JP2024517644A - カチオン性脂質及びその組成物 - Google Patents

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Abstract

本明細書では、式Ｉ又は式Ｉａを有する脂質、TIFF2024517644000109.tif46128及びその薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｘ１、Ｘ２、及びｎは、それぞれ、式Ｉ及び式Ｉａの各々について本明細書で定義されるとおりである。本明細書では、式Ｉ又はＩａを有する脂質及びカプシド不含非ウイルスベクター（例えば、ｃｅＤＮＡ）を含む、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）組成物もまた提供される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一態様では、これらのＬＮＰは、カプシド不含非ウイルスＤＮＡベクターを目的の標的部位（例えば、細胞、組織、器官等）に送達するように使用され得る。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月２０日に出願された米国特許仮出願第６３／１７６，９４３号及び２０２１年７月２日に出願された米国特許仮出願第６３／２１７，８６９号に対する優先権の利益を主張し、それらの各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
遺伝子療法は、異常な遺伝子発現プロファイルによって引き起こされる遺伝性障害又は後天性疾患のいずれかに罹患している患者についての臨床成績を向上することを目的とする。疾患を治療するための薬剤として治療用核酸を患者の細胞に送達する様々な種類の遺伝子療法がこれまでに開発されてきた。
患者の標的細胞への修復遺伝子の導入及び発現は、操作されたウイルス遺伝子送達ベクター、及び潜在的にプラスミド、ミニ遺伝子、オリゴヌクレオチド、ミニサークル、又は様々な閉端ＤＮＡの使用を含む、多くの方法を介して実行され得る。利用可能な多くのウイルス由来ベクター（例えば、組換えレトロウイルス、組換えレンチウイルス、組換えアデノウイルス等）の中で、組換えアデノ随伴ウイルス（recombinant adeno-associated virus、ｒＡＡＶ）は、遺伝子療法において汎用的、かつ比較的安全なベクターとして受け入れられている。しかしながら、アデノ随伴ベクター等のウイルスベクターは、免疫原性が高く、特に再投与に関して有効性を損なう可能性のある体液性免疫及び細胞性免疫を誘発し得る。
非ウイルス遺伝子送達は、ウイルス形質導入に関連する特定の不利な点、特にベクター粒子を形成するウイルス構造タンパク質に対する体液性及び細胞性免疫応答、並びに任意のｄｅ ｎｏｖｏウイルス遺伝子発現に起因する不利な点を回避する。非ウイルス送達技術の利点の中には、担体としての脂質ナノ粒子（lipid nanoparticle、ＬＮＰ）の使用がある。ＬＮＰは、ウイルス遺伝子治療に関連する顕著な毒性をもたらす体液性及び細胞性免疫応答を回避することができるＬＮＰ成分としてカチオン性脂質を設計することを可能にする独自の機会を提供する。
カチオン性脂質は、概して、カチオン性アミン部分、典型的には１つ又は２つの脂肪族炭化水素鎖（すなわち、飽和又は不飽和であり得る水性尾部）を有する疎水性ドメイン、及びカチオン性アミン部分と疎水性ドメインとを連結するリンカー又は生分解性基から構成される。カチオン性アミン部分及びポリアニオン核酸は静電的に相互作用して、正に帯電したリポソーム又は脂質膜構造を形成する。したがって、細胞への取り込みが促進され、核酸が細胞に送達される。
いくつかのカチオン性脂質（例えば、ＤＯＤＡＰ及びＤＯＴＡＰ）は、疎水性ドメイン中に２つ以上の構造的に同一の疎水性尾部を有する。いくつかの他のカチオン性脂質は、互いに構造的に異なる２つ以上の疎水性尾部を有する。ＣＬｉｎＤＭＡなどの当技術分野において既知の非対称カチオン性脂質は、典型的には、以下のいずれかの点で非対称である：（ｉ）疎水性尾部が、異なる化学部分及び官能基を組み込むことによって構造的に異なる（例えば、疎水性尾部のうちの１つにコレステロールを組み込むＣＬｉｎＤＭＡ）；又は（ｉｉ）疎水性尾部が、長さが異なる。対称性カチオン性脂質は、合成の課題が少ないので、通常好まれる。
ＣＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎＤＭＡ（ＤＯＤＡＰ）、及びＤＯＴＡＰなどのいくつかの広く使用されているカチオン性脂質は、リボ核酸（ｓｉＲＮＡ又はｍＲＮＡ）送達のために使用されてきたが、より高い用量での毒性とともに最適以下の送達効率に悩まされている。現在のカチオン性脂質の欠点を考慮して、毒性の低減とともに効力の増強を示すだけでなく、薬物動態並びに細胞取り込み及び脂質担体からの核酸放出等の細胞内動態を改善する脂質足場を提供する必要がある。
本開示において提供されるカチオン性脂質は、生分解性基を含有する１つの疎水性尾部と、生分解性基を含有しない疎水性尾部と、を含む。本開示に提供される例示的な脂質のいくつかは、末端部で分岐して２つの分岐脂肪族炭化水素鎖を形成する疎水性尾部と、分岐しない疎水性尾部と、を含む。本発明者らは、本開示のカチオン性脂質が満足のいく収率及び純度で合成され得ることを見出した。本発明者らはまた、本開示のカチオン性脂質が、治療用核酸を担持するための脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）として製剤化された場合、核酸内の導入遺伝子インサートの持続性の優れた安定したインビボ発現レベルを示し、インビボで忍容性が良好であることを見出した。本開示の例示的なカチオン性脂質の多くは、治療用核酸を担持するＬＮＰとして製剤化された場合、上記の参照脂質対応物よりも優れたインビボ発現及びインビボ忍容性を示すことが見出された。更に、理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、分岐疎水性尾部における末端分岐脂肪族炭化水素鎖の長さ（すなわち、炭素原子の数）と非分岐疎水性尾部の長さとの間の微妙な相互作用が、とりわけＬＮＰ組成物の優れた封入効率を達成するために重要であると考える。
したがって、一態様では、本明細書では、式Ｉ又はＩａで表される脂質、
Figure 2024517644000002
 並びにその薬学的に許容される塩が提供され、式中、Ｒ’、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｘ１、Ｘ２、及びｎは、それぞれ、式Ｉ又はＩａの各々について本明細書で定義されるとおりである。
また、本明細書に記載の脂質、又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物も提供される。
本開示の別の態様は、本明細書に記載の脂質、又はその薬学的に許容される塩、及び核酸を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む組成物に関する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、核酸は、ＬＮＰに封入されている。特定の実施形態では、核酸は、閉端ＤＮＡ（ｃｅＤＮＡ）である。
本開示の更なる態様は、対象における遺伝性障害を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかによる有効量の薬学的組成物を対象に投与することを含む。
上記に簡単に要約され、以下により詳細に論じられる本開示の実施形態は、添付の図面に描かれた本開示の例示的な実施形態を参照することによって理解することができる。しかしながら、添付の図面は、本開示の典型的な実施形態のみを示し、したがって、本開示は他の等しく有効な実施形態を認めることができるため、範囲を限定するものとみなされるべきではない。
ＬＮＰ１、ＬＮＰ２、及びＬＮＰ３中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。ＬＮＰ１は、参照脂質Ａを用いて製剤化され、陽性対照として使用される脂質ナノ粒子であり、一方、ＬＮＰ２及びＬＮＰ３は、表４に記載の脂質２０を用いて製剤化された脂質ナノ粒子である。ＰＢＳを陰性対照として使用した。 上記のようにＬＮＰ１、ＬＮＰ２、ＬＮＰ３及びＰＢＳ中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡを投与されたマウスにおける１日目の体重変化を示すグラフである。 ＬＮＰ４及びＬＮＰ５中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。ＬＮＰ４は、参照脂質Ａ及びＧａｌＮＡｃ４を用いて製剤化され、陽性対照として使用される脂質ナノ粒子であり、一方、ＬＮＰ５は、表５に記載の脂質２０及びＧａｌＮＡｃ４を用いて製剤化された脂質ナノ粒子である。ＰＢＳを陰性対照として使用した。 上記のようにＬＮＰ４、ＬＮＰ５及びＰＢＳ中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｄＤＮＡを投与されたマウスにおける１日目の体重変化を示すグラフである。 ＰＢＳを陰性対照として用いて、表６に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。 ＰＢＳを陰性対照として用いて、表６に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。 表６に記載のＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目及び７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。 表６に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後１日目のマウスにおける体重変化を示すグラフである。 ＰＢＳを陰性対照として用いて、表７に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目に蛍光によって測定されたマウスにおけるルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。 ＰＢＳを陰性対照として用いて、表７に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。 表７に記載のＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目及び７日目のマウスにおけるルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。 表７に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後１日目のマウスにおける体重変化を示すグラフである。
本開示は、非ウイルスベクター（例えば、閉鎖終端ＤＮＡ）等の治療用核酸（ＴＮＡ）を送達するための脂質ベースのプラットフォームを提供し、これは、細胞に取り込まれることができ、高レベルの発現を維持することができる。例えば、ウイルスベクターベースの遺伝子療法に関連する免疫原性は、既存のバックグラウンド免疫のために治療できる患者の数を制限し、かつ各患者の有効レベルまで滴定するための、又は長期にわたって効果を維持するため患者の再投与を妨げてきた。更に、他の核酸モダリティは、免疫応答のカスケードを誘発する生来のＤＮＡ又はＲＮＡセンシングメカニズムのために免疫原性に大きく悩まされている。既存の免疫が欠如しているため、本明細書に記載するＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、必要に応じて、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、合成ベクター又はｃｅＤＮＡ等のＴＮＡの追加用量を可能にし、組織成長に応じて後続の投与を必要とし得る小児集団を含める患者アクセスを更に拡大させる。更に、特に、１つ以上の三級アミノ基を含む脂質組成物、及びジスルフィド結合を含むＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、ＴＮＡ（例えば、ｃｅＤＮＡ）のより効率的な送達、より良好な忍容性及び改善された安全性プロファイルを提供することが本開示の発見である。本明細書中に記載するＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、ウイルスカプシド内の空間によって課されるパッケージングの制約がないため、理論的には、ＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の唯一のサイズ制限は、宿主細胞の発現（例えば、ＤＮＡ複製、又はＲＮＡ翻訳）効率に存在する。
特に希少疾患における療法の開発における最大のハードルの１つは、多数の個々の病態である。地球上で約３億５０００万人が希少障害を抱えて生活しており、国立衛生研究所は、希少障害を、診断されたヒトが２０万人未満の障害又は病態と定義している。これらの希少障害の約８０％は遺伝的起源であり、それらの約９５％はＦＤＡによって承認された治療（ｒａｒｅｄｉｓｅａｓｅｓ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｐａｇｅｓ／３１／ｆａｑｓ－ａｂｏｕｔ－ｒａｒｅ－ｄｉｓｅａｓｅｓ）を有しない。本明細書に記載されるＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の利点の中には、ＴＮＡの特定のモダリティで治療することができる複数の疾患、特に多くの遺伝性障害又は疾患の治療の現在の状態を有意義に変更することができる希少な単一遺伝子疾患に迅速に適応することができるアプローチを提供することにある。
Ｉ．定義
「アルキル」という用語は、飽和、直鎖（すなわち、非分岐）又は分岐鎖炭化水素の一価ラジカルを指す。アルキルが非分岐、例えばＣ１～Ｃ１６非分岐アルキルであることが具体的に記載されていない限り、本明細書で使用される「アルキル」という用語は、分岐及び非分岐アルキル基の両方に適用される。例示的なアルキル基としては、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ７～Ｃ１６アルキル、Ｃ８～Ｃ１４アルキル、Ｃ２～Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１２非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１０非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ４アルキル、Ｃ１～Ｃ３アルキル、Ｃ１～Ｃ２アルキル、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ８非分岐アルキル、Ｃ９非分岐アルキル、Ｃ１０非分岐アルキル、Ｃ１１非分岐アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１２）、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２－メチル－１－ブチル、３－メチル－２－ブチル、２－メチル－１－ペンチル、３－メチル－１－ペンチル、４－メチル－１－ペンチル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、２，２－ジメチル－１－ブチル、３，３－ジメチル－１－ブチル、２－エチル－１－ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デカニル、ウンデカニル、ドデカニル、トリデカニル、テトラデカニル、ペンタデカニル、ヘキサデカニル、ヘプタデカニル、オクタデカニル、ノナデカニル、エイコサニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキレン」という用語は、飽和、直鎖、又は分枝鎖炭化水素の二価ラジカルを指す。アルキレンが非分岐、例えばＣ１～Ｃ１２非分岐アルキレンであることが具体的に記載されていない限り、本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、分岐及び非分岐アルキレン基の両方に適用される。例示的なアルキレン基としては、Ｃ１～－Ｃ１２アルキレン、Ｃ１～Ｃ９アルキレン、Ｃ１～Ｃ８アルキレン、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ４アルキレン、Ｃ２～Ｃ８アルキレン、Ｃ３～Ｃ７アルキレン、Ｃ５～Ｃ７アルキレン、Ｃ７アルキレン、Ｃ５アルキレン、及び上記の例示的なアルキル基のいずれかに対応するアルケニレンが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルケニル」という用語は、１つ以上（例えば、１つ又は２つ）の炭素－炭素二重結合を有する直鎖又は分枝鎖炭化水素の一価ラジカルを指し、アルケニルラジカルは、「シス」及び「トランス」配向、又は別の命名法による、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。アルケニルが非分岐、例えばＣ２～Ｃ１６非分岐アルケニルであることが具体的に記載されていない限り、本明細書で使用される「アルケニル」という用語は、分岐及び非分岐アルケニル基の両方に適用される。例示的なアルケニル基としては、Ｃ２～Ｃ１６非分岐アルケニル、Ｃ７～Ｃ１６アルケニル、Ｃ８～Ｃ１４アルケニル、Ｃ２～Ｃ１４非分岐アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２非分岐アルケニル、Ｃ２～Ｃ１０非分岐アルケニル、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ４アルケニル、Ｃ２～Ｃ３アルケニル、Ｃ８アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ１２アルケニル、及び２個以上の炭素原子を含有する上記の例示的なアルキル基のいずれかに対応するアルケニルが挙げられるが、これらに限定されない。
「アルケニレン」という用語は、１つ以上（例えば、１つ又は２つ）の炭素－炭素二重結合を有する直鎖又は分枝鎖炭化水素の二価ラジカルを指し、アルケニルラジカルは、「シス」及び「トランス」配向、又は別の命名法による、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。アルケニレンが非分岐、例えばＣ２～Ｃ１２非分岐アルキレンであることが具体的に記載されていない限り、本明細書で使用される「アルケニレン」という用語は、分岐及び非分岐アルケニレン基の両方に適用される。例示的なアルケニレン基としては、Ｃ２～Ｃ１２アルケニレン、Ｃ２～Ｃ９アルケニレン、Ｃ２～Ｃ８アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ３～Ｃ７アルケニレン、Ｃ５～Ｃ７アルケニレン、Ｃ２～Ｃ４アルケニレン、Ｃ１～Ｃ８アルキレン、Ｃ２～Ｃ８アルキレン、Ｃ３～Ｃ７アルキレン、Ｃ５～Ｃ７アルキレン、Ｃ７アルキレン、Ｃ５アルキレン、及び２個以上の炭素原子を含有する上記の例示的アルキル基のいずれかに対応するアルケニルが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明のカチオン性脂質の薬学的に許容される有機又は無機の塩を指す。例示的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酸性酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシレート」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモエート（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、及びアンモニウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオン等の別の分子の包含を含み得る。対イオンは、親化合物の電荷を安定化させる任意の有機又は無機部分であり得る。更に、薬学的に許容される塩は、その構造中に２つ以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／又は１つ以上の対イオンを有することができる。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、「約」という用語は、量、時間的持続時間などの測定可能な値を指す場合、開示された方法を実施するのに適切であるように指定の値から±２０％又は±１０％、又は±５％、又は±１％、又は±０．５％、また更により好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味する。
本明細書で使用される場合、「含む（comprise）」、「含む（comprising）」、及び「含む（comprises）」、及び「含む（comprised of）」は、「含む（include）」、「含む（including）」、「含む（includes）」、又は「含有する（contain）」、「含有する（containing）」、「含有する（contains）」という用語と同義であることを意味し、例えば、構成要素に続くものの存在を指定する包括的又は自由形式の用語であり、当該技術分野において既知であるか、又はそこに開示されている、追加の、引用されていない構成要素、特徴、エレメント、メンバー、ステップの存在を除外又は排除しない。
「からなる」という用語は、実施形態の説明において列挙されていないいずれのエレメントも除いた、本明細書に記載される組成物、方法、プロセス、及びそれらのそれぞれの構成要素を指す。
本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という用語は、所与の実施形態に必要なエレメントを指す。この用語は、本発明の実施形態の基本的かつ新規又は機能的な特徴に物質的に影響を及ぼさない追加のエレメントの存在を許容する。
本明細書で使用される場合、「投与」、「投与する」という用語及びその変形は、組成物又は薬剤（例えば、核酸、特にｃｅＤＮＡ）を対象に導入することを指し、１つ以上の組成物又は薬剤の同時で連続的な導入を含む。組成物又は薬剤の対象への導入は、経口、肺、鼻腔内、非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下）、直腸、リンパ管内、腫瘍内、又は局所を含む任意の好適な経路による。投与には、自己管理及び他者による投与が含まれる。投与は、任意の好適な経路によって実行され得る。好適な投与経路は、組成物又は薬剤がその意図された機能を遂行することを可能にする。例えば、好適な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物又は薬剤を対象の静脈に導入することによって投与される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一態様では、「投与」は、治療的投与を指す。
本明細書で使用される場合、「抗治療用核酸免疫応答」、「抗転移ベクター免疫応答」、「治療用核酸に対する免疫応答」、「転移ベクターに対する免疫応答」等の句は、その起源がウイルス性又は非ウイルス性の治療用核酸に対する任意の望ましくない免疫応答を指すことを意味する。本明細書の態様及び実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、望ましくない免疫応答は、ウイルス転移ベクター自体に対する抗原特異的免疫応答である。本明細書の態様及び実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、免疫応答は、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、又は二本鎖ＲＮＡであり得る転移ベクターに特異的である。他の実施形態では、免疫応答は、転移ベクターの配列に特異的である。他の実施形態では、免疫応答は、転移ベクターのＣｐＧ含有量に特異的である。
本明細書で使用される場合、「担体」及び「賦形剤」という用語は、互換的に使用され、任意かつ全ての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝剤、担体溶液、懸濁液、コロイド等を含むことを意味する。薬学的に活性な物質に対するそのような媒質及び薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。補充的活性成分を組成物に組み込むこともできる。「薬学的に許容される」という語句は、宿主に投与された場合に、毒性反応、アレルギー性反応、又は同様の不都合な反応を生じない分子実体及び組成物を指す。
本明細書で使用される場合、「ｃｅＤＮＡ」という用語は、合成又はその他の非ウイルス遺伝子導入のためのカプシド不含閉端直鎖状二本鎖（double stranded、ｄｓ）二重鎖ＤＮＡを指すことを意味する。ｃｅＤＮＡの詳細な説明は、２０１７年３月３日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２０８２８号に記載されており、その全体の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。細胞ベースの方法を使用して様々な逆位末端反復（ＩＴＲ）配列及び構成を含むｃｅＤＮＡの産生のためのある特定の方法は、２０１８年９月７日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０４９９９６号及び２０１８年１２月６日に出願された同ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６４２４２号の実施例１に記載されており、その各々内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。様々なＩＴＲ配列及び構成を含む合成ｃｅＤＮＡベクターの産生のためのある特定の方法は、例えば、２０１９年１月１８日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／１４１２２号に記載されており、その全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、「ｃｅＤＮＡベクター」及び「ｃｅＤＮＡ」という用語は互換的に使用される。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ｃｅＤＮＡは、閉端直鎖状二重鎖（ＣＥＬｉＤ）ＣＥＬｉＤ ＤＮＡである。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ｃｅＤＮＡは、ＤＮＡベースのミニサークルである。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ｃｅＤＮＡは、最小限の免疫学的に定義された遺伝子発現（minimalistic immunological-defined gene expression、ＭＩＤＧＥ）ベクターである。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ｃｅＤＮＡは、ミニストリング（ministring）ＤＮＡである。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ｃｅＤＮＡは、発現カセットの５’及び３’末端にＩＴＲの２つのヘアピン構造を含むダンベル型の直鎖状二重鎖閉端ＤＮＡである。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ｃｅＤＮＡは、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡである。
本明細書で使用される場合、「ｃｅＤＮＡ－バクミド」という用語は、Ｅ．ｃｏｌｉにおいてプラスミドとして伝播することができる分子間二重鎖としてｃｅＤＮＡゲノムを含み、それによりバキュロウイルスのシャトルベクターとして作動し得る、感染性バキュロウイルスゲノムを指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「ｃｅＤＮＡ－バキュロウイルス」という用語は、バキュロウイルスゲノム内の分子間二重鎖としてｃｅＤＮＡゲノムを含むバキュロウイルスを指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「ｃｅＤＮＡ－バキュロウイルス感染昆虫細胞」及び「ｃｅＤＮＡ－ＢＩＩＣ」という用語は、交換可能に使用され、ｃｅＤＮＡ－バキュロウイルスに感染した無脊椎動物宿主細胞（昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）が挙げられるが、これに限定されない）を指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「ｃｅＤＮＡゲノム」という用語は、少なくとも１つの逆位末端反復領域を更に組み込む発現カセットを指すことを意味する。ｃｅＤＮＡゲノムは、１つ以上のスペーサー領域を更に含み得る。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡゲノムは、ＤＮＡの分子間二重鎖ポリヌクレオチドとして、プラスミド又はウイルスゲノムに組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「ＤＮＡ調節配列」、「制御エレメント」、及び「調節エレメント」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、プロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、ターミネーター、タンパク質分解シグナル等の転写及び翻訳制御配列を指すことを意味し、これらは非コード配列（例えば、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ）又はコード配列（例えば、部位特異的修飾ポリペプチド若しくはＣａｓ９／Ｃｓｎ１ポリペプチド）の転写を提供及び／若しくは調節し、かつ／又はコードされたポリペプチドの翻訳を調節する。
本明細書で使用される場合、「外因性」という用語は、その天然源以外の細胞中に存在する物質を指すことを意味する。本明細書で使用される「外因性」という用語は、通常見られず、核酸又はポリペプチドをそのような細胞又は生物に導入することが望まれる、人間の手が関与するプロセスによって細胞又は生物等の生物系に導入された核酸（例えば、ポリペプチドをコードする核酸）又はポリペプチドを指し得る。代替的に、「外因性」とは、それが比較的少量で見られ、細胞又は生物における核酸又はポリペプチドの量を増加させること、例えば、異所性発現又はレベルをもたらすことが望まれる、人間の手が関与するプロセスによって細胞又は生物等の生物系に導入された核酸又はポリペプチドを指し得る。これとは対照的に、本明細書で使用される場合、「内因性」という用語は、生物系又は細胞に対して天然である物質を指す。
本明細書で使用される場合、「発現」という用語は、ＲＮＡ及びタンパク質、また必要に応じて、例えば、転写、転写処理、翻訳及びタンパク質の折りたたみ、修飾及び処理を含むがこれらに限定されない分泌タンパク質の産生に関与する細胞プロセスを指すことを意味する。本明細書で使用される場合、「発現産物」という語句は、遺伝子（例えば、導入遺伝子）から転写されたＲＮＡ、及び遺伝子から転写されたｍＲＮＡの翻訳によって得られたポリペプチドを含む。
本明細書で使用される場合、「発現ベクター」という用語は、ベクター上の転写調節配列に連結された配列からのＲＮＡ又はポリペプチドの発現を指示するベクターを指すことを意味する。発現される配列は、多くの場合、宿主細胞に対して異種であるが、必ずしもそうではない。発現ベクターは、追加のエレメントを含むことができ、例えば、発現ベクターは、２つの複製系を有することができるため、それを２つの生物、例えば発現の場合はヒト細胞、並びにクローニング及び増幅の場合は原核生物宿主で維持することができる。発現ベクターは、組換えベクターであってもよい。
本明細書で使用される場合、「発現カセット」及び「発現ユニット」という用語は、交換可能に使用され、ＤＮＡベクター、例えば、合成ＡＡＶベクターの導入遺伝子の転写を指示するのに十分なプロモーター又は他のＤＮＡ調節配列に操作可能に連結される異種ＤＮＡ配列を指すことを意味する。好適なプロモーターには、例えば、組織特異的プロモーターが含まれる。プロモーターは、ＡＡＶ起源でもあり得る。
本明細書で使用される場合、「隣接する」という用語は、別の核酸配列に対するある核酸配列の相対位置を指すことを意味する。一般に、配列ＡＢＣにおいて、ＢはＡ及びＣに隣接している。配列Ａ×Ｂ×Ｃについても同様である。したがって、隣接する配列は、隣接される配列の前又は後に続くが、隣接される配列と連続している、又はすぐ隣である必要はない。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかの一実施形態では、隣接するという用語は、直鎖状一本鎖合成ＡＡＶベクターの各末端における末端反復を指す。
本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、インビトロ又はインビボでの所与のＲＮＡ又はタンパク質の発現に関連する核酸の任意のセグメントを指すために広く使用される。したがって、遺伝子には、発現されたＲＮＡ（通常はポリペプチドコード配列を含む）をコードする領域、及び、多くの場合、それらの発現に必要な調節配列が含まれる。遺伝子は、目的の供給源からのクローニング又は既知の若しくは予測された配列情報からの合成を含む、様々な供給源から得ることができ、特に所望のパラメータを有するように設計された配列を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、「遺伝性疾患」又は「遺伝性障害」という語句は、ゲノム中の１つ以上の異常、特に出生時から存在する状態によって部分的又は完全に、直接的又は間接的に引き起こされる疾患又は欠損症を指すことを意味する。異常は、遺伝子における変異、挿入、又は欠失であり得る。異常は、遺伝子のコード配列又はその調節配列に影響を与える可能性がある。
本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、それぞれ天然の核酸又はタンパク質には見られないヌクレオチド又はポリペプチド配列を指すことを意味する。異種核酸配列は、天然に存在する核酸配列（又はそのバリアント）に（例えば、遺伝子操作によって）連結されて、キメラポリペプチドをコードするキメラヌクレオチド配列を生成し得る。異種核酸配列は、バリアントポリペプチドに（例えば、遺伝子操作によって）連結されて、融合バリアントポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を生成し得る。
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、本開示の核酸治療薬による形質転換、トランスフェクション、形質導入等を受けやすい任意の細胞型を指す。非限定的な例として、宿主細胞は、単離された初代細胞、多能性幹細胞、ＣＤ３４＋細胞）、人工多能性幹細胞、又はいくつかの不死化細胞株（例えば、ＨｅｐＧ２細胞）のいずれかであり得る。代替的に、宿主細胞は、組織、器官、又は生物におけるインサイチュ又はインビボの細胞であり得る。更に、宿主細胞は、例えば、哺乳動物対象（例えば、遺伝子療法を必要とするヒト患者）の標的細胞であり得る。
本明細書に記載される場合、「誘導性プロモーター」は、誘導因子若しくは誘導剤の存在下、それによって影響される場合、又はそれによって接触される場合に、転写活性を開始又は強化することができるプロモーターを指すことを意味する。本明細書で使用される場合、「誘導因子」又は「誘導剤」は、内因性であり得るか、又は誘導性プロモーターからの転写活性を誘導することにおいて活性であるような方式で投与される、通常は外因性の化合物又はタンパク質であり得る。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、誘導因子又は誘導剤、すなわち、化学物質、化合物、又はタンパク質は、それ自体が核酸配列の転写又は発現の結果であり得（すなわち、誘導因子は、別の構成成分又はモジュールによって発現される誘導因子タンパク質であり得る）、それ自体が誘導性プロモーターの制御下であり得る。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、誘導性プロモーターは、リプレッサー等のある特定の薬剤の不在下で誘導される。誘導性プロモーターの例としては、テトラサイクリン、メタロチオニン、エクジソン、哺乳動物ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、及びマウス乳腺腫瘍ウイルスの長い末端反復（ＭＭＴＶ－ＬＴＲ））、並びに他のステロイド応答性プロモーター、ラパマイシン応答性プロモーター等が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「インビトロ」という用語は、細胞抽出物等の無傷膜を有する細胞の存在を必要としないアッセイ及び方法を指すことを意味し、非細胞系、例えば細胞抽出物等の細胞又は細胞系を含まない媒質にプログラム可能な合成生物的回路を導入することを指し得る。
本明細書で使用される場合、「インビボ」という用語は、多細胞動物等の生物中又は生物内で起こるアッセイ又はプロセスを指すことを意味する。本明細書に記載される態様のうちのいくつかでは、方法又は使用は、細菌等の単細胞生物が使用されるときに「インビボで」起こると言われ得る。「エクスビボ」という用語は、多細胞動物又は植物、例えば、とりわけ外植片、培養細胞（一次細胞及び細胞株を含む）、形質転換細胞株、及び抽出組織又は細胞（血液細胞を含む）の体外に無傷膜を有する生細胞を使用して実施される方法及び使用を指す。
本明細書で使用される場合、「脂質」という用語は、脂肪酸のエステルを含むがこれらに限定されない有機化合物群を指すことを意味し、水に不溶であるが、多くの有機溶媒に可溶であることを特徴とする。それらは、通常、少なくとも３つのクラス：（１）脂肪及び油並びにワックスを含む「単純脂質」、（２）リン脂質及び糖脂質を含む「複合脂質」、並びに（３）ステロイドなどの「誘導脂質」に分類される。リン脂質の代表的な例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リソホスファチジルコリン、リソホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、及びジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられるが、これらに限定されない。スフィンゴ脂質、スフィンゴ糖脂質ファミリー、ジアシルグリセロール、及びβ－アシルオキシ酸等、リンを欠く他の化合物も両親媒性脂質と呼ばれる群に含まれる。追加的に、上記の両親媒性脂質は、トリグリセリド及びステロールを含む他の脂質と混合することができる。
本明細書で使用される場合、「封入される」という用語は、核酸（例えば、ＡＳＯ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｃｅＤＮＡ、ウイルスベクター）等の活性剤又は治療剤を、完全封入、部分封入、又はその両方で提供する脂質粒子を指すことを意味する。好ましい実施形態では、核酸は脂質粒子内に完全に封入される（例えば、核酸を含有する脂質粒子を形成するため）。
本明細書で使用される場合、「脂質粒子」又は「脂質ナノ粒子」という用語は、核酸治療薬（ＴＮＡ）等の治療剤を目的の標的部位（例えば、細胞、組織、器官等）に送達するために使用され得る脂質製剤を指すことを意味する（「ＴＮＡ脂質粒子」、「ＴＮＡ脂質ナノ粒子」又は「ＴＮＡ ＬＮＰ」と称される）。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかの一実施形態では、本発明の脂質粒子は、１つ以上の治療用核酸を含有するＬＮＰであり、ＬＮＰは、典型的には、カチオン性脂質、ステロール、非カチオン性脂質、及び任意選択で、粒子の凝集を防止するＰＥＧ化脂質、更に任意選択で、ＬＮＰを目的の標的部位に送達するための組織特異的標的化リガンドから構成される。他の好ましい実施形態では、治療用核酸等の治療剤を粒子の脂質部分に封入し、それにより酵素分解から保護することができる。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかの一実施形態では、ＬＮＰは、核酸（例えば、ｃｅＤＮＡ）と、本明細書に記載のカチオン性脂質とともに製剤化されたＬＮＰとを含む。
本明細書で使用される場合、「イオン化可能な脂質」という用語は、脂質が生理学的ｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）以下で正に帯電し、第２のｐＨ、好ましくは生理学的ｐＨ以上で中性であるように、少なくとも１つのプロトン化可能又は脱プロトン化可能基を有する脂質、例えばカチオン性脂質を指すことを意味する。ｐＨの関数としてのプロトンの付加又は除去は平衡プロセスであり、荷電又は中性脂質への言及は優勢種の性質を指し、全ての脂質が荷電又は中性の形態で存在する必要はないことは、当業者によって理解されるであろう。一般に、カチオン性脂質は、約４～約７の範囲のプロトン化可能な基のｐＫａを有する。したがって、本明細書で使用される「カチオン性」という用語は、本発明の脂質のイオン化（又は荷電）形態及び中性形態の両方を包含する。
本明細書で使用される場合、「中性脂質」という用語は、選択されたｐＨで非荷電又は中性の双性イオン形態のいずれかで存在する任意の脂質種を指すことを意味する。生理学的ｐＨでは、そのような脂質には、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、セレブロシド、及びジアシルグリセロールが含まれる。
本明細書で使用される場合、「アニオン性脂質」という用語は、生理学的ｐＨで負に荷電するあらゆる脂質を指す。これらの脂質には、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ－ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リジルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、及び中性脂質と結合した他のアニオン性修飾基が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「非カチオン性脂質」という用語は、任意の両親媒性脂質、及び任意の他の中性脂質又はアニオン性脂質を指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「有機脂質溶液」という用語は、全体又は一部に脂質を有する有機溶媒を含む組成物を指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「リポソーム」という用語は、水性外部から分離された内部水性体積を封入する球形構成で組み立てられた脂質分子を指すことを意味する。リポソームは、少なくとも１つの脂質二層を有する小胞である。リポソームは、典型的に、製剤開発の文脈において薬物／治療薬送達のための担体として使用される。それらは、細胞膜と融合し、その脂質構造を再位置付けすることによって作用して、薬物又は活性製剤成分を送達する。そのような送達のためのリポソーム組成物は、典型的には、リン脂質、特にホスファチジルコリン基を有する化合物で構成されるが、これらの組成物はまた、他の脂質を含んでもよい。
本明細書で使用される場合、「局所送達」という用語は、干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）等の活性剤の、生物内の標的部位への直接の送達を指すことを意味する。例えば、薬剤は、腫瘍等の疾患部位、又は炎症部位等の他の標的部位、又は肝臓、心臓、膵臓、腎臓等の標的器官への直接注射によって局所的に送達することができる。
本明細書で使用される場合、「ｎｅＤＮＡ」又は「ニックの入ったｃｅＤＮＡ」という用語は、オープンリーディングフレーム（例えば、発現されるプロモーター及び導入遺伝子）の５’上流のステム領域又はスペーサー領域に２～１００塩基対のニック又はギャップを有する閉端ＤＮＡを指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、一本鎖又は二本鎖のいずれかの形態で少なくとも２つのヌクレオチド（すなわち、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド）を含むポリマーを指すことを意味し、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらのハイブリッドを含む。ＤＮＡは、例えば、アンチセンス分子、プラスミドＤＮＡ、ＤＮＡ－ＤＮＡ二重鎖、事前に凝縮されたＤＮＡ、ＰＣＲ産物、ベクター（Ｐ１、ＰＡＣ、ＢＡＣ、ＹＡＣ、人工染色体）、発現カセット、キメラ配列、染色体ＤＮＡ、又はこれらのグループの誘導体及び組み合わせの形態であり得る。ＤＮＡは、ミニサークル、プラスミド、バクミド、ミニ遺伝子、ミニストリングＤＮＡ（直鎖状の共有結合的に閉じたＤＮＡベクター）、閉端直鎖状二重鎖ＤＮＡ（ＣＥＬｉＤ又はｃｅＤＮＡ）、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡ、ダンベル型ＤＮＡ、最小限の免疫学的に定義された遺伝子発現（ＭＩＤＧＥ）－ベクター、ウイルスベクター又は非ウイルスベクターの形態であり得る。ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）、及びそれらの組み合わせの形態であり得る。核酸としては、既知のヌクレオチド類似体又は修飾型骨格残基若しくは連結を含有する核酸が挙げられ、これらは、合成、天然に存在する、及び天然に存在しないものであり、参照核酸と同様の結合特性を有する。そのような類似体及び／又は修飾残基の例としては、ホスホロチオエート、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（モルホリノ）、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ロックド核酸（ＬＮＡ（商標））、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。別途限定されない限り、この用語は、参照核酸と同様の結合特性を有する天然ヌクレオチドの既知の類似体を含有する核酸を包含する。別途明記しない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的修飾型バリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補的配列、同様に、明示的に示された配列を暗黙的に包含する。
本明細書で使用される場合、「核酸治療薬」、「治療用核酸」及び「ＴＮＡ」という語句は、交換可能に使用され、疾患又は障害を治療するための治療剤の活性成分として核酸を使用する治療の任意のモダリティを指す。本明細書で使用される場合、これらの語句は、ＲＮＡベースの治療薬及びＤＮＡベースの治療薬を指す。ＲＮＡベースの治療薬の非限定的な例としては、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ及びオリゴヌクレオチド、リボザイム、アプタマー、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられる。ＤＮＡベースの治療薬の非限定的な例としては、ミニサークルＤＮＡ、ミニ遺伝子、ウイルスＤＮＡ（例えば、レンチウイルス若しくはＡＡＶゲノム）又は非ウイルスＤＮＡベクター、閉端直鎖状二重鎖ＤＮＡ（ｃｅＤＮＡ／ＣＥＬｉＤ）、プラスミド、バクミド、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡベクター、最小限の免疫学的に定義された遺伝子発現（ＭＩＤＧＥ）－ベクター、非ウイルスミニストリングＤＮＡベクター（直鎖状の共有結合的に閉じたＤＮＡベクター）、及びダンベル型ＤＮＡ最小ベクター（「ダンベルＤＮＡ」）が挙げられる。本明細書で使用される場合、「ＴＮＡ ＬＮＰ」という用語は、上記のように、ＴＮＡの少なくとも１つを含有する脂質粒子を指す。
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」は、糖デオキシリボース（ＤＮＡ）又はリボース（ＲＮＡ）、塩基、及びリン酸基を含む。ヌクレオチドは、リン酸基を介してともに連結している。
本明細書で使用される場合、「操作可能に連結された」とは、そのように記載された構成要素が、それらが意図された様式で機能することを許可する関係にある並列を指すことを意味する。例えば、プロモーターがその転写又は発現に影響を与える場合、プロモーターは、コード配列に操作可能に連結されている。プロモーターは、それが調節する核酸配列の発現を駆動する、又は転写を駆動すると言うことができる。「操作可能に連結された」、「作動可能に位置付けられた」、「作動可能に連結された」、「制御下」、及び「転写制御下」という語句は、プロモーターが、核酸配列に関して正しい機能的位置及び／又は配向にあり、その配列の転写開始及び／又は発現を制御するように調節することを示す。本明細書で使用される場合、「逆位プロモーター」は、核酸配列が逆配向にあるプロモーターを指し、それによりコード鎖であったものは、今は非コード鎖であり、逆も同様である。逆位プロモーター配列を様々な実施形態で使用して、スイッチの状態を調節することができる。加えて、様々な実施形態では、プロモーターをエンハンサーと併せて使用することができる。
本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、タンパク質又はＲＮＡをコードする異種標的遺伝子であり得る、核酸配列の転写を駆動することによって、別の核酸配列の発現を調節する任意の核酸配列を指すことを意味する。プロモーターは、構成的、誘導性、抑制性、組織特異性、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。プロモーターは、核酸配列の残りの転写の開始及び速度が制御される、核酸配列の制御領域である。プロモーターはまた、ＲＮＡポリメラーゼ及び他の転写因子等の調節タンパク質及び分子が結合し得る、遺伝子エレメントを含有し得る。プロモーター配列内では、転写開始部位、同様に、ＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメインが見出されるであろう。真核生物プロモーターは、必ずしもそうではないが、多くの場合、「ＴＡＴＡ」ボックス及び「ＣＡＴ」ボックスを含有する。誘導性プロモーターを含む様々なプロモーターを使用して、本明細書に開示される合成ＡＡＶベクター中の導入遺伝子の発現を駆動することができる。プロモーター配列は、その３’末端で転写開始部位によって結合され、バックグラウンドより上で検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な最小数の塩基又はエレメントを含むように上流（５’配向）に伸びる。
プロモーターは、所与の遺伝子又は配列のコードセグメント及び／又はエキソンの上流に位置する５’非コード配列を単離することによって取得され得る、遺伝子又は配列と天然に関連するものであり得る。このようなプロモーターは、「内因性」と呼ばれ得る。同様に、本明細書の態様及び実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、エンハンサーは、その配列の下流又は上流のいずれかに位置する、核酸配列と天然に関連するものであり得る。本明細書の態様及び実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、コード核酸セグメントは、「組換えプロモーター」又は「異種プロモーター」の制御下で位置付けられ、これらの両方は、その自然環境において操作可能に連結されたコードされた核酸配列と通常は関連しないプロモーターを指す。同様に、「組換え又は異種エンハンサー」は、その自然環境において所与の核酸配列と通常は関連しないエンハンサーを指す。そのようなプロモーター又はエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーター又はエンハンサー、任意の他の原核、ウイルス、又は真核細胞から単離されたプロモーター又はエンハンサー、及び「天然に存在」しない合成プロモーター又はエンハンサーを含み得、すなわち、異なる転写調節領域の異なるエレメント、及び／又は当該技術分野において既知である遺伝子操作の方法を通じて発現を変更する変異を含み得る。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成的に産生することに加えて、プロモーター配列は、本明細書に開示される合成生物的回路及びモジュールに関して、ＰＣＲを含む組換えクローニング及び／又は核酸増幅技術を使用して産生され得る（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号、米国特許第５，９２８，９０６号を参照されたく、各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。更に、ミトコンドリア、クロロプラスト等の非核性細胞小器官内の配列の転写及び／又は発現を配向する制御配列が同様に用いられ得ることが企図される。
本明細書で使用される場合、「Ｒｅｐ結合部位」（Rep binding site、「ＲＢＳ」）及び「Ｒｅｐ結合エレメント」（Rep binding element、「ＲＢＥ」）は、交換可能に使用され、Ｒｅｐタンパク質（例えば、ＡＡＶ Ｒｅｐ７８又はＡＡＶ Ｒｅｐ６８）の結合部位を指すことを意味し、Ｒｅｐタンパク質による結合時に、Ｒｅｐタンパク質が、ＲＢＳを組み込む配列上でその部位特異的エンドヌクレアーゼ活性を実施することを可能にする。ＲＢＳ配列及びその逆相補体は、一緒に単一ＲＢＳを形成する。ＲＢＳ配列は、当該技術分野において周知であり、例えば、ＡＡＶ２において同定されたＲＢＳ配列である５’－ＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣ－３’を含む。
本明細書で使用される場合、「組換えベクター」という語句は、異種核酸配列を含むベクター、又はインビボで発現することができる「導入遺伝子」を指すことを意味する。本明細書に記載されるベクターは、本明細書の態様及び実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、他の好適な組成物及び療法と組み合わせることができることを理解されたい。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、エピソームである。好適なエピソームベクターの使用は、対象における目的のヌクレオチドを高コピー数の染色体外ＤＮＡに維持し、それによって染色体組み込みの潜在的な影響を排除する手段を提供する。
本明細書で使用される場合、「レポーター」という用語は、検出可能な読み出しを提供するために使用可能なタンパク質を指すことを意味する。レポーターは、一般に、蛍光、色、又は発光等の測定可能なシグナルを産生する。レポータータンパク質コード配列は、細胞又は生物中の存在が容易に観察されるタンパク質をコードする。
本明細書で使用される場合、「センス」及び「アンチセンス」という用語は、ポリヌクレオチド上の構造エレメントの配向を指すことを意味する。エレメントのセンスバージョン及びアンチセンスバージョンは、互いの逆相補体である。
本明細書で使用される場合、「配列同一性」という用語は、２つのヌクレオチド配列間の関連性を指すことを意味する。本開示の目的のために、２つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列同一性の程度は、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，上記）、好ましくはバージョン３．０．０以降において実装されるように、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，上記）を使用して決定される。使用される任意のパラメータは、ギャップオープンペナルティ１０、ギャップ拡張ペナルティ０．５、及びＥＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩ ＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長同一性」とラベル付けされたＮｅｅｄｌｅの出力（－ｎｏｂｒｉｅｆオプションを使用して取得される）は、同一性パーセントとして使用され、次のように計算される：（同一のデオキシリボヌクレオチド×１００）／（アラインメントの長さ－アラインメントにおけるギャップの総数）。アラインメントの長さは、好ましくは少なくとも１０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも２５ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも５０ヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも１００ヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「スペーサー領域」という用語は、ベクター又はゲノム内の機能的エレメントを分離する介在配列を指すことを意味する。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＡＡＶスペーサー領域は、最適機能性のための所望の処理で２つの機能的エレメントを保持する。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、スペーサー領域は、ベクター又はゲノムの遺伝的安定性を提供するか、又は増大させる。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、スペーサー領域は、クローニング部位及び塩基対の設計番号のギャップに便利な位置を提供することによって、ゲノムの容易な遺伝子操作を促進する。例えば、ある特定の態様では、いくつかの制限エンドヌクレアーゼ部位を含むオリゴヌクレオチド「ポリリンカー」若しくは「ポリクローニング部位」、又は既知のタンパク質（例えば、転写因子）結合部位を有しないように設計された非オープンリーディングフレーム配列をベクター又はゲノム中に位置付けて、シス作用性因子を分離することができ、例えば、６ｍｅｒ、１２ｍｅｒ、１８ｍｅｒ、２４ｍｅｒ、４８ｍｅｒ、８６ｍｅｒ、１７６ｍｅｒ等を挿入する。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、本発明による治療用核酸での予防的治療を含む治療が提供される、ヒト又は動物を指すことを意味する。通常、動物は、これらに限定されないが、霊長類、げっ歯類、飼育動物、又は狩猟動物などの脊椎動物である。霊長類としては、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えば、アカゲザルが挙げられるが、これらに限定されない。げっ歯類としては、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ、及びハムスターが挙げられる。飼育動物及び狩猟動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロー、ネコ種、例えば、飼いネコ、イヌ種、例えば、イヌ、キツネ、オオカミ、トリ種、例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ、並びに魚、例えば、トラウト、ナマズ、及びサケが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される態様のある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、霊長類又はヒトである。対象は、男性又は女性であり得る。追加的に、対象は、幼児又は子供であり得る。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、新生児又は胎児対象であり得、例えば、対象は、子宮内に存在する。好ましくは、対象は、哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、又はウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、疾患及び障害の動物モデルを代表する対象として有利に使用され得る。加えて、本明細書に記載される方法及び組成物は、飼育動物及び／又はペットに使用され得る。ヒト対象は、任意の年齢、性別、人種、又は民族グループ、例えば、コーカサス人（白人）、アジア人、アフリカ人、黒人、アフリカ系アメリカ人、アフリカ系ヨーロッパ人、ラテンアメリカ系、中東系等であり得る。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、臨床設定において患者又は他の対象であり得る。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、治療を既に受けている。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、胚、胎児、新生児、幼児、子供、青年、又は成人である。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ヒト胎児、ヒト新生児、ヒト幼児、ヒト子供、ヒト青年、又はヒト成人である。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、動物胚、又は非ヒト胚若しくは非ヒト霊長類胚である。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ヒト胚である。
本明細書で使用される場合、「必要とする対象」という語句は、語句の文脈及び使用法が別段の指示をしない限り、（ｉ）記載された発明に従ってＴＮＡ脂質粒子（若しくはＴＮＡ脂質粒子を含む医薬組成物）を投与される予定であり、（ｉｉ）記載された本発明に従ってＴＮＡ脂質粒子（若しくはＴＮＡ脂質粒子を含む医薬組成物）を受けているか、又は（ｉｉｉ）記載された発明に従ってＴＮＡ脂質粒子（若しくはＴＮＡ脂質粒子を含む薬学的組成物）を受けた、対象を指す。
本明細書で使用される場合、「抑制する」、「減少する」、「妨害する」、「阻害する」及び／又は「低減する」という用語（並びに同様の用語）は、一般に、天然、予想若しくは平均に対して、又は対照条件に対して、直接的又は間接的に、濃度、レベル、機能、活性、又は挙動を低減する行為を指す。
本明細書で使用される場合、「合成ＡＡＶベクター」及び「ＡＡＶベクターの合成産生」という用語は、完全に無細胞環境でのＡＡＶベクター及びその合成産生方法を指すことを意味する。
本明細書で使用される場合、「全身送達」という用語は、生物内での干渉ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）等の活性剤の広範な生体内分布をもたらす脂質粒子の送達を指すことを意味する。投与技術によっては、特定の薬剤の全身送達にいたることもあれば、そうでないものもある。全身送達とは、有用な量、好ましくは治療量の薬剤が身体のほとんどの部分にさらされることを意味する。広範な生体内分布を得るには、一般に、薬剤が、投与部位より遠位の疾患部位に到達する前に（初回通過器官（肝臓、肺等）によって、又は急速な非特異的細胞結合によって）急速に分解又は排出されないような血液寿命が必要である。脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の全身送達は、例えば静脈内、皮下、及び腹腔内を含む、当技術分野で既知の任意の手段によることができる。好ましい実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の全身送達は、静脈内送達による。
本明細書で使用される場合、「末端分解部位」及び「ＴＲＳ」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、Ｒｅｐが、細胞ＤＮＡポリメラーゼ、例えばＤＮＡ ｐｏｌデルタ又はＤＮＡ ｐｏｌイプシロンを介してＤＮＡ伸長の基質として役立つ３’－ＯＨを生成する５’チミジンとのチロシン－ホスホジエステル結合を形成する領域を指すことを意味される。代替的に、Ｒｅｐ－チミジン複合体は、配位ライゲーション反応に関与し得る。
本明細書で使用される場合、活性剤（例えば、本明細書に記載されるＴＮＡ脂質粒子）の「治療量」、「治療有効量」、「効果的な量」、「有効量」又は「薬学的有効量」という用語は交換可能に使用され、治療の意図された利益又は効果、例えば、治療用核酸の非存在下で検出される発現レベルと比較した標的配列の発現の阻害を提供するのに十分な量を指す。標的遺伝子又は標的配列の発現を測定するための好適なアッセイは、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能、同様に当業者に既知の表現型アッセイ等の、当業者に既知の技法を使用するタンパク質又はＲＮＡレベルの検査を含む。投与量レベルは、傷害の種類、年齢、体重、性別、患者の病状、病状の重症度、投与経路、及び用いられる特定の活性剤を含む、多様な因子に基づく。したがって、投与計画は、大きく異なる可能性があるが、標準的な方法を使用して医師によって常套的に決定され得る。追加的に、「治療量」、「治療有効量」及び「薬学的有効量」という用語は、記載された本発明の組成物の予防的（prophylactic）又は予防的（preventative）量を含む。記載された発明の予防的（prophylactic）又は予防的（preventative）用途において、医薬組成物又は薬剤は、疾患、障害又は状態の生化学的、組織学的及び／又は行動症状、その合併症、並びに疾患、障害又は状態の発症中に現れる中間の病理学的表現型を含む、疾患、障害又は状態に罹患しやすい患者、又はそうでなければそのリスクがある患者に、リスクを排除若しくは低減するか、重症度を減少させるか、又は疾患、障害若しくは状態の発症を遅らせるのに十分な量で投与される。いくつかの医学的判断によれば、最大用量、すなわち最高の安全用量を使用することが一般に好ましい。「用量」及び「投与量」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかの一態様では、「治療量」、「治療有効量」及び「薬学的有効量」は、非予防的（non-prophylactic）又は非予防的（non-preventative）用途を指す。
本明細書で使用される場合、「治療効果」という用語は、治療の結果を指し、その結果は、望ましくかつ有益であると判断される。治療効果としては、直接的又は間接的に、疾患症状の阻止、低減、又は排除を挙げることができる。治療効果としてはまた、直接的又は間接的に、疾患症状の進行の阻止、低減、又は排除を挙げることができる。
本明細書に記載される任意の治療剤について、治療有効量は、予備的なインビトロ研究及び／又は動物モデルから最初に決定することができる。治療有効用量はまた、ヒトのデータから決定することができる。適用される用量は、投与される化合物の相対的な生物学的利用能及び効力に基づいて調整することができる。上記の方法及び他の周知の方法に基づいて最大の効力を達成するように用量を調整することは、当業者の能力の範囲内である。参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）（２００１）の第１章に見出され得る治療有効性を決定するための一般原則を以下に要約する。
薬物動態学的原理は、許容できない副作用を最小限に抑えながら、望ましい程度の治療効果を得るために投与計画を変更するための基礎を提供する。薬物の血漿濃度を測定でき、治療濃度域に関連している状況では、投与量の変更に関する追加のガイダンスを入手することができる。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、及び／又は「治療」という用語は、状態の進行を抑制する、阻害する、遅らせる、若しくは逆転させる、状態の臨床症状を改善する、又は臨床症状の出現を防ぐ、有益な若しくは望ましい臨床結果を得ることを含む。治療することは、以下：（ａ）障害の重症度を低減すること、（ｂ）治療される障害に特徴的な症状の発症を制限すること、（ｃ）治療される障害に特徴的な症状の悪化を制限すること、（ｄ）以前に障害を有していた患者において障害の再発を制限すること、及び（ｅ）以前に障害に対して無症候性であった患者において症状の再発を制限すること、のうちの１つ以上を達成することを更に指す。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかの一態様では、「治療する」、「治療すること」、及び／又は「治療」という用語は、状態の進行を抑制する、阻害する、遅らせる、若しくは逆行させること、又は状態の臨床症状を改善することを含む。
薬理学的及び／又は生理学的効果等の有益な又は所望の臨床結果は、疾患、障害又は状態の素因を有する可能性があるが、疾患の症状をまだ経験していないか、若しくは呈していない対象において疾患、障害又は状態が発生するのを防ぐこと（予防的治療）、疾患、障害又は状態の症状の緩和、疾患、障害又は状態の程度の減少、疾患、障害又は状態の安定化（すなわち、悪化させない）、疾患、障害又は状態の蔓延を防ぐこと、疾患、障害又は状態の進行を遅らせる又は遅くすること、疾患、障害又は状態の改善又は軽減、及びそれらの組み合わせ、同様に治療を受けていない場合に予想される生存と比較して生存を延長することを含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ベクター」又は「発現ベクター」という用語は、別のＤＮＡセグメント、すなわち「インサート」「導入遺伝子」又は「発現カセット」が、細胞において結合されたセグメント（「発現カセット」）の発現又は複製をもたらすために、結合され得るプラスミド、バクミド、ファージ、ウイルス、ビリオン、又はコスミド等のレプリコンを指すことを意味する。ベクターは、宿主細胞への送達のために、又は異なる宿主細胞間の移動のために設計された核酸構築物であり得る。本明細書で使用される場合、ベクターは、最終的な形態でウイルス起源、又は非ウイルス起源であり得る。しかしながら、本開示の目的のために、「ベクター」は、一般に、合成ＡＡＶベクター又はニックの入ったｃｅＤＮＡベクターを指す。したがって、「ベクター」という用語は、適切な制御エレメントと関連する場合に複製することができ、遺伝子配列を細胞に移すことができる任意の遺伝的エレメントを包含する。本明細書の態様及び実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ベクターは、組換えベクター又は発現ベクターであり得る。
本明細書に開示される本発明の代替エレメント又は実施形態のグループ化は、限定として解釈されるべきではない。各郡のメンバーは、個別に、又は群の他のメンバー又は本明細書で見られる他のエレメントとの任意の組み合わせで参照及び主張することができる。群の１つ以上のメンバーは、利便性及び／又は特許性の理由から、群に含まれるか、又は群から削除することができる。そのような任意の包含又は削除が発生した場合、本明細書では、明細書が修正されたグループを含むとみなされ、したがって添付の特許請求の範囲で使用されている全てのマーカッシュグループの記述を満たす。
態様のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に記載される開示は、人間のクローン化プロセス、人間の生殖細胞系列の遺伝的同一性を修正するプロセス、産業若しくは商業目的でのヒト胚の使用、又は人間若しくは動物にいかなる実質的な医学的利益ももたらすことなく苦しみを引き起こす可能性が高い動物、及びそのようなプロセスから生じる動物の遺伝的同一性を修正するためのプロセスに関係しない。
本明細書では、本発明の様々な態様の説明内で他の用語が定義されている。
ＩＩ．脂質
第１の実施形態では、式Ｉで表されるカチオン性脂質、
Figure 2024517644000003
 又はその薬学的に許容される塩が提供され、式中、
Ｒ’が、存在しないか、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、但し、Ｒ’が水素又はＣ１～Ｃ６アルキルである場合、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子はプロトン化されており、
Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ１２アルキレン又はＣ２～Ｃ１２アルケニレンであり、
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１６非分岐アルケニル、又は
Figure 2024517644000004
 であり、式中、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル又はＣ２～Ｃ１６非分岐アルケニルであり、
Ｒ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ８アルキレン、又はＣ２～Ｃ８アルケニレンであり、
Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７～Ｃ１６アルキル又はＣ７～Ｃ１６アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂ中の合わせた炭素原子の総数が、１５より大きく、
Ｘ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＯＣ（＝Ｓ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｎ＝Ｃ（Ｒａ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝ＮＯ－、－Ｏ－Ｎ＝Ｃ（Ｒａ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、
－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＳｉ（Ｒａ）２Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲａ ２）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、又はＯＣ（＝Ｏ）（ＣＲａ ２）Ｃ（＝Ｏ）－であり、式中、
