JP2024081665A - アルカリホスファターゼを用いて神経線維腫症１型および関連状態を治療する方法 - Google Patents

Abstract

【課題】神経線維腫症１型（ＮＦ１）の少なくとも１つの症状を治療する方法を提供する。
【解決手段】本開示は、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を患者に投与することにより、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状を治療するため、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療するため、または骨癒合を誘導するための方法を特徴とする。
【選択図】なし

Description

多くの疾患および状態は骨もしくは軟骨の異常な骨格機能、構造、または成長を伴う。そのような疾患の例は、神経線維腫症１型（ＮＦ１またはフォンレックリングハウゼン病）である。ＮＦ１は、およそ３，５００人の出生数に１人の発生率の常染色体性優性遺伝障害である。遺伝子ＮＦ１は、Ｒａｓキナーゼを抑制することが知られているＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＧＡＰ）ファミリーのメンバーであるニューロフィブロミンをコードする。ニューロフィブロミンはｐ２１－ＲＡＳの特異的な抑制因子であり、ＮＦ１遺伝子における突然変異は異常な細胞成長および分化につながるＲＡＳの抑制されない活性化を引き起こす。ＮＦ１の一般的な臨床的特徴には、神経皮膚性神経線維腫および視覚路腫瘍などの様々な発癌性形質転換、ならびに認知障害および骨格異常などの他の非癌兆候が含まれる。

神経線維腫症１型は、脊椎の発達を妨げる可能性がある。この疾患は、硬膜と呼ばれる脊椎の保護被覆に影響を与える場合がある。脊髄神経の神経線維腫による髄液の圧力の増加は、脳脊髄液を含む嚢の膨張である硬膜拡張症をもたらす可能性がある。この状態は、背中および肢の疼痛、膀胱制御問題、ならびに重度の場合、痺れをもたらす場合がある。神経線維腫症は、脊髄におよびその周囲に腫瘍を引き起こす場合もある。この領域において良性腫瘍であっても、最も重度の場合では、疼痛および脱力感を引き起こす可能性がある。骨粗鬆症は神経線維腫症１型の罹患者の間で一般的であり、罹患者は一般的に、年齢別の健康な個体よりも骨密度が低い。

神経線維腫症１型の小児は、ジストロフィー脊椎側弯症、非ジストロフィー脊椎側弯症、および／または後湾症を発症し得る。左から右への脊椎の不規則な側弯の脊椎側弯症、および丸まったまたは前角度のある背中の後湾症は、一緒にまたは別個に、神経線維腫症１型の５人に約１人において生じる。非ジストロフィー脊椎側弯症は、神経線維腫症の小児でも、青年期特発性脊椎側弯症．として知られる「典型的な」脊椎側弯症とかなり似ている。しかしながら、ジストロフィー脊椎側弯症は、脊椎に影響を与える神経線維腫に関連する骨性変化により生じる脊椎側弯症のより重度な形態である。これには、異常に薄い肋骨、椎骨の脆弱、および重度な脊椎彎曲が伴い得る。

ジストロフィー脊椎側弯症は、稀だが、衰弱性神経学的障害（不全対麻痺、対麻痺）に関連し得るＮＦ１の患者において深刻な骨格兆候である。これは、いくつかの椎骨を伴う鋭い角度形成、椎骨回転、椎骨貝状陥凹（ｖｅｒｔｅｂｒａｌ ｓｃａｌｌｏｐｉｎｇ）、楔状椎、および他のＸ線所見を特徴とする（Ｄｕｒｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０００）。ＮＦ１と診断されたわずか１４歳の患者でも、前後脊椎Ｘ線写真は、わずか３つの椎骨にわたって４９度の湾曲を伴う胸腰部ジストロフィー脊椎側弯症を示す（Ｐｅｔｒｙｋ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。

ジストロフィー湾曲は、急速な進行の前兆であり、早期固定を必要とし、これは顕著な罹患率に関連する。術後経過は、ＮＦ１患者において本質的に不十分な骨癒合により複雑になり、脊椎後方固定を受けるＮＦ－１の患者の６０～１００％において偽関節（固定の欠如）をもたらす（Ｄｅｌｕｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。例えば、治療された脊椎側弯症の３人のＮＦ１患者のうち３人が、青年期特発性脊椎側弯症の１／１００人の患者と比較して、脊椎後方固定後に偽関節を有した。

脊椎側弯症に対する治療は常に困難であるが、ジストロフィー脊椎側弯症が存在する場合、特に困難である。理学療法は脊椎の小さな構造的問題を軽減することができるが、決定的な治療は整形外科手術を必要とすることが多い。例えば、手術による骨の骨化を誘導するための方法である関節固定を用いて、罹患した患者の脊椎固定をもたらすことができる。関節固定は、天然の骨移植片（例えば、自家移植片または同種移植片）の使用、または合成骨代用材の患部への導入を伴い得る。合成骨代用材の例としては、ヒドロキシアパタイトまたはリン酸三カルシウムに基づく顆粒、ならびに骨形成タンパク質（ＢＭＰ）が挙げられる。別の選択肢は、骨の成長に有利に働く位置に金属インプラントを骨に取り付けて、それらを一緒に保持することである。関節固定は一般的に、例えば、脊椎、手、足首、足、臀部、または膝の結合部のまたはその付近の骨折の癒合を促進するために使用され、骨折は、事故、損傷、または進行性劣化により引き起こされる。関節固定は、ＮＦ１関連脊椎側弯症および後湾症を治療するためにも用いることができる。最終結果は、典型的には、互いに対する骨の移動が制限されるような、２つの隣接している骨の固定である。

動物およびインビトロ研究に基づいて、ＮＦ１における不十分な骨癒合は、骨形成の低減、骨吸収の増加、および不十分な骨石灰化の組み合わせによるものであると考えられており、主要なプロセスが正常な骨の恒常性および骨の修復に関与する。前臨床研究は、ＮＦ１における骨病理がかなりＲａｓ経路の過剰活性化およびピロリン酸（ＰＰｉ）蓄積によるものであることを示す（ｄｅ ｌａ Ｃｒｏｉｘ Ｎｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ニューロフィブロミンは、活性Ｒａｓの変換、ＧＴＰのその不活性形態への結合、ＧＤＰへの結合を加速する。これはＰＰｉ合成および細胞外輸送を促進する遺伝子の発現の上方制御にもつながり、ＰＰｉ蓄積および石灰化の阻害につながる。ＮＦ１の喪失も、間葉系前駆細胞からの傷害性骨芽細胞分化およびアルカリホスファターゼ発現（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２００６；Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２００５）、ならびに破骨細胞形成および骨吸収の顕著な増加（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００６）にもつながる。

ＮＦ１におけるジストロフィー脊椎側弯症の手術後に確実な関節固定を達成する難しさを考えると、単剤療法は一見適切なまたは効果的な治療戦略ではなかった。骨形成を誘導するための組換え骨形成タンパク質（ＢＭＰ）の使用は、脊椎固定手術において確立されているが、ＮＦ１におけるＢＭＰ治療単独に対する骨細胞前駆細胞の応答は、限られているように思え（ｄｅ ｌａ Ｃｒｏｉｘ Ｎｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４、Ｈｅｅｒｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１２）、この患者集団における臨床的転帰を不十分なものにさせる。

後の研究では、ＢＭＰとビスホスホネートとの組み合わせ使用が脛骨の偽関節を伴うＮＦ１欠損マウス（Ｓｃｈｉｎｄｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８）およびＮＦ１患者（Ｂｉｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０）においてＢＭＰ療法単独よりも優れているように思えることが示された。脊椎後方固定の前臨床モデルにおいて、ｒｈＢＭＰ２およびゾレドロン酸で治療されたＮＦ１欠損マウスも固定において顕著な改善を示したが、ＮＦ１欠損マウスは依然として野生型対照よりも少ない骨を生成した（Ｂｏｂｙｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。他の研究は、これらの薬剤を組み合わせた（Ｐｅｔｒｙｋ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。

しかしながら、今までに試みてきた治療である、骨形成を強化するための骨形成タンパク質（ＢＭＰ）および骨吸収を阻害するためのビスホスホネート（パミドロネートおよびゾレドロン酸）は、石灰化障害である、ＮＦ１の患者において病原経路の第３の主要な構成要素に対処することができなかった。Ｓｅｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（２０１０）および手術経験は、おそらくＰＰｉの局在的な蓄積、ならびにロッドが周囲の軟組織およびさらには硬膜へ変位して深刻な神経学的合併症をもたらす、手術用金具が骨においてその元の位置に残存することの難しさにより、ＮＦ１患者における骨軟化症（石灰化の低減）の証拠を提供する（Ｓｅｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。

ＮＦ１を含む多くの骨格疾患は、１つ以上のタンパク質の機能の喪失から生じる。上述のように、ＮＦ１は、ニューロフィブロミンの喪失を特徴とする。別の骨格疾患の例は、組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰまたは肝臓／骨／腎臓型ＡＬＰ）をコードする遺伝子ＡＬＰＬにおける１つ異常の機能喪失突然変異によって引き起こされる稀な遺伝性疾患である低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）である。骨芽細胞および軟骨細胞におけるアルカリホスファターゼ欠損は、クル病または骨軟化症から子宮内でのほぼ完全な骨石灰化の不在まで、様々な重症度の症状につながる骨格石灰化を損なう。しかしながら、未修飾のアルカリホスファターゼを用いた酵素補充療法（例えば、天然アルカリホスファターゼの注入）は、大部分は成功していない。また別の例は、低身長症を引き起こし、後湾症などの脊椎合併症を伴い得る軟骨無形成症である。

ＮＦ１関連骨症状を含む神経線維腫症、ならびに脊椎側弯症、ジストロフィー脊椎側弯症、後湾症、骨折、脱灰などの他の形態の治療の改善が必要である。

概して、本開示は、任意選択的に外科的介入などの物理的介入と組み合わせて、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ、例えば、配列番号１に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するｓＡＬＰ、例えば、アスホターゼアルファ）の投与による、神経線維腫症１型、特にジストロフィー脊椎側弯症および骨折を含む様々な疾患および状態の治療に関する。一実施形態では、開示される方法は、治療後の安定性、例えば、確実な関節固定、治療方法中に挿入された金具の安定性、治療方法前に患者に存在する金具の安定性の増加、および安定した脊椎側弯症（例えば、湾曲の増加なし）をもたらし得る。

患者における神経線維腫症１型（ＮＦ１）の少なくとも１つの症状を治療する方法が本明細書で提供される。一実施形態では、本方法は、ＮＦ１の患者における少なくとも１つの外科的介入と、外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰ（例えば、配列番号１に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するｓＡＬＰ、例えば、アスホターゼアルファ）を投与することと、を含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ｓＡＬＰは配列番号１の配列を有する。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、（ｉ）患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化、のうちの１つ以上をもたらす。一実施形態では、少なくとも１つの症状が、脊椎湾曲症、後弯症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転または角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／または尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着のうちの１つ以上を含む。

患者におけるジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する方法も本明細書で提供される。一実施形態では、本方法は、ジストロフィー脊椎側弯症の患者に対する少なくとも１つの外科的介入と、外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰ（例えば、配列番号１に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するｓＡＬＰ、例えば、アスホターゼアルファ）を投与することと、を含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ｓＡＬＰは配列番号１の配列を有する。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、（ｉ）患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化、のうちの１つ以上をもたらす。一実施形態では、少なくとも１つの症状は、非ジストロフィー脊椎側弯症と比較してより短いおよび／またはより鋭い角度のある湾曲、骨異常、肋骨の薄化、椎骨の脆弱、椎骨の回転、楔状椎、および椎骨の侵食のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、ジストロフィー脊椎側弯症には、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症が含まれる。

患者において骨癒合を誘導する方法が本明細書でさらに提供される。一実施形態では、本方法は、約６ｍｇ／ｋｇ／週のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰを投与することを含む。一実施形態では、本方法は、約９ｍｇ／ｋｇ／週のｓＡＬＰをもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰを投与することを含む。あるいは、本方法は、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）のｓＡＬＰをもたらす投薬量を投与することを含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、ｓＡＬＰは配列番号１の配列を有する。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、外科的介入と併用される。一実施形態では、ｓＡＬＰの投与は、（ｉ）患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化、のうちの１つ以上をもたらす。

患者における少なくとも１つの骨関連障害を治療する方法が本明細書でさらに提供される。患者は、骨石灰化障害（例えば、ＨＰＰ、ＮＦ１、または頭蓋骨癒合症）を有しない患者であり得る。一実施形態では、本方法は、患者における少なくとも１つの外科的介入を含む。本方法は、外科的介入前、介入中、および／または介入後に、例えば、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約６ｍｇ／ｋｇ／週、約７ｍｇ／ｋｇ／週、約８ｍｇ／ｋｇ／週、または約９ｍｇ／ｋｇ／週）をもたらす投薬量で、患者にｓＡＬＰを投与することを含み得る。ｓＡＬＰの投与は、患者の基準点で、治療前の患者の基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、患者は、治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、基準点の骨塩密度における平均変化を有する。他の実施形態では、患者は、治療前の患者の基準点の骨塩密度と比較して、ｓＡＬＰの投与の８ヶ月後に少なくとも０．０１％である、基準点の骨塩密度における平均変化を有する。少なくとも１つの外科的介入は、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択され得る。金具は、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、およびナットのうちの１つ以上であり得る。

一実施形態では、骨癒合の増加は、関節固定によって結合された２つの骨間の増加であり、別の実施形態では、骨癒合の増加は、骨折により分離された骨の２つの部分間の増加である。一実施形態では、骨癒合の増加は、骨周囲器具類（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）における増加である。一実施形態では、骨癒合の増加は、陰影度の増加である。一実施形態では、陰影度の増加は、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される。

一実施形態では、外科的介入は、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、または器具類の挿入のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、器具類は、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む。一実施形態では、外科的介入は、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、ｓＡＬＰは、外科的介入の約７ヶ月後（例えば、外科的介入の約７～約１２ヶ月後以上）に投与される。

本方法は、１つ以上の骨形成タンパク質（複数可）（ＢＭＰ）を患者に投与することをさらに含み得る。一実施形態では、ＢＭＰは、外科的介入中に投与される。

本方法は、１つ以上のビスホスホネート（複数可）を患者に投与することをさらに含み得る。一実施形態では、ビスホスホネートは、外科的介入後に投与される。一実施形態では、ビスホスホネートは、外科的介入の約３ヶ月後（例えば、外科的介入の約３～１２ヶ月後）に投与される。

一実施形態では、患者は、約１２歳、または約１２歳より上である。一実施形態では、患者は、約１８歳、または約１８歳より上である。一実施形態では、患者は、ｓＡＬＰを以前に投与されていない。

一実施形態では、ｓＡＬＰは、毎日または毎週の投与用に製剤化される。例えば、ｓＡＬＰは、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化され得る。一実施形態では、ｓＡＬＰは、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される。一実施形態では、ｓＡＬＰは、毎日１回の投与用に製剤化され、別の実施形態では、連日または隔日での投与用に製剤化される。一実施形態では、ｓＡＬＰは、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される。

一実施形態では、ｓＡＬＰは、配列番号１のアミノ酸配列を含み、別の実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列からなる。一実施形態では、ｓＡＬＰは、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである。

一実施形態では、ｓＡＬＰは、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される。

一実施形態では、患者は、ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する。忍容性は、例えば、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含み得る。

一実施形態では、ｓＡＬＰは、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される。一実施形態では、少なくとも１つの薬学的に許容される担体は、生理食塩水であり、別の実施形態では、塩化ナトリウム（例えば、１５０ｍＭ塩化ナトリウム）およびリン酸ナトリウム（例えば、２５ｍＭリン酸ナトリウム）を含む。一実施形態では、医薬組成物は、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、もしくは皮内投与、またはそれらの組み合わせ用に製剤化される。

本明細書に記載の特徴のうちの１つ以上を含む方法も本明細書で提供される。

「アスホターゼアルファ」とは、本明細書に開示される方法のために製剤化されたヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ）融合タンパク質を意味する。アスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）は、２つの同一のポリペプチド鎖の可溶性糖タンパク質を含む融合タンパク質であり、各ポリペプチド鎖は、配列番号１のアミノ酸残基１～７２６を含む（例えば、ＷＯ２０１７／１７１８７１および米国特許出願公開第２０１３／０３２３２４４号を参照されたい）。各ポリペプチド鎖の構造は、ｈＴＮＡＬＰの触媒ドメイン、ヒト免疫グロブリンＧ１ Ｆｃドメイン、および骨標的化ドメインとして使用されるデカ－アスパルテートペプチドを含む（構造 ｈＴＮＡＬＰ－Ｆｃ－Ｄ１０）。２つのポリペプチド鎖は、２つのジスルフィド結合によって共有結合される。アスホターゼアルファは、米国、欧州、日本、カナダ、イスラエル、オーストラリア、および韓国を含む多くの国で、商品名ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）で認可されている。

本明細書で使用される場合、「平均」は、データセットの平均（ｍｅａｎ）または中央値を表す数値を指す。データセットの平均は、セットにおける値の合計をその数で割ることによって計算される。データセットの中央値は、奇数リストの中央の値を決定することにより、または偶数リスト中央の２つのデータ値の平均を決定することにより計算される。

本明細書で使用される場合、「骨標的化部分」という用語は、骨標的化部分が、単独で、骨基質に対して約１０^－６Ｍ～約１０^－１５Ｍ（例えば、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、１０^－１３Ｍ、１０^－１４Ｍ、または１０^－１５Ｍ）のインビボ結合親和性を有するように、骨基質に対して十分な親和性を有する長さの、１～５０のアミノ酸残基（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２２、２４、２５、２６、２８、３０、３２、３４、３５、３６、３８、４０、４２、４４、４５、４６、４８、または５０のアミノ酸残基など）のアミノ酸配列を指す。例えば、骨標的化部分は、一連の連続したアスパルテート（Ｄ）および／またはグルタメート（Ｅ）残基を含み得、ｎ＝１～５０、例えば、ｎ＝３～３０、例えば、５～１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０である。

本明細書で使用される場合、「触媒的に適格性のある」という用語は、骨石灰化阻害剤の無機ピロリン酸（ＰＰｉ）を加水分解して、無機リン酸（Ｐｉ）を得、それにより、ＰＰｉの細胞外濃度を減少させるｓＡＬＰを指す。したがって、触媒的に適格性のあるｓＡＬＰは、ＰＰｉの濃度を調節することによって骨の骨格石灰化を改善する。

「細胞外ドメイン」とは、天然タンパク質の任意の機能的細胞外部分、例えば、アルカリホスファターゼを意味する。特に、細胞外ドメインは、シグナルペプチドを欠く。

「Ｆｃ」とは、免疫グロブリンの断片の結晶化可能領域、例えば、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、ＩｇＧ－３、またはＩｇＧ－４（免疫グロブリン重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む）を意味する。Ｆｃは、ＦａｂおよびＦｃ領域を結合するヒンジ領域の任意の部分も含み得る。Ｆｃは、ヒトを含む任意の哺乳動物のものであり得、翻訳後修飾され得る（例えば、グリコシル化により）。非限定的な例では、Ｆｃは、配列番号２０のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ－１の断片の結晶化可能領域であり得る。

「断片」とは、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上を含むポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。断片は、最大ポリペプチドの全長の、例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、４００、５００、６００、７００以上のアミノ酸残基を含み得る。例示的なｓＡＬＰ断片は、ＡＬＰのアミノ酸残基１８～４９８、１８～４９９、１８～５００、１８～５０１、１８～５０２、１８～５０３、１８～５０４、１８～５０５、１８～５０６、１８～５０７、１８～５０８、１８～５０９、１８～５１０、１８～５１１、または１８～５１２（例えば、配列番号２～６）を有し、追加のＣ末端および／またはＮ末端部分を含み得る。そのような断片の生物学的活性は、当該技術分野で既知の標準的なアッセイ、例えば、ｓＡＬＰ断片の薬物動態パラメータを計算するための非コンパートメント分析（ＮＣＡ）により試験される。

