JP2023540752A - 黄斑変性症または脈絡膜血管新生の治療における使用のための色素上皮由来因子（ｐｅｄｆ） - Google Patents

Abstract

本発明は、対象におけるドライ型黄斑変性症、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）であって、方法が、ＰＥＤＦおよびＶＥＧＦを対象に投与することを含む、使用のためのＰＥＤＦに関する。

Description

本発明は、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）、ならびに疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡに関する。

加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、西側諸国における法的盲の最も一般的な理由となっている。黄斑下網膜色素上皮の萎縮および脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の発生は、二次的に中心視力の喪失をもたらす。ＡＭＤの初期の徴候は、網膜色素上皮とブルッフ膜との間の沈着物（ドルーゼン）である。ＡＭＤには、ウェット型とドライ型の２つの形態がある。

ウェット型ＡＭＤの疾患の過程では、黄斑の網膜下腔への脈絡膜血管の出芽が生じる。これらの新たな血管はしばしば発生に異常を生じて、漏れやすくなり、網膜下浮腫を引き起こす。これらの浮腫は、中心視力と読書能力の喪失につながる。

ドライ型ＡＭＤの患者では、主な影響は脈絡膜毛細血管の喪失である（Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ， Ｔａｕｂｉｔｚ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。その後、網膜色素上皮（ＲＰＥ）と光受容体が変性し、これは地図状萎縮（ＧＡ）につながる。ドライ型ＡＭＤについては、現在、脈絡毛細管の喪失を防ぐために利用可能な治療法はない。

中心窩下ＣＮＶの患者は、目下、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を低減または遮断する薬物で治療されていた。２００４年以降、抗ＶＥＧＦ療法はウェット型ＡＭＤの標準治療となり、この疾患の管理に革命をもたらした。２００４年から２００６年の間に、３種類の抗ＶＥＧＦ薬が、ＡＭＤの治療薬として規制当局の承認を受け（ペガプタニブ、ラニビズマブ）、またはオフラベルで使用され（ベバシズマブ）、眼科に導入された（Ｂｒｏｗｎｉｎｇ， Ｋａｉｓｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１２）。それらは、それらの活性部位、製剤方法、結合親和性、および生物学的活性において重要な違いを呈する（Ｊｕｌｉｅｎ， Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。ペガプタニブ（マキュジェン）は、ヘパリン結合ドメインに結合することにより、ＶＥＧＦの主要な病理学的アイソフォーム（ＶＥＧＦ－Ａ１６５）に選択的に結合して中和するオリゴヌクレオチドアプタマーである。ラニビズマブ（ルセンティス、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は親和性成熟ヒト化モノクローナル抗体フラグメント（Ｆａｂ）である一方、ベバシズマブ（アバスチン、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）は完全長のヒト化モノクローナル抗体である。どちらも、ＶＥＧＦ－Ａの全てのアイソフォームの受容体結合ドメインを遮断することによって機能する（Ｆｅｒｒａｒａ， Ｄａｍｉｃｏ ｅｔ ａｌ． ２００６）。アフリベルセプト（ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ－Ｅｙｅ、Ｅｙｌｅａ、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ｂａｙｅｒ）は、食品医薬品局によって最近承認された抗ＶＥＧＦ剤である。これはＶＥＧＦＲ１の２番目の免疫グロブリン（Ｉｇ）結合ドメインと、ヒトＩｇＧ１の結晶化可能なフラグメント（Ｆｃ）領域に融合したＶＥＧＦＲ２の３番目のＩｇ結合ドメインとから構成される完全ヒト組換え融合タンパク質である。

アフリベルセプトは、全てのＶＥＧＦ－Ａアイソフォーム、ＶＥＧＦ－ＢおよびＰｌＧＦに結合する（Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ， Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ． ２０１２）。サルの眼球内に硝子体内注射されたベバシズマブの効果が広範囲にわたり記述されている（Ｐｅｔｅｒｓ， Ｈｅｉｄｕｓｃｈｋａ ｅｔ ａｌ． ２００７， Ｊｕｌｉｅｎ， Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１３， Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｊｕｌｉｅｎ ２０１３）。その効果には、脈絡毛細管の穿孔、光受容体の損傷、免疫複合体の形成、および血栓性微小血管障害の低減が含まれていた。ベバシズマブ処置後の血栓症の有力な理論的根拠がＭｅｙｅｒと同僚らにより提示された（Ｍｅｙｅｒ， Ｒｏｂｌｅｓ－Ｃａｒｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ． ２００９）。彼らはベバシズマブがＶＥＧＦ、ヘパリンとの複合体形成、および血小板ＦｃガンマＲＩＩａ受容体の活性化を通じて、血小板凝集、脱顆粒、血栓症を誘導し得ることを見出した。さらに他の結果は、ベバシズマブのＦｃドメインがＦｃ受容体または膜結合ＶＥＧＦを介してヒトＲＰＥおよびヒト臍帯血管内皮細胞膜に効果的に結合して、補体カスケードを活性化し、細胞死をもたらすことを実証している（Ｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｈｏｌｚ ２０１１）。アフリベルセプトもヒトＩｇＧ１のＦｃドメインを含んでいるために同様な問題があるかどうかは不明である。さらにＩｇＧ１アイソタイプは、古典的経路を介した補体系の活性化に非常に効果的であることが知られている（Ｄａｈａ， Ｂａｎｄａ ｅｔ ａｌ． ２０１１）。実際、ＩｇＧ１のＦｃ部分はＣ１ｑに結合する高い能力を持ち、その後の古典的経路の活性化を引き起こす（Ｄａｈａ， Ｂａｎｄａ ｅｔ ａｌ． ２０１１）。対照的に、ラニビズマブはＦｃドメインを保有しておらず、補体カスケードの活性化を回避するが、その一方で非臨床試験において溶血やフィブリン形成も誘導する（Ｊｕｌｉｅｎ， Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。

ＶＥＧＦの阻害は、がんの治療を受けているヒトの血小板を活性化できること（Ｍｅｙｅｒ， Ｒｏｂｌｅｓ－Ｃａｒｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ． ２００９）または血管新生型ＡＭＤ（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｊｕｌｉｅｎ ２０１３）の治療を受けているヒトの血小板を活性化できることが報告された。さらにＶＥＧＦ薬は、硝子体内適用後にサルの脈絡毛細管に血栓性微小血管障害を誘導した（Ｐｅｔｅｒｓ， Ｈｅｉｄｕｓｃｈｋａ ｅｔ ａｌ． ２００７， Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｊｕｌｉｅｎ ２０１２）。また、抗ＶＥＧＦ薬は、脈絡毛細管内での溶血、うっ滞、およびフィブリン形成も誘導する（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｊｕｌｉｅｎ ２０１２， Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ ａｎｄ Ｊｕｌｉｅｎ ２０１３， Ｊｕｌｉｅｎ， Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。アバスチンは、ヘパリンおよびＶＥＧＦタンパク質と一緒に複合体を形成し、血栓イベントを誘導する（Ｊｕｌｉｅｎ， Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１３）。ウェット型ＡＭＤに罹患した患者から外科的に切除された脈絡膜の血管では、抗ＶＥＧＦ（ベバシズマブ）治療が血栓症とタンパク質複合体形成とを誘導していた（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ， Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。

ＡＭＤの患者は、年齢により脳卒中および他の血管関連疾患にかかるリスクが高いため、これらの副作用は不都合である。そのため、ベバシズマブで治療されたウェット型ＡＭＤを有する個人では、ウェット型ＡＭＤでない同年齢および同性の群と比較して増加した長期死亡率が報告されている（Ｈａｎｈａｒｔ， Ｃｏｍａｎｅｓｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１７）。特に心筋梗塞後（Ｈａｎｈａｒｔ， Ｃｏｍａｎｅｓｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１８）および脳血管イベント後（Ｈａｎｈａｒｔ， Ｃｏｍａｎｅｓｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１８）では、抗ＶＥＧＦ治療により引き起こされる死亡率が大幅に上昇する。さらに抗ＶＥＧＦ薬による長期治療は、ウェット型ＡＭＤ患者の網膜の周辺部分において、元の脈絡毛細管の喪失と地図状萎縮を引き起こす（Ｓｃｈｕｔｚｅ， Ｗｅｄｌ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。したがって、この治療は、この治療をしなければ発生しなかったであろう追加の視覚障害を誘導する。

最近、眼のコヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴＡ）と一緒に血管造影を使用して、漏出が既に発生した後のＣＮＶのみを検出する以前のフルオレセイン血管造影の欠点を克服する新たな可能性（Ｔｒｅｉｓｔｅｒ， Ｎｅｓｐｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１８）によって、片側滲出性ＣＮＶの僚眼における無症候性のＣＮＶの顕著な有病率と、全てのＣＮＶ病変に隣接する脈絡毛細管の有意に大きな非灌流が検出されている。Ｔｒｅｉｓｔｅｒら（Ｔｒｅｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ． ２０１８）は、滲出性ＡＭＤの眼における脈絡毛細管の非灌流が、無症候性ＣＮＶの僚眼と比較して増加する傾向を同定した。これは、これらの患者の視力を低減させない無症候性のＣＮＶが存在することを明確に示している。これらの新たな所見は、新生血管形成が光受容体の生存を助ける可能性があるという、後期ウェット型ＡＭＤの眼における以前の観察を裏付けている（Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ， Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１４）。

ウェット型ＡＭＤの治療の長い歴史に関しては、新たに形成された血管を除去またはブ遮断するという、常に同じ原則が使用されてきた。これを達成するために、レーザー凝固、手術、放射線、光線力学療法、および今日では硝子体内抗ＶＥＧＦ薬といった異なる方法が使用されてきた。最初の方法はどれも視力を改善できなかったが、抗ＶＥＧＦ（ラニビズマブ）の使用は成功し、しばらくの間視力を改善できるが、最適な救済には依然としてほど遠い。

本発明の根底にある課題は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）などの眼疾患の治療手段を提供することである。

本発明の根底にあるさらなる課題は、長期間にわたって改善された視力を提供する、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）などの眼疾患の治療手段を提供することである。

本発明の根底にあるこれらおよび他の課題は、添付の独立請求項の主題によって解決される。好ましい実施形態は、添付の従属請求項から得られ得る。

また、本発明の根底にある課題は、第１の態様の第１の実施形態でもある第１の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によっても解決され、本方法は、対象にＰＥＤＦを投与することを含み、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第１の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２の実施形態では、疾患は眼疾患である。

第１の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３の実施形態では、眼疾患は黄斑変性症であり、好ましくは、黄斑変性症は加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、より好ましくはドライ型加齢黄斑変性症またはウェット型加齢黄斑変性症である。

第１の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４の実施形態では、ＰＥＤＦはウェット型ＡＭＤおよび／またはドライ型ＡＭＤにおける地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する。

第１の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５の実施形態では、疾患は、中心性漿液性脈絡網膜症、糖尿病性網膜症、虹彩ルベオーシス、角膜血管新生、ポリープ状脈絡膜血管症、未熟児網膜症、ならびに網膜および脈絡膜線維症を含む群から選択される。

第１の態様の第５の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第６の実施形態では、ＰＥＤＦは、網膜および／または脈絡膜の線維化の進行を抑制する。

また、本発明の根底にある課題は、第２の態様の第１の実施形態でもある第２の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによっても解決され、本方法は、対象にＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを投与することを含み、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第２の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第２の実施形態では、疾患は眼疾患である。

第２の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第３の実施形態では、眼疾患は黄斑変性症であり、好ましくは、黄斑変性症は加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、より好ましくはドライ型加齢黄斑変性症またはウェット型加齢黄斑変性症である。

第２の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第４の実施形態では、ＰＥＤＦはウェット型ＡＭＤおよび／またはドライ型ＡＭＤにおける地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する。

第２の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第５の実施形態では、疾患は、中心性漿液性脈絡網膜症、糖尿病性網膜症、虹彩ルベオーシス、角膜血管新生、ポリープ状脈絡膜血管症、未熟児網膜症、ならびに網膜および脈絡膜の線維症を含む群から選択される。

第２の態様の第５の実施形態の一実施形態でもある第２の態様の第６の実施形態では、ＰＥＤＦは、網膜および／または脈絡膜の線維化の進行を抑制する。

本発明の根底にある問題はまた、第３の態様の第１の実施形態でもある第３の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は眼疾患である。

第３の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第３の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第３の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第３の態様の第３の実施形態では、眼疾患は黄斑変性症であり、好ましくは、黄斑変性症は加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、より好ましくはドライ型加齢黄斑変性症またはウェット型加齢黄斑変性症である。

第３の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第３の態様の第４の実施形態では、ＰＥＤＦはウェット型ＡＭＤおよび／またはドライ型ＡＭＤにおける地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する。

第３の態様の第２の実施形態の一実施形態でもある第３の態様の第５の実施形態では、疾患は、中心性漿液性脈絡網膜症、糖尿病性網膜症、虹彩ルベオーシス、角膜血管新生、ポリープ状脈絡膜血管症、未熟児網膜症、ならびに網膜および／または脈絡膜の線維症を含む群から選択される。

第３の態様の第５の実施形態の一実施形態でもある第３の態様の第６の実施形態では、ＰＥＤＦは、網膜および／または脈絡膜の線維化の進行を抑制する。

本発明の根底にある問題はまた、第４の態様の第１の実施形態でもある第４の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は黄斑変性症である。

第４の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第４の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第３の実施形態では、黄斑変性症は加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）であり、より好ましくはドライ型加齢黄斑変性症またはウェット型加齢黄斑変性症である。

第４の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第４の態様の第４の実施形態では、ＰＥＤＦはウェット型ＡＭＤおよび／またはドライ型ＡＭＤにおける地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する。

本発明の根底にある問題はまた、第５の態様の第１の実施形態でもある第５の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は中心性漿液性脈絡網膜症である。

第５の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第５の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

