JP2023548375A - Ｅｒｂｂ３変異陽性がんを有する対象を治療するための手段及び方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＥＲＢＢ３変異陽性がんを有する対象の治療のための治療用（ヒト）抗体の分野に関する。より具体的には、発がんを駆動するＥＲＢＢ３変異を含むがんの治療に関する。抗体は、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体である。

Description

本発明は、抗体の分野に関する。特に、異常細胞を含む疾患の治療のための治療用（ヒト）抗体の分野に関する。より具体的には、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３に結合する抗体並びにがんの治療におけるそれらの使用に関する。

ＥＲＢＢ３は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ４も含むＥｒｂファミリーの膜貫通受容体チロシンキナーゼである。ファミリーの他のタンパク質と同様に、ＥＲＢＢ３は、細胞外ドメイン、膜貫通及び細胞内チロシンキナーゼドメインを含有する。そのリガンドニューレグリン（ＮＲＧ）と相互作用すると、ＥＲＢＢ３は、自己リン酸化を受ける細胞内チロシンキナーゼドメインを活性化する他のＥｒｂファミリーメンバーとともにヘテロ二量体化し、次いで、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及びＰＩ３Ｋ経路を含む下流シグナル伝達経路を活性化する。ＥｒｂＢ経路の上方制御は、発がん性の増殖性シグナル伝達をもたらし、がん細胞において頻繁に生じる。

ＥＲＢＢ３遺伝子変異は、広範囲の腫瘍において見出される様々なレベルの有病率を有する発がん性駆動因子であると理解されている。これらの変異のいくつかは、ＥＲＢＢ３のリガンド結合細胞外ドメインにおいて存在するが、変異は、細胞内チロシンキナーゼドメインにおいても観察される。興味深いことに、ＥＲＢＢ３は、本来備わっているチロシンキナーゼ活性を欠いていると仮定されている。それにもかかわらず、機械的には、ＥＲＢＢ３におけるこれらの変異は、ＥＲＢＢ２とのリガンド非依存性ヘテロ二量体化又はＥＲＢＢ２キナーゼドメインの誘導のいずれかによって、ＥＲＢＢ２受容体シグナル伝達及び発がんの構成的活性化をもたらすと考えられている。ＥＲＢＢ３変異の他の未知の機能的作用機序は、まだ除外されていない。

ＥＲＢＢ３変異の治療上の重要性は、いくつかのＥｒｂＢファミリー受容体を阻害する可能性のあるチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を使用して検討されている。これらには、アファチニブ、ネラチニブ、ラパチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ又はオシメルチニブが含まれるが、これらに限定されない。Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ，Ｎｏｕｒａ Ｊ ｅｔ ａｌ．（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３４，１８（２０１６）：２１６５－７１）による一研究では、細胞外ＥＲＢＢ３変異を有する患者のアファチニブでの治療は、臨床的応答をもたらした。しかしながら、この研究の全ての患者は、アファチニブ治療後に耐性を発現した。別のバスケット研究では、ＥＲＢＢ３変異を有する患者において、ネラチニブ（汎ＥｒｂＢファミリー阻害剤）での治療後に臨床応答は観察されなかった（Ｈｙｍａｎ，Ｄａｖｉｄ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．５５４，７６９１（２０１８）：１８９－１９４）。上記の研究は、ＥＲＢＢ３変異を有する患者において、ＴＫＩ阻害剤への応答が混合され、決定的ではないことを示している。

いくつかの研究では、概して限られた有効性を示すＥＲＢＢ３変異保持患者におけるモノクローナル抗体の治療可能性も探求されている。しかしながら、大規模なレトロスペクティブ研究（Ｖｅｒｌｉｎｇｕｅ，Ｌｏｉｃ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．９２（２０１８）：１－１０）ＥＲＢＢ３細胞外ドメインに変異を有する患者は、トラスツズマブ及び／又はラパチニブ又はアファチニブによるモノクローナル抗体治療を受け、ＥＲＢＢ３のチロシンキナーゼドメインに変異を有する特定の患者では治療に対する顕著な応答が観察されたが、細胞外ドメインに変異を有する患者は治療に応答しなかった。

ＥＲＢＢ３変異患者におけるアファチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、オシメルチニブ、及びネラチニブなどの汎ＴＫＩ阻害剤を使用したチロシンキナーゼ阻害はまた、限定的な有効性を示している。更に、ＴＫＩ阻害剤での患者における治療は、再発又は転移につながる毒性及び治療に対する耐性をもたらすことも周知である。したがって、ＥｒｂＢシグナル伝達軸を阻害する可能性を有するＥＲＢＢ３駆動因子変異に基づくより堅牢な標的化された治療が必要である。しかし、現在、世界のどこにも認可されている特定のＥｒｂＢ変異指向療法はなく、ＥｒｂＢ変異を有するがんを有する患者の多くは、非特異的がん療法で管理されている。

したがって、当分野ではＥＲＢＢ３変異を有するがんの治療の必要性が存在する。

本開示では、本発明者らは、抗ＥＲＢＢ２抗ＥＲＢＢ３標的化分子の使用が、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性であり、ＥＲＢＢ３変異を有するがん細胞を成功裏に治療すること、好ましくは、標的化分子が、ＥＲＢＢ２のドメイン１及びＥＲＢＢ３のドメイン３を標的化し、それによって、ＥＲＢＢ３変異により促進され、かつ／又はリガンド非依存の様式で生じ得るヘテロ二量体化を立体的に防止することを特定している。

本開示は、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性細胞を有する対象の治療のための方法を提供し、本方法は、ＥＲＢＢ２の細胞外部分、好ましくはドメイン１に結合することができる第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分、好ましくはドメイン３に結合することができる第２の抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体を投与することを含み、本方法は、ＥＲＢＢ３変異を含む細胞に特徴付けられる。典型的には、変異は、ＰＩ３Ｋ経路を促進するようにＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド非依存性ヘテロ二量体化を促進し、及び／又はそれと相関するものである、ＥＲＢＢ３タンパク質の細胞外ドメインを含むか、又は細胞内にある変異である。好ましくは、ＥＲＢＢ３変異陽性細胞は、他の発がん性駆動因子変異及び／又は増幅を欠いている。

好ましくは、ＥＲＢＢ３における変異は、配列番号１による非変異配列と比較して、１つ以上の変異を含む。したがって、ＥＲＢＢ３の変異は、当該非変異配列に対する変異である。

対象は、好ましくは、ヒト対象である。

本開示のＥＲＢＢ３変異は、好ましくは、ＥＲＢＢ３駆動因子変異であり、それは、ＥＲＢＢシグナル伝達軸並びに下流のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及びＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達の活性化を促進するような、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド非依存性ヘテロ二量体化並びに／若しくはＥＲＢＢ２キナーゼドメインの活性化を促進し、かつ／又はこれらと相関する変異を含む。

ＥＲＢＢ３変異は、好ましくは、ＥＲＢＢ３の細胞外ドメイン、好ましくはＤＩ－ＤＩＶドメインで生じ、ドメインＩは残基５６～１６６を含み、ドメインＩＩは残基１８２～３３２を含み、ドメインＩＩＩは残基３５３～４７２を含み、ドメインＩＶは残基４９９～６２９を含む（図５）。より好ましくは、変異は、治療用化合物の親和性及び活性が低下し得るような治療用分子の結合に重要な残基ではない。

より好ましくは、変異は、Ｍ６０、Ｍ９１、Ｒ１０３、Ａ２３２、Ｐ２６２、Ｇ２８４、及びＤ２９７位を含む、ＥＲＢＢ３受容体－リガンド複合体の活性形成及び／又はＥＲＢＢ３のホモ／ヘテロ二量体化に関与する位置で生じる。

本発明の別の態様では、ＥＲＢＢ３変異は、アミノ酸残基７１０～９６４を含むＥＲＢＢ３の細胞内ドメインにおける、好ましくは、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５、又はＥ９２８位での変異を含む。

いくつかの態様では、ＥＲＢＢ３変異は、アミノ酸残基Ｍ６０、Ｍ９１、Ｒ１０３、Ｖ１０４、Ｒ１３５、Ｆ２１９、Ｈ２２８、Ａ２３２、Ｐ２６２、Ｇ２８４、Ｄ２９７、Ｋ３２９、Ｅ３３２、Ｔ３５５、Ｒ４７５、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５又はＥ９２８を含む、発がん性駆動因子である変異を含む。より好ましくは、ＥＲＢＢ３変異は、Ｖ１０４、Ａ２３２、Ｇ２８４、Ｄ２９７、Ｋ３２９、Ｔ３５５、Ｓ８４６又はＥ９２８を含むホットスポット変異である（図５）。

具体的には、ＥＲＢＢ３変異は、以下のうちのいずれか１つを含む：
Ｍ６０Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｍ９１Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｒ１０３Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）、
Ｖ１０４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬ又はＭである）、
Ｒ１３５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＣである）、
Ｆ２１９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬである）、
Ｈ２２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＱである）、
Ａ２３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＶである）、
Ｐ２６２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨ又はＬ又はＳである）、
Ｇ２８４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｄ２９７Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＹ又はＡ又はＨ又はＮ又はＶである）、
Ｋ３２９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＥ又はＩ又はＴである）、
Ｅ３３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｔ３５５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＡ又はＩ又はＰである）、
Ｒ４７５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＷである）、
Ｑ８０９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｓ８４６Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｑ８６５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨである）、
Ｅ９２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）。

好ましくは、ＥＲＲＢ３における変異は、ＥＲＢＢ３の細胞外ドメインにおける変異、より好ましくは、ドメインＩ、ドメインＩＩ、ドメインＩＩＩ、又はドメインＩＶにおける変異から選択される。

好ましくは、ＥＲＲＢ３における変異は、ドメインＩ（ＤＩ）における変異、より好ましくは、Ｍ６０、Ｍ９１、Ｒ１０３、Ｖ１０４、Ｒ１３５位における変異から選択される。

好ましくは、ＥＲＲＢ３における変異は、ドメインＩＩ（ＤＩＩ）における変異、より好ましくは、Ｆ２１９、Ｈ２２８、Ａ２３２、Ｐ２６２、Ｇ２８４、Ｄ２９７、Ｋ３２９及びＥ３３２位における変異から選択される。

好ましくは、ＥＲＲＢ３における変異は、ドメインＩＩＩ（ＤＩＩＩ）における変異、より好ましくは、Ｔ３５５位における変異から選択される。

好ましくは、ＥＲＲＢ３における変異は、ドメインＩＶ（ＤＩＶ）における変異、より好ましくは、Ｒ４７５位における変異から選択される。

好ましくは、ＥＲＲＢ３における変異は、ＥＲＢＢ３の細胞内ドメインにおける変異、より好ましくは、チロシンキナーゼドメインにおける変異から選択される。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異は、アミノ酸残基７１０～９６４を含むＥＲＢＢ３のチロシンキナーゼドメインにおける、好ましくは、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５、又はＥ９２８位での変異を含む。

好ましくは、細胞内ドメインにおける変異は、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５、及びＥ９２８から選択される変異から選択される。

本開示の一態様において、Ｒ４２６位でのＥＲＢＢ３変異は、除外される。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有するがんは、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、及び／若しくはＢＲＡＦを含むがこれらに限定されない別の発がん性駆動因子を欠いているか、又は細胞は、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、及びＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子における発がん性変異の非存在を示す。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有するがんは、以下のがん増幅ｃ－ＭＥＴ増幅、ｃ－ＭＹＣ増幅、ＥＧＦＲ増幅、ＥＲＢＢ２増幅、及び／又はＭＤＭ２増幅を欠く。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有するがんは、ＰＴＥＮ損失を有しない。

ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する第２の抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体は、好ましくは、ＥＲＢＢ２のドメインＩに結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３のドメインＩＩＩに結合する第２の抗原結合部位と、を有する。いくつかの実施形態では、ＥＲＢＢ２に対する第１の抗原結合部位の親和性は、ＥＲＢＢ３に対する第２の抗原結合部位の親和性よりも低い。

二重特異性抗体は、好ましくは、
ｉ）ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列から多くとも３つのアミノ酸、好ましくは多くとも２つのアミノ酸、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ配列を含み、かつ／又は
ｉｉ）ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列から多くとも３つアミノ酸、好ましくは多くとも２つのアミノ酸、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ配列を含む。

一態様では、二重特異性抗体は、
ｉ）ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８の重鎖可変領域配列からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８の重鎖可変領域配列から多くとも１５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含み、かつ／又は
ｉｉ）ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４の重鎖可変領域配列からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４の重鎖可変領域配列から多くとも１５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含む。

本発明における使用に好ましい二重特異性抗体は、重鎖可変領域ＭＦ３９５８（抗ＥＲＢＢ２）及びＭＦ３１７８（抗ＥＲＢＢ３）を含むＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８である。ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８は、単剤として良好に忍容性があること実証されており、１００人を超える患者の治療において免疫原性のリスクが低く、併用療法のための優れた薬剤であり、他の抗ＥＲＢＢ２及び／又は抗ＥＲＢＢ３標的化薬剤に対して優位性を提供する。いかなる理論にも拘束されないが、ＥＲＢＢ３変異を有するＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性細胞を有するがんを有する患者の治療におけるＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８の有効性は、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８がＥＲＢＢ２のドメイン１にドッキングし、ドメイン３でＥＲＢＢ３がＥＲＢＢ２と二量体化することを遮断し、それによってＰＩ３Ｋ経路の活性化を破壊することを可能にする、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８のエピトープ特異性及び親和性の不均衡に基づいていると考えられる。

当該二重特異性抗体の当該第１の抗原結合部位を含む可変ドメイン及び当該第２の抗原結合部位を含む当該可変ドメインは、好ましくは、ＫＡＢＡＴ番号付けによるか、又はＩＭＧＴ番号付けシステムによる、配列（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）を有するＣＤＲ１、配列（ＡＡＳＳＬＱＳ）を有するＣＤＲ２及び配列（ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ）を有するＣＤＲ３を含み、ＣＤＲは、それぞれ、ＱＳＩＳＳＹ、ＡＡＳ及びＱＱＳＹＳＴＰＰＴである。

当該二重特異性抗体の当該第１の抗原結合部位を含む可変ドメイン及び当該第２の抗原結合部位を含む可変ドメインは、好ましくは、図６ａ又は図６ｂの軽鎖可変領域を含む。

本発明は、更に、第一選択療法として、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する第２の抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体での、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性細胞、好ましくは、がん細胞、ＥＲＢＢ３変異を含む細胞を有する対象の治療のための方法を提供する。本発明は、ＥＲＢＢ３変異を有するがんを有する対象の治療の方法を提供し、本方法は、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体を投与することを含み、当該治療は、第一選択療法として提供される。本方法は、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する第１の抗原結合部位と、第２の抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体での治療を含み、がんを有する患者のＥＲＢＢ３変異が、好ましくは、化学療法、チェックポイント阻害剤療法（抗ＰＤ１及び抗ＰＤ－Ｌ１承認療法、並びに臨床開発における適用可能な療法を含む）、抗ＥＲＢＢ２若しくは抗ＥＲＢＢ３若しくは抗ＶＥＧＦＲ２（血管内皮成長因子受容体２）、又はＥＲＢＢ２若しくはＶＥＧＦＲ２－ＴＩＥ２のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）での前の治療、あるいはそれらの組み合わせを含む、前の治療を受けた後に進行した。

本発明による化学療法は、好ましくは、ゲムシタビン、カペシタビン、カルボプラチン、ドセタキセル若しくはパクリタキセルなどのタキサン、５－フルオロウラシル（放射線療法の有無にかかわらず）、ビノレルビン、カルムスチン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、ビンブラスチン、シスプラチン（又はペメトレキセド）、オキサリプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ビンデシン、エトポシド、フォルフォックス（Ｆｏｌｆｏｘ）（すなわち、５－フルオロウラシル、ロイコボリン、及びオキサリプラチンの組み合わせ）若しくはフォルフィリ（Ｆｏｌｆｉｒｉ）（すなわち、ロイコボリン、５－フルオロウラシル及びイリノテカンの組み合わせ）、フォルフィリノックス（Ｆｏｌｆｉｒｉｎｏｘ）（ロイコボリン、５－フルオロウラシル、イリノテカン及びオキサリプラチンの組み合わせ）、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

本発明によるチェックポイント阻害剤療法は、抗ＰＤ１、抗ＰＤ－Ｌ１、及び抗ＣＴＬＡ４治療部分を含み、好ましくは、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ若しくはセミプリマブ、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

ＥＲＢＢ２標的化された治療は、好ましくは、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する抗原結合部位を含む単一特異性二価抗体を用いてであり、好ましくは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、又はトラスツズマブ－エムタンシンである。ＥＲＢＢ２ ＴＫＩは、好ましくは、ラパチニブ、カネルチニブ、ネラチニブ、ツカチニブ（イルビニチニブ（ｉｒｂｉｎｉｔｉｎｉｂ））、ＣＰ－７２４７１４、タルロキシチニブ（ｔａｒｌｏｘｉｔｉｎｉｂ）、ムブリチニブ、アファチニブ、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）、及びダコミチニブのうちの１つ以上、好ましくは、アファチニブである。一態様では、ＥＲＢＢ２ ＴＫＩは、アファチニブである。ＥＲＢＢ２ ＴＫＩは、ＥＲＢＢ１シグナル伝達にも影響を及ぼし得るが、ＥＲＢＢ２に対して顕著な活性を有するという点で、ＥＲＢＢ１ ＴＫＩとは異なる。

ＥＲＢＢ３標的化された治療は、好ましくは、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する抗原結合部位を含む単一特異性二価抗体を用いてであり、好ましくは、パトリツマブ、セリバンツマブ、ルムレツズマブ（ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、エルゲムツマブ（ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、ＧＳＫ２８４９３３０、ＫＴＮ３３７９、又はＡＶ－２０３を含む。

ＶＥＧＦＲ２標的化された治療は、好ましくは、ＶＥＧＦＲ２の細胞外部分に結合する抗原結合部位を含む単一特異性二価抗体を用いてであり、好ましくは、ラムシルマブを含む。ＶＥＧＦＲ２－ＴＩＥ２ ＴＫＩは、好ましくは、レゴラフェニブである。

