JP2023546298A - 多機能性及び多価インターロイキン－ｔｇｆ－ベータ受容体融合ポリペプチド - Google Patents

多機能性及び多価インターロイキン－ｔｇｆ－ベータ受容体融合ポリペプチド Download PDF

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Abstract

インターロイキンポリペプチドと、２つ以上のＴＧＦβリガンド結合ポリペプチドと、を含む、多機能性及び多価融合ポリペプチドが提供される。本明細書に提供される組成物及び方法は、腫瘍形成の予防及びがんの治療用途に有用である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１０月２０日に出願された米国仮出願第６３／０９４，２７７号の利益を主張し、本出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年１０月１５日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーの名称は、５７９４９－７０１＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔで、サイズは８２，７３９バイトである。
がんを駆動し、がんの発症をもたらす腫瘍形成は、例えば、持続的な増殖性シグナル伝達、成長抑制因子に対する応答の減少、細胞死に対する耐性の増加、複製的不死性、及び血管新生の増加をもたらす異常な細胞プロセスによって一般的に特徴付けられ得る。これらのプロセスは、腫瘍の浸潤及び転移を促進すると考えられる。したがって、これらのプロセスに関連する分子を標的とする能力は、がん治療薬の開発にとって重要であり得る。
形質転換成長因子β（ＴＧＦ－β）ファミリー又はタンパク質は、腫瘍形成環境における血管新生及び／又は免疫抑制を促進する多面発現性サイトカインである。ＴＧＦ－βタンパク質は、もともと、正常な線維芽細胞を固定非依存的な成長が可能な細胞に変換するそれらの能力にちなんで命名された。主に造血細胞及び腫瘍細胞によって産生されるＴＧＦ－βタンパク質は、正常又は腫瘍性組織起源の多様性からの細胞の成長及び分化を調節（例えば、刺激又は阻害）することができる。特に、ＴＧＦ－βタンパク質は、例えば、細胞増殖及び分化、胚発達、細胞外マトリックス形成、骨発達、創傷治癒、造血、並びに免疫及び炎症反応などの多くの増殖性及び非増殖性細胞プロセスに関与することが知られている。ＴＧＦ－β発現及び活性の増加したレベルは、腫瘍形成を含むが、これに限定されない多数の病理学的状態に関与し、ＴＧＦ－βタンパク質ファミリーのメンバーは、腫瘍形成プロセス（例えば、血管新生及び免疫抑制）及び転移に関連する多数の生物学的活性を有することが知られている。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、主に細胞媒介性免疫応答を生成するために免疫系に作用する強力なサイトカインである。一般に、ＩＬ－２は、抗原の部位の近くの高濃度の免疫細胞によって局所的に産生され、抗原に対する免疫系応答を生成するために必要な共刺激シグナルを供給する。したがって、ＩＬ－２は、免疫活性化分子であり、腫瘍の治療において免疫療法応答を促進する可能性があり得る。例えば、Ｔ細胞を刺激することに加えて、ＩＬ－２はまた、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞）を刺激することが示されている。しかしながら、高用量のＩＬ－２ベースの療法は、以前に、ＩＬ－２全身投与で観察された毒性と関連していた。このような有害な影響は、効果的な治療薬としてＩＬ－２を首尾よく利用するための障害となる。
本明細書で提供されるのは、免疫応答を活性化させ、腫瘍形成誘発性（ｐｒｏ－ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ）免疫抑制シグナル伝達を阻害するように機能する融合タンパク質である。本明細書に記載されるように、免疫活性化及び免疫抑制の阻害は、一般に、ＴＧＦ－β活性を阻害する２つ以上のポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－βタンパク質に結合する２つ以上のポリペプチド）に融合（例えば、連結）したインターロイキンポリペプチドを含む融合タンパク質によって達成される。本明細書に提供される組成物は、腫瘍形成（例えば、血管新生又は転移）の阻害のため又は阻害においても有用である。したがって、本明細書に開示される融合タンパク質を使用してがんを阻害及び／又は治療する方法もまた、本明細書に開示される。
本明細書では、インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドが提供される。また、本明細書では、ＩＬ受容体に結合し、かつそれを作動させるＩＬポリペプチドと、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドも提供される。
いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２ポリペプチド又はＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２ポリペプチド又はＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３からなる。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－１５ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５からなる。
いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、アクチビン受容体ポリペプチド若しくはその断片、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体ポリペプチド若しくはその断片、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）受容体ポリペプチド若しくはその断片、又はＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチド若しくはその断片を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチド又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチド又はその断片を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号８、配列番号９、又はそれらの組み合わせを含む可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列の切断を含む。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦ－β１ポリペプチド、ＴＧＦ－β２ポリペプチド、ＴＧＦ－β３ポリペプチド、アクチビンβＡポリペプチド、アクチビンβＢポリペプチド、アクチビンβＣポリペプチド、アクチビンβＥポリペプチド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）２ポリペプチド、ＢＭＰ３ポリペプチド、ＢＭＰ４ポリペプチド、ＢＭＰ５ポリペプチド、ＢＭＰ６ポリペプチド、ＢＭＰ７ポリペプチド、ＢＭＰ８ポリペプチド、ＢＭＰ９ポリペプチド、ＢＭＰ１０ポリペプチド、ＢＭＰ１１ポリペプチド、ＢＭＰ１２ポリペプチド、ＢＭＰ１３ポリペプチド、ＢＭＰ１４ポリペプチド、ＢＭＰ１５ポリペプチド、成長分化因子（ＧＤＦ）１ポリペプチド、ＧＤＦ３ポリペプチド、ＧＤＦ８ポリペプチド、ＧＤＦ９ポリペプチド、ＧＤＦ１５ポリペプチド、ノーダル（Ｎｏｄａｌ）ポリペプチド、インヒビンαポリペプチド、抗ミュラー管ホルモンポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ１ポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ２ポリペプチド、アルテマン（ａｒｔｅｍａｎ）ポリペプチド、ペルセフィンポリペプチド、又はニュールツリンポリペプチドを結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はこれらの任意の組み合わせを結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチドを結合する。
いくつかの実施形態では、切断型ＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、切断型ＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、切断型可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ｓＴβＲＩＩ）ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、切断は、２、５、７、１０、１５、２０、２５、又は３０個を超えるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、切断型ＩＬポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、切断型ＩＬポリペプチドは、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、切断型ＩＬポリペプチドは、切断型ＩＬ－２ポリペプチド又はＩＬ－１５ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドを結合するリンカーポリペプチド又はリンカー分子を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＩＬポリペプチド及び第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドを融合するリンカーポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、薬物動態（ＰＫ）調節物質を含む。
いくつかの実施形態では、薬物動態調節物質は、免疫グロブリン定常（Ｆｃ）領域ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＰＫ調節物質は、アルブミンポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、アルブミンポリペプチドは、ヒトアルブミンポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０～２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０～２５のうちのいずれか１つからなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する標的細胞を活性化させる。いくつかの実施形態では、標的細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞である。薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む融合ポリペプチドを含む、薬学的組成物が更に提供される。
また、がんを有する個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減する方法であって、インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドを個体に投与し、それによって、個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減することを含む、方法も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、原発腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、転移性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞を活性化させる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＩＬ－２を発現する。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍を含むがんである。がんを有する個体における腫瘍細胞の中和又は殺傷する方法であって、インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドを個体に投与し、それによって、個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、原発腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、転移性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞を活性化させる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍を含む。
更に、がんを有する対象におけるがんを治療又は改善する方法であって、インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドを対象に投与し、それによって、対象におけるがんを治療又は改善することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、原発腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、転移性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞を活性化させる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍を含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はこれらの任意の組み合わせを結合する。
ＩＬ受容体を発現する細胞を活性化させる方法であって、インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドと細胞を接触させることを含む、方法が更に提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、インビボで接触される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、エクスビボで接触される。いくつかの実施形態では、白血球パック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）又は白血球アフェレーシス（ｌｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ）製品は、免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、アフェレーシス試料に由来する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、その後、細胞ベースの療法に使用される。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２又はＩＬ－１５である。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチド又は断片を含む。本明細書に記載するような組換え融合ポリペプチドをコードする核酸配列を含む核酸分子を含む、宿主細胞。
参照による組み込み
本明細書に記載されている全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
本開示の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に具体的に記載される。本開示の特徴及び利点のよりよい理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明、及び以下の添付の図面を参照することによって得られるであろう。
ヒト一価ＦＩＳＴ（インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチド、単一のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドを含む融合タンパク質）又は二価ＦＩＳＴ（ｂＦＩＳＴとも呼ばれる－インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、第１のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチド）によって以前に刺激されたヒトＴ細胞によるＩＦＮ－ガンマ産生の定量、及びヒトＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又はヒト二価ＦＩＳＴで刺激されたヒトＮＫ細胞によるＣＸＣＬ１０産生を示すデータを示す。 同上。 ５～２０ナノモルのヒト一価ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）、二価ＦＩＳＴ（ｂＦＩＳＴ）、又はｓＴＢＲＩＩとの３０分間のインキュベーション期間後に溶液中で検出された活性ＴＧＦβ１の定量を示すデータを示す。 例示的な二価ＦＩＳＴ（ｂＦＩＳＴ）融合ポリペプチドの概略図を示す。 ＴＧＦβアイソフォームの遮断における二価ＦＩＳＴタンパク質と一価ＦＩＳＴとの比較を示す。 同上。 同上。 細胞傷害性Ｔ細胞増殖のＴＧＦｂ１媒介性抑制の阻害を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 エフェクターメモリーＴ細胞及び末端分化エフェクターメモリー細胞の増殖、並びに二価ＦＩＳＴ、一価ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）、及び対照で刺激されたＴ細胞によるＩＦＮγ産生の定量を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 初代ＮＫ細胞増殖並びにＩＦＮγ及びＣＸＣ１０産生のＴＧＦｂ１媒介性抑制の二価ＦＩＳＴ阻害及び／又は低減を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 ＮＫ細胞を二価ＦＩＳＴで処置すると、ＮＫ細胞の細胞傷害性及び活性化並びにがん細胞に対する細胞傷害性が増加することを示す。 同上。 Ｂ細胞を二価ＦＩＳＴで処置すると、成熟、増殖、及びＩＦＮγ産生が増加することを示す。 同上 同上 同上 肺がん細胞を二価ＦＩＳＴで処置すると、肺がん細胞上でのＴＧＦｂ１誘発性の上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）マーカーの上方調節が阻害されることを示す。 同上。 同上。
本明細書で提供されるのは、例えば、免疫応答を活性化させ、免疫抑制シグナル伝達を阻害及び／若しくは低減し、かつ／又は血管新生若しくは侵襲的シグナル伝達を抑制若しくは阻害することができる多機能性融合タンパク質である。がんとの関連で、免疫活性化は、形質転換された細胞が腫瘍に成長する前にそれらの細胞の認識及び中和を促進するか、又は腫瘍が形成された後にそれらを殺傷する（例えば、中和する）生理学的機能であると考えられる。異質性、分子量、複雑さ、発現レベル、及び分解性に基づく抗原の特異的認識は、腫瘍増殖を制限する免疫系の能力を生じさせると考えられる。反対に、腫瘍細胞は、例えば、免疫抑制因子又は分子（例えば、免疫抑制サイトカイン）の産生により、様々なメカニズムを介して応答性を制限する能力を有すると考えられる。
免疫応答を活性化させ、免疫抑制シグナル伝達を阻害するために、本明細書に開示される融合タンパク質は、一般に、ＴＧＦβ活性を阻害する２つ以上のポリペプチド（例えば、ＴＧＦβタンパク質を結合する２つ以上のポリペプチド）に融合（例えば、連結）したインターロイキンポリペプチドを含む。活性化シグナルと阻害シグナルのバランスは、免疫恒常性の維持に重要な要素である。腫瘍形成中、免疫刺激（例えば、免疫活性化）シグナル（例えば、炎症誘発性サイトカイン）は、腫瘍由来の免疫抑制シグナル伝達分子（例えば、免疫抑制サイトカイン）によって拮抗される。腫瘍形成の駆動に重要であると考えられる免疫抑制サイトカイン群の中には、タンパク質のＴＧＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＧＦβ）がある。
形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、ＴＧＦβタンパク質、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、成長分化因子（ＧＤＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、アクチビン、インヒビン、ノーダル（Ｎｏｄａｌ）、Ｌｅｆｔｙ、及びミュラー管阻害物質（ＭＩＳ）を含む。一般に、ＴＧＦβスーパーファミリーのリガンドは、セリン／スレオニンキナーゼドメインを有するＩ型及びＩＩ型受容体サブユニットからなるヘテロ二量体受容体複合体に結合する二量体を形成する。
タンパク質の形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、増殖、分化、アポトーシス、組織リモデリング、血管新生、免疫応答、及び細胞接着などの必須細胞機能に関与するサイトカインである（例えば、Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｊ．ＴＧＦβ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃｏｎｔｅｘｔ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １３，６１６－６３０（２０１２）を参照のこと）。ＴＧＦβスーパーファミリータンパク質はまた、慢性炎症性状態及びがんなどの疾患状態の病態生理学における重要な要因である。このファミリーのメンバーには、ＴＧＦβの３つのアイソフォームであるβ１、β２、β３、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）及びアクチビンが含まれる。免疫抑制に加えて、ＴＧＦβタンパク質は、上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）及び腫瘍関連血管新生を構成的に誘導することによって、後期がんにおける転移促進性（ｐｒｏｍｅｔａｓｔａｔｉｃ）及び血管新生促進性（ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）因子として作用することができる。
