JP2024512979A - 疼痛の新しい処置 - Google Patents

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Abstract

本出願は、疼痛を処置するための新しい標的を記載し、本発明における使用のための適切な化合物を同定する。

Description

本発明は、Ｓｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ相同体１受容体（ＳＯＳ１）タンパク質およびラット肉腫（ＲＡＳ）と結合し、それによってカスケード経路を阻害し、疼痛の低下をもたらす化合物の使用を記載する。
疼痛を処置するための新規処置の必要性が依然として存在する。最も有効かつ頻繁に処方される疼痛処置の多くはオピオイドである。これらの薬物は乱用および中毒の高い潜在性を有する。しかし、現在までに、第一線処置としてこれらを置き換える、匹敵する有効性の処置は存在しない。疼痛の処置においてパラダイムシフトを提供することは、身体内の新しい標的および経路の同定を必要とする。
本出願は、疼痛を処置するための適切な経路における、ＳＯＳ－Ｒａｓの同定および活用を記載する。
以下のいくつかの状態を媒介することができるＳＯＳ１阻害剤が最近同定された：
ＷＯ２０１９／１２２１２９号は、腫瘍学における癌性成長の処置において有用なＳＯＳ１阻害剤としての、ベンジルアミノで置換されたピリドピリミジンを記載している。
ＷＯ２０１８／１１５３８０号は、腫瘍学における癌性成長の処置において同様に有用なＳＯＳ１阻害剤としての、ベンジルアミノで置換されたキナゾリンを記載している。
ＷＯ２０１８／１７２２５０号は、過剰増殖性疾患の処置において使用するための２つのメチルキナゾリンの属を記載している。
ＷＯ２０１９／２０１８４８号は、過剰増殖性疾患の処置において使用するための２つのメチルキナゾリンのさらなる属を記載している。
ＷＯ２０２０／１７３９３５号は、ＲＡＳ阻害剤としての新しいイソインドリノンで置換されたインドールを教示している。
さらなるＳＯＳ１阻害剤は、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ（２０１９）、１１６（７）、２５５１～２５６０中に教示されている。
ＫＲＡＳとして知られるＲａｓ阻害剤の部分組を含めた様々なＲＡＳ阻害剤もまた、最近同定された。ＷＯ２０１８／０６８０１７号、ＷＯ２０１８／１４０５１３号、ＷＯ２０１８／１４０５１４号、およびＷＯ２０２０／１７３９３８号はすべて、癌を処置するためのＲＡＳ阻害剤としての活性を有する新しい化合物を教示している。新しいＲａｓ阻害剤およびその臨床状態の要約は、ＲＳＣ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０２０、１１、７６０中に見つけ得る。
驚くべきことに、ＳＯＳ１／Ｒａｓ経路を疼痛の処置のために活用することができることが、今回見出された。
したがって、本発明は、疼痛の処置において使用するためのＳＯＳ１阻害剤を提供する。
本発明はまた、疼痛の処置において使用するためのＲＡＳ阻害剤も提供する。
疼痛をもたらすＮＧＦシグナル伝達経路および経路を検証する臨床薬。ＮＧＦがＴｒｋＡと結合し、続くシグナル伝達の結果、ニューロン中の二リン酸化された細胞外シグナル制御キナーゼ（ｄｐｐＥＲＫｎｕｃ）の核集積に至り、疼痛遺伝子が上方制御される。 標的の臨床的遺伝的妥当性確認。ＮＦ１では、患者は神経のｇａｐタンパク質中に突然変異を有する（ＮＦ１）。この突然変異が機能喪失を引き起こし、ＲＡＳＧＴＰ上のＧＴＰからＧＤＰへの正常な代謝回転を妨げ、立ち代ってこれがＲＡＳＧＴＰの濃度を増加させ、過剰なシグナル伝達、腫瘍、および疼痛をもたらす。 ＢＩ３４０６による、ＰＣ－１２細胞系中における神経成長因子（ＮＧＦ）刺激性ホスホ細胞外制御キナーゼ１および２（ｐＥＲＫ１／２）の活性化の阻害からの結果を示すグラフ。 ０．１、０．３、および１ｍｇ／ｋｇの単一用量のタネズマブ（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、Ｔ＝０）と組合せた２５ｍｇ／ｋｇのＢＩ３４０６（１０ｍＬ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、午前および午後の投薬、２日間）、ならびに３ｍｇ／ｋｇのタネズマブ単独（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、Ｔ＝０）の効果を示すグラフ、ＢＩ３４０６では投薬の１時間後ならびにタネズマブ投与後の＋１時間、＋９時間、＋２５時間、および＋３３時間での荷重負荷（ＷＢ）評価を使用。
発明の概要
本出願は、疼痛を処置するための適切な経路としての、ＳＯＳ－Ｒａｓ標的の同定および活用を記載する。
Ｒａｓタンパク質は腫瘍の維持における主要な要素であることが知られており、したがって、この標的は長い間、腫瘍学において魅力的であるとみなされてきた。しかし、最近まで、ＳＯＳ１－Ｒａｓは新薬の開発につながらない標的として見られてきた。Ｒａｓの規範的な特性は、ＧＴＰ加水分解のＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）刺激によって部分的に促進される、ＧＴＰ結合した活性状態とＧＤＰ結合した不活性状態との間を通常は循環する、小さなＧＴＰアーゼのものである（図２）。しかし、Ｒａｓタンパク質が突然変異的に活性化された場合、損なわれたＧＡＰ刺激は、持続的にＧＴＰ結合したＲａｓの形成を支持する。この重大な生化学的欠損が、突然変異Ｒａｓを標的とする初期の努力を促した。プロテインキナーゼの有効な拮抗剤であるＡＴＰ競合的阻害剤との類似性により、ＲａｓのＧＴＰ競合的阻害剤の同定が試みられた。しかし、ＡＴＰは低いマイクロモーラーの親和性でプロテインキナーゼと結合する一方で、ＧＴＰはピコモーラーの親和性でＲａｓタンパク質と結合し、有効な阻害剤の発見が妨げられる。
適切なＳＯＳ１阻害剤およびＲａｓ阻害剤の発見に伴って、癌以外の追加の適応症の経路を調査することが可能となった。驚くべきことに、詳細な調査により、ＳＯＳ１阻害剤およびＲａｓ阻害剤を使用することによって疼痛に対してプラスの効果を有することが可能であることが今回明らかとなった。
本発明は、疼痛の処置において使用するためのＳＯＳ１阻害剤を提供する。
ＳＯＳ１阻害剤の活性は、Ｈｉｌｌｉｇら、ＰＮＡＳ、２０１９年２月１２日、第１１６巻、第７号、２５５１～２５６０に記載のＨＴＲＦ結合アッセイによって測定し得る。
他のＳＯＳ１アッセイは当業者に周知であり、ＦＲＥＴ／ＳＰＲ結合などのアッセイが挙げられる。
本発明において使用するための適切なＳＯＳ１阻害剤は、５マイクロモーラー以下の、ＨＴＲＦ結合アッセイにおけるＩＣ５０を有する。
特に適切なＳＯＳ１阻害剤は、ＨＴＲＦ結合アッセイにおいて１００ナノモーラー未満のＩＣ５０を有する。
特に好ましい実施形態では、ＳＯＳ１阻害剤は、ＨＴＲＦ結合アッセイにおいて１ナノモーラー以下のＩＣ５０を有する。
本発明のＳＯＳ１阻害剤はまた、追加の標的よりも、ＳＯＳ１に対する選択性も示す。適切には、本発明のＳＯＳ１阻害剤は、以下の標的：ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＴｒｋＡキナーゼ、ＴｒｋＢキナーゼ、ＴｒｋＣキナーゼ、Ｃ－Ｒａｆ、Ｂ－Ｒａｆ、ＰＩ３キナーゼ、ＡＫＴ、およびＥＲＫのうちの１つまたは複数よりも、１００倍以上の選択性を示す。
本発明の化合物が、別の標的よりも、ＳＯＳ１に対する１００倍を超える選択性を有するかどうかを決定する際は、以下のアッセイおよび方法を使用し得る：
ＭＥＫ１および２は、ＭＥＫアッセイキット、製品コードＣＳ０４９０、Ｓｉｇｍａ、米国Ｓｔ Ｌｏｕｉｓを使用してアッセイすることができる。
Ｔｒｋ受容体キナーゼ活性は、Ｗａｎｇら、Ｃｕｒｒ Ｃｈｅｍ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、２００８、１：２７～３３に記載のようにアッセイすることができる。
Ｂ－Ｒａｆは、Ｂ－Ｒａｆキナーゼアッセイキット、製品コード１７－３５９、Ｓｉｇｍａ、米国Ｓｔ Ｌｏｕｉｓを使用してアッセイすることができる。
Ｃ－Ｒａｆは、ＢＰＳ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅアッセイキットカタログ番号７９５７０、米国、カリフォルニア州Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、９２１２１を使用してアッセイすることができる。
ＰＩ３キナーゼは、Ｆｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２００９、４６２：３４５～６２に記載の方法を介してアッセイすることができる。
ＡＫＴは、ａｂｃａｍキットＡｋｔキナーゼ活性アッセイキット（ａｂ１３９４３６）、ａｂｃａｍ ｐｌｃ、米国Ｃａｍｂｒｉｄｇｅを使用してアッセイすることができる。
ＥＲＫは、Ｐｒｏｍｅｇａ ＥＲＫ２キナーゼキット、カタログ番号Ｖ１９６１、Ｐｒｏｍｅｇａ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国Ｍａｄｉｓｏｎを使用してアッセイすることができる。
適切なＳＯＳ１阻害剤としては、ＷＯ２０１９／１２２１２９号、ＷＯ２０１８／１１５３８０号およびＷＯ２０１８／１７２２５０号、ＷＯ２０１９／２０１８４８号、ならびにＷＯ２０２０／１７３９３５号中に開示されているものが挙げられる。
さらなるＳＯＳ１阻害剤は、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ（２０１９）、１１６（７）、２５５１～２５６０中に教示されている。
ＡＣＳ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、９（９）、９４１～９４６（２０１８）に記載のインドール。
Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、６１（１９）、８８７５～８８９４（２０１８）に記載のインドール。
Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、６１（１９）、８８７５～８８９４（２０１８）、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２０２０年８月１９日、ＣＤ－２０－０１４２、ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９～８２９０．ＣＤ－２０－０１４２、Ｌｕら、Ｃｈｅｍ ＭｅｄＣｈｅｍ、２０１６、１１、８１４～８２１に記載のベンズイミダゾール。
特に適切な化合物は、以下のものである：
ＢＩ３４０６（Ｎ－［（１Ｒ）－１－［３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－７－メトキシ－２－メチル－６－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシキナゾリン－４－アミン）
この分子の合成はＷＯ２０１８１１５３８０号中に公開されている
Ｂａｙ２９３（６，７－ジメトキシ－２－メチル－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［４－［２－（メチルアミノメチル）フェニル］チオフェン－２－イル］エチル］キナゾリン－４－アミン）。合成はＰＮＡＳ、２０１９、１１６（７）、２５５１～２５６０中に公開されている
４－［［（１Ｒ）－１－（３，３－ジフルオロ－２Ｈ－１－ベンゾフラン－７－イル）エチル］アミノ］－６－［１－（ジフルオロメチル）シクロプロピル］－２－メチルピリド［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン。合成はＷＯ２０１９１２２１２９号中に公開されている。
合成はＷＯ２０２０１８０７７０号中に公開されている
合成はＷＯ２０２０１８０７６８号中に公開されている；
（Ｒ）－シクロプロピル（４－（１－メチル－４－（（１－（２－メチル－３－（フリフルロメチル（ｆｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈｙｌ））フェニル）エチル）アミノ）フタラジン－６－イル）ピペラジン－１－イル）メタノン
合成はＷＯ２０２１１２７４２９号中に公開されている
（Ｒ）－５－（４－（（１－（３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）エチル）アミノ）－２－メチル－８，９－ジヒドロ－７Ｈ－シクロペンタ［ｈ］キナゾリン－６－イル）－１メチルピリジン－２（１Ｈ）－オン
合成はＷＯ２０２１１０５９６０号中に公開されている
（Ｒ）－４－（（１－（３－（１，１－ジフルオロ－２－ヒドロキシ－２－メチルプロピル）－２－フルオロフェニル）エチル）アミノ）－２，６，８，８－テトラメチル－６，８－ジヒドロ－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－オン
合成はＷＯ２０２１１３０７３１号中に公開されている、ならびに
ＷＯ２０１９１２２１２９号に開示されているＢＩ－１７０９６３。
特に適切な化合物は以下のものである。
ＳＯＳ１阻害剤を、疼痛のｉｎ ｖｉｔｒｏモデルにおいて、ＮＧＦ刺激性ＰＣ１２アッセイにおいて試験した（Ｓａｓａｇａｗａら、ＮＡＴＵＲＥ ＣＥＬＬ ＢＩＯＬＯＧＹ、第７巻、第４号、２００５年４月、３６５～３７３）。試験した化合物はモデルにおいて高い有効性を示した。特に、ＢＩ３４０６は疼痛薬物候補タネズマブに匹敵する有効性を示した。
