JP2024503034A - 優先的ｃｈ３ヘテロ二量体化のために操作されたバリアントｃｈ３ドメイン、それを含む多重特異性抗体、及びその作製方法 - Google Patents

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ペジャール、ロバート
マクレアリー、ジュリア
バーロウ、カイル
シヴァスブラマニアン、アルヴィンド
ベンジャミン バトルス、マイケル
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アディマブ， エルエルシー
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Abstract

ＣＨ３－ＣＨ３ホモ二量体よりもＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが提供される。かかるバリアントＣＨ３ドメインを使用して、所望のＦｃ対合を促進し、それ故に、二重特異性抗体及び多重特異性抗体並びに異なる形式のＦｃ融合物の効率的な開発を提供することができる。かかるバリアントＣＨ３ドメインを使用して二重特異性抗体を産生する方法、及びかかるバリアントＣＨ３ドメインを含むライブラリを産生するための方法も提供される。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願
本出願は、２０２１年１月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１３６，１２０号、表題「ＣＨ３ ＤＯＭＡＩＮ ＶＡＲＩＡＮＴＳ ＥＮＧＩＮＥＥＲＥＤ ＦＯＲ ＰＲＥＦＥＲＥＮＴＩＡＬ ＣＨ３ ＨＥＴＥＲＯＤＩＭＥＲＩＺＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＭＵＬＴＩ－ＳＰＥＣＩＦＩＣ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＣＯＭＰＲＩＳＩＮＧ ＴＨＥ ＳＡＭＥ」に対する優先権を主張するものであり、この内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、他のバリアントＣＨ３ドメインと会合してＦｃヘテロ二量化を優先的対合により促進するバリアントＣＨ３ドメイン、並びにポリペプチド、分子、及び多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片、並びに前述のうちのいずれかを含む組成物に関する。本発明は、かかる１つ以上のバリアントＣＨ３ドメイン、ポリペプチド、分子、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片をコードするポリヌクレオチド、並びに前述のうちのいずれかを含む組成物及びライブラリに更に関する。本発明は、バリアントＣＨ３ドメインを含むライブラリを生成する方法、及びこれらのライブラリを使用して、他のバリアントＣＨ３ドメインと会合してＦｃヘテロ二量体化を促進するバリアントＣＨ３ドメインを特定する方法に更に関する。本発明は、Ｆｃヘテロ二量体化を促進するバリアントＣＨ３ドメイン組み合わせ（セット）についてスクリーニングする方法、当該バリアントＣＨ３ドメインセットを含む多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片などのヘテロマー分子を産生する方法、並びに当該バリアントＣＨ３ドメインセットを使用してＦｃヘテロ二量体化が促進される多重特異性抗体及び抗原結合抗体断片などのヘテロマー分子を産生する方法に更に関する。
２つ以上の抗原結合特異性、例えば、二重特異性抗体を有する抗体治療薬を開発するために継続的な努力がなされている。二重特異性抗体を使用して、がん、自己免疫疾患、炎症、又は他の疾患及び状態と関連する複数の表面受容体を妨害することができる。二重特異性抗体を使用して、標的を近接して配置し、タンパク質複合体形成を調節するか、又は細胞間の接触を駆動することもできる。二重特異性抗体の産生は、１９６０年代初頭に初めて報告され（Ｎｉｓｏｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ １９６１ ９３（２）：４６０－４６２）、最初のモノクローナル二重特異性抗体は、１９８０年代にハイブリドーマ技術を使用して生成された（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９８３ ３０５（５９３４）：５３７－５４０）。二重特異性抗体への関心は、それらの治療能力のため、過去１０年間で著しく高まっており、二重特異性抗体は、現在、外来診療所で使用されており、例えば、ブリナツモマブ及びエミシズマブは、特定のがんの治療に承認されている（二重特異性抗体を産生する方法及び医薬用途に承認されている二重特性抗体の特徴についての最近の総説に関して、Ｓｅｄｙｋｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ Ｄｅｖｅｌ Ｔｈｅｒ １２：１９５－２０８（２０１８）及びＬａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １８：５８５－６０８（２０１９）を参照されたい）。
二重特異性抗体が単一特異性抗体を大幅に超える利益を示している一方で、二重特異性抗体の広範な商業的用途は、効率的な／低コストの産生方法の欠如、二重特異性抗体の安定性の欠如、及びヒトにおける長い半減期の欠如によって妨げられている。二重特異性抗体は、２つの異なる重鎖と２つの異なる軽鎖を共発現させることによって形成され得る。しかしながら、重鎖が比較的乱雑な様式で軽鎖に結合するため、２つの重鎖と２つの軽鎖の共発現により、１６個の可能な組み合わせの混合物がもたらされ得、１０個の異なる抗体を表し、それらのうちの１つのみが所望の二重特異性抗体に相当する（完全な乱雑状態が存在する場合、混合物中の最大収率は１２．５％である）。第１の特異性を有する第１の重鎖対と、第１の特異性とは異なる第２の特異性を有する第２の重鎖対が別個に産生され、その後、重鎖－重鎖対合のために混合される場合であっても、３つの可能な組み合わせが可能であり、それらのうちの１つのみが所望の二重特異性抗体に相当する（完全な乱雑状態が存在する場合、混合物中の最大収率は５０％である）。この誤対合（連鎖関連問題とも称される）は、二重特異性抗体を製造する際の大きな課題を一時停止させ、この問題に対処するために様々な技術が開発されている。
重鎖－重鎖誤対合を軽減するために使用される１つの戦略は、共通の重鎖、すなわち、２つの同一の重鎖及び２つの異なる軽鎖を有する二重特異性抗体を設計することである（例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ．６：６１１３（２０１５）を参照されたい）。これにより、抗体産物の誤対合を排除する必要性がなくなる。しかしながら、この戦略は、異なる特異性を有するが、同じ重鎖を有する、すなわち、軽鎖のみが異なる２つの抗体の特定を必要とし、その特定は、困難であり、各結合アームの特異性を損なう傾向があり、多様性を大幅に減少させる（例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＭＡＢＳ １０（８）：１２２６－１２３５（２０１８）を参照されたい）。ロイシンジッパー（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）を参照されたい）。
別の戦略は、抗体定常領域を修飾して、鎖－重鎖誤対合の発生を減少させることである。ＣＨ３ヘテロ二量体化を促進するために、ＣＨ３ドメインにおいて多くの工学的な努力がなされている。かかる技術には、例えば、「Ｗ－ＳＡＶ」置換（例えば、Ａｔｗｅｌｌ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９９７ Ｊｕｌ ４；２７０（１）：２６－３５及びＵＳ５，７３１，１６８（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を参照されたい）；「ＨＡ－ＴＦ」置換（例えば、Ｍｏｏｒｅ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ ２０１１ Ｎｏｖ－Ｄｅｃ；３（６）：５４６－５５７及びＵＳ１０，４７２，４２７（Ｘｅｎｃｏｒ）を参照されたい）；「ＶＹＡＶ－ＶＬＬＷ」置換（例えば、Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ Ｔ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ２０１３；５：６４６－５４及びＵＳ９，４９９，６３４（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）を参照されたい）；「７．８．６０」設計及び「２０．８．３４」設計（例えば、Ｌｒａｖｅｒ－Ｆａｙ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２０１６ Ａｐｒｉｌ ５；２４（４）：６４１－６５１及びＵＳ１０，７７４，１５６（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ ａｔ Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ及びＥｌｉ Ｌｉｌｌｙ）を参照されたい）；「ＤＤ－ＫＫ」などの電荷交換置換による静電相補性（例えば、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０１０；２８５：１９６３７－４６及びＵＳ８，５９２，５６２（Ａｍｇｅｎ）を参照されたい）；並びに「ＥＷ－ＲＶＴ」置換（例えば、Ｃｈｏｉ Ｈ－Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１３ Ｄｅｃ；１２（１２）：２７４８－５９及びＵＳ９９５１１４５Ｂ２（Ａｊｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）を参照されたい）などの「ノブ・イントゥ・ホール」（「ＫｉＨ」）工学が含まれる。ＣＨ３修飾の更なる例としては、ＵＳ１０，５９７，４６４（Ｇｅｎｍａｂ）、ＵＳ１６／４８２，１３７（Ｃｅｎｔｒｙｍｅｄ）、ＵＳ９，５６２，１０９（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、ＵＳ１５／４０９，４５６（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、ＵＳ９，６２４，２９１（Ｒａｍｏｔ ａｔ Ｔｅｌ Ａｖｉｖ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ＰＣＴ／ＥＰ２０１９／０８３６３８（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）、ＵＳ９，６０５，０８４（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＵＳ１６／０６２，４０５（Ａｌｐｈａｍａｂ）、ＵＳ１５／９９７，２２２（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＵＳ１４／９８９，６４８（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、ＵＳ１３／８９２，１９８（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、ＵＳ１５／５８６，６８６（Ｈｏｆｆｍａｎｎ Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、ＵＳ９，３０８，２５８（Ａｍｇｅｎ）、ＵＳ９，２００，０６０（Ａｍｇｅｎ）、ＵＳ１５／５５４，０２２（Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ Ｆｒａｎｃａｉｓ）、ＵＳ９，５７４，０１０（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０２３３８２（Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＵＳ１３／８１４６５７（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＵＳ１１／２２８，０２６（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０４５１３９（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、ＵＳ１６／２４４，３７８（Ｈｏｆｆｍａｎｎ Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）、及びＢｒｉｎｋｍａｎｎ Ｕ．ｅｔ ａｌ，ＭＡｂｓ．２０１７ Ｆｅｂ－Ｍａｒ；９（２）：１８２－２１２（総説）に記載のものが挙げられる。
これらのＣＨ３修飾はＣＨ３ヘテロ二量体を形成する傾向を高めるものであるが、特にヒト療法における使用のための改善された多重特異性抗体の開発への一般的な関心を考慮すると、依然として改善が必要とされている。
本発明の目的は、ＣＨ３－ＣＨ３ホモ二量体よりもＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する操作されたバリアントＣＨ３ドメインを提供することである。本明細書に開示されるバリアントＣＨ３ドメインは、例えば、ヘテロ二量体化が所望される場合、ポリペプチド、分子、又は多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片に組み込まれ得る。
一態様では、バリアント免疫グロブリン重鎖定常領域３（ＣＨ３）ドメインポリペプチド又はかかる第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドが本明細書に提供される。バリアントＣＨ３ドメイン又は重鎖は、（例えば、配列番号１などの親配列、例えば、野生型配列と比較して）少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、かかるバリアントＣＨ３ドメイン又は重鎖ポリペプチドは、別のＣＨ３ドメイン又はＣＨ３ドメインを含む重鎖とのＣＨ３－ＣＨ３ホモ二量体よりも、別のＣＨ３ドメイン又はＣＨ３ドメインを含む重鎖とのＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成し得る。
いくつかの実施形態では、ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含むか又はそれからなり得る１つ以上のアミノ酸置換を含み得るバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド（「第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド」と称され得る）が提供される。いくつかの実施形態では、かかるＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドも提供され得る。
任意選択で、かかるバリアントＣＨ３ドメイン又は重鎖ポリペプチドは、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドとヘテロ二量体（ＣＨ３ドメインがヘテロである）を優先的に形成する。いくつかの事例では、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、（ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドと少なくとも１つのアミノ酸が異なり得る、及び（ｂ）ＥＵ番号付けに従う以下の位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み得る。更に任意選択で、（ｉ）第１のＣＨ３ドメインがアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、第２のＣＨ３ドメインがアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含む。代替的に、（ｉｉ）第１のＣＨ３ドメインがアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含み得、第２のＣＨ３ドメインがアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み得る。存在する場合、Ｓ３５４Ｃ置換とＹ３４９Ｃ置換の組み合わせにより、第１のバリアントＣＨ３ドメインと第２のバリアントＣＨ３ドメインとの間のジスルフィド結合が可能になり得、これにより、ＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体化が更に促進され得る。
いくつかの実施形態では、更に任意選択で、（ｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｙからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＹ４０７Ｔからならならず、（ｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｔからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＴ３６６Ｙからならず、（ｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、（ｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＴ３６６Ｗからならず、（ｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、（ｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからならず、（ｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｈ及びＦ４０５Ａからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＹ３４９Ｔ及びＴ３９４Ｆからならず、（ｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｔ及びＴ３９４Ｆからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＳ３６４Ｈ及びＦ４０５Ａからならず、（ｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗからならず、（ｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、（ｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＫ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＥ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋからならず、（ｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＫ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄからならず、（ｘｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＤ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからならず、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに由来し、（ｘｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＤ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからならず、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに由来し、（（ｘｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからならず、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインに由来し、（ｘｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからならず、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインに由来し、（ｘｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、及びＦ４０５Ｔからならず、（ｘｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、及びＦ４０５Ｔからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗからならず、（ｘｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃからならず、（ｘｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃからならず、（ｘｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６Ｋからなる、又は３６６Ｋ及び３５１Ｋからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換は３５１Ｄからならない、３４９Ｅからならない、３４９Ｄからならない、３６８Ｅからならない、３６８Ｄからならない、３４９Ｅ及び３５５Ｅからならない、３４９Ｅ及び３５５Ｄからならない、３４９Ｄ及び３５５Ｅからならない、又は３４９Ｄ及び３５５Ｄからならず、（ｘｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３５１Ｄからなる、３４９Ｅからなる、３４９Ｄからなる、３６８Ｅからなる、３６８Ｄからなる、３４９Ｅ及び３５５Ｅからなる、３４９Ｅ及び３５５Ｄからなる、３４９Ｄ及び３５５Ｅからなる、又は３４９Ｄ及び３５５Ｄからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換は３６６Ｋからならない、又は３６６Ｋ及び３５１Ｋからならず、（ｘｘｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＦ４０５Ｌからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＫ４０９Ｒからならず、（ｘｘｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＫ４０９Ｒからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＦ４０５Ｌからならず、（ｘｘｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＥ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖからならず、（ｘｘｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＥ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＫ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａからならず、（ｘｘｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、及びＫ４０９Ｖからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＥ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、及びＹ４０７Ａからならず、（ｘｘｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、及びＹ４０７Ａからなる場合、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換はＹ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、及びＫ４０９Ｖからならない。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は当該第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドは、ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み得、任意選択で、ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上を含む第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は当該第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成し得る。
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は当該第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドは、以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み得、任意選択で、以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上を含む第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は当該第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成し得る。いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、（Ｉ）ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上、又は（ＩＩ）ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上、にのみアミノ酸置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換は、（ｉ）３６６位、（ｉｉ）３６８位、（ｉｉｉ）４０７位、（ｉｖ）３６６位及び４０７位、（ｖ）３６６位及び３６８位、（ｖｉ）３６６位及び４０９位、（ｖｉｉ）３６８位及び３７０位、（ｖｉｉｉ）３６８位及び４０７位、（ｉｘ）３９９位及び４０５位、（ｘ）４００位及び４０９位、（ｘｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、（ｘｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、（ｘｉｉｉ）３６６位、３６８位、及び３７０位、（ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、（ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、（ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、（ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、（ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、（ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、（ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、若しくは（ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含み得るか又はそれからなり得る。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、以下：（ｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４０７位の、若しくは３６６位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位の、若しくは３６８位及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又は含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｘｘｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、あるいは（ｘｘｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、のうちのいずれか１つを満たし得る。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインは、ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置３４９にＣＨ３ジスルフィド結合を可能にする置換（システインに対して）を含み得、ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置３５４にアミノ酸置換（システインに対して）を含む別のバリアントＣＨ３ドメインとジスルフィド結合を形成し得る。
いくつかの実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインは、ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置３５４にＣＨ３ジスルフィド結合を可能にするアミノ酸置換（システインに対して）を含み得、ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置３４９にアミノ酸置換（システインに対して）を含む別のバリアントＣＨ３ドメインとジスルフィド結合を形成し得る。
ある実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、以下のアミノ酸置換：Ｙ３４９Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｑ、Ｔ３６６Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｗ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｆ、Ｌ３６８Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、Ｋ３７０Ｇ、Ｋ３７０Ｙ、Ｄ３９９Ｑ、Ｓ４００Ｔ、Ｆ４０５Ｌ、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ｇ、Ｋ４０９Ｒ、Ｋ４０９Ｌ、及び／又はＫ４０９Ｇのうちの１つ以上を含み得る。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。ある特定の実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、以下のアミノ酸置換のセット：（ｉ）Ｔ３６６Ｖ、（ｉｉ）Ｔ３６６Ｗ、（ｉｉｉ）Ｌ３６８Ｆ、（ｉｖ）Ｙ４０７Ｖ、（ｖ）Ｔ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆ、（ｖｉ）Ｔ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇ、（ｖｉｉ）Ｔ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒ、（ｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｒ＿Ｋ４０９Ｇ、（ｉｘ）Ｌ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇ、（ｘ）Ｌ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇ、（ｘｉ）Ｓ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌ、（ｘｉｉ）Ｄ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌ、（ｘｉｉｉ）Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇ、（ｘｉｖ）Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇ、（ｘｖ）Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙ、（ｘｖｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇ、（ｘｖｉｉ）Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ、（ｘｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ、（ｘｉｘ）Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘ）Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｉ）Ｔ３６６Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｒ、（ｘｘｉｉ）Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｉｉｉ）Ｄ３９９Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｌ、（ｘｘｉｖ）Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｄ３９９Ｑ、Ｆ４０５Ｌ、及びＹ４０７Ｇ、（ｘｘｖｉ）Ｔ３６６Ｑ、Ｄ３９９Ｑ、Ｆ４０５Ｌ、及びＫ４０９Ｒ、（ｘｘｖｉｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｇ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｄ３９９Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｌ、又は（ｘｘｉｘ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｌのうちのいずれか１つを含み得る。任意選択で、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを更に含み得る。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
ある特定の実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、以下：（ｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなる、（ｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、（ｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなる、（ｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなる、（ｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗを含むか又はそれからなる、（ｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなる、（ｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含むか又はそれからなる、（ｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、（ｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含むか又はそれからなる、（ｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、（ｘｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、及びＴ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、（ｘｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、（ｘｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｖ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｖｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｖｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｖｉｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、（ｘｘｉｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなる、（ｘｘｘ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなる、（ｘｘｘｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、あるいは（ｘｘｘｉｉ）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、のうちのいずれを満たし得る。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
特定の実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けに従うＹ３４９Ｃを更に含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けに従うＳ３５４Ｃを更に含み得る。
特定の実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けに従うＳ３５４Ｃを含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵ番号付けに従うＹ３４９Ｃを更に含み得る。
いくつかの好ましい実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、（１）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇからなり、（２）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなり、（３）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、（４）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、（５）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、（６）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、（７）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、（８）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、（９）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、（１０）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗからなり、（１１）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、（１２）第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
更なる実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、又は１６１に従うアミノ酸配列を含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、又は１６２に従うアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、又は１６２に従うアミノ酸配列を含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、又は１６１に従うアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、又は１６３に従うアミノ酸配列を含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、若しくは１６４に従うアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、又は１６４に従うアミノ酸配列を含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、又は１６３に従うアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、又は１６５に従うアミノ酸配列を含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５４、又は１６４に従うアミノ酸配列を含む。
更なる実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５４、又は１６４に従うアミノ酸配列を含み得、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、又は１６５に従うアミノ酸配列を含む。いくつかの好ましい実施形態では、前述のうちのいずれか１つの第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１１又は７１に従うアミノ酸配列を含み、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１２又は７２に従うアミノ酸配列を含む。
いくつかの好ましい実施形態では、前述のうちのいずれか１つの第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１２又は７２に従うアミノ酸配列を含み、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１１又は７１に従うアミノ酸配列を含む。
いくつかの好ましい実施形態では、前述のうちのいずれか１つの第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１３又は７３に従うアミノ酸配列を含み、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１４又は７４に従うアミノ酸配列を含む。
いくつかの好ましい実施形態では、前述のうちのいずれか１つの第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１４又は７４に従うアミノ酸配列を含み、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１３又は７３に従うアミノ酸配列を含む。
いくつかの好ましい実施形態では、前述のうちのいずれか１つの第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１５又は７５に従うアミノ酸配列を含み、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１６又は７６に従うアミノ酸配列を含む、又は
いくつかの好ましい実施形態では、前述のうちのいずれか１つの第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、配列番号１６又は７６に従うアミノ酸配列を含み、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１５又は７５に従うアミノ酸配列を含む。
様々なバリアントＣＨ３ドメインが上述されているが、かかるバリアントＣＨ３ドメインのうちのいずれかを含む重鎖ポリペプチドなどのいずれのポリペプチドも本発明によって包含される。
一態様では、バリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は当該バリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドを含むポリペプチドが本明細書に提供される。ポリペプチド中のバリアントＣＨ３ドメインは、上述の第１のバリアントＣＨ３ドメイン又は第２のバリアントＣＨ３ドメインのうちのいずれかであり得る。
前述の実施形態のうちのいくつかでは、ポリペプチドは、免疫グロブリンポリペプチドであり得る。
ポリペプチドは、（ｉ）抗原結合ドメイン、（ｉｉ）免疫グロブリン重鎖定常領域１（ＣＨ１）ドメイン若しくはバリアントＣＨ１ドメイン、（ｉｉｉ）免疫グロブリン重鎖定常領域２（ＣＨ２）ドメイン若しくはバリアントＣＨ２ドメイン、及び／又は（ｉｖ）免疫グロブリン軽鎖定常領域（ＣＬ）ドメインを更に含み得る。
任意選択で、ポリペプチドは、以下：（ｉｉ）ＣＨ１ドメインが野生型ＣＨ１アミノ酸配列を含む、又は野生型ＣＨ１アミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換若しくは改変を含む、（ｉｉｉ）ＣＨ２ドメインが野生型ＣＨ２アミノ酸配列を含む、又は野生型ＣＨ２アミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換若しくは改変を含む、及び／又は（ｉｖ）ＣＬドメインが野生型ＣＬアミノ酸配列を含む、又は野生型ＣＬアミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換若しくは改変を含む、のうちのいずれかを満たし得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドが抗原結合ドメインを含む場合、抗原結合ドメインは、免疫グロブリン重鎖可変領域（「ＶＨ」）ドメイン、免疫グロブリン軽鎖可変領域（「ＶＬ」）ドメイン、一本鎖断片可変領域（「ｓｃＦｖ」）、ナノボディ、又はそれらの組み合わせを含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、第１のバリアントＣＨ３ドメインに加えて、任意選択でＮ末端からＣ末端の方向に、（ｉ）ＶＨドメイン、（ｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメイン、（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ２ドメイン、（ｉｖ）ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、及びＣＨ２ドメイン、（ｖ）ＶＨドメイン及びＣＬドメイン、（ｖｉ）ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、及びＣＨ２ドメイン、（ｖｉｉ）ＶＬドメイン、（ｖｉｉｉ）ＶＬドメイン及びＣＨ１ドメイン、（ｉｘ）ＶＬドメイン及びＣＨ２ドメイン、（ｘ）ＶＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、及びＣＨ２ドメイン、（ｘｉ）ＶＬドメイン及びＣＬドメイン、（ｘｉｉ）ＶＬドメイン、ＣＬドメイン、及びＣＨ２ドメイン、（ｘｉｉｉ）ｓｃＦｖ、（ｘｉｖ）ｓｃＦｖドメイン及びＣＨ１ドメイン、（ｘｖ）ｓｃＦｖドメイン及びＣＨ２ドメイン、（ｘｖｉ）ｓｃＦｖ、ＣＨ１ドメイン、及びＣＨ２ドメイン、（ｘｖｉｉ）ｓｃＦｖドメイン及びＣＬドメイン、又は（ｘｖｉｉｉ）ｓｃＦｖ、ＣＬドメイン、及びＣＨ２ドメインを含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、以下：（Ｉ）ＶＨドメインを含み、ＶＬドメインを含む別のポリペプチドに結合されるか若しくはそれと対合され、ＶＨドメインとＶＬドメインが抗原結合部位を形成する、又は（ＩＩ）ＶＬドメインを含み、ＶＨドメインを含む別のポリペプチドに結合されるか若しくはそれと対合され、ＶＬドメインとＶＨドメインが抗原結合部位を形成する、のうちのいずれかを満たし得る。
別の態様では、少なくとも前述のうちのいずれかによる第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む分子が本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、（Ａ）第１のポリペプチドは、上述の第１のバリアントＣＨ３ドメインのうちのいずれかを含み得、（Ｂ）第２のポリペプチドは、上述の第２のバリアントＣＨ３ドメインのうちのいずれかを含み得る。第１のバリアントＣＨ３ドメインと第２のバリアントＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸が異なり得る。第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは、任意選択でジスルフィド結合を介して互いに結合又は対合されている。
いくつかの実施形態では、分子は、以下の特徴：（Ａ）第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを更に含み得る、（Ｂ）第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを更に含み得る、（Ｃ）ヘテロマー分子が、第３の抗原結合ドメインを任意選択で含み得る第３のポリペプチドを更に含み得、任意選択で、第３のポリペプチドが第１のポリペプチドに結合され得るか若しくはそれと対合され得る、及び／又は（Ｄ）ヘテロマー分子が、第４の抗原結合ドメインを任意選択で含み得る第４のポリペプチドを更に含み得、任意選択で、第４のポリペプチドが第２のポリペプチドに結合され得るか若しくはそれと対合され得る、のうちの１つ以上を含み得る。
いくつかの実施形態では、ヘテロマー分子は、以下の特徴（Ｉ）～（ＩＩ）のうちの１つ以上を含み得る。
特徴（Ｉ）：（Ｉ－１－ｉ）第１のポリペプチドが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成し得る第１の抗原結合ドメインを含み得る、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）ヘテロマー分子が、第３のエピトープに特異的な第３の抗原結合部位を形成し得る第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み得る、又は（Ｉ－２）第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを含み得、ヘテロマー分子が第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み得、第１の抗原結合ドメイン及び第３の抗原結合ドメインが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成し得る。
特徴（ＩＩ）：（ＩＩ－１－ｉ）第２のポリペプチドが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成し得る第２の抗原結合ドメインを含み得る、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）ヘテロマー分子が、第４のエピトープに特異的な第４の抗原結合部位を形成する第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み得る、又は（ＩＩ－２）第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを含み得、ヘテロマー分子が第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み得、第２の抗原結合ドメインと第４の抗原結合ドメインが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成し得る。
任意選択で、第１のエピトープ、第２のエピトープ、第３のエピトープ、及び／若しくは第４のエピトープは、個別に互いに同じであるか、又は異なる。ある特定の実施形態では、第１のエピトープ、第２のエピトープ、第３のエピトープ、及び／又は第４のエピトープは全て互いに異なり得る。ある特定の実施形態では、第１のエピトープ、第２のエピトープ、第３のエピトープ、及び／又は第４のエピトープは全て同じであり得る。ある特定の実施形態では、第１のエピトープは、第２のエピトープ及び／又は第４のエピトープとは異なり得る第３のエピトープと同一である。特定の実施形態では、分子は、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位（例えば、第１の抗原結合ドメイン及び第３の抗原結合ドメインによって形成される）と、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位（例えば、第２の抗原結合ドメイン及び第４の抗原結合ドメインによって形成される）（ある特定の事例では、第３の抗原結合ドメイン及び第４の抗原結合部位ドメインは存在しない場合がある）とを含み得、第１のエピトープと第２のエピトープが互いに異なり得、任意選択で、分子を二重特異性抗体又は抗原結合抗体断片にし得る。
いくつかの実施形態では、（Ａ）第１のポリペプチドは、（ｉ）第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合ドメイン、（ｉｉ）第１のＣＨ１ドメイン若しくは第１のバリアントＣＨ１ドメイン、（ｉｉｉ）第１のＣＨ２ドメイン若しくは第１のバリアントＣＨ２ドメイン、及び／又は（ｉｖ）第１のＣＬドメインを更に含み得る。任意選択で、（ｉｉ）において、第１のＣＨ１ドメインは、野生型ＣＨ１アミノ酸配列を含み得る、又は野生型ＣＨ１アミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含む。任意選択で、（ｉｉｉ）において、第１のＣＨ２ドメインは、野生型ＣＨ２アミノ酸配列を含み得る、又は野生型ＣＨ２アミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。任意選択で、（ｉｖ）において、第１のＣＬドメインは、野生型ＣＬアミノ酸配列を含み得る、又は野生型ＣＬアミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、（Ｂ）第２のポリペプチドは、（ｉ）第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合ドメイン、（ｉｉ）第２のＣＨ１ドメイン若しくは第２のバリアントＣＨ１ドメイン、（ｉｉｉ）第２のＣＨ２ドメイン若しくは第２のバリアントＣＨ２ドメイン、及び／又は（ｉｖ）第２のＣＬドメインを更に含み得る。任意選択で、（ｉｉ）において、第２のＣＨ１ドメインは、野生型ＣＨ１アミノ酸配列を含み得る、又は野生型ＣＨ１アミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。任意選択で、（ｉｉｉ）において、第２のＣＨ２ドメインは、野生型ＣＨ２アミノ酸配列を含み得る、又は野生型ＣＨ２アミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。任意選択で、（ｉｖ）において、第２のＣＬドメインは、野生型ＣＬアミノ酸配列を含み得る、又は野生型ＣＬアミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、（Ａ）第１の抗原結合ドメインは、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ｓｃＦｖ、ナノボディ、若しくはそれらの組み合わせであり得る、及び／又は（Ｂ）第２の抗原結合ドメインは、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ｓｃＦｖ、ナノボディ、若しくはそれらの組み合わせであり得る。
任意選択で、第１の抗原結合ドメインと第３の抗原結合ドメインが第１のエピトープに特異的な抗原結合部位を形成する場合（例えば、上述の実施形態（Ｉ－２）において）、（ｉ）第１の抗原結合ドメインがＶＨであり得、第３の抗原結合ドメインがＶＬであり得る、又は（ｉｉ）第１の抗原結合ドメインがＶＬであり得、第３の抗原結合ドメインがＶＨであり得る。更に任意選択で、第２の抗原結合ドメインと第４の抗原結合ドメインが第２のエピトープに特異的な抗原結合部位を形成する場合（例えば、上述の実施形態（ＩＩ－２）において）、（ｉ）第２の抗原結合ドメインがＶＨであり、第４の抗原結合ドメインがＶＬである、又は（ｉｉ）第２の抗原結合ドメインがＶＬであり、第４の抗原結合ドメインがＶＨである。
いくつかの実施形態では、分子は、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であり得、任意選択で、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、図２～８のいずれか１つに示される構造を含み得、任意選択で、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、ＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４を含む。
したがって、更に別の態様では、多重特異性抗体及び抗原結合抗体断片も本明細書に提供され、任意選択で、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、ＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４を含む。多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、上述の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む分子のうちのいずれかにより得、更に任意選択で、二重特異性であり得る。
更に別の態様では、前述のうちのいずれかをコードするポリヌクレオチドが本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、かかるポリヌクレオチド（単数又は複数）は、（ｉ）上述の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド若しくはかかる第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドのうちのいずれか、（ｉｉ）上述のポリペプチドのうちのいずれか、（ｉｉｉ）上述の分子のうちのいずれか、及び／又は（ｉｖ）上述の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片のうちのいずれかをコードし得る。
更に別の態様では、上述のいずれかのポリヌクレオチド（単数又は複数）を含むベクターが本明細書に提供される。
更に別の態様では、（ｉ）上述の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのうちのいずれか、（ｉｉ）上述のポリペプチドのうちのいずれか、（ｉｉｉ）上述の分子のうちのいずれか、（ｉｖ）上述の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片のうちのいずれか、（ｖ）上述のいずれかのポリヌクレオチド（単数若しくは複数）、及び／又は、（ｖｉ）上述のベクターのうちのいずれかを含み得る細胞が本明細書に提供される。
更に別の態様では、前述のうちのいずれかを含む組成物が本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、組成物は、（Ｉ）（ｉ）上述の第１のバリアントＣＨ３ドメイン若しくはかかる第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドのうちのいずれか、（ｉｉ）上述のポリペプチドのうちのいずれか、（ｉｉｉ）上述の分子のうちのいずれか、（ｉｖ）上述の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片のうちのいずれか、（ｖ）上述のいずれかのポリヌクレオチド（単数若しくは複数）、（ｖｉ）上述のベクターのうちのいずれか、及び／又は（ｖｉｉ）上述の細胞のうちのいずれかと、（ＩＩ）薬学的に又は診断的に許容される担体とを含み得る。
別の態様では、例えば、ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリ又はＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリであり得る、ＣＨ３ドメインライブラリを生成する方法、及びかかる方法を使用して生成されたライブラリが本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリを生成する方法は、インシリコ又はインビトロで、ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチド内の１つ以上の所定のヌクレオチド位置に変異を組み込むこと又はそれらの位置の核酸を無作為化することを含み得、１つ以上の所定のヌクレオチド位置が、１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置のアミノ酸をコードするコドン内にある。
いくつかの実施形態では、所定のＣＨ３ドメイン位置のうちの１つ以上は、ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在し得るか又はそれに近接して存在し得る。いくつかの事例では、ＣＨ３ドメイン位置は、ＣＨ３ドメイン位置のアミノ酸残基が、以下：（ｉ－１）ＣＨ３単量体（すなわち、ＣＨ３が別のＣＨ３ドメインと対合されていない）形態での側鎖溶媒露出表面積（ＳＡＳＡ）が１５％以上である、（ｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態である場合、約８．２Å以下の対合ＣＨ３ドメインの原子が存在する、及び（ｉ－３）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態である場合、残基が対合ＣＨ３ドメインから離れて向いていない又は溶媒に露出していない、を満たす場合、ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するか又はそれに近接して存在するとみなされ得る。いくつかの実施形態では、所定のＣＨ３ドメイン位置のうちの１つ以上は、ＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測され得る。いくつかの事例では、かかる予測は、インシリコ又はインビトロで行われ得る。いくつかの事例では、ＣＨ３ドメイン位置は、ＣＨ３ドメイン位置が、以下：（ｉｉ－１）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するとみなされるＣＨ３ドメイン位置に対して第１、第２、若しくは第３の隣接位置である、及び／又は（ｉｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在する対合ＣＨ３ドメインのＣＨ３ドメイン位置から約８．２Å以下の鎖間ベータ炭素－ベータ炭素距離（グリシンの場合、アルファ炭素を代わりに使用した）を有する、を満たす場合、ＣＨ３ドメイン位置がＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測され得る。
いくつかの実施形態では、所定のＣＨ３ドメイン位置のうちの１つ以上は、ＥＵ番号付けに従う３６４位、３６６位、３６８位、３７０位、３９９位、４００位、４０５位、４０７位、及び／又は４０９位から選択され得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、ＣＨ３－ＣＨ３界面位置から選択され得、ＣＨ３－ＣＨ３界面位置は、（１）ＣＨ３モノマー中のアミノ酸側鎖溶媒露出表面積（ＳＡＳＡ）が１５％以上である、（２）鎖間距離が８．２Å以下である、及び（３）アミノ酸側鎖が、パートナー鎖ら離れて向いていない又は溶媒に露出していない（手作業での検査によって評価される基準）、及び（３）、アミノ酸位置として定義される。
いくつかの実施形態では、変異を１つ以上の所定のヌクレオチド位置に組み込むこと又はそれらの位置の核酸を無作為化することは、縮重コドン、任意選択で、６個の天然に存在するアミノ酸（Ｄ、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｋ、及びＮ）を表す縮重ＲＭＷコドン、又は２０個全ての天然に存在するアミノ酸残基を表す縮重ＮＮＫコドンを導入することを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリは、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを特定するために使用され得、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとは少なくとも１つのアミノ酸が異なる第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する。
いくつかの実施形態では、１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、（ｉ）３６６位、（ｉｉ）３６６位及び４０７位、（ｉｉｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、（ｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、（ｖ）３６８位、（ｖｉ）４０７位、（ｖｉｉ）３６６位及び３６８位、（ｖｉｉｉ）３６６位及び４０９位、（ｉｘ）３６８位及び３７０位、（ｘ）３６８位及び４０７位、（ｘｉ）３９９位及び４０５位、（ｘｉｉ）４００位及び４０９位、（ｘｉｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、（ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び３７０位、（ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、（ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、（ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、（ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、（ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、（ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は（ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び位４０９を含み得るか又はそれからなり得、前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、前述の方法のうちのいずれかによって生成されたＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリも本開示によって包含される。
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリを生成する方法は、インシリコ又はインビトロで、上述のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリのうちのいずれかの複数のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドに対応する複数のＣＨ３ドメインポリペプチドを得ることを含み得る。
代替的に、いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリを生成する方法は、インシリコ又はインビトロで、複数のＣＨ３ドメインポリペプチド中の１つ以上の所定のＣＨ３ドメインアミノ酸位置に置換を組み込むことを含み得る。
かかる実施形態では、１つ以上の所定のＣＨ３ドメインアミノ酸位置のうちの１つ以上は、（ｉ）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在し得るか又はそれに近接して存在し得、任意選択で、ＣＨ３ドメイン位置のアミノ酸残基が、以下：（ｉ－１）ＣＨ３単量体形態での側鎖溶媒露出表面積（ＳＡＳＡ）が１５％以上である、（ｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、約８．２Å以下の対合ＣＨ３ドメインの原子が存在する、及び（ｉ－３）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、残基が対合ＣＨ３ドメインから離れて向いていない、を満たす場合、ＣＨ３ドメイン位置がＣＨ３－ＣＨ３界面に存在する又はそれに近接して存在するとみなされる、（ｉｉ）ＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測され得、任意選択で、予測がインシリコ又はインビトロで行われ、更に任意選択で、ＣＨ３ドメイン位置が、以下、（ｉｉ－１）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するＣＨ３ドメイン位置に対して第１、第２、若しくは第３の隣接位置にある、及び／又は（ｉｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在する対合ＣＨ３ドメインのＣＨ３ドメイン位置から約８．２Å以下の鎖間ベータ炭素－ベータ炭素距離を有する、を満たす場合、ＣＨ３ドメイン位置がＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測される、並びに／又は（ｉｉｉ）ＥＵ番号付けに従う３６４位、３６６位、３６８位、３７０位、３９９位、４００位、４０５位、４０７位、及び／又は４０９位から選択され得る。
任意選択で、かかるＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリは、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを特定するためのものであり得、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとは少なくとも１つのアミノ酸が異なる、任意選択で、少なくとも１つのアミノ酸置換が異なる第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する。
