JP2023547205A - 種々の障害に対してブタを防御する混合ワクチン - Google Patents

種々の障害に対してブタを防御する混合ワクチン Download PDF

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Abstract

本発明は、ブタサーコウイルス２型による感染、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染およびデオキシニバレノール（ＤＯＮ）誘発性マイコトキシン症に対してブタを防御するための、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエの非複製性免疫原およびコンジュゲート化デオキシニバレノール（ＤＯＮ）の組合せを含むワクチンに関する。

Description

本発明は、全般的には、ブタの健康の分野に関する。ブタは多数の病原性微生物に冒されやすく、また、動物飼料中に存在するマイコトキシンによる中毒のような有害事象を被りやすい。これらの観点における防除は、一般に、養豚場および飼料の管理、抗ウイルス薬および抗生物質のような薬剤での処置、ワクチンを使用する予防的処置、毒素結合物質での飼料の処置などによって行われる。例えば、ほとんど全てのブタは、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２またはＰＣＶ－２）およびマイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染、ならびに動物飼料中に存在するマイコトキシンであるデオキシニバレノール（ＤＯＮ）によって誘発されるマイコトキシン症を被りやすい。
ＰＣＶ－２は、若いブタで見られる離乳後多重全身性消耗症候群（ｐｏｓｔ－ｗｅａｎｉｎｇ ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍｉｃ ｗａｓｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＰＭＷＳ）に関連している。この疾患は１９９１年にカナダで初めて見出された。その臨床徴候および病理は１９９６年に初めて公開され、進行性消耗、呼吸困難、頻呼吸ならびに時には黄疸および黄化を含む。Ｎａｙａｒら（Ｃａｎ．Ｖｅｔ．Ｊ．Ｖｏｌｕｍｅ ３８，Ｊｕｎｅ １９９７）は、ＰＭＷＳの臨床症状を有するブタにおいてブタサーコウイルスを検出し、ＰＫ－１５細胞の天然生息ウイルスとして認識されている公知ＰＣＶ以外のＰＣＶがＰＭＷＳに関連している可能性があると結論づけた。その後の刊行物（Ｈａｍｅｌら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７２（６），５２６２－５２６７，１９９８；Ｍｅｅｈａｎら，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７９，２１７１－２１７９，１９９８）はこれらの知見を証明しており、元のＰＫ－１５細胞培養分離体（Ｔｉｓｃｈｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ２９５，６４－６６，１９８２）はＰＣＶ－１と称されるべきであり、該新規病原性ＰＣＶはＰＣＶ－２と命名されることが提示された（Ｍｅｅｈａｎら，前掲）。ＰＣＶ－２は、環状一本鎖ＤＮＡゲノムを含有する小さな（１７ｎｍ～２２ｎｍ）二十面体非エンベロープウイルスである。ＰＣＶ－２ゲノムの長さは約１７６８ｂｐである。世界の種々の地域に由来するＰＣＶ－２分離体は互いに密接に関連しているらしく、約９５～９９％のヌクレオチド配列同一性を示す（Ｆｅｎａｕｘら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｏｒｂｉｏｌ．，３８（７），２４９４－２５０３，２０００）。ＰＣＶのＯＲＦ２は該ウイルスのカプシドタンパク質をコードしている。ＰＣＶ２のＯＲＦ２遺伝子は約２３３アミノ酸のタンパク質をコードしている。全てのＰＣＶ－２分離体のＯＲＦ２遺伝子は９１～１００％のヌクレオチド配列同一性および９０～１００％の推定アミノ酸配列同一性を共有している。
マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、ブタを冒す高伝染性慢性疾患であるブタ流行性肺炎を引き起こすことが公知の細菌種である。Ｍｈｙｏは小さなサイズ（４００～１２００ｎｍ）を有し、小さなゲノム（８９３～９２０キロベースペア（ｋｂ））を有し、細胞壁を欠いている。Ｍｈｙｏはブタの肺における上皮細胞の繊毛に付着する。それらは繊毛の拍動、凝集および繊毛の喪失を引き起こし、最終的に上皮細胞死を招く。これは、ブタ流行性肺炎を有するブタの肺において見出される病変の原因である。この損傷は正常な繊毛クリアランスを妨げ、しばしば、二次感染が生じる。これは動物の体重増加の有意な低減をもたらす。米国における損害は年間最大１０億ドルであるとこれまでに推定されている。ブタ流行性肺炎は世界中で流行しており、Ｍｈｙｏはほとんど全てのブタ集団において見られる。ブタにおけるＭｈｙｏの存在によって誘導される免疫応答は遅く、有効でない。したがって、この疾患の治療が最も重要であるが、それは抗生物質に限定されており、抗生物質は感染を完全には除去しないため、抗生物質は現在のところ部分的に有効であるに過ぎない。ワクチンは該疾患の重症度を低減することが判明しているが、感染したブタにおける疾患の発生を完全には予防しない。
ブタにおいて世界的に広まっているもう１つの病原体はローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）である。この細菌は、回腸炎としても公知の増殖性腸疾患を引き起こす可能性があり、これは世界中の離乳後のブタの一般的な腸疾患である。特徴的な病変は回腸陰窩における未熟腸細胞の増殖であり、これらの細胞は、通常、それらの頂端細胞質内に原因細菌を含有する。剖検時に、組織学的病変は、特に腸細胞において、１．５～２．５μｍの長さのビブリオ様形状細菌の可視化により、ローソニア陽性として確認されうるが、腸間膜リンパ節において、および陰窩間の粘膜固有層において位置するマクロファージ内でもしばしば確認されうる。腸細胞からの該細菌の排除は関連増殖性病変の消散をもたらし、このことは陰窩に対する該細菌の直接的な局所効果を示している。これらの病変におけるローソニア・イントラセルラリスの存在は、疾患を発症している動物および無症状感染のみを示している動物の両方において、ＰＣＲを用いて実証されている。臨床症例は通常、成長（ｇｒｏｗｅｒ）－仕上げ（ｆｉｎｉｓｈｅｒ）期間において見られ、幾つかのより高齢の仕上げブタにおいては、急性出血性形態が記録されている。
