JP2024500515A - 脂質ナノ粒子を含む癌の予防または治療用組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、脂質ナノ粒子を含む癌の予防または治療用組成物に関し、一例による薬学組成物は、生体親和性に優れ、高効率に遺伝子治療剤などを伝達できるので、癌の予防または治療効果に優れ、抗がん剤および／または放射線治療と併用時にも癌の予防または治療効果に優れる。

Description

本発明は、脂質ナノ粒子を含む癌の予防または治療用組成物に関する。

医薬製剤産業にあたり、薬の副作用を減らし、効能および効果を極大化させて必要な量の薬物を効率的に伝達できるように設計した薬物送達システム（ＤＤＳ；Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）は、新薬開発に釣り合う経済的利益を創出しながら成功の可能性が大きい高付加価値核心技術であって、薬物投与を効率化することによって患者の治療の質を高めるのにその目的がある。薬物伝達システムの核心技術の一つである薬物吸収促進技術に属する難溶性薬物の可溶化技術は、新薬物質の開発費用を減らすことができると同時に、現在販売されている医薬品の付加価値を高めることができる最も合理的な方法であると考えられる。特に、我が国のような新薬開発条件が劣悪な状況で薬物の可溶化技術の開発による改良新薬の開発は、少ない費用で莫大な付加価値を創出できる分野である。

遺伝子薬物伝達システムを利用した遺伝子治療法は、遺伝的結合を修正し多くの病気を治療するにあたって大きな希望となる。このような遺伝子治療法を成功的かつ安全に行うにあたり、効果的な遺伝子伝達が主な課題の一つであり、ウイルス伝達体が遺伝子伝達に効果的であることが証明された。しかし、免疫原性（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）、注入されたＤＮＡサイズの限界および大量生産の困難さなどいくつかの欠点によって遺伝子伝達システムとしてウイルス利用が制限されている。陽イオン性リポソームおよび重合体などの非－ウイルス性遺伝子担体がウイルス性システムの代替手段として注目を浴び始めた。

改善された安定性プロファイルおよび重合体伝達体の製造と操作の容易性が効果的かつ安全な遺伝子伝達用非毒性および生分解性重合体担体のデザインおよび合成に対する研究を触発した。ポリ（Ｌ－リシン）、ポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ）、スターバースト（ｓｔａｒｂｕｒｓｔ）、ポリアミドアミン（ｐｏｌｙａｍｉｄｏａｍｉｎｅ）デンドリマー、および陽イオン性リポソームなどが自発的に自己組立が可能であり、プラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）をエンドサイトーシスにより細胞内に侵入するのに十分に小さい構造で圧縮できるため、非－ウイルス性遺伝子伝達体として幅広く研究されてきた。

Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなどの核酸は、生体内で特定タンパク質の発現を抑制できる物質であって、癌、遺伝病、感染症、自己免疫疾患などの治療に重要なツールとして脚光を浴びている（Ｎｏｖｉｎａ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｎａｔｕｒｅ，４３０，１６１－１６４，２００４）。しかし、ｓｉＲＮＡなどの核酸は細胞内に直接伝達が難しく、血液中に酵素によって容易に分解されるので、これを克服するための多くの研究が進められている。現在までに核酸を細胞内に運ぶ方法として、正電荷脂質または重合体と混合して運ぶ方法（それぞれ脂質－ＤＮＡの複合体（ｌｉｐｏｐｌｅｘ）およびポリマー－ＤＮＡの複合体（ｐｏｌｙｐｌｅｘ）と称する）が主に用いられている（Ｈｉｒｋｏなど、Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１０，１１８５－１１９３，２００３；Ｍｅｒｄａｎなど、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，５４，７１５－７５８，２００２；Ｓｐａｇｎｏｕなど、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４３，１３３４８－１３３５６，２００４）。脂質－ＤＮＡの複合体は、核酸と結合して細胞内に核酸をうまく伝達して細胞レベルで多く使用されているが、生体内では局部的に注射の際、多くの場合体内に炎症を誘発させ（ＦｉｌｏｎａｎｄおよびＰｈｉｌｌｉｐｓ、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１３２９，３４５－３５６，１９９７）、血管内注射の際、主に１次通過器官である肺、肝臓、脾臓などの組織に蓄積する短所がある（Ｒｅｎなど、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，７，７６４－７６８，２０００）。

また、このような非－ウイルス性伝達体は、トランスフェクション効率が低いという問題がある。トランスフェクション効率を高めるために多くの努力を注いできたが、これは、依然として安定していると考えられるシステムとは距離が遠い。また、非－ウイルス性遺伝子伝達体担体は、劣悪な生体適合性および非－生分解性により顕著に高い細胞毒性を示す。

このような技術的背景下で、抗がん剤を目的とする器官または細胞に効率的に伝達することができ、抗癌効果に優れたナノ粒子の開発が必要であるのが実情である。

本発明の目的は、（１）６員ヘテロ環アミンおよびアルキル－エポキシドが結合したイオン化可能な脂質（ｉｏｎｉｚａｂｌｅ ｌｉｐｉｄ）；リン脂質；コレステロール；および脂質－ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）複合体を含む脂質ナノ粒子、および
（２）第１抗がん剤を含み、
前記第１抗がん剤は、陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせである、癌の予防または治療用薬学組成物を提供することである。

本発明の他の目的は、前記薬学組成物を含む放射線治療に併用するための癌治療用薬学組成物を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、前記薬学組成物および第２抗がん剤をさらに含む、抗がん剤併用投与用薬学組成物を提供することである。

上記の目的を達成するための一態様は、
（１）６員ヘテロ環アミンおよびアルキル－エポキシドが結合したイオン化可能な脂質（ｉｏｎｉｚａｂｌｅ ｌｉｐｉｄ）；リン脂質；コレステロール；および脂質－ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）複合体を含む脂質ナノ粒子、および
（２）第１抗がん剤を含み、
前記第１抗がん剤は、陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせである、癌の予防または治療用薬学組成物を提供する。

前記薬学組成物に含まれる前記脂質ナノ粒子は生体親和性に優れ、高効率に抗がん剤（例えば、遺伝子治療剤）などを伝達できるため、脂質ナノ粒子媒介遺伝子治療および画像診断技術などの関連技術分野で有用に使用することができる。

本明細書において、「イオン化可能な脂質（ｉｏｎｉｚａｂｌｅ ｌｉｐｉｄ）」または「脂質類似体（ｌｉｐｉｄｏｉｄ）」は、容易にプロトン化できるアミン－含有脂質を意味し、例えば、周辺のｐＨにより電荷状態が変わる脂質である。前記イオン化可能な脂質は、６員ヘテロ環アミンおよびアルキル－エポキシドが結合したものであり得る。具体的には、前記イオン化可能な脂質は、６員ヘテロ環アミンおよびアルキル－エポキシドが反応して生成される脂質と類似した特性を有する化合物であり、より具体的には、６員ヘテロ環アミンをアルキル－エポキシドと反応させてエポキシドの開環反応（ｒｉｎｇ ｏｐｅｎｉｎｇ ｒｅａｃｔｉｏｎ）によって生成される化合物であり得る。

一例として、前記イオン化可能な脂質は、６員ヘテロ環アミンおよびアルキル－エポキシドを１：ｎ（ｎ＝６員ヘテロ環アミンに含まれている第１級アミンの個数×２＋第２級アミンの個数×１）のモル比で反応させて結合したものであり得る。一実施形態によれば、１，４－ビス（３－アミノプロピル）ピペラジン（１，４－ｂｉｓ（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）および１，２－エポキシドデカンを１：４のモル比で混合して７００～８００ｒｐｍ、８５～９５℃の条件で２～４日間反応させて製造したものであり得る。

前記イオン化可能な脂質は、陽イオン性脂質のｐＫａ未満のｐＨでプロトン化（正に荷電）され、ｐＫａ超過のｐＨでは実質的に中性である。一例として、前記脂質ナノ粒子は、プロトン化されたイオン化可能な脂質および／または中性を示すイオン化可能な脂質を含み得る。

前記イオン化可能な脂質は、脂質と類似した特性を有するイオン化可能な化合物であって、薬物（例えば、陰イオン性薬物および／または核酸）との静電的相互作用により前記薬物が脂質ナノ粒子内に高効率に封入されるようにする役割を果たす。

前記６員ヘテロ環アミンは、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）またはピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）構造を含むものであり得る。

前記６員ヘテロ環アミンは、第３級アミンを含む鎖状または非鎖状のアミンであり、一例として、

からなる群より選択される１種以上であり得る。

一例として、前記６員ヘテロ環アミンは、１，４－ビス（３－アミノプロピル）ピペラジン（１，４－ｂｉｓ（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、Ｎ－（３－アミノプロピル）ピペリジン（Ｎ－（３－Ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）、（１－メチル－４－ピペリジニル）メタンアミン（（１－Ｍｅｔｈｙｌ－４－ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ）ｍｅｔｈａｎａｍｉｎｅ）、２－（４－メチル－ピペラジン－１－イル）－エチルアミン（２－（４－Ｍｅｔｈｙｌ－ｐｉｐｅｒａｚｉｎ－１－ｙｌ）－ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）、１－（２－アミノエチル）ピペラジン（１－（２－Ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、および１－（３－アミノプロピル）ピペラジン（１－（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）からなる群より選択される１種以上であり得る。

前記イオン化可能な脂質に含まれるアミンの種類によって、（ｉ）前記脂質ナノ粒子の薬物封入率、（ｉｉ）前記脂質ナノ粒子のＰＤＩ（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）、および／または（ｉｉｉ）前記薬学的組成物の癌組織および／または癌細胞への薬物伝達効率などが異なる。

前記アミンを含むイオン化可能な脂質を含む場合、下記特徴の１種以上を有する：
（１）高効率に前記脂質ナノ粒子に薬物を封入；
（２）製造された脂質ナノ粒子の大きさが均一（または低いＰＤＩ数値を有し）；
（３）癌組織および／または癌細胞への薬物伝達効率に優れ；
（４）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）が可能であり；および／または
（５）癌の予防および／または治療効果に優れる。

一実施形態によれば、１，４－ビス（３－アミノプロピル）ピペラジン（１，４－ｂｉｓ（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ；Ｃａｓ Ｎｏｓ．７２０９－３８－３）を含むイオン化可能な脂質を含む脂質ナノ粒子を含む場合、他の種類のアミンを含むイオン化可能な脂質を含む場合より下記特徴の１種以上を有する：
（１）高効率に前記脂質ナノ粒子に薬物を封入；
（２）製造された脂質ナノ粒子の大きさが均一（または低いＰＤＩ数値を有し）；
（３）癌組織および／または癌細胞への薬物伝達効率に優れ；
（４）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）が可能であり；および／または
（５）癌の予防および／または治療効果に優れる。

前記アルキル－エポキシドは、下記化学式１のような構造を有する。

前記アルキル－エポキシドは、Ｃ６～Ｃ１４、Ｃ６～Ｃ１２、Ｃ６～Ｃ１０、Ｃ８～Ｃ１４、Ｃ８～Ｃ１２、Ｃ８～Ｃ１０、Ｃ１０～Ｃ１４、Ｃ１０～Ｃ１２、またはＣ１０の炭素の長さを有し、例えば、Ｃ１０の１，２－エポキシドデカン（１，２－ｅｐｏｘｙｄｏｄｅｃａｎｅ）である。イオン化可能な脂質に含まれるアルキル－エポキシドの炭素数を上記の範囲とすることにより脂質ナノ粒子内に封入される薬物に対する高い封入率を示すことができる。

一例として、前記イオン化可能な脂質は、下記化学式２の一般式を有する。

上記化学式２の構造は、一実施形態によるイオン化可能な脂質の構造の一例であって、イオン化可能な脂質の構造は、６員ヘテロ環アミンおよびアルキル－エポキシドの種類によって異なる。

一実施形態によれば、前記化学式２の構造を有するイオン化可能な脂質を含む場合、他の種類のイオン化可能な脂質を含む脂質ナノ粒子の場合より下記特徴の１種以上を有する：
（１）高効率に前記脂質ナノ粒子に薬物を封入；
（２）製造された脂質ナノ粒子の大きさが均一（または低いＰＤＩ数値を有し）；
（３）癌組織および／または癌細胞への薬物伝達効率に優れ；
（４）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）が可能であり；および／または
（５）癌の予防および／または治療効果に優れる。

一実施形態によれば、前記薬学的組成物に含まれる前記脂質ナノ粒子は、ｐＫａが５～８、５．５～７．５、６～７、または６．５～７であり得る。ｐＫａは酸解離定数であって、対象物質の酸の強さを表した指標として一般に使用されているものを指す。前記脂質ナノ粒子のｐＫａ値は、脂質ナノ粒子の生体内安定性および脂質ナノ粒子の薬物放出側面において重要である。一例として、上記範囲のｐＫａ値を示す脂質ナノ粒子は、生体内に安全に癌組織および／または癌細胞に伝達され、癌組織および／または癌細胞に到達してエンドサイトーシス（ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）後に正電荷を示して、エンドソーム（ｅｎｄｏｓｏｍｅ）膜の陰イオン性タンパク質と静電的相互作用により封入された薬物（第１抗がん剤）が放出されるようにすることができる。

前記リン脂質は、脂質ナノ粒子内にイオン化可能な脂質および薬物（第１抗がん剤）が相互作用して形成されたコアを囲んで保護する役割を果たし、ターゲット細胞のリン脂質二重層と結合して薬物の細胞内への伝達時、細胞膜通過およびエンドソーム脱出（ｅｎｄｏｓｏｍａｌ ｅｓｃａｐｅ）を容易にすることができる。

前記リン脂質は、一実施形態による脂質ナノ粒子の融合を促進できるリン脂質を限定なく用いることができ、例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ＤＯＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＤＳＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ｐａｌｍｉｔｏｙｌｏｌｅｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＰＯＰＣ）、卵ホスファチジルコリン（ｅｇｇ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＥＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ＤＳＰＥ）、ホスファチジルエタノールアミン（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ）、１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、１－ｐａｌｍｉｔｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（ＰＯＰＥ）、１－ｐａｌｍｉｔｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ（ＰＯＰＣ）、１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－［ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｌ－ｓｅｒｉｎｅ］（ＤＯＰＳ）、および１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－［ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｌ－ｓｅｒｉｎｅ］などからなる群より選択される１種以上であり得る。一例として、ＤＯＰＥを含む脂質ナノ粒子を含む場合、薬物としてｍＲＮＡ伝達に効果的（ｍＲＮＡに対する薬物伝達効率に優れ）であり、別の例として、ＤＳＰＥを含む脂質ナノ粒子を含む場合、薬物としてｓｉＲＮＡ伝達に効果的（ｓｉＲＮＡに対する薬物伝達効率に優れ）である。