「ナイーブ患者」とは、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状を有するか、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を有するか、またはｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を用いた治療を全く受けたことがない骨癒合を必要とする患者を意味する。

「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、交換可能に使用され、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化またはリン酸化）にかかわらず、２つ以上の天然または非天然アミノ酸残基の任意の鎖を指し、本明細書に記載されるように、天然に生じるまたは天然に生じないポリペプチドまたはペプチドの全てまたは一部を構成する。

「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」とは、それぞれ、治療された患者に生理学的許容され、同時に投与される化合物の治療特性を維持する、少なくとも１つの担体または賦形剤を意味する。１つの例示的な薬学的に許容される担体の物質は、生理学的生理食塩水である。例えば、薬学的に許容される担体は、塩化ナトリウム（例えば、１５０ｍＭ塩化ナトリウム）およびリン酸ナトリウム（例えば、２５ｍＭリン酸ナトリウム）を含み得る。他の生理学的に許容される担体およびそれらの製剤は、当業者に既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，２０００，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡに記載されている。

「医薬組成物」とは、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と共に製剤化された、本明細書に記載されるポリペプチドまたは核酸分子を含む組成物を意味する。医薬組成物は、患者における疾患または事象の治療または予防のための治療レジメンの一部として政府の規制機関の認可を得て製造または販売され得る。医薬組成物は、例えば、皮下投与用、静脈内投与用（例えば、粒状塞栓物（ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｅｍｂｏｌｉ）不含の減菌溶液として、および静脈内使用に好適な溶媒系で）、経口投与用（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ゲルキャップ、またはシロップ）、または例えば、単位剤形の、本明細書に記載の任意の他の製剤に製剤化され得る。

本明細書で使用される場合、「生理学的に活性」という用語は、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロリン酸（ＰＰｉ）、およびピリドキサール５’－リン酸（ＰＬＰ）を加水分解して、Ｐｉを得、それにより、ＰＥＡ、ＰＰｉ、およびＰＬＰの細胞外濃度を減少させるｓＡＬＰを指す。

「ｓＡＬＰ」、「可溶性アルカリホスファターゼ」、および「アルカリホスファターゼの細胞外ドメイン」という用語は、交換可能に使用され、可溶性の非膜結合性アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、または可溶性の非膜結合性ＡＬＰのドメインもしくはその生物学的活性断片を指す。ｓＡＬＰは、例えば、Ｃ末端糖脂質アンカー（ＧＰＩシグナル配列、例えば、ヒトＴＮＡＬＰのアミノ酸残基１８～５０２（配列番号２、３、４、５、または６）を含むか、またはそれからなるポリペプチド）を欠くアルカリホスファターゼを含む。特に、ＴＮＡＬＰは、例えば、アスホターゼアルファなどの、配列番号１のアミノ酸残基１～４８５を含むか、もしくはそれからなるポリペプチド、または配列番号１のアミノ酸残基１～４８５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型を含み得る。ｓＡＬＰは、例えば、ヒトＴＮＡＬＰの哺乳類オルソログ、例えば、アカゲザルＴＮＡＬＰ（配列番号７）、ラットＴＮＡＬＰ（配列番号８）、イヌＴＮＡＬＰ（配列番号９）、ブタＴＮＡＬＰ（配列番号１０）、マウスＴＮＡＬＰ（配列番号１１）、ウシＴＮＡＬＰ（配列番号１２～１４）、またはネコＴＮＡＬＰ（配列番号１５）をさらに含む。ｓＡＬＰは、ヒトＰＡＬＰ（例えば、配列番号１６または１７のアミノ酸残基１８～５０２を含むか、またはそれからなるポリペプチド）、：ＧＣＡＬＰ（例えば、配列番号１８のアミノ酸残基１８～５０２を含むか、またはそれからなるポリペプチド）、およびＩＡＬＰ（例えば、配列番号１９のアミノ酸残基１８～５０２を含むか、またはそれからなるポリペプチド）の可溶性の非膜結合形態、ならびにアルカリホスファターゼ活性、例えば、ＰＰｉを加水分解する能力を維持するそれらの追加の変異型および類似体も含む。ｓＡＬＰは、特に、Ｎ末端シグナルペプチド（例えば、配列番号２～６、８、１１～１３、もしくは１５のａａ１～１７、または配列番号７のａａ１～２５）を欠く。

「ｓＡＬＰ融合ポリペプチ」とは、構造Ｚ－ｓＡＬＰ－Ｙ－スペーサー－Ｘ－Ｗｎ－Ｖ、Ｚ－Ｗｎ－Ｘ－スペーサー－Ｙ－ｓＡＬＰ－Ｖ、Ｚ－ｓＡＬＰ－Ｙ－Ｗｎ－Ｘ－スペーサー－Ｖ、およびＺ－Ｗｎ－Ｘ－ｓＡＬＰ－Ｙ－スペーサー－Ｖを有するポリペプチドを意味する。特に、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、Ｚ－ｓＡＬＰ－Ｙ－スペーサー－Ｘ－Ｗｎ－ＶまたはＺ－Ｗｎ－Ｘ－スペーサー－Ｙ－ｓＡＬＰ－Ｖ、例えば、ｈＴＮＡＬＰ－Ｆｃ－Ｄ１０（例えば、アスホターゼアルファ；アミノ酸配列の配列番号１）であり得る。Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｖ、スペーサー、および／またはＷｎのうちの任意の１つは、不在であるか、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列であり得る。例えば、Ｘ、Ｙ、Ｚ、およびＶは、Ｙ位置の２残基リンカー（例えば、ロイシン－リジン）およびＸ位置の２残基リンカー（例えば、アスパラギン酸－イソロイシン）などのジペプチド配列（例えば、ロイシン－リジンまたはアスパラギン酸－イソロイシン）であり得る。スペーサーは、例えば、配列番号２０のアミノ酸配列などの免疫グロブリンのＦｃ領域を含む。Ｗｎは、例えば、一連の連続したアスパルテート（Ｄ）および／またはグルタメート（Ｅ）残基を有する、本明細書に定義される骨標的化部分であり得、ｎ＝１～５０、例えば、ｎ＝３～３０、例えば、５～１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０である。

「シグナルペプチド」とは、ポリペプチドを分泌経路（例えば、細胞外空間）へ指向するポリペプチドのＮ末端における短いペプチド（５～３０のアミノ酸長）を意味する。シグナルペプチドは、典型的には、ポリペプチドの分泌中に切断される。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞内コンパートメントまたは小器官、例えば、ゴルジ体に指向し得る。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞の特定の領域に標的化する既知の機能を有するペプチドに対する相同性、または生物学的活性により特定され得る。当業者は、容易に利用可能なソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用することによりシグナルペプチドを特定することができる。シグナルペプチドは、例えば、配列番号２～６のアミノ酸残基１～１７、または配列番号７のアミノ酸残基１～２５に対して実質的に同一であるものであり得る。

本明細書で使用される場合、ポリペプチドまたは核酸配列が参照配列に対して「少なくともＸ％の配列同一性」を有すると称される場合（「Ｘ」は実数である）、配列が最適にアライメントされるとき、少なくともＸパーセントのアミノ酸残基またはポリペプチドもしくは核酸におけるヌクレオチドが参照配列に対して同一であることを意味する。配列の最適なアライメントは、当該技術分野の技術内である様々な方法、例えば、Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアライメントアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５－７，１９８１）およびＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０）において決定され得る。これらおよび他のアライメントアルゴリズムは、ＧｅｎｅＭａｔｃｈｅｒ Ｐｌｕｓ（Ｓｃｈｗａｒｚ ａｎｄ Ｄａｙｈｏｆｆ，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，Ｅｄ ｐｐ ３５３－３５８，１９７９）、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＢＬＡＳＴ－Ｐ、ＢＬＡＳＴ－Ｎ、ＢＬＡＳＴ－Ｘ、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２、ＣＬＵＳＴＡＬ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）に組み込まれている「Ｂｅｓｔ Ｆｉｔ」（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，４８２－４８９，１９８１）、またはアライメント用の他のソフトウェア／ハードウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して利用可能である。加えて、当業者であれば、比較される配列の長さにわたって最適なアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するのに適切なパラメータを決定することができる。

「患者」または「対象」という用語は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコを含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。

本明細書で使用される場合、「非経口投与」、「非経口的に投与される」、および他の文法的に同等の句は、通常注射による、腸内および局所投与以外の投与モードを指し、限定されないが、皮下、皮内、静脈内、鼻腔内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内、ならびに胸骨内注射および注入を含む。

「治療有効量」とは、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を実質的に改善する、治療する、予防する、遅延する、抑制する、もしくは停止させるか、または骨癒合を誘導するのに十分である、本明細書に記載のポリペプチドまたは核酸分子の量を意味する。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、治療される障害および状態の重症度、患者の体重および全身状態に依存し、そのような要因を考慮して、当業者により決定され得る。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、単回用量、または一定期間にわたって投与される複数回用量で患者に投与され得る。

「治療すること」、「治療する」、または「治療」とは、例えば、医薬組成物を投与することにより、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、もしくはジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治癒する、寛解させる、安定させる、その可能性を低減する、もしくは予防する目的での患者の医療管理、および／または神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状もしくはジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を呈する、もしくは有する可能性がある患者の管理を意味する。この用語は、例えば、医薬組成物を投与することにより、骨癒合を必要とする状態を治癒する、寛解させる、もしくは安定させる目的での患者の医療管理、および／または骨癒合を必要とする状態を呈する、もしくは有する可能性がある患者の管理も意味する。この用語は、積極的な治療、つまり、疾患、病的状態、障害、または事象の改善に具体的に指向された、またはその治癒に関連する治療を含み、また原因治療、つまり、関連疾患、病的状態、障害、または事象の原因の排除に指向された治療も含む。加えて、この用語は、緩和治療、つまり、疾患、病的状態、障害、または事象の治癒ではなく、少なくとも１つの症状の軽減または改善のために設計された治療；対症療法、つまり、関連疾患、病的状態、障害、または事象の体質症状に指向された治療；予防的治療、つまり、例えば、まだ病気ではないが、特定の疾患、病的状態、障害、または事象にかかりやすい、またはさもなければそのリスクにある患者において、関連疾患、病的状態、障害、または事象の発症を最小限にする、または部分的もしくは完全に阻害するように指向された治療；ならびに支持治療、つまり、関連疾患、病的状態、障害、または事象の改善に指向された別の具体的な療法を補うために用いられる治療を含む。

「好ましい」および「好ましくは」という用語は、ある特定の状況下である特定の利益を提供し得る本開示の実施形態を指す。しかしながら、同じまたは他の状況下で、他の実施形態も好ましい場合がある。さらに、１つ以上の好ましい実施形態の記述は、他の実施形態が有用ではないことを暗示するものではなく、本開示の範囲から他の実施形態を除外することを意図していない。

「含む」という用語およびその変形は、これらの用語が説明および特許請求の範囲に現れる場合、意味を限定しない。

特に指定のない限り、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ（少なくとも１つ）」は、交換可能に使用され、１つまたは２つ以上を意味する。

また本明細書において、エンドポイントによる数値範囲の記述は、その範囲内に包含される全ての数値を含む（例えば、１～５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８、４、５などを含む）。

個別のステップを含む本明細書に開示される任意の方法に関して、ステップは任意の実現可能な順序で行われ得る。また、必要に応じて、２つ以上のステップの任意の組み合わせが同時に行われてもよい。

本開示の上記の概要は、開示された各実施形態または本開示の全ての実施を説明することを意図していない。以下の説明は、より具体的に例示的な実施形態を実証する。本出願を通していくつかの箇所に、例のリストによりガイダンスが提供され得、この例は、様々な組み合わせで使用することができる。各場合において、記述のリストは代表的な群としてのみ機能し、排他的なリストとして解釈されるべきではない。

４７歳の患者の重度のジストロフィー腰部脊椎側弯症を示すＸ線写真である。矢印は、Ｌ３で尖部を有する胸腰椎の著しく左凸状のジストロフィー脊椎側弯症を指し示す。このＸ線写真は、短い鋭角、硬膜拡張症、椎体の貝状陥凹、楔状椎、および狭い椎弓根のため、ジストロフィー湾曲を示す。 図１で特定された同じ４７歳の患者の腰椎のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンである。ＣＴスキャンは、腰部全体を通して重度の硬膜拡張症を示すが、矢印によって示されるＬ２およびＬ３で最も顕著であり、際立った後方椎体貝状陥凹がある。 ４７歳の患者の４回目の脊椎手術の６ヶ月前に行ったＣＴスキャンである。図３Ａは、矢印によって示される左後腸骨棘ネジの周囲の透過性（ｌｕｃｅｎｃｙ）を示す。 図３Ｂは、矢印によって示される左Ｌ４椎弓根ネジの下の左側の垂直な連結ロッドの骨折を示す。 両側腸骨ネジによるＴ１１から仙骨までの脊椎固定器具類、および顕著に改善したジストロフィー脊椎側弯症変形．を示す術後の単純フィルムのＸ線写真である。 脊椎手術の２日後に行われた術後のＣＴスキャンである。図５Ａは、矢印によって示される左後腸骨ネジの周囲の安定した透過性を示す。 図５Ｂは、矢印によって示される左後腸骨ネジの先端の骨の外皮質の骨折を示す。 脊椎手術の１３ヶ月後、およびアスホターゼアルファを用いた治療の６ヶ月後に行われたＣＴスキャンである。ＣＴスキャンは、緩みの証拠がない（上の矢印）ネジの周囲の周辺の透過性、および左後腸骨ネジ（下の矢印）の先端での治癒した骨折を示す。

我々は、アスホターゼアルファ（配列番号１、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）のいくつかの新たなおよび予想外の使い方を発見した。骨形成タンパク質（ＢＭＰ）およびビスホスホネート療法を組み合わせたとき、アスホターゼアルファは、ＢＭＰ療法のみと組み合わせた手術が以前失敗した、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症の患者の脊椎手術後に確実な関節固定をもたらした。患者は組織非特異的アルカリホスファターゼが不足していなかったが、組織非特異的アルカリホスファターゼのアスホターゼアルファの投与が確実な関節固定をもたらしたため、この結果は予想外であった。したがって、アスホターゼアルファが外科的介入と組み合わされた場合、例えば、術後の骨癒合および／または石灰化の改善をもたらす相乗効果があった。一実施形態では、アスホターゼアルファは、神経線維腫症１型の１つ以上の症状を有する患者を治療するために使用され得る。一実施形態では、アスホターゼアルファは、ジストロフィー脊椎側弯症の患者を治療するために使用され得る。一実施形態では、アスホターゼアルファは、骨癒合を促進するために使用され得る。アスホターゼアルファの使用は、外科的介入などの物理的介入と併用して生じ得る。任意選択的に、アスホターゼアルファの使用は、１つ以上の骨形成タンパク質、１つ以上のビスホスホネート、またはそれらの組み合わせの投与と併用して生じる。

治療方法
本方法のいくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、例えば、脊椎湾曲症、後湾症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転もしくは角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／もしくは尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着を治療するのに治療的に有効な量で患者に投与される。

本方法のいくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチ変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状、例えば、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症、例えば、非ジストロフィー脊椎側弯症で見られるよりも短く、より鋭い角度のある湾曲、肋骨の薄化を含む骨異常、椎骨の脆弱、椎骨の顕著な回転、楔状椎、および髄液による椎骨の侵食を治療するために治療的に有効な量で患者に投与される。

本方法の一実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチ変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で患者に投与される。骨癒合を誘導する例としては、骨折の治療、および２つの関節の外科的固定である関節固定が挙げられる。例えば、本方法は、脊椎固定を促進するのに有用である。脊椎固定手術は、骨と骨との摩擦を排除し、かつ／または疼痛および他の症状を引き起こす神経圧迫を軽減するために使用され得る。外科的骨固定は、例えば、指、足首、および足にも使用され得る。

本方法のいくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、整形外科手術を受けた患者に投与される。手術には、少なくとも１つのインプラントまたは金具を手術中に挿入することを含み得る。患者は、神経線維腫症１型（ＮＦ１）、ＨＰＰ、または頭蓋骨癒合症を有しない患者であり得る。患者は、脊椎湾曲症、後湾症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転もしくは角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／もしくは尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着などの、疾患または障害を有し得るか、または１つ以上の骨関連状態を有し得る。いくつかの実施形態では、患者は、機能しない骨に挿入された金具を有する。患者は、インプラントの固定が失敗した１つ以上の整形外科手術（例えば、再置換手術）を受けている場合がある。例えば、患者は、頭蓋顔面インプラント、歯科インプラント、脊椎インプラント、臀部、膝、肩、脊椎、肘、もしくは手首の関節置換部品、または釘、ネジ、ピン、ナット、ロッド、およびプレートなどの骨固定材を有し得るか、またはそれらを必要としている可能性がある。患者は、再置換手術を必要としている可能性もあり、頭蓋顔面インプラント、歯科インプラント、脊椎インプラント、臀部、膝、肩、脊椎、肘、もしくは手首の関節置換部品、または釘、ネジ、ピン、ナット、ロッド、およびプレートなどの骨固定材が機能していない。

インプラントまたは金具を含み得る整形外科手術には、例えば、手または上肢、肩、肘、関節（例えば、全関節再建、例えば、関節形成）、足、足首、脊椎の手術、筋骨格腫瘍学関連手術、スポーツ損傷関連手術、外傷などが含まれる。金具またはインプラントの使用を含み得る他の一般的な整形外科手術には、例えば、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨（骨）／尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復が含まれる。前述の整形外科処置のいずれかを受けた患者は、骨の修復を改善するため、またはインプラントもしくは金具の固定を改善するために、本明細書に記載の方法によりｓＡＬＰで治療され得る。

ｓＡＬＰは、手術または疾患によって生じた骨外傷または骨欠損の修復のために使用され得る。損傷したまたは分裂した骨組織は、インプラントまたは金具を使用して再構築され、欠損を修復するために、手術前、手術中、または手術後にｓＡＬＰの投与が補われ得る。ｓＡＬＰ投与と組み合わせて、インプラントまたは金具は、損傷部位の骨断片の残りの小片に必要な機械的支持をさらに提供し、同時に、隣接組織からの血液および骨形成細胞が治癒の改善のためにインプラントに浸透することを可能にする。例えば、本明細書に記載の方法は、骨性眼窩底および顎骨の再構築において、脳神経外科手術および外傷後の頭蓋冠骨欠損を修復するために使用され得る。本明細書に記載の方法は、整形外科および脊椎手術、ならびに骨の分裂した小片の固定および美容整形手術においても使用され得る。疾患により脆弱化した長骨が存在する場合、または皮質骨部が失われた場合、インプラントを使用して長骨を補強し、皮質骨が失われた開口部を被覆することができる。

本明細書に記載の方法は、質が低下した骨（例えば、骨粗鬆症の骨）でまたは再置換手術（例えば、それらは以前に挿入されたインプラントを置換するために使用され得る）においても使用することができる。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、金属プレート、ピン、ロッド、もしくはワイヤなどの機械的な安定デバイスと併用して、または個別に、のいずれかで、例えば骨、例えば骨折した（折れた）骨を内部で安定させる、および／または結合するための骨接合において使用され得る。

本明細書に記載の方法は、圧迫を必要とする骨折を有する患者における骨欠損を治療するためにも使用され得る。特に、ｓＡＬＰは、患者に圧迫固定を提供するために使用され得るインプラントと併用して投与することができる。

本明細書に記載の方法により治療することができる骨には、例えば、関節下骨折、脊椎もしくは椎骨の欠損、または橈骨、尺骨、腓骨、鎖骨、上腕骨、骨盤、大腿骨、膝蓋骨、脛骨、距骨、踵骨、舟状骨、楔状骨（ｃｕｎｅｉｆｏｒｍｓ）、中足骨、中手骨、指骨、肩甲骨、足首、上顎骨、または下顎骨の欠損が含まれる。インプラントまたは金具は、骨欠損に近接して位置付けられ得る（例えば、骨の骨内空間と接するようにインプラントを位置付ける）。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、インプラントまたは金具の施工前、施工中、または施工後のいつでも投与することができる。ｓＡＬＰは、インプラントまたは金具上にコーティングされてもよい。

