JP2023533707A - ヘパラナーゼ中和ａ５４モノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

本発明は、ヘパラナーゼ結合及びヘパラナーゼ中和モノクローナル抗体（ＩｇＧ－１ ｍＡｂ Ａ５４）（そのエピトープ（ＨＢＤ－ＩＩ）及びヘパラナーゼとの相互作用の様式を含む）に、それを含む医薬組成物に、並びに例えば、癌、炎症、ウイルス感染症、糖尿病及び関連する合併症が挙げられるがこれらに限定されないヘパラナーゼ活性に関連する疾患若しくは障害を阻害又は治療するためのその使用に関する。本発明は、ヘパラナーゼ中和ｍＡｂと、化学療法又は放射線等のさらなる抗癌治療とを含む組合せ癌治療をさらに提供する。【選択図】図６（１）

Description

本発明は、ヘパラナーゼ中和モノクローナル抗体、それを含む医薬組成物、及び対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療するためのその使用に関する。

ヘパラナーゼは、限られた数の部位でヘパラン硫酸（ＨＳ）側鎖を切断することができるエンド－β－Ｄ－グルクロニダーゼである。ヘパラナーゼ活性は、腫瘍由来細胞の転移能と相関し、これは、上皮細胞及び内皮細胞の下にある細胞外マトリクス（ＥＣＭ）及び基底膜のＨＳ切断及びリモデリングの結果としての細胞播種の増強に起因する。ヘパラナーゼ発現は、すべての主要なタイプのヒトの癌、すなわち癌腫、肉腫及び血液悪性腫瘍において誘導される。ヘパラナーゼレベルの増加は、手術後の患者の生存の減少、腫瘍転移の増加、及び微小血管密度の上昇に関連することが最も多い。加えて、ヘパラナーゼの上方制御は、より大きいサイズの腫瘍と関連していた。同様に、ヘパラナーゼ過剰発現は増強したが、抗ヘパラナーゼｓｉＲＮＡの局所送達は腫瘍異種移植片の増殖を阻害した。これらの結果は、ヘパラナーゼ機能が腫瘍転移に限定されず、原発巣の進行に関与することを示唆し、従って、腫瘍進行におけるヘパラナーゼの密接な関与を決定的に支持し、抗癌治療剤としてのヘパラナーゼ阻害剤の開発を促す。

ヘパラナーゼは、自己免疫、炎症（Ｌｅｒｎｅｒら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２０１１；１２１（５）：１７０９－２１）及び血管新生（Ｖｌｏｄａｖｓｋｙら、Ｉｎｖａｓｉｏｎ ＆ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ １９９２；１２、１１２－１２７）に関連する細胞浸潤を促進することも示されている。加えて、ヘパラナーゼ発現の増加が腎臓（Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． ６０、１２８７－１２９６、２００１；Ａｂａｓｓｉ及びＧｏｌｉｇｏｒｓｋｙ ＭＳ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６８５－７０２；ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌａｇ及びＢｕｉｊｓｅｒｓ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６４７－６６７）、肝臓（Ｘｉａｏら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ Ｒｅｓ． ２６、１９２～１９８、２００３）及び糖尿病性（Ｋａｔｚら、Ｉｓｒ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ． ４、９９６～１００２、２００２；Ｇｉｌら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２０１２；６１：２０８～１６、Ｓｉｍｅｏｎｏｖｉｃら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６０７－６３０、及びＺｉｏｌｋｏｗｓｋｉら、２０１２；１２２：１３２－４１）の障害において認められている。ヘパラナーゼは、急性膵炎（Ｋｈａｍａｙｓｉら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７０３－７１９）、心筋症（Ｓｈａｎｇら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７２１－７４５）、アミロイドーシス（Ｌｉ ＪＰ及びＺｈａｎｇ Ｘ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６３１－６４５）、ウイルス感染症（Ａｇｅｌｉｄｉｓ Ａ、Ｓｈｕｋｌａ Ｄ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７５９－７７０）にも関与する。

ヘパラナーゼが多種多様な病理学的プロセスに関与するという知見は、この酵素を阻害する治療用化合物の開発につながっており、これには、ＰＩ－８８、ホスホマンノペンタオース硫酸（Ｃｈｈａｂｒａ及びＦｅｒｒｏ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：４７３－４９１）、ＰＧ５４５（Ｈａｍｍｏｎｄ及びＤｒｅｄｇｅ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５３９－５６５）並びにロネパルスタット（Ｒｏｎｅｐａｒｓｔａｔ）、１００％Ｎ－アセチル化され２５％グリコール開裂されている修飾ヘパリンが含まれる。ロネパルスタットは、抗凝固活性をほとんど又は全く有さず、ＥＣＭ結合血管新生促進因子（すなわち、ｂＦＧＦ）の非常に減少した望ましくない放出及び活性化を発揮し（Ｃａｓｕら、Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｈａｅｍｏｓｔ Ｔｈｒｏｍｂ ２００８；３６（３－４）：１９５－２０３）；Ｎａｇｇｉら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０（１３）：１２１０３－１３）、いくつかの腫瘍モデル系において有効であることが証明されている（Ｒｉｔｃｈｉｅら、２０１１、同上；Ｙａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０（６）：２０４１－８、Ｎｏｓｅｄａ及びＢａｒｂｉｅｒｉ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５２３－５３８）が、依然としてヘパラナーゼ酵素活性に関連しない特性を示しうる（Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓら、Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ（Ｃａｒｌｔｏｎ） ２００５；１０（２）：１６７－７３）。

ヘパラナーゼの３つの潜在的なヘパリン結合ドメインは、本発明者ら及び共同研究者によって特定された（Ｌｅｖｙ－Ａｄａｍら、Ｉｄ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０（２１）：２０４５７－６６）。この配列に対応するペプチド（ＫＫＤＣと呼ばれる）は、ヘパリン及びＨＳと高い親和性で物理的に相互作用し、ヘパラナーゼ酵素活性を阻害するので、Ｌｙｓ^１５８－Ａｓｐ^１７１ドメインが特に注目された。さらには、このドメインを欠く欠失構築物は酵素活性を示さず、この領域に向けられたポリクローナル抗体（Ａｂ＃７３３）はヘパラナーゼ活性を阻害する（Ｚｅｔｓｅｒら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ ２００４；１１７（１１）：２２４９－５８）。

ヘパラナーゼ酵素活性を阻害する試みは、この活性の新たな臨床的関連性と並行して、ヘパラナーゼ研究の初期に既に開始された。より最近では、ペプチド、小分子（Ｇｉａｎｎｉｎｉら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５６７－６０３）、ヘパリンの修飾された非抗凝固種、並びにラミナラン硫酸、スラミン、ＰＩ－８８、及びＰＧ５４５等のいくつかの他のポリアニオン性分子（Ｄｒｅｄｇｅら、Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１１、６３５－４２、Ｈａｍｍｏｎｄ及びＤｒｅｄｇｅ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５３９－５６５）を含む様々な阻害分子が開発されている。同様に、抗ヘパラナーゼポリクローナル抗体が開発され、この抗ヘパラナーゼポリクローナル抗体がヘパラナーゼ酵素活性を中和し、細胞浸潤（Ｈｅ Ｘら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４；６４（１１）：３９２８－３３）、タンパク尿症（Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓ Ｖら、Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ（Ｃａｒｌｔｏｎ） ２００５；１０（２）：１６７－７３）及び新生内膜形成（Ｍｙｌｅｒ ＨＡら、Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００６；１３９：３３９－４５）を阻害することが実証された。中和抗ヘパラナーゼモノクローナル抗体が最近報告された（Ｗｅｉｓｓｍａｎｎら、ＰＮＡＳ １１３：７０４－７０９、２０１６）。

本発明の発明者らの一部による米国特許第７，７７２，１８７号明細書は、ヘパラナーゼの５０ＫｄサブユニットのＮ’末端領域に由来するアミノ酸配列に関し、特にヒトヘパラナーゼのＬｙｓ^１５８－Ａｓｎ^１７１の配列に関する。この’１８７特許はさらに、その配列に対するポリクローナル抗体、並びにヘパラナーゼ阻害剤としてのその組成物及び使用を開示する。

本発明の発明者及び共同研究者による米国特許第６，５６２，９５０号明細書は、ヘパラナーゼ活性を特異的に阻害する、ヘパラナーゼタンパク質又はその免疫原性部分によって誘発されるモノクローナル抗体を提供する。この’９５０特許は、２つのモノクローナル抗体ＨＰ－１３０及びＨ－２３９を開示した。注目すべきことに、アミノ酸１３０～２３０に局在する内部エピトープを認識するＨＰ－２３９はヘパラナーゼ活性の阻害を引き起こさなかったが、ヘパラナーゼのＣ末端に対して形成されたＨＰ－１３０はほぼ完全にその活性を阻害した。

本発明の発明者及び共同研究者による米国特許第８，０４８，９９３号明細書は、ヘパラナーゼタンパク質の２４６位のチロシンをフェニルアラニンが置換するという条件で、ヘパラナーゼタンパク質のエピトープに特異的に結合する抗体を提供する。

国際公開第２０１７／０６４７１６Ａ１号パンフレットは、ヘパラナーゼのＬｙｓ^１５８－Ａｓｐ^１７１ドメインに結合し、ヘパラナーゼ酵素活性を中和し、リンパ腫及び骨髄腫の腫瘍進行を減弱する、９Ｅ８と呼ばれる特異的モノクローナル抗体を記載する（Ｗｅｉｓｓｍａｎｎら、ＰＮＡＳ １１３：７０４－７０９、２０１６）。ＩｇＧクローンＳ９－Ｃ１及びＣ６－Ｓ４－Ｃ３は、ＩｇＭ ９Ｅ８に由来した。

従って、ヘパラナーゼ活性に関連する医学的状態を予防及び治療するために使用することができる高度に特異的なヘパラナーゼ中和モノクローナル抗体を提供する必要性は満たされていない。

米国特許第７，７７２，１８７号明細書 米国特許第６，５６２，９５０号明細書 米国特許第８，０４８，９９３号明細書 国際公開第２０１７／０６４７１６Ａ１号パンフレット

Ｌｅｒｎｅｒら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２０１１；１２１（５）：１７０９－２１ Ｖｌｏｄａｖｓｋｙら、Ｉｎｖａｓｉｏｎ ＆ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ １９９２；１２、１１２－１２７ Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓら、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ． ６０、１２８７－１２９６、２００１ Ａｂａｓｓｉ及びＧｏｌｉｇｏｒｓｋｙ ＭＳ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６８５－７０２ ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌａｇ及びＢｕｉｊｓｅｒｓ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６４７－６６７ Ｘｉａｏら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ Ｒｅｓ． ２６、１９２～１９８、２００３ Ｋａｔｚら、Ｉｓｒ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ． ４、９９６～１００２、２００２ Ｇｉｌら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２０１２；６１：２０８～１６ Ｓｉｍｅｏｎｏｖｉｃら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６０７－６３０ Ｚｉｏｌｋｏｗｓｋｉら、２０１２；１２２：１３２－４１ Ｋｈａｍａｙｓｉら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７０３－７１９ Ｓｈａｎｇら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７２１－７４５ Ｌｉ ＪＰ及びＺｈａｎｇ Ｘ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６３１－６４５ Ａｇｅｌｉｄｉｓ Ａ、Ｓｈｕｋｌａ Ｄ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７５９－７７０ Ｃｈｈａｂｒａ及びＦｅｒｒｏ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：４７３－４９１ Ｈａｍｍｏｎｄ及びＤｒｅｄｇｅ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５３９－５６５ Ｃａｓｕら、Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｈａｅｍｏｓｔ Ｔｈｒｏｍｂ ２００８；３６（３－４）：１９５－２０３ Ｎａｇｇｉら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０（１３）：１２１０３－１３ Ｙａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０（６）：２０４１－８ Ｎｏｓｅｄａ及びＢａｒｂｉｅｒｉ、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５２３－５３８ Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓら、Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ（Ｃａｒｌｔｏｎ） ２００５；１０（２）：１６７－７３ Ｌｅｖｙ－Ａｄａｍら、Ｉｄ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００５；２８０（２１）：２０４５７－６６ Ｚｅｔｓｅｒら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ ２００４；１１７（１１）：２２４９－５８ Ｇｉａｎｎｉｎｉら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：５６７－６０３ Ｄｒｅｄｇｅら、Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１１、６３５－４２ Ｈｅ Ｘら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４；６４（１１）：３９２８－３３ Ｍｙｌｅｒ ＨＡら、Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００６；１３９：３３９－４５ Ｗｅｉｓｓｍａｎｎら、ＰＮＡＳ １１３：７０４－７０９、２０１６

