JP2024504148A - オピオイド節減組成物及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、オピオイド節減組成物及びオピオイドの使用を低減するためのその使用に関する。かかる組成物及び方法は、オピオイドを使用する対象において、疼痛を低減する、又はオピオイドの使用を低減する、又は可動性を増加させるために使用されてもよい。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月２２日に出願されたオーストラリア出願第２０２１９０１４７号、２０２１年２月４日に出願されたオーストラリア出願第２０２１９００２５０号、及び２０２２年１月１１日に出願された米国出願第６３／２９８，３９１号の優先権益を主張し、それら各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本開示は、オピオイド節減組成物及びオピオイドの使用を低減するためのその使用に関する。かかる組成物及び方法は、オピオイドを使用する対象において、疼痛を低減する、又はオピオイドの使用を低減する、又は可動性を増加させるために使用され得る。

オピオイドアゴニストとしても知られるオピオイドは、アヘン又はモルヒネ様特性を示す薬物のグループである。オピオイドは、主に中等度から強力な鎮痛剤として使用されるが、眠気、呼吸抑制、気分の変化、意識の喪失を伴わない意識混濁など、他の多くの薬理学的効果も有する。長期間のオピオイド使用は、様々な種類の疼痛と関係する。

腰痛は、炎症及び疼痛に関連する慢性疾患であり、定期的な疼痛管理の一環として継続的なオピオイド使用を必要とする。この状態は、米国の成人人口の約３分の２に影響を与え、医師の外来診療を大幅に増加させ、障害に大きな影響を与える。

慢性疼痛及び／又は炎症を含む、疼痛及び／又は炎症を治療するために、様々な治療薬が使用されてきたが、そのような薬剤の長期投与の後でさえ、治療は依然として無効であることが多い。

明らかに、オピオイド使用者の疼痛を管理する改善された方法が、当技術分野では必要である。

本発明者らは、驚くべきことに、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与することによって、オピオイドを使用している対象において、疼痛を低減する、又はオピオイドの使用を低減する、又はＥＱ－５Ｄスコアを増加することを見出した。

したがって、一実施例において、本開示は、疼痛を低減する、又はオピオイドの使用を低減する、又はＥＱ－５Ｄスコアを増加させる方法に関し、この方法は、対象に、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を投与することを含み、対象は、オピオイドを使用している。例えば、本開示は、疼痛を低減する方法に関し、この方法は、前記対象に、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を投与することを含み、対象は、オピオイドを使用している。別の実施例において、本開示は、オピオイドの使用を減らす方法に関し、本方法は、対象に、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を投与することを含み、対象は、オピオイドを使用している。別の実施例において、本開示は、ＥＱ－５Ｄスコアを増加させる方法に関し、本方法は、対象に、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を投与することを含み、対象は、オピオイドを使用している。

一実施例において、組成物は、ヒアルロン酸（ＨＡ）を含む。一実施例において、組成物によって節減されたオピオイドは、モルヒネである。
一実施例において、本開示の方法は、疼痛及びオピオイドの使用を低減する。別の実施例において、本開示の方法は、疼痛を低減し、機能を改善すると同時に、オピオイドの使用を減少させる。

一実施例において、対象は疼疼痛のためにオピオイドを使用している。一実施例において、疼痛は軸性疼痛である。一実施例において、軸性疼痛は、ＭＲＩによって定義される神経根圧縮に起因する。

本発明者の知見を考慮すると、本発明者らは、経時的にオピオイドの使用を減少させるために投与し得るオピオイド節減組成物に到達した。したがって、別の実施例において、本開示は、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含むオピオイド節減組成物に関する。一実施例において、組成物はまた、ヒアルロン酸（ＨＡ）を含む。例えば、組成物は、１％ＨＡを含み得る。一実施例において、組成物は、１％のＨＡ及び培養増殖ＭＬＰＳＣを含む。一実施例において、オピオイド節減組成物は、オピオイドを使用している対象に投与され、好ましくは、対象は、疼痛のためにオピオイドを使用している。一実施例において、オピオイド節減組成物は、対象によるオピオイドの使用を減少させる。一実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３６ヶ月、低減する。一実施例において、オピオイド節減組成物は、対象によるオピオイドの使用を中止する。一実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３６ヶ月、中止される。

本開示の組成物及び方法は、様々な種類の疼痛の文脈において使用することができる。一実施例において、疼痛は慢性疼痛である。別の実施例において、疼痛は腰痛である。一実施例において、腰痛は、変性した椎間板に関連付けられる。別の実施例において、腰痛は、椎間板に関連付けられる。例えば、椎間板は、対象の隣接する健康な椎間板と比較して、実質的に低減しない椎間板の高さを有し得る。別の実施例において、腰痛は、非神経根由来である。別の実施例において、疼痛は、３ｍｍの突出までの椎間板ヘルニア、椎間板への神経の内方成長、又は椎間板の炎症の１種以上と関連している。一実施例において、神経の内方成長又は炎症は、椎間板空間、又は髄核、又は椎間板の線維環内にある。

一実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、１ヶ月低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３ヶ月低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、１２ヵ月低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、２４ヵ月低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３６ヵ月低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３６ヵ月中止される。

一実施例において、オピオイドの使用は、組成物を投与する前の対象の平均基準値モルヒネ当量に対して低減する。

一実施例において、対象は、組成物を投与する前に、少なくとも１ヶ月オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、組成物を投与する前に、少なくとも３ヶ月オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、組成物を投与する前に、少なくとも６ヶ月オピオイドを使用している。

一実施例において、対象は６～６８ヶ月疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、６８ヶ月を超えて疼痛を経験していない。

一実施例において、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の基準値となるオピオイドの使用に対して、約２０％低減する。別の実施例において、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の基準値となるオピオイドの使用に対して、約３０％低減する。別の実施例において、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の基準値となるオピオイドの使用に対して、約４０％低減する。

一実施例において、対象は、組成物を投与する前の視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）スコアに対して、ＶＡＳスコアが低減する。別の実施例において、対象のＶＡＳ疼痛反応は、３０％である。別の実施例において、対象のＶＡＳ疼痛反応は、５０％である。

一実施例において、対象は、ＥＱ－５Ｄスコアを基準値から増加させられる。一実施例において、増加は、ＥＱ－５Ｄ ＶＡＳスコアに基づいて決定される。一実施例において、増加は、本開示の組成物の投与後、１２ヶ月観察される。一実施例において、増加は、本開示の組成物の投与後、３６ヶ月観察される。一実施例において、増加は、ＥＱ－５Ｄ指数スコアに基づいて決定される。一実施例において、増加は、本開示の組成物の投与後、１２ヶ月観察される。別の実施例において、増加は、本開示の組成物の投与後、２４ヵ月観察される。別の実施例において、増加は、本開示の組成物の投与後、３６ヵ月観察される。

一実施例において、対象は、ＯＤＩ１０点機能反応を達成する。別の実施例において、対象は、ＯＤＩ１５点機能反応を達成する。別の実施例において、対象は、ＯＤＩ１０点機能反応及び３０％のＶＡＳ疼痛反応を達成する。別の実施例において、対象は、ＯＤＩ１５点機能反応及び５０％のＶＡＳ疼痛反応を達成する。一実施例において、これらの対象に、ＭＬＰＳＣ及びＨＡを含む組成物を投与する。一実施例において、対象は、本開示の組成物の投与後、１２ヶ月、ＯＤＩ１０点機能反応を達成する。一実施例において、対象は、組成物を投与する前に、オピオイドを使用していない。一実施例において、対象は、本開示の組成物の投与後、３６ヶ月、ＯＤＩ１０点機能反応を達成する。一実施例において、対象は、組成物を投与する前に、オピオイドを使用している。

別の実施例において、対象は、ＯＤＩ１０点機能反応及び３０％のＶＡＳ疼痛反応を達成し、対象は、本開示の組成物を投与する前に、オピオイドを使用しており、対象は６８ヶ月間を超えて、腰痛を報告していない。一実施例において、本開示の組成物の投与後、２４ヵ月、ＯＤＩ１０点機能反応及び３０％のＶＡＳ疼痛反応が観察される。一実施例において、本開示の組成物の投与後、３６ヶ月、ＯＤＩ１０点機能反応及び３０％のＶＡＳ疼痛反応が観察される。

一実施例において、対象は、組成物を投与後、１２ヶ月、有意な疼痛を有さない。別の実施例において、対象は、組成物を投与後、２４ヵ月、顕著な疼痛を有さない。

一実施例において、対象は、２５～７０％のＯＤＩスコアを有する。別の実施例において、対象は、３０～６０％のＯＤＩスコアを有する。

一実施例において、ＭＬＰＳＣは、ＳＴＲＯ－１＋である。一実施例において、ＭＬＰＳＣは、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。一実施例において、細胞は同種異系である。一実施例において、細胞は培養増殖される。一実施例において、細胞は、培養増殖される前にＴＮＡＰ＋である。一実施例において、細胞は凍結保存されている。

一実施例において、本開示の方法は、１×１０^７～２×１０^８個の細胞を投与することを含む。したがって、本開示の組成物は、１×１０^７～２×１０^８個の細胞を含み得る。

一実施例において、本開示の組成物は、抗ＳＴＲＯ－３抗体を用いて骨単核細胞から単離され、エクスビボで増殖され、凍結保存されたヒト骨髄由来の同種異系の間葉系前駆細胞（ＭＰＣ）を含む。

一実施例において、対象は、組成物を投与後、３６ヶ月、オピオイドの使用を中止する。

別の実施例において、本開示は、対象におけるオピオイドの使用を中止するための薬剤の製造に関する。一実施例において、本明細書に開示された組成物は、薬剤の製造に使用される。一実施例において、オピオイドの使用は、本明細書に開示される対象に薬剤を投与後、３６ヶ月、中止される。例えば、薬剤は、慢性疼痛を有する対象に投与されてもよい。一実施例において、対象は腰痛を有する。