本発明の根底にある問題はまた、第６の態様の第１の実施形態でもある第６の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は糖尿病性網膜症である。

第６の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第６の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

本発明の根底にある問題はまた、第７の態様の第１の実施形態でもある第７の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は虹彩ルベオーシスである。

第７の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第７の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

本発明の根底にある問題はまた、第８の態様の第１の実施形態でもある第８の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は角膜血管新生である。

第８の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第８の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

本発明の根底にある問題はまた、第９の態様の第１の実施形態でもある第９の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患はポリープ状脈絡膜血管症である。

第９の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第９の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

本発明の根底にある問題はまた、第１０の態様の第１の実施形態でもある第１０の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は未熟児網膜症である。

第１０の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１０の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

本発明の根底にある問題はまた、第１１の態様の第１の実施形態でもある第１１の態様によれば、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は網膜および／または脈絡膜の線維症である。

第１１の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１１の態様の第２の実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第１１の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１１の態様の第３の実施形態では、ＰＥＤＦおよび／またはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡは、網膜および／または脈絡膜の線維化の進行を抑制する。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、迷路毛細血管形成は、眼における迷路毛細血管形成、好ましくは眼疾患における迷路毛細血管形成である。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、脈絡毛細管の成長を誘導することは、新たな脈絡毛細管の成長を誘導することを含むか、または新たな脈絡毛細管の成長を誘導することであり、好ましくは、新たな脈絡毛細管は、非漏出性の脈絡毛細管である。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、脈絡毛細管の成長を誘導することは、元の脈絡毛細管に置き換わることができる脈絡毛細管を提供し、好ましくは元の脈絡毛細管は病的な脈絡毛細管であり、より好ましくは元の脈絡毛細管に置き換わることができる脈絡毛細管は非漏出性の脈絡毛細管である。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、脈絡毛細管を引き締めることは、病的な脈絡毛細管を引き締めることを含む。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、細胞外マトリックス形成の阻害することは、血管の内腔に向かう細胞外マトリックスの形成を阻害、および／または血管の周囲の細胞外マトリックスの形成を阻害を含む。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、脈絡毛細管を保護することは、抗ＶＥＧＦ薬の傷害効果から脈絡毛細管を保護することを含む。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、脈絡毛細管を保護することは、抗ＶＥＧＦ薬の退薬の傷害効果から脈絡毛細管を保護することを含む。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、血管の発生をガイドすることは、機能的な血管の発生、好ましくは病的血管からの機能的な血管の発生を含む。

その各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態では、病的血管は、病態、好ましくは対象の病態の結果であり、より好ましくは、病態は対象が罹患しているか、もしくは罹患するリスクがある疾患、および／または治療のためにＰＥＤＦもしくはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡが使用されているか、もしくは使用されることが意図される疾患である。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態では、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡは、硝子体内または網膜下に投与される。

それらの各々および任意の実施形態を含む、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の態様の実施形態において、本方法は、抗ＶＥＧＦ療法を施すことをさらに含み、好ましくは、抗ＶＥＧＦ療法は抗ＶＥＧＦ薬の対象への投与を含み、抗ＶＥＧＦ薬は、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ベバシズマブおよびアフリベルセプトからなる群から選択される。その実施形態において、ＰＥＤＦと抗ＶＥＧＦ療法との両方の併用は、抗ＶＥＧＦ療法の単独使用と比較して、対象に投与される抗ＶＥＧＦ療法の量を減少させることを可能とする。対象に投与される抗ＶＥＧＦ療法の量のそのような減少は、典型的には副作用、特に心血管への副作用および／または脳への副作用などの前記抗ＶＥＧＦ療法の副作用の減少をもたらす。

いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、驚くべきことに、本発明者は、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）が、眼疾患の治療において有益な、健康で機能的な脈絡毛細管の成長ならびに、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることなどのそれらに関連する効果を誘導できることを見出した。その限りにおいて、本発明は、血管の増殖の遮断または血管の除去に基づく眼疾患の治療における現在の技術水準から方向を転換するものである。

さらに、驚くべきことに、本発明者は、眼中のＰＥＤＦタンパク質とＶＥＧＦタンパク質とのレベルのバランスをとることによって、ドライ型およびウェット型の加齢黄斑変性症を含む様々な眼疾患、ならびに治療未経験の静止脈絡膜血管新生および地図状萎縮などといった前記眼疾患にそれぞれ関連するある特定の症状および形態学的変化が治療され得ることを見出した。これに関連して、ＰＥＤＦタンパク質とＶＥＧＦタンパク質とのレベルのそのようなバランスは、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡの投与とは別に、ＶＥＧＦまたは抗ＶＥＧＦ剤の投与を必要とし得ることが当業者によって認識されるであろう。そのような抗ＶＥＧＦ剤は、ＶＥＧＦの活性、特に眼におけるＶＥＧＦの活性、より具体的にはＶＥＧＦの血管新生活性を妨害する薬剤である。その任意の実施形態を含む本発明の各々および任意の態様の実施形態において、そのような抗ＶＥＧＦ剤は、抗ＶＥＧＦ療法であり、より具体的には、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦ薬である。ＰＥＤＦおよび／またはＶＥＧＦのレベルが低下するか、または増加するか、そしてそうであれば、どの程度かを決定するための基礎として、硝子体内または眼内液中のＰＥＤＦタンパク質およびＶＥＧＦタンパク質のレベルを決定する方法は、当該分野で知られており、例えば、Ｂｉｅｓｅｍｅｉｅｒ Ａら（２０１４）に記載されている。

さらに、それらの実施形態を含む本発明の各々および任意の態様によれば、ＰＥＤＦの投与に言及する場合、ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡの投与も同様に開示および包含されることが認識されるであろう。同様に、ＶＥＧＦの投与に言及する場合、ＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡの投与は、同様に開示および包含される。最後に、その任意の実施形態を含む本発明の各々および任意の態様によれば、ＰＥＤＦおよびＶＥＧＦの両方が患者に投与される場合、そのような投与は、（ａ）ＰＥＤＦタンパク質の投与とＶＥＧＦタンパク質の投与、（ｂ）ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡとＶＥＧＦタンパク質の投与、（ｃ）ＰＥＤＦの投与とＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡの投与、および（ｄ）ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡとＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡの投与を包含し得ることが認識されるであろう。

そのようなＰＥＤＦによる迷路毛細血管形成の阻害に照らして、ＰＥＤＦの眼疾患の治療における治療効果は、特にドライ型ＡＭＤとウェット型ＡＭＤの両方の加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、中心性漿液性脈絡網膜症、糖尿病性網膜症、虹彩ルベオーシス、角膜血管新生、ポリープ状脈絡膜血管症、および未熟児網膜症のような迷路毛細血管形成を示す眼疾患に対して妥当と考えられる。例えば、ウェット型ＡＭＤの患者にフルオレセインを注射すると、病的血管から短時間に大量の液体が漏出することが観察される。この所見の最も妥当な原因は、内皮壁の間または内皮壁内に大きな隙間があることである。しかしながら、血液細胞と細胞外マトリックスをつなぐ内皮の隙間は、血小板によってすぐに閉じられるはずだが、そうなっていない。最近、ＡＭＤの患者から外科的に切除された脈絡膜新生血管（ＣＮＶ）において、血管内腔に迷路のような構造を形成する内皮の微絨毛様突起を多く有する毛細血管が発見された。そのような毛細血管の内腔は、間質に向かって開いた結合を示していた。これらの毛細血管は血管網に結合しており、それらは血漿で満たされているため、したがって、それらが漏出源となっていた。このタイプの毛細血管は、ＣＮＶで頻繁に観察され、「迷路毛細血管」と呼ばれていた。これらの迷路毛細血管の漏れやすい部位は、迷路毛細血管の内腔が減少するために血小板が入ることができないため、血小板によって閉じることができない。したがって、このタイプの血管は慢性的な血漿滲出を引き起こし、浮腫の原因となる（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ， Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。

さらに、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）は、非常に強力な神経栄養効果と神経保護効果を有している（Ｋｉｎｇ ａｎｄ Ｓｕｚｕｍａ ２０００）。この因子は、正常酸素条件下でＲＰＥによって産生される。低酸素状態では産生が停止される。これは血管新生を大いに促進する。加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）では、損傷したＲＰＥ細胞が産生するＰＥＤＦはあまりに少ない。これは、非制御的な血管新生を生じる。眼におけるＰＥＤＦの中心的な効果は、血管の新生を防ぐことであると考えられていたが（Ｋｉｎｇ ａｎｄ Ｓｕｚｕｍａ ２０００）、本発明によれば、ＶＥＧＦによって病的な血管形成が開始された際に、ＰＥＤＦはＣＮＶ血管を安定化させ、迷路毛細血管の形成を避けることができる。

既に示したように、第１の態様の第１の実施形態でもある第１の態様によれば、本発明の根底にある課題は、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によって解決され、本方法は対象にＰＥＤＦを投与することを含み、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第１の態様の以下の実施形態は、上記の第１の態様のそれらの実施形態に対する、およびそれらの実施形態のさらなる実施形態である。第１の態様の実施形態の以下の番号付けは、直前の段落に記載された第１の態様を具体的に指す。

その好ましい実施形態およびその実施形態を含む各々および任意の態様によれば、ＰＥＤＦはヒトＰＥＤＦタンパク質であり、より好ましい実施形態において、ＰＥＤＦは配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。

QNPASPPEEG SPDPDSTGAL VEEEDPFFKV PVNKLAAAVS
NFGYDLYRVR SSTSPTTNVL LSPLSVATAL SALSLGAEQR
TESIIHRALY YDLISSPDIH GTYKELLDTV TAPQKNLKSA
SRIVFEKKLR IKSSFVAPLE KSYGTRPRVL TGNPRLDLQE
INNWVQAQMK GKLARSTKEI PDEISILLLG VAHFKGQWVT
KFDSRKTSLE DFYLDEERTV RVPMMSDPKA VLRYGLDSDL
SCKIAQLPLT GSMSIIFFLP LKVTQNLTLI EESLTSEFIH
DIDRELKTVQ AVLTVPKLKL SYEGEVTKSL QEMKLQSLFD
SPDFSKITGK PIKLTQVEHR AGFEWNEDGA GTTPSPGLQP
AHLTFPLDYH LNQPFIFVLR DTDTGALLFI GKILDPRGP （配列番号１）

その好ましい実施形態およびその実施形態を含む各々および任意の態様によれば、ＰＥＤＦは、ＰＥＤＦの誘導体、好ましくはヒトＰＥＤＦの誘導体、およびより好ましくは配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むＰＥＤＦの誘導体である。ＰＥＤＦが上記の効果、特に、迷路毛細血管形成を阻害する効果、脈絡毛細管の成長を誘導する効果、脈絡毛細管を引き締める効果、細胞外マトリックスの形成を阻害する効果、脈絡毛細管を保護する効果、および／または血管の発生をガイドする効果を引き起こすことができる限り、ＰＥＤＦの任意の誘導体が使用され得ることが、当業者には理解されるであろう。一実施形態では、ＰＥＤＦは、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の相同性または同一性を有するものである。さらなる実施形態では、ＰＥＤＦの誘導体は、配列番号１のアミノ酸２０位におけるアミノ酸残基がピロリドンカルボン酸であり、配列番号１のアミノ酸２４位におけるアミノ酸残基がホスホセリンであり、配列番号１のアミノ酸１１４位におけるアミノ酸残基がホスホセリンであり、配列番号１のアミノ酸２２７位におけるアミノ酸残基がホスホセリンであり、および／または配列番号１のアミノ酸２８５位におけるアミノ酸残基がＮ－結合（ＧｌｃＮＡｃ）アスパラギンである。

上記の効果のいずれか、特に、迷路毛細血管の形成およびその阻害を含むその変化、脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックス形成の阻害、脈絡毛細管の保護、および／または血管の発生のガイドは、漏出性の血管の検出と評価とにそれぞれ適したフルオレセイン血管造影（ＦＡ）と組み合わせた場合に好ましい光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ－Ａ）によって評価され得ることが当業者によって理解されるであろう（Ｓｐａｉｄｅ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。光コヒーレンストモグラフィ血管造影（ＯＣＴ－Ａ）は、網膜および脈絡膜の微小血管を画像化するための非侵襲的手法として登場した（Ｓｐａｉｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）。簡単に説明すると、ＯＣＴ－Ａ技術は、移動する赤血球の表面のレーザー光反射を使用して、セグメント化された眼の異なる領域を通る血管を正確に描写し、それにより、血管内における色素の必要性を排除する。患者の網膜のＯＣＴスキャンは、複数の個別のＡスキャンで構成され、これはＢスキャンにコンパイルされて、断面構造情報を提供する。ＯＣＴ－Ａ技術により、同じ組織領域が繰り返し画像化され、スキャン間で差異が分析されるため、高い流量を含むゾーン（すなわち、スキャン間で顕著な変化があるゾーン）と、流量が遅いゾーンまたはまったく流れがないゾーン（スキャン間で類似している）を検出することが可能となる。

また、ＯＣＴ－ＡおよびＦＡは、網膜および／または網膜下腔内に位置する浮腫の検出および評価にもそれぞれ使用され得る。

第１の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第２の実施形態では、疾患は眼疾患または眼科疾患である。

第１の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第３の実施形態では、眼疾患は黄斑変性症、好ましくは加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、より好ましくはドライ型加齢黄斑変性症またはウェット型加齢黄斑変性症である。

第１の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第４の実施形態では、眼疾患は、中心性漿液性脈絡網膜症、糖尿病性網膜症、虹彩ルベオーシス、角膜血管新生、ポリープ状脈絡膜血管症、および未熟児網膜症を含む群から選択される。