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインライブラリのＣＨ３ドメインは、所定の数のＣＨ３ドメインアミノ酸置換を含み得る。ある特定の実施形態では、所定の数は、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上；１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、若しくは２以下；１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４；１～３；１～２；及び／又は１、２、３、４、若しくは５であり得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、（ｉ）３６６位、（ｉｉ）３６６位及び４０７位、（ｉｉｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、（ｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、（ｖ）３６８位、（ｖｉ）４０７位、（ｖｉｉ）３６６位及び３６８位、（ｖｉｉｉ）３６６位及び４０９位、（ｉｘ）３６８位及び３７０位、（ｘ）３６８位及び４０７位、（ｘｉ）３９９位及び４０５位、（ｘｉｉ）４００位及び４０９位、（ｘｉｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、（ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び３７０位、（ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、（ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、（ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、（ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、（ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、（ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は（ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び位４０９を含み得るか若しくはそれからなり得、前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
前述の方法のうちのいずれかによって生成されたＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリも本開示によって包含される。
別の態様では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを特定する方法であって、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する、方法が本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）（ａ－１）野生型又はバリアントＣＨ３ドメインを各々含む第１のポリペプチド又は第１のポリペプチドのセット及び（ａ－２）野生型又はバリアントＣＨ３ドメインを各々含むポリペプチドの第２のセット又は第２のポリペプチドのセットの複数セットを提供するステップであって、任意選択で、（ａ－１）及び（ａ－２）の複数のセットがインシリコ又はインビトロで提供される、提供するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）の複数のセットのうちの１つ以上における第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのＣＨ３ドメイン間の結合又は対合優先度（予測される結合強度など）を定量化するステップであって、任意選択で、定量化がインシリコ及び／又はインビトロで行われ、更に任意選択で、定量化が、任意選択で、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、及び／又はフローサイトメトリーにより、ステップ（ａ）の複数のセットのうちの１つ以上におけるＣＨ３ドメインによって形成されるＣＨ３ドメインホモ二量体及びＣＨ３ドメインヘテロ二量体の量をインビトロで定量化することを含む、定量化するステップと、（ｃ）ヘテロ二量体の所望の結合若しくは対合優先度、任意選択で、所望の結合強度及び／若しくは所望のパーセンテージ、更に任意選択で、参照バリアントＣＨ３ドメインポリペプチドセットと比較して、ＣＨ３ドメインヘテロ二量体の同等以上の結合若しくは対合優先度及び／又はパーセンテージを提供する第１のバリアントＣＨ３ドメイン及び第２のバリアントＣＨ３ドメインの１つ以上のセットを選択するステップと、を含み得る。第１のバリアントＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインは、任意選択で所定のＣＨ３ドメイン位置で、少なくとも１つのアミノ酸、任意選択で１つのアミノ酸置換が異なり得る。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドのＣＨ３ドメインポリペプチドは、本明細書に記載のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリのうちのいずれかによる第１のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られ得る、又は本明細書に開示されるＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリのうちのいずれかによる第１のＣＨ３ドメインライブラリから発現され得る。
いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドのＣＨ３ドメインポリペプチドは、本明細書に記載のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリのうちのいずれかによる第２のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られ得る、又は本明細書に開示されるＣＨ３ドメインライブラリのうちのいずれかによる第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現され得る。
任意選択で、（Ｉ）第１のポリペプチドのＣＨ３ドメインが置換Ｓ３５４Ｃを含み得、第２のポリペプチドのバリアントＣＨ３ドメインが置換Ｙ３４９Ｃを含み得る。代替的に、（ＩＩ）第１のポリペプチドのＣＨ３ドメインが置換Ｙ３４９Ｃを含み得、第２のポリペプチドのバリアントＣＨ３ドメインが置換Ｓ３５４Ｃを含み得る。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドのＣＨ３ドメインポリペプチドが上述の第１のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られる、又は上述の第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現される場合、第２のポリペプチドのＣＨ３ドメインポリペプチドは、上述の第２のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られる、又は上述の第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現され、第１のライブラリ及び第２のライブラリにおける１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置の組み合わせは、例えば、以下の通りであり得る。
本方法のある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、４０７位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び４０７位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、４０７位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び４０７位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位及び３７０位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位及び３７０位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、４００位及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３９９位及びＦ４０５位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３９９位及び４０５位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチド位置は、４００位及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６４位、４０７位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３６８位、及び３７０位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３６８位、及び３７０位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６４位、４０７位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６４位、３６６位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３６８位、及び４０７位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３６８位、及び４０７位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６４位、３６６位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び３６８位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、４０７位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、４０７位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位及び３６８位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位及び４０７位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６４位、３６６位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインライブラリポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６４位、３６６位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位及び４０７位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３９９位、及び４０５位を含み得るか又はそれからなり得、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、４００位、４０７位、及び４０９位；３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位；又は３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位を含み得るか又はそれからなり得る。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、４００位、４０７位、及び４０９位；３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位；又は３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３９９位、及び４０５位を含む。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３９９位、４０５位、及び４０７位；３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位；又は３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位を含む。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３９９位、４０５位、及び４０７位；３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位；又は３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位を含むか又はそれからなり、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位を含むか又はそれからなる。
ある特定の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、第２のＣＨ３ドメインポリペプチド又はドメインコードポリヌクレオチドライブラリの１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置は、３６８位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなる。
前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
本方法のある特定の実施形態では、（ａ－１）第１のポリペプチドが第１の標識を含むか又はそれに連結され、（ａ－２）第２のポリペプチドが第２の標識を含み得るか又はそれに連結され得る。いくつかの事例では、定量化ステップ（ｂ）は、第１の標識及び／又は第２の標識を検出することを含み得る。
本方法の特定の実施形態では、定量化ステップ（ｂ）は、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、及び／又はフローサイトメトリーのうちの少なくとも１つを含み得る。
ある特定の実施形態では、特定する方法は、ステップ（ｃ）で選択された第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのセットを含む抗体の１つ以上の特性に基づいて、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを選択するステップを更に含み得る。例示的な特性には、（ｉ）（ｉ－１）任意選択で、１つ以上の細胞型、任意選択で哺乳類細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞、酵母細胞、昆虫細胞、並びに／又は植物細胞で評価される産生収率、及び／又は（ｉ－２）任意選択でプロテインＡ親和性精製を含む、１つ以上の抗体精製法に対する適合性、（ｉｉ）任意選択で、クロマトグラフィー、任意選択でサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）又は電気泳動、任意選択でＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して定量化される、凝集の程度、任意選択で完全サイズ抗体の多量体の存在、（ｉｉｉ）任意選択で、ＬＣ－ＭＳを使用して評価される、ＣＨ１ドメイン間及び／若しくはＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間の正しい対合の速度、任意選択で正しい対合、（ｉｖ）任意選択で、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）及び／若しくは示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、並びに／又は機器、任意選択でＵｎｃｌｅ（登録商標）を使用して測定される、融解温度（Ｔｍ）及び／又は凝集温度（Ｔａｇｇ）、任意選択でＴａｇｇ２６６、（ｖ）等電点（「ｐＩ」）、（ｖｉ）任意選択で、ＷＯ２０１４／１７９３６３に記載の方法で測定される、多重特異性試薬（「ＰＳＲ」）との相互作用のレベル、（ｖｉｉ）任意選択で、疎水性相互作用クロマトグラフィー（「ＨＩＣ」）を使用して、任意選択でＥｓｔｅｐ Ｐ，ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１５ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；７（３）：５５３－５６１に記載されるように測定される、抗体の疎水性相互作用、（ｖｉｉｉ）任意選択で、（ｖｉｉｉ－１）親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）により、任意選択でＬｉｕ Ｙ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．Ｍａｒ－Ａｐｒ ２０１４；６（２）：４８３－９２に記載されるように、若しくは（ｖｉｉｉ－２）動的光散乱（ＤＬＳ）により測定される、自己相互作用、（ｉｘ）高若しくは低ｐＨストレスに対する安定性、（ｘ）溶解性、（ｘｉ）生産コスト及び／若しくは時間、（ｘｉｉ）他の安定性パラメータ、（ｘｉｉｉ）保存可能期間、（ｘｉｖ）インビボ半減期、並びに／又は（ｘｖ）免疫原性が含まれ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、いずれのかかる特性も、（ａ）バリアントＣＨ３ドメインセットを組み込む分子若しくは多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片構造の特定の構造、及び／又は（ｂ）特定の結合特異性を提供する可変ドメインに依存し得る。したがって、いくつかの事例では、特定の／所与の抗原特異性を有する多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片を設計することを企図する場合、複数のバリアントＣＨ３ドメインセットが特定の抗体若しくは抗体断片構造及び／又は抗原特異性設定で試験され得る。
したがって、別の態様では、所与の抗原特異性を有する多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片（例えば、本明細書に記載の構造のうちのいずれかを有する）に適した第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットについてスクリーニングする方法が本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの異なるセットを各々含む、複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片を発現させることと、（ｂ）ステップ（ａ）で発現された複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片の１つ以上の抗体特性に基づいて、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片に適した、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットを選択することと、を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗体特性は、上述の特性（ｉ）～（ｘｖ）から選択され得る。
更に別の態様では、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片などのヘテロマー分子を産生する方法が本明細書に提供される。かかる方法は、ｃＦＡＥによって推進され得る。任意選択で、ヘテロマー分子は、ＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４定常領域を含み得る。
いくつかの実施形態では、産生される又は産生されるよう意図されているヘテロマー分子は、（Ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第１のポリペプチド（又は当該第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチド）、及び
（Ｂ）第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第２のポリペプチド（当該第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む免疫グロブリン重鎖ポリペプチド）を含み得る。
かかるヘテロマー分子において、（ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドと第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが互いに優先的に対合し得、少なくとも１つのアミノ酸が異なり得る、及び（ｂ）第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドが、任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合され得る。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ｉ）還元環境又は条件（還元剤を含む溶液など）下で、（ｉ－１）任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合された第１のポリペプチドのうちの少なくとも２つを含む第１の親分子と、（ｉ－２）任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合された第２のポリペプチドのうちの少なくとも２つを含む第２の親分子とをインキュベートすることを含み得る。
このステップ（ｉ）では、ヘテロマー分子が多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片である場合、親分子は対応する単一特異性親抗体（ＩｇＧなど）であってもよく、親抗体は還元状態下でインキュベートされてもよく、親抗体の各々における重鎖間の対合（例えば、ジスルフィド結合）は解離されてもよいが、重鎖と軽鎖との間では解離されなくてもよい。
いくつかの実施形態では、本方法は、次いで、（ｉｉ）ステップ（ｉ）のインキュベーション産物を、低還元又は非還元環境下に配置することを含み得る。いくつかの実施形態では、還元剤が還元環境に存在する場合、このステップ（ｉｉ）は還元剤を除去してもよい。
産生方法のある特定の実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び／又は第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、本明細書に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメイン及び第２のバリアントＣＨ３ドメインのセットうちののいずれかであり得る。特定の実施形態では、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットは、本明細書で「ＫｉＨ」又は「ＲＧ－ＦＧ」と称されるセットではない場合がある。
ある特定の実施形態では、ヘテロマー分子は、以下の特徴：（Ａ）第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを更に含む、（Ｂ）第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを更に含む、（Ｃ）ヘテロマー分子が、第３の抗原結合ドメインを任意選択で含む第３のポリペプチドを更に含み、任意選択で、第３のポリペプチドが第１のポリペプチドに結合されているか若しくはそれと対合されている、及び／又は（Ｄ）ヘテロマー分子が、第４の抗原結合ドメインを任意選択で含む第４のポリペプチドを更に含み、任意選択で、第４のポリペプチドが第２のポリペプチドに結合されているか又はそれと対合されている、のうちの１つ以上を含み得る。
産生方法のある特定の実施形態では、ヘテロマー分子は、（Ｃ）第３の抗原結合ドメインを任意選択で含む第３のポリペプチド、及び／又は（Ｄ）第４の抗原結合ドメインを任意選択で含む第４のポリペプチド、を更に含み得る。
産生方法のある特定の実施形態では、ヘテロマー分子は、任意選択で図２～８に示される構造のうちのいずれかを含み得る、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であり得る。
特定の実施形態では、（ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｂ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｃ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、（ｄ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、（ｅ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、又は（ｆ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、３４９位のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃであり、３５４位のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃである。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
更なる実施形態では、（ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなる、（ｂ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなる、（ｃ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、（ｄ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなる、（ｅ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、又は（ｆ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなる。前述の各々において、置換位置は、ＥＵ番号付けに従う。
産生方法のある特定の実施形態では、ヘテロマー分子は、以下の特徴（Ｉ）及び（ＩＩ）のうちの１つ以上を含む多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であり得る。
（Ｉ）（Ｉ－１－ｉ）第１のポリペプチドが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する第１の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）ヘテロマー分子が、第３のエピトープに特異的な第３の抗原結合部位を形成する第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み、任意選択で、第１のエピトープが第３のエピトープと同じであるか若しくは異なる、又は（Ｉ－２）第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを含み、ヘテロマー分子が第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み、第１の抗原結合ドメイン及び第３の抗原結合ドメインが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する、及び／又は
（ＩＩ）（ＩＩ－１－ｉ）第２のポリペプチドが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する第２の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）ヘテロマー分子が、第４のエピトープに特異的な第４の抗原結合部位を形成する第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み、任意選択で、第２のエピトープが第４のエピトープと同じであるか若しくは異なる、又は（ＩＩ－２）第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを含み、ヘテロマー分子が第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み、第２の抗原結合ドメインと第４の抗原結合ドメインが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉ）でのインキュベートは、約１５℃～約４０℃、約２０℃～約４０℃、約２５℃～約３５℃、約２８℃～約３２℃、若しくは約２９℃～約３１℃、又は約３０℃の温度で行われ得る。
ある特定の実施形態では、ステップ（ｉ）でのインキュベートは、約３０分～約２０時間、約１時間～約１５時間、約２時間～約１０時間、約３時間～約７時間、若しくは約４時間～約６時間、又は約５時間行われ得る。
特定の実施形態では、ステップ（ｉ）でのインキュベートは、約３０℃で約５時間行われ得る。
いくつかの実施形態では、還元環境は、少なくとも１つの還元剤、任意選択で少なくとも１つの弱還元剤を含み得る。
ある特定の実施形態では、還元環境は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、β－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、Ｌ－システイン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、又は亜ジチオン酸塩から選択される少なくとも１つの還元剤を含み得る。
ある特定の実施形態では、還元剤は、グルタチオンではない場合がある。
ある特定の実施形態では、還元環境は、約２５～約１２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０～約８０ｍＭ、若しくは約７５ｍＭの２－ＭＥＡ、約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭのＢＭＥ、約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭのＬ－システイン、約１５～約４００μＭ、約２０～約２００μＭ、約２５～約１００μＭ、約３０～約７０μＭ、若しくは約５０μＭのＤＴＴ、又は２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭの亜ジチオン酸塩から選択される少なくとも１つの還元剤を含み得る。
特定の実施形態では、還元環境は、少なくとも２－ＭＥＡを任意選択で約７５ｍＭ含み得る。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉ）でインキュベートされる第１の抗体及び／又は第２の抗体において、第１のポリペプチドのうちの少なくとも２つが、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに結合若しくは対合され得る、及び／又は第２のポリペプチドのうちの少なくとも２つが、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに結合若しくは対合され得る。
いくつかの実施形態では、第１の抗体及び／又は第２の抗体は、哺乳類細胞、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、若しくは細菌細胞で産生され得る。
いくつかの実施形態では、第１の抗体及び／又は第２の抗体は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞若しくはヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞で産生され得る。
産生方法のいくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）での配置は、緩衝液交換によって行われ得、任意選択で、緩衝液がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に交換され得る。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）での配置は、任意選択でＰＢＳへの、脱塩による緩衝液交換によって行われ得る。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）での配置は、任意選択でＰＢＳへの、透析濾過による緩衝液交換によって行われ得る。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）での配置は、酸化剤の添加によって行われ得る。
いくつかの実施形態では、産生方法は、（ｉｉｉ）低還元又は非還元環境下でステップ（ｉｉ）の産物をインキュベートすることを更に含み得る。
ある特定の実施形態では、インキュベートは、約１℃～約２０℃、約２℃～約１０℃、約３℃～約５℃、又は約４℃の温度で行われ得る。ある特定の実施形態では、インキュベートは、約１２時間～約１５４時間、約２４時間～約９６時間、約３６時間～約７２時間、又は約４８時間行われ得る。特定の実施形態では、インキュベートが行われ得、インキュベートは、約４度で約４８時間行われ得る。
いくつかの実施形態では、産生方法は、（ｉｖ）ステップ（ｉｉ）及び／若しくはステップ（ｉｉｉ）の産物中の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片の量を分析すること、並びに／又はステップ（ｉｉ）及び／若しくはステップ（ｉｉｉ）の産物から多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片を精製することを更に含み得る。
特定の実施形態では、分析及び／又は精製は、クロマトグラフィー、任意選択でＬＣ－ＭＳ、ＩＥＸ、及び／又はＳＥＣを介して行われる。
更に別の態様では、本明細書に記載の産生方法によって産生された多重特異性（例えば、二重特異性）抗体及び抗原結合抗体断片などのヘテロマー分子が本明細書に提供される。任意選択で、かかる多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、ＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４を含み得る。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、本明細書に記載の又は図２～８に示される構造のうちのいずれかに従う構造を含み得る。
更に別の態様では、（ｉ）上述のヘテロマー分子のうちのいずれかの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチド、並びに／又は（ｉｉ）上述のヘテロマー分子のうちのいずれか、をコードするポリヌクレオチド（単数又は複数）が本明細書に提供される。
別の態様では、かかるポリヌクレオチド（単数又は複数）を含むポリヌクレオチドベクター（単数又は複数）が本明細書に提供される。
別の態様では、（ｉ）上述のヘテロマー分子のうちのいずれかの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチド、（ｉｉ）上述のヘテロマー分子のうちのいずれか、（ｉｉｉ）（ｉ）及び／若しくは（ｉｉ）をコードするポリヌクレオチド（単数若しくは複数）のうちのいずれか、並びに／又は（ｖｉ）（ｉｉｉ）のうちのいずれか１つ以上を含むベクター（単数又は複数）、を含む細胞が本明細書に提供される。
別の態様では、（Ｉ）（ｉ）上述のヘテロマー分子のうちのいずれかの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチド、（ｉｉ）上述のヘテロマー分子のうちのいずれか、（ｉｉｉ）（ｉ）及び／若しくは（ｉｉ）をコードするポリヌクレオチド（単数若しくは複数）のうちのいずれか、並びに／又は（ｖｉ）（ｉｉｉ）のうちのいずれか１つ以上を含むベクター（単数若しくは複数）、並びに／又は（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）のうちのいずれか１つ以上を含む細胞と、（ＩＩ）薬学的又は診断的に許容可能な担体と、を含む組成物が本明細書に提供される。
別の態様では、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片の産生に適した第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットについてスクリーニングする方法が本明細書に更に提供される。かかる多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、上述のヘテロマー分子を生成する方法を使用して生成されたヘテロマー分子のうちのいずれかにより得る。かかる多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片は、目的とする所与の抗原特異性を有し得る。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）上述のヘテロマー分子を産生する方法を使用して、複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片を産生することを含み得る。
ある特定の実施形態では、複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片は各々、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの異なるセットを含み得る。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ｂ）ステップ（ａ）で産生された複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片の１つ以上の特性に基づいて、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片の産生に適した、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットを選択することを含み得る。
ある特定の実施形態では、１つ以上の特性のうちの少なくとも１つは、上述の特性（ｉ）～（ｘｖ）のうちのいずれかから選択され得る。
ヘテロ二量体化ＣＨ３ドメインの利点を全体的に示す概略図を提供する。目的とする二重特異性抗体は、（ａ）重鎖Ａ（ＶＨ（黒色塗りつぶし）を含む）及び軽鎖Ａ（ＶＬ（水平方向ストライプ模様）を含む）を含むエピトープＡに特異的な半抗体、及び（ｂ）重鎖Ｂ（ＶＨ（チェック模様）を含む）及び軽鎖Ｂ（ＶＬ（垂直方向ストライプ模様）を含む）を含むエピトープＢに特異的な半抗体を含む。 図１Ａは、重鎖Ａ、軽鎖Ａ、重鎖Ｂ、及び軽鎖Ａが全て野生型定常ドメインを含む場合のかかる二重特異性抗体の例示的な産生を示す。かかる４つの鎖がおよそ１：１：１：１の比率で共発現される、共提供される、又は混合されると、重鎖間対合及び重鎖間対合に完全な乱雑状態が存在する場合、１０個の異なる抗体産物を、示されるそれぞれのパーセンテージで生成することができる。産物のおよそ１２．５％は、目的とする二重特異性抗体（ボックス囲み）に相当する。 図１Ｂは、重鎖ＡのＣＨ３ドメイン（ＣＨ３ドメインＡ（斜め線ストライプ模様））及び重鎖ＢのＣＨ３ドメイン（ＣＨ３ドメインＢ（点線））が、互いに異なり、かつヘテロ二量体（すなわち、ＣＨ３ドメインＡとＣＨ３ドメインとの間のヘテロ二量体）を優先的に形成するバリアントＣＨ３ドメインであることを除いて、図１Ａと同様の二重特異性抗体の例示的な産生を示す。既存の重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化技術には、表１に列記されるもの、例えば、「ノブ・イントゥ・ホール」技術（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が含まれる。かかる重鎖Ａ、軽鎖Ａ、重鎖Ｂ、及び軽鎖Ｂがおよそ１：１：１：１の比率で共発現される、共提供される、又は混合されると、ＣＨ３ドメインＡ及びＣＨ３ドメインＢが重ヘテロ対合を排他的に許容する場合、４つの異なる抗体産物を、示されるそれぞれのパーセンテージで生成することができる。産物のおよそ２５％は、目的とする二重特異性抗体（ボックス囲み）に相当する。 図１Ｃは、既に形成された半抗体のうちの２つから（ＩｇＧ、ＩｇＥ、又はＩｇＤの）完全サイズ抗体を産生する場合のヘテロ二量体化ＣＨ３ドメインの利益を全体的に示す、２つの概略図（左及び右）を提供する。かかる産生方法には、Ｆａｂアーム交換（ＦＡＥ）又は制御されたＦＡＥ（ｃＦＡＥ）に依存する方法が含まれるが、これらに限定されない。二重特異性抗体は、エピトープＡに特異的な半抗体とエピトープＢに特異的な半抗体を組み合わせることによって産生され得る。重鎖Ａ及び重鎖Ｂの両方が野生型ＣＨ３ドメインを含む場合（左の概略図）、産物の５０％のみ（半抗体間対合に完全な乱雑状態が存在する場合）が目的とする二重特異性抗体である。しかしながら、右のスキームに示すように、ＣＨ３ドメインＡ（斜め線ストライプ模様）とＣＨ３ドメインＢ（点線）バリアントＣＨ３ドメインが互いに異なり、かつＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体（すなわち、ＣＨ３ドメインＡとＣＨ３ドメインＢとの間のヘテロ二量体）を優先的に形成する場合、産物は目的とする二重特異性抗体により偏っている。ヘテロ二量体のみを形成し、ホモ二量体を形成しない最も理想的なＣＨ３ドメインセットでは、産物の１００％が目的とする二重特異性抗体になる。１００％ではなくとも、５０％超でヘテロ二量体を提供するバリアントＣＨ３ドメインにより、二重特異性抗体の効率的な製造が促進される。
例示的な多重特異性抗体において、黒色塗りつぶしは、重鎖Ａの（エピトープＡに特異的な）ＶＨ（ＶＨドメインＡ）であり、水平方向ストライプ模様は、軽鎖Ａの（エピトープＡに特異的な）ＶＬ（ＶＬドメインＡ）であり、チェック模様は、重鎖Ｂの（エピトープＢに特異的な）ＶＨ（ＶＨドメインＢ）であり、垂直方向ストライプ模様は、軽鎖Ｂの（エピトープＢに特異的な）ＶＬ（ＶＬドメインＢ）であり、斜め線ストライプ模様は、重鎖Ａ中のバリアントＣＨ３ドメイン（ＣＨ３ドメインＡ）であり、点線は、重鎖Ｂ中のバリアントＣＨ３ドメイン（ＣＨ３ドメインＢ）であり、ＣＨ３ドメインＡとＣＨ３ドメインＢがＣＨ３ヘテロ二量体（すなわち、５０％超のＣＨ３ヘテロ二量体をもたらす）を優先的に形成する。これらの定義は、別段の記載がない限り、全ての図に適用される。
本明細書に開示されるバリアントＣＨ３ドメインが使用され得る、様々な多重特異性抗体構造の例示的かつ非限定的な実施形態を提供する。図２～８では、別段の指示がない限り、以下が適用される：（１）各ドメインが長方形として提示され、その中のテキストがドメイン名（例えば、ＣＨ３、ＶＨ１など）を示す、（２）互いに結合された複数のドメインのセットが、ポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチド、軽鎖ポリペプチドなど）を表す、（３）ポリペプチド内のドメインの方向が、Ｎ末端からＣ末端への、ドメイン名を示すテキストの方向に従う、（４）リンカー、ヒンジ、又はジスルフィド結合が図に明示されていなくとも、恐らく抗原結合部位の正確な形成を可能にするために、リンカー又はヒンジが必要に応じてドメイン間で使用されてもよく、ジスルフィド結合がポリペプチド間（及び／又はドメイン内）に存在してもよい、（５）図に示すＣＨ２ドメイン及び／又はＣＨ３ドメインが可能な限り省略されてもよく、適切な場合、ヒンジ又はリンカーで置換されてもよい、（６）斜め線ストライプ模様及び点線が、本明細書に開示されるバリアントＣＨ３ドメインであり得る、ＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するバリアントＣＨ３ドメインである、（７）パターンを有しない（すなわち、白抜きの）長方形は、対応する野生型配列を個別に含み得るか又は野生型配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含み得るドメインである、（８）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインが、個別に任意の（重鎖）アイソタイプのものであってもよい、（９）２つ以上のＣＨ１ドメインが構造内に存在する場合、ＣＨ１ドメインが同じアイソタイプのものであっても同じアイソタイプのものでなくてもよく、２つ以上のＣＨ２ドメインが構造内に存在する場合、ＣＨ２ドメインが同じアイソタイプのものであっても同じアイソタイプのものでなくてもよく、２つ以上のＣＨ３ドメインが構造内に存在する場合、ＣＨ３ドメインが同じアイソタイプのものであっても同じアイソタイプのものでなくてもよい、（１０）軽鎖定常（ＣＬ）ドメインが、カッパＣＬドメイン又はラムダＣＬドメインであってもよい、（１１）２つ以上のＣＬドメインが構造中に存在する場合、全てのＣＬドメインがカッパＣＬであってもよく、又は全てのＣＬドメインがラムダＣＬであってもよく、あるいは、１つのＣＬがカッパＣＬであってもよく、別のＣＬがラムダＣＬドメインであってもよい、（１２）カッパＣＬドメイン及びラムダＣＬドメインの両方が存在する場合、ＣＬドメインと対合されたＣＨ１ドメインが、いくつかの事例では、バリアントＣＨ１ドメインであってもよく、それらのうちの１つが、カッパＣＬに優先的に結合するバリアントＣＨ１であってもよく、別のＣＨ１ドメインが、ラムダＣＬに優先的に結合ＣＨ１するバリアントＣＨ１であってもよい（分子中にカッパＣＬ及びラムダＣＬ並びにカッパ優先ＣＨ１及びラムダ優先ＣＨ１を有することにより、効率的な製造が可能になる）、（１３）ＶＨ－１とＶＬ－１が第１のエピトープのための抗原結合部位を形成し、ＶＨ－２とＶＬ－２が第２のエピトープのための抗原結合部位を形成し、ＶＨ－３とＶＬ－３が第３のエピトープのための抗原結合部位を形成し、ＶＨ－４とＶＬ－４が第４のエピトープのための抗原結合部位を形成し、ＶＨ－５とＶＬ－５が第五のエピトープのための抗原結合部位を形成し、ＶＨ－６とＶＬ－６が第六のエピトープのための抗原結合部位を形成する、（１４）第１のエピトープ～第６のエピトープの全てが互いに異なってもよい、又は第１のエピトープ～第６のエピトープの全てが互いに異なっていなくてもよい、並びに（１５）所与のＶＨ－ＶＬ対において、ＶＨが単独で同族抗原（すなわち、ナノボディ）に十分な特異性を付与する場合、ＶＬが図に示されてなくとも、ＶＬが省略されもよい。 図２は、本明細書に開示されるバリアントＣＨ３ドメインが使用され得る、様々な多重特異性抗体構造の例示的かつ非限定的な実施形態を提供する。左上の抗体（ボックス囲み）は、ヒンジ又はジスルフィド結合が明示されていない、例示的な塩基性完全サイズ二重特異性抗体である。箱詰めされた抗体は、例えば、ＣＨ１－１とＣＨ２－１との間及びＣＨ１－２とＣＨ２－２との間にヒンジを含んでもよく、ジスルフィド結合がヒンジ間に存在してもよい（上部中央）。代替的に、ボックスで囲まれた抗体は、例えば、ＣＨ１－１とＣＨ２－１との間及びＣＨ１－２とＣＨ２－２との間にヒンジを含んでもよく、ジスルフィド結合がヒンジ間、ＣＬ－１とヒンジとの間、及びＣＬ－２とヒンジとの間に存在してもよい（右上）。ヒンジ及びジスルフィド結合、例えば、上部中央及び右上の抗体構造に示されるものは、明示されていなくとも、図に示される及び本明細書に記載の任意の構造に存在してもよい。ボックスで囲まれた抗体のいくつかのバリアントでは、ＣＨ２ドメインが存在しなくてもよい（中央左）、又はＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメインが存在しなくてもよく（左下）、ヒンジ及びジスルフィド結合が、中央真ん中、中央右、中央下、又は右下に示すように存在してもよい。明示されていないが、図３～８の構造又はその変形のうちのいずれかにおいて、任意のＣＨ１ドメイン及び／又はＣＨ２ドメインが必要に応じて省略されてもよい。 図３は、図２に示す抗体構造の変形を提供する。図３Ａでは、ＶＨ位置及びＶＬ位置は、図２の構造と比較して変化している。図３Ｂでは、ＣＨ１位置及びＣＬ位置は、図２の構造と比較して変化している。図３に示す等価変形（ＶＨ－ＶＬ位置又はＣＨ１－ＣＬ位置を入れ替える）は、明示されていなくとも、必要に応じて、図３～８に示す任意の構造又はそれらの変形に更に適用されてもよい。 図４は、図２のボックスで囲まれた抗体構造の変形を提供する。具体的には、第３のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対及び第４のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対が異なる配向で重鎖及び軽鎖のＮ末端に付加される。第３のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対及び第４のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対の両方が示されているが、所望の場合、１つの対が付加されてもよい。図４に示す等価変形（１つ以上のＶＨ－ＶＬ対の付加）は、明示されていなくとも、必要に応じて、図３～８に示す任意の構造又はそれらの変形に更に適用されてもよい。 図５は、図２のボックスで囲まれた抗体構造の追加の変形を提供する。図４の構造と同様に、第３のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対及び第４のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対が異なる配向で付加され、軽鎖上のＶＨ及びＶＬの順序は図４の順序とは異なる。図４に示す等価変形（１つ以上のＶＨ－ＶＬ対の付加）は、明示されていなくとも、必要に応じて、図２～８に示す任意の構造又はそれらの変形に更に適用されてもよい。 図６は、図２のボックスで囲まれた抗体構造の更なる変形を提供する。具体的には、図６Ａ～６Ｄでは、第３のエピトープに特異的なｓｃＦｖ及び第４のエピトープに特異的なｓｃＦｖが付加される。２つのｓｃＦｖが示されているが、所望の場合、１つのｓｃＦｖが付加されてもよい。図６Ａでは、ｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に付加される。図６Ａの４つの構造は、各ｓｃＦｖ内のＶＨ－ＶＬ順序が異なる。図６Ｂでは、ｓｃＦｖが軽鎖のＣ末端に付加される。図６Ｂの４つの構造は、各ｓｃＦｖ内のＶＨ－ＶＬ順序が異なる。図６Ｃでは、ｓｃＦｖが重鎖のＮ末端に付加される。図６Ｃの４つの構造は、各ｓｃＦｖ内のＶＨ－ＶＬ順序が異なる。図６Ｄでは、ｓｃＦｖが軽鎖のＮ末端に付加される。図６Ｄの４つの構造は、各ｓｃＦｖ内のＶＨ－ＶＬ順序が異なる。図６Ａ～６Ｄには示されていないが、２つのｓｃＦｖが異なる位置に（例えば、重鎖のＣ末端に１つ及び軽鎖のＮ末端に１つ）付加されてもよい。図６Ｅでは、４つのｓｃＦｖが重鎖及び軽鎖のＮ末端に付加される。図６Ｃの４つの構造は、各ｓｃＦｖ内のＶＨ－ＶＬ順序が異なる。図６に示す等価変形（１つ以上のｓｃＦｖの付加）は、明示されていなくとも、必要に応じて、図２～８に示す任意の構造又はそれらの変形に更に適用されてもよい。 図７Ａ～７Ｂは、図２のボックスで囲まれた抗体構造の更なる変形を提供する。具体的には、第３のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対及び第４のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対が異なる配向で重鎖及び軽鎖のＣ末端に付加される。第３のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対及び第４のエピトープに特異的なＶＨ－ＶＬ対の両方が示されているが、所望の場合、１つの対のみが付加されてもよい。図７Ａ～７Ｂに示す等価変形（１つ以上のＶＨ－ＶＬ対の付加）は、明示されていなくとも、必要に応じて、図３～８に示す全ての他の構造又はそれらの変形に更に適用されてもよい。 図８Ａ～８Ｅは、本明細書に開示されるバリアントＣＨ３ドメインが使用されてもよく、かつ従来の抗体のＶＨ－ＶＬ抗原結合部位を含まないが、むしろｓｃＦｖのうちの１つ以上を含む、様々な多重特異性抗体断片構造の追加の例示的かつ非限定的な実施形態を提供する。図８Ａでは、左の抗体（ボックス囲み）は、第１のエピトープに特異的な（ＶＨ－１及びＶＬ－１を含む）ｓｃＦｖを含む第１の重鎖及び第２のエピトープに特異的な第２の（ＶＨ－２及びＶＬ－２を含む）ｓｃＦｖを含む第２の重鎖を含む、例示的な塩基性二重特異性抗体断片である。軽鎖は存在しなくてもよい。ＣＨ２ドメイン（中央）又はＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン（右）を欠くそれらのバリアントも提供する。図８Ｂ～８Ｅは、更なるｓｃＦｖを含む、図８Ａの抗体構造の更なる変形を提供する。図８Ｂでは、第３のエピトープに特異的な（ＶＨ－３及びＶＬ－３を含む）第３のｓｃＦｖ及び第４のエピトープに特異的な（ＶＨ－４及びＶＬ－４を含む）第４のｓｃＦｖが重鎖のＮ末端に付加される。図８Ｃでは、第３のエピトープに特異的な（ＶＨ－３及びＶＬ－３を含む）第３のｓｃＦｖ及び第４のエピトープに特異的な（ＶＨ－４及びＶＬ－４を含む）第４のｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に付加される。図８Ｄでは、ＣＬ－１を含む第１の軽鎖、ＣＬ－２を含む第２の軽鎖、第３のエピトープに特異的な（ＶＨ－３及びＶＬ－３を含む）第３のｓｃＦｖ、及び第４のエピトープに特異的な（ＶＨ－４及びＶＬ－４を含む）第４のｓｃＦｖが軽鎖のＮ末端に付加される。図８Ｅでは、第５のエピトープに特異的な（ＶＨ－５及びＶＬ－５を含む）第５のｓｃＦｖ及び第６のエピトープに特異的な（ＶＨ－６及びＶＬ－６を含む）第６のｓｃＦｖが重鎖のＣ末端に付加される。明示されていないが、ｓｃＦｖ内のＶＨ－ＶＬ順序は、所望の場合、入れ替えられてもよい。 ２つのヘテロ二量体技術（ＫｉＨ及びＥＷ－ＲＶＴ）を対照として評価した、実施例１におけるバリアントＣＨ３ドメイン選択概念実証（ＰＯＣ）研究を示す。図９Ａは、フローサイトメトリーによるヘテロ二量体優先バリアントＣＨ３ドメインの選択の概略図を提供する。高ＦＬＡＧ発現因子（ｅｘｐｒｅｓｓｏｒ）は、ＣＨ３ヘテロ二量体を含むより修飾されたＦｃを呈する。（ヘテロ二量体優先バリアントＣＨ３ドメインの発現を示す）抗ＦＬＡＧ抗体で例外的に高く染色されたライブラリ（ノブＨＩＳホールＦＬＡＧ：ＥＷＨＩＳＲＶＴＦＬＡＧ：ＷＴＨＩＳ－ＷＴＦＬＡＧ＝１：１：１０，０００）由来の集団を選択し、ソートする。図９Ｂは、対照ヘテロ二量体（ＫｉＨ及びＥＷ－ＲＶＴ）の濃縮を示した複数の選択ラウンドからの例示的なフロープロットを提供する。ノブＨＩＳホールＦＬＡＧ：ＥＷＨＩＳＲＶＴＦＬＡＧ：ＷＴＨＩＳ－ＷＴＦＬＡＧ＝１：１：１０，０００のバリアントＣＨ３ドメインライブラリを、２ラウンドにわたって高Ｆｌａｇ発現因子についてソートした。ラウンド１（Ｒ１）後の配列決定により、９１個中１個にＫｉＨ変異がもたらされた。ラウンド２（Ｒ２）後の配列決定により、９１個中２個にＫｉＨ変異及び２個にＥＷ－ＲＶＴ変異がもたらされた。 実施例２におけるバリアントＣＨ３ドメイン選択のサイクル１からの代表的なデータを示す。図１０Ａは、ＫｉＨアミノ酸位置（第１の重鎖内の３６６位、並びに第２の重鎖内の３６６位、３６８位、及び４０７位）が可変化されている、３つのライブラリ設計を提供する。第１のライブラリでは、ノブ位置及びホール位置の両方が可変化されており、ホール可変化を有する鎖がＦＬＡＧタグをコードし、ノブ可変化を有する鎖がＨＩＳタグをコードする。第２のライブラリでは、ノブ位置及びホール位置の両方が可変化されており、ホール可変化を有する鎖がＨＩＳタグをコードし、ノブ可変化を有する鎖がＦＬＡＧタグをコードする。第３のライブラリでは、ホール位置が可変化されているが、ノブ位置は可変化されていない。ホール可変化を有する鎖がＦＬＡＧタグをコードし、可変化を有しない鎖がＨＩＳタグをコードする。各ライブラリのＤＮＡ配列の変形を、部位飽和変異誘発（ＳＳＭ）を使用して提供する。黒地に白色のテキストの「Ｘ」は、可変化を表す。図１０Ｂは、第１のライブラリを使用して行った６選択ラウンドからの例示的なフロープロットを提供する。図１０Ｃは、第２のライブラリを使用した６選択ラウンドからの例示的なフロープロットを提供する。図１０Ｄは、第３のライブラリを使用した６選択ラウンドからの例示的なフロープロットを提供する。 特定されたバリアントＣＨ３ドメインの例示的なＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）分析を示す。図１１Ａ（左）は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）によるＣＨ３ヘテロ二量体検出の概略図を提供する。ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）を使用して、ＨＩＳｘ６タグ付きポリペプチドとＦＬＡタグ付きポリペプチドとの間の近接性により、ヘテロ二量体ＣＨ－ＣＨ３セットを含む修飾Ｆｃを特異的に検出することによって、Ｆｃ断片のヘテロ二量体化の相対度を決定した。図１１Ａ（右）は、どの鎖がＦＬＡＧタグを含んでいたかにかかわらず、既存のヘテロ二量体化バリアントＣＨ３ドメインセット（ＫｉＨ及びＥＷ－ＲＶＴ）とＷＴ ＣＨ３ドメインセットとの間の光子数の明らかな差異を示す、ＰＯＣセット中のいくつかの試料からの結果を提供する。図１１Ｂは、バリアントＣＨ３ドメイン陽性対照（ＫｉＨ及びＥＷ－ＲＶＴ、矢印で示す）、陰性（ＷＴ／ＷＴ、矢印で示す）対照、及び実施例２で特定されたバリアントＣＨ３ドメイン（矢印なしのバー）のＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値（光子数、バックグラウンドに対する倍数（ＦＯＢ）（「緩衝液のみ」、すなわち、Ｆｃなし、をバックグラウンドとして使用した））を示すグラフを提供する。本明細書で特定した特定されたバリアントＣＨ３ドメインのうちのいくつかは、同等又は優れたヘテロ二量体化を示した（ＥＷ－ＲＶＴの左のバーを参照されたい）。図１１Ｃは、フローサイトメトリーに基づく選択の最終ラウンド中にＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値を抗ＦＬＡＧ抗体染色に対してプロットしたグラフを提供し、良好な相関を示している。「Ｔ３６６Ｖ－ＨＩＳ；Ｔ３６６ Ｌ３６８ Ｙ４０７Ｖ－ＦＬＡＧ」の抗ＦＬＡＧ ＦＯＢ値及びＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＦＯＢ値は、それぞれ、６２２及び８６であった。「Ｔ３６６Ｖ－ＨＩＳ；Ｔ３６６ Ｌ３６８ Ｙ４０７Ｖ－ＦＬＡＧ」は、逆配向（すなわち、「Ｔ３６６ Ｌ３６８ Ｙ４０７Ｖ－ＨＩＳ Ｔ３６６Ｖ－ＦＬＡＧ」）でも見つかった。「Ｔ３６６ Ｌ３６８ Ｙ４０７Ｖ－ＨＩＳ Ｔ３６６Ｖ－ＦＬＡＧ」の抗ＦＬＡＧ ＦＯＢ値及びＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＦＯＢ値は、それぞれ、５８８及び３９であった。 バリアントＣＨ３ドメインの例示的なサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を示す。図１２Ａは、対照試料からの結果を提供する。図１２Ｂは、特定されたバリアントＣＨ３ドメインからの結果を提供する。試験した全てのＣＨ３セットが一様分布をもたらし、凝集が少ないことを意味した。 バリアントＣＨ３ドメインの例示的なイオン交換（ＩＥＸ）分析を示す。図１３Ａは、対照試料からの結果を提供し、異なる抗体種に対応するピークを示す。図１３Ｂは、特定されたバリアントＣＨ３ドメインからの出力の結果を提供する。ＣＨ３セットＶ－Ｖ、Ｌ－Ｖ、Ｌ－Ｍ、Ｉ－Ｆ、及びＷ－ＳＧは、ＥＷ－ＲＶＴのクロマトグラフと同様のクロマトグラフを示し、鋭い単一のピークを有する。図１３Ｃは、低いＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値を有する試料Ｗ－ＳＹ及びＳＥＬ－ＬのＳＥＣ及びＩＥＸデータを並列で提供する。低いＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値は、不良なＳＥＣ及びＩＥＸクロマトグラムと相関した。 実施例６のＨＥＫ２９３細胞における３５４／３４９ジスルフィド結合置換（Ｓ３５４Ｃ及びＹ３４９Ｃ）を付加したバリアントＣＨ３ドメインを含む二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の産生を示す。図１４Ａは、産生された異なる抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂの概略図を提供する。ニボルマブ（Ｎｉｖｏ）を対照として使用した。図１４Ｂは、各ＢｓＡｂの例示的なＳＥＣクロマトグラムを提供する。図１４Ｃは、各ＢｓＡｂの例示的なＩＥＸクロマトグラムを提供する。 その後のライブラリ生成及びスクリーニングを示す。図１５Ａは、ヘテロ二量体化バリアントＣＨ３ドメインをライブラリから濃縮した、選択ラウンドからの例示的なフロープロットを提供する。図１５Ｂは、界面にわたる接触率、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値、及びロゼッタスコアの改善を有するバリアントＣＨ３ドメインを濃縮するためのサイクル２ステップ１から得た４３０個のバリアントＣＨ３ドメインのセットに適用した選択基準を示す。配列を確認して、変異位置の多様性も確保した。図１５Ｃ及び図１５Ｄは、ｔ－ＳＮＥプロットを提供する。これらのプロットを使用して、更なる産生及び特徴付けのために選択したバリアントＣＨ３ドメインにおける置換の多様性を確保した。点は各々、置換位置のセットを表し、プロット上の互いに近い点は同様の置換位置を含む。 ４８個のバリアントＣＨ３ドメインのヘテロ二量体化及び安定性特徴付けを示す。このグラフでは、４８個のバリアントＣＨ３ドメイン及び対照について、単量体完全サイズ修飾Ｆｃ％（ＳＥＣにより測定したもの、非凝集修飾Ｆｃ％を示す）をヘテロ二量体修飾Ｆｃ％に対してプロットする。これらの結果に基づいて、表８に示す５つのバリアントＣＨ３ドメインセット（「指名」）をサイクル２出力として選択した。指名したクローンは、対照と同様のヘテロ二量体化及び安定性を示した。 ＨＥＫ２９３細胞で産生されたバリアントＣＨ３ドメインを含む例示的なＢｓＡｂの特徴付けを示す。図１７Ａは、産生された例示的な抗体の概略図を示す。バリアントＣＨ３ドメイン毎に、いくつかの異なる構造：３つの抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂ（１つは配向１であり、１つは配向２であり、１つは配向１であり、３５４／３４９置換をＣＨ３セットに更に付加した）、２つの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＢｓＡｂ（１つは配向１であり、１つは配向２である）、１つの抗ＨＥＬ／抗ＢＣＭＡ ＢｓＡｂ（抗ＢＣＭＡ結合部分がナノボディである）を産生した。配列を付録表Ａ～Ｄに提供する。点線ボックス内の構造を比較して、ヘテロ二量体化効率を評価した。図１７Ｂは、ヘテロ二量体化がＣＨ３配向と可変領域との間で一貫していることを示す。抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂ（３５４／３４９置換を欠く）のヘテロ二量体パーセント（％）値を提供する。図１７Ｃは、異なるＢｓＡｂのＩＥＸクロマトグラフを示し、ＩＥＸ及びＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値を比較する。ＢｓＡｂが２つの抗原結合ドメインのうちの１つとしてナノボディを含んだ場合、ＩＥＸは、低分解能（ＢＣＭＡ ＶＨＨ×ＨＥＬのクロマトグラム）をもたらした。図１７Ｄは、３５４／３４９置換を含まない異なるＢｓＡｂのＩＥＸ及びＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値を比較する。ＩＥＸによるヘテロ二量体％値とＬＣＭＳによるヘテロ二量体％値は、良好な相関を示す（データ点は１つのＦａｂアームにナノボディを含むＢｓＡｂを含まない）。図１７Ｅは、３５４／３４９置換を含む異なるＢｓＡｂのＩＥＸ及びＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値を比較する。図１７Ｆは、３５４／３４９置換を含むＢｓＡｂ及び含まないＢｓＡｂ間のＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値を比較する。３５４／３４９置換は、野生型セットを含むほとんどのＣＨ３セットのヘテロ二量体化（ＬＣ－ＭＳにより測定）を改善するようである。図１７Ｇは、３５４／３４９置換を含むＢｓＡｂ及び含まないＢｓＡｂ（ＣＤ３×ＨＥＲ２ ＢｓＡｂ及びＨＥＬ×ＢＣＭＡ Ｆａｂ－ＶＨＨ ＢｓＡｂ）のＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値を、ＬＣ－ＭＳ又はＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％値と比較する。ＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸにより決定したヘテロ二量体化の順位は同じであった。図１７Ｈは、追加の３５４／３４９置換を有する配向１、配向２、及び配向１でのＬＷＧ及び／又はＳＩＧセットのＩＥＸ、ＬＣ－ＭＳ、及びＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）により測定したヘテロ二量体％値を比較する。図１７Ｉは、０日目（ＨＥＫ産生日）のＳＥＣにより測定した単量体完全Ａｂ％によって定義される異なるｂｓＡｂ（１つのアームにナノボディを含むｂｓＡｂを含まない）の安定性及び１４日目までの単量体完全Ａｂ％（単量体完全ＡｂΔ％）の変化を比較する。試験した全てのＢｓＡｂについて、単量体完全Ａｂ％値が０日目では非常に低く、１４日後に単量体完全Ａｂ％値のわずかな増加しか観察されず、最小限の凝集を示した。図１７Ｊは、ＨＥＫ２９３細胞中の異なるＢｓＡｂ（３５４／３４９置換を含むか又は含まない）の産生収率を比較する。 異なるＣＨ３セット（ＷＴ、既存のＣＨ３ヘテロ二量体化セット、サイクル１出力、サイクル２出力、又はそれらの組み合わせ、ＣＨ３ジスルフィド結合置換（すなわち、３５４／３４９置換）を有する又は有しない）を含む抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂの比較を示す。図１８Ａは、良好な相関を示す３５４／３４９置換を有しない異なるＢｓＡｂのＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％値を比較する。図１８Ｂは、３５４／３４９置換を有する異なるＢｓＡｂのＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％値により決定したヘテロ二量体化可能性の順位を比較する。これらの２つの異なる方法（ＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸ）により決定した順位は同じであった。図１８Ｃは、３５４／３４９置換を有する及び有しない異なるＢｓＡｂのＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％値を示し、３５４／３４９置換の存在又は不在にかかわらず、ＬＷＧ－ＳＩＧセットが一貫して高いヘテロ二量体％値を提供したことを明示する。図１８Ｄは、３５４／３４９置換を有する及び有しない異なるＢｓＡｂのＳＥＣにより測定した単量体完全Ａｂ％値を示す。示されるように、ＤＶＧ－ＶＳＹ及びＲＧ－ＦＧなどのいくつかのＢｓＡｂがより高い単量体完全Ａｂ％値を示し、既存のバリアントＣＨ３ドメイン（ＫｉＨ、ＥＷ－ＲＶＴ、又はＺＷ１）と比較して少ない凝集を示した。図１８Ｅは、３５４／３４９置換を含む及び含まない異なるＢｓＡｂのＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値に対してプロットされたＳＥＣにより測定した単量体完全Ａｂ％値のグラフを提供し、３５４／３４９置換が単量体完全Ａｂ％値及びヘテロ二量体％値を全体的に増加させたことを明示する。図１８Ｆは、３５４／３４９置換を含む及び含まない異なるＢｓＡｂのＨＥＫ２９３細胞における産生収率を比較し、いかなる置換セットも産生収率に悪影響を及ぼすようには見えなかったことを示す。図１８Ｇは、ＩＥＸ及びＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値、ＳＥＣにより測定した単量体完全Ａｂ％値、及びＨＥＫ細胞における産生収率に基づいて、ＬＷＧ－ＳＩＧセット及びそのバリアントＬＷＧ－ＩＧを比較する。これらのプロファイルは、ＬＷＧ－ＳＩＧとＬＷＧ－ＩＧとの間で類似しており、ロゼッタヘテロ二量体スコアと一致した。 ホモ二量体よりもＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成し、それ故に、所望のＦｃ対合を促進する、本明細書で特定される例示的なＣＨ３ドメインセット（「ＣＨ３セット名」）の要約を提供する。 図１９に列記したそれぞれのＣＨ３セットのアミノ酸置換（位置及びアミノ酸残基）は、例えば、付録表Ｅ～Ｇで見つけることができる。これらのアミノ酸置換は、任意のＣＨ３ドメイン配列に組み込まれてもよい。図１９に列記したＣＨ３置換セットが配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に組み込まれる例示的なバリアントＣＨ３ドメイン配列も付録表Ｅ～Ｇに示す。この例示的なバリアントＣＨ３ドメイン配列は、本明細書の実施例で使用した配列である。これらの例示的なバリアントＣＨ３ドメイン配列に割り当てられた配列番号も図１９に示す。 ＤＳＣにより測定した、異なるＣＨ３セット（表１５に示す、ＷＴ、既存、サイクル１出力、又はサイクル２出力ＣＨ３ヘテロ二量体化セット、ＣＨ３ジスルフィド結合置換（３５４／３４９置換）を有する又は有しない）を含むＦｃのみ構築物の例示的なＴｍ２値を提供する。白丸は、３５４／３４９置換を含まない構築物を表し、黒丸は、３５４／３４９置換を含む構築物を表す。 ＡＤＩ－６４９５０ ＣＨ３－ＣＨ３界面をその電子密度で提供する。（ａ）（ｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含む鎖Ａと、（ｉｉ）Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含む鎖Ｂ（鎖ＢはＦｃ－ＩＩＩノックアウト置換：Ｍ２５２Ｅ、Ｉ２５３Ａ、及びＹ４３６Ａも含む）とを含むＩｇＧ１ Ｆｃのみ構築物ＡＤＩ－６４９５０の結晶構造の関心領域内の代表的な電子密度。白色が鎖Ａの炭素原子であり、薄い灰色が鎖Ｂの炭素原子であり、濃い灰色が窒素原子であり、黒色が酸素原子であり、極めて濃い灰色が硫黄原子である。タンパク質をスティック表現で示している。２Ｆｏ－Ｆｃ電子密度マップを、２．０Åの分解能で、１．０σで等高線表示した灰色のメッシュとして示している。この結晶構造に関するデータは２．７０Åの近原子分解能にまで及ぶ。（ｂ）ＡＤＩ－６４９５０（ＳＩＧ－ＬＷＧ）及び野生型ＩｇＧ１（ＷＴ；ＰＤＢ ＩＤ：５ＪＩＩ）のＰＩＳＡから生成した界面統計を比較する表。 ＡＤＩ－６４９５０ ＣＨ３－ＣＨ３界面での有極接点を提供する。（ａ）鎖Ａと鎖Ｂとの間のＣＨ３－ＣＨ３界面における有極接点。白色が鎖Ａの炭素原子であり、薄い灰色が鎖Ｂの炭素原子であり、濃い灰色が窒素原子であり、黒色が酸素原子である。タンパク質骨格を漫画表現で示し、目的とする残基をスティック表現で示している。有極接点を黒色の点線で示している。（ｂ）ＡＤＩ－６４９５０（ＳＩＧ－ＬＷＧ）及び野生型ＩｇＧ１（ＷＴ；ＰＤＢ ＩＤ：５ＪＩＩ）のＰｙＭｏｌから生成した極性相互作用を比較する表。 潜在的なＡＤＩ－６４９５０ホモ二量体オフ産物（ｏｆｆ－ｐｒｏｄｕｃｔ）中のいくつかの残基が互いに立体衝突すると予測されることを示し、誤対合の傾向を低下させる。（ａ～ｄ）関心領域を囲む対合界面の図。鎖Ａから鎖Ｂ（ａ）及び鎖Ｂから鎖Ａ（ｂ～ｄ）へのアライメントは、（ａ）Ｌｙｓ４０９及びＰｈｅ４０５、（ｂ）Ａｓｐ３５６及びＴｙｒ３４９、（ｃ）Ｔ３６６Ｗ及びＴｙｒ４０７、並びに（ｄ）Ｔ３６６Ｗ及びＴｙｒ４０７のオルソロガスセットを含む、これらの潜在的なオフ産物の置換位置及び非置換位置でのいくつかの残基のＣＨ３－ＣＨ３界面における立体衝突を明示する。白色が鎖Ａの炭素原子であり、薄い灰色が鎖Ｂの炭素原子であり、濃い灰色が窒素原子であり、黒色が酸素原子である。タンパク質骨格を漫画表現で示し、対象とする残基をスティック表現で示し、衝突に関与する側鎖を透明な分子表面で示している。 （ｉ）ＷＴ、Ｒ－Ｌ、Ｖ－Ｖ、ＱＲ－Ｆ、又はＲＧ－ＦＧセットに属する２つの同じＣＨ３ドメインと、（ｉｉ）ＡＤＩ－２９２３５（白）又はＡＤＩ－２６９０８（黒）の可変ドメインとを含む抗体を用いて実施例１４で得た例示的な結果の比較を示す。図２４Ａは、ＣＨＯ細胞で産生された抗体の産生収率を比較する。図２４Ｂは、ＳＥＣにより測定した単量体完全サイズＡｂ％値のグラフを提供する。 実施例１５のＦＡＥ出力とそれぞれのＦＡＥ入力とを比較した例示的な結果を示す。図２５Ａは、ＷＴ、Ｒ－Ｌ、Ｖ－Ｖ、又はＱＲ－Ｆセットを含む指示したｂｓＡｂを産生するためのＦＡＥ反応ステップ後のタンパク質回収率を比較する。図２５Ｂは、Ｒ－Ｌ、Ｖ－Ｖ、及びＱＲ－ＦセットのＩＥＸ結果を提供し、パネルは各々、（ｉ）２つの同じ指示したＣＨ３ドメインを有する単一特異性親抗体を各々含む、ＦＡＥ入力のクロマトグラム（青色及び赤色）と、（ｉｉ）対応するＦＡＥ反応出力のクロマトグラム（緑色）とのオーバーレイを示している。 実施例１６のＦＡＥ出力とそれぞれのＦＡＥ入力とを比較した例示的な結果を示す。図２６Ａは、ＦＡＥ入力とＦＡＥ出力との間のタンパク質の品質を比較した例示的なＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果を提供する。ＦＡＥ反応を行い、ＷＴ、Ｒ－Ｌ、又はＶ－Ｖセットを含む指示したｂｓＡｂを産生した。図２６Ｂは、例示的なＬＣ－ＭＳ結果を提供し、パネルは各々、（ｉ）２つの同じ指示したＣＨ３ドメインを有する単一特異性親抗体を各々含む、ＦＡＥ入力のクロマトグラム（青色及び赤色）と、（ｉｉ）対応するＦＡＥ反応出力のクロマトグラム（黒色）とのオーバーレイを示している。図２６Ｃは、ＦＡＥ入力における指示した単一特異性抗体と対応するＦＡＥ出力における指示したｂｓＡｂによるＨＥＲ２又はＣＤ３のいずれかへの結合を比較した例示的な結合動態曲線を提供する。図２６Ｄは、ＦＡＥ入力における指示した単一特異性抗体と対応するＦＡＥ出力における指示したｂｓＡｂによるＨＥＲ２及びＣＤ３への同時結合を比較した例示的な結合動態曲線を提供する。「ＨＥＲ２→ＣＤ３」は、試験抗体を最初にＨＥＲ２に曝露し、その後、ＣＤ３に曝露したことを示す。「ＣＤ３→ＨＥＲ２」は、試験抗体を最初にＣＤ３に曝露し、その後、ＨＥＲ２に曝露したことを示す。 実施例１７に記載するように、Ｖ－ＶセットとＲ－Ｌセットを比較したＧＳＨ曝露実験からの例示的な結果を示す。図２７Ａは、ＧＳＨ曝露実験の概略図を提供する。ステップ１では、試験ＣＨ３セットを含む抗ＨＥＲ２、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１、及び試験ＣＨ３セットを含む抗ＣＤ３、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１を、２－ＭＥＡを使用してＦＡＥにより生成する。ステップ２では、ステップ１からの抗ＨＥＲ２、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１を、（ｉ）試験ＣＨ３セットの一方と同じである２つの同じＣＨ３ドメイン、（ｉｉ）試験ＣＨ３セットの他方と同じである２つの同じＣＨ３ドメイン、又は（ｉｉｉ）試験ＣＨ３セット（すなわち、ステップ１からの抗ＨＣＤ３、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１）を含む抗ＣＤ３ ＩｇＧ１を有するＧＳＨを含む弱還元環境下に配置し、鎖再結合が起こるかをＩＥＸにより評価する。図２７Ｂは、Ｒ－Ｌセット及びＶ－Ｖセットを用いたステップ１におけるＦＡＥの例示的なＩＥＸ結果を提供する。グラフパネルは各々、ＦＡＥ出力のクロマトグラムと、２つのＦＡＥ入力抗体のクロマトグラムとのオーバーレイを示す。図２７Ｃ～２７Ｅは、Ｒ－Ｌセット及びＶ－Ｖセットを用いたステップ２におけるＧＳＨ曝露の例示的なＩＥＸ結果を提供する。グラフパネルは各々、ＧＳＨ曝露産物のクロマトグラムと、２つのＧＳＨ曝露入力抗体のクロマトグラムとのオーバーレイを示す。すなわち、入力抗体は、抗ＨＥＲ２、ＣＨ３ヘテロ抗体、及び（ｉ）試験ＣＨ３セットの一方と同じである２つの同じＣＨ３ドメイン（図２７Ｃ）、（ｉｉ）試験ＣＨ３セットの他方と同じである２つの同じＣＨ３ドメイン（図２７Ｄ）、又は（ｉｉｉ）試験ＣＨ３セット（すなわち、ステップ１からの抗ＨＣＤ３、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１（図２７Ｅ）を含む抗ＣＤ３ ＩｇＧ１である。
