JP2024508888A - 一時的塞栓剤としてのアルギネートベースの粒子 - Google Patents
一時的塞栓剤としてのアルギネートベースの粒子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2024508888A JP2024508888A JP2023553243A JP2023553243A JP2024508888A JP 2024508888 A JP2024508888 A JP 2024508888A JP 2023553243 A JP2023553243 A JP 2023553243A JP 2023553243 A JP2023553243 A JP 2023553243A JP 2024508888 A JP2024508888 A JP 2024508888A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alginate
- microspheres
- enzyme
- months
- precursor solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 title claims abstract description 894
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 title claims abstract description 887
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 866
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 861
- 239000002245 particle Substances 0.000 title description 202
- 230000003073 embolic effect Effects 0.000 title description 33
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 549
- 108010004131 poly(beta-D-mannuronate) lyase Proteins 0.000 claims abstract description 313
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 224
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 115
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 63
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 195
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 156
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 156
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 112
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 111
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 90
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 81
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 79
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 59
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 56
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 49
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 43
- 239000012867 bioactive agent Substances 0.000 claims description 39
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 claims description 35
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 34
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 34
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 34
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 32
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 32
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 32
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims description 31
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 claims description 29
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 28
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 claims description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 25
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 23
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 23
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 23
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 23
- AEMOLEFTQBMNLQ-SYJWYVCOSA-N (2s,3s,4s,5s,6r)-3,4,5,6-tetrahydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-SYJWYVCOSA-N 0.000 claims description 21
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- AEMOLEFTQBMNLQ-AZLKCVHYSA-N (2r,3s,4s,5s,6r)-3,4,5,6-tetrahydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound O[C@@H]1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AZLKCVHYSA-N 0.000 claims description 20
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 20
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 18
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 18
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 17
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 17
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims description 13
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000013037 reversible inhibitor Substances 0.000 claims description 10
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 9
- GUTLYIVDDKVIGB-OUBTZVSYSA-N Cobalt-60 Chemical compound [60Co] GUTLYIVDDKVIGB-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims description 9
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 9
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 9
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 9
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 9
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 9
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 9
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 9
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 9
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims description 8
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 claims description 8
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 claims description 8
- 238000005266 casting Methods 0.000 claims description 6
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 4
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 233
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 150
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 66
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 55
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 51
- 239000000463 material Substances 0.000 description 39
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 36
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 36
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 35
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 33
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 30
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 29
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 24
- 150000001768 cations Chemical group 0.000 description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 24
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 24
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 23
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 22
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 22
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 19
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 18
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 18
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 18
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 17
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 17
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 16
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 16
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 16
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 16
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 16
- -1 hydroxypropyl Chemical group 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 15
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 14
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 14
- 230000010102 embolization Effects 0.000 description 13
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 13
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 13
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 10
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 9
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 8
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Chemical group 0.000 description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 6
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 6
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 6
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 239000007970 homogeneous dispersion Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000009103 reabsorption Effects 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 4
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 4
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 238000013161 embolization procedure Methods 0.000 description 4
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N triacetin Chemical compound CC(=O)OCC(OC(C)=O)COC(C)=O URAYPUMNDPQOKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 3
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 241000015177 Saccharina japonica Species 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 230000002358 autolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 3
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 3
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 2
- GJKGAPPUXSSCFI-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxy-4'-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone Chemical compound CC(C)(O)C(=O)C1=CC=C(OCCO)C=C1 GJKGAPPUXSSCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIQOAYVCKAHSEJ-UHFFFAOYSA-N 2-[2,3-bis(2-hydroxyethoxy)propoxy]ethanol;hexadecanoic acid;octadecanoic acid Chemical compound OCCOCC(OCCO)COCCO.CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O OIQOAYVCKAHSEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Polymers CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010002329 Aneurysm Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 208000003947 Knee Osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 230000000947 anti-immunosuppressive effect Effects 0.000 description 2
- 229940027983 antiseptic and disinfectant quaternary ammonium compound Drugs 0.000 description 2
- 230000010108 arterial embolization Effects 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- JHECKPXUCKQCSH-UHFFFAOYSA-J calcium;disodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].[Ca+2].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O JHECKPXUCKQCSH-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC([O-])=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- OSVXSBDYLRYLIG-UHFFFAOYSA-N dioxidochlorine(.) Chemical compound O=Cl=O OSVXSBDYLRYLIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000001087 glyceryl triacetate Substances 0.000 description 2
- 235000013773 glyceryl triacetate Nutrition 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCOCCO IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000416 hydrocolloid Substances 0.000 description 2
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229940071826 hydroxyethyl cellulose Drugs 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N iohexol Chemical compound OCC(O)CN(C(=O)C)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NTHXOOBQLCIOLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001025 iohexol Drugs 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000000518 rheometry Methods 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M sodium;5,5-diethylpyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCC1(CC)C([O-])=NC(=O)NC1=O RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010996 solid-state NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 2
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960002622 triacetin Drugs 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 2
- QNODIIQQMGDSEF-UHFFFAOYSA-N (1-hydroxycyclohexyl)-phenylmethanone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)C1(O)CCCCC1 QNODIIQQMGDSEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJTCHBVEUFDSIK-NWDGAFQWSA-N (2r,5s)-1-benzyl-2,5-dimethylpiperazine Chemical compound C[C@@H]1CN[C@@H](C)CN1CC1=CC=CC=C1 WJTCHBVEUFDSIK-NWDGAFQWSA-N 0.000 description 1
- MEJYDZQQVZJMPP-ULAWRXDQSA-N (3s,3ar,6r,6ar)-3,6-dimethoxy-2,3,3a,5,6,6a-hexahydrofuro[3,2-b]furan Chemical compound CO[C@H]1CO[C@@H]2[C@H](OC)CO[C@@H]21 MEJYDZQQVZJMPP-ULAWRXDQSA-N 0.000 description 1
- WDQFELCEOPFLCZ-UHFFFAOYSA-N 1-(2-hydroxyethyl)pyrrolidin-2-one Chemical compound OCCN1CCCC1=O WDQFELCEOPFLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WECGLUPZRHILCT-GSNKCQISSA-N 1-linoleoyl-sn-glycerol Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)CO WECGLUPZRHILCT-GSNKCQISSA-N 0.000 description 1
- KWVGIHKZDCUPEU-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OC)(OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 KWVGIHKZDCUPEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000263 2,3-dihydroxypropyl (Z)-octadec-9-enoate Substances 0.000 description 1
- CTPDSKVQLSDPLC-UHFFFAOYSA-N 2-(oxolan-2-ylmethoxy)ethanol Chemical compound OCCOCC1CCCO1 CTPDSKVQLSDPLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHFFVFAKEGKNAQ-UHFFFAOYSA-N 2-benzyl-2-(dimethylamino)-1-(4-morpholin-4-ylphenyl)butan-1-one Chemical compound C=1C=C(N2CCOCC2)C=CC=1C(=O)C(CC)(N(C)C)CC1=CC=CC=C1 UHFFVFAKEGKNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFVNOJDQRGSOEL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCO RFVNOJDQRGSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHHURQMJLARIDK-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl octanoate Chemical compound CCCCCCCC(=O)OCC(C)O GHHURQMJLARIDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWRBVKNFOYUCNP-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1-(4-methylsulfanylphenyl)-2-morpholin-4-ylpropan-1-one Chemical compound C1=CC(SC)=CC=C1C(=O)C(C)(C)N1CCOCC1 LWRBVKNFOYUCNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MMSGPUZNNKBAMN-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-4-hydroxyheptane-2,3,4-tricarboxylic acid Chemical compound CCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)C(CC)(CC)C(O)=O MMSGPUZNNKBAMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-GDCKJWNLSA-N 3-oleoyl-sn-glycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)CO RZRNAYUHWVFMIP-GDCKJWNLSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 239000004155 Chlorine dioxide Substances 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-BZINKQHNSA-N D-Guluronic Acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-BZINKQHNSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013283 Janus particle Substances 0.000 description 1
- QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N L-ascorbyl-6-palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N 0.000 description 1
- 241000288903 Lemuridae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920002690 Polyoxyl 40 HydrogenatedCastorOil Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N Sulfobutanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)S(O)(=O)=O ULUAUXLGCMPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKDDRNSBRWANNC-UHFFFAOYSA-N Thienamycin Natural products C1C(SCCN)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(C(O)C)C21 WKDDRNSBRWANNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- AOBORMOPSGHCAX-UHFFFAOYSA-N Tocophersolan Chemical compound OCCOC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C AOBORMOPSGHCAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- SPTSIOTYTJZTOG-UHFFFAOYSA-N acetic acid;octadecanoic acid Chemical compound CC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O SPTSIOTYTJZTOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BYUMYPPGJBLEIS-UHFFFAOYSA-N acetic acid;propane-1,2,3-triol Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.OCC(O)CO BYUMYPPGJBLEIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001733 anti-osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- JBIROUFYLSSYDX-UHFFFAOYSA-M benzododecinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 JBIROUFYLSSYDX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactopyranuronic acid Natural products OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical class OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 1
- 238000007068 beta-elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 description 1
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 description 1
- OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L calcium;(2s,3s,4s,5s,6r)-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxy-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxylato-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Ca+2].O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H](C([O-])=O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)[C@H](C(O)=O)O1 OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940082500 cetostearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 235000019398 chlorine dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229940039231 contrast media Drugs 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003413 degradative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000000881 depressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- XXJWXESWEXIICW-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol monoethyl ether Chemical compound CCOCCOCCO XXJWXESWEXIICW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- PEMGHGXQUNLSDF-UHFFFAOYSA-L dipotassium;2-carboxybenzoate Chemical compound [K+].[K+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O.OC(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O PEMGHGXQUNLSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RCOOPVBHZLPVJV-UHFFFAOYSA-L disodium;2-carboxybenzoate Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O.[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O RCOOPVBHZLPVJV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JMGZBMRVDHKMKB-UHFFFAOYSA-L disodium;2-sulfobutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].OS(=O)(=O)C(C([O-])=O)CC([O-])=O JMGZBMRVDHKMKB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960000878 docusate sodium Drugs 0.000 description 1
- LLRANSBEYQZKFY-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid;propane-1,2-diol Chemical compound CC(O)CO.CCCCCCCCCCCC(O)=O LLRANSBEYQZKFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229940080812 glyceryl caprate Drugs 0.000 description 1
- 229940087068 glyceryl caprylate Drugs 0.000 description 1
- 125000003976 glyceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C(O[H])([H])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940074046 glyceryl laurate Drugs 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Chemical class 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Chemical class 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N imipenem Chemical compound C1C(SCC\N=C\N)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@H]([C@H](O)C)[C@H]21 ZSKVGTPCRGIANV-ZXFLCMHBSA-N 0.000 description 1
- 229960002182 imipenem Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 150000002646 long chain fatty acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 210000001724 microfibril Anatomy 0.000 description 1