標的特異的治療は、同じ標的に対する他の治療と組み合わせられ得る。代替的に、１つの標的を標的とする治療は、言及された標的のうちの別の標的に対しても活性であり得る。

がんは、好ましくは、再発がん若しくは転移がん又はその２つの組み合わせである。再発とは、典型的には、局所再発を指し、がんが元のがんと同じ場所にあるか、それに非常に近い場所にあることを意味する。腫瘍は、典型的には、腫瘍が元のがんの近くのリンパ節又は組織に移動した場合、又は元のがんから離れたより遠い臓器又は組織に広がった場合に転移した腫瘍であると言われる。

ＥＲＢＢ３変異を有するがんには、結腸直腸がん、胃、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）腺がん（アデノ）、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮）、腎がん、黒色腫、卵巣、肺大細胞、食道、小細胞肺がん、肝細胞（ＨＣＣ）、乳がん、ホルモン陽性乳がん、膠芽細胞腫、及び頭頸部がんが含まれる。

ＥＲＢＢ３変異を有するがんは、好ましくは、胃腺がん又は食道胃がんなどの胃がん、膵臓がん、膵管腺がん、肉腫、膀胱がん、結腸直腸がん、胆嚢がん、頭頸部がん、前立腺がん、子宮／子宮内膜がん、乳がん、卵巣がん、肝臓がん、非小細胞肺がんなどの肺がん、好ましくは浸潤性粘液性腺がんを含む非小細胞肺がんである。

ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３陽性細胞を含む固形腫瘍におけるＥＲＢＢ３変異の有病率を示す。 ＥＲＢＢ３の不活性及び活性化形態並びにＥＲＢＢ２とのヘテロ二量体化を示し、開示された本発明の方法の治療分子が、ＥＲＢＢ２のドメインＩ及びＥＲＢＢ３の不活性形態のドメインＩＩＩに結合し、それによって、リガンドの存在下又はリガンド非依存的な様式で、ヘテロ二量体化を促進する細胞外及び／又は細胞内ドメインにおけるＥＲＢＢ３変異の存在下を含む、ヘテロ二量体化を防止する作用機序を示す。 がん型によるＥＲＢＢ３改変の有病率を提供する。図は、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｂｉｏｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／を使用してＭＳＫ－ＩＭＰＡＣＴデータセットから生成された リガンド結合及びヘテロ二量体化に関与すると理解されている様々なＥＲＢＢ３変異の位置のモデリングを示す。ＥＲＢＢ３ドメインＩ～ＩＩＩを、活性ＥＧＦＲ二量体構造（ＰＤＢ ＩＤ：１ＩＶＯ）に別々に重ね合わせた。変異Ｍ９１位及びＲ４２６位は、ＥＧＦＲ上のリガンド結合残基と整列し、したがって、ＥＲＢＢ３リガンド結合に関与する可能性が高い。残基Ｐ２６２は、ＥＧＦＲの二量体化ループに整列し、したがって、その活性形態のＥＲＢＢ３のホモ又はヘテロ二量体化に関与し得る。Ｄ２９７は、二量体化ループと相互作用するようであり、二量体化プロセスにも関与し得る。残基Ｒ１０３、Ｖ１０４、Ａ２３２及びＭ６０は、活性形態のＤＩ－ＤＩＩ相互作用に関与しているようである。Ｇ２８４は、ＤＩ－ＤＩＩＩ界面に近接しており、Ｒへの変異時にＤＩと相互作用し得る。 １０，０００人を超える患者の臨床配列決定に関するＥＲＢＢ３変異を示す。（Ｚｅｈｉｒ，Ａｈｍｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．２３，６（２０１７）：７０３－７１３）。図は、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｂｉｏｐｏｒｔａｌ．ｏｒｇ／を使用してＭＳＫ－ＩＭＰＡＣＴデータセットから生成された。 ａ）共通軽鎖アミノ、ｂ）共通軽鎖可変領域ＤＮＡ配列及びその翻訳（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）、ｃ）共通軽鎖定常領域ＤＮＡ配列及び翻訳、ｄ）ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５、共通の軽鎖可変領域の翻訳、ｅ）Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９Ａ、ｆ）共通軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を列挙する。 二重特異性分子の生成のためＩｇＧ重鎖配列を列挙する。ａ）ＣＨ１領域。ｂ）ヒンジ領域。ｃ）ＣＨ２領域。ｄ）バリエーションＬ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＫＫ）を含有するＣＨ３ドメイン。ｅ）バリエーションＬ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＤＥ）を含有するＣＨ３ドメイン。 可変領域の重鎖の核酸及びアミノ酸配列を列挙する。

チロシンキナーゼ膜貫通受容体のＥｒｂＢファミリーは、ヒト上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体ファミリー（ＨＥＲ）とも称される。ファミリーには４つのメンバー：ＥＲＢＢ（赤芽球腫）－１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３及びＥＲＢＢ４がある。受容体（Ｙａｒｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｎｅｓ ２０１２でレビューされた）は、上皮細胞上で広く発現されている。ニューレグリン（ＮＲＧ）（ヘレグリン（ＨＲＧ）としても知られる）又は上皮成長因子（ＥＧＦ）などのＨＥＲ受容体又はそのリガンドの上方制御は、ヒトがんにおける頻繁な事象である（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．４８７，７４０８（２０１２）：５０５－９）。特に、ＥＲＢＢ１及びＥＲＢＢ２の過剰発現は、上皮性腫瘍において生じ、腫瘍浸潤、転移、化学療法に対する耐性、及び予後不良に関連する（Ｚｈａｎｇ，Ｈｏｎｇｔａｏ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，ｖｏｌ．１１７，８（２００７）：２０５１－８）。正常な乳房では、ＥＲＢＢ３は管腔上皮の成長及び分化に重要であることが示されている。例えば、ＥＲＢＢ３の喪失／阻害は、管腔上皮上での基底の選択的膨張をもたらす（Ｂａｌｋｏ，Ｊｕｓｔｉｎ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌ．１０９，１（２０１２）：２２１－６）。ＲＴＫの細胞外ドメインへのリガンドの結合は、同じ（ホモ二量体化）及び異なる（ヘテロ二量体化）受容体サブタイプの両方の受容体二量体化を誘導する。二量体化は、細胞内チロシンキナーゼドメインを活性化することができ、それは、自己リン酸化を受け、次いで、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及び生存促進経路Ａｋｔによって媒介されるものを含む、いくつかの下流増殖促進シグナル伝達経路を活性化することができる（Ｙａｒｄｅｎ，Ｙｏｓｅｆ，ａｎｄ Ｇｕｒ Ｐｉｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．１２，８ ５５３－６３によってレビューされた）。ＥＲＢＢ２についての特定の内因性リガンドが特定されておらず、したがって、それはヘテロ二量体化を介して正常にシグナル伝達すると想定される（Ｓｅｒｇｉｎａ，Ｎａｔａｌｉａ Ｖ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．４４５，７１２６（２００７）：４３７－４１）。ＥＲＢＢ３は、そのリガンドの係合によって活性化され得る。これらのリガンドには、ニューレグリン（ＮＲＧ）（ヘレグリン（ＨＲＧ）としても知られる）が含まれるが、これに限定されない。

ＥＲＢＢ１は様々な同義語で知られており、その最も一般的なものはＥＧＦＲである。ＥＧＦＲは、４つのサブドメインからなる細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有し、そのうちの２つは、リガンド結合に関与し、そのうちの２つは、ホモ二量体化及びヘテロ二量体化に関与する。ＥＧＦＲは、様々なリガンドからの細胞外シグナルを統合し、多様な細胞内応答をもたらす。ＥＧＦＲは、いくつかのヒト上皮悪性腫瘍、特に乳房、膀胱、非小細胞肺がん肺、結腸、卵巣、頭頸部、及び脳のがんに関与している。遺伝子における活性化変異、並びに受容体及びそのリガンドの過剰発現が見出され、自己分泌活性化ループを生じる。この受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、がん療法の標的として広く使用されている。ＲＴＫを標的とする小分子阻害剤及び細胞外リガンド結合ドメインに指向されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の両方が開発され、これまでにいくつかの臨床的成功が示されている。ヒトＥＧＦＲタンパク質及びそれをコードする遺伝子のデータベース受入番号は、（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿００５２２８．３）である。受入番号は、主に、ＥＧＦＲタンパク質の標的としての特定化の更なる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥＧＦＲタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコード遺伝子における変異のために、変化し得る。

本明細書で使用される「ＥＲＢＢ２」という用語は、ヒトにおいてＥＲＢＢ２遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。遺伝子又はタンパク質の代替名としては、ＣＤ３４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＬＮ１９、ＮＥＵ、ＮＧＬ、ＴＫＲ１が挙げられる。ＥＲＢＢ２遺伝子は、（ヒト上皮成長因子受容体２から）ＨＥＲ２と呼ばれることが多い。本明細書においてＥＲＢＢ２に言及される場合、言及はヒトＥＲＢＢ２を指す。ＥＲＢＢ２に結合する抗原結合部位を含む抗体は、ヒトＥＲＢＢ２に結合する。ＥＲＢＢ２抗原結合部位は、ヒトと他の哺乳動物オーソログとの間の配列及び三次構造の類似性に起因して、かかるオーソログにも結合し得るが、必ずしもそうではない。ヒトＥＲＢＢ２タンパク質及びそれをコードする遺伝子のデータベース受入番号は、（ＮＰ＿００１００５８６２．１、ＮＰ＿００４４３９．２ ＮＣ＿００００１７．１０ ＮＴ＿０１０７８３．１５ ＮＣ＿０１８９２８．２）である。受入番号は、主に、標的としてＥＲＢＢ２の更なる特定化の方法を提供するために与えられ、ＥＲＢＢ２タンパク質結合された抗体の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどに生じる変異などのコード遺伝子の変異のため、変化し得る。ＥＲＢＢ２抗原結合部位は、ＥＲＢＢ２及びその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥＲＢＢ２陽性腫瘍細胞によって発現されるバリアントに結合する。ＥＲＢＢ２に結合する抗原結合部位は、好ましくは、ＥＲＢＢ２のドメインＩに結合する。

本明細書で使用される「ＥＲＢＢ３」という用語は、ヒトにおいてＥＲＢＢ３遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。遺伝子又はタンパク質の代替名は、ＨＥＲ３、ＬＣＣＳ２、ＭＤＡ－ＢＦ－１、ｃ－ＥＲＢＢ３、ｃ－ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ３－Ｓ、ｐ１８０－ＥＲＢＢ３、ｐ４５－ｓＥＲＢＢ３、及びｐ８５－ｓＥＲＢＢ３である。本明細書においてＥＲＢＢ３に言及される場合、言及はヒトＥＲＢＢ３を指す。ＥＲＢＢ３に結合する抗原結合部位を含む抗体は、ヒトＥＲＢＢ３に結合する。ＥＲＢＢ３抗原結合部位は、ヒトと他の哺乳動物オーソログとの間の配列及び三次構造の類似性に起因して、かかるオーソログにも結合し得るが、必ずしもそうではない。本開示のヒトＥＲＢＢ３タンパク質及びそれをコードする遺伝子のデータベース受入番号は、染色体１２上のＥＲＢＢ３遺伝子のゲノム位置（５６４７３８９２～５６４９７２８９）を含むＮＰ＿００１９７３．２及びＮＣ＿００００１２．１１である。受入番号は、主に、標的としてＥＲＢＢ３の更なる特定化の方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥＲＢＢ３タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどに生じる変異などのコード遺伝子の変異のため、変化し得る。ＥＲＢＢ３抗原結合部位は、ＥＲＢＢ３及びその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥＲＢＢ３陽性腫瘍細胞によって発現されるバリアントに結合する。ＥＲＢＢ３に結合する抗原結合部位は、好ましくは、ＥＲＢＢ３のドメインＩＩＩに結合する。好ましくは、非変異又は天然に生じるヒトＥＲＢＢ３のタンパク質配列は、ＮＰ＿００１９７３．２の配列であり、それは、以下のものである：
ＭＲＡＮＤＡＬＱＶＬＧＬＬＦＳＬＡＲＧＳＥＶＧＮＳＱＡＶＣＰＧＴＬＮＧＬＳＶＴＧＤＡＥＮＱＹＱＴＬＹＫＬＹＥＲＣＥＶＶＭＧＮＬＥＩＶＬＴＧＨＮＡＤＬＳＦＬＱＷＩＲＥＶＴＧＹＶＬＶＡＭＮＥＦＳＴＬＰＬＰＮＬＲＶＶＲＧＴＱＶＹＤＧＫＦＡＩＦＶＭＬＮＹＮＴＮＳＳＨＡＬＲＱＬＲＬＴＱＬＴＥＩＬＳＧＧＶＹＩＥＫＮＤＫＬＣＨＭＤＴＩＤＷＲＤＩＶＲＤＲＤＡＥＩＶＶＫＤＮＧＲＳＣＰＰＣＨＥＶＣＫＧＲＣＷＧＰＧＳＥＤＣＱＴＬＴＫＴＩＣＡＰＱＣＮＧＨＣＦＧＰＮＰＮＱＣＣＨＤＥＣＡＧＧＣＳＧＰＱＤＴＤＣＦＡＣＲＨＦＮＤＳＧＡＣＶＰＲＣＰＱＰＬＶＹＮＫＬＴＦＱＬＥＰＮＰＨＴＫＹＱＹＧＧＶＣＶＡＳＣＰＨＮＦＶＶＤＱＴＳＣＶＲＡＣＰＰＤＫＭＥＶＤＫＮＧＬＫＭＣＥＰＣＧＧＬＣＰＫＡＣＥＧＴＧＳＧＳＲＦＱＴＶＤＳＳＮＩＤＧＦＶＮＣＴＫＩＬＧＮＬＤＦＬＩＴＧＬＮＧＤＰＷＨＫＩＰＡＬＤＰＥＫＬＮＶＦＲＴＶＲＥＩＴＧＹＬＮＩＱＳＷＰＰＨＭＨＮＦＳＶＦＳＮＬＴＴＩＧＧＲＳＬＹＮＲＧＦＳＬＬＩＭＫＮＬＮＶＴＳＬＧＦＲＳＬＫＥＩＳＡＧＲＩＹＩＳＡＮＲＱＬＣＹＨＨＳＬＮＷＴＫＶＬＲＧＰＴＥＥＲＬＤＩＫＨＮＲＰＲＲＤＣＶＡＥＧＫＶＣＤＰＬＣＳＳＧＧＣＷＧＰＧＰＧＱＣＬＳＣＲＮＹＳＲＧＧＶＣＶＴＨＣＮＦＬＮＧＥＰＲＥＦＡＨＥＡＥＣＦＳＣＨＰＥＣＱＰＭＥＧＴＡＴＣＮＧＳＧＳＤＴＣＡＱＣＡＨＦＲＤＧＰＨＣＶＳＳＣＰＨＧＶＬＧＡＫＧＰＩＹＫＹＰＤＶＱＮＥＣＲＰＣＨＥＮＣＴＱＧＣＫＧＰＥＬＱＤＣＬＧＱＴＬＶＬＩＧＫＴＨＬＴＭＡＬＴＶＩＡＧＬＶＶＩＦＭＭＬＧＧＴＦＬＹＷＲＧＲＲＩＱＮＫＲＡＭＲＲＹＬＥＲＧＥＳＩＥＰＬＤＰＳＥＫＡＮＫＶＬＡＲＩＦＫＥＴＥＬＲＫＬＫＶＬＧＳＧＶＦＧＴＶＨＫＧＶＷＩＰＥＧＥＳＩＫＩＰＶＣＩＫＶＩＥＤＫＳＧＲＱＳＦＱＡＶＴＤＨＭＬＡＩＧＳＬＤＨＡＨＩＶＲＬＬＧＬＣＰＧＳＳＬＱＬＶＴＱＹＬＰＬＧＳＬＬＤＨＶＲＱＨＲＧＡＬＧＰＱＬＬＬＮＷＧＶＱＩＡＫＧＭＹＹＬＥＥＨＧＭＶＨＲＮＬＡＡＲＮＶＬＬＫＳＰＳＱＶＱＶＡＤＦＧＶＡＤＬＬＰＰＤＤＫＱＬＬＹＳＥＡＫＴＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＨＦＧＫＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＡＥＰＹＡＧＬＲＬＡＥＶＰＤＬＬＥＫＧＥＲＬＡＱＰＱＩＣＴＩＤＶＹＭＶＭＶＫＣＷＭＩＤＥＮＩＲＰＴＦＫＥＬＡＮＥＦＴＲＭＡＲＤＰＰＲＹＬＶＩＫＲＥＳＧＰＧＩＡＰＧＰＥＰＨＧＬＴＮＫＫＬＥＥＶＥＬＥＰＥＬＤＬＤＬＤＬＥＡＥＥＤＮＬＡＴＴＴＬＧＳＡＬＳＬＰＶＧＴＬＮＲＰＲＧＳＱＳＬＬＳＰＳＳＧＹＭＰＭＮＱＧＮＬＧＥＳＣＱＥＳＡＶＳＧＳＳＥＲＣＰＲＰＶＳＬＨＰＭＰＲＧＣＬＡＳＥＳＳＥＧＨＶＴＧＳＥＡＥＬＱＥＫＶＳＭＣＲＳＲＳＲＳＲＳＰＲＰＲＧＤＳＡＹＨＳＱＲＨＳＬＬＴＰＶＴＰＬＳＰＰＧＬＥＥＥＤＶＮＧＹＶＭＰＤＴＨＬＫＧＴＰＳＳＲＥＧＴＬＳＳＶＧＬＳＳＶＬＧＴＥＥＥＤＥＤＥＥＹＥＹＭＮＲＲＲＲＨＳＰＰＨＰＰＲＰＳＳＬＥＥＬＧＹＥＹＭＤＶＧＳＤＬＳＡＳＬＧＳＴＱＳＣＰＬＨＰＶＰＩＭＰＴＡＧＴＴＰＤＥＤＹＥＹＭＮＲＱＲＤＧＧＧＰＧＧＤＹＡＡＭＧＡＣＰＡＳＥＱＧＹＥＥＭＲＡＦＱＧＰＧＨＱＡＰＨＶＨＹＡＲＬＫＴＬＲＳＬＥＡＴＤＳＡＦＤＮＰＤＹＷＨＳＲＬＦＰＫＡＮＡＱＲＴ（配列番号１）。