定義
別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されている意味と同じ意味を有する。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の列挙される数値に関して使用される場合、当該値が、列挙される値から１％以下だけ変動し得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「約１００」という表現には、９９及び１０１、並びにそれらの間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）が含まれる。
本明細書に記載される本開示の態様及び実施形態が、態様及び実施形態を「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、態様及び実施形態「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、並びに態様及び実施形態「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」を含むことが理解される。
「抗体」という用語は、本明細書で最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、抗体には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び／又は抗体断片（好ましくは、「抗原結合抗体断片」とも称される、所望の抗原結合活性を呈する断片）が含まれるが、これらに限定されない。「完全抗体」、「完全Ａｂ」、「完全サイズ抗体」、「完全サイズＡｂ」、「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、又は「全抗体」などは、天然抗体と実質的に同様の構造を有する分子を包含し、ＩｇＧ、ＩｇＤ、又はＩｇＥの場合、２つの免疫グロブリン重鎖及び２つの免疫グロブリン軽鎖を含む。「抗原結合断片」又は「抗原結合抗体断片」とは、インタクトな抗体の一部分、又はインタクトな抗体（複数可）に由来する部分の組み合わせを指し、インタクトな抗体（複数可）が結合する抗原に結合する。
「抗体の抗原結合断片」又は「抗原結合抗体断片」には、抗原に特異的に結合して複合体を形成する抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン又はＣＨ３ドメ）を含む、あらゆる天然に存在する、酵素処理により得ることのできる、合成の、又は遺伝子操作されたポリペプチド又は糖タンパク質が含まれる。例示的な抗体断片としては、Ｆｖ、断片抗原結合（「Ｆａｂ」）断片、Ｆａｂ’断片、遊離スルフヒドリル基を含むＦａｂ’（「Ｆａｂ’－ＳＨ」）、Ｆ（ａｂ’）２断片、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、一本鎖可変断片（「ｓｃＦｖ」）、ナノボディ若しくはＶＨＨ、又はＶＨ若しくはＶＬドメインのみ）、及び前述のような抗体断片のうちの１つ以上から形成される単一特異性化合物又は多重特異性化合物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の抗原結合断片は、ｓｃＦｖ又はナノボディである。好ましい実施形態では、抗原結合断片は、ＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するＣＨ３ドメインセットを含む。
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性であっても多重特異性（例えば、二重特異性、三重特異性、四重特異性など）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合断片は、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含んでもよく、これらの可変ドメインは各々、別個の抗原に特異的に結合することができるか、又は同じ抗原の異なるエピトープに特異的に結合することができる。
「モノクローナル抗体」又は「ｍＡｂ」とは、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、一般に少量で存在する可能なバリアント抗体（例えば、天然に生じる変異及び／若しくは置換を含むもの、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じるもの）を除いて、同一である、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物のモノクローナル抗体は各々、抗原上の単一の決定基に向けられている。
本明細書で「多重特異性化合物」とも称され得る「多重特異性抗体」とは、少なくとも２つの異なる抗原及び／又は少なくとも２つの異なるエピトープを認識して特異的に結合する少なくとも２つの異なる抗原結合ドメインを含む抗体を指す。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、（１）同族対を形成して第１の抗原に結合する、第１の重鎖と第１の軽鎖、及び（２）同族対を形成して第２の抗原に結合する、第２の重鎖と第２の軽鎖を含む。
本明細書で「二重特異性化合物」とも称され得る「二重特異性抗体」とは、多重特異性抗体の一種であり、少なくとも２つの異なる抗原又は少なくとも２つのエピトープを認識して特異的に結合する２つの異なる抗原結合ドメインを含む抗体を指す。少なくとも２つのエピトープは、同じ抗原内に存在しても存在しなくてもよい。二重特異性抗体は、例えば、同一の又は異なる細胞（例えば、免疫細胞及びがん細胞）上の２つの異なる表面受容体、２つの異なるサイトカイン／ケモカイン、受容体、及びリガンドを標的とし得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる抗原は、以下の抗原から選択されてもよい（又は少なくとも２つの異なるエピトープは、以下の抗原のいずれかにおけるエピトープであってもよい）：ＣＤ３；０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６；Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＦ３６１４８）、アディポフィリン（ペリリピン－２、脂肪分化関連タンパク質、ＡＤＲＰ、ＡＤＦＰ、ＭＧＣ１０５９８；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１１１３．２）、ＡＩＭ－２（メラノーマ２、ＰＹＨＩＮ４、インターフェロン誘導性タンパク質ＡＩＭ２に不在；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００４８２４．１）、ＡＬＤＨ１ Ａ１（アルデヒドデヒドロゲナーゼ１ファミリー、メンバーＡ１、ＡＬＤＨ１、ＰＵＭＢ１、レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼ１、ＡＬＤＣ、ＡＬＤＨ－Ｅ１、ＡＬＨＤＩＩ、ＲＡＬＤＨ １、ＥＣ １．２．１．３６、ＡＬＤＨ１１、ＨＥＬ－９、ＨＥＬ－Ｓ－５３ｅ、ＨＥＬ１２、ＲＡＬＤＨ１、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ１、アルデヒドデヒドロゲナーゼ１、可溶性アルデヒドデヒドロゲナーゼ、肝臓細胞質ＡＬＤＨクラス１、精巣上体管腔タンパク質１２、精巣上体管腔タンパク質９、精巣上体分泌精子結合タンパク質Ｌｉ ５３ｅ、レチナールデヒドロゲナーゼ１、ＲａＩＤＨ１、アルデヒドデヒドロゲナーゼファミリー１メンバーＡ１、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、細胞質、ＥＣ １．２．１；ＮＣＢＩ参照番号：ＮＰ－０００６８０．２）；アルファ－アクチニン－４（ＡＣＴＮ４、アクチニン、アルファ４、ＦＳＧＳ１、巣状分節性糸球体硬化症１、非筋アルファ－アクチニン４、Ｆ－アクチン架橋タンパク質、ＦＳＧＳ、アクチニン－４、アクチニンアルファ４アイソフォーム、アルファ－アクチニン－４；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００４９１５．２）；アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ、ＨＰＡＦＰ、ＦＥＴＡ、アルファ－１－フェトプロテイン、アルファ－フェトグロブリン、アルファ－１－フェトプロテイン、アルファ－フェトグロブリン、ＨＰ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ５８７５４．１）；アンフィレグリン（ＡＲＥＧ、ＳＤＧＦ、シュワン腫由来成長因子、結腸直腸細胞由来成長因子、ＡＲ、ＣＲＤＧＦ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ５１７８１．１）；ＡＲＴＣ１（ＡＲＴ１、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１、モノ（ＡＤＰ－リボシル）トランスフェラーゼ１、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼＣ２及びＣ３トキシン様１、ＡＲＴ２、ＣＤ２９６、ＲＴ６、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ２、ＧＰＩ結合ＮＡＤ（Ｐ）（＋）－アルギニンＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１、ＥＣ ２．４．２．３１、ＣＤ２９６抗原；ＮＰ）、ＡＳＬＧ６５９；ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ－ヒドロキシラーゼドメイン含有１、アスパラギン酸ベータ－ヒドロキシラーゼドメイン含有タンパク質１、ＥＣ １．１４．１１．、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ４４１５３．１）；Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１、Ｖ－Ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１、Ｂ７Ｈ４、Ｂ７スーパーファミリーメンバー１、免疫共刺激タンパク質Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７ｈ．５、Ｔ細胞共刺激分子Ｂ７ｘ、Ｂ７Ｓ１、Ｂ７Ｘ、ＶＣＴＮ１、Ｈ４、Ｂ７ファミリーメンバー、ＰＲＯ１２９１、Ｂ７ファミリーメンバー、Ｈ４、Ｔ細胞供刺激分子Ｂ７ｘ、Ｖ－Ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１、タンパク質Ｂ７Ｓ１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＺ１７４０６．１）；ＢＡＦＦ－Ｒ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ、ＢＡＦＦＲ、Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＡＦＦ受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＣＶＩＤ４、ＢＲＯＭＩＸ、ＣＤ２６８、Ｂ細胞活性化因子受容体、プロリキシン、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ、ＢＲ３、ＣＤ２６８抗原；ＮＣＢＩ配列ＮＰ－４４３１７７．１）；ＢＡＧＥ－１；ＢＣＬＸ（Ｌ）；ＢＣＲ－ＡＢＬ融合タンパク質（ｂ３ａ２）；ベータカテニン（ＣＴＮＮＢ１、カテニン（カドヘリン関連タンパク質）、ベータ１、８８ｋＤａ、ＣＴＮＮＢ、ＭＲＤ１９、カテニン（カドヘリン関連タンパク質）、ベータ１（８８ｋＤａ）、アルマジロ、カテニンベータ－１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＡ６１１０７．１）；ＢＩＮＧ－４（ＷＤＲ４６、ＷＤリピートドメイン４６、Ｃ６ｏｒｆ１１、ＢＩＮＧ４、ＷＤリピート含有タンパク質ＢＩＮＧ４、染色体６オープンリーディングフレーム１１、ＦＰ２２１、ＵＴＰ７、ＷＤリピート含有タンパク質４６；ＮＰ）；ＢＭＰＲ１ Ｂ（骨形成タンパク質受容体型ＩＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－００１２０；ＮＰ）；Ｂ－ＲＡＦ（ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＦ２２９０５）；ブレビカン（ＢＣＡＮ、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン７、脳濃縮ヒアルロン酸結合タンパク質、ＢＥＨＡＢ、ＣＳＰＧ７、ブレビカンプロテオグリカン、ブレビカンコアタンパク質、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンＢＥＨＡＢ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ２７９７１．１）；ＣＡＬＣＡ（カルシトニン関連ポリペプチドアルファ、ＣＡＬＣ１、カルシトニン１、カルシトニン、アルファ型ＣＧＲＰ、カルシトニン遺伝子関連ペプチドＩ、ＣＧＲＰ－Ｉ、ＣＧＲＰ、ＣＧＲＰ１、ＣＴ、ＫＣ、カルシトニン／カルシトニン関連ポリペプチド、アルファ、カタカルシン；ＮＰ）；ＣＡＳＰ－５（ＣＡＳＰ５、カスパーゼ５、アポトーシス関連システインペプチダーゼ、カスパーゼ５、アポトーシス関連システインプロテアーゼ、プロテアーゼＩＣＨ－３、プロテアーゼＴＹ、ＩＣＥ（ｒｅｌ）－１１１、ＩＣＥ（ｒｅｌ）ＩＩＩ、ＩＣＥＲＥＬ－ＩＩＩ、ＩＣＨ－３、カスパーゼ－５、ＴＹプロテアーゼ、ＥＣ ３．４．２２．５８、ＩＣＨ３、ＥＣ ３．４．２２；ＮＰ）；ＣＡＳＰ－８；ＣＤ１９（ＣＤ１９－Ｂ－リンパ球抗原ＣＤ１９アイソフォーム２前駆体、Ｂ４、ＣＶＩＤ３［ホモサピエンス］、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１７６１．３）；ＣＤ２０（ＣＤ２０－Ｂ－リンパ球抗原ＣＤ２０、膜貫通４－ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１、Ｂ１、Ｂｐ３５、ＣＤ２０、ＣＶＩＤ５、ＬＥＵ－１６、ＭＳ４Ａ２、Ｓ７；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－６９０６０５．１）；ＣＤ２１（ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体又はＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタイン・バーウイルス受容体）又はＨｓ．７３７９２ Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号Ｍ２６００）；（ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイソフォーム、ＢＬ－ＣＡＭ、Ｌｙｂ－８、ＬｙｂＢ、ＳＩＧＬＥＣ－２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＫ０２６４６）；ＣＤ２２；ＣＤ３３（ＣＤ３３分子、ＣＤ３３抗原（Ｇｐ６７）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３、ＳＩＧＬＥＣ３、ｇｐ６７、ＳＩＧＬＥＣ－３、骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３、ｐ６７、Ｓｉｇｌｅｃ－３、ＣＤ３３抗原；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ２８１５２．１）；ＣＤ４５；ＣＤ７０（ＣＤ７０－腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリー、メンバー７；表面抗原ＣＤ７０；Ｋｉ－２４抗原；ＣＤ２７リガンド；ＣＤ２７－Ｌ；腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー７；ホモサピエンス種のＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１２４３．１）；ＣＤ７２（ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ－；３５９ ａａ、μｌ：８．６６、ＭＷ：４０２２５、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００１７７３）；ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９ａ、免疫グロブリン関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合的に相互作用してＩｇ Ｍ分子と表面上に複合体を形成し、Ｂ細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、μｌ：４．８４、ＭＷ：２５０２８、ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００１７７４．１）；ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９ｂ、ＩＧｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－０００６２６又は１１０３８６７）；Ｃｄｃ２７（細胞分裂周期２７、Ｄ０Ｓ１４３０Ｅ、Ｄ１７Ｓ９７８Ｅ、後期促進複合体サブユニット３、後期促進複合体サブユニット３、ＡＮＡＰＣ３、ＡＰＣ３、ＣＤＣ２７Ｈｓ、Ｈ－ＮＵＣ、ＣＤＣ２７ホモログ、細胞分裂周期２７ホモログ（Ｓ．Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ＨＮＵＣ、ＮＵＣ２、後期促進複合体、タンパク質３、細胞分裂周期２７ホモログ、細胞分裂周期タンパク質２７ホモログ、Ｎｕｃ２ホモログ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ１１６５６．１）；ＣＤＫ４（サイクリン依存性キナーゼ４、細胞分裂タンパク質キナーゼ４、ＰＳＫ－Ｊ３、ＥＣ ２．７．１１．２２、ＣＭＭ３、ＥＣ ２．７．１１；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００００６６．１）；ＣＤＫＮ２Ａ（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ａ、ＭＬＭ、ＣＤＫＮ２、ＭＴＳ１、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ａ（メラノーマ、Ｐ１６、ＣＤＫ４を阻害する）、サイクリン依存性キナーゼ４阻害剤Ａ、多発性腫瘍抑制因子１、ＣＤＫ４Ｉ、ＭＴＳ－１、ＣＭＭ２、Ｐ１６、ＡＲＦ、ＩＮＫ４、ＩＮＫ４Ａ、Ｐ１４、Ｐ１４ＡＲＦ、Ｐ１６－ＩＮＫ４Ａ、Ｐ１６ＩＮＫ４、Ｐ１６ＩＮＫ４Ａ、Ｐ１９、Ｐ１９ＡＲＦ、ＴＰ１６、ＣＤＫ４阻害剤Ｐ１６－ＩＮＫ４、負の細胞周期調節因子ベータ、ｐ１４ＡＲＦ、ｐ１６－ＩＮＫ４、ｐ１６－ＩＮＫ４ａ、ｐ１６ＩＮＫ４Ａ、ｐ１９ＡＲＦ；ＮＰ）；ＣＥＡ；ＣＬＬ１（ＣＬＬ－１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通タンパク質折り畳みを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質代謝回転、並びに炎症及び免疫応答における役割などの多様な機能を有する。この遺伝子によってコードされたタンパク質は、負の顆粒球及び単球機能調節因子である。この遺伝子のいくつかの選択的にスプライスされた転写物バリアントについて説明されているが、これらのバリアントのうちのいくつかの完全長性質は決定されていない。この遺伝子は染色体１２ｐ１３上のナチュラルキラー遺伝子複合体領域内の他のＣＴＬ／ＣＴＬＤスーパーファミリーメンバーと密接に関係している（Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，Ｋ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９：５８５－９０［１９９９］；ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ，Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１０：２６５９－６６［２００７］；Ｃｈｅｎ Ｃ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０７：１４５９－６７［２００６］；Ｍａｒｓｈａｌｌ Ａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：２１５９－６９［２００６］；Ｂａｋｋｅｒ Ａ Ｂ，ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：８４４３－５０［２００４］；Ｍａｒｓｈａｌｌ Ａ Ｓ，ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１４７９２－８０，２００４。ＣＬＬ－１は、（カルシウム又は糖のいずれかに結合することが予測されていない）単一のＣ型レクチン様ドメイン、ストーク領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含む短い細胞質テールを含むＩＩ型膜貫通受容体であることが示されている）；ＣＬＰＰ（カゼイン分解性ミトコンドリアマトリックスペプチダーゼタンパク分解性サブユニット、エンドペプチダーゼＣｌｐ、ＥＣ ３．４．２１．９２、ＰＲＬＴＳ３、ＡＴＰ依存性プロテアーゼＣｌｐＡＰ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＣｌｐＰ（カゼイン分解性プロテアーゼＡＴＰ依存性タンパク分解性サブユニット、Ｅ．ｃｏｌｉ）ホモログ、ＣｌｐＰカゼイン分解性ペプチダーゼＡＴＰ依存性タンパク分解性サブユニットホモログ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＣｌｐＰカゼイン分解性プロテアーゼＡＴＰ依存性タンパク分解性サブユニットホモログ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ヒトタンパク分解性サブユニット、ＡＴＰ依存性プロテアーゼＣｌｐＡＰ、タンパク分解性サブユニット、ヒトＣｌｐＰカゼイン分解性ペプチダーゼＡＴＰ依存性タンパク分解性サブユニット、ＣｌｐＰカゼイン分解性ペプチダーゼ、ＡＴＰ依存性タンパク分解性サブユニットホモログ、ＣｌｐＰカゼイン分解性プロテアーゼ、ＡＴＰ依存性タンパク分解性サブユニット
ホモログ、推定ＡＴＰ依存性Ｃｌｐプロテアーゼタンパク分解性サブユニット、ミトコンドリア；ＮＰ）；ＣＯＡ－１；ＣＰＳＦ；ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形がん腫由来成長因子、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００３２０３又はＮＭ－００３２１）；Ｃｗ６；ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動及び体液性防御において機能し、ＨＩＶ－２感染に関与し、ＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発症にも恐らく関与するＧタンパク質共役受容体）；３７２ ａａ、μｌ：８．５４、ＭＷ：４１９５９、ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００１７０７）；ＣＸＯＲＦ６１ ＣＸＯＲＦ６１－染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１［ホモサピエンス］、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１０１７９７８．１）；サイクリンＤ１（ＣＣＮＤ１、ＢＣＬ１、ＰＲＡＤ１、Ｄ１１Ｓ２８７Ｅ、Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫１、Ｂ細胞リンパ腫１タンパク質、ＢＣＬ－１がん遺伝子、ＰＲＡＤ１がん遺伝子、サイクリンＤ１（ＰＲＡＤ１：副甲状腺腺腫症１）、Ｇ１／Ｓ特異的サイクリンＤ１、副甲状腺腺腫症１、Ｕ２１Ｂ３１、Ｇ１／Ｓ特異的サイクリン－Ｄ１、ＢＣＬ－１；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－４４４２８４．１）；サイクリン－Ａ１（ＣＣＮＡ１、ＣＴ１４６、サイクリンＡ１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ３６３４６．１）；ｄｅｋ－ｃａｎ融合タンパク質；ＤＫＫ１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ ＷＮＴシグナル伝達経路阻害剤１、ＳＫ、ｈＤｋｋ－１、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ（Ｘｅｎｏｐｕｓ Ｌａｅｖｉｓ）ホモログ１、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ １ホモログ（Ｘｅｎｏｐｕｓ Ｌａｅｖｉｓ）、ＤＫＫ－１、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ １ホモログ、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質－１、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１様、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ様タンパク質１、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質１、Ｄｉｃｋｋｏｐｆ－１、Ｄｋｋ－１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＱ８９３６４．１）；ＤＲ１（転写下方制御因子１、ＴＢＰ結合（負の補因子２）、負の補因子２－ベータ、ＴＡＴＡ結合タンパク質関連リンタンパク質、ＮＣ２、ＮＣ２－ベータ、タンパク質Ｄｒ１、ＮＣ２－ベータ、転写下方制御因子１；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１９２９．１）；ＤＲ１３（主要組織適合性複合体、クラスＩＩ、ＤＲベータ１、ＨＬＡ－ＤＲ１Ｂ、ＤＲｗ１０、ＤＷ２．２／ＤＲ２．２、ＳＳ１、ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ、ＨＬＡクラスＩＩ組織適合性抗原、ＤＲ－１ベータ鎖、ヒト白血球抗原ＤＲＢ１、リンパ球抗原ＤＲＢ１、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ－ＤＲベータ１鎖、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ－ＤＲ－ベータ細胞表面糖タンパク質、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ－ＤＲｗ１０－ベータ、ＤＲ－１、ＤＲ－１２、ＤＲ－１３、ＤＲ－１４、ＤＲ－１６、ＤＲ－４、ＤＲ－５、ＤＲ－７、ＤＲ－８、ＤＲ－９、ＤＲ１、ＤＲ１２、ＤＲ１３、ＤＲ１４、ＤＲ１６、ＤＲ４、ＤＲ５、ＤＲ７、ＤＲＢ、ＤＲ９、ＤＲｗ１１、ＤＲｗ８、ＨＬＡ－ＤＲＢ２、クローンＰ２－ベータ－３、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１０、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１１、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１２、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１３、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１４、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１５、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊１６、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊３、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊４、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊７、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊８、ＭＨＣクラスＩＩ抗原ＤＲＢ１＊９；ＮＰ）；Ｅ１６（Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－００３４８）；ＥＤＡＲ（ＥＤＡＲ－腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーＥＤＡＲ前駆体、ＥＤＡ－Ａ１受容体；ダウンレス（ｄｏｗｎｌｅｓｓ）ホモログ；エクトジスプラシン－Ａ受容体；外胚葉異形成症受容体；無汗性エクトジスプラシン受容体１、ＤＬ；ＥＣＴＤ１０Ａ；ＥＣＴＤ１０Ｂ；ＥＤ１Ｒ；ＥＤ３；ＥＤ５；ＥＤＡ－Ａ１Ｒ；ＥＤＡ１Ｒ；ＥＤＡ３；ＨＲＭ１［ホモサピエンス］；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－０７１７３１．１）；ＥＦＴＵＤ２（伸長因子Ｔｕ ＧＴＰ結合ドメイン含有２、伸長因子Ｔｕ ＧＴＰ結合ドメイン含有タンパク質２、ｈＳＮＵ１１４、ＳＮＵ１１４ホモログ、Ｕ５ ＳｎＲＮＰ特異的タンパク質、１１６ＫＤａ、ＭＦＤＧＡ、ＫＩＡＡ００３１、１１６ＫＤ、Ｕ５ ＳｎＲＮＰ特異的タンパク質、１１６ＫＤａ Ｕ５核内低分子リボ核タンパク質成分、ＭＦＤＭ、ＳＮＲＮＰ１１６、Ｓｎｒｐ１１６、Ｓｎｕ１１４、Ｕ５－１１６ＫＤ、ＳＮＲＰ１１６、Ｕ５－１１６ＫＤａ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ０２３６０．１）；ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体、ＥＲＢＢ、がん原遺伝子Ｃ－ＥｒｂＢ－１、受容体チロシン－タンパク質キナーゼＥｒｂＢ－１、ＥＲＢＢ１、ＨＥＲ１、ＥＣ ２．７．１０．１、上皮成長因子受容体（トリ赤芽球性白血病ウイルス（Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ）がん遺伝子ホモログ）、赤芽球性白血病ウイルス（Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ）がん遺伝子ホモログ（トリ）、ＰｌＧ６１、トリ赤芽球性白血病ウイルス（Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ）がん遺伝子ホモログ、細胞成長阻害タンパク質４０、細胞増殖誘導タンパク質６１、ｍＥＮＡ、ＥＣ ２．７．１０；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ９４７６１．１）；ＥＧＦＲ－Ｇ７１９Ａ；ＥＧＦＲ－Ｇ７１９Ｃ；ＥＧＦＲ－Ｇ７１９Ｓ；ＥＧＦＲ－Ｌ８５８Ｒ；ＥＧＦＲ－Ｌ８６１ Ｑ；ＥＧＦＲ－５７６８１；ＥＧＦＲ－Ｔ７９０Ｍ；伸長因子２（ＥＥＦ２、真核生物翻訳伸長因子２、ＥＦ２、ポリペプチジル－ＴＲＮＡトランスロカーゼ、ＥＦ－２、ＳＣＡ２６、ＥＥＦ－２；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１９５２．１）；ＥＮＡＨ（ｈＭｅｎａ）（イネーブルドホモログ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）、ＭＥＮＡ、哺乳類イネーブルド、ＥＮＡ、ＮＤＰＰ１、タンパク質イネーブルドホモログ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ９５４８１．１）（「ＥＮＡＨ（ｈＭｅｎａ）」ではなく「ＥＮＡＨ」のみの結果である）；ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子、Ｍ４Ｓ１、ＭＩＣ１８、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１、ＴＡＣＳＴＤ１、ＴＲＯＰ１、腺がん関連抗原、細胞表面糖タンパク質Ｔｒｏｐ－１、上皮糖タンパク質３１４、主要胃腸腫瘍関連タンパク質ＧＡ７３３－２、ＥＧＰ３１４、ＫＳＡ、ＤＩＡＲ５、ＨＮＰＣＣ８、モノクローナル抗体ＡＵＡ１特定抗原、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ４０、ＥＳＡ、ＫＳ１／４、ＭＫ－１、ヒト上皮糖タンパク質－２、膜成分、染色体４、表面マーカー（３５ｋＤ糖タンパク質）、ＥＧＰ、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＧＡ７３３－２、Ｍ１Ｓ２、ＣＤ３２６抗原、上皮細胞表面抗原、ｈＥＧＰ３１４、ＫＳ １／４抗原、ＡＣＳＴＤ１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ１４７８５．１）；ＥｐｈＡ３（ＥＰＨ受容体Ａ３、ＥＴＫ１、ＥＴＫ、ＴＹＲＯ４、ＨＥＫ、Ｅｐｈ様チロシンキナーゼ１、チロシン－タンパク質キナーゼ受容体ＥＴＫ１、ＥＫ４、ＥＰＨ様キナーゼ４、ＥＣ ２．７．１０．１、ＥＰＨＡ３、ＨＥＫ４、エフリンＡ型受容体３、ヒト胚キナーゼ１、ＴＹＲＯ４タンパク質チロシンキナーゼ、ｈＥＫ４、ヒト胚キナーゼ、チロシン－タンパク質キナーゼＴＹＲＯ４、ＥＣ ２．７．１０；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ６３２８２．１）；ＥｐｈＢ２Ｒ；エピレグリン（ＥＲＥＧ、ＥＲ、プロエピレグリン；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ３６４０５．１）；ＥＴＢＲ（ＥＤＮＲＢ、エンドセリン受容体Ｂ型、ＨＳＣＲ２、ＨＳＣＲ、エンドセリン受容体非選択型、ＥＴ－Ｂ、ＥＴ－ＢＲ、ＥＴＲＢ、ＡＢＣＤＳ、ＷＳ４Ａ、ＥＴＢ、エンドセリンＢ受容体；ＮＰ）；ＥＴＶ６－ＡＭＬ１融合タンパク質；ＥＺＨ２（ゼステホモログエンハンサー２（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）、リジンＮ－メチルトランスフェラーゼ６、ＥＮＸ－１、ＫＭＴ６ ＥＣ ２．１．１．４３、ＥＺＨ１、ＷＶＳ、ゼステ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）ホモログエンハンサー２、ＥＮＸ１、ＥＺＨ２ｂ、ＫＭＴ６Ａ、ＷＶＳ２、ヒストン－リジンＮ－メチルトランスフェラーゼＥＺＨ２、ゼステホモログエンハンサー２、ＥＣ ２．１．１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ１０８５８．１）；ＦｃＲＨ１（ＦＣＲＬ１、Ｆｃ受容体様１、ＦＣＲＨ１、Ｆｃ受容体ホモログ１、ＦｃＲ様タンパク質１、免疫受容体転座関連タンパク質５、ＩＦＧＰ１、ＩＲＴＡ５、ｈＩＦＧＰ１、ＩＦＧＰファミリータンパク質１、ＣＤ３０７ａ、Ｆｃ受容体様タンパク質１、免疫グロブリンスーパーファミリーＦｃ受容体、Ｇｐ４２、ＦｃＲＬ１、ＣＤ３０７ａ抗原；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ３３６９０．１）；ＦｃＲＨ２（ＦＣＲＬ２、Ｆｃ受容体様２、ＳＰＡＰ１、ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１、Ｆｃ受容体ホモログ２、ＦｃＲ様タンパク質２、免疫グロブリン受容体転座関連タンパク質４、ＦＣＲＨ２、ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＩＦＧＰファミリータンパク質４、ＳＰＡＰ１Ａ、ＳＰＡＰ１ Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、ＣＤ３０７ｂ、Ｆｃ受容体様タンパク質２、免疫受容体転座関連タンパク質４、免疫グロブリンスーパーファミリーＦｃ受容体、Ｇｐ４２、ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１、ＦｃＲＬ２、ＣＤ３０７ｂ抗原；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＱ８８４９７．１）；ＦｃＲＨ５（ＦＣＲＬ５、Ｆｃ受容体様５、ＩＲＴＡ２、Ｆｃ受容体ホモログ５、ＦｃＲ様タンパク質５、免疫受容体転座関連タンパク質２、ＢＸＭＡＳ１、ＦＣＲＨ５、ＣＤ３０７、ＣＤ３０７ｅ、ＰＲＯ８２０、Ｆｃ受容体様タンパク質５、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２（ＩＲＴＡ２）、ＦＣＲＬ５、ＣＤ３０７ｅ抗原；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ０１０７０．１）；ＦＬＴ３－ＩＴＤ；ＦＮ１（フィブロネクチン１、冷不溶性グロブリン、ＦＮ、移動刺激因子、ＣＩＧ、ＦＮＺ、ＧＦＮＤ２、ＬＥＴＳ、ＥＤ－Ｂ、ＦＩＮＣ、ＧＦＮＤ、ＭＳＦ、フィブロネクチン；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ４３７６４．１）；Ｇ２５０（ＭＮ、ＣＡＩＸ、カルボニックアンヒドラーゼＩＸ、カルボニックデヒドラターゼ、ＲＣＣ関連タンパク質Ｇ２５０、カルボニックデヒドラターゼＩＸ、膜抗原ＭＮ、腎細胞がん関連抗原Ｇ２５０、ＣＡ－ＩＸ、Ｐ５４／５８Ｎ、ｐＭＷ１、ＲＣＣ関連抗原Ｇ２５０、カルボニックアンヒドラーゼ９；ＮＰ）；（別名、「Ｇ２５０／ＭＮ／ＣＡＩＸ」ではなく「Ｇ２５０」の結果）；ＧＡＧＥ－１，２，８；ＧＡＧＥ－３，４，５，６，７；ＧＤＮＦ－Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１；ＧＦＲＡ１；ＧＤＮＦＲ；ＧＤＮＦＲＡ；ＲＥＴＬ１；ＴＲＮＲ１；ＲＥＴ１ Ｌ；ＧＤＮＦＲ－アルファ１；ＧＦＲ－アルファ－；Ｕ９５８４７；ＢＣ０１４９６２；ＮＭ－１４５７９３ ＮＭ－００５２６４）；ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＹ２６０７６）；ＧＦＲＡ１－ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ－１；ＧＤＮＦ受容体アルファ－１；ＧＤＮＦＲ－アルファ－１；ＧＦＲ－アルファ－１；ＲＥＴリガンド１；ＴＧＦ－ベータ関連神経栄養因子受容体１［ホモサピエンス］；ＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ５６１５９．２；グリピカン－３（ＧＰＣ３、グリピカン３、ＳＤＹＳ、グリピカンプロテオグリカン３、腸タンパク質ＯＣＩ－５、ＧＴＲ２－２、ＭＸＲ７、ＳＧＢＳ１、ＤＧＳＸ、ＯＣＩ－５．ＳＧＢ、ＳＧＢＳ、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、分泌グリピカン－３、ＯＣＩ５；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ３５９７２．１）；ＧｎＴＶｆ；ｇｐ１００（ＰＭＥＬ、プレメラノソームタンパク質、ＳＩＬＶ、Ｄ１２Ｓ５３Ｅ、ＰＭＥＬ１７、ＳＩＬ、メラノサイトタンパク質Ｐｍｅｌ １７、メラノサイト系列特異的抗原ＧＰ１００、メラノーマ関連ＭＥ２０抗原、シルバーローカスタンパク質ホモログ、ＭＥ２０－Ｍ、ＭＥ２０Ｍ、Ｐ１、Ｐ１００、シルバー（マウスホモログ）様、シルバーホモログ（マウス）、ＭＥ２０、ＳＩ、メラノサイトタンパク質Ｍｅｌ １７、メラノサイトタンパク質ＰＭＥＬ、メラノソームマトリックスタンパク質１７のシルバーマウスホモログ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＣ６０６３４．１）；ＧＰＣ；ＧＰ
ＮＭＢ（糖タンパク質（膜貫通）Ｎｍｂ、糖タンパク質ＮＭＢ、糖タンパク質Ｎｍｂ様タンパク質、オステオアクチビン、膜貫通糖タンパク質ＨＧＦＩＮ、ＨＧＦＩＮ、ＮＭＢ、膜貫通糖タンパク質、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ３２７８３．１）；ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；ＮＰ－０７８８０７．１；ＮＭ－０２４５３１．３）；ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９；Ｍｍ．４７８；ＮＰ－００６１３４．１；ＮＭ－００６１４３．２）；ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１；ＮＰ－１１５９４０．２；ＮＭ－０３２５５１．４）；ＨＡＶＣＲ１（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１、Ｔ細胞免疫グロブリンムチンファミリーメンバー１、腎損傷分子１、ＫＩＭ－１、ＫＩＭ１、ＴＩＭ、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ１、ＴＩＭＤ－１、ＴＩＭＤ１、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン受容体１、Ｔ細胞膜タンパク質１、ＨＡＶＣＲ、ＨＡＶＣＲ－１、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメインタンパク質１、ＨＡＶｃｒ－１、Ｔ細胞免疫及びムチンドメイン含有タンパク質１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ１３３２５．１）；ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２、Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ２トリ赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ２、ＮＧＬ、ＮＥＵ、神経／神経膠芽腫由来がん遺伝子ホモログ、転移性リンパ節遺伝子１９タンパク質、がん原遺伝子Ｃ－ＥｒｂＢ－２、がん原遺伝子Ｎｅｕ、チロシンキナーゼ型細胞表面受容体ＨＥＲ２、ＭＬＮ １９、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ＥＣ ２．７．１０．１、Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ２トリ赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ２（神経／神経膠芽腫由来がん遺伝子ホモログ）、ＣＤ３４０、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＴＫＲ１、Ｃ－Ｅｒｂ Ｂ２／Ｎｅｕタンパク質、ハースタチン、神経芽細胞腫／神経膠芽腫由来がん遺伝子ホモログ、受容体チロシン－タンパク質キナーゼＥｒｂＢ－２、Ｖ－Ｅｒｂ－Ｂ２赤芽球性白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ２、神経／神経膠芽腫由来がん遺伝子ホモログ、ＭＬＮ１９、ＣＤ３４０抗原、ＥＣ ２．７．１０；ＮＰ）；ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（上記の別名）；ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ；ＨＬＡ－ＤＯＢ（ペプチドに結合し、それらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット（ｌａ抗原））；２７３ ａａ、μｌ：６．５６、ＭＷ：３０８２０、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００２１１１）；ｈｓｐ７０－２（ＨＳＰＡ２、熱ショック７０ｋＤａタンパク質２、熱ショック７０ｋＤタンパク質２、ＨＳＰ７０－３、熱ショック関連７０ＫＤａタンパク質２、熱ショック７０ＫＤａタンパク質２；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＤ２１８１５．１）；ＩＤＯ１（インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ１、ＩＤＯ、ＩＮＤＯ、インドールアミン－ピロール２，３－ジオキシゲナーゼ、ＩＤＯ－１、インドールアミン－ピロール２，３ジオキシゲナーゼ、インドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ、インドール２，３ジオキシゲナーゼ、ＥＣ １．１３．１１．５２；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００２１５５．１）；ＩＧＦ２Ｂ３；ＩＬ１３Ｒアルファ２（ＩＬ１３ＲＡ２、インターロイキン１３受容体、アルファ２、がん／精巣抗原１９、インターロイキン－１３結合タンパク質、ＩＬ－１３Ｒ－アルファ－２、ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ－１３受容体サブユニットアルファ－２、ＩＬ－１３Ｒサブユニットアルファ－２、ＣＤ２１３Ａ２、ＣＴ１９、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ１３ＢＰ、インターロイキン１３結合タンパク質、インターロイキン１３受容体アルファ２鎖、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２、ＩＬ１３Ｒ、ＣＤ２１３ａ２抗原；ＮＰ）；ＩＬ２０Ｒα；腸カルボキシルエステラーゼ；ＩＲＴＡ２（別名、ＦｃＲＨ５）；カリクレイン４（ＫＬＫ４、カリクレイン関連ペプチダーゼ４、ＰＲＳＳ１７、ＥＭＳＰ１、エナメルマトリックスセリンプロテイナーゼ１、カリクレイン様タンパク質１、セリンプロテアーゼ１７、ＫＬＫ－Ｌ１、ＰＳＴＳ、ＡＩ２Ａ１、カリクレイン４（プロスターゼ、エナメルマトリックス、前立腺）、ＡＲＭ１、ＥＭＳＰ、アンドロゲン制御メッセージ１、エナメルマトリックスセリンプロテアーゼ１、カリクレイン、カリクレイン－４、プロスターゼ、ＥＣ ３．４．２１．－、プロスターゼ、ＥＣ ３．４．２１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＸ３００５１．１）；ＫＩＦ２０Ａ（キネシンファミリーメンバー２０Ａ、ＲＡＢ６ＫＩＦＬ、ＲＡＢ６相互作用、キネシン様（Ｒａｂキネシン６）、有糸分裂ａ；ＬＡＧＥ－１；ＬＤＬＲ－フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質；レングシン（ＬＧＳＮ、レングシン、グルタミンシンテターゼドメイン含有レンズタンパク質、ＧＬＵＬＤ１、グルタミン酸アンモニアリガーゼドメイン含有タンパク質１、ＬＧＳ、グルタミン酸アンモニアリガーゼ（グルタミンシンテターゼ）ドメイン含有１、グルタミン酸アンモニアリガーゼ（グルタミンシンテターゼ）ドメイン含有１、レンズグルタミンシンテターゼ様；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＦ６１２５５．１）；ＬＧＲ５（ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６；ＮＰ－００３６５８．１；ＮＭ－００３６６７．２；ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０、Ｂ細胞活性化及びアポトーシスを制御するロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質、機能の喪失が全身性エリテマトーデスを有する患者における疾患活動性の増加と関連する）；６６１ ａａ、μｌ：６．２０、ＭＷ：７４１４７、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００５５７３；Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、座位Ｅ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ－Ｅ、ＳＣＡ－２、ＴＳＡ－；ＮＰ－００２３３７．１；ＮＭ－００２３４６．２）；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、座位Ｇ６Ｄ；Ｌｙ６－Ｄ、ＭＥＧＴ；ＮＰ－０６７０７９．２；ＮＭ－０２１２４６．２）；ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、座位Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２；ＮＰ－０５９９９７．３；ＮＭ－０１７５２７．３）；ＬｙＰＤ１－ＬＹ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有１、ＰＨＴＳ［ホモサピエンス］、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ１７３１８．１）；ＭＡＧＥ－Ａ１（メラノーマ抗原ファミリーＡ、１（抗原ＭＺ２－Ｅの発現を指示する、ＭＡＧＥ１、メラノーマ抗原ファミリーＡ１、ＭＡＧＥＡ１、メラノーマ抗原ＭＡＧＥ－１、メラノーマ関連抗原１、メラノーマ関連抗原ＭＺ２－Ｅ、抗原ＭＺ２－Ｅ、がん／精巣抗原１．１、ＣＴ１．１、ＭＡＧＥ－１抗原、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー１、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー１、ＭＡＧＥ１Ａ；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００４９７９．３）；ＭＡＧＥ－Ａ１０（ＭＡＧＥＡ１０、メラノーマ抗原ファミリーＡ、１０、ＭＡＧＥ１０、ＭＡＧＥ－１０抗原、メラノーマ関連抗原１０、がん／精巣抗原１．１０、ＣＴ１．１０、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー１０、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー１０；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１２３８７５７．１）；ＭＡＧＥ－Ａ１２（ＭＡＧＥＡ１２、メラノーマ抗原ファミリーＡ、１２、ＭＡＧＥ１２、がん／精巣抗原１．１２、ＣＴ１．１２、ＭＡＧＥ１２Ｆ抗原、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー１２、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー１２、メラノーマ関連抗原１２、ＭＡＧＥ－１２抗原；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１１５９８５９．１）；ＭＡＧＥ－Ａ２（ＭＡＧＥＡ２、メラノーマ抗原ファミリーＡ、２、ＭＡＧＥ２、がん／精巣抗原１．２、ＣＴ１．２、ＭＡＧＥＡ２Ａ、ＭＡＧＥ－２抗原、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー２、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー２、メラノーマ抗原２、メラノーマ関連抗原２、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１２６９４３４．１）；ＭＡＧＥ－Ａ３（ＭＡＧＥＡ３、メラノーマ抗原ファミリーＡ、３、ＭＡＧＥ３、ＭＡＧＥ－３抗原、抗原ＭＺ２－Ｄ、メラノーマ関連抗原３、がん／精巣抗原１．３、ＣＴ１．３、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー３、ＨＩＰＳ、ＨＹＰＤ、ＭＡＧＥＡ６、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー３；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００５３５３．１）；ＭＡＧＥ－Ａ４（ＭＡＧＥＡ４、メラノーマ抗原ファミリーＡ、４、ＭＡＧＥ４、メラノーマ関連抗原４、がん／精巣抗原１．４、ＣＴ１．４、ＭＡＧＥ－４ 抗原、ＭＡＧＥ－４１抗原、ＭＡＧＥ－Ｘ２抗原、ＭＡＧＥ４Ａ、ＭＡＧＥ４Ｂ、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー４、ＭＡＧＥ－４１、ＭＡＧＥ－Ｘ２、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー４；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１０１１５５０．１）；ＭＡＧＥ－Ａ６（ＭＡＧＥＡ６、メラノーマ抗原ファミリーＡ、６、ＭＡＧＥ６、ＭＡＧＥ－６抗原、メラノーマ関連抗原６、がん／精巣抗原１．６、ＣＴ１．６、ＭＡＧＥ３Ｂ抗原、がん／精巣抗原ファミリー１、メラノーマ抗原ファミリーＡ ６、メンバー６、ＭＡＧＥ－３ｂ、ＭＡＧＥ３Ｂ、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー６；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－７８７０６４．１）；ＭＡＧＥ－Ａ９（ＭＡＧＥＡ９、メラノーマ抗原ファミリーＡ、９、ＭＡＧＥ９、ＭＡＧＥ－９抗原、メラノーマ関連抗原９、がん／精巣抗原１．９、ＣＴ１．９、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー９、がん／精巣抗原ファミリー１、メンバー９、ＭＡＧＥＡ９Ａ；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００５３５６．１）；ＭＡＧＥ－Ｃ１（ＭＡＧＥＣ１、メラノーマ抗原ファミリーＣ、１、がん／精巣抗原７．１、ＣＴ７．１、ＭＡＧＥ－Ｃ１抗原、がん／精巣抗原ファミリー７、メンバー１、ＣＴ７、がん／精巣抗原ファミリー７、メンバー１、メラノーマ関連抗原Ｃ１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００５４５３．２）；ＭＡＧＥ－Ｃ２（ＭＡＧＥＣ２、メラノーマ抗原ファミリーＣ、２、ＭＡＧＥＥ１、がん／精巣抗原１０、ＣＴ１０、ＨＣＡ５８７、メラノーマ抗原ファミリーＥ、１、がん／精巣特異的、肝細胞がん関連抗原５８７、ＭＡＧＥ－Ｃ２抗原、ＭＡＧＥ－Ｅ１抗原、肝細胞がん抗原５８７、メラノーマ関連抗原Ｃ２；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－０５７３３３．１）；マンマグロビン－Ａ（ＳＣＧＢ２Ａ２、セクレトグロビン、ファミリー２Ａ、メンバー２、ＭＧＢ１、マンマグロビン１、ＵＧＢ２、マンマグロビンＡ、マンマグロビン－Ａ、マンマグロビン－１、セクレトグロビンファミリー２Ａメンバー２；ＮＰ）；ＭＡＲＴ２（Ｈ ＨＡＴ、ヘッジホッグアシルトランスフェラーゼ、ＳＫＩ１、Ｔ細胞認識メラノーマ抗原２、スキニーヘッジホッグタンパク質１、Ｓｋｎ、Ｔ細胞認識メラノーマ抗原２、タンパク質－システインＮ－パルミトイルトランスフェラーゼＨＨＡＴ、ＥＣ ２．３．１．－；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ３９０７１．１）；Ｍ－ＣＳＦ（ＣＳＦ１、コロニー刺激因子１（マクロファージ）、ＭＣＳＦ、ＣＳＦ－１、ラニモスチム、マクロファージコロニー刺激因子１、ラニモスチム、ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ２１１１７．１）；ＭＣＳＰ（ＳＭＣＰ、精子ミトコンドリア関連システインリッチタンパク質、ＭＣＳ、ミトコンドリア鞘セレンタンパク質、ＨＳＭＣＳＧＥＮ１、精子ミトコンドリア関連システインリッチタンパク質、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－１０９５８８．２）；ＸＡＧＥ－１ｂ／ＧＡＧＥＤ２ａ；ＷＴ１（ウィルムス腫瘍１、ＷＡＧＲ、ＧＵＤ、ＷＩＴ－２、ＷＴ３３、ＥＷＳのアミノ末端ドメイン、ＮＰＨＳ４、ＷＴ１のＤＮＡ結合ドメインの最後の３つのジンクフィンガー、ＡＷＴ１、ウィルムス腫瘍タンパク質、ＥＷＳ－ＷＴ１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ３３４４３．１）；ＶＥＧＦ；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ；ＮＰ－０００３６３．１；ＮＭ－０００３７２．４；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ６０３１９．１）；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－０１７６３
）；ＴＲＰ２－ＩＮＴ２；ＴＲＰ－２；ＴＲＰ－１／ｇｐ７５（チロシナーゼ関連タンパク質１、５，６－ジヒドロキシインドール－２－カルボン酸オキシダーゼ、ＣＡＳ２、ＣＡＴＢ、ＴＹＲＰ、ＯＣＡＳ、カタラーゼＢ、ｂ－タンパク質、糖タンパク質７５、ＥＣ １．１４．１８．、メラノーマ抗原Ｇｐ７５、ＴＹＲＰ１、ＴＲＰ、ＴＹＲＲＰ、ＴＲＰ１、ＳＨＥＰ１１、ＤＨＩＣＡオキシダーゼ、ＥＣ １．１４．１８、ＧＰ７５、ＥＣ １．１４．１８．１；トリオースリン酸イソメラーゼ（トリオースリン酸イソメラーゼ１、ＴＰＩＤ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＨＥＬ－Ｓ－４９、ＴＩＭ、精巣上体分泌タンパク質Ｌｉ ４９、ＴＰＩ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＥＣ ５．３．１．１；ＴＲＡＧ－３（ＣＳＡＧファミリーメンバー２、がん／精巣抗原ファミリー２４、ＣＳＡＧ３Ｂ、メンバー２、ＣＳＡＧファミリーメンバー３Ｂ、がん／精巣抗原ファミリー２４メンバー２、がん／精巣抗原２４．２、軟骨肉腫関連遺伝子２／３タンパク質、タキソール耐性関連遺伝子３タンパク質、軟骨肉腫関連遺伝子２／３タンパク質様、ＣＴ２４．２、タキソール耐性関連遺伝子３、ＴＲＡＧ－３、ＣＳＡＧ３Ａ、ＴＲＡＧ３）；ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）；ＳＨＩＳＡ；ＮＰ－００１００７５３９．１；ＮＭ－００１００７５３８．１；ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２；ＮＰ－００１１０３３７３．１；ＮＭ－００１１０９９０３．１；ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ様ドメイン及び２つのフォリスタチン様ドメイン含有膜貫通タンパク質１；トモレグリン－；Ｈ７３６５；Ｃ９ｏｒｆ２；Ｃ９ＯＲＦ２；Ｕ１９８７８；Ｘ８３９６１；ＮＭ－０８０６５５；ＮＭ－００３６９２；ＴＧＦ－ベータＲＩＩ（ＴＧＦＢＲ２、形質転換成長因子、ベータ受容体ＩＩ（７０／８０ｋＤａ）、ＴＧＦベータ－ＲＩＩ、ＭＦＳ２、ｔｂｅｔａＲ－ＩＩ、ＴＧＦＲ－２、ＴＧＦ－ベータ受容体ＩＩＢ型、ＴＧＦ－ベータＩＩ型受容体、ＴＧＦ－ベータ受容体２型、ＥＣ ２．７．１１．３０、形質転換成長因子ベータ受容体ＩＩＣ型、ＡＡＴ３、ＴＢＥＴＡＲ－ＩＩ、形質転換成長因子、ベータ受容体ＩＩ（７０～８０ｋＤ）、ＴＧＦ－ベータ受容体ＩＩ型、ＦＡＡ３、形質転換成長因子－ベータ受容体ＩＩ型、ＬＤＳ１ Ｂ、ＨＮＰＣＣ６、ＬＤＳ２Ｂ、ＬＤＳ２、ＲＩＴＣ、ＥＣ ２．７．１１、ＴＡＡＤ２；ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定膜貫通プロテオグリカン、ＥＧＦ／ヘレグリンファミリー成長因子及びフォリスタチンに関連）；３７４ ａａ、ＮＣＢＩ受入：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－０５７２７６；ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１；ＯＭＩＭ：６０５７３４；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｑ９ＵＩＫ５；Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＦ１７９２７４；ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６；ＴＡＧ－２；ＴＡＧ－１（コンタクチン２（軸索）、ＴＡＧ－１、ＡＸＴ、アキソニン－１細胞接着分子、ＴＡＸ、コンタクチン２（一過性発現）、ＴＡＸＩ、コンタクチン－２、軸索糖タンパク質ＴＡＧ－１、一過性発現軸索糖タンパク質、一過性軸索糖タンパク質、アキソニン－１、ＴＡＸ－１、ＴＡＧ１、ＦＡＭＥＳ；ＰＲＦ：４４４８６８）；ＳＹＴ－ＳＳＸ１又は－ＳＳＸ２融合タンパク質；サバイビン；ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ ８６３９、ＩＰＣＡ－１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がん関連遺伝子１、前立腺がん関連タンパク質１、前立腺６回膜貫通上皮抗原２、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＦ４５５１３；ＳＴＥＡＰ１（前立腺６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－０１２４４；ＳＳＸ－４；ＳＳＸ－２（ＳＳＸ２、滑膜肉腫、Ｘ切断点２、Ｘ切断点２、ＳＳＸ、Ｘ切断点２Ｂ、がん／精巣抗原５．２、Ｘ－染色体関連２、腫瘍抗原ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０、ＣＴ５．２、ＨＤ２１、がん／精巣抗原ファミリー５、ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０、アイソフォームＢ、がん／精巣抗原ファミリー５メンバー２ａ、メンバー２ａ、タンパク質ＳＳＸ２、肉腫、肉腫、滑膜、Ｘ－染色体関連２、滑膜、滑膜肉腫、Ｘ切断点２Ｂ、滑膜肉腫、ＳＳＸ２Ａ；Ｓｐ１７；ＳＯＸ１０（ＳＲＹ（性別決定領域Ｙ）－ボックス１０、マウス、ＰＣＷＨ、ＤＯＭ、ＷＳ４、ＷＳ２Ｅ、ＷＳ４Ｃ、ドミナントメガコロン、マウス、ヒトホモログ、ドミナントメガコロン、ＳＲＹ関連ＨＭＧ－ボックス遺伝子１０、ヒトホモログ、転写因子ＳＯＸ－１０；ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＧ３０４７０．１）；ＳＮＲＰＤ１（核内低分子リボ核タンパク質Ｄ１、核内低分子リボ核タンパク質Ｄ１、ポリペプチド１６ｋＤａ、ポリペプチド（１６ｋＤ）、ＳＮＲＰＤ、ＨｓＴ２４５６、Ｓｍ－Ｄ１、ＳＭＤ１、Ｓｍ－Ｄ自己抗原、核内低分子リボ核タンパク質Ｄ１ポリペプチド１６ｋＤａ偽遺伝子、ＳｎＲＮＰコアタンパク質Ｄ１、核内低分子リボ核タンパク質Ｓｍ Ｄ１；ＳＬＣ３５Ｄ３（溶質輸送体ファミリー３５、メンバーＤ３、ＦＲＣＬ１、フリンジ接続様タンパク質１、ｂＡ５５Ｋ２２．３、Ｆｒｃ、フリンジ様１、溶質輸送体ファミリー３５メンバーＤ３；ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＣ－０００００６．１１ ＮＣ－０１８９１７．２ ＮＴ－０２５７４１．１６）；ＳＩＲＴ２（サーチュイン２、ＮＡＤ依存性デアセチラーゼサーチュイン－２、ＳＩＲＬ２、サイレント情報調節因子２、調節タンパク質ＳＩＲ２ホモログ２、Ｓｉｒ２関連タンパク質２型、ＳＩＲ２様タンパク質２、サーチュイン２型、サーチュイン（サイレント接合型情報調節２ホモログ）２（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サーチュイン－２、サーチュイン（サイレント接合型情報調節２、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、ホモログ）２、ＥＣ ３．５．１．、ＳＩＲ２；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＫ５１１３３．１）；Ｓｅｍａ ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ Ｈｌｏｇ、セマドメイン、７トロンボスポンジンリピート（１型及び１型様）、膜貫通ドメイン（商標）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＢ０４０８７；セセルニン１（ＳＣＲＮ１、ＳＥＳ１、ＫＩＡＡ０１９３、セセリン－１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＥＡＬ２４４５８．１）；ＳＡＧＥ（ＳＡＧＥ１、肉腫抗原１、がん／精巣抗原１４、ＣＴ１４、推定腫瘍抗原；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－０６１１３６．２）；ＲＵ２ＡＳ（ＫＡＡＧ１、腎臓関連抗原１、ＲＵ２ＡＳ、ＲＵ２アンチセンス遺伝子タンパク質、腎臓関連抗原１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＦ２３６１３．１）；ＲＮＦ４３－Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＲＮＦ４３前駆体［ホモサピエンス］、ＲＮＦ１２４；ＵＲＣＣ；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－０６０２３３．３；ＲｈｏＣ（ＲＧＳ５（Ｇ－タンパク質シグナル伝達調節因子５、ＭＳＴＰ０３２、Ｇ－タンパク質シグナル伝達調節因子５、ＭＳＴＰ０９２、ＭＳＴ０９２、ＭＳＴＰ１０６、ＭＳＴ１０６、ＭＳＴＰ１２９、ＭＳＴ１２９；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＢ８４００１．１）；ＲＥＴ（ｒｅｔがん原遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；ＰＴＣ；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ－ＥＬＥ；ＮＰ－０６６１２４．１；ＮＭ－０２０９７５．４）；ＲＢＡＦ６００（ＵＢＲ４、ユビキチンタンパク質リガーゼＥ３成分Ｎ－レコグニン４、ジンクフィンガー、ＵＢＲ１ １型、ＺＵＢＲ１、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＵＢＲ４、ＲＢＡＦ６００、６００ＫＤａ網膜芽細胞腫タンパク質関連因子、ジンクフィンガーＵＢＲ１型タンパク質１、ＥＣ ６．３．２．、Ｎ－レコグニン－４、ＫＩＡＡ０４６２、ｐ６００、ＥＣ ６．３．２、ＫＩＡＡ１３０７；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＬ８３８８０．１）；ＲＡＧＥ－１（ＭＯＫ、ＭＯＫタンパク質Ｋｉｎａｓｅ、腎腫瘍抗原、ＲＡＧＥ、ＭＡＰＫ／ＭＡＫ／ＭＲＫ重複キナーゼ、腎腫瘍抗原１、腎細胞がん抗原、ＲＡＧＥ－１、ＥＣ ２．７．１１．２２、ＲＡＧＥ１；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ９ＵＱ０７．１）；ＲＡＢ３８／ＮＹ－ＭＥＬ－１（ＲＡＢ３８、ＮＹ－ＭＥＬ－１、ＲＡＢ３８、ＲＡＳがん遺伝子ファミリーメンバー、メラノーマ抗原ＮＹ－ＭＥＬ－１、Ｒａｂ関連ＧＴＰ結合タンパク質、Ｒａｓ関連タンパク質Ｒａｂ－３８、ｒｒＧＴＰｂｐ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ１５８０８．１）；ＰＴＰＲＫ（ＤＪ４８０Ｊ１４．２．１（タンパク質チロシンホスファターゼ、受容体型、Ｋ Ｒ－ＰＴＰ－カッパ、タンパク質チロシンホスファターゼカッパ、タンパク質チロシンホスファターゼカッパ）、タンパク質チロシンホスファターゼ、受容体型、Ｋ、タンパク質－チロシンホスファターゼカッパ、タンパク質－チロシンホスファターゼ、受容体型、カッパ、Ｒ－ＰＴＰ－カッパ、受容体型チロシン－タンパク質ホスファターゼカッパ、ＥＣ ３．１．３．４８、ＰＴＰＫ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ４４５１４．１）；ＰＳＭＡ；ＰＳＣＡ ｈＩｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８０１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ ｃＤＮＡ ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＹ３５８６２８）；ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＪ２９７４３；ＰＲＤＸ５（ペルオキシレドキシン５、ＥＣ １．１１．１．１５、ＴＰｘ ＶＩ型、Ｂ１６６、抗酸化酵素Ｂ１６６、ＨＥＬ－Ｓ－５５、肝臓組織２Ｄ－Ｐａｇｅスポット７１ Ｂ、ＰＭＰ２０、ペルオキシソーム抗酸化酵素、ＰＲＤＸ６、チオレドキシンペルオキシダーゼＰＭＰ２０、ＰＲＸＶ、ＡＯＥＢ１６６、精巣上体分泌タンパク質Ｌｉ ５５、Ａｌｕコリプレッサー１、ペルオキシレドキシン－５、ミトコンドリア、ペルオキシレドキシンＶ、ｐｒｘ－Ｖ、チオレドキシンレダクターゼ、Ｐｒｘ－Ｖ、ＡＣＲ１、Ａｌｕコリプレッサー、ＰＬＰ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＧ３３４８４．１）；ＰＲＡＭＥ（メラノーマ優先発現抗原、メラノーマの優先発現抗原、ＭＡＰＥ、０１Ｐ－４、ＯＩＰＡ、ＣＴ１３０、がん／精巣抗原１３０、腫瘍優先発現メラノーマ抗原、Ｏｐａ相互作用タンパク質４、Ｏｐａ相互作用タンパク質０１Ｐ４；ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＧ３０４３５．１）；ｐｍｌ－ＲＡＲアルファ融合タンパク質；ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；ＳＩ；ＳＩＬ）；ＭＥ２０；ｇｐ１０ ＢＣ００１４１４；ＢＴ００７２０２；Ｍ３２２９５；Ｍ７７３４８；ＮＭ－００６９２８；ＰＢＦ（ＺＮＦ３９５、ジンクフィンガータンパク質３９５、ＰＲＦ－１、ハンチントン病調節、ＨＤ遺伝子調節領域結合タンパク質、領域結合タンパク質２、タンパク質２、パピローマウイルス調節因子１、ＨＤ調節因子２、パピローマウイルス調節因子、ＰＲＦ１、ＨＤＢＰ－２、Ｓｉ－１－８－１４、ＨＤＢＰ２、ハンチントン病遺伝子調節領域結合タンパク質２、ＨＤＲＦ－２、パピローマウイルス調節因子ＰＲＦ－１、ＰＢＦ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ０１２３７．１）；ＰＡＸ５（ペアードボックス５、ペアードボックスホメオティック遺伝子５、ＢＳＡＰ、ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５、Ｂ細胞系列特異的活性化因子、ペアードドメイン遺伝子５、ペアードボックス遺伝子５（Ｂ細胞系列特異的活性化因子タンパク質）、Ｂ細胞特異的転写因子、ペアードボックス遺伝子５（Ｂ細胞系列特異的活性化因子）；ＰＡＰ（ＲＥＧ３Ａ、再生膵島由来３アルファ、ＩＮＧＡＰ、ＰＡＰ－Ｈ、肝腸膵臓タンパク質、ＰＢＢＣＧＦ、ヒト膵島前駆ペプチド、ＲＥＧ－Ｉｌｌ、膵炎関連タンパク質１、Ｒｅｇｉ、Ｒｅｇ ＩＩＩ－アルファ、肝臓がん－腸－膵臓、再生膵島由来タンパク質ＩＩＩ－アルファ、膵臓ベータ細胞成長因子、ＨＩＰ、ＰＡＰ相同タンパク質、ＨＩＰ／ＰＡＰ、増殖誘導タンパク質３４、ＰＡＰ１、増殖誘導タンパク質４２、ＲＥＧ－３－アルファ、再生膵島由来タンパク質３－アルファ、膵炎関連タンパク質；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡ
Ｈ３６７７６．１）；ｐ５３（ＴＰ５３、腫瘍タンパク質Ｐ５３、ＴＰＲ５３、Ｐ５３、細胞腫瘍抗原Ｐ５３、抗原ＮＹ－ＣＯ－１３、変異体腫瘍タンパク質５３、リンタンパク質Ｐ５３、Ｐ５３腫瘍抑制因子、ＢＣＣ７、形質転換関連タンパク質５３、ＬＦＳ１、腫瘍タンパク質５３、リー・フラウメニ症候群、腫瘍抑制因子Ｐ５３；Ｐ２Ｘ５（細胞外ＡＴＰによってゲートされたイオンチャネルであるプリン作動性受容体Ｐ２Ｘリガンドゲートイオンチャネル５はシナプス伝達及びニューロン新生に関与し得、欠乏症は特発性排尿筋不安定の病態生理学に寄与し得る）；４２２ ａａ）、μｌ：７．６３、ＭＷ：４７２０６、ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ－００２５５２；ＯＧＴ（０結合型Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）トランスフェラーゼ、Ｏ－ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーＰ１１０サブユニット、０結合型Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）トランスフェラーゼ（ＵＤＰ－Ｎ－アセチルグルコサミン：ポリペプチド－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ＵＤＰ－Ｎ－アセチルグルコサミン－ペプチドＮ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ１１０ＫＤａサブユニット、ＵＤＰ－Ｎ－アセチルグルコサミン：ポリペプチド－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ウリジンジホスホ－Ｎ－アセチルグルコサミン：ポリペプチドベータ－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、Ｏ－ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼサブユニットＰ１１０、ＥＣ ２．４．１．２５５、０結合型Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ１１０ＫＤａサブユニット、ＥＣ ２．４．１、ＨＲＮＴ１、ＥＣ ２．４．１．１８６、０－ＧＬＣＮＡＣ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ３８１８０．１）；０Ａ１（変形性関節症ＱＴＬ １、ＯＡＳＤ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＡ８８７４２．１）；ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－２（がん／精巣抗原１ Ｂ、ＣＴＡＧ１ Ｂ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－２、ＥＳＯ１、ＣＴＡＧ１、ＣＴＡＧ、ＬＡＧＥ２Ｂ、がん／精巣抗原１、自己免疫原性がん／精巣抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１、アンサー抗原３、がん／精巣抗原６．１、ニューヨーク食道扁平上皮細胞がん１、Ｌ抗原ファミリーメンバー２、ＬＡＧＥ２、ＣＴ６．１、ＬＡＧＥ２Ａ；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＩ３０３６５．１）；ＮＹ－ＢＲ－１（ＡＮＫＲＤ３０Ａ、アンキリンリピートドメイン３０Ａ、乳がん抗原ＮＹ－ＢＲ－１、血清学的規定乳がん抗原ＮＹ－ＢＲ－１、アンキリンリピートドメイン含有タンパク質３０Ａ；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－４４３７２３．２）；Ｎ－ｒａｓ（ＮＲＡＳ、神経芽細胞腫ＲＡＳウイルス（Ｖ－Ｒａｓ）がん遺伝子ホモログ、ＮＲＡＳ１、形質転換タンパク質Ｎ－Ｒａｓ、ＧＴＰａｓｅ ＮＲａｓ、ＡＬＰＳ４、Ｎ－Ｒａｓタンパク質パート４、ＮＳ６、がん遺伝子ホモログ、ＨＲＡＳ１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ０５２１９．１）；ＮＦＹＣ（核転写因子Ｙ、ガンマ、ＨＡＰ５、ＨＳＭ、核転写因子ＹサブユニットＣ、トランス活性化因子ＨＳＭ－１／２、ＣＣＡＡＴ結合因子サブユニットＣ、ＮＦ－ＹＣ、ＣＣＡＡＴ転写結合因子サブユニットガンマ、ＣＡＡＴボックスＤＮＡ結合タンパク質サブユニットＣ、ヒストンＨ１転写因子大サブユニット２Ａ、ＣＢＦＣ、核転写因子Ｙサブユニットガンマ、ＣＢＦ－Ｃ、トランス活性化因子ＨＳＭ－１、Ｈ１ＴＦ２Ａ、転写因子ＮＦ－Ｙ、Ｃサブユニット；ネオ－ＰＡＰ（ＰＡＰＯＬＧ、ポリ（Ａ）ポリメラーゼガンマ、ネオ－ポリ（Ａ）ポリメラーゼ、核ポリ（Ａ）ポリメラーゼガンマ、ポリヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼガンマ、ＳＲＰ ＲＮＡ ３′アデニル化酵素／Ｐａｐ２、ＰＡＰ－ガンマ、ネオ－ＰＡＰ、ＳＲＰ ＲＮＡ ３′アデニル化酵素、ＰＡＰ２、ＥＣ ２．７．７．１９、ＰＡＰＧ；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－０７５０４５．２）；ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号Ｍ１８７２）；Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質輸送体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸トランスポーター３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－００６４２）；ミオシンクラスＩ；ＭＵＭ－３；ＭＵＭ－２（ＴＲＡＰＰＣ１、輸送タンパク質粒子複合体１、ＢＥＴＳ、ＢＥＴＳホモログ、ＭＵＭ２、メラノーマ遍在性変異型２、多発性骨髄腫タンパク質２、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１；ＭＵＭ－１ｆ；ムチン（ＭＵＣ１、ムチン１、細胞表面関連、ＰＥＭＴ、ＰＵＭ、ＣＡ １５－３、ＭＣＫＤ１、ＡＤＭＣＫＤ、腎髄質嚢胞症１（常染色体優性）、ＡＤＭＣＫＤ１、ムチン１、膜貫通、ＣＤ２２７、乳がん関連抗原ＤＦ３、ＭＡＭ６、がん抗原１５－３、ＭＣＤ、がん関連ムチン、ＭＣＫＤ、クレブス・フォン・デン・ルンゲン－６、ＭＵＣ－１／ＳＥＣ、ピーナッツ反応性尿ムチン、ＭＵＣ１／ＺＤ、腫瘍関連上皮膜抗原、ＤＦ３抗原、腫瘍関連ムチン、エピシアリン、ＥＭＡ、Ｈ２３抗原、Ｈ２３ＡＧ、ムチン－１、ＫＬ－６、腫瘍関連上皮ムチン、ＭＵＣ－１、エピシアリン、ＰＥＭ、ＣＤ２２７抗原；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ１５９４１．３）；ＭＵＣＳＡＣ（ムチンＳＡＣ、オリゴマー粘液／ゲル形成、気管気管支ムチン′ＭＵＣ５、ＴＢＭ、ムチン５、サブタイプＡ及びＣ、気管気管支／胃、ｌｅＢ、胃ムチン、ムチンＳＡＣ、オリゴマー粘液／ゲル形成偽遺伝子、ルイス血液型Ｂ抗原、ＬｅＢ、主要気道糖タンパク質、ＭＵＣ－ＳＡＣ、ムチン－５サブタイプＡＣ、気管気管支；ＭＵＣ１（ムチン１、細胞表面関連、ＰＥＭＴ、ＰＵＭ、ＣＡ １５－３、ＭＣＫＤ１、ＡＤＭＣＫＤ、腎髄質嚢胞症１（常染色体優性）、ＡＤＭＣＫＤ１、ムチン１、膜貫通、ＣＤ２２７、乳がん関連抗原ＤＦ３、ＭＡＭ６、がん抗原１５－３、ＭＣＤ、がん関連ムチン、ＭＣＫＤ、クレブス・フォン・デン・ルンゲン－６、ＭＵＣ－１／ＳＥＣ、ピーナッツ反応性尿ムチン、ＭＵＣ－１／Ｘ、多形上皮ムチン、ＭＵＣ１／ＺＤ、腫瘍関連上皮膜抗原、ＤＦ３抗原、腫瘍関連ムチン、エピシアリン、ＥＭＡ、ｈ２３抗原、Ｈ２３ＡＧ、ムチン－１、ＫＬ－６、腫瘍関連上皮ムチン、ＭＵＣ－１、エピシアリン、ＰＥＭ、ＣＤ２２７抗原；ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－０１７７６；ＭＲＰ４多剤耐性関連タンパク質４アイソフォーム３、ＭＯＡＴ－Ｂ；ＭＯＡＴＢ［ホモサピエンス］；ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ－００１２８８７５８．１；ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ－００５８２；ＭＭＰ－７（ＭＭＰ７、マトリライシン、ＭＰＳＬ１、マトリン、マトリックスメタロプロテイナーゼ７（マトリライシン、子宮）、子宮マトリライシン、マトリックスメタロプロテイナーゼ－７、ＥＣ ３．４．２４．２３、Ｐｕｍｐ－１プロテアーゼ、マトリン、子宮メタロプロテイナーゼ、ＰＵＭＰ１、ＭＭＰ－７、ＥＣ ３．４．２４、ＰＵＭＰ－１；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＣ３７５４３．１）；ＭＭＰ－２（ＭＭＰ２、マトリックスメタロペプチダーゼ２（ゼラチナーゼＡ、７２ｋＤａゼラチナーゼ、７２ｋＤａ ＩＶ型コラゲナーゼ）、ＭＯＮＡ、ＣＬＧ４Ａ、マトリックスメタロプロテイナーゼ２（ゼラチナーゼＡ、７２ｋＤゼラチナーゼ、７２ｋＤ ＩＶ型コラゲナーゼ）、ＣＬＧ４、７２ｋＤａゼラチナーゼ、７２ｋＤａ ＩＶ型コラゲナーゼ）、マトリックスメタロプロテイナーゼ－２、ＭＭＰ－ＩＩ、７２ＫＤａゼラチナーゼ、コラゲナーゼ ＩＶ－Ａ型、ＭＭＰ－２、マトリックスメタロプロテイナーゼ－ＩＩ、ＴＢＥ－１、好中球ゼラチナーゼ、ＥＣ ３．４．２４．２４、ＥＣ ３．４．２４；ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＨ０２５７６．１）；並びにＭｅｌｏｅ。
いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる抗原は、以下の抗原から選択されてもよい（又は少なくとも２つの異なるエピトープは、以下の抗原のうちのいずれかにおけるエピトープであってもよい）：１７－ＩＡ、４－１ＢＢ、４Ｄｃ、６－ケト－ＰＧＦｌａ、８－イソ－ＰＧＦ２ａ、８－オキソ－ｄＧ、Ａｌアデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ ＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＵＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ－１、ＡＬＫ－７、アルファ－ｌ－アンチトリプシン、アルファ－Ｖ／ベータ－１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ－１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、アスパラギン酸、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ、Ｂリンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ－１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ－Ｒ、Ｂａｇ－１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ－１、ＢＣＡＭ、Ｂｅｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ－ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ－ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－２ａ、ＢＭＰ－３オステオゲニン、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－２ｂ、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－６ Ｖｇｒ－１、ＢＭＰ－７（ＯＰ－１）、ＢＭＰ－８（ＢＭＰ－８ａ、ＯＰ－２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ－ＩＡ（ＡＬＫ－３）、ＢＭＰＲ－ＩＢ（ＡＬＫ－６）、ＢＲＫ－２、ＲＰＫ－１、ＢＭＰＲ－ＩＩ（ＢＲＫ－３）、ＢＭＰｓ、ｂ－ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ－ＤＮＡ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、ＣＩＯ、ＣＡ１２５、ＣＡＤ－８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣＩ、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬｌ、ＣＣＬｌｌ、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤｌｌａ、ＣＤｌｌｂ、ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）毒素、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）毒素、ＣＫｂ８－ｌ、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶ ＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ－１、ＣＯＸ、Ｃ－Ｒｅｔ、ＣＲＧ－２、ＣＴ－１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬｌ、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（ｌ－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ－１、Ｄｎａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ－Ａ１、ＥＤＡ－Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮ Ａ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ－セレクチン、ＥＴ－１、第Ｉｌａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲｌ、ＦＥＮ－１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ－８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ－３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、Ｆｌｔ－３、Ｆｌｔ－４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルキン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ ６、ＧＣＰ－２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ－１、ＧＤＦ－３（Ｖｇｒ－２）、ＧＤＦ－５（ＢＭＰ－１４、ＣＤＭＰ－１）、ＧＤＦ－６（ＢＭＰ－１３、ＣＤＭＰ－２）、ＧＤＦ－７（ＢＭＰ－１２、ＣＤＭＰ－３）、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＤＦ－９、ＧＤＦ－１５（ＭＩＣ－１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ－１、ＧＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－アルファ２、ＧＦＲ－アルファ３、ＧＩＴＲ、グルカゴン、Ｇｌｕｔ ４、糖タンパク質Ｉｌｂ／ＩＩＩａ（ＧＰ Ｉｌｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ｇｐｌ３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰキャップ又はＮＩＰキャップ）、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ）ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、Ｈｅｐ Ｂ ｇｐｌ２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ－３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ－４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶ ｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＨＩＶ ｇｐｌ２０、ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ １２０ Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧ ＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、ヒト心筋ミオシン、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、ＨＶＥＭ、１－３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２３、インターフェロン（ＩＮＦ）－アルファ、ＩＮＦ－ベータ、ＩＮＦ－ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ１、インテグリン、アルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ－１０、１－ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在性ＴＧＦ－１、潜在性ＴＧＦ－１ ｂｐｌ、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、Ｌｅｆｔｙ、ルイスＹ抗原、ルイスＹ関連抗原、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、Ｌｆｏ、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ－セレクチン、ＬＴ－ａ、ＬＴ－ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ－１、肺サーファクタント、黄体形成ホルモン、リンホトキシンベータ受容体、Ｍａｃ－１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ－２、ＭＣＰ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、メタロプロテアーゼ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ－１－アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃｌ）、ＭＵＣ１８、ミューラー阻害物質、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＣＡＤ、Ｎ－カドヘリン、ＮＣＡ ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリリシン、ニューロトロフィン－３、－４、又は－６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ－３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐｌ５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ－カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ－１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤性アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、Ｐ１ＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロリラキシン、タンパク質Ｃ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ、ＲＳＶ Ｆｇｐ、Ｒｅｔ、リウマトイド因子、ＲＬＩＰ７６、ＲＰＡ２、ＲＳＫ、Ｓ１００、ＳＣＦ／ＫＬ、ＳＤＦ－１、セリン、血清アルブミン、ｓＦＲＰ－３、Ｓｈｈ、ＳＩＧＩＲＲ、ＳＫ－１、ＳＬＡＭ、ＳＬＰＩ、ＳＭＡＣ、ＳＭＤＦ、ＳＭＯＨ、ＳＯＤ、ＳＰＡＲＣ、Ｓｔａｔ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ－ＩＩ、ＴＡＣＥ、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質－７２）、ＴＡＲＣ、ＴＣＡ－３、Ｔ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ／ベータ）、ＴｄＴ、ＴＥＣＫ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ５、ＴＥＭ７、ＴＥＭ８、ＴＥＲＴ、精巣ＰＬＡＰ様アルカリホスファターゼ、ＴｆＲ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータ汎特異的、ＴＧＦ－ベータＲＩ（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲＩＩ、ＴＧＦ－ベータＲｌｌｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、トロンビン、胸腺Ｃｋ－１、甲状腺刺激ホルモン、Ｔｉｅ、ＴＩＭＰ、ＴＩＱ、組織因子、ＴＭＥＦＦ２、Ｔｍｐｏ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＲＡＩＬ Ｒｌ Ａｐｏ－２、ＤＲ４）、ＴＮＦＲＳＦＩＯＢ（ＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ－２Ａ、ＴＲＩＣＫ－Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＲＡＩＬ Ｒ３ ＤｃＲｌ、ＬＩＴ、ＴＲＩＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＲＡＩＬ Ｒ４ ＤｃＲ２、ＴＲＵＮＤＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ（ＲＡＮＫ ＯＤＦ Ｒ、ＴＲ
ＡＮＣＥ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦｌｌＢ（ＯＰＧ ＯＣＩＦ、ＴＲ１）、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ｒ ＦＮ１４）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ ＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴ Ｒ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ ＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹ ＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦＩＡ（ＴＮＦ ＲＩ ＣＤ１２０ａ、ｐ５５－６０）、ＴＮＦＲＳＦＩＢ（ＴＮＦ ＲＩＩ ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５－８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲ ＴＮＦ ＲＩＩＩ、ＴＮＦＣ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０ ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０ ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ Ａｐｏ－１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３ Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－ｌＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒｌ ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３ Ａｐｏ－３、ＬＡＲＤ、ＴＲ－３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ－１）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ Ａｐｏ－２リガンド、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫリガンドＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ａｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＨＴ ＨＶＥＭリガンド、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンドＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦＩＡ（ＴＮＦ－ａコネクチン、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂ ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンドｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンドＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓリガンドＡｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンドＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンドＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－ｌＢＢリガンドＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ Ｒ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェリン受容体、ＴＲＦ、Ｔｒｋ、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、腫瘍関連抗原ＣＡ １２５、腫瘍関連抗原発現ルイスＹ関連炭水化物、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ｕＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥ－カドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｌｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、ＣＴＬＡ４（細胞毒性Ｔリンパ球抗原－４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子－３）、ＴＩＭ－３（Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンタンパク質－３）、ホルモン受容体、並びに成長因子。
ある特定の実施形態では、本開示による多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、ＣＤ３に対して特異性を有する第１の抗原結合ドメインと、以下からなる群から選択される第２の抗原に対して特異性を有する第２の結合ドメインとを有してもよい：１７－ＩＡ、４－１ＢＢ、４Ｄｃ、６－ケト－ＰＧＦｌａ、８－イソ－ＰＧＦ２ａ、８－オキソ－ｄＧ、Ａｌアデノシン受容体、Ａ３３、ＡＣＥ、ＡＣＥ－２、アクチビン、アクチビンＡ、アクチビンＡＢ、アクチビンＢ、アクチビンＣ、アクチビンＲＩＡ、アクチビンＲＩＡ ＡＬＫ－２、アクチビンＲＩＢ ＡＬＫ－４、アクチビンＲＩＩＡ、アクチビンＲＵＢ、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭ１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１５、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ８、ＡＤＡＭ９、ＡＤＡＭＴＳ、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＤＡＭＴＳ５、アドレシン、ａＦＧＦ、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ、ＡＬＫ－１、ＡＬＫ－７、アルファ－ｌ－アンチトリプシン、アルファ－Ｖ／ベータ－１アンタゴニスト、ＡＮＧ、Ａｎｇ、ＡＰＡＦ－１、ＡＰＥ、ＡＰＪ、ＡＰＰ、ＡＰＲＩＬ、ＡＲ、ＡＲＣ、ＡＲＴ、アルテミン、抗Ｉｄ、アスパラギン酸、心房性ナトリウム利尿因子、ａｖ／ｂ３インテグリン、Ａｘｌ、ｂ２Ｍ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ、Ｂリンパ球刺激因子（ＢｌｙＳ）、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ－１、Ｂａｄ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ－Ｒ、Ｂａｇ－１、ＢＡＫ、Ｂａｘ、ＢＣＡ－１、ＢＣＡＭ、Ｂｅｌ、ＢＣＭＡ、ＢＤＮＦ、ｂ－ＥＣＧＦ、ｂＦＧＦ、ＢＩＤ、Ｂｉｋ、ＢＩＭ、ＢＬＣ、ＢＬ－ＣＡＭ、ＢＬＫ、ＢＭＰ、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－２ａ、ＢＭＰ－３オステオゲニン、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－２ｂ、ＢＭＰ－５、ＢＭＰ－６ Ｖｇｒ－１、ＢＭＰ－７（ＯＰ－１）、ＢＭＰ－８（ＢＭＰ－８ａ、ＯＰ－２）、ＢＭＰＲ、ＢＭＰＲ－ＩＡ（ＡＬＫ－３）、ＢＭＰＲ－ＩＢ（ＡＬＫ－６）、ＢＲＫ－２、ＲＰＫ－１、ＢＭＰＲ－ＩＩ（ＢＲＫ－３）、ＢＭＰｓ、ｂ－ＮＧＦ、ＢＯＫ、ボンベシン、骨由来神経栄養因子、ＢＰＤＥ、ＢＰＤＥ－ＤＮＡ、ＢＴＣ、補体因子３（Ｃ３）、Ｃ３ａ、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ５ａ、ＣＩＯ、ＣＡ１２５、ＣＡＤ－８、カルシトニン、ｃＡＭＰ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん関連抗原、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＨ、カテプシンＬ、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＶ、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＢＬ、ＣＣＩ、ＣＣＫ２、ＣＣＬ、ＣＣＬｌ、ＣＣＬｌｌ、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤｌｌａ、ＣＤｌｌｂ、ＣＤｌｌｃ、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ３２、ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４９ａ、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７４、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８９、ＣＤ９５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５２、ＣＤ１６４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＦＴＲ、ｃＧＭＰ、ＣＩＮＣ、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）毒素、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）毒素、ＣＫｂ８－ｌ、ＣＬＣ、ＣＭＶ、ＣＭＶ ＵＬ、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＮ－１、ＣＯＸ、Ｃ－Ｒｅｔ、ＣＲＧ－２、ＣＴ－１、ＣＴＡＣＫ、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ、ＣＸＣＬｌ、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＲ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、サイトケラチン腫瘍関連抗原、ＤＡＮ、ＤＣＣ、ＤｃＲ３、ＤＣ－ＳＩＧＮ、崩壊促進因子、ｄｅｓ（ｌ－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－１）、Ｄｈｈ、ジゴキシン、ＤＮＡＭ－１、Ｄｎａｓｅ、Ｄｐｐ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、Ｄｔｋ、ＥＣＡＤ、ＥＤＡ、ＥＤＡ－Ａ１、ＥＤＡ－Ａ２、ＥＤＡＲ、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ－１）、ＥＭＡ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥＮ Ａ、エンドセリン受容体、エンケファリナーゼ、ｅＮＯＳ、Ｅｏｔ、エオタキシン１、ＥｐＣＡＭ、エフリンＢ２／ＥｐｈＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＣＣ、Ｅ－セレクチン、ＥＴ－１、第Ｉｌａ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩｃ因子、第ＩＸ因子、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、Ｆａｓ、ＦｃＲｌ、ＦＥＮ－１、フェリチン、ＦＧＦ、ＦＧＦ－１９、ＦＧＦ－２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ－８、ＦＧＦＲ、ＦＧＦＲ－３、フィブリン、ＦＬ、ＦＬＩＰ、Ｆｌｔ－３、Ｆｌｔ－４、卵胞刺激ホルモン、フラクタルキン、ＦＺＤ１、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＦＺＤ１０、Ｇ２５０、Ｇａｓ ６、ＧＣＰ－２、ＧＣＳＦ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＤＦ、ＧＤＦ－１、ＧＤＦ－３（Ｖｇｒ－２）、ＧＤＦ－５（ＢＭＰ－１４、ＣＤＭＰ－１）、ＧＤＦ－６（ＢＭＰ－１３、ＣＤＭＰ－２）、ＧＤＦ－７（ＢＭＰ－１２、ＣＤＭＰ－３）、ＧＤＦ－８（ミオスタチン）、ＧＤＦ－９、ＧＤＦ－１５（ＭＩＣ－１）、ＧＤＮＦ、ＧＤＮＦ、ＧＦＡＰ、ＧＦＲａ－１、ＧＦＲ－アルファ１、ＧＦＲ－アルファ２、ＧＦＲ－アルファ３、ＧＩＴＲ、グルカゴン、Ｇｌｕｔ ４、糖タンパク質Ｉｌｂ／ＩＩＩａ（ＧＰ Ｉｌｂ／ＩＩＩａ）、ＧＭ－ＣＳＦ、ｇｐｌ３０、ｇｐ７２、ＧＲＯ、成長ホルモン放出因子、ハプテン（ＮＰキャップ又はＮＩＰキャップ）、ＨＢ－ＥＧＦ、ＨＣＣ、ＨＣＭＶ ｇＢエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ）ｇＨエンベロープ糖タンパク質、ＨＣＭＶ ＵＬ、造血成長因子（ＨＧＦ）、Ｈｅｐ Ｂ ｇｐｌ２０、ヘパラナーゼ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（ＥｒｂＢ－２）、Ｈｅｒ３（ＥｒｂＢ－３）、Ｈｅｒ４（ＥｒｂＢ－４）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ｇＢ糖タンパク質、ＨＳＶ ｇＤ糖タンパク質、ＨＧＦＡ、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＨＩＶ ｇｐｌ２０、ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ １２０ Ｖ３ループ、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＦＧ ＰＥＭ、ＨＲＧ、Ｈｒｋ、ヒト心筋ミオシン、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、ＨＶＥＭ、１－３０９、ＩＡＰ、ＩＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＥ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮｇ、Ｉｇ、ＩｇＡ受容体、ＩｇＥ、ＩＧＦ、ＩＧＦ結合タンパク質、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＧＦＢＰ、ＩＧＦ－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＬ、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－５、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－２３、インターフェロン（ＩＮＦ）－アルファ、ＩＮＦ－ベータ、ＩＮＦ－ガンマ、インヒビン、ｉＮＯＳ、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、インスリン様成長因子１、インテグリンアルファ２、インテグリンアルファ３、インテグリンアルファ４、インテグリンアルファ４／ベータ１、インテグリン、アルファ４／ベータ７、インテグリンアルファ５（アルファＶ）、インテグリンアルファ５／ベータ１、インテグリンアルファ５／ベータ３、インテグリンアルファ６、インテグリンベータ１、インテグリンベータ２、インターフェロンガンマ、ＩＰ－１０、１－ＴＡＣ、ＪＥ、カリクレイン２、カリクレイン５、カリクレイン６、カリクレイン１１、カリクレイン１２、カリクレイン１４、カリクレイン１５、カリクレインＬ１、カリクレインＬ２、カリクレインＬ３、カリクレインＬ４、ＫＣ、ＫＤＲ、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラミニン５、ＬＡＭＰ、ＬＡＰ、ＬＡＰ（ＴＧＦ－１）、潜在性ＴＧＦ－１、潜在性ＴＧＦ－１ ｂｐｌ、ＬＢＰ、ＬＤＧＦ、ＬＥＣＴ２、Ｌｅｆｔｙ、ルイスＹ抗原、ルイスＹ関連抗原、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、Ｌｆｏ、ＬＩＦ、ＬＩＧＨＴ、リポタンパク質、ＬＩＸ、ＬＫＮ、Ｌｐｔｎ、Ｌ－セレクチン、ＬＴ－ａ、ＬＴ－ｂ、ＬＴＢ４、ＬＴＢＰ－１、肺サーファクタント、黄体形成ホルモン、リンホトキシンベータ受容体、Ｍａｃ－１、ＭＡｄＣＡＭ、ＭＡＧ、ＭＡＰ２、ＭＡＲＣ、ＭＣＡＭ、ＭＣＡＭ、ＭＣＫ－２、ＭＣＰ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＤＣ、Ｍｅｒ、メタロプロテアーゼ、ＭＧＤＦ受容体、ＭＧＭＴ、ＭＨＣ（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ、ＭＩＰ－１－アルファ、ＭＫ、ＭＭＡＣ１、ＭＭＰ、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－１０、ＭＭＰ－１１、ＭＭＰ－１２、ＭＭＰ－１３、ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－２４、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－８、ＭＭＰ－９、ＭＰＩＦ、Ｍｐｏ、ＭＳＫ、ＭＳＰ、ムチン（Ｍｕｃｌ）、ＭＵＣ１８、ミューラー阻害物質、Ｍｕｇ、ＭｕＳＫ、ＮＡＩＰ、ＮＡＰ、ＮＣＡＤ、Ｎ－カドヘリン、ＮＣＡ ９０、ＮＣＡＭ、ＮＣＡＭ、ネプリリシン、ニューロトロフィン－３、－４、又は－６、ニュールツリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＧＦ－ベータ、ｎＮＯＳ、ＮＯ、ＮＯＳ、Ｎｐｎ、ＮＲＧ－３、ＮＴ、ＮＴＮ、ＯＢ、ＯＧＧ１、ＯＰＧ、ＯＰＮ、ＯＳＭ、ＯＸ４０Ｌ、ＯＸ４０Ｒ、ｐｌ５０、ｐ９５、ＰＡＤＰｒ、副甲状腺ホルモン、ＰＡＲＣ、ＰＡＲＰ、ＰＢＲ、ＰＢＳＦ、ＰＣＡＤ、Ｐ－カドヘリン、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ、ＰＤＫ－１、ＰＥＣＡＭ、ＰＥＭ、ＰＦ４、ＰＧＥ、ＰＧＦ、ＰＧＩ２、ＰＧＪ２、ＰＩＮ、ＰＬＡ２、胎盤性アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、Ｐ１ＧＦ、ＰＬＰ、ＰＰ１４、プロインスリン、プロリラキシン、タンパク質Ｃ、ＰＳ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＰＴＥＮ、ＰＴＨｒｐ、Ｐｔｋ、ＰＴＮ、Ｒ５１、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ、リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、レニン、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ、ＲＳＶ Ｆｇｐ、Ｒｅｔ、リウマトイド因子、ＲＬＩＰ７６、ＲＰＡ２、ＲＳＫ、Ｓ１００、ＳＣＦ／ＫＬ、ＳＤＦ－１、セリン、血清アルブミン、ｓＦＲＰ－３、Ｓｈｈ、ＳＩＧＩＲＲ、ＳＫ－１、ＳＬＡＭ、ＳＬＰＩ、ＳＭＡＣ、ＳＭＤＦ、ＳＭＯＨ、ＳＯＤ、ＳＰＡＲＣ、Ｓｔａｔ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ－ＩＩ、ＴＡＣＥ、ＴＡＣＩ、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質－７２）、ＴＡＲＣ、ＴＣＡ－３、Ｔ細胞受容体（例えば、Ｔ細胞受容体アルファ／ベータ）、ＴｄＴ、ＴＥＣＫ、ＴＥＭ１、ＴＥＭ５、ＴＥＭ７、ＴＥＭ８、ＴＥＲＴ、精巣ＰＬＡＰ様アルカリホスファターゼ、ＴｆＲ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦ－ベータ汎特異的、ＴＧＦ－ベータＲＩ（ＡＬＫ－５）、ＴＧＦ－ベータＲＩＩ、ＴＧＦ－ベータＲｌｌｂ、ＴＧＦ－ベータＲＩＩＩ、ＴＧＦ－ベータ１、ＴＧＦ－ベータ２、ＴＧＦ－ベータ３、ＴＧＦ－ベータ４、ＴＧＦ－ベータ５、トロンビン、胸腺Ｃｋ－１、甲状腺刺激ホルモン、Ｔｉｅ、ＴＩＭＰ、ＴＩＱ、組織因子、ＴＭＥＦＦ２、Ｔｍｐｏ、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦ、ＴＮＦ－アルファ、ＴＮＦ－アルファベータ、ＴＮＦ－ベータ２、ＴＮＦｃ、ＴＮＦ－ＲＩ、ＴＮＦ－ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ（ＴＲＡＩＬ Ｒｌ Ａｐｏ－２、ＤＲ４）、ＴＮＦＲＳＦＩＯＢ（ＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ－２Ａ、ＴＲＩＣＫ－Ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ（ＴＲＡＩＬ Ｒ３ ＤｃＲｌ、ＬＩＴ、ＴＲＩＤ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ（ＴＲＡＩＬ Ｒ４ ＤｃＲ２、ＴＲＵＮＤＤ）、ＴＮＦＲ
ＳＦ１１Ａ（ＲＡＮＫ ＯＤＦ Ｒ、ＴＲＡＮＣＥ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦｌｌＢ（ＯＰＧ ＯＣＩＦ、ＴＲ１）、ＴＮＦＲＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ｒ ＦＮ１４）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＡＣＩ）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＢＡＦＦ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ ＡＴＡＲ、ＨｖｅＡ、ＬＩＧＨＴ Ｒ、ＴＲ２）、ＴＮＦＲＳＦ１６（ＮＧＦＲ ｐ７５ＮＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＢＣＭＡ）、ＴＮＦＲＳＦ１８（ＧＩＴＲ ＡＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１９（ＴＲＯＹ ＴＡＪ、ＴＲＡＤＥ）、ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ（ＲＥＬＴ）、ＴＮＦＲＳＦＩＡ（ＴＮＦ ＲＩ ＣＤ１２０ａ、ｐ５５－６０）、ＴＮＦＲＳＦＩＢ（ＴＮＦ ＲＩＩ ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５－８０）、ＴＮＦＲＳＦ２６（ＴＮＦＲＨ３）、ＴＮＦＲＳＦ３（ＬＴｂＲ ＴＮＦ ＲＩＩＩ、ＴＮＦＣ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０ ＡＣＴ３５、ＴＸＧＰ１ Ｒ）、ＴＮＦＲＳＦ５（ＣＤ４０ ｐ５０）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ Ａｐｏ－１、ＡＰＴ１、ＣＤ９５）、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ（ＤｃＲ３ Ｍ６８、ＴＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ７（ＣＤ２７）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＴＮＦＲＳＦ９（４－ｌＢＢ ＣＤ１３７、ＩＬＡ）、ＴＮＦＲＳＦ２１（ＤＲ６）、ＴＮＦＲＳＦ２２（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒ２ ＴＮＦＲＨ２）、ＴＮＦＲＳＴ２３（ＤｃＴＲＡＩＬ Ｒｌ ＴＮＦＲＨ１）、ＴＮＦＲＳＦ２５（ＤＲ３ Ａｐｏ－３、ＬＡＲＤ、ＴＲ－３、ＴＲＡＭＰ、ＷＳＬ－１）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ Ａｐｏ－２リガンド、ＴＬ２）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫリガンドＯＤＦ、ＯＰＧリガンド）、ＴＮＦＳＦ１２（ＴＷＥＡＫ Ａｐｏ－３リガンド、ＤＲ３リガンド）、ＴＮＦＳＦ１３（ＡＰＲＩＬ ＴＡＬＬ２）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ（ＢＡＦＦ ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ２０）、ＴＮＦＳＦ１４（ＬＩＧＨＴ ＨＶＥＭリガンド、ＬＴｇ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＴＬ１Ａ／ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８（ＧＩＴＲリガンドＡＩＴＲリガンド、ＴＬ６）、ＴＮＦＳＦＩＡ（ＴＮＦ－ａコネクチン、ＤＩＦ、ＴＮＦＳＦ２）、ＴＮＦＳＦ１Ｂ（ＴＮＦ－ｂ ＬＴａ、ＴＮＦＳＦ１）、ＴＮＦＳＦ３（ＬＴｂ ＴＮＦＣ、ｐ３３）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンドｇｐ３４、ＴＸＧＰ１）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンドＣＤ１５４、ｇｐ３９、ＨＩＧＭ１、ＩＭＤ３、ＴＲＡＰ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓリガンドＡｐｏ－１リガンド、ＡＰＴ１リガンド）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンドＣＤ７０）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンドＣＤ１５３）、ＴＮＦＳＦ９（４－ｌＢＢリガンドＣＤ１３７リガンド）、ＴＰ－１、ｔ－ＰＡ、Ｔｐｏ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ Ｒ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＡＮＣＥ、トランスフェリン受容体、ＴＲＦ、Ｔｒｋ、ＴＲＯＰ－２、ＴＳＧ、ＴＳＬＰ、腫瘍関連抗原ＣＡ １２５、腫瘍関連抗原発現ルイスＹ関連炭水化物、ＴＷＥＡＫ、ＴＸＢ２、Ｕｎｇ、ｕＰＡＲ、ｕＰＡＲ－１、ウロキナーゼ、ＶＣＡＭ、ＶＣＡＭ－１、ＶＥＣＡＤ、ＶＥ－カドヘリン、ＶＥ－カドヘリン－２、ＶＥＦＧＲ－１（ｆｌｔ－１）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－３（ｆｌｔ－４）、ＶＥＧＩ、ＶＩＭ、ウイルス抗原、ＶＬＡ、ＶＬＡ－１、ＶＬＡ－４、ＶＮＲインテグリン、フォン・ヴィレブランド因子、ＷＩＦ－１、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、ＷＮＴ２Ｂ／１３、ＷＮＴ３、ＷＮＴ３Ａ、ＷＮＴ４、ＷＮＴ５Ａ、ＷＮＴ５Ｂ、ＷＮＴ６、ＷＮＴ７Ａ、ＷＮＴ７Ｂ、ＷＮＴ８Ａ、ＷＮＴ８Ｂ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ａ、ＷＮＴ９Ｂ、ＷＮＴ１０Ａ、ＷＮＴ１０Ｂ、ＷＮＴ１１、ＷＮＴ１６、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＸＣＲ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＩＡＰ、ＸＰＤ、ＣＴＬＡ４（細胞毒性Ｔリンパ球抗原－４）、ＰＤ１（プログラム細胞死タンパク質１）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子－３）、ＴＩＭ－３（Ｔ細胞免疫グロブリン及びムチンタンパク質－３）、ホルモン受容体、並びに成長因子。
特定の実施形態では、二重特異性（又は多重特異性）抗体によって標的にされ得る抗原の組み合わせには、ＣＤ３及びＨｅｒ２、ＣＤ３及びＨｅｒ３、ＣＤ３及びＥＧＦＲ、ＣＤ３及びＣＤ１９、ＣＤ３及びＣＤ２０、ＣＤ３及びＥｐＣＡＭ、ＣＤ３及びＣＤ３３、ＣＤ３及びＰＳＭＡ、ＣＤ３及びＣＥＡ、ＣＤ３及びｇｐ１００、ＣＤ３及びｇｐＡ３３、ＣＤ３及びＢ７－Ｈ３、ＣＤ６４及びＥＧＦＲ、ＣＥＡ及びＨＳＧ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２及びＬＴｂｅｔａＲ、ＥＧＦＲ及びＩＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ２及びＶＥＧＦＲ３、ＶＥＧＦＲ２及びＰＤＧＦＲアルファ、ＰＤＧＦＲアルファ及びＰＤＧＦＲベータ、ＥＧＦＲ及びＭＥＴ、ＥＧＦＲ及びＥＤＶ－ｍｉＲ１６、ＥＧＦＲ及びＣＤ６４、ＥＧＦＲ及びＨｅｒ２、ＥＧＦＲ及びＨｅｒ３、Ｈｅｒ２ドメインＥＣＤ２及びＨｅｒ２ドメインＥＣＤ４、Ｈｅｒ２及びＨｅｒ３、ＩＧＦ－１Ｒ及びＨＥＲ３、ＣＤ１９及びＣＤ２２、ＣＤ２０及びＣＤ２２、ＣＤ３０及びＣＤ１６Ａ、ＦｃｅＲＩ及びＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｂ及びＣＤ７９Ｂ、ＢＣＭＡ及びＨＥＬ ＭＰ６５及びＳＡＰ－２、ＩＬ－１７Ａ及びＩＬ－２３、ＩＬ－１アルファ及びＩＬ－１ベータ、ＩＬ－１２及びＩＬ－１８、ＶＥＧＦ及びオステオポンチン、ＶＥＧＦ及びＡｎｇ－２、ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦＲベータ、ＶＥＧＦ及びＨｅｒ２、ＶＥＧＦ及びＤＬＬ４、ＦＡＰ及びＤＲ５、ＦｃｇＲＩＩ及びＩｇＥ、ＣＥＡ及びＤＴＰＡ、ＣＥＡ及びＩＭＰ２８８、並びにＬｕｋＳ－ＰＶ及びＬｕｋＦ－ＰＶが含まれ得るが、これらに限定されない。
「異なる抗原」とは、異なる及び／若しくは別個のタンパク質、ポリペプチド、又は分子、並びに１つのタンパク質、ポリペプチド、又は分子内に含まれ得る異なる及び／若しくは別個のエピトープを指し得る。結果として、二重特異性抗体は、同じポリペプチド上の２つのエピトープに結合することができる。
「エピトープ」という用語は、本明細書で最も広い意味で使用され、対応するパラトープと相互作用する抗原の領域（単数又は複数）を包含する。タンパク質又はペプチドエピトープは、（例えば、水素結合又は疎水性相互作用を介して）パラトープと直接相互作用するアミノ酸残基、及び相互作用しないアミノ酸残基（例えば、エピトープの立体構造に概ね寄与する残基）を含み得る。エピトープは、構造的なもの又は機能的なものとして定義され得る。機能的エピトープは、概して、抗原のある機能（例えば、別のタンパク質に対する親和性又は酵素活性）に直接寄与する残基を有するエピトープである。構造的エピトープは、抗原機能に著しく寄与しない可能性がある抗原構造に寄与する残基を有するエピトープである。エピトープは、立体構造的である場合もある、すなわち、非直鎖状アミノ酸から構成されている場合もある。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基である決定基を含んでもよく、ある特定の実施形態では、エピトープは、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有してもよい。１つの抗原が、複数のエピトープを有する場合がある。したがって、異なる抗体が、抗原上の異なる領域に結合する場合があり、異なる生物学的効果を有する場合がある。「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞が反応する抗原上の部位も指す。この用語は、抗体によって結合される抗原の領域も指す。
いくつかの事例では、完全サイズ抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続される２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖である４つのポリペプチド鎖を含む。重鎖は各々、重鎖可変領域（「ＶＨ」）などの可変領域及び重鎖定常領域（「ＣＨ」）を含む。インタクトな抗体の場合、ＣＨは、ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。抗体断片の場合、ＣＨは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及び／又はＣＨ３ドメインを含んでもよく、いくつかの好ましい実施形態では、ＣＨは、少なくともＣＨ１ドメインを含む。本明細書に開示されるバリアントＣＨ３ドメインは、１つ以上の野生型ＣＨ２ドメイン及び／若しくはＣＨ３ドメインと、又は１つ以上のアミノ酸置換、例えば、抗体の安定性及び／若しくはエフェクター機能を改変若しくは改善するアミノ酸置換を含むＣＨ２及び／若しくはＣＨ３ドメインと組み合わせて使用され得る。軽鎖は各々、軽鎖可変領域（「ＶＬ」）などの可変領域及び軽鎖定常領域（「ＣＬ」）を含む。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域が分散した、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分することができる。ＶＨ及びＶＬは各々、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本開示のある特定の実施形態では、抗体（又はその抗原結合断片）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であっても、天然に又は人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの比較分析に基づいて定義され得る。したがって、重鎖内のＣＤＲは、それぞれ、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、及び「ＣＤＲＨ３」と命名され、軽鎖内のＣＤＲは、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、及び「ＣＤＲＬ３」と命名される。他の事例では、抗体は、その多量体（例えば、ＩｇＭ）又はその抗原結合断片を含んでもよい。
抗体可変ドメイン及び定常ドメイン内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に記載のＥＵインデックス又はＥＵ番号付けシステムによって行われ得る。別段の指定がない限り、ＥＵ番号付けシステムが本明細書で使用される。
ＩＭＧＴ（免疫グロブリン又は抗体、Ｔ細胞受容体、ＭＨ、免疫グロブリンスーパーファミリーＩｇＳＦ、及びＭｈＳＦのための国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム）によれば、ＣＨ１ドメインはアミノ酸位置（又は本明細書で単に「位置」と称される）１１８～２１５（ＥＵ番号付け）であり、ヒンジ領域はアミノ酸位置２１６～２３０（ＥＵ番号付け）である。「ＣＨ１ドメイン」という用語は、重鎖位置１１８～２１５（ＥＵ番号付け）のうちの少なくとも７つの連続したアミノ酸位置を含み、かついくつかの事例では、ヒンジ領域の一部分（重鎖位置２１６～２３０（ＥＵ番号付け）の一部分）も含む（例えば、２１８位まで）重鎖領域を指すために本明細書で広義で使用される。ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置１１８～２２０に対応するＣＨ１ドメイン参照配列は、配列番号６として本明細書に提供されており、これは、ヒトＩｇＧ１アロタイプ「ＩＧＨＧ１＊０１（Ｊ００２２８）」、「ＩＧＨＧ１＊０４（ＪＮ５８２１７８）」、又は「ＩＧＨＧ１＊０７」のＣＨ１ドメイン配列に対応し、野生型（ＷＴ）ＣＨ１ドメインの例示的なアミノ酸配列である。
ＣＨ１ドメイン参照配列：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣ（ＥＵ番号付けに従う位置１１８～２２０）（配列番号６）。
ヒトＩｇＧ１の代替のＣＨ１ドメイン参照配列には、ヒトＩｇＧ１アロタイプ「ＩＧＨＧ１＊０３（Ｙ１４７３７）」又は「ＩＧＨＧ１＊０８」のＣＨ１ドメイン配列に対応する配列番号５が含まれるが、これに限定されない。
代替のＣＨ１ドメイン参照配列（配列番号６と比較して２１４Ｒ）：
（配列表１）
Figure 2024503034000002

Figure 2024503034000003
（ＥＵ番号付けに従う位置１１８～２２０）（配列番号５）。
これらのＣＨ１ドメイン参照配列は、「ＣＨ１ドメイン」配列があらゆる天然に存在するＣＨ１ドメインアロタイプ又は対立遺伝子バリアントを含むよう出願人によって意図されているため、例示的であるよう意図されている。
ＩＭＧＴによれば、ＣＨ２ドメインは、アミノ酸位置（又は本明細書で単に「位置」と称される）２３１～３４０（ＥＵ番号付け）である。「ＣＨ２ドメイン」という用語は、重鎖位置２３１～３４０（ＥＵ番号付け）のうちの少なくとも７つの連続したアミノ酸位置を含む重鎖領域を指すために本明細書で広義で使用される。ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置２３１～３４０に対応するＣＨ２ドメイン参照配列は、配列番号７として本明細書に提供されており、これは、野生型（ＷＴ）ＣＨ２ドメインの例示的なアミノ酸配列である。
ＣＨ２ドメイン参照配列：ＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫ（配列番号７）。
この場合もやはり、列挙されているＣＨ２ドメイン参照配列は、「ＣＨ２ドメイン」配列があらゆる天然に存在するＣＨ２ドメインアロタイプ又は対立遺伝子バリアントを含むよう出願人によって意図されているため、例示的であるよう意図されている。
ＩＭＧＴによれば、ＣＨ３ドメインは、アミノ酸位置（又は本明細書で単に「位置」と称される）３４１～４４６（ＥＵ番号付け）である。「ＣＨ３ドメイン」という用語は、重鎖位置３４１～４４６（ＥＵ番号付け）のうちの少なくとも７つの連続したアミノ酸位置を含む重鎖領域を指すために本明細書で広義で使用される。ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置３４１～４４６に対応するＣＨ３ドメイン参照配列は、配列番号１として本明細書に提供されており、これは、ヒトＩｇＧ１アロタイプ「ＩＧＨＧ１＊０１（Ｊ００２２８）」又は「ＩＧＨＧ１＊０８」のＣＨ３ドメイン配列に対応し、野生型（ＷＴ）ＣＨ３ドメインの例示的なアミノ酸配列である。
ＣＨ３ドメイン参照配列：ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１）。
ヒトＩｇＧ１の代替のＣＨ３ドメイン参照配列には、ヒトＩｇＧ１アロタイプ「ＩＧＨＧ１＊０３（Ｙ１４７３７）」のＣＨ３ドメイン配列に対応する配列番号２、ヒトＩｇＧ１アロタイプ「ＩＧＨＧ１＊０４（ＪＮ５８２１７８）」のＣＨ３ドメイン配列に対応する配列番号３、及びヒトＩｇＧ１アロタイプ「ＩＧＨＧ１＊０７」のＣＨ３ドメイン配列に対応する配列番号４が含まれ得るが、これらに限定されない。
代替のＣＨ３ドメイン参照配列（配列番号１と比較して３５６Ｅ及び３５８Ｍ）：
（配列表２）
Figure 2024503034000004

Figure 2024503034000005
（配列番号２）。
代替のＣＨ３ドメイン参照配列（配列番号１と比較して４２２Ｉ）：
（配列表３）
Figure 2024503034000006

Figure 2024503034000007
（配列番号３）。
代替のＣＨ３ドメイン参照配列（配列番号１と比較して４３１Ｇ）：
（配列表４）
Figure 2024503034000008

Figure 2024503034000009
（配列番号４）。
これらのＣＨ３ドメイン参照配列は、「ＣＨ３ドメイン」配列があらゆる天然に存在するＣＨ３ドメインアロタイプ又は対立遺伝子バリアントを含むよう出願人によって意図されているため、例示的であるよう意図されている。
したがって、本開示によるバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸修飾は、例えば、配列番号１などの野生型配列、又は配列番号２、３、若しくは４などのいずれかの対立遺伝子バリアントであるが、これらに限定されない、いずれかの親ＣＨ３ドメインポリペプチドと比較したものであり得る、及び／又はそれらに組み込まれ得る。
２つの主要なＣＬアイソタイプであるカッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）が存在し、かかるＣＬドメインは、本明細書でカッパＣＬドメイン（「ＣＬκ」ドメイン）及びラムダＣＬドメイン（「ＣＬλ」ドメイン）と称される。
ＩＭＧＴによれば、ＣＬκドメインは、アミノ酸位置１０８～２１４（ＥＵ番号付け）である。「ＣＬκドメイン」という用語は、カッパ軽鎖位置１０８～２１４（ＥＵ番号付け）のうちの少なくとも７つの連続したアミノ酸位置を含む軽鎖領域を指すために本明細書で広義で使用される。アミノ酸位置１０８～２１４（ＥＵ番号付け）に対応するＣＬκドメイン参照配列は、配列番号８として本明細書に提供されており、これは、野生型（ＷＴ）ＣＬκドメインの例示的なアミノ酸配列である。
ＣＬκドメイン参照配列：ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（ＥＵ番号付けに従う位置１０８～２１４）（配列番号８）。
ＩＭＧＴによれば、ＣＬλドメインは、アミノ酸位置１０７～２１５（ＥＵ番号付け）である。「ＣＬλドメイン」という用語は、ラムダ軽鎖位置１０７～２１５（ＥＵ番号付け）のうちの少なくとも７つの連続したアミノ酸位置を含む軽鎖領域を指すために本明細書で広義で使用される。アミノ酸位置１０７～２１５（ＥＵ番号付け）に対応するＣＬλドメイン参照配列は、配列番号９として本明細書に提供されており、これは、野生型（ＷＴ）ＣＬλドメインの例示的なアミノ酸配列である。
ＣＬλドメイン参照配列：ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ（ＥＵ番号付けに従う位置１０７～２１５）（配列番号９）。
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の定常ドメインの様々な標準配列（異なるアロタイプに対応する）は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４ Ｏｃｔ ２０；５：５２０及び米国特許第９１５０６６３号で見つけることができ、これらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。この場合もやはり、これらの参照配列は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４配列があらゆる天然に存在するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４アロタイプを含むよう出願人によって意図されているため、例示的であるよう意図されている。
本明細書で使用される「同族対」又は「同族対合」という用語は、可変領域（例えば、それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）を各々含み、それらの可変領域の組み合わせにより、あるエピトープ又は抗原に対する意図された結合特異性が提供される、２つの抗体鎖（例えば、重鎖及び軽鎖）の対又は対合を指す。本明細書で使用される「非同族対」又は「非同族対合」という用語は、可変領域（例えば、それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）を各々含み、それらの可変領域の組み合わせにより、あるエピトープ又は抗原に対する意図された結合特異性が提供されない、２つの抗体鎖（例えば、重鎖及び軽鎖）の対又は対合を指す。
ＣＨ３－ＣＨ３ホモ二量体の形成を防止する又は減少させ、ＣＨ－ＣＨ３ホモ二量体を優先的に形成する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む操作されたバリアントＣＨ３ドメインが本明細書に提供される。
「ＣＨ３ドメインセット」又は「ＣＨ３セット」という用語は、互換的に使用され、２つのＣＨ３ドメインの組み合わせを指す。ＣＨ３セットが２つの非野生型ＣＨ３ドメイン（すなわち、２つのバリアントＣＨ３ドメイン）を含む場合、かかるＣＨ３セットは、「バリアントＣＨ３ドメインセット」（若しくは「ＣＨ３ドメインバリアントセット」）又は「バリアントＣＨ３セット」（若しくは「ＣＨ３バリアントセット」）とも称され得る。そのセットのＣＨ３ドメインに含まれるアミノ酸置換に基づいて、「ＣＨ３セット名」が各「ＣＨ３セット」に与えられる。あるセットのＣＨ３ドメインに含まれる置換のセットは、「ＣＨ３置換セット」と称され得る。
本明細書で使用される「ＣＨ３セット名」は、重鎖を分離するためにダッシュを用いて、各鎖のＣＨ３ドメインで置換されたアミノ酸位置（ＥＵ番号付けに従う）によって命名される。例えば、「Ｗ－ＳＧ」セットは、第１の重鎖（図１９及び付録表では鎖Ａと称される）のＣＨ３ドメイン（３６６位）にＷを有し、加えて、第２の重鎖（図１９及び付録表では鎖Ｂと称される）のＣＨ３ドメイン（３６６位及び４０７位）にＳ及びＧを有する。これらの２つの鎖は、図１９及び付録表では鎖Ａ及び鎖Ｂと称されるが、鎖名は互換的である。例えば、「Ｗ－ＳＧ」セットは、第２の重鎖（又は「鎖Ｂ」）のＣＨ３ドメイン（３６６位）にＷを有してもよく、加えて、第１の重鎖（又は「鎖Ａ」）のＣＨ３ドメイン（３６６位及び４０７位）にＳ及びＧを有してもよい。「（３４９／３５４）」及び「（３５４／３４９）」とは、ＣＨ３ドメイン間ジスルフィド結合を可能にする置換を指す。例えば、「（３４９／３５４）」は、鎖ＡのＣＨ３におけるＹ３４９Ｃ置換及び鎖ＢのＣＨ３におけるＳ３５４Ｃ置換の存在を示す。同様に、「（３５４／３４９）」は、鎖ＡのＣＨ３におけるＳ３５４Ｃ置換及び鎖ＢのＣＨ３におけるＹ３４９Ｃ置換の存在を示す。したがって、「Ｗ－ＳＧ（３５４／３４９）」とは、Ｓ３５４Ｃ置換が「Ｗ」変電所（３６６位）を有するＣＨ３に存在し、Ｙ３４９Ｃ置換が「ＳＧ」置換（３６６位及び４０７位）を有するＣＨ３に存在することを意味する。