ＭＰＣ＋ＨＡのオピオイド使用者における基準値からのＬＳ平均ＶＡＳ疼痛変化は、偽薬と比較して、２４ヵ月にわたる全ての時点で、基準値からの有意に大きい平均疼痛減少を有した。 ＭＰＣ＋ＨＡのオピオイド使用者における５０％及び３０％のＶＡＳ疼痛反応は、偽薬と比較して、５０％及び３０％のＶＡＳ疼痛反応を有する２４ヵ月時点の患者の割合を有意に増加させた。 ＭＰＣ＋ＨＡのオピオイド使用者において、疼痛が最小限からなし（ＬＢＰ ＶＡＳ≦２０）は、偽薬と比較して、６、１２、１８、及び２４ヵ月時点で疼痛が最小限／なしである患者の割合が有意に増加した。 オピオイド使用者における機能の尺度としてのＯＤＩとＥＱ５Ｄ指数の比較は、ＭＰＣ治療効果のより優れた識別因子であるＥＱ５Ｄ指数における基準値からの変化を意味する。 オピオイド使用者におけるＭＩＣ治療の成功を決定するためには、ＯＤＩよりもＥＱ５Ｄの方が優れた識別子である。 ＭＰＣ＋ＨＡは、複合治療反応５０％ＶＡＳ／０．０３ＥＱ５Ｄ及び３０％ＶＡＳ／０．０３ＥＱ５Ｄを達成した患者の割合を、２４ヵ月時点で、有意に増加させた。 ＭＰＣ＋ＨＡのオピオイド使用者における、ＬＢＰ－ＥＱ５Ｄ指数の全体的な治療成功及びＭＩＣの全体的な治療成功は、ＭＰＣ＋ＨＡ複合治療反応を達成した患者の割合が、１２ヶ月及び２４ヵ月の両方で、複合治療反応３０％ＶＡＳ／０．０３ＥＱ５Ｄを達成した患者の割合を有意に増加した。 ＭＰＣ＋ＨＡのオピオイド使用者における、ＬＢＰ－ＥＱ５Ｄ指数の全体的な治療成功及びＭＩＣの全体的な治療成功は、ＭＰＣ＋ＨＡ複合治療反応を達成した患者の割合が、１２ヶ月及び２４ヵ月の両方で、複合治療反応３０％ＶＡＳ／０．０３ＥＱ５Ｄを達成した患者の割合を有意に増加した。 ＭＰＣ＋ＨＡは、基準値でオピオイドを使用している患者において、２４ヵ月にわたりオピオイドのモルヒネミリグラム当量の使用を有意に減少させる。 ＭＰＣ＋ＨＡは、オピオイド使用者において、２４ヵ月にわたりモルヒネミリグラム当量を減少させる。 ＭＰＣ＋ＨＡ：ＶＡＳ３０％＋オピオイド低減^＊。（^＊全ての対象は、基準値時にオピオイド使用者であり、評価された各時間点でオピオイド値を有する）。 ＭＰＣ＋ＨＡ：ＶＡＳ５０％＋オピオイド低減^＊。 ＭＰＣ＋ＨＡ：複合反応；ＯＤＩ－１０＋オピオイド低減^＊。 ＭＰＣ＋ＨＡ：複合反応；ＯＤＩ－１５＋オピオイド低減^＊。 ＭＰＣ＋ＨＡ：複合反応：ＶＡＳ３０％＋ＯＤＩ－１０＋オピオイド低減^＊。 ＭＰＣ＋ＨＡ：複合反応：ＶＡＳ５０％＋ＯＤＩ－１５＋オピオイド低減^＊。 ＭＰＣ＋ＨＡ：治療の成功；１２ヵ月及び２４ヵ月の両方でのＶＡＳ＋ＯＤＩ反応＋基準値からオピオイド減少^＊及び介入なし。治療成功ＶＡＳ／ＯＤＩ：１２及び２４ヵ月の両方で、基準値からのＶＡＳスコアが５０％低減し、かつ基準値からＯＤＩスコアが１５点改善し、かつ２４ヵ月まで治療後の介入がなく、かつ２４ヵ月でオピオイドが低減した対象。１２及び２４ヵ月の両方で、基準値からのＶＡＳスコアが３０％低減し、かつ基準値からＯＤＩスコアが１０点改善し、かつ２４ヵ月まで治療後の介入がなく、かつ２４ヵ月でオピオイドが低減した対象。 ＭＰＣ＋ＨＡ：治療の成功；１２ヵ月及び２４ヵ月の両方で、ＶＡＳ＋ＥＱ５Ｄ反応＋基準値からオピオイド低減^＊及び介入なし。治療成功ＶＡＳ／ＥＱ５Ｄ指数：１２及び２４ヵ月の両方で、基準値からＶＡＳスコアが５０％低減し、かつ基準値からＥＱ５Ｄ指数スコアが０．０３点改善し、かつ２４ヵ月まで治療後の介入がなく、２４ヵ月でオピオイドが減少した対象。１２及び２４ヵ月の両方で基準値からのＶＡＳスコアが３０％低下し、かつＥＱ５Ｄ指数スコアが基準値から０．０３点改善し、かつ２４ヵ月まで治療後の介入がなく、２４ヵ月でオピオイドが減少した対象。 ＬＳ平均ＶＡＳ腰痛の基準値からの変化－全対象（ｎ＝３９１）。 ＬＳ平均ＶＡＳ腰痛の基準値からの変化－ＣＬＢＰ＜中央値（ｎ＝１９４）。 ＬＳ平均ＯＤＩの基準値からの変化－ＣＬＢＰ＜中央値（ｎ＝１９７）。 ＬＨＳ：ＯＤＩ１０点ＭＩＣ反応者－ＣＬＢＰ≦中央値；ＲＨＳ：ＭＩＣ３０％ＶＡＳ／１０点ＯＤＩ治療成功－ＣＬＢＰ≦中央値。 ＥＱ５Ｄ指数ＣＦＢ－全対象（ＬＨＳ）；ＣＬＢＰ期間＜中央値（ＲＨＳ）。 ＥＱ５Ｄ ＭＣＩＣ指数反応者－全対象（ＬＨＳ）；ＣＬＢＰ期間＜中央値（ＲＨＳ）。 ３０％ＶＡＳ－ＥＱ５Ｄ ０．０３点指数ＭＩＣ治療成功－全対象（ＬＨＳ）；ＣＬＢＰ持続期間＜中央値（ＲＨＳ）。 ５％ＶＡＳ－ＥＱ５Ｄ ０．０３点指数ＭＩＣ治療成功－全対象（ＬＨＳ）；ＣＬＢＰ持続期間＜中央値（ＲＨＳ）。 ＬＨＳ：ＶＡＳ３０％／ＯＤＩ１０％ＭＩＣ治療成功ＣＬＢＰ持続期間＜中央値；ＲＨＳ：ＶＡＳ３０％／ＥＱ５ｄ ０．０３点ＭＩＣ治療成功ＣＬＢＰ＜中央値。ＯＤＩ ＭＩＣ治療の成功－基準値からの腰痛ＶＡＳスコアが３０％低減し、かつ基準値からのＯＤＩが１０点改善し、かつ治療後の介入が評価されていない対象。ＥＱ５Ｄ指数スコアＭＩＣ治療の成功－基準値からの腰痛ＶＡＳスコアが３０％低下し、かつ基準値からのＥＱ５Ｄ指数スコアが０．０３点改善し、かつ評価されている時点を通して治療後の介入がない対象。 ＶＡＳによって測定された２４時間にわたる平均疼痛のＬＳ平均変化－患者の電子日記鎮痛薬使用記入に基づく、基準値オピオイド使用者の事前に指定されたサブグループ。 ＶＡＳによって測定された２４時間にわたる平均疼痛のＬＳ平均変化－全ての対象。 基準値からの平均的な鎮痛薬の低減を伴う２４ヵ月での対象の割合。 ６ヵ月、１２ヵ月、１８ヵ月、２４ヵ月、３６ヵ月時点での、オピオイドを使用していない、基準値オピオイド使用者の割合。 平均疼痛最小重要変化（ＭＩＣ；３０％低減）反応者解析－ＣＬＢＰ持続時間が中央値（６８．８ヵ月）未満である対象の予め指定されたサブグループ。 ＯＤＩによって測定された機能におけるＬＳ平均変化－オピオイド使用者及びオピオイド非使用者の３６ヶ月までのＣＬＢＰ持続期間が中央値未満の対象。 ３６ヵ月までのオピオイド使用者のモルヒネ等価用量におけるＬＳ平均変化。

一般的な技術及び定義
別途具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、（例えば、細胞培養、分子生物学、幹細胞培養、免疫学、及び生化学において）当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有すると解釈されるものとする。

別段の指示がない限り、本開示で利用される細胞培養技術及びアッセイは、当業者に周知の標準的な手順である。このような技術は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（ｅｄｉｔｏｒ），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（ｅｄｉｔｏｒｓ），ａｎｄ Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８，現在までの全ての更新を含む）、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（現在までの全ての更新を含む）のような文献に記載され説明されている。

用語「及び／又は」、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解され、両方の意味又はいずれかの意味を明示的に支持するように解釈される。

本明細書で使用される「約」という用語は、反対に記載されていない限り、指定された値の＋／－１０％、より好ましくは＋／－５％を指す。

「レベル」及び「量」という用語は、対象からの試料中、又は細胞培養培地（又はそこからの試料）中の特定の物質の量を定義するために使用される。例えば、特定の濃度、重量、パーセンテージ（例えば、ｖ／ｖ％）又は比率を使用して、試料中の特定の物質のレベルを定義し得る。一実施例において、レベルは、培養条件下で本開示の細胞によってどのくらいの量の特定のマーカーが発現されるかという点で表される。一実施例において、発現は、細胞表面発現を表す。別の実施例において、レベルは、培養条件下で本明細書に記載の細胞からどのくらいの特定のマーカーが放出されるかという点で表される。一実施例において、試料は、患者又は対象（例えば、血液試料）から得られ、試料中の物質のレベルを測定して、試料中の物質のレベルを決定する。

一実施例において、レベルはｐｇ／ｍｌで表される。別の実施例において、レベルは、１０^６個の細胞あたりのｐｇで発現される。

一実施例において、細胞培養培地中の特定のマーカーのレベルは、培養条件下で決定される。「培養条件」という用語は、培養物中で増殖する細胞を指すために使用される。一実施例において、培養条件は、細胞の積極的な分裂集団を指す。そのような細胞は、一実施例において、指数関数的成長段階であり得る。例えば、特定のマーカーのレベルは、細胞培養培地の試料を採取し、試料中のマーカーのレベルを測定することによって決定できる。別の実施例において、特定のマーカーのレベルは、細胞の試料を採取し、細胞溶解物中のマーカーのレベルを測定することによって決定できる。当業者であれば、分泌されたマーカーは培養液をサンプリングして測定するが、細胞表面に発現したマーカーは細胞溶解液のサンプルを評価して測定することができる。一実施例において、細胞が指数関数的成長段階にあるときに試料が採取される。一実施例において、試料は、培養物中で少なくとも２日後に採取される。

凍結保存された中間体から細胞を増殖させる培養とは、細胞の成長に適した条件下で、低温凍結及びインビトロ培養を受けた細胞を解凍することを意味する。

一実施例において、特定のマーカーの「レベル」又は「量」は、細胞が凍結保存され、次いで培養物に播種された後に決定される。例えば、レベルは、細胞の最初の凍結保存後に決定される。別の実施例において、レベルは、細胞の第２回目の凍結保存後に決定される。例えば、特定のマーカーのレベルを培養条件下で決定できるように、細胞を凍結保存された中間体から培養し、培養で再播種する前に２回目の凍結保存をし得る。

「オピオイド節減剤」という用語は、本開示の文脈において、対象のオピオイド摂取量の低減を促進するために、オピオイドを使用している対象に投与できる組成物を指すために使用される。言い換えれば、本開示のオピオイド節減剤を投与された対象は、時間の経過とともに、低用量のオピオイドを摂取することができる。一実施例において、オピオイド節減剤は、対象の疼痛を低減し、及び／又はその可動性を増加させる。

本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療すること」、「治療」、「疼痛を低減すること」、「オピオイドの使用を減少させること」、「可動性を増加させること」という用語は、オピオイドを使用している対象において、疼痛を低減し、及び／又はオピオイドの使用を低減し、及び／又は可動性を増加させるために、間葉系統幹細胞若しくは前駆細胞及び／又はその子孫及び／又はそれに由来する可溶性因子及び／又はそれに由来する細胞外小胞の集団を投与することを含む。