ＳＯＳ１阻害剤は疼痛処置として数々の利点を有する。これらはオピエートの中毒潜在性を有さず、高い有効性を示す。これらはまた、タネズマブおよび他の抗ＮＧＦを治療上有効な用量で使用することをほぼ不可能にする副作用も、有さないようと考えられる。
本発明は、疼痛の処置において使用するためのＲａｓ阻害剤を提供する。
Ｒａｓ阻害剤の活性は、Ｋｅｓｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．、２０１９年８月６日、１１６（３２）：１５８２３～１５８２９によって記載されている結合アッセイにおいて測定し得る。
本発明において使用するための適切なＲａｓ阻害剤は、５０００ｎＭ以下の、結合アッセイにおけるＩＣ５０を有する。
特に適切なＲａｓ阻害剤は、１００ナノモーラー未満のＩＣ５０を有する。
特に好ましい実施形態では、Ｒａｓ阻害剤は、１ナノモーラー以下のＩＣ５０を有する。
本発明のＲａｓ阻害剤はまた、追加の標的よりも、Ｒａｓに対する選択性も示す。適切には、本発明のＲａｓ阻害剤は、以下の標的：ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＴｒｋＡキナーゼ、ＴｒｋＢキナーゼ、ＴｒｋＣキナーゼ、Ｃ－Ｒａｆ、Ｂ－Ｒａｆ、ＰＩ３キナーゼ、ＡＫＴ、およびＥＲＫのうちの１つまたは複数よりも、１００倍以上の選択性を示す
現在、いくつかのＲａｓ阻害剤が開発中である。Ａｒａｘｅｓ化合物ＡＲＳ－３２４８、ＡＲＳ－１６２０、およびＡＲＳ－８５３、ＡｍｇｅｎのＡＭＧ－５１０、ＭｉｒａｔｉのＭＲＴＸ－８４９、ならびにＢｒｉｄｇｅＢｉｏのＢＢＰ－４５４はすべて、癌薬物として調査されている。そのようなＲａｓ阻害剤が、本発明における使用に適切であろう。
他のＲａｓ阻害剤としては、以下のものが挙げられる：
その合成は、Ｊ．Ｍ．Ｏｓｔｒｅｍ、Ｕ．Ｐｅｔｅｒｓ、Ｍ．Ｌ．Ｓｏｓ、Ｊ．Ａ．Ｗｅｌｌｓ、およびＫ．Ｍ．Ｓｈｏｋａｔ、Ｎａｔｕｒｅ、２０１３、５０３、５４８～５５１；およびＭ．Ｐ．Ｐａｔｒｉｃｅｌｌｉ、Ｍ．Ｒ．Ｊａｎｅｓ、Ｌ．Ｓ．Ｌｉ、Ｒ．Ｈａｎｓｅｎ、Ｕ．Ｐｅｔｅｒｓ、Ｌ．Ｖ．Ｋｅｓｓｌｅｒ、Ｙ．Ｃｈｅｎ、Ｊ．Ｍ．Ｋｕｃｈａｒｓｋｉ、Ｊ．Ｆｅｎｇ、Ｔ．Ｅｌｙ、Ｊ．Ｈ．Ｃｈｅｎ、Ｓ．Ｊ．Ｆｉｒｄａｕｓ、Ａ．Ｂａｂｂａｒ、Ｐ．Ｒｅｎ、およびＹ．Ｌｉｕ、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２０１６、６、３１６～３２９中に見つけ得る。
特に適切なＲａｓ阻害剤としては、以下のものが挙げられる：
ＢＩ－２８５２
（３Ｓ）－５－ヒドロキシ－３－［２－［［［１－［（１－メチルイミダゾール－４－イル）メチル］インドール－６－イル］メチルアミノ］メチル］－１Ｈ－インドール－３－イル］－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オン
ＡＲＳ－３２４８／ＪＮＪ７４６９９１５７
ＡＲＳ－１６２０
Ｍ．Ｒ．Ｊａｎｅｓ、Ｊ．Ｚｈａｎｇ、Ｌ．Ｓ．Ｌｉ、Ｒ．Ｈａｎｓｅｎ、Ｕ．Ｐｅｔｅｒｓ、Ｘ．Ｇｕｏ、Ｙ．Ｃｈｅｎ、Ａ．Ｂａｂｂａｒ、Ｓ．Ｊ．Ｆｉｒｄａｕｓ、Ｌ．Ｄａｒｊａｎｉａ、Ｊ．Ｆｅｎｇ、Ｊ．Ｈ．Ｃｈｅｎ、Ｓ．Ｌｉ、Ｓ．Ｌｉ、Ｙ．Ｏ．Ｌｏｎｇ、Ｃ．Ｔｈａｃｈ、Ｙ．Ｌｉｕ、Ａ．Ｚａｒｉｅｈ、Ｔ．Ｅｌｙ、Ｊ．Ｍ．Ｋｕｃｈａｒｓｋｉ、Ｌ．Ｖ．Ｋｅｓｓｌｅｒ、Ｔ．Ｗｕ、Ｋ．Ｙｕ、Ｙ．Ｗａｎｇ、Ｙ．Ｙａｏ、Ｘ．Ｄｅｎｇ、Ｐ．Ｐ．Ｚａｒｒｉｎｋａｒ、Ｄ．Ｂｒｅｈｍｅｒ、Ｄ．Ｄｈａｎａｋ、Ｍ．Ｖ．Ｌｏｒｅｎｚｉ、Ｄ．Ｈｕ－Ｌｏｗｅ、Ｍ．Ｐ．Ｐａｔｒｉｃｅｌｌｉ、Ｐ．Ｒｅｎ、およびＹ．Ｌｉｕ、Ｃｅｌｌ、２０１８、１７２、５７８～５８９．ｅ５１７。
ＡＲＳ－８５３
Ｍ．Ｐ．Ｐａｔｒｉｃｅｌｌｉ、Ｍ．Ｒ．Ｊａｎｅｓ、Ｌ．Ｓ．Ｌｉ、Ｒ．Ｈａｎｓｅｎ、Ｕ．Ｐｅｔｅｒｓ、Ｌ．Ｖ．Ｋｅｓｓｌｅｒ、Ｙ．Ｃｈｅｎ、Ｊ．Ｍ．Ｋｕｃｈａｒｓｋｉ、Ｊ．Ｆｅｎｇ、Ｔ．Ｅｌｙ、Ｊ．Ｈ．Ｃｈｅｎ、Ｓ．Ｊ．Ｆｉｒｄａｕｓ、Ａ．Ｂａｂｂａｒ、Ｐ．Ｒｅｎ、およびＹ．Ｌｉｕ、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２０１６、６、３１６～３２９。
ＡＭＧ－５１０
Ｊ．Ｃａｎｏｎ、Ｋ．Ｒｅｘ、Ａ．Ｙ．Ｓａｉｋｉ、Ｃ．Ｍｏｈｒ、Ｋ．Ｃｏｏｋｅ、Ｄ．Ｂａｇａｌ、Ｋ．Ｇａｉｄａ、Ｔ．Ｈｏｌｔ、Ｃ．Ｇ．Ｋｎｕｔｓｏｎ、Ｎ．Ｋｏｐｐａｄａ、Ｂ．Ａ．Ｌａｎｍａｎ、Ｊ．Ｗｅｒｎｅｒ、Ａ．Ｓ．Ｒａｐａｐｏｒｔ、Ｔ．Ｓａｎ Ｍｉｇｕｅｌ、Ｒ．Ｏｒｔｉｚ、Ｔ．Ｏｓｇｏｏｄ、Ｊ．Ｒ．Ｓｕｎ、Ｘ．Ｚｈｕ、Ｊ．Ｄ．ＭｃＣａｒｔｅｒ、Ｌ．Ｐ．Ｖｏｌａｋ、Ｂ．Ｅ．Ｈｏｕｋ、Ｍ．Ｇ．Ｆａｋｉｈ、Ｂ．Ｈ．Ｏ’Ｎｅｉｌ、Ｔ．Ｊ．Ｐｒｉｃｅ、Ｇ．Ｓ．Ｆａｌｃｈｏｏｋ、Ｊ．Ｄｅｓａｉ、Ｊ．Ｋｕｏ、Ｒ．Ｇｏｖｉｎｄａｎ、Ｄ．Ｓ．Ｈｏｎｇ、Ｗ．Ｏｕｙａｎｇ、Ｈ．Ｈｅｎａｒｙ、Ｔ．Ａｒｖｅｄｓｏｎ、Ｖ．Ｊ．Ｃｅｅ、およびＪ．Ｒ．Ｌｉｐｆｏｒｄ、Ｎａｔｕｒｅ、２０１９、５７５、２１７～２２３。
ＭＲＴＸ－８４９
Ｊ．Ｈａｌｌｉｎ、Ｌ．Ｄ．Ｅｎｇｓｔｒｏｍ、Ｌ．Ｈａｒｇｉｓ、Ａ．Ｃａｌｉｎｉｓａｎ、Ｒ．Ａｒａｎｄａ、Ｄ．Ｍ．Ｂｒｉｅｒｅ、Ｎ．Ｓｕｄｈａｋａｒ、Ｖ．Ｂｏｗｃｕｔ、Ｂ．Ｒ．Ｂａｅｒ、Ｊ．Ａ．Ｂａｌｌａｒｄ、Ｍ．Ｒ．Ｂｕｒｋａｒｄ、Ｊ．Ｂ．Ｆｅｌｌ、Ｊ．Ｐ．Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｇ．Ｐ．Ｖｉｇｅｒｓ、Ｙ．Ｘｕｅ、Ｓ．Ｇａｔｔｏ、Ｊ．Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｂａｎｅｔ、Ａ．Ｐａｖｌｉｃｅｋ、Ｋ．Ｖｅｌａｓｔａｇｕｉ、Ｒ．Ｃ．Ｃｈａｏ、Ｊ．Ｂａｒｔｏｎ、Ｍ．Ｐｉｅｒｏｂｏｎ、Ｅ．Ｂａｌｄｅｌｌｉ、Ｅ．Ｆ．Ｐａｔｒｉｃｏｉｎ ３ｒｄ、Ｄ．Ｐ．Ｃａｓｓｉｄｙ、Ｍ．Ａ．Ｍａｒｘ、Ｉ．Ｉ．Ｒｙｂｋｉｎ、Ｍ．Ｌ．Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｓ．Ｉ．Ｏｕ、Ｐ．Ｌｉｔｏ、Ｋ．Ｐ．Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ、Ｐ．Ａ．Ｊａｎｎｅ、Ｐ．Ｏｌｓｏｎ、およびＪ．Ｇ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２０２０、１０、５４～７１
Ｊ．Ｂ．Ｆｅｌｌ、Ｊ．Ｐ．Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｂ．Ｒ．Ｂａｅｒ、Ｊ．Ｆ．Ｂｌａｋｅ、Ｋ．Ｂｏｕｈａｎａ、Ｄ．Ｍ．Ｂｒｉｅｒｅ、Ｋ．Ｄ．Ｂｒｏｗｎ、Ｌ．Ｅ．Ｂｕｒｇｅｓｓ、Ａ．Ｃ．Ｂｕｒｎｓ、Ｍ．Ｒ．Ｂｕｒｋａｒｄ、Ｈ．Ｃｈｉａｎｇ、Ｍ．Ｊ．Ｃｈｉｃａｒｅｌｌｉ、Ａ．Ｗ．Ｃｏｏｋ、Ｊ．Ｊ．Ｇａｕｄｉｎｏ、Ｊ．Ｈａｌｌｉｎ、Ｌ．Ｈａｎｓｏｎ、Ｄ．Ｐ．Ｈａｒｔｌｅｙ、Ｅ．Ｊ．Ｈｉｃｋｅｎ、Ｇ．Ｐ．Ｈｉｎｇｏｒａｎｉ、Ｒ．Ｊ．Ｈｉｎｋｌｉｎ、Ｍ．Ｊ．Ｍｅｊｉａ、Ｐ．Ｏｌｓｏｎ、Ｊ．Ｎ．Ｏｔｔｅｎ、Ｓ．Ｐ．Ｒｈｏｄｅｓ、Ｍ．Ｅ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ、Ｐ．Ｓａｖｅｃｈｅｎｋｏｖ、Ｄ．Ｊ．Ｓｍｉｔｈ、Ｎ．Ｓｕｄｈａｋａｒ、Ｆ．Ｘ．Ｓｕｌｌｉｖａｎ、Ｔ．Ｐ．Ｔａｎｇ、Ｇ．Ｐ．Ｖｉｇｅｒｓ、Ｌ．Ｗｏｌｌｅｎｂｅｒｇ、Ｊ．Ｇ．Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ、およびＭ．Ａ．Ｍａｒｘ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０２０、ＤＯＩ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｊｍｅｄｃｈｅｍ．９ｂ０２０５２。
、およびＢＢＰ－４５４
追加のＲａｓ阻害剤は、ＲＳＣ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０２０、１１、７６０によって記載されている。
本発明のさらなる実施形態では、ＳＯＳ１阻害剤は、抗ＮＧＦ抗体と組み合わせて投与した場合に、疼痛の処置において使用するために特に適切であることが見出されている。
本発明のさらなる実施形態では、Ｒａｓ阻害剤は、抗ＮＧＦ抗体と組み合わせて投与した場合に、疼痛の処置において使用するために特に適切であることが見出されている。
本発明は、治療上有効な量のＳＯＳ１阻害剤を抗ＮＧＦ抗体と組み合わせて投与することによって、疼痛を処置する方法を提供する。
タネズマブは抗ＮＧＦ抗体の一例である。これは、有望かつ高度に有効な疼痛治療であるが、患者は、鎮痛を提供するために十分な投与量レベルで不快な副作用を頻繁に被る。
組合せは、協同的なレベルの有効性を提供し、抗ＮＧＦ抗体を、有害事象が見られ得るレベルに達さずに、鎮痛を提供するために十分な投与量レベルで投与することができるという利点を有する。協同的な系では、２つの独立した薬剤が、はるかにより高い用量の、薬剤のうちの一方と同等の活性レベルを示すことができる。２つの薬剤が組み合わさってそのような効果を有することが見出されたことは、驚くべきである。
科学文献は、タネズマブが、ラットにおいて１０ｍｇ／ｋｇで有効性を示すことを教示している。（Ｍｉｙａｇｉら、Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ ａ ｋｎｅｅ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｐａｉｎ ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｍｉｃｅ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ５６７０７２７／、抗ＮＧＦの最大有効用量は１０ｍｇ／ｋｇのマウスである、Ｇｈｉｌａｒｄｉら、Ｎｅｕｒｏｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｎｓｏｒｙ ａｎｄ Ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ Ｎｅｒｖｅ Ｆｉｂｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｉｎｆｕｌ Ａｒｔｈｒｉｔｉｃ Ｊｏｉｎｔ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ３３８６４６５／、抗ＮＧＦの最大有効用量は１０ｍｇ／ｋｇのマウスである、Ｓｈｅｌｔｏｎら、Ｎｅｒｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ ａｎｄ ｃａｃｈｅｘｉａ ｉｎ ａｕｔｏ－ｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｍｅｄ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／１５９２７３７７／、抗ＮＧＦの最大有効用量は１０ｍｇ／ｋｇのマウスである）
ＢＩ３４０６は、マウスの疼痛モデルにおいて、１０ｍｇ／ｋｇの用量で有効性を有することが示されている。
２５ｍｇ／ｋｇでのＳＯＳ１阻害剤ＢＩ３４０６の投薬は、疼痛モデルにおいて、わずかな有効性または有効性がないことを実証することが示されている。
驚くべきことに、０．３ｍｇ／ｋｇをタネズマブと組み合わせた低用量のＳＯＳ１（２５ｍｇ／ｋｇ）ＢＩ３４０６は、有意な鎮痛効果を有する。１．０ｍｇのタネズマブと組み合わせた低用量のＳＯＳ１（２５ｍｇ／ｋｇ）ＢＩ３４０６は、有意な鎮痛効果を有する。
固定用量のＳＯＳｉを用いた鎮痛の増加は、タナズマブ（Ｔａｎａｚｕｍａｂ）の用量に関連している（すなわち、有効性は用量に関連する）
これらのデータは、ヒトにおいてタネズマブの用量を下げ、その結果、このクラスの薬物の使用を制限する副作用の傾向を低下させることが可能なはずであることを示す。タネズマブなどのモノクローナル抗体を介した、ＳＯＳ１阻害とＮＧＦ遮断との組合せは、より高い用量のタネズマブ単独の使用と比較した場合に、増加した疼痛の有効性を低下した副作用でもたらすであろう。
ＳＯＳ阻害剤とＮＧＦモノクローナル抗体、またはＮＧＦ経路の他の遮断剤／モジュレーターとの組合せは、より高い疼痛の有効性を低下した副作用でもたらし、骨関節炎などの状態における疼痛の改善および増強された処置をもたらす潜在性を有している。
したがって、本発明は、抗ＮＧＦと組み合わせたＳＯＳ１阻害剤の使用を提供し、一方または両方の構成要素を、疼痛の処置には治療的以下の用量で投与する。
用語、治療的以下の用量（ｓｕｂ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｏｓｅ）とは、構成要素が単独療法として有効性を示す用量よりも低い用量を説明するために使用する。
組合せの他の利点としては、静脈内または皮下投薬の代わりに経口投薬の潜在性を含む。また、組合せは、より低い処置費用をもたらし、より低い免疫原性リスクを提供する場合がある。
特に適切な抗ＮＧＦ抗体としては、タネズマブ、ファシヌマブ、フルラヌマブ、およびＭＥＤＩ７３５が挙げられる。
特に適切な抗ＮＧＦ抗体はタネズマブおよびファシヌマブである。
好ましい実施形態では、抗ＮＧＦ抗体はタネズマブである。
別の好ましい実施形態では、抗ＮＧＦ抗体はファシヌマブである。
特に好ましい実施形態では、本発明は、疼痛を処置するための、治療的以下の用量のタネズマブと組み合わせたＳＯＳ１阻害剤の使用を提供する。任意選択で、ＳＯＳ１阻害剤およびタネズマブをどちらも治療的以下の用量で投与する。
用語、治療的以下の用量とは、構成要素が単独療法として有効性を示す用量よりも低い用量を説明するために使用する。