本明細書で使用される場合、「バリアントＣＨ３ドメイン」という用語（「バリアントＣＨ３ドメインポリペプチド」、「ＣＨ３ドメインバリアント」、又は「ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド」とも称される）は、互換的に使用され、１つ以上のアミノ酸置換がＣＨ３ドメイン配列に対して行われるアミノ酸配列を有するＣＨ３ドメインを指す。アミノ酸置換が行われるＣＨ３配列は、参照ＣＨ３ドメイン配列配列番号１を含むが、これに限定されない。記載されるバリアントＣＨ３ドメインを特定するためにスクリーニングされたライブラリでは、配列番号１をコードする核酸配列を可変化した。本明細書で使用される「Ｆａｂアーム交換」又は「ＦＡＥ」という用語は、Ｉｇ分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、又はＩｇＤ）の半分子（すなわち、抗体がＩｇＧである場合、半抗体又は半ＩｇＧとも称される、１つの重鎖と１つの軽鎖の対）が、別のＩｇ分子の別の半分子と再結合するプロセスを指す。ＦＡＥが元来ヒトＩｇＧ４分子に天然に存在し、かつＦＡＥが弱還元剤の添加によってインビトロで模倣され得ることが見出された（ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００７ Ｓｅｐ １４；３１７（５８４４）：１５５４－１５５７）。ＩｇＧ４アミノ酸残基を、それらのＩｇＧ１対応残基と置換する部位特異的変異誘発研究により、ヒトにおけるＦＡＥがＩｇＧ４コアヒンジに位置する残基Ｓ２２８（ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００７ Ｓｅｐ １４；３１７（５８４４）：１５５４－１５５７、Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９ Ａｕｇ；２７（８）：７６７－７７１．）及びＩｇＧ４ ＣＨ３ドメインに位置するＲ４０９（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１ Ｓｅｐ １５；１８７（６）：３２３８－４６．）によって駆動され得ることが特定された。後に、４０９位がＲに置換されるＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインと４０５位がＬに置換される別のＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインが互いに優先的に対合し、かかるＣＨ３の使用が二重特異性ＩｇＧ１分子の製造に有用であり得ることが発見された（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３ Ｍａｒ ２６；１１０（１３）：５１４５－５０）。
本明細書で使用される「制御されたＦＡＥ」又は「ｃＦＡＥ」という用語は、ヘテロ二量体を優先的に形成する操作されたＣＨ３ドメインのセットによって人工的に促進されるＦＡＥを指す。ｃＦＡＥは、二重特異性抗体の効率的な製造に特に有用であり得る。例えば、目的とする抗体が、（ａ）重鎖Ａ（ＶＨを含む）及び軽鎖Ａ（ＶＬを含む）を含むエピトープＡに特異的な半抗体を含み、かつ（ｂ）重鎖Ｂ（ＶＨを含む）及び軽鎖Ｂ（ＶＬを含む）を含むエピトープＢに特異的な半抗体を含む場合、（ａ）エピトープＡに特異的な半抗体を２つ含む抗体Ａ及び（ｂ）エピトープＢに特異的な半抗体を２つ含む抗体Ｂが最初に産生され得る。その後、抗体Ａ及び抗体Ｂが、重鎖間のジスルフィド結合の減少を可能にし、結果として半抗体分子をもたらす、弱還元条件下で一緒に配置され得る。重鎖Ａが操作されたＣＨ３ドメインＡを含み、重鎖Ｂが操作されたＣＨ３ドメインＢを含み、ＣＨ３ドメインＡ及びＣＨ３ドメインＢがＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する場合、弱還元条件の除去時に、ｃＦＡＥにより、重鎖Ａと重鎖Ｂとの間のヘテロ二量体が重鎖Ａホモ二量体及び重鎖Ｂホモ二量体よりも優先的に形成され、抗体Ａ及び抗体Ｂよりも多くの目的とする二重特異性抗体がもたらされる。
それぞれ、「半ＩｇＧ」、「半ＩｇＥ」、又は「半ＩｇＤ」とも称され得る、ＩｇＧ、ＩｇＥ、又はＩｇＤを指す際の「半分子」又は「半抗体」という用語は、参照される抗体の１つの重鎖及び１つの軽鎖のセットを指す。
ＣＨ３ドメインを指す際のヘテロ二量体を「優先的に」形成する又はヘテロ二量体の「優先的」形成とは、別の同一ではないＣＨ３ドメインを有するヘテロ二量体の形成が、別の同一のＣＨ３ドメインを有するホモ二量体の形成よりも多く（すなわち、より頻繁に又はより高い確率で）生じることを意味する。互いに異なる２つのＣＨ３ドメインのセット（第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメイン）を指す場合、ホモ二量体（第１のＣＨ３ドメインの二量体と第２のＣＨ３ドメインの二量体）よりも多くの（第１のＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインの）ヘテロ二量体が形成されることを意味する。例えば、第１のＣＨ３ドメインと、第１のＣＨ３ドメインとは異なる第２のＣＨ３ドメインが、およそ１：１の比率で混合、共発現、又は共提供される場合、ＣＨ３二量体のうち、第１のＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインとの間に形成される二量体％は、５０％超である。ＣＨ－ＣＨ３ヘテロ二量体％（例えば、「ヘテロ二量体（単数）％」若しくは「ヘテロ二量体（複数）％」とも称される）又はヘテロ二量体化の程度は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、又はフローサイトメトリーなどであるが、これらに限定されない、任意の利用可能なアッセイによって定量化されてもよい。ヘテロ二量体％は、ＣＨ３ドメインが本明細書に開示されるＣＨ３置換セットを含む場合、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％であり得る。いくつかの好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約７０％以上であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約７５％以上であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約８０％以上であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約８５％以上であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約９０％以上であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約９５％以上であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であり得る。いくつかのより好ましい実施形態では、ヘテロ二量体％は、約１００％であり得る。
ＣＨ３置換セット若しくはＣＨ３セット、及び／又はかかるＣＨ３セットを含む抗体は、凝集の程度（例えば、完全抗体の多量体の存在）及び／若しくは半抗体の量（すなわち、分子中の１つのＣＨ３若しくは分子中の１つの重鎖）（これらはいずれも、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）などのクロマトグラフィー若しくはＳＤＳ－ＰＡＧＥなどの電気泳動によって定量化され得る）；融解温度（Ｔｍ）（例えば、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）により測定され得る）；適切な細胞型（例えば、ＨＥＫ２９３細胞若しくは酵母細胞）における産生収率；「ｐＩ」、等電点（「ｐＩ」）；多重特異性試薬（ＰＳＲ）との相互作用のレベル（ＷＯ２０１４／１７９３６３にあるように測定され得る）；抗体の疎水性相互作用（例えば、Ｅｓｔｅｐ Ｐ，ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１５ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；７（３）：５５３－５６１．にあるように測定される、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により測定され得る）；溶解性；生産コスト及び／若しくは時間；安定性；保存可能期間；インビボ半減期；並びに／又は免疫原性などであるが、これらに限定されない、追加の特性（単数若しくは複数）に基づいて更に評価することができる。所与のバリアントＣＨ３ドメインセット又はＣＨ３セットを評価する際に、ヘテロ二量体％値に加えて、これら又は他の特性のうちのいずれかを使用してもよい。したがって、比較的低いヘテロ二量体％をもたらすバリアントＣＨ３ドメイン又はＣＨ３セットは、バリアントＣＨ３ドメイン又はＣＨ３セットが１つ以上の特性に良好なプロファイルを提供する場合、比較的高いヘテロ二量体％値を有する別のＣＨ３セットと同様に理想的であり得る。例えば、３％の凝集（発現産物の３％が完全抗体の多量体である）で８０％のヘテロ二量体をもたらすＣＨ３セットは、１０％の凝集で９０％のヘテロ二量体をもたらすＣＨ３セットと同様に理想的であり得る。
抗体には以下の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２などのサブクラス（アイソタイプ）に更に分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。本開示による定常ドメインは、任意の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭ、及びＩｇＥであってもよい。本明細書で使用される場合、ＣＨ３ドメインは、抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＭ、及びＩｇＥのＣＨ３に由来し得る。本開示によるＣＨ３置換は、ＣＨ３参照配列配列番号１などであるが、これに限定されない、任意のＣＨ３ドメイン配列に対して行われ得る。ＣＨ１ドメイン及び／又はＣＨ２ドメインが本開示のバリアントＣＨ３ドメインとともに使用される場合、ＣＨ１ドメイン及び／ＣＨ２ドメインは、任意の抗体アイソタイプに由来し得、ＣＨ１ドメインドメインアイソタイプ及び／又はＣＨ２ドメインアイソタイプは、必ずしもＣＨ３ドメインアイソタイプと同じである必要はない。
「ライブラリ」は、核酸、ペプチド、タンパク質、及びそれらの配列情報などの生物学的材料の任意の収集物を包含するために本明細書で使用される。例えば、「ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリ」とは、異なるＣＨ３ドメインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの収集物又はそれらのポリヌクレオチド配列の収集物を指し、「ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリ」とは、異なるＣＨ３ドメインポリペプチドの収集物又はそれらのアミノ酸配列の収集物を指す。
本明細書で使用される「医薬担体」には、生理学的に適合性のある、あらゆる全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤、並びに吸収遅延剤が含まれる。一実施形態では、担体は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、又は舌下投与に好適である。薬学的に許容される担体には、滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための滅菌水溶液又は分散液及び滅菌粉末が含まれる。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。いずれの従来の媒体又は薬剤も活性化合物と適合性がない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるその使用が企図される。補足の活性化合物も本組成物に組み込むことができる。いくつかの実施形態では、担体は、活性治療剤が製剤化される液体であってもよい。賦形剤は、概して、製剤にいずれの薬理活性も提供しないが、化学的及び／又は生物学的安定性、並びに放出特性を提供し得る。例示的な製剤は、例えば、参照により組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．ｅｄｉｔｏｒ，１９ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９５）で見つけることができる。
「保存的アミノ酸置換」は、当該技術分野で既知であり、ある特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１つのアミノ酸が同じ又は同様の化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸と交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性／負電荷極性アミノ酸の別の酸性／負電荷極性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）での置換、非極性側鎖を有するアミノ酸の非極性側鎖を有する別のアミノ酸での置換（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）、塩基性／正電荷極性アミノ酸の別の塩基性／正電荷極性アミノ酸での置換（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する無電荷アミノ酸の極性側鎖を有する別の無電荷アミノ酸での置換（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）、β分岐側鎖を有するアミノ酸のβ分岐側鎖を有する別のアミノ酸での置換（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、及びＶａｌ）、芳香族側鎖を有するアミノ酸の芳香族側鎖を有する別のアミノ酸での置換（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒ）などであり得る。
バリアントＣＨ３ドメイン及びＣＨ３ドメインセット
本明細書に記載されるように、ＣＨ３ドメイン内のある特定の位置、並びにある特定のアミノ酸置換及び置換セットがＣＨ３ドメインの対合又はＣＨ３－ＣＨ３二量体（又はＦｃヘテロ二量体）の形成に影響を及ぼすことが見出された。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のバリアントＣＨ３ドメインは、ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のバリアントＣＨ３ドメインは、表７に列記された位置のうちのいずれか、又は表７に列記された位置組み合わせのうちのいずれかにアミノ酸置換を含み得る。
かかるアミノ酸置換が組み込まれ得る親ＣＨ３ドメインは、野生型若しくは天然に存在するＣＨ３ドメイン配列、又はそのバリアント若しくは操作されたバージョンを含み得る。かかる親ポリペプチドの例示的な配列には、ＥＵ番号付けに従うアミノ酸位置３４１～４４６に対応する、参照ＣＨ３配列配列番号１が含まれるが、これに限定されない。
結果として生じるバリアントＣＨ３ドメインは、ＣＨ３－ＣＨ３ホモ二量体よりもＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する。かかるバリアントＣＨ３ドメインは、ヘテロ二量体（又は多量体）ポリペプチド及びかかるポリペプチドを含む分子の産生に有用であり得る。かかるバリアントＣＨ３ドメインは、二重特異性抗体の天然ＩｇＧ構造を維持しながら異種Ｆｃ対合の忠実度を改善することによって多重特異性抗体及び抗体断片を産生する際に有用であり得、これは、長いインビボ半減期及びエフェクター機能を引き出す能力を含む、治療用分子としてのその十分に確立された特性のため、好ましいものである。これらのドメインＣＨ３バリアントを使用して、適切な重鎖－重鎖対合を促進することによって多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体を生成する際の鎖誤対合を全体的又は部分的に解決することができる。より具体的には、これらのバリアントＣＨ３ドメインを含む多重特異性抗体は、製造中の排除が困難であり得る望ましくない産物関連混入物質、すなわち、誤対合されたドメイン又は鎖を含む分子をわずかにしか形成しない。
いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換は、（ｉ）３６６位、（ｉｉ）３６８位、（ｉｉｉ）４０７位、（ｉｖ）３６６位及び４０７位、（ｖ）３６６位及び３６８位、（ｖｉ）３６６位及び４０９位、（ｖｉｉ）３６８位及び３７０位、（ｖｉｉｉ）３６８位及び４０７位、（ｉｘ）３９９位及び４０５位、（ｘ）４００位及び４０９位、（ｘｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、（ｘｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、（ｘｉｉｉ）３６６位、３６８位、及び３７０位、（ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、（ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、（ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、（ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、（ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、（ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、（ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は（ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含み得るか若しくはそれからなり得る。
いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメインは、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃ置換を更に含み得、これにより、それぞれ、Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃ置換を含む別のバリアントＣＨ３ドメインとのジスルフィド形成が可能になる。いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメインは、以下のアミノ酸置換：Ｓ３６４Ｄ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｑ、Ｔ３６６Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｗ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｆ、Ｌ３６８Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、Ｋ３７０Ｇ、Ｋ３７０Ｙ、Ｄ３９９Ｑ、Ｓ４００Ｔ、Ｆ４０５Ｌ、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ｇ、Ｋ４０９Ｒ、Ｋ４０９Ｌ、及び／又はＫ４０９Ｇのうちの１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメインは、任意選択で、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを更に含み得る。
いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換は、以下の置換組み合わせ：Ｔ３６６Ｗ；Ｔ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇ；Ｔ３６６Ｖ；Ｙ４０７Ｖ；Ｔ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒ；Ｌ３６８Ｆ；Ｔ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇ；Ｌ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇ；Ｓ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌ；Ｄ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌ；Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇ；Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙ；Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇ；Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ；Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ；Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒ；Ｔ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆ；Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇ；又はＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇのうちのいずれか１つを含み得るか若しくはそれからなり得る。いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換は、以下の置換組み合わせ：Ｔ３６６Ｗ；Ｔ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇ；Ｔ３６６Ｖ；Ｙ４０７Ｖ；Ｔ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒ；Ｌ３６８Ｆ；Ｔ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇ；Ｌ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇ；Ｓ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌ；Ｄ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌ；Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇ；Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙ；Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇ；又はＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇのうちのいずれか１つを含み得るか若しくはそれからなり得る。いくつかの実施形態では、Ｓ３５４Ｃ又はＹ３４９Ｃ置換は、置換組み合わせのうちのいずれかに更に追加され得る。
いくつかの実施形態では、これらの置換は、配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる。かかる事例では、本開示によるバリアントＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１１～１６、２１～２６、３１～３６、４１～４６、５１～５６、６１～６６、７１～７６、８１～８６、９１～９６、１０１～１０６、１１１～１１６、１２１～１２６、１３１～１３６、１４１～１４６、１５１～１５６、及び１６１～１６６のうちのいずれか１つにおける配列を含み得るか又はそれからなり得る。いくつかの実施形態では、本開示によるバリアントＣＨ３ドメインは、配列番号１１～１６、２１～２６、３１～３６、４１～４６、５１～５６、６１～６６、７１～７６、及び１６１～１６６のうちのいずれか１つにおける配列を含み得るか又はそれからなり得る。いくつかの好ましい実施形態では、バリアントＣＨ３ドメインは、配列番号１１～１６及び７１～７６のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示によるバリアントＣＨ３ドメインは、本明細書に開示されるＣＨ３ドメインに従う別のバリアントＣＨ３ドメインと対合され得るか又はそれとヘテロ二量体を形成し得る。
ＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する本開示によるバリアントＣＨ３ドメインセットは、表１に列記される既存のＣＨ３技術などのヘテロ二量体化優先ＣＨ３ドメインセットとして以前に特定されたものとは同一ではない。しかしながら、いずれの本明細書に記載の発明ＣＨ３置換セットも、表１のＣＨ３技術などの既存のＣＨ３技術と組み合わされてもよい。
いくつかの実施形態では、かかるＣＨ３ヘテロ二量体は、以下のＣＨ３セット：Ｗ－ＳＧ、Ｖ－Ｖ、ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＴＬ－ＱＬ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、ＬＷＧ－ＳＩＧ、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ、ＶＴＬ－ＶＱＬ、ＶＱＬ－ＶＴＬ、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ、ＶＱＲ－ＶＦ、又はＬＷＧ－ＩＧのうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、かかるＣＨ３ヘテロ二量体は、以下のＣＨ３セット：Ｗ－ＳＧ、Ｖ－Ｖ、ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＴＬ－ＱＬ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、ＬＷＧ－ＳＩＧ、又はＬＷＧ－ＩＧのうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＨ３セットは、ＣＨ３ジスルフィド結合可能置換（「３５４／３４９」置換又は「３４９／３５４」置換）とともに更に追加され得る。かかる実施形態では、かかるＣＨ３ヘテロ二量体は、以下のＣＨ３セット：Ｗ－ＳＧ（３４９／３５４）、Ｖ－Ｖ（３４９／３５４）、ＱＲ－Ｆ（３４９／３５４）、ＲＧ－ＦＧ（３４９／３５４）、ＴＬ－ＱＬ（３４９／３５４）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３４９／３５４）、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ（３４９／３５４）、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ（３４９／３５４）、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ（３４９／３５４）、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ（３４９／３５４）、ＶＴＬ－ＶＱＬ（３４９／３５４）、ＶＱＬ－ＶＴＬ（３４９／３５４）、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ（３４９／３５４）、ＶＱＲ－ＶＦ（３４９／３５４）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３４９／３５４）、又はＷ－ＳＧ（３５４／３４９）、Ｖ－Ｖ（３５４／３４９）、ＱＲ－Ｆ（３５４／３４９）、ＲＧ－ＦＧ（３５４／３４９）、ＴＬ－ＱＬ（３５４／３４９）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３５４／３４９）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３５４／３４９）、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ（３５４／３４９）、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ（３５４／３４９）、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ（３５４／３４９）、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ（３５４／３４９）、ＶＴＬ－ＶＱＬ（３５４／３４９）、ＶＱＬ－ＶＴＬ（３５４／３４９）、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ（３５４／３４９）、ＶＱＲ－ＶＦ（３５４／３４９）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３５４／３４９）のうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、かかるＣＨ３ヘテロ二量体は、以下のＣＨ３セット：Ｗ－ＳＧ（３４９／３５４）、Ｖ－Ｖ（３４９／３５４）、ＱＲ－Ｆ（３４９／３５４）、ＲＧ－ＦＧ（３４９／３５４）、ＴＬ－ＱＬ（３４９／３５４）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＩＧ（３４９／３５４）、Ｗ－ＳＧ（３５４／３４９）、Ｖ－Ｖ（３５４／３４９）、ＱＲ－Ｆ（３５４／３４９）、ＲＧ－ＦＧ（３５４／３４９）、ＴＬ－ＱＬ（３５４／３４９）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３５４／３４９）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３５４／３４９）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３５４／３４９）のうちのいずれかを含み得る。これらのセットにおける置換のアミノ酸位置及び残基の詳細は、付録表Ｅ～Ｇに示されている。
いくつかの好ましい実施形態では、本開示によるＣＨ３セットは、Ｗ－ＳＧ、ＬＷＧ－ＳＩＧ、Ｗ－ＳＧ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３４９／３５４）、Ｗ－ＳＧ（３５４／３４９）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３５４／３４９）であり得る。
更なる実施形態では、いずれの本明細書に記載の置換セットも、別のＣＨ３ヘテロ二量体化優先ＣＨ３置換若しくは置換セット、例えば、本明細書に記載の発明ＣＨ３置換若しくは置換セットのうちのいずれか１つ、又は表１に列記されるものなどの既存のＣＨ３ヘテロ二量体化優先置換若しくは置換セットのうちのいずれか１つと組み合わせて、ＣＨ３ヘテロ二量体化を更に増強又は促進することができる。
更に、ＣＨ３ヘテロ二量体化優先度のために本明細書に提供されるＣＨ３ドメイン内の特定のアミノ酸置換の各々について、置換の結果として含まれるアミノ酸が保存的アミノ酸置換により更に置換されて、ＣＨ３ヘテロ二量体化に同等の優先度を提供する別のバリアントＣＨ３ドメインを得ることができる。代替的に、バリアントＣＨ３ドメインの各々について、野生型配列と比較してバリアントＣＨ３ドメインに影響を及ぼさなかった１つ以上のアミノ酸位置が、保存的置換により改変されて、同等のＣＨ３優先度を提供する別のバリアントＣＨ３ドメインを得ることができる。
実施例に示されるように特定され、かつ既存のＣＨ３ヘテロ二量体化バリアントＣＨ３ドメインセットよりも高いヘテロ二量体化などの少なくとも１つの優れた特性を提供するＣＨ３セットのうちのいくつかの概要が以下に提供される。例えば、実施例に示されるように、酵母細胞上で「修飾Ｆｃ」として発現された場合、（１）～（７）のセットが全て、フローサイトメトリーにより測定される、優れたヘテロ二量体化を示す。（１）～（７）の各々の追加の優れた特性（非包括的）のうちのいくつかも以下に提供される。
（１）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「Ｗ－ＳＧ」セット
「Ｗ－ＳＧ」セットは、１つのＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｗを含み、別のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含む。
例えば、「Ｗ－ＳＧ」セットは、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）により測定される、試験した対照（ＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも高いヘテロ二量体％値を示す（図１１Ｂを参照されたい）。ＣＨ３ジスルフィド置換を有する「Ｗ－ＳＧ」セットは、ＨＥＫ細胞においてＢｓＡｂとして発現された場合、ＬＣ－ＭＳにより測定される、試験した対照（ＥＷ－ＲＶＴ及びＣＨ３ジスルフィド置換を有するＫｉＨ）よりも非常に高いヘテロ二量体％値（１００％）を更に示す（表１３を参照されたい）。更に、ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「Ｗ－ＳＧ」セットは、ＳＥＣにより測定される、試験したそれぞれの対照既存の技術（ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しないＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）と比較して少ない凝集を示す（表６を参照されたい）。加えて、ＣＨ３ジスルフィド置換有する「Ｗ－ＳＧ」セットは、試験した既存の技術（ＣＨ３ジスルフィド置換を有するＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも高い収率を示した（表６を参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号１１及び１２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号１３及び１４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号１５及び１６のアミノ酸配列を含む。
（２）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「Ｖ－Ｖ」セット
「Ｖ－Ｖ」セットは、１つのＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｖを含み、別のＣＨ３ドメインにＹ４０７Ｖを含む。
例えば、「Ｖ－Ｖ」セットは、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）により測定される、試験した既存の技術（ＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも高いヘテロ二量体％値を示す（図１１Ｂを参照されたい）。「Ｖ－Ｖ」セットは、ＨＥＫ２９３細胞で産生された場合、試験した対照（ＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも高い収率も示す（表６を参照されたい）。更に、ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「Ｖ－Ｖ」セットは、ＳＥＣにより測定される、試験したそれぞれの対照既存の技術（それぞれ、ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しないＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）と比較して少ない凝集を示す（表６を参照されたい）。加えて、「Ｖ－Ｖ」セットは、ＨＥＫ２９３細胞においてＢｓＡｂとして発現された場合、ＳＥＣにより測定される、試験した既存の技術（ＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも少ない凝集及びはるかに高い収率（２０７ｍｇ／Ｌ）を提供する（表１３及び図１８Ｆを参照されたい）。
更に、「Ｖ－Ｖ」セットを含むｂｓＡｂがｃＦＡＥ媒介性の産生方法を使用して生成された場合、産物の１００％が意図されたｂｓＡｂであり、誤対合は観察されず（表１８を参照されたい）、これは、ｂｓＡｂ産生効率の点で「Ｖ－Ｖ」セットが既存の「Ｒ－Ｌ」セットよりも優れていることを示す。加えて、「Ｖ－Ｖ」セットを含むｂｓＡｂがグルタチオン曝露に耐性を示すことが更に見出された（図２８Ａ～２８Ｅを参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号２１及び２２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号２３及び２４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号２５及び２６のアミノ酸配列を含む。
（３）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「ＱＲ－Ｆ」セット
「ＱＲ－Ｆ」セットは、１つのＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒ、並びにＬ３６８Ｆを含む。
例えば、「ＱＲ－Ｆ」セットは、修飾Ｆｃとして発現された場合に、試験した既存の技術（ＫｉＨ）よりも、（ｉ）ＬＣ－ＭＳにより測定される、高いヘテロ二量体％値（１００％）、及び（ｉｉ）高いＴｍ（６４℃）を示す（表８を参照されたい）。ＣＨ３ジスルフィド置換を有する「ＱＲ－Ｆ」は、ＨＥＫ２９３細胞においてＢｓＡｂとして発現された場合、ＬＣ－ＭＳにより測定される、ＫｉＨ対照よりも非常に高いヘテロ二量体％（１００％）を示す（表１０を参照されたい）。加えて、ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「ＱＲ－Ｆ」セットは、ＳＥＣにより測定される、試験した関連する既存の技術対照（ＣＨ３ジスルフィド置換を有するＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも少ない凝集を提供する（表１３及び図１８Ｄを参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号３１及び３２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号３３及び３４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号３５及び３６のアミノ酸配列を含む。
（４）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「ＲＧ－ＦＧ」セット
「ＲＧ－ＦＧ」セットは、１つのＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇ、並びにＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含む。
例えば、「ＲＧ－ＦＧ」セットは、修飾Ｆｃとして発現された場合に、試験した既存の技術（ＫｉＨ）よりも、（ｉ）ＬＣ－ＭＳにより測定される、高いヘテロ二量体％値（９０％）、及び（ｉｉ）高いＴｍ（摂氏６４度）を示す（表８を参照されたい）。ＣＨ３ジスルフィド置換を有する「ＲＧ－ＦＧ」セットは、ＨＥＫ細胞においてＢｓＡｂとして発現された場合、ＬＣ－ＭＳにより測定される、試験した対照（ＥＷ－ＲＶＴ及びＣＨ３ジスルフィド置換を有するＫｉＨ）よりも非常に高いヘテロ二量体％値（１００％）を更に示す（表１３を参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号４１及び４２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号４３及び４４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号４５及び４６のアミノ酸配列を含む。
（５）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「ＴＬ－ＱＬ」セット
「ＴＬ－ＱＬ」セットは、１つのＣＨ３ドメインにＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌ、並びにＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含む。
例えば、「ＴＬ－ＱＬ」セットは、修飾Ｆｃとして発現された場合、試験した既存の技術（ＫｉＨ）よりも高いＴｍ（摂氏６５度）を示す（表８を参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号５１及び５２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号５３及び５４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号５５及び５６のアミノ酸配列を含む。
（６）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「ＤＶＧ－ＶＳＹ」セット
「ＤＶＧ－ＶＳＹ」セットは、１つのＣＨ３ドメインにＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇ、並びにＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含む。
例えば、ＣＨ３ジスルフィド置換を有する「ＤＶＧ－ＶＳＹ」セットは、ＨＥＫ２９３細胞においてＢｓＡｂとして発現された場合、ＳＥＣにより測定される、試験した既存の技術（ＫｉＨ）よりも少ない凝集を示す（表１１を参照されたい）。加えて、ＣＨ３ジスルフィド置換を有する「ＤＶＧ－ＶＳＹ」セットは、ＳＥＣにより測定される、試験した関連する既存の技術対照（ＣＨ３ジスルフィド置換を有するＥＷ－ＲＶＴ及びＫｉＨ）よりも少ない凝集を提供する（表１３及び図１８Ｄを参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号６１及び６２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号６３及び６４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号６５及び６６のアミノ酸配列を含む。
（７）ＣＨ３ジスルフィド置換を有する又は有しない「ＬＷＧ－ＳＩＧ」セット
「ＬＷＧ－ＳＩＧ」セットは、セットの一方のＣＨ３ドメインにＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含み、セットの他方のＣＨ３ドメインにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含む。
例えば、「ＬＷＧ－ＳＩＧ」セットは、修飾Ｆｃとして発現された場合、試験した既存の技術（ＫｉＨ）よりも高いＴｍ（摂氏６２．５度）を示す（表８を参照されたい）。更に、ＣＨ３ジスルフィド結合置換を有する又は有しない「ＬＷＧ－ＳＩＧ」セットは、抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂとして発現された場合、ＬＣ－ＭＳ又はＩＥＸにより測定される、試験した既存の技術（ＫｉＨ）よりも高いヘテロ二量体％を示す（図１８Ｃ及び表１３を参照されたい）。
かかる置換が配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われる場合、バリアントＣＨ３ドメインの配列のセットは、それぞれ、配列番号７１及び７２のアミノ酸配列、それぞれ、配列番号７３及び７４のアミノ酸配列、又はそれぞれ、配列番号７５及び７６のアミノ酸配列を含む。
上述の又は本明細書に記載のいずれのバリアントＣＨ３ドメインも、重鎖ポリペプチドなどのポリペプチドの一部であり得る。重鎖ポリペプチドなどのかかるポリペプチドも本発明によって包含される。
ポリペプチド、分子、及び多重特異性抗体
本開示によるバリアントＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンポリペプチド、分子、及び／又は多重特異性抗体などのポリペプチド内に存在し得る。
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリンポリペプチド」とは、免疫グロブリンの少なくとも１つのドメイン（例えば、ＣＨ３ドメイン）を含むポリペプチドを指す。ある特定の事例では、第１のＣＨ３ドメインは、第１のポリペプチド内に存在し得る。ある特定の事例では、第２のＣＨ３ドメインは、第２のポリペプチド内に存在し得る。第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するＣＨ３ドメインである場合、ヘテロマー（例えば、二量体）分子が第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間に形成され得る。かかるヘテロマー分子は、図２～８に開示される構造などであるが、これらに限定されない構造を有する多重特異性抗体であり得る。
いくつかの実施形態では、かかるヘテロ二量体優先ＣＨ３ドメインセットは、以下：Ｗ－ＳＧ、Ｖ－Ｖ、ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＴＬ－ＱＬ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、ＬＷＧ－ＳＩＧ、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ、ＶＴＬ－ＶＱＬ、ＶＱＬ－ＶＴＬ、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ、ＶＱＲ－ＶＦ、又はＬＷＧ－ＩＧのうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、かかるヘテロ二量体優先ＣＨ３ドメインセットは、以下：Ｗ－ＳＧ、Ｖ－Ｖ、ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＴＬ－ＱＬ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、ＬＷＧ－ＳＩＧ、又はＬＷＧ－ＩＧのうちのいずれか１つであり得る。いくつかの実施形態では、かかるヘテロ二量体優先ＣＨ３ドメインセットは、ＣＨ３ジスルフィド結合置換（「３４５／３５４」又は「３５４／３４５」）、すなわち、Ｗ－ＳＧ（３４９／３５４）、Ｖ－Ｖ（３４９／３５４）、ＱＲ－Ｆ（３４９／３５４）、ＲＧ－ＦＧ（３４９／３５４）、ＴＬ－ＱＬ（３４９／３５４）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３４９／３５４）、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ（３４９／３５４）、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ（３４９／３５４）、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ（３４９／３５４）、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ（３４９／３５４）、ＶＴＬ－ＶＱＬ（３４９／３５４）、ＶＱＬ－ＶＴＬ（３４９／３５４）、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ（３４９／３５４）、ＶＱＲ－ＶＦ（３４９／３５４）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３４９／３５４）、又はＷ－ＳＧ（３５４／３４９）、Ｖ－Ｖ（３５４／３４９）、ＱＲ－Ｆ（３５４／３４９）、ＲＧ－ＦＧ（３５４／３４９）、ＴＬ－ＱＬ（３５４／３４９）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３５４／３４９）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３５４／３４９）、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ（３５４／３４９）、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ（３５４／３４９）、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ（３５４／３４９）、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ（３５４／３４９）、ＶＴＬ－ＶＱＬ（３５４／３４９）、ＶＱＬ－ＶＴＬ（３５４／３４９）、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ（３５４／３４９）、ＶＱＲ－ＶＦ（３５４／３４９）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３５４／３４９）を更に含む前述のうちのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、かかるＣＨ３ヘテロ二量体は、以下のＣＨ３セット：Ｗ－ＳＧ（３４９／３５４）、Ｖ－Ｖ（３４９／３５４）、ＱＲ－Ｆ（３４９／３５４）、ＲＧ－ＦＧ（３４９／３５４）、ＴＬ－ＱＬ（３４９／３５４）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３４９／３５４）、ＬＷＧ－ＩＧ（３４９／３５４）、Ｗ－ＳＧ（３５４／３４９）、Ｖ－Ｖ（３５４／３４９）、ＱＲ－Ｆ（３５４／３４９）、ＲＧ－ＦＧ（３５４／３４９）、ＴＬ－ＱＬ（３５４／３４９）、ＤＶＧ－ＶＳＹ（３５４／３４９）、ＬＷＧ－ＳＩＧ（３５４／３４９）、又はＬＷＧ－ＩＧ（３５４／３４９）のうちのいずれかを含み得る。これらのＣＨ３セットにおけるアミノ酸置換位置は、付録表Ｅ～Ｇに明記されている）。
かかる免疫グロブリンポリペプチドは、１つ以上の抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ、又はナノボディなど）、ＣＨ１ドメイン、及び／又はＣＨ２ドメインを更に含み得る。追加のＣＨ３ドメイン（アミノ酸置換を有する又は有しない）が更に含まれ得る。かかるポリペプチドは、多重特異性抗体分子の一部であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ、又はナノボディなど）及びバリアントＣＨ３ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ、又はナノボディなど）、ＣＨ１ドメイン、及びバリアントＣＨ３ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ、又はナノボディなど）、ＣＨ２ドメイン、及びバリアントＣＨ３ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ、又はナノボディなど）、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びバリアントＣＨ３ドメインを含み得る。
代替的に、免疫グロブリンポリペプチドは、ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、又はＣＨ２ドメインを含まない場合がある。例えば、第１のポリペプチドは、第１のＣＨ３に加えて第１のドメインを更に含み得る。第２のポリペプチドが、第１のＣＨ３とヘテロ二量体を優先的に形成する第２のＣＨ３に加えて第２のドメインを更に含み、かつ第１のドメインと第２のドメインとの間にヘテロ二量体を形成することが所望される場合、第１のＣＨ３ドメインと第２のＣＨ３ドメインとの間の優先的ヘテロ二量体化により、第１のドメインと第２のドメインとのヘテロ二量体化が促進される。
一実施形態では、かかるポリペプチドは、バリアントＣＨ３ドメインと組み合わせて、ＣＨ３ドメイン外部の他のバリアントを任意選択で利用して、互いに異なる２つのポリペプチド間の優先的対合を更に促進することができる。
一実施形態では、かかるポリペプチドは、バリアントＣＨ３ドメインと組み合わせて、優先的ラムダ対合又は優先的カッパ対合を促進するバリアントＣＨ１ドメインを任意選択で利用してもよい。別の実施形態では、かかるポリペプチドは、バリアントＣＨ３ドメインと組み合わせて、野生型カッパＣＬドメインなどの別のＣＬドメインよりもバリアントカッパＣＬドメインと優先的に対合するバリアントＣＨ１ドメインを任意選択で利用し得る。別の実施形態では、かかるポリペプチドは、バリアントＣＨ３ドメインと組み合わせて、野生型ラムダＣＬドメインなどの別のＣＬドメインよりもバリアントラムダＣＬドメインと優先的に対合するバリアントＣＨ１ドメインを任意選択で利用し得る。更に別の実施形態では、かかるポリペプチドは、バリアントＣＨ３ドメインと組み合わせて、野生型ＣＨ１ドメインなどの別のＣＨ１ドメインよりもバリアントＣＨ１ドメインと優先的に対合するバリアントカッパ又はラムダＣＬドメインを任意選択で利用し得る。かかるポリペプチドを使用して、３つ以上の抗体に特異的な抗体（例えば、四重特異性抗体）の生成が促進され得る。
いずれのかかるポリペプチドも、第１のバリアントＣＨ３ドメインを含む第１のポリペプチドと、第１のＣＨ３とＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する第２のバリアントＣＨ３ドメインを含む第２のポリペプチドとを有する分子中に存在し得る。いくつかの事例では、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは、例えば、１つ以上のジスルフィド結合、リンカーなどを介して更に連結され得る。
かかる分子は、図２～８に開示される構造などであるが、これらに限定されない構造を有する多重特異性抗体又は抗原結合断片であり得る。本開示による多重特異性抗体は、二重特異性、三重特異性、四重特異性であり得るか、又は５つ、６つ、若しくはそれ以上のエピトープに特異的であり得る。本開示による多重特異性抗体は、二価、三価、又は四価であり得るか、又は５、６、若しくはそれ以上の原子価を有し得る。
ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、及び組成物
本明細書に記載のバリアントＣＨ３ドメインを含むポリペプチド、分子、及び／又は多重特異性抗体は、ポリヌクレオチド（単数又は複数）によってコードされ得る。かかるポリヌクレオチド（単数又は複数）は、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、又はそれらの組み合わせであり得る。
本明細書に記載のいずれのポリペプチドも、ベクター中に存在し得る。
いずれのＣＨ３ドメイン、ポリペプチド、分子、多重特異性抗体、ポリヌクレオチド、及び／又はベクターも、細胞、例えば、真核細胞中に存在し得る。いくつかの実施形態では、かかるポリペプチドは、ＨＥＫ２９３細胞又はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳類細胞で発現され得る。いくつかの実施形態では、バリアントＣＨ３ドメインは、酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）で発現される。いくつかの実施形態では、酵母株は、１つ以上の軽鎖などの１つ以上のポリペプチドを共発現する。
いずれのＣＨ３ドメイン、ポリペプチド、分子、多重特異性抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、及び／又は細胞も、組成物中に存在し得る。組成物が治療用組成物である場合、この組成物は、薬学的に許容される担体を更に含み得る。
ＣＨ３ドメインライブラリ及びバリアントＣＨ３ドメインスクリーニング／選択
ＣＨ３ドメインライブラリを生成する方法も本開示によって企図される。本ライブラリは、特にＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するＣＨ３配列及びＣＨ３セットについてスクリーニングするために使用され得る。
いくつかの実施形態では、アミノ酸置換が発明ＣＨ３セットのうちのいずれかに存在するＣＨ３のアミノ酸位置のうちのいずれかをコードするコドン内の少なくとも１つの核酸位置が可変化され得る。例えば、かかる所定のアミノ酸位置は、ＥＵ番号付けに従う３６４位、３６６位、３６８位、３７０位、３９９位、４００位、４０５位、４０７位、及び／若しくは４０９位、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。
いくつかの実施形態では、表７に列記されるいずれのアミノ酸位置も可変化され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＨ３－ＣＨ３「界面位置」とみなされるアミノ酸位置のいずれかも可変化され得る。
ある特定の実施形態では、本ライブラリによって発現されるＣＨ３ドメインのうちのいくつかは、可変化によって引き起こされる置換に加えて、ＣＨ３ジスルフィド結合置換（すなわち、Ｓ３５４Ｃ／Ｙ３４９Ｃ）を含み得る。
いくつかの実施形態では、縮重コドン、任意選択で、６つの天然に存在するアミノ酸（Ｄ、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｋ、及びＮ）を表す縮重ＲＭＷコドン又は２０個全ての天然に存在するアミノ酸残基を表す縮重ＮＮＫコドンを使用して、所与の位置に可変化を誘導することができる。
ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する１つ以上のバリアントＣＨ３ドメイン及びＣＨ３セットを特定する方法も本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、本方法は、少なくとも３つのステップを含み得る。第１のステップは、細胞（例えば、酵母細胞、哺乳類細胞）又はエクスビボで、（１）本明細書に記載のライブラリのうちのいずれかによる第１のライブラリから発現される第１のバリアントＣＨ３ドメインを含む第１のポリペプチドと、（２）本明細書に記載のライブラリのうちのいずれかによる第２のライブラリから発現される第２のバリアントＣＨ３ドメインを含む第２のポリペプチドとを共発現させることであり得る。第２のステップは、ＣＨ３ヘテロ二量体及びＣＨ３ホモ二量体の量を定量化することであり得る。第３のステップは、所望のヘテロ二量体％を提供する１つ以上のＣＨ３セットを選択することであり得る。
ある特定の実施形態では、第１のライブラリと第２のライブラリは、少なくとも１つの所定のアミノ酸位置が異なり得る。
いくつかの実施形態では、第１のライブラリ内の所定の位置及び第２のライブラリ内の所定の位置は、優先ヘテロ二量体化として本明細書で特定されたＣＨ３セットにおいて置換された位置若しくは位置セットのうちのいずれかを含み得るか又はそれらからなり得る。
可変化は、任意の利用可能なＣＨ３配列、すなわち、野生型又は修飾されたＣＨ３配列に対して行われ得る。いくつかの実施形態では、可変化は、配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に対して行われ得る。
ある特定の実施形態では、所望のヘテロ二量体％は、約５０％超、約５５％超、約６０％超、約６５％超、約７０％超、約７５％超、約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超、又は約１００％であり得る。
ある特定の実施形態では、所望のヘテロ二量体％は、参照ＣＨ３セット、例えば、既存のＣＨ３ヘテロ二量体化技術（例えば、表１）と比較したものであり得る。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のタグを含み得るか又は第１のタグで発現され得、第２のポリペプチドは、第１のタグとは異なる第２のタグを含み得るか又は第２のタグで発現され得る。これにより、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）などの技術によってＣＨ３ヘテロ二量体を特異的に特定することが可能になるであろう。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体及びホモ二量体を定量化する第２のステップは、例えば、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、及び／又はフローサイトメトリーを使用し得る。
ある特定の実施形態では、特定する方法は、１つ以上の抗体特性に基づいて、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを選択するステップを更に含み得る。例示的な特性には、（ｉ）（ｉ－１）任意選択で、１つ以上の細胞型、任意選択で哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ細胞及びＨＥＫ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、並びに／又は植物細胞で評価される産生収率、及び／又は（ｉ－２）任意選択でプロテインＡ親和性精製を含む、１つ以上の抗体精製法に対する適合性、（ｉｉ）任意選択で、クロマトグラフィー、任意選択でＳＥＣ又は電気泳動、任意選択でＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して定量化される、凝集の程度、任意選択で完全サイズ抗体の多量体の存在、（ｉｉｉ）任意選択で、ＬＣ－ＭＳを使用して評価される、ＣＨ１ドメイン間及び／若しくはＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間の正しい対合の速度、任意選択で正しい対合、（ｉｖ）任意選択でＤＳＦ及び／若しくはＤＳＣを使用して、並びに／又は機器、任意選択でＵｎｃｌｅ（登録商標）を使用して測定される、Ｔｍ及び／若しくはＴａｇｇ、任意選択でＴａｇｇ２６６、（ｖ）ｐＩ、（ｖｉ）ＰＳＲとの相互作用のレベル、（ｖｉｉ）任意選択でＨＩＣを使用して測定される、抗体の疎水性相互作用、（ｖｉｉｉ）任意選択で（ｖｉｉｉ－１）ＡＣ－ＳＩＮＳ又は（ｖｉｉｉ－２）ＤＬＳによって測定される、自己相互作用、（ｉｘ）高若しくは低ｐＨストレスに対する安定性、（ｘ）溶解性、（ｘｉ）生産コスト及び／若しくは時間、（ｘｉｉ）他の安定性パラメータ、（ｘｉｉｉ）保存可能期間、（ｘｉｖ）インビボ半減期、並びに／又は（ｘｖ）免疫原性が含まれ得るが、これらに限定されない。
かかる特性は、（ａ）バリアントＣＨ３ドメインセットを組み込む分子若しくは多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片構造の特定の構造、及び／又は（ｂ）特定の結合特異性を提供する可変ドメインに少なくとも部分的に依存し得る。適合性は、目的とする抗体構造及び抗原特異性の特定の状況下で試験され得る。
したがって、所与の抗原特異性を有する多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片（例えば、本明細書に記載の構造のうちのいずれかを有する）に適した第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットについてスクリーニングする方法も本明細書に提供される。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの異なるセットを含む、複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片を発現させることと、（ｂ）ステップ（ａ）で発現された複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片の１つ以上の抗体特性に基づいて、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを選択することと、を含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗体特性は、上述の特性（ｉ）～（ｘｖ）から選択され得る。
ｃＦＡＥ媒介性の多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片を産生する方法、及びかかる方法によって産生された多重特異性抗体及び抗原結合抗体断片
ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するＣＨ３セット（いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＨ３セットのうちのいずれかであり得る）を含むヘテロマー分子を産生する方法も本開示によって企図される。ヘテロマー分子は、任意選択で図２～８のうちのいずれか１つに示される構造を有する、本明細書に記載のヘテロマー分子又は多重特異性抗体及び抗原結合抗体断片のうちのいずれかであり得る。
いくつかの実施形態では、目的とするヘテロマー分子（本方法が産生することを意図するもの）は、（Ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第１のポリペプチド（例えば、第１の重鎖）と、（Ｂ）第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第２のポリペプチド（例えば、第２の重鎖）とを含み得、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは、任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに結合又は対合され得る。
本明細書の実施例は、表１８に示されるように、いかなる誤対合も引き起こすことなくｂｓＡｂ産生効率の点で既存の「Ｒ－Ｌ」セットよりも優れたｂｓＡｂ産生効率を提供することを実証した。加えて、「Ｖ－Ｖ」セットを含むｂｓＡｂがグルタチオン曝露に耐性を示すことが更に見出された（図２８Ａ～２８Ｅを参照されたい）。
したがって、特定の実施形態では、本方法によって産生されたヘテロマー分子又は多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片に組み込まれるＣＨ３セットは、「Ｖ－Ｖ」セットであり得る。ある特定の実施形態では、ＣＨ３セットは、「Ｖ－Ｖ」セット置換に加えて、本明細書に記載の３４９位及び３５４位のジスルフィド修飾（すなわち、Ｖ－Ｖ（３４９／３５４）セット又は「Ｖ－Ｖ（３５４／３４９）」セット）などであるが、これらに限定されない追加の置換を含み得る。
いくつかの実施形態では、本方法は、（ｉ）還元環境下で、（ｉ－１）任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合された第１のポリペプチドのうちの少なくとも２つを含む第１の抗体（第１の親抗体又は第１の単一特異性親抗体とも称され得る）、及び（ｉ－２）任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合された第２のポリペプチドのうちの少なくとも２つを含む第２の抗体（第２の親抗体又は第２の単一特異性親抗体とも称され得る）をインキュベートすることを含み得る。
いくつかの実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の抗原結合ドメインを更に含み得る。いくつかの実施形態では、第２のポリペプチドは、第２の抗原結合ドメインを更に含み得る。いくつかの実施形態では、ヘテロマー分子は、第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを更に含み得、任意選択で、第３のポリペプチドは、第１のポリペプチドに結合され得るか又はそれと対合され得る。いくつかの実施形態では、ヘテロマー分子は、第４の抗原結合ドメインを任意選択で含む第４のポリペプチドを更に含み得、任意選択で、第４のポリペプチドは、第２のポリペプチドに結合され得るか又はそれと対合され得る。
ある特定の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する第１の抗原結合ドメインを含み得る、及び／又はヘテロマー分子は、第３のエピトープに特異的な第３の抗原結合部位を形成する第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み得る。任意選択で、第１のエピトープは、第３のエピトープと同じであり得るか、又は異なり得る。代替の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１の抗原結合ドメインを含み得、ヘテロマー分子は、第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み得、第１の抗原結合ドメイン及び第３の抗原結合ドメインが第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する。
ある特定の実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する第２の抗原結合ドメインを含み得る、及び／又はヘテロマー分子は、第４のエピトープに特異的な第４の抗原結合部位を形成する第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み得る。任意選択で、第２のエピトープは、第４のエピトープと同じであり得るか、又は異なり得る。代替の実施形態では、第２のポリペプチドは、第２の抗原結合ドメインを含み得、ヘテロマー分子は、第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み得、第２の抗原結合ドメインと第４の抗原結合ドメインが第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する。
第１の抗体及び第２の抗体は、任意の適切な細胞型で産生され得る。例示的な細胞としては、哺乳類細胞、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、又は細菌細胞、より具体的には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、第１の抗体及び第２の抗体は、約１５℃～約４０℃、約２０℃～約４０℃、約２５℃～約３５℃、約２８℃～約３２℃、若しくは約２９℃～約３１℃、又は約３０℃の温度でインキュベートされ得る。ある特定の実施形態では、第１の抗体及び第２の抗体は、約３０分～約２０時間、約１時間～約１５時間、約２時間～約１０時間、約３時間～約７時間、若しくは約４時間～約６時間、又は約５時間インキュベートされ得る。特定の実施形態では、第１の抗体及び第２の抗体は、約３０℃で約５時間インキュベートされ得る。
ある特定の実施形態では、第１の抗体及び第２の抗体は、少なくとも１つの還元剤、任意選択で少なくとも１つの弱還元剤の存在下でインキュベートされ得る。理想的には、少なくとも１つの還元剤又は還元環境は、２つの重鎖間（又は第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間）のジスルフィド結合を還元することができるが、重鎖と軽鎖との間では還元することができないものである。様々な還元剤が、ＦＡＥとの関連でこの還元機能を提供することが示されている（例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００７ Ｓｅｐ １４；３１７（５８４４）：１５５４－１５５７を参照されたい）。例示的な還元剤としては、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、β－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、Ｌ－システイン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、又は亜ジチオン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、少なくとも１つの還元剤は、約２５～約１２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０～約８０ｍＭ、若しくは約７５ｍＭの２－ＭＥＡ、約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭのＢＭＥ、約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭのＬ－システイン、約１５～約４００μＭ、約２０～約２００μＭ、約２５～約１００μＭ、約３０～約７０μＭ、若しくは約５０μＭのＤＴＴ、又は 約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭの亜ジチオン酸塩から選択され得る。特定の実施形態では、還元環境は、少なくとも２－ＭＥＡを約７５ｍＭ含み得る。
