JP2024517355A - 血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリン - Google Patents

Abstract

本発明は、疾病の治療において使用するための中間分子量ヘパリンを提供する。

Description

本発明は、血管内皮炎の治療に関する。詳細には、本発明は、血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリンに関する。

脊椎動物の血管系は、動脈、静脈および毛細血管からなる。血管系を通る血流は、酸素および白血球などの必須要素を最も必要としている組織へ送達することによりホメオスタシスの維持を可能とする動態である。血流は、血管の拡張および収縮により制御される。血管系の内腔の側面をライニングする内皮細胞は、内皮を形成する単層として機能し；内皮は、平滑筋細胞の層上に存在する。これらの平滑筋細胞は、締めつけるかあるいは緩め、それぞれ、血管の収縮（血管収縮）または血管の拡張（血管拡張）をもたらす。出血の場合、血流は、血栓形成により制御することができる。炎症部位に達するため、白血球は、血液から内皮細胞を通過して炎症組織に達しなければならない。したがって、血管収縮、血管拡張、血管透過、および血栓形成の調節は、ホメオスタシスの調節に重要である。

血管内皮細胞は、血管壁の単純な構成要素以上のものである。内皮細胞は、血管を弛緩および収縮させる血管作動性物質を産生し放出する。例えば、内皮細胞は、アセチルコリン、ヒスタミンおよびトロンビンなどのシェアストレスまたは刺激に応じて一酸化窒素（ＮＯ）を産生する。次いで、ＮＯは、内皮の周囲の平滑筋細胞に拡散して、血管拡張を開始する。炎症性刺激に応じて放出される反応性酸素種は、内皮透過性を増大し、接着分子の発現により内皮細胞への白血球接着を促進することができる。これは、炎症部位への白血球の流入を作動させる働きをする。更に、内皮は、血栓形成のための表面を提供する。つまり、ホメオスタシスの調節において重要な役割を果たすのは、内皮細胞なのである。

したがって、内皮機能不全、または血管内皮炎は、血流、酸素送達、免疫応答に深刻な結果を有する可能性があり、したがって、ホメオスタシスは正常に機能しない。血管内皮炎は、ＮＯバイオアベイラビリティー低下を特徴とする。これは、内皮表面上の接着分子の発現を増加させ、これにより、血管壁への白血球動員を開始させることができる。したがって、内皮の炎症、または内皮傷害が、血管内皮炎において観察される。これは、内皮による血管の欠陥ライニングをもたらし、内皮下基質を血液中の凝固因子に曝露させる可能性がある。その結果として、血小板凝集および血栓形成が起こり、致死的となり得る血栓をもたらす。

血管内皮炎は、いくつかの疾病が原因であり得、疾病の原因であるよりむしろ症状として通常見られる。その結果として、治療は、血管内皮炎それ自体よりむしろ原因疾患を標的とすることに重点的に取り組んだ。この結果として、血管内皮炎の治療は、不十分である。原因となっている血管内皮炎が疾病重症度および死亡率を実際に高めている可能性があり、血管内皮炎は、これまでに考えられていたよりもずっと大きな役割を果たしている。したがって、原因疾患だけでなく血管内皮炎の治療は、患者の生存率を高め得る。

本明細書では、血管内皮炎および内皮傷害は互換的に使用される。血管内皮炎は、本明細書に記載されている多数の疾病および／または病態が原因であり得るが、ＣＯＶＩＤ－１９またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に関連する血管内皮炎を、本明細書において主として議論する。当業者は、この議論が単に例を提供するためであり、本発明を限定すると考えるべきでないことを理解するだろう。

２０１９年後半、中国武漢において、新型ベータコロナウイルス（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の原因であると特定された。その後、ＣＯＶＩＤ－１９の急速な地理的進行は最高潮に達し、ＷＨＯは２０２０年３月にパンデミックと宣言した（１）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が感染した者の臨床症状は、無症状の患者からより重症肺炎までに及び、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）および多臓器不全に至る可能性がある。ほとんどの症状のある患者は、軽症～中等症の疾病を経験し、最も一般的には入院を必要としない（２～４）。しかしながら、より重症な疾病に進行し得る患者のコホートがあり、症状の進展／臨床症状は、２週間まで現れ、初期の前駆症状的段階から始まり、ＡＲＤＳまで至る可能性がある（３）。深刻になり、換気装置または体外式膜型人工肺（ＥＣＭＯ）を必要する患者のサブグループは、９０％に接近する高い死亡率となる非常に不良な転帰であることが現在知られている（５）。

この疾病は最初に記述されて以来、世界的に九千万人を超える個体が冒された。病態生理学的経路は不明なままであり；したがって、管理は対症的である。特定の抗ウイルス薬またはワクチンを待っている間駆り立てられ得る疾患修飾治療薬は不足している。いくつかの一連の証拠は、ＣＯＶＩＤ－１９における主要な病態生理学的機序として内皮機能不全の方向に向いている。現在のパンデミックの前に、内皮機能不全マーカーは、敗血症患者の疾病重症度および死亡率と関連していることが分かった（６～９）。最近、Ｖａｒｇａ ｅｔ ａｌ．（１０）は、３名のＣＯＶＩＤ－１９患者の死後検査により、肺血管、腎臓血管、胃腸血管および肝臓血管を冒した広範に広がった内皮傷害を実証した。症例の１つでは、著者らは、「ほとんどの小血管はうっ血されたように思われる」と報告し、別の症例では、患者は、原因となる内皮傷害の証拠と共に腸管虚血から死亡した。

最近、２つの提案されている止血機序は、敗血症および他の重病（１１～１４）における炎症および凝固障害を促進する血管内皮炎に関連する分子病態に基づくＡＲＤＳの改善された理解への洞察を提供した：１つは、「内皮の２つの活性化理論」であり、内皮の病因は炎症経路および微小血栓症を活性化し、一方、他方は、血流を止める外科的処置の新規「２パス統合理論」であり、血流を止める外科的処置は、血栓形成を開始し、微小血栓毛性を促進し、血管微小血栓症（ＶＭＴＤ）に至る（１１、１３、１５）。内皮が止血の初期に寄与し、血栓形成の分子機序を引き起こすので、これらの２つの理論は互いに一致している。ＡＲＤＳは、様々な異なる原因からの敗血症にしばしば関連し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（１６）による重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（１７）による中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）および現在のＣＯＶＩＤ－１９において見られる。敗血症関連ＡＲＤＳは、脳症（１８）、肝不全（１９）（２０）、急性腎不全、および急性壊死性膵炎（２１）などの他の臓器機能不全でしばしば発症する。この他臓器の関与は、ＡＲＤＳが原発性疾患ではないかも知れないが、感染症または別の重病により引き起こされる進行中の全身的発症機序の一部であることを示唆している。

これに基づいて、敗血症および多の重病における多臓器不全の原因となる生理変化は、血管内皮炎関連ＶＭＴＤ（ＥＡ－ＶＭＴＤ）の結果として起こる循環機能不全と同じである（１４、１５）。したがって、感染症は、血管内皮炎の原因となる内皮への傷害を引き起こす。次いで、これは散在性微小血栓症（ＤＩＭＴ）をもたらし、これが、例えば、局所的低酸素症、全身性低酸素血症、および／または虚血を引き起こす可能性があり、前述のように、ＣＯＶＩＤ－１９は、内皮傷害に関連することが現在知られている（１０）。

ＣＯＶＩＤ－１９肺の病理解剖のケースシリーズは、びまん性肺胞障害と並行して、多数の局在化された血小板に富んだ微小血栓および出血性病巣が肺中に存在することを明らかにした（２２）。著者らは、ＣＯＶＩＤ－１９の病因の鍵として肺に局在化された血栓性微小血管障害症と仮定し、他者も、微小血栓症は疾病過程において重要な原動力であることを示唆した（２３）。これらの微小循環変化は、造影超音波を用いて、肺、腎臓および肝臓において明白に実証された（２４、２５）。同様な所見は、脳においても見られた（２６）。したがって、ＣＯＶＩＤ－１９が、内皮傷害ならびにびまん性および広範に広がった微小血栓症を引き起こすと思われる証拠が相次いでいる。

凝固性亢進およびＣＯＶＩＤ－１９は、現在広く受け入れられ、研究は、より重症疾患に関連するより高いレベルを有するＤ－ダイマーの異常レベルおよび院内死亡率の増加されたオッズ比を示した（２７～３０）。いくつかの症例報告は、静脈血栓塞栓形成の主な素因の非存在下ＣＯＶＩＤ－１９肺炎患者における急性肺血栓症に注目した（２７、３１、３２）。より最近、Ｐａｎｉｇａｄａ ｅｔ ａｌ．は、Ｄ－ダイマーレベル上昇に加えて、因子ＶＩＩＩおよびフォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）のレベルの著しい増加があったことを示した（３３）。ＶＷＦレベルにおいて５００％を超える増加および因子ＶＩＩＩレベルにおいて３５０％を超える増加が、ＣＯＶＩＤ－１９に関してＥｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（３４）により報告された。更に、血小板減少症患者では、重症疾患リスクが５倍を超えて増加し、最低の血小板数患者は、最も高い死亡率と関連することが実証された（３３、３５、３６）。したがって、凝固性亢進および血小板減少症の両方とも、重症疾患および死亡率の前兆であると思われる。

フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）は、止血ならびに傷害および活性化された血管への血小板接着による血栓形成において重要な役割を果たす多量体血漿糖タンパク質である。ＶＷＦは、巨核球および内皮細胞（ＥＣ）においてのみ合成され、興味深いことには、ＳＡＲＳ－ＣｏＶがこれらの細胞型の両方に直接影響を与えることができる（２２、３６）。

血漿中に見られる圧倒的多数のＶＷＦは、ＥＣ内で合成されたＶＷＦから誘導され、バイベルパラーデ小体（ＷＰＢ）内に貯蔵される。ＥＣに制限されるが、体の異なる血管床内のＶＷＦ合成における違いがあり、肺および脳の小血管は、肝臓または腎臓の同様の大きさの血管より高いレベルのＶＷＦおよび動脈内ＥＣよりもむしろ静脈内でより高いレベルを発現する（３７）。内皮細胞のＷＰＢに貯蔵されているＶＷＦの大部分は、超高分子量ＶＷＦ（ＵＬＶＷＦ）からなる。これらの超高分子量ＶＷＦ多量体は、循環中のより低分子ＶＷＦ多量体より接着性である（３８）。分泌にともなって、ＵＬＶＷＦは、血小板と自然に結合することができる。インターロイキン－１および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－αなどの炎症性サイトカインは、その内容物を放出してＷＰＢのエクソサイトーシスを引き起こすことができる。したがって、ＶＷＦの血漿中レベルを、内皮活性化および血管炎症のマーカーとして使用することができ、ＶＷＦのレベル上昇は、ＡＲＤＳおよび敗血症と関連し、死亡率と独立して相関することが分かった（３９、４０）。