前記コレステロールは、脂質ナノ粒子内に脂質充填に形態的側面から堅固性を付与し、ナノ粒子のコアおよび表面に分散してナノ粒子の安定性を向上させる役割を果たす。

本明細書において「脂質－ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）複合体」、「脂質－ＰＥＧ」、「ＰＥＧ－脂質」、「ＰＥＧ－ｌｉｐｉｄ」、または「ｌｉｐｉｄ－ＰＥＧ」は、脂質とＰＥＧがコンジュゲートされた形態を指し、一側端部に親水性重合体であるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）重合体が結合した脂質を意味する。前記脂質－ＰＥＧ複合体は、脂質ナノ粒子内でナノ粒子の血清内粒子安定性に寄与し、ナノ粒子間の凝集を防ぐ役割を果たす。また、脂質－ＰＥＧ複合体は、核酸の生体内伝達時、分解酵素から核酸を保護して核酸の体内安定性を強化させ、ナノ粒子内封入された薬物の半減期を増加させる。

前記脂質－ＰＥＧ複合体でＰＥＧは脂質に直接接合されるか、またはリンカーモイエティにより脂質に連結される。ＰＥＧを脂質に結合させるために好適な任意のリンカーモイエティを用いることができ、例えば、エステル－非含有リンカーモイエティおよびエステル－含有リンカーモイエティが含まれる。前記エステル－非含有リンカーモイエティは、アミド（－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）、アミノ（－ＮＲ－）、カルボニル（－Ｃ（Ｏ）－）、カルバメート（－ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－）、ジスルフィド（－Ｓ－Ｓ－）、エーテル（－Ｏ－）、スクシニル（－（Ｏ）ＣＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－）、スクシンアミジル（－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）、エーテル、ジスルフィドのみならず、これらの組み合わせ（例えば、カルバメートリンカーモイエティおよびアミドリンカーモイエティの両方を含有するリンカー）が挙げられるが、これらに限定されない。前記エステル－含有リンカーモイエティは、例えば、カーボネート（－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－）、スクシニル、リン酸エステル（－Ｏ－（Ｏ）ＰＯＨ－Ｏ－）、スルホン酸エステル、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

一例として、前記脂質－ＰＥＧ複合体の平均分子量は、１００～１００００ダルトン、２００～１００００ダルトン、５００～１００００ダルトン、１０００～１００００ダルトン、１５００～１００００ダルトン、２０００～１００００ダルトン、１００～７５００ダルトン、２００～７５００ダルトン、５００～７５００ダルトン、１０００～７５００ダルトン、１５００～７５００ダルトン、２０００～７５００ダルトン、１００～５０００ダルトン、２００～５０００ダルトン、５００～５０００ダルトン、１０００～５０００ダルトン、１５００～５０００ダルトン、２０００～５０００ダルトン、１００～３０００ダルトン、２００～３０００ダルトン、５００～３０００ダルトン、１０００～３０００ダルトン、１５００～３０００ダルトン、２０００～３０００ダルトン、１００～２６００ダルトン、２００～２６００ダルトン、５００～２６００ダルトン、１０００～２６００ダルトン、１５００～２６００ダルトン、２０００～２６００ダルトン、１００～２５００ダルトン、～２５００ダルトン、５００～２５００ダルトン、１０００～２５００ダルトン、１５００～２５００ダルトン、または２０００～２５００ダルトンであり得る。

前記脂質－ＰＥＧ複合体内脂質は、ポリエチレングリコールと結合できる脂質であれば限定なく使用することができ、前記脂質ナノ粒子の他の構成要素であるリン脂質および／またはコレステロールを使用することもできる。具体的には、脂質－ＰＥＧ複合体内脂質は、セラミド（ｃｅｒａｍｉｄｅ）、ジミリストイルグリセロール（ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、ＤＭＧ）、スクシニルジアシルグリセロール（ｓｕｃｃｉｎｏｙｌ－ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、ｓ－ＤＡＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルエターノルアミン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ＤＳＰＥ）、またはコレステロールであり得る。

一例として、前記脂質－ＰＥＧ複合体は、ジアルキルオキシプロピルに結合されたＰＥＧ（ＰＥＧ－ＤＡＡ）、ジアシルグリセロールに結合されたＰＥＧ（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ホスファチジルエタノールアミンなどのリン脂質に結合されたＰＥＧ（ＰＥＧ－ＰＥ）、セラミドに結合されたＰＥＧ（ＰＥＧ－ＣＥＲ、またはセラミド－ＰＥＧ複合体）、コレステロールまたはその誘導体に結合されたＰＥＧ、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、ＰＥＧ－ＤＳＰＥ、およびこれらの混合物を含むことができ、例えば、Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミド、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００、１４：０ ＰＥＧ２０００ＰＥであり得る。

一実施形態によれば、セラミド－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む場合、他の種類の脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む場合より下記特徴の１種以上を有する：
（１）高効率に前記脂質ナノ粒子に薬物を封入；
（２）製造された脂質ナノ粒子の大きさが均一（または低いＰＤＩ数値を有し）；
（３）癌組織および／または癌細胞への薬物伝達効率に優れ；
（４）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）が可能であり；および／または
（５）癌の予防および／または治療効果に優れる。

前記脂質－ＰＥＧ複合体内ＰＥＧは、親水性高分子に血漿タンパク質の吸着を抑制する能力を有しているため、脂質ナノ粒子の体内循環時間を増加させてナノ粒子間の凝集現象を防ぐ役割を果たす。また、脂質－ＰＥＧ複合体は、生体内でステルス（ｓｔｅａｌｔｈ）機能を果たしてナノ粒子の分解を防止することができる。

前記ＰＥＧは、脂質に結合しない側に官能基が結合したもの（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ＰＥＧ）であり得る。この時、使用可能な官能基は、スクシニル基（ｓｕｃｃｉｎｙｌ）、カルボン酸（ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、マレイミド（ｍａｌｅｉｍｉｄｅ）、アミン基、ビオチン、シアヌル基（ｃｙａｎｕｒ）、および葉酸（ｆｏｌａｔｅ）などからなる群より選択される１種以上であり得る。

一例によれば、前記脂質－ＰＥＧ複合体は、０．１～２０モル％、０．２５～２０モル％、０．５～２０モル％、１～２０モル％、１．５～２０モル％、２～２０モル％、２．５～２０モル％、３～２０モル％、０．１～１５モル％、０．２５～１５モル％、０．５～１５モル％、１～１５モル％、１．５～１５モル％、２～１５モル％、２．５～１５モル％、３～１５モル％、０．１～１２．５モル％、０．２５～１２．５モル％、０．５～１２．５モル％、１～１２．５モル％、１．５～１２．５モル％、２～１２．５モル％、２．５～１２．５モル％、３～１２．５モル％、０．１～１０モル％、０．２５～１０モル％、０．５～１０モル％、１～１０モル％、１．５～１０モル％、２～１０モル％、２．５～１０モル％、３～１０モル％、０．１～７．５モル％、０．２５～７．５モル％、０．５～７．５モル％、１～７．５モル％、１．５～７．５モル％、２～７．５モル％、２．５～７．５モル％、３～７．５モル％、０．１～５モル％、０．２５～５モル％、０．５～５モル％、１～５モル％、１．５～５モル％、２～５モル％、２．５～５モル％、または３～５モル％で前記脂質ナノ粒子に含まれる。

一例による脂質ナノ粒子の癌組織および／または癌細胞内への薬物伝達効果や癌の予防および／または治療効果は、脂質ナノ粒子に含まれる脂質－ＰＥＧ複合体の含有量に依存する。

例えば、脂質－ＰＥＧ複合体を０．１～２０モル％、０．２５～２０モル％、０．５～２０モル％、１～２０モル％、１．５～２０モル％、２～２０モル％、２．５～２０モル％、３～２０モル％、０．１～１５モル％、０．２５～１５モル％、０．５～１５モル％、１～１５モル％、１．５～１５モル％、２～１５モル％、２．５～１５モル％、３～１５モル％、０．１～１２．５モル％、０．２５～１２．５モル％、０．５～１２．５モル％、１～１２．５モル％、１．５～１２．５モル％、２～１２．５モル％、２．５～１２．５モル％、３～１２．５モル％、０．１～１０モル％、０．２５～１０モル％、０．５～１０モル％、１～１０モル％、１．５～１０モル％、２～１０モル％、２．５～１０モル％、３～１０モル％、０．１～７．５モル％、０．２５～７．５モル％、０．５～７．５モル％、１～７．５モル％、１．５～７．５モル％、２～７．５モル％、２．５～７．５モル％、３～７．５モル％、０．１～５モル％、０．２５～５モル％、０．５～５モル％、１～５モル％、１．５～５モル％、２～５モル％、２．５～５モル％、または３～５モル％で含む脂質ナノ粒子は、上記の範囲以外の含有量で脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子より下記特徴の１種以上を有する：
（１）高効率に第１抗がん剤を封入；
（２）製造された粒子の大きさが均一（または低いＰＤＩ数値を有し）；
（３）癌組織および／または癌細胞への薬物伝達効率に優れ；
（４）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）が可能であり；および／または
（５）癌の予防および／または治療効果に優れる。

一例によれば、前記コレステロールは、１０～６０モル％、２０～６０モル％、３０～６０モル％、３４．５～６０モル％、３５～６０モル％、３９．５～６０モル％、４０～６０モル％、４３～６０モル％、４４～６０モル％、１０～５５モル％、２０～５５モル％、３０～５５モル％、３４．５～５５モル％、３５～５５モル％、３９．５～５５モル％、４０～５５モル％、４３～５５モル％、４４～５５モル％、１０～５２．５モル％、２０～５２．５モル％、３０～５２．５モル％、３４．５～５２．５モル％、３５～５２．５モル％、３９．５～５２．５モル％、４０～５２．５モル％、４３～５２．５モル％、４４～５２．５モル％、１０～５１モル％、２０～５１モル％、３０～５１モル％、３４．５～５１モル％、３５～５１モル％、３９．５～５１モル％、４０～５１モル％、４３～５１モル％、４４～５１モル％、１０～５０モル％、２０～５０モル％、３０～５０モル％、３４．５～５０モル％、３５～５０モル％、３９．５～５０モル％、４０～５０モル％、４３～５０モル％、４４～５０モル％、１０～４５モル％、２０～４５モル％、３０～４５モル％、３４．５～４５モル％、３５～４５モル％、３９．５～４５モル％、４０～４５モル％、４３～４５モル％、４４～４５モル％、１０～４４．２５モル％、２０～４４．２５モル％、３０～４４．２５モル％、３４．５～４４．２５モル％、３５～４４．２５モル％、３９．５～４４．２５モル％、４０～４４．２５モル％、４３～４４．２５モル％、４４～４４．２５モル％、１０～４４モル％、２０～４４モル％、３０～４４モル％、３４．５～４４モル％、３５～４４モル％、３９．５～４４モル％、４０～４４モル％、４３～４４モル％、４４～４４モル％、１０～４３モル％、２０～４３モル％、３０～４３モル％、３４．５～４３モル％、３５～４３モル％、３９．５～４３モル％、または４０～４３モル％で前記脂質ナノ粒子に含まれる。

一例によれば、前記脂質－ＰＥＧ複合体と前記コレステロールの合計は４０～６０モル％、４０～５５モル％、４０～５３．５モル％、４０～５０モル％、４０～４７．５モル％、４０～４５モル％、４０～４４．５モル％、４２～６０モル％、４２～５５モル％、４２～５３．５モル％、４２～５０モル％、４２～４７．５モル％、４２～４５モル％、４２～４４．５モル％、４４～６０モル％、４４～５５モル％、４４～５３．５モル％、４４～５０モル％、４４～４７．５モル％、４４～４５モル％、４４～４４．５モル％、４４．５～６０モル％、４４．５～５５モル％、４４．５～５３．５モル％、４４．５～５０モル％、４４．５～４７．５モル％、または４４．５～４５モル％で前記脂質ナノ粒子に含まれる。

一例によれば、前記イオン化可能な脂質は、１０～６０モル％、１０～５５モル％、１０～５０モル％、１０～４５モル％、１０～４２．５モル％、１０～４０モル％、１０～３５モル％、１０～３０モル％、１０～２６．５モル％、１０～２５モル％、１０～２０モル％、１５～６０モル％、１５～５５モル％、１５～５０モル％、１５～４５モル％、１５～４２．５モル％、１５～４０モル％、１５～３５モル％、１５～３０モル％、１５～２６．５モル％、１５～２５モル％、１５～２０モル％、２０～６０モル％、２０～５５モル％、２０～５０モル％、２０～４５モル％、２０～４２．５モル％、２０～４０モル％、２０～３５モル％、２０～３０モル％、２０～２６．５モル％、２０～２５モル％、２５～６０モル％、２５～５５モル％、２５～５０モル％、２５～４５モル％、２５～４２．５モル％、２５～４０モル％、２５～３５モル％、２５～３０モル％、２５～２６．５モル％、２６．５～６０モル％、２６．５～５５モル％、２６．５～５０モル％、２６．５～４５モル％、２６．５～４２．５モル％、２６．５～４０モル％、２６．５～３５モル％、２６．５～３０モル％、３０～６０モル％、３０～５５モル％、３０～５０モル％、３０～４５モル％、３０～４２．５モル％、３０～４０モル％、３０～３５モル％、３５～６０モル％、３５～５５モル％、３５～５０モル％、３５～４５モル％、３５～４２．５モル％、３５～４０モル％、４０～６０モル％、４０～５５モル％、４０～５０モル％、４０～４５モル％、４０～４２．５モル％、４２．５～６０モル％、４２．５～５５モル％、４２．５～５０モル％、または４２．５～４５モル％で前記脂質ナノ粒子に含まれる。

一例によれば、前記リン脂質は５～３０モル％、５～２５モル％、５～２０モル％、５～１５モル％、５～１３モル％、５～１０モル％、１０～３０モル％、１０～２５モル％、１０～２０モル％、１０～１５モル％、１０～１３モル％、１５～３０モル％、１５～２５モル％、１５～２０モル％、２０～３０モル％、または２０～２５モル％で前記脂質ナノ粒子に含まれる。

本明細書において「モル％（ｍｏｌ％、モルパーセント）」は、特定の構成成分のモル数を構成成分全体のモル数の和で割った後、１００を乗じてパーセントで示したものであり、数式で表現すると、下記数式１の通りである。

前記脂質ナノ粒子は、イオン化可能な脂質：リン脂質：コレステロール：脂質－ＰＥＧ複合体を２０～５０：１０～３０：１０～６０：０．２５～１０のモル比、２０～５０：１０～３０：２０～６０：０．２５～１０のモル比、２０～５０：１０～３０：３０～６０：０．５～５のモル比、２５～４５：１０～２５：４０～５０：０．５～３のモル比、２５～４５：１０～２０：４０～５５：０．５～３のモル比、２５～４５：１０～２０：４０～５５：１．０～１．５のモル比、４０～４５：１０～１５：４０～４５：０．５～３．０のモル比、４０～４５：１０～１５：４０～４５：０．５～３のモル比、４０～４５：１０～１５：４０～４５：１～１．５のモル比、２５～３０：１７～２２；５０～５５：０．５～３．０のモル比、２５～３０：１７～２２；５０～５５：１．０～２．５のモル比、２５～３０：１７～２２；５０～５５：１．５～２．５のモル比で含まれる。前記脂質ナノ粒子に含まれる構成成分中、脂質－ＰＥＧ複合体およびコレステロールのモル数の和を一定に維持しながら、脂質－ＰＥＧ複合体のモル数の増加分だけコレステロールのモル数を減少させることで、前記構成成分のモル比を維持する。