- 238000012837 microfluidics method Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- RZRNAYUHWVFMIP-UHFFFAOYSA-N monoelaidin Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO RZRNAYUHWVFMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYZUSRORWSJGET-UHFFFAOYSA-N octanoic acid ethyl ester Natural products CCCCCCCC(=O)OCC YYZUSRORWSJGET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001987 poloxamine Polymers 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Chemical class 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229920001289 polyvinyl ether Chemical class 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- ARIWANIATODDMH-UHFFFAOYSA-N rac-1-monolauroylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO ARIWANIATODDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHBFNMLVSPCDGN-UHFFFAOYSA-N rac-1-monooctanoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC(=O)OCC(O)CO GHBFNMLVSPCDGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000008684 selective degradation Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SONHXMAHPHADTF-UHFFFAOYSA-M sodium;2-methylprop-2-enoate Chemical compound [Na+].CC(=C)C([O-])=O SONHXMAHPHADTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008137 solubility enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 229940012831 stearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000003075 superhydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N tetratriacontyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010579 uterine corpus leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 201000007954 uterine fibroid Diseases 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L24/0015—Medicaments; Biocides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/08—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L24/0042—Materials resorbable by the body
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/043—Mixtures of macromolecular materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M5/00—Devices for bringing media into the body in a subcutaneous, intra-vascular or intramuscular way; Accessories therefor, e.g. filling or cleaning devices, arm-rests
- A61M5/178—Syringes
- A61M5/19—Syringes having more than one chamber, e.g. including a manifold coupling two parallelly aligned syringes through separate channels to a common discharge assembly
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/23—Carbohydrates
- A61L2300/236—Glycosaminoglycans, e.g. heparin, hyaluronic acid, chondroitin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
- A61L2300/254—Enzymes, proenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/402—Anaestetics, analgesics, e.g. lidocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/41—Anti-inflammatory agents, e.g. NSAIDs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/416—Anti-neoplastic or anti-proliferative or anti-restenosis or anti-angiogenic agents, e.g. paclitaxel, sirolimus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
- A61L2300/602—Type of release, e.g. controlled, sustained, slow
- A61L2300/604—Biodegradation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
- A61L2300/62—Encapsulated active agents, e.g. emulsified droplets
- A61L2300/622—Microcapsules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/04—Materials for stopping bleeding
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/12—Nanosized materials, e.g. nanofibres, nanoparticles, nanowires, nanotubes; Nanostructured surfaces
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/36—Materials or treatment for tissue regeneration for embolization or occlusion, e.g. vaso-occlusive compositions or devices
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Surgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本開示は、再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを含む組成物であって、アルギネートミクロスフェアが、アルギネート、アルギネートリアーゼ、および二価金属イオンを含む組成物を提供する。本開示はまた、アルギネート、アルギネートリアーゼ、および二価金属イオンを含む、再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを含む組成物を作製する方法も提供する。本開示はまた、それを必要とする対象における塞栓を誘導する方法、およびその方法に使用するための本開示の組成物を含有するシリンジも提供する。
Description
関連出願への相互参照
本出願は、全ての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年３月３日に出願されたインド国仮特許出願第２０２１２１００８９３７号の優先権を主張する。
本出願は、全ての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年３月３日に出願されたインド国仮特許出願第２０２１２１００８９３７号の優先権を主張する。
分野
本開示は、二価イオンおよび／または光架橋を使用して架橋したアルギネートミクロスフェアを作製する組成物および方法を提供する。一部の態様では、アルギネートミクロスフェアは、塞栓適用のためにアルギネートリアーゼおよび／または抗炎症剤と共に封入される。一部の態様では、アルギネートミクロスフェアの調製後処理（例えば、滅菌および凍結乾燥）を、貯蔵寿命を改善するために使用する。
背景
臓器における血管の人為的遮断または塞栓は、例えば、（ａ）外傷によって引き起こされた出血を制御するため、（ｂ）動脈瘤などの異常な血管への血流を防止するため、および／または（ｃ）臓器を処置するため（例えば、腫瘍を切除するため、移植のため、または手術のため）に使用され得る。多くの状況では、血管の永続的な塞栓は必要ではない。そのような医学的介入の場合、一時的かつ生物再吸収可能な塞栓剤を使用することが望ましい。例えば、サイズが１０μｍ～８０μｍの範囲のＩＭＰ／ＣＳ（Ｉｍｉｐｅｎｅｍ／Ｃｉｌｉａｓｔａｔｉｎ）抗生物質粒子は、一時的塞栓剤として使用されているが、この材料が完全に吸収されるにはほぼ１カ月を要し得る（例えば、Okuno, et al.; "Midterm Clinical Outcomes and MR Imaging Changes after Transcatheter Arterial Embolization as a Treatment for Mild to Moderate Radiographic Knee Osteoarthritis Resistant to Conservative Treatment", J. Vasc. Interv. Radiol. 2017;28:995-1002を参照されたい）。同様に、Ｇｅｌｆｏａｍ（登録商標）、コラーゲン、およびトロンビンなどの他の塞栓剤もまた使用されている（例えば、Vaidya, et al.; "An overview of embolic agents", Semin. Intervent. Radiol. 2008;25:204-15を参照されたい）。しかしながら、既存の作用剤は、予測不能な再吸収速度、上述のマトリックスを選択的に分解する作用剤（複数可）の欠如、および／または非特異的閉塞を引き起こす塞栓剤の移動などの多くの欠点を有する（例えば、米国特許出願公開第２０１３０２１１２４９号を参照されたい）。さらに、一部の塞栓剤は、体内でのその使用前に処理または調製ステップを必要とする。例えば、Ｇｅｌｆｏａｍは、綿撒糸へと切断するかまたはスラリーにしなければならない。同様に、自己の凝血を収集して、形成し、再注入しなければならない。
したがって、上述のマトリックスを選択的に分解することができる、および／またはｉｎ ｖｉｖｏでいかなる非特異的閉塞も作製することなく、予測可能な溶解速度を示すことができる塞栓剤が必要である。
Okuno, et al.; "Midterm Clinical Outcomes and MR Imaging Changes after Transcatheter Arterial Embolization as a Treatment for Mild to Moderate Radiographic Knee Osteoarthritis Resistant to Conservative Treatment", J. Vasc. Interv. Radiol. 2017;28:995-1002
Vaidya, et al.; "An overview of embolic agents", Semin. Intervent. Radiol. 2008;25:204-15
本開示の概要
一態様では、本開示は、再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアであって、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって、事前に処置されたアルギネートリアーゼ酵素；（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびにアルギネート分子を架橋する二価金属イオンを含み、水を実質的に含まず、および／または滅菌されているアルギネートミクロスフェアに関する。一実施形態では、アルギネートミクロスフェアの分解は、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成の１つまたは複数によって制御される。一実施形態では、（ｉ）～（ｉｉｉ）：（ｉ）金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆性阻害剤であること、（ｉｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、ならびに（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属－イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、（ｉ）～（ｖ）：（ｉ）アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、（ｉｖ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、および（ｖ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、（ａ）～（ｄ）：（ａ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であり、アルギネートミクロスフェアは、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、（ｂ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であり、アルギネートミクロスフェアは、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、（ｃ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であり、アルギネートミクロスフェアは、約５日未満の期間にわたって分解すること、および（ｄ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であり、アルギネートミクロスフェアは、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、（ｉ）～（ｖｉｉ）：（ｉ）ミクロスフェアが、生物活性剤をさらに含むこと、（ｉｉ）ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から選択される凍結保護剤をさらに含むこと、（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されること、（ｉｖ）アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、（ｖ）アルギネートミクロスフェアが、滅菌されるか、またはアルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されて滅菌されること、（ｖｉ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、ならびに（ｖｉｉ）凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが、生理的ｐＨで食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成されること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、（ａ）～（ｄ）：（ａ）ミクロスフェアが、生物活性剤をさらに含み、生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含むこと、（ｂ）アルギネートミクロスフェアが、凍結乾燥され、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にあること、（ｃ）アルギネートミクロスフェアが、滅菌されるか、またはアルギネートミクロスフェアは凍結乾燥されて滅菌され、滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、ならびに（ｄ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であり、所定の温度が約２℃～約８℃の間、またはほぼ室温（ＲＴ）であること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、ミクロスフェアは、抗炎症剤生物活性剤をさらに含み、抗炎症性生物活性剤は、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む。一実施形態では、アルギネートミクロスフェアは、滅菌されるか、またはアルギネートミクロスフェアは、凍結乾燥されて滅菌され、滅菌は、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射によるガンマ線滅菌、または約２５ｋＧｙの電子線照射を含む。
別の態様では、本開示は、再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、（ｉ）温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに（ｉｉ）（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含むステップ；液滴を、二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびにアルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法に関する。一実施形態では、（ｉ）～（ｘ）：（ｉ）前駆体溶液が、１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、（ｉｉ）ゲル化槽が、１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、ｐＨ３．０～６．４の範囲にあること、（ｉｖ）金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆性阻害剤であること、（ｖ）前駆体溶液の温度が、１～４℃の範囲にあること、（ｖｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、（ｖｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、（ｖｉｉｉ）ゲル化槽のｐＨが約６．５未満であること、（ｉｘ）ゲル化槽のｐＨが、前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しいこと、ならびに（ｘ）前駆体溶液および／またはゲル化槽が生物活性剤をさらに含むこと、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、（ｉ）～（ｉｖ）：（ｉ）脱水するステップが、アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含むこと、（ｉｉ）液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施されること、（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、ならびに（ｉｖ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、前駆体溶液および／またはゲル化槽は、１つまたは複数の凍結保護剤を含み、凍結保護剤は各々、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から独立して選択される。一実施形態では、前駆体溶液は、濃度約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％のトレハロース凍結保護剤、濃度約０．１重量／体積％～約１重量／体積％のＰＶＰ４０ｋＤａ凍結保護剤、または濃度約０．１重量／体積％～約１重量／体積％のデキストラン（分子量７０ｋＤａ）凍結保護剤を含む。一実施形態では、前駆体溶液および／またはゲル化溶液は、濃度約０．１重量／体積％～約２重量／体積％のヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン凍結保護剤を含む。一実施形態では、前駆体溶液およびゲル化槽はいずれも、同じ凍結保護剤を含む。一実施形態では、前駆体溶液およびゲル化槽はいずれも、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含む。一実施形態では、脱水するステップは、アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含み、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量は、約１質量％～約３質量％の範囲にある。一実施形態では、方法は、（ｉ）～（ｉｖ）：（ｉ）アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップ、（ｉｉ）アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップ、（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを対象に投与するステップ、ならびに（ｉｖ）アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを、生理的ｐＨで食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用して再構成するステップから選択される少なくとも１つのステップをさらに含む。一実施形態では、（ａ）～（ｄ）：（ａ）方法が、アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップであって、滅菌するステップが高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むステップをさらに含むこと、（ｂ）方法が、アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップであって、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射、または約２５ｋＧｙの電子線照射を含むステップをさらに含むこと、（ｃ）方法が、アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップであって、所定の温度が、約２℃～約８℃の間であるか、または所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）であるステップをさらに含むこと、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、アルギネートミクロスフェアの分解は、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される。一実施形態では、（ｉ）～（ｖｉｉ）：（ｉ）アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、（ｉｖ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、（ｖ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、（ｖｉ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、および（ｖｉｉ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、（ａ）～（ｅ）：（ａ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であり、アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、（ｂ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であり、アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、（ｃ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合され、アルギネートミクロスフェアは、約５日未満の期間にわたって分解すること、（ｄ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合され、アルギネートミクロスフェアは、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、ならびに（ｅ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合され、アルギネートミクロスフェアは、約３０日より長い期間にわたって分解すること、の少なくとも１つが当てはまる。一実施形態では、前駆体溶液および／またはゲル化槽は、生物活性剤をさらに含み、生物活性剤は、抗炎症剤、麻酔剤、抗がん剤、または抗血管新生剤を含む。一実施形態では、前駆体溶液および／またはゲル化槽は、抗炎症性生物活性剤を含み、抗炎症剤は、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む。
参照による組み入れ
本明細書における全ての刊行物、特許、および特許出願は、各々の個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個々に参照により組み込まれることが示されているのと同じ程度に参照により組み込まれる。本明細書の用語と組み込まれた参照の用語との間で矛盾がある場合には、本明細書の用語が優先する。
図面のいくつかの図の簡単な説明
前述の概要、ならびに組成物および流体送達デバイスの実施形態に関する以下の詳細な説明は、例示的な実施形態に関する添付の図面と共に読むことにより良好に理解されるであろう。しかしながら、本開示の実施形態は、示される正確な配置および手段に限定されないと理解すべきである。
前述の概要、ならびに組成物および流体送達デバイスの実施形態に関する以下の詳細な説明は、例示的な実施形態に関する添付の図面と共に読むことにより良好に理解されるであろう。しかしながら、本開示の実施形態は、示される正確な配置および手段に限定されないと理解すべきである。
詳細な説明
概要
概要
一般的に、本開示は、塞栓適用に使用するためにその分解を制御するために、アルギネートリアーゼ酵素を含有するアルギネート粒子を含む脱水および／または滅菌された組成物の調製方法を提供する。
アルギネートベースの液体塞栓剤は、有望な代替であると考えられている。純粋型のアルギネートは、高度に生体適合性であり、そのゲル化特性を制御することができる。それらは、様々な海藻に一般的に見出される様々なＭ：Ｇ比のランダムに１－４結合したβ－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ－ブロック）－α－Ｌ－グルロン酸（Ｇブロック）で構成される天然に存在する多糖コポリマーである。先行技術の開示では、アルギネートを、造影剤イオヘキソール（Ｘ線不透過性を付与するため）に溶解し、ハイドロコイル形態にゲル化させると、塩化カルシウム溶液の存在下で、多糖残基のカルボキシレート基とＣａ２＋とのイオン性架橋により固化する。これらの構成要素は全て、処置部位で同時に混合され、その場でゲルの塊を作製した。このゲルはその後、アルギネートリアーゼ酵素とＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）の混合物である、本発明者によってＥｍｂｏＣｌｅａｒと呼ばれる混合物を使用して溶解され得る。酵素は、β－脱離機構を介してグリコシド結合で多糖鎖を切断し、ＥＤＴＡは、キレート化によってＣａ２＋を除去することによってイオン架橋を分解する。この溶解剤は、塞栓部位で投与され、閉塞した血管を数分以内に完全にきれいにした。この発明は、塞栓剤の選択的分解のいくつかの態様に対処するが、いくつかの問題を呈する。
第１に、Ｅｍｂｏｃｌｅａｒ溶液を使用してＥｍｂｏＧｅｌを分解する手順は、それらが追加の塞栓後手順を行わなければならないことから、患者に対してさらなるリスクを導入する。その上、塞栓の形成とその溶解との間の所望の時間間隔に応じて、これは、患者の２回目の診察の日時を変更すること、およびカテーテル再挿入手順の全ての関連する費用を伴い得る。第２に、動脈瘤の治療などの一部の例では、アルギネートゲルは、注射時または塞栓後手順後に親動脈へと移動することがあり、これは非特異的血管閉塞を引き起こし得る（例えば、Barnett, et al., "A selectively dissolvable radiopaque hydrogel for embolic applications"；および米国特許第９，２２０，７６１号を参照されたい）。
Ｂａｒｎｅｔｔらは、アルギネートベースの塞栓材料が、アルギネートリアーゼベースの組成物の適用によって体内で分解することができることを実証している。精製されたアルギネートを、造影剤イオヘキソール（Ｘ線不透過性を付与するため）に溶解し、ハイドロコイル形態にゲル化させ、これを塩化カルシウム溶液の存在下で多糖残基のカルボキシレート基とＣａ２＋とのイオン性架橋により固化する。これらの構成要素は全て、処置部位で同時に混合され、その場でゲルの塊を作製した。このゲルをその後、ＥｍｂｏＣｌｅａｒを使用して溶解してもよい。
米国特許第９，２２０，７６１号では、分解／崩壊したアルギネートゲルの体の他の部分への非特異的移動は主に、ＥｍｂｏＣｌｅａｒによるＥｍｂｏＧｅｌの即時の／制御されない分解／崩壊が原因で起こり、様々なサイズの微粒子の生成を引き起こすが、これらは、ＥｍｂｏＣｌｅａｒが希釈により無効となるオフターゲットの遠位位置にそれらが分布する前に再吸収することができない。ＥｍｂｏＧｅｌに、生物活性剤／薬をロードする場合、分解制御放出速度論を与えるために、ＥｍｂｏＣｌｅａｒ溶解剤と個別に投与する必要がある。
Ｂｏｙａｎらは、アルギネートリアーゼおよび幹細胞からなるアルギネート粒子の方法および組成物を報告している（すなわち、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１２／０７１５２７Ａ２号を参照されたい）。組み込まれる酵素の濃度に応じて、幹細胞によって分泌されるタンパク質または幹細胞を体に送達することができる。本開示の様々な実施形態とは対照的に、Ｂｏｙａｎの組成物は、その中の幹細胞を死滅させることなく凍結乾燥して滅菌することが不可能である。Ｂｏｙａｎでは、Ｃａ２＋架橋アルギネート粒子を使用して、タンパク質および幹細胞の持続的放出のためにアルギネートリアーゼおよび幹細胞を封入する。この方法では、様々な量のアルギネートリアーゼが幹細胞と共に、異なる分子量のアルギネートと１～４℃で１分間混合され、塩化カルシウム槽中でゲル化して、自己分解可能幹細胞封入カルシウム架橋アルギネートミクロスフェアを得る。幹細胞およびその分泌タンパク質を放出するために、これらの粒子を、３７℃の食塩水に懸濁して、アルギネートリアーゼ酵素のアルギネートマトリックス分解触媒活性を活性化した。さらに、細胞をロードしたアルギネート粒子を、液体窒素中での凍結保存のためにＤＭＳＯによって処理した。この報告は、アルギネート粒子の分解の制御に関する洞察を提供したが、塞栓適用のための規模拡大可能な自己分解可能アルギネート粒子を産生するためにこの方法を使用するには多くの短所がある。温度を１～４℃に低下させても、酵素の分解活性を完全に停止させないことが観察された。さらに、これらの粒子の産生を規模拡大する必要がある場合、酵素とアルギネートとのインキュベーション期間はより長くなる。これは、アルギネートの粘度を低減させ、それによってアルギネートリアーゼ酵素の封入を低減させ、均一に形成された粒子を得るために問題も呈する。同様に、生物活性剤（例えば、抗炎症剤および抗がん剤）の任意の提唱される封入もまた、低減される。さらに、生物活性剤を封入する方法ならびに分解可能アルギネート粒子の凍結乾燥および滅菌などの粒子調製後プロセスは、検討されなかった。アルギネートリアーゼ封入アルギネートミクロスフェアのような一時的な塞栓粒子を開発するために、乾燥および滅菌形態でより長期間貯蔵することが可能で、使用時点で再構成することができ、体に導入されると活性化されるようになることは重要である。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏでいかなる非特異的閉塞も生成することなく、分解するまたは予測可能な再吸収速度を示すことができ、生物活性剤を放出するためのビヒクルとして作用し、所望の貯蔵条件で長期間安定である一時的塞栓剤が必要である。
さらに、Ｋｕｎｊｕｋｕｎｊｕらは、硫酸アンモニウムを使用して、様々なサイズ（１０～３００μｍ）および形状のアルギネートリアーゼ凝集体を報告した（例えば、Kunjukunju, et al., "Cross-linked enzyme aggregates of alginate lyase: A systematic engineered approach to controlled degradation of alginate hydrogel." International Journal of Biological Macromolecules 115(2018): 176-184を参照されたい）。これらの凝集体は、グルタルアルデヒドを使用して架橋され、不溶性の触媒活性のアルギネートリアーゼ凝集体を産生した。得られた架橋された凝集体を、その制御された分解を達成するために、アルギネートハイドロゲルに封入した。しかしながら、この報告書に記載される方法は、それ自体、一時的なアルギネートベースの塞栓剤の調製を可能にするためには好適ではないことがある。
第１に、記載されるサイズおよび多分散性の酵素の凝集体を封入することができないことから、所望のサイズのアルギネート粒子を産生することは可能ではない。第２に、酵素を架橋する記載されるプロセスは、グルタルアルデヒドと凝集するが、これはヒトの体での使用が意図される組成物の調製において回避すべきである毒性剤である。第３に、著者らはアルギネートの分解を制御する他の任意の方法、例えばアルギン酸ナトリウムの分子量もしくは粘度、改変剤（金属イオン）を使用する酵素の前処置、もしくはｐＨおよび温度などの他の生理化学的パラメーター、またはアルギネートリアーゼ酵素の封入効率を改善する他のいかなる方法も報告しなかった。最後に、アルギネート凝集体の貯蔵および貯蔵寿命を達成するための研究は実施されていない。
本開示は、塞栓適用のための、アルギネートリアーゼ酵素、生物活性剤、および凍結保護剤をロードした自己分解可能な架橋アルギネートミクロスフェアを作製するための組成物および方法を提供する。これは、生理的条件下でアルギネートミクロスフェアの調整された分解を得るために、所望の濃度の酵素および生物活性剤のローディングまたは封入を可能にする。本開示には、既存の一時的塞栓剤および先行技術のアルギネートベースの系と比較して多くの利点がある：
１．アルギネートリアーゼ酵素を、触媒による分解活性を可逆的に阻害し得る異なる条件の組合せ（ｐＨ、温度および金属イオン阻害剤）により前処置することによって、酵素のアルギネート粒子への制御されたローディングが可能となる。この戦略は、アルギネート粒子の予測可能かつ望ましい分解速度を提供し、このことは塞栓適用にとって極めて重要である。異なる条件の組合せを使用して、アルギネートリアーゼ酵素のアルギネート粒子へのローディングを調節することは、既存の一時的塞栓粒子および先行のアルギネートベースの系では記載されていない；
２．酵素の前処置は、酵素活性を可逆的に阻害し、それによってアルギネートのアルギネートリアーゼの活性形態への曝露を所望の期間停止させる。この戦略は、アルギネートマトリックスを早期に分解することなく、これらのミクロスフェアの規模拡大産生を可能にし得る；
３．アルギネートベースの酵素を含有する塞栓性ミクロスフェアの自己分解性質により、いかなる副産物または微粒子も再吸収され、腎臓を通して最終的に排泄され得ることが確保される。したがって、血管の非特異的閉塞のリスクが最小限となる；
４．多くの塞栓手順では、患者は、神経障害性疼痛を有する。これらの自己分解可能アルギネートミクロスフェアに、抗炎症剤、例えばヒアルロン酸をロードすることもでき、塞栓部位でのその持続的放出は、慢性炎症に起因し得る神経障害性疼痛を軽減し得る；ならびに／または
５．自己分解可能アルギネートミクロスフェアの組成物はまた、凍結保護剤からなる。凍結保護剤を含めることは、酵素活性に影響を及ぼすことなく、凍結乾燥およびその後の滅菌を可能にする。ミクロスフェアのこれらの調製後処理ステップは、一定期間貯蔵することができ、使用時点で再構成して、体に投与する前に酵素を再活性化することができる滅菌組成物をもたらす。
１．アルギネートリアーゼ酵素を、触媒による分解活性を可逆的に阻害し得る異なる条件の組合せ（ｐＨ、温度および金属イオン阻害剤）により前処置することによって、酵素のアルギネート粒子への制御されたローディングが可能となる。この戦略は、アルギネート粒子の予測可能かつ望ましい分解速度を提供し、このことは塞栓適用にとって極めて重要である。異なる条件の組合せを使用して、アルギネートリアーゼ酵素のアルギネート粒子へのローディングを調節することは、既存の一時的塞栓粒子および先行のアルギネートベースの系では記載されていない；
２．酵素の前処置は、酵素活性を可逆的に阻害し、それによってアルギネートのアルギネートリアーゼの活性形態への曝露を所望の期間停止させる。この戦略は、アルギネートマトリックスを早期に分解することなく、これらのミクロスフェアの規模拡大産生を可能にし得る；
３．アルギネートベースの酵素を含有する塞栓性ミクロスフェアの自己分解性質により、いかなる副産物または微粒子も再吸収され、腎臓を通して最終的に排泄され得ることが確保される。したがって、血管の非特異的閉塞のリスクが最小限となる；
４．多くの塞栓手順では、患者は、神経障害性疼痛を有する。これらの自己分解可能アルギネートミクロスフェアに、抗炎症剤、例えばヒアルロン酸をロードすることもでき、塞栓部位でのその持続的放出は、慢性炎症に起因し得る神経障害性疼痛を軽減し得る；ならびに／または
５．自己分解可能アルギネートミクロスフェアの組成物はまた、凍結保護剤からなる。凍結保護剤を含めることは、酵素活性に影響を及ぼすことなく、凍結乾燥およびその後の滅菌を可能にする。ミクロスフェアのこれらの調製後処理ステップは、一定期間貯蔵することができ、使用時点で再構成して、体に投与する前に酵素を再活性化することができる滅菌組成物をもたらす。