好ましくは、本開示は、ＥＲＢＢ３変異を有するがんの治療を必要とする対象におけるその治療の方法における使用のための、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む抗体を含み、ＥＲＢＢ３変異は、好ましくは、配列番号１による非変異配列と比較して１つ以上の変異を含む。

ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２若しくはＥＲＢＢ３又はそれらの名前の代替名について言及される場合、その言及は、ヒトＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２又はＥＲＢＢ３に対してである。本明細書で言及される抗体は、がんに見出されるように、ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２、又はＥＲＢＢ３、及び多くの変異型ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２、又はＥＲＢＢ３タンパク質に結合する。

がん細胞は、ＥＲＢＢ３遺伝子に変異を有し、ＥＲＢＢ３タンパク質の特定の位置でアミノ酸置換をもたらすことが知られている。本明細書に開示される方法によって治療されるこれらの変異は、ＥｒｂＢシグナル伝達軸並びに下流のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及びＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達の活性化を促進するような、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド非依存性ヘテロ二量体化並びに／若しくはＥＲＢＢ３相互作用を介したＥＲＢＢ２キナーゼドメインの活性化を促進し、かつ／又はこれらと相関する。以前に、ＥＲＢＢ２のドメイン１及びＥＲＢＢ３のドメイン３に結合する二重特異性抗体のクラスは、ＥＲＢＢ２のドメイン１に結合することによって発がんを阻止し、ＥＲＢＢ３のドメイン３の結合を介してＥＲＢＢ３のリガンドを遮断することができることが報告されている（Ｇｅｕｉｊｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３３，９２２－９３６（２０１８））。この機序は、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド依存性ヘテロ二量体化を破壊し、ＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ経路の活性化を破壊する。ＥＲＢＢ３における変異は、ＥＲＢＢ２とのヘテロ二量体化を促進し、リガンド非依存的な様式でＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ経路を活性化し得ることが報告されている。いかなる理論にも拘束されないが、本開示は、ＥＲＢＢ２のドメイン１及びＥＲＢＢ３のドメイン３に結合する二重特異性抗体のクラスの使用によって、ＥＲＢＢ３とのリガンド相互作用を遮断することを介せず、しかし、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のヘテロ二量体化を立体的に阻害し、ＥＲＢＢ２のチロシンキナーゼ受容体の活性化並びにＰＩ３Ｋ及びｍＴＯＲ経路の活性化を防止することによって、ＥＲＢＢ３変異がんの治療の方法を提供すると考えられる。したがって、リガンド非依存性ＥＲＢＢ３発がんを阻害するための好ましくはＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を含む、ＥＲＢＢ２のドメイン１及びＥＲＢＢ３のドメイン３に結合する二重特異性抗体のクラスの作用機序は、これらの二重特異性抗体のリガンド相関ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３ヘテロ二量体化及び発がんを阻害する能力の作用機序とは異なることが理解される。

好ましくは、リガンド非依存性ヘテロ二量体化に関与する変異には、Ｖ１０４、Ａ２３２、Ｐ２６２、Ｇ２８４、Ｑ８０９、Ｓ８４６、及びＥ９２８位のアミノ酸を含む。好ましくは、変異は、Ｖ１０４Ｌ又はＭ、Ａ２３２Ｖ、Ｐ２６２Ｈ、Ｌ又はＳ、Ｇ２８４Ｒ、Ｑ８０９Ｒ、Ｓ８４６Ｉ、又はＥ９２８Ｇである。

ＥＲＢＢ３変異は、好ましくは、ＥＲＢＢ３の細胞外ドメイン、好ましくはＤＩ－ＤＩＶドメインで生じ、ドメインＩは残基５６～１６６を含み、ドメインＩＩは残基１８２～３３２を含み、ドメインＩＩＩは残基３５３～４７２を含み、ドメインＩＶは残基４９９～６２９を含む（図５）。

より好ましくは、変異は、Ｍ６０、Ｍ９１、Ｒ１０３、Ａ２３２、Ｐ２６２、Ｇ２８４、及びＤ２９７位を含む、ＥＲＢＢ３受容体－リガンド複合体の活性形成及び／又はＥＲＢＢ３のホモ／ヘテロ二量体化に関与する位置で生じる。

理論に拘束されないが、本開示の二重特異性抗体の、ＥＲＲＢ２のドメイン１及びＥＲＲＢ３のドメイン３への結合を介したヘテロ二量体化の防止は、細胞内ドメインに存在するＥＲＲＢ３発がん性駆動因子変異を、ＥＲＲＢ２のチロシンキナーゼドメインの活性化への寄与から遮断し、かかるＥＲＲＢ３変異を有する対象を治療に適応させると考えられる。

本発明の別の態様では、ＥＲＢＢ３変異は、アミノ酸残基７１０～９６４を含むＥＲＢＢ３の細胞内チロシンキナーゼドメインにおける、好ましくは、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５、又はＥ９２８位での変異を含む。Ｓ８４６及びＱ８０９位などの細胞内キナーゼドメインで生じるいくつかの変異は、ＥＲＢＢ２／ＥＲＢＢ３ヘテロ二量体の安定化を引き起こすことが報告されている。本開示は、ＥＲＲＢ２のドメイン１及びＥＲＲＢ３のドメイン３に結合する二重特異性抗体での治療の方法を提供し、それによって、ＥＲＲＢ３細胞内ドメインに存在する発がん性駆動因子変異が、ＥＲＲＢ２のチロシンキナーゼドメインの活性化に寄与するのを遮断され、かかるＥＲＲＢ３変異を有する対象を治療に適応させる。好ましい実施形態では、ＥＲＢＢ３変異は、Ｑ８０９又はＳ８４６位での変異である。

いくつかの態様では、ＥＲＢＢ３変異は、アミノ酸残基Ｍ６０、Ｍ９１、Ｒ１０３、Ｖ１０４、Ｒ１３５、Ｆ２１９、Ｈ２２８、Ａ２３２、Ｐ２６２、Ｇ２８４、Ｄ２９７、Ｋ３２９、Ｅ３３２、Ｔ３５５、Ｒ４７５、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５又はＥ９２８を含む、発がん性駆動因子である変異を含む。より好ましくは、ＥＲＢＢ３変異は、Ｖ１０４、Ａ２３２、Ｇ２８４、Ｄ２９７、Ｋ３２９、Ｔ３５５、Ｓ８４６、又はＥ９２８を含むホットスポット変異である。

具体的には、ＥＲＢＢ３変異、又は当該変異を含むがんは、以下のうちのいずれか１つを含む：
Ｍ６０Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｍ９１Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｒ１０３Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）、
Ｖ１０４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬ又はＭである）、
Ｒ１３５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＣである）、
Ｆ２１９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬである）、
Ｈ２２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＱである）、
Ａ２３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＶである）、
Ｐ２６２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨ又はＬ又はＳである）、
Ｇ２８４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｄ２９７Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＹ又はＡ又はＨ又はＮ又はＶである）、
Ｋ３２９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＥ又はＩ又はＴである）、
Ｅ３３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｔ３５５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＡ又はＩ又はＰである）、
Ｒ４７５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＷである）、
Ｑ８０９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｓ８４６Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｑ８６５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨである）、
Ｅ９２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）。

これらの状況では、Ｎは、対応する位置の天然に生じる非変異アミノ酸残基とは異なる、示された位置のＥＲＲＢ３タンパク質のアミノ酸である。本開示の一態様において、Ｒ４２６位でのＥＲＢＢ３変異は、除外される。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有するがん細胞は、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＢＲＡＦを含むがこれらに限定されない別の発がん性駆動因子を欠いているか、又は細胞は、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、及びＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子における発がん性変異の非存在を示す。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有するがん細胞は、以下のがん増幅ｃ－ＭＥＴ増幅、ｃ－ＭＹＣ増幅、ＥＧＦＲ増幅、ＥＲＢＢ２増幅、及びＭＤＭ２増幅を欠く。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を保有するがん細胞は、ＰＴＥＮ損失を有しない。ＰＴＥＮ（ＨＧＮＣ識別子９５８８）は、発がん性ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲシグナル伝達ネットワークの活性化に直接反対する、ＰＩ３キナーゼの脂質産物であるＰＩＰ３を代謝するホスファターゼである。ＰＴＥＮ腫瘍抑制因子の機能の喪失は、がん型において観察される一般的な事象である。「ＰＴＥＮ喪失」とは、ＰＴＥＮ腫瘍抑制因子の機能の喪失を意味する。

上記のＥＲＢＢ３変異のいずれかは、変異がＥｒｂＢシグナル伝達軸並びに下流のマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及びＰＩ３Ｋ経路シグナル伝達の活性化を促進するような、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド非依存性ヘテロ二量体化並びに／若しくはＥＲＢＢ３相互作用を介したＥＲＢＢ２キナーゼドメインの活性化を促進し、かつ／又はこれらと相関する。

本発明は、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性がんを有するリスクがある対象の治療における使用のための、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する第２の抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体を更に提供し、そのがんの細胞は、ＥＲＢＢ３変異を含み、対象は、以前のＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２又はＥＲＢＢ３標的化された腫瘍治療を受けた治療前のがん対象である。

更にＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性がんを有するリスクがある対象を治療する方法を提供し、そのがんの細胞は、ＥＲＢＢ３変異を含み、対象は、化学療法又はＥＲＢＢ２若しくはＥＲＢＢ３標的化された腫瘍治療の以前の治療を受けた治療前のがん対象であり、本方法は、それを必要とする対象に、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する第２の抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体を投与することを含む。

本発明による化学療法は、好ましくは、ゲムシタビン、カペシタビン、カルボプラチン、ドセタキセル若しくはパクリタキセルなどのタキサン、５－フルオロウラシル（放射線療法の有無にかかわらず）、ビノレルビン、ミトキサントロン、ビンブラスチン、シスプラチン（又はペメトレキセド）、オキサリプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ビンデシン、エトポシド、フォルフォックス（Ｆｏｌｆｏｘ）（すなわち、５－フルオロウラシル、ロイコボリン、及びオキサリプラチンの組み合わせ）若しくはフォルフィリ（Ｆｏｌｆｉｒｉ）（すなわち、ロイコボリン、５－フルオロウラシル及びイリノテカンの組み合わせ）、フォルフィリノックス（Ｆｏｌｆｉｒｉｎｏｘ）（ロイコボリン、５－フルオロウラシル、イリノテカン及びオキサリプラチンの組み合わせ）、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

対象は、好ましくは、化学療法又はＥＲＢＢ２阻害に対して標的化された療法を受けている。ＥＲＢＢ２標的腫瘍治療とも称されるＥＲＢＢ２シグナル伝達の阻害は、好ましくは、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する抗原結合部位を含む単一特異性二価抗体の投与、又はＥＲＢＢ２チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）若しくはそれらの組み合わせの投与を含み、単一特異性二価抗体は、好ましくは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、又はトラスツズマブ－エムタンシンであり、ＥＲＢＢ２ ＴＫＩは、好ましくは、ラパチニブ、カネルチニブ、ネラチニブ、ツカチニブ（イルビニチニブ（ｉｒｂｉｎｉｔｉｎｉｂ））、ＣＰ－７２４７１４、タルロキシチニブ（ｔａｒｌｏｘｉｔｉｎｉｂ）、ムブリチニブ、アファチニブ、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）、及びダコミチニブのうちの１つ以上、好ましくは、ラパチニブ、カネルチニブ、ネラチニブ、ツカチニブ（イルビニチニブ）、ムブリチニブ、アファチニブ、バルリチニブ、又はダコミチニブ、より好ましくはアファチニブである。

本開示によれば、対象は、代替的に、ＥＲＢＢ３標的化された腫瘍治療で治療され、好ましくは、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する抗原結合部位を含む単一特異性二価抗体の投与、又はＥＲＢＢ３チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）若しくはそれらの組み合わせの投与を含み、単一特異性二価抗体は、好ましくは、パトリツマブ、セリバンツマブ、ルムレツズマブ（ｌｕｍｒｅｔｕｚｕｍａｂ）、エルゲムツマブ（ｅｌｇｅｍｔｕｍａｂ）、ＧＳＫ２８４９３３０、ＫＴＮ３３７９、又はＡＶ－２０３である。

本開示に記載の治療の方法又は治療における使用のための二重特異性抗体は、好ましくは、細胞がＥＲＢＢ３変異を含むかどうか、又は腫瘍がＥＲＢＢ３変異を有する細胞を含むかどうかを更に決定することを含む。これは、例えば、生検の細胞に対して行われ得る。様々な方法が利用可能であり、多くの方法が当該技術分野で既知である。１つの方法は、ＥＲＢＢ３変異の領域にまたがるプライマーを用いたＰＣＲ増幅によるものである。これは、生じることが知られているＥＲＢＢ３変異に対して実装され得る。新しい変異は、次世代ＤＮＡ又はＲＮＡ配列決定を含む、当業者に公知の技術を介して容易に検出され得る。

推定されるＥＲＢＢ３変異を特定するために利用可能な技術には、ＲＴ－ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、トランスクリプトーム解析、アンカー多重ＰＣＲ、ｎＣｏｕｎｔｅｒ、ＦＩＳＨを含む対立遺伝子特異的ＲＮＡベースの方法論、ハイブリッドキャプチャベースの次世代配列決定（ＮＧＳ）、アンプリコンベースのＮＧＳを含むＤＮＡベースの方法論が含まれる。

ＥＲＢＢ３変異を有するがんには、結腸直腸がん、胃、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）腺がん（アデノ）、ＮＳＣＬＣ（扁平上皮）、腎がん、黒色腫、卵巣、肺大細胞、食道、小細胞肺がん、肝細胞（ＨＣＣ）、乳がん、ホルモン陽性乳がん、膠芽細胞腫、及び頭頸部がんが含まれる。

ＥＲＢＢ３変異を有するがんは、好ましくは、胃腺がん又は食道胃がんなどの胃がん、膵臓がん、膵管腺がん、肉腫、膀胱がん、結腸直腸がん、胆嚢がん、頭頸部がん、前立腺がん、子宮／子宮内膜がん、乳がん、卵巣がん、肝臓がん、非小細胞肺がんなどの肺がん、好ましくは非小細胞肺がん、より好ましくは浸潤性粘液性腺がんである。より好ましくは、がん又は腫瘍は、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ａ２３２Ｖを含む。より好ましくは、がん又は腫瘍は、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ａ２３２Ｖを含む膀胱がんである。

がん又は腫瘍は、好ましくは、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ｖ１０４Ｍを含む。より好ましくは、がん又は腫瘍は、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ｖ１０４Ｍを含む明細胞がんなどの卵巣がんである。

がんの細胞上のＥｒｂＢ受容体のレベルを決定するための様々な方法が利用可能である。例えば、免疫組織化学又は蛍光インサイツハイブリダイゼーションである。両方ともＤａｋｏ Ｄｅｎｍａｒｋ Ａ／Ｓによって市販されたＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）及び／若しくはＨＥＲ２ ＦＩＳＨ（ｐｈａｒｍ Ｄｘ（商標））、並びに／又はＭｏｎｏｇｒａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによって市販されたＨＥＲｍａｒｋ（登録商標）アッセイの使用は、ＥＲＢＢ２又はＥＲＢＢ３細胞表面受容体密度を決定するための好適なアッセイの例である。ＥＲＢＢ２受容体細胞密度を決定するための他の方法は、当業者に周知である。ＥＲＢＢ２を決定するためのインビボ方法も既知である、例えば、Ｃｈｅｒｎｏｍｏｒｉｄｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍａｇｉｎｇ．２０１０ Ａｕｇ；９（４）：１９２－２００及びＡｒｄｅｓｈｉｒｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ．２０１４ Ｏｃｔ；１３（５）：４２７－４３４を参照されたい。好ましくは、本明細書に開示される方法は、当該細胞又は腫瘍のＥＲＢＢ２細胞表面受容体密度を決定することを更に含む。かかる方法は、当業者に既知である（例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｖａｎ Ｚｏｅｌｅｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．２００９ Ｊａｎ ９；３７８（２）：２８５－９を参照されたい）。好ましくは、本明細書に開示される方法は、当該細胞又は腫瘍のＥＲＢＢ１細胞表面受容体密度を決定することを更に含む。かかる方法は、当業者に既知である（例えば、ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘＴＭＫｉｔ（Ｄａｋｏ））ａｍｄ ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０１２；１１：５８２を参照されたい）。同様の方法を使用して、ＥＲＢＢ４細胞表面受容体密度を決定し得る。

いくつかの実施形態では、ＥＲＢＢ１、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、及びＥＲＢＢ４細胞表面受容体密度は、生検腫瘍細胞に対してＦＡＣＳ分析によって決定される。

対象に投与される二重特異性抗体の量は、典型的には、治療窓内にあり、治療効果を得るために十分な量が使用されるが、量は、許容できない程度の副作用をもたらす閾値を超えないことを意味する。選択された投薬量レベルは、投与経路、投与時間、用いられる特定の化合物の排泄速度、治療期間、組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／又は材料、治療される対象の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態及び過去の病歴を含む様々な要因、並びに医学分野で周知の同様の要因に依存する。投薬量は、毎週、隔週又は３週ごとで２００～１０００ｍｇの範囲にある。好ましくは、ＥＲＢＢ２×ＥＲＢＢ３を標的とする本開示の治療薬の投薬は、７５０ｍｇの毎週、隔週、又は３週ごとの投与レジメン、好ましくは７５０ｍｇの隔週、又は３週ごとの用量に従う。この投薬は、好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有する固形腫瘍を有するがんを有する対象においてであり、次いで、投薬レジメンは、４００ｍｇの毎週の一定量用量投与を含み、好ましくは、８００ｍｇの単回投与後に開始される。この代替投薬レジメンに続いて、本発明の二重特異性抗体は、好ましくは、４００ｍｇの毎週用量で３週間、続いて１週間投与なしで投与される。次いで、４００ｍｇの３週ごとの一定の投薬量、続く１週間投与内からなる４週間の期間の１つ以上のサイクルが続く。これは、好ましくは、治療効果が観察されるまで続く。本開示の投与レジメンは、４時間にわたる７５０ｍｇの注入の初回投与後に開始される７５０ｍｇの一定用量での隔週サイクル、続く４週間のサイクルでの７５０ｍｇの隔週の２時間注入を含む。これは、好ましくは、治療効果が観察されるまで続く。