本明細書において、モル比はモル数比を意味する。

前記脂質ナノ粒子は、イオン化可能な脂質２０～５０重量部、リン脂質１０～３０重量部、コレステロール３０～６０重量部、および脂質－ＰＥＧ複合体０．１～５重量部を含み得る。

本明細書において、「重量部」は、各成分が含まれている重量比率を意味する。

前記脂質ナノ粒子は、ナノ粒子全体の重量を基準にしてイオン化可能な脂質２０～５０重量％、リン脂質１０～３０重量％、コレステロール４０～６０重量％、および脂質－ＰＥＧ複合体１．５～３重量％を含み得る。具体的には、前記脂質ナノ粒子は、ナノ粒子全体の重量を基準にしてイオン化可能な脂質２５～５０重量％、リン脂質１０～２０重量％、コレステロール３５～５５重量％、および脂質－ＰＥＧ複合体０．５～５．０重量％で含まれる。

上記の範囲（モル比、重量部、および／または重量％）でイオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および／または脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む薬学組成物は、上記の範囲外でイオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および／または脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む場合より、（ｉ）脂質ナノ粒子の安定度、（ｉｉ）抗がん剤の封入率、（ｉｉｉ）癌組織および／または癌細胞への抗がん剤伝達効率；（ｉｖ）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）効果；および／または（ｖ）癌の予防および／または治療効果に優れる。

本明細書において、前記脂質ナノ粒子が癌組織、および／または癌細胞へ「標的化（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）」、「位置化（ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）」するとは、組織内または細胞内に内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）することであり、核膜も透過できるので核内に内在化することを意味する。

前記薬学組成物は、前記脂質ナノ粒子内部に第１抗がん剤（例えば、陰イオン性薬物および／または核酸などの生理活性物質）が封入されているものであり、前記第１抗がん剤が安定的かつ高効率に前記脂質ナノ粒子に封入され、一例による薬学組成物によって優れた癌の予防および／または治療効果を示すことができる。

一例として、前記脂質ナノ粒子に含まれているイオン化可能な脂質および第１抗がん剤（例えば、陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせ）の重量比は１～２０：１、１～１５：１、１～１０：１、５～２０：１、５～１５：１、５～１０：１、７．５～２０：１、７．５～１５：１、または７．５～１０：１であり得る。

一例による組成物が上記の範囲内の重量比で（１）イオン化可能な脂質；および（２）第１抗がん剤（例えば、陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせ）を含む場合、（ｉ）脂質ナノ粒子内部の第１抗がん剤（例えば、陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせ）の封入率；（ｉｉ）癌組織および／または癌細胞への抗がん剤伝達効率；（ｉｉｉ）生体内で長期循環（ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）効果；および／または（ｉｖ）癌の予防および／または治療効果が上記の範囲外の重量比で（１）イオン化可能な脂質；および（２）第１抗がん剤を含む脂質ナノ粒子を含む組成物より高い（優れる）こともある。

前記第１抗がん剤が封入された脂質ナノ粒子は、癌組織および／または癌細胞内導入が容易になるように平均直径が２０ｎｍ～２００ｎｍ、２０～１８０ｎｍ、２０ｎｍ～１７０ｎｍ、２０ｎｍ～１５０ｎｍ、２０ｎｍ～１２０ｎｍ、２０ｎｍ～１００ｎｍ、２０ｎｍ～９０ｎｍ、３０ｎｍ～２００ｎｍ、３０～１８０ｎｍ、３０ｎｍ～１７０ｎｍ、３０ｎｍ～１５０ｎｍ、３０ｎｍ～１２０ｎｍ、３０ｎｍ～１００ｎｍ、３０ｎｍ～９０ｎｍ、４０ｎｍ～２００ｎｍ、４０～１８０ｎｍ、４０ｎｍ～１７０ｎｍ、４０ｎｍ～１５０ｎｍ、４０ｎｍ～１２０ｎｍ、４０ｎｍ～１００ｎｍ、４０ｎｍ～９０ｎｍ、５０ｎｍ～２００ｎｍ、５０～１８０ｎｍ、５０ｎｍ～１７０ｎｍ、５０ｎｍ～１５０ｎｍ、５０ｎｍ～１２０ｎｍ、５０ｎｍ～１００ｎｍ、５０ｎｍ～９０ｎｍ、６０ｎｍ～２００ｎｍ、６０～１８０、６０ｎｍ～１７０ｎｍ、６０ｎｍ～１５０ｎｍ、６０ｎｍ～１２０ｎｍ、６０ｎｍ～１００ｎｍ、６０ｎｍ～９０ｎｍ、７０ｎｍ～２００ｎｍ、７０～１８０ｎｍ、７０ｎｍ～１７０ｎｍ、７０ｎｍ～１５０ｎｍ、７０ｎｍ～１２０ｎｍ、７０ｎｍ～１００ｎｍ、７０ｎｍ～９０ｎｍ、８０ｎｍ～２００ｎｍ、８０～１８０ｎｍ、８０ｎｍ～１７０ｎｍ、８０ｎｍ～１５０ｎｍ、８０ｎｍ～１２０ｎｍ、８０ｎｍ～１００ｎｍ、８０ｎｍ～９０ｎｍ、９０ｎｍ～２００ｎｍ、９０～１８０ｎｍ、９０ｎｍ～１７０ｎｍ、９０ｎｍ～１５０ｎｍ、９０ｎｍ～１２０ｎｍ、または９０ｎｍ～１００ｎｍであり得る。上記範囲の直径サイズを有するナノ粒子は血液内で長時間残存することで、標的腫瘍組織に至る機会が増加し得る。上記範囲の直径サイズを有する脂質ナノ粒子は、ＥＰＲ（Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ；透過性亢進および停滞効果）効果を示すことができる。前記ＥＰＲ効果とは、特定の大きさを有する分子が正常組織より腫瘍組織に蓄積する傾向があることを意味する。上記範囲の直径サイスを有する脂質ナノ粒子は、上記範囲外の直径サイズを有する脂質ナノ粒子より腎臓への排泄が減少し、免疫細胞の活性が誘発されず、癌細胞および／または癌組織への伝達が効果的に行われる。一例として、上記範囲内の直径を有する脂質ナノ粒子を含む組成物は、上記範囲の上限値を超える直径を有する脂質ナノ粒子を含む組成物より（ｉ）癌組織および／または癌細胞への抗がん剤伝達効率；（ｉｉ）癌組織および／または癌細胞への透過性亢進および停滞効果（ＥＰＲ効果）の増加；および／または（ｉｉｉ）癌の予防および／または治療効果に優れる。一例による脂質ナノ粒子は５～８、５．５～７．５、６～７または６．５～７のｐＫａを示すことによって酸性ｐＨ条件で正電荷を示して、負電荷を持つ第１抗がん剤（例えば、核酸および陰イオン性薬物（例えば、タンパク質））などの治療剤と静電的相互作用を通じて容易に薬物との複合体を形成して高効率に薬物を封入することができ、第１抗がん剤（例えば、核酸）を含む癌の予防および／または治療用組成物として有用に用いることができる。

本明細書において、「封入（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）」は、伝達物質を取り囲んで効率的に生体内に取り込ませるためにカプセル化することをいい、第１抗がん剤（薬物）の封入率（カプセル化効率、Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は、製造に使用された薬物全体の含有量に対して脂質ナノ粒子内に封入された第１抗がん剤（薬物）の含有量を意味する。

一例による組成物において、第１抗がん剤の封入率は７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９４％以上、８０％超～９９％以下、８０％超～９７％以下、８０％超～９５％以下、８５％以上～９５％以下、８７％以上～９５％以下、９０％以上～９５％以下、９１％以上～９５％以下、９１％以上～９４％以下、９１％超～９５％以下、９２％以上～９９％以下、９２％以上～９７％以下、または９２％以上～９５％以下であり得る。

一例によれば、前記封入率は、通常使用される方法によって計算され、例えば、前記第１抗がん剤（薬物）の封入率は、一例による脂質ナノ粒子にＴｒｉｔｏｎ－Ｘを処理し、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘが処理され、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘが処理されない脂質ナノ粒子の蛍光強度を特定の波長帯域幅（例えば、ｅｘｉｔａｔｉｏｎ：４８０～４９０ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ：５２０～５３０ｎｍ）を測定し、下記数式２によって求められる。

前記第１抗がん剤は、癌の治療および／または予防効果を示す陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせであり得る。

前記核酸は、小干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、リボソームリボ核酸（ｒＲＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、ジオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、相補性ジオキシリボ核酸（ｃＤＮＡ）、アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）、伝令リボ核酸（ｍＲＮＡ）、運搬リボ核酸（ｔＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）、ＰＮＡ、ＤＮＡｚｙｍｅ、および遺伝子矯正のためのｓｇＲＮＡなどからなる群から選択される１種以上であり得るが、これらに限定されるものではない。

本明細書において用語「ｓｉＲＮＡ」とは、特定のｍＲＮＡの切断（ｃｌｅａｖａｇｅ）によりＲＮＡｉ（ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）現象を誘導できる二本鎖ＲＮＡ（ｄｕｐｌｅｘ ＲＮＡ）、あるいは一本鎖ＲＮＡの内部で二本鎖形態をとる一本鎖ＲＮＡを称する。ターゲット遺伝子のｍＲＮＡと相同な配列を有するセンスＲＮＡ鎖と、これと相補的な配列を有するアンチセンスＲＮＡ鎖で構成される。ｓｉＲＮＡは、ターゲット遺伝子の発現を抑制できるので、効率的な遺伝子ノックダウン方法として、または遺伝子治療（ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ）の方法として提供される。二本鎖間の結合はヌクレオチド間の水素結合により形成され、二本鎖の内部のすべてのヌクレオチドが相補的に完全結合していなくてもよい。

ｓｉＲＮＡの長さは約１５～６０個、具体的には約１５～５０個、約１５～４０個、約１５～３０個、約１５～２５個、約１６～２５個、約１９～２５個、約２０～２５個、または約２０～２３個のヌクレオチドであり得る。前記ｓｉＲＮＡの長さは、二本鎖ＲＮＡの一方のヌクレオチドの数、すなわち塩基対の数を意味し、一本鎖ＲＮＡの場合は、一本鎖ＲＮＡの内部の二本鎖の長さを意味する。また、ｓｉＲＮＡは、血中安定性を増加させるか、または免疫反応を弱化させるなどの目的のために多様な官能基を導入したヌクレオチドから構成される。

本明細書において用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、効能を増進させるために一つ以上の塩基、糖または骨格（ｂａｃｋｂｏｎｅ）の位置で変形できる（Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．，５（３）：３４３－５５，１９９５）。オリゴヌクレオチド骨格は、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、単鎖アルキル、シクロアルキル、単鎖ヘテロアトミック、ヘテロシクリック糖間結合などに変形できる。また、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一つ以上の置換された糖モイエティ（ｓｕｇａｒ ｍｏｉｅｔｙ）を含み得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、変形された塩基を含み得る。変形された塩基には、ヒポキサンチン、６－メチルアデニン、５－メチルピリミジン（特に５－メチルシトシン）、５－ヒドロキシメチルシトシン（ＨＭＣ）、グリコシルＨＭＣ、ゲントビオシルＨＭＣ、２－アミノアデニン、２－チオウラシル、２－チオチミン、５－ブロモウラシル、５－ヒドロキシメチルウラシル、８－アザグアニン、７－デアザグアニン、Ｎ６（６－アミノヘキシル）アデニン、２，６－ジアミノフリンなどがある。

本明細書において、「一本鎖ジオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）」は、特定のターゲットＤＮＡに選択的に結合してアンチジーン（ａｎｔｉｇｅｎｅ）効果を誘導する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。

本明細書において、「アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）」は、特定のターゲットに結合するオリゴヌクレオチド（一般に、２０～８０ｎｔ ＤＮＡあるいはＲＮＡ）を意味する。好ましくは、本発明において「アプタマー」は、オリゴヌクレオチドアプタマー（例えば、ＤＮＡあるいはＲＮＡ ａｐｔａｍｅｒ）を意味する。

本明細書において、「ｍＲＮＡ」は、遺伝子を発現可能な合成ｍＲＮＡ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｍＲＮＡ）を意味する。

本明細書において、「ｓｈＲＮＡ」は、一本鎖で５０～７０個で構成されたヌクレオチドを意味し、ｉｎ ｖｉｖｏ上でステム－ループ（ｓｔｅｍｌｏｏｐ）構造をなしている。５～１０個のヌクレオチドのループ部位の両方に相補的に１９～２９個のヌクレオチドの長いＲＮＡが塩基対をなして二本鎖のステムを形成する。

本明細書において、「ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）」は遺伝子発現を調節し、全長２１～２３個のヌクレオチドで構成された一本鎖ＲＮＡ分子を意味する。ｍｉＲＮＡは、細胞内で発現しないオリゴヌクレオチドであり、短いステム－ループ構造を有する。ｍｉＲＮＡは、１または２以上のｍＲＮＡ（ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ）と全体または部分的に相同性を有し、前記ｍＲＮＡと相補的な結合によりターゲット遺伝子発現を抑制する。

本明細書において、「リボザイム（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）」はＲＮＡの一種であって、特定なＲＮＡの塩基配列を認識して自体的にこれを切断する酵素のような機能を有するＲＮＡである。リボザイムは、ターゲット伝令ＲＮＡ鎖の相補的な塩基配列で特異性を有し結合する領域とターゲットＲＮＡを切断する領域からなる。

本明細書において、「ＤＮＡｚｙｍｅ」は、酵素活性を有する一本鎖ＤＮＡ分子であって、１０～２３個のヌクレオチドで構成されたＤＮＡｚｙｍｅ（１０－２３ ＤＮＡｚｙｍｅ）は、生理的に類似した条件下でＲＮＡ鎖を特定位置で切断する。１０－２３ ＤＮＡｚｙｍｅは、塩基対を形成せず露出したいかなるフリンおよびピリミジンの間を切断する。１０－２３ ＤＮＡ酵素（ＤＮＡｚｙｍｅ）は、１５個の保存された塩基配列（例えば、５’－ＧＧＣＴＡＧＣＴＡＣＡＡＣＧＡ－３’）からなる酵素の活性部位（ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎ）および上述した酵素の活性部位の両方にＲＮＡ基質を認識する７～８個のＤＮＡ塩基配列からなる基質認識ドメイン（ＲＮＡ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）で構成される。