治療提案のための腫瘍由来活性ＴＧＦβの遮断は広く探索されてきた。多くの治療アプローチは、乳がん及び黒色腫などの浸潤がんの治療のためのＴＧＦβ経路を標的としている。例えば、そのヘテロマー受容体に結合するＴＧＦβアンタゴニストは、乳がんの３つの実験モデルにおいて、腫瘍細胞運動性、血管内浸潤、及び転移の低減を示した。しかしながら、これらの治療戦略は、一般的に、細胞増殖に影響を及ぼさず、このことは、ＴＧＦβ遮断剤が腫瘍細胞の中和又は殺傷を促進するのに十分ではないことを示す。
本明細書に開示される融合タンパク質におけるインターロイキンポリペプチド（例えば、インターロイキン－２又はインターロイキン－１５）の利用は、ＴＧＦβの阻害に加えて、免疫応答を活性化させるのに有用である。タンパク質のインターロイキンファミリーは、一般に、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び他のリンパ球）の活性化、発達、及び分化を促進し、先天性及び適応性免疫の両方において不可欠な役割を果たす。したがって、免疫細胞の活性化、発生、及び分化は、本明細書に開示される融合タンパク質によって達成され得る。
炎症誘発性又は免疫刺激性インターロイキン（例えば、インターロイキン－２又はインターロイキン－１５）は、免疫応答を活性化させるための有用なアジュバントを構成する。例えば、インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、リンパ球活性化及びクローン増殖のための因子であり、細胞傷害性Ｔ細胞の活性化、発達、及び分化を促進する。ＩＬ－２及びＩＬ－１５はまた、ＮＫ細胞の増殖及び細胞傷害性を刺激する。しかしながら、ＩＬ－２は、免疫刺激（例えば、免疫活性化）剤及び免疫抑制剤の両方として作用し得る。免疫抑制因子として、ＩＬ－２は、調節細胞の生成を誘導することによって末梢性寛容を維持する。これらの理由により、ＩＬ－２は、両刃の剣と考えられる。インターロイキン機能の汎用性は、環境及びシグナル伝達剤との相互作用によって影響される。
したがって、本明細書に開示される融合タンパク質は、融合タンパク質が、免疫活性化、免疫抑制の阻害、及び／又は血管新生若しくは侵襲的シグナル伝達の抑制若しくは阻害に有用であるという点で多機能性である。いくつかの実施形態では、免疫活性化、免疫抑制の阻害、及び／又は血管新生若しくは侵襲的シグナル伝達の抑制若しくは阻害は、腫瘍を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、免疫を活性化させること（例えば、ＩＬ－２受容体を発現する細胞を活性化させること）、免疫細胞の免疫抑制を阻害すること（例えば、細胞とＴＧＦβａとの間の相互作用を遮断若しくは阻害すること）、及び／又は対象における血管新生若しくは侵襲的シグナル伝達の抑制若しくは阻害は、腫瘍若しくはがんを治療するために使用され得る。開示されるように、免疫応答の活性化及び免疫抑制応答の阻害は、少なくとも部分的に、インターロイキンポリペプチドによって達成される。順番に、免疫抑制シグナル伝達若しくはシグナル伝達分子の阻害若しくは低減、及び／又は血管新生若しくは侵襲的シグナル伝達若しくはシグナル伝達分子の阻害は、少なくとも部分的に、ＴＧＦβタンパク質の活性を阻害する１つ以上のポリペプチドの使用によって達成される。
本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、一般に、２つ以上の親タンパク質又はポリペプチドに由来するポリペプチド成分を含むタンパク質を指す。一般に、融合タンパク質は、あるタンパク質からのポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列が、別のタンパク質からのポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列をフレーム内に付加され、任意選択的にそのヌクレオチド配列からリンカーによって分離される融合遺伝子から発現される。次いで、融合遺伝子は、単一のタンパク質として組換え宿主細胞によって発現され得る。
本明細書で使用される場合、タンパク質の「ドメイン」は、一般に、タンパク質全体のいずれかの部分であり、完全なタンパク質を含むが、典型的には、完全なタンパク質よりも少ない。ドメインは、タンパク質鎖の残りの部分とは独立して折り畳むことができ、かつ／又は特定の生物学的、生化学的、若しくは構造的機能若しくは位置（例えば、リガンド結合ドメイン、又は細胞質、膜貫通、若しくは細胞外ドメイン）と相関する必要はない。
「組換え」という用語は、材料（例えば、核酸又はポリペプチド）が、ヒトの介入によって人工的又は合成的に（例えば、非天然に）変更されていることを示す。変更は、その自然環境又は状態内の材料に対して、又はその自然環境又は状態から除去され得る。例えば、「組換え核酸」は、例えば、クローニング、ＤＮＡシャッフリング、又は他の周知の分子生物学的手順中に、核酸を組換えることによって作製されるものである。「組換えＤＮＡ分子」は、そのような分子生物学的技術によって一緒に接合されたＤＮＡのセグメントから構成される。本明細書で使用される場合、「組換えタンパク質」又は「組換えポリペプチド」という用語は、組換えＤＮＡ分子を使用して発現されるタンパク質分子を指す。「組換え宿主細胞」は、組換え核酸を含有及び／又は発現する細胞である。
本明細書で互換的に使用される場合、「ポリヌクレオチド配列」又は「ヌクレオチド配列」又は「核酸配列」は、文脈に応じて、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、及びＲＮＡ、核酸、又はヌクレオチドポリマーを表す文字列を含む、ヌクレオチドのポリマーである。任意の特定のポリヌクレオチド配列から、所与の核酸又は相補的ポリヌクレオチド配列のいずれかを決定することができる。一本鎖又は二本鎖であってもよく、センス又はアンチセンス鎖を表すゲノム又は合成起源のＤＮＡ又はＲＮＡが含まれる。
本開示のポリヌクレオチド及びポリペプチド配列は、本明細書に記載される特定のポリヌクレオチド及びポリペプチドとの特定の同一性及び／又は類似性に関して定義することができる。いくつかの実施形態では、配列同一性は、典型的には、６０％を超える、７５％を超える、８０％を超える、９０％を超える、及び／又は９５％を超える。配列の同一性及び／又は類似性は、本明細書に開示される配列と比較して、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％であり得る。最適なアライメントは、配列をアライメントするための任意の好適なアルゴリズムの使用によって決定することができ、その非限定的な例としては、スミス－ウォーターマン（Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ）アルゴリズム、ニードルマン－ブンシュ（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ）アルゴリズム、バローズ－ホイーラー変換（Ｂｕｒｒｏｗｓ－Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ）に基づくアルゴリズム（例えば、バローズホイーラーアライナー（Ｂｕｒｒｏｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ））、クラスタル（Ｃｌｕｓｔａｌ）Ｗ、クラスタルＸ、ＢＬＡＳＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＥＬＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ））、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎで入手可能）、及びＭａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔで入手可能）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＢＬＡＳＴ検索は、所望のパーセント配列同一性を有する配列を得るために、ＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、単語長＝１２で実行される。いくつかの実施形態では、比較目的のためにギャップありアライメントを得るために、ギャップありＢＬＡＳＴ。ＢＬＡＳＴ及びギャップありＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合は、それぞれのプログラム（ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用できる。いくつかの実施形態では、クラスタルオメガ（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）が使用される。
本明細書で使用される場合、「核酸分子コード」、「ＤＮＡ配列コード」、「核酸配列コード」又は「ＤＮＡコード」という用語は、デオキシリボ核酸鎖に沿ったデオキシリボヌクレオチドの順序又は配列を指す。これらのデオキシリボヌクレオチドの順序は、ｍＲＮＡ鎖に沿ったリボヌクレオチドの順序を決定し、また、ポリペプチド（タンパク質）鎖に沿ったアミノ酸の順序を決定する。したがって、ＤＮＡ配列は、ＲＮＡ配列及びアミノ酸配列をコードする。
「遺伝子の発現」又は「核酸の発現」とは、文脈によって示されるように、ＲＮＡへのＤＮＡの転写（任意選択的に、ＲＮＡの修飾、例えば、スプライシングを含む）、ポリペプチドへのＲＮＡの翻訳（おそらくは、ポリペプチドのその後の翻訳後修飾を含む）、又は転写と翻訳の両方を意味する。
「遺伝子」という用語は、生物学的機能に関連する任意の核酸を指すために広く使用される。遺伝子は、典型的には、そのようなコード配列の発現に必要なコード配列及び／又は調節配列を含む。「遺伝子」という用語は、特定のゲノム又は組換え配列、並びにその配列によってコードされるｃＤＮＡ又はｍＲＮＡに適用される。「融合遺伝子」は、導入遺伝子をコードするコード領域を含む。遺伝子はまた、例えば、他のタンパク質の認識配列を形成する非発現核酸セグメントを含む。転写因子などの調節タンパク質が結合し、隣接又は近傍の配列の転写をもたらす転写制御要素を含む非発現調節配列。
本明細書で使用される場合、「コード領域」又は「コード配列」という用語は、構造遺伝子に関して使用される場合、ｍＲＮＡ分子の翻訳の結果として、新生ポリペプチド内に見出されるアミノ酸をコードするヌクレオチド配列を指す。コード領域は、真核生物において、イニシエーターメチオニンをコードするヌクレオチドトリプレット「ＡＴＧ」によって５’側に、終止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、ＴＧＡ）を特定する３つのトリプレットのうちの１つによって３’側に境界される。真核生物における転写制御シグナルは、「プロモーター」及び「エンハンサー」要素を含む。プロモーター及びエンハンサーは、転写に関与する細胞タンパク質と特異的に相互作用するＤＮＡ配列の短いアレイからなる。プロモーター及びエンハンサー要素は、酵母、昆虫、並びに哺乳動物細胞及びウイルスの遺伝子を含む様々な真核生物源から単離されている（類似の制御要素、例えば、プロモーターも原核生物に見出される）。特定のプロモーター及びエンハンサーの選択は、目的のタンパク質を発現するために使用される細胞タイプに依存する。一部の真核生物プロモーター及びエンハンサーは、広い宿主範囲を有するが、他のものは、細胞タイプの限定されたサブセットにおいて機能する。
「発現ベクター」という用語は、特定の宿主細胞内での作動可能に連結されたコード配列の発現に必要な所望のコード配列及び適切な核酸配列を含む組換えＤＮＡ分子を指す。原核生物における発現に必要な核酸配列としては、プロモーター、任意選択的に、オペレーター配列、リボソーム結合部位、及び場合によっては他の配列が挙げられる。真核細胞は、プロモーター、エンハンサー、並びに終結及びポリアデニル化シグナルを利用することが知られている。本発明の毒素ペプチド類似体のコード配列に作動可能に連結された発現ベクターによって、任意選択的に、分泌シグナルペプチド配列をコードすることもでき、その結果、組換え宿主細胞が、発現された毒素ペプチド類似体を分泌することができ、必要に応じて、細胞から毒素ペプチド類似体をより容易に単離することができる。かかる技術は当業者に周知である。
本明細書で使用される場合、個体は、患者及び／又は対象と同義であり、ヒトを含む、及び／又はヒトを指し、本明細書で開示されるような疾患又は状態を治療する必要があると診断されたヒトであってもよい。しかしながら、例は、ヒトに限定されず、チンパンジー、マーモセット、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモットなどを含む。個体は、典型的には、ヒトであり、本明細書に開示されるような疾患又は状態を治療する必要があると診断されたヒトであってもよい。
本明細書で使用される場合、「阻害」又は「阻害すること」という用語は、所与の状態、症状、障害、若しくは疾患の低減若しくは抑制、及び／又は生物学的活性若しくはプロセスのベースライン活性の低下を含む、及び／又は指す。
本明細書で使用される場合、「治療すること」又は「治療」という用語は、疾患若しくは障害又はその症状を改善すること（例えば、疾患又はその臨床症状のうちの少なくとも１つの発症を遅らせるか、停止させるか、又は低減すること）を含む、及び／又は指す。ある特定の実施形態では、「治療すること」又は「治療」はまた、患者によって識別できないものを含む、少なくとも１つの物理的及び／又は生物学的パラメータを緩和又は改善することを含む、及び／又は指す。ある特定の実施形態では、「治療すること」又は「治療」は、疾患、障害、若しくは生物学的プロセスを、物理的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に（例えば、物理的及び／若しくは生物学的パラメータの安定化）、又はその両方のいずれかで調節することを含む、及び／又は指す。ある特定の実施形態では、「治療すること」又は「治療」は、疾患又は障害の発症（ｏｎｓｅｔ）若しくは発症（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）又は進行を予防又は遅延することを含む、及び／又は指す。ある特定の実施形態では、「治療すること」又は「治療」は、（ｉ）健常な生理学的状態、又は（ｉｉ）ベースラインの生理学的状態（例えば、疾患又は障害の進行）の悪化を予防するか、遅延させるか、又は阻害することを含む、及び／又は指す。
本明細書で使用される場合、「ａ」又は「ａｎ」は、特許請求の範囲及び／又は明細書内の「含む」という用語と併用して使用される場合、「１つ」を含み、及び／又は「１つ」を指し、「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、「少なくとも１つ」、及び「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｏｎｅ）」の意味と一致する。同様に、「別の」という単語は、少なくとも１つ以上の他のもの（ａ ｓｅｃｏｎｄ ｏｒ ｍｏｒｅ）を意味し得る。
本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（並びに含むの任意の形態、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（並びに有するの任意の形態、例えば、「有する（ｈａｖｅ）」及び「有する（ｈａｓ）」）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（並びに含むの任意の形態、例えば、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（並びに含有するの任意の形態、例えば、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」）という用語は、包括的又はオープンエンドであり、記載されていない追加の要素又はプロセスステップを除外しない。
本明細書で使用される場合、所与の値又は範囲の文脈における「約」という用語は、所与の値又は範囲の２０％以内、１０％以内、及び／又は５％以内の値又は範囲を含む、及び／又は指す。
本明細書で使用される場合、「及び／又は」という用語は、他のものの有無にかかわらず、２つの特定された特徴又は構成要素のそれぞれの具体的な開示と見なされるべきである。例えば、「Ａ及び／又はＢ」は、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、並びに（ｉｉｉ）Ａ及びＢのそれぞれが、あたかも本明細書において個別に記載されているかのような、それぞれの具体的な開示と見なされるべきである。
本明細書で使用される場合、「試料」は、分析対象物を検出及び／又は定量するために分析されている任意の流体又は液体試料を含む、及び／又は指す。いくつかの実施形態では、試料は、生物学的試料である。試料の例としては、体液、抽出物、タンパク質及び／又はＤＮＡを含有する溶液、細胞抽出物、細胞溶解物、又は組織溶解物が挙げられるが、これらに限定されない。体液の非限定的な例としては、尿、唾液、血液、血清、血漿、脳脊髄液、涙、精液、汗、胸水、液化糞便物質、及び涙腺分泌物が挙げられる。
本明細書で使用される場合、本明細書で説明される任意の事例又は実施形態では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び／又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」と置き換えられ得る。本明細書で説明される任意の事例又は実施形態では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及び／又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」と置き換えられ得る。
インターロイキン
本明細書で提供する融合タンパク質は、一般に、ＴＧＦβ活性を阻害する２つ以上のポリペプチド（例えば、ＴＧＦβタンパク質を結合する２つ以上のポリペプチド）に融合（例えば、連結）したインターロイキンポリペプチドを含む。インターロイキン（ＩＬ）は、最初は白血球単独によって発現されると考えられていたが、後に他の多くの体細胞によって産生されることが見出されたサイトカインのクラスである。インターロイキンは、例えば、免疫細胞の活性化及び分化、並びに細胞の増殖、成熟、移行、及び接着において重要な役割を果たす。したがって、インターロイキンの機能は、炎症性及び免疫応答中の成長、分化、及び活性化を調節することである。したがって、融合タンパク質のインターロイキンポリペプチドは、免疫応答の調節（例えば、活性化）に有用である。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、ＴＧＦβ活性を阻害する２つ以上のポリペプチドに融合（例えば、連結）したインターロイキンポリペプチドを含む融合タンパク質との関連において、免疫応答の活性化に有用なインターロイキンである。インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、抗原刺激によって誘導される多面発現性サイトカインであり、したがって、免疫応答を調節する上で重要な役割を果たす（例えば、Ｓｐｏｌｓｋｉ，Ｒ．，Ｌｉ，Ｐ．＆ Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｗ．Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－２：ｆｒｏｍ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８，６４８－６５９（２０１８）を参照されたい）。例えば、局所領域腫瘍拒絶を誘導し、Ｔ細胞に対する自己分泌因子として作用し、細胞傷害性Ｔ細胞の発達をサポートし、ＮＫ細胞の増殖及び細胞溶解活性を刺激するのに有効であるため、先天的な抗腫瘍応答を促進することができる。
ＩＬ－２は、１５．５ｋＤａの４つのαヘリックス束の小さなサイトカインである。これは、主に抗原シミュレートされたＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生されるが、ＣＤ８＋細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び活性化された樹状細胞（ＤＣ）によっても産生され得る。ＩＬ－２は、ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞の維持のための重要な因子であり、ＣＤ４＋Ｔ細胞の様々なＴ細胞サブセットへの分化において重要な役割を果たす。これは、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の細胞傷害性活性を促進し、抗原に応答してＴ細胞分化プログラムを調節し、Ｔヘルパー１７（Ｔｈ１７）分化を阻害しながら、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）及びＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞へのナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞分化を促進することができる。特に、ＩＬ－２は、転移性黒色腫及び腎細胞がんのための最初のＦＤＡ承認免疫療法薬のうちの１つであった。しかしながら、ＩＬ－２免疫療法は、その短いインビボ半減期及び治療投与量での重度の毒性のために広く適用されていない。
