JP2024514174A - リンカー、コンジュゲート及びその用途 - Google Patents

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Abstract

本発明は、標的化分子－薬物コンジュゲートのリンカー分子、対応するコンジュゲート、その製造方法及び用途に関する。【選択図】図８

Description

本発明はバイオ製薬の分野に関し、特に標的化分子－薬物コンジュゲートを調製するためのリンカー、対応するコンジュゲート、その製造方法及び用途に関する。
ＨＥＲ２は、乳癌及び胃癌を含むいくつかの癌種で過剰発現していることが判明され、癌治療の有望なターゲットサイトであることが証明された。ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ツカチニブ（Ｔｕｃａｔｉｎｉｂ））、治療用ＨＥＲ２抗体（ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、パージェタ（Ｐｅｒｊｅｔａ））、及びＨＥＲ２標的ＡＤＣ（カドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）、エンハーツ（Ｅｎｈｅｒｔｕ））を含む複数のＨＥＲ２標的治療法が承認されている。これらの治療薬物は、ＨＥＲ２陽性の乳癌及び胃癌患者の生存率を大幅に向上させた。特に、Ｅｎｈｅｒｔｕは、ＨＥＲ２高発現の患者で優れた有効性を示しただけでなく、ＨＥＲ２中・低発現の患者でも有効性の兆候を示しており、より多くのＨＥＲ２発現の癌患者が受益する見込みがある。Ｅｎｈｅｒｔｕは有効性が優れているが、１０％以上の間質性肺疾患を引き起こしているため、一部の患者での使用が制限されている。
Ｅｎｈｅｒｔｕ、他の市販のＡＤＣ及び臨床試験中のほとんどのＡＤＣはいずれも、チオスクシンイミド構造（チオスクシンイミド連結）を使用して小分子薬物を標的抗体又はタンパク質にコンジュゲートさせる化学的カップリングによって調製される。チオスクシンイミド構造は、チオール基とマレイミドの反応によって形成される。しかしながら、チオスクシンイミド連結は安定ではない。生体では、逆マイケル付加又はチオール基と他のチオール基との交換はＡＤＣからの細胞毒素の脱落を引き起こし、オフターゲット毒性をもたらすため、安全性が低下し、臨床応用が制限される。
第１態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を提供し、
Figure 2024514174000002
 式中、
Ｗは水素又はＬＫｂであり、
Ｙは水素又はＬＫａ－ＬＫｂであり、
ただし、ＷとＹが同時に水素でないことを条件とし、
各ＬＫａは、独立して、
Figure 2024514174000003
 から選択され、
ｏｐＳｕは、
Figure 2024514174000004
 又はそれらの混合物であり、
各ＬＫｂは、独立してＬ２―Ｌ１―Ｂから選択され、
各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、
Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基であり、
Ｌ１は、酵素により切断（ｃｌｅａｖｅ）可能なアミノ酸配列を含む切断可能配列１（Ｃｌｅａｖａｂｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ １）であり、切断可能配列１は１～１０個のアミノ酸を含み、
Ｌ２は、結合であるか又はＣ２－２０アルキレン基であり、ここでアルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造は、－ＣＲ３Ｒ４－、－Ｏ－、－（ＣＯ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲ５－、
Figure 2024514174000005
 Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基、フェニレン基によって任意に置換され、ここでシクロアルキレン基、ヘテロシクリレン基、及びフェニレン基は、それぞれ独立して、非置換であるか、又はハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、－Ｃ１－１０アルキレン－ＮＨ－Ｒ８、及び－Ｃ１－１０アルキレン－Ｏ－Ｒ９から選択される少なくとも１つの置換基で置換され、
Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合であるか、又は－ＮＨ－Ｃ１－２０アルキレン－（ＣＯ）－、－ＮＨ－（ＰＥＧ）ｉ－（ＣＯ）－から選択されるか、又は側鎖上でそれぞれ独立して非置換の又は－（ＰＥＧ）ｊ－Ｒ１１によって置換された天然アミノ酸もしくは重合度２～１０のオリゴマー天然アミノ酸であり、
－（ＰＥＧ）ｉ－と－（ＰＥＧ）ｊ－は、いずれもＰＥＧフラグメントであり、指定された数の連続した－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）－構造単位又は連続した－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）－構造単位を含み、任意に、１つの末端にＣ１－１０アルキレン基が付加され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基から選択され、
Ｒ１１はＣ１－１０アルキル基であり、
ｎは２～２０の任意の整数であり、
ｄは０又は１～６の任意の整数であり、
各ｉは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、
各ｊは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｊは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは８～１２であり、特に８又は１２である。
第２態様では、本発明は、式（ＩＩ）の構造を有する化合物を提供し、
Figure 2024514174000006
 式中、
Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
Ｐは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
ｎ、ｄ、Ｌｄ１、Ｌｄ２、ＬＫａ及びＬＫｂは式（Ｉ）に定義した通りであり、
好ましくは、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで各Ｂは、独立して、存在しないか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせであり、
好ましくは、Ｓｐ１は、ＰＡＢＣ、アセタール、ヘテロアセタール及びそれらの組み合わせから選択され、より好ましくは、Ｓｐ１は、アセタール、ヘテロアセタール又はＰＡＢＣであり、さらに好ましくは、ヘテロアセタールは、Ｎ，Ｏ－ヘテロアセタールから選択され、より好ましくは、Ｓｐ１は、－Ｏ－ＣＨ２－Ｕ－又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であり、ここで－Ｏ－又は－ＮＨ－は切断可能配列１に接続され、Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、好ましくはＯ又はＳである。
第３態様であは、本発明は、式（ＩＩＩ）の構造を有するコンジュゲートを提供し、
Figure 2024514174000007
 式中、
ｎ、ｄ、Ｌｄ１、Ｌｄ２、ＬＫａ及びＬＫｂは式（Ｉ）に定義した通りであり、
Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
好ましくは、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで
各Ｂは、独立して、存在しないか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせであり、好ましくは、Ｂは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか又は存在しないか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－であり、
ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
Ｐは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
Ａは、式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分に連結される標的化分子であり、Ｇはグリシンであり、
ｚは１～２０の整数である。
第４態様では、本発明は、疾患を治療するための薬物の製造における、本発明のコンジュゲート又はその医薬組成物の用途を提供し、前記疾患は腫瘍又は自己免疫疾患である。
ＳＫ－ＢＲ－３ ＨＥＲ２－高発現細胞系におけるコンジュゲート及び対応するペイロードの有効性を示す。 ＮＣＩ－Ｎ８７ ＨＥＲ２－高発現細胞系におけるコンジュゲート及び対応するペイロードの有効性を示す。 ＣＦＰＡＣ－１ ＨＥＲ２－低発現細胞系におけるコンジュゲートの有効性を示す。 ＮＣＩ－Ｈ２１１０ ＨＥＲ２－低発現細胞系におけるコンジュゲートの有効性を示す。 ＭＤＡ－ＭＢ－４６８ ＨＥＲ２陰性細胞系におけるコンジュゲートの有効性を示す。 ５ｍｇ／ｋｇのＬＣ１１８４（８）、ＬＣ１１８４（４）、ＬＣ３０１－２－１（２）、ＬＣ３０２－２－１（４）、ＬＣ３０２－２－４（４）を投与された、ＪＩＭＴ１ ＣＤＸモデルを有するＳＣＩＤ Ｂｅｉｇｅマウスにおける経時的な平均腫瘍体積変化を示す。 ５ｍｇ／ｋｇのＬＣ１１８４（８）、ＬＣ１１８４（４）、ＬＣ３０１－２－１（２）、ＬＣ３０２－２－１（４）、ＬＣ３０２－２－４（４）を投与された、Ｃａｐａｎ－１ ＣＤＸモデルを有するＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおける経時的な平均腫瘍体積変化を示す。 プールされたヒト血清中で０、２４、４８及び９６時間インキュベートした後のコンジュゲートのエクスビボ血清安定性を示す。
以下において、具体的な実施形態を示して本発明の技術内容を説明する。当業者であれば、本明細書に開示された内容により本発明の他の利点及び効果を容易に理解することができる。本発明は、他の異なる具体的な実施形態によって実施又は適用することもできる。当業者であれば、本発明の精神から逸脱することなく、様々な修正及び変形を行うことができる。
定義
以下に別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される技術とは、当分野で一般的に理解されている技術を指し、当業者に明らかな変形及び同等の置換を含む。以下の用語は、当業者には容易に理解されると考えられるが、本発明をよりよく説明するために以下の定義を説明する。本明細書に商品名が記載されている場合、それに対応する商品又はその有効成分を指すことを意図する。本明細書に引用した全ての特許、公開特許出願及び出版物は全て参照によって本明細書に組み込まれる。
特定の量、濃度、又はその他の値もしくはパラメーターが範囲、好ましい範囲、又は好ましい上限値、又は好ましい下限値として示されていることは、任意の上限値又は好ましい値と任意の下限値又は好ましい値とを組み合わせた全ての範囲が、明記されているかどうかに関わらず、具体的に開示されていることと同等であると理解すべきである。別段の説明がない限り、本明細書で列挙される数値の範囲は、範囲の端点及び範囲内の全ての整数及び分数（小数）を含むことを意図する。例えば、「ｉは１～２０の整数である」という表現は、ｉが１～２０の任意の整数であることを意味し、例えば、ｉは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり得る。ｊ、ｋ及びｇ等の他の類似表現も同様に理解すべきである。
文脈上別段の指示がない限り、「１種（１つ）の」及び「このような（この）」等の単数形は、複数形を含む。表現「１種（１つ）又は複数種（複数）の」又は「少なくとも１種（１つ）」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又はそれ以上を表すことができる。
用語「約」及び「およそ」は、数値変数と組み合わせて使用する場合、一般に、変数の値及び変数の全ての値が、実験誤差の範囲内（例えば、平均値の９５％信頼区間内）又は指定値の±１０％又はより広い範囲内であることを意味する。
用語「化学量論比」とは、様々な物質を一定の重量で配合した比率を指す。例えば、本発明において、活性成分は、指定された重量比で充填剤、接着剤及び潤滑剤と混合される。
用語「任意の」又は「任意に」とは、その後に説明される事象が発生する可能性があるが、必ずしも発生するわけではないことを意味し、該表現は、前記事象又は状況が発生する場合又は発生しない場合を含む。
表現「含む」、「備える」、「含有」及び「有する」はオープンエンドなものであり、追加の列挙されていない要素、ステップ又は成分を排除しない。表現「……からなる」は、指定されていない要素、ステップ又は成分をいずれも除外する。表現「実質的に．．．からなる」は、範囲を、指定の要素、ステップ又は成分、及び保護を請求する主題の基本特徴及び新しい特徴に実質的な影響を及ぼさない任意に存在する要素、ステップ又は成分に限定することを意味する。表現「含む」は表現「実質的に……からなる」和「……からなる」を包含すると理解すべきである。
用語「標的化分子」とは、特定のターゲット（例えば、受容体、細胞表面タンパク質、サイトカイン、腫瘍特異的抗原等）に対して親和性を有する分子を指す。標的化分子は、標的送達によってペイロードをインビボの特定の部位に送達することができる。標的化分子は１つ又は複数のターゲットを認識することができる。具体的なターゲットサイトは、認識されるターゲットによって定義される。例えば、受容体を標的とする標的化分子は、多数の受容体を含む部位に細胞毒素を送達することができる。標的化分子の例としては、抗体、抗体フラグメント、所定抗原の結合タンパク質、抗体模倣物、所定ターゲットに対して親和性を有する足場タンパク質、リガンド等を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるように、用語「抗体」は広範な意味で使用され、特に、それらが所望の生物学的活性を有する限り、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含む。抗体は、任意のサブタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）又はサブクラスであってもよく、任意の適切な種に由来してもよい。いくつかの実施形態において、抗体はヒト又はマウス由来のものである。抗体はまた、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、又は組換え法によって調製されたキメラ抗体であってもよい。
本明細書で使用されるモノクローナル抗体とは、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指し、つまり、少数の可能な自然変異を除けば、集団を構成する個々の抗体は同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して高度な特異性を有する。用語「モノクローナル」とは、抗体の特徴が実質的に均質な抗体集団に由来することを意味し、抗体を産生するために何らかの特定の方法を必要とするものとして解釈されるべきではない。
インタクトな抗体又は完全長抗体は、抗原結合可変領域、軽鎖定常領域（ＣＬ）、及び重鎖定常領域（ＣＨ）を実質的に含み、抗体のサブタイプに応じてＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を含み得る。抗原結合可変領域（フラグメント可変領域、Ｆｖフラグメントとも呼ばれる）は、通常、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。定常領域は、天然配列を有する定常領域（例えば、ヒト天然配列を有する定常領域）又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。可変領域はターゲット抗原を認識してそれと相互作用する。定常領域は免疫系によって認識され、免疫系と相互作用することができる。
抗体フラグメントは、インタクトな抗体の一部、好ましくはその抗原結合領域又は可変領域を含み得る。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント、及び分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。Ｆａｂフラグメントは、全長免疫グロブリンをパパイン消化して得られた抗体フラグメントであり、又は、例えば組換え発現により生成された同じ構造を有するフラグメントである。Ｆａｂフラグメントは、軽鎖（ＶＬ及びＣＬを含む）と別の鎖を含み、ここで前記別の鎖は、重鎖の可変領域（ＶＨ）及び重鎖の１つの定常領域（ＣＨ１）を含む。Ｆ（ａｂ′）２フラグメントは、免疫グロブリンをｐＨ４．０～４．５でペプシン消化して得られた抗体フラグメントであり、又は、例えば組換え発現により生成された同じ構造を有するフラグメントである。Ｆ（ａｂ′）２フラグメントは実質的に２つのＦａｂフラグメントを含み、ここで各重鎖部分は、２つのフラグメントを連結するジスルフィド結合を形成するシステインを含めて、いくつかの追加のアミノ酸を含む。Ｆａｂ′フラグメントは、Ｆ（ａｂ′）２フラグメントの半分（１つの重鎖と１つの軽鎖）を含むフラグメントである。前記抗体フラグメントは、例えば、ジスルフィド結合及び／又はペプチドリンカーを介して連結された複数の鎖を含み得る。抗体フラグメントの例は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｆｄ及びＦｄ′フラグメント、並びに修飾フラグメントを含む他のフラグメントをも含む。抗体フラグメントは、通常少なくとも又は約５０個のアミノ酸、通常少なくとも又は約２００個のアミノ酸を含む。抗原結合フラグメントは、（例えば、対応する領域の置換によって）抗体フレームワークに挿入されると抗原に免疫特異的に結合する抗体が得られる任意の抗体フラグメントを含み得る。
本発明の抗体は、当技術分野で周知の技術、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術又は当分野で既知の他の技術又はそれらの組み合わせを使用して調製することができる。例えば、遺伝子操作された組換え抗体（又は抗体模倣物）は、適切な培養系（例えば、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）又は哺乳動物細胞）によって発現され得る。前記操作は、例えば、リガーゼ特異的認識配列を末端に導入することを指すことができる。