ＥＣからの分泌で循環に部分的に入り、内皮と部分的に結合する分泌されたＶＷＦは、シェアストレスに対して感受性である。このシェアストレスは、ＶＷＦをアンフォールドし、血小板結合、自己会合ならびに酵素ＡＤＡＭＴＳ１３による切断のための部位を曝露する。これらのＶＷＦ分子は、動脈および静脈の両方の流れ方向に血小板と結合する長い「ストリング」に自己会合することができ、内皮に対して接着性であることが以前に分かっている（４１～４３）。プロテアーゼ、ＡＤＡＭＴＳ１３は、ＶＷＦおよびＵＬＶＷＦを切断し、これらの血小板－ＶＷＦストリング上でのその灌流は、これらを循環から迅速に除去した（４１）。ＷＰＢから放出されたＵＬＶＷＦ多量体は、アンフォールディングに対するより低いシェアストレスを有し、したがって、血小板を捕捉する非常に接着性の高いストリングをもたらすこの自己アセンブリ過程のための開始分子であり得る。血小板とＶＷＦとの結合は、ＧＰ Ｉｂ受容体により起こる。この受容体に対する結合部位は、ＶＷＦがその球形の形態である場合に通常曝露されず、したがって、血小板と結合することができない。一旦ＶＷＦが広がると、シェアストレスに続き、結合部位は曝露され、血小板と高親和性で結合する。血小板とＶＷＦとの結合は、インテグリンＧＰＩＩｂＩＩＩａ（α２ｂβ３としても知られている）の活性化をもたらすコンフォメーション変化を引き起こし、血小板－ＶＷＦ結合だけでなく血小板－血小板結合も促進する可能性がある。この理由のため、標準的抗血小板薬の使用は、Ｔｒｅｍｂｌａｙ ｅｔ ａｌ．（４４）のコホート試験により示唆されたように、効果がない（アスピリンまたはＰ２Ｙ１２阻害剤）かまたはこの病理過程の緩和において部分的にしか効果がない可能性が高い。

微小血管系におけるＶＷＦ－血小板に富む血栓を形成するこの能力は、ＡＤＡＭＴＳ１３に対する自己抗体が存在する後天的血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）の顕著な特徴である。インターロイキン－６（ＩＬ－６）は、ＵＬＶＷＦ－血小板ストリングの切断を阻害することができることも分かった（４５）。更に、少なくとも培養細胞においてＡＤＡＭＴＳ１３の合成は、ＩＬ－６およびＴＮＦ－αを含む様々なサイトカインにより劇的に阻害される（４６）。これは、サイトカインストーム、および特にＩＬ－６は、微小血栓症を伝播する可能性があることを示唆している。しかしながら、これは、介在が早期に行われ、サイトカインの放出においてスパイクがない場合、疾病は、より管理可能であり、患者の臨床状態における迅速な悪化を避けることができることも示唆している。

現在、ＣＯＶＩＤ－１９におけるＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比ならびに高分子量ＶＷＦ多量体（ＵＬＶＷＦと当量）のレベルの非常に著しいアンバランスが存在することを示唆していることの一連の重要な証拠がある。先述されているように、非常に高レベルのＶＷＦは、Ｅｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（３４）の報告であるＶＷＦレベルのこの急増を言及する最も初期の症例報告とともに以前に示された。その後、Ｇｏｓｈｕａ ｅｔ ａｌ．（４７）は、疾病重症度に関連する増加されたレベルを有するＣＯＶＩＤ－１９と認められた患者における血漿中ＶＷＦ濃度の報告された著しい上昇－集中治療室（ＩＣＵ）で治療を受けなかった患者と比較してＩＣＵに入院した患者について５６５±１９９％対２７８±１３３％の平均ＶＷＦ抗原レベル（ｐ＜０．０００１）を実証した。次に、Ｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（４８）は、これらの入院ＶＷＦと関連付けながらＣＯＶＩＤ－１９患者の進行に目を向けた。最も高いＶＷＦレベルを有する患者は、より高度な酸素補助を必要とする一方、正常なＶＷＦレベルを有した患者は、入院も補助的酸素も必要としなかった（ｎ＝１０）。

Ｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．の発表直後に、Ｌａｄｉｋｏｕ ｅｔ ａｌ．（４９）は、患者のＶＷＦレベルおよび年齢において見られる正相関があるＩＣＵに入院したＣＯＶＩＤ－１９患者のＶＷＦ抗原レベル増加を示した。彼らは、３５０％のＶＷＦ抗原レベルのメジアンを報告したが、しかしながら、重要なことに、彼らは、著しく低下されたＡＤＡＭＴＳ１３レベル（４９．７％）も示したが、高分子量ＶＷＦ多量体を普通に分解し、その活性を低下させるＶＷＦ切断プロテアーゼの損失を示唆している。彼らは、ＣＯＶＩＤ－１９患者において見られるＶＷＦの過剰な放出がＡＤＡＭＴＳ１３の枯渇をもたらし、血栓好発状態の一因となることを推測した。更に、これらのデータの解析は、ＶＷＦレベルのメジアンは、生き残った患者（３３５％）と比較して死亡した患者（４７７％）において有意に高かった（ｐ＝０．０１５）を示した。

Ｈｅｌｍｓ ｅｔ ａｌ．（５０）は、ＣＯＶＩＤ－１９患者の血栓症リスクを評価した仏国における多施設前向きコホート研究を最近発表し、これは、ＶＷＦおよび因子ＶＩＩＩがかなり増加したことを示した。ＶＷＦの増加およびＡＤＡＭＴＳ１３の減少を示すこのデータと併せて、ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比が大幅に狂っていることを示す更なる研究がある。Ｈｕｉｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（５１）は、ＩＣＵに入院した１２名の患者から平均ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比が８．５（正常０．５～２）であったことを初めて示した。その後、Ｍａｎｃｉｎｉ ｅｔ ａｌ（５２）は、低強度ケアを要する患者、３．４２と比較して、高強度ケア（挿管および機械換気）を要した患者において見られる最も悪い比、８．３を有する疾病重症度と強く関連したＡＤＡＭＴＳ１３活性に対するフォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）の比が上昇した同様な知見を実証した（ｐ＜０．００１）。

ごく最近、Ｐｈｉｌｉｐｐｅ ｅｔ ａｌ．（５３）は、その２３名が症状が軽く、外来患者として治療されたパリの２施設に入院された２０８名の患者のコホートからの彼らの結果を発表した。彼らは、ＶＷＦ：Ａｇが臨床重症度に応じてのみ増減され、レベルが、非重症患者（２８８％、２３０～３５０、ｐ＜０．０００１）またはＣＯＶＩＤ－１９外来患者（１４４％、１３３～１９８、ｐ＝０．００７）と比較して、重症患者（メジアン５０７％、ＩＱＲ４２８～５９６）において有意に高いことを見出した。単変量解析モデルでは、入院における４２３％を超えるＶＷＦ：Ａｇレベルは、より高い入院死亡率（ＯＲ ８９．７ ９５％ ＣＩ ２５．９～５６７．４、ｐ＜０．００１）と有意に関連付けられ、これは、年齢、ＢＭＩ、Ｄ－ダイマーおよびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に対して調整された多変量解析モデルにおいて非常に有意なままであった（オッズ比、ＯＲ ２５．６、９５％ ＣＩ ５．６～１９８．２、ｐ＜０．００１）。さらに重要なことには、彼らは、ＶＷＦ高分子量多量体（ＨＭＷＭ）は、非重症患者（０．９６、１．０４～１．３９、ｐ＜０．００１）と比較して、重症患者（比のメジアン１．１８、ＩＱＲ０．８６～１．０９）において有意に高かったことを示した。更に、ＨＭＷＭレベル（比）（ＯＲ １１６、９５％ ＣＩ １０．２～１９４３、ｐ＜０．００１）は、入院死亡率と最も有意に関連付けられるものの１つであった。

血管内皮炎および内皮傷害により引き起こされる統合理論を展開することは可能であり、これは、微小血栓形成をもたらすＶＷＦおよびＵＬＶＷＦの放出を引き起こす。次いで、これは、低酸素症をもたらし、「サイトカインストーム」およびＩＬ－６の放出により過程を強めることができ、これは、ＡＤＡＭＴＳ１３の機能を阻害および低下させ、散在性微小血栓症ならびに多臓器機能不全および多臓器不全が続いて起こる。この肺のレベルにおける微小血管血栓症は、右心室機能不全の原因であることも示唆された（５４）。この機序は、高Ｄ－ダイマーレベル（微小血栓症の大量レベルが理由で高レベル）、因子ＶＩＩＩおよびＶＷＦの高レベル（内皮傷害に応じてＷＰＢから放出）および所見される異型ＡＲＤＳ像（５５）、ならびに微小血栓症および肺症状、神経症状および胃腸症状の広がった臨床像を含み現在観察される所見の多くの主要因であり得る。本発明者らが示唆する内皮傷害および微小血栓症は、何故既存の血管内皮炎および微小動脈障害（例えば、糖尿病、高血圧、または肥満に続き）患者に重症ＣＯＶＩＤ－１９のリスクが増大するのかも説明するかも知れない（２９、５６）。同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染後転帰不良およびその可変な症状に罹り易くさせる様々な疾病と共に低レベルのＡＤＡＭＴＳ１３および高レベルのＶＷＦを有する患者とのつながりを示す証拠が急速に相次いでいる（５７～６４）。標準的抗血小板薬治療（アスピリンまたはＰ２Ｙ１２阻害剤）の使用も、ＶＷＦと血小板との相互作用がＧＰ２ｂ３ａ受容体を活性化すると仮定すると効果的である可能性が高い。カプラシズマブまたはアンフィバチドのいずれかを用いて、ＧＰ１ｂ受容体によるＶＷＦ－血小板結合の阻害は、魅力的な選択肢であり、提案された（６５）が、これらの薬物は、広範に使用されておらず、これらを用いた臨床経験は極めて限定的である。同様に、これらは、重大な出血プロファイルを有する。

したがって、血管内皮炎それ自体の治療の必要性がある。

ヘパリンは、広範囲の分子量の多糖鎖を特徴とする天然の高度に硫酸化された多糖である。ヘパリンは、多様な作用で様々な異なるリガンドに作用する。ヘパリンは、グリコサミノグリカン炭水化物ファミリーのメンバーであり、多分散硫酸化、Ｎ－アセチル化およびウロノシルエピ化を有するＧｌｃＡβ１－４ＧｌｃＮＡｃα１－４の反復二糖単位からなる。ヘパリンは、非常に不均一である。天然源から単離されるヘパリンは、約３０００Ｄａ～約３０，０００Ｄａの範囲の分子量を有する多糖鎖を含む。これは、未分画ヘパリン（ＵＦＨ）として公知である。ＵＦＨを、酵素的または化学的に処理してより短い多糖鎖を供給することができる。酵素的または化学的に処理されたＵＦＨの生成物を親和性精製して、分画ヘパリンを得ることができ、各画分中の多糖の分子量を容易に決定することができる。低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）は、約４０００Ｄａ～約８０００Ｄａの範囲の多糖鎖を含む。

１９９１年、開心手術中の患者へのヘパリンの静脈内投与は、血漿中ＶＷＦレベルの変化なく、ＶＷＦ依存性血小板機能障害を誘導することが最初に実証された（６６）。このＶＷＦ依存性血小板凝固に対するヘパリンの阻害効果は、アンチトロンビンＩＩＩに対するヘパリンの親和性に依存しなかったが、ヘパリンの分離得ように依存した。最近のｉｎ ｖｉｔｒｏ実験から、ヘパリンは、ＶＷＦのＡ１ドメイン内の特定のアミノ酸配列（残基５６９～５８３）と結合し、前記配列中、塩基性アミノ酸が規則的に配列されていることが分かった。ヘパリン結合は、この結合部位のペプチドのコンフォメーション変化を誘導した（６７）。ヘパリンは、活性化されたＶＷＦおよび不活性化されたＶＷＦの両方と同様に結合したが、コラーゲンとのＶＷＦ結合を干渉しなかった。血小板ＧｐＩｂ結合ドメイン（残基５２４～５４２）もＡ１ドメインに配置されているので、ヘパリンは、立体障害および血小板結合の阻害をもたらすドメインのコンフォメーション変化の誘導の両方により血小板ＧｐＩｂとのＶＷＦ結合を干渉しないことが示唆された。

