＤ４３を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４３の発現が低いこと、及び／またはＣＤ４３が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４３を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ１１ｂの発現が高いこと、及び／またはＣＤ１１ｂが多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１１ｂを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約８倍、または約２倍～約４倍の量のＣＤ１１ｂを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約３倍の量のＣＤ１１ｂを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１倍～約４倍、または約１．１倍～約２倍の量のＣＤ１１ｂを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．５倍の量のＣＤ１１ｂを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ１１ｂの発現が低いこと、及び／またはＣＤ１１ｂが少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ１１ｂを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ２１の発現が高いこと、及び／またはＣＤ２１が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞または細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ２１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約６４倍、約４倍～約３２倍、または約８倍～約１６倍の量のＣＤ２１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１０倍または約１２倍の量のＣＤ２１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２倍～約８倍、または約４倍～約８倍の量のＣＤ２１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約４倍または約５倍の量のＣＤ２１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ２１の発現が低いこと、及び／またはＣＤ２１が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ２１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ５１の発現が高いこと、及び／またはＣＤ５１が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ５１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ５１の発現が低いこと、及び／またはＣＤ５１が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ５１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１．１分の１～約４分の１、または約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ５１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１．５分の１の量のＣＤ５１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１～約４分の１、または約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ５１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．５分の１の量のＣＤ５１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＬＥＣ－２の発現が高いこと、及び／またはＣＬＥＣ－２が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＬＥＣ－２を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＬＥＣ－２の発現が低いこと、及び／またはＣＬＥＣ－２が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２分の１～約１６分の１、または約４分の１～約８分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約４分の１または約５分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約４分の１～約３２分の１、または約８分の１～約１６分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１０分の１または約１２分の１の量のＣＬＥＣ－２を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含まない、またはＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を実質的に含まない。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）の発現が高いこと、及び／またはＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）の発現が低いこと、及び／またはＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１倍～約２分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶと実質的に同じ量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２分の１～約８分の１、または約２分の１～約４分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約３分の１または約４分の１の量のＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％～約２５％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約２０％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１３％～約１９％が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ６３の発現が高いこと、及び／またはＣＤ６３が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ６３を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ６３の発現が低いこと、及び／またはＣＤ６３が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ６３を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍～約８倍、または約２倍～約４倍の量のＣＤ６３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍または約３倍の量のＣＤ６３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ６３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ６３を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ６３を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４２ｂを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４２ｂの発現が高いこと、及び／またはＣＤ４２ｂが多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４２ｂを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４２ｂの発現が低いこと、及び／またはＣＤ４２ｂが少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約８分の１～約３２分の１、または約１０分の１～約２０分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１６分の１または約２０分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約６４分の１～約１２８分の１、または約５０分の１～約７５分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約６４分の１または約７０分の１の量のＣＤ４２ｂを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％～約６０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３５％～約５５％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約７０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％～約７０％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６２％～約６８％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６５％～約６６％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ９の発現が高いこと、及び／またはＣＤ９が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ９を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ９の発現が低いこと、及び／またはＣＤ９が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ９を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１．５倍～約４倍、または約２倍～約４倍の量のＣＤ９を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２倍の量のＣＤ９を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ９を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ９を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ９を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％～約５０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約４０％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約３５％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１３％～約３１％が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ３１の発現が高いこと、及び／またはＣＤ３１が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ３１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ３１の発現が低いこと、及び／またはＣＤ３１が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ３１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１．１分の１～約４分の１、または約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ３１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１．５分の１の量のＣＤ３１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２分の１～約４分の１の量のＣＤ３１を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２分の１または約３分の１の量のＣＤ３１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％～約４０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％～約４０％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％～約３５％が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４７の発現が高いこと、及び／またはＣＤ４７が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４７を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ４７の発現が低いこと、及び／またはＣＤ４７が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４７を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約１２８倍～約５１２倍、または約２５６倍～約５１２倍、または約２５０倍～約３００倍の量のＣＤ４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２５６倍または約３００倍の量のＣＤ４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１または約１．５分の１の量のＣＤ４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ４７を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１５％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３％～約８％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４％～約７％が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ１４７の発現が高いこと、及び／またはＣＤ１４７が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ１４７を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ１４７の発現が低いこと、及び／またはＣＤ１４７が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ１４７を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２分の１～約８分の１、または約２分の１～約４分の１の量のＣＤ１４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２分の１または約３分の１の量のＣＤ１４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１～約２分の１の量のＣＤ１４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約１．１分の１または約１．２分の１の量のＣＤ１４７を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）と実質的に同じ量のＣＤ１４７を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ３２ａを含まない、またはＣＤ３２ａを実質的に含まない。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ３２ａの発現が高いこと、及び／またはＣＤ３２ａが多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ３２ａを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＣＤ３２ａの発現が低いこと、及び／またはＣＤ３２ａが少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ３２ａを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約５０分の１～約１００分の１、１２８分の１～約５１２分の１、または約２５６分の１～約５１２分の１、または約２５０分の１～約３００分の１の量のＣＤ３２ａを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約２５０分の１または約２５６分の１の量のＣＤ３２ａを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２５０分の１～約４００分の１、または２５６分の１～約５１２分の１の量のＣＤ３２ａを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２５６分の１または約３００分の１の量のＣＤ３２ａを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％超が、ＧＰＶＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％超が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％超が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約６０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約８０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９９％以下が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２５％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１５％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５０％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２５％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約１０％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約５％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約５０％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７５％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９５％～約９９％が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約１％未満、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＧＰＶＩの発現が高いこと、及び／またはＧＰＶＩが多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＧＰＶＩを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ＧＰＶＩの発現が低いこと、及び／またはＧＰＶＩが少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＧＰＶＩを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約８倍～約６４倍、または約１６倍～約３２倍の量のＧＰＶＩを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶの、約３０倍または約３２倍の量のＧＰＶＩを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約２分の１～約１６分の１、または約４分の１～約８分の１の量のＧＰＶＩを有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）の、約４分の１または約５分の１の量のＧＰＶＩを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含まない、またはＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を実質的に含まない。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞よりも少ないＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐを有すること、及びＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含まないこと、またはＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を実質的に含まないこと、に特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含み、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含む、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約７０％未満、または約６０％未満、または約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞よりも、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の発現が低いこと、及び／またはホスファチジルセリン（ＰＳ）が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のホスファチジルセリン（ＰＳ）を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含まないこと、またはホスファチジルセリン（ＰＳ）を実質的に含まないこと、に特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含み、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含む、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の集団によって特徴付けられており、巨核球由来細胞外小胞の約２０％～約４０％が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む、及び／または、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の試験で陽性を示す脂質二重層膜を含み、巨核球由来細胞外小胞の約８０％～約９９％、または約８５％～約９９％が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含み、巨核球由来細胞外小胞の約２５％～約５５％、または約３５％～約５５％が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞よりも、ＣＤ４１の発現が高いこと、及び／またはＣＤ４１が多く存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量のＣＤ４１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞よりも、ＣＤ４１の発現が低いこと、及び／またはＣＤ４１が少なく存在すること、に特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞の、約２分の１、または約１０分の１、または約５０分の１、または約１００分の１、または約３００分の１、または約５００分の１、または約１０００分の１の量のＣＤ４１を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、全長フィラミンＡを含有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリンを含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、その集団の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ホスファチジルセリンを含む脂質二重層膜を含む、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、アネキシンＶに陽性を示す脂質二重層膜を含む。例えば、アネキシンＶは、ホスファチジルセリン（ＰＳ）と相互作用し、ホスファチジルセリンの発現及び／または存在または非存在の代理として使用され得る。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、その集団の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超が、ＰＳに陽性を示す、巨核球由来細胞外小胞集団に特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、巨核球由来細胞外小胞の集団によって特徴付けられており、そのうちの約２０％～約４０％が、ホスファチジルセリンを含む、及び／またはホスファチジルセリンに対して陽性である脂質二重層膜を含む。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ４３、ＣＤ３１、及びＣＤ１１ｂのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つを含む。実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ９、及びＣＤ１１ｂのうちの２つ、３つ、または４つを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量の、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ４３、ＣＤ３１、及びＣＤ１１ｂのうちの１つ以上を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的な量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、及びＣＤ６３のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む。実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ、ＣＤ６１、及びＣＤ６３のうちの２つまたは３つを含む。実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＣＤ６１を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量の、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、及びＣＤ６３のうちの１つ以上を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的な量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つを含む。実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ９、ＣＤ３１、及びＣＤ１４７のうちの２つ、３つ、または４つを含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量の、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩのうちの１つ以上を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的な量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、及びＣＤ３１のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを含む。実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、及びＣＤ９のうちの２つまたは３つを含む。実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＰＳ及びＣＤ９を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、天然起源巨核球由来細胞外小胞、血小板由来細胞外小胞（ＰＬＴＥＶ）などの血小板に由来する小胞もしくは細胞外小胞、及び／または無血小板血漿（ＰＰＦ）巨核球由来細胞外小胞の、約２倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約３００倍、または約５００倍、または約１０００倍の量の、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＣＤ６２Ｐ、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ９、及びＣＤ３１のうちの１つ以上を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的な量のＤＲＡＱ５を発現しないことに特徴付けられる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まないことに特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞及び／または複数の巨核球由来細胞外小胞及び／または巨核球由来細胞外小胞集団は、脂質二重層膜を含み、
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ５４を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ１８を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ４３を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ１１ｂを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ２１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ５１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ２４ｂを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＧＶＰＩを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、約９５％超、または約９９％超及び／または複数の巨核球由来細胞外小胞及び／または巨核球由来細胞外小胞集団は、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含む。

サイズプロファイルまたはフィンガープリント
様々な実施形態において、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、それを、例えば、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞と区別する独自のサイズ（例えば小胞直径）プロファイルまたはフィンガープリントに特徴付けられる。様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、例えば、それらのより高い運搬能力のために望ましい、例えば、天然起源巨核球由来細胞外小胞、及び／または血小板に由来する小胞または細胞外小胞と比べて、より大きな粒子にとって有利に働く、そのようなサイズプロファイルまたはフィンガープリントに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～約１００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、約３０ｎｍ～約４００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約５００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、平均して直径で約２００ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

様々な実施形態において、本巨核球由来細胞外小胞は、平均して直径で約２５０ｎｍの粒子の偏りに特徴付けられる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ未満の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約３０ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約３０ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約２００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約３００ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約４００ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約５００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約６００ｎｍ～約７００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約７００ｎｍ～約８００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約８００ｎｍ～約９００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約９００ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約５００ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約６００ｎｍ～約１０００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１５０ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約２００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約３０ｎｍ～１００ｎｍ、または約３０ｎｍ～４００ｎｍ、または約１００ｎｍ～約２００ｎｍ、または約１００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約２００ｎｍ～約３５０ｎｍ、または約４００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約３０～１００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約３０～４００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約２００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約２００ｎｍ～約３５０ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約４００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約２００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約３０～約１００ｎｍ及び／または約３０～約４００ｎｍ及び／または約１００ｎｍ～約２００ｎｍ及び／または約１００ｎｍ～約３００ｎｍ及び／または約２００ｎｍ～約３５０ｎｍ及び／または約４００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、直径が異なる小胞の様々な亜集団を含む。例えば、実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、直径約５０ｎｍの亜集団、直径約１５０ｎｍの亜集団、直径約２００ｎｍの亜集団、直径約２５０ｎｍの亜集団、直径約３００ｎｍの亜集団、直径約４００ｎｍの亜集団、直径約５００ｎｍの亜集団、及び直径約６００ｎｍの亜集団の１つ以上（例えば、１つ、または２つ、または３つ、または４つ）を含む。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、直径約４５ｎｍの亜集団、直径約１３５ｎｍの亜集団、直径約２８５ｎｍの亜集団、及び直径約５２５ｎｍの亜集団の１つ以上（例えば、１つ、または２つ、または３つ、または４つ）を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、直径約５０ｎｍ及び／または直径約１５０ｎｍ及び／または直径約３００ｎｍ及び／または直径約５００ｎｍを有する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞集団は、以下の特徴を示す。
ａ）集団の巨核球由来細胞外小胞の約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７％以上、または約９９％以上が、細胞核を実質的に含まない。
ｂ）巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。
ｃ）集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が、ＣＤ４１を含む。
ｄ）集団は、約１×１０^７個以上、約１．５×１０^７個以上、約５×１０^７個以上、約１×１０^８個以上、約１．５×１０^８個以上、約５×１０^８個以上、約１×１０^９個以上、約５×１０^９個以上、約１×１０^１０個以上、または約１×１０^１０個以上の巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞集団は、以下の特徴を示す。
ａ）集団の巨核球由来細胞外小胞の約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９７％以上、または約９９％以上が、細胞核を実質的に含まない。
ｂ）巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する。
ｃ）集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上が、ＣＤ６１を含む。
ｄ）集団は、約１×１０^７個以上、約１．５×１０^７個以上、約５×１０^７個以上、約１×１０^８個以上、約１．５×１０^８個以上、約５×１０^８個以上、約１×１０^９個以上、約５×１０^９個以上、約１×１０^１０個以上、または約１×１０^１０個以上の巨核球由来細胞外小胞を含む。

巨核球由来細胞外小胞集団における細胞核の量を決定するためのいずれかの方法が、本開示によって企図されている。方法の非限定的な例には、巨核球由来細胞外小胞をＤＲＡＱ５などの核染色剤で染色することが含まれ、染色の欠如が、巨核球由来細胞外小胞が細胞核を実質的に含まないことを示す。

巨核球由来細胞外小胞の供給源及び特性評価
巨核球は、造血幹細胞及び前駆細胞に由来する大型の倍数体細胞であり、ＣＤ３４^＋細胞コンパートメント内に含まれる。実施形態では、巨核球は、ＣＤ４１、ＣＤ６２Ｐ、ＧＰＶＩ、ＣＬＥＣ－２、ＣＤ４２ｂ及びＣＤ６１のうちの１つ以上の発現及び／または存在に特徴付けられる。実施形態では、巨核球は、ＣＤ４２ｂ＋、ＣＤ６１＋、及びＤＮＡ＋のうちの１つ以上である。成熟巨核球の形態学的特徴の１つは、大きな多葉核が発達することである。成熟巨核球は、増殖を止めることができるが、エンドミトーシスによってそのＤＮＡ含量を増加させ続け、並行して細胞サイズも増加する。

実施形態では、細胞外小胞に加えて、巨核球は、プレ血小板及び前血小板、ならびに血小板様粒子を放出することができる。これらの放出部分は、血小板に成熟することが可能である。実施形態では、プレ血小板及び前血小板ならびに血小板様粒子は全て異なる産物であり、これらはサイズ、モルフォロジー、バイオマーカーの発現及び／または存在、及び機能によって区別され得る。

巨核球は、多能性造血幹細胞（ＨＳＣ）前駆細胞に由来する。ＨＳＣは、主に肝臓、腎臓、脾臓、及び骨髄で産生され、受け取るシグナルに応じて様々な血液細胞を産生することができる。

トロンボポエチン（ＴＰＯ）は、ＨＳＣの巨核球への分化を誘導するための主要シグナルである。巨核球分化を誘導するための他の分子シグナルには、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、インターロイキン－３（ＩＬ－３）、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）、インターロイキン９（ＩＬ－９）などがある。産生の詳細は、本明細書の別の場所にも記載されている。