本発明において使用するための適切なＳＯＳ１阻害剤は、５マイクロモーラー以下の、ＨＴＲＦ結合アッセイにおけるＩＣ５０を有する。
特に適切なＳＯＳ１阻害剤は、１００ナノモーラー未満のＩＣ５０を有する。
特に好ましい実施形態では、ＳＯＳ１阻害剤は、１ナノモーラー以下のＩＣ５０を有する。
本発明のＳＯＳ１阻害剤はまた、追加の標的よりも、ＳＯＳ１に対する選択性も示す。適切には、本発明のＳＯＳ１阻害剤は、以下の標的：ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＴｒｋＡキナーゼ、ＴｒｋＢキナーゼ、ＴｒｋＣキナーゼ、Ｃ－Ｒａｆ、Ｂ－Ｒａｆ、ＰＩ３キナーゼ、ＡＫＴ、およびＥＲＫのうちの１つまたは複数よりも、１００倍以上の選択性を示す。
抗ＮＧＦ抗体、特にタネズマブまたはフシニマブ（Ｆｕｓｉｎｉｍａｂ）と組み合わせて使用するためのさらなる適切なＳＯＳ１阻害剤は、以下のものである：
ＢＩ３４０６（Ｎ－［（１Ｒ）－１－［３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－７－メトキシ－２－メチル－６－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシキナゾリン－４－アミン）
この分子の合成はＷＯ２０１８１１５３８０号中に公開されている
Ｂａｙ２９３（６，７－ジメトキシ－２－メチル－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［４－［２－（メチルアミノメチル）フェニル］チオフェン－２－イル］エチル］キナゾリン－４－アミン）
合成はＰＮＡＳ、２０１９、１１６（７）、２５５１～２５６０中に公開されている
４－［［（１Ｒ）－１－（３，３－ジフルオロ－２Ｈ－１－ベンゾフラン－７－イル）エチル］アミノ］－６－［１－（ジフルオロメチル）シクロプロピル］－２－メチルピリド［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン
合成はＷＯ２０１９１２２１２９号中に公開されている
合成はＷＯ２０２０１８０７７０号中に公開されている
合成はＷＯ２０２０１８０７６８号中に公開されている。
（Ｒ）－シクロプロピル（４－（１－メチル－４－（（１－（２－メチル－３－（フリフルロメチル（ｆｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈｙｌ））フェニル）エチル）アミノ）フタラジン－６－イル）ピペラジン－１－イル）メタノン
合成はＷＯ２０２１１２７４２９号中に公開されている
（Ｒ）－５－（４－（（１－（３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）エチル）アミノ）－２－メチル－８，９－ジヒドロ－７Ｈ－シクロペンタ［ｈ］キナゾリン－６－イル）－１メチルピリジン－２（１Ｈ）－オン
合成はＷＯ２０２１１０５９６０号中に公開されている
（Ｒ）－４－（（１－（３－（１，１－ジフルオロ－２－ヒドロキシ－２－メチルプロピル）－２－フルオロフェニル）エチル）アミノ）－２，６，８，８－テトラメチル－６，８－ジヒドロ－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｇ］キナゾリン－７－オン
合成はＷＯ２０２１１３０７３１号中に公開されている
タナズマブ（Ｔａｎａｚｕｍａｂ）と組み合わせて使用するための特に適切なＳＯＳ－１阻害剤は、ＢＩ３４０６（Ｎ－［（１Ｒ）－１－［３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－７－メトキシ－２－メチル－６－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシキナゾリン－４－アミン）およびＢａｙ２９３（６，７－ジメトキシ－２－メチル－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［４－［２－（メチルアミノメチル）フェニル］チオフェン－２－イル］エチル］キナゾリン－４－アミン）である。
ファシヌマブと組み合わせて使用するための特に適切なＳＯＳ－１阻害剤は、ＢＩ３４０６（Ｎ－［（１Ｒ）－１－［３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－７－メトキシ－２－メチル－６－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシキナゾリン－４－アミン）およびＢａｙ２９３（６，７－ジメトキシ－２－メチル－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［４－［２－（メチルアミノメチル）フェニル］チオフェン－２－イル］エチル］キナゾリン－４－アミン）である。
本発明において使用するための適切なＲａｓ阻害剤は、５０００ｎＭ以下の、結合アッセイにおけるＩＣ５０を有する。
特に適切なＲａｓ阻害剤は、１００ナノモーラー未満のＩＣ５０を有する。
特に好ましい実施形態では、Ｒａｓ阻害剤は、１ナノモーラー以下のＩＣ５０を有する。
適切なＲａｓ阻害剤としては、以下のものが挙げられる：
ＢＩ－２８５２
（３Ｓ）－５－ヒドロキシ－３－［２－［［［１－［（１－メチルイミダゾール－４－イル）メチル］インドール－６－イル］メチルアミノ］メチル］－１Ｈ－インドール－３－イル］－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オン
ＡＲＳ－３２４８／ＪＮＪ７４６９９１５７
ＡＲＳ－１６２０
ＡＲＳ－８５３
ＡＭＧ－５１０
ＭＲＴＸ－８４９
、およびＢＢＰ－４５４
ファシヌマブと組み合わせて使用するための特に適切なＲａｓ阻害剤は、ＢＩ２８５２（３Ｓ）－５－ヒドロキシ－３－［２－［［［１－［（１－メチルイミダゾール－４－イル）メチル］インドール－６－イル］メチルアミノ］メチル］－１Ｈ－インドール－３－イル］－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オンである。
タナズマブ（Ｔａｎａｚｕｍａｂ）と組み合わせて使用するための特に適切なＲａｓ阻害剤は、ＢＩ２８５２（３Ｓ）－５－ヒドロキシ－３－［２－［［［１－［（１－メチルイミダゾール－４－イル）メチル］インドール－６－イル］メチルアミノ］メチル］－１Ｈ－インドール－３－イル］－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オンである。
理論に束縛されずに、ＳＯＳ１阻害剤およびＲａｓ阻害剤は、以下の方法で疼痛を処置するように作用すると考えられている。
神経成長因子（ＮＧＦ）は、ＮＧＦ受容体（ＴｒｋＡ）と結合し、侵害受容に関与している遺伝子の上方制御をもたらすタンパク質である。ＮＧＦは、慢性疼痛の発生の重要な貢献因子であることが知られている。図１に示すように、ＮＧＦとＴｒｋＡとの結合、および続くシグナル伝達の結果、ニューロン中の二リン酸化された細胞外シグナル制御キナーゼ（ｄｐｐＥＲＫｎｕｃ）の核集積に至り、疼痛遺伝子が上方制御される。
ＳＯＳ、およびＲａｓなどのＳＯＳによって下流で影響を受ける分子のレベルが、このカスケードに注がれ、より高いレベルのＳＯＳおよびＲＡＳがより高いレベルのｂＲＡＦおよびＭＥＫをもたらし、二リン酸化された細胞外シグナル制御キナーゼ（ｄｐｐＥＲＫｎｕｃ）の蓄積をもたらし、より高いレベルの疼痛がもたらされる。この経路を阻害することによって、ＲＡＳ ＧＴＰの形成を制御することが可能である。ＲＡＳ ＧＴＰのレベルを下げることによって、疼痛が低下される。
用語、疼痛（ｐａｉｎ）には、それだけには限定されないが、急性疼痛、慢性疼痛、炎症性疼痛、侵害受容性疼痛、神経因性疼痛、痛覚過敏、アロディニア、中枢性疼痛、癌性疼痛、手術後疼痛、内臓痛、筋骨格痛、心臓痛または血管痛、偏頭痛を含む頭痛、歯痛を含む口腔顔面痛、および背痛が含まれる。
より詳細には、処置に適した疼痛としては、それだけには限定されないが、
（ａ）急性疼痛および／または自発性疼痛、
（ｂ）慢性疼痛およびまたは継続中の疼痛、
（ｃ）関節痛、骨関節炎もしくは関節リウマチから生じる疼痛、炎症性腸疾患から生じる疼痛、乾癬、および湿疹のうちの任意の１つを含む、炎症性疼痛
（ｄ）侵害受容性疼痛、
（ｅ）有痛性糖尿病性神経障害またはヘルペス後神経痛に関連する疼痛を含めた神経因性疼痛、
（ｆ）痛覚過敏、
（ｇ）アロディニア、
（ｈ）中枢性疼痛、中枢性卒中後痛、多発性硬化症から生じる疼痛、脊髄損傷から生じる疼痛、またはパーキンソン病もしくは癲癇から生じる疼痛、
（ｉ）癌性疼痛、
（ｊ）手術後疼痛、
（ｋ）消化内臓痛および非消化内臓痛、胃腸管系（ＧＩ）障害が原因の疼痛、機能性腸障害（ＦＢＤ）から生じる疼痛、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から生じる疼痛、月経困難症から生じる疼痛、骨盤痛、膀胱炎、間質性膀胱炎、または膵炎を含めた、内臓痛、
（ｌ）筋骨格痛、筋痛、線維筋痛症、脊椎炎、血清陰性（非リウマチ性）関節症、非関節性リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、化膿性筋炎、
（ｍ）心臓痛または血管痛、狭心症が原因の疼痛、心筋（ｍｙｏｃａｒｄｉｃａｌ）梗塞、増帽弁狭窄症、心膜炎、レイノー現象、浮腫性硬化症（ｓｃｌｅｒｅｄｏｍａ）、浮腫性硬化症（ｓｃｌｅｒｅｄｏｍａ）、または骨格筋虚血、
（ｎ）偏頭痛、前兆を伴う偏頭痛、前兆群発頭痛を伴わない偏頭痛、緊張型頭痛を含む、頭痛
（ｏ）歯痛、側頭下顎筋筋膜痛、または耳鳴を含む口腔顔面痛、あるいは
（ｐ）背痛、滑液包炎、月経痛、偏頭痛、関連痛、三叉神経痛、過敏化、脊椎の外傷および／もしくは変性または脳卒中から生じる疼痛
が挙げられる。
疼痛の処置は、それだけには限定されないが、疼痛の発生または進行を妨げる、寛解させる、制御する、その発生率を低下させる、または遅延させることを含む。
特に適切な疼痛適応症としては、骨関節炎および癌性疼痛が挙げられる。
別の実施形態では、適切な適応症は骨関節炎である。
本発明の別の態様によれば、第２の薬理学的に活性のある化合物と合わせた組合せにおいて、別々、連続的、または同時に使用するための、本発明の化合物を提供する。好ましくは、組合せの第２の薬理学的に活性のある化合物は、それだけには限定されないが以下を挙げ得る：
・オピオイド鎮痛剤、たとえば、モルヒネ、ヘロイン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、レボルファノール、レバロルファン、メサドン、メペリジン、フェンタニル、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、プロポキシフェン、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ブプレノルフィン、ブトルファノール、ナルブフィン、またはペンタゾシン；
・非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）、たとえば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、ニメスリド、ニトロフルルビプロフェン、オルサラジン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スルファサラジン、スリンダク、トルメチン、またはゾメピラック；
・バルビツレート鎮痛剤、たとえば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタビタール（ｂｕｔａｂｉｔａｌ）、メホバルビタール、メタルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルチタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｔｉｔａｌ）、セコバルビタール、タルブタール、テアミラール（ｔｈｅａｍｙｌａｌ）、またはチオペンタール；
・鎮痛作用を有するベンゾジアゼピン、たとえば、クロルジアゼポキシド、クロラゼペート、ジアゼパム、フルラゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパム、またはトリアゾラム；
・鎮痛作用を有するＨ１拮抗剤、たとえば、ジフェンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニルアミン、またはクロルシクリジン；
・鎮痛剤、たとえば、グルテチミド、メプロバメート、メタカロン、またはジクロラルフェナゾン；
・骨格筋弛緩剤、たとえば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メトカルバモール、またはオルフレナジン；
・ＮＭＤＡ受容体拮抗剤、たとえば、デキストロメトルファン（（＋）－３－ヒドロキシ－Ｎ－メチルモルフィナン）もしくはその代謝物デキストロルファン（（＋）－３－ヒドロキシ－Ｎ－メチルモルフィナン）、ケタミン、メマンチン、ピロロキノリンキニーネ、シス－４－（ホスホノメチル）－２－ピペリジンカルボン酸、ブジピン、ＥＮ－３２３１（ＭｏｒｐｈｉＤｅｘ（登録商標）、モルヒネとデキストロメトルファンの組合せ配合物）、トピラメート、ネラメキサン、または、ＮＲ２Ｂ拮抗剤、たとえば、イフェンプロジル、トラキソプロジル、もしくは（－）－（Ｒ）－６－｛２－［４－（３－フルオロフェニル）－４－ヒドロキシ－１－ピペリジニル］－１－ヒドロキシエチル－３，４－ジヒドロ－２（１Ｈ）－キノリノンを含むペルジンフォテル；