ＶＷＦとの結合に寄与するヘパリンの構造的特異性は、主要な二糖単位－ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２ＳおよびＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓの周りを回転する。更に、二糖の３より多い単位のアセンブリは、結合能に重要であることが実証された。同様に、低分子量（６１００Ｄａ（ｇ／モル））の分画ヘパリンは、ＶＷＦとの結合に対してより高い親和性を示したが、これらは、ＵＦＨと比較してＶＷＦ活性をあまり阻害することができなかった。これは、最小のヘパリン分子量および分子サイズは、立体障害を得るために重要であることを示唆している。

これらの中間分子量ヘパリンは、ＶＷＦ－ＧＰＩｂ結合の阻害に対して特異性を有し、したがって、微小血栓症を止める可能性があるが、これらはアンチトロンビンＩＩＩに対する効果をほとんど有しないので、これらは抗凝固効果をほとんど有しない。したがって、約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）の質量を有する中間分子量ヘパリンは、増加されたＶＷＦレベルおよび血管内皮炎に依存する血栓促進状態を有する患者の治療を考慮する場合の理想的な治療選択肢である。更に、これらの先行研究の結果は、低分子量ヘパリンは、うまく働かない可能性が高く、ＧＰＩｂ受容体を標的としないが、ＵＦＨがＶＷＦと結合することができる糖部分を含み得る間、ＵＦＨは最適ではないことを示唆している。更に、ＵＦＨのモニタリングは難しく、他の画分のＵＦＨ、例えば、ＬＭＷＨ画分は、予測できない危険な出血性イベントをもたらし得る抗凝固効果を有する。

更に興味深いことは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ヘパリン硫酸と結合し、特に、ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ糖部分を必要とすることが最近分かったという事実である（７４、７５）。これは、これらの糖部分の外生的供給は、肺において内生のヘパリン硫酸との結合を阻害し、したがって、予防的治療として作用する可能性があることを示唆している。総合すれば、ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓ二糖の少なくとも３単位を有する特化された中間分子量ヘパリン（約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）は、ウイルス付着および複製を阻害するが、ウイルスが原因の血管内皮炎に続発するＶＷＦの放出により引き起こされる微小血栓症も阻害する可能性がある。

本明細書に記載されているように、血管内皮炎は、いくつかの疾病と関連し得る。本発明者は、中間分子量ヘパリンを使用して血管内皮炎、特に、高い血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有する患者における血管内皮炎を治療することができることを見出した。

したがって、本発明は、血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリンを提供する。中間分子量ヘパリンは、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）を阻害し得る。中間分子量ヘパリンは、ＶＷＦの多量体、好ましくは超高分子量ＶＷＦを阻害し得る。中間分子量ヘパリンは、血小板とＶＷＦとの結合を阻害し得る。

したがって、第一態様では、本発明は、患者における血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリンを提供する。好ましくは、患者が、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対する血漿中フォンヴィレブランド因子の比を有する場合である。あるいはまたは加えて、患者は、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対するフォンヴィレブランド因子抗原の比を有し得る。

中間分子量ヘパリンは、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）を阻害し得る。中間分子量ヘパリンは、ＶＷＦの多量体、好ましくは超高分子量ＶＷＦを阻害し得る。中間分子量ヘパリンは、血小板とＶＷＦとの結合を阻害し得る。

患者は、少なくとも約２の、少なくとも約４の、少なくとも約８の、または少なくとも約１０のＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有し得る。患者は、約２を超える、約４を超える、または約８を超える、または約１０を超えるＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有し得る。患者は、約２～１６、約４～１２、または好ましくは約６～１０のＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有し得る。約８を超えるＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有する患者は、重症の病気を通常示し、死に向かって悪化している患者を示すことが多い。

患者は、少なくとも約２の、少なくとも約４の、少なくとも約８の、または少なくとも約１０のＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有し得る。患者は、約２を超える、約４を超える、または約８を超える、または約１０を超えるＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有し得る。患者は、約２～１６、約４～１２、または好ましくは約６～１０のＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有し得る。約８を超えるＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有する患者は、重症の病気を通常示し、死に向かって悪化している患者を示すことが多い。

患者におけるＶＷＦおよびＡＤＡＭＴＳ１３のレベルを、ＥＬＩＳＡを用いて測定することができる。Ｈｕｉｓｍａｎ ｅｔ ａｌにより記載されているように、この比を算出することができる（５１）。簡潔に言えば、ＶＷＦ抗原レベルを、国際単位で決定することができ、ＡＤＡＭＴＳ１３レベルを国際単位で決定することができ、そして、ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を決定することができる。

血漿中ＶＷＦの正常レベルは、約５０ＩＵ／ｄＬ～約２００ＩＵ／ｄＬの範囲である。一般集団では、血漿中ＶＷＦの平均レベルは、約１００ＩＵ／ｄＬである。血漿中ＶＷＦの高レベルは、約２００ＩＵ／ｄＬ以上、例えば、約２００ＩＵ／ｄＬ～約４００ＩＵ／ｄＬ、約２２５ＩＵ／ｄＬ～約３７５ＩＵ／ｄＬ、約２５０ＩＵ／ｄＬ～約３５０ＩＵ／ｄＬ、約２７５ＩＵ／ｄＬ～約３００ＩＵ／ｄＬである。

患者は、約１５０％以上、約１７５％以上、約２００％以上、約３００％以上、約３５０％以上、または約４００％以上、または約５００％以上の上昇されたＶＷＦ抗原レベルを有し得る。患者は、約６００％以下、約７００％以下、約８００％以下、または約１０００％以下のＶＷＦ抗原レベルを有し得る。

なお、血漿中ＶＷＦレベルは、感染症、炎症、心的外傷により、ならびに身体的および感情的ストレスで一次的に上昇し得る。したがって、患者は、一次的でなく、例えば、少なくとも約６時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１８時間または少なくとも約２４時間、上昇された血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。好ましくは、患者は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、または少なくとも約７日間上昇された血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。更により好ましくは、患者は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間または少なくとも４週間上昇された血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。なお更により好ましくは、患者は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間または少なくとも１年間上昇された血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。患者は、約１週間まで、約４週間まで、約２ヶ月間まで、約４ヶ月間まで、約６ヶ月間まで、または約１年間まで上昇された血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。

中間分子量ヘパリンは、約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）の質量を有してよい。中間分子量ヘパリンは、ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓ（またはＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ）二糖の少なくとも３単位を含んでよい。

血管内皮炎は、ＣＯＶＩＤ－１９、ウイルス感染症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、がん、細菌感染症、敗血症、心血管疾患、糖尿病、心的外傷、特に、脳外傷もしくは頭部外傷 、やけど、吸入損傷、薬物反応、血液学的病態、くも膜下出血、大動脈瘤疾患、脳卒中、または脳実質性出血が原因であり得る。血管内皮炎は、ウイルス感染症が原因であり得、前記ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。血管内皮炎は、がん、特に、白血病、リンパ腫、骨髄腫、または結腸がん、乳がん、脳がん、肺がん、膵がん、精巣がん、前立腺がん、子宮頸がん、肝がん、もしくは皮膚がんなどの固形臓器がんが原因であり得る。

中間分子量ヘパリンによる血管内皮炎の治療は、がんの血行性伝播を阻害し得る。ヒト腫瘍細胞は、メラノーマおよび結腸がん細胞の両方を含む高せん断流動状態下ＶＷＦと結合することができ、この能力を示す。ＶＷＦと結合された固定化された血小板は、流れシェアストレス下異なるがん性細胞株の連結、ローリング、および強力接着を媒介することが分かった。ＶＷＦは、固定化された血小板への腫瘍細胞のこの強力接着を可能とする重要な役割を果たした。現在のデータは、ＶＷＦががん性細胞の連結に重要な役割を果たすことを示唆している。加えて、正常な血栓症経路の一部として起こるＶＷＦ－血小板結合は、ＶＷＦ－血小板へ腫瘍細胞が合体してＶＷＦ＋血小板＋がん細胞のヘテロ凝集物を生成することを可能とし、これにより、腫瘍細胞の血液由来の（血行性）伝播の助けとなるように更に振る舞う可能性がある。この過程は、がん細胞の血管壁への移動する能力により少なくとも部分的に引き起され、これにより、一旦ＶＷＦおよび血小板への最初の結合が起こると、他の臓器に伝播し得る。加えて、様々ながんは、得られたＵＬ－ＶＷＦの遊離により血管内皮炎を引き起こすことが分かっている。この機序により、腫瘍は、次いで、血小板と腫瘍細胞の連結ならびにがんの血行性伝播および転移性伝播を可能とするＵＬ－ＶＷＦの遊離を引き起こす。このがん誘発血管内皮炎は、更に、原因となっている悪性腫瘍を有する患者における血栓症リスクの全体的な増大をもたらす。したがって、血管内皮炎の治療を目的としたいずれもの処置ならびに血小板および／または腫瘍細胞とＶＷＦとの結合の阻害は、悪性腫瘍関連血栓症リスクの低下および更に、血行性転移性伝播のリスクの低下の二重の目的を果たすだろう。

中間分子量ヘパリンを、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内、皮内、動脈内、関節内、皮膚、経皮、皮下、デポ形態、例えば、デポ注射、骨内、および吸入からなる群から選択される投与方法により投与してよい。好ましくは、中間分子量ヘパリン投与方法は、皮下、静脈内または筋肉内である。投与方法は、吸入、任意的にネブライザーによる吸入であってよい。

中間分子量ヘパリンを、約０．０１ｍｇ／ｋｇから、約０．１ｍｇ／ｋｇから、約１ｍｇ／ｋｇから、約５ｍｇ／ｋｇから、約１０ｍｇ／ｋｇから、約２０ｍｇ／ｋｇから、約３０ｍｇ／ｋｇから、約５０ｍｇ／ｋｇから、約７０ｍｇ／ｋｇから、約８０ｍｇ／ｋｇから、または約１００ｍｇ／ｋｇからの用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、約５００ｍｇ／ｋｇ以下、約３００ｍｇ／ｋｇ以下、約２００ｍｇ／ｋｇ以下、または約１００ｍｇ／ｋｇ以下の用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ～約１．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、単回投与または継続投与として投与してよい。中間分子量ヘパリン投与量は、ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比または全体的ＶＷＦレベルに依存し得る。当業者は、ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比または全体的ＶＷＦレベルに基づいて患者のための適切な量を選択することができるだろう。

中間分子量ヘパリンは、医薬製剤中に含まれていてもよい。医薬製剤は、賦形剤を含んでよい。賦形剤は、溶媒、共溶媒、緩衝剤、安定化剤、酸化防止剤、防腐剤、キレート剤、乳化剤、香料、潤滑剤、懸濁剤、等張化剤、界面活性剤、可溶化剤、分散助剤、分散剤、保湿剤、増粘剤、着色料、湿潤剤、消泡剤、粘度調整剤、甘味料およびこれらの組合せを含む群から選択され得る。医薬製剤は、追加の活性剤を含んでよい。追加の活性剤は、低分子量ヘパリンを含んでよい。

中間分子量ヘパリンは、化学修飾を含んでよい。化学修飾は、Ｎ－アセチル化、脱Ｎ－アセチル化、Ｎ－硫酸化、Ｏ－硫酸化、脱２－Ｏ硫酸化、完全脱硫酸化を含む群から選択され得る。

第二態様では、本発明は、患者における疾病または病態の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対する血漿中フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３）の比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるＣＯＶＩＤ－１９の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるウイルス感染症の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であってよい。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんの治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫、または結腸がん、乳がん、脳がん、肺がん、膵がん、精巣がん、前立腺がん、子宮頸がん、肝がん、もしくは皮膚がんなどの固形臓器がんであってよい。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における細菌感染症の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における敗血症の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における心血管疾患の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における糖尿病の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における心的外傷の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるやけどの治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における吸入損傷の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における薬物反応の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における血液学的病態の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるくも膜下出血の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における大動脈瘤疾患の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

