JP2024505089A - 抗ウイルス治療薬としてのａｘｌ阻害剤ｓｌｃ－３９１の使用 - Google Patents

Abstract

以下の構造を有する式（１）のＡＸＬ阻害剤を使用する抗ウイルス療法が、本明細書に提供される。【化１】TIFF2024505089000007.tif39108【選択図】図１

Description

背景技術
本開示は、ＣＯＶＩＤ－１９を含むウイルス感染症を治療するためにＡＸＬキナーゼ阻害剤を使用する抗ウイルス療法を提供する。

ＡＸＬは、受容体チロシンキナーゼのＴＡＭ（Ｔｙｒｏ３、ＡＸＬ、及びＭＥＲ）ファミリーのメンバーである。これは、細胞外（Ｎ末端）ドメイン及び細胞内（Ｃ末端）チロシンキナーゼドメインを含む膜貫通受容体（分子量：１００及び１４０ｋＤａ）である。ＴＡＭファミリーは、正常な成人組織及び器官系において恒常性調節因子として機能する。

ＡＸＬ活性化は、リガンド依存性受容体又はリガンド非依存性受容体のいずれかの二量体化によって媒介され得る。成長停止特異的タンパク質６（Ｇａｓ６）は、ＡＸＬの細胞外ドメインに結合し、Ｇａｓ６／ＡＸＬ複合体の二量体化をもたらし、結果的にＡＸＬの細胞内チロシンキナーゼドメイン上のチロシン残基の自己リン酸化を引き起こす主なリガンドとして同定されている。これらの細胞内ドメインのリン酸化は、続いて、ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲ、ＭＥＫ－ＥＲＫ、ＮＦ－κＢ、及びＪＡＫ／ＳＴＡＴを含む下流シグナル伝達経路を誘導する（Ｇａｙ ２０１７；Ｗｉｕｍ ２０１８；Ｓｃｈｏｕｍａｃｈｅｒ及びＢｕｒｂｒｉｄｇｅ ２０１７）。ＡＸＬは、腫瘍の発達、増殖、及び拡散、並びに免疫調節にとって重要な多様な細胞プロセスの推定上の駆動因子であるため（Ｓｃｈｏｕｍａｃｈｅｒ ａｎｄ Ｂｕｒｂｒｉｄｇｅ，２０１７）、ＡＸＬは抗がん治療薬の開発のための有望な標的となっている。

更に、ＡＸＬは、Ｉ型インターフェロン応答の主要な抑制因子であり、抗ウイルス免疫をブロックするためにウイルスによって標的とされる。ＡＸＬは、ｐｏｘ－、ｒｅｔｒｏ－、ｆｌａｖｉ－、ａｒｅｎａ－、ｆｉｌｏ－、及びα－ウイルスを含むいくつかの異なるエンベロープウイルスによって使用されることが知られている（Ｓｈｉｍｏｊｉｍａ ２００６、Ｍｅｅｒｔｅｎｓ ２０１２、Ｄｏｗａｌｌ ２０１６、Ｍｅｅｒｔｅｎｓ ２０１７）。多くのエンベロープウイルスは、それらの膜上にリン脂質ホスファチジルセリンを提示し、それを介してＧＡＳ６及びプロテインＳに結合し、次いでＡＸＬに結合する。ＧＡＳ６－ＡＸＬを介したウイルス粒子結合は、そのチロシンキナーゼドメインによりシグナル伝達を強力に活性化し、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）シグナル伝達を抑制し、ウイルス複製を促進する（Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ ２０１３、Ｍｅｅｒｔｅｎｓ ２０１７）。ＡＸＬは、２つの機構、すなわち、「アポトーシス模倣」による増強されたウイルス侵入及び抗ウイルスＩ型インターフェロン応答の抑制を介してウイルス感染を増加させる。

ＡＸＬシグナル伝達は、ＳＯＣＳ１／３及びＴＢＫ１を介してウイルス誘導性のＩＦＮ応答を抑制し（Ｓｈａｒｉｆ ２００６、Ｃｒｕｚ ２０１９）、感染細胞におけるウイルス複製の増加、及び隣接細胞の抗ウイルス防御の低下をもたらす（Ｈｕａｎｇ ２０１５、Ｃｈｅｎ ２０１８、Ｓｔｒａｎｇｅ ２０１９）。ＡＸＬは、独自のＩ型インターフェロン応答チェックポイントである。ＩＦＮＲシグナル伝達は、ＡＸＬ発現を誘導する。ＡＸＬは、骨髄細胞（樹状細胞、マクロファージ）、ＮＫ細胞及び腫瘍細胞におけるＴＬＲ誘導性Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）応答の重要な負のフィードバック調節機構である（Ｒｏｔｈｌｉｎ ２００７、Ｌｅｅ ２０１９、Ｃａｎａｄａｓ ２０１８）。