二価金属イオン架橋に加えて、光重合法を使用して上記と同じ特性を有する自己分解可能アルギネート粒子組成物を調製してもよい。この方法は、アルギネートミクロスフェアの較正された分解をさらに改善し得る。
定義
本明細書で使用される場合、「１つの」、「１つの（ａｎ）」、または「その」という用語は、一般的に単数形および複数形の両方を含むと解釈される。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、一般的に、数値が測定または決定される方法、すなわち測定系の限界に部分的に依存する、当業者によって決定される許容可能な誤差範囲内である特定の数値を指す。例えば「約」は、所定の数値の±２０％、±１０％、または±５％の範囲を指し得る。
「実質的に」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、９９．９９％、または少なくとも約９９．９９９％、またはそれより上である大部分、あるいはほとんどを指し得る。
「担体」または「ビヒクル」は、本明細書で使用される場合、薬物投与にとって好適な担体材料を指す。本明細書において有用な担体およびビヒクルは、非毒性であり、組成物の他の構成要素と有害に相互作用しない、当技術分野で公知の任意のそのような材料、例えば任意の液体、ゲル、溶媒、液体希釈剤、溶解剤、界面活性剤、またはその他を含む。
「治療有効量」という用語は、一般的に、そのような化合物または他の治療を必要とする対象に投与した場合に、状態またはそのリスクを防止、低減、処置、または除去するために最小限で十分である化合物または他の治療の量（または用量）を指し得る。一部の例では、「治療有効量」という用語は、対象に投与した場合に予防効果を有するために十分である化合物または他の治療のその量を指し得る。治療有効量は変動し得る：例えば、これは対象の状態、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与様式（例えば、皮下送達）、およびその他に応じて変化し得るが、その全てが当業者によって決定され得る。
本明細書で使用される場合、「処置している」、または「処置する」とは、（ｉ）病態が起こるのを防止する（例えば、予防）；（ｉｉ）病態を阻害する、もしくはその発症を停止させる；（ｉｉｉ）病態を軽減する；および／または（ｉｖ）病態に関連する症状を減損させることを含む。
「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内で、妥当な利益／リスク比に釣り合って、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を引き起こすことなく、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するために好適である化合物、材料、組成物、および／または投薬剤形を指す。
「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、あらゆる全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤、ならびにその他を含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および作用剤の使用は、当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または作用剤が活性成分と不適合でない限り、本開示の治療組成物におけるその使用が企図される。補助活性成分もまた、組成物に組み込まれ得る。
「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、その意図される機能の実施を容易にするために化合物と同時投与されることが可能なビヒクルおよび担体を含むと意図される。薬学的活性物質のためのそのような媒体の使用は当技術分野で周知である。そのようなビヒクルおよび担体の例は、溶液、溶媒、分散媒体、遅延剤、乳剤およびその他を含む。マルチ結合化合物と共に使用するために好適な任意の他の従来の担体もまた、本開示の範囲内に入る。
組成物および方法
本発明は、二価金属イオンまたは光活性化光重合（光架橋）をそれぞれ使用してゲル化または架橋して、酵素をロードしたアルギネートミクロスフェアを形成することができる、アルギン酸ナトリウムまたはメタクリレート－アルギネートへのアルギネートリアーゼのローディングに関する。アルギネートリアーゼ酵素をロードした二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアを作製する場合、アルギネートリアーゼ酵素をアルギネート（前駆体溶液）と混合し、二価金属イオンゲル化槽に滴下する。アルギネートリアーゼ酵素をロードした光架橋アルギネートミクロスフェアの場合、メタクリレート－アルギネートを、アルギネートリアーゼ酵素および光重合開始剤（前駆体溶液）と混合し、これをドロップキャスティングするか、または例えばマイクロ流体力学プラットフォームを使用して界面活性剤もしくは油（モノエマルジョンまたはダブルエマルジョン）を含有する異なる液体に注入し、液滴を形成することができる。これらの液滴に、近ＵＶ波長（２００ｎｍ～４００ｎｍ）を様々な時間照射する。照射すると、メタクリレート－アルギネートの架橋が起こり、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネートミクロスフェアを形成する。さらに、これらのミクロスフェアはまた、前駆体溶液に混合することによって抗炎症剤を封入することができ、上記の架橋手順に供することができる。これらの架橋アルギネート粒子の分解は、前駆体溶液の組成、ゲル化槽、およびこれらの粒子を調製する方法によって制御することができる。
アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアの調製のための前駆体溶液の組成
架橋したアルギネート粒子の分解は、前駆体溶液の組成：（ｉ）アルギネートミクロスフェアにロードされたアルギネートリアーゼ酵素（ｐＨ、温度、および金属イオン阻害剤によって前処置されてもよい）の濃度、ならびに（ｉｉ）アルギネートの既定の分子量およびＭ（β－Ｄ－マンヌロン酸）とＧ（α－Ｌ－グルロン酸）ブロックの比（Ｍ／Ｇ）によって制御され得る。
前駆体溶液中で、アルギネートリアーゼ酵素は、アルギネートリアーゼ酵素のアルギネート粒子への封入に影響を及ぼし得るアルギネートの切断を引き起こす。これはまた、アルギネート溶液の初回粘度も低減させ、このことは、アルギネート粒子内の封入効率を維持するためにならびにまた所望のサイズおよび形状の粒子を得るための両方にとって重要である。したがって、酵素は、架橋のために前駆体ミックスを二価金属イオンゲル化槽に添加する前に、異なるｐＨ、低い温度、および／または金属イオン阻害剤への曝露において前処置され得る。
リアーゼ酵素の最適な触媒活性は、６．８～７．５の範囲のｐＨで観察される。アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の調製時のアルギン酸ナトリウムの初回分解を防止するために、アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム溶液のｐＨを、３．０に低下させてもよい。このプロセスを行うために、酢酸ナトリウム－酢酸緩衝剤は、イオン強度＜１Ｍ、好ましくは＜０．１Ｍ、および最も好ましくは＜０．０１ＭでｐＨ範囲３．７～５．６である。加えて、溶液の所望のｐＨ（ｐＨ６．５～３．０）をまた、水酸化ナトリウム（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）または塩酸（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）を使用して達成してもよい。これは、アルギネートリアーゼの触媒活性の低減または停止をもたらす。触媒活性のこの調節は、アルギネートリアーゼ酵素の３Ｄ立体構造のアンフォールティングが原因であり得る。アルギネートリアーゼ酵素の触媒活性の停止は、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子を、ｐＨ６．５～７．５を有する水性環境に曝露することによって逆転／活性化され得る。アルギネートリアーゼ酵素の活性を逆転させるための好ましい緩衝剤は、リン酸緩衝剤である。リン酸緩衝剤の好ましいイオン強度は、０．０１Ｍであり、ｐＨ範囲は２０℃で６．５～７．５である。溶液の所望のｐＨ（ｐＨ６．５～７．５）をまた、水酸化ナトリウム（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）または塩酸（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）を使用して達成してもよい。さらに、ｐＨ６．５～７．５の間を有する食塩水または脱イオン水または水溶液も使用してもよい。
溶液のｐＨを変化させることと組み合わせて、混合前の前駆体溶液の個々の構成要素の温度を、アルギネートの分解を阻害するために１～４℃に維持してもよい。個々の構成要素を混合後の前駆体溶液の温度を、アルギネートの分解を阻害するために１～４℃に維持してもよい。温度は、溶液の粘度にも影響を及ぼし得ることに注意されたい。
前駆体溶液のｐＨおよび温度を変化させることに加えて、酵素を、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋などの金属イオン阻害剤によって前処置してもよい。これらの金属イオンは、酵素の活性を阻害し得る（Inoue, et al., "Functional identification of alginate lyase from the brown alga Saccharina japonica", Sci. Rep. 2019;9:1-11）。
したがって、上記のアプローチの組合せを使用して、前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素を阻害（可逆的または部分的に）してもよい。これは、アルギネートマトリックスを分解することなく、アルギネートリアーゼ酵素のアルギネート粒子へのローディングを増強し得る。これらのアプローチの組合せは、引用された報告には採用されていない。
アルギネートミクロスフェアの自己分解はまた、アルギネートの化学特性（分子量およびＭ（β－Ｄ－マンヌロン酸）とＧ（α－Ｌ－グルロン酸）ブロックの比（Ｍ／Ｇ））によっても制御することができる。特に、Ｇ－ブロックは、カルボキシレート残基の幾何学によりＭ－ブロックと比較して二価カチオンに対してより親和性を有する。アルギネートは、ＭおよびＧ含有量に大きい変動を含有し、同様に配列構造（Ｇ－ブロック、Ｍ－ブロック、およびＭＧブロック）においても多様性を保有する（Ramos, et al., "Effect of alginate molecular weight and M/G ratio in beads properties foreseeing the protection of probiotics", Food Hydrocoll. 2018;77:8-16）。一般的に、Ｍ含有量と比較してより高いＧ含有量（低いＭ／Ｇ比）を有するアルギネートは、カチオンと架橋した場合、より高いＭ／Ｇ比を有するアルギネートと比較して、透過性が低く、酵素分解に対してより大きい耐性を有するより機械的に強固な構造／被包を生じる。アルギネートの頑強性を改善する他の要因は、二価イオンおよびアルギネートの分子量／粘度の選択である。
アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子の急速な分解（≧２日間～≦５日間）を達成するために、低い分子量／低い粘度を有するより低いＧ含有量のアルギネート（例えば、より高いＭ：Ｇ比）を、前駆体溶液に使用してもよい。ある特定の実施形態では、精製アルギネートは、５０％より高いＭ含有量（β－Ｄ－マンヌロン酸）を含有する。精製アルギネート中のＭ含有量のパーセンテージは、５０％、および８０％、５５％～７５％、および６０％～８０％であり得る。中間（＞５日間～≦３０日間）または遅い（＞３０日間）分解期間を得るために、高い分子量／粘度を有するより高いＧ含有量のアルギネート（例えば、より低いＭ：Ｇ比）を使用してもよい。ある特定の実施形態では、精製アルギネートは、５０％より高いＧ含有量（α－Ｌ－グルロン酸）を含有する。精製アルギネートにおけるＧ含有量のパーセンテージは、５０％および８０％、５５％～７５％、および６０％～８０％であり得る。
アルギネートの分子量または粘度はまた、アルギネート粒子の機械的特性にも影響を及ぼす（Farres, et al., "Formation kinetics and rheology of alginate fluid gels produced by in-situ calcium release", Food Hydrocolloids 40(2014): 76-84）。アルギネートポリマーの平均分子量は、＞１００ｋＤａ、好ましくは＞２００ｋＤａ、および最も好ましくは＞３０ｋＤａであり得る。２０℃で１％アルギネート溶液の粘度は、急速におよび遅く分解するアルギネートリアーゼをロードした二価金属イオンと複合体を形成したアルギネート粒子の調製に関して＞２５ｍＰａ－ｓ、好ましくは＜１０００ｍＰａ－ｓの範囲を有し得る。
前駆体溶液中で異なる分子量およびＭ／Ｇ比（Ｍ（β－Ｄ－マンヌロン酸）とＧ（α－Ｌ－グルロン酸）ブロック（Ｍ／Ｇ）の比）のアルギネートと混合した処置された（ｐＨ、温度、および金属イオン阻害剤に曝露した）アルギネートリアーゼ酵素の活性（単位、Ｕ）もまた、二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアの分解を調節する。アルギネートリアーゼ酵素の活性は、０．０２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲であり得る。アルギネートミクロスフェアの急速な分解に関して（≧２日間～≦５日間）、酵素の好ましい活性は、０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲であり得る。中間（＞５日間～≦３０日間）または遅い（＞３０日間）分解期間を得るために、酵素活性の好ましい範囲は、それぞれ０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートおよび０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートであり得る。
生物活性剤の封入
以前の報告は、高分子量ヒアルロン酸（１００～５００ＫＤａ）が、抗炎症および免疫抑制活性を示すことを実証した。多くの塞栓医学的介入は、神経障害性疼痛を引き起こすが、これは高分子量ヒアルロン酸の使用によって軽減され得る。本発明は、アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアにおける高分子量ヒアルロン酸の封入を開示する。上記で言及した前駆体溶液に、高分子量ヒアルロン酸を含む抗炎症性生物活性剤を添加してもよい。これは、前駆体溶液中のアルギネート濃度の１重量％～２０重量％のヒアルロン酸の添加を含む。二価金属イオンゲル化槽で架橋時に、ヒアルロン酸を封入してもよい。封入されたヒアルロン酸は、アルギネートリアーゼ－アルギネートミクロスフェアの分解により塞栓部位で放出され得る。ヒアルロン酸の放出は、神経障害性疼痛を緩和し得る。
ゲル化槽の組成
前駆体アルギネートリアーゼ酵素－アルギン酸ナトリウム（適切な分子量およびＭ／Ｇ比）溶液は、適切な条件（低い温度、ｐＨ、または金属イオン）下で、ヒアルロン酸（４．２および４．３節で言及したように）と共に二価金属イオン槽中でゲル化してミクロスフェアを形成する必要がある。得られた粒子サイズは、＞４０μｍ、＜２００μｍ、しかし＜２０００μｍであり得る。二価の架橋したアルギネートミクロスフェアの分解を低減するために、ゲル化槽の温度およびｐＨはそれぞれ、１～４℃および３．０で維持され得る。ｐＨは、上記の節で言及したイオン強度を有する緩衝剤を使用して維持され得る。ゲル化槽の組成および条件は、所望のアルギネートベースの塞栓粒子を作製するために重要である。ゲル化槽組成物の二価金属イオン構成要素は、Ｃｕ２＋、Ｂａ２＋、Ｓｒ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｏ２＋、Ｎｉ２＋、Ｍｎ２＋、およびＭｇ２＋からなる群から選択され得る（Lee, et al., "Alginate: properties and biomedical applications," Progress in polymer science 37, no. 1(2012): 106-126;およびBrus, et al., "Structure and dynamics of alginate gels cross-linked by polyvalent ions probed via solid state NMR spectroscopy," Biomacromolecules 18, no. 8(2017): 2478-2488）。二価カチオンの選択はまた、アルギネートマトリックスの架橋にも影響を及ぼし得る。二価金属イオンとアルギネートとの結合強度は、漸減順にＣｕ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｓｒ２＋＞Ｃａ２＋＞Ｃｏ２＋＞Ｎｉ２＋＞Ｍｎ２＋＞Ｍｇ２＋で与えられる。好ましい金属カチオンは、Ｂａ２＋およびＣａ２＋である。これらの金属イオンを、０．１重量／体積％～１０重量／体積％の範囲の異なる濃度で使用してもよい。二価金属イオンの好ましい濃度は、２重量／体積％であり得る。
凍結乾燥および滅菌
アルギネートリアーゼおよびヒアルロン酸を含有する自己分解可能アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命は、凍結乾燥および凍結乾燥製品の滅菌を通して改善され得る。これらの調製後プロセスに関して、凍結保護剤を、前駆体溶液（以前の節で得られた）およびゲル化槽に添加してもよい。凍結保護剤の添加は多くの方面で重要である。第１に、これは、凍結乾燥プロセスの際に、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の真球度および機械的頑強性を維持するために役立つ。第２に、これは、超低温および凍結サイクルでの酵素の３Ｄ立体構造を保存し、それによって酵素活性を保存する。凍結乾燥後のミクロスフェア形状の回復は、問題として見なされた。これは、凍結乾燥の際に高い水分含有量のゲルが縮小し、しばしば再水和時にその元の形状を再確立しないことから予想外ではない。砂糖およびポリマーなどの凍結保護剤の添加は、これを補完して、構造内の内部水の昇華の際に多孔性構造を維持するために役立ち得る。同様に、凍結保護剤／凍結保護媒体を添加することなく酵素の凍結乾燥を実施した場合［１２、１３］、酵素の残存活性は有意に低減したことも観察されている。このように、凍結保護剤の使用はまた、水性媒体中での再構成時に形状の急速な回復を補助し、酵素を含む活性成分の機能性の保持を可能にする。
凍結保護剤を含有する前駆体およびゲル化溶液の組成。無処置または前処置された前駆体アルギネートリアーゼ酵素－アルギン酸ナトリウムおよびゲル化溶液を、ヒドロキシプロピル－ベータシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）などの凍結保護剤と異なる割合で混合してもよい。
表１は、前駆体およびゲル化槽溶液中の凍結保護剤の組成を記載する。前駆体溶液およびゲル化槽のための凍結保護剤の好ましい濃度は、アルギネート濃度の重量／体積％として記載され、これらはそれぞれ、二価金属イオン濃度に関して０．１重量／体積％～４重量／体積％および０．１重量／体積％～１０重量／体積％であり得る。トレハロース、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、ＰＶＰ（分子量４０ｋＤａ）、およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度はそれぞれ、０．１重量／体積％～２０重量／体積％、０．１重量／体積％～２重量／体積％、０．１重量／体積％～１重量／体積％、および０．１重量／体積％～１重量／体積％の範囲を有し得る。グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールなどの他の凍結保護剤はまた、上記の凍結保護剤と類似の割合の安定化剤１であり得る。一実施形態では、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、またはポリグリコール安定化剤１は、安定化剤２と共に使用される。
これらの凍結保護剤の構成要素を、無処置および前処置前駆体溶液と１５分間～１時間混合した後、二価金属イオンと架橋するために凍結保護剤を含有するゲル化槽に添加して、アルギネートリアーゼおよび凍結保護剤を含有するアルギネートミクロスフェアを形成してもよい。これらのミクロスフェアを凍結乾燥サイクルに供し、３質量％またはそれ未満、好ましくは２質量％またはそれ未満、およびより好ましくは１質量％またはそれ未満の水分含有量を有する凍結乾燥粒子を得てもよい。バイアルに密封された乾燥条件下で、乾燥粒子を、高エネルギー放射線滅菌（ガンマ線または電子線照射）にさらに供してもよい。これらの凍結乾燥されて滅菌されたアルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアは、≦２４カ月間貯蔵することができる。
アルギネートリアーゼをロードした光架橋自己分解可能アルギネートミクロスフェアを調製するための組成物および方法
アルギネートリアーゼをロードした自己分解可能光架橋アルギネート粒子は、メタクリレート－アルギネートおよび光重合開始剤を使用して調製することができる。光架橋した粒子の分解は、（ｉ）光架橋アルギネートミクロスフェアにロードされたアルギネートリアーゼ酵素（ｐＨ、温度、および金属イオン阻害剤によって前処置され得る）、（ｉｉ）既定の分子量およびＭ（β－Ｄ－マンヌロン酸）およびＧ（α－Ｌ－グルロン酸）ブロックの比（Ｍ／Ｇ））のメタクリレート置換／官能化アルギネート、（ｉｖ）光重合開始剤のメタクリレートアルギネート濃度に対する比、ならびに（ｖ）粒子の架橋に影響を及ぼす光照射の持続時間を含む、前駆体溶液の組成を制御することによってモジュレートすることができる。
二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアと同様に、アルギネートリアーゼを含有する前駆体溶液は、アルギネートを分解し得る。これは、アルギネートの粘度を低減させ、アルギネートの酵素ローディング能を低減させ、粒子のサイズおよび形状に有害に影響を及ぼし得る。したがって、前駆体溶液を、光照射に供する前に、異なるｐＨ、低い温度および金属イオン阻害剤への曝露において前処置してもしなくてもよい。
前駆体溶液の全ての前処置プロセスは、二価金属イオン架橋ミクロスフェアの調製に関して言及したものとまさに同じである。
本明細書において、メタクリレート－アルギネートの分子量およびＭ：Ｇブロックの比を検討する。
架橋したアルギネート粒子の分解は、前駆体溶液の組成：（ｉ）アルギネートミクロスフェアにロードされたアルギネートリアーゼ酵素（ｐＨ、温度、および金属イオン阻害剤によって前処置され得る）の濃度ならびに（ｉｉ）アルギネートの既定の分子量およびＭ（β－Ｄ－マンヌロン酸）およびＧ（α－Ｌ－グルロン酸）ブロックの比（Ｍ／Ｇ）によって制御することができる。
前駆体溶液では、アルギネートリアーゼ酵素は、アルギネートリアーゼ酵素のアルギネート粒子への封入に影響を及ぼし得るアルギネートの切断を引き起こす。これはまた、アルギネート粒子内の封入効率を維持するため、ならびに所望のサイズおよび形状の粒子を得るための両方にとって重要であるアルギネート溶液の初回粘度を低減させる。したがって、酵素は、架橋のために前駆体ミックスを二価金属イオンゲル化槽に添加する前に、異なるｐＨ、低い温度、および／または金属イオン阻害剤への曝露において前処置され得る。
リアーゼ酵素の最適な触媒活性は、６．８～７．５の範囲のｐＨで観察される。アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の調製時のアルギン酸ナトリウムの初回分解を防止するために、アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム溶液のｐＨを、３．０に低減してもよい。このプロセスを行うために、酢酸ナトリウム－酢酸緩衝剤は、イオン強度＜１Ｍ、好ましくは＜０．１Ｍ、および最も好ましくは＜０．０１Ｍ、ｐＨ範囲３．７～５．６である。加えて、溶液の所望のｐＨ（ｐＨ６．５～３．０）をまた、水酸化ナトリウム（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）または塩酸（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）を使用して達成してもよい。これによって、アルギネートリアーゼ触媒活性の低減または停止が起こる。触媒活性のこの調節は、アルギネートリアーゼ酵素の３Ｄ立体構造のアンフォールディングに起因し得る。アルギネートリアーゼ酵素の停止した触媒活性は、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子を、ｐＨ６．５～７．５を有する水性環境に曝露することによって逆転／活性化され得る。アルギネートリアーゼ酵素の活性を逆転させるための好ましい緩衝剤は、リン酸緩衝剤である。リン酸緩衝剤の好ましいイオン強度は、２０℃、ｐＨ範囲６．５～７．５で０．０１Ｍである。溶液の所望のｐＨ（ｐＨ６．５～７．５）を、水酸化ナトリウム（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）または塩酸（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）を使用して達成してもよい。さらに、食塩水または脱イオン水またはｐＨ６．５～７．５の間を有する水溶液もまた、使用してもよい。
溶液のｐＨを変化させることと組み合わせて、混合前の前駆体溶液の個々の構成要素の温度を、アルギネートの分解を阻害するために１～４℃に維持してもよい。個々の構成要素の混合後の前駆体溶液の温度を、アルギネートの分解を阻害するために１～４℃で維持してもよい。温度はまた、溶液の粘度にも影響を及ぼすことに注意されたい。
前駆体溶液のｐＨおよび温度を変化させることに加えて、酵素を、金属イオン阻害剤、例えばＣｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋によって前処置してもよい。これらの金属イオンは、酵素の活性を阻害することができる（Inoue, et al., "Functional identification of alginate lyase from the brown alga Saccharina japonica", Sci. Rep. 2019;9:1-11）。
生物活性剤の封入
以前の報告は、高分子量ヒアルロン酸（１００～５００ｋＤａ）が、抗炎症活性および免疫抑制活性を示すことを実証した。多くの塞栓の医学的介入は、高分子量ヒアルロン酸の使用によって軽減され得る神経障害性疼痛を引き起こす。本発明は、メタクリレート－アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン架橋メタクリレート－アルギネートミクロスフェアにおける高分子量ヒアルロン酸の封入を開示する。前駆体溶液に、高分子量ヒアルロン酸を含む抗炎症性生物活性剤を添加してもよい。これは、前駆体溶液中のメタクリレート－アルギネート濃度の１重量％～２０重量％のヒアルロン酸の添加を伴う。二価金属イオン－ゲル化槽中で架橋すると、ヒアルロン酸が封入され得る。封入されたヒアルロン酸は、メタクリレート－アルギネートリアーゼ－メタクリレート－アルギネートミクロスフェアの分解により塞栓部位で放出され得る。ヒアルロン酸の放出は、神経障害性疼痛を緩和し得る。
自己分解可能光架橋アルギネートミクロスフェアを作製するために、水溶性光重合開始剤、例えばＩｒｇａｃｕｒｅ２９５９、Ｉｒｇａｃｕｒｅ１８４、Ｉｒｇａｃｕｒｅ６５１、Ｉｒｇａｃｕｒｅ３６９、およびＩｒｇａｃｕｒｅ９０７を使用してもよい。好ましい光重合開始剤は、Ｉｒｇａｃｕｒｅ２９５９である。これらの光重合開始剤は、波長３２０～４１０ｎｍの紫外線による照射によって活性化してラジカルを形成するが、理想的な波長は３６５ｎｍである。ミクロスフェアの分解はまた、メタクリレート－アルギネートの濃度、光重合開始剤、およびＵＶ照射の持続時間にも依存する。前駆体溶液中のメタクリレートアルギネートおよび光重合開始剤の濃度はそれぞれ、重量／体積％～４重量／体積％および０．１重量／体積％～１．５重量／体積％の範囲を有し得る。急速に分解するアルギネートミクロスフェアの場合（≦５日間）、アルギネートおよび光重合開始剤の好ましい濃度はそれぞれ、１重量／体積％～１．５重量／体積％および０．１重量／体積％～０．３重量／体積％であり得る。中間の分解期間（＞５日間～＜３０日間）の場合、アルギネートおよび光重合開始剤の好ましい濃度はそれぞれ、２重量／体積％～３重量／体積％および０．４重量／体積％～０．８重量／体積％であり得る。アルギネート粒子の遅い分解はそれぞれ、アルギネートおよび光重合開始剤の好ましい濃度である３重量／体積％～４重量／体積％および０．９重量／体積％～１．５重量／体積％を使用して達成され得る。さらに、ＵＶ照射の持続時間は、＞１０秒～＜１０分の範囲を有し得るが、急速に分解するミクロスフェアの好ましい持続時間は、＜１分であり得、中間に分解する期間の照射の持続時間は、１～５分であり得るが、遅く分解するアルギネートミクロスフェアの場合、照射期間は、＞５分であるが、＜１０分である。
ミクロスフェアを調製する方法は、ドロップキャスティング技術を含み、前駆体溶液の液滴は、超疎水性表面（例えば、ＰＴＦＥ）上にプリントされ得るか、または例えばシングルもしくはダブルエマルジョン－マイクロ流体力学プラットフォームを使用して生成され得る。所望のサイズの液滴が生成されると、ＵＶ光を曝露してアルギネートの鎖を架橋させ、球状のアルギネートリアーゼをロードしたアルギネートミクロスフェアが形成され得る。
マイクロ流体力学を使用してアルギネート粒子およびアルギネートリアーゼ封入アルギネート粒子を作製する方法
アルギネート粒子は、アルギネート液滴の形状、サイズ、および形態に対して正確な制御を提供する液滴マイクロ流体力学を通して産生される。典型的に、アルギネート溶液を、水溶性Ｃａ－ＥＤＴＡまたは水に不溶性のＣａＣＯ３粒子と混合し、マイクロ流体力学プラットフォーム上の油相中で乳化し、所望のサイズおよび形状のアルギネート溶液の液滴を生成する。アルギネートの液滴を、酸性条件下でＣａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３から放出された二価Ｃａ２＋イオンと架橋させることができる。この架橋は、「オンチップ」または「オフチップ法」を通して実施され、Ｃａ２＋架橋アルギネートビーズを生成することができる。しかしながら、この従来の方法は、アルギネートリアーゼのような高分子を酸性のｐＨ環境でアルギネート粒子を有効に封入することができる場合には、使用することが難しい。したがって、上記の従来の方法を使用して、アルギネートリアーゼ酵素をアルギネートビーズに封入する場合、Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３を含有するアルギネートリアーゼ－アルギネート混合物は酸性条件下でゲル化し、溶液は、マイクロ流体力学プラットフォームの中を通過してアルギネート前駆体溶液液滴を生成することができない。この欠点を克服するために、マイクロ流体力学を使用してアルギネートリアーゼ封入アルギネートビーズの生成に成功した新規方法を以下に提示する。
アルギネートリアーゼのアルギネートビーズへの封入を、本開示の液滴マイクロ流体力学方法を使用して実施し、前駆体溶液は、１～４℃の温度でｐＨ１０の緩衝剤中で調製され、アルギネート、アルギネートリアーゼ、およびＣａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３を含む。一実施形態では、前駆体溶液は賦形剤を含む。別の実施形態では、賦形剤は、前駆体溶液から形成されたアルギネートリアーゼ封入アルギネートビーズを洗浄するために溶液中で使用される。一実施形態では、賦形剤を含む水を使用して、前駆体溶液から形成されたアルギネートリアーゼ封入アルギネートビーズを洗浄する。アルギネートは、既定の分子量およびＧ／Ｍ比のアルギネートであり得る。Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３の濃度は、１Ｍ～０．０１Ｍの範囲にあり、好ましい濃度は０．０５Ｍ～０．１Ｍである。
アルギネートリアーゼ酵素の活性は、０．００１ｎＵ／ｍｇ～０．２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲であり得る。アルギネートミクロスフェアの急速な分解に関して（≧２日間～≦５日間）、酵素の好ましい活性は、０．５ｍＵ／ｍｇ～０．２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲であり得る。中間の分解（＞５日間～≦３０日間）または遅い分解（＞３０日間）期間を得るために、酵素活性の好ましい範囲はそれぞれ、＜０．５ｍＵ／ｍｇ～＞０．１μＵ／ｍｇアルギネートおよび＜０．１μＵ／ｍｇ～＞０．００１ｎＵ／ｍｇアルギネートであり得る。
緩衝液は、８．０～１３．０のｐＨ範囲を有し、緩衝剤の好ましい範囲は９．０～１１．０である。アルギネート、アルギネートリアーゼ、およびＣａ－ＥＤＴＡ溶液を調製するために使用することができる共通の緩衝剤系は、フタル酸水素二ナトリウム／オルトリン酸二水素ナトリウム、バルビトンナトリウム／塩酸、フタル酸水素二カリウム／オルトリン酸二水素カリウム、オルトリン酸二水素カリウム／水酸化ナトリウム、バルビトンナトリウム／塩酸、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン／塩酸、テトラホウ酸ナトリウム／塩酸、グリシン／水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム／炭酸水素ナトリウム、テトラホウ酸ナトリウム／水酸化ナトリウム、重炭酸ナトリウム／水酸化ナトリウム、オルトリン酸水素ナトリウム／水酸化ナトリウム、および塩化カリウム／水酸化ナトリウムである。最も好ましい緩衝剤系は、重炭酸ナトリウム／水酸化ナトリウムである。緩衝剤のイオン強度は、＜１Ｍであり、好ましい範囲は、＜０．５Ｍ～＞０．０５Ｍであり、最も好ましくは≦０．１Ｍである。好ましい温度範囲は、＜１０℃であり、最も好ましくは＞１℃～＜４℃である。上記の条件は、アルギネート液滴の生成を可能にし、アルギネートリアーゼを封入したビーズを調製する従来の方法が直面する問題を、２つの方法で克服する：（ａ）これらの条件は、アルギネートリアーゼ酵素の活性を阻害し、このように前駆体溶液中のアルギネートの初回分解を防止し、および（ｂ）これらの条件は、Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３からのＣａ２＋イオンの放出を防止する。さらに、前駆体溶液は、油と共に、好適なマイクロ流体力学チップの中を通過してアルギネート液滴（油中水エマルジョン法）を形成する。これらの液滴は、それらを濃度０．０１体積／体積％～５体積／体積％の酢酸に曝露することによって二価Ｃａ２＋イオンによって架橋される。酢酸濃度の好ましい範囲は、１体積／体積％～２体積／体積％酢酸である。酢酸に曝露すると、Ｃａ２＋イオンは、Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３から放出され、アルギネートのエッグボックスに結合し、Ｃａ２＋架橋アルギネートリアーゼをロードしたアルギネートビーズを形成する。次に、これらのビーズを、賦形剤を含有する脱イオン水によって洗浄し、酸を除去する。必要であれば、ビーズをさらに、濃度２重量／体積％～１０重量／体積％の範囲の塩化カルシウム溶液中で架橋する。洗浄したビーズを、賦形剤を含有する溶液中で６～２４時間の持続時間、懸濁させ、フリーズドライに供する。フリーズドライした粒子を、中性ｐＨ緩衝剤中で再構成し、アルギネートリアーゼ酵素を活性化して、アルギネートビーズの分解を開始することができる。
凍結乾燥および滅菌
アルギネートリアーゼおよびヒアルロン酸を含有する自己分解可能アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命は、凍結乾燥および凍結乾燥産物の滅菌を通して改善され得る。これらの調製後プロセスに関して、凍結保護剤を前駆体溶液およびゲル化槽に添加してもよい。凍結保護剤の添加は多くの点で重要である。第１に、これは、凍結乾燥プロセスの際のアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の真球度および機械的頑強性を維持するために役立つ。第２に、これは超低温および凍結サイクルで酵素の３Ｄ立体構造を保存し、それによって酵素活性を保存する。凍結乾燥後のミクロスフェア形状の回復は、問題であると考えられた。高水分含有量のゲルは凍結乾燥の間に縮小し、しばしば再水和時にその元の形状を再確立しないことから、このことは予想外ではない。砂糖およびポリマーなどの凍結保護剤を添加すると、これを補完することができ、構造内の内部水の昇華の間に多孔性構造を維持するために役立つ。同様に、酵素の残存活性は、凍結保護剤／凍結保護媒体を添加することなく酵素の凍結乾燥を実施した場合には有意に低減されたことが観察されている［１２、１３］。このように、凍結保護剤の使用はまた、水性媒体中での再構成時に形状の迅速な回復を補助し、酵素を含む活性成分の機能性の保持を可能にする。
凍結保護剤を含有する前駆体およびゲル化溶液の組成。無処置または前処置された前駆体アルギネートリアーゼ酵素－アルギン酸ナトリウムおよびゲル化溶液（４．１および４．２節に記載のように）を、ヒドロキシプロピル－ベータシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）などの凍結保護剤と異なる割合で混合してもよい。
表１は、前駆体およびゲル化槽溶液中の凍結保護剤の組成を記載する。前駆体溶液およびゲル化槽に関する凍結保護剤の好ましい濃度は、アルギネート濃度の重量／体積％として記載され、二価金属イオン濃度に関してそれぞれ、０．１重量／体積％～４重量／体積％および０．１重量／体積％～１０重量／体積％であり得る。トレハロース、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、ＰＶＰ（分子量４０ｋＤａ）、およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度はそれぞれ、０．１重量／体積％～２０重量／体積％、０．１重量／体積％～２重量／体積％、０．１重量／体積％～１重量／体積％、および０．１重量／体積％～１重量／体積％の範囲を有し得る。
これらの凍結保護剤構成要素を、無処置および前処置前駆体溶液と１５分間～１時間混合した後、二価金属イオンと架橋するために凍結保護剤を含有するゲル化槽に添加して、アルギネートリアーゼおよび凍結保護剤を含有するアルギネートミクロスフェアを形成してもよい。これらのミクロスフェアを、凍結乾燥サイクルに供して、水分含有量が３質量％またはそれ未満、好ましくは２質量％またはそれ未満、およびより好ましくは１質量％またはそれ未満であるフリーズドライ粒子を得てもよい。バイアルに密封された乾燥条件下で、乾燥粒子を、高エネルギー放射線滅菌（ガンマ線または電子線照射）にさらに供してもよい。これらの凍結乾燥されて滅菌されたアルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン架橋アルギネートミクロスフェアを、≦２４カ月間保存することができる。
追加の実施形態
精製されたアルギネートまたはアルギネートの酸化形態の濃度もまた、二価複合体形成アルギネートビーズの孔サイズおよび頑強性に影響を及ぼし得る。アルギネートの濃度は、アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子を急速に分解する（≧２日間～≦５日間）および遅く分解する（＞５日間～≦３０日間）調製物に関して、約０．０５重量／体積％、０．１０重量／体積％、０．１５重量／体積％、０．２０重量／体積％、０．２５重量／体積％、０．３０重量／体積％、０．３５重量／体積％、０．４０重量／体積％、０．４５重量／体積％、０．５０重量／体積％、０．６０重量／体積％、０．７０重量／体積％、０．８０重量／体積％、０．９０重量／体積％、１．０重量／体積％、１．２５重量／体積％、１．５重量／体積％、１．７５重量／体積％、２．０重量／体積％、２．２５重量／体積％、２．５重量／体積％、２．７５重量／体積％、３．０重量／体積％、３．２５重量／体積％、３．５重量／体積％、３．７５重量／体積％、４重量／体積％、４．２５重量／体積％、４．５重量／体積％、４．７５重量／体積％、５．０重量／体積％、５．２５重量／体積％、５．５重量／体積％、５．７５重量／体積％、６．０重量／体積％であり得るか、または約６．０重量／体積％より高い濃度であり得る。