第１の態様の第１、第２、第３および第４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第５の実施形態では、迷路毛細血管の形成は、眼における、好ましくは眼疾患における迷路毛細血管の形成である。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、および第５の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第６の実施形態では、脈絡毛細管の成長を誘導することは、新たな脈絡毛細管の成長を誘導することを含むか、新たな脈絡毛細管の成長を誘導することであり、好ましくは、非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導することを含むか、非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導することである。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５および第６の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第７の実施形態では、脈絡毛細管の成長を誘導することは、元の脈絡毛細管を置き換えることができる脈絡毛細管を提供し、好ましくは、元の脈絡毛細管は病的な脈絡毛細管である。それに関連して、病的な脈絡毛細管はブルッフ膜とＲＰＥとの間に位置し、ＯＣＴ－Ａで見られることが、当業者により認められるであろう。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、および第７の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第８の実施形態では、脈絡毛細管を引き締めることは、病的な脈絡毛細管を引き締めることを含む。これに関連して、ブルッフ膜とＲＰＥとの間または網膜下腔内に位置する各新生血管脈絡毛細管または血管は、好ましくは病的とみなされることが認められるであろう。より好ましくは、脈絡毛細管は、それらが迷路状の毛細血管へと発生するか、または他の理由により漏出性になった場合にのみ、病的であるとみなされる。その診断は、ＯＣＴ－Ａおよび／またはフルオレセイン血管造影法（ＦＡ）によって行われ得る。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７および第８の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第９の実施形態では、細胞外マトリックスの形成を阻害することは、血管の内腔に向かう細胞外マトリックスの形成の阻害および／または血管の周囲の細胞外マトリックスの形成の阻害を含む。好ましくは、そのような血管は、内腔への内皮突起の不在により、赤血球の流れを阻害しない。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８および第９の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１０の実施形態では、脈絡毛細管を保護することは、抗ＶＥＧＦ薬の傷害効果から脈絡毛細管を保護することを含む。そのような抗ＶＥＧＦ薬は、好ましくはペガプタニブ、ラニビズマブ、ベバシズマブおよびアフリベルセプトを含む群から選択されるものである。それに関連して、そのような傷害効果には、血管の退行ならびにＲＰＥおよび光受容体の変性が包含され、地図状萎縮がもたらされることが認められるであろう。地図状萎縮は、ＲＰＥの自家蛍光が消失するため、走査型レーザー検眼鏡（ＳＬＯ）で暗いスポットとして検出され得る。ＳＬＯ像は、ＲＰＥにおけるリポフスチンの自家蛍光の結果である。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９および第１０の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１１の実施形態では、脈絡毛細管を保護することは、抗ＶＥＧＦ薬の退薬の傷害効果から脈絡毛細管を保護することを含む。これに関連して、好ましくは、血管が漏出性となり、迷路毛細血管へと変化すること；内皮細胞が増殖し、移動することが理解されるであろう。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０および第１１の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１２の実施形態では、血管の発生をガイドすることは、機能的な血管の発生、好ましくは病的血管からの機能的な血管の発生を含む。それに関連して、好ましくは病的血管は、適切な血流を可能にせず、多すぎるか、または非定型的な細胞外マトリックスタンパク質の漏出性の血管である。

第１の態様の第１２の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１３の実施形態では、病的血管は、病態の結果である。そのような病態は、低酸素、ＨＩＦ１アルファのアップレギュレーション、ならびに増殖因子およびＶＥＧＦの非定型形成のうちの１つまたは組合せであり得る。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２および第１３の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１４の実施形態では、ＰＥＤＦは硝子体内もしくは網膜下に投与され、またはＰＥＤＦをコードするアデノ随伴ウイルスなどのベクターとして投与される。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、および第１４の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１５の実施形態では、本方法は、抗ＶＥＧＦ療法を適用することをさらに含み、好ましくは、抗ＶＥＧＦ療法は、抗ＶＥＧＦ薬の対象への投与を含み、抗ＶＥＧＦ薬は、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ベバシズマブおよびアフリベルセプトを含む群から選択される。それに関連して、ＰＥＤＦが早期に使用され得ること、例えばＣＮＶが片眼で検出された場合、僚眼が予防的に治療され得ること；また、眼の正常な視力を伴う無症候性のＣＮＶが診断された場合、ＣＮＶを安定に保つために治療が開始され得ることが、当業者によって認められるであろう。

第１の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４および第１５の実施形態の一実施形態でもある第１の態様の第１６の実施形態では、対象は、抗ＶＥＧＦ治療の副作用、好ましくは抗ＶＥＧＦ治療から生じる視覚喪失に罹患している対象である。

第２の態様の第１の実施形態でもある第２の態様では、本発明の根底にある課題は、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによって解決され、方法は対象にＰＥＤＦを投与することを含み、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。一実施形態において、ｍＲＮＡは、配列番号１に記載のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡである。ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡが、疾患の治療および／または予防のための方法においてなど、本発明に従って使用される場合、ｍＲＮＡは、好ましくはｍＲＮＡを小胞体（ＥＲ）に誘導し、続いて切断されるシグナルペプチドをコードする配列を含むことが、当業者により理解される。一実施形態では、上記ｍＲＮＡは、配列番号１に記載のアミノ酸配列をコードするｍＲＮＡである。

ATGCAGGCCCTGGTGCTACTCCTCTGCATTGGAGCCCTCCTCGGGCACAGCAGCTGCCAGAACCCTGCCAGCCCCCCGGAGGAGGGCTCCCCAGACCCCGACAGCACAGGGGCGCTGGTGGAGGAGGAGGATCCTTTCTTCAAAGTCCCCGTGAACAAGCTGGCAGCGGCTGTCTCCAACTTCGGCTATGACCTGTACCGGGTGCGATCCAGCACGAGCCCCACGACCAACGTGCTCCTGTCTCCTCTCAGTGTGGCCACGGCCCTCTCGGCCCTCTCGCTGGGAGCGGAGCAGCGAACAGAATCCATCATTCACCGGGCTCTCTACTATGACTTGATCAGCAGCCCAGACATCCATGGTACCTATAAGGAGCTCCTTGACACGGTCACCGCCCCCCAGAAGAACCTCAAGAGTGCCTCCCGGATCGTCTTTGAGAAGAAGCTGCGCATAAAATCCAGCTTTGTGGCACCTCTGGAAAAGTCATATGGGACCAGGCCCAGAGTCCTGACGGGCAACCCTCGCTTGGACCTGCAAGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCGCAGATGAAAGGGAAGCTCGCCAGGTCCACAAAGGAAATTCCCGATGAGATCAGCATTCTCCTTCTCGGTGTGGCGCACTTCAAGGGGCAGTGGGTAACAAAGTTTGACTCCAGAAAGACTTCCCTCGAGGATTTCTACTTGGATGAAGAGAGGACCGTGAGGGTCCCCATGATGTCGGACCCTAAGGCTGTTTTACGCTATGGCTTGGATTCAGATCTCAGCTGCAAGATTGCCCAGCTGCCCTTGACCGGAAGCATGAGTATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAAGTGACCCAGAATTTGACCTTGATAGAGGAGAGCCTCACCTCCGAGTTCATTCATGACATAGACCGAGAACTGAAGACCGTGCAGGCGGTCCTCACTGTCCCCAAGCTGAAGCTGAGTTACGAAGGCGAAGTCACCAAGTCCCTGCAGGAGATGAAGCTGCAATCCTTGTTTGATTCACCAGACTTTAGCAAGATCACAGGCAAACCCATCAAGCTGACTCAGGTGGAACACCGGGCTGGCTTTGAGTGGAACGAGGATGGGGCGGGAACCACCCCCAGCCCAGGGCTGCAGCCTGCCCACCTCACCTTCCCGCTGGACTATCACCTTAACCAGCCTTTCATCTTCGTACTGAGGGACACAGACACAGGGGCCCTTCTCTTCATTGGCAAGATTCTGGACCCCAGGGGCCCCTAA

配列番号２のヌクレオチド配列の最初の５７ヌクレオチドは、ヒトＰＥＤＦのシグナルペプチドをコードする。しかしながら、前記シグナルペプチドおよびそれをコードするヌクレオチド配列が、異なるシグナルペプチドおよびそのような異なるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列によってそれぞれ置き換えられることは、本発明の範囲内である。そのような異なるシグナルペプチドは、当技術分野において公知である。

代替的な実施形態では、上記ｍＲＮＡは、配列番号３のヌクレオチド配列である。

GGACGCTGGATTAGAAGGCAGCAAAAAAAGATCTGTGCTGGCTGGAGCCCCCTCAGTGTGCAGGCTTAGAGGGACTAGGCTGGGTGTGGAGCTGCAGCGTATCCACAGGCCCCAGGATGCAGGCCCTGGTGCTACTCCTCTGCATTGGAGCCCTCCTCGGGCACAGCAGCTGCCAGAACCCTGCCAGCCCCCCGGAGGAGGGCTCCCCAGACCCCGACAGCACAGGGGCGCTGGTGGAGGAGGAGGATCCTTTCTTCAAAGTCCCCGTGAACAAGCTGGCAGCGGCTGTCTCCAACTTCGGCTATGACCTGTACCGGGTGCGATCCAGCATGAGCCCCACGACCAACGTGCTCCTGTCTCCTCTCAGTGTGGCCACGGCCCTCTCGGCCCTCTCGCTGGGAGCGGACGAGCGAACAGAATCCATCATTCACCGGGCTCTCTACTATGACTTGATCAGCAGCCCAGACATCCATGGTACCTATAAGGAGCTCCTTGACACGGTCACTGCCCCCCAGAAGAACCTCAAGAGTGCCTCCCGGATCGTCTTTGAGAAGAAGCTRCGCATAAAATCCAGCTTTGTGGCACCTCTGGAAAAGTCATATGGGACCAGGCCCAGAGTCCTGACGGGCAACCCTCGCTTGGACCTGCAAGAGATCAACAACTGGGTGCAGGCGCAGATGAAAGGGAAGCTCGCCAGGTCCACAAAGGAAATTCCCGATGAGATCAGCATTCTCCTTCTCGGTGTGGCGCACTTCAAGGGGCAGTGGGTAACAAAGTTTGACTCCAGAAAGACTTCCCTCGAGGATTTCTACTTGGATGAAGAGAGGACCGTGAGGGTCCCCATGATGTCGGACCCTAAGGCTGTTTTACGCTATGGCTTGGATTCAGATCTCAGCTGCAAGATTGCCCAGCTGCCCTTGACCGGAAGCATGAGTATCATCTTCTTCCTGCCCCTGAAAGTGACCCAGAATTTGACCTTGATAGAGGAGAGCCTCACCTC （配列番号３）

その任意の実施形態を含む第２の態様のさらなる実施形態では、ｍＲＮＡは好ましくは、ＰＥＤＦのコード配列が取られたｍＲＮＡの５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲとは異なる５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲなどの構造要素を含む組換えまたは異種のｍＲＮＡである。

その任意の実施形態を含む第１の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２の態様にも同様に適用される。言い換えれば、第１の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１２の態様の第１の実施形態でもある第１２の態様では、本発明の根底にある課題は、対象におけるドライ型黄斑変性症、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によっても解決され、本方法は、ＰＥＤＦおよびＶＥＧＦを対象に投与することを含む。

第１２の態様の第１の実施形態でもある第１２の態様の第２の実施形態では、対象は、治療未経験の静止型脈絡膜血管新生に罹患している。この実施形態に関連して、脈絡膜と網膜色素上皮との間に臨床症状のない個体では、治療未経験の静止型脈絡膜血管新生が観察されることが認められることになる。これらのＣＮＶは完全に灌流されているが、いかなる液体の漏出および滲出もない。また、これらの個体の視力は正常でもあり得る（Ｑｕｅｒｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ．およびＭｅｎｔｅｓ Ｊ ａｎｄ Ｙｉｌｄｉｒｉｍ Ｓを参照）。

第１２の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１２の態様の第３の実施形態では、対象の視力は正常である。

第１２の態様の第１、第２および第３の実施形態の一実施形態でもある第１２の態様の第４の実施形態では、対象は地図状萎縮に罹患している。この実施形態に関連して、地図状萎縮（ＧＡ）は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）の非滲出性の後期段階を表すことが認められることになる。これは、典型的には、光受容体を含む網膜外層の喪失、網膜色素上皮の変性、および脈絡毛細管の希薄化の領域によって特徴付けられる。（Ｍｕｌｌｅｒ， Ｐ．Ｌ．， ｅｔ ａｌ．（２０２０）を参照）。

第１２の態様の第４の実施形態の一実施形態でもある第１２の態様の第５の実施形態では、地図状萎縮は、抗ＶＥＧＦ療法の結果である。

第１２の態様の第１、第２、第３、第４および第５の実施形態の一実施形態でもある第１２の態様の第６の実施形態では、ＰＥＤＦは脈絡毛細管の成長を誘導する。

第１２の態様の第６の実施形態の一実施形態でもある第１２の態様の第７の実施形態では、脈絡毛細管は非漏出性の脈絡毛細管である。

第１２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６および第７の実施形態の一実施形態でもある第１２の態様の第８の実施形態では、ＰＥＤＦは地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する。

その任意の実施形態を含む第１の態様の開示は、第１２の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第１の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第１２の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１３の態様の第１の実施形態でもある第１３の態様では、本発明の根底にある課題は、対象におけるドライ型黄斑変性症、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによっても解決され、本方法は、ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡとＶＥＧＦまたはＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含む。

それらの任意の実施形態を含む第２および第１２の態様の開示は、第１３の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第２の態様の各々および任意の実施形態、ならびに第１２の態様の各々および任意の実施形態は、それらの任意の実施形態を含む、第１３の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１４の態様の第１の実施形態でもある第１４の態様では、本発明の根底にある課題は、対象におけるウェット型黄斑変性症、好ましくはウェット型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によっても解決され、本方法は、ＰＥＤＦおよび抗ＶＥＧＦ療法を対象に施すことを含む。

第１４の態様の第１の実施形態でもある第１４の態様の第２の実施形態では、ＰＥＤＦは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導する。

