JP2023538400A - 高シアル化免疫グロブリン - Google Patents

Abstract

高シアル化ヒト免疫グロブリンＧ（ｈｓＩｇＧ）調製物を調製する方法が本明細書に記載される。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年８月２１日に出願された米国特許仮出願第６３／０６８，７９６号の利益を主張するものである。前述仮出願の全容は、参照により本明細書に組み込まれる。

（発明の分野）
高シアル化ヒト免疫グロブリンＧ（hypersialylated human immunoglobulin G、ｈｓＩｇＧ）調製物を調製する方法が本明細書に記載される。

Ｆｃドメインのシアル化の重要な役割が同定されたことによって、強力な免疫グロブリン療法を開発する機会が提示された。免疫グロブリンのある市販の供給源は、静脈内免疫グロブリン（intravenous immunoglobulin、ＩＶＩｇ）であり、これは、ヒトドナーのプールされた血漿（例えば、少なくとも１，０００人のドナーからのプールされた血漿）から調製され、様々な炎症性障害を治療するために使用される。市販のＩＶＩｇ調製物は、一般に、存在する抗体のＦｃドメイン上で低レベルのシアル化を示す。具体的には、これらの調製物は、Ｆｃ領域における分岐グリカンの低レベルのジシアリル化を示す。更に、ＩＶＩｇ調製物は、有効性のばらつき、高いコスト、及び供給が限定されるなどの明確な限定を有する。

いくつかの実施形態では、分画された血漿から、高レベルのＦｃシアル化を有する免疫グロブリンＧ（immunoglobulin G、ＩｇＧ）を調製するための方法が、とりわけ、本明細書に記載される。本明細書に記載の方法は、Ｆｃドメインにおける分岐グリカンの５０％超が両方の分岐（すなわち、アルファ１，３分岐及びアルファ１，６分岐）でシアル化されている、高シアル化ＩｇＧ（hypersialylated IgG、ｈｓＩｇＧ）を提供し得る。

ＨｓＩｇＧは、ＩｇＧ抗体、主にＩｇＧ１抗体の多様な混合物を含む。これらの抗体の多様性は高い。本明細書に記載の方法を使用してｈｓＩｇＧを調製するために使用される免疫グロブリンは、例えば、プールされたヒト血漿（例えば、少なくとも１，０００～３０，０００人のドナーからのプールされた血漿）から得ることができる。免疫グロブリンは、プールされたヒト血漿又は血清、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分、ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分、寒冷沈降物が除去されている血漿、及びプールされたヒト血清又は血漿のエタノール沈殿物を含む様々な供給源から得ることができる。本方法は、他のタンパク質、例えば、ヒト血清又は血漿中に存在する他のタンパク質を含む組成物中にあるプールされたＩｇＧをシアル化するのに有用である。例えば、本明細書に記載の方法は、少なくとも５％（１０％、２０％、３０％、４０％以上）ｗｔ／ｗｔのタンパク質がＩｇＧではない組成物中にあるプールされたＩｇＧをシアル化するのに有用である。したがって、本方法は、タンパク質の９５％（９０％、８０％、７０％、又は６０％）ｗｔ／ｗｔ未満がＩｇＧである組成物中のプールされたＩｇＧをシアル化するのに有用である。本組成物中に存在する他のタンパク質は、ヒト血漿又は血清中に存在する非ＩｇＧタンパク質であり得る。本方法は、例えば、市販のＩＶＩｇよりも純度が低い出発材料の効率的な使用を可能にする。

ＨｓＩｇＧは、Ｆｃ領域における分岐グリカンにおいてＩＶＩｇよりもはるかに高いレベルのシアル酸を有する。これにより、構造及び活性の両方においてＩＶＩｇとは異なる組成物が得られる。ＨｓＩｇＧは、国際公開第２０１４／１７９６０１号又はＷａｓｈｂｕｒｎ ｅｔ ａｌ．（（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ１１２：Ｅ１２９７－Ｅ１３０６（２０１５））に記載されているように調製することができ、これらの両方は、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。多くの場合、ｈｓＩｇＧは、Ｆａｂ領域に存在する分岐グリカンの高レベルのジシアリル化を有する。

ガンマグロブリンは、Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２３，４１７－３２（１９４４）、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６８，４５９－７５（１９４６）の血漿画分ＩＩ～ＩＩＩに濃縮されていることが知られており、これらは、本出願を通して互換的に「ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ」又は「ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、血漿の分画によって、ガンマグロブリン濃縮物が得られる。いくつかの実施形態では、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分からｈｓＩｇＧ調製物を調製する方法が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩからｈｓＩｇＧ調製物を調製する方法が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ可溶性部分（ＣｏｈｎＩＶ／Ｖ）からｈｓＩｇＧ調製物を調製する方法が本明細書に記載される。ＨｓＩｇＧはまた、寒冷沈降物が除去されている血漿（寒冷上清、寒冷欠乏血漿、寒冷沈降物枯渇血漿、又は寒冷沈降物低減血漿と呼ばれることもある）を使用して調製され得る。

（ａ）プールされたヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を提供する工程であって、本組成物中のタンパク質の少なくとも５％又は少なくとも１０％ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、工程と、（ｂ）β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β1,4-Galactosyltransferase I、β４ＧａｌＴ）及びウリジン５’－ジホスホガラクトース（uridine 5’-diphosphogalactose、ＵＤＰ－Ｇａｌ）を、一緒に又は逐次的に、本組成物に添加して、反応混合物を作製する工程であって、反応混合物が、緩衝液中にある、工程と、（ｃ）反応混合物をインキュベートする工程と、（ｄ）ＳＴ６ベータ－ガラクトシドアルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（ST6 beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1、ＳＴ６Ｇａｌ１）及びシチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（cytidine-5’-monophospho-N-acetylneuraminic acid、ＣＭＰ－ＮＡＮＡ）を、一緒に又は逐次的に、反応混合物に添加する工程と、（ｅ）反応混合物をインキュベートし、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む、高シアル化ヒト免疫グロブリンＧ（ｈｓＩｇＧ）調製物を調製する方法が本明細書に記載される。

いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は１８～２２時間実行され、工程（ｅ）は、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は３０～３２時間実行される。

いくつかの実施形態では、工程（ｄ）は、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを工程（ａ）の反応混合物に添加する工程を含む。

（ａ）プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程であって、本組成物中のタンパク質の少なくとも５％又は少なくとも１０％ｗｔ／ｗｔが、緩衝液中でＩｇＧではない、工程と、（ｂ）緩衝液中でβ１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）、ＵＤＰ－Ｇａｌ、ＳＴ６Ｇａｌ１、及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中の本組成物をインキュベートし、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む、高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法も本明細書に記載される。

（ａ）プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程であって、本組成物中のタンパク質の少なくとも５％又は少なくとも１０％ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、工程と、（ｂ）本組成物をβ４ＧａｌＴ及びＳＴ６Ｇａｌと組み合わせて、反応混合物を作製する工程であって、反応混合物が、緩衝液中にあり、ＵＤＰ－Ｇａｌ及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含有する、工程と、反応混合物をインキュベートし、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む、高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法も本明細書に記載される。

いくつかの実施形態では、緩衝液は、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ０トリス（ヒドロキシメチル）メタン（Bis(2-hydroxyethyl)amino0tris(hydroxymethyl)methane、ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（3-(N-morpholino)propanesulfonic acid、ＭＯＰＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid、ＭＥＳ）、１，４－ピペラジンジエタンスルホン酸（1,4-Piperazinediethanesulfonic acid、ＰＩＰＥＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（N,N-Bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid、ＢＥＳ）、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（3-morpholino-2-hydroxypropanesulfonic acid、ＭＯＰＳＯ）、トリエタノールアミン（Triethanolamine、ＴＥＡ）、ピペラジン－Ｎ－Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（Piperazine-N-N’-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid、ＰＯＰＳＯ）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinepropanesulfonic acid、ＥＰＰＳ）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体の混合物を提供する工程は、（ａ）少なくとも１０００人のヒト対象からのプールされた血漿を提供する工程、及び（ｂ）プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程、を含む。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴ及びＳＴ６Ｇａｌ及び同時に又はいずれかの順序で逐次的に添加される。いくつかの実施形態では、追加のＣＭＰ－ＮＡＮＡは、ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第１の添加後の時点で反応物に添加される。いくつかの実施形態では、追加のＣＭＰ－ＮＡＮＡは、ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第２の添加後の時点で反応物に添加される。いくつかの実施形態では、ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第１の添加と第２の添加とは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４時間の間があいている。いくつかの実施形態では、ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第２の添加と第３の添加とは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７又は１８時間の間があいている。

いくつかの実施形態では、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びＵＤＰ－Ｇａｌは、同時に反応物に添加される。いくつかの実施形態では、β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びＵＤＰ－Ｇａｌは、同時に反応物に添加されない。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡは、同時に反応物に添加される。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡは、同時に反応物に添加されない。

いくつかの実施形態では、本方法は、ｈｓＩｇＧ調製物を１つ以上の精製工程に供することを更に含む。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴを含む反応混合物をインキュベートする工程は、ヒトＩｇＧ上に存在する分岐グリカンのガラクトシル化を可能にする条件下及び時間にわたって実行される。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１を含む反応混合物をインキュベートする工程は、ヒトＩｇＧ上に存在するガラクトシル化分岐グリカンのシアル化を可能にする条件下及び時間にわたって実行される。

いくつかの実施形態では、プールされたヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物中のタンパク質の少なくとも６０％、７０％、８０％、又は９０％ｗｔ／ｗｔは、ＩｇＧである。いくつかの実施形態では、プールされたヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物中のタンパク質の少なくとも１０％、１５％、２０％、又は３０％ｗｔ／ｗｔは、ＩｇＧではない。

いくつかの実施形態では、プールされたヒトＩｇＧを含む組成物は、プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清、寒冷沈降物枯渇血漿、エタノール沈殿されているプールされたヒト血清若しくは血漿、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分、又はヒトＣｏｈｎ血漿Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ画分からなる群から選択される組成物である。いくつかの実施形態では、プールされたヒトＩｇＧを含む組成物は、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分又はヒトＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分である。

いくつかの実施形態では、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分又はヒトＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を提供する工程は、少なくとも１００人のドナー、少なくとも５００人のドナー、又は少なくとも１０００人のドナーからプールされたヒト血清からのタンパク質の冷エタノール沈殿を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を提供する工程は、沈殿、クロマトグラフィ、濾過、脱脂、病原体不活性化、及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上を更に含む。

いくつかの実施形態では、プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程は、プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を緩衝液に交換する工程、又はプールされたヒトＩｇＧを含む組成物を緩衝液に可溶化する工程を含む。いくつかの実施形態では、緩衝液は、ＢＩＳ－ＴＲＩＳである。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴ１は、配列番号１２又は配列番号１３と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＳＴ６Ｇａｌ１が、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列、配列番号１９のアミノ酸２３～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸１３～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸１１～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸６～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸５～３２０の部分、又は配列番号１９のアミノ酸４～３２０の部分を含む。

いくつかの実施形態では、反応混合物中の塩濃度は、１５０ｍＭ未満、１２５ｍＭ未満、１００ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、又は５ｍＭ未満である。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴを含む反応混合物をインキュベートする工程は、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は１８～２２時間実行され、ＳＴ６Ｇａｌ１を含む反応混合物をインキュベートする工程は、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は３０～３２時間実行される。

いくつかの実施形態では、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分又はＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を緩衝液中に提供する工程は、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ又はＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ材料を緩衝液中に可溶化する工程と、未溶解材料を除去する工程と、得られた溶液を緩衝液への緩衝液交換に供する工程とを含む。いくつかの実施形態では、緩衝液は、ＢＩＳ－ＴＲＩＳである。いくつかの実施形態では、本方法は、緩衝液交換の前に、脱脂剤、高純度珪藻岩濾過媒体、又はヒュームドシリカのうちの１つ以上を溶液に添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、ケイ酸カルシウム水和物、二酸化ケイ素、及びヒュームドシリカのうちの１つ以上が、緩衝液交換の前に溶液に添加される。いくつかの実施形態では、本方法は、溶液を深層濾過することを更に含む。

いくつかの実施形態では、反応は、ｐＨ５．５～８．５で行われる。いくつかの実施形態では、反応は、１０～５００ｍＭ、ｐＨ５．５～８．５のＢＩＳ－ＴＲＩＳ中で行われる。

いくつかの実施形態では、反応混合物は、１～２０ｍＭのＭｎＣｌ_２を含む。

いくつかの実施形態では、ＵＤＰ－Ｇａｌを含む反応混合物中のＵＤＰ－Ｇａｌの初期濃度は、２０～５００μｍｏｌのＵＤＰ－Ｇａｌ／ｇ ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中のＣＭＰ－ＮＡＮＡの初期濃度は、１００～３０００μｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡ／ｇ ＩｇＧ抗体である。

いくつかの実施形態では、インキュベーションは、２０～５０℃で行われる。いくつかの実施形態では、インキュベーションは、３０～４５℃又は３５～３９℃で行われる。

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、少なくとも１０００人のドナーから単離されたＩｇＧ抗体を含む。

いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、又は７０％ｗ／ｗは、ＩｇＧ１抗体である。

いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧ調製物は、更に処理されて、ＳＴ６Ｇａｌ１及びβ４ＧａｌＴが除去される。

いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧ調製物中の分岐グリカンの約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧ調製物中の分岐Ｆｃグリカンの約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメイン上の分岐グリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイン上の分岐グリカンの最も少ない５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴを含む反応混合物をインキュベートする工程は、１２～３０時間実行される。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１を含む反応混合物をインキュベートする工程は、２０～４０時間実行される。

いくつかの実施形態では、本方法は、１つ以上の追加の精製工程を更に含み、非ＩｇＧタンパク質が、低減又は除去される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧではないタンパク質は、ヒト血漿又は血清中に存在するタンパク質である。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴは、５、１０、２０、３０、５０、又は１００ｍＵ／ｍｇ超のＩｇＧで、β４ＧａｌＴを含む反応混合物中に存在する。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａ１は、５、１０、２０、５０、１００、又は２００ｍＵ／ｍｇ超のＩｇＧで、ＳＴ６Ｇａｌ１を含む反応混合物中に存在する。

いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧ調製物中のＩｇＧ抗体における分岐グリカンの５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％超は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、β４ＧａｌＴを含む反応混合物をインキュベートする工程は、ガラクトシル化ＩｇＧ抗体を産生するのに十分な期間にわたって進行する。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１を含む反応混合物をインキュベートする工程は、ジシアリル化ＩｇＧ抗体を産生するのに十分な期間にわたって進行する。

高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法も本明細書に記載され、本方法は、（ａ）プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清、寒冷沈降物枯渇プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清若しくは血漿のエタノール沈殿物、プールされたヒト血漿若しくは血清のＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分、プールされたヒト血清若しくは血漿のＣｏｈｎＩＶ／Ｖ画分、又はプールされたヒト血清若しくは血漿のＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分を含む組成物を提供する工程と、（ｂ）β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びＵＤＰ－Ｇａｌを含む反応混合物中の本組成物をインキュベートして、ガラクトシル化ＩｇＧ抗体を産生する工程と、（ｃ）ガラクトシル化ＩｇＧ抗体を、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中でインキュベートし（ガラクトシル化反応混合物及びシアル化反応混合物は、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）緩衝液を含む）、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む。

高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法も記載され、本方法は、（ａ）プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清、寒冷沈降物枯渇プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清若しくは血漿のエタノール沈殿物、プールされたヒト血漿若しくは血清のＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分、プールされたヒト血清若しくは血漿のＣｏｈｎＩＶ／Ｖ画分、又はプールされたヒト血清若しくは血漿のＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分を含む組成物を提供する工程と、（ｂ）β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）、ＵＤＰ－Ｇａｌ、ＳＴ６Ｇａｌ１、及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中の本組成物を、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）緩衝液中で少なくとも２４時間インキュベートし、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む。

高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法が本明細書に記載され、本方法は、（ａ）プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程であって、本組成物中のタンパク質の少なくとも５％（１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％）ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、工程と、（ｂ）β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びＵＤＰ－Ｇａｌを含む反応混合物中の本組成物をインキュベートして、ガラクトシル化ＩｇＧ抗体を産生する工程と、（ｃ）ガラクトシル化ＩｇＧ抗体を、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中でインキュベートし（ガラクトシル化反応混合物及びシアル化反応混合物は、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）緩衝液を含む）、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む。