真菌は一般に、器官および組織の寄生ならびにアレルゲン症状を含む、ブタにおける広範な疾患を引き起こす。しかし、非食用キノコの摂取による中毒以外に、真菌は、マイコトキシン症と称される種々の毒性作用をもたらす有機化学物質およびマイコトキシンを産生しうる。この疾患は、食品または動物飼料を汚染する糸状菌によって産生される薬理学的に活性な化合物であるマイコトキシンへの曝露によって引き起こされる。マイコトキシンは、真菌の生理機能に重要ではない二次代謝産物であり、これは、摂取、吸入または皮膚接触の際に、最小濃度で脊椎動物に対して極めて毒性である。現在、約４００個のマイコトキシンが認識されており、類似した生物学的および構造的特性を有する化学的に関連する分子のファミリーに細分されている。これらのうち、約１２個のグループが動物の健康への脅威としてたびたび注目されている。最も大きな一般的関心が持たれており農業経済的に最も重要なマイコトキシンの例には、アフラトキシン（ＡＦ）、オクラトキシン（ＯＴ）、トリコテセン（Ｔ；ＤＯＮを含む）、ゼアラレノン（ＺＥＮ）、フモニシン（Ｆ）、発振戦性毒素および麦角アルカロイドが含まれる。マイコトキシンは急性疾患および慢性疾患に関連づけられており、その生物学的作用は主にその化学構造の多様性に応じて変動するが、生物学的、栄養的および環境的要因によっても変動する。マイコトキシン症の病態生理学はマイコトキシンと動物細胞における機能性分子および細胞小器官との相互作用の結果であり、これは発がん性、遺伝毒性、タンパク質合成の阻害、免疫抑制、皮膚刺激および他の代謝障害を引き起こしうる。感受性動物種において、マイコトキシンは、複雑で重複する毒性作用を誘発しうる。マイコトキシン症は伝染性ではなく、免疫系の有意な刺激もない。
ボミトキシンとしても公知であるデオキシニバレノールはＢ型トリコテセンであり、これは主にコムギ、オオムギ、オートムギ、ライムギおよびトウモロコシのような穀物に存在するが、イネ、ソルガムおよびライコムギにも存在する。デオキシニバレノールの存在は主にフザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）（赤かび病（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ））およびフザリウム・クルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）に関連しており、それらは共に、コムギにおける赤かび病およびトウモロコシにおける赤かび病を引き起こす重要な植物病原体である。赤かび病の発生とデオキシニバレノールによるコムギの汚染との間には直接的な関連性が確認されている。赤かび病の発生は開花時の湿気に強く関連しており、降雨の量ではなく降雨の時機が最も重要な要因である。更に、ＤＯＮの含有量はフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ）に対する栽培品種の感受性、以前の作物、耕作慣行および抗真菌剤の使用によって著しい影響を受ける。フザリウム・グラミネアラムは２５℃の温度で最適に成長し、一方、フザリウム・クルモラムは２１℃で最適に成長する。したがって、フザリウム・グラミネアラムは、より温暖な気候で見出される、より一般的な種である。
ＤＯＮはヒトおよび家畜の両方におけるマイコトキシン症の発生に関連づけられている。そのトキシン（毒素）は、タンパク質合成の強力なインヒビターであるトリコテセンのクラスに属する。ＤＯＮに対する曝露は脳へのアミノ酸トリプトファンの取り込みを減少させ、そしてこれはセロトニンの脳内合成を減少させる。セロトニンのレベルの低下はＤＯＮの食欲不振作用の原因であると考えられている。消化管の刺激も飼料摂取の減少において何らかの役割を果たしている可能性があり、飼料拒食中の雌ブタで見られる傍食道胃潰瘍の高い発生率の部分的な原因でもありうる。
現在のところ、ＤＯＮ誘発性マイコトキシン症の予防的処置は、作物におけるマイコトキシン産生を低減するための適正農業規範、ならびにマイコトキシンレベルが一定限度未満に維持されること保証するための食品および飼料商品の管理プログラムに限られている。薬物または抗生物質での治療は疾患の経過にほとんどまたは全く効果を示さない。現在のところ、マイコトキシン症に対処するために利用可能なヒト用または動物用ワクチンは存在しない。
これは、前記で特定されている種々の病原体に関しては異なっており、これらの病原体に対するワクチンは一般に公知である。ＰＣＶ２による感染に対して動物、特にブタを予防的に処置するための通常のワクチンは（非複製性）免疫原としての全不活化ＰＣＶ－２ウイルスに基づくものでありうる。また、当技術分野においては、ＯＲＦ２にコードされるカプシドタンパク質（例えば、組換え発現された場合）は、適切なワクチンに使用されるブタサーコウイルス２型のサブユニット免疫原として適していることが示されている。このように理解されうるのは、このサブユニットが循環系においてウイルス自体と同じ様態を示し（それはウイルス様粒子を形成する）、ＤＮＡおよび非構造タンパク質がカプシドの内部に存在しないという点でのみ本質的に異なるに過ぎないからである。当技術分野においてはＰＣＶ２に対する幾つかのワクチンが商業的に入手可能である。Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＣＶ（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｏｘｍｅｅｒ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから入手可能）は、３週齢以上のブタにおいて使用される、ブタサーコウイルス２型に対してブタを防御するためのワクチンである。