本明細書において、「ＰＮＡ（Ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）」は、核酸とタンパク質の性質を両方とも有する分子であって、ＤＮＡまたはＲＮＡと相補的に結合が可能な分子を意味する。ＰＮＡは、核酸塩基（ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）がペプチド結合で連結された類似ＤＮＡで１９９９年に最初に報告された（文献［Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＥ，Ｅｇｈｏｌｍ Ｍ，Ｂｅｒｇ ＲＨ，Ｂｕｃｈａｒｄｔ Ｏ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｂｙ ｓｔｒａｎｄ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｔｈｙｍｉｎｅ－ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｐｏｌｙａｍｉｄｅ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１，Ｖｏｌ．２５４：ｐｐ１４９７－１５００］）。ＰＮＡは自然界には存在せず、人工的に化学的な方法で合成される。ＰＮＡは、相補的な塩基配列の天然核酸と混成化（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）反応を起こして二本鎖を形成する。長さが同じ場合、ＰＮＡ／ＤＮＡ二本鎖はＤＮＡ／ＤＮＡ二本鎖より、ＰＮＡ／ＲＮＡ二本鎖はＤＮＡ／ＲＮＡ二本鎖より安定である。ペプチド基本骨格としては、Ｎ－（２－アミノエチル）グリシンがアミド結合により繰り返し連結されたものが最もよく使用され、この場合、ペプチド核酸の基本骨格（ｂａｃｋｂｏｎｅ）は、負電荷を帯びる天然核酸の基本骨格と異なり電気的に中性である。ＰＮＡに存在する４個の核酸塩基は、空間的大きさと核酸塩基間の距離が天然の核酸の場合とほぼ同じである。ＰＮＡは、化学的に天然の核酸よりも安定しているだけでなく、核酸分解酵素（ｎｕｃｌｅａｓｅ）やタンパク質分解酵素（ｐｒｏｔｅａｓｅ）によって分解されず、生物学的にも安定している。

本明細書において、「ｓｇＲＮＡ」は、特定のＤＮＡターゲットに結合するオリゴヌクレオチド（一般にＲＮＡ分子）でｃｒｉｓｐｒ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）とｔｒａｃｅｒ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）の複合単一ＲＮＡ分子を意味する。ＣＲＩＳＰＲ ｓｙｓｔｅｍでＣａｓ９ ｎｕｃｌｅａｓｅとともに特定のＤＮＡ配列を認識するために利用され、選択的な遺伝子切断を可能にするＲＮＡ分子であって、ほぼＤＮＡと相補的に結合が可能な２０－ｎｔ配列を含み、全長は１００ｎｔである。

本明細書において、「遺伝子矯正タンパク質」は、Ｃａｓ９、ｓｐＣａｓ９、ｃｊＣａｓ９、ｃａｓＸ、ＣａｓＹおよびＣｐｆ１などを称し、ｓｇＲＮＡとともにターゲットＤＮＡ塩基配列を認識してＤＮＡ切断を起こすタンパク質をいう。

一例による薬物伝達用組成物は、Ｃａｓ９ ｍＲＮＡを高い封入率で含み得る。公知のＣａｓ９ ｍＲＮＡ伝達用組成物は、低い比率でＣａｓ９ ｍＲＮＡを含むのでＣａｓ９ ｍＲＮＡ伝達用組成物として活用するには限界があった。これとは異なり、一例による脂質ナノ粒子は高い封入率で、具体的には７０％以上の封入率でＣａｓ９ ｍＲＮＡを含むことができ、したがって、遺伝子矯正治療に有用に活用することができる。

前記陰イオン性薬物は、陰イオンを帯びる各種ペプチド、タンパク質薬物、タンパク質－核酸構造体またはヒアルロン酸－ペプチド複合体、ヒアルロン酸－タンパク質複合体などの陰イオン性生体高分子－薬物複合体などであり得る。前記タンパク質薬物の非制限的な例としては、遺伝子矯正はさみであるＣａｓ９、ｃｐｆ１などの遺伝子矯正タンパク質をはじめとして、細胞死誘導因子（例えば、ｃｙｔｏｃｒｏｍｅ Ｃ、ｃａｓｐａｓｅ３／７／８／９など）および多様な細胞内タンパク質（例えば、転写因子）などであり得る。

一例による癌の予防または治療用薬学的組成物は、内部に陰イオン性薬物および／または核酸が封入された脂質ナノ粒子を含み得る。
前記癌は、ＨＰＶ（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ｖｉｒｕｓ）感染によって誘発された癌であり得る。例えば、前記ＨＰＶ感染によって誘発された癌は、これらに限定されるものではないが、子宮頸癌、膣がん、外陰癌、肛門癌、陰茎癌、扁桃癌、咽頭癌、喉頭癌、頭頸部癌および肺腺癌からなる群より選択される。

前記癌は、子宮頸癌、子宮体癌、膣がん（ｖａｇｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、外陰癌（ｖｕｌｖａｒ ｃａｎｃｅｒ）、肛門癌（ａｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、陰茎癌（ｐｅｎｉｓ ｃａｎｃｅｒ）、扁桃癌（ｔｏｎｓｉｌ ｃａｎｃｅｒ）、咽頭癌（ｐｈａｒｙｎｘ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌（ｌａｒｙｎｘ ｃａｎｃｅｒ）、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、肺腺癌（ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺癌、胃癌、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性または急性白血病、胸腺癌、上皮癌、唾液腺癌、肝癌、胃癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、食道癌、膵臓癌、神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、膀胱癌、絨毛膜癌、結腸癌、口腔癌、皮膚癌、黒色腫、骨癌、直腸癌、小腸癌、内分泌腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫および下垂体腺腫からなる群より選択される。

前記薬学的組成物は、ヒトを含む哺乳動物に非経口投与を含む多様な経路により投与され、非経口投与は静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用でき、投与量は、患者の身体状態および体重、病気の程度、薬物形態、投与経路および時間によって異なるが、当業者によって適宜選択される。

一例による前記薬学的組成物を製剤化する場合、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して製造される。
非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶液、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤などが含まれる。

非水性溶剤や懸濁剤には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどを使用することができる。坐剤基剤には、ウイテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼラチンなどを使用することができる。

一例による薬学的組成物は、薬学的に有効な量を投与することができる。本発明において、「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的な受益／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効容量水準は、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、同時に使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野でよく知られている要素により決定することができる。一例による薬学的組成物は個別に治療剤として投与するか、または他の治療剤と併用して投与することができ、従来の治療剤とは順次的または同時に投与することができ、単一または多重投与することができる。前記要素をすべて考慮して副作用なく、最小限の量で最大の効果を得ることができる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定することができる。

具体的には、本発明による化合物の有効量は、患者の年齢、性別、体重により異なり、毎日または隔日に投与するか、１日１回～３回に分けて投与することができる。しかし、投与経路、肥満の重症度、性別、体重、年齢などによって増減できるので、前記投与量はいかなる方法でも本発明の範囲を限定するものではない。

一実施形態によれば、前記薬学的組成物は薬学的組成物に含まれている薬物（陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせ）の濃度を基準にして０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、または１～５ｍｇ／ｋｇの容量を投与することができる。

他の態様は、前記薬学組成物を含む、放射線治療に併用するための癌治療用薬学組成物；放射線敏感性増進用薬学組成物；または放射線治療併用癌治療用薬学組成物を提供することができる。前記薬学組成物は、癌の治療時に癌細胞の放射線に対する損傷敏感度を向上させて癌の治療効果をさらに上昇させることができ、放射線に対する癌細胞の耐性を抑制して放射線による癌細胞の死滅が容易になるように誘導して処理できる組成物または製剤として活用され、前記薬学組成物を含む組成物は放射線治療と併用して使用することができる。

本明細書において、放射線敏感性増進とは、放射線を利用した病気の治療において、放射線に対する細胞の敏感性を増進させることを意味する。これによって放射線治療効率を上昇させることができ、特に、癌の治療時に併行処理する場合、癌細胞の放射線敏感性が増進され、癌細胞の殺傷効果および増殖抑制効果を奏することになる。

一例による放射線治療に併用するための癌治療用薬学組成物（または放射線敏感性増進用組成物、放射線治療併用癌治療用薬学組成物）は第１抗がん剤として、ＨＰＶ１６型（ＨＰＶ１６）またはＨＰＶ１８型（ＨＰＶ１８）ウイルスＥ６および／またはＥ７タンパク質；ホスホメバロン酸キナーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｍｅｖａｌｏｎａｔｅ ｋｉｎａｓｅ；ＰＭＶＫ）タンパク質；またはその組み合わせの発現または活性抑制剤を含み得る。前記ＰＭＶＫ発現抑制剤、Ｅ６、および／またはＥ７発現抑制剤はＰＭＶＫ、Ｅ６、および／またはＥ７遺伝子のｍＲＮＡに相補的に結合するアンチセンスヌクレオチド、小干渉ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ；ｓｉＲＮＡ）、および短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ ｈａｉｒｐｉｎ ＲＮＡ；ｓｈＲＮＡ）から構成された群より選択される。前記ＰＭＶＫ活性抑制剤および／または前記ＨＰＶ１６（またはＨＰＶ１８型）ウイルスＥ６および／またはＥ７活性抑制剤はＰＭＶＫ、ＨＰＶ１６（またはＨＰＶ１８型）ウイルスＥ６、および／またはＥ７タンパク質に特異的に結合するペプチド、ペプチドミメティクス、およびアプタマーで構成された群より選択される。

一例において、前記薬学組成物は、癌の治療時、放射線照射と併用して投与することができる。前記「放射線照射」は、悪性細胞のＤＮＡに損傷を与える局所治療方法を意味する。正常細胞は腫瘍細胞に比べてこのような損傷を修復する能力がさらに大きい。放射線照射はこの差を利用する治療を意味し、通常意味する放射線を利用して治療する方法を含む。放射線照射は治療目的により、根治的放射線治療、補助的放射線治療、緩和的放射線治療に分けられる。根治的放射線治療は、腫瘍が比較的に局所部位に限定され、遠隔転移のない場合、完治を目的とする放射線治療をいう。補助的放射線治療は、外科的手術後局所再発防止のために行われる放射線治療をいう。放射線治療を併用することによって再発頻度を減らすだけでなく、手術の範囲を減らして機能を維持することもできる。緩和的放射線治療は、癌による症状を緩和する目的で行われる放射線治療である。

放射線は、高エネルギー放射線を利用して癌細胞を破壊する治療法や癌細胞だけでなく、周囲にある正常組織にも影響を与えるので、治療による副作用があらわれることがある。その例として、皮膚の変化、脱毛、悪心および吐き気、下痢、口内炎／食道炎、口腔乾燥症、生殖機能の変化などがある。

一例による放射線治療に併用するための癌治療用薬学組成物；放射線敏感性増進用薬学組成物；または放射線治療併用癌治療用薬学組成物は、放射線の必要量を軽減することによってこのような副作用を減らすことができる。また、放射線に敏感な癌細胞だけでなく、放射線に抵抗性がある癌細胞でも放射線敏感度を上昇させる。

上記の範囲（モル比、重量部、および／または重量％）でイオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および／または脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む放射線治療に併用するための癌治療用薬学組成物（または放射線敏感性増進用組成物、放射線治療併用癌治療用薬学組成物）は、上記の範囲外でイオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および／または脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む場合に比べて放射線に対する癌細胞、腫瘍細胞、癌組織の敏感度を上昇させて癌細胞の死滅、癌の治療効果に優れる。

一実施形態によれば、１，４－ビス（３－アミノプロピル）ピペラジン（１，４－ｂｉｓ（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）および／またはセラミド－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む場合、他の種類の脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む場合に比べて放射線に対する癌細胞、腫瘍細胞、癌組織の敏感度を上昇させて癌細胞の死滅、癌の治療効果に優れる。

さらに他の態様は、前記薬学組成物および第２抗がん剤をさらに含む、抗がん剤併用投与用薬学組成物；または抗癌治療増進用薬学的組成物を提供することができる。前記薬学組成物については上述した通りである。

前記第２抗がん剤は、ゴシポール、ナイトロジェンマスタード、イマチニブ、オキサリプラチン、リツキシマブ、エルロチニブ、ネラチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、ニロチニブ、セマクサニブ、ボスチニブ、アキシチニブ、セジラニブ、レスタウルチニブ、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、スニチニブ、カルボプラチン、ベバシズマブ、シスプラチン、セツキシマブ、ビスカム・アルバム、アスパラギナーゼ、トレチノイン、ヒドロキシカルバミド、ダサチニブ、エストラムスチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、イブリツモマブチウキセタン、ヘプタプラチン、アミノレブリン酸メチル、アムサクリン、アレムツズマブ、プロカルバジン、アルプロスタジル、硝酸ホルミウムキトサン、ゲムシタビン、ドキシフルリジン、ペメトレキセド、テガフール、カペシタビン、ギメラシル、オテラシル、アザシチジン、メトトレキサート、ウラシル、シタラビン、フルオロウラシル、フルダラビン、エノシタビン、フルタミド、デシタビン、メルカプトプリン、チオグアニン、クラドリビン、カルモフール、ラルチトレキセド、ドセタキセル、パクリタキセル、イリノテカン、ベロテカン、トポテカン、ビノレルビン、エトポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、テニポシド、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、マイトマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ピラルビシン、アクラルビシン、ペプロマイシン、テムシロリムス、テモゾロミド、ブスルファン、イホスファミド、シクロホスファミド、メルファラン、アルトレタミン、ダカルバジン、チオテパ、ニムスチン、クロラムブシル、ミトラクトール、ロイコボリン、トレチノイン、エキセメスタン、アミノグルテチミド、アナグレリド、ナベルビン、ファドロゾール、タモキシフェン、トレミフェン、テストラクトン、アナストロゾール、レトロゾール、ボロゾール、ビカルタミド、ロムスチン、およびカルムスチンからなる群より選択される少なくとも１種以上であり得る。

一例において、前記第２抗がん剤は、前記薬学組成物に含まれる脂質ナノ粒子の内部に封入されないものであり得る。

さらに他の態様は、癌（例えば、ＨＰＶ感染によって誘発された癌）の治療のための化学療法または放射線療法を行う場合、前記薬学組成物を併用投与する段階を含む、癌の化合療法または放射線療法に対する敏感度増進方法を提供することができる。

前記「併用投与」は、化合療法の場合、化学療法を行う数時間（例えば、４時間）前に前記薬学組成物を投与する段階を先に行うことができる。また、放射線療法の場合、放射線照射１日後に、２日にわたって数回（例えば２～４回）前記薬学組成物を投与することができる。

他の態様は、前記薬学組成物を患者に投与する段階を含む癌の予防または治療方法を提供する。癌については上述した通りである。

一例による癌の予防または治療方法は、前記投与する段階以前に、前記癌の予防および／または治療を必要とする患者を確認（選別）する段階をさらに含み得る。一例において、前記患者は放射線治療および／または化学治療を受けたことがある患者；放射線治療および／または化学治療を受けている患者；および／または放射線治療および／または化学治療を受ける予定の患者であり得る。

前記治療方法が適用される対象個体は、癌が発病または発病し得るヒトを含むネズミ、家畜などを含む哺乳動物を意味するが、これらに限定されない。上記の範囲（モル比、重量部、および／または重量％の範囲）でイオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および／または脂質－ＰＥＧ複合体を含む脂質ナノ粒子を含む薬学組成物（または放射線治療および／または抗がん剤併用投与用薬学組成物）を対象個体に投与することによって、個体を効率的に治療することができる。