ＨＥＲ２とは、上皮成長因子（ＥＧＦＲ）受容体チロシンキナーゼファミリーに属するヒト上皮成長因子受容体－２を指す。本出願において、用語ＥｒｂＢ２とＨＥＲ２は同じ意味を有し、交換的に使用できる。
本明細書で使用されるように、用語「標的化分子－薬物コンジュゲート」は「コンジュゲート」と呼ばれる。コンジュゲートの例としては、抗体－薬物コンジュゲートを含むが、これに限定されない。
小分子化合物とは、薬物に一般的に使用される有機分子に相当するサイズの分子を指す。該用語は、生体高分子（例えば、タンパク質、核酸等）を包含しないが、例えばジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド等の低分子量ペプチド又はその誘導体を含む。通常、小分子化合物の分子量は、例えば、約１００～約２０００Ｄａ、約２００～約１０００Ｄａ、約２００～約９００Ｄａ、約２００～約８００Ｄａ、約２００～約７００Ｄａ、約２００～約６００Ｄａ、約２００～約５００Ｄａであり得る。
細胞毒素とは、細胞の発現活性、細胞機能を阻害又は阻止し、及び／又は細胞破壊を引き起こす物質を指す。現在ＡＤＣに一般的に使用されている細胞毒素は、化学療法薬よりも毒性が強い。細胞毒素の例としては、微小管細胞骨格、ＤＮＡ、ＲＮＡ、キネシン媒介のタンパク質輸送、アポトーシス調節のようなターゲットサイトを標的とする薬物を含むが、これらに限定されない。微小管細胞骨格を標的とする薬物は、例えば、微小管安定化剤又は微小管タンパク質重合阻害剤であり得る。微小管安定化剤の例としては、タキサン類を含むが、これに限定されない。微小管タンパク質重合阻害剤の例としては、メイタンシノイド類（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、アウリスタチン類（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、ビンブラスチン類、コルヒチン類、ドラスタチン類を含むが、これらに限定されない。ＤＮＡ標的薬物は、例えば、ＤＮＡ構造を直接破壊する薬物又はトポイソメラーゼ阻害剤であり得る。ＤＮＡ構造を直接破壊する薬物の例としては、ＤＮＡ二本鎖切断剤（ＤＮＡ ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｅｒ）、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレータ（ＤＮＡ ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｏｒ）を含むが、これらに限定されない。ＤＮＡ二本鎖切断剤は、例えば、エンジイン系抗生物質であり得、ダイネマイシン、エスペラマイシン、ネオカルチノスタチン、ｕｎｃｉａｌａｍｙｃｉｎ等を含むが、これらに限定されない。ＤＮＡアルキル化剤は、例えば、ＤＮＡビスアルキル化剤（ｂｉｓ－ａｌｋｙｌａｔｏｒ、即ちＤＮＡ架橋剤（ＤＮＡ－ｃｒｏｓｓ ｌｉｎｋｅｒ））又はＤＮＡモノアルキル化剤（ｍｏｎｏ－ａｌｋｙｌａｔｏｒ）であり得る。ＤＮＡアルキル化剤の例としては、ピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、１－（クロロメチル）－２，３－ジヒドロゲン－１Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）二量体、ＣＢＩ－ＰＢＤヘテロ二量体、ジヒドロインドロベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）二量体、ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ様化合物（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ－ｌｉｋｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）等を含むが、これらに限定されない。トポイソメラーゼ阻害剤の例としては、エキサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）及びその誘導体（例えば、ＤＸ８９５１ｆ、ＤＸｄ－（１）及びＤＸｄ－（２）であり、その構造は以下に示される）、カンプトテシン類及びアントラサイクリン類を含むが、これらに限定されない。ＲＮＡを標的とする薬物は、例えば、スプライシングを阻害する薬物であり得、その例としては、プラジエノリド（ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ）を含むが、これに限定されない。キネシン媒介のタンパク質輸送を標的とする薬物は、例えば、有糸分裂キネシン阻害剤であり得、キネシン紡錘体タンパク質（ＫＳＰ）阻害剤を含むが、これに限定されない。
「スペーサー（ｓｐａｃｅｒ）」とは、異なる構造モジュールの間に位置し、構造モジュールを空間的に分離できる構造を指す。スペーサーの定義は、特定の機能を有するかどうか、又は生体内で切断又は分解され得るかどうかによって限定されない。スペーサーの例としては、アミノ酸及び非アミノ酸構造を含むが、これらに限定されない。そのうち、非アミノ酸構造は、アミノ酸誘導体又は類似体であり得るが、これらに限定されない。「スペーサー配列（Ｓｐａｃｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」とは、スペーサーとなるアミノ酸配列を指し、その例としては、単一のアミノ酸、複数のアミノ酸を含む配列、例えばＧＡ等の２つのアミノ酸を含む配列、又は例えば、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ等を含むが、これらに限定されない。自己犠牲スペーサーは、前駆インビボの保護部分の活性化後の２つの化学結合を相次いで切断させる共有結合成分であり、保護部分（例えば、切断可能な配列）は活性化後に除去され、分解反応のカスケードが引き起こされ、結果として、より小さな分子が順番に放出される。自己犠牲スペーサーの例としては、ＰＡＢＣ（ｐ－ベンジルオキシカルボニル）、アセタール、ヘテロアセタール及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
用語「アルキル基」とは、炭素原子と水素原子からなる直鎖又は分枝飽和脂肪族炭化水素基を意味し、該飽和脂肪族炭化水素基は単結合によって分子の残りの部分に連結されている。アルキル基は、１～２０個の炭素原子を有し得、即ち「Ｃ１－Ｃ２０アルキル基」であり得、例えば、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ１－Ｃ３アルキル基、Ｃ１－Ｃ２アルキル基、Ｃ３アルキル基、Ｃ４アルキル基、Ｃ３－Ｃ６アルキル基である。アルキル基の非限定的な例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、イソペンチル基、２－メチルブチル基、１－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、ネオペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、４－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、１－メチルペンチル基、２－エチルブチル基、１－エチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，１－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、又は１，２－ジメチルブチル基、又はそれらの異性体を含むが、これらに限定されない。二価ラジカルとは、対応する一価ラジカルの自由価電子を持つ炭素原子から水素原子を１つ除去することによって得られた基を意味する。二価ラジカルは、分子の残りの部分に連結されている２つの連結部位を有する。例えば、「アルキレン基」又は「アルキリデン基」とは、直鎖又は分枝鎖の飽和二価炭化水素基を指す。「アルキレン基」の例としては、例えば、メチレン基（－ＣＨ２－）、エチレン基（－Ｃ２Ｈ４－）、プロピレン基（－Ｃ３Ｈ６－）、ブチレン基（－Ｃ４Ｈ８－）、ペンチレン基（－Ｃ５Ｈ１０－）、ヘキシレン基（－Ｃ６Ｈ１２－）、１－メチルエチレン基（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－）、２－メチルエチレン基（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－）、メチルプロピレン基、又はエチルプロピレン基等を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるように、１つの基が他の基と組み合わされる場合、化学的に安定な構造が形成されるのであれば、基の連結は直鎖状でも分枝状でもよい。このような組み合わせによって形成される構造は、該構造内の任意の適切な原子によって、好ましくは指定の化学結合によって分子の他の部分に連結することができる。例えば、－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基、及び－（ＣＯ）－から選択される２つ以上の二価基が結合して組み合わせを形成すると、２つ以上の二価基は、例えば、－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ１－１０アルキレン－（ＣＯ）－、－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ４－１０シクロアルキレン－（ＣＯ）－、－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ４－１０シクロアルキレン－Ｃ１－１０アルキレン－（ＣＯ）－、－ＣＲ１Ｒ２－ＣＲ１Ｒ２’－（ＣＯ）－、－ＣＲ１Ｒ２－ＣＲ１’Ｒ２’－ＣＲ１’’Ｒ２’’－（ＣＯ）－等のように、互いに直鎖状の連結を形成することができる。得られた二価構造は、分子の他の部分にさらに連結することができる。
本明細書で使用されるように、表現「抗体－カップリング薬物」と「抗体－薬物コンジュゲート」は同じ意味を有する。
式（Ｉ）の化合物
第１態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物を提供し、
Figure 2024514174000008
 式中、
Ｗは水素又はＬＫｂであり、
Ｙは水素又はＬＫａ－ＬＫｂであり、
ただし、ＷとＹが同時に水素でないことを条件とし、
各ＬＫａは、独立して、
Figure 2024514174000009
 から選択され、
ｏｐＳｕは、
Figure 2024514174000010
 又はそれらの混合物であり、
各ＬＫｂは、独立してＬ２―Ｌ１―Ｂから選択され、
各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、
Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基であり、
Ｌ１は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含む切断可能配列１であり、切断可能配列１は１～１０個のアミノ酸を含み、
Ｌ２は、結合であるか又はＣ２－２０アルキレン基であり、ここでアルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造は、－ＣＲ３Ｒ４－、－Ｏ－、－（ＣＯ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲ５－、
Figure 2024514174000011
 Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基、フェニレン基によって任意に置換され、ここでシクロアルキレン基、ヘテロシクリレン基、及びフェニレン基は、それぞれ独立して、非置換であるか、又はハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、－Ｃ１－１０アルキレン－ＮＨ－Ｒ８、及び－Ｃ１－１０アルキレン－Ｏ－Ｒ９から選択される少なくとも１つの置換基で置換され、
Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合であるか、又は－ＮＨ－Ｃ１－２０アルキレン－（ＣＯ）－、－ＮＨ－（ＰＥＧ）ｉ－（ＣＯ）－から選択されるか、又は側鎖上でそれぞれ独立して非置換の又は－（ＰＥＧ）ｊ－Ｒ１１によって置換された天然アミノ酸もしくは重合度２～１０のオリゴマー天然アミノ酸であり、
－（ＰＥＧ）ｉ－と－（ＰＥＧ）ｊ－は、それぞれＰＥＧフラグメントであり、指定された数の連続した－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）－構造単位又は連続した－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）－構造単位を含み、任意に、１つの末端にＣ１－１０アルキレン基が付加され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基から選択され、
Ｒ１１はＣ１－１０アルキル基であり、
ｎは２～２０の任意の整数であり、
ｄは０又は１～６の任意の整数であり、
各ｉは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、
各ｊは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｊは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは８～１２であり、特に８又は１２である。
一実施形態において、Ｌ２は、ｐが０又は１～５の整数である－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＨ２）２（ＣＯ）－、
Figure 2024514174000012
 及びｂが１～１０の整数である
Figure 2024514174000013
 から選択される。
一実施形態において、上記Ｌ２構造中のカルボニル基はＬ１に連結され、別の連結部位はｏｐＳｕに連結される。
一実施形態において、ｐは０～３であり、好ましくは３である。
Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合又は
Figure 2024514174000014
 から選択され、
各ｉ、ｊ及びｋは、独立して１～１００の整数から選択される。
一実施形態において、各ｉ、ｊ及びｋは、独立して１～２０の整数から選択される。一実施形態において、各ｉ、ｊ及びｋは、独立して１～１２の整数から選択される。
一実施形態において、各ｉは、独立して２～８の整数から選択され、特に４である。
一実施形態において、各ｊは、独立して８～１２の整数から選択され、特に８又は１２である。
一実施形態において、各ｋは、独立して１～７の整数から選択され、特に１又は３又は５である。
一実施形態において、Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合、又は両端にそれぞれアミノ基とカルボニル基を有するＣ１－２０アルキレン基、又は両端にそれぞれアミノ基とカルボニル基を有する一定長のＰＥＧフラグメント（－（ＰＥＧ）ｉ－と表される）、又は側鎖上でそれぞれ独立して非置換の又は一定長のＰＥＧフラグメント（－（ＰＥＧ）ｊ－と表される）によって置換される１つ又は複数の天然アミノ酸から選択される。
一実施形態において、－（ＰＥＧ）ｉ－は、－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｉ－又は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－を含み、そして任意に、１つの末端にＣ１－１０アルキレン基が付加され、－（ＰＥＧ）ｊ－は、－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－又は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－を含み、そして任意に、１つの末端にＣ１－１０アルキレン基が付加される。非常に具体的な一実施形態において、－（ＰＥＧ）ｉ－は、－Ｃ２Ｈ４－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｉ－又は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－を含む。
なお、分子中に２つ以上のＬｄ１、Ｂ、Ｌ２又はＬ１構造が存在する場合、各Ｌｄ１、Ｂ、Ｌ２又はＬ１の構造は独立して選択されることを理解すべきである。分子中に２つ以上のＲｘ（ｘは、１、２、３、４、５、６、７、８、９等である）がある場合、各Ｒｘは独立して選択される。いくつかの実施形態において、分子中の「ｘ」は、追加の単一アポストロフィ（’）又は複数のアポストロフィ（例えば、’’、’’’、’’’’等）で表されるか又は追加の単一アポストロフィ（’）又は複数のアポストロフィ（例えば、’’、’’’、’’’’等）で表されず、例えば、Ｒ、Ｒ１’、Ｒ１’’、Ｒ１’’’、Ｒ２’、Ｒ２’’、Ｒ２’’’等であり、ここで各Ｒｘは、追加の単一アポストロフィ又は複数のアポストロフィの有無にかかわらず、独立して選択される。他のＲｘ、例えばＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及び「Ｌｄ１」、「Ｂ」、「Ｌ２」、「Ｌ１」も、同様に理解すべきである。いくつかの実施形態において、分子中の「ｉ」は追加の数字で表されるか又は追加の数字で表されず、例えば、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４等であり、ここの数字は順序を表すものではなく、単に「ｉ」を区別するために使用される。各「ｉ」は追加の数字の有無にかかわらず、独立して選択される。
一実施形態において、切断可能配列１は、ＧＬｙ－ＧＬｙ－Ｐｈｅ－ＧＬｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ及びそれらの組み合わせから選択され、好ましい切断可能配列１はＧＬｙ－ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙである。
一実施形態において、Ｗは水素である。
一実施形態において、Ｒ１１は、Ｃ１－６アルキル基であり、好ましくはメチル基である。
一実施形態において、ｎは、２～５の整数であり、特に３である。
一実施形態において、ｄは、０、又は１～４の任意の整数であり、好ましくは０、１、２又は３である。
チオスクシンイミドは、生理学的条件下では不安定であり、コンジュゲーション部位での切断を引き起こす逆マイケル付加が発生しやすい。また、系内に他のチオール化合物が存在する場合、チオスクシンイミドは、別のチオール化合物とチオール基を交換することもできる。この２つの反応はどちらもペイロードの脱落と毒副作用を引き起こすことがある。本発明において、リンカーに適用される時、開環したスクシンイミド構造は逆マイケル付加又はチオール基の交換が発生しなくなるため、製品はより安定になる。開環反応の方法は、ＷＯ２０１５１６５４１３Ａ１を参照することができる。