実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、ヒト多能性幹細胞に由来する。

実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である。実施形態では、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞は、末梢血または臍帯血から供給される。実施形態では、末梢血は、顆粒球コロニー刺激因子動員成体末梢血（ｍＰＢ）である。実施形態では、ヒト多能性幹細胞ヒト多能性幹細胞は、肝臓、腎臓、脾臓、または骨髄で産生されるＨＳＣである。実施形態では、ＨＳＣは、肝臓で産生される。実施形態では、ＨＳＣは、腎臓で産生される。実施形態では、ＨＳＣは、脾臓で産生される。実施形態では、ＨＳＣは、骨髄で産生される。実施形態では、ＨＳＣは、ＴＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ－９などの１つ以上から選択される分子シグナルを受け取ることによって、巨核球に分化するように誘導される。実施形態では、分子シグナルはＴＰＯである。実施形態では、分子シグナルはＧＭ－ＣＳＦである。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－３である。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－６である。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－１１である。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－６である。実施形態では、分子シグナルはＳＣＦである。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－６．ＳＣＦである。実施形態では、分子シグナルはＦｌｔ３Ｌである。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－６である。実施形態では、分子シグナルはＩＬ－９である。

実施形態では、分子シグナルはケモカインである。

実施形態では、分子シグナルは、巨核球形成に向けた細胞運命決定を促進する。

実施形態では、分子シグナルにはエリスロポエチン（ＥＰＯ）がない。

実施形態では、ヒト多能性幹細胞は胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。ＥＳＣは、ＥＳＣが得られる方法に関係なく、体の３種の胚葉全てから細胞を形成する能力を持っている。ＥＳＣは、機能上は次の特徴の１つ以上を有することができる幹細胞である。すなわち、（ａ）免疫不全マウスに移植すると奇形腫を誘発できる。（ｂ）３種の胚葉全ての細胞型（すなわち、外胚葉、中胚葉、及び内胚葉の細胞型）に分化することができる。（ｃ）胚性幹細胞の１つ以上のマーカー（例えば、Ｏｃｔ４、アルカリホスファターゼ、ＳＳＥＡ－３表面抗原、ＳＳＥＡ－４表面抗原、ＳＳＥＡ－５表面抗原、Ｎａｎｏｇ、ＴＲＡ－ｌ－６０、ＴＲＡ－１－８１、ＳＯＸ２、ＲＥＸ１など）を発現する。

実施形態では、ヒト多能性幹細胞は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＣ）である。成熟した分化細胞は、胚性幹細胞様の特性を持つ胚様細胞に再プログラム化すること、及び脱分化させることができる。ｉＰＳＣは、胎児体細胞、生後体細胞、新生児の体細胞、幼若体細胞、または成体の体細胞を使用して生成することができる。線維芽細胞は、例えば、特定の転写因子のレトロウイルス導入を介して多能性に逆行させることができ、その結果、ｉＰＳが生じる。実施形態では、ｉＰＳは、線維芽細胞、ケラチノサイト、メラノサイト血液細胞、骨髄細胞、脂肪細胞、及び組織常在性前駆細胞を含む様々な組織から生成される。実施形態では、ｉＰＳＣは、１つ以上の再プログラム化！ム化因子または山中因子、例えば、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、及びｃ－Ｍｙｃを介して生成される。特定の実施形態では、少なくとも２つ、３つ、または４つの再プログラム化因子が体細胞で発現されて、体細胞が再プログラム化される。

多能性細胞が分化を完了し、成熟巨核球になると、これは血小板を産生するプロセスを開始する。血小板は、核を含有せず、直径約１～３ｕｍであり得る。巨核球は、細胞外小胞も産生する。

実施形態では、本巨核球は、血小板よりも巨核球由来細胞外小胞の産生を促進するように誘導される。すなわち、実施形態では、本巨核球は、血小板よりも実質的に多くの巨核球由来細胞外小胞を産生する。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、血小板を実質的に含まない。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、約１０％未満、または約７％未満、または約５％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％未満の血小板を含有する。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、血小板に由来する細胞外小胞を実質的に含まない。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、血小板に由来する細胞外小胞の約１０％未満、または約７％未満、または約５％未満、または約３％未満、または約２％未満、または約１％未満を含有する。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、細胞小器官を実質的に含まない。混入する細胞小器官の非限定的な例には、ミトコンドリア、及び細胞核があるが、これらに限定されない。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、ミトコンドリアを実質的に含まない。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞を含む調剤は、エキソソームを実質的に含まない。実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、細胞小器官を含む。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、核を実質的に含まない。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約８０％～約１００％、約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、または約９５％～約１００％が、核を実質的に含まない。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９５％超、約９９％超、または約１００％が、核を実質的に含まない。

ターゲティング
巨核球由来細胞外小胞は、様々な標的細胞にホーミングすることができる。巨核球由来細胞外小胞は、標的細胞に結合すると、標的細胞による巨核球由来細胞外小胞を内部移行させる様々なメカニズムを介して、カーゴを放出することができる。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで骨髄にホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロで骨髄にホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約２倍、または約３倍、または約４倍、または約５倍、または約６倍、または約７倍、または約８倍、または約９倍、または約１０倍の特異性で骨髄にホーミングする。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、骨髄中の１つ以上の骨髄造血細胞にホーミングする。実施形態では、１つ以上の骨髄造血細胞は、骨髄芽球、前骨髄球、好中性骨髄球、好酸性骨髄球、好中性後骨髄球、好酸性後骨髄球、好中性帯状核細胞、好酸性帯状核細胞、分葉核好中球、分葉核好酸球、分葉核好塩基球、及びマスト細胞から選択される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、骨髄中の１つ以上の赤血球生成細胞にホーミングする。実施形態では、１つ以上の赤血球生成細胞は、前正赤芽球、好塩基性正赤芽球、多染性正赤芽球、及び正染性正赤芽球から選択される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、形質細胞、細網細胞、リンパ球、単球、及び巨核球のうちの１つ以上にホーミングする。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、骨髄中の１つ以上の造血細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、骨髄中の１つ以上の造血細胞、例えば血小板新生細胞（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｃｃｅｌｌ）にホーミングする。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、骨髄中の１つ以上の造血幹細胞にホーミングする。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでＨＳＣにホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでＨＳＣにホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約２倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約３倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約４倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約５倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約６倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約７倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約８倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約９倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約１０倍の特異性でＨＳＣにホーミングする。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボでリンパ系細胞（ｌｙｍｐｈａｔｉｃｃｅｌｌ）にホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロでリンパ系細胞にホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約２倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約３倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約４倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約５倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約６倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約７倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約８倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約９倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約１０倍の特異性でリンパ系細胞にホーミングする。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで制御性Ｔ細胞にホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビトロで制御性Ｔ細胞にホーミングするのに適している。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約２倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約３倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約４倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約５倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約６倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約７倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約８倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約９倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、インビボで、別の細胞型、または別の器官、または他の全ての細胞型を合わせたものに比べて、約１０倍の特異性で制御性Ｔ細胞にホーミングする。

一態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するための方法を含む、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、送達能を有する治療薬を移送するための本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を治療薬と共に培養して、治療薬を巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させるようにし、送達能を有する治療薬を生成すること、及び（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

いくつかの実施形態では、送達能を有する治療薬を移送するための本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を治療薬と共に培養して、治療薬を巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させ、送達能を有する治療薬を生成すること、及び（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

一態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するためのエクスビボの方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療することができる治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させるようにし、送達能を有する治療薬を生成すること、及び（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

一態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するためのインビボの方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療することができる治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させ、送達能を有する治療薬を生成すること、（ｃ）患者から生体細胞を取得すること、及び（ｄ）送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞に接触させ、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

いくつかの実施形態では、送達能を有する治療薬を移送するための本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療することができる治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させ、送達能を有する治療薬を生成すること、及び（ｃ）患者に送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

一態様では、本開示は、骨髄増殖性疾患または障害を治療することができる送達能を有する治療薬を移送するためのエクスビボの方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を、骨髄増殖性疾患または障害を治療することができる治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させるようにし、送達能を有する治療薬を生成すること、（ｃ）患者から生体細胞を取得すること、及び（ｄ）送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞に接触させ、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

一態様では、本開示は、送達能を有する治療薬を移送するためのインビボの方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）巨核球由来細胞外小胞を取得すること、（ｂ）巨核球由来細胞外小胞を、骨髄増殖性疾患または障害を治療することができる治療薬と共に培養して、治療薬を、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させ、送達能を有する治療薬を生成すること、（ｃ）患者から生体細胞を取得すること、及び（ｄ）送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞に接触させ、接触させた生体細胞を患者に投与すること、を含む。

実施形態では、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療することができる送達能を有する治療薬の生体細胞との接触は、送達能を有する治療薬を生体細胞と共培養して、送達能を有する治療薬から生体細胞へのカーゴの移送を提供することを含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者の細胞の細胞表面受容体に結合する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ステップ（ｃ）の接触させた生体細胞の細胞表面受容体に結合する。実施形態では、生体細胞は、がん細胞、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、筋細胞、結合組織細胞、健康細胞、異常細胞、分化細胞、及び多能性細胞のうちの１つ以上である。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者の細胞の細胞外膜と融合する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ステップ（ｃ）の生体細胞の細胞外膜と融合する。実施形態では、生体細胞は、がん細胞、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、筋細胞、結合組織細胞、健康細胞、異常細胞、分化細胞、及び多能性細胞のうちの１つ以上である。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者の細胞によってエンドサイトーシスされる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ステップ（ｃ）の生体細胞によってエンドサイトーシスされる。実施形態では、生体細胞は、がん細胞、腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、筋細胞、結合組織細胞、健康細胞、異常細胞、分化細胞、及び多能性細胞のうちの１つ以上である。

巨核球由来細胞外小胞を産生する方法
実施形態では、細胞培養プロセスは、初代ヒト末梢血ＣＤ３４＋ＨＳＣから同種巨核球由来細胞外小胞を産生するように適合される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、民営の供給業者から供給される初代ヒト末梢血ＣＤ３４＋ＨＳＣを取得し、幹細胞維持培地からＨＳＣ増殖培地へ移行させることを含む方法によって生成される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、初代ヒト臍帯血ＣＤ３４＋ＨＳＣを取得することを含む方法によって生成される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、初代ヒト骨髄ＣＤ３４＋ＨＳＣを取得することを含む方法によって生成される。実施形態では、この方法は、ＨＳＣ培養物を巨核球分化培地に入れ、培養上清から巨核球由来細胞外小胞を回収することをさらに含む。したがって、実施形態では、本巨核球由来細胞外小胞は、出発ＣＤ３４＋ＨＳＣから産生される。

実施形態では、巨核球分化は、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ４２ｂ、巨核球特異的細胞骨格タンパク質β１－チューブリン、アルファ顆粒成分（例えば、血小板第４因子及びフォン・ヴィレブランド因子）、分泌顆粒、及び超構造的性質（例えば、陥入膜系、暗調小管系、多小胞体）のうちの１つ以上のバイオマーカーの発現及び／または存在によって確認される。

実施形態では、巨核球は、約１０個～約３０００個、約５０個～約２６００個、約８０個～約５００個、約５００個～約２６００個、または約５００個～約１５００個の巨核球由来細胞外小胞／細胞を産出する。

実施形態では、ナノ粒子分析、電子顕微鏡法、フローサイトメトリー、及び／またはウエスタンブロット法を使用して、バイオマーカーの発現及び／または存在及び巨核球由来細胞外小胞の組成を確認する。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、エリスロポエチンが添加されていない状態で生成された巨核球から単離される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、トロンボポエチンが添加された状態で生成された巨核球から単離される。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、核酸を実質的に含まない。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、自己由来核酸を実質的に含まない。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、ＲＮＡを実質的に含まない。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、核酸を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、自己由来核酸を含む。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、自己由来ＲＮＡを含む。ＲＮＡの非限定的な例には、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、及び／またはノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡが含まれる。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞が由来する細胞からのＲＮＡを実質的に含まない。非限定的な例では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞を調製する方法、及び／または天然ＲＮＡを除去するＲＮａｓｅの使用のため、ＲＮＡを含有しない。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、自己由来ＤＮＡを実質的に含まない。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞が由来する細胞からのＤＮＡを実質的に含まない。非限定的な例では、巨核球由来細胞外小胞は、小胞を調製する方法、及び／または天然ＤＮＡを除去するＤＮａｓｅの使用のため、ＤＮＡを含有しない。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（ａ）巨核球、（ｂ）巨核球由来の血小板、及び（ｃ）血小板に由来する細胞外小胞のうちの１つ以上を実質的に含まない。

実施形態では、凍結顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）動員ヒト末梢血ＣＤ３４＋細胞が取得され、巨核球まで培養されてから、培養の前にＣＤ４１＋細胞（巨核球）が増やされ、その後、フローサイトメーターまたはナノ粒子分析によって、細胞培養におけるＣＤ４１の発現及び／または存在及び巨核球由来細胞外小胞の濃度を測定する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、例えば速度／力が段階的に増大する一連の遠心分離によって生成される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（ａ）例えば、約１５０×ｇの遠心分離で例えば約１０分間、培地から細胞を除去すること、（ｂ）血小板様粒子（ＰＬＰ）と細胞破片とを、例えば約１０００×ｇで例えば約１０分間の遠心分離によって除去すること、及び（ｃ）上清から、例えば約２５，０００ｒｐｍ（３８０００×ｇ）で、例えば約１時間、例えば約４℃で、超遠心分離することで、巨核球由来細胞外小胞を増やすこと、によって生成される。

実施形態では、異なるｐＨ及びｐＯ_２またはｐＣＯ_２ならびに異なるサイトカインカクテルを用いた多段階培養プロセスを用いて、巨核球の産生を大幅に増加させる。

実施形態では、巨核球は、（ａ）巨核球前駆細胞の産生を促進する分子シグナル／因子／サイトカインカクテルを用いてＣＤ３４＋ＨＳＣを培養すること、及び（ｂ）前駆細胞から成熟巨核球を増殖させるために、細胞を異なる条件に移行させること、によって生成される。実施形態では、市販培地が使用される。実施形態では、無血清培地が使用される。実施形態では、巨核球産生を増加させるためにｐＨがシフトされる。実施形態では巨核球産生を増加させるためにＣＯ_２割合がシフトされる。実施形態では、巨核球産生を増加させるために、分子シグナル／因子／サイトカインの同一性が変更される。実施形態では、分子シグナル／因子／サイトカインカクテルは、ＴＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＳＣＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ－９などのうちの１つ以上を含む。

