JP2023540663A - Ｇｌｐ－１ｒアゴニスト／ｆｇｆ２１融合タンパク質 - Google Patents

Abstract

本発明は、グルカゴン様ペプチド１受容体５（ＧＬＰ－１Ｒ）アゴニストペプチドおよびヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の変異体を含む、融合タンパク質に関する。本発明はさらに、特に、対照における肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症の治療のための医薬としての、ＧＬＰ－１ＲアゴニストペプチドおよびＦＧＦ２１の変異体を含む融合タンパク質の使用に関する。本発明はまた、ＧＬＰ－１ＲアゴニストペプチドとＦＧＦ２１の変異体とを含む融合タンパク質を含む、医薬組成物にも関する。

Description

本発明は、ＧＬＰ－１Ｒ（グルカゴン様ペプチド１受容体）アゴニストペプチドおよびヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の変異体を含む、融合タンパク質に関する。本発明はさらに、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症の治療のための医薬としてのこれらの融合タンパク質の使用に関する。

融合タンパク質としてのＦＧＦ２１およびＧＬＰ－１Ｒアゴニストの使用には欠点がある。ＦＧＦ２１の薬理学的作用は、ＧＬＰ－１（一次ＧＬＰ－１Ｒアゴニスト）が薬理学的作用を発揮する血漿レベルよりも高い血漿レベルにおいて観察される。さらに、より高い血漿レベルでは、ＧＬＰ－１は、有害作用を有することが知られており、例えば、それは、吐き気および嘔吐を誘導する。まとめると、このことは、融合タンパク質の形態で、ＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ－１Ｒアゴニストの組合せを投与する場合、ＧＬＰ－１媒介性有害作用のリスクを示す。したがって、ＦＧＦ２１およびＧＬＰ－１Ｒアゴニストを組み合わせた新しい融合タンパク質ならびにその製剤が、必要とされている。

本発明の目的は、潜在的な有害作用（例えば、吐き気および嘔吐など）を回避しながら、両方の活性剤の利益効果（例えば、体重、脂質、血糖コントロールなどにおいて）を達成するために、最適化されたＧＬＰ－１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１化合物活性比を有する融合タンパク質を提供することである。

一態様において、本発明は、ＧＬＰ－１ＲアゴニストペプチドおよびヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体を含む、融合タンパク質に関する。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）（配列番号２６０）のアミノ酸配列において、最大約１５個のアミノ酸残基の置換を含む、天然ＧＬＰ－１（７－３６）の変異体である。

一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５０または配列番号２５１のアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含み、
（ｉ）置換Ｑ５５ＣおよびＰ１４７Ｃまたは置換Ｑ５５ＣおよびＮ１４９Ｃ、ならびに
（ｉｉ）Ｇ１９８および／またはＰ１９９の置換または欠失を含み、
アミノ酸残基の番号付けは、配列番号２５０に従う。

一実施形態において、ＧＬＰ－１ＲアゴニストペプチドおよびヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、Ｌ－Ｆｃ、Ｆｃ－Ｌ、Ｌ_１－Ｆｃ－Ｌ_２、およびＦｃからなる群から選択される構造を含むリンカー分子を介して連結されており、Ｌ、Ｌ_１、およびＬ_２は、単一のアミノ酸およびペプチドからなる群から独立して選択され、Ｆｃは、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインである。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約９～約５３１分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約９～約４８２分の１（もしくは約９．４４９～約４８２．３９６分の１）または約９～約３１９分の１（もしくは約９．４４９～約３１９．３１１分の１）または約９～約１２１分の１（もしくは約９．４４９～約１２１．１８９分の１）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約９～約３１９分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、少なくとも約９．４分の１または少なくとも約９．４５分の１または少なくとも約９．５分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、少なくとも約１０分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、最大約４８２．４分の１または最大約４８２．３５分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、最大約４８２分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１０～約４８２分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１０～約３１９分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約９０～約１００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、少なくとも約１８分の１（または少なくとも約１８．２６８分の１）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１８～約５０１分の１（または約１８．２６８～約５００．６８６分の１）または約１８～約４６９分の１（または約１８．２６８～約４６８．６７９分の１）または約１８～約３１３分の１（または約１８．２６８～約３１３．２１４分の１）または約１８～約１２３分の１（または約１８．２６８～約１２３．４６６分の１）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１８～約３１３分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

上述の実施形態のうちの１つにおいて、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、少なくとも約１８．２分の１または少なくとも約１８．３分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

上述の実施形態のうちの１つにおいて、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、少なくとも約２０分の１、または少なくとも約５０分の１、または少なくとも約１００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１０分の１～約５００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１５分の１～約５００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約２０分の１～約５００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約５０分の１～約５００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１００分の１～約５００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。一実施形態において、融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約１００分の１～約３００分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、融合タンパク質は、上記において定義されるＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、アミノ酸配列
Ｘ_１－Ｘ_２－Ｘ_３－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｘ_１０－Ｓ－Ｘ_１２－Ｘ_１３－Ｘ_１４－Ｘ_１５－Ｘ_１６－Ｘ_１７－Ｘ_１８－Ｘ_１９－Ｘ_２０－Ｘ_２１－Ｘ_２２－Ｘ_２３－Ｘ_２４－Ｘ_２５－Ｌ－Ｘ_２７－Ｘ_２８－Ｘ_２９－Ｘ_３０（配列番号４０７７）
を含むかまたはそれからなり、
式中
Ｘ_１は、Ｈ、Ｙ、またはＦであり、
Ｘ_２は、Ｇ、Ｓ、Ｔ、またはＡであり、
Ｘ_３は、ＥまたはＱであり、
Ｘ_１０は、ＫまたはＬであり、
Ｘ_１２は、Ｋ、Ｉ、またはＱであり、
Ｘ_１３は、ＱまたはＬであり、
Ｘ_１４は、Ｌ、Ｍ、またはＣであり、
Ｘ_１５は、Ｅ、Ａ、またはＤであり、
Ｘ_１６は、Ｅ、Ｋ、またはＳであり、
Ｘ_１７は、Ｅ、Ｒ、またはＱであり、
Ｘ_１８は、Ｌ、Ａ、またはＲであり、
Ｘ_１９は、Ｖ、Ａ、またはＦであり、
Ｘ_２０は、Ｒ、Ｈ、Ｑ、Ｋ、またはＩであり、
Ｘ_２１は、Ｌ、Ｅ、Ｈ、またはＲであり、
Ｘ_２２は、ＦまたはＬであり、
Ｘ_２３は、Ｉ、Ｙ、またはＦであり、
Ｘ_２４は、Ｅ、Ｌ、またはＹであり、
Ｘ_２５は、ＷまたはＬであり、
Ｘ_２７は、Ｉ、Ｌ、Ｋ、またはＥであり、
Ｘ_２８は、Ａ、Ｋ、Ｎ、またはＥであり、
Ｘ_２９は、Ｇ、Ｔ、Ｋ、またはＶであり、
Ｘ_３０は、Ｇまたは欠失であり、
場合により、アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基をさらに含み、
場合により、アミノ酸配列は、そのＣ末端に最大約１２、約１１、または約１０個のアミノ酸残基からなるペプチド延長をさらに含む。

一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、ＧまたはＡである。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、単一のアミノ酸残基である。一実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸残基は、Ｇである。

一実施形態において、ペプチド延長は、配列番号４００８～４０６３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。一実施形態において、ペプチド延長は、単一のアミノ酸残基、例えば、Ｐである。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１～５６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、アミノ酸配列
Ｘ_１－Ｇ－Ｅ－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｘ_１０－Ｓ－Ｘ_１２－Ｘ_１３－Ｌ－Ｘ_１５－Ｘ_１６－Ｘ_１７－Ｘ_１８－Ｘ_１９－Ｘ_２０－Ｘ_２１－Ｆ－Ｘ_２３－Ｅ－Ｗ－Ｌ－Ｘ_２７－Ｘ_２８－Ｘ_２９－Ｇ（配列番号４０７８）
を含むかまたはそれからなり、
式中
Ｘ_１は、Ｈ、Ｙ、またはＦであり、
Ｘ_１０は、ＫまたはＬであり、
Ｘ_１２は、Ｋ、Ｉ、またはＱであり、
Ｘ_１３は、ＱまたはＬであり、
Ｘ_１５は、Ｅ、Ａ、またはＤであり、
Ｘ_１６は、Ｅ、Ｋ、またはＳであり、
Ｘ_１７は、Ｅ、Ｒ、またはＱであり、
Ｘ_１８は、Ｌ、Ａ、またはＲであり、
Ｘ_１９は、Ｖ、Ａ、またはＦであり、
Ｘ_２０は、Ｒ、Ｈ、Ｑ、Ｋ、またはＩであり、
Ｘ_２１は、Ｌ、Ｅ、Ｈ、またはＲであり、
Ｘ_２３は、Ｉ、Ｙ、またはＦであり、
Ｘ_２７は、Ｉ、Ｌ、Ｋ、またはＥであり、
Ｘ_２８は、Ａ、Ｋ、Ｎ、またはＥであり、
Ｘ_２９は、Ｇ、Ｔ、Ｋ、またはＶであり、
場合により、アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基をさらに含み、
場合により、アミノ酸配列は、そのＣ末端に最大約１２、約１１、または約１０個のアミノ酸残基からなるペプチド延長をさらに含む。

一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、ＧまたはＡである。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、単一のアミノ酸残基である。一実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸残基は、Ｇである。

一実施形態において、ペプチド延長は、配列番号４００８～４０６３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、アミノ酸配列
Ｈ－Ｇ－Ｅ－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｘ_１０－Ｓ－Ｋ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｅ－Ｅ－Ｘ_１８－Ｖ－Ｘ_２０－Ｌ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｗ－Ｌ－Ｋ－Ａ－Ｘ_２９－Ｇ（配列番号４０７９），
を含むかまたはそれからなり、
式中
Ｘ_１０は、ＫまたはＬであり、
Ｘ_１８は、ＡまたはＲであり、
Ｘ_２０は、ＲまたはＱであり、
Ｘ_２９は、ＧまたはＴであり、
場合により、アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基をさらに含み、
場合により、アミノ酸配列は、そのＣ末端に最大１２、１１または１０個のアミノ酸残基からなるペプチド延長をさらに含む。

一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、ＧまたはＡである。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、単一のアミノ酸残基である。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、Ｇである。

一実施形態において、ペプチド延長は、上記において定義されている。一実施形態において、ペプチド延長は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号４０４７）またはＰＫＫＩＲＹＳ（配列番号４０４０）のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１または２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号４０６４～４０７６および５５３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むことも、それからなることもない。

一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、およびＰ１９９の欠失からなる群から選択される置換または欠失を含む。

一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３、２５４、２５５、および２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３または２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７、２５８、および２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一実施形態において、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

別の態様において、本発明は、ＧＬＰ－１Ｒ（グルカゴン様ペプチド１受容体）アゴニストペプチドおよびヒトＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）の機能的に活性な変異体を含む、融合タンパク質であって、
ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１～５６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３、２５４、２５５、および２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
ＧＬＰ－１ＲアゴニストペプチドおよびヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、Ｌ－Ｆｃ、Ｆｃ－Ｌ、Ｌ_１－Ｆｃ－Ｌ_２、およびＦｃからなる群から選択される構造を含むリンカー分子を介して連結されており、Ｌ、Ｌ_１、およびＬ_２は、単一のアミノ酸およびペプチドからなる群から独立して選択され、Ｆｃは、配列番号２５７、２５８、および２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインである、
融合タンパク質に関する。

さらなる別の態様において、本発明は、配列番号１～８、１６～３１、３３～２２９、および５６６～４００７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる融合タンパク質、または配列番号１～８、１６～３１、３３～２２９、および５６６～４００７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなるその機能的に活性な変異体に関する。

別の態様において、本発明は、配列番号１～８、１８～３１、３９、４０、４２～７２、７４、７６、７８～８４、８８～９０、９２～９７、１００～１０２、１０５～１０９、１１２、１１３、１１５、１１６、１１８、１２０～１２４、１２６～１３０、１３２～１３６、１３９、１４２～１４８、１５０～１５３、１５５～１５８、１６１～１７２、１７４～１７７、１８０～１８８、１９０、１９２～２０９、２１１、２１２、２１６、２１７、および２１９～２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、融合タンパク質、または配列番号１～８、１８～３１、３９、４０、４２～７２、７４、７６、７８～８４、８８～９０、９２～９７、１００～１０２、１０５～１０９、１１２、１１３、１１５、１１６、１１８、１２０～１２４、１２６～１３０、１３２～１３６、１３９、１４２～１４８、１５０～１５３、１５５～１５８、１６１～１７２、１７４～１７７、１８０～１８８、１９０、１９２～２０９、２１１、２１２、２１６、２１７、および２１９～２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、その機能的に活性な変異体に関する。

別の態様において、本発明は、配列番号２、７、および８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、融合タンパク質、または配列番号２、７、および８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる、その機能的に活性な変異体に関する。

一実施形態において、上記において定義される融合タンパク質（またはその機能的に活性な変異体）は、例えばヒトＧＬＰ－１Ｒを安定に発現する細胞のｃＡＭＰ反応を測定することによって決定される、約１５ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／Ｌ、または約２０ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／Ｌ、または約５０ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／Ｌ、または約１００ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／ＬのＥＣ５０で、ヒトＧＬＰ－１Ｒを活性化する。一実施形態において、ヒトＧＬＰ－１Ｒの活性化は、本質的に実施例４において説明されるように決定される。

一実施形態において、上記において定義される融合タンパク質（またはその機能的に活性な変異体）は、（ｉ）約２５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０で（例えば、約１０ｎｍｏｌ／Ｌ～約５０ｎｍｏｌ／Ｌ、もしくは約１５ｎｍｏｌ／Ｌ～約５０ｎｍｏｌ／Ｌ、もしくは約１５ｎｍｏｌ／Ｌ～約４５ｎｍｏｌ／ＬのＥＣ５０で）、ヒトＦＧＦ受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）の自己リン酸化を誘導する、かつ／または（ｉｉ）約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約２５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約２０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１５ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０で（例えば、約２．５ｎｍｏｌ／Ｌ～約１５ｎｍｏｌ／Ｌもしくは約４ｎｍｏｌ／Ｌ～約１２ｎｍｏｌ／ＬのＥＣ５０で）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する。一実施形態において、ヒトＦＧＦＲ１ｃの自己リン酸化および／またはＭＡＰＫ ＥＲＫ１／２のリン酸化は、例えば、本質的に実施例３において説明されるように、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）を使用することによって決定される。

一実施形態において、上記において定義される融合タンパク質（またはその機能的に活性な変異体）は、少なくとも約４５℃または少なくとも約５０℃または少なくとも約５５℃または少なくとも約６０℃の融解温度および／または凝集温度を有する。一実施形態において、融解温度および／または凝集温度は、本質的に実施例５において説明されるように決定される。

一実施形態において、上記において定義される融合タンパク質（またはその機能的に活性な変異体）は、非ヒト霊長類において、少なくとも約１５時間または少なくとも約２０時間の終末血漿半減期を有する。一実施形態において、上記において定義される融合タンパク質（またはその機能的に活性な変異体）は、マウスにおいて、少なくとも約８時間または少なくとも約１０時間または少なくとも約１２時間の終末血漿半減期を有する。一実施形態において、終末半減期は、非ヒト霊長類、例えば、カニクイザル、またはマウス、例えば、Ｃ５７ＢＩ／６マウスへの、溶液における約０．３ｍｇ／ｋｇの融合タンパク質の単回皮下投与の後に決定される。一実施形態において、終末半減期は、本質的に実施例６において説明される方法によって決定される。

別の態様において、本発明は、上記において定義される融合タンパク質をコードする核酸分子に関する。

別の態様において、本発明は、上記において定義される核酸分子を含有する宿主細胞に関する。

別の態様において、本発明は、上記において定義される融合タンパク質を産生する方法であって、上記において定義される宿主細胞を培養し、融合タンパク質を単離することを含む、方法に関する。

別の態様において、本発明は、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞を含む、医薬組成物に関する。

別の態様において、本発明は、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、上記において定義される宿主細胞、または上記において定義される医薬組成物を含む、キットに関する。

別の態様において、本発明は、医薬としての使用のための、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、上記において定義される宿主細胞、または上記において定義される医薬組成物に関する。

別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、ＮＡＳＨ、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療での使用のための、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、上記において定義される宿主細胞、または上記において定義される医薬組成物に関する。

一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。

別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、ＮＡＳＨ、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療のための医薬の製造における、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、上記において定義される宿主細胞、または上記において定義される医薬組成物に関する。

一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。

別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、ＮＡＳＨ、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害を治療する方法であって、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、上記において定義される宿主細胞、または上記において定義される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。

一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。

別の態様において、本発明は、２型糖尿病を有する肥満の異常脂血症の患者に対して、太り過ぎにおける血糖コントロールを改善するための、上記において定義される融合タンパク質、上記において定義される核酸分子、上記において定義される宿主細胞、または上記において定義される医薬組成物に関する。