Ｒａが、各出現に対して、独立して、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である。
第２の実施形態では、第１の実施形態によるカチオン性脂質又はその薬学的に許容される塩において、Ｘ１及びＸ２が、同じであり、他の全ての残りの変数は、式Ｉ又は第１の実施形態について記載したとおりである。
第３の実施形態では、第１若しくは第２の実施形態によるカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｘ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＯＣ（＝Ｓ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、若しくは－Ｓ－Ｓ－であるか、又はＸ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、若しくは－Ｓ－Ｓ－であるか、又はＸ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ若しくは－Ｓ－Ｓ－であり、全ての他の残りの変数が、式Ｉ又は第１若しくは第２の実施形態について記載されているとおりである。
第４の実施形態では、本開示のカチオン性脂質は、式ＩＩで表されるか、
Figure 2024517644000005
 又はその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎが、１、２、３、及び４から選択される整数であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉ又は第１～第３の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第５の実施形態では、本開示のカチオン性脂質は、式ＩＩＩで表されるか、
Figure 2024517644000006
 又はその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎが、１、２、及び３から選択される整数であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ又は第１～第４の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第６の実施形態では、本開示のカチオン性脂質は、式ＩＶで表されるか、
Figure 2024517644000007
 又はその薬学的に許容される塩であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ又は第１～第５の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第７の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ若しくは実施形態１～６のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル若しくはＣ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ１～Ｃ５アルキル若しくはＣ２～Ｃ５アルケニル、又はＣ１～Ｃ４アルキル若しくはＣ２～Ｃ４アルケニル、又はＣ１～Ｃ３アルキル若しくはＣ２～Ｃ３アルケニル、又はＣ１～Ｃ２アルキル、又はＣ６アルキル、又はＣ５アルキル、又はＣ４アルキル、又はＣ３アルキル、又はＣ２アルキル、又はＣ１アルキル、又はＣ６アルケニル、又はＣ５アルケニル、又はＣ４アルケニル、又はＣ３アルケニル、又はＣ２アルケニルであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ又は第１～第６の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第８の実施形態では、本開示のカチオン性脂質は、式Ｖで表されるか、
Figure 2024517644000008
 又はその薬学的に許容される塩であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ又は第１～第７の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第９の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第８の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ９アルキレン若しくはＣ２～Ｃ９アルケニル、又はＣ１～Ｃ７アルキレン若しくはＣ２～Ｃ７アルキニレン、又はＣ１～Ｃ５アルキレン若しくはＣ２～Ｃ５アルケニレン、又はＣ２～Ｃ８アルキレン若しくはＣ２～Ｃ８アルケニレン、又はＣ３～Ｃ７アルキレン若しくはＣ３～Ｃ７アルケニレン、又はＣ５～Ｃ７アルキレン若しくはＣ５～Ｃ７アルケニレンであるか、あるいはＲ３が、Ｃ１２アルキレン、Ｃ１１アルキレン、Ｃ１０アルキレン、Ｃ９アルキレン、又はＣ８アルキレン、又はＣ７アルキレン、又はＣ６アルキレン、又はＣ５アルキレン、又はＣ４アルキレン、又はＣ３アルキレン、又はＣ２アルキレン、又はＣ１アルキレン、又はＣ１２アルケニレン、Ｃ１１アルケニレン、Ｃ１０アルケニレン、Ｃ９アルケニレン、又はＣ８アルケニレン、又はＣ７アルケニレン、又はＣ６アルケニレン、又はＣ５アルケニレン、又はＣ４アルケニレン、又はＣ３アルケニレン、又はＣ２アルケニレンであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第８の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。代替的に、第９の実施形態の一部として、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第８の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ９アルキレン若しくはＣ２～Ｃ９アルケニル、又はＣ１～Ｃ７アルキレン若しくはＣ２～Ｃ７アルキニレン、又はＣ１～Ｃ６アルキレン若しくはＣ２～Ｃ６アルケニレン、又はＣ１～Ｃ５アルキレン若しくはＣ２～Ｃ５アルケニレン、又はＣ２～Ｃ８アルキレン若しくはＣ２～Ｃ８アルケニレン、又はＣ３～Ｃ７アルキレン若しくはＣ３～Ｃ７アルケニレン、又はＣ５～Ｃ７アルキレン若しくはＣ５～Ｃ７アルケニレンであるか、あるいはＲ３が、Ｃ１２アルキレン、Ｃ１１アルキレン、Ｃ１０アルキレン、Ｃ９アルキレン、又はＣ８アルキレン、又はＣ７アルキレン、又はＣ６アルキレン、又はＣ５アルキレン、又はＣ４アルキレン、又はＣ３アルキレン、又はＣ２アルキレン、又はＣ１アルキレン、又はＣ１２アルケニレン、Ｃ１１アルケニレン、Ｃ１０アルケニレン、Ｃ９アルケニレン、又はＣ８アルケニレン、又はＣ７アルケニレン、又はＣ６アルケニレン、又はＣ５アルケニレン、又はＣ４アルケニレン、又はＣ３アルケニレン、又はＣ２アルケニレンであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第８の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第１０の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第９の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、若しくはＣ２～Ｃ６アルケニレンであるか、又はＲ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ４アルキレン、若しくはＣ２～Ｃ４アルケニレンであるか、又はＲ５が存在しないか、又はＲ５が、Ｃ８アルキレン、Ｃ７アルキレン、Ｃ６アルキレン、Ｃ５アルキレン、Ｃ４アルキレン、Ｃ３アルキレン、Ｃ２アルキレン、Ｃ１アルキレン、Ｃ８アルケニレン、Ｃ７アルケニレン、Ｃ６アルケニレン、Ｃ５アルケニレン、Ｃ４アルケニレン、Ｃ３アルケニレン、又はＣ２アルケニレンであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第９の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第１１の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１０の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１４非分岐アルケニル、又は
Figure 2024517644000009
 であり、Ｒ４ａ及びＲ４ｂは、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１２非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ１２非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ２～Ｃ１２非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ１２非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ３～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ３～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ４～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ４～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ５～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ５～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ６～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ６～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ１５非分岐アルキル、Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ１３非分岐アルキル、Ｃ１２非分岐アルキル、Ｃ１１非分岐アルキル、Ｃ１０非分岐アルキル、Ｃ９非分岐アルキル、Ｃ８非分岐アルキル、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ６非分岐アルキル、Ｃ５非分岐アルキル、Ｃ４非分岐アルキル、Ｃ３非分岐アルキル、Ｃ２非分岐アルキル、Ｃ１非分岐アルキル、Ｃ１６非分岐アルケニル、Ｃ１５非分岐アルケニル、Ｃ１４非分岐アルケニル、Ｃ１３非分岐アルケニル、Ｃ１２非分岐アルケニル、Ｃ１１非分岐アルケニル、Ｃ１０非分岐アルケニル、Ｃ９非分岐アルケニル、Ｃ８非分岐アルケニル、Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ６非分岐アルケニル、Ｃ５非分岐アルケニル、Ｃ４非分岐アルケニル、Ｃ３非分岐アルケニル、若しくはＣ２アルケニルであるか、又はＲ４が、
Figure 2024517644000010
 であり、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ２～Ｃ１０非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ１０非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、
Figure 2024517644000011
 であり、式中、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ１５非分岐アルキル、Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ１３非分岐アルキル、Ｃ１２非分岐アルキル、Ｃ１１非分岐アルキル、Ｃ１０非分岐アルキル、Ｃ９非分岐アルキル、Ｃ８非分岐アルキル、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ６非分岐アルキル、Ｃ５非分岐アルキル、Ｃ４非分岐アルキル、Ｃ３非分岐アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ１アルキル、Ｃ１６非分岐アルケニル、Ｃ１５非分岐アルケニル、Ｃ１４非分岐アルケニル、Ｃ１３非分岐アルケニル、Ｃ１２非分岐アルケニル、Ｃ１１非分岐アルケニル、Ｃ１０非分岐アルケニル、Ｃ９非分岐アルケニル、Ｃ８非分岐アルケニル、Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ６非分岐アルケニル、Ｃ５非分岐アルケニル、Ｃ４非分岐アルケニル、Ｃ３非分岐アルケニル、若しくはＣ２アルケニルであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は実施形態１～１０のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第１２の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１１の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７～Ｃ１４アルキル若しくはＣ７～Ｃ１４アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ８～Ｃ１２アルキル若しくはＣ８～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ９アルケニル、Ｃ８アルケニル、若しくはＣ７アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂにおいて合わせた炭素原子の総数が１５より大きく、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１１の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第１３の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１２の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれＣ８アルキル若しくはＣ８アルケニルを超え、すなわち、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１６アルキル若しくはＣ９～Ｃ１６アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１５アルキル若しくはＣ９～Ｃ１５アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１４アルキル若しくはＣ９～Ｃ１４アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１３アルキル若しくはＣ９～Ｃ１３アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１２アルキル若しくはＣ９～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１０～Ｃ１２アルキル若しくはＣ１０～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、若しくはＣ９アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂにおいて合わせた炭素原子の総数が１５より大きく、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１２の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。第１４の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１３の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、互いと等しい数の炭素原子を含有するか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが同じであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、両方とも、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ９アルケニル、Ｃ８アルケニル、若しくはＣ７アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂにおいて合わせた炭素原子の総数が１５より大きく、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１３の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第１５の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１４の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、実施形態１～１４のいずれか１つで定義されるように、各々、互いとは異なる数の炭素原子を含有するか、又は炭素原子の数Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、１個若しくは２個の炭素原子だけ異なるか、又は炭素原子の数Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、１個の炭素原子だけ異なるか、又はＲ６ａがＣ７アルキルでありかつＲ６ａがＣ８アルキルであり、Ｒ６ａがＣ８アルキルでありかつＲ６ａがＣ７アルキルであり、Ｒ６ａがＣ８アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ８アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ１２アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１２アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、Ｒ６ａがＣ７アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ７アルキルであり、Ｒ６ａがＣ８アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ８アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ１２アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１２アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ１３アルキルであり、若しくはＲ６ａがＣ１３アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、などであり、他の全ての残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１４の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第１６の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１５の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ’が、存在しない。
第１７の実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ若しくは第１～第１６の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ４が、Ｃ７以下の非分岐アルキルであるアルキル又はＣ７以下の非分岐アルケニルであるアルケニルであり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれＣ８アルキルより大きいアルキル又はＣ８アルケニルより大きいはアルケニルであるか、すなわち、又はＲ４が、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ３～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ３～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ４～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ４～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ５～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ５～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ６～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ６～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ６非分岐アルキル、Ｃ５非分岐アルキル、Ｃ４非分岐アルキル、Ｃ３非分岐アルキル、Ｃ２非分岐アルキル、Ｃ１非分岐アルキル、Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ６非分岐アルケニル、Ｃ５非分岐アルケニル、Ｃ４非分岐アルケニル、Ｃ３非分岐アルケニル、若しくはＣ２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１６アルキル若しくはＣ９～Ｃ１６アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１５アルキル若しくはＣ９～Ｃ１５アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１４アルキル若しくはＣ９～Ｃ１４アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１３アルキル若しくはＣ９～Ｃ１３アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１２アルキル若しくはＣ９～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１０～Ｃ１２アルキル若しくはＣ１０～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、若しくはＣ９アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂにおいて合わせた炭素原子の総数が１５より大きく、全ての他の残りの変数が、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１６の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
いくつかの態様では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１６の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質において、Ｒ’が水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子は、窒素原子が正に帯電しているという点でプロトン化されている。
いくつかの態様では、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ又は第１～第１６の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質において、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２がそれぞれ、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、四級アンモニウムカチオン又は四級アミンを形成する。
第１８の実施形態では、式Ｉａで表されるカチオン性脂質、
Figure 2024517644000012
 又はその薬学的に許容される塩が提供され、式中、
Ｒ’が、存在しないか、又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ１２アルキレン又はＣ２～Ｃ１２アルケニレンであり、
Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１６非分岐アルケニル、又は
Figure 2024517644000013
 であり、式中、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル又はＣ２～Ｃ１６非分岐アルケニルであり、
Ｒ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ８アルキレン、又はＣ２～Ｃ８アルケニレンであり、
Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７～Ｃ１６アルキル又はＣ７～Ｃ１６アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂ中の合わせた炭素原子の総数が、１５より大きく、
Ｘ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＯＣ（＝Ｓ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｎ＝Ｃ（Ｒａ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝ＮＯ－、－Ｏ－Ｎ＝Ｃ（Ｒａ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、
－ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＳｉ（Ｒａ）２Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲａ ２）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、又はＯＣ（＝Ｏ）（ＣＲａ ２）Ｃ（＝Ｏ）－であり、式中、
Ｒａが、各出現に対して、独立して、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
ｎが、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である。
第１９の実施形態では、第１８の実施形態によるカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、式Ｉａ中のＸ１及びＸ２が、同じであり、他の全ての残りの変数が、式Ｉａ又は第１８の実施形態について記載したとおりである。
第２０の実施形態では、第１８若しくは第１９の実施形態によるカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、式Ｉａ中のＸ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＯＣ（＝Ｓ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、若しくは－Ｓ－Ｓ－であるか、又はＸ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、若しくは－Ｓ－Ｓ－であるか、又はＸ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ若しくは－Ｓ－Ｓ－であり、全ての他の残りの変数が、式Ｉａ又は第１８若しくは第１９の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２１の実施形態では、本開示のカチオン性脂質が、式ＩＩａで表されるか、
Figure 2024517644000014
 又はその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎが、１、２、３、及び４から選択される整数であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉａ又は第１８、第１９、若しくは第２０の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２２の実施形態では、本開示のカチオン性脂質が、式ＩＩＩａで表されるか、
Figure 2024517644000015
 又はその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎが、１、２、及び３から選択される整数であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ又は第１８、第１９、第２０、若しくは第２１の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２３の実施形態では、本開示のカチオン性脂質が、式ＩＶａで表されるか、
Figure 2024517644000016
 又はその薬学的に許容される塩であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ又は第１８、第１９、第２０、第２１若しくは第２２の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２４の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ又は第１８、第１９、第２０、第２１若しくは第２２の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル若しくはＣ２～Ｃ６アルケニル、又はＣ１～Ｃ５アルキル若しくはＣ２～Ｃ５アルケニル、又はＣ１～Ｃ４アルキル若しくはＣ２～Ｃ４アルケニル、又はＣ１～Ｃ３アルキル若しくはＣ２～Ｃ３アルケニル、又はＣ１～Ｃ２アルキル、又はＣ６アルキル、又はＣ５アルキル、又はＣ４アルキル、又はＣ３アルキル、又はＣ２アルキル、又はＣ１アルキル、又はＣ６アルケニル、又はＣ５アルケニル、又はＣ４アルケニル、又はＣ３アルケニル、又はＣ２アルケニルであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２若しくは第２３の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２５の実施形態では、本開示のカチオン性脂質が、式Ｖａで表されるか、
Figure 2024517644000017
 又はその薬学的に許容される塩であり、他の全ての残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３若しくは第２４の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２６の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４若しくは第２５の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ９アルキレン若しくはＣ２～Ｃ９アルケニレン、又はＣ１～Ｃ７アルキレン若しくはＣ２～Ｃ７アルケニレン、又はＣ１～Ｃ５アルキレン若しくはＣ２～Ｃ５アルケニレン、又はＣ２～Ｃ８アルキレン若しくはＣ２～Ｃ８アルケニレン、又はＣ３～Ｃ７アルキレン若しくはＣ３～Ｃ７アルケニレン、又はＣ５～Ｃ７アルキレン若しくはＣ５～Ｃ７アルケニレンであるか、あるいはＲ３が、Ｃ１２アルキレン、Ｃ１１アルキレン、Ｃ１０アルキレン、Ｃ９アルキレン、又はＣ８アルキレン、又はＣ７アルキレン、又はＣ６アルキレン、又はＣ５アルキレン、又はＣ４アルキレン、又はＣ３アルキレン、又はＣ２アルキレン、又はＣ１アルキレン、又はＣ１２アルケニレン、Ｃ１１アルケニレン、Ｃ１０アルケニレン、Ｃ９アルケニレン、又はＣ８アルケニレン、又はＣ７アルケニレン、又はＣ６アルケニレン、又はＣ５アルケニレン、又はＣ４アルケニレン、又はＣ３アルケニレン、又はＣ２アルケニレンであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４若しくは第２５の実施形態のいずれか１つに記載されているとおりである。代替的に、第２６の実施形態の一部として、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４若しくは第２５の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ９アルキレン若しくはＣ２～Ｃ９アルケニレン、Ｃ１～Ｃ７アルキレン若しくはＣ２～Ｃ７アルケニレン、Ｃ１～Ｃ６アルキレン若しくはＣ２～Ｃ６アルケニレン、Ｃ１～Ｃ５アルキレン若しくはＣ２～Ｃ５アルケニレン、又はＣ２～Ｃ８アルキレン若しくはＣ２～Ｃ８アルケニレン、又はＣ３～Ｃ７アルキレン若しくはＣ３～Ｃ７アルケニレン、又はＣ５～Ｃ７アルキレン若しくはＣ５～Ｃ７アルケニレンであるか、あるいはＲ３が、Ｃ１２アルキレン、Ｃ１１アルキレン、Ｃ１０アルキレン、Ｃ９アルキレン、又はＣ８アルキレン、又はＣ７アルキレン、又はＣ６アルキレン、又はＣ５アルキレン、又はＣ４アルキレン、又はＣ３アルキレン、又はＣ２アルキレン、又はＣ１アルキレン、又はＣ１２アルケニレン、Ｃ１１アルケニレン、Ｃ１０アルケニレン、Ｃ９アルケニレン、又はＣ８アルケニレン、又はＣ７アルケニレン、又はＣ６アルケニレン、又はＣ５アルケニレン、又はＣ４アルケニレン、又はＣ３アルケニレン、又はＣ２アルケニレンであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４若しくは第２５の実施形態のいずれか１つに記載されているとおりである。
第２７の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５若しくは第２６の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ６アルキレン、若しくはＣ２～Ｃ６アルケニレンであるか、又はＲ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ４アルキレン、若しくはＣ２～Ｃ４アルケニレンであるか、又はＲ５が存在しないか、又はＲ５が、Ｃ８アルキレン、Ｃ７アルキレン、Ｃ６アルキレン、Ｃ５アルキレン、Ｃ４アルキレン、Ｃ３アルキレン、Ｃ２アルキレン、Ｃ１アルキレン、Ｃ８アルケニレン、Ｃ７アルケニレン、Ｃ６アルケニレン、Ｃ５アルケニレン、Ｃ４アルケニレン、Ｃ３アルケニレン、若しくはＣ２アルケニレンであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５若しくは第２６の実施形態のいずれか１つに記載されているとおりである。
第２８の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６若しくは第２７の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１４非分岐アルケニル、又は
Figure 2024517644000018
 であり、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１２非分岐アルキル又はＣ２～－Ｃ１２非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ２～Ｃ１２非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ１２非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ３～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ３～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ４～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ４～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ５～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ５～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ６～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ６～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ１５非分岐アルキル、Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ１３非分岐アルキル、Ｃ１２非分岐アルキル、Ｃ１１非分岐アルキル、Ｃ１０非分岐アルキル、Ｃ９非分岐アルキル、Ｃ８非分岐アルキル、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ６非分岐アルキル、Ｃ５非分岐アルキル、Ｃ４非分岐アルキル、Ｃ３非分岐アルキル、Ｃ２非分岐アルキル、Ｃ１非分岐アルキル、Ｃ１６非分岐アルケニル、Ｃ１５非分岐アルケニル、Ｃ１４非分岐アルケニル、Ｃ１３非分岐アルケニル、Ｃ１２非分岐アルケニル、Ｃ１１非分岐アルケニル、Ｃ１０非分岐アルケニル、Ｃ９非分岐アルケニル、Ｃ８非分岐アルケニル、Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ６非分岐アルケニル、Ｃ５非分岐アルケニル、Ｃ４非分岐アルケニル、Ｃ３非分岐アルケニル、若しくはＣ２アルケニルであるか、又はＲ４が、
Figure 2024517644000019
 であり、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ２～Ｃ１０非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ１０非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、
Figure 2024517644000020
 であり、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ１５非分岐アルキル、Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ１３非分岐アルキル、Ｃ１２非分岐アルキル、Ｃ１１非分岐アルキル、Ｃ１０非分岐アルキル、Ｃ９非分岐アルキル、Ｃ８非分岐アルキル、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ６非分岐アルキル、Ｃ５非分岐アルキル、Ｃ４非分岐アルキル、Ｃ３非分岐アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ１アルキル、Ｃ１６非分岐アルケニル、Ｃ１５非分岐アルケニル、Ｃ１４非分岐アルケニル、Ｃ１３非分岐アルケニル、Ｃ１２非分岐アルケニル、Ｃ１１非分岐アルケニル、Ｃ１０非分岐アルケニル、Ｃ９非分岐アルケニル、Ｃ８非分岐アルケニル、Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ６非分岐アルケニル、Ｃ５非分岐アルケニル、Ｃ４非分岐アルケニル、Ｃ３非分岐アルケニル、若しくはＣ２アルケニルであり、全ての他の残りの変数が、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、若しくは第２７の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第２９の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７若しくは第２８の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７～Ｃ１４アルキル若しくはＣ７～Ｃ１４アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ８～Ｃ１２アルキル若しくはＣ８～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ９アルケニル、Ｃ８アルケニル、若しくはＣ７アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂを合わせた炭素数の合計は１５より大きく、他の残りの変数は全て、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７若しくは第２８の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第３０の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８若しくは第２９の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれＣ８アルキル若しくはＣ８アルケニルより大きく、すなわち、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１６アルキル若しくはＣ９～Ｃ１６アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１５アルキル若しくはＣ９～Ｃ１５アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１４アルキル若しくはＣ９～Ｃ１４アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１３アルキル若しくはＣ９～Ｃ１３アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１２アルキル若しくはＣ９～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１０～Ｃ１２アルキル若しくはＣ１０～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、若しくはＣ９アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂを合わせた炭素数の合計は１５より大きく、他の残りの変数は全て、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８若しくは第２９の実施形態のいずれか１つについて記載されているとおりである。
第３１の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９若しくは第３０の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、互いと等しい数の炭素原子を含有するか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが同じであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、両方とも、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ７アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ９アルケニル、Ｃ８アルケニル、若しくはＣ７アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂを合わせた炭素数の合計は１５より大きく、他の残りの変数は全て、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９若しくは第３０の実施形態のいずれか１つに記載のとおりである。
第３２の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０若しくは第３１の実施形態のいずれか１つに記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０若しくは第３１の実施形態のいずれか１つで定義されるＲ６ａ及びＲ６ｂが、各々、互いとは異なる数の炭素原子を含有するか、又は炭素原子の数Ｒ６ａ及びＲ６ｂは、１個若しくは２個の炭素原子だけ異なるか、又は、炭素原子の数Ｒ６ａ及びＲ６ｂは、１個の炭素原子だけ異なるか、又はＲ６ａがＣ７アルキルでありかつＲ６ａがＣ８アルキルであり、Ｒ６ａがＣ８アルキルでありかつＲ６ａがＣ７アルキルであり、Ｒ６ａがＣ８アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ８アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ１２アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１２アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、Ｒ６ａがＣ７アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ７アルキルであり、Ｒ６ａがＣ８アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ８アルキルであり、Ｒ６ａがＣ９アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ９アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１０アルキルでありかつＲ６ａがＣ１２アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１２アルキルでありかつＲ６ａがＣ１０アルキルであり、Ｒ６ａがＣ１１アルキルでありかつＲ６ａがＣ１３アルキルであり、若しくはＲ６ａがＣ１３アルキルでありかつＲ６ａがＣ１１アルキルであり、などであり、但し、他の残りの変数は全て、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０若しくは第３１の実施形態のいずれか１つに記載のとおりである。
第３３の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１若しくは第３２の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ’は存在しない。
第３４の実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２若しくは第３３の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩において、Ｒ４が、Ｃ７以下の非分岐アルキル若しくはＣ７以下の非分岐アルケニルであるアルケニルであり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれＣ８より大きいアルキル若しくはＣ８より大きいアルケニルであるアルケニルであり、すなわち、又はＲ４が、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ２～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ３～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ３～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ４～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ４～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ５～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ５～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ６～Ｃ７非分岐アルキル若しくはＣ６～Ｃ７非分岐アルケニルであるか、又はＲ４が、Ｃ７非分岐アルキル、Ｃ６非分岐アルキル、Ｃ５非分岐アルキル、Ｃ４非分岐アルキル、Ｃ３非分岐アルキル、Ｃ２非分岐アルキル、Ｃ１非分岐アルキル、Ｃ７非分岐アルケニル、Ｃ６非分岐アルケニル、Ｃ５非分岐アルケニル、Ｃ４非分岐アルケニル、Ｃ３非分岐アルケニル、若しくはＣ２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１６アルキル若しくはＣ９～Ｃ１６アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１５アルキル若しくはＣ９～Ｃ１５アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１４アルキル若しくはＣ９～Ｃ１４アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１３アルキル若しくはＣ９～Ｃ１３アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９～Ｃ１２アルキル若しくはＣ９～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１０～Ｃ１２アルキル若しくはＣ１０～Ｃ１２アルケニルであるか、又はＲ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１６アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１０アルケニル、若しくはＣ９アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂを合わせた炭素数の合計は１５より大きく、他の残りの変数は全て、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２若しくは第３３の実施形態のいずれか１つに記載のとおりである。
いくつかの実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３若しくは第３４の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質において、Ｒ’が存在せず、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子が、脂質が約７．４以下のｐＨ、例えば約７．４のｐＨの生理的条件で存在する場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３若しくは第３４の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質において、Ｒ’が存在せず、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子が、脂質が水溶液中で存在している場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３若しくは第３４の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質において、Ｒ’が存在せず、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子が、脂質が約７．４以下のｐＨで存在する場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ、又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３若しくは第３４の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質において、Ｒ’が存在せず、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子が、脂質が水溶液中で、かつ約７．４以下のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）で存在する場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａ又は第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、第２５、第２６、第２７、第２８、第２９、第３０、第３１、第３２、第３３若しくは第３４の実施形態のいずれか１つによるカチオン性脂質において、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２がそれぞれＣ１～Ｃ６アルキルであり、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２が、それらに結合している窒素原子と一緒になって、四級アンモニウムカチオン又は四級アミンを形成する。
一実施形態では、本開示のカチオン性脂質又は式Ｉ若しくは式Ｉａのカチオン性脂質は、以下から選択される任意の１つの脂質であるか、
Figure 2024517644000021
Figure 2024517644000022
Figure 2024517644000023
Figure 2024517644000024
Figure 2024517644000025
 又はその薬学的に許容される塩である。
更に、式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、式Ｉａ、式ＩＩａ、式ＩＩＩａ、式ＩＶａ、式Ｖａの脂質、若しくはその薬学的に許容される塩（例えば、四級アンモニウム塩）、又は本明細書に開示される例示的な脂質のうちのいずれかは、例えば、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）及びクロロホルム（ＣＨＣｌ３）中のクロロメタン（ＣＨ３Ｃｌ）で処理することによって、四級アミン又は四級アンモニウムカチオンを含む対応する脂質に変換されてもよく、すなわち、Ｒ’、Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣ１～Ｃ６アルキル（全て本開示において企図される）である。このような脂質中の四級アンモニウムカチオンは、それらの溶液のｐＨとは無関係に永久的に帯電している。
いくつかの実施形態では、脂質１、脂質２、脂質３、脂質４、脂質５、脂質６、脂質７、脂質８、脂質９、脂質１０、脂質１１、脂質１２、脂質１３、脂質１４、脂質１５、脂質１６、脂質１７、脂質１８、脂質１９、脂質２０、脂質２１、脂質２２、脂質２３、脂質２４、又は脂質２５のいずれかの窒素原子は、脂質が生理学的条件、例えば、約７．４以下のｐＨ、例えば、約７．４のｐＨで存在する場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、脂質１、脂質２、脂質３、脂質４、脂質５、脂質６、脂質７、脂質８、脂質９、脂質１０、脂質１１、脂質１２、脂質１３、脂質１４、脂質１５、脂質１６、脂質１７、脂質１８、脂質１９、脂質２０、脂質２１、脂質２２、脂質２３、脂質２４、又は脂質２５のいずれかの窒素原子は、脂質が水溶液中で存在する場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、脂質１、脂質２、脂質３、脂質４、脂質５、脂質６、脂質７、脂質８、脂質９、脂質１０、脂質１１、脂質１２、脂質１３、脂質１４、脂質１５、脂質１６、脂質１７、脂質１８、脂質１９、脂質２０、脂質２１、脂質２２、脂質２３、脂質２４、又は脂質２５のいずれかの窒素原子は、脂質が約７．４以下のｐＨ（例えば、約７．４のｐＨ）で存在する場合にプロトン化される。
いくつかの実施形態では、脂質１、脂質２、脂質３、脂質４、脂質５、脂質６、脂質７、脂質８、脂質９、脂質１０、脂質１１、脂質１２、脂質１３、脂質１４、脂質１５、脂質１６、脂質１７、脂質１８、脂質１９、脂質２０、脂質２１、脂質２２、脂質２３、脂質２４、又は脂質２５のいずれかの窒素原子は、脂質が溶液中でかつ、約７．４以下のｐＨ（例えば、約７．４のｐＨ）で存在する場合にプロトン化される。
ＩＩＩ．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）
核酸の送達ビヒクルとしてのＬＮＰ
本明細書に記載のカチオン性脂質と、カプシド不含非ウイルスベクター又は治療用核酸（ＴＮＡ）（例えば、ｃｅＤＮＡ）とを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、又はその薬学的組成物は、目的の標的部位（例えば、細胞、組織、器官等）にカプシド不含非ウイルスＤＮＡベクターを送達するために使用され得る。したがって、本開示の別の態様は、本明細書に記載される１つ以上のカチオン性脂質又はその薬学的に許容される塩と、治療用核酸（therapeutic nucleic acid、ＴＮＡ）とを含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に関する。
カチオン性脂質は、典型的に、核酸カーゴ、例えばｃｅＤＮＡを低ｐＨで凝縮させるため、及び膜会合及び膜融合性を駆動するために用いられる。一般に、カチオン性脂質は、四級アミンを含む脂質を形成するために、正に帯電した、又は例えばｐＨ６．５以下の酸性条件下でプロトン化される少なくとも１つのアミノ基を含む脂質である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、本明細書に提供されるカチオン性脂質又はその薬学的に許容される塩は、約３０％～約８０％、例えば、約３５％～約８０％、約４０％～約８０％、約４５％～約８０％、約５０％～約８０％、約５５％～約８０％、約６０％～約８０％、約６５％～約８０％、約７０％～約８０％、約７５％～約８０％、３０％～約７５％、約３５％～約７５％、約４０％～約７５％、約４５％～約７５％、約５０％～約７５％、約５５％～約７５％、約６０％～約７５％、約６５％～約７５％、約７０％～約７５％、３０％～約７０％、約３５％～約７０％、約４０％～約７０％、約４５％～約７０％、約５０％～約７０％、約５５％～約７０％、約６０％～約７０％、約６５％～約７０％、約３０％～約６５％、約３５％～約６５％、約４０％～約６５％、約４５％～約６５％、約５０％～約６５％、約５５％～約６５％、約６０％～約６５％、約３０％～約６０％、約３５％～約６０％、約４０％～約６０％、約４５％～約６０％、約５０％～約６０％、約５５％～約６０％、約３０％～約５５％、約３５％～約５５％、約４０％～約５５％、約４５％～約５５％、約５０％～約５５％、約３０％～約５０％、約３５％～約５０％、約４０％～約５０％、約４５％～約５０％、約３０％～約４５％、約３５％～約４５％、約４０％～約４５％、約３０％～約４０％、又は約３５％～約４０％のモルパーセンテージで提供される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、本明細書に提供されるカチオン性脂質又はその薬学的に許容される塩は、４０％～約６０％、又は約４５％～約６０％、又は約４５％～約５５％、又は約４５％～約５０％、又は約５０％～約５５％、又は約４０％～約５０％；例えば、これらに限定されないが、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、又は約６０％のモルパーセンテージで存在する。
ステロール
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載のよりカチオン性の脂質、又はその薬学的に許容される塩、及びＴＮＡに加えて、本明細書に記載のＬＮＰは、脂質粒子の膜完全性及び安定性を提供するために、少なくとも１つのステロールを更に含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子に使用することができる例示的なステロールは、コレステロール又はその誘導体である。コレステロール誘導体の非限定的な例としては、５α－コレスタノール、５β－コプロスタノール、コレステリル－（２’－ヒドロキシ）－エチルエーテル、コレステリル－（４’－ヒドロキシ）－ブチルエーテル、及び６－ケトコレスタノールなどの極性類似体；５α－コレスタン、コレステノン、５α－コレスタノン、５β－コレスタノン、及びコレステリルデカノエートなどの非極性類似体、；並びにそれらの混合物が挙げられる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、コレステロール誘導体は、コレステリル－（４’－ヒドロキシ）－ブチルエーテル等の極性類似体である。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、コレステロール誘導体は、コレステリルヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）である。
例示的なコレステロール誘導体は、国際特許出願公開第２００９／１２７０６０号及び米国特許出願公開第２０１０／０１３０５８８号に記載されており、これら各々の内容は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
更なる例示的なステロールとしては、ベータシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、ロペオール（lopeol）、シクロアルテノール、及びそれらの誘導体が挙げられる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子に使用することができる例示的なステロールは、ベータシトステロールである。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子中で、ステロールは、約２０％～約５０％、例えば、約２５％～約５０％、約３０％～約５０％、約３５％～約５０％、約４０％～約５０％、約４５％～約５０％、約２０％～約４５％、約２５％～約４５％、約３０％～約４５％、約３５％～約４５％、約４０％～約４５％、約２０％～約４０％、約２５％～約４０％、約３０％～約４０％、約３５％～約４０％、約２０％～約３５％、約２５％～約３５％、約３０％～約３５％、約２０％～約３０％、又は約２５％～約３５％のモルパーセンテージで存在する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、ステロールは、約３５％～約４５％、又は約４０％～約４５％、又は約３５％～約４０％；例えば、これらに限定されないが、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、又は約４５％のモルパーセンテージで存在する。
非カチオン性脂質
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載される脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、少なくとも１つの非カチオン性脂質を更に含む。非カチオン性脂質は、構造脂質としても知られており、膜の完全性及び脂質粒子の安定性を提供するために、膜融合性を増加させ、形成中のＬＮＰの安定性も増加させる働きをし得る。非イオン化可能な脂質としては、両親媒性脂質、中性脂質、及びアニオン性脂質が挙げられる。したがって、非カチオン性脂質は、中性の非電荷、双性イオン性、又はアニオン性脂質であり得る。
例示的な非カチオン性脂質としては、ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル－ホスファチジルエタノールアミン（１６－Ｏ－モノメチルＰＥなど）、ジメチル－ホスファチジルエタノールアミン（１６－Ｏ－ジメチルＰＥなど）、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジエルコイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジエライドイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＨｙＰＥ）；レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジカシド、セレブロシド、ジセチルホスフェート、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、又はそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。他のジアシルホスファチジルコリン及びジアシルホスファチジルエタノールアミンリン脂質もまた使用され得ることを理解されたい。これらの脂質中のアシル基は、好ましくは、Ｃ１０～Ｃ２４炭素鎖を有する脂肪酸に由来するアシル基、例えば、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、又はオレオイルである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、非カチオン性脂質は、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、及びジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）から選択されるいずれか１つ以上である。
脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中での使用に好適な非カチオン性脂質の他の例としては、例えば、ステアリルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、パルミチン酸アセチル、リシノール酸グリセロール、ステアリン酸ヘキサデシル、ミリスチン酸イソプロピル、両性アクリル系ポリマー、トリエタノールアミン－硫酸ラウリル、アルキル－アリールサルフェートポリエチルオキシル化脂肪酸アミド、ジオクタデシルジメチル臭化アンモニウム、セラミド、スフィンゴミエリン等の非亜リン脂質が挙げられる。
追加の例示的な非カチオン性脂質は、国際特許出願公開第２０１７／０９９８２３号及び米国特許出願公開第２０１８／００２８６６４号に記載されており、これらの各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、非カチオン性脂質は、約２％～約２０％、例えば、約３％～約２０％、約５％～約２０％、約７％～約２０％、約８％～約２０％、約１０％～約２０％、約１２％～約２０％、約１３％～約２０％、約１５％～約２０％、約１７％～約２０％、約１８％～約２０％、約２％～約１８％、約３％～約１８％、約５％～約１８％、約７％～約１８％、約８％～約１８％、約１０％～約１８％、約１２％～約１８％、約１３％～約１８％、約１５％～約１８％、約１７％～約１８％、約２％～約１７％、約３％～約１７％、約５％～約１７％、約７％～約１７％、約８％～約１７％、約１０％～約１７％、約１２％～約１７％、約１３％～約１７％、約１５％～約１７％、約２％～約１５％、約３％～約１５％、約５％～約１５％、約７％～約１５％、約８％～約１５％、約１０％～約１５％、約１２％～約１５％、約１３％～約１５％、約２％～約１３％、約３％～約１３％、約５％～約１３％、約７％～約１３％、約８％～約１３％、約１０％～約１３％、約１２％～約１３％、約２％～約１２％、約３％～約１２％、約５％～約１２％、約７％～約１２％、約８％～約１２％、約１０％～約１２％、約２％～約１０％、約３％～約１０％、約５％～約１０％、約７％～約１０％、約８％～約１０％、約２％～約８％、約３％～約８％、約５％～約８％、約７％～約８％、約２％～約７％、約３％～約７％、約５％～約７％、約２％～約５％、約３％～約５％、又は約２％～約３％のモルパーセンテージで存在する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、非カチオン性脂質は、約５％～約１５％、約７％～約１５％、約８％～約１５％、約１０％～約１５％、約１２％～約１５％、約１３％～約１５％、５％～約１３％、約７％～約１３％、約８％～約１３％、約１０％～約１３％、約１２％～約１３％、約５％～約１２％、約７％～約１２％、約８％～約１２％、約１０％～約１２％、約５％～約１０％、約７％～約１０％、約８％～約１０％、約５％～約８％、約７％～約８％、又は約５％～約７％；例えば、これらに限定されないが、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、又は約１５％のモルパーセンテージで存在する。
ＰＥＧ化脂質
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載される脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、少なくとも１つの（例えば、１つ、２つ、又は３つの）ＰＥＧ化脂質を更に含む。ＰＥＧ化脂質は、１つ以上のポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）ポリマー鎖に共有結合又は非共有結合している、本明細書で定義される脂質であり、したがって、コンジュゲート脂質のクラスである。一般に、ＰＥＧ化脂質は、粒子の凝集を阻害し、かつ／又は立体安定化を提供するために、ＬＮＰに組み込まれる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質は、１つ以上のＰＥＧポリマー鎖に共有結合している。
ＰＥＧ化脂質における使用に好適なＰＥＧ分子としては、約５００～約１０，０００、又は約１，０００～約７，５００、又は約１，０００～約５，０００、又は約２，０００～約５，０００、又は約２，０００～約４，０００、又は約２，０００～約３，５００、又は約２，０００～約３，０００の分子量を有するものが挙げられるが、これらに限定されず、例えば、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２５００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ３５００、及びＰＥＧ４０００が挙げられるが、これらに限定されない。