加えて、アルギネート粒子が金属イオン槽内で架橋されるゲル化時間はまた、二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子のサイズ、真球度、および物理的頑強性にも影響を及ぼし得る。一般的に、「真球度」という用語は、物体の形状が完全な球体の形状にどれほど厳密に類似するかに関する尺度を指し得る。注入可能物質の真円度は、例えば異常な形状の物質は、血管の中を移動して血管の閉塞をもたらし、それによって体の様々な部分への血流を遮断することが難しくなり得ることから、重要であり得る。ゲル化時間は、約１分未満、約２分未満、約３分未満、約４分未満、約５分未満、約６分未満、約７未満、約８分未満、約９分未満、約１０分未満、約１１分未満、約１２分未満、約１３分未満、約１４分未満、約１５分未満、約２０分未満、約２５分未満、または約３０未満であり得る。
アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の所望の分解期間を達成するために、好ましいアルギネートと混合した酵素の量を変化させてもよい。アルギネートと混合したアルギネートリアーゼの量は、急速に分解する（≧２日間～≦５日間）、中間に分解する（＞５日間～≦３０日間）、または遅く分解する（＞３０日間）二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子の調製物に関して、＜１単位から５０単位／ｍｌアルギン酸ナトリウムまで変化する。明快にするために、酵素学では１単位（Ｕ）は、１分あたり１μｍｏｌの基質の反応を触媒する酵素の量である。二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子への酵素のローディング量はまた、アルギン酸ナトリウムの分子量または粘度にも依存する。
ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約０．００１ナノ単位（ｎＵ）／粒子、約０．０１ｎＵ／粒子、約０．１０ｎＵ／粒子、約０．５０ｎＵ／粒子、約０．００１ミリ単位（ｍＵ）／粒子、約０．０１ｍＵ／粒子、約０．０５ｍＵ／粒子、約０．１０ｍＵ／粒子、約０．２５ｍＵ／粒子、約０．５０ｍＵ／粒子、約０．７５ｍＵ／粒子、約１．０ｍＵ／粒子、約１．２５ｍＵ／粒子、約１．５ｍＵ／粒子、約１．７５ｍＵ／粒子、約２．０ｍＵ／粒子、約２．２５ｍＵ／粒子、約２．５ｍＵ／粒子、約２．７５ｍＵ／粒子、約３．０ｍＵ／粒子、約３．２５ｍＵ／粒子、約３．５ｍＵ／粒子、約３．７５ｍＵ／粒子、約４．０ｍＵ／粒子、またはその任意の２つの値の間の範囲である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約０．００１ｍＵ～４．０ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は約０．０１ｍＵ～３ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約０．０５ｍＵ～２．５ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約０．０５ｍＵ～０．５ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約０．５ｍＵ～１．０ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約１．０ｍＵ～１．５ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約１．５ｍＵ～２．０ｍＵ／粒子の間である。ある特定の実施形態では、アルギネートリアーゼ酵素の活性は、約２．０ｍＵ～２．５ｍＵ／粒子の間である。アルギネートリアーゼ酵素の粒子あたりの活性は、Ｘ個の粒子を作製するために使用されるアルギネートの量、およびＸ個の粒子を調製するために使用される酵素の量の関数として決定され得る。例えば、アルギネートリアーゼ酵素の粒子あたりの活性は、アルギネート１００ｍｇが粒子２０，０００個に変換されることに基づいて、約１～約５０単位の間の酵素を含有する約０．０５ｍＵ～２．５ｍＵ／粒子の間であると決定され得る。
さらに、酵素をロードしたアルギネート粒子の分解はまた、アルギネートリアーゼ酵素活性を調節することによっても制御することができる。アルギネートリアーゼの触媒分解活性を制御するために、酵素は、＜１ｍＭのＣｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋金属イオンと複合体を形成してもよく、またはそれによって前処置してもよい。これらの金属イオンは、酵素活性をおよそ９０％阻害することができる。１ｍＭ濃度の他の金属イオン、例えばＭｇ２＋およびＣａ２＋はそれぞれ、活性を２０％～５０％低減させる。遊離のまたは未結合の金属イオンを、透析を通して溶液から除去してもよい。これらの金属イオンは酵素の活性を阻害することができ、酵素にとって有害であると考えられ得る（Inoue, et al., "Functional identification of alginate lyase from the brown alga Saccharina japonica", Sci. Rep. 2019;9:1-11）。逆に、同じ考え方を、本開示のある特定の実施形態に採用して、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の分解を調節する。重要なことに、この酵素は、生理的温度およびｐＨで最適な酵素活性を示す。このように、ｉｎ ｖｉｖｏ条件下では、酵素活性を、急速に（≧２日間～≦５日間）およびより長く（＞５日間～≦３０日間または＞３０日間）粒子を分解する持続時間を達成するように、これらの金属イオンのみを使用して調節することができた。
一般的に、酵素は、不活性なまたは不溶性マトリックスに固定され得る。これは、ｐＨまたは温度などの酵素反応に影響を及ぼす生理的要因に対する耐性を提供し、反応速度も増加させる。これはまた、酵素をその場（例えば、粒子の内部、表面修飾等）に局在したままにする。本開示のある特定の実施形態では、改変または天然のアルギネートリアーゼ酵素はそのアルギン酸ナトリウム基質（不活性マトリックスではなくて反応性）に固定／封入される。したがって、別の重要な態様は、アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム前駆体溶液からアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子を製造する際の最初の分解を回避することである。この問題を克服するために、本開示のある特定の実施形態では、以下のアプローチが使用のために提唱される。
酵素を、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｆｅ３＋、Ｍｇ２＋、およびＣａ２＋などの金属イオン阻害剤によって前処置してもよい。粒子の物理的頑強性に影響を及ぼすことなく最適な濃度のこれらの金属イオンは、酵素活性を部分的に阻害することによって粒子の分解を低減し得る。
別のアプローチは、アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム前駆体溶液の温度を周囲温度から４～１０℃の範囲の温度に低下させることである。これは、アルギネートリアーゼの触媒活性を低減させるかまたは停止させ、それによってアルギン酸ナトリウムの分解を防止する。加えて、二価金属イオンゲル化槽の温度もまた、１～１０℃の範囲に低減させてもよい。この金属イオン槽を、アルギン酸ナトリウム－アルギネートリアーゼ溶液の液滴をゲル化させるために使用して、二価金属イオン複合体形成アルギネートリアーゼをロードしたアルギン酸ナトリウム粒子を形成する。
アルギネートリアーゼの触媒活性はまた、アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウムおよびゲル化槽溶液のｐＨを変化させることによって調節され得る。この酵素の最適な触媒活性は、６．８～７．５の範囲のｐＨで観察される（例えば、Farres, et al., "Formation kinetics and rheology of alginate fluid gels produced by in-situ calcium release", Food Hydrocolloids 40(2014): 76-84を参照されたい）。アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の調製時のアルギン酸ナトリウムの初回分解を防止するために、アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム溶液のｐＨを、３．０に低下させてもよい。このプロセスを行うために、酢酸ナトリウム－酢酸緩衝剤は、イオン強度＜１Ｍ、好ましくは＜０．１Ｍ、および最も好ましくは＜０．０１Ｍで、ｐＨは３．７～５．６の範囲である。加えて、溶液の所望のｐＨ（ｐＨ６．５～３．０）をまた、水酸化ナトリウム（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）または塩酸（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）を使用して達成してもよい。これは、アルギネートリアーゼ触媒活性の低減または停止をもたらす。触媒活性のこの調節は、アルギネートリアーゼ酵素の３Ｄ立体構造のアンフォールディングに起因し得る。停止したアルギネートリアーゼ酵素の触媒活性は、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子を、ｐＨ６．５～７．５を有する水性環境に曝露することによって逆転／活性化され得る。アルギネートリアーゼ酵素の活性を逆転させるために好ましい緩衝剤は、リン酸緩衝剤である。リン酸緩衝剤の好ましいイオン強度は、０．０１Ｍであり、ｐＨ範囲は２０℃で６．５～７．５である。溶液の所望のｐＨ（ｐＨ６．５～７．５）はまた、水酸化ナトリウム（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）または塩酸（＞１Ｍ～＜０．０１Ｍ）を使用しても達成され得る。加えて、食塩水または脱イオン水またはｐＨ６．５～７．５の間を有する水溶液もまた使用してもよい。
したがって、上記のアプローチの組合せを効率よく使用して、アルギネートリアーゼ酵素は、アルギネートマトリックスを分解することなく二価金属イオンと複合体を形成した／ゲル化したアルギネート粒子に封入またはロードされ得る。
前駆体アルギネートリアーゼ酵素－アルギン酸ナトリウム溶液は、適切な条件下（低い温度およびｐＨ）で、１つまたは複数の凍結保護剤を含有する二価金属イオン槽中でゲル化する必要がある。ゲル化槽の組成および条件は、所望のアルギネートベースの塞栓粒子を作製するために重要である。ゲル化槽組成物の二価金属イオン構成要素は、Ｃｕ２＋、Ｂａ２＋、Ｓｒ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｏ２＋、Ｎｉ２＋、Ｍｎ２＋、およびＭｇ２＋からなる群から選択され得る（Lee, et al., "Alginate: properties and biomedical applications," Progress in polymer science 37, no. 1(2012): 106-126;およびBrus, et al., "Structure and dynamics of alginate gels cross-linked by polyvalent ions probed via solid state NMR spectroscopy," Biomacromolecules 18, no. 8(2017): 2478-2488）。二価カチオンの選択はまた、アルギネートマトリックスの架橋にも影響を及ぼし得る。二価金属イオンとアルギネートとの結合強度は、漸減順にＣｕ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｓｒ２＋＞Ｃａ２＋＞Ｃｏ２＋＞Ｎｉ２＋＞Ｍｎ２＋＞Ｍｇ２＋で与えられる。好ましい金属カチオンは、Ｂａ２＋およびＣａ２＋である。これらの金属イオンは、０．１重量／体積％～１０重量／体積％の範囲の異なる濃度で使用され得る。ゲル化槽中の凍結保護剤の添加は２つの点で重要である：（ａ）これは、凍結乾燥プロセスの間にアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の真球度および機械的頑強性を維持するために役立ち、ならびに（ｂ）これはまた超低温および凍結サイクルにおいて酵素の３Ｄ立体構造を保存し、それによって酵素活性を保存する。
多くの例では、酵素の残存活性が、凍結保護剤／凍結保存媒体を添加することなく酵素の凍結乾燥を実施した場合に有意に低減されることが観察されている（Tamiya, et al., "Freeze denaturation of enzymes and its prevention with additives," Cryobiology 22, no. 5(1985): 446-456;およびPorter, et al., "Effects of freezing on particulate enzymes of rat liver," J. Biol. Chem 205(1953): 883-891）。凍結保護剤構成要素は、当技術分野で公知の構成要素、例えばスクロース、グリセロール、エチレングリコール、ソルビトール、トレハロース、プロピレングリコール、または固有の／市販の凍結保護剤を含み得る。これらの凍結保護剤を、ゲル化槽に加える場合、これはアルギン酸ナトリウム粒子のマトリックスに封入されるか、またはその中で均一に分布する（Chan, et al., "Effects of starch filler on the physical properties of lyophilized calcium-alginate beads and the viability of encapsulated cells," Carbohydrate polymers 83, No. 1(2011): 225-232）。
加えて、凍結保護剤をまた、二価金属イオンを含有するゲル化槽中でこれらの粒子の製造プロセスの際に添加する代わりに、フリーズドライしたアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の調製のプロセシング段階後に使用してもよい。このプロセスでは、前駆体アルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム溶液の液滴を、二価金属イオンのみを含有するゲル化槽に添加して、アルギネート－リアーゼ（lyse）をロードしたアルギネート粒子を形成した。ゲル化槽からのこれらの粒子の単離後、これを好適な凍結保護剤中に浸し、フリーズドライプロセスに供してもよい。フリーズドライ条件下では、これは酵素の凍結変性を防止し、ならびに水がマトリックスから昇華する際に形成される孔を塞ぐことによりゲル構造の崩壊を防止することによって、欠陥のないアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子を提供する。粒子サイズは、＞４０μｍ、＜２００μｍであり得るが、＜２０００μｍであり得る。同様に、このプロセスを使用して、微小線維、コア－シェル粒子、ヤーヌス粒子、またはカプセルなどの異なる形態学のアルギネートベースの塞栓剤を調製してもよい。
さらに、ある特定の実施形態では、本開示は、Ｘ線不透過性のおよび薬物をロードしたアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の両方の調製を提供する。これを達成するために、Ｃａ２＋イオン、ならびに以下のＸ線造影金属イオン、例えばバリウム、ガドリニウム、およびタンタル金属イオンの１つを含有する二価金属イオンの組成物（Yu, et al., "Metal-based X-ray contrast media," Chemical Reviews 99, no. 9 (1999): 2353-2378）を、ゲル化槽において使用することが提唱されている。別の提唱されるアプローチは、市販のＸ線不透過剤によるアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子の再構成であり、これはアルギネートマトリックスが水性媒体中で膨張するとマトリックスに一時的に吸収されるようになる。薬物／生物活性剤（抗がん剤および骨形成剤）を、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子にロードする提唱される方法は、これらの粒子を薬物に２～３時間曝露することを伴う。体における薬物の送達は、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子のその場での分解機構によって容易となる。
ある特定の実施形態では、酵素をロードしたアルギネートミクロスフェアを長期間保存してもよい。ある特定の実施形態では、金属イオンと複合体を形成した酵素をその基質に固定する。マトリックスの遅い分解は、貯蔵状態の間に始まることが企図される。この分解は、ミクロスフェアを５．５未満のｐＨ中に懸濁することによって停止され得る。アルギネートミクロスフェアの分解を防止するために、操作温度を１０℃未満に低下させることとは別に、代替方法は、これらのミクロスフェアをフリーズドライまたは真空乾燥することである。これは、アルギネートミクロスフェアの分解を停止させ得る。ある特定の実施形態では、乾燥した球体を、特に設計されたシリンジにロードしてもよい。
図１８は、ミクロスフェアを再構成および／または投与するためのシリンジの提唱される設計を例証する。シリンジは、ロック位置であってもアンロック位置であってもよいプランジャー７０１を含み得る。シリンジはまた、懸濁媒体７０２を含む第１のチャンバー、乾燥ミクロスフェア７０３を含む第２のチャンバーも含み得る。一般的に、シリンジは、圧力がプランジャーに適用されるまではシリンジのチャンバーの各々の含有量が分離され（例えば、流体的に）、それによって各チャンバーの内容物を混合する（例えば、ミクロスフェアを再構成する）ように、構築および構成され得る。当技術分野で公知の任意のマルチチャンバー凍結乾燥シリンジを使用してもよいと企図される。ある特定の実施形態では、シリンジは、第１のチャンバー７０１と第２のチャンバー７０２とを隔てる破断可能な膜７０４を含み得る。圧力がプランジャー７０１に適用されると、破断可能な膜が破断し、第１のチャンバーの内容物が、第２のチャンバー７０３の乾燥ミクロスフェアと接触し、ミクロスフェアを再構成する。他の実施形態では、シリンジは、液体バイパス管を含む。なお別の実施形態では、シリンジの第１のチャンバーと第２のチャンバーを隔てる障壁は、一方向弁を含み得る。圧力がプランジャー７０１に適用されると、一方向弁は強制的に開き、第１のチャンバーの内容物が第２のチャンバーの乾燥ミクロスフェアと接触してミクロスフェアを再構成する。一部の実施形態では、再構成媒体は注射用水（ＷＦＩ）であり得る。再構成されると、再構成されたミクロスフェアは、すぐに使用できる。シリンジは、再構成されたミクロスフェアを対象に投与するために、チューブまたはその他を接続するためのクイックコネクター７０５（例えば、ルアーロックコネクター）を含み得る。
対象
本明細書に記載される方法または組成物のいずれかによって処置される患者は、任意の年齢であってもよく、成人、幼児、または乳児であってもよい。一部の例では、患者は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９歳、またはその間の範囲内（例えば、２～２０歳の間、２０～４０歳の間、または４０～９０歳の間）である。患者はヒトまたは非ヒト対象であり得る。
本明細書に開示される組成物のいずれも、非ヒト対象、例えば実験動物または農場動物に投与され得る。非ヒト対象の非限定的な例としては、実験用または研究用動物、イヌ、ヤギ、モルモット、ハムスター、マウス、ブタ、非ヒト霊長類（例えば、ゴリラ、類人猿、オランウータン、キツネザル、またはヒヒ）、ラット、ヒツジ、またはウシが挙げられる。
添加剤および賦形剤
一部の例では、本明細書に記載されるアルギネート粒子またはミクロスフェアは、アルギネート粒子またはミクロスフェアの長期間の保存を提供し得る、強力な活性成分を含有する製剤を増大させ得る、薬物吸収を容易にし得る、粘度を低減し得る、または溶解度を増強し得る賦形剤を含有し得る。本開示のアルギネート粒子またはミクロスフェアは、約１重量％もしくは体積％、２重量％もしくは体積％、３重量％もしくは体積％、４重量％もしくは体積％、５重量％もしくは体積％、６重量％もしくは体積％、７重量％もしくは体積％、８重量％もしくは体積％、９重量％もしくは体積％、１０重量％もしくは体積％、１５重量％もしくは体積％、２０重量％もしくは体積％、２５重量％もしくは体積％、３０重量％もしくは体積％、３５重量％もしくは体積％、４０重量％もしくは体積％、４５重量％もしくは体積％、５０重量％もしくは体積％、または約５０重量％もしくは体積％より多くの賦形剤を含み得る。
ある特定の実施形態では、本開示のアルギネート粒子またはミクロスフェアは、１つまたは複数の溶解剤を含み得る。本明細書で使用される場合、「溶解剤」は、トリアセチン、トリエチルクエン酸、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ドキュセートナトリウム、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ｎ－ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆汁塩、ポリエチレングリコール２００－６００、グリコフロール、ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ、プロピレングリコール、およびジメチルイソソルビドおよびその他などの化合物を含む。本開示のアルギネート粒子またはミクロスフェアは、約１重量％もしくは体積％、２重量％もしくは体積％、３重量％もしくは体積％、４重量％もしくは体積％、５重量％もしくは体積％、６重量％もしくは体積％、７重量％もしくは体積％、８重量％もしくは体積％、９重量％もしくは体積％、１０重量％もしくは体積％、１５重量％もしくは体積％、２０重量％もしくは体積％、２５重量％もしくは体積％、３０重量％もしくは体積％、３５重量％もしくは体積％、４０重量％もしくは体積％、４５重量％もしくは体積％、５０重量％もしくは体積％、または約５０重量％もしくは体積％より多くの溶解剤を含み得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、他の医学的または薬学的作用剤、担体、補助剤、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤、または乳化剤、溶解促進剤、ならびに浸透圧、モル浸透圧濃度、および／またはアルギネート粒子もしくはミクロスフェアのモル浸透圧濃度を調節するための塩を含む。一部の実施形態では、組成物は、安定化剤を含む。一部の実施形態では、安定化剤は、例えば脂肪酸、脂肪アルコール、アルコール、長鎖脂肪酸エステル、長鎖エーテル、脂肪酸の親水性誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルエーテル、ポリビニルアルコール、炭化水素、疎水性ポリマー、吸水ポリマー、およびその組合せから選択される。一部の実施形態では、安定化剤のアミドアナログもまた使用される。
一部の実施形態では、組成物は、懸濁剤を含む。有用な懸濁剤は、単に例えば、ポリビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドンＫｌ２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ３０、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（Ｓ６３０）、ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコールは、約３００～約６０００、または約３３５０～約４０００、または約７０００～約５４００の分子量を有してもよい）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸ステアリン酸ヒドロキシメチルセルロース、ポリソルベート－８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えばトラガカントゴムおよびアカシアゴム、グアーガム、キサンタンガムを含むキサンタン、砂糖、セルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン、ポビドンおよびその他などの化合物を含む。
一部の実施形態では、組成物は、追加の界面活性剤（コサーファクタント）および／または緩衝剤および／または溶媒を含む。一部の実施形態では、界面活性剤および／または緩衝剤および／または溶媒は、ａ）天然および合成の親油性作用剤、例えばリン脂質、コレステロール、およびコレステロール脂肪酸エステル、ならびにその誘導体；ｂ）非イオン性界面活性剤、例えば、ポリオキシエチレン脂肪アルコールエステル、ソルビタン脂肪酸エステル（Ｓｐａｎｓ）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）、モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）および他のＴｗｅｅｎ（登録商標））、ソルビタンエステル、グリセロールエステル、例えば、Ｍｙｒｊおよびグリセロール三酢酸（トリアセチン）、ポリエチレングリコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、ポリソルベート８０、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＲＨ４０、Ｃｒｅｍｐｈｏｒ Ａ２５、Ｃｒｅｍｐｈｏｒ Ａ２０、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ）および他のＣｒｅｍｏｐｈｏｒｓ）、スルホスクシネート、アルキルスルフェート（ＳＬＳ）；ＰＥＧグリセリル脂肪酸エステル、例えばＰＥＧ－８カプリル酸／カプリン酸グリセリル（Ｌａｂｒａｓｏｌ）、ＰＥＧ－４カプリル酸／カプリン酸グリセリル（Ｌａｂｒａｆａｃ Ｈｙｄｒｏ ＷＬ １２１９）、ＰＥＧ－３２ラウリン酸グリセリル（Ｇｅｌｕｃｉｒｅ４４４／１４）、ＰＥＧ－６モノオレイン酸グリセリル（Ｌａｂｒａｆｉｌ Ｍ１９４４ＣＳ）、ＰＥＧ－６リノレン酸グリセリル（Ｌａｂｒａｆｉｌ Ｍ２１２５ＣＳ）；プロピレングリコールモノおよびジ脂肪酸エステル、例えばラウリン酸プロピレングリコール、カプリル酸／カプリン酸プロピレングリコール；Ｂｒｉｊ（登録商標）７００、アスコルビル－６－パルミテート、ステアリルアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレングリセロールトリイリシンオレエート（triiricinoleate）、およびその任意の組合せまたは混合物であり；ｃ）アニオン性界面活性剤、例えばこれらに限定されないが、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、スルホコハク酸ナトリウム、ジオクチル、アルギン酸ナトリウム、アルキルポリオキシエチレンスルフェート、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸トリエタノールアミン、ラウリン酸カリウム、胆汁塩、およびその任意の組合せまたは混合物が挙げられる；ならびにｄ）カチオン性界面活性剤、例えば四級アンモニウム化合物、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、およびラウリルジメチルベンジル－アンモニウムクロリドである。溶媒は、意図される対象について選択され得ることが企図される。
一部の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、保存剤を含む。本明細書に記載される組成物において使用するために好適な保存剤としては、これらに限定されないが、安息香酸、ホウ酸、ｐ－ヒドロキシ安息香酸、フェノール、塩素化フェノール化合物、アルコール、四級化合物、四級アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、または塩化セチルピリジニウム）、安定化二酸化塩素、水銀（例えば、メルフェンまたはチオメルサール）、またはその混合物が挙げられる。
他の実施形態および均等物
本明細書で使用する節の見出しは、単に構成上の目的のためであり、記載の主題を限定すると解釈してはならない。
本明細書に記載される方法は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコール、主題、および配列決定技術が変化し得ることから、それらに限定されないと理解される。同様に、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を記載する目的のためであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本明細書に記載の方法および組成物の範囲を限定すると意図されないと理解される。本開示の一部の実施形態を、本明細書に示し、説明してきたが、そのような実施形態は、単なる例として提供されることは当業者に明らかであろう。複数の変形形態、変化、および置換が、本開示から逸脱することなく当業者に想起される。本明細書に記載される開示の実施形態に対する様々な代替を、本開示の実践において使用してもよいと理解すべきである。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義すること、ならびにこれらの特許請求の範囲およびその均等物の範囲内の方法および構造はそれによって含まれることが意図される。
いくつかの態様は、例証のために実施例応用を参照して記載される。特に示していない限り、任意の実施形態を任意の他の実施形態と組み合わせてもよい。複数の特定の詳細、関係、および方法が本明細書に記載される特色の完全な理解を提供するために示されると理解すべきである。しかしながら、当業者は、具体的な詳細の１つまたは複数がなくとも、または他の方法によって本明細書に記載される特色が実践され得ることを容易に認識する。本明細書に記載される特色は、一部の作用が異なる順序で起こってもよく、および／または他の作用もしくは事象と同時に起こってもよいことから、作用または事象の例証される順序に限定されない。さらに、必ずしも全ての例証される作用または事象が、本明細書に記載される特色に従って方法論を実施するために必要ではない。さらに、本開示の方法が本明細書に示されるステップの特定の順序に依存しない程度に、ステップの特定の順序は特許請求の範囲に対する限定であると解釈してはならない。本開示の方法を対象とするいかなる特許請求の範囲も、書かれた順序でそのステップの実施に限定してはならず、当業者は、ステップを変化させてもよく、それでもなお本開示の精神および範囲内にあることを容易に認識し得る。
一部の実施形態を、本明細書において示し、記載してきたが、そのような実施形態が単に例として提供されることは当業者に明白である。本開示の実施形態は、本明細書内に提供される特定の実施例に限定されないことが意図される。本開示のある特定の実施形態は、上述の明細書を参照して記載してきたが、本明細書における実施形態の説明および例証は、限定的な意味であると解釈されることを意味しない。複数の変形形態、変化、および置換が、本開示から逸脱することなく当業者に想起される。
さらに、本開示の実施形態の全ての態様は、多様な条件および変数に依存する本明細書に記載される特定の描写、構成、または関連する割合に限定されないと理解される。本明細書に記載される本開示の実施形態に対する様々な代替を、本発明の実践において使用してもよいと理解すべきである。したがって、本開示はまた、そのような任意の代替、改変、変形形態、または均等物を含むと企図される。以下の特許請求の範囲は、少なくとも部分的に、本発明の範囲を定義すること、ならびにこれらの特許請求の範囲およびその均等物の範囲内の方法および構造がそれによって含まれることが意図される。
広い本発明の概念から逸脱することなく、上記で示され、説明された例示的な実施形態に変化を行ってもよいことが当業者に認識される。したがって、本開示は、示され、記載された例示的な実施形態に限定されず、特許請求の範囲によって定義される本開示の精神および範囲内の改変を含むことが意図されると理解される。例えば、例示的な実施形態の特定の特色は、特許請求される本発明の一部であってもなくてもよく、本開示の実施形態の様々な特色を組み合わせてもよい。「右」、「左」、「下」、および「上」という単語は、参照される図面の方向を指定する。「内向き」および「外向き」という単語はそれぞれ、流体送達装置の幾何学中心に向かう方向およびそこから離れる方向を指す。本明細書に具体的に示していない限り、「１つの」、「１つの（ａｎ）」、および「その」という用語は、１つの構成要素に限定されず、代わりに「少なくとも１つ」の意味として読むべきである。
本明細書で引用する範囲は、列挙されたエンドポイントを含むその範囲内の値の全ての短縮表記であると理解される。例えば、１～５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０からなる群からの任意の数、数の組合せ、または部分範囲を含むと理解される。
本開示の図面および説明の少なくとも一部は、本開示の明確な理解に関連する要素に焦点を当てるために単純化されており、明快にする目的のために当業者が認識する他の要素を除去しているが、これもまた本開示の一部を含み得ると理解すべきである。しかしながら、そのような要素は当技術分野で周知であるため、およびそれらは本開示のより良好な理解を必ずしも容易にしないために、そのような要素の説明は本明細書で提供されない。
以下の条項は、本開示のある特定の実施形態を説明する。
条項１． 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアであって、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
アルギネート分子と架橋する二価金属イオン、
を含み、
水を実質的に含まないおよび／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
アルギネート分子と架橋する二価金属イオン、
を含み、
水を実質的に含まないおよび／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。
条項２． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、条項１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３． アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を防止するためにｐＨ３．０～６．４の範囲にある、条項１または２に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４． 金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤である（例えば、二価金属カチオンと架橋する前の前駆体溶液中のアルギネートの分解を制御するため）、条項１～３のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項５． 前駆体溶液の温度が、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を制御するために１～４℃の範囲にある、条項１～４のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項６． 前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にする、条項１～５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項７． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量、の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされる、条項１～６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項８． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネート分子の既定の分子量によって制御される、条項１～７のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９． アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にある、条項１～８のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、アルギネートミクロスフェアの分解を制御する、条項１～９のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５である、条項１～１０のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２． 約５日未満の期間にわたって分解する、条項１１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１３． 約２日より長い期間にわたって分解する、１１または１２に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１４． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５である、条項１～１０のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１５． 約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項１４に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１６． ０．０２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項１～１５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１７． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間である、条項１～１６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１８． 約５日未満の期間にわたって分解する、条項１７に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１９． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間である、条項１～１６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２０． 約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項１９に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２１． 生物活性剤をさらに含む、条項１～２０のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２２． 生物活性剤が、対象における塞栓に関連する疼痛を緩和するために抗炎症剤および／または麻酔薬を含む、条項２１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２３． 生物活性剤が、抗がん剤または抗血管新生剤を含む、条項２１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２４． 抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、条項２２に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２５． ヒアルロン酸のアルギネート分子に対する比が重量で約１：２０である、条項２４に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２６． ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）からなる群から選択される凍結保護剤をさらに含む、条項１～２５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２７． 凍結乾燥される、条項１～２６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２８． 凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、条項２７に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項２９． アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９である、条項１～２８のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３０． アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが滅菌される、条項１～２９のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３１． 滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含む、条項３０に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３２． 滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、条項３１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３３． アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間である、条項１～３１のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３４． 所定の温度が、約２℃～約８℃の間である、条項３３に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３５． 所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）である、条項３３に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３６． 生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成される、条項２７～３５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３７． 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含むステップ；
