JP2024511072A - 炎症性関節炎を調節するための免疫調節微粒子 - Google Patents

Abstract

炎症性関節炎状態を治療するための組成物及び方法であって、患者の炎症性関節炎に罹患した関節又は関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節に局所投与された場合に、全般的な免疫抑制を引き起こすことなく全身に有効である組成物及び方法が、本明細書に記載される。【選択図】図３Ｈ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月２６日に出願された米国仮出願第６３／１６６，８７３号の優先権を主張し、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

連邦政府の補助金
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより授与されたＦ３１ＡＲ０７９９２１、Ｔ３２ＡＲ０６４１９４、Ｔ３２ＣＡ１５３９１５、Ｐ３０ＡＲ０７３７６１、Ｒ０３ＤＥ０３１００９、Ｐ３０ＣＡ２３１００、及びＵＬ１ＴＲ００１４４２、並びにＮａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎにより授与されたＥＣＣＳ－２０２５７５２の下で政府の支援を受けて行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

炎症性関節炎は、世界中の何百万人もの人々に影響を及ぼしている。これらの状態は、腫脹並びに急性及び慢性の両方の関節痛を引き起こす。炎症性関節炎は生活の質を低下させ低下させ、障害の主な原因となっている。炎症性関節炎は、関節、関節周囲の組織、及び他の結合組織に局所的及び全身的に影響を及ぼす多くの状態を説明する。関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬性関節炎、及び強直性脊椎炎は、炎症性関節炎の最も一般的な形態である。この疾患の他の形態には、変形性関節症、小児関節炎、線維筋痛、痛風、及び狼瘡が含まれる。

関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の全身性炎症を特徴とする自己免疫性炎症性関節炎の一形態である。ＲＡに関連する全身性炎症はまた、皮膚、眼、肺、心臓、及び血管などの他の組織及び器官に損傷を引き起こす。ＲＡに罹患した関節は、炎症促進性メディエーターを産生する活性化過剰の病原性ＣＤ４＋Ｔ細胞を含む、免疫細胞で浸潤される。例えば、中等度から重度のＲＡでは、複数の軟骨細胞外マトリックスエピトープに対して反応性を有するポリクローナルＣＤ４＋Ｔ細胞が末梢血及び滑膜において単離されている。これらの活性化過剰免疫細胞は、関節の構造的損傷に寄与し、疼痛、腫脹、骨びらん、及び関節変形を引き起こす炎症促進性サイトカインを産生する。

炎症性関節炎のための従来の薬物としては、鎮痛剤、ステロイド、及び非ステロイド性抗炎症薬が挙げられる。メトトレキサート及びスルファサラジンなどの全般的な免疫抑制を引き起こす従来の疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）も、ＲＡなどの炎症性関節炎の予後を大幅に改善している。腫瘍壊死因子阻害剤（例えば、エタネルセプト）、インターロイキン－６阻害剤（例えば、トシリズマブ）、及びインターロイキン－１受容体アンタゴニスト（例えば、アナキンラ）、並びにヤヌスキナーゼ阻害剤（例えば、トファシチニブ）などの生物学的ＤＭＡＲＤは、炎症促進性サイトカイン及びそれらの受容体を含む炎症の特定のメディエーターを標的とする。しかしながら、上記の全ての薬物は、非特異的免疫抑制を介して作用し、日和見感染及び重篤な感染、がんのリスクを増加させ、ワクチンに対する有効性を低減する。尿路感染及び上気道感染は、免疫抑制薬の一般的な副作用である。免疫学的破壊のより深刻な影響には、肺炎、蜂巣炎、憩室炎、及び急性腎盂腎炎が含まれ得る。現在のＤＭＡＲＤはまた、３０％を超える患者でＲＡ寛解を誘導することができない。したがって、免疫系を調節して、炎症性関節炎の症状及び組織損傷を最小限からゼロの全般的な免疫抑制で低減することができる薬剤が必要とされている。

本明細書には、全般的な免疫抑制を引き起こすことなく全身的に有効である、免疫調節による炎症性関節炎の治療に有用な組成物及び方法が記載される。組成物及び方法は、炎症性関節炎に罹患した関節若しくは関連する流入領域リンパ節、局所皮下組織、又は炎症性関節炎に罹患した関節の関節包に直接関節内注射によって送達される免疫調節剤を含む生分解性微粒子（ＭＰ）の使用を含む。ＭＰは、炎症性関節炎に罹患した関節及び直接治療されなかった少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節の炎症又は構造的関節損傷を低減するのに十分な時間にわたって、ＭＰに封入又は結合した免疫調節剤の徐放性又は持続性局所放出を提供する。

ＲＡに罹患した関節などの炎症性関節炎に罹患した関節は、炎症促進性メディエーターを産生する活性化過剰の病原性ＣＤ４＋Ｔ細胞を含む、免疫細胞で浸潤される。例えば、中等度から重度のＲＡでは、複数の軟骨細胞外マトリックスエピトープに対して反応性を有するポリクローナルＣＤ４＋Ｔ細胞が末梢血及び滑膜において単離されている。関節浸潤性ＣＤ４＋Ｔ細胞は、炎症促進性である病原性Ｔヘルパー（Ｔｈ）及び調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）と呼ばれるＦｏｘＰ３を発現する疾患保護Ｔ細胞を含む。Ｔ_ｒｅｇ細胞は、概して、炎症性Ｔ細胞を抑制する。しかしながら、病原性炎症に応答して、Ｔ_ｒｅｇ細胞は、免疫調節機能を失い、インターロイキン（ＩＬ）－１７などの炎症促進性サイトカインを産生する「ｅｘＴ_ｒｅｇ細胞」表現型に変換することができる。Ｔ_ｒｅｇ細胞と、レチノイン酸受容体関連オーファン受容体ガンマ（ＲＯＲγ）ｔ発現Ｔｈ１７細胞を含む自己反応性炎症促進性ＣＤ４＋Ｔ細胞のサブセットとの間の数的不均衡、及び慢性的に炎症した関節及び流入領域リンパ節におけるｅｘＴ_ｒｅｇ細胞の存在によるＴ_ｒｅｇ細胞の機能障害は、ＲＡの病因に大きく寄与する。

Ｓａｋａｇｕｃｈｉ（ＳＫＧ）マウスモデルでは、ヒトＲＡと同様のＲＡ疾患プロセスがうまくモデル化されている。ＳＫＧマウスは、自発的なＴｈ１７依存性関節炎を発達させる。関節炎の発症は、真菌構成成分の注射によって加速され得る。ＳＫＧマウス関節炎は、関節の対称的な関与、リウマチ因子の陽性、抗シトルリン化ペプチド抗体、ＩＬ－６、ＩＬ－１、及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む主要なＲＡサイトカインの上昇、軟骨及び骨の破壊、並びにヒトＲＡに類似する骨密度の低減を示す。ＲＡのＳＫＧマウスモデルは、多くのＲＡ患者において説明される不十分なＴ_ｒｅｇ細胞機能及びＴ_ｒｅｇ細胞安定性をシミュレートする。免疫不全組換え活性化遺伝子２（Ｒａｇ２－ＫＯ）マウスにＳＫＧ ＣＤ４＋Ｔ細胞と同時移植されたＳＫＧマウスＴ_ｒｅｇ細胞は、疾患発達を阻害する。ＳＫＧ Ｔ_ｒｅｇ細胞はまた、ＦｏｘＰ３を下方制御し、関節炎の関節及び流入領域リンパ節において病原性ＩＬ－１７＋ｅｘＴ_ｒｅｇに変換される。

本明細書に記載の組成物及び方法は、炎症性関節炎に罹患した関節若しくはその関連する流入領域リンパ節、局所皮下組織、又は関節包への関節内（ＩＡ）注射によって送達される免疫調節剤を提供する。これらの経路を介して送達される免疫調節剤は、Ｔ_ｒｅｇ細胞の局所的な拡大及び安定化、並びに炎症性関節炎に罹患した関節における抗炎症性サイトカインの産生を誘導する。局所的な免疫調節を促進することに加えて、拡大及び安定化されたＴ_ｒｅｇ細胞並びに関連する抗炎症サイトカインの再循環は、最小限の全身性免疫抑制で関節炎の重症度の全身的な改善をもたらす。ＩＡ投与されたＭＰに封入された免疫調節剤の局所放出は、疾患保護Ｔ_ｒｅｇ細胞の局所拡大及び安定化を刺激する。これらの疾患保護Ｔ_ｒｅｇ細胞及び病原性Ｔ細胞は、免疫器官全体を通して全身的に再循環することができるため、局所的に拡大され、安定化されたＴ_ｒｅｇ細胞は、局所的及び全身的な非関節特異的免疫応答を抑制することなく、関節特異的自己免疫を全身的に抑制することができる。

したがって、全身性免疫抑制なしに、関節炎保護Ｔ_ｒｅｇ細胞の全身的な拡大及び安定化を誘導する免疫調節剤を封入するＭＰが本明細書に記載される。例えば、関節炎保護Ｔ_ｒｅｇ細胞を誘導する高親和性レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストは、ＭＰに封入され得る。ＲＡＲアゴニストは、全身投与後に疾患保護Ｔ_ｒｅｇ細胞を誘導することが実証されている、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）を含み得る。ＭＰは、任意の好適な生分解性又は生体吸収性ポリマーを含み得る。例えば、ＭＰは、ＲＡＲアゴニスト封入ＰＬＧＡ ＭＰを生成するために、ポリ－（乳－ｃｏ－グリコール）酸（ＰＬＧＡ）を含む、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）を含み得る。炎症性関節炎に罹患した関節若しくは関連する流入領域リンパ節、局所皮下組織、又はＲＡＲアゴニストの局所的な徐放を提供するＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの関節包への直接的な関節内注射。例えば、ＲＡＲアゴニストＡＴＲＡは、ナイーブＳＫＧマウス及びヒトＴ細胞のＴ_ｒｅｇ細胞への分化を増強し、炎症性Ｔｈ１７極性化状態におけるＳＫＧマウス及びヒトＴ_ｒｅｇ細胞を安定化させる。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、局所注射後、炎症性関節炎に罹患した関節若しくは関連する流入領域リンパ節、局所皮下組織、又は関節包に保持される。

ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、炎症を軽減し、骨喪失を低減させ、注射された関節若しくは関連する流入領域リンパ節、局所皮下組織、又は関節包内のＴ_ｒｅｇ細胞を増強し、Ｔ細胞依存性免疫応答の非特異的抑制の証拠なしに関節炎の症状を全身的に改善するのに十分な時間にわたって、生体活性ＡＴＲＡの徐放性又は持続性放出を提供する。例えば、生分解性ＭＰは、患者の炎症性関節炎に罹患した関節におけるＴ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を少なくとも２１日間維持することができる。生分解性ＭＰはまた、患者の炎症性関節炎に罹患した関節におけるＴ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を約３ヶ月間維持することができる。

炎症性関節炎に罹患している、又は無症候性炎症性関節炎を有すると疑われる患者に、封入された免疫調節剤ＭＰを有するＤＭＡＲＤを含む組成物を投与することを伴う方法も本明細書に記載される。封入された免疫調節剤ＭＰは、炎症性関節炎に罹患した関節若しくはその流入領域リンパ節、関節の近くの皮下、又は関節包への局所注射を通じて患者に投与される。ＤＭＡＲＤは、患者に経口、皮下、又は静脈内投与され得る。治療することができる炎症性関節炎の例としては、乾癬性関節炎、ＲＡ、強直性脊椎炎、変形性関節症、若年性関節炎、線維筋痛、痛風、又は狼瘡が挙げられる。