投薬は、好ましくは、完全用量に到達するために、好ましくは＞３６０ｍｇの抗体を投薬する場合、本発明の二重特異性抗体の２回の注入の静脈内注射を含む。代替的に、例えば、≦３６０ｍｇの抗体を投薬する場合、より低い投薬量に対して、完全用量の単回注入を与えてもよい。注入関連反応を軽減するための投薬レジメンに前投薬が含まれる場合がある。

好ましくは、治療は、腫瘍の大きさ若しくは病変の点での安定化、又は腫瘍の低減を含む更なる腫瘍増殖の予防を含む。好ましくは、治療又は投与は、毎週のレジメンで本発明による二重特異性抗体を用いて行われ、少なくとも１、２、４、８、又は少なくとも１２ヶ月間進行する。好ましくは、８００ｍｇの初回投与後に開始される毎週の４００ｍｇの均一用量での一週間サイクルを含む投薬レジメンに従う。３週目から、本発明の二重特異性抗体は、３週間、４００ｍｇの毎週用量、続いて１週間、本発明の二重特異性抗体の投与なしで投与される。代替的には、４時間にわたる７５０ｍｇの注入の初回投与後に開始される７５０ｍｇの一定用量での隔週サイクル、続く４週間のサイクルでの７５０ｍｇの隔週の２時間注入を含む投与レジメンに従う。更なる代替法は、対象当たり７５０ｍｇの一定用量の３週ごと投与を含む。

好ましくは、診断には、標的配列決定法を使用した分子プロファイリング、融合、挿入／欠失（インデル）、単一ヌクレオチドバリアント、及び／又はコピー数バリエーションを含む、最後の１つのバイオマーカーの分析が含まれる。好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有する腫瘍ゲノムは、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＢＲＡＦを含むがこれらに限定されない別の発がん性駆動因子を欠いているか、又は腫瘍細胞は、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、及びＰＴＥＮからなる群から選択される１つ以上の遺伝子における発がん性変異の非存在を示す。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有する腫瘍ゲノムは、以下のがん増幅ｃ－ＭＥＴ増幅、ｃ－ＭＹＣ増幅、ＥＧＦＲ増幅、ＥＲＢＢ２増幅、ＭＤＭ２増幅を欠く。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有する腫瘍ゲノムは、ＰＴＥＮ損失を有しない。

好ましくは、疾患進行は、ＣＴスキャンを使用することによる抗腫瘍活性の測定、並びに客観的全体応答効率（ＯＲＲ）、応答期間（ＤＯＲ）、無進行生存（ＰＦＳ）及び生存を決定するＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１による評価を含む。好ましくは、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合する第１の抗原結合部位及びＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合する第２の抗原結合部位を有する二重特異性抗体、特にＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８は、腫瘍のサイズ若しくは病変を安定化させるか、又は治療は更なる腫瘍増殖を防止する。好ましくは、治療は薬物関連毒性なしであるか、又は薬物関連であるか、若しくは薬物関連と疑われるグレード３～５の有害事象の発生が限定された良好な安全性プロファイルを有する。

二重特異性抗体は、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤、並びに追加の任意の活性剤を含む医薬組成物として製剤化され得る。抗体及び抗体を含む組成物は、非経口、経腸、及び局所投与を含む任意の経路によって投与され得る。非経口投与は、通常、注射によるものであり、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、心室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、脳内脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏ ｓｐｉｎａｌ）、腫瘍内、及び胸骨内の注射及び注入を含む。

本開示は、本明細書に記載の方法及び治療における使用のための二重特異性抗体を提供する。好適な二重特異性抗体は、ＥＲＢＢ２に結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３に結合する第２の抗原結合部位と、を含む。二重特異性抗体は、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性細胞上のＥＲＢＢ３のリガンド誘導受容体機能を低減させる、又は低減させ得、及び／又はＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３ヘテロ二量体化を破壊する。好ましい抗体及びそれらの調製は、ＷＯ２０１５／１３０１７３に開示され、それは参照により本明細書に組み込まれる。ＷＯ２０１５／１３０１７３の実施例は、リガンド結合及びエピトープマッピングなどの抗体のいくつかの特性を更に説明する。

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換的に使用され、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、テンジクネズミ、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物（例えば、がんを有するヒト患者などの患者）を指す。

本明細書で使用される「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、疾患又はその症状の治癒又は改善目的のために、対象に行われるか、又は対象に活性薬剤又は活性薬剤の組み合わせを投与する任意の種類の介入又はプロセスを指す。これには、疾患に関連する症状、合併症、状態、又は生化学的兆候を逆転させる、緩和する、改善する、抑制する、又は遅延させること、並びに疾患に関連する症状、合併症、状態、又は生化学的兆候の発症、進行、発生、重症化、又は再発を予防することが含まれる。

本明細書で使用される場合、「有効な治療」又は「肯定的な治療応答」とは、有益な効果、例えば、疾患又は障害、例えば、がんの少なくとも１つの症状の改善をもたらす治療を指す。有益な効果は、その方法に従って治療を開始する前に行われた測定又は観察を上回る改善を含む、ベースラインを上回る改善の形態をとることができる。例えば、有益な効果は、疾患の臨床症状若しくは診断症状、又はがんのマーカーの軽減又は排除によって証明される、任意の臨床病期において対象におけるがんの進行を遅延させる、安定させる、停止する、又は逆転させる形態をとることができる。有効な治療は、例えば、腫瘍サイズを減少させ得る、循環腫瘍細胞の存在を減少させ得る、腫瘍の転移を軽減若しくは予防し得る、腫瘍成長を遅延させ得る若しくは停止させ得る、及び／又は腫瘍再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）若しくは再発（ｒｅｌａｐｓｅ）を予防し得る若しくは遅延させ得る。

「治療量」又は「有効量」という用語は、所望の生物学的、治療的、及び／又は予防的結果を提供する薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。その結果は、疾患の兆候、症状、若しくは原因のうちの１つ以上の軽減（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）、改善、寛解、軽減（ｌｅｓｓｅｎｉｎｇ）、遅延、及び／若しくは緩和、又は生物系の任意の他の所望の変化とすることができる。いくつかの実施形態では、治療量は、腫瘍発生を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、治療量は、腫瘍再発を予防する又は遅延させるのに十分な量である。

治療量の薬物又は組成物は、（ｉ）がん細胞の数を減少させ得る、（ｉｉ）腫瘍サイズを減少させ得る、（ｉｉｉ）がん細胞の末梢器官への浸潤を抑制し得る、遅延させ得る、ある程度遅延させ得る、かつ停止し得る、（ｉｖ）腫瘍転移を抑制し得る、（ｖ）腫瘍成長を阻害し得る、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／若しくは再発を予防し得る若しくは遅延させ得る、かつ／又は（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。

治療量は、治療される個体の病状、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する薬剤又は薬剤の組み合わせの能力などの要因に応じて変化し得る。

治療量は、１回以上の投与で投与することができる。

治療量には、薬剤又は薬剤の組み合わせの任意の毒作用又は有害作用と、治療的に有益な効果とのバランスを保つ量も含まれる。」

本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」という用語は、抗原に結合することができる二重特異性抗体に由来し、好ましくはそれに存在する部位を指す。抗原結合部位は、典型的には、抗体の可変ドメインによって形成され、抗体の可変ドメインに存在する。可変ドメインは、当該抗原結合部位を含有する。抗原結合部位は、通常の生理学的条件下で抗原に結合し得る。これは、多くの場合、抗原結合部位が抗原に「結合する」とも称される。

一実施形態では、抗体可変ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。抗原結合部位は、組み合わされたＶＨ／ＶＬ可変ドメイン又はＶＨ領域のみ又はＶＬ領域のみに存在し得る。抗原結合部位が可変ドメインの２つの領域のうちの１つのみに存在する場合、対応する可変領域は、結合可変領域の折り畳み及び／又は安定性に寄与し得るが、抗原自体の結合に顕著に寄与しない。

本明細書で使用される場合、抗原結合とは、抗体のその抗原への典型的な結合能力を指す。ＥＲＢＢ２に結合する抗原結合部位を含む抗体は、ＥＲＢＢ２に結合し、そうでなければ同一の条件下では、同じ種の相同受容体ＥＲＢＢ１及びＥＲＢＢ４に対して少なくとも１００倍低く結合する。ＥＲＢＢ３に結合する抗原結合部位を含む抗体は、ＥＲＢＢ３に結合し、そうでなければ同一の条件下では、同じ種の相同受容体ＥＲＢＢ１及びＥＲＢＢ４に結合しない。

ＥｒｂＢファミリーが細胞表面受容体のファミリーであることを考慮すると、結合は、典型的には、受容体を発現する細胞に対して評価される。抗原への抗体の結合は、様々な方法で評価され得る。１つの方法は、抗体を抗原（好ましくは、抗原を発現する細胞）とともにインキュベートし、非結合抗体を（好ましくは、洗浄ステップによって）除去し、結合した抗体に結合した標識された抗体によって結合した抗体を検出することである。

抗体による抗原結合は、典型的には、抗体のランダムで非特異的な付着とは対照的に、抗体の相補性領域並びに抗原及び可変ドメインの両方の特異的な三次元構造を介して媒介され、これらの２つの構造が精度（錠前及び鍵に類似する相互作用）で一緒に結合することを可能にする。抗体は、典型的には、抗原のエピトープを認識し、かかるエピトープは同じように他の化合物にも存在する可能性があるので、ＥＲＢＢ２及び／又はＥＲＢＢ３に結合する本発明による抗体は、かかる他の化合物が同じエピトープを含有する場合、同じように他のタンパク質も認識する可能性がある。したがって、「結合する」という用語は、同じエピトープを含有する別の１つ以上のタンパク質への抗体の結合を排除しない。かかる他のタンパク質は、好ましくは、ヒトタンパク質ではない。本明細書に定義されるＥＲＢＢ２抗原結合部位及びＥＲＢＢ３抗原結合部位は、典型的には、出生後、好ましくは成人のヒトにおいて、細胞の膜上の他のタンパク質に結合しない。

本明細書で使用される「結合を妨げる」という用語は、抗体がＥＲＢＢ３上のエピトープに指向され、抗体がＥＲＢＢ３への結合についてリガンドと競合することを意味する。抗体は、リガンド結合を弱め得るか、ＥＲＢＢ３にすでに結合している場合、リガンドを置き換え得るか、又は例えば、立体障害を介して、リガンドがＥＲＢＢ３に結合し得ることを少なくとも部分的に防止し得る。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、好ましくは、抗原上のエピトープに結合する１つ以上の可変ドメインを含有する、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質分子を意味し、かかるドメインは、抗体の可変領域を有する配列相同性に由来するか、又はその配列相同性を共有する。治療的使用のための抗体は、可能な限り治療される対象の天然抗体に近いことが好ましい（例えば、ヒト対象のためのヒト抗体）。抗体結合は、特異性及び親和性に関して表され得る。特異性は、どの抗原又はそのエピトープが結合ドメインによって特異的に結合されるかを決定する。親和性は、特定の抗原又はエピトープへの結合の強度の尺度である。本発明の二重特異性抗体のような抗体は、天然抗体の定常ドメイン（Ｆｃ部分）を含む。本発明の抗体は、典型的には、好ましくは、ヒトＩｇＧサブクラスの二重特異性全長抗体である。好ましくは、本明細書に開示される抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。かかる抗体は、ヒトへのインビボ投与時に好ましい半減期を有し、クローン細胞での共発現時にホモ二量体よりも優先的にヘテロ二量体を形成する修飾された重鎖を提供し得るＣＨ３工学的技術有する、優れたＡＤＣＣ特性を有する。

本明細書に開示される抗体は、好ましくは、「全長」抗体である。本発明による「全長」という用語は、本質的に完全な抗体を含むと定義されるが、必ずしも無傷な抗体の全ての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、全長抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含有する。各鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含有し、これらは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、及びＣＬ、ＶＬと指定されたドメインに分類され得る（それぞれのドメインに好適なアミノ酸配列は、図６及び図７に示されている。抗体は、Ｆａｂ部分に含まれる可変ドメインを介して抗原に結合し、結合後、定常ドメインを介して、主にＦｃ部分を介して免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。「可変ドメイン」、「ＶＨ／ＶＬ対」、「ＶＨ／ＶＬ」という用語は、本明細書で互換的に使用される。本発明による全長抗体は、所望の特徴を提供する変異が存在し得る抗体を包含する。かかる変異は、領域のうちのいずれの実質的な部分の欠失を有してはならない。しかしながら、結果として得られた抗体の結合特性を本質的に変化させることなく、１つ以上のアミノ酸残基が欠失した抗体は、「全長抗体」という用語内に包含される。例えば、ＩｇＧ抗体は、定常領域において１～２０アミノ酸残基の挿入、欠失、又はそれらの組み合わせを有し得る。例えば、抗体自体が低いＡＤＣＣ活性を有する場合、抗体のＡＤＣＣ活性は、抗体の定常領域をわずかに修飾することにより、改善され得る（Ｊｕｎｔｔｉｌａ，Ｔ．Ｔ．，Ｋ．Ｐａｒｓｏｎｓ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）．”Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｉｎ ｖｉｖｏ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＨＥＲ２－Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７０（１１）：４４８１－４４８９）。

免疫原性の理由によりその好ましい半減期、及び完全に自己の（ヒト）分子の近いままでいる必要性のため、全長ＩｇＧ抗体が好ましい。本明細書に開示される抗体は、好ましくは、二重特異性ＩｇＧ抗体、好ましくは、二重特異性全長ＩｇＧ１抗体である。ＩｇＧ１は、ヒトにおけるその長い循環半減期に基づいて好まれている。ヒトにおける任意の免疫原性を予防するために、二重特異性ＩｇＧ抗体がヒトＩｇＧ１であることが好ましい。

「二重特異性」（ｂｓ）という用語は、抗体の一部（上記で定義される）が抗原上の１つのエピトープに結合するが、第２の部分が異なるエピトープに結合することを意味する。異なるエピトープは、典型的には、異なる抗原上に存在する。二重特異性抗体の重鎖可変領域は、典型的には、互いに異なるが、軽鎖可変領域は、好ましくは同じである。異なる重鎖可変領域が同じ又は共通の軽鎖に会合している二重特異性抗体は、共通軽鎖を有する二重特異性抗体とも称される。本明細書に記載される二重特異性抗体は、典型的には、ＥＲＢＢ２に結合する１つの可変ドメインと、ＥＲＢＢ３に結合する別の可変ドメインと、を含む。

好ましい二重特異性抗体は、単一細胞内の２つの異なる重鎖及び共通軽鎖の共発現によって得られ得る。野生型ＣＨ３ドメインを使用する場合、２つの異なる重鎖と共通軽鎖の共発現は、３つの異なる種、ＡＡ、ＡＢ、及びＢＢをもたらすだろう。所望の二重特異性生成物（ＡＢ）のパーセンテージを増加させるために、ＣＨ３工学が用いられ得るか、又は言い換えれば、それは本明細書で定義される適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する重鎖を使用し得る。好適な適合性ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインは、図７ｄ及び７ｅに示される。

本明細書で使用される「適合性ヘテロ二量体化ドメイン」という用語は、操作されたドメインＡ’が優先的に操作されたドメインＢ’とヘテロ二量体を形成し、その逆もまた同様であるが、Ａ’－Ａ’及びＢ’－Ｂ’の間のホモ二量体化が減少するように操作されたタンパク質ドメインを指す。

「共通軽鎖」という用語は、同一であり得るか、又はいくつかのアミノ酸配列の差を有し得るが、全長抗体の結合特異性は影響を受けない軽鎖を指す。例えば、保存的アミノ酸変化、重鎖と対になった場合に結合特異性に寄与しないか、又は部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入すること及び試験することによって、同一ではないが依然として機能的に等価である軽鎖を調製するか、又は見つけることは、例えば、可能である。「再配列された」という用語の付加を伴うか否かにかかわらず、「共通軽鎖」、「共通ＶＬ」、「単一軽鎖」、「単一ＶＬ」という用語は全て、本明細書で互換的に使用される。

共通軽鎖（可変領域）は、好ましくは生殖系列配列を有する。好ましい生殖系列配列は、ヒトレパートリーで頻繁に使用され、良好な熱力学的安定性、収率、及び溶解性を有する軽鎖可変領域である。好ましい実施形態では、軽鎖は、図６に示すように、ＩｇＶκ１－３９＊０１遺伝子セグメントのアミノ酸配列を含む軽鎖領域、より好ましくは、０～１０個、好ましくは０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有する共通軽鎖ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１を含む。ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、又はＩＧＫＶ１－３９としても知られている。この遺伝子の外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１。ＩＧＫＶ１－３９の可変領域を図６に示す。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。図６は、Ｊ領域と組み合わせたＩｇＶκ１－３９の２つの好ましい配列を記載する。合わせられた配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５と示され、代替名は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデータベースワールドワイドウェブによる命名）である。

軽鎖可変領域を含むＩｇＶκ１－３９＊０１が生殖系列配列であることが好ましい。軽鎖可変領域を含むＩＧＪκ１＊０１又は／ＩＧＪκ５＊０１が生殖系列配列であることが更に好ましい。好ましい実施形態では、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１又はＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５軽鎖可変領域は生殖系列配列である。

好ましい実施形態では、軽鎖可変領域は、生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１を含む。好ましい実施形態では、軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１を含む。好ましい実施形態では、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１。軽鎖可変領域は、生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又は生殖系列カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１、好ましくは生殖系列ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１を含む。

