JP2024513429A - ビフィズス菌を刺激するための栄養組成物 - Google Patents
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Abstract
非乳児ヒト対象の消化管におけるビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を増加させるのに使用するための、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を１：９～９：１のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比で含む栄養組成物。
Description
本発明は、非乳児ヒト対象の消化管におけるビフィズス菌の相対存在量を増加させるのに使用するための栄養組成物に関する。
腸内微生物叢における細菌種の性質は、摂取される食品によって大きく左右される。種々の有益な腸内細菌は、オリゴ糖及び多糖類などの食物繊維を摂取する。ヒト母乳は、消化されず且つ変化せずに腸管に到達することができる様々なオリゴ糖（ヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）として分類される）を含有する。結果として、それらは、特定の腸内微生物叢成分、特にビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びバクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）の種により、主な炭素及びエネルギー源として利用され得る。これらの種は、乳児の健康に有益な影響、より具体的には腸内の細菌コロニー形成の促進及び病原体からの防御に有益な影響を有することが示されている。
ヒトの母乳中のＨＭＯの量及び多様性は、例えば、地理的起源及び遺伝的背景に応じて女性間で変動するが、ヒトの母乳は、主に以下の３つのＨＭＯタイプを含有すると言うことができる：フコシル化ＨＭＯ（３５％～５０％）、シアル化ＨＭＯ（１２％～１４％）及び非フコシル化中性ＨＭＯ（４２％～５５％）。フコシル化ＨＭＯとしては、２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）が挙げられ、これは、ヒトの母乳中に最も多く含まれるＨＭＯである。
ビフィズス菌は、全生涯にわたってヒトの腸に居住する一般的な細菌である。それらは、グルコース、ガラクトース及びフルクトースを発酵する能力を有する糖分解性生物であり、健康な消化管を維持する際に中心的な役割を果たすと考えられている。
ビフィズス菌の腸内コロニー形成は、出生時に始まり、このプロセスは、経時的に異なる種及び株を獲得及び喪失しながら継続的に進行する。乳児の微生物叢から成人の微生物叢への移行は、食事の固形食品への移行後に始まると考えられている。この移行の効果の１つは、ビフィズス菌の相対存在量の、乳児における約６０～７０％から、成人における約２～１４％への減少である。
加齢により、ビフィズス菌の相対存在量は、さらに減少する傾向があり、これは、大部分の高齢者、例えば約５０、６０又は７０歳を超える高齢者が、これらの種の大幅に低い相対存在量を有することを意味する。
ビフィズス菌によるコロニー形成は、ヒトの健康を維持する上で重要な役割を果たすと考えられている。様々な研究により、非乳児ヒト対象の消化管におけるビフィズス菌の存在量の増加は、腸管病原性感染症、２型糖尿病、腸管バリア機能障害、ストレス、不安及び鬱病などの腸脳障害、アトピー性皮膚炎などのアレルギー、喘息並びに炎症性の腸の病態の予防又は治療に関連することが示されている（国際公開第２０１８／１５７９００号パンフレット、Ｃ．Ｂ．Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ４４（２０２０）３６９－３８５及びＦ．Ｔｕｒｒｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ７５（２００９）１５３４－１５４５）。
より具体的には、Ｓ．Ｃ．Ｌｅａｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９８（２００５）１３０３－１３１５に記載されているように、高齢者では、ビフィズス菌の存在量の減少に伴い、それに応じてあまり望ましくない微生物種及び病原性生物の数が増加する。さらに、ビフィズス菌、特にＢ．ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）は、抗生物質に関連する下痢の発生及び期間を減少させ、サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）などの多くの他の病原性生物に対して阻害効果を示すことが示されている。
加えて、便秘に対するよい影響及び重度の月経前症候群の消化管症状の軽減が報告されている。