本明細書において「投与」はいかなる適切な方法で対象個体に前記薬学的組成物を導入することを意味し、投与経路は目的とする組織に至る限り経口または非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用）の様々な経路により投与することができる。

前記予防または治療方法は、前記薬学組成物（または放射線治療および／または抗がん剤併用投与用薬学組成物）を薬学的有効量で投与することを含む。好ましい１日使用量は、正しい医学的判断範囲内で処置によって決定することができ、１回または数回に分けて投与することができる。しかし、特定患者に対する具体的な有効治療量は達成しようとする反応の種類と程度、場合によって他の製剤の使用の有無をはじめとする具体的な組成物、患者の年齢、体重、健康状態、性別および食べ物、投与時間、投与経路および組成物の分泌率、治療期間、具体的な組成物と共に使用または同時に使用される薬物をはじめとする様々な因子および医薬分野で周知の類似因子に応じて適用を異にすることができる。

さらに他の態様は、前記薬学的組成物を動物（例えば、ヒトを除いた動物）に投与する段階；および放射線を照射する段階を含む癌に対する治療方法を提供することができる。

前記薬学的組成物を投与した後に放射線を照射する場合、相乗効果により放射線治療効果、さらには癌の治療効果を顕著に増進することができる。

前記治療の対象となる動物は、ヒト、家畜、および愛玩動物を含む任意の哺乳類であり得るが、これらに限定されるものではない。

前記放射線照射は、従来の癌の放射線治療のために使用されていた任意の放射線照射方法あるいはその後に開発される癌に対する放射線照射方法を適用することができる。

さらに他の態様は、前記脂質ナノ粒子および前記第１抗がん剤を含む癌細胞死滅用組成物を提供することができる。さらに他の態様は、前記第１抗がん剤を前記脂質ナノ粒子に封入させる段階を含む癌細胞死滅方法を提供することができる。一例による組成物で死滅させ得る癌細胞は上述した癌細胞を意味する。

本発明に係る薬学組成物は、生体親和性に優れ、高効率に遺伝子治療剤などを伝達できるので、癌の予防または治療効果に優れ、他の抗がん剤および／または放射線治療と併用する場合にも癌の予防または治療効果に優れる。

一例による脂質ナノ粒子の例示的な構造を示す図である。 一例によるナノ粒子をＣｒｙｏ－ＴＥＭで観察したイメージを示す図である。 ＣＤＣｌ_３で２４６－Ｃ１０の^１Ｈ ＮＭＲ（室温、４００ＭＨｚ）の結果を示す図である。 ２４１－Ｃ１０ ＬＮＰ～２４３－Ｃ１０ ＬＮＰは、脂質ナノ粒子がｐＨ４．１～ｐＨ９．６の範囲を有する溶液に現れる蛍光強度を測定した結果を示す図である。 ２４４－Ｃ１０ ＬＮＰ～２４６－Ｃ１０ ＬＮＰは、脂質ナノ粒子がｐＨ４．１～ｐＨ９．６の範囲を有する溶液に現れる蛍光強度を測定した結果を示す図である。 ナノ粒子の細胞内遺伝子伝達効率を示す結果であって、具体的には、ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡ（ｌｕｃ ｍＲＮＡ）を封入したＬＮＰをＨｅＬａ ｃｅｌｌに形質転換させた後、細胞を溶解して測定した発光強度を示す図である。 ナノ粒子の細胞内遺伝子伝達効率を示す結果であって、具体的には、一例によりｓｉＲＮＡを封入したＬＮＰをＨｅｌａ－Ｌｕｃ癌細胞に形質転換させた後、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）発現を測定した結果を示す図である。 ナノ粒子のマウス内遺伝子伝達効率を示す結果であって、具体的には、蛍光付きｓｉＧＦＰをＬＮＰに封入した後、ｍｏｕｓｅモデルに注入して４８時間後、ＩｖＩＳによって生体分布を癌組織、肝臓、腎臓で確認した結果を示す図である。 ナノ粒子のマウス内遺伝子伝達効率を示す結果であって、具体的には、ｓｉＬｕｃを含む脂質ナノ粒子をＨｅｌａ－Ｌｕｃ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍｏｕｓｅモデルに投与してルシフェラーゼの発現の増減を生体発光装置で測定した結果を示す図である。 ナノ粒子のマウス内遺伝子伝達効率を示す結果であって、具体的には、ｓｉＬｕｃを含む脂質ナノ粒子をＨｅｌａ－Ｌｕｃ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍｏｕｓｅモデルに投与して注射方法によるルシフェラーゼの発現の増減の生体発光図表で表す。 頭頸部扁平上皮癌細胞株および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子による細胞死滅効果を示す図である。 頭頸部扁平上皮癌細胞株および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるｍＲＮＡ遺伝子発現の増減を示す図である。 頭頸部扁平上皮癌細胞株および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるタンパク質の発現の増減を示す図である。 膵臓癌細胞株、肺癌細胞株、乳癌細胞株、および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子による細胞死滅効果を示す図である。 膵臓癌細胞株、肺癌細胞株、乳癌細胞株、および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるｍＲＮＡ遺伝子発現の増減を示す図である。 膵臓癌細胞株、肺癌細胞株、乳癌細胞株、および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるタンパク質の発現の増減を示す図である。 膵臓癌細胞株、肺癌細胞株、および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子および放射線による細胞死滅を示す図である。 膵臓癌細胞株、肺癌細胞株、および子宮頸癌細胞株でｓｉＲＮＡを含むナノ粒子および放射線によるタンパク質の発現の増減を示す図である。 膵臓癌細胞株移植マウスモデルで放射線に対するｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるｓｉＲＮＡ伝達およびｍＲＮＡ遺伝子発現の増減を示す図である。 肺癌細胞株移植マウスモデルで放射線に対するｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるｓｉＲＮＡ伝達およびｍＲＮＡ遺伝子発現の増減を示す図である。

本発明は、下記の実施形態を例に挙げて、さらに詳しく説明するが、下記の実施例によって権利範囲を制限することを意図するものではない。

実施例１．イオン化可能な脂質（ｉｏｎｉｚａｂｌｅ ｌｉｐｉｄ）の製造
実施例１－１．イオン化可能な脂質の製造
６員ヘテロ環第３級アミンを含む下記表１のアミン系化合物および１，２－ｅｐｏｘｉｄｏｄｅｃａｎｅ（以下、Ｃ１０）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製、米国）を１：ｎ（ｎ＝第１級アミン×２＋第２級アミン×１）のモル比で反応させ、イオン化可能な脂質を合成した。

具体的には、５ｍｌバイアールに前記表１の２４１～２４６のアミンそれぞれとエポキシド（Ｃ１０）を１：ｎ（ｎ＝第１級アミン×２＋第２級アミン×１）のモル比でマグネチックバーと一緒に添加して、撹拌機で７５０ｒｐｍ、９０℃で３日間反応させた。その後、ＷＥＬＵＸ ｆｉｎｅ ｓｉｌｉｃａ ｃｏｌｕｍｎ（Ｉｎｔｅｒｔｅｃ社製、韓国）で精製した後、前記反応によって生成された各イオン化可能な脂質の分子量を計算し、エタノールを使用して１００ｍｇ／ｍｌの濃度に合わせて保管した。２４１のアミンとＣ１０を使用して製造したイオン化可能な脂質を「２４１－Ｃ１０」と称し、他の種類のアミンを使用して製造したイオン化可能な脂質も同様に、「使用されたアミン名（２４１～２４６）－Ｃ１０」と称した。

実施例１－２．生成されたイオン化可能な脂質の確認
前記実施例１－１で製造したイオン化可能な脂質を確認するために、^１Ｈ ＮＭＲを行った。具体的には、実施例１－１で合成したイオン化可能な脂質（２４６－Ｃ１０）５μｇをＣＤＣｌ_３（ｓｉｇｍａ社製、米国）０．５ｍｌに希釈して１００ｍｍｏｌｅの濃度となるように準備した。その後、４００ＭＨｚ ＮＭＲ専用チューブに０．５ｍｌずつ入れて上部を塞いだ後、パラフィルムでシールドしてＡｇｉｌｅｎｔ ４００ＭＨＺ ＦＴ－ＮＭＲ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製、米国）を用いてＮＭＲ ｓｐｅｃｔｒａを得て、その結果を図２に示す。図２に示すように、２４６－Ｃ１０の各官能基を示す信号が飽和されたことが分かった。

また、実施例１－１で製造したイオン化可能な脂質（２４１－Ｃ１０～２４６－Ｃ１０）を確認するためにＭＳ分析を行った。具体的には、イオン化可能な脂質は０．５ｐｐｍ以下の濃度にエタノールに希釈してＭＳ分析を行った。分析に用いられた装置は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、米国）の６２３０ＬＣ／ＭＳであり、分離管はＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＺｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８（１００ｍｍ×２．１ｍｍ ｉ．ｄ．，３．５μｍ）を用い、移動相として０．１％ギ酸が含まれている蒸留水（Ａ）とアセトニトリル（Ｂ）の２種類の溶媒を勾配溶離した。移動相の溶媒勾配は、最初の有機溶媒のアセトニトリル（Ｂ）の比率を３０％から始まり、２分まで８０％まで上げた後、再び有機溶媒の比率を３０％まで下げ、安定化するまで４分間維持した。移動相の流速は３００ｕｌ／ｍｉｎであり、この時、分析装置の注入量は２ｕｌであった。ＭＳ分析を行った結果を下記表２に示す。表２に示すように、イオン化可能な脂質の測定されたｍ／ｚ ｒａｔｉｏと計算されたｍ／ｚ ｒａｔｉｏがほぼ一致することを確認することができた。

上記結果から実施例１－１でイオン化可能な脂質がうまく作られたことを確認することができた。

実施例２．脂質ナノ粒子の製造
実施例２－１．脂質ナノ粒子の製造
前記実施例１－１で製造したイオン化可能な脂質（２４１－Ｃ１０～２４６－Ｃ１０）、コレステロール（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｐｏｗｄｅｒ、ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔ、ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ、≧９９％、ｓｉｇｍａ社製、韓国）、リン脂質（ＤＳＰＣ）（Ａｖａｎｔｉ社製、米国）、および脂質－ＰＥＧ複合体（Ｃ１６ ＰＥＧ２０００セラミド）（Ｃ１６ ＰＥＧ２０００ Ｃｅｒａｍｉｄｅ、Ａｖａｎｔｉ社製、米国）をエタノールに４２．５：１３：４３：１．５のモル比で溶解した。

イオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および脂質－ＰＥＧが溶解したエタノールおよびアセテートバッファーを１：３の体積比で１２ｍｌ／ｍｉｎの流速で微細流体混合装置（Ｂｅｎｃｈｔｏｐ Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒ；ＰＮＩ社製、Ｃａｎａｄａ）を用いて混合して、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を製造した。

実施例２－２．核酸が封入された脂質ナノ粒子の製造
前記実施例１－１で製造したイオン化可能な脂質（２４１－Ｃ１０～２４６－Ｃ１０）、コレステロール（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｐｏｗｄｅｒ、ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔ、ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ、≧９９％、ｓｉｇｍａ社製、韓国）、リン脂質（ＤＳＰＣまたはＤＯＰＥ）（１８：０ ＰＣ（ＤＳＰＣ）、１８：１（△９－Ｃｉｓ）ＰＥ（ＤＯＰＥ）、Ａｖａｎｔｉ社製、米国）、および脂質－ＰＥＧ複合体（Ｃ１６ ＰＥＧ２０００セラミド）（Ｃ１６ ＰＥＧ２０００ Ｃｅｒａｍｉｄｅ、Ａｖａｎｔｉ社製、米国）をエタノールに溶解した。ＲＮＡ治療剤であるｍＲＮＡ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｍＲＮＡ；配列番号１）３０μｇをクエン酸ナトリウム０．７５ｍｌに希釈するか、またはｓｉＲＮＡ（ｓｉＬＵＣ、ｓｉＧＦＰ、Ａｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡ、Ａｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡなど）３０μｇを５０ｍＭの酢酸ナトリウム０．７５ｍｌに希釈して水性相を製造した。ｍＲＮＡおよびｓｉＲＮＡは、Ｂｉｏｎｅｅｒ（韓国）に依頼して合成して使用した。

イオン化可能な脂質、コレステロール、リン脂質、および脂質－ＰＥＧ複合体（以下、脂質－ＰＥＧ）が溶解した有機相（エタノール）およびＲＮＡ治療剤（核酸）が溶解した水性相（酢酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）を１２ｍｌ／ｍｉｎの流速で微細流体混合装置（Ｂｅｎｃｈｔｏｐ Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒ；ＰＮＩ社製、Ｃａｎａｄａ）を用いて混合して、核酸が封入された脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を製造した。（ｉ）ｍＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子を製造するために、イオン化可能な脂質：リン脂質（ＤＯＰＥ）：コレステロール：脂質－ＰＥＧ（Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミド）を２６．５：２０：５２．５～５１：１．０～２．５（モル比の総和が１００となるようにコレステロールと脂質－ＰＥＧの含有量を調節）のモル比でエタノールに溶解し、ｍＲＮＡ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｍＲＮＡ；配列番号１）：イオン化可能な脂質が１：１０の重量比となるように有機相および水性相を混合して脂質ナノ粒子を製造した。（ｉｉ）ｓｉＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子を製造するためにイオン化可能な脂質：リン脂質（ＤＳＰＣ）：コレステロール：脂質－ＰＥＧ（Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミド）を４２．５：１３：３４．５～４４．２５：０．２５～１０．０（モル比の総和が１００となるようにコレステロールと脂質－ＰＥＧの含有量を調節）のモル比でエタノールに溶解し、ｓｉＲＮＡ（ｓｉＬＵＣ、ｓｉＧＦＰ、Ａｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡ、Ａｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡなど）：イオン化可能な脂質が１：７．５の重量比となるように有機相および水性相を混合して脂質ナノ粒子（ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ；ＬＮＰ）を製造した。使用されたｓｉＲＮＡ配列は、配列は下記表３に記載した。表３中の小文字で表される塩基は２’－Ｏ－Ｍｅｔｈｙｌに変更した。

製造されたＬＮＰをエタノールの除去および体内のｐＨと脂質ナノ粒子のｐＨを合わせるために、１０，０００ＭＷＣＯ透析カセットを用いて、１６時間ＰＢＳに対して透析した。
イオン化可能な脂質「２４１－Ｃ１０」を含む脂質ナノ粒子を「２４１－Ｃ１０ ＬＮＰ」と称し、他の種類のアミンを含むイオン化可能な脂質を使用して製造した脂質ナノ粒子（核酸が封入された脂質ナノ粒子を含み）を「含まれているアミン名（２４１～２４６）－Ｃ１０ ＬＮＰ」と称した。