治療的なＡＸＬ受容体阻害は、肺内のＡＸＬの重要な役割を含む、実験モデルにおける原発性ウイルス感染に起因する肺病理を改善した（Ｓｈｉｂａｔａ ２０１４）。一次呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染の間、ＡＸＬ阻害は、ＩＦＮγ産生Ｔ細胞及びＮＫ細胞の数を増加させ、ＲＳＶ複製並びにＩＬ－４及びＩＬ－１３の肺全体でのレベルを抑制した。肺内Ｈ１Ｎ１感染炎症の致死効果は、ＡＸＬ阻害によって低減された。感染マウスにおけるＡＸＬ阻害は、ＩＦＮ－β産生マクロファージ及び樹状細胞の数を増加させ、好中球浸潤を抑制した（Ｓｈｉｂａｔａ ２０１４）。ＡＸＬヌルマウスは、恐らくはウイルス侵入の減少及びＩＦＮ応答の増強の組み合わせに起因して、ジカの病原性に耐性があり（Ｈａｓｔｉｎｇｓ２０１９）、ウイルス感染中の治療薬としてのＡＸＬ阻害剤の潜在的な役割が示唆される。

ＡＸＬは、いくつかの異なるエンベロープウイルス（例えば、エボラ、ジカ）によって標的化されて、細胞に侵入してウイルス免疫応答を低下させることが知られているため、ＡＸＬは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む幅広いエンベロープウイルスの感染症の治療のための良好な薬物標的として認識されている。ＡＸＬの阻害剤であるＢＭＳ－７７７６０７は、培養細胞アッセイにおいてＡＸＬ及びＭＥＲの両方のリガンド依存性活性化を強く阻害し、３０～３６００ｎＭの範囲の濃度でＧａｓ６誘導性の受容体活性化を効果的にブロックした。ＢＭＳ－７７７６０７で処理した野生型骨髄由来樹状細胞は、未処理の細胞よりもウイルス感染に対する感受性がはるかに低かった（Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ ２０１３）。別のＡＸＬ阻害剤であるＢＧＢ３２４（ベムセンチニブ）が、動物モデルにおける致死性エボラウイルス感染に対して効果を有することが示されている（Ｄｏｗａｌｌ ２０１６）。予備的インビトロ試験において、ベムセンチニブは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２誘導性の細胞障害性効果から細胞を保護することが示された。その後の研究により、ベムセンチニブが細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を強力に阻害する能力が確認されたことから、早期ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の治療のためのＡＸＬ阻害剤の潜在的な使用と、入院ＣＯＶＩＤ－１９患者のために英国における多施設第ＩＩ相臨床試験で迅速に承認される第一候補薬としての選択が裏付けられた。（ＢｅｒＧｅｎＢｉｏ、プレスリリース２０２０年４月２８日）。

「ＡＸＬ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｂｒｏｎｃｈｉａｌ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ」（Ｗａｎｇ ２０２０）に開示されているように、チロシンタンパク質キナーゼ受容体ＡＸＬは、宿主細胞膜上のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質と特異的に相互作用することが見出された。ＡＸＬ又はＡＣＥ２のいずれも高く発現しない細胞で過剰発現される場合、ＡＸＬは、ＡＣＥ２と同じくらい効率的にウイルス侵入を促進する。驚くべきことに、ＡＣＥ２ではなくＡＸＬを欠失させると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス偽型による肺細胞の感染が有意に減少する。ＡＣＥ２ではなく可溶性ヒト組換えＡＸＬは、肺細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス偽型感染をブロックする。総合すると、これらの発見は、ＡＸＬがヒト呼吸器系のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の促進に重要な役割を果たす可能性があり、将来の臨床介入戦略の潜在的な標的であることを示唆している。