・アルファ－アドレナリン作動性、たとえば、ドキサゾシン、タムスロシン、クロニジン、グアンファシン、デクスメタトミジン、モダフィニル、または４－アミノ－６，７－ジメトキシ－２－（５－メタン－スルホンアミド－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノール－２－イル）－５－（２－ピリジル）キナゾリン；
・三環系抗鬱剤、たとえば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリン、またはノルトリプチリン；
・抗痙攣剤、たとえば、カルバマゼピン、ラモトリギン、トピラトマート（ｔｏｐｉｒａｔｍａｔｅ）、またはバルプロエート；
・タキキニン（ＮＫ）拮抗剤、特に、ＮＫ－３、ＮＫ－２、またはＮＫ－１拮抗剤、たとえば、（αＲ，９Ｒ）－７－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］－８，９，１０，１１－テトラヒドロ－９－メチル－５－（４－メチルフェニル）－７Ｈ－［１，４］ジアゾシノ［２，１－ｇ］［１，７］－ナフチリジン－６－１３－ジオン（ＴＡＫ－６３７）、５－［［（２Ｒ，３Ｓ）－２－［（１Ｒ）－１－［３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エトキシ－３－（４－フルオロフェニル）－４－モルホリニル］－メチル］－１，２－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン（ＭＫ－８６９）、アプレピタント、ラネピタント、ダピタント、または３－［［２－メトキシ－５－（トリフルオロメトキシ）フェニル］－メチルアミノ］－２－フェニルピペリジン（２Ｓ，３Ｓ）；
・ムスカリン性拮抗剤、たとえば、オキシブチニン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロプシウム（ｔｒｏｐｓｉｕｍ）、ダリフェナシン、ソリフェナシン、テミベリン、およびイプラトロピウム；
・ＣＯＸ－２選択的阻害剤、たとえば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、デラコキシブ、エトリコキシブ、またはルミラコキシブ；
・コールタール鎮痛剤、特に、パラセタモール；
・神経遮断剤、たとえば、ドロペリドール、クロルプロマジン、ハロペリドール、ペルフェナジン、チオリダジン、メソリダジン、トリフルオペラジン、フルフェナジン、クロザピン、オランザピン、リスペリドン、ジプラシドン、クエチアピン、セルチンドール、アリピプラゾール、ソネピプラゾール、ブロナンセリン、イロペリドン、ペロスピロン、ラクロプリド、ゾテピン、ビフェプルノックス、アセナピン、ルラシドン、アミスルプリド、バラペリドン、パリンドール、エプリバンセリン、オサネタント、リモナバント、メクリネルタント、Ｍｉｒａｘｉｏｎ（登録商標）、またはサリゾタン；
・バニロイド受容体作動剤（たとえばレジンフェラトキシン（ｒｅｓｉｎｆｅｒａｔｏｘｉｎ））または拮抗剤（たとえばカプサゼピン）；
・ベータ－アドレナリン作動性、たとえばプロプラノロール；
・局所麻酔剤、たとえばメキシレチン；
・コルチコステロイド、たとえばデキサメタゾン；
・５－ＨＴ受容体作動剤または拮抗剤、特に５－ＨＴ１Ｂ／１Ｄ作動剤、たとえば、エレトリプタン、スマトリプタン、ナラトリプタン、ゾルミトリプタン、またはリザトリプタン、
・５－ＨＴ２Ａ受容体拮抗剤、たとえばＲ（＋）－アルファ－（２，３－ジメトキシ－フェニル）－１－［２－（４－フルオロフェニルエチル）］－４－ピペリジンメタノール（ＭＤＬ－１００９０７）；
・コリン作動性（ニコチン性）鎮痛剤、たとえば、イスプロニクリン（ＴＣ－１７３４）、（Ｅ）－Ｎ－メチル－４－（３－ピリジニル）－３－ブテン－１－アミン（ＲＪＲ－２４０３）、（Ｒ）－５－（２－アゼチジニルメトキシ）－２－クロロピリジン（ＡＢＴ－５９４）、またはニコチン；
・Ｔｒａｍａｄｏｌ（登録商標）；
・ＰＤＥＶ阻害剤、たとえば、５－［２－エトキシ－５－（４－メチル－１－ピペラジニル－スルホニル）フェニル］－１－メチル－３－ｎ－プロピル－１，６－ジヒドロ－７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン（シルデナフィル）、（６Ｒ，１２ａＲ）－２，３，６，７，１２，１２ａ－ヘキサヒドロ－２－メチル－６－（３，４－メチレンジオキシフェニル）－ピラジノ［２’，１’：６，１］－ピリド［３，４－ｂ］インドール－１，４－ジオン（ＩＣ－３５１またはタダラフィル）、２－［２－エトキシ－５－（４－エチル－ピペラジン－１－イル－１－スルホニル）－フェニル］－５－メチル－７－プロピル－３Ｈ－イミダゾ［５，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－４－オン（バルデナフィル）、５－（５－アセチル－２－ブトキシ－３－ピリジニル）－３－エチル－２－（１－エチル－３－アゼチジニル）－２，６－ジヒドロ－７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、５－（５－アセチル－２－プロポキシ－３－ピリジニル）－３－エチル－２－（１－イソプロピル－３－アゼチジニル）－２，６－ジヒドロ－７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、５－［２－エトキシ－５－（４－エチルピペラジン－１－イルスルホニル）ピリジン－３－イル］－３－エチル－２－［２－メトキシエチル］－２，６－ジヒドロ－７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン、４－［（３－クロロ－４－メトキシベンジル）アミノ］－２－［（２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）ピロリジン－１－イル］－Ｎ－（ピリミジン－２－イルメチル）ピリミジン－５－カルボキサミド、３－（１－メチル－７－オキソ－３－プロピル－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｄ］ピリミジン－５－イル）－Ｎ－［２－（１－メチルピロリジン－２－イル）エチル］－４－プロポキシベンゼンスルホンアミド；
・カンナビノイド；
・代謝型グルタミン酸サブタイプ１受容体（ｍＧｌｕＲ１）拮抗剤；
・セロトニン再取り込み阻害剤、たとえば、セルトラリン、セルトラリン代謝物デメチルセルトラリン（ｄｅｍｅｔｈｙｌｓｅｒｔｒａｌｉｎｅ）、フルオキセチン、ノルフルオキセチン（フルオキセチンデスメチル代謝物）、フルボキサミン、パロキセチン、シタロプラム、シタロプラム代謝物デスメチルシタロプラム、エシタロプラム、ｄ，ｌ－フェンフルラミン、フェモキセチン、イホキセチン、シアノドチエピン、リトキセチン、ダポキセチン、ネファゾドン、セリクラミン、およびトラゾドン；
・ノルアドレナリン（ノルエピネフリン）再取り込み阻害剤、たとえば、マプロチリン、ロフェプラミン、ミルタゼピン（ｍｉｒｔａｚｅｐｉｎｅ）、オキサプリチリン、フェゾラミン、トモキセチン、ミアンセリン、ブプロプリオン、ブプロプリオン代謝物ヒドロキシブプロプリオン、ノミフェンシン、およびビロキサジン（Ｖｉｖａｌａｎ（登録商標））、特に選択的ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、たとえばレボキセチン、特に（Ｓ，Ｓ）－レボキセチン；
・二重セロトニン－ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、たとえば、ベンラファキシン、ベンラファキシン代謝物Ｏ－デスメチルベンラファキシン、クロミプラミン、クロミプラミン代謝物デスメチルクロミプラミン、デュロキセチン、ミルナシプラン、およびイミプラミン；
・誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）阻害剤、たとえば、Ｓ－［２－［（１－イミノエチル）アミノ］エチル］－Ｌ－ホモシステイン、Ｓ－［２－［（１－イミノエチル）－アミノ］エチル］－４，４－ジオキソ－Ｌ－システイン、Ｓ－［２－［（１－イミノエチル）アミノ］エチル］－２－メチル－Ｌ－システイン、（２Ｓ，５Ｚ）－２－アミノ－２－メチル－７－［（１－イミノエチル）アミノ］－５－ヘプテン酸、２－［［（１Ｒ，３Ｓ）－３－アミノ－４－ヒドロキシ－１－（５－チアゾリル）－ブチル］チオ］－５－クロロ－３－ピリジンカルボニトリル、２－［［（１Ｒ，３Ｓ）－３－アミノ－４－ヒドロキシ－１－（５－チアゾリル）ブチル］チオ］－４－クロロベンゾニトリル、（２Ｓ，４Ｒ）－２－アミノ－４－［［２－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］チオ］－５－チアゾールブタノール、２－［［（１Ｒ，３Ｓ）－３－アミノ－４－ヒドロキシ－１－（５－チアゾリル）ブチル］チオ］－６－（トリフルオロメチル）－３ピリジンカルボニトリル、２－［［（１Ｒ，３Ｓ）－３－アミノ－４－ヒドロキシ－１－（５－チアゾリル）ブチル］チオ］－５－クロロベンゾニトリル、Ｎ－［４－［２－（３－クロロベンジルアミノ）エチル］フェニル］チオフェン－２－カルボキサミジン、またはグアニジノエチルジスルフィド、
・アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、たとえばドネペジル；
・プロスタグランジンＥ２サブタイプ４（ＥＰ４）拮抗剤、たとえば、Ｎ－［（｛２－［４－（２－エチル－４，６－ジメチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－１－イル）フェニル］エチル｝アミノ）－カルボニル］－４－メチルベンゼンスルホンアミド、または４－［（１Ｓ）－１－（｛［５－クロロ－２－（３－フルオロフェノキシ）ピリジン－３－イル］カルボニル｝アミノ）エチル］安息香酸；
・ロイコトリエンＢ４拮抗剤、たとえば、１－（３－ビフェニル－４－イルメチル－４－ヒドロキシ－クロマン－７－イル）－シクロペンタンカルボン酸（ＣＰ－１０５６９６）、５－［２－（２－カルボキシエチル）－３－［６－（４－メトキシフェニル）－５Ｅ－ヘキセニル］オキシフェノキシ］－吉草酸（ＯＮＯ－４０５７）、またはＤＰＣ－１１８７０；
・５－リポキシゲナーゼ阻害剤、たとえば、ジロートン、６－［（３－フルオロ－５－［４－メトキシ－３，４，５，６－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル］）フェノキシ－メチル］－１－メチル－２－キノロン（ＺＤ－２１３８）、または２，３，５－トリメチル－６－（３－ピリジルメチル），１，４－ベンゾキノン（ＣＶ－６５０４）；
・ナトリウムチャネル遮断剤、たとえばリドカイン；あるいは
・５－ＨＴ３拮抗剤、たとえばオンダンセトロン；
ならびにそれらの薬学的に許容される塩および溶媒和物。
本発明は、上記定義した式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、または担体とを含む、医薬配合物をさらに提供する。医薬配合物は、上述の障害の処置のための、１つまたは複数の追加の活性薬剤をさらに含み得る。
本発明は、上述の障害の処置において別々、同時、または連続的に投与するための組合せ調製物としての、上記定義した式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、１つまたは複数の追加の活性薬剤とを含む、医薬キットをさらに提供する。
本発明は、治療上有効な量の上記定義した式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、そのような処置を必要としている哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物（特にヒト）における上述の障害の処置の方法をさらに提供する。
医薬的使用に意図する本発明の化合物は、結晶性または非晶質の生成物として投与し得る。これらは、たとえば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、得られ得る。マイクロ波または高周波乾燥をこの目的のために使用し得る。
これらは、投与した 単独で、または本発明の１つもしくは複数の他の化合物と組み合わせて、または１つもしくは複数の他の薬物と組み合わせて（あるいはその任意の組合せとして）投与し得る。一般に、これらは、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と会合した配合物として投与する。本明細書中において用語「賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）」とは、本発明の化合物以外の任意の成分を記載するために使用する。賦形剤の選択肢は、具体的な投与様式、溶解度および安定性に対する賦形剤の影響、ならびに剤形の性質などの要因に大幅に依存する。
本発明の化合物の送達に適した医薬組成物およびその調製方法は、当業者に容易に明らかとなるであろう。そのような組成物およびその調製方法は、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５）中に見つけ得る。
経口投与
本発明の化合物は経口投与し得る。経口投与は、化合物が胃腸管に入るように嚥下することを含み得る、または化合物が口から血流に直接入る頬側もしくは舌下投与を用い得る。
経口投与に適した配合物としては、錠剤、粒子、液体、もしくは粉末を含有するカプセル、ロゼンジ（液体を充填したものを含む）、咀嚼錠、多粒子およびナノ粒子、ゲル、固溶体、リポソーム、フィルム、膣坐薬、スプレー、および液体配合物などの固体配合物が挙げられる。
