JP2024026130A - 新規の昆虫阻害タンパク質 - Google Patents

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Abstract

【課題】作物植物及び種子の農業関連の害虫に対して昆虫阻害活性を示す新規のクラスのタンパク質を提供する。【解決手段】ＰｉｒＡ、ＰｉｒＢ、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質である殺虫性タンパク質又はその殺虫性断片をコードするポリヌクレオチドセグメントに操作可能に連結された異種プロモーターを含む組換え核酸分子であって、殺虫性タンパク質は特定のアミノ酸配列をコードする、もしくは特定のポリヌクレオチド配列とストリンジェントなハイブリッド形成条件下でハイブリッド形成するポリヌクレオチドである、組換え核酸分子である。【選択図】なし

Description

関連出願の参照
本出願は、２０１８年９月２５日出願の米国仮出願第６２／７３６，２３６号の利益を
主張するものであり、この仮出願はその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
配列表の組込み
２０１９年９月２４日に、コンピューターで読み取り可能な形式の配列表を含有する「
ＭＯＮＳ４６５ｗｏ－ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と名付けられたファ
イルが作成された。このファイルは４５６キロバイト（ＭＳ－Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標
）で測定）であり、電子提出（米国特許庁ＥＦＳ－Ｗｅｂファイリングシステムを用いて
）によって同時に出願され、参照によってその全体がこの出願に組み込まれる。
発明の分野
本発明は一般に、昆虫阻害タンパク質の分野に関する。作物植物及び種子の農業関連の
害虫に対して昆虫阻害活性を示す新規のクラスのタンパク質が開示されている。特に、開
示されているタンパク質は、作物植物及び種子の農業関連の害虫、特に鞘翅目及び鱗翅目
の害虫種に対して殺虫活性がある。開示されている毒素タンパク質の１以上をコードする
組換えポリヌクレオチド構築物を含有する植物、植物の一部、及び種子が提供される。
とりわけ、トウモロコシ、ダイズ、サトウキビ、イネ、コムギ、野菜、ワタを含む農業
上重要な植物からの収穫量を改善することがますます重要になっている。増加する人口に
食料を供給し、衣服を着せ、エネルギーを提供する農産物の必要性の高まりに加えて、気
候関連の影響及び農業慣行以外の土地を使用するという増加する人口からの圧力は、農業
用に利用可能な耕作可能地の量を減らすと予測される。これらの要因は、特に植物のバイ
オテクノロジー及び農学慣行に大きな改善がない場合に、食料安全保障の厳しい予測につ
ながってきた。これらの圧力に照らして、技術、農業技術、及び害虫管理における環境的
に持続可能な改善は、農業に利用できる限られた量の耕作可能地で作物生産を拡大するた
めの欠かせないツールである。
昆虫、特に鱗翅目、鞘翅目、及び半翅目内の昆虫は、畑作物への被害の主な原因と考え
られており、それによって、蔓延している地域での収穫量が減少する。歴史的に、合成化
学殺虫剤の集中的な適用は農業における害虫駆除剤として当てにされていた。新たな耐性
の問題に加えて、環境及びヒトの健康への懸念が生物殺虫剤の研究開発を刺激した。この
研究努力は、細菌を含む種々の昆虫病原性微生物種の進歩的な発見と使用につながった。
昆虫病原性細菌、特にＢａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の可能性が発見され、生物学的
害虫駆除剤として開発されると、生物的防除のパラダイムが変化した。細菌、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（Ｂｔ）の菌株は、Ｂｔ菌株が特定の昆虫に対して
高い毒性を示すことが発見されて以来、殺虫性タンパク質の供給源として使用されてきた
。Ｂｔ株は、胞子形成の開始時及び定常増殖期に傍胞子結晶封入体内に局在するデルタ内
毒素を産生することが知られており（例えば、Ｃｒｙタンパク質）、分泌された殺虫性タ
ンパク質を産生することも知られている。感受性の高い昆虫が摂取すると、デルタ内毒素
と同様に分泌毒素が中腸上皮の表面で効果を発揮し、細胞膜を破壊し、細胞の破壊と死を
もたらす。殺虫性タンパク質をコードする遺伝子はまた、他のＢａｃｉｌｌｕｓ及び、例
えば、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ（以前Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓとして
知られていた「Ｌｓ」）、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｏｐｉｌｌｉａｅ、Ｐｈｏｔ
ｏｒｈａｂｄｕｓ及びＸｅｎｏｒｈａｂｄｕｓのような追加の細菌種の多様性を含む、Ｂ
ｔ以外の細菌種においても同定されている。
結晶性及び分泌型の可溶性殺虫性毒素は、宿主に高い特異性があり、化学殺虫剤の代替
品として世界中で受け入れられている。例えば、殺虫性毒素タンパク質は、農業上重要な
植物を昆虫の侵入から保護し、化学殺虫剤の適用の必要性を減らし、収量を増やすために
種々の農業用途で採用されてきた。殺虫性毒素タンパク質は、種々の細菌株を含有する微
生物製剤を植物表面に分散させるための噴霧のような機械的方法によって、及び遺伝子形
質転換技術を用いて殺虫性毒素タンパク質を発現するトランスジェニックの植物及び種子
を生産することによって、作物植物の農業関連の害虫を防除するために使用される。
殺虫性毒素タンパク質を発現するトランスジェニック植物の使用は世界的に適応されて
きた。例えば、２０１２年には、２，６１０万ヘクタールに、Ｂｔ毒素を発現するトラン
スジェニック作物が植えられた（Ｊａｍｅｓ，Ｃ．，Ｇｌｏｂａｌ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ
Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｉｚｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈ／ＧＭ Ｃｒｏｐｓ：２０１２．ＩＳ
ＡＡＡ．Ｂｒｉｅｆ Ｎｏ．４４）。 トランスジェニック昆虫保護作物の世界的な使用
及びこれらの作物で使用される限られた数の殺虫性毒素タンパク質は、現在利用されてい
る殺虫性タンパク質に耐性を付与する既存の昆虫対立遺伝子についての選択圧を作り出し
ている。
殺虫性毒素タンパク質に対する標的害虫での耐性の発達は、殺虫性毒素タンパク質を発
現するトランスジェニック作物に対する昆虫耐性の上昇を管理するのに有用である新しい
形態の殺虫性毒素タンパク質の発見及び開発の継続的なニーズを生み出す。有効性が改善
され、感受性の高い昆虫種のさらに広いスペクトルに対する防除を示す新しいタンパク質
毒素は、耐性対立遺伝子を発生させることができる生き残った昆虫の数を減らすであろう
。加えて、同じ害虫に対して毒性があり、異なる作用機序を示す２以上のトランスジェニ
ック殺虫性毒素タンパク質の１つの植物での使用は、単一の標的昆虫種における耐性の可
能性を低下させる。
したがって、本発明者らは本明細書において、標的の鱗翅目、鞘翅目、及び半翅目の害
虫種に対して殺虫活性を示す類似の毒素タンパク質、変異型タンパク質、及び例示的な組
換えタンパク質と共にＸｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ及びＰｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓに由来する
タンパク質毒素ファミリーを開示する。
本明細書で開示されているのは、作物植物の１以上の害虫に対して阻害活性を呈するこ
とが示される、本明細書でＰｉｒＡＢ（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ昆虫関連）タンパク質
毒素と呼ばれる昆虫阻害活性を持つ殺虫性タンパク質（毒素タンパク質）の群である。Ｐ
ｉｒＡＢタンパク質毒素クラスのタンパク質は単独で、またはＰｉｒＡタンパク質及びＰ
ｉｒＢ細胞タンパク質の融合体として、または他の殺虫性タンパク質及び毒剤と組み合わ
せて製剤及び 植物体にて使用することができるので、農業システムで現在使用されてい
る殺虫性タンパク質及び殺虫剤化学物質への代替を提供する。
一実施形態では、本出願で開示されているのは、殺虫性タンパク質またはその断片をコ
ードするポリヌクレオチドセグメントに操作可能に連結された異種プロモーターを含む組
換え核酸分子であり、その際、（ａ）前記殺虫性タンパク質は、配列番号２、４、６、８
、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、
３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６
８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４
、９６、９８、１００、１０２、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１
１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１
３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、ま
たは１５７のアミノ酸配列を含み；または（ｂ）前記殺虫性タンパク質は、（ｉ）配列番
号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５に対して少
なくとも６５％の同一性；もしくは（ｉｉ）配列番号１０９、１２１、及び１２５に対し
て少なくとも７０％の同一性；もしくは（ｉｉｉ）配列番号１２、１８、２４、３６、４
２、６２、６８、７４、８０、８６、９８、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、
１５３、１５５及び１５７に対して少なくとも８０％の同一性；もしくは（ｉｖ）配列番
号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８２％の同一性；もしく
は（ｖ）配列番号６及び５０に対して少なくとも８６％の同一性；もしくは（ｉｖ）配列
番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは（ｖｉｉ）配列番号
４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは（ｖｉｉｉ）配列番号
２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同一性；もしくは（ｉ
ｘ）配列番号１３５と少なくとも９９％の 同一性；または（ｘ）配列番号８、１０、
１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６、７０、７２、７６、７
８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１０７、１３９、及び１４
３との１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、または（ｃ）前記ポリヌクレオチ
ドセグメントは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、
２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４
９、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９
、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、
９７、９９、１０１、１０３、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１
６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３
６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５
６、または１５８ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとハイブリッド形成する；
または（ｄ）前記組換え核酸分子はベクターと操作可能に連結され、前記ベクターはプラ
スミド、ファージミド、バクミド、コスミド、及び細菌もしくは酵母の人工染色体から成
る群から選択される。組換え核酸分子は、植物において殺虫性タンパク質を発現するよう
に機能する配列を含むことができ、または、植物細胞で発現して殺虫で有効量の殺虫性タ
ンパク質を生産する。
本出願の別の実施形態では、本出願の組換え核酸分子を含む宿主細胞であり、その際、
宿主細胞は細菌細胞及び植物細胞から成る群から選択される。企図される宿主細胞には、
Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｅｖｉｂａ
ｃｉｌｌｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌ
ａ、Ｐａｎｔｏｅａ、及びＥｒｗｉｎｉａが挙げられる。特定の実施形態では、前記Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ種はＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓもしくはＢａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒ
ｉｎｇｉｅｎｓｉｓであり、前記ＢｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕはＢｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｅｒｕｓであり、または前記ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａはＥｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉである。企図される植物宿主細胞には、双子葉植物細胞及び単子
葉植物細胞が挙げられる。さらに企図される植物宿主細胞には、アルファルファ、バナナ
、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャベツ、ブラッシカ、ニンジン、キャッサバ、トウ
ゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、白菜、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウ
モロコシ、クローバー、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｓｐ．）、ウリ、キュウリ、ダグラ
スモミ、ナス、ユーカリ、亜麻、ニンニク、ブドウ、ホップ、ネギ、レタス、ロブロリー
パイン、キビ、メロン、ナッツ、オートムギ、オリーブ、タマネギ、観賞用植物、ヤシ、
牧草、エンドウマメ、ピーナッツ、コショウ、ハトエンドウ、マツ、ジャガイモ、ポプラ
、カボチャ（ｐｕｍｐｋｉｎ）、ラジアータパイン、ダイコン、ナタネ、イネ、根茎、ラ
イムギ、サフラワー、低木、ソルガム、サザンパイン、ダイズ、ホウレンソウ、カボチャ
（ｓｑｕａｓｈ）、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイートコーン、スイー
トガム、スイートポテト、スイッチグラス、茶、タバコ、トマト、ライコムギ、芝草、ス
イカ、コムギの植物細胞が挙げられる。
さらに別の実施形態では、殺虫性タンパク質は、西洋トウモロコシ根切り虫、西部トウ
モロコシ根切り虫、北部トウモロコシ根切り虫、メキシコ型トウモロコシ根切り虫、ブラ
ジル型トウモロコシ根切り虫、コロラドハムシ、Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｉｄｕｌ
ａ及びＤｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐｅｃｉｏｓａから成るブラジル型トウモロコシ根切り
虫複合体、アブラナ科ノミハムシ、縞模様ノミハムシ、西洋クロノミハムシを含む鞘翅目
昆虫に対して活性を示す。
別の実施形態では、殺虫性タンパク質は、クロヨトウムシ、アメリカタバコガ、コナガ
、欧州アワノメイガ、ツマジロクサヨトウ、南部ヨトウムシ、ダイズルーパー、南西部ア
ワノメイガ、オオタバコガ（Ｔｏｂａｃｃｏ Ｂｕｄｗｏｒｍ）、ベルベットビーンキャ
タピラー、サトウキビボーラー、モロコシマダラメイガ、クロアワヨトウ、シロイチモジ
ヨトウ、オオタバコガ（Ｏｌｄ Ｗｏｒｌｄ Ｂｏｌｌｗｏｒｍ）、ハスモンヨトウ、ま
たはピンクボールワームを含む鱗翅目昆虫に対して活性を示す。
さらに別の実施形態では、殺虫性タンパク質は、ミナミアオカメムシ、亜熱帯性クサギ
カメムシ、ミナミアオカメムシ、亜熱帯性クサギカメムシ、アカシマカメムシ、クロトゲ
アオハラカメムシ種、チャバネカメムシ、クサギカメムシ、ミドリカメムシ、クサギカメ
ムシ、西洋サビイロメクラガメまたはサビイロメクラガメ含む半翅目の昆虫種に対して活
性を示す。
本出願において企図されるのはまた、殺虫性タンパク質またはその断片をコードするポ
リヌクレオチドセグメントに操作可能に連結された異種プロモーターを含む組換え核酸分
子を含む植物であり、その際、（ａ）前記殺虫性タンパク質は、配列番号２、４、６、８
、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、
３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６
８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４
、９６、９８、１００、１０２、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１
１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１
３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、ま
たは１５７のアミノ酸配列を含む；または（ｂ）前記殺虫性タンパク質は、（ｉ）配列番
号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５に対して少
なくとも６５％の同一性；もしくは（ｉｉ）配列番号１０９、１２１、及び１２５に対し
て少なくとも７０％の同一性；もしくは（ｉｉｉ）配列番号１２、１８、２４、３６、４
２、６２、６８、７４、８０、８６、９８、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、
１５３、１５５、及び１５７に対して少なくとも８０％の同一性；もしくは（ｉｖ）配列
番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８２％の同一性；もし
くは（ｖ）配列番号６及び５０に対して少なくとも８６％の同一性；もしくは（ｖｉ）配
列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは（ｖｉｉ）配列番
号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは（ｖｉｉｉ）配列番
号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同一性；もしくは（
ｉｘ）配列番号１３５と少なくとも９９％の同一性；もしくは（ｘ）配列番号８、１０、
１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６、７０、７２、７６、７
８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１０７、１３９、及び１４
３との１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む；または（ｃ）前記ポリヌクレオチ
ドセグメントは、ストリンジェントなハイブリッド形成条件下で配列番号４９、５１、５
２、５３、５４、５５、５６、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６もしく
は１５８のヌクレオチド配列の相補体とハイブリッド形成する；または（ｄ）前記植物が
検出可能な量の前記殺虫性タンパク質を提示する。特定の実施形態では、殺虫性タンパク
質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２
６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５８
、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、
８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０５、１０７、１０９
、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９
、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９
、１５１、１５３、１５５、または１５７を含む。一実施形態では、植物は単子葉植物ま
たは双子葉植物のいずれかである。別の実施形態では、植物は、アルファルファ、バナナ
、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャベツ、ブラッシカ、ニンジン、キャッサバ、トウ
ゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、白菜、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウ
モロコシ、クローバー、ワタ、ウリ、キュウリ、ダグラスモミ、ナス、ユーカリ、亜麻、
ニンニク、ブドウ、ホップ、ネギ、レタス、ロブロリーパイン、キビ、メロン、ナッツ、
オートムギ、オリーブ、タマネギ、観賞用植物、ヤシ、牧草、エンドウマメ、ピーナッツ
、コショウ、ハトエンドウマメ、マツ、ジャガイモ、ポプラ、カボチャ（ｐｕｍｐｋｉｎ
）、ラジアータパイン、ダイコン、ナタネ、イネ、根茎、ライムギ、サフラワー、低木、
ソルガム、サザンパイン、ダイズ、ホウレンソウ、カボチャ（ｓｑｕａｓｈ）、イチゴ、
テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイートコーン、スイートガム、スイートポテト、ス
イッチグラス、茶、タバコ、トマト、ライコムギ、芝草、スイカ、コムギから成る群から
選択される。
さらなる実施形態では、組換え核酸分子を含む種子が開示される。
別の実施形態では、本出願で開示されている組換え核酸分子を含む昆虫阻害組成物が企
図される。昆虫阻害組成物はさらに、前記殺虫性タンパク質とは異なる少なくとも１つの
他の殺虫剤をコードするヌクレオチド配列を含むことができる。少なくとも１つの他の殺
虫剤は、昆虫阻害タンパク質、昆虫阻害ｄｓＲＮＡ分子、及び補助タンパク質から成る群
から選択される。昆虫阻害組成物における少なくとも１つの他の殺虫剤は、鱗翅目、鞘翅
目、または半翅目の１以上の害虫種に対して活性を示す。昆虫阻害組成物における少なく
とも１つの他の殺虫剤は、一実施形態では、Ｃｒｙ１Ａ、Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、
Ｃｒｙ１Ａ．１０５、Ｃｒｙ１Ａｅ、Ｃｒｙ１Ｂ、Ｃｒｙ１Ｃ、Ｃｒｙ１Ｃ変異型、Ｃｒ
ｙ１Ｄ、Ｃｒｙ１Ｅ、Ｃｒｙ１Ｆ、Ｃｒｙ１Ａ／Ｆキメラ、Ｃｒｙ１Ｇ、Ｃｒｙ１Ｈ、Ｃ
ｒｙ１Ｉ、Ｃｒｙ１Ｊ、Ｃｒｙ１Ｋ、Ｃｒｙ１Ｌ、Ｃｒｙ２Ａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、Ｃｒｙ２
Ａｅ、Ｃｒｙ３、Ｃｒｙ３Ａ変異型、Ｃｒｙ３Ｂ、Ｃｒｙ４Ｂ、Ｃｒｙ６、Ｃｒｙ７、Ｃ
ｒｙ８、Ｃｒｙ９、Ｃｒｙ１５、Ｃｒｙ３４、Ｃｒｙ３５、Ｃｒｙ４３Ａ、Ｃｒｙ４３Ｂ
、Ｃｒｙ５１Ａａ１、ＥＴ２９、ＥＴ３３、ＥＴ３４、ＥＴ３５、ＥＴ６６、ＥＴ７０、
ＴＩＣ４００、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、ＴＩＣ４３１、ＴＩＣ８００、ＴＩＣ８０
７、ＴＩＣ８３４、ＴＩＣ８５３、ＴＩＣ９００、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ１２０１、ＴＩ
Ｃ１４１５、ＴＩＣ２１６０、ＴＩＣ３１３１、ＴＩＣ８３６、ＴＩＣ８６０、ＴＩＣ８
６７、ＴＩＣ８６９、ＴＩＣ１１００、ＶＩＰ３Ａ、ＶＩＰ３Ｂ、ＶＩＰ３Ａｂ、ＡＸＭ
Ｉ－ＡＸＭＩ－、ＡＸＭＩ－８８、ＡＸＭＩ－９７、ＡＸＭＩ－１０２、ＡＸＭＩ－１１
２、ＡＸＭＩ－１１７、ＡＸＭＩ－１００、ＡＸＭＩ－１１５、ＡＸＭＩ－１１３、及び
ＡＸＭＩ－００５、ＡＸＭＩ１３４、ＡＸＭＩ－１５０、ＡＸＭＩ－１７１、ＡＸＭＩ－
１８４、ＡＸＭＩ－１９６、ＡＸＭＩ－２０４、ＡＸＭＩ－２０７、ＡＸＭＩ－２０９、
ＡＸＭＩ－２０５、ＡＸＭＩ－２１８、ＡＸＭＩ－２２０、ＡＸＭＩ－２２１ｚ、ＡＸＭ
Ｉ－２２２ｚ、ＡＸＭＩ－２２３ｚ、ＡＸＭＩ－２２４ｚ及びＡＸＭＩ－２２５ｚ、ＡＸ
ＭＩ－２３８、ＡＸＭＩ－２７０、ＡＸＭＩ－２７９、ＡＸＭＩ－３４５、ＡＸＭＩ－３
３５，ＡＸＭＩ－Ｒ１及びその変異型、ＩＰ３及びその変異型、ＤＩＧ－３、ＤＩＧ－５
、ＤＩＧ－１０、ＤＩＧ－６５７ ＤＩＧ－１１、Ｃｒｙ７１Ａａ１、Ｃｒｙ７２Ａａ１
、ＰＨＩ－４変異型、ＰＩＰ－７２変異型、ＰＩＰ－４５変異型、ＰＩＰ－６４変異型、
ＰＩＰ－７４変異型、ＰＩＰ－７５変異型、ＰＩＰ－７７変異型、Ａｘｍｉ４２２、Ｄｉ
ｇ－３０５、Ａｘｍｉ４４０、ＰＩＰ－４７変異型、Ａｘｍｉ２８１、ＢＴ－００９、Ｂ
Ｔ－００１２、ＢＴ－００１３、ＢＴ－００２３、ＢＴ００６７、ＢＴ－００４４、ＢＴ
－００５１、ＢＴ－００６８、ＢＴ－０１２８、ＤＩＧ－１７、ＤＩＧ－９０、ＤＩＧ－
７９、Ｃｒｙ１ＪＰ５７８Ｖ、Ｃｒｙ１ＪＰＳ１、及びＣｒｙ１ ＪＰＳ１Ｐ５７８Ｖか
ら成る群から選択される。
本出願で開示されている検出可能な量の組換え核酸分子を含む商品生産物が企図される
。そのような商品生産物には、穀物取扱業者によって袋詰めされた商品トウモロコシ、コ
ーンフレーク、コーンケーキ、コーンフラワー、コーンミール、コーンシロップ、コーン
油、コーンサイレージ、コーンスターチ、コーンシリアル等、及び対応するワタ商品生産
物、例えば、飼料または食品、繊維、紙、バイオマスのために加工される全粒綿実または
加工された綿実、綿油、リント、種子や植物の一部、及び綿油由来の燃料または綿繰り機
廃棄物由来のペレットのような燃料製品、及び対応するダイズ商品生産物、例えば、全粒
ダイズ種子または加工されたダイズ種子、ダイズ油、ダイズタンパク質、ダイズミール、
ダイズ粉、ダイズフレーク、ダイズふすま、豆乳、ダイズチーズ、ダイズワイン、ダイズ
を含む動物飼料、ダイズを含む紙、ダイズを含むクリーム、ダイズバイオマス、及びダイ
ズ植物及びダイズ植物の一部を用いて生産された燃料製品、及び対応するイネ、コムギ、
ソルガム、ハトエンドウ、ピーナッツ、果実、メロン、及び該当する場合、本出願の検出
可能な量のそのようなポリヌクレオチド及びまたはポリペプチドを含有するそのような商
品生産物のジュース、濃縮物、ジャム、ゼリー、マーマレード、及び他の食用形態を含む
植物性商品生産物が挙げられる。
本出願において企図されるのはまた、本出願で開示されている組換え核酸分子を含む種
子を生産する方法である。該方法は、本出願で開示されている組換え核酸分子を含む種子
の少なくとも１つを植えることと、種子から植物を育てることと、植物から種子を収穫す
ることとを含み、その際、収穫された種子は本出願における組換え核酸分子を含む。
別の実例となる実施形態では、昆虫の侵入に耐性のある植物が提供され、その際、前記
植物の細胞は、（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、
２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４
８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０
、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０５、
１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、
１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、
１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、もしくは１５７に記述されたような殺虫で有
効量の殺虫性タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む；または（ｂ）前記殺虫性タ
ンパク質は、（ｉ）配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３
３、及び１４５に対して少なくとも６５％の同一性；もしくは（ｉｉ）配列番号１０９、
１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性；もしくは（ｉｉｉ）配列番号１
２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８、１１３、１１７、
１１９、１４７、１４９、１５３、１５５及び１５７に対して少なくとも８０％の同一性
；もしくは（ｉｖ）配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくと
も８２％の同一性；もしくは（ｖ）配列番号６及び５０に対して少なくとも８６％の同一
性；もしくは（ｖｉ）配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；も
しくは（ｖｉｉ）配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もし
くは（ｖｉｉｉ）配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８
％の同一性；もしくは（ｉｘ）配列番号１３５に対して少なくとも９９％の同一性；もし
くは（ｘ）配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４
、６６、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０
５、１０７、１３９、及び１４３と１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本出願において開示されているのはまた、鞘翅目または鱗翅目の種の害虫を防除する方
法、及び植物、特に作物植物の鞘翅目または鱗翅目の種の害虫の侵入を防除する方法であ
る。方法は、一実施形態では、（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６
、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、
４４、４６、４８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７
６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１
０２、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１
２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１
４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、または１５７に記述されたよ
うな殺虫で有効量の１以上の殺虫性タンパク質と害虫を接触させることを含む；または（
ｂ）前記殺虫性タンパク質は、（ｉ）配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２
９、１３１、１３３、及び１４５に対して少なくとも６５％の同一性；もしくは（ｉｉ）
配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性；もしくは（ｉ
ｉｉ）配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８、
１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５に対して少なくとも８０％の
同一性及び１５７；もしくは（ｉｖ）配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１
に対して少なくとも８２％の同一性；もしくは（ｖ）配列番号６及び５０に対して少なく
とも８６％の同一性；もしくは（ｖｉ）配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９
４％の同一性；もしくは（ｖｉｉ）配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７
％の同一性；もしくは（ｖｉｉｉ）配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対し
て少なくとも９８％の同一性；もしくは（ｉｘ）配列番号１３５と少なくとも９９％の同
一性；もしくは（ｘ）配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、
６０、６４、６６、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１
００、１０５、１０７、１３９、及び１４３との１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。
本明細書でさらに提供されるのは、殺虫性タンパク質またはその断片をコードするポリ
ヌクレオチドセグメントを含む組換え核酸分子の存在を検出する方法であり、その際、（
ａ）前記殺虫性タンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８
、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、
４６、４８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７
８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、
１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、
１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、
１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、または１５７のアミノ酸配列を含む
；または（ｂ）前記殺虫性タンパク質は、（ｉ）配列番号４４、４６、４８、１２３、１
２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５に対して少なくとも６５％の同一性；もしく
は（ｉｉ）配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性；も
しくは（ｉｉｉ）配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８
６、９８、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５及び１５７に対し
て少なくとも８０％の同一性；もしくは（ｉｖ）配列番号３０、９２、１１１、１１５、
及び１５１に対して少なくとも８２％の同一性；もしくは（ｖ）配列番号６及び５０に対
して少なくとも８６％の同一性；もしくは（ｖｉ）配列番号１３７及び１４１に対して少
なくとも９４％の同一性；もしくは（ｖｉｉ）配列番号４、２６、及び３２に対して少な
くとも９７％の同一性；もしくは（ｖｉｉｉ）配列番号２、２８、３４、１０２、及び１
０２に対して少なくとも９８％の同一性；もしくは（ｉｘ）配列番号１３５と少なくとも
９９％の同一性；もしくは（ｘ）配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４
０、５８、６０、６４、６６、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４
、９６、１００、１０５、１０７、１３９、及び１４３との１００％の同一性を有するア
ミノ酸配列を含む；または（ｃ）前記ポリヌクレオチドセグメントは、配列番号１、３、
５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３
３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５２、５３、５４、５５
、５６、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、
８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０
４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２
４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４
４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、もしくは１５８のヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドとハイブリッド形成する。本発明の一実施形態では、方法
は、ストリンジェントなハイブリッド形成条件下で、本明細書で提供される殺虫性タンパ
ク質またはその断片をコードするポリヌクレオチドセグメントを含む植物由来のゲノムＤ
ＮＡとハイブリッド形成するが、そのようなハイブリッド形成条件下ではセグメントを含
まない他の同質遺伝子の植物由来のゲノムＤＮＡとハイブリッド形成しない核酸プローブ
に核酸の試料を接触させることを含み、その際、プローブは、配列番号４９、５１、５２
、５３、５４、５５、５６、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、または
１５８に対して相同性もしくは相補性であり、または（ｉ）配列番号４４、４６、４８、
１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５に対して少なくとも６５％の同一
性；もしくは（ｉｉ）配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の
同一性；もしくは（ｉｉｉ）配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４
、８０、８６、９８、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５及び１
５７に対して少なくとも８０％の同一性；もしくは（ｉｖ）配列番号３０、９２、１１１
、１１５、及び１５１に対して少なくとも８２％の同一性；もしくは（ｖ）配列番号６及
び５０に対して少なくとも８６％の同一性；もしくは（ｖｉ）配列番号１３７及び１４１
に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは（ｖｉｉ）配列番号４、２６、及び３２に
対して少なくとも９７％の同一性；もしくは（ｖｉｉｉ）配列番号２、２８、３４、１０
２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同一性；もしくは（ｉｘ）配列番号１３５と
少なくとも９９％の同一性；もしくは（ｘ）配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２
、３８、４０、５８、６０、６４、６６、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、
９０、９４、９６、１００、１０５、１０７、１３９、及び１４３との１００％の同一性
を有するアミノ酸配列を含む殺虫性タンパク質をコードする配列に対して相同性もしくは
相補性である。方法はさらに、（ａ）試料及びプローブをストリンジェントなハイブリッ