１つ以上のＰＥＧ鎖が連結される脂質は、ステロール、非カチオン性脂質、又はリン脂質であり得る。例示的なＰＥＧ化脂質としては、ＰＥＧ－ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）（１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）等）、ＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピル（ＤＡＡ）、ＰＥＧ－リン脂質、ＰＥＧ－セラミド（Ｃｅｒ）、ＰＥＧ化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）、ＰＥＧコハク酸ジアシルグリセロール（ＰＥＧＳ－ＤＡＧ）（４－Ｏ－（２’，３’－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－Ｏ－（ｗ－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタンジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ）等）、ＰＥＧジアルコキシプロピルカルバム、Ｎ－（カルボニル－メトキシポリエチレングリコール２０００）－１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンナトリウム塩、又はそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。追加の例示的なＰＥＧ化脂質は、例えば、米国特許第５，８８５，６１３号及び同第６，２８７，５９１号、並びに米国特許出願公開第２００３／００７７８２９号、同第２００３／００７７８２９号、同第２００５／０１７５６８２号、同第２００８／００２００５８号、同第２０１１／０１１７１２５号、同第２０１０／０１３０５８８号、同第２０１６／０３７６２２４号、及び同第２０１７／０１１９９０４号に記載されており、これらの各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中の少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ－ジラウリルオキシプロピル；ＰＥＧ－ジミリスチルオキシプロピル；ＰＥＧ－ジパルミチルオキシプロピル、ＰＥＧ－ジステアリルオキシプロピル；１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）；ＰＥＧ－ジラウリルグリセロール；ＰＥＧ－ジパルミトイルグリセロール；ＰＥＧ－ジステリルグリセロール；ＰＥＧ－ジラウリルグリカミド；ＰＥＧ－ジミリスチルグリカミド；ＰＥＧ－ジパルミトイルグリカミド；ＰＥＧ－ジステリルグリカミド；（１－［８’－（コレスト－５－エン－３［ベータ］－オキシ）カルボキサミド－３’，６’－ジオキサオクタニル］カルバモイル－［オメガ］－メチル－ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ－コレステロール）；３，４－ジテトラデコキシルベンジル－［オメガ］－メチル－ポリ（エチレングリコール）エーテル（ＰＥＧ－ＤＭＢ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］－ヒドロキシル（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ）；及びポリエチレングリコール（モノ）オクタデシル（ｍＰＥＧ－Ｃ１８）からなる群から選択される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ、又はその両方である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ－ＯＨ、ｍＰＥＧ－Ｃ１８、又はそれらの任意の組み合わせ、例えば、それらの２つ若しくは３つの組み合わせである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、又はその両方である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、少なくとも１つのペグ化脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００－ＯＨ、若しくはｍＰＥＧ－Ｃ１８、又はそれらの任意の組み合わせ、例えば、それらの２つ若しくは３つの組み合わせである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、ＤＭＰ－ＰＥＧ２０００及びＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００を含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、及びＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００－ＯＨ、若しくはｍＰＥＧ－Ｃ１８、又はそれらの任意の組み合わせ、例えば、それらの２つ若しくは３つの組み合わせを含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、合計で、約１％～１０％、例えば、約１．５％～約１０％、約２％～約１０％、約２．５％～約１０％、約３％～約１０％、約３．５％～約１０％、約４％～約１０％、約４．５％～約１０％、約５％～約１０％、約５．５％～約１０％、約６％～約１０％、約６．５％～約１０％、約７％～約１０％、約７．５％～約１０％、約８％～約１０％、約８．５％～約１０％、約９％～約１０％、約９．５％～約１０％、約１％～約５％、約１．５％～約５％、約２％～約５％、約２．５％～約５％、約３％～約５％、約３．５％～約５％、約４％～約５％、約４．５％～約５％、約１％～約４％、約１．５％～約４％、約２％～約４％、約２．５％～約４％、約３％～約４％、約３．５％～約４％、約１％～約３．５％、約１．５％～約３．５％、約２％～約３．５％、約２．５％～約３．５％、約３％～約３．５％、約１％～約３％、約１．５％～約３％、約２％～約３％、約２．５％～約３％、約１％～約２．５％、約１．５％～約２．５％、約２％～約２．５％、約１％～約２％、約１．５％～約２％、又は約１％～約１．５％のモルパーセンテージで存在する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、合計で、約１％～約２％、約１．５％～約２％、又は約１％～約１．５％；例えば、これらに限定されないが、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、又は約２％のモルパーセンテージで存在する。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、合計で、約２．１％～約１０％、例えば、約２．５％～約１０％、約３％～約１０％、約３．５％～約１０％、約４％～約１０％、約４．５％～約１０％、約５％～約１０％、約５．５％～約１０％、約６％～約１０％、約６．５％～約１０％、約７％～約１０％、約７．５％～約１０％、約８％～約１０％、約８．５％～約１０％、約９％～約１０％、約９．５％～約１０％、約２．１％～約７％、約２．５％～約７％、約３％～約７％、約３．５％～約７％、約４％～約７％、約４．５％～約７％、約５％～約７％、約５．５％～約７％、約６％～約７％、約６．５％～約７％、約２．１％～約５％、約２．５％～約５％、約３％～約５％、約３．５％～約５％、約４％～約５％、約４．５％～約５％、約２．１％～約４％、約２．５％～約４％、約３％～約４％、約３．５％～約４％、約２．１％～約３．５％、約２．５％～約３．５％、約３％～約３．５％、約２．１％～約３％、約２．５％～約３％、又は約２．１％～約２．５％のモルパーセンテージで存在する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質は、合計で、約２．１％～約５％、約２．５％～約５％、約３％～約５％、約３．５％～約５％、約４％～約５％、約４．５％～約５％、約２．１％～約４％、約２．５％～約４％、約３％～約４％、約３．５％～約４％、約２．１％～約３．５％、約２．５％～約３．５％、約３％～約３．５％、約２．１％～約３％、約２．５％～約３％、又は約２．１％～約２．５％；例えば、これらに限定されないが、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３％、約３．１％、約３．２％、約３．３％、約３．４％、約３．５％、約３．６％、約３．７％、約３．８％、約３．９％、約４％、約４．１％、約４．２％、約４．３％、約４．４％、約４．５％、約４．６％、約４．７％、約４．８％、約４．９％、又は約５％のモルパーセンテージで存在する。
組織特異的標的化リガンド及びＰＥＧ化脂質コンジュゲート
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、目的の標的部位へのＬＮＰの送達を補助、増強、及び／又は増加させる目的で、少なくとも１つの組織特異的標的化リガンドを更に含む。リガンドは、ペプチド、タンパク質、抗体、グリカン、糖、核酸、脂質、グリカン、糖、核酸、脂質、又は上記のいずれかを含む結合体）であり得、これは、特定の細胞及び組織に独特であるレセプター又は表面抗原を認識する。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、少なくとも１つの組織特異的標的化リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）又はＧａｌＮＡｃ誘導体である。用語「ＧａｌＮＡｃ誘導体」は、修飾ＧａｌＮＡｃ、官能化ＧａｌＮＡｃ、及び１つ以上のＧａｌＮＡｃ分子（天然又は修飾）が、１つ以上の官能基又は１つ以上のクラスの例示的な生物学的分子（例えば、ペプチド、タンパク質、抗体、グリカン、糖、核酸、脂質が挙げられるが、これらに限定されない）に共有結合しているＧａｌＮＡｃ結合体を包含する。１つ以上のＧａｌＮＡｃ分子が結合され得る生体分子自体は、典型的には、安定性の増加及び／又は凝集の阻害を助ける。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＧａｌＮＡｃなどの組織特異的標的リガンドと、リガンドがコンジュゲートされる生体分子とのモル比は、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、及び１：１０である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＧａｌＮＡｃなどの組織特異的標的リガンドと、リガンドがコンジュゲートされる生体分子とのモル比は、１：１（例えば、モノ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ）、２：１（ビ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ）、３：１（トリ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ）、及び４：１（テトラアンテナリーＧａｌＮＡｃ）である。コンジュゲート化ＧａｌＮＡｃ、例えばトリ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ（ＧａｌＮＡｃ３）又はテトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ（ＧａｌＮＡｃ４）は、当技術分野で公知のように合成することができ（ＷＯ２０１７／０８４９８７及びＷＯ２０１３／１６６１２１を参照されたい）、当該技術分野において周知のように脂質又はＰＥＧに化学的にコンジュゲートすることができる（Ｒｅｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）「Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｐｐｅｒ Ｓｉｚｅ Ｌｉｍｉｔ ｆｏｒ Ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｎ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ｖｉｖｏ」２７６：３７５５７７－３７５８４を参照されたい）。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、組織特異的標的化リガンドは、本明細書で定義及び記載されるＰＥＧ化脂質に共有結合して、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートを形成する。例示的なＰＥＧ化脂質は上に記載されており、ＰＥＧ－ジラウリルオキシプロピル；ＰＥＧ－ジミリスチルオキシプロピル；ＰＥＧ－ジパルミチルオキシプロピル、ＰＥＧ－ジステアリルオキシプロピル；１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）；ＰＥＧ－ジラウリルグリセロール；ＰＥＧ－ジパルミトイルグリセロール；ＰＥＧ－ジステリルグリセロール；ＰＥＧ－ジラウリルグリカミド；ＰＥＧ－ジミリスチルグリカミド；ＰＥＧ－ジパルミトイルグリカミド；ＰＥＧ－ジステリルグリカミド；（１－［８’－（コレスト－５－エン－３［ベータ］－オキシ）カルボキサミド－３’，６’－ジオキサオクタニル］カルバモイル－［オメガ］－メチル－ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ－コレステロール）；３，４－ジテトラデコキシルベンジル－［オメガ］－メチル－ポリ（エチレングリコール）エーテル（ＰＥＧ－ＤＭＢ）、及び１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）を含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、組織特異的標的化リガンドは、ＧａｌＮＡｃ又はＧａｌＮＡｃ誘導体に共有結合されている。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、モノ－、ビ－、トリ－、又はテトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ－ＤＳＰＥ－ＰＥＧである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、モノ－、ビ－、トリ－、又はテトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ－ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、テトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ－ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、約０．１％～約１０％、例えば、約０．２％～約１０％、約０．３％～約１０％、約０．４％～約１０％、約０．５％～約１０％、約０．６％～約１０％、約０．７％～約１０％、約０．８％～約１０％、約０．９％～約１０％、約１％～約１０％、約１．５％～約１０％、約２％～約１０％、約２．５％～約１０％、約３％～約１０％、約３．５％～約１０％、約４％～約１０％、約４．５％～約１０％、約５％～約１０％、約５．５％～約１０％、約６％～約１０％、約６．５％～約１０％、約７％～約１０％、約７．５％～約１０％、約８％～約１０％、約８．５％～約１０％、約９％～約１０％、約９．５％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．２％～約５％、約０．３％～約５％、約０．４％～約５％、約０．５％～約５％、約０．６％～約５％、約０．７％～約５％、約０．８％～約５％、約０．９％～約１０％、約１％～約５％、約１．５％～約５％、約２％～約５％、約２．５％～約５％、約３％～約５％、約３．５％～約５％、約４％～約５％、約４．５％～約５％、約０．１％～約３％、約０．２％～約３％、約０．３％～約３％、約０．４％～約３％、約０．５％～約３％、約０．６％～約３％、約０．７％～約３％、約０．８％～約３％、約０．９％～約３％、約１％～約３％、約１．５％～約３％、約２％～約３％、約２．５％～約３％、約０．１％～約２％、約０．２％～約２％、約０．３％～約２％、約０．４％～約２％、約０．５％～約２％、約０．６％～約２％、約０．７％～約２％、約０．８％～約２％、約０．９％～約２％、約１％～約２％、約１．５％～約２％、約０．１％～約１．５％、０．２％～約１．５％、約０．３％～約１．５％、約０．４％～約１．５％、約０．５％～約１．５％、約０．６％～約１．５％、約０．７％～約１．５％、約０．８％～約１．５％、約０．９％～約１．５％、約１％～約１．５％、約０．１％～約１％、０．２％～約１％、約０．３％～約１％、約０．４％～約１％、約０．５％～約１％、約０．６％～約１％、約０．７％～約１％、約０．８％～約１％、又は約０．９％～約１％のモルパーセンテージで存在する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質ナノ粒子において、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、０．１％～約１．５％、０．２％～約１．５％、約０．３％～約１．５％、約０．４％～約１．５％、約０．５％～約１．５％、約０．６％～約１．５％、約０．７％～約１．５％、約０．８％～約１．５％、約０．９％～約１．５％、約１％～約１．５％、約０．１％～約１％、０．２％～約１％、約０．３％～約１％、約０．４％～約１％、約０．５％～約１％、約０．６％～約１％、約０．７％～約１％、約０．８％～約１％、又は約０．９％～約１％；例えば、これらに限定されないが、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、又は約１．５％のモルパーセンテージで存在する。
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の他の成分
コンジュゲート化脂質などのＬＮＰの更なる成分もまた、本開示において企図される。例示的な複合脂質としては、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）－脂質コンジュゲート、ポリアミド－脂質コンジュゲート（ＡＴＴＡ－脂質コンジュゲートなど）、カチオン性－ポリマー脂質（ＣＰＬ）コンジュゲート、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
更に、本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載される脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、例えば、ＬＮＰ内への共封入によって、又は治療用核酸若しくは上記のＬＮＰの成分のいずれか１つへのコンジュゲーションによって、免疫調節化合物を更に含む。デキサメタゾン又は修飾されたデキサメタゾンなどの免疫調節化合物は、免疫応答を最小限に抑えるのに役立ち得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰは、デキサメタゾンパルミチン酸エステルを更に含む。
本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、カチオン性脂質に加えて、脂質ナノ粒子は、ｃｅＤＮＡなどの核酸カーゴを凝縮及び／又は封入するための薬剤を含む。このような薬剤は、本明細書では、凝縮剤又は封入剤とも称される。制限なしに、核酸を凝縮及び／又は封入するための当該技術分野で既知の任意の化合物は、それが非融合性である限り使用することができる。言い換えれば、薬剤は、ｃｅＤＮＡ等の核酸カーゴを凝縮及び／又は封入することができるが、融合活性をほとんど又はまったく有しない。理論に拘束されることを望まないが、凝縮剤は、ｃｅＤＮＡ等の核酸を凝縮／封入しない場合、いくらかの融合活性を有する可能性があるが、当該凝縮剤で形成された脂質ナノ粒子を封入する核酸は、非融合性であり得る。
総脂質対核酸比
一般に、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、最終粒子が、約１０：１～６０：１、例えば、約１５：１～約６０：１、約２０：１～約６０：１、約２５：１～約６０：１、約３０：１～約６０：１、約３５：１～約６０：１、約４０：１～約６０：１、約４５：１～約６０：１、約５０：１～約６０：１、約５５：１～約６０：１、約１０：１～約５５：１、約１５：１～約５５：１、約２０：１～約５５：１、約２５：１～約５５：１、約３０：１～約５５：１、約３５：１～約５５：１、約４０：１～約５５：１、約４５：１～約５５：１、約５０：１～約５５：１、約１０：１～約５０：１、約１５：１～約５０：１、約２０：１～約５０：１、約２５：１～約５０：１、約３０：１～約５０：１、約３５：１～約５０：１、約４０：１～約５０：１、約４５：１～約５０：１、約１０：１～約４５：１、約１５：１～約４５：１、約２０：１～約４５：１、約２５：１～約４５：１、約３０：１～約４５：１、約３５：１～約４５：１、約４０：１～約４５：１、約１０：１～約４０：１、約１５：１～約４０：１、約２０：１～約４０：１、約２５：１～約４０：１、約３０：１～約４０：１、約３５：１～約４０：１、約１０：１～約３５：１、約１５：１～約３５：１、約２０：１～約３５：１、約２５：１～約３５：１、約３０：１～約３５：１、約１０：１～約３０：１、約１５：１～約３０：１、約２０：１～約３０：１、約２５：１～約３０：１、約１０：１～約２５：１、約１５：１～約２５：１、約２０：１～約２５：１、約１０：１～約２０：１、約１５：１～約２０：１、又は約１０：１～約１５：１の総脂質対治療用核酸（質量若しくは重量）比を有するように調製される。
脂質及び核酸の量を調整して、所望のＮ／Ｐ比（すなわち、正に帯電可能なポリマーアミン（Ｎ＝窒素）基の負に荷電した核酸ホスフェート（Ｐ）基に対する比）、例えば３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０以上のＮ／Ｐ比を提供することができる。一般に、脂質粒子製剤の全体脂質含有量は、約５ｍｇ／ｍＬ～約３０ｍｇ／ｍＬの範囲であり得る。
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）のサイズ
本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態によれば、ＬＮＰは、約４０ｎｍ～約１２０ｎｍ、例えば、約４５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約５５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約６５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約７５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約８５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約９０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約９５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１００ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１０５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１１０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約１１５ｎｍ～約１２０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約４５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約５５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約６５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約８５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約９０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約９５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約１００ｎｍ～約１１０ｎｍ、約１０５ｎｍ～約１１０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４５ｎｍ～約１００ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約５５ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６５ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７５ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８５ｎｍ～約１００ｎｍ、約９０ｎｍ～約１００ｎｍ、又は約９５ｎｍ～約１００ｎｍの範囲の直径を有する。
本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態によれば、ＬＮＰは、約１００ｎｍ未満、例えば、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４５ｎｍ～約９０ｎｍ、約５０ｎｍ～約９０ｎｍ、約５５ｎｍ～約９０ｎｍ、約６０ｎｍ～約９０ｎｍ、約６５ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７５ｎｍ～約９０ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、約８５ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８５ｎｍ、約４５ｎｍ～約８５ｎｍ、約５０ｎｍ～約８５ｎｍ、約５５ｎｍ～約８５ｎｍ、約６０ｎｍ～約８５ｎｍ、約６５ｎｍ～約８５ｎｍ、約７０ｎｍ～約８５ｎｍ、約７５ｎｍ～約８５ｎｍ、約８０ｎｍ～約８５ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、約４５ｎｍ～約８０ｎｍ、約５０ｎｍ～約８０ｎｍ、約５５ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６５ｎｍ～約８０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約７５ｎｍ～約８０ｎｍ、約４０ｎｍ～約７５ｎｍ、約４５ｎｍ～約７５ｎｍ、約５０ｎｍ～約７５ｎｍ、約５５ｎｍ～約７５ｎｍ、約６０ｎｍ～約７５ｎｍ、約６５ｎｍ～約７５ｎｍ、約７０ｎｍ～約７５ｎｍ、約４０ｎｍ～約７０ｎｍ、約４５ｎｍ～約７０ｎｍ、約５０ｎｍ～約７０ｎｍ、約５５ｎｍ～約７０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、又は約６５ｎｍ～約７０ｎｍの直径を有する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＬＮＰは、約６０ｎｍ～約８５ｎｍ、約６５ｎｍ～約８５ｎｍ、約７０ｎｍ～約８５ｎｍ、約７５ｎｍ～約８５ｎｍ、約８０ｎｍ～約８５ｎｍ、約６０ｎｍ～約８０ｎｍ、約６５ｎｍ～約８０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、約７５ｎｍ～約８０ｎｍ、約６０ｎｍ～約７５ｎｍ、約６５ｎｍ～約７５ｎｍ、約７０ｎｍ～約７５ｎｍ、約６０ｎｍ～約７０ｎｍ、又は約６５ｎｍ～約７０ｎｍ；例えば、これらに限定されないが、約６０ｍｍ、約６１ｍｍ、約６２ｍｍ、約６３ｍｍ、約６４ｍｍ、約６５ｍｍ、約６６ｍｍ、約６７ｍｍ、約６８ｍｍ、約６９ｍｍ、約７０ｍｍ、約７１ｍｍ、約７２ｍｍ、約７３ｍｍ、約７４ｍｍ、約７５ｍｍ、約７６ｍｍ、約７７ｍｍ、約７８ｍｍ、約７９ｍｍ、約８０ｍｍ、約８１ｍｍ、約８２ｍｍ、約８３ｍｍ、約８４ｍｍ、又は約８５ｍｍの直径を有する。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）サイズは、例えば、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＵＫ）システムを使用して準弾性光散乱によって決定することができる。
カチオン性脂質、ステロール、非カチオン性脂質、ＰＥＧ化脂質、及び任意選択で組織特異的標的化リガンドを含むＬＮＰ
本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態によれば、本明細書に提供される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの非カチオン性脂質、及び少なくとも１つのＰＥＧ化脂質を含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの非カチオン性脂質、及び少なくとも１つのＰＥＧ化脂質から本質的になる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの非カチオン性脂質、及び少なくとも１つのＰＥＧ化脂質からなる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、カチオン性脂質：ステロール：非カチオン性脂質：ＰＥＧ化脂質のモル比は、約４８（±５）：１０（±３）：４１（±５）：２（±２）、例えば約４７．５：１０．０：４０．７：１．８又は約４７．５：１０．０：４０．７：３．０である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態によれば、本明細書に提供される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質、及び組織特異的標的化リガンドを含む。本明細書における態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、組織特異的標的化リガンドは、ＧａｌＮａｃである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質、及び組織特異的標的化リガンドから本質的になる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に提供される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのステロール、少なくとも１つの非カチオン性脂質、少なくとも１つのＰＥＧ化脂質、及び組織特異的標的化リガンドからなる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、組織特異的標的化リガンドは、ＰＥＧ化脂質にコンジュゲートして、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートを形成する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、モノ－、ビ－、トリ－、又はテトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ－ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートは、テトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ－ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、カチオン性脂質：ステロール：非カチオン性脂質：ＰＥＧ化脂質：ＰＥＧ化脂質コンジュゲートのモル比は、約４８（±５）：１０（±３）：４１（±５）：２（±２）、１．５（±１）、例えば、４７．５：１０．０：４０．２：１．８：０．５又は４７．５：１０．０：３９．５；２．５：０．５である。
ＩＶ．治療用核酸（ＴＮＡ）
本開示は、治療用核酸（ＴＮＡ）を送達するための脂質ベースのプラットフォームを提供する。ＲＮＡベースの治療薬の非限定的な例は、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ及びオリゴヌクレオチド、リボザイム、アプタマー、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含む。ＤＮＡベースの治療薬の非限定的な例は、ミニサークルＤＮＡ、ミニ遺伝子、ウイルス性ＤＮＡ（例えば、レンチウイルス又はＡＡＶゲノム）若しくは非ウイルス性合成ＤＮＡベクター、閉端直鎖状の二重鎖ＤＮＡ（ｃｅＤＮＡ／ＣＥＬｉＤ）、プラスミド、バクミド、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡベクター、最小限度に免疫学的に定義された遺伝子発現（ＭＩＤＧＥ）ベクター、非ウイルス性ミニストリングＤＮＡベクター（直鎖状の共有結合性閉鎖ＤＮＡベクター）、又はダンベル形ＤＮＡミニマルベクター（「ダンベルＤＮＡ」）を含む。したがって、本開示の態様は、一般に、ＴＮＡを含むイオン化可能な脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）と呼ばれるプロセスを通じて特定のタンパク質の細胞内レベルを下方調節することができるｓｉＲＮＡ又はｍｉＲＮＡもまた、本発明によって核酸治療薬であると企図される。ｓｉＲＮＡ又はｍｉＲＮＡが宿主細胞の細胞質に導入された後、これらの二本鎖ＲＮＡ構築物はＲＩＳＣと呼ばれるタンパク質に結合することができる。ｓｉＲＮＡ又はｍｉＲＮＡのセンス鎖はＲＩＳＣ複合体によって除去される。ＲＩＳＣ複合体は、相補的ｍＲＮＡと結合すると、ｍＲＮＡを切断し、切断された鎖を放出する。ＲＮＡｉは、対応するタンパク質の下方調節をもたらすｍＲＮＡの特異的破壊を誘導することによるものである。
タンパク質へのｍＲＮＡ翻訳を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）及びリボザイムは、核酸治療薬となり得る。アンチセンス構築物の場合、これらの一本鎖デオキシ核酸は、標的タンパク質ｍＲＮＡの配列に相補的な配列を有し、ワトソン－クリック塩基対合によってｍＲＮＡに結合することができる。この結合は、標的ｍＲＮＡの翻訳を防ぎ、かつ／又はｍＲＮＡ転写産物のＲＮａｓｅＨ分解を誘起する。その結果、アンチセンスオリゴヌクレオチドは作用の特異性（すなわち、特定の疾患関連タンパク質の下方調節）を高めた。
本明細書に提供される方法及び組成物のいずれにおいても、治療用核酸（ＴＮＡ）は治療用ＲＮＡであり得る。当該治療用ＲＮＡは、ｍＲＮＡ翻訳の阻害剤、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の薬剤、触媒的に活性なＲＮＡ分子（リボザイム）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、又はｍＲＮＡ転写物（ＡＳＯ）、タンパク質若しくは他の分子リガンドに結合するＲＮＡ（アプタマー）であり得る。本明細書に提供される方法のいずれにおいても、ＲＮＡｉの薬剤は、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、短鎖干渉ＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、又は三重らせん形成オリゴヌクレオチドであり得る。
本明細書に提供される方法組成物のいずれにおいても、治療用核酸（ＴＮＡ）は、閉端二本鎖ＤＮＡ（例えば、ｃｅＤＮＡ、ＣＥＬｉＤ、直鎖状の共有結合的に閉じたＤＮＡ（「ミニストリング」）、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）、プロテロメア閉端ＤＮＡ、ダンベル直鎖状ＤＮＡ、プラスミド、ミニサークル等）等の治療用ＤＮＡである。本開示のいくつかの実施形態は、導入遺伝子（例えば、治療用核酸）を発現することができる閉端直鎖状二重鎖（ｃｅＤＮＡ）を含む方法及び組成物に基づく。本明細書に記載されるようなｃｅＤＮＡベクターは、ウイルスカプシド内の限定空間によって課されるパッケージング制約を有しない。ｃｅＤＮＡベクターは、原核細胞的に産生されたプラスミドＤＮＡベクターに対する可変の真核細胞的に産生された代替物を表す。
ｃｅＤＮＡベクターは、好ましくは、非連続的な構造ではなく直鎖状で連続的な構造を有する。直鎖状で連続的な構造は、細胞エンドヌクレアーゼによる攻撃に対してより安定であると同時に、組換えられて変異誘発を引き起こす可能性が低いと考えられる。したがって、直鎖状で連続的な構造のｃｅＤＮＡベクターは、好ましい実施形態である。連続的な直鎖状の一本鎖分子内二重鎖ｃｅＤＮＡベクターは、ＡＡＶカプシドタンパク質をコードする配列なしに、終端に共有結合している可能性がある。これらのｃｅＤＮＡベクターは、細菌起源の環状二重鎖核酸分子であるプラスミド（本明細書に記載されるｃｅＤＮＡプラスミドを含む）とは構造的に異なる。プラスミドの相補鎖は、変性に続いて分離されて２つの核酸分子を産生することができるが、反対に、ｃｅＤＮＡベクターは、相補鎖を有するが、単一ＤＮＡ分子であり、したがって変性された場合でも単一分子のままである。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、プラスミドとは異なり、原核細胞タイプのＤＮＡ塩基メチル化なしに産生され得る。したがって、ｃｅＤＮＡベクター及びｃｅＤＮＡ－プラスミドは、構造（特に、直鎖状対環状）並びにこれらの異なる対象物を産生及び精製するために使用される方法の両方に関して、またｃｅＤＮＡ－プラスミドの場合は原核細胞タイプ及びｃｅＤＮＡベクターの場合は真核細胞タイプのものである、それらのＤＮＡメチル化に関して異なる。
共有結合性閉端を有する非ウイルス性カプシド不含ｃｅＤＮＡ分子（ｃｅＤＮＡ）が本明細書に提供される。これらの非ウイルスカプシド不含ｃｅＤＮＡ分子は、２つの異なる逆位末端反復（ＩＴＲ）配列の間に位置付けられた異種遺伝子（例えば、導入遺伝子、特に治療用導入遺伝子）を含有する発現構築物（例えば、ｃｅＤＮＡ－プラスミド、ｃｅＤＮＡ－バクミド、ｃｅＤＮＡ－バキュロウイルス又は統合型細胞株）からの許容宿主細胞中で産生され得、ＩＴＲは、互いに関して異なる。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＴＲのうちの１つは、野生型ＩＴＲ配列と比較して、欠失、挿入、及び／又は置換によって改変されており（例えば、ＡＡＶ ＩＴＲ）、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、機能的末端分解部位（ＴＲＳ）及びＲｅｐ結合部位を含む。ｃｅＤＮＡベクターは、好ましくは、発現カセット等の分子の少なくとも一部分にわたって二重鎖、例えば、自己相補的である（例えば、ｃｅＤＮＡは、二本鎖環状分子ではない）。ｃｅＤＮＡベクターは、共有結合性閉端を有し、したがって、例えば、１時間以上３７℃でエキソヌクレアーゼ消化（例えば、エキソヌクレアーゼＩ又はエキソヌクレアーゼＩＩＩ）に対して耐性である。
本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一態様では、ｃｅＤＮＡベクターは、５’から３’方向に、第１のアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）、目的のヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載される発現カセット）、及び第２のＡＡＶ ＩＴＲを含む。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、第１のＩＴＲ（５’ＩＴＲ）及び第２のＩＴＲ（３’ＩＴＲ）は、互いに対して非対称であり、すなわち、それらは、互いに異なる三次元空間構成を有する。例示的な実施形態として、第１のＩＴＲは、野生型ＩＴＲであり得、第２のＩＴＲは、変異型又は修飾型ＩＴＲであり得るか、又はその逆であり、第１のＩＴＲは、変異型又は修飾型ＩＴＲであり得、第２のＩＴＲは、野生型ＩＴＲであり得る。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、第１のＩＴＲ及び第２のＩＴＲは、両方とも修飾されているが、異なる配列であるか、又は異なる修飾を有するか、又は同一の修飾型ＩＴＲではなく、異なる三次元空間構成を有する。言い換えると、非対称ＩＴＲを有するｃｅＤＮＡベクターは、ＷＴ－ＩＴＲに対する１つのＩＴＲにおける任意の変化が他のＩＴＲに反映されないＩＴＲを有するか、又は代替的に、非対称ＩＴＲが修飾された非対称ＩＴＲ対を有する場合、互いに対して異なる配列及び異なる三次元形状を有し得る。
本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、５’から３’方向に、第１のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）、目的のヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載される発現カセット）、及び第２のＡＡＶ ＩＴＲを含み、第１のＩＴＲ（５’ＩＴＲ）及び第２のＩＴＲ（３’ＩＴＲ）は、互いに対して対称又は実質的に対称であり、すなわち、ｃｅＤＮＡベクターは、対称の三次元空間構成を有するＩＴＲ配列を含み得、それによりそれらの構造は、幾何学的空間で同じ形状であるか、又は三次元空間で同じＡ、Ｃ－Ｃ’、Ｂ－Ｂ’ループを有する。そのような実施形態では、対称のＩＴＲ対、又は実質的に対称のＩＴＲ対は、野生型ＩＴＲではない修飾型ＩＴＲ（例えば、ｍｏｄ－ＩＴＲ）であり得る。ｍｏｄ－ＩＴＲ対は、野生型ＩＴＲからの１つ以上の修飾を有し、互いに逆相補（逆位）である同じ配列を有し得る。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、修飾型ＩＴＲ対は、本明細書で定義されるように実質的に対称であり、すなわち、修飾型ＩＴＲ対は、異なる配列を有し得るが、対応する又は同じ対称な三次元形状を有し得る。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、対称のＩＴＲ、又は実質的に対称のＩＴＲは、本明細書に記載されるように野生型（ＷＴ－ＩＴＲ）であり得る。すなわち、両方のＩＴＲが野生型配列を有するが、必ずしも同じＡＡＶ血清型のＷＴ－ＩＴＲである必要はない。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、一方のＷＴ－ＩＴＲは、１つのＡＡＶ血清型に由来し得、他方のＷＴ－ＩＴＲは、異なるＡＡＶ血清型に由来し得る。そのような実施形態では、ＷＴ－ＩＴＲ対は、本明細書で定義されるように実質的に対称であり、すなわち、それらは、対称的な三次元空間構成を維持しながら、１つ以上の保存的ヌクレオチド修飾を有することができる。
本明細書に提供される野生型又は変異型又は他の方法で修飾されたＩＴＲ配列は、ｃｅＤＮＡベクターの産生のために発現構築物（例えば、ｃｅＤＮＡ－プラスミド、ｃｅＤＮＡ－バクミド、ｃｅＤＮＡ－バキュロウイルス）に含まれるＤＮＡ配列を表す。したがって、ｃｅＤＮＡ－プラスミド又は他の発現構築物から産生されたｃｅＤＮＡベクター中に実際に含有されるＩＴＲ配列は、産生プロセス中に起こる天然に存在する変化（例えば、複製エラー）の結果として、本明細書に提供されるＩＴＲ配列に対して同一であっても同一でなくてもよい。
本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、治療用核酸配列である導入遺伝子を有する発現カセットを含む本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクターは、導入遺伝子の発現を可能にするか又は制御する１つ以上の調節配列に作動可能に連結され得る。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、ポリヌクレオチドは、第１のＩＴＲ配列及び第２のＩＴＲ配列を含み、目的のヌクレオチド配列は、第１及び第２のＩＴＲ配列によって隣接され、第１及び第２のＩＴＲ配列は、互いに対して非対称であるか、又は互いに対して対称である。
本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、発現カセットは、２つのＩＴＲ間に位置し、導入遺伝子に操作可能に連結されたプロモーター、転写後調節エレメント、並びにポリアデニル化及び終結シグナルのうちの１つ以上をこの順に含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、プロモーターは、調節可能－誘導性又は抑制性である。プロモーターは、導入遺伝子の転写を促進する任意の配列であり得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーター又はそのバリアントである。転写後調節エレメントは、導入遺伝子の発現を調整する配列であり、非限定的な例として、治療用核酸配列である導入遺伝子の発現を強化する三次構造を作成する任意の配列である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、転写後調節エレメントは、ＷＰＲＥを含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ポリアデニル化及び終結シグナルは、ＢＧＨｐｏｌｙＡを含む。当該技術分野において既知の任意のシス調節エレメント、又はその組み合わせ、例えば、ＳＶ４０後期ポリＡシグナル上流エンハンサー配列（ＵＳＥ）又は他の転写後処理エレメント（単純ヘルペスウイルス又はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のチミジンキナーゼ遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない）が追加として使用され得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、５’～３’方向の発現カセット長は、ＡＡＶビリオン中でカプシド化されることが知られている最大長を超える。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、長さは、４．６ｋｂ超、又は５ｋｂ超、又は６ｋｂ超、又は７ｋｂ超である。様々な発現カセットが、本明細書に例示される。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では発現カセットは、４０００ヌクレオチド超、５０００ヌクレオチド、１０，０００ヌクレオチド、若しくは２０，０００ヌクレオチド、若しくは３０，０００ヌクレオチド、若しくは４０，０００ヌクレオチド、又は５０，０００ヌクレオチド、又は約４０００～１０，０００ヌクレオチド、若しくは１０，０００～５０，０００ヌクレオチドの任意の範囲、又は５０，０００ヌクレオチド超を含み得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、発現カセットはまた、内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）及び／又は２Ａエレメントを含み得る。シス調節エレメントとしては、プロモーター、リボスイッチ、インスレーター、ｍｉｒ調節エレメント、転写後調節エレメント、組織及び細胞型特異的プロモーター、並びにエンハンサーが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＴＲは、導入遺伝子のプロモーターとして作用し得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、導入遺伝子の発現を調節するための追加の構成成分、例えば、導入遺伝子の発現を制御及び調節するための調節スイッチを含み、所望であれば、ｃｅＤＮＡベクターを含む細胞の制御された細胞死を可能にするキルスイッチである調節スイッチを含み得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、カプシド不含であり、第１のＩＴＲ、発現可能な導入遺伝子カセット及び第２のＩＴＲをこの順にコードするプラスミドから取得され得、第１及び／又は第２のＩＴＲ配列のうちの少なくとも１つは、対応する野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲ配列に関して変異する。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に開示されるｃｅＤＮＡベクターは、治療目的（例えば、医療、診断、若しくは獣医学的使用）又は免疫原性ポリペプチドに使用される。
発現カセットは、治療用核酸配列である任意の導入遺伝子を含むことができる。ある特定の実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、１つ以上のポリペプチド、ペプチド、リボザイム、ペプチド核酸、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉｓ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスポリヌクレオチド、抗体、抗原結合断片、又はそれらの任意の組み合わせを含む、対象における任意の目的の遺伝子を含む。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクターの発現カセット、発現構築物、又はドナー配列で提供される配列は、宿主細胞についてコドン最適化することができる。本明細書で使用される場合、「最適化されたコドン」又は「コドン最適化」という用語は、目的の脊椎動物、例えばマウス又はヒトの細胞中の発現強化のために、少なくとも１つ、２つ以上、又は相当数の未変性配列（例えば、原核細胞配列）のコドンを、その脊椎動物の遺伝子中でより頻繁に又は最も頻繁に使用されるコドンと置き換えることによって、核酸配列を修飾するプロセスを指す。様々な種は、特定のアミノ酸のある特定のコドンに対して特定の偏向を呈する。
典型的に、コドン最適化は、元の翻訳されたタンパク質のアミノ酸配列を変更しない。最適化されたコドンは、例えば、ＡｐｔａｇｅｎのＧｅｎｅ Ｆｏｒｇｅ（登録商標）コドン最適化及びカスタム遺伝子合成プラットフォーム（Ａｐｔａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，２１９０ Ｆｏｘ Ｍｉｌｌ Ｒｄ．Ｓｕｉｔｅ ３００，Ｈｅｒｎｄｏｎ，Ｖａ．２０１７１）又は別の公開データベースを使用して決定することができる。
多くの生物は、特定のコドンを使用して、成長するペプチド鎖における特定のアミノ酸の挿入をコードする偏向を示す。生物間のコドン使用頻度の違いであるコドン優先又はコドン偏向は、遺伝暗号の縮退によってもたらされ、多くの生物の間で十分に文書化されている。コドン偏向は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と相関関係があることが多く、特に翻訳されるコドンの特性及び特定のトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の可用性に依存すると考えられている。細胞内の選択されたｔＲＮＡの優勢は、一般にペプチド合成で最も頻繁に使用されるコドンの反映である。したがって、コドン最適化に基づいて、所与の生物における最適な遺伝子発現のために遺伝子を調整することができる。
多種多様な動物、植物、及び微生物種で利用可能な多数の遺伝子配列を考えると、コドン使用頻度の相対頻度を計算することが可能である（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．「Ｃｏｄｏｎ ｕｓａｇｅ ｔａｂｕｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄａｔａｂａｓｅｓ：ｓｔａｔｕｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｙｅａｒ ２０００」Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８：２９２（２０００））。
逆位末端反復（ＩＴＲ）
本明細書に記載されるように、ｃｅＤＮＡベクターは、共有結合性末端（直鎖状で連続的な非カプシド構造）を有する相補的ＤＮＡの連続鎖から形成されたカプシド不含直鎖状二重鎖ＤＮＡ分子であり、異なるか、又は互いに対して非対称である５’逆位末端反復（ＩＴＲ）配列及び３’ＩＴＲ配列を含む。ＩＴＲのうち少なくとも１つは、機能的末端分解部位及び複製タンパク質結合部位（ＲＰＳ）（複製タンパク質結合部位と呼ばれることもある）、例えば、Ｒｅｐ結合部位を含む。一般に、ｃｅＤＮＡベクターは、少なくとも１つの修飾型ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）、すなわち、他のＩＴＲに対する欠失、挿入、及び／又は置換、並びに発現可能な導入遺伝子を含有する。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、ＡＡＶ ＩＴＲ、例えば、野生型ＡＡＶ ＩＴＲである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、他のＩＴＲに対する修飾型ＩＴＲであり、すなわち、ｃｅＤＮＡは、互いに対して非対称であるＩＴＲを含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、非機能的ＩＴＲである。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、（１）シス調節エレメント、プロモーター及び少なくとも１つの導入遺伝子を含む発現カセット；又は、（２）少なくとも１つの導入遺伝子に作動可能に連結されたプロモーター、及び（３）当該発現カセットに隣接する２つの自己相補的配列、例えば、ＩＴＲを含み、ｃｅＤＮＡベクターはカプシドタンパク質と会合していない。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、ＡＡＶゲノム中で見出される２つの自己相補的配列を含み、少なくとも１つは、操作的Ｒｅｐ結合エレメント（ＲＢＥ）及びＡＡＶの末端分解部位（ＴＲＳ）又はＲＢＥの機能的バリアント、及び導入遺伝子に作動可能に連結された１つ以上のシス調節エレメントを含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、導入遺伝子の発現を調節するための追加の構成成分、例えば、導入遺伝子の発現を制御及び調節するための調節スイッチを含み、ｃｅＤＮＡベクターを含む細胞の制御された細胞死を可能にするキルスイッチである調節スイッチを含み得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれか一実施形態では、２つの自己相補的配列は、任意の既知のパルボウイルス、例えばＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１～ＡＡＶ１２）等のディペンドウイルスからのＩＴＲ配列であり得る。ヘアピン二次構造形成を可能にする可変パリンドローム配列に加えて、５’－ＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣ－３’等のＲｅｐ結合部位（ＲＢＳ）及び末端分解部位（ＴＲＳ）を保持する修飾型ＡＡＶ２ ＩＴＲ配列を含むが、これらに限定されない任意のＡＡＶ血清型を使用することができる。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一部の実施形態では、ＩＴＲは合成であってもよい。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、合成ＩＴＲは、２つ以上のＡＡＶ血清型からのＩＴＲ配列に基づいている。別の実施形態では、合成ＩＴＲは、ＡＡＶベース配列を含まない。更に別の実施形態では、合成ＩＴＲは、上記のＩＴＲ構造を保存するが、わずかなＡＡＶ源配列を有するか、又はまったく有しない。いくつかの態様では、合成ＩＴＲは、野生型Ｒｅｐ又は特定血清型のＲｅｐと選好的に相互作用し得るか、又は場合によっては、野生型Ｒｅｐによって認識されず、変異型Ｒｅｐによってのみ認識される。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＴＲは、ヘアピン二次構造形成を可能にする可変パリンドローム配列に加えて、５’－ＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣ－３’などの機能性Ｒｅｐ結合部位（ＲＢＳ）及び末端分解部位（ＴＲＳ）を保持する合成ＩＴＲ配列である。いくつかの例では、修飾型ＩＴＲ配列は、ＲＢＳ、ＴＲＳの配列、並びに野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲの対応する配列からの１つのＩＴＲヘアピン二次構造の末端ループ部分を形成するＲｅｐ結合エレメントの構造及び位置を保持する。ｃｅＤＮＡベクターで使用するための例示的なＩＴＲ配列は、表２～９、１０Ａ及び１０Ｂ、配列番号２、５２、１０１～４４９及び５４５～５４７に開示され、部分的なＩＴＲ配列は、２０１８年９月７日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０４９９９６号の図２６Ａ～図２６Ｂに示される。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、表２、３、４、５、６、７、８、９、１０Ａ及び１０Ｂ ２０１８年９月７日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／４９９９６号のいずれか１つ以上に示されるＩＴＲ配列又はＩＴＲ部分配列における修飾のうちのいずれかに対応するＩＴＲにおける修飾を伴うＩＴＲを含み得る。
本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、シス調節エレメントの特定の組み合わせを更に含む発現構築物から産生され得る。シス調節エレメントとしては、プロモーター、リボスイッチ、インスレーター、ｍｉｒ調節エレメント、転写後調節エレメント、組織及び細胞型特異的プロモーター、並びにエンハンサーが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ＩＴＲは、導入遺伝子のプロモーターとして作用し得る。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、導入遺伝子の発現を調節するための追加成分、例えば、２０１８年９月７日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０４９９９６号に記載される調節スイッチを含み、導入遺伝子、又はｃｅＤＮＡベクターを含む細胞を殺傷し得るキルスイッチの発現を調節する。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、発現カセットはまた、導入遺伝子の発現を増加させるために、転写後エレメントを含み得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＰ）転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を使用して、導入遺伝子の発現を増加させる。他の転写後処理エレメント、例えば、単純ヘルペスウイルス又はＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）のチミジンキナーゼ遺伝子からの転写後エレメントを使用することができる。分泌配列は、導入遺伝子、例えば、ＶＨ－０２及びＶＫ－Ａ２６配列に連結され得る。発現カセットは、例えば、ウシＢＧＨｐＡ若しくはウイルスＳＶ４０ｐＡから単離された天然配列、又は合成配列等の、当該技術分野において既知のポリアデニル化配列又はその変形を含み得る。いくつかの発現カセットはまた、ＳＶ４０後期ポリＡシグナル上流エンハンサー（upstream enhancer、ＵＳＥ）配列を含み得る。ＵＳＥは、ＳＶ４０ｐＡ又は異種ポリＡシグナルと組み合わせて使用され得る。
２０１８年９月７日に出願され、参照により全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５００４２号の図１Ａ～図１Ｃは、非限定の例示的なｃｅＤＮＡベクター、又はｃｅＤＮＡプラスミドの対応する配列の概略図を示す。ｃｅＤＮＡベクターは、カプシド不含であり、第１のＩＴＲ、発現可能な導入遺伝子カセット及び第２のＩＴＲをこの順にコードするプラスミドから取得され得、第１及び／又は第２のＩＴＲ配列のうちの少なくとも１つは、対応する野生型ＡＡＶ２ ＩＴＲ配列に関して変異する。発現可能な導入遺伝子カセットは、好ましくは、エンハンサー／プロモーター、ＯＲＦレポーター（導入遺伝子）、転写後調節エレメント（例えば、ＷＰＲＥ）、並びにポリアデニル化及び終結シグナル（例えば、ＢＧＨポリＡ）のうちの１つ以上をこの順序で含む。
プロモーター
上記のものを含む好適なプロモーターは、ウイルスに由来し得るため、ウイルスプロモーターと称され得るか、又はそれらは、原核生物又は真核生物を含む任意の生物に由来し得る。好適なプロモーターを使用して、任意のＲＮＡポリメラーゼ（例えば、ｐｏｌ Ｉ、ｐｏｌ ＩＩ、ｐｏｌ ＩＩＩ）によって発現を駆動することができる。例示的なプロモーターとしては、SV40初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルスの長い末端反復配列（long terminal repeat、ＬＴＲ）プロモーター；アデノウイルス主要後期プロモーター（adenovirus major late promoter、Ａｄ ＭＬＰ）；単純ヘルペスウイルス（herpes simplex virus、ＨＳＶ）プロモーター、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus、ＣＭＶ）プロモーター、例えば、ＣＭＶ最初期プロモーター領域（ＣＭＶＴＥ）、ラウス肉腫ウイルス（rous sarcoma virus、ＲＳＶ）プロモーター、ヒトＵ６小核プロモーター（Ｕ６、例えば、（Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０，４９７－５００（２００２））、増強されたＵ６プロモーター（例えば、Ｘｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００３年９月１日；３１（１７））、ヒトＨ１プロモーター（Ｈ１）、ＣＡＧプロモーター、ヒトアルファ１－アンチトリプシン（ＨＡＡＴ）プロモーター（例えば、その他同種のもの）が挙げられる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、これらのプロモーターは、それらの下流イントロン含有端で変更されて、１つ以上のヌクレアーゼ切断部位を含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ヌクレアーゼ切断部位を含有するＤＮＡは、プロモーターＤＮＡに対して外来である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、プロモーターは、１つ以上の特定の転写調節配列を含むことにより、発現を更に増強する、並びに／又はその空間的発現及び／若しくは時間的発現を変更することができる。プロモーターはまた、転写の開始部位から数千塩基対も離れて位置し得る遠位エンハンサー又はリプレッサーエレメントを含み得る。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、及び動物を含む供給源に由来し得る。プロモーターは、発現が起こる細胞、組織若しくは器官に関して、又は発現が起こる発達段階に関して、又は生理学的ストレス、病原体、金属イオン、若しくは誘導剤等の外部刺激に応答して、構成的又は示差的に遺伝子成分の発現を調節し得る。プロモーターの代表的な例としては、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレータープロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ－ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶ ＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター又はＳＶ４０後期プロモーター及びＣＭＶ ＩＥプロモーター、並びに以下に列挙されるプロモーターが挙げられる。そのようなプロモーター及び／又はエンハンサーは、目的の任意の遺伝子、例えば、治療用タンパク質）の発現に使用できる。例えば、ベクターは、治療用タンパク質をコードする核酸配列に操作可能に連結されるプロモーターを含み得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、治療用タンパク質コード配列に操作可能に連結されたプロモーターは、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、例えば、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）の長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、例えば、ＣＭＶ最初期プロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、又はラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターであり得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、プロモーターはまた、ヒトユビキチンＣ（ｈＵｂＣ）、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、又はヒトメタロチオネイン等のヒト遺伝子からのプロモーターであってもよい。プロモーターはまた、天然又は合成の、組織特異的プロモーター、例えば、肝臓特異的プロモーター、例えば、ヒトアルファ１－抗トリプシン（ＨＡＡＴ）又はトランスサイレチン（ＴＴＲ）であり得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、肝臓への送達は、肝細胞の表面上に存在する低密度リポタンパク質（low-density lipoprotein、ＬＤＬ）受容体を介して、肝細胞へのｃｅＤＮＡベクターを含む組成物の内因性ＡｐｏＥ特異的標的を使用して達成され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、使用されるプロモーターは、治療用タンパク質をコードする遺伝子のネイティブプロモーターである。治療用タンパク質をコードするそれぞれの遺伝子のプロモーター及び他の調節配列は既知であり、特徴付けられている。使用されるプロモーター領域は、当技術分野において既知のエンハンサー（例えば、Ｓｅｒｐｉｎエンハンサー）などの１つ以上の追加の調節配列（例えば、天然）を更に含んでもよい。
本発明に従って使用するための好適なプロモーターの非限定例としては、例えば、ＣＡＧプロモーター、ＨＡＡＴプロモーター、ヒトＥＦ１－αプロモーター、又はＥＦ１－αプロモーター及びラットＥＦ１－αプロモーターの断片が挙げられる。
ポリアデニル化配列
ポリアデニル化配列をコードする配列は、ｃｅＤＮＡベクターから発現されたｍＲＮＡを安定化するため、及び核輸送及び翻訳を助けるために、ｃｅＤＮＡベクター中に含まれ得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、ポリアデニル化配列を含まない。他の実施形態では、ベクターは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０以上のアデニンジヌクレオチドを含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列は、約４３ヌクレオチド、約４０～５０ヌクレオチド、約４０～５５ヌクレオチド、約４５～５０ヌクレオチド、約３５～５０ヌクレオチド、又はその間の任意の範囲を含む。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡは、２つの異なる逆位末端反復配列（ＩＴＲ）（例えば、ＡＡＶ ＩＴＲ）の間に作動可能に位置付けられた異種核酸をコードするベクターポリヌクレオチドから取得可能であり、ＩＴＲのうちの少なくとも１つは、末端分解部位及び複製タンパク質結合部位（ＲＰＳ）、例えば、Ｒｅｐ結合部位（例えば、ｗｔ ＡＡＶ ＩＴＲ）を含み、ＩＴＲのうちの１つは、他のＩＴＲ、例えば機能的ＩＴＲに関する欠失、挿入、及び／又は置換を含む。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、宿主細胞はウイルスカプシドタンパク質を発現せず、ポリヌクレオチドベクターテンプレートは任意のウイルスカプシドコード配列を欠いている。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ポリヌクレオチドベクターテンプレートは、ＡＡＶカプシド遺伝子を欠いているが、他のウイルスのカプシド遺伝子も欠いている）。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、核酸分子はまた、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質コード配列を欠いている。したがって、本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、機能的なＡＡＶキャップ及びＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子の両方を欠いている。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、改変ＩＴＲを有さない。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、本明細書に開示される（又は、２０１８年９月７日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０４９９９６号において）調節スイッチを含む。
Ｖ．ｃｅＤＮＡベクターの産生
本明細書で定義される非対称ＩＴＲ対又は対称ＩＴＲ対を含む本明細書に記載のｃｅＤＮＡベクターの産生のための方法は、２０１８年９月７日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ１８／４９９９６号のセクションＩＶに記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるように、ｃｅＤＮＡベクターは、例えば、プロセスであって、ａ）ポリヌクレオチド発現構築物テンプレート（例えば、ｃｅＤＮＡ－プラスミド、ｃｅＤＮＡ－バクミド、及び／又はｃｅＤＮＡ－バキュロウイルス）を内包する宿主細胞（例えば、昆虫細胞）の集団をインキュベートするステップであって、Ｒｅｐタンパク質の存在下では、宿主細胞内のｃｅＤＮＡベクターの産生を誘導するために効果的な条件下、かつそのために十分な時間にわたってウイルスカプシドコード配列を欠いており、宿主細胞が、ウイルスカプシドコード配列を含まない、インキュベートするステップと、ｂ）ｃｅＤＮＡベクターを宿主細胞から採取し、単離するステップと、を含む、プロセスによって取得され得る。Ｒｅｐタンパク質の存在は、修飾型ＩＴＲを有するベクターポリヌクレオチドの複製を誘導して、宿主細胞中でｃｅＤＮＡベクターを産生する。
但し、ウイルス粒子（例えば、ＡＡＶビリオン）は発現されない。したがって、ＡＡＶ又は他のウイルスベースベクターにおいて天然に課されるもの等のサイズ制限はない。
宿主細胞から単離されたｃｅＤＮＡベクターの存在は、宿主細胞から単離されたＤＮＡをｃｅＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化すること、並びに消化されたＤＮＡ材料を非変性ゲル上で分析して、直鎖状かつ非連続的なＤＮＡと比較して特徴的な直鎖状かつ連続的なＤＮＡのバンドの存在を確認することによって確認され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本開示は、例えば、Ｌｅｅ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｐｌｏｓ Ｏｎｅ ８（８）：ｅ６９８７９に記載されるように、非ウイルス性ＤＮＡベクターの産生において、ＤＮＡベクターポリヌクレオチド発現テンプレート（ｃｅＤＮＡテンプレート）をそれら自体のゲノムに安定して組み込んでいる宿主細胞株の使用を提供する。好ましくは、Ｒｅｐは、約３のＭＯＩで宿主細胞に付加される。宿主細胞株が哺乳動物細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３細胞である場合、細胞株は、安定して組み込まれたポリヌクレオチドベクターテンプレートを有し得、ヘルペスウイルス等の第２のベクターを使用して、Ｒｅｐタンパク質を細胞に導入することができ、Ｒｅｐ及びヘルパーウイルスの存在下でのｃｅＤＮＡの切除及び増幅を可能にする。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクターを作製するために使用される宿主細胞は、昆虫細胞であり、バキュロウイルスは、Ｒｅｐタンパク質をコードするポリヌクレオチドと、ｃｅＤＮＡの非ウイルスＤＮＡベクターポリヌクレオチド発現構築物テンプレートとを両方送達するために使用される。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、宿主細胞は、Ｒｅｐタンパク質を発現するように操作されている。
次いで、ｃｅＤＮＡベクターは、宿主細胞から採取され、単離される。本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクターを細胞から採取及び収集するための時間は、ｃｅＤＮＡベクターの高収率産生を達成するために選択され、最適化され得る。例えば、採取時間は、細胞生存率、細胞形態論、細胞増殖などを考慮して選択され得る。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、十分な条件下で細胞は増殖し、ｃｅＤＮＡベクターを産生するためのバキュロウイルス感染から十分な時間が経過した後、但し細胞のほとんどがバキュロウイルスの毒性のために死滅し始める前に採取される。ＤＮＡ－ベクターは、Ｑｉａｇｅｎ Ｅｎｄｏ－Ｆｒｅｅプラスミドキット等のプラスミド精製キットを使用して単離され得る。プラスミド単離のために開発された他の方法もまた、ＤＮＡ－ベクターに対して適合され得る。一般に、任意の核酸精製方法が採用され得る。
ＤＮＡベクターは、ＤＮＡの精製のための当業者に既知の任意の手段によって精製され得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターはＤＮＡ分子として精製される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクターは、エクソソーム又は微小粒子として精製される。ｃｅＤＮＡベクターの存在は、細胞から単離されたベクターＤＮＡをＤＮＡベクター上に単一認識部位を有する制限酵素で消化すること、並びにゲル電気泳動を使用し、消化されたＤＮＡ材料及び未消化のＤＮＡ材料の両方を分析して、直鎖状かつ非連続的なＤＮＡと比較して特徴的な直鎖状かつ連続的なＤＮＡのバンドの存在を確認することによって確認され得る。
ＶＩ．脂質粒子の調製
脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、ＴＮＡ（例えば、ｃｅＤＮＡ）及び脂質の混合時に自発的に形成することができる。所望の粒子サイズ分布に応じて、得られたナノ粒子混合物は、例えば、Ｌｉｐｅｘ Ｅｘｔｒｕｄｅｒ（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ）等のサーモバレル押出機を使用して、膜（例えば、１００ｎｍカットオフ）を通して押し出すことができる。場合によっては、押し出しステップは省略することができる。エタノール除去及び同時緩衝液交換は、例えば、透析又はタンジェンシャル・フロー・フィルトレーションによって達成され得る。
一般に、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、当該技術分野において既知の任意の方法によって形成することができる。例えば、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／００３７９７７号、同第２０１０／００１５２１８号、同第２０１３／０１５６８４５号、同第２０１３／０１６４４００号、同第２０１２／０２２５１２９号及び同第２０１０／０１３０５８８号に記載されている方法によって調製することができ、これらの各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、連続混合法、直接希釈プロセス、又はインライン希釈プロセスを使用して調製することができる。直接希釈及びインライン希釈プロセスを使用して脂質ナノ粒子を調製するための装置のプロセス及び装置は、米国特許出願公開第２００７／００４２０３１号に記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。段階希釈プロセスを使用して脂質ナノ粒子を調製するためのプロセス及び装置は、米国特許出願公開第２００４／０１４２０２５号に記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、衝突ジェットプロセスによって調製することができる。一般に、粒子は、アルコール（例えば、エタノール）に溶解した脂質を、緩衝液、例えば、クエン酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸ナトリウム及び塩化マグネシウム緩衝液、リンゴ酸緩衝液、リンゴ酸及び塩化ナトリウム緩衝液、又はクエン酸ナトリウム及び塩化ナトリウム緩衝液、に溶解したｃｅＤＮＡと混合することによって形成される。ｃｅＤＮＡに対する脂質の混合比は、約４５～５５％の脂質及び約６５～４５％のｃｅＤＮＡであり得る。