全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）が、用量依存的にＴ_ｒｅｇ細胞増強及びＴｈ１７抑制を差次的に促進することを示す。図１Ａは、Ｔｈ１７誘導条件下のナイーブＣＤ４＋マウスＴ （ｍＴ）細胞からのＴｈ１７及びＴ_ｒｅｇ細胞分化に対するＡＴＲＡの効果を評価するためのインビトロ実験を概略的に示す。図１Ｂは、０～１０ｎＭの濃度のＡＴＲＡを用いてＴｈ１７誘導条件で分化したＣＤ４＋ｍＴ細胞におけるＦｏｘＰ３発現の定量化を示す。図１Ｃは、０～１０ｎＭの濃度のＡＴＲＡを用いてＴｈ１７誘導条件で分化したＣＤ４＋ｍＴ細胞におけるＩＬ－１７発現の定量化を示す。図１Ｄは、０～１０ｎＭの濃度のＡＴＲＡを用いてＴｈ１７誘導条件で分化したＣＤ４＋ｍＴ細胞におけるＲＯＲγｔ発現の定量化を示す。図１Ｅは、モデル炎症条件におけるＴ_ｒｅｇ細胞の不安定化実験を概略的に示す。図１Ｆは、１ｎＭのＡＴＲＡの有無にかかわらず、不安定化アッセイの後の、Ｔ_ｒｅｇ細胞におけるＦｏｘＰ３発現の定量化を示す。図１Ｇは、１ｎＭのＡＴＲＡの有無にかかわらず、不安定化アッセイの後の、Ｔ_ｒｅｇ細胞におけるＩＬ－１７発現の定量化を示す。図１Ｈは、１ｎＭのＡＴＲＡの有無にかかわらず、不安定化アッセイの後の、Ｔ_ｒｅｇ細胞におけるＲＯＲγｔ発現の定量化を示す。図１Ｂ～Ｄ及びＦ～Ｈのデータは、代表的な実験の平均±Ｓ．Ｄ．であり、３つの実験複製物において実施された。図１Ｂ～Ｄ及びＦ～Ｈの統計分析は、対応のないスチューデントの両側ｔ検定を使用して実施した。 生体活性ＡＴＲＡの徐放性又は持続性放出をもたらすポリ－（乳－ｃｏ－グリコール）酸（ＰＬＧＡ）微粒子（ＭＰ）中のＡＴＲＡの封入を示す。図２Ａは、５０：５０のポリ－（乳－ｃｏ－グリコール）ＡＴＲＡ微粒子（ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ又はＰＬＧＡ－ＡＴＲＡ ＭＰと称される）を合成するための工程を示す概略図である。図２Ｂ、Ｄ、及びＦは、それぞれ、１０．６、６．５、及び３．９μｍの平均ＭＰ直径を有する粒子を産生するために様々な速度で均質化されたＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの走査型電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）を示す。 図２Ｂ、Ｄ、及びＦに示される平均は、粒子サイズごとの３つのバッチにわたる平均体積平均化直径を表す。図２Ｃ、Ｅ、及びＧは、体積平均化サイズ及び標準偏差を含む、各均質化速度についての単一の代表的なバッチ内のＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰサイズ分布を示す。図２Ｃは、９．６μｍのＭＰ直径の体積平均を有する粒子のＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰサイズ分布を示す。図２Ｅは、６．３μｍの体積平均ＭＰ直径を有する粒子のＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰサイズ分布を示す。図２Ｇは、３．９μｍの体積平均ＭＰ直径を有する粒子のＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰサイズ分布を示す。図２Ｈは、２８日間にわたる１ｍＬの放出溶液中の１０．６μｍのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ、６．５μｍのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ、又は３．１９μｍのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの体積平均を有する１０ｍｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰからのＡＴＲＡの放出プロファイルを示す。図２Ｉは、図１Ａに示されるＣＤ４＋ｍＴ細胞Ｔｈ１７分化アッセイにおける様々な時点での、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ製剤から放出されるＡＴＲＡの有効性を示す。図２Ｊは、図１Ｅに記載のＣＤ４＋ｍＴ細胞不安定化アッセイにおける様々な時点での、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ製剤から放出されるＡＴＲＡの有効性を示す。図２Ｋは、ＣＤ４＋ヒトｈＴ細胞分化アッセイにおける様々な時点での、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ製剤から放出されるＡＴＲＡの有効性を示す。ｎａｎｏｄｒｏｐによって測定される希釈された上清の濃度は、時点の下に示される。図２Ｂ、Ｄ、及びＦの直径平均は、サイズごとの３つのバッチの分析に基づく。図２Ｃ、Ｅ、及びＧのデータは、サイズごとの３つの異なる画像切片の分析からまとめられた、各サイズの単一のバッチからの分布及び直径平均である。図２Ｃは、各サイズの２つの追加のバッチについて実施され、同様の結果が得られた。図２Ｈ～Ｋのデータは、代表的な実験の平均±Ｓ．Ｄ．である。図２Ｈは、各サイズの粒子の単一のバッチを実施した３つの別個の放出複製物からのデータを表す。図２Ｉ及びＪは、２回実施された。図２Ｋは、２人の独立したドナーで２回実施された。図２Ｈにおける統計分析は、対応のないスチューデントの両側ｔ検定（＊＝＜０．０５、＊＊＝＜０．０１）を使用して各複製物の曲線下面積を比較することによって実施した。図２Ｉ～Ｋにおける分析は、対応のないスチューデントの両側ｔ検定を使用して実施された。 ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰが、ＳＫＧマウスにおける自己免疫性関節炎をどのように改善するかを示す。図３Ａは、中期関節炎の治療におけるＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの有効性及び注射部位でのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの保持を評価する実験設定を示す概略図である。図３Ｂは、粒子の滞留及び分解を追跡するためにインビボ画像化システム（ＩＶＩＳ）を使用して、関節内（ＩＡ）注射されたＣｙ５タグ付きＰＬＧＡブランクＭＰからの蛍光シグナルの定量化を示す。図Ｃ～Ｆは、２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置したマウス又は用量一致ボーラスＡＴＲＡでＩＡ注射したマウスのいずれかの関節炎の進行の定量化を示す。定量化には、図３Ｃに示される集計臨床スコアの比較、図３Ｄに示される同側及び対側の後足の臨床スコアの比較、図３Ｅに示される後足の集計足首厚さ、並びに図３Ｆに示される同側及び対側の後足の足首の厚さの比較が含まれる。図３Ｇは、関節炎の発症を同期させるために０日目にマンナンを注射し、１４日目に２μｇの３５ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ又は対照未充填ＰＬＧＡブランクＭＰのいずれかで処置したＳＫＧマウスにおける関節炎の臨床スコアによる疾患進行を示す。図３Ｈは、治療（同側）を受けた後足対偽ＰＢＳ注射（対側）を受けた後足の集計臨床スコアリングを示す。図３Ｉは、ＳＫＧマウスにおける後足首厚さを使用した関節炎進行の定量化を示す。図３Ｊは、処置及び対照マウスにおける同側足首と対側足首との間の足首厚さの比較を示す。図３Ｂのデータは、ｎ＝９のマウスにおけるＣｙ５タグ付きＰＬＧＡブランクＭＰの正規化放射効率の平均±ＳＤである。図Ｃ～Ｊのデータは、平均±ＳＥＭである。図Ｃ～Ｆ（ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの場合はｎ＝５、ボーラスＩＡ ＡＴＲＡの場合はｎ＝５のマウス）及び図Ｇ～Ｊ（ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの場合はｎ＝１０のマウス、ＰＬＧＡブランクＭＰの場合はｎ＝１１のマウス）は、同腹マウスのセットで実施された単一の実験からのデータを表す。図３Ｂの統計分析は、対応のないスチューデントの両側ｔ検定を使用して実施し、図Ｃ～Ｊの統計分析は、線形混合効果モデルを使用して実施された。 インビボでのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの薬物動態のモデリングを示す。図４Ａは、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰからのＡＴＲＡの放出、滑膜と末梢血との間のＡＴＲＡの移行、及び腎臓を介した末梢血からのＡＴＲＡの除去を示す２コンパートメント薬物動態モデルの概略図である。図４Ｂは、モデルコンパートメントの支配微分方程式、及び一次モデル係数のパラメータ値を示す。図４Ｃは、１０．６μｍ、６．５μｍ、及び３．９μｍのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのインビトロ放出プロファイルに基づく、末梢血中のモデル計算濃度プロファイルを示す。図４Ｄは、滑液中のＡＴＲＡのモデル計算濃度プロファイルを示す。図４Ｅは、放出プロファイルについての最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）及びそれが生じる時間（ｔ_ｍａｘ）値を示す。図４Ｃ～Ｅのデータは、示されるパラメータ及びインビトロで決定される平均ＡＴＲＡ放出プロファイルを使用したモデル出力を表す。 ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスにおける軟骨保護の増強及び免疫細胞浸潤の低減を示す。図５Ａ～Ｂは、免疫細胞浸潤（矢印に示される免疫細胞）を実証する、ＰＬＧＡブランクＭＰ又はＡＴＲＡ 封入ＰＬＧＡ ＭＰのいずれかで処置されたマンナン誘導性関節炎を有するＳＫＧマウスからの足首の代表的なヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を示す。図５Ｃは、集計足首データの自動組織形態計測分析を介した免疫細胞浸潤による足首炎症の定量化を示す。図５Ｄは、集計同側（ｉｐｓｉ）対対側（ｃｏｎｔｒａ）足首データの自動組織形態測定分析を介した免疫細胞浸潤による足首炎症の定量化を示す。図５Ｅ～Ｆは、（矢印に示される）距骨／脛骨接合部の骨びらん及びプロテオグリカン喪失を示す代表的なサフラニン－Ｏ染色を示す。図５Ｇは、集計スコアとしてのプロテオグリカン喪失の定量化を示す。図５Ｆは、同側スコア対対側スコアとしてのプロテオグリカン喪失の定量化を示す。図５Ａ～Ｂ及び図５Ｅ～Ｆの画像は、代表的な画像であり、図５Ｃ、Ｄ、Ｇ、及びＨのデータは、平均±ＳＤを表す。組織学は、図３及び図４の臨床及び免疫学的データに表されるマウスからのものである。ＰＬＧＡブランクＭＰデータについてはｎ＝７匹のマウスから、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰデータからはｎ＝４匹のマウスから集計データを取った。図５Ｃの統計分析は、対応のないスチューデントの両側ｔ検定を使用して実施された。図５Ｄの統計分析は、処置群間の対応のないスチューデントの両側検定、並びに同じ処置群内の同側群及び対側群間の対応のないスチューデントの両側ｔ検定を使用して実施された。図５Ｇの統計分析は、マン－ホイットニー検定を使用して実施された。図５Ｈの統計分析は、処置群間のマン－ホイットニー検定、並びに同じ処置群内の同側群及び対側群間のウィルコクソン検定を使用して実施された。図５Ｉ～Ｊは、ＰＬＧＡ－ブランクＭＰ又はＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置したマウスの後足における骨びらんの定量化を示し、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの軟骨保護効果を実証する。図５Ｉは、両方の後足の集計骨びらんスコアリングを示すが、図５Ｊは、直接処置された同側後足又は未処置の対側後足によって分類されたスコアを示し、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置されたマウスにおける処置された関節及び未処置の関節の両方で軟骨保護が観察されることを実証する。 ＳＫＧマウスにおける関節炎転帰におけるＡＴＲＡ媒介改善の拡張された特徴付けを示す。図６Ａは、２、２０、又は２００μｇ用量でＰＬＧＡブランクＭＰ又はＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのいずれかで処置したマウスからの臨床スコアを示す。２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ及びＰＬＧＡブランクＭＰのデータは、本明細書に示される図３、並びに代替用量との比較のための図６Ｂ及び図６Ｄにおいて同じデータである。図６Ｂは、マンナンを注射し、２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ又は対照ブランクＰＬＧＡ（ＰＬＧＡブランク）微粒子のいずれかで１４日目に処置した関節炎ＳＫＧマウスの足首厚さの変化を示す。図６Ｃは、直接処置された（同側）か、又は２、２０、若しくは２００μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ又はＰＬＧＡブランクＭＰのいずれかで１４日目に処置されたマウスからの処置に対して対側であった後足の集計臨床スコアを示す。図６Ａ～Ｃの群のデータは、以下のように検出された：ＰＬＧＡブランク（ｎ＝１１）、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ ２００μｇ（ｎ＝５）、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ ２０μｇ（ｎ＝３）、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ ２μｇ（ｎ＝１０）。＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１を示す。図６Ａ～Ｃの統計分析は、線形混合効果モデルを使用して実施された。ｂ及びｃにおける同側スコアと対側スコアとの間の差は、有意ではなかった。 運命マッピングマウスにおける関節炎の誘導を示す。図７Ａは、運命マッピングマウスにおける関節炎の誘導、並びにその後の処置及びエンドポイントを示す概略図である。図７Ｂ～Ｄは、運命マッピングマウスの脾臓（図７Ｂに示す）、流入領域リンパ節（図７Ｃに示す）、又は足首（図７Ｄに示す）から単離したｔｄＴｏｍａｔｏ^＋ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ－１７発現の定量化を示す。対になった点は同腹仔を表し、一方の同腹仔をＰＬＧＡブランクＭＰでＩＡ処置し、他方の同腹仔をＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰでＩＡ処置した。 ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰが、関節炎に関連しない抗原に対する全身性免疫応答を損なわないことを示す。図８Ａは、完全なフロイントアジュバント（ＣＦＡ）を用いた最初の免疫化（ｐｒｉｍｅ）及び１０日後の不完全なフロイントアジュバント（ＩＦＡ）を用いた後続のブースター免疫化（ｂｏｏｓｔ）を使用した、関節炎ＳＫＧマウスにおける卵白アルブミン（ＯＶＡ）ワクチン接種アッセイを示す概略図である。図８Ｂは、ＰＬＧＡブランクＭＰ（ｎ＝２）又はＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ（ｎ＝３）のいずれかで処置した関節炎を有するＳＫＧマウスの臨床スコアを示す。ＯＶＡによる免疫化は、関節炎ＳＫＧマウスを用いた以前の試験と比較して、いずれのコホートにおいても臨床スコアの進行に影響を及ぼさなかった。図８Ｃは、ブースター免疫化の直前及びブースター免疫化の１０日後の両方で、ＯＤ４０５＝０．３で測定された力価アッセイからの抗ＯＶＡ ＩｇＧ１力価のｌｏｇ１０を示す。図８Ｄは、健康なＣ５７Ｂｌ／６マウスにおけるＯＶＡワクチン接種アッセイを示す概略図である。図８Ｅは、ＯＤ４０５＝０．３で測定した力価アッセイからの抗ＯＶＡ ＩｇＧ１力価のｌｏｇ１０を示す。図８Ｆは、ＯＶＡによる最初の免疫化の２０日後の処理されたマウス脾細胞からの四量体＋ＣＤ４＋Ｔ細胞計数を示す。図８Ｂのデータは、処置されたＰＬＧＡブランクＭＰ処置マウス（ｎ＝２）及びＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウス（ｎ＝３）の平均±ＳＥＭを表す。図８Ｃ、Ｅ、及びＦのデータは、それぞれ、ｎ＝２、ｎ＝５、及びｎ＝５の生物学的複製物の平均±ＳＤを表す。図８Ｃ、Ｅ、及びＦの統計分析は、対応のないスチューデントの両側ｔ検定を使用して実施した。 皮下送達を介したＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの有効性を示す。図９Ａ～Ｂは、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ、トウモロコシ油中のＡＴＲＡの用量一致ボーラス、及びビヒクル単独（トウモロコシ油）を肩甲骨間に皮下注射されたＳＫＧマウスの臨床スコアを示す。ボーラスＡＴＲＡもＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰも、臨床スコア（図９Ａ）又は足首腫脹（図９Ｂ）において改善をもたらさなかった。 ２４時間の前処理後のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＦｏｘＰ３又はＩＬ－１７発現の定量化を示す。図１０Ａは、何もしない（なし）、１ｎＭのＡＴＲＡ（ＡＴＲＡ）、又はＩＬ－２のいずれかで２４時間前処理し、続いて細胞の除去及び洗浄、並びにＴｈ１７誘導条件への移行を行った後のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＦＯＸＰ３発現の定量化を示す。図１０Ｂは、何もしない（なし）、１ｎＭのＡＴＲＡ（ＡＴＲＡ）、又はＩＬ－２のいずれかで２４時間前処理し、続いて細胞の除去及び洗浄、並びにＴｈ１７誘導条件への移行を行った後のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ－１７発現の定量化を示す。 ＡＴＲＡが細胞ＤＮＡにエピジェネティック修飾を行うかどうかを決定するためのトランスポザーゼアクセシブルクロマチン配列決定のためのアッセイ（ＡＴＡＣ）からのデータを示す。図１１Ａは、３つの群の差次的にアクセス可能な領域（ＤＡＲ）（共通、Ｔｈ１７対照＞ＡＴＲＡ処理、ＡＴＲＡ処理＞Ｔｈ１７対照）のピーク当たりの計数の定量化を示し、異なる領域のピーク当たりの計数の差の広がりを示す。図１１Ｂは、１ｎＭのＡＴＲＡ（ＡＴＲＡで処理した）又はなし（Ｔｈ１７対照）を用いてＴｈ１７誘導条件で培養した細胞間のピーク当たりの計数によるＤＡＲの定量化を示す。図１１Ｃは、ＡＴＲＡ処理群において強化されたＤＡＲ又はＴｈ１７対照群において強化されたＤＡＲによって行に分類された全てのＤＡＲのヒートマップである。行と比較して、所与の試料におけるＤＡＲのｚスコアを決定することによって、ヒートマッピングを実施した。図１１Ｄは、Ｔｈ１７及びＴ_ｒｅｇ関連遺伝子のゲノムブラウザプロットを示す。

患者における炎症性関節炎を治療するのに有用な組成物及び方法を本明細書に記載する。本明細書に記載の組成物は、そのような治療を必要とする、又はそのような治療の必要性を発達させる可能性がある動物又はヒトなどの対象を治療するために投与することができる。例えば、組成物は、免疫系関連の障害又は疾患の発生率及び重症度を低減することができる。治療することができる免疫系関連の障害又は疾患の例としては、乾癬性関節炎、関節リウマチ（ＲＡ）、強直性脊椎炎、変形性関節症、小児性関節炎、線維筋痛、痛風、及び狼瘡などの炎症性関節炎の状態が挙げられる。患者は、関節が炎症性関節炎によって活動的に炎症を起こさない場合、例えば、患者が寛解状態にある場合に、重症度を低減するか又は再発を防ぐために治療され得る。患者はまた、疾患の重症度を低減するか、又は疾患の更なる発達若しくは発症を防ぐために、炎症性関節炎の発症前の段階にあるときに治療され得る。

患者における炎症性関節炎を治療するための方法は、患者の炎症性関節炎に罹患した関節、炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節、炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は炎症性関節炎に罹患した関節の関節包のうちの少なくとも１つに、免疫調節剤ＭＰを局所投与することを含み得る。免疫調節剤は、炎症性関節炎に罹患した関節の微小環境を変更し、全般的な全身性免疫抑制を引き起こすことなく、少なくとも１つの他の炎症した関節に全身的に影響を及ぼす任意の組成物に含まれ得る。例えば、免疫調節剤は、骨びらん、炎症を低減し、軟骨損傷を低減することによって、微小環境を変更することができる。薬剤はまた、炎症促進性サイトカイン又はケモカインの量を低減すること、抗炎症性サイトカインを増加させること、又は炎症におけるＢ細胞、Ｔ細胞、及びマクロファージなどの様々な免疫細胞の役割を調節することによって、関節の免疫微小環境を調節することができる。

免疫調節剤
免疫調節剤には、調節性Ｔ_ｒｅｇ誘導剤、滑膜線維芽細胞調節剤、又は生分解性材料に少なくとも部分的に封入されている抗原提示細胞調節剤を含み得る。Ｔ_ｒｅｇ誘導剤は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＦＯＸＰ３発現を誘導することができる。Ｔ_ｒｅｇ誘導剤は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストを含み得る。ＲＡＲアゴニストは、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）を含み得る。免疫調節剤はまた、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＩＬ－１０発現を誘導することができる。

免疫調節剤は、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を含み得、ＤＭＡＲＤは、生分解性材料内に封入されている。ＤＭＡＲＤはまた、少なくとも部分的に封入された免疫調節剤から除外することができ、代わりに、少なくとも部分的に封入された免疫調節剤を患者に投与するのと別個に及び同時に、患者に経口、皮下、又は静脈内投与することができる。Ｔ_ｒｅｇ誘導剤とＤＭＡＲＤとの組み合わせによる患者の治療は、炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を相乗的に低減させることができる。

免疫調節剤は、ＭＰに封入されているか、又はＭＰの表面に結合しているかのいずれかのＴＧＦ－βを含むことができない。ＴＧＦ－βは、全般的な免疫抑制につながる非特異的Ｔ_ｒｅｇ拡大を誘導することが知られている。更に、関節内ＴＧＦ－β注射は、炎症、滑膜肥厚、及び骨棘形成を誘導することが実証されており、炎症した関節を悪化させ得る。関節内ＴＧＦ－β注射も炎症性関節炎の発症を促進することが実証されているが、ＴＧＦ－βの局所阻害はＴ_ｒｅｇ／Ｔｈ１７のバランスを改善することが示されている。

免疫調節剤を含むＭＰ
免疫調節剤を含むＭＰは、炎症の重症度を低減するために、炎症性関節炎に罹患した関節に関節内注射（ＩＡ）によって投与することができる。免疫調節剤の封入は、治療に関連する濃度での免疫調節剤の徐放を容易にして、未治療の関節ではなく治療された関節のみで疾患進行を抑制することができる。免疫調節剤拡大及び安定化Ｔ_ｒｅｇ細胞、並びに関連する抗炎症性サイトカインの再循環は、注射されない関節における疾患進行に対する全身抑制に関与する。

例えば、組成物が、患者の炎症性関節炎に罹患した関節（関節内注射により直接）、炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節、炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は炎症性関節炎に罹患した関節の関節包のうちの少なくとも１つに投与される場合、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰなどの生分解性微粒子に少なくとも部分的に封入されたＡＴＲＡなどの調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤は、炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させることができる。炎症した関節内のＴｒｅｇ細胞集団を安定化させることは、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させることを含み得る。機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞は、炎症促進性Ｔ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含み得る。機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞はまた、Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞又はＴｈ１様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含み得る。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ治療はまた、患者における抗炎症性サイトカインの全身産生を増強することができる。

ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、炎症性関節炎に罹患した関節への関節内注射（ＩＡ）によって投与することができ、ＳＫＧマウスにおける炎症の重症度を低減する。これは、炎症促進性Ｔｈ１７細胞よりも抗炎症性Ｔ_ｒｅｇ細胞を増強することと相関する。ＡＴＲＡ封入ＭＰは、マウス及びヒトＴ_ｒｅｇ細胞の分化を促進し、マウスＴ_ｒｅｇ細胞の不安定化を防ぎ、Ｔｈ１７細胞を阻害する。溶液中のＡＴＲＡのボーラス注射は、ＡＴＲＡを直接関節、関連するリンパ節、及び軟部組織に送達することができるが、この注射方法は、関節炎の進行にほとんど又はまったく効果がない。これは、関節、リンパ節、及び関連する軟組織からの注射されたＡＴＲＡ溶液の迅速なクリアランスにより、Ｔ_ｒｅｇ細胞を拡張し安定化させるための適切な濃度のＡＴＲＡを維持することができないことによる可能性が高い。対照的に、注射されたＰＬＧＡベースのＭＰ中にＡＴＲＡを封入することは、治療的に関連する濃度でのＡＴＲＡの徐放を容易にし、注射後少なくとも４週間、疾患の進行を抑制する。ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、ＳＫＧマウスにおける関節炎の重症度を低減し、処置された関節及び未処置の関節の両方における臨床スコアを安定化させた。

疾患調節と一致して、ＩＡ治療を受けた同側足首関節及び偽ＩＡ注射を受けた対側関節の両方におけるエンドポイント組織学的評価は、１５の異なる型の浸潤免疫細胞、骨びらん、及びプロテオグリカン喪失の低減を実証した。これらの結果は、ＡＴＲＡ封入ＭＰが、炎症を低減することに加えて、ＳＫＧ関節炎における全身性疾患修飾剤としても作用することを示す。これらの結果に基づいて、本明細書に記載の局所注射されたＩＡベースの免疫調節剤封入ポリマーＭＰアプローチは、局所及び全身の治療有効性の両方を実証した。このアプローチは、全身的に送達されたＤＭＡＲＤに応答しない個々の関節の炎症を一時的に低減するために、いくつかのＲＡ患者で使用されるＩＡステロイド注射とは異なる。

ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、同じ患者において、同側注射された関節及び対側未注射関節に等しく影響を及ぼし得る。この方法を使用する全身性疾患調節は、Ｔ細胞依存性免疫応答の全般的な抑制とは関連していない可能性がある。むしろ、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置ＳＫＧマウスの足首及び流入領域リンパ節におけるＴｈ１７細胞を上回るＴ_ｒｅｇ細胞の増強は、Ｔ_ｒｅｇ細胞の局所的な増強及びこれらの細胞の全身再循環を実証し、関連する抗炎症性サイトカインは、関節炎退縮を改善する。この知見はまた、増強したｅｘＴ_ｒｅｇ細胞の数がＳＫＧマウス関節炎モデルにおける関節炎の重症度を増加させるという観察と一致する。ＳＫＧマウスにおけるＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのＩＡ投与は、Ｔ_ｒｅｇ細胞の安定性を改善し、Ｔ_ｒｅｇ細胞のｅｘＴ_ｒｅｇ細胞への変換を制限した。

毛細血管の数及び毛細血管透過性は、ＲＡ関節で増加する可能性がある。これにより、注射療法、特に溶液中のＡＴＲＡのような低分子量化合物が、ＲＡに罹患した関節から迅速にクリアランスされる。ＩＡ注射は、限られた頻度でのみ患者に安全に投与することができるため、注射された溶液中の薬物の迅速なクリアランスは、薬物投与の頻度を単に増やすだけでは克服することができない。注射された溶液中の薬物の濃度を増加させると、薬物への関節曝露を延長させることができる。しかしながら、注射された薬物濃度の上昇は、関節内の局所的な毒性を引き起こす可能性がある。高濃度の注射された薬物の急速な放出はまた、関節からの退出後にオフターゲット組織によって取り込まれた場合、望ましくない副作用を引き起こす可能性がある。対照的に、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、局所濃度のＡＴＲＡの徐放性又は持続性放出をもたらすことができ、これは、組成物が直接投与されなかった患者の炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失の重症度を低減することができる。ＩＡ投与されたＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰからのＡＴＲＡの放出プロファイルは、免疫抑制閾値を超える全身ＡＴＲＡ曝露を引き起こすには不十分である。

局所投与されたＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの治療有効性は、ＳＫＧマウスにおけるＤＭＡＲＤによる全身治療よりも治療有効性が高い場合がある。ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰによる関節炎スコアの改善は、ＳＫＧマウスにおける第一選択の従来のＤＭＡＲＤであるメトトレキサートの報告された有効性よりも優れている場合がある。これは、１．０ｍｇ／ｋｇの投与にもかかわらず、ヒトにおける典型的な臨床的に投与される用量の約２０倍を超える１日用量であり得る。ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの有効性は、ＳＫＧマウスにおける毎週１００μｇの抗ＩＬ－１７抗体処置又は毎週２００μｇの抗ＩＬ－６Ｒ抗体などの生物学的ＤＭＡＲＤの同等の全身投与であり得る。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、Ｔ細胞依存性免疫応答の全般的な抑制に関連していないため、それらはまた、保護免疫応答を更に損なうことなく、疾患制御を増強するための現在承認されているＤＭＡＲＤの投与に対する免疫調節アジュバントとしても機能し得る。

ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置されたＳＫＧマウスにおける臨床評価及び組織形態計測評価の改善は、Ｔ_ｒｅｇ細胞対Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型細胞比又はＴ_ｒｅｇ対Ｔｈ１様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞比の改善と相関し得る。例えば、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのＩＡ注射後、Ｔ_ｒｅｇ細胞集団は、３日以内に、及び処置後２１日までに、同側足首におけるＴｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型細胞よりも増強され得る。この増強は、両方の足首の流入領域リンパ節などにおいて局所的に観察することができるが、脾臓では観察することができない。これらの結果は、関節－流入領域リンパ節におけるＴ_ｒｅｇ細胞の安定性が、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのＩＡ注射の１１日後に増強されるように思われた、運命マッピングＳＫＧマウスからのデータと一致する。ＡＴＲＡによって媒介されるＴ_ｒｅｇ細胞機能のインビトロ増強と共に、これらの結果は、全身疾患特異的免疫調節が、ＡＴＲＡによる全身免疫抑制ではなく、処置された関節からのＴ_ｒｅｇ細胞の再循環に起因し得ることを実証する。

ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、コラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）マウスにおける免疫寛容原性ワクチンを使用した抗原特異的免疫調節、ＲＡ自己抗原（Ｒｈｅｕｍａｖａｘ）の混合物とのインキュベーションによる免疫寛容原性Ｔ_ｒｅｇ誘導樹状細胞のエクスビボ生成及び１７注入、並びに１つ又は複数のＲＡ自己抗原に対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）－Ｔ_ｒｅｇのエクスビボ生成及び注入などの自己免疫炎症性関節炎で評価されている他の前臨床免疫調節戦略とは異なり得る。Ｒｈｅｕｍａｖａｘ及びＣＡＲ－Ｔ_ｒｅｇ細胞アプローチの有効性は、ＲＡにおいて実質的な抗原拡散が生じることが知られているために標的とされ得る既知の自己抗原の不足によって制限され得る。

ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、関与するエピトープの先験的な知識なしに、疾患特異的Ｔ_ｒｅｇ細胞を促進するために炎症部位で局所的に作用するという利点を有し得る。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、Ｔ細胞媒介免疫応答の免疫抑制なしで、処置されたマウスにおける炎症性関節炎疾患の進行を永続的に抑制することができる。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、２～２００μｇの範囲の用量で、炎症性関節炎に罹患した関節への単一のＩＡ注射後の疾患進行を抑制するのに等しく有効であり得る。このＡＴＲＡ用量は、ブドウ膜炎、実験的自己免疫性脳脊髄炎、及び炎症性自己免疫性関節炎における炎症を調節する他の自己免疫性疾患マウスモデルで使用される、０．５～２５ｍｇ／ｋｇの範囲の頻繁な全身投与ＡＴＲＡ用量よりも有意に低い。例えば、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、２～２０μｇの範囲の用量で、炎症性関節炎に罹患した関節への単一のＩＡ注射後の疾患進行を抑制するのに有効であり得る。

１回のＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ注射（Ｃ_ｍａｘ）後のインビボでのＡＴＲＡへの計算された最大全身曝露は、４０ｐＭであり、これは、げっ歯類における毒性に関連付けられている用量（１４ｍｇ／ｋｇ超）で到達した濃度をはるかに下回り得る。本明細書に記載の薬物動態モデルは、治療された炎症性関節炎に罹患した関節の滑液中のＡＴＲＡの治療有効濃度及び非免疫抑制性全身濃度を予測した。

炎症性関節炎は、慢性的な疼痛及び障害につながる可能性がある。ＤＭＡＲＤは疾患管理を変革したが、患者の大部分は寛解を達成するのに苦労し続けている。例えば、第２のＤＭＡＲＤを組み合わせることによって、特定のＤＭＡＲＤに部分的にしか応答しない患者における免疫抑制を深めることは、現在、実行可能な選択肢ではない。臨床疾患の進行を遅らせるために病原性免疫細胞を調節する能力は、軟骨プロテオグリカン（ＰＧ）の保存及び骨びらんの低減（ＢＥ）と相まって、全般的な免疫抑制なしで全身性疾患特異的臨床利益を提供する局所送達剤としてのＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの有用性を支持する。

ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、ＲＡなどの炎症性関節炎の発達の早期に投与された場合、局所免疫調節を媒介する。この結果は、疾患の進行を減速させる又は防ぐための効果的な単剤療法としてのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの使用を支持する。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの定期的な注射は、感染及びがんに対する免疫応答を更に損なうことなく疾患の制御を増強するために、現在承認されているＤＭＡＲＤと組み合わせた免疫調節アジュバントとして機能し得る。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、凍結乾燥して長期間保管することができ、市販品使用することができる可能性がある。加えて、温度安定性の低い抗体と比較して、ＡＴＲＡのような小分子治療薬の温度安定性は、冷蔵保管と比較して、より経済的に好ましい室温保管の能力を提供する。炎症性関節炎に罹患した関節へのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ注射は、必要に応じて、蛍光透視及び超音波ガイダンスの技法の下で実施することができる。重要なことに、全身送達されたＡＴＲＡは、ＣＩＡマウス及び変形性関節症（ＯＡ）のモデルにおいて軟骨保護的であることが報告されている。更に、ＡＴＲＡの全身投与は、筋骨格症状を引き起こさない。まとめると、これらの結果は、ＡＴＲＡが十分に耐容性であり、ＩＡ送達に安全であり得ることを示す。

生分解性／生体吸収性ポリマー
本明細書に記載の免疫調節剤は、吸収を遅らせる薬剤を含み得る生分解性／生体吸収性材料に少なくとも部分的に封入することができる。注射用組成物の長期吸収は、組成物に、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを含めることによってもたらすことができる。更に、本明細書に記載の化合物は、時間放出製剤、例えば、緩徐放出ポリマーを含む組成物において製剤化することができる。組成物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤などの迅速な放出から免疫調節剤を保護する担体を用いて調製することができる。

本明細書に記載の微粒子に含まれるポリマーは、任意の好適な生分解性ポリマーである。ポリマーの非限定的な例としては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ＰＬＧＡ－ポリ（エチレングリコール）ブロックコポリマー、ポリ（Ｌ－乳酸－Ｉ－グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン－ｃｏ－グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ＰＥＯ－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ＰＰＯ－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリ（ヒドロキシブチレート）（Ｐ４ＨＢ）、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ポリ－Ｌ－グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリホスフェート、ポリホスホエステル、ポリホスファジン、ポリジオキサゾン、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリ二ビルアルコール、ポリアミノ酸、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（レブリン酸）、及び前述のポリマーのうちの１つ以上の組み合わせ、又は前述のポリマーのうちの２つ以上のブロックコポリマーが挙げられる。

例えば、ポリマーは、ＰＬＧＡであり得る。ＰＬＧＡポリマー中の乳酸：グリコール酸比は、約５０：５０～約９９：１（例えば、約７５：２５～約９０：１０、約７０：３０～約９０：１０、約８０：２０～約９０：１０、約８５：１５～約７５：２５、約８５：１５、又は約７５：２５）である。いくつかの実施形態では、ＰＬＧＡは、約２０ｋＤａ～約１０００ｋＤａ（例えば、約５０ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約３００ｋＤａ、又は約１５０ｋＤａ～約２５０ｋＤａの重量平均分子量（ＭＷ）を有し得る。ＰＬＧＡは、３以下、２．５以下、２以下、又は更には約１．８以下の多分散性指数を有し得る。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約２５℃～約６５℃、約３０℃～約５５℃、又は約３５℃～約５０℃のガラス転移温度を有する。

あるいは、ポリマーは、ＰＬＡであり得る。ＰＬＡは、約２０ｋＤａ～約１０００ｋＤａ（例えば、約４０ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約６０ｋＤａ～約３００ｋＤａ、又は約８０ｋＤａ～約２５０ｋＤａの重量平均分子量（ＭＷ）を有し得る。いくつかの実施形態では、ＰＬＡは、３以下、２．５以下、２以下、又は更には約１．８以下の多分散性指数を有し得る。

本明細書に記載の生分解性／生体吸収性ポリマーのトリブロックコポリマーを含むマルチブロックコポリマーもまた、本明細書で企図される。

他の例では、ポリマーは、ＰＬＡ／ＰＬＧＡブロックコポリマーである。ＰＬＡ／ＰＬＧＡブロックコポリマーは、約１０ｋＤａ～約３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ～約２００ｋＤａ、又は約４０ｋＤａ～約１００ｋＤａの重量平均分子量（ＭＷ）を有し得る。いくつかの実施形態では、ＰＬＡ／ＰＬＧＡブロックコポリマーは、３以下、２．５以下、２以下、又は更には約１．８以下の多分散性指数を有し得る。

本明細書に記載の２つ以上のポリマーのブレンドも企図される。例えば、ＰＬＡとＰＬＧＡとのブレンドが企図され、ＰＬＡは、ＰＬＧＡとブレンドされるか、又はＰＬＧＡは、１５：８５、２５：７５、５０：５０などの約一連の比率でＰＬＡとブレンドされる。例えば、ＰＣＬとＰＬＧＡとのブレンドが企図され、ＰＣＬは、ＰＬＧＡとブレンドされるか、又はＰＬＧＡは、１５：８５、２５：７５、５０：５０などのおよその一連の比率でＰＬＡとブレンドされる。

持続的放出製剤は、放出及び分解特性の特定の調整のために、本明細書に記載の１つ以上の生分解性ポリマーを含み得る。生分解性／生体吸収性ポリマーは、末端がカルボン酸末端であるキャップのないポリマー、又は末端がエステルとして部分的若しくは更には完全にキャップされているキャップポリマー（例えば、メチル、エチル、プロピル、及びブチルエステルなどの（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルエステル、ベンジル及びナフチルメチルエステルなどの（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール－（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルエステル、並びにそれらの組み合わせ）を含む、任意の形態であり得る。キャップの（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル及び／又は（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール部分は、－ＮＲ^１Ｒ^２基などの１つ以上の基で置換することができ、式中、Ｒ^１及びＲ^２は、独立して、Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール、及び（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール－（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル基から選択される。キャップの（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル及び／又は（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール部分は、－ＯＲ^１基などの１つ以上の基で置換することができ、式中、Ｒ^１は、Ｈ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール、及び（Ｃ_６－Ｃ_１４）アリール－（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル基から選択される。

ポリマーは、両親媒性ブロックコポリマーを含み得る。追加の特定の実施形態では、ポリマーは、乳酸及びグリコール酸（例えば、ＰＬＧＡ）のコポリマーを含み得る。追加の特定の実施形態では、ポリマーは、ＰＬＧＡ－ブロック－ＰＥＧ及びＰＬＧＡのうちの少なくとも１つを含み得る。ＰＬＧＡ及びＰＥＧのブロックコポリマーでは、ＰＥＧブロックは、約５００Ｄａ～約４０，０００Ｄａ（例えば、約１，０００Ｄａ～約２０，０００Ｄａ 又は約２，０００Ｄａ～約１０，０００Ｄａの分子量を有し得る。

生分解性／生体吸収性ポリマーとしては、ポリ乳酸－ｃｏ－カプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ乳酸－ブロック－ポリエチレングリコール、ポリグリコール酸－ブロック－ポリエチレングリコール、ポリラクチド－ｃｏ－グリコリド－ブロック－ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール－ブロック－脂質、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、グリコサミノグリカン、ポリオルトエステル、多糖類、多糖類誘導体、ポリヒアルロン酸、ポリアルギン酸、キチン、キトサン、キトサン誘導体、セルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリペプチド、ポリリシン、ポリグルタミン酸、アルブミン、ポリヒドロキシアルコノエート、ポリヒドロキシバレレート、ポリヒドロキシブチレート、タンパク質、ポリホスフェートエステル、脂質、及びそれらの混合物も挙げられる。