第１４の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１４の態様の第３の実施形態では、抗ＶＥＧＦ療法は、対象に抗ＶＥＧＦ薬を投与することを含む。

第１４の態様の第１、第２および第３の実施形態の一実施形態でもある第１４の態様の第４の実施形態では、抗ＶＥＧＦ薬は、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ベバシズマブおよびアフリベルセプトを含む群から選択される。

その各々および任意の実施形態を含む第１の態様の開示は、第１４の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第１の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第１４の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１５の態様の第１の実施形態でもある第１５の態様では、本発明の根底にある課題は、対象におけるウェット型黄斑変性症、好ましくはウェット型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによっても解決され、本方法は、ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡと抗ＶＥＧＦ療法とを対象に施すことを含む。

その任意の実施形態を含む第２および第１４の態様の開示は、第１５の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第２の態様の各々および任意の実施形態、ならびに第１４の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む、第１５の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１６の態様の第１の実施形態でもある第１６の態様では、本発明の根底にある課題は、対象における治療未経験の静止脈絡膜血管新生の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によっても解決され、本方法は、対象にＰＥＤＦおよびＶＥＧＦを投与することを含む。

第１６の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１６の態様の第２の実施形態では、対象の視力は正常である。

第１６の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１６の態様の第３の実施形態では、対象はドライ型黄斑変性、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症に罹患している。

第１６の態様の第１、第２および第３の実施形態の一実施形態でもある第１６の態様の第４の実施形態では、対象は地図状萎縮に罹患している。

第１６の態様の第４の実施形態の一実施形態でもある第１６の態様の第５の実施形態では、地図状萎縮は、抗ＶＥＧＦ療法の結果である。

第１６の態様の第１、第２、第３、第４および第５の実施形態の一実施形態でもある第１６の態様の第６の実施形態では、ＰＥＤＦは脈絡毛細管の成長を誘導する。

第１６の態様の第６の実施形態の一実施形態でもある第１６の態様の第７の実施形態では、脈絡毛細管は非漏出性の脈絡毛細管である。

その任意の実施形態を含む第１の態様の開示は、第１６の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第１の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第１６の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１７の態様の第１の実施形態でもある第１７の態様では、本発明の根底にある課題は、対象における治療未経験の静止脈絡膜血管新生の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡによっても解決され、本方法は、対象に対してＰＥＤＦとＶＥＧＦとを、またはＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡを投与することを含む。

その任意の実施形態を含む第２および第１６の態様の開示は、第１７の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第２の態様の各々および任意の実施形態、ならびに第１６の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む、第１７の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第１８の態様の第１の実施形態でもある第１８の態様では、本発明の根底にある課題は、対象における無症候性の血管新生の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によって解決され、本方法は、対象にＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡ投与することを含む。

第１８の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１８の態様の第２の実施形態では、対象はドライ型黄斑変性、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症に罹患している。

第１８の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１８の態様の第３の実施形態では、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡは、脈絡毛細管の成長を誘導し、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導する。

第１８の態様の第１、第２および第３の実施形態の一実施形態でもある第１８の態様の第４の実施形態では、方法はさらに、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡ、および／または抗ＶＥＧＦ薬を対象に投与することを含む。

第１８の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１８の態様の第５の実施形態では、対象はウェット型黄斑変性、好ましくはウェット型加齢黄斑変性症に罹患している。

第１９の態様の第１の実施形態でもある第１９の態様では、本発明の根底にある課題は、対象における黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）またはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡによって解決され、対象は無症候性の血管新生を罹患している。

第１９の態様の第１の実施形態の一実施形態でもある第１９の態様の第２の実施形態では、黄斑変性症は、加齢黄斑変性症である。

第１９の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１９の態様の第３の実施形態では、黄斑変性症は、ドライ型黄斑変性症である。

第１９の態様の第３の実施形態の一実施形態でもある第１９の態様の第４の実施形態では、方法はさらに、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含む。

第１９の態様の第１、第２、第３および第４の実施形態の一実施形態でもある第１９の態様の第５の実施形態では、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡは、脈絡毛細管の成長、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導する。

第１９の態様の第１および第２の実施形態の一実施形態でもある第１９の態様の第６の実施形態では、黄斑変性症は、ウェット型黄斑変性症である。

それらの任意の実施形態を含む第１および第２の態様の開示は、それらの任意の実施形態を含む第１８の態様および第１９の態様にも同様に適用されることが認められることになる。言い換えれば、第１の態様および第２の態様の各々および任意の実施形態は、それらの任意の実施形態を含む第１８および第１９の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第２０の態様の第１の実施形態でもある第２０の態様では、本発明の根底にある課題は、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡを含む医薬組成物によっても解決され、医薬組成物は、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のためのものであり、本方法は、ＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管の形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。好ましくは、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含む。

それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２０の態様にも同様に適用される。言い換えれば、それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２０の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第２１の態様の第１の実施形態でもある第２１の態様では、本発明の根底にある課題は、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡのいずれかを含む医薬組成物によっても解決され、医薬組成物は、疾患の治療および／または予防のための方法における使用のためのものであり、疾患は眼疾患である。

それらの任意の実施形態を含む第３の態様、第４の態様、第５の態様、第６の態様、第７の態様、第８の態様、第９の態様、第１０の態様、第１１の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様、第１９の態様、および第２０の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２１の態様にも同様に適用される。言い換えれば、それらの任意の実施形態を含む第３の態様、第４の態様、第５の態様、第６の態様、第７の態様、第８の態様、第９の態様、第１０の態様、第１１の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様、第１９の態様、および第２０の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２１の態様の実施形態でもあり、その逆も然りである。

第２２の態様の第１の実施形態でもある第２２の態様では、本発明の根底にある課題は、疾患の治療および／または予防のための医薬の製造における、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡの使用によって解決され、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管の形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２２の態様にも同様に適用される。言い換えれば、第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２２の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第２３の態様の第１の実施形態でもある第２３の態様では、本発明の根底にある課題は、疾患の治療および／または予防のための医薬の製造における、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡの使用によっても解決され、疾患は眼疾患である。

それらの任意の実施形態を含む第３の態様、第４の態様、第５の態様、第６の態様、第７の態様、第８の態様、第９の態様、第１０の態様、第１１の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２３の態様にも同様に適用される。言い換えれば、それらの任意の実施形態を含む第３の態様、第４の態様、第５の態様、第６の態様、第７の態様、第８の態様、第９の態様、第１０の態様、第１１の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２３の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第２４の態様の第１の実施形態でもある第２４の態様では、本発明の根底にある課題は、対象の疾患の治療および／または予防のための方法によって解決され、疾患の治療および／または予防は、治療有効量の色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡを対象に投与すること、ならびに迷路毛細血管の形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２４の態様にも同様に適用される。言い換えれば、それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２４の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第２５の態様の第１の実施形態でもある第２５の態様では、本発明の根底にある課題は、対象の疾患の治療および／または予防のための方法によっても解決され、疾患の治療および／または予防は、治療有効量の色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）もしくは色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡを対象に投与することを含み、疾患は眼疾患である。

それらの任意の実施形態を含む第３の態様、第４の態様、第５の態様、第６の態様、第７の態様、第８の態様、第９の態様、第１０の態様、第１１の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２５の態様にも同様に適用される。言い換えれば、それらの任意の実施形態を含む第３の態様、第４の態様、第５の態様、第６の態様、第７の態様、第８の態様、第９の態様、第１０の態様、第１１の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の各々および任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２５の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。好ましい実施形態では、疾患の治療および／または予防は、迷路毛細血管形成を阻害すること、脈絡毛細管の成長を誘導すること、好ましくは非漏出脈絡毛細管の成長を誘導すること、脈絡毛細管を引き締めること、細胞外マトリックスの形成を阻害すること、脈絡毛細管を保護すること、および／または血管の発生をガイドすることを含む。

第２６の態様の第１の実施形態でもある第２６の態様では、本発明の根底にある課題は、対象において迷路毛細血管の形成を阻害する方法、脈絡毛細管の成長を誘導する方法、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導する方法、脈絡毛細管を引き締める方法、細胞外マトリックスの形成を阻害する方法、脈絡毛細管を保護する方法、および／または血管の発生をガイドする方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によって解決され、方法は対象にＰＥＤＦを投与することを含む。

それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、その任意の実施形態を含む第２６の態様にも同様に適用される。言い換えれば、第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２６の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

第２７の態様の第１の実施形態でもある第２７の態様では、本発明の根底にある課題は、対象において迷路毛細血管の形成を阻害する方法、脈絡毛細管の成長を誘導する方法、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導する方法、脈絡毛細管を引き締める方法、細胞外マトリックスの形成を阻害する方法、脈絡毛細管を保護する方法、および／または血管の発生をガイドする方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）をコードするｍＲＮＡ、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）によって解決され、方法は対象にＰＥＤＦを投与することを含む。

それらの任意の実施形態を含む第１の態様、第２の態様、第１２の態様、第１３の態様、第１４の態様、第１５の態様、第１６の態様、第１７の態様、第１８の態様および第１９の態様の開示は、第２７の態様にも同様に適用される。言い換えれば、第１および第２の任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む第２７の態様の実施形態でもあり、その逆もまた然りである。

その任意の実施形態を含む各々および任意の態様の実施形態において、対象はヒト対象である。

その任意の実施形態を含む各々および任意の態様に関連して、ＶＥＧＦはヒトＶＥＧＦである。

その任意の実施形態を含む各々および任意の態様に関連して、好ましくは、ＰＥＤＦの量またはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡの量は、その治療有効量である。

その任意の実施形態を含む各々および任意の態様に関連して、好ましくは、ＶＥＧＦの量またはＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡの量は、その治療有効量である。

それらの任意の実施形態を含む各々および任意の態様に関連して、ＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡは、実際には、適切な非ウイルスベクター中またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などのウイルスベクター中のインサートから、一般にはｃＤＮＡインサートとして発現されてもよい。非ウイルスまたはウイルスベクターから発現される場合、ＰＥＤＦをコードするインサートは、構成的または調節可能なプロモーターによる転写制御下にあることが好ましい。

それらの任意の実施形態を含む各々および任意の態様に関連して、ＶＥＧＦをコードするｍＲＮＡは、実際には、適切な非ウイルスベクター中またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などのウイルスベクター中のインサートから、一般にはｃＤＮＡインサートとして発現されてもよい。非ウイルスまたはウイルスベクターから発現される場合、ＶＥＧＦをコードするインサートは、構成的または調節可能なプロモーターによる転写制御下にあることが好ましい。

それらの任意の実施形態を含む各々および任意の態様に関連して、ヒトＶＥＧＦは、ヒトＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄおよびそれらの任意のアイソフォームからなる群から選択される。ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－ＣおよびＶＥＧＦ－Ｄのアミノ酸配列およびそれらをコードするｍＲＮＡの好ましい実施形態は、それらの各種アイソフォームを含めて、図２２～６５に開示されている。ｍＲＮＡ配列が実際にはｃＤＮＡ配列として表されており、ＴをＵに置き換えることによって対応するｍＲＮＡ配列を導き出すことができることが、当業者には認識されるであろう。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、迷路毛細血管の形成は、眼における迷路毛細血管の形成、好ましくは眼疾患における迷路毛細血管の形成である。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、脈絡毛細管の成長を誘導することは、新たな脈絡毛細管の成長を誘導することを含むか、または新たな脈絡毛細管の成長を誘導することである。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、脈絡毛細管の成長を誘導することは、元の脈絡毛細管を置き換えることができる脈絡毛細管を提供し、好ましくは元の脈絡毛細管は病的な脈絡毛細管である。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、脈絡毛細管を引き締めることは、病的な脈絡毛細管を引き締めることを含む。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、細胞外マトリックス形成の阻害することは、血管の内腔に向かう細胞外マトリックス形成の阻害および／または血管の周囲の細胞外マトリックス形成の阻害を含む。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、脈絡毛細管を保護することは、抗ＶＥＧＦ剤の傷害効果から脈絡毛細管を保護することを含む。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、脈絡毛細管を保護することは、抗ＶＥＧＦ薬の退薬の傷害効果から脈絡毛細管を保護することを含む。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、血管の発生をガイドすることは、機能的な血管、好ましくは病的血管からの機能的な血管の発生を含む。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、ＰＥＤＦはヒトＰＥＤＦである。

本明細書で好ましく使用される各々および任意の態様の実施形態において、非漏出性の脈絡毛細管は、その漏出特性が健康な対象、好ましくは健康なヒト対象の漏出特性に対応する脈絡毛細管である。

本明細書で好ましく使用されるそれらの任意の実施形態を含む本発明の各々および任意の態様の実施形態において、ＰＥＤＦおよび／またはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡが投与される対象は、表示の疾患に罹患している対象である。

それらの任意の実施形態を含む本発明の各々および任意の態様の実施形態において、抗ＶＥＧＦ薬という用語は、任意の抗ＶＥＧＦ療法を含む。

それらの任意の実施形態を含む本発明の各々および任意の態様の実施形態において、抗ＶＥＧＦ治療は、対象、好ましくはそれを必要とする対象に抗ＶＥＧＦ療法、好ましくは抗ＶＥＧＦ薬を施すことを含む。

その各々および任意の実施形態を含む任意の態様の任意の実施形態は、その任意の実施形態を含む他の態様の各々および任意の１つの実施形態でもあることが、当業者によって理解されるであろう。

１回目に記載された第１の態様の実施形態が、２回目に記載された第１の態様の実施形態を構成することが、当業者によりさらに理解されるであろう。

また、迷路毛細血管の形成は、一群の患者、すなわち本発明によって治療することができる臨床環境を定義するための手段となり、より具体的には、本発明による治療により、そのような迷路毛細血管の形成が阻害されることも理解されるであろう。

また、脈絡毛細管の成長、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長がほとんどない、または欠けていることは、一群の患者、すなわち本発明によって治療することができる臨床環境を定義するための手段となり、より具体的には、本発明による治療により、脈絡毛細管の成長、好ましくは非漏出性の脈絡毛細管の成長が誘導されることが理解されるであろう。