抗ウイルス薬としてのＡＸＬ阻害剤の使用の役割を更に裏付けるために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の包括的リン酸化のランドスケープを探求した研究がある（Ｂｏｕｈａｄｄｏｕ ２０２０）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染したＶｅｒｏＥ６細胞のリン酸化プロテオミクス解析により、宿主細胞経路がウイルス感染によってハイジャックされることが明らかになった。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、カゼインキナーゼＩＩ（ＣＫ２）及びｐ３９ ＭＡＰＫの活性化、多様なサイトカインの産生、並びに分裂期キナーゼのシャットダウンを促進し、細胞周期停止をもたらした。６８個の薬物及び化合物のスクリーニング試験において、ｐ３８、ＣＫ２、ＣＤＫ、ＡＸＬ、及びＰＩＫＦＹＶＥキナーゼの薬理学的阻害は、潜在的なＣＯＶＩＤ－１９療法を意味する抗ウイルス活性を有することが見出された。ＡＸＬ阻害剤ギルテリチニブについて強力な抗ウイルス活性が観察された（ＩＣ５０＝０．８０７ｕＭ）。著者らは、ＡＸＬが、Ｒａｓ／ＥＲＫ、ＰＩ３Ｋ、及びｐ３８を含む様々な細胞内経路を調節することが知られていることに留意した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中、ｐ３８の阻害は、サイトカイン産生を抑制し、ウイルス複製を傷害したことから、ＡＸＬの阻害、及びそれに続くｐ３８シグナル伝達の抑制が、ＣＯＶＩＤ－１９の病原性に関連する複数の機構を標的とし得ることが示唆される。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による肺癌細胞の感染は、ＺＥＢ１及びＡＸＬの上方制御を含む、上皮から間葉系への移行（ＥＭＴ）と一致する代謝及び転写変化を誘導し、それによって、感染後のＡＣＥ２を下方制御することが見出されている（Ｓｔｅｗａｒｔ ２０２０）。研究者らは、ＡＸＬ阻害剤ベムセンチニブによる治療がＺＥＢ１を下方制御することを見出した。これらの発見に基づいて、彼らは、ＡＸＬ阻害剤がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞を間葉系表現型から遠ざけるための治療として役立つ可能性があると結論付けた。

別の最近の刊行物は、ＡＸＬが、肺及び気管支上皮細胞の感染を促進するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の候補受容体であることを示した（Ｗａｎｇ ２０２１）。チロシンタンパク質キナーゼ受容体ＡＸＬは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＳのＮ末端ドメインと特異的に相互作用することが見出された。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス偽型と本物のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の両方で、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＡＸＬの過剰発現が、ＡＣＥ２の過剰発現と同じくらい効率的にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の侵入を促進することが実証されたが、一方で、ＡＸＬをノックアウトすると、Ｈ１２９９肺細胞及びヒト初代肺上皮細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染が有意に低減することが示された。可溶性ヒト組換えＡＸＬは、高レベルのＡＸＬを発現する細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染をブロックする。ＡＸＬの発現レベルは、ＣＯＶＩＤ－１９患者からの気管支肺胞洗浄液細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓレベルと十分に相関している。

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強力かつ選択的なＡＸＬ阻害剤を使用する抗ウイルス療法が、本明細書に提供される。特に、ＡＸＬ阻害剤は、肺及び気管支上皮細胞の感染を予防又は治療するために使用され得る。重要なことに、ＡＸＬは、ウイルス侵入だけでなく、サイトカイン産生、ウイルス複製、及びＥＭＴを調節する役割を果たすため、本明細書に記載のＡＸＬ阻害剤は、ウイルス複製を低下させ、ウイルス侵入を阻害することによって早期の疾患介入を可能にし、それによって重度の呼吸器症状又は他の臓器の代償不全の潜在的な発症を予防する。

具体的には、抗ウイルス薬として作用するＡＸＬ阻害剤は、３－（５－（シクロプロピルメチル）－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）－５－（１－（ピペリジン－４－イル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）ピリジン－２－アミン（「ＳＬＣ－３９１」）である。

様々な実施形態において、ウイルス感染は、ベータコロノウイルス（例えば、ＳＡＲＳ及びＭＥＲＳ）等のヒト及び非ヒト動物に感染するウイルスを含む、コロナウイルス等の呼吸器病原体によって引き起こされる。

様々な実施形態において、抗ウイルス薬（ＳＬＣ－３９１）は、ウイルス感染の症状を呈する患者に投与される。他の実施形態において、抗ウイルス薬（ＳＬＣ－３９１）は、ウイルス感染に陽性反応を示した無症状の患者に投与される。

他の実施形態において、抗ウイルス薬（ＳＬＣ－３９１）は、第２の抗感染症薬、例えば、インターフェロン、リビバリン等と同時投与される。

Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対するＳＬＣ－３９１の阻害効果を示す。 レチウイルス系ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽ウイルス中和アッセイにおけるＳＬＣ－３９１の中和曲線を示す。 細胞変性効果（ＣＰＥ）によって評価される、ヒトインフルエンザウイルスに対する抗ウイルス効果を示す。