様々な研究は、腸内微生物叢と過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の発症との間の関係に焦点を当てており、ＩＢＳ患者に関連する微生物叢の変化及びビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）のレベルの低下を示している。高齢者の腸内微生物叢において、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に関連する下痢に罹患している高齢者におけるビフィズス菌の数が健常対照群と比較して減少していることが観察された。ビフィズス菌の数の減少は、嚢胞性線維症、Ｂ型肝炎並びにＩ型及びＩＩ型の両方の糖尿病などの他の疾患でも観察されている（Ｓ．Ａｒｂｏｌｅｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，７（２０１６）１２０４）。
したがって、非乳児ヒト対象、より具体的には成人、より具体的には高齢者の消化管におけるビフィズス菌の存在量の増加を達成することが一般的に望まれている。
本明細書における非乳児ヒト対象は、少なくとも３歳の年齢のヒト対象と定義される。
ビフィズス菌の数は、年齢と共に減少するだけでなく、ビフィズス菌種の多様性も変化する。Ｂ．ロングム亜種ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｌｏｎｇｕｍ）、Ｂ．ロングム亜種インファンティス（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、Ｂ．ブレーベ（Ｂ．ｂｒｅｖｅ）及びＢ．ビフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）は、一般に、乳児で優勢である一方、Ｂ．カテヌラツム（Ｂ．ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、Ｂ．アドレスセンティス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及びＢ．ロングム亜種ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｌｏｎｇｕｍ）は、成人でより優勢である（Ｓ．Ａｒｂｏｌｅｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，７（２０１６）１２０４）。
これらの異なる種は、様々なＨＭＯを摂取する異なる能力を示す。乳児型ビフィズス菌は、ＨＭＯを利用するように適合されているが、成人型ビフィズス菌の大半は、ＨＭＯを利用することができない。Ｂ．ロングム亜種インファンティス（（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ．ｉｎｆａｎｔｉｓ）は、フコシル化及びシアル化分子を含むほとんど全てのタイプのＨＭＯを積極的に摂取するが、Ｂ．ロングム亜種ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ｌｏｎｇｕｍ）株のＨＭＯを消化する能力は、限られている。Ｂ．ロングム亜種ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ｌｏｎｇｕｍ）株の大部分は、ＬＮＴ及びＬＮＢのみを摂取し、他のＨＭＯを変化させないままであることがわかった（Ｃ．Ｂ．Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，４４，２０２０，３６９－３８５）。
一方、国際公開第２０１７／１４４０６２号パンフレット及び国際公開第２０１７／４６７１１号パンフレットは、２’－ＦＬなどの中性ＨＭＯを投与することにより、非乳児ヒトの消化管の微生物叢におけるビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラツム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）の相対存在量が増加することを開示しており、国際公開第２０１８／１２７９００号パンフレットは、非乳児ヒトにおけるビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）及び／又はビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）の相対存在量を増加させるために、２’－ＦＬなどの中性ＨＭＯを少なくとも１４日間以下にわたって投与することを開示している。
換言すると、２’－ＦＬを含むＨＭＯの、非乳児微生物叢におけるビフィズス菌、特にビフィズス菌の存在量に対する影響について、矛盾する研究が存在する。
非乳児の腸におけるビフィズス菌に対するオリゴ糖の効果に対する本発明者らの研究において、驚くべきことに、非乳児、より具体的には（高齢）成人へのＧＯＳ及び２’ＦＬの両方の組み合わせ投与は、これらの化合物の個々の投与によって達成されるレベルを超えて、ビフィズス菌、特にビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及びビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を相乗的に増加させることがわかった。