また、引き締まっていない脈絡毛細管の存在は、一群の患者、すなわち本発明によって治療することができる臨床環境を定義するための手段となり、より具体的には、本発明による治療により、そのような、引き締まっていない脈絡毛細管が引き締められることが理解されるであろう。

また、豊富な細胞外マトリックスの形成は、一群の患者、すなわち本発明によって治療することができる臨床環境を定義するための手段となり、より具体的には、本発明による治療により、そのような豊富な細胞外マトリックスの形成が阻害されることが理解されるであろう。

また、保護されていない脈絡毛細管は、一群の患者、すなわち本発明によって治療することができる臨床環境を定義するための手段となり、より具体的には、本発明による治療により、そのような保護されていない脈絡毛細管が保護されることも理解されるであろう。

また、ガイドのない血管の発生は、一群の患者、すなわち本発明によって治療することができる臨床環境を定義するための手段となり、より具体的には、本発明による治療により、そのようなガイドのない血管の発生をガイドされた血管の発生に転換することができることも理解されるであろう。

好ましくは、無症候性の脈絡膜血管新生（無症候性のＣＮＶ）は、光コヒーレンストモグラフィ血管造影法によって検出および診断される（例えば、Ｔｒｅｉｓｔｅｒ Ａ ２０１８を参照）。

無症候性の脈絡膜血管新生（無症候性のＣＮＶ）については、もともとＧｒｅｅｎ Ｗら（Ｔｒａｎｓ Ａｍ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｓｏｃ． １９７７； ７５： １８０）およびＳａｒｋｓ Ｓら（Ｂｒ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １９７３， ５７：９５１）によって記載されており、出血または滲出液で覆われていない死後の眼において、ブルッフ膜の切れ目を通る異常な脈絡膜血管によって特徴付けられる。Ｙａｎｎｕｚｚｉら（Ｒｅｔｉｎａ， １９９２； １２：１９１－２２３）は、インドシアニングリーン血管造影（ＩＣＧＡ）を用いて、脈絡膜血管の遅い染色を伴う過蛍光として無症候性のＣＮＶ病変を検出できることを示した。ＩＣＧＡは、蛍光血管造影（ＦＡ）と組み合わせて行われた；しかしながら、ＦＡは、脈絡膜への浸透の欠如と、大きなタンパク質に対する親和性の低下による漏れの増加により制限されることが示された。

医薬組成物は、少なくともＰＥＤＦまたはＰＥＤＦをコードするｍＲＮＡ、および好ましくは薬学的に許容される賦形剤を含むことが理解されるであろう。そのような賦形剤は、当技術分野で使用されている、および／または知られている任意の賦形剤であり得る。より具体的には、そのような賦形剤は、本明細書に開示される医薬の製造に関連して議論される任意の賦形剤である。さらなる実施形態では、医薬組成物は、さらなる薬学的に活性な薬剤を含む。

医薬および医薬組成物の調製は、本開示に照らし、当業者に公知である。典型的には、そのような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注射剤として；注射前の液体への溶解または液体への懸濁に適した固体形態として；経口投与用の錠剤または他の固体として；時間放出カプセル剤として；または目薬、クリーム剤、ローション剤、軟膏、吸入剤などを含む現在用いられている任意の他の形態で調製され得る。また、手術現場の特定の領域を処置するための外科医、内科医、または医療従事者による生理食塩水ベースの洗浄液などの無菌製剤の使用も、特に有用であり得る。組成物はまた、マイクロデバイス、微粒子またはスポンジを介しても送達され得る。

製剤化された後、医薬は、その剤形に適合した様式で、薬理学的に有効な量で投与されることになる。製剤は、上記のタイプの注射可能な溶液などの様々な剤形で容易に投与されるが、薬物放出カプセル剤なども使用され得る。

この文脈において、投与される活性成分の量および組成物の体積は、治療される個体または対象に依存する。投与に必要な活性化合物の具体的な量は、実務家の判断に依存し、各個体に固有のものである。

活性化合物を分散させるのに必要な最小限の体積の医薬が典型的に利用される。投与に適したレジメンも可変であるが、最初に化合物を投与し、結果をモニタリングし、その後さらに一定の間隔でさらに管理された用量を与えることによって類型化される。

医薬組成物または医薬は、滅菌されてもよく、および／または保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩、および／もしくは緩衝剤などのアジュバントを含んでいてもよい。さらに、それらは他の治療上価値のある物質を含んでいてもよい。組成物は、従来的な混合、造粒、またはコーティング方法に従って調製され、典型的には約０．１％から７５％、好ましくは約１％から５０％の有効成分を含む。

液体、特に注射可能な組成物は、例えば、溶解、分散などによって調製され得る。活性化合物は、例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなどの薬学的に純粋な溶媒に溶解または混合され、それによって注射可能な溶液または懸濁液が形成される。さらに、注射前に液体に溶解するのに適した固体形態が製剤化され得る。

必要に応じて、投与される医薬組成物および医薬はそれぞれ、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ならびに例えば、酢酸ナトリウムおよびオレイン酸トリエタノールアミンなどの他の物質などといった少量の非毒性補助物質を含んでいてもよい。

本発明の核酸分子および医薬をそれぞれ利用した投与レジメンは、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および病状；治療される症状の重症度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；および採用する特定のアプタマーまたはその塩を含む種々の因子に従って選択される。通常の熟練した医師または獣医師は、状態の進行を予防、対抗、または阻止するのに必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。

本発明は、さらなる特徴、実施形態、および利点が得られ得る以下の図、実施例、および配列表によってさらに説明される。

眼球除去直後に固定された未処置ラットの脈絡毛細管を示す電子顕微鏡写真である；矢印はブルッフ膜に向かう内皮の開窓を示している；表示のバー＝２μｍ。 低酸素の１４時間後に撮影された電子顕微鏡写真である；大幅に低減した毛細血管内腔内に多くの糸状仮足様の突起があった；毛細血管を取り囲む細胞外マトリックスが増強されており（矢頭）、ブルッフ膜内に細胞が見られた（矢印）；表示のバー＝２μｍ。 低酸素後に撮影された電子顕微鏡写真である；毛細管内腔に突き出た内皮の個々の糸状仮足は、長さが１０μｍを超えていた（矢印）；表示のバー＝２μｍ。 低酸素後に撮影された電子顕微鏡写真である；迷路毛細血管の内皮細胞間または内皮細胞内（矢頭）に多くの隙間があいていた；表示のバー＝２μｍ。 硝子体内ＰＥＤＦ注射および低酸素後に撮影された電子顕微鏡写真である；迷路毛細血管は発生しておらず、毛細血管の内腔はインビボのように維持されていた（アスタリスク）；表示のバー＝５μｍ。 低酸素後、硝子体内ＰＥＤＦ注射なしで撮影された電子顕微鏡写真である；迷路毛細血管が発生し、毛細血管の内腔が崩壊していた（矢印）；表示のバー＝５μｍ。 低酸素およびアバスチン、ＰＥＤＦによる処置または処置なしの超薄切片における脈絡毛細管、脈絡毛細管内腔および内皮によって占められる領域の定量的分析を示す棒グラフである。 半薄切片において示されたＣＮＶの電子顕微鏡写真である；左右の矢印はＣＮＶの拡張と、ＲＰＥが単層のままである部位を示している；光受容体核層はより薄く、外側のセグメントは変則的で、ＣＮＶに面している。 ＶＥＧＦベクター注射の６週間後の眼について、色素の注射から約２０分後の代表的なＳＬＯ血管造影画像を示している（左はフルオレセイン血管造影（ＦＡ）、右はインドシアニングリーン血管造影（ＩＣＧ））。 ベクター注射の６週間後（処置前）と７週間後（処置の１週間後）の測定間のＣＮＶ病変領域の最大厚さの変化の平均を各群について示している棒グラフである；平均標準偏差が示される、^＊＝ｐ＜０．０５、^＊＊＊＝ｐ＜０．０００１。 ブルッフ膜（黒い矢頭）とＲＰＥとの間に位置する新たに形成された脈絡毛細管を示す電子顕微鏡写真である；血管は赤血球（ＲＢ）を含んでいる；ＲＰＥと新たな血管との間に、ＰＥＤＦ処置後に新たなブルッフ膜（白い矢頭）が形成されていた。 ブルッフ膜（黒い矢頭）とＲＰＥとの間に位置する新たに形成された脈絡毛細管を示す電子顕微鏡写真である；血管は赤血球（ＲＢ）を含んでいる；ＲＰＥと新たな血管との間に新たなブルッフ膜（白い矢頭）が形成されていた；ＰＥＤＦ処置後、ＲＰＥに面する内皮に開窓しているこの血管に周皮細胞（Ｐ）が付随している（矢印）。 ＰＥＤＦ処置後の２つのＲＰＥ細胞間における、非常に電子密度の高いタイトジャンクション（矢頭）を示す電子顕微鏡写真である。 ＰＥＤＦ処置後の脈絡毛細管細胞の２つの内皮間における、いくつかの非常に電子密度の高い顕著な接合部（矢頭）を示している電子顕微鏡写真である。 ＰＥＤＦ処置の非存在下で、細胞外マトリックスの厚い層（矢頭）によって取り囲まれ、元のＲＰＥ単層からＲＰＥ細胞のいくつかの層によって分離された、新たに形成された血管を示す電子顕微鏡写真である；細胞外マトリックスの突出により、内皮の襞が血管内腔に向かってシフトした（白いアスタリスク）；内皮内に大きな空胞が形成されているが（黒いアスタリスク）、これはヒトＣＮＶの病的血管に典型的である（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ， Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１５）；そのような突起または空胞は、ＰＥＤＦ処置後には見られなかった；表示のバー＝５μｍ。 偏光顕微鏡によって撮影された写真のパネルである；下段は、ピクロシリウスレッド染色後のＣＮＶの眼からの切片を示している；上段は、偏光下での同じ切片を示している；黒い矢頭はＣＮＶと脈絡膜との境界を示している。白い矢頭は、未成熟ＩＩＩ型コラーゲンを示している；黒い矢印は、ＰＥＤＦ処置後の血管を囲むＩ型コラーゲンのリングの位置を指し示している；アスタリスクは、成熟コラーゲン（Ｉ型）からなる強膜を標識している；左の列は、ＰＥＤＦとアバスチンとを注射した後の眼の例を示している；中央の列は、アバスチンのみで処置された眼を示している；右の列は、ＰＥＤＦのみで処置された眼の例を示している。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣを未処置のままとした；と写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣを２５０ｎｇ／ｍＬのＰＥＤＦ、単独で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣを５００ｎｇ／ｍＬのＰＥＤＦ単独で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣを２５０μｇ／ｍＬのベバシズマブ単独で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣを１ｍｇ／ｍＬのベバシズマブ単独で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣを２ｍｇ／ｍＬのベバシズマブ単独で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 ＨＵＶＥＣを組み合わせとしてＰＥＤＦ（２５０ｎｇ／ｍＬ）＋ベバシズマブ（２５０μｇ／ｍＬ）で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 増殖因子を低減させたマトリゲル上でのＨＵＶＥＣの内皮細胞管形成の顕微鏡写真である；ＨＵＶＥＣをまたは組み合わせとしてＰＥＤＦ（２５０ｎｇ／ｍＬ）＋ベバシズマブ（１ｍｇ／ｍＬ）で処置した；写真は３７℃で５時間インキュベートした後に撮影した。 ピクロシリウスレッド染色後にＣＮＶを有する眼から調製したパラフィン切片の顕微鏡写真のパネルである。上段の顕微鏡写真は切片の概観を、中段の顕微鏡写真は全ＣＮＶ領域（全ＣＮＶ領域」）を、下段の顕微鏡写真は抗ＶＥＧＦ抗体により画像化したＶＥＧＦ発現の全領域（「ＶＥＧＦ陽性領域」）を示している。 ＡＡＶ－ＶＥＧＦベクター単独、ＡＡＶ．ＶＥＧＦベクターとビヒクル、ＡＡＶ．ＶＥＧＦベクターとＰＥＤＦタンパク質、ＡＡＶ．ＶＥＧＦベクターとアバスチン、ならびにＡＡＶ．ＶＥＧＦベクター、ＰＥＤＦタンパク質、およびアバスチンの３種の組合せの投与時の全ＣＮＶのパーセンテージとしてのＶＥＧＦ陽性領域を示す箱型図である。 染色後の眼、より具体的には網膜のパラフィン切片の顕微鏡写真のパネルである。左の顕微鏡写真は、１４時間の低酸素およびビヒクル注射で調製した網膜切片を示し、右の顕微鏡写真は、１４時間の低酸素およびＰＥＤＦタンパク質の注射で調製した網膜切片を示している。 図２０に示されている結果を示す箱型図であり、より具体的には、ビヒクルの注射またはＰＥＦＤタンパク質の注射後の死んだ神経節細胞個／μｌの割合（％）を示している。 ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）の血管内皮増殖因子Ａアイソフォームａ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１０２０５３７．２）のアミノ酸配列（配列番号４）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント１（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１０２５３６６．３）のｍＲＮＡ配列（配列番号５）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｂ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００３３６７．４）のアミノ酸配列（配列番号６）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント２（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００３３７６．６）のｍＲＮＡ配列（配列番号７）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｃ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１０２０５３８．２）のアミノ酸配列（配列番号８）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント３（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１０２５３６７．３）のｍＲＮＡ配列（配列番号９）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｄ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１０２０５３９．２）のアミノ酸配列（配列番号１０）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント４（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１０２５３６８．３）のｍＲＮＡ配列（配列番号１１）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｅ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１０２０５４０．２）のアミノ酸配列（配列番号１２）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント５（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１０２５３６９．３）のｍＲＮＡ配列（配列番号１３）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｆ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１０２０５４１．２）のアミノ酸配列（配列番号１４）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント６（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１０２５３７０．３）のｍＲＮＡ配列（配列番号１５）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｇのアミノ酸配列（配列番号１６）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント７（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１０３３７５６．３）のｍＲＮＡ配列（配列番号１７）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｈ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５０９３．１）のアミノ酸配列（配列番号１８）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント８（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２２．）のｍＲＮＡ配列（配列番号１９）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｉ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５０９４．１）のアミノ酸配列（配列番号２０）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント１（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２３．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号２１）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｊ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５０９５．１）のアミノ酸配列（配列番号２２）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント２（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２４．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号２３）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｋ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５０９６．１）のアミノ酸配列（配列番号２４）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント３（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２５．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号２５）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｍ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５０９８．１）のアミノ酸配列（配列番号２６）を示す図である。 ヒトの血管内皮成長因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント５（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２７．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号２７）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｎ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５０９９．１）のアミノ酸配列（配列番号２８）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント６（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２８．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号２９）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｏ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１６５１００．１）のアミノ酸配列（配列番号３０）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント７（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１１７１６２９．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号３１）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｑ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１９１３１３．１）のアミノ酸配列（配列番号３２）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント９（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１２０４３８４．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号３３）を示す図である。 図５２は、ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｒ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１１９１３１４．１）のアミノ酸配列（配列番号３４）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント９（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１２０４３８５．２）のｍＲＮＡ配列（配列番号３５）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａアイソフォームｓ（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１２７３９７３．１）のアミノ酸配列（配列番号３６）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント１０（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１２８７０４４．２）のｍＲＮＡ配列（配列番号３７）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子ＡアイソフォームＶＥＧＦ－Ａｘ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１３０３９３９．１）のアミノ酸配列（配列番号３８）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）転写バリアント４（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１３１７０１０．１）のｍＲＮＡ配列（配列番号３９）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子ＢアイソフォームＶＥＧＦＢ－１６７前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００１２３０６６２．１）のアミノ酸配列（配列番号４０）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ｂ（ＶＥＧＦＢ）転写バリアントＶＥＧＦＢ－１６７（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００１２４３７３３．２）のｍＲＮＡ配列（配列番号４１）を示す図である。 ヒトの血管内皮成長因子ＢアイソフォームＶＥＧＦＢ－１８６前駆体（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００３３６８．１）のアミノ酸配列（配列番号４２）を示す図である。 ヒトの血管内皮成長因子Ｂ（ＶＥＧＦＢ）転写バリアントＶＥＧＦＢ－１８６（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００３３７７．５）のｍＲＮＡ配列（配列番号４３）を示す図である。 ヒトの血管内皮成長因子Ｃプレプロタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００５４２０．１）のアミノ酸配列（配列番号４４）を示す図である。 ヒトの血管内皮成長因子Ｃ（ＶＥＧＦＣ）（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００５４２９．５）のｍＲＮＡ配列（配列番号４５）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ｄプレプロタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＰ＿００４４６０．１）のアミノ酸配列（配列番号４６）を示す図である。 ヒトの血管内皮増殖因子Ｄ（ＶＥＧＦＤ）（ＧｅｎＢａｎｋエントリーＮＭ＿００４４６９．５）のｍＲＮＡ配列（配列番号４７）を示す図である。