第三態様では、本発明は、患者における疾病または病態の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対する血漿中フォンヴィレブランド因子抗原（ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３）の比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるＣＯＶＩＤ－１９の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるウイルス感染症の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であってよい。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんの治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫、または結腸がん、乳がん、脳がん、肺がん、膵がん、精巣がん、前立腺がん、子宮頸がん、肝がん、もしくは皮膚がんなどの固形臓器がんであり得る。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における細菌感染症の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における敗血症の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における心血管疾患の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における糖尿病の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における心的外傷の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるやけどの治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における吸入損傷の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における薬物反応の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における血液学的病態の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるくも膜下出血の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者における大動脈瘤疾患の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリンを提供する。

疑いを避けるために、本発明の第一態様の中間分子量ヘパリンに関する本明細書に記載されている実施形態は、必要な変更を加えて、本発明の第二および第三態様の中間分子量ヘパリンにも適用する。

本発明の第一態様で定義されている血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリンは、前記ヘパリンがいずれかの疾病または病態が原因の血管内皮炎に続発するＶＷＦの放出により引き起こされる微小血栓症を阻害することができるので、特に有利である。血管内皮炎の原因がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である場合、加えて、前記ヘパリンは、ウイルス付着および複製を阻害することができる。

第四態様では、本発明は、特に本発明の第一または第二または第三態様に記載の血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリンを含むキットを提供する。

第五態様では、本発明は、血管内皮炎の治療方法であって、前記方法は、中間分子量ヘパリンの治療有効量を、治療を必要としている対象に投与することを含み、前記患者は、少なくとも約２の血漿中ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有する、方法を提供する。

第六態様では、本発明は、血管内皮炎の治療のための医薬品製造のための第一または第二または第三態様で定義されている中間分子量ヘパリンの使用を提供する。

疑いを避けるために、本発明の第一態様の中間分子量ヘパリンに関する本明細書に記載されている実施形態は、必要な変更を加えて、第二～第六態様にも適用する。

ここで、本発明を、非限定的であることを意図している以下の図を参照して説明する。
図１は、因子ＩＩａに対する低分子量（ＬＭＷ）ヘパリン、未分画（ＵＦ）ヘパリンおよび中間分子量（ＭＭＷ）ヘパリンの活性のグラフを示す。 図２は、因子Ｘに対するＬＭＷヘパリン、ＵＦヘパリンおよびＭＭＷヘパリンの活性のグラフを示す。 図３は、媒体コントロールに対する、ＭＭＷヘパリンの５μＭ、１０μＭおよび１５μＭ用量を用いたＶＷＦ誘導血小板凝集の阻害の透過光血小板凝集検査法（ＬＴＡ）トレースを示す。 図４は、ＭＭＷヘパリンの１５μＭ用量を用いたＶＷＦ誘導血小板凝集の阻害の透過光血小板凝集検査法（ＬＴＡ）トレースを示す。 図５Ａおよび図５Ｂは、ＶＷＦ依存性血小板凝固に対するＭＭＷＨおよびＬＭＷＨの効果を示す。 図６は、５μＭ、１０μＭおよび２０μＭのＭＭＷＨを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図７は、５μＭおよび１０μＭのＭＭＷＨを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図８は、１０μＭのＭＭＷＨおよび抗ＶＷＦ ｍＡｂを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図９は、５μＭおよび２０μＭのＭＭＷＨおよび抗ＶＷＦ ｍＡｂを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図１０は、１０μＭのＬＭＷＨおよび抗ＶＷＦ ｍＡｂを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図１１は、２０μＭのＬＭＷＨを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図１２は、ＶＷＦ誘導血小板凝固のＭＭＷＨ、ＬＭＷＨおよびｍＡｂ阻害の統計解析（曲線下面積および傾き）を示す。 図１３は、非リストセチンアゴニスト：Ａ．アゴニストとしてＡＤＰ；Ｂ：アゴニストとしてコラーゲン；Ｃ．アゴニストとしてＴＲＡＰ６と共に５μＭ、１０μＭおよび２０μＭのＭＭＷＨを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図１３は、非リストセチンアゴニスト：Ａ．アゴニストとしてＡＤＰ；Ｂ：アゴニストとしてコラーゲン；Ｃ．アゴニストとしてＴＲＡＰ６と共に５μＭ、１０μＭおよび２０μＭのＭＭＷＨを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図１３は、非リストセチンアゴニスト：Ａ．アゴニストとしてＡＤＰ；Ｂ：アゴニストとしてコラーゲン；Ｃ．アゴニストとしてＴＲＡＰ６と共に５μＭ、１０μＭおよび２０μＭのＭＭＷＨを用いたＶＷＦ誘導血小板凝固の阻害のＬＴＡトレースを示す。 図１４は、アゴニスト：Ａ．ＡＤＰ；Ｂ．コラーゲン；Ｃ．ＴＲＡＰ－６の存在下、ＶＷＦ誘導血小板凝集のＭＭＷＨ（０μＭ、５μＭ、１０μＭおよび２０μＭ）阻害のグラフを示す。

本明細書を通して、本発明の１つ以上の態様を、本発明の別の実施形態を定義するために、本明細書に記載されている１つ以上の特徴と組み合わせてよい。

続く議論では、いくつかの用語を参照し、文脈上反対のことが明示的に示されない限り、下記に示されている意味を有すると理解されるべきである。

本明細書において名詞の単数形への言及は、文脈上他の意味が示されない限り、複数の名詞を包含し、その逆もまた同様である。

本明細書を通して、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、または「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」もしくは「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」などの変化形は、指定された要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群の包含を暗示するが、他の要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群の除外を暗示しないと理解される。用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は、その範囲内に、用語「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ」または「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」を含む。

用語「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ」、またはその変化形は、指定された要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群の包含、ならびに他の要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群の除外を暗示すると理解されるべきである。

用語「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」またはその変化形は、指定された要素、整数もしくは工程、または要素、整数もしくは工程の群の包含を暗示し、更なる構成要素が存在してもよいが、処方物、組成物、または化合物の必須特性に実質的に影響しないもののみであると理解されるべきである。

本明細書において用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、数または値を特定する場合、特定された値の±５％以内である値を表すために使用される。

用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」および「療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、障害もしくは病態の進行速度を低下もしくは止めるため、または障害もしくは病態を寛解もしくは治癒するために、患者の治療的処置を定義する。治療または療法の結果としての障害または病態の予防も含まれる。

本明細書で使用されるとき、用語「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」は、好ましくは哺乳類を表す。通常、哺乳類は、ヒトである。

フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）は、止血に関与する血中糖タンパク質である。ＶＷＦは、血漿中に存在する高分子量多量体糖タンパク質であり、内皮（バイベルパラーデ小体）、巨核球（血小板のα－顆粒）、および内皮下結合組織中の超高分子量ＶＷＦとして構成的に産生される。塩基性ＶＷＦモノマーは、２０５０アミノ酸タンパク質である。

二糖は、その分子が２つの単糖残基を含む糖である。

低分子量ヘパリンは、本明細書において、約４０００Ｄａ（ｇ／モル）～約８０００Ｄａ（ｇ／モル）の平均分子量を有するヘパリンと定義される。中間分子量ヘパリンは、本明細書において、約８０００Ｄａ（ｇ／モル）を超えて約１３０００Ｄａ（ｇ／モル）までの平均分子量を有するヘパリンと定義される。

血管内皮炎は、いずれかの疾病が原因であり得る。詳細には、血管内皮炎は、ＣＯＶＩＤ－１９、ウイルス感染症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、がん、細菌感染症、敗血症、心血管疾患、糖尿病、心的外傷、特に、頭部外傷、やけど、吸入損傷、薬物反応、血液学的病態、くも膜下出血、大動脈瘤疾患、脳卒中、または脳実質性出血が原因であり得る。

感染症は、細菌性、真菌性、または寄生性であり得る。感染症は、細菌性であり得る。細菌感染症は、アクチノミセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｉｉ）、バチルス・アンシラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バクテロイデス・フラギリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ボルデテラ・パータシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｆｅｒｉ）、ボレリア・ガリニイ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｇａｒｉｎｉｉ）、ボレリア・アフゼリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ａｆｚｅｌａｉｉ）、ボレリア・レクレンチス（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ）、ブルセラ・アボルツス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ）、ブルセラ・カニス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｃａｎｉｓ）、ブルセラ・メリテンシス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）、ブルセラ・スイス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クラミドフィラ・シタッシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、クリストリジウム・ボツリヌス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、コリネバクテリウム・ジフテリアエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、エンテロコッカス・ファエカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、フランシセラ・ツラレンシス（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、レプトスピラ種（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、マイコバクテリウム・レプラ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・ツベルキュロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ナイセリア・ゴナーレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、シュードモナス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、ノカルジア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、リケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スピロカエテス・スタフィロコッカス（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トレポネマ・パリドゥム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、またはエルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）であり得る。

感染症は、真菌性であり得る。真菌感染症は、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、コクシジオイデス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、クリプトコックス・ガッチイ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ）、ヒストプラスマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、ムコルマイセテス属（ｍｕｃｏｒｍｙｃｅｔｅｓ）、チネア・クルリス（Ｔｉｎｅａ ｃｒｕｒｉｓ）、チネア・コルポリス（Ｔｉｎｅａ ｃｏｒｐｏｒｉｓ）、またはチネア・ペディス（Ｔｉｎｅａ ｐｅｄｉｓ）であり得る。

感染症は、寄生性であり得る。寄生感染症は、原生動物眼感染症、シャーガス病、リーシュマニア症、トキソプラズマ症、ジアルジア症、マラリア、微胞子虫症、またはリノスポリジウム症であり得る。好ましくは、寄生感染症は、マラリアである。

ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、疾病ＣＯＶＩＤ－１９の原因であるウイルスである。ＣＯＶＩＤ－１９は、ＡＲＤＳをもたらし得る。血管内皮炎は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症が原因であり得る。血管内皮炎は、ＣＯＶＩＤ－１９が原因であり得る。血管内皮炎は、ＡＲＤＳが原因であり得る。

血管内皮炎は、がんが原因であり得る。がんは、白血病、リンパ腫または骨髄腫であり得る。あるいは、または加えて、がんは、固形臓器がん、例えば、結腸がん、乳がん、脳がん、肺がん、膵がん、精巣がん、前立腺がん、子宮頸がん、肝がん、または皮膚がんであり得る。

血管内皮炎は、血液学的病態、例えば、血栓性血小板減少性紫斑病、貧血症、または鎌状赤血球症が原因であり得る。

内皮細胞機能障害は、血液中に循環する腫瘍細胞の通路が組織に入ることを可能とする可能性がある。したがって、血管内皮炎の治療は、血液由来のがんの血行性伝播を防止し得る。血管内皮炎の治療は、がんの血行性伝播を阻害し得る。中間分子量ヘパリンは、がんの血行性伝播を阻害し得る。

血管内皮炎のバイオマーカーは、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）レベル上昇、超高分子量フォンヴィレブランド因子（ＵＬＶＷＦ）レベル、因子ＶＩＩＩレベルならびにシンデカン１、ＶＷＦ抗原、ＶＷＦ活性、ＶＷＦ多量体、ＡＤＡＭＴＳ１３レベル、血小板数、ＶＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチンレベル、ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３比またはＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を含み得る。好ましくは、血管内皮炎のバイオマーカーは、ＶＷＦ：ＡＤＡＭＴＳ１３またはＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３の比である。