ＧＬＰ－１減衰率（１２か月のシミュレーション）に依存した有害作用（胃排出（ＧＥ）率）および薬力学（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである： ・ ９．４４９超のＧＬＰ－１減衰率（９に四捨五入することができる）について、ＧＬＰ－１媒介性胃腸有害作用（胃排出；ＧＥ率）のＥＣ５０は、薬力学的作用（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）のＥＣ５０よりも大きかった； ・ ＦＧＦ２１－（脂質）およびＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）の展開によって正規化された薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、１２１．１８９であり、すなわち、１２１．１８９（１２１に四捨五入することができる）において、ＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）と平均ＦＧＦ２１媒介性作用（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離において、薬力学的作用（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間で最大距離がある（図２を参照のこと）； ・ 薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、３１９．３１１であった（３１９に四捨五入することができる）； ・ 平均薬力学（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、４８２．３９６であった（図２を参照のこと；４８２に四捨五入することができる）； ・ 胃排出率の最大は５３１．０であった；（全て：縦線）。 ＧＬＰ－１減衰率（１２か月のシミュレーション）に依存した胃排出（ＧＥ）率および平均薬力学的作用（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである： ・ 平均薬力学（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、４８２．３９６であった（右の縦線；４８２に四捨五入することができる）。 ・ ＦＧＦ２１－（脂質）およびＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）の展開によって正規化された薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、１２１．１８９であった（左の縦線；１２１に四捨五入することができる）。曲線「（最大ＧＥ率）／範囲」は、ＨｂＡ１ｃとＧＥ率との間の最大距離と、ＨｂＡ１ｃと平均ＦＧＦ２１媒介性作用（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離との間の比を表す。「（最大ＧＥ率）／範囲」曲線の最小において（すなわち、１２１．１８９において）、ＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）とＦＧＦ２１媒介性作用（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離において、薬力学的作用（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間で最大距離がある。 ＧＬＰ－１減衰率（３か月のシミュレーション）に依存した有害作用（胃排出（ＧＥ）率）および薬力学（ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである： ・ １８．２６８超のＧＬＰ－１減衰率（１８に四捨五入することができる）について、ＧＬＰ－１媒介性胃腸有害作用（胃排出；ＧＥ率）のＥＣ５０は、薬力学的作用（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）のＥＣ５０よりも大きかった； ・ ＦＧＦ２１－（脂質）およびＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）の展開によって正規化された薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、１２３．４６６であり、すなわち、１２３．４６６（１２３に四捨五入することができる）において、ＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）と平均ＦＧＦ２１媒介性作用（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離において、薬力学的作用（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間で最大距離がある（図４を参照のこと）； ・ 薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、３１３．２１４であった（３１３に四捨五入することができる）； ・ 平均薬力学（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、４６８．６７９であった（図４を参照のこと；４６９に四捨五入することができる）； ・ 胃排出率の最大は５００．６８６であった（５０１に四捨五入することができる）；（全て：縦線）。 ＧＬＰ－１減衰率（３か月のシミュレーション）に依存した胃排出（ＧＥ）率および平均薬力学的作用（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである： ・ 平均薬力学（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、４６８．６７９であった（右の縦線；４６９に四捨五入することができる）； ・ ＦＧＦ２１－（脂質）およびＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）の展開によって正規化された薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間の最大距離は、１２３．４６６であった（左の縦線；１２３に四捨五入することができる）。曲線「（最大ＧＥ率）／範囲」は、ＨｂＡ１ｃとＧＥ率との間の最大距離と、ＨｂＡ１ｃと平均ＦＧＦ２１媒介性作用（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離との間の比を表す。「（最大ＧＥ率）／範囲」曲線の最小において（すなわち、１２３．４６６において）、ＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）とＦＧＦ２１媒介性作用（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離において、薬力学的作用（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用（ＧＥ率）との間で最大距離がある。 （ＡおよびＢ）ＣＨＯ細胞におけるヒトＦＧＦ２１受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイ（Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ、ＩＣＷ）の結果を示すグラフである。ｐＦＧＦＲが（Ａ）に示され、ｐＥＲＫが（Ｂ）に示されている。 （Ａ～Ｄ）異なるＧＬＰ－１Ｒアゴニストについて、ＨＥＫ－２９３細胞におけるヒトグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイの結果を示すグラフである。配列番号２が（Ａ）に示され、配列番号７が（Ｂ）に示され、配列番号８が（Ｃ）に示され、配列番号２、７、および８が（Ｄ）に示されている。 （Ａ～Ｆ）３つの異なる生物分析方法を使用した、０．３ｍｇ／ｋｇの溶液を雌性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスまたは雄性カニクイザルに単回皮下投与した後のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質の血漿濃度を示すグラフである。（Ａ）は、マウスにおける配列番号２を示し、（Ｂ）は、サルにおける配列番号２を示し、（Ｃ）は、マウスにおける配列番号７を示し、（Ｄ）は、サルにおける配列番号７を示し、（Ｅ）は、マウスにおける配列番号８を示し、（Ｆ）は、サルにおける配列番号８を示す。 図７－１の続き。 インタクトな全長融合タンパク質の定量化のための生物分析方法を使用した、０．３ｍｇ／ｋｇの溶液を雌性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに単回皮下投与した後のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質、およびＧ－ＦＧＦ２１（配列番号２５２）の血漿濃度を示すグラフである。 ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照を週１回で２８日間投薬した雌性食事性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける体重の進展を示すグラフである。 ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照を週１回で２８日間投薬した雌性ＤＩＯマウスにおける累積食物摂取量の進展を示すグラフである。 （ＡおよびＢ）１日目におけるＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照での初回治療後（Ａ）または２２日目に開始した４回目の治療後（Ｂ）のｄｂ／ｄｂマウスの２４時間血中グルコースプロファイルを示すグラフである。データは、平均±平均の標準誤差であり、ｎ＝８匹／群である。 ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照を週１回で３６日間投薬した雌性ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿ＨｂＡ１ｃ含有量を示すグラフである。 （Ａ～Ｂ）ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照を週１回で８週間投薬した後のＤＩＯ ＮＡＳＨマウスにおける肝臓重量および脂質含有量の進展を示すグラフである。（Ａ）は、肝臓重量および脂質レベルを示し、（Ｂ）は、肝臓コレステロールおよび肝臓トリグリセリドレベルを示す。 図１３－１の続き。 ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照を週１回で８週間投薬した後のＤＩＯ ＮＡＳＨマウスにおける線維症の発生および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活性スコアの進展を示すグラフを示す。 ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質および対照を週１回で８週間投薬した後のＤＩＯ ＮＡＳＨマウスにおける高い、同じ、または低い線維症およびＮＡＦＬＤ活性スコアを有する動物の数を示すグラフを示す。

本発明を以下において詳細に説明するが、本明細書において説明される特定の方法、プロトコール、および試薬は変わることがあるため、本発明はそれらに限定されるものではないことは理解されるべきである。本明細書において使用する専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のみのためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないということも理解されるべきである。特に明記されない限り、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

以下において、本発明のある特定の要素について説明する。これらの要素は、特定の実施形態により列挙されるが、それらは、追加の実施形態を創出するためにあらゆる様式およびあらゆる数において組み合わせることができるということは理解されるべきである。様々に説明される実施例および例示的な実施形態は、明確に説明された実施形態のみに本発明を限定すると解釈すべきではない。この説明は、明確に説明される実施形態をいくつもの開示されたおよび／または例示的な要素と組み合わせる実施形態も、支持および包含すると理解されるべきである。さらに、本出願における全ての説明された要素のあらゆる順序および組合せは、文脈において明記されない限り、本出願の説明によって開示されるものと解釈すべきである。

本明細書において使用される用語は、「Ａ ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）」，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ Ｈ．Ｋｏｌｂｌ編，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，ＣＨ－４０１０ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載される通りに定義される。

本発明の実施は、そうでないと明記されない限り、当技術分野における文献において説明される、化学、生化学、細胞生理学、免疫学、遺伝子組換えＤＮＡ技術における従来の方法を用いるであろう（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）。

以下の本明細書および特許請求の範囲全体を通して、文脈上必要とされない限り、言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびその変形、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、言明されたメンバー、整数、または工程の包含だけでなく、任意の他のメンバー、整数、もしくは工程、または、メンバー、整数、または工程の群の包含を含意するが、いくつかの実施形態では、そのような他のメンバー、整数、または工程、または、メンバー、整数、もしくは工程の群が除外される場合もある、すなわち、主題が、言明されたメンバー、整数、もしくは工程、またはメンバー、整数、または工程の群の包含からなることも理解されるべきである。本発明を説明する文脈において使用される用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」ならびに同様の指示語は（特に特許請求の範囲の文脈において）、本明細書において別段の指示がないか、または文脈において明確に否定されない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるできである。本明細書における値の範囲の列挙は、単にその範囲内に属する別々の各値を個別に言及するための簡単な方法として機能する。本明細書において別段の指示がない限り、個々の各値は、それらが本明細書において個別に列挙されるかのように、本明細書に組み入れられる。本明細書において説明される全ての方法は、そうでないことが本明細書において示されていない限り、または文脈によって明確に否定されない限り、任意の適切な順序において実行することができる。本明細書において提供されるありとあらゆる実施例または例示言語（例えば、「例えば、～など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく解説することを意図するものであり、そうでないことが主張されない限り、発明の範囲に制限を課すものではない。明細書におけるいかなる言語も、非請求要素を発明の実施に不可欠なものと指摘していると解釈すべきではない。

いくつかの文献が、本明細書の本文全体を通して引用されている。本明細書において引用された各文献（全ての特許、特許出願、科学的刊行物、製造業者の仕様書、取扱説明書などを含む）は、上記および下記に関わらず、それらを参照することによりその全体を本明細書に組み入れる。本明細書のいかなる記載も、先行発明によるそのような開示に先行する権利がないことの承認として、解釈されるべきではない。

用語「融合タンパク質」は、一般的に、２つ以上の異なるタンパク質（例えば、タンパク質および／またはペプチド）を連結、特に共有結合させ、結果として元のそれぞれのタンパク質に由来する機能特性を有する単一の分子を生じさせることよって作り出されたタンパク質を指す。一般に、本発明の融合タンパク質は、ＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性およびＦＧＦ２１活性を示す。融合タンパク質は、遺伝子融合によって（例えば、遺伝子組換えＤＮＡ技術によって）、または化学的および／もしくは酵素的コンジュゲーションによって生じさせることができる。本発明による融合タンパク質において、融合タンパク質の成分は、（Ｎ末端からＣ末端まで）Ａ－Ｂ－ＣまたはＣ－Ｂ－Ａの順序で整列することができ、ＡはＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドであり、Ｂはリンカー分子であり、ＣはヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体である。

用語「ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチド」は、本明細書において使用される場合、ＧＬＰ－１受容体、例えば、ＧＬＰ－１（一次ＧＬＰ－１Ｒアゴニストとして）に結合するおよびそれを活性化するペプチドを指す。ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドはまた、本明細書において、単純に「ＧＬＰ－１Ｒアゴニスト」とも称され得る。

用語「ペプチド」は、概して、ペプチド結合によって共有結合的に連結された、例えば、約２以上、または約３以上、または約４以上、または約６以上、または約８以上、または約９以上、または約１０以上、または約１３以上、または約１６以上、または約２１以上のアミノ酸を含む、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指す。ペプチドは、例えば、最大約１００個のアミノ酸からなる。用語「ポリペプチド」は、大きなペプチドを指す。一実施形態において、用語「ポリペプチド」は、約１００個を上回るアミノ酸残基を有するペプチドを指す。用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において、互換的に使用される。

一実施形態において、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）の変異体である。用語「天然ＧＬＰ－１（７－３６）」は、本明細書において使用される場合、場合により、そのＣ末端にアミド基を含む配列番号２６０のアミノ酸配列を有するペプチドを指す。

一般に、天然ＧＬＰ－１（７－３６）の変異体は、天然ＧＬＰ－１（７－３６）のアミノ酸配列における／それに対する、少なくとも１つのアミノ酸残基の欠失、付加、および／または置換に基づいてもよい。

一実施形態において、変異体は、天然ＧＬＰ－１（７－３６）（配列番号２６０）のアミノ酸配列において最大約１５個、約１４個、約１３個、約１２個、約１１個、約１０個、約９個、約８個、約７個、約６個、または約５個のアミノ酸残基の置換を含む。

用語「アミノ酸」または「アミノ酸残基」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、および天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸模倣物、その構造がそのような立体異性体形態を許容する場合にはそのＤおよび／またはＬ立体異性体におけるものを指す。アミノ酸は、本明細書において、それらの名前もしくは当業界で公知のそれらの３文字記号のどちらかにおいて、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会（ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）によって推奨される１文字記号によって呼ばれる。

アミノ酸に関連して使用される場合、用語「天然に存在する」は、慣習的な２０のアミノ酸（すなわち、アラニン（ＡｌａまたはＡ）、システイン（ＣｙｓまたはＣ）、アスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）、グルタミン酸（ＧｌｕまたはＥ）、フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）、イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、リジン（ＬｙｓまたはＫ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）、プロリン（ＰｒｏまたはＰ）、グルタミン（ＧｌｎまたはＱ）、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、トレオニン（ＴｈｒまたはＴ）、バリン（ＶａｌまたはＶ）、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）、およびチロシン（ＴｙｒまたはＹ））、ならびにセレノシステイン、ピロリシン（ＰＹＬ）、およびピロリン－カルボキシリシン（ＰＣＬ）を意味する。

用語「非天然アミノ酸」は、本明細書において使用される場合、自然にはコードされないかまたはどの有機体の遺伝子コードにも見出されないアミノ酸を意味することを指す。それは、例えば、純粋に合成された化合物である場合がある。非天然アミノ酸の例としては、これらに限定されるわけではないが、ヒドロキシプロリン、ガンマ－カルボキシグルタメート、Ｏ－ホスホセリン、アゼチジンカルボン酸、２－アミノアジピン酸、３－アミノアジピン酸、ベータ－アラニン、アミノプロピオン酸、２－アミノ酪酸、４－アミノ酪酸、６－アミノカプロン酸、２－アミノヘプタン酸、２－アミノイソ酪酸、３－アミノイソ酪酸、２－アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン、２，４－ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’－ジアミノピメリン酸、２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ－ヒドロキシリシン、３－ヒドロキシプロリン、４－ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ－イソロイシン、Ｎ－メチルアラニン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、Ｎ－メチルペンチルグリシン、Ｎ－メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、Ｄ－オルニチン、Ｄ－アルギニン、ｐ－アミノフェニルアラニン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、およびチオプロリンが挙げられる。

用語「アミノ酸類似体」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を有する化合物を指す。アミノ酸類似体は、例えば、それらのＣ末端カルボキシ基、それらのＮ末端アミノ基、および／またはそれらの側鎖官能基のうちの１つもしくは任意の組合せにおいて、可逆的もしくは非可逆的に化学的に遮断されるか、または化学的に修飾された、天然および非天然アミノ酸を含む。そのような類似体としては、これらに限定されるわけではないが、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、Ｓ－（カルボキシメチル）－システイン、Ｓ－（カルボキシメチル）－システインスルホキシド、Ｓ－（カルボキシメチル）－システインスルホン、アスパラギン酸－（ベータメチルエステル）、Ｎ－エチルグリシン、アラニンカルボキサミド、ホモセリン、ノルロイシン、およびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。

用語「アミノ酸模倣物」は、本明細書において使用される場合、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化学化合物を指す。

いくつかの実施形態において、変異体は、そのＮ末端に、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含む。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、単一のアミノ酸残基である。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、プロリンを除く天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、およびアミノ酸模倣物から選択される。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、Ｇ、Ａ、Ｎ、およびＣからなる群から選択される。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、ＧまたはＡである。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、Ｇである。

いくつかの実施形態において、変異体は、そのＣ末端にペプチド延長を含む。ペプチド延長は、例えば、最大約１２個、約１１個、約１０個、または約９個のアミノ酸残基（例えば、約７個、約８個、もしくは約９個のアミノ酸残基）からなり得る。一実施形態において、ペプチド延長は、配列番号４００８～４０６３からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる。一実施形態において、ペプチド延長は、単一のアミノ酸残基、例えば、Ｐである。

一実施形態において、本発明の融合タンパク質のＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチド成分は、本明細書において定義される天然ＧＬＰ－１（７－３６）のものに比べて、減少したＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を示す。「融合タンパク質の一部としてのＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチド」という表現は、ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドが融合タンパク質の成分であり、必ずしもその単離された形態ではない場合（すなわち、融合タンパク質の成分ではない場合）に、減少したＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性が示されることを意味する。

一実施形態において、用語「ＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性」（または「ＧＬＰ－１Ｒアゴニスト効力」）は、本明細書において使用される場合、ＧＬＰ－１受容体の活性化を指す。一実施形態において、この用語は、インビトロにおけるアゴニスト活性／効力を指す。別の実施形態において、この用語は、インビボにおけるアゴニスト活性／効力を指す。一実施形態において、ＧＬＰ－１受容体の活性は、インビトロにおけるアゴニストと接触したときのＧＬＰ－１受容体を安定的に発現する細胞のｃＡＭＰ反応を測定することによって決定される。一実施形態において、細胞は、ＨＥＫ－２９３細胞株に由来する。一実施形態において、ＧＬＰ－１受容体は、ヒトＧＬＰ－１受容体である。一実施形態において、ＧＬＰ－１受容体の活性は、本質的に実施例４において説明されるように決定される。一実施形態において、活性／効力は、ＥＣ５０値を決定することによって定量される。

用語「線維芽細胞増殖因子２１」または「ＦＧＦ２１」は、本明細書において使用される場合、当技術分野において公知の任意のＦＧＦ２１タンパク質を指し、特に、ヒトＦＧＦ２１を指す。一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１は、配列番号２５０（全長ヒト野生型ＦＧＦ２１）のアミノ酸配列を有する。成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１、すなわち、配列番号２５０のアミノ酸１～２８（Ｍ１～Ａ２８）（すなわち、シグナル配列／ペプチド）を欠くヒト野生型ＦＧＦ２１は、配列番号２５１によって表される。追加のＮ末端Ｇｌｙを有する成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１は、配列番号２５２によって表され、本明細書においてＧ－ＦＧＦ２１と称される。

一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５０または配列番号２５１のアミノ酸配列と少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％同一であるアミノ酸配列を含み、
（ｉ）置換Ｑ５５ＣおよびＰ１４７Ｃまたは置換Ｑ５５ＣおよびＮ１４９Ｃ、ならびに
（ｉｉ）Ｇ１９８および／またはＰ１９９の置換または欠失を含み、
アミノ酸残基の番号付けは、配列番号２５０に従う。

配列番号２５０におけるＱ５５Ｃは、配列番号２５１におけるＱ２７Ｃに対応し、配列番号２５０におけるＰ１４７Ｃは、配列番号２５１におけるＰ１１９Ｃに対応し、配列番号２５０におけるＮ１４９Ｃは、配列番号２５１におけるＮ１２１Ｃに対応し、配列番号２５０におけるＧ１９８は、配列番号２５１におけるＧ１７０に対応し、配列番号２５０におけるＰ１９９は、配列番号２５１におけるＰ１７１に対応する。