乳児微生物叢に対するこれらの化合物の相乗効果が示唆されているが（国際公開第２０１１／００８０８６号パンフレット）、非乳児微生物叢、特にビフィズス菌種、より一層具体的には高齢成人におけるビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及びビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）種に対する相乗効果は、驚くべきことである。上で説明したように、成人の腸内微生物叢は、乳児の腸内細菌叢と比較してはるかに多様であり、含有するビフィズス菌がはるかに少なく、また一般に２’－ＦＬに対する応答性が低い異なる亜種からなる。
したがって、本発明は、非乳児ヒト対象、好ましくは成人のヒトの消化管内のビフィズス菌、特にビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を治療的及び非治療的の両方で増加させるための、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）の、１：９～９：１のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比での使用に関する。
一実施形態によれば、本発明は、ビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の低い相対存在量に関連する疾患を処置するか又はその発症を予防する方法において、非乳児ヒト対象の消化管内のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を増加させるのに使用するための、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を１：９～９：１のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比で含む栄養組成物に関する。
そのような疾患の例は、腸管病原性感染症、腸管バリア機能障害、２型糖尿病、ストレス、不安及び鬱病などの腸脳障害、アトピー性皮膚炎などのアレルギー、喘息並びに／又は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの炎症性の腸の病態である。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）には、クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）が含まれる。
所与の疾患又は障害に関連して、「処置」という用語は、以下に限定されないが、疾患若しくは障害の阻止（例えば、疾患若しくは障害の発症の抑止）、疾患若しくは障害の緩和（例えば、疾患若しくは障害の退行の惹起）；及び／又は疾患若しくは障害に起因するか若しくはその結果生じる病態の緩和（例えば、疾患若しくは障害の症状の緩和、予防若しくは処置）を含む。
疾患又は障害に関連して、「予防」という用語は、依然として何も生じていない場合における疾患の発症の開始の予防、障害若しくは疾患の素因があり得るが、障害若しくは疾患を有すると依然として診断されていない対象における疾患若しくは障害の防止及び／又は既に疾患／障害が存在する場合のさらなる疾患／障害の発症の防止を意味する。
一実施形態では、栄養組成物は、消化管におけるビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の平均未満の存在量を有し、且つ／又は腸管病原性感染症、腸管バリア機能障害、２型糖尿病、ストレス、不安及び鬱病などの腸脳障害、アトピー性皮膚炎などのアレルギー、喘息並びに／若しくは炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの炎症性の腸の病態に罹患しているか若しくはそれを発症するリスクがある非乳児ヒト対象に投与される。
別の実施形態によれば、本発明は、非乳児ヒト対象の消化管内のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を増加させるための、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を１：９～９：１のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比で含む栄養組成物の非治療的使用に関する。
本明細書で使用される、対象の消化管におけるビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量の増加は、対象の消化管における細菌の総数に対するこれらの微生物の数が、栄養組成物の介入後、加入前と比較してより多いことを指す。増加は、好ましくは、少なくとも３％、より好ましくは少なくとも８％、例えば少なくとも１０％、より一層好ましくは少なくとも１５％である。増加の程度は、栄養組成物の１日投与量に依存し得る。これらの微生物の相対存在量は、以下で実施例に記載のように決定され得る。
本明細書で用いられる、消化管におけるこれらの微生物の平均相対存在量よりも低いとは、対象の消化管における細菌の総数に対するこれらの微生物の数が、同じ年齢群の１０人の健康な対象の群のこれらの微生物の腸管の平均数と比較してより少ないことを指す。健康な対象は、疾患と診断されておらず、消化管に関するいかなる問題も患っていない対象である。