ド形成条件に供することと、（ｂ）プローブと試料のＤＮＡとのハイブリッド形成を検出
することとを含んでもよい。
本発明によって提供されるのはまた、タンパク質を含む試料にて殺虫性タンパク質また
はその断片の存在を検出する方法であり、その際、前記殺虫性タンパク質は、配列番号２
、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、
３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５８、６０、６２、６
４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０
、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３
、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３
、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３
、１５５、または１５７のアミノ酸配列を含む；または、前記殺虫性タンパク質は、（ｉ
）配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５に
対して少なくとも６５％の同一性；もしくは（ｉｉ）配列番号１０９、１２１、及び１２
５に対して少なくとも７０％の同一性；もしくは（ｉｉｉ）配列番号１２、１８、２４、
３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８、１１３、１１７、１１９、１４７、
１４９、１５３、１５５及び１５７に対して少なくとも８０％の同一性；もしくは（ｉｖ
）配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８２％の同一性
；もしくは（ｖ）配列番号６及び５０に対して少なくとも８６％の同一性；もしくは（ｖ
ｉ）配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは（ｖｉｉ）
配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは（ｖｉｉｉ）
配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同一性；もし
くは（ｉｘ）配列番号１３５と少なくとも９９％の同一性；もしくは（ｘ）配列番号８、
１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６、７０、７２、７
６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１０７、１３９、及
び１４３との１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、この方法
は、（ａ）試料を免疫反応性抗体と接触させることと、（ｂ）抗体と殺虫性タンパク質ま
たはその断片との結合を検出することとを含み。その際、結合はタンパク質の存在を示す
。いくつかの実施形態では、検出する工程はＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロットを含む
。
配列の簡単な説明
配列番号１はＴＩＣ４７７１ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＩＳＢ０００００２株から得られた核酸配列
である。
配列番号２は、ＴＩＣ４７７１ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号３はＴＩＣ４７７２ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＩＳＢ０００００２株から得られた核酸配列
である。
配列番号４はＴＩＣ４４７２ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号５はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ４７７１及びＴＩＣ４７７２
のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ６８８０をコードする核
酸配列である。
配列番号６はＴＩＣ６８８０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７はＴＩＣ７５７５ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｅｈｌｅｒｓｉｉの８５８２３株から得られた核酸配列である。
配列番号８はＴＩＣ７５７５ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号９はＴＩＣ７５７６ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｅｈｌｅｒｓｉｉの８５８２３株から得られた核酸配列である。
配列番号１０はＴＩＣ７５７６ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１１はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７５７
６のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３１６をコードする
核酸配列である。
配列番号１２はＴＩＣ９３１６ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１３はＴＩＣ７６６０ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｃａｂａｎｉｌｌａｓｉｉの８５９０８株から得られた核酸配列であ
る。
配列番号１４はＴＩＣ７６６０ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１５はＴＩＣ７６６１ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｃａｂａｎｉｌｌａｓｉｉの８５９０８株から得られた核酸配列であ
る。
配列番号１６はＴＩＣ７６６１ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１７はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６０及びＴＩＣ７６６
１のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３１７をコードする
核酸配列である。
配列番号１８はＴＩＣ９３１７ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１９はＴＩＣ７６６２ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｅｈｌｅｒｓｉｉの８５８８７株から得られた核酸配列である。
配列番号２０はＴＩＣ７６６２ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号２１はＴＩＣ７６６３ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｅｈｌｅｒｓｉｉの８５８８７株から得られた核酸配列である。
配列番号２２はＴＩＣ７６６３ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号２３はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６２及びＴＩＣ７６６
３のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３１８をコードする
核酸配列である。
配列番号２４はＴＩＣ９３１８ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号２５はＴＩＣ７６６４ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｐｏｉｎａｒｉｉの８６１９８株から得られた核酸配列である。
配列番号２６はＴＩＣ７６６４ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号２７はＴＩＣ７６６５ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｐｏｉｎａｒｉｉの８６１９８株から得られた核酸配列である。
配列番号２８はＴＩＣ７６６５ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号２９はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６４及びＴＩＣ７６６
５のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３１９をコードする
核酸配列である。
配列番号３０はＴＩＣ９３１９ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号３１はＴＩＣ７６６６ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＰｈｏ
ｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓの８６１９７株から得られた核酸配列であ
る。
配列番号３２はＴＩＣ７６６６ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号３３はＴＩＣ７６６７殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＰｈｏｔ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓの８６１９７株から得られた核酸配列である
。
配列番号３４はＴＩＣ７６６７ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号３５はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６６及びＴＩＣ７６６
７のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３２２をコードする
核酸配列である。
配列番号３６はＴＩＣ９３２２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号３７はＴＩＣ７６６８ ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質の配列をコードするＰｈｏ
ｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓの８６１９４株から得られた核酸配列であ
る。
配列番号３８はＴＩＣ７６６８ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号３９はＴＩＣ７６６９ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするＰｈｏ
ｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓの８６１９４株から得られた核酸配列であ
る。
配列番号４０はＴＩＣ７６６９ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号４１はインフレーで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６８及びＴＩＣ７６６９
のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３２０をコードする核
酸配列である。
配列番号４２はＴＩＣ９３２０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号４３はＴＩＣ７９３９殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするマイクロ
バイオーム内に含まれる未知の細菌株から得られた核酸配列である。
配列番号４４はＴＩＣ７９３９ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号４５はＴＩＣ７９４０ ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質の配列をコードするマイク
ロバイオーム内に含まれる未知の細菌株から得られた核酸配列である。
配列番号４６はＴＩＣ７９４０ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号４７はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７９３９及びＴＩＣ７９４
０のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ９３２１をコードする
核酸配列である。
配列番号４８はＴＩＣ９３２１ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号４９はＴＩＣ６８８０ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞
での発現に使用される合成コード配列であり、ＴＩＣ４７７１タンパク質をコードする断
片の開始メチオニンコドンの直後に追加のアラニンコドンが挿入されている。
配列番号５０はＴＩＣ６８８０ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号５１はＴＩＣ９３１６ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞での
発現に使用される合成コード配列である。
配列番号５２はＴＩＣ９３１７ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞での
発現に使用される合成コード配列である。
配列番号５３はＴＩＣ９３１８ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞での
発現に使用される合成コード配列である。
配列番号５４はＴＩＣ９３１９ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞での
発現に使用される合成コード配列である。
配列番号５５はＴＩＣ９３２０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞での
発現に使用される合成コード配列である。
配列番号５６はＴＩＣ９３２２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞での
発現に使用される合成コード配列である。
配列番号５７はＴＩＣ１０３５７殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＳｈｅ
ｗａｎｅｌｌａ ｖｉｏｌａｃｅａのＤＳＳ１２株から得られた核酸配列である。
配列番号５８はＴＩＣ１０３５７ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号５９はＴＩＣ１０３６６殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＳｈｅ
ｗａｎｅｌｌａ ｖｉｏｌａｃｅａのＤＳＳ１２株から得られた核酸配列である。
配列番号６０はＴＩＣ１０３６６ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号６１はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３５７及びＴＩＣ１０
３６６のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３７５をコー
ドする核酸配列である。
配列番号６２はＴＩＣ１０３７５ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号６３はＴＩＣ１０３５８殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＰｈｏ
ｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓのｌａｕｍｏｎｄｉｉＴＴＯ１株から得ら
れた核酸配列である。
配列番号６４はＴＩＣ１０３５８ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号６５はＴＩＣ１０３６７殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＰｈｏ
ｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓのｌａｕｍｏｎｄｉｉＴＴＯ１株から得ら
れた核酸配列である。
配列番号６６はＴＩＣ１０３６７ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号６７はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３５８及びＴＩＣ１０
３６７のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３７６をコー
ドする核酸配列である。
配列番号６８は、ＴＩＣ１０３７６ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号６９は、ＴＩＣ１０３６０殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＰｈ
ｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃａから得られた核酸配列である。
配列番号７０はＴＩＣ１０３６０ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７１はＴＩＣ１０３６９殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＰｈｏ
ｔｏｒｈａｂｄｕｓ ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃａから得られた核酸配列である。
配列番号７２はＴＩＣ１０３６９ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７３はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６０及びＴＩＣ１０
３６９のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３７７をコー
ドする核酸配列である。
配列番号７４はＴＩＣ１０３７７ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７５はＴＩＣ１０３６１殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｓｐのＮＢＡＩＩＸｅｎＳａ０４株から得られた核酸配列である。
配列番号７６はＴＩＣ１０３６１ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７７はＴＩＣ１０３７０殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｓｐのＮＢＡＩＩＸｅｎＳａ０４株から得られた核酸配列である。
配列番号７８はＴＩＣ１０３７０ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号７９はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６１及びＴＩＣ１０
３７０のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３７８をコー
ドする核酸配列である。
配列番号８０はＴＩＣ１０３７８ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号８１はＴＩＣ１０３６２殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＹｅｒ
ｓｉｎｉａ ａｌｄｏｖａｅの６７０－８３株から得られた核酸配列である。
配列番号８２はＴＩＣ１０３６２ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号８３はＴＩＣ１０３７１殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＹｅｒ
ｓｉｎｉａ ａｌｄｏｖａｅの６７０－８３株から得られた核酸配列である。
配列番号８４はＴＩＣ１０３７１ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号８５はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６２及びＴＩＣ１０
３７１のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３７９をコー
ドする核酸配列である。
配列番号８６はＴＩＣ１０３７９ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号８７はＴＩＣ１０３６３殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｄｏｕｃｅｔｉａｅのＦＲＭ１６株から得られた核酸配列である。
配列番号８８はＴＩＣ１０３６３ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号８９はＴＩＣ１０３７２殺虫性ＰｉｒＢ細胞タンパク質の配列をコードするＸ
ｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｄｏｕｃｅｔｉａｅのＦＲＭ１６株から得られた核酸配列である
。
配列番号９０はＴＩＣ１０３７２ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号９１はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６３及びＴＩＣ１０
３７２のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３８０をコー
ドする核酸配列である。
配列番号９２は、ＴＩＣ１０３８０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号９３はＴＩＣ１０３６４殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードする Ｘｅ
ｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｇｒｉｆｆｉｎｉａｅのＢＭＭＣＢ株から得られた核酸配列である
。
配列番号９４はＴＩＣ１０３６４ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号９５はＴＩＣ１０３７３殺虫性ＰｉｒＢ細胞タンパク質の配列をコードするＸ
ｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｇｒｉｆｆｉｎｉａｅのＢＭＭＣＢ株から得られる核酸配列であ
る。
配列番号９６はＴＩＣ１０３７３ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号９７はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４及びＴＩＣ１０
３６４のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１０３８１をコー
ドする核酸配列である。
配列番号９８はＴＩＣ１０３８１ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号９９はＴＩＣ１０３５９殺虫性ＰｉｒＡタンパク質の配列をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａから得られた核酸配列である。
配列番号１００はＴＩＣ１０３５９ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１０１はＴＩＣ１０３６８殺虫性ＰｉｒＢ細胞タンパク質の配列をコードする
Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａから得られた核酸配列である。
配列番号１０２はＴＩＣ１０３６８ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１０３はコード配列ＴＩＣ１０３５９及びＴＩＣ１０３６８から構成されるオ
ペロンをコードする核酸配列である。
配列番号１０４はＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８殺虫性ＰｉｒＡタンパク質配列をコード
するＰｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓのＨｍ株から得られた核酸配列
である。
配列番号１０５はＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８ ＰｉｒＡタンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１０６は、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９殺虫性ＰｉｒＢタンパク質配列をコー
ドするＰｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓのＨｍ株から得られた核酸配
列である。
配列番号１０７はＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１０８はインフレームで操作可能に連結されたＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８及
びＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、
ＴＩＣ１０４３４をコードする核酸配列である。
配列番号１０９はＴＩＣ１０４３４ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１１０はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７６
６５のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１２１０をコード
する核酸配列である。
配列番号１１１はＴＩＣ１１２１０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１１２はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７６
６７のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１２１１をコード
する核酸配列である。
配列番号１１３はＴＩＣ１１２１１ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１１４はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６２及びＴＩＣ７６
６５のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１２１２をコード
する核酸配列である。
配列番号１１５はＴＩＣ１１２１２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１１６はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７６
６１のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１３０１をコード
する核酸配列である。
配列番号１１７はＴＩＣ１１３０１ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１１８はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６０及びＴＩＣ７５
７６のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１３０２をコード
する核酸配列である。
配列番号１１９はＴＩＣ１１３０２ｆ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列であ
る。
配列番号１２０はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ４７７１、ＴＩＣ４７７
１、及びＴＩＣ４４７２のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ
１１４４０をコードする核酸配列である。
配列番号１２１は、ＴＩＣ１１４４０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列であ
る。
配列番号１２２はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ７５７
５及びＴＩＣ７５７６のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１
１４４１をコードする核酸配列である。
配列番号１２３は、ＴＩＣ１１４４１ｆ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１２４はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ４７７
１、及びＴＩＣ４４７２のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ
１１４４２をコードする核酸配列である。
配列番号１２５はＴＩＣ１１４４２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１２６はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６０、ＴＩＣ７５７
５、及びＴＩＣ７５７６コード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１
１４４３をコードする核酸配列である。
配列番号１２７はＴＩＣ１１４４３ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列であ
る。
配列番号１２８は、インフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６０及びＴＩＣ７
５７６のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１４４４をコー
ドする核酸配列である。
配列番号１２９はＴＩＣ１１４４４ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１３０はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６０、ＴＩＣ７６６
２、及びＴＩＣ７６６３コード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１
１４４５をコードする核酸配列である。
配列番号１３１はＴＩＣ１１４４５ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１３２はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ７６６２、ＴＩＣ７６６
０、及びＴＩＣ７６６１コード配列から構成される融合タンパク質、ＴＩＣ１１４４６を
コードする核酸配列である。
配列番号１３３はＴＩＣ１１４４６ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１３４はＴＩＣ１１５０５殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＸｅ
ｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＭＤＩ－００３５７７７株から得られた
核酸配列である。
配列番号１３５はＴＩＣ１１５０５ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１３６はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４及びＴＩＣ１
１５０５のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１５０６をコ
ードする核酸配列である。
配列番号１３７はＴＩＣ１１５０６ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１３８はＴＩＣ１１５１０殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＸｅ
ｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｂｏｖｉｅｎｉｉのＭＤＩ－００３５８０８株から得られた核酸配
列である。
配列番号１３９はＴＩＣ１１５１０ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１４０はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４及びＴＩＣ１
１５１０のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１５１２をコ
ードする核酸配列である。
配列番号１４１はＴＩＣ１１５１２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１４２はＴＩＣ１１５１１殺虫性ＰｉｒＢタンパク質の配列をコードするＸｅ
ｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＡＮ６ ／ １株から得られた核酸配列
である。
配列番号１４３はＴＩＣ１１５１１ ＰｉｒＢタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１４４はインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４及びＴＩＣ１
１５１１のコード配列から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１５１３をコ
ードする核酸配列である。
配列番号１４５はＴＩＣ１１５１３ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１４６はＴＩＣ１０３７６ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物
細胞での発現に使用される合成コード配列であり、ＴＩＣ１０３５８タンパク質をコード
する断片の開始メチオニンコドンの直後に追加のアラニンコドンが挿入されている。
配列番号１４７はＴＩＣ１０３７６ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１４８はＴＩＣ１０３７８ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物
細胞での発現に使用される合成コード配列であり、ＴＩＣ１０３６１タンパク質をコード
する断片の開始メチオニンコドンの直後に追加のアラニンコドンが挿入されている。
配列番号１４９はＴＩＣ１０３７８ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１５０はＴＩＣ１０３８０ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物
細胞における発現に使用される合成コード配列であり、ＴＩＣ１０３６３タンパク質をコ
ードする断片の開始メチオニンコドンの直後に追加のアラニンコドンが挿入されている。
配列番号１５１はＴＩＣ１０３８０ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１５２はＴＩＣ１０３８１ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物
細胞での発現に使用される合成コード配列であり、ＴＩＣ１０３６４タンパク質をコード
する断片の開始メチオニンコドンの直後に追加のアラニンコドンが挿入されている。
配列番号１５３はＴＩＣ１０３８１ＰＬ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列で
ある。
配列番号１５４は操作可能に連結されたＴＩＣ７６６１及びＴＩＣ７６６０のコード配
列から構成されるＴＩＣ１１１０３ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞で
の発現に使用される合成コード配列である。
配列番号１５５はＴＩＣ１１１０３ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１５６は操作可能に連結されたＴＩＣ７６６３及びＴＩＣ７６６２のコード配
列から構成されるＴＩＣ１１１０４ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞で
の発現に使用される合成コード配列である。
配列番号１５７はＴＩＣ１１１０４ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質のアミノ酸配列である
。
配列番号１５８はＴＩＣ１１３０２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードする植物細胞
での発現に使用される合成コード配列である。
配列番号１５９は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉで発現され、タンパク質の精製
に使用されるコード配列に操作可能に連結されているヒスチジンタグをコードする合成コ
ード配列である。
配列番号１６０はヒスチジンタグのアミノ酸配列である。
農業害虫駆除の技術分野における問題は、標的害虫に対して有効であり、標的害虫種に
対して広いスペクトルの毒性を示し、望ましくない農業問題を引き起こすことなく植物で
発現することができ、且つ植物で商業的に使用されている現在の毒素と比べて代替の作用
機序を提供する新しい毒素タンパク質の必要性として特徴付けることができる。
本明細書で開示されているのは、鞘翅目、半翅目及び鱗翅目の害虫に耐性を提供するＰ
ｉｒＡタンパク質ＴＩＣ４７７１、ＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ７６６０、ＴＩＣ７６６２、
ＴＩＣ７６６４、ＴＩＣ７６６６、ＴＩＣ７６６８、ＴＩＣ７９３９、ＴＩＣ１０３５７
、ＴＩＣ１０３５８、ＴＩＣ１０３６０、ＴＩＣ１０３６１、ＴＩＣ１０３６２、ＴＩＣ
１０３６３、ＴＩＣ１０３６４、ＴＩＣ１０３５９、及びＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８（
まとめて、「ＰｉｒＡタンパク質」）；ＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ４７７２、ＴＩＣ７５
７６、ＴＩＣ７６６１、ＴＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６５、ＴＩＣ７６６７、ＴＩＣ７６
６９、ＴＩＣ７９４０、ＴＩＣ１０３６６、ＴＩＣ１０３６７、ＴＩＣ１０３６９、ＴＩ
Ｃ１０３７０、ＴＩＣ１０３７１、ＴＩＣ１０３７２、ＴＩＣ１０３７３、ＴＩＣ１０３
６８、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９、ＴＩＣ１１５０５、ＴＩＣ１１５１０、及びＴＩＣ
１１５１１（まとめて、「ＰｉｒＢタンパク質」）；ならびにＰｉｒＡＢ融合タンパク質
、ＴＩＣ６８８０、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９