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト対象を指す。例えば、対象は成人であってもよい。別の実施例において、対象は、子供であってもよい。別の実施例において、対象は青年であってもよい。「対象」、「患者」、又は「個人」などの用語は、文脈上、本開示で互換的に使用することができる用語である。治療を必要とする対象には、オピオイドを使用している対象が含まれる。例えば、対象は、腰痛などの疼痛のためにオピオイドを使用していることができる。一実施例において、対象の疼痛及びオピオイドの使用は継続中である。例えば、対象は、２、３、４、５、６、１２、２４ヶ月又はそれを超えて疼痛を有していてもよい。したがって、一実施例において、対象は、１、２、３、４、５、６、１２、２４ヶ月又はそれを超えてオピオイドを使用することができる。一実施例において、対象はモルヒネを使用している。一実施例において、対象は６８ヶ月間を超える腰痛を報告していない。

別の実施例において、対象は、２５～７０％のオスウェストリー障害指数（ＯＤＩ）スコアを有する。別の実施例において、対象は、３０～６０％のＯＤＩスコアを有する。ＯＤＩスコアは、以下のように患者を定義するために使用することができる：０％～２０％：最小限の障害；２１％～４０％：中等度の障害；４１％～６０％：重度の障害；６１％～８０％：不自由な背中の疼痛：８１％～１００％：寝たきりか、症状が誇張されている。一実施例において、対象は少なくとも１ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも３ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも６ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも１２ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも２４ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも３６ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも４８ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、少なくとも６０ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、６～７８ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、６～７０ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、２～６８ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、３～６８ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、６～６８ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、１２～６８ヶ月間疼痛を経験している。別の実施例において、対象は、６８ヶ月間以上疼痛を経験していない。一実施例において、対象の疼痛は鎮痛剤で治療する必要がある。一実施例において、鎮痛剤はオピオイドである。一実施例において、オピオイドはモルヒネである。例えば、対象は、３～６８ヶ月間慢性腰痛を経験し得る。この例では、対象の疼痛は、オピオイドで治療され得る。一実施例において、対象は少なくとも６ヶ月間慢性的な腰痛を経験している。一実施例において、対象は６～１２ヶ月間慢性的な腰痛を経験している。

ある特定の実施形態において、本開示は、慢性腰痛などの疼痛を低減するための方法及び組成物に関する。疼痛の低減は、本明細書で論じられる様々な方法（例えば、ＶＡＳ、ＥＱ－５Ｄ、ＯＤＩ）を使用して、決定できる。「軸性疼痛」という用語は、本開示の文脈において、特定の部位又は領域に限定された局所的な疼痛（例えば、首の疼痛又は脚の疼痛）を指すために使用される。

一実施例において、本開示の組成物は、遺伝的に修飾されていない間葉系前駆細胞系統又は幹細胞を含む。本明細書で使用される場合、「遺伝的に修飾されていない」という用語は、核酸によるトランスフェクションによって修飾されていない細胞を指す。疑義を避けるために、本開示の文脈において、タンパク質をコードする核酸でトランスフェクトされた間葉系前駆細胞又は幹細胞は、遺伝的に修飾されていると見なされる。

本明細書を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップのグループを含むことを意味すると理解されるが、任意の他の要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップのグループを除外しない。

本明細書全体を通して、特に明記されていない限り、又は文脈が別途必要としない限り、単一のステップ、物質の組成物、ステップの群又は物質の組成物の群への言及は、それらのステップ、物質の組成物、ステップの群又は物質の組成物の群のうちの１つ又は複数（すなわち、１つ以上）を包含するように、解釈されなければならない。

当業者は、本明細書に記載される開示が、具体的に記載されるもの以外の変形及び改良を受ける余地があることを理解するであろう。本開示がそのような全ての変形及び改良を含むことを理解されたい。本開示は、本明細書において個別に又は集合的に言及又は示されるステップ、特徴、組成物、及び化合物の全て、並びに任意の及び全ての組み合わせ、又は任意の２つ以上の前記ステップ又は特徴も含む。

本開示は、例示のみを目的とする、本明細書に記載される特定の実施形態によって、範囲が限定されるべきではない。機能的に均等な生成物、組成物、及び方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本開示の範囲内である。

本明細書に開示される任意の例は、特に明記されない限り、任意の他の例に準用されるものとする。

オピオイド使用
本開示の方法は、オピオイドを使用している対象に向けられている。一実施例において、対象は疼痛のためにオピオイドを使用している。一実施例において、疼痛は慢性疼痛である。例えば、疼痛は腰痛であってよい。オピオイドは、アヘン又はモルヒネ様の特性を示す鎮痛薬のグループである。一実施例において、オピオイドは、オピオイド受容体作動薬と呼ばれてもよい。

例示的なオピオイドとしては、アルフェンタニル、アリルプロジン、アルファプロジン、アニレリジン、ベンジルモルヒネ、ベジトラミド、ブプレノルフィン、ブトルファノール、クロニタゼン、コデイン、デソモルヒネ、デキストロモラミド、デゾシン、ジアンプロミド、ジアモルホン（ｄｉａｍｏｒｐｈｏｎｅ）、ジヒドロコデイン、ジヒドロモルヒネ ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアンブテン、酪酸ジオキサフェチル、ジピパノン、エプタゾシン、エトヘプタジン、エチルメチルチアンブテン、エチルモルヒネ、エトニタゼン、フェンタニル、ヘロイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、ヒドロキシペチジン、イソメタドン ケトベミドン、レボルファノール、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ミロヒネ、ナルセイン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ナロルヒネ、ナルブフェン、ノルモルヒネ ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルフォン、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェノモルファン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、ピリトラミド、プロフェプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、上記のいずれかの混合物、上記のいずれかの塩などが挙げられる。一実施例において、オピオイドは、モルヒネ又はモルヒネ受容体と相互作用するその類似体である。

一実施例において、対象は、少なくとも１ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも３ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも６ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも１２ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも２４ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも３６ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも４８ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも６０ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、オピオイドを６～７８ヶ月間使用している。別の実施例において、対象は、６～７０ヶ月間オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、オピオイドを６～６８ヶ月間使用している。別の実施例において、対象は、６８ヶ月間以上オピオイドを使用していない。

一実施例において、対象は、７５ｍｇ／日未満の平均基準値モルヒネ当量（ＭＥＤ）を有する。一実施例において、ＭＥＤは、対象による電子日記記入によって決定される。

別の実施例において、対象は、少なくとも６ヶ月間、慢性腰痛のために、オピオイドを使用している。別の実施例において、対象は、少なくとも２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月又は６ヵ月の保存的な腰痛ケアに失敗している。保存的治療レジメンの例としては、以下のいずれか又は全てが挙げられ得る：初期安静、抗炎症薬、鎮痛薬、麻薬／オピオイド、筋弛緩薬などの薬物療法、又はマッサージ、鍼治療、カイロプラクティック治療、活動性の改善、自宅での腰椎運動プログラムなどの介入。

別の実施例において、オピオイドを使用している対象に、日常的な歩行訓練、治療体操、腰痛治療に特化した腰痛教育プログラムなど、管理下の理学療法を施している。

別の実施例において、オピオイドを使用している対象は、指数椎間板でのＭＲＩにおいて３、４、５若しくは６の修正フィルマン（Ｐｆｉｒｒｍａｎｎ）スコアを有し、及び／又は指数椎間板でのＭＲＩにおいてモディック（Ｍｏｄｉｃ）グレードＩＩの変化以下を有する。一実施例において、オピオイドを使用している対象は、ＭＲＩ上、指数椎間板の椎間板突出があってもなくてもよい。

一実施例において、オピオイドを使用している対象者は、腰痛ＶＡＳ（２４時間の平均痛み）で、１００ｍｍ中少なくとも４０ｍｍ、９０ｍｍ以下の腰痛を持つことができる。

別の実施例において、オピオイドを使用しており、腰痛を有する対象は、椎間板変性に関連している。別の実施例において、腰痛は、椎間板に関連付けられる。一実施例において、椎間板は、対象の隣接する健康な椎間板のそれと比較して、実質的に減少していない椎間板の高さを有する。別の実施例において、腰痛は、非神経根由来であり、及び／又は３ｍｍの突出までの椎間板ヘルニア、椎間板への神経の内方成長、椎間板の炎症の１種以上に関連する。一実施例において、神経の内方成長又は炎症は、椎間板空間、又は髄核、又は椎間板の線維環内にある。

別の実施例において、疼痛は、軸性疼痛である。したがって、一実施例において、本開示は、対象における軸性疼痛を治療する方法に関し、この方法は、本開示の組成物を投与することを含む。例では、対象はオピオイドを使用している。一実施例において、組成物は、ＭＬＰＳＣ及びＨＡを含む。一実施例において、軸性疼痛は脚の疼痛である。一実施例において、軸性疼痛は、ＭＲＩによって定義される神経根圧縮に起因する。一実施例において、対象は、６８ヶ月間以上にわたって、慢性疼痛を報告していない。別の実施例において、対象は、６８ヶ月間以上にわたって、オピオイドを使用していない。

疼痛を低減する、オピオイドの使用を減らす、又は可動性を高める
一実施例において、本開示の方法は、オピオイドを使用している対象の疼痛を低減する。一実施例において、本開示の組成物を投与することは、対象の視覚アナログスケール（ＶＡＳ）疼痛反応を低減する。ＶＡＳは、痛みの測定によく使われる測定装置である。なぜなら、ＶＡＳは、簡単に直接測定することができない連続的な値の範囲にあると考えられている特徴又は意識を測定するのに役立つからである。要するに、疼痛ＶＡＳは疼痛強度の一次元的な尺度である。患者は、現在の疼痛の状態の認識を表していると感じる点を線の上でマークする。ＶＡＳスコアは、ラインの左端から患者がマークする点までをミリメートル単位で測定することによって決定される。ＶＡＳスコアを経時的に比較して、疼痛レベルの変化を測定することができる。したがって、それは、疼痛の低減の有用な指標となり得る。一実施例において、本開示の組成物を投与することは、対象の視覚アナログスケール（ＶＡＳ）疼痛反応を１０％低減する。別の実施例において、本開示の組成物を投与することは、対象のＶＡＳを２０％低減させる。別の実施例において、本開示の組成物を投与することは、対象のＶＡＳを３０％低減させる。別の実施例において、本開示の組成物を投与することは、対象のＶＡＳを５０％低減させる。これらの実施例において、ＶＡＳの低減は、本明細書に開示される治療前に得られた基準値ＶＡＳスコアとの比較によって判定され得る。一実施例において、治療後、１２ヶ月、ＶＡＳの低下が観察される。別の実施例において、治療後、２４ヵ月、ＶＡＳの減少は観察される。

一実施例において、対象は、本開示の組成物を投与した後に、有意な疼痛を有さない。一実施例において、本開示の組成物の投与後、１２ヶ月、対象は有意な疼痛を有さない。別の実施例において、本開示の組成物の投与後、２４ヵ月、対象は顕著な疼痛を有さない。

本発明者らは、本開示の組成物がオピオイド節減剤として使用され得ることを特定した。したがって、別の実施例において、本開示の方法は、対象におけるオピオイドの使用を低減させる。一実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、１ヶ月、低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３ヶ月後、低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、６ヶ月、低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、１２ヵ月、低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、１８ヵ月、低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、２４ヵ月、低減する。別の実施例において、オピオイドの使用は、組成物の投与後、３６ヵ月、低減する。一実施例において、対象のオピオイドの使用は、本開示の組成物を投与する前の基準値のオピオイドの使用に対して、低減する。例えば、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の対象の平均基準値モルヒネ当量に対して、低減させることができる。