高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法も記載され、本方法は、（ａ）プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程であって、本組成物中のタンパク質の少なくとも５％（１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％）ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、工程と、（ｂ）β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）、ＵＤＰ－Ｇａｌ、ＳＴ６Ｇａｌ１、及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中の本組成物を、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）緩衝液中で少なくとも２４時間インキュベートし、それによってｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む。

本明細書に記載の方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分は、プールされた血漿のエタノール沈殿によって得られる凍結乾燥固体であり、これは次いで、ＢＩＳ－ＴＲＩＳに再懸濁される。本明細書に記載の方法のいずれかのいくつかの実施形態では、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分は、プールされた血漿のエタノール沈殿によって得られる凍結乾燥固体であり、これは次いで、反応混合物中でＩｇＧ抗体の混合物をインキュベートする前に、ＢＩＳ－ＴＲＩＳに緩衝液交換される。

様々な実施形態では、β４ＧａｌＴ１は、配列番号１２又は配列番号１３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一であり、ＳＴ６Ｇａｌ１は、配列番号１４又は配列番号１９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含み、工程（ｂ）は、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、又は４０時間実行され、工程（ｃ）は、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、又は４０時間実行され、工程（ｃ）は、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを工程（ａ）の反応混合物に添加する工程を含み、反応は、１０～５００ｍＭのｐＨ５．５－８．５のＢＩＳ－ＴＲＩＳ中で行われ、反応混合物は、１～２０ｍＭのＭｎＣｌ_２を含み、反応は、２５～７５ｍＭのｐＨ６．５～７．３のＢＩＳ－ＴＲＩＳ、２．５～７．５ｍＭのＭｎＣｌ_２中で行われ、ＵＤＰ－Ｇａｌは、９５μｍｏｌのＵＤＰ－Ｇａｌ／タンパク質ｇで存在し、ＵＤＰ－Ｇａｌは、４０～２００μｍｏｌのＵＤＰ－Ｇａｌ／タンパク質ｇで存在し、ＣＭＰ－ＮＡＮＡは、７００μｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡ／タンパク質ｇで存在し、ＣＭＰ－ＮＡＮＡは、２００～２２００μｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡ／タンパク質ｇで存在し、β４ＧａｌＴは、２３ＵのＢ４ＧａｌＴ／タンパク質ｇで存在し、β４ＧａｌＴは、１０～９５ＵのＢ４ＧａｌＴ／タンパク質ｇで存在し、ＳＴ６Ｇａｌ１は、９４ＵのＳＴ６／タンパク質ｇで存在し、ＳＴ６Ｇａｌ１は、２０～３００ＵのＳＴ６／タンパク質ｇで存在し、インキュベーションは２０～５０℃で行われ、インキュベーションは、３０～４５℃で行われ、ＩｇＧ抗体は、少なくとも１０００人のドナーから単離されたＩｇＧ抗体を含み、ＩｇＧ抗体の少なくとも７０％、８０％、９０％ｗ／ｗは、ＩｇＧ１抗体であり、ドナー対象の少なくとも９０％は、ウイルスに曝露されたことがあり、ｈｓＩｇＧ調製物中の分岐グリカンの約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有し、ｈｓＩｇＧ調製物中の分岐Ｆｃグリカンの約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有し、Ｆａｂドメイン上の分岐グリカンの少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有し、Ｆｃドメイン上の分岐グリカンの少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有し、工程（ｂ）におけるインキュベーションは、１２～３０時間であり、工程（ｃ）におけるインキュベーションは、２０～４０時間である。

タンパク質の９７％超がＩｇＧである組成物の場合、ＵＤＰ－Ｇａｌは、１５～６０ｕｍｏｌ／タンパク質ｇｍ（例えば、３８ｕｍｏｌのＵＤＰ－Ｇａｌ／タンパク質ｇ）で存在し、ＣＭＰ－ＮＡＮＡは、１１０～６００ｕｍｏｌ／タンパク質ｇ（例えば、２２０ｕｍｏｌ／タンパク質ｇ）、及び４～２０ＵのＢ４ＧａｌＴ／タンパク質ｇ（例えば、７．５Ｕ／タンパク質ｇ）、７．５～４５ＵのＳＴ６／タンパク質ｇ（例えば、１５Ｕ／タンパク質ｇ範囲）で存在する。

いくつかの実施形態では、組成物は、グリカンの少なくとも５０％がα１，３分岐及びα１，６分岐の両方でシアル化されているシアル化ＩｇＧを含むシアル化ＩｇＧを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃグリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方でシアル化されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃグリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方でシアル化されており、Ｆａｂグリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方でシアル化されている。

いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは、分画血漿、例えば、少なくとも１００人、５００人、又は１，０００人のドナーからプールされたヒト血漿に由来する。特定の実施形態では、免疫グロブリンの５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％超がＩｇＧポリペプチド（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４、又はそれらの混合物）であるが、他の免疫グロブリンサブクラスの量が存在し得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかは、１つ以上の追加の精製工程を更に含み得、非ＩｇＧタンパク質が、低減又は除去される。

いくつかの実施形態では、本発明は、障害を治療するための方法に関し、本方法は、障害に関連する少なくとも１つの症状を緩和する用量で対象にｈｓＩｇＧを含む組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物は、約４、５、６、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、９７５、又は１０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、シアル化ｈｓＩｇＧを含む組成物は、毎日、週１回、週２回、隔週、毎月、半月ごとに、隔月、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、１４日に１回、２１日に１回、２８日に１回、２８日間周期で連続２日間につき１日１回、又はＦＤＡ認可ＩＶＩＧ用量と同じ投与頻度で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物は、静脈内、皮下、又は筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、単回用量で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、複数回用量で投与される。

いくつかの実施形態では、疾患は、炎症性疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、自己抗体の存在に関連する。

いくつかの実施形態では、疾患は、神経疾患である。いくつかの実施形態では、神経疾患は、皮膚筋炎、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy、ＣＩＤＰ）、多巣性運動ニューロパチー（multifocal motor neuropathy、ＭＭＮ）、重症筋無力症及び全身硬直症候群からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、疾患は、血管炎、全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosis、ＳＬＥ）、粘膜類天疱瘡及びブドウ膜炎からなる群から選択され、皮膚科学において、川崎症候群、皮膚筋炎、中毒性表皮壊死症、及び水疱症を治療するために最も一般的に使用される。

いくつかの実施形態では、疾患は、ＩＶＩＧによる治療のためにＦＤＡに認可されている。いくつかの実施形態では、用量は、障害に対するＦＤＡ認可ＩＶＩＧ用量未満、ほぼ同等である。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧのＦＤＡ認可用量は、２００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、又は２０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物は、約４、５、６、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、９７５、又は１０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物は、障害に対するＦＤＡ認可ＩＶＩＧ用量の一部、例えば、障害に対するＦＤＡ認可用量の３／４、１／２、１／３、１／４、１／５、１／６、１／７、１／８、１／９、又は１／１０で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物は、毎日、週１回、週２回、隔週、毎月、半月ごとに、隔月、３日ごとに、４日ごとに、５日ごとに、６日ごとに、７日ごとに、１４日に１回、２１日に１回、２８日に１回、２８日間周期で連続２日間につき１日１回、又はＦＤＡ認可ＩＶＩＧ用量と同じ投与頻度で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物は、静脈内、皮下、又は筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、単回用量で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、複数回用量で投与される。

いくつかの実施形態では、障害は、心筋炎、急性運動性軸索型神経障害、脂肪過多ドロザ、抗糸球体基底膜腎炎；グッドパスチャ症候群、抗リン脂質抗体症候群（Antiphospholipid syndrome、ＡＰＳ、ＡＰＬＳ）、抗シンセターゼ症候群；筋炎、ＩＬＤ、失調性神経障害（急性及び慢性）、自己免疫性腸疾患（Autoimmune enteropathy、ＡＩＥ）、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性網膜症、自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性じんま疹、疱疹状皮膚炎、後天性表皮水疱症、本態性混合型クリオグロブリン血症、多発血管炎性肉芽腫症（Granulomatosis with polyangiitis、ＧＰＡ）、混合性結合組織病（Mixed connective tissue disease、ＭＣＴＤ）、神経性筋強直症、視神経炎、傍腫瘍性小脳変性症、抗Ｎ－メチル－Ｄ－アスパルテート（Anti-N-Methyl-D-Aspartate、抗ＮＭＤＡ）受容体脳炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少症、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、皮膚筋炎、妊娠性類天疱瘡、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、ＩｇＧ４に関連する疾患、ランバート・イートン筋無力症症候群、ループス腎炎、筋炎、多巣性運動神経障害、重症筋無力症、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、多発性筋炎、全身性紅斑性狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus、ＳＬＥ）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、障害は、急性散在性脳脊髄炎（Acute disseminated encephalomyelitis、ＡＤＥＭ）、自己免疫性血管浮腫（後天性血管浮腫ＩＩ型）、自己免疫性肝炎（Ｉ型及びＩＩ型）、自己免疫性下垂体炎；リンパ性下垂体炎、自己免疫性内耳疾患（Autoimmune inner ear disease、ＡＩＥＤ）、エバンス症候群、グレーブス眼症、橋本脳症、ＩｇＡ血管炎（IgA vasculitis、ＩｇＡＶ）、潜在性自己免疫性肝炎、線状ＩｇＡ病（Linear IgA disease、ＬＡＤ）、ループス血管炎、膜性糸球体腎炎、顕微鏡的多発血管炎（Microscopic polyangiitis、ＭＰＡ）、モーレン潰瘍、モルヘア、オプソクローヌスミオクローヌス症候群、Ｏｒｄ甲状腺炎、回帰性リウマチ、神経芽腫を伴う傍腫瘍性眼球クローヌス－ミオクローヌス運動失調、連鎖状球菌を伴う小児自己免疫性神経精神障害（Pediatric Autoimmune Neuropsychiatric Disorder Associated with Streptococcus、ＰＡＮＤＡＳ）、心膜切開後症候群、原発性胆汁性肝硬変（Primary biliary cirrhosis、ＰＢＣ）、ラスムッセン脳炎、リウマチ性血管炎、シュニッツラー症候群、シデナム舞踏病、未分化結合組織疾患（Undifferentiated connective tissue disease、ＵＣＴＤ）、ミラーフィッシャ症候群、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、組成物は、Ｆａｂドメイン上の分岐グリカンの少なくとも５０％が、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結によってα１，３アーム及びα１，６アームの両方でシアル化されており、Ｆｃドメイン上の分岐グリカンの少なくとも５０％が、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結によってα１，３アーム及びα１，６アームの両方でシアル化されているｈｓＩｇＧを含む。

いくつかの実施形態では、発明は、ＩＶＩＧの有効用量以下でｈｓＩｇＧを投与することを含む、ＣＩＤＰを有する対象においてＣＩＤＰを治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧの有効用量は２００～２０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、ＩＶＩＧの有効用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、発明は、ＩＶＩＧの有効用量有効用量以下でｈｓＩｇＧを投与することを含む、免疫性血小板減少症を有する対象において免疫性血小板減少症を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧの有効用量は１０００～２０００ｍｇ／ｋｇ ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、ＩＶＩＧの有効用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、発明は、ＩＶＩＧの有効用量以下でｈｓＩｇＧを投与することを含む、ｗＡＩＳＨＡを有する対象においてｗＡＩＳＨＡを治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧの有効用量は１０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、ＩＶＩＧの有効用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、発明は、ＩＶＩＧの有効用量以下でｈｓＩｇＧを投与することを含む、ギラン・バレー症候群を有する対象においてギラン・バレー症候群を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧの有効用量は、１０００～２０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、ＩＶＩＧの有効用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＩＶＩＧの有効用量以下でｈｓＩｇＧを投与することを含む、ＰＩＤ（primary humoral immunodeficiency disease、一次体液免疫不全症）を有する対象においてＰＩＤを治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧの有効用量は、２００～８００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、ＩＶＩＧの有効用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、又は８０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、発明は、ＩＶＩＧの有効用量以下でｈｓＩｇＧを投与することを含む、川崎病を有する対象において川崎病を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＩＶＩＧの有効用量は、１０００～２０００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、ＩＶＩＧの有効用量の１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、９７５、又は１０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

いくつかの実施形態では、ｈｓＩｇＧを含む組成物を投与することは、有効用量のＩＶＩＧを含む組成物を投与することと同様の有効性を有する。

いくつかの実施形態では、本組成物は、血漿、例えば、ヒト血漿に由来するポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、圧倒的多数がＩｇＧポリペプチド（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４、又はそれらの混合物）であるが、微量の他の免疫グロブリンサブクラスを含有する微量のその他のポリペプチドも存在し得る。

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチド、例えば、免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列を指す。例えば、抗体は、重（heavy、Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略される）及び軽（light、Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略される）を含み得る。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、及びｄＡｂ断片）、並びに完全な抗体、例えば、タイプＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（及びそれらのサブタイプ）のインタクトな免疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパ又はラムダタイプであり得る。

本明細書で使用される場合、「定常領域」という用語は、抗体の１つ若しくは２つ以上の定常領域免疫グロブリンドメインに対応するか、又はそれに由来するポリペプチドを指す。定常領域は、以下の免疫グロブリンドメインのうちのいずれか又は全てを含み得る：Ｃ_Ｈ１ドメイン、ヒンジ領域、Ｃ_Ｈ２ドメイン、Ｃ_Ｈ３ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、又はＩｇＭに由来）、及びＣ_Ｈ４ドメイン（ＩｇＥ又はＩｇＭに由来）。

本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、各「Ｆｃポリペプチド」が、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除くが、抗体の定常領域を含む、２つの「Ｆｃポリペプチド」のダイマーを指す。いくつかの実施形態では、「Ｆｃ領域」は、１つ若しくは２つ以上のジスルフィド結合、化学リンカー、又はペプチドリンカーによって結合された２つのＦｃポリペプチドを含む。「Ｆｃポリペプチド」は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、また、これらのドメインに対してＮ末端に存在する可撓性ヒンジの一部又は全てを含み得る。ＩｇＧの場合、「Ｆｃポリペプチド」は、免疫グロブリンドメインＣガンマ２（Cgamma2、Ｃγ２）及びＣガンマ３（Cgamma3、Ｃγ３）、並びにＣガンマ１（Cgamma1、Ｃγ１）とＣγ２との間のヒンジの下部を含む。Ｆｃポリペプチドの境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃポリペプチドは、通常、Ｔ２２３又はＣ２２６又はＰ２３０から開始してそのカルボキシル末端までの残基を含むように規定され、この番号付けは、Ｋａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）におけるＥＵインデックスに従う。ＩｇＡの場合、Ｆｃポリペプチドでは、免疫グロブリンドメインＣアルファ２（Calpha2、Ｃα２）及びＣアルファ３（Calpha3、Ｃα３）、並びにＣアルファ１（Calpha1、Ｃα１）とＣα２との間のヒンジの下部を含む。Ｆｃ領域は、合成であり得るか、組換えであり得るか、又はＩＶＩｇなどの天然源から生成され得る。

本明細書で使用するとき、「グリカン」は、糖であり、少なくとも３つの糖などの糖残基のモノマー又はポリマーであり得、直鎖状又は分岐状であり得る。「グリカン」は、天然糖残基（例えば、グルコース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルノイラミン酸、ガラクトース、マンノース、フコース、ヘキソース、アラビノース、リボース、キシロースなど）及び／又は修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、２’－デオキシリボース、ホスホマンノース、６’スルホＮ－アセチルグルコサミンなど）を含み得る。「グリカン」という用語は、糖残基のホモ及びヘテロポリマーを含む。「グリカン」という用語はまた、複合糖質の（例えば、ポリペプチド、糖脂質、プロテオグリカンなどの）グリカン成分も包含する。この用語は、開裂された又はそうでなければ複合糖質から放出されたグリカンを含む遊離グリカンも包含する。

本明細書で使用するとき、「糖タンパク質」という用語は、１つ以上の糖部分（すなわち、グリカン）に共有結合したペプチド骨格を含有するタンパク質を指す。糖部分は、単糖類、二糖類、オリゴ糖、及び／又は多糖類の形態であり得る。糖部分は、単一の非分岐鎖の糖残基を含み得るか、又は１つ若しくは２つ以上の分岐鎖を含み得る。糖タンパク質は、Ｏ－結合糖部分及び／又はＮ－結合糖部分を含有し得る。いくつかの場合では、本明細書における「糖タンパク質」という用語は、１つ以上の糖部分に共有結合している免疫グロブリンを指す。