開環スクシンイミド部分を含む化合物は、スクシンイミド開環反応の効率にかかわらず、半分取／分取ＨＰＬＣ又は他の適切な分離手段によって精製して、高純度と確定した成分を得ることができる。
リガーゼ受容体又は供与体基質の認識配列を含む部分
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分は、リガーゼ受容体又は供与体基質の認識配列であり、リガーゼの触媒作用下で、式（Ｉ）の化合物と標的化分子との酵素触媒カップリングを促進する。標的化分子は任意に修飾され、リガーゼ受容体又は供与体基質の対応する認識配列を含む。
一実施形態において、リガーゼはトランスペプチダーゼである。一実施形態において、リガーゼは、天然トランスペプチダーゼ、非天然トランスペプチダーゼ、それらの変異体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。非天然トランスペプチダーゼは、天然トランスペプチダーゼを操作することによって得られたものであり得るが、これらに限定されない。好ましい一実施形態において、リガーゼは、天然ソルターゼ、非天然ソルターゼ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。天然ソルターゼの種類は、ソルターゼＡ、ソルターゼＢ、ソルターゼＣ、ソルターゼＤ、ソルターゼＬ．プランタルム等を含む（ＵＳ２０１１０３２１１８３Ａ１）を含む。異なる分子又は構造フラグメント間の特異的なカップリングを実現するために、リガーゼの種類はリガーゼ認識配列に対応する。
いくつかの実施形態において、リガーゼは、ソルターゼＡ、ソルターゼＢ、ソルターゼＣ、ソルターゼＤ、及びソルターゼＬ．プランタルムから選択されるソルターゼである。これらの実施形態において、リガーゼ受容体基質の認識配列は、オリゴマーグリシン、オリゴマーアラニン、及び重合度３～１０のオリゴマーグリシン／アラニン混合物からなる群から選択される。特定の一実施形態において、リガーゼ受容体基質の認識配列はＧｎであり、ここでＧはグリシン（Ｇｌｙ）であり、ｎは２～１０の整数である。
別の特定の実施形態において、リガーゼは、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）由来のソルターゼＡである。それに応じて、リガーゼ認識配列は、該酵素の典型的な認識配列ＬＰＸＴＧであり得る。さらなる特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質認識配列はＬＰＸＴＧＪであり、リガーゼ受容体基質認識配列はＧｎであり、ここでＸは天然又は非天然の任意の単一アミノ酸であり得、Ｊは存在しないか、又は任意に標識され得る１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメントである。一実施形態において、Ｊは存在しない。さらなる実施形態において、Ｊは１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメントであり、その中の各アミノ酸は独立して任意の天然又は非天然のアミノ酸である。別の実施形態において、ＪはＧｍであり、ここでｍは１～１０の整数である。さらなる特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質認識配列はＬＰＥＴＧである。別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質認識配列はＬＰＥＴＧＧである。
一実施形態において、リガーゼは、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）由来のソルターゼＢであり、対応する供与体基質認識配列はＮＰＱＴＮであり得る。別の実施形態において、リガーゼは、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）由来のソルターゼＢであり、対応する供与体基質認識配列はＮＰＫＴＧであり得る。
さらなる実施形態において、リガーゼは、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のソルターゼＡであり、対応する供与体基質認識配列はＬＰＸＴＧＪであり得、ここでＪは上記で定義した通りである。別の実施形態において、リガーゼは、ストレプトミセス・セリカラー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ）由来のソルターゼｓｕｂｆａｍｉｌｙ ５であり、対応する供与体基質認識配列はＬＡＸＴＧであり得る。
さらなる実施形態において、リガーゼは、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）由来のソルターゼＡであり、対応する供与体基質認識配列はＬＰＱＴＳＥＱであり得る。
リガーゼ認識配列は、手動スクリーニングによって最適化された他の斬新なトランスペプチダーゼ認識配列であり得る。
反応性基を含む部分
ペイロードと連結するための反応性基
一実施形態において、Ｂは末端基Ｒ１０であり、Ｌ１中の切断可能配列１はペイロードに連結される。この場合、切断可能配列１とペイロードを連結して得られた分子にはＢが存在しない。一実施形態において、Ｂは、ペイロードへの連結に使用される。ペイロードとの連結のために、式（Ｉ）の化合物は反応性基を含む。一実施形態において、式（Ｉ）の化合物中のＢは、アミド結合又はエステル結合又はエーテル結合を介してペイロードに連結される。一実施形態において、式（Ｉ）のＢ中の反応性基は、独立して、縮合反応、求核付加又は求電子付加のための反応性基（例えば、反応性Ｃ＝Ｏ部分、反応性Ｃ＝Ｃ－Ｃ＝Ｏ部分、アミノ基、アミノ基、ヒドロキシル基又はチオール基）であり、又は置換反応のための反応性基（例えば、Ｏ、Ｃ、Ｎ又はＳ原子に連結される脱離基）である。一実施形態において、Ｂ中の反応性基は、独立して、カルボキシル基、活性エステル、アルデヒド基、アミノ基、アミノ基、ヒドロキシル基及びチオール基から選択される。具体的な一実施形態において、ペイロードに連結するためのＢ中の反応性基は、独立して、アミノ基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボキシル基及び活性エステルから選択される。
一実施形態において、Ｂ中の反応性基は、独立して、アミノ基、アミノ基又はヒドロキシル基であり、ペイロード中の対応する基（例えば、カルボキシル基、スルホン酸基、遊離－ＯＨ末端を有するホスホリル基、活性エステル、酸塩化物又はイソシアネート）と反応する。別の実施形態において、Ｂ中の反応性基は、独立して、カルボキシル基又は活性エステルであり、ペイロード中の対応する基（例えば、アミノ基、アミノ基又はヒドロキシル基）と反応する。
一実施形態において、Ｂ中の反応性基は、独立して、アミノ基、ヒドロキシル基又はチオール基であり、ペイロード中の対応する基（例えば、ハロゲン、ヒドロキシル基、アルデヒド基）と反応する。別の実施形態において、Ｂ中の反応性基は、独立して、ヒドロキシル基であり、ペイロード中の対応する基（例えば、ハロゲン又はヒドロキシル基）と反応する。
一実施形態において、各Ｂは、独立して、Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせである。
一実施形態において、Ｓｐ１は、ＰＡＢＣ、アセタール、ヘテロアセタール及びそれらの組み合わせから選択される。一実施形態において、Ｓｐ１は、アセタール、ヘテロアセタール又はＰＡＢＣである。一実施形態において、ヘテロアセタールはＮ，Ｏ－ヘテロアセタールから選択される。一実施形態において、Ｓｐ１は、－Ｏ－ＣＨ２－Ｕ－又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であり、ここで－Ｏ－又は－ＮＨ－は切断可能配列１に連結される。Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、好ましくはＯ又はＳである。一実施形態において、Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮであり、好ましくはＯ又はＳである。
一実施形態において、Ｂは、Ｒ１０であるか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－Ｒ１０であるか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－Ｒ１０である。
一実施形態において、Ｒ１０は、水素、ヒドロキシ基であるか又は
Figure 2024514174000015
 である。一実施形態において、Ｒ１０は水素である。一実施形態において、Ｒ１０は、ヒドロキシル基又は
Figure 2024514174000016
 である。
一実施形態において、Ｒ１０は、Ｂとペイロードとの反応から生じる生成物分子には現れない構造部分を表す。
式（Ｉ）の化合物の具体的な実施形態
一実施形態において、Ｗは水素であり、各ＬＫａは
Figure 2024514174000017
 である。一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は式（Ｉ－１）の構造を有する。
Figure 2024514174000018
一実施形態において、Ｌｄ２は結合であり、ｄは０である。一実施形態において、式（Ｉ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000019
一実施形態において、ｄは０であり、Ｌｄ２は
Figure 2024514174000020
 である。一実施形態において、式（Ｉ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000021
一実施形態において、ｄは１、２又は３であり、Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、
Figure 2024514174000022
 から選択される。一実施形態において、式（Ｉ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000023
一実施形態において、Ｌｄ２は
Figure 2024514174000024
 であり、ｄは０である。一実施形態において、式（Ｉ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000025
一実施形態において、ｄは１、２又は３であり、Ｌｄ２は
Figure 2024514174000026
 であり、そして各Ｌｄ１は、独立して、
Figure 2024514174000027
 から選択される。一実施形態において、式（Ｉ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000028
一実施形態において、ｎは３であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＨ２）２（ＣＯ）－であり、ｐは３であり、Ｌ１はＧＧＦＧであり、Ｂは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－Ｒ１０又は－Ｒ１０又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－Ｒ１０であり、ＵはＯであり、ｇは１である。一実施形態において、リンカーＬＡ３０１－１は次の構造を有する。
Figure 2024514174000029
一実施形態において、リンカーＬＡ３０１－２は次の構造を有する。
Figure 2024514174000030
一実施形態において、リンカーＬＡ３０１－３は次の構造を有する。
Figure 2024514174000031
一実施形態において、リンカーＬＡ３０１－４は次の構造を有する。
Figure 2024514174000032
Figure 2024514174000033
一実施形態において、リンカーＬＡ３０１－５は次の構造を有する。
Figure 2024514174000034
一実施形態において、リンカーＬＡ３０２－１は次の構造を有する。
Figure 2024514174000035
一実施形態において、リンカーＬＡ３０２－２は次の構造を有する。
Figure 2024514174000036
一実施形態において、リンカーＬＡ３０２－３は次の構造を有する。
Figure 2024514174000037
Figure 2024514174000038
一実施形態において、リンカーＬＡ３０２－４は次の構造を有する。
Figure 2024514174000039
Figure 2024514174000040
一実施形態において、ｉは４であり、ｇは１であり、Ｒ１１はメチル基である。
一実施形態において、リンカーＬＡ３０１－２は、次のリンカーＬＡ３０１－２－１～ＬＡ３０１－２－３に示す通りである。
Figure 2024514174000041
一実施形態において、ｉは４であり、ｊは８であり、ｇは１であり、Ｒ１１はメチル基である。一実施形態において、リンカーＬＡ３０２－２は、次のリンカーＬＡ３０２－２－１～ＬＡ３０２－２－３に示す通りである。
Figure 2024514174000042
一実施形態において、ｉは４であり、ｊは１２であり、ｇは１であり、Ｒ１１はメチル基である。一実施形態において、リンカーＬＡ３０２－２は、次のリンカーＬＡ３０２－２－４～ＬＡ３０２－２－６に示す通りである。
Figure 2024514174000043
ペイロードを有する式（Ｉ）の化合物
Ｂに含まれる反応性基は、別の反応性基を含むペイロードと共有コンジュゲーションして、ペイロードを有する式（Ｉ）の化合物を得る。
さらなる態様では、本発明は、式（ＩＩ）の構造を有する化合物を提供し、
Figure 2024514174000044
 式中、
Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
Ｐは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
ｎ、ｄ、Ｌｄ１、Ｌｄ２、ＬＫａ及びＬＫｂは式（Ｉ）に定義した通りである。
上記で定義したように、式（Ｉ）の化合物中の各ＬＫｂは、独立してＬ２―Ｌ１―Ｂから選択される。各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基である。一実施形態において、Ｒ１０は、Ｂとペイロードとの反応から生じる生成物分子には現れない構造部分を表す。
一実施形態において、Ｐは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分に連結して、式（ＩＩ）の化合物を形成する。上述したように、式（ＩＩ）の化合物のＢ―Ｐ構造にはＲ１０が現れない。
なお、式（Ｉ）の化合物中のＢが末端基Ｒ１０である場合、式（ＩＩ）の化合物にはＲ１０が現れないため、式（ＩＩ）の化合物のＢ―Ｐ構造中のＢはそれに応じて存在しないことを理解すべきである。
一実施形態において、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここでＰは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基であり、Ｒ１０は、Ｂとペイロードとの反応から生じる生成物分子には現れない構造部分を表す。
一実施形態において、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで各Ｂは、独立して、存在しないか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせである。好ましい一実施形態において、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで各Ｂは、独立して、存在しないか、又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか、又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－である。別の実施形態において、ＭはＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐである。一実施形態において、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐ中のＢは存在しない。一実施形態において、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐ中のＢは、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせである。一実施形態において、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐ中のＢは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－である。Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、好ましくはＯ又はＳである。一実施形態において、式（Ｉ）の化合物中のＢは、アミド結合又はエステル結合又はエーテル結合を介してペイロードに連結される。
上述したように、式（Ｉ）の化合物中のＢが末端基Ｒ１０である場合、式（ＩＩ）の化合物のＢ―Ｐ構造中のＢはそれに応じて存在しない。この場合、Ｌ１中の切断可能配列１がペイロードに連結されて式（ＩＩ）の化合物が形成され、ここで切断可能配列１とペイロードとを連結して得られた分子中にはＢが存在しないと理解されてもよい。したがって、一実施形態において、Ｐは、式（Ｉ）の化合物のＬ１部分に連結されて、式（ＩＩ）の化合物が形成される。したがって、一実施形態において、ＭはＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり且つＢは存在せず、Ｍは、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｐと表されてもよい。
ペイロード
本発明において、ペイロードは、小分子化合物、核酸及び核酸類似体、トレーサー分子（蛍光分子等を含む）、短ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、及びタンパク質からなる群から選択され得る。一実施形態において、ペイロードは、小分子化合物、核酸分子、トレーサー分子からなる群から選択る。好ましい一実施形態において、ペイロードは小分子化合物から選択される。より好ましい実施形態において、ペイロードは、細胞毒素及びそのフラグメントからなる群から選択される。