実施例２－３．核酸が封入された脂質ナノ粒子の観察
ｓｉＬｕｃ（配列番号５）が封入された脂質ナノ粒子をセラミド－ＰＥＧ複合体（Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミド）を使用して実施例２－２と同様に製造した。製造された脂質ナノ粒子（セラミド－ＰＥＧ複合体を１．５モル％含み）を２００ｍｅｓｈ ｃａｒｂｏｎ ｌａｃｅｙ ｆｉｌｍ Ｃｕ－ｇｒｉｄにｓｉＲＮＡの濃度を基準にして６０ｕｇロードしてｖｉｔｒｏｂｏｔで液化した（約－１７０度以下）Ｅｔｈａｎｅに浸してｐｌｕｎｇｅ ｆｒｅｅｚｅさせて準備した後、Ｃｒｙｏ－ＴＥＭ（Ｔｅｃｎａｉ Ｆ２０、ＦＥＩ）で観察し、その結果を図１ｂに示す。図１ｂに示すように、中身の詰まった球状の１００ｎｍ以下の大きさの粒子が観察された。

実施例３．脂質ナノ粒子のｐＫａ
本実施例でインビトロＴＮＳ分析（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＴＮＳ ａｓｓａｙ）により前記実施例２－１で剤形化された各脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）のｐＫａを計算した。陰イオン性ＴＮＳは、正に荷電したイオン化可能な脂質と相互作用して親油性になり、ｐＨ値がそれぞれのＬＮＰのｐＫａ値に近接することによってＴＮＳの親油性が低くなり、さらに多くの水分子がＴＮＳ蛍光をクェンチング（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ）させるので、６．０～７．０のｐＫａを有する脂質ナノ粒子は生体内薬物伝達効率に優れ、ｐＨによる蛍光（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を示すグラフにおいて、「ｓ字型曲線」を示す脂質ナノ粒子はエンドソーム膜と相互作用が容易であり、酸性化の際には、容易にエンドソームから脱出することを意味する。

具体的には、２０ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、２５ｍＭ ｃｉｔｒａｔｅ、２０ｍＭ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ、および１５０ｍＭ ＮａＣｌを含む溶液のｐＨを０．１Ｎ ＮａＯＨおよび／または０．１Ｎ ＨＣｌを使用して、ｐＨ４．１からｐＨ９．６まで０．５の間隔で調整して様々なｐＨ単位の溶液を製造した。それぞれのｐＨ（ｐＨ４．１からｐＨ９．６まで０．５間隔のｐＨ）を有する溶液を１００ｕｌずつｂｌａｃｋ ９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに添加し、３００ｕＭのＴＮＳストック（ｓｔｏｃｋ）溶液を使用して６ｕＭの最終濃度となるように上記の範囲のｐＨを有する溶液にそれぞれ添加した。２４１－Ｃ１０ ＬＮＰ～２４６－Ｃ１０ ＬＮＰを最終濃度が２０ｕＭとなるように混合溶液に添加した。蛍光強度は、Ｔｅｃａｎ装置を用いて３２５ｎｍのｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ、４３５ｎｍのｅｍｉｓｓｉｏｎで測定して、各脂質ナノ粒子に対する蛍光強度を図３ａおよび図３ｂに示し、各脂質ナノ粒子に対するｐＫａは最大蛍光の半分に達するｐＨ値を計算して、下記表４に示す。図３ｂに示すように、２４４－Ｃ１０ ＬＮＰ～２４６－Ｃ１０ ＬＮＰは、非線形回帰分析（ｎｏｎｌｉｎｅａｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ）により蛍光滴定ｓ字型曲線を示すことが分かった。

上記表４で確認したように、一実施形態による脂質ナノ粒子は、生体内安全性および薬物放出に優れたｐＫａ６．０～７．０の範囲であることを確認した。

実施例２－２と同様の方法で製造した、核酸が封入されたＬＮＰの場合も含まれているイオン化可能な脂質の種類（イオン化可能な脂質に含まれているアミンの種類）により同じ様相を示した。

実施例４．脂質ナノ粒子の特性確認
実施例４－１．粒子の大きさの測定
本実施例で前記実施例２－２で製造したｍＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子（ＬＮＰ；脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）の大きさを測定した。前記実施例２－２で製造した各脂質ナノ粒子に含まれているＲＮＡ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｍＲＮＡ；配列番号１）の濃度が１μｇ／ｍｌとなるようにＰＢＳを使用して希釈し、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＵＫ）で動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いてＬＮＰの直径および多分散度（ＰＤＩ；ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を測定し、その結果は下記表５に示す。

上記表５で確認したように、一実施形態による脂質ナノ粒子は、肝細胞内導入が容易で、薬物放出に優れた粒子の大きさを示し、２４１－Ｃ１０ ＬＮＰ＞２４３－Ｃ１０ ＬＮＰ＞２４２－Ｃ１０ ＬＮＰ＝２４５－Ｃ１０ ＬＮＰ＞２４４－Ｃ１０ ＬＮＰ＞２４６－Ｃ１０ ＬＮＰの順にＰＤＩ数値が小さく、粒子が均一であることが分かった。

実施例４－２．薬物封入率の測定
核酸薬物としてｓｉＲＮＡ（ｓｉＦＶＩＩ ｓｉＲＮＡ）を封入した各ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）のカプセル化効率（薬物封入率、％）をＲｉｂｏｇｒｅｅｎ分析（Ｑｕａｎｔ－ｉＴ^ＴＭ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ（登録商標）ＲＮＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により測定した。前記実施例２－２で製造した核酸薬物を封入したＬＮＰを９６ウェルプレートでｓｉＲＮＡの最終濃度が４～７μｇ／ｍｌとなるように１×ＴＥ緩衝液５０ｕｌに希釈した。Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘを処理しないグループ（Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ ＬＮＰ（－））は１×ＴＥバッファー５０ｕｌを添加し、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘを処理したグループ（Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ ＬＮＰ（＋））は２％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘバッファー５０ｕｌを添加した。３７℃で１０分間インキュベーションして、Ｔｒｉｔｏｎ－ＸでＬＮＰを分解してカプセル化された核酸を放出させた。その後、Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ試薬１００ｕｌを各ウェルに添加した。Ｔｒｉｔｏｎ ＬＮＰ（－）とＴｒｉｔｏｎ ＬＮＰ（＋）の蛍光強度（ＦＬ）は、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ（登録商標）２００ ＰＲＯ ＮａｎｏＱｕａｎｔ（Ｔｅｃａｎ）で波長帯域幅（ｅｘｉｔａｔｉｏｎ：４８５ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ：５２８ｎｍ）で測定し、薬物封入率（カプセル化効率、％）は下記数式３のように計算した。各ＬＮＰに対する薬物封入率（％）は、２回繰り返し測定した結果値の平均値であり、下記表６に示す。

上記表６に示すように、一実施形態による脂質ナノ粒子は、高効率に薬物を封入できることを確認した。

実施例５．脂質ナノ粒子を用いた細胞内核酸伝達確認
実施例５－１．ＬＮＰに含まれるイオン化可能な脂質の種類による核酸伝達効果
一実施形態によるＬＮＰを細胞に形質転換（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させる一日前にＨｅＬａ細胞（韓国細胞株銀行）をｗｈｉｔｅ ｐｌａｔｅ（９６ｗｅｌｌ）に０．０１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに分注してＤＭＥＭ ｍｅｄｉａ（ＳＨ３００２２、Ｈｙｃｌｏｎｅ、米国）で３７℃、０．５～３％ＣＯ_２の条件で培養した。実施例２－２で製造した、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）遺伝子をコードするｍＲＮＡ（ｌｕｃ ｍＲＮＡ；配列番号１）が封入されたＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含む２４１－Ｃ１０ ＬＮＰ～２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ）をＡｐｏＥ３ ０．１μｇ／ｍｌとピペットで攪拌した後、常温で１０分間インキュベーションした後、ＨｅＬａ ｃｅｌｌで処理（脂質ナノ粒子に含まれているｍＲＮＡを基準にして１００ｎｇ／ｗｅｌｌ）した。ＡｐｏＥ３は、ＬＮＰ表面に結合して細胞表面に発現したＬＤＬ受容体を通じてＬＮＰが細胞内にエンドサイトーシス（ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）により取り込まれる役割を果たす。

２４時間後、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ^ＴＭ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ溶液（ｐｒｏｍｅｇａ社製、米国）を１００ｕｌ／ｗｅｌｌずつ処理して１０分間常温に置いた後、溶解した細胞をＩｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００発光測定装置（Ｔｅｃａｎ社製、米国）を用いて発光強度（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を測定し、その結果を図４ａに示す。図４ａに示すように、ｐＫａの範囲が６．０～７．０である２４４－Ｃ１０ ＬＮＰ、２４５－Ｃ１０ ＬＮＰ、および２４６－Ｃ１０ ＬＮＰの場合、強い発光強度を示し、その中でも２４６－Ｃ１０ ＬＮＰの場合発光強度が最も高く、２４６－Ｃ１０ ＬＮＰが細胞内薬物伝達効率が最も高いことが分かった。

実施例５－２．癌細胞内核酸伝達確認
脂質ナノ粒子にＣ１６ ＰＥＧ－ｃｅｒａｍｉｄｅまたはＰＥＧ－ＤＳＰＥを含む脂質－ＰＥＧの含有量を１．５～１０．０モル％に変更して前記実施例２－２と同様の方法で脂質ナノ粒子を製造した。

脂質ナノ粒子に含まれているイオン化可能な脂質：ｓｉＲＮＡの重量比は７．５：１であり、ＬＮＰに含まれるイオン化可能な脂質（２４６－Ｃ１０）：リン脂質（ＤＳＰＣ）：コレステロール：脂質－ＰＥＧ（Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミドまたはＰＥＧ－ＤＳＰＥ）のモル比は４２．５：１３：３９．５～４３：１．５～５．０（モル比の総和が１００となるようにコレステロールと脂質－ＰＥＧの含有量を調節）であった。

一実施形態によるＬＮＰを細胞に形質転換（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させる一日前にＨｅＬａ細胞（韓国細胞株銀行）をｗｈｉｔｅ ｐｌａｔｅ（９６ｗｅｌｌ）に０．０１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに分注してＤＭＥＭ ｍｅｄｉａ（ＳＨ３００２２、Ｈｙｃｌｏｎｅ、米国）で３７℃、０．５～３％ＣＯ_２の条件で培養した。ｓｉＬｕｃ（配列番号２および３）が封入された脂質ナノ粒子をｓｉＲＮＡの濃度１０ｎＭでＨｅＬａ－Ｌｕｃ細胞株に処理２４時間後、Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ^ＴＭＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ溶液（ｐｒｏｍｅｇａ、米国）を１００ｕｌ／ｗｅｌｌずつ処理して１０分間常温に置いた後、溶解した細胞をＩｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００発光測定装置（Ｔｅｃａｎ、米国）を用いて発光強度（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を測定し、その結果を図４ｂに示す。使用されたｓｉＬｕｃ（ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）遺伝子をターゲットとするｓｉＲＮＡ）の配列は上記表３に記載した。

図４ｂに示すように、一例による脂質ナノ粒子は癌細胞であるＨｅｌａ－Ｌｕｃ細胞への核酸伝達効果に優れた。

実施例５－３．薬物動態学的解析（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ）
前記実施例２－２と同様の方法で脂質ナノ粒子に含まれる脂質－ＰＥＧの含有量を１．５～５．０モル％にしてＡｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡ（配列番号６および７；表３）が封入された脂質ナノ粒子を製造した。脂質ナノ粒子に含まれているイオン化可能な脂質：ｓｉＲＮＡの重量比は７．５：１であり、ＬＮＰに含まれるイオン化可能な脂質（２４６－Ｃ１０）：リン脂質（ＤＳＰＣ）：コレステロール：脂質－ＰＥＧ（Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミド）のモル比は４２．５：１３：３９．５～４３：１．５～５．０であった。上記で製造した脂質ナノ粒子の直径およびＰＤＩを前記実施例４－１と同様の方法で測定して下記表７に示す。

ａｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子２ｍｇ／ｋｇの薬物をＳｐｒａｇｕ－Ｄａｗｌｅｙ系ラット（７～８週齢、ｍａｌｅ）の大腿静脈（ｆｅｍｏｒａｌ ｖｅｉｎ）に注射した後、０．５分～２４時間血液を採取し、直ちに１３、０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離をした後、ｐｌａｓｍａを確保して－７０℃ ｄｅｅｐ ｆｒｅｅｚｅｒに保管した。得られたｐｌａｓｍａからｓｔｅｍ－ｌｏｏｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ検出法を用いてｐｌａｓｍａ内にＡｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡを確認した。ｓｉＲＮＡに特異的なＳｔｅｍ－ｌｏｏｐ ＲＴ ｐｒｉｍｅｒとｐｒｏｂｅを選別してｓｉＲＮＡ標準試料を用いてＲｅａｌ ｔｉｍｅ ＰＣＲ技法を適用した時、ｓｉＲＮＡ標準試料に対するＣｐ値（ｙ）間の線形分析の結果、勾配平均と決定系数Ｒ^２を有し、ｓｉＲＮＡ標準試料とＣｐ値の間の回帰性を分析してｓｔｅｍ－ｌｏｏｐ ＲＴ－ｑＰＣＲ検出法を行った。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎプログラムを利用して薬物動態パラメータを分析した結果を表８に示す。

表８に示すように、ｓｉＨＰＶ１６_Ｅ６／Ｅ７が封入されたＬＮＰは、ｎａｋｅｄ ｓｉＲＮＡに比べて薬物投与後に最高血中濃度（Ｃｍａｘ）が高く、薬物の消失半減期（Ｔ１／２）がさらに長く維持し、薬物の掃除率（ＣＬ）が低いので体内に長時間維持し、薬物が消失する程度が低くて生体内安定性（ｉｎ ｖｉｖｏ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）が向上した。

実施例５－４．癌組織へのｓｉＲＮＡ－ＬＮＰｓの移行確認
脂質ナノ粒子に含まれる脂質－ＰＥＧの含有量を５．０モル％にしてＣｙ５．５ ｌａｂｅｌｅｄ ｓｉＧＦＰ（配列番号４および５；表３）が封入された脂質ナノ粒子（２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ）を製造した。脂質ナノ粒子に含まれているイオン化可能な脂質：ｓｉＲＮＡの重量比は７．５：１であり、ＬＮＰに含まれるイオン化可能な脂質（２４６－Ｃ１０）：リン脂質（ＤＳＰＣ）：コレステロール：脂質－ＰＥＧ（Ｃ１６－ＰＥＧ２０００セラミド）のモル比は４２．５：１３：３９．５：５．０であった。上記で製造した脂質ナノ粒子の直径およびＰＤＩを前記実施例４－１と同様の方法で測定して下記表９に示す。