当業者であれば、「共通」が、アミノ酸配列が同一ではない軽鎖の機能的等価物も指すことを認識するであろう。機能的結合領域の形成に実質的に影響を及ぼさない変異（欠失、置換、付加）が存在する当該軽鎖の多くのバリアントが存在する。軽鎖はまた、１～５個のアミノ酸の挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する、本明細書において上記で特定された軽鎖であり得る。

好ましくは、第１の抗原結合部位及び当該第２の抗原結合部位の両方は、配列（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）を有するＣＤＲ１、配列（ＡＡＳＳＬＱＳ）を有するＣＤＲ２及び配列（ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ）を有するＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。

本明細書に開示される抗体は、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性細胞上のＥＲＢＢ３のリガンド誘導受容体機能を低減させ得る。過剰なＥＲＢＢ２の存在下で、ＥＲＢＢ２／ＥＲＢＢ３ヘテロ二量体は、ヘテロ二量体内のＥＲＢＢ３鎖についての検出可能なリガンドの非存在下で、発現細胞に成長シグナルを提供し得る。このＥＲＢＢ３受容体機能は、本明細書では、ＥＲＢＢ３のリガンド非依存性受容体機能と称される。ＥＲＢＢ２／ＥＲＢＢ３ヘテロ二量体はまた、ＥＲＢＢ３リガンドの存在下で発現細胞に成長シグナルを提供する。このＥＲＢＢ３受容体機能は、本明細書では、ＥＲＢＢ３のリガンド誘導受容体機能と称される。

本明細書で使用される「ＥＲＢＢ３リガンド」という用語は、ＥＲＢＢ３に結合して活性化するポリペプチドを指す。ＥＲＢＢ３リガンドの例には、ニューレグリン１（ＮＲＧ）及びニューレグリン２、ベータセルリン、ヘパリン結合表皮成長因子、及びエピレグリンが挙げられるが、これらに限定されない。この用語には、天然に生じるポリペプチドの生物学的に活性な断片及び／又はバリアントが含まれる。

好ましくは、ＥＲＢＢ３のリガンド誘導受容体機能は、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３陽性細胞のＥＲＢＢ３リガンド誘導増殖である。好ましい実施形態では、当該細胞は、ＭＣＦ－７細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－２２（商標））、ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－３０（商標））細胞、ＮＣＩ－８７（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８２２（商標））細胞、ＢｘＰＣ－３－ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ１２５０５８）、ＢＴ－４７４細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ－２０（商標））、又はＪＩＭＴ１細胞（ＤＳＭＺ番号：ＡＣＣ５８９）である。

ＥＲＢＢ２タンパク質は、いくつかのドメインを含有する（Ｌａｎｄｇｒａｆ，Ｒ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７；９（１）：２０２－の参照図１を参照されたい）。細胞外ドメインは、ドメインＩ～ＩＶと称される。本明細書に記載の抗体の抗原結合部位のそれぞれのドメインへの結合の場所がマッピングされている。ＥＲＢＢ２（第１の抗原結合部位）のドメインＩ又はドメインＩＶに結合する抗原結合部位（第１の抗原結合部位）を有する二重特異性抗体は、様々な軽鎖と組み合わせた場合、ＥＲＢＢ２に対する顕著な結合特異性及び親和性を維持する重鎖可変領域を含む。ＥＲＢＢ２（第１の抗原結合部位）のドメインＩ又はドメインＩＶに結合する抗原結合部位（第１の抗原結合部位）及びＥＲＢＢ３に対する抗原結合部位（第２の抗原結合部位）を有する二重特異性抗体は、ＥＲＢＢ２の別の細胞外ドメインに結合する抗原結合部位（第１の抗原結合部位）を含む二重特異性抗体と比較して、ＥＲＢＢ３のリガンド誘導受容体機能を低減させるのにより有効である。ＥＲＢＢ２に結合する抗原結合部位（第１の抗原結合部位）を含む二重特異性抗体であって、当該抗原結合部位は、ＥＲＢＢ２のドメインＩ又はドメインＩＶに結合することが好ましい、二重特異性抗体。好ましくは、当該抗原結合部位は、ＥＲＢＢ２のドメインＩＶに結合する。好ましい抗体は、ＥＲＢＢ２のドメインＩに結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３のドメインＩＩＩに結合する第２の抗原結合部位と、を含む。

好ましい一実施形態では、当該抗体は、Ｔ１４４、Ｔ１６４、Ｒ１６６、Ｐ１７２、Ｇ１７９、Ｓ１８０、及びＲ１８１からなる群から選択されるＥＲＢＢ２のドメインＩの少なくとも１つのアミノ酸、並びにＴ１４４、Ｔ１６４、Ｒ１６６、Ｐ１７２、Ｇ１７９、Ｓ１８０、又はＲ１８１からなる約５アミノ酸位以内に位置する表面曝露アミノ酸残基に結合する抗原結合部位を含む。

好ましい一実施形態では、当該抗体は、好ましくは、Ｒ４２６を含む群から選択されるＥＲＢＢ３のドメインＩＩＩの少なくとも１つのアミノ酸、及び天然ＥＲＢＢ３タンパク質中のＲ４２６から１１．２Å以内に位置する表面曝露アミノ酸残基に結合する抗原結合部位を含む。

ＥＲＢＢ２に結合し、更にＡＤＣＣを含む抗原結合部位（第１の抗原結合部位）を有する二重特異性抗体は、特にインビボで、顕著なＡＤＣＣ活性を有しなかった他のＥＲＢＢ２結合抗体よりもより有効である。したがって、ＡＤＣＣを示す二重特異性抗体が好ましい。より高い選択性で活性化受容体に結合するＦｃ領域を（アミノ酸置換を導入することによって）操作することによって、抗がんＭａｂによって所望される細胞傷害活性を媒介するより高い能力を有する抗体を作製することができる。

抗体のＡＤＣＣを増強するための１つの技術は、アフコシル化である。（例えば、Ｊｕｎｔｔｉｌａ，Ｔ．Ｔ．，Ｋ．Ｐａｒｓｏｎｓ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）．”Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｉｎ ｖｉｖｏ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＨＥＲ２－Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７０（１１）：４４８１－４４８９を参照されたい）。したがって、アフコシル化された、本明細書で開示される二重特異性抗体が更に提供される。代替的に、又は追加的に、ＡＤＣＣの増強を達成するために、例えば、糖鎖工学及び変異誘発を含む、複数の他の戦略を使用することができ、これらの全ては、低親和性活性化ＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃ結合を改善すること、及び／又は低親和性阻害性ＦｃγＲＩＩｂへの結合を低減することを目指すものである。

ＡＤＣＣを誘発する際に抗体又はエフェクター細胞の有効性を決定するためのいくつかのインビトロ方法が存在する。それらの中には、クロム－５１［Ｃｒ５１］リリースアッセイ、ユウロピウム［Ｅｕ］リリースアッセイ、及び硫黄－３５［Ｓ３５］リリースアッセイが含まれる。通常、ある特定の表面が曝露された抗原を発現する標識標的細胞株は、その抗原に特異的な抗体とともにインキュベートされる。洗浄後、典型的には、Ｆｃ受容体ＣＤ１６を発現するエフェクター細胞を、抗体標識標的細胞と共インキュベートする。続いて、典型的には、標的細胞溶解を、例えば、シンチレーションカウンター又は分光光度法による細胞内標識のリリースによって測定する。

好ましい二重特異性抗体では、ＥＲＢＢ３陽性細胞に対する当該第２の抗原結合部位の親和性は、ＥＲＢＢ２陽性細胞に対する当該第１の抗原結合部位の親和性と等しいか、又は好ましくはそれよりも高い。ＥＲＢＢ３陽性細胞に対する当該第２の抗原結合部位の親和性（ＫＤ）は、好ましくは、２．０ｎＭ以下、より好ましくは１．５ｎＭ以下、より好ましくは１．３９ｎＭ以下、より好ましくは０．９９ｎＭ以下である。好ましい一実施形態では、ＳＫ ＢＲ３細胞上のＥＲＢＢ３に対する当該第２の抗原結合部位の親和性は、２．０ｎＭ以下、より好ましくは１．５ｎＭ以下、より好ましくは１．３９ｎＭ以下、好ましくは０．９９ｎＭ以下である。一実施形態では、当該親和性は、１．３９～０．５９ｎＭの範囲内にある。好ましい一実施形態では、ＢＴ４７４細胞上のＥＲＢＢ３に対する当該第２の抗原結合部位の親和性は、２．０ｎＭ以下、より好ましくは１．５ｎＭ以下、より好ましくは１．０ｎＭ以下、より好ましくは０．５ｎＭ以下、より好ましくは０．３１ｎＭ以下、より好ましくは０．２３ｎＭ以下である。一実施形態では、当該親和性は、０．３１～０．１５ｎＭの範囲内にある。上記の親和性は、ＷＯ２０１５／１３０１７３の実施例に記載されるように、好ましくは、定常状態の細胞親和性測定を使用して測定され、細胞は、細胞結合放射能が測定された後、放射性標識抗体を使用して４℃でインキュベートされる。

ＥＲＢＢ２陽性細胞に対する当該第１の抗原結合部位の親和性（ＫＤ）は、好ましくは５．０ｎＭ以下、より好ましくは４．５ｎＭ以下、より好ましくは３．９ｎＭ以下である。好ましい一実施形態では、ＳＫ ＢＲ３細胞上のＥＲＢＢ２に対する当該第１の抗原結合部位の親和性は、５．０ｎＭ以下、好ましくは４．５ｎＭ以下、より好ましくは４．０ｎＭ以下、より好ましくは３．５ｎＭ以下、より好ましくは３．０ｎＭ以下、より好ましくは２．３ｎＭ以下である。一実施形態では、当該親和性は、３．０～１．６ｎＭの範囲内にある。好ましい一実施形態では、ＢＴ４７４細胞上のＥＲＢＢ２に対する当該第１の抗原結合部位の親和性は、５．０ｎＭ以下、好ましくは４．５ｎＭ以下、より好ましくは３．９ｎＭ以下である。一実施形態では、当該親和性は、４．５～３．３ｎＭの範囲内にある。上記の親和性は、ＷＯ２０１５／１３０１７３の実施例に記載されるように、好ましくは、定常状態の細胞親和性測定を使用して測定され、細胞は、細胞結合放射能が測定された後、放射性標識抗体を使用して４℃でインキュベートされる。

好ましくは、開示された方法において使用される二重特異性抗体は、心筋細胞の生存に顕著に影響を及ぼさない。心毒性は、ＥＲＢＢ２標的化療法における既知の危険因子であり、トラスツズマブをアントラサイクリンと併せて使用する場合、合併症の頻度が増加し、それによって心臓ストレスを誘導する。

本明細書に開示される二重特異性抗体は、好ましくは、ヒトにおいて使用される。したがって、好ましい抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体である。ポリペプチドに対するヒトの忍容は、多くの異なる態様によって管理される。Ｔ細胞媒介する、Ｂ細胞媒介する、又は他の免疫は、ポリペプチドに対するヒトの忍容に包含される変数のうちの１つである。二重特異性抗体の定常領域は、好ましくは、ヒト定常領域である。定常領域は、天然に生じるヒト抗体の定常領域と１つ以上、好ましくは１０個以下、好ましくは５つ以下のアミノ酸差を含有し得る。定常部分が、天然に生じるヒト抗体に完全に由来することが好ましい。本明細書で産生される様々な抗体は、ヒト抗体可変ドメインライブラリに由来する。このように、これらの可変ドメインは、ヒトである。独自のＣＤＲ領域は、ヒトに由来し得るか、合成され得るか、又は別の生物に由来し得る。可変領域は、天然に生じるヒト抗体の可変領域のアミノ酸配列と同一であるが、ＣＤＲ領域については、ヒト可変領域とみなされる。抗体中のＥＲＢＢ２結合ＶＨ、ＥＲＢＢ３結合ＶＨ、又は軽鎖の可変領域は、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列の可能な差をカウントしない、天然に生じるヒト抗体の可変領域と１つ以上、好ましくは、１０個以下、好ましくは、５つ以下のアミノ酸の差を含有し得る。かかる変異はまた、体細胞超変異の文脈においても自然に生じる。

抗体は、少なくとも重鎖可変領域に関して、様々な動物種に由来し得る。そのような例えば、マウス重鎖可変領域をヒト化することが一般的な慣行である。これが達成され得る様々な方法があり、その中には、マウス重鎖可変領域の３Ｄ構造に一致する３Ｄ構造を有するヒト重鎖可変領域へのＣＤＲ移植；好ましくは、マウス重鎖可変領域から既知の又は疑わしいＴ細胞又はＢ細胞エピトープを除去することによって行われる、マウス重鎖可変領域の脱免疫がある。この除去は、典型的には、エピトープの配列は、それがもはやＴ細胞又はＢ細胞エピトープではないように修飾されるように、エピトープ中のアミノ酸のうちの１つ以上を別の（典型的には保存的な）アミノ酸に置換することによって行われる。

かかる脱免疫化マウス重鎖可変領域は、元のマウス重鎖可変領域よりもヒトにおいて免疫原性が低い。好ましくは、可変領域又はドメインは、例えば、ベニヤリングされるなど、更にヒト化される。ベニヤリング技術を使用することにより、免疫系によって容易に遭遇される外部残基を選択的にヒト残基に置き換えて、弱免疫原性又は実質的に非免疫原性のベニヤリング表面のいずれかを含むハイブリッド分子を提供する。本発明で使用される動物は、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、霊長類、最も好ましくは、ヒトである。

本明細書に開示される二重特異性抗体は、好ましくは、ヒト抗体の定常領域を含む。重鎖定常ドメインの違いによって、抗体は５つのクラス又はアイソタイプ：ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥに群分けされる。これらのクラス又はアイソタイプは、対応するギリシャ文字で命名された当該重鎖のうちの少なくとも１つを含む。好ましくは、定常領域は、ＩｇＧ定常領域、より好ましくは、ＩｇＧ１定常領域、好ましくは、変異型ＩｇＧ１定常領域を含む。例えば、アロタイプＧ１ｍ１、１７、及びＧ１ｍ３など、ＩｇＧ１の定常領域のいくつかのバリエーションが天然に生じ、及び／又は結果として得られる抗体の免疫学的特性を変化させることなく許容される。典型的には、約１～１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせが、定常領域内で許容される。

本明細書で開示される好ましい二重特異性抗体は、
－ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３配列、好ましくは少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、又は少なくとも重鎖可変領域配列、あるいは、列挙された重鎖可変領域から多くとも１５個のアミノ酸、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列、並びに／あるいは
－ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３配列、好ましくは少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列、又は少なくとも重鎖可変領域配列、あるいは、列挙された重鎖可変領域から多くとも１５個のアミノ酸、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含む。

ＣＤＲ配列は、例えば、最適化の目的で、好ましくは抗体の結合効率又は安定性を改善するために変更される。最適化は、例えば、結果として得られる抗体の安定性及び／又は結合親和性が好ましくは験され、かつ改善されたＥＲＢＢ２又はＥＲＢＢ３特異的ＣＤＲ配列が好ましくは選択された後に、変異誘発手順によって実施される。当業者は、少なくとも１つの改変されたＣＤＲ配列を含む抗体バリアントを良好に生成することができる。例えば、保存的アミノ酸置換が適用される。保存的アミノ酸置換の例としては、１つの疎水性残基、例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、又はメチオニンを別の疎水性残基への置換、及び１つの極性残基の別の極性残基への置換、例えば、アルギニンのリジンへの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸への置換、又はグルタミンのアスパラギンへの置換が挙げられる。

好ましい抗体は、ＥＲＢＢ２に結合する可変ドメインを含み、当該可変ドメインのＶＨ鎖は、ＶＨ鎖ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８（ヒト化されたＭＦ２９７１である）、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１（ヒト化されたＭＦ３００４である）、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８のアミノ酸配列を含むか、又は上記のＶＨ鎖配列に関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換若しくはそれらの組み合わせを有する、ＶＨ鎖ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８（ヒト化されたＭＦ２９７１である）、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１（ヒト化されたＭＦ３００４である）、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８を含む。ＥＲＢＢ２に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、好ましくは、以下のアミノ酸配列を含む：
－ＭＦ１８４９、又は
－ＭＦ２９７１又はそのヒト化バージョン（当該ヒト化バージョンが、好ましくはＭＦ３９５８のアミノ酸配列を含む）、又は
－ＭＦ３００４又はそのヒト化バージョン（当該ヒト化バージョンが、好ましくはＭＦ３９９１のアミノ酸配列を含む）。一実施形態では、ＥＲＢＢ２に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、ＶＨ鎖ＭＦ１８４９のアミノ酸配列；又はＭＦ２９７１若しくはそのヒト化バージョン（当該ヒト化バージョンは、好ましくは、ＭＦ３９５８のアミノ酸配列を含む）；又はＭＦ３００４若しくはそのヒト化バージョン（当該ヒト化バージョンは、好ましくは、ＭＦ３９９１のアミノ酸配列を含む）含み、列挙されたＶＨ配列は、それぞれの配列に関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有する。好ましい実施形態では、ＥＲＢＢ２に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、ＭＦ３９５８のアミノ酸配列を含むか、又はＶＨ鎖配列に関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換若しくはそれらの組み合わせを有するＭＦ３９５８のアミノ酸配列を含む。

ＥＲＢＢ３に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、好ましくは、ＶＨ鎖ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４のアミノ酸配列を含むか、又はＶＨ鎖配列に関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換若しくはそれらの組み合わせを有するＶＨ鎖ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４のアミノ酸配列を有する。ＥＲＢＢ３に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、好ましくは、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０６１、若しくはＭＦ６０６５のアミノ酸配列を含むか、又は、それぞれのＶＨ鎖配列に関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換若しくはそれらの組み合わせを有するＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０６１、若しくはＭＦ６０６５のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＥＲＢＢ３に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、ＭＦ３１７８のアミノ酸配列を含むか、又はＶＨ鎖配列に関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９若しくは１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換若しくはそれらの組み合わせを有するＭＦ３１７８のアミノ酸配列を含む。好ましくは、上記のアミノ酸挿入、欠失及び置換は、ＣＤＲ３領域に存在しない。上記のアミノ酸挿入、欠失及び置換はまた、好ましくは、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域に存在しない。上記のアミノ酸挿入、欠失及び置換はまた、好ましくは、ＦＲ４領域に存在しない。