脂質溶液は、アルコール、例えばエタノール中に、５～３０ｍｇ／ｍＬ、よりおそらく５～１５ｍｇ／ｍＬ、最もおそらく９～１２ｍｇ／ｍＬの全脂質濃度で、開示されたカチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＥ、及びＤＯＰＣ等のリン脂質）、１つ以上のＰＥＧ化脂質、及びステロール（例えば、コレステロール）を含有することができる。脂質溶液において、脂質のモル比は、カチオン性脂質について約２５～９８％、例えば約３５～６５％の範囲であり得；非イオン性脂質について約０～１５％、例えば約０～１２％の範囲であり得；ＰＥＧ化脂質については約０～１５％、例えば約１～６％の範囲であり得；ステロールンについては約０～７５％、例えば約３０～５０％の範囲であり得る。
ｃｅＤＮＡ溶液は、３．５～５の範囲のｐＨを有する、緩衝溶液中に０．３～１．０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは、０．３～０．９ｍｇ／ｍＬの濃度範囲でｃｅＤＮＡを含むことができる。
ＬＮＰを形成するために、１つの例示的であるが非限定的な実施形態では、２つの液体は、約１５～４０℃、好ましくは約３０～４０℃の範囲の温度に加熱され、次いで、例えば、衝突ジェットミキサーにおいて混合され、即座にＬＮＰを形成する。混合流量は、１０～６００ｍＬ／分の範囲であり得る。チューブＩＤは、０．２５～１．０ｍｍの範囲を有し、１０～６００ｍＬ／分の総流量であり得る。流量とチューブＩＤとの組み合わせは、ＬＮＰの粒子サイズを３０ｎｍ～２００ｎｍに制御する効果を有し得る。次いで、溶液を、より高いｐＨで、１：１～１：３の体積：体積、好ましくは約１：２の体積：体積の範囲の混合比で緩衝溶液と混合することができる。必要に応じて、この緩衝溶液は、１５～４０℃又は３０～４０℃の範囲の温度になり得る。次いで、混合されたＬＮＰは、アニオン交換濾過ステップを受けることができる。アニオン交換の前に、混合されたＬＮＰを一定期間、例えば３０分～２時間インキュベートすることができる。インキュベーション中の温度は、１５～４０℃又は３０～４０℃の範囲の温度になり得る。インキュベーション後、アニオン交換分離ステップを含む０．８μｍフィルター等のフィルターで溶液を濾過する。このプロセスでは、１ｍｍのＩＤ～５ｍｍのＩＤの範囲のチューブＩＤ及び１０～２０００ｍＬ／分の流量を使用できる。
形成後、ＬＮＰを濃縮し、限外濾過プロセスを介して限界濾過することができ、このプロセスでは、アルコールが除去され、緩衝液が最終的な緩衝溶液、例えば、約ｐＨ７、例えば約ｐＨ６．９、約ｐＨ７．０、約ｐＨ７．１、約ｐＨ７．２、約ｐＨ７．３、又は約ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）と交換される。
限外濾過プロセスでは、膜の公称分子量カットオフ範囲が３０～５００ｋＤのタンジェンシャル・フロー・フィルトレーションフォーマット（ＴＦＦ）を使用できる。膜フォーマットは中空糸又はフラットシートカセットである。適切な分子量カットオフのＴＦＦプロセスでは、保持液にＬＮＰを保持することができ、濾液又は透過液はアルコール、クエン酸緩衝液及び最終緩衝液の廃棄物を含有する。ＴＦＦプロセスは、初期濃度が１～３ｍｇ／ｍＬのｃｅＤＮＡ濃度になる複数ステップのプロセスである。濃縮後、ＬＮＰ溶液を最終緩衝液に対して１０～２０容量で限界濾過し、アルコールを除去して緩衝液交換を実施する。次いで、材料を更に１～３倍に濃縮することができる。濃縮されたＬＮＰ溶液は滅菌濾過できる。
ＶＩＩ．薬学的組成物及び製剤
本明細書では、ＴＮＡ脂質粒子と、薬学的に許容される担体又は賦形剤と、を含む、薬学的組成物もまた提供される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本発明は更に、本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいずれかの実施形態に記載のカチオン性脂質、又は本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいずれかの実施形態に記載の脂質ナノ粒子、及び薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物に関する。
一般に、本発明の脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、意図した治療効果を提供するように選択された平均直径を有する。
脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の意図した使用に応じて、構成成分の割合は変化し得、特定の製剤の送達効率は、例えば、エンドソーム放出パラメータ（ＥＲＰ）アッセイを使用して測定され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡは、粒子の脂質部分と複合され得るか、又は脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の脂質位置に封入され得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡは、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の脂質位置に完全に封入され得、それによって例えば水溶液中のヌクレアーゼによる分解からそれを保護する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中のｃｅＤＮＡは、３７℃で少なくとも約２０、３０、４５、又は６０分間のヌクレアーゼへの脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の曝露後に実質的に分解されない。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中のｃｅＤＮＡは、３７℃で少なくとも約３０、４５、若しくは６０分、又は少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、若しくは３６時間の血清中の粒子のインキュベーション後に実質的に分解されない。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、対象、例えばヒト等の哺乳動物に対して実質的に非毒性である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本開示の治療用核酸を含む医薬組成物は、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）に製剤化され得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、治療用核酸を含む脂質粒子は、開示されたカチオン性脂質から形成することができる。いくつかの他の実施形態では、治療用核酸を含む脂質粒子は、非カチオン性脂質から形成され得る。好ましい実施形態では、本発明の脂質粒子は、核酸を含有する脂質粒子であり、これは、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ及びオリゴヌクレオチド、リボザイム、アプタマー、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ミニサークルＤＮＡ、ミニ遺伝子、ウイルス性ＤＮＡ（例えば、レンチウイルス若しくはＡＡＶゲノム）又は非ウイルス性合成ＤＮＡベクター、閉端直鎖状二重鎖ＤＮＡ（ｃｅＤＮＡ／ＣＥＬｉＤ）、プラスミド、バクミド、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡベクター、最小限の免疫学的に定義された遺伝子発現（ＭＩＤＧＥ）ベクター、非ウイルス性ミニストリングＤＮＡベクター（直鎖状共有結合性閉鎖ＤＮＡベクター）、又はダンベル型ＤＮＡ最小ベクター（「ダンベルＤＮＡ」）からなる群から選択される治療用核酸を含む開示されたカチオン性脂質から形成される。
別の好ましい実施形態では、本発明の脂質粒子は核酸含有脂質粒子であり、これは非カチオン性脂質、及び任意選択的に粒子の凝集を防止するＰＥＧ化脂質又はコンジュゲートされた脂質の他の形態から形成される。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子製剤は水溶液である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）製剤は、凍結乾燥粉末である。
いくつかの態様によれば、本開示は、１つ以上の薬学的賦形剤を更に含む脂質粒子製剤を提供する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）製剤は、スクロース、トリス、トレハロース、及び／又はグリシンを更に含む。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に開示される脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、対象の細胞、組織、又は器官へのインビボ送達のために対象に投与するのに好適な医薬組成物に組み込まれ得る。典型的に、医薬組成物は、本明細書に開示されるＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）及び薬学的に許容される担体を含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本開示のＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、治療的投与（例えば、非経口投与）の所望の経路に適した医薬組成物に組み込むことができる。高圧静脈内又は動脈内注入を介した受動組織形質導入、同様に、核内微量注射若しくは細胞質内注射等の細胞内注射もまた、企図される。治療目的のための医薬組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、又は高ｃｅＤＮＡベクター濃度に好適な他の秩序構造として製剤化され得る。無菌の注射可能な溶液は、適切な緩衝液中の必要量のｃｅＤＮＡベクター化合物を、必要に応じて、上記で列挙した成分のうちの１つ又は組み合わせと組み込み、濾過滅菌によって調製され得る。
本明細書に開示される脂質粒子は、局所、全身、羊膜内、くも膜下腔内、頭蓋内、動脈内、静脈内、リンパ内、腹腔内、皮下、気管、組織内（例えば、筋肉内、心臓内、肝内、腎臓内、脳内）、くも膜下腔内、膀胱内、結膜（例えば、眼窩外、眼窩内、眼窩後、網膜内、網膜下、脈絡膜、脈絡膜下、間質内、房内、及び硝子体内）、蝸牛内、並びに粘膜（例えば、経口、直腸、経鼻）投与に好適な薬学的組成物に組み込むことができる。高圧静脈内又は動脈内注入を介した受動組織形質導入、同様に、核内微量注射若しくは細胞質内注射等の細胞内注射もまた、企図される。
ＴＮＡ脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）を含む薬学的に活性な組成物は、核酸中の導入遺伝子をレシピエントの細胞に送達するように製剤化され得、その中の導入遺伝子の治療的発現をもたらす。この組成物はまた、薬学的に許容される担体を含み得る。
治療目的のための医薬組成物は、典型的に、無菌であり、製造及び貯蔵の条件下で安定している。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、又は高ｃｅＤＮＡベクター濃度に好適な他の秩序構造として製剤化され得る。無菌の注射可能な溶液は、適切な緩衝液中の必要量のｃｅＤＮＡベクター化合物を、必要に応じて、上記で列挙した成分のうちの１つ又は組み合わせと組み込み、濾過滅菌によって調製され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、少なくとも１つの脂質二層を有する固体コア粒子である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、非二層構造、すなわち非ラメラ（すなわち、非二層）形態を有する。無制限に、非二層形態としては、例えば、三次元チューブ、棒、立方対称性などを挙げることができる。脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）の非ラメラ形態（すなわち、非二層構造）は、当業者に既知であり、当業者によって使用される分析技法を使用して決定され得る。そのような技法としては、低温透過型電子顕微鏡（「Ｃｒｙｏ－ＴＥＭ」）、示差走査熱量計（「ＤＳＣ」）、Ｘ線回折等が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、脂質粒子の形態（ラメラ対非ラメラ）は、容易に評価され、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０１３０５８８号（その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＣｒｙｏ－ＴＥＭ分析を使用して容易に評価され、特性化され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、非ラメラ形態を有する脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、高電子密度である。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本開示は、単一ラメラ構造又は多ラメラ構造のいずれかである脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。いくつかの態様では、本開示は、多胞体粒子及び／又は発泡ベース粒子を含む脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）製剤を提供する。脂質構成成分の組成物及び濃度を制御することによって、コンジュゲートされた脂質が脂質粒子（脂質ナノ粒子）外で交換する速度、順に脂質ナノ粒子が膜融合性になる速度を制御することができる。加えて、例えば、ｐＨ、温度、又はイオン強度を含む他の変数を使用して、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）が膜融合性になる速度を変化及び／又は制御することができる。脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）が膜融合性になる速度を制御するために使用され得る他の方法は、本開示に基づいて当業者に明らかとなるであろう。コンジュゲートされた脂質の組成物及び濃度を制御することによって、脂質粒径を制御することができることも明らかとなるであろう。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、製剤化されたカチオン性脂質のｐＫａは、核酸の送達のためのＬＮＰの有効性と相関させることができる（Ｊａｙａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１２），５１（３４），８５２９－８５３３、Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２８，１７２－１７６（２０１０）を参照されたい（これらはいずれも、参照によりその全体が組み込まれる））。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｐＫａの好ましい範囲は、約５～約８である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｐＫａの好ましい範囲は、約６～約７である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、好ましいｐＫａは、約６．５である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、カチオン性脂質のｐＫａは、２－（ｐ－トルイジノ）－６－ナフタレンスルホン酸（ＴＮＳ）の蛍光に基づくアッセイを使用し、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中で決定され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中のｃｅＤＮＡの封入は、核酸と会合したときに蛍光を強化した色素を使用する、膜不透過性蛍光色素排除アッセイ、例えばＯｌｉｇｒｅｅｎ（登録商標）アッセイ又はＰｉｃｏＧｒｅｅｎ（登録商標）アッセイを実施することによって決定され得る。一般に、封入は、脂質粒子製剤に色素を添加し、得られた蛍光を測定し、それを少量の非イオン性界面活性剤の添加時に観察される蛍光と比較することによって決定される。脂質二層の界面活性剤媒介性崩壊は、封入されたｃｅＤＮＡを放出し、それが膜不透過性色素と相互作用することを可能にする。ｃｅＤＮＡの封入は、Ｅ＝（Ｉｏ－Ｉ）／Ｉｏとして計算することができ、Ｉ及びＩｏは、界面活性剤の添加前及び添加後の蛍光強度を指す。
単位投与量
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、薬学的組成物は、単位剤形で提供することができる。単位剤形は、典型的に、薬学的組成物の１つ以上の投与経路に適合されるであろう。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、吸入による投与に適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、吸入器による投与に適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、噴霧器による投与に適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、エアロゾル化器による投与に適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、経口投与のため、頬側投与のため、又は舌下投与のために適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、静脈内、筋肉内、又は皮下投与に適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、単位剤形は、髄腔内又は脳室内投与に適合されている。本明細書の態様及び実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、薬学的組成物は、局所投与用に製剤化されている。単一剤形を産生するために担体材料と組み合わされ得る活性成分の量は、一般に、治療効果をもたらす化合物の量となるであろう。
ＶＩＩＩ．治療方法
本明細書に記載される脂質ナノ粒子及び方法（例えば、脂質ナノ粒子などのＴＮＡ脂質粒子）を使用して、宿主細胞に核酸配列（例えば、治療用核酸配列）を導入することができる。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用する宿主細胞への核酸配列の導入を、治療された患者からの適切なバイオマーカーでモニタリングして、遺伝子発現を評価することができる。
本明細書に提供されるＬＮＰ組成物を使用して、様々な目的のために導入遺伝子（核酸配列）を送達することができる。本明細書の態様及び実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクター（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））は、例えば、エクスサイチュ、インビトロ及びインビボの適用、方法論、診断手順、及び／又は遺伝子療法計画を含む、様々な方法で使用することができる。
本明細書では、治療有効量のＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を、任意選択的に薬学的に許容される担体とともに、治療を必要とする対象の標的細胞（例えば、肝細胞、筋細胞、腎細胞、神経細胞、又は他の罹患した細胞型）に導入することを含む、対象における疾患又は障害を治療する方法が提供される。実装されるＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））は、疾患を治療するために有用な目的のヌクレオチド配列を含む。特に、ＴＮＡは、対象に導入されたときに、外因性ＤＮＡ配列によってコードされる所望のポリペプチド、タンパク質、又はオリゴヌクレオチドの転写を指示することができる制御エレメントに操作可能に連結された所望の外因性ＤＮＡ配列を含み得る。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））は、本明細書に記載され、当該技術分野において既知の任意の好適な経路を介して投与することができる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、標的細胞は、ヒト対象内にある。
本明細書では、診断有効量若しくは治療有効量のＴＮＡ ＬＮＰ（本明細書に記載の例えばｃｅＤＮＡベクターリピド粒子（例えば、リピドナノ粒子））を、それを必要とする対象に提供する方法であって、それを必要とする対象の組織又は臓器に、ある量のＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を提供することと、ＴＮＡ ＬＮＰからの導入遺伝子の発現を可能にするのに有効な時間の間、診断有効量若しくは治療有効量の、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクターリピド粒子（例えば、脂質ナノ粒子））によって発現されるタンパク質、ペプチド、核酸を対象に提供することと、を含む、方法が提供される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、対象はヒトである。
本明細書では、対象における疾患、障害、機能不全、傷害、異常状態、又は外傷のうちの少なくとも１つ以上の症状を診断、予防、治療、又は改善するための方法が提供される。一般に、この方法は、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を、それを必要とする対象に、対象の疾患、障害、機能不全、傷害、異常状態、又は外傷の１つ以上の症状を診断、予防、治療、又は改善するのに十分な量及び時間にわたって投与するステップを少なくとも含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、対象はヒトである。
本明細書では、疾患又は疾患状態の１つ以上の症状を治療するためのツールとしてＴＮＡ ＬＮＰを使用するための方法が提供される。欠陥遺伝子が知られているいくつかの遺伝性疾患が存在し、典型的に、通常は一般に劣性的に遺伝される酵素の欠乏状態と、調節又は構造タンパク質に関与し得るが、典型的に常に優性的に遺伝されるとは限らない不均衡状態との２つのクラスに分類される。欠乏状態の疾患の場合、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用し、導入遺伝子を送達して、置換療法のために正常な遺伝子を罹患した組織に運び入れるとともに、本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、アンチセンス変異を使用して、疾患の動物モデルを創り出すことができる。不均衡疾患状態の場合、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子）を使用して、モデルシステムにおいて疾患状態を創り出すことができ、次いでこれを使用して、その疾患状態に反作用するように試みることができる。したがって、本明細書に開示されるＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））及び方法は、遺伝子疾患の治療を可能にする。本明細書で使用される場合、疾患状態は、疾患を引き起こす、又はそれをより重篤にする欠乏又は不均衡を部分的又は全体的に修繕することによって治療される。
一般に、上記の説明に従ってＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用して任意の導入遺伝子を送達して、遺伝子発現に関する任意の障害に関連する症状を治療、予防、又は改善することができる。例示的な疾患状態としては、嚢胞性線維症（及び他の肺の疾患）、血友病Ａ、血友病Ｂ、サラセミア、貧血症及び他の血液障害、ＡＩＤＳ、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、てんかん及び他の神経障害、がん、糖尿病、筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型、ベッカー型）、ハーラー病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝障害、網膜変性疾患（及び他の眼の疾患）、ミトコンドリオパチー（例えば、レーバー遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）、リー症候群、及び亜急性硬化性脳炎）、ミオパチー（例えば、顔面肩甲上腕型ミオパチー（ＦＳＨＤ）及び心筋症）、固形臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓、心臓）の疾患等が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、本明細書に開示されるようなｃｅＤＮＡベクターは、代謝障害（例えば、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症）を有する個人の治療において有利に使用され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本明細書に記載されるＴＮＡ ＬＮＰを使用して、遺伝子又は遺伝子産物中の変異によって引き起こされる疾患又は障害を治療、改善、及び／又は予防することができる。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載されるｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））で治療することができる例示的な疾患又は障害としては、代謝性疾患又は障害（例えば、ファブリー病、ゴーシェ病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、糖原病）；尿素サイクル疾患又は障害（例えば、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠損症）；リソソーム蓄積症又は障害（例えば、異染性白質ジストロフィー（metachromatic leukodystrophy、ＭＬＤ）、ＩＩ型ムコ多糖症（ＭＰＳＩＩ；ハンター症候群））；肝臓の疾患又は障害（例えば、進行性家族性肝内胆汁うっ滞（progressive familial intrahepatic cholestasis、ＰＦＩＣ）；血液疾患又は障害（例えば、血友病Ａ及びＢ、サラセミア、並びに貧血）；がん及び腫瘍、並びに遺伝性疾患又は障害（例えば、嚢胞性線維症）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子）を用いて、導入遺伝子（例えば、ホルモン又は増殖因子をコードする導入遺伝子）の発現レベルを調節することが望ましい状況において、異種ヌクレオチド配列を送達することができる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用して、疾患又は障害をもたらす遺伝子産物の異常なレベル及び／又は機能（例えば、タンパク質中の不在又は欠損）を訂正することができる。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））は、機能的タンパク質を産生し、かつ／又はタンパク質のレベルを修復して、タンパク質中の不在若しくは欠損によって引き起こされる特定の疾患若しくは障害から生じる症状を緩和若しくは低減するか、又は利益を付与することができる。例えば、ＯＴＣ欠損症の治療は、機能的ＯＴＣ酵素を産生することによって達成することができ；血友病Ａ及びＢの治療は、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、及び第Ｘ因子のレベルを改変することによって達成することができ；ＰＫＵの治療は、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ酵素のレベルを改変することによって達成することができ；ファブリー病又はゴーシェ病の治療は、機能的なアルファガラクトシダーゼ又はベータグルコセレブロシダーゼをそれぞれ産生することによって達成することができ；ＭＦＤ又はＭＰＳＩＩの治療は、それぞれ、機能的アリールスルファターゼＡ又はイズロン酸－２－スルファターゼを産生することによって達成することができ；嚢胞性線維症の治療は、機能的嚢胞性線維症膜貫通調節因子を産生することによって達成することができ；糖原病の治療は、機能的なＧ６Ｐａｓｅ機能を回復させることによって達成することができ；ＰＦＩＣの治療は、機能的なＡＴＰ８Ｂ１、ＡＢＣＢ１１、ＡＢＣＢ４、又はＴＪＰ２遺伝子を産生することによって達成することができる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＲＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用して、インビトロ又はインビボで細胞にＲＮＡベースの治療薬を提供することができる。ＲＮＡベースの治療薬の例としては、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ及びオリゴヌクレオチド、リボザイム、アプタマー、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用して、インビトロ又はインビボで細胞にアンチセンス核酸を提供することができる。例えば、導入遺伝子が、ＲＮＡｉ分子である場合、標的細胞中のアンチセンス核酸又はＲＮＡｉの発現は、細胞による特定のタンパク質の発現を減少させる。したがって、ＲＮＡｉ分子又はアンチセンス核酸である導入遺伝子を投与して、それを必要とする対象における特定のタンパク質の発現を減少させることができる。アンチセンス核酸をインビトロで細胞に投与して、細胞生理学を調節する、例えば、細胞又は組織培養系を最適化することもできる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用して、インビトロ又はインビボで細胞にＤＮＡベースの治療薬を提供することができる。ＤＮＡベースの治療剤の例としては、ミニサークルＤＮＡ、ミニ遺伝子、ウイルスＤＮＡ（例えば、レンチウイルス又はＡＡＶゲノム）又は非ウイルス合成ＤＮＡベクター、閉端直鎖状二本鎖ＤＮＡ（ｃｅＤＮＡ／ＣＥＬｉＤ）、プラスミド、バクミド、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡベクター、最小限の免疫学的に定義された遺伝子発現（ＭＩＤＧＥ）－ベクター、非ウイルスミニストリングＤＮＡベクター（直鎖状の共有結合的に閉じたＤＮＡベクター）、又はダンベル型ＤＮＡ最小ベクター（「ダンベルＤＮＡ」）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡベクター（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））を使用して、インビトロ又はインビボで細胞にミニサークルを提供することができる。例えば、導入遺伝子が、ミニサークルＤＮＡである場合、標的細胞中のミニサークルＤＮＡの発現は、細胞による特定のタンパク質の発現を減少させる。したがって、ミニサークルＤＮＡである導入遺伝子を投与して、それを必要とする対象における特定のタンパク質の発現を減少させることができる。ミニサークルＤＮＡをインビトロで細胞に投与して、細胞生理学を調節する、例えば、細胞又は組織培養系を最適化することもできる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、発現カセットを含むＴＮＡベクターによってコードされる例示的な導入遺伝子としては、Ｘ、リソソーム酵素（例えば、テイ・サックス病に関連するヘキソサミニダーゼＡ、又はハンター症候群／ＭＰＳ ＩＩに関連するイズロネートスルファターゼ）、エリスロポエチン、アンジオスタチン、エンドスタチン、スーパーオキシドジスムターゼ、グロビン、レプチン、カタラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、並びにサイトカイン（例えば、インターフェロン、β－インターフェロン、インターフェロン－γ、インターロイキン－２、インターロイキン－４、インターロイキン１２、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、リンホトキシン等）、ペプチド増殖因子及びホルモン（例えば、ソマトトロピン、インスリン、インスリン様増殖因子１及び２、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、神経栄養因子－３及び４、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア由来増殖因子（ＧＤＮＦ）、形質転換増殖因子－ａ及び－ｂ等）、受容体（例えば、腫瘍壊死因子受容体）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例示的な実施形態では、導入遺伝子は、１つ以上の所望の標的に特異的なモノクローナル抗体をコードする。いくつかの例示的な実施形態では、２つ以上の導入遺伝子が、ｃｅＤＮＡベクターによってコードされる。いくつかの例示的な実施形態では、導入遺伝子は、目的の２つの異なるポリペプチドを含む融合タンパク質をコードする。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、導入遺伝子は、本明細書で定義されるように、全長抗体又は抗体断片を含む、抗体をコードする。本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に定義されるように、抗原結合ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列である。他の例示的な導入遺伝子配列は、自殺遺伝子産物（チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、チトクロームＰ４５０、オキシシチジンキナーゼ、及び腫瘍壊死因子）、がん療法において使用される薬物に対する耐性を付与するタンパク質、及び腫瘍抑制因子遺伝子産物をコードする。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、対象（例えば、ヒト）における遺伝性障害を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかに記載される、有効量の脂質ナノ粒子又はその薬学的組成物を対象に投与することを含む。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害は、鎌状赤血球貧血症、メラノーマ、血友病Ａ（凝固因子ＶＩＩＩ（ＦＶＩＩＩ）欠損症）及び血友病Ｂ（凝固因子ＩＸ（ＦＩＸ）欠損症）、嚢胞性線維症（ＣＦＴＲ）、家族性高コレステロール血症（ＬＤＬ受容体欠損症）、肝芽細胞腫、ウィルソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、先天性肝性ポルフィリン症、遺伝性肝代謝障害、レッシュナイハン症候群、鎌状赤血球貧血症、サラセミア、色素性乾皮症、ファンコニ貧血、網膜色素変性症、毛細血管拡張性運動失調症、ブルーム症候群、網膜芽細胞腫、ムコ多糖蓄積症（例えば、ハーラー症候群（ＭＰＳ Ｉ型）、シャイエ症候群（ＭＰＳ Ｉ Ｓ型）、ハーラー・シャイエ症候群（ＭＰＳ Ｉ Ｈ－Ｓ型）、ハンター症候群（ＭＰＳ ＩＩ型）、サンフィリッポＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤ型（ＭＰＳ ＩＩＩ Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ型）、モルキオＡ及びＢ型（ＭＰＳ ＩＶＡ及びＭＰＳ ＩＶＢ）、マロトー・ラミー症候群（ＭＰＳ ＶＩ型）、スライ症候群（ＭＰＳ ＶＩＩ型）、ヒアルロニダーゼ欠損症（ＭＰＳ ＩＸ型））、ニーマン・ピック病Ａ／Ｂ、Ｃ１及びＣ２型、ファブリー病、シンドラー病、ＧＭ２－ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ病）、テイ・サックス病、異染性白質ジストロフィー、クラッベ病、ムコリピドーシスＩ、ＩＩ／ＩＩＩ及びＩＶ型、シアリドーシスＩ及びＩＩ型、グリコーゲン蓄積症Ｉ及びＩＩ型（ポンペ病）、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ型、シスチン症、バッテン病、アスパルチルグルコサミン尿症、サラ病、ダノン病（ＬＡＭＰ－２欠損症）、リソソーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症、神経セロイドリポフスチン症（ＣＬＮ１－８、ＩＮＣＬ、及びＬＩＮＣＬ）、スフィンゴリピドーシス、ガラクトシアリドーシス、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、フリードライヒ運動失調症、デュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、ベッカー筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、ジストロフィー表皮水疱症（ＤＥＢ）、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ１欠損症、乳児期の全身性動脈石灰化（ＧＡＣＩ）、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト黄斑ジストロフィー（ＡＢＣＡ４）、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠損症、アッシャー症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、アルファ－１アンチトリプシン欠損症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞（ＰＦＩＣ）Ｉ型（ＡＴＰ８Ｂ１欠損症）、ＩＩ型（ＡＢＣＢ１１）、ＩＩＩ型（ＡＢＣＢ４）、又はＩＶ型（ＴＪＰ２）、並びにカテプシンＡ欠損症からなる群から選択される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝的障害は血友病Ａである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害は血友病Ｂであり、本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝的障害はフェニルケトン尿症（phenylketonuria、ＰＫＵ）である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害はウィルソン病である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害は、ゴーシェ病Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害はシュタルガルト黄斑ジストロフィーである。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害はＬＣＡ１０である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害はアッシャー症候群である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、遺伝性障害は滲出型ＡＭＤである。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本開示は、対象（例えば、ヒト）における遺伝性障害、例えば、上記の例示的な遺伝性障害を治療するための医薬品の製造のための、本明細書の態様又は実施形態のいずれかに記載の脂質ナノ粒子又はその薬学的組成物の使用に関する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、医薬品によって治療される遺伝性障害は、シュタルガルト黄斑ジストロフィーである。本明細書における態様又は実施形態のいずれかの一実施形態において、医薬品によって治療される遺伝性障害は、ＬＣＡ１０である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、医薬品によって治療される遺伝性疾患は、アッシャー症候群である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、医薬品によって治療される遺伝性障害は、滲出型ＡＭＤである。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、本開示は、対象（例えば、ヒト）における遺伝性障害、例えば、上記の例示的な遺伝性障害の治療で使用するための、本明細書の態様又は実施形態のいずれかに記載の脂質ナノ粒子又はその薬学的組成物の使用に関する。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、上記使用によって治療される遺伝性障害は、シュタルガルト黄斑ジストロフィーである。本明細書における態様又は実施形態のいずれかの一実施形態において、上記使用によって治療される遺伝性障害は、ＬＣＡ１０である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、上記の使用によって治療される遺伝性疾患は、アッシャー症候群である。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、上記の使用によって治療される遺伝性障害は、滲出型ＡＭＤである。
投与
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、本明細書に記載のｃｅＤＮＡベクター脂質粒子）は、インビボでの細胞の形質導入のために生物に投与することができる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子）は、エクスビボでの細胞の形質導入のために生物に投与することができる。
一般に、投与は、分子を血液又は組織細胞と最終的に接触させるために通常使用される経路のうちのいずれかによるものである。そのような核酸を投与する好適な方法は、当業者によって利用可能かつ周知であり、特定の組成物を投与するために２つ以上の経路が使用され得るが、特定の経路は、多くの場合、別の経路よりもより即時的であり、より効果的な反応を提供し得る。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子）の例示的な投与形態としては、経口、直腸、経粘膜、鼻腔内、吸入（例えば、エアロゾルを介した）、頬側（例えば、舌下）、膣、髄腔内、眼内、経皮、内皮内、子宮内（又は卵内）、非経口（例えば、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、筋肉内（骨格、横隔膜、及び／又は心筋への投与を含む）、胸膜内、脳内、及び動脈内）、局所（例えば、気道表面を含む皮膚及び粘膜表面への、並びに経皮投与）、リンパ内等、並びに直接組織又は器官注射（例えば、肝臓、眼、骨格筋、心筋、横隔膜、筋肉、若しくは脳への）が挙げられる。
ＴＮＡ ＬＮＰ様ｃｅＤＮＡベクター（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）の投与は、脳、骨格筋、平滑筋、心臓、横隔膜、気道上皮、肝臓、腎臓、脾臓、膵臓、皮膚、及び眼からなる群から選択される部位を含むが、これらに限定されない、対象の任意の部位に対して行われ得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰの投与はまた、腫瘍に対するものであり得る（例えば、腫瘍若しくはリンパ節内又はその付近の）。任意の所与の症例における最も好適な経路は、治療、改善、及び／又は予防される病態の性質及び重症度、並びに使用されている特定のｃｅＤＮＡ ＬＮＰの性質に依存するであろう。追加的に、ｃｅＤＮＡは、単一のベクター、又は複数のｃｅＤＮＡベクター（例えば、ｃｅＤＮＡカクテル）中に２つ以上の導入遺伝子を投与することを可能にする。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰの骨格筋への投与としては、肢（例えば、上腕、下腕、上肢、及び／又は下肢）、腰、首、頭（例えば、舌）、咽頭、腹部、骨盤／会陰、及び／又は指の骨格筋への投与が挙げられるが、これらに限定されない。ｃｅＤＮＡベクター（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子））は、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内、四肢灌流（任意選択的に、脚及び／若しくは腕の単離された四肢灌流、例えば、Ａｒｒｕｄａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｌｏｏｄ １０５：３４５８－３４６４を参照）並びに／又は直接筋肉内注入によって骨格筋に送達され得る。特定の実施形態では、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰは、対象（例えば、ＤＭＤなどの筋ジストロフィーを有する対象）に、四肢灌流、任意選択的に単離された四肢灌流（例えば、静脈内又は動脈内投与による）によって投与される。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰは、「流体力学的」技術を用いることなく投与することができる。
ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）の心筋への投与としては、左心房、右心房、左心室、右心室、及び／又は中隔への投与が挙げられる。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、静脈内投与、大動脈内投与等の動脈内投与、直接心臓注射（例えば、左心房、右心房、左心室、右心室への）、及び／又は冠動脈灌流によって心筋に送達され得る。横隔膜筋への投与は、静脈内投与、動脈内投与、及び／又は腹腔内投与を含む任意の好適な方法によって行われ得る。平滑筋への投与は、静脈内投与、動脈内投与、及び／又は腹腔内投与を含む任意の好適な方法によって行われ得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、投与は、平滑筋内、その付近、及び／又はその上に存在する内皮細胞に対して行われ得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、骨格筋、横隔膜筋及び／又は心筋に投与される（例えば、筋ジストロフィー又は心臓病（例えば、ＰＡＤ又はうっ血性心不全）を治療、改善、及び／又は予防するために。
ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、ＣＮＳ（例えば、脳又は眼）に投与することができる。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、脊髄、脳幹（延髄、脳橋）、中脳（視床下部、視床、視床上部、脳下垂体、黒質、松果体）、小脳、終脳（線条体、後頭葉、側頭葉、頭頂葉、及び前頭葉、皮質、基底核、海馬、及び偏桃体（portaamygdala）を含む大脳）、辺縁系、新皮質、線条体、大脳、並びに下丘中に導入されてもよい。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）はまた、網膜、角膜、及び／又は視神経等の眼の異なる領域に投与され得る。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、（例えば、腰椎穿刺によって）脳脊髄液に送達され得る。ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡベクター脂質粒子）は、更に、血液脳関門が撹乱された状況（例えば、脳腫瘍又は脳梗塞）において、ＣＮＳに血管内投与され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、当該技術分野において既知の任意の経路によってＣＮＳの所望の領域に投与され得、髄腔内、眼内、脳内、脳室内、静脈内（例えば、マンニトール等の糖の存在下）、鼻腔内、耳内、眼内（例えば、硝子体内、網膜下、前房）、及び眼周囲（例えば、テノン下領域）送達、並びに運動ニューロンへの逆行性送達を伴う筋肉内送達を含むが、これらに限定されない。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかのいくつかの実施形態によれば、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、ＣＮＳ中の所望の領域又は区画への直接注射（例えば、定位的注入）によって、液体製剤中で投与される。他の実施形態によれば、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、所望の領域への局所適用によって、又はエアロゾル製剤の鼻腔内投与によって提供され得る。眼への投与は、液滴の局所適用によって行われてもよい。更なる代替例として、ｃｅＤＮＡベクターは、固体の徐放性製剤として投与され得る（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，２０１，８９８号を参照されたい）。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）を、逆行性輸送に使用して、運動ニューロンが関与する疾患及び障害（例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）など）を治療、改善、及び／又は予防することができる。例えば、ＴＮＡ ＬＮＰ（例えば、ｃｅＤＮＡ ＬＮＰ）は、筋組織に送達され、そこからニューロン中に移動し得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、適切なレベルの発現が達成されるまで、治療用製品の反復投与を行うことができる。したがって、本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、治療用核酸を複数回投与及び再投与することができる。例えば、治療用核酸は、０日目に投与することができる。０日目の初回治療に続いて、治療用核酸を用いた初回治療の約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、又は約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、又は約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、約１０年、約１１年、約１２年、約１３年、約１４年、約１５年、約１６年、約１７年、約１８年、約１９年、約２０年、約２１年、約２２年、約２３年、約２４年、約２５年、約２６年、約２７年、約２８年、約２９年、約３０年、約３１年、約３２年、約３３年、約３４年、約３５年、約３６年、約３７年、約３８年、約３９年、約４０年、約４１年、約４２年、約４３年、約４４年、約４５年、約４６年、約４７年、約４８年、約４９年又は約５０年後に、２回目の投薬（再投与）を実施することができる。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、１つ以上の追加の化合物も含めることができる。それらの化合物は、別々に投与され得るか、又は追加の化合物は、本発明の脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）中に含まれ得る。言い換えれば、脂質粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、ＴＮＡに加えて他の化合物、又は少なくとも第１のものとは異なる第２のＴＮＡを含有し得る。無制限に、他の追加の化合物は、小さい又は大きい有機又は無機分子、単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖類、多糖類、ペプチド、タンパク質、ペプチド類似体及びそれらの誘導体、ペプチド模倣体、核酸、核酸類似体及び誘導体、生体物質から作製される抽出物、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され得る。
本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、１つ以上の追加の化合物は、治療剤であり得る。治療剤は、治療目的に好適な任意のクラスから選択され得る。したがって、治療剤は、治療目的に好適な任意のクラスから選択され得る。治療剤は、所望の治療目的及び生物作用に従って選択され得る。例えば、本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＬＮＰ内のＴＮＡが、がんを治療するために有用である場合、追加の化合物は、抗がん剤（例えば、化学療法剤、標的がん療法（小分子、抗体、又は抗体－薬物コンジュゲートを含むが、これらに限定されない）であり得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡを含有するＬＮＰが、感染症を治療するために有用である場合、追加の化合物は、抗微生物剤（例えば、抗生物質又は抗ウイルス化合物）であり得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、ＴＮＡを含有するＬＮＰが、免疫疾患又は障害を治療するために有用である場合、追加の化合物は、免疫応答を調節する化合物（例えば、免疫抑制剤、免疫刺激性化合物、又は１つ以上の特定の免疫経路を調節する化合物）であり得る。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、異なるタンパク質又は異なる化合物（治療薬等）をコードするＴＮＡ等の、異なる化合物を含有する異なる脂質粒子の異なるカクテルを、本発明の組成物及び方法で使用することができる。本明細書の態様又は実施形態のいずれかの一実施形態では、追加の化合物は、免疫調節剤である。例えば、追加の化合物は、免疫抑制剤である。本明細書の態様又は実施形態のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、追加の化合物は、免疫刺激性化合物である。
以下の実施例は、限定ではない例証によって提供される。本開示で企図される脂質は、以下に記載される一般的な合成方法を使用して設計及び合成することができることが当業者によって理解されるであろう。
実施例１：一般的な合成
式Ｉの脂質を設計し、以下のスキーム１（Ｒ５は存在しない）及びスキーム２（Ｒ５はＣ１～Ｃ８アルキレン又はＣ２～Ｃ８アルケニレンである）に示すのと同様の合成方法を使用して合成した。スキーム１及びスキーム２で示される化合物中の全ての他の変数、すなわち、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｘ１、Ｘ２、及びｎは、式Ｉで定義されるとおりである。Ｘ１’は、定義されるとおり、Ｘ１であるが、但し、ベンジル又はピリジンなどの追加の保護基を有する。
Figure 2024517644000026
Figure 2024517644000027
 Ｒｘは、Ｒ５より炭素数が１つ少ないアルキレン又はアルケニレンである。
式IIIのジエステル脂質を設計し、以下のスキーム３（R5は存在しない）及びスキーム４（R5はC1～C8アルキレン又はC2～C8アルケニレンである）に示すのと同様の合成方法を使用して合成した。スキーム３及びスキーム４で示される化合物中の全ての他の変数、すなわち、R1、R2、R3、R4、R6a、R6b、及びnは、式ＩIIで定義されるとおりである。
Figure 2024517644000028
Figure 2024517644000029
 Ｒｘは、Ｒ５より炭素数が１つ少ないアルキレン又はアルケニレンである。
スキーム１及びスキーム３
スキーム１及びスキーム３を参照すると、ステップ１において、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中の酸１及びアルコール２（又は２ａ）の撹拌溶液に、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、続いて１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）を添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで塩酸（ＨＣｌ）及び水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてＤＣＭ中０～１０％メタノール（ＭｅＯＨ）を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、酸３を白色固体として得た。
ステップ２では、ＤＣＭ中の酸３（又は３ａ）の溶液に、ＥＤＣＩ及びトリエチルアミン（triethylamine、ＴＥＡ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩及びＤＭＡＰを添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。翌日、反応物を塩化アンモニウム水溶液（ＮＨ４Ｃｌ（水溶液））でクエンチし、ＤＣＭで希釈した。有機層をＮＨ４Ｃｌ及びブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させた。生成物４（又は４ａ）を更に精製することなく次のステップで使用した。
ステップ３では、化合物４（又は４ａ）を無水テトラヒドロフラン（tetrahydrofuran、ＴＨＦ）に溶解した。次いで５、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）中の臭化マグネシウム溶液を０℃で滴加した。得られた混合物を、窒素ガス（Ｎ２）下、室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、６（又は６ａ）を得た。
ステップ４において、無水ＴＨＦ中の６（又は６ａ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を０℃で添加し、混合物をＮ２雰囲気下で一晩撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、７を得た。
ステップ５では、ＤＣＭ中の化合物７（又は７ａ）及び化合物８（又は８ａ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加した。次いで、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰ（０．０１２ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層を炭酸水素ナトリウム水溶液（ＮａＨＣＯ３（水溶液））で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、最終生成物９（又はジエステル９ａ）を得た。
スキーム２及びスキーム４
スキーム２及びスキーム４を参照すると、ステップ１において、ＴＨＦ中の３ｇ（１１．８ｍｍｏｌ）のケトン１０の氷冷溶液に、無水リン酸溶液１１を滴加した。反応物を３０分間撹拌し、次いで水素化ナトリウム（ＮａＨ）を添加した。反応により１２を得た。
ステップ２では、ＴＨＦ中の化合物２を水素化アルミニウムリチウム溶液（ＬｉＡｌＨ４）と反応させた。４８時間後、粗生成物を水でクエンチし、エーテルで抽出してアルコール１３を得た。
その後のスキーム２及びスキーム４のステップ３からステップ７は、適切な出発物質としてアルコール１３を用い、当業者の知識の範囲内である他の変更を加えて、スキーム１及びスキーム３のステップ１からステップ５に記載したのと同様の手順で行った。
実施例２：一般的な合成
式Ｉの脂質は、本実施例に記載される手順などの代替合成手順を使用して合成することができる。
別の一般合成（Ａ）
少なくとも脂質１１、脂質１、及び脂質２、並びに式Ｉの任意の脂質（ここで、Ｒ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ６アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５は存在せず、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは、式Ｉで定義されるとおりである）は、以下に提供されるスキーム５に示したものと同様の合成方法を用いて調製したか、又は調製することができる。式Ｉの脂質を生成するための化合物２ｂの化合物２ａによる置換、臭化ヘプチルマグネシウムの化合物５による置換、及び／又は４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の化合物８ａによる置換などであるがこれらに限定されない小さな改変をスキーム５に示した一般合成に適用して式Ｉの他の脂質を生成することができる。
Figure 2024517644000030
ステップ１：９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナン酸（２５ｃ）の合成
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中のノナン二酸（２ｂ）（２０ｇ、１０６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１０．３ｇ、１０６ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、トリエチルアミン（２０ｍＬ）、続いてＥＤＣＩ（２４．３ｇ、１２７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．５ｇ、４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで１５０ｍＬの１ＮのＨＣｌ及び１５０ｍＬの水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてＤＣＭ中０～１０％メタノールを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、化合物２５ｃ（１２．８ｇ、５２％）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｔ，２Ｈ），２．３２（ｔ，２Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．２４－１．３６（ｍ，６Ｈ）。
ステップ２：化合物４ｆの合成
ＤＣＭ中の酸２５ｃ及びアルコール１の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ、続いてＥＤＣＩを添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで１ＮのＨＣｌ及び水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてＤＣＭ中０～１０％メタノールを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、化合物４ｆを得た。
ステップ３：化合物６ｇの合成
化合物４ｆを無水ＴＨＦに溶解した。次いで、Ｅｔ２Ｏ中の１Ｍのヘプチルマグネシウムブロミド溶液を０℃で滴加した。得られた混合物を、Ｎ２下、室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、６ｇを得た。
ステップ４：化合物７ｈの合成
無水ＴＨＦ中の６ｇの溶液に、ＮａＢＨ４を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で一晩撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、７ｈを得た。
ステップ５：化合物９ｃの合成
ＤＣＭ中の化合物７ｈ及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の溶液に、ＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰを添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、ＤＣＭ中０～５％ＭｅＯＨを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物９ｃを得た（これは、式Ｉの脂質であり、ここでＲ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ６アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５は存在せず、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは、式Ｉで定義されるとおりである）。
代替的一般合成（Ｂ）
少なくとも脂質１２、脂質３、及び脂質４、並びに式Ｉの任意の脂質（ここで、Ｒ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２はメチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ３アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ４アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであり、式Ｉで定義されるとおりであり、かつＲ６に等しい）は、以下に提供されるスキーム６に示したものと同様の合成方法を用いて調製したか、又は調製することができる。式Ｉの他の脂質を生成するために、スキーム６に示される一般的な合成に、軽微な改変を適用することができ、例えば、これらに限定されないが、化合物２ｄの化合物２ａによる置換、ヘプチルマグネシウムブロミドの化合物５による置換、４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の化合物８ａによる置換、化合物２３の、式Ｉ中のＲ６ａ及びＲ６ｂの範囲及び定義に従って、２つの脂肪族鎖尾部に異なる数の炭素原子を有する同等のジオールによる置換、及び／又はＲ６ａ及びＲ６ｂが異なる式Ｉの脂質を生成するための、それぞれが脂肪族鎖中に異なる数の炭素原子を有する２つの異なる種の化合物２２の使用が挙げられる。
Figure 2024517644000031
化合物１３ｂの合成
窒素雰囲気下で０℃に冷却したアルキルマグネシウムブロミド２２のメチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）溶液に、無水エチルエーテルに溶解したテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－オン（２１）を滴加した。５分間撹拌した後、氷浴を回収し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を通常通り後処理し、溶離液としてヘキサン中０～２５％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を使用するカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、化合物２３を得た。
化合物２３を５ｍＬのトルエンに溶解し、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（ｐＴＳＡ）をマイクロ波管に加え、１００℃で１時間マイクロ波処理した。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～５％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２４を得た。
ＥｔＯＡｃ中の化合物２４の溶液に、２００ｍｇの活性炭担持１０％パラジウム（Ｐｄ）、パールマン（Ｐｅａｒｌｍａｎ）（５０～７０％湿潤）を添加し、混合物を脱気した後、水素バルーンを混合物上に一晩放置した。混合物をセライトで濾過し、溶離液としてヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃを使用して粗製物を精製して、アルコール化合物１３ｂを得た。
５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（２５）の合成
ジクロロメタン（ＤＣＭ）（２０ｍＬ）中のグルタル酸２ｄ（５．４ｇ、４１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｏ－ジメトキシアミン塩酸塩（２ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．２５ｇ、２ｍｍｏｌ）、続いて１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）及びトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（５．７ｍＬ、４１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで５０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ水溶液で洗浄し、ＤＣＭ（３０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてヘキサン中０～２５％ＥｔＯＡｃを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（２５）（２．２ｇ、６０％）を油状物として得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．５５－１．９（ｍ，４Ｈ），１．９４－２．００（ｍ，２Ｈ）。
ステップ１：化合物１５ｃの合成
アルコール１３ｂ及びアミド２５を無水ＤＣＭに溶解し、続いてＥＤＣＩ及びＤＭＡＰを溶解した。反応物を窒素下で一晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液を添加して後処理し、ＤＣＭ及びＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～２５％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１５ｃとした。
ステップ２：化合物１６ｃの合成
窒素下で無水ＴＨＦ中の１５ｃの氷冷溶液に、エーテル中のヘプチルマグネシウムブロミドを滴加した。反応物を一晩撹拌し、反応混合物を０℃に冷却した後、ＮＨ４Ｃｌ水溶液を用いてクエンチした。粗生成物をヘキサンを用いて抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、１６ｃを得た。
ステップ３：化合物１７ｃの合成
１６ｃの氷冷溶液に、テトラヒドロフラン／メタノール（ＴＨＦ／ＭｅＯＨ）を溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を添加した。還元反応を薄層クロマトグラフィー（thin layer chromatography、ＴＬＣ）で追跡した。１時間後、出発物質は完全に消失し、反応物をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。粗生成物を蒸発乾固させ、次いでＤＣＭに再溶解し、水で１回洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。粗化合物１７ｃを更なる精製なしで次のステップに使用した。
ステップ４：化合物１８ｂの合成
ＤＣＭ中の１７ｃ及び４－ジメチルアミノ酪酸ＨＣｌの溶液に、ＥＤＣＩ、ＤＭＡＰ及び最後にトリエチルアミンを添加した。反応物を一晩撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、ＤＣＭ及びＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、ＤＣＭ中０～５％ＭｅＯＨを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１８ｂを得た（これは、式Ｉの脂質であり、ここでＲ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ３アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ４アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであり、式Ｉで定義されるとおりである）。
代替合成（Ｃ）
少なくとも脂質１３、脂質５、及び脂質６、並びに式Ｉの任意の脂質（ここで、Ｒ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２はメチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ４アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ３アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであり、式Ｉで定義されるとおりであり、かつＲ６に等しい）は、以下に提供されるスキーム７に示したものと同様の合成方法を用いて調製したか、又は調製することができる。式Ｉの他の脂質を生成するために、スキーム７に示される一般的な合成に、軽微な改変を適用することができ、例えば、これらに限定されないが、ヘプチルマグネシウムブロミドの化合物５による置換、４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の化合物８ａによる置換、化合物２３ａの、式Ｉ中のＲ６ａ及びＲ６ｂの範囲及び定義に従って、２つの脂肪族鎖尾部に異なる数の炭素原子を有する同等のジオールによる置換、及び／又はＲ６ａ及びＲ６ｂが異なる式Ｉの脂質を生成するための、それぞれが脂肪族鎖中に異なる数の炭素原子を有する２つの異なる種の化合物２２の使用が挙げられる。