「インターロイキン－２」又は「ＩＬ－２」という用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然ＩＬ－２を指す。ＩＬ－２は、未処理のＩＬ－２、並びに細胞内での処理から生じるＩＬ－２の任意の形態を含む。この用語はまた、ＩＬ－２の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なヒトＩＬ－２のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。未処理のヒトＩＬ－２は、成熟ＩＬ－２分子には存在しないＮ末端２０アミノ酸シグナルペプチドを更に含む。ＩＬ－２はまた、「野生型ＩＬ－２」又は天然に存在するＩＬ－２も含む。天然ヒトＩＬ－２分子の配列は、配列番号１に示される。本開示の目的のため、野生型という用語は、１つ以上のアミノ酸変異を含むＩＬ－２の形態も包含する。例えば、本明細書に記載の融合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％を超える配列同一性を有するＩＬ－２ポリペプチドを含むことができる。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。
ＩＬ－２ポリペプチドは、全長の天然配列又はその切断を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、切断型ＩＬ－２ポリペプチドである。切断型ＩＬ－２ポリペプチドは、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－２ポリペプチドと比べて）約２個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸が切断されたＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－２ポリペプチドと比べて）約２アミノ酸～約５アミノ酸、約２アミノ酸～約７アミノ酸、約２アミノ酸～約８アミノ酸、約２アミノ酸～約１０アミノ酸、約２アミノ酸～約１５アミノ酸、約２アミノ酸～約２０アミノ酸、約５アミノ酸～約７アミノ酸、約５アミノ酸～約８アミノ酸、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約５アミノ酸～約２０アミノ酸、約７アミノ酸～約８アミノ酸、約７アミノ酸～約１０アミノ酸、約７アミノ酸～約１５アミノ酸、約７アミノ酸～約２０アミノ酸、約８アミノ酸～約１０アミノ酸、約８アミノ酸～約１５アミノ酸、約８アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、又は約１５アミノ酸～約２０アミノ酸が切断されたＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－２ポリペプチドと比べて）約２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸が切断されたＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－２ポリペプチドと比べて）少なくとも約２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、又は約１５個のアミノ酸が切断されたＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－２ポリペプチドに対して）最大でも約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸が切断されたＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＩＬ－２ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩＬ－２ポリペプチドを含む。好適なＩＬ－２配列又はバリアント配列（例えば、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、及び／又は挿入を有する）は、本明細書に記載される（例えば、実施例１～３のいずれか１つに記載されるような）方法のうちのいずれかによって同定することができる。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。好適なＩＬ－２配列又はバリアント配列（例えば、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、及び／又は挿入を有する）は、本明細書に記載される（例えば、実施例１～３のいずれか１つに記載されるような）方法のうちのいずれかによって同定することができる。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＩＬ－２配列を含む。好適なＩＬ－２配列又はバリアント配列（例えば、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、及び／又は挿入を有する）は、本明細書に記載される（例えば、実施例１～３のいずれか１つに記載されるような）方法のうちのいずれかによって同定することができる。
インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）もまた、ＴＧＦβ活性を阻害する２つ以上のポリペプチドに融合（例えば、連結）したインターロイキンポリペプチドを含む融合タンパク質との関連において、免疫応答の活性化に有用なインターロイキンである。インターロイキン１５（ＩＬ－１５）は、４つのαヘリックス構造を含む約１２～１４キロダルトンのサイトカインである。ＩＬ－１５は、インターロイキンＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、及びＩＬ－２１からなるサイトカインファミリーに属する。ＩＬ－１５は、ＩＬ－２と共有されるＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体β（ＩＬ－１５Ｒβ）（ＣＤ１２２）サブユニットと、追加のファミリーメンバーの全てによっても利用される共通ガンマ鎖（γＣ）（ＣＤ１３２）受容体サブユニットと、から構成される受容体複合体を介してシグナル伝達する。特に、ＩＬ－１５は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の成長因子であり、これらの免疫細胞の発達、増殖、及び活性化において重要な役割を果たす。ＩＬ－１５には治療的使用の可能性があるが、天然ＩＬ－１５には治療的発達の問題、すなわち低い生物学的効力及び短い半減期がある。
「インターロイキン－１５」又は「ＩＬ－１５」という用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然ＩＬ－１５を指す。ＩＬ－１５は、未処理のＩＬ－１５、並びに細胞内での処理から生じるＩＬ－１５の任意の形態を含む。この用語はまた、ＩＬ－１５の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なヒトＩＬ－１５のアミノ酸配列は、配列番号４に示される。ＩＬ－１５はまた、「野生型ＩＬ－１５」又は天然に存在するＩＬ－１５も含む。天然ヒトＩＬ－１５分子の配列は、配列番号４に示される。本開示の目的のため、野生型ＩＬ－１５という用語は、１つ以上のアミノ酸変異を含むＩＬ－１５の形態も包含する。例えば、本明細書に記載の融合タンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％を超える配列同一性を有するＩＬ－１５ポリペプチドを含むことができる。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。好適なＩＬ－１５配列又はバリアント配列（例えば、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、及び／又は挿入を有するＩＬ－１５ポリペプチド配列）は、本明細書に記載される（例えば、実施例１～３のいずれか１つに記載されるような）方法のうちのいずれかによって同定することができる。
ＩＬ－１５ポリペプチドは、全長の天然配列又はその切断を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、切断型ＩＬ－１５ポリペプチドである。切断型ＩＬ－１５ポリペプチドは、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－１５ポリペプチドと比べて）約２個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸が切断されたＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－１５ポリペプチドと比べて）約２アミノ酸～約５アミノ酸、約２アミノ酸～約７アミノ酸、約２アミノ酸～約８アミノ酸、約２アミノ酸～約１０アミノ酸、約２アミノ酸～約１５アミノ酸、約２アミノ酸～約２０アミノ酸、約５アミノ酸～約７アミノ酸、約５アミノ酸～約８アミノ酸、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約５アミノ酸～約２０アミノ酸、約７アミノ酸～約８アミノ酸、約７アミノ酸～約１０アミノ酸、約７アミノ酸～約１５アミノ酸、約７アミノ酸～約２０アミノ酸、約８アミノ酸～約１０アミノ酸、約８アミノ酸～約１５アミノ酸、約８アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、又は約１５アミノ酸～約２０アミノ酸が切断されたＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－１５ポリペプチドと比べて）約２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸が切断されたＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－１５ポリペプチドと比べて）少なくとも約２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、又は約１５個のアミノ酸が切断されたＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ＩＬ－１５ポリペプチドに対して）最大でも約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸が切断されたＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＩＬ－１５ポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号５に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号５に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号５に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号５に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＩＬ－１５配列を含む。
ＴＧＦβ阻害ポリペプチド
本明細書に記載されるように、本明細書で提供する融合タンパク質は、一般に、ＴＧＦβ活性を阻害する２つ以上のポリペプチド（例えば、ＴＧＦβタンパク質を結合する２つ以上のポリペプチド）に融合（例えば、連結）したインターロイキンポリペプチド（例えば、ＩＬ－２又はＩＬ－１５）を含む。形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）スーパーファミリーは、多くの細胞タイプの活性化、増殖、及び分化を開始及び制御し、したがって、胚発達及び恒常性において重要な役割を果たす可溶性因子（例えば、タンパク質）の大群である。ＴＧＦβスーパーファミリーは、いくつかのサブファミリーを含む：アクチビン／インヒビンファミリー、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、成長分化因子（ＧＤＦ）、ＴＧＦβサブファミリー、及びグリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）ファミリー。ＴＧＦβスーパーファミリーには３つの種類がある：ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３。ＴＧＦβスーパーファミリータンパク質は、無脊椎動物及び脊椎動物を含む様々な種で発見されている。ＴＧＦβの機能不全は、発達障害、臓器機能の重度の欠陥を引き起こす可能性があり、様々な種類のがんを含むいくつかの疾患に関連している。
ＴＧＦβスーパーファミリー活性の阻害及び抑制は、インターロイキンポリペプチドに加えて、２つ以上のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドを含む融合タンパク質の使用によって達成することができる。本明細書に記載の融合タンパク質との関連で、２つ以上のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、２つ以上のＴＧＦβタンパク質を結合することができる多価の一本鎖ポリペプチドを産生する。一般に、ＴＧＦβスーパーファミリーのリガンドは、Ｉ型及びＩＩ型受容体サブユニットからなる受容体複合体に結合する。本明細書に開示されるように、ＴＧＦβスーパーファミリー受容体に由来するポリペプチドは、ＴＧＦβスーパーファミリーリガンドの阻害又は抑制に有用である。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＧＦβスーパーファミリー受容体は、アクチビン受容体ポリペプチド又はその断片、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体ポリペプチド又はその断片、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）受容体ポリペプチド又はその断片、及びＴＧＦβ受容体ポリペプチド又はその断片からなる群から選択される。
タンパク質のＴＧＦβスーパーファミリー内で、タンパク質のＴＧＦβサブファミリーは、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３を含む。ＴＧＦβタンパク質の生物学的効果のうちの１つは、自己分泌作用機序を使用したほとんどの正常な上皮細胞の増殖の阻害であり、これはＴＧＦβの腫瘍抑制因子の役割を示唆している。外因性ＴＧＦβに対する自己分泌ＴＧＦβ活性及び／又は応答性の喪失は、悪性進行につながる成長優位性を有するいくつかの上皮細胞を提供するようである。これは、ＴＧＦβの腫瘍抑制因子の役割に加えて、腫瘍形成促進（ｐｒｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ）の役割を示唆している。ＴＧＦβの中で、β１、β２、β３、ＴＧＦβ１は、これまでに記載された中で最も強力な免疫抑制サイトカインであり、がん細胞に対する免疫系応答のいくつかの成分に有害な影響（例えば、免疫抑制）を及ぼし、がんによって最も頻繁に過剰発現される。特に、ＴＧＦβタンパク質（例えば、ＴＧＦβ１）は、マクロファージ、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞、及びＮＫ細胞のエフェクター機能を減少又は低下させ、ここで、ＴＧＦβは、そのメディエータであるＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、及びＳＭＡＤ４を介してＩＦＮγ産生の負の調節因子として作用する。免疫抑制に加えて、ＴＧＦβタンパク質は、上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）及び腫瘍関連血管新生を構成的に誘導することによって、後期がんにおける転移促進性及び血管新生促進性因子として作用することができる。
ほとんどの細胞タイプは、Ｉ型（５３ｋＤａ）、ＩＩ型（７０～８５ｋＤａ）、及びＩＩＩ型（２５０～３５０ｋＤａ）と呼ばれる３つのサイズのＴＧＦβ受容体を発現する。Ｉ型受容体は、ＴＧＦβを結合するためにＩＩ型受容体の存在を明らかに必要とする、膜結合セリン／スレオニンキナーゼである。ＩＩ型受容体はまた、膜結合セリン／スレオニンキナーゼであり、高い親和性でＴＧＦβ１及びＴＧＦβ３を結合し、はるかに低い親和性でＴＧＦβ２を結合する。Ｉ型及びＩＩ型受容体は共に、ＴＧＦβの抗増殖性シグナルの形質導入に不可欠なヘテロ二量体シグナル伝達複合体を形成する。ＩＩＩ型受容体は、大きな細胞外ドメイン及び４３個のアミノ酸残基細胞質ドメインを有する膜貫通プロテオグリカンである。ＩＩＩ型受容体の細胞質ドメインは、明らかなシグナル伝達モチーフを欠き、受容体は、シグナル伝達に直接関与しない場合がある。特に、受容体の細胞外ドメインからなるＴβＲＩＩの可溶性細胞外ドメインは、高い親和性でＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３を結合する。
したがって、ＴＧＦβ受容体ＴβＲＩＩポリペプチドは、本明細書に記載される多機能性融合タンパク質のＴＧＦβ結合ポリペプチドに有用である。特に、ＴＧＦβ受容体ＴβＲＩＩポリペプチドは、ＴＧＦβ１活性又はそれに関連するシグナル伝達を阻害又は低減するのに有用である。本明細書で使用される場合、「可溶性形質転換成長因子（ＴＧＦ）β受容体ＩＩＢ型又はｓＴβＲＩＩ型」という用語は、代替的にスプライシングされた形質転換成長因子βＩＩ型受容体、好ましくは、任意の種若しくは供給源からのＴＧＦβＩＩ型受容体のエクトドメインの可溶性又は非膜形態を指し、全長エクトドメイン及びエクトドメインの断片又は部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓＴβＲＩＩＢは、ヒト又はマウスである。ヒトＴＧＦβ受容体ＩＩは、配列番号５又は６のアミノ酸配列（それぞれ短アイソフォーム及び長アイソフォーム）を有する。本明細書で使用される場合、「ｓＴβＲＩＩ断片」という用語は、参照ポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ以上を意味する。一実施形態では、ＩＬ－２は、クローニングを可能にするために、Ｎ末端又はＣ末端で切断される。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号７に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号７に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号７に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号７に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。
本明細書に記載されるように、２つ以上のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドは、天然ｓＴＢＲＩＩ受容体のエクトドメインを利用する。したがって、本明細書で使用するｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドは、配列番号８（例えば、ｓＴＢＲＩＩの短アイソフォーム）、配列番号９（例えば、ｓＴＢＲＩＩの長アイソフォーム）、又はそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号８に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号８に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号８に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号８に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＴＢＲＩＩ配列を含む。
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９に対して約８５％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９に対して約８５％～約９０％、約８５％～約９５％、約８５％～約９６％、約８５％～約９７％、約８５％～約９８％、約８５％～約９９％、約８５％～約１００％、約９０％～約９５％、約９０％～約９６％、約９０％～約９７％、約９０％～約９８％、約９０％～約９９％、約９０％～約１００％、約９５％～約９６％、約９５％～約９７％、約９５％～約９８％、約９５％～約９９％、約９５％～約１００％、約９６％～約９７％、約９６％～約９８％、約９６％～約９９％、約９６％～約１００％、約９７％～約９８％、約９７％～約９９％、約９７％～約１００％、約９８％～約９９％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９に対して約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％の配列同一性を有するｓＴＢＲＩＩ配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９に対して少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するＴＢＲＩＩ配列を含む。