本発明は、ヘパラナーゼ中和ＩｇＧモノクローナル抗体（ｍＡｂ Ａ５４）、それを含む医薬組成物、及び悪性増殖性疾患を含むがこれに限定されないヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療するためのその使用を提供する。

本発明のｍＡｂ Ａ５４は、単剤として、又は化学療法若しくは放射線を含むがこれらに限定されない少なくとも１つのさらなる従来の療法と組み合わせて、ヘパラナーゼ酵素活性に関連する疾患及び障害を軽減及び治療するのに有用である。

第１の態様によれば、本発明は、中和モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、又は少なくともその抗原結合部分を含む抗体断片を提供する。別の実施形態によれば、このｍＡｂ又はその抗体断片は、ヘパラナーゼ中和効果を有する。

別の実施形態によれば、上記抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、ｄＡｂ、単離ＣＤＲ領域、単鎖抗体、ダイアボディ、及び線状抗体からなる群から選択される。

別の態様によれば、本発明は、本発明のｍＡｂ又はその抗体断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列を提供する。

別の態様によれば、本発明のｍＡｂ又はその抗体断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターが提供される。さらに別の態様によれば、本発明のベクターを含む宿主細胞が提供される。

別の態様によれば、本発明のｍＡｂ又はその抗体断片と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物が提供される。

別の態様によれば、必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療する方法であって、その対象に治療有効量の本発明のｍＡｂ又はその抗体断片を投与し、これによりこの対象におけるヘパラナーゼに関連する疾患又は障害を治療する工程を含む方法が提供される。

いくつかの実施形態では、当該方法は、本発明のｍＡｂ又はその抗体断片と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物をその対象に投与することを含む。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、ヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害は、悪性増殖性疾患、炎症性障害、自己免疫障害、ウイルス感染症、糖尿病及び関連する腎機能障害からなる群から選択される。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、ヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害は、癌等の悪性増殖性疾患である。

別の実施形態によれば、上記増殖性疾患は、癌腫（細胞腫）及び肉腫を含むがこれらに限定されない固形悪性腫瘍である。特定の実施形態によれば、この固形悪性腫瘍は黒色腫である。特定の実施形態によれば、固形悪性腫瘍は、乳癌、前立腺癌、皮膚癌、結腸癌、肺癌、膵癌、頭頸部癌、腎癌、卵巣癌、子宮頸癌、骨癌、肝癌、甲状腺癌、舌癌及び脳癌からなる群から選択される。

特定の実施形態によれば、上記増殖性疾患は、リンパ腫、白血病及び多発性骨髄腫等の造血器悪性腫瘍である。特定の実施形態によれば、この造血器悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病、急性骨髄球性白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肥満細胞白血病、多発性骨髄腫、骨髄性リンパ腫、ホジキン（Ｈｏｄｇｋｉｎ）リンパ腫、非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。

別の実施形態では、本発明の方法は、上記対象において腫瘍転移を低減又は阻害する。別の実施形態では、本発明の方法は、上記対象において腫瘍進行を阻害する。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、ヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害は、炎症性障害、自己免疫障害、ウイルス感染症、及び腎障害である。

本発明の方法の特定の実施形態では、上記対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は男性（雄）である。いくつかの実施形態では、対象は女性（雌）である。いくつかの実施形態では、対象は成人（成体）である。いくつかの実施形態では、対象は小児である。

別の態様によれば、ヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本発明のｍＡｂ又はその断片を、少なくとも１つの抗癌治療と組み合わせて投与し、これによりそのヘパラナーゼに関連する疾患又は障害を治療する工程を含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、上記抗癌治療は化学療法及び放射線療法から選択される。

別の態様によれば、ヘパラナーゼ活性を中和する方法であって、細胞を本発明のｍＡｂ又はその抗体断片と接触させる工程を含む方法が提供される。

本発明のさらなる実施形態及び適用可能性の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。

別の態様によれば、ヘパラナーゼ酵素に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体であって、この抗体、その抗原結合断片、類似体又は誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、このＣＤＲは配列番号１から配列番号６、若しくはこれらの組合せを含む抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体が提供される。

別の態様によれば、ヘパラナーゼ酵素のＨＢＤ－ＩＩ領域（ヘパリン結合ドメイン２）に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体であって、この抗体、その抗原結合断片、類似体又は誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、このＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、若しくはこれらの組合せを含む抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体が提供される。

いくつかの実施形態では、上記抗体又は断片は、マウス若しくはヒトの抗体若しくは断片であるか、又はヒト化抗体若しくは断片である。

別の態様によれば、必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患若しくは障害を抑制、阻害、予防又は治療する方法であって、その対象に治療有効量の、ヘパラナーゼ酵素に向けられた、若しくはＨＢＤ－ＩＩ領域（ヘパリン結合ドメイン２）に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体を投与する工程を含み、この抗体、又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、このＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む方法が提供される。

別の態様によれば、必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患若しくは障害を阻害又は治療する方法であって、その対象に治療有効量のヘパラナーゼ酵素に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体を投与する工程を含み、この抗体、又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、このＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む方法が提供される。

別の態様によれば、必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患若しくは障害を阻害又は治療する方法であって、その対象に治療有効量のヘパラナーゼ酵素のＨＢＤ－ＩＩ領域（ヘパリン結合ドメイン２）に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体を投与する工程を含み、この抗体、又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、このＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む方法が提供される。

図１は、様々なハイブリドーマを用いたヘパラナーゼの活性アッセイを表す折れ線グラフである。 図２Ａは、固定化潜在性ヘパラナーゼへの漸増濃度のｍＡｂ５４の結合対対照マウスＩｇＧの結合を表す折れ線グラフである。 図２Ｂは、Ａ５４ ｍＡｂ重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）のＳＤＳ－ＰＡＧＥであり、図２Ｃは、Ａ５４ ｍＡｂ重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）のウェスタンブロット分析である。 図３Ａは、０．１μｇ／ｍｌの精製ｍＡｂ Ａ５４と共にプレインキュベートした精製した組換えの活性ヘパラナーゼ対対照マウスＩｇＧと共にプレインキュベートした精製した組換えの活性ヘパラナーゼの活性アッセイを表す線グラフである。 図３Ｂは、１μｇ／ｍｌの精製ｍＡｂ Ａ５４と共にプレインキュベートした精製した組換えの活性ヘパラナーゼ対対照マウスＩｇＧと共にプレインキュベートした精製した組換えの活性ヘパラナーゼの活性アッセイを表す線グラフである。 図４Ａ～４Ｃは、マウスＩｇＧ又はｍＡｂ Ａ５４の存在下でのＵ８７ヒト神経膠腫細胞の浸潤を描く。図４Ａ～４Ｂは顕微鏡写真を示す。 図４Ａ～４Ｃは、マウスＩｇＧ又はｍＡｂ Ａ５４の存在下でのＵ８７ヒト神経膠腫細胞の浸潤を描く。図４Ｃは、再構成された基底膜を通る細胞浸潤の程度を表す棒グラフである。 図５Ａ～５Ｂは、ｍＡｂ Ａ５４の不存在下（ＰＢＳ）及び存在下でＮＯＳ／ＳＣＩＤマウスにおいて増殖するヒト骨髄腫腫瘍のルシフェラーゼインビボイメージング（ＩＶＩＳ）を表す写真である。 図５Ｃは、それぞれのルシフェラーゼシグナルの定量を表す棒グラフである。図５Ｄ～５Ｅは、ｍＡｂ Ａ５４の不存在下（ＰＢＳ）及び存在下でＮＯＳ／ＳＣＩＤマウスにおいて増殖するヒト神経膠腫腫瘍のルシフェラーゼインビボイメージング（ＩＶＩＳ）を表す写真である。 図５Ｆは、それぞれのルシフェラーゼシグナルの定量を表す棒グラフである。 図６Ａ～６Ｂは、ＰＢＳで処置した腫瘍担持マウス（対照）と比較した、ＭＰＣ－１１マウス骨髄腫腫瘍増殖の減弱におけるｍＡｂ Ａ５４の効果を表す。 図６Ｃは、ＰＢＳで処置した腫瘍担持マウス（対照）と比較した、ＭＰＣ－１１マウス骨髄腫腫瘍増殖の減弱におけるｍＡｂ Ａ５４の効果を表す。 図７Ａ～７Ｂは、ｍＡｂ Ａ５４の不存在下（ＰＢＳ）及び存在下で、Ｂａｌｂ／ｃマウスの乳腺脂肪体において増殖するマウス４Ｔ１乳癌腫瘍のルシフェラーゼ蛍光インビボイメージング（ＩＶＩＳ）を表す写真である。 図７Ｃは、それぞれのルシフェラーゼシグナルの定量を表す棒グラフである。 図７Ｄは、図７Ａ及び図７Ｂに記載されるビヒクル（ＰＢＳ）又はｍＡｂ Ａ５４で処置されたＢａｌｂ／ｃマウスから切除された４Ｔ１原発性腫瘍の重量を表す棒グラフである。図７Ｅ及び図７Ｆは、ビヒクル（ＰＢＳ）又はｍＡｂ Ａ５４で処置された、原発性腫瘍の除去後にＢａｌｂ／ｃマウスにおいて検出された４Ｔ１転移巣のルシフェラーゼ蛍光インビボイメージング（ＩＶＩＳ）を表す写真である。 図７Ｇは、それぞれのルシフェラーゼシグナルの定量を表す棒グラフである。 図８Ａ～８Ｄは、ＮＯＳ／ＳＣＩＤマウスにおいて、ｍＡｂ Ａ５４の不存在下（ＰＢＳ）及び存在下（それぞれ図８Ａ及び８Ｂ）並びにボルテゾミブ（Ｂｒｏｔｅｚｏｍｉｂ）の存在下及びｍＡｂ Ａ５４＋ボルテゾミブの存在下（それぞれ図８Ｃ及び８Ｄ）で増殖するヒト骨髄腫腫瘍のルシフェラーゼ蛍光インビボイメージング（ＩＶＩＳ）を表す写真である。 図８Ｅは、それぞれのルシフェラーゼシグナルの定量を表す棒グラフである。 図９Ａ及び図９Ｂは、ｍＡｂ Ａ５４の不存在下（ＰＢＳ）及び存在下で、Ｂａｌｂ／ｃマウスの乳腺脂肪体において増殖するマウス乳癌腫瘍のルシフェラーゼ蛍光インビボイメージング（ＩＶＩＳ）を表す写真である。 図９Ｃは、それぞれのルシフェラーゼシグナルの定量を表す棒グラフである。図９Ｄは、図９Ａ及び図９Ｂに記載されるビヒクル（ＰＢＳ）又はｍＡｂ Ａ５４で処置されたＢａｌｂ／ｃマウスから切除された腫瘍の重量を表す棒グラフである。 図１０は、Ａ５４ ｍＡｂ、ロネパルスタット又はＰＢＳで処置されたＣ５７ＢＬ／６マウスの生存率を表す折れ線グラフである。 図１１Ａは、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＡｂ Ａ５４、ゲムシタビン、又はｍＡｂ Ａ５４＋ゲムシタビンの組合せで処置されたＣ５７ＢＬ／６マウスから切除された腫瘍のサイズを表すグラフである。 図１１Ｂは、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｍＡｂ Ａ５４、ゲムシタビン、又はｍＡｂ Ａ５４＋ゲムシタビンの組合せで処置されたＣ５７ＢＬ／６マウスから切除された腫瘍の重量を表すグラフである。図１１Ｃは、腫瘍の写真を示す。 図１２Ａは、パパイン及びフィシンプロテアーゼによるＩｇＧ消化の概略図である。図１２Ｂは、Ａ５４ Ｆａｂの切断及び精製を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。 図１２Ｃは、非結合Ｆａｂ（右肩）からの結合Ａ５４－ＨＰＳＥ複合体（主ピーク）のサイズ排除クロマトグラフィー分離である。 図１３は、Ａ５４ ＣＤＲループの三次Ｆａｂ構造の概略図である。 図１４Ａ及び１４Ｂは、２つの異なる角度からのＨＰＳＥ（β／α）_８－バレルとのＡ５４結合相互作用を示す概略図である。図１４Ｃは、Ａ５４－ＨＰＳＥ結合に対する静電荷の強い寄与を示す静電表面表示である。 図１５Ａは、Ａ５４ Ｈ２ループ（緑）とＨＰＳＥ（青）との間の相互作用を示す概略図である。図１５Ｂは、Ａ５４ Ｈ３ループ（緑）とＨＰＳＥ（青）との間の相互作用を示す概略図である。 図１５Ｃは、Ａ５４ Ｌ１ループ（赤）とＨＰＳＥ（青）との間の相互作用を示す概略図である。図１５Ｄは、Ａ５４ Ｌ３ループ（赤）とＨＰＳＥ（青）との間の相互作用を示す概略図である。 図１５Ｅは、ＨＰＳＥ ＨＢＤ－ＩＩ残基（青）とＡ５４ ＶＨ（緑）及びＶＬ（赤）由来の残基との間の相互作用を示す概略図である。図１５Ｆは、ＰＤＢ ５Ｅ９Ｃ由来のｄｐ４四糖（シアン）とＡ５４－ＨＰＳＥ複合体との重なりを表示する概略図であり、Ａ５４がＨＰＳＥ結合溝をどのように立体的に閉塞するかを示す。