Figure 2024517644000032
化合物１３ｃの合成
アルキルマグネシウムブロミド２２を、窒素ガス下でオーブン乾燥した丸底フラスコに量り取り、０℃に冷却した。次いで、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）中のγ－ブチロラクトン（２１ａ）溶液を０℃で滴加した。得られた混合物を、窒素下、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を３ＭのＨＣｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２３ａを得た。
ジオール２３ａ及びＰＴＳＡをトルエンに溶解し、６０℃で２時間マイクロ波処理した。次いで、溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２４ａを得た。
化合物２４ａをＥｔＯＡｃに溶解し、脱気し、５％Ｐｄ／Ｃを添加し、再び脱気した。反応物を水素下で４時間維持した。次いで、反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１３ｃを得た。
化合物２９の合成
イソプロピルマグネシウムクロリド溶液（ＴＨＦ中２．０Ｍ溶液；１０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の２－オキセパノン（２６）（０．３４ｇ、３ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（０．８８ｇ、９ｍｍｏｌ）の混合物に０℃で滴加し、室温に到達させた。室温で１時間撹拌した後、混合物を０℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を添加した。層を分離し、水層をＤＭＣで抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、６－ヒドロキシ－Ｎ－メトキシ－Ｎ－メチルヘキサンアミド（２７）を得、これを更に精製することなく次のステップで使用した。
ＴＨＦ（１３８ｍＬ）中の化合物２７（３．９６ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘプチルマグネシウムブロミド（４５．２ｍＬ、４５．２ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、窒素下で一晩撹拌した。翌日、反応物を０℃に冷却し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、生成物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を、溶離液として０～５０％ＥｔＯＡｃ及びヘキサンを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、１－ヒドロキシトリデカン－６－オン（２８）（３．５３ｇ、７５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６４（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．３９（ｄｄ，Ｊ＝１６．３，７．５Ｈｚ，４Ｈ），１．６６－１．４８（ｍ，６Ｈ），１．３２－１．２６（ｍ，１０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。
アセトン（４ｍＬ）中の化合物２８（０．１７ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ジョーンズ試薬（すなわち、硫酸水溶液中の三酸化クロムの溶液）を、色がオレンジ色のままになるまで添加した（３ｍｍｏｌ、１．５ｍＬ）。反応混合物を室温に到達させ、ＥｔＯＡｃで希釈した。続いて、有機層をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して化合物２９を得、これを更に精製することなく化合物１７ｉの合成における試薬として次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ２．５０－２．２８（ｍ，５Ｈ），１．６７－１．４８（ｍ，６Ｈ），１．２６（ｓ，８Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）。
ステップ１：化合物１６ｉの合成
化合物３３の溶液に、ＤＣＭ、ＥＤＣＩ、及びＤＭＡＰを添加し、混合物を窒素ガス雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、化合物１３ｃを反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。合わせた有機層をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１６ｉを得た。
ステップ２：化合物１７ｉの合成
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ（１：１）中の化合物１６ｉの溶液に、ＮａＢＨ４を０℃で添加し、窒素雰囲気下で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１７ｉを得た。
ステップ３：化合物１８ｃの合成
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の化合物１７ｉ及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加した。次いで、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰを添加し、混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層を炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）水溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、ＤＣＭ中０～５％ＭｅＯＨを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１８ｃを得た（これは、式Ｉの脂質であり、ここでＲ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ４アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ３アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであり、式Ｉで定義されるとおりであり、かつＲ６ｓに等しい）。
代替合成（Ｄ）
少なくとも脂質１４、脂質７、及び脂質８、並びに式Ｉの任意の脂質（ここで、Ｒ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２はメチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ５アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ２アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであるか、又は異なり、式Ｉで定義されるとおりである）は、以下に提供されるスキーム８に示したものと同様の合成方法を用いて調製したか、又は調製することができる。式Ｉの他の脂質を生成するために、スキーム８に示される一般的な合成に、軽微な改変を適用することができ、例えば、これらに限定されないが、化合物２ｃの化合物２ａによる置換、臭化ヘプチルマグネシウムの化合物５による置換、及び／又は４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の化合物８ａによる置換である。
Figure 2024517644000033
７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタン酸（２５ａ）の合成
ピメリン酸２ｃ（２０．０ｇ、０．１２５ｍｏｌ）をジクロロメタン／ＤＭＦ（１２０ｍＬ／１５ｍＬ）に溶解し、続いてＥｔ３Ｎ（５８ｍＬ、０．５０ｍｏｌ）及びＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１０．１ｇ、０．１００ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、ＥＤＣＩ（２８．８ｇ、０．１５ｍｏｌ）を添加し、続いてＤＭＡＰ（６．３ｇ、０．０５０ｍｏｌ）を添加した。氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。薄い懸濁液を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を、０．５ＭのＨＣｌ、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、２．８ｇ（収率１１％）の純粋な化合物２５ａ及び７．８ｇのわずかに不純な物質（副生成物としてジアミドを含む）を得て、これを取っておいた。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．６６（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４０－２．３０（ｍ，４Ｈ），１．７０－１．６０（ｍ，４Ｈ），１．５０－１．３０（ｍ，２Ｈ）。
化合物１３ｄの合成
ＴＨＦ（無水）中のケトン１０の氷冷溶液に、ニートの（エチル炭酸）（ジエチルリン酸）無水物（１１ａ）を滴加した。反応物を３０分間撹拌し、続いて油中のＮａＨを少しずつ添加した。反応混合物を１８時間還流し、０℃に冷却し、水３００ｍＬでクエンチし、エーテルで抽出した。有機層を水、ブラインで数回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して７．５ｇの粗物質１３ｄを得、これをそのまま次のステップに使用した。
ステップ１：化合物１５ｄの合成
化合物１３ｄ及び７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタン酸（２５ａをＤＣＭ中に溶解し、次いでＤＭＡＰ及びＥＤＣＩをこの溶液に室温で添加した。一晩撹拌後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー精製（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）により、標題化合物１５ｄを得た。
ステップ２：化合物１６ｄの合成
化合物１５ｄをトルエンと数回共蒸発させ、反応前に五酸化リン（Ｐ２Ｏ５）上で一晩乾燥させた。乾燥化合物１５ｄを、火炎乾燥した丸底フラスコ中でＴＨＦに溶解し、０℃に冷却し、エーテル中のヘプチルマグネシウムブロミドを滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ヘキサンで数回抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標題化合物１６ｄを得た。
ステップ３：化合物１７ｄの合成
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１中に溶解した氷冷した化合物１６ｄに、ＮａＢＨ４を一度に添加した。５分後、氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより完全な変換を確認した後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、化合物１７ｄを定量的収率で得た。
ステップ４：化合物１８ｄの合成
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩をＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ混合物に溶解し、続いてＥｔ３Ｎ、化合物１７ｄ、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰを添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中、０～１５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１８ｄを得た（これは、式Ｉの脂質であり、ここでＲ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ５アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ２アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであるか、又は異なり、式Ｉで定義されるとおりである）。
代替的合成（Ｅ）
少なくとも脂質１５、脂質９、及び脂質１０、並びに式Ｉの任意の脂質（ここで、Ｒ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ６アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ１アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであり、式Ｉで定義されるとおりであり、かつＲ６に等しい）は、以下に提供されるスキーム９に示したものと同様の合成方法を用いて調製したか、又は調製することができる。式Ｉの他の脂質を生成するために、スキーム９に示される一般的な合成に、軽微な改変を適用することができ、例えば、これらに限定されないが、化合物２ｅの化合物２ａによる置換、臭化ヘプチルマグネシウムの化合物５による置換、及び／又は４－（ジメチルアミノ）ブタン酸の化合物８ａによる置換である。
Figure 2024517644000034
８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクタン酸（２５ｂ）の合成
スベリン酸２ｅ（１５．０６ｇ、８６．４５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン／ＤＭＦ（６０ｍＬ／１５ｍＬ）に溶解し、続いてＴＥＡ（１８．１ｍＬ、１２９．８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．２２ｇ、４３．２６ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、ＥＤＣＩ（１０．３６ｇ、５４．０７ｍｏｌ）を添加し、続いてＤＭＡＰ（２．６４ｇ、２１．６３ｍｏｌ）を添加した。氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。薄い懸濁液を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機相を、０．５ＭのＨＣｌ、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、２．４ｇ（収率２６％）の純粋な化合物２５ｂを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３０（ｍ，４Ｈ），１．７０－１．６０（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．３０（ｍ，４Ｈ）。
ステップ１：化合物１の合成
ＴＨＦ中のアルキルマグネシウムブロミド（２２）の氷冷０．５Ｍ／ＴＨＦ溶液に、ＴＨＦ中のギ酸エチルを添加した。室温で一晩撹拌後、反応混合物を約６０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、エイテル（either）で抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をジクロロメタン－ヘキサンからの再結晶によって精製して、２．８２ｇ（収率８２％）の純粋な化合物１を得た。
ステップ２：化合物１０の合成
アルコール１を１８ｍＬのジクロロメタンと混合し、０℃冷却し、Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンを一度に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３（飽和）及びＮａ－２Ｓ２Ｏ３（１５％水溶液）の１：１混合物（２５：２５ｍＬ）でクエンチし、室温で２０分間撹拌した。層を分離し、有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して粗化合物１０を得て、これを精製せずに次のステップに使用した。
ステップ３：化合物３１の合成
ＴＨＦ中にケトン１０及びメトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリドを含有する懸濁液に、ＴＨＦ中のＫＯｔＢｕの１Ｍ溶液を１５分かけて滴加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、Ｅｔ２Ｏで希釈し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２％ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物３１を得た。
ステップ４：化合物３２の合成
ジオキサン／水中のケタール３１の氷冷した濁った溶液に、４ＮのＨＣｌを３０分かけて滴加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。薄層クロマトグラフィーにより完全な変換を確認した後、反応混合物をエーテルで希釈し、０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３（飽和）及び１０％のＮａ２ＣＯ３をゆっくりと添加することによってクエンチした。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物３２を定量的収率で得た。
ステップ５：化合物１３ｅの合成
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１中に溶解した氷冷した化合物３２に、ＮａＢＨ４を一度に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、０℃にてＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、化合物１３ｅを定量的収率で得た。
ステップ６：化合物１５ｅの合成
化合物２５ｂ及び１３ｅをジクロロメタン中に溶解し、次いでＤＭＡＰ及びＥＤＣＩをこの溶液に室温で添加した。一晩撹拌後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー精製（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）により、純粋な化合物１５ｅを得た。
ステップ７：化合物１６ｅの合成
化合物１５ｅをトルエンと数回共蒸発させ、反応前にＰ２Ｏ５上で一晩乾燥させた。乾燥化合物１５ｅを、火炎乾燥した丸底フラスコ中でＴＨＦに溶解し、０℃に冷却し、ヘプチルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ヘキサンで数回抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物１６ｅを得た。
ステップ８：化合物１７ｅの合成
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１中に溶解した氷冷した化合物１６ｅに、ＮａＢＨ４を一度に添加した。完全な変換が薄層クロマトグラフィーによって確認されるまで、反応混合物を室温で約２時間撹拌し、次いで２ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、化合物１７ｅを得た。
ステップ９：化合物１８ｅの合成
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩をＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ混合物に溶解し、続いてＴＥＡ、化合物１７ｅ、ＥＤＣＩ及びＤＭＡＰを添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中、０～１５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１８ｅを得た（これは、式Ｉの脂質であり、ここでＲ’は存在せず、Ｒ１及びＲ２メチルであり、ｎは３であり、Ｒ３はＣ６アルキレンであり、Ｒ４はＣ７アルキルであり、Ｒ５はＣ１アルキレンであり、Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－であり、Ｒ６ａ及びＲ６ｂは同じであり、式Ｉで定義されるとおりであり、かつＲ６に等しい）。
実施例３：脂質２０、脂質２１、脂質１９、脂質２２、及び脂質１１の合成
脂質２０、脂質２１、脂質１９、脂質２２、及び脂質１１を合成するための手順は、以下に提供されるスキーム１０を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000035
ステップ１：９－（ヘプタデカン－９－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｂ）の合成
ＤＣＭ（１０００ｍＬ）中のノナン二酸（２ｂ、アゼライン酸とも呼ばれる）（７．３４ｇ、３９ｍｍｏｌ）及びヘプタデカン－９－オール（１ａ）（５ｇ、１９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（２．３７ｇ、１９ｍｍｏｌ）、続いてＥＤＣＩ（３ｇ、１９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで２５０ｍＬの１ＮのＨＣｌ及び２５０ｍＬの水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてＤＣＭ中０～１０％メタノールを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、３ｂ（６．２ｇ、７５％）を白色固形物として得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ４．８０－４．９０（ｍ，１Ｈ），２．２５－２．３４（ｍ，４Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．５０（ｍ，４Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，３０Ｈ），０．８４－０．９０（ｔ，３Ｈ）。
ステップ２：ヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｂ）の合成
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の化合物３（５．４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（３．６ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（３．５ｍＬ、２５．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．３６ｇ、１３．９７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．１５ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＮＨ４Ｃｌ（水溶液）でクエンチし、ＤＣＭで希釈した。有機層をＮＨ４Ｃｌ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させた。生成物４ｂを更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，５．５Ｈｚ，６Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，４Ｈ），１．３７－１．１９（ｍ，３２Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
ステップ３：ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ４がＣ７アルキルである６ｂ）、ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘプタデカノエート（Ｒ４がＣ８アルキルである６ｂ）、ヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（Ｒ４がＣ９アルキルである６ｂ）、ヘプタデカン－９－イル９－オキソノナデカノエート（Ｒ４がＣ１０アルキルである６ｂ）、又はヘプタデカン－９－イル９－オキソイコサノエート（Ｒ４がＣ１１アルキルである６ｂ）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ４がＣ７アルキルである場合の６ｂ）
化合物４ｂ（１．０ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、１Ｍのヘプチルマグネシウムブロミド溶液（Ｒ４がＣ７アルキルである場合の化合物５ａ）のＥｔ２Ｏ溶液（３．２ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。混合物をＮ２下、室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ７アルキルである場合の６ｂを得た（０．３ｇ、３０％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６４－１．４３（ｍ，１２Ｈ），１．２７（ｓ，３６），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘプタデカノエート（Ｒ４がＣ８アルキルである場合の６ｂ）
化合物４ｂ（１．０ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を１０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、１Ｍのオクチルマグネシウムブロミド溶液（Ｒ４がＣ８アルキルである場合の化合物５）のＥｔ２Ｏ溶液（１．６ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。混合物をＮ２下、室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ８アルキルである場合の６ｂを得た（０．４１ｇ、４０％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６５－１．３８（ｍ，８Ｈ），１．３３－１．１８（ｍ，４２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（Ｒ４がＣ９アルキルである場合の６ｂ）
化合物４ｂ（１．１ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、１Ｍのノニルマグネシウムブロミド溶液（Ｒ４がＣ９アルキルである場合の化合物５）のＥｔ２Ｏ溶液（６．１３ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。得られた混合物を２時間かけて室温に到達させた。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ９アルキルである場合の６ｂを得た（１．２ｇ、９６％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６５－１．３８（ｍ，８Ｈ），１．３３－１．１８（ｍ，４４Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－オキソノナデカノエート（Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の６ｂ）
化合物４ｂ（０．３ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を２ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、１Ｍのデシルマグネシウムブロミド溶液（Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の化合物５）のＥｔ２Ｏ溶液（１．２８ｍＬ、０．７７ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。得られた混合物を２時間かけて室温に到達させた。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、ヘキサンで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の６ｂを得た（０．２ｇ、４７％）。
ヘプタデカン－９－イル９－オキソイコサノエート（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の６ｂ）
２ｍＬの無水エーテル中の１－ブロモウンデカン（０．４７ｇ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｍｇ（０．０７２ｇ、３ｍｍｏｌ）及び１滴の１，２－ジブロモエタンを添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、濾過し、乾燥させた。生成物のウンデシルマグネシウムブロミド（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の化合物５）を、更に精製することなく次のステップで使用した。
化合物４ｂ（０．４７ｇ、１ｍｍｏｌ）を３ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、ＴＨＦ中のウンデシルマグネシウムブロミド溶液（１．１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。得られた混合物を２時間かけて室温に到達させた。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、ヘキサンで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の化合物５）を得た（０．２７ｇ、４８％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７０－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．２９－１．２５（ｍ，４８Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ４：ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ４がＣ７アルキルである場合の７ｂ）、ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘプタデカノエート（Ｒ４がＣ８アルキルである場合の７ｂ）、ヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（Ｒ４がＣ９アルキルである場合の７ｂ）、ヘプタデカン－９－イル９－オキソノナデカノエート（Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の７ｂ）、又はヘプタデカン－９－イル９－オキソイコサノエート（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の７ｂ）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（Ｒ４がＣ７アルキルである場合の７ｂ）
１０ｍＬの無水ＴＨＦ中のヘプタデカン－９－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ４がＣ７アルキルである場合の６ｂ）（０．３ｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．０９ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で一晩撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ７アルキルである場合の７ｂを得た（０．２５ｇ、８２％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．９２－４．７８（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６６－１．３６（ｍ，１２Ｈ），１．３１－１．２５（ｍ，４０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシヘプタデカノエート（Ｒ４がＣ８アルキルである場合の７ｂ）
１０ｍＬの無水ＴＨＦ中のヘプタデカン－９－イル９－オキソヘプタデカノエート（Ｒ４がＣ８アルキルである場合の６ｂ）（０．４ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．０４ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で一晩撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ８アルキルである場合の７ｂを得た（０．２１ｇ、５２％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．９２－４．８０（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６４－１．４０（ｍ，１２Ｈ），１．３６－１．１８（ｍ，４２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（Ｒ４がＣ９アルキルである場合の７ｂ）
４０ｍＬのＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：１）混合物中のヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（Ｒ４がＣ９アルキルである場合の６ｂ）（１．１ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．３ｇ、８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物を１ＭのＨＣｌ溶液（水溶液）でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の５～４０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ９アルキルである場合の７ｂを得た（０．９ｇ、８３％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８８－４．８３（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４８－１．４１（ｍ，８Ｈ），１．３６－１．１８（ｍ，４４Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシノナデカノエート（Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の７ｂ）
３ｍＬのＴＨＦ：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：１：１）混合物中のヘプタデカン－９－イル９－オキソノナデカノエート（Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の６ｂ）（０．２ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．０３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で３時間撹拌した。反応物を０．５ｍＬのＨ２Ｏでクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の５～４０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の７ｂを得た（０．１６ｇ、８０％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６１－１．３７（ｍ，１２Ｈ），１．３２－１．１８（ｍ，４６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシイコサノエート（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の７ｂ）
３ｍＬのＴＨＦ：ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：１：１）混合物中のヘプタデカン－９－イル９－オキソイコサノエート（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の６ｂ）（０．２７ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．０５ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で３時間撹拌した。反応物を０．５ｍＬのＨ２Ｏでクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯで乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の５～４０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の７ｂを得た（０．２５ｇ、９２％）。１Ｈ ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５７（ｓ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６９－１．３７（ｍ，１２Ｈ），１．２９－１．１７（ｍ，４８Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ５：ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質１１）、ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカノエート（脂質１９）、ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）オクタデセノエート（脂質２０）、ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ノナデカノエート（脂質２１）、又はヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）イコサノエート（脂質２２）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質１１）
ＤＣＭ（５ｍＬ）中のヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（Ｒ４がＣ７アルキルである場合の７ｂ）（０．２５ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．１２５ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、０．２７ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ（０．１４３ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０１２ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質１１（０．１４ｇ、４５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．９３－４．７７（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２３（ｍ，５Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．８３－１．７３（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．４０（ｍ，１０Ｈ），１．２５（ｓ，４３Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６２３．５９。
ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカノエート（脂質１９）
ＤＣＭ（３ｍＬ）中のヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシヘプタデカノエート（Ｒ４がＣ８アルキルである場合の７ｂ）（０．２１ｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．０８ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、０．１６ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ（０．０９ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（０．００８ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質１９（０．１１２ｇ、４４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｍ，２Ｈ），２．３４－２．２４（ｍ，５Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７８（ｐ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６８－１．５６（ｍ，２Ｈ），１．５４－１．４０（ｍ，８Ｈ），１．２５（ｓ，４５Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４０Ｈ７９ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６３８．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６３７．６０。
ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）オクタデセノエート（脂質２０）
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中のヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（Ｒ４がＣ９アルキルである場合の７ｂ）（０．３ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．２１ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０７ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．２５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に再溶解した。有機層をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３（水溶液）（２００ｍＬ）及びブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。有機層を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の５～４０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質２０（０．１２４ｇ、３４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．２３（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．８５－１．７１（ｍ，２Ｈ），１．６７－１．５５（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．４４（ｍ，８Ｈ），１．２４（ｓ，４６Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６５２．７［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６５１．６２。
ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ノナデカノエート（脂質２１）
１ｍＬのＤＣＭ中のヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシノナデカノエート（Ｒ４がＣ１０アルキルである場合の７ｂ）（０．１６ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．０５２ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（０．０４ｇ、０．０．３３ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．０５６ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質２１（０．０７ｇ、３６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ４．９３－４．８１（ｍ，２Ｈ），２．３４－２．２４（ｍ，５Ｈ），２．２２（ｓ，６Ｈ），１．８５－１．６７（ｍ，４Ｈ），１．６３－１．５７（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，７Ｈ），１．２４（ｓ，４７Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４２Ｈ８３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６６５．６３［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６６６．５。
ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）イコサノエート（脂質２２）
ＤＣＭ（１ｍＬ）中の化合物ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシイコサノエート（Ｒ４がＣ１１アルキルである場合の７ｂ）（０．２５ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．０６８ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０５４ｇ、０．０．４４ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．０７４ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質２２（０．１３４ｇ、４５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８７－４．８１（ｍ，２Ｈ），２．３４－２．２４（ｍ，５Ｈ），２．２３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ），１．８７－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．７４－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．６５－１．５７（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，７Ｈ），１．２４（ｓ，５０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６７９．６５。
実施例４：脂質２３の合成
脂質２３を合成するための手順は、も提供されるスキーム１１を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000036
ステップ１及びステップ２：３－オクチルウンデカン－１－オール（１３ａ）の合成
１２０ｍＬのＴＨＦ中のヘプタデカン－９－オン（１０ａ）の３ｇ（１１．８ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、１８ｍＬの（エチルカルボン酸）（ジエチルリン酸）無水物（１１ａ）を滴加した。反応物を３０分間撹拌し、次いで３．２ｇ（８０ｍｍｏｌ）のＮａＨを添加した。反応混合物を１８時間還流した。粗生成物を水でクエンチし、エーテルで抽出して２を得た。５ｍＬのＴＨＦ中の１グラムのエチル３－オクチルウンデカ－２－エノエート（１２ａ）を１ｍＬのＬｉＡｌＨ４（２Ｍ溶液）と反応させた。４８時間後、粗生成物を水でクエンチし、エーテルで抽出して０．６ｇの３－オクチルウンデカン－１－オール（１３）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，２７Ｈ），１．５０－１．６０（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．８７（ｍ，１Ｈ），１．８８－２．００（ｍ，１Ｈ），３．５０－３．６８（ｍ，２Ｈ），３．７０－３．７７（ｍ，１Ｈ）。
ステップ３：７－（（３－オクチルウンデシル）オキシ）－７－オキソヘプタン酸（１４ｂ）の合成
０．６ｇ（２．１ｍｍｏｌ）の３－オクチルウンデカン－１－オール（１３）を３０ｍＬの塩化メチレンに溶解し、続いて０．９ｇ（４．３ｍｍｏｌ）のピメリン酸を溶解した。この混合物に、０．８７ｇ（４．３ｍｍｏｌ）の１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）を添加し、続いて０．６９ｇ（４．３ｍｍｏｌ）の４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。反応物を一晩撹拌した。１ＮのＨＣｌ水溶液を用いて反応をクエンチし、シリカゲルカラムで精製して、０．４５ｇ（収率５０％）の７－（（３－オクチルウンデシル）オキシ）－７－オキソヘプタン酸（１４ｂ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．５５（ｍ，２７Ｈ），１．５６－１．７５（ｍ，５Ｈ），２．３０（ｄｄ，２Ｈ），２．３６（ｄｄ，２Ｈ），４．０７（ｄｄ，２Ｈ）。
ステップ４：３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（１５ｂ）の合成
１０ｍＬのジクロロメタン中の０．４５ｇ（１．１ｍｍｏｌ）の７－（（３－オクチルウンデシル）オキシ）－７－オキソヘプタン酸（１４）の溶液に、０．２５ｇ（１．６ｍｍｏｌ）の１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）を添加し、続いて０．１６ｇ（１．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩、０．１６ｇ（１．６ｍｍｏｌ）のトリメチルアミン及び最後に０．１９ｇ（１．６ｍｍｏｌ）の４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。反応混合物を一晩撹拌し、次いで１ＮのＨＣｌ溶液でクエンチした。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させて、０．４５ｇ（収率９０％）の３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（１５ｂ）を得た。粗生成物を更なる精製なしで次のステップに使用した。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．５５（ｍ，３２Ｈ），１．５６－１．８０（ｍ，４Ｈ），２．３０（ｄｄ，２Ｈ），２．３６（ｄｄ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），４．０７（ｄｄ，２Ｈ）。Ｃ２８Ｈ５５ＮＯ４についてのＭＳ実測値４７０．３［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値４６９．４。
ステップ５：３－オクチルウンデシル７－オキソヘキサデカノエート（１６ｂ）の合成
１ｍＬのノニルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を、３ｍＬの無水ＴＨＦ中の０．４５ｇ（０．９ｍｍｏｌ）の３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（１５ｂ）の氷冷溶液に滴加した。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、２時間撹拌した。反応物を再び冷却し、塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。粗生成物をヘキサンで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲル（０～１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、０．３ｇ（収率５８％）の３－オクチルウンデシル７－オキソヘキサデカノエート（１６ｂ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．４０（ｍ，３８Ｈ），１．４５－１．７０（ｍ，７Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），２．３２－２．３９（ｑ，４Ｈ），４．０７（ｄｄ，２Ｈ）。
ステップ６：３－オクチルウンデシル７－ヒドロキシヘキサデカノエート（１７ｂ）の合成
３ｍＬのＴＨＦ／ＭｅＯＨ／塩化メチレン（１／１／１）混合物に溶解した０．３ｇ（０．５６ｍｍｏｌ）の３－オクチルウンデシル７－オキソヘキサデカノエート（１６ｂ）の氷冷溶液に、５０ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を室温まで加温し、３時間撹拌した後、水でクエンチし、蒸発させた。粗生成物を塩化メチレンに再溶解し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、２２０ｍｇの粗生成物を更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８８（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．４５（ｍ，４６Ｈ），１．５０－１．７０（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｔ，２Ｈ），３．６５（ｂｒｏａｄ ｓ，１Ｈ），４．０７（ｄｄ，２Ｈ）。
ステップ７：３－オクチルウンデシル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質２３）の合成
１ｍＬの塩化メチレン中の０．２２ｇ（０．４ｍｍｏｌ）の３－オクチルウンデシル７－ヒドロキシヘキサデカノエート（１７ｂ）の溶液に、０．０６８ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩ、０．０７４ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）の４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩、及び０．０５４ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを、０．０５４ｇ（０．５ｍｍｏｌ）もトリエチルアミンと一緒に添加し、１６時間を経過させた。反応物を蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィーカラム０～５％メタノール／塩化メチレンの後、純粋な３－オクチルウンデシル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質２３）を０．１６ｇ（収率６０％）の量で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．４０（ｍ，４８Ｈ），１．４１－１．７０（ｍ，６Ｈ），１．７２－１．８５（ｄｄ，２Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），２．２２－２．４０（ｍ，６Ｈ），４．０７（ｄｄ，２Ｈ），４．８０－４．９０（ｍ，１Ｈ）。Ｃ４１Ｈ８１ＮＯ４についてのＭＳ実測値６５２．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６５１．６。
実施例５：脂質１６の合成
脂質１６を合成するための手順は、以下にまた提供されるスキーム１２を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000037
ステップ１：９－（ヘニコサン－１１－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｃ）の合成
丸底フラスコ中で、１．５ｇ（４．８ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－オール（１ｂ）を６０ｍＬの塩化メチレンに溶解し、続いて１．８ｇ（９．６ｍｍｏｌ）のアゼライン酸（２ｂ）を溶解した。この混合物に、１．４８ｇ（９．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて１．２ｇ（９．６ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応物を一晩撹拌した。反応を１ＮのＨＣｌ（１００ｍＬ）を用いてクエンチした。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～２５％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、１．１ｇ（収率４７％）の９－（ヘニコサン－１１－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｃ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．８０（ｍ，６２Ｈ），２．２０－２．４０（ｍ，４Ｈ），４．８２－４．９４（ｍ，１Ｈ）。Ｃ３０Ｈ５８Ｏ４についてのＭＳ実測値４８１．４［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値４８２．４。
ステップ２：ヘニコサン－１１－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｃ）の合成
２０ｍＬのＤＣＭ中の１．１ｇ（２．３ｍｍｏｌ）の９－（ヘニコサン－１１－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｃ）の溶液に、０．５３ｇ（３．４ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて０．３５ｇ（３．４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩、最後に、０．４２ｇ（３．４ｍｍｏｌ）の４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を添加した。反応混合物を１６時間撹拌し、次いで１ＮのＨＣｌ溶液（２×５ｍＬ）でクエンチした。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させて、１ｇ（収率８０％）のヘニコサン－１１－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｃ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，３５Ｈ），１．４１－１．５０（ｍ，４Ｈ），１．５５－１．６８（ｍ，４Ｈ），２．２６（ｄｄ，２Ｈ），２．３７（ｄｄ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），４．８０－４．８７（ｍ，１Ｈ）。
ステップ３：ヘニコサン－１１－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｃ）の合成
２．３ｍＬのノニルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を、６ｍＬの無水ＴＨＦ中の１ｇ（１．９ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソヘプタノエート（４ｃ）の氷冷溶液に滴加した。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、２時間撹拌した。反応物を再び冷却し、塩化アンモニウム水溶液でクエンチした。粗生成物をヘキサンで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、０．７ｇ（収率６２％）のヘニコサン－１１－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｃ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．４０（ｍ，４５Ｈ），１．４５－１．６１（ｍ，１１Ｈ），２．２６（ｔ，２Ｈ），２．３７（ｔ，４Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。
ステップ４：ヘニコサン－１１－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（７ｃ）の合成
２ｍＬのＴＨＦ／２ｍＬのＭｅＯＨ／２ｍＬのＤＣＭ溶液に溶解した、０．７ｇ（１．２ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｃ）の氷冷溶液に、０．２ｇ（５．３ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を室温まで加温し、３時間撹拌した後、水でクエンチし、蒸発乾固させた。粗生成物をＤＣＭに再溶解し、水で洗浄した。蒸発及びカラム精製後、０．６ｇ（収率８６％）のヘニコサン－１１－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（７ｃ）が得られた。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８８（ｔ，９Ｈ），１．１０－１５９（ｍ，５９Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，１Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。
ステップ５：ヘニコサン－１１－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）オクタデカノエート（脂質１６）の合成
１ｍＬの塩化メチレン中の０．２４ｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（７ｃ）の溶液に、０．０７ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩ、０．０７４ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）の４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩、０．０５４ｇ（０．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰ及び０．０５４ｇ（０．５３ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを添加した。１６時間後、反応物を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィーカラム０～５％メタノール／塩化メチレンの後、純粋なヘニコサン－１１－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）オクタデカノエート（脂質１６）を０．１６０ｇ（収率５５％）の量で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．３５（ｍ，５５Ｈ），１．４０－１．５４（ｍ，７Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，２Ｈ）１．７７－１．８５（ｍ，２Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ）２．２２－２．４０（ｍ，６Ｈ），４．８２－４．８７（ｍ，２Ｈ）。Ｃ４５Ｈ８９ＮＯ４についてのＭＳ実測値７０８．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７０７．７。
実施例６：脂質１８の合成
脂質１８を合成するための手順は、以下にまた提供されるスキーム１３を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000038
ステップ１：７－（ヘニコサン－１１－イルオキシ）－７－オキソヘプタン酸（３ｄ）の合成
窒素雰囲気下の丸底フラスコ中で、２ｇ（６．３ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－オール（１ｂ）を３０ｍＬの無水塩化メチレンに溶解し、続いて２．１ｇ（１２．７ｍｍｏｌ）のピメリン酸（２ｃ）を溶解した。この混合物に、１．４ｇ（７．３ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて１．６ｇ（１３ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応物を４８時間撹拌した。塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、塩化メチレンで抽出した。有機相をブライン（１２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～２０％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、１．３３ｇ（収率４５％）の７－（ヘニコサン－１１－イルオキシ）－７－オキソヘプタン酸（３ｄ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．１８－１．４２（ｍ，３２Ｈ），１．４２－１．５５（ｍ，３Ｈ），１．６０－１．６９（ｍ，４Ｈ），２．２９（ｔ，２Ｈ），２．３６（ｔ，２Ｈ）４．８４－４．８８（ｍ，１Ｈ）。Ｃ２８Ｈ５４Ｏ４についてのＭＳ実測値４５５．３［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値４５４．４。
ステップ２：ヘニコサン－１１－イル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（４ｄ）の合成
１０ｍＬの無水ＤＣＭ中の１．３３ｇ（２．９ｍｍｏｌ）の７－（ヘニコサン－１１－イルオキシ）－７－オキソヘプタン酸（３ｄ）溶液に、窒素ガス雰囲気下で、０．８４ｇ（４．４ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて０．８２ｍＬ（５．８５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン、０．３４ｇ（３．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩、最後に３６ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応混合物を１６時間撹拌し、次いで塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレン（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～１０％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、０．９１ｇ（収率６４％）のヘニコサン－１１－イル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（４ｄ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２４－１．２９（ｍ，３８Ｈ），１．３０－１．５２（ｍ，８Ｈ），１．５５－１．７５（ｍ，５Ｈ），２．２９（ｄｄ，２Ｈ），２．４２（ｄｄ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。
ステップ３：ヘニコサン－１１－イル７－オキソヘキサデカノエート（６ｄ）の合成
２．２ｍＬのノニルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を、５ｍＬの無水ＴＨＦ中の０．８６ｇ（０．１７ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－イル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（４ｄ）の氷冷溶液に滴加した。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。反応物を再び冷却し、塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）でクエンチした。粗生成物をヘキサン（２×１０ｍＬ）及び塩化メチレン（２×１５ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、０．６４０ｇ（収率６５％）のヘニコサン－１１－イル７－オキソオクタデカノエート（６ｄ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．３５（ｍ，４４Ｈ），１．４０－１．６０（ｍ，１２Ｈ），２．２８（ｔ，２Ｈ），２．３１－２．３８（ｑ，４Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。Ｃ３７Ｈ７２Ｏ３についてのＭＳ実測値５６５．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５６４．６。
ステップ４：ヘニコサン－１１－イル７－ヒドロキシヘキサデカノエート（７ｄ）の合成
４ｍＬの５０％混合ＴＨＦ／ＭｅＯＨに溶解した０．６４ｇ（１．１ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－イル７－オキソヘキサデカノエート（７ｄ）の氷冷溶液に、６４ｍｇ（１．７ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を室温に加温し、１時間撹拌した後、塩化アンモニウム水溶液（１ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレン（１０ｍＬ）及び酢酸エチル（５ｍＬ）を用いて粗生成物を抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１５４（ｍ，６３Ｈ），１．５４－１．５５（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｔ，２Ｈ），３．５０－３．６０（ｍ，１Ｈ），４．８３－４．８８（ｍ，１Ｈ）。Ｃ３７Ｈ７４Ｏ３についてのＭＳ実測値５６７．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５６６．５６。
ステップ５：ヘニコサン－１１－イル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質１８）の合成
４ｍＬの無水塩化メチレン中の０．５７ｇ（１ｍｍｏｌ）のヘニコサン－１１－イル７－ヒドロキシヘキサデカノエート（７ｄ）の溶液に、窒素雰囲気下で、０．２９ｇ（１．５ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩ、０．２０ｇ（１．２ｍｍｏｌ）の４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩及び０．１８６ｇ（１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。５分後、０．２１ｍＬ（１．５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミを反応混合物に注入し、１６時間後、反応を塩化アンモニウム水溶液（５ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレン（２×１０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィーカラム０～５％メタノール／塩化メチレンの後、純粋なヘニコサン－１１－イル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質１８）を０．２９６ｇ（収率２８％）の量で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．３０（ｍ，４７Ｈ），１．４０－１．８４（ｍ，１５Ｈ），２．２３（ｓ，６Ｈ），２．２４－２．４（ｍ，６Ｈ），４．８１－４．８８（ｍ，２Ｈ）。Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４についてのＭＳ実測値６８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６７９．７。