液滴を、凍結保護剤および二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させて、それによってアルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含むステップ；
液滴を、凍結保護剤および二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させて、それによってアルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項３８． 前駆体溶液が１つまたは複数の凍結保護剤を含む、条項３７に記載の方法。
条項３９． ゲル化槽が、１つまたは複数の凍結保護剤を含む、条項３７または３８に記載の方法。
条項４０． 凍結保護剤が、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）からなる群から選択される、条項３８または３９に記載の方法。
条項４１． 前駆体溶液中のトレハロースの濃度が、約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％である、条項４０に記載の方法。
条項４２． ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％である、条項４０または４１に記載の方法。
条項４３． 前駆体溶液中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％である、条項４０～４２のいずれか１項に記載の方法。
条項４４． 前駆体溶液中のデキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％である、条項４０～４３のいずれか１項に記載の方法。
条項４５． 前駆体溶液およびゲル化槽が同じ凍結保護剤を含む、条項３９～４４のいずれか１項に記載の方法。
条項４６． 前駆体溶液およびゲル化槽が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含む、条項４５に記載の方法。
条項４７． 脱水するステップが、アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含む、条項３７～４６のいずれか１項に記載の方法。
条項４８． 凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、条項４７に記載の方法。
条項４９． アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９である、条項３７～４８のいずれか１項に記載の方法。
条項５０． アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップをさらに含む、条項３７～４９のいずれか１項に記載の方法。
条項５１． 滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含む、条項５０に記載の方法。
条項５２． 滅菌するステップが、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、条項５１に記載の方法。
条項５３． アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップをさらに含む、条項３７～５１のいずれか１項に記載の方法。
条項５４． アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間である、条項３７～５３のいずれか１項に記載の方法。
条項５５． 所定の温度が、約２℃～約８℃の間である、条項５３または５４に記載の方法。
条項５６． 所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）である、条項５３または５４に記載の方法。
条項５７． アルギネートミクロスフェア、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェア、または滅菌されたミクロスフェアを対象に投与するステップをさらに含む、条項３７～５６のいずれか１項に記載の方法。
条項５８． アルギネートミクロスフェア、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェア、または滅菌されたミクロスフェアを対象に投与するステップの前に、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェア、または滅菌されたミクロスフェアを、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成するステップを行う、条項５７に記載の方法。
条項５９． 液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施される、条項３７～５８のいずれか１項に記載の方法。
条項６０． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、条項３７～５９のいずれか１項に記載の方法。
条項６１． アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を防止するためにｐＨ３．０～６．４の範囲にある、条項３７～６０のいずれか１項に記載の方法。
条項６２． 金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤である（例えば、二価金属カチオンと架橋する前の前駆体溶液中のアルギネートの分解を制御するため）、条項３７～６０のいずれか１項に記載の方法。
条項６３． 前駆体溶液の温度が、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を制御するために１～４℃の範囲にある、条項３７～６２のいずれか１項に記載の方法。
条項６４． 前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にする、条項３７～６２のいずれか１項に記載の方法。
条項６５． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされる、条項３７～６４のいずれか１項に記載の方法。
条項６６． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネート分子の既定の分子量によって制御される、条項３７～６４のいずれか１項に記載の方法。
条項６７． アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲内にある、条項３７～６６のいずれか１項に記載の方法。
条項６８． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、アルギネートミクロスフェアの分解を制御する、条項３７～６７のいずれか１項に記載の方法。
条項６９． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５である、条項３７～６８のいずれか１項に記載の方法。
条項７０． アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解する、条項６９に記載の方法。
条項７１． アルギネートミクロスフェアが、約２日より長い期間にわたって分解する、条項６９または７０に記載の方法。
条項７２． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５である、条項３７～６８のいずれか１項に記載の方法。
条項７３． アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項７２に記載の方法。
条項７４． ０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項３７～７３のいずれか１項に記載の方法。
条項７５．０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項３７～７４のいずれか１項に記載の方法。
条項７６． アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解する、条項７５に記載の方法。
条項７７． ０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項３７～７４のいずれか１項に記載の方法。
条項７８． アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項７７に記載の方法。
条項７９． ０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項３７～７４のいずれか１項に記載の方法。
条項８０． アルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解する、条項７９に記載の方法。
条項８１． 前駆体溶液および／またはゲル化槽が、生物活性剤をさらに含む、条項３７～８０のいずれか１項に記載の方法。
条項８２． 生物活性剤が、対象における塞栓に関連する疼痛を緩和するために抗炎症剤および／または麻酔剤を含む、条項８１に記載の方法。
条項８３． 生物活性剤が、抗がん剤または抗血管新生剤を含む、条項８１に記載の方法。
条項８４． 抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、条項８３に記載の方法。
条項８５． ヒアルロン酸のアルギネート分子に対する比が、重量で約１：２０である、条項８４に記載の方法。
条項８６． ゲル化槽のｐＨが、約６．５未満である、条項３７～８５のいずれか１項に記載の方法。
条項８７． ゲル化槽のｐＨが、前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しい、条項３７～８５のいずれか１項に記載の方法。
条項８８． 前駆体溶液の温度が１℃～約４℃の間に等しいかまたはほぼ等しい、条項３７～８７のいずれか１項に記載の方法。
条項８９． 再水和時に自己分解可能な光重合されたアルギネートミクロスフェアであって、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する、エチレン不飽和官能基によって官能化されたアルギネート分子；ならびに
光重合開始剤を含み、
アルギネート分子が光重合開始剤を照射することによって架橋され、ならびに
水を実質的に含まず、および／または滅菌されている光重合されたアルギネートミクロスフェア。
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する、エチレン不飽和官能基によって官能化されたアルギネート分子；ならびに
光重合開始剤を含み、
アルギネート分子が光重合開始剤を照射することによって架橋され、ならびに
水を実質的に含まず、および／または滅菌されている光重合されたアルギネートミクロスフェア。
条項９０． エチレン不飽和官能基が、アクリレート、メタクリレート、ビニル、およびアリルからなる群から選択される、条項８９に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９１． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽における１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、条項８９または９０に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９２． アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を防止するためにｐＨ３．０～６．４の範囲にある、条項８９～９１のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９３． 金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤である（例えば、二価金属カチオンと架橋する前の前駆体溶液中のアルギネートの分解を制御するため）、条項８９～９１のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９４． 前駆体溶液の温度が、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を制御するために１～４℃の範囲にある、条項８９～９３のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９５． 前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にする、条項８９～９３のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９６． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされる、条項８９～９５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９７． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネート分子の既定の分子量によって制御される、条項８９～９６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９８． アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にある、条項８９～９６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項９９． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、アルギネートミクロスフェアの分解を制御する、条項８９～９８のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１００． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５である、条項８９～９９のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０１． 約５日未満の期間にわたって分解する、条項１００に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０２． 約２日より長い期間にわたって分解する、条項１００または１０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０３． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５である、条項８９～９９のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０４． 約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項１０３に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０５． ０．０２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項８９～１０４のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０６． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間である、条項８９～１０５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０７． 約５日未満の期間にわたって分解する、条項１０６に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０８． アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間である、条項８９～１０５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１０９． 約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項１０８に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１０． 生物活性剤をさらに含む、条項８９～１０９のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１１． 生物活性剤が、対象における塞栓に関連する疼痛を緩和するために抗炎症剤を含む、条項１１０に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１２． 抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、条項１１１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１３． ヒアルロン酸のアルギネート分子に対する比が重量で約１：２０である、条項１１２に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１４． ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）からなる群から選択される凍結保護剤をさらに含む、条項８９～１１３のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１５． 凍結乾燥されている、条項８９～１１４のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１６． 凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、条項１０３に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１７． アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９である、条項８９～１１６のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１８． アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが滅菌されている、条項８９～１１７のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１１９． 滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含む、条項１１８に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２０． 滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、条項１１９に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２１． アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間である、条項８９～１２０のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２２． 所定の温度が、約２℃～約８℃の間である、条項１２１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２３． 所定の温度が、ほぼ室温（ＲＴ）である、条項１２１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２４． 生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成される、条項１１５～１２３のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１２５． 再水和時に自己分解可能な光重合されたアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する、エチレン不飽和官能基によって官能化されたアルギネート分子；および光重合開始剤を含むステップ；
光重合開始剤を含む液滴を照射し、それによってアルギネート分子を架橋させて、光重合されたアルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する、エチレン不飽和官能基によって官能化されたアルギネート分子；および光重合開始剤を含むステップ；
光重合開始剤を含む液滴を照射し、それによってアルギネート分子を架橋させて、光重合されたアルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項１２６． エチレン不飽和官能基が、アクリレート、メタクリレート、ビニル、およびアリルからなる群から選択される、条項１２５に記載の方法。
条項１２７． 前駆体溶液が１つまたは複数の凍結保護剤を含む、条項１２５または１２６に記載の方法。
条項１２８． ゲル化槽が、１つまたは複数の凍結保護剤を含む、条項１２５～１２７のいずれか１項に記載の方法。
条項１２９． 凍結保護剤が、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）およびデキストラン（分子量７０ｋＤａ）からなる群から選択される、条項１２７または１２８に記載の方法。
条項１３０． 前駆体溶液中のトレハロースの濃度が、０．１重量／体積％～約２０重量／体積％である、条項１２９に記載の方法。
条項１３１． ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％である、条項１２９または１３０に記載の方法。
条項１３２． 前駆体溶液中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％である、条項１２９～１３１のいずれか１項に記載の方法。
条項１３３． 前駆体溶液中のデキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％である、条項１２９～１３２のいずれか１項に記載の方法。
条項１３４． 前駆体溶液およびゲル化槽が同じ凍結保護剤を含む、条項１２８～１３３のいずれか１項に記載の方法。
条項１３５． 前駆体溶液およびゲル化槽が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含む、条項１３４に記載の方法。
条項１３６． 脱水するステップが、アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含む、条項１２５～１３５のいずれか１項に記載の方法。
条項１３７． 凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、条項１３６に記載の方法。
条項１３８． アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９である、条項１２５～１３７のいずれか１項に記載の方法。
条項１３９． アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップをさらに含む、条項１２５～１３８のいずれか１項に記載の方法。
条項１４０． 滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含む、条項１３９に記載の方法。
条項１４１． 滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、条項１４０に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項１４２． アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップをさらに含む、条項１２５～１４１のいずれか１項に記載の方法。
条項１４３． アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間である、条項１２５～１４２のいずれか１項に記載の方法。
条項１４４． 所定の温度が、約２℃～約８℃の間である、条項１４２または１４３に記載の方法。
条項１４５． 所定の温度が、ほぼ室温（ＲＴ）である、条項１４２または１４３に記載の方法。
条項１４６． アルギネートミクロスフェア、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェア、または滅菌されたミクロスフェアを対象に投与するステップをさらに含む、条項１２５～１４５のいずれか１項に記載の方法。
条項１４７． アルギネートミクロスフェア、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェア、または滅菌されたミクロスフェアを対象に投与するステップの前に、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用してアルギネートミクロスフェア、凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェア、または滅菌されたミクロスフェアを再構成するステップを行う、条項１４６に記載の方法。
条項１４８． 前駆体溶液を、オリフィスを通して流れさせて液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、およびマイクロ流体力学による液滴産生からなる群から選択される方法を使用して実施される、条項１２５～１４７のいずれか１項に記載の方法。
条項１４９． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、条項１２５～１４８のいずれか１項に記載の方法。
条項１５０． アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を防止するためにｐＨ３．０～６．４の範囲にある、条項１２５～１４９のいずれか１項に記載の方法。
条項１５１． 金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤である（例えば、二価金属カチオンと架橋する前の前駆体溶液中のアルギネートの分解を制御するため）、条項１２５～１５０のいずれか１項に記載の方法。
条項１５２． 前駆体溶液の温度が、二価金属カチオンと架橋する前のアルギネートの分解を制御するために１～４℃の範囲にある、条項１２５～１５１のいずれか１項に記載の方法。
条項１５３． 前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、所望の活性の酵素（単位Ｕとして言及される）とアルギネートとの混合を可能にし、アルギネートミクロスフェアの分解を一定期間制御する、条項１２５～１５２のいずれか１項に記載の方法。
条項１５４． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネート分子の既定の分子量によって制御される、条項１２５～１５３のいずれか１項に記載の方法。
条項１５５． アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にある、条項１２５～１５４のいずれか１項に記載の方法。
条項１５６． Ｍ：Ｇブロックの既定の比がアルギネートミクロスフェアの分解を制御する、条項１２５～１５５のいずれか１項に記載の方法。
条項１５７． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５である、条項１２５～１５６のいずれか１項に記載の方法。
条項１５８． アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解する、条項１５７に記載の方法。
条項１５９． アルギネートミクロスフェアが、約２日より長い期間にわたって分解する、条項１５７または１５８に記載の方法。
条項１６０． Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５である、条項１２５～１５６のいずれか１項に記載の方法。
条項１６１． アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項１６０に記載の方法。
条項１６２． ０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項１２５～１６１のいずれか１項に記載の方法。
条項１６３． ０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項１２５～１６２のいずれか１項に記載の方法。
条項１６４． アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解する、条項１６３に記載の方法。
条項１６５． ０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項１２５～１６２のいずれか１項に記載の方法。
条項１６６． アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解する、条項１６５に記載の方法。
条項１６７． ０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合される、条項１２４～１４７のいずれか１項に記載の方法。
条項１６８． アルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解する、条項１６７に記載の方法。
条項１６９． 前駆体溶液および／またはゲル化槽が生物活性剤をさらに含む、条項１２５～１６８のいずれか１項に記載の方法。
条項１７０． 生物活性剤が、対象における塞栓に関連する疼痛を緩和するために抗炎症剤を含む、条項１６９に記載の方法。
条項１７１． 抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、条項１７０に記載の方法。
条項１７２． ヒアルロン酸のアルギネート分子に対する比が重量で約１：２０である、条項１７１に記載の方法。
条項１７３． ゲル化槽のｐＨが、約６．５未満である、条項１２５～１７２のいずれか１項に記載の方法。
条項１７４． ゲル化槽のｐＨが、前駆体溶液のｐＨと等しいかまたはほぼ等しい、条項１２５～１７２のいずれか１項に記載の方法。
条項１７５． 前駆体溶液の温度が、１℃～約４℃の間に等しいかまたはほぼ等しい、条項１２５～１７４のいずれか１項に記載の方法。
条項１７６． それを必要とする対象における自己分解性の塞栓を誘導する方法であって、条項１～３６および８９～１２４のいずれか１項に記載の複数のアルギネートミクロスフェアを対象の血管に投与するステップを含む方法。
条項１７７． 血管が、膝動脈である、条項１７６に記載の方法。
条項１７８． 条項１～３６または８９～１２４のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェアを含む第１のチャンバー；
第１のチャンバーに対して軸方向に配置され、再構成媒体を含む第２のチャンバー；および
押し下げると、アルギネートミクロスフェアを再構成媒体に曝露し、それによってアルギネートミクロスフェアを再構成するように構成されたプランジャーを含むシリンジ。
第１のチャンバーに対して軸方向に配置され、再構成媒体を含む第２のチャンバー；および
押し下げると、アルギネートミクロスフェアを再構成媒体に曝露し、それによってアルギネートミクロスフェアを再構成するように構成されたプランジャーを含むシリンジ。
条項１７９． 第１のチャンバーと第２のチャンバーを隔てる破断可能な膜をさらに含み、プランジャーを押し下げると、破断可能な膜が破断してアルギネートミクロスフェアを再構成媒体に曝露し、それによってアルギネートミクロスフェアを再構成する、条項１７８に記載のシリンジ。
条項１８０． それを必要とする哺乳動物対象に投与するための、再水和時に自己分解可能なミクロスフェアであって、
哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能である生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；
生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素；ならびに
生体適合性多糖材料を架橋する二価金属イオンを含み、
水を実質的に含まない、および／または滅菌されているミクロスフェア。
哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能である生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；
生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素；ならびに
生体適合性多糖材料を架橋する二価金属イオンを含み、
水を実質的に含まない、および／または滅菌されているミクロスフェア。
条項１８１． 生体適合性多糖材料がアルギネートを含む、条項１８０に記載のミクロスフェア。
条項１８２． 酵素が、アルギネートリアーゼを含む、条項１８０または１８１に記載のミクロスフェア。
条項１８３． 生体適合性多糖材料が再吸収可能である、条項１８０～１８２のいずれか１項に記載のミクロスフェア。
条項１８４． 生体適合性多糖材料が、哺乳動物対象内の酵素による加水分解に対して安定である、条項１８０～１８３のいずれか１項に記載のミクロスフェア。
条項１８５． 生体適合性多糖材料の再吸収速度が、体内に入ると塞栓材料の切断を引き起こす特異的作用を有する、哺乳動物内で見出されない量の酵素を含めることによってより正確に制御される、条項１８０～１８４のいずれか１項に記載のミクロスフェア。
条項１８６． それを必要とする哺乳動物対象に投与するための、再水和時に自己分解可能なミクロスフェアを調製する方法であって、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能である生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；ならびに生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素を含むステップ；
液滴を、凍結保護剤および二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させて、それによって生体適合性多糖材料を架橋させてミクロスフェアを形成するステップ、
ミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能である生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；ならびに生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素を含むステップ；
液滴を、凍結保護剤および二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させて、それによって生体適合性多糖材料を架橋させてミクロスフェアを形成するステップ、
ミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項１８７． 生体適合性多糖材料がアルギネートを含む、条項１８６に記載の方法。
条項１８８． 酵素が、アルギネートリアーゼを含む、条項１８６または１８７に記載の方法。
条項１８９． 生体適合性多糖材料が再吸収可能である、条項１８６～１８８のいずれか１項に記載の方法。
条項１９０． 生体適合性多糖材料が、哺乳動物対象内での酵素による加水分解に対して安定である、条項１８６～１８９のいずれか１項に記載の方法。
条項１９１． 生体適合性多糖材料の再吸収速度が、体内に入ると塞栓材料の切断を引き起こす特異的作用を有する、哺乳動物内で見出されない量の酵素を含めることによってより正確に制御される、条項１８６～１９０のいずれか１項に記載の方法。
条項１９２． それを必要とする哺乳動物対象に投与するための、再水和時に自己分解可能な光重合されたミクロスフェアであって、
哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能な生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；
生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素；ならびに
光重合開始剤を含み、
生体適合性多糖材料が光重合開始剤を照射することによって架橋され、ならびに
水を実質的に含まない、および／または滅菌されている光重合されたミクロスフェア。
哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能な生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；
生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素；ならびに
光重合開始剤を含み、
生体適合性多糖材料が光重合開始剤を照射することによって架橋され、ならびに
水を実質的に含まない、および／または滅菌されている光重合されたミクロスフェア。
条項１９３． 生体適合性多糖材料がアルギネートを含む、条項１９２に記載のミクロスフェア。
条項１９４． 酵素がアルギネートリアーゼを含む、条項１９２または１９３に記載のミクロスフェア。
条項１９５． 生体適合性多糖材料が再吸収可能である、条項１９２～１９４のいずれか１項に記載のミクロスフェア。
条項１９６． 生体適合性多糖材料が、哺乳動物対象内での酵素による加水分解に対して安定である、条項１９２～１９５のいずれか１項に記載のミクロスフェア。
条項１９７． 生体適合性多糖材料の再吸収速度が、体内に入ると塞栓材料の切断を引き起こす特異的作用を有する、哺乳動物内で見出されない量の酵素を含めることによってより正確に制御される、条項１９２～１９６のいずれか１項に記載のミクロスフェア。
条項１９８． それを必要とする哺乳動物対象に投与するための、再水和時に自己分解可能な光重合されたミクロスフェアを調製する方法であって、
前駆体溶液を、オリフィスを通して流れさせて液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能である生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素；ならびに光重合開始剤を含むステップ；ならびに
光重合開始剤を含む液滴に照射して、それによって生体適合性多糖材料を架橋させて、光重合されたミクロスフェアを形成するステップ、
ミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
前駆体溶液を、オリフィスを通して流れさせて液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、哺乳動物対象が酵素により加水分解することが不可能である生体適合性多糖材料であって、（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有する生体適合性多糖材料；生体適合性多糖材料を加水分解することが可能な酵素であって、哺乳動物対象に天然に存在せず、温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置される酵素；ならびに光重合開始剤を含むステップ；ならびに
光重合開始剤を含む液滴に照射して、それによって生体適合性多糖材料を架橋させて、光重合されたミクロスフェアを形成するステップ、
ミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項１９９． 生体適合性多糖材料がアルギネートを含む、条項１９８に記載の方法。
条項２００． 酵素がアルギネートリアーゼを含む、条項１９８または１９９に記載の方法。
条項２０１． 生体適合性多糖材料が再吸収可能である、条項１９８～２００のいずれか１項に記載の方法。
条項２０２． 生体適合性多糖材料が、哺乳動物対象内での酵素による加水分解に対して安定である、条項１９８～２０１のいずれか１項に記載の方法。
条項２０３． 生体適合性多糖材料の再吸収速度が、体内に入ると塞栓材料の切断を引き起こす特異的作用を有する、哺乳動物内で見出されない量の酵素を含めることによってより正確に制御される、条項１９８～２０２のいずれか１項に記載の方法。
条項３００． 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、
マイクロ流体力学プラットフォームを使用して前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、
（ｉ）様々な範囲および様々な温度（１～４℃）のアルカリｐＨ溶液によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉｉ）（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；
（ｉｉｉ）Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３などの架橋剤；ならびに
（ｉｖ）賦形剤を含むステップ
液滴を、界面活性剤、油、酢酸を含むゲル化溶液と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させてアルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
マイクロ流体力学プラットフォームを使用して前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、
（ｉ）様々な範囲および様々な温度（１～４℃）のアルカリｐＨ溶液によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉｉ）（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；
（ｉｉｉ）Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３などの架橋剤；ならびに
（ｉｖ）賦形剤を含むステップ
液滴を、界面活性剤、油、酢酸を含むゲル化溶液と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させてアルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項３０１． 条項３００に記載の方法によって作製されたアルギネートミクロスフェア。
条項３０２． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、および二価カチオン架橋、の１つまたは複数によって制御される、請求項３０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３０３． アルギネート、アルギネートリアーゼ、および架橋剤（Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３）を含有する前駆体溶液のｐＨが、アルギネートの分解ならびに前駆体溶液のゲル化を防止するために１～４℃の温度で８～１３の範囲にある、条項３０２に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３０４． 前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にする、条項３０１～３０３のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３０５． アルカリｐＨおよび低温を有する前駆体溶液の液滴を、マイクロ流体力学チップを通して生成し、０．０５体積／体積％～５体積／体積％の範囲の酢酸、油および界面活性剤を含有する溶液中で１分から３時間の持続時間、架橋することができる、条項３０１～３０４のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。酸性条件下では、アルギネートとＣａ２＋イオンとの架橋は、Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３のイオン化により起こり、封入された酵素は酸性ｐＨ条件下では不活性のままであり、このようにアルギネートビーズの分解を防止する。
条項３０６． アルギネートリアーゼを含有するＣａ２＋架橋アルギネートビーズを、ビーズを＜１０重量／体積％の塩化カルシウムに＞１分～＜２４時間の持続時間、曝露することによって二価Ｃａ２＋カチオンとさらに架橋させることができる、条項３０１～３０５のいずれか１項に記載のアルギネートミクロスフェア。架橋期間の持続時間は、生理的条件下でアルギネート粒子の分解を制御する。
条項３０７． 塩化カルシウム溶液がフリーズドライステップのために必要な賦形剤をさらに含有する、条項３０６に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３０８． アルギネートリアーゼを含有するＣａ２＋架橋アルギネートビーズが、未結合Ｃａ２＋イオンを除去するために賦形剤を含有する水性媒体中でさらに洗浄される、条項３０７に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３０９． アルギネートリアーゼを含有するＣａ２＋架橋アルギネートビーズが、賦形剤を含有する溶液中で分散され、フリーズドライステップに供されて、アルギネートリアーゼ酵素を含有するフリーズドライしたＣａ２＋架橋アルギネートビーズを産生する、条項３０８に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３１０． アルギネートリアーゼ酵素を含有するフリーズドライしたＣａ２＋架橋アルギネートビーズが、滅菌ステップ（ガンマ線照射および電子線照射）にさらに供される、条項３０９に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項３１１． アルギネートリアーゼ酵素を含有するフリーズドライされて滅菌されたＣａ２＋架橋アルギネートビーズが、アルギネートリアーゼ酵素を活性化して、アルギネート粒子の分解を開始する中性ｐＨの水溶液中で再構成することができる、条項３１０に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０１． 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアであって、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
アルギネート分子を架橋する二価金属イオンを含み、
水を実質的に含まない、および／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
アルギネート分子を架橋する二価金属イオンを含み、
水を実質的に含まない、および／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。
条項４０２． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成の１つまたは複数によって制御される、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０３． （ｉ）～（ｉｉｉ）：
（ｉ）金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｉｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、および
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（ｉ）金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｉｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、および
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０４． （ｉ）～（ｖ）：
（ｉ）アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、および
（ｖ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（ｉ）アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、および
（ｖ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０５． （ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｉｖ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、および
（ｄ）（ｖ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０４に記載のアルギネートミクロスフェア。
（ａ）（ｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｉｖ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、および
（ｄ）（ｖ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０４に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０６． （ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）ミクロスフェアが生物活性剤をさらに含むこと、
（ｉｉ）ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から選択される凍結保護剤をさらに含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されること、
（ｉｖ）アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、
（ｖ）アルギネートミクロスフェアが滅菌されるか、またはアルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されて滅菌されること、
（ｖｉ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、および
（ｖｉｉ）凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成されること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（ｉ）ミクロスフェアが生物活性剤をさらに含むこと、
（ｉｉ）ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から選択される凍結保護剤をさらに含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されること、
（ｉｖ）アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、
（ｖ）アルギネートミクロスフェアが滅菌されるか、またはアルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されて滅菌されること、
（ｖｉ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、および
（ｖｉｉ）凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成されること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０１に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０７． （ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含むこと、
（ｂ）（ｉｉｉ）の凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にあること、
（ｃ）（ｖ）の滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、および
（ｄ）（ｖｉ）の所定の温度が約２℃～約８℃の間、またはほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０６に記載のアルギネートミクロスフェア。
（ａ）（ｉ）の生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含むこと、
（ｂ）（ｉｉｉ）の凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にあること、
（ｃ）（ｖ）の滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、および
（ｄ）（ｖｉ）の所定の温度が約２℃～約８℃の間、またはほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０６に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０８． （ａ）の抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含み、または（ｃ）の滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、条項４０７に記載のアルギネートミクロスフェア。
条項４０９． 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに
（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含むステップ；
液滴を、二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させてアルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに
（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含むステップ；
液滴を、二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させてアルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項４１０． （ｉ）～（ｘ）：
（ｉ）前駆体溶液が、１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉ）ゲル化槽が、１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨがｐＨ３．０～６．４の範囲にあること、
（ｉｖ）金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｖ）前駆体溶液の温度が１～４℃の範囲にあること、
（ｖｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｖｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
（ｖｉｉｉ）ゲル化槽のｐＨが約６．５未満であること、
（ｉｘ）ゲル化槽のｐＨが、前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しいこと、ならびに
（ｘ）前駆体溶液および／またはゲル化槽が、生物活性剤をさらに含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０９に記載の方法。
（ｉ）前駆体溶液が、１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉ）ゲル化槽が、１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨがｐＨ３．０～６．４の範囲にあること、
（ｉｖ）金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｖ）前駆体溶液の温度が１～４℃の範囲にあること、
（ｖｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｖｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、ゲル化槽の温度、およびアルギネートミクロスフェア中の金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
（ｖｉｉｉ）ゲル化槽のｐＨが約６．５未満であること、
（ｉｘ）ゲル化槽のｐＨが、前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しいこと、ならびに
（ｘ）前駆体溶液および／またはゲル化槽が、生物活性剤をさらに含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０９に記載の方法。
条項４１１． （ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）脱水するステップが、アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含むこと、
（ｉｉ）液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施されること、
（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、ならびに
（ｉｖ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０９に記載の方法。
（ｉ）脱水するステップが、アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含むこと、
（ｉｉ）液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施されること、
（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、ならびに
（ｉｖ）アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０９に記載の方法。
条項４１２． （ｉ）および（ｉｉ）の凍結保護剤が各々、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から独立して選択される、条項４１０に記載の方法。
条項４１３． （ａ）～（ｆ）：
（ａ）前駆体溶液（ｉ）中のトレハロースの濃度が、約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％であること、
（ｂ）前駆体溶液（ｉ）またはゲル化槽（ｉｉ）中のヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％であること、
（ｃ）前駆体溶液（ｉ）中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｄ）前駆体溶液（ｉ）中のデキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｅ）前駆体溶液（ｉ）およびゲル化槽（ｉｉ）が同じ凍結保護剤を含むこと、ならびに
（ｆ）前駆体溶液（ｉ）およびゲル化槽（ｉｉ）が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４１２に記載の方法。
（ａ）前駆体溶液（ｉ）中のトレハロースの濃度が、約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％であること、
（ｂ）前駆体溶液（ｉ）またはゲル化槽（ｉｉ）中のヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％であること、
（ｃ）前駆体溶液（ｉ）中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｄ）前駆体溶液（ｉ）中のデキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｅ）前駆体溶液（ｉ）およびゲル化槽（ｉｉ）が同じ凍結保護剤を含むこと、ならびに
（ｆ）前駆体溶液（ｉ）およびゲル化槽（ｉｉ）が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４１２に記載の方法。
条項４１４． 凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、条項４１１に記載の方法。
条項４１５． （ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップ、
（ｉｉ）アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップ、
（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを対象に投与するステップ、および
（ｉｖ）アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用して再構成するステップ、
から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む、条項４０９に記載の方法。
（ｉ）アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを滅菌するステップ、
（ｉｉ）アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップ、
（ｉｉｉ）アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを対象に投与するステップ、および
（ｉｖ）アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されているアルギネートミクロスフェアを、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用して再構成するステップ、
から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む、条項４０９に記載の方法。
条項４１６． （ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、
（ｂ）（ｉ）の滅菌するステップが、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含むこと、
（ｃ）（ｉｉ）の所定の温度が約２℃～約８℃の間であること、および
（ｄ）（ｉｉ）の所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）であること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４１５に記載の方法。
（ａ）（ｉ）の滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、
（ｂ）（ｉ）の滅菌するステップが、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含むこと、
（ｃ）（ｉｉ）の所定の温度が約２℃～約８℃の間であること、および
（ｄ）（ｉｉ）の所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）であること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４１５に記載の方法。
条項４１７． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、条項４０９に記載の方法。
条項４１８． （ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、
（ｖ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、
（ｖｉ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、および
（ｖｉｉ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０９に記載の方法。
（ｉ）アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、
（ｖ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、
（ｖｉ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、および
（ｖｉｉ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前駆体溶液中で混合されること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４０９に記載の方法。
条項４１９． （ａ）～（ｅ）：
（ａ）アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｖ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、
（ｄ）（ｖｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、および
（ｅ）（ｖｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解すること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４１８に記載の方法。
（ａ）アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｖ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、
（ｄ）（ｖｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、および
（ｅ）（ｖｉｉ）のアルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解すること、
の少なくとも１つが当てはまる、条項４１８に記載の方法。
条項４２０． （ｘ）の生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含む、条項４１０に記載の方法。
条項４２１． 抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、条項４２０に記載の方法。
条項５０９． 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、
マイクロ流体力学プラットフォームを使用して、前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、
（ｉ）アルカリｐＨによっておよび約１５℃未満の温度によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉｉ）（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
（ｉｉｉ）二価カチオン架橋剤を含むステップ
液滴を、油および酸を含むゲル化溶液と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
マイクロ流体力学プラットフォームを使用して、前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前駆体溶液が、
（ｉ）アルカリｐＨによっておよび約１５℃未満の温度によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉｉ）（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
（ｉｉｉ）二価カチオン架橋剤を含むステップ
液滴を、油および酸を含むゲル化溶液と接触させ、それによってアルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによってミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む方法。
条項５１０． アルギネートミクロスフェアの分解が、アルギネートリアーゼ酵素の前処置、ミクロスフェア中のアルギネート酵素の量、アルギネート分子の既定の分子量、およびアルギネート分子のＭ：Ｇブロックの既定の比、およびアルギネート分子の二価カチオン架橋の１つまたは複数によって制御される、条項５０９に記載の方法。
条項５１１． （ｉ）～（ｖｉｉｉ）：
（ｉ）アルギネートリアーゼ酵素が、約８～約１３のｐＨによって前処置されること、
（ｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素が、約１℃～約４℃の温度で前処置されること、
（ｉｉｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｉｖ）前駆体溶液が約８～約１３のｐＨを有し、および約１℃～約４℃の温度で維持されること、
（ｖ）前駆体溶液が賦形剤をさらに含むこと、
（ｖｉ）二価カチオン架橋剤が、Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３から放出されたＣａ２＋であること、
（ｖｉｉ）酸が酢酸であること、ならびに
（ｖｉｉｉ）ゲル化溶液が、界面活性剤をさらに含むこと
の少なくとも１つが当てはまる、条項５０９または５１０に記載の方法。
（ｉ）アルギネートリアーゼ酵素が、約８～約１３のｐＨによって前処置されること、
（ｉｉ）アルギネートリアーゼ酵素が、約１℃～約４℃の温度で前処置されること、
（ｉｉｉ）前駆体溶液中のアルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｉｖ）前駆体溶液が約８～約１３のｐＨを有し、および約１℃～約４℃の温度で維持されること、
（ｖ）前駆体溶液が賦形剤をさらに含むこと、
（ｖｉ）二価カチオン架橋剤が、Ｃａ－ＥＤＴＡまたはＣａＣＯ３から放出されたＣａ２＋であること、
（ｖｉｉ）酸が酢酸であること、ならびに
（ｖｉｉｉ）ゲル化溶液が、界面活性剤をさらに含むこと
の少なくとも１つが当てはまる、条項５０９または５１０に記載の方法。
条項５１２． ゲル化溶液が、油、約０．０５体積／体積％～約５体積／体積％酢酸、および界面活性剤を含み、液滴をゲル化溶液と約１分間～約３時間接触させて、アルギネート分子を架橋する、条項５０９～５１１のいずれか１項に記載の方法。
条項５１３． アルギネートミクロスフェアを脱水するステップ、および必要に応じて滅菌するステップの前に、アルギネートミクロスフェアを二価Ｃａ２＋イオンと架橋させるステップを行う、条項５０９～５１２のいずれか１項に記載の方法。
条項５１４． アルギネートミクロスフェアを脱水するステップ、および必要に応じて滅菌するステップの前に、アルギネートミクロスフェアを第２の二価Ｃａ２＋イオンとさらに架橋させるステップを行う、条項５０９～５１２のいずれか１項に記載の方法。
条項５１５． アルギネート分子を第２の二価Ｃａ２＋イオンとさらに架橋させるステップが、二価Ｃａ２＋イオンと架橋したアルギネートミクロスフェアを形成する、条項５１４に記載の方法。
条項５１６． アルギネートミクロスフェアまたはアルギネート分子が、約１０重量／体積％未満のＣａＣｌ２を含む溶液への約１分間～約２４時間の曝露によって架橋される、条項５１３または５１４に記載の方法。
条項５１７． 溶液が賦形剤をさらに含む、条項５１６に記載の方法。
条項５１８． アルギネートミクロスフェアまたは二価Ｃａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを脱水するステップが、アルギネートミクロスフェアまたは二価Ｃａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含む、条項５１７に記載の方法。
条項５１９． 凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥された二価Ｃａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを、ガンマ線照射および／または電子線照射を使用して滅菌するステップを含む、条項５１８に記載の方法。
条項５２０． 凍結乾燥されたおよび滅菌されたアルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥されて滅菌された二価Ｃａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを、中性ｐＨの水溶液中で再構成するステップを含む、条項５１９に記載の方法。
（実施例１）
アルギネート粒子のアルギネートリアーゼ酵素濃度依存的分解
アルギネート粒子のアルギネートリアーゼ酵素濃度依存的分解
アルギネート粒子を調製する概略図を、図１Ａ～１Ｃおよび図２Ａ～２Ｃに示す。粘度（５～４０ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）のアルギン酸ナトリウムを、脱イオン水に溶解し、濃度４重量／体積％の保存溶液を調製した。同様に、濃度５０Ｕ／ｍｌのアルギネートリアーゼ酵素の保存溶液を、酵素粉末５ｍｇ（５０Ｕと等価）をＤＩ水１ｍｌに溶解することによって調製した。最終濃度５Ｕ／ｍｌまたは０．５Ｕ／ｍｌのアルギネートリアーゼ酵素および２重量／体積％のアルギン酸ナトリウムを有するアルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム前駆体溶液を調製するために、アルギネートリアーゼ酵素０．１ｍｌまたは０．０１ｍｌを、４重量／体積％のアルギン酸ナトリウム０．５ｍｌと３０秒間混合し、体積を脱イオン水によって１ｍｌにした。
前駆体アルギネートリアーゼ－アルギネート溶液を、１０重量／体積％塩化カルシウムを含有するゲル化槽に絶えず攪拌しながら５分間滴加し、アルギネートリアーゼをロードしたＣａ２＋複合体形成アルギネート粒子を得た。次に、粒子をふるいまたは遠心分離によって単離し、脱イオン水で各１分間３回洗浄し、過剰量の塩化カルシウムを除去した。洗浄したアルギネートリアーゼをロードしたＣａ２＋架橋アルギネート粒子を、ｐＨ６．８の１０ｍＭリン酸緩衝剤に分散させ、３７℃で所望の持続時間インキュベートし、アルギネート粒子の分解を評価した。アルギネートリアーゼ酵素５単位（Ｕ）および０．５Ｕをロードしたカルシウムイオンと複合体形成したアルギネート粒子の分解を図３Ａに示す。酵素５Ｕをロードしたアルギネート粒子は、１２時間で急速に分解したが、酵素０．５Ｕをロードした粒子は、より遅い速度で分解し、３６時間後に５Ｕをロードしたアルギネート粒子と類似の吸光度レベルに達することができなかった。図３Ｂから、５Ｕをロードしたアルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子は、１２時間で完全に分解したが、アルギネートリアーゼ０．５Ｕをロードしたアルギネート粒子試料は、３６時間で部分的に分解した粒子を示した。対照試料（酵素なし）では、カルシウムイオンと複合体を形成したアルギネート粒子は、インタクトのままであった。これらの結果は、アルギネート粒子のアルギネートリアーゼ酵素濃度依存的分解を実証した。
（実施例２）
高粘度アルギネートから調製したアルギネート粒子のアルギネートリアーゼ酵素濃度依存的分解
高粘度アルギネートから調製したアルギネート粒子のアルギネートリアーゼ酵素濃度依存的分解
高粘度アルギン酸ナトリウム（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）を、脱イオン水に溶解し、濃度３重量／体積％の保存溶液を調製した。同様に、濃度５０Ｕ／ｍｌのアルギネートリアーゼ酵素の保存溶液を、酵素粉末（５０Ｕと等価である）５ｍｇを、ＤＩ水１ｍｌに溶解することによって調製した。最終濃度１Ｕ／ｍｌ、０．５Ｕ／ｍｌおよび０．２５Ｕ／ｍｌのアルギネートリアーゼ酵素、ならびに２重量／体積％のアルギン酸ナトリウムを有するアルギネートリアーゼ－アルギン酸ナトリウム前駆体溶液を調製するために、アルギネートリアーゼ酵素０．０２ｍｌ、０．０１ｍｌ、０．００５ｍｌを、３重量／体積％のアルギン酸ナトリウム０．５ｍｌと３０秒間混合し、体積を脱イオン水によって１ｍｌにした。