栄養組成物は、任意の非乳児ヒト対象に投与することができるが、好ましくは１８歳超、好ましくは４０歳超、より好ましくは５０歳超、より一層好ましくは６０歳超、より好ましくは６５歳超、最も好ましくは少なくとも７０歳の成人ヒト対象に投与される。
ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）の基本構造は、最大約７個のガラクトース残基で伸長するラクトースのコアを還元末端に含む（重合度８；ＤＰ８）。市販のＧＯＳ調製物は、一般に、β－ガラクトシダーゼ酵素（ＥＣ．３．２．１．２３）によるラクトースの酵素処理によるトランスガラクトシル化反応によって生成され、様々なＤＰ及び結合を有するおよそ１００種の異なるタイプの構造を有するオリゴマーの混合物が得られる。ベータ－ガラクトシダーゼは、バチルス・シルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・オリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、クルイベロマイセス・マルシアナス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、クルイベロマイセス・フラジリス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、スポロボロマイセス・シングラリス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ ｓｉｎｇｕｌａｒｉｓ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）及びパピリオトレマ・テレストリス（Ｐａｐｉｌｉｏｔｒｅｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）（クリプトコッカス・パピリオトレマ・テレストリス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｐａｐｉｌｉｏｔｒｅｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ））などの多くの微生物で産生される。ベータ－ガラクトシダーゼは、その三次元構造が異なり、その結果としてグリコシド結合のステレオ選択的形成及びレジオ選択的形成がもたらされる。
酵素反応後、ＧＯＳは、ナノろ過及び／又は連続擬似移動床（ＳＳＭＢ）などの従来の方法を用いて単離及び精製される。得られる生成物は、ＧＯＳ含有シロップであり、必要に応じて乾燥（例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥又は噴霧冷却により）させて粉末にすることができる。
特に好ましいタイプのＧＯＳは、ＢｉｏｔｉｓＴＭＧＯＳなど、バチルス・シルクランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）由来のベータ－ガラクトシダーゼ酵素により調製されるＧＯＳである。Ｂ．シルクランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）由来のベータ－ガラクトシダーゼは、特に強いトランスガラクトシル化活性を有し、世界中で商品化されている。
栄養組成物は、ＧＯＳ及び２’－ＦＬを１：９～９：１、好ましくは１：８～８：１、より好ましくは１：７～７：１、より一層好ましくは１：６～６：１、より一層好ましくは１：５～５：１、より好ましくは１：４～４：１、より好ましくは１：３～４：１、より好ましくは１：２～４：１、最も好ましくは１：１～４：１の範囲のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比で含有する。
栄養組成物は、好ましくは、０．５～３０ｇ、好ましくは０．５～２０ｇ、より好ましくは１～１０ｇ、より一層好ましくは１～８ｇ、最も好ましくは２～６ｇのＧＯＳ＋２’－ＦＬの１日投与量で投与される。
この点において、ＧＯＳは、鎖長、結合タイプ及び分岐度が異なる炭水化物の複合混合物であることに留意されたい。それは、好ましくは、乾燥重量で４０～１００重量％、より好ましくは５０～９０重量％、最も好ましくは６０～８０重量％のオリゴ糖（ＤＰ≧３）を含み、グルコース及びガラクトースなどの単糖並びにラクトース、ラクツロース及びアロラクトースなどの二糖をさらに含み得る。ラクトース含有量は、一般に、乾燥重量基準で０～６０重量％、好ましくは０～４０重量％、最も好ましくは０～３０重量％の範囲であり、単糖含有量は、一般に、０～１０重量％の範囲である。
本明細書中のＧＯＳの重量パーセントの全ては、前記ＧＯＳ中に存在するラクトースを除く二糖及びオリゴ糖（すなわちＤＰ≧２）の重量に基づいて計算される。しかしながら、ラクトース及び単糖類、例えばグルコース及びガラクトースは、計算に含まれない。
本明細書に記載されている重量比についても同様であり、それらを計算する場合、単糖及びラクトースは、含まれないが、ＧＯＳに存在する全てのより長い糖（すなわちＤＰ≧２）は、考慮される。