２回注射（２用量）ワクチンとして投与された場合、免疫持続期間（ＤＯＩ）は２２週間であり、ブタの肥育期間をほぼ完全にカバーする。Ｉｎｇｅｌｖａｃ ＣｉｃｒｏＦｌｅｘ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍから入手可能）は、２週齢以上のブタにおいて使用される、ブタサーコウイルス２型に対してブタを防御するためのワクチンである。それは１回注射（１用量）ワクチンとしてのみ登録されている。Ｃｉｒｃｏｖａｃ（登録商標）（Ｃｅｖａ Ｓａｎｔｅ Ａｎｉｍａｌｅ，Ｌｉｂｏｕｒｎｅ，Ｆｒａｎｃｅから入手可能）は、３週齢以上のブタにおいて使用される、ブタサーコウイルス２型に対してブタを防御するためのワクチンである。Ｓｕｖａｘｙｎ（登録商標）ＰＣＶ（Ｚｏｅｉｔｉｓ，Ｃａｐｅｌｌｅ ａ／ｄ ＩＪｓｓｅｌ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから入手可能）は、３週齢以上のブタにおいて使用される、ブタサーコウイルス２型に対してブタを防御するためのワクチンである。他のＰＣＶ２ワクチンは、例えば、ＷＯ２００７／０２８８２３、ＷＯ２００７／０９４８９３およびＷＯ２００８／０７６９１５に記載されている。これらのワクチンは全て、それらがＰＣＶ２のＯＲＦ２カプシドタンパク質を含む点で共通している。
マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に関しては、多数の市販ワクチンが存在し、これらは商業的養豚業の大部分において日常的に使用されている。一般に、これらのワクチンは、例えば、典型的には非経口注射により投与されるサブユニットタンパク質および／またはバクテリンのようなＭｈｙｏの非複製性免疫原を含む。幾つかの例としては、ＲｅｓｐｉＳｕｒｅ（登録商標）（Ｚｏｅｔｉｓ）、Ｉｎｇｅｌｖａｃ（登録商標）Ｍ．ｈｙｏ、およびＭｙｃｏＦＬＥＸ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、Ｓｔｅｌｌａｍｕｎｅ（登録商標）Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ（Ｅｌａｎｃｏ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）、Ｆｏｓｔｅｒａ（登録商標）ＰＣＶ ＭＨ（Ｚｏｅｔｉｓ）ならびにＭ＋Ｐａｃ（登録商標）およびＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｍ Ｈｙｏ（共にＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈから入手可能）が挙げられる。
能動的防御を誘導することによりローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）と闘うためのワクチンは商業的に入手可能であり、当技術分野において記載されている。これらのワクチンは商品名Ｅｎｔｅｒｉｓｏｌ（登録商標）Ｉｌｅｉｔｉｓ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ，ＵＳＡ）（これは生弱毒化ワクチンである）、およびＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｉｌｅｉｔｉｓ（Ｍｅｒｃｋ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）またはＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｌａｗｓｏｎｉａ（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）（これらは共に、バクテリンの形態のローソニア・イントラセルラリスの非複製性免疫原を含むワクチンである）として入手可能である。
発明の目的
本発明の目的は、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２またはＰＣＶ－２）およびマイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（Ｍｈｙｏ）による感染、ならびにマイコトキシンデオキシニバレノール（ＤＯＮ）によって誘発されるマイコトキシン症に対してブタを１回の処置で防御しうる組成物を提供することである。
発明の概括
本発明の目的を達成するために、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原およびコンジュゲート化（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）デオキシニバレノール（ＤＯＮ）の組合せを含むワクチンを案出した。このワクチンはブタサーコウイルス２型による感染、マイコプラズマ・ヒオニューモニエによる感染およびＤＯＮ誘発性マイコトキシン症（全て、ブタの間で非常に広まっている障害である）に対してブタを１回の処置で防御するのに適しているようである。ＰＣＶ２およびＭｈｙｏに対する混合ワクチン（組合せワクチン）は当技術分野で公知であるが、コンジュゲート化デオキシニバレノールが、ＤＯＮ誘発性マイコトキシン症に対して動物を防御するためのワクチンとしての使用に適していることを見出したことは驚くべきことであった。ＤＯＮをトキソイドに変換することは（特許請求の範囲では除外されていないが）特に必要ではなく、コンジュゲート化トキシンは処置宿主動物にとって安全であるようであった。また、処置後に、誘導された免疫応答が、ＤＯＮの経口摂取の後のマイコトキシン症に対してワクチン接種動物を実際に防御するのに十分な程度に強力であると見出されたことは驚くべきことであった。マイコトキシンに対する免疫応答を誘導することによる能動的防御はいずれのマイコトキシンに関しても当技術分野において示されておらず、ましてや、非常に大量に存在し極めて毒性な化合物であるデオキシニバレノールに関しては言うまでもない。もう１つの驚きは、ワクチンの前記の３成分が負の干渉を起こさないことが見出されたことであった。混合ワクチンでは、それらの抗原のそれぞれに対して適切な免疫応答が引き起こされうる。そのような応答は、当技術分野で公知のとおり、病原体ＰＣＶ２およびＭｈｙｏに対して防御的であり、そして本発明において初めて、ＤＯＮ摂取に対して防御的であることが証明された。