本発明の治療方法には、上下顎または頭蓋顔面固定、段階的な再構築で骨欠損を修復するための一時的な固定、関節窩もしくは上腕骨固定、膝蓋骨固定、または脊椎固定も含まれる。例えば、脊椎手術において、インプラントは、椎弓根内に設置されるか、体間デバイスを固定するために使用されるか、脊椎固定プレートおよびスペーサー置換を固定するために使用されるか、骨粗鬆症の椎骨において使用されるか、または隣接する椎骨の棘突起に近接して位置付けられ得る。本方法には、骨欠損に近接してロッド、ピン、釘、またはメッシュもしくは骨プレートを挿入することも含まれる。ｓＡＬＰは、手術前、手術中、または手術後のいつでも投与することができる。ｓＡＬＰは、任意のインプラントまたは金具上にコーティングされてもよい。

本明細書に記載の方法を使用して治療することができる特定の骨欠損には、例えば、骨の空隙、隙間、陥凹部、または他の断絶などの任意の骨の欠損領域が含まれる。骨欠損は、例えば、疾患または外傷によるものであり得る。本明細書に記載のインプラントまたは金具は、例えば、歯周欠損の修復、頭蓋顔面または顎顔面の手術または再構築、美容整形手術、手の手術、関節の再構築、骨折修復、整形外科手技、および脊椎固定において適用され得る。インプラントは、ワッシャ（例えば、本発明のワッシャ）、金属プレート、ピン、ロッド、もしくはワイヤなどの他の機械的デバイスと併用して、または個別に、のいずれかで、例えば骨、例えば骨折した（折れた）骨を内部で安定させる、および／または結合するための骨接合においても使用され得る。例えば、インプラントは、骨欠損および骨折の圧迫固定を提供するためにワッシャと共に使用され得る。特に、本方法は、大きい骨の欠損または骨折の治療に有用である。骨折の非限定的な例としては、例えば、安定骨折、横骨折、斜骨折、らせん骨折、粉砕骨折、ならびに開放および変位骨折が挙げられる。骨折固定を必要とし得る例示的な大きい骨としては、例えば、大腿骨、脛骨、腓骨、上腕骨、尺骨、橈骨、肋骨、寛骨（寛骨（ｈｉｐ ｂｏｎｅ））、および胸骨が挙げられる。これらの手術のそれぞれにおいて、ｓＡＬＰは、手術前、手術中、または手術後のいつでも投与することができる。

外科的介入
開示される方法のいずれかにおけるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、例えば、外科的介入などの物理的介入と併用して生じ得る。外科的介入は、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、または骨折した骨の固定に使用され得る。外科的介入は、骨固定役立つ器具類（例えば、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージなどの金具の移植）を含み得る。外科的介入には、開首または開背手術（ｏｐｅｎ ｎｅｃｋ ｏｒ ｏｐｅｎ ｂａｃｋ ｓｕｒｇｅｒｙ）、低侵襲手術、またはそれらの組み合わせなどの従来の観血的手術が含まれ得る。

骨形成タンパク質
開示される方法のいずれかにおけるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）の投与と併用して生じ得る。骨形成および骨癒合（例えば、関節固定または骨折の治療）を誘導するためのＢＭＰの使用が既知である。一実施形態では、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状の治療、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状の治療、または骨癒合の誘導は、ＢＭＰの投与と併用して生じる。ＢＭＰは、患部、例えば、骨折に直接、または皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、もしくは皮内投与により投与することができる。一実施形態では、ＢＭＰは、物理的介入、例えば、外科的介入中に投与される。ＢＭＰは、骨形成を誘導するのに有効な任意のＢＭＰであり得る。有用なＢＭＰの例は、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－４、およびＢＭＰ－７である。ＢＭＰの遺伝子配列、タンパク質配列、ならびに組換えおよび天然に由来するＢＭＰを産生するための方法が当該技術分野で既知である。ＢＭＰは、凍結乾燥した粉砕した海綿状の同種移植片骨と混合したコラーゲン吸収性海綿上に投与され得る。

ビスホスホネート
開示される方法のいずれかにおけるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、少なくとも１つのビスホスホネーの投与と併用して生じ得る。一実施形態では、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状の治療、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状の治療、または骨癒合の誘導は、少なくとも１つのビスホスホネートの投与と併用して生じる。骨密度の減少を防止するための少なくとも１つのビスホスホネートの使用は、当該技術分野で既知であり、通例である。ビスホスホネートの例としては、ゾレドロン酸およびパミドロネートが挙げられるが、これらに限定されない。

一実施形態では、少なくとも１つのビスホスホネートは、物理的介入、例えば、外科的介入中または介入後に投与される。例えば、少なくとも１つのビスホスホネートは、単回または複数回投薬量レジメンのいずれかにおいて提供され得る。１回以上の用量が、例えば、毎時間、１時間おき、毎日、隔日、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年投与され得る。あるいは、用量は、例えば、１日１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、または１２回投与され得る。一実施形態では、投与レジメンは単回投与である。投与レジメンの継続期間は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日間（複数可）、週間（複数可）、または月間（複数可）であり得る。一実施形態では、投与は、物理的介入、例えば、外科的介入の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に始まり得る。少なくとも１つのビスホスホネートは、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、９００、もしくは１，０００ｍｇ／ｋｇの投薬量で送達され得る。少なくとも１つのビスホスホネートは、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、または皮内投与により投与され得る。一実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化される。投薬量の量、頻度、および継続期間は、神経線維腫症１型、ジストロフィー脊椎側弯症の症状、骨癒合／石灰化の必要性、および患者からの異なるパラメータなどの患者によって提示される従来の要因により、臨床医によって適応される。

治療有効性の評価
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰ、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を使用した治療の有効性を評価するのに有用な例示的な測定基準には、（１）骨癒合、（２）骨石灰化、（３）骨塩密度、ならびに（４）血漿ＰＰｉおよびＰＬＰ濃度が含まれる。本方法は、治療有効性を評価するために、単独でまたは組み合わせて、記載の測定基準（例えば、骨癒合、石灰化、骨塩密度、または血漿ＰＰｉおよびＰＬＰ濃度）のうちの１つ以上を使用することをさらに含み得、本明細書に記載される改善は、ｓＡＬＰが治療される状態に有効な治療であることを示す。加えて、本方法は、ｓＡＬＰの有効量を決定して、それを必要とする患者に投与するために、ｓＡＬＰ（例えば、配列番号１、例えば、アスホターゼアルファ）投与の投薬量および／または頻度を変更することをさらに含み得る。

骨癒合および石灰化
場合によっては、本開示によるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、治療後、患者の骨癒合を増加させる。骨癒合の増加は、新しい骨をもたらし、２つ以上の骨の融合（例えば、２つの通常は分離している骨の固定、または骨折により分離された骨の２つの部分の融合）をもたらす石灰化の増加、または器具類付近の骨癒合の増加を含む。骨癒合および石灰化の増加を特定するための方法は、通例であり、Ｘ線撮影およびコンピュータ断層撮影（ＣＴ）などの非侵襲技法を含む。典型的には、患者の関連領域の画像は、治療方法の前および治療方法後の１つ以上の時点で撮影され、画像が比較される。骨癒合および／または石灰化の増加は、陰影度の増加として特定される。したがって、良好な関節固定は、固定を標的とする２つの骨間の治療後の陰影度の増加として特定され得る。骨中の金具、例えば、ネジの緩みの低減は、器具類を囲む、例えば、固定する骨の陰影度の増加として特定され得る。治療前の画像は、治療方法が始まる前の任意の時間に撮影され得、治療が開始される１、２、３、４、５、または６日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）前であるように調整され得る。治療前の画像は、治療が開始された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に撮影され得る。患者における骨癒合および／または石灰化の増加は、治療期間の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に検出可能となり得る。患者における骨癒合および／または石灰化の増加は、場合によっては、治療期間後の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）にわたって維持され得る。参照骨は、１つ以上の特定の骨であり得る。一実施形態では、基準点は、開示の方法による、固定される１つ以上の特定の骨（例えば、脛骨、橈骨、尺骨、および脊椎の骨、例えば椎骨、例えば、頚椎Ｃ１～Ｃ７、胸椎Ｔ１～Ｔ１２、腰椎Ｌ１～Ｌ５、仙骨Ｓ１～Ｓ５、および尾骨）である。一実施形態では、基準点は、開示の方法によって治療される骨折がある特定の骨である。一実施形態では、基準点は、器具類を囲む骨である。

骨塩密度（ＢＭＤ）
場合によっては、本開示によるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、治療後、患者のＢＭＤの変化を限定する。ＢＭＤを測定する方法は、既知であり、例えば、骨生検、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡまたはＤＥＸＡ）、末梢骨定量的ＣＴ（ｐＱＣＴ）、高解像度ｐＱＣＴ（ＨＲ－ｐＱＣＴ）、および定量的超音波（ＱＵＳ）を含む。測定は、ＣＴハウンスフィールド測定を含む任意の方法によるものであってよく、結果と規範的データベースまたは対照患者との比較に使用され得る。ＢＭＤは、典型的には、ＺスコアまたはＴスコアとして報告される。治療前のＢＭＤ値は、治療方法が始まる前の任意の時間に測定され得、治療が開始される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）前であるように調整され得る。治療前のＢＭＤ値は、治療が開始された１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）後に測定影され得る。一実施形態では、治療後の基準点のＢＭＤ値は、０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、１％以下減少する。一実施形態では、治療後の基準点のＢＭＤ値は、少なくとも０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、または１％増加する。一実施形態では、治療後の基準点のＢＭＤ値の変化は未変化であるか、または変化が検出不可能である。患者のＢＭＤの変化は、場合によっては、治療期間後、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２日間（複数可）、週間（複数可）、または月間（複数可）以上維持され得る。基準点は、例えば、１つ以上の特定の骨であり得る。一実施形態では、基準点は、開示の方法によって治療される１つ以上の特定の骨（複数可）である。

ＰＰｉおよびＰＬＰ濃度
ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）が本開示により投与される患者からの血漿試料における平均ＰＰｉ濃度減少は、ｓＡＬＰの投与前の患者からの血漿試料のＰＰｉ濃度に対して、約２５％以上（例えば、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、または６０％超）であり得る。患者からの血漿試料における平均ＰＰｉ濃度減少は、場合によっては、少なくとも１週間、６ヶ月間、または最大１年間以上の治療期間の間維持され得る。典型的には、減少は、アスホターゼアルファでの治療期間の継続期間にわたって維持される。

ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）が投与される患者からの血漿試料における平均ＰＬＰ濃度減少は、ｓＡＬＰの投与前の患者からの血漿試料のＰＬＰ濃度に対して、約５０％以上（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９５％超）であり得る。患者からの血漿試料における平均ＰＬＰ濃度減少は、場合によっては、少なくとも１週間および最大１年間以上の治療期間の間維持され得る。典型的には、減少は、アスホターゼアルファでの治療期間の継続期間にわたって維持される。

アルカリホスファターゼ
アスホターゼアルファは、ＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ、配列番号１）融合ポリペプチドである。特に、アスホターゼアルファ（配列番号１）は、効率的に、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状を治療するため、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療するため、または骨癒合を誘導するため、およびそれらに関連する身体障害に使用され得る。

本明細書に記載の結果を考えると、治療方法は、特定のアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）またはＡＬＰをコードする核酸配列の投与に限定されない。アルカリホスファターゼは、リン酸部分の切断（例えば、ピロリン酸の加水分解、ＰＰｉ）を触媒する酵素群を包含する。４つの既知の哺乳類アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）アイソザイムが存在する：組織非特異的アルカリホスファターゼ（ＴＮＡＬＰ、以下にさらに説明される）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ０５１８７，ＮＰ＿１１２６０３およびＮＰ＿００１６２３）、胚細胞アルカリホスファターゼ（ＧＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ１０６９６、および腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＬＰ）（例えば、受入番号Ｐ０９９２３およびＮＰ＿００１６２２）。本明細書に論じられる例示的なＡＬＰに加えて、ＡＬＰの同一または同様の触媒部位構造および／または酵素的活性を有するあらゆるポリペプチド（例えば、本明細書で定義されるｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）が本明細書に開示される方法において使用され得る。ｓＡＬＰを含む骨送達コンジュゲートは、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１０３２６３号および第ＷＯ２００８／１３８１３１号にさらに記載されている。

本明細書に記載の方法により使用され得るＴＮＡＬＰには、例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿０００４６９、ＡＡＩ１０９１０、ＡＡＨ９０８６１、ＡＡＨ６６１１６、ＡＡＨ２１２８９、およびＡＡＩ２６１６６）、アカゲザルＴＮＡＬＰ（受入番号ＸＰ＿０１１０９７１７）、ラットＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿０３７１９１）、イヌＴＮＡＬＰ（受入番号ＡＡＦ６４５１６）、ブタＴＮＡＬＰ（受入番号ＡＡＮ６４２７３）、マウス（受入番号ＮＰ＿０３１４５７）、ウシＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿７８９８２８、ＮＰ＿７７６４１２、ＡＡＭ ８２０９、およびＡＡＣ３３８５８）、およびネコＴＮＡＬＰ（受入番号ＮＰ＿００１０３６０２８）が含まれる。特に、ＴＮＡＬＰは、本明細書に開示される方法において使用される組換えヒトＴＮＡＬＰ（例えば、配列番号１、アスホターゼアルファ、米国特許第７，７６３，７１２号および第７，９６０，５２９号を参照されたい）であり得る。ＴＮＡＬＰはまた、上記のＴＮＡＬＰのポリペプチドまたは核酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を呈するものであり得る。

可溶性アルカリホスファターゼ
本明細書に記載される方法において使用され得るＡＬＰには、本明細書に記載のアルカリホスファターゼのいずれかの可溶性（例えば、細胞外または非膜結合）形態が含まれる。ｓＡＬＰは、例えば、ヒト組織非特異的アルカリホスファターゼ（ヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ））の可溶性形態であり得る。本方法は、特定のｓＡＬＰに限定されず、例えば、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）、無機ピロリン酸（ＰＰｉ）、およびピリドキサール５’－リン酸（ＰＬＰ）に対して生理学的に活性な任意のｓＡＬＰを含み得る。特に、ｓＡＬＰは、骨の骨格石灰化を改善するのに触媒的に適格性のあるものである。本方法は、本明細書に記載の方法において使用され得る、本明細書に記載のｓＡＬＰをコードする核酸をさらに含む。

ＴＮＡＬＰは、Ｃ末端において糖脂質部分によって固定される膜結合タンパク質（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ，Ｐ０５１８６）である。この糖脂質アンカー（ＧＰＩ）は、一時的な膜アンカーおよびＧＰＩ付加のシグナルの両方として機能する、疎水性Ｃ末端の除去の後に翻訳後付加される。ＧＰＩアンカーは細胞膜に位置するが、ＴＮＡＬＰの残りの部分は細胞外に位置する。特に、ＴＮＡＬＰ（例えば、ヒトＴＮＡＬＰ（ｈＴＮＡＬＰ））は、疎水性Ｃ末端配列の第１のアミノ酸（アラニン）を停止コドンに置き換えるように操作され、それにより、ＴＮＡＬＰの天然の固定された形態の全てのアミノ酸残基を含み、ＧＰＩ膜アンカーを欠く操作されたｈＴＮＡＬＰを産生することができる。当業者は、ＧＰＩ膜アンカーの位置が異なるＡＬＰにおいて異なり、例えば、ポリペプチドのＣ末端上に最後の１０、１２、１４、１６、１８、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４５、５０以上のアミノ酸残基を含み得ることを理解する。組換えｓＴＮＡＬＰは、例えば、アミノ酸１～５０２（分泌された場合、１８～５０２）、アミノ酸１～５０１（分泌された場合、１８～５０１）、アミノ酸１～５０４（分泌された場合、１８～５０４）、アミノ酸１～５０５（分泌された場合、１８～５０５）、またはアミノ酸１～５０２を含み得る。したがって、天然ＡＬＰのＣ末端は、ＡＬＰ活性に影響を与えることなく、ある特定のアミノ酸によって切り詰められ得る。

Ｃ末端ＧＰＩアンカーに加えて、ＴＮＡＬＰは、Ｎ末端シグナルペプチド配列も有する。Ｎ末端シグナルペプチドは、合成されたとき、合成されたタンパク質上に存在するが、ＥＲに移行された後、ＴＮＡＬＰから切断される。ｓＡＬＰは、その分泌型（すなわち、Ｎ末端シグナルを欠く）およびその非分泌型（すなわち、Ｎ末端シグナルを有する）の両方を含む。当業者は、Ｎ末端シグナルペプチドの位置が異なるアルカリホスファターゼにおいて異なり、ポリペプチドのＮ末端上に最初の５、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２７、３０以上のアミノ酸残基を含み得ることを理解する。当業者は、例えば、Ｂｅｎｄｔｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（４）：７８３－７９５，２００４）に記載されるような、およびｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／のウェブで利用可能な適切なコンピュータアルゴリズムにより、シグナル配列切断部位の位置を予測することができる。

本方法は、ＡＬＰアイソザイムの細胞外ドメインに由来するｓＡＬＰコンセンサス配列（例えば、ＴＮＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＣＡＬＰ、ＩＡＬＰなど）を使用して行うこともできる。したがって、上で論じられるｓＴＮＡＬＰと同様に、本開示は、他の可溶性ヒトＡＬＰアイソザイムも提供する、すなわち、ペプチドシグナルを含まず、好ましくは、ＡＬＰの細胞外ドメインを含む。ｓＡＬＰは、ヒトＡＬＰアイソザイムおよび哺乳類ＴＮＡＬＰオルソログ（ヒト、マウス、ラット、ウシ、ネコ、およびイヌ）のＡＬＰ細胞外ドメインに由来するコンセンサス配列、または哺乳類ＴＮＡＬＰオルソログ（ヒト、マウス、ラット、ウシ、ネコ、およびイヌ）のみのＡＬＰ細胞外ドメインに由来するコンセンサスを満たすポリペプチ配列も含む。ｓＡＬＰは、これらのＴＮＡＬＰオルソログまたはヒトＡＬＰアイソザイムの様々な組み合わせに由来する同様のコンセンサス配列を満たすものも含む。そのようなコンセンサス配列は、例えば、ＷＯ２００８／１３８１３１において得られる。

本方法のｓＡＬＰは、上述のｓＡＬＰの野生型配列を含むだけでなく、これらのアルカリホスファターゼ（例えば、配列番号１～１９、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）に対して少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有する任意のポリペプチドも含み得る。ＡＬＰ配列に導入することができる突然変異の例は、米国公開第２０１３／０３２３２４４号に記載されている。ｓＡＬＰは、任意選択的に、任意の適切な１つ以上のアミノ酸残基においてグリコシル化され得る。加えて、ｓＡＬＰは、本明細書に記載のｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）のいずれかに対して少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有し得る。ｓＡＬＰは、本明細書に記載のｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）のいずれかに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の付加、欠失、または置換を有し得る。

ｓＡＬＰ融合ポリペプチド
本明細書に記載のｓＡＬＰのいずれか（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）、リンカー、スペーサー（例えば、Ｆｃ領域）、骨標的化部分は、構造Ｚ－ｓＡＬＰ－Ｙ－スペーサー－Ｘ－Ｗｎ－Ｖ、Ｚ－Ｗｎ－Ｘ－スペーサー－Ｙ－ｓＡＬＰ－Ｖ、Ｚ－ｓＡＬＰ－Ｙ－Ｗｎ－Ｘ－スペーサー－Ｖ、およびＺ－Ｗｎ－Ｘ－ｓＡＬＰ－Ｙ－スペーサー－Ｖを含む融合ポリペプチドにおいて組み合わされ得る。特に、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドの構造は、Ｚ－ｓＡＬＰ－Ｙ－スペーサー－Ｘ－Ｗｎ－ＶまたはＺ－Ｗｎ－Ｘ－スペーサー－Ｙ－ｓＡＬＰ－Ｖであり得る。ｓＡＬＰ融合ポリペプチドのｓＡＬＰは、本明細書に記載されるように、完全長ＡＬＰまたはＡＬＰの機能断片、例えば、ＡＬＰの可溶性細胞外ドメイン（例えば、ＴＮＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＣＡＬＰ、およびＩＡＬＰ）であり得る。