一実施例において、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の基準値オピオイド使用に対して、約２０％低減する。別の実施例において、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の基準値オピオイド使用に対して、約３０％低減する。別の実施例において、対象のオピオイドの使用は、組成物を投与する前の基準値オピオイド使用に対して、約４０％低減する。一実施例において、オピオイドはモルヒネであり、低減は、組成物を投与する前の対象の平均基準値モルヒネ当量に対するものである。

一実施例において、対象は、本開示の組成物を投与した後、オピオイドの使用を中止する。一実施例において、対象は、本開示の組成物を投与した後、１２ヶ月、オピオイドの使用を中止する。別の実施例において、対象は、本開示の組成物を投与した後、１８ヵ月、オピオイドの使用を中止する。別の実施例において、対象は、本開示の組成物を投与後、２４ヵ月、オピオイドの使用を中止する。別の実施例において、対象は、本開示の組成物を投与後、３６ヵ月、オピオイドの使用を中止する。別の実施例において、対象は、本開示の組成物を投与してから１８～３６ヵ月後にオピオイドの使用を中止する。

一実施例において、本開示の方法は、オピオイドを使用している対象における可動性及び／又は機能を増加させる。一実施例において、可動性及び／又は機能は、ＯＤＩ及び／又はＥＱ－５Ｄなどのこの基準の十分に確立された尺度に従って、対象の機能として記述される。一実施例において、本開示の組成物を投与すると、対象のＥｕｒｏＱｏｌ－５Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ（ＥＱ－５Ｄ）スコアを基準値から増加させる。したがって、一実施例において、本開示の方法は、オピオイドを使用している対象のＥＱ－５Ｄスコアを増加させる。ＥＱ－５Ｄは、健康状態の単純な記述プロファイルと単一指数値を提供する。ＥＱ－５Ｄ自己申告アンケートは、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）を含んでおり、回答者の自己評価された健康状態を段階的（０～１００）尺度で記録し、スコアが高いほど健康関連の生活の質が高くなる。特定の実施例において、ＥＱ－５Ｄは、ＥＱ－５Ｄ記述的システムも含み、ＥＱ－５Ｄ記述的システムは、移動性、セルフケア、通常の活動、疼痛／不快感、及び不安／抑うつという健康の５つの次元を含む。この記述的システムは、健康プロファイルとして使用される、又は現在の健康のためのフォンノイマン・モーゲンシュテルン効用値（ＥＱ－５Ｄ指数）を表す指数スコアに変換されることができる。

一実施例において、ＥＱ－５Ｄは、少なくとも１～６ヶ月間増加される。一実施例において、ＥＱ－５Ｄは、少なくとも６～１２ヶ月間増加される。一実施例において、ＥＱ－５Ｄは、少なくとも０．０１だけ増加する。一実施例において、ＥＱ－５Ｄは、少なくとも０．０２だけ増加する。一実施例において、ＥＱ－５Ｄは、少なくとも０．０３だけ増加する。一実施例において、ＥＱ－５Ｄは、０．０１～０．０４増加する。一実施例において、増加は、ＥＱ－５ＤＶＡＳに基づいて判定される。

別の実施例において、本開示の組成物を投与することは、対象のＯＤＩスコアを低減し得る。一実施例において、ＯＤＩは、少なくとも１～６ヶ月間、少なくとも１０又は少なくとも１５点低減する。一実施例において、ＯＤＩは、少なくとも６～１２ヶ月間、少なくとも１０又は少なくとも１５点低減する。別の実施例において、ＯＤＩは、少なくとも２４ヶ月間、少なくとも１０又は少なくとも１５点低減する。

別の実施例において、本開示の方法は、対象を治療することに関し、この方法は、本開示の組成物及びオピオイドを投与することを含み、複数の用量のオピオイドが対象に投与され、オピオイドの用量が治療過程全体で減少する。例えば、オピオイドの用量は、本開示の組成物の投与後の治療過程で、約２０～５０％減少させることができる。

別の実施例において、本開示は、対象におけるオピオイドの使用を減少させる方法に関し、本方法は、本開示の組成物を投与することを含む。例えば、この方法は、ＭＬＰＳＣ及びＨＡを含む組成物を投与することを含むことができる。一実施例において、対象は慢性腰痛を有する。一実施例において、対象は６８ヶ月間以上慢性腰痛を有していない。一実施例において、オピオイドの使用は、本開示の組成物の投与後、１２～３６ヶ月、減少する。一実施例において、オピオイドの使用の減少は、本開示の組成物の投与後、３６ヶ月、持続する。一実施例において、オピオイドの使用は、本開示の組成物の投与後、１８～３６ヶ月、中止される。

間葉系前駆細胞
本明細書で使用される「間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）」という用語は、多能性を維持しながら自己再生する能力を有し、間葉系起源、例えば、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、間質細胞、線維芽細胞及び腱など、又は非中胚葉起源、例えば、肝細胞、神経細胞、及び上皮細胞などのいくつかの細胞型に分化する能力を有する未分化多能性細胞を指す。誤解を避けるために、「間葉系前駆細胞」は、骨、軟骨、筋肉及び脂肪細胞、及び繊維性結合組織などの間葉細胞に分化することができる細胞を指す。

「間葉系前駆細胞又は幹細胞」という用語は、親細胞及びその未分化の子孫の両方を含む。この用語はまた、間葉系前駆細胞、多能性間質細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、血管周囲間葉系前駆細胞、及びそれらの未分化子孫を含む。

間葉系前駆細胞又は幹細胞は、自己、同種異系、異種、同系、又は同質であり得る。自己細胞は、それらが再移植される同じ個体から単離される。同種異系細胞は、同種のドナーから単離される。異種細胞は、別の種のドナーから単離される。同系又は同質細胞は、例えば、双子、クローン、又は高度に近交系の研究動物モデルなどの遺伝的に同一の生物から単離される。

一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、同種異系である。一実施例において、同種間葉系前駆細胞又は幹細胞を培養拡張して、凍結保存する。

間葉系前駆細胞又は幹細胞は、主に骨髄に存在するが、例えば、臍帯血及び臍帯、成人末梢血、脂肪組織、骨梁及び歯髄を含む多様な宿主組織に存在することも示されている。それらはまた、皮膚、脾臓、膵臓、脳、腎臓、肝臓、心臓、網膜、脳、毛包、腸、肺、リンパ節、胸腺、靭帯、腱、骨格筋、真皮、及び骨膜にも見出され、中胚葉及び／又は内胚葉及び／又は外胚葉などの生殖系列に分化できる。したがって、間葉系統の前駆細胞又は幹細胞は、脂肪組織、骨組織、軟骨組織、弾性組織、筋肉組織、及び繊維性結合組織を含むが、これらに限定されない多数の細胞型に分化することができる。これらの細胞が入る特定の分化系列決定と分化経路は、機械的影響、及び／又は、成長因子、サイトカインなどの内因性生物活性因子、及び／又は、宿主組織によって確立された局所的微小環境条件から受ける様々な影響に依存する。

「濃縮された」、「濃縮」、又はそれらの変形用語は、本明細書において、細胞集団を説明するために使用され、この細胞集団において、１種の特定の細胞型の割合又は多数の特定の細胞型の割合は、細胞の未処理の集団（例えば、それらの天然環境における細胞）と比較した場合、増加する。一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞が濃縮された集団は、少なくとも約０．１％又は０．５％又は１％又は２％又は５％又は１０％又は１５％又は２０％又は２５％又は３０％又は５０％又は７５％の間葉系前駆細胞又は幹細胞を含む。この点で、「間葉系前駆細胞又は幹細胞のために濃縮された細胞の集団」という用語は、「Ｘ％の間葉系前駆細胞又は幹細胞を含む細胞の集団」という用語に明示的な支持を与えるために使用され、ここで、Ｘ％は、本明細書に記載されるパーセンテージである。間葉系前駆細胞又は幹細胞は、いくつかの実施例において、クローン原性コロニーを形成することができ、例えばＣＦＵ－Ｆ（線維芽細胞）又はそのサブセット（例えば、５０％又は６０％又は７０％又は７０％又は９０％又は９５％）がこの活性を有することができる。

本開示の一実施例において、間葉系統前駆体又は幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。ＭＳＣは、均質な組成物であってもよいし、ＭＳＣで濃縮された混合細胞集団であってもよい。均質なＭＳＣ組成物は、接着性骨髄細胞又は骨膜細胞を培養することによって得られ得、ＭＳＣは、独自のモノクローナル抗体で識別される特定の細胞表面マーカーによって識別され得る。ＭＳＣにおいて濃縮された細胞集団を得るための方法は、例えば、米国特許第５，４８６，３５９号に記載されている。ＭＳＣの代替的な供給源としては、血液、皮膚、臍帯血、筋肉、脂肪、骨、及び軟骨膜が挙げられるが、これらに限定されない。一実施例において、ＭＳＣは同種異系である。一実施例において、ＭＳＣは凍結保存される。一実施例において、ＭＳＣは、培養拡張され、凍結保存される。

別の実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、ＣＤ２９＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０２＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６＋、ＣＤ１６６＋、ＭＨＣ１＋ＭＳＣである。

単離又は濃縮された間葉系前駆細胞又は幹細胞は、培養によってインビトロで増殖させることができる。単離又は濃縮された間葉系前駆細胞又は幹細胞は、凍結保存され、解凍され、その後、培養によってインビトロで増殖させることができる。

一実施例において、単離又は濃縮された間葉系前駆細胞又は幹細胞を、培地（無血清又は血清補充）、例えば、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及びグルタミンを補充したアルファ最小必須培地（αＭＥＭ）中に５０，０００生存細胞／ｃｍ^２で播種し、３７℃、２０％Ｏ_２で一晩培養容器に付着させる。その後、必要に応じて培養培地を交換及び／又は変更し、細胞を更に６８～７２時間、３７℃、５％Ｏ_２で培養する。

当業者には理解されるように、培養された間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、インビボでの細胞と表現型が異なる。例えば、一実施形態において、それらは、以下のマーカー、ＣＤ４４、ＮＧ２、ＤＣ１４６、及びＣＤ１４０ｂのうちの１種以上を発現する。培養された間葉系前駆細胞又は幹細胞は、インビボでの細胞とは生物学的にも異なり、インビボにおける大部分の非循環（静止）細胞と比較して、高い増殖率を有する。

一実施例において、細胞の集団は、選択可能な形態のＳＴＲＯ－１＋細胞を含む細胞調製物から濃縮される。この関連において、「選択可能な形態」という用語は、細胞が、ＳＴＲＯ－１＋細胞の選択を可能にするマーカー（例えば、細胞表面マーカー）を発現することを意味すると理解される。マーカーはＳＴＲＯ－１であり得るが、必ずしもそうである必要はない。例えば、本明細書に記載及び／又は例示されるように、ＳＴＲＯ－２及び／又はＳＴＲＯ－３（ＴＮＡＰ）及び／又はＳＴＲＯ－４及び／又はＶＣＡＭ－１及び／又はＣＤ１４６及び／又は３Ｇ５を発現する細胞（例えば、間葉前駆細胞）は、ＳＴＲＯ－１も発現する（そしてＳＴＲＯ－１ブライトであり得る）。したがって、細胞がＳＴＲＯ－１＋であることを示すことは、細胞がＳＴＲＯ－１発現によってのみ選択されることを意味しない。一実施例において、細胞は、少なくともＳＴＲＯ－３発現、例えば、ＳＴＲＯ－３＋（ＴＮＡＰ＋）に基づいて、選択される。