本発明はまた、ブタサーコウイルス２型による感染、マイコプラズマ・ヒオニューモニエによる感染およびＤＯＮ誘発性マイコトキシン症に対してブタを防御する方法における使用のための、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原およびコンジュゲート化デオキシニバレノール（ＤＯＮ）の組合せを含むワクチンに関する。
本発明は更に、ブタサーコウイルス２型の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原の組合せを含む第１組成物（「組成物」なる語は、それが、投与前に内容物が混合される２つの別個の容器に関するものであることを除外しない）と、コンジュゲート化デオキシニバレノール（ＤＯＮ）を含む第２組成物との組合せを含むキットオブパーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）に関する。キットオブパーツは、例えば、実際の投与の前に２つの組成物を混合することによって、または２つの別個の投与ノズル／バレルを有する投与装置、例えばＩＤＡＬ（登録商標）３Ｇ ＴＷＩＮ（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）を使用する混合しない併用によって、１回の処置でブタに投与するために２つの組成物を使用する方法の説明を含みうる。
定義
ワクチンは、対象動物において病原性微生物または化合物に対する防御免疫を誘導しうる、すなわち、後記のとおりの予防的処置を成功裏にもたらしうる、対象動物に安全に投与される医薬組成物である。
病原体の非複製性免疫原は、対応病原体に対して免疫応答を惹起する、（弱毒化形態の野生型における）全体としての生きた複製性病原体以外の病原体に対応する任意の物質または化合物であり、この場合、この免疫応答の結果として、対応毒性病原体またはその毒性因子の１以上が宿主免疫系により認識され、最終的に少なくとも部分的に中和される。非複製性免疫原の典型例は、死滅全病原体（この語は細胞溶解形態のこれらの病原体を含む）、ならびにこれらの病原体のサブユニット、例えばカプシドタンパク質、表面発現タンパク質（例えば、組換え発現タンパク質またはリポ多糖）および排出分子、例えばトキシン（毒素）である。このグループの免疫原は、それらが体液性免疫応答を典型的に誘発するという共通点を有する。
バクテリンは、死亡細菌の懸濁液であって、例えば、細菌培養物を濃縮し、ついでそれを、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）、クロロクレゾール、ホルマリンのような化学物質で、または例えばＵＶ光もしくは他のタイプの不活化で不活化することにより得られるものを意味する。
病原体による感染または別の有害事象に対する予防的処置は、その病原体による感染（またはその感染から生じる障害）の予防、改善または治癒を助けること、または該事象の予防、改善または治癒を助けることであり、ここで、該処置は、それぞれ、病原性病原体によるチャレンジまたは該事象の発生の前に行われる。
マイコトキシン症は、マイコトキシンへの曝露から生じる疾患である。臨床徴候、標的器官および転帰は、マイコトキシンの固有の毒性特性、曝露の量および長さ、ならびに曝露動物の健康状態に左右される。
マイコトキシンに対して防御する、は、動物におけるマイコトキシンの負の生理学的作用（例えば、平均１日体重増加の減少）の１以上を予防または低減することを意味する。
デオキシニバレノール（ＤＯＮと略記され、ボミトキシンまたはＶＯＭとしても公知である）は、真菌フザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）により産生されるマイコトキシンであり、これは小穀物の赤かび病（ＦＨＢ）または痂皮を引き起こす。ＤＯＮは飼料拒食および嘔吐を引き起こしうる。基本化合物の分子式はＣ１５Ｈ２０Ｏ６である。
コンジュゲート化分子は、免疫原性化合物が共有結合により結合している分子である。典型的には、免疫原性化合物は、ＫＬＨ、ＢＳＡまたはＯＶＡのような（大きな）タンパク質である。
アジュバントは非特異的免疫刺激物質である。原則として、免疫事象のカスケードにおける特定のプロセスを支持または増幅して、最終的に、より良好な免疫応答（すなわち、抗原に対する統合された身体的応答、特に、リンパ球により媒介され、典型的には特異的抗体または前感作リンパ球による抗原の認識を含むもの）を招きうる各物質がアジュバントとして定義されうる。アジュバントは、一般に、前記の特定のプロセスが生じるのに必要ではなく、前記プロセスを支持または増幅するに過ぎない。
発明の更に詳細な実施形態
本発明によるワクチンのもう１つの実施形態においては、ＰＣＶ２の非複製性免疫原はＰＣＶ２のＯＲＦ２タンパク質である。この免疫原は、ＰＣＶ２ウイルスに対する適切な防御免疫応答を誘発することが証明されており、本混合ワクチンにおける使用に適しているようであり、すなわち、免疫系の共刺激は対象ブタに対して尚も安全であろう。免疫原はＰＣＶ２の組換え発現ＯＲＦ２タンパク質、例えばバキュロウイルス発現ＯＲＦ２タンパク質でありうる。
更にもう１つの実施形態においては、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原はマイコプラズマ・ヒオニューモニエのバクテリンであり、これはマイコプラズマ・ヒオニューモニエの死滅全マイコプラズマ・ヒオニューモニエを含みうる。Ｍｈｙｏのバクテリンは、特に全細胞を含有する場合、本混合ワクチンにおける使用に適していることが示されている。
更にもう１つの実施形態においては、コンジュゲート化ＤＯＮは、１０．０００Ｄａを超える分子量を有するタンパク質にコンジュゲート化されたＤＯＮを含む。そのようなタンパク質、特にキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）およびオボアルブミン（ＯＶＡ）はブタおよび他の動物において適切な免疫応答を誘導しうることが判明している。該タンパク質に関する実用的な上限は１００ＭＤａでありうる。この限界を超えると、物理的な欠点が生じうる。