本発明は、ヘパラナーゼ中和モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、それを含む医薬組成物、及び悪性疾患を含むがこれに限定されないヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療するためのその使用に関する。

本発明は、ヘパラナーゼタンパク質（ＨＰＳＥ）に結合し（図２Ａ～２Ｃ）、ヘパラナーゼ酵素活性を中和する（図１及び３Ａ～３Ｂ）ｍＡｂの開発に部分的に基づく。本明細書において実証されるように、このｍＡｂは、マトリゲル、再構成された基底膜を介した細胞浸潤を著しく阻害した（図４Ａ～４Ｃ）。単剤としてのｍＡｂでの処置は、ルシフェラーゼ蛍光のインビボイメージングシステム（ＩＶＩＳ）によって明らかにされるように、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおいて増殖するより小さいヒト骨髄腫（ＣＡＧ）及び神経膠腫（Ｕ８７）腫瘍異種移植片（図５Ａ、５Ｂ、５Ｄ及び５Ｅ）をもたらした（図５Ｃ及び５Ｆ）。同様に、ｍＡｂ Ａ５４は、同系Ｂａｌｂ／ｃマウスモデルにおいてマウス骨髄腫（ＭＰＣ－１１）腫瘍増殖を減弱した（図６Ａ～６Ｃ）。ｍＡｂ Ａ５４は、同所性同系Ｂａｌｂ／ｃマウスモデルにおいて４Ｔ１マウス乳癌の自然転移も阻害した（図７Ａ～７Ｄ）。さらに、ヘパラナーゼタンパク質は、ＨＢＤ－Ｉ（ヘパリン結合ドメイン１）及びＨＢＤ－ＩＩ（ヘパリン結合ドメイン２）を含むがこれらに限定されない複数の結合位置を有する。ｍＡｂ Ａ５４相互作用の大部分は、ＨＢＤ－ＩＩとの相互作用である（実施例１２に詳述）。ｍＡｂ Ａ５４ ＣＤＲループは、ほぼすべてのＡ５４－ＨＰＳＥ結合相互作用を媒介する。Ａ５４ Ｆａｂは、ＨＢＤ－ＩＩ（Ｇｌｎ２７０－Ｌｙｓ２８０；図１４Ａ及び１４Ｂ）の真上の（β／α）_８－バレルドメイン上でＨＰＳＥに結合する。この相互作用は、ＨＰＳＥがそのＨＳ基質に結合するのを酵素結合溝の立体閉塞によって防止する。タンパク質表面電荷は、Ａ５４－ＨＰＳＥ相互作用に大きい静電的寄与を示す。ＨＢＤ－ＩＩは実質的に正に帯電しているのに対して、Ａ５４の結合交接部（界面、ｉｎｔｅｒｆａｃｅ）は負に帯電している（図１４Ｃ）。

ｍＡｂ Ａ５４は高い特異性を発揮し、ヘパラナーゼ酵素活性の標的化のみを可能にする。従って、本発明の抗体は、単剤として、又は化学療法若しくは放射線を含むがこれらに限定されない少なくとも１つのさらなる療法と組み合わせて、腫瘍進行、炎症、１型糖尿病、糖尿病性腎症、及びウイルス感染症を含むがこれらに限定されないヘパラナーゼ活性に関連する疾患及び障害を軽減及び治療するのに有用である。

別の実施形態によれば、配列番号１に示される配列（ＧＹＴＦＴＮ）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号２に示される配列（ＹＩＮＰＴＴＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、及び配列番号３に示される配列（ＧＧＡＧＹＤＹＤＥＤＹＡＭＤＹ）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含むｍＡｂ又はその抗体断片が提供される。

別の実施形態によれば、配列番号１に示される配列（ＧＹＴＦＴＮ）（短い配列）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号２に示される配列（ＹＩＮＰＴＴＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、及び配列番号３に示される配列（ＧＧＡＧＹＤＹＤＥＤＹＡＭＤＹ）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含むｍＡｂ又はその抗体断片が提供される。

別の実施形態によれば、配列番号４に示される配列（ＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＹＭＮ）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号５に示される配列（ＬＡＳＩＬＥＳ）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号６に示される配列（ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲを含むｍＡｂ又はその抗体断片が提供される。

別の実施形態によれば、配列番号４に示される配列（ＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＹＭＮ）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号５に示される配列（ＬＡＳＩＬＥＳ）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号６に示される配列（ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含むｍＡｂ又はその抗体断片が提供される。

別の実施形態によれば、配列番号１に示される配列（ＧＹＴＦＴＮ）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号２に示される配列（ＹＩＮＰＴＴＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、及び配列番号３に示される配列（ＧＧＡＧＹＤＹＤＥＤＹＡＭＤＹ）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを含み、かつ配列番号４に示される配列（ＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＹＭＮ）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号５に示される配列（ＬＡＳＩＬＥＳ）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号６に示される配列（ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）からなる群から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲを含むｍＡｂ又はその抗体断片が提供される。

別の実施形態によれば、配列番号１に示される配列（ＧＹＴＦＴＮ）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号２に示される配列（ＹＩＮＰＴＴＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤ）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、及び配列番号３に示される配列（ＧＧＡＧＹＤＹＤＥＤＹＡＭＤＹ）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、かつ配列番号４に示される配列（ＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＹＭＮ）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号５に示される配列（ＬＡＳＩＬＥＳ）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、及び配列番号６に示される配列（ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含むｍＡｂ又はその抗体断片が提供される。

別の実施形態によれば、配列番号１に示される短い配列（ＧＹＴＦＴＮ）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）は、配列番号１７に示される長い配列（ＧＹＴＦＴＮＹＷＭＨ）を含む重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）によって置換されてもよい。

いくつかの実施形態によれば、本発明は、配列番号７に示されるアミノ酸配列：ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＫＰＧＡＳＶＲＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＴＴＧＹＴＥＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＧＡＧＹＤＹＤＥＤＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳを有する重鎖可変ドメイン配列、若しくはこの重鎖配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するその類似体若しくは誘導体を含むｍＡｂ又はその抗体断片を提供する。いくつかの実施形態では、上記類似体又は誘導体は、配列番号７と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。

別の実施形態によれば、本発明は、配列番号８に示されるアミノ酸配列：ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣＲＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＹＭＮＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＩＬＥＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＮＥＤＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫを有する軽鎖可変ドメイン配列、若しくはこの軽鎖配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するその類似体若しくは誘導体を含むｍＡｂ又はその抗体断片を提供する。いくつかの実施形態では、上記類似体又は誘導体は、配列番号８と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の配列同一性を有する。

具体的な実施形態によれば、当該抗体又はその断片は、配列番号７に示される配列を有する重鎖可変ドメインと、配列番号８に示される配列を有する軽鎖可変ドメインとを含む。

参照配列の抗原結合部分と少なくとも７０％の配列同一性を有する当該モノクローナル抗体又はその断片の類似体及び誘導体も本発明の範囲内にある。いくつかの実施形態によれば、参照配列の抗原結合部分と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の配列同一性を有する当該モノクローナル抗体又はその断片の類似体及び誘導体が提供される。

用語「少なくともＸパーセントの同一性を有する」は、配列が最適にアラインメントされた場合の２つの比較される配列において同一であるアミノ酸残基のパーセントを指す。従って、７０％のアミノ酸配列同一性は、２つ以上の最適にアラインメントされたポリペプチド配列中の７０％のアミノ酸が同一であることを意味する。

本発明に係るモノクローナル抗体は、マウス、ラット及びヒトを含むがこれらに限定されない任意の哺乳動物種由来の定常領域を含有してもよい。本発明に係るモノクローナル抗体には、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、異種抗体、及び抗体の少なくとも抗原結合部分を含む抗体断片が含まれる。

本発明は、ハイブリドーマ細胞又は他の生物学的系から単離されたモノクローナル抗体、並びに組換え又は合成により生成されたモノクローナル抗体を包含する。このハイブリドーマは、当該技術分野で公知の方法のいずれかによって調製されてもよい（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５－４９７（１９７５））。ハイブリドーマ細胞株の上清は、典型的には、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）等の当該技術分野で公知の方法のいずれか１つによって抗体結合活性についてスクリーニングされる。上清は、ヘパラナーゼ酵素活性を阻害するｍＡｂの産生についてスクリーニングされてもよい。

上記のｍＡｂの重鎖又は軽鎖のアミノ酸配列のいずれかをコードするＤＮＡ配列も本発明の範囲内に包含される。当業者には疑いなく明らかであるように、遺伝コードの縮重性に起因して、複数の核酸配列が、配列番号９又は配列番号１０に示されるもの以外でも本発明のｍＡｂをコードする可能性がある。本発明は、上記ＤＮＡ配列を有するプラスミド等の発現ベクター、及びこれらの発現ベクターのうちの１つ以上を含有する宿主細胞も提供する。

抗体又は免疫グロブリンは、ジスルフィド結合によって互いに連結された２つの重鎖及び２つの軽鎖を含み、各軽鎖は、「Ｙ」字形の構成でジスルフィド結合によってそれぞれの重鎖に連結されている。抗体のタンパク質消化により、Ｆｖ（可変断片）及びＦｃ（結晶性断片）ドメインが得られる。抗原結合ドメイン、Ｆａｂは、ポリペプチド配列が変化する領域を含む。用語Ｆ（ａｂ’）_２は、ジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ’アームを表す。抗体の中心軸はＦｃ断片と呼ばれる。各重鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、続いていくつかの定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）を有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、他端に定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）を有し、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列しており、軽鎖定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。軽鎖及び重鎖の各対の可変ドメインは、抗原結合部位を形成する。軽鎖及び重鎖上のドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインは４つのフレームワーク領域を含み、このフレームワーク領域は、その配列は比較的保存されており、相補性決定領域（ＣＤＲ１～３）として知られる３つの超（高頻度）可変ドメインによって連結されている。これらのドメインは、抗原結合部位の特異性及び親和性に寄与する。重鎖のアイソタイプ（γ、α、δ、ε又はμ）は、免疫グロブリンのクラス（それぞれＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭ）を決定する。軽鎖は、すべての抗体のクラスにおいて見出される２つのアイソタイプ（カッパ、κ又はラムダ、λ）のいずれかである。

用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長又はインタクトなモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含む。

本発明に係る抗体は、抗体の抗原結合部分を少なくとも含む分子である。具体的な実施形態では、本発明に係る抗体（複数種可）は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、並びにＦａｂ又はＦ（ａｂ’）_２断片等のそのタンパク質分解断片である。さらに、キメラ抗体、ヒト抗体及びヒト化抗体、組換え及び操作された抗体、並びにそれらの断片が本発明の範囲内に含まれる。さらには、抗体の可変領域をコードするＤＮＡを他の抗体をコードするＤＮＡに挿入してキメラ抗体を作製することもできる。単鎖抗体も本発明の範囲内に入る。