Ｘ、Ｙ、Ｚ、およびＶ、ならびに／またはスペーサーのうちの任意の１つは、不在であるか、または少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸配列を含むリンカー領域であり得る。例えば、Ｘ、Ｙ、Ｚ、およびＶは、Ｙ位置の２残基リンカー（例えば、ロイシン－リジン）またはＸ位置の２残基リンカー（例えば、アスパラギン酸－イソロイシン）などのジペプチド配列（例えば、ロイシン－リジンまたはアスパラギン酸－イソロイシン）であり得る。例えば、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドは、構造ｈＴＮＡＬＰ－Ｆｃ－Ｄ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含むｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を有し得る。

リンカー領域は、ｓＡＬＰが生物学的活性を維持することを可能にする、例えば、立体障害のない任意の配列および長さのものであり得る。例示的なリンカーの長さは、１～２００のアミノ酸残基、例えば、１～５、６～１０、１１～１５、１６～２０、２１～２５、２６～３０、３１～３５、３６～４０、４１～４５、４６～５０、５１～５５、５６～６０、６１～６５、６６～７０、７１～７５、７６～８０、８１～８５、８６～９０、９１～９５、９６～１００、１０１～１１０、１１１～１２０、１２１～１３０、１３１～１４０、１４１～１５０、１５１～１６０、１６１～１７０、１７１～１８０、１８１～１９０、または１９１～２００のアミノ酸残基である。例えば、リンカーは、可動性部分、例えば、顕著に固定された二次または三次構造を含まない領域を含むか、またはそれからなる。例示的な可動性リンカーは、例えば、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはさらには１００％のグリシン残基を含む、グリシン豊富リンカーである。リンカーは、例えば、セリン残基も含み得る。場合によっては、リンカーのアミノ酸配列は、グリシンおよびセリン残基のみからなる。リンカーは、任意選択的に、任意の適切な１つ以上のアミノ酸残基においてグリコシル化され得る。加えて、本明細書に記載されるリンカーは、共有結合または非共有結合された任意の他の配列または部分を含み得る。リンカーはまた、不在であってもよく、スペーサー（例えば、Ｆｃ領域）およびｓＡＬＰが介在残基なしで一緒に直接融合される。

有用なスペーサーは、Ｆｃ領域を含むポリペプチドを含むが、これに限定されない。例えば、ｓＡＬＰは、Ｎ末端またはＣ末端ドメインに免疫グロブリンのＦｃ領域を含む融合ポリペプチドであり得る。免疫グロブリン分子は、当該技術分野で周知の構造を有する。これは、鎖間ジスルフィド結合によって結合された２つの軽鎖（各約２３ｋＤ）および２つの重鎖（各約５０～７０ｋＤ）を含む。免疫グロブリンは、タンパク質分解により（例えば、パパイン切断により）、Ｆａｂ（軽鎖ならびに重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインを含む）およびＦｃ（隣接している配列と共に、重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む）に容易に切断される。本明細書に記載される有用なＦｃ断片は、任意の哺乳動物（例えば、ヒト）からの、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ、およびそれらの様々なサブクラス（例えば、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、ＩｇＧ－４、ＩｇＡ－１、ＩｇＡ－２）を含む、任意の免疫グロブリン分子のＦｃ断片を含む。例えば、Ｆｃ断片は、ヒトＩｇＧ－１である。Ｆｃ断片は、例えば、重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、ならびにヒンジ領域の任意の部分を含み得る。Ｆｃ領域は、任意選択的に、当業者に既知の任意の適切な１つ以上のアミノ酸残基においてグリコシル化され得る。特に、融合ポリペプチドのＦｃ断片は、配列番号２０のアミノ酸配列を有するか、または配列番号２０に対して少なくとも５０％（例えば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の配列同一性を有する。操作された、例えば、天然に生じないＦｃ領域は、本明細書に記載のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば、ＷＯ２００５／００７８０９に記載のものに組み込まれ得る。本明細書に記載されるＦｃ断片は、本明細書に記載のＦｃ断片のいずれかに対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０以上の付加、欠失、または置換を有し得る。

Ｗｎは、例えば、一連の連続したアスパルテート（Ｄ）および／またはグルタメート（Ｅ）残基を有する、骨標的化部分であり得、ｎ＝１～５０、例えば、ｎ＝３～３０、例えば、５～１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３６、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０である。存在する場合、骨標的化部分は、融合ポリペプチドのどこにでも、例えば、Ｎ末端またはＣ末端にもしくはその付近に、および／またはリンカー領域に位置付けられ得る。例えば、骨標的化部分は、ｓＡＬＰ融合ポリペプチドのＣ末端に存在し得る。ｓＡＬＰおよび融合ポリペプチドはまた、骨標的化部分を欠いてもよい。

追加のアミノ酸残基は、融合ポリペプチドを産生するために使用されるクローニング戦略によりポリペプチドに導入され得る。例えば、追加のアミノ酸残基は、可溶性形態のポリペプチドを維持するために、追加のＧＰＩ固定シグナルを提供しない。さらに、任意のそのような追加のアミノ酸残基は、本方法のポリペプチドに組み込まれる場合、宿主細胞のエンドプロテアーゼのための切断部位を提供しない。設計された配列が宿主細胞のエンドプロテアーゼによって切断される可能性は、例えば、Ｉｋｅｚａｗａ（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２５：４０９－４１７，２００２）により記載されるように予測することができる。

ｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、二量体または三量体に会合し得る。例えば、２つのｓＡＬＰ－Ｆｃ単量体は、Ｆｃ断片のヒンジ領域に位置する２つのジスルフィド結合により共有結合され得る。加えて、ｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）は、グリコシル化またはＰＥＧ化され得る。

核酸およびポリペプチドの産生
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）をコードする核酸は、当該技術分野で既知の任意の方法により産生され得る。典型的には、所望の融合ポリペプチドをコードする核酸は、分子クローニング方法を使用して生成され、一般的に、プラスミドまたはウイルスなどのベクター内に配置される。ベクターを使用して、核酸を、融合ポリペプチドの発現に適切な宿主細胞に形質転換する。代表的な方法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８９）に開示されている。多くの細胞型が、適切な宿主細胞として使用することができるが、哺乳類細胞は、適切な翻訳後修飾を付与することができるため、好ましい。宿主細胞には、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＯＳ－７細胞、または当該技術分野で既知の任意の他の好適な宿主細胞が含まれる。例えば、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞）である。

ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、宿主細胞において、ｓＡＬＰポリペプチドの発現をもたらすのに好適な任意の条件下で産生され得る。そのような条件は、緩衝液、炭酸水素および／またはＨＥＰＥＳ、塩化物のようなイオン、リン酸、カルシウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、鉄、単糖のような炭素源、アミノ酸、潜在的な脂質、ヌクレオチド、ビタミン、ならびにインスリンのような成長因子；アルファ－ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ハムのｓ－Ｆ１２、ならびに２～４ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび５％ウシ胎仔血清を補充したＩＭＤＭのような通常の市販の培地；２～４ｍＭ Ｌ－グルタミンを補充した、Ｈｙｃｌｏｎｅ（商標）ＳＦＭ４ＣＨＯ、Ｓｉｇｍａ ＣＨＯ ＤＨＦＲ－、Ｃａｍｂｒｅｘ ＰＯＷＥＲ（商標）ＣＨＯ ＣＤのような通常の市販の動物タンパク質不含培地などの構成要素を用いて調製された培地の適切な選択を含む。これらの培地は、望ましくは、選択圧を維持するために、チミジン、ヒポキサンチン、およびＬ－グリシンなしで調製され、安定したタンパク質産生発現を可能にする。

本方法により治療された患者
ｓＡＬＰが投与される患者は、任意の年齢の患者であってもよいが、特に、青年期、例えば、約１２～１８歳の者、または約１８歳より上の成人であってもよい。患者は、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状に苦しんでいる可能性がある。患者は、ジストロフィー脊椎側弯症に苦しんでいる可能性がある。患者は、骨癒合および／または石灰化の誘導を必要としている場合がある。例えば、患者は、脊椎の骨、例えば、椎骨の骨折など、１つ以上の骨折に苦しんでいる可能性がある。患者は、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症を含む、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を有し得る。

投与および投薬量
開示の方法のいずれかにおいて、医薬組成物（例えば、ＴＮＡＬＰなどのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも８０、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の配列同一性を有する変異型など、本明細書に記載のポリペプチ変異型、例えば、アスホターゼアルファを含む）の任意の量が患者に投与され得る。投薬量は、投与モードおよび患者の年齢を含む多くの要因に依存する。典型的には、単回用量に含まれる組成物（例えば、ＴＮＡＬＰなどのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の量は、顕著な毒性を誘導することなく、本明細書に記載の患者を治療するのに有効な量である。

例えば、開示の方法のいずれかにおいて、本明細書に記載のｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０５ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、または２．０ｍｇ／ｋｇ～３．０ｍｇ／ｋｇ）、または１μｇ／ｋｇ～１，０００μｇ／ｋｇ（例えば、５μｇ／ｋｇ～１，０００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、または１０μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ）の範囲の個々の用量で患者に投与され得る。

ｓＡＬＰの例示的な用量は、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、９００、または１，０００μｇ／ｋｇを含む。本明細書に記述される全ての投薬量または範囲は、これらの投薬量を、記述される値または範囲のエンドポイントを±１０％修正するために使用され得る。特に、本開示による組成物（例えば、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む）は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約５００ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で患者に投与され得る。例えば、ｓＡＬＰ組成物（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、約０．５ｍｇ／ｋｇ週～約１４０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約０．８ｍｇ／ｋｇ／週～約５０ｍｇ／ｋｇ／週、または約１ｍｇ／ｋｇ／週～約１０ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約３または約６または約９ｍｇ／ｋｇ／週）の範囲の毎週投薬量で患者に投与され得る。特に、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、２ｍｇ／ｋｇを週３回（合計約６ｍｇ／ｋｇ／週）、１ｍｇ／ｋｇを週６回（合計約６ｍｇ／ｋｇ／週）、３ｍｇ／ｋｇを週３（合計約９ｍｇ／ｋｇ／週）、０．５ｍｇ／ｋｇを週３回（合計約１．５ｍｇ／ｋｇ／週）、または９．３ｍｇ／ｋｇを週３回（合計約２８ｍｇ／ｋｇ／週）の投薬量で投与され得る。投薬量は、例えば、神経線維腫症１型、ジストロフィー脊椎側弯症の程度、骨癒合の必要性、および患者からの異なるパラメータなどの従来の要因により臨床医によって適応される。

ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物の投薬量は、単回または複数回投薬量レジメンのいずれかにおいて提供され得る。用量は、例えば、毎時間、２時間おき、毎日、１日２回（ｂｉｄａｉｌｙ）、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、毎週、隔週、毎月、隔月、または毎年投与され得る。あるいは、用量は、例えば、１日１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、または１２回投与され得る。特に、投与レジメンは、週３回である。投与レジメンの継続期間は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日間（複数可）、週間（複数可）、または月間（複数可）であり得る。投与レジメンは、外科的介入などの物理的介入前、介入中、または介入後に始まり得る。投薬量の量、頻度、および継続期間は、神経線維腫症１型、ジストロフィー脊椎側弯症、骨折、または骨石灰化の程度、および患者からの異なるパラメータなどの従来の要因により、臨床医によって適応される。

例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、透明の無色からわずかに黄色の水溶液、ｐＨ ７．４である注射用溶液として製剤化され得る。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、例えば、１２ｍｇ／０．３ｍＬ、１８ｍｇ／０．４５ｍＬ、２８ｍｇ／０．７ｍＬ、４０ｍｇ／１ｍｌ、または８０ｍｇ／０．８ｍＬの濃度で製剤化され得る。特に、本組成物は注射用の４０ｍｇ／ｍｌの溶液として製剤化され得、溶液の各ｍｌは、４０ｍｇのｓＡＬＰを含む（例えば、各バイアルは、０．３ｍｌの溶液、および１２ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含むか、各バイアルは、０．４５ｍｌの溶液および１８ｍｇのｓＡＬＰ（４０ ｍｇ／ｍｌ）を含むか、各バイアルは、０．７ｍｌの溶液および２８ｍｇのｓＡＬＰ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含むか、または各バイアルは、１．０ｍｌの溶液および４０ｍｇのアスホターゼアルファ（４０ｍｇ／ｍｌ）を含む）。ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で注射用の溶液として製剤化され得、各１ｍｌの溶液は、１００ｍｇのｓＡＬＰまたはｓＡＬＰポリペプチドを含む（例えば、各バイアルは、０．８ｍｌの溶液および８０ｍｇのアスホターゼアルファ（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む）。

例えば、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の推奨投薬量は、週３回皮下投与される２ｍｇ／体重ｋｇ、または週６回皮下投与される１ｍｇ／体重ｋｇの投薬量レジメンである。さらなる投薬量の情報は以下に提供される（表１）。

場合によっては、本開示によるｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与は、（ｉ）患者における骨癒合の増加、および／または（ｉｉ）検出不可能な、もしくは増加した骨塩密度の変化、のうちの１つ以上をもたらし得る。

本明細書に開示される態様のいずれかにおいて、患者は、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）の投与に対する忍容性、例えば、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎，、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を呈する。

本明細書に開示される態様のいずれかにおいて、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、例えば、生理食塩水（例えば、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウム）と共に医薬組成物に製剤化される。例えば、少なくとも１つの薬学的に許容される担体は、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび２５ｍＭリン酸ナトリウムを含み得る。

上記の態様のいずれかにおいて、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、ＰＥＡ、ＰＰｉ、およびＰＬＰに対して生理学的に活性であり、骨における骨格石灰化を改善するのに触媒的に適格性があり、かつ／またはアルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである。

製剤
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物は、標準的な方法により製剤化され得る。医薬製剤は、十分に確立された技術分野であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）、Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）、およびＫｉｂｂｅ（２０００）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）においてさらに記載されている。例えば、ｓＡＬＰ組成物（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）は、例えば、好適な濃度および２～８℃（例えば、４℃）での保管に好適な緩衝溶液として製剤化され得る。組成物はまた、０℃を下回る温度（例えば、－２０℃または－８０℃）で保管するために製剤化され得る。組成物はさらに、２～８℃（例えば、４℃）で最大２年間（例えば、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１年間、１ １／２年間、または２年間）保管するために製剤化され得る。したがって、本明細書に記載の組成物は、２～８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間の保管において安定していてもよい。

ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物は、様々な形態であり得る。これらの形態には、液体、半固体および固体剤形、例えば、液状溶液（例えば、注射液および注入液）、分散液または懸濁液、錠剤、ピル、粉末、リポソーム、および坐剤が含まれる。好ましい形態は、部分的に、意図される投与モードおよび治療用途に依存する。

例えば、全身または局所送達用に意図された組成物は、注射液または注入液の形態であり得る。したがって、ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む組成物は、非経口モード（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、または筋肉内注射）による投与用に製剤化され得る。

ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰ融合ポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高濃度で安定した保存に好適な他の規則構造として製剤化され得る。滅菌注射液は、本明細書に記載の組成物を、必要に応じて、上記で列挙された成分のうちの１つまたは組み合わせと共に必要な量で適切な溶媒に組み込み、続いて濾過滅菌することにより調製され得る。一般的に、分散液は、本明細書に記載の組成物を、基本的な分散媒体および上記に列挙された成分から必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことにより調製される。減菌注射液の調製のための減菌粉末の場合、調製方法は、本明細書に記載の組成物の粉末に加えて、その前の減菌濾過溶液からの任意の追加の所望の成分（本明細書を参照されたい）が得られる真空乾燥および凍結乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散の場合に必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持され得る。注射可能な組成物の吸収の延長は、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによりもたらされ得る。

本明細書に記載の医薬組成物はまた、イムノリポソーム組成物に製剤化され得る。そのような製剤は、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２：３６８８、Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７７：４０３０；、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載の方法など、当該技術分野で既知の方法により調製され得る。循環時間が強化されたリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。

ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む医薬組成物はまた、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などの迅速な放出に対して組成物（例えば、ｓＡＬＰポリペプチドまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド）を保護する担体と共に製剤化され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーが使用され得る。そのような製剤を調製するための多くの方法が当該技術分野で既知である。例えば、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８）Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。

組成物が第２の活性剤と組み合わせて使用される場合、組成物は、第２の薬剤と共製剤化され得るか、または組成物は、第２の薬剤の製剤とは別個に製剤化され得る。例えば、それぞれの医薬組成物が、例えば、投与直前に混合され、一緒に投与され得るか、または例えば、同時もしくは異なる時間に別個に投与され得る。

担体／ビヒクル
ｓＡＬＰ（ＴＮＡＬＰなど、例えば、配列番号１のｓＡＬＰポリペプチド、または配列番号１の配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリペプチド変異型、例えば、アスホターゼアルファ）を含む調製物は、薬学的に許容される減菌の水性もしくは非水性溶媒、懸濁液、またはエマルジョンと組み合わせて、患者、例えば、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を有する、または骨癒合を必要とする患者に提供され得る。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、魚油、および注射可能な有機エステルである。水性担体には、生理食塩水および医療用緩衝非経口ビヒクル（塩化ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース溶液、デキストロース＋塩化ナトリウム溶液、ラクトースを含むリンゲル溶液、または固定油を含む）を含む、水、水－アルコール溶液、エマルジョン、または懸濁液が挙げられる。例えば、薬学的に許容される担体は、塩化ナトリウムおよび／またはリン酸ナトリウムを含むことができ、組成物は、例えば、約１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび／または約２５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４を含む。

静脈内ビヒクルは、流動および栄養補給物、電解質補給物、例えば、リンゲルのデキストロースなどに基づくものを含み得る。薬学的に許容される塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの鉱酸塩、および酢酸、プロピオン酸、マロン酸、安息香酸などの有機酸の塩がその中に含まれ得る。加えて、湿潤剤または乳化剤などの補助物質、ｐＨ緩衝物質などがそのようなビヒクル中に存在し得る。薬学的に許容される担体の完全な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｎ．Ｊ．１９９１）において利用可能である。

以下の実施例は、本開示を限定するのではなく、例示することを意図している。特定の実施例、材料、量、および手順は、本明細書に記載される開示の範囲および趣旨により広義に解釈されることを理解されたい。

実施例１．神経線維腫症１型（ＮＦ１）の患者におけるジストロフィー脊椎側弯症のために脊椎固定後に石灰化を促進するためのアスホターゼアルファの使用
ジストロフィー脊柱側弯症は、稀だが、神経線維腫症１型（ＮＦ１）の患者において深刻な骨格兆候であり、衰弱性神経学的障害に関連し得る。ジストロフィー型湾曲は迅速に進行し、早期固定を必要とし、不十分な骨癒合および偽関節を合併することが多い。ＮＦ１における不十分な骨癒合は、骨癒合の低減、骨吸収の増加、および不十分な骨石灰化の組み合わせによるものと考えられている。ニューロフィブロミンの喪失はピロリン酸（ＰＰｉ）の合成を促進する遺伝子を上方制御することができ、ＰＰｉの蓄積および石灰化の阻害、アルカリホスファターゼ発現の低減による骨芽細胞分化障害、ならびに骨吸収の増加につながる。

ＮＦ１のマウスノックアウトモデルにおける前臨床研究は、ＰＰｉの恒常性を制御する２つの主な遺伝子であるＥｎｐｐ１およびＡｎｋの発現の減少を示した。しかしながら、この結果は、接着性骨髄細胞における報告されたヒト細胞アッセイと矛盾した（Ｄｅ ｌａ Ｃｒｏｉｘ Ｎｄｏｎｇ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；２０：９０４－９１０，２０１４）。