細胞又はその集団の選択への言及は、必ずしも特定の組織源からの選択を必要としない。本明細書に記載されるように、ＳＴＲＯ－１＋細胞は、多種多様な供給源から選択され得るか、単離され得るか、又はそれから濃縮され得る。そうは言っても、いくつかの実施例において、これらの用語は、ＳＴＲＯ－１＋細胞（例えば、間葉系前駆細胞）又は血管組織若しくは周皮細胞（例えば、ＳＴＲＯ－１＋周皮細胞）を含む組織、又は本明細書に記載された組織のいずれか１種以上からなる任意の組織からの選択に対する支持を示す。

一実施例において、本開示で使用される細胞は、ＴＮＡＰ＋、ＶＣＡＭ－１＋、ＴＨＹ－１＋、ＳＴＲＯ－２＋、ＳＴＲＯ－４＋（ＨＳＰ－９０β）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４６＋、３Ｇ５＋、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から個別に又は集合的に選択される１種以上のマーカーを発現する。

「個別に」とは、本開示が、列挙されたマーカー又はマーカーの群を個別に包含し、個々のマーカー又はマーカーの群が本明細書に個別に列挙されない場合があるにもかかわらず、添付の特許請求の範囲は、そのようなマーカー又はマーカーの群を互いに個別かつ分割可能に定義し得ることを意味する。

「集合的に」とは、本開示が、列挙されたマーカー又はマーカーの群の任意の数又は組み合わせを包含し、マーカー又はマーカーの群のそのような数又は組み合わせが本明細書に具体的に列挙されない場合があるにもかかわらず、添付の特許請求の範囲は、マーカー又はマーカーの群の任意の他の組み合わせから別個かつ分割可能に、そのような組み合わせ又はサブ組み合わせを定義し得ることを意味する。

本明細書で使用される場合、「ＴＮＡＰ」という用語は、組織非特異的アルカリホスファターゼの全てのアイソフォームを包含することが意図される。例えば、この用語は、肝臓アイソフォーム（ＬＡＰ）、骨アイソフォーム（ＢＡＰ）、及び腎臓アイソフォーム（ＫＡＰ）を包含する。一実施例において、ＴＮＡＰは、ＢＡＰである。一実施例において、本明細書で使用される場合、ＴＮＡＰは、ブダペスト条約の規定の下で、２００５年１２月１９日にＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株（寄託受託番号ＰＴＡ－７２８２）によって産生されるＳＴＲＯ－３抗体に結合することができる分子を指す。

更に、一実施例において、ＳＴＲＯ－１＋細胞は、クローン原性ＣＦＵ－Ｆを生じることができる。

一実施例において、ＳＴＲＯ－１＋細胞のかなりの割合は、少なくとも２つの異なる生殖系列への分化が可能である。ＳＴＲＯ－１＋細胞が傾注し得る系統の非限定的な例としては、骨前駆細胞、胆管上皮細胞及び肝細胞に対して多能性である肝細胞前駆細胞、乏突起膠細胞及び星状細胞に進行するグリア細胞前駆細胞を生成することができる神経制限細胞、神経細胞に進行する神経細胞前駆細胞、心筋及び心筋細胞の前駆細胞、グルコース応答性インスリン分泌膵ベータ細胞株などが挙げられる。他の系統としては、歯芽細胞、象牙質産生細胞及び軟骨細胞、並びに以下の前駆細胞：網膜色素上皮細胞、線維芽細胞、角化細胞などの皮膚細胞、樹状細胞、毛包細胞、腎管上皮細胞、平滑及び骨格筋細胞、精巣前駆細胞、血管内皮細胞、腱、靭帯、軟骨、脂肪細胞、線維芽細胞、骨髄間質、心筋、平滑筋、骨格筋、周皮細胞、血管、上皮、グリア、神経細胞、星状細胞及び乏突起膠細胞が挙げられるが、これらに限定されない。

一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、単一のドナー又は複数のドナーから得られ、ドナー試料又は間葉系前駆細胞又は幹細胞は、続いてプールされ、次いで培養増殖される。

本開示に包含される間葉系前駆細胞又は幹細胞も、対象に投与する前に凍結保存され得る。一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞を、対象に投与する前に、培養拡張し、凍結保存する。

一実施例において、本開示は、間葉系前駆細胞又は幹細胞、並びにその子孫、それに由来する可溶性因子、及び／又はそれから単離された細胞外小胞を包含する。別の実施例において、本開示は、間葉系統前駆体又は幹細胞、並びにそこから単離された細胞外小胞を包含する。例えば、細胞外小胞の細胞培地への分泌に適した期間と条件下で、本開示の間葉系前駆系統又は幹細胞を拡大培養することが可能である。その後、分泌された細胞外小胞を、治療に使用するために、培地から得ることができる。

本明細書で使用される場合、「細胞外小胞」という用語は、細胞から自然に放出され、サイズが約３０ｎｍ～１０ミクロンの範囲の脂質粒子を指すが、通常、それらは２００ｎｍ未満である。それらは、放出細胞（例えば、間葉系幹細胞、ＳＴＲＯ－１＋細胞）からの、タンパク質、核酸、脂質、代謝産物、又はオルガネラを含有し得る。

本明細書で使用される「エクソソーム」という用語は、一般的に約３０ｎｍから約１５０ｎｍの大きさで、哺乳類細胞の細胞膜に輸送されて放出されるエンドソーム小胞区画に由来する細胞外小胞の一種を指す。それらは、核酸（例えば、ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ）、タンパク質、脂質、代謝産物を含み、１つの細胞から分泌され、他の細胞に取り込まれ、荷物を運搬することにより、細胞間通信に機能する。

一実施例において、本開示の組成物は、標的組織において新しい血管形成を誘導する細胞を含む。

細胞の培養増殖
一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞を培養増殖させる。「培養増殖された」間葉系前駆細胞又は幹細胞培地は、細胞培養培地中で培養され、継代培養された（すなわち、再培養された）という点で、新たに単離された細胞と区別される。一実施例において、培養増殖された間葉系前駆細胞又は幹細胞は、約４～１０代の継代にわたって培養増殖する。一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞を、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０代の継代にわたって培養増殖する。例えば、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～１０代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～８代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～７代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆体又は幹細胞は、１０代を超える継代にわたって培養増殖できる。別の実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞を、７代を超える継代にわたって培養増殖できる。これらの実施例において、幹細胞は、凍結保存される前に培養増殖してもよく、中間凍結保存したＭＬＰＳＣ集団を提供する。一実施例において、本開示の組成物は、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団、又は別の言い方をすれば、凍結保存中間体から細胞を培養することによって、生成される。

一実施例において、本開示の組成物は、凍結保存された中間体から培養増殖した培養物である間葉系前駆細胞又は幹細胞を含む。一実施例において、凍結保存された中間体から増殖させた細胞培養物は、少なくとも５代、少なくとも６代、少なくとも７代、少なくとも８代、少なくとも９代、少なくとも１０代の継代にわたって培養増殖する。例えば、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～１０代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～８代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも５～７代の継代にわたって培養増殖できる。一実施例において、間葉系統前駆体又は幹細胞は、１０代を超える継代にわたって培養増殖できる。別の実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、７代を超える継代のために培養増殖できる。

一実施例において、凍結保存された中間体から増殖させた間葉系前駆細胞又は幹細胞培養物は、動物タンパク質を含まない培地で培養増殖できる。一実施例において、凍結保存された中間体から増殖させた間葉系前駆細胞又は幹細胞培養物は、異種を含まない培地で増殖できる。一実施例において、凍結保存された中間体から増殖させた間葉系前駆細胞又は幹細胞培養物は、胎児ウシ血清を含まない培地中で増殖できる。

一実施形態において、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、単一のドナー又は複数のドナーから得ることができ、ドナー試料又は間葉系前駆細胞又は幹細胞は、続いてプールされた後、培養増殖される。一実施例において、培養増殖プロセスは、
ｉ．継代増殖によって、生存細胞の数を増殖して、少なくとも約１０億個の生存細胞の調製物を提供することと、この継代増殖は、単離された間葉系前駆細胞又は幹細胞の初代培養物を確立し、次いで、前の培養物から単離された間葉系前駆細胞又は幹細胞の第１の非初代（Ｐ１）培養物を連続的に確立することを含む、
ｉｉ．継代増殖によって、単離された間葉系前駆細胞又は幹細胞のＰ１培養物を、間葉系前駆細胞又は幹細胞の第２の非初代（Ｐ２）培養物に増殖することと、
ｉｉｉ．間葉系前駆細胞又は幹細胞のＰ２培養物から得られた処理中の間葉系前駆細胞又は幹細胞調製物を調製して、凍結保存することと、
ｉｖ．凍結保存された処理中の中間間葉系統前駆体又は幹細胞の調製物を解凍し、継代増殖によって、処理中の間葉系統前駆体又は幹細胞の調製物を増殖することと、を含む。

一実施例において、増殖された間葉系前駆細胞又は幹細胞調製物は、以下を含む抗原プロファイル及び活性プロファイルを有する：
ｉ．約０．７５％未満のＣＤ４５＋細胞；
ｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１０５＋細胞；
ｉｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１６６＋細胞。

一実施例において、増殖した間葉系前駆細胞又は幹細胞調製物は、対照と比べて、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化ＰＢＭＣによるＩＬ２－Ｒα発現を、少なくとも約３０％阻害することができる。

一実施例において、培養増殖した間葉系前駆細胞又は幹細胞は、約４～１０代の継代にわたって培養増殖させ、ここで、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、更に培養増殖される前に、少なくとも２代又は３代の継代後に凍結保存する。一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞を、本開示の方法に従って培養する前に、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回増殖させ、凍結保存し、次いで、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回増殖させる。

間葉系前駆細胞又は幹細胞単離及びエクスビボ増殖のプロセスは、当該技術分野で既知の任意の装置及び細胞取り扱い方法を使用して実施できる。本開示の様々な培養増殖の実施形態は、細胞の操作を必要とするステップ、例えば、播種、栄養補給、接着培養物の解離、又は洗浄のステップを使用する。細胞を操作するステップは、細胞を損傷する可能性がある。間葉系前駆細胞又は幹細胞は、一般的に、調製中、ある程度の損傷に耐えることができるが、細胞への損傷を最小限に抑えながら、所与のステップを適切に実施する手順及び／又は装置を取り扱うことによって、細胞を操作することが好ましい。

一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，２５１，２９５号に記載されているように、細胞供給源バッグ、洗浄液バッグ、再循環洗浄バッグ、入口及び出口ポートを有する紡績膜フィルター、濾液バッグ、混合ゾーン、洗浄された細胞のための最終生成物バッグ、及び適切なチューブを含む装置で洗浄される。

一実施例において、本開示に従って培養した間葉系前駆細胞又は幹細胞組成物は、ＣＤ１０５陽性であり、ＣＤ１６６陽性であり、かつＣＤ４５陰性であることに関して、９５％均一である。一実施例において、この均一性は、エクスビボ拡張、すなわち、複数の集団の二重化によって、持続する。