本開示の様々な実施形態は、肺及び気管支上皮細胞の感染を含む感染症の予防又は治療のための抗感染症薬としてのＴＡＭファミリーキナーゼ阻害剤（例えば、ＡＸＬ阻害剤）の使用を対象とする。特に、ＡＸＬ阻害剤（ＳＬＣ－３９１）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＭＥＲＳ－ＣｏＶ等のコロナウイルスによって引き起こされる重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）に対して有効である。

ＡＸＬ阻害剤ＳＬＣ－３９１
選択的ＡＸＬ阻害は、ウイルス病原体によって引き起こされる疾患を治療するための実行可能な治療を提供する。本開示のＡＸＬ阻害剤（ＳＬＣ－３９１）は、以下の化学構造を有する：

ＳＬＣ－３９１は、選択的かつ強力な低分子ＡＸＬ阻害剤であり、望ましい効力及び薬学的特性を有する潜在的なファースト・イン・クラスである。ＳＬＣ－３９１は、血液腫瘍及び固形腫瘍においてインビトロ及びインビボ活性を示した、ナノモル（ｎＭ）範囲のＩＣ_５０を有する経口ＡＸＬキナーゼ阻害剤である。ＳＬＣ－３９１及びその薬学的に許容される形態（例えば、塩、溶媒和物、水和物又はプロドラッグ）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２０１５／０８１２５７により詳細に記載される。

ＳＬＣ－３９１は、現在、固形腫瘍を有する対象への経口投与後の安全性及び薬物動態の第Ｉ相、非盲検、用量漸増及び用量拡大試験で評価されている（ＳＬＣ－３９１－１０１）。第Ｉ相試験を裏付ける非臨床及び安全性薬理学研により、優れた曝露とともにヒト対象において良好な忍容性を示すことが既に分かっている臨床医薬品へのアクセスと相まって、ＳＬＣ－３９１は、独自に抗ウイルス治療薬としての評価のために臨床化できる状態となり、入院ＣＯＶＩＤ－１９患者のための潜在的な治療薬として調査されている。

Ａ．インビトロ薬理学
ＳＬＣ－３９１は、強力かつ特異的なＡＸＬ阻害剤である（ＡＸＬのＩＣ_５０が９．６ｎＭであるのに対し、ＴＹＲＯ３は４２．３ｎＭであり、ＭＥＲは６３．５ｎＭである）。ＳＬＣ－３９１はまた、他のチロシンキナーゼと比較して、ＴＡＭキナーゼに対して良好な選択性を示している。インビトロＢａＦ３細胞アッセイにおいて、ＳＬＣ－３９１を９３個の受容体チロシンキナーゼのパネルに対してスクリーニングしたところ、結果は、１００ｎＭのＳＬＣ－３９１が、４つの受容体チロシンキナーゼのみを＞６０％阻害することを示した（ＡＸＬ［６９％］、ＭＥＲ［６１％］、ＶＥＧＦＲ１［６４％］、ＦＧＦＲ３［６４％］）。ＳＬＣ－３９１の選択性を、放射測定ホスホトランスフェラーゼアッセイを使用して、ヒトキノームからの３２０タンパク質キナーゼのパネルに対して更に評価した。結果は、ＳＬＣ－３９１について良好な選択性プロファイルを示し、以下のキナーゼが、ＡＸＬと同程度まで阻害された（ＩＣ５０値）：ｃ－ＭＥＴ（１２ｎＭ）、ＲＥＴ（２８ｎＭ）、ＲＯＳ１（２３ｎＭ）、ＥＰＨＡ６（４５ｎＭ）、ＡＬＫ１（３１ｎＭ）、ＮＵＡＫ１（６２ｎＭ）、及びＡｕｒｏｒａＣ（５１ｎＭ）。加えて、ＡＸＬ活性を示す、ＡｋｔのＧａｓ６誘導リン酸化の阻害に対するＳＬＣ－３９１のＩＣ５０は、ヒトＮＳＣＬＣ細胞株、Ａ５４９において０．２９μＭであった。

ＳＬＣ－３９１は、肺、乳房、及び造血系統を含む、ＡＸＬが豊富に発現する様々な起源の細胞株で抗増殖活性を示すことが示されている。細胞増殖活性のＩＣ５０値は、１．０５μＭ（４Ｔ１）～３．４５μＭ（Ｋ５６２）の範囲であった。ＳＬＣ－３９１はまた、アンカレッジ非依存性細胞増殖の濃度依存性障害を示し、Ａ５４９細胞において１μＭで完全な阻害が観察された。Ａ５４９において細胞遊走に対するわずかな効果（１μＭで４０％未満の減少）が見られたのみであったが、ＳＬＣ－３９１は、抗増殖性のためのＩＣ５０値よりもはるかに低い濃度で細胞侵入を阻害した；０．２μＭのＳＬＣ－３９１が、Ａ５４９細胞侵入を約７５％阻害した。