好ましくは、抗体は、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７１、ＭＦ３９５８、ＭＦ３００４、又はＭＦ３９９１の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、最も好ましくは、ＭＦ３９５８の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。当該抗体は、好ましくは、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０６１、又はＭＦ６０６５の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、最も好ましくは、ＭＦ３１７８の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。

好ましくは、ＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域は、当該ＶＨに関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有するＶＨ鎖ＭＦ３９５８のアミノ酸配列を含む（好ましくは、当該挿入、欠失、置換は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３に存在しない）。これらは、好ましくは、ＦＲ４領域に存在しない。アミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。

好ましくは、ＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域は、当該ＶＨに関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有するＶＨ鎖ＭＦ３１７８のアミノ酸配列を含む。１つ以上のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせは、好ましくは、ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域に存在しない。これらは、好ましくは、ＦＲ４領域に存在しない。アミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。

好ましくは、ＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域は、当該ＶＨに関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有するＶＨ鎖ＭＦ３９９１のアミノ酸配列を含む（好ましくは、当該挿入、欠失、置換は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３に存在しない）。これらは、好ましくは、ＦＲ４領域に存在しない。アミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。

好ましくは、ＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域は、当該ＶＨに関して、多くとも１５個、好ましくは多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個、より好ましくは多くとも１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換又はそれらの組み合わせを有するＶＨ鎖ＭＦ３１７８のアミノ酸配列を含む。１つ以上のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせは、好ましくは、ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域に存在しない。これらは、好ましくは、ＦＲ４領域に存在しない。アミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換である。

好ましくは、抗体の第１の抗原結合部位は、ＭＦ３９５８の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又はＭＦ３９５８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列から多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、当該第２の抗原結合部位は、ＭＦ３１７８の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又はＭＦ３１７８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列から多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。

好ましくは、二重特異性抗体は、ｉ）ＭＦ３９５８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域並びに軽鎖可変領域を含む第１の抗原結合部位と、ｉｉ）ＭＦ３１７８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域並びに軽鎖可変領域を含む第２の抗原結合部位と、を含む。

好ましくは、ＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域は、ＭＦ３９５８配列を有し、ＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域は、ＭＦ３１７８配列を有する。この組み合わせは、ＰＢ４１８８抗体とも称される。好ましくは、ＰＢ４１８８抗体は、脱フコシル化されている。

好ましくは、二重特異性抗体は、図８ａに示す「ＥＲＢＢ２結合のための重鎖」及び図８ｂに示す「ＥＲＢＢ３結合のための重鎖」を含む。

好ましくは、二重特異性抗体の抗原結合部位は、本明細書で定義される共通軽鎖、好ましくは生殖系列共通軽鎖、好ましくは再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１、又はそれらの断片若しくは機能的誘導体（ｉｍｇｔ．ｏｒｇのＩＭＧＴデータベースワールドワイドウェブによる命名）を含む。再配列された生殖系列ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１、ＩＧＫＶ１－３９／ＩＧＫＪ１、ｈｕＶκ１－３９軽鎖又は短いｈｕＶκ１－３９という用語が使用される。軽鎖は、１、２、３、４又は５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを有し得る。言及された１、２、３、４又は５個のアミノ酸置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換であり、挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせは、好ましくは、ＶＬ鎖のＣＤＲ３領域に存在せず、好ましくは、ＶＬ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域又はＦＲ４領域に存在しない。好ましくは、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位は、同じ軽鎖可変領域、又はむしろ共通軽鎖を含む。好ましくは、軽鎖可変領域は、配列（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）を有するＣＤＲ１、配列（ＡＡＳＳＬＱＳ）を有するＣＤＲ２及び配列（ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ）を有するＣＤＲ３を含む。好ましくは、軽鎖可変領域は、図６に示される共通軽鎖配列を含む。

二重特異性抗体を産生するための様々な方法が利用可能であり、ＷＯ２０１５／１３０１７３で論じられている。１つの方法は、細胞における２つの異なる重鎖及び２つの異なる軽鎖の発現を含み、細胞によって産生される抗体を収集する。このようにして産生された抗体は、典型的には、重鎖及び軽鎖の異なる組み合わせを有する抗体の集合を含有し、そのうちのいくつかは、所望の二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、その後、収集物から精製され得る。

細胞によって産生される他の抗体に対する二重特異性の比率は、様々な方法で増加され得る。好ましくは、比率は、細胞内で２つの異なる軽鎖ではなく、２つの本質的に同一の軽鎖を発現することによって増加される。この概念は、当技術分野では、「共通軽鎖」法とも称される。本質的に同一の軽鎖が、異なる抗原結合部位及び併存する異なる結合特性を有する可変ドメインの形成を可能にする２つの異なる重鎖とともに作用する場合、細胞によって産生される他の抗体に対する二重特異性抗体の比率は、２つの異なる軽鎖の発現に対して顕著に改善される。細胞によって産生される二重特異性抗体の比率は、２つの異なる重鎖の互いの対合を、２つの同一の重鎖の対合に対して刺激することによって更に改善され得る。当該技術分野では、かかる重鎖のヘテロ二量体化が達成され得る様々な方法が記載されている。好ましい方法は、ＰＣＴ出願番号第ＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４号（ＷＯ２０１３／１５７９５４Ａ１）に記載されており、それは参照により本明細書に組み込まれる。単一細胞から二重特異性抗体を産生するための方法及び手段が開示されており、それにより、単一特異性抗体の形成よりも二重特異性抗体の形成を有利にする手段が提供される。

明確さ及び簡潔な説明の目的のために、特徴は、同じ又は別個の実施形態の一部として本明細書に記載されるが、本発明の範囲は、記載される特徴の全て又はいくつかの組み合わせを有する実施形態を含み得ることが理解されるであろう。

項
１．ＥＲＢＢ３変異を有するがんの治療を必要とする対象におけるその治療の方法における使用のための、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む、二重特異性抗体。
２．ＥＲＢＢ３変異を有するがんを有する対象の治療の方法であって、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体を投与することを含む、方法。
３．二重特異性抗体が、ＥＲＢＢ２のドメインＩに結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３のドメインＩＩＩに結合する第２の抗原結合部位と、を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
４．二重特異性抗体が、
ｉ）ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列から多くとも３つのアミノ酸、好ましくは多くとも２つのアミノ酸、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ配列を含み、かつ／又は
ｉｉ）ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列から多くとも３つアミノ酸、好ましくは多くとも２つのアミノ酸、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ配列を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
５．二重特異性抗体が、
ｉ）ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８の重鎖可変領域配列からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８の重鎖可変領域配列から多くとも１５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含み、かつ／又は
ｉｉ）ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４の重鎖可変領域配列からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域配列を含むか、又は当該抗体が、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４の重鎖可変領域配列から多くとも１５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
６．二重特異性抗体が、重鎖可変領域ＭＦ３９５８及びＭＦ３１７８を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
７．二重特異性抗体が、当該第１の抗原結合部位を含む可変ドメインを含み、当該二重特異性抗体の当該第２の抗原結合部位を含む可変ドメインが、好ましくは、ＫＡＢＡＴ番号付けによるか、又はＩＭＧＴ番号付けシステムによる、配列（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）を有するＣＤＲ１、配列（ＡＡＳＳＬＱＳ）を有するＣＤＲ２及び配列（ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ）を有するＣＤＲ３を含み、当該軽鎖可変領域のＣＤＲが、それぞれ、ＱＳＩＳＳＹ、ＡＡＳ及びＱＱＳＹＳＴＰＰＴである、先行項のいずれか一項に記載の方法。
８．ＥＲＢＢ３変異を有するがんが、結腸直腸がん、胃がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）腺がん（アデノ）、ＮＳＣＬＣ扁平上皮がん、腎がん、黒色腫、卵巣がん、肺大細胞がん、食道がん、小細胞肺がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、乳がん、ホルモン陽性乳がん、膠芽細胞腫、及び頭頸部がん、胃腺がん又は食道胃がん、膵臓がん、膵管腺がん、肉腫、膀胱がん、胆嚢がん、頭頸部がん、前立腺がん、子宮／子宮内膜がん、浸潤性粘液腺がんを含む非小細胞肺がんなどの肺がんである、先行項のいずれか一項に記載の方法。
９．ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ３のドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶにおける変異を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１０．ＥＲＢＢ３変異が、細胞内ドメインにおける、好ましくはチロシンキナーゼドメインにおける、好ましくは、７１０～９６４の範囲のアミノ酸残基に関与する、好ましくは、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５、又はＥ９２８位での、変異を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１１．ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド非依存性ヘテロ二量体化を引き起こす変異を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１２．変異が、ＰＩ３Ｋ経路を促進する、項１１に記載の方法。
１３．ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ３の細胞外ドメインにおける変異を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１４．ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ３の細胞内ドメインにおける変異を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１５．ＥＲＢＢ３における変異が、配列番号１に記載の非変異配列に対する変異である、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１６．ＥＲＢＢ３変異が、以下の変異
Ｍ６０Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｍ９１Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｒ１０３Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）、
Ｖ１０４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬ又はＭである）、
Ｒ１３５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＣである）、
Ｆ２１９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬである）、
Ｈ２２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＱである）、
Ａ２３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＶである）、
Ｐ２６２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨ又はＬ又はＳである）、
Ｇ２８４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｄ２９７Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＹ又はＡ又はＨ又はＮ又はＶである）、
Ｋ３２９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＥ又はＩ又はＴである）、
Ｅ３３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｔ３５５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＡ又はＩ又はＰである）、
Ｒ４７５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＷである）、
Ｑ８０９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｓ８４６Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｑ８６５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨである）、
Ｅ９２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）のうちの１つ以上を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１７．ＥＲＢＢ３が、Ｒ４２６で変異を有しない、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１８．がんが、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、及びＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子における検出可能な変異を欠く、先行項のいずれか一項に記載の方法。
１９．がんが、ｃ－ＭＥＴ、ｃ－ＭＹＣ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、及びＭＤＭ２増幅を含む群から選択される１つ以上の遺伝子における検出可能な増幅を欠く、先行項のいずれか一項に記載の方法。
２０．がんが、検出可能なＰＴＥＮ損失を有しない、先行項のいずれか一項に記載の方法。
２１．二重特異性抗体の投与が、当該対象におけるＥＲＢＢ３変異を有するがんの治療のための第一選択療法を含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
２２．がんが、対象が前の治療を受けた後に進行した、項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
２３．前の治療が、化学療法、チェックポイント阻害剤療法（抗ＰＤ１及び抗ＰＤ－Ｌ１承認療法並びに臨床開発における適用可能な療法を含む）、抗ＥＲＢＢ２若しくは抗ＥＲＢＢ３若しくは抗ＶＥＧＦＲ２（血管内皮成長因子受容体２）、又はＥＲＢＢ２若しくはＶＥＧＦＲ２－ＴＩＥ２のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）での前の治療、あるいはＴＫＩ又は上記のうちのいずれかの組み合わせを含む、項２２に記載の方法。
２４．化学療法が、ゲムシタビン、カペシタビン、カルボプラチン、ドセタキセル若しくはパクリタキセルなどのタキサン、５－フルオロウラシル（放射線療法の有無にかかわらず）、ビノレルビン、カルムスチン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、ビンブラスチン、シスプラチン（又はペメトレキセド）、オキサリプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ビンデシン、エトポシド、フォルフォックス（Ｆｏｌｆｏｘ）（すなわち、５－フルオロウラシル、ロイコボリン、及びオキサリプラチンの組み合わせ）若しくはフォルフィリ（Ｆｏｌｆｉｒｉ）（すなわち、ロイコボリン、５－フルオロウラシル及びイリノテカンの組み合わせ）、フォルフィリノックス（Ｆｏｌｆｉｒｉｎｏｘ）（ロイコボリン、５－フルオロウラシル、イリノテカン及びオキサリプラチンの組み合わせ）、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項２３に記載の方法。
２５．本発明によるチェックポイント阻害剤療法が、抗ＰＤ１、抗ＰＤ－Ｌ１、及び抗ＣＴＬＡ４治療部分を含み、好ましくは、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ若しくはセミプリマブ、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項２３に記載の方法。
２６．ＴＫＩが、ラパチニブ、カネルチニブ、ネラチニブ、ツカチニブ（イルビニチニブ（ｉｒｂｉｎｉｔｉｎｉｂ））、ＣＰ－７２４７１４、タルロキシチニブ（ｔａｒｌｏｘｉｔｉｎｉｂ）、ムブリチニブ、アファチニブ、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）、及びダコミチニブ、アファチニブ、又はそれらの任意の組み合わせである、項２３に記載の方法。
２７．ＶＥＧＦＲ２標的化された治療が、ラムシルマブ又はレゴラフェニブである、項２３に記載の方法。
２８．がんが、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ａ２３２Ｖを含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
２９．がんが、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ａ２３２Ｖを含む膀胱がんである、先行項のいずれか一項に記載の方法。
３０．がんが、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ｖ１０４Ｍを含む、先行項のいずれか一項に記載の方法。
３１．がんが、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ｖ１０４Ｍを含む、明細胞がんなどの卵巣がんである、先行項のいずれか一項に記載の方法。

本明細書で使用される場合、Ｘが独立して数字０～９である「ＭＦＸＸＸＸ」は、可変ドメインを含むＦａｂを指し、ＶＨは、図８に示される４桁によって特定されるアミノ酸配列を有する。別段の指示がない限り、軽鎖可変領域は、典型的には、図６ｂの配列を有する。実施例における軽鎖定常領域は、図６ｃに示される配列を有する。「ＭＦＸＸＸＸ ＶＨ」は、４桁で識別されるＶＨのアミノ酸配列を指す。ＭＦは、更に、軽鎖の定常領域と、通常、軽鎖の定常領域と相互作用する重鎖の定常領域と、を含む。重鎖のＶＨ／可変領域は異なり、典型的には、ＣＨ３領域も異なり、重鎖の一方はそのＣＨ３ドメインのＫＫ変異を有し、他方はそのＣＨ３ドメインの相補的ＤＥ変異を有する（参考ＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４（ＷＯ２０１３／１５７９５４として公開）、並びに図７ｄ及び図７ｅを参照されたい）。実施例における二重特異性抗体は、図７に示されるＫＫ／ＤＥ ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ１ドメインを有するＦｃ尾部、図６ａに示される共通軽鎖、及びＭＦ番号によって指定されるＶＨを有する。

実施例１：
ＥＲＢＢ２発現ＢＡＦ３細胞の生存を誘導するＥＲＢＢ３変異の能力、及びＥＲＢＢ２－ＢＡＦ３細胞の変異体ＥＲＢＢ３誘導生存を戻す、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を含むＥＲＢＢ２×ＥＲＢＢ３二重特異性抗体の能力は、Ｊａｉｓｗａｌ ｅｔ ａｌ．Ｖｏｌ．２３，Ｉｓｓｕｅ ５，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ（２０１３）に記載されるように本質的に評価され、実施される。

ＥＲＢＢ２：ＢＡＦ３－ＥＲＢＢ２（ＷＴ）／ＥＲＢＢ３（ＷＴ）で実施されたヘレグリン（ＨＲＧ）滴定で、ＥＲＢＢ３ ＢＡＦ３及び１９点変異細胞株を作製する。

ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を含むＥＲＢＢ２×ＥＲＢＢ３二重特異性抗体滴定を、最大生存刺激をもたらすＨＲＧ濃度（有効濃度、ＥＣ１００）の存在下で、ＢＡＦ３－ＥＲＢＢ２（ＷＴ）／ＥＲＢＢ３（ＷＴ）に対して実施する。

モデル系は、ＥＲＢＢ２×ＥＲＢＢ３二重特異性抗体（ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８（前の実験で決定したＥＣ１００）を含む）で、ＷＴ及び変異細胞株で処理される。

プロジェクトは以下からなる：
１．ＥＲＢＢ２－ｗｔ及びＥＲＢＢ３－ｗｔの両方を発現するＢＡＦ３細胞ヘレグリン滴定のヘレグリン滴定曲線は、合計９濃度で、０．３ｎｇ／ｍｌから開始する。
２．ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を含むＥＲＢＢ２×ＥＲＢＢ３二重特異性抗体の滴定により、ステップ１で決定された、ＥＣ１００でのヘレグリンの存在下で、ＥＲＢＢ２－ｗｔ及びＥＲＢＢ３－ｗｔの両方を発現するＢＡＦ３細胞について、曲線を描く。
ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８については、ＢＡＦ３－ＥＲＢＢ２（ＷＴ）／ＥＲＢＢ３（ＷＴ）に対して、合計９濃度で、０．０３ｎｇ／ｍｌからの開始濃度を使用する。
３．ＥＲＢＢ３変異体構築物が生成され、ＥＲＢＢ２発現ＢＡＦ３中でＥＲＢＢ３変異体構築物を発現する。全ての細胞株におけるＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３の両方の発現レベルは、ＦＡＣＳによって検証される。
以下のＥＲＢＢ３変異細胞株を作製する：
Ａ２３２Ｖ
Ｄ２９７Ｙ
Ｅ３３２Ｋ
Ｅ９２８Ｇ
Ｆ２１９Ｌ
Ｇ２８４Ｒ
Ｈ２２８Ｑ
Ｋ３２９Ｅ
Ｍ６０Ｋ
Ｍ９１Ｉ
Ｑ８０９Ｒ
Ｑ８６５Ｈ
Ｒ１０３Ｇ
Ｒ１３５Ｃ
Ｒ４７５Ｗ
Ｓ８４６Ｉ
Ｔ３５５Ｉ
Ｖ１０４Ｌ
Ｖ１０４Ｍ
４．モデル系を、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８（ＥＣ１００）を含むＥＲＢＢ２×ＥＲＢＢ３二重特異性抗体で処理する。生成された全てのモデル系を、ステップ２で決定されたＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８（ＥＣ１００）及びＰＢＳ（ビヒクル対照）で処理する。二重特異性抗体での処理は、示されるように、Ｈｅｒ３変異体での形質転換細胞株における細胞増殖の阻害を示す。