、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２１、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ１０
３７５、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７７、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３７９、
ＴＩＣ１０３８０、ＴＩＣ１０３８１、ＴＩＣ１０４３４、ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１
１２１１、ＴＩＣ１１２１２、ＴＩＣ１１３０１、ＴＩＣ１１３０２、ＴＩＣ１１４４０
、ＴＩＣ１１４４１、ＴＩＣ１１４４２、ＴＩＣ１１４４３、ＴＩＣ１１４４４、ＴＩＣ
１１４４５、ＴＩＣ１１４４６、ＴＩＣ１１５０６、ＴＩＣ１１５１２、ＴＩＣ１１５１
３、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０
３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、及びＴＩＣ１１１０４（まとめて、「ＰｉｒＡＢ融合タ
ンパク質」）によって例示される新規のＰｉｒＡＢ殺虫性タンパク質のクラスである。
開示されているのはまた、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９
３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９
３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ
１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２をコード
する、植物細胞での発現のために設計された合成コード配列である。さらに開示されてい
るのは、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質の
うちの１以上をコードするコード配列に操作可能に連結されたプロモーターを含む組換え
核酸分子である。
本出願における「ＰｉｒＡタンパク質」、「ＰｉｒＡタンパク質毒素」、「ＰｉｒＡ毒
素タンパク質」、「ＰｉｒＡ殺虫性タンパク質」、「ＰｉｒＡ関連毒素」、または「Ｐｉ
ｒＡ関連毒素タンパク質」等への言及は、鞘翅目害虫、半翅目害虫及び鱗翅目害虫に対す
る活性を付与し、そのようなタンパク質のＰｉｒＡタンパク質のいずれかとの配列比較が
約２０～約１００パーセントの画分比率のアミノ酸配列同一性を生じるのであれば殺虫活
性または昆虫阻害活性を示す任意のタンパク質を含む、ＴＩＣ４７７１（配列番号２）、
ＴＩＣ７５７５（配列番号８）、ＴＩＣ７６６０（配列番号１４）、ＴＩＣ７６６２（配
列番号２０）、ＴＩＣ７６６４（配列番号２６）、ＴＩＣ７６６６（配列番号３２）、Ｔ
ＩＣ７６６８（配列番号３８）、ＴＩＣ７９３９（配列番号４４）、ＴＩＣ１０３５７（
配列番号５８）、ＴＩＣ１０３５８（配列番号６４）、ＴＩＣ１０３６０（配列番号７０
）、ＴＩＣ１０３６１（配列番号７６）、ＴＩＣ１０３６２（配列番号８２）、ＴＩＣ１
０３６３（配列番号８８）、ＴＩＣ１０３６４（配列番号９４）、ＴＩＣ１０３５９（配
列番号１００）、及びＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８（配列番号１０５）の殺虫性タンパク
質または昆虫阻害タンパク質の配列及びそれらの殺虫性セグメントまたは昆虫阻害性セグ
メントまたはそれらの組み合わせを含む、それから成る、それと実質的に相同である、そ
れに類似するまたはそれに由来する任意の新規の殺虫性タンパク質または昆虫阻害タンパ
ク質を指す。
本出願における「ＰｉｒＢタンパク質」、「ＰｉｒＢタンパク質毒素」、「ＰｉｒＢ毒
素タンパク質」、「ＰｉｒＢ殺虫性タンパク質」、「ＰｉｒＢ関連毒素」、または「Ｐｉ
ｒＢ関連毒素タンパク質」等への言及は、鞘翅目害虫、半翅目害虫及び鱗翅目害虫に対す
る活性を付与し、そのようなタンパク質のＰｉｒＢタンパク質のいずれかとの配列比較が
約２４～約１００パーセントの画分比率のアミノ酸配列同一性を生じるのであれば殺虫活
性または昆虫阻害活性を示す任意のタンパク質を含む、ＴＩＣ４７７２（配列番号４）、
ＴＩＣ７５７６（配列番号１０）、ＴＩＣ７６６１（配列番号１６）、ＴＩＣ７６６３（
配列番号２２）、ＴＩＣ７６６５（配列番号２８）、ＴＩＣ７６６７（配列番号３４）、
ＴＩＣ７６６９（配列番号４０）、ＴＩＣ７９４０（配列番号４６）、ＴＩＣ１０３６６
（配列番号６０）、ＴＩＣ１０３６７（配列番号６６）、ＴＩＣ１０３６９（配列番号７
２）、ＴＩＣ１０３７０（配列番号７８）、ＴＩＣ１０３７１（配列番号８４）、ＴＩＣ
１０３７２（配列番号９０）、ＴＩＣ１０３７３（配列番号９６）、ＴＩＣ１０３６８（
配列番号１０２）、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９（配列番号１０７）、ＴＩＣ１１５０５
（配列番号１３５）、ＴＩＣ１１５１０（配列番号１３９）、及びＴＩＣ１１５１１（配
列番号１４３）の殺虫性タンパク質または昆虫阻害タンパク質の配列及びそれらの殺虫性
セグメントまたは昆虫阻害性セグメントまたはそれらの組み合わせを含む、それから成る
、それと実質的に相同である、それに類似するまたはそれに由来する任意の新規の殺虫性
タンパク質または昆虫阻害タンパク質を指す。
「ＰｉｒＡＢ融合タンパク質」という用語は本出願において、ＰｉｒＢタンパク質に隣
接するＰｉｒＡタンパク質の双方を含むタンパク質を記載するのに使用される。ＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、細胞内で発現されると、ＰｉｒＡタンパク
質及びＰｉｒＢタンパク質の双方を含む融合タンパク質を生成するようにＰｉｒＢタンパ
ク質をコードするコード配列とインフレームで操作可能に連結されたＰｉｒＡタンパク質
をコードするコード配列を含むことができる。ＰｉｒＡＢタンパク質は、同じ細菌オペロ
ンに由来するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質から構成することができ、また
は代わりに、異なる細菌オペロンに由来するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質
から構成することができる。ＰｉｒＡタンパク質がＰｉｒＢタンパク質と隣接している例
示的なＰｉｒＡＢ融合タンパク質を表１に提供する。
表１．ＰｉｒＢタンパク質に隣接するＰｉｒＡタンパク質から構成される例示的なＰｉｒ
ＡＢ融合タンパク質及びその中に含まれる対応するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタン
パク質。
Figure 2024026130000001
「ＰｉｒＡＢ融合タンパク質」という用語はまた、本出願において、ＰｉｒＡタンパク
質に隣接するＰｉｒＢタンパク質を含むタンパク質を記載するのに使用される。ＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、細胞内で発現されると、ＰｉｒＢタンパク
質及びＰｉｒＡタンパク質の双方を含む融合タンパク質を生成するようにＰｉｒＡタンパ
ク質をコードするコード配列とインフレームで操作可能に連結されたＰｉｒＢタンパク質
をコードするコード配列を含むことができる。ＰｉｒＢタンパク質は、同じ細菌オペロン
に由来するＰｉｒＢタンパク質及びＰｉｒＡタンパク質から構成することができ、または
代わりに、異なるオペロンに由来するＰｉｒＢタンパク質及びＰｉｒＡタンパク質から構
成することができる。ＰｉｒＢタンパク質がＰｉｒＡタンパク質と隣接している例示的な
タンパク質を表２に提供する。
表２．ＰｉｒＡタンパク質に隣接するＰｉｒＢタンパク質から構成される例示的なＰｉｒ
ＡＢ融合タンパク質及びその中に含まれる対応するＰｉｒＢタンパク質及びＰｉｒＡタン
パク質。
Figure 2024026130000002
「ＰｉｒＡＢ融合タンパク質」という用語はまた、本出願において、ＰｉｒＢタンパク
質に隣接する２つのＰｉｒＡタンパク質を含むタンパク質を記載するのに使用される。こ
の種類のＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、細胞内で発現するとＰｉ
ｒＡタンパク質と別のＰｉｒＡタンパク質とＰｉｒＢタンパク質とを含む融合タンパク質
が生成するようにＰｉｒＢタンパク質をコードするコード配列に操作可能に連結された、
同じＰｉｒＡタンパク質または異なるＰｉｒＡタンパク質をコードするコード配列に操作
可能に連結されたＰｉｒＡタンパク質をコードするコード配列を含むことができる。Ｐｉ
ｒＢタンパク質に隣接する２つのＰｉｒＡタンパク質を含む例示的なＰｉｒＡＢ融合タン
パク質を表３に提供する。
表３．別のＰｉｒＡタンパク質に隣接し、且つＰｉｒＢタンパク質に隣接するＰｉｒＡタ
ンパク質から構成される例示的なＰｉｒＡＢ融合タンパク質及びその中に含まれる対応す
るＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質。
Figure 2024026130000003
「ＰｉｒＡＢ融合タンパク質」という用語はまた、本出願において、互いに隣接する複
数のＰｉｒＡタンパク質及び／または複数のＰｉｒＢタンパク質を含むタンパク質を記載
するのに使用される。複数のＰｉｒＡタンパク質及び／またはＰｉｒＢタンパク質は、複
製されたＰｉｒＡタンパク質またはＰｉｒＢタンパク質であることができ、または異なる
ＰｉｒＡタンパク質またはＰｉｒＢタンパク質であることができる。融合タンパク質とし
ての複数のＰｉｒＡタンパク質及び／またはＰｉｒＢタンパク質の組み合わせは、特定の
標的害虫種に対する活性を高めることができ、または活性が存在する害虫種の範囲を増や
してもよい。
「セグメント」または「断片」という用語は本出願において、ＰｉｒＡタンパク質、Ｐ
ｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢタンパク質の１つを記載する完全なアミノ酸配列ま
たは核酸配列よりも短い連続するアミノ酸配列または核酸配列を記載するのに使用される
。昆虫阻害活性を示すセグメントまたは断片は、そのようなセグメントまたは断片と、配
列番号２、８、１４、２０、２６、３２、３８、４４、５８、６４、７０、７６、８２、
８８、９４、１００、または１０５に記述されたＰｉｒＡタンパク質；配列番号４、１０
、１６、２２、２８、３４、４０、４６、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６、
１０２、１０７、１３５、１３９、または１４３に記述されたＰｉｒＢタンパク質；また
は配列番号６、１２、１８、２４、３０、３６、４２、４８、５０、６２、６８、７４、
８０、８６、９２、９８、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、
１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３７、１４１、１４５、１４７、
１４９、１５１、１５３、１５５、または１５７に記述されたＰｉｒＡＢ融合タンパク質
、または関連するファミリーメンバーの殺虫性タンパク質の対応する区分との配列比較が
セグメントまたは断片と並べたタンパク質の対応する区分との間で約６５～約１００パー
セントの同一性の配列比較を生じるのであれば、本出願でも開示されている。本明細書に
記載されているＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢタンパク質
のうちの１つのセグメントまたは断片は、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、ま
たはＰｉｒＡＢタンパク質のうちの１つの少なくとも約５０個の連続するアミノ酸、少な
くとも約７５個の連続するアミノ酸、少なくとも約１００個の連続するアミノ酸、少なく
とも約１２５個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５０個の連続するアミノ酸、少なく
とも約２００個の連続するアミノ酸、少なくとも約２５０個の連続するアミノ酸、少なく
とも約３００個の連続するアミノ酸、少なくとも約３５０個の連続するアミノ酸、少なく
とも約４００個の連続するアミノ酸、少なくとも約４５０個の連続するアミノ酸、少なく
とも約５００個の連続するアミノ酸、少なくとも約５５０個の連続するアミノ酸、または
少なくとも約６００個の連続するアミノ酸を含んでもよい。本明細書に記載されているＰ
ｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢタンパク質のうちの１つのセ
グメントまたは断片は塩基配列の活性を示してもよい。
本出願における「活性がある」または「活性」、「殺虫活性」または「殺虫性」または
「殺虫活性」、「昆虫阻害性」または「殺虫性」という用語への言及は、有効量のＰｉｒ
Ａタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１以上を含有す
る特定の作物にて阻害すること（成長、摂食、繁殖力、または生存能力を阻害すること）
、抑制すること（成長、摂食、繁殖力、または生存能力を抑制すること）、防除すること
（害虫の侵入防除すること、害虫の摂食活動を防除すること）におけるタンパク質毒素の
ような毒剤の有効性を指す。これらの用語は、害虫が毒性タンパク質にさらされると、病
的状態、大量死、繁殖力の低下、または発育阻害をもたらす、殺虫で有効な量の毒性タン
パク質を害虫に提供した結果を含むことが意図される。これらの用語には、殺虫で有効な
量の毒性タンパク質を植物の中または上に提供した結果としての、植物、植物の組織、植
物の一部、種子、植物細胞に由来する害虫、または植物が成長していてもよい特定の地理
的位置由来の害虫の反発作用も含まれる。一般に、殺虫活性は、成長、発達、生存率、摂
食行動、交尾行動、繁殖力を阻害することで有効である、または鱗翅目、鞘翅目もしくは
半翅目の昆虫を含むが、これらに限定されない特定の標的害虫のこのタンパク質、タンパ
ク質断片、タンパク質セグメントまたはポリヌクレオチドに対する昆虫の摂食によって引
き起こされる悪影響の測定可能な減少で有効である毒性タンパク質の能力を指す。毒性タ
ンパク質は、植物によって生成され得る、または植物に、もしくは植物が位置する場所内
の環境に適用され得る。「生物活性」、「効果的な」、「有効な」という用語またはそれ
らの変形はまた、標的害虫に対する本発明のタンパク質の効果を記載するのにも本出願に
おいて交換可能に利用される用語である。
殺虫で有効な量の毒剤は、標的の害虫の餌で提供されると、毒剤が害虫に接触したとき
に殺虫活性を示す。毒剤は殺虫性タンパク質または当該技術分野で知られている１以上の
化学薬品であることができる。殺虫性または殺虫性の化学薬品及び殺虫性または殺虫性の
タンパク質薬剤は、単独で、または互いに組み合わせて使用することができる。化学薬品
には、標的害虫の抑制のために特定の遺伝子を標的とするｄｓＲＮＡ分子、有機塩素化合
物、有機リン酸塩、カルバメート、ピレスロイド、ネオニコチノイド、及びリアノイドが
挙げられるが、これらに限定されない。殺虫性または殺虫性のタンパク質薬剤には、本出
願に記述されているタンパク質毒素、と同様に鞘翅目、鱗翅目、半翅目、総翅目、または
双翅目の害虫種を標的とするものを含む他のタンパク性毒剤が挙げられる。
「Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ昆虫関連」タンパク質、またはＰｉｒＡＢタンパク質は、
一部の昆虫に対して殺虫活性を持つ二成分毒素である。一部のＰｉｒＡＢタンパク質は、
昆虫の血体腔に注入すると鱗翅目活性を有することが示されている。しかしながら、昆虫
食で提示された場合、ＰｉｒＡＢタンパク質の経口投与はほとんどまたはまったく活性を
示さなかった（例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２０１７），ＰｉｒＡＢ ｐｒｏｔｅ
ｉｎ ｆｒｏｍ Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ ＨＢ３１０ ｅｘ
ｈｉｂｉｔｓ ａ ｂｉｎａｒｙ ｔｏｘｉｎ ｗｉｔｈ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ Ｇａｌｌｅｒｉａ ｍｅ
ｌｌｏｎｅｌｌａ．Ｊ．Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒ．Ｐａｔｈｏｌ，１４８：４３－５０；Ｌｉ
，ｅｔ ａｌ．（２０１４），Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓ Ｐ
ｉｒＡＢ－ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｂｏｔｈ ｃｙｔｏｔｏ
ｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＦＥＭＳ Ｍｉ
ｃｒｏｂｉａｌ．Ｌｅｔｔ，３５６：２３－３１；Ｗｕ及びＹｕｎｈｏｎｇ，（２０１６
），Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，６，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：３４
９９６；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ３４９９６；ならびにＺｈａｎｇ，ｅｔ ａ
ｌ．（２０１３），ＸａｘＡＢ－ｌｉｋｅ ｂｉｎａｒｙ ｔｏｘｉｎ ｆｒｏｍ Ｐｈ
ｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｂｏｔｈ ｉｎｓ
ｅｃｔｉｃｉｄａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ．ＦＥＭＳ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．３５０：４８－５６）を参照のこと）。鱗翅目に対す
るＰｉｒＡＢタンパク質の経口活性が報告されているが、それらの研究は、昆虫の餌で提
供される精製毒素ではなく、ＰｉｒＡＢタンパク質を発現するＥ．ｃｏｌｉ細菌を含む餌
を昆虫が摂取することに依存している（例えば、Ｗａｔｅｒｆｉｅｌｄ，ｅｔ ａｌ．（
２００５），Ｔｈｅ Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ Ｐｉｒ ｔｏｘｉｎｓ ａｒｅ ｓｉ
ｍｉｌａｒ ｔｏ ａ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎｓ
ｅｃｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｕｔ ｓｈｏｗ ｎｏ ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｈｏｒｍｏｎｅ
ｅｓｔｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ，２
４５：４７－５２及びＢｌａｃｋｂｕｒｎ，ｅｔ ａｌ．（２００６），Ｒｅｍａｒｋａ
ｂｌｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ ｍｏ
ｔｈ （Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ） ｔｏ ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ
Ｐｉｒ ｔｏｘｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎ
ｓ．Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉａ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ ｅｔ Ａｐｐｌｉｃａｔ
ａ，１２１：３１－３７を参照のこと）。全く対照的に、本明細書では、実施例に記載さ
れているように、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパ
ク質のタンパク質調製物は昆虫餌バイオアッセイで提供された。鱗翅目、鞘翅目、及び半
翅目の害虫に対する経口活性が観察され、実施例にて提示されている。加えて、ＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、及びＴＩＣ９３１８を発現してい
る植物に由来するリーフディスクを、鱗翅目害虫種である欧州アワノメイガ及び南西部ア
ワノメイガ（ＳＷＣＢ）に対する活性を実証する経口昆虫摂食試験で使用した。さらに、
ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３８０、及びＴＩＣ１０３８１を発現
している植物に由来するリーフディスクはＳＷＣＢに対して活性を示した。また、実施例
に記載されているように、ＴＩＣ９３１５及びＴＩＣ１１３０２は安定して形質転換され
た植物において西洋トウモロコシ根切り虫害虫に対して活性を示した。
害虫、特に作物の害虫への言及は、作物の害虫、特にＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタ
ンパク質、及びＰｉｒＡＢタンパク質、関連するファミリーの殺虫性タンパク質、または
それらのセグメントまたは断片の少なくとも１つによって防除される害虫を意味すること
が意図される。
実施例に記載されているように、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰ
ｉｒＡＢタンパク質の１以上は、成虫、蛹、幼虫、及び新生子を含む鞘翅目、半翅目、及
び鱗翅目の害虫種由来の害虫に対して殺虫活性を示す。
鱗翅目の昆虫には、Ｎｏｃｔｕｉｄａｅ科のヨトウムシ（ａｒｍｙｗｏｒｍ）、ヨトウ
ムシ（ｃｕｔｗｏｒｍ）、ルーパー、及びヘリオチン、例えば、ツマジロクサヨトウ（Ｓ
ｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）、シロイチモジヨト（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒ
ａ ｅｘｉｇｕａ）、クロヨトウムシ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｅｍｐｔａ）、ベル
タヨトウムシ（Ｍａｍｅｓｔｒａ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ）、南部アワヨトウ（Ｓｐｏ
ｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａ）、タマナヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ）
、キャベツルーパー（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）、ダイズルーパー（Ｐｓｅｕｄ
ｏｐｌｕｓｉａ ｉｎｃｌｕｄｅｎｓ）、ベルベットビーンキャタピラー（Ａｎｔｉｃａ
ｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ）、グリーンクローバーワーム（Ｈｙｐｅｎａ ｓｃａ
ｂｒａ）、オオタバコガ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）、顆粒状カットワ
ーム（Ａｇｒｏｔｉｓ ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａ）、ヨトウムシ（Ｐｓｅｕｄａｌｅｔｉ
ａ ｕｎｉｐｕｎｃｔａ）、西洋根切り虫（Ａｇｒｏｔｉｓ Ｏｒｔｈｏｇｏｎｉａ）；
Ｐｙｒａｌｉｄａｅ科のボーラー、ケイスベアラ、ウェブワーム、コーンワーム、キャベ
ツムシ及びスケリトナイザー、例えば、欧州アワノメイガ（Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉ
ｌａｌｉｓ）、ネーブルオレンジワーム（Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ）
、コーンルートウェブワーム（Ｃｒａｍｂｕｓのｃａｌｉｇｉｎｏｓｅｌｌｕｓ）、ソッ
ドウェブワーム（Ｈｅｒｐｅｔｏｇｒａｍｍａ ｌｉｃａｒｓｉｓａｌｉｓ）、ヒマワリ
ガ（Ｈｏｍｏｅｏｓｏｍａ ｅｌｅｃｔｅｌｌｕｍ）、レサーコーンストークボーラー（
Ｅｌａｓｍｏｐａｌｐｕｓ ｌｉｇｎｏｓｅｌｌｕｓ）；Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ科のハ
マキムシ、バッドワーム、シードワーム、及びフルーツワーム、例えば、コドリンガ（Ｃ
ｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）、グレープベリーモス（Ｅｎｄｏｐｉｚａ ｖｉｔｅａ
ｎａ）、ナシヒメシンクイ（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ）、ヒマワリバッド
モス（Ｓｕｌｅｉｍａ ｈｅｌｉａｎｔｈａｎａ）；ならびに他の多くの経済的に重要な
鱗翅目、例えば、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、ピンクボールワ
ーム（Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ ｇｏｓｓｙｐｉｅｌｌａ）、及びマイマイガ（Ｌｙｍ
ａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ） が挙げられるが、これらに限定されない。鱗翅目の他
の害虫には、例えば、オオタバコガ（Ａｌａｂａｍａ ａｒｇｉｌｌａｃｅａ）、フルー
ツツリーハマキムシ（Ａｒｃｈｉｐｓ ａｒｇｙｒｏｓｐｉｌａ）、欧州ハマキムシ（Ａ
ｒｃｈｉｐｓ ｒｏｓａｎａ）及び他のＡｒｃｈｉｐｓ種（Ｃｈｉｌｏ ｓｕｐｐｒｅｓ
ｓａｌｉｓ、アジアのズイムジ、またはニカメイガ）、イネハマキムシ（Ｃｎａｐｈａｌ
ｏｃｒｏｃｉｓ ｍｅｄｉｎａｌｉｓ）、コーンルートウェブワーム（Ｃｒａｍｂｕｓ
ｃａｌｉｇｉｎｏｓｅｌｌｕｓ）、ブルーグラスウェブワーム（Ｃｒａｍｂｕｓ ｔｅｔ
ｅｒｒｅｌｌｕｓ）、南西部アワノメイガ（Ｄｉａｔｒａｅａ ｇｒａｎｄｉｏｓｅｌｌ
ａ）、サーガルケーンボーラー（Ｄｉａｔｒａｅａ ｓａｃｃｈａｒａｌｉｓ）、とげの
あるボールワーム（Ｅａｒｉａｓ ｉｎｓＥａｒｉａｓ ｖｉｔｔｅｌｌａ）、オオタバ
コガ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ）、アメリカタバコガ（Ｈｅｌｉｃｏ
ｖｅｒｐａ ｚｅａ、ダイズポッドワーム及びワタオオタバコガとしても知られる）、オ
オタバコガ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）、ソッドウェブワーム（Ｈｅｒ
ｐｅｔｏｇｒａｍｍａ ｌｉｃａｒｓｉｓａｌｉｓ）、西洋ビーン根切り虫（Ｓｔｒｉａ
ｃｏｓｔａ ａｌｂｉｃｏｓｔａ）、欧州グレープバインモス（Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔ
ｒａｎａ）、シトラスリーフマイナー（Ｐｈｙｌｌｏｃｎｉｓｔｉｓ ｃｉｔｒｅｌｌａ
）、オオモンシロチョウ（Ｐｉｅｒｉｓ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、小型モンシロチョウ（
Ｐｉｅｒｉｓ ｒａｐａｅ、輸入されたアオムシとしても知られている）、タバコ根切り
虫（クラスターキャタピラーとしても知られているＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ
）、及びトマトキバガ（Ｔｕｔａ ａｂｓｏｌｕｔａ）が挙げられる。
鞘翅目の昆虫には、特に害虫が西洋トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖ
ｉｒｇｉｆｅｒａ、ＷＣＲ）である場合、Ａｇｒｉｏｔｅｓ ｓｐｐ．、Ａｎｔｈｏｎｏ
ｍｕｓ ｓｐｐ．、Ａｔｏｍａｒｉａ ｌｉｎｅａｒｉｓ、Ｃｈａｅｔｏｃｎｅｍａ ｔ
ｉｂｉａｌｉｓ、Ｃｏｓｍｏｐｏｌｉｔｅｓ ｓｐｐ．、Ｃｕｒｃｕｌｉｏ ｓｐｐ．、
Ｄｅｒｍｅｓｔｅｓ ｓｐｐ．、Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐｐ．、Ｅｐｉｌａｃｈｎａ
ｓｐｐ．、Ｅｒｅｍｎｕｓ ｓｐｐ．、Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎ
ｅａｔａ、Ｌｉｓｓｏｒｈｏｐｔｒｕｓ ｓｐｐ．、Ｍｅｌｏｌｏｎｔｈａ ｓｐｐ．、
Ｏｒｙｃａｅｐｈｉｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｏｔｉｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｈｌｙ
ｃｔｉｎｕｓ ｓｐｐ．、Ｐｏｐｉｌｌｉａ ｓｐｐ．、Ｐｓｙｌｌｉｏｄｅｓ ｓｐｐ
．、Ｒｈｉｚｏｐｅｒｔｈａ ｓｐｐ．、Ｓｃａｒａｂｅｉｄａｅ、Ｓｉｔｏｐｈｉｌｕ
ｓ ｓｐｐ．、Ｓｉｔｏｔｒｏｇａ ｓｐｐ．、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｓｐｐ．、Ｔｒｉｂ
ｏｌｉｕｍ ｓｐｐ．、及びＴｒｏｇｏｄｅｒｍａ ｓｐｐ．、北方型トウモロコシ根切
り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｒｂｅｒｉ、ＮＣＲ）、メキシコ型トウモロコシ根切
り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ ｚｅａｅ、ＭＣＲ）、ブラジル型ト
ウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｌｔｅａｔａ、ＢＺＲ）、南方型トウ
モロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ ｈｏｗａ
ｒｄｉｉ、ＳＣＲ）、コロラドハムシ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅ
ａｔａ、ＣＰＢ）、ブラジル型トウモロコシ根切り虫複合体（ＢＣＲ、Ｄｉａｂｒｏｔｉ
ｃａ ｖｉｒｉｄｕｌａとＤｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐｅｃｉｏｓａから成る）、アブラ
ナノミハムシ（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｃｒｕｃｉｆｅｒ）Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ
ｓｔｒｉｏｌａｔａ）、縞模様ノミハムシ（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｓｔｒｉｏｌａｔ
ａ）及び西洋クロノミハムシ（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｐｕｓｉｌｌａ）が挙げられる
が、これらに限定されない。）
半翅目の昆虫には、Ｐｅｎｔａｔｏｍｉｄａｅ科のカメムシ：Ｃｈｉｎａｖｉａ属のミ
ドリカメムシ（Ｃｈｉｎａｖｉａ ｈｉｌａｒｉｓ、Ｃｈｉｎａｖｉａ ｍａｒｇｉｎａ
ｔａ、及びＣｈｉｎａｖｉａ ｐｅｎｓｙｌｖａｎｉｃａ）、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ属
のカメムシ（Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｇｒａｎｕｌｏｓｅ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ
ｋａｎｅｉ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｌｉｇａｔａ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｌｉｎ
ｅａｔｅ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｏｐｕｎｔｉａｅ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｐｅ
ｒｓｉｍｉｌｉｓ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｒｏｓｓｉａｎａ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏ
ａ ｓａｙｉ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｕｈｌｅｒｉ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｂｅ
ｌｆｒａｇｉｉ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｆａｃｅｔａ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｏ
ｓｂｏｒｎｉ、Ｃｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ ｓａｕｃｉａ、及びＣｈｌｏｒｏｃｈｒｏａ
ｓｅｎｉｌｉｓ）、サザンミドリカメムシ（Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕｌａ）、Ｅｄｅ
ｓｓａ属のカメムシ（Ｅｄｅｓｓａ ｍｅｄｉｔａｂｕｎｄａ、Ｅｄｅｓｓａ ｂｉｆｉ
ｄａ、及びＥｄｅｓｓａ ｆｌｏｒｉｄａ）、亜熱帯クサギカメムシ（Ｅｕｓｃｈｉｓｔ
ｕｓ ｈｅｒｏｓ）、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ属のカメムシ（Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ａｃ
ｕｍｉｎａｔｕｓ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｂｉｆｏｒｍｉｓ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ
ｃｏｎｓｐｅｒｓｕｓ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｃｒｅｎａｔｏｒ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕ
ｓ ｅｇｇｌｅｓｔｏｎｉ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｉｃｔｅｒｉｃｕｓ、Ｅｕｓｃｈｉ
ｓｔｕｓ ｉｎｆｌａｔｕｓ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｌａｔｉｍａｒｇｉｎａｔｕｓ、
Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｏｂｓｃｕｒｅｓ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｐｏｌｉｔｕｓ、Ｅ
ｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｑｕａｄｒａｔｏｒ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｓｅｖｕｓ、Ｅｕｓ
ｃｈｉｓｔｕｓ ｓｔｒｅｎｕｏｕｓ、Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｔｒｉｓｔｉｇｍｕｓ、
及びＥｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｖａｒｉｏｌａｒｉｕｓ）、クサギカメムシ（Ｈａｌｙｏｍ
ｏｒｐｈａ ｈａｌｙｓ）、カタアカカメムシ（Ｔｈｙａｎｔａ ａｃｃｅｒｒａ）、Ｔ
ｈｙａｎｔａ属のカメムシ（Ｔｈｙａｎｔａ ｃａｌｃｅａｔａ、Ｔｈｙａｎｔａ ｃｕ
ｓｔａｔｏｒ、Ｔｈｙａｎｔａ ｐａｌｌｉｄｏｖｉｒｅｎｓ、Ｔｈｙａｎｔａ ｐｅｒ
ｄｉｔｏｒ、Ｔｈｙａｎｔａ ｍａｃｕｌａｔｅ、及びＴｈｙａｎｔａ ｐｓｅｕｄｏｃ
ａｓｔａ）、Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ属のミドリハラカメムシ（Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ｍｅｌ
ａｃａｎｔｈｕｓ）及び他のカメムシ（Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ａｖｉｌａｐｉｒｅｓｉ、
Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ｄｉｍｉｄａｔｕｓ、Ｄｉ
ｃｈｅｌｏｐｓ ｆｕｒｃａｔｕｓ、Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ｆｕｒｃｉｆｒｏｎｓ、Ｄｉ
ｃｈｅｌｏｐｓ ｌｏｂａｔｕｓ、Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ｍｉｒｉａｍａｅ、Ｄｉｃｈｅ
ｌｏｐｓ ｎｉｇｒｕｍ、Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ ｐｅｒｕａｎｕｓ、Ｄｉｃｈｅｌｏｐｓ
ｐｈｏｅｎｉｘ、及びＤｉｃｈｅｌｏｐｓ ｓａｌｔｅｎｓｉｓ）、アカシマカメムシ
（Ｐｉｅｚｏｄｏｒｕｓ ｇｕｉｌｄｉｎｎｉ）と同様にＰｉｅｚｏｄｏｒｕｓ ｌｉｔ
ｕｒａｔｕｓ；及びＰｌａｔａｓｐｉｄａｅ科の昆虫、例えば、タイワンマルカメムシ（
Ｍｅｇａｃｏｐｔａ ｃｒｉｂｒａｒｉａ）、西洋ミドリメクラガメ（Ｌｙｇｕｓ ｈｅ
ｓｐｅｒｕｓ）、及びミドリメクラガメ（Ｌｙｇｕｓ ｌｉｎｅｏｌａｒｉｓ）が挙げら
れるが、これらに限定されない。
本出願における「単離されたＤＮＡ分子」、または同等の用語もしくは表現への言及は
、ＤＮＡ分子が、単独で存在する、または他の組成物と組み合わせて存在するが、その自
然環境内には存在しないものであることを意味するように意図される。例えば、生物のゲ
ノムのＤＮＡ内に自然に見いだされるコード配列、イントロン配列、非翻訳リーダー配列
、プロモーター配列、転写終結配列等のような核酸要素は、要素が生物のゲノム内にあり
、それが天然に見いだされるゲノム内の位置にある限り、「単離された」とは見なされな
い。しかしながら、これらの要素のそれぞれ、及びこれらの要素の下位区分は、要素が生
物のゲノム内になく、それが天然に見いだされるゲノム内の位置にない限り、本開示の範
囲内で「単離」されることになる同様に、殺虫性タンパク質またはそのタンパク質の任意
の天然に存在する殺虫性変異体をコードするヌクレオチド配列は、ヌクレオチド配列が、
タンパク質をコードする配列が天然に見いだされる細菌のＤＮＡ内になかった限りにおい
て、単離されたヌクレオチド配列であるということになる。天然に存在する殺虫性タンパ
ク質のアミノ酸配列をコードする合成ヌクレオチド配列は、本開示の目的のために単離さ
れたと見なされる。本開示の目的のために、任意のトランスジェニックヌクレオチド配列
、すなわち、植物または細菌の細胞のゲノムに挿入された、または染色体外ベクターに存
在するＤＮＡのヌクレオチド配列は、それがプラスミドまたは細胞を形質転換するために
使用される同様の構造内に存在してもしなくても、植物もしくは細菌のゲノム内に存在し
てもしなくても、または植物もしくは細菌に由来する組織、子孫、生物試料または商品生
産物に検出可能な量で存在してもしなくても、単離されたヌクレオチド配列であると見な
される。
本明細書でさらに記載されているように、ＰｉｒＡタンパク質、ＴＩＣ４７７１（配列
番号１）及びＰｉｒＢ細胞タンパク質、ＴＩＣ４７７２（配列番号３）をコードする２つ
のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むオペロンは、それぞれ配列番号２及び
配列番号４として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅ
ｍａｔｏｐｈｉｌａのＩＳＢ０００００２株から得られたＤＮＡで発見された。２つのＯ
ＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ６８８０（配列番号５）をコードするＰｉｒＡＢ融合
タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結され、
配列番号６として提示されるＴＩＣ６８８０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した。微