本発明による栄養組成物において、ＧＯＳ及び２’－ＦＬは、栄養組成物の総重量に対して合計で少なくとも１０重量％、例えば少なくとも２０重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％又は少なくとも９０重量％、例えば９１重量％以下、９２重量％以下、９３重量％以下又は９４重量％以下の量で存在することが好ましい。
栄養組成物は、食品製品、飲料又は栄養補助食品の形態を有し得る。さらに、それは、プレバイオティック製剤として、すなわち細菌なしで又はプロバイオティック製剤として、すなわちビフィズス菌及び／若しくは乳酸菌などの望ましい（共生）細菌と共に投与され得る。
栄養組成物は、液体、半液体又は固体の構成成分を有し得る。
食品製品は、ヒト、ヤギ、ヒツジ、雌ウシ、ラクダ又は反芻動物由来の乳などの哺乳動物の乳ではない。食品製品又は栄養組成物は、合成組成物である。「合成組成物」という用語は、人工的に調製された組成物を指し、好ましくはエクスビボで化学的及び／又は生物学的に、例えば化学反応、酵素反応又は組換えにより生成される少なくとも１種の化合物を含有する組成物を意味する。
好適な食品製品及び飲料の例は、ミルク、ミルクセーキ、チョコレートミルク、ヨーグルト、クリーム、チーズ、プリン及びアイスクリームなどの乳製品；栄養バー、エネルギーバー、スナックバー、シリアルバー及び糖尿病患者のためのバーなどのバー；栄養ドリンク、ダイエットドリンク、液体完全食、スポーツドリンク及び他の栄養飲料などの液体製品；チップス、トルティーヤ、膨化させて焼いたスナック、クラッカー、プレッツェル及びセイボリービスケットなどのセイボリースナック；マフィン、ケーキ及びビスケットなどのベーカリー製品；グミ及びキャンディなどの菓子；並びにスパゲッティなどのパスタである。
食品サプリメントは、丸剤、カプセル又は乾燥粉末の形態を有し得る。栄養補助食品は、直ちに摂取可能なもの又は水のような液体中に溶解する必要があるものであり得る。乾燥粉末形態の製品には、所望の粉末量（例えば、一日投与量又は単位投与量）を計測するためのスプーンなどのデバイスが付属し得る。
栄養組成物は、ジャー、ボトル、小袋、カートン、ラッピングなどで提供され得る。
好ましい実施形態では、栄養組成物は、１回分の形態で提供される。各一回分は、任意選択により、個別に包装され得る。１回分は、好ましくは、０．５～３０ｇ、好ましくは０．５～２０ｇ、より好ましくは１～１０ｇ、より一層好ましくは１～８ｇ、最も好ましくは２～６ｇの２’－ＦＬ及びＧＯＳを含む。
栄養組成物の単位用量は、少なくとも週に１回、好ましくは少なくとも３日に１回、より好ましくは少なくとも２日に１回、最も好ましくは少なくとも１日１回投与することが好ましい。
処置は、少なくとも２週間、例えば少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも４か月、少なくとも５か月又は少なくとも６か月の期間にわたって継続することが好ましい。栄養組成物の投与によりもたらされる健康上の有益性を維持するために、前記組成物は、少なくとも１日１回投与することが好ましい。栄養組成物は、朝食時など、食事と共に又は１日の終わり、例えば就寝の０～１２０分前、より好ましくは０～６０分前、最も好ましくは０～３０分前に摂取され得る。代わりに、栄養組成物は、１日２回、好ましくは朝及び夕方、例えば朝食時及び夕食時又は朝食時及び就寝前に投与され得る。食事と一緒の投与は、簡便であると共に、摂取者が栄養組成物の摂取を忘れるリスクが低減する。
好ましい実施形態では、栄養組成物は、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、イヌリン及び他のＨＭＯなどの他のプレバイオティック成分をさらに含む。
栄養組成物は、脂質、消化可能な炭水化物、タンパク質並びに／又はビタミン、ミネラル及び／若しくは生物学的に活性なペプチドなどの追加の栄養剤をさらに含有し得る。
タンパク質の例は、乳タンパク質（例えば、カゼイン及び／又はホエータンパク質）、植物タンパク質（例えば、ダイズタンパク質及び／又はイネタンパク質）、それらの加水分解物及びそれらの混合物である。
消化可能な炭水化物の例は、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形分、デンプン及びマルトデキストリンである。
ビタミン及びミネラルの例は、鉄、マグネシウム、亜鉛、ビタミンＢ３及びビタミンＢ６、ビタミンＤ、ビタミンＣ、ビタミンＥ及び／又はベータカロチンである。
栄養組成物は、香味剤、防腐剤及び／又は着色剤をさらに含有し得る。
高齢者の遠位結腸をシミュレートする糞便発酵