この研究において、重度のＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症および骨粗鬆症の５４歳の閉経後の女性は、事前のＴ１１から骨盤の脊椎固定を含む、７年の期間にわたって事前の背中手術を３回受けた（図１）。脊椎固定は、進行性硬膜拡張症（図２）、偽関節、および生命を脅かす出血を合併した。前方アプローチが試されたが、左腸骨静脈合併症により中断された。患者は、後方器具類および骨形成タンパク質（ＢＭＰ）による増強再置換も受けたが、斬進的なネジの緩み、大腿前部の感覚異常、および難治性の背痛が継続的にあった。彼女は、Ｌ４椎弓根のロッドの変位を発展させ、修復手術を必要とした。患者は、難治性の背痛を助けるために５ｍｇのモルヒネも受けた。患者は、モルヒネ治療で保存的に管理されたが、背痛は持続し、視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の疼痛スコアは９、オスウェストリー下背部障害スコア（Ｏｓｗｅｓｔｒｙ ｌｏｗ ｂａｃｋ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ｓｃｏｒｅ）は５２％であった。ＣＴスキャンにより、緩みを示す左後腸骨ネジの進行した周囲透過性（図３Ａ）、およびＬ４椎弓根ネジ連結部の左垂直ロッドの骨折（図３Ｂ）が明らかになり、４回目の脊椎手術を必要とした。

高確率のインプラント失敗および手術後の確実な関節固定を達成する難しさを考えると、外科的介入と、骨癒合を強化するための骨形成タンパク質（組換えヒトＢＭＰ－２）、骨吸収を阻害するためのビスホスホネート（例えばゾレドロン酸）、および確実な関節固定．を達成するために骨石灰化を改善するためのアスホターゼアルファ（組換えヒトアルカリホスファターゼ）を含む追加の利用可能な医療介入との組み合わせが決定された。

研究の開始時に、患者は、胸椎Ｔ１１から仙骨の脊椎器具類の再挿入、骨盤固定の再挿入、およびＴ１１から骨盤の脊椎後方固定を含む腰部固定の再置換を受けた（図４）。これは４回目の脊椎手術であった。反復手術中または手術後の医療介入には、骨癒合を強化するために、手術される骨に直接適用される術内ＢＭＰが含まれた。

手術のおよそ３ヶ月後に、骨吸収を阻害するために、患者は、副作用なく、単一の５ｍｇのゾレドロン酸の静脈内注入として、ビスホスホネート療法を受けた。

手術のおよそ７ヶ月後および６ヶ月間の間継続して、骨石灰化を改善するために、アスホターゼアルファ（組換えヒトアルカリホスファターゼ、ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）を、２ｍｇ／ｋｇの用量で３ｘ／週皮下投与した。アスホターゼアルファの投与は、６ヶ月の終わりに（すなわち、手術の１３ヶ月後）に中止した。患者は、治療中、深刻な有害事象を経験しなかった。

確実な関節固定が、４回目の手術の１３ヶ月後に良好に得られた。安定した器具類装着された（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｅｄ）脊椎固定は、ＣＴスキャン（脊椎Ｘ線写真）により判断されるように、１３ヶ月で観察された。ハウンスフィールド単位スケール測定を使用して、基準点としてＴ１０椎体を用いた、全体的な骨塩密度における実質的な変化はその時点では見られなかった。

ＢＭＰ単独（骨形成を強化するために使用された）では、初期の手術中、この患者において良好な脊椎固定はもたらされなかった。それらは、患者の手術中にも再度使用されたが、今回は、ビスホスホネートおよびアスホターゼアルファを用いた組み合わせ療法と共に使用された。ＢＭＰ（例えば、ｒｈＢＭＰ－２）およびビスホスホネートと組み合わせたアスホターゼアルファが、ＢＭＰ療法単独が以前に失敗した、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症の患者の脊椎手術後に確実な関節固定をもたらしたことがわかった。

骨吸収のマーカーが手術後に増加したことが認められた。手術の３ヶ月後のビスホスホネートゾレドロン酸（ＺＯＬ）の投与後、骨吸収マーカー（ＮＴＸおよびＣＴＸ）は減少したが、骨形成マーカー（ＯＣＮおよびＰ１ＮＰ）も減少した。理論に拘束されるものではないが、これらのマーカーの減少は、ＺＯＬ後の骨代謝回転の低減による可能性がある。したがって、患者は、基底疾患およびＺＯＬの使用の両方により骨石灰化の阻害を経験し得る（さもなければ、骨吸収阻害の有益な効果を有する）。

しかしながら、同時に、骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）および総ＡＬＰレベルの両方がアスホターゼアルファの投与後に大幅に増加した。この研究は、ＺＯＬなどのビスホスホネートの投与後のアスホターゼアルファの投与が、幾分「救援」療法のような、骨石灰化を改善し得ることを示唆する。アスホターゼアルファの投与は、骨折治癒が生じ、ネジの緩みが分解能の兆候を示した、ＺＯＬの投与の潜在的な交絡効果が生じたことにもかかわらず、骨石灰化を改善することが示された。これらの結果は、ビスホスホネート療法の補助としてアスホターゼアルファを用いる、より一般的な治療プロトコルを示唆する。より具体的には、骨吸収を阻害するためのＺＯＬなどのビスホスホネートの投与の後に、ビスホスホネートの骨石灰化に対する有害効果の可能性を弱めるために、アスホターゼアルファの投与が続き得る。これは、ビスホスホネート治療がアスホターゼアルファ治療中は禁忌であることを示唆する、一般に広まっている標準治療とは異なる（Ｋｉｓｈｎａｎｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｍｅｔａｂ．１２２：４－１７，２０１７）。

研究の詳細
表２は、参照範囲を含む、研究期間中に行われた室内および放射能調査を要約する。全ての手順のタイミングはおおよそであり、患者の臨床的進行に基づき、そして患者のスケジュールに対応するために、特定の日時に柔軟性を許容した。

アスホターゼアルファ治療前調査
手術の４ヶ月後の腎臓超音波の報告
右腎９．７ｃｍ、正常なエコー像および皮質。腫瘤、結石、または水腎なし
左腎１０．４ｃｍ、正常なエコー像および皮質。腫瘤、結石、または水腎なし

手術の５ヶ月後の総合的な眼検査により、一時的な眼瞼異常からわかるように、特に左眼の乾性角結膜炎と報告された。正常な動眼神経。正常な黄斑。

ベースラインのＤＸＡスキャンにより、左大腿骨頸部ＢＭＤが－２．８のＴスコアに相当する０．６４３であることが明らかとなった。右大腿骨頸部ＢＭＤは、－３．０のＴスコアに相当する０．６２７であった。平均総臀部ＢＭＤは、－２．９のＴスコアに相当する０．６３５であった。８年前のＢＭＤと比較して、骨密度は、８．１％減少し、これは有意であった。左３３％前腕ＢＭＤは、－３．０のＴスコアに相当する０．６２１であった。

Ｘ線データ、ＣＴ腰椎
手術の７ヶ月前に得た手術前ＣＴおよび脊椎Ｘ線写真は、左Ｌ４椎弓根ネジの下の垂直な連結ロッドの骨折および左後腸骨棘ネジの周辺の透過性を示した（図３Ａ～３Ｂ）。腰椎、特に右Ｌ２～Ｌ４の進行した硬膜拡張症、および両側仙腸関節ネジでのＴ １１から骨盤の脊椎骨盤固定器具類の手術後の変化が認められた。

手術日に、胸椎Ｔ１１から仙骨の脊椎器具類の再挿入、骨盤固定の再挿入、およびＴ１１から骨盤の脊椎後方固定を含む腰部固定の再置換が行われた（図４）。

手術直後のＣＴ、および脱力感がない両側足首のストッキングのような感覚異常の突然の発症のため手術の２日後に得た脊椎Ｘ線写真は、両側で内側腸骨に延在する追加のネジで再置換器具類装着された（ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｅｄ）脊椎固定Ｔ１１－骨盤の術後変化を示した。Ｔ１１、Ｔ１２、Ｌ１、Ｓ１の両側椎弓根ネジ、Ｌ２およびＬ４の左椎弓根ネジ、Ｌ５の右椎弓根ネジ、ならびに両側腸骨ネジが認められた。左後腸骨ネジの周囲の安定した透過性は、ネジの先端の皮質外層に新たな骨欠損と共にみられた（図５Ａ～５Ｂ）。両側足首の感覚異常は徐々に２日後に改善され、患者は自宅退院前に安全に歩けた。患者の重度のジストロフィー脊椎側弯症、および機械的失敗の過去の手術歴を所与として以前の高確率の失敗を考えると、患者は、骨吸収を阻害するために、骨吸収を阻害するためのゾレドロン酸（手術の３ヶ月後に１回、５ｍｇ ＩＶ）、および骨石灰化を改善するために、骨石灰化を改善するためのアスホターゼアルファ（手術の７～１３ヶ月後に（２ｍｇ／ｋｇ ３ｘ／週の皮下注射）も受けた。

手術の３ヶ月および７ヶ月後に得た脊椎Ｘ線写真は、無傷の器具類が後方にＴ１１から仙骨まで認められ、ネジが両仙腸関節にわたって延在する、脊椎固定の安定した術後変化を示した、すなわち、確実な両側背外側関節強直を伴う安定した器具類装着された脊椎固定Ｔ１１－骨盤が観察された。左後腸骨ネジの先端に関連する以前に見られた骨欠損の治癒および硬化が、手術観察の２日後以降に観察された。

アスホターゼアルファ治療後調査
Ｘ線写真
アスホターゼアルファ開始からおよそ７ヶ月後に得たＣＴおよび脊椎Ｘ線写真は、確実な両側背外側関節強直を伴う安定した器具類装着された脊椎固定Ｔ１１－骨盤を示した。左ネジ周辺腸骨骨折の間隔治癒が手術の５日後以降に観察された。両側仙腸関節ネジの周囲の最小限の周辺の透過性が緩みの確証的な証拠なく観察された。安定した凸状の右脊椎側弯症および非対照の右側の硬膜拡張症が観察された。

再腎臓超音波、再眼検査、および再ＤＸＡスキャンが手術の１．２年後に計画された。アスホターゼアルファ治療前後の臓超音波および総合的な眼検査では、異所性石灰化は示されなかった。手術の１３ヶ月後の経過観察訪問時に、患者は、ＶＡＳ疼痛スコア７およびオスウェストリー下背部障害スコア４２％の背痛の改善を報告した。患者は、モルヒネ治療を停止することができた。

追加観察
結論として、安定した器具類装着された脊椎固定は、脊椎のＸ線写真により判断された手術後に観察された。ネジの先端に新たな骨欠損を伴う（ネジ周辺の骨折を示す）左後腸骨ネジの周囲に透過性を示した（ネジの緩みを示唆する）手術直後のＣＴ腰椎（手術の２日後に得た）と比較して、アスホターゼアルファ開始からおよそ６ヶ月後のＣＴ腰椎は、緩みの証拠なく左後腸骨ネジの先端の骨折が治癒したことを示した（図６）。しかしながら、これら２つのＣＴスキャンを比較したとき、外科的変化がなかった基準点としてのＴ１０椎体において認められた、ＣＴハウンスフィールド測定を使用した骨塩密度に有意な変化はなかった。再置換手術の前に提示された肉眼的な骨架橋の程度（骨形成を示す）ならびに脊椎後方（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｅｌｅｍｅｎｔ）骨架橋部位での客観的測定（ハウンスフィールド測定）は、実質的な間隔変化を示さなかった。

実施例２．大腿骨頸部骨折の治療
本明細書に開示の方法によると、当該技術分野の整形外科医は、大腿骨が骨折した患者を治療する場合がある。例えば、患者は、自転車から落ちた後に大腿骨を骨折する可能性があるか、または特発骨折する可能性がある。変位のない骨折は激痛を引き起こす場合があり、医者は、プレートおよび４本のネジを骨折上に配置し、続いて３ヶ月間患者の脚をギブスに固定する整形外科手術を行い得る。３ヶ月後、骨がＸ線およびＣＴスキャンで見たときに適切な治癒を表さない場合、またはネジが緩んだ場合、整形外科医は、２ヶ月間、６ｍｇ／ｋｇ／週で皮下投与されるアスホターゼアルファのレジメンで患者を治療し得る。アスホターゼアルファ治療の後、医師または外科医は、さらなるＸ線およびＣＴスキャンを行い、治癒プロセスを視覚化してもよい。医師または外科医は、アスホターゼアルファ治療が治癒プロセスを補助したこと、および２本のネジがこれ以上緩まないことを判断することができる。十分な治癒後、外科医は、プレートおよび４本のネジを含む金具が大腿骨から除去されてもよいことを判断し得る。

実施例３．外傷性顔面骨折の治療
複数の顔面の頬骨を骨折した患者は、顔の原形および特徴を復元するために顔面骨の再建により口腔顎顔面外科医または形成外科医によって治療され得る。骨折の複雑度により、外科医は、顔面骨の再形成に役立つように複数のネジおよびプレートを利用することを決めてもよい。ネジおよびプレートは、顔に永久に残存するように設計され得る。医師は、最初に、手術の２週間前に、２ｍｇ／ｋｇ／週で局所投与されるアスホターゼアルファのレジメンを開始してもよい。医師は、手術を行い、プレートおよびネジを頬骨の骨折部分上に配置する。回復時間の３ヶ月後、医師は、Ｘ線およびＣＴスキャンにより治癒プロセスを視覚化してもよい。医師は、ネジの１本が緩いと判断する場合があり、アスホターゼアルファの投薬量を６ｍｇ／ｋｇ／週に増加することができる。回復時間のさらに１ヶ月後、医師は、Ｘ線およびＣＴスキャンにより治癒プロセスを再度視覚化してもよく、ネジがもはや緩くないと判断し得、その時点で、アスホターゼアルファ治療を終了してもよい。

参照文献
１）Ｄｕｒｒａｎｉ，Ａ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２０００．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｉｎａｌ ｄｅｆｏｒｍｉｔｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ １．Ｓｐｉｎｅ ２５，６９－７５．
２）Ｗｕ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，２００６．Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍｉｎ ｐｌａｙｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ．Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５，２８３７－２８４５．
３）Ｙａｎｇ，Ｆ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，２００６．Ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ２１ｒａｓ ａｎｄ ＰＩ３Ｋ ｃｏｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ａｌｔｅｒ ｍｕｒｉｎｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ １－ｈａｐｌｏｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １１６，２８８０－２８９１．
４）Ｐｅｔｒｙｋ，Ａ．，Ｂｅｃｈｔｏｌｄ，Ｊ．，Ｃａｒｌｓｏｎ，Ｃ．，Ｄａｈｌ，Ｍ．，Ｐｏｌｌｙ，Ｄ．，２０１６．Ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ ｆｏｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃｏｌｉｏｓｉｓ ｉｎ ＮＦ１ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｐｏｓｔｅｒ Ｎｏ．２２４５
５）Ｗｈｙｔｅ，Ｍ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２．Ｅｎｚｙｍｅ－ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｌｉｆｅ－ｔｈｒｅａｔｅｎｉｎｇ ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｉａ．ＮＥＪＭ ３６６，９０４－９１３．
６）ｄｅ ｌａ Ｃｒｏｉｘ Ｎｄｏｎｇ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，２０１４．Ａｓｆｏｔａｓｅ ａｌｆａ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｂｏｎｅ ｇｒｏｗｔｈ，ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｔｙｐｅ－１．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０，９０４－９１０．
７）ＵＳ ２０１３／０３２３２４４ Ａ１，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｎｄ／ｏｒ Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ
８）ＷＯ ２０１７／１７３３９５，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｔｒｅａｔｉｎｇ 低ホスファターゼ症 ｉｎ Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｄｕｌｔｓ
９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．：２３６８９９９，Ｂｏｎｅ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，Ｋｉｔｓ，ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ
１０）Ｄｅｌｕｃｉａ，Ｔ．Ａ．，Ｙｏｈａｙ，Ｋ．，Ｗｉｄｍａｎｎ，Ｒ．Ｆ．，２０１１，．Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ：ｕｐｄａｔｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ２３，４６－５２
１１）Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒａｓ ａｒｅ ｐｒｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｓ ｆｏｒ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ．Ｂｏｎｅ ３６，７９３－８０２
１２）Ｈｅｅｒｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ １（ＮＦ１）ｄｉｓｐｌａｙ ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｂｏｎｅ ５０，７９８－８０３
１３）Ｓｃｈｉｎｄｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ａｎｄ Ｎｆ１ ｈａｐｌｏｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２６，６５－７４
１４）Ｂｉｒｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｕｓｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｐｓｅｕｄａｒｔｈｒｏｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｂｉａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ ４，５０７－５１７
１５）Ｂｏｂｙｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍａｘｉｍｉｚｉｎｇ ｂｏｎｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｓｐｉｎｅ ｆｕｓｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｒｈＢＭＰ－２ ａｎｄ ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ａｎｄ ＮＦ１ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｏｃｉｅｔｙ ３２，１０９０－１０９４
１６）Ｓｅｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｈｉｇｈ ｂｏｎｅ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｉｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｏｍａｔｏｓｉｓ １．Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ：ａ ｊｏｕｒｎａｌ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｓ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＵＳＡ ２１，１１９－１２７

前述の発明を実施するための形態および実施例は、単に理解を明確にするために記載されてきた。不必要な制限がそれから理解されるべきではない。本開示は、示され、記載される正確な詳細に限定されず、当業者に明らかな変形に関しては、特許請求の範囲により定義される本開示内に含まれる。

特に示されない限り、本明細書および特許請求の範囲に使用される構成要素、分子量などの量を表す全ての数字は、全ての場合において、「約」という用語により修飾されると理解されるべきである。したがって、特に反対が示されない限り、本明細書および特許請求の範囲に記載される数値のパラメータは、本開示によって得えられることが求められる所望の特性により異なり得る近似である。少なくとも、および特許請求の範囲の範囲と同等の原理を制限しようとするのではなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告される有効桁数の観点から、および適切な通常の丸め技法により解釈されるべきである。

本開示の広範囲を記載する数値範囲およびパラメータは近似であるが、特定の実施例に記載される数値は、可能な限り正確に報告される。しかしながら、全ての数値は、それぞれの試験測定において見られる標準偏差に必然的に起因する範囲を本質的に含む。

全ての見出しは、読者の利便性のためであり、特にそのように特定されない限り、見出しに続く文脈の意味を限定するように使用されるべきではない。

本明細書に引用される全ての特許、仮特許出願を含む特許出願、特許公開および非特許公開を含む刊行物、ならびに電子的に利用な能な材料（例えばＧｅｎＢａｎｋ ａｎｄ ＲｅｆＳｅｑの、例えばヌクレオチド配列提出、ならびに例えばＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢのアミノ酸配列提出、およびＧｅｎＢａｎｋ ａｎｄ ＲｅｆＳｅｑの注釈付きコード領域からの翻訳を含む）は参照により組み込まれる。

［配列表］
SEQUENCE LISTING

<110> Alexion Pharmaceuticals, Inc.