実施形態では、本産生方法は、例えば、限定されることなく、ナノ粒子分析、電子顕微鏡、フローサイトメトリー、及び／またはウエスタンブロット分析によって、ＣＤ５４、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、及びＧＰＶＩの１つ以上について結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けするステップをさらに含む。実施形態では、本産生方法は、例えば、限定されることなく、アネキシンＶの検査によって、例えば、限定されることなく、ナノ粒子分析、電子顕微鏡、フローサイトメトリー、及び／またはウエスタンブロット分析によって、ホスファチジルセリンについて結果として得られた巨核球由来細胞外小胞を特徴付けするステップをさらに含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、成熟巨核球から生成される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、未熟巨核球から生成される。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する方法は、大量生産を可能にするために標準化されている。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する本方法は、バッチ間／ドナー間の変動が、約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満である。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する方法は、バッチ間／ドナー間の変動が１２．５％未満であるように開発される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する方法は、バッチ間／ドナー間の変動が１０％未満であるように開発される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する方法は、バッチ間／ドナー間の変動が７．５％未満であるように開発される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する方法は、バッチ間／ドナー間の変動が５％未満であるように開発される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞を生成する方法は、バッチ間／ドナー間の変動が２．５％未満であるように開発される。

実施形態では、集団は、約１×１０^７個以上、約１．５×１０^７個以上、約５×１０^７個以上、１×１０^８個以上、約１．５×１０^８個以上、約５×１０^８個以上、約１×１０^９個以上、約５×１０^９個以上、約１×１０^１０個以上、または約１×１０^１０個以上の巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、集団は、約２×１０^１０個～約１×１０^１１個、約４×１０^１０個～約９×１０^１１個、または約５×１０^１０個～約８．５×１０^１１個の巨核球由来細胞外小胞を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、集団として単離される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞集団は、実質的に均一である。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５４を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ５４を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ５４を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ５４を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５４を含まない、またはＣＤ５４を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ１８を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ１８を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ１８を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ１８を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ１８を含まない、またはＣＤ１８を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４３を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、または約１％～約１５％、約０％～約５％または約０％～約１０％が、ＣＤ４３を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ４３を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４３を含まない、またはＣＤ４３を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ１１ｂを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約１％～約５０％、約５％～約４０％、または約１０％～約３５％が、ＣＤ１１ｂを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＣＤ１１ｂを含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ１１ｂを含まない、またはＣＤ１１ｂを実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約４０％、約０％～約３０％、約０％～約２０％、約０％～約１０％、または約０％～約５％が、ＣＤ６２Ｐを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６２Ｐを含まない、またはＣＤ６２Ｐを実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ４１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ４１を含む。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％～約１００％、約６０％～約１００％、または約８５％～約１０％が、ＣＤ６１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約８５％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ６１を含む。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ２１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約１０％、約０％～約５％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ２１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ２１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＣＤ２１を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ２１を含まない、またはＣＤ２１を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約１０％、約０％～約５％、約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ＣＤ５１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ５１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＣＤ５１を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ５１を含まない、またはＣＤ５１を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＬＥＣ－２を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約１０％、約０％～約５％、または約０％～約１２％が、ＣＬＥＣ－２を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１０％未満、約５％未満、または約２％未満が、ＣＬＥＣ－２を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＬＥＣ－２を含まない、またはＣＬＥＣ－２を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約１％～約１５％、約２％～約１０％、約０％～約５％、または約０％～約５％が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含まない、またはＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を実質的に含まない。

実施形態では、ＣＤ４１＋巨核球由来細胞外小胞の集団の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）を含む。

実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞は、ＤＲＡＱ５を実質的に含まない。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約０％～約１５％、約０％～約１０％、または約０％～約５％が、ＤＲＡＱ５を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、または約５％未満が、ＤＲＡＱ５を含む。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６３を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約２０％、約１％～約１５％、または約１％～約１０％が、ＣＤ６３を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ６３を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ６３を含まない、またはＣＤ６３を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４２ｂを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約０％～約１５％、約０％～約１０％、または約０％～約５％が、ＣＤ４２ｂを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ４２ｂを含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４２ｂを含まない、またはＣＤ４２ｂを実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ９を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％～約１００％、約５０％～約８０％、または約６０％～約７０％が、ＣＤ９を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ＣＤ９を含む。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ３１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、または約１％～約１５％が、ＣＤ３１を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ３１を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ３１を含まない、またはＣＤ３１を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４７を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約４０％、約１％～約３５％、約１％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、または約１％～約１５％が、ＣＤ４７を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約４０％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ４７を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ４７を含まない、またはＣＤ４７を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ１４７を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約２０％～約３０％、または約１％～約１５％が、ＣＤ１４７を含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ１４７を含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ１４７を含まない、またはＣＤ１４７を実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ３２ａを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約２０％、約１％～約１５％、または約１％～約１０％が、ＣＤ３２ａを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＣＤ３２ａを含まない、またはＣＤ３２ａを実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＧＶＰＩを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約０％～約５％、約０％～約１０％、約０％～約３０％、約０％～約１５％、または約０％～約１０％が、ＧＶＰＩを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＧＶＰＩを含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ＧＶＰＩを含まない、またはＧＶＰＩを実質的に含まない。

実施形態では、集団の実質的に全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリンを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約１５％～約９０％、約３０％～約８０％、または約５０％～約７０％が、ホスファチジルセリンを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約２０％超、約３０％超、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、または約９５％超、または約９９％超が、ホスファチジルセリンを含む。実施形態では、集団の巨核球由来細胞外小胞の約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、ＧＶＰＩを含む。実施形態では、集団の全ての巨核球由来細胞外小胞は、ホスファチジルセリンを含まない、またはホスファチジルセリンを実質的に含まない。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、（ａ）末梢血または臍帯血から供給される初代ＣＤ３４＋ＨＳＣであるヒト多能性幹細胞を取得すること、（ｂ）ＥＰＯを添加せず、ＴＰＯを添加した状態で、ヒト多能性幹細胞を巨核球に分化させること、及び（ｃ）巨核球から巨核球由来細胞外小胞を単離すること、によって生成される。

実施形態では、本方法は、インビボの方法である。実施形態では、本方法は、エクスビボの方法である。

実施形態では、末梢血から供給されるＣＤ３４＋ＨＳＣは、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）などの動員剤の投与によって幹細胞が血流に動員されたボランティアから得られた複能性幹細胞である。

実施形態では、臍帯血は、出産後に胎盤及び付着した臍帯に残る血液に由来する複能性幹細胞を含む。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者由来のものである。実施形態では、ヒト多能性幹細胞が患者から抽出され、巨核球を生成するために使用され、この巨核球から、選択されたカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。実施形態では、分化細胞が患者から抽出され、ｉＰＳＣを生成するために使用され、このｉＰＳＣが巨核球を生成するために使用される。この巨核球から、選択されたカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者と同種異系のものである。実施形態では、ヒト多能性幹細胞が、患者ではないヒト対象から抽出され、巨核球を生成するために使用され、この巨核球から、選択されたカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。実施形態では、分化細胞が、患者ではないヒト対象から抽出され、ｉＰＳＣを生成するために使用され、このｉＰＳＣが巨核球を生成するために使用される。この巨核球から、選択されたカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、患者と異種のものである。実施形態では、多能性幹細胞が、非ヒト対象から抽出され、巨核球を生成するために使用され、この巨核球から、選択されたカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。実施形態では、分化細胞が、非ヒト対象から抽出され、ｉＰＳＣを生成するために使用され、このｉＰＳＣが巨核球を生成するために使用される。この巨核球から、選択されたカーゴを含む巨核球由来細胞外小胞が生成され、その後、患者に投与される。

実施形態では、培養することは、超音波処理、サポニン透過処理、機械的振動、低張透析、多孔質膜を介した押し出し、コレステロール抱合、電流印加、及びそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む。実施形態では、培養することは、エレクトロポレーションすること、形質転換すること、トランスフェクトすること、及びマイクロインジェクトすることのうちの１つ以上を含む。

実施形態では、本方法は、（ｄ）巨核球由来細胞外小胞を放射線と接触させることをさらに含む。実施形態では、放射線はガンマ線である。実施形態では、ガンマ線は、１２ｋＧｙ、２５ｋＧｙ、または５０ｋＧｙを超える量である。実施形態では、ガンマ線は、約１２ｋＧｙ～１５ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約１５ｋＧｙ～２０ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約２０ｋＧｙ～２５ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約２５ｋＧｙ～３０ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約３０ｋＧｙ～３５ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約３５ｋＧｙ～４０ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約４０ｋＧｙ～４５ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約４５ｋＧｙ～５０ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約５０ｋＧｙ～５５ｋＧｙの量である。実施形態では、ガンマ線は、約５５ｋＧｙ～６０ｋＧｙの量である。

実施形態では、この方法は実質的に無血清である。実施形態では、この方法は、６０％を超えて無血清である。実施形態では、この方法は、７０％を超えて無血清である。実施形態では、この方法は、８０％を超えて無血清である。実施形態では、この方法は、９０％を超えて無血清である。

様々な実施形態において、本開示の巨核球由来細胞外小胞は、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞である。実施形態では、実質的に精製された、とは、生物学的に純粋と同義である。実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、その天然の状態で見出される通常は付随する成分を、程度の差はあるが、ほぼ含まない。「単離」とは、元の発生源または周囲からの分離の程度を示す。実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、いかなる不純物も巨核球由来細胞外小胞の生物学的特性に物質的に影響を与えず、または他の悪影響を引き起こさないように、他の物質含有が十分に少ない。実施形態では、実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞は、産生に必要とされ得る細胞物質、ウイルス物質、または培地の含有が十分に少ない。純度及び均一性は、典型的には、当技術分野で知られている生化学的アプローチを使用して決定される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、サイズ排除ろ過を使用して精製される。実施形態では、フィルターは、約６５０ｎｍの細孔径を有する。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、サイズ排除ろ過を使用して精製される。実施形態では、フィルターは、約５０ｎｍ～約６００ｎｍの細孔径を有する。実施形態では、フィルターは、少なくとも５０ｎｍの細孔径を有する。実施形態では、フィルターは、約６００ｎｍの細孔径を有する。

巨核球由来細胞外小胞のカーゴ
巨核球由来細胞外小胞は、ｍＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、及びサイトカインなどの多様なカーゴを含有することが可能である。巨核球由来細胞外小胞は、カーゴを移送して標的細胞の機能を変化させることができる。これらは、表面受容体シグナル伝達、原形質膜融合、及び内部移行を通じて、標的細胞に影響を及ぼす。生物製剤カーゴまたは治療用カーゴを巨核球または巨核球由来細胞外小胞に搭載することにより、巨核球由来細胞外小胞を送達担体としてさらに使用して、標的化治療効果を達成することができる。これまで、小型ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ）、小型直鎖ＤＮＡ、及びプラスミドＤＮＡは、全て、様々な送達用途のために巨核球由来細胞外小胞に正常に搭載されてきた。巨核球由来細胞外小胞の標的化は、表面タンパク質の補体によって規定され、目的の特定のバイオマーカーを発現または除去するようにさらに操作されて、生体内分布及び細胞間認識を改善することができる。例えば、本巨核球由来細胞外小胞は、その独自のバイオマーカープロファイルを持つので、ペイロード、例えば、治療薬の送達に特に適している。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、内腔にカーゴを搭載するのに適している。実施形態では、カーゴは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、炭水化物、脂質、生体分子、及び小分子のうちの１つ以上から選択される。実施形態では、カーゴは、生物学的に産生された構成要素である。実施形態では、カーゴは、合成的に産生された構成要素である。実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に最初から組み込まれている。実施形態では、生成された巨核球由来細胞外小胞が生物学的要素を含むように、この生物学的要素が巨核球で過剰発現される。実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に後で搭載される。実施形態では、精製された巨核球由来細胞外小胞は、カーゴと混合されて、カーゴ搭載された巨核球由来細胞外小胞が生成される。実施形態では、カーゴは疎水性である。実施形態では、カーゴは親水性である。実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞の脂質二重層に組み込まれる。実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞の内腔に配置される。

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の内腔に位置するカーゴに加えて、またはそのカーゴの代わりに、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞に会合される。実施形態では、カーゴは、巨核球由来細胞外小胞の表面及び／または外面に会合される。巨核球由来細胞外小胞に会合されたカーゴの非限定的な例としては、小胞の表面に共有結合的に接合したカーゴ、または静電相互作用を介して表面に会合したカーゴが挙げられる。当業者には理解されるように、巨核球由来細胞外小胞に会合されたカーゴは、小胞の内腔に搭載されていない場合でも、依然として輸送することができる。

実施形態では、カーゴは、物理的に誘導される及び／または化学的に誘導されるアクティブ搭載ストラテジーを使用して、巨核球由来細胞外小胞に搭載される。実施形態では、アクティブ搭載ストラテジーは、物理的に誘導される。実施形態では、物理的に誘導されるアクティブ搭載ストラテジーは、エレクトロポレーション、超音波処理、凍結融解サイクル、及び押し出しなどの外力による巨核球由来細胞外小胞脂質二重層の機械的または物理的破壊を含む。実施形態では、エレクトロポレーションは、電場を使用して巨核球由来細胞外小胞脂質二重層に自発的な孔形成を誘導することを含み、電場の存在によって脂質二重層を破壊し、一方、カーゴが巨核球由来細胞外小胞に取り込まれた後に電場を取り除くことで、孔を閉鎖し、脂質層を再形成することが可能である。実施形態では、超音波処理は、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層の剛性を低下させ、カーゴの拡散を可能にするソニケータープローブを介して加えられる超音波エネルギーを含む。実施形態では、凍結融解サイクルでは、熱エネルギーを使用して、巨核球由来細胞外小胞のカーゴ搭載を促進する。実施形態では、押し出しは、合成リポソームの形成のための確立されたプロトコルに従って行われ、巨核球由来細胞外小胞が遊離カーゴと混合され、ナノスケールの細孔を含む膜を通過し、せん断力によって脂質二重層が破壊されて、外生的なカーゴが巨核球由来細胞外小胞に入ることを可能にする。

実施形態では、アクティブ搭載ストラテジーは、化学的に誘導される。実施形態では、化学的に誘導されるアクティブ搭載ストラテジーは、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層を迂回するために、サポニンまたはトランスフェクション試薬などの化学薬品の使用を含む。実施形態では、化学薬品は、サポニンなどの界面活性剤である。実施形態では、サポニンは、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層からコレステロールを選択的に除去するために使用されて、脂質二重層の細孔を開く。実施形態では、化学薬品はトランスフェクション剤である。実施形態では、トランスフェクション剤は、脂質二重層との相互作用及びその後の内部移行を促進するカチオン性物質を利用することによって、巨核球由来細胞外小胞に核酸を送達するために使用される。実施形態では、トランスフェクション剤は、リポフェクタミン及び／または脂質ベースの薬剤である。

実施形態では、本開示の巨核球由来細胞外小胞への核酸の搭載率（すなわち、小胞あたりの核酸のコピー）は、約１～約１０００、約１～約５００、約１～約１００、約１０～約１０００、約１００～約１０００、約５００～約１０００、約１００～約５００，０００、約１０００～約３００，０００、約１００，０００～約３００，０００、約１０００～約１０，０００、または約１０００～約５０００の範囲である。実施形態では、核酸はＤＮＡである。実施形態では、核酸はプラスミドＤＮＡである。

実施形態では、カーゴ、例えば、核酸を本開示の巨核球由来細胞外小胞に搭載するための搭載効率は、約１％～約９９％、約１０％～約９０％、約３０％～約７０％、約４０％～約６０％、約４０％～約５０％、または約５０％～約６０％の範囲である。実施形態では、カーゴは核酸である。実施形態では、核酸はＤＮＡである。実施形態では、核酸はプラスミドＤＮＡである。実施形態では、搭載効率は、以下の式を使用して計算される。
搭載効率（％）＝カーゴ＋ＭＶ＃／総ＭＶ＃