液体配合物としては、懸濁液、溶液、シロップ、およびエリキシルが挙げられる。そのような配合物は、軟または硬カプセル中の充填剤として用いてよく、典型的には、担体、たとえば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油、および１つまたは複数の乳化剤および／または懸濁剤を含む。液体配合物はまた、固体の再構成によって、たとえばサシェ（ｓａｃｈｅｔ）からも調製し得る。
本発明の化合物はまた、Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐａｔｅｎｔｓ、１１（６）、９８１～９８６、ＬｉａｎｇおよびＣｈｅｎ（２００１）中に記載されているものなどの、速溶性、速崩壊性の剤形においても使用し得る。
錠剤剤形には、用量に応じて、薬物は、剤形の１重量％～８０重量％、より典型的には剤形の５重量％～６０重量％を構成し得る。薬物に加えて、錠剤は一般に崩壊剤を含有する。崩壊剤の例としては、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルシウムカルボキシメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、アルファ化デンプン、およびアルギン酸ナトリウムが挙げられる。一般に、崩壊剤は、剤形の１重量％～２５重量％、好ましくは５重量％～２０重量％を構成する。
結合剤は一般に、錠剤配合物に粘着性の性質を与えるために使用する。適切な結合剤としては、微結晶セルロース、ゼラチン、糖、ポリエチレングリコール、天然および合成ガム、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースが挙げられる。錠剤はまた、ラクトース（一水和物、噴霧乾燥した一水和物、無水など）、マンニトール、キシリトール、デキストロース、スクロース、ソルビトール、微結晶セルロース、デンプン、および二塩基性リン酸カルシウム二水和物などの希釈剤も含有し得る。
錠剤はまた、ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート８０などの界面活性剤、ならびに二酸化ケイ素およびタルクなどの滑剤も、任意選択で含み得る。存在する場合、界面活性剤は錠剤の０．２重量％～５重量％を構成してよく、滑剤は錠剤の０．２重量％～１重量％を構成してよい。
錠剤はまた、一般に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリルフマル酸ナトリウム、およびステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムの混合物などの潤滑剤も含有する。潤滑剤は、一般に、錠剤の０．２５重量％～１０重量％、好ましくは０．５重量％～３重量％を構成する。
他の可能な成分としては、抗酸化剤、着色剤、香味料、保存料、および味マスキング剤が挙げられる。
例示的な錠剤は、約８０％までの薬物、約１０重量％～約９０重量％の結合剤、約０重量％～約８５重量％の希釈剤、約２重量％～約１０重量％の崩壊剤、および約０．２５重量％～約１０重量％の潤滑剤を含有する。
錠剤ブレンドは、直接またはローラーによって圧縮して、錠剤を形成し得る。あるいは、錠剤ブレンドまたはブレンドの一部を、錠剤化前に湿、乾、もしくは溶融顆粒化、溶融凝結、または押出し得る。最終配合物は１つまたは複数の層を含んでよく、コーティングされていてもされていなくてもよい。これはカプセル封入されていてさえよい。
錠剤の配合は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、第１巻、Ｈ．ＬｉｅｂｅｒｍａｎおよびＬ．Ｌａｃｈｍａｎ（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８０）中に記述されている。
ヒトまたは獣医学的使用のための消費可能な経口フィルムは、典型的には、迅速に溶解するまたは粘膜接着であり得る、柔軟な水溶性または水膨潤性の薄膜剤形であり、典型的には、式Ｉの化合物、フィルム形成ポリマー、結合剤、溶媒、湿潤剤、可塑剤、安定化剤または乳化剤、粘度改質剤、および溶媒を含む。配合物の一部の構成要素は複数の機能を行い得る。
本発明の化合物は水溶性または不溶性であり得る。水溶性の化合物は、典型的には、溶質の１重量％～８０重量％、より典型的には２０重量％～５０重量％を構成する。可溶性がより低い化合物は、より高い割合の組成物、典型的には溶質の８８重量％までを構成し得る。あるいは、本発明の化合物は、多粒子ビーズの形態であり得る。
フィルム形成ポリマーは、天然多糖、タンパク質、または合成ヒドロコロイドから選択してよく、典型的には、０．０１～９９重量％の範囲、より典型的には３０～８０重量％の範囲で存在する。
他の可能な成分としては、抗酸化剤、着色料、香味料および香味増強剤、保存料、唾液刺激剤、冷却剤、共溶媒（油を含む）、軟化剤、充填剤、消泡剤、界面活性剤、ならびに味マスキング剤が挙げられる。
本発明によるフィルムは、典型的には、可剥性の背面支持体または紙上にコーティングした薄い水性フィルムの蒸発乾燥によって調製する。これは、乾燥オーブンもしくはトンネル、典型的には組み合わせたコーティング乾燥機中において、または凍結乾燥もしくは真空化によって行い得る。
経口投与のための固体配合物は、即時および／または改変放出となるように配合し得る。改変放出配合物としては、遅延、持続、パルス、制御、標的化、およびプログラム放出が挙げられる。
本発明の目的のための適切な改変放出配合物は、米国特許第６，１０６，８６４号中に記載されている。高エネルギー分散および浸透圧およびコーディング粒子などの他の適切な放出技術の詳細は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｏｎ－ｌｉｎｅ、２５（２）、１～１４、Ｖｅｒｍａら、（２００１）中に見つかる。徐放性を達成するためのチューイングガムの使用は、ＷＯ００／３５２９８号中に記載されている。
非経口投与
本発明の化合物はまた、血流内、筋肉内、または内蔵内にも直接投与し得る。非経口投与の適切な手段としては、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、および皮下が挙げられる。非経口投与のための適切な装置としては、針（顕微針を含む）注射器、無針注射器、および輸液技法が挙げられる。
非経口配合物は、典型的には、塩、炭水化物、および緩衝剤（好ましくは３～９のｐＨにするもの）などの賦形剤を含有し得る水溶液であるが、一部の応用には、これらは、より適切には、無菌的な非水性溶液として、または無菌的な発熱物質を含まない水などの適切なビヒクルと併せて使用する乾燥形態として配合し得る。
無菌的条件下における、たとえば凍結乾燥による非経口配合物の調製は、当業者に周知の標準の医薬的技法を使用して容易に達成し得る。
非経口溶液の調製において使用する本発明の化合物の溶解度は、溶解度増強剤の取り込みなどの適切な配合技法の使用によって増加させ得る。
非経口投与のための配合物は、即時および／または改変放出となるように配合し得る。改変放出配合物としては、遅延、持続、パルス、制御、標的化、およびプログラム放出が挙げられる。したがって、本発明の化合物は、活性化合物の改変放出を提供する埋込型デポーとして投与するための、固形物、半固体、またはチキソトロピー液体として配合し得る。そのような配合物の例としては、薬物でコーティングしたステントおよびポリ（ｄｌ－乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＧＬＡ）ミクロスフェアが挙げられる。
局所投与
本発明の化合物はまた、皮膚または粘膜に、すなわち経真皮的または経皮的に局所投与もし得る。この目的のための典型的な配合物としては、ゲル、ヒドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏、散布剤、包帯、泡沫、フィルム、皮膚パッチ、ウエファー、移植片、スポンジ、繊維、帯具、およびマイクロエマルジョンが挙げられる。リポソームも使用し得る。典型的な担体としては、アルコール、水、鉱物油、流動パラフィン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールが挙げられる。浸透促進剤を取り込ませてもよく、たとえば、Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ、８８（１０）、９５５～９５８、ＦｉｎｎｉｎおよびＭｏｒｇａｎ（１９９９年１０月）を参照されたい。
局所投与の他の手段としては、電気穿孔、イオン泳動、音波泳動、超音波泳動、および顕微針または無針（たとえば、Ｐｏｗｄｅｒｊｅｃｔ（商標）、Ｂｉｏｊｅｃｔ（商標）など）注射による送達が挙げられる。
局所投与のための配合物は、即時および／または改変放出となるように配合し得る。改変放出配合物としては、遅延、持続、パルス、制御、標的化、およびプログラム放出が挙げられる。
吸入／鼻腔内投与
本発明の化合物はまた、鼻腔内でまたは吸入によって、典型的には乾燥粉末の形態で（単独で、混合物として、たとえばラクトースとの乾燥ブレンドで、もしくは混合構成要素粒子として、たとえばリン脂質、たとえばホスファチジルコリンと混合してのいずれかで）、ドライパウダー吸入器から、または加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー（好ましくは電気流体力学を使用して霧状ミストを生じるアトマイザー）、もしくは適切な噴霧剤、たとえば１，１，１，２－テトラフルオロエタンまたは１，１，１，２，３，３，３－ヘプタフルオロプロパンを用いたまたは用いない噴霧器からのエアロゾルスプレーとして、投与することもできる。鼻腔内使用には、粉末は生体接着剤、たとえばキトサンまたはシクロデキストリンを含み得る。
加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー、または噴霧器は、たとえば、エタノール、水性エタノール、または活性薬剤の分散、可溶化、もしくは放出の延長のための適切な代替薬剤、溶媒としての噴霧剤、および任意選択の界面活性剤、たとえば、トリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸、またはオリゴ乳酸を含む、本発明の化合物の溶液または懸濁液を含有する。
乾燥粉末または懸濁液配合物において使用する前に、薬物製品を、吸入による送達に適した大きさ（典型的には５ミクロン未満）まで微小化する。これは、スパイラルジェットミリング、流動床ジェットミリング、ナノ粒子を形成するための超臨界流体加工、高圧ホモジネート、またはスプレー乾燥などの、任意の適切な微粉砕方法によって達成し得る。
吸入器または注入器において使用するためのカプセル（たとえばゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースから作製したもの）、ブリスター、およびカートリッジは、本発明の化合物、適切な粉末基剤、たとえばラクトースまたはデンプン、および性能改質剤、たとえば、ｌ－ロイシン、マンニトール、またはステアリン酸マグネシウムの粉末混合物を含有するように配合し得る。ラクトースは、無水であるか、または一水和物の形態であってよく、好ましくは後者である。他の適切な賦形剤としては、デキストラン、グルコース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、フルクトース、スクロース、およびトレハロースが挙げられる。
電気流体力学を使用して霧状ミストを生じるアトマイザーにおいて使用するための適切な溶液配合物は、１回の操作あたり１μｇ～２０ｍｇの本発明の化合物を含有してよく、操作体積は１μｌ～１００μｌで変動し得る。典型的な配合物は、式Ｉの化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノール、および塩化ナトリウムを含み得る。プロピレングリコールの代わりに使用し得る代替溶媒としては、グリセロールおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
メントールおよびレボメントールなどの適切な香味料、またはサッカリンもしくはサッカリンナトリウムなどの甘味料を、吸入／鼻腔内投与を意図する本発明の配合物に加え得る。
吸入／鼻腔内投与のための配合物は、たとえばＰＧＬＡを使用して、即時および／または改変放出となるように配合し得る。改変放出配合物としては、遅延、持続、パルス、制御、標的化、およびプログラム放出が挙げられる。
ドライパウダー吸入器およびエアロゾルの場合、単位用量は、計量された量を送達する弁によって決定される。本発明によるユニットは、典型的には、１～１０，０００μｇの本発明の化合物を含有する一定量または「パフ」を投与するように配置されている。全体的な１日用量は、典型的には１μｇ～１０ｍｇの範囲であり、これは、単一用量で、またはより通例では一日にわたる分割用量として投与し得る。
直腸／膣内投与
本発明の化合物は、直腸または経膣で、たとえば、坐薬、膣坐薬、または浣腸の形態で投与し得る。カカオ脂が従来の坐薬基剤であるが、様々な代替物質を必要に応じて使用し得る。
直腸／経膣投与のための配合物は、即時および／または改変放出となるように配合し得る。改変放出配合物としては、遅延、持続、パルス、制御、標的化、およびプログラム放出が挙げられる。
眼球／耳の投与