いくつかの実施形態では、本方法は、次いで、（ｉｉ）ステップ（ｉ）のインキュベーション産物を、低還元又は非還元環境下に配置することを含み得る。
ある特定の実施形態では、このステップ（ｉｉ）により、第１のバリアントＣＨ３ドメインと第２のバリアントＣＨ３ドメインとの間の対合、ひいては、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の対合が可能になり得る。
ある特定の実施形態では、配置は、緩衝液交換を介してもよく、還元剤などの還元条件の除去を可能にする。例えば、緩衝液がＰＢＳと交換されてもよい。
特定の実施形態では、緩衝液交換は、脱塩又は透析濾過により行われ得る。
別の実施形態では、配置は、酸化剤を添加することによって行われ得る。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）の産物は、低還元又は非還元環境下でインキュベートされ得る。ある特定の実施形態では、インキュベーションは、約１℃～約２０℃、約２℃～約１０℃、約３℃～約５℃、又は約４℃の温度で行われ得る。ある特定の実施形態では、インキュベーションは、約１２時間～約１５４時間、約２４時間～約９６時間、約３６時間～約７２時間、又は約４８時間行われ得る。特定の実施形態では、インキュベーションは、約４℃で約４８時間行われ得る。
いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）及び／又はステップ（ｉｉｉ）の産物は、ステップ（ｉｉ）及び／又はステップ（ｉｉｉ）の産物中の目的とする多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片の量について分析され得る。いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）及び／又はステップ（ｉｉｉ）の産物は、精製された多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片を得るために精製され得る。ある特定の実施形態では、かかる分析及び／又は精製は、ＬＣ－ＭＳ、ＩＥＸ、及び／又はＳＥＣなどであるが、これらに限定されないクロマトグラフィーによって行われ得る。特定の実施形態では、誤対合がＬＣ－ＭＳにより観察されない可能性がある。
産生方法によって産生されたいずれの多重特異性抗体及び抗原結合抗体断片も本開示によって更に包含される。
本発明を例証するために、実施例が以下に提供される。これらの実施例は、本発明をいかなる特定の用途又は動作理論に制限するようには意図されていない。
本明細書に記載の実施例では、ＣＨ３ドメイン参照配列（配列番号１）をＩｇＧ１の野生型ＣＨ３ドメイン配列として使用し、様々なアミノ酸置換を参照配列に組み入れて、ヘテロ二量体化の可能性を試験した。実施例で使用した配列のうちのいくつかを付録表Ａ～Ｇ及び配列表に提供する。実施例で配列番号１をＣＨ３ドメイン参照配列として使用したが、ＣＨ３ドメイン配列修飾に関する本発明は、配列番号２、３、若しくは４（ＩｇＧ１の場合）、又はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４の別の標準ＣＨ３配列などであるが、これらに限定されない、他のＣＨ３ドメイン参照配列にも適用されてもよい。
別段の記載がない限り、適用可能な場合、ＣＨ１参照配列及びＣＨ２参照配列（それぞれ、配列番号６及び配列番号７）を実施例に使用した。
実施例１：既存のＣＨ３ヘテロ二量体化技術を使用したＣＨ３ドメイン二量体化読み取り法としての修飾Ｆｃ－提示酵母ライブラリのフローサイトメトリーに基づく選択の評価（概念実証試験）。
ヘテロ二量体優先バリアントＣＨ３ドメインについてスクリーニングするために、各々の細胞が「修飾Ｆｃ」（Ｆｃの一部分がＤ２２１～Ｋ４４７位（ＥＵ番号付け）を包含し、ヒンジ（ＣＰＰＣの代わりにＳＰＰＳ）、修飾ＣＨ２ドメイン（Ｎ２９７Ａ）ドメイン、及びＣＨ３ドメインの一部分が野生型配列又はバリアント配列のいずれかを有する）を提示する酵母ライブラリ系を設計し、最初にフローサイトメトリーにより分析して、ＣＨ３ヘテロ二量体を含む細胞集団を濃縮した。
最初に、ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するバリアントＣＨ３ドメインを特定するための方法としてこの系を評価するために、既存のバリアントＣＨ３ドメインセット、Ｗ－ＳＡＶ（すなわち、ＫｉＨ）及びＥＷ－ＲＶＴ（表１を参照されたい）を対照として使用して本系を試験した。これら２つのＣＨ３セットは、二重特異性抗体で使用した場合、（本明細書に記載の方法を使用して）ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）及び液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により測定した、ＣＨ３ヘテロ二量体の形成に高い優先度を示すことが確認された。
バリアントＣＨ３ドメインのライブラリを構築し、操作された酵母株中で発現させた。具体的には、「修飾Ｆｃ」を各々含む２つの重鎖発現プラスミド（ｐＡＤ６２３４及びｐＡＤ６２３３）を構築した。ｐＡＤ６２３４はＦＬＡＧタグを含み、ＵＲＡ及びｐＡＤ６２３３は、ＨＩＳタグ及びＴＲＰを含んだ。
ｐＡＤ６２３４及びｐＡＤ６２３３の３つのセットを生成した。第１のセットがＫｉＨ置換セット（ノブＨＩＳホールＦＬＡＧ）を含むＣＨ３ドメインをコードし、第２のセットがＥＷ－ＲＴセット（ＥＷＨＩＳＲＶＴＦＬＡＧ）を含むＣＨ３ドメインをコードし、第３のセットがＷＴ－ＷＴセット（「ＷＴセット」とも称する）（ＷＴＨＩＳ－ＷＴＦＬＡＧ）を含むＣＨ３ドメインをコードした。
それぞれ、第１、第２、及び第３のプラスミドセットを１：１：１０，０００混合で導入した酵母細胞である酵母概念実証（ＰＯＣ）ライブラリを生成し、以前に説明されたように増殖させ（例えば、ＷＯ２００９０３６３７９、ＷＯ２０１０１０５２５６、ＷＯ２０１２００９５６８、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２０１３ Ｏｃｔ；２６（１０）：６６３－７０を参照されたい）、高ＦＬＡＧ発現因子（ＣＨ３ヘテロ二量体発現因子を示す）のフローサイトメトリーに基づく選択に供した（図９Ａの概略図）。
簡潔に述べると、修飾Ｆｃの発現後、操作された酵母細胞（約１０７～１０８）を、ＰＢＳＦ中、１：１００で希釈した抗ＨＩＳ ＦＩＴＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、カタログ番号ＭＡ１－８１８９１）及び１：５００で希釈した抗ＦＬＡＧ ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、カタログ番号６３７３０８）で、４℃で１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬのＰＢＳＦ中で再懸濁し、ストレーナーキャップ付きソートチューブに移した。ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してソートを行い、ソートゲートを決定してヘテロ二量体を濃縮した。ライブラリを２ラウンドにわたって選択した。ＨＩＳタグ及びＦＬＡＧタグの両方を有するクローンを第４ラウンド及び第５ラウンドから配列決定し、配列固有性について分析した。細胞を、ウラシル及びトリプトファンを欠く培地にプレーティングして単一の単離株を生成し、配列を特定した。
予想通り、ＣＨ３ヘテロ二量体を発現する細胞（ＫｉＨ又はＥＷ－ＲＶＴ）が２選択ラウンド後に有意に濃縮され（図９Ｂ）、これは、修飾Ｆｃライブラリにフローサイトメトリーに基づく選択を併用した系を使用して、実際に、ＣＨ３ヘテロ二量体優先バリアントＣＨ３ドメインを特定することができることを示す。
実施例２：４つのＫｉＨ位置のうちの１つ以上を飽和させるバリアントＣＨ３ドメインライブラリを使用したサイクル１選択。
本実施例では、実施例１に記載のバリアントＣＨ３ドメイン選択系を使用して、ＫｉＨ置換位置のうちの１つ以上にアミノ酸置換を有する新規バリアントＣＨ３ドメインを特定した（ＫｉＨは、１つのＣＨ３内の３６６位（「ノブ」位置）にＷを有し、別のＣＨ３内の３６６位、３６８位、及び４０７位（「ホール」位置）にＳ、Ａ、及びＶを有する、表１を参照されたい）。
具体的には、バリアントＣＨ３ドメインＤＮＡ断片の２つのプールを生成して、発現プラスミドに挿入した（図１０Ａ）。第１のプールを、第１のＣＨ３ドメインのＴ３６６位、並びに第２のＣＨ３ドメインのＴ３６６位、Ｌ３６８位、及びＹ４０７位の２０個全てのアミノ酸の置換を可能にすることによって生成した。２つの変形を第１のプール内で作製し、１つは、Ｆｌａｇタグを有する鎖内にホール位置可変化を行うものであり（ノブＳＳＭ－ＨＩＳホールＳＳＭ－ＦＬＡＧ）（図１０Ａのライブラリ１）、もう１つは、Ｆｌａｇタグを有する鎖内にノブ位置可変化を行うものである（ホールＳＳＭ－ＨＩＳノブＳＳＭ－ＦＬＡＧ）（図１０Ａのライブラリ２）。第２のプールを、２０個全てのアミノ酸で第１のＣＨ３ドメイン定常のＴ３３６Ｗ位を固定し、かつ第２のＣＨ３ドメインのＴ３６６位、Ｌ３６８位、及びＹ４０７位を可変化することによって生成した（ノブ－ＨＩＳホールＳＳＭ－ＦＬＡＧ）（図１０Ａのライブラリ３）以前に説明されたように（Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１（１９９４），ｐｐ．１０７４７－１０７５１）、ＤＮＡシャッフリング法を使用してライブラリを構築した。実施例１（図１０Ｂ～１０Ｄ）に記載したように、ライブラリを増殖させ、６選択ラウンドに供し、選択産物を配列決定した。
表２に示すように、選択による順序の崩壊はもたらされなかった。
第６ラウンドの終了時に、８６個の固有のＣＨ３ヘテロ二量体が見つかった。ノブ・イントゥ・ホール（ＫｉＨ）位置における上位の置換組み合わせを発生頻度（繰り返し）とともに表３に提供する。
以下の実施例において、８６個の固有のＣＨ３ヘテロ二量体配列を酵母中で生成し、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により特徴付けした。融解温度も決定した。
実施例３：実施例２で特定されたＣＨ３セットのＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）分析。
実施例２で特定された８６個の固有のＣＨ３ヘテロ二量体を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）により分析した（図１１Ａ左）。ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）を使用して、Ｆｃ断片のヘテロ二量体化の相対度を決定した。簡潔に述べると、０．５ｎＭの断片を、０．５ｎＭの最終試験濃度溶液として、１０倍ビオチン－ａ－Ｆｌａｇ（５μｌ、２０ｎＭ最終試験濃度）と一緒に、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＡｌｐｈａＬＩＳＡイムノアッセイ緩衝液（１０倍）に添加し、３８４ウェルＡｌｐｈａＰｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に入れた。その後、ａ－Ｈｉｓを有する１０倍アクセプタービーズ溶液（５μｌ）を添加し、プレートを黒色のカバーで覆い、室温で１時間インキュベートした。次に、１０倍（５μｌ）ドナービーズ（ＳＡコーティング）溶液を暗室でアッセイに添加し、室温で３０分間インキュベートした。プレートを、ＥｎＳｐｉｒｅ Ａｌｐｈａプログラム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して読み取った。
既存のＣＨ３ヘテロ二量体化置換セットに関するデータは、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）を使用してＣＨ３ヘテロ二量体化を測定することができることを実証した（図１１Ａ右）。これらの結果を図１１Ｂに提供する。５つのＣＨ３セットが、陽性対照（ＫｉＨ及びＥＷ－ＲＴ）よりも高いＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値を示した（表４）。ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値（バックグラウンドに対する倍率）を、図１１Ｃのｘ軸上のα－Ｆｌａｇ ＡＰＣ値（バックグラウンドに対する倍率）に対して更にプロットした。「Ｖ－Ｖ」セットが両方の配向で見つかった（ＦＬＡＧで３６６Ｖ、ＦＬＡＧで４０７Ｖ）。
実施例４：実施例３で選択されたＣＨ３セットのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析。
実施例３で特定された５つのＣＨ３セット（「Ｖ－Ｖ」）のうちの１つを含む精製された抗体の発現及び品質を両方の配向で試験したため、合計６つの変形）を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により評価した。高いメインピーク％は、高品質を表す。簡潔に述べると、Ａｇｉｌｅｎｔ １ １００ ＨＰＬＣを用いて、カラムクロマトグラフィー（ＴＳＫｇｅｌ Ｓｕｐｅｒ ＳＷ３０００カラム）を監視した。使用前に、カラムを高度にグリコシル化されて凝集したＩｇＧでプレコンディショニングして抗体－カラム相互作用の可能性を最小限に抑え、洗浄緩衝液（２００ｍＭリン酸ナトリウム、２５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．８）で平衡化した。およそ２～５μｇのタンパク質試料をカラムに注入し、流量を０．４００ｍＬ／分に調整した。タンパク質移動を波長２８０ｎｍで監視した。合計アッセイ時間はおよそ１１分間であった。データを、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して分析した。
ＷＴ及び対照ＣＨ３セット（Ｗ－ＳＡＶ（すなわち、ＫｉＨ）及びＥＷ－ＲＶＴ）のＳＥＣクロマトグラフを図１２Ａに示し、実施例３で選択されたＣＨ３セットのＳＥＣクロマトグラフを図１２Ｂに示す。
実施例５：サイクル１出力のイオン交換（ＩＥＸ）クロマトグラフィー分析
イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）をクローンのサブセットに行った。全てのクロマトグラフィー分離を、インラインｐＨ監視を可能にする統合ｐＨ電極及びＭｏｎｏ Ｓ ５／５０ ＧＬカラムを備えたコンピュータ制御ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔ １５０分取クロマトグラフィーシステムで行った。カチオン交換緩衝液は、１５．６ｍＭのＣＡＰＳ、９．４ｍＭのＣＨＥＳ、４．６ｍＭのＴＡＰＳ、９．９ｍＭのＨＥＰＰＳＯ、８．７ｍＭのＭＯＰＳＯ、１１．０ｍＭのＭＥＳ、１３．０ｍＭの酢酸塩、９．９ｍＭのギ酸塩、１０ｍＭのＮａＣｌで構成されたものであり、ｐＨを、ＮａＯＨを使用して４．０（緩衝液Ａ）又は１１．０（緩衝液Ｂ）に調整した。５００ｕｇのタンパク質を２５％緩衝液Ｂに緩衝液交換し、０．２ｍｍのフィルターに通して濾過した。毎回分離前に、カラムを１０カラム体積の２５％緩衝液Ｂで平衡化した。その後、タンパク質を、キャピラリーループを介してカラムにロードし、続いて、２５％緩衝液Ｂで１０カラム体積を洗浄し、２０カラム体積に２５％－１００％緩衝液Ｂにより線形ｐＨ勾配を行い、１０カラム体積を１００％Ｂで保持した。
ＷＴ及び対照ＣＨ３セット（Ｗ－ＳＡＶ（すなわち、ＫｉＨ）及びＥＷ－ＲＶＴ）のＩＥＸクロマトグラフを図１３Ａに示し、実施例３で選択されたＣＨ３セットのＳＥＣクロマトグラフを図１４Ｂに示す。低いＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値を有するいくつかのＣＨ３セットが、ＳＥＣ及びＩＥＸにより測定される、低品質を示した。
実施例６：ＨＥＫ２９３でのサイクル１出力の産生
ＩｇＧ様形式（２つのＦａｂ領域が二量体Ｆｃ分子のＮ末端に結合している）での対照二重特異性共通抗体に対する特定されたバリアントＣＨ３ドメインの影響も評価した。Ｗ－ＳＧ置換セット（一方のＣＨ３にＴ３６６Ｗを含み、他方のＣＨ３にＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含む）及びＶ－Ｖ置換セット（一方のＣＨ３にＴ３６６Ｖを含み、他方のＣＨ３にＹ４０７Ｖを含む）を例示的な試験セットとして選択し、抗Ｈｅｒ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体としてＨＥＫ２９３細胞で産生した。２つの抗体、ＡＤＩ－２９２３５（抗ＨＥＲ２）及びＡＤＩ－２６９０８（抗ＣＤ３）に由来するＶＨ－ＣＨ１配列を使用した。野生型ＣＨ３セット、Ｗ－ＳＡＶセット（すなわち、ＫｉＨ）、及びＥＷ－ＲＶＴセットを対照として含めた。加えて、ＣＨ３ドメイン置換（Ｓ３５４Ｃ／Ｙ３４９Ｃ）を導入して、重鎖の所望のヘテロ二量体対合を促進した。試験したＣＨ３セットを表５に要約する。
ＤＮＡプラスミドをサンガーシーケンシングにより確認した後、標準プロトコルによりＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。トランスフェクトされたＨＥＫ細胞をＣＤ ｏｐｔｉＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養し、トランスフェクトした６日後に上清を回収し、プロテインＡベースの親和性精製に供した。
対照抗体を含むＨＥＫ２９３細胞で産生された抗Ｈｅｒ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体（ＷＴであるか、又はＷ－ＳＡＶ（ＫｉＨ）若しくはＥＷ－ＲＶＴ置換を含むＣＨ３セットを含む）を図１４Ａに要約する。
完全サイズ抗体のうちのヘテロ二量体（ＨＣ１／ＨＣ２ヘテロ）及びホモ二量体（ＨＣ１ホモ及びＨＣ２ホモ）のパーセンテージ、並びに半抗体（「１／２ Ａｂ」、すなわち、重鎖（ＨＣ）を１つのみ含む）の存在を、ＬＣ－ＭＳにより分析した。ＬＣ－ＭＳを使用してＣＨ３ヘテロ二量体化を評価するために、抗体試料をＰＮＧａｓｅＦグリコシダーゼで消化してＮ結合グリカンを除去し、その後、８０℃で維持したＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＭａｂＰａｃ ＲＰ（登録商標）４μｍカラム（２．１×１００ｍｍ）を備えたＡｃｑｕｉｔｙ超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）システム（Ｗａｔｅｒｓ）に注入した。注入後、試料を、０．３ｍＬ／分の流量で２０－５５％アセトニトリルの１３分勾配（移動相Ａ：０．１％ギ酸／Ｈ２Ｏ溶液、移動相Ｂ：０．１％ギ酸／アセトニトリル溶液）を使用して、カラムから溶出した。カラムから溶出された種を、ポジティブエレクトロスプレーイオン化モードでＱ Ｅｘａｃｔｉｖｅ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ）で検出した。機器パラメータを、３．５ｋＶのスプレー電圧、３５０℃のキャピラリー温度、３５のシースガス流量、１０の補助ガス流量、及び９０のＳ－レンズＲＦレベルとして設定した。ＭＳスペクトルを、７５０～４０００ｍ／ｚのスキャン範囲で取得した。取得したＭＳデータを、Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｆｉｎｄｅｒソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析し、その後、手動検査を行い、正確な割り当て及び相対定量化精度を確実にした。ヘテロ二量体種及びホモ二量体種の各々の相対定量化を、全てのヘテロ二量体ピーク強度及びホモ二量体ピーク強度の合計に対するピークの強度に基づいて計算した。
ＨＥＫ産生産物もプロテインＡベースのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及びイオン交換（ＩＥＸ）クロマトグラフィーにより分析し、ＳＥＣ及びＩＥＸによるクロマトグラフィープロファイルを図１４Ｂ及び図１４Ｃに示す。ＬＣ－ＭＳ結果、ＳＥＣ結果、及び得られた力価を表６に要約する。「（３５４／３４９）」とは、ＨＣ１がＹ３４９Ｃを含み、ＨＣ２がＳ３５４Ｃを含んだことを意味する。
実施例７：ＣＨ３－ＣＨ３界面位置及びサイクル１出力に基づくサイクル２ライブラリ生成。
ＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成するバリアントＣＨ３ドメインを更に探索するために、ＣＨ３－ＣＨ３界面におけるアミノ酸位置（界面位置）及びＫｉＨ位置（サイクル１出力置換を含む）に基づいて、新たなＣＨ３ドメインライブラリを設計した。最初に、界面位置を特定するために、３２個の高分解能の整列した野生型ＣＨ３結晶構造をプロテインデータバンク（ＰＤＢ）から構築し、構造誘導型アプローチに使用して、多様化のためのＣＨ３界面残基を特定した。可変化するための界面残基を、１）１５％以上の単量体中の側鎖ＳＡＳＡ（溶媒露出表面積）を有する、２）隣接原子の接触距離が８．２Ａ以下（既知のノブ・イン・ホール変異間の距離を捕捉するために設定した距離）である、及び ３）残基がパートナー鎖から離れて向いていない又は溶媒に露出していない（手動検査によって決定される）、残基として定義した。これらの規則を適用することにより、ＣＨ３界面において可変化する２４個の位置が特定された。
次に、界面の片側（鎖Ａ上）の１つ又は２つの「アンカー」変異を、界面の反対側（鎖Ｂ上）の１つ、２つ、又は３つの「ネイバー（ｎｅｉｇｈｂｏｒ）」変異に対して試験するためのライブラリを設計した。鎖Ａ上のアンカー位置Ａ毎に、ネイバー位置Ｂのセットを、位置Ａと接触する鎖Ｂ上の界面位置のサブセットとして特定した（鎖間Ｃｂ－Ｃｂ距離は８．２Å未満である（Ｃｂ＝ベータ炭素）。グリシンの場合、グリシンがＣｂ原子を有しないため、Ｃ－アルファ原子を使用した）。その後、ネイバー（Ｂ）のセット内の全ての可能なシングレット変異、ダブレット変異、及びトリプレット変異の組み合わせを生成した。８．０Å以下の鎖内Ｃｂ－Ｃｂ距離カットオフ内にない残基の対を含む二量体及び三量体を濾去した。結果として得られたセットにより、以下の試験用ネイバー変異：２４個のシングレット、３９個のダブレット、及び１６個のトリプレットが特定された。
ネイバー／アンカー対合位置のセットを、以下のステップによりスクリーニングのために１４個のライブラリプールに分割した：１）ネイバー／アンカー対合位置を、多様性の増加別（シングレット、ダブレット、トリプレット）及びタンパク質中の一般的な位置別にソートした。及び２）多様性が限界に達するまで、ネイバー／アンカー対を組み合わせてプールに入れた（鎖間接触距離により測定された最も近いプールを選択する）。各々の個別のライブラリプールは約１０６の多様性を含んだ。加えて、２つのプールを、実施例１で得られた出力（Ｔ３６６Ｖ／Ｙ４０７Ｖ（「Ｖ－Ｖ」）及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ Ｙ４０７Ｇ（「Ｗ－ＳＧ」））上に構築した。可変化されるアンカー位置及びネイバー位置並びに位置組み合わせ、並びにプールのうちのいくつかにおける可変化によって可能なＤＮＡ配列及びアミノ酸配列多様性を表７に要約する。ＤＮＡ配列多様性を以下のように計算した：
多様性＝（（Ｎアンカー単量体×３２１＋Ｎアンカー二量体×３２２）×（Ｎネイバー単量体×３２１＋Ｎネイバー二量体×３２２＋Ｎネイバー三量体×３２３））。
実施例８：サイクル２選択ステップ１：酵母上に提示される修飾Ｆｃを使用した選択。
ライブラリＤＮＡをＢｉｏＸｐシステムで合成し、前述のように酵母に形質転換した。クローンを、高Ｈｉｓシグナル及び高Ｆｌａｇシグナルに対する抗Ｈｉｓ試薬及び抗Ｆｌａｇ試薬を使用して選択した。ライブラリを５ラウンドにわたって選択した（図１５Ａ）。クローンをラウンド４及び５から配列決定し、配列固有性について分析した。４３０個の固有のバリアントＣＨ３ドメインセットを得た。
４３０個のＣＨ３セットを、前述のようにＩＥＸ（サブセット）及びＡｌｐｈａＬＩＳＡにより特徴付けた。４３０個のＣＨ３セットの特徴付けに、ロゼッタスコアリングも使用した。界面結合エネルギーの変化（ロゼッタによって予測される）として定義されるΔΔＧを、Ｂａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｐｈｙｓ Ｃｈｅｍ Ｂ（２０１８），ｐｐ．５３８９－５３９９に記載されるように決定した。簡潔に述べると、ΔΔＧを入力ＰＤＢ結晶構造に対して計算し、平均値を求めた（１ｌ６ｘ、２ｉｗｇ、４ｗｉ２、５ｇｓｑ）。次に、ヘテロ二量体状態のΔΔＧスコアを、両方の可能なホモ二量体状態のΔΔＧスコアとともに計算した。最後に、ロゼッタヘテロ二量体化スコア（ＲＨＳ）を計算した：ＲＨＳ＝ΔΔＧヘテロ二量体－最小（ΔΔＧホモ二量体Ａ、ΔΔＧホモ二量体Ｂ）。
固有性、ＩＥＸ、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、及びロゼッタ特徴付けデータに基づいて、４８個のＣＨ３セットを、実施例９におけるＨＥＫ２９３細胞での更なる産生のために選択した。選択したＣＨ３セットと選択しなかったＣＨ３セットとの間の３つの変数であるＩＥＸ（鎖間接触パーセント）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）値、及びロゼッタスコアの比較を図１５Ｂに提供する。
セットを、ｔ－ＳＮＥ（ｔ分散確率的ネイバー埋め込み）視覚化を使用して配列固有性によって更に特徴付けた。ｔ－ＳＮＥプロットを、２ｄプロット内の位置空間を視覚化するように構築し、点は各々、変異位置のセットを表し、プロット上の互いに近い点は同様の変異位置を含んだ。持ち越されるように選択されたクローンは、ｔ－ＳＮＥプロットで視覚化された広い範囲の設計空間に及んだ（図１５Ｃ及び図１５Ｄ）。持ち越されるように選択されたクローンは、ｔ－ＳＮＥプロットで視覚化された広い範囲の設計空間に及ぶ。
実施例９：サイクル２選択ステップ２：ＨＥＫ２９３細胞での修飾Ｆｃ産生を使用した選択。
実施例８で選択された４８個のバリアントＣＨ３ドメインセットをＣＨ２－ＣＨ３構築物としてクローニングし、ＨＥＫ２９３細胞で産生し、ＬＣＭＳ（前述の通り）、融解温度、及び１４日間安定性を使用して更に特徴付けた。
融解温度（Ｔｍ）を示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）により測定した。２０マイクロリットルの試料を、０．１～１ｍｇ／ｍｌで、１０μｌの２０倍Ｓｙｐｒｏ ｏｒａｎｇｅ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）と混合した後、Ｃ１０００サーモサイクラー（ＢｉｏＲａｄ）内で０．５℃間隔で４０～９５℃への制御された温度上昇に供して、Ｆｒｅｔシグナルを収集した。融解温度を、生シグナルの第１の導関数の負数をとることによって得た。
加速安定性試験の場合、試料をＨＢＳ中４０℃で１４日間インキュベートし、０日目、１日目、２日目、７日目、及び１４日目の試料を採取した。その後、試料をＳＥＣにより凝集について分析した。ＳＥＣ分析の場合、泳動用緩衝液組成物は、２００ｍＭリン酸ナトリウム、２５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０であった。加速安定性勾配を、ＳＥＣで測定した凝集パーセントから計算した。
追加の特徴付けデータに基づいて、５つのＣＨ３セットをサイクル２出力として選択し、実施例１０のＩｇＧ様二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）として更に産生した。図１６は、試験したＣＨ３セットのヘテロ二量体％値（ＬＣ－ＭＳにより測定）及び安定性（ＳＥＣにより測定）を示すプロットを提供し、黒丸のデータ点は、ＨＥＫ２９３細胞における二重特異性抗体産生に指名されたバリアントＣＨ３ドメインセットを表す。表８は、５つのサイクル２出力を、対照（野生型及びＷ－ＳＡＶ（すなわち、ＫｉＨ））とともに、ＬＣ－ＭＳにより測定したそれぞれのヘテロ二量体％値及び示差走査蛍光量測定（ＤＳＦ）により測定した融解温度Ｔｍで要約する。
実施例１０：ＨＥＫ２９３細胞で二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）として産生したサイクル２出力の特徴付け。
実施例９で選択された５つのサイクル２出力バリアントＣＨ３ドメインセットを、３つの異なるＦｖセットを有するＢｓＡｂとして産生し、ＩｇＧ様形式でヘテロ二量体化効率を評価した。図１７Ａに示すように、出力バリアントＣＨ３ドメインセット当たり合計５つの異なる構造を用いて、異なる配向（配向１又は配向２）で、以下の３つのＦｖセット：抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２（Ａｄｉｍａｂ）、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、又は抗ＨＥＬ／抗ＢＣＭＡ（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｌｅｇｅｎｄ Ｂｉｏ／Ｊａｎｓｓｅｎ）を使用した。抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、ナノボディ（ＶＨＨ）である。
二重特異性抗体又は単一特異性抗体のいずれかの野生型ＣＨ３ドメインセット（すなわち、参照配列配列番号１の二量体）を陰性対照として使用し、抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２二重特異性抗体に使用したＷ－ＳＡＶ（すなわち、ＫｉＨ）置換セットを陽性対照として使用した。更に、追加でＳ３５４Ｃ／Ｙ３４９Ｃ置換を組み込んだ、配向１の野生型ＣＨ３セット又はサイクル２出力バリアントＣＨ３ドメインセットを含む抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２二重特異性抗体も産生した。
合計で、表９に要約したように、４１個の異なる抗体を産生した。表９の抗体の重鎖配列及び軽鎖配列を付録表Ａ～Ｄに提供する。

ＨＥＫ２９３細胞で産生した表９の抗体を、上述のように、ＬＣ－ＭＳ（完全サイズ抗体のうちのヘテロ二量体％及びホモ二量体％）、ＩＥＸ（ヘテロ二量体％）、及びＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）により分析した。結果を表１０に要約する。

ＨＥＫ２９３細胞で産生した表９の抗体を、ＳＥＣにより加速安定性、すなわち、プロテインＡ精製試料上での０日目（産生日）の完全抗体％（「単量体完全Ａｂ％」）及び１４日目までの完全抗体％（「単量体完全Ａｂ％」）の変化について更に分析した。ＨＥＫ２９３細胞での産生からのＳＥＣ結果及びプロセス収率を表１１に要約する。


ヘテロ二量体％データ、単量体完全サイズ抗体％データ、及び収率を、４１個の抗体のうちの特定の抗体のセット間で更に比較した（図１７Ｂ～図１７Ｊ）。これらの比較において、「抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向１」、「抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向２」、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３配向１」、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３配向２」、及び「抗ＨＥＬ／抗ＢＣＭＡ配向１」を比較した場合、ＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％は、同じＣＨ３置換を有するＢｓＡｂ間で同等であった（図１７Ｂ）。ＢｓＡＢにおけるＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％と、ＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％を比較した場合、ＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸは、抗ＨＥＬ／抗ＢＣＭＡ抗体（１つのＦａｂアームにナノボディを含むＢｓＡｂ）に対して異なるヘテロ二量体％値（例えば、それぞれ、５４％及び４１％）を提供し、ここで、抗ＢＣＭＡ結合部分はＶＨ／ＶＬ対の代わりにナノボディ（「ＶＨＨ」）である（図１７Ｃ）。対照的に、ＬＣ－ＭＳによるヘテロ二量体％値とＩＥＸによるヘテロ二量体％値は、２つのＶＨ／ＶＬ対を有する他の抗体に対して良好に相関した（図１７Ｄ）。ＬＣ－ＭＳによるヘテロ二量体％値とＩＥＸによるヘテロ二量体％値との間の相関は、３５４／３４９ジスルフィド結合を有する抗ＣＤ３抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂのうちのいくつかでは明らかではなかった（図１７Ｅ）。
３５４／３４９置換を有する及び有しないＣＨ３セットにおけるＬＣ－ＭＳにより測定したヘテロ二量体％値を比較した場合、３５４／３４９置換を有するほとんどのＣＨ３セット（「ＴＬ－ＱＬ」を除く）は、３５４／３４９置換を有しない対応するＣＨ３セットよりも高いヘテロ二量体％値を示し（図１７Ｆ）、これは、Ｓ３５４ＣとＹ３４９Ｃとの間のジスルフィド結合がほとんどのセット（「ＴＬ－ＱＬ」を除く）においてヘテロ二量体化を増強することを示している。
結果は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）により測定したヘテロ二量体％値を、ＬＣ－ＭＳ又はＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％値と比較した場合、％値に何らかの矛盾があったとしても、ヘテロ二量体化の可能性に関してＣＨ３セットの順序（すなわち、順位）が維持されたことを示す（図１７Ｇ）。
全体的に、ヘテロ二量体％を決定するために使用した方法にかかわらず、３５４／３４９置換を有する又は有しない配向１又は配向２での「ＬＷＧ－ＳＩＧ」が、試験した様々なＣＨ３セットの中で最も高いヘテロ二量体％を提供するようである（図１７Ｈ）。
ＢｓＡｂの安定性も、ＳＥＣにより測定した０日目の単量体完全Ａｂ％及び１４日目までの単量体完全Ａｂ％（単量体完全ＡｂΔ％）の変化に基づいて比較した。図１７Ｉに示すように、抗体が「抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向１」であるか、「抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向２」であるか、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３配向１」であるか、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３配向２」であるか、「抗ＨＥＬ／抗ＢＣＭＡ配向１」であるかにかかわらず、０日目の単量体完全抗体％値は低く（すなわち、少ない凝集）、１４日目までにわずかな凝集しか起こらなかった。
最後に、ＨＥＫ２９３細胞でのＢｓＡｂの産生収率を比較した。図１７Ｊに示すように、抗体が「抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向１」であるか、「抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向２」であるか、「３５４／３４９置換を有する抗ＣＤ３／抗ＨＥＲ２配向１」であるか、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３配向１」であるか、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３配向２」であるか、「抗ＨＥＬ／ＢＣＭＡ配向１」であるかにかかわらず、産生収率は類似していた。
実施例１１：サイクル１出力置換、サイクル２出力置換、又はサイクル１出力置換とサイクル２出力置換の組み合わせを含むＢｓＡｂの同時特徴付け。
実施例１１では、サイクル１出力置換（Ｗ－ＳＧ又はＶ－Ｖ）を含む抗ＣＤ３抗ＨＥＲ２ ＢｓＡｂ、及びサイクル２出力置換（ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＴＬ－ＱＬ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、又はＬＷＧ－ＳＩＧ）を含むＢｓＡｂを、３５４／３４９置換を有した場合と有しなかった場合で、対照比較した。加えて、サイクル２出力置換とサイクル１出力置換又はＫｉＨ置換（ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ、ＷＱＬ－ＳＡＶＴＬ、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ、ＶＴＬ－ＶＱＬ、ＶＱＬ－ＶＴＬ、ＱＲＱＬ－ＦＴＬ、又はＶＱＲ－ＶＦ）との組み合わせのうちのいくつかを含むＢｓＡｂを、サイクル２出力置換の修飾バージョン（ＬＷＧ－ＩＧ）とともに、対照試験した。
実施例１１で使用したＢｓＡｂを表１２に要約する。全てのＢｓＡｂをＨＥＫ２９３細胞で産生した。

ＨＥＫ２９３細胞で産生した表１２のＢｓＡｂを、ＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸによりヘテロ二量体％について分析した。結果を表１３に要約する。
ＨＥＫ２９３細胞で産生し、かつプロテインＡ精製した表１２のｂｓＡｂを、ＳＥＣにより単量体完全Ａｂ％について更に分析した。ＨＥＫ２９３細胞での産生からのＳＥＣ結果及びプロセス収率を表１４に要約する。
ヘテロ二量体％データ、単量体完全サイズ抗体％データ、及び収率を、３１個の抗体のうちの特定の抗体のセット間で更に比較した。この比較により、ＬＣ－ＭＳ及びＩＥＸにより測定したヘテロ二量体％値を、３５４／３４９置換を有しない野生型又はサイクル１若しくは２出力ＣＨ３ドメインを含むＢｓＡｂで比較した場合、ＬＣ－ＭＳ値とＩＥＸ値との間に良好な相関が観察されたことが明らかになった（図１８Ａ）。更に、更に３５４／３４９置換を含む野生型又はサイクル１若しくは２出力ＣＨ３ドメインを含むＢｓＡｂに同じ比較を行った場合、％値に何らかの矛盾があったとしても、ヘテロ二量体化の可能性に関してＣＨ３セットの順序（すなわち、順位）は維持された（図１８Ｂ）。
実施例１０で観察されたように、３５４／３４９置換を有した場合と有しなかった場合のサイクル１選択及びサイクル２選択で特定されたＣＨ３セット（すなわち、サイクル１出力（Ｗ－ＳＧ及びＶ－Ｖ）及びサイクル２出力（ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＴＬ－ＱＬ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、及びＬＷＧ－ＳＩＧ）、並びに試験した既存のヘテロ二量体化技術（すなわち、ＫｉＨ、ＥＷ－ＲＶＴ、及びＺＷ１）のうち、ＬＷＧ－ＳＩＧが、３５４／３４９置換を有した場合と有しなかった場合で、一貫して最も高いヘテロ二量体化率を提供した（図１８Ｃ）。Ｗ－ＳＧ、ＲＧ－ＦＧ、及びＱＲ－Ｆも、３５４／３４９置換と組み合わせた場合、試験した既存のヘテロ二量体化技術（すなわち、ＫｉＨ、ＥＷ－ＲＶＴ、及びＺＷ１）のヘテロ二量体化率を超えた。
興味深いことに、Ｖ－Ｖ及びＱＲ－Ｆ（３５４／３４９置換を有する又は有しない）などのサイクル１及びサイクル２出力ＣＨ３セットのうちのいくつかは、プロテインＡ精製産生生成物においてＳＥＣにより測定した、試験した既存のヘテロ二量体化技術（すなわち、ＫｉＨ、ＥＷ－ＲＶＴ、及びＺＷ１）と比較して少ない凝集を示した（図１８Ｄ）。
ＣＨ３セットを３５４／３４９置換を有するものと有しないものとの間で比較した場合、３５４／３４９置換を有するＣＨ３セットは、全体的に、ＬＣ－ＭＳにより測定したより高いヘテロ二量体値及びＳＥＣにより測定したより高い単量体完全Ａｂ値を示した（図１８Ｅ）。これは、３５４／３４９置換の付加により、ＣＨ３ヘテロ二量体化及び改善された安定性が促進されたことを示す。
産生収率を、３５４／３４９置換を有した場合と有しなかった場合で、異なるＣＨ３セット間で比較した。図１８Ｆに示すように、いずれのＣＨ３置換セットも産生収率を低下させるようには見えなかった。更に、ある特定のＣＨ３セット、例えば、Ｖ－Ｖが、試験した既存のヘテロ二量体化技術（すなわち、ＫｉＨ、ＥＷ－ＲＶＴ、及びＺＷ１）よりも高い収率を有するようであることが観察された。加えて、表１３から明らかなように、組み合わせ置換セット（サイクル１置換とサイクル２置換との組み合わせ又はサイクル２置換とＫｉＨ置換との組み合わせ）の多く、例えば、ＷＴＬ－ＳＡＶＱＬ、ＷＴＬ－ＳＧＱＬ、ＷＱＬ－ＳＧＴＬ、及びＶＱＬ－ＶＴＬ、特にＬＷＧ－ＩＧ置換が、試験した既存のヘテロ二量体化技術（すなわち、ＫｉＨ、ＥＷ－ＲＶＴ、及びＺＷ１）よりも優れた産生収率を提供した。
サイクル２出力ＬＷＧ－ＳＩＧのバリアントである新たなＣＨ３セット「ＬＷＧ－ＩＧ」は、図１８Ｇに示すように、ＬＷＧ－ＩＧがＬＷＧ－ＳＩＧよりも更に高い産生収率を提供したことを除いて、ＬＷＧ－ＳＩＧと全体的に類似した特性を示した。ＬＷＧ－ＳＩＧとＬＷＧ－ＩＧとの間のこの類似性は、ＬＷＧ－ＳＩＧ及びＬＷＧ－ＩＧのロゼッタヘテロ二量体スコアと一致している。
ＣＨ３ジスルフィド結合置換（３５４／３４９置換又は３４９／３５４置換であり得る）を有する又は有しない、実施例に記載の発明ＣＨ３ドメイン置換セット、例えば、サイクル１出力及びサイクル２出力、並びに実施例１１における試験した追加のバリアントＣＨ３ドメイン（すなわち、サイクル１出力置換とサイクル２出力置換との組み合わせ、サイクル２出力置換とサイクル２出力置換との組み合わせ、サイクル２出力置換とＫｉＨ置換との組み合わせ、及びＬＷＧ－ＩＧ）、並びにそれらの関連変形の多くが付録表Ｅ～Ｇに提供されている。かかるＣＨ３置換セットを配列番号１の参照ＣＨ３ドメイン配列に組み込んだ例示的なバリアントＣＨ３ドメイン配列も付録表Ｅ～Ｇに提供されている。例示的な配列は、本明細書の実施例で使用したものである。しかしながら、これらの配列は例示的であり、同じＣＨ３置換セットが任意のＣＨ３ドメイン配列に組み込まれ得る、すなわち、配列番号１に限定されない場合があることに留意されたい。これらの例示的なバリアントＣＨ３ドメイン配列に割り当てた配列番号の要約を図１９に提供する。
実施例１２：サイクル１出力セット及びサイクル２出力セットのＴｍに対する影響の同時評価。
実施例１２では、３５４／３４９置換を有する又は有しない、サイクル１からの２つのバリアントＣＨ３ドメインセット（Ｗ－ＳＧ及びＶ－Ｖ）、及びサイクル２からの４つのバリアントＣＨ３ドメインセット（ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＤＶＧ－ＶＳＹ、及びＬＷＧ－ＳＩＧ）、並びに既存のＣＨ３セット（Ｗ－ＳＡＶ（ＫｉＨとも称する）、ＶＹＡＶ－ＶＬＬＷ（ＺＷ１とも称する）、及びＥＷ－ＲＶＴ）を、ＣＨ２－ＣＨ３構築物（すなわち、Ｆｃのみの構築物）としてＨＥＫ２９３細胞で産生し、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定した融解温度（Ｔｍ）に対するＣＨ３置換の影響を分析した。
方法
タンパク質発現：
ＣＨ３変異セットのヘテロ二量体ｆｃのみの構築物ＨＩＳタグ及びＦＬＡＧタグの両方を含むように、ヘテロ二量体をＨＩＳタグ及びＦＬＡＧ精製タグとして発現した。前述のように、タンパク質をＨＥＫ細胞中で一過性にトランスフェクトした。
一次捕捉：
一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ培養物を、２４００Ｇで５分間遠心分離することにより採取した。上清を細胞ペレットからデカント除去し、２４００Ｇで５分間にわたる２回目のスピンを行った後、１０カラム体積の２０ｍＭリン酸ナトリウム、５００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４緩衝液で平衡化したＮｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ樹脂（Ｃｙｔｉｖａ １７５３１８０）にロードした。その後、結合タンパク質を、２ｍＭイミダゾールを含む５カラム体積の平衡化緩衝液で洗浄し、２５０ｍＭイミダゾールを含む５カラム体積の平衡化緩衝液で溶出した。溶出液を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５培地（Ｃｙｔｉｖａ １７００３３０）を使用して、直ちに２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．２に脱塩した。
二次精製：
タンパク質を１０倍結合緩衝液（０．５Ｍトリス、１．５Ｍ塩化ナトリウム、１００ｍＭ塩化カルシウム、ｐＨ ７．４）で処理した後、１５カラム体積の５０ｍＭトリス、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．４で平衡化した抗ＦＬＡＧ Ｍ１樹脂（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ａ４５９６）にロードした。結合タンパク質を、１ｍＭ塩化カルシウムを含む３６カラム体積の平衡化緩衝液で洗浄し、２ｍＭ ＥＤＴＡを含む４カラム体積の平衡化緩衝液で溶出した。溶出液を、Ａｍｉｃｏｎ（商標）Ｕｌｔｒａ－１５遠心フィルター装置を通して、３×５透析濾過体積にわたって２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．２に緩衝液交換した。タンパク質を１ｍｇ／ｍＬの最終標的濃度に正規化し、０．２ｕｍで濾過した。
ＤＳＣによるＴｍ測定：
ＤＳＣ測定を、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－キャピラリーＤＳＣ（現在のＭａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用して行った。ＨＢＳ緩衝液を基準として用いて、典型的には１２０℃／時で１５～１００℃の範囲にわたってデータを収集した。４００μＬの試料をＤＳＣ試験に使用した。実行中のソフトウェアはＶＰＶｉｅｗｅｒ２０００であった。分析ソフトウェアはＭｉｃｒｏｃａｌ ＬＬＣ Ｃａｐ ＤＳＣ Ｖｅｒｓｉｏｎ Ｏｒｉｇｉｎ７０－Ｌ３であり、これを使用して、生データをモル熱容量（ＭＨＣ）に変換した。
結果
得られた第１のＴｍ値及び第２のＴｍ値（Ｔｍ１及びＴｍ２）を、各ＣＨ３ドメイン内の置換とともに表１５に提供する。Ｔｍ２値を図２０で更に視覚化している。
表１５に示すように、全てのバリアントＣＨ３セットがほぼ同様のＴｍ１値を提示した。Ｖ－Ｖ、ＱＲ－Ｆ、ＲＧ－ＦＧ、ＲＧ－ＦＧ（３５４／３４９）、及びＬＷＧ－ＳＩＧ（３５４／３４９）のＴｍ１値は、ＷＴ ＣＨ３セットのＴｍ１よりもわずかに高かった。表１５及び図２０に示すように、３５４／３４９置換を有するＣＨ３セットは、３５４／３４９置換を有しない対応するＣＨ３セットよりも高いＴｍ２値を提示した。別個のＴｍ２ピークをもたらさなかった３５４／３４９置換を有しないＣＨ３セット（Ｗ－ＳＡＶ、ＱＲ－Ｆ、及びＲＧ－ＦＧ）では、３５４／３４９置換を付加したときに、より別個のＴｍ２ピークが得られた。
実施例１３：ＬＷＧ－ＳＩＧを有するＩｇＧ１ Ｆｃの構造分析。
ＣＨ３－ＣＨ３相互作用に対するＣＨ３内の置換の影響を分析するために、ＡＤＩ－６４９５０と名付けたＬＷＧ－ＳＩＧセットを含むＦｃのみの構築物をＣＨＯ－Ｋ１細胞で産生し、結晶構造を分析した。
方法
ＡＤＩ－６４９５０ ＩｇＧ１ Ｆｃの結晶化及び構造決定：
鎖Ａ上にＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むバリアントＣＨ３（ＩｇＧ１）ドメインを含み、かつ鎖Ｂ上にＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ｇを含む（ここで、鎖ＢはＦｃ－ＩＩＩノックアウト置換（Ｍ２５２Ｅ、Ｉ２５３Ａ、及びＹ４３６Ａ）も含む）バリアントＣＨ３（ＩｇＧ１）ドメインを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ二量体であるＡＤＩ－６４９５０を、２ｍＭのトリス－ＨＣｌ ｐＨ８．０及び１５０ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中で１０．９ｍｇ／ｍＬに濃縮した。１０．９ｍｇ／ｍｌのＡＤＩ－６４９５０を、ＤＭＳＯ中に溶解した１ｍＭのＦｃ－ＩＩＩと２５ｍＭになるまで混合した。ＪＣＳＧ＋、ＰＡＣＴ、ＢＣＳ、及びＰｒｏＰｌｅｘスクリーンを、リザーバにわたってＭＲＣプレート中１００＋１００ｎｌのシッティングドロップを使用して設置した。データ収集に使用した結晶を、リザーバ：０．１Ｍクエン酸ｐＨ５．０及び２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）６０００にわたってＪＣＳＧ＋スクリーン、ウェルＢ９で成長させた。０．１Ｍクエン酸塩ｐＨ５．０、２０％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）６０００、及び２５％グリセロールを含む凍結溶液を添加した後、結晶を液体窒素中で急速凍結した。データを、ステーションＢｉｏＭＡＸ（ＭＡＸ ＩＶ、Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）で、１００Ｋで収集した（λ＝０．９７６３Å）。３６００個の画像を、画像当たり０．１°の振動幅で収集した。ビームラインは、Ｅｉｇｅｒ １６Ｍハイブリッド画素検出器を装備していた。２．７Åまでのデータを、ソフトウェアＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ Ｗ．（２０１０）“ＸＤＳ”Ａｃｔａ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６，１２５－１３２）及びＡｉｍｌｅｓｓ（Ｅｖａｎｓ Ｐ．Ｒ．ａｎｄ Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ，Ｇ．Ｎ．（２０１３）“Ｈｏｗ ｇｏｏｄ ａｒｅ ｍｙ ｄａｔａ ａｎｄ ｗｈａｔ ｉｓ ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ”Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６９，１２０４－１２１４）を含むａｕｔｏＰＲＯＣ（Ｖｏｎｒｈｅｉｎ，Ｃ．，Ｆｌｅｎｓｂｕｒｇ，Ｃ．，Ｋｅｌｌｅｒ，Ｐ．，Ｓｈａｒｆｆ，Ａ．，Ｓｍａｒｔ，Ｏ．，Ｐａｃｉｏｒｅｋ，Ｗ．，Ｗｏｍａｃｋ，Ｔ．＆ Ｂｒｉｃｏｇｎｅ，Ｇ．（２０１１）．Ｄａｔａ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｕｔｏＰＲＯＣ ｔｏｏｌｂｏｘ．Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７，２９３－３０２）を使用して処理した。結晶は、Ｐ２１空間群において非対称ユニット（ＡＳＵ）で単一の分子からなった。ＡＤＩ－６４９５０の分子置換溶液を、ＰＤＢエントリー５ＤＪ６（Ｌｅａｖｅｒ－Ｆａｙ ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌｌｙ Ｄｅｓｉｇｎｅｄ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｔａｔｅ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２４（４）：６４１－６５１）を使用したＰＨＡＳＥＲ（ＭｃＣｏｙ，Ａ．Ｊ．，Ｇｒｏｓｓｅ－Ｋｕｎｓｔｌｅｖｅ，Ｒ．Ｗ．，Ａｄａｍｓ，Ｐ．Ｄ．，Ｗｉｎｎ，Ｍ．Ｄ．，Ｓｔｏｒｏｎｉ，Ｌ．Ｃ．，＆ Ｒｅａｄ，Ｒ．Ｊ．（２００７）．Ｐｈａｓｅｒ ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ａｐｐｌｉｅｄ ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，４０（４），６５８－６７４）によって得た。これらの構造を、ＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙ Ｐ．，Ｌｏｈｋａｍｐ，Ｂ．，Ｓｃｏｔｔ，Ｗ．Ｇ．ａｎｄ Ｃｏｗｔａｎ Ｋ．（２０１０）“Ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｏｔ”Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６，４８６－５０１）を用いて手作業で構築し、Ｒｅｆｍａｃ５（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ，Ｇ．Ｎ．，Ｓｋｕｂａｋ，Ｐ．，Ｌｅｂｅｄｅｖ，Ａ．Ａ．，Ｐａｎｎｕ，Ｎ．Ｓ．，Ｓｔｅｉｎｅｒ，Ｒ．Ａ．，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｒ．Ａ．，Ｗｉｎｎ，Ｍ．Ｄ．Ｌｏｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｖａｇｉｎ，Ａ．Ａ．（２０１１）ＲＥＦＭＡＣ５ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６７ ３５５－３６７）を使用して精緻化し、最終Ｒ及びＲｆｒｅｅは、それぞれ、２０．４％及び２５．６％であった（図２１）。
比較のためにＰＤＢ ＩＤ：５ＪＩＩをＷＴ参照として使用した。
結果
ＡＤＩ－６４９５０に存在する置換によって媒介されるＣＨ３－ＣＨ３対合：
ＰＩＳＡ（タンパク質、界面、構造、及びアセンブリ）により計算したＣＨ３－ＣＨ３界面の形成時の自由エネルギー利得に基づいて、ＡＤＩ－６４９５０が、ＷＴ ＣＨ３ドメインを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ二量体よりも強いＣＨ３－ＣＨ３相互作用を有することが分かった（図２１）。鎖Ａ（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇ）と鎖Ｂ（Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ｇ）との間の対合（Ａ－Ｂヘテロ二量体）がＣＨ３－ＣＨ３界面でいくつかの新規の有極接点によって媒介されることが分かった（図２２）。これらの接点には、鎖Ａ Ｌｙｓ４０９と鎖Ｂ Ａｓｐ３９９との間に形成された塩架橋、並びに鎖Ａ Ｌｙｓ４０９と鎖Ｂ Ａｓｐ３９９との間、鎖Ａ Ｇｌｕ３５７と鎖Ｂ Ｌｙｓ３７０との間、鎖Ａ Ｓｅｒ３６４と鎖Ｂ Ｌｙｓ３７０との間、鎖Ａ Ｌｅｕ３９８と鎖Ｂ Ｌｙｓ３９２との間、鎖Ａ Ｔ３６６Ｓと鎖Ｂ Ｔｙｒ４０７との間、鎖Ａ Ｌｙｓ３６０と鎖Ｂ Ｔｙｒ３４９との間、及び鎖Ａ Ｓｅｒ３５４と鎖Ｂ Ｔｈｒ３５０との間の水素結合が含まれる（図２２）。
ＡＤＩ－６４９５０オフ産物Ａ－Ａホモ二量体とＢ－Ｂホモ二量体のＣＨ３－ＣＨ３界面での立体衝突は、誤対合の傾向を低下させると予測される。
潜在的なオフ産物ホモ二量体「Ａ－Ａ」（すなわち、２つの鎖Ａの二量体）及び「Ｂ－Ｂ」（すなわち、２つの鎖Ｂの二量体）を、鎖Ａを鎖Ｂに整列させること及び鎖Ｂを鎖Ａに整列させることによって生成し、その後、ＰｙＭｏｌで衝突をプローブした。（ａ）鎖Ａ Ｐｈｅ４０５及び鎖Ａ Ｌｙｓ４０９、（ｂ）鎖Ｂ Ｔｙｒ３４９及び鎖Ｂ Ａｓｐ３５６、（ｃ）鎖Ｂ Ｔ３６６Ｗ及び鎖Ｂ Ｔｙｒ４０７、並びに直交の（ｄ）鎖Ｂ Ｔ３６６Ｗ及び鎖Ｂ Ｔｙｒ４０７を含むいくつかの実質的な衝突が観察された（図２３）。これらの衝突は、ＡＤＩ－６４９５０不対合ホモ二量体構築物Ａ－Ａ及びＢ－Ｂの形成の傾向を低下させると予測される。
実施例１４：ｃＦＡＥ適合性試験、パート１－２つの同一のバリアントＣＨ３ドメインを含む抗体の産生。
二重特異性抗体を作製する多くの異なる方法のうちのいくつかは、ＦＡＥに依存する。サイクル１出力ＣＨ３ドメインセット及びサイクル２出力ＣＨ３ドメインセットのうちのいくつかを、ＷＴ ＣＨ３セットを陰性対照として使用し、ＩｇＧ１分子間のＦＥＡを媒介することが知られている既存のＣＨ３ドメインセット「Ｒ－Ｌ」（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０１３ Ｍａｒ ２６；１１０（１３）：５１４５－５０）を陽性対照として使用して、ｃＦＡＥに基づく製造方法に対するそれらの適用性について試験した（表１６を参照されたい）。
例えば、目的とする抗体が、（ａ）重鎖Ａ（ＶＨを含む）及び軽鎖Ａ（ＶＬを含む）を含むエピトープＡに特異的な半抗体を含み、かつ（ｂ）重鎖Ｂ（ＶＨを含む）及び軽鎖Ｂ（ＶＬを含む）を含むエピトープＢに特異的な半抗体を含む場合、（ａ）エピトープＡに特異的な半抗体を２つ含む抗体Ａ（抗体Ａ）及び（ｂ）エピトープＢに特異的な半抗体を２つ含む抗体Ｂ（抗体Ｂ）が産生され得る。その後、抗体Ａ及び抗体Ｂが、重鎖間のジスルフィド結合の減少を可能にし、結果として半抗体分子をもたらす、弱還元条件下に一緒に配置され得る。重鎖ＡがバリアントＣＨ３ドメインＡを含み（ＣＨ３ドメインＡ）、重鎖ＢがバリアントＣＨ３ドメインＢを含み（ＣＨ３ドメインＢ）、ＣＨ３ドメインＡ及びＣＨ３ドメインＢがＣＨ３－ＣＨ３ヘテロ二量体を優先的に形成する場合、弱還元条件の除去時に、ｃＦＡＥにより、重鎖Ａと重鎖Ｂとの間のヘテロ二量体が重鎖Ａホモ二量体及び重鎖Ｂホモ二量体よりも優先的に形成され、単一特異性抗体Ａ及び抗体Ｂよりも多くの目的とする二重特異性抗体がもたらされ得る（図１Ｃを参照されたい）。
単一特異性抗体Ａ及び抗体Ｂが最初に産生されるため、所与のバリアントＣＨ３ドメインのうちの２つ（ＣＨ３ドメインＡのうちの２つ又はＣＨ３ドメインＢのうちの２つ）を含む抗体の産生が不良である場合、かかる二重特異性抗体を製造する方法は、効率的に行われない場合がある。これは、ヘテロ二量体化を好むＣＨ３セットが全てｃＦＡＥによる二重特異性抗体の生成に有用であるとは限らない可能性があることを意味する。例えば、出願人の経験に基づいて、既存のＣＨ３セット、ＫｉＨ（表１）は、単一特異性親抗体が良好に産生されないため、ｃＦＡＥ媒介性の産生と適合性がない。この目的のために、表１６に列記したＣＨ３セットに属する同じＣＨ３ドメインのうちの２つを有する抗体、すなわち、単一特異性親抗体を、それらの産生収率及び純度について最初に試験した。
方法
（ｉ）ＡＤＩ－２９２３５と名付けた抗ＨＥＲ２抗体又はＡＤＩ－２６９０８と名付けた抗ＣＤ３抗体の可変領域配列、及び（ｉｉ）ＷＴ、Ｋ４０９Ｒ、Ｆ４０５Ｌ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｑ＿Ｋ４０９Ｒ、Ｌ３６８Ｆ、Ｔ３６６Ｒ＿Ｋ４０９Ｇ、又はＬ３６８Ｆ＿Ｋ３７０ＧのＣＨ３ドメイン（すなわち、互いに同一の２つのＣＨ３ドメイン）を含む単一特異性ＩｇＧ１抗体をＣＨＯ細胞で産生し、プロテインＡベースの親和性精製に供した。産生収率（ｍｇ／Ｌ）を比較した。完全サイズ単量体ＩｇＧ分子％での精製生成物の純度も、上述のようにＳＥＣにより分析した。
結果
得られた産生収率を図２４Ａに要約する。図２４Ａに示すように、全てのバリアントＣＨ３ドメインが十分な産生収率をもたらした。いくつかのバリアントＣＨ３ドメイン（Ｔ３６６Ｖ ＣＨ３ドメインを有するＡＤＩ－２９２３５、Ｌ３６８Ｆ ＣＨ３ドメインを有するＡＤＩ－２９２３５、並びにＴ３６６Ｑ＿Ｋ４０９Ｒ ＣＨ３ドメインを有するＡＤＩ－２９２３５及びＡＤＩ－２６９０８など）は、ＷＴ ＣＨ３と比較して高い収率を提供した。
完全サイズ単量体Ａｂ％でのプロテインＡベースの精製後の純度値を図２４Ｂに要約する。図２４Ｂに示すように、Ｔ３６６Ｒ＿Ｋ４０９Ｇ ＣＨ３ドメインを除く全てのバリアントＣＨ３ドメインが高い純度をもたらした。この結果に基づいて、「Ｖ－Ｖ」及び「ＱＲ－Ｆ」セットを、対照ＣＨ３セットとともに、以下の実施例において、ｃＦＡＥに基づく製造について更に試験した。しかしながら、ＣＨＯ細胞で産生された場合、Ｔ３６６Ｒ＿Ｋ４０９Ｇ ＣＨ３ドメインを含む抗体の純度は比較的低いが、異なる条件を使用して、例えば、異なる細胞型を使用して産生及び／又は精製された場合、かかる抗体が高い純度を達成し得ることが依然として可能であることに留意されたい。
これらの結果は、全体的に、バリアントＣＨ３セットを含むｂｓＡｂが、ｂｓＡｂの４つ全ての鎖が同じ細胞で発現されたときに効率的に産生されたとしても、各々そのセットのバリアントＣＨ３ドメインの一方のみを含み、そのセットの他方のバリアントＣＨ３ドメインを含まない親抗体が効率的に産生されないことを意味しないことを強調している。すなわち、ＦＡＥに基づくｂｓＡｂ製造方法に対するバリアントＣＨ３セットの適用性は、バリアントＣＨ３セットがヘテロ二量体をどの程度優先的に形成するかに基づいて必ずしも予測可能ではない。
実施例１５：ｃＦＡＥ適合性試験、パート２－ｃＦＡＥに基づくｂｓＡｂ産生。
本実施例は、「Ｖ－Ｖ」セット及び／又は「ＱＲ－Ｆ」セットがｃＦＡＥを媒介してｂｓＡｂを産生することができるかを試験した。実施例１５の目的とするｂｓＡｂは、（ａ）重鎖Ａ（ＡＤＩ－２９２３５のＶＨ、ＷＴ ＣＨ１ドメイン～ＣＨ２ドメイン、及び表１７に列記した試験ＣＨ３セットのＣＨ３ドメインを含む）、及び軽鎖Ａ（ＡＤＩ－２９２３５のＶＬ及びＷＴ ＣＬドメインを含む）を含む抗ＨＥＲ２半抗体と、（ｂ）重鎖Ｂ（ＡＤＩ－２６９０８のＶＨ、ＷＴ ＣＨ１ドメイン～ＣＨ２ドメイン、及び当該試験ＣＨ３セットの他方のＣＨ３ドメインを含む）、及び軽鎖Ｂ（ＡＤＩ－２６９０８のＶＬ及びＷＴ ＣＬドメインを含む）を含む抗ＣＤ３半抗体とを含む。ＡＤＩ－２９２３５とＡＤＩ－２６９０８は共通の軽鎖を共有し、それ故に、軽鎖Ａと軽鎖Ｂは互いに同一である。
方法
２つの抗ＨＥＲ２半抗体を含む抗ＨＥＲ２完全サイズ抗体、及び２つの抗ＣＤ３抗体を含む抗ＣＤ３完全サイズ抗体（表１７のｂｓＡｂを産生するため）をＣＨＯ細胞で産生し、プロテインＡベースの親和性精製に供した。加えて、２つのＫ４０９Ｒ ＣＨ３ドメインを含むパニツムマブ、及び２つのＦ４０５Ｌ ＣＨ３ドメインを含むニボルムマブ（表１７のｂｓＡｂインデックス番号３を産生するため）も産生し、精製した。
その後、精製生成物を以下のＦＡＥ反応ステップに供し、反応生成物を、タンパク質回収率（１ｍｇタンパク質反応当たりのＦＡＥ産物中のタンパク質含有量）及びＩＥＸにより評価したｂｓＡｂ形成に基づいて分析した。
ＦＡＥ反応：
１０倍２－メルカプトエチルアミン－ＨＣｌ（２－ＭＥＡ）原液（７５０ｍＭ）を、１．７０ｇの２－ＭＥＡを２０ｍＬのＰＢＳ中に溶解させることによって調製した。約６００～７００μＬの２Ｎ ＮａＯＨを使用して、ｐＨを７．４に調整した。
試験したｂｓＡｂ毎に、５００μｇの対応する抗ＨＥＲ２完全サイズ抗体（ＰＢＳ中２５０μＬ ２ｍｇ／ｍＬ）及び５００μｇの対応する抗ＣＤ３完全サイズ抗体（ＰＢＳ中２５０μＬ ２ｍｇ／ｍＬ）を、ディープウェルプレートのウェルに入れた。ｂｓＡｂインデックス番号３の場合、Ｋ４０９Ｒを有するパニツムマブを５００μｇ、及びＦ４０５Ｌを有するニボルマブを５００μｇ使用した。その後、４００μＬのＰＢＳ、続いて、１００μＬの１０倍２－ＭＥＡ原液を各ウェルに添加して、７５ｍＭの最終２－ＭＥＡ濃度を得た。試料を３０℃で５時間静置インキュベートした。
Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ２５プレート（３つのウェルにわたって１ｍＬの分割）を用いて脱塩を各試料に行い、緩衝液をＰＢＳに交換して、２－ＭＥＡを除去した（約５０μＭ未満を達成するために）。その後、試料を４℃で更に４８時間インキュベートした。
結果
１．タンパク質回収
タンパク質回収率を図２５Ａに提供する。図２５Ａに示すように、回収率は約８０％であり、異なるｂｓＡｂ試料の間で類似していた。
２．ＩＥＸにより評価したＢｓＡｂ形成
各々のパネルがＦＡＥ反応生成物（「出力」として示す）のクロマトグラムと対応する親抗体の精製生成物（「入力」として示す）のクロマトグラムとのオーバーレイを示す、試験した３つのバリアントＣＨ３セット、Ｒ－Ｌ、Ｖ－Ｖ、及びＱＲ－Ｆ（ＢｓＡｂインデックス番号２及び４～８に対応する）の例示的なＩＥＸ結果を図２５Ｂに提供する。図２５Ｂに示すように、Ｒ－Ｌセット（ｂｓＡｂインデックス番号２及び４）及びＶ－Ｖセット（ｂｓＡｂインデックス番号５及び６）は、ＦＡＥ反応ステップ時に意図されたｂｓＡｂを得るのに成功した。対照的に、ＱＲ－Ｆセットを使用した場合、意図されたｂｓＡｂをはるかに少ない量しか得られなかった。
これらの結果は、特に、バリアントＣＨ３ドメインセットがホモ二量体よりもヘテロ二量体を優先的に形成し、かつ４つ全ての鎖が同じ細胞で発現されたときにｂｓＡｂの優先的な産生を可能にしたとしても、このバリアントＣＨ３ドメインセットがＦＡＥを媒介することを意味しないことを強調している。すなわち、ＦＡＥに基づくｂｓＡｂ製造方法への適用性は予測不可能である。
実施例１６：ｃＦＡＥ適合性試験、パート３－Ｖ－Ｖセットについての更なる分析。
本実施例は、「Ｖ－Ｖ」セット（ｂｓＡｂインデックス番号５～６）を陰性対照（ＷＴ）（ｂｓＡｂ Ｉｎｄｅｘ ＃１）及び陽性対照（Ｒ－Ｌ）（ｂｓＡｂインデックス番号３～４）とともに使用して、ｂｓＡｂ生産のためのＦＡＥ産物を更に分析した。具体的には、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した産物品質、ＬＣ－ＭＳにより分析したｂｓＡｂ形成効率、及びバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により分析した同族抗原への別個の結合又は同時結合を、ＦＡＥ反応生成物（出力）とそれらの単一特異性親抗体（入力）との間で比較した。
１．ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるＦＡＥ産物の品質：
ＦＡＥ産物中のタンパク質含有量及び単一特異性親抗体（ＦＡＥ入力）の精製生成物（ＦＡＥ出力）を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（非還元）により視覚化し、比較した。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果を図２６Ａに提供する。図２６Ａに示すように、試験した全てのＣＨ３セットにおいて入力試料と出力試料との間に類似したバンドパターンが観察された。６０ｋＤａ未満の顕著なバンドは観察されなかった。すなわち、タンパク質の品質は入力と出力との間で一貫していた。
２．ＬＣ－ＭＳにより評価したＢｓＡｂ形成
Ｒ－Ｌセット又はＶ－Ｖセット（ｂｓＡｂインデックス番号２及び４～６）を含むｂｓＡｂ及びそれらの親抗体のＦＡＥ産物を、非還元条件下でＬＣ－ＭＳにより分析した。
各々のパネルがＦＡＥ反応生成物（「出力」として示す）のクロマトグラムと対応する親抗体の精製生成物（「入力」として示す）のクロマトグラムとのオーバーレイを示す、例示的なＬＣ－ＭＳ結果を図２６Ｂに提供する。図２６Ｂに示すように、Ｒ－Ｌセット及びＶ－Ｖセットはいずれも、意図されたｂｓＡｂの産生を成功させた。ＬＣ－ＭＳ結果に基づいて計算した、総完全サイズ抗体産物の中から得られた各種（「ａＡＡａ」、「ａＡＢａ」、又は「ａＢｂａ」）の％を表１８に提供する。表１８では、「ａＡＢａ」は、共通の軽鎖（「ａ」）と各々対合された１つの重鎖Ａ（「Ａ」）及び１つの重鎖Ｂ（「Ｂ」）を有する抗体、すなわち、意図されたｂｓＡｂを表し、「ａＡＡａ」は、共通の軽鎖と各々対合された２つの重鎖Ａを含む親抗体Ａ、すなわち、指示したバリアントＣＨ３を含むＡＤＩ－２９２３５を表し、「ａＢＢａ」は、共通の軽鎖と各々対合された２つの重鎖Ｂを含む親抗体Ｂ、すなわち、指示したバリアントＣＨ３を含むＡＤＩ－２６９０８を表す。％値は、得られた全ての完全サイズＩｇＧ分子の％である。表１８に示すように、Ｖ－Ｖセットは、１００％の意図されたｂｓＡｂを提供する優れたｂｓＡｂ産生を達成し、これは、陽性対照（Ｒ－Ｌセット）を使用して達成された値よりも更に高い。
３．同族抗原に対する結合動態：
ＦＡＥ産物（ｂｓＡｂインデックス番号１～２及び４～６）及びそれらの単一特異性親抗体の同族抗原に対する結合動態を比較した。
方法
同族抗原（ＨＥＲ２又はＣＤ３）への結合を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してＢＬＩにより測定した。ＩｇＧを、抗ヒトＩｇＧ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）に捕捉し（１．５ｎｍ）、ＰＢＳＦ（０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを有するＰＢＳ）中で最低３０分間静置させた。ＰＢＳＦ中での短い（６０秒間）ベースラインステップの後、ＩｇＧをロードしたバイオセンサーチップをＨＥＲ２又はＣＤ３（１００ｎＭ ＰＢＳＦ溶液）に曝露し（１８０秒間、１０００ｒｐｍの軌道振盪）、その後、ＰＢＳＦに浸漬して（１８０秒間、１０００ｒｐｍの軌道振盪）、バイオセンサーチップ表面からの抗原のあらゆる解離を測定した。結合応答が０．１ｎｍ超であったデータを整列させ、（会合ステップに対して）ステップ間補正し、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ分析ソフトウェアバージョン１１．１を使用して１：１結合モデルに適合させた。
結果
例示的な結合動態曲線を図２６Ｃに提供する。ｂｓＡｂの同族抗原への結合動態は、それらの対応する単一特異性親抗体の結合動態と一致した。結合動態は、ＣＨ３置換に有意に影響されなかった。
４．同時抗原結合：
最後に、ＦＡＥ産物（ｂｓＡｂ一致１～２及び４～６）が２つの同族抗原に同時に結合することができるかを試験し、結合動態を、それらの親抗体の結合動態と比較した。
方法
同時抗原結合を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で、２５℃で試験した。個別のｂｓＡｂ及びそれぞれの単一特異性親抗体の、ＨＥＲ２、次いでＣＤ３、又はＣＤ３、次いでＨＥＲ２への結合動態を分析した。全ての試薬を、０．１％（ｗ／ｗ）ＢＳＡを有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳＦ）に製剤化した。
ＨＥＲ２、次いでＣＤ３への結合を試験するために、単量体ＨＥＲ２－ｍｏＦｃ（１００ｎＭ）を最初に抗マウスＦｃ ＩｇＧ捕捉センサーチップ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にロードし、その後、ＰＢＳＦ中で最低１５分間静置させた。これらのロードしたセンサーチップを、最初にＰＢＳＦを含むウェルに曝露して（６０秒間）、本アッセイのために安定したベースラインを確立した後、ｂｓＡｂ（１００ｎＭ）に曝露し（１８０秒間）、最後にＣＤ３（１００ｎＭ）に曝露した（６００秒間）。
ＣＤ３、次いでＨＥＲ２への結合を試験するために、単量体ＣＤ３－ｍｏＦｃ（１００ｎＭ）を最初に抗マウスＦｃ ＩｇＧ捕捉センサーチップ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）にロードし、その後、ＰＢＳＦ中で最低１５分間静置させた。これらのロードしたセンサーチップを、最初にＰＢＳＦを含むウェルに曝露して（６０秒間）、本アッセイのために安定したベースラインを確立した後、ｂｓＡｂ（１００ｎＭ）に曝露し（１８０秒間）、最後にＨＥＲ２（１００ｎＭ）に曝露した（６００秒間）。
本アッセイの最後の２つのステップで十分な結合応答を有するＢｓＡｂをデュアル結合剤とみなした。
結果
例示的な結合動態曲線を図２６Ｄに提供する。図２６Ｄに示すように、Ｖ－Ｖセット及びＲ－ＬセットからのＦＡＥ産物は、ＦＡＥ産物が最初にＨＥＲ２に曝露されたか最初にＣＤ３に曝露されたかにかかわらず、ＨＥＲ２及びＣＤ３への同時結合を示した。
実施例１７：ｃＦＡＥ適合性試験、パート４－グルタチオン曝露。
本実施例は、ＦＡＥベースの方法により産生したＶ－Ｖセットを含む抗体がグルタチオン（ＧＳＨ）の存在下で安定しているかを試験した。具体的には、実施例１７は、ＧＳＨに曝露した場合、２－ＭＥＡ下でＦＡＥにより生成したＣＨ３ヘテロ二量体が別の（ホモ又はヘテロ）ＣＨ３セットから生成した別のＣＨ３ドメインと解離して再結合するかを試験した。安定性を、Ｒ－Ｌセットの安定性と比較した。
方法
Ｒ－Ｌセット及びＶ－Ｖセット毎に、以下のステップ１及びステップ２を行った。