生物宿主細胞由来のＴＩＣ４７７１を用いたバイオアッセイは、鱗翅目種のアメリカタバ
コガ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｚｅａ、ＣＥＷ）、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌ
ｏｓｔｅｌｌａ、ＤＥＭ）、欧州アワノメイガ（Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ
、ＥＣＢ）、ベルベットビーンキャタピラー（Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌ
ｉｓ、ＶＢＣ）、及び南方ヨトウムシ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａ、ＳＡ
Ｗ）；鞘翅目種のコロラドハムシ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔ
ａ、ＣＰＢ）；及び半翅目種のミドリメクラガメ（Ｌｙｇｕｓ ｌｉｎｅｏｌａｒｉｓ、
ＴＰＢ）に対して活性を示した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ４７７２を用いたバイオア
ッセイは、鱗翅目種、ＣＥＷ、ＤＢＭ、ＶＢＣ及び半翅目種、ＴＰＢに対して活性を示し
た。ＴＩＣ４７７１とＴＩＣ４７７２から構成される、微生物宿主細胞由来のＰｉｒＡＢ
融合タンパク質であるＴＩＣ６８８０を用いたバイオアッセイは、鱗翅目種のツマジロク
サヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、ＦＡＷ）、ＣＥＷ、南西部ア
ワノメイガ（Ｄｉａｔｒａｅａ ｇｒａｎｄｉｏｓｅｌｌａ、ＳＷＣＢ）、ＤＢＭ、ＥＣ
Ｂ、及びＶＢＣ、鞘翅目種 ＣＰＢ及び西洋トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃ
ａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ、ＷＣＲ）；半翅目種のミドリメクラガメ（Ｌｙｇｕｓ ｌｉｎ
ｅｏｌａｒｉｓ、ＴＰＢ）、西洋ミドリメクラガメ（Ｌｙｇｕｓ Ｈｅｓｐｅｒｕｓ、Ｗ
ＴＰ）、南方ミドリカメムシ（Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕｌａ、ＳＧＢ）、及び亜熱帯
クサギカメムシ（Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｈｅｒｏｓ、ＮＢＳＢ）、及び双翅目種のネッ
タイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ、ＹＦＭ）に対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７５７５（配列番号７）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７５
７６（配列番号９）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンが、それぞれ、配列番
号８及び配列番号１０として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏｒｈａｂｄ
ｕｓ ｅｈｌｅｒｓｉｉの８５８２３株から得られたＤＮＡで発見された。２つのＯＲＦ
を用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３１６（配列番号１１）をコードするＰｉｒＡＢ融合タ
ンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結され、配
列番号１２として提示されるＴＩＣ９３１６ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した。微
生物宿主細胞由来のＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７５７６を用いたバイオアッセイは、アッ
セイで調べた昆虫に対する活性を示さなかった。しかしながら、ＴＩＣ７５７５とＴＩＣ
７５７６から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３１６を用いたバイオアッセ
イは、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、タマナヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ、ＢＣＷ）、
ＳＡＷ、オオタバコガ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、ＴＢＷ）、ＥＣＢ、
及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ、及び半翅目種、ＴＰＢ、ＷＴＰ、ＳＧＢ、及びＮＢＳＢ
に対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６０（配列番号１３）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７
６６１（配列番号１５）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、配
列番号１４及び配列番号１６として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏｒｈ
ａｂｄｕｓ ｃａｂａｎｉｌｌａｓｉｉの８５９０８株から得られたＤＮＡで発見された
。２つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３１７（配列番号１７）をコードするＰ
ｉｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能
に連結され、配列番号１８として提示されるＴＩＣ９３１７ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質
を生成した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６０及びＴＩＣ７６６１を用いたバイオア
ッセイは、アッセイで用いた昆虫に対する活性を示さなかった。しかしながら、ＴＩＣ７
６６０とＴＩＣ７６６１から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３１７を用い
たバイオアッセイは、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ及び
ＷＣＲ、半翅目種、ＴＰＢ、ＷＴＰ、及びＳＧＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６２（配列番号１９）とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７６
６３（配列番号２１）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、配列
番号２０及び配列番号２２として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏｒｈａ
ｂｄｕｓ ｅｈｌｅｒｓｉｉの８５８８７株から得られたＤＮＡで発見された。２つのＯ
ＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３１８（配列番号２３）をコードするＰｉｒＡＢ融
合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結され
、配列番号２４として提示されるＴＩＣ９３１８ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した
。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６２及びＴＩＣ７６６３を用いたバイオアッセイは、
アッセイで用いた昆虫に対する活性を示さなかった。しかしながら、ＴＩＣ７６６２とＴ
ＩＣ７６６３から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３１８を用いたバイオア
ッセイは、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＢＣＷ、ＴＢＷ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰ
Ｂ及びＷＣＲ、及び半翅目種、ＴＰＢ、ＷＴＰ、ＳＧＢ、及びＮＢＳＢに対して活性を示
した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６４（配列番号２５）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７
６６５（配列番号２７）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、配
列番号２６及び配列番号２８として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏｒｈ
ａｂｄｕｓ ｐｏｉｎａｒｉｉの８６１９８株から得られたＤＮＡで発見された。２つの
ＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３１９（配列番号２９）をコードするＰｉｒＡＢ
融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結さ
れ、配列番号３０として提示されるＴＩＣ９３１９ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成し
た。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６４を用いたバイオアッセイは鞘翅目種のＣＰＢに
対して活性を示した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６５を用いたバイオアッセイは鱗
翅目種のＴＢＷに対して活性を示した。ＴＩＣ７６６４とＴＩＣ７６６５３から構成され
るＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３１９を用いたバイオアッセイは、鱗翅目種、ＳＷ
ＣＢ、ＢＣＷ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ、及び半翅目種、ＴＰＢ、ＷＴＰ
、及びＳＧＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６６（配列番号３１）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７
６６７（配列番号３３）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、配
列番号３２及び配列番号３４として示されるタンパク質毒素をコードするＰｈｏｔｏｒｈ
ａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓの８６１９７株から得られたＤＮＡで発見された。
２つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３２２（配列番号３５）をコードするＰｉ
ｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に
連結され、配列番号３６として提示されるＴＩＣ９３２２ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を
生成した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６６を用いたバイオアッセイは、アッセイで
用いた昆虫に対する活性を示さなかった。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６７を用いた
バイオアッセイは、鱗翅目種、ＳＷＣＢに対して活性を示した。ＴＩＣ７６６６とＴＩＣ
７６６７から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３２２を用いたバイオアッセ
イは、鱗翅目種、ＳＷＣＢ及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ、及び半翅目種、ＴＰＢに対し
て活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６８（配列番号３７）とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７６
６９（配列番号３９）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、配列
番号３８及び配列番号４０として提示されるタンパク質毒素をコードするＰｈｏｔｏｒｈ
ａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓの８６１９４株から得られたＤＮＡで発見された。
２つのＯＲＦを用いてＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３２０（配列番号４１）をコードするＰｉｒ
ＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連
結され、配列番号４２として提示されるＴＩＣ９３２０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生
成した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ７６６８及びＴＩＣ７６６９を用いたバイオアッセ
イは、アッセイで用いた昆虫に対する活性を示さなかった。しかしながら、ＴＩＣ７６６
８とＴＩＣ７６６９から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３２０を用いたバ
イオアッセイは、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ及びＷＣ
Ｒ、及び半翅目種、ＴＰＢ、ＳＧＢ、及びＮＢＳＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７９３９（配列番号４３）とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７９
４０（配列番号４５）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、配列
番号４４及び配列番号４６として提示されるタンパク質毒素をコードするマイクロバイオ
ーム内に含まれる未知の細菌種から得られたＤＮＡで発見された。２つのＯＲＦを用いて
、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ９３２１（配列番号４７）をコードするＰｉｒＡＢ融合タンパク質
を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結され、配列番号４
８として提示されるＴＩＣ９３２１ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３５７（配列番号５７）とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１
０３６６（配列番号５９）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ、
配列番号５８及び配列番号６０として提示されるタンパク質毒素をコードするＳｈｅｗａ
ｎｅｌｌａ ｖｉｏｌａｃｅａから得られたＤＮＡで発見された。２つのオープンリーデ
ィングフレームを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ１０３７５（配列番号６１）をコードする
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可
能に連結され、配列番号６２として提示されるＴＩＣ１０３７５ ＰｉｒＡＢ融合タンパ
ク質を生成した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３５８（配列番号６３）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
１０３６７（配列番号６５）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ
、配列番号６４及び配列番号６６として提示されるタンパク質毒素をコードするＰｈｏｔ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓのｌａｕｍｏｎｄｉｉＴＴＯ１株から得られ
たＤＮＡで発見された。２つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ１０３７６（配列番
号６７）をコードするＰｉｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列は
インフレームで操作可能に連結され、配列番号６８として提示されるＴＩＣ１０３７６
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ１０３５８及びＴＩ
Ｃ１０３６７を用いたバイオアッセイは、アッセイで用いた昆虫に対する活性を示さなか
った。しかしながら、ＴＩＣ１０３５８とＴＩＣ１０３６７から構成されるＰｉｒＡＢ融
合タンパク質ＴＩＣ１０３７６を用いたバイオアッセイは、鱗翅目種、ＳＷＣＢ及び鞘翅
目種、北方トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｒｂｅｒｉ、ＮＣＲ）及
びＷＣＲに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６０（配列番号６９）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
１０３６９（配列番号７１）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ
、配列番号７０及び配列番号７２として提示されるタンパク質毒素をコードするＰｈｏｔ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃａから得られたＤＮＡで発見された。２つのＯ
ＲＦを用いて、ＤＮＡ配列、ＴＩＣ１０３７７（配列番号７３）をコードするＰｉｒＡＢ
融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結さ
れ、配列番号７４として提示されるＴＩＣ１０３７７ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成
した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６１（配列番号７５）及びＰｉｒＢ細胞タンパク質Ｔ
ＩＣ１０３７０（配列番号７７）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それ
ぞれ配列番号７６及び配列番号７８として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎ
ｏｒｈａｂｄｕｓ ｓｐｐ．のＮＢＡＩＩＸｅｎＳａ０４株から得られたＤＮＡで発見さ
れた。２つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列ＴＩＣ１０３７８（配列番号７９）をコードす
るＰｉｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作
可能に連結され、配列番号８０として提示されるＴＩＣ１０３７８ ＰｉｒＡＢ融合タン
パク質を生成した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６２（配列番号８１）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
１０３７１（配列番号８３）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ
、配列番号８２及び配列番号８４として提示されるタンパク質毒素をコードするＹｅｒｓ
ｉｎｉａ ａｌｄｏｖａｅの６７０－８３株から得られたＤＮＡで発見された。２つのＯ
ＲＦを用いて、ＤＮＡ配列ＴＩＣ１０３７９（配列番号８５）をコードするＰｉｒＡＢ融
合タンパク質を作製し、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連結され、配列番
号８６として提示されるＴＩＣ１０３７９ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６３（配列番号８７）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
１０３７２（配列番号８９）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ
配列番号８８及び配列番号９０として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏｒ
ｈａｂｄｕｓ ｄｏｕｃｅｔｉａｅのＦＲＭ１６株から得られたＤＮＡで発見された。２
つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列ＴＩＣ１０３８０（配列番号９１）をコードするＰｉｒ
ＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能に連
結され、配列番号９２として提示されるＴＩＣ１０３８０ ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を
生成した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ１０３６３及びＴＩＣ１０３７２を用いたバイオ
アッセイは、アッセイで用いた昆虫に対する活性を示さなかった。しかしながら、ＴＩＣ
１０３６３とＴＩＣ１０３７２から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１０３８
０を用いたバイオアッセイは、鱗翅目種、ＦＡＷ、鞘翅目種、ＮＣＲとＷＣＲ、及び半翅
目種、ＮＢＳＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６４（配列番号９３）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
１０３７３（配列番号９５）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞれ
、配列番号９４及び配列番号９６として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｇｒｉｆｆｉｎｉａｅのＢＭＭＣＢ株から得られたＤＮＡで発見された
。２つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列ＴＩＣ１０３８１（配列番号９７）をコードするＰ
ｉｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配列はインフレームで操作可能
に連結され、配列番号９８として提示されるＴＩＣ１０３８１ ＰｉｒＡＢ融合タンパク
質を生成した。微生物宿主細胞由来のＴＩＣ１０３６４及びＴＩＣ１０３７３を用いたバ
イオアッセイは、アッセイで用いた昆虫に対する活性を示さなかった。しかしながら、Ｔ
ＩＣ１０３６４とＴＩＣ１０３７３から構成されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１０
３７８を用いたバイオアッセイは、鞘翅目、ＮＣＲとＷＣＲ、及び半翅目種、ＮＢＳＢに
対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３５９（配列番号９９）及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
１０３６８（配列番号１０１）をコードする２つのＯＲＦを含有するオペロンは、それぞ
れ、配列番号１００及び配列番号１０２として提示されるタンパク質毒素をコードするＸ
ｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａから得られたＤＮＡで発見された。ＴＩ
Ｃ１０３５９とＴＩＣ１０３６８の双方を含むオペロン配列は配列番号１０３として提示
されている。
ＰｉｒＡタンパク質ＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８（配列番号１０４）及びＰｉｒＢタン
パク質ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９（配列番号１０６）をコードする２つのＯＲＦを含有
するオペロンは、それぞれ配列番号１０５及び配列番号１０７として提示されるタンパク
質毒素をコードするＰｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓのＨｍ株から得
られたＤＮＡで発見された。２つのＯＲＦを用いて、ＤＮＡ配列ＴＩＣ１０４３４（配列
番号１０８）をコードするＰｉｒＡＢ融合タンパク質を作製し、その際、２つのコード配
列はインフレームで操作可能に連結され、配列番号１０９として提示されるＴＩＣ１０３
７８ＰｉｒＡＢ融合タンパク質を生成した。ＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８及びＰｉｒＢ＿
ＡＢＥ６８８７９から構成される、微生物宿主細胞由来のＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩ
Ｃ１０４３４を用いたバイオアッセイは、鞘翅目種、ＮＣＲ及びＷＣＲに対して活性を示
した。
ＴＩＣ１１５０５（配列番号１３４）をコードするＰｉｒＢタンパク質のＯＲＦを含有
するオペロンは、配列番号１３５として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＭＤＩ－００３５７７７株から発見された。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１０５６のコード配列（配列番号１３６）は、ＴＩＣ
１１５０５コード配列にインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４コード配
列を含んで、配列番号１３７として提示されるＴＩＣ１１５０６ ＰｉｒＡＢ融合タンパ
ク質を生成した。
ＴＩＣ１１５１０（配列番号１３８）をコードするＰｉｒＢタンパク質のＯＲＦを含有
するオペロンは、配列番号１３９として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＭＤＩ－００３５７７７株から発見された。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１５１２のコード配列（配列番号１４０）は、ＴＩＣ
１１５０５コード配列にインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４コード配
列を含んで、配列番号１４１として提示されるＴＩＣ１１０５６ ＰｉｒＡＢ融合タンパ
ク質を生成した。
ＴＩＣ１１５１１（配列番号１４２）をコードするＰｉｒＢタンパク質のＯＲＦを含有
するオペロンは、配列番号１４３として提示されるタンパク質毒素をコードするＸｅｎｏ
ｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａのＭＤＩ－００３５７７７株から発見された。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１５１３のコード配列（配列番号１４４）は、ＴＩＣ
１１５１３コード配列にインフレームで操作可能に連結されたＴＩＣ１０３６４コード配
列を含んで、配列番号１４５として提示されるＴＩＣ１１０５６ ＰｉｒＡＢ融合タンパ
ク質を生成した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１１２１１、及びＴＩＣ１１３０
１は、それぞれＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７５７５及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７６６
５、ＴＩＣ７６６７、及びＴＩＣ７６６１を含んでいた。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩ
Ｃ１１２１２は、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６２及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７６
６５を含むＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１３０２は、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７
６６０及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７５７６を含む。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ
１１２１０及びＴＩＣ１１２１１は、鱗翅目種、ＳＷＣＢ及び半翅目種、ＮＢＳＢに対し
て活性を示した。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１３０１及びＴＩＣ１１３０２は、
鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＷＣＲ、及び半翅目種、ＮＢＳＢ
及びＷＴＰに対して活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ１１１０３及びＴＩＣ１１１０４は、ＰｉｒＡタン
パク質と一致するＰｉｒＢタンパク質を含んでいた。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１
１１０３はＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７６６１とＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６０から
構成される。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＴＩＣ１１１０４はＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ
７６６３とＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６２から構成される。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１１４０はＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ４７７１とＰ
ｉｒＢタンパク質ＴＩＣ４４７２の複製から構成される。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩ
Ｃ１１１４１はＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７５７５とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７５７６
の複製から構成される。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１１４２はＰｉｒＡタンパク
質ＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ４７７１とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ４７７２とから構成さ
れる。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１４４３は、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６
０及びＴＩＣ７５７５とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７５７６とから構成される。ＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質ＴＩＣ１１４４４は、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７
６６０とＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７６６１とから構成される。ＰｉｒＡＢ融合タンパク
質ＴＩＣ１１４４５は、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６０及びＴＩＣ７６６２とＰｉｒ
Ｂタンパク質ＴＩＣ７６６３とから構成される。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１４
４６は、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６２及びＴＩＣ７６６０とＰｉｒＢタンパク質Ｔ
ＩＣ７６６１とから構成される。細菌宿主細胞由来のＴＩＣ１１４４２は半翅目害虫種、
ＮＢＳＢに対して活性を示した。細菌宿主細胞由来のＴＩＣ１１４４４は鱗翅目種、ＳＷ
ＣＢ及び半翅目種、ＮＢＳＢに対して活性を示した。
実施例に記載されているように、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ６８８０ＰＬ（配列
番号４９）、ＴＩＣ９３１６（配列番号５１）、ＴＩＣ９３１７（配列番号５３）、ＴＩ
Ｃ９３１８（配列番号５５）、ＴＩＣ９３２０（配列番号５７）、ＴＩＣ９３２２（配列
番号５９）、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ（配列番号１４６）、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ（配列番
号１４８）、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ（配列番号１５０）、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ（配列番
号１５２）、ＴＩＣ１１１０３（配列番号１５４）、ＴＩＣ１１１０４（配列番号１５６
）、及びＴＩＣ１１３０２（配列番号１５８）をコードする合成ＤＮＡ配列は植物細胞で
の発現のために設計された。ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、及びＴＩＣ９３１８を発
現するバイナリー形質転換プラスミド構築物で形質転換したトウモロコシ植物は、害虫種
である欧州アワノメイガ及び南西部アワノメイガに対して活性を示した。
植物細胞での発現については、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質は、細胞質ゾルに存在するよ
うに発現させることができ、または植物細胞の種々の細胞小器官を標的とするように発現
させることができる。例えば、タンパク質を葉緑体に対して標的指向化することは、オフ
表現型の発生を防ぎながら、トランスジェニック植物で発現されるタンパク質のレベルの
上昇を生じてもよい。標的指向化はまた、トランスジェニック事象における害虫耐性の有
効性の増大も生じてもよい。標的ペプチドまたは輸送ペプチドは、核、ミトコンドリア、
小胞体（ＥＲ）、葉緑体、アポプラスト、ペルオキシソーム及び原形質膜を含む細胞内の
特定の領域へのタンパク質の輸送を指図する短い（３～７０のアミノ酸長）ペプチド鎖で
ある。一部の標的ペプチドはタンパク質が輸送された後、シグナルペプチダーゼによって
タンパク質から切断される。葉緑体を標的とするために、タンパク質は約４０～５０アミ
ノ酸である輸送ペプチドを含有する。葉緑体輸送ペプチドの使用の記載については、米国
特許第５，１８８，６４２号及び同第５，７２８，９２５号を参照のこと。多くの葉緑体
に局在するタンパク質は、核遺伝子から前駆体として発現され、葉緑体輸送ペプチド（Ｃ
ＴＰ）によって葉緑体に標的指向化される。そのような単離された葉緑体タンパク質の例
には、リブロース－１，５－ビスリン酸カルボキシラーゼ、フェレドキシン、フェレドキ
シンオキシドレダクターゼ、集光性複合タンパク質Ｉ及びタンパク質ＩＩ、チオレドキシ
ンＦ、エノールピルビルシキメートホスフェートシンターゼ（ＥＰＳＰＳ）、及び米国特
許第７，１９３，１３３号に記載されている輸送ペプチドの小サブユニット（ＳＳＵ）に
関連するものが挙げられるが、これらに限定されない。非葉緑体タンパク質は、異種ＣＴ
Ｐとのタンパク質融合を使用することによって葉緑体に標的指向化されてもよく、ＣＴＰ
は葉緑体に対してタンパク質を標的指向化するのに十分であることが生体内及び試験管内
で実証されている。例えば、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａのＥＰＳＰＳ
ＣＴＰ（ＣＴＰ２）（Ｋｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．２１０：４３７－４４
２，１９８７を参照のこと）またはＰｅｔｕｎｉａ ｈｙｂｒｉｄａ ＥＰＳＰＳ ＣＴ
Ｐ（ＣＴＰ４）（ｄｅｌｌａ－Ｃｉｏｐｐａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３：６８７３－６８７７，１９８６を参照のこと）のような好
適な葉緑体輸送ペプチドの組込みは、トランスジェニック植物にて葉緑体に対して異種Ｅ
ＰＳＰＳタンパク質配列を標的指向化することが示されている （米国特許第５，６２７
，０６１号；同第５，６３３，４３５；号；及び同第５，３１２，９１０号；及びＥＰ０
２１８５７１；ＥＰ１８９７０７；ＥＰ５０８９０９；及びＥＰ９２４２９９を参照のこ
と）。葉緑体に対してＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを標的指向化するために、葉緑体
輸送ペプチドをコードする配列を、植物細胞での最適な発現のために設計されているＰｉ
ｒＡＢ融合タンパク質の１つをコードする合成コード配列に対して操作可能な連結且つイ
ンフレームで５’に配置する。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質に関連する
追加の毒素タンパク質配列は、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質の天然に存在するアミノ酸配列を用いてアミノ酸配列レベルでの差異を
新規アミノ酸配列変異体に統合し、変異体をコードする組換え核酸配列への適切な変更を
行うことによって作り出すことができることが企図される。
この開示はさらに、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タ
ンパク質の改良された変異体が、当該技術分野で知られている種々の遺伝子編集法を使用
することによって植物体において操作され得ることを企図する。ゲノム編集に使用される
そのような技術には、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、メガヌクレアーゼ、Ｔ
ＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ）、及びＣＲＩＳＰＲ（クラスタ
ー化された規則的に間隔を空けた短いパリンドロームリピート）／Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ
関連）システムが挙げられるが、これらに限定されない。これらのゲノム編集法を用いて
、植物細胞内で形質転換された毒素タンパク質コード配列を異なる毒素コード配列に変更
することができる。具体的には、これらの方法を介して、新しいタンパク質アミノ酸配列
を操作するために毒素コード配列内の１以上のコドンが変更される。あるいは、コード配
列内の断片を置換するもしくは欠失させる、または追加のＤＮＡ断片をコード配列に挿入