更にもう１つの実施形態においては、ワクチンはローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の非複製性免疫原、特にローソニア・イントラセルラリスの死滅全細胞であり、例えば、市販ワクチンであるポルシリス・イレイティス（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ Ｉｌｅｉｔｉｓ）（Ｍｅｒｃｋ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈから入手可能）またはポルシリス・ローソニア（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ Ｌａｗｓｏｎｉａ）（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈから入手可能）から公知のものである。
ブタサーコウイルス２型による感染、マイコプラズマ・ヒオニューモニエによる感染およびＤＯＮ誘発性マイコトキシン症に対してブタを防御する方法における使用のための混合ワクチンのもう１つの実施形態においては、ワクチンをブタに全身投与する。例えば胃腸管（口腔または肛門腔）または眼（例えば、ニワトリに免疫化する場合）における粘膜組織を介した局所投与は、種々の動物において免疫応答を誘導するための有効な経路であることが公知であるが、全身投与は、３つ全ての障害に対して動物を防御するための適切な免疫応答をもたらすことが判明した。特に、筋肉内および／または皮内投与に際して有効な免疫化が達成されうることが判明した。
ブタがその母体免疫を喪失する前に、かつ、相当な量のＤＯＮで汚染された飼料を動物が摂取しうる前に、投与を行うことが好ましいが、投与の齢は重要でないと考えられる。したがって、投与時の好ましい年齢は６週齢以下である。更に好ましいのは４週齢以下、例えば１～３週齢である。
本発明によるワクチンは動物に少なくとも１回または２回投与されうる。多数の動物（特にブタ、ニワトリ、反芻動物）は、一般に、免疫原性組成物の１回の注射（ショット）のみによる免疫化に感受性であるが、ＤＯＮに対する経済的な実施可能な防御のためには２回の注射が好ましいと考えられる。１回目または２回目の注射は、コンジュゲート化ＤＯＮのみを含有する１価ワクチンでありうるが、もう一方の注射は該混合ワクチンで行う。これは、ＰＣＶ２およびＭｈｙｏに対する防御のためには、１回の注射が典型的なブタの生涯にわたる有効な防御をもたらすことが判明していることに基づく。しかし、該新規混合ワクチンでの初回ワクチン接種および追加ワクチン接種を動物が受けることも想定される。ワクチンのの２回の注射の間の期間は１週間から１～２年の間でありうる。若い動物の場合には、例えば１～３週齢での初回免疫化、およびそれに続く、１～４週間後、典型的には１～３週間後、例えば２週間後の追加投与のレジメンで十分であると考えられる。より高齢の動物は、他の商業的に適用される動物用免疫化レジメンで公知のとおり、数ヶ月ごと（例えば、最後の投与の４、５、６ヶ月後）または毎年もしくは半年ごとに追加投与を要しうる。
該混合ワクチンは、前記の３つの抗原に加えて、アジュバントを含みうる。抗原が単独では、所定レベルの防御を得るための免疫応答を誘導できない場合に、アジュバントが使用されうる。ＫＬＨまたはＢＳＡのような担体分子を伴うコンジュゲート分子は、追加的なアジュバントを使用することなく免疫系を十分に刺激しうることが公知であるが、追加的なアジュバントを使用することが有利でありうる。これは追加投与の必要性をなくし、またはその投与のための間隔を延長させうる。これは全て、特定の状況において必要な防御レベルに左右される。本ワクチンでの使用に特に適していると考えられるアジュバントのタイプとしては、水中油エマルジョン（例えば、鉱油、サメ肝油、ビタミンＥアセタートに基づくもの）、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）の溶液、ならびにアルハイドロゲルおよび他のアルミニウム含有アジュバント系が挙げられる。
次に、以下の実施例を用いて、本発明を更に詳細に説明することとする。
実施例
第１の一連の実験（後記の実施例１～３に記載されている）においては、１価ＤＯＮワクチンの有効性を安全性および有効性に関して試験した。ついで本発明による３価ワクチンの有効性を適宜試験した（実施例４）。
実施例１：コンジュゲート化ＤＯＮを使用した免疫化チャレンジ実験
目的
本研究の目的は、ＤＯＮ摂取によるマイコトキシン症に対してブタを防御するコンジュゲート化デオキシニバレノールの安全性および有効性を評価することであった。これを調べるために、ブタをＤＯＮ－ＫＬＨで２回免疫化した後、毒性ＤＯＮでチャレンジした。免疫化の種々の経路を用いて、投与経路の影響を試験した。
研究設計
研究において、８頭の雌ブタに由来する４０頭の１週齢のブタを、５つの群に分けて使用した。群１～３の２４頭の子ブタを１週齢および３週齢で２回免疫化した。群１は、両方の齢で筋肉内（ＩＭ）に免疫化した。群２は１週齢で筋肉内注射を受け、３週齢で経口追加投与を受けた。群３は、皮内（ＩＤ）に２回免疫化した。５．５週齢から、群１～３を、液体中で経口投与されるＤＯＮで４週間チャレンジした。群４は免疫化しなかったが、群１～３に関して記載されているとおりにＤＯＮでのチャレンジのみを行った。群５は対照として用い、５．５週齢から４週間にわたって対照流体のみの投与を受けた。
液体製剤中のＤＯＮ濃度は５．４ｍｇ／ｋｇ飼料の量に相当した。これは１日当たり平均２．５ｍｇのＤＯＮの量に相当する。４週間のチャレンジの後、肝臓、腎臓および胃に特別な注意を払いながら、全ての動物を死後調査した。また、群５を除き、研究の第０日、第３４日、第４１日、第４９日、第５５日、第６４日（安楽死後）に採血を行った。群５の血液サンプルは第０日、第３４日、第４９日および安楽死の直後に採取した。
試験物品
以下の３つの異なる免疫原性組成物を製剤化した：ＩＭ免疫化に使用した注射用水中油型エマルジョン（Ｘ－ｓｏｌｖｅ ５０，ＭＳＤ ＡＨ，Ｂｏｘｍｅｅｒ）中の５０μｇ／ｍｌのＤＯＮ－ＫＬＨを含む試験物品１；経口免疫化に使用した油中水型エマルジョン（ＧＮＥ，ＭＳＤ ＡＨ，Ｂｏｘｍｅｅｒ）中の５０μｇ／ｍｌのＤＯＮ－ＫＬＨを含む試験物品２；およびＩＤ免疫化用の注射用の水中油型エマルジョン（Ｘ－ｓｏｌｖｅ ５０）中の５００μｇ／ｍｌのＤＯＮ－ＫＬＨを含む試験物品３。