２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間において同一であるアミノ酸の割合を示す。比較のための配列の最適化アラインメントは、手作業以外に、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｓ Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２、４８２の局所的相同性アルゴリズムによって、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８、４４３の局所的相同性アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、２４４４の類似検索方法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ Ｎ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、生成され得る。

ＦＧＦ２１（例えば、ヒトＦＧＦ２１）に関連して使用される場合、用語「機能的に活性な変異体」は、ＦＧＦ２１活性を有するタンパク質を指す。

一実施形態において、用語「ＦＧＦ２１活性」（または「ＦＧＦ２１効力」）は、本明細書において使用される場合、ＦＧＦ２１受容体（ＦＧＦＲ、例えば、ＦＧＦＲ１ｃ）の活性を指す。一実施形態において、ＦＧＦ２１受容体は、ヒトＦＧＦ２１受容体である。一実施形態において、この用語は、インビトロにおける活性／効力を指す。別の実施形態において、この用語は、インビボにおける活性／効力を指す。一実施形態において、ＦＧＦ２１受容体の活性化は、インビトロにおけるＦＧＦ２１化合物と接触したときのＦＧＦ２１受容体自己リン酸化および／またはＭＡＰＫ ＥＲＫ１／２のリン酸化を測定することによって決定される。一実施形態において、ヒトＦＧＦＲ１ｃの自己リン酸化および／またはＭＡＰＫ ＥＲＫ１／２のリン酸化は、例えば、本質的に実施例３において説明されるように、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）を使用することによって決定される。一実施形態において、活性および／または効力は、ＥＣ５０値を決定することによって定量される。

用語「Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイ」は、本明細書において使用される場合、免疫細胞化学的アッセイ、より詳しくは、通常はマイクロプレート（例えば、９６ウェル形式または３８４ウェル形式）において実施される、定量的免疫蛍光アッセイを指す。それは、ウェスタンブロットの特異性を、ＥＬＩＳＡの再現性および処理能力と組み合わせるものである（例えば、Ａｇｕｉｌａｒ Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）：ｅ９９６５を参照されたい）。適切なＩＣＷアッセイシステムは市販されている（例えば、ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）。一実施形態において、抗ｐＦＧＦＲおよび／または抗ｐＥＲＫは、ＩＣＷアッセイにおいて使用される。

一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、野生型ヒトＦＧＦ２１（例えば、配列番号２５０または２５１または２５２）のＦＧＦ２１活性と同じかまたは実質的に同じＦＧＦ２１活性を示し、ＦＧＦ２１活性は、ヒトＦＧＦ２１の単離された機能的に活性な変異体の、すなわち、それが本発明の融合タンパク質に含まれていない場合または任意の他の手段で改変されない場合の、ＦＧＦ２１活性を指す。

ＦＧＦ２１（例えば、ヒトＦＧＦ２１）に関連して使用される場合、用語「実質的に同じ」は、ＦＧＦ２１（例えば、野生型ヒトＦＧＦ２１（例えば、配列番号２５０または２５１または２５２））のＦＧＦ２１活性の５０～１５０％、または６０～１４０％、または６５～１３５％の範囲内にあるＦＧＦ２１活性を指す。

場合により、ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、ヒトＦＧＦ２１における天然に存在する変異である置換Ｇ１４１Ｓおよび／またはＰ１７４Ｌをさらに含み、アミノ酸残基の番号付けは、配列番号２５０に従う。配列番号２５０におけるＧ１４１Ｓは、配列番号２５１におけるＧ１１３Ｓに対応し、配列番号２５０におけるＰ１７４Ｌは、配列番号２５１におけるＰ１４６Ｌに対応する。

本発明における使用にさらに好適なＦＧＦ２１変異体は、例えば、ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０７９５５１号に記載されており、これは、参照により本明細書に組み入れられる。

一実施形態において、ＧＬＰ－１ＲアゴニストペプチドおよびヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、Ｌ－Ｆｃ、Ｆｃ－Ｌ、Ｌ_１－Ｆｃ－Ｌ_２、およびＦｃからなる群から選択される構造を含むリンカー分子を介して連結されており、Ｌ、Ｌ_１、およびＬ_２は、単一のアミノ酸およびペプチドからなる群から独立して選択され、Ｆｃは、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインである。

一実施形態において、Ｆｃドメイン（Ｆｃ領域とも称される）は、免疫グロブリンＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＦｃドメインである。一実施形態において、Ｆｃドメインの変異体は、Ｆｃドメインの野生型配列に比べて、最大約６個、約５個、または約４個の変異を含む。一実施形態において、変異は、アミノ酸置換、アミノ酸付加、およびアミノ酸欠失、例えば、ＮまたはＣ末端欠失からなる群から選択される。一実施形態において、Ｆｃドメインまたはその変異体は、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の野生型配列との約５０％より高い、約６０％より高い、約７０％より高い、約８０％より高い、約９０％より高い、約９３％より高い、約９５％より高い、約９６％より高い、約９７％より高い、約９８％より高い、もしくは約９９％より高い配列同一性を有し得るか、または約１００％の配列同一性を有し得る。一実施形態において、Ｆｃドメインまたはその変異体は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域、例えば、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域の野生型配列との約５０％より高い、約６０％より高い、約７０％より高い、約８０％より高い、約９０％より高い、約９３％より高い、約９５％より高い、約９６％より高い、約９７％より高い、約９８％より高い、もしくは約９９％より高い配列同一性を有し得るか、または約１００％の配列同一性を有し得る。一実施形態において、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７、２５８、および２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、リンカー分子におけるペプチド（本明細書において「ペプチドリンカー」とも称される）は、約２～約１００個のアミノ酸残基、または約２～約９０個のアミノ酸残基、または約２～約８０個のアミノ酸残基、または約２～約７０個のアミノ酸残基、または約２～約６０個のアミノ酸残基、または約２～約５０個のアミノ酸残基、または約２～約４０個のアミノ酸残基、または約２～約３０個のアミノ酸残基、または約２～約２５個のアミノ酸残基、または約２～約２０個のアミノ酸残基の長さを有する。一実施形態において、ペプチドリンカーは、少なくとも約５個のアミノ酸残基を含む。一般的に、ペプチドリンカーは、柔軟性およびプロテアーゼ抵抗性を提供するように設計される。一実施形態において、ペプチドリンカーは、グリシン－セリンリッチリンカーであり、例えば、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約８５％のアミノ酸は、それぞれ、グリシンまたはセリン残基である。別の実施形態において、アミノ酸は、グリシンおよびセリンから選択され、すなわち、ペプチドリンカーは、グリシンおよびセリンから排他的に構成される（グリシン－セリンリンカーとして呼ばれる）。一実施形態において、ペプチドリンカーは、そのＣ末端にアラニン残基をさらに含む。ペプチドリンカーは、１つまたはそれ以上の特異的プロテアーゼ切断部位をさらに含み得る。一実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２３１～２４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。Ｌ１およびＬ２は、同じであっても異なってもよい。一実施形態において、Ｌ１およびＬ２は、異なる。一実施形態において、Ｌ１は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなり、Ｌ２は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなるか、または逆も同様である。

本発明の融合タンパク質に関連して使用される場合、用語「機能的に活性な変異体」は、本明細書において定義される範囲内のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性およびＦＧＦ２１活性を有する融合タンパク質を指す。

一実施形態において、機能的に活性な変異体は、それが由来する融合タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも約９６％、または少なくとも約９７％、または少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態において、機能的に活性な変異体のアミノ酸配列におけるそれが由来する融合タンパク質のアミノ酸配列からの偏差は、そのＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性および／またはＦＧＦ２１活性に関与しない融合タンパク質の領域において生じる変異（例えば、１つまたはそれ以上のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加）に排他的に基づく。一実施形態において、変異は、融合タンパク質に含まれるＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドおよび／またはヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体のアミノ酸配列外で排他的に生じる。一実施形態において、機能的に活性な変異体のアミノ酸配列におけるそれが由来する融合タンパク質のアミノ酸配列からの偏差は、保存的アミノ酸置換に排他的に基づく。

保存的アミノ酸置換は、あるアミノ酸を、同じアミノ酸ファミリーの別のもの、すなわち、それらの側鎖において関連するアミノ酸（例えば、電荷および／またはサイズに関して）と互いに置換することを含む。天然に存在するアミノ酸は、概して、４つのファミリーに分割される：酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性アミノ酸（リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性アミノ酸（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、まとめて、芳香族アミノ酸として分類されることもある。

「核酸分子」は、本発明において、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）である。本発明による核酸分子は、一本鎖または二本鎖の分子の形態であり得る。本発明による核酸分子は、直鎖状であってもよく、または共有結合により閉じて環を形成してもよい。

用語「ＤＮＡ」は、デオキシリボヌクレオチド残基を含む分子、場合により、完全にまたは実質的にデオキシリボヌクレオチド残基で構成される分子を指す。「デオキシリボヌクレオチド」は、ベータ－Ｄ－リボフラノシル基の２’位においてヒドロキシル基を欠くヌクレオチドに関する。用語「ＤＮＡ」は、単離ＤＮＡ、例えば、部分的または完全に精製されたＤＮＡ、本質的に純粋なＤＮＡ、合成ＤＮＡ、および遺伝子組換えにより生じたＤＮＡを含む。用語「ＤＮＡ」はまた、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、および／または改変によって天然に存在するＤＮＡとは異なる修飾ＤＮＡも含む。そのような改変は、ＤＮＡの末端または内部などへの、例えば、ＤＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドへの、非ヌクレオチド材料の付加を含み得る。ＤＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドなども含むことができる。改変ＤＮＡ分子は、類似体または天然に存在するＤＮＡの類似体と呼ぶことができる。

用語「ＲＮＡ」は、リボヌクレオチド残基を含む分子、場合により、完全にまたは実質的に、リボヌクレオチド残基で構成された分子を指す。「リボヌクレオチド」は、ベータ－Ｄ－リボフラノシル基の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドに関する。用語「ＲＮＡ」は、単離ＲＮＡ、例えば、部分的または完全に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、および遺伝子組換えにより生じたＲＮＡを含む。用語「ＲＮＡ」はまた、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、および／または改変によって天然に存在するＲＮＡとは異なる修飾ＲＮＡも含む。そのような改変は、ＲＮＡの末端または内部などへの、例えば、ＲＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドへの、非ヌクレオチド材料の付加を含み得る。ＲＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドもしくは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなども含むことができる。改変ＲＮＡ分子は、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体と呼ぶことができる。本発明によれば、「ＲＮＡ」は、一本鎖ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡを指す。一実施形態において、ＲＮＡは、ｍＲＮＡ、例えば、インビトロにおいて転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ ＲＮＡ）または合成ＲＮＡである。ＲＮＡは、例えば、ＲＮＡの安定性（例えば、半減期）を増加させる１つまたはそれ以上の修飾によって、修飾することができる。そのような変更は、当業者に公知であり、そのようなものとして、例えば、５’－キャップまたは５’キャップ類似体が挙げられる。

用語「天然に存在する」は、ヌクレオチドと組み合わせて使用される場合、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）の塩基を指す。

本発明による核酸分子は、ベクターに含有させる／含ませることができる。用語「ベクター」は、本明細書において使用される場合、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター（例えば、ラムダファージベクター）、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルスもしくはバキュロウイルスベクター）、または人工染色体ベクター（例えば、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、もしくはＰ１人工染色体（ＰＡＣ））を含む、当業者に公知の全てのベクターを含む。前記ベクターは、発現ベクターおよびクローニングベクターを含む。発現ベクターは、プラスミドおよびウイルスベクターを含み、一般的に、特定の宿主生物（例えば、細菌、酵母、植物、昆虫、もしくは哺乳動物）における、またはインビトロ発現系における、所望されるコード配列と、作動可能に連結されたコード配列の発現のために必要な適切なＤＮＡ配列とを含有する。クローニングベクターは、一般的に、ある特定の所望のＤＮＡ断片を設計および増幅するために使用され、所望のＤＮＡ断片の発現に必要な機能的配列を欠き得る。

あるいは、本発明による核酸分子は、ゲノム、例えば、宿主細胞のゲノム、に統合させてもよい。特定の核酸分子をゲノムに統合するための手段および方法は、当業者に周知である。

ある特定の例示的な実施形態において、用語「細胞」または「宿主細胞」は、インタクトな細胞、すなわち、その正常な細胞内成分、例えば、酵素、細胞小器官、または遺伝物質などを放出していない、インタクトな膜を有する細胞に関する。ある特定の例示的な実施形態において、インタクトな細胞は、生存細胞、すなわち、その正常な代謝機能を行うことができる生きた細胞である。ある特定の例示的な実施形態において、細胞または宿主細胞は、外因性の核酸をトランスフェクトまたは形質転換することができる任意の細胞である。ある特定の例示的な実施形態において、外因性の核酸をトランスフェクトまたは形質導入させ、レシピエントに移した細胞は、レシピエントにおいてその核酸を発現することができる。

用語「細胞」は、原核生物細胞、例えば、細菌細胞など、および真核生物細胞、例えば、酵母細胞、真菌細胞、または哺乳動物細胞などを含む。好適な細菌細胞としては、グラム陰性細菌株、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の細菌株など、ならびにグラム陽性細菌株、例えば、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、およびラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）などに由来する細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好適な真菌細胞としては、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、ニューロスポーラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒ）、およびアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の種に由来する細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好適な酵母細胞としては、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の種（例えば、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の種（例えば、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ））、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）の種（例えば、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）およびピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ））、およびハンゼヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）の種に由来する細胞が挙げられる。好適な哺乳動物細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ－２９３などが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ＨＥＫ－２９３細胞が使用される。しかしながら、両生類細胞、昆虫細胞、植物細胞、および異種タンパク質の発現のために当技術分野において使用される任意の他の細胞も、使用することができる。ある特定の例示的な実施形態において、哺乳動物細胞（例えば、ヒト、マウス、ハムスター、ブタ、ヤギ、または霊長類に由来する細胞）は、養子移入に使用される。これらの細胞は、多くの組織型から誘導することができ、初代細胞および細胞株、例えば、免疫系の細胞（例えば、抗原提示細胞、例えば、樹枝状細胞およびＴ細胞など、幹細胞、例えば、造血幹細胞および間充織幹細胞など）、ならびに他の細胞型を含む。

抗原提示細胞は、本明細書において使用される場合、その表面上の主要組織適合遺伝子複合体との関連において抗原を提示する細胞である。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用して、この複合体を認識することができる。「細胞」または「宿主細胞」は、単離してもよく、または組織または有機体、特に「非人体」、の一部であってもよい。

用語「非ヒト生物」は、本明細書において使用される場合、非ヒト霊長類または他の動物、例えば、哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、およびげっ歯類（例えば、マウス、ラット、モルモット、もしくはハムスター）を含むことを意味する。

本明細書による医薬組成物は、１種もしくはそれ以上の担体および／または賦形剤を含み、それら全ては、薬学的に許容されるものである。用語「薬学的に許容される」は、本明細書において使用される場合、ある特定の例示的な実施形態では、該医薬組成物の活性剤の作用と相互作用しない材料の非毒性を意味する。

用語「担体」は、本明細書において使用される場合、適用を促進、増強、または可能にするために有効成分と組み合わされる、天然または合成の有機または無機成分を指す。本発明によれば、用語「担体」は、対象への投与にとって好適な、１種またはそれ以上の適合性の固体または液体の充填剤、希釈剤、または封入物質も含む。

非経口投与に好適な担体物質としては、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、静菌性生理食塩水（例えば、０．９％ベンジルアルコールを含有する生理食塩水）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス液、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレン、および、特に、生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン／ポリオキシ－プロピレンコポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。

用語「賦形剤」は、本明細書において使用される場合、有効成分ではないが医薬組成物中に存在していてもよい全ての物質、例えば、塩、結合剤（例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール）、充填剤、潤滑剤、増粘剤、表面活性剤、防腐剤、乳化剤、緩衝剤物質、香味剤、または着色剤などを含むことが意図される。

薬学的に許容される塩を製造するために、薬学的に許容されない塩を使用してもよく、それらは本発明に含まれる。この種類の薬学的に許容される塩は、非限定的に以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから製造されるものを含む。薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩などとして製造することもできる。塩は、医薬組成物のイオン強度または張度を調節するために加えることができる。

医薬組成物での使用のための好適な防腐剤としては、酸化防止剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、システイン、メチオニン、パラベン、チメロサール、フェノール、クレゾールおよびその混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

医薬組成物での使用のための好適な緩衝物質としては、これらに限定されるわけではないが、塩での酢酸、塩でのクエン酸、塩でのホウ酸、塩でのリン酸、およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス、ＴＨＡＭ、トロメタモール）が挙げられる。

ある特定の例示的な実施形態において、本発明による医薬組成物は、滅菌である。医薬組成物は、一様な剤形において提供することができ、当業者に公知の様式において製造することができる。医薬組成物は、例えば、溶液剤または懸濁剤の形態であってもよい。

医薬組成物は、適切な希釈剤によって再構成される、安定な凍結乾燥された製品として製剤化することもでき、場合により、上記において定義されるような１種またはそれ以上の賦形剤を含む。

本発明による医薬組成物は、少なくとも１種の他の医薬品有効成分をさらに含んでもよい。

用語「医薬品有効成分」（ＡＰＩ）は、本明細書において使用される場合、いくつらかの薬理効果を提供し、例えば、本明細書において定義される疾患または障害などの状態を治療または予防するために使用される、任意の薬学的に活性な化学的または生物学的化合物ならびにそれらの任意の薬学的に許容される塩およびそれらの任意の混合物を含む。