一実施形態において、細胞毒素は、微小管細胞骨格を標的とする薬物からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、タキサン類、メイタンシノイド類、アウリスタチン類、エポチロン類（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ）、コンブレタスタチンＡ－４ホスフェート（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ－４ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、コンブレタスタチンＡ－４（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ－４）及びその誘導体、インドール－スルホンアミド類、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）等のビンブラスチン類、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビンフルニン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、ビングリシネート（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ）、無水ビンブラスチン（ａｎｈｙ－ｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドラスタチン１０（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ １０）及びその類似体、ハリコンドリンＢ、エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、インドール－３－オキサミド類、ポドフィロトキシン類、７－ジエチルアミノ－３－（２′－ベンゾオキサゾリル）－クマリン（ＤＢＣ）、ディスコデルモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、ラウリマライド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）からなる群から選択される。別の実施形態において、細胞毒素は、例えば、カンプトテシン類及びその誘導体、ミトキサントロン、ミトグアゾン等のＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェナメット、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード類からなる群から選択される。さらなる好ましい実施形態において、細胞毒素は、例えば、カルムスチン、フルベンズロン（ｆｌｕｂｅｎｚｕｒｏｎ）、ホルモテロール、ロムスチン、ニムスチン、ラムスチン等のニトロソウレア類からなる群から選択される。一実施形態において、細胞毒素は、アジリジン類からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレデパ、及びウレデパからなる群から選択される。一実施形態において、細胞毒素は、抗腫瘍抗生物質からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、エンジイン抗生物質類からなる群から選択される。より好ましい一実施形態において、細胞毒素は、ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）、ネオカルチノスタチン、及びアクラシノマイシンからなる群から選択される。別の好ましい実施形態において、細胞毒素は、アクチノマイシン、アントラマイシン、ブレオマイシン類、アクチノマイシンＣ、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、カルミノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、デトルビシン、アドリアマイシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン類、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン素、ペプロマイシン、ピューロマイシン、鉄アドリアマイシン、ロドルビシン、ルフォクロモマイシン、ストレプトゾシン、ジノスタチン、ゾルビシンからなる群から選択される。さらなる好ましい実施形態において、細胞毒素は、トリコテセン類からなる群から選択される。より好ましい一実施形態において、細胞毒素は、Ｔ－２毒素、（ベルカリン）ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ、バシロクポリンＡ、及びアンギジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）からなる群から選択される。一実施形態において、細胞毒素は、抗腫瘍アミノ酸誘導体からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、ウベニメックス、アザセリン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシンからなる群から選択される。別の実施形態において、細胞毒素は、葉酸類似体からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、ジメチル葉酸、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート、及びエダトレキサートからなる群から選択される。一実施形態において、細胞毒素は、プリン類似体からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、及びチオグアニンからなる群から選択される。さらなる実施形態において、細胞毒素は、ピリミジン類似体からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、アンシタビン、ゲムシタビン、エノシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、及びフロクスウリジンからなる群から選択される。一実施形態において、細胞毒素は、アンドロゲン類から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、及びテストラクトンからなる群から選択される。別の実施形態において、細胞毒素は、抗副腎薬からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、アミノグルテチミド、ミトタン、及びトリロスタンからなる群から選択される。一実施形態において、細胞毒素は、抗アンドロゲン類からなる群から選択される。好ましい一実施形態において、細胞毒素は、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸リュープロレリン、及びゴセレリンからなる群から選択される。さらなる実施形態において、細胞毒素は、プロテインキナーゼ阻害剤及びプロテアソーム阻害剤からなる群から選択される。別の実施形態において、細胞毒素は、ビンブラスチン類、コルヒチン類、タキサン類、アウリスタチン類、メイタンシノイド類、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｎｕｂｉｃｉｎ）、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｕｃｉｎ）、ＳＮ－３８、クリプトフィシン類似体（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇ）、デルクステカン（ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ）、デュオカルマジン（ｄｕｏｃａｒｍａｚｉｎｅ）、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、センタナマイシン（ｃｅｎｔａｎａｍｙｃｉｎ）、ｄｏｌａｓｔａｎｓｉｎｅ、及びピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）（ＰＢＤ）からなる群から選択される。特定の一実施形態において、細胞毒素は、ビンブラスチン類、コルヒチン類、タキサン類、アウリスタチン類、及びメイタンシノイド類からなる群から選択される。
特定の一実施形態において、細胞毒素は、例えばＤＸ８９５１ｆ等のエキサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）又はその誘導体である。
特定の一実施形態において、細胞毒素は、例えばＤＭ１等のメイタンシノイドである。なお、チオール基部分を含む細胞毒素を使用する時、チオール基部分は、マレイミド部分と反応してチオスクシンイミド、例えばＤＭ１等のメイタンシノイドを形成することができ、細胞毒素は、チオスクシンイミドを介して直接連結できることを注意すべきである。この場合、いくつかの実施形態において、ペイロードとチオール基部分が共同で細胞毒素を構成するため、この場合、ペイロードは、チオール基部分を除いた細胞毒素分子の残りの部分を表すことが理解可能である。
特定の一実施形態において、細胞毒素は、例えばＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）、ＭＭＡＤ（モノメチルアウリスタチンＤ）等のアウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）である。アウリスタチン化合物の合成及び構造はＵＳ２００６０２２９２５３に開示されており、その開示内容の全ては参照により本明細書に組み込まれる。
ペイロードは、式（Ｉ）の化合物中の反応性基と反応することによりペイロードを式（Ｉ）の化合物と共有コンジュゲーションさせることができる反応性基を含む。反応性基を含まない化合物には、ペイロードを得るために適切な誘導体化が必要である。
特定の一実施形態において、細胞毒素は次の式（ｉ）の化合物である。
Figure 2024514174000045
 式中、ｇは１～６の任意の整数であり、
一実施形態において、ｇは１～３の任意の整数であり、好ましくは１である。
一実施形態において、細胞毒素は次の化合物１～１４から選択され、ここで波形結合は、式（Ｉ）の化合物との連結部位を表す。
Figure 2024514174000046
いくつかの実施例において、ペイロードは、ＤＸ８９５１ｆ（化合物９）、ＤＸｄ－（１）（化合物１０）、及びＤＸｄ－（２）（化合物１４）から選択され、好ましくはＤＸ８９５１ｆ又はＤＸｄ－（１）であり、より好ましくはＤＸｄ－（１）である。
ペイロードを有する式（Ｉ）の化合物の調製
一実施形態において、連結ユニットとペイロードは、縮合反応、求核付加、求電子付加等を含むが、これらに限定されない、当分野で既知の任意の反応を用いて上記で定義した反応性基を介して連結される。
一実施形態において、ペイロードは細胞毒素である。一実施形態において、連結ユニット－ペイロード中間体（番号はＬＢｘである）は、次の表に示す通りである。
Figure 2024514174000047
コンジュゲート及びその調製
さらに、リガーゼ認識配列を含む部分を有する、ペイロードを有する式（Ｉ）の化合物は、リガーゼ認識配列を含む他の分子とコンジュゲーションすることができるため、例えば抗体－薬物コンジュゲート等の標的化分子－薬物コンジュゲートの調製に用いることができる。したがって、さらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物、標的化分子及びペイロードを含むコンジュゲートを提供する。
さらなる態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）の構造を有するコンジュゲートを提供し、
Figure 2024514174000048
 式中、
ｎ、ｄ、Ｌｄ１及びＬｄ２は式（Ｉ）に定義した通りであり、
Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
Ｐは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
Ａは、式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分に連結される標的化分子であり、Ｇはグリシンであり、
ｚは１～２０の整数である。
一実施形態において、ＬＫａとＬＫｂは式（Ｉ）に定義した通りである。
上記で定義したように、一実施形態において、式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分は、リガーゼ受容体又は供与体基質の認識配列であり、リガーゼの触媒作用下で式（Ｉ）の化合物と標的化分子との酵素触媒カップリングを促進するものである。標的化分子は任意に修飾され、リガーゼ受容体又は供与体基質の対応する認識配列を含む。
なお、標的化分子Ａと式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分とがリガーゼの触媒作用下でコンジュゲーションする時、リガーゼ受容体基質認識配列とリガーゼ供与体基質認識配列は反応して対応する生成物配列を得ることを理解すべきである。
一実施形態において、標的化分子Ａは、リガーゼの供与体基質認識配列ＬＰＸＴＧＪを含み、ここでＪは上記で定義した通りである。リガーゼの受容体基質の対応する認識配列Ｇｎとコンジュゲーションする時、ＬＰＸＴＧＪ配列中のグリシンの上流ペプチド結合がソルターゼＡによって切断され、生成された中間体がＧｎの遊離Ｎ末端に連結されて新しいペプチド結合が生成される。得られたアミノ酸配列はＬＰＸＴＧｎである。配列ＧｎとＬＰＸＴＧＪは上記で定義した通りである。
一実施形態において、Ｐは式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結され、Ａは式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分に連結され、式（ＩＩＩ）の化合物が形成される。
上述したように、式（ＩＩＩ）の化合物のＢ―Ｐ構造にはＲ１０が現れない。上述したように、式（Ｉ）の化合物中のＢが末端基Ｒ１０である時、式（ＩＩＩ）の化合物のＢ―Ｐ構造中のＢはそれに応じて存在しない。
上述したように、式（ＩＩＩ）の化合物のＡ―Ｇｎ構造において、Ａは、リガーゼ受容体基質認識配列とリガーゼ供与体基質認識配列との反応から得られた対応する生成物配列を任意に含む。
一実施形態において、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここでＰは、式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基であり、Ｒ１０は、Ｂとペイロードとの反応から生じる生成物分子には現れない構造部分を表す。
一実施形態において、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで各Ｂは、独立して、存在しないか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせである。好ましい一実施形態において、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで各Ｂは、独立して、存在しないか、又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか、又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－である。別の実施形態において、Ｍは、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐである。一実施形態において、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐ中のＢは存在しない。一実施形態において、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐ中のＢは、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせである。一実施形態において、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐ中のＢは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－である。Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、好ましくはＯ又はＳである。一実施形態において、式（Ｉ）の化合物中のＢは、アミド結合又はエステル結合又はエーテル結合を介してペイロードに連結される。一実施形態において、ＭはＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり且つＢは存在せず、ＭはＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｐと表されてもよい。
標的化分子
一実施形態において、標的化分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
一実施形態において、標的化分子は、抗ヒトＨＥＲ２抗体又はその抗原結合フラグメントである。抗ヒトＨＥＲ２抗体の例としては、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）及びトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）を含むが、これらに限定されない。ペルツズマブは、ＨＥＲ２の２番目の細胞外ドメイン（ＥＣＤ２）に結合し、ＨＥＲ２陽性乳癌の治療用に承認されている。トラスツズマブは、ＨＥＲ２の４番目の細胞外ドメイン（ＥＣＤ４）に結合し、ＨＥＲ２陽性の乳癌及び胃癌の治療用に承認されている。
好ましい一実施形態において、抗ヒトＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブに基づいて操作された抗ＨＥＲ２抗体から選択される１つ又は複数であるである。
好ましい一実施形態において、抗ヒトＨＥＲ２抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント及び抗体模倣物から選択される組換え抗体である。一実施形態において、抗体模倣物は、ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、ナノボディから選択される。式（Ｉ）の化合物とのコンジュゲーションについて、本発明の標的化分子は、式（Ｉ）の化合物中のＤ１又はＤ２に連結するための修飾部分を含み得る。このような修飾部分の導入位置は限定されず、例えば、標的化分子が抗体である時、その導入位置は、抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端又はＮ末端であってもよいが、これらに限定されない。