本明細書で使用される場合、「ＩＶＩｇ」は、少なくとも１，０００人のヒトドナーの血漿から抽出された、４つ全てのＩｇＧサブグループを含むプールされた多価ＩｇＧの調製物である。ＩＶＩｇは、免疫不全患者のための血漿タンパク質置換療法として承認されている。ＩＶＩｇ Ｆｃグリカンシアル化のレベルは、ＩＶＩｇ調製間で変化するが、概して２０％未満である。ジシアリル化のレベルは概してはるかに低い。本明細書で使用される場合、「ＩＶＩｇに由来する」という用語は、ＩＶＩｇの操作から得られるポリペプチドを指す。例えば、ＩＶＩｇ（例えば、シアル化ＩｇＧが富化された）又は修飾ＩＶＩｇ（例えば、酵素的にシアル化されたＩＶＩｇ ＩｇＧ）から精製されたポリペプチド。

本明細書で使用される場合、「ＦｃポリペプチドのＮ－グリコシル化部位」は、グリカンがＮ－結合されるＦｃポリペプチド内のアミノ酸残基を指す。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆｃポリペプチドのダイマーを含有し、Ｆｃ領域は、各Ｆｃポリペプチド上に１つの２つのＮ－グリコシル化部位を含む。

本明細書で使用される場合、「分岐状グリカンのパーセント（％）」は、存在するグリカンの総モルに対するグリカンＸのモル数を指し、Ｘは、対象とするグリカンを表す。

「医薬的に有効な量」又は「治療上有効な量」という用語は、本明細書に記載される障害又は病態を有する患者の治療に有効な量（例えば、用量）を指す。本明細書では、「医薬的に有効な量」は、単独で又は他の治療薬と組み合わせて一回服用されるか、又は任意の投与量若しくは経路で摂取されるかのいずれかで、所望の治療効果を与える量として解釈され得ることも理解されたい。

「医薬製剤」及び「医薬製品」は、製剤又は製品及び使用説明書を含むキットに含まれ得る。

「医薬製剤」及び「医薬製品」は、概して、最終的な所定レベルのシアル化が達成され、プロセス不純物を含まない組成物を指す。そのため、「医薬製剤」及び「医薬製品」は、ＳＴ６Ｇａｌシアリルトランスフェラーゼ及び／若しくはシアル酸ドナー（例えば、シチジン５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸）、並びに／又はその副産物（例えば、シチジン５’一モノホスフェート）を実質的に含まない。

「医薬製剤」及び「医薬製品」は、概して、組換えの場合、糖タンパク質が産生された細胞の他の成分（例えば、小胞体又は細胞質タンパク質及びＲＮＡ）を実質的に含まない。

「精製される」（又は「単離される」）は、天然環境に存在する他の成分から除去又は分離されるポリヌクレオチド又はポリペプチドを指す。例えば、単離ポリペプチドは、産生された細胞の他の成分（例えば、小胞体又は細胞質タンパク質及びＲＮＡ）から分離されたものである。単離されたポリヌクレオチドは、他の核成分（例えば、ヒストン）及び／又は上流若しくは下流核酸から分離されたものである。単離されたポリヌクレオチド又はポリペプチドは、示されるポリヌクレオチド又はポリペプチドの天然環境中に存在する他の成分を６０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％含まなくてもよい。

本明細書で使用される場合、「シアル化」という用語は、末端シアル酸を有するグリカンを指す。「モノシアリル化」という用語は、例えば、α１，３分岐又はα１，６分岐に１つの末端シアル酸を有する分岐グリカンを指す。「ジシアリル化」という用語は、２本のアーム、例えば、α１，３アーム及びα１，６アームの両方に末端シアル酸を有する分岐グリカンを指す。

本出願全体を通して、様々な実施形態が範囲形式にて提示され得る。範囲形式の説明は単に便宜上及び簡潔さのためのものであり、本開示の範囲上の確固とした制限として解釈されるべきではない、と理解すべきである。したがって、範囲の説明は、全ての可能な部分範囲、並びにその範囲内の個々の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの具体的に開示される部分範囲、並びにその範囲内の個々の数、例えば、１、２、３、４、５、及び６を有するとみなされるべきである。これは、範囲の広さにかかわらず適用される。

本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に単数であることを指示しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「試料」という用語は、その混合物を含む複数の試料を含む。

「決定すること」、「測定すること」、「評価すること」、「査定すること」、「アッセイすること」、及び「分析すること」の用語は、測定の形態を指すために、本明細書においてしばしば互換的に使用される。これらの用語は、要素が存在するか否かを決定することを含む（例えば、検出）。これらの用語は、定量的、定性的、又は定量的及び定性的決定を含み得る。査定することは、相対的であっても絶対的であってもよい。「の存在を検出すること」は、文脈によって存在するか不在であるかを決定することに加えて、存在する何かの量を決定することを含み得る。

本明細書で使用される場合、「約」数という用語は、その数が、その数にプラス又はマイナス１０％されることを指す。「約」範囲という用語は、その範囲が、その最低値に１０％マイナスされ、その最大値に１０％プラスされることを指す。

特に定義されない限り、本明細書で使用されている全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に共通に理解されるものと同じ意味を有している。本発明で使用するための方法及び材料が本明細書に記載され、当該技術分野において既知の他の好適な方法及び材料を使用することもできる。材料、方法、及び実施例は、単に例示的なものであり、限定を意図したものではない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。不一致である場合、定義を含め本明細書が適用される。

本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなるであろう。

ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ及びＰｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）におけるタンパク質分布を示す。 ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ及びＰｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）における非ＩｇＧタンパク質分布を示す。正規化ペプチドスペクトルマッチに基づいて、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩは、約６５％ＩｇＧ及び３５％非ＩｇＧであり、これは、報告された値と一致する。Ｐｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）は、９９％超ＩｇＧであった。 ２つのＮ－アセチルグルコサミン及び３つのマンノース残基を含む短い分岐コアオリゴ糖を示す。分岐のうちの１つは、当該技術分野において「α１，３アーム」と称され、第２の分岐は「α１，６アーム」と称される。四角：Ｎ－アセチルグルコサミン、濃灰色の円：マンノース、薄灰色の円：ガラクトース、菱形：Ｎ－アセチルノイラミン酸、三角：フコース。 ＩＶＩｇに存在する一般的なＦｃグリカンを示す。四角：Ｎ－アセチルグルコサミン、濃灰色の円：マンノース、薄灰色の円：ガラクトース、菱形：Ｎ－アセチルノイラミン酸、三角：フコース。 ガラクトシル化工程に続いてシアル化工程を実行することによって、免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ抗体がシアル化され得る方法を示す。四角：Ｎ－アセチルグルコサミン、濃灰色の円：マンノース、薄灰色の円：ガラクトース、菱形：Ｎ－アセチルノイラミン酸、三角：フコース。 ＩＶＩｇから開始する反応のＩｇＧ－Ｆｃグリカンプロファイルの代表的な例の反応生成物を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ヒト集団の遺伝的異質性に起因して、ＩｇＧ３グリコペプチドは、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４のいずれかと同一であり、したがって、一緒に定量化される。左図は、ＩｇＧをｈｓＩｇＧに転換するための酵素的シアル化反応の概略図であり、右図は、出発ＩＶＩｇ及びｈｓＩｇＧのＩｇＧ Ｆｃグリカンプロファイルである。バーは、左から右に、それぞれＩｇＧ１、ＩｇＧ２／３、及びＩｇＧ３／４に対応する。 完全ガラクトシル化及びシアル化グリカンの構造を示す。 ＢＩＳ－ＴＲＩＳに直接溶解されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対するシアル化反応（表１１）においてジシアリル化されているＩｇＧ１分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。 ＢＩＳ－ＴＲＩＳに緩衝液交換されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対するシアル化反応（表１２）においてジシアリル化されているＩｇＧ１分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。 ＢＩＳ－ＴＲＩＳに直接溶解されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対するシアル化反応（表１１）においてジシアリル化されているＩｇＧ２／３分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。 ＢＩＳ－ＴＲＩＳに直接溶解されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対するシアル化反応（表１１）においてジシアリル化されているＩｇＧ３／４分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。 ＢＩＳ－ＴＲＩＳに緩衝液交換されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対するシアル化反応（表１２）においてジシアリル化されているＩｇＧ２／３分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。 ＢＩＳ－ＴＲＩＳに緩衝液交換されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対するシアル化反応（表１２）においてジシアリル化されているＩｇＧ３／４分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。 ＡｌｄｒｉｃｈのＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ材料のタンパク質純度プロファイルをＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩペーストの可溶性画分と比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。

本開示は、（例えば、ＮｅｕＡｃ－α２，６－Ｇａｌ末端連結で）分岐グリカンのアームの両方においてシアル化された特定のレベルの分岐グリカンを有する、Ｆｃ領域を有する免疫グロブリン（例えば、ヒトＩｇＧ）を調製する方法を、部分的に包含する。レベルは、個々のＦｃ領域について測定され得る（例えば、Ｆｃ領域における分岐グリカンのα１，３アーム、α１，６アーム、若しくは両方でシアル化された分岐グリカンの数）か、又はポリペプチドの調製物の全体組成について測定され得る（例えば、ポリペプチドの調製物におけるＦｃ領域内の分岐グリカンのα１，３アーム、α１，６アーム、若しくは両方でシアル化された分岐グリカンの数若しくは割合）。いくつかの実施形態では、本開示は、ｈｓＩｇＧを使用する治療の方法に関する。

免疫グロブリンは、重鎖の定常領域内の保存位置でグリコシル化される。例えば、ＩｇＧ抗体は、ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に単一のＮ－結合グリコシル化部位を有する。ＩＶＩＧ及びｈｓＩｇＧ中に存在する抗体のタイプであるヒトＩｇＧについて、コアオリゴ糖は、通常、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ及びコアフコースからなり、異なる数の外側残基を有する。個々のＩｇＧ間の変動は、末端ＧｌｃＮＡｃの一方若しくは両方におけるガラクトース及び／又はガラクトース－シアル酸の結合、又は第３のＧｌｃＮＡｃアーム（バイセクトＧｌｃＮＡｃ）の結合を介して生じ得る。ＩＶＩＧの様々な市販の調製物は、ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７において一般的な１０％未満シアル化されているか、又は更に５％未満シアル化されている。

高シアル化ＩｇＧを調製するために使用され得る天然由来ポリペプチドとしては、例えば、ヒト血清中のＩｇＧ（例えば、１，０００人を超えるドナーからプールされたヒト血清）、ヒト血清に由来するＩｇＧ、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）、及びＩＶＩｇに由来するポリペプチド（例えば、ＩＶＩｇ（例えば、シアル化ＩｇＧが富化された）、又は修飾ＩＶＩｇ（例えば、酵素的にシアル化されたＩＶＩｇ ＩｇＧ）から精製されたポリペプチド）が挙げられる。

シアル化のレベルは、個々のＦｃ領域について測定され得る（例えば、Ｆｃ領域における分岐グリカンのα１，３アーム、α１，６アーム、若しくは両方でシアル化された分岐グリカンの数）か、又は糖タンパク質の調製物の全体組成について測定され得る（例えば、糖タンパク質の調製物におけるＦｃ領域内の分岐グリカンのα１，３アーム、α１，６アーム、若しくは両方でシアル化された分岐グリカンの数若しくは割合）。

高シアル化ＩｇＧは、Ｆｃ領域のグリカンの少なくとも４０％がジシアリル化されている、すなわち、α１，３アーム（例えば、ＮｅｕＡｃ－α２，６－Ｇａｌ末端連結を有する）上及びα１，６アーム（例えば、ＮｅｕＡｃ－α２，６－Ｇａｌ末端連結を有する）上にシアル酸を有する、免疫グロブリンを含む組成物である。

いくつかの実施形態では、シアル化レベルは、糖タンパク質調製物中の１つ以上のグリカン（例えば、α１，３アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン、並びに／又はα１，６アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン、並びに／又はα１，３アーム及びα１，６アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン）の絶対レベル又は範囲（例えば、そのモル数又はパーセント）である。いくつかの実施形態では、所定又は標的レベルは、糖タンパク質調製物中のグリカンの総レベルに対する、糖タンパク質調製物中の１つ以上のグリカン（例えば、α１，３アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン、並びに／又はα１，６アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン、並びに／又はα１，３アーム及びα１，６アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン）のレベル又は範囲である。いくつかの実施形態では、所定又は標的レベルは、糖タンパク質調製物中のシアル化グリカンの総レベルに対する、糖タンパク質調製物中の１つ以上のグリカン（例えば、α１，３アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン、並びに／又はα１，６アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン、並びに／又はα１，３アーム及びα１，６アーム上にシアル酸を有する分岐グリカン）のレベル又は範囲である。いくつかの実施形態では、所定又は標的レベルは、パーセントとして表される。

ＳＴ６ベータ－ガラクトシドアルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（ＳＴ６又はＳＴ６Ｇａｌ１）（例えば、ヒトＳＴ６）は、本明細書に記載の方法で使用される。有用なＳＴ６は、そのアミノ酸配列が、α２，６連結を介したグリカンの末端ガラクトースへのシアル酸の移動に関与するタンパク質（例えば、ヒトＳＴ６Ｇａｌ１又はＳＴ６）の少なくとも１つの特徴的な配列を含み、かつ／又はそれと少なくとも１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、又は７０％の同一性を示すポリペプチド、例えば、配列番号１及び４～９のいずれかと少なくとも１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、又は７０％同一性であるポリペプチドを含む。多種多様なＳＴ６シアリルトランスフェラーゼ配列は、本明細書に記載されるものなど、当該技術分野において既知であり、いくつかの実施形態では、ＳＴ６シアリルトランスフェラーゼは、本明細書に記載されるＳＴ６シアリルトランスフェラーゼ（その各々は、「参照」ＳＴ６シアリルトランスフェラーゼとみなされる）のうちの１つと、少なくとも１つの特徴的配列を共有し、かつ／又は本明細書に記載されるＳＴ６シアリルトランスフェラーゼのうちの１つとの特定の程度の全体的な配列同一性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＳＴ６シアリルトランスフェラーゼは、本明細書に記載される参照ＳＴ６シアリルトランスフェラーゼと少なくとも１つの生物活性を共有する。いくつかのこのような実施形態では、共有生物活性は、グリカンへのシアル酸の移動に関する。いくつかの実施形態では、ＳＴ６シアリルトランスフェラーゼは、ヒトシアリルトランスフェラーゼである。

ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ１（Beta-1,4-galactosyltransferase 1、Ｂ４ＧａｌＴ）、例えば、ヒトＢ４ＧａｌＴが、本明細書に記載の方法で使用される。有用なＢ４ＧａｌＴは、そのアミノ酸配列が、ウリジン５’－ジホスホセガラクトース（ＵＤＰ－Ｇａｌ）からＧｌｃＮＡｃへのβ－１，４連結としての移動ガラクトースの移動に関与するタンパク質の少なくとも１つの特徴的な配列を含み、かつ／又はそれと少なくとも１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、又は７０％の同一性を示すポリペプチドであり得る。幅広い様々なベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ配列は、本明細書に記載のものなど、当該技術分野において既知であり、いくつかの実施形態では、ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼは、本明細書に記載のベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（その各々は、「参照」ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼとみなされ得る）のうちの１つの少なくとも１つの特徴的な配列を共有し、かつ／又はそれと特定の程度の全体的な配列同一性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼは、本明細書に記載の参照ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼと少なくとも１つの生物活性を共有する。いくつかのこのような実施形態では、共有生物活性は、グリカンへのガラクトースの移動に関する。いくつかの実施形態では、ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼは、ヒトガラクトシルトランスフェラーゼである。

ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ及び／又はＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩは、ｈｓＩｇＧを調製するためのＩｇＧの供給源として使用され得る。ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ及び／又はＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩを調製するための様々な方法は、Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．６８，４５９－７５（１９４６））に記載されている。例えば、Ｃｏｈｎ画分Ｉは、プールされた血漿から沈殿され、低温でエタノールを添加することによって除去される（例えば、－３℃で血漿に対して０．０２７モル分率で）。上清（Ｃｏｈｎ画分ＩＩ／ＩＩＩ／ＩＶ／Ｖ）のｐＨは、緩衝液及び塩を添加することによって低減され（例えば、上清のｐＨは、１．７７の酸に対する塩のモル比で酢酸ナトリウム－酢酸緩衝液を添加することによって約６．８に低減される）、エタノール中０．０９１モル分率で－５℃で沈殿すると、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩが得られる。

ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩは、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）及び血漿製品の様々な供給業者から購入することができる。

いくつかの実施形態では、第１の分画／沈殿を実行して、Ｃｏｈｎ画分Ｉを沈殿させ、全ての他の成分を可溶性のままにすることができる。その後の沈殿によって、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩを得ることができる。いくつかの実施形態では、最初の分画によって、ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩを得ることができる。

酵素
ガラクトシル化酵素
ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（Ｂ４ＧａｌＴ）、例えば、ヒトＢ４ＧａｌＴ、例えば、ヒトＢ４Ｇａｌｔ１、並びにそのオルソログ、変異体、及びバリアントの酵素活性部分を含む、ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（Ｂ４ＧａｌＴ）、例えば、ヒトＢ４ＧａｌＴ、例えば、ヒトＢ４Ｇａｌｔ１、並びにそのオルソログ、変異体、及びバリアントは、それを含む融合タンパク質及びポリペプチドと共に、本明細書に記載の方法で使用するのに好適である。Ｂ４Ｇａｌｔ１は、ドナー基質ＵＤＰ－ガラクトースに対して排他的な特異性を有すると思われるＩＩ型膜結合糖タンパク質を各々コードする、７つのβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（β４ＧａｌＴ）遺伝子のうちの１つであり、これらは全て、β１，４結合のガラクトースを類似アクセプター糖：ＧｌｃＮＡｃ、Ｇｌｃ、及びＸｙｌに転移する。Ｂ４Ｇａｌｔ１は、単糖又は糖タンパク質炭水化物鎖の非還元末端のいずれかにあるＮ－アセチルグルコサミン残基にガラクトースを付加する。Ｂ４ＧａｌＴ１は、ＧＧＴＢ２とも呼ばれる。Ｂ４ＧＡＬＴ１の４つのアイソフォームをコードしている４つの代替転写物（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ２６８３）を表１に記載する。

Ｂ４ＧａｌＴ１の可溶性形態は、タンパク質分解処理による膜形態に由来する。切断部位は、Ｂ４ＧＡＬＴ１アイソフォーム１の７７～７８位にある（配列番号５）。

いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧＡＬＴ１アイソフォーム１（配列番号５）のアミノ酸１１３、１３０、１７２、２４３、２５０、２６２、３１０、３４３、又は３５５に対応するＢ４ＧａｌＴ１のアミノ酸のうちの１つ以上は、（配列番号５）と比較して保存されている。

いくつかの実施形態では、酵素は、例えば、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｂ４ＧＡＬＴ１アイソフォーム１（配列番号５）、又は配列番号５のオルソログ、変異体、若しくはバリアントの酵素活性部分である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｂ４ＧＡＬＴ１アイソフォーム２（配列番号６）、又は配列番号６のオルソログ、変異体、若しくはバリアントの酵素活性部分である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｂ４ＧＡＬＴ１アイソフォーム３（配列番号７）、又は配列番号７のオルソログ、変異体、若しくはバリアントの酵素活性部分である。いくつかの実施形態では、酵素は、Ｂ４ＧＡＬＴ１アイソフォーム４（配列番号８）、又は配列番号８のオルソログ、変異体、若しくはバリアントの酵素活性部分である。

いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分は、細胞質ドメイン、例えば、配列番号９を含まない。いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分は、膜貫通ドメイン、例えば、配列番号１０を含まない。いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分は、細胞質ドメイン、例えば、配列番号９も、膜貫通ドメイン、例えば、配列番号１０を含まない。

いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分は、管腔ドメイン、例えば、配列番号１１、又はそのオルソログ、変異体、若しくはバリアントの全部又は一部分を含む。

いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分は、配列番号５のアミノ酸１０９～３９８、又はそのオルソログ、変異体、若しくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ１の酵素活性部分は、配列番号５、又は配列番号５のオルソログ、変異体、若しくはバリアントからなる。

Ｂ４ＧａｌＴ１の好適な機能的部分は、配列番号１２と少なくとも８０％（８５％、９０％、９５％、９８％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含み得るか、又はそれからなり得る。

また、本明細書に記載の方法で使用するのに好適なのは、配列番号１３と少なくとも８０％（８５％、９０％、９５％、９８％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるアミノ酸配列である。

シアル化酵素
ＳＴ６Ｇａｌ１、例えば、ヒトＳＴ６Ｇａｌ１、並びにそのオルソログ、変異体、及びバリアントの酵素活性部分を含む、ＳＴ６、例えば、ＳＴ６Ｇａｌ１、例えば、ヒトＳＴ６Ｇａｌ１、並びにそのオルソログ、変異体、及びバリアントは、それを含む融合タンパク質及びポリペプチドと共に、本明細書に記載の方法で使用するのに好適である。アルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（Alpha-2,6-sialyltransferase 1、ＳＴ６）は、シチジン５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＣＭＰ－ＮＡＮＡ）からＧａｌにα－２，６連結としてシアル酸を移動させるＩＩ型ゴルジ膜結合糖タンパク質である。ＳＴ６Ｇａｌ１は、ＳＴ６Ｎ又はＳＩＡＴ１とも呼ばれる。ＳＴ６ＧＡＬ１の２つのアイソフォームをコードしている４つの代替転写物（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ６４８０）を表５に記載する。

ＳＴ６Ｇａｌ１の可溶性形態は、タンパク質分解処理による膜形態に由来する。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１アイソフォームａ（配列番号１４）のアミノ酸１４２、１４９、１６１、１８４、１８９、２１２、２３３、３３５、３５３、３５４、３６４、３６５、３６９、３７０、３７６、又は４０６に対応するＳＴ６Ｇａｌ１のアミノ酸のうちの１つ以上は、配列番号１４と比較して保存されている。

また、例えば、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分も本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、酵素は、ＳＴ６Ｇａｌ１アイソフォームａ（配列番号１４）、又は配列番号１４のオルソログ、変異体、若しくはバリアントの酵素活性部分である。いくつかの実施形態では、酵素は、ＳＴ６Ｇａｌ１アイソフォームｂ（配列番号１５）、又は配列番号１５のオルソログ、変異体、若しくはバリアントの酵素活性部分である。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、細胞質ドメイン、例えば、配列番号１６を含まない。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、膜貫通ドメイン、例えば、配列番号１７を含まない。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、細胞質ドメイン、例えば、配列番号１６又は、膜貫通ドメイン、例えば、配列番号１７を含まない。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、管腔ドメイン、例えば、配列番号１８、又はそのオルソログ、変異体、若しくはバリアントの全部又は一部分を含む。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、配列番号１４のアミノ酸８７～４０６（配列番号１９）、又はそのオルソログ、変異体、若しくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、配列番号１９、又は配列番号１９のオルソログ、変異体、若しくはバリアントからなる。

ＳＴ６Ｇａｌ１の好適な機能的部分は、配列番号１９と少なくとも７０％（８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含み得るか、又はそれからなり得る。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１は、配列番号１９、配列番号１９のアミノ酸２３～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸１３～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸１１～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸６～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸５～３２０の部分、又は配列番号１９のアミノ酸４～３２０の部分を含むか、又はそれらからなる。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、配列番号１４のアミノ酸１０９～４０６（配列番号２０）、又はそのオルソログ、変異体、若しくはバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１の酵素活性部分は、配列番号２０、又は配列番号２０のオルソログ、変異体、若しくはバリアントからなる。

ＳＴ６Ｇａｌ１の好適な機能的部分は、配列番号２０と少なくとも７０％（８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含み得るか、又はそれからなり得る。

また、本明細書に記載の方法で使用するのに好適なのは、配列番号２１と少なくとも７０％（８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるアミノ酸配列である。

バリアント
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の酵素は、（例えば、本明細書で提供される）例示的な配列のアミノ酸配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、又は１００％同一であり、例えば、例示的な配列の残基の最大１％、２％、５％、１０％、１５％、又は２０％が、例えば本明細書に記載の変異を含むか又はそれに加えて、例えば、保存的変異で置換されている差異を有する。好ましい実施形態では、バリアントは、親の所望の活性、例えば、β－ガラクトシドα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ活性又はβ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ活性を保持している。

２つの核酸配列の同一性パーセントを求めるために、最適に比較する目的でこれらの配列をアライメントする（例えば、最適にアライメントするために第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の一方又は両方にギャップが導入され得、また、比較目的のために非相同配列は無視され得る）。比較目的のためにアライメントされる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも８０％であり、いくつかの実施形態では、少なくとも９０％又は１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置におけるヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置が第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドによって占められる場合、分子はその位置で同一である（本明細書で使用される場合、核酸の「同一性」は核酸の「相同性」と等価である）。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列を最適にアライメントするために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮して、配列が共有している同一の位置の数の関数である。

対象ポリペプチド又は核酸配列（すなわち、クエリ）と第２のポリペプチド又は核酸配列（すなわち、標的）との間の同一性パーセントは、例えば、以下のような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の技能の範囲内である様々な方式で求められる：Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ（Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．ａｎｄ Ｍ．Ｓ．Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １４７：１９５－７）、「ＢｅｓｔＦｉｔ」（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，４８２－４８９（１９８１））ａｓ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ ｉｎｔｏ ＧｅｎｅＭａｔｃｈｅｒ Ｐｌｕｓ（商標），Ｓｃｈｗａｒｚ ａｎｄ Ｄａｙｈｏｆ（１９７９）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｏ．，Ｅｄ，ｐｐ３５３－３５８、ＢＬＡＳＴプログラム（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ、（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，Ｗ．Ｇｉｓｈ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５：４０３－１０）、ＢＬＡＳＴ－２、ＢＬＡＳＴ－Ｐ、ＢＬＡＳＴ－Ｎ、ＢＬＡＳＴ－Ｘ、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２、ＣＬＵＳＴＡＬ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア。加えて、当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。概して、標的タンパク質又は核酸について、比較の長さは、最長で標的の全長（例えば、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％）である任意の長さであってもよい。本開示の目的のために、同一性パーセントは、クエリ配列の全長に対するものである。

本開示の目的のために、２つの配列間の配列の比較及び同一性パーセントの決定は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５のＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリックスを使用して達成することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の配列と１００％同一ではない配列を有する酵素は、アミノ酸置換又は欠失によって異なる。置換の場合、差異は、１つ以上のアミノ酸残基の保存的又は非保存的置換であり得る。保存的置換は、ポリペプチド中の所定のアミノ酸を類似の特徴の別のアミノ酸で置換するものである。典型的な保存的置換は、以下の置換である：アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンなどの脂肪族アミノ酸の、別の脂肪族アミノ酸による置換、セリンのトレオニンによる置換又はその逆、アスパラギン酸及びグルタミン酸などの酸性残基の、別の酸性残基による置換、アスパラギン及びグルタミンなどのアミド基を有する残基の、アミド基を有する別の残基による置換、リジン及びアルギニンなどの塩基性残基の、別の塩基性残基による交換、並びにフェニルアラニン及びチロシンなどの芳香族残基の、別の芳香族残基による置換。保存的置換は、典型的には、以下のグループ内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン、及びフェニルアラニン、チロシン。

いくつかの実施形態では、Ｂ４ＧａｌＴ又はＳＴ６シアリルトランスフェラーゼポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸残基上に置換基を含む。更に他の有用なポリペプチドは、別の部分（例えば、ペプチド又は分子）と会合（例えば、融合、結合、又はカップリング）している。例えば、Ｂ４ＧａｌＴ又はＳＴ６シアリルトランスフェラーゼポリペプチドは、アミノ酸配列（例えば、リーダー配列、分泌配列、プロタンパク質配列、第２のポリペプチド、又はポリペプチドの精製、富化、若しくは安定化を容易にする配列）に融合、結合、又はカップリングすることができる。

グリカン
インビボ、Ｎ－結合オリゴ糖鎖は、小胞体の内腔内のタンパク質、例えば、免疫グロブリンに添加される。具体的には、初期オリゴ糖（典型的には１４糖）を、Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒの標的コンセンサス配列内に含有されるアスパラギン残基の側鎖上のアミノ基に添加し、式中、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸であり得る。この初期オリゴ糖の構造は、殆どの真核生物に共通であり、３つのグルコース、９つのマンノース、及び２つのＮ－アセチルグルコサミン残基を含有する。この初期オリゴ糖鎖は、小胞体中の特定のグリコシダーゼ酵素によりトリミングすることができ、２つのＮ－アセチルグルコサミン及び３つのマンノース残基からなる短い分岐状コアオリゴ糖を得ることができる。分岐のうちの１つは、図３に示されるように、当該技術分野において「α１，３アーム」と称され、第２の分岐は「α１，６アーム」と称される。

Ｎ－グリカンは、「高マンノース型」、「ハイブリッド型」、及び「複合型」と呼ばれる３つの異なる群に細分化することができ、共通の五糖コア（Ｍａｎ（α１，６）－（Ｍａｎ（α１，３））－Ｍａｎ（β１，４）－ＧｌｃＮＡｃ（β１，４）－ＧｌｃＮＡｃ（β１，Ｎ）－Ａｓｎ）は全ての３つの群で生じる。

ＩＶＩｇに存在するより一般的なＦｃグリカンは、図４に示されるものを含む。

小胞体における初期処理の後、ポリペプチドはゴルジに転移され、更なる処理が行われ得る。グリカンが、コア五糖構造に完全にトリミングされる前にゴルジに移されると、「高マンノースグリカン」が得られる。

追加的に又は代替的に、Ｎ－アセチルグルコサミンの１つ以上の単糖単位が、コアマンノースサブユニットに添加されて、「複合グリカン」を形成し得る。ガラクトースをＮ－アセチルグルコサミンサブユニットに添加してもよく、シアル酸サブユニットをガラクトースサブユニットに添加してもよく、その結果、シアル酸、ガラクトース、又はＮ－アセチルグルコサミン残基のいずれかが末端となる鎖が得られる。追加的に、フコース残基が、コアオリゴ糖のＮ－アセチルグルコサミン残基に添加され得る。これらの添加の各々は、特定のグリコシルトランスフェラーゼにより触媒される。

「ハイブリッドグリカン」は、高マンノース及び複合グリカンの両方の特徴を含む。例えば、ハイブリッドグリカンの１つの分岐は、主に又は排他的にマンノース残基を含み得、別の分岐は、Ｎ－アセチルグルコサミン、シアル酸、ガラクトース、及び／又はフコース糖を含み得る。

シアル酸は、複素環構造を有する９－炭素単糖のファミリーである。これらは、環に結合したカルボン酸基を介した負電荷、並びにＮ－アセチル基及びＮ－グリコリル基を含む他の化学的装飾を有する。哺乳類発現系で産生されるポリペプチドに見出される２つの主なタイプのシアル残基は、Ｎ－アセチル－ノイラミン酸（N-acetyl-neuraminic acid、ＮｅｕＡｃ）及びＮ－グリコリルノイラミン酸（N-glycolylneuraminic acid、ＮｅｕＧｃ）である。これらは、通常、Ｎ－及びＯ－結合グリカンの両方の非還元末端でガラクトース（galactose、Ｇａｌ）残基に結合した末端構造として生じる。これらのシアル基についてのグリコシド結合構成は、α２，３又はα２，６のいずれかであり得る。

Ｆｃ領域は、保存されたＮ－結合グリコシル化部位でグリコシル化される。例えば、ＩｇＧ抗体の各重鎖は、Ｃ_Ｈ２ドメインのＡｓｎ２９７で単一のＮ－結合グリコシル化部位を有する（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ８：２２６－２３４（２００９）を参照されたい）。ＩｇＡ抗体は、Ｃ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメイン内にＮ－結合グリコシル化部位を有し、ＩｇＥ抗体は、Ｃ_Ｈ３ドメイン内にＮ－結合グリコシル化部位を有し、ＩｇＭ抗体は、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及びＣ_Ｈ４ドメイン内にＮ－結合グリコシル化部位を有する（Ａｒｎｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：２９０８０－２９０８７（２００５）、Ｍａｔｔｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２２６０－２２７２（１９９８）、Ｎｅｔｔｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７：３２８－３２９（１９９５）を参照されたい）。