本発明の化合物はまた、眼または耳に直接、典型的には等張のｐＨ調節した無菌的な塩類溶液中の微小化した懸濁液または溶液の液滴の形態でも、投与し得る。眼球および耳の投与に適した他の配合物としては、軟膏、生分解性（たとえば、吸収性ゲルスポンジ、コラーゲン）および非生分解性（たとえばシリコン）の移植片、ウエファー、レンズ、ならびに粒子状または小胞の系、たとえばニオソームまたはリポソームが挙げられる。ポリマー、たとえば、架橋結合したポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロース性ポリマー、たとえば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、もしくはメチルセルロース、またはヘテロ多糖ポリマー、たとえばゲランガムを、保存料、たとえば塩化ベンザルコニウムと一緒に取り込ませ得る。そのような配合物はまた、イオン泳動によっても送達し得る。
眼球／耳の投与のための配合物は、即時および／または改変放出となるように配合し得る。改変放出配合物としては、遅延、持続、パルス、制御、標的化、またはプログラム放出が挙げられる。
他の技術
本発明の化合物は、前述の投与様式のうちの任意のものにおいて使用するために、その溶解度、溶解速度、味マスキング、生体利用能、および／または安定性を改善させるために、可溶性の巨大分子部分、たとえば、シクロデキストリンおよびその適切な誘導体またはポリエチレングリコール含有ポリマーと組み合わせ得る。
たとえば、薬物－シクロデキストリン複合体が、ほとんどの剤形および投与経路に一般に有用であることが見出されている。封入および非封入のどちらの複合体も使用し得る。薬物との直接複合体形成の代替方法として、シクロデキストリンを補助添加剤として、すなわち、担体、希釈剤、または可溶化剤として使用し得る。これらの目的のために最も一般的に使用されているものは、アルファ－、ベータ－、およびガンマ－シクロデキストリンであり、その例は、国際特許出願ＷＯ９１／１１１７２号、ＷＯ９４／０２５１８号、およびＷＯ９８／５５１４８号中に見つけ得る。
部品キット
たとえば特定の疾患または状態を処置する目的で、活性化合物の組合せを投与することが望ましい場合がある限りは、その少なくとも１つが本発明による化合物を含有する２つ以上の医薬組成物を、組成物の共投与に適したキットの形態で好都合に組み合わせ得ることは、本発明の範囲内にある。
したがって、本発明のキットは、その少なくとも１つが本発明による式Ｉの化合物を含有する２つ以上の別々の医薬組成物と、前記組成物を別々に保持するための手段、たとえば、容器、分割ボトル、または分割ホイルパケットを含む。そのようなキットの一例は、錠剤、カプセルなどのパッケージングに使用されている、見慣れたブリスターパックである。
本発明のキットは、様々な剤形、たとえば経口および非経口を投与するため、別々の組成物を様々な投与間隔で投与するため、または別々の組成物を互いに対して滴定するために、特に適している。コンプライアンスを支援するために、キットは、典型的には投与の指示を含み、いわゆる記憶補助と共に提供し得る。
投与量
ヒト患者への投与には、本発明の化合物の合計１日用量は、典型的には、０．５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲であり、もちろん投与様式に依存する。たとえば、経口投与は３ｍｇ～３０００ｍｇの合計１日用量を必要とし得る一方で、静脈内用量は０．５ｍｇ～５００ｍｇしか必要としない場合がある。合計１日用量は単一または分割用量で投与してよく、医師の判断で、本明細書中に与える典型的な範囲外であってよい。
これらの投与量は、約６０ｋｇ～７０ｋｇの体重を有する平均ヒト対象に基づく。医師は、乳児および高齢者などの、体重がこの範囲外となる対象の用量を容易に決定することができるであろう。
疑いを回避するために、本明細書中における「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」への言及は、治癒的、対症的、および予防的処置への言及を含む。
実験
材料および方法
ＳＯＳ１阻害剤の同定：
以下の方法は、Ｈｉｌｌｉｇら、ＰＮＡＳ、２０１９年２月１２日、第１１６巻、第７号、２５５１～２５６０中に記載のＨＴＲＦ結合アッセイに基づく。
阻害データの測定および評価、ＩＣ５０値の計算。
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）を、ＰＨＥＲＡｓｔａｒリーダー（ＢＭＧ、ドイツ）を用いて、ＨＴＲＦモジュール（励起：３３７ｎｍ、発光１：６２０ｎｍ、発光２：６６５ｎｍ）を使用して測定した。６６５および６２０ｎｍでの発光の比を、さらなる評価のための特異的シグナルとして使用した。対照、すなわち、ＤＭＳＯ＝０％の阻害、阻害剤対照溶液を有する阻害対照ウェル＝１００％の阻害を使用してデータを正規化した。化合物は、１１個までの濃度（たとえば、２０μＭ、５．７μＭ、１．６μＭ、０．４７μＭ、０．１３μＭ、３８ｎＭ、１１ｎＭ、３．１ｎＭ、０．８９ｎＭ、０．２５ｎＭ、および０．０７３ｎＭ）で２回繰り返し試験した。ＩＣ５０値は、４パラメータの当て嵌めを使用して、市販のソフトウェアパッケージ（Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ、スイス）を用いて計算した。ＫＲＡＳＧ１２Ｃの活性化はＳＯＳ１ｃａｔアッセイ（「オン－アッセイ」）によって行った。このアッセイは、ＳＯＳ１ｃａｔに媒介される、蛍光ＧＴＰ類似体を用いたＫＲＡＳＧ１２Ｃ－ＧＤＰのローディングを定量する。成功したローディングの検出は、ＧＳＴ－ＫＲＡＳＧ１２Ｃと結合した抗ＧＳＴ－テルビウム（ＦＲＥＴドナー）からローディングした蛍光ＧＴＰ類似体（ＦＲＥＴアクセプター）への共鳴エネルギー移動を測定することによって、達成した。ＤＹ－６４７Ｐ１（Ｄｙｏｍｉｃｓ ＧｍｂＨ、ドイツ）］で標識した蛍光ＧＴＰ類似体ＥＤＡ－ＧＴＰ－ＤＹ－６４７Ｐ１［２’／３’－Ｏ－（２－アミノエチル－カルバモイル）グアノシン－５’－三リン酸をＪｅｎａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ （ドイツ）によって合成し、１ｍＭの水溶液として供給した。ＫＲＡＳＧ１２Ｃ作業溶液を、１００ｎＭのＧＳＴ－ＫＲＡＳＧ１２Ｃおよび２ｎＭの抗ＧＳＴ－テルビウム（Ｃｉｓｂｉｏ、フランス）を含有するアッセイ緩衝液［１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．４（ＡｐｐｌｉＣｈｅｍ）、１５０ｍＭのＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ）、５ｍＭのＭｇＣｌ２（Ｓｉｇｍａ）、１ｍＭのＤＴＴ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、０．０５％のＢＳＡ Ｖ画分、ｐＨ７．０（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）、０．００２５％（ｖ／ｖ）のＩｇｅｐａｌ（Ｓｉｇｍａ）］中で調製した。ＳＯＳ１ｃａｔ作業溶液を、２０ｎＭのＳＯＳ１ｃａｔおよび２００ｎＭのＥＤＡ－ＧＴＰ－ＤＹ－６４７Ｐ１を含有するアッセイ緩衝液中で調製した。阻害剤対照溶液を、２００ｎＭのＥＤＡ－ＧＴＰ－ＤＹ－６４７Ｐ１を含有するＳＯＳ１ｃａｔを含まないアッセイ緩衝液中で調製した。アッセイのすべてのステップは２０℃で行った。２．５μＬの体積のＫＲＡＳＧ１２Ｃ作業溶液を、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ分注器（Ｔｈｅｒｍｏ ＬａｂＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して試験プレートのすべてのウェルに加えた。１０分後、２．５μＬのＳＯＳ１ｃａｔ作業溶液を、阻害剤対照溶液ウェル以外のすべてのウェルに加えた。３０分間のインキュベーションの後、ＨＴＲＦを測定した。
Ｒａｓ阻害剤の同定
Ｒａｓ阻害剤を、Ｋｅｓｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．、２０１９年８月６日、１１６（３２）：１５８２３～１５８２９からの以下のアッセイを使用して同定した。
Ａｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎアッセイ２２０、ＳＯＳ：ＲＡＳの相互作用を測定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ無細胞方法。
様々なタンパク質－タンパク質相互作用の測定を、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒによって開発されたＡｌｐｈａ ２２１ Ｓｃｒｅｅｎ技術を使用して行った。組換えＲＡＳタンパク質（Ｈ－、Ｎ－、Ｋ－２２２ ＲＡＳ変異体；すべてのＫＲＡＳ変異体はＫＲＡＳアイソフォーム４Ｂ（ｕｎｉｐｒｏｔ ｉｄ Ｐ０１１１６－２）に基づく；２２３ ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｄ）１～１６９、Ｎ末端の６Ｈｉｓタグ、Ｃ末端のａｖｉタグはＸｔａｌ ２２４、ＢｉｏＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，Ｉｎｃ．からのものであり、ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）１～１６９、Ｃ末端のａｖｉタグ、ビオチン標識、突然変異：２２５ Ｃ５１Ｓ、Ｃ８０Ｌ、Ｃ１１８Ｓ、ＮＲＡＳ（野生型）１～１７２、Ｃ末端ａｖｉタグ、ビオチン標識；ＨＲＡＳ（野生型）１～２２６ １６６、Ｃ末端ａｖｉタグ、ビオチン標識）。ビオチン化は、製造者（Ａｖｉｄｉｔｙ ２２８ ＬＬＣ、米国コロラド州Ａｕｒｏｒａ）によって推奨されるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、２２７組換えＢｉｒＡビオチン－タンパク質リガーゼを用いて行った。ＳＯＳ１（５６４～１０４９、Ｎ末端２２９ ＧＳＴタグ、ＴＥＶ切断部位）、ｃＲａｆ（１～３０３、Ｎ末端ＧＳＴタグ、ＴＥＶ切断部位）、および２３０ ＰＩ３ＫＡ－ＲＢＤ（１６０～３１７、Ｎ末端ＨＩＳ＿ＧＳＴタグ）などの相互作用タンパク質を、グルタチオンＳ２３１トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）融合物として発現させた。したがって、Ａｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎビーズは、グルタチオンでコーティングした２３２ Ａｌｐｈａ Ｌｉｓａアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＡＬ １０９ Ｒ）およびＡｌｐｈａ Ｓｃｒｅｅｎストレプトアビジン２３３とコンジュゲートさせたドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ６７６０００２Ｌ）であった。ヌクレオチドは２３４ Ｓｉｇｍａ（ＧＴＰ＃Ｇ８８７７、ＧＤＰ＃Ｇ７１２７）から購入し、Ｔｗｅｅｎ－２０はＢｉｏｒａｄからのものであった（＃１６１－０７８１）。すべての２３５相互作用アッセイは、０．１％のウシ血清アルブミン、２３６ ０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０、および１０μＭの対応するヌクレオチドを含有するＰＢＳ中で実施した。アッセイは、２３７白色ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ－３８４ Ｐｌｕｓプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＃６００８２８０）中、２０μＬの最終体積で実施した。手短に述べると２３８、ビオチン標識したＲＡＳタンパク質（１０ｎＭの最終濃度）およびＧＳＴ－ＳＯＳ１、ＧＳＴ－ＰＩ３Ｋ２３９、またはＧＳＴ－ＣＲＡＦ（１０ｎＭの最終）を、対応するヌクレオチド（ＳＯＳ１を含有する２４１アッセイにはＧＤＰまたはＧＴＰ、ＰＩ３ＫまたはＣＲＡＦを含有する相互作用アッセイにはＧＴＰのみ）を含有する緩衝液中でグルタチオンアクセプタービーズ（５μｇ／ｍＬの最終２４０濃度）と混合し、２４２ ３０分間室温でインキュベートした。ストレプトアビジンドナー２４３ビーズ（５μｇ／ｍＬの最終濃度）を緑色光下で加えた後、混合物を６０分間、暗所、室温でさらにインキュベートした２４４。単一の酸素誘導蛍光を、Ｅｎｓｐｉｒｅマルチモードプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で、２４６製造者の推奨に従って２４５測定した。データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍデータ２４７ソフトウェアを使用して分析した。
疼痛を処置するＳＯＳ１阻害剤およびＲａｓ阻害剤の能力を、ＮＧＦ刺激性ＰＣ１２アッセイ（Ｓａｓａｇａｗａら、ＮＡＴＵＲＥ ＣＥＬＬ ＢＩＯＬＯＧＹ、第７巻、第４号、２００５年４月、３６５～３７３）に基づく以下のアッセイを使用して測定した。
ＢＩ３４０６による、ＰＣ－１２細胞系中における神経成長因子（ＮＧＦ）刺激性ホスホ細胞外制御キナーゼ１および２（ｐＥＲＫ１／２）の活性化の阻害。
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ：
様々なＮＧＦ刺激濃度でのＢＩ－３４０６阻害：
選択的小分子ラット肉腫の阻害効果：Ｓｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ１（ＲＡＳ：ＳＯＳ１）阻害剤、ＢＩ－３４０６（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を、ＮＧＦ活性化後のＥＲＫ１／２のリン酸化を測定するＨＴＲＦ読取値を介してモニタリングした。そうでないと指定しない限り、すべてのアッセイは、１％の熱失活させたウマ血清（Ｍｅｒｃｋ）、０．５％の熱失活させたウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％のペニシリン－ストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ－グルタミンを添加したＲＰＭＩ－１６４０成長培地（Ｇｉｂｃｏ）中で２４時間血清飢餓させた、ラット副腎ＰＣ－１２細胞（Ｍｅｒｃｋ）中で行った。ＨＴＲＦの市販のキット（Ｃｉｓｂｉｏ）からの試薬を、製造者の指示に従って調製した。