配列番号８又は配列番号９のｓＴＢＲＩＩポリペプチドは、その追加の切断を含むことができる。いくつかの実施形態では、ｓＴＢＲＩＩポリペプチドは、切断型ｓＴＢＲＩＩポリペプチドである。切断型ｓＴＢＲＩＩポリペプチドは、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ｓＴＢＲＩＩポリペプチドと比べて）約２個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸が切断されたｓＴＢＲＩＩを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ｓＴＢＲＩＩポリペプチドと比べて）約２アミノ酸～約５アミノ酸、約２アミノ酸～約７アミノ酸、約２アミノ酸～約８アミノ酸、約２アミノ酸～約１０アミノ酸、約２アミノ酸～約１５アミノ酸、約２アミノ酸～約２０アミノ酸、約５アミノ酸～約７アミノ酸、約５アミノ酸～約８アミノ酸、約５アミノ酸～約１０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約５アミノ酸～約２０アミノ酸、約７アミノ酸～約８アミノ酸、約７アミノ酸～約１０アミノ酸、約７アミノ酸～約１５アミノ酸、約７アミノ酸～約２０アミノ酸、約８アミノ酸～約１０アミノ酸、約８アミノ酸～約１５アミノ酸、約８アミノ酸～約２０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２０アミノ酸、又は約１５アミノ酸～約２０アミノ酸が切断されたｓＴＢＲＩＩを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、約２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸が切断されたｓＴＢＲＩＩを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、少なくとも約２個のアミノ酸、約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、又は約１５個のアミノ酸が切断されたｓＴＢＲＩＩを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（例えば、全長ｓＴＢＲＩＩポリペプチドに対して）最大でも約５個のアミノ酸、約７個のアミノ酸、約８個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、又は約２０個のアミノ酸が切断されたｓＴＢＲＩＩを含む。
好適なｓＴＢＲＩＩ配列又はバリアント配列（例えば、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、及び／又は挿入を有するｓＴＢＲＩＩポリペプチド配列）は、本明細書に記載される（例えば、実施例１～３のいずれか１つに記載されるような）ＴＧＦβを封鎖又は結合する方法のうちのいずれかによって同定することができる。
多機能性及び多価融合タンパク質組成物
本明細書では、融合ポリペプチドであって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドが提供される。また、本明細書では、ＩＬ受容体に結合し、かつそれを作動させる第１のＩＬポリペプチドと、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第２のポリペプチドと、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第３のポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドも提供される。
いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－１５である。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－１５である。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬポリペプチドは、切断型ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２配列は、（例えば、配列番号３におけるように）６２位にアラニンを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号８、配列番号９、又はそれらの組み合わせを含む可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列の切断を含む。ある特定の実施形態では、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第２のポリペプチド、及び／又は可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第３のポリペプチドは、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第２のポリペプチド、及び／又は可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第３のポリペプチドは、配列番号８、配列番号９、又はそれらの組み合わせを含む可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦ－β１ポリペプチド、ＴＧＦ－β２ポリペプチド、ＴＧＦ－β３ポリペプチド、アクチビンβＡポリペプチド、アクチビンβＢポリペプチド、アクチビンβＣポリペプチド、アクチビンβＥポリペプチド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）２ポリペプチド、ＢＭＰ３ポリペプチド、ＢＭＰ４ポリペプチド、ＢＭＰ５ポリペプチド、ＢＭＰ６ポリペプチド、ＢＭＰ７ポリペプチド、ＢＭＰ８ポリペプチド、ＢＭＰ９ポリペプチド、ＢＭＰ１０ポリペプチド、ＢＭＰ１１ポリペプチド、ＢＭＰ１２ポリペプチド、ＢＭＰ１３ポリペプチド、ＢＭＰ１４ポリペプチド、ＢＭＰ１５ポリペプチド、成長分化因子（ＧＤＦ）１ポリペプチド、ＧＤＦ３ポリペプチド、ＧＤＦ８ポリペプチド、ＧＤＦ９ポリペプチド、ＧＤＦ１５ポリペプチド、ノーダルポリペプチド、インヒビンαポリペプチド、抗ミュラー管ホルモンポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ１ポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ２ポリペプチド、アルテマンポリペプチド、ペルセフィンポリペプチド、又はニュールツリンポリペプチドを標的とする。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はこれらの任意の組み合わせを結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチドを結合する。
別の実施形態では、第２のポリペプチド及び／又は第３のポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はそれらの任意の組み合わせに結合し、かつそれを封鎖する。ある特定の実施形態では、第２のポリペプチド及び／又は第３のポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチドに結合し、かつそれを封鎖する。
融合ポリペプチドのポリペプチドは、リンカーアミノ酸配列を介して「融合」又は「連結」され得る。リンカーは、いずれかの標的化ポリペプチド（例えば、ＩＬ２ポリペプチド又はＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチド）の結合を阻害しないように、ポリペプチドリンカー又は好適な可撓性の他のリンカーであってもよい。リンカーポリペプチドは、非構造化（例えば、二次構造を欠く）、構造化、又はそれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、ＩＬポリペプチド又は可溶性ＴＢＲＩＩポリペプチドの天然アミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＩＬポリペプチド又はＴＧＦ受容体ポリペプチドに対して天然ではない。例えば、非天然リンカーは、ポリグリシン、ポリアラニン、ポリセリンアミノ酸、又はそれらの組み合わせ（例えば、ＧＳＳＧ（配列番号２６）、ＧＧＳＳ（配列番号２７）、ＧＳＡＧＧ（配列番号２８）など）を含むことができる。
いくつかの実施形態では、リンカーは、非天然又は合成リンカーである。本明細書で使用される場合、「合成リンカー」という用語は、標的化剤に共有結合され、かつ細胞傷害性部分にも共有結合される原子群を含むか、又は原子群に由来する化学部分を含む。リンカーとしては、二価ラジカル、例えば、アルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、－（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ－などの部分（式中、Ｒ２が、独立して、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレノキシ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙ）、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標）などのポリエーテルアミン）の繰り返し単位であり、ｎが、独立して、１を超える、具体的には、ｎが、１～１５であり得る）を含むか、それらに由来する化合物；実施例１に記載されるリンカー、Ｎ－スクシンイミジル４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及びＮ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）を含む化合物；並びにスクシネート、スクシンアミド、ジグリコレート、マロネート、及びカプロアミドを含む二酸エステル及びアミド、並びにペプチド（例えば、１つ以上のｌｙｓ残基又は標的化剤及び細胞傷害性部分に連結するための他の好適な化学基を有する、Ｇ、Ａ及びＣの繰り返し単位（例えば、１０個まで）などであるが、これらに限定されない）が挙げられる。任意選択的に、リンカーは、非置換であるか又は１つ以上の置換基で置換され、かつ／又は任意選択的に、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１から独立して選択される１つ以上のヘテロ部分で中断され、かつ／又は任意選択的に、Ｃ（Ｏ）及びＣ（Ｓ）（式中、Ｒ１が、独立して、Ｈ及びＣ１－６アルキルから選択される）のうちの１つ以上で中断される、Ｃ１－３０アルキレンである。リンカーは、ペプチド結合又はジスルフィド結合などの切断不可能な（安定なリンカー）又は切断可能な単位（不安定なリンカー）を含むことができる。リンカーは、反応性官能基を介して、標的化剤及び／又は細胞傷害性部分にコンジュゲートすることができる。
切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーの両方を、融合タンパク質（ＡＤＣ）の合成に使用することができる。切断可能なリンカーとしては、リソソームプロテアーゼに感受性であるか、若しくは酸性ｐＨに感受性であるかのいずれかであるモチーフ（例えば、加水分解されて、ゲムツズマブオゾガマイシン及びイノツズマブオゾガマイシン中でリンカーを切断するヒドラゾン）が挙げられるか、又はそれらは、グルタチオンによって還元され得るジスルフィド架橋を含有することができる。ジスルフィド架橋の立体障害は、細胞内の早期切断を制限するように最適化され得る。一般に、ジスルフィドリンカーは、最初に切断されてチオール化合物を放出する。ヒドラゾンなどの酸切断可能なリンカーは、血液循環中の中性ｐＨで安定したままであるように設計されているが、酸性細胞区画では加水分解を受け、細胞傷害性薬物を放出する。
いくつかの実施形態では、リンカー（例えば、ペプチドリンカー）は、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸～約４０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約７５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸、又は約７５個のアミノ酸～約１００個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約７５個のアミノ酸、又は約１００個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも約１０個のアミノ酸、約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、又は約７５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、最大でも約１５個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸、約２５個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸、約４０個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、約７５個のアミノ酸、又は約１００個のアミノ酸を含む。
一般に、融合ポリペプチドの異なるポリペプチド要素は、Ｎ末端からＣ末端まで、任意の数の異なる組み合わせで配置又は順序付けられ得る。例えば、本明細書に記載されるのは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＩＬポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドである。更なる例として、本明細書に記載の融合ポリペプチドはまた、Ｎ末端からＣ末端まで、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、ＩＬポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含むことができる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、薬物動態エクステンダーポリペプチド（例えば、Ｆｃポリペプチド又はＨＳＡポリペプチド）を更に含み、薬物動態エクステンダーを更に含む融合ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、任意の数の異なる組み合わせで配置又は順序付けられ得る。図３は、ＩＬポリペプチドと、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチド（例えば、配列番号１０～２５）の例示的な実施形態の非限定的な概略図を示す。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０～２０のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１０を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１１を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１２を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１３を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１４を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１５を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１６を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１７を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１８を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号１９を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号２０を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号２１を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号２２を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号２３を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号２４を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５のものに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合物は、配列番号２５を含む。
いくつかの実施形態では、二価ＦＩＳＴ融合ポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸修飾（例えば、置換、欠失、切断など）を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチド配列は、約５個を超えるアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチド配列は、約５個を超えるアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約１０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約１５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約１５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、又は約２０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）～約２５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチド配列は、約５個を超えるアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約１５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、約２０個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）、又は約２５個のアミノ酸修飾変異（例えば、置換、欠失、切断など）を含む。いくつかの実施形態では、修飾は、ＩＬ－２受容体に対する親和性を増加させる。特定の実施形態では、ＩＬ－２受容体は、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５と称される）を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２受容体は、ＩＬ－２Ｒβを含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２受容体は、ＩＬ－２Ｒγを含む。ある特定の実施形態では、修飾は、ＩＬ－２Ｒβに対する親和性を増加させ、ＩＬ－２Ｒαに対する親和性を減少させる。ＩＬ－２受容体に対するＩＬ－２親和性に影響を及ぼすこのような変異としては、当該分野で既知のものが挙げられる。好適な二価ＦＩＳＴ配列又はバリアント配列（例えば、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、及び／若しくは挿入を有する融合ポリペプチド配列）は、本明細書に記載の（例えば、実施例１～５のいずれか１つに記載されるような）免疫細胞を活性化させる（例えば、ＩＦＮ－ガンマ分泌の増加、増殖の増加など）方法及びＴＧＦβを封鎖若しくは結合する（例えば、ＴＧＦβ結合など）方法のうちのいずれかによって同定することができる。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列からなる。
本明細書に開示される融合ポリペプチドは、薬物動態調節ポリペプチド（例えば、治療剤の薬物動態プロファイルを改善するポリペプチド）を更に含むことができる。例えば、融合タンパク質は、ＩＬポリペプチドのＮ末端に融合した免疫グロブリンＦｃポリペプチド又はヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）ポリペプチドを更に含むことができる。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＰＫ調節物質は、アルブミンポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、アルブミンポリペプチドは、ヒトアルブミンポリペプチドである。
ある特定の実施形態では、本開示の融合ポリペプチドは、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、及び希釈剤を含む薬学的組成物に含まれる。ある特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質は、滅菌溶液中に懸濁して投与される。ある特定の実施形態では、溶液は、約０．９％のＮａＣｌを含む。ある特定の実施形態では、溶液は、約５．０％のデキストロースを含む。ある特定の実施形態では、溶液は、緩衝液、例えば、アセテート、シトレート、ヒスチジン、スクシネート、ホスフェート、バイカーボネート、及びヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、及びポロキサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖類、例えば、グルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、グリシン又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオン、又はキレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸又はエチレングリコール－ビス（β－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸のうちの１つ以上を更に含む。
ある特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質は、出荷／貯蔵され、凍結乾燥され、再構成されてから投与される。ある特定の実施形態では、凍結乾燥された融合ポリペプチド製剤は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、デキストラン４０、又はそれらの組み合わせなどの増量剤を含む。凍結乾燥製剤は、ガラス又は他の好適な非反応性材料から構成されるバイアルに含有され得る。再構成されたか否かにかかわらず、製剤化されると、融合タンパク質は、特定のｐＨ、一般に７．０未満で緩衝され得る。ある特定の実施形態では、ｐＨは、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、又は５．０～６．０であり得る。