Ｂ．インビボ薬理学
その腫瘍適応症を裏付けるために、ＳＬＣ－３９１の重要なインビボ薬理学試験を完了した。ＳＬＣ－３９１を経口投与（ＰＯ）（１日２回［ＢＩＤ］及び１日１回［ＱＤ］）した場合の、インビボでのバイオアベイラビリティを検討した。ＳＬＣ３９１の生物学的有効用量は、それぞれ５０～７５ｍｇ／ｋｇＢＩＤの間であり、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は６０％～６７％の範囲であると考えられた。ＳＬＣ－３９１の経口投与はまた、腫瘍異種移植片試料中のリン酸化Ａｋｔのレベルを４１％減少させた。

Ｃ．安全性薬理学
現在の第１相臨床プログラムを裏付けるために、ＳＬＣ－３９１についての安全性薬理学、非臨床薬物動態（ＰＫ）及び代謝試験を完了した。標準ｈＥＲＧアッセイにおいて、ＳＬＣ－３９１は、試験濃度ではｈＥＲＧ阻害を示さず、半最大阻害濃度（ＩＣ５０）が３０μＭを超えると決定された。参照標準ドフェチリドのＩＣ５０は２０ｎＭであり、これは文献に報告されている範囲内である。

ビーグル犬（雄及び雌）における２８日間の強制経口投与毒性試験において、ＳＬＣ－３９１は、Ｐ－ＱＲＳ－Ｔ複合体の形態、並びにＰＲ間隔、ＱＴ、及びＱＴｃ間隔、又はＱＲＳ複合体の持続時間の定量的測定には、観察可能な効果を有しなかった。心拍数（ＨＲ）への影響はなく、呼吸パラメータへのＳＬＣ－３９１関連の影響もなかった。Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（雄及び雌）における２８日間の強制経口投与毒性試験において、機能観察バッテリー評価に基づくＳＬＣ－３９１に関連する有害な中枢神経系（ＣＮＳ）への影響は見られなかった。

ＳＬＣ－３９１のバイオアベイラビリティを決定するために、ＰＯ及びＩＶ投与を用いて、３つの種（ＣＤ－１マウス、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット、及びビーグル兼）において単回投与ＰＫ試験を行った。加えて、ラット及びイヌにおける優良試験所基準（ＧＬＰ）に基づく２８日間の経口毒性試験の一環として、単回及び反復経口投与後のＴＫを評価した。

遺伝毒性スクリーニング試験において、ＳＬＣ－３９１は、肝臓Ｓ９代謝活性化の有無にかかわらず、サルモネラテスター株ＴＡ９８及びＴＡ１００（Ａｍｅｓスクリーニング試験）において陰性であった。ＦｌｏｗＳｃｒｅｅｎアッセイにおいて、ＳＬＣ－３９１は、潜在的に遺伝毒性であり、異数性誘発機序を有するものとして分類され、インビボのラット小核アッセイにおいて、最大用量７０ｍｇ／ｋｇ／日で潜在的な遺伝毒性応答が観察されたが、１３ｍｇ／ｋｇ／日では観察されなかった。

現在の第Ｉ相臨床プログラムを裏付けるために、ＳＬＣ－３９１について全ての非臨床毒性試験を完了した。これらには、ラット及びイヌにおける単回投与最大耐用量（ＭＴＤ）、非ＧＬＰ、ラット及びイヌにおける反復投与試験、並びにラット及びイヌにおける２８日間のＧＬＰ試験が含まれる。２８日間のラットＧＬＰ毒性試験において、ＮＯＡＥＬは３０ｍｇ／ｋｇ／日であった。開始臨床用量を算出する目的で、ヒト当量（ＨＥＤ）が１１．３ｍｇ／ｋｇに等しい７０ｍｇ／ｋｇ／日の用量レベル（試験された最高用量）を重篤な毒性を発現する用量として定義する。２８日間のイヌＧＬＰ毒性試験では、６ｍｇ／ｋｇ／日がＩＣＨＳ９で定義されているＨＮＳＴＤであり、ＨＥＤが３．３ｍｇ／ｋｇに等しい。イヌＨＥＤ（３．３ｍｇ／ｋｇ）がラットＨＥＤ（１１．３ｍｇ／ｋｇ）よりも低いため、イヌはＳＬＣ－３９１毒性に対してラットよりも感受性が高いと考えられる。この感受性の増加は、ＰＫ試験で観察されるように、ラットと比較してイヌにおいてより高い経口バイオアベイラビリティと関連し得る。