実施例７：脂質１７の合成
脂質１７を合成するための手順は、以下にまた提供されるスキーム１４を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000039
ステップ１：９－オキソ－９－（ペンタコサン－１３－イルオキシ）ノナン酸（３ｅ）の合成
窒素雰囲気下の丸底フラスコ中で、０．９ｇ（２．４ｍｍｏｌ）のペンタコサン－１３－オール（１ｃ）を５０ｍＬの無水塩化メチレンに溶解し、続いて０．９ｇ（４．３ｍｍｏｌ）のピメリン酸（２ｂ）を溶解した。この混合物に、０．４６ｇ（２．４ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて０．６ｇ（４．６ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応物を一晩撹拌した。塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、塩化メチレンで抽出した。有機相をブライン（１２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～２０％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、０．４５ｇ（収率３４％）の９－オキソ－９－（ペンタコサン－１３－イルオキシ）ノナン酸（３ｅ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．８０（ｍ，７０Ｈ），２．２０－２．４０（ｍ，４Ｈ），４．８２－４．９４（ｍ，１Ｈ）．Ｃ３４Ｈ６６Ｏ４についてのＭＳ実測値５３９．４［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５３８．５。
ステップ２：ペンタコサン－１３－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｅ）の合成
３０ｍＬの無水ＤＣＭ中の０．４５ｇ（０．８ｍｍｏｌ）の９－オキソ－９－（ペンタコサン－１３－イルオキシ）ノナン酸（３ｄ）の溶液に、０．２４ｇ（１．２５ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて、０．２ｍＬ（１．７ｍｍｏｌ）のトリメチルアミン、０．０９ｇ（０．９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩、最後に、１０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応混合物を１６時間撹拌し、次いで塩化アンモニウム水溶液（６０ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレンで抽出した。有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～１０％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、０．３５ｇ（収率７０％）のペンタコサン－１３－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｅ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．３０（ｍ，５２Ｈ），１．４８－１．６２（ｍ，８Ｈ），２．２７（ｄｄ，２Ｈ），２．２９（ｄｄ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。Ｃ３６Ｈ７１ＮＯ４についてのＭＳ実測値５８２．４［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５８１．５４。
ステップ３：ペンタコサン－１３－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｅ）の合成
０．９ｍＬのノニルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を、３ｍＬの無水ＴＨＦ中の０．３５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）のペンタサン－１３－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソヘプタノエート（４ｅ）の氷冷溶液に滴加した。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。反応物を再び冷却し、塩化アンモニウム水溶液（３ｍＬ）でクエンチした。粗生成物をヘキサン（３×２０ｍＬ）及び塩化メチレン（１×１０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲル（０～１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、０．３２１ｇ（収率８２％）のペンタコサン－１３－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｅ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．３０（ｍ，５４Ｈ），１．４０－１．６５（ｍ，９Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），２．３７（ｔ，４Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。Ｃ４３Ｈ８４Ｏ３についてのＭＳ実測値６４９．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６４８．６４。
ステップ４：ペンタコサン－１３－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（７ｅ）の合成
２ｍＬの５０％混合ＴＨＦ／ＭｅＯＨに溶解した０．３ｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のペンタサン－１３－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｅ）の氷冷溶液に、２６ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを添加した。反応物を室温に加温し、１時間撹拌した後、塩化アンモニウム水溶液（１ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレン（１０ｍＬ）及び酢酸エチル（５ｍＬ）を用いて抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８８（ｔ，９Ｈ），１．１０－１５４（ｍ，７２Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），３．５１－３．６２（ｍ，１Ｈ），４．８３－４．８７（ｍ，１Ｈ）。Ｃ４３Ｈ８６Ｏ３についてのＭＳ実測値６５１．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６５０．６６。
ステップ５：ペンタコサン－１３－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）オクタデカノエート（脂質１７）の合成
３ｍＬの無水塩化メチレン中の０．２９ｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のペンタコサン－１３－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（６ｅ）の溶液に、窒素雰囲気下で、０．１２８ｇ（０．６７ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩ、０．０９ｇ（０．５３ｍｍｏｌ）の４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩及び０．０８２ｇ（０．６７ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。５分後、０．０９ｍＬ（０．６７ｍｍｏｌ）のトリエチルアミを反応混合物に注入し、１６時間後、反応を塩化アンモニウム水溶液（３ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレン（２×１５ｍＬ）及び酢酸エチル（１５ｍＬ）で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーカラム０～５％メタノール／塩化メチレンの後、純粋なペンタコサン－１３－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）オクタデカノエート（脂質１７）を０．１３５ｇ（収率３４％）の量で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．３５（ｍ，６４Ｈ），１．４０－１．７６（ｍ，１１Ｈ），１．７７－１．８５（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｓ，６Ｈ）２．２４－２．３２（ｍ，６Ｈ），４．８２－４．８７（ｍ，２Ｈ）。Ｃ４９Ｈ９７ＮＯ４についてのＭＳ実測値７６４．７［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７６３．７４。
実施例８：脂質２４の合成
脂質２４を合成するための手順は、以下にまた提供されるスキーム１５を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000040
ステップ１：９－（ヘプタデカン－９－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｂ）の合成
窒素雰囲気下の丸底フラスコ中で、１０ｇ（３９ｍｍｏｌ）のヘプタデカン－９－オール（１ａ）を１００ｍＬの無水塩化メチレンに溶解し、続いて１４．７ｇ（７８ｍｍｏｌ）のアゼライン酸（２ｂ）を溶解した。この混合物に、９．７ｇ（５０．７ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて９．５ｇ（７８ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応物を一晩撹拌した。塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、塩化メチレンで抽出した（１００ｍＬ）。有機相をブライン（１２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～２０％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、７ｇ（収率４２％）の９－（ヘプタデカン－９－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｂ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２０－１．３３（ｍ，３０Ｈ），１．４０－１．５０（ｍ，４Ｈ），１．５０－１．６４（ｍ，４Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），２．３２（ｔ，２Ｈ），４．８２－４．８８（ｍ，１Ｈ）。Ｃ２６Ｈ５０Ｏ４についてのＭＳ実測値４２７．３［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値４２６．３７。
ステップ２：ヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｂ）の合成
４０ｍＬの無水ジクロロメタン中の５ｇ（１１．７ｍｍｏｌ）の９－（ヘプタデカン－９－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｂ）の溶液に、３．３７ｇ（１７．６ｍｍｏｌ）のＥＤＣＩを添加し、続いて、３．３ｍＬ（２３．５ｍｍｏｌ）のトリメチルアミン、１．４８ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩、最後に、１４３ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。反応混合物を１６時間撹拌し、次いで塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）でクエンチし、塩化メチレンで抽出（１５０ｍＬ）した。有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲルカラム（０～２０％酢酸エチル－ヘキサン）で精製して、３．９ｇ（収率７０％）のヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｂ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，６Ｈ），１．１０－１．４０（ｍ，２９Ｈ），１．４１－１．５７（ｍ，１０Ｈ），２．２７（ｄｄ，２Ｈ），２．２９（ｄｄ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），４．８３－４．８８（ｍ，１Ｈ）。Ｃ２８Ｈ５５ＮＯ４についてのＭＳ実測値４７０．４［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値４６９．４１。
ステップ３：ヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｆ）の合成
１４．９ｍＬのノニルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を、２４ｍＬの無水ＴＨＦ中の５ｇ（１０．６ｍｍｏｌ）のヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｂ）の氷冷溶液に滴加した。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。反応物を再び冷却し、塩化アンモニウム水溶液（２０ｍＬ）でクエンチした。粗生成物を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲル（０～１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、４ｇ（収率７０％）のヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｆ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，９Ｈ），１．１０－１．３５（ｍ，４０Ｈ），１．４０－１．６０（ｍ，８Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），２．３７（ｔ，４Ｈ），４．８３－４．８８（ｍ，１Ｈ）。Ｃ３５Ｈ６８Ｏ３についてのＭＳ実測値５３７．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５３６．５。
ステップ４：ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシ－９－ノニルオクタデカノエート（７ｆ）の合成
５．２ｍＬのノニルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）を、８ｍＬの無水ＴＨＦ中の２ｇ（３．７ｍｍｏｌ）のヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｆ）の氷冷溶液に滴加した。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。反応物を再び冷却し、塩化アンモニウム水溶液（８ｍＬ）でクエンチした。粗生成物を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、シリカゲル（０～１０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製して、１．１ｇ（収率４４％）のヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシ－９－ノニルオクタデカノエート（７ｆ）を得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，１２Ｈ），１．００－１．３１（ｍ，６３Ｈ），１．３５－１．３９（ｍ，１０Ｈ），１．５１－１．６６（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），４．８３－４．８９（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ １４．２，２２．７，２３．６，２５．４，２９．３，２９．４，２９．６，２９．７，３０．４，３２．０，３４．０，３４．９，３９．４，７４．０，７４．２，１７３．８。
ステップ５：ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）－９－ノニルオクタデカノエート（脂質２４）の合成
８ｍＬの無水塩化メチレン中の０．９ｇ（１．５ｍｍｏｌ）のヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシ－９－ノニルオクタデカノエート（７ｆ）の溶液に、１ｇ（６ｍｍｏｌ）の４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩を添加し、続いて１．８ｇ（９ｍｍｏｌ）の１Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、及び０．１８２ｇ（１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＡＰを添加した。１６時間後、反応物を蒸発させ、０～５％メタノール／塩化メチレンを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、０．８ｇの出発アルコールを回収した。不純な脂質２４を含有する画分を、０．１％ＴＦＡ－水／０．１％ＴＦＡ－アセトニトリルを使用するＣ１８カラムによって再精製した。純粋なヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）－９－ノニルオクタデカノエート（脂質２４）を０．０４４ｇ（収率４％）の量で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ０．８７（ｔ，１２Ｈ），１．１０－１．３０（ｍ，６３Ｈ），１．４０－１．８０（ｍ，１５），１．８５－２．１０（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），２．３５（ｔ，２Ｈ），２．８２－２．８５（ｓ，ｓ，６Ｈ），３．００－３．１５（ｍ，２Ｈ），４．８０－４．９０（ｍ，２Ｈ）。Ｃ５０Ｈ９９ＮＯ４についてのＥＳＩ＋－ＭＳ実測値７７８．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７７７．８。
実施例９：脂質２５の合成
脂質２５を合成するための手順は、以下にまた提供されるスキーム１６を参照して以下に記載される。
Figure 2024517644000041
ステップ１：９－（ヘプタデカン－９－イルオキシ）－９－オキソノナン酸（３ｂ）の合成
ＤＣＭ（１０００ｍＬ）中のノナン二酸又はアゼライン酸（２ｂ）（７．３４ｇ、３９ｍｍｏｌ）及びヘプタデカン－９－オール（１ａ）（５ｇ、１９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（２．３７ｇ、１９ｍｍｏｌ）、続いてＥＤＣＩ（３ｇ、１９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで２５０ｍＬの１ＮのＨＣｌ及び２５０ｍＬの水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてＤＣＭ中０～１０％メタノールを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、３ｂ（６．２ｇ、７５％）を白色固形物として得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ４．８０－４．９０（ｍ，１Ｈ），２．２５－２．３４（ｍ，４Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．５０（ｍ，４Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，３０Ｈ），０．８４－０．９０（ｔ，３Ｈ）。
ステップ２：ヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｂ）の合成
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の化合物３ｂ（５．４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（３．６ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）、及びＴＥＡ（３．５ｍＬ、２５．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌した。次いで、Ｎ，Ｏ－ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１．３６ｇ、１３．９７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．１５ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＮＨ４Ｃｌ（水溶液）でクエンチし、ＤＣＭで希釈した。有機層をＮＨ４Ｃｌ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させた。生成物４ｂを更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，５．５Ｈｚ，６Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，４Ｈ），１．３７－１．１９（ｍ，３２Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
ステップ３：ヘプタデカン－９－イル９－オキソオクタデカノエート（６ｇ）の合成
化合物４ｂ（１．１ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、Ｅｔ２Ｏ（６．１３ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）中の１Ｍのノニルマグネシウムブロミド溶液を０℃で滴加した。得られた混合物を２時間かけて室温に到達させた。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、６ｆ（１．２ｇ、９６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６５－１．３８（ｍ，８Ｈ），１．３３－１．１８（ｍ，４４Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ４：ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシオクタデカノエート（７ｇ）の合成
４０ｍＬのＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：１）混合物中の６ｂ（１．１ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．３ｇ、８ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で２時間撹拌した。反応混合物を１ＭのＨＣｌ溶液（水溶液）でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。有機層を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の５～４０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、７ｇ（０．９ｇ、８３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８８－４．８３（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４８－１．４１（ｍ，８Ｈ），１．３６－１．１８（ｍ，４４Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ５：ヘプタデカン－９－イル９－（（メチルスルホニル）オキシ）オクタデカノエート（１９）の合成
乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）の溶液に、化合物７ｇ（０．４８ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加し、氷浴中で０℃に冷却した。次いで、トリエチルアミン又はＥｔ３Ｎ（０．４５ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃で１５分間撹拌した。次いで、ＤＣＭに溶解した塩化メタンスルホニル（ＭｓＣｌ）（０．２５ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、氷浴を取り外し、反応物を室温で更に３時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３（水溶液）（２０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固して化合物１９を得て、これを更に精製することなく次のステップで使用した。
ステップ６：ヘプタデカン－９－イル９－メルカプトオクタデカノエート（２０）の合成
化合物１９（０．２ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＤＭＦに溶解して、緑色溶液を得た。反応混合物に、水硫化ナトリウム又はＮａＨＳ（０．０９ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を一度に添加し、室温で２４時間撹拌した。翌日、反応混合物をＨ２Ｏ（５ｍＬ）とＥｔ２Ｏ（５ｍＬ）との間で分配した。水層をＥｔ２Ｏ（５ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固して、生成物２０（０．０７ｇ）を無色油状物として得て、更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７１－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．３６－１．１２（ｍ，４６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ７：ヘプタデカン－９－イル９－（（３－（ジメチルアミノ）プロピル）ジスルファニルオクタデセノエート（脂質２５）
化合物２０（０．５ｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジメチル－３－（ピリジン－２－イルジスルファニル）プロパン－１－アミン（０．２ｇ、０．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解し、室温で一晩撹拌した。次いで、溶媒を真空下で蒸発させ、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨを用いるカラムクロマトグラフィーにより精製して、脂質２５（０．４ｇ）を淡黄色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｑ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６９－２．５９（ｍ，３Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．２３（ｓ，６Ｈ），１．９２－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．７１－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．４１－１．１５（ｍ，４６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４０Ｈ８１ＮＯ２Ｓ２］についてのＭＳ実測値６７２．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６７１．５７。
実施例１０：脂質１１の代替合成並びに脂質１及び２の合成
脂質１１の合成は、上記の実施例３に提供される。実施例２におけるスキーム５及び代替合成（Ａ）を参照して、この実施例は、脂質１１の代替合成並びに脂質１及び脂質２の合成を記載する。
ステップ１：９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９，９オキソノナン酸（２５ｃ）の合成
実施例２の代替合成（Ａ）のステップ１を参照されたい。
ステップ２：ヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｇ）、ヘニコサン－１１－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｈ）、及びペンタコサン－１３－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（４ｉ）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の４ｆ）
Figure 2024517644000042
 ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の酸２５ｃ（４ｍｍｏｌ）及びヘプタデカン－９－オール１ａ（４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＭＡＰ（５９０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）、続いてＥＤＣＩ（９１６ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で一晩撹拌し、次いで５０ｍＬの１ＮのＨＣｌ及び５０ｍＬの水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固させ、溶離液としてＤＣＭ中０～１０％メタノールを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の化合物を含有する画分をプールし、蒸発させて、化合物４ｃを収率５７％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｍ，４Ｈ），１．４９（ｍ，４Ｈ），１．３７－１．１９（ｍ，３８），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
ヘニコサン－１１－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の４ｆ）
Figure 2024517644000043
 ヘプタデカン－９－オール１ａをヘニコサン－１１－オール１ｂで置換することを除いて、化合物４ｃについて上述したのと同じ試薬及び条件を使用して、化合物４ｄを酸２５ｃから収率５８％で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ４．８５（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６８－１．５４（ｍ，４Ｈ），１．５０－１．４１（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．２０（ｍ，４６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
ペンタコサン－１３－イル９－（メトキシ（メチル）アミノ）－９－オキソノナノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の４ｆ）
Figure 2024517644000044
 ヘプタデカン－９－オール１ａをペンタコサン－１３－オール１ｃで置換することを除いて、化合物４ｃについて上述したのと同じ試薬及び条件を使用して、化合物４ｅを酸２５ｃから収率２１％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｍ，４Ｈ），１．４９（ｍ，４Ｈ），１．３７－１．１９（ｍ，４６），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
ステップ３：ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘキサデカノエート（６ｈ）、ヘニコサン－１１－イル９－オキソヘキサデカノエート（６ｉ）、及びペンタコサン－１３－イル９－オキソヘキサデカノエート（６ｊ）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の６ｇ）
Figure 2024517644000045
 化合物４ｃ（２．１３ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。次いで、Ｅｔ２Ｏ中の１Ｍのヘプチルマグネシウムブロミド溶液（３．２ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。混合物をＮ２下、室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、６ｈを収率５７％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６４－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．３４－１．２１（ｍ，３８Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘニコサン－１１－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の６ｇ）
Figure 2024517644000046
 化合物６ｈについて上述したのと同じ条件を用いて、化合物６ｉを４ｄから収率５６％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６４－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．３４－１．２４（ｍ，４６），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，９Ｈ）。
ペンタコサン－１３－イル９－オキソヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の６ｇ）
Figure 2024517644000047
 化合物６ｈについて上述したのと同じ条件を用いて、化合物６ｊを４ｅから収率４６％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，４Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６４－１．４３（ｍ，８Ｈ），１．３２－１．２５（ｍ，５６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ４：ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（７ｉ）、ヘニコサン－１１－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（７ｊ）、及びペンタコサン－１３－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（７ｋ）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の７ｈ）
Figure 2024517644000048
 １０ｍＬの無水ＴＨＦ中の６ｈ（０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（０．０９ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、Ｎ２雰囲気下で一晩撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、７ｉを収率８２％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６６－１．３６（ｍ，１２Ｈ），１．３１－１．２５（ｍ，４０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，９Ｈ）。
ヘニコサン－１１－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の７ｈ）
Figure 2024517644000049
 化合物７ｉについて上述したのと同じ条件を用いて、化合物７ｊを化合物６ｉから収率８６％で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ４．８５（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），１．１０－１．５９（ｍ，６０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，９Ｈ）。
ペンタコサン－１３－イル９－ヒドロキシヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の７ｈ）
Figure 2024517644000050
 化合物７ｉについて上述したのと同じ条件を用いて、化合物７ｋを化合物６ｊから収率７８％で得た。１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）：δ ４．８５（ｍ，１Ｈ），３．５７（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，２Ｈ），１．１０－１．５９（ｍ，７２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ５：ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質１１）、ヘニコサン－１１－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質１）、及びペンタコサン－１３－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（脂質２）の合成
ヘプタデカン－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の９ｃ）
Figure 2024517644000051
 ＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物７ｉ（０．４９ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．１２５ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、０．２７ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ（０．１４３ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０１２ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質１を収率４５％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８７（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２３（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７８（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．４０（ｍ，１０Ｈ），１．３６－１．２２（ｍ，４２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６２３．５９。
ヘニコサン－１１－９－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の９ｃ）
Figure 2024517644000052
 化合物脂質１１について上述したのと同じ条件を用いて、脂質１を７ｊから４５％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２３（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．４０（ｍ，１０Ｈ），１．３６－１．２１（ｍ，５２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６８０．１６。
ペンタコサン－１３－イル９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の９ｃ）
Figure 2024517644000053
 化合物脂質１１について上述したのと同じ条件を用いて、脂質２を７ｋから４５％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８５（ｍ，２Ｈ），２．３７－２．２３（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７９（ｍ，２Ｈ），１．５２－１．４３（ｍ，１０Ｈ），１．３６－１．２１（ｍ，６０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４７Ｈ９３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値７３６．８［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７３６．２６。
実施例１１：脂質１２、脂質３、及び脂質４の合成
スキーム６及び実施例２に記載の代替合成法（Ｂ）を参照して、本実施例は、脂質１２、脂質３、及び脂質４の合成を記載する。
５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタン酸（２５）の合成
実施例２の代替合成（Ｂ）に記載されているとおりである化合物２５の合成手順を参照されたい。
５－オクチルトリデカン－１，５－ジオール（２３ｂ）、５－デシルペンタデカン－１，５－ジオール（２３ｃ）、及び５－ドデシルヘプタデカン－１，５－ジオール（２３ｄ）の合成
５－オクチルトリデカン－１，５－ジオール（Ｒ６、Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の２２及び２３）
Figure 2024517644000054
 窒素雰囲気下で、０度に冷却したオクチルマグネシウムブロミド２２ａの溶液（２６ｍＬ、エーテル中２Ｍ、２．３当量）に、５ｍＬの無水エチルエーテルに溶解された化合物２１（２ｍＬ、２２ｍｍｏｌ、１当量）を滴加した。５分間撹拌した後、氷浴を回収し、反応物を室温で一晩撹拌した。粗生成物を５００ｍＬの氷に投入し、濃ＨＣｌで希釈した。水性混合物をＤＣＭ（２×３００ｍＬ）で抽出し、次いで有機相を水（３００ｍＬ）で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。得られた生成物２３ｂは８．５ｇであり、更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６５（ｔ，２Ｈ），１．５６－１．４１（ｍ，３Ｈ），１．４０－１．３５（ｍ，８Ｈ），１．３４－１．２３９（ｍ，２０Ｈ），０．８７（ｔ，９Ｈ）。
５－デシルペンタデカン－１，５－ジオール（Ｒ６、Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の２２及び２３）
Figure 2024517644000055
 窒素雰囲気下で、０度に冷却したデシルマグネシウムブロミド２２ｂの溶液（４６ｍＬ、エーテル中１Ｍ、２．３当量）に、５ｍＬの無水エチルエーテルに溶解された化合物２１（１．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、１当量）を滴加した。５分間撹拌した後、氷浴を回収し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を先の実施例と同様に後処理し、得られた生成物２３ｃは８ｇであり、更に精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６４（ｔ，２Ｈ），１．６０－１．３５（ｍ，１０Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，２６Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。
５－ドデシルヘタデカン－１，５－ジオール（Ｒ６、Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の２２及び２３）
Figure 2024517644000056
 窒素雰囲気下で、０度に冷却したドデシルマグネシウムブロミド２２ｃの溶液（６９ｍＬ、ＭｅＴＨＦ中０．５Ｍ、２．３当量）に、３ｍＬの無水エチルエーテルに溶解された化合物２１（１．４ｍＬ、１５ｍｍｏｌ、１当量）を滴加した。５分間撹拌した後、氷浴を回収し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応物を通常通り後処理し、溶離液としてヘキサン中０～２５％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製して、２３ｄを得た（５．６ｇ、８４％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６５（ｔ，２Ｈ），１．５７－１．２０（ｍ，４６Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。
５－オクチルトリデカ－４－エン－１－オール（２４ａ）、５－デシルペンタデカ－４－エン－１－オール（２４ｂ）、及び５－ドデシルヘプタデカ－４－エン－１－オール（２４ｃ）の合成
５－オクチルトリデカ－４－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の２３及び２４）
Figure 2024517644000057
 化合物２３ｂ（０．５２ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を５ｍＬのトルエンに溶解し、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）をマイクロ波管に添加し、１００℃で１時間マイクロ波処理した。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～５％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、２４ｂ（０．３８ｇ、７７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ５．１０（ｔ，１Ｈ），３．６５（ｔ，２Ｈ），２．２３－１．９３（ｍ，６Ｈ），１．７０－１．４５（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．１０（ｍ，２０Ｈ），０．８８（ｔ，６Ｈ）。
５－デシルペンタデカ－４－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の２３及び２４）
Figure 2024517644000058
 ２ｇのジオール２３ｃを用いて先の実施例と同様に反応を行い、精製して、１．３８ｇ（６８％）の生成物２４ｃを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ５．１０（ｔ，１Ｈ），３．６５（ｔ，２Ｈ），２．０７－１．９２（ｍ，６Ｈ），１．６１－１．４０（ｍ，６Ｈ），１．３８－１．１３（ｍ，２６Ｈ），０．８６（ｔ，６Ｈ）。
５－ドデシルペンタデカ－４－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の２３及び２４）
Figure 2024517644000059
 反応は通常通り行ったが、温度を１００℃の代わりに８０℃で１時間保持した。１．１ｇのジオール２３ｄから０．８９ｇ（７９％）の２４ｄを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ δ ５．１０（ｔ，１Ｈ），３．６４（ｔ，２Ｈ），２．００－１．９４（ｍ，７Ｈ），１．７０－１．４５（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．１０（ｍ，３６Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。
５－オクチルトリデカン－１－オール（１３ｆ）、５－デシルペンタデカ－４－エン－１－オール（１３ｇ）、及び５－ドデシルヘプタデカ－４－エン－１－オール（１３ｈ）の合成
５－オクチルトリデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１３ｂ）
Figure 2024517644000060
 酢酸エチル（２０ｍＬ）中の化合物２４ｂ（１．１ｇ）の溶液に、２００ｍｇの活性炭担持１０％Ｐｄ、パールマン（Ｐｅａｒｌｍａｎ）（５０～７０％湿潤）を添加し、混合物を脱気した後、水素バルーンを混合物上に一晩放置した。混合物をセライトで濾過し、溶離液としてヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃを使用して粗生成物を精製して、１３ｆ（０．７４ｇ、６７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６７－３．６２（ｍ，２Ｈ），１．５７－１．５０（ｍ，２Ｈ），１．３３－１．１０（ｍ，３１Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。
５－デシルペンタデカ－４－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１３ｂ）
Figure 2024517644000061
 水素下でＰｄ／Ｃで処理した１．３８ｇの２４ｃを用いて反応を行い、通常通り精製して、０．９３ｇ（６７％）の５－デシルペンタデカン－１－オール１３ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６６－３．６１（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．４４（ｍ，６Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，４４Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。
５－ドデシルヘプタデカ－４－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１３ｂ）
Figure 2024517644000062
 水素下でＰｄ／Ｃで処理した０．８９ｇの２４ｄを用いて反応を４時間行い、通常通り精製して、０．６６ｇ（７４％）の５－デシルヘプタデカン－１－オール１３ｈを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６６－３．６１（ｍ，２Ｈ），１．５８－１．５１（ｍ，２Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，４４Ｈ），０．８８（ｔ，６Ｈ）。
ステップ１：５－オクチルトリデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（１５ｆ）、５－デシルペンタデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（１５ｇ）、５－ドデシルヘプタデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（１５ｈ）の合成
５－オクチルトリデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１５ｃ）
Figure 2024517644000063
 アルコール１３ｆ（０．９７ｇ、３．１ｍｍｏｌ）及びアミド２５（０．６５ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を８ｍＬの無水ＤＣＭに溶解し、続いてＥＤＣＩ（０．７７ｇ、４ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．５７ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を溶解した。反応物を窒素下で一晩撹拌し、２０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ水溶液を加えて後処理し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～２５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、１５ｆ（０．５３ｇ、３７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０６（ｔ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｔ，２Ｈ），２．３９（ｔ，２Ｈ），１．９９－１．９２（ｍ，２Ｈ）１．５６－１．６２（ｍ，２Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，３４Ｈ），０．８８（ｔ，６Ｈ）。［Ｃ２８Ｈ５５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値４７０．４［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値４６９．４１。
５－デシルペンタデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１５ｃ）
Figure 2024517644000064
 ０．９２ｇのアルコール１３ｇの反応及び精製を先の実施例と同様に行って、１．１ｇ（７９％）の５－デシルペンタデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート１５ｉを得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０６（ｔ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４７（ｔ，２Ｈ），２．３９（ｔ，２Ｈ），２．００－１．９３（ｍ，２Ｈ），１．５９－１．５５（ｍ，５Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，４４Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。［Ｃ３２Ｈ６３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値５２６．４［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５２５．５。
５－ドデシルヘプタデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１５ｃ）
Figure 2024517644000065
 ０．６４ｇのアルコール１３ｈの反応及び精製を先の実施例と同様に行って、０．４５ｇ（５１％）の５－ドデシルヘプタデシル５－（メトキシ（メチル）アミノ）－５－オキソペンタノエート１５ｈを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ４．０６（ｔ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１４（ｓ，３Ｈ），２．４９（ｔ，２Ｈ），２．３６（ｔ，２Ｈ），２．００－１．８８（ｍ，３Ｈ），１．６５－１．５１（ｍ，４Ｈ），１．３６－１．２０（ｍ，５２Ｈ），０．８７（ｔ，６Ｈ）。［Ｃ３６Ｈ７１ＮＯ４］についてのＭＳ実測値５８２．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値５８１．５。
ステップ２：５－オクチルトリデシル５－オキソドデカノエート（１６ｆ）、５－デシルペンタデシル５－オキソドデカノエート（１６ｇ）、及び５－ドデシルヘプタデシル５－オキソドデカノエート（１６ｈ）の合成
５－オクチルトリデシル５－オキソドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１６ｃ）
Figure 2024517644000066
 窒素下で１ｍＬの無水ＴＨＦ中の１５ｆ（０．３ｇ、６４ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、エーテル中１Ｍのヘプチルマグネシウムブロミドを滴加した。反応物を一晩撹拌し、反応混合物を０℃に冷却した後、ＮＨ４Ｃｌａｑ（１ｍＬ）を用いてクエンチした。粗生成物をヘキサン（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中の０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、１６ｆ（０．１３ｇ、４０％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ４．０５（ｔ，２Ｈ），２．４６（ｔ，２Ｈ），２．４０－２．２０（ｍ，４Ｈ），１．８２－１．９９（ｍ，２Ｈ），１．５９－１．３０（ｍ，５Ｈ），１．２６－１．１５（ｍ，４２），０．８７（ｔ，９Ｈ）。［Ｃ３３Ｈ６４Ｏ３］についてのＭＳ実測値５０９．４［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５０８．４９。
５－デシルペンタデシル５－オキソドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１６ｃ）
Figure 2024517644000067
 １．１ｇの１５ｇへのヘプチルマグネシウムブロミドのグリニャールの添加により、０．３３ｇ（２８％）の５－デシルペンタデシル５－オキソドデカノエート１６ｇを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０５（ｔ，２Ｈ），２．４６（ｔ，２Ｈ），２．４１－２．２９（ｍ，４Ｈ），１．９０－１．８４（ｍ，２Ｈ），１．５７－１．４０（ｍ，１０Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，４６），０．８８（ｔ，９Ｈ）．［Ｃ３７Ｈ７２Ｏ３］についてのＭＳ実測値５６５．５［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５６４．５。
５－ドデシルヘプタデシル５－オキソドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１６ｃ）
Figure 2024517644000068
 ０．７２ｇの１５ｈへのヘプチルマグネシウムブロミドのグリニャールの添加により、０．２ｇ（２６％）の５－デシルヘプタデシル５－オキソドデカノエート１６ｈを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０５（ｔ，２Ｈ），２．４６（ｔ，２Ｈ），２．４１－２．２８（ｍ，４Ｈ），１．９４－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．６１－１．５０（ｍ，７Ｈ），１．３５－１．１０（ｍ，５６），０．８７（ｔ，９Ｈ）．［Ｃ４１Ｈ８０Ｏ３］についてのＭＳ実測値６２１．６［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６２０．６。
ステップ３：５－オクチルトリデシル５－ヒドロキシドデカノエート（１７ｆ）、５－デシルペンタデシル５－ヒドロキシドデカノエート（１７ｇ）、及び５－ドデシルヘプタデシル５－ヒドロキシドデカノエート（１７ｈ）の合成
５－オクチルトリデシル５－ヒドロキシドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１７ｃ）
Figure 2024517644000069
 ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（１ｍＬ／１ｍＬ）中に溶解した１６ｆ（０．１ｇ、１９ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、ＮａＢＨ４を添加した。還元反応を、ＴＬＣで追跡した。１時間後、出発物質は完全に消失し、反応物をＮＨ４Ｃｌａｑ（０．５ｍＬ）でクエンチした。粗生成物を蒸発乾固させ、次いでＤＣＭに再溶解し、水で１回洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。粗生成物１７ｆを更なる精製なしで次のステップ（ステップ４）に使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０６（ｔ，２Ｈ），３．６０－３．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．３３（ｔ，２Ｈ），１．７３－１．３０（ｍ，１０Ｈ），１．２６－１．２０（ｍ，３４Ｈ），０．８８（ｔ，９Ｈ）。
５－デシルペンタデシル５－ヒドロキシドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１７ｃ）
Figure 2024517644000070
 ５－デシルペンタデシル５－オキソドデカノエート１６ｇを出発物質として使用したことを除いて、化合物１７ｇの合成について上述したように還元を行った。粗生成物１７ｇを精製せずにステップ４の次の反応に使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０６（ｔ，２Ｈ），３．６０－３．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．３３（ｔ，２Ｈ），１．６２－１．５（ｍ，４Ｈ），１．４５－１．４０（ｍ，３Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，４５Ｈ），０．８８（ｔ，９Ｈ）。
５－ドデシルペンタデシル５－ヒドロキシドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１７ｃ）
Figure 2024517644000071
 ５－デシルペンタデシル５－オキソドデカノエート１６ｈを出発物質として使用したことを除いて、化合物１７ｆの合成について上述したように還元を行った。粗生成物１７ｈを精製せずにステップ４の次の反応に使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０６（ｔ，２Ｈ），３．６０－３．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．３３（ｔ，２Ｈ），１．９０－１．４０（ｍ，１９Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，５０Ｈ），０．８８（ｔ，９Ｈ）。
ステップ４：５－オクチルトリデシル５－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ドデカノエート（脂質１２）、５－デシルペンタデシル５－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ドデカノエート（脂質３）、及び５－ドデシルヘプタデシル５－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ドデカノエート（脂質４）の合成
５－オクチルトリデシル５－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の２６）
Figure 2024517644000072
 ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中の１７ｆ（０．１ｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノ酪酸ＨＣｌの溶液に、ＥＤＣＩ（８３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５３ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び最後にトリエチルアミン（３３ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を一晩撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ及びＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質１２（７５ｍｇ、６１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．９２－４．８６（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．８４－１．７２（ｍ，２Ｈ），１．６６－１．５０（ｍ，１４Ｈ），１．３５－１．１０（ｍ，４２Ｈ），０．８７（ｔ，９Ｈ）。［Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６２３．５９。
５－デシルペンタデシル５－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の２６）
Figure 2024517644000073
 ０．３ｇの化合物１７ｇの反応を、脂質１２についての先の記載と同じ手順を使用して行い、０．２６ｇ（７２％）の脂質３を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．９０－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ），２．３３－２．２２（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．８２－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．６６－１．４５（ｍ，９Ｈ），１．３５－１．１０（ｍ，５２Ｈ），０．８７（ｔ，９Ｈ）。［Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６７９．７。
５－ドデシルヘプタデシル５－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ドデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の２６）
Figure 2024517644000074
 ０．２ｇの化合物１７ｈの反応を、脂質１２についての先の記載と同じ手順を用いて行い、０．１５ｇ（６３％）の脂質４を得た。（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．９０－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ），２．３４－２．２６（ｍ，６Ｈ），２．２５（ｓ，６Ｈ），１．８３－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．６７－１．４０（ｍ，８Ｈ），１．３５－１．１０（ｍ，６１Ｈ），０．８７（ｔ，９Ｈ）。［Ｃ４７Ｈ９３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値７３６．７［Ｍ＋Ｈ］＋計算値７３５．７。
実施例１２：脂質１３、脂質５、及び脂質６の合成
スキーム７及び実施例２における代替合成法（Ｃ）を参照して、本実施例は、脂質１３、脂質５、及び脂質６の合成を記載する。
６－オキソトリデカン酸（２９）の合成
実施例２の代替合成（Ｃ）に記載されているとおりである化合物２９の合成手順を参照されたい。
４－オクチルドデカン－１，４－ジオール、４－デシルテトラデカン－１，４－ジオール、及び４－ドデシルヘキサデカン－１，４－ジオールの合成
４－オクチルドデカン－１，４－ジオール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の２３ａ）。
オクチルマグネシウムブロミド（２９ｍＬ、５８ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でオーブン乾燥した丸底フラスコに量り入れ、０℃に冷却した。次いで、Ｅｔ２Ｏ（５ｍＬ）中のγ－ブチロラクトン（１．８ｍＬ、２３．２ｍｍｏｌ）溶液を０℃で滴加した。混合物をＮ２下、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を３ＭのＨＣｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－オクチルドデカン－１，４－ジオールを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６５（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），１．６０－１．４４（ｍ，７Ｈ），１．２５（ｓ，２６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）。
４－デシルテトラデカン－１，４－ジオール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の２３ａ）
デシルマグネシウムブロミド（７０ｍＬ、７０ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でオーブン乾燥したｒｂフラスコに量り入れ、０℃に冷却した。次いで、Ｅｔ２Ｏ（６．３ｍＬ）中のγ－ブチロラクトン（４．５ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）溶液を０℃で滴加した。混合物をＮ２下、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を１ＭのＨＣｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－デシルテトラデカン－１，４－ジオールを得た（７．１ｇ、７１％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６４（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６０－１．４３（ｍ，７Ｈ），１．２６（ｓ，３３Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）。
４－ドデシルヘキサデカン－１，４－ジオール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の２３ａ）
ドデシルマグネシウムブロミド（１００ｍＬ、７０ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でオーブン乾燥したｒｂフラスコに量り入れ、０℃に冷却した。次いで、Ｅｔ２Ｏ（５ｍＬ）中のγ－ブチロラクトン（１．８ｇ、２８ｍｍｏｌ）溶液を０℃で滴加した。混合物をＮ２下、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を１ＭのＨＣｌ溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～５０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－ドデシルヘキサデカン－１，４－ジオールを得た（７．２４ｇ、６２％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），１．６８－１．３６（ｍ，７Ｈ），１．２５（ｓ，４０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）。
４－オクチルドデカ－３－エン－１－オール、４－デシルテトラデカ－３－エン－１－オール、及び４－ドデシルヘキサンアデカ－３－エン－１－オールの合成
４－オクチルドデカ－３－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の２４ａ）
化合物２３ｂ（２．３４ｇ、７．４ｍｍｏｌ）及びＰＴＳＡ（パラ－トルエンスルホン酸）（０．２８ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）をトルエン（２０ｍＬ）に溶解し、６０℃で２時間マイクロ波処理した。次いで、溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－オクチルドデカ－３－エン－１－オール（０．４１ｇ、２２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ５．１４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．１０－１．８９（ｍ，６Ｈ），１．６７－１．５７（ｍ，３Ｈ），１．２８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）。
４－デシルテトラデカ－３－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の２４ａ）