一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、３Ｄ培養物中で培養増殖する。例えば、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、バイオリアクター内で培養増殖できる。一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、最初に２Ｄ培養で培養増殖させたのち、３Ｄ培養で更に増殖する。一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、マスター細胞バンクから増殖培養する。一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、３Ｄ培養で播種する前に、２Ｄ培養でマスター細胞バンクから培養増殖する。一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも３日間、２Ｄ培養物中のマスター細胞バンクから培養増殖させた後、バイオリアクターで３Ｄ培養物に播種する。一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、少なくとも４日間、２Ｄ培養物中のマスター細胞バンクから培養増殖させた後、バイオリアクターで３Ｄ培養物に播種する。一実施例において、本開示の間葉系前駆細胞又は幹細胞は、３～５日間、２Ｄ培養物中のマスター細胞バンクから培養増殖させた後、バイオリアクターで３Ｄ培養物に播種する。これらの実施例において、２Ｄ培養は、細胞工場で実施され得る。様々な細胞工場製品が市販されている（例えば、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、Ｓｉｇｍａ）。

細胞培養培地
本明細書に開示される間葉系前駆細胞又は幹細胞は、様々な好適な増殖培地中で培養増殖できる。

本開示の文脈で使用される場合、「培地（ｍｅｄｉｕｍ）」又は「培地（ｍｅｄｉａ）」という用語は、細胞を取り囲む環境の構成要素を含む。培地は、細胞が成長することを可能にするのに適した条件に寄与し、及び／又は提供する。培地は、固体、液体、気体、又は相及び材料の混合物であり得る。培地は、液体増殖培地並びに細胞増殖を維持しない液体培地を含むことができる。培地は、寒天、アガロース、ゼラチン及びコラーゲン基質などのゼラチン性培地も含まれる。例示的な気体媒体としては、ペトリ皿又は他の固体若しくは半固体支持体上で成長する細胞が曝露される気体相が挙げられる。

培養増殖に使用される細胞培養培地は、全ての必須アミノ酸を含有し、非必須アミノ酸も含有し得る。一般に、アミノ酸は、必須アミノ酸（Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ）及び非必須アミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｔｙｒ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ）に分類される。

当業者は、最適な結果を得るために、基礎培地が対象の細胞株に適切でなければならないことを理解するであろう。例えば、基礎培地中のグルコース（又は他のエネルギー源）のレベルを上げること、又はグルコース（又は他のエネルギー源）が枯渇し、その結果増殖が制限されることが判明した場合、培養の過程でグルコース（又は他のエネルギー源）を添加することが必要な場合がある。一実施例において、溶存酸素（ＤＯ）レベルも制御され得る。

一実施例において、細胞培地は、ヒト由来の添加剤を含有する。例えば、ヒト血清及びヒト血小板細胞溶解物を細胞培養培地に添加できる。

一実施例において、細胞培養培地は、ヒト由来の添加剤のみを含有する。したがって、実施例において、細胞培養培地は、異種を含まない。誤解を避けるために、これらの実施例において、培養培地は動物性タンパク質を含まない。一実施例において、本開示の方法で使用される細胞培養培地は、動物成分を含まない。

一実施例において、培地は血清を含む。他の実施例において、培養培地は、ウシ胎仔血清を含まない培養であって、間葉系前駆細胞又は幹細胞増殖を促進する成長因子を含む。一実施形態では、培地は、無血清幹細胞培地である。一実施例において、細胞培養培地は、
基礎培地と、
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）と、
線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）と、を含む。

一実施例において、培地は、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）及び線維芽細胞成長因子２（ＦＧＦ２）を含み、ＦＧＦ２のレベルは、約６ｎｇ／ｍｌ未満である。例えば、ＦＧＦ２レベルは、約５ｎｇ／ｍｌ未満、約４ｎｇ／ｍｌ未満、約３ｎｇ／ｍｌ未満、約２ｎｇ／ｍｌ未満、約１ｎｇ／ｍｌ未満であり得る。他の実施例において、ＦＧＦ２レベルは、約０．９ｎｇ／ｍｌ未満、約０．８ｎｇ／ｍｌ未満、約０．７ｎｇ／ｍｌ未満、約０．６ｎｇ／ｍｌ未満、約０．５ｎｇ／ｍｌ未満、約０．４ｎｇ／ｍｌ未満、約０．３ｎｇ／ｍｌ未満、約０．２ｎｇ／ｍｌ未満である。

別の実施例において、ＦＧＦ２のレベルは、約１ｐｇ／ｍｌ～１００ｐｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＦＧＦ２のレベルは、約５ｐｇ／ｍｌ～８０ｐｇ／ｍｌである。

一実施例において、ＰＤＧＦは、ＰＤＧＦ－ＢＢである。一実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、約１ｎｇ／ｍｌ～１５０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、約７．５ｎｇ／ｍｌ～１２０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、約１５ｎｇ／ｍｌ～６０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約１５ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約２０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約２１ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約２２ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約２３ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約２４ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＢＢのレベルは、少なくとも約２５ｎｇ／ｍｌである。

別の実施例において、ＰＤＧＦは、ＰＤＧＦ－ＡＢである。一実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、約１ｎｇ／ｍｌ～１５０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、約７．５ｎｇ／ｍｌ～１２０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、約１５ｎｇ／ｍｌ～６０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約１５ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約２０ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約２１ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約２２ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約２３ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約２４ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＰＤＧＦ－ＡＢのレベルは、少なくとも約２５ｎｇ／ｍｌである。

他の実施例において、追加の因子を細胞培養培地に添加することができる。一実施例において、培地は、ＥＧＦを更に含む。ＥＧＦは、その受容体であるＥＧＦＲに結合することによって、細胞増殖を刺激する成長因子である。一実施例において、本開示の方法は、ウシ胎児血清を含まずにＥＧＦを更に含む細胞培地中で、幹細胞の集団を培養することを含む。一実施例において、ＥＧＦのレベルは、約０．１～７ｎｇ／ｍｌである。例えば、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約５ｎｇ／ｍｌであり得る。

別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、約０．２ｎｇ／ｍｌ～３．２ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、約０．４ｎｇ／ｍｌ～１．６ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、約０．２ｎｇ／ｍｌの間である。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．３ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．４ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．６ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．７ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．８ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約０．９ｎｇ／ｍｌである。別の実施例において、ＥＧＦのレベルは、少なくとも約１．０ｎｇ／ｍｌである。

上記の実施例において、αＭＥＭ又はＳｔｅｍＳｐａｎ（商標）などの基礎培地を、参照量の成長因子により補充し得る。一実施例において、培地は、３２ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ－ＢＢ、０．８ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ、及び０．０２ｎｇ／ｍｌのＦＧＦを補充したアルファＭＥＭ又はＳｔｅｍＳｐａｎ（商標）を含む。

他の実施例において、追加の因子を細胞培養培地に添加し得る。例えば、細胞培養培地は、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ｌα、２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（１．２５Ｄ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、及びストローマ細胞由来因子ｌα（ＳＤＦ－ｌα）からなる群から選択される１種以上の刺激因子を補充し得る。別の実施形態において、細胞の成長を支援するのに十分な量の少なくとも１種のサイトカインの存在下で、細胞を培養し得る。別の実施形態において、細胞は、ヘパリン又はその誘導体の存在下で培養し得る。例えば、細胞培養培地は、約５０ｎｇ／ｍｌのヘパリンを含有し得る。他の実施例において、細胞培地は、約６０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約７０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約８０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約９０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約１００ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約１１０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約１２０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約１３０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約１４０ｎｇ／ｍｌのヘパリン、約１５０ｎｇ／ｍｌのヘパリン又はその誘導体を含む。一実施例において、ヘパリン誘導体は硫酸塩である）。ヘパリン硫酸塩の様々な形態はこの技術分野で既知であり、ヘパリン硫酸塩２（ＨＳ２）を含む。ＨＳ２は、例えば、オス及び／又はメスの哺乳動物の肝臓を含む、様々な供給源に由来し得る。したがって、例示的なヘパリン硫酸塩としては、オス肝ヘパリン硫酸塩（ＭＭＬ ＨＳ）及びメス肝ヘパリン硫酸塩（ＦＭＬ ＨＳ）が挙げられる。

別の実施例において、本開示の細胞培養培地は、幹細胞を未分化状態に維持しながら、幹細胞の増殖を促進する。幹細胞は、特定の分化系統に傾注していない場合、未分化と考えられる。上で考察されたように、幹細胞は、それらを分化細胞と区別する形態学的特徴を示す。更に、未分化幹細胞は、分化状態を検出するためのマーカーとして使用され得る遺伝子を発現する。ポリペプチド生成物は、分化状態を検出するためのマーカーとしても使用され得る。したがって、当業者は、ルーチンの形態学的、遺伝学的、及び／又はプロテオミクス分析を使用して、本開示の方法が幹細胞を未分化状態に維持するかどうかを容易に決定することができる。

細胞の改変
本明細書に開示される間葉系前駆細胞又は幹細胞は、投与時に細胞の溶解が阻害されるような方法で、変更され得る。抗原の変化は、免疫学的非反応性又は耐性を誘導することができ、それによって、正常な免疫反応における外来細胞の拒絶を最終的に引き起こす、免疫反応のエフェクター相（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞産生、抗体産生など）の誘導を防止する。この目的を達成するために改変され得る抗原としては、例えば、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＬＦＡ－３及びＩＣＡＭ－１が挙げられる。

間葉系前駆細胞又は幹細胞もまた、線状骨格筋細胞の分化及び／又は維持にとって重要なタンパク質を発現するように遺伝子改変され得る。例示的なタンパク質としては、成長因子（ＴＧＦ－β、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、ＦＧＦ）、筋原性因子（例えば、ｍｙｏＤ、ミオゲニン、筋原性因子５（Ｍｙｆ５）、筋原性調節因子（ＭＲＦ））、転写因子（例えば、ＧＡＴＡ－４）、サイトカイン（例えば、カーディオトロピン－１）、ニューレグリンファミリーのメンバー（例えば、ニューレグリン１、２及び３）、並びにホメオボックス遺伝子（例えば、Ｃｓｘ、スズマン及びＮＫｘファミリー）が挙げられる。

組成物
一実施例において、本開示は、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）及びヒアルロン酸（ＨＡ）を含むオピオイド節減組成物を包含する。一実施例において、組成物が投与され、その後、オピオイドが投与後に節減される。例えば、オピオイドは、３ヶ月後、節減され得る。別の実施例において、オピオイドは、６ヶ月後、節減され得る。別の実施例において、オピオイドは、１２ヵ月後、節減され得る。別の実施例において、オピオイドは、１８ヵ月後、節減され得る。別の実施例において、オピオイドは、２４ヵ月後、節減され得る。別の実施例において、オピオイドは、３６ヵ月に、節減され得る別の実施例において、オピオイドは、１８ヵ月後、停止され得る。別の実施例において、オピオイドは、３６ヵ月に、停止され得る。

一実施例において、オピオイド節減組成物は、１％ＨＡを含む。別の実施例において、オピオイド節減組成物は、オピオイドを使用している対象に投与される。例えば、対象は、疼痛の治療のためにオピオイドを使用し得る。

本明細書に開示される間葉系細胞又は幹細胞は、凍結保存された中間体から培養増殖させて、少なくとも１回分の治療用量を含有する調製物を生成し得る。一実施例において、本開示の方法は、１回分の用量の投与を包含する。他の実施例において、２回分以上の用量が投与される。

一実施例において、本開示の組成物は、１０×１０^６～３５×１０^６個の細胞を含む。別の実施例において、該組成物は、２０×１０^６個～３０×１０^６の細胞を含む。他の実施例において、組成物は、少なくとも５００万個の細胞を含む。別の実施例において、該組成物は、６００万個の細胞を含む。