本明細書で用いられるＭＰは、好適かつ適切な寸法を有する。いくつかの実施例では、微粒子は、卵形、球形、楕円形、管状などであり得る。形状に加えて、ＭＰは、ＭＰに、マクロファージによる食作用に対する抵抗性を提供するか、又はＭＰが直接投与された炎症性関節炎に罹患した関節若しくは流入領域リンパ節から脱出するのに好適な直径を有する。例えば、ＭＰは、約５μｍ～最大約２０μｍの平均直径を有し得る。別の例では、ＭＰは、約２０μｍ～最大約５０μｍの粒径を有し得る。

加えて、ＭＰは、「Ｄ値」によって定量化され得る粒径分布を有する。本明細書で使用される場合、「Ｄ５０」という用語は、５０パーセンタイルの数又は体積ベースの粒子直径中央値を指し、これは、粒子集団の数又は体積で５０％未満が見出される直径である。Ｄ１０（１０％）、Ｄ９０（９０％）、Ｄ９９、及びＤ１００（１００％）などの他のパーセンテージもまた一般的に使用される。本明細書で使用される場合、「Ｄ９９」という用語は、９９パーセンタイルの数又は体積ベースのいずれかの粒子直径中央値を指し、これは、粒子集団の体積の数で９９％未満が見出される直径である。数又は体積の測定値は、数の場合は［ｎｕｍ］、体積の場合は［ｖｏｌ］で示される。

本明細書に記載される様々な実施形態の微粒子は、約５μｍ～約２０μｍのＤ５０粒子直径を有し得る。本明細書に記載される様々な実施形態の微粒子は、約２０μｍ～約５０μｍのＤ５０粒子直径を有し得る。微粒子はまた、約５μｍ未満の直径（例えば、約１μｍ～約５μｍ、約１．５～約４μｍ、約１．７５～約３．５μｍ、又は約２～約３μｍのＤ５０粒子直径）を有し得る。他の実施形態では、微粒子は、約９μｍ未満のＤ９０粒径（例えば、約２μｍ～約９μｍ、約３μｍ～約７μｍ、又は約３．５μｍ～約６μｍのＤ９０粒径）を有し得る。更に他の実施形態では、微粒子は、約１０μｍ未満のＤ９９粒径（例えば、約３μｍ～約１０μｍ、約４μｍ～約９μｍ、約４．５～約８μｍ、又は約５μｍ～約７μｍのＤ９９粒子直径）を有し得る。他の実施形態では、微粒子は、約１５μｍ未満のＤ１００［ｎｕｍ］粒径（例えば、約３μｍ～約１２μｍ、約４μｍ～約１１μｍ、又は約５μｍ～約１０μｍのＤ１００粒径）を有する。

粒径及び粒子サイズ分布は、例えば、米国特許第９，４２３，３３５号（本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる）に記載されているように、単一粒子光学サイズ分類（ＳＰＯＳ）によって決定することができる。ＳＥＭ、顕微鏡、光散乱、レーザー回折、コールターカウンター（電気的帯感知）、及びデジタル画像分析を含む、粒径及び粒子サイズ分布を決定するための他の方法もまた使用することができる。

微粒子は密度を有する。密度は、約０．５～約２ｇ／ｍＬ（例えば、約０．５～約１．５ｇ／ｍＬ、約０．７５ｇ／ｍＬ～約１．５ｇ／ｍＬ、及び約１．０ｇ／ｍＬ～約１．５ｇ／ｍＬ）である。微粒子は、生分解性である。追加の実施形態では、微粒子は生体浸食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）である。追加の実施形態では、微粒子は生体適合性である。

微粒子は、注射可能な組成物が依然として流動性及び注射可能である限り、本明細書に記載の注射可能な組成物において、任意の好適かつ適切な濃度で存在することができる。しかしながら、ある特定の組成物は、固体の特定の濃度に達すると、最終的に注射可能でなくなることを理解されたい。微粒子は、ビヒクル中で約１ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ～約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ～約３００ｍｇ／ｍＬ、又は約１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ）の濃度で存在することができる。

免疫調節剤は、ポリマーの最大約５０重量％（例えば、ポリマーの約５重量％～約５０重量％、約１０重量％～約４０重量％、約１５重量％～約３５重量％、約２０重量％～約３５重量％、又は約２０重量％～約４０重量％）の重量で存在することができる。ＡＰＩを含むポリマーを使用して、本明細書に記載の様々な実施形態の微粒子を製造する。いくつかの実施形態では、微粒子を、そのようなポリマーから製造して、高いＩＡ充填を有し、依然として制御されたバースト及び徐放性を示す微粒子を得ることができる。更なる特定の実施形態では、免疫調節剤は、ポリマーの最大約４０重量％の重量で存在することができる。代替の特定の実施形態では、免疫調節剤は、ポリマーの少なくとも約１０重量％の重量で存在し得る。更なる特定の実施形態では、免疫調節剤は、ポリマーの少なくとも約２０重量％の重量で存在することができる。代替の特定の実施形態では、免疫調節剤は、ポリマーの約２０～約３５重量％、又はポリマーの約２０～約４０重量％の重量で存在し得る。

免疫調節剤は、複数の微粒子の最大約５０重量％（例えば、複数の微粒子の約１重量％～約５重量％、約５重量％～約５０重量％、約１０重量％～約４０重量％、又は約１５重量％～約３０重量％）の重量で存在することができ、重量パーセントは、微粒子中に存在し得る他の材料の存在を考慮して調整することができる。

注射可能な組成物に用いられるＩＡの特定の量（質量単位で測定される）は、典型的には、例えば、送達される組成物の量に依存する。送達される組成物の量は、典型的には、例えば、患者のサイズ、体重、年齢、及び健康状態、治療される疾患又は障害、投与の場所又は部位、薬物放出の持続時間、ＩＡの効力、並びに用いられる特定のＩＡに依存する。

本明細書に記載の微粒子は、例えば、凍結乾燥粉末として、密封された乾燥容器に保存することができる。注射の前に、粒子を注射ビヒクルと混合することができ、得られた懸濁液のアリコートを、患者への注射のために収集することができる。典型的な設定では、この手順は、ＩＡ注入のために懸濁液を針に引き込むことによって行うことができる。一実施形態では、画像ガイダンスの有無にかかわらず、注射用の３ｍＬの注射器を備えた１．５インチ又は１インチの２５ゲージの針を、局所麻酔剤のための２％のリドカインと共に使用することができる。他の方法は、ＩＡ注射の当業者には明らかであろう。例えば、Ｌｏｃｋｍａｎ，“Ｋｎｅｅ ｊｏｉｎｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｓｐｉｒａｔｉｏｎｓ，”Ｃａｎ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．２００６ Ｎｏｖ １０；５２（１１）：１４０３－１４０４（本明細書に完全に記載されているかのように、参照により組み込まれる）を参照されたい。

投与量、製剤、及び投与経路
本明細書に記載の治療剤を含有する医薬製剤は、利用可能な成分を使用して利用可能な手順によって調製することができる。製剤は、薬学的に許容される担体、ビヒクル、及びアジュバントを含有し得る。例えば、治療剤は、一般的な賦形剤、希釈剤、又は担体と共に製剤化することができ、錠剤、カプセル、溶液、懸濁液、粉末、エアロゾルなどに形成することができる。そのような製剤に好適な賦形剤、希釈剤、及び担体の例としては、緩衝剤、並びにデンプン、セルロース、糖、マンニトール、及びケイ酸誘導体などの充填剤及び増量剤が挙げられる。結合剤には、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及び他のセルロース誘導体、アルギネート、ゼラチン、及びポリビニルピロリドンなども含まれ得る。パラフィンなどの溶解を遅延させるための薬剤も含まれ得る。四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤も含まれ得る。セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの表面活性剤を含むことができる。カオリン及びベントナイトなどの吸着性医薬担体を添加することができる。防腐剤も添加することができる。本発明の組成物はまた、セルロース及び／又はセルロース誘導体などの増粘剤を含有し得る。それらはまた、キサンタン、グアー、又はカルボガム若しくはアラビアゴムなどのゴム、又は代替的にポリエチレングリコール、ベントン（ｂｅｎｔｏｎｅ）、及びモンモリロナイトなどを含有し得る。

例えば、水に加えて、アセトン、エタノール、イソプロピルアルコール、「Ｄｏｗａｎｏｌ」という名前で販売される製品などのグリコールエーテル、ポリグリコール及びポリエチレングリコール、短鎖酸のＣ１－Ｃ４アルキルエステル、乳酸エチル又は乳酸イソプロピル、「Ｍｉｇｌｙｏｌ」という名前で販売される製品などの脂肪酸トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピル、動物油、鉱物油、及び植物油、並びにポリシロキサンなどの溶媒から選択される、生理学的観点から許容される１つ以上の水性又は有機溶媒を使用して、溶液を調製することが可能である。

免疫調節剤は、非経口投与のために（例えば、関節、炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節、炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は炎症性関節炎に罹患した関節の関節包への注射、例えば、ボーラス注射又は連続注入によって）製剤化することができ、アンプル、充填済み注射器、少量注入容器、又は複数回用量容器において、単位用量形態で提示することができる。

炎症性関節炎に罹患した関節に投与される免疫調節剤の用量は、炎症性関節炎に罹患した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させるのに十分な量であり得、かつ患者の全身性免疫抑制を引き起こさない。炎症性関節炎に罹患した関節に投与される免疫調節剤の用量は、炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させるのに十分な量であり得、かつ患者の全身性免疫抑制を引き起こさない。

上記のように、防腐剤を添加して、剤形の貯蔵寿命を維持するのを助けることができる。活性剤及び他の成分は、油性又は水性ビヒクル中で懸濁液、溶液、又はエマルションを形成することができ、懸濁剤、安定剤、及び／又は分散剤などの処方剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含有し得る。代替的に、治療剤及び他の成分は、使用前に好適なビヒクル、例えば、減菌のパイロジェンフリー水で構成するために、減菌固体の無菌単離によって、又は溶液からの凍結乾燥によって得られる粉末形態であり得る。

組成物はまた、酸化防止剤、界面活性剤、保存剤、フィルム形成剤、角質溶解剤、又は面皰改善剤（ｃｏｍｅｄｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔ）を含み得る。ｔ－ブチルヒドロキノン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、及びα－トコフェロールなどの酸化防止剤、並びにその誘導体が添加され得る。

組成物は、任意選択の成分として、薬学的に許容される担体、希釈剤、可溶化剤、又は乳化剤、及び当該技術分野で利用可能な種類の塩を含み得る。そのような物質の例としては、生理学的に緩衝された生理食塩水及び水などの通常の生理食塩水が挙げられる。本発明の薬学的製剤において有用な薬学的担体及び／又は希釈剤の特定の非限定的な例としては、水及び生理学的に許容される緩衝生理食塩水、例えば、ｐＨ７．０～８．０のリン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。

更に、活性成分は、記載の状態又はいくつかの他の状態にかかわらず、他の治療剤、例えば、鎮痛剤、抗炎症剤、抗がん剤などと組み合わせて使用することもできる。

キット
本発明は更に、疾患を検出、制御、予防、又は治療するためのキット又は他の容器などの包装された薬学的組成物に関する。本発明のキットは、本明細書に記載のもの（例えば、炎症性関節炎状態）などの免疫応答、免疫状態、及び自己免疫疾患を検出、制御、予防、又は治療するために設計され得る。

一実施形態では、キット又は容器は、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰなどの生分解性材料に少なくとも部分的に封入された免疫調節剤、及び免疫調節剤を含む組成物を調製するための説明書を保持し得る。

別の実施形態では、キット又は容器は、疾患の治療、予防、又は制御のための治療有効量の薬学的組成物、及び疾患の制御のための薬学的組成物の使用説明書を保持し得る。薬学的組成物は、疾患が制御、予防、又は治療されるように、治療有効量でＴ_ｒｅｇ誘導剤、滑膜線維芽細胞調節剤、又は抗原提示細胞調節剤などの少なくとも１種類の免疫調節剤を含み得る。そのような組成物は、液体形態、粉末形態、又は患者に即座に投与することを可能にする他の形態であり得る。

本発明のキットはまた、本発明の組成物を投与するのに有用なツールを備える容器を含み得る。そのようなツールには、注射器、スワブ、カテーテル、消毒液などが含まれ得る。一部のキットは、本明細書に記載の方法のいずれかに従って患者を治療するための、混合容器、器具、及び注射デバイスを含む、所望のツール、溶液、化合物の全てを含み得る。一実施形態では、キットは、本明細書に記載の様々な実施形態の免疫調節剤封入ＭＰを含む。免疫調節剤封入ＭＰは、注射器、バイアル（例えば、バイアルは、隔壁及び／又は圧着シールを含み得、バイアルは、任意選択で、窒素雰囲気などの不活性雰囲気又は乾燥空気を含み得る）、又はパウチ（例えば、防湿層を含むパウチ；パウチは、任意選択で、窒素雰囲気などの不活性雰囲気又は乾燥空気を含み得る）などの好適な容器（例えば、実質的に水不透過性）中に乾燥粉末として滅菌包装することができる。免疫調節剤封入ＭＰを含むバイアルは、懸濁液を引き出すための針の使用を必要としない注射キャップを有することができ、ＭＰを損傷する、又は負圧下で溶液から粒子を分離したりすることを回避するために使用することができる。キットはまた、乾燥剤を含み得る。乾燥剤は、パウチに含まれ得るか、又はパウチ材料の層に組み込まれてもよい。いくつかの実施形態では、微粒子は、凍結ビヒクルに減菌包装されてもよい。前述のように、ビヒクルは、流動性の生体吸収性ポリマー、生理食塩水、滅菌水、リンゲル溶液、及び等張塩化ナトリウム溶液などの流動性ビヒクル（例えば、液体ビヒクル）を含む、任意の好適なビヒクルであり得る。ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射剤ＵＳＰ（０．９％）、リンゲル注射剤ＵＳＰ、乳酸リンゲル注射剤ＵＳＰ、乳酸ナトリウム注射剤ＵＳＰ、デキストロース注射剤ＵＳＰ（５％又は１０％）、注射用静菌水ＵＳＰ、及び注射用滅菌水ＵＳＰが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施例では、微粒子は、水中に懸濁し、注射器などの容器に予め充填し、凍結することができる。

キットは、少なくとも１つの静的混合要素、例えば、注射器に取り付けられる要素を含み得る。いくつかの実施形態では、使用者は、微粒子を送達するための静的混合要素を提供する。

キットはまた、とりわけ、本明細書に記載の様々な実施形態の微粒子がビヒクルで再構成されるときに生じ得る任意の微粒子凝集を分散するのに役立つビーズを含み得る。いくつかの実施形態では、ビーズは、微粒子よりも十分に大きいため、微粒子は注射部位に選択的に送達することができ、一方、ビーズは注射デバイス（例えば、注射器）内に残る。例えば、ビーズは、約１ｍｍである少なくとも１つの寸法を有し得る。ビーズは、球形及び卵形を含む、任意の好適な形状であり得る。ビーズはまた、任意の好適なテクスチャを有し得る。例えば、ビーズは、滑らかなテクスチャ及び／又は粗いテクスチャを有し得る。ビーズはまた、ガラス、セラミック、金属（例えば、ステンレス鋼）、ポリマー（例えば、ｅＰＴＦＥ又はポリプロピレン）、及び複合材料を含む任意の好適な材料で作製され得る。ビーズは、別個の容器内、本明細書に記載される様々な実施形態の微粒子と同じ容器内にキットに含まれてもよい。あるいは使用者が、好適なサイズ、形状、テクスチャ、及び／又は材料のビーズを治療現場で提供することができる。

キットはまた、滅菌水又は滅菌生理食塩水（例えば、標的注射領域が実質的に疎水性又は親油性である場合）などの本明細書に記載の注射ビヒクル、又は非水性ビヒクル（例えば、本明細書に記載の疎水性の液体ビヒクル）を含む他の好適なビヒクルを含み得る。投与前に、微粒子を注射ビヒクルに添加して懸濁液を形成し、攪拌（ａｇｉｔａｔｅｄ）（例えば、攪拌（ｓｔｉｒｒｅｄ）、振盪、又はボルテックス）して均一性を最大にすることができる。いくつかの実施形態では、非水性ビヒクル（例えば、本明細書に記載の疎水性の液体ビヒクル）などのビヒクルに懸濁された微粒子がキットに入ってもよい。

キットは、皮下注射針、又はカニューレ、カテーテル、若しくは他の好適なチューブなどの他の送達デバイスを更に含み得る。キットは、施術者のための説明書、投与量表、及び他の関連情報を更に含み得る。

キットは、別個の容器内のＡＰＩを微粒子及びビヒクルと組み合わせて、微粒子の投与（例えば、注射）時にＡＰＩのボーラスを提供することができるように、本明細書に記載の様々な実施形態の微粒子と同じ容器内又は別個の容器内のいずれかに１つ以上の追加のＡＰＩ（例えば、局所麻酔剤）を含み得る。他の実施形態では、使用者は、本明細書に記載の様々な実施形態の微粒子と組み合わせることができる１つ以上の追加のＡＰＩを、治療現場で提供することができる。１つの特定の例では、キットは、２ｍｌの１％のリドカイン中にＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを含む、ＩＡ膝注射用の予め充填された注射器を含む。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ及びリドカインは、いくつかの実施形態では、凍結乾燥され、ＩＡ注射前にＰＬＧＡ ＭＰを懸濁し、粉末を溶解する好適なビヒクル（例えば、滅菌生理食塩水又は水）で再構成される。