チャレンジ用のデオキシニバレノール（Ｆｅｒｍｅｎｔｅｋ，Ｉｓｒａｅｌから入手）を、１００ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように１００％ メタノール中で希釈し、－１５℃未満で保存した。使用前に、ＤＯＮを更に希釈し、投与用の飼料中に供給した。
包含基準
健康な動物のみを使用した。不健康な動物を除外するために、研究開始前に、全身の身体的外観および臨床的な異常または疾患の非存在に関して、全ての動物を検査した。群ごとに、異なる雌ブタからの子ブタを使用した。日常的な実施においては、ＤＯＮ汚染飼料の摂取によりＤＯＮに予め曝露された場合であっても、全ての動物を免疫化する。ＤＯＮ自体は免疫応答を引き起こさないため、ＤＯＮに予め曝露された動物とＤＯＮに関してナイーブな動物との間に原理的差異はないと考えられる。
結果
いずれの動物も、ＤＯＮ－ＫＬＨによる免疫化に関連した悪影響を示さなかった。したがって、該組成物は安全であるようであった。
実験開始時、全てのブタはＤＯＮに対する力価に関して血清学的に陰性であった。チャレンジ中に、筋肉内免疫化群（群１）および皮内免疫化群（群３）は、コーティング抗原として天然ＤＯＮ－ＢＳＡを使用したＥＬＩＳＡによる測定で、ＤＯＮに対する抗体応答を示した。表１は研究中の４つの時点における平均ＩｇＧ値およびそれらのＳＤ値を示す。筋肉内免疫化と皮内免疫化との両方がＤＯＮに対して有意な力価を誘導した。
Figure 2023547205000001
 表２に示されているとおり、有意な抗ＤＯＮ ＩｇＧ力価の増加を示さなかった群２の動物を含む全ての免疫化動物が、チャレンジ動物と比較して最初の１５日間で有意に高い体重増加を示した。チャレンジされた動物に関しては、全ての動物が、研究の経過の全体にわたって、より多くの体重増加を示した。
Figure 2023547205000002
 小腸の状態（空腸における絨毛／陰窩比により判定されたもの）もモニターした。表３に絨毛／陰窩比を示す。認められうるとおり、群３の動物は、健康な対照（群５）に匹敵する平均絨毛陰窩／陰窩比を有していたが、免疫化されていないチャレンジされた群（群４）は遥かに低い（統計的に有意な）絨毛陰窩比を有していた。また、群１および群２は、免疫化されていないチャレンジ対照群と比較して有意に良好な（すなわち、高い）絨毛／陰窩比を有していた。これは、免疫化が、ＤＯＮにより開始される腸の損傷に対して防御することを示している。
Figure 2023547205000003
 他の器官、より詳細には肝臓、腎臓および胃の一般的な状態もモニターした。３つ全ての試験群（群１～３）は、免疫化されていないチャレンジ対照群（群４）より良好な健康状態であることが観察された。表４に一般的な健康データの要約を示す。胃潰瘍の程度は－（潰瘍形成の証拠無し）から＋＋（複数の潰瘍）までとして示されている。胃炎の程度は－（炎症の証拠無し）から＋＋／－（胃炎の開始）までとして示されている。
Figure 2023547205000004
 実施例２：ＤＯＮレベルに対する免疫化の効果
目的
本研究の目的は、ＤＯＮ摂取の毒物動態学に対するＤＯＮコンジュゲートでの免疫化の効果を評価することであった。これを調べるために、ブタをＤＯＮ－ＫＬＨで２回免疫化した後、ブタに毒性ＤＯＮを与えた。
研究設計
研究において１０頭の３週齢のブタを使用し、各群５頭のブタの２つの群に分けた。群１のブタをＤＯＮ－ＫＬＨ（試験物品１；実施例１）で３週齢および６週齢で２回、ＩＭ免疫化した。群２は対照として用い、対照流体のみの投与を受けた。１１週齢で、動物のそれぞれに０．０５ｍｇ／ｋｇの用量のボーラスによりＤＯＮ（Ｆｅｒｍｅｎｔｅｋ，Ｉｓｒａｅｌ）を投与した。該用量は（１日飼料摂取量に基づけば）１ｍｇ／ｋｇ飼料の汚染レベルに類似していた。ブタの血液サンプルを、ＤＯＮの投与直前、ならびにＤＯＮの投与の０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、３、４、６、８および１２時間後に採取した。
包含基準
健康な動物のみを使用した。
血漿中のＤＯＮの分析
Ｘｅｖｏ（登録商標）ＴＱ－ＳＭＳ装置（Ｗａｔｅｒｓ，Ｚｅｌｌｉｋ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）に接続されたＡｃｑｕｉｔｙ（登録商標）ＵＰＬＣシステムを使用する検証済みのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を用いて、非結合ＤＯＮの血漿分析を行った。この方法を用いた場合のブタ血漿中のＤＯＮの定量下限は０．１ｎｇ／ｍｌである。
毒物動態学的分析
ＤＯＮの血漿中濃度－時間プロファイルの毒物動態モデリングを非コンパートメント分析（Ｐｈｏｅｎｉｘ，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＵＳＡ）により行った。以下のパラメータを計算した：時間ゼロから無限大までの曲線下面積（ＡＵＣ０→∞）、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）および最大血漿濃度における時間（ｔｍａｘ）。
結果
毒物動態学的結果を以下の表５に示す。認められうるとおり、ＤＯＮ－ＫＬＨでの免疫化は全ての毒物動態学的パラメーターを減少させる。毒性作用の発現をもたらすのは非結合ＤＯＮであるため、ＤＯＮ－ＫＬＨでの免疫化は、動物の血液中の非結合ＤＯＮの量を減少させることにより、ＤＯＮにより引き起こされる毒性作用を低減すると結論付けられうる。
Figure 2023547205000005
 実施例３：種々のＤＯＮコンジュゲートに対する血清学的応答
目的
本研究の目的は、種々のコンジュゲート化デオキシニバレノール産物の有効性を評価することであった。
研究設計
研究において１８頭の３週齢のブタを使用し、各群６頭のブタの３つの群に分けた。群１のブタをＤＯＮ－ＫＬＨ（実施例１の試験物品１を使用）で３週齢および５週齢で２回、筋肉内免疫化した。群２を、相応して、ＤＯＮ－ＯＶＡで免疫化した。群３は陰性対照として用いた。全ての動物を、３週齢、５週齢および８週齢で、抗ＤＯＮ ＩｇＧ応答に関して検査した。