化合物２３ｃ（３．０ｇ、８．１ｍｍｏｌ）及びＰＴＳＡ（パラ－トルエンスルホン酸）（０．３１ｇ、１．６ｍｍｏｌ）をトルエン（２５ｍＬ）に溶解し、６５℃で１時間マイクロ波処理した。次いで、溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－デシルテトラデカ－３－エン－１－オール（１．４０ｇ、４９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ５．１４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．０７－１．９７（ｍ，６Ｈ），１．７６－１．５８（ｍ，３Ｈ），１．２６（ｓ，３２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）。
４－ドデシルヘキサンアデカ－３－エン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の２４ａ）
化合物２３ｄ（４．０ｇ、９．４ｍｍｏｌ）及びＰＴＳＡ（パラ－トルエンスルホン酸）（０．３６ｇ、１．８ｍｍｏｌ）をトルエン（３０ｍＬ）に溶解し、６０℃で１時間マイクロ波処理した。次いで、溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－ドデシルヘキサンアデカ－３－エン－１－オール（１．４５ｇ、３８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｐ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），２．１０－１．９６（ｍ，６Ｈ）２．０２，１．７４－１．５１（ｍ，３Ｈ），１．２５（ｓ，４０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）。
４－オクチルドデカン－１－オール、４－デシルテトラデカン－１－オール、及び４－ドデシルヘキサンアデカン－１－オールの合成
４－オクチルドデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１３ｃ）
化合物２４ｂ（０．２４ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、脱気し、０．１ｇの５％Ｐｄ／Ｃを添加し、再び脱気した。反応物をＨ２下で４時間維持した。次いで、反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－オクチルドデカン－１－ジオールを得た（０．１４ｇ、５８％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６２（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，３Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，３３Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）。
４－デシルテトラデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１３ｃ）
化合物２４ｃ（１．４ｇ、３．９８ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、脱気し、０．７５ｇの５％Ｐｄ／Ｃを添加し、再び脱気した。反応物をＨ２下で４時間維持した。次いで、反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－デシルテトラデカン－１－ジオールを得た（０．４２ｇ、３１％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６２（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５６－１．５１（ｍ，３Ｈ），１．２６（ｓ，４１Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，６Ｈ）。
４－ドデシルヘキサンアデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１３ｃ）
化合物２４ｄ（１．４５ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、脱気し、０．１ｇの５％Ｐｄ／Ｃを添加し、再び脱気した。反応物をＨ２下で１．５時間維持した。次いで、反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－ドデシルヘキサンアデカン－１－ジオールを得た（０．８２ｇ、５６％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．６２（ｄｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，２Ｈ），１．５６－１．５１（ｍ，３Ｈ），１．２６（ｓ，４９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）。
ステップ１：４－オクチルドデシル６－オキソトリデカノエート、４－デシルテトラデシル６－オキソトリデカノエート、及び４－ドデシルヘキサンデシル６－オキソトリデカノエートの合成
４－オクチルドデシル６－オキソトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の３４）
ＤＣＭ（６ｍＬ）中の化合物３３（０．１３ｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．１４ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０９ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、４－オクチルドデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１３ｃ）（０．２ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。合わせた有機層をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－オクチルドデカン６－オキソトリデカノエートを得た（０．１１ｇ、４３％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４０－２．３０（ｍ，６Ｈ），１．５９（ｄｄ，Ｊ＝７．２，３．６Ｈｚ，８Ｈ），１．２４（ｓ，３９Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
４－デシルテトラデシル６－オキソトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の３４）
ＤＣＭ（１１ｍＬ）中の化合物３３（０．２２ｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．２３ｇ、１．２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、４－デシルテトラデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１３ｃ）（０．４２ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。合わせた有機層をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－デシルテトラデシル６－オキソトリデカノエートを得た（０．２５ｇ、４４％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４８－２．２６（ｍ，６Ｈ），１．６０－１．５５（ｍ，８Ｈ），１．２４（ｓ，４７Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
４－ドデシルヘキサンアデシル６－オキソトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の３４）
ＤＣＭ（２２ｍＬ）中の化合物３３（０．５５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ（０．４６ｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１５分間撹拌した。次いで、４－ドデシルヘキサンアデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１３ｃ）（０．８２ｇ、２ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。合わせた有機層をＨ２Ｏ及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～３０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－ドデシルヘキサンアデシル６－オキソトリデカノエートを得た（０．５３ｇ、４３％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４１－２．３０（ｍ，６Ｈ），１．６７－１．４７（ｍ，９Ｈ），１．２４（ｄ，５５Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ２：４－オクチルドデシル６－ヒドロキシトリデカノエート、４－デシルテトラデシル６－ヒドロキシトリデカノエート、及び４－ドデシルヘキサデシル６－ヒドロキシトリデカノエートの合成
４－オクチルドデシル６－ヒドロキシトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の３５）
４ｍＬのＴＨＦ：ＭｅＯＨ（１：１）中の４－オクチルドデシル６－オキソトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである３４）（０．３ｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＮａＢＨ４（０．０１ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～２０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－オクチルドデカン６－ヒドロキシトリデカノエートを得た（０．０９ｇ、７０％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｓ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６６－１．３４（ｍ，４４Ｈ），１．２４（ｓ，４０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
４－デシルテトラデシル６－ヒドロキシトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の３５）
１６ｍＬのＴＨＦ：ＭｅＯＨ（１：１）中の４－デシルテトラデシル６－オキソトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである３４）（０．５１ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＮａＢＨ４（０．０３ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－デシルテトラデシル６－ヒドロキシトリデカノエートを得た（０．４８ｇ、９４％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｓ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６６－１．３７（ｍ，８Ｈ），１．２６（ｓ，５９Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
４－ドデシルヘキサンアデシル６－ヒドロキシトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の３５）
１６ｍＬのＴＨＦ：ＭｅＯＨ（１：１）中の４－デシルヘキサンアデシル６－オキソトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである３４）（０．５１ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＮａＢＨ４（０．０３ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｎ２雰囲気下で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、４－デシルヘキサンアデシル６－ヒドロキシトリデカノエートを得た（０．４８ｇ、９４％）。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．６０（ｓ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．６６－１．３７（ｍ，８Ｈ），１．２６（ｓ，５９Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，９Ｈ）。
ステップ３：４－オクチルドデシル６－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）トリデカノエート（脂質１３）、４－デシルテトラデシル６－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）トリデカノエート（脂質５）、及び４－ドデシルヘキサデシル６－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）トリデカノエート（脂質６）の合成
４－オクチルトリデシル６－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）トリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の３６）
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の化合物４－オクチルドデシル６－ヒドロキシトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の３５）（０．０９ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．０４ｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、０．１１ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ（０．０６ｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０００５ｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質１３（０．０８ｇ、７２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３１－２．２５（ｍ，５Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７８（ｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６８－１．４２（ｍ，８Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３９Ｈ），０．８７（ｄｄ，Ｊ＝６．８，４．８Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６２３．５９。
４－デシルテトラデシル６－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）トリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の３６）
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の化合物４－デシルテトラデシル６－ヒドロキシトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の３５）（０．２１ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．０９３ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液に、０．２３ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ（０．１０７ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０２ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質５（０．０９ｇ、４３％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４２－２．２２（ｍ，５Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７８（ｐ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６７－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．２４（ｓ，５２Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６７９．６５。
４－ドデシルヘキサンアデシル６－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）トリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の３６）
ＤＣＭ（８ｍＬ）中の化合物４－ドデシルヘキサンアデシル６－ヒドロキシトリデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の３５）（０．４８ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ブタン酸（０．２０ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、０．５ｍＬのＤＩＰＥＡを添加した。次いで、ＥＤＣＩ（０．２２ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０３ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。翌日、反応物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を真空下で蒸発させ、溶離液としてＤＣＭ中の０～５％ＭｅＯＨを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製して、脂質６（０．１５ｇ、２６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ４．８６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３８－２．２３（ｍ，５Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．８９－１．６５（ｍ，６Ｈ），１．６５－１．４０（ｍ，８Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，５６Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，９Ｈ）。［Ｃ４７Ｈ９３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値７３６．７［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７３５．７１。
実施例１３：脂質１４、脂質７、及び脂質８の合成
スキーム８及び実施例２における代替合成法（Ｄ）を参照して、本実施例は、脂質１４、脂質７、及び脂質８の合成を記載する。
７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタン酸（２５ａ）の合成
実施例２の代替合成（Ｄ）に記載されているとおりである化合物２５ａの合成手順を参照されたい。
エチル３－オクチルウンデカ－２－エノエート、エチル３－デシルトリデカ－２－エノエート、及び３－ドデシルペンタデカ－２－エノエートの合成
エチル３－オクチルウンデカ－２－エノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１２ｂ）
１９０ｍＬのＴＨＦ（無水）中の９－ヘプタデカノン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１０）（２．０５ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、ニートのエチル２－（ジエトキシホスホリル）アセテート（３３．４ｇ、１４９ｍｍｏｌ）を滴加した。反応物を３０分間撹拌し、続いてＮａＨ（５．３ｇ、１３３ｍｍｏｌ、油中６０％）を少しずつ添加した。反応混合物を１８時間還流し、０℃に冷却し、水３００ｍＬでクエンチし、エーテルで抽出した。有機層を水、ブラインで数回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して７．５ｇの粗物質を得て、これをそのまま次のステップに使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．６０（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．６０－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．１２－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．２０（ｍ，２７Ｈ），０．９５－０．８２（ｍ，６Ｈ）
エチル３－デシルトリデカ－２－エノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１２ｂ）
粗生成物を、５．０５ｇの１１－ヘンエイコサノン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１０）から出発して、類似体エチル３－オクチルウンデカ－２－エノエートについての上記手順に従って得た。粗物質をカラムクロマトグラフィー（１％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、５．２ｇの純粋なエチル３－デシルトリデカ－２－エノエート（収率８４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．６０（ｓ，１Ｈ），４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．６０－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．１３－２．０９（ｍ，２Ｈ），１．５１－１．２０（ｍ，３５Ｈ），０．９０－０．８０（ｍ，６Ｈ）。
３－ドデシルペンタデカ－２－エノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１２ｂ）
７４ｍＬのＴＨＦ（無水）中のペンタコサン－１３－オン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１０）（２．７０ｇ、７．３６ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に、ニートのトリエチルホスホノアセテート（１０．２３ｍＬ、５１．５ｍｍｏｌ）を滴加した。反応物を３０分間撹拌し、続いてＮａＨ（１．７７ｇ、４４．１ｍｍｏｌ、油中６０％）を少しずつ添加した。反応混合物を１８時間還流し、０℃に冷却し、水３００ｍＬでクエンチし、エーテルで抽出した。有機相を水、ブラインで数回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）により精製して、２．９６ｇの化合物３－ドデシルペンタデカ－２－エノエートを収率９２％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．６０（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．６０－２．５０（ｍ，２Ｈ），２．１２－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．２０（ｍ，４３Ｈ），０．９５－０．８２（ｍ，６Ｈ）。
３－オクチルウンデカン－１－オール、３－デシルトリデカン－１－オール、及び３－ドデシルペンタデカン－１－オールの合成
３－オクチルウンデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１３ｄ）
粗エチル３－オクチルウンデカ－２－エノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１２ａ）（１．２ｇ）を５ｍＬのＴＨＦに溶解し、０℃に冷却し、ＬｉＡｌＨ４（７．５ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ）を滴加した。反応混合物を一晩撹拌し、室温に加温し、次いで８ｍＬのＴＨＦ／Ｈ２Ｏ混合物（体積で１：１）の添加によって０℃でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、セライトを通して濾過した。有機相を水、ブラインで２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２－ＥｔＯＡｃ）により精製して、０．５７ｇの３－オクチルウンデカ－２－エン－１－オールを得た。２ステップの収率は６４％である。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．０１－２．１５（ｍ，４Ｈ），１．６０－１．１０（ｍ，２５Ｈ），１．８２－１．９５（ｍ，６Ｈ）。
３－オクチルウンデカ－２－エン－１－オール（０．５７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃに溶解し、２００ｍｇの湿潤Ｐｄ／Ｃ触媒を用いてＨ２（１気圧）による還元に供した。きれいな変換により、０．５５ｇ（収率９７％）の化合物３－オクチルウンデカン－１－オールを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．６６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．５１（ｍ，２Ｈ），１．４１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．１０－１．２９（ｍ，２９Ｈ），１．８１－１．９０（ｍ，６Ｈ）。
３－デシルトリデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１３ｄ）
１．０ｇのエチル３－デシルトリデカ－２－エノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１２ａ）から出発し、３－オクチルウンデカ－２－エン－１－オールの類似体についての手順に従って、０．９０ｇの３－デシルトリデカ－２－エン－１－オールを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．３７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．９８－２．１０（ｍ，４Ｈ），１．５０－１．１０（ｍ，３３Ｈ），１．８２－１．９５（ｍ，６Ｈ）。
３－デシルトリデカン－１－オールは、０．９ｇの５ａから出発して、類似体３－オクチルウンデカン－１－オールについての上記手順に従って得られ、８４０ｍｇの純粋な３－デシルトリデカン－１－オールが９３％の収率で得られた。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．６６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．１０－１．２９（ｍ，３７Ｈ），１．８１－１．９０（ｍ，６Ｈ）。
３－ドデシルペンタデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１３ｄ）
３－ドデシルペンタデカ－２－エノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれ１２である場合の１２ａ）（２．９６ｇ、６．７８ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、２００ｍｇの湿った１０％Ｐｄ／Ｃ触媒を用いてＨ２（１気圧）で還元した。きれいな変換により、２．９５ｇ（収率９９％）の化合物エチル３－ドデシルペンタデカノエートを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．１２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２０（ｄ，Ｊ＝６．９，２Ｈ），１．９０－１．８０（ｍ，１Ｈ），１３５－１．２０（ｍ，４７Ｈ），（１．８１－１．９０（ｍ，６Ｈ）。
エチル３－ドデシルペンタデカノエート（２．９４ｇ、６．７０ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＴＨＦに溶解させ、０℃に冷却し、ＬｉＡｌＨ４（６．０ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ、１２．１ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を一晩撹拌し、室温に加温し、次いで２０ｍＬのＴＨＦ／Ｈ２Ｏ混合物（体積で１：１）の添加によって０℃でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、セライトを通して濾過した。有機相を水、ブラインで２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２－ＥｔＯＡｃ）により精製して、２．６ｇの３－ドデシルペンタデカン－１－オールを収率９８％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．６６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６０－１．４５（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．１０－１．２９（ｍ，４５Ｈ），１．８１－１．９０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ１：３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート、３－デシルトリデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート、及び３－ドデシルペンタデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエートの合成
３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１５ｄ）。
化合物２５ａ（３２４ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）及び３－オクチルウンデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１３ｄ）（５４５ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を４ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いでＤＭＡＰ（２９０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（３８０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を室温でこの溶液に添加した。一晩撹拌後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー精製（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）により、純粋な標題化合物０．５０ｇ（収率６６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．０６（ｔ，Ｊ＝７．１，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），２．２９（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），１．７－１．５（ｍ，６Ｈ），１．４－１．１（ｍ，３１Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８，６Ｈ）
３－デシルトリデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１５ｄ）
０．４０ｇ（１．９７ｍｍｏｌ）の化合物２５ａ及び０．８４ｇの３－デシルトリデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１３ｄ）から出発し、上記の手順（類似体３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエートについて）に従って、標題化合物０．８２ｇを収率８０％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．０６（ｔ，Ｊ＝７．１，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），２．２９（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），１．７－１．５（ｍ，６Ｈ），１．４－１．１（ｍ，３９Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８，６Ｈ）。
３－ドデシルペンタデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１５ｄ）
化合物２５ａ（４００ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）及び３－ドデシルペンタデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１３ｄ）（９８０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いでＤＭＡＰ（３８０ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（４８０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を室温でこの溶液に添加した。一晩撹拌後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー精製（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）により、純粋な標題化合物１．０ｇ（収率９２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ，Ｊ（Ｈｚ）：４．０６（ｔ，Ｊ＝７．１，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），２．２９（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ），１．７－１．５（ｍ，６Ｈ），１．４－１．１（ｍ，４７Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８，６Ｈ）。
ステップ２：３－オクチルウンデシル７－オキソテトラデカノエート、３－デシルトリデシル７－オキソテトラデカノエート、及び３－ドデシルペンタデシル７－オキソテトラデカノエートの合成
３－オクチルウンデシル７－オキソテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１６ｄ）
３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１５ｄ）をトルエンと数回共蒸発させ、反応の前にＰ２Ｏ５上で一晩乾燥させた。乾燥化合物３－オクチルウンデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（０．５０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を、火炎乾燥したｒｂｆ中で４ｍＬのＴＨＦに溶解し、０℃に冷却し、ヘプチルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）（１．３ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ヘキサンで数回抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、標題化合物２２５ｍｇ（収率４２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．０７（ｔ，Ｊ＝７．１，２Ｈ），２．４５－２．３５（ｍ，４Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．６０－１．２０（ｍ，３９Ｈ），１．９０－１．８５（ｍ，９Ｈ）。
３－デシルトリデシル７－オキソテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１６ｄ）
０．８２ｇ（１．５６ｍｍｏｌ）の３－デシルトリデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１５ｄ）で出発し、上記の手順（類似体３－オクチルウンデシル７－オキソテトラデカノエートについて）に従って、０．４３ｇの標題化合物を４９％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．０７（ｔ，Ｊ＝７．１，２Ｈ），２．４５－２．３５（ｍ，４Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．６０－１．２０（ｍ，４７Ｈ），１．９０－１．８５（ｍ，９Ｈ）。
３－ドデシルペンタデシル７－オキソテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１６ｄ）
３－ドデシルペンタデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１５ｄ）をトルエンと数回共蒸発させ、反応の前にＰ２Ｏ５上で一晩乾燥させた。乾燥化合物３－ドデシルペンタデシル７－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソヘプタノエート（１．０ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を、火炎乾燥したｒｂｆ中で７ｍＬのＴＨＦに溶解し、０℃に冷却し、ヘプチルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）（２．７ｍＬ、２．７ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ヘキサンで数回抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％）により精製して、標題化合物５６０ｍｇ（収率５２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．０７（ｔ，Ｊ＝７．１，２Ｈ），２．４５－２．３５（ｍ，４Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．５０（ｍ，８Ｈ），１．６０－１．２０（ｍ，５５Ｈ），１．９０－１．８５（ｍ，９Ｈ）。
ステップ３：３－オクチルウンデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート、３－デシルトリデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート、及び３－ドデシルペンタデシル７－ヒドロキシテトラデカノエートの合成
３－オクチルウンデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１７ｄ）
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１（２ｍＬ）中に溶解した氷冷した化合物３－オクチルウンデシル７－オキソテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１６ｄ）（２２０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）に、ＮａＢＨ４（２４．５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を一度に添加した。５分後、氷浴を除去し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。ＴＬＣにより完全な変換を確認した後、反応混合物を２ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物２２０ｍｇを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．１０－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．６０－３．５０（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），１７０－１．１５（ｍ，５２Ｈ），０．８－０．９（ｍ，９Ｈ）。
３－デシルトリデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１７ｄ）
標題化合物を、類似体３－オクチルウンデシル７－ヒドロキシテトラデカノエートについての上記手順に従って、３１０ｍｇの３－デシルトリデシル７－オキソテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１６ｄ）から出発して、３００ｍｇの純粋な標題化合物を定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．１０－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．６０－３．５０（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），１７０－１．１５（ｍ，６０Ｈ），０．８－０．９（ｍ，９Ｈ）。
３－ドデシルペンタデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１７ｄ）
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１（２ｍＬ）中に溶解した氷冷した化合物３－ドデシルペンタデシル７－オキソテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１６ｄ）（２５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）に、ＮａＢＨ４（２２．８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を一度に添加した。５分後、氷浴を除去し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。ＴＬＣにより完全な変換を確認した後、反応混合物を２ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、標題化合物２５０ｍｇを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．１０－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．６０－３．５０（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），１７０－１．１５（ｍ，６８Ｈ），０．８－０．９（ｍ，９Ｈ）。
ステップ４：３－オクチルウンデシル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）テトラデカノエート（脂質１４）、３－デシルトリデシル－７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）テトラデカノエート（脂質７）、及び３－ドデシルペンタデシル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）テトラデカノエート（脂質８）の合成
３－オクチルウンデシル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１８ｄ）
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩（９９ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ（４ｍＬ／０．５ｍＬ）混合物中に溶解し、続いてＴＥＡ（０．１ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）、化合物３－オクチルウンデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の１７ｄ）（２２０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１３５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（８０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０～１５％ＭｅＯＨ）によって精製し、１９５ｍｇの脂質１４（７３％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．９０－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．１０－４．０２（ｍ，２Ｈ），２．３５－２．２０（ｍ，６Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ），１．８３－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．４５（ｍ，８Ｈ），１．３５－１．１５（ｍ，４３），１．９５－１．８５（ｍ，９Ｈ）。［Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６２３．５。
３－デシルトリデシル－７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１８ｄ）
脂質７を、４３０ｍｇの３－デシルトリデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の１７ｄ）から出発して、類似体脂質１４についての上記手順に従って、３７０ｍｇの純粋な脂質７を収率７２％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．９０－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．１０－４．０２（ｍ，２Ｈ），２．３５－２．２０（ｍ，６Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ），１．８３－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．４５（ｍ，９Ｈ），１．２５－１．１５（ｍ，５０），１．９５－１．８５（ｍ，９Ｈ）。［Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６８０．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６７９．６。
３－ドデシルペンタデシル７－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘキサデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の３８）
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩（８７．４ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ（３ｍＬ／０．５ｍＬ）混合物中に溶解し、続いてＴＥＡ（０．０８５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、化合物３－ドデシルペンタデシル７－ヒドロキシテトラデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の１７ｄ）（２５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１１５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（７４ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨ）によって精製し、１４８ｍｇの脂質８（収率５１％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：４．９０－４．８０（ｍ，１Ｈ），４．１２－４．０２（ｍ，２Ｈ），２．３５－２．２０（ｍ，６Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ），１．８３－１．７３（ｍ，４Ｈ），１．７０－１．４５（ｍ，７Ｈ），１．２５－１．１５（ｍ，５８Ｈ），１．９５－１．８５（ｍ，９Ｈ）。［Ｃ４７Ｈ９３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値７３６．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７３５．６。
実施例１４：脂質２３、脂質２４、及び脂質２５の合成
スキーム９及び実施例２における代替合成法（Ｅ）を参照して、本実施例は、脂質１５、脂質９、及び脂質１０の合成を記載する。
８－（メトキシ（メチル）アミノ）－７－オキソオクタン酸（２５ｂ）の合成
実施例２の代替合成（Ｅ）に記載されているとおりである化合物２５ｂの合成手順を参照されたい。
ステップ１：ヘプタデカン－９－オール（１ａ）及びペンタコサン－１３－オール（１ｃ）の合成
ヘニコサン－１１－オン１０ｂ（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれ１０である場合の化合物１０）は、少なくともＴＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．（Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ．，ＵＳＡ）から市販されていた。
ペンタコサン－１３－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１）
Figure 2024517644000075
 １０ｍＬのＴＨＦ中の１－ドデシルマグネシウムブロミド２２ｃの氷冷０．５Ｍ／ＴＨＦ（４０．５ｍＬ、０．０２０ｍｏｌ）溶液に、３ｍＬのＴＨＦ中の０．６９ｇのギ酸エチルを添加した。室温で一晩撹拌後、反応混合物を約６０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、エイテル（either）で抽出した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗生成物をジクロロメタン－ヘキサンからの再結晶によって精製して、２．８２ｇ（収率８２％）の純粋な標題化合物を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．５８（ｍ，１Ｈ），１．５０－１．１２（ｍ，４５Ｈ），０．９０－０．８０（ｍ，６Ｈ）。
ヘプタデカン－９－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ６アルキルである場合の化合物１）
Figure 2024517644000076
 アルコール１ａは、出発物質としてヘプチルマグネシウムブロミド２２ａを用いて、ペンタコサン－１３－オール（１ｃ）についての先の記載と同様に、収率７９％で調製した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ３．５７（ｍ，１Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．２，１Ｈ），１．５０－１．１２（ｍ，２８Ｈ），０．９０－０．８０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ２：ヘプタデカン－９－オン（１０ａ）及びペンタコサン－１３－オン（１０ｃ）の合成
ペンタコサン－１３－オン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１０）
Figure 2024517644000077
 化合物１ｃ（０．８２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を１８ｍＬのジクロロメタンと混合し、０℃に冷却し、デス－マーチンペルヨージナン（１．１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）をそれに一度に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３（飽和）及びＮａ－２Ｓ２Ｏ３（１５％水溶液）の１：１混合物（２５：２５ｍＬ）でクエンチし、室温で２０分間撹拌した。層を分離し、有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して０．８０ｇの粗化合物１０ｃを得て、これを精製せずに次のステップに使用した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：２．４０－２．３０（ｍ，４Ｈ），１．６１－１．５０（ｍ，５Ｈ），１．３０－１．１５（ｍ，３８Ｈ），０．９０－０．８０（ｍ，６Ｈ）。
ヘプタデカン－９－オン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ６アルキルである場合の化合物１０）
Figure 2024517644000078
 化合物１０ａは、出発物質としてヘプタデカン－９－オール（１ａ）を使用して、ペンタコサン－１３－オン（１０ｃ）についての先の記載と同様に調製した。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ ２．４１－２．３２（ｍ，４Ｈ），１．６１－１．５０（ｍ，４Ｈ），１．３１－１．１５（ｍ，２０Ｈ），０．９０－０．８０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ３：９－（メトキシメチレン）ヘプタデカン（３１ａ）、１１－（メトキシメチレン）ヘニコサン（３１ｂ）、及び１３－（メトキシメチレン）ペンタコサン（３１ｃ）
Figure 2024517644000079
１３－（メトキシメチレン）ペンタコサン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物３１）
１３０ｍＬのＴＨＦ中にペンタコサン－１３－オン（１０ｃ）（３．９５ｇ、１０．８０ｍｍｏｌ）及びメトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロリド（５．５４ｇ、１６．２０ｍｍｏｌ）を含有する懸濁液に、ＴＨＦ中のカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ＫＯｔＢｕ）の１Ｍ溶液（１６．２０ｍＬ、１６．２０ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴化した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、４５０ｍＬのＥｔ２Ｏで希釈し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２％ＥｔＯＡｃ）により精製して、４．３０ｇの化合物３１ｃを収率８０％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．７３（ｓ，１Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），１．９９－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．２０－１．３６（ｍ，４０Ｈ），０．８４－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
１１－（メトキシメチレン）ヘニコサン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物３１）
５．０２ｇの１０ｂから出発し、類似体３１ｃについての手順に従って、４．２９ｇの３１ｂを収率７８％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．７３（ｓ，１Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），１．９８－２．０４（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．２０－１．３６（ｍ，３２Ｈ），０．８４－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
９－（メトキシメチレン）ヘプタデカン（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の化合物３１）
２．５７ｇの１０ａから出発し、類似体３１ｃについての手順に従って、１．１０ｇの３１ａを収率４０％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：５．７３（ｓ，１Ｈ），３．５１（ｓ，３Ｈ），１．９９－２．０４（ｍ，２Ｈ），１．８０－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．２２－１．３６（ｍ，２４Ｈ），０．８４－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ４：２－オクチルデカナール（３２ａ）、２－デシルドデカナール（３２ｂ）、及び２－ドデシルテトラデカナール（３２ｃ）の合成
Figure 2024517644000080
２－ドデシルテトラデカナール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物３２）
ジオキサン／水（２４０ｍＬ／１２５ｍＬ）中の１３－（メトキシメチレン）ペンタコサン（３１ｃ）（３．４ｇ、８．６０ｍｍｏｌ）の氷冷下濁った溶液に、４Ｎ ＨＣｌジオキサン溶液（１２５ｍＬ、０．５ｍｏｌ）を３０分かけて滴加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ＴＬＣによって完全な変換を確認した後、反応混合物を約０．５Ｌのエーテルで希釈し、０℃に冷却した。ＮａＨＣＯ３（飽和）及び１０％Ｎａ２ＣＯ３をゆっくりと添加することによってクエンチした。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、３．２８ｇの化合物３２ｃを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：９．５１（ｓ，１Ｈ），２．１９－２．２６（ｍ，１Ｈ），１．５５－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．４８（ｍ，２Ｈ），１．１８－１．３２（ｍ，４０Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
２－デシルドデカナール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物３２）
４．２９ｇの１１－（メトキシメチレン）ヘニコサン（３１ｂ）から出発し、類似体３２ｃについての手順に従って、３．９５ｇの化合物３２ｂを９６％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：９．５３（ｓ，１Ｈ），２．１９－２．２６（ｍ，１Ｈ），１．５５－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．４８（ｍ，２Ｈ），１．１８－１．３２（ｍ，３２Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
２－オクチルドデカナール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の化合物３２）
１．１０ｇの９－（メトキシメチレン）ヘプタデカン（３１ａ）から出発し、類似体３２ｃについての手順に従って、１．０５ｇの化合物３２ａを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：９．５３（ｓ，１Ｈ），２．１９－２．２６（ｍ，１Ｈ），１．５５－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．４６（ｍ，２Ｈ），１．１８－１．３２（ｍ，２４Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ５：２－オクチルデカン－１－オール（１３ｉ）、２－デシルドデカン－１－オール（１３ｊ）、及び２－ドデシルテトラデカン－１－オール（１３ｋ）
Figure 2024517644000081
２－ドデシルテトラデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１３ｅ）
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１（３６ｍＬ）中に溶解した氷冷した化合物３１ｃ（３．２７ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）に、ＮａＢＨ４（５５０ｍｇ、１４．６０ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、０℃にて２０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、３．１２ｇの化合物３２ｃを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．５３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．４２－１．４５（ｍ，１Ｈ），１．２０－１．３５（ｍ，４５Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
２－デシルドデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物１３ｅ）
４．１７ｇの２－デシルドデカナール（３１ｂ）から出発し、類似体１３ｋについての手順に従って、４．１０ｇの化合物１３ｊを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．５３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．５５（ｍ，１Ｈ），１．２０－１．３５（ｍ，３７Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
２－オクチルデカン－１－オール（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の化合物１３ｅ）
１．０４ｇの２－オクチルデカナール（３１ａ）から出発し、類似体１３ｋについての手順に従って、１．０２ｇの化合物１３ｉを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．５３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．５５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．２０－１．３５（ｍ，２９Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ６：２－オクチルデシル８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクタノエート（１５ｉ）、２－デシルドデシル８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクタノエート（１５ｊ）、及び２－ドデシルテトラデシル８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクノエート（１５ｋ）の合成
Figure 2024517644000082
２－ドデシルテトラデシル８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソペンタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１５ｅ）
化合物２５ｂ（４９０ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）及び１３ｋ（１．０ｇ、２．５９ｍｍｏｌ）を７ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いでＤＭＡＰ（４３０ｍｇ、３．５０ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（５３０ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を室温でこの溶液に添加した。一晩撹拌後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和水溶液）で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィー精製（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）により、１．１７ｇ（収率８７％）の純粋な標題化合物１５ｋを得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９６（ｄ，Ｊ＝６．０，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（３Ｈ），２．３５－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３０（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，４９Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，６Ｈ）
２－デシルドデシル８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソペンタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物１５ｅ）
０．５５ｇ（２．５３ｍｍｏｌ）の化合物２５ｂ及び１．０３ｇ（３．０４ｍｍｏｌ）の２－デシルドデカン－１－オール（１３ｊ）を用いて出発し、類似体１５ｋについての手順に従って、１．１６ｇの化合物１５ｊを８７％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９６（ｄ，Ｊ＝６．０，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（３Ｈ），２．３５－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３０（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，４１Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，６Ｈ）
２－オクチルデシル８－（メトキシ（メチル）アミノ）－８－オキソオクタノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の化合物１５ｅ）
０．６３ｇ（２．８５ｍｍｏｌ）の化合物２５ｂ及び１．０１ｇ（３．７０ｍｍｏｌ）の２－オクチルデカン－１－オール（１３ｉ）で出発し、類似体１５ｋについての手順に従って、１．２２ｇの化合物１５ｉを９０％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９５（ｄ，Ｊ＝６，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（３Ｈ），２．３５－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３０（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．６５（ｍ，４Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，３３Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ７：２－オクチルデシル８－オキソペンタデカノエート（１６ｉ）、２－デシルドデシル８－オキソペンタデカノエート（１６ｊ）、及び２－ドデシルテトラデシル８－オキソペンタデカノエート（１６ｋ）の合成
Figure 2024517644000083
２－ドデシルテトラデシル８－オキソペンタデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１６ｅ）
化合物１５ｋをトルエンと数回共蒸発させ、反応前にＰ２Ｏ５上で一晩乾燥させた。乾燥化合物１５ｋ（１．１７ｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を、火炎乾燥丸底フラスコ中で、７ｍＬのＴＨＦに溶解し、０℃に冷却した。混合物を０℃に冷却し、ヘプチルマグネシウムブロミド（エーテル中１Ｍ）（２．９５ｍＬ、２．９５ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ヘキサンで数回抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、６６０ｍｇの標題化合物１６ｋ（収率５４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９６（ｄ，Ｊ＝６．０，２Ｈ），２．３５－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３０（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，７Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，５６Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
２－デシルドデシル８－オキソペンタデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物１６ｅ）
１．１６ｇの化合物１５ｊから出発し、類似体１６ｋについての方法に従って、０．６７ｇの化合物１６ｊを５４％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９６（ｄ，Ｊ＝６．０，２Ｈ），２．３５－２．４５（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．３０（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．７０（ｍ，７Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，４８Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，６Ｈ）。
２－オクチルデシル８－オキソペンタデカカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の化合物１６ｅ）
１．２２ｇの化合物１５ｉから出発し、類似体１６ｋについての方法に従って、０．７３ｇの化合物１６ｉを５５％の収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９６（ｄ，Ｊ＝６．０，２Ｈ），２．４５－２．４５（ｍ，４Ｈ），２．２０－２．３０（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．７０（ｍ，７Ｈ），１．２０－１．４０（ｍ，４０Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，９Ｈ）
ステップ８：２－オクチルデシル８－ヒドロキシペンタデカノエート（１７ｉ）、２－デシルドデシル８－ヒドロキシペンタデカノエート（１７ｊ）、及び２－ドデシルテトラデシル８－ヒドロキシペンタデカノエート（１７ｋ）の合成
Figure 2024517644000084