キットは、複数のパッケージの内容物を再構成するための、及び／又は得られた組成物（例えば、注射可能な組成物）の投与のための指示を提供するための、説明書又は印刷されたしるしを含み得る。例えば、印刷されたしるし上の説明書は、脂肪組織、硬膜外組織、及び標的神経又はその近くの少なくとも１つを含む生物学的組織への注射を指示し得る。

範囲形式で表される値は、範囲の限界として明示的に列挙された数値だけでなく、各数値及び部分範囲が明示的に列挙されているかのように、その範囲内に包含される全ての個々の数値又は部分範囲も含むように柔軟に解釈されるべきである。例えば、「約０．１％～約５％」又は「約０．１％～５％」の範囲は、約０．１％～約５％だけでなく、個々の値（例えば、１％、２％、３％、及び４％）及び示された範囲内の部分範囲（例えば、０．１％～０．５％、１．１％～２．２％、３．３％～４．４％）も含むと解釈されるべきである。別途示されない限り、「約Ｘ～Ｙ」という記述は、「約Ｘ～約Ｙ」と同じ意味を有する。同様に、別途示されない限り、「約Ｘ、Ｙ、又は約Ｚ」という記述は、「約Ｘ、約Ｙ、又は約Ｚ」と同じ意味を有する。

本明細書では、文脈が明確に別途指示しない限り、用語「ａ」、「ａｎ」、又は「ｔｈｅ」は、１つ又は２つ以上を含むように使用される。「又は」という用語は別途示されない限り、非排他的な「又は」を指すように使用される。加えて、本明細書で用いられ、別途定義されない表現又は用語は、説明のみを目的とするものであり、限定するものではないことを理解されたい。セクション見出しの使用は、本明細書を読むのを助けることを意図したものであり、限定するものとして解釈されるべきではない。更に、セクション見出しに関連する情報は、その特定のセクション内又はセクション外で生じ得る。更に、本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及び特許文献は、参照により個別に組み込まれるかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書に記載の方法では、時間的又は操作順序が明示的に列挙されている場合を除き、工程は、本発明の原理から逸脱することなく、任意の順番で実施することができる。更に、明示的な請求項の用語がそれらを別個に実施することを列挙しない限り、指定された工程を同時に実施することができる。例えば、Ｘを行う特許請求された工程及びＹを行う特許請求された工程は、単一の操作内で同時に実施され得、結果として生じるプロセスは、特許請求されたプロセスの文字通りの範囲内に入るであろう。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、値又は範囲、例えば、記載された値又は記載された範囲の限界の１０％以内、５％以内、又は１％以内の変動の程度を可能にし得る。

本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、９９．９９％、若しくは少なくとも約９９．９９９％以上にあるような、多数若しくは大部分を指す。

実施例１：ＡＴＲＡは、エクスビボでマウス及びヒトＴ細胞におけるＴ_ｒｅｇ分化及び安定性を促進する。
Ｔ_ｒｅｇ細胞の増強に対するＡＴＲＡの効果を試験するために、サイトカイン補充を使用したＴｈ１７炎症状態におけるエクスビボ分化及び安定化アッセイを行った（図１Ａ）。ナイーブＳＫＧ ＣＤ４＋Ｔ細胞を単離して、９０％超のＣＤ４＋ＣＤ４４－ＣＤ６２Ｌ＋濃縮後（データは示さず）を一貫して得た。続いて、これらの細胞を、Ｔｈ１７分極化サイトカインＩＬ－６、ＴＧＦ－β１、ＩＬ－１β、及びＩＬ－２３と共に、抗マウスＣＤ３（αＣＤ３）及びＣＤ２８（αＣＤ２８）抗体で刺激し、４日後に免疫表現型を分析した。条件のサブセットにおいて、ＡＴＲＡを、１０ｐＭ～１０ｎＭの範囲のＴ細胞培養培地に添加した。ＡＴＲＡは、濃度依存的にＦｏｘＰ３を差次的に上方制御し、ＩＬ１７Ａ発現を抑制した（データは示さず）。１００ｐＭを超えると、ＡＴＲＡは一貫してＦｏｘＰ３発現を増強した（４０．０±３．４％）が、１００ｐＭ未満では、Ｔ細胞の１１．２±２．３％がＦｏｘＰ３を発現した（図１Ｂ）。ＩＬ－１７Ａ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合は、１０ｐＭのＡＴＲＡで対照と同等（９．５±１．７％対１１．３±１．５％）であったが、１００ｐＭのＡＴＲＡ濃度（７．２±１．５％）、１ｎＭのＡＴＲＡ濃度（５．４±１．９％）、及び１０ｎＭのＡＴＲＡ濃度（５．４±２．３％）は、ＩＬ－１７Ａの発現を低減し、ピーク効果は１ｎＭであった（図１Ｃ）。ＩＬ－１７Ａの発現の低減に加えて、ＲＯＲγｔ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合は、０ｎＭのＡＴＲＡ（７３．３±３．９％）に曝露した細胞と比較して、１ｎＭのＡＴＲＡ条件（５３．３±７．９％）で低減した（図１Ｄ）。

次に、ヒトＴ細胞に対するＡＴＲＡの効果を評価した（データは示さず）。ナイーブヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を、末梢健康ヒトドナー血から単離し、一貫して、濃縮後９０％超のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯＣＤ６２Ｌ＋を得た。その後、これらの細胞を、ＩＬ－６、ＴＧＦ－β１、ＩＬ－１β、ＩＬ－２３、及びＩＬ－２１と共に、抗ヒトＣＤ３及びＣＤ２８抗体で刺激した。実験条件のサブセットにおいて、ＡＴＲＡを、上記のように、１０ｐＭ～１０ｎＭの範囲の濃度でヒトＴ細胞拡大培地に添加した。ヒトＴ細胞におけるＴｈ１７及びＴ_ｒｅｇ誘導に対するＡＴＲＡの差次的効果を表すために、ＩＬ－１７Ａ＋Ｔ細胞のＦｏｘＰ３＋Ｔ細胞に対する比率を比較した。１ｎＭのＡＴＲＡでは、１人のドナーにおけるＩＬ－１７＋：ＦｏｘＰ３＋細胞の比率は、それぞれ、ＡＴＲＡなし及び１０ｐＭのＡＴＲＡにおける４．８７：１±０．０２及び４．０２：１±０．９９と比較して、２．６８：１±０．４７であった（データは示さず）。

Ｔ_ｒｅｇのエクスビボ安定性の維持に対するＡＴＲＡの効果は、以前に確立されたＴ_ｒｅｇ細胞安定性アッセイ後に定量化した。ＳＫＧ ＦｏｘＰ３ｅＧＦＰ Ｔ_ｒｅｇ細胞をフローサイトメトリー（ＴＣＲ－β＋ＣＤ４＋ｅＧＦＰ＋）によって選別し、ＩＬ６の存在下で、１ｎＭのＡＴＲＡの有無にかかわらず、７２時間、αＣＤ３及びαＣＤ２８で刺激した（図１Ｅ）。細胞培養培地へのＡＴＲＡの添加は、Ｔ_ｒｅｇ細胞の安定性を増強し、７１．６±５．５％の細胞がＦｏｘＰ３ｅＧＦＰ発現を保持し、５６．４±２．２％を有意に上回る細胞が、細胞培養培地中で、ＡＴＲＡの不在下でＦｏｘＰ３ｅＧＦＰ発現を保持した（図１Ｆ）。ＦｏｘＰ３発現の喪失は、Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ細胞表現型へのＴ_ｒｅｇ細胞遷移と相関し、１ｎＭのＡＴＲＡで培養した１１．６±１．８％及び５．７±１．１％の細胞と比較して、ＡＴＲＡなしの細胞の２３．０±１．７％及び１３．３±１．５％が、それぞれ、ＲＯＲγｔ及びＩＬ－１７を発現した（図１Ｇ及びＨ）。

実施例２：ポリ－（乳－ｃｏ－グリコール）酸微粒子は、生体活性ＡＴＲＡ放出を維持する。
炎症した関節における関節内（ＩＡ）薬物送達のための徐放性ＡＴＲＡを製剤化するために、ＩＡ注射可能な微粒子（ＭＰ）を、単一のエマルション法を使用してポリ－（乳－ｃｏ－グリコール）酸（ＰＬＧＡ）から製造して、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを生成した（図２Ａ）。凍結乾燥したＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの走査電子顕微鏡を使用して、表面形態を特徴付けた。一般に、初期のＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの表面のテクスチャを、均一にした（図２Ｂ、２Ｄ、及び２Ｆ）。均質化速度を制御することにより、粒子を生成し、粒子のサイズ及び分布（３つのバッチにわたって体積平均直径は１０．６±０．７μｍ、６．５±０．４μｍ、及び３．９±０．４μｍであり、及び全ての条件における各バッチ内の多分散性指数は
０．３０であった）を定量化した（それぞれ、図２Ｃ、２Ｅ、及び２Ｇ）。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、６２．４±３．２％の充填効率を有し、これは約１．２重量％のＡＴＲＡの組成物をもたらす。インビトロでのＡＴＲＡ放出を定量化するために、１０ｍｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを、ＰＢＳ中の１ｍｌの０．１％のＢＳＡ中に懸濁し、３７℃でインキュベートし、放出上清を所定の時点で２８日間にわたって収集した。ＡＴＲＡの約１３％は、最初の２４時間以内に放出された（図２Ｄ）。２４～９６時間まで、元のＡＴＲＡ含有量の１０±０．６％、１５±０．２％、及び２２±１．３％が、それぞれ、１０．６μｍ、６．５μｍ、及び３．９μｍの平均直径のＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰから放出された。その後、１日当たり最初に充填されたＡＴＲＡの約０．４％の速度で、次の２４日間、全てのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰからのＡＴＲＡの放出が持続し、これは、１日当たりの粒子１ｍｇ当たり約０．５２ｎｇのＡＴＲＡの放出に対応する。インビトロ分解中の粒子形態の変化を特徴付けるために、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを定期的に収集し、洗浄し、画像化した。粒子は最初に、分解を受ける前に、バルク浸食が構造崩壊をもたらすまで膨張した（データは示さず）。２１日目までに、１０．６μｍの粒子の大部分はその形態を保持したが、６．５μｍの粒子の大部分は浸食を開始し、３．９μｍの粒子の大半は崩壊していた。

ＩＡ注射後の滑液、脾臓、及び末梢血中のＡＴＲＡのインビボ濃度を推定するために、インビトロ放出プロファイルに基づいて２コンパートメン薬物動態モデルを開発した（データは図示さず）。ＡＴＲＡの体内分布は、一次速度方程式、並びに以前に報告された、血清及び滑膜透過性データ（データは示さず）におけるＡＴＲＡ半減期の実験的に測定された動態パラメータを使用して近似した。このモデルは、最初のスパイクの後、６．５μｍのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで、関節内の濃度が少なくとも２８日間、６ｎＭ超で維持されたことを示した。末梢血中のＡＴＲＡの濃度は、生理学的に関連する値（＜２０ｐＭ）（データは示さず）を下回った。モデル及び分解プロファイルに基づいて、更なる評価のために、６．５μｍのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを選択した。

放出されたＡＴＲＡの生体活性を、１日目、１４日目、及び２８日目に収集された上清、及び約２０μＬの滑液中に注射された２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの送達に基づいて予想される関節濃度に希釈した複製物を用いて、図１Ａに概説された実験概略図に従って評価した。３つ全ての時点で収集されたＡＴＲＡの生体活性は、ＦｏｘＰ３発現を増加させ、ＩＬ－１７発現を低減するマウスＴｈ１７の９つの分化アッセイからの結果に匹敵する、新しく調製された１ｎＭのＡＴＲＡに匹敵した（図２Ｉ）。放出されたＡＴＲＡはまた、１ｎＭのＡＴＲＡに匹敵するＴ_ｒｅｇ細胞を安定化しＦｏｘＰ３発現を改善し、同時にＩＬ－１７発現を抑制した（図２Ｊ）。ヒトＴｈ１７分化アッセイにおいて、放出されたＡＴＲＡはまた、１ｎＭのＡＴＲＡに匹敵する生体活性を保持した（図２Ｋ）。

実施例３．ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、ＳＫＧ関節炎における関節炎症を抑制する。
確立されたＳＫＧ関節炎を調節することの実現可能性を評価するために、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを、重篤な症状を発達させる前の、中期の関節炎を有する１０匹のＳＫＧマウスの脛骨／足根足首の関節に注射した。中期の関節炎を有する１１匹のＳＫＧマウスの脛骨／足根足首の関節にＰＬＧＡブランクＭＰを注射した。関節炎の発症は、腹腔内（ＩＰ）マンナン注射を使用して同期させた。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置を、確立されたＳＫＧ関節炎に対応する１４日後に投与した（図３Ａ）。インビボでＭＰ分解を追跡するために、シアニン－５（Ｃｙ５）コンジュゲートＰＬＧＡを組み込み、ＡＴＲＡなしで蛍光標識されたＣｙ５ ＰＬＧＡ ＭＰ及びＰＬＧＡ ＭＰ（ＰＬＧＡブランクＭＰ）を生成した。ＰＬＧＡブランクＭＰを、生存動物インビボ画像化システム（ＩＶＩＳ）を使用して画像化した。ＳＫＧ関節炎の抑制における持続的ＡＴＲＡ放出の役割を決定するために、ＩＡ注射されたＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを、溶液中のボーラスＡＴＲＡの用量一致ＩＡ注射と比較した。マウスは、ＩＡ注射を介して単一の足首関節（同側足首）に２０μＬの滅菌リン酸緩衝生理食塩水ＰＢＳに懸濁した２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを受けた。対側後足関節（対側足首）に、同様の方法で、２０μＬの滅菌ＰＢＳ中のＣｙ５ ＰＬＧＡブランクＭＰを注射した。２０μＬの減菌トウモロコシ油に懸濁した用量一致ボーラスＡＴＲＡを、対照マウスの同側足首に注射した。対側後足関節（対側足首）に、同様の方法で、２０μＬの滅菌ＰＢＳ中のＣｙ５ ＰＬＧＡブランクＭＰを注射した。蛍光減衰に基づき、ＭＰは、注射後も関節内に局在したままであり、研究の過程で着実に分解された（図３Ｂ）。処置群間の隔週の臨床スコアリングを使用して、関節炎の進行を定量化した。マウスの処置前臨床スコアは、群間で同等であり、これは、手首及び足首の関節の両方で観察された軽度の腫脹を伴う処置前の１４日目に初期スコア０から平均スコア３．５に急速に増加した。指の大部分は、全ての群で腫れていた（図３Ｃ～Ｆ）。関節炎の重症度は、ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスにおいて抑制された。対照的に、用量一致ＩＡボーラスＡＴＲＡで処置したマウスは、臨床利益を実証しなかった。関節炎の抑制に対するＡＴＲＡの効果を確立するために、ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰを、ＳＫＧマウスにおけるＡＴＲＡなしのＰＬＧＡ ＭＰ（ＰＬＧＡブランクＭＰ）のＩＡ注射と比較した。両群は、上記で報告された結果と同様に、処置前の１４日目の平均スコアが３．５であった（図３Ｇ）。２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの単回ＩＡ注射による処置の４日後（Ｄ１８：３．１±０．３）及び１週間後（Ｄ２１：２．５±０．４）、マウスにおいて臨床スコアが低下し、研究エンドポイントまで（Ｄ３５：２．２±０．９）安定したままであった。スコアは、同じ時点（Ｄ１８：４．０±０．５、Ｄ２１：４．４±０．８、Ｄ３５：４．７±１．０）で測定されたＰＬＧＡブランクＭＰ処置マウスのスコアよりも有意に低かった。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスとは対照的に、ＰＬＧＡブランクＭＰ処置マウスの臨床スコアは、研究の期間にわたって増加し続けた。インビボでＡＴＲＡの用量依存性効果があったかどうかを評価するために、マウスのサブセットは、２０μｇ又は２００μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのいずれかのより高い用量を受けた。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置した全ての群の臨床スコアリングは、同等であった（図６Ａ）。上述の研究の同側関節及び対側関節の両方において、臨床スコア及び足首厚さの測定値の改善を定量化した（図３Ｈ～Ｊ、図６Ｂ及びＣ）。２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスにおける後足の足首の厚さは、処置後も安定したままか、又は減少した。対照的に、臨床スコアは、ＩＡボーラスＡＴＲＡ及びＰＬＧＡブランクＭＰ処置マウスの同側足首及び対側足首の両方で比較的増加した。