各抗体アイソタイプは、定常領域において異なる様々なＮ－結合炭水化物構造を有する。例えば、ＩｇＧは、Ｆｃ領域の各ＦｃポリペプチドにおけるＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に単一のＮ－結合二分岐炭水化物を有し、これはまた、Ｃ１ｑ及びＦｃγＲの結合部位も含有する（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１６３：５９－７６（１９９８）、及びＷｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい）。ヒトＩｇＧの場合、コアオリゴ糖は、通常、異なる数の外側残基を有するＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃからなる。個々のＩｇＧ間の変動は、末端ＧｌｃＮＡｃの一方若しくは両方におけるガラクトース及び／又はガラクトース－シアル酸の結合、又は第３のＧｌｃＮＡｃアーム（バイセクトＧｌｃＮＡｃ）の結合、及び／又はフコースの結合を介して生じ得る。

抗体
本明細書に記載の方法において有用な抗体としては、例えば、免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ抗体が挙げられる。抗体、例えば、ＩｇＧ抗体をプールすることができる。例えば、ＩｇＧ抗体は、プールされた血漿中に存在し得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体は、少なくとも１０００人のドナーから単離されたＩｇＧ抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、又は７０％ｗ／ｗは、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、ドナー対象の少なくとも９０％は、ウイルスに曝露されたことがある。

いくつかの場合では、プールされたＩｇＧ抗体は、分画、例えば、冷エタノール分画を使用して産生される（例えば、Ｃｏｈｎ－Ｏｎｃｌｅｙ手順（Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ＩＶ．Ａ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ Ｆｌｕｉｄｓ，」Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ６８：４５９－７５（１９４６）を参照されたい））。例えば、Ｏｆｏｓｕ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｌａｓｍａ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｕｓｅｄ ｔｏ Ｐｒｏｍｏｔｅ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，」Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ９９：８５１－６２（２００８）を参照されたく、Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｅｎｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｐｌａｓｍａ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｒｅｍｏｖａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，」ＢｉｏＤｒｕｇｓ １９（２）：７９－９６（２００５）も参照されたい。いくつかの場合では、分画は、凍結血漿を（例えば、約２℃～４℃で）ゆっくり解凍し、遠心分離して、寒冷沈降物を除去した後、例えば、エタノールの濃度、温度、ｐＨ、及び／又はイオン強度を操作することによって、上清中に残存するタンパク質の可溶度を変化させることを含む。いくつかの場合では、分画は、遠心分離、濾過（例えば、ナノ濾過）、及び／又は病原体低減処理を更に含む（例えば、Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）。

いくつかの場合では、プールされたＩｇＧ抗体、プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清、寒冷沈降物枯渇血漿、エタノール沈殿されているプールされたヒト血清若しくは血漿、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分、又はヒトＣｏｈｎ血漿Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ画分。いくつかの場合では、プールされたＩｇＧ抗体は、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分、又はヒトＣｏｈｎ血漿Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ画分である。

いくつかの場合では、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分は、（ａ）寒冷分離工程と、（ｂ）、アルコール沈殿工程と、（ｃ）沈殿物を回収し、それによってヒトＣｏｈｎＩ血漿画分を得る工程と、を含むプロセスによって得られる。いくつかの場合では、アルコール沈殿は、エタノール沈殿、例えば、冷エタノール沈殿、例えば、約－３℃～約－５℃のエタノール沈殿である。いくつかの場合では、アルコール沈殿は、８％又は約８％（ｖ／ｖ）アルコール、例えば、８％又は約８％（ｖ／ｖ）エタノールでのアルコール沈殿を含む。いくつかの場合では、アルコール沈殿は、ｐＨ７．２又は約ｐＨ７．２で実行される。いくつかの場合では、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分は、（ａ）ヒトＣｏｈｎＩ血漿画分上清を提供する工程と、（ｂ）第２のアルコール沈殿工程と、（ｃ）沈殿物を収集し、それによってヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を得る工程と、を含むプロセスによって得られる。いくつかの場合では、第２のアルコール沈殿は、２０％又は約２０％（ｖ／ｖ）アルコール、例えば、２０％～又は約２０％～約２５％（ｖ／ｖ）エタノールでのアルコール沈殿を含む。いくつかの場合では、第２のアルコール沈殿は、ｐＨ６．９又は約ｐＨ６．９で実行される。いくつかの場合では、ヒトＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分は、ヒトＣｏｈｎＩ血漿画分及びヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を組み合わせることによって得られる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＩｇＧ抗体の混合物を提供することを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体の混合物を提供する工程は、（ａ）少なくとも１０００人のヒト対象からのプールされた血漿を提供する工程、及び（ｂ）プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程、を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体の混合物は、静脈内免疫グロブリンから単離される。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ抗体の混合物は、静脈内免疫グロブリンである。

いくつかの実施形態では、プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離することは、沈殿（例えば、カプリル酸沈殿及び／又はポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）沈殿）、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換クロマトグラフィ、親水性相互作用クロマトグラフィ、例えば、親水性相互作用液体クロマトグラフィ、及び／又は高速液体クロマトグラフィ、例えば、Ｃ１８高速液体クロマトグラフィ）、濾過、脱脂、病原体不活性化、例えば、ウイルス不活性化（例えば、洗剤処理及び／又はカプリル酸沈殿）、又はこれらの組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程は、エタノール沈殿及び／又はカプリル酸（オクタン酸とも呼ばれる）沈殿を含む。

いくつかの実施形態では、プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程は、ＰＥＧ－４０００及び／又はＰＥＧ－６０００沈殿を含む。

いくつかの実施形態では、プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程は、エタノール沈殿又はカプリル酸沈殿、それに続くＰＥＧ－４０００及び／又はＰＥＧ－６０００沈殿、例えば、カプリル酸沈殿、それに続くＰＥＧ－４０００沈殿を含む。

いくつかの実施形態では、プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程は、ＩｇＧ抗体をイオン交換カラムに結合すること、及びＩｇＧ抗体をイオン交換カラムから溶出することを含む。

いくつかの実施形態では、プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程は、脱脂剤、高純度珪藻岩濾過媒体、又はヒュームドシリカのうちの１つ以上をＩｇＧ抗体の混合物に添加することを含む。いくつかの実施形態では、脱脂剤、高純度珪藻岩濾過媒体、又はヒュームドシリカは、緩衝液交換の前にＩｇＧ抗体の混合物に添加される。

いくつかの場合では、ＩｇＧ抗体の混合物、例えば、ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分又はＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分を単離することは、非ＩｇＧタンパク質の量を低減することを含む。いくつかの場合では、ＩｇＧ抗体の混合物、例えば、ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分又はＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分を単離することは、非タンパク質成分の量を低減することを含む。いくつかの場合では、ＩｇＧ抗体の混合物、例えば、ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分又はＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分を単離することは、ウイルス不活性化を含む。

非ＩｇＧタンパク質及び／又は非タンパク質成分の量を低減するのに好適な精製技術は、当該技術分野において既知であり、記載されている。例えば、Ｏｆｏｓｕ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｌａｓｍａ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｕｓｅｄ ｔｏ Ｐｒｏｍｏｔｅ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，」Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ９９：８５１－６２（２００８）を参照されたい。

好適なウイルス不活性化方法は、当該技術分野において既知であり、記載されている。例えば、Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｅｎｓｕｒｉｎｇ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｐｌａｓｍａ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｒｅｍｏｖａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，」ＢｉｏＤｒｕｇｓ １９（２）：７９－９６（２００５）を参照されたい。

酵素的ガラクトシル化及びシアル化
本明細書に記載の方法に好適な酵素的ガラクトシル化及びシアル化反応は、例えば、国際出願第ＵＳ２０２１／０３３１５０号に記載されている。

本明細書に記載の方法は、ガラクトシル化工程を含むことができる。例示的なガラクトシル化反応は、図５に示される。したがって、本明細書には、抗体、例えば、本明細書に記載の抗体と、ガラクトシル化酵素、例えば、Ｂ４ＧａｌＴ又はその酵素活性部分若しくはバリアントの、本明細書に記載のガラクトシル化酵素と、ＵＤＰ－ｇａｌ又はその塩と、を含む組成物（ガラクトシル化混合物）を提供すること、及び、例えば、本明細書に記載されるように、抗体をガラクトシル化するのに有効な条件下で組成物をインキュベートし、それによってガラクトシル化抗体を生成すること、によって、抗体、例えば、本明細書に記載される抗体をガラクトシル化する方法が提供される。

本明細書に記載の方法は、シアル化工程を含むことができる。例示的なシアル化反応は、図５に示される。したがって、本明細書には、例えば、本明細書に記載されるようなガラクトシル化抗体と、シアル化酵素、例えば、ＳＴ６Ｇａｌ１又はその酵素活性部分若しくはバリアントの、本明細書に記載のシアル化酵素と、ＣＭＰ－ＮＡＮＡ又はその塩と、を含む組成物（シアル化反応混合物）を提供すること、例えば、本明細書に記載されるように、抗体をシアル化するのに有効な条件下で組成物をインキュベートすること、によって、高シアル化抗体、例えば、本明細書に記載の抗体をシアル化する方法が提供される。

いくつかの実施形態では、ガラクトシル化工程及びシアル化工程は、同じ反応混合物中で逐次実行される、すなわち、ガラクトシル化反応混合物は、シアル化酵素及びＣＭＰ－ＮＡＮＡ又はその塩を添加するとシアル化反応混合物になる。いくつかの実施形態では、ガラクトシル化反応混合物は、シアル化工程の前に濾過、分画、又は精製されない。いくつかの実施形態では、ガラクトシル化工程及びシアル化工程は別々に実行され、例えば、プレガラクトシル化抗体が提供されるが、それらは、シアル化工程の前に処理（例えば、濾過、分画、又は精製）及び／又は保管されていてもよい。

したがって、本明細書に記載の方法はまた、逐次的なガラクトシル化及びシアル化工程も含むことができる。例示的なガラクトシル化及びシアル化反応は、図５に示される。したがって、本明細書には、ａ）抗体、例えば、本明細書に記載の抗体と、ガラクトシル化酵素、例えば、Ｂ４ＧａｌＴ又はその酵素活性部分若しくはバリアントの、本明細書に記載のガラクトシル化酵素と、ＵＤＰ－ｇａｌ又はその塩と、を含む組成物を提供する工程、ｂ）例えば、本明細書に記載されるように、抗体をガラクトシル化するのに有効な条件下で組成物をインキュベートする工程、ｃ）シアル化酵素、例えば、本明細書に記載のシアル化酵素、例えば、ＳＴ６Ｇａｌ１又はその酵素活性部分若しくはバリアント及びＣＭＰ－ＮＡＮＡ又はその塩をガラクトシル化反応混合物に添加し、それによって、シアル化反応混合物を生成する工程、及びｄ）例えば、本明細書に記載されるように、ガラクトシル化抗体をシアル化するのに有効な条件下で組成物をインキュベートする工程、によって、抗体、例えば、本明細書に記載の抗体をガラクトシル化及びシアル化する、例えば、高シアル化する方法が提供される。

本明細書にはまた、抗体、例えば、本明細書に記載の抗体と、ガラクトシル化酵素、例えば、Ｂ４ＧａｌＴ又はその酵素活性部分若しくはバリアントの、本明細書に記載のガラクトシル化酵素と、ＵＤＰ－ｇａｌ又はその塩と、シアル化酵素、例えば、ＳＴ６Ｇａｌ１又はその酵素活性部分若しくはバリアントの、本明細書に記載のシアル化酵素と、ＣＭＰ－ＮＡＮＡ又はその塩と、を含む組成物を提供すること、及びｄ）例えば、本明細書に記載されるように、抗体をガラクトシル化及びシアル化するのに有効な条件下で組成物をインキュベートすること、によって、抗体、例えば、本明細書に記載の抗体をガラクトシル化及びシアル化する、例えば、高シアル化する方法が提供される。

いくつかの実施形態では、ガラクトシル化反応混合物及び／又はシアル化反応混合物は、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）緩衝液を含む。

いくつかの実施形態では、ガラクトシル化反応混合物及び／又はシアル化反応混合物は、ＭｎＣｌ_２を含む。

いくつかの実施形態では、反応混合物のうちの１つ以上の１つ以上の成分は、インキュベーション中に補充される。すなわち、反応混合物は、反応の開始時の成分量（反応の経過中に変化し得る）を含んでもよいが、反応中に追加量の成分が補充されてもよい。

いくつかの実施形態で、Ｂ４ＧａｌＴは、配列番号１２又は配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

いくつかの実施形態では、ＳＴ６Ｇａｌ１は、配列番号１９又は配列番号２１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体上の分岐グリカンの少なくとも又は約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体上の分岐Ｆｃグリカンの約又は少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。

更に、いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体のＦａｂドメイン上の分岐グリカンの約又は少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体上の分岐Ｆｃグリカンの約又は少なくとも８０％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体のＦａｂドメイン上の分岐グリカンの約又は少なくとも６０％、６５％、７０％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体上の分岐Ｆｃグリカンの約又は少なくとも８５％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体のＦａｂドメイン上の分岐グリカンの約又は少なくとも６０％、６５％、７０％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体上の分岐Ｆｃグリカンの約又は少なくとも９０％は、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する。

いくつかの実施形態では、例えば、ｈｓＩｇＧなどのシアル化抗体のＦａｂドメイン上の分岐グリカンの約又は少なくとも６０％、６５％、７０％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。

いくつかの場合では、ｈｓＩｇＧは、例えば、国際出願第ＵＳ２０２１／０３３１５６号に記載されているように精製され得る。

例示的なガラクトシル化及びシアル化反応を以下の表に示す。

緩衝液
本明細書に記載の組成物及び方法で使用するのに好適な緩衝液としては、表９に示されるものが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの場合では、緩衝液は、１０～５００ｍＭ、例えば、１０～１００ｍＭ、例えば、約５０ｍＭで本組成物又は反応混合物中に存在する。いくつかの場合では、緩衝液は、５．５～８．５、例えば、６．５～７．５、例えば、約７．０のｐＨを有する。

グリカンの評価
上記のように、免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ抗体は、ガラクトシル化工程に続いてシアル化工程を実行することによってインビボでシアル化され得る。ベータ－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ１（Ｂ４ＧａｌＴ）は、ウリジン５’－ジホスホセガラクトース（ＵＤＰ－Ｇａｌ）からＧｌｃＮＡｃにβ－１，４連結としてガラクトースを移動させるＩＩ型ゴルジ膜結合糖タンパク質である。アルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（ＳＴ６又はＳＴ６Ｇａｌとも称される）は、シチジン５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＣＭＰ－ＮＡＮＡ）からＧａｌにα－２，６連結としてシアル酸を移動させるＩＩ型ゴルジ膜結合糖タンパク質である。概略的には、反応は、図５に示されるように進行する。

ポリペプチドのグリカンは、当該技術分野において既知の任意の方法を用いて評価することができる。例えば、グリカン組成物のシアル化（例えば、α１，３分岐及び／又はα１，６分岐においてシアル化された分岐グリカンのレベル）は、国際公開第２０１４／１７９６０１号に記載の方法を使用して特徴付けることができる。

本明細書に記載の方法によって調製されるｈｓＩｇＧ組成物のいくつかの実施形態では、Ｆｃドメインにおける分岐グリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。加えて、いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメインにおける分岐グリカンの少なくとも４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％は、ＮｅｕＡｃ－α２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。全体として、いくつかの実施形態では、分岐グリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％は、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する。

糖タンパク質のグリカンは、当該技術分野において既知の任意の方法を使用して評価することができる。例えば、グリカン組成物のシアル化（例えば、α１，３アーム及び／又はα１，６アーム上でシアル化されている分岐グリカンのレベル）は、例えば、Ｂａｒｂ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４８：９７０５－９７０７（２００９）、Ａｎｕｍｕｌａ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３８２：１６７－１７６（２０１２）、Ｇｉｌａｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１７：８０－８８（２０１１）、Ｗｕｈｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ．８４９：１１５－１２８（２００７）に記載されている方法を使用して特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、グリカンのシアル化の評価に加えて、表９に記載の１つ以上のパラメータが評価される。