して、新しい毒素コード配列を操作する。新しいコード配列は、害虫に対する高い活性ま
たはスペクトルのような新しい特性を持つ毒素タンパク質をコードすることができると共
に、元の昆虫毒素タンパク質に対して耐性が発達している害虫種に対して活性を提供する
ことができる。当該技術分野で既知の方法によって、遺伝子編集された毒素コード配列を
含む植物細胞を用いて、新しい毒素タンパク質を発現する植物全体を生成することができ
る。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質に類似する
タンパク質は、当該技術分野で知られている種々のコンピューターに基づくアルゴリズム
を用いて互いに比較することによって同定することができる。例えば、ＰｉｒＡタンパク
質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質に関連するタンパク質のアミノ
酸配列同一性は、次のデフォルトパラメーター：重量マトリクス：ｂｌｏｓｕｍ、ギャッ
プ開口ペナルティ：１０．０、ギャップ拡張ペナルティ：０．０５、親水性ギャップ：オ
ン、親水性残基：ＧＰＳＮＤＱＥＲＫ、残基固有のギャップペナルティ：オンを用いたＣ
ｌｕｓｔａｌ Ｗ配列比較を用いて分析することができる（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、ｅｔ ａ
ｌ．，（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２：４６７３－
４６８０）。アミノ酸同一性パーセントはさらに、１００％に（アミノ酸同一性／対象タ
ンパク質の長さ）を乗じた積によって算出される。他の配列比較アルゴリズムも当該技術
分野で利用可能であり、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ配列比較を用いて得られたものと同様の結果
を提供する。
鱗翅目、鞘翅目、または半翅目の昆虫種に対して昆虫阻害活性を示すタンパク質は、そ
のようなクエリタンパク質とＴＩＣ７９３９との配列比較がクエリタンパク質と主題のタ
ンパク質との間で約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％
、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％
、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列
同一性（またはこの範囲の比率の任意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少
なくとも６５％～約１００％のアミノ酸同一性を示す場合；または、そのようなクエリタ
ンパク質とＴＩＣ７６６４もしくはＴＩＣ７６６６との配列比較がクエリタンパク質と主
題のタンパク質との間で約９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸同一性（または
この範囲の比率の任意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも９７％
～約１００％のアミノ酸同一性を示す場合；または、そのようなクエリタンパク質とＴＩ
Ｃ４７７１の配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で約９８％、９９％
、１００％のアミノ酸配列同一性（またはこの範囲の比率の任意の一部）であるクエリタ
ンパク質の長さに沿って少なくとも９８％～約１００％のアミノ酸同一性を示す場合；ま
たは、そのようなクエリタンパク質とＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ７６６０、ＴＩＣ７６６２
、ＴＩＣ７６６８、ＴＩＣ１０３５７、ＴＩＣ１０３５８、ＴＩＣ１０３６０、ＴＩＣ１
０３６１、ＴＩＣ１０３６２、ＴＩＣ１０３６４、ＴＩＣ１０３５９、またはＰｉｒＡ＿
ＡＢＥ６８８７８との配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質の間で１００％の
同一性を示す場合、ＰｉｒＡタンパク質に関することが意図される。
鱗翅目、鞘翅目、または半翅目の昆虫種に対して昆虫阻害活性を示すタンパク質は、そ
のようなクエリタンパク質とＴＩＣ７９４０との配列比較がクエリタンパク質と主題のタ
ンパク質との間で約６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％
、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％
、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列
同一性（またはこの範囲の比率の任意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少
なくとも６５％～約１００％のアミノ酸同一性を示す場合；または、そのようなクエリタ
ンパク質とＴＩＣ４７７２との配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で
約９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸同一性（またはこの範囲の比率の任意の
一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも９７％～約１００％のアミノ酸
同一性を示す場合；または、そのようなクエリタンパク質とＴＩＣ７６６５、ＴＩＣ７６
６７、もしくはＴＩＣ１０３６８の配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との
間で約９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列同一性またはこの範囲の比率の任意の一
部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも９８％～約１００％のアミノ酸同
一性を示す場合；または、そのようなクエリタンパク質とＴＩＣ７５７６、ＴＩＣ７６６
１、ＴＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６９、ＴＩＣ１０３６６、ＴＩＣ１０３６７、ＴＩＣ１
０３６９、ＴＩＣ１０３７０、ＴＩＣ１０３７１、ＴＩＣ１０３７２、ＴＩＣ１０３７３
、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９、ＴＩＣ１１５１０、またはＴＩＣ１１５１１との配列比
較が、クエリタンパク質と主題のタンパク質との間で１００％のアミノ酸配列同一性を示
す場合、ＰｉｒＢタンパク質に関することが意図される。
鱗翅目、鞘翅目、または半翅目の昆虫種に対して昆虫阻害活性を示すタンパク質は、そ
のようなクエリタンパク質とＴＩＣ９３２１、ＴＩＣ１１４１１、ＴＩＣ１１４４３、Ｔ
ＩＣ１１４４４、ＴＩＣ１１４４５、ＴＩＣ１１４４６、ＴＩＣ１１５１３との配列比較
がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で約６５％、６６％、６７％、６８％、６
９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７
９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８
９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９
９％、１００％のアミノ酸配列同一性（またはこの範囲の比率の任意の一部）であるクエ
リタンパク質の長さに沿って少なくとも６５％～約１００％のアミノ酸同一性を示す場合
；またはそのようなクエリタンパク質のＴＩＣ１０４３４、ＴＩＣ１１４４０、もしくは
ＴＩＣ１１４４２との配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で約７０％
、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％
、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％
、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００
％のアミノ酸配列同一性（またはこの範囲の比率の任意の一部）であるクエリタンパク質
の長さに沿って少なくとも７０％～約１００％のアミノ酸同一性を示す場合；またはその
ようなクエリタンパク質のＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９
３２２、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ１０３７５、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７７、Ｔ
ＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３７９、ＴＩＣ１０３８１、ＴＩＣ１１２１１、ＴＩＣ１１
３０１、ＴＩＣ１１３０２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０
３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、もしくはＴＩＣ１１１０４との配列比較がクエリタンパ
ク質と主題のタンパク質との間で約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、
８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、
９６％、９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列同一性（またはこの範囲の比
率の任意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも８０％～約１００％
のアミノ酸同一性を示す場合；またはそのようなクエリタンパク質のＴＩＣ９３１９、Ｔ
ＩＣ１０３８０、ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１１２１２、もしくはＴＩＣ１０３８０ＰＬ
との配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で約８２％、８３％、８４％
、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列同一性（またはこの範囲の比率の任
意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも８２％～約１００％のアミ
ノ酸同一性を示す場合；またはそのようなクエリタンパク質のＴＩＣ６８８０もしくはＴ
ＩＣ６８８０ＰＬとの配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で約８６％
、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列同一性（またはこの範囲の比率の任
意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも８６％～約１００％のアミ
ノ酸同一性を示す場合；またはそのようなクエリタンパク質のＴＩＣ１１５０６またはＴ
ＩＣ１１５１２との配列比較がクエリタンパク質と主題のタンパク質との間で約９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％のアミノ酸配列同一性（またはこの
範囲の比率の任意の一部）であるクエリタンパク質の長さに沿って少なくとも９４％～約
１００％のアミノ酸同一性を示す場合、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質に関することが意図さ
れる。
例示的なＰｉｒＡタンパク質、ＴＩＣ４７７１、ＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ７６６０、Ｔ
ＩＣ７６６２、ＴＩＣ７６６４、ＴＩＣ７６６６、ＴＩＣ７６６８、ＴＩＣ７９３９、Ｔ
ＩＣ１０３５７、ＴＩＣ１０３５８、ＴＩＣ１０３６０、ＴＩＣ１０３６１、ＴＩＣ１０
３６２、ＴＩＣ１０３６３、ＴＩＣ１０３６４、ＴＩＣ１０３５９、及びＰｉｒＡ＿ＡＢ
Ｅ６８８７８は、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズムを用いて互いに並べた。表４及び５に
報告されているように、完全長タンパク質のそれぞれについてのアミノ酸配列同一性パー
セントのペアごとのマトリクスを作成した。
Figure 2024026130000004
Figure 2024026130000005
例示的なＰｉｒＢタンパク質、ＴＩＣ４７７２、ＴＩＣ７５７６、ＴＩＣ７６６１、Ｔ
ＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６５、ＴＩＣ７６６７、ＴＩＣ７６６９、及びＴＩＣ７９４０
はＣｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズムを用いて互いに並べた。表６及び７に報告されている
ように、完全長タンパク質のアミノ酸配列同一性パーセントのペアごとのマトリクスを作
成した。
Figure 2024026130000006
Figure 2024026130000007
例示的なＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ６８８０、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７
、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２１
、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３７５、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７７、ＴＩ
Ｃ１０３７８、ＴＩＣ１０３７９、ＴＩＣ１０３８０、ＴＩＣ１０３８１、ＴＩＣ１０４
３４、ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１１２１１、ＴＩＣ１１２１２、ＴＩＣ１１３０１、Ｔ
ＩＣ１１３０２、ＴＩＣ１１４４０、ＴＩＣ１１４４１、ＴＩＣ１１４４２、ＴＩＣ１１
４４３、ＴＩＣ１１４４４、ＴＩＣ１１４４５、ＴＩＣ１１４４６、ＴＩＣ１１５０６、
ＴＩＣ１１５１２、ＴＩＣ１１５１３、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、
ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、及びＴＩＣ１１１０
４はＣｌｕｓｔａｌ Ｗアルゴリズムを用いて互いに並べた。表８、９、１０、及び１１
に報告されているように、完全長タンパク質のそれぞれについてアミノ酸配列同一性パー
セントのペアごとのマトリクスが作成された。
Figure 2024026130000008
Figure 2024026130000009
Figure 2024026130000010
Figure 2024026130000011
Figure 2024026130000012
Figure 2024026130000013
同一性パーセントに加えて、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質は、一次構造（保存されたアミノ酸モチーフ）によって、長さ（Ｐｉｒ
Ａについては約１３３～約１４１アミノ酸、ＰｉｒＢについては約４１４～約４２８アミ
ノ酸、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質については約５４９～約５６６アミノ酸）によって、及
びその他の特性によって関連付けることができる。ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパ
ク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質の特性を表１２で報告する。
Figure 2024026130000014
Figure 2024026130000015
Figure 2024026130000016
本出願の実施例でさらに記載されているように、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードす
る組換え核酸分子の配列は植物で使用するために設計された。植物で使用するために設計
された植物で最適化された例示的な組換え核酸分子配列は、配列番号４９、５１、５２、
５３、５４、５５、５６、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、及び１５
８として提示されている。
これらの組換え核酸分子の配列を含有する発現カセット及びベクターは、当技術分野で
既知の形質転換の方法及び技法に従って、構築し、トウモロコシ、ダイズ、ワタまたは他
の植物の細胞に導入することができる。例えば、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ介在性形の
形質転換は、米国特許出願公開第２００９／０１３８９８５Ａ１（ダイズ）、２００８／
０２８０３６１Ａ１（ダイズ）、２００９／０１４２８３７Ａ１（トウモロコシ）、２０
０８／０２８２４３２（ワタ）、２００８／０２５６６７（ワタ）、２００３／０１１０
５３１（コムギ）、２００１／００４２２５７Ａ１（テンサイ）、米国特許第５，７５０
，８７１号（キャノーラ）、同第７，０２６，５２８号（コムギ）、及び同第６，３６５
，８０７号（イネ）、及びＡｒｅｎｃｉｂｉａ，ｅｔ ａｌ．，（１９９８），Ｔｒａｎ
ｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ．７：２１３－２２２（サトウキビ）に記載されており、そのすべ
ては参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。形質転換細胞は、ＰｉｒＡＢ融合
タンパク質ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、Ｔ
ＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、またはＴＩＣ９３２２を発現する形質転換植物に再生す
ることができる。殺虫活性を調べるために、実施例に記載されているように、形質転換植
物から得られた植物リーフディスクを用いて、鱗翅目害虫の幼虫の存在下でバイオアッセ
イを実施する。鞘翅目害虫に対する殺虫活性を調べるために、以下の例で記載するように
Ｒ０及びＦ１の世代の形質転換植物が根切り虫アッセイにおいて使用される。半翅目害虫
に対する殺虫活性を調べるために、実施例に記載されているように、植物から取り出され
た組織または植物に残っている組織のいずれかからの形質転換植物の鞘、トウモロコシの
穂または葉をアッセイに使用する。
従来の形質転換法の代替として、導入遺伝子、発現カセット（複数可）等のようなＤＮ
Ａ配列を、部位特異的な組込みを介して植物または植物細胞のゲノム内の特定の部位また
は遺伝子座に挿入してもよく、または組み込んでもよい。したがって、本開示の組換えＤ
ＮＡの構築物（複数可）及び分子（複数可）は、植物または植物細胞のゲノムに挿入する
ための少なくとも１つの導入遺伝子、発現カセット、または他のＤＮＡ配列を含むドナー
テンプレート配列を含んでもよい。部位特異的組込みのためのそのようなドナーテンプレ
ートはさらに、挿入配列（すなわち、植物ゲノムに挿入される配列、導入遺伝子、カセッ
ト等）に隣接する１または２の相同性アームを含んでもよい。本開示の組換えＤＮＡ構築
物（複数可）はさらに、部位特異的ヌクレアーゼ及び／または部位特異的組込みを実行す
るための任意の関連タンパク質をコードする発現カセット（複数可）を含んでもよい。こ
れらのヌクレアーゼ発現カセット（複数可）は、ドナーテンプレートと同じ分子またはベ
クター（シス）または別の分子またはベクター（トランス）に存在してもよい。ゲノムＤ
ＮＡを切断して、所望のゲノム部位または遺伝子座で二本鎖切断（ＤＳＢ）またはニック
を生成する様々なタンパク質（またはタンパク質の複合体及び／またはガイドＲＮＡ）を
含む部位特異的組込みのためのいくつかの方法が当該技術分野で知られている。当該技術
分野で理解されるように、ヌクレアーゼ酵素によって導入されたＤＳＢまたはニックを修
復する過程の間に、ドナーテンプレートＤＮＡはＤＳＢまたはニックの部位でゲノムに組
み込まれるようになってもよい。挿入事象は非相同末端結合（ＮＨＥＪ）を介して発生し
てもよいが、ドナーテンプレートにおける相同性アーム（複数可）の存在は、相同組換え
を介した修復過程の間での植物ゲノムへの挿入配列の導入及び標的指向化を促進してもよ
い。使用されてもよい部位特異的ヌクレアーゼの例には、ジンクフィンガーヌクレアーゼ
、操作されたまたはネイティブのメガヌクレアーゼ、ＴＡＬＥエンドヌクレアーゼ、及び
ＲＮＡ誘導エンドヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１）が挙げられる。ＲＮ
Ａ誘導部位特異的ヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ９またはＣｐｆ１）を使用する方法につ
いては、組換えＤＮＡ構築物（複数可）はまた、植物ゲノム内の所望の部位にヌクレアー
ゼを向けるための１以上のガイドＲＮＡをコードする配列も含むであろう。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または
関連する殺虫性タンパク質をコードする組換え核酸分子組成物が企図される。例えば、Ｐ
ｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または関連
する殺虫性タンパク質は、タンパク質をコードするＯＲＦを伴うポリヌクレオチド分子が
、例えば、プロモーター、及び構築物が意図されるシステムでの発現に必要な他の調節要
素のような遺伝子発現要素に操作可能に連結されている組換えＤＮＡ構築物で発現させる
ことができる。非限定的な例には、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、Ｔ
ＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、Ｔ
ＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、
ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２ま
たは植物におけるタンパク質の発現のための配列をコードする関連ファミリーメンバーの
殺虫性タンパク質に操作可能に連結された植物で機能的なプロモーター、またはＰｉｒＡ
＿ＡＢＥ６８８７８のようなＰｉｒＡタンパク質、もしくはＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ４
７７２、ＴＩＣ７５７６、ＴＩＣ７６６１、ＴＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６５、ＴＩＣ７
６６７、ＴＩＣ７６６９、ＴＩＣ７９４０、ＴＩＣ１０３６６、ＴＩＣ１０３６７、ＴＩ
Ｃ１０３６９、ＴＩＣ１０３７０、ＴＩＣ１０３７１、ＴＩＣ１０３７２、ＴＩＣ１０３
７３、ＴＩＣ１０３６８、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９、ＴＩＣ１１５０５、ＴＩＣ１１
５１０及びＴＩＣ１１５１１；もしくはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ６８８０、Ｔ
ＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２２、Ｔ
ＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２１、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３７５、ＴＩＣ１０３
７６、ＴＩＣ１０３７７、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３７９、ＴＩＣ１０３８０、Ｔ
ＩＣ１０３８１、ＴＩＣ１０４３４、ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１１２１１、ＴＩＣ１１
２１２、ＴＩＣ１１３０１、ＴＩＣ１１３０２、ＴＩＣ１１４４０、ＴＩＣ１１４４１、
ＴＩＣ１１４４２、ＴＩＣ１１４４３、ＴＩＣ１１４４４、ＴＩＣ１１４４５、ＴＩＣ１
１４４６、ＴＩＣ１１５０６、ＴＩＣ１１５１２、ＴＩＣ１１５１３、ＴＩＣ１０３７６
ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１
１１０３、及びＴＩＣ１１１０４；または、Ｂｔ細菌もしくは他のＢａｃｉｌｌｕｓ種に
おけるタンパク質の発現のための配列をコードする関連する殺虫性タンパク質に操作可能
に連結されたＢｔで機能的なプロモーターが挙げられる。エンハンサー、イントロン、非
翻訳リーダー、コードされたタンパク質不動化タグ（ＨＩＳタグ）、転座ペプチド（すな
わち、プラスチド輸送ペプチド、シグナルペプチド）、翻訳後修飾酵素のためのポリペプ
チド配列、リボソーム結合部位、及びＲＮＡｉ標的部位を含むが、これらに限定されない
他の要素は、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８、ＰｉｒＢタンパク質、
ＴＩＣ４７７２、ＴＩＣ７５７６、ＴＩＣ７６６１、ＴＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６５、
ＴＩＣ７６６７、ＴＩＣ７６６９、ＴＩＣ７９４０、ＴＩＣ１０３６６、ＴＩＣ１０３６
７、ＴＩＣ１０３６９、ＴＩＣ１０３７０、ＴＩＣ１０３７１、ＴＩＣ１０３７２、ＴＩ
Ｃ１０３７３、ＴＩＣ１０３６８、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９、ＴＩＣ１１５０５、Ｔ
ＩＣ１１５１０、及びＴＩＣ１１５１１、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ６８
８０、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３
２２、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２１、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３７５、ＴＩ
Ｃ１０３７６、ＴＩＣ１０３７７、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３７９、ＴＩＣ１０３
８０、ＴＩＣ１０３８１、ＴＩＣ１０４３４、ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１１２１１、Ｔ
ＩＣ１１２１２、ＴＩＣ１１３０１、ＴＩＣ１１３０２、ＴＩＣ１１４４０、ＴＩＣ１１
４４１、ＴＩＣ１１４４２、ＴＩＣ１１４４３、ＴＩＣ１１４４４、ＴＩＣ１１４４５、
ＴＩＣ１１４４６、ＴＩＣ１１５０６、ＴＩＣ１１５１２、ＴＩＣ１１５１３、ＴＩＣ１
０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、
ＴＩＣ１１１０３、及びＴＩＣ１１１０４、または、関連殺虫性タンパク質コード配列に
操作可能に連結することができる。
本明細書で提供されている例示的な組換えポリヌクレオチド分子には、例えば、配列番
号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１
４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番
号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配
列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８
、配列番号５０、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号
６６、配列番号６８、配列番号７０、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７６、配列
番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、
配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６、配列番号９８、配列番号１
００、配列番号１０２、配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０９、配列番号１
１１、配列番号１１３、配列番号１１５、配列番号１１７、配列番号１１９、配列番号１
２１、配列番号１２３、配列番号１２５、配列番号１２７、配列番号１２９、配列番号１
３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、配列番号１３９、配列番号１
４１、配列番号１４３、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１４９、配列番号１
５１、配列番号１５３、配列番号１５５、及び配列番号１５７に記述されたようなアミノ
酸配列を有するポリペプチドまたはタンパク質をコードする配列番号１、配列番号３、配
列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列
番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、
配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３
９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番
号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配
列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７
、配列番号６９、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号
７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列
番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１
、配列番号１０４、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２
、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２２
、配列番号１２４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２
、配列番号１３４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２
、配列番号１４４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配列番号１５２
、配列番号１５４、配列番号１５６、及び配列番号１５８のようなポリヌクレオチドに操
作可能に連結される異種プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。異種プロ
モーターはまた、色素体を標的とするＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３
１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０
３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、Ｔ
ＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２、または標的としないＴＩＣ
６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、Ｔ
ＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ
１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４及びＴＩ
Ｃ１１３０２または関連する殺虫性タンパク質をコードする合成ＤＮＡコード配列に操作
可能に連結することもできる。本明細書で開示されているタンパク質をコードする組換え
核酸分子のコドンは、同義のコドン（当該技術分野ではサイレント置換として知られてい
る）で置き換えることができる。
本明細書で使用されるとき、「組換え」という用語は、通常は自然界には見られず、ヒ
トの介入によって作り出された非天然のＤＮＡ、タンパク質、または生物を指す。「組換
えＤＮＡ分子」は、天然には一緒に存在しないであろう、且つヒトの介入の結果であるＤ
ＮＡ分子の組み合わせを含むＤＮＡ分子である。例えば、導入遺伝子を含むＤＮＡ分子及
び導入遺伝子に隣接する植物ゲノムＤＮＡのような、互いに異種の少なくとも２つのＤＮ
Ａ分子の組み合わせから構成されるＤＮＡ分子は組換えＤＮＡ分子である。
本明細書で使用されるとき、「異種」という用語は、そのような組み合わせが通常自然
界に見られない場合の２以上のＤＮＡ分子の組み合わせを指す。例えば、２つのＤＮＡ分
子は、異なる種に由来してもよく、及び／または２つのＤＮＡ分子は、異なる遺伝子、例
えば、同じ種に由来する異なる遺伝子または異なる種に由来する同じ遺伝子に由来しても
よい。したがって、調節要素は、そのような組み合わせが通常自然界に見られない場合、
すなわち、転写可能なＤＮＡ分子が調節要素に操作可能に連結して天然に存在しない場合
、操作可能に連結された転写可能ＤＮＡ分子に関して異種である。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または
関連する殺虫性タンパク質のコード配列を含む組換えＤＮＡ構築物はさらに、ＰｉｒＡタ
ンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または関連する殺虫
性タンパク質、昆虫阻害性ｄｓＲＮＡ分子、または補助タンパク質をコードするＤＮＡ配
列と同時に発現するまたは共発現するように構成することができる１以上の昆虫阻害剤を
コードするＤＮＡの領域を含むことができる。補助タンパク質には、補因子、酵素、結合
相手、または、例えば、その発現を助け、植物におけるその安定性に影響を与え、オリゴ
マー化のために自由エネルギーを最適化し、その毒性を増強し、且つその活性のスペクト
ルを増大することによって昆虫阻害剤の有効性に役立つように機能する他の薬剤が挙げら
れるが、これらに限定されない。補助タンパク質は、例えば、１以上の昆虫阻害剤の取り
込みを促進してもよく、または毒剤の毒性効果を増強してもよい。
すべてのタンパク質またはｄｓＲＮＡ分子が１つのプロモーターから発現されるように
、または各タンパク質またはｄｓＲＮＡ分子が別個のプロモーターの制御下にあるように
、またはそれらの何らかの組み合わせのであるように、組換えＤＮＡ構築物を構築するこ
とができる。本発明のＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合
タンパク質、及び関連タンパク質は、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、または
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または関連タンパク質の１以上が、選択した発現系の種類に
応じて、他のオープンリーディングフレーム及びプロモーターも含有する共通のヌクレオ
チドセグメントから発現される多重遺伝子発現系から発現させることができる。例えば、
細菌の多重遺伝子発現系は、単一のプロモーターを利用して、単一のオペロン内からの多
重結合／タンデムオープンリーディングフレームの発現（すなわち、ポリシストロン性発
現）を駆動することができる。別の例では、植物の多重遺伝子発現系は、それぞれが異な
るタンパク質または１以上のｄｓＲＮＡ分子のような他の薬剤を発現する、多重に連結さ
れていない発現カセットを利用することができる。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または
関連するファミリーメンバータンパク質をコードする配列を含む組換え核酸分子または組
換えＤＮＡ構築物は、ベクター、例えば、プラスミド、バキュロウイルス、合成染色体、
ビリオン、コスミド、ファージミド、ファージ、またはウイルスベクターによって宿主細
胞に送達することができる。そのようなベクターを用いて、ＰｉｒＡタンパク質、Ｐｉｒ
Ｂタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または宿主細胞における関連タンパク
質コード配列の安定した発現もしくは一過性の発現、またはコードされたポリペプチドの
その後の発現を達成することができる。タンパク質をコードする配列を含み、宿主細胞に
導入される外因性の組換えポリヌクレオチドまたは組換えＤＮＡ構築物は、本明細書では
「導入遺伝子」と呼ばれる。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または
関連するタンパク質をコードする配列のいずれか１以上を発現する組換えポリヌクレオチ
ドを含有するトランスジェニック細菌、トランスジェニック植物細胞、トランスジェニッ
ク植物、及びトランスジェニック植物の一部。「細菌細胞」または「細菌」という用語は
、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、またはＲｈｉｚｏｂｉｕｍの細胞を含むことが
できるが、これらに限定されない。「植物細胞」または「植物」という用語は、双子葉植
物細胞または単子葉植物細胞を含むことができるが、これらに限定されない。企図される
植物及び植物細胞には、アルファルファ、バナナ、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャ
ベツ、ブラッシカ、ニンジン、キャッサバ、トウゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマ
メ、ハクサイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、ワタ、ウリ
、キュウリ、ダグラスモミ、ナス、ユーカリ、亜麻、ニンニク、ブドウ、ホップ、ネギ、
レタス、ロブロリーパイン、キビ、メロン、ナッツ、オートムギ、オリーブ、タマネギ、
観賞用植物、ヤシ、牧草、エンドウマメ、ピーナッツ、コショウ、ハトエンドウ、マツ、
ジャガイモ、ポプラ、カボチャ（ｐｕｍｐｋｉｎ）、ラジアータパイン、ダイコン、ナタ
ネ、イネ、根茎、ライムギ、サフラワー、低木、ソルガム、サザンパイン、ダイズ、ホウ
レンソウ、カボチャ（ｓｑｕａｓｈ）、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイ
ートコーン、スイートガム、スイートポテト、スイッチグラス、茶、タバコ、トマト、ラ
イコムギ、芝草、スイカ、コムギの植物細胞または植物が挙げられるが、これらに限定さ
れない。他の実施形態では、トランスジェニック植物細胞から再生されたトランスジェニ
ック植物及びトランスジェニック植物の一部が提供される。特定の実施形態では、トラン
スジェニック植物は、植物から一部を切断する、折る、粉砕する、または他の方法で分離
することによって、トランスジェニック種子から得ることができる。特定の実施形態では
、植物の一部は、種子、朔果、葉、花、茎、根、またはそれらの任意の部分、またはトラ
ンスジェニック植物の一部の再生不可能な部分であることができる。この文脈で使用され
るとき、トランスジェニック植物の一部の「再生不可能な」部分は、植物全体を形成する
ように誘導できない部分、または有性生殖及び／または無性生殖が可能な植物全体を形成
するように誘導できない部分である。特定の実施形態では、植物の一部の再生不可能な部
分は、トランスジェニック植物の種子、朔果、葉、花、茎、または根の一部である。
昆虫、鞘翅目または鱗翅目または半翅目を阻害する量のＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９