Ｍ．Ｍ．Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，ｖｏｌ．９，Ａｕｇｕｓｔ １０，２０１８，ａｒｔｉｃｌｅ１８４４に記載されているように、ｍｉｃｒｏＭａｔｒｉｘＴＭ（Ａｐｐｌｉｋｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、２４ウェルプレート中で糞便発酵を行った。嫌気性チャンバー内において、オリゴ糖ＧＯＳ（ＢｉｏｔｉｓＴＭＧＯＳ ｅｘ－ＦｒｉｅｓｌａｎｄＣａｍｐｉｎａ）、２’－ＦＬ（ＡｅｑｕｉｖａｌＴＭ２’－ＦＬ、ｅｘ－ＦｒｉｅｓｌａｎｄＣａｍｐｉｎａ）又はそれらの混合物を最終濃度が０（ブランク）又は０．５重量％になるように添加した培地（組成：表１を参照されたい）をウェルに充填した（各条件を２回繰り返す）。プレートをｍｉｃｒｏＭａｔｒｉｘＴＭ内に約２０分間置き、溶存酸素濃度を５％未満に低下させ、培地の温度を３７℃に上昇させた。この２０分後、プレートに健康な７０＋ヒト対象の糞便物質のプールを接種し、発酵を開始した。発酵中、アンモニウムガス及びＣＯ２を用いて、ｐＨをｐＨ６．８、デッドゾーン０．１に制御した。プレートを３００ｒｐｍで軌道振盪させた。混合ガス（ＣＯ２／Ｈ２／Ｎ２：１０／５／８５）を用いて、培養物を発酵中に嫌気性に保った。７時間発酵させた後、１ｍｌの試料を採取した。
Ｍ．Ｍ．Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，ｖｏｌ．９，Ａｕｇｕｓｔ １０，２０１８，ａｒｔｉｃｌｅ１８４４に記載されているように、ｍｉｃｒｏＭａｔｒｉｘＴＭ（Ａｐｐｌｉｋｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、２４ウェルプレート中で糞便発酵を行った。嫌気性チャンバー内において、オリゴ糖ＧＯＳ（ＢｉｏｔｉｓＴＭＧＯＳ ｅｘ－ＦｒｉｅｓｌａｎｄＣａｍｐｉｎａ）、２’－ＦＬ（ＡｅｑｕｉｖａｌＴＭ２’－ＦＬ、ｅｘ－ＦｒｉｅｓｌａｎｄＣａｍｐｉｎａ）又はそれらの混合物を最終濃度が０（ブランク）又は０．５重量％になるように添加した培地（組成：表１を参照されたい）をウェルに充填した（各条件を２回繰り返す）。プレートをｍｉｃｒｏＭａｔｒｉｘＴＭ内に約２０分間置き、溶存酸素濃度を５％未満に低下させ、培地の温度を３７℃に上昇させた。この２０分後、プレートに健康な７０＋ヒト対象の糞便物質のプールを接種し、発酵を開始した。発酵中、アンモニウムガス及びＣＯ２を用いて、ｐＨをｐＨ６．８、デッドゾーン０．１に制御した。プレートを３００ｒｐｍで軌道振盪させた。混合ガス（ＣＯ２／Ｈ２／Ｎ２：１０／５／８５）を用いて、培養物を発酵中に嫌気性に保った。７時間発酵させた後、１ｍｌの試料を採取した。
糞便プール調製物
８人の健康な高齢者の糞便試料をプールに含めた。
８人の健康な高齢者の糞便試料をプールに含めた。
選択基準は、以下のとおりであった：年齢＞７０歳；提供前の３か月間、抗生物質、プレバイオティクス、プロバイオティクス及び／又は下剤を摂取していない；提供前の３日間、発熱又は下痢などの感染症の症状がない；ＢＭＩ ２２．５～２７．５。
嫌気性条件下でリン酸緩衝液（５０ｍＭ ｐＨ７．２±０．１、０．０５％システイン－ＨＣｌ）を加えることにより個々の糞便試料を１０倍希釈し、ストマッカーでホモジナイズした。その後、２０％グリセロールを添加して、最終糞便濃度８％の糞便スラリーを得た。糞便スラリーを分取し、冷凍庫（－８０℃）に保存した。プレートに接種する直前に、８人のドナーのそれぞれの糞便サンプルを解凍し、嫌気性チャンバー内で混合した。各反応ウェル（作業容量５ｍｌ）に６２５μｌの糞便プール（１％の糞便）を接種した。
試料の調製及び分析
接種直後に、オリゴ糖を含まないウェルから１ｍｌの試料を採取した。さらに、ｔ＝７での発酵中に１ｍｌの試料を採取した（嫌気性チャンバー内）。試料を４℃、１３２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この細菌ペレットを、ＤＮＡ単離（ＱＩＡａｍｐ ＰｏｗｅｒＦｅｃａｌ Ｐｒｏ ＤＮＡキット）後、ショットガンメタゲノミクスシーケンス（ＢａｓｅＣｌｅａｒ）により微生物叢組成を決定するために使用した。上清を３０％アセトニトリルで１０／１００倍希釈し、ＨＰＬＣによるオリゴ糖の分析に使用した。
接種直後に、オリゴ糖を含まないウェルから１ｍｌの試料を採取した。さらに、ｔ＝７での発酵中に１ｍｌの試料を採取した（嫌気性チャンバー内）。試料を４℃、１３２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。この細菌ペレットを、ＤＮＡ単離（ＱＩＡａｍｐ ＰｏｗｅｒＦｅｃａｌ Ｐｒｏ ＤＮＡキット）後、ショットガンメタゲノミクスシーケンス（ＢａｓｅＣｌｅａｒ）により微生物叢組成を決定するために使用した。上清を３０％アセトニトリルで１０／１００倍希釈し、ＨＰＬＣによるオリゴ糖の分析に使用した。
結果
図１に示すように、Ｂ．アドレスセンティス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及びＢ．ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）の両方の相対存在量及びそれらの合計量は、ｂｌａｎｃと比較して、２’－ＦＬ及びＧＯＳの個々の添加によって増加した。
図１に示すように、Ｂ．アドレスセンティス（Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及びＢ．ロングム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）の両方の相対存在量及びそれらの合計量は、ｂｌａｎｃと比較して、２’－ＦＬ及びＧＯＳの個々の添加によって増加した。