患者は、健康コントロール対象と比較して、上昇された血漿中フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）レベルを有し得る。患者は、健康コントロールと比較して、血漿中ＶＷＦの持続的高レベルを有し得る。血漿中ＶＷＦレベルは、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、または好ましくは少なくとも約１週間の期間にわたって、健康コントロール対象と比較して、上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルは、約１週間まで、約４週間まで、約２ヶ月間まで、約４ヶ月間まで、約６ヶ月間まで、または約１年間までの期間健康コントロール対象と比較して、上昇する可能性がある。

例えば、血漿中ＶＷＦレベルは、少なくとも約５０ｎｍｏｌ／Ｌ、好ましくは少なくとも約６０ｎｍｏｌ／Ｌ、更により好ましくは少なくとも約７０ｎｍｏｌ／Ｌ、またはなお更により好ましくは少なくとも約９０ｎｍｏｌ／Ｌ、まで上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルは、約１３０ｎｍｏｌ／Ｌ、約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ、または約２００ｎｍｏｌ／Ｌまで上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルは、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約１週間、少なくとも約１ヶ月間または少なくとも約１年間に少なくとも約５０ｎｍｏｌ／Ｌまで上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルは、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約１週間、少なくとも約１ヶ月間または少なくとも約１年間に少なくとも約６０ｎｍｏｌ／Ｌまで上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルは、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約１週間、少なくとも約１ヶ月間または少なくとも約１年間に少なくとも約７０ｎｍｏｌ／Ｌまで上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルは、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約１週間、少なくとも約１ヶ月間または少なくとも約１年間に少なくとも約９０ｎｍｏｌ／Ｌまで上昇する可能性がある。血漿中ＶＷＦレベルを、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて測定してよい。

あるいはまたは加えて、患者は、少なくとも約６時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１８時間または少なくとも約２４時間に約２００ＩＵ／ｄＬ以上の血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。好ましくは、患者は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、または少なくとも約７日間約２００ＩＵ／ｄＬ以上の血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。更により好ましくは、患者は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間または少なくとも４週間約２００ＩＵ／ｄＬ以上の血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。なお更により好ましくは、患者は、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間または少なくとも１年間約２００ＩＵ／ｄＬ以上の血漿中フォンヴィレブランド因子レベルを有し得る。

血管内皮機能を、冠状動脈および末梢循環において評価することができる。冠状動脈内皮機能の評価のための非侵襲的検査は、薬理的または生理的刺激に対する血流を測定するドップラー心エコー法を含む。他の検査は、陽電子放出断層撮影および位相コントラスト磁気共鳴イメージングを含む。しかしながら、最も基準となる検査は、アセチルコリンなどの内皮依存性血管拡張薬の冠状動脈内注入に対する径の変化を検査する侵襲的な定量的冠動脈造影法を含む。末梢循環中の内皮の評価は、上腕動脈超音波およびひずみゲージ静脈インピーダンスプレチスモグラフィを含む。

中間分子量ヘパリンとＶＷＦとの結合を、競合結合アッセイにより評価してよい。ヘパリン－セファロースビーズを、標識化されたＶＷＦ、例えば、^１２５Ｉ－ｖＷＦと共に、標識化されたＶＷＦが固定化されたヘパリンと結合することを可能とする時間の間、インキュベートしてよい。次いで、様々な濃度の中間分子量ヘパリンを添加し、置換された標識化ＶＷＦの量を決定してよい。ＶＷＦと結合している中間分子量ヘパリンを決定するための他の方法は、表面プラズモン共鳴法、バイオレイヤー干渉法、等温滴定カロリメトリー、蛍光偏光結合アッセイ、ＥＬＩＳＡおよびマイクロスケール熱泳動法を含み得る。

ＶＷＦとの血小板結合の阻害を、固定された血小板のリストセチン誘導凝固により評価してよい。血小板を、中間分子量ヘパリンおよびクエン酸処理血漿（ＶＷＦ源）と共にインキュベートしてよい。次いで、リストセチンを添加し、次いで、血小板凝固を決定してよい。ＭＭＷＨは、リストセチン誘導血小板凝集アッセイにより測定される場合、１５μＭの濃度においてＶＷＦ誘導血小板凝集を完全に阻害し得る。血小板とのＶＷＦ結合の阻害を決定する他の方法は、ＥＬＩＳＡ、蛍光支援細胞選別法、動的光散乱法、またはフローチャンバーアッセイを含み得る。

中間分子量ヘパリンは、約８０００Ｄａ（ｇ／モル）を超えて約１３０００Ｄａ（ｇ／モル）まで、好ましくは約１００００Ｄａ（ｇ／モル）～約１２０００Ｄａ（ｇ／モル）の範囲の質量を有してよい。中間分子量ヘパリンは、約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）の質量を有してよい。中間分子量ヘパリンは、約９０００Ｄａ（ｇ／モル）～約１３０００Ｄａ（ｇ／モル）、好ましくは約１００００Ｄａ（ｇ／モル）～約１２０００Ｄａ（ｇ／モル）の範囲の平均分子質量を有する多糖鎖を含んでよい。中間分子量ヘパリンは、約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）の平均分子質量を有する多糖鎖を含んでよい。中間分子量ヘパリンの分子量を、例えば、質量分析法またはサイズ排除クロマトグラフィーにより決定してよい。

中間分子量ヘパリンを、化学合成してよい。中間分子量ヘパリンを、酵素的に合成してよい。高圧液体クロマトグラフィーを使用して中間分子量ヘパリンを精製してよい。

中間分子量ヘパリンは、ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓ二糖の少なくとも３単位、例えば、少なくとも４単位、少なくとも５単位、少なくとも６単位、少なくとも８単位、または少なくとも１０単位を含んでよい。中間分子量ヘパリンは、ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓ二糖の２５単位以下、例えば、２０単位以下を含んでよい。ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓ二糖の単位の存在を、抗体、質量分析法、または化学および酵素試験からの赤外光により決定してよい。ＧｌｃＮＳ６Ｓ－ＩｄｏＡ２Ｓ単位を、順序正しく配列してよい。

中間分子量ヘパリンは、ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ二糖の少なくとも３単位、例えば、少なくとも４単位、少なくとも５単位、少なくとも６単位、少なくとも８単位、または少なくとも１０単位を含んでよい。中間分子量ヘパリンは、ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ二糖の２５単位以下、例えば、２０単位以下を含んでよい。ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ二糖の単位の存在を、抗体、質量分析法、または化学および酵素試験からの赤外光により決定してよい。ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ単位を、順序正しく配列してよい。ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ単位数を、所望の抗ＶＷＦ活性および／または標準的抗凝固活性を提供するように調整してよい。

中間分子量ヘパリンは、ＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ、ＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ、ＵＡ－ＧｌｃＮＡｃを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、少なくとも約６０％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ、ＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ、およびＵＡ－ＧｌｃＮＡｃを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、少なくとも約４５％、好ましくは少なくとも約４８％、好ましくは少なくとも約４９％、好ましくは少なくとも約６０％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、約６０％以下、好ましくは約７０％以下、好ましくは約８５％以下のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、少なくとも約４％、好ましくは少なくとも約５％、好ましくは少なくとも約６％、好ましくは少なくとも約１０％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、約１５％以下、好ましくは約２０％以下のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、少なくとも約４％、好ましくは少なくとも約５％、好ましくは少なくとも約６％、好ましくは少なくとも約１０％のＵＡ－ＧｌｃＮＡｃを含んでよい。中間分子量ヘパリンは、約１５％以下、好ましくは約２０％以下のＵＡ－ＧｌｃＮＡｃを含んでよい。いくつかの実施形態では、中間分子量ヘパリンは、少なくとも４９．２％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ、５．４％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮおよび５．４％のＵＡ－ＧｌｃＮＡｃを含んでよい。いくつかの実施形態では、中間分子量ヘパリンは、少なくとも８２％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ、９％のＵＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳおよび９％のＵＡ－ＧｌｃＮＡｃを含んでよい。中間分子量ヘパリンを含むＵＡ－ＧｌｃＮＡｃのパーセンテージ組成を、未分画ヘパリンと比較して濃縮されていてもよい。

中間分子量ヘパリンを、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内、皮内、動脈内、または関節内、皮膚、経皮、皮下、デポ形態、例えば、デポ注射、骨内、および吸入から選択される投与方法により投与してよい。投与の好ましい方法は、皮下、静脈内、筋肉内または吸入を含む。

これまでの研究は、様々な条件において噴霧剤としてＵＦＨを調べた。小規模研究は、肺フィブリン沈着を限定し、急性肺傷害の進行を弱め、回復を早めることを示している（６９）。急性肺障害および関連病態を有する患者の早期フェーズ治験により、噴霧されたＵＦＨが、肺死腔、凝固活性化、微小血管血栓症を低減し、肺障害を改善し、換気補助のない時間を増やすことが分かった（７０～７３）。２５６例の人工呼吸器をつけている重症患者のプレパンデミック二重盲検無作為試験では、噴霧されたＵＦＨは、急性呼吸窮迫症候群を含む肺障害の進行を限定し、生存者が家に帰ることを促進した。したがって、中間分子量ヘパリンを、ネブライザーによる吸入により投与してよい。

ヘパリン投与量は、通常、「ハウエル単位」で測定される。ヘパリンの１単位（「ハウエル単位」）は、純粋なヘパリンの０．００２ｍｇとおおよそ等しい量であり、これは、０℃において２４時間１ｍｌのネコの血液を流体に維持するために必要な量である。中間分子量ヘパリンを、注入ポンプにより送達してよい毎時約５０００単位、次いで約１２００～１６００単位のボーラス用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、約１８単位／ｋｇ～約５０００単位／ｋｇの用量で投与してよい。好ましくは、中間分子量ヘパリンを、約１００単位／ｋｇ～約８００単位／ｋｇの用量で投与してよい。あるいは、中間分子量ヘパリンを、約１８単位／ｋｇ～約７５単位／ｋｇの用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、約５０００単位、約４０００単位、約３０００単位、約２０００単位、約１０００単位または１２時間毎に５００単位の用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、１２時間毎に５０００単位の用量で投与してよい。

中間分子量ヘパリンを、約３単位～約５０００単位、例えば、約６単位～約４０００単位、約１２単位～約３０００単位、約２５単位～約２０００単位、約５０単位～約１０００単位、約１００単位～約５００単位、または約１２５単位～約２５０単位の用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、約１８単位／ｋｇ～約５０００単位／ｋｇ、例えば、約１００単位／ｋｇ～約４０００単位／ｋｇ、または約２００単位／ｋｇ～約８００単位／ｋｇの用量で投与してよい。中間分子量ヘパリンを、約１８単位／ｋｇ～約７５単位／ｋｇの用量で投与してよい。前記用量を、単回投与または継続投与として与えてよい。前記用量を、期間にわたって与えてよい。前記期間は、約１ヶ月～約１２ヶ月、例えば、約２ヶ月～約１１ヶ月、約３ヶ月～約１０ヶ月、約４ヶ月～約９ヶ月、約５ヶ月～約８ヶ月、約６ヶ月～約７ヶ月であってよい。前記期間は、約１日～７日、約２日～約６日、約３日～約５日、約４日～約５日であってよい。前記用量を、約１時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約３時間～約６時間にわたって投与してよい。前記用量を、原因となっている血管内皮炎およびＶＷＦレベルの上昇の期間投与してよい。