前駆体アルギネートリアーゼ－アルギネート溶液を、２重量／体積％塩化カルシウムを含有するゲル化槽に、絶えず攪拌しながら５分間滴加し、アルギネートリアーゼをロードしたＣａ２＋複合体形成アルギネート粒子を得た。次に、粒子を、ふるいまたは遠心分離によって単離し、脱イオン水で各１分間３回洗浄し、過剰量の塩化カルシウムを除去した。洗浄したアルギネートリアーゼをロードしたＣａ２＋複合体形成アルギネート粒子を、ｐＨ６．５の１０ｍＭリン酸緩衝剤に分散させ、３７℃で所望の持続時間インキュベートし、アルギネート粒子の分解を評価した。アルギネートリアーゼ酵素１Ｕ、０．５Ｕ、および０．２５Ｕをロードしたカルシウムイオンと複合体形成したアルギネート粒子の分解を図４に示す。酵素１Ｕをロードしたアルギネート粒子は、酵素０．５Ｕおよび０．２５Ｕをロードした粒子と比較して１２０時間にわたって急速に分解した。対照試料（酵素を有しない）では、Ｃａ２＋架橋アルギネート粒子はインタクトのままであった。これらの結果は、アルギネート粒子のアルギネートリアーゼ酵素濃度依存的分解を実証した。
（実施例３）
アルギネートリアーゼ酵素の立体構造／活性のｐＨ依存的調節
アルギネートリアーゼ酵素の立体構造／活性のｐＨ依存的調節
リアーゼ酵素の立体構造／活性のｐＨ依存的調節を調べるために、アルギネートリアーゼ酵素を、異なるｐＨに曝露し、蛍光分光法に供した。一般的に、酵素のオープン立体構造は、酵素の触媒活性を不活化または低減するが、天然の構造のさらなる安定化は、酵素の触媒活性を改善する。図５から、酸性ｐＨ４．６（酢酸緩衝剤）での天然の酵素（１Ｕ／ｍｌ）の蛍光は、ｐＨ７．０（１０ｍＭ、リン酸緩衝剤）での天然の酵素と比較して低レベルである。酸性ｐＨでの蛍光の低減は、酵素がオープン立体構造であることを示した。酵素溶液のｐＨを、ｐＨ４．６から７．０に変化させると、蛍光は回復するかまたは増強され、ｐＨ７．０での天然の酵素と類似のレベルであることが見出される。このことは、酵素活性の再活性化を伴う、溶液のｐＨの変化に応答したアルギネートリアーゼ酵素の可逆的立体構造を実証した。したがって、アルギネートリアーゼ－アルギネート前駆体またはゲル化槽溶液のｐＨを変化させることによって、アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン粒子の製造プロセスの際の粒子の初回分解が起こる。アルギネート－リアーゼ酵素をロードした二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子を、中性ｐＨ（６．５～７．５）を有する水溶液中で再構成すると、アルギネートリアーゼ酵素の活性は回復し、アルギネート粒子の調整された分解を得ることができる。
（実施例４）
アルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの調製に及ぼすｐＨの影響
アルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの調製に及ぼすｐＨの影響
アルギネートリアーゼ酵素および高粘度アルギネート（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）をそれぞれ、ｐＨ４の０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝剤中に最終濃度５Ｕ／ｍｌおよび１．５重量／体積％で溶解した。同様に、アルギネートリアーゼ酵素－高粘度アルギネート（粘度１４４ｃｐ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）溶液もまた、ｐＨ６．５の０．０１Ｍリン酸緩衝剤中で調製し、最終濃度はそれぞれ、５Ｕ／ｍｌおよび１．５重量／体積％であった。両方の溶液を４℃で１５分間インキュベートした後、２重量／体積％塩化カルシウム溶液中に滴加し、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたカルシウムイオン架橋アルギネートミクロスフェアを得た。架橋したミクロスフェアを、脱イオン水で各１分間３回洗浄した。酢酸緩衝剤中で調製したミクロスフェアは、球状の形状を示した（図６（ａ））。他方、リン酸緩衝剤から得たミクロスフェアは、不規則な形状であり、部分的に分解していた（図６（ｂ））。これらの結果は、低いｐＨが酵素の触媒活性を低減させ、アルギネートの分解を防止し、それによって球状のミクロスフェアを得るのを助けることを示している。ミクロスフェアを作製するこの方法は、処理ウィンドウを増加させ、これはアルギネートリアーゼ酵素をロードしたアルギネートミクロスフェアの産生を規模拡大するために役立ち得る。
（実施例５）
酸性ｐＨ（酢酸緩衝剤、ｐＨ４）によって前処置されたアルギネート－アルギネートリアーゼ前駆体溶液から調製したＣａ２＋架橋アルギネートリアーゼ－アルギネートミクロスフェアの分解
酸性ｐＨ（酢酸緩衝剤、ｐＨ４）によって前処置されたアルギネート－アルギネートリアーゼ前駆体溶液から調製したＣａ２＋架橋アルギネートリアーゼ－アルギネートミクロスフェアの分解
アルギネートリアーゼ酵素および高粘度アルギネート（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）をそれぞれ、ｐＨ４の０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝剤中、５Ｕ／ｍｌおよび１．５重量／体積％の最終濃度で溶解した。同様に、アルギネートリアーゼ酵素－高粘度アルギネート（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）溶液もまた、ｐＨ６．５の０．０１Ｍリン酸緩衝剤中で調製し、最終濃度はそれぞれ、５Ｕ／ｍｌおよび１．５重量／体積％であった。両方の溶液を４℃で１５分間インキュベートした後、２重量／体積％塩化カルシウム溶液中に滴加し、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたカルシウムイオン架橋アルギネートミクロスフェアを得た。架橋したミクロスフェアを、脱イオン水で各１分間３回洗浄した。酢酸緩衝剤中で調製したミクロスフェアは、球状の形状を示した（図７（ａ））。他方、リン酸緩衝剤から得たミクロスフェアは不規則な形状であり、部分的に分解していた（図７（ｂ））。これらの結果は、低いｐＨが酵素の触媒活性を低減させてアルギネートの分解を防止し、それによって球状のミクロスフェアを得るのを助けることを示している。ミクロスフェアを作製するこの方法は、処理ウィンドウを増加させ、前駆体溶液中のアルギネートリアーゼによるアルギネートの分解を最小限にすることによって、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたアルギネートミクロスフェアの産生を規模拡大するために役立ち得る。これらの２つのミクロスフェアを、０．０１Ｍリン酸緩衝剤中でおよび／またはｐＨ６．５（酢酸緩衝剤によって前処置された前駆体溶液の場合）を達成するために０．１Ｎ ＮａＯＨを補充して７２時間インキュベートした。酢酸緩衝剤によって処置したアルギネート－アルギネートリアーゼミクロスフェアは、図７（ｃ）に示すように残渣の可視可能な徴候なく完全に分解した。他方、リン酸緩衝剤によって処置したアルギネート－アルギネートリアーゼミクロスフェアは、図７（ｄ）に観察されるように何らかの白い残渣を示した。これらの粒子の分解をまた、ＵＶ－可視光分光法を使用して決定したところ、アルギネートミクロスフェアの分解産物が、２３５ｎｍでのその吸光度によって決定された。酢酸緩衝剤によって処置したアルギネートリアーゼ－アルギネートＣａ２＋架橋ミクロスフェアは、リン酸緩衝剤によって処置した等価のミクロスフェアと比較してより大きい分解を示したことが観察された（図７（ｅ））。これらの結果は、アルギネートリアーゼ酵素のｐＨ依存性の可逆的活性を示し、酵素は、低いｐＨに曝露することによって部分的および可逆的に阻害またはモジュレートされ、アルギネートマトリックスを分解することなくアルギネートミクロスフェアへの酵素の所望の量のローディングを可能にする。アルギネートミクロスフェアに捕捉された酵素は、最適なｐＨに曝露することによって可逆的に活性化され、アルギネートミクロスフェアの分解をもたらす。
（実施例６）
アルギネートリアーゼ酵素の酸性ｐＨ依存性可逆的活性
アルギネートリアーゼ酵素の酸性ｐＨ依存性可逆的活性
アルギネートリアーゼ酵素および高粘度アルギネート（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）をそれぞれ、０．１Ｍ酢酸緩衝剤（ｐＨ４．０）および０．０１Ｍリン酸緩衝剤（ｐＨ６．５）に、１Ｕ／ｍｌおよび０．１重量／体積％の最終濃度で溶解した。それぞれの反応の試料名は、アルギネート－ＡＬ Ａ．Ｂおよびアルギネート－ＡＬ Ｐ．Ｂである。これらの溶液の温度を、１～４℃および３７℃で３０分間維持した。インキュベーション後、０．１Ｎ ＮａＯＨを添加することによって、反応を停止させた。同様に、アルギネートリアーゼ酵素を、酢酸緩衝剤中で１５分間プレインキュベートした後、０．０１Ｍリン酸緩衝剤に溶解し、最適なｐＨ６．５に達するために０．１Ｎ ＮａＯＨを補充した高粘度アルギネートと、それぞれ、０．１Ｕ／ｍｌおよび１重量／体積％の最終濃度で混合した。溶液を、１～４℃および３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、０．１Ｎ ＮａＯＨを添加することによって反応を終了させた（試料名はアルギネート（Ｐ．Ｂ）－ＡＬ（Ａ．Ｂ）である）。反応の終了後、アルギネートリアーゼ酵素の酵素活性を、分解産物の波長２３５ｎｍでの吸光度によって決定した。
図８から、アルギネート－ＡＬ Ａ．Ｂの酵素活性が、アルギネート－ＡＬ Ｐ．Ｂ試料と比較して、１～４℃および３７℃で低減されることが観察された。さらに、アルギネート－ＡＬ Ｐ．Ｂ試料から、アルギネートリアーゼ活性の低減に及ぼす低温の効果は無視できる程度であることが観察される。さらに、リン酸緩衝剤に溶解したアルギネートと混合した酢酸緩衝剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素（アルギネート（Ｐ．Ｂ）－ＡＬ（Ａ．Ｂ））は、アルギネート－ＡＬ Ｐ．Ｂ試料と比較して４℃で酵素活性の４倍低減を示した。このことは、酢酸緩衝剤が、１～４℃で酵素の活性を部分的に低減させたことを示している。特に、アルギネートリアーゼ酵素活性は、３７℃でかなり増加し、レベルは、アルギネート－ＡＬ Ｐ．Ｂ試料と類似であることが見出された。活性のこの増加は、ｐＨ依存性可逆的アルギネートリアーゼ活性を示し、酵素は、低いｐＨに曝露されると、部分的および可逆的に阻害またはモジュレートされ、溶液の最適なｐＨに変化させることによって回復する。これらの結果は、図９Ａ～９Ｃによってさらに裏付けられる。
（実施例７）
凍結保護剤ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）およびトレハロース（０．５重量／体積％）を使用してアルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの凍結乾燥
凍結保護剤ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）およびトレハロース（０．５重量／体積％）を使用してアルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの凍結乾燥
高粘度（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）の１．５重量／体積％アルギン酸ナトリウム、ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）、トレハロース（０．５重量／体積％）を脱イオン水に溶解し、磁気攪拌子上、１～４℃で３０分／４５分間攪拌し、均一な分散液を得た。次に、５Ｕアルギネートリアーゼ酵素を分散液に加え、１分間混合した。ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）およびトレハロース（０．５重量／体積％）を含有するこの溶液を、２重量／体積％ＣａＣｌ２に滴加し、１５分間攪拌し、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたＰＶＰ４０ｋＤａおよびトレハロースを含有するＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを得た。これらのミクロスフェアをさらに、脱イオン水で各１分間３回洗浄し、液体窒素に３０秒～２分間曝露した。凍結したミクロスフェアを、超高真空下で－５７℃に設定した凍結乾燥器を使用して２４時間凍結乾燥した。図１０Ａおよび１０Ａ’から、フリーズドライまたは凍結乾燥されたミクロスフェアが、凍結乾燥していないミクロスフェアと比較して形状の変化を示さず、このようにミクロスフェアの形状が保存されることを示している。
（実施例８）
凍結保護剤ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（０．５重量／体積％）を使用してアルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの凍結乾燥
凍結保護剤ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（０．５重量／体積％）を使用してアルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの凍結乾燥
高粘度（１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）の１．５重量／体積％アルギン酸ナトリウムおよびヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（０．５重量／体積％）を脱イオン水に溶解し、磁気攪拌子上、１～４℃で３０分／４５分間攪拌し、均一な分散液を得た。次に、アルギネートリアーゼ酵素５Ｕを分散液に添加し、１分間混合した。０．５重量／体積％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンを含有するこの溶液を、２重量／体積％ＣａＣｌ２に滴加し、１５分間攪拌し、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンを含有するＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを得た。これらのミクロスフェアをさらに、脱イオン水で各１分間３回洗浄し、液体窒素に３０秒～２分間曝露した。凍結したミクロスフェアを、超高真空下で－５７℃に設定した凍結乾燥器を使用して２４時間凍結乾燥した。図１０Ｂおよび１０Ｂ’から、フリーズドライまたは凍結乾燥されたミクロスフェアは、凍結乾燥していないミクロスフェアと比較して形状の変化を示さず、このようにミクロスフェアの形状が保存されることを示している。
（実施例９）
ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）およびトレハロース（０．５重量／体積％）凍結保護剤を含有するアルギネートリアーゼ酵素をロードした凍結乾燥されたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの分解
ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）およびトレハロース（０．５重量／体積％）凍結保護剤を含有するアルギネートリアーゼ酵素をロードした凍結乾燥されたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの分解
高粘度（粘度１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）１．５重量／体積％アルギン酸ナトリウム、ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）、トレハロース（０．５重量／体積％）を脱イオン水に溶解し、磁気攪拌子上、１～４℃で３０分／４５分間攪拌し、均一な分散液を得た。次に、５Ｕアルギネートリアーゼ酵素を分散液に添加し、１分間混合した。ＰＶＰ４０ｋＤａ（０．５重量／体積％）およびトレハロース（０．５重量／体積％）を含有するこの溶液を、２重量／体積％ＣａＣｌ２に滴加し、１５分間攪拌し、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたＰＶＰ４０ｋＤａおよびトレハロースを含有するＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを得た。これらのミクロスフェアをさらに、脱イオン水で各１分間３回洗浄し、液体窒素に３０秒～２分間曝露した。凍結したミクロスフェアを、超高真空下で－５７℃に設定した凍結乾燥器を使用して２４時間凍結乾燥した。図１１（ａ）は、フリーズドライまたは凍結乾燥されたミクロスフェアを示す。凍結乾燥されたミクロスフェアを、０．０１Ｍリン酸緩衝剤（ｐＨ６．５）に懸濁し、３７℃で７２時間インキュベートした。懸濁したミクロスフェアが分解したことが観察され、および図１１（ｃ）に示されるように濁度が観察される。図１１（ｅ）は、凍結乾燥された自己分解可能なアルギネートミクロスフェアの分解産物の吸収スペクトルを示す。
（実施例１０）
ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（０．５重量／体積％）凍結保護剤を含有するアルギネートリアーゼ酵素をロードした凍結乾燥されたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの分解
ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（０．５重量／体積％）凍結保護剤を含有するアルギネートリアーゼ酵素をロードした凍結乾燥されたＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアの分解
高粘度（１４４ｃＰ、２５℃の水中で１重量／体積％の条件）の１．５重量／体積％アルギン酸ナトリウムおよびヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（０．５重量／体積％）を脱イオン水に溶解し、磁気攪拌子上、１～４℃で３０分／４５分間攪拌し、均一な分散液を得た。次に、アルギネートリアーゼ酵素５Ｕを分散液に添加し、１分間混合した。０．５重量／体積％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンを含有するこの溶液を、２重量／体積％ＣａＣｌ２に滴加し、１５分間攪拌し、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンを含有するＣａ２＋架橋アルギネートミクロスフェアを得た。これらのミクロスフェアをさらに、脱イオン水で各１分間３回洗浄し、液体窒素に３０秒～２分間曝露した。凍結したミクロスフェアを、超高真空下で－５７℃に設定した凍結乾燥器を使用して２４時間凍結乾燥した。図１１（ｂ）は、フリーズドライまたは凍結乾燥されたミクロスフェアを示す。凍結乾燥されたミクロスフェアを、０．０１Ｍリン酸緩衝剤（ｐＨ６．５）に懸濁し、３７℃で７２時間インキュベートした。懸濁したミクロスフェアが分解したことが観察され、図１１（ｄ）に示すように濁度が観察される。図１１（ｅ）は、凍結乾燥された自己分解可能アルギネートミクロスフェアの分解産物の吸収スペクトルを示す。
（実施例１１）
アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子のｅｘ ｖｉｖｏ分解
アルギネートリアーゼをロードした二価金属イオン複合体形成アルギネート粒子のｅｘ ｖｉｖｏ分解
この試験では、アルギネートリアーゼ酵素５Ｕを、カルシウムイオン複合体形成アルギネート粒子および対照粒子（酵素を有しない）にロードし、食塩水に浸した肝臓（ウシ）の上に置いた。粒子の分解を評価するために、肝臓を、温度を３７±１℃に設定したオーブン内で維持し、粒子の形態学的変化を４８時間観察した。図９から、アルギネートリアーゼをロードしたアルギネート粒子は、その形状を４８時間で失い、白色残渣の被膜が観察され得る。他方、対照粒子は、その形状を４８時間維持する。対照粒子上では、バイオフィルムの形成であり得る黒色被膜を観察することができる。
（実施例１２）
アルギネート粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ生体適合性
アルギネート粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ生体適合性
アルギネートリアーゼ酵素１Ｕおよび５Ｕをロードした２つの異なるカルシウムイオン複合体形成アルギネート粒子を調製した。粒子の生体適合性を評価するために、細胞の形態学および生存率を、図１２に示すように光学顕微鏡を通して観察した。細胞を、２４ウェルプレートに１ｍｌあたり１０４個の細胞の細胞密度で播種した。細胞を、１０％ウシ胎児血清、ならびに１％ペニシリンおよび１％ストレプトマイシンを含有するアルファ－ＭＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ２、および９５％相対湿度で培養した。サイズ２～３ｍｍの少なくとも１０個の粒子を２４ウェルプレートに添加し、２４時間インキュベートした。対照試料では、骨芽細胞の生存率および形態学に有害な影響を及ぼすことなく、インタクト粒子が観察された。アルギネートリアーゼ酵素５Ｕをロードしたアルギネート粒子は、完全に分解されたが（分解したアルギネート粒子のデブリによって示される）、アルギネートリアーゼ酵素１Ｕをロードしたアルギネート粒子は、不規則な形状であった。細胞は、分解した粒子の下で平坦な形態で生存している。このデータは、アルギネートリアーゼをロードしたカルシウム複合体形成アルギネート粒子のｉｎ ｖｉｔｒｏ生体適合性を実証した。
（実施例１３）
アルカリｐＨ（炭酸緩衝剤、ｐＨ１０）によって前処置されたアルギネート－アルギネートリアーゼ前駆体溶液中での凍結乾燥されたＣａ２＋架橋アルギネートリアーゼ－アルギネートミクロスフェアの分解
アルカリｐＨ（炭酸緩衝剤、ｐＨ１０）によって前処置されたアルギネート－アルギネートリアーゼ前駆体溶液中での凍結乾燥されたＣａ２＋架橋アルギネートリアーゼ－アルギネートミクロスフェアの分解
４重量／体積％Ｐｒｏｎｏｖａアルギネート（Ｇ／Ｍ＜１、分子量およそ７５ｋＤａ～２００ｋＤａ）を炭酸緩衝剤（ｐＨ１０および０．１Ｍ）中で溶解し、磁気攪拌子上、１～４℃で３０分／４５分間攪拌して、均一な分散液を得た。次に、１００ｍＭエチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウム塩水和物およびアルギネートリアーゼを添加して、最終濃度２重量／体積％のアルギネート、０．０５Ｕ／ｍｌのアルギネートリアーゼ、および５０ｍＭのエチレンジアミン四酢酸カルシウム二ナトリウム塩水和物を含有する前駆体溶液を得た。マイクロ流体力学プラットロームを通して、サイズおよそ２００μｍの前駆体溶液の液滴を、水中油型エマルジョン技術を使用して生成し、２重量／体積％酢酸、油＋０．０５％界面活性剤の酸性溶液に曝露して、ビーズを架橋させ、Ｃａ２＋イオンは、Ｃａ－ＥＤＴＡのイオン化によって放出され、エッグボックスアルギネート液滴に結合して、アルギネートリアーゼ酵素をロードしたＣａ２＋架橋アルギネートビーズを生成した。サイズおよそ２００μｍの架橋したアルギネートビーズを単離するために、液滴を、液滴破壊溶液によって処置し、さらに脱イオン水によって洗浄し、油および界面活性剤を除去した。これらのビーズをさらに、２重量／体積％ＣａＣｌ２溶液中で５分間架橋させた後、脱イオン水によって再度洗浄し、残存塩化カルシウム溶液を除去した。さらに、ビーズを、トレハロースおよびβ－ヒドロキシシクロデキストリンを含有する酢酸緩衝剤（０．１Ｍ、ｐＨ４．０）中で少なくとも６時間貯蔵した後、凍結乾燥に供した。凍結乾燥後、ビーズを食塩水溶液中で再水和または再構成し、静止溶液条件で分解を１８時間評価した。図１３から、Ｔ１時間は、何らかの軽微な分解、均一性を欠く形状の変化、および溶液中に出現する小さい粒子（＜１０μｍ）の凝集を示した。Ｔ２時間は、この傾向に従い、表面および形状の損傷の増加を伴い、溶液中の小さい粒子の凝集が増加している。Ｔ１８時間は、完全にビーズのない溶液を示し、凝集は観察されなかった。
（実施例１４）
Ｅｌａｓｔｒａｔ肝臓モデルにおける食塩水溶液中で再構成した凍結乾燥後の再吸収可能アルギネートビーズの分解
Ｅｌａｓｔｒａｔ肝臓モデルにおける食塩水溶液中で再構成した凍結乾燥後の再吸収可能アルギネートビーズの分解
本明細書において、アルギネートリアーゼ０．０５Ｕを含有する凍結乾燥された再吸収可能アルギネートビーズを、食塩水溶液中で再構成し、Ｅｌａｓｔｒａｔ肝臓モデルに注入して、これらのビーズの閉塞効率および食塩水の流れの回復を定量することによる経時的なビーズの分解を調べた。図１４は、０分（Ｔ＝０）での流量が、肝モデルチャネルにビーズを注入後３８分間で＞９０％低減したことを示す。５０分までに、６４％の流れが回復し、約２時間後、流量は８０％回復した。これらの結果は、実施例１３に示すように、静止条件と比較した場合に動的流動条件ではより大きい分解速度が観察されたことを示している。
（実施例１５）
Ｅｌａｓｔｒａｔ肝臓モデルにおける再吸収可能アルギネートビーズの分解挙動に及ぼすＣａ２＋イオン架橋の評価
Ｅｌａｓｔｒａｔ肝臓モデルにおける再吸収可能アルギネートビーズの分解挙動に及ぼすＣａ２＋イオン架橋の評価
再吸収可能アルギネートの分解速度に及ぼすカルシウムイオン架橋の効果を図１５に示す。酸性条件下でＣａ－ＥＤＴＡのイオン化によって放出されたＣａ２＋イオンによって架橋されたアルギネートリアーゼ０．０１Ｕを含有する再吸収可能アルギネートビーズ（ＣａＣｌ２を含まない０．０１）は、肝臓モデルに注入後食塩水の流量の非効率的な低減を示し、アルギネートリアーゼ分解活性による変形したアルギネートビーズの存在を示している。４０分までに、約８０％の流量が達成され、それによって再吸収可能アルギネートビーズの急速な分解を示している。酵素の活性を低減させるために、これらのビーズを、２重量／体積％ＣａＣｌ２溶液中で５分間さらに架橋させた。これらの粒子を、肝臓モデルに注入し、流量の完全な低減が７０分までに観察され、その後、流れの回復の加速が１００分までに達成された。他方、永続的なビーズ（Ｃａ－ＥＴＤＡと架橋したのみ）は、流量の連続的な低減を示し、１４０分の期間にわたってアルギネートビーズの分解または崩壊が観察されなかったことを示している。これらの結果は、Ｃａ２＋架橋がアルギネートリアーゼ活性に依存し、それによってアルギネートビーズの分解を制御することを実証した。
（実施例１６）
アルギネートリアーゼのアルカリｐＨ依存性可逆的活性
アルギネートリアーゼのアルカリｐＨ依存性可逆的活性
アルギネートリアーゼ酵素およびＬＶＧアルギネート（Ｇ／Ｍ＞１、分子量およそ７５ｋＤａ～２００ｋＤａ）またはＬＶＭアルギネート（Ｇ／Ｍ＜１、分子量およそ７５ｋＤａ～２００ｋＤａ）を、０．１Ｍ炭酸緩衝剤（ｐＨ１０．０）および０．０１Ｍリン酸緩衝剤（ｐＨ６．５）にそれぞれ、最終濃度０．１Ｕ／ｍｌおよび０．１重量／体積％で溶解した。それぞれの反応の試料名は、ＬＶＭ－または－ＬＶＧ－ＡＬ ｐＨ１０およびＬＶＧ－アルギネート－ＡＬ ｐＨ７である。同様に、アルギネートリアーゼ酵素を、ｐＨ１０．０の０．１Ｍ炭酸緩衝剤中で１５分間プレインキュベートした後、ＬＶＧアルギネート（Ｇ／Ｍ＞１、分子量およそ７５ｋＤａ～２００ｋＤａ）またはＬＶＭアルギネート（Ｇ／Ｍ＜１、分子量およそ７５ｋＤａ～２００ｋＤａ）と、最適なｐＨ６．５を達成するために０．０１Ｍリン酸緩衝剤中でそれぞれ、０．１Ｕ／ｍｌおよび０．１重量／体積％の最終濃度で混合した。それぞれの反応の試料名は、ＬＶＭ－または－ＬＶＧ－ＡＬ ｐＨ１０～７である。上記で言及した試料を全てインキュベートし、アルギネートリアーゼ酵素の酵素活性を、波長２３５ｎｍでの分解産物の吸光度によって決定した（図１６）。
（実施例１７）
アルギネートリアーゼ酵素０．０５Ｕをロードしたアルギネートビーズに及ぼす滅菌の効果
アルギネートリアーゼ酵素０．０５Ｕをロードしたアルギネートビーズに及ぼす滅菌の効果
アルギネート０．０５Ｕを含有する凍結乾燥されたアルギネートビーズを、１０ｋＧｙ電子線を使用して滅菌し、生理的条件（ｐＨ７および温度３７℃）下、食塩水溶液中で２４時間自己分解に供した。図１７は、フリーズドライした滅菌アルギネートビーズ対照（リアーゼを含まない）と比較した場合、２３５ｎｍで記録された吸光度の増加によって示されるように、アルギネートリアーゼ活性が存在することを示す。これらの結果は、再吸収可能なビーズを、フリーズドライすることができ、滅菌することができ、および生理的条件下の水溶液（本明細書では、食塩水）中で再構成すると分解させることができ、滅菌はアルギネートリアーゼ酵素活性に影響を及ぼさないことを実証した。
アルギネート０．０５Ｕを含有する凍結乾燥されたアルギネートビーズを、１０ｋＧｙ電子線を使用して滅菌し、生理的条件（ｐＨ７および温度３７℃）下、食塩水溶液中で２４時間自己分解に供した。図１７は、フリーズドライした滅菌アルギネートビーズ対照（リアーゼを含まない）と比較した場合、２３５ｎｍで記録された吸光度の増加によって示されるように、アルギネートリアーゼ活性が存在することを示す。これらの結果は、再吸収可能なビーズを、フリーズドライすることができ、滅菌することができ、および生理的条件下の水溶液（本明細書では、食塩水）中で再構成すると分解させることができ、滅菌はアルギネートリアーゼ酵素活性に影響を及ぼさないことを実証した。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアであって、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
前記アルギネート分子を架橋する二価金属イオンを含み、
前記アルギネートミクロスフェアが、水を実質的に含まないおよび／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。
（項目２）
アルギネートミクロスフェアの分解が、前記アルギネートリアーゼ酵素の前処置、前記ミクロスフェア中の前記アルギネート酵素の量、前記アルギネート分子の既定の分子量、および前記アルギネート分子のＭ：Ｇブロックの前記既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目３）
（ｉ）～（ｉｉｉ）：
（ｉ）前記金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ ２＋ 、Ｚｎ ２＋ 、およびＦｅ ３＋ からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｉｉ）前駆体溶液中での前記アルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、および
（ｉｉｉ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、前記ゲル化槽の温度、および前記アルギネートミクロスフェア中の前記金属イオン酵素阻害剤の量、の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目４）
（ｉ）～（ｖ）：
（ｉ）前記アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲内にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、および
（ｖ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目５）
（ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｉｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、および
（ｄ）（ｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること
の少なくとも１つが当てはまる、項目４に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目６）
（ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）前記ミクロスフェアが生物活性剤をさらに含むこと、
（ｉｉ）前記ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から選択される凍結保護剤をさらに含むこと、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されること、
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、
（ｖ）前記アルギネートミクロスフェアが滅菌されるか、または前記アルギネートミクロスフェアが、凍結乾燥されて滅菌されること、
（ｖｉ）前記アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、および
（ｖｉｉ）凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成されること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目７）
（ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の前記生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含むこと、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にあること、
（ｃ）（ｖ）の前記滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、および
（ｄ）（ｖｉ）の前記所定の温度が約２℃～約８℃の間、またはほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、項目６に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目８）
（ａ）の前記抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含むか、または（ｃ）の前記滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射もしくは約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、項目７に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目９）
再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、前記方法が、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前記前駆体溶液が、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに
（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含む、ステップ；
前記液滴を、二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させ、それによって前記アルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
前記アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによって前記ミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む、方法。
（項目１０）
（ｉ）～（ｘ）：
（ｉ）前記前駆体溶液が１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉ）前記ゲル化槽が１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前記前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、ｐＨ３．０～６．４の範囲にあること、
（ｉｖ）前記金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ ２＋ 、Ｚｎ ２＋ 、およびＦｅ ３＋ からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｖ）前記前駆体溶液の温度が、１～４℃の範囲にあること、
（ｖｉ）前記前駆体溶液中の前記アルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）と前記アルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｖｉｉ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、前記ゲル化槽のｐＨ、前記ゲル化槽の温度、および前記アルギネートミクロスフェア中の前記金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
（ｖｉｉｉ）前記ゲル化槽のｐＨが約６．５未満であること、
（ｉｘ）前記ゲル化槽のｐＨが、前記前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しいこと、ならびに
（ｘ）前記前駆体溶液および／または前記ゲル化槽が、生物活性剤をさらに含むこと、の少なくとも１つが当てはまる、項目９に記載の方法。
（項目１１）
（ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）前記脱水するステップが、前記アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含むこと、
（ｉｉ）前記液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施されること、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、ならびに
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、
の少なくとも１つが当てはまる、項目９に記載の方法。
（項目１２）
（ｉ）および（ｉｉ）の前記凍結保護剤が各々、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から独立して選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
（ａ）～（ｆ）：
（ａ）前記前駆体溶液（ｉ）中の前記トレハロースの濃度が約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％であること、
（ｂ）前記前駆体溶液（ｉ）または前記ゲル化槽（ｉｉ）中のヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％であること、
（ｃ）前記前駆体溶液（ｉ）中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｄ）前記前駆体溶液（ｉ）中の前記デキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｅ）前記前駆体溶液（ｉ）および前記ゲル化槽（ｉｉ）が同じ凍結保護剤を含むこと、ならびに
（ｆ）前記前駆体溶液（ｉ）および前記ゲル化槽（ｉｉ）が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
（ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）前記アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを滅菌するステップ、
（ｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップ、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを対象に投与するステップ、および
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用して再構成するステップ、
から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む、項目９に記載の方法。
（項目１６）
（ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の前記滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、
（ｂ）（ｉ）の前記滅菌するステップが、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含むこと、
（ｃ）（ｉｉ）の前記所定の温度が、約２℃～約８℃の間であること、および
（ｄ）（ｉｉ）の前記所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
アルギネートミクロスフェアの分解が、前記アルギネートリアーゼ酵素の前処置、前記ミクロスフェア中の前記アルギネート酵素の量、前記アルギネート分子の既定の分子量、および前記アルギネート分子のＭ：Ｇブロックの前記既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、項目９に記載の方法。
（項目１８）
（ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）前記アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
（ｖ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
（ｖｉ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、および
（ｖｉｉ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
の少なくとも１つが当てはまる、項目９に記載の方法。
（項目１９）
（ａ）～（ｅ）：
（ａ）（ｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、
（ｄ）（ｖｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、および
（ｅ）（ｖｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解すること、
の少なくとも１つが当てはまる、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
（ｘ）の前記生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２１）
前記抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、項目２０に記載の方法。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアであって、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
前記アルギネート分子を架橋する二価金属イオンを含み、
前記アルギネートミクロスフェアが、水を実質的に含まないおよび／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。
（項目２）
アルギネートミクロスフェアの分解が、前記アルギネートリアーゼ酵素の前処置、前記ミクロスフェア中の前記アルギネート酵素の量、前記アルギネート分子の既定の分子量、および前記アルギネート分子のＭ：Ｇブロックの前記既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目３）
（ｉ）～（ｉｉｉ）：
（ｉ）前記金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ ２＋ 、Ｚｎ ２＋ 、およびＦｅ ３＋ からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｉｉ）前駆体溶液中での前記アルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、および
（ｉｉｉ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、前記ゲル化槽の温度、および前記アルギネートミクロスフェア中の前記金属イオン酵素阻害剤の量、の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目４）
（ｉ）～（ｖ）：
（ｉ）前記アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲内にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、および
（ｖ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目５）
（ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｉｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、および
（ｄ）（ｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること
の少なくとも１つが当てはまる、項目４に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目６）
（ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）前記ミクロスフェアが生物活性剤をさらに含むこと、
（ｉｉ）前記ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から選択される凍結保護剤をさらに含むこと、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されること、
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、
（ｖ）前記アルギネートミクロスフェアが滅菌されるか、または前記アルギネートミクロスフェアが、凍結乾燥されて滅菌されること、
（ｖｉ）前記アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、および
（ｖｉｉ）凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成されること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目７）
（ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の前記生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含むこと、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にあること、
（ｃ）（ｖ）の前記滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、および
（ｄ）（ｖｉ）の前記所定の温度が約２℃～約８℃の間、またはほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、項目６に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目８）
（ａ）の前記抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含むか、または（ｃ）の前記滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射もしくは約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、項目７に記載のアルギネートミクロスフェア。
（項目９）
再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、前記方法が、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前記前駆体溶液が、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに
（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含む、ステップ；
前記液滴を、二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させ、それによって前記アルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
前記アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによって前記ミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む、方法。
（項目１０）
（ｉ）～（ｘ）：
（ｉ）前記前駆体溶液が１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉ）前記ゲル化槽が１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前記前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、ｐＨ３．０～６．４の範囲にあること、
（ｉｖ）前記金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ ２＋ 、Ｚｎ ２＋ 、およびＦｅ ３＋ からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｖ）前記前駆体溶液の温度が、１～４℃の範囲にあること、
（ｖｉ）前記前駆体溶液中の前記アルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）と前記アルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｖｉｉ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、前記ゲル化槽のｐＨ、前記ゲル化槽の温度、および前記アルギネートミクロスフェア中の前記金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
（ｖｉｉｉ）前記ゲル化槽のｐＨが約６．５未満であること、
（ｉｘ）前記ゲル化槽のｐＨが、前記前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しいこと、ならびに
（ｘ）前記前駆体溶液および／または前記ゲル化槽が、生物活性剤をさらに含むこと、の少なくとも１つが当てはまる、項目９に記載の方法。
（項目１１）
（ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）前記脱水するステップが、前記アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含むこと、
（ｉｉ）前記液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施されること、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、ならびに
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、
の少なくとも１つが当てはまる、項目９に記載の方法。
（項目１２）
（ｉ）および（ｉｉ）の前記凍結保護剤が各々、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から独立して選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
（ａ）～（ｆ）：
（ａ）前記前駆体溶液（ｉ）中の前記トレハロースの濃度が約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％であること、
（ｂ）前記前駆体溶液（ｉ）または前記ゲル化槽（ｉｉ）中のヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％であること、
（ｃ）前記前駆体溶液（ｉ）中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｄ）前記前駆体溶液（ｉ）中の前記デキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｅ）前記前駆体溶液（ｉ）および前記ゲル化槽（ｉｉ）が同じ凍結保護剤を含むこと、ならびに
（ｆ）前記前駆体溶液（ｉ）および前記ゲル化槽（ｉｉ）が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
（ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）前記アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを滅菌するステップ、
（ｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップ、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを対象に投与するステップ、および
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用して再構成するステップ、
から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む、項目９に記載の方法。
（項目１６）
（ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の前記滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、
（ｂ）（ｉ）の前記滅菌するステップが、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含むこと、
（ｃ）（ｉｉ）の前記所定の温度が、約２℃～約８℃の間であること、および
（ｄ）（ｉｉ）の前記所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
アルギネートミクロスフェアの分解が、前記アルギネートリアーゼ酵素の前処置、前記ミクロスフェア中の前記アルギネート酵素の量、前記アルギネート分子の既定の分子量、および前記アルギネート分子のＭ：Ｇブロックの前記既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、項目９に記載の方法。
（項目１８）
（ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）前記アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
（ｖ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
（ｖｉ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、および
（ｖｉｉ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
の少なくとも１つが当てはまる、項目９に記載の方法。
（項目１９）
（ａ）～（ｅ）：
（ａ）（ｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、
（ｄ）（ｖｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、および
（ｅ）（ｖｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解すること、
の少なくとも１つが当てはまる、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
（ｘ）の前記生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含む、項目１０に記載の方法。
（項目２１）
前記抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、項目２０に記載の方法。
Claims (21)
- 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアであって、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；
（ｉ）既定の分子量、および（ｉｉ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子；ならびに
前記アルギネート分子を架橋する二価金属イオンを含み、
前記アルギネートミクロスフェアが、水を実質的に含まないおよび／または滅菌されているアルギネートミクロスフェア。 - アルギネートミクロスフェアの分解が、前記アルギネートリアーゼ酵素の前処置、前記ミクロスフェア中の前記アルギネート酵素の量、前記アルギネート分子の既定の分子量、および前記アルギネート分子のＭ：Ｇブロックの前記既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、請求項１に記載のアルギネートミクロスフェア。
- （ｉ）～（ｉｉｉ）：
（ｉ）前記金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｉｉ）前駆体溶液中での前記アルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）とアルギネート分子との混合を可能にすること、および
（ｉｉｉ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、ゲル化槽のｐＨ、前記ゲル化槽の温度、および前記アルギネートミクロスフェア中の前記金属イオン酵素阻害剤の量、の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること
の少なくとも１つが当てはまる、請求項１に記載のアルギネートミクロスフェア。 - （ｉ）～（ｖ）：
（ｉ）前記アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲内にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｍＵ（ミリ単位）～約２．５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること、および
（ｖ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、約０．０５ｎＵ（ナノ単位）～約０．０５ｍＵ／ミクロスフェアの間であること
の少なくとも１つが当てはまる、請求項１に記載のアルギネートミクロスフェア。 - （ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｉｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、および
（ｄ）（ｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること
の少なくとも１つが当てはまる、請求項４に記載のアルギネートミクロスフェア。 - （ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）前記ミクロスフェアが生物活性剤をさらに含むこと、
（ｉｉ）前記ミクロスフェアが、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から選択される凍結保護剤をさらに含むこと、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアが凍結乾燥されること、
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、
（ｖ）前記アルギネートミクロスフェアが滅菌されるか、または前記アルギネートミクロスフェアが、凍結乾燥されて滅菌されること、
（ｖｉ）前記アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、および
（ｖｉｉ）凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアが、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤中で再構成されること
の少なくとも１つが当てはまる、請求項１に記載のアルギネートミクロスフェア。 - （ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の前記生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含むこと、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にあること、
（ｃ）（ｖ）の前記滅菌が、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、および
（ｄ）（ｖｉ）の前記所定の温度が約２℃～約８℃の間、またはほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、請求項６に記載のアルギネートミクロスフェア。 - （ａ）の前記抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含むか、または（ｃ）の前記滅菌が、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射もしくは約２５ｋＧｙの電子線照射を含む、請求項７に記載のアルギネートミクロスフェア。
- 再水和時に自己分解可能なアルギネートミクロスフェアを調製する方法であって、前記方法が、
前駆体溶液から液滴を形成するステップであって、前記前駆体溶液が、
温度を変化させることによって、ｐＨを変化させることによって、および／または金属イオン酵素阻害剤によって前処置されたアルギネートリアーゼ酵素；ならびに
（ａ）既定の分子量、および（ｂ）β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）ブロックのα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）ブロックに対する既定の比の１つまたは両方を有するアルギネート分子を含む、ステップ；
前記液滴を、二価金属イオンを含むゲル化槽と接触させ、それによって前記アルギネート分子を架橋させて、アルギネートミクロスフェアを形成するステップ；ならびに
前記アルギネートミクロスフェアを脱水し、必要に応じて滅菌し、それによって前記ミクロスフェアから水を実質的に除去するステップを含む、方法。 - （ｉ）～（ｘ）：
（ｉ）前記前駆体溶液が１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉ）前記ゲル化槽が１つまたは複数の凍結保護剤を含むこと、
（ｉｉｉ）アルギネートリアーゼおよびアルギネートを含有する前記前駆体溶液中のアルギネートリアーゼ酵素のｐＨが、ｐＨ３．０～６．４の範囲にあること、
（ｉｖ）前記金属イオン酵素阻害剤が、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、およびＦｅ３＋からなる群から選択される可逆的阻害剤であること、
（ｖ）前記前駆体溶液の温度が、１～４℃の範囲にあること、
（ｖｉ）前記前駆体溶液中の前記アルギネート酵素の前処置が、酵素の既定の量（単位Ｕで測定される）と前記アルギネート分子との混合を可能にすること、
（ｖｉｉ）前記アルギネートリアーゼ酵素の活性が、前記ゲル化槽のｐＨ、前記ゲル化槽の温度、および前記アルギネートミクロスフェア中の前記金属イオン酵素阻害剤の量の１つまたは複数を調整することによってモジュレートされること、
（ｖｉｉｉ）前記ゲル化槽のｐＨが約６．５未満であること、
（ｉｘ）前記ゲル化槽のｐＨが、前記前駆体溶液のｐＨに等しいかまたはほぼ等しいこと、ならびに
（ｘ）前記前駆体溶液および／または前記ゲル化槽が、生物活性剤をさらに含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、請求項９に記載の方法。 - （ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）前記脱水するステップが、前記アルギネートミクロスフェアを凍結乾燥するステップを含むこと、
（ｉｉ）前記液滴を形成するステップが、ドロップキャスティング、噴霧凝固／噴霧冷却、噴霧乾燥、マイクロ流体力学による液滴産生、およびジェット切断からなる群から選択される方法を使用して実施されること、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアの真球度が、少なくとも約０．７、少なくとも約０．７５、少なくとも約０．８、少なくとも約０．８５、少なくとも約０．９、少なくとも約０．９５、または少なくとも約０．９９であること、ならびに
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェアの貯蔵寿命が、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間であること、
の少なくとも１つが当てはまる、請求項９に記載の方法。 - （ｉ）および（ｉｉ）の前記凍結保護剤が各々、ヒドロキシプロピル－βシクロデキストリン、トレハロース、４０ｋＤａのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ４０ｋＤａ）、デキストラン（分子量７０ｋＤａ）、グルコース、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、グリコール、およびポリグリコールからなる群から独立して選択される、請求項１０に記載の方法。
- （ａ）～（ｆ）：
（ａ）前記前駆体溶液（ｉ）中の前記トレハロースの濃度が約０．１重量／体積％～約２０重量／体積％であること、
（ｂ）前記前駆体溶液（ｉ）または前記ゲル化槽（ｉｉ）中のヒドロキシプロピル－βシクロデキストリンの濃度が、約０．１重量／体積％～約２重量／体積％であること、
（ｃ）前記前駆体溶液（ｉ）中のＰＶＰ４０ｋＤａの濃度が、約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｄ）前記前駆体溶液（ｉ）中の前記デキストラン（分子量７０ｋＤａ）の濃度が約０．１重量／体積％～約１重量／体積％であること、
（ｅ）前記前駆体溶液（ｉ）および前記ゲル化槽（ｉｉ）が同じ凍結保護剤を含むこと、ならびに
（ｆ）前記前駆体溶液（ｉ）および前記ゲル化槽（ｉｉ）が、等しいまたはほぼ等しい濃度の同じ凍結保護剤を含むこと、
の少なくとも１つが当てはまる、請求項１２に記載の方法。 - 前記凍結乾燥されたアルギネートミクロスフェアの残存水分含有量が、約１質量％～約３質量％の範囲にある、請求項１１に記載の方法。
- （ｉ）～（ｉｖ）：
（ｉ）前記アルギネートミクロスフェアまたは凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを滅菌するステップ、
（ｉｉ）前記アルギネートミクロスフェアを、所定の温度で貯蔵した場合に、少なくとも約３カ月間、少なくとも約６カ月間、少なくとも約１２カ月間、少なくとも約１８カ月間、少なくとも約２４カ月間、少なくとも約３６カ月間、少なくとも約４８カ月間、または少なくとも約６０カ月間貯蔵するステップ、
（ｉｉｉ）前記アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを対象に投与するステップ、および
（ｉｖ）前記アルギネートミクロスフェア、または凍結乾燥によって脱水されている前記アルギネートミクロスフェアを、生理的ｐＨの食塩水または食塩水－Ｘ線不透過性造影剤を使用して再構成するステップ、
から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。 - （ａ）～（ｄ）：
（ａ）（ｉ）の前記滅菌するステップが、高エネルギー放射線滅菌、ガンマ線滅菌、または電子線滅菌を含むこと、
（ｂ）（ｉ）の前記滅菌するステップが、ＩＳＯ１１１３７－１：２００６に従う、コバルト６０同位体からの約１５～約２５ｋＧｙの間のガンマ線照射または約２５ｋＧｙの電子線照射を含むこと、
（ｃ）（ｉｉ）の前記所定の温度が、約２℃～約８℃の間であること、および
（ｄ）（ｉｉ）の前記所定の温度がほぼ室温（ＲＴ）であること
の少なくとも１つが当てはまる、請求項１５に記載の方法。 - アルギネートミクロスフェアの分解が、前記アルギネートリアーゼ酵素の前処置、前記ミクロスフェア中の前記アルギネート酵素の量、前記アルギネート分子の既定の分子量、および前記アルギネート分子のＭ：Ｇブロックの前記既定の比、ならびにゲル化槽中の１つまたは複数のイオンの量および／または電荷を含むゲル化槽の組成、の１つまたは複数によって制御される、請求項９に記載の方法。
- （ｉ）～（ｖｉｉ）：
（ｉ）前記アルギネート分子の既定の分子量が、約１００ｋＤａより大きく約８００ｋＤａ未満の範囲にあること、
（ｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約５５：４５、約６０：４０、約６５：３５、約７０：３０、約７５：２５、約８０：２０、約８５：１５、約９０：１０、または約９５：５であること、
（ｉｉｉ）Ｍ：Ｇブロックの前記既定の比が、約５０：５０、約４５：５５、約４０：６０、約３５：６５、約３０：７０、約２５：７５、約２０：８０、約１５：８５、約１０：９０、または約５：９５であること、
（ｉｖ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～１Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
（ｖ）０．１２５Ｕ／ｍｇ～０．２５０Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
（ｖｉ）０．０２５Ｕ／ｍｇ～０．１２５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、および
（ｖｉｉ）０．００２５Ｕ／ｍｇ～０．００５Ｕ／ｍｇアルギネートの範囲の酵素活性を有する前記前処置されたアルギネートリアーゼ酵素が、前記前駆体溶液中で混合されること、
の少なくとも１つが当てはまる、請求項９に記載の方法。 - （ａ）～（ｅ）：
（ａ）（ｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満または約２日より長い期間にわたって分解すること、
（ｂ）（ｉｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、
（ｃ）（ｖ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日未満の期間にわたって分解すること、
（ｄ）（ｖｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約５日～約３０日の間の期間にわたって分解すること、および
（ｅ）（ｖｉｉ）の前記アルギネートミクロスフェアが、約３０日より長い期間にわたって分解すること、
の少なくとも１つが当てはまる、請求項１８に記載の方法。 - （ｘ）の前記生物活性剤が、抗炎症剤、麻酔薬、抗がん剤、または抗血管新生剤を含む、請求項１０に記載の方法。
- 前記抗炎症剤が、約１００万（Ｍ）～約５Ｍダルトンの間の分子量を有するヒアルロン酸を含む、請求項２０に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN202121008937 | 2021-03-03 | ||
| IN202121008937 | 2021-03-03 | ||
| PCT/IB2022/051852 WO2022185235A1 (en) | 2021-03-03 | 2022-03-02 | Alginate based particles as a temporary embolic agent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2024508888A true JP2024508888A (ja) | 2024-02-28 |
Family
ID=80683728
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2023553243A Pending JP2024508888A (ja) | 2021-03-03 | 2022-03-02 | 一時的塞栓剤としてのアルギネートベースの粒子 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US12083242B2 (ja) |
| EP (1) | EP4301425A1 (ja) |
| JP (1) | JP2024508888A (ja) |
| CN (1) | CN116997370A (ja) |
| WO (1) | WO2022185235A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024052780A1 (en) * | 2022-09-07 | 2024-03-14 | Crannmed Limited | Self-degrading enzyme loaded biologically derived particles |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008127290A2 (en) * | 2006-10-12 | 2008-10-23 | The Johns Hopkins University | Alginate and alginate lyase compositions and methods of use |
| US10092524B2 (en) * | 2008-06-11 | 2018-10-09 | Edge Therapeutics, Inc. | Compositions and their use to treat complications of aneurysmal subarachnoid hemorrhage |
| US20130211249A1 (en) | 2010-07-22 | 2013-08-15 | The Johns Hopkins University | Drug eluting hydrogels for catheter delivery |
| US10441610B2 (en) | 2010-11-23 | 2019-10-15 | Georgia Tech Research Corporation | Protein delivery from stem cell microcarriers |
| EP2692368B1 (en) * | 2011-03-30 | 2018-02-21 | Toray Industries, Inc. | Biodegradable particle, vascular embolization material and method for producing biodegradable particles |
-
2022
- 2022-03-02 US US17/794,072 patent/US12083242B2/en active Active
- 2022-03-02 WO PCT/IB2022/051852 patent/WO2022185235A1/en active Application Filing
- 2022-03-02 JP JP2023553243A patent/JP2024508888A/ja active Pending
- 2022-03-02 EP EP22709049.5A patent/EP4301425A1/en active Pending
- 2022-03-02 CN CN202280018211.0A patent/CN116997370A/zh active Pending
-
2024
- 2024-06-10 US US18/738,275 patent/US20240325595A1/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116997370A (zh) | 2023-11-03 |
| US20240325595A1 (en) | 2024-10-03 |
| US12083242B2 (en) | 2024-09-10 |
| EP4301425A1 (en) | 2024-01-10 |
| WO2022185235A1 (en) | 2022-09-09 |
| US20230405179A1 (en) | 2023-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5616251B2 (ja) | 固形腫瘍の化学的塞栓療法用組成物 | |
| US20240325595A1 (en) | Alginate Based Particles as a Temporary Embolic Agent | |
| US6680046B1 (en) | Method of embolization using polyvinyl alcohol microspheres | |
| Rong et al. | Alginate-calcium microsphere loaded with thrombin: a new composite biomaterial for hemostatic embolization | |
| US20020009415A1 (en) | Microspheres for use in the treatment of cancer | |
| JP2015180625A (ja) | 塞栓剤からの薬物送達 | |
| US20090214654A1 (en) | Treatment of aneurysm with application of connective tissue stabilization agent in combination with a delivery vehicle | |
| US8658214B2 (en) | Methods for processing microspheres | |
| US20230172859A1 (en) | Drug-loaded microbead compositions, embolization compositions and associated methods | |
| CN113164650A (zh) | 包含生物降解高分子的用于化疗栓塞的水凝胶粒子 | |
| JP3879018B2 (ja) | 生体適合性物質の水不溶化多孔性粒子及びその製造法 | |
| Flandroy et al. | (D, L) Polylactide microspheres as embolic agent: A preliminary study | |
| US20220265831A1 (en) | Alginate Based Particles as a Temporary Embolic Agent | |
| WO2005087193A2 (en) | Chemoembolisation involving an anthracycline compound | |
| WO2024052780A1 (en) | Self-degrading enzyme loaded biologically derived particles | |
| CN116603081B (zh) | 一种可生物降解的放射性90y微球及其制备方法 | |
| JP2005112858A (ja) | 生体適合性物質の水不溶化多孔性粒子及びその製造法 | |
| JP2005103319A (ja) | 生体適合性物質の水不溶化多孔性粒子及びその製造法 | |
| TW201818923A (zh) | 醫藥賦形劑組成物之血管栓塞用親水性微粒 | |
| RU2669801C1 (ru) | Полимерный материал медицинского назначения для эмболизации |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231031 |