例示的な薬学的に許容される塩としては、以下の酸：塩酸（例えば、塩化物塩）、硫酸（例えば、硫酸塩）、硝酸（例えば、硝酸塩）、リン酸（例えば、リン酸塩）、臭化水素酸（例えば、臭化水素塩）、マレイン酸（例えば、マレイン酸塩）、リンゴ酸（例えば、リンゴ酸塩）、アスコルビン酸、クエン酸、（例えば、クエン酸塩）、酒石酸（例えば、酒石酸塩）、パモ酸（例えば、パモ酸塩）、ラウリン酸（例えば、ラウリン酸塩）、ステアリン酸（例えば、ステアリン酸塩）、パルミチン酸（例えば、パルミチン酸塩）、オレイン酸、ミリスチン酸（例えば、ミリスチン酸塩）、ラウリル酸、ナフタレンスルホン酸、リノレン酸（例えば、リノレン酸）などのうちの１つまたはそれ以上から作製される塩が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書において使用される場合、用語「医薬品有効成分」、「活性剤」、「有効成分」、「活性物質」、「治療的に活性な化合物」、および「薬物」は、同義語であることが意図され、すなわち、同一の意味を有する。

本発明により、医薬品有効成分は、場合により、以下から選択される：
－ Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４において言及される全ての薬物、例えば、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ １２において言及される全ての抗糖尿病薬、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ ０６において言及される全ての体重減量剤または食欲抑制剤、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ ５８において言及される全ての脂質低下剤、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４ ｃｈａｐｔｅｒ １７において言及される全ての抗高血圧症薬、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅにおいて言及される全ての腎臓保護薬（ｎｅｐｈｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）、またはＲｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４ｃｈａｐｔｅｒ ３６において言及される全ての利尿薬など；
－ インスリンおよびインスリン誘導体、例えば：インスリングラルギン（例えば、Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、１００Ｕ／ｍＬ超に濃縮されたインスリングラルギン、例えば、２７０～３３０Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンまたは３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン（ＥＰ２３８７９８９において開示される）、インスリングルリシン（例えば、Ａｐｉｄｒａ（登録商標））、インスリンデテミル（例えば、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標））、インスリンリスプロ（例えば、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）、Ｌｉｐｒｏｌｏｇ（登録商標））、インスリンデグルデク（例えば、ＤｅｇｌｕｄｅｃＰｌｕｓ（登録商標）、ＩｄｅｇＬｉｒａ（ＮＮ９０６８））、インスリンアスパルトおよびアスパルト製剤（例えば、ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））、基礎インスリンおよび類似体（例えば、ＬＹ２６０５５４１、ＬＹ２９６３０１６、ＮＮ１４３６）、ペグ化インスリンリスプロ（例えば、ＬＹ－２７５５８５）、長時間作用型インスリン（例えば、ＮＮ１４３６、Ｉｎｓｕｍｅｒａ（ＰＥ０１３９）、ＡＢ－１０１、ＡＢ－１０２、Ｓｅｎｓｕｌｉｎ ＬＬＣ）、中間時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｎ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｎ）、速効性および短時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｌｉｎｊｅｔａ（登録商標）（ＶＩＡｊｅｃｔ（登録商標））、ＰＨ２０インスリン、ＮＮ１２１８、ＨｉｎｓＢｅｔ（登録商標））、予備混合インスリン、ＳｕｌｉＸｅｎ（登録商標）、ＮＮ１０４５、インスリン＋Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標）、ＰＥ－０１３９、ＡＣＰ－００２ヒドロゲルインスリン、および経口、吸入可能、経皮、および口腔、または舌下インスリン（例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）、Ｎａｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ａｆｒｅｚｚａ（登録商標）、インスリントレゴピル（ｔｒｅｇｏｐｉｌ）、ＴＰＭ－０２インスリン、Ｃａｐｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ｏｒａｌ－ｌｙｎ（登録商標）、Ｃｏｂａｌａｍｉｎ（登録商標）、経口インスリン、ＯＲＭＤ－０８０１、Ｏｓｈａｄｉ経口インスリン、ＮＮ１９５３、ＮＮ１９５４、ＮＮ１９５６、ＶＩＡｔａｂ（登録商標））。二官能性リンカーによってアルブミンまたは他のタンパク質に結合したこれらのインスリンの誘導体も好適である；
－ グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）、ＧＬＰ－１類似体、およびＧＬＰ－１受容体アゴニスト、例えば：ＧＬＰ－１（７～３７）、ＧＬＰ－１（７～３６）アミド、リキシセナチド（例えば、Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、エキセナチド（例えば、エキセンディン－４、ｒエキセンディン－４、Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｂｙｄｕｒｅｏｎ（登録商標）、エキセナチドＮｅｘＰ）、エキセナチド－ＬＡＲ、リラグルチド（例えば、Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））、セマグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド、デュラグルチド、アルブゴン、オキシントモジュリン、ゲニプロシド、ＡＣＰ－００３、ＣＪＣ－１１３１、ＣＪＣ－１１３４－ＰＣ、ＧＳＫ－２３７４６９７、ＰＢ－１０２３、ＴＴＰ－０５４、ラングレナチド（ＨＭ－１１２６０Ｃ）、ＣＭ－３、ＧＬＰ－１Ｅｌｉｇｅｎ、ＡＢ－２０１、ＯＲＭＤ－０９０１、ＮＮ９９２４、ＮＮ９９２６、ＮＮ９９２７、Ｎｏｄｅｘｅｎ、Ｖｉａｄｏｒ－ＧＬＰ－１、ＣＶＸ－０９６、ＺＹＯＧ－１、ＺＹＤ－１、ＺＰ－３０２２、ＣＡＭ－２０３６、ＤＡ－３０９１、ＤＡ－１５８６４、ＡＲＩ－２６５１、ＡＲＩ－２２５５、エキセナチド－ＸＴＥＮ（ＶＲＳ－８５９）、エキセナチド－ＸＴＥＮ＋グルカゴン－ＸＴＥＮ（ＶＲＳ－８５９＋ＡＭＸ－８０８）、およびポリマー結合ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体；
－ 二重ＧＬＰ－１／ＧＩＰアゴニスト（例えば、ＲＧ－７６９７（ＭＡＲ－７０１）、ＭＡＲ－７０９、ＢＨＭ０８１、ＢＨＭ０８９、ＢＨＭ０９８）；二重ＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニスト（例えばＢＨＭ－０３４、ＯＡＰ－１８９（ＰＦ－０５２１２３８９、ＴＫＳ－１２２５）、ＴＴ－４０１／４０２、ＺＰ２９２９、ＬＡＰＳ－ＨＭＯＸＭ２５、ＭＯＤ－６０３０）；
－ 二重ＧＬＰ－１／ガストリンアゴニスト（例えば、ＺＰ－３０２２）；
－ 胃腸ペプチド、例えば、ペプチドＹＹ３－３６（ＰＹＹ３－３６）またはその類似体および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）またはその類似体；
－ グルカゴン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グレリンアンタゴニストまたはインバースアゴニスト、キセニンおよびその類似体；
－ ジペプチジルペプチダーゼ－ＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤、例えば：アログリプチン（例えば、Ｎｅｓｉｎａ（登録商標）、Ｋａｚａｎｏ（登録商標））、リナグリプチン（例えば、Ｏｎｄｅｒｏ（登録商標）、Ｔｒａｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｄｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｙｅｎｔａ（登録商標））、サキサグリプチン（例えば、Ｏｎｇｌｙｚａ（登録商標）、Ｋｏｍｂｏｇｌｙｚｅ ＸＲ（登録商標））、シタグリプチン（例えば、Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標）、Ｘｅｌｅｖｉａ（登録商標）、Ｔｅｓａｖｅｌ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ（登録商標）、Ｖｅｌｍｅｔｉａ（登録商標）、Ｊｕｖｉｓｙｎｃ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ ＸＲ（登録商標））、アナグリプチン、テネリグリプチン（例えば、Ｔｅｎｅｌｉａ（登録商標））、トレラグリプチン、ビルダグリプチン（例えば、Ｇａｌｖｕｓ（登録商標）、Ｇａｌｖｕｍｅｔ（登録商標））、ゲミグリプチン、オマリグリプチン、エボグリプチン、デュトグリプチン、ＤＡ－１２２９、ＭＫ－３１０２、ＫＭ－２２３、ＫＲＰ－１０４、ＰＢＬ－１４２７、ピノキサシンヒドロクロリド、およびＡｒｉ－２２４３；
－ ナトリウム依存性グルコーストランスポーター２（ＳＧＬＴ－２）阻害剤、例えば：カナグリフロジン、ダパグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、ＥＧＴ－０００１４４２、ＬＩＫ－０６６、ＳＢＭ－ＴＦＣ－０３９、およびＫＧＡ－３２３５（ＤＳＰ－３２３５）；
－ ＳＧＬＴ－２およびＳＧＬＴ－１の二重阻害剤（例えば、ＬＸ－４２１１、ＬＩＫ０６６）。
－ 肥満防止薬、例えば、回腸型胆汁酸トランスポーター（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ－１６１４２３５＋ＧＳＫ－２３３０６７２）と組み合わせたＳＧＬＴ－１阻害剤（例えばＬＸ－２７６１、ＫＧＡ－３２３５）またはＳＧＬＴ－１阻害剤；
－ ビグアニド（例えば、メトホルミン、ブホルミン、フェンホルミン）；
－ チアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、グリタゾン類似体（例えば、ロベグリタゾン）；
－ ペルオキシソーム増殖活性化受容体（ＰＰＡＲ－）（アルファ、ガンマ、またはアルファ／ガンマ）アゴニストまたはモジュレーター（例えば、サログリタザル（例えば、Ｌｉｐａｇｌｙｎ（登録商標））、ＧＦＴ－５０５）、またはＰＰＡＲガンマ部分アゴニスト（例えば、Ｉｎｔ－１３１）；
－ スルホニル尿素（例えば、トルブタミド、グリベンクラミド、グリメピリド、Ａｍａｒｙｌ（登録商標）、グリピザイド）およびメグリチニド（例えば、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニド）；
－ アルファ－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール、ボグリボース）；
－ アミリンおよびアミリン類似体（例えば、プラムリンチド、Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））；
－ Ｇタンパク質結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニスト（例えば、ＧＳＫ－１２９２２６３、ＰＳＮ－８２１、ＭＢＸ－２９８２、ＡＰＤ－５９７、ＡＲＲＹ－９８１、ＺＹＧ－１９、ＤＳ－８５００、ＨＭ－４７０００、ＹＨ－Ｃｈｅｍ１）；
－ ＧＰＲ４０アゴニスト（例えば、ＴＵＧ－４２４、Ｐ－１７３６、Ｐ－１１１８７、ＪＴＴ－８５１、ＧＷ９５０８、ＣＮＸ－０１１－６７、ＡＭ－１６３８、ＡＭ－５２６２）；
－ ＧＰＲ１２０アゴニストおよびＧＰＲ１４２アゴニスト；
－ 全身性または低吸収性ＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１＝Ｇタンパク質結合胆汁酸受容体１）アゴニスト（例えば、ＩＮＴ－７７７、ＸＬ－４７５、ＳＢ７５６０５０）；
－ 糖尿病免疫療法、例えば：経口Ｃ－Ｃケモカインレセプタータイプ２（ＣＣＲ－２）アンタゴニスト（例えば、ＣＣＸ－１４０、ＪＮＪ－４１４４３５３２）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ－１β）アンタゴニスト（例えばＡＣ－２０１）、または経口モノクローナル抗体（ＭｏＡ）（例えば、メタゾラミド、ＶＶＰ８０８、ＰＡＺ－３２０、Ｐ－１７３６、ＰＦ－０５１７５１５７、ＰＦ－０４９３７３１９）；
－ メタボリック症候群および糖尿病の治療のための抗炎症剤、例えば：核内因子カッパＢ阻害剤（例えば、Ｔｒｉｏｌｅｘ（登録商標））；
－ アデノシンモンリン酸－活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）刺激剤、例えば：Ｉｍｅｇｌｉｍｉｎ（ＰＸＬ－００８）、Ｄｅｂｉｏ－０９３０（ＭＴ－６３－７８）、Ｒ－１１８；
－ １１－ベータ－ヒドロキシステロイド脱水素酵素１（１１－ベータ－ＨＳＤ－１）の阻害剤（例えば、ＬＹ２５２３１９９、ＢＭＳ７７０７６７、ＲＧ－４９２９、ＢＭＳ８１６３３６、ＡＺＤ－８３２９、ＨＳＤ－０１６、ＢＩ－１３５５８５）；
－ グルコキナーゼの活性剤（例えば、ＰＦ－０４９９１５３２、ＴＴＰ－３９９（ＧＫ１－３９９）、ＧＫＭ－００１（ＡＤＶ－１００２４０１）、ＡＲＲＹ－４０３（ＡＭＧ－１５１）、ＴＡＫ－３２９、ＴＭＧ－１２３、ＺＹＧＫ１）；
－ ジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）の阻害剤（例えば、プラジガスタット（ＬＣＱ－９０８））、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤（例えば、トロズスクエミン）、グルコース－６－ホスファターゼの阻害剤、フルクトース－１，６－ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤；
－ グルコーストランスポーター－４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト（例えば、ＭＫ－４２５６）；
－ １種またはそれ以上の脂質低下剤も組合せパートナーとして好適であり、例えば：
３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル－コエンザイム－Ａ－レダクターゼ（ＨＭＧ－ＣｏＡ－レダクターゼ）阻害剤、例えば、シンバスタチン（例えば、Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｉｎｅｇｙ（登録商標）、Ｓｉｍｃｏｒ（登録商標））、アトルバスタチン（例えば、Ｓｏｒｔｉｓ（登録商標）、Ｃａｄｕｅｔ（登録商標））、ロスバスタチン（例えば、Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標））、プラバスタチン（例えば、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標）、Ｓｅｌｉｐｒａｎ（登録商標））、フルバスタチン（例えば、Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ピタバスタチン（例えば、Ｌｉｖａｚｏ（登録商標）、Ｌｉｖａｌｏ（登録商標））、ロバスタチン（例えば、Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標）、Ａｄｖｉｃｏｒ（登録商標））、メバスタチン（例えば、Ｃｏｍｐａｃｔｉｎ（登録商標））、リバスタチン、セリバスタチン（Ｌｉｐｏｂａｙ（登録商標））、フィブレート、例えば、ベザフィブレート（例えば、Ｃｅｄｕｒ（登録商標）ｒｅｔａｒｄ）、シプロフィブレート（例えば、Ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｎ（登録商標））、フェノフィブレート（例えば、Ａｎｔａｒａ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｎ（登録商標）、Ｌｉｐａｎｔｈｙｌ（登録商標））、ゲンフィブロジル（例えば、Ｌｏｐｉｄ（登録商標）、Ｇｅｖｉｌｏｎ（登録商標））、エトフィブレート、シンフィブレート、ロニフィブレート、クリノフィブレート、クロフィブリド、ニコチン酸およびその誘導体（例えば、ナイアシン、例えば、ナイアシンの徐放性製剤など）、ニコチン酸受容体１アゴニスト（例えば、ＧＳＫ－２５６０７３）、ＰＰＡＲ－デルタアゴニスト、アセチル－ＣｏＡ－アセチルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤（例えば、アバシミベ）、コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ、Ｅｚｅｔｒｏｌ（登録商標）、Ｚｅｔｉａ（登録商標）、Ｌｉｐｔｒｕｚｅｔ（登録商標）、Ｖｙｔｏｒｉｎ（登録商標）、Ｓ－５５６９７１）、胆汁酸結合物質（例えば、コレスチラミン、コレセベラム）、回腸胆汁酸トランスポート（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ－２３３０６７２、ＬＵＭ－００２）、ミクロソーマールトリグリセリド移転タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤（例えば、ロミタピド（ＡＥＧＲ－７３３）、ＳＬｘ－４０９０、グラノタピド）、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）のモジュレーター（例えば、アリロクマブ（ＲＥＧＮ７２７／ＳＡＲ２３６５５３）、ＡＭＧ－１４５、ＬＧＴ－２０９、ＰＦ－０４９５０６１５、ＭＰＳＫ３１６９Ａ、ＬＹ３０１５０１４、ＡＬＤ－３０６、ＡＬＮ－ＰＣＳ、ＢＭＳ－９６２４７６、ＳＰＣ５００１、ＩＳＩＳ－３９４８１４、１Ｂ２０、ＬＧＴ－２１０、１Ｄ０５、ＢＭＳ－ＰＣＳＫ９Ｒｘ－２、ＳＸ－ＰＣＫ９、ＲＧ７６５２）、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター、例えば、肝臓選択性甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニス（例えば、エプロチローム（ＫＢ－２１１５）、ＭＢ０７８１１、ソベチロム（ＱＲＸ－４３１）、ＶＩＡ－３１９６、ＺＹＴ１）、ＨＤＬ－上昇化合物（ＨＤＬ－ｒａｉｓｉｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば：コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤（例えば、アナセトラピブ（ＭＫ０８５９）、ダルセトラピブ、エバセトラピブ、ＪＴＴ－３０２、ＤＲＬ－１７８２２、ＴＡ－８９９５、Ｒ－１６５８、ＬＹ－２４８４５９５、ＤＳ－１４４２）、または二重ＣＥＴＰ／ＰＣＳＫ９阻害剤（例えばＫ－３１２）、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ１）レギュレーター、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ－８２３７７８、ＴＡＰ－３０１、ＤＲＬ－２１９９４、ＤＲＬ－２１９９５）、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）阻害剤（例えば、ダラプラディブ、Ｔｙｒｉｓａ（登録商標）、バレスプラジブ、リラプラジブ）、ＡｐｏＡ－Ｉエンハンサー（例えば、ＲＶＸ－２０８、ＣＥＲ－００１、ＭＤＣＯ－２１６、ＣＳＬ－１１２）、コレステロール合成阻害剤（例えば、ＥＴＣ－１００２）、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ－８２３７７８、ＴＡＰ－３０１、ＤＲＬ－２１９９４、ＤＲＬ－２１９９５）、およびオメガ－３脂肪酸およびその誘導体（例えば、イコサペント酸エチル（ＡＭＲ１０１）、Ｅｐａｎｏｖａ（登録商標）、ＡＫＲ－０６３、ＮＫＰＬ－６６、ＰＲＣ－４０１６、ＣＡＴ－２００３）；
－ ブロモクリプチン（例えば、Ｃｙｃｌｏｓｅｔ（登録商標）、Ｐａｒｌｏｄｅｌ（登録商標））、フェンテルミンおよびフェンテルミン処方物または組合せ（例えば、Ａｄｉｐｅｘ－Ｐ、Ｉｏｎａｍｉｎ、Ｑｓｙｍｉａ（登録商標））、ベンズフェタミン（例えば、Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、ジエチルプロピオン（例えば、Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フェンジメトラジン（例えば、Ａｄｉｐｏｓｔ（登録商標）、Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標））、ブプロピオンおよび組合せ（例えば、Ｚｙｂａｎ（登録商標）、Ｗｅｌｌｂｕｔｒｉｎ ＸＬ（登録商標）、Ｃｏｎｔｒａｖｅ（登録商標）、Ｅｍｐａｔｉｃ（登録商標））、シブトラミン（例えば、Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（登録商標）、Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標））、トピラマート（例えば、Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標））、ゾニサミド（例えば、Ｚｏｎｅｇｒａｎ（登録商標））、テソフェンシン、オピオイドアンタゴニスト、例えば、ナルトレキソン（例えば、Ｎａｌｔｒｅｘｉｎ（登録商標）、ナルトレキソン＋ブプロピオン）、カンナビノイド受容体１（ＣＢ１）アンタゴニスト（例えば、ＴＭ－３８８３７）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ－１）アンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ－８３０２１６、ＡＬＢ－１２７１５８（ａ））、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト（例えば、ＡＺＤ－２８２０、ＲＭ－４９３）、ニューロペプチドＹ５（ＮＰＹ５）またはＮＰＹ２アンタゴニスト（例えば、ベルネペリト、Ｓ－２３４４６２）、ＮＰＹ４アゴニスト（例えば、ＰＰ－１４２０）、ベータ－３－アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５－ヒドロキシトリプタミン２ｃ（５ＨＴ２ｃ）受容体のアゴニスト（例えば、ロルカセリン、Ｂｅｌｖｉｑ（登録商標））、プラムリンチド／メトレレプチン、リパーゼ阻害剤、例えば、セチリスタット（例えば、Ｃａｍｅｔｏｒ（登録商標））、オルリスタット（例えば、Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標）、Ｃａｌｏｂａｌｉｎ（登録商標））、血管新生阻害剤（例えば、ＡＬＳ－Ｌ１０２３）、ベータヒスチジンおよびヒスタミンＨ３アンタゴニスト（例えば、ＨＰＰ－４０４）、ＡｇＲＰ（アグーチ関連タンパク質）阻害剤（例えば、ＴＴＰ－４３５）、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチン（例えば、Ｆｌｕｃｔｉｎｅ（登録商標））、ジュロキセチン（例えば、Ｃｙｍｂａｌｔａ（登録商標））、二重または三重モノアミン取り込み阻害剤（ドーパミン、ノルエピネフリン、およびセロトニン再取り込み）、例えば、セルトラリン（例えば、Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））、テソフェンシン、メチオニンアミノペプチダーゼ－２（ＭｅｔＡＰ２）阻害剤（例えば、ベロラニブ）、および線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＩＳＩＳ－ＦＧＦＲ４Ｒｘ）またはプロヒビチン標的指向性ペプチド－１（例えば、Ａｄｉｐｏｔｉｄｅ（登録商標））；
－ 硝酸オキシド供与体、ＡＴ１アンタゴニストまたはアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ２）受容体アンタゴニスト、例えば、テルミサルタン（例えば、Ｋｉｎｚａｌ（登録商標）、Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））、カンデサルタン（例えば、Ａｔａｃａｎｄ（登録商標）、Ｂｌｏｐｒｅｓｓ（登録商標））、バルサルタ（例えば、Ｄｉｏｖａｎ（登録商標）、Ｃｏ－Ｄｉｏｖａｎ（登録商標））、ロサルタン（例えば、Ｃｏｓａａｒ（登録商標））、エプロサルタン（例えば、Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標））、イルベサルタン（例えば、Ａｐｒｏｖｅｌ（登録商標）、ＣｏＡｐｒｏｖｅｌ（登録商標））、オルメサルタン（例えば、Ｖｏｔｕｍ（登録商標）、Ｏｌｍｅｔｅｃ（登録商標））、タソサルタン、アジルサルタン（例えば、Ｅｄａｒｂｉ（登録商標））、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（二重ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ－２活性剤、レニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体（ＥＴ１／ＥＴＡ）遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ遮断薬、アルファ－２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ遮断薬、混合アルファ／ベータ遮断薬、カルシウムアンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、カルシウムチャネル遮断薬ジルチアゼムの経鼻剤（例えば、ＣＰ－４０４）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、例えば、ネプリリシンＡＣＥ阻害剤またはネプリリシン－ＥＣＥ阻害剤、二重作用性ＡＴ受容体－ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／ＥＴＡアンタゴニスト、終末糖化産物（ＡＧＥ）分解剤、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、例えば、抗ＲＡＡＳ（レニン－アンジオテンシン－アルドステロン－システム）ワクチン、ＡＴ１－またはＡＴ２－ワクチンなど、高血圧症ファーマコゲノミクスに基づく薬物、例えば、抗高血圧応答を有する遺伝的多型のモジュレーター、栓球凝集抑制因子、および他のものまたはそれらの組合せが好適である。