一実施例において、本開示の組成物は、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を含む。「担体」及び「賦形剤」という用語は、活性化合物の貯蔵、投与、及び／又は生物学的活性を促進するために、当技術分野で従来から使用される物質の組成物を指す（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８０）を参照）。担体は、活性化合物の任意の望ましくない副作用も低減し得る。好適な担体は、例えば、安定しており、例えば、担体内の他の成分と反応することができない。一実施例において、担体は、治療に使用される用量及び濃度では、レシピエントに有意な局所的又は全身的有害作用を生じさせない。

本開示に好適な担体としては、従来使用されているもの、例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、ラクトース、リンゲル溶液、緩衝溶液、ヒアルロナン及びグリコールが、溶液のための例示的な液体担体、特に（等張の場合）である。好適な医薬担体及び賦形剤としては、デンプン、セルロース、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。

別の実施例において、担体は、例えば、細胞が増殖又は懸濁される培地組成物である。そのような培地組成物は、それが投与される対象に任意の有害作用を誘発しない。例示的な担体及び賦形剤は、細胞の生存率及び／又は疾患を治療又は予防する細胞の能力に悪影響を及ぼさない。

一実施例において、担体又は賦形剤は、細胞及び／又は可溶性因子を好適なｐＨに維持するための緩衝活性を提供し、それによって生物学的活性を発揮し、例えば、担体又は賦形剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。ＰＢＳは、細胞及び因子の相互作用が最小限であり、細胞及び因子の迅速な放出を可能にするので、魅力的な担体又は賦形剤を示し、このような場合、本開示の組成物は、血流に直接適用するため、又は組織若しくは組織を取り囲む若しくは組織に隣接する領域に、例えば注射により適用するための液体として製造され得る。

本開示の組成物は、凍結保存してもよい。間葉系前駆細胞又は幹細胞の凍結保存は、この技術分野で既知の低速冷却方法又は「高速」凍結プロトコルを使用して、行われ得る。好ましくは、凍結保存方法は、未凍結細胞と比較して、凍結保存細胞の同様の表現型、細胞表面マーカー、及び成長率を維持する。

凍結保存された組成物は、凍結保存溶液を含み得る。凍結保存溶液のｐＨは、通常、６．５～８、好ましくは７．４である。

サイロ保存溶液は、例えば、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ ＡＴＭなどの滅菌された非発熱性等張溶液を含み得る。１００ｍＬのＰｌａｓｍａＬｙｔｅＡＴＭは、５２６ｍｇの塩化ナトリウム、ＵＳＰ（ＮａＣｌ）；５０２ｍｇのグルコン酸ナトリウム（Ｃ６Ｈ１１ＮａＯ７）；３６８ｍｇの酢酸ナトリウム、ＵＳＰ（Ｃ２Ｈ３ＮａＯ２・３Ｈ２Ｏ）；３７ｍｇの塩化カリウム、ＵＳＰ（ＫＣｌ）；及び３０ｍｇの塩化マグネシウム、ＵＳＰ（ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を含む。抗菌剤は、含まれない。ＰＨは、水酸化ナトリウムで調整する。ＰＨは７．４（６．５～８．０）である。

凍結保存溶液は、Ｐｒｏｆｒｅｚｅ（商標）を含み得る。凍結保存溶液は、追加的又は代替的に、培地、例えば、αＭＥＭを含み得る。

凍結を容易にするために、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの凍結保護剤を、通常、凍結保存溶液に加える。理想的には、凍結保護剤は、細胞及び患者にとって非毒性であり、非抗原性であり、化学的に不活性であり、解凍後の高い生存率を提供し、洗浄せずに移植できるようにするべきである。しかしながら、最も一般的に使用される凍結保護剤、ＤＭＳＯは、いくらかの細胞毒性を示す。ヒドロキシルエチルデンプン（ＨＥＳ）は、凍結保存溶液の細胞毒性を低減するために、ＤＭＳＯの代替物として、又はＤＭＳＯと組み合わせて使用され得る。

凍結保存溶液は、ＤＭＳＯ、ヒドロキシエチルデンプン、ヒト血清成分、及び他のタンパク質増量剤のうちの１種以上を含み得る。一実施例において、凍結保存された溶液は、血漿分解物Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を含み、ＨＳＡ溶液は、５％のＨＳＡ及び１５％の緩衝液を含む。

一実施例において、凍結保存溶液は、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、及びトレハロースのうちの１種以上を更に含んでもよい。

凍結保存された組成物は、解凍して対象に直接投与してもよく、又は例えば、ヒアルロン酸を含む別の溶液に加えてもよい。代替的に、凍結保存された組成物を解凍し、投与前に間葉系前駆細胞又は幹細胞を代替キャリアに再懸濁し得る。

本明細書に開示される組成物は、単独で、又は他の細胞との混合物として投与され得る。異なる種類の細胞は、投与直前又は投与直前に本開示の組成物と混合されてもよく、又は投与前に共培養されてもよい。

投与される細胞の正確な量は、対象の年齢、体重、及び性別、並びに治療される障害の程度及び重症度を含む様々な要因に依存する。

組成物中に提供される細胞の数にもかかわらず、一実施例において、５０×１０^６～２００×１０^７個の細胞が投与される。他の実施例において、６０×１０^６～２００×１０^６細胞又は７５×１０^６～１５０×１０^６細胞を投与する。一実施例において、７５×１０^６個の細胞を投与する。別の実施例において、１５０×１０^６個の細胞が投与される。これらの実施例において、細胞は、１回の用量又は複数回にわたる用量として投与され得る。

一実施例において、組成物は、５．００×１０^６個の生存細胞／ｍＬを超える量を含む。別の実施例において、組成物は、５．５０×１０^６個の生存細胞／ｍＬを超える量を含む。別の実施例において、組成物は、６．００×１０^６個の生存細胞／ｍＬを超える量を含む。別の実施例において、組成物は、６．５０×１０^６個の生存細胞／ｍＬを超える量を含む。別の実施例において、組成物は、６．６８×１０^６個の生存細胞／ｍＬを超える量を含む。

一実施例において、間葉系前駆細胞又は幹細胞は、組成物の細胞集団の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％を構成する。

一実施例において、組成物は、所望の目的のために、書面による指示が記載された適切な容器に任意選択的に包装され得る。

本開示の組成物は、例えば、静脈内投与などによって全身投与され得る。一実施例において、組成物は、疼痛を伴う椎間板に投与される。一実施例において、本開示の組成物は、髄核又は椎間板の線維環内に投与される。

当業者であれば、広く説明した本発明の精神又は範囲から逸脱することなく、具体的な実施形態に示したような本発明に多数の変形及び／又は改変を加えることができることが理解されよう。したがって、本実施形態は、全ての点で例示的であり、限定的ではないと見なされるべきである。

本明細書で説明及び／又は参照される全ての刊行物は、その全体が本明細書に組み込まれる。

本出願は、２０２１年１月２２日に出願されたＡＵ２０２１９００１４７、２０２１年２月４日に出願されたＡＵ２０２１９００２５０、及び２０２２年１月１１日に出願されたＵＳ６３／２９８，３９１に基づく優先権を主張し、それらの開示は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書に含まれている文書、行為、材料、デバイス、物品などの任意の議論は、単に本発明の文脈を示す目的のためである。これらの事項の一部又は全部が、本出願の各請求項の優先日以前に存在した、本発明に関連する分野における先行技術基盤の一部を形成していること、又は一般的な一般知識であったことを認めるものと解釈してはならない。全て

組成物
治療組成物は、ヒト骨髄由来の同種ＭＰＣを含み、エクスビボで増殖させ、凍結保存したものである。細胞は、単独（ＭＰＣ）である、又は１％ヒアルロン酸（ＨＡ）（ＭＰＣ＋ＨＡ）である。

患者
椎間板の中等度Ｘ線写真的な退行性変化と関連する慢性腰痛（６ヵ月を超える）を有する対象。

ＭＰＣ及びＭＰＣ＋ＨＡによる両方の治療は、基準値に対して、オピオイドを使用している全ての患者における平均ＶＡＳ腰痛を減少させた。最も顕著な減少は、ＭＰＣ＋ＨＡを投与された対象において観察された。実際、ＭＰＣ＋ＨＡは、偽薬と比較して、３６ヶ月にわたる全ての時点で、基準値から有意に大きい平均疼痛低下を有した（図１及び２８）。より広く見ると（図２９）、ＭＰＣ＋ＨＡによる治療は、１２ヶ月（ｐ＝０．０１６２）及び２４ヵ月（ｐ＝０．０４２６）の基準値に対して、全ての患者の平均ＶＡＳ腰痛を減少させた。

治療レジメンを変更しないように指示されているにもかかわらず、オピオイドを使用しており、ＭＰＣ＋ＨＡで治療された患者は、２４ヶ月間にわたりオピオイドの使用が約４０％減少したことを示しました。これらの患者において、ＭＰＣ＋ＨＡは、有意に、
－平均ＶＡＳスコアが低減した（図１）；
－５０％及び３０％のＶＡＳ反応者の割合が増加した（図２）；
－１２及び２４ヵ月時点で疼痛が最小限／なしである患者の割合が増加した（図３）。基準値から腰痛ＶＡＳスコアが５０％減少し、かつ評価時点まで治療後の介入を行わなかった対象として定義される、疼痛反応者は、
－平均ＥＱ－５Ｄスコアが増加（図４及び５）、
－２４ヵ月までに疼痛及び機能における治療の成功の複合を達成した患者の割合が増加した（図６～８）。ＬＢＰ－ＯＤＩ治療の成功に関して、全体的な成功は、基準値からのＬＢＰＶＡＳスコアの５０％の低下、かつ１２及び２４ヵ月の両方で基準値からのＯＤＩスコアの１５点の改善、かつ２４ヵ月まで治療後の介入がない対象として定義される。ＭＩＣについて、成功は、基準値からのＬＢＰＶＡＳスコアの３０％の低下、かつ１２及び２４ヵ月の両方で基準値からのＯＤＩスコアの１０点の改善、かつ２４ヵ月まで治療後の介入がない対象として定義される。ＬＢＰ－ＥＱ５Ｄについて、治療の成功は、１２及び２４ヵ月の両方でＥＱ５Ｄが０．０３改善し、かつＶＡＳ（全体）が５０％低下する又はＶＡＳ（ＭＩＣ）が３０％低下し、介入がない対象として定義される。

特に、ＭＰＣ及びＭＰＣ＋ＨＡの両方が、オピオイド使用者において、２４ヵ月にわたって、モルヒネミリグラム当量を低下させ（図９及び１０）、ＭＰＣ＋ＨＡで有意な低下が観察された（ｐ＝０．０１）。

ＭＰＣ＋ＨＡを投与された患者における治療反応の更なる分析は、
－毎日のオピオイド使用を減らしながら、２４ヶ月間にわたって、ＶＡＳ３０％とＶＡＳ５０％の疼痛反応の両方を達成したオピオイド使用者の割合が増加した（図１１及び１２）。
－毎日のオピオイド使用を減らしながら、２４ヶ月にわたって、ＯＤＩ１０点機能反応（図１３）、１５点機能反応（図１４）、ＶＡＳ３０％＋ＯＤＩ１０点機能反応（図１５）、及びＶＡＳ５０％＋ＯＤＩ１５点機能反応（図１６）の両方を達成するオピオイド使用者の割合が増加した。
－オピオイドの使用も減少しながら、１２ヵ月と２４ヵ月の両方で、疼痛／機能複合反応を達成するオピオイド使用者の割合が増加した（図１７及び１８）。