結果
血清学的結果をｌｏｇ２抗体価として以下の表に示す。
Figure 2023547205000006
 どちらのコンジュゲートも、抗ＤＯＮ ＩｇＧ応答を惹起するのに適しているようである。また、応答は１回のみの注射によって誘導されるようである。
実施例４：種々の混合ワクチンの有効性
目的
本研究の目的は、ＤＯＮに対するワクチン接種を、ＰＣＶ２、Ｍｈｙｏおよび所望によりローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）に対するワクチン接種と組合せることが可能であるかどうかを判断することであった。
研究設計
１２頭の雌ブタに由来する６４頭の１週齢の子ブタの集団を各群８頭の８つの群に分けた。群１～３は、ＩＤＡＬ（登録商標）（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）装置を使用して皮内（ＩＤ）ワクチン接種に用い、各場合において、１回の注射当たり０．２ｍｌを投与した。群１の子ブタは、初回－追加方式における陽性対照として、実施例１（試験物品３）で使用した１価ＤＯＮ－ＫＬＨワクチンの投与を受けた。群２（「ＰＭ」と表示される）は、１回目のワクチン接種として、水中油型エマルジョン（スクアレンおよびビタミンＥアセタートを含む）中の１価ＤＯＮ－ＫＬＨワクチン（群１と同じレベルのＤＯＮ抗原）の投与を受け、そして、本発明の３つの抗原、すなわち、非複製性ＰＣＶ２免疫原［この場合は、Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＣＶ ＩＤと同じレベルのＰＣＶ２のバキュロウイルス発現ＯＲＦ２タンパク質］、非複製性Ｍｈｙｏ免疫原［この場合は、Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｍ Ｈｙｏ ＩＤ ＯＮＣＥと同じレベルのＭｈｙｏバクテリン］およびＤＯＮ－ＫＬＨを同じアジュバント中に含有するワクチンでの２回目のワクチン接種を受けた。群３はＤＯＮ ＩＤに関する陰性対照であり、３週齢でＰｏｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＣＶ Ｍ Ｈｙｏのみの投与を受けた。
群４～８は、標準的な皮下シリンジを使用する筋肉内（ＩＭ）ワクチン接種に用い、各場合において、１回の注射当たり２ｍｌを投与した。群４は筋肉内ワクチン接種に関する陽性対照であり、Ｘ－ｓｏｌｖｅ ５０中の１価ＤＯＮ－ＫＬＨワクチン（実施例１、試験物品１）の２回の投与を受けた。群５は、１回目の注射として、Ｅｍｍｕｎａｄｅ（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）でアジュバント化された１価ＤＯＮ－ＫＬＨワクチンの投与を受け、そして３週間の時点で２回目の注射として、同じアジュバント中のＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＣＶ Ｍ ＨｙｏおよびＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｌａｗｓｏｎｉａと混合されたＤＯＮ－ＫＬＨ［すなわち、本出願においては「ＰＭＬ」と表示される、市販の３成分Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＣＶ２ Ｍ Ｈｙｏローソニア混合ワクチン］の投与を受けた。群６は初回ワクチン接種としてＸ－ｓｏｌｖｅ ５０中の１価ＤＯＮ－ＫＬＨの投与を受け、そして同じ１価ＤＯＮ－ＫＬＨワクチンおよび別のＰＭＬワクチンによる非混合併用組合せワクチン接種を受けた。群７は陰性対照群（ＰＭＬのみ）であった。群８は、ＤＯＮチャレンジを受けた陰性対照であった。
前記場合のそれぞれにおいて、１回目のワクチン接種は、子ブタが１週齢のときに、頸部の右側に投与し、２回目のワクチン接種は、３週齢で、頸部の左側に投与した。チャレンジ（群２、４、５および８）は、流体と混合されたＤＯＮを使用して、前記の実施例１に記載されているとおりに行った。チャレンジの最初の２週間においては、ＤＯＮを朝および夜に投与し、チャレンジの次の２週間においては、ＤＯＮを朝、午後および夜に投与した。投与量は、第１週に子ブタが１日当たり１ｍｇのＤＯＮの投与を受け、第２週に１日当たり２ｍｇのＤＯＮの投与を受け、第３週に１日当たり３ｍｇのＤＯＮの投与を受け、第４週に１日当たり４ｍｇのＤＯＮの投与を受けるものであった。
包含基準
健康な動物のみを使用した。不健康な動物を除外するために、研究開始前にそれらを検査した（全身の身体的外観および臨床的な異常または疾患の非存在）。
結果
いずれの動物も、前記の種々のワクチン接種に関連した悪影響を示さなかった。したがって、該組成物は安全であるようであった。
コンジュゲート化ＤＯＮを含むワクチンの投与を受けた全ての群はワクチン接種後に血清転換した（表７を参照されたい）。ＩＤ力価はＩＭ力価よりわずかに低かった。ＩＤワクチン接種群においては、ＰＭとの組合せワクチン接種を受けた群は、ＤＯＮのみでワクチン接種された群より高い力価を示した。これは、ＤＯＮ＋ＰＭの組合せ群（ＩＤ）がＤＯＮ用量の３０％の投与を受けたに過ぎなかったにもかかわらずである。また、ＤＯＮ＋ＰＭの組合せ（ＩＤ）群は、ＤＯＮ単独（ＩＤ）群と比較して力価の低下が遅いことも認められた。筋肉内においては、ＤＯＮのみ、ＤＯＮとＰＭＬとの組合せ（混合）、およびＤＯＮとＰＭＬとの組合せ（非混合）の投与を受けた群に関する結果は非常に類似していることが観察された。このことは、ＤＯＮに対する血清学に関しては、その他の抗原との組合せも混合も有意な影響を及ぼさないらしいことを示唆している。
Figure 2023547205000007