いくつかの例では、本明細書に記載のグリカン構造及び組成物は、例えば、１つ以上の、酵素、クロマトグラフィ、質量分析（mass spectrometry、ＭＳ）、ＭＳが続くクロマトグラフィ、電気泳動法、ＭＳが続く電気泳動法、核磁気共鳴（nuclear magnetic resonance、ＮＭＲ）法、及びこれらの組み合わせによって分析される。例示的な酵素方法には、１つ以上のグリカン（例えば、１つ以上の露出グリカン）を放出するのに十分な条件下及び時間で糖タンパク質製剤を１つ以上の酵素と接触させることが含まれる。いくつかの例では、１つ以上の酵素には、ＰＮＧａｓｅ Ｆが含まれる。例示的なクロマトグラフィ方法としては、パルスドアンペロメトリ検出を使用する強陰イオン交換クロマトグラフィ（Strong Anion Exchange chromatography using Pulsed Amperometric Detection、ＳＡＸ－ＰＡＤ）、液体クロマトグラフィ（liquid chromatography、ＬＣ）、高性能液体クロマトグラフィ（high performance liquid chromatography、ＨＰＬＣ）、超高性能液体クロマトグラフィ（ultra performance liquid chromatography、ＵＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィ（thin layer chromatography、ＴＬＣ）、アミドカラムクロマトグラフィ、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な質量分析法（ＭＳ）としては、タンデムＭＳ、ＬＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、マトリックス支援型レーザ脱着イオン化質量分析法（matrix assisted laser desorption ionization mass spectrometry、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）、フーリエ変換質量分析法（Fourier transform mass spectrometry、ＦＴＭＳ）、質量分析によるイオンモビリティ分離（ion mobility separation with mass spectrometry、ＩＭＳ－ＭＳ）、電子移動解離（electron transfer dissociation、ＥＴＤ－ＭＳ）、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な電気泳動法としては、キャピラリ電気泳動（capillary electrophoresis、ＣＥ）、ＣＥ－ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、特定のグリカン構造を認識する抗体を使用するウエスタンブロッティングが続くＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-polyacrylamide gel electrophoresis、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な核磁気共鳴（ＮＭＲ）としては、一次元ＮＭＲ（one-dimensional NMR、１Ｄ－ＮＭＲ）、二次元ＮＭＲ（two-dimensional NMR、２Ｄ－ＮＭＲ）、相関分光磁気角度スピニングＮＭＲ（correlation spectroscopy magnetic-angle spinning NMR、ＣＯＳＹ－ＮＭＲ）、全相関分光ＮＭＲ（total correlated spectroscopy NMR、ＴＯＣＳＹ－ＮＭＲ）、異核種単一量子コヒーレンスＮＭＲ（heteronuclear single-quantum coherence NMR、ＨＳＱＣ－ＮＭＲ）、異核間多量子コヒーレンス（heteronuclear multiple quantum coherence、ＨＭＱＣ－ＮＭＲ）、回転核オーバーハウザ効果分光ＮＭＲ（rotational nuclear Overhauser effect spectroscopy NMR、ＲＯＥＳＹ－ＮＭＲ）、核オーバーハウザ効果分光法（nuclear Overhauser effect spectroscopy、ＮＯＥＳＹ－ＮＭＲ）、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの例では、本明細書に記載される技術は、グリカン又は糖タンパク質の検出、分析、及び／又は単離のための１つ以上の他の技術と組み合わされてもよい。例えば、特定の例では、グリカンは、１つ以上の利用可能な方法を使用して、本開示に従って分析される（ただし、いくつかの例では、Ａｎｕｍｕｌａ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３５０（１）：１，２００６、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７９：１６２，１９８９、及び／又はＴｏｗｎｓｅｎｄ，Ｒ．Ｒ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ「Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．，Ｅｄ．Ｚ．Ｅｌ Ｒａｓｓｉ，ｐｐ１８１－２０９，１９９５、国際公開第２００８／１２８２１６号、国際公開第２００８／１２８２２０号、国際公開第２００８／１２８２１８号、国際公開第２００８／１３０９２６号、国際公開第２００８／１２８２２５号、国際公開第２００８／１３０９２４号、国際公開第２００８／１２８２２１号、国際公開第２００８／１２８２２８号、国際公開第２００８／１２８２２７号、国際公開第２００８／１２８２３０号、国際公開第２００８／１２８２１９号、国際公開第２００８／１２８２２２号、国際公開第２０１０／０７１８１７号、国際公開第２０１０／０７１８２４号、国際公開第２０１０／０８５２５１号、国際公開第２０１１／０６９０５６号、及び国際公開第２０１１／１２７３２２号を参照されたい）。例えば、いくつかの例では、グリカンは、クロマトグラフィ方法、電気泳動法、核磁気共鳴法、及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上を使用して特徴付けられる。いくつかの例では、例えば、糖タンパク質製剤における１つ以上の標的タンパク質特異的パラメータを、例えば、本明細書に開示されるパラメータのうちの１つ以上を評価するための方法は、以下の方法のうちの１つ以上によって実行され得る。

いくつかの例では、例えば、糖タンパク質製剤における１つ以上の標的タンパク質特異的パラメータを、例えば、本明細書に開示されるパラメータのうちの１つ以上を評価するための方法は、以下の方法のうちの１つ以上によって実行され得る。

上記の文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるか、又は代替的に、それらが本明細書に記載されるパラメータを決定するための方法のうちの１つ以上に関連する程度まで組み込まれる。

薬学的組成物及び投与
高シアル化ＩｇＧは、薬学的組成物に組み込むことができる。例えば、薬学的組成物は、ｈｓＩｇＧを、無菌水及び生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味賦形剤、希釈剤、ビヒクル、防腐剤、結合剤などの薬学的に許容されるビヒクル又は媒体と好適に組み合わせ、続いて概して許容される薬学的慣行に必要な単位用量形態で混合することによって製剤化され得る。医薬製剤に含まれる有効成分の量は、指定範囲内の好適な用量が提供されるようなものである。

ｈｓＩｇＧは、静脈内投与用に製剤化され得る。

注射用無菌組成物は、ビヒクルとしての注射のために蒸留水を使用して、従来の薬学的慣行に従って製剤化することができる。例えば、グルコース並びに、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、及び塩化ナトリウムなどの他のサプリメントを含有する生理食塩水又は等張溶液を、注射のための水溶液として、任意選択的に、好適な可溶化剤、例えば、エタノールなどのアルコール、及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどのポリアルコール、及びポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ－５０などの非イオン性界面活性剤と組み合わせて、使用してもよい。

油性液体の非限定的な例としては、ゴマ油及び大豆油が挙げられ、可溶化剤としての安息香酸ベンジル又はベンジルアルコールと組み合わされ得る。含まれ得る他のアイテムは、リン酸緩衝液、又は酢酸ナトリウム緩衝液などの緩衝液、プロカイン塩酸塩などの無痛化薬、ベンジルアルコール又はフェノールなどの安定剤、及び酸化防止剤である。製剤化された注射剤は、好適なアンプルにパッケージされ得る。

好適な投与手段は、患者の年齢及び状態に基づいて選択され得る。本明細書に記載の方法によって調製されるｈｓＩｇＧの好適な用量は、市販のＩＶＩｇ調製物の好適な用量又は認可用量とほぼ同じか又はそれ未満（例えば、２０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、又は８０％少ない）であり得る。用量及び投与方法は、患者の体重、年齢、状態などに応じて変化し、当業者が必要に応じて適宜選択することができる。

本発明を以下の実施例に更に記載するが、これは、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１：ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分からのＩｇＧの高シアル化
全分岐グリカンの５０％超がジシアリル化されているＩｇＧは、以下のように調製することができる。

簡単に述べると、ＩｇＧ抗体（例えば、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ又はＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩから）の混合物を、β１，４ガラクトシルトランスフェラーゼ１（Ｂ４ＧａｌＴ）及びα２，６－シアリルトランスフェラーゼ（ＳＴ６Ｇａｌ１）酵素を使用する酵素反応に曝露する。ＳＴ６Ｇａｌ１を添加する前に反応からＢ４ＧａｌＴを除去する必要はなく、酵素反応間に生成物を部分的又は完全に精製する必要もない。したがって、反応は、逐次的であっても同時であってもよい。

ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素は、既存のアスパラギン結合グリカンに選択的にガラクトース残基を付加する。得られるガラクトシル化グリカンは、シアル酸残基を選択的に付加して、タンパク質に結合するアスパラギン結合グリカン構造をキャップする、シアル酸トランスフェラーゼ酵素に対する基質として機能する。したがって、ジシアリル化のために、シアル化反応全体では、２つの糖ヌクレオチド（ウリジン５’－ジホスホガラクトース（ＵＤＰ－Ｇａｌ）及びシチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＣＭＰ－ＮＡＮＡ））を用いた。後者を定期的に補充して、モノシアリル化生成物に対してジシアリル化生成物を増加させることができる。反応物は、共因子塩化マンガン（ＩＩ）を含む。

ＩＶＩｇから開始するこのような反応及び反応生成物のＩｇＧ－Ｆｃグリカンプロファイルの代表的な例を図６に示す。左図は、ＩｇＧをｈｓＩｇＧに転換するための酵素的シアル化反応の概略図であり、右図は、出発ＩＶＩｇ及びｈｓＩｇＧのＩｇＧ Ｆｃグリカンプロファイルである。この試験では、グリコペプチド質量分光分析を介して、異なるＩｇＧサブクラスのグリカンプロファイルが得られる。異なるＩｇＧサブクラスについてのグリコペプチドを定量化するために使用したペプチド配列は、ＩｇＧ１＝ＥＥＱＹＮＳＴＹＲ（配列番号１）、ＩｇＧ２／３＝ＥＥＱＦＮＳＴＦＲ（配列番号２、ＩｇＧ３／４＝ＥＥＱＹＮＳＴＦＲ（配列番号３）、及びＥＥＱＦＮＳＴＹＲ（配列番号４）であった。

グリカンデータは、ＩｇＧサブクラスごとに示される。ＩｇＧ３及びＩｇＧ４サブクラスからのグリカンは、別々に定量化することができない。示されるように、ＩＶＩｇについて、全ての非シアル化グリカンの合計は８０％超であり、全てのシアル化グリカンの合計は＜２０％である（上のグラフ）。反応生成物について、全ての非シアル化グリカンの合計は＜２０％であり、全てのシアル化グリカンの合計は８０％超である（下のグラフ）。グリコプロファイルに列挙されている異なるグリカンの命名法は、Ｎ結合型グリカンのＯｘｆｏｒｄ表記を使用する。

以下の実施例のための出発材料は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈから供給されるＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩの凍結乾燥固体（Ｇ２３８８；７８重量％のタンパク質、主にγ－グロブリン及びβ－グロブリン）であった。材料の一部分は、選択した反応緩衝液（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）にも、選択した濃度（＞１００ｍｇ／ｍＬ）でも完全に可溶性ではなかった。不溶性材料は、概して、おそらくリポタンパク質の存在に起因して、固体沈殿物ではなくゲル様であった。

ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ材料の５つの異なる調製物を作成し（調製物Ａ～Ｅ）、ｈｓＩｇＧを調製するために使用した。濃度を、ＩｇＧの吸光係数（１．３７）を使用してＡ２８０によって推定した。ＩｇＧ濃度をＡ２８０での吸収によって評価したが、このシグナルは、非ＩｇＧタンパク質、並びに非タンパク質材料の存在を反映している可能性が高いことに留意すべきである。したがって、実際のＩｇＧ濃度は、示されたものよりも低い可能性がある。

調製物Ａ：Ｃｏｈｎ画分ＩＩ、ＩＩＩを５０ｍＭのｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に溶解して、１０９ｍｇ／ｍＬの測定（Ａ２８０）濃度とした。未溶解材料を沈降させた。

調製物Ｂ：Ｃｏｈｎ画分ＩＩ、ＩＩＩを５０ｍＭのｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に溶解して、９７ｍｇ／ｍＬの測定（Ａ２８０）濃度とした。未溶解材料を沈降させた。

調製物Ｃ：Ｃｏｈｎ画分ＩＩ、ＩＩＩ（６４０ｍｇ）を３０ｍＬの５０ｍＭ、ｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液（２１．３ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、無菌濾過（０．２μｍ）して、未溶解材料を除去し、次いで次いでＧ２５脱塩カラムを使用して５０ｍＭのｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に緩衝液交換した。得られた材料を静置し、沈降した固体から液体をデカントし、１０ｋＤａのＭＷＣＯ Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔｕｒｂｏ１５装置を使用して液体を５０．６ｍｇ／ｍＬに濃縮した。

調製物Ｄ：Ｃｏｈｎ画分ＩＩ、ＩＩＩを５０ｍＭのｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に溶解し、１０ｋＤａのＧ２透析カセットを使用して５０ｍＭのｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に緩衝液交換した。未溶解材料を沈降させ、上清をデカントして除いた。上清中の濃度は、３７ｍｇ／ｍＬであった。

調製物Ｅ：Ｃｏｈｎ画分ＩＩ、ＩＩＩ材料（６２２ｍｇ）を９ｍＬの５０ｍＭ、ｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液（６９１ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、１０ｋＤａのＧ２透析カセットを使用して５４時間かけて、５０ｍＭのｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に緩衝液交換し、透析緩衝液を１回交換した。材料を遠心分離して、未溶解材料を沈降させ、上清をデカントして除いた。上清中の濃度は、３８ｍｇ／ｍＬであった。

ｐＨ６．９のＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液中のヒトＢ４ＧａｌＴ酵素、ＵＤＰ－Ｇａｌ糖ヌクレオチドドナー、及び塩化マンガン（ＩＩ）（ＭｎＣｌ_２）を使用するガラクトシル化を、最初に３７℃で１８～２２時間行った。これに続いて、配列番号１４のアミノ酸１０９～４０６（配列番号２０）を含むヒトＳＴ６シアリルトランスフェラーゼの欠失変異体及びＣＭＰ－ＮＡＮＡ糖ドナーの総量の半分を添加してシアル化を行った。ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第２の半分を、シアル化開始の約９時間後に添加した。総シアル化時間は、３０～３２時間であった。反応スケールは、２０ｍｇのタンパク質であった。試薬の量を反応全体にわたって変化させた。

Ｆｃガラクトシル化及びシアル化の程度を、以下のようにグリコペプチド分析によって決定した。５０μｇの試料を変性させ、還元し、アルキル化した。得られた材料をトリプシン消化及びＬＣＭＳによる分析に供した。Ｆｃグリコペプチド上の以下のグリカンを定量化した。

総シアル化を、完全にガラクトシル化及びシアル化されたグリカン（Ａ２、Ａ２Ｆ、及びＡ２Ｆ＋バイセクト＿ＧｌｃＮＡｃ）についてのＬＣＭＳピーク面積の合計として定義した（図７）。

表１１の条件を使用して、ＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に直接溶解したＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分材料に対して、第１のセットの反応を行った。図８、図１０、及び図１１は、各反応についてジシアリル化されている分岐グリカンの割合を示す。

表１２の条件を使用して、ＢＩＳ－ＴＲＩＳ緩衝液に交換したＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分材料緩衝液上で、第２のセットの反応を行った。図９、図１２、及び図１３は、各反応についてジシアリル化されている分岐グリカンの割合を示す。

出発材料は、完全にシアル化されたと定義される種（Ａ２Ｆ、Ａ２、Ａ２Ｆ＋バイセクトＧｌｃＮＡｃ）を本質的に有しなかった。しかしながら、いくつかの反応条件下では、９０％超の完全なシアル化（分岐グリカンの両方のアーム上でのシアル化）を達成することができた。ＢＩＳ－ＴＲＩＳに直接溶解した材料で行った反応は、直接溶解した材料を使用した反応をより高いタンパク質濃度で実施した場合であっても、緩衝液交換した材料を使用した場合よりも著しくより低いレベルの完全シアル化ＩｇＧを達成した。これは、出発材料中の塩化ナトリウムがシアル化反応に悪影響を有するためであり得る。興味深いことに、ＮａＣｌは、非ＩｇＧタンパク質のシアル化に著しい影響を与えないようであった。

実施例２：ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ沈殿物は約６５％ＩｇＧである
Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから供給されたＣｏｈｎ画分ＩＩ／ＩＩＩを、１０ｋＤａのＭＷＣＯフィルターを通してＢＩＳ－ＴＲＩＳに透析し、かつ／又は脱塩カラム（Ｇ２５）を使用してＢＩＳ－ＴＲＩＳに更に緩衝液交換した。

ＬＣ－ＭＳを使用して、出発材料中、市販のＩＶＩＧ調製物であるＰｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）の出発材料における、並びに透析後のＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩの可溶性画分及び不溶性画分の両方におけるタンパク質の相対量を、分子量補正正規化ペプチドスペクトルマッチ（normalized peptide spectral match、ｎＰＳＭ）に基づいて定量化した。

図１は、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ及びＰｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）におけるタンパク質分布を示し、図２は、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ及びＰｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）における非ＩｇＧタンパク質分布を示す。