アッセイ手順：
ＰＣ－１２細胞をルーチン的な細胞培養物から単離し、適切な細胞密度で３８４ウェルプレート中に（典型的には２５，０００個の細胞／ウェル）２４時間、血清飢餓条件下で播種した。インキュベーションの後、ＰＣ－１２細胞を、適切な濃度応答範囲にわたる作業濃度のＢＩ－３４０６で３０分間前処置した（３７℃／５％ＣＯ２）。試験したＮＧＦ（Ｍｅｒｃｋ）の濃度あたり、二つ組のＢＩ－３４０６の濃度応答曲線を設定した。３０分間の化合物のプレインキュベーションの後、ＰＣ－１２細胞をＮＧＦで処置し（２５０ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬのＮＧＦの力価を試験した）、続いて５分間インキュベートした（３７℃／５％ＣＯ２）。５分間のＮＧＦ処置の後、市販のＨＴＲＦキットからの溶解緩衝液を、振盪を伴った３０分間のインキュベーションのためにＰＣ－１２細胞に施用した（２０℃、６００ｒｐｍ）。１ウェルあたり適切な体積の溶解物を収集し、別々の３８４ウェルのＰｒｏｘｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に移し、５×濃縮ＨＴＲＦキット抗体混合物をそれぞれの溶解物試料ウェル内に分注した。室温で２時間のインキュベーションを行った後、マイクロプレートリーダー（ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳＸ、ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用した蛍光シグナルの決定を行った。
分析
ｉ．ＮＧＦ活性化に対するＢＩ－３４０６のＩＣ５０プロット：
試料データをそれぞれのプレート内で使用した高および低対照（それぞれ＋／－２５ｎｇ／ｍＬのＮＧＦ）に対して正規化することによって、阻害百分率値を化合物濃度ごとに計算した。それぞれの二つ組のＢＩ－３４０６濃度応答曲線からの阻害百分率値を平均して、濃度ごとのデータ点を提供した。その後、平均阻害百分率値を使用して、５０％の阻害濃度（ＩＣ５０）を決定し、最大％有効性（阻害）は、４パラメータのロジスティック当て嵌めを使用して、（ＢＩ３４０６の最大％有効性／－ＮＧＦ対＋ＮＧＦの差異によって与えられる最大％有効性）であった［式中、ｙ＝Ａ ｘｎＨ／（ＥＣ５０ｎＨ＋ｘｎＨ）であり、ｘおよびｙは、それぞれ試験薬剤濃度および％細胞ｐＥＲＫシグナルを表す］。パラメータＥＣ５０は試験薬剤濃度の最大半量アウトプットであり、Ａは最大の阻害（有効性）である一方で、ｎＨはヒル係数である（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）。その後、応答データを、それぞれのＢＩ－３４０６化合物濃度のモル濃度対数に対して、表示目的のために決定された当て嵌め結果と共にプロットした。エラーバーは１標準偏差を表す。
ｉｉ．ＢＩ－３４０６のＩＣ５０対ＮＧＦ濃度：
セクション「ｉ」に記載した分析に従って、２５０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、および１０ｎｇ／ｍＬのＮＧＦ濃度で、ＩＣ５０値をＢＩ－３４０６について計算した。続いて、生じたＮＧＦ濃度（ｘ軸）ごとのＩＣ５０値（ｙ軸）の相乗平均を、別々のグラフ内にプロットした。エラーバーは、２～８個の別々のＩＣ５０複製組から計算した１標準偏差を表す。
ｉｉｉ．最大有効性百分率対ＮＧＦ濃度：
セクション「ｉ」に記載のように、適切なＢＩ－３４０６濃度応答範囲にわたる阻害百分率値を化合物濃度ごとに計算した。ＮＧＦ濃度ごとの、試験したＢＩ－３４０６化合物の上位濃度について計算した平均阻害百分率値を、２～８個の複製組から計算し、続いて別々のグラフ内にプロットして、ＮＧＦ濃度（ｘ軸）に対する最大有効性百分率（ｙ軸）を示した。エラーバーは１標準偏差を表す。
結果を図３中にグラフで表す。
組合せ作業；抗ＮＧＦおよびＢＩ－３４０６阻害の協同性。
選択的小分子ＲＡＳ：ＳＯＳ阻害剤、ＢＩ－３４０６（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、および既知の抗体に基づくＮＧＦ阻害剤、抗ＮＧＦの合わせた阻害効果を、ＮＧＦ活性化によるＥＲＫ１／２のリン酸化を測定するＨＴＲＦ読取値を介してモニタリングした。そうでないと指定しない限り、すべてのアッセイは、１％の熱失活させたウマ血清（Ｍｅｒｃｋ）、０．５％の熱失活させたウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％のペニシリン－ストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ－グルタミンを添加したＲＰＭＩ－１６４０成長培地（Ｇｉｂｃｏ）中で２４時間血清飢餓させた、ラット副腎ＰＣ－１２細胞（Ｍｅｒｃｋ）中で行った。ＨＴＲＦの市販のキット（Ｃｉｓｂｉｏ）からの試薬を、製造者の指示に従って調製した。
アッセイ手順：
ＰＣ－１２細胞をルーチン的な細胞培養物から単離し、適切な細胞密度（典型的には２５，０００個の細胞／ウェル）で３８４ウェルプレート中に２４時間、血清飢餓条件下で播種した。様々な抗ＮＧＦ（Ａｂｃａｍ）濃度および固定ＮＧＦ濃度の作業調製物を血清飢餓培地中で調製し、３０分間プレインキュベートした（３７℃／５％ＣＯ２）。同時に、ＰＣ－１２細胞を、作業濃度のＢＩ－３４０６で３０分間前処置した（３７℃／５％ＣＯ２）。試験した抗ＮＧＦ；ＮＧＦの組合せあたり、二つ組のＢＩ－３４０６の濃度応答曲線を設定した。３０分間のプレインキュベーションの後、ＰＣ－１２細胞を適切な抗ＮＧＦ；ＮＧＦの組合せで処置し（固定の２５０ｎｇ／ｍＬの濃度のＮＧＦに対する、３０μｇ／ｍＬ～０μｇ／ｍＬの範囲の抗ＮＧＦの力価を試験した）、続いて５分間インキュベートした（３７℃／５％ＣＯ２）。５分間の抗ＮＧＦ；ＮＧＦ処置の後、市販のＨＴＲＦキットからの溶解緩衝液を、振盪を伴った３０分間のインキュベーションのためにＰＣ－１２細胞に施用した（２０℃、６００ｒｐｍ）。１ウェルあたり適切な体積の溶解物を収集し、別々の３８４ウェルのＰｒｏｘｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に移し、５×濃縮ＨＴＲＦキット抗体混合物をそれぞれの溶解物試料ウェル内に分注した。室温で２時間のインキュベーションを行った後、蛍光シグナルをマイクロプレートリーダー（ＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳＸ、ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）において測定した。
分析
ｉ．抗ＮＧＦ；ＮＧＦ負荷に対するＢＩ－３４０６の有効性百分率のプロット：
試料データをそれぞれのプレート内で使用した高および低対照（それぞれ＋／－２５０ｎｇ／ｍＬのＮＧＦ）に対して正規化することによって、阻害百分率値を化合物濃度ごとに計算した。それぞれの二つ組のＢＩ－３４０６濃度応答曲線からの阻害百分率値を平均して、濃度ごとのデータ点を提供した。その後、平均阻害百分率値を使用して、５０％の阻害濃度（ＩＣ５０）を決定し、最大％有効性（阻害）は、４パラメータのロジスティック当て嵌めを使用して、（ＢＩ３４０６の最大％有効性／－ＮＧＦによって与えられる最大％有効性）であった［式中、ｙ＝Ａ ｘｎＨ／（ＥＣ５０ｎＨ＋ｘｎＨ）であり、ｘおよびｙは、それぞれ試験薬剤濃度および％細胞ｐＥＲＫシグナルを表す］。パラメータＥＣ５０は試験薬剤濃度の最大半量アウトプットであり、Ａは最大のアウトプット（有効性）である一方で、ｎＨはヒル係数である（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）。その後、応答データを、それぞれのＢＩ－３４０６化合物濃度のモル濃度対数に対して、表示目的のために決定された当て嵌め結果と共にプロットした。エラーバーは１標準偏差を表す。抗ＮＧＦ：ＮＧＦの組合せごとの、試験したＢＩ－３４０６化合物の上位および下位の濃度の両方について計算した平均阻害百分率値を抽出し、試験した様々な抗ＮＧＦ：ＮＧＦの組合せにわたって表形式で比較した。
ウエスタンブロット：
ＢＩ－３４０６阻害に対するＮＧＦ負荷：
選択的小分子ＲＡＳ：ＳＯＳ阻害剤、ＢＩ－３４０６（Ｓｅｌｌｅｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の阻害効果は、ＮＧＦ活性化によるＥＲＫ１／２のリン酸化を測定する、ウエスタンブロットに基づく読取値（Ｊｅｓｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）を介してモニタリングした。そうでないと指定しない限り、すべてのアッセイは、１％の熱失活させたウマ血清（Ｍｅｒｃｋ）、０．５％の熱失活させたウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％のペニシリン－ストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ－グルタミンを添加したＲＰＭＩ－１６４０成長培地（Ｇｉｂｃｏ）中で２４時間血清飢餓させたラット副腎ＰＣ－１２細胞（Ｍｅｒｃｋ）中で行った。Ｊｅｓｓ分離モジュールの市販のキット（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）からの試薬を、製造者の指示に従って調製した。
アッセイ手順：
ＰＣ－１２細胞をルーチン的な細胞培養物から単離し、適切な細胞密度で６ウェルプレート中に２４時間、血清飢餓条件下で播種した。インキュベーションの後、ＰＣ－１２細胞を、作業濃度のＢＩ－３４０６で３０分間前処置した（３７℃／５％ＣＯ２）。試験したＮＧＦ（Ｍｅｒｃｋ）の濃度あたり、二つ組のＢＩ－３４０６の濃度応答曲線を設定した。３０分間の化合物のプレインキュベーションの後、ＰＣ－１２細胞を適切な濃度のＮＧＦで処置し、続いて５分間インキュベートした（３７℃／５％ＣＯ２）。５分間のＮＧＦ処置の後、ＰＣ－１２細胞懸濁液をファルコンチューブに移し、遠心分離した（３００×ｇで５分間、４℃）。細胞上清を廃棄し、残った細胞ペレットを氷冷ＰＢＳで洗浄した。これを３×ＰＢＳの洗浄について繰り返した後、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する氷冷溶解緩衝液を乾燥細胞ペレットに加えた。続いてチューブを３０秒間超音波処理し、細胞溶解の完了を確実にするために、定期的に反転させながら氷上で１５分間保管した。溶解の後、試料を遠心分離し（１３，０００×ｇで５分間、４℃）、上清を抽出して、ウエスタンブロット分析のために調製した。上清試料を、製造者の指示に従ってＪｅｓｓ毛細カセット内にロードするために調製した。試験したＢＩ－３４０６濃度あたり二つ組の試料を同じ実行内にロードした。ｉに記載のようにデータを分析した。
細胞培養および成長因子処置。
ＰＣ１２細胞（１）をアメリカ培養細胞系統保存機関（メリーランド州Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）から購入し、１０％のウマ血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ニューヨーク州Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ）および５％のウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ユタ州Ｌｏｇａｎ）を有するＲＰＭＩ－１６４０（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ、メリーランド州Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ）中で培養した。細胞生存度はトリパンブルー色素排除によって評価した。アッセイの前に、細胞をＤＭＥＭ中で１６時間飢餓させ、その後、２０ｎｇ／μｌの濃度でＲＰＭＩ－１６４０中に溶かし、その後使用前に適切な濃度まで希釈した神経成長因子（ＮＧＦ－β、マウス顎下腺、Ｓｉｇｍａ、モンタナ州Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を用いて刺激した。
免疫蛍光アッセイ。
細胞をポリ－Ｌ－リシンでコーティングしたカバーガラスまたは格子ガラス底面の皿上に播種し、血清飢餓させ、示した濃度のＮＧＦを用いて刺激した。細胞を４％のパラホルムアルデヒドで１０分間、室温で固定し、０．２％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を用いて１０分間、室温で、または１００％のメタノールを用いて１０分間、－２０℃で透過処理し、その後、１％のＢＳＡで３０分間、室温で遮断した。その後、細胞を、一次抗体である抗ホスホＥＲＫ１／２（１：２００）抗体と共に１～２時間、室温で、続いて二次抗体（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７抗マウスＩｇＧ（１：５００））抗体と共に１時間、室温でインキュベートした。すべての抗体はＣｅｋｋ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、米国マサチューセッツ州Ｄａｎｖｅｒｓによって供給された。平衡化後、細胞を洗浄し、分光蛍光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍａｘ、米国カリフォルニア州Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、９５１３４）を使用して蛍光を測定した。