中間分子量ヘパリンを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約９ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約７ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ～約６ｍｇ／ｋｇ、または約２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの用量で投与してよい。前記用量を、単回投与または継続投与として与えてよい。前記用量を、期間にわたって与えてよい。前記期間は、約１ヶ月～約１２ヶ月、例えば、約２ヶ月～約１１ヶ月、約３ヶ月～約１０ヶ月、約４ヶ月～約９ヶ月、約５ヶ月～約８ヶ月、約６ヶ月～約７ヶ月であってよい。前記期間は、約１日～約７日、約２日～約６日、約３日～約５日、約４日～約５日であってよい。前記用量を、約１時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約３時間～約６時間にわたって投与してよい。前記用量を、原因となっている血管内皮炎およびＶＷＦレベルの上昇の期間投与してよい。

中間分子量ヘパリンを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与してよい。前記用量を、単回投与または継続投与として与えてよい。前記用量を、期間にわたって与えてよい。前記期間は、約１ヶ月～約１２ヶ月、例えば、約２ヶ月～約１１ヶ月、約３ヶ月～約１０ヶ月、約４ヶ月～約９ヶ月、約５ヶ月～約８ヶ月、約６ヶ月～約７ヶ月であってよい。前記期間は、約１日～約７日、約２日～約６日、約３日～約５日、約４日～約５日であってよい。前記用量を、約１時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約３時間～約６時間にわたって投与してよい。前記用量を、原因となっている血管内皮炎およびＶＷＦレベルの上昇の期間投与してよい。

中間分子量ヘパリンを、約０．１ｍｇ～約５０００ｍｇ、約０．５ｍｇ～約２０００ｍｇ、約１ｍｇ～約１０００ｍｇ、約５ｍｇ～約９００ｍｇ、約１０ｍｇ～約８００ｍｇ、約２０ｍｇ～約７００ｍｇ、約３０ｍｇ～約６００ｍｇ、約５０ｍｇ～約５００ｍｇ、約７５ｍｇ～約４００ｍｇ、約１００ｍｇ～約３００ｍｇ、約１２５ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２００ｍｇの用量で投与してよい。前記用量を、単回投与または継続投与として与えてよい。前記用量を、期間にわたって与えてよい。前記期間は、約１ヶ月～約１２ヶ月、例えば、約２ヶ月～約１１ヶ月、約３ヶ月～約１０ヶ月、約４ヶ月～約９ヶ月、約５ヶ月～約８ヶ月、約６ヶ月～約７ヶ月であってよい。前記期間は、約１日～約７日、約２日～約６日、約３日～約５日、約４日～約５日であってよい。前記用量を、約１時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約３時間～約６時間にわたって投与してよい。前記用量を、原因となっている血管内皮炎およびＶＷＦレベルの上昇の期間投与してよい。

中間分子量ヘパリンを、例えば、約１国際単位（ＩＵ）、約２ＩＵ、約５ＩＵ、約１０ＩＵ、約１５ＩＵ、約２０ＩＵ、約２５ＩＵ、約５０ＩＵ、約７５ＩＵ、約１００ＩＵ、約２００ＩＵ、約３００ＩＵ、約４００ＩＵ、約５００ＩＵ、約１０００ＩＵ、約１５００ＩＵ、約２０００ＩＵ、約２５００ＩＵ、約５０００ＩＵ、約１００００ＩＵ、約２００００ＩＵ、または約２５０００ＩＵの用量で投与してよい。前記用量を、単回投与または継続投与として与えてよい。前記用量を、期間にわたって与えてよい。前記期間は、約１ヶ月～約１２ヶ月、例えば、約２ヶ月～約１１ヶ月、約３ヶ月～約１０ヶ月、約４ヶ月～約９ヶ月、約５ヶ月～約８ヶ月、約６ヶ月～約７ヶ月であってよい。前記期間は、約１日～約７日、約２日～約６日、約３日～約５日、約４日～約５日であってよい。前記用量を、約１時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約３時間～約６時間にわたって投与してよい。前記用量を、原因となっている血管内皮炎およびＶＷＦレベルの上昇の期間投与してよい。

中間分子量ヘパリンを、約１ＩＵ～約５００００ＩＵ、約２ＩＵ～約２５０００ＩＵ、約５ＩＵ～約２００００ＩＵ、約１０ＩＵ～約１００００ＩＵ、約１５ＩＵ～約５０００ＩＵ、約２０ＩＵ～約２５００ＩＵ、約２５ＩＵ～約２０００ＩＵ、約５０ＩＵ～約１５００ＩＵ、約７５ＩＵ～約１０００ＩＵ、約１００ＩＵ～約５００ＩＵ、約２００ＩＵ～約４００ＩＵ、約２５０ＩＵ～約３００ＩＵの用量で投与してよい。前記用量を、単回投与または継続投与として与えてよい。前記用量を、期間にわたって与えてよい。前記期間は、約１ヶ月～約１２ヶ月、例えば、約２ヶ月～約１１ヶ月、約３ヶ月～約１０ヶ月、約４ヶ月～約９ヶ月、約５ヶ月～約８ヶ月、約６ヶ月～約７ヶ月であってよい。前記期間は、約１日～約７日、約２日～約６日、約３日～約５日、約４日～約５日であってよい。前記用量を、約１時間～約２４時間、約２時間～約１２時間、約３時間～約６時間にわたって投与してよい。前記用量を、原因となっている血管内皮炎およびＶＷＦレベルの上昇の期間投与してよい。

ＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比に相応する中間分子量ヘパリンを投与してよい。例えば、高いＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有する患者に、より低いＶＷＦ抗原：ＡＤＡＭＴＳ１３比を有する患者と比較して、高用量のＭＭＷＨを投与してよい。

中間分子量ヘパリンは、医薬製剤中に含まれていてもよい。医薬製剤は、対象に投与するために適した物質の組成物を含む。医薬製剤は、液体、固体、コロイド状またはエアロゾル状の形態であってよい。賦形剤は、溶媒、共溶媒、緩衝剤、安定化剤、酸化防止剤、防腐剤、キレート剤、乳化剤、香料、潤滑剤、懸濁剤、等張化剤、界面活性剤、可溶化剤、分散助剤、分散剤、保湿剤、増粘剤、着色料、湿潤剤、消泡剤、粘度調整剤、甘味料およびこれらの組合せからなる群から選択され得る。医薬製剤は、グルコースを含んでよい。医薬製剤は、塩化ナトリウムを含んでよい。医薬製剤は、リン酸緩衝生理食塩水を含んでよい。

医薬製剤は、追加の活性剤を含んでよい。前記追加の活性剤は、生理作用を有する物質の組成物を含む。前記追加の活性剤は、異なる二糖の低分子量ヘパリンまたは中間分子量ヘパリン組成物を含んでよい。前記追加の活性剤は、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）アゴニスト、アラムコール、カスパーゼ阻害剤、ガレクチン３阻害剤、分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ５（ＭＡＰＫ５）阻害剤、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）アゴニスト、ＦＧＦ２１アゴニスト、ロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４）受容体アンタゴニスト、ナイアシン類似体、心尖部ナトリウム胆汁酸共輸送体（ＡＳＢＴ）阻害剤、アポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）阻害剤、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン受容体遮断薬、ケモカイン受容体阻害剤、チオゾリジンジオン、ＧＬＰ－１類似体、ビグアニド、ＨＩＶ複製阻害剤、メトホルミン、アヘン剤、麻酔剤、ＨＭＧ－ＣｏＡ還元酵素阻害剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、またはこれらのいずれかの組合せを含む群から選択され得る。

中間分子量ヘパリンは、化学修飾を含んでよい。前記化学修飾は、中間分子量ヘパリンへのいずれかの化学変化を含む。したがって、前記化学修飾は、Ｎ－アセチル化、脱Ｎ－アセチル化、Ｎ－硫酸化、Ｏ－硫酸化、脱２－Ｏ硫酸化、完全脱硫酸化、またはこれらの組合せを含んでよい。

本発明は、血管内皮炎の治療において使用するための本明細書で定義されている中間分子量ヘパリンを含むキットを提供する。前記キットは、本明細書で定義されている投与量で単位剤形の中間分子量ヘパリンを含んでよい。前記キットは、医薬品包装品を含んでよい。前記キットは、本発明に記載の使用のための中間分子量ヘパリンを合成するための必要な試薬を含んでよい。

本発明は、血管内皮炎の治療方法であって、前記方法は、本明細書で定義されている中間分子量ヘパリンの治療有効量を、治療を必要としている対象に投与することを含む、方法を提供する。治療有効量は、血管内皮炎をある程度まで治療するために必要な中間分子量ヘパリンのいずれかの量である。

本発明は、血管内皮炎の治療のための医薬品製造のための本明細書で定義されている中間分子量ヘパリンの使用を提供する。

いずれもの相互参照または関連特許または出願を含む本明細書で引用されている全ての文書は、明示的に排除さもなければ限定されない限り、その全文を参照することにより本明細書に援用される。

付属の請求の範囲により定義されている本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、示されている実施形態に様々な修正を行ってもよいと理解されるだろう。

ここで、以下の非限定的実施例の参照により本発明を実証する。

別段に言及されない限り、室温および圧は、それぞれ、２０℃（２９３．１５Ｋ、６８°Ｆ）および１ａｔｍ（標準気圧）（１４．６９６ｐｓｉ、１０１．３２５ｋＰａ）である。

二糖分析
ＭＭＷヘパリンに対して二糖分析を行った。結果を下表１に示す。

因子ＩＩａおよび因子Ｘａ活性
因子ＩＩａ（トロンビンとしても公知）は、可溶性フィブロゲンをフィブリンの不溶性鎖に変化し、同様に他の凝固関連反応を触媒するセリンプロテアーゼとして作用する。因子Ｘａは、凝固因子Ｘの活性体である。因子Ｘは、セリンエンドペプチダーゼ酵素であり、凝固系のいくつかの段階において重要な役割を果たす。

ヘパリン（未分画ヘパリン）およびその誘導体、例えば、低分子量ヘパリンは、血漿補因子であるアンチトロンビン（ＡＴ）と結合して、いくつかの凝固因子ＩＩａ、Ｘａ、ＸＩａおよびＸＩＩａを不活性化する。この不活性化はＡＴの存在に依存し、因子Ｘａとの直接的相互作用でないので、このヘパリンによる因子Ｘａの不活性化は、「間接的（ｉｎｄｉｒｅｃｔ）」と呼ばれる。

図１および２に示されているように、ＭＭＷヘパリンは、ＵＦヘパリンおよびＬＭＷ（低分子量）ヘパリンと比較されるとき、それぞれ、因子ＩＩａおよび因子Ｘａに対する非常に低い活性を示す。したがって、ＵＦヘパリンまたはＬＭＷヘパリンと異なり、ＭＭＷヘパリンは、因子ＩＩａ媒介凝固にも因子Ｘａ媒介凝固にも影響を与えない。

リストセチン誘導血小板凝集アッセイにおけるＭＭＷヘパリンの分析
「透過光法による血小板凝集検査の標準化推進：ＳＳＣ／ＩＳＴＨの血小板生理学分科会からの作業部会のコンセンサス」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２０１３，１１：１１８３‐１１８９に従ったプロトコール。

リストセチン希釈標準溶液の調製：
リストセチン保存液（５０ｍｇ／ｍＬ）を、２４ｍｇ／ｍＬまで生理食塩水で希釈した。生理食塩水中の２４ｍｇ／ｍＬリストセチンの溶液４００μＬからの２０μＬは、１．２ｍｇ／ｍＬのリストセチン濃度を有する溶液を提供する。

ＭＭＷヘパリン希釈標準溶液の調製：
ＭＭＷヘパリン（１１ｋＤａ、０．５６９ｇ）をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）に溶解して、Ｈ_２Ｏ中のＭＭＷヘパリン５．２ｍＭ溶液を得た。Ｈ_２Ｏ中のＭＭＷヘパリン保存液５．２ｍＭを、－２０℃で凍結した。