本明細書において使用される場合、用語「部品のキット（簡潔に：キット）」は、１つまたはそれ以上の容器と、場合によりデータ媒体とを含む製品を指す。前記１つまたはそれ以上の容器は、本発明の上述の薬剤、例えば、融合タンパク質、医薬組成物、および関連する薬剤、例えば、核酸分子および宿主細胞のうちの１つまたはそれ以上を充填することができる。キットには、例えば、希釈剤、緩衝剤、およびさらなる試薬を収容する追加の容器を含ませてもよい。前記データ媒体は、非電子的データ媒体、例えば、グラフィックデータ媒体、例えば、情報リーフレット、情報シート、バーコードもしくはアクセスコード、または電子的データ媒体、例えば、コンパクトディスク（ＣＤ）、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）、マイクロチップ、もしくは別の半導体ベースの電子的データ媒体である。アクセスコードは、データベース、例えば、インターネットデータベース、集中データベース、分散データベースなどへのアクセスの可能にする。前記データ媒体は、本発明の薬剤、例えば、融合タンパク質、医薬組成物および本明細書において説明される核酸分子および宿主細胞のような関連の薬剤の使用のための取扱説明書を含んでもよい。

本明細書において説明される薬剤および組成物は、任意の従来の経路、例えば、経口、経肺、吸入によって、または注射もしくは注入による非経口において投与することができる。一実施形態において、非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、皮内、または筋肉内において使用される。本明細書において説明される薬剤および組成物は、徐放性投与によって投与することもできる。

非経口投与にとって好適な医薬組成物は、通常、活性化合物の滅菌水性または非水性調製物を含み、これらは、場合により、レシピエントの血液に対して等張である。適合性の担体／溶媒／希釈剤の例は、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、静菌性生理食塩水（例えば、０．９％ベンジルアルコールを含有する生理食塩水）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、およびハンクス液である。さらに、通常、滅菌の不揮発性油も、溶液または懸濁液媒体として使用することができる。

本明細書において説明される薬剤および組成物は、通常、治療有効量において投与される。「治療有効量」は、場合により、許容できない副作用を引き起こすことなく、単独でまたはさらなる用量と一緒に、所望の治療反応または所望の治療効果を達成する量を指す。特定の疾患または特定の状態の治療の場合、所望の反応は、疾患の経過の阻害に関する。これは、疾患の進行を減速させること、および、特に疾患の進行を中断または逆転させることを含む。疾患または状態の治療における所望の反応は、前記疾患または状態の発生の遅延または発生の予防であってもよい。本明細書において説明される薬剤および組成物の有効量は、治療される状態、疾患の重篤度、対象の個々のパラメータ、例えば、年齢、生理的条件、サイズ、および体重など、治療の持続期間、付随する療法のタイプ（存在する場合）、投与の特定の経路、ならびに同様の因子に依存するであろう。したがって、本明細書において説明される薬剤の投与される用量は、様々なそのようなパラメータに依存する。対象における反応が、初回用量において十分でない場合、より多い用量（または、別のより局所的経路の投与によって効果的に達成される、より多い用量）を使用することもできる。

本発明によると、用語「疾患または障害」は、任意の病理学的状態または不健康な状態、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症を指す。

用語「肥満」は、健康に負の影響を有し得る程度にまで過剰な体脂肪が蓄積された医学的状態を指す。ヒト（成人）対象に関して、肥満は、３０ｋｇ／ｍ^２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）（ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ^２）として定義することができる。

用語「太り過ぎ」は、体脂肪の量が、最適に健康である量を超えている医学的状態を指す。ヒト（成人）対象に関して、肥満は、２５ｋｇ／ｍ^２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）（例えば、２５ｋｇ／ｍ^２≦ＢＭＩ＜３０ｋｇ／ｍ^２）として定義することができる。

ＢＭＩは、成人において太り過ぎおよび肥満を分類するために一般的に使用される身長体重比の単純な指標である。それは、キログラムで表した人の体重をメートルで表したその人の身長の二乗で割ったものとして定義される（ｋｇ／ｍ^２）。

「メタボリック症候群」は、以下の医学的状態のうちの少なくとも３つのクラスタリングとして定義することができる：腹部（中心性）肥満（例えば、コーカソイドの男性の場合には胴回り≧９４ｃｍおよびコーカソイドの女性の場合は≧８０ｃｍ、他の群に関しては民族的特有の値を有すると定義）、高い血圧（例えば、１３０／８５ｍｍＨｇ以上）、高い空腹時血漿グルコース（例えば、少なくとも１００ｍｇ／ｄＬ）、高い血清トリグリセリド（少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬＥ）、および低い高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）レベル（例えば、男性の場合には４０ｍｇ／ｄＬ未満および女の場合は５０ｍｇ／ｄＬ未満）。

「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）」（単に「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）」とも呼ばれる）は、インスリン産生、インスリン作用、またはその両方における欠陥から結果として生じる血中グルコースの高濃度によって特徴付けられる代謝病の群を指す。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、緩徐発症成人自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、ならびに特定の遺伝的条件、薬物、栄養不良、感染症、および他の病気からの結果として生じる他のタイプの糖尿病からなる群から選択される。

糖尿病の現在のＷＨＯ診断基準は以下の通りである：空腹時血漿グルコース≧７．０ｍｍｏｌ／ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）または２時間血漿グルコース≧１１．１ｍｍｏｌ／ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）。

「１型糖尿病」（「インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）」または「若年性糖尿病」としても知られる）は、インスリンの完全な欠乏によって引き起こされる高い血中グルコース濃度によって特徴付けられる状態である。これは、体の免疫システムが、膵臓におけるインスリンを産生するベータ細胞を攻撃し、それらを破壊する場合に生じる。膵臓は、インスリンを少ししか、または全く産生しない。膵臓除去または膵疾患も、インスリンを産生するベータ細胞の欠乏を生じ得る。１型糖尿病は、糖尿病の症例の５％から１０％の間を占める。

「２型糖尿病」（「インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」または「成人発症型糖尿病」としても知られる）は、インスリンの可用性に関わらない過剰なグルコース産生と、不十分なグルコースクリアランス（インスリン作用）の結果として過度に高いレベルのままにグルコースレベルが循環することによって特徴付けられる状態である。２型糖尿病は、糖尿病の全ての診断症例の約９０から９５％を占める。

「妊娠性糖尿病」は、それ以前に糖尿病と診断されていない女性が、妊娠中（特に妊娠第三期）に高い血中グルコースレベルを示す状態である。妊娠性糖尿病は、調査された集団に応じて、妊娠の３～１０％に影響する。

「緩徐発症成人自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）」（「遅発性１型糖尿病」とも呼ばれる）は、成人において生じる、多くの場合において発症の経過がより遅い、１型糖尿病の形態である。

「若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）」は、インスリン産生を妨害する常染色体優性遺伝子における変異によって引き起こされる、糖尿病の遺伝子型を指す。

「糖尿病性網膜症」は、糖尿病患者に生じる代謝の乱れによって誘発される眼疾患であり、視力の進行性喪失へ導く。

用語「高血糖」は、血液中の過剰な糖（グルコース）を指す。

用語「異常脂血症」は、リポタンパク質の過剰産生（高脂肪血症）または欠乏（低脂血症）を含む、リポタンパク質代謝の障害を指す。異常脂血症は、血中の総コレステロール、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールおよび／もしくはトリグリセリド濃度の上昇、ならびに／または高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール濃度の減少によって明らかにされる。

非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝細胞の炎症および変性を伴う、脂肪の蓄積（脂肪滴）によって特徴付けられる肝臓疾患である。一度罹患すると、この疾患は、肝臓機能が変化して肝不全へと進行し得る状態である、肝硬変の高リスクを伴う。その後、ＮＡＳＨは、多くの場合、肝臓がんへと進行する。

「アテローム性動脈硬化症」は、動脈内腔の狭窄を引き起こして線維症および石灰化へと進行し得る、大動脈および中動脈の血管内膜におけるプラークと呼ばれる不規則に分布する脂質沈着によって特徴付けられる血管疾患である。病巣は、通常、限局性であり、ゆっくりと断続的に進行する。時折、血流障害を生じ、その結果として、閉塞に対して末梢側の組織死を引き起こす、プラークの破裂を生じる。血流の制限は、ほとんどの臨床徴候の主要因であり、これは、閉塞の分布および重篤度によって変わる。

用語「医薬」は、本明細書において使用される場合、治療法において、すなわち、疾患および障害の治療において使用される、物質／組成物を指す。

「治療」は、対象における疾患または障害を予防、改善または除去するため；対象の疾患および障害を停止または鈍化させるため；対象における新たな疾患または障害の発生を阻害または鈍化させるため；現在または以前に疾患または障害を有している対象における症状の頻度もしくは重篤度および／または再発を減少させるため；および／または、対象の寿命を延長、すなわち増加させるために、化合物もしくは組成物または化合物もしくは組成物の組合せを対象に投与することを意味する。

特に、「疾患または障害を治療すること」および「疾患または障害の治療」という語句は、治癒、期間の短縮、改善、予防、進行または悪化の鈍化または阻害、または疾患もしくは障害もしくはそれらの症状の発症を予防または遅延させることを包含する。

用語「対象」は、本明細書において、治療のための対象、特に、ヒト、非ヒト霊長類、または他の動物、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、またはげっ歯類（例えば、マウス、ラット、モルモット、もしくはハムスター）などを含むがこれらに限定されない、罹患した対象（「患者」とも呼ばれる）を指す。一実施形態において、対象または患者は、ヒトである。

そこで、説明をするが、本発明の範囲を限定することは意図していない以下の実施例を参照することによって本発明をさらに説明する。

システム薬理学モデリングによる最適なＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１活性比の決定
ヒトにおけるＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質の薬理学的効果への改善された機械論的洞察を使用して、最適なＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１効力比を特定した。機械論的システム薬理学モデルを開発し、ＧＬＰ－１およびＦＧＦ２１のヒトにおけるグルコース、脂質およびエネルギー代謝に対する効果を説明した（Ｃｕｅｖａｓ－Ｒａｍｏｓら（２００９）Ｃｕｒｒ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｖ ５（４）：２１６－２２０；Ｄｅａｃｏｎら（２０１１）Ｒｅｖ Ｄｉａｂｅｔ Ｓｔｕｄ ８（３）：２９３－３０６；Ｋｉｍら（２００８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ６０（４）：４７０－５１２；Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら（２０１４）Ｍｏｌ Ｍｅｔａｂ ３（３）：２２１－２２９）。

このモデルは、ＧＬＰ－１およびＦＧＦ２１の効果について関連する経路を表した。血糖コントロール（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、空腹時血漿グルコース、食後血糖値）、脂質パラメータ（すなわち、血漿トリグリセリド、脂肪酸、コレステロール）およびエネルギーバランス（すなわち、体重、食物摂取、エネルギー消費）を獲得して、模擬薬物治療（例えば、ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質、リラグルチド、ＦＧＦ２１類似体ＬＹ２４０５３１９）に対する治療奏功を評価した。ＬＹ２４０５３１９については、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら（２０１３）ＰＬｏＳ ＯＮＥ８（３）：ｅ５８５７５を参照されたい。

このモデルは、ホルモンインスリン、グルカゴンおよびある特定のインクレチン（例えば、ＧＬＰ－１、ＧＩＰ）によって制御されるグルコースホメオスタシスの重要な態様を網羅した。血糖コントロールに関する主要モデルエンドポイントは、ＨｂＡ１ｃであったが、これは、先の数ヶ月にわたる平均血漿グルコース濃度を推定するために使用される共通の臨床エンドポイントである。ＨｂＡ１ｃは、Ｎａｔｈａｎら（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ３１（８）：１４７３－１４７８によって報告されたように、平均血漿グルコースとＨｂＡ１ｃとの間位の線形的相関を使用してモデルにおいて推定した。

このモデルは、コレステロールの提示を含む基本的脂質代謝を扱うのに適したレベルで、トリグリセリドおよび脂肪酸代謝を組み入れた。ＨＤＬおよび非ＨＤＬ、すなわち、ＬＤＬ＋ＶＬＤＬコレステロールは、循環しているリポタンパク質である。脂質代謝の提示は、ＦＧＦ２１化合物の、脂質およびスタチンとの相互作用に与える影響をシミュレートすることを可能にした。ＦＧＦ２１化合物は、脂質濃度に著しい効果を有した（Ｇａｉｃｈら（２０１３）Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ１８（３）：３３３－３４０；Ｆｉｓｈｅｒら（２０１１）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１５２（８）：２９９６－３００４）。