正規化ペプチドスペクトルマッチに基づいて、ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩは、約６５％ＩｇＧ及び３５％非ＩｇＧであり、これは、報告された値と一致する。Ｐｒｉｖｉｇｅｎ（登録商標）は、９９％超ＩｇＧであった。したがって、ｈｓＩｇＧを調製するために実施例１で使用された材料は、タンパク質のかなりの部分がＩｇＧ以外であったことが理解され得る。

図１０～図１３は、ＢＩＳ－ＴＲＩＳに直接溶解されたＡｌｄｒｉｃｈ ＣｏｈｎＩＩ、ＩＩＩ材料に対する表１１（図１０、図１１）及び１２（図１２、図１３）に示されるシアル化反応においてジシアリル化されているＩｇＧ２／３（図１０、図１２）及びＩｇＧ３／４（図１１、図１３）分岐グリカンの画分を示す。グリカンを、ＩｇＧのトリプシン消化からのグリコペプチドのＬＣＭＳ分析によって定量化した。ジシアリル化は、Ａ２Ｆ、Ａ２Ｆ＋バイセクト、Ａ２の合計として定義される。

実施例３：脱脂
沈殿工程を使用しないが、ＢＩＳ－ＴＲＩＳへの緩衝液交換の前に脱脂を使用するＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩペーストの処理を、以下のように実行した。

ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩペーストを４℃で水に再懸濁し、０．５Ｍの酢酸を使用してｐＨを４．８１に調整した。撹拌を４℃で一晩継続した。２．４ＭのＢＩＳ－ＴＲＩＳ塩基緩衝液を使用してｐＨを７．００に調整した。遠心分離後、上清を０．４５ｕｍ、次いで０．２２ｕｍのフィルターを使用して濾過し、４℃で置いた。脂質除去剤（Lipid removal agent、ＬＲＡ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ Ｃｏｒｐ）及びＣｅｌｐｕｒｅ（登録商標）Ｐ－１００（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ Ｃｏｒｐ）を添加し、懸濁液を周囲温度で１．５時間撹拌し、４℃で１．５時間撹拌し、次いで０．２２ｕｍで濾過した。５ＭのＮａＣｌ溶液を使用して導電率を９．２ｍＳ／ｃｍに調整した。ヒュームドシリカ３５０～４２０ｍ^２／ｇ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）及びＣｅｌｐｕｒｅ（登録商標）Ｐ－１００を添加し、溶液を周囲温度で１時間撹拌し、０．２２ｕｍで濾過し、次いで０．１ｕｍで濾過した。

溶液を濃縮し、６ダイア容量の５０ｍＭのＢＩＳ－ＴＲＩＳ７．２０緩衝液を使用するＴＦＦ（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ３膜、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって緩衝液交換した。ＴＦＦシステムから溶出した後、材料を、Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔｕｒｂｏ１５装置（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）において１００ｍｇ／ｍＬ（１．３７の吸光係数を使用する）に更に濃縮した。材料「Ｆ」を指定する。

図１４は、ＡｌｄｒｉｃｈのＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ材料のタンパク質純度プロファイルをＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩペーストの可溶性画分と比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを示す。

上で得られたＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ材料Ｆをガラクトシル化反応に供した。

次いで、反応ＪＳ１２１２－１材料をシアル化した。

ガラクトシル化（ＪＳ１２１２－１化学量論）及びシアル化（ＪＳ１２１２－４化学量論）反応を実行し、２つの酵素反応を以下に記載するように同時に又は逐次的に行った。

逐次的反応：
ＢＩＳ－ＴＲＩＳ中の処理済みＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ（８．０ｍＬ、８００ｍｇ）を、３８ｕｍｏｌのＵＤＰ－Ｇａｌ、９．０ＵのＢ４ＧａｌＴ、５．０ｍＭの塩化マンガン（ＩＩ）と混合し、３７℃で２４時間インキュベートした。１２０ｕｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡ及び２８．８ＵのＳＴ６を添加し、インキュベーションを継続した。９時間の時点で、追加の１２０ｕｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡを添加した。反応を３１時間で停止した。

同時反応において、上に示した全ての試薬量をＴ＝０で混合した。９時間の時点で、追加の１２０ｕｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡを添加した。３１時間の総反応時間で反応を停止した。

両方とも同じ高レベルのガラクトシル化及びシアル化を示した。この材料に対する反応は、実施例１よりも少ない酵素で進行した。これは、低い塩含量で達成される高いタンパク質濃度に部分的に起因する。

配列
配列番号１（ＩｇＧ１）
ＥＥＱＹＮＳＴＹＲ

配列番号２（ＩｇＧ２／３）
ＥＥＱＦＮＳＴＦＲ

配列番号３（ＩｇＧ３／４）
ＥＥＱＹＮＳＴＦＲ

配列番号４（ＩｇＧ３／４）
ＥＥＱＦＮＳＴＹＲ

配列番号５（ＮＰ＿００１４８８．２ Ｂ４ＧＡＬＴ１［生物＝ヒト］［ＧｅｎｅＩＤ＝２６８３］［アイソフォーム＝１］）
ＭＲＬＲＥＰＬＬＳＧＳＡＡＭＰＧＡＳＬＱＲＡＣＲＬＬＶＡＶＣＡＬＨＬＧＶＴＬＶＹＹＬＡＧＲＤＬＳＲＬＰＱＬＶＧＶＳＴＰＬＱＧＧＳＮＳＡＡＡＩＧＱＳＳＧＥＬＲＴＧＧＡＲＰＰＰＰＬＧＡＳＳＱＰＲＰＧＧＤＳＳＰＶＶＤＳＧＰＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＤＴＩＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＱＥＡＬＫＤＹＤＹＴＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＡＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＳＬＰＹＶＱＹＦＧＧＶＳＡＬＳＫＱＱＦＬＴＩＮＧＦＰＮＮＹＷＧＷＧＧＥＤＤＤＩＦＮＲＬＶＦＲＧＭＳＩＳＲＰＮＡＶＶＧＲＣＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＱＶＬＤＶＱＲＹＰＬＹＴＱＩＴＶＤＩＧＴＰＳ

配列番号６（ＮＰ＿００１３６５４２４．１ Ｂ４ＧＡＬＴ１［生物＝ヒト］［ＧｅｎｅＩＤ＝２６８３］［アイソフォーム＝２］）
ＭＰＧＡＳＬＱＲＡＣＲＬＬＶＡＶＣＡＬＨＬＧＶＴＬＶＹＹＬＡＧＲＤＬＳＲＬＰＱＬＶＧＶＳＴＰＬＱＧＧＳＮＳＡＡＡＩＧＱＳＳＧＥＬＲＴＧＧＡＲＰＰＰＰＬＧＡＳＳＱＰＲＰＧＧＤＳＳＰＶＶＤＳＧＰＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＤＴＩＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＱＥＡＬＫＤＹＤＹＴＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＡＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＳＬＰＹＶＱＹＦＧＧＶＳＡＬＳＫＱＱＦＬＴＩＮＧＦＰＮＮＹＷＧＷＧＧＥＤＤＤＩＦＮＲＬＶＦＲＧＭＳＩＳＲＰＮＡＶＶＧＲＣＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＱＶＬＤＶＱＲＹＰＬＹＴＱＩＴＶＤＩＧＴＰＳ

配列番号７（ＮＰ＿００１３６５４２５．１ Ｂ４ＧＡＬＴ１［生物＝ヒト］［ＧｅｎｅＩＤ＝２６８３］［アイソフォーム＝３］）
ＭＲＬＲＥＰＬＬＳＧＳＡＡＭＰＧＡＳＬＱＲＡＣＲＬＬＶＡＶＣＡＬＨＬＧＶＴＬＶＹＹＬＡＧＲＤＬＳＲＬＰＱＬＶＧＶＳＴＰＬＱＧＧＳＮＳＡＡＡＩＧＱＳＳＧＥＬＲＴＧＧＡＲＰＰＰＰＬＧＡＳＳＱＰＲＰＧＧＤＳＳＰＶＶＤＳＧＰＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＤＴＩＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＱＥＡＬＫＤＹＤＹＴＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＡＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＲＬＶＦＲＧＭＳＩＳＲＰＮＡＶＶＧＲＣＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＱＶＬＤＶＱＲＹＰＬＹＴＱＩＴＶＤＩＧＴＰＳ

配列番号８（ＮＰ＿００１３６５４２６．１ Ｂ４ＧＡＬＴ１［生物＝ヒト］［ＧｅｎｅＩＤ＝２６８３］［アイソフォーム＝４］）
ＭＲＬＲＥＰＬＬＳＧＳＡＡＭＰＧＡＳＬＱＲＡＣＲＬＬＶＡＶＣＡＬＨＬＧＶＴＬＶＹＹＬＡＧＲＤＬＳＲＬＰＱＬＶＧＶＳＴＰＬＱＧＧＳＮＳＡＡＡＩＧＱＳＳＧＥＬＲＴＧＧＡＲＰＰＰＰＬＧＡＳＳＱＰＲＰＧＧＤＳＳＰＶＶＤＳＧＰＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＹＥＫＩＲＲＬＬＷ

配列番号９
ＭＲＬＲＥＰＬＬＳＧＳＡＡＭＰＧＡＳＬＱＲＡＣＲ

配列番号１０
ＬＬＶＡＶＣＡＬＨＬＧＶＴＬＶＹＹＬＡＧ

配列番号１１
ＲＤＬＳＲＬＰＱＬＶＧＶＳＴＰＬＱＧＧＳＮＳＡＡＡＩＧＱＳＳＧＥＬＲＴＧＧＡＲＰＰＰＰＬＧＡＳＳＱＰＲＰＧＧＤＳＳＰＶＶＤＳＧＰＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＤＴＩＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＱＥＡＬＫＤＹＤＹＴＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＡＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＳＬＰＹＶＱＹＦＧＧＶＳＡＬＳＫＱＱＦＬＴＩＮＧＦＰＮＮＹＷＧＷＧＧＥＤＤＤＩＦＮＲＬＶＦＲＧＭＳＩＳＲＰＮＡＶＶＧＲＣＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＱＶＬＤＶＱＲＹＰＬＹＴＱＩＴＶＤＩＧＴＰＳ

配列番号１２（Ｂ４ＧａｌＴ）
ＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＤＴＩＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＱＥＡＬＫＤＹＤＹＴＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＡＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＳＬＰＹＶＱＹＦＧＧＶＳＡＬＳＫＱＱＦＬＴＩＮＧＦＰＮＮＹＷＧＷＧＧＥＤＤＤＩＦＮＲＬＶＦＲＧＭＳＩＳＲＰＮＡＶＶＧＲＣＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＱＶＬＤＶＱＲＹＰＬＹＴＱＩＴＶＤＩＧＴＰＳ

配列番号１３（Ｂ４ＧａｌＴ）
ｇｓｓｐｌｌｄｍＧＰＡＳＮＬＴＳＶＰＶＰＨＴＴＡＬＳＬＰＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＭＰＶＤＬＥＬＶＡＫＱＮＰＮＶＫＭＧＧＲＹＡＰＲＤＣＶＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＶＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＤＴＩＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＱＥＡＬＫＤＹＤＹＴＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＡＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＳＬＰＹＶＱＹＦＧＧＶＳＡＬＳＫＱＱＦＬＴＩＮＧＦＰＮＮＹＷＧＷＧＧＥＤＤＤＩＦＮＲＬＶＦＲＧＭＳＩＳＲＰＮＡＶＶＧＲＣＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＱＶＬＤＶＱＲＹＰＬＹＴＱＩＴＶＤＩＧＴＰＳｐｒｄｈｈｈｈｈｈｈ

配列番号１４（ＮＰ＿００１３４０８４５．１（ＮＰ＿００３０２３．１、ＮＰ＿７７５３２３．１）ＳＴ６ＧＡＬ１［生物＝ヒト］［ＧｅｎｅＩＤ＝６４８０］［アイソフォーム＝ａ］）
ＭＩＨＴＮＬＫＫＫＦＳＣＣＶＬＶＦＬＬＦＡＶＩＣＶＷＫＥＫＫＫＧＳＹＹＤＳＦＫＬＱＴＫＥＦＱＶＬＫＳＬＧＫＬＡＭＧＳＤＳＱＳＶＳＳＳＳＴＱＤＰＨＲＧＲＱＴＬＧＳＬＲＧＬＡＫＡＫＰＥＡＳＦＱＶＷＮＫＤＳＳＳＫＮＬＩＰＲＬＱＫＩＷＫＮＹＬＳＭＮＫＹＫＶＳＹＫＧＰＧＰＧＩＫＦＳＡＥＡＬＲＣＨＬＲＤＨＶＮＶＳＭＶＥＶＴＤＦＰＦＮＴＳＥＷＥＧＹＬＰＫＥＳＩＲＴＫＡＧＰＷＧＲＣＡＶＶＳＳＡＧＳＬＫＳＳＱＬＧＲＥＩＤＤＨＤＡＶＬＲＦＮＧＡＰＴＡＮＦＱＱＤＶＧＴＫＴＴＩＲＬＭＮＳＱＬＶＴＴＥＫＲＦＬＫＤＳＬＹＮＥＧＩＬＩＶＷＤＰＳＶＹＨＳＤＩＰＫＷＹＱＮＰＤＹＮＦＦＮＮＹＫＴＹＲＫＬＨＰＮＱＰＦＹＩＬＫＰＱＭＰＷＥＬＷＤＩＬＱＥＩＳＰＥＥＩＱＰＮＰＰＳＳＧＭＬＧＩＩＩＭＭＴＬＣＤＱＶＤＩＹＥＦＬＰＳＫＲＫＴＤＶＣＹＹＹＱＫＦＦＤＳＡＣＴＭＧＡＹＨＰＬＬＹＥＫＮＬＶＫＨＬＮＱＧＴＤＥＤＩＹＬＬＧＫＡＴＬＰＧＦＲＴＩＨＣ

配列番号１５（ＮＰ＿７７５３２４．１ ＳＴ６ＧＡＬ１［生物＝ヒト］［ＧｅｎｅＩＤ＝６４８０］［アイソフォーム＝ｂ］）
ＭＮＳＱＬＶＴＴＥＫＲＦＬＫＤＳＬＹＮＥＧＩＬＩＶＷＤＰＳＶＹＨＳＤＩＰＫＷＹＱＮＰＤＹＮＦＦＮＮＹＫＴＹＲＫＬＨＰＮＱＰＦＹＩＬＫＰＱＭＰＷＥＬＷＤＩＬＱＥＩＳＰＥＥＩＱＰＮＰＰＳＳＧＭＬＧＩＩＩＭＭＴＬＣＤＱＶＤＩＹＥＦＬＰＳＫＲＫＴＤＶＣＹＹＹＱＫＦＦＤＳＡＣＴＭＧＡＹＨＰＬＬＹＥＫＮＬＶＫＨＬＮＱＧＴＤＥＤＩＹＬＬＧＫＡＴＬＰＧＦＲＴＩＨＣ

配列番号１６
ＭＩＨＴＮＬＫＫＫ

配列番号１７
ＦＳＣＣＶＬＶＦＬＬＦＡＶＩＣＶＷ

配列番号１８
ＫＥＫＫＫＧＳＹＹＤＳＦＫＬＱＴＫＥＦＱＶＬＫＳＬＧＫＬＡＭＧＳＤＳＱＳＶＳＳＳＳＴＱＤＰＨＲＧＲＱＴＬＧＳＬＲＧＬＡＫＡＫＰＥＡＳＦＱＶＷＮＫＤＳＳＳＫＮＬＩＰＲＬＱＫＩＷＫＮＹＬＳＭＮＫＹＫＶＳＹＫＧＰＧＰＧＩＫＦＳＡＥＡＬＲＣＨＬＲＤＨＶＮＶＳＭＶＥＶＴＤＦＰＦＮＴＳＥＷＥＧＹＬＰＫＥＳＩＲＴＫＡＧＰＷＧＲＣＡＶＶＳＳＡＧＳＬＫＳＳＱＬＧＲＥＩＤＤＨＤＡＶＬＲＦＮＧＡＰＴＡＮＦＱＱＤＶＧＴＫＴＴＩＲＬＭＮＳＱＬＶＴＴＥＫＲＦＬＫＤＳＬＹＮＥＧＩＬＩＶＷＤＰＳＶＹＨＳＤＩＰＫＷＹＱＮＰＤＹＮＦＦＮＮＹＫＴＹＲＫＬＨＰＮＱＰＦＹＩＬＫＰＱＭＰＷＥＬＷＤＩＬＱＥＩＳＰＥＥＩＱＰＮＰＰＳＳＧＭＬＧＩＩＩＭＭＴＬＣＤＱＶＤＩＹＥＦＬＰＳＫＲＫＴＤＶＣＹＹＹＱＫＦＦＤＳＡＣＴＭＧＡＹＨＰＬＬＹＥＫＮＬＶＫＨＬＮＱＧＴＤＥＤＩＹＬＬＧＫＡＴＬＰＧＦＲＴＩＨＣ