ある特定の実施形態では、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤と、本開示の融合ポリペプチドとを混合することを含む、がん治療剤（ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を調製する方法を本明細書に記載する。ある特定の実施形態では、本開示の１つ以上の融合ポリペプチドを凍結乾燥することを含む、貯蔵又は出荷のためのがん治療剤を調製する方法を本明細書に記載する。
本明細書に記載の融合ポリペプチド（例えば、配列番号１０～２５）は、核酸によってコードされ得る。核酸は、２つ以上のヌクレオチド塩基を含む種類のポリヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、核酸は、ポリヌクレオチドをコードするポリペプチドを細胞に移入するために使用することができるベクターの成分である。本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの１つの種類は、ゲノム組み込み型ベクター（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｖｅｃｔｏｒ）、又は「組み込み型ベクター」であり、これは、宿主細胞の染色体ＤＮＡに組み込まれ得る。ベクターの別の種類は、「エピソーム」ベクター、例えば、染色体外複製が可能な核酸である。それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することができるベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。好適なベクターは、プラスミド、細菌人工染色体、酵母人工染色体、ウイルスベクターなどを含む。プロモーター、エンハンサー、転写の制御に使用するためのポリアデニル化シグナルなどの発現ベクター調節要素は、哺乳動物、微生物、ウイルス又は昆虫遺伝子に由来し得る。通常、複製起点によって付与される、宿主において複製する能力、及び形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子は、追加的に組み込まれ得る。レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどのウイルスに由来するベクターを用いてもよい。プラスミドベクターは、染色体位置への組み込みのために線形化され得る。ベクターは、ゲノム内の定義された位置又は制限されたセットの部位への部位特異的組み込み（例えば、ＡｔｔＰ－ＡｔｔＢ組換え）を指示する配列を含むことができる。更に、ベクターは、転位因子（ｔｒａｎｓｐｏｓａｂｌｅ ｅｌｅｍｅｎｔ）に由来する配列を含むことができる。
使用方法
本明細書に開示される融合ポリペプチドは、がん療法のための有効な血管新生抑制及び抗がん化合物として有用である。例えば、開示された融合ポリペプチドは、その単一の成分又は組み合わせによって達成されないＩＬ－２受容体の下流の独自の遺伝子発現プロファイルを誘導する有効な免疫療法であり、これは新しい薬理学的特性をもたらす。これらの新規の多機能性タンパク質は、がん細胞を効果的に排除するために相乗的に作用するいくつかの免疫系メカニズム及びシグナル伝達経路を同時に活性化させることができる。細胞レベルでは、免疫療法プラットフォームは、部分的に、ＧＭ－ＣＳＦ誘導が悪性細胞に対する特異的免疫反応のカスケードを誘発することに起因して、リンパ系細胞（例えば、Ｔ、Ｂ、ＮＫ、及びＮＫ－Ｔ細胞）及び間接的にプライム抗原提示細胞（例えば、樹状細胞及びマクロファージ）の全体（ｐａｎｏｐｌｙ）を活性化させる。分子レベルでは、それは先天性及び適応性免疫応答を増強するために不可欠な重要な転写因子及びシグナル伝達分子を活性化させる。本明細書に記載される融合ポリペプチドは、がんに対して免疫系の様々なアームを標的とし、同期させる。
したがって、本明細書に開示されるのは、がんを有する個体における腫瘍の成長、血管新生、及び／又は進行を阻害又は低減する方法であって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを個体に投与し、それにより、個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減することを含む、方法である。更に、提供されるのは、がんを有する個体における腫瘍の成長、血管新生、及び／又は進行を阻害又は低減する方法で使用するための融合ポリペプチドであって、当該方法が、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを個体に投与し、それにより、個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減することを含む、融合ポリペプチドである。
また、本明細書に開示されるのは、がんを有する個体における腫瘍の成長、血管新生、及び／又は進行を阻害又は低減する方法であって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを個体に投与することを含み、融合ポリペプチドが、免疫細胞を活性化させる、方法である。更に、提供されるのは、がんを有する個体における腫瘍の成長、血管新生、及び／又は進行を阻害又は低減する方法で使用するための融合ポリペプチドであって、当該方法が、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを個体に投与することを含み、融合ポリペプチドが、免疫細胞を活性化させる、融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、活性化は、細胞増殖の増加、サイトカインシグナル伝達（例えば、ＩＦＮγ）の増加、及び／又はＴＧＦβ１媒介性抑制の低減を含む。
更に、開示されるのは、がんを有する個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷する方法であって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを個体に投与し、それによって、個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷することを含む、方法である。更に、提供されるのは、がんを有する個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷する方法で使用するための融合ポリペプチドであって、当該方法が、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを個体に投与し、それによって、個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷することを含む、融合ポリペプチドである。
また、開示されるのは、がんを有する個体におけるがんを治療又は改善する方法であって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを対象に投与し、それによって、個体におけるがんを治療又は改善することを含む、方法である。更に、提供されるのは、がんを有する個体におけるがんを治療又は改善する使用方法のための融合ポリペプチドであって、当該方法が、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを対象に投与し、それによって、個体におけるがんを治療又は改善することを含む、融合ポリペプチドである。
また、提供されるのは、ＩＬ受容体を発現する細胞を活性化させる方法であって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを細胞と接触させることを含む、方法である。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。免疫細胞は、インビボ又はエクスビボで接触させ、その後活性化させることができる。インビボで、免疫細胞は、腫瘍微小環境内に存在し得る。更に、提供されるのは、ＩＬ受容体を発現する細胞を活性化させる方法で使用するための融合ポリペプチドであって、当該方法が、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチドを細胞と接触させることを含む、融合ポリペプチドである。
本明細書に開示される融合ポリペプチドを使用した免疫細胞のエクスビボ活性化を利用する方法もまた実施される。例えば、開示されるのは、免疫細胞をエクスビボで活性化させる方法であって、（ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、（ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、（ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、組成物を免疫細胞と接触させることを含む、方法である。このような方法は、活性化させた免疫細胞をがん又は腫瘍を有する個体に投与することによって、がん又は腫瘍の治療に適用することができる。例えば、本明細書に記載の融合ポリペプチドは、免疫細胞のエクスビボ活性化のための方法において有用である。免疫細胞のエクスビボ処置は、キメラ抗原受容体細胞療法の創成のための免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ又はＣＡＲ－ＮＫ細胞及びＢ細胞）の生成及び増殖にも有用である。例えば、免疫細胞を含む白血球パック（例えば、白血球アフェレーシス製品）を、本明細書に開示される融合ポリペプチドと接触させて、キメラ抗原受容体細胞療法で使用されるＴ細胞又はＮＫ細胞を増殖させることができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する。いくつかの実施形態では、がんは、血液がんである。
いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－１５である。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、ＩＬポリペプチドは、ＩＬ－１５である。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号３に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号５に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＬポリペプチドは、切断型ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号８、配列番号９、又はそれらの組み合わせを含む可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列の切断を含む。ある特定の実施形態では、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦ－β１ポリペプチド、ＴＧＦ－β２ポリペプチド、ＴＧＦ－β３ポリペプチド、アクチビンβＡポリペプチド、アクチビンβＢポリペプチド、アクチビンβＣポリペプチド、アクチビンβＥポリペプチド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）２ポリペプチド、ＢＭＰ３ポリペプチド、ＢＭＰ４ポリペプチド、ＢＭＰ５ポリペプチド、ＢＭＰ６ポリペプチド、ＢＭＰ７ポリペプチド、ＢＭＰ８ポリペプチド、ＢＭＰ９ポリペプチド、ＢＭＰ１０ポリペプチド、ＢＭＰ１１ポリペプチド、ＢＭＰ１２ポリペプチド、ＢＭＰ１３ポリペプチド、ＢＭＰ１４ポリペプチド、ＢＭＰ１５ポリペプチド、成長分化因子（ＧＤＦ）１ポリペプチド、ＧＤＦ３ポリペプチド、ＧＤＦ８ポリペプチド、ＧＤＦ９ポリペプチド、ＧＤＦ１５ポリペプチド、ノーダルポリペプチド、インヒビンαポリペプチド、抗ミュラー管ホルモンポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ１ポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ２ポリペプチド、アルテマンポリペプチド、ペルセフィンポリペプチド、又はニュールツリンポリペプチドを標的とする。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はこれらの任意の組み合わせを結合する。いくつかの実施形態では、第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドは、ＴＧＦβ１ポリペプチドを結合する。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、配列番号１０～２０のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
「がん」という用語は、原発性悪性腫瘍（例えば、その細胞が元の腫瘍の部位以外の対象の体内の部位に移行していないもの）及び二次性悪性腫瘍（例えば、転移、元の腫瘍の部位とは異なる二次部位への腫瘍細胞の移行から生じるもの）を含む。
「腫瘍」は、悪性であるか良性であるかにかかわらず、腫瘍性細胞の成長及び増殖、並びに全ての前がん性及びがん性細胞及び組織を指す。
本明細書に開示される方法は、固形腫瘍を含むがんの治療又は固形腫瘍の治療に有用である。「固形腫瘍」という用語は、例えば、乳がん、卵巣がん、結腸がん、及び概してＧＩ（胃腸）管、子宮頸がん、肺がん、特に小細胞肺がん及び非小細胞肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、前立腺がん、又はカポジ肉腫を指す。融合ポリペプチドは、固形腫瘍の成長を中和及び／又は阻害する。更に、腫瘍の種類及び使用される特定の組み合わせに応じて、腫瘍体積の減少を得ることができる。本明細書に開示される組み合わせはまた、腫瘍の転移性拡散及び微小転移の成長又は発達を防止するのに適している。本明細書に開示される組み合わせは、特に、予後不良の患者、特に転移性黒色腫又は膵臓がんを有するそのような予後不良の患者の治療に適している。
更に、本明細書に開示される方法は、血液がんの治療に有用である。「血液がん」という用語は、血液のがんを指し、とりわけ、白血病及び悪性リンパ増殖性障害を含む。「白血病」は、あまりにも多くの白血球又は赤血球が作られるため、血小板及び正常な赤血球などの、血液を構成する他の部分が圧迫される血液のがんを指す。白血病の症例は、急性又は慢性に分類されることが理解される。急性白血病におけるがん細胞は、未成熟期に遮断されるが、増殖を続ける。慢性白血病は、よりゆっくりと進行し、がん細胞は、完全に成熟するまで発達する。更に、白血球は、骨髄性又はリンパ性であり得る。したがって、ある特定の形態の白血病は、例として、急性リンパ性（又はリンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び骨髄異形成症候群であり得る。「悪性血液障害」は、とりわけ、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫、又は多発性骨髄腫などのリンパ腫を指し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるのは、がん又は腫瘍の治療に有用な融合タンパク質である。治療は、治療中の状態を改善（ｉｍｐｒｏｖｅ）又は改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）しようとする方法を指す。がんに関して、治療には、腫瘍体積の減少、腫瘍体積の増加の減少、無増悪生存期間又は全体的な平均余命の増加が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、治療は、治療中のがんの寛解に影響を及ぼし得る。ある特定の実施形態では、治療は、以前に治療されたがん又は腫瘍の再発又は進行を防止することを意図した予防用量又は維持用量としての使用を包含する。当業者であれば、全ての個体が施される治療に等しく又はまったく応答するわけではないことが理解され、それにもかかわらず、これらの個体は治療されていると見なされる。
本明細書で提供する融合ポリペプチドは、免疫応答（例えば、抗腫瘍免疫応答）の活性化に有用である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、融合ポリペプチドは、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する。したがって、いくつかの実施形態では、治療すること又は治療は、腫瘍細胞を標的とする免疫エフェクター細胞を活性化させること、及び／又は免疫抑制細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、腫瘍関連好中球（ＴＡＮ）、及びがん関連線維芽細胞（ＣＡＦ））の活性化を低減することを含む。
「Ｔ細胞」という用語は、ＰＢＭＣ中に存在し、「ＣＤ３」（Ｔ細胞受容体）の表面マーカーを発現するリンパ球細胞のサブセットを指す。別途示されない限り、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋（例えば、Ｔヘルパー細胞）及びＣＤ８＋（例えば、細胞傷害性キラー細胞）を含むことが意図される。
本明細書に提供される方法は、Ｔ調節細胞などの免疫抑制免疫細胞の抑制又は低減にも有用である。「Ｔｒｅｇ」又は「調節性Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ４＋ＣＤ２５－及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖及び／又はエフェクター機能を抑制する、及び／又はそうでなければ免疫応答を下方調節するＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯｘＰ３＋Ｔ細胞を指す。特に、Ｔｒｅｇは、ＣＤ８Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及び他の免疫細胞によって媒介される免疫応答を下方制御し得る。いくつかの実施形態では、免疫抑制細胞の分化又は活性化の遮断又は防止を更に包含する。
特定の実施形態では、がん又は腫瘍は、固形がん又は腫瘍である。特定の実施形態では、がん又は腫瘍は、血液がん又は腫瘍である。ある特定の実施形態では、がん又は腫瘍は、乳房、心臓、肺、小腸、結腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、及び肝臓腫瘍を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質で治療することができる腫瘍は、腺腫、腺がん、血管肉腫、星細胞腫、上皮がん、胚細胞腫、膠芽腫、神経膠腫、血管内皮腫、血管肉腫、血腫、肝芽腫、白血病、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫及び／又は奇形腫を含む。ある特定の実施形態では、腫瘍／がんは、末端性黒子性黒色腫、日光角化症、腺がん、腺様嚢胞がん、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮がん、星細胞系腫瘍、バルトリン腺がん、基底細胞がん、気管支腺がん、毛細血管がん、がん腫、がん肉腫、胆管がん、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜異型増殖症、子宮内膜間質肉腫、類子宮内膜腺がん、上衣肉腫（ｅｐｅｎｄｙｍａｌ ｓａｒｃｏｍａ）、スイングの肉腫（Ｓｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、限局性結節性過形成、ガストロノーマ、生殖細胞腫瘍（ｇｅｒｍ ｌｉｎｅ ｔｕｍｏｒ）、膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽腫、血管内皮腫、血管腫、肝細胞腺腫、肝腺種症（ｈｅｐａｔｉｃ ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｉｓ）、肝細胞がん、インスリン炎（ｉｎｓｕｌｉｎｉｔｅ）、上皮内腫瘍、上皮内扁平上皮内腫瘍（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ）、浸潤性扁平上皮がん、大細胞がん、脂肪肉腫、肺がん、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘腫瘍、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘表皮がん、骨髄性白血病、神経芽細胞腫、神経上皮腺がん、結節性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん、乳頭漿液性腺がん、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、前立腺がん、肺芽腫、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性がん、扁平上皮がん（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小細胞がん、軟部組織がん、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平上皮がん（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮がん（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、未分化がん、ブドウ膜黒色腫、疣贅性がん、膣／外陰がん、ＶＩＰｐｏｍａ、及びウィルムス腫瘍からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の融合タンパク質で治療される腫瘍／がんは、脳がん、頭頸部がん、結腸直腸がん、急性骨髄性白血病、前Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、膀胱がん、星細胞腫、好ましくはグレードＩＩ、ＩＩＩ若しくはＩＶ星細胞腫、膠芽腫、多形性膠芽腫、小細胞がん及び非小細胞がん、好ましくは非小細胞肺がん、肺腺がん、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺がん、アンドロゲン依存性転移性前立腺がん、前立腺がん、並びに乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ）、好ましくは乳管がん、及び／若しくは乳がん（ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む。特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質で治療されたがんは、膠芽腫を含む。特定の実施形態では、本開示の１つ以上の融合タンパク質で治療されたがんは、膵臓がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ以上の融合タンパク質で治療されたがんは、卵巣がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ以上の融合タンパク質で治療されたがんは、肺がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ以上の融合タンパク質で治療されたがんは、前立腺がんを含む。特定の実施形態では、本開示の１つ以上の融合タンパク質で治療されたがんは、結腸がんを含む。ある特定の実施形態では、治療されるがんは、膠芽腫、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん、又は肺がんを含む。ある特定の実施形態では、がんは、他の治療に対して不応性である。ある特定の実施形態では、治療されたがんは、再発する。ある特定の実施形態では、がんは、再発性／難治性膠芽腫、膵臓がん、卵巣がん、結腸がん、前立腺がん、又は肺がんである。