このモデルにおける体重減少または体重増加は、体脂肪量の変化として測定した。脂肪量と体重との間に直接的な関係性があった（Ｂｒｏｙｌｅｓら（２０１１）Ｂｒ Ｊ Ｎｕｔｒ １０５（８）：１２７２－１２７６）。食物摂取は、基礎および安静時代謝率に基づいた（Ａｍｉｒｋａｌａｌｉら（２００８）Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ６２（７）：２８３－２９０）。エネルギー消費がカロリー摂取と等しい場合、体脂肪量は、一定を維持した。食物摂取に対する治療効果は、Ｇｏｂｅｌら（２０１４）（Ｏｂｅｓｉｔｙ（Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ）２２（１０）：２１０５－２１０８）の式を使用して、モデルに実行した。

食物は、炭水化物（グルコース等価物）、脂肪（脂肪酸等価物）およびタンパク質（アミノ酸等価物）であると考えた。全ての栄養が胃に入り、遅延ノードを通過し、その後、３区画の消化管に入った。消化管の設計は、食物消化および吸収に関して、Ｂａｓｔｉａｎｅｌｌｉら（１９９６）Ｊ Ａｎｉｍ Ｓｃｉ ７４（８）：１８７３－１８８７；Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ（１９９７）Ｍｅｄ Ｉｎｆｏｒｍ（Ｌｏｎｄ）２２（１）：３５－４５）によってなされた仕事に基づいた。

栄養、ホルモン、薬物および疾患状態は、胃排出の遅延を生じさせる可能性がある。健康状態下で、胃排出率は、食事の量、そのエネルギー密度および胃における栄養量（Ａｃｈｏｕｒら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ５５（９）：７６９－７７２；Ｆｏｕｉｌｌｅｔら（２００９）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｇｕｌ Ｉｎｔｅｇｒ Ｃｏｍｐ Ｐｈｙｓｉｏｌ２９７（６）：Ｒ１６９１－１７０５）に依存する。糖尿病を有する個体は、経口ブドウ糖負荷試験または食事試験（Ｂｈａｒｕｃｈａら（２００９）Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（Ｏｘｆ）７０（３）：４１５－４２０；Ｃｈａｎｇら（２０１２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ３５（１２）：２５９４－２５９６）で観察されるグルコース吸収の遅延を有することが多い。この遅延は、胃排出の減速に起因する。胃と小腸との間の移動時の遅延をこの例のモデルに加えて、糖尿病対象における胃排出の遅延を説明した。薬物およびホルモン（例えば、ＧＬＰ－１）は、胃の迷走神経緊張に影響し得、これは機械的混合および／または蠕動を減少し、胃排出も遅延させる（Ｊｅｌｓｉｎｇら（２０１２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ １４（６）：５３１－５３８；Ｌｉｔｔｌｅら（２００６）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ９１（５）：１９１６－１９２３；Ｎａｕｃｋら（２０１１）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ６０（５）：１５６１－１５６５；ｖａｎ Ｃａｎら（２０１３）Ｉｎｔ Ｊ Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３８（６）：７８４－９３）。

本明細書において記載される融合タンパク質の１つの目的は、ＧＬＰ－１関連有害作用、すなわち、吐き気および嘔吐（Ｌｅａｎら（２０１４）Ｉｎｔ Ｊ Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３８（５）：６８９－６９７）を予防するかまたは減少させることであった。胃排出測定値は、胃排出率の低さに相関する吐き気および嘔吐といった有害事象の推定を提供した。したがって、モデルにおける胃有害事象についてのマーカーは、胃排出率の和であった。

健常者および疾患の異なるステージの２型糖尿病患者を表す異なる仮想患者がモデルプラットフォームに実装された。さらに、仮想患者は、異なる程度の肥満および異常脂血症を網羅した。仮想患者は、疾患重症度の可変性ならびにクリニックにおいて観察された病態生理学的および表現型の可変性を表した。

いくつかの治療薬、すなわち、ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質、リラグルチド、ＦＧＦ２１類似体ＬＹ２４０５３１９、メトホルミン、アトルバスタチン、シタグリプチン、およびヒトインスリンがモデルにおいて実施された。これらの治療薬は、シミュレーションにおいてオンオフ切り換えすることができた。仮想患者は、ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質を投与される場合、メトホルミンおよびアトルバスタチンのバックグラウンドにあると想定された。

仮想ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質が、この実施例において記載されるモデルにおいて実施された。融合タンパク質は、ＦＧＦ２１アゴニスト活性とＧＬＰ－１アゴニスト活性の両方を含み、ＦＧＦ２１受容体アゴニストとＧＬＰ－１受容体アゴニストの両方と同じ効果を有した。仮想融合タンパク質の薬物動態特性は、デュラグルチドと同様であると想定した（Ｇｅｉｓｅｒら（２０１６）Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ５５（５）：６２５－３４）。

多くのデータセットと比較することによってモデルを検証した。シミュレーション結果は、関連データおよび知識、例えば、Ｈｅｌｌｅｒｓｔｅｉｎら（１９９７）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １００（５）：１３０５－１３１９；Ｍｕｓｃｅｌｌｉら（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５７（５）：１３４０－１３４８と定量的に一致した。モデルは、関連の定量的試験データ、例えば、Ａｓｃｈｎｅｒら（２００６）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ２９（１２）：２６３２－２６３７；Ｄａｌｌａ Ｍａｎ、Ｃａｕｍｏら（２００５）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ２８９（５）：Ｅ９０９－９１４；Ｄａｌｌａ Ｍａｎら（２００５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５４（１１）：３２６５－３２７３；Ｆｉａｌｌｏ－Ｓｃｈａｒｅｒ（２００５）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ９０（６）：３３８７－３３９１；Ｈａｈｎら（２０１１）Ｔｈｅｏｒ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ Ｍｏｄｅｌ８：１２；Ｈｅｒｍａｎら（２００５）Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ７８（６）：６７５－６８８；Ｈｅｒｍａｎら（２００６）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ４６（８）：８７６－８８６およびＪ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ９１（１１）：４６１２－４６１９；Ｈｏｊｌｕｎｄら（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ ２８０（１）：Ｅ５０－５８；Ｍｏｎａｕｎｉら（２０００）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４９（６）：９２６－９３５；Ｎａｕｃｋら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ３２（１）：８４－９０；Ｎａｕｃｋら（１９９３）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ９１（１）：３０１－３０７；Ｎａｕｃｋら（２００４）Ｒｅｇｕｌ Ｐｅｐｔ１２２（３）：２０９－２１７；Ｔｚａｍａｌｏｕｋａｓら（１９８９）Ｗｅｓｔ Ｊ Ｍｅｄ１５０（４）：４１５－４１９；Ｓｉｋａｒｉｓ（２００９）Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ３（３）：４２９－４３８；ＶｉｃｉｎｉおよびＣｏｂｅｌｌｉ（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ２８０（１）：Ｅ１７９－１８６；Ｖｏｌｌｍｅｒら（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５７（３）：６７８－６８７に適合した。

ＦＧＦ２１類似体およびＧＬＰ－１受容体アゴニストを含む既存の治療薬が直接的比較についてモデルにおいて実施された。ＦＧＦ２１類似体の効果は臨床データ、例えば、Ｇａｉｃｈら（２０１３）Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ１８（３）：３３３－３４０で検証された。ＧＬＰ－１受容体アゴニストリラグルチドは、標的について直接的な競合相手であり、その実行を様々な臨床データ、例えば、Ｊａｃｏｂｓｅｎら（２００９）Ｂｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ６８（６）：８９８－９０５；Ｅｌｂｒｏｎｄら（２００２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ２５（８）：１３９８－１４０４；Ｃｈａｎｇら（２００３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５２（７）：１７８６－１７９１；Ｋｏｌｔｅｒｍａｎら（２００３）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ８８（７）：３０８２－３０８９；Ｄｅｇｎら（２００４）Ｄｉａｂｅｔｅｓ５３（５）：１１８７－１１９４；Ｋｏｌｔｅｒｍａｎら（２００５）Ａｍ Ｊ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔ Ｐｈａｒｍ６２（２）：１７３－１８１；Ｖｉｌｓｂｏｌｌら（２００８）Ｄｉａｂｅｔ Ｍｅｄ２５（２）：１５２－１５６；Ｂｕｓｅら（２００９）Ｌａｎｃｅｔ３７４（９６８３）：３９－４７；Ｊｅｌｓｉｎｇら（２０１２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ１４（６）：５３１－５３８；Ｈｅｒｍａｎｓｅｎら（２０１３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ１５（１１）：１０４０－１０４８；Ｓｕｚｕｋｉら（２０１３）Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ５２（１０）：１０２９－１０３４；ｖａｎ Ｃａｎら（２０１３）Ｉｎｔ Ｊ Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３８（６）：７８４－９３；Ｚｉｎｍａｎら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ３２（７）：１２２４－１２３０；Ｒｕｓｓｅｌｌ－Ｊｏｎｅｓら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ５２（１０）：２０４６－２０５５；Ｐｒａｔｌｅｙら（２０１１）Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ６５（４）：３９７－４０７；Ｎａｕｃｋら（２０１３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ１５（３）：２０４－２１２；Ｆｌｉｎｔら（２０１１）Ａｄｖ Ｔｈｅｒ２８（３）：２１３－２２６；Ｋａｐｉｔｚａら（２０１１）Ａｄｖ Ｔｈｅｒ２８（８）：６５０－６６０；およびＡｓｔｒｕｐら（２０１２）Ｉｎｔ Ｊ Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３６（６）：８４３－８５４に記載されたデータと比較した。

モデルプラットフォームは、活性比を変化させて、仮想ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質の利益的および有害作用のシミュレーションを可能にした。有効ＦＧＦ２１媒介性ＥＣ５０値には、Ｇａｉｃｈら（２０１３）Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ１８（３）：３３３－３４０に由来するものに対する定数を設定した。有効ＧＬＰ－１媒介性ＥＣ５０値は、内在ＧＬＰ－１（表１）に関して、１つ増加の２～６００の因子によって減少した。

仮想融合タンパク質のそれぞれについて、関連の薬力学的エンドポイント、すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬコレステロールおよび脂肪量について、暴露－奏功の関係をシミュレートした。ＧＬＰ－１媒介性有害事象についてのマーカーとして、胃排出率を使用した。平均的な肥満異常脂血症の２型糖尿病の仮想患者に対するＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質による５２週間の治療を幅の広い用量範囲でシミュレートした。５２週間の処置後、全ての関連の薬力学的エンドポイントが定常状態に到達することを予想した。それぞれのエンドポイントについて、最大半量効果濃度（ＥＣ５０値）を暴露－奏功曲線から決定した。ＥＣ５０値は、特に主にＧＬＰ－１媒介性エンドポイントであるＨｂＡ１ｃおよび胃排出率について、活性比で変化した。図１は、ＧＬＰ－１減衰率に依存するＥＣ５０値を記載する。ＧＬＰ－１減衰率の増加は、ＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性の減少を示した。

この手順は、薬力学的作用を媒介した血漿レベルに比べてより高い血漿レベルで有害作用が観察される、関連する活性比の特定を可能にした。９より高いＧＬＰ－１減衰率について、ＧＬＰ－１媒介性消化管有害作用のＥＣ５０のほうが薬力学的作用のＥＣ５０より高かった。したがって、胃の有害作用は、薬力学的作用を達成するために必要なレベルよりも高い血漿レベルで生じた。ＧＬＰ－１媒介性消化管有害作用を回避しながら、全ての望ましい薬力学的作用を提供する用量を解明することが可能であった。

胃排出率についての最大ＥＣ５０値は、減衰率５３１で到達した。有害作用と平均薬力学的作用との間の最大距離は、減衰率４８２で到達した（図２）。したがって、１：４８２以上の活性比は、関係しなかった。薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用との間の最大距離は、３１９であった。ＦＧＦ２１－（脂質）およびＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）の展開によって正規化された薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用との間の最大距離は、１２１であった。

１：１０～１：４８２の間の効力比を有するＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質は、脂質特性、体重およびグルコース代謝を改善するのに最も有益であると予測され、胃排出反応に基づく著しい有害事象を発生する見込みはなかった。より低い効力比は、それらの予想される胃排出の強力な抑制および有害事象の潜在性に基づいて、良好な候補になりそうになかった。より高い効力比は、充分に効果的ではない可能性があり、したがって競合的ではない可能性が高いと考えられた。

平均的な肥満異常脂血症の２型糖尿病の仮想患者に対するＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質による１２週間の治療は、主にＧＬＰ－１媒介性パラメータＨｂＡ１ｃレベルが、当該技術分野において公知のＧＬＰ－１受容体アゴニストおよびＦＧＦ２１剤での１２週間の治療後に定常状態に臨床的に到達するため、幅の広い投与範囲でシミュレートしなかった。

図３は、１２週間のシミュレーション期間にわたるＧＬＰ－１減衰に対して得られたＥＣ５０値を示す。１８より高いＧＬＰ－１減衰率について、ＧＬＰ－１媒介性消化管有害作用のＥＣ５０のほうが薬力学的作用のＥＣ５０より高かった。胃排出率についての最大ＥＣ５０値は、減衰率５０１で到達した。有害作用と平均の薬力学的作用との間の最大距離は、減衰率４６９で到達した（図４）。薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用との間の最大距離は、３１３であった。ＦＧＦ２１－（脂質）およびＧＬＰ－１媒介性作用（ＨｂＡ１ｃ）の展開によって正規化された薬力学（ＨｂＡ１ｃ）の最大と有害作用との間の最大距離は、１２３であった。

異なる活性比を有するＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質についての有害事象の効能および潜在能を記載のシステム薬理学アプローチによって調査した。おそらく計算された理想的な効力比を有する融合タンパク質が、同定され、胃排出反応に基づく著しく有害なＧＬＰ－１ＲＡ関連作用を発生しない可能性のある状態で、脂質特性、体重および血糖コントロールを改善するのに有益であると予測された。選択したモデルが知らせる効力比を有する化合物がリスク特性に対する良好な効能を提供することを予測した。

ＨＥＫ－２９３、ＣＨＯ、および大腸菌細胞におけるホモ二量体ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質の発現、ならびに単離されたＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドの化学合成
ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質を、ＨＥＫ－２９３またはＣＨＯ細胞における一過性トランスフェクションによって産生した。融合タンパク質のＤＮＡ配列を、Ｎ末端でＩＬ２シグナル配列（配列番号２４６）に融合させ、続いて、ヒスチジンリッチな配列（Ｈｉｓタグ）およびＴＥＶプロテアーゼ切断部位（配列番号２４７または２４８）に融合させた。シグナル配列は、培養培地への所望のタンパク質の分泌に必要であった。タンパク質を、固定化金属イオン親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）（ｃＯｍｐｌｅｔｅ Ｈｉｓ－Ｔａｇ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎ（商標）、Ｒｏｃｈｅ）を使用して、培養上清から精製した。ＩＭＡＣカラムからの溶出後、場合により、Ｎ末端Ｈｉｓタグを、ＴＥＶプロテアーゼの添加によって切断した。Ｈｉｓタグ切断後、切断反応溶液を、ＩＭＡＣカラム（ｃＯｍｐｌｅｔｅ Ｈｉｓ－Ｔａｇ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎ（商標）、Ｒｏｃｈｅ）上に２回通過させ、（Ｈｉｓタグを有さない）フロースルー分画を収集した。タンパク質を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー（ｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）および泳動緩衝液としてリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）を用いたゲルろ過カラムを使用して、さらに精製した。所望のタンパク質を含有する分画を収集し、プールし、濃縮して、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。

配列番号２５２のＦＧＦ２１タンパク質（Ｎ末端Ｇｌｙの付加を有する成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１、本明細書においてＧ－ＦＧＦ２１と称される）を、大腸菌において発現させた。ＦＧＦ２１タンパク質のＤＮＡ配列を、Ｎ末端でヒスチジンリッチ配列（Ｈｉｓタグ）およびＴＥＶまたはＳＵＭＯプロテアーゼ切断部位（配列番号２４８または２４９）に融合させた。所望されるタンパク質を、固定化金属イオン親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）（ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、続いてＴＥＶまたはＳＵＭＯプロテアーゼの添加によりＮ末端Ｈｉｓタグを切断した。Ｈｉｓタグの切断後、切断反応溶液を、イオン交換カラム（Ｓｏｕｒｃｅ １５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、続いて泳動緩衝液としてリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）を用いたゲルろ過カラム（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、精製した。所望のタンパク質を含有する分画を収集し、プールし、濃縮して、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。

代替的なアプローチにおいて、融合タンパク質は、大腸菌封入体における発現、続いて、Ｔｒｉｓ緩衝塩化グアニジウム溶液において封入体をアンフォールディングし、カオトロピック塩なしで緩衝液に希釈することによるリフォールディングによってフォールディングされた融合タンパク質を得るリフォールディングステップによって、産生した。融合タンパク質は、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、続いてＴＥＶプロテアーゼの添加によりＮ末端前配列を切断した。切断反応溶液を、アニオン交換カラム（ＰＯＲＯＳ ５０ ＨＱ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して精製した。所望されるタンパク質を含有する分画を収集し、プールした。最終的な緩衝液条件およびタンパク質濃度を、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を使用した限外ろ過／透析ろ過ステップによって構築した。試料を、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。