選択的な一実施形態において、式（Ｉ）の化合物中のＤ１又はＤ２とのコンジュゲーションのための修飾部分は、例えば化学修飾方法を使用して抗体の重鎖又は軽鎖の非末端位置に導入することができる。
一実施形態において、本発明の標的化分子は、末端修飾を含み得る抗体又はその抗原結合フラグメントである。末端修飾とは、抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端又はＮ末端における修飾を指し、該修飾は、例えばリガーゼ認識配列を含む。別の実施形態において、末端修飾は、２～１００個のアミノ酸を含むスペーサーＳｐ２をさらに含んでもよく、ここで抗体、Ｓｐ２及びリガーゼ認識配列は順に連結される。好ましい一実施形態において、Ｓｐ２は、２～２０個のアミノ酸を含むスペーサー配列である。特定の一実施形態において、Ｓｐ２は、ＧＡ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳから選択されるスペーサー配列であり、特にＧＡである。
好ましい一実施形態において、前記抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖は、野生型（ＬＣ）と、リガーゼ認識配列ＬＰＸＴＧを直接導入することによって修飾されるＣ－末端修飾軽鎖（ＬＣＣＴ）と、短いペプチドスペーサー及びリガーゼ供与体基質認識配列ＬＰＸＴＧを導入することによって修飾されるＣ－末端修飾軽鎖（ＬＣＣＴＬ）との３つの種類を含む。抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖は、野生型（ＨＣ）と、リガーゼ認識配列ＬＰＸＴＧを直接導入することによって修飾されるＣ－末端修飾重鎖（ＨＣＣＴ）と、短いペプチドスペーサー及びリガーゼ供与体基質認識配列ＬＰＸＴＧを導入することによって修飾されるＣ－末端修飾重鎖（ＨＣＣＴＬ）との３つの種類を含む。Ｘは、任意の天然又は非天然の単一のアミノ酸であり得る。式（ＶＩＩ）の化合物中のｚが１又は２である場合、上記重鎖と軽鎖の組み合わせは、アミノ酸配列表に示すように、８つの好ましい抗体分子を形成することができる。
本発明のコンジュゲートは、ペイロードをさらに含んでもよい。ペイロードは上述した通りである。
コンジュゲートの具体的な実施形態
一実施形態において、Ｑは水素であり、各ＬＫａは
Figure 2024514174000049
 である。一実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ－１）の構造を有する。
Figure 2024514174000050
一実施形態において、Ｌｄ２は結合であり、ｄは０である。一実施形態において、式（ＩＩＩ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000051
一実施形態において、ｄは０であり、Ｌｄ２は
Figure 2024514174000052
 である。一実施形態において、式（ＩＩＩ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000053
一実施形態において、ｄは１、２又は３であり、Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、
Figure 2024514174000054
 から選択される。一実施形態において、式（ＩＩＩ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000055
一実施形態において、Ｌｄ２は
Figure 2024514174000056
 であり、ｄは０である。一実施形態において、式（ＩＩＩ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000057
一実施形態において、ｄは１、２又は３であり、Ｌｄ２は
Figure 2024514174000058
 であり、各Ｌｄ１は、独立して、
Figure 2024514174000059
 から選択される。一実施形態において、式（ＩＩＩ－１）の化合物は次の通りである。
Figure 2024514174000060
一実施形態において、ｚは１～４である。一実施形態において、ｚは２又は４である。一実施形態において、ｚは２である。一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－１、ＬＣ３０１－２、ＬＣ３０２－１において、ｚは２又は４である。一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－３、ＬＣ３０１－４、ＬＣ３０１－５、ＬＣ３０２－２、ＬＣ３０２－３及びＬＣ３０２－４において、ｚは２である。
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物中のＢは末端基Ｒ１０であり、Ｌ１中の切断可能配列１はペイロードに連結されて式（ＩＩ）の化合物が形成され、ここで切断可能配列１とペイロードとを連結して得られた分子にはＢが存在しない。この場合、ＭはＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり且つＢは存在しないと理解されてもよい。この場合、Ｍは、ＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｐと表されてもよい。一実施形態において、ｎは３であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＨ２）２（ＣＯ）－であり、ｐは３であり、Ｌ１はＧＧＦＧであり、Ｂは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか又は存在しないか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－であり、ＵはＯであり、ｇは１である。一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－１は次の構造を有する。
Figure 2024514174000061
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－２は次の構造を有する。
Figure 2024514174000062
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－３は次の構造を有する。
Figure 2024514174000063
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－４は次の構造を有する。
Figure 2024514174000064
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－５は次の構造を有する。
Figure 2024514174000065
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０２－１は次の構造を有する。
Figure 2024514174000066
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０２－２は次の構造を有する。
Figure 2024514174000067
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０２－３は次の構造を有する。
Figure 2024514174000068
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０２－４は次の構造を有する。
Figure 2024514174000069
一実施形態において、ｉは４であり、ｇは１であり、Ｒ１１はメチル基である。
一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０１－２は、次のコンジュゲートＬＣ３０１－２－１に示す通りである。
Figure 2024514174000070
一実施形態において、ｉは４であり、ｊは８であり、ｇは１であり、Ｒ１１はメチル基である。一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０２－２は、次のコンジュゲートＬＣ３０２－２－１に示す通りである。
Figure 2024514174000071
一実施形態において、ｉは４であり、ｊは１２であり、ｇは１であり、Ｒ１１はメチル基である。一実施形態において、コンジュゲートＬＣ３０２－２は、次のコンジュゲートＬＣ３０２－２－４に示す通りである。
Figure 2024514174000072
コンジュゲートの調製
本発明のコンジュゲートは、当分野で既知の任意の方法によって調製することができる。いくつかの実施形態において、コンジュゲートは、標的化分子とペイロードを有する式（Ｉ）の化合物とのリガーゼ触媒下での部位特異的なコンジュゲーションによって調製され、ここで標的化分子はリガーゼ認識配列によって修飾される。前記方法はステップＡとステップＢを含む。
ステップＡ． 連結ユニット－ペイロード中間体の調製
好ましい一実施形態において、式（Ｉ）の化合物中のＢは、反応性基を介して別の反応性基を含むペイロードに共有連結される。
本発明の式（Ｉ）の化合物を用いて調製された連結ユニット－ペイロード中間体は、構造が明確で、組成が明確で、純度が高いため、抗体とのカップリング反応時、導入される不純物が少ないか又は他の不純物が導入されない。このような中間体を、リガーゼ認識配列を含む修飾抗体とのリガーゼ触媒下での部位特異的なコンジュゲーションに用いると、高度に制御可能な品質を有する均質なＡＤＣが得られる。
ステップＢ． 標的化分子を、ペイロードを有する式（Ｉ）の化合物に連結する
本発明の標的化分子は、当分野で既知の任意の方法によってペイロードを有する式（Ｉ）の化合物（即ち式（ＩＩ）の化合物）にコンジュゲーションすることができる。
標的化分子とペイロードを有する式（Ｉ）の化合物は、基質のリガーゼ特異的認識配列を介して互いに連結される。認識配列は、使用される特定のリガーゼに依存する。一実施形態において、標的化分子は、軽鎖及び／又は重鎖のＣ末端に認識配列に基づく末端修飾が導入された抗体であり、標的化分子と式（ＩＩ）の化合物は、野生型又は最適化された操作リガーゼ又はそれらの任意の組み合わせの触媒作用及び適切な触媒反応条件下でコンジュゲーションする。
具体的な一実施形態において、リガーゼはソルターゼＡであり、コンジュゲーション反応は次の解決手段で表すことができる。
Figure 2024514174000073
 三角形は抗体の一部を表し、五角形は式（ＩＩ）の化合物の一部を表す。ｎ、Ｘ及びＪはそれぞれ上記で定義した通りである。受容体基質の対応する認識配列Ｇｎとコンジュゲーションする時、ＬＰＸＴＧＪ配列中のグリシンの上流ペプチド結合がソルターゼＡによって切断され、生成された中間体がＧｎの遊離Ｎ末端に連結されて新しいペプチド結合が生成される。得られたアミノ酸配列はＬＰＸＴＧｎである。配列ＧｎとＬＰＸＴＧＪは上記で定義した通りである。
生理学的環境におけるコンジュゲートの代謝
腫瘍細胞中の一部又は全てのリンカーが切断されると、抗腫瘍化合物部分が放出されて抗腫瘍化合物の抗腫瘍作用が示される。リンカーは薬物との連結位置で切断されるため、抗腫瘍化合物はそれ自体固有の構造で放出されて固有の抗腫瘍作用が示される。
一実施形態において、切断可能配列１（例えば、ＧＧＦＧ）は、リソソーム酵素（例えば、カテプシンＢ及び／又はカテプシンＬ）によって切断することができる。
一実施形態において、Ｓｐ１は自己犠牲スペーサーを含む。一実施形態において、Ｓｐ１は、ＰＡＢＣ、アセタール又はヘテロアセタールを含む。一実施形態において、Ｌ１はＧＧＦＧである。一実施形態において、リンカーは－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－を含む。一実施形態において、－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－は、制限酵素部位と自己犠牲スペーサーの組み合わせを表し、細胞中で切断されて目標分子（例えば、薬物）を放出する。
具体的なコンジュゲートの表
一実施形態において、ペイロードは細胞毒素又はそのフラグメントである。一実施形態において、抗体は修飾トラスツズマブ、好ましくは、Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ（軽鎖ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、重鎖：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）又はＡｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ（軽鎖ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、重鎖：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）である。Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣとＡｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬの配列は、いずれもＡｂ０００１（トラスツズマブ）のアミノ酸配列に基づいており、軽鎖のＣ末端にＧＡＬＰＥＴＧＧ（Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ）が導入されるか、又は軽鎖と重鎖のＣ末端にＧＡＬＰＥＴＧＧ（Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ）が導入され、ここでＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬにおいて、Ａｂ０００１の重鎖のＣ末端のリジンは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のように維持してもよいし、又はＧＡＬＰＥＴＧＧが導入される前に除去してもよい（結果の配列は配列リストに示されていない）。一実施形態において、抗体－薬物コンジュゲートは、次の表に示す通りである。
ＡＤＣの命名法：括弧内の数字は、抗体に連結することが意図されるペイロード（薬物）分子の数を表す。
Figure 2024514174000074
医薬組成物及び薬物製剤
本発明のさらなる目的は、予防的又は治療的に有効な量の本発明のコンジュゲート、及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供することである。
本発明の医薬組成物は、ヒト又は動物の症状を予防、緩和、防止又は治癒する効果が達成される限り、いかなる方法で投与することができる。例えば、投与経路に応じて様々な適切な剤形、特に注射用凍結乾燥粉末、注射剤又は注射用滅菌粉末等の注射剤を調製することができる。
用語「薬学的に許容される」とは、通常の医学的判断の範囲内で患者の組織と接触した時、不当な毒性、刺激性又はアレルギー反応等がなく、メリットとデメリットの比率が合理的であり、意図された用途に有効であることを意味する。
用語「薬学的に許容される担体」とは、薬学的に許容され、コンジュゲートの生物活性と特性を妨げない担体材料を指す。水性担体の例としては、緩衝生理食塩水等を含むが、これに限定されない。薬学的に許容される担体は、例えばｐＨ調整剤と緩衝剤、毒性調整剤等の組成物を生理的条件に近づける担体物質、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム等をも含む。
一実施形態において、本発明の医薬組成物の薬物対抗体比（ＤＡＲ）は、１～２０の整数又は非整数であり、例えば、約１～約１０、約１～約８、約１～約６、約１～約４、約１－３約、約１～約２．５、約１～約２である。特定の一実施形態において、本発明のコンジュゲートのＤＡＲは約２、約４、約６又は約８である。
治療方法及び用途
本発明のコンジュゲートは、腫瘍及び／又は自己免疫疾患の治療に用いることができる。コンジュゲート治療に敏感な腫瘍は、特定の腫瘍関連抗原又は細胞表面受容体を特徴とする腫瘍を含み、これらの腫瘍細胞はコンジュゲート中の標的化分子によって認識され、さらにコンジュゲート中のペイロード／細胞毒素によって死滅され得る。
したがって、さらなる態様では、本発明は、疾患、病症又は病状を治療する薬物の製造における、本発明のコンジュゲート又は本発明の医薬組成物の用途をさらに提供し、前記疾患、病症又は病状は、腫瘍又は自己免疫疾患から選択される。
別の態様では、本発明は、腫瘍又は自己免疫疾患の治療における本発明のコンジュゲート又は本発明の医薬組成物の用途を提供する。
さらなる態様では、本発明、必要とする個体に有効量の本発明のコンジュゲート又は本発明の医薬組成物を投与することを含む、腫瘍又は自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
好ましい一実施形態において、本発明で提供される抗ヒトＨＥＲ２抗体と小分子細胞毒素とを連結して形成されたコンジュゲートは、腫瘍細胞表面のＨＥＲ２に特異的に結合し、ＨＥＲ２発現の腫瘍細胞を選択的に死滅させることができる。別の好ましい一実施形態において、本発明は、疾患、病症又は病状を治療する薬物の製造における本発明のコンジュゲート又は本発明の医薬組成物の用途を提供し、前記疾患、病症又は病状は、ＨＥＲ２陽性の腫瘍から選択される。より好ましい実施形態において、前記疾患、病症又は病状は、乳癌、胃癌、肺癌、卵巣癌及び尿路上皮癌等からなる群から選択される。
被験者に投与されるコンジュゲートの投与量は大きい範囲で調整することができる。投与量は、医療専門家の判断の上で、具体的な投与経路及び被験者のニーズに応じて変化することができる。
上述したように、本発明の実施形態はさらに、次の［１］～［１７］を挙げることができる。
［１］
式（Ｉ’）の化合物であって、
Figure 2024514174000075
 式中、
Ｗは水素又はＬＫｂであり、
Ｙは水素又はＬＫａ－ＬＫｂであり、
ただし、ＷとＹが同時に水素でないことを条件とし、
各ＬＫａは、独立して、
Figure 2024514174000076
 から選択され、
ｏｐＳｕは、
Figure 2024514174000077
 又はそれらの混合物であり、
各ＬＫｂは、独立してＬ２―Ｌ１―Ｂから選択され、
各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、
Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基であり、
Ｌ１は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含む切断可能配列１であり、切断可能配列１は１～１０個のアミノ酸を含み、
Ｌ２は、結合であるか又はＣ２－２０アルキレン基であり、ここでアルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造は、－ＣＲ３Ｒ４－、－Ｏ－、－（ＣＯ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲ５－、