<120> METHODS OF TREATING NEUROFIBROMATOSIS TYPE 1 AND RELATED
CONDITIONS WITH ALKALINE PHOSPHATASE

<130> PA24-117

<150> US 62/717,371
<151> 2018-08-10

<160> 20

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 726
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 1

Leu Val Pro Glu Lys Glu Lys Asp Pro Lys Tyr Trp Arg Asp Gln Ala
1 5 10 15


Gln Glu Thr Leu Lys Tyr Ala Leu Glu Leu Gln Lys Leu Asn Thr Asn
20 25 30


Val Ala Lys Asn Val Ile Met Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly Val Ser
35 40 45


Thr Val Thr Ala Ala Arg Ile Leu Lys Gly Gln Leu His His Asn Pro
50 55 60


Gly Glu Glu Thr Arg Leu Glu Met Asp Lys Phe Pro Phe Val Ala Leu
65 70 75 80


Ser Lys Thr Tyr Asn Thr Asn Ala Gln Val Pro Asp Ser Ala Gly Thr
85 90 95


Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Ala Asn Glu Gly Thr Val Gly
100 105 110


Val Ser Ala Ala Thr Glu Arg Ser Arg Cys Asn Thr Thr Gln Gly Asn
115 120 125


Glu Val Thr Ser Ile Leu Arg Trp Ala Lys Asp Ala Gly Lys Ser Val
130 135 140


Gly Ile Val Thr Thr Thr Arg Val Asn His Ala Thr Pro Ser Ala Ala
145 150 155 160


Tyr Ala His Ser Ala Asp Arg Asp Trp Tyr Ser Asp Asn Glu Met Pro
165 170 175


Pro Glu Ala Leu Ser Gln Gly Cys Lys Asp Ile Ala Tyr Gln Leu Met
180 185 190


His Asn Ile Arg Asp Ile Asp Val Ile Met Gly Gly Gly Arg Lys Tyr
195 200 205


Met Tyr Pro Lys Asn Lys Thr Asp Val Glu Tyr Glu Ser Asp Glu Lys
210 215 220


Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asp Leu Val Asp Thr Trp Lys
225 230 235 240


Ser Phe Lys Pro Arg Tyr Lys His Ser His Phe Ile Trp Asn Arg Thr
245 250 255


Glu Leu Leu Thr Leu Asp Pro His Asn Val Asp Tyr Leu Leu Gly Leu
260 265 270


Phe Glu Pro Gly Asp Met Gln Tyr Glu Leu Asn Arg Asn Asn Val Thr
275 280 285


Asp Pro Ser Leu Ser Glu Met Val Val Val Ala Ile Gln Ile Leu Arg
290 295 300


Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile Asp
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His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala Val
325 330 335


Glu Met Asp Arg Ala Ile Gly Gln Ala Gly Ser Leu Thr Ser Ser Glu
340 345 350


Asp Thr Leu Thr Val Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Thr Phe
355 360 365


Gly Gly Tyr Thr Pro Arg Gly Asn Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro Met
370 375 380


Leu Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ala Ile Leu Tyr Gly Asn
385 390 395 400


Gly Pro Gly Tyr Lys Val Val Gly Gly Glu Arg Glu Asn Val Ser Met
405 410 415


Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro Leu
420 425 430


Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ser Lys Gly
435 440 445


Pro Met Ala His Leu Leu His Gly Val His Glu Gln Asn Tyr Val Pro
450 455 460


His Val Met Ala Tyr Ala Ala Cys Ile Gly Ala Asn Leu Gly His Cys
465 470 475 480


Ala Pro Ala Ser Ser Leu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
485 490 495


Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
500 505 510


Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
515 520 525


Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
530 535 540


Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
545 550 555 560


Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
565 570 575


His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
580 585 590


Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
595 600 605


Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
610 615 620


Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
625 630 635 640


Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
645 650 655


Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
660 665 670


Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
675 680 685


Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
690 695 700


Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Asp Ile Asp Asp Asp Asp
705 710 715 720


Asp Asp Asp Asp Asp Asp
725


<210> 2
<211> 524
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Ile Ser Pro Phe Leu Val Leu Ala Ile Gly Thr Cys Leu Thr Asn
1 5 10 15


Ser Leu Val Pro Glu Lys Glu Lys Asp Pro Lys Tyr Trp Arg Asp Gln
20 25 30


Ala Gln Glu Thr Leu Lys Tyr Ala Leu Glu Leu Gln Lys Leu Asn Thr
35 40 45


Asn Val Ala Lys Asn Val Ile Met Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly Val
50 55 60


Ser Thr Val Thr Ala Ala Arg Ile Leu Lys Gly Gln Leu His His Asn
65 70 75 80


Pro Gly Glu Glu Thr Arg Leu Glu Met Asp Lys Phe Pro Phe Val Ala
85 90 95


Leu Ser Lys Thr Tyr Asn Thr Asn Ala Gln Val Pro Asp Ser Ala Gly
100 105 110


Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Ala Asn Glu Gly Thr Val
115 120 125


Gly Val Ser Ala Ala Thr Glu Arg Ser Arg Cys Asn Thr Thr Gln Gly
130 135 140


Asn Glu Val Thr Ser Ile Leu Arg Trp Ala Lys Asp Ala Gly Lys Ser
145 150 155 160


Val Gly Ile Val Thr Thr Thr Arg Val Asn His Ala Thr Pro Ser Ala
165 170 175


Ala Tyr Ala His Ser Ala Asp Arg Asp Trp Tyr Ser Asp Asn Glu Met
180 185 190


Pro Pro Glu Ala Leu Ser Gln Gly Cys Lys Asp Ile Ala Tyr Gln Leu
195 200 205


Met His Asn Ile Arg Asp Ile Asp Val Ile Met Gly Gly Gly Arg Lys
210 215 220


Tyr Met Tyr Pro Lys Asn Lys Thr Asp Val Glu Tyr Glu Ser Asp Glu
225 230 235 240


Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asp Leu Val Asp Thr Trp
245 250 255


Lys Ser Phe Lys Pro Arg Tyr Lys His Ser His Phe Ile Trp Asn Arg
260 265 270


Thr Glu Leu Leu Thr Leu Asp Pro His Asn Val Asp Tyr Leu Leu Gly
275 280 285


Leu Phe Glu Pro Gly Asp Met Gln Tyr Glu Leu Asn Arg Asn Asn Val
290 295 300


Thr Asp Pro Ser Leu Ser Glu Met Val Val Val Ala Ile Gln Ile Leu
305 310 315 320


Arg Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
325 330 335


Asp His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala
340 345 350


Val Glu Met Asp Arg Ala Ile Gly Gln Ala Gly Ser Leu Thr Ser Ser
355 360 365


Glu Asp Thr Leu Thr Val Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Thr
370 375 380


Phe Gly Gly Tyr Thr Pro Arg Gly Asn Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro
385 390 395 400


Met Leu Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ala Ile Leu Tyr Gly
405 410 415


Asn Gly Pro Gly Tyr Lys Val Val Gly Gly Glu Arg Glu Asn Val Ser
420 425 430


Met Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro
435 440 445


Leu Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ser Lys
450 455 460


Gly Pro Met Ala His Leu Leu His Gly Val His Glu Gln Asn Tyr Val
465 470 475 480


Pro His Val Met Ala Tyr Ala Ala Cys Ile Gly Ala Asn Leu Gly His
485 490 495


Cys Ala Pro Ala Ser Ser Ala Gly Ser Leu Ala Ala Gly Pro Leu Leu
500 505 510


Leu Ala Leu Ala Leu Tyr Pro Leu Ser Val Leu Phe
515 520


<210> 3
<211> 524
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Ile Ser Pro Phe Leu Val Leu Ala Ile Gly Thr Cys Leu Thr Asn
1 5 10 15


Ser Leu Val Pro Glu Lys Glu Lys Asp Pro Lys Tyr Trp Arg Asp Gln
20 25 30


Ala Gln Glu Thr Leu Lys Tyr Ala Leu Glu Leu Gln Lys Leu Asn Thr
35 40 45


Asn Val Ala Lys Asn Val Ile Met Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly Val
50 55 60


Ser Thr Val Thr Ala Ala Arg Ile Leu Lys Gly Gln Leu His His Asn
65 70 75 80


Pro Gly Glu Glu Thr Arg Leu Glu Met Asp Lys Phe Pro Phe Val Ala
85 90 95


Leu Ser Lys Thr Tyr Asn Thr Asn Ala Gln Val Pro Asp Ser Ala Gly
100 105 110


Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Ala Asn Glu Gly Thr Val
115 120 125


Gly Val Ser Ala Ala Thr Glu Arg Ser Arg Cys Asn Thr Thr Gln Gly
130 135 140


Asn Glu Val Thr Ser Ile Leu Arg Trp Ala Lys Asp Ala Gly Lys Ser
145 150 155 160


Val Gly Ile Val Thr Thr Thr Arg Val Asn His Ala Thr Pro Ser Ala
165 170 175


Ala Tyr Ala His Ser Ala Asp Arg Asp Trp Tyr Ser Asp Asn Glu Met
180 185 190


Pro Pro Glu Ala Leu Ser Gln Gly Cys Lys Asp Ile Ala Tyr Gln Leu
195 200 205


Met His Asn Ile Arg Asp Ile Asp Val Ile Met Gly Gly Gly Arg Lys
210 215 220


Tyr Met Tyr Pro Lys Asn Lys Thr Asp Val Glu Tyr Glu Ser Asp Glu
225 230 235 240


Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asp Leu Val Asp Thr Trp
245 250 255


Lys Ser Phe Lys Pro Arg His Lys His Ser His Phe Ile Trp Asn Arg
260 265 270


Thr Glu Leu Leu Thr Leu Asp Pro His Asn Val Asp Tyr Leu Leu Gly
275 280 285


Leu Phe Glu Pro Gly Asp Met Gln Tyr Glu Leu Asn Arg Asn Asn Val
290 295 300


Thr Asp Pro Ser Leu Ser Glu Met Val Val Val Ala Ile Gln Ile Leu
305 310 315 320


Arg Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
325 330 335


Asp His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala
340 345 350


Val Glu Met Asp Arg Ala Ile Gly Gln Ala Gly Ser Leu Thr Ser Ser
355 360 365


Glu Asp Thr Leu Thr Val Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Thr
370 375 380


Phe Gly Gly Tyr Thr Pro Arg Gly Asn Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro
385 390 395 400


Met Leu Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ala Ile Leu Tyr Gly
405 410 415


Asn Gly Pro Gly Tyr Lys Val Val Gly Gly Glu Arg Glu Asn Val Ser
420 425 430


Met Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro
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450 455 460


Gly Pro Met Ala His Leu Leu His Gly Val His Glu Gln Asn Tyr Val
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Pro His Val Met Ala Tyr Ala Ala Cys Ile Gly Ala Asn Leu Gly His
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Cys Ala Pro Ala Ser Ser Ala Gly Ser Leu Ala Ala Gly Pro Leu Leu
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Leu Ala Leu Ala Leu Tyr Pro Leu Ser Val Leu Phe
515 520


<210> 4
<211> 524
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 4

Met Ile Ser Pro Phe Leu Val Leu Ala Ile Gly Thr Cys Leu Thr Asn
1 5 10 15


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Ala Gln Glu Thr Leu Lys Tyr Ala Leu Glu Leu Gln Lys Leu Asn Thr
35 40 45


Asn Val Ala Lys Asn Val Ile Met Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly Val
50 55 60


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65 70 75 80


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100 105 110


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Gly Val Ser Ala Ala Thr Glu Arg Ser Arg Cys Asn Thr Thr Gln Gly
130 135 140


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Val Gly Ile Val Thr Thr Thr Arg Val Asn His Ala Thr Pro Ser Ala
165 170 175


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Pro Pro Glu Ala Leu Ser Gln Gly Cys Lys Asp Ile Ala Tyr Gln Leu
195 200 205


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Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asp Leu Val Asp Thr Trp
245 250 255


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275 280 285


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Thr Asp Pro Ser Leu Ser Glu Met Val Val Val Ala Ile Gln Ile Leu
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Arg Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
325 330 335


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355 360 365


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<211> 524
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 5

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Lys Ser Phe Lys Pro Arg Tyr Lys His Ser His Phe Ile Trp Asn Arg
260 265 270


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275 280 285


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Arg Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
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Asp His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala
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355 360 365


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370 375 380


Phe Gly Gly Tyr Thr Pro Arg Gly Asn Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro
385 390 395 400


Met Leu Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ala Ile Leu Tyr Gly
405 410 415


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435 440 445


Leu Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ser Lys
450 455 460


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465 470 475 480


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485 490 495


Cys Ala Pro Ala Ser Ser Ala Gly Ser Leu Ala Ala Gly Pro Leu Leu
500 505 510


Leu Ala Leu Ala Leu Tyr Pro Leu Ser Val Leu Phe
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<210> 6
<211> 524
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 6

Met Ile Ser Pro Phe Leu Val Leu Ala Ile Gly Thr Cys Leu Thr Asn
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Ser Leu Val Pro Glu Lys Glu Lys Asp Pro Lys Tyr Trp Arg Asp Gln
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100 105 110


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165 170 175


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180 185 190


Pro Pro Glu Ala Leu Ser Gln Gly Cys Lys Asp Ile Ala Tyr Gln Leu
195 200 205


Met His Asn Ile Arg Asp Ile Asp Val Ile Met Gly Gly Gly Arg Lys
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Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asp Leu Val Asp Thr Trp
245 250 255


Lys Ser Phe Lys Pro Arg His Lys His Ser His Phe Ile Trp Asn Arg
260 265 270


Thr Glu Leu Leu Thr Leu Asp Pro His Asn Val Asp Tyr Leu Leu Gly
275 280 285


Leu Phe Glu Pro Gly Asp Met Gln Tyr Glu Leu Asn Arg Asn Asn Val
290 295 300


Thr Asp Pro Ser Leu Ser Glu Met Val Val Val Ala Ile Gln Ile Leu
305 310 315 320


Arg Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
325 330 335


Asp His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala
340 345 350


Val Glu Met Asp Arg Ala Ile Gly Gln Ala Gly Ser Leu Thr Ser Ser
355 360 365


Glu Asp Thr Leu Thr Val Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Thr
370 375 380


Phe Gly Gly Tyr Thr Pro Arg Gly Asn Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro
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Met Leu Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ala Ile Leu Tyr Gly
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Met Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro
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Leu Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ser Lys
450 455 460


Gly Pro Met Ala His Leu Leu His Gly Val His Glu Gln Asn Tyr Val
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Pro His Val Met Ala Tyr Ala Ala Cys Ile Gly Ala Asn Leu Gly His
485 490 495


Cys Ala Pro Ala Ser Ser Ala Gly Ser Leu Ala Ala Gly Pro Leu Leu
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<210> 7
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<212> PRT
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<400> 7

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<211> 524
<212> PRT
<213> Rattus norvegicus

<400> 8

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385 390 395 400


Met Val Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ala Ile Leu Tyr Gly
405 410 415


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485 490 495


Cys Ala Trp Ala Ser Ser Ala Ser Ser Pro Ser Pro Gly Ala Leu Leu
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Leu Pro Leu Ala Leu Phe Pro Leu Arg Thr Leu Phe
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<210> 9
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<212> PRT
<213> Canis lupus familiaris

<400> 9

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<213> Sus scrofa

<400> 10

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Met Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro
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Leu Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Lys
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Cys Ala Trp Ala Gly Ser Gly Ser Ala Pro Ser Pro Gly Ala Leu Leu
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Leu Pro Leu Ala Val Leu Ser Leu Arg Thr Leu Phe
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<210> 12
<211> 524
<212> PRT
<213> Bos taurus

<400> 12

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195 200 205


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Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asn Leu Ile Asp Ile Trp
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275 280 285


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325 330 335


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Leu Leu Leu Ala Leu Leu Pro Leu Gly Ser Leu Phe
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<210> 13
<211> 524
<212> PRT
<213> Bos taurus

<400> 13

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195 200 205


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Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asn Leu Ile Asp Ile Trp
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Lys Ser Phe Lys Pro Lys His Lys His Ser His Tyr Val Trp Asn Arg
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Asn Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
325 330 335


Asp His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala
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355 360 365


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405 410 415


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420 425 430


Met Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro
435 440 445


Leu Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Lys
450 455 460


Gly Pro Met Ala His Leu Leu His Gly Val His Glu Gln Asn Tyr Ile
465 470 475 480


Pro His Val Met Ala Tyr Ala Ala Cys Ile Gly Ala Asn Arg Asp His
485 490 495


Cys Ala Ser Ala Ser Ser Ser Gly Ser Pro Ser Pro Gly Pro Leu Leu
500 505 510


Leu Leu Leu Ala Leu Leu Pro Leu Gly Ser Leu Phe
515 520


<210> 14
<211> 124
<212> PRT
<213> Bos taurus

<400> 14

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Thr Arg Arg Ala Thr Ser Thr His Leu Leu Ala Gly
115 120


<210> 15
<211> 524
<212> PRT
<213> Felis catus

<400> 15

Met Ile Ser Pro Phe Leu Val Leu Ala Ile Gly Thr Cys Leu Thr Asn
1 5 10 15


Ser Leu Val Pro Glu Lys Glu Lys Asp Pro Lys Tyr Trp Arg Asp Gln
20 25 30


Ala Gln Gln Thr Leu Lys Asn Ala Leu Arg Leu Gln Lys Leu Asn Thr
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Asn Val Val Lys Asn Val Ile Met Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly Val
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85 90 95


Leu Ser Lys Thr Tyr Asn Thr Asn Ala Gln Val Pro Asp Ser Ala Gly
100 105 110


Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Ala Asn Glu Gly Thr Val
115 120 125


Gly Val Ser Ala Ala Thr Gln Arg Thr Gln Cys Asn Thr Thr Gln Gly
130 135 140


Asn Glu Val Thr Ser Ile Leu Arg Trp Ala Lys Asp Ser Gly Lys Ser
145 150 155 160


Val Gly Ile Val Thr Thr Thr Arg Val Asn His Ala Thr Pro Ser Ala
165 170 175


Ala Tyr Ala His Ser Ala Asp Arg Asp Trp Tyr Ser Asp Asn Glu Met
180 185 190


Pro Pro Glu Ala Leu Ser Gln Gly Cys Lys Asp Ile Ala Tyr Gln Leu
195 200 205


Met His Asn Val Arg Asp Ile Glu Val Ile Met Gly Gly Gly Arg Lys
210 215 220


Tyr Met Phe Pro Lys Asn Arg Thr Asp Val Glu Tyr Glu Met Asp Glu
225 230 235 240


Lys Ala Arg Gly Thr Arg Leu Asp Gly Leu Asn Leu Val Asp Ile Trp
245 250 255


Lys Ser Phe Lys Pro Arg His Lys His Ser His Tyr Val Trp Asn Arg
260 265 270


Thr Glu Leu Leu Thr Leu Asp Pro Tyr Gly Val Asp Tyr Leu Leu Gly
275 280 285


Leu Phe Glu Pro Gly Asp Met Gln Tyr Glu Leu Asn Arg Asn Ser Thr
290 295 300


Thr Asp Pro Ser Leu Ser Glu Met Val Glu Ile Ala Ile Lys Ile Leu
305 310 315 320


Ser Lys Asn Pro Lys Gly Phe Phe Leu Leu Val Glu Gly Gly Arg Ile
325 330 335


Asp His Gly His His Glu Gly Lys Ala Lys Gln Ala Leu His Glu Ala
340 345 350


Val Glu Met Asp Gln Ala Ile Gly Arg Ala Gly Ala Met Thr Ser Val
355 360 365


Glu Asp Thr Leu Thr Ile Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Thr
370 375 380


Phe Gly Gly Tyr Thr Pro Arg Gly Asn Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro
385 390 395 400


Met Val Ser Asp Thr Asp Lys Lys Pro Phe Thr Ser Ile Leu Tyr Gly
405 410 415


Asn Gly Pro Gly Tyr Lys Val Val Gly Gly Glu Arg Glu Asn Val Ser
420 425 430


Met Val Asp Tyr Ala His Asn Asn Tyr Gln Ala Gln Ser Ala Val Pro
435 440 445


Leu Arg His Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Lys
450 455 460


Gly Pro Met Ala His Leu Leu His Gly Val His Glu Gln Asn Tyr Ile
465 470 475 480


Pro His Val Met Ala Tyr Ala Ala Cys Ile Gly Ala Asn Leu Asp His
485 490 495


Cys Ala Ser Ala Ser Ser Ala Gly Gly Pro Ser Pro Gly Pro Leu Phe
500 505 510


Leu Leu Leu Ala Leu Pro Ser Leu Gly Ile Leu Phe
515 520


<210> 16
<211> 532
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 16

Met Gln Gly Pro Trp Val Leu Leu Leu Leu Gly Leu Arg Leu Gln Leu
1 5 10 15


Ser Leu Gly Ile Ile Pro Val Glu Glu Glu Asn Pro Asp Phe Trp Asn
20 25 30


Arg Gln Ala Ala Glu Ala Leu Gly Ala Ala Lys Lys Leu Gln Pro Ala
35 40 45


Gln Thr Ala Ala Lys Asn Leu Ile Ile Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly
50 55 60