実施例４．ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、滑膜浸潤、軟骨損傷、及び骨びらんを減少させる。
関節炎性ＳＫＧ関節における骨及び組織のびらんを評価するために、マウスの同側足首を、ＰＬＧＡブランク又はＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのいずれかで処置した。マウスの対側足首は、両方の処置群において、リン酸緩衝生理食塩水の偽注射を受けた。マウスを、３５日目に屠殺した後、組織学のために処理した。関節炎の足首関節切片のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色は、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスの関節における細胞充実性が、ＰＬＧＡブランクＭＰ処置マウスからの関節と比較して低減したことを示した（図５Ａ）。マウスコラーゲン誘導性関節炎（「ＣＩＡ」）の標準化顕微鏡的関節炎スコアリング（「ＳＭＡＳＨ」）スコアリングについて最近公開されたガイドラインに触発されて、細胞浸潤の定量化を容易にするために、組織閾値化及び細胞検出／分類のデフォルト設定を使用して、コンピュータ支援アルゴリズムをＱｕＰａｔｈソフトウェアで生成した。軟骨プロテオグリカン（ＰＧ）喪失及び骨びらん（ＢＥ）スコアリングを、ＳＭＡＳＨが推奨する配向足首関節切片上で行った。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置したマウスからの足首は、ＰＬＧＡブランクＭＰを受けたマウスと比較して、免疫細胞の数が有意に低減した（図５Ｂ）。滑膜の炎症及び浸潤の程度は、同じ処置群の対側後部関節と同側後部関節との間で同等であった（図５Ｃ）。ＰＬＧＡブランクＭＰ処置マウスからの足首切片のサフラニン－Ｏ染色を使用して、それぞれ、２．８±０．４及び１．８±０．４であったプロテオグリカン（ＰＧ）喪失及び骨びらん（ＢＥ）をスコア化した（図４Ｄ及びＥ）。２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスのＰＧ及びＢＥスコアは、それぞれ、１．４±０．５及び１．０±０．８であった。２０及び２００μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスのＰＧ及びＢＥスコアは、２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスのスコアに匹敵した（データは示さず）。これらの結果は、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰが、処置マウスにおける同側足首及び偽注射された対側足首の両方において、ＢＥ及びＰＧ喪失に対する保護を付与したことを確認した。

実施例５．ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰは、インビトロでＴ_ｒｅｇ細胞の安定性を促進する。
運命マッピングマウスにおける関節炎の誘導、並びにその後の処置及びエンドポイントを示す概略図を示す（図７Ａ）。タモキシフェン給餌時に、Ｔ_ｒｅｇ細胞を含む任意の器官においてＴｄＴｏｍａｔｏ蛍光タンパク質の発現を誘導するタモキシフェンを給餌する運命マッピングマウス。これらの細胞は、死ぬまでＴｄＴｏｍａｔｏ蛍光タンパク質を発現し続け、したがって、細胞がｅｘ－Ｔ_ｒｅｇに不安定化された場合（ＦｏｘＰ３発現を失い、ＩＬ－１７発現を得る）でも、Ｔ_ｒｅｇ細胞を有する全ての器官を示し、すなわち、Ｔ_ｒｅｇ細胞の運命を「マッピング」する。ＩＬ－１７発現は、運命マッピングマウスの脾臓（図７Ｂに示す）、流入領域リンパ節（図７Ｃに示す）、又は足首（図７Ｄに示す）から単離したｔｄＴｏｍａｔｏ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞によって定量化した。対になった点は同腹仔を表し、一方の同腹仔をＰＬＧＡブランクＭＰでＩＡ処置し、他方の同腹仔をＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰでＩＡ処置した。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰで処置されたマウスは、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置された脾臓においてではなく、足首及び流入領域リンパ節において、ＩＬ－１７発現細胞に不安定化されたＴ_ｒｅｇ細胞をあまり含まない。

実施例６．ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ治療は、全般的な免疫抑制なしで有効である。
ＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰによって誘導される局所Ｔ_ｒｅｇ細胞増強がＴ細胞媒介応答の全身阻害をもたらすかどうかを評価するために、２μｇのＰＬＧＡブランクＭＰ又は２μｇのＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰのいずれかで処置された関節炎のＳＫＧマウスのＴ細胞依存性抗原による免疫化に対する応答を測定した。一次免疫化は、ＩＡ注射の３日後の完全なフロイントアジュバントにおける、ＳＫＧ関節炎に関連しない抗原である卵白アルブミン（ＯＶＡ）のエマルションの皮下注射、続いて不完全なフロイントアジュバントにおけるＯＶＡからなる１０日後のブースター免疫化からなる（図６Ａ）。このＯＶＡ免疫化経路は、強力な抗ＯＶＡ ＩｇＧ１抗体応答をもたらすことが知られているため、末梢血中のプライミング後及びブースター後の抗ＯＶＡ ＩｇＧ１抗体濃度を定量化した。関節炎を伴わない健康な非免疫化ＳＫＧマウスを使用して、ベースライン免疫応答を定量化した。臨床スコアリングによって評価される関節炎の進行は、ＰＬＧＡブランクＭＰ及びＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰマウスの両方におけるプライム免疫化又はブースト免疫化のいずれによって影響を受けず、非免疫化マウスと類似した（図８Ｂ）。血漿抗ＯＶＡ ＩｇＧ１抗体力価は、ＰＬＧＡブランクＭＰとＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置マウスとの間で同等であり、両群は、高い抗体力価をもたらしたが、非免疫化マウスにおける抗体力価は、検出限界を下回った（図８Ｃ）。脾臓及び流入領域リンパ節のフローサイトメトリーにより、Ｔｈ１（生＋ＣＤ４＋ＩＦＮγ＋）及びＴｈ２（生＋ＣＤ４＋ＩＬ－４＋）細胞の総数及び割合が、ＰＬＧＡブランクＭＰ処置群とＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置群との間で同等であったことが確認された（データは示さず）。

関節炎に関連しないＴ細胞抑制に対するＩＡ ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの効果を定量化するために、我々は、Ｈ２ｂバックグラウンドマウスにおいてＴ細胞を定量化するために利用可能なＯＶＡ特異的四量体を利用し、健康なＣ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｂ６）マウスにおいて前述の免疫化研究を行った（図８Ｄ）。全身投与されたＡＴＲＡは、全身曝露の効果を評価するために、毎日の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射として送達された。ＩＡ ＰＬＧＡＡＴＲＡ ＭＰ処置マウスにおける抗ＯＶＡ ＩｇＧ１応答は、力価において、処置を受けなかった免疫化マウス及び毎日ＡＴＲＡ注射を受けたマウスにおける応答と同等であった（図８Ｅ）。ＯＶＡ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｉ－Ａ（ｂ）ＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮ四量体染色（ＮＩＨ Ｔｅｔｒａｍｅｒ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙ）によって定量化されるように、脾臓においてＡＴＲＡの毎日のｉ．ｐ．投与後に有意に低かったが、ＩＡ注射されたＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの単回用量は、未処置の免疫化マウスと比較して、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を損なわなかった（図８Ｆ）。

実施例７．ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ及びボーラスＡＴＲＡは、皮下投与された場合、臨床スコアを改善しない。
ＳＫＧマウスの処置における皮下投与されたＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰの有効性を評価して、ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰが全身放出を介して作用するかどうか、その場合、皮下ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置が疾患スコアを改善するか、又はＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ処置が局所的に作用するか、その場合、関節内空間へのその送達が疾患スコアを改善するかを決定した。ＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰ、トウモロコシ油中の用量一致ボーラスＡＴＲＡ、及びビヒクル（トウモロコシ油）を、関節炎ＳＫＧに、ＳＫＧマウスの肩甲骨間に皮下投与した（図９Ａ～Ｂ）。ボーラスＡＴＲＡもＡＴＲＡ封入ＰＬＧＡ ＭＰも、臨床スコア（図９Ａ）又は足首腫脹（図９Ｂ）において改善をもたらさなかった。

実施例８．ＡＴＲＡによるＣＤ４＋Ｔ細胞の前処理は、Ｔｈ１７誘導条件に曝露した後、ＦＯＸＰ３発現を増加させ、ＩＬ－１７発現を低減する。
図１０Ａは、何もしない（なし）、１ｎＭのＡＴＲＡ（ＡＴＲＡ）、又はＩＬ－２のいずれかで２４時間前処理し、続いて細胞の除去及び洗浄、並びにＴｈ１７誘導条件への移行を行った後のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＦＯＸＰ３発現の定量化を示す。図１０Ｂは、何もしない（なし）、１ｎＭのＡＴＲＡ（ＡＴＲＡ）、又はＩＬ－２のいずれかで２４時間前処理し、続いて細胞の除去及び洗浄、並びにＴｈ１７誘導条件への移行を行った後のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ－１７発現の定量化を示す。ＡＴＲＡによるＣＤ４＋Ｔ細胞の前処理は、Ｔｈ１７誘導条件に曝露した後、ＦＯＸＰ３発現を増加させ、ＩＬ－１７発現を低減する。この実施例は、機能濃度でのＡＴＲＡへの事前曝露が、機能濃度でＡＴＲＡがもはや直接存在しなくても、ＣＤ４＋Ｔ細胞の運命に影響を及ぼし、Ｔ_ｒｅｇ表現型を促進することを実証する。

実施例９．ＡＴＲＡは、Ｔ_ｒｅｇ及びＴｈ１７関連遺伝子座におけるクロマチンのアクセス可能性を調節する。
トランスポザーゼによる網羅的オープンクロマチン（ＡＴＡＣ）配列決定アッセイは、高活性タンパク質を使用して、開放クロマチン領域内のＤＮＡに結合し、スニップして、転写のためにアクセス可能なＤＮＡの部分をプローブする。ＡＴＡＣアッセイを実施して、ＡＴＲＡが細胞ＤＮＡにエピジェネティック修飾を引き起こして、転写のためのＤＮＡのアクセス可能性に影響を及ぼすかを決定し、ひいては、細胞の「デフォルト」状態／プログラムである何かを調節する。差次的にアクセス可能な領域（ＤＡＲ）の定量化は、（ＡＴＲＡで処理した）又はなし（Ｔｈ１７対照）の１ｎＭのＡＴＲＡでＴｈ１７誘導条件で培養した細胞間のピーク当たりの計数によって示される。（図１１Ａ）。「差次的にアクセス可能な」ＤＮＡの定量化は、Ｔｈ１７対照においてより開いているＤＮＡ内に１０３１６個の領域があり、ＡＴＲＡ処置細胞においてより開いているＤＮＡ内に７９５７個の領域があることを示す。３つの群のＤＡＲ（共通、Ｔｈ１７対照＞ＡＴＲＡ処理、ＡＴＲＡ処理＞ Ｔｈ１７対照）のピーク当たりの計数の定量化は、異なる領域のピーク当たりの計数の差の広がりを示す（図１１Ｂ）。

図１１Ｃは、ＡＴＲＡ処理群において強化されたＤＡＲ又はＴｈ１７対照群において強化されたＤＡＲによって行に分類された全てのＤＡＲのヒートマップである。行と比較して、所与の試料におけるＤＡＲのｚスコアを決定することによって、ヒートマッピングを実施した。Ｔｈ１７及びＴ_ｒｅｇ関連遺伝子のゲノムブラウザプロットを示す（図１１Ｄ）。ピークのサイズは、リードの数に対応するため、ピークが大きいほど、ＤＮＡの領域にアクセスしやすくなる。非常に関連性の高い遺伝子（ＦｏｘＰ３、ＲＯＲｃ、ＩＬ－１７Ａ、及びＩＬ－６ＲＡ）に対応する４つのプロットが示され、ＡＴＲＡ処理細胞及びＴｈ１７対照細胞の両方の平均ピークが視覚化される（図１１Ｄ）。ＦｏｘＰ３では、青のピークがより大きいことがわかり、ＡＴＲＡがＦｏｘＰ３のアクセス可能性を促進することがわかる。次の３つ（ＲＯＲｃ ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－６ＲＡ）では、拡大すると、緑のピークがはるかに大きく（いくつかは非常に大きいため切断される）、炎症促進性遺伝子領域に対応するこれらの部位がはるかにアクセスしやすいことがわかり得る。