さらに、ＧＯＳは、２’－ＦＬよりも大きい効果を有することが観察され得る。しかしながら、驚くべきことに、ＧＯＳの一部を２’ＦＬで置き換えると、相対存在量がさらに増加し、それにより２’－ＦＬ及びＧＯＳの相乗効果が証明される。
Claims (11)
- ビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の低い相対存在量に関連する疾患を処置するか又はその発症を予防する方法において、非乳児ヒト対象の消化管内のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を増加させるのに使用するための、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を１：９～９：１のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比で含む栄養組成物。
- ビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の低い相対存在量に関連する前記疾患は、腸管病原性感染症、腸管バリア機能障害、２型糖尿病、ストレス、不安及び鬱病などの腸脳障害、アトピー性皮膚炎などのアレルギー、喘息並びに／又は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの炎症性の腸の病態から選択される、請求項１に記載の栄養組成物。
- 前記非乳児ヒト対象は、消化管におけるビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の平均未満の存在量を有する、請求項１又は２に記載の使用のための栄養組成物。
- 前記非乳児ヒト対象は、腸管病原性感染症、腸管バリア機能障害、２型糖尿病、ストレス、不安及び鬱病などの腸脳障害、アトピー性皮膚炎などのアレルギー、喘息並びに／又は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの炎症性の腸の病態に罹患しているか又はそれを発症するリスクがある、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための栄養組成物。
- 前記非乳児ヒト対象は、１８歳超、好ましくは４０歳超、より好ましくは５０歳超、より一層好ましくは６０歳超、より好ましくは６５歳超、最も好ましくは少なくとも７０歳の成人ヒト対象である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための栄養組成物。
- 前記ＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比は、１：８～８：１、好ましくは１：７～７：１、より好ましくは１：６～６：１、より一層好ましくは１：５～５：１、より好ましくは１：４～４：１、より好ましくは１：３～４：１、より好ましくは１：２～４：１、最も好ましくは１：１～４：１の範囲である、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための栄養組成物。
- 前記非乳児ヒト対象に投与されるＧＯＳ＋２’－ＦＬの１日投与量は、０．５～３０ｇ、好ましくは０．５～２０ｇ、より好ましくは１～１０ｇ、より一層好ましくは１～８ｇ、最も好ましくは２～６ｇの範囲である、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のための栄養組成物。
- 飲料、アイスクリーム、バー、スナック、ベーカリー製品、菓子、キャンディ、パスタ又は栄養補助食品の形態を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための栄養組成物。
- 非乳児ヒト対象の消化管内のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）及び／又はビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の相対存在量を増加させるための、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）及び２’－フコシルラクトース（２’－ＦＬ）を１：９～９：１のＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比で含む栄養組成物の非治療的使用。
- 前記ＧＯＳ：２’－ＦＬの重量比は、１：８～８：１、好ましくは１：７～７：１、より好ましくは１：６～６：１、より一層好ましくは１：５～５：１、より好ましくは１：４～４：１、より好ましくは１：３～４：１、より好ましくは１：２～４：１、最も好ましくは１：１～４：１の範囲である、請求項９に記載の非治療的使用。
- 前記非乳児ヒト対象は、１８歳超、好ましくは４０歳超、より好ましくは５０歳超、より一層好ましくは６０歳超、より好ましくは６５歳超、最も好ましくは少なくとも７０歳の成人である、請求項９又は１０に記載の非治療的使用。
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