Val Ser Thr Val Thr Ala Ala Arg Ile Leu Lys Gly Gln Lys Lys Asp
65 70 75 80


Lys Leu Gly Pro Glu Thr Phe Leu Ala Met Asp Arg Phe Pro Tyr Val
85 90 95


Ala Leu Ser Lys Thr Tyr Ser Val Asp Lys His Val Pro Asp Ser Gly
100 105 110


Ala Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Gly Asn Phe Gln Thr
115 120 125


Ile Gly Leu Ser Ala Ala Ala Arg Phe Asn Gln Cys Asn Thr Thr Arg
130 135 140


Gly Asn Glu Val Ile Ser Val Met Asn Arg Ala Lys Lys Ala Gly Lys
145 150 155 160


Ser Val Gly Val Val Thr Thr Thr Arg Val Gln His Ala Ser Pro Ala
165 170 175


Gly Ala Tyr Ala His Thr Val Asn Arg Asn Trp Tyr Ser Asp Ala Asp
180 185 190


Val Pro Ala Ser Ala Arg Gln Glu Gly Cys Gln Asp Ile Ala Thr Gln
195 200 205


Leu Ile Ser Asn Met Asp Ile Asp Val Ile Leu Gly Gly Gly Arg Lys
210 215 220


Tyr Met Phe Pro Met Gly Thr Pro Asp Pro Glu Tyr Pro Asp Asp Tyr
225 230 235 240


Ser Gln Gly Gly Thr Arg Leu Asp Gly Lys Asn Leu Val Gln Glu Trp
245 250 255


Leu Ala Lys His Gln Gly Ala Arg Tyr Val Trp Asn Arg Thr Glu Leu
260 265 270


Leu Gln Ala Ser Leu Asp Pro Ser Val Thr His Leu Met Gly Leu Phe
275 280 285


Glu Pro Gly Asp Met Lys Tyr Glu Ile His Arg Asp Ser Thr Leu Asp
290 295 300


Pro Ser Leu Met Glu Met Thr Glu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Ser Arg
305 310 315 320


Asn Pro Arg Gly Phe Phe Leu Phe Val Glu Gly Gly Arg Ile Asp His
325 330 335


Gly His His Glu Ser Arg Ala Tyr Arg Ala Leu Thr Glu Thr Ile Met
340 345 350


Phe Asp Asp Ala Ile Glu Arg Ala Gly Gln Leu Thr Ser Glu Glu Asp
355 360 365


Thr Leu Ser Leu Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Ser Phe Gly
370 375 380


Gly Tyr Pro Leu Arg Gly Ser Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro Gly Lys
385 390 395 400


Ala Arg Asp Arg Lys Ala Tyr Thr Val Leu Leu Tyr Gly Asn Gly Pro
405 410 415


Gly Tyr Val Leu Lys Asp Gly Ala Arg Pro Asp Val Thr Glu Ser Glu
420 425 430


Ser Gly Ser Pro Glu Tyr Arg Gln Gln Ser Ala Val Pro Leu Asp Gly
435 440 445


Glu Thr His Ala Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Arg Gly Pro Gln
450 455 460


Ala His Leu Val His Gly Val Gln Glu Gln Thr Phe Ile Ala His Val
465 470 475 480


Met Ala Phe Ala Ala Cys Leu Glu Pro Tyr Thr Ala Cys Asp Leu Ala
485 490 495


Pro Arg Ala Gly Thr Thr Asp Ala Ala His Pro Gly Pro Ser Val Val
500 505 510


Pro Ala Leu Leu Pro Leu Leu Ala Gly Thr Leu Leu Leu Leu Gly Thr
515 520 525


Ala Thr Ala Pro
530


<210> 17
<211> 535
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 17

Met Leu Gly Pro Cys Met Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Leu Arg
1 5 10 15


Leu Gln Leu Ser Leu Gly Ile Ile Pro Val Glu Glu Glu Asn Pro Asp
20 25 30


Phe Trp Asn Arg Glu Ala Ala Glu Ala Leu Gly Ala Ala Lys Lys Leu
35 40 45


Gln Pro Ala Gln Thr Ala Ala Lys Asn Leu Ile Ile Phe Leu Gly Asp
50 55 60


Gly Met Gly Val Ser Thr Val Thr Ala Ala Arg Ile Leu Lys Gly Gln
65 70 75 80


Lys Lys Asp Lys Leu Gly Pro Glu Ile Pro Leu Ala Met Asp Arg Phe
85 90 95


Pro Tyr Val Ala Leu Ser Lys Thr Tyr Asn Val Asp Lys His Val Pro
100 105 110


Asp Ser Gly Ala Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Gly Asn
115 120 125


Phe Gln Thr Ile Gly Leu Ser Ala Ala Ala Arg Phe Asn Gln Cys Asn
130 135 140


Thr Thr Arg Gly Asn Glu Val Ile Ser Val Met Asn Arg Ala Lys Lys
145 150 155 160


Ala Gly Lys Ser Val Gly Val Val Thr Thr Thr Arg Val Gln His Ala
165 170 175


Ser Pro Ala Gly Thr Tyr Ala His Thr Val Asn Arg Asn Trp Tyr Ser
180 185 190


Asp Ala Asp Val Pro Ala Ser Ala Arg Gln Glu Gly Cys Gln Asp Ile
195 200 205


Ala Thr Gln Leu Ile Ser Asn Met Asp Ile Asp Val Ile Leu Gly Gly
210 215 220


Gly Arg Lys Tyr Met Phe Arg Met Gly Thr Pro Asp Pro Glu Tyr Pro
225 230 235 240


Asp Asp Tyr Ser Gln Gly Gly Thr Arg Leu Asp Gly Lys Asn Leu Val
245 250 255


Gln Glu Trp Leu Ala Lys Arg Gln Gly Ala Arg Tyr Val Trp Asn Arg
260 265 270


Thr Glu Leu Met Gln Ala Ser Leu Asp Pro Ser Val Thr His Leu Met
275 280 285


Gly Leu Phe Glu Pro Gly Asp Met Lys Tyr Glu Ile His Arg Asp Ser
290 295 300


Thr Leu Asp Pro Ser Leu Met Glu Met Thr Glu Ala Ala Leu Arg Leu
305 310 315 320


Leu Ser Arg Asn Pro Arg Gly Phe Phe Leu Phe Val Glu Gly Gly Arg
325 330 335


Ile Asp His Gly His His Glu Ser Arg Ala Tyr Arg Ala Leu Thr Glu
340 345 350


Thr Ile Met Phe Asp Asp Ala Ile Glu Arg Ala Gly Gln Leu Thr Ser
355 360 365


Glu Glu Asp Thr Leu Ser Leu Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe
370 375 380


Ser Phe Gly Gly Tyr Pro Leu Arg Gly Ser Ser Ile Phe Gly Leu Ala
385 390 395 400


Pro Gly Lys Ala Arg Asp Arg Lys Ala Tyr Thr Val Leu Leu Tyr Gly
405 410 415


Asn Gly Pro Gly Tyr Val Leu Lys Asp Gly Ala Arg Pro Asp Val Thr
420 425 430


Glu Ser Glu Ser Gly Ser Pro Glu Tyr Arg Gln Gln Ser Ala Val Pro
435 440 445


Leu Asp Glu Glu Thr His Ala Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Arg
450 455 460


Gly Pro Gln Ala His Leu Val His Gly Val Gln Glu Gln Thr Phe Ile
465 470 475 480


Ala His Val Met Ala Phe Ala Ala Cys Leu Glu Pro Tyr Thr Ala Cys
485 490 495


Asp Leu Ala Pro Pro Ala Gly Thr Thr Asp Ala Ala His Pro Gly Arg
500 505 510


Ser Val Val Pro Ala Leu Leu Pro Leu Leu Ala Gly Thr Leu Leu Leu
515 520 525


Leu Glu Thr Ala Thr Ala Pro
530 535


<210> 18
<211> 532
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 18

Met Gln Gly Pro Trp Val Leu Leu Leu Leu Gly Leu Arg Leu Gln Leu
1 5 10 15


Ser Leu Gly Ile Ile Pro Val Glu Glu Glu Asn Pro Asp Phe Trp Asn
20 25 30


Arg Gln Ala Ala Glu Ala Leu Gly Ala Ala Lys Lys Leu Gln Pro Ala
35 40 45


Gln Thr Ala Ala Lys Asn Leu Ile Ile Phe Leu Gly Asp Gly Met Gly
50 55 60


Val Ser Thr Val Thr Ala Ala Arg Ile Leu Lys Gly Gln Lys Lys Asp
65 70 75 80


Lys Leu Gly Pro Glu Thr Phe Leu Ala Met Asp Arg Phe Pro Tyr Val
85 90 95


Ala Leu Ser Lys Thr Tyr Ser Val Asp Lys His Val Pro Asp Ser Gly
100 105 110


Ala Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Gly Asn Phe Gln Thr
115 120 125


Ile Gly Leu Ser Ala Ala Ala Arg Phe Asn Gln Cys Asn Thr Thr Arg
130 135 140


Gly Asn Glu Val Ile Ser Val Met Asn Arg Ala Lys Lys Ala Gly Lys
145 150 155 160


Ser Val Gly Val Val Thr Thr Thr Arg Val Gln His Ala Ser Pro Ala
165 170 175


Gly Ala Tyr Ala His Thr Val Asn Arg Asn Trp Tyr Ser Asp Ala Asp
180 185 190


Val Pro Ala Ser Ala Arg Gln Glu Gly Cys Gln Asp Ile Ala Thr Gln
195 200 205


Leu Ile Ser Asn Met Asp Ile Asp Val Ile Leu Gly Gly Gly Arg Lys
210 215 220


Tyr Met Phe Pro Met Gly Thr Pro Asp Pro Glu Tyr Pro Asp Asp Tyr
225 230 235 240


Ser Gln Gly Gly Thr Arg Leu Asp Gly Lys Asn Leu Val Gln Glu Trp
245 250 255


Leu Ala Lys His Gln Gly Ala Arg Tyr Val Trp Asn Arg Thr Glu Leu
260 265 270


Leu Gln Ala Ser Leu Asp Pro Ser Val Thr His Leu Met Gly Leu Phe
275 280 285


Glu Pro Gly Asp Met Lys Tyr Glu Ile His Arg Asp Ser Thr Leu Asp
290 295 300


Pro Ser Leu Met Glu Met Thr Glu Ala Ala Leu Leu Leu Leu Ser Arg
305 310 315 320


Asn Pro Arg Gly Phe Phe Leu Phe Val Glu Gly Gly Arg Ile Asp His
325 330 335


Gly His His Glu Ser Arg Ala Tyr Arg Ala Leu Thr Glu Thr Ile Met
340 345 350


Phe Asp Asp Ala Ile Glu Arg Ala Gly Gln Leu Thr Ser Glu Glu Asp
355 360 365


Thr Leu Ser Leu Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Ser Phe Gly
370 375 380


Gly Tyr Pro Leu Arg Gly Ser Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro Gly Lys
385 390 395 400


Ala Arg Asp Arg Lys Ala Tyr Thr Val Leu Leu Tyr Gly Asn Gly Pro
405 410 415


Gly Tyr Val Leu Lys Asp Gly Ala Arg Pro Asp Val Thr Glu Ser Glu
420 425 430


Ser Gly Ser Pro Glu Tyr Arg Gln Gln Ser Ala Val Pro Leu Asp Gly
435 440 445


Glu Thr His Ala Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Arg Gly Pro Gln
450 455 460


Ala His Leu Val His Gly Val Gln Glu Gln Thr Phe Ile Ala His Val
465 470 475 480


Met Ala Phe Ala Ala Cys Leu Glu Pro Tyr Thr Ala Cys Asp Leu Ala
485 490 495


Pro Arg Ala Gly Thr Thr Asp Ala Ala His Pro Gly Pro Ser Val Val
500 505 510


Pro Ala Leu Leu Pro Leu Leu Ala Gly Thr Leu Leu Leu Leu Gly Thr
515 520 525


Ala Thr Ala Pro
530


<210> 19
<211> 528
<212> PRT
<213> Homo sapiens

<400> 19

Met Gln Gly Pro Trp Val Leu Leu Leu Leu Gly Leu Arg Leu Gln Leu
1 5 10 15


Ser Leu Gly Val Ile Pro Ala Glu Glu Glu Asn Pro Ala Phe Trp Asn
20 25 30


Arg Gln Ala Ala Glu Ala Leu Asp Ala Ala Lys Lys Leu Gln Pro Ile
35 40 45


Gln Lys Val Ala Lys Asn Leu Ile Leu Phe Leu Gly Asp Gly Leu Gly
50 55 60


Val Pro Thr Val Thr Ala Thr Arg Ile Leu Lys Gly Gln Lys Asn Gly
65 70 75 80


Lys Leu Gly Pro Glu Thr Pro Leu Ala Met Asp Arg Phe Pro Tyr Leu
85 90 95


Ala Leu Ser Lys Thr Tyr Asn Val Asp Arg Gln Val Pro Asp Ser Ala
100 105 110


Ala Thr Ala Thr Ala Tyr Leu Cys Gly Val Lys Ala Asn Phe Gln Thr
115 120 125


Ile Gly Leu Ser Ala Ala Ala Arg Phe Asn Gln Cys Asn Thr Thr Arg
130 135 140


Gly Asn Glu Val Ile Ser Val Met Asn Arg Ala Lys Gln Ala Gly Lys
145 150 155 160


Ser Val Gly Val Val Thr Thr Thr Arg Val Gln His Ala Ser Pro Ala
165 170 175


Gly Thr Tyr Ala His Thr Val Asn Arg Asn Trp Tyr Ser Asp Ala Asp
180 185 190


Met Pro Ala Ser Ala Arg Gln Glu Gly Cys Gln Asp Ile Ala Thr Gln
195 200 205


Leu Ile Ser Asn Met Asp Ile Asp Val Ile Leu Gly Gly Gly Arg Lys
210 215 220


Tyr Met Phe Pro Met Gly Thr Pro Asp Pro Glu Tyr Pro Ala Asp Ala
225 230 235 240


Ser Gln Asn Gly Ile Arg Leu Asp Gly Lys Asn Leu Val Gln Glu Trp
245 250 255


Leu Ala Lys His Gln Gly Ala Trp Tyr Val Trp Asn Arg Thr Glu Leu
260 265 270


Met Gln Ala Ser Leu Asp Gln Ser Val Thr His Leu Met Gly Leu Phe
275 280 285


Glu Pro Gly Asp Thr Lys Tyr Glu Ile His Arg Asp Pro Thr Leu Asp
290 295 300


Pro Ser Leu Met Glu Met Thr Glu Ala Ala Leu Arg Leu Leu Ser Arg
305 310 315 320


Asn Pro Arg Gly Phe Tyr Leu Phe Val Glu Gly Gly Arg Ile Asp His
325 330 335


Gly His His Glu Gly Val Ala Tyr Gln Ala Leu Thr Glu Ala Val Met
340 345 350


Phe Asp Asp Ala Ile Glu Arg Ala Gly Gln Leu Thr Ser Glu Glu Asp
355 360 365


Thr Leu Thr Leu Val Thr Ala Asp His Ser His Val Phe Ser Phe Gly
370 375 380


Gly Tyr Thr Leu Arg Gly Ser Ser Ile Phe Gly Leu Ala Pro Ser Lys
385 390 395 400


Ala Gln Asp Ser Lys Ala Tyr Thr Ser Ile Leu Tyr Gly Asn Gly Pro
405 410 415


Gly Tyr Val Phe Asn Ser Gly Val Arg Pro Asp Val Asn Glu Ser Glu
420 425 430


Ser Gly Ser Pro Asp Tyr Gln Gln Gln Ala Ala Val Pro Leu Ser Ser
435 440 445


Glu Thr His Gly Gly Glu Asp Val Ala Val Phe Ala Arg Gly Pro Gln
450 455 460


Ala His Leu Val His Gly Val Gln Glu Gln Ser Phe Val Ala His Val
465 470 475 480


Met Ala Phe Ala Ala Cys Leu Glu Pro Tyr Thr Ala Cys Asp Leu Ala
485 490 495


Pro Pro Ala Cys Thr Thr Asp Ala Ala His Pro Val Ala Ala Ser Leu
500 505 510


Pro Leu Leu Ala Gly Thr Leu Leu Leu Leu Gly Ala Ser Ala Ala Pro
515 520 525


<210> 20
<211> 227
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Construct