「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、概してインタクトな抗体の抗原結合部位を含み、従って抗原に結合する能力を保持する。本定義に包含される抗体断片の例としては、（ｉ）ＶＬドメイン、ＣＬドメイン、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを有するＦａｂ断片、（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ末端に１個以上のシステイン残基を有するＦａｂ断片であるＦａｂ’断片、（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片、（ｉｖ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメイン並びにＣＨ１ドメインのＣ末端に１つ以上のシステイン残基を有するＦｄ’断片、（ｖ）抗体の単一アームのＶＬドメイン及びＶＨドメインを有するＦｖ断片、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ １９８９、３４１、５４４－５４６）、（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ領域、（ｖｉｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ’断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）_２断片、（ｉｘ）単鎖抗体分子（例えば、単鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８、２４２、４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）１９８８、８５、５８７９－５８８３）、（ｘ）同じポリペプチド鎖中の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む２つの抗原結合部位を有する「ダイアボディ（二重特異性抗体）」（例えば、欧州特許出願公開第４０４，０９７号明細書；国際公開第９３／１１１６１号パンフレット；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９３、９０、６４４４－６４４８を参照）；（ｘｉ）相補的軽鎖ポリペプチドと共に一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む「線状抗体（Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、１９９５、８、１０５７－１０６２；及び米国特許第５，６４１，８７０号明細書）」が挙げられる。

単鎖抗体は、抗原結合能を有し、免疫グロブリン軽鎖及び重鎖の可変領域と相同又は類似のアミノ酸配列、すなわち連結されたＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む単鎖複合ポリペプチドであることができる。

本明細書で使用する場合の「中和抗体」は、本明細書に従ってインビボアッセイ又はインビトロアッセイによって決定されるように、標的を介する活性又はシグナル伝達を低減又は阻害（遮断）することができる特異的リガンド標的（例えば、ヘパラナーゼ又はＨＢＤ－ＩＩ）に対する抗原結合部位を有する分子を指す。

本明細書で使用する場合の用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在してもよい起こりうる天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して向けられる。さらには、異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。修飾語「モノクローナル」は、いずれかの特定の方法による抗体の製造を必要とすると解釈されるべきではない。ｍＡｂｓは当業者に公知の複数の方法により得られてもよい。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ １９７５、２５６、４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよいし、又は組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ １９９１、３５２、６２４－６２８又はＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９１、２２２：５８１－５９７に記載されている技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。

本発明のｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びそれらの任意のサブクラスを含む、任意の免疫グロブリンクラスのものであってもよい。ｍＡｂを産生するハイブリドーマは、インビトロ又はインビボで培養されてもよい。高力価のｍＡｂは、個々のハイブリドーマからの細胞が新鮮感作（ｐｒｉｓｔｉｎｅ－ｐｒｉｍｅｄ）Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射されて高濃度の所望のｍＡｂを含有する腹水が生成されるインビボ産生によって得ることができる。アイソタイプＩｇＭ又はＩｇＧのｍＡｂは、このような腹水から、又は培養液上清から、当業者にとって周知であるカラムクロマトグラフィー方法を用いて精製されてもよい。

本発明におけるモノクローナル抗体は、具体的には、「キメラ」抗体、及び、この抗体の断片が所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体の断片を含み、キメラ抗体では、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は相同であり、鎖の残りは、別の種に由来するか又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は相同である（米国特許第４，８１６，５６７号明細書、及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５（１９８４））。加えて、親和性又は特異性を含む抗体分子の特定の特性を変更するために、相補性決定領域（ＣＤＲ）移植が実施されてもよい。ＣＤＲ移植の非限定的な例は、米国特許第５，２２５，５３９号明細書に開示されている。

キメラ抗体は、マウスｍＡｂに由来する可変領域及びヒト免疫グロブリン定常領域を有するもの等、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。実質的にヒト抗体（アクセプター抗体と呼ばれる）由来の可変領域フレームワーク残基及び実質的にマウス抗体（ドナー抗体と呼ばれる）由来の相補性決定領域を有する抗体は、ヒト化抗体とも呼ばれる。キメラ抗体は、適用における免疫原性を低減し、産生における収率を増加させるために主に使用され、例えば、マウスｍＡｂがハイブリドーマからのより高い収率を有するがヒトにおいてより高い免疫原性を有する場合に、ヒト／マウスキメラｍＡｂが使用される。キメラ抗体及びそれらの産生方法は、当該技術分野において公知である（例えば、国際公開第８６／０１５３３号パンフレット、国際公開第９７／０２６７１号パンフレット、国際公開第９０／０７８６１号パンフレット、国際公開第９２／２２６５３号パンフレット及び米国特許第５，６９３，７６２号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号明細書、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，５３０，１０１号明細書及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書）。

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。大部分において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒトの残基によって置換される。さらには、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでもよい。これらの修飾（改変）は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、この場合、超可変ループのすべて又は実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ １９８６、３２１、５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ １９８８、３３２、３２３－３２９；及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、１９９２、２、５９３－５９６を参照。

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、かつ／又は本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して生成することができる。１つの実施形態では、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択される（Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９９６ １４、３０９－３１４；Ｓｈｅｅｔｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、１９９８、９５、６１５７－６１６２）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９１、２２７、３８１；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９１、２２２、５８１）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活性化されているマウスに導入することによっても作製することもできる。負荷（チャレンジ）すると、ヒト抗体の産生が観察され、これは、遺伝子再構成、アセンブリ、及び抗体レパートリーを含むすべての点で、ヒトにおいて見られるものとよく似ている。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号明細書；米国特許第５，５４５，８０６号明細書；米国特許第５，５６９，８２５号明細書；米国特許第５，６２５，１２６号明細書；米国特許第５，６３３，４２５号明細書；米国特許第５，６６１，０１６号明細書、並びに以下の科学刊行物に記載されている：Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５－５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３：６５－９３（１９９５）。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に向けられた抗体を産生するヒトＢリンパ球（このようなＢリンパ球は、個体から回収されてもよいし、又はインビトロで免疫化されたものでもよい）の不死化を介して調製されてもよい。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ（アラン・アール・リス）、７７頁（１９８５年）；Ｂｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６－９５（１９９１）；及び米国特許第５，７５０，３７３号明細書を参照。

「単鎖可変（領域）フラグメント（ｓｃＦｖ）」という用語は、短い（通常はセリン、グリシン）リンカーと一緒に連結された、免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の可変領域の融合物を意味する。単鎖抗体は、抗原結合能を有し、免疫グロブリン軽鎖及び重鎖の可変領域（連結Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））に相同又は類似のアミノ酸配列を含む単鎖複合ポリペプチドであることができる。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌの両方が、天然のモノクローナル抗体配列をコピーしてもよく、又は鎖の一方若しくは両方が、米国特許第５，０９１，５１３号明細書に記載されるタイプのＣＤＲ－ＦＲ構築物を含んでもよい。この米国特許第５，０９１，５１３号明細書の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。軽鎖及び重鎖の可変領域に類似する別個のポリペプチドは、ポリペプチドリンカーによって共に保持される。このような単鎖抗体の生成方法は、特にＶ_Ｈ鎖及びＶ_Ｌ鎖のポリペプチド構造をコードするＤＮＡが公知である場合、例えば、米国特許第４，９４６，７７８号明細書、米国特許第５，０９１，５１３号明細書及び米国特許第５，０９６，８１５号明細書に記載される方法に従って達成されてもよく、これらの特許文献の各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用する場合の「抗体の抗原結合部分を有する分子」は、任意のアイソタイプのものであり、任意の動物細胞株又は微生物によって生成されるインタクトな免疫グロブリン分子だけでなく、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片を含むがこれらに限定されないその抗原結合反応性画分、その重鎖及び／若しくは軽鎖の可変部分、Ｆａｂミニ抗体（全内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９３／１５２１０号パンフレット、米国特許出願第０８／２５６，７９０号、国際公開第９６／１３５８３号パンフレット、米国特許出願第０８／８１７，７８８号、国際公開第９６／３７６２１号パンフレット、米国特許出願第０８／９９９，５５４号を参照）、二量体二重特異性ミニ抗体（Ｍｕｌｌｅｒら、１９９８を参照）、並びにそのような反応性画分を組み込むキメラ抗体若しくは単鎖抗体、並びにそのような抗体反応性画分が物理的に挿入されている任意の他のタイプの分子若しくは細胞、例えばキメラＴ細胞受容体若しくはそのような受容体を有するＴ細胞、又はそのような反応性画分を含有する分子の一部によって治療部分を送達するように開発された分子も含むことが意図される。このような分子は、酵素的切断、ペプチド合成又は組換え技術を含むがこれらに限定されない任意の公知の技術によって提供されてもよい。

モノクローナル抗体の調製のために、連続細胞株培養によって産生される抗体を提供する当該技術分野で公知の任意の技術を使用することができる。例としては、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２（１９８３）；「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８５）におけるＣｏｌｅら、７７－９６頁における技術等の様々な技術が挙げられる。

抗体をインビボで産生させる従来の方法に加えて、抗体は、ファージディスプレイ技術を用いてインビトロで生成することができる。このような組換え抗体の生成は、従来の抗体産生と比較してはるかに速く、そのような組換え抗体は膨大な数の抗原に対して生成することができる。さらには、従来の方法を使用する場合、多くの抗原は、非免疫原性又は極めて毒性であることが明らかにされ、それゆえ、動物において抗体を生成するためには使用することができない。さらに、組換え抗体の親和性成熟（すなわち、親和性及び特異性の増加）は、非常に単純であり、比較的迅速である。最後に、特定の抗原に対する多数の異なる抗体が、１つの選択手順において生成されることが可能である。組換えモノクローナル抗体を作製するために、すべてディスプレイライブラリーに基づく様々な方法を使用して、異なる抗原認識部位を有する抗体の大きいプールを作製することができる。このようなライブラリーは、いくつかの方法で作製することができる。重鎖生殖系列遺伝子のプールにおいて合成ＣＤＲ３領域をクローニングすることによって合成レパートリーを生成することができ、従って、様々な特異性を有する組換え抗体断片を選択することができる大きい抗体レパートリーを生成することができる。ヒトのリンパ球プールを、抗体ライブラリーの構築のための出発材料として使用することができる。ヒトＩｇＭ抗体のナイーブレパートリーを構築し、従って、大きい多様性のヒトライブラリーを作製することが可能である。この方法は、異なる抗原に対する多数の抗体を選択するために首尾よく広く使用されている。バクテリオファージライブラリーの構築及び組換え抗体の選択のためのプロトコルは、周知の参考文献Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｃｏｌｌｉｇａｎら（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（ジョン・ワイリー・アンド・サンズ）（１９９２－２０００）、第１７章、１７．１節に提供されている。

非ヒト抗体は、当該技術分野で公知の任意の方法によってヒト化されてもよい。１つの方法では、非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ヒト抗体又はコンセンサス抗体フレームワーク配列に挿入される。次いで、さらなる変化を抗体フレームワークに導入して、親和性又は免疫原性を調節することができる。

組成物、投与及び投与量
本発明の方法において使用するために、当該モノクローナル抗体は、１種以上の薬学的に許容できる担体、安定剤又は賦形剤（ビヒクル）を使用して従来の方法で製剤化されて、特にタンパク質活性剤に関して当該技術分野で公知の医薬組成物が形成されてもよい。担体は、組成物の他の原材料（成分）と適合性であり、そのレシピエント（被投与者）に有害でないという意味で「許容できる」。適切な担体は、典型的には、生理食塩水又はエタノール、ポリオール、例えばグリセロール若しくはプロピレングリコールを含む。

当該抗体は、中性又は塩形態として製剤化されてもよい。薬学的に許容できる塩には、酸付加塩（遊離アミノ基で形成される）が含まれ、この酸付加塩は、塩酸若しくはリン酸等の無機酸、又は酢酸、シュウ酸、酒石酸及びマレイン酸等の有機酸を用いて形成される。遊離カルボキシル基で形成される塩は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、又は水酸化第二鉄等の無機塩基、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン及びプロカイン等の有機塩基から誘導されてもよい。

当該組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、又は腹腔内の投与用に適切に製剤化されてもよく、好都合には、好ましくはレシピエントの血液と等張である抗体の滅菌水溶液を含む。このような製剤は、典型的には、生理学的に適合性の物質、例えば、塩化ナトリウム、グリシン等を含有し、生理学的条件と適合性の緩衝ｐＨを有する水に固体活性成分を溶解して水溶液を生成し、この溶液を滅菌することによって調製される。これらは、単位用量又は複数回用量の容器、例えば、密封アンプル又はバイアル中で調製されてもよい。