融合タンパク質を遺伝子組換え方法（上記を参照のこと）によって産生した一方で、単離されたペプチドＧＬＰ－１Ｒアゴニストを、化学合成した。

より詳細には、ペプチドを、以下の手動の合成手順を使用して合成した：
０．３ｇの乾燥ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（０．６６ｍｍｏｌ／ｇ）を、ポリプロピレンフィルタを備えたポリエチレン容器内に置いた。樹脂は、ＤＣＭ（１５ｍｌ）にて１時間、ＤＭＦ（１５ｍｌ）にて１時間膨張した。樹脂のＦｍｏｃ基は、２０％（ｖ／ｖ）のピペリジン／ＤＭＦ溶液で５分および１５分間、２回処理することによって脱保護した。樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。固形支持体からのＦｍｏｃ除去の配座に、カイザー試験（定量的方法）を使用した。乾燥ＤＭＦ中のＣ末端Ｆｍｏｃアミノ酸（樹脂負荷に対応する５等量の余剰）を脱保護された樹脂に添加し、次のＦｍｏｃアミノ酸のカップリングをＤＭＦ中のＤＩＣおよびＨＯＢＴの５等量の余剰で開始させた。反応混合物における各反応物の濃度は約０．４Ｍであった。混合物は、室温で２時間、ローターで回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。カップリング完了時にペプチド樹脂アリコートに行ったカイザー試験は、陰性であった（樹脂に色がなかった）。第１のアミノ酸の付着後、無反応のアミノ基は、存在する場合、樹脂の中で、無水酢酸／ピリジン／ＤＣＭ（１：８：８）を使用して、２０分間キャップして、配列の任意の欠失を回避した。キャッピング後、ＤＣＭ／ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで樹脂を洗浄した（各６／６／６／６時間）。Ｃ末端のアミノ酸付着ペプチジル樹脂のＦｍｏｃ基は、２０％（ｖ／ｖ）のピペリジン／ＤＭＦ溶液で５分および１５分間、２回処理することによって脱保護した。樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。Ｆｍｏｃ脱保護完了時のペプチド樹脂アリコートに行ったカイザー試験は、陽性であった。

ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂上の標的配列における残りのアミノ酸は、ＤＭＦ中の樹脂負荷に対応する５等量の余剰を使用して、Ｆｍｏｃ ＡＡ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔ方法を使用して、順次結合させた。反応混合物における各反応物の濃度は約０．４Ｍであった。混合物は、室温で２時間、ローターで回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。各カップリングステップおよびＦｍｏｃ脱保護ステップの後、カイザー試験を実施して、反応の完全性を確認した。

線形配列の完成後、分枝点または修飾点として使用されるリジンのε－アミノ基は、ＤＭＦ中の２．５％のヒドラジン水和物を使用することによって、１５分間を２回、脱保護し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔ方法（樹脂負荷に対して、５等量の余剰を使用）によるＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯＨ）－ＯｔＢｕを使用して、グルタミン酸のγ－カルボキシル末端をＬｙｓのε－アミノ基に付着させた。混合物は、室温で２時間、ローターで回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６×３０ｍＬ）。グルタミン酸のＦｍｏｃ基は、２０％（ｖ／ｖ）のピペリジン／ＤＭＦ溶液で５分および１５分間（各２５ｍＬ）、２回処理することによって脱保護した。樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。Ｆｍｏｃ脱保護完了時のペプチド樹脂アリコートのカイザー試験は、陽性であった。

側鎖分枝がさらに１つのγ－グルタミン酸も含んでいた場合、ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔ方法（樹脂負荷に対して、５等量の余剰）を使用して、γ－グルタミン酸の遊離アミノ基に付着させるために、第２のＦｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯＨ）－ＯｔＢｕを使用した。混合物は、室温で２時間、ローターで回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６×３０ｍＬ）。γ－グルタミン酸のＦｍｏｃ基は、２０％（ｖ／ｖ）のピペリジン／ＤＭＦ溶液で５分および１５分間（２５ｍＬ）、２回処理することによって脱保護した。樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦで洗浄した（各６：６：６回）。Ｆｍｏｃ脱保護完了時のペプチド樹脂アリコートに行ったカイザー試験は、陽性であった。

樹脂からのペプチドの最終切断：
手動の合成によって合成したペプチジル樹脂をＤＣＭ（６×１０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（６×１０ｍＬ）およびエーテル（６×１０ｍＬ）で洗浄し、減圧デシケーターで一晩乾燥させた。固体支持体からのペプチドの切断は、ペプチド－樹脂を試薬カクテル（８０％のＴＦＡ／５％のチオアニソール／５％のフェノール／２．５％のＥＤＴ／２．５％のＤＭＳ／５％のＤＣＭ）で、室温で３時間処理することによって達成した。切断混合物はろ過によって回収し、樹脂はＴＦＡ（２ｍＬ）およびＤＣＭ（２×５ｍＬ）で洗浄した。余剰ＴＦＡおよびＤＣＭを窒素下で少量に濃縮し、少量のＤＣＭ（５～１０ｍＬ）を残留物に添加し、窒素下で蒸発させた。この工程を３～４回繰り返して、揮発性不純物の多くを除去した。残留物を０℃に冷却し、無水エーテルを添加して、ペプチドを沈殿させた。沈殿したペプチドを遠心分離にかけ、上清エーテルを除去し、新鮮なエーテルをペプチドに添加し、再び遠心分離にかけた。粗試料は分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥した。ペプチドの同一性をＬＣＭＳによって確認した。

ＣＨＯ細胞におけるヒトＦＧＦ２１受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイ（Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ）
Ｇ－ＦＧＦ２１（配列番号２５２）および本発明の融合タンパク質の細胞インビトロ有効性を、特異的な高感度のＩｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイを使用して測定した。ＩＣＷアッセイは、通常、マイクロプレート形式を使用して実施される、免疫細胞化学的アッセイである。ＦＧＦ２１受容体自己リン酸化ＩＣＷアッセイ（Ａｇｕｉｌａｒら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）： ｅ９９６５）のために、ヒトベータ－Ｋｌｏｔｈｏ（ＫＬＢ）とともにヒトＦＧＦＲ１ｃを安定して発現するＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ダルムシュタット、ドイツ）を使用した。ＭＡＰキナーゼＥＲＫ１／２の受容体自己リン酸化レベルまたは下流活性化を決定するために、２×１０^４細胞／ウェルを、９６ウェルプレートに播種し、４８時間増殖させた。細胞を、無血清培地（ＧｌｕｔａＭＡＸを伴うハムＦ－１２ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘ、Ｇｉｂｃｏ、ダルムシュタット、ドイツ）によって３～４時間、血清飢餓させた。細胞を、続いて、漸増濃度のＧ－ＦＧＦ２１（配列番号２５２）または示される融合タンパク質のいずれかによって、３７℃で５分間処理した。インキュベーション後、培地を廃棄し、細胞を、３．７％の新たに調製したパラ－ホルムアルデヒドにおいて２０分間固定させた。２０分間、ＰＢＳ中で細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を浸透させた。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、室温で２時間、ブロッキングを実施した。一次抗体として、抗ｐＦＧＦＲ Ｔｙｒ６５３／６５４（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、フランクフルト、ドイツ）または抗ｐＥＲＫホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡＰキナーゼＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を加えて、４℃で一晩インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。細胞を、次いで、二次抗マウス８００ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）とともに、室温で１時間インキュベートした。続いて、細胞を、ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で再び洗浄した。赤外色素シグナルを、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像表示装置（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により定量した。結果を、ＴＯ－ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスルーエ、ドイツ）によるＤＮＡの定量化によって正規化した。任意単位（ＡＵ）としてデータを得て、用量－応答曲線からＥＣ５０値を得た（表２および３にまとめる）。図５は、ヒトＦＧＦＲ１ｃ＋ＫＬＢを過剰発現するＣＨＯ細胞によるＩＣＷの結果を示している。

ヒトグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイ
ヒトグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体についての化合物のアゴニズムを、ヒトＧＬＰ－１受容体を安定的に発現するＨＥＫ－２９３細胞株においてｃＡＭＰ反応を測定する機能的アッセイによって決定した。

遺伝子組換えＨＥＫ－２９３細胞を、３７℃に設置したＴ１７５培養フラスコにおいて、培地（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）中でコンフルエンス近くまで増殖させ、２ｍＬのバイアルにおいて、１～５×１０^７細胞／ｍＬの濃度で、１０％ＤＭＳＯを含有する細胞培養培地中に収集した。それぞれのバイアルは、１．８ｍＬの細胞懸濁液を含有していた。バイアルを、イソプロパノールチャンバにおいて－８０℃にゆっくりと凍結させ、次いで、長期貯蔵のために液体窒素に移した。

それらの使用の前に、凍結細胞を、３７℃で迅速に解凍し、２０ｍＬの細胞緩衝液（１×ＨＢＳＳ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％ＢＳＡ）で洗浄し、９００ｒｐｍで５分間遠心分離した。細胞を、アッセイ緩衝液（細胞緩衝液＋２ｍＭ ＩＢＭＸ）中に再懸濁させ、１×１０^６細胞／ｍＬの細胞密度に調節した。測定のために、５μＬの細胞懸濁液（最終５×１０^３細胞／ウェル）および５μＬの試験化合物を、３８４ウェルプレートのウェルに添加し、続いて、室温で３０分間インキュベートした。Ｂａｃｈｅｍ（ブーベンドルフ、スイス、Ｈ－６７９５）から得たヒトＧＬＰ－１（７－３６）アミド（配列番号２６０）を、対照として得た。細胞のｃＡＭＰ含有量を、Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）に基づいて、Ｃｉｓｂｉｏ Ｃｏｒｐ．のキット（カタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＣ）を使用して決定した。溶解バッファ（キットの成分）に希釈したＨＴＲＦ試薬を添加した後、プレートを１時間インキュベートし、続いて、６６５／６２０ｎｍで蛍光比を測定した。アゴニストのインビトロ効力は、最大反応の５０％活性（ＥＣ_５０）を引き起こした濃度を決定することによって定量した。

結果を表４にまとめ、用量－応答曲線を図６に示す。

ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質の立体構造的および熱的安定性の分析
立体構造的安定性および凝集傾向を、ＵＮｉｔ（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ、カリフォルニア州、米国）を使用して、ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質について、同時に決定した。ＵＮｉｔは、タンパク質のアンフォールディングを検出するためのタンパク質の内部蛍光の分析と、凝集挙動を調査するための静的光散乱（ＳＬＳ）測定とを組み合わせたものである。

ｐＨ７．４のリン酸緩衝液において５ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤化した融合タンパク質について、データを取得した。９μＬの体積のそれぞれの試料を、ＵＮｉキャプラリーホルダにロードし、ＵＮｉｔにおいて三連に分析した。温度を、０．３℃／分の一定の線形速度で２０から９５℃に上昇させた。融解温度（Ｔｍ）および凝集発生温度（Ｔａｇｇ）を得るために、内部蛍光および２６６ｎｍのレーザーで検出したＳＬＳシグナルを示すＢａｒｙＣｅｎｔｒｉｃ Ｍｅａｎ（ＢＣＭ）を、適用した温度に対してプロットした。ＵＮｉｔ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアｖ． ２．１を使用してデータを分析し、それを表５にまとめる。

さらに、一部のタンパク質については、熱シフトアッセイを適用して、示差走査熱量測定（ＤＳＦまたはＴｈｅｒｍｏＦｌｕｏｒ（商標））アッセイに倣って熱安定性を分析した（Ａｈｍａｄ Ｓ．ら（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１： ４３３－４４６、Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏら（２００１）Ｊ． Ｂｉｏｍｏｌ． Ｓｃｒｅｅｎ ６： ４２９－４４０、Ｎｉｅｓｅｎら（２００７）Ｎａｔ． Ｐｒｏｔｏｃ． ２： ２２１２－２１）。このアッセイは、疎水性蛍光色素、例えば、Ｓｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｓ６６５１）が、タンパク質の疎水性パッチに結合したときに、その蛍光を増大させるという観察に基づく。そのような疎水性パッチは、加熱によりタンパク質がアンフォールドされると、タンパク質において露出され、その結果、蛍光の増加を、アンフォールディングの程度の尺度として、したがって、タンパク質の熱安定性の尺度として使用することができる。

ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中のそれぞれのタンパク質の溶液を、Ｓｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅの１６０×溶液（供給業者によって提供される５０００× ＤＭＳＯストックから水中に希釈）と混合することによって、タンパク質を試験した。試料の体積を、ＰＢＳで２０μＬに調節した。典型的な条件には、最終混合物中、０．８ｍｇ／ｍＬのタンパク質および８×Ｓｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅが含まれたが、タンパク質濃度は、０．４ｍｇ／ｍＬ～１．２ｍｇ／ｍＬで変動し得る。試料を、９６ウェルのＰＣＲプレート（ＢｉｏＲａｄ Ｓｅｍｉ－Ｓｋｉｒｔ ９６、白色）に分注し、短時間遠心分離して、気泡を除去した。プレートを、ＢｉｏＲａｄ ｉＱ５リアルタイムＰＣＲ機器に挿入し、１℃／分の傾斜スピードで１０から９０℃の熱勾配に供した。励起および蛍光の定量化のために、４８５ｎｍおよび５７５ｎｍの波長のフィルタを選択した。ＢｉｏＲａｄ ｉＱ５ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎソフトウェア（ｖ． ２．０．１４８．６０６２３）をデータ処理に使用した。温度に対する蛍光強度の曲線において、変曲点を、融解温度（Ｔｍ）の尺度として選択した。

マウスおよび非ヒト霊長類における薬物動態
ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質の血漿濃度および薬物動態パラメータを、３つの異なる方法を使用して、０．３ｍｇ／ｋｇの溶液を雌性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスまたは雄性カニクイザルに単回皮下投与した後に決定した。血液試料は、投薬の３０分後～１６８時間後の時点で採取した。

ａ．）ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質のインタクトなＦＧＦ２１部分の定量化のための生物分析スクリーニング方法
血漿試料を、ＥＬＩＳＡキット（Ｆ１２３１－Ｋ０１、Ｅａｇｌｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）を用いて融合タンパク質のインタクトなＦＧＦ２１部分について分析した。このアッセイは、ヒトインタクトＦＧＦ２１の異なるエピトープに結合した２つの選択抗体を用いる二部位サンドイッチ技法を利用していた。一方の抗体は、ヒトＦＧＦ２１のＮ末端アミノ酸（アミノ酸２９～３５）に特異的に結合し、他方の抗体は、ヒトＦＧＦ２１のＣ末（アミノ酸２０３～２０９）に特異的に結合した。アッセイ標準、対照、および不明な試料を、抗ヒトＦＧＦ２１（アミノ酸２９～３５）特異的抗体でコーティングしたマイクロプレートのウェルに直接的に添加した。同時に、西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート抗ヒトＦＧＦ２１（アミノ酸２０３～２０９）特異的抗体を、それぞれのウェルに添加した。第１のインキュベーション期間の後、マイクロタイターウェルの壁部の抗体が試料中のヒトＦＧＦ２１を捕捉し、それぞれのマイクロタイターウェルの未結合タンパク質は、洗い流した。「抗ＦＧＦ２１抗体－ヒトインタクトＦＧＦ２１－ＨＲＰコンジュゲートトレーサー抗体」の「サンドイッチ」を形成した。未結合のトレーサー抗体は、後続の洗浄ステップにおいて除去した。免疫複合体の検出のために、ウェルを、次いで、一定時間の反応において基質溶液とともにインキュベートし、次いで、分光光度マイクロプレートリーダーで測定した。マイクロタイターウェルの壁部のヒトインタクトＦＧＦ２１に結合した免疫複合体の酵素活性は、試料中のインタクトＦＧＦ２１の量に正比例した。

ｂ．）インタクトな全長融合タンパク質の定量化のための生物分析スクリーニング方法
血漿中の全長ＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質の濃度を、ＥＬＩＳＡ方法を利用して決定した。融合タンパク質のＮ末端を、マウスモノクローナル抗ＧＬＰ１抗体（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ＭＳＤ）によって捕捉した。１５０μＬのブロッカーＡ（ＭＳＤ）でプレートを穏やかに振盪させながら室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングし、３００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した後、５０μＬの希釈した血漿試料（標準物およびＰＫ研究試料）を、それぞれのウェルに添加し、プレートを、穏やかに振盪させながら室温で１時間インキュベートした。３００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した後、５０μＬのプライマー検出抗体（Ｃ末端ウサギ抗ＦＧＦ２１抗体、Ｐｉｎｅｄａ Ａｎｔｉｋｏｒｐｅｒ－Ｓｅｒｖｉｃｅ、ベルリン、ドイツ）をそれぞれのウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。３００μＬの洗浄緩衝液で３回洗浄した後、ＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ ０．０５％（ＰＢＳ－Ｔ）中に希釈した２５μＬのヤギ抗ウサギ抗体（Ｓｕｌｆｏタグ標識、ＭＳＤ）を、それぞれのウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、１５０μＬのリード緩衝液をウェルに添加した。

ｃ．）ＧＬＰ－１ ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質のインタクトなＧＬＰ－１部分の定量化のために生物分析スクリーニング方法。
血漿試料を、ＧＬＰ－１ ＥＬＩＳＡ方法を用いて融合タンパク質のインタクトなＧＬＰ－１部分について分析した。ＥＬＩＳＡプレートに、マウスモノクローナル抗ＧＬＰ－１抗体（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ＭＳＤ）をコーティングした。１５０μＬのブロッカーＡ（ＭＳＤ）で穏やかに振盪させながら室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングし、３００μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、５０μＬの希釈した血漿試料（標準物およびＰＫ研究試料）を、それぞれのウェルに添加し、プレートを、穏やかに振盪させながら室温で１時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、ＰＢＳ－Ｔ中に希釈した（１／３，３３３）２５μＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｕｌｆｏタグ標識、ＭＳＤ）を、それぞれのウェルに添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。３００μＬのＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、１５０μＬのリード緩衝液をウェルに添加した。

薬物動態パラメータを、非コンパートメントモデルおよび線形台形補間計算を使用して、プログラムＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ６．４によって計算した。結果を、図７および８、ならびに表６に示す。結果は、新規なＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質が、最大２０～４０時間の半減期で、血漿レベルをｎｇ／ｍＬ範囲内に維持したことを示す。

マウスモデルにおけるインビボ有効性
ａ．）複数用量、食事性肥満（ＤＩＯ）マウス
雌性Ｃ５７ＢＬ／６Ｎチャールズリバーマウスを、標準食または高脂肪食（ｓｓｎｉｆｆ調節脂肪食Ｅ１５７９７）に自由にアクセスできる１２時間の明／暗サイクルの特定の無病原体バリア施設において、群ごとに収容した。高脂肪食を事前に２０週間与えた後、マウスを、体重に応じて処置群に層別化し（ｎ＝８匹）、それぞれの群が同様の平均体重を有するようにした。標準食（ｓｓｎｉｆｆ Ｒ／Ｍ－Ｈ、Ｖ１５３４－０）に自由にアクセスさせた年齢一致群を標準対照群として含めた。デュラグルチド処置群もまた、比較として含めた。処置の開始前に、マウスに、３日間、ビヒクル溶液を皮下（ｓ．ｃ．）注射し、計量して、手順に順応させた。