ＳＬＣ－３９１の治療的使用
様々な実施形態が、ＳＬＣ－３９１、又はその薬学的に許容される形態（例えば、塩、溶媒和物、水和物若しくはプロドラッグ）のうちのいずれか１つの治療的使用を、対象における感染又は感染によって引き起こされる疾患に対する抗ウイルス薬として提供する。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用され、限定されないが、サル及びヒトを含むヒト及び非ヒト霊長類；ラット及びマウスを含むげっ歯類；ウシ；ウマ；ヒツジ；ネコ；イヌ等を含む動物を指す。「哺乳動物」は、任意の哺乳動物種の単数又は複薄のメンバーを意味し、例として、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、げっ歯類等、及び霊長類、例えば、非ヒト霊長類、及びヒトを含む。非ヒト動物モデル、例えば、哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ目等が、実験的調査に使用され得る。

１つの具体的な実施形態は、対象における疾患又は感染の予防又は治療に使用するための式（Ｉ）の化合物（すなわち、ＳＬＣ－３９１）を提供する。より具体的な実施形態において、感染は、コロナウイルス又はインフルエンザウイルスによって引き起こされる。

いくつかの実施形態において、感染又は疾患はコロナウイルスによって引き起こされる。より具体的な実施形態において、コロナウイルスは、ＳＡＲＳコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）及び／又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。更に具体的な実施形態において、疾患は、２０１９年の新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされるＣＯＶＩＤ－１９である。

いくつかの実施形態において、コロナウイルスによって引き起こされる疾患は呼吸器疾患であり、肺炎（軽度及び重度）、急性呼吸器感染症、重症急性呼吸器感染症（ＳＡＲＩ）、低酸素性呼吸不全、急性呼吸窮迫症候群、敗血症、敗血症性ショック、又は重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）を含み得る。

呼吸器疾患の症状には、発熱、咳、のどの痛み、鼻詰まり、疲労、頭痛、及び筋肉痛等の単純な感染症からの軽度の症状が含まれ得る。より重度の感染症（例えば、肺炎、ＳＡＲＩ）の症状は、呼吸頻度の増加、重度の呼吸不全又は呼吸困難、中枢性チアノーゼ、傾眠、意識不明又は痙攣、息切れ等を含み得る。高齢者及び免疫抑制者は、非定型的症状を有する場合がある。

ある特定の実施形態において、抗感染症薬（ＳＬＣ－３９１）は、症状を示すことなくコロナウイルスに陽性反応を示した無症候の対象に投与される。

他の実施形態において、抗感染症薬（ＳＬＣ－３９１）は、コロナウイルスに陽性反応を示してから０～７日以内、又は０～５日以内、又は０～３日以内、又は０～１日以内に対象に投与される。

「陽性反応を示す」とは、特定のウイルスからの遺伝物質又は特定のウイルスの表面上のタンパク質又はタンパク質断片の明確な検出を意味する。

別の実施形態は、対象の哺乳動物細胞におけるウイルスの複製又は増殖の阻害又は低減に使用するための式（Ｉ）の化合物（ＳＬＣ－３９１）を提供する。具体的には、細胞は、肺及び気管支上皮細胞である。より具体的な実施形態において、ウイルスはコロナウイルスであり、式（Ｉ）の化合物は、細胞内のコロナウイルスの核酸負荷を減少させる。

更なる実施形態は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、その宿主受容体ＡＣＥ２と結合するのをブロックするのに使用するための式（Ｉ）の化合物（ＳＬＣ－３９１）を提供する。

他の実施形態において、抗ウイルス薬（ＳＬＣ－３９１）は、第２の抗感染症薬、例えば、インターフェロン、リビバリン、リトナビル、モノクローナル抗体等と同時投与される。

好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物（ＳＬＣ－３９１）は、経口投与される。他の実施形態において、式（Ｉ）の化合物（ＳＬＣ－３９１）は、腹腔内又は静脈内投与によって投与される。