「腫瘍微小環境」という用語は、腫瘍細胞の成長及び転移をサポートするために、固形腫瘍の中及び周囲の微小環境（例えば、悪性細胞又は悪性細胞のクラスターが位置する領域／領域）を指す。腫瘍微小環境としては、周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、他の細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外マトリックス、及び腫瘍性形質転換を促進し、腫瘍の成長及び浸潤をサポートし、宿主免疫から腫瘍を保護し、治療抵抗性を促進し、休眠転移（ｄｏｒｍａｎｔ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ）が成功するためのニッチを提供することができる機械的手がかりを含む。腫瘍とその周囲の微小環境は密接に関連しており、絶えず相互作用している。腫瘍は、細胞外シグナルを放出し、腫瘍血管新生を促進し、末梢性免疫寛容を誘導することによってその微小環境に影響を与えることができるが、微小環境中の免疫細胞は、がん細胞の成長及び進化に影響を与えることができる。
ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は脳内などの融合タンパク質含有薬学的組成物の投与に好適な任意の経路によって、それを必要とする対象に投与され得る。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、静脈内に投与される。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、皮下に投与される。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、腫瘍内投与される。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、好適な投与スケジュール、例えば、毎週、毎週２回、毎月、毎月２回、２週間に１回、３週間に１回、又は月に１回などで投与される。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、３週間に１回投与される。融合タンパク質は、任意の治療有効量で投与され得る。ある特定の実施形態では、治療上許容される量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、治療上許容される量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、治療上許容される量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇである。治療有効量には、治療される疾患又は苦痛に関連する１つ以上の症状を改善するのに十分な量が含まれる。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記、並びに他の技術及び科学用語（ｔｅｒｍ）又は用語（ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ）は、特許請求された主題が関係する技術分野の当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有することが意図される。一部の場合では、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするために、及び／又は容易に参照できるように本明細書に定義され、本明細書にそのような定義を含めることは、必ずしも、当該技術分野において一般に理解されるものとは実質的な違いを表すと解釈されるべきではない。
本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療すること」という用語は、レシピエントにおいて有益な又は所望の結果を得るための薬学的又は他の介入レジメンに関連して使用される。有益な又は所望の結果としては、治療上の利益及び／又は予防的利益が挙げられるが、これらに限定されない。治療上の利益は、症状の根絶又は改善、又は治療中の基礎障害の根絶又は改善を指し得る。また、治療上の利益は、対象が依然として基礎障害に罹患している可能性があるにもかかわらず、対象において改善が観察されるように、基礎障害に関連する生理学的症状のうちの１つ以上の根絶又は改善とともに達成され得る。予防効果としては、疾患若しくは状態の出現を遅らせるか、予防するか、又は排除すること、疾患若しくは状態の症状の発症を遅らせるか、又は排除すること、疾患若しくは状態の進行を遅らせるか、停止させるか、又は逆転させること、あるいはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。予防的利益については、特定の疾患を発症するリスクのある対象、又は疾患の生理学的症状のうちの１つ以上を報告する対象は、この疾患の診断がなされていないにもかかわらず、治療を受けてもよい。
本出願の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的又は医学的応答、例えば、腫瘍細胞増殖の低減若しくは阻害、又は症状の改善、状態の緩和、疾患進行の遅延（ｓｌｏｗ）若しくは遅延（ｄｅｌａｙ）、又は疾患の予防などを誘発する本出願の化合物の量を指す。１つの非限定的な実施形態では、「治療有効量」という用語は、対象に投与されたときに、状態、又は障害若しくは疾患を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防及び／若しくは改善する、又は標的となった酵素若しくは受容体の活性を少なくとも部分的に阻害するのに有効である、本出願の化合物の量を指す。
「標的細胞」という用語は、本開示によって収集、単離、又は分離される所望の細胞である細胞の細胞タイプ、細胞集団、又は組成を指す。標的細胞は、本明細書に記載される種々の手順が、精製、収集、操作などを必要とするか、又はそれを行うように設計される細胞を表す。特定のセルが何であるかは、用語が使用される文脈に依存する。例えば、手順の目的が特定の種類の幹細胞を単離することである場合、その細胞が、手順の標的細胞となる。「標的細胞」及び「所望の細胞」という用語は、互換可能であり、本開示に関して同じ意味を有する。標的細胞は、属－種関係で存在することができる。例えば、標的細胞が白血球を含む場合、標的細胞は、Ｔ細胞を含むであろう。
本明細書に開示される方法は、特に有用であるか、又は免疫細胞の活性化を含む。「免疫細胞」という用語は、一般に、免疫系の細胞を指す。免疫細胞は、骨髄細胞又はリンパ球細胞系統に由来する。一般に、本明細書に開示される方法は、免疫エフェクター細胞の活性化を対象とするが、これらに限定されない。
「免疫エフェクター細胞」という用語は、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えば、アルファ／ベータＴ細胞及びガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞、及び骨髄由来の貪食細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、及びガンマ／デルタＴ細胞、又はそれらの組み合わせは、融合ポリペプチドによって活性化させる。
「免疫エフェクター機能」又は「免疫エフェクター応答」という用語は、その用語が本明細書で使用される場合、標的細胞への免疫攻撃を増強又は促進する、例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の殺傷、又は標的細胞の成長若しくは増殖の阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。免疫エフェクター機能は、直接的な細胞傷害性、サイトカイン放出、ケモカイン放出、食作用、又は免疫応答をプライミング又は永続化する他の免疫機能を含む。
「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であり得る。
「骨髄細胞」という用語は、骨髄系統の末端分化細胞を指す。これらの細胞には、好中球、好酸球及び単球／マクロファージ、骨髄性樹状細胞が含まれる。本開示の任意の態様の一実施形態では、骨髄細胞は、好中球、好酸球、又は単球／マクロファージ／樹状細胞である。
「マクロファージ」及び／又は「マクロファージ様細胞」という用語は、一般に、マクロファージ、単球、及びマクロファージ／単球系統の細胞、並びにウイルス、細菌細胞、他の外来細胞、がん細胞、及び他の望ましくない増殖細胞を含むが、これらに限定されない特定の標的にこれらの細胞を感作するために、Ｔ細胞及びＢ細胞などの免疫細胞の他のクラスへの貪食又は抗原提示などの、マクロファージに一般的に関連する機能を実行する任意の他の類似の細胞を指す。
本明細書で使用される場合、「リンパ球」という用語は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、又はＢ細胞を含む。ＮＫ細胞は、固有の免疫系の主要な成分を表す細胞傷害性（細胞傷害性（ｃｅｌｌ ｔｏｘｉｃ））リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は、ウイルスに感染した腫瘍及び細胞を殺傷する。
「ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞」という用語は、特定の抗原刺激の不在下で、かつＭＨＣクラスに従って制限なしに標的細胞を殺傷する免疫系の細胞を指す。標的細胞は、腫瘍細胞又はウイルスを保有する細胞であってもよい。ＮＫ細胞は、ＣＤ５６の存在及びＣＤ３表面マーカーの不在によって特徴付けられる。
「Ｔ細胞」という用語は、「ＣＤ３」（Ｔ細胞受容体）の表面マーカーを発現するリンパ球細胞のサブセットを指す。別途示されない限り、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋（例えば、Ｔヘルパー細胞）及びＣＤ８＋（例えば、細胞傷害性キラー細胞）を含むことが意図される。
「内因性細胞」という用語は、細胞株からの細胞から区別される、ドナー（又は患者）由来の細胞を指すために使用される。内因性細胞は、一般に、特定の細胞タイプを単離又は濃縮することができる細胞の不均一な集団である。内因性細胞は、患者の自己又は同種の治療を意図してもよい。
本出願全体を通して、様々な実施形態は、範囲形式で提示されてもよい。範囲形式の説明は、単に便宜上及び簡潔さのためであり、本開示の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、その範囲内の全ての可能なサブ範囲並びに個々の数値を具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などのサブ範囲、及びその範囲内の個々の数、例えば、１、２、３、４、５、及び６などのサブ範囲を具体的に開示したものと見なされるべきである。これは、範囲の広さに関係なく適用される。
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明示的に別様に示さない限り、複数参照を含む。例えば、「試料（ａ ｓａｍｐｌｅ）」という用語は、複数の試料（その混合物を含む）を含む。
「決定すること」、「測定すること」、「評価すること（ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ）」、「評価すること（ａｓｓｅｓｓｉｎｇ）」、「アッセイすること」、及び「分析すること」という用語は、測定の形態を指すために、本明細書で互換的に使用されることが多い。これらの用語は、要素が存在するかどうかを判定すること（例えば、検出）を含む。これらの用語には、定量的、定性的又は定量的及び定性的な決定を含めることができる。評価することは、相対的又は絶対的であり得る。「の存在を検出すること」は、文脈に応じて存在するか否かを判定することに加えて、存在するものの量を決定することを含むことができる。
「対象」、「個体」、又は「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用されることが多い。「対象」は、発現した遺伝物質を含有する生物学的実体であり得る。生物学的実体は、例えば、細菌、ウイルス、真菌、及び原生動物を含む、植物、動物、又は微生物であり得る。対象は、インビボで得られた、又はインビトロで培養された生物学的実体の組織、細胞及びそれらの子孫であり得る。対象は、哺乳動物であり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。いくつかの実施形態では、対象は、がんのリスクが高いと診断され得るか、又はその疑いがあり得る。いくつかの実施形態では、対象は、腫瘍を有するリスクが高いと診断され得るか、又はその疑いがあり得る。いくつかの実施形態では、対象は、必ずしもがんのリスクが高いと診断されるか、又はその疑いがあるわけではない。
「インビボ」という用語は、対象の体内で起こる事象を表すために使用される。
「エクスビボ」という用語は、対象の体外で起こる事象を表すために使用される。エクスビボアッセイは、対象に対して実行されない。むしろ、それは、対象から分離した試料上で実行される。試料に対して実行されるエクスビボアッセイの例は、「インビトロ」アッセイである。
「インビトロ」という用語は、材料が得られる生物源から分離されるように、実験室試薬を保持するための容器内に含まれる場所を占める事象を説明するために使用される。インビトロアッセイは、生細胞又は死細胞が用いられる細胞ベースのアッセイを包含することができる。インビトロアッセイはまた、無傷の細胞が使用されない無細胞アッセイを包含することができる。
本明細書で使用される場合、「約」数という用語は、その数のプラス又はマイナス１０％を指す。「約」範囲という用語は、その最小値のマイナス１０％の範囲と、その最大値のプラス１０％の範囲を指す。
本明細書で使用されるセクション見出しは、単に組織的な目的のためのものであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。
加えて、以下の実施例は、単に例示的な目的のために含まれ、本開示の範囲を限定することを意図しない。
実施例１－免疫細胞の改善されたＩＬ－２活性化
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、第１のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチド（ｂＦＩＳＴ）と、を含む融合ポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチド及び単一のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチド（一価ＦＩＳＴ）を含む融合タンパク質と比較して、ヒトＮＫ細胞においてより高いレベルのＩＦＮ－ガンマ及びＣＸＣＬ１０を活性化させることを実証する。
ヒトＴ細胞及びＮＫ細胞を陰性選択によってＰＢＭＣから単離し、ＦＩＳＴ（ＩＬ２－ｓＴＢＲＩＩ、一価）又は二価のｓＴＢＲＩＩトラップを有するＦＩＳＴバリアント（ＩＬ２－ｓＴＢＲＩＩ－ｓＴＢＲＩＩ）で４８時間刺激した。インキュベーションの４８時間後、条件培地を収集して、ＥＬＩＳＡにより、Ｔ細胞からのＩＦＮ－ガンマ及びＮＫ細胞からのＣＸＣＬ１０のレベルを定量した。図１のデータに示されるように、ｂＦＩＳＴは、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）よりも有意に高いＩＬ－２受容体活性化を示す。
実施例２－改善されたＴＧＦβ１結合
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、第１のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチド（ｂＦＩＳＴ）と、を含む融合ポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチド及び単一のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチド（一価ＦＩＳＴ）を含む融合タンパク質と比較して、より効果的に活性ＴＧＦβ１を結合することを実証する。
０．１％ヒト又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する４ｍＭのＨＣｌで予め活性化されたヒト活性ＴＧＦβ１（２ｎｇ／ｍＬ）を、ｓＴＢＲＩＩアイソフォーム２（長）、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又はｂＦＩＳＴ（５～２０ｎｍｏＬ）と３０分間室温でインキュベートし、溶液中の遊離活性ＴＧＦβをＥＬＩＳＡ（ヒトＴＧＦβ１イムノアッセイのＥＬＩＳＡ）によって定量した。
ｂＦＩＳＴは、図２に示すように、ｓＴＢＲＩＩよりも有意に低い濃度で、溶液中の活性ＴＧＦβ１を効果的に遮断する。これらの結果は、融合タンパク質の一部としてのＩＬ－２もまた、ｓＴＢＲＩＩ部分及び活性ＴＧＦβへのその結合特性を修飾することを示す。更に、二価ｓＴＢＲＩＩトラップバリアントは、より有効なＴＧＦβ遮断活性を有する。
実施例３－溶液中のＴＧＦβアイソフォームの遮断
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、第１のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴＢＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、ＴＧＦβアイソフォームをより効果的に結合することを実証する。
等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３及びＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）を、ＣＴＬＬ－２増殖（ＩＬ－２依存性Ｔリンパ球細胞株）のＴＧＦβ１媒介性抑制を阻害するそれらの能力について比較した。ｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）、又は対照（ＴｂＲＩＩアイソフォーム２）による溶液中のＴＧＦβアイソフォームの遮断活性は、ｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照を１ｎｇ／ｍＬの活性ＴＧＦβアイソフォームとインキュベートすることによって決定した。等モル濃度（５～５×１０－６ｎｍｏＬの範囲）のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＴβＲＩＩアイソフォーム２）を、溶液中の活性ＴＧＦβアイソフォームを遮断する能力について比較した。ｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で希釈された１ｎｇ／ｍＬの活性ＴＧＦβアイソフォームと３０分間インキュベートし、遊離ＴＧＦβ（非遮断）を、各ＴＧＦβアイソフォームに特異的なＥＬＩＳＡによって定量した。
ｂＦＩＳＴｖ３は、ＦＩＳＴ及び対照ＴβＲＩＩアイソフォーム２（図４Ａ～図４Ｃ）と比較して、ＴＧＦｂ１（９ピコモル）及びＴＧＦβ３（７０ピコモル）に対するピコモル力価との親和性が有意に増加したことを示した。図４Ａは、ＴＧＦｂ１結合の遮断を示す。図４Ｂは、ＴＧＦｂ２結合の遮断を示す。図４Ｃは、ＴＧＦｂ３結合の遮断を示す。表１は、溶液中のＴＧＦβ遮断活性の結合値を示す。ＴＧＦβ１及びＴＧＦβ３アイソフォームは、最も腫瘍形成性であるアイソフォームであり、腫瘍免疫抵抗性、血管新生、転移、及び免疫抑制の強力な誘導因子である。ＴＧＦβ１及びＴＧＦβ３アイソフォームはまた、線維性疾患の既知の誘導因子である。対照的に、ＴＧＦβ２は、融合タンパク質又は対照によって遮断されなかった。ＴＧＦβ２は、造血、心血管機能、グルコース及び脂肪酸代謝の重要な調節因子である。
表１：溶液中の活性ＴＧＦβ遮断活性のＩＣ５０値
実施例４－ＣＴＬＬ－２増殖のＴＧＦｂ１媒介性抑制の阻害
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、ｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、細胞傷害性Ｔ細胞増殖をより効果的に誘導し、かつＴＧＦβ１媒介性抑制を防止することを実証する。