実施形態では、巨核球由来細胞外小胞の表面は、巨核球由来細胞外小胞の生体内分布及びターゲティング能力に影響を与えるように修飾される。実施形態では、表面リガンドは、遺伝子工学によって巨核球由来細胞外小胞に付加される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞は、それらの脂質二重層において融合タンパク質を発現するように生成される。実施形態では、巨核球由来細胞外小胞脂質二重層中の内因性タンパク質は、細胞工学によってターゲティングリガンドと融合される。

実施形態では、カーゴは、１つ以上の治療薬である。実施形態では、治療薬は、核酸治療薬である。実施形態では、核酸治療薬は、機能性タンパク質をコードする。

実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、ＤＮＡフラグメント、またはＤＮＡプラスミドから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される。実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｓｎｏＲＮＡのうちの１つ以上から選択される。

実施形態では、１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物は、ベクター内に組み込まれる。実施形態では、ベクターは、ヌクレオチド配列に機能的に連結されている発現制御配列を含む発現ベクターである。実施形態では、ベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ派生物、コスミド、またはウイルスベクターである。実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、サイトメガロウイルスベクター、またはキメラウイルスベクターを含む。

実施形態では、治療薬は、小分子治療薬、または生物製剤治療薬である。実施形態では、生物製剤治療薬は、遺伝子治療に使用される。実施形態では、生物製剤治療薬は、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする。実施形態では、機能性タンパク質または組換えタンパク質は、野生型タンパク質、融合タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチド、抗体または抗体フラグメントを含む。実施形態では、治療薬は、核酸治療薬である。実施形態では、核酸治療薬は、野生型機能性ＦＡ遺伝子を発現する、及び／または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体を含む。

実施形態では、治療薬は、ワクチン接種に有用な当技術分野で知られている任意の核酸送達系である。一実施形態では、核酸送達系は、ワクチンベクター、ＤＮＡプラスミド、またはｍＲＮＡワクチンである。実施形態では、治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である。実施形態では、核酸治療薬は、患者において欠損している野生型遺伝子（すなわち、ＦＡ関連遺伝子）をコードする。実施形態では、核酸治療薬は、ｍＲＮＡであり、任意に、インビトロで転写または合成され、及び／または、任意に、プソイドウリジン及び５－メトキシウリジンから選択される１つ以上の非標準ヌクレオチドを含む。

実施形態では、１つ以上の非標準ヌクレオチドは、２－チオウリジン、５－アザウリジン、プソイドウリジン、４－チオウリジン、５－メチルウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－アミノウリジン、５－アミノプソイドウリジン、５－ヒドロキシウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、５－メトキシウリジン、５－メトキシプソイドウリジン、５－エトキシウリジン、５－エトキシプソイドウリジン、５－ヒドロキシメチルウリジン、５－ヒドロキシメチルプソイドウリジン、５－カルボキシウリジン、５－カルボキシプソイドウリジン、５－ホルミルウリジン、５－ホルミルプソイドウリジン、５－メチル－５－アザウリジン、５－アミノ－５－アザウリジン、５－ヒドロキシ－５－アザウリジン、５－メチルプソイドウリジン、５－アミノプソイドウリジン、５－ヒドロキシプソイドウリジン、４－チオ－５－アザウリジン、４－チオプソイドウリジン、４－チオ－５－メチルウリジン、４－チオ－５－アミノウリジン、４－チオ－５－ヒドロキシウリジン、４－チオ－５－メチル－５－アザウリジン、４－チオ－５－アミノ－５－アザウリジン、４－チオ－５－ヒドロキシ－５－アザウリジン、４－チオ－５－メチルプソイドウリジン、４－チオ－５－アミノプソイドウリジン、４－チオ－５－ヒドロキシプソイドウリジン、２－チオシチジン、５－アザシチジン、プソイドイソシチジン、Ｎ４－メチルシチジン、Ｎ４－アミノシチジン、Ｎ４－ヒドロキシシチジン、５－メチルシチジン、５－アミノシチジン、５－ヒドロキシシチジン、５－メトキシシチジン、５－エトキシシチジン、５－ヒドロキシメチルシチジン、５－カルボキシシチジン、５－ホルミルシチジン、５－メチル－５－アザシチジン、５－アミノ－５－アザシチジン、５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、５－メチルプソイドイソシチジン、５－アミノプソイドイソシチジン、５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－５－アザシチジン、２－チオプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチルシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシシチジン、２－チオ－５－メチルシチジン、２－チオ－５－アミノシチジン、２－チオ－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－メチルシチジン、Ｎ４－メチル－５－アミノシチジン、Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシシチジン、Ｎ４－メチル－５－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－メチル－５－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－メチル－５－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－メチルシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アミノシチジン、Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシシチジン、Ｎ４－アミノ－５－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－アミノ－５－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチル－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノ－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノプソイドイソシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－メチルシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－メチル－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－メチルシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－アミノ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルシチジン、Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチル－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシ－５－アザシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－メチルプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－アミノプソイドイソシチジン、２－チオ－Ｎ４－ヒドロキシ－５－ヒドロキシプソイドイソシチジン、Ｎ６－メチルアデノシン、Ｎ６－アミノアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシアデノシン、７－デアザアデノシン、８－アザアデノシン、Ｎ６－メチル－７－デアザアデノシン、Ｎ６－メチル－８－アザアデノシン、７－デアザ－８－アザアデノシン、Ｎ６－メチル－７－デアザ－８－アザアデノシン、Ｎ６－アミノ－７－デアザアデノシン、Ｎ６－アミノ－８－アザアデノシン、Ｎ６－アミノ－７－デアザ－８－アザアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシ－７－デアザアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシ－８－アザアデノシン、Ｎ６－ヒドロキシ－７－デアザ－８－アザアデノシン、６－チオグアノシン、７－デアザグアノシン、８－アザグアノシン、６－チオ－７－デアザグアノシン、６－チオ－８－アザグアノシン、７－デアザ－８－アザグアノシン、及び６－チオ－７－デアザ－８－アザグアノシンから選択される。

実施形態では、本方法は、遺伝子編集及び／または遺伝子修正を含む。実施形態では、本方法は、例えば、非標準ヌクレオチドを含むＲＮＡ、例えば、ヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、ニッカーゼ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質、ＤＮＡ修復タンパク質、ＤＮＡ修飾タンパク質、塩基修飾タンパク質、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ、ＤＮＡ脱メチル化を引き起こすタンパク質、ＤＮＡを基質とする酵素、またはその天然もしくは操作バリアント、ファミリーメンバー、オルソログ、フラグメント、または融合構築物の１つ以上をコードするＲＮＡによる、合成ＲＮＡに基づく遺伝子編集及び／または遺伝子修正を包含する。実施形態では、遺伝子編集及び／または遺伝子修正の効率は高く、例えば、ＤＮＡベースの遺伝子編集及び／または遺伝子修正よりも高い。実施形態では、遺伝子編集及び／または遺伝子修正の本方法は、インビボでの適用にとって十分に効率的である。実施形態では、遺伝子編集及び／または遺伝子修正の本方法は、細胞選択（例えば、編集された細胞の選択）を必要としないほど十分に効率的である。実施形態では、本方法の遺伝子編集の効率は、約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％、または約１０％、または約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約１００％である。実施形態では、本方法の遺伝子修正の効率は、約１％、または約２％、または約３％、または約４％、または約５％、または約６％、または約７％、または約８％、または約９％、または約１０％、または約２０％、または約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約１００％である。

実施形態では、本方法は、操作されたヌクレアーゼ切断またはＤＮＡ修飾ドメインを含む高効率遺伝子編集タンパク質を含む。実施形態では、本方法は、操作されたヌクレアーゼ切断またはＤＮＡ修飾ドメインを含む高忠実度遺伝子編集タンパク質を含む。実施形態では、高効率遺伝子編集タンパク質は、操作されたＤＮＡ結合ドメインを含む。実施形態では、高忠実度遺伝子編集タンパク質は、操作されたＤＮＡ結合ドメインを含む。実施形態では、本方法は、操作された反復配列を含む遺伝子編集タンパク質を含む。実施形態では、本方法は、１つ以上のＣＲＩＳＰＲ関連ファミリーメンバーを含む遺伝子編集タンパク質を含む。実施形態では、本方法は、遺伝子編集タンパク質で細胞をトランスフェクトすること、または遺伝子編集タンパク質を発現するように細胞を誘導することによって、細胞のＤＮＡ配列を変更することを含む。実施形態では、本方法は、インビトロ培養に存在する細胞のＤＮＡ配列を変更することを含む。実施形態では、本方法は、インビボに存在する細胞のＤＮＡ配列を変更することを含む。

実施形態では、本方法は、トランスフェクション培地中に１つ以上のステロイド及び／または１つ以上の抗酸化剤を含み、インビボトランスフェクション効率、インビボ再プログラム化効率、及びインビボ遺伝子編集効率を増加させることができる。実施形態では、本方法は、細胞または患者をヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾンまたはベタメタゾンなどのグルココルチコイドと接触させることを含む。実施形態では、本方法は、細胞をステロイドを含有する培地と接触させること、及び細胞を１つ以上の核酸分子と接触させることによって、目的のタンパク質を発現するように細胞を誘導することを含む。実施形態では、核酸分子は合成ＲＮＡを含む。実施形態では、ステロイドはヒドロコルチゾンである。実施形態では、ヒドロコルチゾンは、約０．１ｕＭ～約１０ｕＭの間、または約１ｕＭの濃度で培地中に存在する。実施形態では、本方法は、細胞を抗酸化剤を含有する培地と接触させること、及び細胞を１つ以上の核酸分子と接触させることによって、目的のタンパク質を発現するようにインビボで細胞を誘導することを含む。実施形態では、抗酸化剤は、アスコルビン酸またはアスコルビン酸－２－ホスフェートである。実施形態では、アスコルビン酸またはアスコルビン酸－２－ホスフェートは、約０．５ｍｇ／Ｌ～約５００ｍｇ／Ｌ（約５０ｍｇ／Ｌを含む）の濃度で培地中に存在する。実施形態では、方法は、細胞をステロイド及び／または抗酸化剤を含有する培地と接触させること、及び細胞を１つ以上の核酸分子と接触させることによって、インビボで細胞を再プログラム化及び／または遺伝子編集することを含み、１つ以上の核酸分子は、１つ以上の再プログラム化及び／または遺伝子編集タンパク質をコードする。実施形態では、細胞は生物中に存在し、ステロイド及び／または抗酸化剤が生物に送達される。

実施形態では、核酸治療薬は、遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質及び／または関連エレメントをコードする。実施形態では、遺伝子編集タンパク質は、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回分配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される。実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、Ｃｐｆ１、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される。実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ｘＣａｓ９、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１４、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、クラス１Ｃａｓタンパク質、クラス２Ｃａｓタンパク質、ＭＡＤ７、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される。

実施形態では、治療薬は、生物製剤治療薬である。実施形態では、生物製剤治療薬は、タンパク質である。実施形態では、生物製剤治療薬は、インターフェロン、モノクローナル抗体、及び／またはインターロイキンである。実施形態では、生物製剤治療薬は、特異的能動免疫療法、非特異的能動免疫療法、受動免疫療法、及び細胞傷害性療法の１つ以上から選択される免疫療法を実施するために使用される。

実施形態では、生物製剤治療薬は、組換えタンパク質である。

実施形態では、生物製剤治療薬は、ウイルスである。

実施形態では、生物製剤治療薬は、抗体または抗体フラグメント、融合タンパク質、遺伝子編集タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチドのうちの１つである。

実施形態では、治療薬は、小分子治療薬である。実施形態では、小分子治療薬は、薬物、阻害剤、または補因子のうちの１つ以上である。実施形態では、薬物は、がん治療に使用するためのものである。実施形態では、阻害剤は、キナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害薬、及びアポトーシスを標的とする阻害剤のうちの１つ以上である。

実施形態では、治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である。

医薬組成物
一態様では、本開示は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療するのに有用な組成物を提供し、当該組成物は、本開示の巨核球由来細胞外小胞を含む。別の態様では、本開示は、ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療するのに有用な組成物を提供し、当該組成物は、内腔を囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞を含み、巨核球由来細胞外小胞内腔は、カーゴを含む、及び／またはカーゴは、巨核球由来細胞外小胞の表面と会合しており；脂質二重層膜は、脂質二重層膜と会合した、または、脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む。実施形態では、カーゴは、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療に有用な１つ以上の薬剤を含む。実施形態では、薬剤は、ファンコニ貧血（ＦＡ）の治療に有用な治療薬を含む１つ以上の治療薬である。

治療的処置は、治療が投与される患者への毒性を最小限に抑えながら、有効用量で治療効果を達成するように設計された１つ以上の投与経路の使用、及び１つ以上の製剤の使用を含む。

実施形態では、有効用量は、インビボでの細胞毒性を実質的に回避する量である。様々な実施形態において、有効用量は、ヒト患者における免疫反応を実質的に回避する量である。例えば、免疫反応は、自然免疫系によって介在される免疫応答であり得る。免疫応答は、当技術分野で知られているマーカー（例えば、サイトカイン、インターフェロン、ＴＬＲ）を使用してモニタリングすることができる。実施形態では、有効用量により、残留毒性を緩和するために使用される免疫抑制剤によるヒト患者の治療の必要性がなくなる。

製剤化時に、溶液は、本明細書に記載されるように、投薬製剤に適合した方式で、かつ治療上有効であるような量で、投与され得る。製剤は、注射液などの多様な剤形で、容易に投与することができる。水溶液における非経口投与のために、例えば、溶液は、一般に、好適に緩衝化され、液体希釈剤は、最初に、例えば、十分な生理食塩水またはグルコースで等張にされる。かかる水溶液は、例えば、静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内投与のために使用され得る。好ましくは、当業者に周知のように、滅菌水性媒体が用いられる。

医薬製剤は、送達試薬（別名「トランスフェクション試薬」、別名「担体」、別名「送達担体」）及び／または賦形剤をさらに含んでもよい。薬学的に許容される送達試薬、賦形剤、及びそれらの調製方法及び使用方法（医薬製剤を調製して患者に投与する方法を含む）は、当技術分野で周知であり、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００８／０２１３３７７号（全体を参照により本明細書に援用する）を含む多数の刊行物に記載されている。態様において、本開示は、本明細書に開示される組成物、及び薬学的に許容される賦形剤または担体を含む医薬組成物に関する。