ＭＭＷヘパリンを、以下のように生理食塩水に希釈した。

プロトコール
血液サンプルを、いかなる抗血小板療法（例えば、アスピリン）も受けていない非喫煙者から採取した。抗血小板療法は、血小板凝固阻害剤または血小板凝集阻害剤としても知られうる。

静脈うっ血のない血液をドナーから１０９ｍＭクエン酸ナトリウム溶液（ＶＡＣＵＥＴＴＥ、３．５ｍＬ ＃４５４３２７、ロット＃Ａ２１０１３ＦＱ）中に採血した。採血された血液の最初の３～４ｍＬを廃棄した。

血液サンプルを室温で１５分間静置させた後、遠心分離した。多血小板血漿（ＰＲＰ）が、ブレーキを使用しないで２１℃において１０分間、２００ｇで血液サンプルを遠心分離することにより調製された。乏血小板血漿（ＰＰＰ）が、２１℃において１５分間、１５００ｇで血液サンプルを遠心分離することにより、血液サンプルからＰＲＰを除去して調製された。

ＰＲＰの血小板計数を行うことにより、ＰＲＰ品質の評価を行った。ＰＲＰ中の血小板数は、４２１Ｇ／Ｌであった。ＰＲＰサンプルの血小板数を、自己由来ＰＰＰを用いて標準化された値に調整しなかった（また、すべきでない）。

－遠心分離後、ＰＲＰサンプルを、室温において１５分間放置した後、透過光血小板凝集検査（ＬＴＡ）試験を行った。ＰＲＰを使用して、凝集検査機で０％透過光を設定した。自己由来ＰＰＰを使用して、凝集検査機で１００％透過光を設定した。

調製された３つのＭＭＷヘパリン希釈標準溶液濃度（５μＭ、１０μＭおよび１５μＭ）の各々について、以下のステップを行った。

生理食塩水で希釈されたＭＭＷヘパリン（上記の「ＭＭＷヘパリン希釈標準溶液の調製」で記述された）２０μＬを、ＰＲＰ３６０μＬに添加した。得られた溶液を２秒間撹拌し、次いで、３７℃で５分間撹拌しないでインキュベートした。次いで、溶液を３７℃で１分間撹拌しながらインキュベートした。アゴニスト（リストセチン）の添加前に、ＬＴＡのベースライントレースを、少なくとも１分間振動および安定性について観察した。

リストセチン希釈標準溶液、すなわち生理食塩水に希釈されたリストセチン（上記の「リストセチン希釈標準溶液の調製」で記述された）２０μＬをＭＭＷヘパリンおよびＰＲＰ溶液に添加して、最終溶液体積４００μＬを得た。

ＬＴＡ試験を３７℃で行った。ＬＴＡ試験中、ＰＲＰサンプルを使い捨てスターラーを用いて１０００ｒｐｍで常に撹拌した。

－ＬＴＡ試験のために添加されたアゴニスト（リストセチン）の体積は一貫性を持つべきであり、総サンプル体積の１０％以下である。本実施例では、アゴニストの体積は、４０μＬを超えるべきでない。

ＭＭＷヘパリンの３用量：５μＭ、１０μＭおよび１５μＭを試験し、これらを生理食塩水媒体コントロールと比較した。図３に示されているように、全試験濃度（５μＭ、１０μＭおよび１５μＭ）は、ＶＷＦ誘導血小板凝集を完全に阻害した。

最も高いＭＭＷヘパリン濃度、１５μＭを再試験した。この再試験は同様な結果、すなわち、図４に示されているようにＶＷＦ誘導血小板凝集の完全阻害を得た。

したがって、ＰＲＰサンプルにＭＭＷヘパリンを添加する場合、ＶＷＦ誘導血小板凝集の完全阻害が観察された。

フォンヴィレブランド因子血小板結合の用量依存性ＭＭＷＨ阻害
「透過光法による血小板凝集検査の標準化推進：ＳＳＣ／ＩＳＴＨの血小板生理学分科会からの作業部会のコンセンサス」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２０１３，１１：１１８３‐１１８９に従ったプロトコール。

リストセチン希釈標準溶液の調製：
リストセチン保存液（５０ｍｇ／ｍＬ）を、４８ｍｇ／ｍＬまで生理食塩水で希釈した。

ＭＭＷヘパリン希釈標準溶液の調製：
ＭＭＷヘパリン（１１ｋＤａ、０．５６９ｇ）をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）に溶解して、Ｈ_２Ｏ中の５．２ｍＭ ＭＭＷヘパリン溶液を得た。Ｈ_２Ｏ中の５．２ｍＭ ＭＭＷヘパリン保存液を、－２０℃で凍結した。

２０回の希釈に対応して、各凝集試験において２０μＬを使用した。ＭＭＷＨを、以下のように生理食塩水に希釈した。

モノクローナル抗ＶＷＦ
ポジティブコントロールとして、リストセチン誘導血小板凝集をブロックする抗ＶＷＦモノクローナル抗体を使用した。簡潔に、Ａｂ ＃７０１ ５．５ｍｇ／ｍＬを、生理食塩水中２００μｇ／ｍＬに希釈した。生理食塩水中の２００μｇ／ｍＬ Ａｂ ＃７０１の２０μＬを４００μＬ ＰＲＰで更に希釈して、１０μｇ／ｍＬの最終抗体濃度を得た。
ＬＭＷＨの調製：Ｌｏｖｅｎｏｘ（エノキサパリン）溶液
保存液８０００ＵＩ：１００ｍｇ／ｍＬ；分子量：４５００Ｄａ；Ｌｏｖｅｎｏｘ保存液濃度：２２ｍＭ
２０μＭ ＬＭＷＨの最終濃度を調製するため：１０００μＬ生理食塩水中のＬｏｖｅｎｏｘ ２２ｍＭ保存液１８μＬを希釈して、４００μＭ保存液を得た。４００μＬの最終体積中４００μＭ保存液２０μＬは、２０μＭのＬＭＷＨの最終濃度を提供する。
１０μＭ ＬＭＷＨの最終濃度を調製するため：１０００μＬ生理食塩水中のＬｏｖｅｎｏｘ ２２ｍＭ保存液９μＬを希釈して、２００μＭ保存液を得た。４００μＬの最終体積中の２００μＭ保存液２０μＬは、１０μＭのＬＭＷＨの最終濃度を提供する。
アゴニスト誘導凝集
ＡＤＰ：保存液濃度５ｍＭ、生理食塩水中４０μＭに希釈した。４００μＬの最終体積中の４０μＭ保存液２０μＬは、２μＭのＡＤＰの最終濃度を提供する。
コラーゲン：保存液濃度１ｍｇ／ｍＬ、生理食塩水中４０μｇ／ｍＬに希釈した。４００μＬの最終体積中の４０μｇ／ｍＬコラーゲン保存液２０μＬは、２μｇ／ｍＬのコラーゲンの最終濃度を提供する。
ＴＲＡＰ６：保存液濃度２０ｍＭ、生理食塩水中２００μＭに希釈した。４００μＬの最終体積中の２００μＭ ＡＤＰ保存液２０μＬは、１０μＭのＡＤＰの最終濃度を提供する。

プロトコール
血液サンプルを、いかなる抗血小板療法（例えば、アスピリン）を受けていない非喫煙者から採取した。

静脈うっ血のない血液をドナーから１０９ｍＭクエン酸ナトリウム溶液（ＶＡＣＵＥＴＴＥ、３．５ｍＬ ＃４５４３２７、ロット＃Ａ２１０１３ＦＱ）中に採血した。採血された血液の最初の３～４ｍＬを廃棄した。

血液サンプルを室温で１５分間静置させた後、遠心分離した。多血小板血漿（ＰＲＰ）が、ブレーキを使用しないで２１℃において１０分間、２００ｇで血液サンプルを遠心分離することにより調製された。乏血小板血漿（ＰＰＰ）が、２１℃において１５分間、１５００ｇで血液サンプルを遠心分離することにより、血液サンプルからＰＲＰを除去して調製された。

ＰＲＰの血小板計数を行うことにより、ＰＲＰ品質の評価を行った。ＰＲＰサンプルの血小板数を、自己由来ＰＰＰを用いて標準化された値に調整しなかった（また、すべきでない）。

－遠心分離後、ＰＲＰサンプルを室温において１５分間放置した後、透過光血小板凝集検査（ＬＴＡ）試験を行った。ＰＲＰを使用して、凝集検査機で０％透過光を設定した。自己由来ＰＰＰを使用して、凝集検査機で１００％透過光を設定した。ＬＴＡ試験を３７℃で行った。ＬＴＡ試験中、ＰＲＰサンプルを使い捨てスターラーを用いて１０００ｒｐｍで常に撹拌した。－ＬＴＡのために添加されたアゴニストの体積は一貫性を持つべきであり、総サンプル体積の１０％を決して超えない。

ＭＭＷＨ試験阻害
２０μＬ ＭＭＷＨ（５、１０または２０μＭ）および１０μＬ ＲｅｏＰｒｏ（２０μｇ／ｍＬの最終濃度）を、３６０μＬ ＰＲＰに添加した。得られた溶液を２秒間撹拌し、次いで、３７℃で５分間撹拌しないでインキュベートした。次いで、溶液を３７℃で１分間撹拌しながらインキュベートした。アゴニスト（リストセチン）の添加前に、ＬＴＡのベースライントレースを、少なくとも１分間振動および安定性について観察した。

リストセチン希釈標準溶液、すなわち生理食塩水に希釈されたリストセチン（上記「リストセチン希釈標準溶液の調製」で記述された）１０μＬをＭＭＷＨ、ＲｅｏＰｒｏおよびＰＲＰ溶液に添加して、４００μＬの最終溶液体積、および１．２ｍｇ／ｍＬの最終リストセチン濃度を得た。

上記方法においてＭＭＷＨの代わりに２０μＬの生理食塩水を用いたコントロール実験も行った。

ＬＭＷＨ試験阻害
２０μＬ ＬＭＷＨ（１０または２０μＭ）および１０μＬ ＲｅｏＰｒｏ（２０μｇ／ｍＬの最終濃度）を、３６０μＬ ＰＲＰに添加した。得られた溶液を２秒間撹拌し、次いで、３７℃で５分間撹拌しないでインキュベートした。次いで、溶液を３７℃で１分間撹拌しながらインキュベートした。アゴニスト（リストセチン）の添加前に、ＬＴＡのベースライントレースを、少なくとも１分間振動および安定性について観察した。

リストセチン希釈標準溶液、すなわち生理食塩水に希釈されたリストセチン（上記「リストセチン希釈標準溶液の調製」に記述された）１０μＬをＬＭＷＨ、ＲｅｏＰｒｏおよびＰＲＰ溶液に添加して、４００μＬの最終溶液体積、および１．２ｍｇ／ｍＬの最終リストセチン濃度を得た。

上記方法においてＲｅｏＰｒｏの代わりに１０μＬの生理食塩水を用いたコントロール実験も行った。

モノクローナル抗ＶＷＦ試験阻害
２０μＬ Ａｂ＃７０１および１０μＬ ＲｅｏＰｒｏ（２０μｇ／ｍＬの最終濃度）を、３６０μＬ ＰＲＰに添加した。得られた溶液を２秒間撹拌し、次いで、３７℃で５分間撹拌しないでインキュベートした。次いで、溶液を３７℃で１分間撹拌しながらインキュベートした。アゴニスト（リストセチン）の添加前に、ＬＴＡのベースライントレースを、少なくとも１分間振動および安定性について観察した。

リストセチン希釈標準溶液、すなわち生理食塩水に希釈されたリストセチン（上記「リストセチン希釈標準溶液の調製」で記述された）１０μＬを、モノクローナル抗ＶＷＦ、ＲｅｏＰｒｏおよびＰＲＰ溶液に添加して、４００μＬの最終溶液体積、および１．２ｍｇ／ｍＬの最終リストセチン濃度を得た。