実施例１
抗ウイルス細胞ベースのアッセイ
有効な細胞ベースのアッセイを実施して、ｑＰＣＲ法を用いて、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の阻害についてＳＬＣ－３９１を試験した。図１はその結果を要約したものであり、ウイルスＲＮＡを複製するために必要なサイクルによって測定されるように、ＳＬＣ－３９１がＶｅｒｏ Ｅ６細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を阻害することができたことを示している（サイクル数が多いほど、感染は低い）。図示されるように、高度のウイルス阻害は、１μＭの濃度で最大７２時間達成された。０．０１μＭの濃度であっても、ＳＬＣ－３９１はウイルス感染を２４時間効果的に阻害することができた。図１は、ウイルス複製の用量依存的阻害を更に示している。

実施例２
ＳＬＣ－３９１は、偽ウイルス中和アッセイにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＡＣＥ２への結合を阻害する
方法：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の宿主受容体ＡＣＥ２への結合をブロックするためのＳＬＣ３９１の阻害活性を、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ偽ウイルス中和アッセイを使用して測定した。ＳＬＣ３９１をＯｐｔｉ－ＭＥＭで２倍に連続希釈し、アッセイプレート中で偽ウイルスと混合し、室温で１時間インキュベートした。ヒトＡＣＥ２を過剰発現するＣＨＯ細胞であるＣＨＯ－ｈＡＣＥ２細胞を、ＤＭＥＭ完全増殖培地中で６×１０^６細胞／ｍＬの濃度に希釈し、ＳＬＣ－３９１－偽ウイルス混合物に添加した。３７℃及び５％ＣＯ_２で３４時間インキュベートした後、新たなＤＭＥＭ完全増殖培地を添加し、更に２４時間インキュベートした。増殖培地を慎重に除去した。新たに作製したルシフェラーゼ検出試薬を、培地を除去した直後に添加し、１５分間室温でインキュベートした。ルシフェラーゼ活性（相対光（ＲＬＵ）で）を測定した。非感染細胞を１００％中和として、偽ウイルス単独に感染した細胞を０％中和としてみなして、中和率を正規化した。

結果：ＳＬＣ３９１ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和アッセイは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の中和におけるＳＬＣ－３９１の効力を検出するためのレンチウイルスベースの偽ウイルス中和アッセイである。このアッセイに記載されるスパイクタンパク質は、レンチウイルスベースの偽ウイルス粒子の表面上に位置するため、偽ウイルスは、ＣＨＯ－ｈＡＣＥ２細胞によって過剰発現されるＡＣＥ２に結合し、コロナウイルス細胞膜の融合プロセスをシミュレートすることができる。感染後、偽ウイルスは、細胞内で運搬されたルシフェラーゼ遺伝子を発現することができる。ルシフェラーゼ活性を測定することによって、偽ウイルス感染の程度を推測することができる。試験した中和アッセイでは、ＳＬＣ－３９１は、生物発光シグナルを有意に低下させた（図２）。これは、ＳＬＣ－３９１がＡＣＥ２及びスパイクタンパク質の相互作用をブロックし、偽ウイルス感染を用量依存的な様式で予防することができることを示している。１μＭの濃度で、ＳＬＣ－３９１は、ＣＨＯ－ｈＡＣＥ２細胞に結合するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２偽ウイルスを完全に中和し、その感染を予防することができた。

実施例３
ＳＬＣ－３９１は、ヒトＡ型インフルエンザ誘導細胞変性効果に対して細胞保護を提供する
方法：ＲＰＭＩ２６５０細胞におけるヒトインフルエンザウイルス（ＦｌｕＡＰＲ８３４）複製後に、ウイルス誘導細胞変性効果（ＣＰＥ）の阻害及び細胞生存率を、化学発光エンドポイント（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ）によって測定した。細胞（１ウェル当たり５×１０^５細胞）を９６ウェルの平底組織培養プレートに播種し、３７℃及び５％ＣＯ_２で一晩付着させた。インキュベーション後、希釈した試験化合物と、感染後４日目に少なくとも５０％の細胞死をもたらすように予め決定された力価に希釈したウイルス（Ａ型インフルエンザ）とをプレートに添加した。３７℃、５％ＣＯ_２で４日間インキュベーションした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して細胞生存率を測定した。ウイルス感染ウェルの減少率及び非感染化合物対照ウェルの細胞生存率を算出し、４つのパラメータ曲線適合分析を使用してＥＣ_５０及びＴＣ５０値を決定した。ＥＣ_５０は、ＣＰＥを５０％阻害するための試験化合物の濃度であり、ＴＣ_５０は、ウイルスの非存在下で５０％の細胞死を引き起こした試験化合物の濃度であった。治療指数（ＴＩ）は、ＴＣ_５０をＥＣ_５０で割って算出した。