２－ドデシルテトラデシル８－ヒドロキシペンタデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１６ｅ）
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ＝１：１（３ｍＬ）中に溶解した氷冷した化合物１６ｋ（３６６ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）に、ＮａＢＨ４（３２．３ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を一度に添加した。完全な変換がＴＬＣーによって確認されるまで、反応混合物を室温で約２時間撹拌し、次いで２ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、濃縮乾固した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２と混合し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ）によって精製して、３５６ｍｇの化合物１７ｋを収率９６％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９５（ｄ，Ｊ＝５．８，２Ｈ），３．５８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．２５－２．３５（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．６５（３Ｈ），１．１５－１．４５（ｍ，６５Ｈ），０．８－０．９（ｍ，９Ｈ）。
２－デシルドデシル８－ヒドロキシペンタデカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物１６ｅ）
化合物１７ｊを、３１０ｍｇの１６ｊから出発して、類似体１７ｋについての上記手順に従って、２９０ｍｇの純粋な１７ｊを収率９３％で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９５（ｄ，Ｊ＝５．８，２Ｈ），３．５７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．２５－２．３５（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．６５（３Ｈ），１．１５－１．４５（ｍ，５７Ｈ），０．８－０．９（ｍ，９Ｈ）。
２－オクチルデシル８－ヒドロキシペンタデカカノエート（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ８アルキルである場合の化合物１６ｅ）
化合物１７ｉを、３００ｍｇの１６ｊから出発して、類似体１７ｋについての上記手順に従って、３００ｍｇの１７ｉを定量的収率で得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δ：３．９５（ｄ，Ｊ＝５．８，２Ｈ），３．５７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．２５－２．３５（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．６５（３Ｈ），１．１５－１．４５（ｍ，４９Ｈ），０．８－０．９（ｍ，９Ｈ）。
ステップ９：２－オクチルデシル８－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ペンタデカノエート（脂質１５）、２－デシルドデシル８－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ペンタデカノエート（脂質９）、及び２－ドデシルテトラデシル８－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ペンタデカノエート（脂質１０）の合成
Figure 2024517644000085
２－ドデシルテトラデシル８－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ペンタデカノエート（脂質２５）（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１２アルキルである場合の化合物１８ｅ）
４－（ジメチルアミノ）ブタン酸塩酸塩（１２８ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ（６ｍＬ／０．５ｍＬ）混合物に溶解し、続いてＴＥＡ（０．２ｍＬ、１．４３ｍｍｏｌ）、化合物１７ｋ（３５６ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１７０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１０９ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１５％ＭｅＯＨ）によって精製し、２８３ｍｇの脂質２５（収率６８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δｐｐｍ：４．９０－４．８０（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝５．７，２Ｈ），２．２２－２．３５（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７３－１．８４（ｍ，２Ｈ），１．５８－１．６５（ｍ，４Ｈ），１，４０－１．５０（ｍ，３Ｈ），１．２０－１．３５（ｍ，６０Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，９Ｈ）。［Ｃ４７Ｈ９３ＮＯ４］についてのＭＳ実測値７３６．６［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値７３５．６。
２－デシルドデシル８－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ペンタデカノエート（脂質２４）（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物１８ｅ）
脂質２４は、２９７ｍｇの１７ｊから出発して、類似体脂質２５についての上記手順に従って、２７０ｍｇの純粋な脂質２４を収率７８％で提供して得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δｐｐｍ：４．９０－４．８０（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝５．７，２Ｈ），２．２２－２．３５（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．４０－１．８０（ｍ，９Ｈ），１．１５－１．３０（ｍ，５２Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，９Ｈ）。［Ｃ４３Ｈ８５ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６８０．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６７９．６。
２－オクチルデシル８－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ペンタデカノエート（脂質２３）（Ｒ６ａ及びＲ６ｂがそれぞれＣ１０アルキルである場合の化合物１８ｅ）
脂質２３は、３００ｍｇの１７ｉから出発して、類似体脂質２５についての上記手順に従って、２４０ｍｇの純粋な脂質２３を収率６８％で提供して得た。１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ｄ－クロロホルム）δｐｐｍ：４．９０－４．８０（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝５．７，２Ｈ），２．２２－２．３５（ｍ，６Ｈ），２．２１（ｓ，６Ｈ），１．７０－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．４０－１．６０（ｍ，７Ｈ），１．１５－１．３０（ｍ，４４Ｈ），０．８２－０．９０（ｍ，９Ｈ）。［Ｃ３９Ｈ７７ＮＯ４］についてのＭＳ実測値６２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋、計算値６２３．５。
実施例１５：四級アミン又は四級アンモニウムカチオンを含むカチオン性脂質の合成
上記の脂質１～２５及び式Ｉの脂質のそれぞれは、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）及びクロロホルム（ＣＨＣｌ３）中のクロロメタン（ＣＨ３Ｃｌ）で処理することによって、四級アミン又は四級アンモニウムカチオンを含むその対応する脂質に変換することができる。
実施例１６：脂質ナノ粒子の調製
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、約１０：１～３０：１の全脂質対ｃｅＤＮＡの重量比で調製した。手短に言えば、本開示のカチオン性脂質、非カチオン性脂質（例えば、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ））、膜融合性をもたらすための構成成分（ステロール等、例えば、コレステロール）、及び複合脂質分子（ＰＥＧ化脂質コンジュゲート等）、例えば、１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（２０００（「ＰＥＧ－ＤＭＧ」）の平均ＰＥＧ分子量を有する）を、例えば、４７．５：１０．０：４０．７：１．８、４７．５：１０．０：３９．５：３．０、又は４７．５：１０．０：４０．２：２．３のモル比でアルコール（例えば、エタノール）に可溶化した。ｃｅＤＮＡを緩衝液で所望の濃度に希釈した。例えば、ｃｅＤＮＡを、酢酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及び塩化マグネシウム、クエン酸、リンゴ酸、又はリンゴ酸及び塩化ナトリウムを含む緩衝液中の０．１ｍｇ／ｍｌ～０．２５ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈した。一例では、ｃｅＤＮＡを１０～５０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ４）で０．２ｍｇ／ｍＬに希釈した。アルコール脂質溶液をｃｅＤＮＡ水溶液と、例えばシリンジポンプ又は衝突ジェットミキサーを使用して、約１：５～１：３（体積／体積）の比で、１０ｍＬ／分を超える総流量で混合した。一例では、アルコール脂質溶液をｃｅＤＮＡ水溶液と約１：３（体積／体積）の比で１２ｍＬ／分の流量で混合した。アルコールを除去し、緩衝液を透析によってＰＢＳに置き換えた。代替的に、緩衝液を、遠心分離管を使用してＰＢＳと置き換えた。アルコール除去及び同時緩衝液交換は、例えば、透析又はタンジェンシャル・フロー・フィルトレーションによって達成された。得られた脂質ナノ粒子を、０．２μｍ孔無菌フィルターで濾過する。ＬＮＰを調製する追加的又は代替的な方法は、例えば、国際特許出願公開第２０２１／０４６２６５号及び同第２０２２／２３６４７９号に詳細に記載されており、これらのそれぞれの全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
ある研究では、参照脂質Ａ、ＤＳＰＣ、コレステロール、及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（モル比４７．５：１０．０：４０．７：１．８）を含む脂質溶液を対照として使用して、例示的なｃｅＤＮＡを含む脂質ナノ粒子を調製した。いくつかの研究では、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）のような組織特異的標的リガンドが、参照脂質Ａ及び本開示のカチオン性脂質を含む製剤に含まれていた。例えばトリ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ（ＧａｌＮＡｃ３）又はテトラ－アンテナリーＧａｌＮＡｃ（ＧａｌＮＡｃ４）などのＧａｌＮＡｃリガンドは、当技術分野で公知のように合成することができ（ＷＯ２０１７／０８４９８７及びＷＯ２０１３／１６６１２１を参照されたい）、当該技術分野において周知のように脂質又はＰＥＧに化学的にコンジュゲートすることができる（Ｒｅｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）「Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｐｐｅｒ Ｓｉｚｅ Ｌｉｍｉｔ ｆｏｒ Ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｎ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ｖｉｖｏ」２７６：３７５５７７－３７５８４を参照されたい）。緩衝溶液中のｃｅＤＮＡの水溶液を調製した。脂質溶液及びｃｅＤＮＡ溶液を、１：３（ｖ／ｖ）の脂質対ｃｅＤＮＡの比、１２ｍＬ／分の全流量で、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｅｒ上でインハウス手順を使用して混合した。
Figure 2024517644000086
 Ｎｏ．＝番号、ＩＶ＝静脈内、ＲＯＡ＝投与経路、ＬＮＰ＝脂質ナノ粒子、ＩＶＩＳ＝インビボ撮像セッション、ＢＷ＝体重
Figure 2024517644000087
 Ｎｏ．＝番号、ＩＶ＝静脈内、ＲＯＡ＝投与経路、ＬＮＰ＝脂質ナノ粒子、ＩＶＩＳ＝インビボ撮像セッション、ＢＷ＝体重
Figure 2024517644000088
 Ｎｏ．＝番号、ＩＶ＝静脈内、ＲＯＡ＝投与経路、ＬＮＰ＝脂質ナノ粒子、ＩＶＩＳ＝インビボ撮像セッション、ＢＷ＝体重
Figure 2024517644000089
 ＤＳＰＣ＝ジステアロイルホスファチジルコリン、Ｃｈｏｌ＝コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ）、及びＳＳ－ＯＰ＝ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＯＰ（ＮＯＦ）、ＧａｌＮＡｃ＝Ｎ－アセチルガラクトサミン、ＧａｌＮＡｃ４＝テトラアンテナリーＧａｌＮＡｃ
Figure 2024517644000090
 ＤＳＰＣ＝ジステアロイルホスファチジルコリン、Ｃｈｏｌ＝コレステロール、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ）、及びＳＳ－ＯＰ＝ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＯＰ（ＮＯＦ）、ＧａｌＮＡｃ＝Ｎ－アセチルガラクトサミン、ＧａｌＮＡｃ４＝テトラアンテナリーＧａｌＮＡｃ
Figure 2024517644000091
 ＤＯＰＣ＝ジオレオイルホスファチジルコリン）、Ｃｈｏｌ＝コレステロール、ＤＳＰＥ＝ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ）、及びＳＳ－ＯＰ＝ＣＯＡＴＳＯＭＥ（登録商標）ＳＳ－ＯＰ（ＮＯＦ）、ＧａｌＮＡｃ＝Ｎ－アセチルガラクトサミン、ＧａｌＮＡｃ４＝テトラアンテナリーＧａｌＮＡｃ
Figure 2024517644000092
実施例１７：脂質ナノ粒子の前臨床インビボ研究
マウスにおけるＬＮＰを配合したｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼのインビボ発現及び忍容性を評価するために、いくつかの前臨床試験を行った。これらのＬＮＰは、対照としての参照脂質Ａ又は本開示の脂質のいずれかを含む。これらの前臨床試験に含まれる試験デザイン及び手順は、以下のとおりである。
材料及び方法
Figure 2024517644000093
 ａ全血を血清分離チューブに収集し、凝固活性剤を添加した
種（数、性別、年齢）：ＣＤ－１マウス（Ｎ＝６５及び５匹の予備、雄、到着時に約４週齢）。
ケージサイドでの観察：ケージサイドでの観察を毎日行った。
臨床観察：臨床観察は、０日目の試験材料投与の約１、約５～約６、及び約２４時間後に行われた。例外毎に追加の観察を行った。全ての動物の体重を、該当する場合、０、１、２、３、４及び７日目に記録した。必要に応じて、追加の体重を記録した。
用量投与：試験品（ＬＮＰ：ｃｅＤＮＡ－Ｌｕｃ）を、外側尾静脈への静脈内投与により、群１～３８に０日目に５ｍＬ／ｋｇで投与した。
インライフ撮像：４日目に、全ての動物に２．５ｍＬ／ｋｇの腹腔内（intraperitoneal、ＩＰ）注射を介して１５０ｍｇ／ｋｇ（６０ｍｇ／ｍＬ）のルシフェリンを投与した。各ルシフェリン投与後≦１５分。以下に説明するインビボ撮像プロトコルに従って全ての動物にＩＶＩＳ撮像セッションを行った。
麻薬の回復：麻酔下の間、回復中、及び移動するまで、動物を継続的にモニタリングした。
中間採血：全ての動物を、０日目に中間採血した。試験後５～６時間（５．０時間以上、６．５時間以下）。
採取後、動物は、０．５～１．０ｍＬの乳酸リンゲル液を皮下投与された。
血清のための全血を、尾静脈ニック、伏在静脈、又は眼窩洞穿刺（吸入イソフルラン下）によって収集した。全血は、凝固活性剤チューブを備えた血清分離器に収集され、１つ（１）の血清アリコートに処理された。
インビボ撮像プロトコル
●ルシフェリンストック粉末を表示上－２０℃で保存した。
●製剤化されたルシフェリンを１ｍＬのアリコート、２～８℃で保存して、光から保護した。
●製剤化されたルシフェリンは、２～８℃で最大３週間安定であり、光から保護され、室温（ＲＴ）で約１２時間安定であった。
●ルシフェリンをＰＢＳに十分な容量で６０ｍｇ／ｍＬの目標濃度に溶解し、必要に応じて５ＭのＮａＯＨ（約０．５μｌ／ｍｇルシフェリン）及びＨＣｌ（約０．５μＬ／ｍｇルシフェリン）でｐＨ＝７．４に調整した。
●少なくとも約５０％の超過分を含め、プロトコルに従って適切な量を調製した。
注射及び撮像
●動物の被毛を剃った（必要に応じて）。
●プロトコルに従って、腹腔内を介して６０ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ中の１５０ｍｇ／ｋｇのルシフェリンを注射した。
●撮像は、投与直後又は投与後最大１５分行った。
●撮像セッション中に動物を麻酔するために、イソフルラン気化器を１～３％（通常は２．５％）に設定した。
●撮像セッションのためのイソフルラン麻酔：
○動物をイソフルランチャンバーに入れ、イソフルランが有効になるまで約２～３分待った。
○ＩＶＩＳ機器の側面の麻酔レベルが「オン」の位置にあることを確認した。
○動物をＩＶＩＳ機器に入れた。
最高感度の設定で所望の取得プロトコルを行った。
研究Ａ
試験Ａは、ＬＮＰ－ｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ組成物を０．２５ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに投与した場合の、本開示の例示的な脂質、すなわち、脂質２０のＬＮＰとして製剤化される能力、並びにｉｎ ｖｉｖｏ発現及び忍容性を評価する目的で行った最初の前臨床試験であった。
原則として、０．１５以下の多分散指数（polydispersity index、ＰＤＩ）は、形成されたＬＮＰのサイズの均一性が良好であることを示し、９０％の封入効率（encapsulation efficiency、ＥＥ）は、満足のいく封入率であることを示す。両方とも脂質２０を用いて製剤化されたが、様々なＤＭＧ－ＰＥＧ２０００量で製剤化されたＬＮＰ１及びＬＮＰ２は、０．１５未満の優れたＰＤＩ値及び９０％を超えるＥＥ値を示した。
図１Ａは、ＬＮＰ１、ＬＮＰ２、及びＬＮＰ３中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。ＬＮＰ１は、参照脂質Ａを用いて製剤化され、陽性対照として使用される脂質ナノ粒子であり、一方、ＬＮＰ２及びＬＮＰ３は、表４に記載の脂質２０を用いて製剤化された脂質ナノ粒子である。ＰＢＳを陰性対照として使用した。図１Ｂは、上記のようにＬＮＰ１、ＬＮＰ２、ＬＮＰ３及びＰＢＳ中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡを投与されたマウスにおける１日目の体重変化を示すグラフである。
図１Ａに示すように、ＬＮＰ２又はＬＮＰ３（すなわち、脂質２０を含むＬＮＰ）とともに製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼで処置されたマウスの群は、４日目に良好なルシフェラーゼ発現を示した。参照脂質Ａを用いて製剤化された陽性対照ＬＮＰ（すなわち、ＬＮＰ１）とは異なり、処置は１日目にマウスにおいて体重の統計的に有意な変化を引き起こさなかったので、脂質１を含むＬＮＰもマウスにおいて耐容性が良好であった（図１Ｂを参照）。
研究Ｂ
試験Ｂの目的は、本開示の例示的な脂質、すなわち、脂質２０と、肝臓組織特異的標的化リガンドとしてのＧａｌＮＡｃ４とを含むＬＮＰ組成物として製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼのインビボ発現及び忍容性を評価することであった。ＬＮＰ－ｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ組成物を０．５ｍｇ／ｋｇの投与量でマウスに投与した。
図２Ａは、ＬＮＰ４及びＬＮＰ５中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。ＬＮＰ４は、参照脂質Ａ及びＧａｌＮＡｃ４を用いて製剤化され、陽性対照として使用される脂質ナノ粒子であり、一方、ＬＮＰ５は、表５に記載の脂質２０及びＧａｌＮＡｃ４を用いて製剤化された脂質ナノ粒子である。ＰＢＳを陰性対照として使用した。図２Ｂは、上記のようにＬＮＰ４、ＬＮＰ５及びＰＢＳ中に製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｄＤＮＡを投与されたマウスにおける１日目の体重変化を示すグラフである。
研究Ｂにおける観察は、上記の研究Ａにおける観察と確証された。具体的には、図２Ａに示されるように、良好なルシフェラーゼ発現が、ＬＮＰ５（すなわち、脂質２０を含むＬＮＰ）とともに製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼで処置されたマウスの群において４日目に観察された。更に、参照脂質Ａを用いて製剤化された陽性対照ＬＮＰ（すなわち、ＬＮＰ４）とは異なり、脂質２０を含むＬＮＰは、０．５ｍｇ／ｋｇの増加した用量であってもマウスにおいて良好な耐容性を示し、１日目にマウスにおいて統計的に有意な体重変化を引き起こさなかった（図２Ｂ参照）。
研究Ｃ
試験Ｃの目的は、本開示の様々な例示的な脂質と、肝臓組織特異的標的化リガンドとしてのＧａｌＮＡｃ４とを含むＬＮＰ組成物として製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼのインビボ発現及び忍容性を評価することであった。ＬＮＰ－ｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ組成物をそれぞれ０．５ｍｇ／ｋｇの投与量でマウスに投与した。本開示のカチオン性脂質を組み込む試験Ｃのために製剤化されたＬＮＰは全て、０．１５以下の多分散性指数（ＰＤＩ）及び９０％以上の封入効率（ＥＥ）を示した。
図３Ａは、ＰＢＳを陰性対照として用いて、表６に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。図３Ｂは、ＰＢＳを陰性対照として用いて、表６に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。図３Ｃは、表６に記載のＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目及び７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。図３Ｄは、表６に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後１日目のマウスにおける体重変化を示すグラフである。
示されるように図３Ａ及び図３Ｂ、４日目及び７日目に、ＬＮＰ中の本発明の脂質とともに製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ構築物で処置されたマウスの群は、参照脂質Ａとともに製剤化された陽性対照ｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ（すなわち、ＬＮＰ６）で処置された群と比較して、同等の発現（例えば、脂質２０を含むＬＮＰ７、脂質２３を含むＬＮＰ８、脂質１１を含むＬＮＰ９、脂質１９を含むＬＮＰ１０、脂質２１を含むＬＮＰ１１）又はより高い発現（例えば、脂質２２を含むＬＮＰ１２、脂質１６を含むＬＮＰ１３、脂質１７を含むＬＮＰ１４、脂質１８を含むＬＮＰ１５、脂質２５を含むＬＮＰ１６）を示した。図３Ｃは、ＬＮＰ中の本発明の脂質とともに製剤化された構築物のルシフェラーゼの高発現レベルが安定であり、４日目から７日目まで持続することができたことを実証する。図３Ｄは、本発明の脂質を用いて製剤化されたＬＮＰ（例えば、脂質２０を含むＬＮＰ７、脂質２３を含むＬＮＰ８、脂質１１を含むＬＮＰ９、脂質１９を含むＬＮＰ１０、脂質２１を含むＬＮＰ１１、脂質２２を含むＬＮＰ１２、脂質１８を含むＬＮＰ１５、脂質１３を含むＬＮＰ１６、脂質２４を含むＬＮＰ１７）が、概して忍容性良好であり、１日目のマウスにおいて統計的に有意な体重の変化を引き起こさなかったことを示す。
研究Ｄ
試験Ｄの目的は、試験Ｃに含まれるもの以外の本開示の様々な例示的な脂質（試験Ｃでも特徴付けられたＬＮＰ ９を除く）、及び肝臓組織特異的標的化リガンドとしてのＧａｌＮＡｃ４も含むＬＮＰ組成物として製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼのインビボ発現及び忍容性を評価することであった。ＬＮＰ－ｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ組成物をそれぞれ０．５ｍｇ／ｋｇの投与量でマウスに投与した。本開示のカチオン性脂質を組み込む試験Ｄのために製剤化されたＬＮＰは全て、０．１５以下の多分散性指数（ＰＤＩ）及び９５％以上の封入効率（ＥＥ）を示した。
図４Ａは、ＰＢＳを陰性対照として用いて、表７に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。図４Ｂは、ＰＢＳを陰性対照として用いて、表７に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。図４Ｃは、表７に記載のＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後４日目及び７日目のマウスにおける蛍光によって測定されたルシフェラーゼ発現の総量を示すグラフである。図４Ｄは、表７に記載の本発明の脂質を含むＬＮＰで製剤化されたルシフェラーゼをコードするｃｅＤＮＡの投与後１日目のマウスにおける体重変化を示すグラフである。
示されるように図４Ａ及び図４Ｂ、４日目及び７日目に、ＬＮＰ中の本発明の脂質とともに製剤化されたｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ構築物で処置されたマウスの群は、参照脂質Ａとともに製剤化された陽性対照ｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼで処置された群（すなわち、ＬＮＰ６）と比較して、同等又はより高い発現を示した。図４Ｃは、ＬＮＰ中の本発明の脂質とともに製剤化された構築物のルシフェラーゼの高発現レベルが安定であり、４日目から７日目まで持続することができたことを実証する。図４Ｄは、本発明の脂質を用いて製剤化されたＬＮＰ（例えば、脂質１１を含むＬＮＰ９、脂質１を含むＬＮＰ１８、脂質２を含むＬＮＰ１９、脂質１２を含むＬＮＰ２０、脂質３を含むＬＮＰ２１、脂質４を含むＬＮＰ２２、脂質１３を含むＬＮＰ２３、脂質５を含むＬＮＰ２４、脂質６を含むＬＮＰ２５、脂質１４を含むＬＮＰ２６、脂質７を含むＬＮＰ２７、脂質８を含むＬＮＰ２８、脂質１５を含むＬＮＰ２９、脂質９を含むＬＮＰ３０、及び脂質１０を含むＬＮＰ３１）が、概して忍容性が良好であり、１日目のマウスにおいて統計的に有意な体重の変化を引き起こさなかったことを示す。
注目すべきことに、研究Ｃにおいても特徴付けられた脂質１１を含むＬＮＰ ９は、４日目又は７日目にかかわらず、参照脂質Ａを含むＬＮＰ ６のインビボｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ発現よりも高いインビボｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ発現を一貫して示した（図４Ａ及び図４Ｂ）。図４Ｃは、ＬＮＰ９とは別に、脂質１を含む少なくともＬＮＰ１８が、４日目に参照脂質Ａを含むＬＮＰ６のインビボｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ発現よりも高いインビボｃｅＤＮＡ－ルシフェラーゼ発現を示し、そのような高レベルの発現が７日目まで持続したことを示す。
したがって、試験Ａ～Ｄは、全体として、本開示のカチオン性脂質を用いて製剤化されたＬＮＰが、（ｉ）ｃｅＤＮＡの導入遺伝子インサートの持続性の優れた安定したインビボ発現レベルを有し、かつ（ｉｉ）インビボで忍容性が良好であることを実証する。
実施例１８：研究Ｅ－ＬＮＰ封入効率に対する疎水性尾部中の脂肪族鎖の長さの効果
リポソーム又は脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の封入効率（ＥＥ）は、リポソーム又はＬＮＰによって完全に封入されるｃｅＤＮＡなどの治療用核酸分子又は薬物物質の比、割合、分率又はパーセンテージである。ＬＮＰによって封入される薬剤物質の分率は、ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ ｄｓＤＮＡアッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（登録商標））をＬＮＰスラリー（Ｃｆｒｅｅ）に添加したときの蛍光を測定し、この値を１％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００（Ｃｔｏｔａｌ）によるＬＮＰの溶解のときに得られたｃｅＤＮＡ含有量と比較することによる、封入されていない薬剤物質の含有量を決定することによって測定され、ここで封入率＝（Ｃｔｏｔａｌ－Ｃｆｒｅｅ）／Ｃｔｏｔａｌ×１００）である。
ＬＮＰ組成物の封入効率は、例えば、これらに限定されないが、治療濃度域及び純度などの、ＬＮＰ組成物の重要な特性の指標であると考えられる。上記で簡単に考察したように、本発明の脂質を使用して製剤化されたＬＮＰ組成物は全て、９０％以上の封入効率（ＥＥ）を有していた。研究Ｅの目的は、疎水性尾部、すなわち式ＩのＲ４及び／又はＲ６ａ及びＲ６ｂにおける脂肪族鎖の具体的な炭素原子含量の長さを変化させた場合の、本開示のリピドを組み込んだ種々のＬＮＰ組成物の封入効率における統計的に有意な変化を、たとえあったとしても、わずかではあるが評価することであった。更に、肝臓標的化用途について、理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、より低い平均ナノ粒子サイズが、ＬＮＰ組成物が肝臓洞様毛細血管に整列する内皮細胞の小孔構造（fenestrae）をより効率的に迂回することを潜在的に可能にし、それによって、ＬＮＰ組成物が肝細胞によってより効率的に内在化されることを可能にすると考える。特定の閾値サイズを超えるＬＮＰは、細網内皮系の細胞によって優先的に取り込まれる傾向があり、これが用量制限免疫応答を引き起こし得ることが更に仮定される。
以下の表９は、ＬＮＰ６（参照脂質Ａ、対照）、ＬＮＰ７（脂質２０、式ＩのＲ４＝Ｃ９アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ８アルキルである）、ＬＮＰ９（脂質１１、式ＩのＲ４＝Ｃ７アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ８アルキルである）、ＬＮＰ１０（脂質１９、式ＩのＲ４＝Ｃ８アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ８アルキルである）、ＬＮＰ１１（脂質２１、式ＩのＲ４＝Ｃ１０アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ８アルキルである）、並びにＬＮＰ１２（脂質２２、式ＩのＲ４＝Ｃ１１アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ８アルキルである）の平均ＬＮＰ直径（ｎｍ）及び対応する封入効率を比較する。
Figure 2024517644000094
表８に示すように、参照脂質Ａを含む対照ＬＮＰ６は、≧６５．０ｎｍの平均直径及び≦９２．０％の封入効率を有する。唯一の変数が非分岐疎水性尾部、すなわち、Ｒ４の長さである式Ｉのカチオン性脂質をそれぞれ組み込む他の５つのＬＮＰの中で、Ｒ４が９個以下の炭素原子（すなわち、７、８又は９個の炭素原子）を含有する場合、平均粒径は６５．０ｎｍ以下であるが、脂質１１を含むＬＮＰ７のみが少なくとも９３．０％以上の改善された封入効率を有したことが観察された。
以下の表９は、ＬＮＰ６（参照脂質Ａ、対照）、ＬＮＰ７（脂質２０、式ＩのＲ４＝Ｃ９アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ８アルキルである）、ＬＮＰ１３（脂質１６、式ＩのＲ４＝Ｃ９アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ１０アルキルである）、並びにＬＮＰ１４（脂質１７、式ＩのＲ４＝Ｃ９アルキル；Ｒ６ａ及びＲ６ｂは両方ともＣ１０アルキルである）の平均ＬＮＰ直径（ｎｍ）及び対応する封入効率を比較する。
Figure 2024517644000095
 ＊表１０のＬＮＰ６及びＬＮＰ７並びに表９のＬＮＰ６及びＬＮＰ７は、同じバッチの試薬を用いて同時に製剤化し、平均粒径及び封入効率を１回測定した。
表９に示すように、参照脂質Ａを含む対照ＬＮＰ ６は、≧６５．０ｎｍの平均直径及び≦９２．０％の封入効率を有する。唯一の変数が、分岐疎水性尾部における末端分岐脂肪族炭化水素鎖、すなわち、Ｒ６ａ及びＲ６ｂの長さであった、各々が式Ｉのカチオン性脂質を組み込む他の５つのＬＮＰの中で、Ｒ６ａ及びＲ６ｂの炭素数が８から１２までが大きくなるにつれて平均粒径が大きくなることが観察されたが、脂質１６（Ｒ６ａ及びＲ６ｂが両方ともＣ１０アルキル）である）を含むＬＮＰ１３及び脂質１７（Ｒ６ａ及びＲ６ｂが両方ともＣ１２アルキル）を含むＬＮＰ１４は、それぞれ、脂質２０（Ｒ６ａ及びＲ６ｂが両方ともＣ８アルキル）である）を含むＬＮＰ７の封入効率よりも高い封入効率を有していた。
参考文献及び均等物
本出願全体を通して引用される、参考文献、発行された特許、公開された特許出願、及び同時係属中の特許出願を含む、全ての特許及び他の刊行物は、例えば、本明細書に記載の技術に関連して使用され得る、そのような刊行物に記載される方法論を説明及び開示する目的で、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。これらの出版物は、本出願の出願日より前のそれらの開示のためにのみ提供されている。この点に関するいかなるものも、発明者が先行発明のおかげで、又はいかなる他の理由のためにもそのような開示に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。日付に関する全ての記述又はこれらの文書の内容に関する表現は、出願人が入手できる情報に基づいており、これらの文書の日付又は内容の正確さに関するいかなる承認も構成するものではない。
本開示の実施形態の説明は、網羅的であること、又は本開示を開示された正確な形態に限定することを意図したものではない。本開示の特定の実施形態及び実施例が、例示の目的で本明細書で説明されているが、当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な同等の修正が可能である。例えば、方法のステップ又は機能は、所与の順序で提示されるが、代替的な実施形態は、異なる順序で機能を実施してもよく、又は機能は実質的に同時に実施されてもよい。本明細書に提供される開示の教示は、必要に応じて他の手順又は方法に適用することができる。本明細書に記載される様々な実施形態は、更なる実施形態を提供するために組み合わせることができる。本開示の態様は、必要に応じて、上記の参照文献及び出願の組成物、機能、及び概念を用いて本開示の更なる実施形態を提供するように修正することができる。更に、生物学的機能の同等性の考慮により、種類又は量の生物学的又は化学的作用に影響を与えることなく、タンパク質構造にいくつかの変更を加えることができる。詳細な説明に照らして、これらの変更及び他の変更を本開示に加えることができる。そのような修正は全て、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。
前述の実施形態のいずれかの特定のエレメントは、他の実施形態のエレメントと組み合わせるか、又は置き換えることができる。更に、本開示のある特定の実施形態に関連する利点が、これらの実施形態の文脈で説明されたが、他の実施形態もそのような利点を示し得、全ての実施形態が本開示の範囲内にあるために必ずしもそのような利点を示す必要はない。
本明細書に記載される技術は、以下の実施例によって更に説明されており、決してこれらを更に限定するものと解釈されるべきではない。本発明は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコル、及び試薬等にいかなる様式でも限定されず、そのようなものとして変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態のみを説明する目的のためであり、単に特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定することを意図されない。

Claims (113)

  1. 式Ｉで表されるカチオン性脂質、
    Figure 2024517644000096
     又はその薬学的に許容される塩であって、式中、
    Ｒ’が、存在しないか、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、但し、Ｒ’が水素又はＣ１～Ｃ６アルキルである場合、Ｒ’、Ｒ１、及びＲ２が全て結合している窒素原子はプロトン化されており、
    Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ２～Ｃ６アルケニルであり、
    Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ１２アルキレン又はＣ２～Ｃ１２アルケニレンであり、
    Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１６非分岐アルケニル、又は
    Figure 2024517644000097
     であり、式中、
    Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１６非分岐アルキル又はＣ２～Ｃ１６非分岐アルケニルであり、
    Ｒ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ８アルキレン、又はＣ２～Ｃ８アルケニレンであり、
    Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７～Ｃ１６アルキル又はＣ７～Ｃ１６アルケニルであり、但し、Ｒ６ａ及びＲ６ｂ中の合わせた炭素原子の総数が、１５より大きく、
    Ｘ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＯＣ（＝Ｓ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｎ＝Ｃ（Ｒａ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝ＮＯ－、－Ｏ－Ｎ＝Ｃ（Ｒａ）－、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａ－、
    －ＮＲａＣ（＝Ｏ）－、－ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＳｉ（Ｒａ）２Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）（ＣＲａ ２）Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、又はＯＣ（＝Ｏ）（ＣＲａ ２）Ｃ（＝Ｏ）－であり、式中、
    Ｒａが、各出現に対して、独立して、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
    ｎが、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である、カチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  2. Ｘ１及びＸ２が、同一である、請求項１に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  3. Ｘ１及びＸ２が、それぞれ独立して、－ＯＣ（＝Ｏ）－、－ＳＣ（＝Ｏ）－、－ＯＣ（＝Ｓ）－、
    －Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｓ－、又は－Ｓ－Ｓ－である、請求項１又は２に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  4. 前記脂質が、式ＩＩで表されるか、
    Figure 2024517644000098
     又はその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎが、１、２、３、及び４から選択される整数である、請求項１～３のいずれか一項に記載のカチオン性脂質。
  5. 前記脂質が、式ＩＩＩで表されるか、
    Figure 2024517644000099
     又はその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎが、１、２、及び３から選択される整数である、請求項１～４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質。
  6. 前記脂質が、式ＩＶで表されるか、
    Figure 2024517644000100
     又はその薬学的に許容される塩である、請求項１～５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質。
  7. Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～Ｃ３アルキル、又はＣ２～Ｃ３アルケニルである、請求項１～６のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  8. Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～Ｃ２アルキルである、請求項１～７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  9. 前記脂質が、式Ｖで表されるか、
    Figure 2024517644000101
     又はその薬学的に許容される塩である、請求項１～８のいずれか一項に記載のカチオン性脂質。
  10. Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ９アルキレン又はＣ２～Ｃ９アルケニレンである、請求項１～９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  11. Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ７アルキレンである、請求項１～１０のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  12. Ｒ３が、Ｃ７アルキレンである、請求項１～１０のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  13. Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキレンである、請求項１～１１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  14. Ｒ３が、Ｃ６アルキレンである、請求項１～１１及び１３のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  15. Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ５アルキレンである、請求項１～１１及び１３のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  16. Ｒ３が、Ｃ５アルキレンである、請求項１～１１、１３、及び１５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  17. Ｒ３が、Ｃ４アルキレンである、請求項１～１１、１３、及び１５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  18. Ｒ３が、Ｃ３アルキレンである、請求項１～１１、１３、及び１５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  19. Ｒ５が、存在しないか、Ｃ１～Ｃ４アルキレン、又はＣ２～Ｃ４アルケニレンである、請求項１～１８のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  20. Ｒ５が、存在しない、請求項１～１９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  21. Ｒ５が、Ｃ１アルキレンである、請求項１～１９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  22. Ｒ５が、Ｃ２アルキレンである、請求項１～１９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  23. Ｒ５が、Ｃ３アルキレンである、請求項１～１９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  24. Ｒ５が、Ｃ４アルキレンである、請求項１～１９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  25. Ｒ４が、Ｃ１～Ｃ１４非分岐アルキル、Ｃ２～Ｃ１４非分岐アルケニル、又は
    Figure 2024517644000102
     であり、式中、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１２非分岐アルキル又はＣ２～Ｃ１２非分岐アルケニルである、請求項１～２４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  26. Ｒ４が、Ｃ２～Ｃ１２非分岐アルキル又はＣ２～Ｃ１２非分岐アルケニルである、請求項１～２５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  27. Ｒ４が、Ｃ５～Ｃ１２非分岐アルキルである、請求項１～２６のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  28. Ｒ４が、Ｃ６非分岐アルキルである、請求項１～２７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  29. Ｒ４が、Ｃ７非分岐アルキルである、請求項１～２７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  30. Ｒ４が、Ｃ８非分岐アルキルである、請求項１～２７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  31. Ｒ４が、Ｃ９非分岐アルキルである、請求項１～２７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  32. Ｒ４が、Ｃ１０～Ｃ１２非分岐アルキルである、請求項１～２７のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  33. Ｒ４が、Ｃ２～Ｃ７非分岐アルキル又はＣ２～Ｃ７非分岐アルケニルである、請求項１～２６のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  34. Ｒ４が、
    Figure 2024517644000103
     であり、式中、Ｒ４ａ及びＲ４ｂが、それぞれ独立して、Ｃ５～Ｃ９非分岐アルキルである、請求項１～２４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  35. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７～Ｃ１４アルキル又はＣ７～Ｃ１４アルケニルである、請求項１～３４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  36. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ８アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ１１アルケニル、又はＣ１２アルケニルである、請求項１～３５のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  37. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ７アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、又はＣ１２アルキルである、請求項１～３６のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  38. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１０アルケニル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルケニル、又はＣ１６アルケニルである、請求項１～３４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  39. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、それぞれ独立して、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１５アルキル、及びＣ１６アルキルである、請求項３８に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  40. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、互いに等しい数の炭素原子を含有する、請求項１～３９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  41. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、同一である、請求項１～４０のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  42. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、両方ともＣ７アルキルである、請求項１～３７、４０、及び４１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  43. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、両方ともＣ８アルキルである、請求項１～３７、４０、及び４１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  44. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、両方ともＣ９アルキルである、請求項１～４１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  45. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、両方ともＣ１０アルキルである、請求項１～４１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  46. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、両方ともＣ１１アルキルである、請求項１～４１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  47. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、両方ともＣ１２アルキルである、請求項１～４１のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  48. Ｒ６ａ及びＲ６ｂが、各々、互いとは異なる数の炭素原子を含有する、請求項１～３９のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  49. Ｒ６ａが、Ｃ９アルキルであり、Ｒ６ｂが、Ｃ８アルキルである、請求項１～３９及び４８のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  50. Ｒ６ａが、Ｃ８アルキルであり、Ｒ６ｂが、Ｃ９アルキルである、請求項１～３９及び４８のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  51. Ｒ６ａが、Ｃ９アルキルであり、Ｒ６ｂが、Ｃ１０アルキルである、請求項１～３９及び４８のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  52. Ｒ６ａが、Ｃ１０アルキルであり、Ｒ６ｂが、Ｃ９アルキルである、請求項１～３９及び４８のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  53. Ｒ’が、存在しない、請求項１～５０のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩。
  54. 前記脂質が、以下から選択されるか、
    Figure 2024517644000104
    Figure 2024517644000105
    Figure 2024517644000106
    Figure 2024517644000107
    Figure 2024517644000108
     又はその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載のカチオン性脂質。
  55. 請求項１～５４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩、及び治療用核酸を含む、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）。
  56. 前記治療用核酸が、前記脂質内に封入されている、請求項５５に記載の脂質ナノ粒子。
  57. 前記治療用核酸が、ミニ遺伝子、プラスミド、ミニサークル、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、リボザイム、ｃｅＤＮＡ、ミニストリング、ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）、プロテロメア閉端ＤＮＡ、又はダンベル直鎖状ＤＮＡ、ダイサー基質ｄｓＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ＤＮＡウイルスベクター、ウイルスＲＮＡベクター、非ウイルスベクター、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項５５又は５６に記載の脂質ナノ粒子。
  58. 前記治療用核酸が、閉端ＤＮＡ（ｃｅＤＮＡ）である、請求項５５～５７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  59. ステロールを更に含む、請求項５５～５８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  60. 前記ステロールが、コレステロール又はベータ－シトステロールである、請求項５９に記載の脂質ナノ粒子。
  61. 非カチオン性脂質を更に含む、請求項５５～６０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  62. 前記非カチオン性脂質が、ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイル－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＳＰＥ）、モノメチル－ホスファチジルエタノールアミン（１６－Ｏ－モノメチルＰＥなど）、ジメチル－ホスファチジルエタノールアミン（１６－Ｏ－ジメチルＰＥなど）、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアロイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルセリン（ＤＯＰＳ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジエルコイルホスファチジルコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）、ジエライドイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＨｙＰＥ）；レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リソレシチン、リソホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン（ＥＳＭ）、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジカシド、セレブロシド、ジセチルホスフェート、リソホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項５４に記載の脂質ナノ粒子。
  63. 前記非カチオン性脂質が、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、及びジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）からなる群から選択される、請求項６１又は６２に記載の脂質ナノ粒子。
  64. 少なくとも１つのＰＥＧ化脂質を更に含む、請求項５５～６３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  65. 前記少なくとも１つのＰＥＧ化脂質が、ＰＥＧ－ジラウリルオキシプロピル；ＰＥＧ－ジミリスチルオキシプロピル；ＰＥＧ－ジパルミチルオキシプロピル、ＰＥＧ－ジステアリルオキシプロピル；１－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ－ＰＥＧ）；ＰＥＧ－ジラウリルグリセロール；ＰＥＧ－ジパルミトイルグリセロール；ＰＥＧ－ジステリルグリセロール；ＰＥＧ－ジラウリルグリカミド；ＰＥＧ－ジミリスチルグリカミド；ＰＥＧ－ジパルミトイルグリカミド；ＰＥＧ－ジステリルグリカミド；（１－［８’－（コレスト－５－エン－３［ベータ］－オキシ）カルボキサミド－３’，６’－ジオキサオクタニル］カルバモイル－［オメガ］－メチル－ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ－コレステロール）；３，４－ジテトラデコキシルベンジル－［オメガ］－メチル－ポリ（エチレングリコール）エーテル（ＰＥＧ－ＤＭＢ）、及び１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）］（ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）からなる群から選択される、請求項６４に記載の脂質ナノ粒子。
  66. 前記少なくとも１つのＰＥＧ化脂質が、ＤＭＧ－ＰＥＧ、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ、又はその両方である、請求項６４又は６５に記載の脂質ナノ粒子。
  67. 前記少なくとも１つのＰＥＧ化脂質が、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００、又はその両方である、請求項６４～６６のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  68. 組織特異的標的化リガンドを更に含む、請求項５５～６７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  69. 前記組織特異的標的化リガンドが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）又はＧａｌＮＡｃ誘導体である、請求項６８に記載の脂質ナノ粒子。
  70. 前記組織特異的標的化リガンドが、前記少なくとも１つのＰＥＧ化脂質に共有結合して、ＰＥＧ化脂質コンジュゲートを形成する、請求項６８又は６９に記載の脂質ナノ粒子。
  71. 前記ＰＥＧ化脂質コンジュゲートが、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００に共有結合したテトラアンテナ型ＧａｌＮＡｃを含む、請求項７０に記載の脂質ナノ粒子。
  72. 前記カチオン性脂質が、約３０％～約８０％のモルパーセンテージで存在する、請求項５５～７１のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  73. 前記ステロールが、約２０％～約５０％のモルパーセンテージで存在する、請求項５９～７１のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  74. 前記非カチオン性脂質が、約２％～約２０％のモルパーセンテージで存在する、請求項５９～７３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  75. 前記少なくとも１つのＰＥＧ化脂質が、約２．１％～約１０％のモルパーセンテージで存在する、請求項６４～７４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  76. 前記ＰＥＧ化脂質コンジュゲートが、約０．１％～約１０％のモルパーセンテージで存在する、請求項７０～７５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  77. ステロール、非カチオン性脂質、ＰＥＧ化脂質、及びＰＥＧ化脂質コンジュゲートを更に含む、請求項５５～７６のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  78. パルミチン酸デキサメタゾンを更に含む、請求項５５～７７のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  79. 前記粒子が、約１０：１～約４０：１の全脂質対ｃｅＤＮＡ比を有する、請求項５５～７８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  80. 前記ナノ粒子が、約４０ｎｍ～約１２０ｎｍの範囲の直径を有する、請求項５５～７９のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  81. 前記ナノ粒子が、約１００ｎｍ未満の直径を有する、請求項５５～８０のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  82. 前記ナノ粒子が、約６０ｎｍ～約８０ｎｍの直径を有する、請求項５５～８１のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  83. 前記ｃｅＤＮＡが、閉端直鎖状二重鎖ＤＮＡである、請求項５５～８２のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  84. 前記ｃｅＤＮＡが、発現カセットを含み、前記発現カセットが、プロモーター配列及び導入遺伝子を含む、請求項８３に記載の脂質ナノ粒子。
  85. 前記発現カセットが、ポリアデニル化配列を含む、請求項８４に記載の脂質ナノ粒子。
  86. 前記ｃｅＤＮＡが、前記発現カセットの５’又は３’末端のいずれかに隣接する少なくとも１つの逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  87. 前記発現カセットが、２つのＩＴＲに隣接し、前記２つのＩＴＲが、１つの５’ＩＴＲ及び１つの３’ＩＴＲを含む、請求項８６に記載の脂質ナノ粒子。
  88. 前記発現カセットが、３’末端でＩＴＲ（３’ＩＴＲ）に連結している、請求項８６に記載の脂質ナノ粒子。
  89. 前記発現カセットが、５’末端でＩＴＲ（５’ＩＴＲ）に連結している、請求項８６に記載の脂質ナノ粒子。
  90. 前記少なくとも１つのＩＴＲが、ＡＡＶ血清型に由来するＩＴＲであり、ガチョウウイルスのＩＴＲに由来し、Ｂ１９ウイルスＩＴＲに由来し、パルボウイルスからの野生型ＩＴＲである、請求項８６に記載の脂質ナノ粒子。
  91. 前記ＡＡＶ血清型が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１及びＡＡＶ１２を含む群から選択される、請求項９０に記載の脂質ナノ粒子。
  92. 前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、野生型ＡＡＶ ＩＴＲである、請求項８７～９１のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  93. 前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲのうちの少なくとも１つが、修飾型又は変異型ＩＴＲである、請求項８７～９２のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  94. 前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲが、対称である、請求項８７～９３のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  95. 前記５’ＩＴＲ及び前記３’ＩＴＲが、非対称である、請求項８７～９４のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  96. 前記ｃｅＤＮＡが、５’ＩＴＲと前記発現カセットとの間にスペーサー配列を更に含む、請求項８７～９５のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  97. 前記ｃｅＤＮＡが、３’ＩＴＲと前記発現カセットとの間にスペーサー配列を更に含む、請求項８７～９６のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  98. 前記スペーサー配列が、少なくとも５塩基対の長さである、請求項９６又は９７に記載の脂質ナノ粒子。
  99. 前記ｃｅＤＮＡが、ニック又はギャップを有する、請求項５５～９８のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  100. 前記ｃｅＤＮＡが、ＣＥＬｉＤ、ＤＮＡベースのミニサークル、ＭＩＤＧＥ、ミニストリングＤＮＡ、発現カセットの５’及び３’末端にＩＴＲの２つのヘアピン構造を含むダンベル型の直鎖状二重鎖閉端ＤＮＡ、又はｄｏｇｇｙｂｏｎｅ（商標）ＤＮＡである、請求項５５～９９のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子。
  101. 請求項１～５４のいずれか一項に記載のカチオン性脂質又は請求項５５～１００のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
  102. 対象における遺伝性障害を治療する方法であって、有効量の請求項５５～１００のいずれか一項に記載の脂質ナノ粒子、又は有効量の請求項１０１に記載の薬学的組成物を、前記対象に投与することを含む、方法。
  103. 前記対象が、ヒトである、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記遺伝性障害が、鎌状赤血球貧血症、メラノーマ、血友病Ａ（凝固因子ＶＩＩＩ（ＦＶＩＩＩ）欠損症）及び血友病Ｂ（凝固因子ＩＸ（ＦＩＸ）欠損症）、嚢胞性線維症（ＣＦＴＲ）、家族性高コレステロール血症（ＬＤＬ受容体欠損症）、肝芽細胞腫、ウィルソン病、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、先天性肝性ポルフィリン症、遺伝性肝代謝障害、レッシュナイハン症候群、鎌状赤血球貧血症、サラセミア、色素性乾皮症、ファンコニ貧血、網膜色素変性症、毛細血管拡張性運動失調症、ブルーム症候群、網膜芽細胞腫、ムコ多糖蓄積症（例えば、ハーラー症候群（ＭＰＳ Ｉ型）、シャイエ症候群（ＭＰＳ Ｉ Ｓ型）、ハーラー・シャイエ症候群（ＭＰＳ Ｉ Ｈ－Ｓ型）、ハンター症候群（ＭＰＳ ＩＩ型）、サンフィリッポＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤ型（ＭＰＳ ＩＩＩ Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ型）、モルキオＡ及びＢ型（ＭＰＳ ＩＶＡ及びＭＰＳ ＩＶＢ）、マロトー・ラミー症候群（ＭＰＳ ＶＩ型）、スライ症候群（ＭＰＳ ＶＩＩ型）、ヒアルロニダーゼ欠損症（ＭＰＳ ＩＸ型））、ニーマン・ピック病Ａ／Ｂ、Ｃ１及びＣ２型、ファブリー病、シンドラー病、ＧＭ２－ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ病）、テイ・サックス病、異染性白質ジストロフィー、クラッベ病、ムコリピドーシスＩ、ＩＩ／ＩＩＩ及びＩＶ型、シアリドーシスＩ及びＩＩ型、グリコーゲン蓄積症Ｉ及びＩＩ型（ポンペ病）、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ型、シスチン症、バッテン病、アスパルチルグルコサミン尿症、サラ病、ダノン病（ＬＡＭＰ－２欠損症）、リソソーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）欠損症、神経セロイドリポフスチン症（ＣＬＮ１－８、ＩＮＣＬ、及びＬＩＮＣＬ）、スフィンゴリピドーシス、ガラクトシアリドーシス、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、フリードライヒ運動失調症、デュシェンヌ筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、ベッカー筋ジストロフィー（ＢＭＤ）、ジストロフィー表皮水疱症（ＤＥＢ）、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ１欠損症、乳児期の全身性動脈石灰化（ＧＡＣＩ）、レーバー先天性黒内障、シュタルガルト黄斑ジストロフィー（ＡＢＣＡ４）、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）欠損症、アッシャー症候群、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、アルファ－１アンチトリプシン欠損症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞（ＰＦＩＣ）Ｉ型（ＡＴＰ８Ｂ１欠損症）、ＩＩ型（ＡＢＣＢ１１）、ＩＩＩ型（ＡＢＣＢ４）、又はＩＶ型（ＴＪＰ２）、並びにカテプシンＡ欠損症からなる群から選択される、請求項１０２又は１０３に記載の方法。
  105. 前記遺伝性障害が、血友病Ａである、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記遺伝性障害が、血友病Ｂである、請求項１０４に記載の方法。
  107. 前記遺伝性障害が、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）である、請求項１０４に記載の方法。
  108. 前記遺伝性障害が、ウィルソン病である、請求項１０４に記載の方法。
  109. 前記遺伝性障害が、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ型である、請求項１０４に記載の方法。
  110. 前記遺伝性障害が、シュタルガルト黄斑ジストロフィーである、請求項１０４に記載の方法。
  111. 前記遺伝性障害が、ＬＣＡ１０である、請求項１０４に記載の方法。
  112. 前記遺伝性障害が、アッシャー症候群である、請求項１０４に記載の方法。
  113. 前記遺伝性障害が、滲出型ＡＭＤである、請求項１０４に記載の方法。
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