例えば、医薬組成物は、薬学的に許容される塩の形態であり得る。そのような塩には、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．６６，２－１９（１９７７）及びＴｈｅＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄＵｓｅ．Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌａｎｄＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｖｅｒｌａｇ，Ｚｕｒｉｃｈ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）２００２に列挙されているものが含まれる。薬学的に許容される塩の非限定的な例には、：硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸塩、パモ酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ－アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン－２－安息香酸塩、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、α－ヒドロキシ酪酸、ブチン－１，４－ジカルボキシラート、ヘキシン－１，４－ジカルボキシラート、カプリン酸塩、カプリル酸塩、ケイ皮酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、リンゴ塩酸、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ニコチン酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、セバシン酸塩、スベリン酸塩、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エチルスルホン酸塩、２－ヒドロキシエチルスルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、ナフタレン－１，５－スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石酸塩、ナトリウム、カリウム、リチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムや亜鉛などの他の金属の水酸化物；非置換またはヒドロキシ置換モノ－、ジ－、またはトリ－アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどのアンモニア及び有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ－メチル、Ｎ－エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ－、ビス－、またはトリス－（２－ヒドロキシエチル）アミン、２－ヒドロキシ－ｔｅｒｔ－ブチルアミン、またはトリス－（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ－、ビス－、またはトリス－（２－ＯＨ－低級アルキルアミン）；Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アミンまたはトリ－（２－ヒドロキシエチル）アミンなどのＮ，Ｎ－ジ－低級アルキル－Ｎ－（ヒドロキシル－低級アルキル）－アミン；Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン；及びアルギニン、リジンなどのアミノ酸などが含まれる。

本医薬組成物は、水、及び例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油などといった石油、動物、植物、もしくは合成起源の油を含む油などの液体を含む賦形剤を含むことができる。医薬品賦形剤は、例えば、生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンのり、タルク、ケラチン、コロイダルシリカ、尿素などであり得る。加えて、補助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤、及び着色剤を使用してもよい。実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、患者に投与される際に無菌である。適切な薬学的賦形剤としてはまた、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども挙げられる。本明細書に開示されるいずれの薬剤もまた、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含んでもよい。

実施形態では、医薬組成物は、局所、髄腔内、病巣内、冠動脈内、静脈内（ＩＶ）、関節内、筋肉内、鼻腔内、及び気管支内の投与、ならびに膵臓内血管内注射、髄核内、腰椎穿刺、心筋内、経心内、瘻孔内、髄間腔、鼻腔内、及び硬膜空間内の注射を介した投与のうちの１つ以上のために製剤化される。

実施形態では、医薬組成物は、注入用に製剤化される。実施形態では、医薬組成物は注入用に製剤化され、医薬組成物は、末梢線、中心線、トンネル線、植え込み可能なポート、及び／またはカテーテルを介した患者の静脈内の針を通して、患者の血流に送達される。実施形態では、患者は、注入液による水分補給などの補助的な投薬または治療を受けることもできる。実施形態では、医薬組成物は、静脈内注入用に製剤化される。実施形態では、注入は、持続注入、二次静脈内療法（ＩＶ）、及び／またはＩＶプッシュである。実施形態では、医薬組成物の注入は、注入ポンプ、皮下注射針、ドリップチャンバー、末梢カニューレ、及び圧力バッグのうちの１つ以上から選択される機器の使用により行われ得る。

実施形態では、医薬組成物は、皮膚に、または皮膚上に、例えば、薬用化粧品の形で、表皮内、皮内または皮下に導入される（例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ，Ｈ．，Ｃｌｉｎ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７（５）：４５３－４６０（２００９）を参照）。実施形態では、医薬組成物は、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、スプレー、溶液などの形態である。実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤、非キレート非界面活性剤などであるが、これらに限定されない、浸透促進剤をさらに含む。実施形態では、医薬組成物はまた、芳香剤、着色剤、日焼け止め剤、抗菌剤及び／または保湿剤を含んでもよい。

本明細書に開示される開示がより効率的に理解されるように、以下に実施例を提供する。これらの実施例は、説明のみを目的としており、いかなる態様においても本開示を限定するものと解釈されるべきではないことを理解されたい。

実施例１：巨核球由来細胞外小胞の生成
細胞培養プロセスは、初代ヒト末梢血ＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）から同種巨核球由来細胞外小胞を産生するように適合した（図１Ａ）。

民営の供給業者から供給される初代ヒトＣＤ３４＋ＨＳＣを解凍し、幹細胞維持培地からＨＳＣ増殖培地へ移行させた。この期間中、ＨＳＣは大幅に増殖した。次に、これらの培養物を巨核球分化培地に入れ、巨核球由来細胞外小胞を培養上清から回収した。ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ４２ｂ、巨核球特異的細胞骨格タンパク質β１－チューブリン、アルファ顆粒成分（例えば、血小板第４因子及びフォン・ヴィレブランド因子）、分泌顆粒、及び超構造的性質（例えば、陥入膜系、暗調小管系、多小胞体）のバイオマーカー発現により、巨核球の分化を確認した。巨核球は、５００～１５００個の巨核球由来細胞外小胞／細胞を生じ、これは、直径３０～６００ｎｍ、１００～３００ｎｍ、ＤＮＡ－、ＣＤ４１＋であった。巨核球由来細胞外小胞は、タンジェント流ろ過によってさらに単離／濃縮し、１．５×１０^８巨核球由来細胞外小胞／ｍＬの標的濃度でパッケージ化した。巨核球由来細胞外小胞は、巨核球及び血小板特異的バイオマーカー、ＲＮＡ、ならびにサイトゾルタンパク質の強力な発現を示した。

ナノ粒子分析、フローサイトメトリー、及び低温透過型電子顕微鏡により、バイオマーカーの発現と組成とを確認した。

ＭｋＥＶの産出量は、インビトロでの巨核球（Ｍｋ）分化の間、経時的に増加することを見出した（図１Ｂ）。培養中のＭｋＥＶの表現型を評価し（図１Ｃ）、細胞表面マーカー発現の代表的なヒストグラムと、巨核球及び採取したＭｋＥＶの顕微鏡画像とを作成した。

ＭｋＥＶバイオマーカーの発現を調べた。本開示のＭｋＥＶの表面マーカー発現を、無血小板血漿（ＰＦＰ）ＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶ（ＰＬＴＥＶ）と比較した（図２Ａ～図２Ｅ）。フローサイトメトリーのゲーティングストラテジー（図２Ａ～図２Ｂ）、ＣＤ４１＋本開示のＭＫＥＶ、ＣＤ４１＋ＰＦＰＭｋＥＶ、及びＣＤ４１＋ＰＬＴＥＶのマーカープロファイル（図２Ｃ）、ならびに本開示のＭｋＥＶとＰＦＰＭｋＥＶとの間のマーカー発現における倍率変化（図２Ｄ）、及び本開示のＭｋＥＶとＰＬＴＥＶとの間のマーカー発現における倍率変化（図２Ｅ）を明示する代表的なグラフを示す。データは、本開示のＭｋＥＶがＰＦＰＭｋＥＶ及びＰＬＴＥＶと比較して異なる表面マーカーの発現を示すこと、ならびにＰＦＰＭｋＥＶ及びＰＬＴＥＶと相対的な本ＭｋＥＶのマーカープロファイルを確立することを示す。ＤＲＡＱ５陽性事象の存在がごく少ないことは、細胞汚染がないことを示している（図２Ｆ）。

本開示のＭｋＥＶのサイズ及びモルフォロジーを特徴付けした。ＣＤ４１（図３Ａ）及びホスファチジルセリン（図３Ｂ）のイムノゴールド標識を伴う本開示のＭｋＥＶの低温ＥＭ像を作成した。低温ＥＭ像でＭｋＥＶを測定することから、ＭｋＥＶサイズの範囲が１００～３００ｎｍ、直径が平均して約２５０ｎｍであることを示した。図３Ｃは、ＰＦＰ血漿から単離したＭｋＥＶの画像であり、ＣＤ４１（大きな点）及びＰＳ（小さな点）を共染色している（Ｂｒｉｓｓｏｎｅｔａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ２８：２６３－２７１（２０１７）を参照。これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。細胞小器官内容物に関しては、（１）電子顕微鏡、及び（２）ミトコンドリア呼吸分析（ＡｇｉｌｅｎｔＳｅａｈｏｒｓｅ）によって評価されるように、予備分析ではＭｋＥＶにミトコンドリアがあることの証拠は示されていない。ゲノム解析は、コーディングＲＮＡ及びノンコーディングｍｉＲＮＡの配列決定によって行う。プロテオミクス解析は質量分析法を使用して実施し、プロテオミクスデータによりフロー及びＥＭ表面マーカーを検証する。

本開示のＭｋＥＶのサイズは、フローサイトメトリー分析、及びＣＤ４１＋イムノゴールド標識による低温ＥＭ分析を使用して、ＰＦＰＭｋＥＶと比較する。本開示のＭｋＥＶのサイズ分布は、重複したが、ＰＦＰＭｋＥＶ及び血小板由来ＥＶのサイズ分布とは異なっていた（図４Ａ～図４Ｋ）。（図４Ｃは、Ａｒｒａｕｄｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｎｄＨａｅｍｏｓｔａｓｉｓ１２：６１４－６２７（２０１４）から採用しており、図４Ｄ及び図４Ｅは、Ｂｒｉｓｓｏｎｅｔａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ２８：２６３－２７１（２０１７）に見つけられ、これらの全体を参照により本明細書に援用する）。

ＭｋＥＶの精製も調べたところ、サイズ排除ろ過により、未ろ過産物から凝集物が効果的に除去されることがわかった。例えば、６５０ｎｍサイズ排除フィルターを使用した採取後のろ過では、未ろ過のＭｋＥＶ産物（図５Ａ）と比較して、大きな凝集物質（凍結ＭｋＥＶ試料でＥＭによって観察した）を首尾よく除去することがわかった（図５Ｂ）。

実施例２：ＭＶの製造プロセスとインビボ遺伝子送達のための産物の放出
この実施例は、製造の標準化とスケーリング、及び初代ヒトＣＤ３４＋ＨＳＣからのＭｋＥＶの単離のプロセスに関連する。ＭｋＥＶを特徴付け、バッチ間の変動性と放出テストとを実行した。ＭｋＥＶの遺伝子搭載効率とトランスフェクション効率とを規定し、それにより、インビボでの生体内分布及び有効性の追跡、ならびに遺伝子送達アプリケーションの産物パラメータを規定することを可能にした。

臨床への参入のために、ＭｋＥＶの製造は、組織の調達、製造、産出量、検査、及び保管の標準化を含む放出基準を満たさなければならない。ＭｋＥＶの品質と同一性、純度、有効性、及び産出量に関するバッチ間の変動性を規定し、これらを産物の放出基準を規定するために使用した。ＭｋＥＶは、品質と保管の最低要件を満たしているか、またはそれを上回っている。

初代ヒトＣＤ３４＋細胞からのＭｋＥＶ製造は、約４００ｍＬのバッチ培養（約１２００ｃｍ^２の培養面積、これはＴ２２５の約５倍に相当する）に適応して、バッチあたり約８ｅ１０ＭｋＥＶを産出した。ＭｋＥＶを、同一性及び純度（バイオマーカー発現、％組成）と産出量（バッチあたりの合計ＭｋＥＶ事象）とを評価するためのテストにかけた。表１にＭｋＥＶの放出仕様の例を示す。

初代ヒトＣＤ３４＋ＨＳＣからＭｋＥＶを製造及び単離するための標準化及びスケーリングプロセス：初代ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞（ＨＳＣ）を利用した。ＨＳＣ（純度９０～９５％）の最初の単離、濃縮、及びバンキングを、同一性、無菌性、生存率、及びバンキングの安定性を実証するための様々なアッセイを使用して、ＦＤＡのガイダンスに従って実行し認定した。ＨＳＣを、顆粒球コロニー刺激因子によってドナー骨髄から血液に動員し、アフェレーシスによって末梢血から回収し、バンキング前に、シャーガス、ＣＭＶ、ＨｅｐＢ、ＨｅｐＣ、ＨＩＶ－１／ＨＩＶ－２ＰｌｕｓＯ、ＨＴＬＶＩ／ＩＩ、梅毒、ＨＢＶ、ＨＣＶ、及びＷＮＶについて検査した（ＣＯＶＩＤ－１９検査も含まれる）。ＨＳＣバイアルは、出荷前に臨床的に承認された培地で凍結保存され、解凍後に生存能力を発揮する。非限定的な例では、ＨＳＣバイアルは、出荷前に臨床的に承認された培地で凍結保存され、解凍後に生存能力を発揮する。

初期段階のＭｋＥＶ産生のプロセスフロー：ＨＳＣからＭＶを製造するためのスケーラブルなｃＧＭＰ互換プロセスを利用した。ＭｋＥＶの産生を２つの不連続なセグメントに分割した。すなわち、（Ａ）ＨＳＣの増殖、巨核球の分化及びＭｋＥＶの産生と、（Ｂ）タンジェント流ろ過及びバイアル充填（１．５ｅ８ＭＶ／ｍＬ）によるＭＶの単離／濃縮とである。ＭｋＥＶバイアルを、バンキング用に凍結保存した。集中製造は、ＨＳＣの増殖とＭｋＥＶの産生／処理／充填とを目的としている。

セグメントＡ：５ｅ６細胞／バッチの初代ヒトＣＤ３４＋ＨＳＣは、細胞培養中に約３０倍のバイオマス増殖を受けて、約１．５ｅ８巨核球／バッチを産出した。ＣＤ３４＋ＨＳＣから巨核球前駆細胞への分化は、７～９日間にわたって行われた。各巨核球は５００～１５００ＭＶの間で産出され、上清から採取する前には、約７．５ｅ１０ＭｋＥＶ／バッチの合計バッチ産出量が得られた。

セグメントＢ：ＭｋＥＶをタンジェント流ろ過（必要に応じて代替として分画遠心法）によって単離／濃縮し、体積を約５００ｍＬに減らした。ＭｋＥＶを、約１．５ｅ８ＭｋＥＶ／ｍＬの濃度でパッケージ化して、約５００バイアル／バッチを得た。

実施例３：ＭｋＥＶの特性評価、及びバッチ間変動性と放出試験のパフォーマンス
ＭｋＥＶを、バッチ処理から回収した。高感度フローサイトメトリーを使用して、表面バイオマーカー発現（ＣＤ４１、ＣＤ６２Ｐ、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ））、細胞小器官内容物（ミトコンドリア）、及びリン脂質組成物（ホスファチジルセリン）を核色素（ＤＲＡＱ５）と組み合わせて決定して、有核細胞と区別した。全蛍光強度は、フルオロフォア結合ＩｇＧ抗体特異性コントロールを差し引いた後に算出した。ＭｋＥＶの前方及び側方の光散乱を調べて、サイズ分布、純度、及び凝集を評価した。サイズ規定されたナノ粒子は、ゲーティングコントロールとして機能した。ＭｋＥＶサイズ及び総バッチ産出量を、ナノ粒子分析器（Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ，ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して決定した。ＭｋＥＶタンパク質含量（Ａｌｉｘ及びＴＳＧ１０１）をＥＬＩＳＡによって決定し、ＤＮＡ含量を測定して、細胞破片及び細胞核による潜在的な汚染を推定した。ＭｋＥＶの完全性及び純度を、低温電子顕微鏡法及びイムノゴールド標識によって確認し、表面分子（ＣＤ４１、ホスファチジルセリン）のさらなる測定を可能にした。これらの実験は、多くの独立したＭｋＥＶバッチについて、バッチごとに何度も繰り返した。非限定的な例では、実験は、最小で３つの独立したＭｋＥＶバッチについて、バッチごとに少なくとも３回繰り返した。ヒト全血からのＭｋＥＶ／ＰＥＶを陽性対照として使用した。