Figure 2024514174000078
 Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基、フェニレン基によって任意に置換され、ここでシクロアルキレン基、ヘテロシクリレン基、及びフェニレン基は、それぞれ独立して、非置換であるか、又はハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、－Ｃ１－１０アルキレン－ＮＨ－Ｒ８、及び－Ｃ１－１０アルキレン－Ｏ－Ｒ９から選択される少なくとも１つの置換基で置換され、
Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合であるか、又は－ＮＨ－Ｃ１－２０アルキレン－（ＣＯ）－、－ＮＨ－（ＰＥＧ）ｉ－（ＣＯ）－から選択されるか、又は側鎖上でそれぞれ独立して非置換の又は－（ＰＥＧ）ｊ－Ｒ１１によって置換された天然アミノ酸もしくは重合度２～１０のオリゴマー天然アミノ酸であり、
－（ＰＥＧ）ｉ－と－（ＰＥＧ）ｊ－は、それぞれＰＥＧフラグメントであり、指定された数の連続した－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）－構造単位又は連続した－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）－構造単位を含み、任意に、１つの末端にＣ１－１０アルキレン基が付加され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基から選択され、
Ｒ１１はＣ１－１０アルキル基であり、
ｎは２～２０の任意の整数であり、
ｄは０又は１～６の任意の整数であり、
各ｉは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、
各ｊは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｊは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは８～１２であり、特に８又は１２である、前記化合物。
［２］
Figure 2024514174000079
から選択される、上記［１］に記載の化合物。
［３］
Figure 2024514174000080
Figure 2024514174000081
 から選択され、
式中、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４である、上記［１］～［２］のいずれか１項に記載の化合物。
［４］
Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合又は
Figure 2024514174000082
 から選択され、
各ｋは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｋは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは１～７であり、特に１、３又は５である、上記［１］～［２］のいずれか１項に記載の化合物。
［５］
切断可能配列１は、ＧＬｙ－ＧＬｙ－Ｐｈｅ－ＧＬｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ、ＡＬＡ’－Ｌｅｕ－ＡＬＡ’－Ｌｅｕ、ＡＬＡ’－ＡＬＡ’－Ａｌａ及びそれらの組み合わせから選択され、好ましい切断可能配列１はＧＬｙ－ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙであり、
及び／又は
Ｓｐ１は、ＰＡＢＣ、アセタール、ヘテロアセタール及びそれらの組み合わせから選択され、好ましくは、Ｓｐ１は、アセタール、ヘテロアセタール又はＰＡＢＣであり、好ましくは、ヘテロアセタールは、Ｎ，Ｏ－ヘテロアセタールから選択され、好ましくは、Ｓｐ１は、－Ｏ－ＣＨ２－Ｕ－又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であり、ここで－Ｏ－又は－ＮＨ－は切断可能配列１に接続され、Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮであり、好ましくはＯ又はＳである、上記［１］～［４］のいずれか１項に記載の化合物。
［６］
Ｗは水素であり、及び／又は
Ｒ１０は、水素、ヒドロキシ基であるか又は
Figure 2024514174000083
 であり、
Ｒ１１は、Ｃ１－６アルキル基、好ましくはメチル基であり、及び／又は
ｎは、２～５の整数、特に３であり、及び／又は
ｄは、０、又は１～４の任意の整数であり、好ましくは０、１、２又は３である、上記［１］～［５］のいずれか１項に記載の化合物。
［７］
Figure 2024514174000084
Figure 2024514174000085
Figure 2024514174000086
Figure 2024514174000087
Figure 2024514174000088
Figure 2024514174000089
Figure 2024514174000090
Figure 2024514174000091
 から選択され、
各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、各ｇは独立して１～６の整数であり、好ましくは１～３であり、より好ましくは１である、上記［１］～［６］のいずれか１項に記載の化合物。
［８］
式（ＩＩ’）の構造を有する化合物であって、
Figure 2024514174000092
 式中、
Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
Ｐは、式（Ｉ’）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
ｎ、ｄ、Ｌｄ１、Ｌｄ２、ＬＫａ及びＬＫｂは上記［１］に定義した通りである、前記化合物。
［９］
式（ＩＩＩ’）の構造を有するコンジュゲートであって、
Figure 2024514174000093
 式中、
ｎ、ｄ、Ｌｄ１及びＬｄ２は上記［１］に定義した通りであり、
Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
Ｐは、式（Ｉ’）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
Ａは、式（Ｉ’）の化合物のＧｎ部分に連結される標的化分子であり、Ｇはグリシンであり、
ｚは１～２０の整数である、前記コンジュゲート。
［１０］
次の式（ＩＩＩ’－１）の構造を有する上記［９］に記載のコンジュゲート。
Figure 2024514174000094
［１１］
前記コンジュゲートは、次の構造を有し、
Figure 2024514174000095
Figure 2024514174000096
 好ましくは、ｚは１～４であり、好ましくは２であり、
各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、
各ｊは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｊは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは８～１２であり、特に８又は１２である、上記［９］又は［１０］に記載のコンジュゲート。
［１２］
前記標的化分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、好ましくは、前記抗体又は抗原結合フラグメントは、式（Ｉ’）の化合物中のＧｎ部分に連結するように修飾され、
好ましくは、前記抗体は、抗ヒトＨＥＲ２抗体である、上記［９］～［１１］のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
［１３］
前記ペイロードは細胞毒素又はそのフラグメントであり、式（Ｉ’）の化合物中のＢ部分又はＬ１部分に連結するための任意の誘導体化を有し、
好ましくは、細胞毒素は、タキサン類、メイタンシノイド類、アウリスタチン類、エポチロン類（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ）、コンブレタスタチンＡ－４ホスフェート（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ－４ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、コンブレタスタチンＡ－４（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ－４）及びその誘導体、インドール－スルホンアミド類、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）等のビンブラスチン類、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビンフルニン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、ビングリシネート（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ）、無水ビンブラスチン（ａｎｈｙ－ｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドラスタチン１０（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ １０）及びその類似体、ハリコンドリンＢ、エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、インドール－３－オキサミド類、ポドフィロトキシン類、７－ジエチルアミノ－３－（２′－ベンゾオキサゾリル）－クマリン（ＤＢＣ）、ディスコデルモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、ラウリマライド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）、カンプトテシン類及びその誘導体、ミトキサントロン、ミトグアゾン、窒素マスタード類、ニトロソウレア類、アジリジン類、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレデパ、ウレデパ、ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）、ネオカルチノスタチン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、ブレオマイシン類、アクチノマイシンＣ、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、カルミノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、デトルビシン、アドリアマイシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン素、ペプロマイシン、ピューロマイシン、鉄アドリアマイシン、ロドルビシン、ルフォクロモマイシン、ストレプトゾシン、ジノスタチン、ゾルビシン、トリコテセン類、Ｔ－２毒素、（ベルカリン）ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ、バシロクポリンＡ、アンギジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）、ウベニメックス、アザセリン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ジメチル葉酸、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート、エダトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、ゲムシタビン、エノシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、フロクスウリジン、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸リュープロレリン、プロテインキナーゼ阻害剤、及びプロテアソーム阻害剤からなる群から選択され、及び／又は
ビンブラスチン類、コルヒチン類、タキサン類、アウリスタチン類、メイタンシノイド類、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｎｕｂｉｃｉｎ）、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｕｃｉｎ）、ＳＮ－３８、クリプトフィシン類似体（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ ａｎａｌｏｇ）、デルクステカン（ｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ）、デュオカルマジン（ｄｕｏｃａｒｍａｚｉｎｅ）、カリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、センタナマイシン（ｃｅｎｔａｎａｍｙｃｉｎ）、ｄｏｌａｓｔａｎｓｉｎｅ、ピロロベンゾジアゼピン（ｐｙｒｒｏｌｏｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ）、エキサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）及びそれらの誘導体から選択され、及び／又は
アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）、特にＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ又はＭＭＡＤから選択され、及び／又は
ＤＸ８９５１ｆ等のエキサテカン（ｅｘａｔｅｃａｎ）及びその誘導体から選択され、及び／又は
ＤＸｄ－（１）及びＤＸｄ－（２）から選択され、好ましくはＤＸｄ－（１）である、上記［９］～［１２］のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
［１４］
前記ペイロードは、
Figure 2024514174000097
 から選択され、
特に
Figure 2024514174000098
 から選択される、上記［９］～［１３］のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
［１５］
Figure 2024514174000099
Figure 2024514174000100
Figure 2024514174000101
Figure 2024514174000102
 であり、
各ｇは独立して１～６の整数であり、好ましくは１～３であり、より好ましくは１である、上記［９］～［１４］のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
［１６］
予防的又は治療的に有効な量の上記［９］～［１５］のいずれか１項に記載のコンジュゲート、及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
［１７］
疾患を治療するための薬物の製造における、上記［９］～［１５］のいずれか１項に記載のコンジュゲート又は上記［１６］に記載の医薬組成物の用途であって、前記疾患は、腫瘍又は自己免疫疾患であり、好ましくはＨＥＲ２陽性腫瘍であり、
好ましくは、前記ＨＥＲ２陽性腫瘍は、乳癌、胃癌、肺癌、卵巣癌及び尿路上皮癌から選択される、前記用途。
有益な効果
本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、特別に設計されたリンカー－ペイロードを使用し、より安定であり、比較的低いＤＡＲで優れた治療効果を得ることができ、したがって、副作用を軽減し、治療指数を向上させることができる。
本発明は、独特の構造を有する連結ユニットを利用し、標的化分子とペイロードのコンジュゲーションをリガーゼで触媒する。本発明のコンジュゲートは均質性が良好で、活性が高く、選択性が高い。また、連結ユニット－ペイロード中間体の毒性は遊離ペイロードよりもはるかに低いため、薬物の製造過程は危害が小さく、工業的な生産に有利である。
本発明のコンジュゲートは、以下の技術的効果のうちの少なくとも１つを実現する。
（１）ターゲット細胞に対して高い阻害活性を有し、又はターゲット細胞に対して強力な殺傷効果を有する。
（２）優れた物理化学的特性（例えば、溶解度、物理及び／又は化学的安定性）。
（３）優れた薬物動態学特性（例えば、血漿における良好な安定性、適切な半減期及び作用持続時間）。
（４）優れた安全性（ターゲット以外の正常細胞又は組織に対する毒性が低く及び／又は副作用が少なく、治療可能域が広い）等。
（５）高度にモジュール化された設計であり、複数の薬物を簡単に組み立てることができる。
実施例
調製の実施例
本発明の目的及び技術的解決手段をより明確に説明するために、以下において、本発明を具体的な実施例によりさらに説明する。これらの実施例は本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解すべきである。以下の実施例に記載されていない具体的な実験方法は、従来の実験方法に準じて実施する。
機器、材料及び試薬
特に明記しない限り、実施例で使用される機器及び試薬はいずれも市販から入手することができる。試薬はさらに精製することなくそのまま使用できる。
ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ、Ｗａｔｅｒ２７９５－Ｑｕａｔｔｒｏマイクロ三連四重極質量分析計
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ ２６９５、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００
半分取ＨＰＬＣ：Ｌｉｓｕｒｅ ＨＰ ｐｌｕｓ ５０Ｄ
フローサイトメトリー：ＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓ
ＨＩＣ－ＨＰＬＣ：Ｂｕｔｙｌ－ＨＩＣ；移動相Ａ液：２５ｍＭのＰＢ、２Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ７．０；移動相Ｂ：２５ｍＭのＰＢ、ｐＨ７．０；流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ；収集時間：２５ｍｉｎ；注入量：２０μｇ；カラム温度：２５℃；検出波長：２８０ｎｍ；サンプルチャンバー温度：８℃。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ：クロマトグラフィカラム：ＴＳＫ－ｇｅｌ Ｇ３０００ ＳＷＸＬ、ＴＯＳＯＨ ７．８ｍｍ ＩＤ×３００ｍｍ、５μｍ；移動相：０．２ＭのＫＨ２ＰＯ４、０．２５ＭのＫＣｌ、ｐＨ６．２；流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ；収集時間：３０ｍｉｎ；注入体積：５０μｇ；カラム温度：２５℃；検出波長：２８０ｎｍ；サンプルトレイ温度：８℃。