結果：ＳＬＣ－３９１は、ＲＰＭＩ２６５０細胞において、ヒトＡ型インフルエンザ誘導細胞変性効果（ＣＰＥ）に対する細胞保護を示した。ＥＣ５０及びＴＣ５０は、それぞれ０．１４μＭ及び＞１０μＭであった。治療指数（ＴＩ）は７１．４超に達した。

図３に示すように、ＲＰＭＩ２６５０細胞におけるヒトインフルエンザウイルス（Ａ型インフルエンザ）感染に対するＳＬＣ－３９１の細胞保護効果を評価した。細胞を、様々な濃度のＳＬＣ－３９１の存在下又は不在下で、３７℃、５％ＣＯ_２で４日間、Ａ型インフルエンザで処理した。ウイルス感染のない状態で、ＳＬＣ－３９１によって誘導された細胞傷害性を評価した。細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏにより測定した。ウイルスＣＰＥの減少率及び細胞対照のパーセントを、ＳＬＣ－３９１処理を行わなかった細胞から決定した。

実施例４
ＳＬＣ３９１は、Ａ型インフルエンザ感染ＲＰＭＩ２６５０細胞においてウイルス収量の減少を示した
方法：ＲＰＭＩ２６５０細胞を５０００細胞／ウェルで播種し、９６ウェルマイクロタイタープレートに付着させるために一晩インキュベートした。一晩のインキュベーション後、細胞培養培地を除去し、細胞単層をＰＢＳで１回洗浄した。１００（１００）μＬ／ウェルのアッセイ培地をプレートに添加した。Ａ型インフルエンザ細胞保護アッセイ（感染後４日目）から試験濃度１０μＭ、０．２μＭ、及び０．００３μＭの上清試料を収集し、各処理濃度をプールした。３連のウイルス対照上清をプールした。試料をアッセイ培地中で対数増分を用いて連続的に希釈し、４連で１００μＬ／ウェルで細胞に添加した。３７℃、５％ＣＯ_２で４日間インキュベーションした後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを用いて細胞生存率染色を行い、ＴＣＩＤ_５０／ｍＬを算出した。ＳＬＣ－３９１で処理したウイルスのウイルス感染性の倍率変化を、未処理ウイルスとの比較によって決定した。

結果：ＳＬＣ－３９１は、Ａ型インフルエンザ感染ＲＰＭＩ２６５０細胞においてウイルス収量の減少を示した。ＳＬＣ－３９１が１０μＭ、０．４μＭ及び０．００３μＭの試験濃度である場合、ウイルス減少の倍率は、ウイルス対照と比較してそれぞれ９５２．９、７４．９及び３４．８に達した。
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２０２１年２月１日に出願された米国特許出願第６３／１４４，４５３号を含む、本明細書において参照されている、かつ／又は出願データシートに列挙されている米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許刊行物の全ては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

上記から、本開示の特定の実施形態が例示のために本明細書に記載されているが、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な変更が行われ得ることを理解されたい。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲以外によって限定されない。

Claims (15)

1. 感染又は感染によって引き起こされる疾患の予防又は治療に使用するための式（Ｉ）の化合物であって、以下の構造を有する、化合物：
   

   
2. 前記使用が、コロナウイルス又はインフルエンザウイルスによって引き起こされる感染を予防又は治療することを含む、請求項１に記載の化合物。
3. 前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１又は２に記載の化合物。
4. 感染によって引き起こされる前記疾患が、呼吸器疾患である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
5. 前記疾患が、ＣＯＶＩＤ１９である、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
6. 前記使用が、前記ウイルスに陽性反応を示した無症状の対象に前記式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の化合物。
7. 前記使用が、前記ウイルスに陽性反応を示してから０～７日以内に対象に前記式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の化合物。
8. 対象の細胞内のウイルスの複製又は増殖の阻害又は低減に使用するための式（Ｉ）の化合物であって、以下の構造を有する、化合物：
   

   
9. 前記細胞が、肺及び気管支上皮細胞である、請求項８に記載の化合物。
10. 前記ウイルスが、コロナウイルス又はインフルエンザウイルスである、請求項８又は９に記載の化合物。
11. 前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項８～１０のいずれか一項に記載の化合物。
12. 前記使用が、前記ウイルスに陽性反応を示した無症状の対象に前記式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載の化合物。
13. 前記使用が、前記ウイルスに陽性反応を示してから０～７日以内に対象に前記式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載の化合物。
14. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質が、その宿主受容体ＡＣＥ２と結合するのをブロックするのに使用するための式（Ｉ）の化合物であって、以下の構造を有する、化合物：
    

    
15. 前記使用が、ＣＯＶＩＤ１９を治療することを含む、請求項１４に記載の化合物。

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