試験化合物。
抗ＮＧＦモノクローナル抗体はＡｂｃａｍ（米国マサチューセッツ州Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）によって供給された。ＢＩ－３４０６はＭｅｄｉｃｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ、米国ニュージャージー州によって供給された。
データ分析。
データはＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して分析した。
結果
ＢＩ３４０６を含めたいくつかの構造的に多様なＳＯＳ１阻害剤を、ＰＣ－１２細胞系アッセイにおける神経成長因子（ＮＧＦ）刺激性ホスホ細胞外制御キナーゼ１および２（ｐＥＲＫ１／２）の活性化の阻害において、適切な対照に対して試験した。試験したすべての化合物が、５を下回る、ＳＯＳ１アッセイにおけるＩＣ５０を有する。
すべてが、４０～７０％の有効性レベルを示した。
ＢＩ－３４０６は、１０～２０ｎＭのＩＣ５０を有していた。
Ｒａｓ阻害剤を同じアッセイにおいて試験した。これは４０～７０％の有効性レベルを示した。
ＳＯＳ１阻害剤ＢＩ－３４０６と組み合わせたＮＧＦ阻害剤タネズマブの、疼痛を処置する能力を、ＰＣ－１２細胞系アッセイにおける神経成長因子（ＮＧＦ）刺激性ホスホ細胞外制御キナーゼ１および２（ｐＥＲＫ１／２）の活性化の阻害において測定した。
２００ｎＭの濃度では、タネズマブは１００％の有効性を有していた。
５０ｎＭの濃度では、タネズマブは９０％の有効性を有していた。
５００ｎＭの濃度のＢＩ－３４０６は４０％の有効性を有していた。
５００ｎＭの濃度のＢＩ－３４０６と組み合わせた５０ｎＭの濃度のタネズマブは、約９６％の有効性を有していた。
Ｒａｓ阻害剤と組み合わせたＮＧＦ阻害剤タネズマブの、疼痛を処置する能力も、アッセイにおいて測定した。
２００ｎＭの濃度では、タネズマブは１００％の有効性を有していた。
５０ｎＭの濃度では、タネズマブは９０％の有効性を有していた。
５００ｎＭの濃度のＢＩ－３４０６は４０％の有効性を有していた。
Ｒａｓ阻害剤と併せた５０ｎＭの濃度のタネズマブは、約９７％の有効性を有していた。
表題：Ｃ５７Ｂｌ６マウスにおける荷重負荷を使用した、ＣＦＡ（完全フロイントアジュバント）誘導性過敏症に対する、単一用量のタネズマブと組み合わせた２５ｍｇ／ｋｇのＢＩ３４０６の調査。
研究の目的：ＢＩ３４０６では投薬の１時間後ならびにタネズマブ投与後の＋１時間、＋９時間、＋２５時間、および＋３３時間での荷重負荷（ＷＢ）評価を使用した、２５ｍｇ／ｋｇのＢＩ３４０６（１０ｍＬ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、午前および午後の投薬、２日間）、０．１、０．３、および１ｍｇ／ｋｇの単一用量のタネズマブとの組合せ（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、Ｔ＝０）、ならびに３ｍｇ／ｋｇのタネズマブ単独（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、Ｔ＝０）の効果を調査すること。
動物：ｎ＝５０匹の雄のＣ５７／ＢＬ６マウス、２０．１ｇ～２６．０ｇ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ注文番号＃４６５０５６８）。
環境条件：動物は、５匹の群で、標準のケージ中、食料と水を自由に利用し、１２時間／１２時間の明／暗サイクル（午前７：００に点灯）で、収容した。
試験化合物：
・２５ｍｇ／ｋｇのＢＩ３４０６（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ＢＩＤ、２日間）
・０．１、０．３、１、および３ｍｇ／ｋｇのタネズマブ（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、Ｔ＝０）
対照群：ビヒクル、０．５％のヒドロキシメチルセルロース（１０ｍＬ／ｋｇ、ｐ．ｏ．、ＢＩＤ、２日間）
研究スケジュール：
ＣＦＡ投薬の３日前：ＷＢ装置への慣らし、ベースライン読取りを１回とる。
投薬の２４時間前：２０μｌのＣＦＡの足底内注射、左後足に１．５ｍｇ／ｍｌ。
投薬の１時間前：ＣＦＡ後の読取りをＷＢ用にとる。
１日目：化合物の投与
・０．１、０．３、１、および３ｍｇ／ｋｇのタネズマブ（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）。
・２５ｍｇ／ｋｇのＢＩ３４０６（１０ｍＬ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、ＢＩＤ、２日間）。
１および２日目に、荷重負荷測定を、ＢＩ３４０６のそれぞれの投薬の１時間後に行った（上記スケジュールを参照）。
３日目 動物にＢＩ３４０６を投薬し、血液採取のためにそれぞれの時点で群ごとに３匹の動物を選別した。時点は、ＢＩ３４０６の最後の投薬の１時間、２時間、および８時間後であった。動物をスケジュール１の方法によって選別し、血液を、心穿刺を介してＥＤＴＡチューブ内に採取し、４℃で１０分間、１５００×ｇで遠心分離した。生じた血漿を取り出し、２つのアリコートに分割した。試料は発送時まで－８０℃で保管した。
研究の評価：荷重負荷
ナイーブな動物は、その体重を２つの後足間で均等に分配する。しかし、有痛性の傷害を一方の後足に与えた場合（すなわち、坐骨神経狭窄またはＣＦＡ足底内注射）、罹患した足にかかる体重が減るように、体重は再分配される（傷害を受けた足への体重負荷の減少を伴う）。動物をインキャパシタンステスト装置（Ｌｉｎｔｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、英国）内に入れ、後足を別々のセンサーにのせた。左および右の後肢によって発揮された平均の力を２秒間にわたって記録した。荷重負荷の読取りを、左および右の後足の両方についてとった。同側性／対側性の比を計算し、％（平均±標準誤差）で表した。

統計：二方向ＲＭ混合モデル（処置×繰り返し因子：回数）（ＩｎＶｉｖｏＳｔａｔ ｖ３．７．０．０）
同じ時点のビヒクル群と比較した場合に、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、および＊＊＊ｐ＜０．００１の有意差（ｎ＝９～１０匹／群）。同じ薬物群内のベースラインと比較した場合に、＃＃＃ｐ＜０．００１の有意差。
分析
鎮痛性以下の用量のＳＯＳｉ（ＢＩ３４０６、２５ｍｇ／ｋｇ ｐｏ）は、単独では制限されない鎮痛効果を有していたが、ＮＧＦモノクローナル抗体（タネズマブ）と組み合わせた場合は、増強された鎮痛応答が観察された。タネズマブの増強された鎮痛効果は、ＳＯＳｉ（ＢＩ３４０６、２５ｍｇ／ｋｇ ｐｏ）と組み合わせた場合、用量に関連していた。鎮痛応答の統計的に有意な増強は、０．３ｍｇ／ｋｇおよび１．０ｍｇ／ｋｇのタネズマブをＳＯＳｉ（ＢＩ３４０６、２５ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせた場合に観察された。組合せ研究により、単独で投薬した場合のより高い用量のタネズマブに匹敵する鎮痛効果が生じた。

Claims (16)

  1. 疼痛の処置において使用するためのＳＯＳ１阻害剤およびＲａｓ阻害剤。
  2. 前記ＳＯＳ１阻害剤が、５マイクロモーラー以下の、アッセイにおけるＩＣ５０を有する、請求項１に記載の使用。
  3. 前記ＳＯＳ１阻害剤が１００ナノモーラー未満のＩＣ５０を有する、請求項１に記載の使用。
  4. 前記ＳＯＳ１阻害剤が１ナノモーラー以下のＩＣ５０を有する、請求項１に記載の使用。
  5. 前記Ｒａｓ阻害剤が、５００ナノモーラー以下の、アッセイにおけるＩＣ５０を有する、請求項１に記載の使用。
  6. 前記Ｒａｓ阻害剤が１００ナノモーラー未満のＩＣ５０を有する、請求項１に記載の使用。
  7. 前記Ｒａｓ阻害剤が１ナノモーラー以下のＩＣ５０を有する、請求項１に記載の使用。
  8. 本発明の前記ＳＯＳ１阻害剤および前記Ｒａｓ阻害剤が、以下の標的：
    ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、ＴｒｋＡキナーゼ、ＴｒｋＢキナーゼ、ＴｒｋＣキナーゼ、Ｃ－Ｒａｆ、Ｂ－Ｒａｆ、ＰＩ３キナーゼ、ＡＫＴ、およびＥＲＫ
    のうちの１つまたは複数よりも、１００倍以上の選択性を示す、請求項１から７に記載の使用。
  9. 前記ＳＯＳ１阻害剤が以下：
    ＢＩ３４０６（Ｎ－［（１Ｒ）－１－［３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－７－メトキシ－２－メチル－６－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシキナゾリン－４－アミン）
    Ｂａｙ２９３（６，７－ジメトキシ－２－メチル－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［４－［２－（メチルアミノメチル）フェニル］チオフェン－２－イル］エチル］キナゾリン－４－アミン）
    ４－［［（１Ｒ）－１－（３，３－ジフルオロ－２Ｈ－１－ベンゾフラン－７－イル）エチル］アミノ］－６－［１－（ジフルオロメチル）シクロプロピル］－２－メチルピリド［４，３－ｄ］ピリミジン－７－オン
    ；
    、およびＢＩ－１７０９６３
    から選択される、請求項１に記載の使用。
  10. 前記ＳＯＳ１阻害剤が、（Ｎ－［（１Ｒ）－１－［３－アミノ－５－（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］－７－メトキシ－２－メチル－６－［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシキナゾリン－４－アミン）（ＢＩ－３４０６）および（６，７－ジメトキシ－２－メチル－Ｎ－［（１Ｒ）－１－［４－［２－（メチルアミノメチル）フェニル］チオフェン－２－イル］エチル］キナゾリン－４－アミン）（ＢＡＹ－２９３）から選択される、請求項１に記載の使用。
  11. 前記Ｒａｓ阻害剤が以下：
    から選択される、請求項１に記載の使用。
  12. 前記Ｒａｓ阻害剤が、（３Ｓ）－５－ヒドロキシ－３－［２－［［［１－［（１－メチルイミダゾール－４－イル）メチル］インドール－６－イル］メチルアミノ］メチル］－１Ｈ－インドール－３－イル］－２，３－ジヒドロイソインドール－１－オン（ＢＩ－２８５２）である、請求項１に記載の使用。
  13. 抗ＮＧＦ抗体と組み合わせて投与した場合に、前記疼痛の処置において使用するための、請求項１～１２に記載のＳＯＳ１阻害剤またはＲａｓ阻害剤。
  14. 前記抗ＮＧＦ抗体がタネズマブである、請求項１３に記載の使用。
  15. 疼痛が、急性疼痛、慢性疼痛、炎症性疼痛、侵害受容性疼痛、神経因性疼痛、痛覚過敏、アロディニア、中枢性疼痛、癌性疼痛、手術後疼痛、内臓痛、筋骨格痛、心臓痛または血管痛、偏頭痛を含む頭痛、歯痛を含む口腔顔面痛、および背痛を含む、請求項１～１４に記載の使用。
  16. 疼痛が以下：
    （ａ）急性疼痛および／または自発性疼痛、
    （ｂ）慢性疼痛およびまたは継続中の疼痛、
    （ｃ）関節痛、骨関節炎もしくは関節リウマチから生じる疼痛、炎症性腸疾患から生じる疼痛、乾癬、および湿疹のうちの任意の１つを含む、炎症性疼痛
    （ｄ）侵害受容性疼痛、
    （ｅ）有痛性糖尿病性神経障害またはヘルペス後神経痛に関連する疼痛を含む神経因性疼痛、
    （ｆ）痛覚過敏、
    （ｇ）アロディニア、
    （ｈ）中枢性疼痛、中枢性卒中後痛、多発性硬化症から生じる疼痛、脊髄損傷から生じる疼痛、またはパーキンソン病もしくは癲癇から生じる疼痛、
    （ｉ）癌性疼痛、
    （ｊ）手術後疼痛、
    （ｋ）消化内臓痛および非消化内臓痛、胃腸管系（ＧＩ）障害が原因の疼痛、機能性腸障害（ＦＢＤ）から生じる疼痛、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）から生じる疼痛、月経困難症から生じる疼痛、骨盤痛、膀胱炎、間質性膀胱炎、または膵炎を含む、内臓痛、
    （ｌ）筋骨格痛、筋痛、線維筋痛症、脊椎炎、血清陰性（非リウマチ性）関節症、非関節性リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎、化膿性筋炎、
    （ｍ）心臓痛または血管痛、狭心症が原因の疼痛、心筋（ｍｙｏｃａｒｄｉｃａｌ）梗塞、増帽弁狭窄症、心膜炎、レイノー現象、浮腫性硬化症（ｓｃｌｅｒｅｄｏｍａ）、浮腫性硬化症（ｓｃｌｅｒｅｄｏｍａ）、または骨格筋虚血、
    （ｎ）偏頭痛、前兆を伴う偏頭痛、前兆群発頭痛を伴わない偏頭痛、緊張型頭痛を含む、頭痛
    （ｏ）歯痛、側頭下顎筋筋膜痛、または耳鳴を含む口腔顔面痛、あるいは
    （ｐ）背痛、滑液包炎、月経痛、偏頭痛、関連痛、三叉神経痛、過敏化、脊椎の外傷および／もしくは変性または脳卒中から生じる疼痛
    を含む、請求項１～１４に記載の使用。
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