ＣＨＯ細胞は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手した。ｐｃＤＮＡ３．３は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した。ＨＥＫ２９３Ｆは、Ｐｒｅｊｉｎから入手した。ＰＥＩＭＡＸトランスフェクション試薬は、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅから入手した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＰｒｏＡは、ＧＥから入手した。Ｃａｐｔｏ Ｓ ＩｍｐＡｃｔは、ＧＥから入手した。Ｒｉｎｋ－ａｍｉｄｅ－ＭＢＨＡ－樹脂及びジクロロ樹脂は、南開合成（Ｎａｎｋａｉ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）から入手した。ＨＣＣ１９５４は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－２３３８から入手した。ＳＫ－ＢＲ－３は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－３０から入手した。ＢＴ－４７４は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－２０から入手した。ＮＣＩ－Ｎ８７は、ＡＴＣＣ Ｃａｔ ＃ ＣＲＬ－５８２２から入手した。ＭＣＦ７は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－２２から入手した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－２６から入手した。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－１３２から入手した。ＣＦＰＡＣ－１は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－１９１８から入手した。ＮＣＩ－Ｈ２１１０は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－５９２４から入手した。ＪＩＭＴ－１は、Ｗｕｘｉ Ａｐｐｔｅｃｈから入手した。Ｃａｐａｎ－１は、ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－１５７３から入手した。抗体トラスツズマブは、既知の配列に従って調製した。黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）由来の最適化された組換え酵素ソルターゼＡは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）内で調製した。
実施例１ 抗体発現担体の構築、抗体発現、精製及び同定
１．１ 修飾された抗ヒトＨＥＲ２抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの製造
抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ（軽鎖ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、重鎖：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）の発現プラスミドは次のように構築した。抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの配列については、トラスツズマブのアミノ酸配列を基に、軽鎖のＣ末端にＧＡＬＰＥＴＧＧを導入し、ここでＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。プラスミドをＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、細胞集団を確立し、高発現細胞集団をスクリーニングし、５～１０Ｌのリアクターでのトラスツズマブの培養プロセスを参考にして培養し、上清を収集した。
１．２ 抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの精製
Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの精製は、ＭａｂＳｅｌｅｃｔアフィニティークロマトグラフィーとＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｓ陽イオン交換クロマトグラフィーを組み合わせた標準プロセスで実施され、精製の生成物は元のトラスツズマブ薬物緩衝液（５ｍＭのヒスチジン－ＨＣｌ、２％のトレハロース、０．００９％のポリソルベート２０、ＰＨ６．０）に溶解され、小分けにして冷凍した。
１．３ 抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの品質制御
上記のＳＤＳ－ＰＡＧＥで精製した抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの純度は９８．５％であった。ＳＥＣ－ＨＰＬＣにより、サンプル中の高分子ポリマーの含有量が０．４％未満であり、エンドトキシンの含有量が０．０９８ＥＵ／ｍｇ未満であることが検出された。
１．４ 他の修飾抗ヒト抗体の調製
同様の方法により、トラスツズマブ軽鎖及び／又は重鎖のＣ末端にそれぞれリガーゼ認識配列に基づく末端修飾を導入し、修飾抗体を得た。
Ａｂ０００１（トラスツズマブ）に基づく修飾抗ヒトＨＥＲ２抗体を表１に示す。末端修飾配列中のＬＰＥＴＧＧは、リガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。
Figure 2024514174000103
実施例２ 中間体の調製
２．１ 中間体Ｍｃ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄ（ＲＦ１１８４）の調製
中間体Ｍｃ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄ （ＲＦ１１８４）は市販から入手するか又はＥＰ２９０７８２４に記載の手順に従って調製することができる。該化合物は、リンカー－ペイロード中間体（式（ＩＶ）の化合物）の調製に使用されるとともに、（任意に修飾された）抗体に直接連結して参照ＡＤＣを調製するためにも使用される。
２．２ リンカー－ペイロード中間体ＬＢ３０１－２－１の調製
Figure 2024514174000104
ステップ１：リンカーＨＸ１８０４１の調製
Figure 2024514174000105
 ＨＸ１８０４１は、Ｒｉｎｋ－アミド－ＭＢＨＡ－樹脂を使用した従来の固相ポリペプチド合成方法によって合成された。Ｆｍｏｃは、連結ユニット内のアミノ酸を保護するためのものである。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢＴ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選択された。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥して保存し、使用に備える。理論分子量は５３８．２４で、測定値として、［Ｍ＋Ｈ］＋＝５３９．２であった。
ステップ２：リンカー－ペイロード中間体ＬＢ３０１－２－１の調製
ＨＸ１８０４１と中間体ＭＣ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄ（モル比は約１．２：１）を秤量し、それぞれ水とＤＭＦに溶解し、十分に混合して混合物を得、０～４０℃で０．５～２０ｈ反応させた。反応が完了した後、反応混合物に適量のＴｒｉｓ塩基溶液又は開環反応を促進する他の溶液を直接加え、その後、０～４０℃で０．２～２０ｈ反応させた。反応が完了した後、生成物を半分取／分取ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、リンカー－ペイロードＬＢ３０１－２－１を得た。理論上の質量は１５８９．６５で、測定値として、［（Ｍ＋２Ｈ）／２］＋＝７９６．６であった。
２．３ リンカー－ペイロード中間体 ＬＢ３０２－２－１の調製
Figure 2024514174000106
ステップ１：リンカーＨＸ２０１１３の調製
Figure 2024514174000107
 ＨＸ２０１１３は、Ｒｉｎｋ－アミド－ＭＢＨＡ－樹脂を使用した従来の固相ポリペプチド合成方法によって合成された。Ｆｍｏｃは、連結ユニット内のアミノ酸を保護するためのものである。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢＴ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選択された。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥して保存し、使用に備える。理論上の質量は１２０７．５９で、測定値として、［Ｍ－Ｈ］－＝１２０６．７であった。
ステップ２：リンカー－ペイロード中間体 ＬＢ３０２－２－１の調製
ＨＸ２０１１３と中間体ＭＣ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄ（モル比は約１：２）を秤量し、それぞれ水とＤＭＦに溶解し、十分に混合して混合物を得、０～４０℃で０．５～３０ｈ反応させた。反応が完了した後、反応混合物に適量のＴｒｉｓ塩基溶液又は開環反応を促進する他の溶液を直接加え、その後、０～４０℃で０．２～２０ｈ反応させた。反応が完了した後、生成物を半分取／分取ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、リンカー－ペイロード中間体ＬＢ３０２－２－１を得た。理論上の質量は３３１０．４１で、測定値として、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝１１０４．５であった。
２．４ リンカー－ペイロード中間体ＬＢ３０２－２－４の調製
Figure 2024514174000108
ステップ１：リンカーＨＸ２０１１１の調製
Figure 2024514174000109
 ＨＸ２０１１１は、Ｒｉｎｋ－アミド－ＭＢＨＡ－樹脂を使用した従来の固相ポリペプチド合成方法によって合成された。Ｆｍｏｃは連結ユニット内のアミノ酸を保護するためのものである。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢＴ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選択された。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥して保存し、使用に備える。理論上の質量は１３８３．７０で、測定値として、［Ｍ－Ｈ］－＝１３８２．６であった。
ステップ２：リンカー－ペイロード中間体ＬＢ３０２－２－４の調製
ＨＸ２０１１１と中間体ＭＣ－ＧＧＦＧ－Ｄｘｄ（モル比は約１：２）を秤量し、それぞれ水とＤＭＦに溶解し、十分に混合して混合物を得、０～４０℃で０．５～３０ｈ反応させた。反応が完了した後、反応混合物に適量のＴｒｉｓ塩基溶液又は開環反応を促進する他の溶液を直接加え、その後、０～４０℃で０．２～２０ｈ反応させた。反応が完了した後、生成物を半分取／分取ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、リンカー－ペイロード中間体ＬＢ３０２－２－４を得た。理論上の質量は３４８６．５２で、測定値として、［（Ｍ＋３Ｈ）／３］＋＝１１６３．３であった。
実施例３ 標的化分子－薬物コンジュゲートの調製
３．１ リンカー－ペイロード中間体をそれぞれリガーゼにより抗体に部位特異的にコンジュゲーションさせてＡＤＣを形成した。コンジュゲーション反応の方法については、ＷＯ２０１５１６５４１３Ａ１を参照することができる。生成されたＡＤＣは、次の表に示す通りである。
Figure 2024514174000110
３．２ 参照ＡＤＣのＬＣ１１８４（８）及びＬＣ１１８４（４）は、中間体ＲＦ１１８４を（任意に修飾された）抗体に直接連結すること（Ｃｙｓコンジュゲーションであり、即ちマレイミド構造とシステインのチオール基によって形成された連結を介したコンジュゲーション）によって調製された。コンジュゲーション反応の方法は当分野で知られている。ＬＣ１１８４（８）には、還元された鎖間システインを介して８つのＲＦ１１８４が導入された。ＬＣ１１８４（４）には、還元された鎖間システインを介して４つのＲＦ１１８４が導入された。
効果実施例１ 細胞増殖に対するＨＥＲ２を標的とするコンジュゲートの影響
ＨＥＲ２高発現癌細胞ＳＫ－ＢＲ－３（図１）とＮＣＩ－Ｎ８７（図２）、ＨＥＲ２低発現癌細胞ＣＦＰＡＣ－１（図３）とＮＣＩ－Ｈ２１１０（図４）、及びＨＥＲ２陰性細胞系ＭＤＡ－ＭＢ－４６８（図５）を使用して細胞毒性測定を実施し、腫瘍細胞増殖に対するコンジュゲートの影響を分析した。試験されたサンプルは、コンジュゲートＬＣ３０２－２－１（４）、ＬＣ３０２－２－４（４）及び小分子化合物１０（構造は上記に示されている）を含む。簡単に説明すると、３０００～５０００個の細胞を９６ウェルプレートに播種し、細胞は一晩成長した後に接着することができる。細胞を異なる濃度の指定薬物で１２０時間処理した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ(R) Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙで細胞生存率を検査し、細胞生存率のパーセンテージを算出した。
ＨＥＲ２高発現のＳＫ－ＢＲ－３とＮＣＩ－Ｎ８７では、コンジュゲートＬＣ３０２－２－１（４）、ＬＣ３０２－２－４（４）は類似の有効性を示した。ＬＣ３０２－２－１（４）及びＬＣ３０２－２－４（４）のＩＣ５０値は、小分子ペイロードＤｘｄよりも低かった。ＨＥＲ２低発現細胞及び陰性細胞では、コンジュゲートＬＣ３０２－２－１（４）及びＬＣ３０２－２－４（４）は最小の有効性を示した。
Figure 2024514174000111
効果実施例２ コンジュゲートのインビボでの評価
インビボ抗腫瘍有効性の研究については、５ｘ１０６のＪＩＭＴ－１人乳癌細胞（ＨＥＲ２培地）をＳＣＩＤ Ｂｅｉｇｅマウスの右脇腹に皮下接種した。７日後、腫瘍体積が平均１４２ｍｍ３になった時、腫瘍を有するマウスを割り当て、ＬＣ１１８４（８）及び他の５つの異なるコンジュゲートを５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。ＬＣ１１８４（８）はＬＣ１１８４（４）よりも優れた有効性を示し、同じペイロードを使用する場合、より高いＤＡＲがより高い有効性をもたらすことが示唆されている。ＬＣ３０２－２－１（４）及びＬＣ３０２－２－４（４）の有効性はＬＣ１１８４（８）よりも優れている。ＬＣ３０１－２－１（４）は、ＬＣ１１８４（８）と同等の有効性を示し、ＬＣ３０１－２－１（２）はＬＣ１１８４（４）と同等の有効性を示している（図６）。本発明のコンジュゲートは低いＤＡＲで良好な有効性を達成した。
５ｘ１０６のＣａｐａｎ－１ヒト膵臓癌細胞（ＨＥＲ２低発現）をＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脇腹に皮下接種して、異種移植モデルを作製した。８日後、腫瘍体積が平均１７８ｍｍ３になった時、腫瘍を有するマウスにＬＣ１１８４（８）及び他の５つの異なるコンジュゲートを５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。ＬＣ１１８４（８）の有効性はＬＣ１１８４（４）よりも優れている。ＬＣ３０２－２－１（４）、ＬＣ３０２－２－４（４）及びＬＣ３０１－２－１（４）は、ＬＣ１１８４（８）と同等の有効性を示し、ＬＣ３０１－２－１（２）はＬＣ１１８４（４）と同等の有効性を示した（図７）。
効果実施例３ コンジュゲートのエクスビボ血清安定性
エクスビボ血清安定性の研究については、コンジュゲートＬＣ３０２－２－１（４）、ＬＣ３０２－２－４（４）及びＬＣ１１８４（８）を、それぞれ３７℃でプールされたヒト血清に接種した。０、２４、４８及び９６時間の時点で、コンジュゲートを抗原で捕捉し、次にグリコシダーゼによって脱グリコシル化し、酸によって解離した。上清を収集して遠心分離し、高分解能ＬＣ－ＭＳで検出してＤＡＲを決定した。
ＬＣ３０２－２－１（４）及びＬＣ３０２－２－４（４）は、血清中で９６時間インキュベートした後でも非常に安定している。９６時間のインキュベーション後、ＬＣ３０２－２－１（４）及びＬＣ３０２－２－４（４）のＤＡＲに有意な低下がなかった。しかしながら、ＬＣ１１８４（８）のＤＡＲは９６時間のインキュベーション後に、７．８から２．６に低下した（図８）。リンカーの安定性は、より多くのペイロードが標的腫瘍に送達され、オフターゲットの遊離ペイロードの放出が減少したことが示され、その結果、治療指数が向上した。
配列表
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． １：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＡＬＰＥＴＧＧ

ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ２：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ３：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＡＬＰＥＴＧＧ

ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ４：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ重鎖：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＡＬＰＥＴＧＧ

Claims (17)

  1. 式（Ｉ）の化合物であって、
    Figure 2024514174000112
     式中、
    Ｗは水素又はＬＫｂであり、
    Ｙは水素又はＬＫａ－ＬＫｂであり、
    ただし、ＷとＹが同時に水素でないことを条件とし、
    各ＬＫａは、独立して、
    Figure 2024514174000113
     から選択され、
    ｏｐＳｕは、
    Figure 2024514174000114
     又はそれらの混合物であり、