ＭｋＥＶは、巨核球及び血小板からそれぞれ収集または生成され、ＣＤ４１＋発現を定量化するために、イムノゴールド標識及び電子顕微鏡と組み合わせたナノ粒子追跡分析を使用して特徴付けた。ヒトＣＤ３４＋由来巨核球は、巨核球あたり５００～１５００ＭｋＥＶを産生し（図６Ａ）、これはマウス骨髄及びマウス胎児肝細胞培養対照の中間であり、約２００ｎｍ／ＭｋＥＶの同様の平均サイズであった（図６Ｂ）。ヒトＣＤ３４＋由来巨核球培養物からのＣＤ４１＋ＭｋＥＶのパーセンテージはマウス骨髄由来ＭｋＥＶに匹敵したが、イムノゴールド電子顕微鏡によると、ヒトＭｋＥＶは、より多くのＣＤ４１結合金粒子を有していた（図６Ｃ～図６Ｄ）。従来のアゴニスト（トロンビン及びコラーゲン）及び炎症性刺激（インビボモデルを模倣するためのＬＰＳ）で活性化されたヒト血小板は、同様の数のＥＶ／血小板を生成し（図６Ｅ）、ＭｋＥＶよりもサイズが大きかった（図６Ｆ）（図６Ａ～図６Ｆについては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｆｒｅｎｃｈｅｔａｌ．，ＢｌｏｏｄＡｄｖａｎｃｅｓ，４：３０１１－３０２３（２０２０）を参照されたい）。血小板由来ＥＶは、サイズが大きいため、ミトコンドリア及び他の細胞小器官（ＭｋＥＶとは異なる）を含有する場合もある。ＣＤ４１＋ＰＥＶのパーセンテージ、及びＰＥＶによるＣＤ４１結合金粒子の相対的発現を、ヒトＭｋＥＶ及びマウスＭｋＥＶ対照と比較した（図６Ｇ～図６Ｈ）。

バッチ間の一貫性を評価するために、巨核球からＭｋＥＶを回収または生成し、フローサイトメトリーを使用してＣＤ４１＋発現を定量して特徴付けを行った。ＭｋＥＶ／ｍＬの総数、及びバッチ当たりの生産したＭｋＥＶの総数（図７Ａ）、及び製造したＭｋＥＶの表面マーカー発現（図７Ｂ）に関するバッチ間のばらつきは最小限であった。

実施例４：ＭｋＥＶの遺伝子搭載を定義する
これらの実施例は、ＭｋＥＶへの多様なカーゴの搭載成功に関連したデータを記載している。

一例では、野生型ヒトＦＡＮＣＡをコードする９．８ｋｂのｐＤＮＡをＭｋＥＶへエレクトロポレーション（ＥＰ）した。異なるエレクトロポレーション条件で、再現性のあるカーゴ搭載の滴定ができるようにした。首尾よく内在化され、そのためＭｋＥＶ内に保護されている、ｐＤＮＡコピーのみを定量化するために、エレクトロポレーション後にＭｋＥＶをＤＮａｓｅで処理し、遊離のカーゴ及びＥＶ結合カーゴを除去した。その後、保護された内在化ｐＤＮＡカーゴを抽出し、ｑＰＣＲで定量した。搭載ｐＤＮＡの量（単位はナノグラム（ｎｇ））を、並行して実施された標準曲線に基づいて計算し、ｐＤＮＡコピー数／ＭｋＥＶを計算した。図１１Ａに示すように、１０コピーのｐＤＮＡから１０００コピー超のｐＤＮＡまで、エレクトロポレーション条件に応じて再現性良く滴定された量のｐＤＮＡがＭｋＥＶ内に搭載された。

別の例では、Ｃａｓ９がＭｋＥＶへ搭載された。ＭｋＥＶをＣａｓ９でエレクトロポレーションし、プロテイナーゼＫで処理して内在化していないカーゴ（遊離カーゴ及び小胞表面会合カーゴ）を除去するか、またはろ過処理して遊離カーゴを除去するかのいずれかを行い、その後、Ｃａｓ９の定量のためにウェスタンブロッティングにより分析した。対照には、エレクトロポレーション±プロテイナーゼＫ±ろ過を行っていないＭｋＥＶとＣａｓ９が含まれていた。ろ過に続いて、Ｃａｓ９は、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照の非エレクトロポレーションＭｋＥＶには存在せず、タンパク質カーゴの小胞会合及び／または内部移行の成功を示している。同様に、プロテイナーゼＫ消化に続いて、Ｃａｓ９は、エレクトロポレーションしたＭｋＥＶに存在したが、対照の非エレクトロポレーションＭｋＥＶには存在せず、エレクトロポレーション後の搭載タンパク質カーゴの内部移行及び保護の成功の両方を示している（図１１Ｂ）。

非限定的な例では、遺伝子搭載効率を定義するために、ＬａｂｅｌＩＴＴｒａｃｋｅｒＣｙ５（Ｍｉｒｕｓ）を使用して、約５００ｂｐ、３，０００ｂｐ、及び６，０００ｂｐのプラスミドＤＮＡをＣｙ５蛍光標識に結合させる。前述のように、プラスミドあたり４～１０のラベル分子とする。ＭｋＥＶは、ＭａｘＣｙｔｅＶＬＸを使用して、１００μＬ（１５分、３７℃）中にＣｙ５＋標識ＤＮＡを２５０×１０^３（ＤＮＡ／ＭＶ）の比率で、エレクトロポレーションを行った。このＭａｘＣｙｔｅＶＬＸは、商業生産のためにバッチあたり最大２０００億個の細胞をトランスフェクトできるスケーラブルなｃＧＭＰ準拠のエレクトロポレーションシステムである。ＭｋＥＶを洗浄してＭｋＥＶ凝集の核酸を改善し、氷上で２０分間インキュベートして回復させ、その後遠心分離してエレクトロポレーション中に生成された大きな凝集物を除去する。ＭｋＥＶをＰＢＳで洗浄し、トランスフェクション研究のために共培地に再懸濁させる。ｐＤＮＡのコピー数を規定するために、搭載されたＭｋＥＶから、ＱＩＡｐｒｅｐＳｐｉｎＭｉｎｉｐｒｅｐＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してｐＤＮＡを精製し、ＱｕｂｉｔｄｓＤＮＡＨＳＡｓｓａｙＫｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してその濃度を定量化する。
搭載効率（％）＝Ｃｙ５＋ＭＶ＃／総ＭＶ＃
ｐＤＮＡコピー＃＝［搭載ｐＤＮＡ（ｎｇ）＊１０^９／分子量］＊アボガドロ数

Ｃｙ５は、Ｃｙ５陽性の巨核球小胞の数を指す。ＭＶ＃は巨核球小胞の数を指す。搭載ｐＤＮＡは、ＭＶに搭載されたｐＤＮＡの量を指す。分子量とは、ｐＤＮＡの分子量を指す。

ｐＤＮＡのコピー数は、プラスミドＤＮＡの一部の定量的ＰＣＲ増幅と、ゲル電気泳動によるアンプリコンの可視化とによって確認する。インビトロでのトランスフェクション効率を規定するために、ＭｋＥＶをＨＳＣあたり２５、５０、１００ＭｋＥＶの比率でＣＤ３４＋ＨＳＣと共培養し、前述の方法を使用して３７℃、６００×ｇで３０分間、遠心分離する（ＫａｏａｎｄＰａｐｏｕｔｓａｋｉｓ，ＳｃｉｅｎｃｅＡｄｖａｎｃｅｓ４：１－１１（２０１８）（この全体を参照により本明細書に援用する））。Ｃｙ５＋ＨＳＣのパーセンテージを、フローサイトメトリーによって、２４、４８、及び７２時間で定量化する。核トランスフェクション効率を規定するために、前述のように２４時間でＨＳＣの細胞核を単離し、Ｃｙ５＋細胞核の割合をフローサイトメトリーによって定量化する。

ＭｋＥＶあたりの搭載効率は、ｐＤＮＡのサイズに比例し、トランスフェクション効率は、約５０～６０％と予想される。ＥＶでのＤＮＡの搭載効率及び容量は、ＤＮＡサイズに依存することが予想され、長さが１０００ｂｐ未満の直鎖ＤＮＡ分子は、このアプローチを使用したより大きな直鎖ＤＮＡ及びプラスミドＤＮＡと比較して、より効率的にＭｋＥＶに結合される。ｐＤＮＡの搭載効率が制限されている場合、これらの研究を直鎖ＤＮＡで繰り返し、結果を他のＭｋＥＶでの過去の研究と比較する。遺伝物質をＭｋＥＶに搭載するための他の非限定的な方法には、超音波処理、サポニン透過処理、低張透析、コレステロール抱合、及び巨核球マイクロインジェクション／トランスフェクションが含まれる。トランスフェクション効率の研究は、インビボ投薬ストラテジーを提供する。

実施例５：ＭｋＥＶに関連した生体内分布データ
この実施例では、カーゴ搭載ＭｋＥＶの送達、エクスビボでのＭｋＥＶの標的化、及びインビボでのＭｋＥＶ生体内分布データを含む、ＭｋＥＶの生体内分布データに関連したデータを提供する。

初代ＨＳＰＣによるＭｋＥＶ送達カーゴの内部移行を決定するため、共焦点顕微鏡検査を実施した。最初に、野生型マウスから骨髄を回収し、ＮＨ_４Ｃｌを使用した赤血球溶解（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び系統枯渇（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に供した。ＨＳＰＣを蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）により単離し、系統枯渇ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－細胞と定義した。予めＲＮＰに形成されたＧＦＰタグを付けたＣａｓ９（Ｓｉｇｍａ）とガイドＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ）をＭｋＥＶに搭載した。ＨＳＰＣを搭載ＭｋＥＶと１８時間共培養した。インキュベーション期間の後、固定されていない細胞を顕微鏡のスライドガラスの上に移し、Ｚｅｉｓｓ７８０共焦点顕微鏡及びｘ６３対物レンズを使用して画像化した。ＺｅｎＢｌａｃｋソフトウェアを利用して画像の取り込み及び処理を行った。

ＮＨ_４Ｃｌを使用した赤血球溶解（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）後の初代野生型全骨髄細胞を使用して、共培養を行った。ＭｋＥＶには、ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載するか、またはＤｉＤＶｙｂｒａｎｔ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識するかのいずれかを行った。ＤｉＤ標識を製造者の指示書に従って実施し、次いで、洗浄ステップを２回行った。搭載または標識されたＭｋＥＶを１ｅ６全骨髄細胞と２４時間共培養した。その後、共培養物を、以下の抗体を使用してフローサイトメトリー（ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａＸ－２０，ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により分析した：ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１９、ＧＲ－１、ＴＥＲ１１９、ＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０、７ＡＡＤ、ｃＫｉｔ、Ｓｃａ－１。ＦｌｏｗＪｏ（ｖｅｒｓｉｏｎ１０．８．１，ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してフローサイトメトリーデータ分析を行った。

ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９リボ核タンパク質（ＲＮＰ）を搭載したＭｋＥＶと共培養したＨＳＰＣ（系統枯渇ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－マウス骨髄細胞）の共焦点顕微鏡画像を得た（図８）。カーゴを搭載したＭｋＥＶと共培養した細胞はＧＦＰ陽性細胞を示し、ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載したＭｋＥＶの細胞内への取り込みを示している。対照的に、細胞単独、及びＲＮＰを搭載したモックである（エレクトロポレーションなし（ＥＰなし））ＭｋＥＶと共培養した細胞を含む対照試料は、ＧＦＰ陽性を示さなかった。これらのデータは、ＲＮＰカーゴを搭載したＭｋＥＶのＨＳＰＣへの送達が成功したことを示している。

図９Ａ～図９Ｃに示すように、ＭｋＥＶは、エクスビボで、造血幹細胞及び前駆細胞を優先的に標的とする。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９タンパク質を搭載したＭｋＥＶ（図９Ａ）または親油性蛍光色素ＤｉＤで標識したＭｋＥＶ（図９Ｂ）。その後、搭載ＭｋＥＶ及びＤｉＤ標識ＭｋＥＶを、野生型マウスに由来する初代全骨髄と共培養した。２４時間の共培養後、細胞を、ＧＦＰ＋またはＤｉＤ＋（すなわち、ＭｋＥＶ＋）である細胞の％についてフローサイトメトリーにより分析した。細胞のＭｋＥＶ取り込み／ＭｋＥＶとの会合を示す、ＧＦＰ＋またはＤＩＤ＋である細胞の割合を、フローサイトメトリーにより定量した。さらに、系統陽性（Ｌｉｎ＋）、系統陰性（Ｌｉｎ－）、及び系統陰性／ｃ－Ｋｉｔ＋／Ｓｃａ－１＋（ＬＳＫ）細胞の割合を、系統陽性マーカー、Ｓｃａ－１、及びｃ－Ｋｉｔ細胞表面タンパク質に対する蛍光標識抗体を使用して同時に決定した。不均一全骨髄集団における細胞の各サブタイプのパーセンテージを図９Ａに示す。ＧＦＰタグを付けたＣａｓ９を搭載したＭｋＥＶと共培養した細胞では（図９Ａ中、棒グラフで図示）、培養物中の細胞の大多数（９５％）がＬｉｎ＋細胞（分化細胞）であるにもかかわらず、これらの細胞のうち最大でも２３％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、５％未満が造血幹細胞及び前駆細胞（Ｌｉｎ－細胞）であったが、細胞用量あたり３００ＥＶにおいて、これらの細胞のうちほぼ５０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、集団のわずか０．２５％を構成する、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞のＬＳＫ細胞では、この集団のほぼ４０％がＭＫＥＶに関して陽性であった。これらのデータは、骨髄由来の造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボでの優先的標的化を示している。同様に、図９Ｂに示すように、ＤｉＤ標識ＭｋＥＶと共培養した全骨髄細胞では、Ｌｉｎ＋細胞のうち２０％しかＭｋＥＶに関して陽性ではなかった。対照的に、より稀な集団のＬｉｎ－細胞のうち３０％がＭｋＥＶに関して陽性であった。最後に、これらの培養物の評価した中で最も稀かつ最も多能性の造血幹細胞（ＬＳＫ）では、この集団のうち４８％がＭＫＥＶに関して陽性であった。対照と比較した場合、ＭｋＥＶ共培養の全条件を通して全骨髄培養物中の総Ｌｉｎ＋細胞及び総Ｌｉｎ－細胞のパーセンテージに大きな変化はなく（図９Ｃ）、毒性がないことを示している。