実施例２：
ＥＲＢＢ３変異を有する固形腫瘍患者における、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３を標的とする全長ＩｇＧ１二重特異性抗体である二重特異性抗体ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を用いた臨床研究
研究期間：
研究の用量漸増部（第１部）では、２８人の患者が募集された。研究の第２部は、用量拡大段階である。第２部の合計期間は約２５～３２ヶ月であるが、実際の期間は、いくつかの変数、例えば、全体的な対象の募集率の影響を受ける。

患者数：
第１部には２８人の患者が登録された。第２部について、少なくとも２０人の評価可能な患者、及び最大約４０人の患者が、以下のうちのいずれか１つを含むＥＲＢＢ３変異を含む、文書化されたＥＲＢＢ３変異を有する群に登録され得る：
Ｍ６０Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｍ９１Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｒ１０３Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）、
Ｖ１０４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬ又はＭである）、
Ｒ１３５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＣである）、
Ｆ２１９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬである）、
Ｈ２２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＱである）、
Ａ２３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＶである）、
Ｐ２６２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨ又はＬ又はＳである）
Ｇ２８４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｄ２９７Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＹ又はＡ又はＨ又はＮ又はＶである）、
Ｋ３２９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＥ又はＩ又はＴである）、
Ｅ３３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
Ｔ３５５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＡ又はＩ又はＰである）、
Ｒ４７５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＷである）、
Ｑ８０９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
Ｓ８４６Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
Ｑ８６５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨである）、
Ｅ９２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）。

好ましくは、患者のがんは、以下のＥＲＢＢ３変異、細胞外ドメインにおいて、Ｇ２８４Ｒ、Ｒ０１３Ｇ、Ｖ１０４Ｍ、Ｒ１３５Ｃ、Ａ２３２、Ｄ２９７、Ｔ３５５、又は細胞内ドメインにおいて、Ｅ９２８Ｇ、Ｓ８４６Ｉ、Ｑ８６５Ｈ、又はＱ８０９Ｒを有する。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有する患者のがん細胞は、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＢＲＡＦの以下の発がん性駆動因子を欠いているか、又は細胞は、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、ＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子における発がん性変異の非存在を示す。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を有するがん細胞は、以下のがん増幅ｃ－ＭＥＴ増幅、ｃ－ＭＹＣ増幅、ＥＧＦＲ増幅、ＥＲＢＢ２増幅、ＭＤＭ２増幅を欠く。

好ましくは、ＥＲＢＢ３変異を保有するがん細胞は、ＰＴＥＮ損失を有しない。

疾患の進行以外の理由により研究処置の少なくとも２サイクルを完了しない患者は、有効性について評価可能ではなく、それぞれの群で置き換えられる。

この実施例では、研究の第２部を記載する。

研究の目的：

研究設計
これは、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８の安全性、忍容性、ＰＫ、ＰＤ、免疫原性及び抗腫瘍活性を評価するための第Ｉ／ＩＩ相、非盲検、多施設、多国籍、用量漸増、単一群割り当て研究である。

研究は、２つの部で設計されている：
第１部
研究の第１部には、以下の９つの用量レベルの調査が含まれる：１人の患者のコホートで４０ｍｇ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、及び３人の患者のコホートで２４０ｍｇ、３６０ｍｇ、４８０ｍｇ、６００ｍｇ、７５０ｍｇ、及び９００ｍｇ。ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８は、最初に、３週間の処置サイクルの１日目に約６０分間にわたって投与された。第１部の間、注入期間を２時間に延長し、注入関連反応（ＩＲＲ）を軽減するために、それを最大４時間まで増加させる任意選択を用いた。

用量制限毒性（ＤＬＴ）は、いずれの用量レベルにおいても経験されなかった。十分なＰＫ情報を得るために、６００ｍｇ及び７５０ｍｇのコホートの各々に３人の患者を追加した。

９００ｍｇの用量レベルでＭＴＤに達しなかったため、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８－ＣＬ０１のデータレビュー委員会（ＤＲＣ）は、累積安全性、利用可能なＰＫデータ及びＰＫシミュレーションに基づいて、７５０ｍｇの用量レベルを研究のＲＰ２Ｄとして割り当てることを決定した。

第２部
第２部には、選択された患者集団の拡大群における、選択された用量レベルのＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８の安全性及び忍容性の更なる特徴付け、並びにＣＲ、ＰＲ、又は耐久性ＳＤ（期間において少なくとも１２週間のＳＤ）を有する患者の割合として定義されるＣＢＲの評価が含まれる。

最初の２サイクルでは毎週４００ｍｇの一定用量、初回投与では８００ｍｇの負荷用量からなる４週間サイクルを有する毎週の用量レジメンを、新たに募集された患者において評価した。サイクル３から、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８は、毎週４００ｍｇの用量で３週間、続く１週間のオフで投与される。ＩＲＲを軽減するために、必須の前投薬が投与される。しかしながら、コルチコステロイドは、サイクル１の１日目の負荷用量の前にのみ必須であり、ＩＲＲを管理するために治験責任医師の裁量により、後続の注入にのみ使用されるべきである。

代替的に、８００ｍｇの初回投与後に開始される毎週の４００ｍｇの均一用量での一週間サイクルを含む投薬レジメンに従う。３週目から、本発明の二重特異性抗体は、３週間、４００ｍｇの毎週用量、続いて１週間、本発明の二重特異性抗体の投与なしで投与される。

代替的には、４時間にわたる７５０ｍｇの注入の初回投与後に開始される７５０ｍｇの一定用量での隔週サイクル、続く４週間のサイクルでの７５０ｍｇの隔週の２時間注入を含む投与レジメンに従う。更なる代替法は、対象当たり７５０ｍｇの一定用量の３週ごと投与を含む。

毎週のスケジュールの安全性は、処置された最初の５人の患者が少なくとも２つの処置サイクルを完了した後のランイン期間中にレビューされる。ＤＲＣは、グレード３～４の毒性の発生率、ＩＲＲの発生率及び重症度、並びにコンプライアンスに焦点を当てて、全ての安全性データをレビューする。ＤＲＣレビューが毒性が許容できないと結論づけた場合、治験依頼者はコホートごとに十分な数の患者が登録されるまで、３週間サイクル投与レジメンで患者の登録を継続する。

第２部では患者内用量漸増は認められていない。

本研究の第２部で評価される目的の患者集団は以下のとおりである：
・ＥＲＢＢ３変異が記録されている任意の固形腫瘍。

毎週の推奨用量で処置されたコホートごとに最低１０人の患者を含む、少なくとも２０人、及び最大約４０人の患者が各群（Ｃ～Ｆ）に登録され得る。以前は閉鎖されていたコホートが再開される場合がある。

処置の期間
研究の第１部及び第２部の両方の患者は、疾患の進行、死亡、許容できない毒性、又はその他の理由による中止まで処置を継続する場合がある。

データレビュー委員会（ＤＲＣ）：
第１部における全ての用量漸増の決定は、全ての利用可能な安全性データ及びＰＫデータをレビューするために招集されたＤＲＣによって行われた。ＤＲＣの参加者には、治験責任医師（又はその代表者）、治験依頼者の医療ディレクター、研究メディカルモニター、研究医薬品安全性監視医師、研究プロジェクトマネージャー、研究統計学者、必要に応じて招待された専門家（臨床薬理学専門家など）が含まれた。

第２部では、ＤＲＣは、その後の全ての患者の毎週の用量レジメンを拡大する前に、毎週の用量の安全性ランイン期間の完了後のデータをレビューする。

研究評価：
本研究は、最大４週間（２８日間）のスクリーニング期間までの分子事前スクリーニング評価、続く任意の理由で処置を中止又は終了するまでの連続した処置サイクルからなる。第２部の最初の推奨用量で処置された患者の処置サイクル期間は３週間（２１日）であり、第２部の隔週推奨用量で処置された患者の処置サイクル期間は４週間（２８日）である。全ての患者は、処置を中止してから１週間以内に処置終了訪問に参加し、処置終了又は研究中止から３０日後に最終研究訪問に参加する必要がある。

最終研究訪問の完了時に進行していない、又は同意を撤回していない患者は、次の抗がん治療の開始まで、最大２年間（約２年間）３ヶ月ごとに追跡調査を行い、疾患の進行及び／又は生存状態を確認する。

治験中に安全性データ及び利用可能なＰＫ、ＰＤ及び抗腫瘍活性データの継続的な評価が、代替的投薬頻度を評価すべきであるか、又は他の患者集団を第２部で評価すべきであることを示唆する場合、これらの修正は、これらの評価を開始する前にプロトコル修正で明確にされる。

分子事前スクリーニング及びスクリーニング：
分子事前スクリーニングは、該当するＥＲＢＢ３変異、発がん性変異駆動因子の欠如、増幅若しくはＰＴＥＮ損失について分子スクリーニングを実施する資格を有する現地の研究所で、又はかかる能力を有する集中検査を介して実施される。

患者は、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＢＲＡＦを含むがこれらに限定されない別の発がん性駆動因子を欠く該当するＥＲＢＢ３変異を有し、あるいは、細胞は、以下の発がん性増幅、ｃ－ＭＥＴ増幅、ｃ－ＭＹＣ増幅、ＥＧＦＲ増幅、ＥＲＢＢ２増幅、ＭＤＭ２増幅を欠く、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、ＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子の発がん性変異の非存在を示し、ＰＴＥＮ損失を有さないものは、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を含む二重特異性抗体による処置のために選択される。

安全性評価
同時性疾患はベースラインで捕捉され、ＡＥ及び併用療法は研究参加全体を通して監視される。安全性評価には、Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）の性能状態、身体検査（身長及び体重を含む）、バイタルサイン及び心電図（ＥＣＧ）のレビューが含まれる。左心室駆出分画（ＬＶＥＦ）の心機能検査はまた、スクリーニング、サイクル４（又はサイクル５、１日目）の終了、研究訪問の終了、臨床的に示される場合は、研究中の任意の時点でも実施される。検査室評価には、臨床化学、血液学、凝固試験、尿及び妊娠試験が含まれる。サイトカインパネル解析は２０１７年８月１日まで実施されたことに注意されたい。

全てのＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８投与日に、患者は、診療所から退院する前に、観察及びバイタルサインを繰り返すために、注入終了時から少なくとも６０分間（ＰＫ試料が必要な場合はより長い）診療所に留まる必要がある。更なる追加の安全性評価は、臨床的に指示されるように実行される必要があり、必要に応じて、診療所での滞在期間は、治験責任医師の判断に基づいて延長される必要がある。

免疫原性評価
抗ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８抗体の血清力価を、サイクル１、２、３、４の各々について１日目の投薬前、その後４サイクルごとに（サイクル８、１２、１６など）、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８投与の－３日前の窓を有する処置終了訪問及び最終研究訪問で測定する。

薬物動態評価
第１部及び第２部の初期推奨用量スケジュール：サイクル１では、１日目の投薬前、注入終了時（ＥＯＩ）、及びＥＯＩの１、２、４、８、２４時間後、次いで４日目（又は３日目）、８日目及び１５日目に、ＰＫ分析のために血液試料を採取する。サイクル２～４では、投薬前及びＥＯＩ血液試料のみが採取される。

第２部の毎週の推奨用量スケジュール：サイクル１では、血液試料を、１日目の投薬前、ＥＯＩ、ＥＯＩの２、４、２４時後、次いで、８日目及び１５日目の投薬前、２２日目の投薬前及びＥＯＩに、ＰＫ分析のために採取する。サイクル２及び３では、１５日目に投薬前及びＥＯＩの血液試料を採取する。サイクル４では、１日目に投薬前の血液試料を採取し、１５日目に投薬前及びＥＯＩに採取する。その後２サイクルごと（サイクル６、８、１０など）に、１５日目に投薬前の血液試料を採取する。

腫瘍評価
腫瘍評価は、現地の治験責任医師によりＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって評価される。画像化は、スクリーニング時に、及び３週間サイクルのレジメンを受けた患者の治療の２サイクルごとの終了時に、及び隔週投薬レジメンを受けた患者の８週間ごとに取得される。

バイオマーカー及び薬力学評価
記録保管された又は既存の腫瘍組織の可用性、更なる腫瘍試料の同意、及び特定のバイオマーカー試験の同意に応じて、記録保管された及び／又は新鮮な腫瘍試料材料及び／又は血液（液体生検）に対して、一連のバイオマーカー及び薬力学的試験が実施される。

十分な試料が利用可能である場合、以下の候補バイオマーカーを評価する：
・ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ２：ＨＥＲ３二量体化、リン酸化されたＨＥＲ２（ｐＨＥＲ２）及びＨＥＲ３（ｐＨＥＲ３）、並びにヘレグリン、
・循環血漿腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）及び腫瘍試料ＤＮＡ（利用可能性に応じて）を使用して、ＨＥＲ２及びＨＥＲ３シグナル伝達に関連するものを含むがん遺伝子における変異を調べる。
・ＭＡＰＫ及びＡＫＴシグナル伝達経路におけるリン酸化された分子
・Ｆｃγ受容体多型、
・ＨＥＲ２についての循環腫瘍細胞、
・ＥＲＢＢ３変異

生殖細胞系ＤＮＡ評価は含まれていない（Ｆｃγ受容体多型を除く）。

ベースラインでは、患者は、必須の腫瘍試料組織、好ましくは、新鮮な組織又は記録保存の組織由来のブロックを提供することが要求される。治験依頼者は、新鮮な組織の好みを示す。記録保存は許容され、１年以内でなければならないＮＳＣＬＣ以外のスクリーニングから２年以内に採取する必要がある。更に、患者には、サイクル４の終了時及び処置終了時に腫瘍試料／生検を提供することが要求される。

これらの時点では、液体生検試験の目的で血液試料も採取される。

適格基準：
本研究では、ＥＲＢＢ３変異陽性がん、発がん性変異の欠如、増幅、及びＰＴＥＮ喪失を有する患者を登録した。

第２部の一般的な選択基準
１．１８歳以上、
２．ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１による少なくとも１つの測定可能な病変又はＨ群の限られた数の患者について評価可能な病変、
３．ＥＣＯＧ０又は１の性能状態、
４．少なくとも１２週間の推定寿命、
５．脱毛症、グレード２の感覚神経毒性、又は治験責任医師の意見で治験薬に関連する有害事象の評価に影響を及ぼさないと思われるその他の毒性を除き、グレード１以下（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３で定義）に解消された以前の抗がん療法の結果として発生した毒性、
６．ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８の最初の用量前の次の間隔内の抗がん剤又は治験薬での処置：
ａ．研究登録前の＞１４日又は＞５半減期のいずれか短い方。
ｂ．放射線療法のための＞１４日。注：１週間未満のウォッシュアウト期間は、治験依頼者ＡＰＰでの非ＣＮＳ疾患への緩和放射線の場合にのみ許可される
７．患者は、以前の手術又は他の処置又は合併症から、グレード２以下、又は治験責任医師の意見では治験薬に関連する有害事象の評価に影響を及ぼさないというベースライン状態に回復している、
８．スクリーニング時の検査室値：
ａ．コロニー刺激因子サポートなしの絶対好中球数が≧１．５×１０^９／Ｌ、
ｂ．血小板≧１００×１０^９／Ｌ、
ｃ．ヘモグロビン≧８ｇ／ｄＬ又は≧２．２ｍｍｏｌ／Ｌ（輸血に依存しない）、
ｄ．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）≦３×正常上限（ＵＬＮ）及び総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ；転移性肝臓関与の場合、ＡＬＴ／ＡＳＴ≦５×ＵＬＮ及び総ビリルビン≦２×ＵＬＮが許容され；ギルバート症候群の前件の場合、総ビリルビン≦３．０×ＵＬＮ又は直接ビリルビン≦１．５×ＵＬＮの場合が許容される、
ｅ．ＣｏｃｋｒｏｆｔＧａｕｌｔ式に基づいて＞３０ｍＬ／分の推定糸球体濾過速度（ＧＦＲ）、
９．ベースラインで必須腫瘍生検試料（ＦＦＰＥ）、好ましくはブロックを提供することができる。安全／可能であれば、新鮮なＦＦＰＥ生検試料が好ましい、記録保存組織は許容される（好ましくは２年以下）、注：アファチニブ又は他のＨＥＲ標的化剤を受けた患者については、獲得した耐性のメカニズムを評価するために、最後の処置ラインの後に採取された生検が強く好ましい。
１０．スクリーニング中及びサイクル１、１日目の７日以内に妊娠可能性のある女性（≦５０歳の女性又は研究登録前≦１２ヶ月の無月経の病歴として定義）の尿又は血液ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）試験によって定義される陰性の妊娠試験結果、
１１．妊娠可能性のある性的に活発な男性及び女性の患者は、研究の全期間中及びＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８の最終投与後６ヶ月間、効果的な避妊法（例えば、殺精子剤、経口避妊薬又は非経口避妊薬及び／又は子宮内避妊具によるバリア法）を使用することに同意する必要がある。女性患者の不妊症は、患者の医療記録で確認されなければならず、以下のいずれかとして定義されなければならないことに留意されたい：両側卵巣摘出術を伴う外科的子宮摘出術、両側管結紮術、最後の月経が１年超前の自然閉経；最後の月経が１年超前の放射線誘発性卵巣摘出術；最後の月経から１年間隔の化学療法誘発性閉経、
１２．同意は、患者がいつでも損なうことなく撤回できることを理解した、研究固有のスクリーニング手順の前に書面によるインフォームドコンセントを与える能力、
１３．必須及び任意選択のプロトコル要件を理解することができ、研究プロトコル手順を順守する意思及び能力があり、主要なインフォームドコンセント文書に署名している。任意の生検試料採取（組織及び／又は血液）及び長期試料保管については、追加の同意が必要である。