当該組成物は、安定剤、例えばポリエチレングリコール、タンパク質、糖類（例えばトレハロース）、アミノ酸、無機酸及びそれらの混合物を組み込んでもよい。安定剤は、適切な濃度及びｐＨで水溶液中で使用される。水溶液のｐＨは、５．０～９．０の範囲内、好ましくは６～８の範囲内になるように調整される。抗体の製剤化において、抗吸着剤が使用されてもよい。他の好適な賦形剤は、典型的には、アスコルビン酸等の抗酸化剤を含んでもよい。

当該組成物は、上記タンパク質を複合体化又は吸収するためのポリマーの使用によって達成されてもよい制御放出調製物として製剤化されてもよい。制御放出製剤のための適切なポリマーとしては、例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニルピロリドン、エチレン酢酸ビニル、及びメチルセルロースが挙げられる。制御放出のための別の可能な方法は、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）又はエチレン酢酸ビニルコポリマー等のポリマー材料の粒子に上記抗体を組み込むことである。あるいは、これらの薬剤をポリマー粒子に組み込む代わりに、これらの材料を、例えばコアセルベーション技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセル若しくはゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに、又はコロイド状薬物送達系、例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセルに、又はマクロエマルションに封入することが可能である。

経口調製物が望ましい場合、当該組成物は、ラクトース、スクロース、デンプン、タルク、ステアリン酸マグネシウム、結晶性セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム又はアラビアゴム等の担体と組み合わされてもよい。

本発明のｍＡｂは、非経口的に、一般的には静脈内注入によって投与されてもよい。投与は、腹腔内、経口、皮下、又は筋肉内経路によるものであってもよい。抗体は概して、約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇ患者体重、通常約０．５～約１０ｍｇ／ｋｇ、多くの場合約１～約５ｍｇ／ｋｇの範囲に投与される。これに関して、少なくとも１２時間、好ましくは少なくとも４日、より好ましくは２１日までの循環半減期を有する抗体を使用することが好ましい。キメラ抗体及びヒト化抗体は、それぞれ４日まで及び１４～２１日までの循環半減期を有すると予想される。いくつかの場合では、処置期間にわたって、大きい負荷用量、続いて定期的な（例えば、毎週の）維持用量を投与することが有利であってもよい。抗体は、徐放性送達システム、ポンプ、及び持続注入のための他の公知の送達システムによって送達することもできる。投与レジメンは、特定の抗体の薬物動態に基づいてその特定の抗体の所望の循環レベルを提供するように変更されてもよい。従って、用量は、治療剤の所望の循環レベルが維持されるように計算される。

典型的には、有効用量は、対象の状態、及び治療される対象の体重又は表面積によって決定される。用量のサイズ及び投与レジメンも、特定の対象におけるｍＡｂ又はさらなる治療剤の組合せの投与に伴う任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度によって決定される。投与される治療用組成物の有効量を決定する際に、医師は、とりわけ、循環血漿レベル、毒性、及び疾患の進行を評価する必要がある。

化学療法
さらに別の実施形態によれば、本発明のｍＡｂ及び少なくとも１種の化学療法剤の投与を含む併用癌療法が提供される。

化学療法薬は、癌細胞に対するその効果、その薬物が干渉する細胞活性若しくは細胞プロセス、又はその薬物が影響を及ぼす細胞周期の特定の段階に基づいていくつかのグループに分けられる。従って、化学療法薬は以下のカテゴリーの１つに入る：アルキル化剤、ニトロソウレア、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、トポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤、とりわけ白金系薬物、ステロイド及び抗血管新生剤。

「ヌクレオシド類似体」とも呼ばれる代謝拮抗剤は、ＤＮＡ分子中のビルディングブロック（基本単位）としての天然物質を置換し、これにより細胞代謝及びタンパク質合成に必要な酵素の機能を変化させる。代謝拮抗剤が細胞増殖に必要な栄養素を模倣する場合、細胞は最終的に溶解を受ける。ヌクレオシドが非機能性ヌクレオシド類似体で置き換えられる場合、非機能性ヌクレオシド類似体はＤＮＡ及びＲＮＡに組み込まれ、最終的に、細胞のＤＮＡを合成する能力を阻害することによって細胞周期停止及びアポトーシスを誘導する。代謝拮抗剤は主として新しい細胞の形成のために新しいＤＮＡの合成を受ける細胞に作用するので、代謝拮抗剤は細胞周期特異的であり、細胞分裂のＳ期の間に最も有効である。これらの薬物に関連する毒性は、急速に成長及び分裂している細胞において見られる。代謝拮抗剤の例としては、プリンアンタゴニスト、ピリミジンアンタゴニスト、及び葉酸アンタゴニストが挙げられる。これらの薬剤は、Ｓ期の間に細胞を損傷し、白血病、乳房、卵巣、及び胃腸管の腫瘍、並びに他の癌を治療するために一般に使用される。代謝拮抗剤の具体例としては、５－フルオロウラシル（５ＦＵとしても知られる）、カペシタビン、６－メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン及びペメトレキセドが挙げられる。

白金系化学療法薬は、いくつかの異なる方法でＤＮＡを架橋し、有糸分裂による細胞分裂を妨害する。損傷したＤＮＡはＤＮＡ修復機構を誘発し、これは次に、修復が不可能であることが判明したときにアポトーシスを活性化する。ＤＮＡ変化の中で最も顕著なものは、プリン塩基との１，２－鎖内架橋である。これらには、付加物のほぼ９０％を形成する１，２－鎖内ｄ（ＧｐＧ）付加物及びあまり一般的でない１，２－鎖内ｄ（ＡｐＧ）付加物が含まれる。１，３－鎖内ｄ（ＧｐＸｐＧ）付加物が生じるが、ヌクレオチド切除修復（ＮＥＲ）によって容易に切除される。他の付加物としては、白金系薬物の活性に寄与すると仮定されている鎖間架橋及び非機能性付加物が挙げられる。細胞タンパク質、特にＨＭＧドメインタンパク質との相互作用も有糸分裂を妨害する機構として進展しているが、これはおそらくその主要な作用方法ではない。白金系化学療法薬としては、シスプラチン（シスプラチナ又はｃｉｓ－ジアンミンジクロリド白金ＩＩ（ＣＤＤＰ）としても知られる）、カルボプラチン及びオキサリプラチンが挙げられる。シスプラチンはしばしばアルキル化剤として指定されるが、アルキル基を有さず、アルキル化反応を行うことはできない。正しくは、シスプラチンはアルキル化様と分類される。白金系化学療法薬は、肉腫、いくつかの癌腫（細胞腫）（例えば、小細胞肺癌及び卵巣癌）、リンパ腫並びに胚細胞性腫瘍を含む様々な種類の癌を治療するために使用される。

有糸分裂阻害剤は細胞分裂を妨害する。このカテゴリーで最も知られている化学療法剤はパクリタキセル（タキソール（登録商標）、「植物アルカロイド」、「タキサン」及び「抗微小管剤」としても知られている）である。ドセタキセルと共に、パクリタキセルはタキサンの薬物カテゴリーを形成する。しかしながら、エトポシド、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含むがこれらに限定されない他の有糸分裂阻害剤が公知である。パクリタキセルは、細胞分裂中の正常な微小管成長を妨害することによって、その機能を停止させることによって作用する。パクリタキセルは、それらの構造を過安定にする。これは、細胞のその細胞骨格を柔軟に使用する能力を破壊する。具体的には、パクリタキセルは、微小管の「ビルディングブロック」であるチューブリンのβサブユニットに結合し、パクリタキセルの結合は、これらのビルディングブロックを適所に固定する。得られた微小管／パクリタキセル複合体は、分解する能力を有さない。これは細胞機能に悪影響を及ぼす。これは、微小管の短縮及び伸長（動的不安定性と呼ばれる）が、他の細胞成分を輸送する機構としてのそれらの機能のために必要であるためである。例えば、有糸分裂中、微小管は、その複製及びその後の２つの娘細胞核への分離によって染色体をすべて位置付ける。さらには、パクリタキセルは、アポトーシス停止タンパク質Ｂｃｌ－２（Ｂ細胞白血病２）に結合し、従ってその機能を停止させることによって、癌細胞においてプログラム細胞死（アポトーシス）を誘導する。

抗癌化学療法において広く使用されるＤＮＡ相互作用薬の別の群は、とりわけ、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）及びドキソルビシン塩酸塩としても知られている）、レスピノマイシンＤ及びイダルビシンを含むアントラサイクリン抗生物質の群である。これらの薬物は、インターカレーション及び高分子生合成の阻害によってＤＮＡと相互作用し、これにより、転写のためにＤＮＡを巻き戻す酵素トポイソメラーゼＩＩの進行を阻害する。これらは、トポイソメラーゼＩＩ複合体が複製のためにＤＮＡ鎖を破壊した後、トポイソメラーゼＩＩ複合体を安定化し、ＤＮＡ二重らせんが再封入されるのを防止し、これにより複製のプロセスを停止させる。これは、広範ながんの治療に通常使用される。

アルキル化抗腫瘍剤はＤＮＡを直接攻撃する。それらは、アルキル基をＤＮＡに結合させ、ＤＮＡ二重らせん鎖中のグアニン核酸塩基を架橋する。これにより、鎖はほどけて分離することができなくなる。これはＤＮＡ複製において必要であるので、細胞はもはや分裂することができない。これらの薬物は非特異的に作用する。シクロホスファミドはアルキル化剤であるが、非常に強力な免疫抑制物質である。

トポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害剤は、それぞれトポイソメラーゼＩ及びトポイソメラーゼ２の酵素活性を妨害し、最終的にＤＮＡの複製及び転写の両方の阻害をもたらす。トポイソメラーゼＩ阻害剤の例としては、トポテカン及びイリノテカンが挙げられる。イリノテカンは、カルボキシルエステラーゼ変換酵素によって生物学的に活性な代謝産物７－エチル－１０－ヒドロキシ－カンプトテシン（ＳＮ－３８）に変換されるプロドラッグである。ＳＮ－３８は、その親化合物であるイリノテカンよりも１０００倍強力であり、トポイソメラーゼＩとＤＮＡとの間の切断可能な複合体を安定化することによってトポイソメラーゼＩ活性を阻害し、その結果、ＤＮＡ複製を阻害してアポトーシス細胞死を誘発するＤＮＡ切断をもたらす。イリノテカンがその細胞毒性効果を発揮するためには進行中のＤＮＡ合成が必要であるため、イリノテカンはＳ期特異的薬剤としても分類される。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の例としては、エトポシド及びテニポシドが挙げられる。

抗血管新生剤は、新しい血管の生成を妨害し、最終的に腫瘍の「飢餓」をもたらす。抗血管新生剤の非限定的な例としては、モノクローナル抗体ベバシズマブ、ドーパミン及びテトラチオモリブデン酸（塩）が挙げられる。

血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、血管拡張、血管透過性の増加及び内皮細胞の有糸分裂誘発を媒介する３２～４２ｋＤａの二量体糖タンパク質である。ＶＥＧＦ遺伝子の差異的エクソンスプライシングは、３つの分泌アイソフォームをコードする３つの主要ｍＲＮＡ種をもたらす（下付き文字はアミノ酸の番号を示す）：ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１６５、及びＶＥＧＦ１２１。多数のマイナーなスプライス変異体も記載されている（ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４５及びＶＥＧＦ１４８）。ＶＥＧＦポリペプチドの変異体及び癌治療におけるそれらの使用は、例えば、国際公開第２００３／０１２１０５号パンフレットに開示されている。

様々な実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、代謝拮抗剤、白金系薬物、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管新生剤及びこれらの組合せからなる群から選択される。

いくつかの実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、プリンアンタゴニスト、ピリミジンアンタゴニスト及び葉酸アンタゴニストを含む代謝拮抗剤である。いくつかの実施形態によれば、代謝拮抗剤はピリミジンアンタゴニストである。いくつかの実施形態によれば、代謝拮抗剤は、メトトレキサート、ペメトレキセド、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、６－メルカプトプリン、ネララビン、ペントスタチン、カペシタビン、シタラビン、５－フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素及びフルダラビンからなる群から選択される。

いくつかの実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、シスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンを含むがこれらに限定されない白金系薬物である。

さらに他の実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビンを含むがこれらに限定されない有糸分裂阻害剤である。

さらに他の実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、ダウノルビシン、レスピノマイシンＤ及びイダルビシンを含むがこれらに限定されないアントラサイクリン抗生物質である。

いくつかの実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、ベバシズマブ、ドーパミン、テトラチオモリブデン酸（塩）、及びＶＥＧＦの抗血管新生変異体を含むがこれらに限定されない抗血管新生剤である。