図１０Ａ～１０Ｋに示すように、野生型マウスへのインビボ送達後の蛍光標識ＭｋＥＶのインビボでの生体内分布を調べた。実験計画を図１０Ａに示す（ｎ＝３～５匹のマウス／群）。野生型マウスに蛍光標識したＭｋＥＶを尾静脈を介して静脈内注射し、注射後１６時間に組織を採取して、蛍光について分析した。図１０Ｂは、マウスから切除された大腿骨においてＩＶＩＳにより検出された蛍光シグナルを示す。Ｎ＝５匹のマウス／群。プレートリーダーでアッセイし、組織重量により正規化した、それぞれのホモジナイズした組織の蛍光（図１０Ｃ）。図１０Ｃに示すように、注射後、骨髄への顕著なインビボでのＭｋＥＶ標的化があった。図１０Ｄ及び１０Ｅは、ＣＤ４５、系統マーカー、ＣＤ１５０、ＣＤ２０１、及びＣＤ４８に対する抗体を使用して染色し、フローサイトメトリーにより分析して、ＭｋＥＶに関して陽性である造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋細胞；図１０Ｄ）及び非常に原始的な長期造血幹細胞の％（ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ１５０＋／ＣＤ２０１＋／ＣＤ４８－細胞；図１０Ｅ）を決定した、骨髄細胞の実験データのグラフを示す。ＭｋＥＶは、骨髄内で造血細胞を優先的に標的とし（図１０Ｄ）、そのコンパートメント内で、非常に稀な（骨髄細胞の０．０３％未満）長期造血幹細胞を標的としている（図１０Ｅ）。ＭｋＥＶ注射の１６時間後の末梢白血球数（図１０Ｆ）、ヘモグロビン（図１０Ｇ）、血小板数（図１０Ｈ）、ＷＢＣ分画（図１０Ｉ）、またはＣＤ４５＋及びＣＤ４５－細胞の％（図１０Ｊ）、または骨髄中の長期造血幹細胞の％（図１０Ｋ）の変化がないことにより示されるように、造血コンパートメントに関する毒性の証拠はなかった。

実施例６：ＦＡでの治療送達ビヒクルとしての巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）の使用
非限定的な例では、ＭｋＥＶは、末梢血から供給されるヒト初代ＣＤ３４＋ＨＳＣを取得することによって生成された。ヒト初代ＣＤ３４＋細胞を巨核球に分化させ、巨核球からＭｋＥＶを単離した。ＭｋＥＶに治療用カーゴを搭載した。非限定的な例では、カーゴは、野生型ＦＡＮＣＡタンパク質をコードするプラスミドＤＮＡであった。プラスミドＤＮＡを、エレクトロポレーションを使用してＭｋＥＶ内に搭載し、カーゴを搭載したＭｋＥＶを、ＦＡＮＣＡ－／－マウスに静脈内注射した。注射されたＭｋＥＶは骨髄にホーミングし、それらが持つカーゴを造血幹細胞に送達し、ＦＡＮＣＡタンパク質発現を修復する。ＦＡＮＣＡタンパク質の発現及び機能に関する遺伝子修正及び修復の成功は、ウェスタンブロッティング、マイトマイシンＣ耐性の増加、及び／またはＦＡＮＣＤ機能の回復によって示される。

別の非限定的な例では、カーゴは、野生型ヒトＦＡＮＣＡタンパク質をコードするｐＤＮＡであった。マウスの系統枯渇細胞をマウス骨髄から回収し、ｐＤＮＡ搭載ＭｋＥＶ（製剤（ＤＰ）－ＥＶ）と共培養した。共培養後４８時間以内に、全ＲＮＡを細胞から抽出し、ｐＤＮＡでコードされたヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡを、ｑＰＣＲを使用して定量した。カーゴを搭載したＭｋＥＶに曝露された細胞ではヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡの強い発現があったが（図１２Ａ）、モック搭載ＭｋＥＶ（カーゴのないエレクトロポレーション）で処理された細胞では、ヒトＦＡＮＣＡ発現を示さなかった。濃度測定による定量では、この増加が、カーゴを搭載したＭｋＥＶで処理された細胞におけるｍＲＮＡ発現がモック搭載ＭｋＥＶの１８．５倍であったことが示された（図１２Ｂ）。細胞を、１０分の１の用量のヒトＦＡＮＣＡコードｐＤＮＡを搭載したＭｋＥＶと共培養した場合、共培養細胞においてヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡの量の用量依存的な減少があった（図１３Ａ）。これは、モック処理した細胞と比較した場合に、低用量及び高用量のＤＰ－ＥＶで処理したそれぞれの細胞におけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現の１．３倍及び４．４倍の増加を示す濃度測定読み取り値によって確認された（図１３Ｂ）。

別の非限定的な例では、野生型ヒトＦＡＮＣＡをコードするｐＤＮＡを搭載したＭｋＥＶを、ＦＡＮＣＡ－／－マウスから単離されたマウス骨髄系統枯渇細胞と共培養した。４８時間の共培養後、ヒトＦＡＮＣＡｍＲＮＡ（アンプリコンの長さは４１３ｂｐ）をｑＰＣＲで定量した。図１４Ａに示すように、内因性ＦＡＮＣＡ発現を欠く細胞は、ＤＰ－ＥＶと共培養した場合に、ｐＤＮＡのＭｋＥＶ媒介送達からのヒトＦＡＮＣＡの強い発現を示す。対照的に、モック対照（ｐＤＮＡカーゴは搭載せずに並行処理されたＭｋＥＶと共培養した細胞）はＦＡＮＣＡ発現を示さなかった。濃度測定読み取り値から、モック処理した細胞と比較した、ＤＰ－ＥＶ処理した細胞におけるＦＡＮＣＡｍＲＮＡ発現の６０倍の増加が示された。（図１４Ｂ）

別の非限定的な例では、造血細胞は、ＦＡ患者に由来する。ＦＡ特異的変異を有する造血幹細胞及び前駆細胞、またはＦＡ－Ａ患者からの初代ＣＤ３４＋細胞に、カーゴを搭載したＭｋＥＶをエクスビボでトランスフェクトする。ＦＡＮＣＡタンパク質の発現及び機能に関する遺伝子修正及び修復の成功は、ｑＰＣＲ、ウェスタンブロッティング、マイトマイシンＣ耐性の増加、及び／またはＦＡＮＣＤ機能の回復によって示される。

別の非限定的な例では、カーゴは、野生型ＦＡＮＣＡタンパク質をコードするｐＤＮＡである。ＦＡ特異的変異を有する造血幹細胞及び前駆細胞、またはＦＡ－Ａ患者からの初代ＣＤ３４＋細胞に、カーゴを搭載したＭｋＥＶをエクスビボでトランスフェクトし、これらのＭｋＥＶ曝露ＣＤ３４＋細胞を免疫不全マウス、例えば、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）免疫不全Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＮＳＧ）マウスに静脈内注射する。ＦＡＮＣＡタンパク質の発現及び機能に関する遺伝子修正及び修復の成功は、例えば、ウェスタンブロッティング、マイトマイシンＣ耐性の増加、及び／またはＦＡＮＣＤ機能の回復、生着増加、末梢血に対する寄与、及び／または増殖優位性によって示される。

別の非限定的な例では、カーゴは、ＦＡＮＣＡ変異を修正するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９とガイドＲＮＡとで構成される遺伝子編集複合体である。本実施例では、ＦＡ－Ａ患者由来の造血細胞に、カーゴを搭載したＭｋＥＶをインビトロでトランスフェクトした。ＦＡＮＣＡ発現に関する遺伝子編集及び修復の成功は、未処理細胞またはモックＥＶで処理した細胞と比較した場合の、トランスフェクトされた細胞における増殖優位性という機能的利益によって証明された（図１５）。野生型ＦＡＮＣＡの修復を伴う細胞のこの増殖優位性は、文献上かなり十分に報告されている現象である（Ｒｉｏ，Ｐ．ｅｔａｌ．ＮａｔＭｅｄ２５，１３９６－１４０１（２０１９）、Ｒｏｍａｎ－Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｆ．Ｊ．ｅｔａｌ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ２５，６０７－６２１．ｅ７（２０１９）、Ｎｉｃｏｌｅｔｔｉ，Ｅ．ｅｔａｌ．ＡｎｎＨｅｍａｔｏｌ９９，９１３－９２４（２０２０）、及びＲｉｏ，Ｐ．ｅｔａｌ．Ｂｌｏｏｄ１３０，１５３５－１５４２（２０１７）。別の非限定的な例では、ＦＡ特異的変異を有する造血幹細胞及び前駆細胞、またはＦＡ－Ａ患者由来細胞に、カーゴを搭載したＭｋＥＶをエクスビボでトランスフェクトする。遺伝子編集の成功は、機能の次世代シーケンシング及び機能性ＦＡＮＣＡタンパク質の修復によって決定される。ＭｋＥＶ曝露ＣＤ３４＋細胞は、その後、細胞培養で維持され、次世代シーケンシングによって、首尾よく編集された細胞の増殖優位性及び正常なインビトロでの分化パターンを明らかにするために、インデルについて再度評価される。

別の非限定的な例では、カーゴは、ＦＡＮＣＡ変異を修正するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９とガイドＲＮＡとを含む遺伝子編集複合体である。ＦＡ特異的変異を有する造血幹細胞及び前駆細胞、またはＦＡ－Ａ患者からの初代ＣＤ３４＋細胞に、カーゴを搭載したＭｋＥＶをエクスビボでトランスフェクトし、これらのＭｋＥＶ曝露ＣＤ３４＋細胞を免疫不全マウス、例えば、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）免疫不全Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＮＳＧ）マウスに静脈内注射する。インデルは、ＮＧＳによる生着の前後に測定される。生着、及び末梢血に対する寄与、及び増殖優位性、及び／またはマイトマイシンＣに対する耐性の変化を測定する。

別の非限定的な例では、カーゴは、ＦＡＮＣＡ変異を修正するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９とガイドＲＮＡとを含む遺伝子編集複合体である。ヒト骨髄異種移植マウスモデルを、造血幹細胞及び前駆細胞、ＦＡ特異的変異を有する造血幹細胞及び前駆細胞、またはＦＡ－Ａ患者からの初代ＣＤ３４＋細胞を用いて作製する。カーゴ搭載ＭｋＥＶをヒト骨髄異種移植マウスに静脈内注射する。注射されたＭｋＥＶは骨髄にホーミングし、それらが持つカーゴを造血幹細胞に送達し、ＦＡＮＣＡ遺伝子を首尾よく編集する。ＦＡＮＣＡタンパク質の発現及び機能に関する遺伝子編集及び修復の成功は、ウェスタンブロッティング、マイトマイシンＣ耐性の増加、及び／またはＦＡＮＣＤ機能の回復によって示される。インデルは、ＮＧＳによる生着の前後に測定される。生着、及び末梢血に対する寄与の変化を測定する。

均等物
本開示は、その特定の実施形態に関連して記載したが、さらなる修正が可能であり、本出願は、一般に、本開示の原理に従って、本開示の任意の変型、使用、または適応を網羅するものであり、本開示が属する技術分野において知られているか、または慣行に含まれるような本開示から発展させたもの、及び前述される本質的な特徴に適用され得るもの、ならびに添付の特許請求の範囲に従った本開示から発展させたものを含むことを理解されたい。

当業者であれば、単なる日常的な実験を使用して、本明細書に具体的に記載される特定の実施形態の多数の均等物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲の範囲に包含されることが意図される。

参照による援用
本明細書で参照される全ての特許及び刊行物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書で考察される刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示に対してのみ提供される。本明細書におけるいずれの内容も、本開示が先行開示によりそのような刊行物に先行する資格がないことを認めるものと解釈されるべきではない。

本明細書で使用される場合、全ての見出しは単に本明細書の構成のためのものであり、いかなる様式においても開示を制限することを意図したものではない。いかなる個々のセクションの内容も、全てのセクションに等しく適用可能であり得る。