除外基準
１．妊娠中又は授乳中、
２．最初の投薬の予定日までのスクリーニング中に、活性な制御されていない感染症又は３８．５℃を超える原因不明の熱の存在。治験責任医師の裁量により、腫瘍熱又は臨床的に重要ではない軽度の感染症を有する患者を登録する場合がある（すなわち、軽度の上気道感染症）、
３．ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８の構成要素のうちのいずれかに対する既知の過敏症、又は治療用抗体を含む、ヒト又はヒト化モノクローナル抗体に対する重度の過敏症反応の病歴、
４．既知のＨＩＶ、活性Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎、以前にＣ型肝炎の治療を受けたことがあり、検出できないウイルス量を有する患者は的確である、
５．既知の症候性又は不安定な脳転移。無症候性脳転移を有する患者は、転移が少なくとも１ヶ月間放射線学的及び臨床的に安定している場合、参加に適格である。この適応症のためにステロイドを服用している場合、患者は少なくとも１ヶ月間安定した用量を服用している必要がある。
６．軟髄膜転移を有する患者、
７．腫瘍が治癒又は緩和の意図をもって治療され、治験責任医師の意見では、治験依頼者の同意を得て、以前又は同時の悪性腫瘍が、治験薬の安全性及び有効性の評価に影響を及ぼさない限り、皮膚の非基底細胞がん又は子宮頸部のインサイチュがんを除く、以前又は同時の悪性腫瘍、
８．ＮＹＨＡクラスＩＩＩ若しくはＩＶのうっ血性心不全又はＬＶＥＦ＜５０％の存在、あるいは投薬を必要とする重大な心疾患、不安定狭心症、うっ血性心不全、心筋梗塞、又は心室性不整脈の病歴。
９．治験責任医師によって、インフォームドコンセントへの署名、研究への協力若しくは参加、又は結果の解釈を妨げる可能性があると判断されたその他の医学的又は心理的状態の存在。

統計解析：
第１部及び第２部
第２部では、各群についての抗腫瘍及び臨床的有益性の変数を説明的に要約する。必要に応じて、変数はベースラインからの絶対的及び相対的変化の観点で表される。カテゴリデータは、パーセンテージ及び頻度表として表される。

必要に応じて、第１部中にＭＴＤ又はＭＲＤと特定されたものを受けた患者及び第２部で同じ用量を受けた患者からのデータを組み合わせて要約し得、並びに独立して要約し得る。

重篤及び非重篤なＡＥの頻度及び性質は、絶対的及び相対的な頻度で評価され、ＭｅｄＤＲＡ医学辞書に従ってコード化される。

第１部
データ評価は本質的に記述的である。患者の人口統計学、疾患の特徴、並びに薬物動態及び薬力学的変数を各用量レベルで要約する。ＤＬＴの頻度及び性質も、各用量レベルで要約される。

実施例３：
ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３陽性発現、及び適用可能なＥＲＢＢ３変異を含む固形腫瘍を有する患者を、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８で処置した。この研究では、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８が腫瘍の大きさ又は病変を安定させることが示されている。この処置は、更なる腫瘍増殖を防止する。

腫瘍分子プロファイリング：
腫瘍組織の分析は、該当するＥＲＢＢ３変異を示す。加えて、腫瘍ゲノムは、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＢＲＡＦの変異の非存在を示すか、又は細胞は、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、ＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子における変異の非存在を示す。

ＥＲＢＢ３変異を有する腫瘍組織は、以下のがん増幅ｃ－ＭＥＴ増幅、ｃ－ＭＹＣ増幅、ＥＧＦＲ増幅、ＥＲＢＢ２増幅、ＭＤＭ２増幅を欠く。

ＥＲＢＢ３変異を有する腫瘍組織は、ＰＴＥＮ損失を有しない。

二重特異性抗体ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８での処置：
処置は、毎週のレジメンで二重特異性抗体ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を与えられた。最初の用量は、前投薬で投与された。合計８サイクルを、８ヶ月の研究期間中に投与した。

４週間のサイクルを有する毎週の用量レジメンは、最初の２サイクルでは毎週４００ｍｇの一定用量、初回投与では８００ｍｇの負荷用量からなる。サイクル３から、ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８は、毎週４００ｍｇの用量で３週間、続く１週間のオフで投与される。ＩＲＲを軽減するために、必須の前投薬が投与される。しかしながら、コルチコステロイドは、サイクル１の１日目の負荷用量の前にのみ必須であり、ＩＲＲを管理するために治験責任医師の裁量により、後続の注入にのみ使用されるべきである。

有効性：
疾患を、可能であればＰＥＴ／ＣＴスキャン又はＣＴスキャンを使用して、測定可能な疾患で評価した。客観的全応答率（ＯＲＲ）、応答期間（ＤＯＲ）、無進行生存（ＰＦＳ）及び生存を決定するＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１によって評価された抗腫瘍活性及び臨床的利益。４つの腫瘍評価で安定した疾患が報告された（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）。

実施例３の投与レジメンに代わって、薬物は、以下のように隔週投薬スケジュールで提供され得る：
最初の注入では４時間にわたり、その後、４週間サイクルで隔週ごとに各注入で２時間にわたる７５０ｍｇのＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８からなる隔週スケジュール。また、前投薬は、ＩＲＲ（注入関連反応）を管理するために含まれ、全ての注入のための解熱剤及び抗ヒスタミン剤からなる。コルチコステロイドは、１日目のサイクル１用量の前に含まれ、その後、治験責任医師の裁量に従って、ＩＲＲを管理するために投与される。

実施例３の投与計画に代わって、薬物は、以下のように３週ごとの投与スケジュールで提供され得る：
最初の注入では４時間にわたり、その後、４週間サイクルで隔週ごとに各注入で２時間にわたる７５０ｍｇのＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８からなる３週ごとスケジュール。また、前投薬は、ＩＲＲ（注入関連反応）を管理するために含まれ、全ての注入のための解熱剤及び抗ヒスタミン剤からなる。コルチコステロイドは、１日目のサイクル１用量の前に含まれ、その後、治験責任医師の裁量に従って、ＩＲＲを管理するために投与される。

実施例４
ＥＲＲＢ３タンパク質に変異Ａ２３２Ｖを有する膀胱がんと診断された７１歳の男性患者を、実施例２及び３の臨床試験に登録した。処置は、最初の注入では４時間にわたり、その後、４週間サイクルで隔週ごとに各注入で２時間にわたる７５０ｍｇのＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８からなる隔週スケジュールを含んだ。また、前投薬は、ＩＲＲ（注入関連反応）を管理するために含まれ、全ての注入のための解熱剤及び抗ヒスタミン剤からなる。コルチコステロイドは、１日目のサイクル１用量の前に含まれ、その後、治験責任医師の裁量に従って、ＩＲＲを管理するために投与される。

実施例５
ＥＲＢＢ３において変異Ｖ１０４Ｍを有する卵巣明細胞がんと診断された女性患者を、実施例２及び３の臨床試験に登録した。処置は、最初の注入では４時間にわたり、その後、４週間サイクルで隔週ごとに各注入で２時間にわたる７５０ｍｇの結合群ＭＦ３９５８×ＭＦ３１７８を含む二重特異性抗体からなる隔週スケジュールを含んだ。また、前投薬は、ＩＲＲ（注入関連反応）を管理するために含まれ、全ての注入のための解熱剤及び抗ヒスタミン剤からなる。コルチコステロイドは、１日目のサイクル１用量の前に含まれ、その後、治験責任医師の裁量に従って、ＩＲＲを管理するために投与される。

当該二重特異性抗体の投与を開始する前に、患者は集中治療室に入院した。一次応答の評価に続いて、臨床試験研究の一環として、臨床的に関連する活動の二次的特性を評価した。

臨床活動：
患者は、広範な腹膜転移を伴う卵巣がんに起因する悪性腫瘍関連腹水を呈した。当該二重特異性抗体による処置を開始する前に、患者は、翌日にすでに腹水の新たな形成が観察され、大量の腹腔穿刺を週に２回必要とした。当該二重特異性抗体による治療開始後、患者は、治療用傍穿刺の必要性を週に１回に低減し、より良好な全身性能状態（３から２）によって明らかに併発症候が改善した。

指示された時間間隔で以下の量の穿刺を記録した。

二重特異性抗体の最初の投与の３日後に、６リットルの流体を除去した。更に４日後に７リットルの液体を除去し、更に６日後に再び６リットルを除去した。

臨床的及び傍臨床的観察は、本発明の二重特異性抗体の投与の治療効果を明らかにしている。

Claims (31)

1. ＥＲＢＢ３変異を有するがんの治療を必要とする対象におけるその治療の方法における使用のための、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む、二重特異性抗体。
2. ＥＲＢＢ３変異を有するがんを有する対象の治療の方法であって、ＥＲＢＢ２の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３の細胞外部分に結合することができる抗原結合部位と、を含む二重特異性抗体を投与することを含む、方法。
3. 前記二重特異性抗体が、ＥＲＢＢ２のドメインＩに結合する第１の抗原結合部位と、ＥＲＢＢ３のドメインＩＩＩに結合する第２の抗原結合部位と、を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
4. 前記二重特異性抗体が、
   ｉ）ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むか、又は前記抗体が、ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列から多くとも３つのアミノ酸、好ましくは多くとも２つのアミノ酸、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ配列を含み、かつ／又は
   ｉｉ）ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むか、又は前記抗体が、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列から多くとも３つアミノ酸、好ましくは多くとも２つのアミノ酸、好ましくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記二重特異性抗体が、
   ｉ）ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３及びＭＦ１８９８の重鎖可変領域配列からなる群から選択されるＥＲＢＢ２特異的重鎖可変領域配列を含むか、又は前記抗体が、ＭＦ２９２６、ＭＦ２９３０、ＭＦ１８４９、ＭＦ２９７３、ＭＦ３００４、ＭＦ３９５８、ＭＦ２９７１、ＭＦ３０２５、ＭＦ２９１６、ＭＦ３９９１、ＭＦ３０３１、ＭＦ２８８９、ＭＦ２９１３、ＭＦ１８４７、ＭＦ３００１、ＭＦ３００３若しくはＭＦ１８９８の重鎖可変領域配列から多くとも１５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含み、かつ／又は
   ｉｉ）ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３及びＭＦ６０７４の重鎖可変領域配列からなる群から選択されるＥＲＢＢ３特異的重鎖可変領域配列を含むか、又は前記抗体が、ＭＦ３１７８、ＭＦ３１７６、ＭＦ３１６３、ＭＦ３０９９、ＭＦ３３０７、ＭＦ６０５５、ＭＦ６０５６、ＭＦ６０５７、ＭＦ６０５８、ＭＦ６０５９、ＭＦ６０６０、ＭＦ６０６１、ＭＦ６０６２、ＭＦ６０６３、ＭＦ６０６４、ＭＦ６０６５、ＭＦ６０６６、ＭＦ６０６７、ＭＦ６０６８、ＭＦ６０６９、ＭＦ６０７０、ＭＦ６０７１、ＭＦ６０７２、ＭＦ６０７３若しくはＭＦ６０７４の重鎖可変領域配列から多くとも１５個のアミノ酸が異なる重鎖可変領域配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記二重特異性抗体が、重鎖可変領域ＭＦ３９５８及びＭＦ３１７８を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記二重特異性抗体が、前記第１の抗原結合部位を含む可変ドメインを含み、前記二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部位を含む前記可変ドメインが、好ましくは、ＫＡＢＡＴ番号付けによるか、又はＩＭＧＴ番号付けシステムによる、配列（ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ）を有するＣＤＲ１、配列（ＡＡＳＳＬＱＳ）を有するＣＤＲ２及び配列（ＱＱＳＹＳＴＰＰＴ）を有するＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域の前記ＣＤＲが、それぞれ、ＱＳＩＳＳＹ、ＡＡＳ及びＱＱＳＹＳＴＰＰＴである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記ＥＲＢＢ３変異を有するがんが、結腸直腸がん、胃がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）腺がん（アデノ）、ＮＳＣＬＣ扁平上皮がん、腎がん、黒色腫、卵巣がん、肺大細胞がん、食道がん、小細胞肺がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、乳がん、ホルモン陽性乳がん、膠芽細胞腫、及び頭頸部がん、胃腺がん又は食道胃がん、膵臓がん、膵管腺がん、肉腫、膀胱がん、胆嚢がん、頭頸部がん、前立腺がん、子宮／子宮内膜がん、浸潤性粘液腺がんを含む非小細胞肺がんなどの肺がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ３のドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶにおける変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記ＥＲＢＢ３変異が、前記細胞内ドメインにおける、好ましくはチロシンキナーゼドメインにおける、好ましくは、７１０～９６４の範囲のアミノ酸残基に関与する、好ましくは、Ｑ８０９、Ｓ８４６、Ｑ８６５、又はＥ９２８位での、変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ２及びＥＲＢＢ３のリガンド非依存性ヘテロ二量体化を引き起こす変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ＥＲＢＢ３変異が、ＰＩ３Ｋ経路を促進する、請求項１１に記載の方法。
13. 前記ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ３の細胞外ドメインにおける変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記ＥＲＢＢ３変異が、ＥＲＢＢ３の細胞内ドメインにおける変異を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
15. ＥＲＢＢ３における変異が、配列番号１に記載の非変異配列に対する変異である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記ＥＲＢＢ３変異が、以下の変異
    Ｍ６０Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
    Ｍ９１Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
    Ｒ１０３Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）、
    Ｖ１０４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬ又はＭである）、
    Ｒ１３５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＣである）、
    Ｆ２１９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＬである）、
    Ｈ２２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＱである）、
    Ａ２３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＶである）、
    Ｐ２６２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨ又はＬ又はＳである）、
    Ｇ２８４Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
    Ｄ２９７Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＹ又はＡ又はＨ又はＮ又はＶである）、
    Ｋ３２９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＥ又はＩ又はＴである）、
    Ｅ３３２Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＫである）、
    Ｔ３５５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＡ又はＩ又はＰである）、
    Ｒ４７５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＷである）、
    Ｑ８０９Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＲである）、
    Ｓ８４６Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＩである）、
    Ｑ８６５Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＨである）、
    Ｅ９２８Ｎ（Ｎは任意の天然に生じるアミノ酸、好ましくはＧである）のうちの１つ以上を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記ＥＲＢＢ３が、Ｒ４２６で変異を有しない、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記がんが、ＢＲＡＦ、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、ｃＫＩＴ－ＢＲＣＡ１－２、ＭＥＴ、ＲＯＳ、ＲＥＴ、ＡＬＫ、ＡＫＴ１、ＥＲＢＢ４、ＮＦＥ２Ｌ２、ＰＴＰＮ１１、ＦＢＸＷ７、ＮＲＡＳ、ＲＨＯＡ、ＣＴＮＮＢ１、ＨＲＡＳ、ＳＦ３Ｂ１、ＤＩＣＥＲ１、ＫＩＴ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＳＭＡＤ４、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＶＨＬ、ＥＲＢＢ２、ＭＴＯＲ、及びＰＴＥＮを含む群から選択される１つ以上の遺伝子における検出可能な変異を欠く、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記がんが、ｃ－ＭＥＴ、ｃ－ＭＹＣ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＢ２、及びＭＤＭ２増幅を含む群から選択される１つ以上の遺伝子における検出可能な増幅を欠く、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記がんが、検出可能なＰＴＥＮ損失を有しない、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記二重特異性抗体の前記投与が、前記対象におけるＥＲＢＢ３変異を有するがんの治療のための第一選択療法を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記がんが、前記対象が前の治療を受けた後に進行した、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記前の治療が、化学療法、チェックポイント阻害剤療法（抗ＰＤ１及び抗ＰＤ－Ｌ１承認療法並びに臨床開発における適用可能な療法を含む）、抗ＥＲＢＢ２若しくは抗ＥＲＢＢ３若しくは抗ＶＥＧＦＲ２（血管内皮成長因子受容体２）、又はＥＲＢＢ２若しくはＶＥＧＦＲ２－ＴＩＥ２のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）での前の治療、あるいはＴＫＩ又は上記のうちのいずれかの組み合わせを含む、請求項２２に記載の方法。
24. 前記化学療法が、ゲムシタビン、カペシタビン、カルボプラチン、ドセタキセル若しくはパクリタキセルなどのタキサン、５－フルオロウラシル（放射線療法の有無にかかわらず）、ビノレルビン、カルムスチン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、ビンブラスチン、シスプラチン（又はペメトレキセド）、オキサリプラチン、カルボプラチン、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ビンデシン、エトポシド、フォルフォックス（Ｆｏｌｆｏｘ）（すなわち、５－フルオロウラシル、ロイコボリン、及びオキサリプラチンの組み合わせ）若しくはフォルフィリ（Ｆｏｌｆｉｒｉ）（すなわち、ロイコボリン、５－フルオロウラシル及びイリノテカンの組み合わせ）、フォルフィリノックス（Ｆｏｌｆｉｒｉｎｏｘ）（ロイコボリン、５－フルオロウラシル、イリノテカン及びオキサリプラチンの組み合わせ）、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２３に記載の方法。
25. 本発明による前記チェックポイント阻害剤療法が、抗ＰＤ１、抗ＰＤ－Ｌ１、及び抗ＣＴＬＡ４治療部分を含み、好ましくは、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ若しくはセミプリマブ、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２３に記載の方法。
26. 前記ＴＫＩが、ラパチニブ、カネルチニブ、ネラチニブ、ツカチニブ（イルビニチニブ（ｉｒｂｉｎｉｔｉｎｉｂ））、ＣＰ－７２４７１４、タルロキシチニブ（ｔａｒｌｏｘｉｔｉｎｉｂ）、ムブリチニブ、アファチニブ、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）、及びダコミチニブ、アファチニブ、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項２３に記載の方法。
27. ＶＥＧＦＲ２標的化された治療が、ラムシルマブ又はレゴラフェニブである、請求項２３に記載の方法。
28. 前記がんが、ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ａ２３２Ｖを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記がんが、前記ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ａ２３２Ｖを含む膀胱がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記がんが、前記ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ｖ１０４Ｍを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記がんが、前記ＥＲＢＢ３タンパク質における変異Ｖ１０４Ｍを含む、明細胞がんなどの卵巣がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。