上記の所見と合わせて、これらのデータは、ＭＬＰＳＣを含む組成物が、オピオイド節減剤として、特に腰痛などの慢性疼痛を有する対象の文脈において有用であり得ることを示す。この患者集団におけるオピオイドの持続的な使用と、その継続的な副作用を考慮すると、これは重要な知見である。細胞療法の投与後２４ヶ月続くオピオイド使用の分析は、ＭＬＰＳＣを含む組成物がオピオイド節減剤として有用であり得るという更なる証拠を示した。ＭＰＣ＋ＨＡ及びＭＰＣを受けた患者の７３．７％及び６３．４％は、それぞれ鎮痛薬の使用を減少させた。対照的に、偽薬患者の５０％のみが鎮痛剤の使用を減少させた（図３０）。特に、ＭＰＣ＋ＨＡの投与後１８ヵ月（ｐ＝０．０１２１）及び３６ヵ月（ｐ＝０．００７５）で、オピオイドの非使用を達成した患者の有意な増加が観察された（図３１）。オピオイドの使用の持続的な排除は顕著であり、これらの患者において病理学的に慢性的な性質を考慮すると、特に驚くべき結果を表している。

早期介入
１回用量のＭＰＣ治療は、３６ヶ月を通して、全ての患者の疼痛を低減した（図１９及び３２）。これらの患者の慢性腰痛（ＣＬＢＰ）期間の中央値は、６８ヶ月であった。６８ヶ月未満のＣＬＢＰを有する患者からのデータの更なる分析は、疼痛に対するＭＰＣ治療効果（ＭＰＣ及びＭＰＣ＋ＨＡの両方）が、これらの患者において最も顕著であることを明らかにした（図２０、図２１）。特に、ＯＤＩ機能スコアに対する治療効果は、ＣＬＢＰ持続期間が６８ヶ月未満の患者（図２１）、特にオピオイド使用者でもある患者（図３３）で最も顕著であった。更に、ＭＰＣ治療（ＭＰＣ及びＭＰＣ＋ＨＡの両方）は、オピオイド使用者において、３６ヶ月にわたって、モルヒネ当量を低減させた（図３４）。また、ＭＰＣ＋ＨＡの投与が、１２ヵ月時点で複合反応者の数（３０％ＶＡＳ／０．０３ＥＱ５Ｄ）を有意に増加させたことも注目に値する（図２２、ＭＰＣ治療群においても、１２ヵ月時点での複合反応者の数の増加傾向が観察された）。ＥＱ５Ｄの改善は、ＭＰＣ及びＭＰＣ＋ＨＡの両方の治療の後、６８ヶ月未満のＣＬＢＰ持続時間を有する患者において、観察された（図２３～２６、ＲＨＳは、６８ヶ月未満のＣＬＢＰを示す）。これらのデータは、ＥＱ５ＤがＣＬＢＰの初期段階で治療反応をより効果的に評価する可能性があるため、特に有望である。加えて、ＭＰＣ＋ＨＡ投与は、１２ヵ月及び２４ヵ月の両方で、疼痛／機能（ＶＡＳ／ＯＤＩ）及び疼痛／生活の質（ＶＡＳ／ＥＱ５Ｄ指数）の複合的な治療成功を増加させた（図２７）。

６８か月未満のＣＬＢＰ患者において最も顕著な改善が見られたのは、ＭＰＣ＋ＨＡの投与後に観察され、
－平均ＶＡＳスコアを有意に低減し、
－５０％及び３０％のＶＡＳ反応者の割合を有意に増加し、
－１２ヵ月及び２４ヵ月時点で、疼痛が最小限／なしである患者の割合を有意に増加し、
－平均ＥＱ－５Ｄスコアを有意に増加し、
－２４ヵ月までの疼痛及び機能の複合的な治療成功を達成した患者の割合を有意に増加した。

まとめると、上記の参照データは、ＣＬＢＰ患者における細胞療法による早期介入、特にＣＬＢＰの６８ヶ月前の介入の治療結果の改善を示している。

軸性疼痛の低減
ＭＰＣ（ｎ＝１５）及びＭＰＣ＋ＨＡ（ｎ＝１４）による両方の治療は、ＭＲＩによって定義される神経根圧迫（表１及び２）を有する患者における軸性疼痛を低減した。これらのデータは、対象において、特にＭＲＩによって定義される神経根圧迫を有する対象において、ＭＬＰＳＣを投与することによって、対象における軸性疼痛を低減する方法を支持する。

Claims (41)

1. 疼痛を低減する、又はオピオイドの使用を低減する、又はＥＱ－５Ｄスコアを増加する方法であって、前記方法が、前記対象に、間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を投与することを含み、前記対象が、オピオイドを使用している、方法。
2. 前記組成物が、ヒアルロン酸（ＨＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記対象が、疼痛のためにオピオイドを使用している、請求項１又は請求項２に記載の方法。
4. 間葉系前駆細胞又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む、オピオイド節減組成物。
5. ヒアルロン酸（ＨＡ）、好ましくは１％ＨＡを更に含む、請求項４に記載の組成物。
6. 前記オピオイド節減組成物が、オピオイドを使用している対象に投与され、好ましくは、前記対象が、疼痛のために前記オピオイドを使用している、請求項４又は請求項５に記載の組成物。
7. 前記疼痛のうち、慢性疼痛である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項６に記載の組成物。
8. 疼痛が、腰痛であり、好ましくは、前記腰痛が、椎間板変性と関連している、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項４～７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 前記腰痛が、椎間板と関連しており、好ましくは、前記椎間板が、前記対象の隣接する健康な椎間板の高さと比較して、実質的に低減していない椎間板高さを有する、請求項７に記載の方法又は組成物。
10. 前記腰痛が、非神経根由来であり、かつ／又は以下：
    －最大３ｍｍの突出の椎間板ヘルニア、
    －椎間板への神経の内方成長、
    －椎間板内の炎症、のうちの１つ以上と関連している、請求項７に記載の方法及び組成物。
11. 前記神経の内方成長又は炎症が、椎間板空間、又は髄核、又は前記椎間板の線維環内にある、請求項１０に記載の方法又は組成物。
12. オピオイドの使用が、前記組成物の投与後、１ヶ月、好ましくは３ヶ月低減する、請求項１～３若しくは６～１１のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１１のいずれか一項に記載の組成物。
13. オピオイドの使用が、前記組成物の投与後、６ヶ月、好ましくは１２ヶ月、より好ましくは１８ヶ月、更により好ましくは２４ヵ月低減する、請求項１～３若しくは６～１１のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１１のいずれか一項に記載の組成物。
14. オピオイドの使用が、前記組成物の投与後少なくとも１２ヶ月間、好ましくは少なくとも２４ヵ月間低減する、請求項１～３若しくは７～１１のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１１のいずれか一項に記載の組成物。
15. オピオイドの使用が、前記組成物を投与する前の前記対象の平均基準値モルヒネ当量に対して低減する、請求項１～３若しくは６～１４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１４のいずれか一項に記載の組成物。
16. 前記対象が、前記組成物を投与する前に、少なくとも１ヶ月間、好ましくは少なくとも３ヶ月間、より好ましくは少なくとも６ヶ月間、オピオイドを使用している、請求項１～３又は６～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記対象のオピオイドの使用が、前記組成物を投与する前の前記対象の基準値となるオピオイドの使用に対して、約２０％、約３０％、約４０％低減する、請求項１～３又は６～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記対象の平均ＶＡＳスコアが、前記組成物を投与する前の前記対象のＶＡＳスコアに対して低減する、請求項１～３又は６～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記対象の視覚アナログスケール（ＶＡＳ）疼痛反応が、３０％、好ましくは５０％である、請求項１～３又は６～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記オピオイドが、モルヒネである、請求項１～３若しくは６～１９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１９のいずれか一項に記載の組成物。
21. 前記対象の平均ＥＱ－５Ｄスコアが、基準値から増加する、請求項１～３又は６～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記対象が、ＯＤＩ１０点機能反応、好ましくは１５点ＯＤＩ機能反応を達成する、請求項２若しくは３又は６～２０のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記対象が、前記組成物を投与した後、１２ヶ月、好ましくは２４ヵ月重大な疼痛を有しない、請求項１～３又は６～２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記対象が、前記組成物を投与した後、１２～２４ヵ月オピオイドの使用を中止する、請求項１～３又は６～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記対象が、２５～７０％、３０～６０％のＯＤＩスコアを有する、請求項１～３又は６～２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ＭＬＰＳＣが、ＳＴＲＯ－１＋である、請求項１～３若しくは６～２５のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５のいずれか一項に記載の組成物。
27. 前記ＭＬＰＳＣが、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である、請求項１～３若しくは６～２６のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５若しくは２６のいずれか一項に記載の組成物。
28. 前記細胞が、同種異系及び／又は培養増殖されており、好ましくは、前記細胞が、培養増殖される前にＴＮＡＰ＋である、請求項１～３若しくは６～２７のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５又は２６若しくは２７のいずれか一項に記載の組成物。
29. 前記細胞が、凍結保存されている、請求項１～３若しくは６～２８のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５若しくは２５～２８のいずれか一項に記載の組成物。
30. １×１０^７～２×１０^８個の細胞を投与することを含む、請求項１～３又は６～２９のいずれか一項に記載の方法。
31. １×１０^７～２×１０^８個の細胞を含む、請求項５～１５又は２５～２９のいずれか一項に記載の組成物。
32. 前記組成物が、抗ＳＴＲＯ－３抗体を用いて骨単核細胞から単離され、エクスビボで増殖され、かつ凍結保存された、ヒト骨髄由来の同種異系の間葉系前駆細胞（ＭＰＣ）を含む、請求項１～３若しくは６～３０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５若しくは２５～２９若しくは３１のいずれか一項に記載の組成物。
33. 前記対象が、６～６８ヶ月間疼痛を経験している、請求項１～３若しくは６～３２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５若しくは２５～２９若しくは３１若しくは３２のいずれか一項に記載の組成物。
34. 前記対象が、６８ヶ月間を超えて疼痛を経験していない、請求項１～３若しくは６～３３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５若しくは２５～２９若しくは３１～３３のいずれか一項に記載の組成物。
35. 前記疼痛が、軸性疼痛である、請求項１～３若しくは６～３３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５～１５若しくは２５～２９若しくは３１～３４のいずれか一項に記載の組成物。
36. 前記軸性疼痛が、ＭＲＩによって定義される神経根圧迫に起因する、請求項３５に記載の方法又は組成物。
37. 前記対象が、前記組成物を投与した後３６ヶ月オピオイドの使用を中止する、請求項１～３又は６～３６のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記組成物が、投与後３６ヶ月対象におけるオピオイドの使用を中止する、請求項５～１５又は２５～２９又は３１～３４のいずれか一項に記載の組成物。
39. 対象によるオピオイドの使用を中止するための薬剤の製造における、請求項５～１５又は２５～２９又は３１～３４のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、前記オピオイドの使用が、前記組成物の投与後３６ヶ月中止される、使用。
40. 前記対象が、慢性疼痛を有する、請求項３９に記載の使用。
41. 前記対象が、慢性腰痛を有する、請求項４０に記載の使用。