Ｃ５７ＢＬ／６ ｆｅｍａｌｅで７週齢、２０ｇのマウスに５×１０^６個のＨｅＬａ細胞を皮下接種した。マウスの腫瘍体積および体重を週２回モニターした。腫瘍の大きさはデジタルカリパスを用いて測定した。腫瘍の体積はＶ＝０．５×Ｗ^２×Ｌ（Ｖ＝腫瘍体積、Ｗ＝腫瘍幅、Ｌ＝腫瘍長）を使用して計算した。腫瘍の大きさが１００ｍｍ^３である時、脂質ナノ粒子をマウスに注入し、注入４８時間後にＩｖＩＳによって生体分布を確認した。癌組織、肝臓、腎臓での蛍光を測定し、その結果を図５ａに示す。図５ａに示すように、一例による脂質ナノ粒子の投与時、癌組織への移行に優れていることを確認することができた。

実施例５－５．Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｔｕｍｏｒ ｍｏｕｓｅモデルでのｉｎ ｖｉｖｏ ｓｉＲＮＡ伝達および遺伝子調節確認
前記実施例５－２で確認した通り、インビトロで優れた遺伝子発現効果（遺伝子伝達効果）を示す２４６－Ｃ１０ ＬＮＰの生体内薬物伝達効率および生体分布（ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を本実施例で確認した。

前記実施例５－４と同様の方法でｓｉＬｕｃ（配列番号２および３；表３）を２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を製造し、各ナノ粒子をＰＢＳで１６時間透析してエタノールを除去した。Ｃ５７ＢＬ／６ Ｆｅｍａｌｅで７週齢、２０ｇのマウス（オリエンタルバイオ）に５×１０^６個のＨｅＬａ－Ｌｕｃ癌細胞を皮下接種した。マウスの腫瘍体積および体重を週２回モニターした。腫瘍の大きさはデジタルカリパスを用いて測定した。腫瘍の体積はＶ＝０．５×Ｗ^２×Ｌ（Ｖ＝腫瘍体積、Ｗ＝腫瘍幅、Ｌ＝腫瘍長）を使用して計算した。腫瘍の大きさが１００ｍｍ^３である時、ｓｉＬｕｃ脂質ナノ粒子とＮｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｉＲＮＡをマウスに注入し、注入４８時間後、ＩｖＩＳ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、米国）装置を用いて生体発光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）強度を図５ｂに示す。図５ｂに示すように、ＨｅＬａ－Ｌｕｃ ｘｅｎｏｇｒａｆｔマウスの生体内で相補的なｓｉＬｕｃ脂質ナノ粒子を投与したグループがＮｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｉＲＮＡ脂質ナノ粒子を投与したグループより発光強度が減少することを確認することができた。これにより、一例による脂質ナノ粒子の伝達および保存力に優れていることを確認することができた。

前記実施例５－４と同様の方法でｓｉＬｕｃ（配列番号２および３；表３）を２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を製造し、各ナノ粒子をＰＢＳで１６時間透析してエタノールを除去した。図５ｂと同様の方法でＸｅｎｏｇｒａｆｔマウスモデルを製作して注射方法による生体発光強度を測定した。

ｓｉＬｕｃが封入された脂質ナノ粒子を静脈注射（Ｉｖ（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ） ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）または腫瘍内注射（ＩＴ（ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ））方法で注射後、３時間後にＩｖＩＳ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、米国）装置を用いて生体発光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）を確認し、その結果を図５ｃに示す。図５ｃに示すように、ｓｉＬｕｃを含む脂質ナノ粒子が投与された注射方法による生体発光を図表で表し、静脈注射、腫瘍内注射方法いずれも発光強度を減少させることを確認することができた。

実施例６．Ａｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡを利用した癌治療の効果確認
実施例６－１．ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７遺伝子をターゲットとするｓｉＲＮＡを封入した脂質ナノ粒子の製造
前記実施例２－２と同様の方法でＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７遺伝子をターゲットとするｓｉＲＮＡ（配列番号６および７；表３）が封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を製造した。

実施例６－２．癌細胞死滅効果測定
癌細胞の死滅効果を測定するために頭頸部扁平上皮癌（ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＮＳＣＣ）細胞株であるＵＭ－ＳＣＣ－４７（Ｍｅａｒｋ Ｃａｔ Ｎｏ．ＳＣＣ０７１）細胞と、子宮頸癌細胞株であるＣａ Ｓｋｉ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ Ｎｏ．ＣＲＬ－１５５０）細胞株に前記実施例６－１で製造したＡｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。

頭頸部扁平上皮癌細胞株であるＵＭ－ＳＣＣ－４７は１０％ウジ胎児血清と抗生物質が含まれているＤＭＥＭ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社製Ｃａｔ：ＳＨ３０２４３．０１）で３７℃、５％ＣＯ_２および１００％湿度条件で培養した。子宮頸癌細胞株であるＣａ Ｓｋｉは、１０％ウジ胎児血清と抗生物質が含まれているＲＰＭＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社製Ｃａｔ：ＳＨ３００２７．０１）培地で３７℃、５％ＣＯ_２および１００％湿度条件で培養した。

形質注入２４時間前、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１×１０^５細胞を入れて培養した後、Ａｎｔｉ ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を単独投与群および併用投与群でＵＭ－ＳＣＣ－４７で１０～３０ｎＭの濃度に処理し、Ｃａ Ｓｋｉ細胞で１０～４０ｎＭの濃度に処理し、シスプラチン（ＣＤＤＰ）の場合、単独投与群および併用投与群でＵＭ－ＳＣＣ－４７に１～５ｕＭの濃度に、Ｃａ Ｓｋｉに５～１０ｕＭの濃度に処理し、Ａｐｏｅ４ １．５ｕｇ／ｍｌと常温で１５分間結合させた後、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理した。形質注入後、４８時間後に血球計数板（ｈｅｍｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて位相差顕微鏡で、細胞内のｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅの染色程度を確認して細胞生存率を確認し、その結果を図６ａに示す。

図６ａに示すように、一例によりｓｉＲＮＡ行って封入された脂質ナノ粒子による癌細胞の死滅効果に優れ、抗がん剤（ＣＤＤＰ）と併用時に死滅効果がさらに向上した。

実施例６－３．ｍＲＮＡ発現の測定
本実施例で一例による脂質ナノ粒子による薬物（ｓｉＲＮＡ）伝達効率を測定するためにＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７のｍＲＮＡ発現を測定し、一例による脂質ナノ粒子による癌の予防または治療効果を確認するためにｐ２１ ｍＲＮＡ発現を測定した。

ｍＲＮＡ発現程度を測定するために頭頸部扁平上皮癌（ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＮＳＣＣ）細胞株であるＵＭ－ＳＣＣ－４７（Ｍｅａｒｋ Ｃａｔ Ｎｏ．ＳＣＣ０７１）細胞、子宮頸癌細胞株であるＣａ Ｓｋｉ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ Ｎｏ．ＣＲＬ－１５５０）細胞株に前記実施例６－１で製造したＡｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。頭頸部扁平上皮癌細胞株であるＵＭ－ＳＣＣ－４７と子宮頸癌細胞株であるＣａ Ｓｋｉは実施例６－２と同様に培養した。

形質注入２４時間前、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１×１０^５細胞を入れて培養した後、Ａｎｔｉ ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を単独投与群および併用投与群でＵＭ－ＳＣＣ－４７で１０～３０ｎＭの濃度に処理し、Ｃａ Ｓｋｉ細胞で１０～４０ｎＭの濃度に処理した。シスプラチン（ＣＤＤＰ）の場合、単独投与群および併用投与群でＵＭ－ＳＣＣ－４７で１～５ｕＭの濃度に、Ｃａ Ｓｋｉで５～１０ｕＭの濃度に処理し、Ａｐｏｅ４ １．５ｕｇ／ｍｌと常温で１５分間結合させた後、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理した。

形質注入後、４８時間後に細胞を溶解してＲｉｂｏＥＸ^ＴＭ（ＧｅｎｅＡｌｌ、Ｃａｔ ｎｏ ３０１－００１）を用いて製造会社の指示に伴ってＲＮＡを抽出して、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ：配列番号８／Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ：配列番号９／Ｐｒｏｂｅ：ＵＰＬ＃６３（Ｒｏｃｈｅ））、Ｐ２１（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ：配列番号１０／Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ：配列番号１１／Ｐｒｏｂｅ：ＵＰＬ＃８２（Ｒｏｃｈｅ））、ＨＰＲＴ１（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ：配列番号１２／Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ：配列番号１３／Ｐｒｏｂｅ：ＵＰＬ＃７３（Ｒｏｃｈｅ））のｍＲＮＡの発現程度を確認できるＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ－Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を行い、その結果を図６ｂに示す。ＨＰＲＴ１はＨｏｕｓｅ ｋｅｅｐｉｎｇ ｇｅｎｅとして使用され、使用されたプライマー配列は下記表１０に記載した。

図６ｂに示すように、Ａｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子の処理時、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７のｍＲＮＡの発現が顕著に減少し、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３の下位遺伝子であるｐ２１ ｍＲＮＡの発現は顕著に増加したことを確認でき、化学抗がん剤（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、ＣＤＤＰ）と併用時、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７のｍＲＮＡの発現の減少およびｐ２１ ｍＲＮＡの発現の増加がさらに向上した。

実施例６－４．タンパク質発現測定
本実施例で、一例による脂質ナノ粒子による癌の予防または治療効果を確認するためにｐ２１およびｐ５３タンパク質の発現を測定した。

タンパク質の発現程度を測定するために頭頸部扁平上皮癌（ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨＮＳＣＣ））細胞株であるＵＭ－ＳＣＣ－４７（Ｍｅａｒｋ Ｃａｔ Ｎｏ．ＳＣＣ０７１）細胞、子宮頸癌細胞株であるＣａ Ｓｋｉ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ Ｎｏ．ＣＲＬ－１５５０）細胞株に前記実施例６－１で製造したＡｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。頭頸部扁平上皮癌細胞株であるＵＭ－ＳＣＣ－４７と子宮頸癌細胞株であるＣａ Ｓｋｉは実施例６－２と同様に培養した。

形質注入２４時間前、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１×１０^５細胞を入れて培養した後、Ａｎｔｉ ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を単独投与群および併用投与群でＵＭ－ＳＣＣ－４７で１０～３０ｎＭの濃度に処理し、Ｃａ Ｓｋｉ細胞で１０～４０ｎＭの濃度に処理した。シスプラチン（ＣＤＤＰ）の場合、単独投与群および併用投与群でＵＭ－ＳＣＣ－４７で１～５ｕＭの濃度に、Ｃａ Ｓｋｉで５～１０ｕＭの濃度に処理し、Ａｐｏｅ４ １．５ｕｇ／ｍｌと常温で１５分間結合させた後、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理した。

形質注入４８時間後にウェスタンブロット分析方法を用いてｐ２１、ｐ５３、Ｈｏｕｓｅ ｋｅｅｐｉｎｇタンパク質であるｂ－ａｃｔｉｎの発現水準を測定した。ＲＩＰＡ細胞溶解緩衝液（ＲＩＰＡ Ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（Ｐｈ７．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＳＤＳ、０．５％ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅおよび１％ ＮＰ－４０）を添加して溶解し、タンパク質量を定量できるＢＣＡ ａｓｓａｙを用いて同じタンパク質量でウェスタンブロットを行った。１次抗体Ａｎｔｉ－Ｐ２１（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ Ｃａｔ ｎｏ．ＳＣ－８１７）は１：２０００に希釈して使用し、Ａｎｔｉ－ｐ５３（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ Ｃａｔ ｎｏ．ＳＣ－４７６９８）は１：２０００に希釈して使用し、Ａｎｔｉ－Ｂ－ａｃｔｉｎ（Ｓａｎｔａｃｒｕｚ Ｃａｔ ｎｏ．ＳＣ－４７７７８）は１：３０００に希釈して使用した。２次抗体としては、ＩｇＧ－Ｍｏｕｓｅ－ＨＲＰが結合した抗体を１：５０００に希釈して行い、その結果を図６ｃに示す。

図６ｃに示すように、Ａｎｔｉ－ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ｓｉＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子の単独または抗がん剤（ＣＤＤＰ）と併用処理時、ｐ２１およびｐ５３のタンパク質発現が顕著に増加した。

実施例７．ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡを利用した癌治療の効果確認
実施例７－１．ＰＭＶＫをターゲットとするｓｉＲＮＡを封入した脂質ナノ粒子の製造
前記実施例２－２の方法と同様にＰＭＶＫをターゲットとするｓｉＲＮＡ（配列番号１４および１５；表３）が封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を製造した。

実施例７－２．癌細胞の死滅効果の測定
癌細胞の死滅効果を測定するために膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＬ－１４２０）、肺癌細胞株Ａ５４９（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－１８５）、乳癌細胞株であるＭＣＦ－７（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＨＴＢ－２２）、および子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－２）細胞株に前記実施例７－１で製造したＡｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。

膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａは、１０％ウジ胎児血清と抗生物質が含まれているＤＭＥＭ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ社製Ｃａｔ：ＳＨ３０２４３．０１）で３７℃、５％ＣＯ_２および１００％湿度条件で培養した。

肺癌細胞株Ａ５４９、乳癌細胞株であるＭＣＦ－７は、１０％ウジ胎児血清と抗生物質が含まれているＲＰＭＩ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社製Ｃａｔ：ＳＨ３００２７．０１）培地で３７℃、５％ＣＯ^２および１００％湿度条件で培養した。

形質注入２４時間前、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに０．５～１×１０^５細胞を入れて培養した後、Ａｎｔｉ ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を単独投与群および併用投与群で２０～４０ｎＭの濃度に処理し、シスプラチン（（ＣＤＤＰ）Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ ｎｏ．Ｐ４３９４）の場合、単独投与群および併用投与群で１～５ｕＭの濃度に処理し、Ａｐｏｅ４ １．５ｕｇ／ｍｌを常温で１５分間結合させた後、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理した。形質注入後、４８時間後に血球計数板（ｈｅｍｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて位相差顕微鏡で、細胞内のｔｒｙｐａｎ ｂｌｕｅの染色程度を確認して細胞生存率を確認し、その結果を図７ａに示す。

図７ａに示すように、一例による薬物が封入された脂質ナノ粒子によってｓｉＲＮＡによる癌細胞の死滅効果が増加した。

実施例７－３．ｍＲＮＡの発現の測定
本実施例で一例による脂質ナノ粒子による薬物（ｓｉＲＮＡ）伝達効率を測定するために肺癌、膵臓癌、乳癌、子宮頸癌細胞でＰＭＶＫ ｍＲＮＡの発現を測定した。

ｍＲＮＡの発現程度を測定するために膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＬ－１４２０）、肺癌細胞株Ａ５４９（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－１８５）、乳癌細胞株であるＭＣＦ－７（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＨＴＢ－２２）、および子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－２）細胞株に前記実施例７－１で製造したＡｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ、肺癌細胞株Ａ５４９、乳癌細胞株であるＭＣＦ－７は実施例７－２と同様に培養した。