［実施例１：低酸素への眼の曝露］
１６匹のラットの３２個の眼を軽度の低酸素に曝露させた。虚血は、眼球除去後、１５ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブ中のＤＭＥＭ中で１４時間、４℃で眼をインキュベートすることによってモデル化した（チューブあたり１つの眼）。低体温は、虚血性発作に対する耐性時間を延長する可能性がある。チューブを７ｍｌのＤＭＥＭと空気で満たした。ＤＭＥＭと空気との間の酸素交換を促進するために、それらを水平にして保管した。１４時間後、眼の半分を免疫細胞化学のためにパラフィンに包埋するか、または電子顕微鏡検査のためにＥｐｏｎに包埋した。１２個の眼を眼球除去の直後に包埋し、対照として供した。

酸素圧は、較正した光ファイバー酸素センサー（ＷＰＩ、フリードバーグ、ドイツ）によって測定したが、これは、このエクスビボ実験において眼の硝子体に挿入され、比較のために麻酔下の生きているラットの眼にも挿入された。眼球除去直後、酸素圧をインビボ濃度の２％にまで下げ、その後徐々に上昇させて、１時間後にインビボ濃度に到達させた。その後、インビボ酸素濃度の切り下げは行わなかった。

［実施例２：内皮細胞の糸状仮足様突起の内周輪郭の測定］
糸状仮足様突起の内周輪郭について、プラスチック包埋した各眼からの脈絡毛細管の電子顕微鏡写真を分析した。また、切片化した血管の面積あたりの外側内皮細胞周輪郭の長さも測定した。ｉＴＥＭ画像解析ソフトウェア（ｉＴＥＭバージョン５．０；Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｓｏｆｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ、ミュンスター、ドイツ）を測定に使用した。結果は、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１１およびＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ２２ソフトウェアで、ノンパラメトリックなマン・ホイットニー検定を用いて分析した。０．０５未満のｐ値を群間で有意に異なるとみなした。内側内皮細胞周輪郭の長さは、対照群と比較して５８％増加しており（ｐ＜０．００１）、これは、血管内腔に向かう微絨毛内皮細胞突起の形成を指し示している。これらの血管は、ヒトＣＮＶの迷路毛細血管にまさに対応する（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ， Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。

［実施例３：脈絡膜毛細血管に対する低酸素の効果］
低酸素に曝露されていない脈絡毛細管には、ブルッフ膜側に向かって開窓した規則的な薄い内皮が含まれている（図１の矢印を参照）。毛細血管の内腔には、いかなる細胞の突起もない。低酸素の１４時間後、毛細血管内腔内に多くの糸状仮足様の突起が見られた。（図２を参照）。毛細血管を取り囲む細胞外マトリックスが増強されており（矢頭）、ブルッフ膜内に細胞が見られた（矢印）。毛細管内腔内の個々の糸状仮足は、長さが１０μｍを超えていた（図３の矢印を参照）。低酸素後、内皮細胞間または内皮細胞内に多くの隙間があいていた（図４の矢頭を参照）。

［実施例４：低酸素後におけるＶＥＧＦおよびＨＩＦ－１αの発現］
標準的な手順に従って、対照および虚血の眼をホルマリン固定およびパラフィン包埋した。厚さ４μｍの切片を切り出し、脱パラフィン化して再水和し、クエン酸緩衝液中（ｐＨ＝６．０）で煮沸した。ＴＢＳ（ｐＨ＝７．６）中での３回の洗浄工程後、製造業者の指示に従って、ＨＩＦ－１αおよびＶＥＧＦの免疫組織化学染色を湿潤チャンバー内で実施した。スライドを一次ウサギ抗ＨＩＦ－１α抗体（１：１００、Ａｂｃａｍ、デンマーク）と共に３７℃で１２０分間インキュベートした後、ＤＡＫＯ ＲＥＡＬ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ／ＲＥＤ ｋｉｔ ｒａｂｂｉｔ／ｍｏｕｓｅを用いて処理し、その後、ヘマトキシリンで対比染色して、カバーした。ＶＥＧＦに対する免疫反応性解析のために、マウス一次抗体（１：５０、Ｇｅｎｅ Ｔｅｘ、米国）を用いて、ＴＢＳ緩衝液中（ｐＨ＝９．０）で煮沸し、同じ手順を行った。

対照ラットでは、ＨＩＦ－１αは脈絡膜には発現していなかった。低酸素後、脈絡膜にＨＩＦ－１αが検出された。対照の眼のＶＥＧＦは、ＲＰＥ内で検出された。１４時間の虚血後、網膜および脈絡膜にＶＥＧＦの染色が追加的に現れた。

［実施例５：ＰＥＤＦによる迷路毛細管形成の阻害］
１２個の眼に２０μｇのＰＥＤＦ（ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ）を注射し、次いで実施例１に記載したようにして低酸素に曝露した。３つの眼に０．８μｌのベバシズマブ（アバスチン）を注射した。また、６つの眼には、注射なしで低酸素に曝露させた。眼の超薄切片を電子顕微鏡で調べた。

処置なしでは、脈絡毛細管は、図１～４に示されているように内皮の間に隙間を有する迷路毛細血管へと変化し、崩壊して、しばしば毛細血管内腔が完全に失われることもあった（図５の矢印参照）。対照的に、脈絡毛細管の内腔はインビボ固定後のように見え、よく保存されていた（図６のアスタリスクを参照）。

切片化した血管ごとの内側および外側の内皮細胞周輪郭によって囲まれた領域を、全ての眼の電子顕微鏡写真において測定した。これらの測定値から、脈絡毛細管全体、脈絡毛細管の内腔、および内皮が占める面積を計算した。ＰＥＤＦは、血管内腔と隙間に向かう内皮糸状仮足の形成を阻害しただけでなく、処置なし（図７を参照）（ｐ＜０．００００００３）よりも、また、アバスチン処置と比較して（ｐ＜０．０２３）、有意により良好に血管内腔を保存した。また、切片化した内皮細胞の面積は、細胞の体積に比例している可能性が高いが、未処置と比較して有意により大きくなっていたのに対し（図７右を参照）（ｐ＜０．０３）、アバスチンは効果がなかった（ｐ＝０．７５）。

スチューデントのｔ検定を行って、異なる実験群の結果を比較した。分析にはエクセルソフトウェアを使用した。誤差の確率は５％であった（ｐ＜０．０５統計的有意）。

［実施例６：ＶＥＧＦ過剰発現およびＰＥＤＦ処置後の機能的な引き締まった脈絡膜毛細血管およびブルッフ膜の形成］
以前のアデノベクター研究と同じＶＥＧＦカセットを使用して、このプロジェクトのために新たなベクター系を設計した（Ｊｕｌｉｅｎ， Ｋｒｅｐｐｅｌ ｅｔ ａｌ． ２００８）。プラスミドｐＢＬＡＳＴ４９－ｈＶＥＧＦ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、サンディエゴ、カリフォルニア）由来のヒトＶＥＧＦ－Ａ１６５ ｃＤＮＡを、Ｓｉｒｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ（ミュンヘン、ドイツ）によって製造された最先端のＡＡＶ２ベクター（サブタイプ４）骨格に挿入した。この新たなＡＡＶベクターには、以前にアデノウイルス研究で使用されていた非特異的なＣＭＶプロモーターではなく、ＲＰＥに特異的なＲＰＥ６５プロモーターが含まれているという利点がある。これらの新たなＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ－ＶＥＧＦ）は、アデノベクターと比較して毒性が低く、発現速度が遅く、発現時間が長いため、数か月の時間枠にわたる治療薬候補の評価に特化した長時間の発現試験に適している（Ｒｏｌｌｉｎｇ， Ｌｅ Ｍｅｕｒ ｅｔ ａｌ． ２００６）。

＜ラットの眼におけるＡＡＶ．ＶＥＧＦ－Ａ１６５ベクターの網膜下注射＞
２μｌのＰＢＳで希釈したウイルス粒子数２×１０^９個のＡＡＶ－ＶＥＧＦベクターを３０匹のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓラットの両眼に網膜下注射した。簡単に説明すると、３成分麻酔薬（体重１ｋｇあたりフェンタニル０．００５ｍｇ、ミダゾラム２ｍｇ、およびメデトミジン０．１５ｍｇ）の腹腔内注射による麻酔の後、メドリアティカム点眼液（チュービンゲン大学薬局、ドイツ）１～２滴で瞳孔を拡張させ、局所麻酔薬ノベシン（ＯｍｎｉＶｉｓｉｏｎ、プッチハイム、ドイツ）１滴を適用した。メトセル（ＯｍｎｉＶｉｓｉｏｎ、プッチハイム、ドイツ）点眼薬を使用して、眼の乾燥を防いだ。注射は、手術用顕微鏡を使用して行った。まず、強膜を２５Ｇ針で辺縁近くまで切開し、その後、ＮａｎｏＦｉｌ ３４Ｇ鈍針付きの１０μｌ ＮａｎｏＦｉｌシリンジ（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて、２μｌのベクター懸濁液（２μｌにはＡＡＶ－ＶＥＧＦ最大可能量の２×１０^９個のウイルス粒子が含まれる）を網膜下（毛様体扁平部）に注射した。局所抗生物質点眼薬のＧｅｎｔａｍｉｃｉｎ－ＰＯＳ（登録商標）（Ｕｒｓａｐｈａｒｍ、ザールブリュッケン、ドイツ）を注射後に適用した。解毒剤（体重１ｋｇあたりナロキソン０．１２ｍｇ、フルマゼニル０．２ｍｇ、アチパメゾール０．７５ｍｇ）の皮下注射により、麻酔を中和した。

＜硝子体内注射＞
治療物質の硝子体内注射は、ＶＥＧＦベクター注射の６週間後に行った。

硝子体内注射のために、眼の外側隅の結膜を小さく切開した。目の細かいピンセットで結膜をつかみ、軽く引っ張って眼球を回転させた。ＮａｎｏＦｉｌ ３４ゲージ斜角針（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を備えた１０μｌ ＮａｎｏＦｉｌシリンジを使用し、穴を通して硝子体内に５μｌ容量を注射した。注射後、逆流を減らすためにさらに３～４秒間、針を眼に刺したままにし、その後に引き抜いた。眼球を正常な位置に戻し、抗生物質の軟膏を眼に塗布した。照明を備えた手術用顕微鏡を使用して、全体の手順を実行した。３つの群を調査した。

１）アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ；２５ｍｇ／ｍｌ；Ｒｏｃｈｅ）を２０個の眼に硝子体内注射した。