Claims

細胞を修飾するための方法であって、
（ａ）前記細胞を、内腔を取り囲む脂質二重層膜を含む複数の実質的に精製された巨核球由来細胞外小胞（ＭｋＥＶ）を含む組成物と接触させることであって、
前記ＭｋＥＶ内腔は、前記細胞の修飾に適した薬剤を含むカーゴを含み、及び／または前記ＭｋＥＶの表面と会合している前記細胞の修飾に適した薬剤を含むカーゴを含み、
前記脂質二重層膜は、前記脂質二重層膜と会合した、または、前記脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、前記接触させること、及び
（ｂ）前記細胞を修飾して、細胞内で機能性ファンコニ貧血（ＦＡ）関連遺伝子を提供し、及び／または変異した機能性ＦＡ関連遺伝子を修復すること、
を含む前記方法。
前記脂質二重層膜は、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、ＣＤ５４、及びＧＰＶＩから選択される１つ以上のタンパク質を含む、及び／または前記脂質二重層膜は、ホスファチジルセリンを含む、請求項１に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む、請求項２に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む、請求項２または３に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む、請求項２～４のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径のものである、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、約３０ｎｍ～約１００ｎｍの範囲の直径のものである、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径のものである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径のものである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの直径のものである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、自己由来ＤＮＡを含まない請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、
ａ．巨核球、及び／または
ｂ．血小板、
を実質的に含まない、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、造血幹細胞にホーミングするのに適している、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、骨髄にホーミングするのに適している、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、リンパ系細胞にホーミングするのに適している、請求項１４に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、制御性Ｔ細胞にホーミングするのに適している、請求項１５に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、ヒト多能性幹細胞由来であり、任意に、前記ヒト多能性幹細胞は、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
前記初代ＣＤ３４＋造血幹細胞が、末梢血または臍帯血を供給源とする、請求項１７に記載の方法。
前記末梢血が、顆粒球コロニー刺激因子動員成体末梢血（ｍＰＢ）である、請求項１８に記載の方法。
前記ヒト多能性幹細胞が、胚性幹細胞（ＥＳＣ）である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）である、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞を、エリスロポエチンを加えずに生成する巨核球から単離する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞を、添加したトロンボポエチンの存在下で生成する巨核球から単離する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
前記組成物が、薬学的に許容される賦形剤または担体をさらに含む医薬組成物である、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
前記カーゴが前記内腔内にあり、前記カーゴは、前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合している、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
前記細胞の修飾に適した前記カーゴ及び／または前記薬剤が、１つ以上の治療薬を含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、小分子治療薬、または生物製剤治療薬である、請求項２６に記載の方法。
前記生物製剤治療薬は、遺伝子治療に使用される、請求項２７に記載の方法。
前記生物製剤治療薬は、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする、請求項２８に記載の方法。
前記機能性タンパク質または前記組換えタンパク質は、野生型タンパク質、融合タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチド、抗体または抗体フラグメントを含む、請求項２９に記載の方法。
前記治療薬は、核酸治療薬である、請求項２６に記載の方法。
前記核酸治療薬は、野生型機能性ＦＡ遺伝子を発現する、及び／または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体を含む、請求項３１に記載の方法。
前記核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはＤＮＡフラグメントから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される、請求項３１に記載の方法。
前記１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物は、ベクター内に組み込まれる、請求項３３に記載の方法。
前記ベクターは、ヌクレオチド配列に機能的に連結されている発現制御配列を含む発現ベクターである、請求項３４に記載の方法。
前記ベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ派生物、コスミド、またはウイルスベクターである、請求項３４に記載の方法。
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、サイトメガロウイルスベクター、またはキメラウイルスベクターを含む、請求項３６に記載の方法。
前記核酸治療薬は、遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質、及び／または関連エレメントをコードする、請求項３１～３７のいずれか１項に記載の方法。
前記遺伝子編集タンパク質は、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回分配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項３８に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ｘＣａｓ９、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１４、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、クラス１Ｃａｓタンパク質、クラス２Ｃａｓタンパク質、ＭＡＤ７、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項３９に記載の方法。
前記治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である、請求項２６～４０のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）を含む、ＦＡ関連遺伝子またはそのフラグメントを含む、請求項２６に記載の方法。
前記治療薬は、前記ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増大または回復させる、請求項２６に記載の方法。
前記ＦＡ関連タンパク質は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）を含む、請求項４４に記載の方法。
ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法であって、
（ａ）実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を得ること；
（ｂ）前記実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を、治療薬と共に培養して、前記治療薬を、前記巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させること、及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合させて、送達能を有する治療薬を生成することであって、
前記治療薬は、ＦＡを治療することができる、前記培養すること；及び
（ｃ）患者に前記送達能を有する治療薬を投与すること、または前記送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させること、及び前記接触した生体細胞を患者に投与すること、
を含み、
前記巨核球由来細胞外小胞は、実質的に精製されており、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、
前記巨核球由来細胞外小胞内腔は、前記治療薬を含み、及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の前記表面と会合しており；
前記脂質二重層膜は、前記脂質二重層膜と会合した、または前記脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、前記方法。
前記脂質二重層膜は、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、ＣＤ５４、及びＧＰＶＩから選択される１つ以上のタンパク質を含み、及び／または前記脂質二重層膜は、ホスファチジルセリンを含む、請求項４５に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む、請求項４６に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満、または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む、請求項４６または請求項４７に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項４５～４９のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約３０ｎｍ～約１００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項４５～４９のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、実質的に約１００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項４５～５０のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径を有する、請求項４５～５０のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの直径を有する、請求項４５～５０のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、自己由来ＤＮＡを実質的に含まない、請求項４５～５１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、
（ａ）巨核球、及び／または
（ｂ）血小板、
を実質的に含まない、請求項４５～５１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、インビボ及び／またはインビトロで、造血幹細胞にホーミングするのに適している、請求項４５～５６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、インビボ及び／またはインビトロで、骨髄にホーミングするのに適している、請求項４５～５７のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、インビボ及び／またはインビトロで、リンパ系細胞にホーミングするのに適している、請求項５８に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、インビボ及び／またはインビトロで、制御性Ｔ細胞にホーミングするのに適している、請求項５９に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記内腔に前記治療薬を搭載すること、及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合する前記治療薬を搭載することに適している、請求項４５～６０のいずれか１項に記載の方法。
前記培養を、インビボで行う、請求項４５に記載の方法。
前記培養を、エクスビボで行う、請求項４５に記載の方法。
前記方法は、患者から生体細胞を取得することをさらに含む、請求項６３に記載の方法。
前記送達能を有する治療薬の前記生体細胞への前記接触は、前記送達能を有する治療薬を前記生体細胞と共培養することを含む、請求項６３または６４に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記患者由来のものである、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記患者と同種異系のものである、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記患者と異種のものである、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、小分子治療薬である、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、生物製剤治療薬である、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記生物製剤治療薬は、遺伝子治療に使用される、請求項７０に記載の方法。
前記生物製剤治療薬は、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする、請求項７０に記載の方法。
前記機能性タンパク質または前記組換えタンパク質は、野生型タンパク質、融合タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチド、抗体または抗体フラグメントを含む、請求項７２に記載の方法。
前記治療薬は、核酸治療薬である、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の方法。
前記核酸治療薬は、前記患者において欠損している野生型機能性ＦＡ遺伝子を発現し、及び／または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体を含む、請求項７４に記載の方法。
前記核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、プラスミドまたはＤＮＡフラグメントから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される、請求項７４に記載の方法。
前記１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物は、ベクター内に組み込まれる、請求項７６に記載の方法。
前記ベクターは、ヌクレオチド配列に機能的に連結されている発現制御配列を含む発現ベクターである、請求項７７に記載の方法。
前記ベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ派生物、コスミド、またはウイルスベクターを含む、請求項７７に記載の方法。
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、またはサイトメガロウイルスベクター、またはキメラウイルスベクターを含む、請求項７９に記載の方法。
前記核酸治療薬は、遺伝子編集タンパク質をコードする、及び／または遺伝子編集機能のための関連エレメントをコードする、請求項７４～８０のいずれか１項に記載の方法。
前記遺伝子編集タンパク質は、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回分配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項８１に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ｘＣａｓ９、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１４、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、クラス１Ｃａｓタンパク質、クラス２Ｃａｓタンパク質、ＭＡＤ７、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項８２に記載の方法。
前記治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である、請求項４５～８３のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、前記ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増大または回復させる、請求項４５に記載の方法。
前記ＦＡ関連タンパク質は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）を含む、請求項８５に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、ヒト多能性幹細胞由来であり、任意に、前記ヒト多能性幹細胞は、初代ＣＤ３４＋造血幹細胞である、請求項４５～８６のいずれか１項に記載の方法。
前記初代ＣＤ３４＋造血幹細胞が、末梢血または臍帯血を供給源とする、請求項８７に記載の方法。
前記末梢血が、顆粒球コロニー刺激因子動員成体末梢血（ｍＰＢ）である、請求項８８に記載の方法。
前記ヒト多能性幹細胞が、胚性幹細胞（ＥＳＣ）である、請求項４５～８９のいずれか１項に記載の方法。
前記ヒト多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ）である、請求項４５～８９のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞を、エリスロポエチンを加えずに生成する巨核球から単離する、請求項４５～９１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞を、添加したトロンボポエチンの存在下で生成する巨核球から単離する、請求項４５～９２のいずれか１項に記載の方法。
前記培養することは、超音波処理、サポニン透過処理、機械的振動、低張透析、多孔質膜を介した押し出し、コレステロール抱合、電流印加、及びそれらの組み合わせのうちの１つ以上を含む、請求項４５～６８のいずれか１項に記載の方法。
前記培養することは、エレクトロポレーションすること、形質転換すること、トランスフェクトすること、及びマイクロインジェクトすることのうちの１つ以上を含む、請求項４５～９４のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記患者の細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項４５～９５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記ステップ（ｃ）の前記接触させた生体細胞の細胞表面受容体に結合する、請求項４５～９６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記患者の細胞の前記細胞外膜と融合する、請求項４５～９７のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記ステップ（ｃ）の前記生体細胞の前記細胞外膜と融合する、請求項４５～９８のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記患者の細胞によってエンドサイトーシスされる、請求項４５～９９のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記ステップ（ｃ）の前記生体細胞によってエンドサイトーシスされる、請求項４５～９８のいずれか１項に記載の方法。
ファンコニ貧血（ＦＡ）を治療する方法であって、
ａ．実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を得ることであって；前記巨核球由来細胞外小胞は、内腔を囲む脂質二重層膜を含み、
前記脂質二重層膜は、前記脂質二重層膜と会合した、または、前記脂質二重層膜に埋設した１つ以上のタンパク質を含む、前記得ること；
ｂ．前記実質的に精製された複数の巨核球由来細胞外小胞を、治療薬と共に培養して、前記治療薬を、前記巨核球由来細胞外小胞の内腔に定着させること、及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合して、送達能を有する治療薬を生成することであって、
前記治療薬は、前記ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増加もしくは回復させることができる、前記培養すること、
ｃ．患者に前記送達能を有する治療薬を投与するか、もしくは前記送達能を有する治療薬をインビトロで生体細胞と接触させて、前記接触させた生体細胞を患者に投与し、それにより、前記患者におけるＦＡ関連遺伝子発現を、ＦＡに罹患していない患者の正常レベルに達するまで回復または増加させること、
を含む、前記方法。
前記脂質二重層膜が、ＣＤ１８、ＣＤ４３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ４１、ＣＤ６１、ＣＤ２１、ＣＤ５１、ＣＬＥＣ－２、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７ａ）、ＣＤ６３、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ９、ＣＤ３１、ＣＤ４７、ＣＤ１４７、ＣＤ３２ａ、ＣＤ５４、及びＧＰＶＩから選択される１つ以上のタンパク質を含む、及び／または前記脂質二重層膜は、ホスファチジルセリンを含む、請求項１０２に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６２Ｐを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ４１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ６１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ１４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３１を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ４７を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ３２ａを含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約４０％超、または約５０％超、または約６０％超、または約７０％超、または約８０％超、または約９０％超、または約９５％超が、ＣＤ９を含む脂質二重層膜を含み、及び／または
前記巨核球由来細胞外小胞の約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ＣＤ６３を含む脂質二重層膜を含む、請求項１０３に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約７０％未満、または約６０％未満、約５０％未満、または約４０％未満、または約３０％未満、または約２０％未満、または約１０％未満、または約５％未満または約１％未満が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）を含む脂質二重層膜を含む、請求項１０３または１０４に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約２０％未満、または約１５％未満、または約１０％未満、または約５％未満が、ＬＡＭＰ－１（ＣＤ１０７Ａ）を含む脂質二重層膜を含む、請求項１０３～１０５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの範囲の直径のものである、請求項１０３～１０６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、約３０ｎｍ～約１００ｎｍの範囲の直径のものである、請求項１０３～１０６のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの範囲の直径のものである、請求項１０３～１０７のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約６００ｎｍの直径のものである、請求項１０３～１０７のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞の約９０％以上、または約９５％以上、または約９７％以上、または約９９％以上が、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの直径のものである、請求項１０３～１０５のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、実質的に、自己ＤＮＡを含まない請求項１０２～１１１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、
ａ．巨核球、及び／または
ｂ．血小板、
を実質的に含まない、請求項１０２～１１１のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、造血幹細胞にホーミングするのに適している、請求項１０２～１１３のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、骨髄にホーミングするのに適している、請求項１０２～１１３のいずれか１項に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、リンパ系細胞にホーミングするのに適している、請求項１１５に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞が、インビボ及び／またはインビトロで、制御性Ｔ細胞にホーミングするのに適している、請求項１１６に記載の方法。
前記巨核球由来細胞外小胞は、前記内腔に前記治療薬を搭載すること、及び／または前記巨核球由来細胞外小胞の表面と会合する前記治療薬を搭載することに適している、請求項１０２～１１７のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、小分子治療薬である、請求項１０２～１１８のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、生物製剤治療薬である、請求項１０２～１１８のいずれか１項に記載の方法。
前記生物製剤治療薬は、遺伝子治療に使用される、請求項１２０に記載の方法。
前記生物製剤治療薬は、機能性タンパク質または組換えタンパク質をコードする、請求項１２１に記載の方法。
前記機能性タンパク質または前記組換えタンパク質は、野生型タンパク質、融合タンパク質、サイトカイン、抗原、及びペプチド、抗体または抗体フラグメントを含む、請求項１２２に記載の方法。
前記治療薬は、核酸治療薬である、請求項１０２～１１８のいずれか１項に記載の方法。
前記核酸治療薬は、前記患者において欠損している野生型機能性ＦＡ遺伝子を発現し、及び／または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得る遺伝子編集タンパク質をコードする核酸、または機能性ＦＡ関連遺伝子もしくはそのタンパク質産物を作成し得るリボ核タンパク質遺伝子編集複合体を含む、請求項１２４に記載の方法。
前記核酸治療薬は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、調節ＲＮＡ、ノンコーディングＲＮＡ及びコーディングＲＮＡ、直鎖ＤＮＡ、プラスミドまたはＤＮＡフラグメントから選択される１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物から選択される、請求項１２４に記載の方法。
前記１つ以上の非自己核酸構築物及び／または組換え核酸構築物は、ベクター内に組み込まれる、請求項１２６に記載の方法。
前記ベクターは、ヌクレオチド配列に機能的に連結されている発現制御配列を含む発現ベクターである、請求項１２７に記載の方法。
前記ベクターは、プラスミド、ファージミド、ファージ派生物、コスミド、またはウイルスベクターである、請求項１２７に記載の方法。
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、またはサイトメガロウイルスベクター、またはキメラウイルスベクターを含む、請求項１２９に記載の方法。
前記核酸治療薬が、遺伝子編集機能のための遺伝子編集タンパク質、及び／または関連エレメントをコードする、請求項１０２～１１８のいずれか１項に記載の方法。
前記遺伝子編集タンパク質は、ジンクフィンガー（ＺＦ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、メガヌクレアーゼ、及びクラスター化して規則的な配置の短い回分配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質から選択される、請求項１３１に記載の方法。
前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、Ｃａｓ９、ｘＣａｓ９、Ｃａｓ１２ａ（Ｃｐｆ１）、Ｃａｓ１３ａ、Ｃａｓ１４、ＣａｓＸ、ＣａｓＹ、クラス１Ｃａｓタンパク質、クラス２Ｃａｓタンパク質、ＭＡＤ７、及びそれらのｇＲＮＡ複合体から選択される、請求項１３２に記載の方法。
前記治療薬は、ワクチン及び／または免疫原性抗原である、請求項１０２～１３３のいずれか１項に記載の方法。
前記治療薬は、前記ＦＡ関連遺伝子の発現及び／または１つ以上のＦＡ関連タンパク質のレベル及び／または機能を増大または回復させる、請求項１３４に記載の方法。
前記ＦＡ関連タンパク質は、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ１（ＢＲＣＡ２）、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＪ（ＢＲＩＰ１）、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦＡＮＣＮ（ＰＡＬＢ２）、ＦＡＮＣＯ（ＲＡＤ５１Ｃ）、ＦＡＮＣＰ（ＳＬＸ４）、ＦＡＮＣＱ（ＥＲＣＣ４）、ＦＡＮＣＲ（Ｒａｄ５１）、ＦＡＮＣＳ（ＢＲＣＡ１）、ＦＡＮＣＴ（ＵＢＥ２Ｔ）、ＦＡＮＣＵ（ＸＲＣＣ２）、ＦＡＮＣＶ（ＲＥＶ７）及びＦＡＮＣＷ（ＲＦＷＤ３）を含む、請求項１３５に記載の方法。
前記治療することは、前記患者の、白血球数、好中球数、網赤血球数、血小板数、及び赤血球数、骨髄、または正常細胞の産生のうちの１つ以上の欠乏を、低減、改善または消失させる、請求項４５～１３６のいずれか１項に記載の方法。
前記治療することは、前記患者が、頭痛、めまい、疲労、息切れ、貧血、血小板減少症、好中球減少症、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、腎臓関連疾患及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のうちの１つ以上を発症する可能性を、低減、改善または消失させる、請求項４５～１３７のいずれか１項に記載の方法。
前記治療することにより、血液及び／または骨髄移植、アンドロゲン療法、合成増殖因子療法、化学療法及び／または手術の必要性がなくなる、請求項４５～１３８のいずれか１項に記載の方法。
前記治療することは、染色体切断検査、全末梢血計算、マイトマイシンＣ耐性検査、末梢血リンパ球の細胞周期解析、及び変異解析のうちの１つ以上を使用して検出されるか、または検出可能であるように、ＦＡを低減、改善または消失させる、請求項４５～１３９のいずれか１項に記載の方法。