 チャレンジされたＤＯＮに対する防御を、絨毛／陰窩比を決定することにより、腸において測定した（表８を参照されたい）。ＩＤ群（群２）が最高の比を示し、この比は、実施例１に記載されている研究における健常対照と同じであった。１価ＤＯＮ ＩＭ群（群４）と、ＤＯＮ、ＰＣＶ、Ｍｈｙｏ、ローソニアの４成分の群（群５）とは共に、ワクチン接種を受けていないチャレンジ動物（群８）よりも有意に健康な腸を有していた。混合ワクチン（群２および５）で得られた値は、１価ＤＯＮワクチンの投与を受けた群（群４）より一層良好であったが、このことは、ワクチン接種経路および追加的なローソニア抗原の存在には無関係に、両方の混合ワクチンによって、ＤＯＮチャレンジに対する適切な防御が達成されたことを示している。
Figure 2023547205000008
 これに続いて、対照群８と比較した場合、全てのワクチン接種群で胃潰瘍の減少が観察された。これらのデータ、および肝臓の状態に関するデータを、以下の表９に示す。
Figure 2023547205000009
 したがって、胃潰瘍および肝臓障害のレベルにおいても、該混合ワクチンはＤＯＮチャレンジに対して防御することを認めることができた。
その他の病原体（ＰＣＶ２、マイコプラズマ・ヒオニューモニエおよびローソニア・イントラセルラリス）に対する防御を示すために、研究の最後に、ＩＭ群に関して、血清学的測定を行った。既存の市販ワクチン［Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）の範囲］のこれらの既存の抗原に関して公知のとおり、ＩＭワクチン接種後の血清学的な陽性は、同じ抗原でのＩＭワクチン接種およびＩＤワクチン接種の後の対応病原体による感染に対する防御を示す。結果を表１０に示す。Ｍｈｙｏに関しては、陰性／陽性試験を用いた。ＰＣＶおよびローソニアに関しては、Ｅｌｉｓａ力価を測定した。
Figure 2023547205000010
 結果は、該抗原のそれぞれが陽性の血清学的結果をもたらしたことを示しており、このことは、対応病原体に対する防御が達成されたことを示している。
結論
この研究は、ＤＯＮワクチン接種がＰＣＶ、Ｍｈｙｏおよびローソニアの非複製性免疫原による同時ワクチン接種によって影響を受けないこと、ならびにコンジュゲート化ＤＯＮ抗原が、これら３つの抗原のそれぞれを使用して達成されうる防御を無効にしないことを示している。

Claims (15)

  1. ブタサーコウイルス２型による感染、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染およびデオキシニバレノール（ＤＯＮ）誘発性マイコトキシン症に対してブタを防御するための、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエの非複製性免疫原およびコンジュゲート化デオキシニバレノール（ＤＯＮ）の組合せを含むワクチン。
  2. ＰＣＶ２の非複製性免疫原がＰＣＶ２のＯＲＦ２タンパク質である、請求項１記載のワクチン。
  3. ＰＣＶ２の非複製性免疫原がＰＣＶ２の組換え発現ＯＲＦ２タンパク質である、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  4. マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原がマイコプラズマ・ヒオニューモニエのバクテリンである、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  5. マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原が死滅全マイコプラズマ・ヒオニューモニエを含む、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  6. コンジュゲート化ＤＯＮが、１０，０００Ｄａを超える分子量を有するタンパク質にコンジュゲート化したＤＯＮである、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  7. コンジュゲート化ＤＯＮが、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）またはオボアルブミン（ＯＶＡ）にコンジュゲート化したＤＯＮである、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  8. ワクチンがローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の非複製性免疫原を含む、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  9. ワクチンがローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）の死滅全細胞を含む、前記請求項のいずれか１項記載のワクチン。
  10. ブタサーコウイルス２型による感染、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染およびデオキシニバレノール（ＤＯＮ）誘発性マイコトキシン症に対してブタを防御する方法における使用のための、ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエの非複製性免疫原およびコンジュゲート化デオキシニバレノール（ＤＯＮ）の組合せを含むワクチン。
  11. 該方法において、ワクチンをブタに全身投与する、請求項１０記載の使用のためのワクチン。
  12. 該方法において、ワクチンをブタに筋肉内または皮内投与する、請求項１０または１１記載の使用のためのワクチン。
  13. 該方法において、ワクチンを６週齢以下のブタに投与する、請求項１０～１２のいずれか１項記載の使用のためのワクチン。
  14. 該方法において、ワクチンを４週齢以下、好ましくは１～３週齢のブタに投与する、請求項１０～１３のいずれか１項記載の使用のためのワクチン。
  15. ブタサーコウイルス２型（ＰＣＶ２）の非複製性免疫原、マイコプラズマ・ヒオニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の非複製性免疫原の組合せを含む第１組成物と、コンジュゲート化デオキシニバレノール（ＤＯＮ）を含む第２組成物との組合せを含むキットオブパーツ（ｋｉｔ－ｏｆ－ｐａｒｔｓ）。
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