これはチュービンゲン大学病院の薬局によって購入され、分注されたものである。１００ｍｇのアバスチン（登録商標）を、２４０ｍｇのａ，ａ－トレハロース ２Ｈ_２Ｏ、２３．２ｍｇのＮａ_２ＨＰＯ４ Ｈ２Ｏ、４．８ｍｇのＮａＨ２ＰＯ４、および１．６ｍｇのポリソルベート２０を含有する４ミリリットルのビヒクル溶液で希釈した。

２）ＰＥＤＦヒトＨＥＫ２９３組換えタンパク質（１μｇ／μｌ；ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ）を２０個の眼に硝子体内注射した。

組換えタンパク質のペレットを濾過し（０．４μｍ）、２０ｍＭ ＴＲＩＳ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５中０．５ｍｇ／ｍＬで凍結乾燥させた。製品データシートに従って、脱イオン水（Ａｍｐｕｗａ水）に溶解させ、１μｇ／μｌの作業原液を得た。

３）２０個の眼は処置しなかった。

インビボイメージング（ＳＬＯ／ＯＣＴ、ＦＡおよびＩＣＧ血管造影）および定量化は（Ｗａｎｇ， Ｒｅｎｄａｈｌ ｅｔ ａｌ． ２００３）に従って行った。網膜下ＡＡＶ－ＶＥＧＦは、注射後５週間から２０か月でＲＰＥの増殖を引き起こし、２～１２か月でフルオレセイン血管造影により漏出が観察されるようになる。したがって、ベクター注射の６週間後に、走査レーザー眼底検査（ＳＬＯ）、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）、フルオレセイン血管造影（ＦＡ）およびインドシアニングリーン血管造影（ＩＣＧ）を実施した。ＶＥＧＦベクターの注射の７週間後に（Ｆｉｓｃｈｅｒ， Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００９， Ｈｕｂｅｒ， Ｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ． ２００９）のプロトコールに従って動物使用用に改変したＳｐｅｃｔｒａｌｉｓ（商標）ＨＲＡ＋ＯＣＴ（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ハイデルベルク、ドイツ）デバイスを用いて、眼を再調査した。７８ｄｐｔ二重非球面レンズ（Ｖｏｌｋ Ｏｐｔｉｃａｌ， Ｉｎｃ．、メンター、オハイオ４４０６０、米国）をデバイスの出口に直接配置し、追加のカスタムメイドの＋３．５ｄｐｔコンタクトレンズをラットの眼に直接配置した。ラットに麻酔をかけ、瞳孔を拡張させ、メトセルで処置して眼の乾燥を防ぎ、３．５ｄｐｔレンズの接着をより良好にした。ＩＣＧ色素（２５０μｌ（ＶＥＲＤＹＥ、５ｍｇ／ｍｌ、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｇｒｅｅｎ））を尾静脈に注射し、フルオレセイン色素（Ａｌｃｏｎ１０％（１／１０希釈）、２５０μｌ）を皮下注射した。ＳＬＯ／ＯＣＴは、初期段階の血管撮影として注射から約２～５分後に、後期段階として約１５～２０分後に行った。ＳＬＯ／ＯＣＴ装置はヒトの眼で使用するように較正されているため、ｘ軸とｙ軸との寸法はラットにおける使用のために補正されていない。網膜の高さのようなｚ軸の寸法は適切に表示される。したがって、ここで実施された血管造影測定におけるＣＮＶ過蛍光領域の測定値は、元のＨｅｉｄｅｌｂｅｒｇ較正を使用したμｍではなく、任意単位（ａｕ）で表示される。ＯＣＴデータセットで実施された厚さ測定の定量化は、ビームのｚ方向にあるため、μｍで表示される。

＜組織学のための眼の処理＞
電子顕微鏡（ＥＭ）のために、眼全体を０．１Ｍカコジル酸緩衝液中（ｐＨ７．４）の５％グルタルアルデヒドで一晩固定した。その後、血管造影で見えた病変部を切り取って埋め込むことが可能になる。

＜統計＞
スチューデントのｔ検定を行って、処置動物の結果を対照群と比較した。分析にはエクセルソフトウェアを使用した。誤差の確率は５％であった（ｐ＜０．０５を統計的に有意）。多重比較の問題を回避するために、ホルム・ボンフェローニ法を使用して結果を補正した。

＜ラットの眼におけるＡＡＶ．ＶＥＧＦ－Ａ１６５の網膜下注射の６週間後の血管造影によるＣＮＶの調査＞
ＡＡＶ－ＶＥＧＦで誘発したラットＣＮＶモデルは、インビボイメージングで記録したところ、ＶＥＧＦ形質導入から６週間後に完全に増殖したＣＮＶを示した。代表的な画像を（図８を参照）に示す。

ＶＥＧＦを過剰発現する６０個の眼全てが、ＦＡおよびＩＣＧイメージングで典型的なＣＮＶ病変様の過蛍光を示したが（図９）、これは、ＶＥＧＦ形質導入の有効性が１００％であることを意味する。

以下では、ＶＥＧＦベクターの形質導入に成功し、ＣＮＶ様病変を示す眼を「ＣＮＶ眼」と呼び、ＣＮＶ様病変を「ＣＮＶ病変」と呼ぶ。

全ての眼を血管造影法によって調査した。ほとんどのＣＮＶ病変は、ＦＡおよびＩＣＧ血管造影の両方で典型的なリング状のパターンを示した。中央の低蛍光領域は、特にＦＡ画像では、明るい過蛍光のリングに囲まれていた（図９の左パネルを参照）。このパターンは、ＯＣＴ解析とよく相関し、過反射領域で顕著な網膜下病変を示している。対照的に、ＩＣＧのシグナルは通常、病変の低蛍光中心の周りのより広い領域に広がる、かなりむらのあるパターンを示した。

ＩＣＧは、半減期が非常に長く、内腔タンパク質に結合する色素である。したがって、それが組織内に保持されている場合、単一の静脈内注射後のいくつかの時点で記録され得る。これは、例えば、ＣＮＶ血管から周囲の組織へのタンパク質の漏出と共に生じる。

図９に示されているように（右のパネル、緑のチャネルを参照）、ＦＡのシグナルとは対照的に、ＩＣＧの過蛍光は、ＣＮＶ病変の周囲にかなりむらのあるパターンを示し、これは時間の経過と共に広がる（２０分以内、しかし、追加の色素注射を行わない後の時点、ここでは最初の血管造影セッションの１週間後の時点におけるＩＣＧの再調査においても）。最後に、これは後の時点で眼の背景全体をカバーし得る、より大きな単一の過蛍光ハイライト領域の形成につながる。しかしながら、これらのパターンは、追加のＩＣＧ色素を注射した直後に劇的に変化するわけではない。

＜ＰＥＤＦ処置によるＣＮＶ病変領域の厚みの減少＞
各眼について、ＣＮＶ病変領域全体（ＳＬＯ血管造影法で検出）の領域をＯＣＴでスクリーニングした。病変の厚さが最大の領域を決定し、画像化した。これらの画像において、最大の厚さを測定した。異なる薬剤による処置によって引き起こされた変化を分析するために、ベクターの網膜下注射の７週間後（処置の１週間後）の分析の各眼の測定値と、６週間の分析の対応する値（処置前）の差を決定した。ＰＥＤＦは細胞の増殖と線維化を阻害したため、未処置群と比較してＣＮＶの厚さが有意に減少していたが、アバスチン群のように血管が完全に崩壊することはなかった。したがって、アバスチン群ではＣＮＶがより平坦となっていた（図１０を参照）。

＜健康な脈絡毛細管、ブルッフ膜、および結合複合体の新たな形成に対するＰＥＤＦの効果＞
ＰＥＤＦタンパク質処置後の眼を電子顕微鏡で調査し、ＰＥＤＦ処置なしのＶＥＧＦベクター注射後の眼を対照として使用した。ＰＥＤＦ処置の最も顕著な効果は、新たに形成された脈絡毛細管が、あらゆる処置なしの健康な脈絡毛細管と非常に類似していたことである。新たに形成された血管はＲＰＥのすぐ下に位置し、新たなブルッフ膜を形成していた（図１１を参照）。内皮細胞は、健康な血管のように薄く、周皮細胞と結合し、開窓を生じており（図１２を参照）、網膜下腔へと増殖してはいなかった。

さらに、網膜色素上皮細胞（図１４）と脈絡毛細管の内皮細胞（図１５）との間の結合複合体は、ＶＥＧＦベクターのみで処置した眼と比較して劇的に拡大し、電子密度が高くなっていた。これらの複合体は、接着ジャンクションとタイトジャンクションからなっている。また、タイトジャンクションは、脈絡毛細管の内皮細胞の間にも現れたが、それらは、これらの血管では以前には報告されていなかった。血液網膜関門は、網膜血管のタイトジャンクションと網膜色素上皮のタイトジャンクションによって構築されていることが一般に認められている。ジャンクションに対する効果は、ＶＥＧＦの過剰発現と組み合わせたＰＥＤＦによって媒介される。

ＰＥＤＦはまた、ＲＰＥ細胞の分裂を低減させ、細胞外マトリックスを含有する血管内突起の形成を阻害した（図２および１５を参照）。この現象は、ＣＮＶのウサギモデルでも記述されている（Ｊｕｌｉｅｎ， Ｋｒｅｐｐｅｌ ｅｔ ａｌ． ２００８）。そのような突起はＰＥＤＦ処置後には見られず、これは、新たに形成された血管に単層の基底膜の形成を引き起こした一方で、処置を行わないと基底膜は多層化した。また、新たに形成された血管の網膜下腔および網膜への突破は、ＰＥＤＦ処置後には発生しなかったが、ＰＥＤＦ注射なしでは見られた。

［実施例７：ＰＥＤＦと抗ＶＥＧＦ薬との組合せの効果］
ＰＥＤＦと抗ＶＥＧＦ薬、例えばベバシズマブ（アバスチン）との組合せは、相乗的に作用し、新たな機能的な血管の協調的な増殖をサポートし、また、新たに形成された脈絡毛細管の開窓の形成も改善する。

［実施例８：ＰＥＤＦはＣＮＶにおける細胞外マトリックスの形成を低減させる］
この実施例に示すように、ＰＥＤＦはＣＮＶにおける細胞外マトリックスの形成を低減させた。したがって、ＣＮＶに典型的な瘢痕化が最小限に抑えられ、したがって、新たに形成された血管からＰＲＥおよび光受容体に向かう酸素と栄養との供給距離が短縮された。

＜方法＞
ＣＮＶを誘導するために、２μｌのＡＡＶ．ＶＥＧＦ－Ａ^１６５の網膜下注射（２×１０^９個のウイルス粒子のＡＡＶ－ＶＥＧＦベクター、２μｌのＰＢＳで希釈）をＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓラットの４８個の眼において行った。３週間後、インビボ検査によりＣＮＶの発生をチェックし、１００％の眼（ｎ＝４８眼）がＣＮＶを示した。

インビボ調査の直後に、４μｌのＰＥＤＦタンパク質（１０μｇ）「グループ１」（ｎ＝１２眼）もしくはアバスチン（５０μｇ）「グループ２」（ｎ＝１２眼）、または併用療法（ＰＥＤＦタンパク質（１０μｇ）＋アバスチン（５０μｇ））「グループ３」（ｎ＝１２眼）の硝子体内投与で眼を処置した。未処置の眼は、対照「グループ４」（ｎ＝１２眼）として供された。

６週目に、ＰＥＤＦタンパク質またはアバスチン、または両タンパク質の組み合わせによる２回目の硝子体内処置を、３週目で説明したようにして実施した。１週間後の７週目に、ＣＮＶにおける細胞外マトリックスの成熟に対する効果を偏光顕微鏡で評価した。

眼のパラフィン切片は、次のプロトコールに従って染色した。

＜ピクロシリウスレッド染色プロトコール＞
１． 蒸留水で脱パラフィン化および水和
２． Ｗｅｉｇｅｒｔｓヘマトキシリンで８分間染色
３． 蒸留水でよくすすぐ
４． 溶液Ａ中に２分間入れる
５． 蒸留水でリンス
６． 溶液Ｂ中に６０分間入れる
７． 溶液Ｃ中に２分間入れる
８． ７０％エタノールで４５秒間
９． 脱水、清澄化、マウント
１０．スライドを偏光顕微鏡下（Ａｘｉｏｐｌａｎ、Ｚｅｉｓｓ）で評価。この方法は、異なるタイプのコラーゲンを色で識別することを可能とする。Ｉ型（赤、オレンジ）；ＩＩＩ型（黄色、緑）。

＜結果＞
図１６に結果が示されている。

ＰＥＤＦおよびアバスチンの注射後、脈絡膜血管新生領域内において、偏光顕微鏡下でコラーゲンが緑色に見えた（図１６、左列）。また、アバスチン単独の注射後、コラーゲンは緑色がかっていたが、両タンパク質の注射と比較して、コラーゲンの量が大幅に増加していた（図１６、中央の列）。緑色は、コラーゲンが線維性組織に典型的なＩＩＩ型であることを指し示していた。ＰＥＤＦ単独の注射後、コラーゲンはオレンジ色であり、薄層として血管を取り囲んでいた（図１６、矢印、右列）。これは、コラーゲンが成熟しており、細胞外マトリックスと血管との新たな形成が停止したことを指し示した。ＰＥＤＦ注射後、標本を３６０度回転させた後、緑色がかったコラーゲンは見られなかった。処置なしでは、コラーゲンは緑がかっており、ＣＮＶ領域の大部分を占めていたが（図示せず）、これは、アバスチン注射後の結果と同様であった（図１６、中央の列）。

［実施例９：ＶＥＧＦの網膜下または硝子体内注射によるヒトＡＭＤの模倣］
Ｌｏｎｇ Ｅｖａｎｓラットの眼の網膜下または硝子体内に２μｌのＰＢＳ中の１００ｎｇのＶＥＧＦタンパク質（ｈＶＥＧＦ Ｓｉｇｍａ）を注射した。対照には、ＰＢＳのみを注射した。