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１３．Ｐａｎｄｉｙａｎ Ｐ，Ｚｈｕ Ｊ．Ｏｒｉｇｉｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．２０１５；７６（１）：１３－２４．
１４．Ｋｉｍｕｒａ Ａ，Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ．ＩＬ－６：ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｔｒｅｇ／Ｔｈ１７ ｂａｌａｎｃｅ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１０；４０（７）：１８３０－５．
１５．Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ ＧＳ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ？ Ｎａｔｕｒｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２００９；５（１）：１－．
１６．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｔ，Ｈａｔａ Ｈ，Ｎｏｍｕｒａ Ｔ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｎ．ＳＫＧ ｍｉｃｅ，ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ．２００３；５（３）：１－５４．
１７．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｔ，Ｈａｔａ Ｈ，Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ Ｈ，Ｔａｎａｋａ Ｓ，Ｈｉｒｏｔａ Ｋ，Ｎｏｍｕｒａ Ｔ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｎ．ＳＫＧ ｍｉｃｅ，ａ ｍｏｎｏｇｅｎｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｄｕｅ ｔｏ ａｌｔｅｒｅｄ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｔ－ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；２００６．ｐ．１４７－５９．
１８．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｎ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｔ，Ｈａｔａ Ｈ，Ｎｏｍｕｒａ Ｔ，Ｔａｇａｍｉ Ｔ，Ｙａｍａｚａｋｉ Ｓ，Ｓａｋｉｈａｍａ Ｔ，Ｍａｔｓｕｔａｎｉ Ｔ，Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｉ，Ｎａｋａｔｓｕｒｕ Ｓ．Ａｌｔｅｒｅｄ ｔｈｙｍｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｄｕｅ ｔｏ ａ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＺＡＰ－７０ ｇｅｎｅ ｃａｕｓｅｓ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．２００３；４２６（６９６５）：４５４－６０．
１９．Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｎ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｔ，Ｈａｔａ Ｈ，Ｎｏｍｕｒａ Ｔ，Ｔａｇａｍｉ Ｔ，Ｙａｍａｚａｋｉ Ｓ，Ｓａｋｉｈａｍａ Ｔ，Ｍａｔｓｕｒｔａｎｉ Ｔ，Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｉ，Ｎａｋａｔｓｕｒｕ Ｓ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ．Ａｌｔｅｒｅｄ ｔｈｙｍｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ４１ ｄｕｅ ｔｏ ａ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＺＡＰ－７０ ｇｅｎｅ ｃａｕｓｅｓ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．２００３；４２６（６９６５）：４５４－６０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０２１１９．ＰｕｂＭｅｄ ＰＭＩＤ：ＷＯＳ：０００１８６８００８０００４１．
２０．Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ＬＡ，Ｈｏｙｔ ＫＪ，Ｌｅｅ ＰＹ，Ｒａｏ ＤＡ，Ｊｏｎｓｓｏｎ ＡＨ，Ｎｇｕｙｅｎ ＪＰ，Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ Ｋ，Ｊｕｌｅ ＡＭ，Ｃｈａｒｂｏｎｎｉｅｒ Ｌ－Ｍ，Ｃａｓｅ Ｓ．Ｔｈ１７ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＪＣＩ ｉｎｓｉｇｈｔ．２０２０；５（６）．
２１．Ｓｖｅｎｓｓｏｎ ＭＮ，Ｄｏｏｄｙ ＫＭ，Ｓｃｈｍｉｅｄｅｌ ＢＪ，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ Ｓ，Ｐａｎｗａｒ Ｂ，Ｗｉｅｄｅ Ｆ，Ｙａｎｇ Ｓ，Ｓａｎｔｅｌｌｉ Ｅ，Ｗｕ ＤＪ，Ｓａｃｃｈｅｔｔｉ Ｃ．Ｒｅｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ＰＴＰＮ２ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ Ｔｒｅｇｓ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．２０１９；１２９（３）：１１９３－２１０．
２２．Ｈｓｉｅｈ Ｗ－Ｃ，Ｓｖｅｎｓｓｏｎ ＭＮ，Ｚｏｃｃｈｅｄｄｕ Ｍ，Ｔｒｅｍｂｌａｙ ＭＬ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｓ，Ｓｔａｎｆｏｒｄ ＳＭ，Ｂｏｔｔｉｎｉ Ｎ．ＰＴＰＮ２ ｌｉｎｋｓ ｃｏｌｏｎｉｃ ａｎｄ ｊｏｉｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＪＣＩ ｉｎｓｉｇｈｔ．２０２０；５（２０）．
２３．Ｓｐｒｏｕｓｅ ＭＬ，Ｂａｔｅｓ ＮＡ，Ｆｅｌｉｘ ＫＭ，Ｗｕ ＨＪＪ．Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｏｎ ｇｕｔ－ｄｉｓｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ：ａ ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１９；１５６（４）：３０５－１８．
２４．Ｚａｉｓｓ ＭＭ，Ｗｕ Ｈ－ＪＪ，Ｍａｕｒｏ Ｄ，Ｓｃｈｅｔｔ Ｇ，Ｃｉｃｃｉａ Ｆ．Ｔｈｅ ｇｕｔ－ｊｏｉｎｔ ａｘｉｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２０２１；１７（４）：２２４－３７．
２５．Ｎｏｚａｋｉ Ｙ，Ｙａｍａｇａｔａ Ｔ，Ｓｕｇｉｙａｍａ Ｍ，Ｉｋｏｍａ Ｓ，Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ Ｋ，Ｆｕｎａｕｃｈｉ Ｍ．Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｌ－ｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００６；１１９（３）：２７２－９．
２６．Ｅｌｉａｓ ＫＭ，Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ａ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ ＴＳ，Ｓｔｅｐｈｅｎｓ Ｇ，Ｋａｎｎｏ Ｙ，Ｓｈｅｖａｃｈ ＥＭ，Ｏ’Ｓｈｅａ ＪＪ．Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｔｈ１７ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ＦｏｘＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ４２ Ｓｔａｔ－３／Ｓｔａｔ－５ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ．Ｂｌｏｏｄ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ．２００８；１１１（３）：１０１３－２０．
２７．Ｋｗｏｋ Ｓ－Ｋ，Ｐａｒｋ Ｍ－Ｋ，Ｃｈｏ Ｍ－Ｌ，Ｏｈ Ｈ－Ｊ，Ｐａｒｋ Ｅ－Ｍ，Ｌｅｅ Ｄ－Ｇ，Ｌｅｅ Ｊ，Ｋｉｍ Ｈ－Ｙ，Ｐａｒｋ Ｓ－Ｈ．Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２；１８９（２）：１０６２－７１．
２８．Ｈｕｒｔｉｇ Ｍ，Ｚａｇｈｏｕｌ Ｉ，Ｓｈｅａｒｄｏｗｎ Ｈ，Ｓｃｈｍｉｄｔ ＴＡ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｅｌｓａｉｄ ＫＡ，Ｊａｙ ＧＤ．Ｔｗｏ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ｄｅｓｃｒｉｂｅｓ ｔｈｅ ｉｎｔｒａ－ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｐｒｇ４ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ＡＣＬ ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｙｕｃａｔａｎ ｍｉｎｉ ｐｉｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（登録商標）．２０１９；３７（２）：３８６－９６．
２９．Ｊｉｎｇ Ｊ，Ｎｅｌｓｏｎ Ｃ，Ｐａｉｋ Ｊ，Ｓｈｉｒａｓａｋａ Ｙ，Ａｍｏｒｙ ＪＫ，Ｉｓｏｈｅｒｒａｎｅｎ Ｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｂａｓｅｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｌｌ－ｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｗｉｔｈ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｃａｎｃｅｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２０１７；３６１（２）：２４６－５８．
３０．Ｈａｙｅｒ Ｓ，Ｖｅｒｖｏｏｒｄｅｌｄｏｎｋ ＭＪ，Ｄｅｎｉｓ ＭＣ，Ａｒｍａｋａ Ｍ，Ｈｏｆｆｍａｎｎ Ｍ，Ｂａｃｋｌｕｎｄ Ｊ，Ｎａｎｄａｋｕｍａｒ ＫＳ，Ｎｉｅｄｅｒｒｅｉｔｅｒ Ｂ，Ｇｅｋａ Ｃ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ａ．‘ＳＭＡＳＨ’ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｓｔａｎｄａｒｄｉｓｅｄ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｓｃｏｒｉｎｇ ｏｆ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ．２０２１；８０（６）：７１４－２６．
３１．Ｍｕｃｉｄａ Ｄ，Ｐａｒｋ Ｙ，Ｋｉｍ Ｇ，Ｔｕｒｏｖｓｋａｙａ Ｏ，Ｓｃｏｔｔ Ｉ，Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ Ｍ，Ｃｈｅｒｏｕｔｒｅ Ｈ．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ ＴＨ１７ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００７；３１７（５８３５）：２５６－６０．
３２．Ｘｉａｏ Ｓ，Ｊｉｎ Ｈ，Ｋｏｒｎ Ｔ，Ｌｉｕ ＳＭ，Ｏｕｋｋａ Ｍ，Ｌｉｍ Ｂ，Ｋｕｃｈｒｏｏ ＶＫ．Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈ１７ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ４３ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ＴＧＦ－β－ｄｒｉｖｅｎ Ｓｍａｄ３ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ＩＬ－６ ａｎｄ ＩＬ－２３ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００８；１８１（４）：２２７７－８４．
３３．Ｂａｉ Ａ，Ｌｕ Ｎ，Ｇｕｏ Ｙ，Ｌｉｕ Ｚ，Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｐｅｎｇ Ｚ．Ａｌｌ－ｔｒａｎｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｓｈｉｆｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｔｒｅｇ／Ｔｈ１７ ｐｒｏｆｉｌｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ ａｎｄ ｍｕｒｉｎｅ ｃｏｌｉｔｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｂｉｏｌｏｇｙ．２００９；８６（４）：９５９－６９．
３４．Ｂｉｒｄ Ｈ，Ｍｏｌｌ Ｊ，Ｒｕｓｈｔｏｎ Ａ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ；２０１３．
３５．Ｈａｔａ Ｈ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ Ｎ，Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ Ｈ，Ｉｗａｋｕｒａ Ｙ，Ｓｅｋｉｋａｗａ Ｋ，Ａｚｕｍａ Ｙ，Ｋａｎａｉ Ｃ，Ｍｏｒｉｉｚｕｍｉ Ｅ，Ｎｏｍｕｒａ Ｔ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｔ．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－６，ＴＮＦ－α，ＩＬ－１，ａｎｄ ＩＬ－１０ ｔｏ Ｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．２００４；１１４（４）：５８２－８．
３６．Ｌｕ Ｌ，Ｌａｎ Ｑ，Ｌｉ Ｚ，Ｚｈｏｕ Ｘ，Ｇｕ Ｊ，Ｌｉ Ｑ，Ｗａｎｇ Ｊ，Ｃｈｅｎ Ｍ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｓｈｅｎ Ｙ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｌｌ－ｔｒａｎｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｎａｔｕｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｕｎｄｅｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２０１４；１１１（３３）：Ｅ３４３２－Ｅ４０．
３７．Ｎａｇａｔｅ Ｔ，Ｋａｗａｉ Ｊ，Ｎａｋａｙａｍａ Ｊ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ ｏｎ ｚｙｍｏｓａｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ＳＫＧ ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００９；７１（６）：７１３－７．
３８．Ｋｉｍ ＷＵ，Ｌｅｅ ＷＫ，Ｒｙｏｏ ＪＷ，Ｋｉｍ ＳＨ，Ｋｉｍ Ｊ，Ｙｏｕｎ Ｊ，Ｍｉｎ ＳＹ，Ｂａｅ ＥＹ，Ｈｗａｎｇ ＳＹ，Ｐａｒｋ ＳＨ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙ （ｌａｃｔｉｃ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ）ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｅｎｔｒａｐｐｉｎｇ ｔｙｐｅ ＩＩ ｃｏｌｌａｇｅｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ４４ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ：Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２００２；４６（４）：１１０９－２０．
３９．Ｂａｓｓｉｎ ＥＪ，Ｂｕｃｋｌｅｙ ＡＲ，Ｐｉｇａｎｅｌｌｉ ＪＤ，Ｌｉｔｔｌｅ ＳＲ．ＴＲＩ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｐｒｅｖｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ａ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｍｏｄｅｌ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０２０；１５（９）：ｅ０２３９３９６．
４０．Ｊｈｕｎｊｈｕｎｗａｌａ Ｓ，Ｂａｌｍｅｒｔ ＳＣ，Ｒａｉｍｏｎｄｉ Ｇ，Ｄｏｎｓ Ｅ，Ｎｉｃｈｏｌｓ ＥＥ，Ｔｈｏｍｓｏｎ ＡＷ，Ｌｉｔｔｌｅ ＳＲ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ－２，ＴＧＦ－β１ ａｎｄ ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ．２０１２；１５９（１）：７８－８４．
４１．Ｌｉａｎｇ Ｄ，Ｚｕｏ Ａ，Ｓｈａｏ Ｈ，Ｂｏｒｎ ＷＫ，Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ＲＬ，Ｋａｐｌａｎ ＨＪ，Ｓｕｎ Ｄ．Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＣＤ２５＋ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ γδ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｕｖｅｉｔｉｓ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ ｖｉｓｕａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３；５４（５）：３４９３－５０３．
４２．Ａｂｔａｈｉ Ｆｒｏｕｓｈａｎｉ ＳＭ，Ｄｅｌｉｒｅｚｈ Ｎ，Ｈｏｂｂｅｎａｇｈｉ Ｒ，Ｍｏｓａｙｅｂｉ Ｇ．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ａｌｌ－ｔｒａｎｓ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ．２０１４；４３（１）：５４－６８．
４３．Ｋｕｒｔｚ ＰＪ，Ｅｍｍｅｒｌｉｎｇ ＤＣ，Ｄｏｎｏｆｒｉｏ ＤＪ．Ｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｌｌ－ｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｒｅｔｉｎｙｌｉｄｅｎｅ ｄｉｍｅｄｏｎｅ ｉｎ Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．１９８４；３０（２）：１１５－２４．
４４．Ｓｎｙｄｅｒ ＪＭ，Ｚｈｏｎｇ Ｇ，Ｈｏｇａｒｔｈ Ｃ，Ｈｕａｎｇ Ｗ，Ｔｏｐｐｉｎｇ Ｔ，ＬａＦｒａｎｃｅ Ｊ，Ｐａｌａｕ Ｌ，Ｃｚｕｂａ ＬＣ，Ｇｒｉｓｗｏｌｄ Ｍ，Ｇｈｉａｕｒ Ｇ．Ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｏｆ Ｃｙｐ２６ａ１ ａｎｄ Ｃｙｐ２６ｂ１ ｄｕｒｉｎｇ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｌｉｆｅ ４５ ｃａｕｓｅｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｌｉｆｅｓｐａｎ，ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ，ｓｐｌｅｎｏｍｅｇａｌｙ，ａｎｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ．２０２０；３４（１２）：１５７８８－８０４．
４５．Ｃｈｏｉ Ｙ，Ｌｅｅ Ｃ，Ｐａｒｋ Ｋ，Ｋｉｍ ＳＹ，Ｋｉｍ ＳＨ，Ｈａｎ Ｓ，Ｋｉｍ ＳＨ，Ｂｙｕｎ Ｙ．Ｓｕｂａｃｕｔｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｌｌ－ｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｌｏａｄｅｄ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００３；５９（３）：３２６－３２．
４６．Ｚｈｕ Ｌ，Ｃｈａｎａｌａｒｉｓ Ａ，Ｌｙｍｐａｎｙ Ｓ，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｔ．Ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｉｎｊｕｒｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐａｒｔ ｂｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｃａｒｔｉｌａｇｅ．２０１７；２５：Ｓ１６８．
４７．Ｋａｎｎｅｇａｎｔｉ Ｋ，Ｓｉｍｏｎ Ｌ．Ｔｗｏ－ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｎｇｉｎｅｅｒｓ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ．２０１１；４５（２）：１０１－５．
４８．ｖａｎ Ｂｅｕｎｉｎｇｅｎ ＨＭ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｋｒａａｎ ＰＭ，Ａｒｎｔｚ ＯＪ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ ＷＢ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ １ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｏｓｔｅｏｐｈｙｔｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｕｒｉｎｅ ｋｎｅｅ ｊｏｉｎｔ．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９４ Ａｕｇ；７１（２）：２７９－９０．
４９．Ｃｏｏｐｅｒ ＷＯ，Ｆａｖａ ＲＡ，Ｇａｔｅｓ ＣＡ，Ｃｒｅｍｅｒ ＭＡ，Ｔｏｗｎｅｓ ＡＳ．Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｂｙ ｉｎｔｒａ－ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２；８９（２）：２４４－２５０．
５０．Ｈｕｂｅｒ，Ｓａｍｕｅｌ，ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈ Ｓｃｈｒａｍｍ．“ＴＧＦ－ｂｅｔａ ａｎｄ ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．”Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．１１．１ （２００６）：１０１４－１０２３．
５１．Ａａｒｔｓ，ｅｔ．ａｌ．，Ｌｏｃａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－β１ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｍｐｒｏｖｅｓ Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ ｂａｌａｎｃｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｊｏｉｎｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｄｕｒｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ．２０２２ Ｆｅｂ；１２：３１８２．

本明細書で参照又は言及される全ての特許及び刊行物は、本発明が属する当業者の技術レベルを示すものであり、そのような参照される各特許又は刊行物は、参照によりその全体が個別に組み込まれるか、又はその全体が本明細書に記載されているかのように、同じ程度に参照により本明細書に具体的に組み込まれる。出願人は、任意のそのような引用された特許又は刊行物からの任意の及び全ての材料及び情報を本明細書に物理的に組み込む権利を留保する。

以下の記述は、本明細書における前述の説明による本発明の様々な実施形態を説明及び要約することを意図している。

記述：
１．患者における炎症性関節炎を治療するための方法であって、
患者の炎症性関節炎に罹患した関節又は関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節に、組成物を直接投与することを含み、組成物が、
生分解性微粒子に少なくとも部分的に封入された調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤を含み、生分解性微粒子が、ＴＧＦ－βを含まない、方法。
２．関節が、炎症性関節炎によって活動的に炎症を起こさない、記述１に記載の方法。
３．患者が、炎症性関節炎の寛解状態にある、記述１に記載の方法。
４．患者が、炎症性関節炎の発症前の段階にある、記述１に記載の方法。
５．生分解性微粒子が、生分解性ポリマーを含む、記述１に記載の方法。
６．ポリマーが、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）である、記述５に記載の方法。
７．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＦＯＸＰ３発現を誘導する、記述１に記載の方法。
８．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストである、記述７に記載の方法。
９．ＲＡＲアゴニストが、全てのトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）である、記述８に記載の方法。
１０．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＩＬ－１０発現を誘導する、記述１に記載の方法。
１１．組成物が、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を更に含み、ＤＭＡＲＤが、微粒子内に封入されている、記述１に記載の方法。
１２．患者に、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を投与することを更に含む、記述１に記載の方法。
１３．ＤＭＡＲＤが、患者に、経口、皮下、又は静脈内投与される、記述１２に記載の方法。
１４．微粒子が、約１重量％～約５重量％のＡＴＲＡを含む、記述９に記載の方法。
１５．生分解性微粒子は、直径が約５μｍ～最大約２０μｍである、記述１に記載の方法。
１６．生分解性微粒子は、直径が約２０μｍ～最大約５０μｍである、記述１に記載の方法。
１７．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤とＤＭＡＲＤとの組み合わせが、炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を相乗的に低減させる、記述１１又は１２に記載の方法。
１８．組成物が、患者の炎症性関節炎に罹患した関節（関節内注射により直接）、炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節、炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は炎症性関節炎に罹患した関節の関節包のうちの少なくとも１つに投与される場合、組成物が、炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させる、記述１に記載の方法。
１９．組成物が、患者における抗炎症性サイトカインの全身産生を増強する、記述１に記載の方法。
２０．組成物が、関節内注射によって炎症性関節炎に罹患した関節に直接投与される場合、又は炎症性関節炎に罹患した関節に関連する流入領域リンパ節に直接投与される場合、組成物が、炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させる、記述１に記載の方法。
２１．機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、炎症促進性Ｔ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、記述２０に記載の方法。
２２．機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、記述２０に記載の方法。
２３．機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、記述５６に記載の方法。
２４．約２μｇ～約２０μｇの組成物が、炎症性関節炎に罹患した関節又は炎症性関節炎に罹患した関節に関連する流入領域リンパ節に直接投与される、記述９及び１４に記載の方法。
２５．約２μｇ～約２００μｇの組成物が、炎症性関節炎に罹患した関節又は炎症性関節炎に罹患した関節に関連する流入領域リンパ節に直接投与される、記述９及び１４に記載の方法。
２６．投与される組成物の用量が、炎症性関節炎に罹患した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させるのに十分であり、かつ患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、記述９及び１４に記載の方法。
２７．投与される組成物の用量が、炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させるのに十分であり、かつ患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、記述９及び１４に記載の方法。
２８．組成物は、組成物が直接投与されなかった患者の少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症の重症度又は骨喪失を低減させる、記述１に記載の方法。
２９．組成物が、患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、記述１に記載の方法。
３０．生分解性微粒子は、組成物が直接投与されなかった患者の炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を低減させるのに十分な時間にわたって、Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の徐放性又は持続性放出を提供する、記述１に記載の方法。
３１．生分解性微粒子が、患者の炎症性関節炎に罹患した関節におけるＴ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を少なくとも２１日間維持する、記述３０に記載の方法。
３２．生分解性微粒子が、患者の炎症性関節炎に罹患した関節におけるＴ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を約３ヶ月間維持する、記述３０に記載の方法。
３３．生分解性微粒子が、マクロファージによる食作用に耐性であるか、又は生分解性微粒子が直接投与された炎症性関節炎に罹患した関節若しくは流入領域リンパ節から脱出する、記述１又は３０に記載の方法。
３４．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＴ細胞のＴ_ｒｅｇ細胞への分化を誘導する、記述１に記載の方法。
３５．生分解性微粒子が、微粒子の表面に吸着されたＴＧＦ－βを有しない、記述１に記載の方法。
３６．患者における炎症性関節炎状態を治療するための方法であって、
患者の炎症性関節炎に罹患した関節、炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節、炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は炎症性関節炎に罹患した関節の関節包のうちの少なくとも１つに、組成物を局所投与することを含み、組成物が、
免疫調節剤であって、炎症性関節炎に罹患した関節の微小環境を変更し、少なくとも１つの他の炎症した関節に全身的に影響を及ぼす、免疫調節剤を含む、方法。
３７．免疫調節剤が、生分解性材料に少なくとも部分的に封入された調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤を含み、生分解性微粒子が、ＴＧＦ－βを含まない、記述３６に記載の方法。
３８．免疫調節剤が、生分解性材料に少なくとも部分的に封入された滑膜線維芽細胞調節剤を含み、薬剤が、ＴＧＦ－βを含まない、記述３６に記載の方法。
３９．免疫調節剤が、生分解性材料に少なくとも部分的に封入された抗原提示細胞調節剤を含み、薬剤が、ＴＧＦ－βを含まない、記述３６に記載の方法。
４０．患者が、炎症性関節炎の寛解状態にある、記述３６に記載の方法。
４１．患者が、炎症性関節炎の発症前の段階にある、記述３６に記載の方法。
４２．生分解性材料が、生分解性ポリマーを含む、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
４３．生分解性ポリマーが、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）である、記述４２に記載の方法。
４４．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＦＯＸＰ３発現を誘導する、記述３７に記載の方法。
４５．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＩＬ－１０発現を誘導する、記述３６に記載の方法。
４６．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストである、記述４４に記載の方法。
４７．ＲＡＲアゴニストが、全てのトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）である、記述４６に記載の方法。
４８．組成物が、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を更に含み、ＤＭＡＲＤが、微粒子内に封入されている、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
４９．患者に、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を投与することを更に含む、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
５０．ＤＭＡＲＤが、患者に、経口、皮下、又は静脈内投与される、記述４９に記載の方法。
５１．微粒子が、約１重量％～約５重量％のＡＴＲＡを含む、記述４７に記載の方法。
５２．微粒子は、直径が約５μｍ～最大約２０μｍである、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
５３．生分解性微粒子は、直径が約２０μｍ～最大約５０μｍである、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
５４．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤とＤＭＡＲＤとの組み合わせが、炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を相乗的に低減させる、記述４８又は４９に記載の方法。
５５．免疫調節剤が、炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させる、記述３６に記載の方法。
５６．免疫調節剤が、患者における抗炎症性サイトカインの全身産生を増強する、記述３６に記載の方法。
５７．免疫調節剤が、炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させる、記述３６に記載の方法。
５８．機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、炎症促進性Ｔ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、記述５７に記載の方法。
５９．機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、記述５７に記載の方法。
６０．機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、記述５７に記載の方法。
６１．約２μｇ～約２０μｇの免疫調節剤が、局所投与される、記述４７又は５１に記載の方法。
６２．約２μｇ～約２００μｇの免疫調節剤が、局所投与される、記述４７又は５１に記載の方法。
６３．患者に投与される免疫調節剤の用量が、炎症性関節炎に罹患した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させるのに十分であり、かつ患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、記述４７又は５１に記載の方法。
６４．患者に投与される免疫調節剤の用量が、炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させるのに十分であり、かつ患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、記述４７又は５１に記載の方法。
６５．免疫調節剤は、免疫調節剤が直接投与されなかった患者の少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症の重症度又は骨喪失を低減させる、記述３６に記載の方法。
６６．組成物が、患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、記述３６に記載の方法。
６７．生分解性微粒子は、組成物が直接投与されなかった患者の炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも３７つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を低減させるのに十分な時間にわたって、Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の徐放性又は持続性放出を提供する、記述１に記載の方法。
６８．生分解性微粒子が、患者の炎症性関節炎に罹患した関節におけるＴ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を少なくとも２１日間維持する、記述６７に記載の方法。
６９．生分解性微粒子が、患者の炎症性関節炎に罹患した関節におけるＴ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を約３ヶ月間維持する、記述６７に記載の方法。
７０．生分解性微粒子が、マクロファージによる食作用に耐性であるか、又は生分解性微粒子が直接投与された炎症性関節炎に罹患した関節若しくは流入領域リンパ節から脱出する、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
７１．Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＴ細胞のＴ_ｒｅｇ細胞への分化を誘導する、記述３７に記載の方法。
７２．生分解性微粒子が、微粒子の表面に吸着されたＴＧＦ－βを有しない、記述３７、３８、又は３９に記載の方法。
７３．患者における炎症性関節炎を治療するための方法であって、
患者の炎症性関節炎に罹患した関節又は炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節に、組成物を直接投与することを含み、組成物が、
生分解性微粒子に少なくとも部分的に封入された調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤から本質的になる、方法。