いくつかの実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド及びミトキサントロンを含むがこれらに限定されないトポイソメラーゼ阻害剤である。

いくつかの実施形態によれば、上記少なくとも１種の化学療法剤は、カルムスチン、ロムスチン、ベンダムスチン、ダカルバジン及びプロカルバジンを含むがこれらに限定されないアルキル化剤である。

密封小線源治療
さらに別の実施形態によれば、本発明のｍＡｂ及び放射線治療を含む併用癌療法が提供される。放射線は、ＡＥＣＬ Ｔｈｅｒａｔｒｏｎ及びＶａｒｉａｎ Ｃｌｉｎａｃ等のこの目的のために製造された標準的な装置を使用して、周知の標準的な技術に従って投与される。

外部放射線源と患者への進入点との間の距離は、標的細胞の死滅と副作用の最小化との間の許容可能なバランスを表す任意の距離であってもよい。典型的には、外部放射線源は、患者への進入点から７０～１００ｃｍにある。

本発明のｍＡｂ及び化学療法剤と組み合わせて使用されてもよい放射線源は、治療される患者の外部又は内部のいずれにあることも可能である。線源が患者の外部にある場合、この療法は、外照射放射線療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者の内部にある場合、この治療は密封小線源治療（ブラキセラピー、ＢＴ）と呼ばれる。

密封小線源治療は、概して、患者の中に放射線源を配置することによって行われる。典型的には、放射線源は、治療される組織から約０～３ｃｍに配置される。公知の技術には、組織内密封小線源治療、腔内密封小線源治療、及び表面密封小線源治療が含まれる。放射性シードは、永久的又は一時的に移植することができる。永久インプラントにおいて使用されているいくつかの典型的な放射性原子としては、ヨウ素－１２５及びラドンが挙げられる。一時的なインプラントに使用されているいくつかの典型的な放射性原子としては、ラジウム、セシウム－１３７、及びイリジウム－１９２が挙げられる。密封小線源治療で使用されているいくつかの追加の放射性原子としては、アメリシウム－２４１及び金－１９８が挙げられる。

放射線量は、当該技術分野で周知のように、多数の要因に依存する。そのような要因には、治療される臓器、不注意に悪影響を受ける可能性がある放射線の経路内の健康な臓器、放射線療法に対する患者の耐性、及び治療を必要とする身体の領域が含まれる。線量は、典型的には１～１００Ｇｙ、より具体的には２～８０Ｇｙである。報告されているいくつかの線量としては、脊髄に対して３５Ｇｙ、腎臓に対して１５Ｇｙ、肝臓に対して２０Ｇｙ、及び前立腺に対して６５～８０Ｇｙが挙げられる。しかしながら、本発明はいかなる特定の線量にも限定されないことが強調されるべきである。線量は、上記の因子を含む所与の状況における特定の因子に従って処置する医師によって決定されることになる。

密封小線源治療のための放射線量は、外照射放射線療法について上述した線量と同じであることができる。外照射放射線療法の線量を決定するための上述の因子に加えて、使用される放射性原子の性質も、密封小線源治療の線量を決定する際に考慮される。

別の実施態様では、抗癌治療は、グリコール開裂ヘパリン化合物（例えば、ロネパルスタット）を含むがこれに限定されないヘパラナーゼ阻害剤である。

本発明の組合せ方法の様々な実施形態では、当該ｍＡｂ及び少なくとも１種の薬物又は治療（例えば、化学療法、放射線療法）は、各活性薬剤の投与の頻度及び投与の順序に言及する「投薬スケジュール」及び「投与レジメン」とも呼ばれるいくつかの処置スケジュールのいずれに従って投与されてもよい。例えば、当該ｍＡｂ及び少なくとも１種の化学療法剤は、例えば、組み合わせた剤形又は別々の剤形を使用して、実質的に同時に、すなわち同じ時に投与されてもよい。この投与形態は、「随伴（ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ）」投与とも呼ばれてもよい。併用（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）投与は、同じ全体期間内、例えば、同じ日であるが必ずしも同じ時ではない、活性薬剤の投与を指す。例えば、一方の活性薬剤は、食物との投与を必要としてもよく、他方は、半絶食状態での投与を必要とする。交互（ａｌｔｅｒｎａｔｅ）投与は、特定の期間にわたる、例えば数日又は１週間の経過にわたる１種の薬剤の投与と、その後の同じ期間にわたる他の薬剤の投与と、次いで１つ以上のサイクルにわたるこのパターンの反復とを含む。逐次的又は連続的な投与は、１つ以上の用量を使用する第１の期間中の１種の薬剤の投与と、それに続く１つ以上の用量を使用する第２の期間中の他の薬剤の投与を含む。必ずしも規則的な順序に従ってではなく、治療期間にわたる異なる日における活性薬剤の投与を含む重複スケジュールも採用されてもよい。使用される薬剤及び対象の状態に応じて、これらの一般的なガイドラインのバリエーションが採用されてもよい。

プロテアソーム阻害剤
さらに別の実施形態によれば、本発明のｍＡｂ及びプロテアソーム阻害剤を含む併用癌療法が提供される。プロテアソーム阻害剤は、プロテアソームを遮断する薬物である。プロテアソームは、不要な又は損傷したタンパク質を分解する酵素である。

いくつかの実施形態では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ、又はこれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、プロテアソーム阻害剤はボルテゾミブである。

本発明の方法
本発明のｍＡｂは、必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療するのに有用である。いくつかの実施形態では、ヘパラナーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療するための医薬の調製のための本発明のｍＡｂの使用が提供される。

本明細書で使用される場合、用語「ヘパラナーゼ活性」、「ヘパラナーゼ酵素活性」又は「ヘパラナーゼ触媒活性」は、β脱離によってヘパリン又はヘパラン硫酸を分解する細菌酵素（ヘパラナーゼＩ、ＩＩ及びＩＩＩ）の活性とは対照的に、ヘパリン又はヘパラン硫酸基質に特異的な動物エンドグリコシダーゼ加水分解活性を指す。

本発明に従って阻害又は中和されるヘパラナーゼ活性は、組換えヘパラナーゼ又は天然ヘパラナーゼの活性のいずれであることも可能である。このような活性は、例えば、米国特許第６，１７７，５４５号明細書及び米国特許第６，１９０，８７５号明細書に開示されており、これらの特許文献は、本明細書に完全に記載されているかのように、参照により組み込まれる。ヘパラナーゼ活性及び抗体中和効果を決定する方法は、当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ヘパラナーゼ中和効果は、本明細書に記載される活性アッセイ（例えば、実施例１及び３）によって測定されてもよい。別の実施形態では、ヒトヘパラナーゼのＬｙｓ^１５８－Ａｓｐ^１７１ドメイン等のヘパラン硫酸（ＨＳ）結合ドメインに対する抗体の親和性が測定されてもよい。さらなる実施形態では、ヘパラナーゼの細胞取り込みが測定されてもよい。

本明細書で使用する場合、用語「ヘパラナーゼ触媒活性に関連する」は、ヘパラナーゼの触媒活性に少なくとも部分的に依存する状態を指す。多くのそのような状態下でのヘパラナーゼの触媒活性は正常であることができるが、そのような状態下でのその阻害は罹患個体の改善をもたらすことが理解されている。

本発明に係る医薬組成物は、独立型治療として、又は任意の他の治療剤による治療に加えて投与されてもよい。具体的な実施態様によれば、本発明に係る抗体は、少なくとも１種の抗癌剤と組み合わせた治療レジメンの一部として、その抗体を必要とする対象に投与される。本発明に係る医薬組成物は、他の薬剤と共に投与されてもよいし、別々に投与されてもよい。

本発明を説明するために本明細書で使用される場合、「悪性増殖性障害」、「癌」、「腫瘍」及び「悪性腫瘍」はすべて、組織又は器官の過形成に同等に関連する。すべてのタイプの腫瘍が、本発明の方法によって治療されてもよい。腫瘍は、固形であってもよく、又は非固形であってもよい。

いくつかの実施形態によれば、本発明のｍＡｂ又はそれを含む組成物は、非固形癌、例えば、造血性悪性腫瘍、例えば、あらゆる種類の白血病、例えば、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、肥満細胞白血病、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫及び多発性骨髄腫の治療又は阻害に使用することができる。

別の実施形態によれば、増殖性疾患は、癌腫、肉腫、神経膠腫及び黒色腫が挙げられるがこれらに限定されない固形悪性腫瘍である。さらなる実施形態によれば、本発明のｍＡｂ又はそれを含む組成物は、口唇及び口腔、咽頭、喉頭、副鼻腔、大唾液腺、甲状腺、食道、胃、小腸、結腸、結腸直腸、肛門管、肝臓、胆嚢、肝外胆管、ファーター膨大部、膵外分泌部、肺の腫瘍、胸膜中皮腫、骨の腫瘍、軟部肉腫、皮膚、乳房、外陰部、膣、子宮頸部、子宮体、卵巣、卵管、ファロピウス管（輸卵管）の癌腫及び悪性黒色腫、妊娠性栄養芽腫瘍、陰茎、前立腺、精巣、腎臓、腎盂、尿管、膀胱、尿道の癌腫及び悪性黒色腫、眼瞼の癌腫、結膜の癌腫、結膜の悪性黒色腫、ブドウ膜の悪性黒色腫、網膜芽細胞腫、涙腺の癌腫、眼窩の肉腫、脳、脊髄、血管系の肉腫、血管肉腫及びカポジ肉腫等の固形腫瘍の治療又は阻害に使用することができる。

それゆえ、本発明の組成物は、あらゆる段階での腫瘍、すなわち腫瘍形成、原発性腫瘍、腫瘍進行若しくは腫瘍転移を治療又は阻害するのに有用であることを理解されたい。

別の実施形態では、本発明のｍＡｂは、血管新生の阻害に使用することができ、従って、血管新生又は血管化に関連する疾患及び障害、例えば、限定されないが、腫瘍血管新生、眼科障害、例えば糖尿病性網膜症及び黄斑変性症、特に加齢黄斑変性症、並びに胃潰瘍の再灌流の治療に有用である。

本発明のｍＡｂ又はその任意の組成物は、乾癬、肥厚性瘢痕、座瘡及び硬化症／強皮症等の他の細胞増殖性の疾患若しくは障害を阻害又は治療するために、並びにポリープ、多発性外骨腫症、遺伝性外骨腫症、後水晶体線維増殖症、血管腫、及び動静脈奇形等の他の疾患若しくは障害を阻害又は治療するために有用である。

ヘパラナーゼ触媒活性は、免疫系の活性化細胞が循環系から離れて炎症反応及び自己免疫反応の両方を誘発する能力と相関する。血小板、顆粒球、Ｔリンパ球及びＢリンパ球、マクロファージ並びに肥満細胞と内皮下ＥＣＭとの相互作用は、ヘパラナーゼ触媒活性によるヘパラン硫酸（ＨＳ）の分解に関連する（Ｖｌｏｄａｖｓｋｙ，Ｉ．ら、Ｉｎｖａｓｉｏｎ ＆ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ １２、１１２－１２７（１９９２））。この酵素は、種々の活性化シグナル（例えば、トロンビン、カルシウムイオノフォア、免疫複合体、抗原、マイトジェン）に応答して細胞内区画（例えば、リソソーム、特異的顆粒）から放出され、これは、炎症部位及び自己免疫病変におけるその調節された関与及び存在を示唆する。血小板及びマクロファージによって放出されるヘパラナーゼは、アテローム性動脈硬化病変に存在する可能性が高い（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｋ．Ｈ．ら、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ． ２００、１５６－１６７（１９９２））。従って、本発明のｍＡｂ又はその任意の組成物は、自己免疫疾患及び炎症性疾患を阻害又は治療するのにも有用である。

それゆえ、別の実施形態では、本発明の組成物は、免疫抑制及び／又は炎症抑制が有益である任意の疾患、状態又は障害における炎症症状の治療又は改善、例えば、限定はされないが、関節における炎症症状（Ｌｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００８、５８：１５９０－６００）、筋骨格障害及び結合組織障害、若しくは過敏症に関連する炎症症状（Ｅｄｏｖｉｔｓｋｙら、Ｂｌｏｏｄ ２００５、３６０９－１６）、アレルギー反応、喘息、アテローム性動脈硬化症（Ｐｌａｎｅｒら、Ｐｌｏｓ ＯＮＥ ２０１１；６（４）：ｅ１８３７０）、耳炎及び他の耳鼻咽喉科疾患、皮膚炎及び他の皮膚疾患、後部ブドウ膜炎及び前部ブドウ膜炎、結膜炎、視神経炎、強膜炎並びに他の免疫性並びに／若しくは炎症性の眼疾患の治療又は改善に有用であってもよい。