アゴニスト誘導凝集におけるＭＭＷＨ試験阻害
調査されたアゴニストは、ＡＤＰ、コラーゲンおよびＴＲＡＰ６であった。

２０μＬ ＭＭＷＨ（５、１０または２０μＭ）または２０μＬ 生理食塩水を、３６０μＬ ＰＲＰに添加した。得られた溶液を２秒間撹拌し、次いで、３７℃で５分間撹拌しないでインキュベートした。次いで、溶液を３７℃で１分間撹拌しながらインキュベートした。アゴニストの添加前に、ＬＴＡのベースライントレースを、少なくとも１分間振動および安定性について観察した。

２０μＬアゴニスト（ＡＤＰ、コラーゲンまたはＴＲＡＰ６）をＭＭＷＨおよびＰＲＰ溶液に添加して、４００μＬの最終溶液体積、および以下の最終アゴニスト濃度を得た：
ＡＤＰ：２μＭ；
コラーゲン：２μｇ／ｍＬ；または
ＴＲＡＰ６：１０μＭ。

結果
凝固相を選択的に分析するために、ＲｅｏＰｒｏ（αＩＩｂβ３の阻害剤）の存在下実験を行った。結果を、傾きおよび曲線下面積（ＡＵＣ）として示す。
１）ＭＭＷＨ用量反応（０、５、１０および２０μＭ）
用量反応曲線を、図６に示す。
２）ＭＭＷＨ用量反応（０、５および１０μＭ）
用量反応曲線を、図７に示す。
３）ｍＡｂおよびＭＭＷＨ １０μＭ
用量反応曲線を、図８に示す。
４）ｍＡｂ（抗ＶＷＦ）およびＭＭＷＨ（２０μＭ×２および５μＭ）用量反応
用量反応曲線を、図９に示す。
５）ｍＡｂ（抗ＶＷＦ）およびＬＭＷＨ（１０μＭ×３）用量反応
用量反応曲線を、図１０に示す。
６）ＬＭＷＨ（２０μＭ×３）用量反応
用量反応曲線を、図１１に示す。
７）統計解析
一元配置分散分析（ＡＵＣ）




一元配置分散分析（傾き）


８）アゴニスト誘導血小板凝集
図１３および１４に示されているように、ＡＤＰ、コラーゲンまたはＴＲＡＰ６をアゴニストとして使用した場合、血小板凝集に対する効果は観察されなかった。

結論
フォンヴィレブランド因子依存性血小板凝固実験ならびにＡＤＰ、コラーゲンまたはトロンビン受容体活性ペプチド６（ＴＲＡＰ６）により誘導される血小板凝集試験においてＭＭＷＨを試験した。血小板凝固実験では、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）およびモノクローナル抗ＶＷＦ抗体を、それぞれ、ネガティブおよびポジティブコントロールとして使用した。

図５Ａおよび５Ｂに示されているように、ＶＷＦ依存性血小板凝固は、ＭＭＷＨにより用量依存的に効果的に阻害され、ＬＭＷＨの存在下有意な阻害は観察されなかった。対照的に、抗ＶＷＦモノクローナル抗体（ＶＷＦ－血小板相互作用を妨げることが分かっている）は、血小板凝固を完全に阻害した。３．４～３．７μＭのＭＭＷＨ濃度において、５０％阻害を得た。

図１３および１４に示されているように、他のアゴニストを使用した場合、血小板凝集に対する効果は観察されなかった。
本発明は、次の非限定的条項を参照して更に理解され得る：
条項１．
血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリン。
条項２．
前記中間分子量ヘパリンは、フォンヴィレブランド因子を阻害する、条項１に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項３．
前記中間分子量ヘパリンは、フォンヴィレブランド因子の多量体を阻害し、任意的に、前記フォンヴィレブランド因子は、超高分子量フォンヴィレブランド因子である、条項２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項４．
前記中間分子量ヘパリンは、前記血小板とフォンヴィレブランド因子との結合を阻害する、条項１～３のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項５．
前記中間分子量ヘパリンは、約８０００Ｄａ（ｇ／モル）を超え、約１３０００Ｄａ（ｇ／モル）までの範囲の質量を有し、任意的に、前記中間分子量ヘパリンは、約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）の質量を有する、条項１～４のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項６．
前記中間分子量ヘパリンは、ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ二糖の少なくとも３単位を含む、条項１～５のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項７．
血管内皮炎は、ＣＯＶＩＤ－１９、ウイルス感染症、急性呼吸窮迫症候群、がん、感染症、敗血症、心血管疾患、糖尿病、心的外傷、特に、脳外傷もしくは頭部外傷 、やけど、吸入損傷、薬物反応、血液学的病態、くも膜下出血、大動脈瘤疾患、脳卒中、または脳実質性出血が原因である、条項１～６のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項８．
前記血管内皮炎は、ウイルス感染症を原因とし、前記ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であってもよい、条項７に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項９．
前記血管内皮炎は、がんを原因とし、前記がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫、または固形臓器がんであってもよい、条項７に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１０．
前記血管内皮炎の治療は、がんの血行性伝播を阻害する、条項１～６のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１１．
前記中間分子量ヘパリンを、非経口、皮下、デポ形態、例えば、デポ注射、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内、皮内、動脈内、関節内、皮膚、経皮、骨内、および吸入からなる群から選択される投与方法により投与する、条項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１２．
前記投与方法は、皮下である、条項１１に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１３．
前記投与方法は、静脈内である、条項１１に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１４．
前記投与方法は、筋肉内である、条項１１に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１５．
前記投与方法は、吸入であり、任意的にネブライザーによる吸入である、条項１１に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１６．
前記中間分子量ヘパリンを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１７．
前記中間分子量ヘパリンを、単回投与または継続投与として投与する、条項１１～１６のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１８．
前記中間分子量ヘパリンは、医薬製剤中に含まれる、条項１～１７のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項１９．
前記医薬製剤は、賦形剤を含む、条項１８に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項２０．
前記賦形剤は、溶媒、共溶媒、緩衝剤、安定化剤、酸化防止剤、防腐剤、キレート剤、乳化剤、香料、潤滑剤、懸濁剤、等張化剤、界面活性剤、可溶化剤、分散助剤、分散剤、保湿剤、増粘剤、着色料、湿潤剤、消泡剤、粘度調整剤、甘味料およびこれらの組合せからなる群から選択される、条項１９に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項２１．
前記医薬製剤は、追加の活性剤を含み、任意的に前記追加の活性剤は、異なる二糖組成の低分子量ヘパリンまたは中間分子量ヘパリンを含む、条項１８～２０のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項２２．
前記中間分子量ヘパリンは、化学修飾を含む、条項１～２１のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項２３．
前記化学修飾は、Ｎ－アセチル化、脱Ｎ－アセチル化、Ｎ－硫酸化、Ｏ－硫酸化、脱２－Ｏ硫酸化、完全脱硫酸化、またはこれらの組合せを含む、条項２２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
条項２４．
キットであって、条項１～２３のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリンを含む、キット。
条項２５．
血管内皮炎の治療方法であって、前記方法は、中間分子量ヘパリンの治療有効量を、治療を必要としている対象に投与することを含む、方法。
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Claims (26)

1. 中間分子量ヘパリンであって、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対する血漿中フォンヴィレブランド因子抗原の比を有する患者における血管内皮炎の治療において使用するための中間分子量ヘパリン。
2. 前記中間分子量ヘパリンは、フォンヴィレブランド因子を阻害し、任意的に、前記中間分子量ヘパリンは、リストセチン誘導血小板凝集アッセイにより測定される場合、１５μＭの濃度においてフォンヴィレブランド因子誘導血小板凝集を完全に阻害する、請求項１に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
3. 前記中間分子量ヘパリンは、フォンヴィレブランド因子の多量体を阻害し、任意的に、前記フォンヴィレブランド因子は、超高分子量フォンヴィレブランド因子である、請求項２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
4. 前記中間分子量ヘパリンは、前記血小板とフォンヴィレブランド因子との結合を阻害する、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
5. 前記中間分子量ヘパリンは、約８０００Ｄａ（ｇ／モル）を超え、約１３０００Ｄａ（ｇ／モル）までの範囲の質量を有し、任意的に、前記中間分子量ヘパリンは、約１１０００Ｄａ（ｇ／モル）の質量を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
6. 前記中間分子量ヘパリンは、ＩｄｏＡ２Ｓ－ＧｌｃＮＳ６Ｓ二糖の少なくとも３単位を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
7. 前記血管内皮炎の治療は、がんの血行性伝播を阻害する、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
8. 患者における疾病または病態の治療において使用するための中間分子量ヘパリンであって、前記患者は、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対する血漿中フォンヴィレブランド因子抗原の比を特徴とする血管内皮炎を有する、前記使用のための中間分子量ヘパリン。
9. 前記疾病または病態は、ＣＯＶＩＤ－１９、ウイルス感染症、急性呼吸窮迫症候群、がん、細菌感染症、敗血症、心血管疾患、糖尿病、心的外傷、やけど、吸入損傷、薬物反応、血液学的病態、くも膜下出血、または大動脈瘤疾患である、請求項８に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
10. 前記血管内皮炎は、ウイルス感染症を原因とし、任意的に、前記ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項９に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
11. 前記血管内皮炎は、がんを原因とし、任意的に、前記がんは、白血病、リンパ腫、骨髄腫、または固形臓器がんである、請求項９に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
12. 前記中間分子量ヘパリンを、非経口、皮下、皮下、デポ形態、例えば、デポ注射、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内、皮内、動脈内、関節内、皮膚、経皮、骨内、および吸入からなる群から選択される投与方法により投与する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
13. 前記投与方法は、皮下である、請求項１２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
14. 前記投与方法は、静脈内である、請求項１２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
15. 前記投与方法は、筋肉内である、請求項１２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
16. 前記投与方法は、吸入であり、任意的にネブライザーによる吸入である、請求項１２に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
17. 前記中間分子量ヘパリンを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
18. 前記中間分子量ヘパリンを、単回投与または継続投与として投与する、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
19. 前記中間分子量ヘパリンは、医薬製剤中に含まれる、請求項１～１８のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
20. 前記医薬製剤は、賦形剤を含む、請求項１９に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
21. 前記賦形剤は、溶媒、共溶媒、緩衝剤、安定化剤、酸化防止剤、防腐剤、キレート剤、乳化剤、香料、潤滑剤、懸濁剤、等張化剤、界面活性剤、可溶化剤、分散助剤、分散剤、保湿剤、増粘剤、着色料、湿潤剤、消泡剤、粘度調整剤、甘味料およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項２０に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
22. 前記医薬製剤は、追加の活性剤を含み、任意的に前記追加の活性剤は、低分子量ヘパリンを含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
23. 前記中間分子量ヘパリンは、化学修飾を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
24. 前記化学修飾は、Ｎ－アセチル化、脱Ｎ－アセチル化、Ｎ－硫酸化、Ｏ－硫酸化、脱２－Ｏ硫酸化、完全脱硫酸化、またはこれらの組合せを含む、請求項２３に記載の使用のための中間分子量ヘパリン。
25. キットであって、請求項１～２４のいずれか一項に記載の使用のための中間分子量ヘパリンを含む、キット。
26. 血管内皮炎の治療方法であって、前記方法は、中間分子量ヘパリンの治療有効量を、治療を必要としている患者に投与することを含み、前記患者は、少なくとも約２のＡＤＡＭＴＳ１３に対する血漿中フォンヴィレブランド因子抗原の比を有する、方法。