本明細書に記載の具体的な方法、デバイス、及び組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示的であり、本発明の範囲に対する限定として意図されない。本明細書を考慮すると、他の目的、態様、及び実施形態が、当業者に生じ、特許請求の範囲の範囲によって定義される本発明の趣旨内に包含される。本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、本明細書に開示される本発明に様々な置換及び修正を行うことができることは、当業者には容易に明らかであろう。

本明細書で例示的に説明される本発明は、任意の要素、又は本明細書では必須として具体的に開示されていない制限がない場合に、適切に実施することができる。本明細書に例示的に記載される方法及びプロセスは、適切には、異なる工程の順番で実施することができ、方法及びプロセスは、必ずしも、本明細書又は特許請求の範囲に示される工程の順番に限定されない。

いかなる状況下でも、特許は、本明細書に具体的に開示されている特定の例又は実施形態又は方法に限定されると解釈されてはならない。いかなる状況下でも、特許は、審査官又は特許商標庁の他の職員若しくは従業員による記述によって制限されると解釈されてはならないが、そのような記述が、具体的かつ応答性のある書面で明示的に採用されている条件又は制限である場合は除く。

用いられている用語及び表現は、限定ではなく、説明の用語として使用され、そのような用語及び表現の使用には、示され、説明される特徴又はその一部の任意の等価物を除外する意図はないが、請求される本発明の範囲内で様々な修正が可能であることが認識される。したがって、本発明は、好ましい実施形態及び任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の修正及び変形は、当業者によって行われ得、そのような修正及び変形は、添付の特許請求の範囲及び本発明の記述によって定義される本発明の範囲内であると見なされることが理解されるであろう。

本発明は、本明細書において広範かつ一般的に記載されている。一般的な開示に含まれるより狭い種及び亜属集団のそれぞれも、本発明の一部を形成する。これには、削除された材料が本明細書に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、属から任意の主題を除去する条件又は否定的な制限を伴う本発明の一般的な説明が含まれる。更に、本発明の特徴又は態様が、マーカッシュ群に関して記載されている場合、当業者は、本発明が、それによって、マーカッシュ群の任意の個々のメンバー又はメンバーのサブグループに関しても記載されていることを認識するであろう。

Claims (73)

1. 患者における炎症性関節炎を治療するための方法であって、
   前記患者の炎症性関節炎に罹患した関節又は前記関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節に、組成物を直接投与することを含み、前記組成物が、
   生分解性微粒子に少なくとも部分的に封入された調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤を含み、前記生分解性微粒子が、ＴＧＦ－βを含まない、方法。
2. 前記関節が、前記炎症性関節炎によって活動的に炎症を起こさない、請求項１に記載の方法。
3. 前記患者が、前記炎症性関節炎の寛解状態にある、請求項１に記載の方法。
4. 前記患者が、前記炎症性関節炎の発症前の段階にある、請求項１に記載の方法。
5. 前記生分解性微粒子が、生分解性ポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記ポリマーが、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）である、請求項５に記載の方法。
7. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＦＯＸＰ３発現を誘導する、請求項１に記載の方法。
8. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストである、請求項７に記載の方法。
9. 前記ＲＡＲアゴニストが、全てのトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）である、請求項８に記載の方法。
10. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＩＬ－１０発現を誘導する、請求項１に記載の方法。
11. 前記組成物が、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を更に含み、前記ＤＭＡＲＤが、前記微粒子内に封入されている、請求項１に記載の方法。
12. 前記患者に、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
13. 前記ＤＭＡＲＤが、前記患者に、経口、皮下、又は静脈内投与される、請求項１２に記載の方法。
14. 前記微粒子が、約１重量％～約５重量％のＡＴＲＡを含む、請求項９に記載の方法。
15. 前記生分解性微粒子は、直径が約５μｍ～最大約２０μｍである、請求項１に記載の方法。
16. 前記生分解性微粒子は、直径が約２０μｍ～最大約５０μｍである、請求項１に記載の方法。
17. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤と前記ＤＭＡＲＤとの組み合わせが、前記炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を相乗的に低減させる、請求項１１又は１２に記載の方法。
18. 前記組成物が、前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節（関節内注射により直接）、前記炎症性関節炎に罹患した関節の前記流入領域リンパ節、前記炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は前記炎症性関節炎に罹患した関節の関節包のうちの少なくとも１つに投与される場合、前記組成物が、前記炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させる、請求項１に記載の方法。
19. 前記組成物が、前記患者における抗炎症性サイトカインの全身産生を増強する、請求項１に記載の方法。
20. 前記組成物が、関節内注射によって前記炎症性関節炎に罹患した関節に直接投与される場合、又は前記炎症性関節炎に罹患した関節に関連する前記流入領域リンパ節に直接投与される場合、前記組成物が、前記炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させる、請求項１に記載の方法。
21. 前記機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、炎症促進性Ｔ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、請求項２０に記載の方法。
22. 前記機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、請求項２０に記載の方法。
23. 前記機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、請求項５６に記載の方法。
24. 約２μｇ～約２０μｇの前記組成物が、前記炎症性関節炎に罹患した関節又は前記炎症性関節炎に罹患した関節に関連する前記流入領域リンパ節に直接投与される、請求項９及び１４に記載の方法。
25. 約２μｇ～約２００μｇの前記組成物が、前記炎症性関節炎に罹患した関節又は前記炎症性関節炎に罹患した関節に関連する前記流入領域リンパ節に直接投与される、請求項９及び１４に記載の方法。
26. 投与される前記組成物の用量が、前記炎症性関節炎に罹患した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させるのに十分であり、かつ前記患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、請求項９及び１４に記載の方法。
27. 投与される前記組成物の用量が、前記炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させるのに十分であり、かつ前記患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、請求項９及び１４に記載の方法。
28. 前記組成物は、前記組成物が直接投与されなかった前記患者の少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症の重症度又は骨喪失を低減させる、請求項１に記載の方法。
29. 前記組成物が、前記患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、請求項１に記載の方法。
30. 前記生分解性微粒子は、前記組成物が直接投与されなかった前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を低減させるのに十分な時間にわたって、前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の徐放性又は持続性放出を提供する、請求項１に記載の方法。
31. 前記生分解性微粒子が、前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節における前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を少なくとも２１日間維持する、請求項３０に記載の方法。
32. 前記生分解性微粒子が、前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節における前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を約３ヶ月間維持する、請求項３０に記載の方法。
33. 前記生分解性微粒子が、マクロファージによる食作用に耐性であるか、又は前記生分解性微粒子が直接投与された前記炎症性関節炎に罹患した関節若しくは前記流入領域リンパ節から脱出する、請求項１又は３０に記載の方法。
34. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＴ細胞のＴ_ｒｅｇ細胞への分化を誘導する、請求項１に記載の方法。
35. 前記生分解性微粒子が、前記微粒子の表面に吸着されたＴＧＦ－βを有しない、請求項１に記載の方法。
36. 患者における炎症性関節炎状態を治療するための方法であって、
    前記患者の炎症性関節炎に罹患した関節、前記炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節、前記炎症性関節炎に罹患した関節の近傍の皮下組織、又は前記炎症性関節炎に罹患した関節の関節包のうちの少なくとも１つに、組成物を局所投与することを含み、前記組成物が、
    免疫調節剤であって、前記炎症性関節炎に罹患した関節の微小環境を変更し、少なくとも１つの他の炎症した関節に全身的に影響を及ぼす、免疫調節剤を含む、方法。
37. 前記免疫調節剤が、生分解性材料に少なくとも部分的に封入された調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤を含み、前記生分解性微粒子が、ＴＧＦ－βを含まない、請求項３６に記載の方法。
38. 前記免疫調節剤が、生分解性材料に少なくとも部分的に封入された滑膜線維芽細胞調節剤を含み、前記薬剤が、ＴＧＦ－βを含まない、請求項３６に記載の方法。
39. 前記免疫調節剤が、生分解性材料に少なくとも部分的に封入された抗原提示細胞調節剤を含み、前記薬剤が、ＴＧＦ－βを含まない、請求項３６に記載の方法。
40. 前記患者が、前記炎症性関節炎の寛解状態にある、請求項３６に記載の方法。
41. 前記患者が、前記炎症性関節炎の発症前の段階にある、請求項３６に記載の方法。
42. 前記生分解性材料が、生分解性ポリマーを含む、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
43. 前記生分解性ポリマーが、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）である、請求項４２に記載の方法。
44. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＦＯＸＰ３発現を誘導する、請求項３７に記載の方法。
45. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞においてＩＬ－１０発現を誘導する、請求項３６に記載の方法。
46. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストである、請求項４４に記載の方法。
47. 前記ＲＡＲアゴニストが、全てのトランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）である、請求項４６に記載の方法。
48. 前記組成物が、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を更に含み、前記ＤＭＡＲＤが、前記微粒子内に封入されている、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
49. 前記患者に、疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を投与することを更に含む、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
50. 前記ＤＭＡＲＤが、前記患者に、経口、皮下、又は静脈内投与される、請求項４９に記載の方法。
51. 前記微粒子が、約１重量％～約５重量％のＡＴＲＡを含む、請求項４７に記載の方法。
52. 前記微粒子は、直径が約５μｍ～最大約２０μｍである、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
53. 前記生分解性微粒子は、直径が約２０μｍ～最大約５０μｍである、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
54. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤と前記ＤＭＡＲＤとの組み合わせが、前記炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を相乗的に低減させる、請求項４８又は４９に記載の方法。
55. 前記免疫調節剤が、前記炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させる、請求項３６に記載の方法。
56. 前記免疫調節剤が、前記患者における抗炎症性サイトカインの全身産生を増強する、請求項３６に記載の方法。
57. 前記免疫調節剤が、前記炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させる、請求項３６に記載の方法。
58. 前記機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、炎症促進性Ｔ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、請求項５７に記載の方法。
59. 前記機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１７様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、請求項５７に記載の方法。
60. 前記機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞が、Ｔｈ１様ｅｘＴ_ｒｅｇ表現型Ｔ細胞を含む、請求項５７に記載の方法。
61. 約２μｇ～約２０μｇの前記免疫調節剤が、局所投与される、請求項４７又は５１に記載の方法。
62. 約２μｇ～約２００μｇの前記免疫調節剤が、局所投与される、請求項４７又は５１に記載の方法。
63. 前記患者に投与される前記免疫調節剤の用量が、前記炎症性関節炎に罹患した関節内のＴ_ｒｅｇ細胞集団を安定化させるのに十分であり、かつ前記患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、請求項４７又は５１に記載の方法。
64. 前記患者に投与される前記免疫調節剤の用量が、前記炎症性関節炎に罹患した関節内の、Ｔ_ｒｅｇ細胞の機能不全Ｔ_ｒｅｇ細胞に対する比率を増加させるのに十分であり、かつ前記患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、請求項４７又は５１に記載の方法。
65. 前記免疫調節剤は、前記免疫調節剤が直接投与されなかった前記患者の少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症の重症度又は骨喪失を低減させる、請求項３６に記載の方法。
66. 前記組成物が、前記患者の全身性免疫抑制を引き起こさない、請求項３６に記載の方法。
67. 前記生分解性微粒子は、前記組成物が直接投与されなかった前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節及び少なくとも１つの他の炎症性関節炎に罹患した関節における炎症又は骨喪失を低減させるのに十分な時間にわたって、前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の徐放性又は持続性放出を提供する、請求項３７に記載の方法。
68. 前記生分解性微粒子が、前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節における前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を少なくとも２１日間維持する、請求項６７に記載の方法。
69. 前記生分解性微粒子が、前記患者の前記炎症性関節炎に罹患した関節における前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤の連続放出を約３ヶ月間維持する、請求項６７に記載の方法。
70. 前記生分解性微粒子が、マクロファージによる食作用に耐性であるか、又は前記生分解性微粒子が直接投与された前記炎症性関節炎に罹患した関節若しくは前記流入領域リンパ節から脱出する、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
71. 前記Ｔ_ｒｅｇ誘導剤が、ナイーブＴ細胞のＴ_ｒｅｇ細胞への分化を誘導する、請求項３７に記載の方法。
72. 前記生分解性微粒子が、前記微粒子の表面に吸着されたＴＧＦ－βを有しない、請求項３７、３８、又は３９に記載の方法。
73. 患者における炎症性関節炎を治療するための方法であって、
    前記患者の炎症性関節炎に罹患した関節又は前記炎症性関節炎に罹患した関節の流入領域リンパ節に、組成物を直接投与することを含み、前記組成物が、
    生分解性微粒子に少なくとも部分的に封入された調節性Ｔ細胞（Ｔ_ｒｅｇ）誘導剤から本質的になる、方法。