別の実施形態では、本発明の組成物は、自己免疫疾患、例えば、限定されないが、イートン－ランバート（Ｅａｔｏｎ－Ｌａｍｂｅｒｔ）症候群、グッドパスチャー（Ｇｏｏｄｐａｓｔｕｒｅ）症候群、グレーヴス（Ｇｒｅａｖｅ）病、ギラン・バレー（Ｇｕｉｌｌａｉｎ－Ｂａｒｒ）症候群、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、肝炎、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、神経叢障害、例えば、急性腕神経炎、多腺性機能不全症候群、原発性胆汁性肝硬変、関節リウマチ（Ｌｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００８、５８：１５９０－６００）、強皮症、血小板減少症、甲状腺炎、例えば、橋本病、シェーグレン（Ｓｊｂｇｒｅｎ）症候群、アレルギー性紫斑病、乾癬、混合性結合組織病、多発性筋炎、皮膚筋炎、血管炎、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、ウェゲナー（Ｗｅｇｅｎｅｒ）肉芽腫症、ライター（Ｒｅｉｔｅｒ）症候群、ベーチェット（Ｂｅｈｇｅｔ）症候群、強直性脊椎炎、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎（ヘルペス状皮膚炎）、インスリン依存性糖尿病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎及びクローン病（Ｌｅｒｎｅｒら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２０１１、１２１：１７０９－２１）の治療又は改善に有用である。

なおさらに、ヘパラナーゼは、糸球体基底膜内のヘパラン硫酸プロテオグリカンの負に帯電した側鎖を選択的に分解することによってタンパク尿の病態形成に関与することが提唱されている。負に帯電したヘパラン硫酸プロテオグリカンの喪失は、糸球体基底膜の透過選択特性の変化、糸球体上皮及び内皮細胞アンカーポイントの喪失、並びに増殖因子の遊離をもたらす可能性があり、潜在的に、受動ハイマン（Ｈｅｙｍａｎｎ）腎炎（ＰＨＮ）及びピューロマイシンアミノヌクレオシドネフローゼ（ＰＡＮ）等の異なる腎障害をもたらす可能性がある。Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓ，Ｖ．ら（Ｌｅｖｉｄｉｏｔｉｓ，Ｖ．ら、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ． １５、６８－７８（２００４））によって記載されているように、ヘパラナーゼに対するポリクローナル抗体は、糸球体の組織学的外観、及びＰＨＮを生じる免疫機構に影響を及ぼすことなくタンパク尿を有意に低減し、それゆえ、タンパク尿を低減するためにヘパラナーゼの阻害が用いられてもよい。特に、ヘパラナーゼ阻害剤ロネパルスタットは、１型及び２型糖尿病に関連するタンパク尿を減少させた（Ｇｉｌら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２０１２；６１：２０８－１６）。それゆえ、別の実施形態では、本明細書に記載される組成物及びｍＡｂは、任意の腎障害及び臓器線維症（Ａｂａｓｓｉ及びＧｏｌｉｇｏｒｓｋｙ ＭＳ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６８５－７０２；ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌａｇ及びＢｕｉｊｓｅｒｓ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６４７－６６７；Ｍａｓｏｌａら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６６９－６８４）の治療又は改善に有用である。

別の実施形態では、本明細書に記載される組成物及びｍＡｂは、糖尿病性腎症の治療又は改善に有用である。別の実施形態では、本明細書に記載される組成物及びｍＡｂは、１型糖尿病（Ｚｉｏｌｋｏｗｓｋｉら、２０１２；１２２：１３２－４１、Ｓｉｍｅｏｎｏｖｉｃら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６０７－６３０）の治療又は改善に有用である。

別の実施形態では、本明細書に記載される組成物及びｍＡｂは、アミロイドーシス（Ｌｉ ＪＰ及びＺｈａｎｇ Ｘ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：６３１－６４５）及びウイルス感染症（Ａｇｅｌｉｄｉｓ Ａ、Ｓｈｕｋｌａ Ｄ． Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２０２０；１２２１：７５９－７７０）の治療又は改善に有用である。別の実施形態では、本発明の組成物及びｍＡｂは、敗血症の治療又は改善に有用である。

用語「哺乳動物」は、イヌ及びネコ等のペット動物、ブタ、ウシ、ヒツジ及びヤギ等の家畜、マウス及びラット等の実験動物、サル、類人猿及びチンパンジー等の霊長類、並びに好ましくはヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。

以上、本発明について概説してきたが、これは、例示として提供され本発明を限定することを意図しない以下の実施例を参照することによって、より容易に理解されるであろう。

材料及び方法
マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の生成。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｓｉｇｍａ（シグマ））中のキーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合した５０μｇの組換え６５ｋＤａ潜在性プロヘパラナーゼ（ｐｒｏ－ｈｅｐａｒａｎａｓｅ）で免疫し、続いて、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のＫＬＨ－ヘパラナーゼを２週間ごとに５回注射した（５０μｇ）。尾静脈注射後、脾細胞を単離し、ＮＳＯ骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマを、本質的に記載されるように（Ｇｉｎｇｉｓ－Ｖｅｌｉｔｓｋｉら、Ｆａｓｅｂ Ｊ ２００７；Ｌｅｖｙ－Ａｄａｍら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２０１０；２８５（３６）：２８０１０－９；Ｓｈａｆａｔら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２００６；３４１（４）：９５８－６３）、ＥＬＩＳＡによってプロヘパラナーゼに結合するそれらの能力についてスクリーニングした。陽性ハイブリドーマを選択し、増殖させ、クローニングした。ハイブリドーマサブクラスを、アイソタイピングキットによって製造業者（Ｓｅｒｏｔｅｃ（セロテック）、オックスフォード、英国）の指示に従って決定した。ｍＡｂ Ａ５４をＩｇＧ１－κとして特徴付け、製造業者（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ピアース・バイオテクノロジー）、ロックフォード（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ）、イリノイ州）の指示に従ってプロテインＧセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）４でのアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。

精製ｍＡｂ Ａ５４抗体をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分離し、重鎖及び軽鎖タンパク質のバンドを抽出し、配列決定した。次いで、対応するヌクレオチド配列を明らかにし、遺伝子をＲＴ－ＰＣＲによって増幅し、クローニングした。簡潔には、ＴＲＩｚｏｌ（トリゾール）（登録商標）試薬を用いて上記ハイブリドーマ細胞から全ＲＮＡを単離した。次いで、この全ＲＮＡを、アイソタイプ特異的アンチセンスプライマーを用いてｃＤＮＡに逆転写した。ＶＨ及びＶＬの抗体断片を、標準的なｃＤＮＡ末端の迅速増幅（ＲＡＣＥ）に従って増幅した。増幅した抗体断片を標準クローニングベクターに別々にクローニングした。コロニーＰＣＲを実施して、正しいサイズの挿入断片を有するクローンについてスクリーニングした。正しいサイズの挿入断片を有する５つ以上のコロニーを各断片について配列決定した。異なるクローンの配列をアラインメントした。これらのクローンのコンセンサスヌクレオチド配列及びアミノ酸配列を表１に提供する。マウスＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ）を対照として使用した。

細胞及び細胞培養。ヒトＨＥＫ２９３、Ｕ８７－ＭＧ神経膠腫、及びＣＡＧ骨髄腫細胞、並びにマウス４Ｔ１乳癌、及びＭＰＣ－１１骨髄腫細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関）（ＡＴＣＣ、マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）、バージニア州）から購入した。ＣＡＧ骨髄腫（Ｒａｍａｎｉら、Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ． ２０１６；５５：２２－３４）、Ｕ８７神経膠腫（Ｂａｒａｓｈら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ、２０１９；１４５（６）：１５９６－１６０８）及び４Ｔ１乳癌（Ｈａｍｍｏｎｄら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１２；７（１２）：ｅ５２１７５）細胞は以前に記載されている。１０％ウシ胎仔血清及び抗生物質を補充したダルベッコ変法イーグル培地（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（バイオロジカル・インダストリーズ）、ベイト・ヘメック（Ｂｅｉｔ Ｈａｅｍｅｋ）、イスラエル）中で細胞を増殖させた。

細胞溶解物、ヘパラナーゼ活性及びタンパク質ブロッティング。細胞溶解物の調製、タンパク質ブロッティング、及びヘパラナーゼ酵素活性の測定は、記載のように行った（Ａｒｖａｔｚら、Ｆａｓｅｂ Ｊ ２０１１；２４（１２）：４９６９－７６）。阻害研究のために、高度に精製された組換えヘパラナーゼ（２００ｎｇ）を、中性ｐＨ条件（ｐＨ７．２）下で氷上で３０分間、示された抗体（２μｇ）とプレインキュベートした後、ヘパラナーゼの天然産生基質として使用される^３５Ｓ標識ＥＣＭ（Ｇｉｎｇｉｓ－Ｖｅｌｉｔｓｋｉら、２００７、前出）に添加した。

ＥＣＭ分解アッセイ。細胞外マトリクス（ＥＣＭ）基質は、培養された内皮細胞によって沈着され、従って、その組成、生物学的機能及びバリア特性において内皮下基底膜によく似ている。数年の経験は、このアッセイにおいて上記酵素を効果的に阻害する化合物が前臨床動物モデルにおいても有効であることを示す。この基質の調製及びヘパラナーゼアッセイのためのその使用に関するさらなる詳細は、以下に見出すことができる：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｖｌｏｄａｖｓｋｙ ２００１；１０．４．１～１０．４．１４頁）。簡潔には、３５ｍｍ組織培養皿の表面をコーティングする硫酸塩［^３５Ｓ］標識ＥＣＭを、Ａ５４ ｍＡｂの不存在下及び存在下で組換えヒトヘパラナーゼ（２００ｎｇ／ｍｌ）と共にインキュベートする（４時間、３７℃、ｐＨ６．０、最終容量１ｍｌ）。反応混合物は以下を含有する：５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＣａＣｌ２、及び１０ｍＭリン酸－クエン酸緩衝液、ｐＨ６．０。プロテオグリカン分解の発生を評価するために、インキュベーション培地を回収し、ゲル濾過のためにセファロース６Ｂカラム（０．９×３０ｃｍ）に加える（載せる）。画分（０．２ｍｌ）をＰＢＳで溶出し、放射活性について計数する。排除体積（Ｖｏ）はブルーデキストランでマークし、全内包体積（Ｖｔ）はフェノールレッドでマークする。ＨＳ側鎖の分解断片は、０．５＜Ｋａｖ＜０．８（ピークＩＩ）でセファロース６Ｂから溶出される。結果は、実際のゲル濾過パターンによって最もよく表される（ｖｌｏｄａｖｓｋｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ５：７９３－８０２、１９９９）。

マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）浸潤アッセイ。本質的に記載されるように（Ａｒｖａｔｚら、２０１１、前出）、ポリカーボネートＮｕｃｌｅｏｐｏｒｅ（ヌクレオポア）膜を有する改変Ｂｏｙｄｅｎチャンバーを用いて浸潤アッセイを実施した。簡単に述べると、フィルター（直径６．５ｍｍ、細孔径８μｍ）をマトリゲル（３０μｌ）でコーティングした。１００μｌの無血清培地中の細胞（２×１０^５）を、示された抗体の存在下で各チャンバーの上部に三連で播種し、下部区画を、１０％ＦＣＳを補充した６００μｌの培地で満たした。５％ＣＯ_２インキュベーター中で３７℃で５時間インキュベートした後、フィルターの上面上の非浸潤細胞を綿棒で拭き取り、フィルターの下面上の遊走細胞を固定し、０．５％クリスタルバイオレット（Ｓｉｇｍａ）で染色し、少なくとも７つの顕微鏡視野の検査によって計数した（Ｂａｒａｓｈら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． １１０：１１０２－１１１４、２０１８）。