ステップ１：最初に、（ｉ）ＡＤＩ－２９２３５可変ドメイン及び（ｉｉ）試験ＣＨ３セットの一方のバリアントＣＨ３（すなわち、２つの同じＣＨ３ドメイン）を含む第１の抗ＨＥＲ２ ＩｇＧ１を産生し、精製した。（ｉ）ＡＤＩ－２９２３５可変ドメイン及び（ｉｉ）試験ＣＨ３セットの他方のバリアントＣＨ３（すなわち、２つの同じＣＨ３ドメイン）を含む第２の抗ＨＥＲ２ ＩｇＧ１も産生し、精製した。次に、７５ｍＭの２－ＭＥＡ及び３０℃での５時間のインキュベーションを使用して、本質的に実施例１５に記載したように、第１の抗ＨＥＲ２ ＩｇＧ１と第２の抗ＨＥＲ２ ＩｇＧ１の混合物にＦＡＥ反応を行い、（ｉ）ＡＤＩ－２９２３５可変ドメイン及び（ｉｉ）当該試験ＣＨ３セットを含む抗ＨＥＲ２、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１を得た。
同様に、（ｉ）ＡＤＩ－２６９０８可変ドメイン及び（ｉｉ）当該試験ＣＨ３セットの一方のバリアントＣＨ３（すなわち、２つの同じＣＨ３ドメイン）を含む第１の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１を産生し、精製した。（ｉ）ＡＤＩ－２６９０８可変ドメイン及び（ｉｉ）試験ＣＨ３セットの他方のバリアントＣＨ３（すなわち、２つの同じＣＨ３ドメイン）を含む第２の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１も産生し、精製した。次に、７５ｍＭの２－ＭＥＡ及び３０℃での５時間のインキュベーションを使用して、本質的に実施例１５に記載したように、第１の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１と第２の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１の混合物にＦＡＥ反応を行い、（ｉ）ＡＤＩ－２６９０８可変ドメイン及び（ｉｉ）当該試験ＣＨ３セットを含む抗ＣＤ３、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１を得た。
ステップ２：抗ＨＥＲ２、ＣＨ３ヘテロ抗体を、（Ｉ）第１の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１、（ＩＩ）第２の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１、又は（ＩＩＩ）抗ＣＤ３、ＣＨ３ヘテロＩｇＧ１と混合し、０．５ｍＭのＧＳＨを含む弱還元環境下に配置し、３７℃で２４時間インキュベートした（このＧＳＨとのインキュベーションプロセスを、本明細書で「ＧＤＨ曝露」と称する）。ＧＳＨ曝露産物をＩＥＸにより分析して、更なるＦＡＥが起こったかを決定した。
実施例１７の実験スキームを図２７Ａに要約する。
結果
図２７Ｂは、ステップ１で２－ＭＥＡを使用したＦＡＥ時のＲ－Ｌセット及びＶ－Ｖセットの例示的なＩＥＸ結果を示す。図２７Ｃ～２７Ｅは、ステップ２でのＧＳＨ曝露時のＲ－Ｌセット及びＶ－Ｖセットの例示的なＩＥＸ結果を提供する。グラフパネルは各々、ＧＳＨ曝露産物のクロマトグラム、及び２つのＧＳＨ曝露入力抗体（すなわち、抗ＨＥＲ２、ＣＨ３ヘテロ抗体、及び（Ｉ）図２７Ｃの場合では第１の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１、（ＩＩ）図２７Ｄの場合では第２の抗ＣＤ３ ＩｇＧ１、又は（ＩＩＩ）図２７Ｅの場合では抗ＣＤ３、ＣＨ３ヘテロのクロマトグラムのオーバーレイを示す。図２７Ｃ～２７Ｅに示すように、ＧＳＨ曝露により、新たなＩＥＸピークはもたらされず、これは、ＧＳＨ曝露入力抗体間の鎖再結合は起こらなかったことを示す。すなわち、２－ＭＥＡ下でＦＡＥにより生成したＣＨ３ヘテロ二量体は安定しており、ＧＳＨの存在下で別の（ホモ又はヘテロ）ＣＨ３セットから生成した別のＣＨ３ドメインと再結合しない。ＧＳＨストレス下でのＶ－Ｖセットの安定性は、Ｒ－Ｌセットの安定性と同等であった。
実施例１８：３０℃で５時間にわたる７５ｍＭの２－ＭＥＡ下でのＦＡＥにより、重鎖と軽鎖との間の解離は引き起こされない。
本実施例は、実施例１５～１７で使用したｃＦＡＥ反応条件が重鎖と軽鎖との間の解離を引き起こすかを試験した。（ｉ）重鎖Ａ及び軽鎖Ａを含む第１の抗原に特異的な半抗体と、（ｉｉ）重鎖Ｂ及び軽鎖Ｂを含む第２の抗原に特異的な半抗体とを各々含む表１９に示すＢｓＡｂは、本実施例における目的とするｂｓＡｂであった。使用した可変配列は、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１）、又はインガツズマブ（抗ＥＧＦＲ）由来の配列であった。
方法
表１９に列記したｂｓＡｂ毎に、それぞれの単一特異性親抗体（すなわち、指示したＣＨ３修飾を有する第１の抗原に特異的な抗体Ａ及び第２の抗原に特異的な抗体Ｂ）をＣＨＯ細胞で産生し、プロテインＡベースの親和性精製に供した。その後、精製生成物を、以下のＦＡＥ反応ステップに供した。ＦＡＥ反応生成物をＧｉｎｇｉｓＫＨＡＮ（登録商標）酵素により消化してＦａｂ断片を得て、これをＬＣ－ＭＳにより分析した。
ＦＡＥ反応：
１０倍２－メルカプトエチルアミン－ＨＣｌ（２－ＭＥＡ）原液（７５０ｍＭ）を、１．７０ｇの２－ＭＥＡを２０ｍＬのＰＢＳ中に溶解させることによって調製した。約６００～７００μＬの２Ｎ ＮａＯＨを使用して、ｐＨを７．４に調整した。
試験したｂｓＡｂ毎に、５００μｇの対応する抗ＨＥＲ２完全サイズ抗体（ＰＢＳ中２５０μＬ ２ｍｇ／ｍＬ）及び５００μｇの対応する抗ＣＤ３完全サイズ抗体（ＰＢＳ中２５０μＬ ２ｍｇ／ｍＬ）を、ディープウェルプレートのウェルに入れた。ｂｓＡｂインデックス番号３の場合、Ｋ４０９Ｒを有するパニツムマブを５００μｇ、及びＦ４０５Ｌを有するニボルマブを５００μｇ使用した。その後、４００μＬのＰＢＳ、続いて、１００μＬの１０倍２－ＭＥＡ原液を各ウェルに添加して、７５ｍＭの最終２－ＭＥＡ濃度を得た。試料を３０℃で５時間静置インキュベートした。
２－ＭＥＡを、１０ｋＤａのＭＷＣＯスピンチューブ（５００μＬ未満＋３ｍＬ×６）を使用した透析濾過による緩衝液交換により除去した。その後、試料を４℃で更に４８時間インキュベートした。
結果
ＬＣ－ＭＳにより特定したＦａｂ種を表２０に提供する。表２０では、「ａＡ」は、１つの重鎖Ａ（「Ａ」）及び１つの軽鎖Ａ（「ａ」）を含む半抗体に由来するＦａｂを表し、「ｂＡ」は、１つの重鎖Ａ（「Ａ」）及び１つの軽鎖Ｂ（「ｂ」）を含む半抗体に由来するＦａｂを表し、「ａＢ」は、１つの重鎖Ｂ（「Ｂ」）及び１つの軽鎖Ａ（「ａ」）を含む半抗体に由来するＦａｂを表し、「ｂＢ」は、１つの重鎖Ｂ（「Ｂ」）及び１つの軽鎖Ｂ（「ｂ」）を含む半抗体に由来するＦａｂを表す。すなわち、「ａＡ」と「ｂＢ」は同族対であり、「ｂＡ」と「ａＢ」は非同族対である。％値は、ＦＡＥ産物の消化により得た全Ｆａｂの％である。表２０に示すように、試験したいずれの特異性組み合わせにも非同族対は見つからなかった。すなわち、ｃＦＡＥ反応条件は、重鎖と軽鎖との間のジスルフィド結合を破壊しない。
例示的な実施形態
本開示によるいくつかの例示的な実施形態が以下の本明細書に記載される。
実施形態１．第１の免疫グロブリン重鎖定常領域３（ＣＨ３）ドメインバリアントポリペプチドであって、任意選択で、当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成するように、ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み、
当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、
（ａ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドと少なくとも１つのアミノ酸が異なり、かつ
（ｂ）ＥＵ番号付けに従う以下の位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み、
任意選択で、
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含む、又は
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含み、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、
更に任意選択で、
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｙからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｔからならず、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｔからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｙからならず、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからならず、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからならず、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｈ及びＦ４０５Ａからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｔ及びＴ３９４Ｆからならず、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｔ及びＴ３９４Ｆからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｈ及びＦ４０５Ａからならず、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗからならず、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋからならず、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄからならず、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからならず、当該第１のＣＨ３ドメイン及び当該第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに由来し、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからならず、当該第１のＣＨ３ドメイン及び当該第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに由来し、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからならず、当該第１のＣＨ３ドメイン及び当該第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインに由来し、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからならず、当該第１のＣＨ３ドメイン及び当該第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインに由来し、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、及びＦ４０５Ｔからならず、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、及びＦ４０５Ｔからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗからならず、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃからならず、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃからならず、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６Ｋからなる、又は３６６Ｋ及び３５１Ｋからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５１Ｄからならない、３４９Ｅからならない、３４９Ｄからならない、３６８Ｅからならない、３６８Ｄからならない、３４９Ｅ及び３５５Ｅからならない、３４９Ｅ及び３５５Ｄからならない、３４９Ｄ及び３５５Ｅからならない、又は３４９Ｄ及び３５５Ｄからならず、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５１Ｄからなる、３４９Ｅからなる、３４９Ｄからなる、３６８Ｅからなる、３６８Ｄからなる、３４９Ｅ及び３５５Ｅからなる、３４９Ｅ及び３５５Ｄからなる、３４９Ｄ及び３５５Ｅからなる、又は３４９Ｄ及び３５５Ｄからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６Ｋからならない、又は３６６Ｋ及び３５１Ｋからならず、
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＦ４０５Ｌからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ４０９Ｒからならず、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ４０９Ｒからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＦ４０５Ｌからならず、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖからならず、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａからならず、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、及びＫ４０９Ｖからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、及びＹ４０７Ａからならず、かつ
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、及びＹ４０７Ａからなる場合、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、及びＫ４０９Ｖからならない、第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態２．
（Ｉ）以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み、かつ任意選択で、以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上を含む第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する、又は
（ＩＩ）以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み、かつ任意選択で、以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上を含む第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する、実施形態１に記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態３．当該第１のＣＨ３ドメインが、
（Ｉ）以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上、又は
（ＩＩ）以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上、にのみアミノ酸置換を含む、実施形態１又は２に記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態４．当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が、
（ｉ）３６６位、（ｉｉ）３６６位及び４０７位、（ｉｉｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、（ｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、（ｖ）３６８位、（ｖｉ）４０７位、（ｖｉｉ）３６６位及び３６８位、（ｖｉｉｉ）３６６位及び４０９位、（ｉｘ）３６８位及び３７０位、（ｘ）３６８位及び４０７位、（ｘｉ）３９９位及び４０５位、（ｘｉｉ）４００位及び４０９位、（ｘｉｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、（ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び３７０位、（ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、（ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、（ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、（ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、（ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、（ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、（ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、（ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は（ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか若しくはそれからなる、実施形態１～２のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態５．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位の、若しくは３６８位及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、あるいは
（ｘｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアント内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、実施形態１～４のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態６．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６８位の、若しくは３５４位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
（ｘｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、
当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内の３４９位のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃであり、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内の３５４位のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃである、実施形態１～２又は４～５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態７．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６８位の、若しくは３４９位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
（ｘｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
（ｘｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、
当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内の３５４位のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃであり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内の３４９位のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃである、実施形態１～２又は４～５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態８．以下のアミノ酸置換：Ｓ３６４Ｄ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｑ、Ｔ３６６Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｗ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｆ、Ｌ３６８Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、Ｋ３７０Ｇ、Ｋ３７０Ｙ、Ｄ３９９Ｑ、Ｓ４００Ｔ、Ｆ４０５Ｌ、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ｇ、Ｋ４０９Ｒ、Ｋ４０９Ｌ、及び／又はＫ４０９Ｇのうちの１つ以上を含み、
任意選択で、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを更に含む、実施形態１～２若しくは４～７のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態９．以下のアミノ酸置換：
（ｉ）Ｔ３６６Ｗ、（ｉｉ）Ｔ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇ、（ｉｉｉ）Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇ、（ｉｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇ、（ｖ）Ｔ３６６Ｖ、（ｖｉ）Ｌ３６８Ｆ、（ｖｉｉ）Ｙ４０７Ｖ、（ｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆ、（ｉｘ）Ｔ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒ、（ｘ）Ｔ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇ、（ｘｉ）Ｌ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇ、（ｘｉｉ）Ｌ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇ、（ｘｉｉｉ）Ｓ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌ、（ｘｉｖ）Ｄ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌ、（ｘｖ）Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇ、（ｘｖｉ）Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙ、（ｘｖｉｉ）Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ、（ｘｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ、（ｘｉｘ）Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘ）Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｉ）Ｔ３６６Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｒ、（ｘｘｉｉ）Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｉｉｉ）Ｄ３９９Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｌ、（ｘｘｉｖ）Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｄ３９９Ｑ、Ｆ４０５Ｌ、及びＹ４０７Ｇ、（ｘｘｖｉ）Ｔ３６６Ｑ、Ｄ３９９Ｑ、Ｆ４０５Ｌ、及びＫ４０９Ｒ、（ｘｘｖｉｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｇ、及びＫ４０９Ｌ、（ｘｘｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｄ３９９Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｌ、又は（ｘｘｉｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｌを含み、
任意選択で、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを更に含む、実施形態１～２若しくは４～８のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１０．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗを含むか又はそれからなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、及びＴ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなる、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含むか又はそれからなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含むか又はそれからなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなる、
（ｘｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、あるいは
（ｘｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、実施形態１～２若しくは４～９のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１１．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗからなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｖからなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＬ３６８Ｆからなる、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなる、
（ｘｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
（ｘｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、又は
（ｘｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、実施形態１～２若しくは４～９のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１２．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＬ３６８Ｆからなる、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
（ｘｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
（ｘｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなる、
（ｘｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
（ｘｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、又は
（ｘｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、実施形態１～２若しくは４～９のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１３．
（１）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇからなる、
（２）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなる、
（３）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（４）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（５）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（６）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる、
（７）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（８）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、
（９）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（１０）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗからなる、
（１１）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
（１２）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、実施形態１～２又は４～９のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１４．
（Ｉ）配列番号１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、若しくは１６１（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、若しくは１６２に従うアミノ酸配列を含む）、
（ＩＩ）配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、若しくは１６２（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、若しくは１６１に従うアミノ酸配列を含む）、
（ＩＩＩ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、若しくは１６３（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、若しくは１６４に従うアミノ酸配列を含む）、
（ＩＶ）配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、若しくは１６４（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、若しくは１６３に従うアミノ酸配列を含む）、
（Ｖ）配列番号１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、若しくは１６５（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、若しくは１６６に従うアミノ酸配列を含む）、又は
（ＶＩ）配列番号１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、若しくは１６６（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、若しくは１６５に従うアミノ酸配列を含む）、に従うアミノ酸配列を含む、実施形態１～２若しくは４～９のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１５．
（Ｉ）配列番号１１若しくは７１（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１２若しくは７２に従うアミノ酸配列を含む）、
（ＩＩ）配列番号１２若しくは７２（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１１若しくは７１に従うアミノ酸配列を含む）、
（ＩＩＩ）配列番号１３若しくは７３（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１４若しくは７４に従うアミノ酸配列を含む）、
（ＩＶ）配列番号１４若しくは７４（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１３若しくは７３に従うアミノ酸配列を含む）、
（Ｖ）配列番号１５若しくは７５（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１６若しくは７６に従うアミノ酸配列を含む）、又は
（ＶＩ）配列番号１６若しくは７６（任意選択で、当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、それぞれ、配列番号１５若しくは７５に従うアミノ酸配列を含む）、に従うアミノ酸配列を含む、実施形態１～２若しくは４～９のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド。
実施形態１６．実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを少なくとも１つの含む、免疫グロブリンポリペプチド。
実施形態１７．少なくとも第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む分子であって、
（Ａ）当該第１のポリペプチドが、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを含み、
（Ｂ）当該第２のポリペプチドが、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを含み、
更に、当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド及び当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドはアミノ酸が少なくとも１つ異なり、
当該第１のポリペプチド及び当該第２のポリペプチドが、任意選択でジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合されている、分子。
実施形態１８．多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であって、
（Ａ）第１の抗原結合ドメイン及び実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、
（Ｂ）第２の抗原結合ドメイン及び実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第２のＣＨ３ドメインによる第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、
（Ｃ）第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドと、
（Ｄ）第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドと、を含み、

（ａ）当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド及び当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドはアミノ酸が少なくとも１つ異なり、
（ｂ）当該第１のポリペプチド及び当該第２のポリペプチドが互いに結合又は対合されており、
更に、
（Ｉ）当該第１の抗原結合ドメイン及び当該第３の抗原結合ドメインが当該第１のエピトープに特異的な結合部位を形成し、
（ＩＩ）当該第２の抗原結合ドメインと当該第４の抗原結合ドメインが当該第１のエピトープとは異なる当該第２のエピトープに特異的な結合部位を形成する、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片。
実施形態１９．

（Ｉ）（Ｉ－ｉ）当該第１の抗原結合ドメインが免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインであり、当該第３の抗原結合ドメインが免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメインである、若しくは（Ｉ－ｉｉ）当該第１の抗原結合ドメインがＶＬドメインであり、当該第３の抗原結合ドメインがＶＨドメインである、及び／又は
（ＩＩ）（ＩＩ－ｉ）当該第２の抗原結合ドメインがＶＨドメインであり、当該第４の抗原結合ドメインがＶＬドメインである、若しくは（ＩＩ－ｉｉ）当該第２の抗原結合ドメインがＶＬドメインであり、当該第４の抗原結合ドメインがＶＨドメインであり、
任意選択で、当該多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片が二重特異性である、実施形態１８に記載の多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片。
実施形態２０．ポリヌクレオチド又はポリペプチドであって、
（ｉ）実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド、
（ｉｉ）実施形態１６に記載のポリペプチド、
（ｉｉｉ）実施形態１７に記載の分子、及び／又は
（ｉｖ）実施形態１８若しくは１９に記載の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片をコードする、ポリヌクレオチド又はポリペプチド。
実施形態２１．実施形態２０に記載のポリヌクレオチド（単数又は複数）を含む、ベクター。
実施形態２２．細胞であって、
（ｉ）実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを含む、
（ｉｉ）実施形態１６に記載のポリペプチドを含む、
（ｉｉｉ）実施形態１７に記載の分子を含む、
（ｉｖ）実施形態１８若しくは１９に記載の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片を含む、
（ｖ）実施形態２０に記載のポリヌクレオチド（単数若しくは複数）を含む、及び／又は
（ｖｉ）実施形態２１に記載のベクターを含む、細胞。
実施形態２３．組成物であって、
（Ｉ）（ｉ）実施形態１～１５のいずれか１つに記載の第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド、
（ｉｉ）実施形態１６に記載のポリペプチド、
（ｉｉｉ）実施形態１７に記載の分子、
（ｉｖ）実施形態１８若しくは１９に記載の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片、
（ｖ）実施形態２０に記載のポリヌクレオチド（単数若しくは複数）、
（ｖｉ）実施形態２１に記載のベクター、及び／又は
（ｖｉｉ）実施形態２２に記載の細胞と、
（ＩＩ）薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
実施形態２４．ＣＨ３ドメインバリアントライブラリを生成する方法であって、１つ以上の所定のヌクレオチド位置に変異を組み込むこと又はそれらの位置の核酸を無作為化することを含み、当該１つ以上の所定のヌクレオチド位置が、ＥＵ番号付けに従う３６４位、３６６位、３６８位、３７０位、３９９位、４００位、４０５位、４０７位、及び／又は４０９位から選択される所定のＣＨ３ドメイン位置のうちの１つ以上のアミノ酸をコードするコドン内にあり、
任意選択で、当該１つ以上の変異が、縮重コドン、任意選択で、６個の天然に存在するアミノ酸（Ｄ、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｋ、及びＮ）を表す縮重ＲＭＷコドン、又は２０個全ての天然に存在するアミノ酸残基を表す縮重ＮＮＫコドンにより生成され、
更に任意選択で、当該ライブラリが、第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド及び第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドの１つ以上のセットを特定するためのものであり、当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとは少なくとも１つのアミノ酸が異なる当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する、方法。
実施形態２５．第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド及び第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドの１つ以上のセットを特定する方法であって、当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドが、当該第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとは少なくとも１つのアミノ酸置換が異なる当該第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成し、当該方法が、
（ａ）（ａ－１）実施形態２４に記載のＣＨ３ドメインバリアントライブラリに従う第１のＣＨ３ドメインバリアントライブラリから発現されたＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを各々含む第１のポリペプチド又は第１のポリペプチドセットと、（ａ－２）実施形態２４に記載のＣＨ３ドメインバリアントライブラリに従う第２のＣＨ３ドメインバリアントライブラリから発現されたＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドを各々含む第２のポリペプチド又は第２のポリペプチドセットとを共発現又は結合することと、
（ｂ）当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドホモ二量体及び当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドヘテロ二量体の量を定量化することと、
（ｃ）ヘテロ二量体の所望のパーセンテージ、任意選択で、任意選択で参照ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドセットと比較して同等以上のパーセンテージのヘテロ二量体を提供する第１のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチド及び第２のＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドの１つ以上のセットを選択することと、を含み、
当該第１のＣＨ３ドメインバリアントライブラリ及び当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの所定のＣＨ３ドメイン位置が少なくとも１つ異なり、
任意選択で、
（Ｉ）当該第１のポリペプチド又は当該第１のポリペプチドセットの当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがＳ３５４Ｃ置換を含み、当該第１のポリペプチド又は当該第１のポリペプチドセットの当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがＹ３４９Ｃ置換を含む、あるいは
（ＩＩ）当該第１のポリペプチド又は当該第１のポリペプチドセットの当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがＹ３４９Ｃ置換を含み、当該第１のポリペプチド又は当該第１のポリペプチドセットの当該ＣＨ３ドメインバリアントポリペプチドがＳ３５４Ｃ置換を含む、方法。
実施形態２６．
（ｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０７位を含むか又はそれからなる、
（ｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０７位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなる、
（ｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び４０７位を含むか又はそれからなる、
（ｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び４０７位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｖ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４０７位を含むか又はそれからなる、
（ｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４０７位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなる、
（ｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位を含むか又はそれからなる、
（ｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び３７０位を含むか又はそれからなる、
（ｘ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び３７０位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位及びＦ４０５位を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位及び４０５位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び３７０位を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び３７０位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び３６８位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｖ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び３６８位を含むか又はそれからなる、
（ｘｖ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び４０７位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び４０７位を含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、及び４０５位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位、４０７位、及び４０９位；３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位；若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｖｉｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位、４０７位、及び４０９位；３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位；若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、及び４０５位を含むか又はそれからなる、
（ｘｉｘ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位、４０５位、及び４０７位；３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位；若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位を含むか又はそれからなる、
（ｘｘ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位、４０５位、及び４０７位；３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位；若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
（ｘｘｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、あるいは
（ｘｘｉｉ）当該第１のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、当該第２のＣＨ３ドメインライブラリの当該１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、実施形態２５に記載の方法。
実施形態２７．
（ａ－１）当該第１のポリペプチド又は当該第１のポリペプチドセットの各ポリペプチドが第１の標識を含むか又はそれに連結され、かつ
（ａ－２）当該第２のポリペプチド又は当該第２のポリペプチドセットの各々が第２の標識を含むか又はそれに連結される、実施形態２５又は２６に記載の方法。
実施形態２８．当該定量化ステップ（ｂ）が、当該第１の標識及び／又は当該第２の標識を検出することを含む、実施形態２７に記載の方法。
実施形態２９．当該定量化ステップ（ｂ）が、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、及び／又はフローサイトメトリーのうちの少なくとも１つを含む、実施形態２５～２８のいずれか１つに記載の方法。
付録

Claims (45)

  1. バリアント免疫グロブリン重鎖定常領域３（「ＣＨ３」）ドメインポリペプチド（「第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド」）又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドであって、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含むか又はそれからなる１つ以上のアミノ酸置換を含む、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  2. 前記バリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成し、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、
    （ａ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドと少なくとも１つのアミノ酸が異なり、かつ（ｂ）ＥＵ番号付けに従う以下の位置：３６４、３６６、３６８、３７０、３９９、４００、４０５、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  3. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドがアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドがアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含むか、又は
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドがアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃを更に含み、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドがアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃを更に含み、
    任意選択で、
    （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｙからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｔからならず、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｔからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｙからならず、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからならず、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからならず、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｈ及びＦ４０５Ａからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｔ及びＴ３９４Ｆからならず、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｔ及びＴ３９４Ｆからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｈ及びＦ４０５Ａからならず、
    （ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗからならず、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２Ｌ、及びＴ３９４Ｗからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖからならず、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋからならず、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄからならず、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからならず、前記第１のＣＨ３ドメイン及び前記第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに由来し、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ２２１Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからならず、前記第１のＣＨ３ドメイン及び前記第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインに由来し、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからならず、前記第１のＣＨ３ドメイン及び前記第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインに由来し、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｒ、Ｅ２２５Ｒ、Ｐ２２８Ｒ、及びＫ４０９Ｒからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＣ２２３Ｅ、Ｐ２２８Ｅ、及びＬ３６８Ｅからならず、前記第１のＣＨ３ドメイン及び前記第２のＣＨ３ドメインがヒトＩｇＧ２ ＣＨ３ドメインに由来し、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、及びＦ４０５Ｔからならず、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、及びＦ４０５Ｔからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ及びＫ４０９Ｗからならず、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃからならず、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、及びＳ３５４Ｃからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗ、及びＹ３４９Ｃからならず、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６Ｋからなるか、又は３６６Ｋ及び３５１Ｋからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５１Ｄからならない、３４９Ｅからならない、３４９Ｄからならない、３６８Ｅからならない、３６８Ｄからならない、３４９Ｅ及び３５５Ｅからならない、３４９Ｅ及び３５５Ｄからならない、３４９Ｄ及び３５５Ｅからならない、又は３４９Ｄ及び３５５Ｄからならず、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５１Ｄからなる、３４９Ｅからなる、３４９Ｄからなる、３６８Ｅからなる、３６８Ｄからなる、３４９Ｅ及び３５５Ｅからなる、３４９Ｅ及び３５５Ｄからなる、３４９Ｄ及び３５５Ｅからなる、又は３４９Ｄ及び３５５Ｄからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６Ｋからならない、又は３６６Ｋ及び３５１Ｋからならず、
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＦ４０５Ｌからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ４０９Ｒからならず、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ４０９Ｒからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＦ４０５Ｌからならず、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖからならず、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３４５Ｒ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｖ、及びＫ４０９Ｖからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＫ３６０Ｄ、Ｄ３９９Ｍ、及びＹ４０７Ａからならず、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、及びＫ４０９Ｖからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、及びＹ４０７Ａからならず、かつ
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＥ３５６Ｇ、Ｅ３５７Ｄ、Ｓ３６４Ｑ、及びＹ４０７Ａからなる場合、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｓ、Ｋ３７０Ｙ、Ｔ３６６Ｍ、及びＫ４０９Ｖからならず、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１若しくは２に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  4. （Ｉ）ＥＵ番号付けに従う、以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み、かつ任意選択で、以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含む第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成するか、又は
    （ＩＩ）ＥＵ番号付けに従う、以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含み、かつ任意選択で、以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含む第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する、先行請求項のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  5. 前記第１のＣＨ３ドメインが、
    （Ｉ）ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６４、３６６、４００、４０７、及び４０９のうちの１つ以上、又は
    （ＩＩ）ＥＵ番号付けに従う以下のアミノ酸位置：３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、及び４０７のうちの１つ以上、にのみアミノ酸置換を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  6. 前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が、
    （ｉ）３６６位、
    （ｉｉ）３６６位及び４０７位、
    （ｉｉｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、
    （ｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、
    （ｖ）３６８位、
    （ｖｉ）４０７位、
    （ｖｉｉ）３６６位及び３６８位、
    （ｖｉｉｉ）３６６位及び４０９位、
    （ｉｘ）３６８位及び３７０位、
    （ｘ）３６８位及び４０７位、
    （ｘｉ）３９９位及び４０５位、
    （ｘｉｉ）４００位及び４０９位、
    （ｘｉｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び３７０位、
    （ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、
    （ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、
    （ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、
    （ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、
    （ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、
    （ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、
    （ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は
    （ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、先行請求項のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  7. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位に又は３６８位及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、（ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位及び３６８位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が４００位、４０７位、及び４０９位の、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３９９位、４０５位、及び４０７位の、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、あるいは
    （ｘｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメイン内のアミノ酸置換が３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、先行請求項のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  8. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６８位の、又は３５４位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
    （ｘｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、
    前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内の３４９位のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃであり、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内の３５４位のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃであり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４、６、若しくは７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  9. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６８位の、又は３４９位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
    （ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３６８位、及び３７０位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、及び３６８位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６４位、３６６位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３４９位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、４００位、４０７位、及び４０９位の、３５４位、３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、及び４０５位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３４９位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位の、又は３５４位、３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、
    （ｘｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなる、又は
    （ｘｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位、３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位、３６８位、４００位、及び４０９位のアミノ酸置換からなり、
    前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内の３５４位のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃであり、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内の３４９位のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃであり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４、６、若しくは７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  10. 以下のアミノ酸置換：Ｓ３６４Ｄ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｑ、Ｔ３６６Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｗ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｆ、Ｌ３６８Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、Ｋ３７０Ｇ、Ｋ３７０Ｙ、Ｄ３９９Ｑ、Ｓ４００Ｔ、Ｆ４０５Ｌ、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ｇ、Ｋ４０９Ｒ、Ｋ４０９Ｌ、及び／又はＫ４０９Ｇのうちの１つ以上を含み、
    任意選択で、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを更に含み、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４若しくは６～９のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  11. 以下のアミノ酸置換のセット：
    （ｉ）Ｔ３６６Ｗ、
    （ｉｉ）Ｔ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇ、
    （ｉｉｉ）Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇ、
    （ｉｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇ、
    （ｖ）Ｔ３６６Ｖ、
    （ｖｉ）Ｌ３６８Ｆ、
    （ｖｉｉ）Ｙ４０７Ｖ、
    （ｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆ、
    （ｉｘ）Ｔ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒ、
    （ｘ）Ｔ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇ、
    （ｘｉ）Ｌ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇ、
    （ｘｉｉ）Ｌ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇ、
    （ｘｉｉｉ）Ｓ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌ、
    （ｘｉｖ）Ｄ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌ、
    （ｘｖ）Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇ、
    （ｘｖｉ）Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙ、
    （ｘｖｉｉ）Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ、