３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９
３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ
１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２または
関連するタンパク質を含むトランスジェニック植物の製造方法が提供される。そのような
植物は、本出願で提供されている任意のＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９
３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１
０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、
ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２、または関連タンパク質
をコードする組換えポリヌクレオチドを植物細胞に導入することと、昆虫、鞘翅目、鱗翅
目、または半翅目を阻害する量のタンパク質を発現する前記植物細胞に由来する植物を選
択することとによって作製することができる。植物は、再生、種子、花粉、または分裂組
織の形質転換技術によって植物細胞から導出することができる。植物を形質転換するため
の方法は当該技術分野で既知である。
加工製品が検出可能な量のＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、Ｔ
ＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６Ｐ
Ｌ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１
１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２、または関連するタンパク質、その
昆虫阻害性のセグメントまたは断片を含む加工植物製品またはその任意の特徴的な部分も
また、本出願において開示されている。特定の実施形態では、加工製品は、植物の一部、
植物バイオマス、油、粗びき粉、砂糖、動物飼料、コムギ粉、フレーク、ふすま、糸くず
、外皮、加工種子、及び種子から成る群から選択される。特定の実施形態では、加工製品
は再生不可能である。植物製品は、トランスジェニック植物またはトランスジェニック植
物の一部に由来する商品または商業の他の製品を含むことができ、商品または他の製品は
、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３
１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ
、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４
、またはＴＩＣ１１３０２；または関連タンパク質の特徴的な部分をコードするまたは含
むヌクレオチドセグメントまたは発現されたＲＮＡまたはタンパク質を検出することによ
って商業を介して追跡することができる。
ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３
１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ
、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４
、またはＴＩＣ１１３０２、または関連タンパク質を発現している植物は、他の毒性タン
パク質を発現する、及び／または除草剤耐性遺伝子、収量またはストレス耐性形質等を付
与する遺伝子等のような他のトランスジェニック形質を発現するトランスジェニック事象
と交配することによって交配することができ、または形質がすべて連鎖されるようにその
ような形質を単一のベクターで組み合わせることができる。
実施例でさらに記載されているように、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ
９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ
１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ
、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２をコードする配列は植物
で使用するために設計された。これらの合成ヌクレオチド配列または人工ヌクレオチド配
列を含有する発現カセット及び発現ベクターは、当該技術分野で知られている形質転換の
方法及び技法に従って、構築され、トウモロコシ、ワタ、及びダイズの植物細胞に導入す
ることができる。形質転換細胞は、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１
７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３
７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩ
Ｃ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２を発現していることが観察され
る形質転換植物に再生される。殺虫活性を調べるために、鱗翅目、鞘翅目、及び半翅目の
害虫の存在下でバイオアッセイが実施される。
実施例にさらに記載されているように、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ
９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ
１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ
、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２または関連するタンパ
ク質をコードする配列、及びこれらのタンパク質に対して実質的な比率の同一性を有する
配列は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、熱増幅及びハイブリッド形成のような当業者
に既知の方法を用いて同定することができる。例えば、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３
１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３
２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１
０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２タンパク
質または関連タンパク質は、関連タンパク質に特異的に結合する抗体を産生させるのに使
用することができ、且つ密接に関連している他のタンパク質メンバーを選抜する及び見つ
けるために使用することができる。
さらに、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、Ｔ
ＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３
７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１
１１０４、またはＴＩＣ１１３０２タンパク質、または関連タンパク質をコードするヌク
レオチド配列を、スクリーニング用のプローブ及びプライマーとして使用して、熱サイク
ル増幅法または等温増幅法及びハイブリッド形成法を用いてクラスの他のメンバーを同定
することができる。例えば、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３
、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１４６、配列番号１４８、配列
番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５４、配列番号１５６、及び配列番号１５８と
して記述されている配列に由来するオリゴヌクレオチドを用いて、商品生産物に由来する
デオキシリボ核酸試料におけるＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、
ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６
ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１
１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２タンパク質または関連タンパク質
の導入遺伝子の存在または非存在を決定することができる。オリゴヌクレオチドを使用す
る特定の核酸検出法の感度を考えると、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配
列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１４６、配列番号１
４８、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５４、配列番号１５６及び配列番号
１５８として記述されている配列に由来するオリゴヌクレオチドを用いて、商品生産物の
一部のみが、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４
、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配
列番号１５２、配列番号１５４、配列番号１５６、または配列番号１５８を含有するトラ
ンスジェニック植物に由来するプールされた供給源に由来する商品生産物にてＴＩＣ６８
８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ
９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０
３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩ
Ｃ１１３０２の導入遺伝子を検出できることが期待される。そのようなオリゴヌクレオチ
ドを用いて、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４
、配列番号５５、配列番号５６、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配
列番号１５２、配列番号１５４、配列番号１５６、または配列番号１５８にてヌクレオチ
ド配列の変異を導入することができることがさらに認識されている。そのような「突然変
異誘発」オリゴヌクレオチドは、トランスジェニック植物宿主細胞における様々な昆虫阻
害活性または多様な発現を示すＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、
ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６
ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１
１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２、または関連するアミノ酸配列変
異体の同定に有用である。
ヌクレオチド配列の相同体、例えば、ハイブリッド形成条件下にて、本出願で開示され
ている配列のそれぞれまたはいずれかとハイブリッド形成するヌクレオチド配列によって
コードされる殺虫性タンパク質もまた本発明の実施形態である。本発明はまた、第２のヌ
クレオチド配列とハイブリッド形成する第１のヌクレオチド配列を検出する方法を提供し
、その際、第１のヌクレオチド配列（またはその逆相補性配列）は、殺虫性タンパク質ま
たはその殺虫性断片をコードし、ストリンジェントなハイブリッド形成条件下で第２のヌ
クレオチド配列とハイブリッド形成する。そのような場合、第２のヌクレオチド配列はス
トリンジェントなハイブリッド形成条件下で配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列
番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列
番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、
配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４
１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番
号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配
列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、配列番号６９
、配列番号７１、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号
８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列
番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０
４、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１
４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２０、配列番号１２２、配列番号１２
４、配列番号１２６、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３
４、配列番号１３６、配列番号１３８、配列番号１４０、配列番号１４２、配列番号１４
４、配列番号１４６、配列番号１４８、配列番号１５０、配列番号１５２、配列番号１５
４、配列番号１５６、及び配列番号１５８から成る群から選択されるヌクレオチド配列で
あることができる。ヌクレオチドコード配列は、適切なハイブリッド形成条件下で互いに
ハイブリッド形成し、これらのヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質は、他
のタンパク質のいずれか１つに対して生じた抗血清と交差反応する。本明細書で定義され
るようなストリンジェントなハイブリッド形成条件は、少なくとも４２℃でのハイブリッ
ド形成と、それに続く２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳによる室温でのそれぞれ５分間の２回
の洗浄と、それに続く０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにおける６５℃でのそれぞれ３０
分間の２回の洗浄とを含む。一層さらに高い温度での洗浄は一層さらにストリンジェント
な条件、例えば、６８℃でのハイブリッド形成条件、それに続く０．１％ＳＤＳを含有す
る２×ＳＳＣにおける６８℃での洗浄を構成する。
当業者は、遺伝暗号の冗長性のために、他の多くの配列がＰｉｒＡタンパク質、Ｐｉｒ
Ｂタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質に関連するタンパク質をコードすること
ができ、且つそれらの配列は、それらがＢａｃｉｌｌｕｓ株または植物細胞のいずれかで
殺虫性タンパク質を発現するように機能する程度まで、多くのそのような冗長なコード配
列がこれらの条件下で、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融
合タンパク質をコードするネイティブのＸｅｎｏｒｈａｂｄｕｓまたはＰｈｏｔｏｒｈａ
ｂｄｕｓ配列とハイブリッド形成しないことを当然認識している本発明の実施形態である
ことを認識するであろう。本出願は、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、または
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または関連するタンパク質をコードする配列及びそれに対し
て実質的な比率の同一性を有する配列を同定するための、当業者に既知のこれら及び他の
同定方法の使用を企図する。
ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３
１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ
、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４
、またはＴＩＣ１１３０２タンパク質または関連タンパク質によって昆虫、特に鱗翅目、
鞘翅目、または半翅目による作物の侵入を防除する方法も本出願で開示されている。その
ような方法は、昆虫、鞘翅目、または鱗翅目または半翅目を阻害する量のＴＩＣ６８８０
ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３
２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８
０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１
１３０２、または関連する毒素タンパク質を含む植物を成長させることを含むことができ
る。特定の実施形態では、そのような方法はさらに、（ｉ）ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ
９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ
９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩ
Ｃ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２タン
パク質、または関連する毒素タンパク質を含むまたはコードする任意の組成物を植物また
は植物を生じさせる種子に適用すること；及び（ｉｉ）ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３
１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３
２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１
０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２タンパク
質、または関連する毒素タンパク質をコードするポリヌクレオチドで植物または植物を生
じさせる植物細胞を形質転換すること、のいずれか１以上をさらに含むことができる。一
般に、ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ
９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８
ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１
０４、またはＴＩＣ１１３０２タンパク質、または関連する毒素タンパク質を、組成物で
提供して、微生物で提供して、またはトランスジェニック植物で提供して、または鱗翅目
、鞘翅目または半翅目の昆虫に対する昆虫阻害活性を付与することができることが企図さ
れる。
特定の実施形態では、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融
合タンパク質、または関連する毒素タンパク質の組換え核酸分子は、発現に好適な条件下
でＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質または関
連する毒素タンパク質の１つを発現するように形質転換された組換えＢａｃｉｌｌｕｓま
たは任意の他の組換え細菌細胞を培養することによって調製される昆虫阻害性組成物の殺
虫活性成分である。そのような組成物は、前記組換えポリペプチドを発現／産生するその
ような組換え細胞の培養物の乾燥、凍結乾燥、均質化、抽出、濾過、遠心分離、沈降、ま
たは濃縮によって調製することができる。そのようなプロセスは、Ｂａｃｉｌｌｕｓまた
は他の昆虫病原性細菌の細胞抽出物、細胞浮遊液、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞
上清、細胞濾液、または細胞ペレットを生じることができる。そのように生成された組換
えポリペプチドを得ることによって、組換えポリペプチドを含む組成物は、細菌細胞、細
菌胞子、及び傍胞子封入体を含むことができ、農業昆虫阻害スプレー製品または食餌バイ
オアッセイにおける昆虫阻害製剤としてを含む種々の用途のために製剤化することができ
る。
一実施形態では、耐性発生の可能性を低減するために、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢ
タンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質または関連タンパク質の１つを含む昆虫阻
害組成物はさらに、同じ鱗翅目、鞘翅目、または半翅目の昆虫種に対して昆虫阻害活性を
示すが、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、またはＰｉｒＡＢ融合タンパク質、
または関連する毒素タンパク質とは異なる当業者に既知の少なくとも１つの追加のポリペ
プチドを含むことができる。そのような組成物のための考えられる追加のポリペプチドに
は、昆虫阻害タンパク質及び昆虫阻害性ｄｓＲＮＡ分子が挙げられる。害虫を防除するた
めのそのようなリボヌクレオチド配列の使用の一例は、Ｂａｕｍ，ｅｔ ａｌ．，（米国
特許公開２００６／００２１０８７ Ａ１）に記載されている。
鱗翅目害虫の防除のためのそのような追加のポリペプチドは、例えば、Ｃｒｙ１Ａ（米
国特許第５，８８０，２７５号）、Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ａ．１０５、
Ｃｒｙ１Ａｅ、Ｃｒｙ１Ｂ（米国特許公開番号１０／５２５，３１８）、Ｃｒｙ１Ｃ（米
国特許第６，０３３，８７４）、Ｃｒｙ１Ｄ、Ｃｒｙ１Ｄａ及びそれらの変異型、Ｃｒｙ
１Ｅ、Ｃｒｙ１Ｆ、及びＣｒｙ１Ａ／Ｆキメラ（米国特許第７，０７０，９８２号；同第
６，９６２，７０５号；及び同第６，７１３，０６３号）、例えば、ＴＩＣ８３６、ＴＩ
Ｃ８６０、ＴＩＣ８６７、ＴＩＣ８６９、及びＴＩＣ１１００（国際出願公開ＷＯ２０１
６／０６１３９１（Ａ２））、ＴＩＣ２１６０（国際出願公開ＷＯ２０１６／０６１３９
２（Ａ２））のような、しかし、これらに限定されないＣｒｙ１Ｇ、Ｃｒｙ１Ｈ、Ｃｒｙ
１Ｉ、Ｃｒｙ１Ｊ、Ｃｒｙ１Ｋ、Ｃｒｙ１Ｌ、Ｃｒｙ１－型キメラ、Ｃｒｙ２Ａ、Ｃｒｙ
２Ａｂ（米国特許第７，０６４，２４９）、Ｃｒｙ２Ａｅ、Ｃｒｙ４Ｂ、Ｃｒｙ６、Ｃｒ
ｙ７、Ｃｒｙ８、Ｃｒｙ９、Ｃｒｙ１５、Ｃｒｙ４３Ａ、Ｃｒｙ４３Ｂ、Ｃｒｙ５１Ａａ
１、ＥＴ６６、ＴＩＣ４００、ＴＩＣ８００、ＴＩＣ８３４、ＴＩＣ１４１５、Ｖｉｐ３
Ａ、ＶＩＰ３Ａｂ、ＶＩＰ３Ｂ、ＡＸＭＩ－００１、ＡＸＭＩ－００２、ＡＸＭＩ－０３
０、ＡＸＭＩ－０３５、ＡＮＤ ＡＸＭＩ－０４５（米国特許公開２０１３－０１１７８
８４ Ａ１）、ＡＸＭＩ－５２、ＡＸＭＩ－５８、ＡＸＭＩ－８８、ＡＸＭＩ－９７、Ａ
ＸＭＩ－１０２、ＡＸＭＩ－１１２、ＡＸＭＩ－１１７、ＡＸＭＩ－１００（米国特許公
開２０１３－０３１０５４３ Ａ１）、ＡＸＭＩ－１１５、ＡＸＭＩ－１１３、ＡＸＭＩ
－００５（米国特許公開２０１３－０１０４２５９ Ａ１）、ＡＸＭＩ－１３４（米国特
許公開２０１３－０１６７２６４ Ａ１）、ＡＸＭＩ－１５０（米国特許公開２０１０－
０１６０２３１ Ａ１）、ＡＸＭＩ－１８４（米国特許公開２０１０－０００４１７６
Ａ１）、ＡＸＭＩ－１９６、ＡＸＭＩ－２０４、ＡＸＭＩ－２０７、ＡＸＭＩ－２０９（
米国特許公開２０１１－００３００９６ Ａ１）、ＡＸＭＩ－２１８、ＡＸＭＩ－２２０
（米国特許公開２０１４－０２４５４９１ Ａ１）、ＡＸＭＩ－２２１ｚ、ＡＸＭＩ－２
２２ｚ、ＡＸＭＩ－２２３ｚ、ＡＸＭＩ－２２４ｚ、ＡＸＭＩ－２２５ｚ（米国特許公開
２０１４－０１９６１７５ Ａ１）、ＡＸＭＩ－２３８（米国特許公開２０１４－００３
３３６３ Ａ１）、ＡＸＭＩ－２７０（米国特許公開２０１４－０２２３５９８ Ａ１）
、ＡＸＭＩ－３４５（米国特許公開２０１４－０３７３１９５ Ａ１）、ＡＸＭＩ－３３
５（国際出願公開ＷＯ２０１３／１３４５２３（Ａ２））、ＤＩＧ－３（米国特許公開２
０１３－０２１９５７０ Ａ１）、ＤＩＧ－５（米国特許公開２０１０－０３１７５６９
Ａ１）、ＤＩＧ－１１（米国特許公開２０１０－０３１９０９３ Ａ１）、ＡｆＩＰ－
１Ａ及びそれらの誘導体（米国特許公開２０１４－００３３３６１ Ａ１）、ＡｆＩＰ－
１Ｂ及びそれらの誘導体（米国特許公開２０１４－００３３３６１ Ａ１）、ＰＩＰ－１
ＡＰＩＰ－１Ｂ（米国特許公開２０１４－０００７２９２ Ａ１）、ＰＳＥＥＮ３１７４
（米国特許公開２０１４－０００７２９２ Ａ１）、ＡＥＣＦＧ－５９２７４０（米国特
許公開２０１４－０００７２９２ Ａ１）、Ｐｐｕｔ＿１０６３（米国特許公開２０１４
－０００７２９２ Ａ１）、ＤＩＧ－６５７（国際出願公開ＷＯ２０１５／１９５５９４
（Ａ２））、Ｐｐｕｔ＿１０６４（米国特許公開２０１４－０００７２９２ Ａ１）、Ｇ
Ｓ－１３５及びそれらの誘導体（米国特許公開２０１２－０２３３７２６ Ａ１）、ＧＳ
１５３及びそれらの誘導体（米国特許公開２０１２－０１９２３１０ Ａ１）、ＧＳ１５
４及びそれらの誘導体（米国特許公開２０１２－０１９２３１０ Ａ１）、ＧＳ１５５及
びそれらの誘導体（米国特許公開２０１２－０１９２３１０Ａ１）、米国特許公開２０１
２－０１６７２５９ Ａ１に記載されているような配列番号２及びそれらの誘導体、米国
特許公開２０１２－００４７６０６ Ａ１に記載されているような配列番号２及びそれら
の誘導体、米国特許公開２０１１－０１５４５３６ Ａ１に記載されているような配列番
号２及びそれらの誘導体、米国特許公開２０１１－０１１２０１３ Ａ１に記載されてい
るような配列番号２及びそれらの誘導体、米国特許公開２０１０－０１９２２５６ Ａ１
に記載されているような配列番号２及び４及びそれらの誘導体、米国特許公開２０１０－
００７７５０７ Ａ１に記載されているような配列番号２及びそれらの誘導体、米国特許
公開２０１０－００７７５０８ Ａ１に記載されているような配列番号２及びそれらの誘
導体、米国特許公開２００９－０３１３７２１ Ａ１に記載されているような配列番号２
及びそれらの誘導体、米国特許公開２０１０－０２６９２２１ Ａ１に記載されているよ
うな配列番号２または４及びそれらの誘導体、米国特許第７，７７２，４６５（Ｂ２）に
記載されているような配列番号２及びそれらの誘導体、ＷＯ２０１４／００８０５４ Ａ
２に記載されているようなＣＦ１６１＿００８５及びそれらの誘導体、米国特許公開ＵＳ
２００８－０１７２７６２ Ａ１、ＵＳ２０１１－００５５９６８ Ａ１、及びＵＳ２０
１２－０１１７６９０ Ａ１に記載されているような鱗翅目毒性タンパク質及びそれらの
誘導体；ＵＳ７５１０８７８（Ｂ２）に記載されているような配列番号２及びそれらの誘
導体、米国特許第７８１２１２９（Ｂ１）に記載されているような配列番号２及びそれら
の誘導体、Ｃｒｙ７１Ａａ１及びＣｒｙ７２Ａａ１（ＵＳ特許公開ＵＳ２０１６－０２３
０１８７ Ａ１）、Ａｘｍｉ４２２（ＵＳ特許公開ＵＳ２０１６－０２０１０８２ Ａ１
）、Ａｘｍｉ４４０（ＵＳ特許公開ＵＳ２０１６－０１８５８３０ Ａ１）、Ａｘｍｉ２
８１（ＵＳ特許公開２０１６－０１７７３３２ Ａ１）、ＢＴ－００４４、ＢＴ－００５
１、ＢＴ－００６８、ＢＴ－０１２８及びそれらの変異型（ＷＯ２０１６－０９４１５９
Ａ１）、ＢＴ－００９、ＢＴ－００１２、ＢＴ－００１３、ＢＴ－００２３、ＢＴ００
６７及びそれらの変異型（ＷＯ２０１６－０９４１６５ Ａ１）、Ｃｒｙ１ＪＰ５７８Ｖ
、Ｃｒｙ１ＪＰＳ１、Ｃｒｙ１ ＪＰＳ１Ｐ５７８Ｖ（ＷＯ２０１６－０６１２０８ Ａ
１）；等のような、しかし、これらに限定されない昆虫阻害タンパク質から成る群から選
択されてもよい。
鞘翅目害虫を防除するためのそのような追加のポリペプチドは、例えば、Ｃｒｙ３Ｂｂ
（米国特許第６，５０１，００９号）、Ｃｒｙ１Ｃ変異体、Ｃｒｙ３Ａ変異体、Ｃｒｙ３
、Ｃｒｙ３Ｂ、Ｃｒｙ３４／３５、５３０７、ＡＸＭＩ１３４（米国特許公開２０１３－
０１６７２６４ Ａ１）ＡＸＭＩ－１８４（米国特許公開２０１０－０００４１７６ Ａ
１）、ＡＸＭＩ－２０５（米国特許公開２０１４－０２９８５３８ Ａ１）、ＡＸＭＩ－
２０７（米国特許公開２０１３－０３０３４４０ Ａ１）、ＡＸＭＩ－２１８、ＡＸＭＩ
－２２０（米国特許公開２０１４０２４５４９１Ａ１）、ＡＸＭＩ－２２１ｚ、ＡＸＭＩ
－２２３ｚ（米国特許公開２０１４－０１９６１７５ Ａ１）、ＡＸＭＩ－２７９（米国
特許公開２０１４－０２２３５９９ Ａ１）、ＡＸＭＩ－Ｒ１及びその変異型（米国特許
公開２０１０－０１９７５９２ Ａ１、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、ＴＩＣ４３１、Ｔ
ＩＣ８０７、ＴＩＣ８５３、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ１２０１、ＴＩＣ３１３１、ＤＩＧ－
１０（米国特許公開２０１０－０３１９０９２ Ａ１）、ｅＨＩＰ（米国特許出願公開番
号２０１０／００１７９１４）、ＩＰ３及びその変異型（米国特許公開２０１２から０２
１０４６２Ａ１）、ｖ－Ｈｅｘａｔｏｘｉｎ－Ｈｖ１ａ（米国特許出願公開２０１４－０
３６６２２７ Ａ１）、ＰＨＩ－４変異型（米国特許出願公開２０１６－０２８１１０５
Ａ１）、ＰＩＰ－７２変異型（ＷＯ２０１６－１４４６８８ Ａ１）、ＰＩＰ－４５変
異型、ＰＩＰ－６４変異型、ＰＩＰ－７４変異型、ＰＩＰ－７５変異型、及びＰＩＰ－７
７変異型（ＷＯ２０１６－１４４６８６ Ａ１）、ＤＩＧ－３０５（ＷＯ２０１６１０９
２１４ Ａ１）、ＰＩＰ－４７変異型（米国特許公開２０１６－０１８６２０４ Ａ１）
、ＤＩＧ－１７、ＤＩＧ－９０、ＤＩＧ－７９（ＷＯ２０１６－０５７１２３ Ａ１）、
ＤＩＧ－３０３（ＷＯ２０１６－０７００７９ Ａ１）；等のような、しかし、これらに
限定されない昆虫阻害タンパク質から成る群から選択されてもよい。
半翅目害虫を防除するためのそのような追加のポリペプチドは、ＴＩＣ１４１５（米国
特許公開２０１３－００９７７３５ Ａ１）、ＴＩＣ８０７（米国特許番号８６０９９３
６）、ＴＩＣ８５２及びＴＩＣ８５３（米国特許公開２０１０－００６４３９４ Ａ１）
、ＴＩＣ８３４及びその変異型（米国特許公開２０１３－０２６９０６０ Ａ１）、ＡＸ
ＭＩ－０３６（米国特許公開２０１０－０１３７２１６ Ａ１）、及びＡＸＭＩ－１７１
（米国特許公開２０１３－００５５４６９ Ａ１）、Ｃｒｙ６４Ｂａ及びＣｒｙ６４Ｃａ
（Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ（２０１８），Ｃｒｙ６４Ｂａ ａｎｄ Ｃｒｙ６４Ｃａ，Ｔｗｏ
ＥＴＸ／ＭＴＸ２－Ｔｙｐｅ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｉｎ
ｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｈｅｍｉｐｔ
ｅｒａｎ Ｐｅｓｔｓ．Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃ
ｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，８４（３）：１－１１）のような、しかし、これらに限定されない
半翅目に活性があるタンパク質から成る群から選択されてもよい。
他の実施形態では、そのような組成物／製剤はさらに、本発明の他の昆虫阻害タンパク
質によって阻害されない昆虫に対する阻害活性を示して得られる昆虫阻害のスペクトルを
拡大する少なくとも１つの追加のポリペプチド、例えば、Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａｎｓ
に対して昆虫阻害活性を示す追加のポリペプチドを含むことができる。
昆虫が特定の殺虫剤に対する耐性を発達させる可能性は当該技術分野で文書化されてい
る。虫害耐性管理戦略の１つは、異なる作用機序を介して作動する２つの異なる昆虫阻害
剤を発現するトランスジェニック作物を採用することである。したがって、昆虫阻害剤の
いずれか１つに耐性のある昆虫は他の昆虫阻害剤によって防除することができる。別の虫
害耐性管理戦略は、対象となる鞘翅目または鱗翅目の害虫種に対して保護されていない植
物を用いて、そのような保護されていない植物の避難を提供することである。１つの特定
の例は、その全体が参照によって組み込まれる米国特許第６，５５１，９６２号に記載さ
れている。
種子処理製剤、スプレーオン製剤、ドリップオン製剤、またはワイプオン製剤でタンパ
ク質とともに使用される、本明細書で開示されているタンパク質によっても防除される害
虫を防除するために設計されている局所適用殺虫剤の化学作用のような他の実施形態は、
土壌に直接適用することができ（土壌灌注）、本明細書で開示されているタンパク質を発
現する成長している植物に適用することができ、または開示されているタンパク質の１以
上をコードする１以上の導入遺伝子を含有する種子に適用されるように製剤化することが
できる。種子処理で使用するためのそのような製剤は、当該技術分野で知られている種々
の粘着剤及び粘着付与剤と共に適用することができる。そのような製剤は、開示されてい
るタンパク質と作用様式において相乗的である殺虫剤を含有することができるので、製剤
殺虫剤は様々な作用様式を介して作用して、開示されているタンパク質によって防除され
得る同じまたは類似の害虫を防除する、またはそのような殺虫剤はＰｉｒＡタンパク質、
ＰｉｒＢタンパク質、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質、または関連する殺虫性タンパク質の１
つによって効果的に防除されていない、さらに広い宿主範囲または植物の害虫種の範囲内
で害虫を防除するように作用する。
前述の組成物／製剤はさらに、餌、粉末、粉塵、ペレット、顆粒、スプレー、エマルシ
ョン、コロイド懸濁液、水溶液、Ｂａｃｉｌｌｕｓ胞子／結晶調製物、種子処理、１以上
のタンパク質を発現するように形質転換された組換え植物細胞／植物組織／種子／植物、
または１以上のタンパク質を発現するように形質転換された細菌のような農業的に許容さ
れる担体をさらに含むことができる。組換えポリペプチドに固有の昆虫阻害または殺虫性
阻害のレベル及び植物または食餌アッセイに適用される製剤のレベルに応じて、組成物／
製剤は、種々の重量での量の組換えポリペプチド、例えば、０．０００１重量％～０．０
０１重量％～０．０１重量％～１重量％～９９重量％の組換えポリペプチドを含むことが
できる。
前述を考慮して当業者は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、開示されてい
る具体的な態様にて変更を行なうことができ、それでも同様のまたは類似する結果を得る
ことができることを十分に理解するべきである。したがって、本明細書で開示されている
具体的な構造的及び機能的詳細は、限定的であると解釈されるべきではない。本明細書で
引用された各参考文献の開示全体は本出願の開示の範囲内に組み込まれることが理解され
るべきである。
実施例１
ＰｉｒＡタンパク質とＰｉｒＢタンパク質の発見及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質の構築
この実施例では、殺虫性ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ４７７１、ＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ
７６６０、ＴＩＣ７６６２、ＴＩＣ７６６４、ＴＩＣ７６６６、ＴＩＣ７６６８、ＴＩＣ
７９３９、ＴＩＣ１０３５７、ＴＩＣ１０３５８、ＴＩＣ１０３６０、ＴＩＣ１０３６１
、ＴＩＣ１０３６２、ＴＩＣ１０３６３、ＴＩＣ１０３６４、ＴＩＣ１０３５９、及びＰ
ｉｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８（まとめて「ＰｉｒＡタンパク質」）、ＰｉｒＢタンパク質Ｔ
ＩＣ４７７２、ＴＩＣ７５７６、ＴＩＣ７６６１、ＴＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６５、Ｔ
ＩＣ７６６７、ＴＩＣ７６６９、ＴＩＣ７９４０、ＴＩＣ１０３６６、ＴＩＣ１０３６７
、ＴＩＣ１０３６９、ＴＩＣ１０３７０、ＴＩＣ１０３７１、ＴＩＣ１０３７２、ＴＩＣ
１０３７３、ＴＩＣ１０３６８、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９、ＴＩＣ１１５０５、ＴＩ
Ｃ１１５１０、及びＴＩＣ１１５１１（まとめた「ＰｉｒＢタンパク質」）の発見、なら
びにＰｉｒＡＢ融合タンパク質、ＴＩＣ６８８０、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、Ｔ
ＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２１、Ｔ
ＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３７５、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７７、ＴＩＣ１
０３７８、ＴＩＣ１０３７９、ＴＩＣ１０３８０、ＴＩＣ１０３８１、ＴＩＣ１０４３４
、ＴＩＣ１１２１０、ＴＩＣ１１２１１、ＴＩＣ１１２１２、ＴＩＣ１１３０１、ＴＩＣ
１１３０２、ＴＩＣ１１４４０、ＴＩＣ１１４４１、ＴＩＣ１１４４２、ＴＩＣ１１４４
３、ＴＩＣ１１４４４、ＴＩＣ１１４４５、ＴＩＣ１１４４６、ＴＩＣ１１５０６、ＴＩ
Ｃ１１５１２、ＴＩＣ１１５１３、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩ
Ｃ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、及びＴＩＣ１１１０４（
まとめて「ＰＩｓＡＢタンパク質）の作出を説明する。
Ｐｈｏｔｏｒａｂｄｕｓ及びＸｅｎｏｒａｂｄｕｓのＰｉｒＡＢ殺虫性タンパク質をコ
ードする配列を、独自の収集及び公開配列情報から特定し、合成し、クローニングし、配
列決定し、及び昆虫バイオアッセイで調べた。細菌のオペロンは、Ｐｈｏｔｏｒａｂｄｕ
ｓ及びＸｅｎｏｒａｂｄｕｓの種から同定し、各オペロンはＰｉｒＡ及びＰｉｒＢのコー
ド配列を含む。殺虫性ＰｉｒＡタンパク質、ＴＩＣ４７７１、ＴＩＣ７５７５、ＴＩＣ７
６６０、ＴＩＣ７６６２、ＴＩＣ７６６４、ＴＩＣ７６６６、ＴＩＣ７６６８、ＴＩＣ７
９３９、ＴＩＣ１０３５７、ＴＩＣ１０３５８、ＴＩＣ１０３６０、ＴＩＣ１０３６１、
ＴＩＣ１０３６２、ＴＩＣ１０３６３、ＴＩＣ１０３６４、ＴＩＣ１０３５９、及びＰｉ
ｒＡ＿ＡＢＥ６８８７８；ならびにＰｉｒＢタンパク質、ＴＩＣ４７７２、ＴＩＣ７５７
６、ＴＩＣ７６６１、ＴＩＣ７６６３、ＴＩＣ７６６５、ＴＩＣ７６６７、ＴＩＣ７６６
９、ＴＩＣ７９４０、ＴＩＣ１０３６６、ＴＩＣ１０３６７、ＴＩＣ１０３６９、ＴＩＣ
１０３７０、ＴＩＣ１０３７１、ＴＩＣ１０３７２、ＴＩＣ１０３７３、ＴＩＣ１０３６
８、ＰｉｒＢ＿ＡＢＥ６８８７９、ＴＩＣ１１５０５、ＴＩＣ１１５１０、及びＴＩＣ１
１５１１は、表１３で列記されているＰｈｏｔｏｒａｂｄｕｓ及びＸｅｎｏｒａｂｄｕｓ
の種から単離した。タンパク質ＴＩＣ７９３９及びＴＩＣ７９４０に関しては、オペロン
はマイクロバイオーム試料から同定され、それが由来した細菌種はまだ不明である。
Figure 2024026130000017
Figure 2024026130000018
Ｐｈｏｔｏｒａｂｄｕｓ及びＸｅｎｏｒａｂｄｕｓのＰｉｒＡ及びＰｉｒＢ殺虫性タン
パク質をコードする配列は、独自の収集及び公開配列情報から特定し、合成し、クローニ
ングし、配列を確認し、及び昆虫バイオアッセイで調べた。細菌のオペロンを同定し、表
１３に列記されている各Ｐｈｏｔｏｒａｂｄｕｓ及びＸｅｎｏｒａｂｄｕｓ種の配列決定
に由来するコンティグに基づいてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のプライマーを設計し
た。各タンパク質毒素の完全長コード配列のアンプリコンは、表１３に列記されている各
種から単離された全ＤＮＡを用いて作り出した。アンプリコンのそれぞれは、当該技術分
野で既知の方法を用いて、Ｂｔで発現可能なプロモーターと操作可能に連結したＢａｃｉ
ｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（Ｂｔ）の発現ベクターにクローニングした。
ＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質を含む融合タンパク質は当該技術分野で既
知の方法を用いて作製した。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質をコードするコード配列は、操作
可能に連結されたＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質のコード配列を含むので、
細胞で発現されると、互いに隣接するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質を含む
タンパク質が作り出された。ＰｉｒＢタンパク質に隣接するＰｉｒＡタンパク質から構成
されるＰｉｒＡＢ融合タンパク質を表１に提示する。表１に提示したＰｉｒＡＢ融合タン
パク質は、同じ細菌オペロンに由来するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質、ま
たは異なる細菌オペロンに由来するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質から構成
される。ＰｉｒＡタンパク質に隣接するＰｉｒＢタンパク質から構成されるＰｉｒＡＢ融
合タンパク質を表２に提示する。表２のＰｉｒＡＢ融合タンパク質は、同じ細菌オペロン
に由来するＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質から構成される。別のＰｉｒＡタ
ンパク質と隣接し、次にＰｉｒＢタンパク質と隣接するＰｉｒＡタンパク質から構成され
るＰｉｒＡＢ融合タンパク質を表３に提示する。表３に提示したＰｉｒＡＢ融合タンパク
質のＰｉｒＡタンパク質成分は、重複ＰｉｒＡタンパク質または異なるＰｉｒＡタンパク
質であることができる。
実施例２
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質は昆虫バイオ
アッセイにて鱗翅目、鞘翅目、及び半翅目に対する活性を示す
この実施例は、鱗翅目、鞘翅目、及び半翅目の種々の種に対するＰｉｒＡタンパク質、
ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質によって示される阻害活性を説明す
る。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質はＢｔ及び
Ｅ．ｃｏｌｉで発現させ、鱗翅目、鞘翅目、半翅目、及び双翅目の種々の種に対する毒性
についてアッセイした。各毒素の調製物は、鱗翅目害虫種、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏ
ｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、ＦＡＷ）、アメリカタバコガ（Ｈｅｌｉｃｏｖ
ｅｒｐａ ｚｅａ、（ＣＥＷ）、ダイズポッドワーム及びオオタバコガとしても知られる
）、南西部のアワノメイガ（Ｄｉａｔｒａｅａ ｇｒａｎｄｉｏｓｅｌｌａ、ＳＷＣＢ）
、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ、ＤＢＭ）、欧州アワノメイガ（Ｏ
ｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ、ＥＣＢ）、ベルベットビーンキャタピラー（Ａｎ
ｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ、ＶＢＣ）、タマナヤガ（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉ
ｐｓｉｌｏｎ、ＢＣＷ）、南部ヨトウムシ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｒｉｄａｎｉａ、
ＳＡＷ）、ダイズルーパー（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｕｓｉａ ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ＳＢＬ）、
及びオオタバコガ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、ＴＢＷ）；鞘翅目の害虫
種、コロラドハムシ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ、ＣＰＢ）
、北部トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｒｂｅｒｉ、ＮＣＲ）、南部
トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ ｈｏ
ｗａｒｄｉｉ、ＳＣＲ）、及び西部トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉ
ｒｇｉｆｅｒａ、ＷＣＲ）；半翅目種、南部アオカメムシ（Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕ
ｌａ、ＳＧ）、亜熱帯性クサギカメムシ（Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｈｅｒｏｓ、ＮＢＳＢ
）、ミドリメクラガメ（Ｌｙｇｕｓ ｌｉｎｅｏｌａｒｉｓ、ＴＰＢ）、及び西部ミドリ
メクラガメ（Ｌｙｇｕｓ Ｈｅｓｐｅｒｕｓ、ＷＴＰ）；ならびに双翅目種、ネッタイシ
マカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ、ＹＦＭ）に対してアッセイした。
ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質を発現する
形質転換されたＢｔ及びＥ．ｃｏｌｉを増殖させ、胞子または可溶化タンパク質をアッセ
イ用の昆虫餌に加えた。大量死と発育阻害は、ＰｉｒＡタンパク質、ＰｉｒＢタンパク質
、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１以上を含有する食餌での昆虫の成長と発達を、未処
理の対照飼育の食餌での昆虫と比較することによって評価した。鱗翅目、鞘翅目、半翅目
、及び双翅目の害虫の活動を観察した。各タンパク質で観察されたバイオアッセイの活性
を表１４（鱗翅目）及び１５（鞘翅目、半翅目、双翅目）に提示するが、その際、「＋」
は活性を示し、空のセルは活性が観察されなかったことを示し、「ＮＴ」は毒素がその特
定の害虫に対して分析されなかったことを示す。
Figure 2024026130000019
Figure 2024026130000020
Figure 2024026130000021
Figure 2024026130000022
表１４及び１５に見られるように、ほとんどの場合、ＰｉｒＡ毒素タンパク質及びＰｉ
ｒＢ毒素タンパク質だけでは殺虫活性を示さなかった。しかしながら、各オペロン由来の
ＰｉｒＡタンパク質とＰｉｒＢタンパク質とを含む融合タンパク質は、鱗翅目、鞘翅目、
半翅目、及び双翅目の害虫種に対して広いスペクトルの活性を示した。ＰｉｒＡタンパク
質及びＰｉｒＢタンパク質のいくつかは、個々の能力で調べると経口活性を示した。例え
ば、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ４７７１は、鱗翅目種、ＣＥＷ、ＤＢＭ、ＥＣＢ、ＶＢＣ
、ＳＡＷ、鞘翅目種、ＣＰＢ、及び半翅目種、ＴＰＢに対して活性を示した。ＰｉｒＢタ
ンパク質ＴＩＣ４７７２は、鱗翅目種、ＣＥＷ、ＤＢＭ、ＶＢＣ、ＳＡＷ、及び半翅目種
、ＴＰＢに対して活性を示した。ＴＩＣ４７７１タンパク質及びＴＩＣ４７７２タンパク
質をＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ６８８０と組み合わせると、鱗翅目活性に対するほ
とんどの活性が保持された（ＣＥＷ、ＤＢＭ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ）。ＳＡＷに対する活
性は失われたが、さらに２種の昆虫種ＦＡＷ及びＳＷＣＢに対する活性は見られた。ＴＩ
Ｃ６８８０はまた、鞘翅目及び半翅目の害虫種に関して、個々のＴＩＣ４４７１及びＴＩ
Ｃ４７７２と比較して追加の活性を示した。鞘翅目に関しては、ＴＩＣ６８８０はＣＰＢ
に対する活性を保持し、ＷＣＲに対する活性を追加した。半翅目に関しては、ＴＩＣ６８
８０はＴＰＢに対する活性を保持し、ＳＧＢ、ＮＢＳＢ、及びＷＴＰに対して観察された
活性を追加した。ＴＩＣ６８８０はまた、ＴＩＣ４７７１またはＴＩＣ４７７２では見ら
れなかった双翅目種、ＹＦＭに対しても活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質、ＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７５７６は、
それぞれ、アッセイした昆虫に対して昆虫阻害活性を示さなかった一方で、対応するＰｉ
ｒＡＢ融合タンパク質であるＴＩＣ９３１６は、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、ＶＢＣ、
ＢＣＷ、ＳＡＷ、及びＴＢＷに対して活性を示した。ＴＩＣ９３１６は、鞘翅目種、ＣＰ
Ｂ及び半翅目種、ＳＧＢ、ＮＢＳＢ、ＴＰＢ、及びＷＴＰに対しても活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質、ＴＩＣ７６６０及びＴＩＣ７６６１はそ
れぞれ活性を示さなかった。しかしながら、対応するＰｉｒＡＢ融合タンパク質であるＴ
ＩＣ９３１７は、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ及びＷＣ
Ｒ、ならびに半翅目種、ＳＧＢ、ＴＰＢ、及びＷＴＰに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質、ＴＩＣ７６６２及びＴＩＣ７６６３はそ
れぞれ活性を示さなかった。しかしながら、対応するＰｉｒＡＢ融合タンパク質であるＴ
ＩＣ９３１８は、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、ＶＢＣ、ＢＣＷ、及びＴＢＷ、鞘翅目種
、ＣＰＢ及びＷＣＲ、ならびに半翅目種、ＳＧＢ、ＮＢＳＢ、ＴＰＢ、及びＷＴＰに対し
て活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６４は鞘翅目、ＣＰＢに対して活性を示した。ＰｉｒＢ
タンパク質ＴＩＣ７６６５は鱗翅目種、ＴＢＷに対して活性を示した。対応するＰｉｒＡ
Ｂ融合タンパク質であるＴＩＣ９３１９は、鱗翅目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、ＶＢＣ、及び
ＢＣＷ、鞘翅目種、ＣＰＢ及びＷＣＲ、及び半翅目種、ＳＧＢ、ＴＰＢ、及びＷＴＰに対
して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７６６６は昆虫阻害活性を示さなかった。ＰｉｒＢタンパク
質ＴＩＣ７６６７は鱗翅目種、ＳＷＣＢに対して活性を示した。対応するＰｉｒＡＢ融合
タンパク質であるＴＩＣ９３２２は鱗翅目種、ＦＡＷ、ＣＥＷ、ＳＷＣＢ及びＶＢＣ、鞘
翅目種、ＣＰＢ、及び半翅目種、ＴＰＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質及びＰｉｒＢタンパク質、ＴＩＣ７６６８及びＴＩＣ７６６９はそ
れぞれ活性を示さなかった。対応するＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３２０は、鱗翅
目種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及びＶＢＣ、鞘翅目種、ＣＰＢ、及び半翅目種、ＳＧＢ、ＮＢ
ＳＢ、及びＴＰＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３２１は鞘翅目の害虫、ＣＰＢに対して活性を示し
た。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３５７、ＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３６６、及び対
応するＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１０３７５は、アッセイされた限られた数の鱗翅
目に対して活性を示さなかった。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３５８及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３６７はそれ
ぞれ、アッセイした昆虫種に対して活性を示さなかった。しかしながら、対応するＰｉｒ
ＡＢ融合タンパク質であるＴＩＣ１０３７６は、鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢ及び鞘翅目害虫
種、ＮＣＲ及びＷＣＲに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６０及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３６９はそれ
ぞれ、アッセイされた限られた数の鱗翅目害虫種に対して活性を示さなかった。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６１及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３７０は、そ
れぞれ、アッセイされた限られた数の鱗翅目害虫種に対して活性を示さなかった。しかし
ながら、対応する融合タンパク質であるＴＩＣ１０３７８は、鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢ、
鞘翅目害虫種、ＮＣＲとＷＣＲ、及び半翅目害虫種、ＮＢＳＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６２及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３７１はアッ
セイされた限られた数の鱗翅目害虫種に対して活性を示さなかった。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６３はアッセイされた限られた数の害虫種に対して活
性を示さなかった。ＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３７２は鱗翅目昆虫種、ＳＷＣＢに対
して活性を示した。対応する融合タンパク質であるＴＩＣ１０３８０は、鱗翅目害虫種、
ＳＷＣＢに対する活性を保持し、鞘翅目害虫種、ＮＣＲ及びＷＣＲと半翅目害虫種、ＮＢ
ＳＢとに対する活性を追加した。
ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ１０３６４及びＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ１０３７３はアッ
セイされた限られた数の害虫種に対して活性を示さなかった。対応する融合タンパク質Ｔ
ＩＣ１０３８１は、鞘翅目の害虫種ＮＣＲとＷＣＲ、及び半翅目害虫種ＮＢＳＢに対して
活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質であるＴＩＣ１０４３４は、鞘翅目害虫種、ＮＣＲ及びＷＣ
Ｒに対して活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１１０３は鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢに対して活性を
示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１０４は半翅目種、ＮＢＳＢに対して活性を示した
。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１２１０は鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢとＢＣＷ、及び
半翅目害虫種ＮＢＳＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１２１１は鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢ及び半翅目種、
ＮＢＳＢに対して活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１２１２は鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢに対して活性を
示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１３０１は、鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及
びＶＢＣ、鞘翅目害虫種、ＮＣＲ及びＷＣＲ、及び半翅目害虫種、ＮＢＳＢ及びＷＴＰに
対して活性を示した。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ１１３０２は、鱗翅目害虫種、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及
びＶＢＣ、鞘翅目害虫種、ＷＣＲ、ならびに半翅目害虫種、ＮＢＳ及びＷＴＰに対して活
性を示した。
実施例３
ＰｉｒＡ、ＰｉｒＢの混合物、及びＰｉｒＡＢ融合タンパク質の混合物は昆虫バイオアッ
セイにて鱗翅目、鞘翅目、及び半翅目に対する活性を示す。
この実施例は、種々の濃度にてＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７６６０
をＰｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７５７６及びＴＩＣ７６６１と混合することによって、と同
様にＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３１６とＴＩＣ９３１７；ＴＩＣ９３１６とＴＩ
Ｃ１１３０１；及びＴＩＣ９３１７とＴＩＣ１１３０２とを混合することによって示され
る阻害活性を説明する。
種々の濃度でのＰｉｒＡタンパク質とＰｉｒＢタンパク質の混合物、及びＰｉｒＡＢ融
合タンパク質の混合物を昆虫餌で提示し、鱗翅目害虫種、ＢＣＷ、ＳＷＣ、及びＶＢＣ、
鞘翅目害虫種、ＷＣＲ及びＮＣＲ、ならびに半翅目害虫種、ＮＢＳＢに対する活性につい
てアッセイした。混合物は様々な濃度の毒素タンパク質を含んでいた。以下の表１６は各
混合物で活性が観察された昆虫種を示している。
Figure 2024026130000023
Figure 2024026130000024
表１６に見られるように、ＰｉｒＡタンパク質ＴＩＣ７５７５及びＴＩＣ７６６０とＰ
ｉｒＢタンパク質ＴＩＣ７５７６及びＴＩＣ７６６１の混合物は、対応する融合タンパク
質ＴＩＣ９３１６及びＴＩＣ９３１７と同様の活性を提供した。ＰｉｒＡＢ融合タンパク
質ＴＩＣ９３１６とＴＩＣ９３１７；ＴＩＣ９３１６とＴＩＣ１１３０１；ＴＩＣ９３１
７とＴＩＣ１１３０２の混合物は、融合タンパク質の一方または双方と同様の活性を示し
た。
実施例４
植物細胞での発現のためのＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１
６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２
２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０
３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２をコードする
合成コード配列の設計
植物におけるＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ
９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ
１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ
、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２の発現に使用するために
合成または人工のコード配列を構築した。これらの合成コード配列をバイナリー植物形質
転換ベクターにクローニングし、植物細胞を形質転換するのに使用した。ＰｉｒＡＢ融合
タンパク質のアミノ酸配列を維持しながら、ＡＴＴＴＡ及びＡ／Ｔリッチ植物のポリアデ
ニル化配列のような特定の非現実的な問題配列を回避して、米国特許第５，５００，３６
５号に一般的に記載されている方法に従って合成核酸配列を合成した。ＰｉｒＡＢ融合タ
ンパク質ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩ
Ｃ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７
８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、及びＴＩＣ１１３０２の合成コ
ード配列を表１７に提示する。ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０
３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、及びＴＩＣ１０３８１ＰＬをコードするコード配列
は、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質コード配列内の対応するＰｉｒＡコード配列部分の開始メ
チオニン残基の直後に追加のアラニンコドンを含有していた。
Figure 2024026130000025
ＴＩＣ１１１０３及びＴＩＣ１１１０４の合成コード配列及び対応するタンパク質配列
を以下の表１８に提示する。
Figure 2024026130000026
実施例５
植物細胞におけるＰｉｒＡＢ融合タンパク質の発現のための発現カセット
種々の植物発現カセットが表１７に記述されている配列で設計された。そのような発現
カセットは植物プロトプラストにおける一過性発現または植物細胞の形質転換に有用であ
る。典型的な発現カセットは植物細胞内のタンパク質の最終的な配置に関して設計される
。色素体を標的とするタンパク質については、合成ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６
、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２
、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３
８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２殺虫性タンパク
質コード配列が葉緑体を標的とするシグナルペプチドのコード配列とインフレームで操作
可能に連結される。得られた植物形質転換ベクターは、リーダーに５’で操作可能に連結
され、イントロンに５’で操作可能に連結され（または任意でイントロンなし）、色素体
を標的とするまたは標的としないＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７
、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７
６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ
１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、及びＴＩＣ１１３０２タンパク質をコードする合成コー
ド配列に５’で操作可能に連結され、次に３’ＵＴＲに５’で操作可能に連結される構成
的プロモーターを含む殺虫性タンパク質の発現のための第１の導入遺伝子カセットと、グ
リホサートまたは抗生物質の選択を用いて形質転換された植物細胞を選択するための第２
の導入遺伝子カセットとを含む。上記に記載されている要素はすべて、例えば、制限エン
ドヌクレアーゼ部位またはライゲーション非依存性クローニング部位のような発現カセッ
トの構築のために提供される追加の配列と共に連続して配置されることが多い。
実施例６
ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７
８、ＴＩＣ１０３８０、及びＴＩＣ１０３８１を発現しているトランスジェニックトウモ
ロコシ植物は、鱗翅目害虫種に対する活性を示す
この実施例は、トランスジェニックトウモロコシ植物で発現させ、鱗翅目害虫種に対し
てアッセイした場合の、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、Ｔ
ＩＣ９３１８、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３８０、及びＴＩＣ１０３８１の阻害活性
を説明する。
ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３
７８、ＴＩＣ１０３８０、またはＴＩＣ１０３８１を発現するように設計された導入遺伝
子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターを、当該技術分野で既知の方法を用い
てクローニングした。植物形質転換ベクターは、リーダーに５’で操作可能に連結され、
イントロンに５’で操作可能に連結され、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３
１８、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３８０、またはＴＩＣ１０３８
１をコードする合成コード配列に５’で操作可能に連結され、３’ＵＴＲに５’で操作可
能に連結される植物で発現可能なプロモーターを含むＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、
ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３８０、またはＴＩ
Ｃ１０３８１殺虫性タンパク質を発現するための第１の導入遺伝子カセットと、グリホサ
ートを用いて形質転換植物細胞を選択するための第２の導入遺伝子カセットとを含んでい
た。得られたベクターを用いて、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが介在する形質転換法を用
いてトウモロコシ植物を安定して形質転換した。形質転換された細胞は当該技術分野で既
知の方法によって植物を形成するように誘導した。植物のリーフディスクを使用するバイ
オアッセイは、米国特許第８，３４４，２０７号に記載されているものと同様に実施した
。形質転換されていないトウモロコシ植物を用いて、陰性対照として使用される組織を得
た。各バイナリーベクターからの複数の形質転換事象を、鱗翅目害虫種、ＦＡＷ、ＣＥＷ
、ＳＷＣＢ、ＥＣＢ、及びＢＣＷに対して評価した。
ＴＩＣ９３１６を発現するいくつかの形質転換された事象はＳＷＣＢ及びＥＣＢに対し
て良好から中程度の阻害活性を示した。同様に、ＴＩＣ９３１７を発現する形質転換事象
もＳＷＣＢ及びＥＣＢに対して良好から中程度の阻害活性を示した。ＴＩＣ９３１８を発
現する形質転換事象はＳＷＣＢ及びＥＣＢに対して良好から優れた阻害活性を示した。Ｔ
ＩＣ１０３７６、ＴＩＣ１０３７８、ＴＩＣ１０３８０、及びＴＩＣ１０３８１を発現す
る形質転換事象はＳＷＣＢに対して良好から中程度の活性を示した。
実施例７
安定して形質転換されたトウモロコシ植物で発現された場合の鞘翅目トウモロコシ根切り
虫害虫に対するＰｉｒＡＢ融合タンパク質の活性のアッセイ
この実施例は、トウモロコシの根を常食とする様々な鞘翅目種に対するＴＩＣ６８８０
ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３
２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８
０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１
１３０２の阻害活性を説明する。
色素体を標的とする及び標的としないＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９
３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１
０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、
ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、またはＴＩＣ１１３０２の双方を発現するように
設計した導入遺伝子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターを、当該技術分野で
既知の方法を用いてクローニングし、それらは表１７及び１８に示されるような配列を含
む。得られたベクターを用い、当該技術分野で既知の方法を用いてトウモロコシ植物を安
定して形質転換する。単一のＴ－ＤＮＡ挿入事象を選択し、増殖させる。殺虫活性は、安
定して形質転換されたトウモロコシ植物の根を常食とする鞘翅目害虫、ＮＣＲ、ＳＣＲ、
及びＷＣＲに対してアッセイする。
Ｒ０の安定して形質転換された植物を用いて、鞘翅目耐性ついてアッセイし、同様にＦ
１子孫を生成する。各バイナリーベクターの形質転換から複数の単一コピー事象を選択す
る。バイナリーベクターの形質転換から生じる事象の一部をＲ０鞘翅目アッセイで使用す
る一方で、事象の別の部分を用いてさらなる試験のためにＦ１子孫を生成する。
Ｒ０アッセイ植物を８インチのポットに移植する。植物に、ＷＣＲ、ＮＣＲ、またはＳ
ＣＲの卵を接種する。卵は接種前に約１０日間インキュベートし、接種後４日で孵化が起
こり、十分な数の幼虫が確実に生き残るようにし、トウモロコシの根を攻撃することがで
きる。形質転換された植物はおよそＶ２～Ｖ３のステージで接種される。植物は侵入後お
よそ２８日間生育させる。ポットから植物を取り出し、根を慎重に洗浄し、すべての土を
取り除く。根への損傷は、表１９に提示するように１～５の損傷評価尺度を用いて評価す
る。陰性対照とも比較を行ってアッセイが適正に実施されていることを保証する。各バイ
ナリーベクターの形質転換のための複数のＲ０の事象を鞘翅目アッセイに使用する。低い
根の損傷スコアは、調べた鞘翅目害虫に対する調べたＰｉｒＡＢ融合タンパク質によって
付与された耐性を示す。
Figure 2024026130000027
各バイナリーベクターの形質転換から生じるＲ０の安定して形質転換された事象の一部
はＦ１子孫を作り出すために使用される。Ｒ０の安定して形質転換された植物は自家受精
させて、Ｆ１子孫を作り出す。Ｆ１種子が植えられる。ヘテロ接合性植物は、当該技術分
野で既知の分子的方法によって同定され、鞘翅目の害虫に対するアッセイ、と同様に毒素
タンパク質のＥＬＩＳＡ発現測定に使用される。各事象に由来するヘテロ接合性のＦ１子
孫の一部を昆虫アッセイに使用する一方で、別の部分は毒素タンパク質の発現を測定する
のに使用する。
ＷＣＲ、ＮＣＲ、またはＳＣＲからの卵は接種後４日以内に孵化できるように約１０日
間インキュベートする。ＷＣＲについては、各ポットに約２，０００個の卵が接種される
。ＮＣＲについては、この種の卵の入手可能性が低いため、使用する卵が少なくてもよい
。植物はほぼＶ２～Ｖ３のステージで接種される。植物は侵入後およそ２８日間生育させ
る。ポットから植物を取り出し、根を慎重に洗浄し、すべての土を取り除く。根への損傷
は、表２０に提示するように０～３の損傷評価尺度を用いて評価する。陰性対照と比較を
行ってアッセイが適正に実施されていることを保証する。低い根の損傷スコアは、ＴＩＣ
６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１９、Ｔ
ＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、ＴＩＣ
１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、または
ＴＩＣ１１３０２によって付与された鞘翅目の害虫に対する耐性を示す。
Figure 2024026130000028
実施例８
安定して形質転換されたトウモロコシ、ダイズまたはワタ植物で発現された場合の鱗翅目
害虫に対するＰｉｒＡＢ融合タンパク質の活性のアッセイ。
この実施例は、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現する安定して形質転換されたト
ウモロコシ、ダイズまたはワタ植物由来の組織を摂食した種々の鱗翅目害虫種に対する活
性のアッセイを説明する。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の色素体を標的とする型及び標的としない型の双方を発現す
るように設計された導入遺伝子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターは、当該
技術分野で既知の方法を用いてクローニングし、表１７及び１８に提示されるコード配列
を含む。
トウモロコシ、ダイズ、またはワタは、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍが介在する形質転
換法を用いて上記に記載されているバイナリー形質転換ベクターで形質転換される。形質
転換された細胞は、当該技術分野で既知の方法によって植物を形成するように誘導される
。植物のリーフディスクを使用するバイオアッセイは米国特許第８，３４４，２０７号に
記載されているものと同様に実施される。形質転換されていないトウモロコシ、ダイズ、
またはワタの植物を用いて陰性対照として使用する組織を得る。各バイナリーベクターか
らの複数の形質転換事象を、ＢＣＷ、ＣＥＷ、ＤＢＭ、ＥＣＢ、ＦＡＷ、ＳＡＷ、ＳＢＬ
、ＳＷＣＢ、ＴＢＷ、及びＶＢＣのような、しかし、これらに限定されない鱗翅目害虫に
対して評価する。昆虫バイオアッセイにて発育阻害及び／または大量死を示すこれらの昆
虫は、調べたＰｉｒＡＢ融合タンパク質の影響を受けやすいと判定されている。
実施例９
安定的して形質転換されたキャノーラ植物で発現された場合のノミハムシ害虫に対するＰ
ｉｒＡＢ融合タンパク質の活性のアッセイ
この実施例は、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現するトランスジェニックキャノ
ーラ植物全体またはトランスジェニックキャノーラ植物に由来する組織を常食とさせた場
合のノミハムシの種々の種に対する活性のアッセイを説明する。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の色素体を標的とする型及び標的としない型の双方を発現す
るように設計された導入遺伝子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターは、当該
技術分野で既知の方法を用いてクローニングし、表１７及び１８に提示されるコード配列
を含む。
得られたバイナリー形質転換ベクターを用い、当該技術分野で既知の方法を用いてキャ
ノーラ植物細胞を安定して形質転換する。形質転換された細胞は植物を形成するように誘
導される。植物のリーフディスクを使用するバイオアッセイは、野外で収集されたノミハ
ムシを用いた米国特許第８，３４４，２０７号に記載されているものと同様に実行される
。形質転換されていないキャノーラ植物を用いて陰性対照として使用する組織を得る。各
バイナリーベクターからの複数の形質転換事象は、例えば、アブラナ科ノミハムシ（Ｐｈ
ｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）、縞模様ノミハムシ（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅ
ｔａ ｓｔｒｉｏｌａｔａ）、西洋クロノミハムシ（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｐｕｓｉ
ｌｌａ等）のような、しかし、これらに限定されない鞘翅目のノミハムシ害虫に対して評
価される。ノミハムシが摂食し続けるので、ノミハムシの大量死を毎日判定する。リーフ
ディスクは１２日間にわたって２日～３日ごとに交換し、ノミハムシが摂食のために新鮮
な材料を利用できるようにし、試料中のタンパク質分解の影響を減らす。
あるいは、形質転換されたキャノーラ植物は、ノミハムシの蔓延が存在する畑に植える
ことができる。土壌から出てきたノミハムシが実験区画から逃げるのを防ぐために、植物
をテントに収容することができる。キャノーラの葉の損傷評価を利用して、どの植物がさ
らに少ない損傷を経験し、ノミハムシに対する耐性を示したかを判定することができる。
実施例１０
安定して形質転換されたダイズ植物における半翅目害虫に対する ＰｉｒＡＢ融合タンパ
ク質の活性のアッセイ
この実施例は、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現するように安定して形質転換さ
れたダイズ植物における半翅目害虫に対する活性のアッセイを説明する。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つの色素体を標的とする型及び標的としない型の双方を
発現するように設計された導入遺伝子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターは
、当該技術分野で既知の方法を用いてクローニングし、表１７及び１８に提示されるコー
ド配列を含む。ダイズ植物は、バイナリー植物形質転換ベクターを用いて形質転換される
。形質転換されたダイズ植物細胞は植物全体を形成するように誘導される。半翅目害虫に
対する活性のアッセイは、半翅目害虫の種及びその害虫の好ましい標的組織に依存する種
々の技術を用いて実施される。例えば、カメムシの半翅目害虫種は通常、ダイズ植物の発
育中の種子や鞘を常食とする。カメムシに対する活性をアッセイするために、Ｒ５ステー
ジの鞘をＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現するトランスジェニックダイズ植物から
収穫し、寒天または湿った紙の層を含有するカバー付きペトリ皿または大型マルチウェル
プレートに入れて摂食環境に湿度を提供する。２齢のカメムシの幼虫をペトリ皿または大
型マルチウェルプレートに入れる。乾燥を防ぎながら酸素交換を提供するカバーを摂食環
境の上に置く。カメムシの幼虫は数日間摂食できるようにする。発育阻害及び大量死の測
定を行い、形質転換されていないダイズ植物由来の鞘を常食としているカメムシの幼虫と
比較する。
あるいは、活性のアッセイは、安定して形質転換された植物全体で実施することもでき
る。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現する形質転換植物は栽培箱または温室で生育
させる。Ｒ５ステージでは、植物は通気性のあるプラスチック製の「受粉」シート（Ｖｉ
ｌｕｔｉｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ，Ｆｒａｎｋｆｏｒｔ，ＩＬ）から作られ
たケージに封入する。シートスリーブは、Ｖｅｌｃｒｏ（登録商標）タイを用いて土壌表
面のすぐ上の主幹に固定する。各植物には特定の数の２齢のカメムシの幼虫が付く。幼虫
はケージ側の小さなスリットから個々のケージに放され、昆虫が逃げないようにケージを
しっかりと閉じる。幼虫は数日から１週間以上ダイズの鞘を摂食できるようにする。毎日
観察を利用して発育阻害と大量死の測定値を決定する。摂食期間の終了時に、生きている
幼虫と死んだ幼虫を回収する。植物をケージの下で切り取り、実験室に移し、そこで各植
物の昆虫を回収する。ケージを開ける前に、植物を激しく振って、確実にすべての昆虫が
摂食部位からケージの底に落ちるようにする。次に、ケージの底を開け、すべての植物材
料を取り出し、黒いシート上に置く。昆虫は、吸引器または他の手段を用いて回収するこ
とができる。昆虫の数とその発育段階を各植物について記録する。また、死んだ幼虫の数
と発達段階も記録する。これらの測定値を、陰性対照の形質転換されていない植物から得
られた測定値と比較する。
カメムシの幼虫の発育の遅れ（発育阻害）または大量死は、形質転換されていない対照