<400> 20

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15


Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30


Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45


Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60


His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80


Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95


Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110


Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125


Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140


Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160


Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175


Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190


Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205


His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220


Pro Gly Lys
225

前述の発明を実施するための形態および実施例は、単に理解を明確にするために記載されてきた。不必要な制限がそれから理解されるべきではない。本開示は、示され、記載される正確な詳細に限定されず、当業者に明らかな変形に関しては、特許請求の範囲により定義される本開示内に含まれる。
例えば、本発明は、以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］患者における神経線維腫症１型（ＮＦ１）の少なくとも１つの症状を治療する方法であって、
ＮＦ１の患者における少なくとも１つの外科的介入と、
前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することと、
を含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
（ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
（ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
のうちの１つ以上をもたらす、方法。
［実施形態２］前記少なくとも１つの症状が、脊椎湾曲症、後弯症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転または角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／または尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の方法。
［実施形態３］患者におけるジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する方法であって、
ジストロフィー脊椎側弯症の患者への少なくとも１つの外科的介入と、
前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者にｓＡＬＰを投与することと、
を含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
（ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
（ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
のうちの１つ以上をもたらす、方法。
［実施形態４］少なくとも１つの症状が、非ジストロフィー脊椎側弯症と比較してより短いおよび／またはより鋭い角度のある湾曲、骨異常、肋骨の薄化、椎骨の脆弱、椎骨の回転、楔状椎、ならびに椎骨の侵食のうちの１つ以上を含む、実施形態３に記載の方法。
［実施形態５］前記ジストロフィー脊椎側弯症が、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症である、実施形態３または４に記載の方法。
［実施形態６］患者において骨癒合を誘導する方法であって、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者にｓＡＬＰを投与することを含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、外科的介入と併用され、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
（ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
（ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
のうちの１つ以上をもたらす、方法。
［実施形態７］前記骨癒合の増加が、関節固定によって結合された２つの骨間の増加である、実施形態１～６のいずれかに記載の方法。
［実施形態８］前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、実施形態１～７のいずれかに記載の方法。
［実施形態９］前記骨癒合の増加が、骨周囲器具類（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）における増加である、実施形態１～７のいずれかに記載の方法。
［実施形態１０］前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、実施形態１～９のいずれかに記載の方法。
［実施形態１１］前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、実施形態１０に記載の方法。
［実施形態１２］前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および器具類の挿入のうちの１つ以上を含む、実施形態１～１１のいずれかに記載の方法。
［実施形態１３］前記器具類が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、実施形態１２に記載の方法。
［実施形態１４］前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、実施形態１～１３のいずれかに記載の方法。
［実施形態１５］前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、実施形態１～１４のいずれかに記載の方法。
［実施形態１６］前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、実施形態１５に記載の方法。
［実施形態１７］前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、実施形態１～１６のいずれかに記載の方法。
［実施形態１８］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、実施形態１７に記載の方法。
［実施形態１９］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、実施形態１７または１８に記載の方法。
［実施形態２０］前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、実施形態１～１９のいずれかに記載の方法。
［実施形態２１］前記患者が、約１２歳である、実施形態１～２０のいずれかに記載の方法。
［実施形態２２］前記患者が、約１２歳より上である、実施形態１～２０のいずれかに記載の方法。
［実施形態２３］前記患者が、約１８歳である、実施形態１～２０のいずれかに記載の方法。
［実施形態２４］前記患者が、約１８歳より上である、実施形態１～２０のいずれかに記載の方法。
［実施形態２５］前記患者が、前記ｓＡＬＰを以前に投与されていない、実施形態１～２４のいずれかに記載の方法。
［実施形態２６］前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、実施形態１～２５のいずれかに記載の方法。
［実施形態２７］前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、実施形態１～２６のいずれかに記載の方法。
［実施形態２８］前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、実施形態１～２７のいずれかに記載の方法。
［実施形態２９］前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、実施形態２７または２８に記載の方法。
［実施形態３０］前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、実施形態２７または２８に記載の方法。
［実施形態３１］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、実施形態１～３０のいずれかに記載の方法。
［実施形態３２］前記ｓＡＬＰが、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される、実施形態１～３１のいずれかに記載の方法。
［実施形態３３］前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する、実施形態１～３２のいずれかに記載の方法。
［実施形態３４］前記忍容性が、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含む、実施形態３３に記載の方法。
［実施形態３５］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、実施形態１～３４のいずれかに記載の方法。
［実施形態３６］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、実施形態３５に記載の方法。
［実施形態３７］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、実施形態３５に記載の方法。
［実施形態３８］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態３７に記載の方法。
［実施形態３９］前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、実施形態３５～３８のいずれかに記載の方法。
［実施形態４０］前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、実施形態３９に記載の方法。
［実施形態４１］前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、実施形態１～４０のいずれかに記載の方法。
［実施形態４２］前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、実施形態１～４１のいずれかに記載の方法。
［実施形態４３］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４２のいずれかに記載の方法。
［実施形態４４］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４３に記載の方法。
［実施形態４５］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、実施形態４４に記載の方法。
［実施形態４６］本明細書に記載の特徴のうちの１つ以上を含む、方法。
［実施形態４７］患者における少なくとも１つの骨関連障害を治療する方法であって、
前記患者における少なくとも１つの外科的介入を含み、前記方法が、前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することを含み、前記ｓＡＬＰの投与により、前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨形成をもたらす骨癒合が増加する、方法。
［実施形態４８］前記骨癒合の増加が、関節固定により結合された２つの骨間の増加である、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態４９］前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、実施形態４７または４８に記載の方法。
［実施形態５０］前記骨癒合の増加が、金具と接触している骨における増加である、実施形態４７～４９のいずれかに記載の方法。
［実施形態５１］前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、またはナットである、実施形態５０に記載の方法。
［実施形態５２］前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、実施形態４７～５１のいずれかに記載の方法。
［実施形態５３］前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、実施形態５２に記載の方法。
［実施形態５４］前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および金具の挿入のうちの１つ以上を含む、実施形態４７～５３のいずれかに記載の方法。
［実施形態５５］前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、実施形態５４に記載の方法。
［実施形態５６］前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、実施形態４７～５５のいずれかに記載の方法。
［実施形態５７］前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、実施形態４７～５６のいずれかに記載の方法。
［実施形態５８］前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、実施形態５７に記載の方法。
［実施形態５９］前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、実施形態４７～５８のいずれかに記載の方法。
［実施形態６０］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、実施形態５９に記載の方法。
［実施形態６１］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、実施形態５９または６０に記載の方法。
［実施形態６２］前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、実施形態４７～６１のいずれかに記載の方法。
［実施形態６３］前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、実施形態４７～６２のいずれかに記載の方法。
［実施形態６４］前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、実施形態４７～６３のいずれかに記載の方法。
［実施形態６５］前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、実施形態４７～６４のいずれかに記載の方法。
［実施形態６６］前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、実施形態６４または６５に記載の方法。
［実施形態６７］前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、実施形態６４または６５に記載の方法。
［実施形態６８］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、実施形態４７～６７のいずれかに記載の方法。
［実施形態６９］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、実施形態４７～６８のいずれかに記載の方法。
［実施形態７０］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、実施形態６９に記載の方法。
［実施形態７１］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、実施形態６９に記載の方法。
［実施形態７２］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態７１に記載の方法。
［実施形態７３］前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、実施形態６９～７２のいずれかに記載の方法。
［実施形態７４］前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、実施形態７３に記載の方法。
［実施形態７５］前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、実施形態４７～７４のいずれかに記載の方法。
［実施形態７６］前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、実施形態４７～７５のいずれかに記載の方法。
［実施形態７７］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４７～７６のいずれかに記載の方法。
［実施形態７８］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７７に記載の方法。
［実施形態７９］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、実施形態７８に記載の方法。
［実施形態８０］前記少なくとも１つの外科的介入が、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択される、実施形態４７～７９のいずれかに記載の方法。
［実施形態８１］前記骨癒合の増加が、関節固定により結合された２つの骨間の増加である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態８２］前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態８３］前記骨癒合の増加が、骨周囲の金具における増加である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態８４］前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態８５］前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、実施形態８３に記載の方法。
［実施形態８６］前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および金具の挿入のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の方法。
［実施形態８７］前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、実施形態８６に記載の方法。
［実施形態８８］前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、実施形態１に記載の方法。
［実施形態８９］前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９０］前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、実施形態８９に記載の方法。
［実施形態９１］前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９２］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、実施形態９１に記載の方法。
［実施形態９３］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、実施形態９１に記載の方法。
［実施形態９４］前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９５］前記患者が、約１２歳である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９６］前記患者が、約１２歳より上である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９７］前記患者が、約１８歳である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９８］前記患者が、約１８歳より上である、実施形態１に記載の方法。
［実施形態９９］前記患者が、前記ｓＡＬＰを以前に投与されていない、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１００］前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１０１］前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１０２］前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１０３］前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、実施形態１０２に記載の方法。
［実施形態１０４］前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、実施形態１０１に記載の方法。
［実施形態１０５］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１０６］前記ｓＡＬＰが、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１０７］前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１０８］前記忍容性が、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含む、実施形態１０７に記載の方法。
［実施形態１０９］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１１０］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、実施形態１０９に記載の方法。
［実施形態１１１］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、実施形態１０９に記載の方法。
［実施形態１１２］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態１１１に記載の方法。
［実施形態１１３］前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、実施形態１０９に記載の方法。
［実施形態１１４］前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、実施形態１１３に記載の方法。
［実施形態１１５］前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１１６］前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１１７］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載の方法。
［実施形態１１８］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１７に記載の方法。
［実施形態１１９］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、実施形態１１８に記載の方法。
［実施形態１２０］前記骨癒合の増加が、金具と接触している骨における増加である、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１２１］前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、またはナットである、実施形態１２０に記載の方法。
［実施形態１２２］前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１２３］前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、実施形態１２２に記載の方法。
［実施形態１２４］前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および器具類の挿入のうちの１つ以上を含む、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１２５］前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、実施形態１２４に記載の方法。
［実施形態１２６］前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１２７］前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１２８］前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、実施形態１２７に記載の方法。
［実施形態１２９］前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１３０］前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、実施形態１２９に記載の方法。
［実施形態１３１］前記ビスホスホネートが、外科的介入の約３ヶ月後に投与される、実施形態１２９に記載の方法。
［実施形態１３２］前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１３３］前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１３４］前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１３５］前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１３６］前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、実施形態１３４に記載の方法。
［実施形態１３７］前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、実施形態１３４に記載の方法。
［実施形態１３８］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１３９］前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１４０］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、実施形態１３９に記載の方法。
［実施形態１４１］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、実施形態１３９に記載の方法。
［実施形態１４２］前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、実施形態１４１に記載の方法。
［実施形態１４３］前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、実施形態１３９に記載の方法。
［実施形態１４４］前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、実施形態１４３に記載の方法。
［実施形態１４５］前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１４６］前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１４７］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４７に記載の方法。
［実施形態１４８］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１４７に記載の方法。
［実施形態１４９］前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、実施形態１４８に記載の方法。
［実施形態１５０］前記少なくとも１つの外科的介入が、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択される、実施形態４７に記載の方法。

Claims (150)

1. 患者における神経線維腫症１型（ＮＦ１）の少なくとも１つの症状を治療する方法であって、
   ＮＦ１の患者における少なくとも１つの外科的介入と、
   前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することと、
   を含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
   （ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
   （ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
   のうちの１つ以上をもたらす、方法。
2. 前記少なくとも１つの症状が、脊椎湾曲症、後弯症、骨粗鬆症、椎骨の脆弱、肋骨の薄化、椎骨の回転、楔状椎、椎骨の侵食、回転または角度のある脊椎変形、硬膜拡張症、不完全な骨石灰化、ホスホエタノールアミン（ＰＥＡ）の血液および／または尿中レベルの上昇、石灰化減少、高カルシウム尿症、低身長、骨格変形、あひる歩行、骨痛、骨折、脱力感、ならびにピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
3. 患者におけるジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する方法であって、
   ジストロフィー脊椎側弯症の患者への少なくとも１つの外科的介入と、
   前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者にｓＡＬＰを投与することと、
   を含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
   （ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
   （ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
   のうちの１つ以上をもたらす、方法。
4. 少なくとも１つの症状が、非ジストロフィー脊椎側弯症と比較してより短いおよび／またはより鋭い角度のある湾曲、骨異常、肋骨の薄化、椎骨の脆弱、椎骨の回転、楔状椎、ならびに椎骨の侵食のうちの１つ以上を含む、請求項３に記載の方法。
5. 前記ジストロフィー脊椎側弯症が、ＮＦ１関連ジストロフィー脊椎側弯症である、請求項３または４に記載の方法。
6. 患者において骨癒合を誘導する方法であって、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者にｓＡＬＰを投与することを含み、前記ｓＡＬＰの前記投与が、外科的介入と併用され、前記ｓＡＬＰの前記投与が、次の：
   （ｉ）前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨をもたらす骨癒合の増加、および／または
   （ｉｉ）前記治療前の前記患者の基準点の骨塩密度と比較して、前記ｓＡＬＰの前記投与の８ヶ月後に検出不可能または０．０１％以下である、前記基準点の前記骨塩密度における平均変化、
   のうちの１つ以上をもたらす、方法。
7. 前記骨癒合の増加が、関節固定によって結合された２つの骨間の増加である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記骨癒合の増加が、骨周囲器具類（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）における増加である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項１０に記載の方法。
12. 前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および器具類の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記器具類が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項１２に記載の方法。
14. 前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項１７に記載の方法。
19. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項１７または１８に記載の方法。
20. 前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記患者が、約１２歳である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記患者が、約１２歳より上である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記患者が、約１８歳である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記患者が、約１８歳より上である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記患者が、前記ｓＡＬＰを以前に投与されていない、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項２７または２８に記載の方法。
30. 前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項２７または２８に記載の方法。
31. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記ｓＡＬＰが、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記忍容性が、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含む、請求項３３に記載の方法。
35. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項３５に記載の方法。
37. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項３５に記載の方法。
38. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項３７に記載の方法。
39. 前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項３９に記載の方法。
41. 前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
44. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の方法。
45. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項４４に記載の方法。
46. 本明細書に記載の特徴のうちの１つ以上を含む、方法。
47. 患者における少なくとも１つの骨関連障害を治療する方法であって、
    前記患者における少なくとも１つの外科的介入を含み、前記方法が、前記外科的介入前、介入中、および／または介入後に、約０．２ｍｇ／ｋｇ／週～約１２ｍｇ／ｋｇ／週をもたらす投薬量で、前記患者に可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を投与することを含み、前記ｓＡＬＰの投与により、前記患者の基準点で、前記治療前の前記患者の前記基準点と比較して、新たな骨形成をもたらす骨癒合が増加する、方法。
48. 前記骨癒合の増加が、関節固定により結合された２つの骨間の増加である、請求項４７に記載の方法。
49. 前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、請求項４７または４８に記載の方法。
50. 前記骨癒合の増加が、金具と接触している骨における増加である、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、またはナットである、請求項５０に記載の方法。
52. 前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項４７～５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項５２に記載の方法。
54. 前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および金具の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項４７～５３のいずれか一項に記載の方法。
55. 前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項５４に記載の方法。
56. 前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項４７～５５のいずれか一項に記載の方法。
57. 前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項５７に記載の方法。
59. 前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項４７～５８のいずれか一項に記載の方法。
60. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項５９に記載の方法。
61. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項５９または６０に記載の方法。
62. 前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項４７～６１のいずれか一項に記載の方法。
63. 前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項４７～６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項４７～６３のいずれか一項に記載の方法。
65. 前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項４７～６４のいずれか一項に記載の方法。
66. 前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項６４または６５に記載の方法。
67. 前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項６４または６５に記載の方法。
68. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項４７～６７のいずれか一項に記載の方法。
69. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項４７～６８のいずれか一項に記載の方法。
70. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項６９に記載の方法。
71. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項６９に記載の方法。
72. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項７１に記載の方法。
73. 前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項６９～７２のいずれか一項に記載の方法。
74. 前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項７３に記載の方法。
75. 前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項４７～７４のいずれか一項に記載の方法。
76. 前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項４７～７５のいずれか一項に記載の方法。
77. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４７～７６のいずれか一項に記載の方法。
78. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項７７に記載の方法。
79. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項７８に記載の方法。
80. 前記少なくとも１つの外科的介入が、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択される、請求項４７～７９のいずれか一項に記載の方法。
81. 前記骨癒合の増加が、関節固定により結合された２つの骨間の増加である、請求項１に記載の方法。
82. 前記骨癒合の増加が、骨折により分離されている骨の２つの部分間の増加である、請求項１に記載の方法。
83. 前記骨癒合の増加が、骨周囲の金具における増加である、請求項１に記載の方法。
84. 前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項１に記載の方法。
85. 前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項８３に記載の方法。
86. 前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および金具の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
87. 前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項８６に記載の方法。
88. 前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載の方法。
89. 前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
90. 前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項８９に記載の方法。
91. 前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
92. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項９１に記載の方法。
93. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項９１に記載の方法。
94. 前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項１に記載の方法。
95. 前記患者が、約１２歳である、請求項１に記載の方法。
96. 前記患者が、約１２歳より上である、請求項１に記載の方法。
97. 前記患者が、約１８歳である、請求項１に記載の方法。
98. 前記患者が、約１８歳より上である、請求項１に記載の方法。
99. 前記患者が、前記ｓＡＬＰを以前に投与されていない、請求項１に記載の方法。
100. 前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項１に記載の方法。
101. 前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項１に記載の方法。
102. 前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項１に記載の方法。
103. 前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項１０２に記載の方法。
104. 前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項１０１に記載の方法。
105. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項１に記載の方法。
106. 前記ｓＡＬＰが、神経線維腫症１型の少なくとも１つの症状、ジストロフィー脊椎側弯症の少なくとも１つの症状を治療する、または骨癒合を誘導するのに治療的に有効な量で投与される、請求項１に記載の方法。
107. 前記患者が、前記ｓＡＬＰの投与に忍容性を呈する、請求項１に記載の方法。
108. 前記忍容性が、注射部位紅斑、ヘモグロビンの減少、発熱、肺炎、上気道感染、中耳炎、嘔吐、便秘、下痢、歯牙喪失、上咽頭炎、発疹、う蝕、および易刺激性からなる群から選択される有害事象の発生の欠如または減少を含む、請求項１０７に記載の方法。
109. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項１に記載の方法。
110. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項１０９に記載の方法。
111. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項１０９に記載の方法。
112. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１１１に記載の方法。
113. 前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項１０９に記載の方法。
114. 前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項１１３に記載の方法。
115. 前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項１に記載の方法。
116. 前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項１に記載の方法。
117. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
118. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項１１７に記載の方法。
119. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項１１８に記載の方法。
120. 前記骨癒合の増加が、金具と接触している骨における増加である、請求項４７に記載の方法。
121. 前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、金属ケージ、釘、ピン、またはナットである、請求項１２０に記載の方法。
122. 前記骨癒合の増加が、陰影度の増加である、請求項４７に記載の方法。
123. 前記陰影度の増加が、Ｘ線撮影またはコンピュータ断層撮影（ＣＴ）により判断される、請求項１２２に記載の方法。
124. 前記外科的介入が、関節固定、骨の除去、骨移植材の挿入、および器具類の挿入のうちの１つ以上を含む、請求項４７に記載の方法。
125. 前記金具が、ネジ、ロッド、プレート、および金属ケージのうちの１つ以上を含む、請求項１２４に記載の方法。
126. 前記外科的介入が、観血的手術または低侵襲手術のうちの１つ以上を含む、請求項４７に記載の方法。
127. 前記患者に１つ以上の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を投与することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
128. 前記ＢＭＰが、前記外科的介入中に投与される、請求項１２７に記載の方法。
129. 前記患者に１つ以上のビスホスホネート（複数可）を投与することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
130. 前記ビスホスホネートが、前記外科的介入後に投与される、請求項１２９に記載の方法。
131. 前記ビスホスホネートが、外科的介入の約３ヶ月後に投与される、請求項１２９に記載の方法。
132. 前記ｓＡＬＰが、前記外科的介入の約７ヶ月後に投与される、請求項４７に記載の方法。
133. 前記ｓＡＬＰが、毎日または毎週の投与用に製剤化される、請求項４７に記載の方法。
134. 前記ｓＡＬＰが、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回、または週７回の投与用に製剤化される、請求項４７に記載の方法。
135. 前記ｓＡＬＰが、週３回の投与用に２ｍｇ／ｋｇの投薬量で、週３回の投与用に３ｍｇ／ｋｇの投薬量で、または週６回の投与用に１ｍｇ／ｋｇの投薬量で製剤化される、請求項４７に記載の方法。
136. 前記ｓＡＬＰが、毎日１回の投与用に製剤化される、請求項１３４に記載の方法。
137. 前記ｓＡＬＰが、連日または隔日での投与用に製剤化される、請求項１３４に記載の方法。
138. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月またはそれ以上の治療期間の間投与される、請求項４７に記載の方法。
139. 前記ｓＡＬＰが、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に医薬組成物に製剤化される、請求項４７に記載の方法。
140. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、生理食塩水である、請求項１３９に記載の方法。
141. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、塩化ナトリウムおよびリン酸ナトリウムを含む、請求項１３９に記載の方法。
142. 前記少なくとも１つの薬学的に許容される担体が、１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび２５ｍＭのリン酸ナトリウムを含む、請求項１４１に記載の方法。
143. 前記医薬組成物が、皮下、筋肉内、静脈内、経口、経鼻、舌下、髄腔内、および皮内のうちの少なくとも１つの投与用に製剤化される、請求項１３９に記載の方法。
144. 前記医薬組成物が、皮下投与用に製剤化される、請求項１４３に記載の方法。
145. 前記ｓＡＬＰが、アルカリホスファターゼの可溶性細胞外ドメインである、請求項４７に記載の方法。
146. 前記ｓＡＬＰが、約６ｍｇ／ｋｇ／週～約９ｍｇ／ｋｇ／週の投薬量で投与される、請求項４７に記載の方法。
147. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
148. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列を含む、請求項１４７に記載の方法。
149. 前記ｓＡＬＰが、配列番号１の配列を有するアミノ酸配列からなる、請求項１４８に記載の方法。
150. 前記少なくとも１つの外科的介入が、膝、肩、臀部、足首、肘、もしくは手首の関節鏡検査および半月板切除、肩の関節鏡検査および除圧、手根管開放、膝の関節鏡検査および軟骨形成、支持インプラントの除去、膝の関節鏡検査および前十字靱帯再建、膝置換、大腿骨頸部骨折の修復、転子部骨折の修復、皮膚／筋肉／骨／骨折のデブリードマン、膝の関節鏡検査、片方または両方の半月板の修復、臀部置換、肩の関節鏡検査／鎖骨遠位端切除、回旋腱板の腱の修復、橈骨または尺骨の修復骨折、椎弓切除、足首骨折の修復（２踝型）、肩の関節鏡検査およびデブリードマン、腰部脊椎固定、橈骨の遠位部の修復骨折、下背部椎間板手術、指の腱鞘の切開、足首骨折（腓骨）の修復、大腿骨骨幹部骨折の修復、ならびに転子部骨折の修復からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。

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