    （ｘｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌ、
    （ｘｉｘ）Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、
    （ｘｘ）Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、
    （ｘｘｉ）Ｔ３６６Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｒ、
    （ｘｘｉｉ）Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌ、
    （ｘｘｉｉｉ）Ｄ３９９Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｌ、
    （ｘｘｉｖ）Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｌ、
    （ｘｘｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｄ３９９Ｑ、Ｆ４０５Ｌ、及びＹ４０７Ｇ、
    （ｘｘｖｉ）Ｔ３６６Ｑ、Ｄ３９９Ｑ、Ｆ４０５Ｌ、及びＫ４０９Ｒ、
    （ｘｘｖｉｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｇ、及びＫ４０９Ｌ、
    （ｘｘｖｉｉｉ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｄ３９９Ｑ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｌ、又は
    （ｘｘｉｖ）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｓ４００Ｔ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｌのうちの１つを含み、
    任意選択で、Ｙ３４９Ｃ又はＳ３５４Ｃを更に含み、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４若しくは６～１０のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  12. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗを含むか又はそれからなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなる、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなる、
    （ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含むか又はそれからなる、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ及びＫ３７０Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｒ及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＤ３９９Ｑ及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ４００Ｔ及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなる、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖ及びＬ３６８Ｆを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒを含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなる、あるいは
    （ｘｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＬ３６８Ｉ及びＹ４０７Ｇを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇを含むか又はそれからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４若しくは６～１１のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  13. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗからなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＬ３６８Ｆからなる、
    （ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなる、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなる、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなる、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなる、
    （ｘｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
    （ｘｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、あるいは
    （ｘｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４若しくは６～１２のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  14. （ｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （ｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （ｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなる、
    （ｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、
    （ｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＬ３６８Ｆからなる、
    （ｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなる、
    （ｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、及びＫ３７０Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｒ、及びＫ４０９Ｇからなる、
    （ｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｓ、及びＫ３７０Ｙからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｄ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ｇからなる、
    （ｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ｇ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｖ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｖｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｖｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなる、
    （ｘｘｖｉｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｆ、Ｓ４００Ｔ、及びＫ４０９Ｌからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｑ、Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９Ｑ、及びＦ４０５Ｌからなる、
    （ｘｘｉｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなる、
    （ｘｘｘ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｖ、及びＬ３６８Ｆからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｑ、及びＫ４０９Ｒからなる、
    （ｘｘｘｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、又は
    （ｘｘｘｉｉ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４若しくは６～１３のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  15. （１）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇからなる、
    （２）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｗからなる、
    （３）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （４）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、
    （５）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （６）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなる、
    （７）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （８）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、
    （９）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （１０）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗからなる、
    （１１）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなる、
    （１２）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｉ、及びＹ４０７Ｇからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｇからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項１～４若しくは６～１４のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  16. 以下、
    （Ｉ）配列番号１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、若しくは１６１（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、若しくは１６２に従うアミノ酸配列を含む）、
    （ＩＩ）配列番号１２、２２、３２、４２、５２、６２、７２、８２、９２、１０２、１１２、１２２、１３２、１４２、１５２、若しくは１６２（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、１３１、１４１、１５１、若しくは１６１に従うアミノ酸配列を含む）、
    （ＩＩＩ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、若しくは１６３（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、若しくは１６４に従うアミノ酸配列を含む）、
    （ＩＶ）配列番号１４、２４、３４、４４、５４、６４、７４、８４、９４、１０４、１１４、１２４、１３４、１４４、１５４、若しくは１６４（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、１３３、１４３、１５３、若しくは１６３に従うアミノ酸配列を含む）、
    （Ｖ）配列番号１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、若しくは１６５（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、若しくは１６６に従うアミノ酸配列を含む）、又は
    （ＶＩ）配列番号１６、２６、３６、４６、５６、６６、７６、８６、９６、１０６、１１６、１２６、１３６、１４６、１５６、若しくは１６６（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１５、２５、３５、４５、５５、６５、７５、８５、９５、１０５、１１５、１２５、１３５、１４５、１５５、若しくは１６５に従うアミノ酸配列を含む）、から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～４若しくは６～１５のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  17. 以下、
    （Ｉ）配列番号１１若しくは７１（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１２若しくは７２に従うアミノ酸配列を含む）、
    （ＩＩ）配列番号１２若しくは７２（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１１若しくは７１に従うアミノ酸配列を含む）、
    （ＩＩＩ）配列番号１３若しくは７３（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１４若しくは７４に従うアミノ酸配列を含む）、
    （ＩＶ）配列番号１４若しくは７４（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１３若しくは７３に従うアミノ酸配列を含む）、
    （Ｖ）配列番号１５若しくは７５（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１６若しくは７６に従うアミノ酸配列を含む）、又は
    （ＶＩ）配列番号１６若しくは７６（任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、それぞれ、配列番号１５若しくは７５に従うアミノ酸配列を含む）、から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～４若しくは６～１６のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド。
  18. 請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド又は前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドを少なくとも１つ含む、免疫グロブリンポリペプチド。
  19. 少なくとも第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む分子であって、
    （Ａ）前記第１のポリペプチドが、請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含み、
    （Ｂ）前記第２のポリペプチドが、請求項２～１７のいずれか一項に記載の第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含み、
    更に、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが、任意選択でジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合されており、
    任意選択で、前記分子が、以下の特徴、
    （Ａ）前記第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを更に含む、
    （Ｂ）前記第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを更に含む、
    （Ｃ）ヘテロマー分子が、第３の抗原結合ドメインを任意選択で含む第３のポリペプチドを更に含み、任意選択で、前記第３のポリペプチドが前記第１のポリペプチドに結合されているか若しくはそれと対合されている、及び／又は
    （Ｄ）前記ヘテロマー分子が、第４の抗原結合ドメインを任意選択で含む第４のポリペプチドを更に含み、任意選択で、前記第４のポリペプチドが前記第２のポリペプチドに結合されているか又はそれと対合されている、のうちの１つ以上を含み、
    任意選択で、前記分子が、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であり、任意選択で、図２～８のうちのいずれか１つに示される構造を含み、更に任意選択でＩｇＧであり、なお更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４であり、
    任意選択で、前記分子が、以下の特徴、
    （Ｉ）（Ｉ－１－ｉ）前記第１のポリペプチドが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する第１の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）前記ヘテロマー分子が、第３のエピトープに特異的な第３の抗原結合部位を形成する第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含む、又は
    （Ｉ－２）前記第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを含み、前記ヘテロマー分子が第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み、前記第１の抗原結合ドメイン及び前記第３の抗原結合ドメインが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する、並びに／又は
    （ＩＩ）（ＩＩ－１－ｉ）前記第２のポリペプチドが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する第２の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）前記ヘテロマー分子が、第４のエピトープに特異的な第４の抗原結合部位を形成する第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含む、又は
    （ＩＩ－２）前記第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを含み、前記ヘテロマー分子が第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み、前記第２の抗原結合ドメイン及び前記第４の抗原結合ドメインが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する、のうちの１つを含み、
    任意選択で、前記第１のエピトープ、前記第２のエピトープ、前記第３のエピトープ、及び／若しくは前記第４のエピトープが、個別に互いに同一であるか又は異なる、分子。
  20. 多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であって、
    （Ａ）第１の抗原結合ドメイン及び請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、
    （Ｂ）第２の抗原結合ドメイン及び請求項２～１７のいずれか一項に記載の第２のＣＨ３ドメインによる第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、
    前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが互いに結合又は対合されており、任意選択で、前記多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片が、図２～８のうちのいずれか１つに示される構造を含み、任意選択で、前記多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片が、ＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４を含む、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片。
  21. 以下の特徴、
    （Ｉ）（Ｉ－１－ｉ）前記第１のポリペプチドが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する第１の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）前記ヘテロマー分子が、第３のエピトープに特異的な第３の抗原結合部位を形成する第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含む、又は
    （Ｉ－２）前記第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを含み、前記ヘテロマー分子が第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み、前記第１の抗原結合ドメイン及び前記第３の抗原結合ドメインが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する、並びに／又は
    （ＩＩ）（ＩＩ－１－ｉ）前記第２のポリペプチドが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する第２の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）前記ヘテロマー分子が、第４のエピトープに特異的な第４の抗原結合部位を形成する第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含む、又は
    （ＩＩ－２）前記第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを含み、前記ヘテロマー分子が第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み、前記第２の抗原結合ドメイン及び前記第４の抗原結合ドメインが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する、のうちの１つ以上を含み、
    任意選択で、前記第１のエピトープ、前記第２のエピトープ、前記第３のエピトープ、及び／若しくは前記第４のエピトープが、個別に互いに同一であるか又は異なり、
    任意選択で、
    （Ｉ－２）において、（ｉ）前記第１の抗原結合ドメインが免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインであり、前記第３の抗原結合ドメインが免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであるか、若しくは（ｉｉ）前記第１の抗原結合ドメインがＶＬドメインであり、前記第３の抗原結合ドメインがＶＨドメインである、及び／又は
    （ＩＩ－２）において、（ｉ）前記第２の抗原結合ドメインがＶＨドメインであり、前記第４の抗原結合ドメインがＶＬドメインであるか、若しくは（ｉｉ）前記第２の抗原結合ドメインがＶＬドメインであり、前記第４の抗原結合ドメインがＶＨドメインであり、
    任意選択で、前記多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片が二重特異性である、請求項２０に記載の多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片。
  22. ポリヌクレオチド（単数又は複数）であって、
    （ｉ）請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド、
    （ｉｉ）請求項１８に記載のポリペプチド、
    （ｉｉｉ）請求項１９に記載の分子、及び／又は
    （ｉｖ）請求項２０若しくは２１に記載の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片をコードする、ポリヌクレオチド（単数又は複数）。
  23. 請求項２２に記載のポリヌクレオチド（単数又は複数）を含む、ベクター。
  24. 細胞であって、
    （ｉ）請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチドを含む、
    （ｉｉ）請求項１８に記載のポリペプチドを含む、
    （ｉｉｉ）請求項１９に記載の分子を含む、
    （ｉｖ）請求項２０若しくは２１に記載の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片を含む、
    （ｖ）請求項２２に記載のポリヌクレオチド（単数若しくは複数）を含む、及び／又は
    （ｖｉ）請求項２３に記載のベクターを含む、細胞。
  25. 組成物であって、
    （Ｉ）（ｉ）請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む重鎖ポリペプチド、
    （ｉｉ）請求項１８に記載のポリペプチド、
    （ｉｉｉ）請求項１９に記載の分子、
    （ｉｖ）請求項２０若しくは２１に記載の多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片、
    （ｖ）請求項２２に記載のポリヌクレオチド（単数若しくは複数）、
    （ｖｉ）請求項２３に記載のベクター、及び／又は
    （ｖｉｉ）請求項２４に記載の細胞と、
    （ＩＩ）薬学的に又は診断的に許容される担体と、を含む、組成物。
  26. ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリを生成する方法であって、インシリコ又はインビトロで、ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチド内の１つ以上の所定のヌクレオチド位置に変異を組み込むこと又はそれらの位置の核酸を無作為化することを含み、前記１つ以上の所定のヌクレオチド位置が、１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置のアミノ酸をコードするコドン内にあり、前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が、
    （ｉ）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するか又はそれに近接して存在し、任意選択で、ＣＨ３ドメイン位置のアミノ酸残基が、以下、（ｉ－１）ＣＨ３単量体形態での側鎖溶媒露出表面積（ＳＡＳＡ）が１５％以上である、（ｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、約８．２Å以下の対合ＣＨ３ドメインの原子が存在する、及び（ｉ－３）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、前記残基が前記対合ＣＨ３ドメインから離れて向いていない、を満たす場合、前記ＣＨ３ドメイン位置がＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するか又はそれに近接して存在するとみなされる、
    （ｉｉ）ＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測され、任意選択で、前記予測がインシリコ又はインビトロで行われ、更に任意選択で、ＣＨ３ドメイン位置が、以下、（ｉｉ－１）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するＣＨ３ドメイン位置に対して第１、第２、若しくは第３の隣接位置にある、及び／又は（ｉｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、前記ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在する前記対合ＣＨ３ドメインのＣＨ３ドメイン位置から約８．２Å以下の鎖間ベータ炭素－ベータ炭素距離を有する、を満たす場合、前記ＣＨ３ドメイン位置がＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測される、並びに／又は
    （ｉｉｉ）ＥＵ番号付けに従う３６４位、３６６位、３６８位、３７０位、３９９位、４００位、４０５位、４０７位、及び／又は４０９位から選択され、
    任意選択で、前記変異を前記１つ以上の所定のヌクレオチド位置に前記組み込むこと又はそれらの位置の核酸を無作為化することが、縮重コドン、任意選択で、６個の天然に存在するアミノ酸（Ｄ、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｋ、及びＮ）を表す縮重ＲＭＷコドン、又は２０個全ての天然に存在するアミノ酸残基を表す縮重ＮＮＫコドンを導入することを含み、
    更に任意選択で、前記ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリが、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを特定するためのものであり、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとは少なくとも１つのアミノ酸が異なる前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成する、方法。
  27. 前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が、
    （ｉ）３６６位、
    （ｉｉ）３６６位及び４０７位、
    （ｉｉｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、
    （ｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、
    （ｖ）３６８位、
    （ｖｉ）４０７位、
    （ｖｉｉ）３６６位及び３６８位、
    （ｖｉｉｉ）３６６位及び４０９位、
    （ｉｘ）３６８位及び３７０位、
    （ｘ）３６８位及び４０７位、
    （ｘｉ）３９９位及び４０５位、
    （ｘｉｉ）４００位及び４０９位、
    （ｘｉｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び３７０位、
    （ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、
    （ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、
    （ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、
    （ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、
    （ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、
    （ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、
    （ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は
    （ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項２６に記載の方法。
  28. 請求項２６又は２７に記載の方法を使用して生成された、ＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリ。
  29. ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリを生成する方法であって、
    （Ｉ）インシリコ若しくはインビトロで、請求項２８に記載のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの複数のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドに対応する複数のＣＨ３ドメインポリペプチドを得ること、又は
    （ＩＩ）インシリコ若しくはインビトロで、複数のＣＨ３ドメインポリペプチド内の１つ以上の所定のＣＨ３ドメインアミノ酸位置に置換を組み込むことを含み、前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメインアミノ酸位置のうちの前記１つ以上が、
    （ｉ）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するか又はそれに近接して存在し、任意選択で、ＣＨ３ドメイン位置のアミノ酸残基が、以下、（ｉ－１）ＣＨ３単量体形態での側鎖溶媒露出表面積（ＳＡＳＡ）が１５％以上である、（ｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、約８．２Å以下の対合ＣＨ３ドメインの原子が存在する、及び（ｉ－３）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、前記残基が前記対合ＣＨ３ドメインから離れて向いていない、を満たす場合、前記ＣＨ３ドメイン位置が前記ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するか又はそれに近接して存在するとみなされる、
    （ｉｉ）ＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測され、任意選択で、前記予測がインシリコ又はインビトロで行われ、更に任意選択で、ＣＨ３ドメイン位置が、以下、（ｉｉ－１）ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在するＣＨ３ドメイン位置に対して第１、第２、若しくは第３の隣接位置にある、及び／又は（ｉｉ－２）ＣＨ３－ＣＨ３二量体形態で、前記ＣＨ３－ＣＨ３界面に存在する前記対合ＣＨ３ドメインのＣＨ３ドメイン位置から約８．２Å以下の鎖間ベータ炭素－ベータ炭素距離を有する、を満たす場合、前記ＣＨ３ドメイン位置がＣＨ３－ＣＨ３相互作用に影響を及ぼすと予測される、並びに／又は
    （ｉｉｉ）ＥＵ番号付けに従う３６４位、３６６位、３６８位、３７０位、３９９位、４００位、４０５位、４０７位、及び／又は４０９位から選択され、
    任意選択で、前記ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリが、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを特定するためのものであり、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとは少なくとも１つのアミノ酸が異なる、任意選択で、少なくとも１つのアミノ酸置換が異なる前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成し、
    更に任意選択で、前記ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが所定の数のＣＨ３ドメインアミノ酸置換を含み、任意選択で、前記所定の数が、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上；１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、若しくは２以下；１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４；１～３；１～２；及び／又は１、２、３、４、又は５である、方法。
  30. （ＩＩ）における前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が、
    （ｉ）３６６位、
    （ｉｉ）３６６位及び４０７位、
    （ｉｉｉ）３６４位、３６６位、及び４０９位、
    （ｉｖ）３６６位、３６８位、及び４０７位、
    （ｖ）３６８位、
    （ｖｉ）４０７位、
    （ｖｉｉ）３６６位及び３６８位、
    （ｖｉｉｉ）３６６位及び４０９位、
    （ｉｘ）３６８位及び３７０位、
    （ｘ）３６８位及び４０７位、
    （ｘｉ）３９９位及び４０５位、
    （ｘｉｉ）４００位及び４０９位、
    （ｘｉｉｉ）３６４位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｉｖ）３６６位、３６８位、及び３７０位、
    （ｘｖ）３６６位、３９９位、及び４０５位、
    （ｘｖｉ）３６６位、４００位、及び４０９位、
    （ｘｖｉｉ）３６６位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｖｉｉｉ）３６８位、４００位、及び４０９位、
    （ｘｉｘ）３９９位、４０５位、及び４０７位、
    （ｘｘ）４００位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｘｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位、
    （ｘｘｉｉ）３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位、
    （ｘｘｉｉｉ）３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位、
    （ｘｘｉｖ）３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位、又は
    （ｘｘｖ）３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位のアミノ酸置換を含むか若しくはそれからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項２９に記載の方法。
  31. 請求項２９又は３０に記載の方法を使用して生成された、ＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリ。
  32. 第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを特定する方法であって、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドとヘテロ二量体を優先的に形成し、前記方法が、
    （ａ）（ａ－１）野生型又はバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第１のポリペプチド及び（ａ－２）野生型又はバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第２のポリペプチドの複数のセットを提供することであって、任意選択で、（ａ－１）及び（ａ－２）の前記複数のセットがインシリコ又はインビトロで提供される、提供することと、
    （ｂ）ステップ（ａ）の前記複数のセットのうちの１つ以上における前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメイン間の結合又は対合優先度を定量化化することであって、任意選択で、前記定量化化がインシリコ及び／又はインビトロで行われ、更に任意選択で、前記定量化化が、任意選択で、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、及び／又はフローサイトメトリーにより、ステップ（ａ）の前記複数のセットのうちの１つ以上における前記ＣＨ３ドメインによって形成されるＣＨ３ドメインホモ二量体及びＣＨ３ドメインヘテロ二量体の量をインビトロで定量化化することを含む、定量化化することと、
    （ｃ）ヘテロ二量体の所望の結合若しくは対合優先度、任意選択で所望のパーセンテージ、更に任意選択で、任意選択で参照ＣＨ３ドメインポリペプチドセットと比較して同等以上のＣＨ３ドメインヘテロ二量体の結合若しくは対合優先度及び／又はパーセンテージを提供する第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを選択することと、を含み、
    任意選択で所定のＣＨ３ドメイン位置で、前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸が少なくとも１つ、任意選択でアミノ酸置換が少なくとも１つ異なり、
    任意選択で、
    （Ａ）前記第１のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが、請求項３１に記載の第１のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られる、若しくは請求項２８に記載の第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現される、及び／又は
    （Ｂ）前記第２のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが、請求項３１に記載の第２のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られる、又は請求項２８に記載の第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現され、
    更に任意選択で、
    （Ｉ）前記第１のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが置換Ｓ３５４Ｃを含み、前記第２のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが置換Ｙ３４９Ｃを含む、又は
    （ＩＩ）前記第１のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが置換Ｙ３４９Ｃを含み、前記第２のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが置換Ｓ３５４Ｃを含む、方法。
  33. （Ａ）前記第１のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが、請求項３１に記載の第１のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られる、又は請求項２８に記載の第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現され、並びに
    （Ｂ）前記第２のポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインポリペプチドが、請求項３１に記載の第２のＣＨ３ドメインポリペプチドライブラリから得られる、又は請求項２８に記載の第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリから発現され、
    （ｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０７位を含むか又はそれからなる、
    （ｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０７位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなる、
    （ｉｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び４０７位を含むか又はそれからなる、
    （ｉｖ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び４０７位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｖ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４０７位を含むか又はそれからなる、
    （ｖｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｖｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４０７位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位を含むか又はそれからなる、
    （ｖｉｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位を含むか又はそれからなる、
    （ｉｘ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び３７０位を含むか又はそれからなる、
    （ｘ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び３７０位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位及びＦ４０５位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位及び４０５位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び３７０位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３６８位、及び３７０位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び３６８位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｖ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位及び３６８位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び４０７位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６４位、３６６位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位及び４０７位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、及び４０５位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位、４０７位、及び４０９位；３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位；若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｖｉｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が４００位、４０７位、及び４０９位；３６６位、４００位、４０７位、及び４０９位；若しくは３６６位、３６８位、４００位、４０７位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、及び４０５位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｉｘ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位、４０５位、及び４０７位；３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位；若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３９９位、４０５位、及び４０７位；３６６位、３９９位、４０５位、及び４０７位；若しくは３６６位、３６８位、３９９位、４０５位、及び４０７位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、
    （ｘｘｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位を含むか又はそれからなる、あるいは
    （ｘｘｉｉ）前記第１のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第１のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６６位、３９９位、４０５位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、前記第２のＣＨ３ドメインポリペプチド若しくは前記第２のＣＨ３ドメインコードポリヌクレオチドライブラリの前記１つ以上の所定のＣＨ３ドメイン位置が３６８位、４００位、及び４０９位を含むか又はそれからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項３２に記載の方法。
  34. （ａ－１）前記第１のポリペプチドが第１の標識を含むか又はそれに連結され、並びに
    （ａ－２）前記第２のポリペプチドが第２のラベルを含むか若しくはそれに連結され、任意選択で、前記定量化化ステップ（ｂ）が、前記第１のラベル及び／又は前記第２のラベルを検出することを含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
  35. 前記定量化化ステップ（ｂ）が、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、及び／又はフローサイトメトリーのうちの少なくとも１つを含む、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. ステップ（ｃ）で選択された第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドのセットを含む抗体の１つ以上の特性に基づいて、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの１つ以上のセットを選択するステップを更に含み、前記１つ以上の特性が、以下、
    （ｉ）（ｉ－１）任意選択で、１つ以上の細胞型、任意選択で哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ細胞及びＨＥＫ細胞、イスト細胞、昆虫細胞、及び／若しくは植物細胞で評価される産生収率、並びに／又は（ｉ－２）任意選択でプロテインＡ親和性精製を含む、１つ以上の抗体精製法に対する適合性、
    （ｉｉ）任意選択で、クロマトグラフィー、任意選択でサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）又は電気泳動、任意選択でＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して定量化化される、凝集の程度、任意選択で完全サイズ抗体の多量体の存在、
    （ｉｉｉ）任意選択で、ＬＣ－ＭＳを使用して評価される、ＣＨ１ドメイン間及び／若しくはＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間の正しい対合の速度、任意選択で正しい対合、
    （ｉｖ）任意選択で、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）及び／若しくは示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、並びに／又は機器、任意選択でＵｎｃｌｅ（登録商標）を使用して測定される、融解温度（Ｔｍ）及び／又は凝集温度（Ｔａｇｇ）、任意選択でＴａｇｇ２６６、
    （ｖ）等電点（「ｐＩ」）、
    （ｖｉ）任意選択で、ＷＯ２０１４／１７９３６３に記載の方法で測定される、多重特異性試薬（「ＰＳＲ」）との相互作用のレベル、
    （ｖｉｉ）任意選択で、疎水性相互作用クロマトグラフィー（「ＨＩＣ」）を使用して、任意選択でＥｓｔｅｐ Ｐ，ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１５ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；７（３）：５５３－５６１に記載されるように測定される、抗体の疎水性相互作用、
    （ｖｉｉｉ）任意選択で、（ｖｉｉｉ－１）親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）により、任意選択でＬｉｕ Ｙ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．Ｍａｒ－Ａｐｒ ２０１４；６（２）：４８３－９２に記載されるように、若しくは（ｖｉｉｉ－２）動的光散乱（ＤＬＳ）により測定される、自己相互作用、
    （ｉｘ）高若しくは低ｐＨストレスに対する安定性、
    （ｘ）溶解性、
    （ｘｉ）生産コスト及び／若しくは時間、
    （ｘｉｉ）他の安定性パラメータ、
    （ｘｉｉｉ）保存可能期間、
    （ｘｉｖ）インビボ半減期、並びに／又は
    （ｘｖ）免疫原性から選択される、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 所与の抗原特異性を有する、請求項２０又は２１に記載の多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片に適した第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットについてスクリーニングする方法であって、
    （ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドの異なるセットを各々含む、複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片を発現させることと、
    （ｂ）ステップ（ａ）で発現された複数の多重特異性抗体及び／又は抗原結合抗体断片の１つ以上の抗体特性に基づいて、前記多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片に適した、第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドのセットを選択することと、を含み、前記１つ以上の抗体特性が、以下、
    （ｉ）（ｉ－１）任意選択で、１つ以上の細胞型、任意選択で哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ細胞及びＨＥＫ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、及び／若しくは植物細胞で評価される産生収率、並びに／又は（ｉ－２）任意選択でプロテインＡ親和性精製を含む、１つ以上の抗体精製法に対する適合性、
    （ｉｉ）任意選択で、クロマトグラフィー、任意選択でサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）又は電気泳動、任意選択でＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して定量化化される、凝集の程度、任意選択で完全サイズ抗体の多量体の存在、
    （ｉｉｉ）任意選択で、ＬＣ－ＭＳを使用して評価される、ＣＨ１ドメイン間及び／若しくはＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間の正しい対合の速度、任意選択で正しい対合、
    （ｉｖ）任意選択で、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）及び／若しくは示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、並びに／又は機器、任意選択でＵｎｃｌｅ（登録商標）を使用して測定される、融解温度（Ｔｍ）及び／又は凝集温度（Ｔａｇｇ）、任意選択でＴａｇｇ２６６、
    （ｖ）等電点（「ｐＩ」）、
    （ｖｉ）任意選択で、ＷＯ２０１４／１７９３６３に記載の方法で測定される、多重特異性試薬（「ＰＳＲ」）との相互作用のレベル、
    （ｖｉｉ）任意選択で、疎水性相互作用クロマトグラフィー（「ＨＩＣ」）を使用して、任意選択でＥｓｔｅｐ Ｐ，ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１５ Ｍａｙ－Ｊｕｎ；７（３）：５５３－５６１に記載されるように測定される、抗体の疎水性相互作用、
    （ｖｉｉｉ）任意選択で、（ｖｉｉｉ－１）親和性捕捉自己相互作用ナノ粒子分光法（ＡＣ－ＳＩＮＳ）により、任意選択でＬｉｕ Ｙ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．Ｍａｒ－Ａｐｒ ２０１４；６（２）：４８３－９２に記載されるように、若しくは（ｖｉｉｉ－２）動的光散乱（ＤＬＳ）により測定される、自己相互作用、
    （ｉｘ）高若しくは低ｐＨストレスに対する安定性、
    （ｘ）溶解性、
    （ｘｉ）生産コスト及び／若しくは時間、
    （ｘｉｉ）他の安定性パラメータ、
    （ｘｉｉｉ）保存可能期間、
    （ｘｉｖ）インビボ半減期、並びに／又は
    （ｘｖ）免疫原性から選択される、方法。
  38. ヘテロマー分子を産生する方法であって、前記ヘテロマー分子が、
    （Ａ）第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、
    （Ｂ）第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、
    （ａ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド及び前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドはアミノ酸が少なくとも１つ異なり、及び
    （ｂ）前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが、任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合されており、
    前記方法が、
    （ｉ）還元環境下で、（ｉ－１）任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合された前記第１のポリペプチドのうちの少なくとも２つを含む第１の親分子と、（ｉ－２）任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合を介して、互いに結合又は対合された前記第２のポリペプチドのうちの少なくとも２つを含む第２の親分子とをインキュベートすることと、
    （ｉｉ）ステップ（ｉ）のインキュベーション産物を、低還元又は非還元環境下に配置することと、を含み、
    任意選択で、
    （Ａ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、請求項１～１７のいずれか一項に記載の第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドに従う、並びに／又は
    （Ｂ）前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドが、請求項２～１７のいずれか一項に記載の第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチドに従い、
    任意選択で、前記ヘテロマー分子が、以下の特徴、
    （Ａ）前記第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを更に含む、
    （Ｂ）前記第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを更に含む、
    （Ｃ）前記ヘテロマー分子が、第３の抗原結合ドメインを任意選択で含む第３のポリペプチドを更に含み、任意選択で、前記第３のポリペプチドが前記第１のポリペプチドに結合されているか若しくはそれと対合されている、及び／又は
    （Ｄ）前記ヘテロマー分子が、第４の抗原結合ドメインを任意選択で含む第４のポリペプチドを更に含み、任意選択で、前記第４のポリペプチドが前記第２のポリペプチドに結合されているか又はそれと対合されている、のうちの１つ以上を含み、
    更に任意選択で、前記ヘテロマー分子が、多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であり、任意選択で、図２～８のうちのいずれか１つに示される構造を含み、任意選択で、前記ヘテロマー分子が、ＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４定常領域を含む、方法。
  39. （ａ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むかか又はそれからなり、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｂ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が４０７位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３６６位のアミノ酸置換を含むか又はそれからなる、
    （ｃ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、
    （ｄ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなる、
    （ｅ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び４０７位のアミノ酸置換からなる、あるいは
    （ｆ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３５４位及び４０７位のアミノ酸置換からなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換が３４９位及び３６６位のアミノ酸置換からなり、
    前記３４９位のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃであり、前記３５４位のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃであり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項３８に記載の方法。
  40. （ａ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなる、
    （ｂ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ４０７Ｖを含むか又はそれからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＴ３６６Ｖを含むか又はそれからなる、
    （ｃ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、
    （ｄ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなる、
    （ｅ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＹ４０７Ｖからなる、あるいは
    （ｆ）前記第１のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＳ３５４Ｃ及びＹ４０７Ｖからなり、任意選択で、前記第２のバリアントＣＨ３ドメインポリペプチド内のアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｖからなり、
    前述の各々において、前記置換位置がＥＵ番号付けに従う、請求項３８又は３９に記載の方法。
  41. 以下の特徴、
    （Ｉ）（Ｉ－１－ｉ）前記第１のポリペプチドが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する第１の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）前記ヘテロマー分子が、第３のエピトープに特異的な第３の抗原結合部位を形成する第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み、任意選択で、前記第１のエピトープが前記第３のエピトープと同じであるか若しくは異なる、又は
    （Ｉ－２）前記第１のポリペプチドが第１の抗原結合ドメインを含み、前記ヘテロマー分子が第３の抗原結合ドメインを含む第３のポリペプチドを含み、前記第１の抗原結合ドメイン及び前記第３の抗原結合ドメインが、第１のエピトープに特異的な第１の抗原結合部位を形成する、並びに／あるいは
    （ＩＩ）（ＩＩ－１－ｉ）前記第２のポリペプチドが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する第２の抗原結合ドメインを含む、及び／若しくは（Ｉ－１－ｉｉ）前記ヘテロマー分子が、第４のエピトープに特異的な第４の抗原結合部位を形成する第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み、任意選択で、第２のエピトープが第４のエピトープと同じであるか若しくは異なる、又は
    （ＩＩ－２）前記第２のポリペプチドが第２の抗原結合ドメインを含み、前記ヘテロマー分子が第４の抗原結合ドメインを含む第４のポリペプチドを含み、前記第２の抗原結合ドメイン及び前記第４の抗原結合ドメインが、第２のエピトープに特異的な第２の抗原結合部位を形成する、のうちの１つ以上を含む、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記ステップ（ｉ）は、以下の特徴、
    （ａ）前記インキュベートが、約１５℃～約４０℃、約２０℃～約４０℃、約２５℃～約３５℃、約２８℃～約３２℃、若しくは約２９℃～約３１℃、又は約３０℃の温度で行われる、
    （ｂ）前記インキュベートが、約３０分～約２０時間、約１時間～約１５時間、約２時間～約１０時間、約３時間～約７時間、若しくは約４時間～約６時間、又は約５時間行われる、
    （ｃ）前記インキュベートが、約３０℃で約５時間行われる、
    （ｄ）前記還元環境が、少なくとも１つの還元剤、任意選択で少なくとも１つの弱還元剤を含む、
    （ｅ）前記還元環境が、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ｂ－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、Ｌ－システイン、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、又は亜ジチオン酸塩から選択される少なくとも１つの還元剤を含む、
    （ｆ）前記還元環境が、約２５～約１２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０～約８０ｍＭ、若しくは約７５ｍＭの２－ＭＥＡ、約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭのＢＭＥ、約２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭのＬ－システイン、約１５～約４００μＭ、約２０～約２００μＭ、約２５～約１００μＭ、約３０～約７０μＭ、若しくは約５０μＭのＤＴＴ、又は２０～約５００μＭ、約４０～約２５０μＭ、約８０～約１５０μＭ、約９０～約１２０μＭ、若しくは約１００μＭの亜ジチオン酸塩から選択される少なくとも１つの還元剤を含む、
    （ｇ）前記還元環境が、少なくとも２－ＭＥＡを任意選択で約７５ｍＭ含む、
    （ｈ）前記第１のポリペプチドのうちの前記少なくとも２つが、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに結合若しくは対合されている、及び／又は前記第２のポリペプチドのうちの前記少なくとも２つが、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに結合若しくは対合されている、
    （ｉ）前記第１の抗体及び／若しくは前記第２の抗体が、哺乳類細胞、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、若しくは細菌細胞で産生される、並びに／又は
    （ｊ）前記第１の抗体及び／若しくは前記第２の抗体が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞若しくはヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞で産生される、のうちの１つ以上を含む、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記ステップ（ｉｉ）は、以下の特徴、
    （ａ）前記配置が、任意選択でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）への、緩衝液交換によって行われる、
    （ｂ）前記配置が、任意選択でＰＢＳへの、脱塩による緩衝液交換によって行われる、
    （ｃ）前記配置が、任意選択でＰＢＳへの、透析濾過による緩衝液交換によって行われる、及び／又は
    （ｄ）前記配置が、酸化剤の添加によって行われる、のうちの１つ以上を含む、請求項３８～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. （ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）の産物を、還元若しくは非還元環境下で、任意選択で約１℃～約２０℃、約２℃～約１０℃、約３℃～約５℃、若しくは約４℃の温度で、任意選択で約１２時間～約１５４時間、約２４時間～約９６時間、約３６時間～約７２時間、若しくは約４８時間インキュベートすること、及び／又は
    （ｉｖ）ステップ（ｉｉ）及び／若しくはステップ（ｉｉｉ）の前記産物中の前記多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片の量を分析すること、並びに／又はステップ（ｉｉ）及び／若しくはステップ（ｉｉｉ）の前記産物から前記多重特異性抗体若しくは抗原結合抗体断片を精製すること、を更に含み、
    任意選択で、前記分析及び／又は前記精製が、クロマトグラフィー、任意選択でＬＣ－ＭＳ、ＩＥＸ、かつ／若しくはＳＥＣを介して行われる、請求項３８～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 請求項３８～４４のいずれか一項に記載の方法によって産生されたヘテロマー分子であって、任意選択で、前記ヘテロマー分子が多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片であり、更に任意選択で、前記多重特異性抗体又は抗原結合抗体断片がＩｇＧ、更に任意選択でＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４を含む、ヘテロマー分子。
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