等モル濃度（５０～５×１０－５ｎｍｏＬの範囲）のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＩＬ－２及びＴβＲＩＩアイソフォーム２）を、ＣＴＬＬ－２増殖の活性ＴＧＦβ１媒介性抑制を阻害するそれらの能力について比較した。ＣＴＬＬ－２細胞（５×１０３細胞／ウェル）を、活性ＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍＬ）を伴って／伴わずに、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照で、７２時間３７℃で刺激した。インキュベーション期間後、発光細胞生存率アッセイによって、細胞増殖を決定した。絶対ＩＣ５０は、シグモイド用量応答を伴う非線形回帰モデルを使用して、用量応答曲線を用いて決定した。生存率（％）＝（Ｌｕｍ試験品－Ｌｕｍ培地対照）／（Ｌｕｍビヒクル対照－Ｌｕｍ培地対照）×１００％。細胞数を、発光シグナル対細胞用量曲線によって定量した。ｂＦＩＳＴｖ３は、ＣＴＬＬ－２細胞増殖を誘導したが、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）よりも効果的に、ＣＴＬＬ－２増殖のＴＧＦβ１媒介性抑制を防止した。図５Ａ：ｂＦＩＳＴｖ３で刺激されたＣＴＬＬ－２の増殖。図５Ｂ：活性ＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、ｂＦＩＳＴｖ３で刺激されたＣＴＬＬ－２の増殖。図５Ｃ：ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）で刺激されたＣＴＬＬ－２の増殖。図５Ｄ：活性ＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）で刺激されたＣＴＬＬ－２の増殖。図５Ｅ：ＩＬ－２で刺激されたＣＴＬＬ－２の増殖。図５Ｆ：ＣＴＬＬ－２の増殖は、活性ＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍＬ）の存在下でＩＬ－２を刺激した。データは、平均＋ＳＤ、＊＊ｐ＜０．００５として示す。ＴＧＦβ１は、ＩＬ－２シグナル伝達及び複数の経路を介したＴ細胞の増殖を阻害することが知られている。ＴＧＦβ１は、ＩＬ－２Ｒの下流にあるＪＡＫ／ＳＴＡＴカスケードの成分のリン酸化及び活性化を阻害するとともに、ｃ－Ｍｙｃ、サイクリンＤ２、及びサイクリンを含むＩＬ－２標的遺伝子のサブセット上で、核レベルで阻害活性を発揮する。
表２：融合タンパク質又は対照の刺激に応答したＣＴＬＬ－２細胞増殖のためのＩＣ５０値
表３：ＣＴＬＬ－２細胞増殖のＴＧＦｂ１依存性抑制の阻害のためのＩＣ５０値
実施例５－エフェクターメモリーＴ細胞及び末端分化エフェクターメモリー細胞のｂＦＩＳＴ増殖
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、ｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、エフェクターメモリー（ＴＥＭ）及び末端分化エフェクターメモリー（ＴＥＭＲＡ）ＣＤ８Ｔ細胞の両方のサイトカイン産生及び増殖をより効果的に誘導することを実証する。
ＣＥＦペプチドプールで刺激されたＰＢＭＣ由来の精製されたヒトＴ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔで標識して、Ｔ細胞増殖（ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）平均蛍光（ＭＦＩ）は、細胞増殖が増加するにつれて低下する）を追跡した。等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）、又はＴｂＲＩＩアイソフォーム２で刺激された、ＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＣＲ７－ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋Ｔ細胞）、及び末端分化エフェクターメモリーＣＤ８Ｔ細胞（ＣＣＲ７－ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋Ｔ細胞）の増殖。健常なドナーからのヒトＰＢＭＣをＣＥＦペプチドプールで一晩刺激して、抗原特異的Ｔ細胞の生成を誘導した。Ｔ細胞（ＣＤ３＋）を、ヒトＴ細胞単離キットを使用した免疫磁気陰性選択によって、健常なドナーに由来するＰＢＭＣから精製した。精製したＴ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔで標識した後、５ｎｍｏＬのｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）及びＩＬ－２で４８時間刺激した。刺激したＴ細胞を、メモリーＴ細胞集団に特異的な蛍光コンジュゲート抗体で標識した。インキュベーション期間の後、細胞上清を収集して、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮγの濃度を定量し、細胞を収集して、フローサイトメトリーにより各Ｔ細胞亜集団の細胞増殖を決定した。ｂＦＩＳＴｖ３は、Ｔ細胞からのＩＦＮγ産生を誘導し、エフェクターメモリー（ＴＥＭ）及び末端分化エフェクターメモリー（ＴＥＭＲＡ）の両方のＣＤ８Ｔ細胞の有意に高い増殖を誘導する（例えば、ＦＩＳＴと比較した場合）。図６Ａは、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）及び末端分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ）のｂＦＩＳＴｖ３誘導増殖を示す。図６Ｂは、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）及び末端分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ）のＦＩＳＴ誘導増殖を示す。図６Ｃは、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）及び末端分化エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭＲＡ）のＩＬ－２誘導増殖を示す。図６Ｄは、２人のドナーに由来する刺激したＴＥＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＭＦＩ値の平均を示す（ＭＦＩの減少は増殖の増加を示す）。図６Ｅは、２人のドナーに由来する刺激したＴＥＭＲＡの平均ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＭＦＩ値を示す（ＭＦＩの減少は増殖の増加を示す）。図６Ｆは、ｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）、又はＩＬ－２で刺激されたＴ細胞によるＩＦＮγ産生の４８時間の定量を示す。データは、平均＋ＳＤ、＊ｐ＜０．０５として示す。エフェクターメモリーＴリンパ球は、腫瘍関連抗原による第２のチャレンジに対して迅速な免疫保護を付与することができる、抗原プライミングされたリンパ球である。記憶Ｔ細胞亜集団ＣＣＲ７－は、炎症を起こす組織（例えば、腫瘍部位）に移行し、がん細胞に対する細胞傷害性のような即時エフェクター機能を発揮することができる。ＣＣＲ７－メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞は、抗腫瘍細胞溶解活性に不可欠なＩＦＮγ及びパーフォリン含有顆粒の産生を特徴とする。特に、パーフォリン発現は、末端分化エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７－ＣＤ６２Ｌ－）において顕著である。
実施例６－ｂＦＩＳＴは、初代ＮＫ細胞増殖のＴＧＦｂ１媒介性抑制を阻害し、ＩＦＮγ産生を増加させる
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、ｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、初代ＮＫ細胞増殖及びＩＦＮγ産生のＴＧＦｂ１媒介をより効果的に阻害及び／又は低減することを実証する。
ヒトＮＫ細胞を、ヒトＮＫ細胞単離キットを使用した免疫磁気陰性選択によって、健常なドナー由来のＰＢＭＣから精製した。精製したＮＫ細胞を、等モル濃度（２５ｎＭ、１２．５ｎＭ及び６．２５ｎＭ）のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）及びＩＬ－２で５日間刺激されたと標識した。インキュベーション期間後、細胞培養上清を回収して、ＥＬＩＳＡによるＩＦＮγの濃度を定量した。生存細胞の数を、細胞数／発光曲線を使用して蛍光ベースのアッセイで定量し、細胞増殖のパーセンテージを、これらの実験条件についてのＮＫ細胞増殖の最大刺激として、陽性対照（ＩＬ－２＋ＴｂＲＩＩ）に対して計算した。
末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）由来の精製されたヒトＮＫ細胞を、活性ＴＧＦｂ１（１ｎｇ／ｍＬ）を伴って／伴わずに、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＩＬ－２＋ＴｂＲＩＩ）で５日間刺激した。培養上清を収集して、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮγの量を定量し、存在するＡＴＰの量を定量することによって、培養中の生存細胞数を決定した。これは、代謝的に活性な細胞を示す。図７Ａは、活性ＴＧＦｂ１の不在下におけるＮＫ細胞増殖のパーセンテージを示す。図７Ｂは、活性ＴＧＦｂ１の存在下でのＮＫ細胞増殖のパーセンテージを示す。図７Ｃは、活性ＴＧＦｂ１の不在下で培養した刺激ＮＫ細胞によって産生されるＩＦＮγの定量を示す。図７Ｄは、活性ＴＧＦｂ１（１ｎｇ／ｍＬ）で培養した刺激ＮＫ細胞によって産生されるＩＦＮγの定量。図７Ｅは、活性ＴＧＦｂ１（１ｎｇ／ｍＬ）で培養した刺激ＮＫ細胞によって産生されるＣＸＣＬ１０の定量。データは、重複して行われた２つの独立した実験を表す。ｂＦＩＳＴｖ３とＦＩＳＴとの統計比較が示される（データは、平均＋ＳＤ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５として示される）。
実施例７－ｂＦＩＳＴは、ＮＫ細胞媒介性の細胞傷害性及び活性化を増加させる
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、ｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介性の細胞傷害及び活性化をより効果的に増加及び／又は刺激することを実証する。
ＮＫ９２細胞を９時間血清飢餓状態にした後、活性ＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍＬ）を伴って／伴わずに、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）及びＴβＲＩＩアイソフォーム２（対照）で４８時間刺激した。インキュベーション期間後、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮγの量を定量した。ＮＫ９２細胞を収集し、異なるエフェクター：標的比（１：１、３：１、６：１）で標的細胞（Ｋ－５６２細胞、慢性骨髄性白血病）と共培養した。がん細胞に対するＮＫ９２細胞溶解活性は、ＮＫ：Ｋ－５６２共培養（３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで３時間）後、固定可能な生存率染色によって特定の腫瘍標的死の％を測定することによって決定した。死細胞の％は、次の式に基づいて計算した。
ＴＧＦ－βは、ＮＫ細胞活性化、ＩＦＮ－γ産生、及び活性化受容体ＮＫＧ２Ｄ及びＮＫｐ３０の発現を含む免疫細胞機能に深刻な影響を与え、それによって、ＮＫ細胞の細胞傷害性能力を低下させ、かつそれらの抗腫瘍機能を損なう、強力な免疫抑制サイトカインである。ｂＦＩＳＴは、活性ＴＧＦｂ１の堅牢な免疫細胞活性化及び有効な遮断（ピコモル効力を有する）の両方を誘導する。これらの２つの効果は、がん細胞に対するより高いＮＫ細胞増殖、活性化、及び細胞傷害性を促進する。図８Ａは、ＮＫ９２細胞によるＩＦＮγ産生の定量を、ＮＫ９２細胞活性化の指標として示す（上述したように、ヒトＮＫ９２細胞を９時間血清飢餓状態にした後、活性ＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍＬ）を伴って／伴わずに、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＩＬ－２＋ＴβＲＩＩ）で４８時間刺激し、細胞上清を回収した）。図８Ｂは、６：１の比（エフェクター：標的）でのＫ－５６２細胞に対するｂＦＩＳＴｖ３又はＦＩＳＴ刺激ＮＫ９２細胞の誘導細胞傷害性を示す。ｂＦＩＳＴｖ３とＦＩＳＴとの統計比較を示す。データは、平均＋ＳＤ、＊ｐ＜０．０５として示す。
実施例８－ｂＦＩＳＴは、Ｂ細胞の成熟、増殖、及びＩＦＮγ産生を刺激し、増加させる
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、ｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、（１）Ｂ細胞の成熟、増殖及びＩＦＮγ産生をより効果的に刺激及び／又は増加させ、（２）Ｂ細胞の成熟、増殖及びＩＦＮγ産生のＴＧＦｂ１抑制を低減及び／又は阻害することを実証する。
ヒトＢ細胞を、ヒトＢ細胞単離キットを使用した免疫磁性陰性選択によって、健常なドナー由来のＰＢＭＣから精製した。精製したＢ細胞をＣＦＳＥで予め標識して、細胞増殖（マーカー強度は細胞増殖が増加するにつれて低下する）を追跡した後、等モル濃度（２０ｎＭ、１０ｎＭ、及び５ｎＭ）のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ、及びＩＬ－２で５日間刺激した。インキュベーション期間後、Ｂ細胞をＣＤ８６及びＨＬＡ－ＤＲで標識し、二重陽性（ＣＤ８６＋ＨＬＡ－ＤＲ＋）Ｂ細胞及び増殖のパーセンテージをフローサイトメトリーによって定量した。細胞培養上清を回収し、ＥＬＩＳＡによるＩＦＮγの濃度を定量した。ｂＦＩＳＴｖ３とＦＩＳＴとの統計比較を示す。データは、平均＋ＳＤ、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５、＊＊＊ｐ＜０．０００５として示す。
二価ＦＩＳＴは、Ｂ細胞の活性化、増殖、及びＩＦＮγの産生を効果的に増加及び／又は刺激する（例えば、ＦＩＳＴ又はＩＬ－２と比較して）。二価ＦＩＳＴはまた、二価ＦＩＳＴ刺激効果に対するＢ細胞応答性を示す共刺激分子（ＣＤ８６）及びＨＬＡ－ＤＲ（ＭＨＣクラスＩＩ）分子発現の上方制御を誘導する。更に、二価ＦＩＳＴはまた、抗原提示細胞（ＡＰＣ）成熟マーカー及びＩＦＮγ産生の高発現を有するエフェクター細胞にＢ細胞を活性化させる。
図９Ａ～図９Ｄは、末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）由来の精製ヒトＢ細胞（ＣＤ１９－ＣＤ３－）からのデータを示し、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識して細胞増殖を追跡した後、活性ＴＧＦｂ１（１ｎｇ／ｍＬ）を伴って／伴わずに、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＩＬ－２＋ＴｂＲＩＩ）で５日間刺激した。刺激Ｂ細胞を、ＨＬＡ－ＤＲ及びＣＤ８６に特異的なコンジュゲート抗体で標識して、フローサイトメトリーによって成熟Ｂ細胞のパーセンテージを定量した。図９Ａは、活性ＴＧＦｂ１を伴って／伴わずに培養された二重陽性ＣＤ８６＋ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｂ細胞の誘導におけるｂＦＩＳＴｖ３（２０ｎｍｏＬ）とＦＩＳＴ（２０ｎｍｏＬ）との比較を示す。図９Ｂは、活性ＴＧＦｂ１を伴って／伴わずに、２０、１０、５ｎｍｏＬのｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＩＬ－２＋ＴｂＲＩＩ）で刺激されたＣＤ８６＋ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｂ細胞のパーセンテージを示す。図９Ｃは、活性ＴＧＦｂ１を伴った／伴わない、ＣＤ８６＋ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｂ細胞増殖の誘導におけるｂＦＩＳＴｖ３（２０ｎｍｏＬ）とＦＩＳＴ（２０ｎｍｏＬ）との比較を示す。ＣＦＳＥ（細胞トレーサー）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示す。図９Ｄは、活性ＴＧＦｂ１を伴って／伴わずに培養した刺激Ｂ細胞の上清におけるＩＦＮγ産生の定量を示す。
実施例９－－ｂＦＩＳＴは、肺がん細胞上の上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）マーカーの上方制御を阻害する
本明細書に開示される融合ポリペプチド組成物及び方法を例示すると、流れる実施例は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）ポリペプチドと、ｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、第２のｓＴβＲＩＩ受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドが、肺がん細胞上の上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）マーカーの上方調節をより効果的に阻害及び／又は低減することを実証する。
Ａ－５４９肺がん細胞を、活性ＴＧＦｂ１を伴って／伴わずに、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）、又は対照（ＩＬ２及びＩＬ２＋ＴｂＲＩＩ）で７２時間処置した。インキュベーション期間後、細胞を収集し、Ｅ－カドヘリン、Ｎ－カドヘリン、及びＰＤ－Ｌ１に特異的なコンジュゲート抗体で標識した。これらのＥＭＴマーカーを発現する細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリーによって定量した。上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）は、がん細胞が間葉細胞に変化する上皮特徴を抑制することを可能にする。ＥＭＴプロセスの結果、がん細胞は、移動性を獲得し、原発腫瘍部位から遠隔臓器に移動して転移を形成する能力を得る。Ｅ－カドヘリン発現の喪失は、ＥＭＴにおける重要なステップであり、非転移性から転移性がん細胞への変換を特徴付ける間葉系表現型の特徴である。ｂＦＩＳＴによる処置は、ＴＧＦｂ１媒介性のＥＭＴマーカーの上方制御（Ｅ－カドヘリンの減少、Ｎ－カドヘリンの増加、及びＰＤ－Ｌ１発現の増加）を減少させる。図１０Ａは、等モル濃度のｂＦＩＳＴｖ３、ＦＩＳＴ（一価ＦＩＳＴ）又は対照（ＩＬ－２及びＩＬ－２＋ＴｂＲＩＩ）で、活性ＴＧＦｂ１を伴って／伴わずに７２時間処置した後の、Ｅ－カドヘリンを発現するＡ－５４９細胞（肺がん細胞）のパーセンテージを示す。図１０Ｂは、Ｎ－カドヘリンを発現するＡ－５４９細胞のパーセンテージを示し、図１０Ｃは、ＰＤ－Ｌ１を発現するＡ－５４９細胞のパーセンテージを示す。データは、重複して行われた２つの独立した実験を表す。示されるように、ｂＦＩＳＴによる肺がん細胞の処置は、Ｅ－カドヘリン発現の増加、Ｎ－カドヘリンの減少、及びＰＤ－Ｌ１発現の減少を増加させる。
本開示の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されているが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは、当業者には明らかであろう。多くの変形、変更、及び置換が、本開示から逸脱することなく、ここで、当業者に生じるであろう。本明細書に記載される本開示の実施形態に対する様々な代替案が、本開示を実施する際に用いられ得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲及びそれらの等価物の範囲内の方法及び構造は、それによってカバーされることが意図される。

Claims (111)

  1. 融合ポリペプチドであって、
    インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、
    第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
  2. 融合ポリペプチドであって、
    ＩＬ受容体に結合し、かつそれを作動させるＩＬポリペプチドと、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、可溶性ＴＧＦβに結合し、かつそれを封鎖する第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む、融合ポリペプチド。
  3. 前記ＩＬポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチド又はＩＬ－１５を含む、請求項１又は２に記載の融合ポリペプチド。
  4. 前記ＩＬポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  5. 前記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号２又は配列番号３を含む、請求項４に記載の融合ポリペプチド。
  6. 前記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号２に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列、又は配列番号３に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の融合ポリペプチド。
  7. 前記ＩＬ－２ポリペプチドが、配列番号２又は配列番号３からなる、請求項４に記載の融合ポリペプチド。
  8. 前記ＩＬポリペプチドが、ＩＬ－１５ポリペプチドを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  9. 前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号５を含む、請求項８に記載の融合ポリペプチド。
  10. 前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号５に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の融合ポリペプチド。
  11. 前記ＩＬ－１５ポリペプチドが、配列番号５からなる、請求項８に記載の融合ポリペプチド。