配列番号１９（ＳＴ６Ｇａｌ１）
ＡＫＰＥＡＳＦＱＶＷＮＫＤＳＳＳＫＮＬＩＰＲＬＱＫＩＷＫＮＹＬＳＭＮＫＹＫＶＳＹＫＧＰＧＰＧＩＫＦＳＡＥＡＬＲＣＨＬＲＤＨＶＮＶＳＭＶＥＶＴＤＦＰＦＮＴＳＥＷＥＧＹＬＰＫＥＳＩＲＴＫＡＧＰＷＧＲＣＡＶＶＳＳＡＧＳＬＫＳＳＱＬＧＲＥＩＤＤＨＤＡＶＬＲＦＮＧＡＰＴＡＮＦＱＱＤＶＧＴＫＴＴＩＲＬＭＮＳＱＬＶＴＴＥＫＲＦＬＫＤＳＬＹＮＥＧＩＬＩＶＷＤＰＳＶＹＨＳＤＩＰＫＷＹＱＮＰＤＹＮＦＦＮＮＹＫＴＹＲＫＬＨＰＮＱＰＦＹＩＬＫＰＱＭＰＷＥＬＷＤＩＬＱＥＩＳＰＥＥＩＱＰＮＰＰＳＳＧＭＬＧＩＩＩＭＭＴＬＣＤＱＶＤＩＹＥＦＬＰＳＫＲＫＴＤＶＣＹＹＹＱＫＦＦＤＳＡＣＴＭＧＡＹＨＰＬＬＹＥＫＮＬＶＫＨＬＮＱＧＴＤＥＤＩＹＬＬＧＫＡＴＬＰＧＦＲＴＩＨＣ

配列番号２０（ＳＴ６Ｇａｌ１）
ＬＱＫＩＷＫＮＹＬＳＭＮＫＹＫＶＳＹＫＧＰＧＰＧＩＫＦＳＡＥＡＬＲＣＨＬＲＤＨＶＮＶＳＭＶＥＶＴＤＦＰＦＮＴＳＥＷＥＧＹＬＰＫＥＳＩＲＴＫＡＧＰＷＧＲＣＡＶＶＳＳＡＧＳＬＫＳＳＱＬＧＲＥＩＤＤＨＤＡＶＬＲＦＮＧＡＰＴＡＮＦＱＱＤＶＧＴＫＴＴＩＲＬＭＮＳＱＬＶＴＴＥＫＲＦＬＫＤＳＬＹＮＥＧＩＬＩＶＷＤＰＳＶＹＨＳＤＩＰＫＷＹＱＮＰＤＹＮＦＦＮＮＹＫＴＹＲＫＬＨＰＮＱＰＦＹＩＬＫＰＱＭＰＷＥＬＷＤＩＬＱＥＩＳＰＥＥＩＱＰＮＰＰＳＳＧＭＬＧＩＩＩＭＭＴＬＣＤＱＶＤＩＹＥ

配列番号２１（ＳＴ６Ｇａｌ１）
ｇｓｓｐｌｌｄｍｌｅｈｈｈｈｈｈｈｈｍＡＫＰＥＡＳＦＱＶＷＮＫＤＳＳＳＫＮＬＩＰＲＬＱＫＩＷＫＮＹＬＳＭＮＫＹＫＶＳＹＫＧＰＧＰＧＩＫＦＳＡＥＡＬＲＣＨＬＲＤＨＶＮＶＳＭＶＥＶＴＤＦＰＦＮＴＳＥＷＥＧＹＬＰＫＥＳＩＲＴＫＡＧＰＷＧＲＣＡＶＶＳＳＡＧＳＬＫＳＳＱＬＧＲＥＩＤＤＨＤＡＶＬＲＦＮＧＡＰＴＡＮＦＱＱＤＶＧＴＫＴＴＩＲＬＭＮＳＱＬＶＴＴＥＫＲＦＬＫＤＳＬＹＮＥＧＩＬＩＶＷＤＰＳＶＹＨＳＤＩＰＫＷＹＱＮＰＤＹＮＦＦＮＮＹＫＴＹＲＫＬＨＰＮＱＰＦＹＩＬＫＰＱＭＰＷＥＬＷＤＩＬＱＥＩＳＰＥＥＩＱＰＮＰＰＳＳＧＭＬＧＩＩＩＭＭＴＬＣＤＱＶＤＩＹＥＦＬＰＳＫＲＫＴＤＶＣＹＹＹＱＫＦＦＤＳＡＣＴＭＧＡＹＨＰＬＬＹＥＫＮＬＶＫＨＬＮＱＧＴＤＥＤＩＹＬＬＧＫＡＴＬＰＧＦＲＴＩＨＣ

他の実施形態
本発明はその詳細な説明と関連して記載されてきたが、前述の説明は本発明の範囲を例示したものであって、発明の範囲を限定することを意図したものではなく、発明の範囲は添付の特許請求の範囲の範囲により定義されると理解される。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims (58)

1. 高シアル化ヒト免疫グロブリンＧ（ｈｓＩｇＧ）調製物を調製する方法であって、
   （ａ）プールされたヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を提供する工程であって、前記組成物中のタンパク質の少なくとも５％又は少なくとも１０％ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、工程と、
   （ｂ）β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びウリジン５’－ジホスホガラクトース（ＵＤＰ－Ｇａｌ）を、一緒に又は逐次的に、前記組成物に添加して、反応混合物を作製する工程であって、前記反応混合物が、緩衝液中にある、工程と、
   （ｃ）前記反応混合物をインキュベートする工程と、
   （ｄ）ＳＴ６ベータ－ガラクトシドアルファ－２，６－シアリルトランスフェラーゼ１（ＳＴ６Ｇａｌ１）及びシチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＣＭＰ－ＮＡＮＡ）を、一緒に又は逐次的に、前記反応混合物に添加する工程と、
   （ｅ）前記反応混合物をインキュベートし、それによって前記ｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む、方法。
2. 高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法であって、
   （ａ）プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程であって、前記組成物中のタンパク質の少なくとも５％又は少なくとも１０％ｗｔ／ｗｔが、緩衝液中でＩｇＧではない、工程と、
   （ｂ）緩衝液中でβ１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）、ＵＤＰ－Ｇａｌ、ＳＴ６Ｇａｌ１、及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む反応混合物中の前記組成物をインキュベートし、それによって前記ｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む、方法。
3. 高シアル化（ｈｓＩｇＧ）を調製する方法であって、
   （ａ）プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程であって、前記組成物中のタンパク質の少なくとも５％又は少なくとも１０％ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、工程と、
   （ｂ）前記組成物をβ４ＧａｌＴ及びＳＴ６Ｇａｌと組み合わせて、反応混合物を作製する工程であって、前記反応混合物が、緩衝液中にあり、かつＵＤＰ－Ｇａｌ及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含有する、工程と、前記反応混合物をインキュベートし、それによって前記ｈｓＩｇＧ調製物を作製する工程と、を含む、方法。
4. 前記緩衝液が、ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ０トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ＢＩＳ－ＴＲＩＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、１，４－ピペラジンジエタンスルホン酸（ＰＩＰＥＳ）、Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－２－アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、ピペラジン－Ｎ－Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＰＯＰＳＯ）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンプロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. ＩｇＧ抗体の混合物を提供する工程が、（ａ）少なくとも１０００人のヒト対象からのプールされた血漿を提供する工程と、（ｂ）前記プールされた血漿からＩｇＧ抗体の混合物を単離する工程と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. β４ＧａｌＴ及びＳＴ６Ｇａｌ及び同時に又はいずれかの順序で逐次的に添加される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 追加のＣＭＰ－ＮＡＮＡが、ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第１の添加後の時点で前記反応物に添加される、請求項６に記載の方法。
8. 追加のＣＭＰ－ＮＡＮＡが、ＣＭＰ－ＮＡＮＡの第２の添加後の時点で前記反応物に添加される、請求項６に記載の方法。
9. ＣＭＰ－ＮＡＮＡの前記第１及び第２の添加が、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４時間離れている、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. ＣＭＰ－ＮＡＮＡの前記第２及び第３の添加が、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、又は１８時間離れている、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
11. β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びＵＤＰ－Ｇａｌが、同時に前記反応物に添加される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. β１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼＩ（β４ＧａｌＴ）及びＵＤＰ－Ｇａｌが、同時に前記反応物に添加されない、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡが、同時に前記反応物に添加される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡが、同時に前記反応物に添加されない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記ｈｓＩｇＧ調製物を１つ以上の精製工程に供する工程を更に含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. β４ＧａｌＴを含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、前記ヒトＩｇＧ上に存在する分岐グリカンのガラクトシル化を可能にする条件下及び時間にわたって実行される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. ＳＴ６Ｇａｌ１を含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、前記ヒトＩｇＧ上に存在するガラクトシル化分岐グリカンのシアル化を可能にする条件下及び時間にわたって実行される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. プールされたヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む前記組成物中の前記タンパク質の少なくとも６０％、７０％、８０％、又は９０％ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. プールされたヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む前記組成物中の前記タンパク質の少なくとも１０％、１５％、２０％、又は３０％ｗｔ／ｗｔが、ＩｇＧではない、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. プールされたヒトＩｇＧを含む前記組成物が、プールされたヒト血漿、プールされたヒト血清、寒冷沈降物枯渇血漿、エタノール沈殿されているプールされたヒト血清若しくは血漿、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分、又はヒトＣｏｈｎ血漿Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ画分からなる群から選択される組成物である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. プールされたヒトＩｇＧを含む前記組成物が、ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ画分又はヒトＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ画分である、請求項２０に記載の方法。
22. 前記ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分又は前記ヒトＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を提供する工程が、少なくとも１００人のドナー、少なくとも５００人のドナー、又は少なくとも１０００人のドナーからプールされたヒト血清からのタンパク質の冷エタノール沈殿を含む、請求項２１に記載の方法。
23. 前記ヒトＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を提供する前記工程が、沈殿、クロマトグラフィ、濾過、脱脂、病原体不活性化、及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上を更に含む、請求項２２に記載の方法。
24. プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を提供する工程が、プールされたヒトＩｇＧを含む組成物を緩衝液に交換する工程、又はプールされたヒトＩｇＧを含む組成物を緩衝液に可溶化する工程を含む、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記緩衝液が、ＢＩＳ－ＴＲＩＳである、請求項２４に記載の方法。
26. 前記β４ＧａｌＴ１が、配列番号１２又は配列番号１３と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＳＴ６Ｇａｌ１が、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１と少なくとも８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列、配列番号１９のアミノ酸２３～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸１３～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸１１～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸６～３２０の部分、配列番号１９のアミノ酸５～３２０の部分、又は配列番号１９のアミノ酸４～３２０の部分を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記反応混合物中の塩濃度が、１５０ｍＭ未満、１２５ｍＭ未満、１００ｍＭ未満、５０ｍＭ未満、２５ｍＭ未満、１０ｍＭ未満、又は５ｍＭ未満である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
28. β４ＧａｌＴを含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は１８～２２時間実行され、ＳＴ６Ｇａｌ１を含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は３０～３２時間実行される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 工程（ｃ）が、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は１８～２２時間実行され、工程（ｅ）が、少なくとも８、１２、１８、２４、３０、４０、又は３０～３２時間実行される、請求項１に記載の方法。
30. 前記ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ血漿画分又は前記ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ血漿画分を緩衝液中に提供する工程が、前記ＣｏｈｎＩＩ／ＩＩＩ又は前記ＣｏｈｎＩ／ＩＩ／ＩＩＩ材料を緩衝液中に可溶化する工程と、未溶解材料を除去する工程と、前記得られた溶液を緩衝液への緩衝液交換に供する工程と、を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記緩衝液が、ＢＩＳ－ＴＲＩＳである、請求項２９に記載の方法。
32. 緩衝液交換の前に、脱脂剤、高純度珪藻岩濾過媒体、又はヒュームドシリカのうちの１つ以上を前記溶液に添加する工程を更に含む、請求項３０又は３１に記載の方法。
33. ケイ酸カルシウム水和物、二酸化ケイ素、及びヒュームドシリカのうちの１つ以上が、緩衝液交換の前に前記溶液に添加される、請求項３２に記載の方法。
34. 前記溶液を深層濾過する工程を更に含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の方法。
35. 工程（ｄ）が、ＳＴ６Ｇａｌ１及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを工程（ａ）の前記反応混合物に添加する工程を含む、請求項１に記載の方法。
36. 前記反応が、ｐＨ５．５～８．５で行われる、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記反応が、１０～５００ｍＭ、ｐＨ５．５～８．５のＢＩＳ－ＴＲＩＳ中で行われる、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
38. 反応混合物が、１～２０ｍＭのＭｎＣｌ_２を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
39. ＵＤＰ－Ｇａｌを含む前記反応混合物中のＵＤＰ－Ｇａｌの初期濃度が、２０～５００μｍｏｌのＵＤＰ－Ｇａｌ／ｇ ＩｇＧ抗体である、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
40. ＣＭＰ－ＮＡＮＡを含む前記反応混合物中のＣＭＰ－ＮＡＮＡの初期濃度が、１００～３０００μｍｏｌのＣＭＰ－ＮＡＮＡ／ｇ ＩｇＧ抗体である、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記インキュベーションが、２０～５０℃で行われる、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記インキュベーションが、３０～４５℃又は３５～３９℃で行われる、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記ＩｇＧ抗体が、少なくとも１０００人のドナーから単離されたＩｇＧ抗体を含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。
44. 前記ＩｇＧ抗体の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、又は７０％ｗ／ｗが、ＩｇＧ１抗体である、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記ｈｓＩｇＧ調製物が、更に処理されて、ＳＴ６Ｇａｌ１及びβ４ＧａｌＴが除去される、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記ｈｓＩｇＧ調製物中の前記分岐グリカンの約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％が、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記ｈｓＩｇＧ調製物中の前記分岐Ｆｃグリカンの約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％が、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
48. Ｆａｂドメイン上の前記分岐グリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％が、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する、請求項１～４７のいずれか一項に記載の方法。
49. Ｆｃドメイン上の前記分岐グリカンの少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％が、ＮｅｕＡｃ－α ２，６－Ｇａｌ末端連結を通して接続されるα１，３アーム及びα１，６アームの両方にシアル酸を有する、請求項１～４８のいずれか一項に記載の方法。
50. β４ＧａｌＴを含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、１２～３０時間実行される、請求項１～４９のいずれか一項に記載の方法。
51. ＳＴ６Ｇａｌ１を含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、２０～４０時間実行される、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
52. １つ以上の追加の精製工程を更に含み、非ＩｇＧタンパク質が、低減又は除去される、請求項１～５１のいずれか一項に記載の方法。
53. ＩｇＧではない前記タンパク質が、ヒト血漿又は血清中に存在するタンパク質である、請求項１～５２のいずれか一項に記載の方法。
54. β４ＧａｌＴが、５、１０、２０、３０、５０、又は１００ｍＵ／ｍｇ ＩｇＧ超でβ４ＧａｌＴを含む前記反応混合物中に存在する、請求項１～５３のいずれか一項に記載の方法。
55. ＳＴ６Ｇａ１が、５、１０、２０、５０、１００、又は２００ｍＵ／ｍｇ ＩｇＧ超でＳＴ６Ｇａｌ１を含む前記反応混合物中に存在する、請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記ｈｓＩｇＧ調製物中の前記ＩｇＧ抗体における前記分岐グリカンの５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％超が、α１，３分岐及びα１，６分岐の両方にシアル酸を有する、請求項１～５５のいずれか一項に記載の方法。
57. β４ＧａｌＴを含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、ガラクトシル化ＩｇＧ抗体を産生するのに十分な期間にわたって進行する、請求項１～５６のいずれか一項に記載の方法。
58. ＳＴ６Ｇａｌ１を含む前記反応混合物をインキュベートする工程が、ジシアリル化ＩｇＧ抗体を産生するのに十分な期間にわたって進行する、請求項１～５７のいずれか一項に記載の方法。

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