形質注入２４時間前、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに０．５～１×１０^５細胞を入れて培養した後、Ａｎｔｉ ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を単独投与群および併用投与群で２０～４０ｎＭの濃度に処理し、シスプラチン（（ＣＤＤＰ）Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ ｎｏ．Ｐ４３９４）の場合、単独投与群および併用投与群で１～５ｕＭの濃度に処理し、Ａｐｏｅ４ １．５ｕｇ／ｍｌを常温で１５分間結合させた後、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理した。形質注入後、４８時間後に細胞を溶解してＲｉｂｏＥＸ^ＴＭ（ＧｅｎｅＡｌｌ、Ｃａｔ ｎｏ ３０１－００１）を用いて製造会社の指示に伴ってＲＮＡを抽出し、ＰＭＶＫ（Ｆｏｒｗａｒｄ：：配列番号１６／Ｒｅｖｅｒｓｅ：配列番号１７／Ｐｒｏｂｅ：ＵＰＬ＃４９（Ｒｏｃｈｅ））、Ｂ－ＡＣＴＩＮ（Ｆｏｒｗａｒｄ：配列番号１８／Ｒｅｖｅｒｓｅ：配列番号１９／Ｐｒｏｂｅ：ＵＰＬ＃６４（Ｒｏｃｈｅ））のｍＲＮＡの発現程度を確認できるＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｒｅａｌ ｔｉｍｅ－Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を行い、その結果を図７ｂに示す。Ｂ－ＡＣＴＩＮはＨｏｕｓｅ ｋｅｅｐｉｎｇ ｇｅｎｅとして使用され、使用されたプライマー配列は下記表１１に記載した。

図７ｂに示すように、ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子を癌細胞に処理時、ＰＭＶＫのｍＲＮＡの発現が顕著に減少した。

実施例７－４．タンパク質の発現の測定
本実施例で一例による脂質ナノ粒子による薬物（ｓｉＲＮＡ）伝達効率を測定するために肺癌、膵臓癌、乳癌、子宮頸癌細胞でＰＭＶＫのタンパク質の発現を測定した。

タンパク質の発現程度を測定するために膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＬ－１４２０）、肺癌細胞株Ａ５４９（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－１８５）、乳癌細胞株であるＭＣＦ－７（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＨＴＢ－２２）、および子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－２）細胞株に前記実施例７－１で製造したＡｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ、肺癌細胞株Ａ５４９、乳癌細胞株であるＭＣＦ－７は実施例７－２と同様に培養した。

形質注入２４時間前、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに０．５～１×１０^５細胞を入れて培養した後、Ａｎｔｉ ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．５モル％含み）を単独投与群および併用投与群で２０～４０ｎＭの濃度に処理し、シスプラチン（（ＣＤＤＰ）Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ ｎｏ．Ｐ４３９４）の場合、単独投与群および併用投与群で１～５ｕＭの濃度に処理し、Ａｐｏｅ４ １．５ｕｇ／ｍｌを常温で１５分間結合させた後、６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに処理した。形質注入４８時間後にウェスタンブロット分析方法を用いてＰＭＶＫの発現水準を測定した。ＲＩＰＡ細胞溶解緩衝液（ＲＩＰＡ Ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ：１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＳＤＳ、０．５％ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅおよび１％ ＮＰ－４０）を添加して溶解し、タンパク質量を定量できるＢＣＡ ａｓｓａｙを用いて同じタンパク質量でウェスタンブロットを行った。１次抗体Ａｎｔｉ－ＰＭＶＫ（Ａｔｌａｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｔ ｎｏ．ＨＰＡ０２９９００）は１：２０００に希釈して使用した。２次抗体としてはＩｇＧ－Ｍｏｕｓｅ－ＨＲＰが結合した抗体を１：５０００に希釈して行い、その結果を図７ｃに示す。

図７ｃに示すように、Ａｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された脂質ナノ粒子を癌細胞に処理時、ＰＭＶＫタンパク質の発現が顕著に減少した。

実施例７－５．癌細胞主でＰＭＶＫのノックダウン時、放射線敏感度による生存率測定
本実施例で一例による脂質ナノ粒子による薬物（ｓｉＲＮＡ）伝達効率を測定するために肺癌、膵臓癌、子宮頸癌細胞で放射線治療抵抗性関連因子として知られるＰＭＶＫのノックダウン時の細胞生存率を測定した。

細胞生存率を測定するために膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＬ－１４２０）、肺癌細胞株Ａ５４９（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－１８５）、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－２）およびＣａ Ｓｋｉ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＲＬ－１５５０）細胞株に前記実施例２－２と同様の方法でＰＭＶＫ遺伝子をターゲットとするｓｉＲＮＡ（配列番号１４および１５；表３）が封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子（脂質－ＰＥＧを１モル％含み）を製造して形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ、Ｃａ Ｓｋｉ、肺癌細胞株Ａ５４９は実施例７－２と同様に培養した。

形質注入２４時間前、Ｍｉａｐａｃａ－２、Ａ５４９、ＨｅＬａ、Ｃａ Ｓｋｉ細胞を０．３×１０^４個で９６ウォールプレートにシーディングした後、２４時間培養した。培養した細胞に前記実施例７－５で製造したＡｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子（脂質－ＰＥＧを１モル％含み）を形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。また、６－ＭＶ光子線線型加速器（６－ＭＶ ｐｈｏｔｏｎ ｂｅａｍ ｌｉｎｅａｒ ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ）を用いて１０Ｇｙの放射線を処理した。放射線処理後、２日目にＣＣＫ－８アッセイを用いて細胞の生存率を確認した。その結果を図７ｄに示す。

図７ｄに示すように、Ａｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子と放射線を癌細胞に処理時、細胞死滅が顕著に増加した。

実施例７－６．癌細胞主でＰＭＶＫナノ粒子によるノックダウン時、放射線敏感度によるタンパク質の発現の測定
本実施例で一例による脂質ナノ粒子による薬物（ｓｉＲＮＡ）伝達効率を測定するために肺癌、膵臓癌、子宮頸癌細胞で放射線治療抵抗性関連印字として知られるＰＭＶＫをノックダウン時のタンパク質の発現を測定した。

タンパク質の発現を測定するために膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＬ－１４２０）、肺癌細胞株Ａ５４９（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－１８５）、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＣＬ－２）およびＣａ Ｓｋｉ（ＡＴＣＣ Ｃａｔ．ｎｏ ＣＲＬ－１５５０）細胞株に前記実施例７－５で製造したＡｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入されたＬＮＰを形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。膵臓癌細胞株であるＭｉａｐａｃａ－２、子宮頸癌細胞株であるＨｅｌａ、Ｃａ Ｓｋｉ、肺癌細胞株Ａ５４９は実施例７－２と同様に培養した。

形質注入２４時間前、Ｍｉａｐａｃａ－２、Ａ５４９、ＨｅＬａ、Ｃａ Ｓｋｉ細胞を１．０×１０^５個で６ウォールプレートにシーディングした後、２４時間培養した。培養した細胞に前記実施例７－５で製造したＡｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０ ＬＮＰ（脂質－ＰＥＧを１．０モル％含み）を形質注入（Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）させた。また、６－ＭＶ光子線線型加速器（６－ＭＶ ｐｈｏｔｏｎ ｂｅａｍ ｌｉｎｅａｒ ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ）を用いて１０Ｇｙの放射線を処理した。放射線処理後、２日目にタンパク質を抽出した後、ＰＭＶＫ抗体を利用したウェスタンブロットを行うことによってタンパク質の発現を確認した。その結果を図７ｅに示す。

図７ｅに示すように、Ａｎｔｉ－ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡが封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子と放射線を癌細胞に処理時、ＰＭＶＫ ｓｉＲＮＡによるタンパク質の発現が減少することを確認することができた。

実施例７－７．Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｔｕｍｏｒ ｍｏｕｓｅモデルでのｓｉＲＮＡを含むナノ粒子によるｉｎ ｖｉｖｏ ｓｉＲＮＡ伝達および遺伝子調節確認
本実施例で一例による脂質ナノ粒子による薬物（ｓｉＲＮＡ）伝達効率を測定するために肺癌、膵臓癌のＸｅｎｏｇｒａｆｔ ｍｏｕｓｅモデルで放射線治療抵抗性関連因子として知られるＰＭＶＫのノックダウン時の腫瘍の大きさの変化を測定した。

ＢＡＬＢ／ｃ ｍａｌｅで５週齢の２０ｇのヌードマウス（オリエンタルバイオ）の右太ももに３×１０^６個のＭｉａｐａｃａ－２癌細胞（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ－１４２０）と１×１０^６個のＡ５４９癌細胞（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ－１８５）を皮下接種した。マウスの腫瘍体積および体重を週３回モニターした。腫瘍の大きさはデジタルカリパスを用いて測定した。腫瘍の体積はＶ＝０．５×Ｗ^２×Ｌ（Ｖ＝腫瘍体積、Ｗ＝腫瘍幅、Ｌ＝腫瘍長）を用いて計算した。前記実施例７－５と同様の方法でＰＭＶＫ遺伝子をターゲットとするｓｉＲＮＡ（配列番号１４および１５；表３）が封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子（脂質－ＰＥＧを１モル％含み）を製造した。腫瘍の大きさが１００ｍｍ^３±２０である時、ＰＭＶＫが封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子とＶｅｈｉｃｌｅ ＬＮＰをＭｉａｐａｃａ－２ ＸｅｎｏｇｒａｆｔヌードマウスでＩｖ（Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｅ）で１週目、３週目にＱＤ×３で３ｍｇ／ｋｇを注入し、ナノ粒子の注入後、主１回、６－ＭＶ光子線線型加速器（６－ＭＶ ｐｈｏｔｏｎ ｂｅａｍ ｌｉｎｅａｒ ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ）を用いて４Ｇｙの放射線を処理した。その結果を７ｆに示す。

前記実施例７－５と同様の方法でＰＭＶＫ遺伝子をターゲットとするｓｉＲＮＡ（配列番号１４および１５；表３）が封入された２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子（脂質－ＰＥＧを１モル％含み）を製造した。腫瘍の大きさが１００ｍｍ^３±２０である時、ＰＭＶＫが封入されたＬＮＰと、Ｖｅｈｉｃｌｅ ＬＮＰをＡ５４９ ＸｅｎｏｇｒａｆｔヌードマウスでＩｖ（Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓｅ）で１週目、３週目にＱＤ×３で３ｍｇ／ｋｇを注入し、また、ナノ粒子の注入後、主１回、６－ＭＶ光子線線型加速器（６－ＭＶ ｐｈｏｔｏｎ ｂｅａｍ ｌｉｎｅａｒ ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒ）を用いて２Ｇｙの放射線を処理した。その結果を７ｇに示す。図７ｆおよび図７ｇに示すように、Ａｎｔｉ－ＰＭＫＶ ｓｉＲＮＡを含む２４６－Ｃ１０脂質ナノ粒子が投与されたマウスモデルでＰＭＶＫ遺伝子の発現の減少が、放射線処理を行う場合さらに減少することを確認することができた。

Claims (16)

1. （１）１，４－ビス（３－アミノプロピル）ピペラジン（１，４－ｂｉｓ（３－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）およびアルキル－エポキシドが結合したイオン化可能な脂質（ｉｏｎｉｚａｂｌｅ ｌｉｐｉｄ）；リン脂質；コレステロール；および脂質－ＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）複合体を含む脂質ナノ粒子、および
   （２）第１抗がん剤を含み、
   前記第１抗がん剤は、陰イオン性薬物、核酸、またはその組み合わせである、癌の予防または治療用薬学組成物。
2. 前記アルキル－エポキシドは１，２－エポキシドデカン（１，２－ｅｐｏｘｙｄｏｄｅｃａｎｅ）である、請求項１に記載の薬学組成物。
3. 前記リン脂質は、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ、ＰＯＰＣ、ＥＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＥ、Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ＰＯＰＥ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＳ、および１，２－ｄｉｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－［ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｌ－ｓｅｒｉｎｅ］からなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の薬学組成物。
4. 前記脂質－ＰＥＧ複合体内脂質は、セラミド（ｃｅｒａｍｉｄｅ）、ジミリストイルグリセロール（ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、ＤＭＧ）、スクシニルジアシルグリセロール（ｓｕｃｃｉｎｏｙｌ－ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ、ｓ－ＤＡＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルエターノルアミン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ＤＳＰＥ）、およびコレステロールからなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の薬学組成物。
5. 前記脂質－ＰＥＧ複合体を０．２５～１０モル％で含む、請求項１に記載の薬学組成物。
6. 前記脂質ナノ粒子は、イオン化可能な脂質：リン脂質：コレステロール：脂質－ＰＥＧ複合体を２０～５０：１０～３０：１０～６０：０．２５～１０のモル比で含む、請求項１に記載の薬学組成物。
7. 前記脂質ナノ粒子はｐＫａが６．０～７．０である、請求項１に記載の薬学組成物。
8. 前記第１抗がん剤は、前記脂質ナノ粒子内部に封入されている、請求項１に記載の薬学組成物。
9. 前記脂質ナノ粒子は、平均直径が３０ｎｍ～１５０ｎｍである、請求項１に記載の薬学組成物。
10. 前記陰イオン性薬物は、ペプチド、タンパク質薬物、タンパク質－核酸構造体、および陰イオン性生体高分子－薬物複合体からなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の薬学組成物。
11. 前記核酸は、小干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、リボソームリボ核酸（ｒＲＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、ジオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、相補性ジオキシリボ核酸（ｃＤＮＡ）、アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）、伝令リボ核酸（ｍＲＮＡ）、運搬リボ核酸（ｔＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）、ＰＮＡ、およびＤＮＡｚｙｍｅからなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の薬学組成物。
12. 前記癌は、ＨＰＶ（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ｖｉｒｕｓ）感染によって誘発された癌である、請求項１に記載の薬学組成物。
13. 前記癌は、子宮頸癌、子宮体癌、膣がん（ｖａｇｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、外陰癌（ｖｕｌｖａｒ ｃａｎｃｅｒ）、肛門癌（ａｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、陰茎癌（ｐｅｎｉｓ ｃａｎｃｅｒ）、扁桃癌（ｔｏｎｓｉｌ ｃａｎｃｅｒ）、咽頭癌（ｐｈａｒｙｎｘ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌（ｌａｒｙｎｘ ｃａｎｃｅｒ）、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、肺腺癌（ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺癌、胃癌、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性または急性白血病、胸腺癌、上皮癌、唾液腺癌、肝癌、胃癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、食道癌、膵臓癌、神経膠腫、多発性骨髄腫、腎細胞癌、膀胱癌、絨毛膜癌、結腸癌、口腔癌、皮膚癌、黒色腫、骨癌、直腸癌、小腸癌、内分泌腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫および下垂体腺腫からなる群より選択される、請求項１に記載の薬学組成物。
14. 請求項１～１３のいずれか一項に記載の薬学組成物を含む、放射線治療に併用するための癌治療用薬学組成物。
15. 請求項１～１３のいずれか一項に記載の薬学組成物および第２抗がん剤をさらに含む、抗がん剤併用投与用薬学組成物。
16. 前記第２抗がん剤は、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、およびカルボプラチンからなる群より選択される１種以上である、請求項１５に記載の抗がん剤併用投与用薬学組成物。

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