    各ＬＫｂは、独立してＬ２―Ｌ１―Ｂから選択され、
    各Ｂは、独立して、末端基Ｒ１０であるか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせと、３）末端基Ｒ１０との組み合わせであり、
    Ｒ１０は、水素であるか又はペイロード中の基と反応する時に脱離できる基であり、
    Ｌ１は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含む切断可能配列１であり、切断可能配列１は１～１０個のアミノ酸を含み、
    Ｌ２は、結合であるか又はＣ２－２０アルキレン基であり、ここでアルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造は、－ＣＲ３Ｒ４－、－Ｏ－、－（ＣＯ）－、－Ｓ（＝Ｏ）２－、－ＮＲ５－、
    Figure 2024514174000115
     Ｃ４－１０シクロアルキレン基、Ｃ４－１０ヘテロシクリレン基、フェニレン基によって任意に置換され、ここでシクロアルキレン基、ヘテロシクリレン基、及びフェニレン基は、それぞれ独立して、非置換であるか、又はハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、－Ｃ１－１０アルキレン－ＮＨ－Ｒ８、及び－Ｃ１－１０アルキレン－Ｏ－Ｒ９から選択される少なくとも１つの置換基で置換され、
    Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合であるか、又は－ＮＨ－Ｃ１－２０アルキレン－（ＣＯ）－、－ＮＨ－（ＰＥＧ）ｉ－（ＣＯ）－から選択されるか、又は側鎖上でそれぞれ独立して非置換の又は－（ＰＥＧ）ｊ－Ｒ１１によって置換された天然アミノ酸もしくは重合度２～１０のオリゴマー天然アミノ酸であり、
    －（ＰＥＧ）ｉ－と－（ＰＥＧ）ｊ－は、それぞれＰＥＧフラグメントであり、指定された数の連続した－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）－構造単位又は連続した－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）－構造単位を含み、任意に、１つの末端にＣ１－１０アルキレン基が付加され、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、－Ｃ１－１０アルキル基、－Ｃ１－１０ハロアルキル基、Ｃ４－１０シクロアルキレン基から選択され、
    Ｒ１１はＣ１－１０アルキル基であり、
    ｎは２～２０の任意の整数であり、
    ｄは０又は１～６の任意の整数であり、
    各ｉは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、
    各ｊは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｊは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは８～１２であり、特に８又は１２である、前記化合物。
  2. Figure 2024514174000116
     から選択される、請求項１に記載の化合物。
  3. Figure 2024514174000117
    Figure 2024514174000118
     から選択され、
    式中、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４である、請求項１から２のいずれか１項に記載の化合物。
  4. Ｌｄ２と各Ｌｄ１は、独立して、結合又は
    Figure 2024514174000119
     から選択され、
    各ｋは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｋは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは１～７であり、特に１、３又は５である、請求項１から２のいずれか１項に記載の化合物。
  5. 切断可能配列１は、ＧＬｙ－ＧＬｙ－Ｐｈｅ－ＧＬｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ及びそれらの組み合わせから選択され、好ましい切断可能配列１はＧＬｙ－ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙであり、
    及び／又は
    Ｓｐ１は、ＰＡＢＣ、アセタール、ヘテロアセタール及びそれらの組み合わせから選択され、好ましくは、Ｓｐ１は、アセタール、ヘテロアセタール又はＰＡＢＣであり、好ましくは、ヘテロアセタールは、Ｎ，Ｏ－ヘテロアセタールから選択され、好ましくは、Ｓｐ１は、－Ｏ－ＣＨ２－Ｕ－又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であり、ここで－Ｏ－又は－ＮＨ－は切断可能配列１に接続され、Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、好ましくはＯ又はＳである、請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物。
  6. Ｗは水素であり、及び／又は
    Ｒ１０は、水素、ヒドロキシ基であるか又は
    Figure 2024514174000120
     であり、
    Ｒ１１は、Ｃ１－６アルキル基、好ましくはメチル基であり、及び／又は
    ｎは、２～５の整数、特に３であり、及び／又は
    ｄは、０、又は１～４の任意の整数であり、好ましくは０、１、２又は３である、請求項１から５のいずれか１項に記載の化合物。
  7. Figure 2024514174000121
    Figure 2024514174000122
    Figure 2024514174000123
    Figure 2024514174000124
    Figure 2024514174000125
    Figure 2024514174000126
    Figure 2024514174000127
    Figure 2024514174000128
     から選択され、
    各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、各ｇは独立して１～６の整数であり、好ましくは１～３であり、より好ましくは１である、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物。
  8. 式（ＩＩ）の構造を有する化合物であって、
    Figure 2024514174000129
     式中、
    Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
    Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
    ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
    Ｐは、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
    ｎ、ｄ、Ｌｄ１、Ｌｄ２、ＬＫａ及びＬＫｂは請求項１に定義した通りであり、
    好ましくは、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで各Ｂは、独立して、存在しないか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせであり、
    好ましくは、Ｓｐ１は、ＰＡＢＣ、アセタール、ヘテロアセタール及びそれらの組み合わせから選択され、より好ましくは、Ｓｐ１は、アセタール、ヘテロアセタール又はＰＡＢＣであり、さらに好ましくは、ヘテロアセタールは、Ｎ，Ｏ－ヘテロアセタールから選択され、より好ましくは、Ｓｐ１は、－Ｏ－ＣＨ２－Ｕ－又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であり、ここで－Ｏ－又は－ＮＨ－は切断可能配列１に接続され、Ｕは、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり、好ましくはＯ又はＳである、前記化合物。
  9. 式（ＩＩＩ）の構造を有するコンジュゲートであって、
    Figure 2024514174000130
     式中、
    ｎ、ｄ、Ｌｄ１、Ｌｄ２、ＬＫａ及びＬＫｂは請求項１に定義した通りであり、
    Ｑは水素又はＬＫｂ―Ｐであり、
    Ｍは水素又はＬＫａ－ＬＫｂ―Ｐであり、
    好ましくは、Ｍは水素又はＬＫａ－Ｌ２―Ｌ１―Ｂ―Ｐであり、ここで
    各Ｂは、独立して、存在しないか、又は、１）自己犠牲スペーサーＳｐ１と、２）結合、又は－ＣＲ１Ｒ２－、Ｃ１－１０アルキレン基及び－（ＣＯ）－から選択される１つの二価基、又は２つ以上の前記二価基の組み合わせとの組み合わせであり、好ましくは、Ｂは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか又は存在しないか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－であり、
    ただし、ＱとＭが同時に水素でないことを条件とし、
    Ｐは、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物のＢ部分又はＬ１部分に連結されるペイロードであり、
    Ａは、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物のＧｎ部分に連結される標的化分子であり、Ｇはグリシンであり、
    ｚは１～２０の整数である、前記コンジュゲート。
  10. 次の式（ＩＩＩ－１）の構造を有する請求項９に記載のコンジュゲート。
    Figure 2024514174000131
  11. 前記コンジュゲートは、次の構造を有し、
    Figure 2024514174000132
    Figure 2024514174000133
    Figure 2024514174000134
     好ましくは、ｚは１～４であり、好ましくは２であり、
    各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｉ、ｉ１、ｉ２、ｉ３、ｉ４は、それぞれ独立して、１～１２の整数であり、より好ましくは２～８であり、特に４であり、
    各ｊは独立して１～１００の整数であり、好ましくは１～２０であり、好ましくは、各ｊは独立して１～１２の整数であり、より好ましくは８～１２であり、特に８又は１２であり、
    好ましくは、ｎは３であり、Ｌ２は－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＨ２）２（ＣＯ）－であり、ｐは３であり、Ｌ１はＧＧＦＧであり、Ｂは、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－であるか又は存在しないか又は－ＮＨ－ＣＨ２－Ｕ－（ＣＨ２）ｇ－（ＣＯ）－であり、ＵはＯであり、ｇは１である、請求項９又は１０に記載のコンジュゲート。
  12. 前記標的化分子は、抗体又はその抗原結合フラグメントであり、好ましくは、前記抗体又は抗原結合フラグメントは、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物中のＧｎ部分に連結するように修飾され、
    好ましくは、前記抗体は、抗ヒトＨＥＲ２抗体である、請求項９から１１のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  13. 前記ペイロードは細胞毒素又はそのフラグメントであり、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物中のＢ部分又はＬ１部分に連結するための任意の誘導体化を有し、
    好ましくは、細胞毒素は、タキサン類、メイタンシノイド類、アウリスタチン類、エポチロン類（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ）、コンブレタスタチンＡ－４ホスフェート（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ－４ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、コンブレタスタチンＡ－４（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ Ａ－４）及びその誘導体、インドール－スルホンアミド類、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）等のビンブラスチン類、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビンフルニン（ｖｉｎｆｌｕｎｉｎｅ）、ビングリシネート（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ）、無水ビンブラスチン（ａｎｈｙ－ｄｒｏｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ドラスタチン１０（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ １０）及びその類似体、ハリコンドリンＢ、エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、インドール－３－オキサミド類、ポドフィロトキシン類、７－ジエチルアミノ－３－（２′－ベンゾオキサゾリル）－クマリン（ＤＢＣ）、ディスコデルモリド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、ラウリマライド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）、カンプトテシン類及びその誘導体、ミトキサントロン、ミトグアゾン、窒素マスタード類、ニトロソウレア類、アジリジン類、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレデパ、ウレデパ、ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）、ネオカルチノスタチン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、ブレオマイシン類、アクチノマイシンＣ、カルビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、カルミノマイシン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、デトルビシン、アドリアマイシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン素、ペプロマイシン、ピューロマイシン、鉄アドリアマイシン、ロドルビシン、ルフォクロモマイシン、ストレプトゾシン、ジノスタチン、ゾルビシン、トリコテセン類、Ｔ－２毒素、（ベルカリン）ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ、バシロクポリンＡ、アンギジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）、ウベニメックス、アザセリン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ジメチル葉酸、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート、エダトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、ゲムシタビン、エノシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、フロクスウリジン、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸リュープロレリン、プロテインキナーゼ阻害剤、及びプロテアソーム阻害剤からなる群から選択され、及び／又は
    ビンブラスチン類、コルヒチン類、タキサン類、アウリスタチン類、メイタンシノイド類、カリケアミシン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ＳＮ－３８、クリプトフィシン類似体、デルクステカン、デュオカルマジ、カリケアミシン、センタナマイシン、ドラスタンシン、ピロロベンゾジアゼピン、エキサテカン及びそれらの誘導体から選択され、及び／又は
    アウリスタチン、特にＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ又はＭＭＡＤから選択され、及び／又は
    ＤＸ８９５１ｆ等のエキサテカン及びその誘導体から選択され、及び／又は
    ＤＸｄ－（１）及びＤＸｄ－（２）から選択され、好ましくはＤＸｄ－（１）である、請求項９から１２のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  14. 前記ペイロードは、
    Figure 2024514174000135
     から選択され、
    特に
    Figure 2024514174000136
     から選択される、請求項９から１３のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  15. Figure 2024514174000137
    Figure 2024514174000138
    Figure 2024514174000139
    Figure 2024514174000140
     であり、
    各ｇは独立して１～６の整数であり、好ましくは１～３であり、より好ましくは１である、請求項９から１４のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  16. 予防的又は治療的に有効な量の請求項９から１５のいずれか１項に記載のコンジュゲート、及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  17. 疾患を治療するための薬物の製造における、請求項９から１５のいずれか１項に記載のコンジュゲート又は請求項１６に記載の医薬組成物の用途であって、前記疾患は、腫瘍又は自己免疫疾患であり、好ましくはＨＥＲ２陽性腫瘍であり、
    好ましくは、前記ＨＥＲ２陽性腫瘍は、乳癌、胃癌、肺癌、卵巣癌及び尿路上皮癌から選択される、前記用途。
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