と比較した場合に有意差があれば、毒性の指標として解釈される。
実施例１１
安定して形質転換されたトウモロコシ植物における半翅目害虫に対するＰｉｒＡＢ融合タ
ンパク質の活性のアッセイ
この実施例は、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現するように安定して形質転換さ
れたトウモロコシ植物における半翅目害虫に対する活性のアッセイを説明する。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つの色素体を標的とする型及び標的としない型の双方を
発現するように設計された導入遺伝子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターは
、当該技術分野で既知の方法を用いてクローニングし、表１７及び１８に提示されるコー
ド配列を含む。トウモロコシ植物はバイナリー植物形質転換ベクターを用いて形質転換さ
れる。形質転換されたトウモロコシ植物細胞は植物全体を形成するように誘導される。半
翅目害虫に対する活性のアッセイは、半翅目害虫の種及びその害虫の好ましい標的組織に
依存する種々の技術を用いて実施される。例えば、カメムシの半翅目害虫種は通常、春の
終わりまたは初夏に若いトウモロコシ植物を常食とし、その結果、葉に穴を開け、ひどい
場合は植物を変形させる。夏の終わりに、カメムシは通常、穂自体を常食とし、穀粒を直
接破壊する。
カメムシに対する活性をアッセイする１つの方法は、大型マルチウェルプレートにてＰ
ｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現する安定して形質転換されたトウモロコシ植物に由
来するリーフディスクにカメムシの幼虫を曝露することである。２齢期のカメムシの幼虫
を、安定して形質転換されたトウモロコシ植物に由来するリーフディスクと共に大型マル
チウェルプレートに入れ、数日間摂食させる。発育阻害と大量死の測定を行い、形質転換
されていないトウモロコシのリーフディスクを摂食したカメムシの幼虫と比較する。
あるいは、形質転換された植物全体を用いてカメムシに対する活性をアッセイすること
ができる。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現する安定して形質転換されたトウモロ
コシ植物は、実施例４のダイズ植物について記載されたのと同様の方法でケージに封入す
る。２齢の幼虫をＶ３ステージのトウモロコシ植物に導入し、数日～１週間摂食させる。
所定の摂食期間の後、生きている幼虫及び死んだ幼虫を回収する。発育阻害と大量死の測
定値を形質転換されていない対照植物と比較する。
安定して形質転換されたトウモロコシの穂を用いてカメムシに対する活性をアッセイす
るために、Ｖ３ステージの植物で分析するのと同様のアプローチを利用することができる
。ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現する安定して形質転換されたトウモロコシ植物
の発育中のトウモロコシの穂は、カメムシの幼虫の逃亡を防ぎながら空気の自由な交換を
可能にする材料のシートを用いて被包する。被包した穂には、２齢期のカメムシの幼虫が
はびこり、数日～１週間、発達中の穂の穀粒を常食にさせる。発育阻害と大量死の測定値
を形質転換されていない対照植物の穂と比較する。
実施例１２
安定的して形質転換されたワタ植物における半翅目害虫に対するＰｉｒＡＢ融合タンパク
質の活性のアッセイ
この実施例は、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現するように安定して形質転換さ
れたワタ植物における半翅目害虫に対する活性のアッセイを説明する。
ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つの色素体を標的とする型及び標的としない型の双方を
発現するように設計された導入遺伝子カセットを含むバイナリー植物形質転換ベクターは
、当該技術分野で既知の方法を用いてクローニングし、表１７及び１８に提示されるコー
ド配列を含む。ワタ植物はバイナリー植物形質転換ベクターを用いて形質転換される。形
質転換されたワタ植物細胞は植物全体を形成するように誘導される。半翅目害虫に対する
活性のアッセイは、半翅目害虫の種及びその害虫の好ましい標的組織に依存する種々の技
術を用いて実施される。例えば、カメムシの半翅目害虫種は通常、種子を食べる虫なので
、ワタの朔果への損傷が主な懸念事項である。それらは主に朔果に穴を開けて種子を食べ
ることによってワタを損傷する。それらの摂食活動は、摂食が起こった大きな朔果の外側
に直径約１／１６インチの暗斑を生じることができる。種子の摂食は摂食部位の近くで綿
毛の生成を減らし、綿毛を汚す可能性がある。そのサイズのために、成虫と４齢及び５齢
の幼虫とは朔果に損傷を与える可能性が最も高く、したがって、幼虫の初期段階で昆虫を
殺傷することが重要である。Ｌｙｇｕｓ属の半翅目害虫種は、主にスクエアと若い朔果を
常食とする。幼虫はより貪欲な食べる虫であり、最も深刻な被害を引き起こす傾向がある
。スクエアを常食にするとき、Ｌｙｇｕｓは発達中の葯を標的にし、その結果、スクエア
が縮んで植物から落下することが多い。朔果に発展するそれらのスクエアについては、朔
果は花粉、未受精の種子、及び空の小室を形成することができない葯を有してもよい。朔
果を常食とするとき、Ｌｙｇｕｓは発育中の種子を標的にし、朔果の外側に小さな黒いく
ぼんだ斑点を生じる。
安定して形質転換されたワタ植物におけるＰｉｒＡＢ融合タンパク質の活性をアッセイ
する１つの方法は、昆虫バイオアッセイでスクエアを使用することである。スクエアは、
ＴＩＣ６８８０ＰＬ、ＴＩＣ９３１６、ＴＩＣ９３１７、ＴＩＣ９３１８、ＴＩＣ９３１
９、ＴＩＣ９３２０、ＴＩＣ９３２２、ＴＩＣ１０３７６ＰＬ、ＴＩＣ１０３７８ＰＬ、
ＴＩＣ１０３８０ＰＬ、ＴＩＣ１０３８１ＰＬ、ＴＩＣ１１１０３、ＴＩＣ１１１０４、
またはＴＩＣ１１３０２を発現している形質転換ワタ植物から回収される。スクエアをペ
トリ皿に入れることができ、または各スクエアを大型ウェルプレートのウェルに入れるこ
とができる。若い新生子のＬｙｇｕｓまたはカメムシの幼虫をペトリ皿または大型ウェル
プレートに入れ、所定の時間摂食させる。発育阻害と大量死の測定を、摂食の時間経過に
わたって行い、形質転換されていないワタ植物に由来するスクエアがアッセイに使用され
る対照と比較する。
あるいは、活性のアッセイは形質転換されたワタ植物全体で実施することができる。例
えば、Ｌｙｇｕｓ種に対してアッセイするために、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発
現する植物に由来するＲ１種子を１０インチのポットに播種する。形質転換されていない
ワタ植物、好ましくは形質転換された植物と同じ品種からのものが陰性対照として使用さ
れる。植物は、摂氏３２度で１６時間の明期と摂氏２３度で８時間の暗期の光周期、及び
８００～９００マイクロアインシュタインの間の光強度での環境室内で維持される。植え
付け後４０日から４５日で、個々の植物を通気性のあるプラスチックの「受粉」シート（
Ｖｉｌｕｔｉｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ，Ｆｒａｎｋｆｏｒｔ，ＩＬ）で作ら
れたケージに封入する。シートスリーブはＶｅｌｃｒｏ（登録商標）タイを用いて土壌表
面のすぐ上の主幹に固定される。実験室飼育からの性的に成熟したオスとメスのＬｙｇｕ
ｓ ｌｉｎｅｏｌａｒｉｓまたはＬｙｇｕｓ ｈｅｓｐｅｒｕｓの成虫（６日齢）の２つ
のペアを、１４ミリリットルの丸底プラスチック試験管（Ｂａｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｓｏｎ
Ｌａｂｗａｒｅ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に回収し、各植物に使用する
。成虫はケージ側の小さなスリットから個々のケージに放され、昆虫が逃げないようにケ
ージをしっかりと閉じる。昆虫を交尾させ、植物を２１日間ケージで保持する。
２１日後、植物をケージの下で切り取り、実験室に移し、そこで各植物の昆虫を回収し
、数える。ケージを開ける前に、植物を激しく振って、確実にすべての昆虫が摂食部位か
らケージの底に落ちるようにする。次に、ケージの底を開け、すべての植物材料を取り出
し、黒いシート上に置く。吸引器を用いて昆虫を回収する。その後、植物を十分に検査し
て、残っている昆虫を回収する。回収した昆虫の数とその発育段階を各植物について記録
する。Ｌｙｇｕｓの成熟度：３齢、４齢、５齢までの幼虫及び成虫に基づいて昆虫の総数
をいくつかの群に分ける。
カメムシ種に対してアッセイするために、ＰｉｒＡＢ融合タンパク質の１つを発現する
植物に由来するＲ１種子を上記に記載されているようにポットに播種し、増殖させてケー
ジに入れる。形質転換されていないワタ植物も陰性対照として使用される。２齢のカメム
シの幼虫を用いて植物に侵入させ、数日または数週間、スクエア及び朔果を摂食させる。
ケージに入れられた植物を上記に記載されているように回収し、回収されたカメムシを、
記録された幼虫の成熟度と同様に、大量死についても調べ、スコア化する。次いで、これ
らのスコアを陰性対照植物と比較する。
実施例１３
安定して形質転換されたトウモロコシ植物で発現した場合ＴＩＣ９３１８及びＴＩＣ１１
３０２は西洋トウモロコシ根切り虫害虫に対する活性を実証する
この実施例は、安定して形質転換されたトウモロコシ植物における西洋トウモロコシ根
切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ、ＷＣＲ）に対するＴＩＣ９３１８
及びＴＩＣ１１３０２の阻害活性を説明する。
トウモロコシ植物は、ＴＩＣ９３１８またはＴＩＣ１１３０２のいずれかの発現のため
の発現カセットを含むバイナリー植物形質転換構築物で形質転換された。バイナリー植物
形質転換ベクターは、ＴＩＣ９３１８及びＴＩＣ１１３０２を発現するように設計された
導入遺伝子カセットを含み、当該技術分野で既知の方法を用いてクローニングされた。植
物形質転換ベクターは 、リーダーに５’で操作可能に連結され、イントロンに５’で操
作可能に連結され、ＴＩＣ９３１８またはＴＩＣ１１３０２をコードする合成コード配列
に５’で操作可能に連結され、３’ＵＴＲに５’で操作可能に連結される植物で発現可能
なプロモーターを含む、ＴＩＣ９３１８またはＴＩＣ１１３０２殺虫性タンパク質の発現
のための第１の導入遺伝子カセットと、グリホサートを用いて形質転換植物細胞を選択す
るための第２の導入遺伝子カセットとを含んだ。得られたベクターを用い、Ａｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍが介在する形質転換法を用いてトウモロコシ植物を安定して形質転換した
。形質転換された細胞は、当該技術分野で知られている方法によって植物を形成するよう
に誘導された。
Ｒ０の安定して形質転換された植物を用いてＷＣＲ耐性についてＴＩＣ１１３０２をア
ッセイし、同様にＦ１の子孫を生成した。各バイナリーベクターの形質転換から複数の単
一コピー事象を選択した。各バイナリーベクター形質転換から生じる事象の一部はＲ０の
ＷＣＲアッセイに使用した。
Ｒ０のアッセイ植物を８インチのポットに移植した。植物にＷＣＲ由来のそれぞれ約２
，０００個の卵が接種した。十分な数の幼虫が確実に生き残るように接種前に卵を約１０
日間インキュベートして、接種後４日で孵化させ、トウモロコシの根を攻撃することがで
きた。各ポットに約２，０００個のＷＣＲの卵を接種した。形質転換された植物にほぼＶ
２～Ｖ３のステージで接種した。植物は侵入後約２８日間生育させた。植物をポットから
取り出し、根を慎重に洗浄して、すべての土を取り除いた。根への損傷は実施例１７の表
１９に提示するように、１～５の損傷評価尺度を用いて評価した。アッセイが適切に行わ
れたことを保証するために、陰性対照との比較も行った。各ＴＩＣ１１３０２バイナリー
ベクター形質転換のための複数のＲ０事象をＷＣＲアッセイで使用した。
ＴＩＣ９３１８とＴＩＣ１１３０２の各バイナリーベクター形質転換から生じるＲ０の
安定して形質転換された事象の一部を用いてＦ１子孫を生成した。Ｒ０の安定して形質転
換された植物を自家受精させてＦ１子孫を生成した。Ｆ１種子を８インチのポットに播種
した。ヘテロ接合性植物は、当該技術分野で既知の分子的方法を介して同定し、ＷＣＲに
対するアッセイに使用した。ＷＣＲ卵の接種は、上記に記載されているようにＲ０の安定
して形質転換された事象について記載された通りであった。根への損傷は、実施例７の表
２０に提示されるように０～３の損傷評価尺度を用いて評価した。アッセイが適切に行わ
れたことを保証するために陰性対照と比較を行った。各構築物の平均根損傷評価（ＲＤＲ
）を以下の表２１に提示するが、その際、「ＮＴ」は調べられていないことを示す。
Figure 2024026130000029
上記の表２１に見られるように、ＴＩＣ９３１８とＴＩＣ１１３０２は双方とも、陰性
対照と比較した場合に西洋トウモロコシ根切り虫（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆ
ｅｒａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ）に対する耐性を示した。
本明細書で開示され、請求されている組成物のすべては、本開示の観点で過度の実験を
行うことなく行い、実行することができる。本発明の組成物は前述の説明に役立つ実施形
態という点で記載されてきたが、本発明の真の概念、精神、または範囲から逸脱すること
なく、本明細書に記載されている組成物に対して変形、変化、改変及び変更が適用されて
もよいことが当業者には明らかであろう。さらに具体的には、同一または類似の結果が達
成される一方で、化学的及び生理学的の双方に関連する特定の作用物質が、本明細書に記
載されている作用物質に置換されてもよいことが明らかであろう。当業者に明らかなその
ような類似の置換及び改変はすべて、添付のクレームによって定義される本発明の精神、
範囲、及び概念の範囲内にあるとみなされる。
刊行物及び公開された特許はすべて、各個々の刊行物または特許出願が、参照によって
具体的かつ個々に組み込まれることが指示されたかのようにと同程度に、参照によって本
明細書に組み込まれる。

Claims (31)

  1. 殺虫性タンパク質またはその殺虫性断片をコードするポリヌクレオチドセグメントに操
    作可能に連結された異種プロモーターを含む組換え核酸分子であって、
    ａ．前記殺虫性タンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８
    、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、
    ４６、４８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７
    ８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、
    １０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、
    １２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、
    １４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、もしくは１５７のアミノ酸配列を含
    む；または
    ｂ．前記殺虫性タンパク質は、
    ｉ．配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５
    に対して少なくとも６５％の同一性；もしくは
    ｉｉ． 配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性
    ；もしくは
    ｉｉｉ．配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８
    、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５、及び１５７に対して少な
    くとも８０％の同一性；または
    ｉｖ． 配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８
    ２％の同一性；もしくは
    ｖ．配列番号６及び５０に対して少なくとも８６％の同一性；もしくは
    ｖｉ． 配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは
    ｖｉｉ．配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは
    ｖｉｉｉ．配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同
    一性；もしくは
    ｉｘ． 配列番号１３５に対して少なくとも９９％の同一性；もしくは
    ｘ．配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６
    、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１
    ０７、１３９、及び１４３に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む；また
    は
    ｃ．前記ポリヌクレオチドセグメントは、ストリンジェントなハイブリッド形成条件下で
    、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２
    ７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５２
    、５３、５４、５５、５６、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、
    ７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１
    ０１、１０３、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１
    ２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１
    ４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、もしくは１
    ５８のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドとハイブリッド形成する、前記組換え
    核酸分子。
  2. ａ．前記組換え核酸分子が、植物にて前記殺虫性タンパク質を発現するように機能する配
    列を含む、または
    ｂ．前記組換え核酸分子が、植物細胞で発現され、殺虫で有効量の殺虫性タンパク質を産
    生する、または
    ｃ．前記組換え核酸分子がベクターに操作可能に連結され、前記ベクターが、プラスミド
    、ファージミド、バクミド、コスミド、及び細菌もしくは酵母の人工染色体から成る群か
    ら選択される、請求項１に記載の組換え核酸分子。
  3. 宿主細胞内に存在すると定義され、前記宿主細胞が細菌細胞及び植物細胞から成る群か
    ら選択される、請求項１に記載の組換え核酸分子。
  4. 前記細菌宿主細胞が、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｂａｃｉｌ
    ｌｕｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
    ｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｔｏｅａ、及びＥｒｗｉｎｉａから成る群から選択さ
    れる細菌の属に由来する、請求項３に記載の組換え核酸分子。
  5. 前記Ｂａｃｉｌｌｕｓ種がＢａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓまたはＢａｃｉｌｌｕｓ
    ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓであり、前記ＢｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓがＢｒｅｖｉｂａ
    ｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｅｒｕｓであり、または前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａが
    Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉである、請求項４に記載の組換え核酸分子。
  6. 前記植物細胞が双子葉植物または単子葉植物である、請求項３に記載の組換え核酸分子
    。
  7. 前記植物宿主細胞が、アルファルファ、バナナ、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャ
    ベツ、ブラッシカ、ニンジン、キャッサバ、トウゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマ
    メ、ハクサイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、ワタ、ウリ
    、キュウリ、ダグラスモミ、ナス、ユーカリ、亜麻、ニンニク、ブドウ、ホップ、ネギ、
    レタス、ロブロリーパイン、キビ、メロン、ナッツ、オートムギ、オリーブ、タマネギ、
    観賞用植物、ヤシ、牧草、エンドウマメ、ピーナッツ、コショウ、ハトエンドウ、マツ、
    ジャガイモ、ポプラ、カボチャ（ｐｕｍｐｋｉｎ）、ラジアータマツ、ダイコン、ナタネ
    、イネ、根茎、ライムギ、サフラワー、低木、ソルガム、サザンパイン、ダイズ、ホウレ
    ンソウ、カボチャ（ｓｑｕａｓｈ）、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイー
    トコーン、スイートガム、スイートポテト、スイッチグラス、茶、タバコ、トマト、ライ
    コムギ、芝草、スイカ、コムギの植物細胞から成る群から選択される、請求項６に記載の
    組換え核酸分子。
  8. 前記殺虫性タンパク質が鞘翅目の昆虫に対して活性を示す、請求項１に記載の組換え核
    酸分子。
  9. 前記昆虫が、西洋トウモロコシ根切り虫、南部トウモロコシ根切り虫、北部トウモロコ
    シ根切り虫、メキシコ型トウモロコシ根切り虫、ブラジル型トウモロコシ根切り虫、コロ
    ラダハムシ、Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｉｄｕｌａ及びＤｉａｂｒｏｔｉｃａ ｓｐ
    ｅｃｉｏｓａから成るブラジル型トウモロコシ根切り虫複合体、アブラナ科ノミハムシ、
    縞模様ノミハムシ、または西洋クロノミハムシである、請求項８に記載の組換え核酸分子
    。
  10. 前記殺虫性タンパク質が、鱗翅目の昆虫種に対して活性を示す、請求項１に記載の組換
    え核酸分子。
  11. 前記昆虫が、タマナヤガ、アメリカタバコガ、コナガ、欧州アワノメイガ、ツマジロク
    サヨトウ、南部ヨトウムシ、ダイズルーパー、南西部アワノメイガ、オオタバコガ（Ｔｏ
    ｂａｃｃｏ Ｂｕｄｗｏｒｍ）、ベルベットビーンキャタピラー、サトウキビボーラー、
    レッサーコーンストークボーラー、クロヨトウムシ、シロイチモジヨトウ、オオタバコガ
    （Ｏｌｄ Ｗｏｒｌｄ Ｂｏｌｌｗｏｒｍ）、ハスモンヨトウ、またはピンクボールワー
    ムである、請求項１０に記載の組換え核酸分子。
  12. 前記殺虫性タンパク質が、半翅目の昆虫種に対して活性を示す、請求項１に記載の組換
    え核酸分子。
  13. 前記昆虫がミナミアオカメムシ、亜熱帯性クサギカメムシ、アカシマカメムシ、クロト
    ゲアオハラカメムシ種、チャバネカメムシ、クサギカメムシ、ミドリカメムシ、クサギカ
    メムシ、西洋サビイロメクラガメ、またはサビイロメクラガメである、請求項１２に記載
    の組換え核酸分子。
  14. 請求項１に記載の組換え核酸分子を含む植物またはその一部。
  15. 前記植物が単子葉植物または双子葉植物である、請求項１４に記載の植物またはその一
    部。
  16. 前記植物が、アルファルファ、バナナ、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャベツ、ブ
    ラッシカ、ニンジン、キャッサバ、トウゴマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、ハク
    サイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、ワタ、ウリ、キュウ
    リ、ダグラスモミ、ナス、ユーカリ、亜麻、ニンニク、ブドウ、ホップ、ニラ、レタス、
    ロブロリーパイン、キビ、メロン、ナッツ、オートムギ、オリーブ、タマネギ、観賞用植
    物、ヤシ、牧草、エンドウマメ、ピーナッツ、コショウ、ハトエンドウマメ、マツ、ジャ
    ガイモ、ポプラ、カボチャ（ｐｕｍｐｋｉｎ）、ラジアータパイン、ダイコン、ナタネ、
    イネ、根茎、ライムギ、サフラワー、低木、ソルガム、サザンパイン、ダイズ、ホウレン
    ソウ、カボチャ（ｓｑｕａｓｈ）、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイート
    コーン、スイートガム、スイートポテト、スイッチグラス、茶、タバコ、トマト、ライコ
    ムギ、芝草、スイカ、コムギから成る群から選択される、請求項１４に記載の植物または
    その一部。
  17. 前記種子が前記組換え核酸分子を含む、請求項１４に記載の植物の種子。
  18. 請求項１に記載の組換え核酸分子を含む昆虫阻害組成物。
  19. さらに、前記殺虫性タンパク質とは異なる少なくとも１つの他の殺虫剤をコードするヌ
    クレオチド配列を含む、請求項１８に記載の昆虫阻害組成物。
  20. 前記少なくとも１つの他の殺虫剤が、昆虫阻害タンパク質、昆虫阻害ｄｓＲＮＡ分子、
    及び補助タンパク質から成る群から選択される、請求項１９に記載の昆虫阻害組成物。
  21. 前記少なくとも１つの他の殺虫剤が、鱗翅目、鞘翅目、または半翅目の１以上の害虫種
    に対して活性を示す、請求項１９に記載の昆虫阻害組成物。
  22. 前記少なくとも１つの他の殺虫剤が、Ｃｒｙ１Ａ、Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒ
    ｙ１Ａ．１０５、Ｃｒｙ１Ａｅ、Ｃｒｙ１Ｂ、Ｃｒｙ１Ｃ、Ｃｒｙ１Ｃ変異型、Ｃｒｙ１
    Ｄ、Ｃｒｙ１Ｅ、Ｃｒｙ１Ｆ、Ｃｒｙ１Ａ／Ｆキメラ、Ｃｒｙ１Ｇ、Ｃｒｙ１Ｈ、Ｃｒｙ
    １Ｉ、Ｃｒｙ１Ｊ、Ｃｒｙ１Ｋ、Ｃｒｙ１Ｌ、Ｃｒｙ２Ａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、Ｃｒｙ２Ａｅ
    、Ｃｒｙ３、Ｃｒｙ３Ａ変異型、Ｃｒｙ３Ｂ、Ｃｒｙ４Ｂ、Ｃｒｙ６、Ｃｒｙ７、Ｃｒｙ
    ８、Ｃｒｙ９、Ｃｒｙ１５、Ｃｒｙ３４、Ｃｒｙ３５、Ｃｒｙ４３Ａ、Ｃｒｙ４３Ｂ、Ｃ
    ｒｙ５１Ａａ１、ＥＴ２９、ＥＴ３３、ＥＴ３４、ＥＴ３５、ＥＴ６６、ＥＴ７０、ＴＩ
    Ｃ４００、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、ＴＩＣ４３１、ＴＩＣ８００、ＴＩＣ８０７、
    ＴＩＣ８３４、ＴＩＣ８５３、ＴＩＣ９００、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ１２０１、ＴＩＣ１
    ４１５、ＴＩＣ２１６０、ＴＩＣ３１３１、ＴＩＣ８３６、ＴＩＣ８６０、ＴＩＣ８６７
    、ＴＩＣ８６９、ＴＩＣ１１００、ＶＩＰ３Ａ、ＶＩＰ３Ｂ、ＶＩＰ３Ａｂ、ＡＸＭＩ－
    ＡＸＭＩ－、ＡＸＭＩ－８８、ＡＸＭＩ－９７、ＡＸＭＩ－１０２、ＡＸＭＩ－１１２、
    ＡＸＭＩ－１１７、ＡＸＭＩ－１００、ＡＸＭＩ－１１５、ＡＸＭＩ－１１３、及びＡＸ
    ＭＩ－００５、ＡＸＭＩ１３４、ＡＸＭＩ－１５０、ＡＸＭＩ－１７１、ＡＸＭＩ－１８
    ４、ＡＸＭＩ－１９６、ＡＸＭＩ－２０４、ＡＸＭＩ－２０７、ＡＸＭＩ－２０９、ＡＸ
    ＭＩ－２０５、ＡＸＭＩ－２１８、ＡＸＭＩ－２２０、ＡＸＭＩ－２２１ｚ、ＡＸＭＩ－
    ２２２ｚ、ＡＸＭＩ－２２３ｚ、ＡＸＭＩ－２２４ｚ 及びＡＸＭＩ－２２５ｚ、ＡＸＭ
    Ｉ－２３８、ＡＸＭＩ－２７０、ＡＸＭＩ－２７９、ＡＸＭＩ－３４５、ＡＸＭＩ－３３
    ５，ＡＸＭＩ－Ｒ１及びその変異型、ＩＰ３及びその変異型、ＤＩＧ－３、ＤＩＧ－５、
    ＤＩＧ－１０、ＤＩＧ－６５７ ＤＩＧ－１１、Ｃｒｙ７１Ａａ１、Ｃｒｙ７２Ａａ１、
    ＰＨＩ－４変異型、ＰＩＰ－７２変異型、ＰＩＰ－４５変異型、ＰＩＰ－６４変異型、Ｐ
    ＩＰ－７４変異型、ＰＩＰ－７５変異型、ＰＩＰ－７７変異型、Ａｘｍｉ４２２、Ｄｉｇ
    －３０５、Ａｘｍｉ４４０、ＰＩＰ－４７変異型、Ａｘｍｉ２８１、ＢＴ－００９、ＢＴ
    －００１２、ＢＴ－００１３、ＢＴ－００２３、ＢＴ００６７、ＢＴ－００４４、ＢＴ－
    ００５１、ＢＴ－００６８、ＢＴ－０１２８、ＤＩＧ－１７、ＤＩＧ－９０、ＤＩＧ－７
    ９、Ｃｒｙ１ＪＰ５７８Ｖ、Ｃｒｙ１ＪＰＳ１、及びＣｒｙ１ ＪＰＳ１Ｐ５７８Ｖから
    成る群から選択されるタンパク質である、請求項２１に記載の昆虫阻害組成物。
  23. さらに、前記組換え核酸分子を発現する植物細胞を含むと定義される、請求項１８に記
    載の昆虫阻害組成物。
  24. 商品生産物が、検出可能な量の前記組換え核酸分子またはそれによってコードされる殺
    虫性タンパク質を含む、請求項１４に記載の植物またはその一部から生産される商品生産
    物。
  25. 穀物取扱業者によって袋詰めされた商品トウモロコシ、コーンフレーク、コーンケーキ
    、トウモロコシ粉、コーンミール、コーンシロップ、コーン油、コーンサイレージ、コー
    ンスターチ、コーンシリアル、等、全粒綿実または加工された綿実、綿油、リント、飼料
    または食品用に加工された種子及び植物の一部、繊維、紙、バイオマス、及び綿油由来の
    燃料または綿繰り機廃棄物由来のペレットのような燃料製品、全粒ダイズ種子または加工
    されたダイズ種子、ダイズ油、ダイズタンパク質、ダイズミール、ダイズ粉、ダイズフレ
    ーク、ダイズふすま、豆乳、ダイズチーズ、ダイズワイン、ダイズを含む動物飼料、ダイ
    ズを含む紙、ダイズを含むクリーム、ダイズバイオマス、及びダイズ植物とダイズ植物の
    一部を用いて製造される燃料製品から成る群から選択される請求項２４に記載の商品生産
    物。
  26. 種子を生産する方法であって、
    ａ．請求項１７に従って少なくとも第１の種子を植えることと；
    ｂ．前記種子から植物を生育させることと；
    ｃ．前記植物から種子を収穫することとを含み、前記収穫された種子が、前記組換え核酸
    分子を含む、前記方法。
  27. 前記植物の前記細胞が請求項１に記載の組換え核酸分子を含む、昆虫の侵入に耐性があ
    る植物。
  28. 鞘翅目種、鱗翅目種、または半翅目種の害虫または害虫の侵入を防除する方法であって
    、
    ａ．配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６
    、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５８、
    ６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８
    ６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０５、１０７、１０９、
    １１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、
    １３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、
    １５１、１５３、１５５、または１５７に記述されているような殺虫で有効量の殺虫性タ
    ンパク質に前記害虫を接触させること；
    ｂ．または
    ｉ．配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５
    に対して少なくとも６５％の同一性；もしくは
    ｉｉ． 配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性
    ；もしくは
    ｉｉｉ．配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８
    、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５、及び１５７に対して少な
    くとも８０％の同一性；もしくは
    ｉｖ． 配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８
    ２％の同一性；もしくは
    ｖ．配列番号６及び５０と少なくとも８６％の同一性；もしくは
    ｖｉ． 配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは
    ｖｉｉ．配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは
    ｖｉｉｉ．配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同
    一性；もしくは
    ｉｘ． 配列番号１３５に対して少なくとも９９％の同一性；もしくは
    ｘ．配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６
    、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１
    ０７、１３９、及び１４３に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、殺虫
    で有効量の１以上の殺虫性タンパク質と前記害虫を接触させることを含む、前記方法。
  29. 植物ゲノムＤＮＡを含む試料にて請求項１に記載の組換え核酸分子の存在を検出する方
    法であって、
    ａ．ストリンジェントなハイブリッド形成条件下で請求項１に記載のＤＮＡ分子を含む植
    物由来のゲノムＤＮＡとハイブリッド形成し、そのようなハイブリッド形成条件下では請
    求項１に記載の組換え核酸分子を含まない他の同質遺伝子植物由来のゲノムＤＮＡとハイ
    ブリッド形成しない核酸プローブに前記試料を接触させること、その際、前記プローブが
    配列番号４９、５１、５２、５３、５４、５５、５６、１４６、１４８、１５０、１５２
    、１５４、１５６、もしくは１５８に相同性もしくは相補性である、または請求項１に記
    載の核酸分子、または
    ｉ．配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５
    に対して少なくとも６５％の同一性；もしくは
    ｉｉ． 配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性
    ；もしくは
    ｉｉｉ．配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８
    、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５、及び１５７に対して少な
    くとも８０％の同一性；もしくは
    ｉｖ． 配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８
    ２％の同一性；もしくは
    ｖ．配列番号６及び５０と少なくとも８６％の同一性；もしくは
    ｖｉ． 配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは
    ｖｉｉ．配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは
    ｖｉｉｉ．配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同
    一性；もしくは
    ｉｘ． 配列番号１３５に対して少なくとも９９％の同一性；もしくは
    ｘ．配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６
    、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１
    ０７、１３９、及び１４３に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む殺虫性
    タンパク質をコードする配列であることと；
    ｂ．前記試料及びプローブをストリンジェントなハイブリッド形成条件に供することと；
    ｃ．前記プローブの前記試料のＤＮＡとのハイブリッド形成を検出することとを含む、前
    記方法。
  30. タンパク質を含む試料にて殺虫性タンパク質またはその断片の存在を検出する方法であ
    って、前記殺虫性タンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１
    ８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４
    、４６、４８、５０、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、
    ７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２
    、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３
    、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３
    、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、または１５７のアミノ酸配列を含
    む；または、前記殺虫性タンパク質が、
    ｉ．配列番号４４、４６、４８、１２３、１２７、１２９、１３１、１３３、及び１４５
    に対して少なくとも６５％の同一性；もしくは
    ｉｉ． 配列番号１０９、１２１、及び１２５に対して少なくとも７０％の同一性
    ；もしくは
    ｉｉｉ．配列番号１２、１８、２４、３６、４２、６２、６８、７４、８０、８６、９８
    、１１３、１１７、１１９、１４７、１４９、１５３、１５５、及び１５７に対して少な
    くとも８０％の同一性；もしくは
    ｉｖ． 配列番号３０、９２、１１１、１１５、及び１５１に対して少なくとも８
    ２％の同一性；もしくは
    ｖ．配列番号６及び５０と少なくとも８６％の同一性；もしくは
    ｖｉ． 配列番号１３７及び１４１に対して少なくとも９４％の同一性；もしくは
    ｖｉｉ．配列番号４、２６、及び３２に対して少なくとも９７％の同一性；もしくは
    ｖｉｉｉ．配列番号２、２８、３４、１０２、及び１０２に対して少なくとも９８％の同
    一性；もしくは
    ｉｘ． 配列番号１３５に対して少なくとも９９％の同一性；もしくは
    ｘ．配列番号８、１０、１４、１６、２０、２２、３８、４０、５８、６０、６４、６６
    、７０、７２、７６、７８、８２、８４、８８、９０、９４、９６、１００、１０５、１
    ０７、１３９、及び１４３に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；
    前記方法が、
    ｘｉ． 前記試料を免疫反応性抗体と接触させことと；
    ｘｉｉ．前記抗体の前記殺虫性タンパク質またはその断片との結合を検出することとを含
    み、その際、結合は前記タンパク質の存在を示す、前記方法。
  31. 検出する前記工程がＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロットを含む、請求項３０に記載の
    方法。
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