１時間後および２４時間後に、電子顕微鏡および免疫細胞化学によって眼を調べた。脈絡毛細管は、図２から４およびヒトのＣＮＶのにおける以前の論文に示されているように、迷路毛細血管へと変化した（Ｓｃｈｒａｅｒｍｅｙｅｒ， Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ． ２０１５）。さらに、ブルッフ膜内および脈絡毛細管周囲の細胞外マトリックスの顕著な増加が見られた。また、図１５に示されているように、血管内腔への内皮陥入を誘導する細胞外マトリックスの突出も存在していた。ＲＰＥと血管の基底膜の合成は、多層に強化されていた。さらに、ＲＰＥは高度に活性化され、単層外へと移行していた。脈絡毛細管内では、血小板が活性化され、おそらく補体活性化によって赤血球が溶解され、うっ滞も発生していた。これらの所見は全て、驚くべきことに、注射後１～２４時間で既に観察され、対照群においては見られず、ＡＭＤに罹患しているヒトの眼に見られる所見を模倣していた。

［実施例１０：血管新生に対するＰＥＤＦ、ベバシズマブ、またはＰＥＤＦとベバシズマブの両方の組合せのインビトロ効果］
血管新生に対するＰＥＤＦ、ベバシズマブ（アバスチン）、またはＰＥＤＦとベバシズマブ（アバスチン）との両方の組合せのインビトロ効果を、内皮細胞管形成アッセイで決定した。内皮細胞管形成アッセイは、潜在的な薬剤候補の血管新生および抗血管新生効果を研究するための古典的なインビトロアッセイである。

＜方法：内皮細胞管形成アッセイ＞
増殖因子を低減させたマトリゲル（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）６０μＬで９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、米国）をプレコートし、ＥＣＧＭ培地（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ、ドイツ）中のＨＵＶＥＣ細胞（１３０００個細胞／ウェル）をプレートに播種した。内皮細胞管形成に対するこれらの分子の効果を決定するため、ＰＥＤＦ単独（２５０ｎｇ／ｍｌ、５００ｎｇ／ｍｌ）、ベバシズマブ単独（アバスチン；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ， Ｉｎｃ．、南サンフランシスコ、カリフォルニア）（２５０μｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ）、ならびにＰＥＤＦ（２５０ｎｇ／ｍＬ）＋ベバシズマブ（２５０μｇ／ｍＬ）およびＰＥＤＦ（２５０ｎｇ／ｍＬ）＋ベバシズマブ（１ｍｇ／ｍＬ）併用濃度でウェルに補充した。３７℃で５時間インキュベーションした後、Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＩＬ ＬＥＤ倒立位相差顕微鏡を使用してウェル内の管形成を分析した。

＜結果＞
図１７ａ～ｈに結果が示されている。

２５０ｎｇ／ｍＬの濃度のＰＥＤＦによる内皮管形成の阻害はほとんどなく（図１７ｂ）、５００ｎｇ／ｍＬで完全な阻害が観察された（図１７ｃ）。ベバシズマブは、２ｍｇ／ｍＬの濃度でのみ管形成を阻害した（図１７ｆ）。２５０ｎｇ／ｍＬ（ＰＥＤＦ）と２５０μｇ／ｍＬ（ベバシズマブ）との濃度でのＰＥＤＦとベバシズマブとの同時投与はそれぞれ、同じ濃度のＰＥＤＦまたはベバシズマブで個別に処置した場合よりも、管形成に対してはるかに強力な阻害効果を示した（図１７ｇ）。これは、ベバシズマブで特に顕著であり、ベバシズマブを単独で使用した場合には、２ｍｇ／ｍＬの高濃度でのみ内皮管形成が阻害された。したがって、ベバシズマブをＰＥＤＦと組み合わせて処置した場合には、このように効果的に、はるかに低い濃度で管形成が阻害された（図１７ｂ、図１７ｈ）。このデータは、内皮管形成の阻害、したがって血管新生の阻害に関するＰＥＤＦとベバシズマブの相乗効果を示している。

［実施例１１：ＰＥＤＦは脈絡毛細管の成長を誘導する］
この例では、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）を使用したドライ型ＡＭＤのモデルで証明されているように、ＰＥＤＦが脈絡毛細管の成長を誘導することを示す。

網膜変性のヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）誘発モデルは、いくつかのドライ型ＡＭＤ関連の特徴を呈することが示されている（Ｈａｎｕｓ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ．（２０１６）． ”Ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓｏｄｉｕｍ ｉｏｄａｔｅ．” Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓｃｏｖ ２： １６０５４）。

ＬＥラットでは、４０ｍｇ／ｋｇのＮａＩＯ３の静脈内投与が、ＲＰＥの領域的および時間依存的な変化を誘発するのに最適であることが示されている。ここでは、ＮａＩＯ３中毒の直後に単回硝子体内注射を行った場合のＰＥＤＦタンパク質単独（１１μｇ）の処置またはアバスチン（５０μｇ）などの抗ＶＥＧＦ剤と組み合わせた処置の有効性を示す。

インビボ検査とフラットマウントしたＲＰＥ／脈絡膜複合体は、３日後に新しい健康な脈絡膜毛細血管の形成を示す。

［実施例１２：ＶＥＧＦと組み合わせたＰＥＤＦは脈絡毛細管の成長を誘導する］
この実施例では、ＰＥＤＦとＶＥＧＦの組合せが、ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_３）を使用したドライ型ＡＭＤモデルにおいて、脈絡毛細管の成長を誘導することを示す。

網膜変性のヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）誘発モデルは、いくつかのドライ型ＡＭＤ関連の特徴を呈することが示されている。ＬＥラットでは、４０ｍｇ／ｋｇのＮａＩＯ３の静脈内投与が、ＲＰＥの領域的および時間依存的な変化を誘発するのに最適であることが示されている。ここでは、ＮａＩＯ３中毒の直後に単回硝子体内注射を行った場合のＰＥＤＦタンパク質（１１μｇ）処置単独またはＶＥＧＦ（２～４μｇ）タンパク質と組み合わせた処置の有効性を示す。両タンパク質は別々にも注射される。

インビボ検査とフラットマウントしたＲＰＥ／脈絡膜複合体とは、３日後に新しい健康な脈絡膜毛細血管の形成を示す。ＰＥＤＦとＶＥＧＦとを組み合わせた場合、またはＰＥＤＦを単独で使用した場合、新たな脈絡膜毛細血管は健康的、すなわち漏れがなく、機能的である。

［実施例１３：抗ＶＥＧＦ薬と組み合わせたＰＥＤＦは健康な網膜血管の増殖を誘導する］
この実施例では、酸素誘導性虚血性網膜症モデルを用いた血管新生モデルで証明されるように、抗ＶＥＧＦ薬と組み合わせたＰＥＤＦが健康な網膜血管の増殖を誘導することを示す。

ＰＥＤＦタンパク質単独（１１μｇ）または抗ＶＥＧＦ抗体（アバスチン、５０μｇ）と組み合わせたＰＥＤＦタンパク質は、新生ラットの酸素誘導性虚血性網膜症（ＯＩＲ）において、新たな網膜血管の形成を誘導する。

前記モデルは、未熟児網膜症（ＲＯＰ）を代表するものと考えられており、Ｓｅｍｋｏｖａ Ｉらにより既に記述されている（Ｓｅｍｋｏｖａ， Ｉ．， ｅｔ ａｌ．（２００２））． ”Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｒｉｓ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ： ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｙｅ．” Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９９（２０）： １３０９０－１３０９５）。

簡単に説明すると、正常酸素状態群のラットは室内空気で維持されるのに対し、過剰酸素状態群のラットは生後７日目（Ｐ７）からＰ１２まで７５％の酸素に曝露され、その後、室内空気に移され、直ちに処置される。

非灌流領域および血管新生の程度は、Ｓｅｍｋｏｖａら（２００２）（上記）に記載されているようにして決定される。ＰＥＤＦを単独で使用する、または抗ＶＥＧＦ薬と組み合わせて使用する場合、新たな網膜血管は健康、すなわち漏出性でなく、機能的である。

［実施例１４：抗ＶＥＧＦと組み合わせたＰＥＤＦは、ＰＥＤＦ単独よりも効果的にＶＥＧＦの量を低減させた］
実施例６に記載の実験で生成された脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）をパラフィン切片において抗ＶＥＧＦ抗体で染色した。３０匹のラットにＡＡＶ－ＶＥＧＦベクターを網膜下注射した。その３週間後、全てのラットが注射領域周辺にＣＮＶを発症した。ラットを５つの群に分けた。半自動機械学習ベースのアプローチ（ＷＥＫＡセグメンテーション）を使用し、ＦＩＪＩソフトウェアを用いて、全ＣＮＶ領域とＶＥＧＦ陽性領域を測定した。

図１８および１９に結果が示されている。

図１９に示されるように、ＰＥＤＦ（１１μｇ）＋アバスチン（５０μｇ）（ｎ＝６）による処置は、未処置対照群（ｎ＝５）と比較して、この群のＣＮＶ領域におけるＶＥＧＦの有意な低減をもたらした。ＰＥＤＦ単独での処置は、この群（ｎ＝５）においてＶＥＧＦの強い個体内変動をもたらした。このＰＥＤＦ群と比較して、アバスチン＋ＰＥＤＦ群も有意な低減を示した。データをクラスカル・ウォリス事後検定を使用したウィルコクソン検定によって分析した。（^＊ｐ＜０．０５）。ＰＥＤＦとアバスチンとの組合せは、アバスチン単独よりも最小限に効果を高めたに過ぎないが、この組合せは、ＰＥＤＦの抗アポトーシス効果のために有利である（実施例１５を参照）。

［実施例１５：ＰＥＤＦの神経保護効果］
この実施例では、低酸素ラット眼モデルで証明されるように、ＰＥＤＦが神経保護的であることを示す。

低酸素網膜は、実施例１に記載のようにして作製した。ラットの眼を摘出し、直ちにＰＢＳ（ビヒクル）またはＰＥＤＦ溶液（１１．５μｇ／μｌ）を注射した。冷蔵庫（４℃）で１４時間インキュベートした後、眼を固定し、パラフィンに包埋した。Ｔｕｎｎｅｌ解析をインサイチュー細胞死検出ＴＭＲ ｒｅｄ ＴＵＮＥＬキット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、マンハイム、ドイツ）を用いて、製造業者の推奨に従って実施した。アポトーシス細胞核は赤で示された；光受容体の外側のセグメントも赤く見えたが、これは網膜のフルオロフォアによって引き起こされたものである。

図２０および２１に結果が示されている。

ＰＥＤＦによる処置は、実施例１に記載のエクスビボ網膜低酸素モデルにおけるアポトーシス細胞の数を減らし、これは、ビヒクル処置と比較して、神経節細胞に対する有意な神経保護効果を提供した。（^＊＊ｐ＜０．０５）。

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特に断りのない限り、その開示が参照により本明細書の一部をなすものとされる、本明細書に列挙される文書の完全な書誌データは以下の通りである。

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本明細書、特許請求の範囲、配列表および／または図面に開示された本発明の特徴は、別々に、およびそれらの任意の組合せの両方で、本発明をその様々な形態で実現するための材料となり得る。

Claims (18)

1. 対象におけるドライ型黄斑変性症、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）であって、前記方法が、ＰＥＤＦおよびＶＥＧＦを前記対象に投与することを含み、前記ＰＥＤＦおよび前記ＶＥＧＦが前記対象に同時または順次投与される、使用のためのＰＥＤＦ。
2. 前記対象が治療未経験の静止脈絡膜血管新生に罹患している、請求項１に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
3. 前記対象が地図状萎縮を患っている、請求項１および２のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
4. 地図状萎縮が抗ＶＥＧＦ療法の結果である、請求項３に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
5. ＰＥＤＦが脈絡毛細管の成長を誘導する、請求項１、２、３および４のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
6. 脈絡毛細管が非漏出性の脈絡毛細管である、請求項５に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
7. ＰＥＤＦが地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する、請求項１、２、３、４、５および６のいずれか１項、好ましくは請求項３、４、５および６のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
8. 対象におけるウェット型黄斑変性症、好ましくはウェット型加齢黄斑変性症の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）であって、前記方法が、ＰＥＤＦおよび抗ＶＥＧＦ療法を前記対象に施すことを含み、前記ＰＥＤＦおよび前記抗ＶＥＧＦ療法が前記対象に同時または順次施される、使用のためのＰＥＤＦ。
9. ＰＥＤＦが非漏出性の脈絡毛細管の成長を誘導する、請求項８に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
10. 前記抗ＶＥＧＦ療法が前記対象への抗ＶＥＧＦ薬の投与を含む、請求項８および９のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
11. 前記抗ＶＥＧＦ薬が、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ベバシズマブおよびアフリベルセプトを含む群から選択される、請求項８、９および１０のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
12. 対象における治療未経験の静止脈絡膜血管新生の治療および／または予防のための方法における使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）であって、前記方法が、ＰＥＤＦおよびＶＥＧＦを前記対象に投与することを含み、前記ＰＥＤＦおよび前記ＶＥＧＦが前記対象に同時または順次投与される、使用のためのＰＥＤＦ。
13. 前記対象がドライ型黄斑変性症、好ましくはドライ型加齢黄斑変性症に罹患している、請求項１２に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
14. 前記対象が地図状萎縮を患っている、１２および１３に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
15. 地図状萎縮が抗ＶＥＧＦ療法の結果である、請求項１４に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
16. ＰＥＤＦが脈絡毛細管の成長を誘導する、請求項１２、１３、１４、１５のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
17. 前記脈絡毛細管が非漏出性の脈絡毛細管である、請求項１６に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。
18. ＰＥＤＦが地図状萎縮の成長および／または形成を阻害する、請求項１２、１３、１４、１５、１６および１７のいずれか１項、好ましくは請求項１４、１５、１６および１７のいずれか１項に記載の使用のための色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）。