１）食後の雌性ＤＩＯマウスにおける血中グルコースに対する急性作用：初回血液試料を、それぞれ、ビヒクル（リン酸緩衝溶液）の初回投与（皮下）またはＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質（リン酸緩衝液中に溶解）の初回投与の直前に採取した。投与体積は、ストック溶液の濃度に応じて、５または１０ｍＬ／ｋｇであった。動物は、実験の間、水およびそれらの対応食に自由にアクセスさせた。血中グルコースレベルを、ｔ＝０時間、ｔ＝１時間、ｔ＝２時間、ｔ＝３時間、ｔ＝４時間、ｔ＝６時間、およびｔ＝２４時間の時点で測定した（方法：Ａｃｃｕ－Ｃｈｅｃｋ血糖測定装置）。血液試料採取は、麻酔なしで尾部切開によって行った。

２）雌性ＤＩＯマウスにおける体重に対する慢性的作用：マウスを、週１回、８日目の朝、明サイクルの開始時に、ビヒクルまたは試験化合物のいずれかで４週間処置した。体重および食物摂取を、毎日記録した。処置開始の２日前および２６日目に、総脂肪質量を、核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって測定した。

体重および食物摂取に対する融合タンパク質の作用を、それぞれ、図９および図１０に示す。配列番号８または配列番号７の融合タンパク質で処置した動物は、研究の終了時までに、ビヒクルまたはデュラグルチドで処置した動物よりも、累積でより多くの食物を摂取したが、それらは、ビヒクルまたはデュラグルチドで処置した動物よりも、有意に大きな体重減少を有した。このことは、配列番号７および配列番号８の両方の分子のＧＬＰ－１受容体活性とＦＧＦ２１模倣物活性との均衡を明確に示しているが、これは、体重減少に対するそれらの作用の実現に、食物摂取の抑制は必要なかったことが理由である。

ｂ．）食後の雌性糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおける複数回皮下投薬の血中グルコース低下作用
動物、研究設計（投薬前フェーズ、投薬フェーズ）、薬理学的介入
雌性の健常な低脂肪（ＢＫＳ．Ｃｇ－（低脂肪）／ＯｌａＨｓｄまたはＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７（ｍ）＋／＋ Ｌｅｐｒ（ｄｂ）Ｊ）および糖尿病傾向の肥満ｄｂ／ｄｂ（ＢＫＳ．Ｃｇ－＋Ｌｅｐｒｄｂ／＋Ｌｅｐｒｄｂ／ＯｌａＨｓｄまたはＢＫＳ．ＣＧ－ｍ ＋／＋ Ｌｅｐｒ（ｄｂ）／Ｊ）マウスを、Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ Ｉｎｃ．またはＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓに注文した。全ての動物を、木片の床敷を有するシューボックスケージに群で収容し、投薬フェーズの前におよそ２～３週間順化させた。

マウスを、１２時間の明／暗サイクル（明フェーズ午前４：００～午後４：００）、２０～２６℃の室温、および３０～７０％の相対湿度を含む生態条件下で収容した。全ての動物は、グリーンフィールドの水道水およびＰｕｒｉｎａ Ｆｏｍｕｌａｂ Ｄｉｅｔ ５００８に自由にアクセスさせた。研究開始の時点で、マウスは、およそ１０～１２週齢であった。

投薬前フェーズ（１５日間）
ＨｂＡ１ｃおよび血中グルコース測定のために、９日目に尾部クリップによって血液を採取した。血中グルコース濃度を、ＡｌｐｈａＴＲＡＫ広範囲血糖測定装置（コード２９ストリップ）を使用して測定した。血糖測定装置の測定は、いずれの他の生命活動よりも前に行い、二連に行った。値が、２０ｍｇ／ｄＬ（計算された血糖測定装置の値）を上回って異なる場合には、３回目の値を記録した。肥満度測定値を、９日目および１５日目に収集した。ＨｂＡ１ｃおよび肥満度値を、ブロックランダム化に使用した。１５日目に、ブロックランダム化の結果に応じて、動物を、処置群（ｎ＝８匹／群）ならびに新しいケージおよびケージメイト（ｎ＝４匹の動物／ケージ）に割り当てた。低脂肪群は、年齢が一致する健常な参照群として研究に含めた。

投薬製剤および投薬
投薬フェーズの１日目、８日目、１５日目、２２日目、および２７日目に、皮下注射体積５ｍｌ／ｋｇのビヒクル（滅菌ＰＢＳ）、デュラグルチド、配列番号８、または配列番号７のいずれかで、動物を処置した。投薬は、午前１０：００～１２：００に完了させ、それぞれの個体の最新の肥満度記録に調節した。トルリシティ（デュラグルチドペン）を含む注射溶液は、適切な濃度を達成するために、滅菌ＰＢＳをストック溶液またはペン製剤に添加することによって調製した。

投薬フェーズ（３６日間）
１）朝食後の動物における血中グルコース濃度：動物は、実験の間、水および食事に無制限にアクセスさせた。血中グルコースを、１日目、２日目、８日目、９日目、１５日目、１６日目、２２日目、２３日目、２７日目、および２８日目の午前１０：００～１２：００、ならびに２日目、９日目、１６日目、２３日目、および２８日目の投薬後２４時間の時点で、いずれの他の生命活動よりも前に測定した。さらに、１日目および２２日目には、血液を、投薬の１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、６時間後、および２４時間後に採取した（図１１）。およそ５μＬの血液を、尾部クリップを介して採取し、血中グルコース測定を、ＡｌｐｈａＴＲＡＫ広範囲血糖測定装置（コード２９ストリップ）を使用して二連に行った。値が、２０ｍｇ／ｄＬ（計算されたグルコース値）を上回って異なる場合には、３回目の値を記録した。曲線下面積（ＡＵＣ）を、それぞれの個体および示される時点について、トラペゾイド法によって計算した。

２）ＨｂＡ１ｃ分析：血液を、投薬前フェーズの９日目および投薬フェーズの３６日目に、尾部クリップを介して採取した。血液を、５μＬの添加剤なしのマイクロキャピラリーチューブに採取し、即座に溶血血液を含有する遠心チューブに入れた。チューブを、激しく振盪させて溶血血液と血液とを混合し、血液および試薬が完全に混合されるのを確実にするために、ロッカーに置いた。研究開始時および研究終了時における血漿ＨｂＡ１ｃレベルを、図１２に示す。

統計学的分析：データは、平均±平均の標準誤差として示す。統計学的分析のために、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）および多重比較（ダネット法）を行い、糖尿病で肥満のｄｂ／ｄｂビヒクルマウス（ｎ＝８匹）の群を、糖尿病で肥満のｄｂ／ｄｂ試験物品処置マウス（ｎ＝８匹）の群と比較した。２つの群の平均値における差が０．０５を上回る場合、それらは、統計学的に有意な差であると考えた。非糖尿病の低脂肪ビヒクル群のデータを、図１１および１２に示すが、これは、非肥満で非糖尿病状態の参照データセットとしての機能を果たす。

配列番号８または配列番号７の融合タンパク質で処置した動物において、血中グルコースレベルに対する低下作用は、ビヒクルまたはデュラグルチド処置動物におけるものよりも有意に高かった（図１１）。最も高い用量の配列番号８の融合タンパク質は、さらには、処置の２２日目に測定したほぼ全ての２４時間血中グルコースプロファイルわたって、血中グルコースレベルの正常な非糖尿病動物レベルへの低減をもたらした。さらに、配列番号８または配列番号７の融合タンパク質で処置した動物は、図１２に示されるように、ビヒクルまたはデュラグルチドで処置した動物よりも、研究の終了時までに、ＨｂＡ１ｃ増加のさらに顕著な抑制を示した。

ｃ．）ＤＩＯ－ＮＡＳＨマウスモデル
動物および実験の設定
全ての動物実験は、国際的に認められた研究室動物の取扱いおよび使用に関する原理に従っていた。

５週齢の雄性Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスを、ＪａｎＶｉｅｒ（ＪａｎＶｉｅｒ ｌａｂｓ、フランス）から入手し、それぞれの群を、１つのケージ当たり５匹の動物で１２／１２時間の暗明サイクル下において収容した。室温を、５０％±１０％の湿度で２２℃±１℃に制御した。動物は、以前はＡＭＬＮ食として説明されていた（Ｃｌａｐｐｅｒら（２０１３）Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ ３０５：Ｇ４８３－Ｇ４９５）高脂肪食（４０％、そのうち１８％は、トランス脂肪）、４０％炭水化物（２０％フルクトース）、および２％コレステロール（Ｄ０９１００３０１、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ、米国）または通常のげっ歯動物食（Ａｌｔｒｏｍｉｎ １３２４、Ｂｒｏｇａａｒｄｅｎ、デンマーク）、および水道水（低脂肪食、ｎ＝１０～１２匹）に自由にアクセスさせた。２６週間後に、ベースラインにおける個体の線維症および脂肪肝のステージングの組織学的評価のために、肝臓生検を行った。

マウスを、生検する１日前に、エンロフロキサジン（Ｂａｙｅｒ、ドイツ）（５ｍｇ／ｍＬ／１ｍＬ／ｋｇ）で事前処置した。生検の前に、マウスを、１００％酸素中のイソフルラン（２％～３％）で麻酔した。正中線に小さな腹部切開を行い、肝臓の左側葉を露出させた。円錐形の肝組織片（５０～１００ｍｇ）を、葉の遠位部分から切り出し、組織学のために４％パラホルムアルデヒド中に固定した。Ｃｌａｐｐｅｒらによって以前に説明されている生検手順を、ＥＲＢＥ ＶＩＯ １００Ｃ電気手術器（ＥＲＢＥ、米国）を使用したバイポーラ凝固による肝臓の切断表面の電気凝固を使用して改良した。肝臓を腹腔に戻し、腹壁を縫合し、皮膚をステープルで留めた。カルプロフェン（Ｐｆｉｚｅｒ、米国）（５ｍｇ／ｍＬ－０．０１ｍＬ／１０ｇ）およびエンロフロキサジン（５ｍｇ／ｍＬ－１ｍＬ／ｋｇ）を、外科手術の時点ならびに術後１日目および２日目に、それぞれ、術後痛緩和および感染を制御するために腹腔内に投与した。生検手順の後に、動物を、１匹ずつ収容し、３週間ＡＭＬＮ食を続けて回復させた。１０～１２匹の動物の研究群への層別化およびランダム化は、ベースライン肝臓生検によって評価した個々の疾患のステージングに基づいて行った。

動物を、次いで、ＡＭＬＮ食または通常食のいずれかにおいて、１週間に１回でさらに８週間、皮下注射により５０ｍｇ／ｋｇのＧＬＰ－１ＲＡ／ＦＧＦ２１ Ｆｃ融合タンパク質、０．６ｍｇ／ｋｇのデュラグルチド、またはビヒクル（ＰＢＳ）で処置した。続いて、動物を安楽死させ、肝臓重量を決定し、組織学および生化学分析のために肝臓組織を採取した（図１３を参照されたい）。

組織学評価およびデジタル画像分析
ベースライン肝臓生検および終末期試料を、左側葉から採取し（約１００ｍｇ）、４％パラホルムアルデヒド中に一晩固定した。肝臓組織を、パラフィン包埋し、切片を作製した（３μｍの厚さ）。肝臓形態学および線維症を評価するために、切片を、それぞれ、ヘマトキシリンおよびエオシンならびにＳｉｒｉｕｓ Ｒｅｄで染色し、続いて、Ｖｉｓｉｏｍｏｒｐｈソフトウェア（Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ、デンマーク）で分析した。組織学評価およびスコア付けを、研究に盲検化された病理医が行った。ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）（脂肪肝、炎症、気球状変性）および線維症のステージは、Ｋｌｅｉｎｅｒら（２００５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ４１： １３１３－１３２１によって概説されている臨床基準を使用して行った。データを、図１４および図１５において２つの異なる形式で示す。

配列番号８の融合タンパク質は、肝臓重量、肝臓総脂質含有量、肝臓コレステロールおよびトリグリセリド含有量、ならびにＮＡＦＬＤ活性スコアに対して作用を明確に示し、これは、デュラグルチドの作用によって例証されるＧＬＰ－１アゴニズム単独のものよりも優れていた。

Claims (19)

1. ＧＬＰ－１Ｒ（グルカゴン様ペプチド１受容体）アゴニストペプチドおよびヒトＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）の機能的に活性な変異体を含む、融合タンパク質であって、
   該ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、天然ＧＬＰ－１（７－３６）（配列番号２６０）のアミノ酸配列において、最大約１５個のアミノ酸残基の置換を含む、天然ＧＬＰ－１（７－３６）の変異体であり、
   該ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５０または配列番号２５１のアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含み、
   （ｉ）置換Ｑ５５ＣおよびＰ１４７Ｃまたは置換Ｑ５５ＣおよびＮ１４９Ｃ、ならびに
   （ｉｉ）Ｇ１９８および／またはＰ１９９の置換または欠失を含み、
   アミノ酸残基の番号付けは、配列番号２５０に従い、
   該ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドおよび該ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、Ｌ－Ｆｃ、Ｆｃ－Ｌ、Ｌ_１－Ｆｃ－Ｌ_２、およびＦｃからなる群から選択される構造を含むリンカー分子を介して連結されており、Ｌ、Ｌ_１、およびＬ_２は、単一のアミノ酸およびペプチドからなる群から独立して選択され、Ｆｃは、免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインである、前記融合タンパク質。
2. 天然ＧＬＰ－１（７－３６）のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性に比べて、約９～約５３１分の１のＧＬＰ－１Ｒアゴニスト活性を有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
3. ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１～５６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の融合タンパク質。
4. ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、アミノ酸配列
   Ｈ－Ｇ－Ｅ－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｘ_１０－Ｓ－Ｋ－Ｑ－Ｌ－Ｅ－Ｅ－Ｅ－Ｘ_１８－Ｖ－Ｘ_２０－Ｌ－Ｆ－Ｉ－Ｅ－Ｗ－Ｌ－Ｋ－Ａ－Ｘ_２９－Ｇ（配列番号４０７９）
   を含み、式中、
   Ｘ_１０は、ＫまたはＬであり、
   Ｘ_１８は、ＡまたはＲであり、
   Ｘ_２０は、ＲまたはＱであり、
   Ｘ_２９は、ＧまたはＴであり、
   場合により、該アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基をさらに含み、
   場合により、該アミノ酸配列は、そのＣ末端に最大約１２、約１１、または約１０個のアミノ酸残基からなるペプチド延長をさらに含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
5. ＧＬＰ－１Ｒアゴニストペプチドは、配列番号２６１または２６２のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
6. ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、およびＰ１９９の欠失からなる群から選択される置換または欠失を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
7. ヒトＦＧＦ２１の機能的に活性な変異体は、配列番号２５３、２５４、２５５、および２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
8. 免疫グロブリンまたはその変異体のＦｃドメインは、配列番号２５７、２５８、および２５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
9. 配列番号１～８、１８～３１、３９、４０、４２～７２、７４、７６、７８～８４、８８～９０、９２～９７、１００～１０２、１０５～１０９、１１２、１１３、１１５、１１６、１１８、１２０～１２４、１２６～１３０、１３２～１３６、１３９、１４２～１４８、１５０～１５３、１５５～１５８、１６１～１７２、１７４～１７７、１８０～１８８、１９０、１９２～２０９、２１１、２１２、２１６、２１７、および２１９～２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、または配列番号１～８、１８～３１、３９、４０、４２～７２、７４、７６、７８～８４、８８～９０、９２～９７、１００～１０２、１０５～１０９、１１２、１１３、１１５、１１６、１１８、１２０～１２４、１２６～１３０、１３２～１３６、１３９、１４２～１４８、１５０～１５３、１５５～１５８、１６１～１７２、１７４～１７７、１８０～１８８、１９０、１９２～２０９、２１１、２１２、２１６、２１７、および２１９～２２９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含む、その機能的に活性な変異体。
10. 配列番号２、７、および８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質、または配列番号２、７、および８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９６％同一であるアミノ酸配列を含む、その機能的に活性な変異体。
11. 前記融合タンパク質は、ヒトＧＬＰ－１Ｒを安定に発現する細胞のｃＡＭＰ反応を測定することによって決定される、約１５ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／Ｌ、または約２０ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／Ｌ、または約５０ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／Ｌ、または約１００ｐｍｏｌ／Ｌ～約４００ｐｍｏｌ／ＬのＥＣ５０で、ヒトＧＬＰ－１Ｒを活性化することができる、請求項１～１０のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
12. 前記融合タンパク質は、（ｉ）約２５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約２００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０で、ヒトＦＧＦ受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）の自己リン酸化を誘導することができ、かつ／または（ｉｉ）約１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約７５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約２５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約２０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、もしくは約１０ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０で、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導することができる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
13. 請求項１～１２のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸分子。
14. 請求項１３に記載の核酸分子を含有する、宿主細胞。
15. 請求項１～１２のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項１３に記載の核酸分子、または請求項１４に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。
16. 請求項１～１２のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項１３に記載の核酸分子、請求項１４に記載の宿主細胞、または請求項１５に記載の医薬組成物を含む、キット。
17. 医薬としての使用のための、請求項１～１２のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項１３に記載の核酸分子、請求項１４に記載の宿主細胞、または請求項１５に記載の医薬組成物。
18. 肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療での使用のための、請求項１～１２のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項１３に記載の核酸分子、請求項１４に記載の宿主細胞、または請求項１５に記載の医薬組成物。
19. 糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である、請求項１８に記載の使用のための融合タンパク質、核酸分子、宿主細胞、または医薬組成物。

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