  12. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、アクチビン受容体ポリペプチド若しくはその断片、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体ポリペプチド若しくはその断片、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）受容体ポリペプチド若しくはその断片、又はＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチド若しくはその断片を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  13. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチド又はその断片を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  14. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチド又はその断片を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  15. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、配列番号８、配列番号９、又はそれらの組み合わせを含む可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチドを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  16. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列の切断を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  17. 前記可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に対して８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  18. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、ＴＧＦ－β１ポリペプチド、ＴＧＦ－β２ポリペプチド、ＴＧＦ－β３ポリペプチド、アクチビンβＡポリペプチド、アクチビンβＢポリペプチド、アクチビンβＣポリペプチド、アクチビンβＥポリペプチド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）２ポリペプチド、ＢＭＰ３ポリペプチド、ＢＭＰ４ポリペプチド、ＢＭＰ５ポリペプチド、ＢＭＰ６ポリペプチド、ＢＭＰ７ポリペプチド、ＢＭＰ８ポリペプチド、ＢＭＰ９ポリペプチド、ＢＭＰ１０ポリペプチド、ＢＭＰ１１ポリペプチド、ＢＭＰ１２ポリペプチド、ＢＭＰ１３ポリペプチド、ＢＭＰ１４ポリペプチド、ＢＭＰ１５ポリペプチド、成長分化因子（ＧＤＦ）１ポリペプチド、ＧＤＦ３ポリペプチド、ＧＤＦ８ポリペプチド、ＧＤＦ９ポリペプチド、ＧＤＦ１５ポリペプチド、ノーダル（Ｎｏｄａｌ）ポリペプチド、インヒビンαポリペプチド、抗ミュラー管ホルモンポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ１ポリペプチド、Ｌｅｆｔｙ２ポリペプチド、アルテマン（ａｒｔｅｍａｎ）ポリペプチド、ペルセフィンポリペプチド、又はニュールツリンポリペプチドを結合する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  19. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はこれらの任意の組み合わせを結合する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  20. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、ＴＧＦβ１ポリペプチドを結合する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  21. 切断型ＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  22. 前記切断型ＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、切断型可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ｓＴβＲＩＩ）ポリペプチドである、請求項２１に記載の融合タンパク質。
  23. 前記切断が、２、５、７、１０、１５、２０、２５、又は３０個を超えるアミノ酸を含む、請求項２２に記載の融合ポリペプチド。
  24. 前記ＩＬポリペプチドが、切断型ＩＬポリペプチドを含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  25. 前記切断型ＩＬポリペプチドが、Ｎ末端切断、Ｃ末端切断、又はそれらの組み合わせを含む、請求項２４に記載の融合ポリペプチド。
  26. 前記切断型ＩＬポリペプチドが、切断型ＩＬ－２ポリペプチド又はＩＬ－１５ポリペプチドを含む、請求項２４に記載の融合ポリペプチド。
  27. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドを結合するリンカーポリペプチド又はリンカー分子を更に含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  28. 前記ＩＬポリペプチド及び前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドを融合させるリンカーポリペプチドを更に含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  29. 薬物動態（ＰＫ）調節物質を更に含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  30. 前記薬物動態調節物質が、免疫グロブリン定常（Ｆｃ）領域ポリペプチドを含む、請求項２９に記載の融合ポリペプチド。
  31. 前記免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドが、ヒト免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドである、請求項３０に記載の融合ポリペプチド。
  32. 前記免疫グロブリンＦｃ領域が、ＩｇＧ Ｆｃ領域である、請求項３０に記載の融合ポリペプチド。
  33. 前記ＩｇＧ Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項３０に記載の融合ポリペプチド。
  34. 前記ＰＫ調節物質が、アルブミンポリペプチドを含む、請求項２９に記載の融合ポリペプチド。
  35. 前記アルブミンポリペプチドが、ヒトアルブミンポリペプチドである、請求項３４に記載の融合ポリペプチド。
  36. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１０～２５のうちのいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  37. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  38. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  39. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  40. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  41. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  42. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  43. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  44. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  45. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  46. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  47. 前記融合ポリペプチドが、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  48. 前記融合ポリペプチドが、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  49. 前記融合ポリペプチドが、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  50. 前記融合ポリペプチドが、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  51. 前記融合ポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  52. 前記融合ポリペプチドが、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の融合ポリペプチド。
  53. 前記融合ポリペプチドが、配列番号１０～２５のうちのいずれか１つからなる、請求項１～５２のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  54. 前記融合ポリペプチドが、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する標的細胞を活性化させる、請求項１～５３のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  55. 前記標的細胞が、免疫細胞である、請求項５４に記載の融合ポリペプチド。
  56. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞である、請求項５５に記載の融合ポリペプチド。
  57. 薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドを含む、薬学的組成物。
  58. がんを有する個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減する方法であって、
    （ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、
    （ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    （ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    を含む融合ポリペプチドを前記個体に投与し、それにより、前記個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減することを含む、方法。
  59. 前記腫瘍が、原発腫瘍である、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記腫瘍が、転移性腫瘍である、請求項５８又は５９に記載の方法。
  61. 前記がんが、固形腫瘍を含む、請求項５８～６０のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記融合ポリペプチドが、腫瘍微小環境内の免疫細胞を活性化させる、請求項５８～６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記免疫細胞が、ＩＬ－２を発現する、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記融合ポリペプチドが、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は前記腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する、請求項５８～６４のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記がんが、血液がんである、請求項５８～６５のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記がんが、固形腫瘍を含むがんである、請求項５８～６６のいずれか一項に記載の方法。
  68. がんを有する個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷する方法であって、
    （ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、
    （ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    （ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    を含む融合ポリペプチドを前記個体に投与し、それにより、前記個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷することを含む、方法。
  69. 前記腫瘍が、原発腫瘍である、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記腫瘍が、転移性腫瘍である、請求項６８又は６９に記載の方法。
  71. 前記がんが、固形腫瘍を含む、請求項６８～７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記融合ポリペプチドが、腫瘍微小環境内の免疫細胞を活性化させる、請求項６８～７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記免疫細胞が、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む、請求項７２に記載の方法。
  75. 前記融合ポリペプチドが、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は前記腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する、請求項６８～７４のいずれか一項に記載の方法。
  76. 前記がんが、血液がんである、請求項６８～７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記がんが、固形腫瘍を含む、請求項６８～７６のいずれか一項に記載の方法。
  78. がんを有する対象におけるがんを治療又は改善する方法であって、
    （ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、
    （ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    （ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    を含む融合ポリペプチドを前記対象に投与し、それにより、前記対象における前記がんを治療又は改善することを含む、方法。
  79. 前記腫瘍が、原発腫瘍である、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記腫瘍が、転移性腫瘍である、請求項７８又は７９に記載の方法。
  81. 前記がんが、固形腫瘍を含む、請求項７８～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記融合ポリペプチドが、腫瘍微小環境内の免疫細胞を活性化させる、請求項７８～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 前記免疫細胞が、ＩＬ－２又はＩＬ－１５受容体を発現する、請求項８２に記載の方法。
  84. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む、請求項８２に記載の方法。
  85. 前記融合ポリペプチドが、腫瘍微小環境内の免疫細胞の免疫抑制を阻害若しくは低減し、かつ／又は前記腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の活性化を低減若しくは阻害する、請求項７８～８４のいずれか一項に記載の方法。
  86. 前記がんが、血液がんである、請求項７８～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記がんが、固形腫瘍を含む、請求項７８～８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、ＴＧＦβ１ポリペプチド、ＴＧＦβ２ポリペプチド、ＴＧＦβ３ポリペプチド、又はこれらの任意の組み合わせを結合する、請求項７８～８７のいずれか一項に記載の方法。
  89. ＩＬ受容体を発現する細胞を活性化させる方法であって、
    （ａ）インターロイキン（ＩＬ）ポリペプチドと、
    （ｂ）第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、
    （ｃ）第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドと、を含む融合ポリペプチドと細胞を接触させることを含む、方法。
  90. 前記細胞が、免疫細胞である、請求項８９に記載の方法。
  91. 前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞ＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、又はガンマデルタＴ細胞を含む、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記免疫細胞が、インビボで接触される、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記免疫細胞が、エクスビボで接触される、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の方法。
  94. 白血球パック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）又は白血球アフェレーシス（ｌｅｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ）製品が、前記免疫細胞を含む、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記免疫細胞が、アフェレーシス試料に由来する、請求項９３に記載の方法。
  96. 前記免疫細胞が、その後、細胞ベースの療法に使用される、請求項９３に記載の方法。
  97. 前記ＩＬポリペプチドが、ＩＬ－２又はＩＬ－１５である、請求項８９～９６のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記第１のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチド及び／又は前記第２のＴＧＦβスーパーファミリー受容体ポリペプチドが、可溶性ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）ポリペプチド又は断片を含む、請求項８９～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 請求項１～５６のいずれか一項に記載の組換え融合ポリペプチドをコードする核酸配列を含む核酸分子を含む、宿主細胞。
  100. がんを有する個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  101. がんを有する個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  102. がんを有する対象におけるがんを治療又は改善するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  103. ＩＬ受容体を発現する細胞を活性化させるための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  104. がんを有する個体における腫瘍の成長及び／又は進行を阻害又は低減するための医薬品の製造における、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  105. がんを有する個体における腫瘍細胞を中和又は殺傷するための医薬品の製造における、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  106. がんを有する対象におけるがんを治療又は改善するための医薬品の製造における、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  107. ＩＬ受容体を発現する細胞を活性化させるための医薬品の製造における、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドの使用。
  108. がんを有する個体における腫瘍の成長及び／又は進行の阻害又は低減に使用するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  109. がんを有する個体における腫瘍細胞の中和又は殺傷に使用するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  110. がんを有する対象におけるがんの治療又は改善に使用するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
  111. ＩＬ受容体を発現する細胞の活性化に使用するための、請求項１～５６のいずれか一項に記載の融合ポリペプチド。
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