腫瘍形成能
Ｕ８７神経膠腫。ルシフェラーゼ標識Ｕ８７神経膠腫細胞の指数関数的培養物からの細胞をトリプシン／ＥＤＴＡで剥離し、ＰＢＳで洗浄し、５×１０^７細胞／ｍｌの濃度にした。細胞懸濁液（５×１０^６／０．１ｍｌ）を、５週齢の雌ＳＣＩＤ／Ｂｅｉｇｅマウス（ｎ＝７）の右側腹部に皮下接種した。細胞接種の３日後、マウスを、（ａ）ビヒクル（ＰＢＳ）、及び（ｂ）Ａ５４ ｍＡｂ（５００μｇ／マウス、３回／週）を受ける２つのコホート（各５～１０匹のマウス）に無作為に割り当てる。腫瘍形成を、記載されているように（Ｂａｒａｓｈら、ＦＡＳＥＢ Ｊ ２０１０；２４：１２３９－４８、Ｂａｒａｓｈら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． １１０：１１０２－１１１４、２０１８）、ルシフェリンの投与後にＩＶＩＳイメージングによって腫瘍形成を検査する（１週間に１回）（下記参照）。実験の最後に、マウスを殺処分し、病理学的検査のために異種移植片を切除し、秤量し、ホルマリン中で固定する。

４Ｔ１マウス乳癌（実験的転移）。ルシフェラーゼ標識４Ｔ１乳癌細胞（１×１０^５／Ｂａｌｂ／ｃマウス）を静脈内注射する（ｎ＝１０マウス／群；２つの群：未処置対照、Ａ５４ ｍＡｂ）。細胞接種の２０分前に抗体を注射する（腹腔内、５００μｇ／マウス、３回／週）。ＩＶＩＳ生物発光イメージングを、細胞接種の６日後、１０日後及び１４日後に行う。終了時に、マウスを殺処分し、肺を病理学的検査及び５顕微鏡視野あたりの細胞コロニーの計数に供する。細胞は主に肺に転移し、発光シグナルは再現性があり、定量的であり、信頼性がある。

４Ｔ１マウス乳癌（自然転移）。ルシフェラーゼ標識４Ｔ１乳癌細胞（１×１０^５／Ｂａｌｂ／ｃマウス）を第３乳腺脂肪体に直接注射し、マウスの処置（ＰＢＳ対照対ｍＡｂ Ａ５４ ５００μｇ／マウス、３回／週）を４Ｔ１細胞接種の３日後に開始した。接種の４日後（０日目）に、マウスを６匹のマウスの２つの群に無作為化した。研究の１５日目に、原発性腫瘍を含む乳腺脂肪体を、２％イソフルラン麻酔下ですべてのマウスから切除した。マウスを上記のようにｍＡｂ Ａ５４で処置し、乳房切除の１２日後及び１８日後にＩＶＩＳ生物発光イメージングを実施する。終了時に、マウスを殺処分し、肺の表面上の顕性マクロ転移の数を手動で数えた（Ｈａｍｍｏｎｄら、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１２；７（１２）：ｅ５２１７５）。

ＣＡＧ骨髄腫。ルシフェラーゼ標識ＣＡＧヒト骨髄腫細胞（５×１０^６）をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの尾静脈に注射する。細胞接種の３日後、マウスを、（ａ）ビヒクル（ＰＢＳ）、及び（ｂ）Ａ５４ ｍＡｂ（５００μｇ／マウス、３回／週）を受ける２つのコホート（各５～１０匹のマウス）に無作為に割り当てる。ルシフェリン投与後にＩＶＩＳイメージングによって腫瘍形成を検査する（週に１回）（下記参照）。終了時に、マウスを殺処分し、骨格を切除し、ホルマリン中で固定し、１０％ＥＤＴＡ溶液で脱灰した後、パラフィンに包埋し、組織学的及び免疫組織化学的分析に供する。

ＭＰＣ－１１骨髄腫。マウスＭＰＣ－１１骨髄腫細胞をトリプシン／ＥＤＴＡで剥離し、ＰＢＳで洗浄し、５×１０^５細胞／０．２ｍｌの濃度にし、６～８週齢のＢａｌｂ／ｃマウスの右側腹部に皮下接種する。細胞接種の３日後、マウスを、（ａ）ビヒクル（ＰＢＳ）、及び（ｂ）Ａ５４ ｍＡｂ（５００μｇ／マウス、３回／週）を受ける２つのコホート（各６匹のマウス）に無作為に割り当てる。異種移植片サイズを、７日目、１０日目及び１４日目に、ノギスを使用して二次元で腫瘍を外部測定することによって決定する。実験の最後に、マウスを殺処分し、腫瘍異種移植片を取り出し、秤量する。

Ｂ１６黒色腫。Ｂ１６－ＢＬ６マウス黒色腫細胞（２×１０^５）を、示された化合物と共にＣ５７／ＢＬマウスの尾静脈に注射し、その後１８日目に肺転移を測定した。すべての動物実験は、ハイファ（Ｈａｉｆａ）、イスラエルのＴｅｃｈｎｉｏｎ（テクニオン）のＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（動物実験委員会）によって承認された。

ＩＶＩＳイメージング。ルシフェラーゼ発現腫瘍の生物発光イメージングは、遮光標本ボックスに搭載された高感度の冷却電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラを用いて行う（ＩＶＩＳ；Ｘｅｎｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．（キセノジェン）、ウォルサム（Ｗａｌｔｈａｍ）、マサチューセッツ州）。イメージング（画像化）はリアルタイムで行い、非侵襲的であり、定量的データを提供する。簡潔には、マウスに１５０ｍｇ／ｋｇのＤ－ルシフェリン基質を腹腔内注射し、このマウスを麻酔し、イソフルラン（ＥＺＡｎｅｓｔｈｅｓｉａ（イーゼットアネスシージア）、パーマー（Ｐａｌｍｅｒ）、ペンシルベニア州）に連続的に曝露しながら、遮光カメラボックス内の温めたステージ上に置く。生物発光細胞から放出された光は、ＩＶＩＳカメラシステムによって検出され、画像は、５×１０^４～１×１０^７に設定された対数スケール色範囲を使用して腫瘍量について定量化し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェア（Ｘｅｎｏｇｅｎ）を使用して総光子カウント／秒（ＰＰＳ）の測定を行う。

統計。データは、平均±ＳＥとして提示する。統計的有意性を両側スチューデント（Ｓｔｕｄｅｎｔ）のｔ検定によって分析した。Ｐ＜０．０５の値を有意とみなす。

実施例１． 最も活性なヘパラナーゼ中和モノクローナル抗体の特定及び選択．
ヘパラナーゼ酵素活性を最もよく阻害するハイブリドーマクローンを選択するために、６５ｋＤａ潜在性ヘパラナーゼタンパク質に対して産生した様々なハイブリドーマの上清を回収し、組換えヘパラナーゼとプレインキュベートし、硫酸標識ＥＣＭからのヘパラン硫酸（ＨＳ）分解断片の放出を阻害する能力について調べた。この目的のために、精製した組換え活性ヘパラナーゼ（２００ｎｇ）を、氷上の無血清ＲＰＭＩ培地中で２時間、様々なハイブリドーマ上清と共にプレインキュベートした。次いで、この混合物を^３５Ｓ標識ＥＣＭコーティングした皿に加え、ヘパラナーゼ活性を上記の「材料及び方法」に記載したように決定した。図１に示すように、ハイブリドーマ＃Ａ５４とのプレインキュベーションは、すべての他のハイブリドーマ上清と比較して最良のヘパラナーゼ阻害活性（放出された硫酸塩標識ＨＳ分解産物の量のほぼ８０％の減少）をもたらした。

実施例２． ｍＡｂ Ａ５４は、ヘパラナーゼを優先的に認識する．
ＥＬＩＳＡ法を適用して、ｍＡｂ Ａ５４対対照マウスＩｇＧによるヘパラナーゼの優先的認識を特徴付けた（図２Ａ）。この目的のために、マイクロタイター９６ウェルプレートを潜在性６５ｋＤａヘパラナーゼ（Ｈｐａ６５）でコーティングした。次いで、精製した（プロテインＧセファロース）ｍＡｂ Ａ５４又は対照マウスＩｇＧを示した濃度で添加し、固定化したヘパラナーゼへの結合の程度をＥＬＩＳＡによって決定した。非免疫マウスＩｇＧとの相互作用はなかったが、Ａ５４抗体はこの酵素に対する高親和性結合を示した（ＩＣ５０＝０．４５ｎＭ）。次に、精製したＡ５４ ｍＡｂをＳＤＳ－ＰＡＧＥ（図２Ｂ）及びウェスタンブロット（図２Ｃ、二次抗体：ヤギ抗マウスκ－ＨＲＰ）分析に供して、抗体の軽鎖及び重鎖の純度、分子量及びアイソタイプをさらに特徴付けた。レーンＭ１及びＭ２：タンパク質マーカー；レーン１：還元条件；レーン２：非還元条件；レーンＰ：陽性対照としてのマウスＩｇＧ１、κ。（Ａｂ：抗体：ヤギ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ）。簡潔には、ｐｃＤＮＡ３．４発現ベクター及び無血清（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ）培地を適用して、ｍＡｂ Ａ５４を２９３Ｆ細胞で発現させた。抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１－κとして特徴付けた。

実施例３． ｍＡｂ Ａ５４はヘパラナーゼ酵素活性を阻害する.
次に、精製したｍＡｂ Ａ５４がヘパラナーゼ酵素活性を阻害する能力を調べた。この目的のために、組換え活性ヘパラナーゼ（２００ｎｇ）を、氷上の無血清ＲＰＭＩ培地中で１時間、対照マウスＩｇＧ又は精製したｍＡｂ Ａ５４（０．１及び１μｇ／ｍｌ）と共にプレインキュベートした。次いで、この混合物を、^３５Ｓ標識ＥＣＭでコーティングした皿に加え、ヘパラナーゼ酵素活性を、「方法」に記載したように決定した。図３Ａに示すように、０．１μｇ／ｍｌの上記抗体とのプレインキュベーションは、この酵素のほぼ７５％の阻害をもたらし、完全な阻害（すなわち、セファロース６Ｂでのゲル濾過に供した場合の画分番号１５～３０に溶出したＨＳ分解断片の放出）は、図３Ｂに示すように、１μｇ／ｍｌの上記抗体の存在下で得られた。非免疫マウスＩｇＧに対する阻害効果はなかった。

実施例４． ｍＡｂ Ａ５４は細胞浸潤を減弱する．
その後、細胞浸潤に対する上記抗体の効果を調べた。簡潔には、Ｕ８７神経膠腫細胞（１×１０^５）を、対照マウスＩｇＧ又はｍＡｂ Ａ５４（２μｇ）の存在下で、マトリゲルコーティングした８μｍ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（トランスウェル）フィルター上に播種した。膜の下側に接着する浸潤細胞を６時間後に可視化し（図４Ａ～Ｂ）、「方法」に記載したように定量した（図４Ｃ；高倍率視野あたりの浸潤細胞の数；^＊ｐ＝０．００１）。図４Ａ～Ｃに示すように、マトリゲル（再構成された基底膜）を通るＵ８７神経膠腫細胞の浸潤は、ｍＡｂ Ａ５４の存在下でほぼ９０％減弱された。

実施例５． 抗ヘパラナーゼｍＡｂ Ａ５４は、ヒト骨髄腫及びヒト神経膠腫腫瘍増殖を減弱する．
ｍＡｂ Ａ５４が経時的に骨髄腫腫瘍形成を減弱する能力を調べた。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ｎ＝５）にＬｕｃ－ＣＡＧヒト骨髄腫細胞（５×１０^６）を静脈内（ｉ．ｖ．）に接種し、細胞接種後３日目に開始して、マウスをＡ５４ ｍＡｂ（５００μｇ／マウス、３回／週）又は対照としてのＰＢＳで処置した。腫瘍増殖を３週間後にＩＶＩＳイメージングによって評価した（図５Ａ及び５Ｂ）。ルシフェラーゼシグナルの定量もグラフで示す（図５Ｃ）。図５Ｂに示すように、骨髄腫増殖速度の顕著な低下が認められた（Ｐ＝０．０２）。

同様に、Ｌｕｃ－Ｕ８７ヒト神経膠腫細胞（５×１０^６／０．１ｍｌ）を、５週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ｎ＝５）の右側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）接種した。マウスをｍＡｂ Ａ５４（５００μｇ／マウス、３回／週）又は対照としてのＰＢＳで処置した。ＩＶＩＳイメージングによって腫瘍増殖を評価し（図５Ｄ及び５Ｅ）、ルシフェラーゼシグナルの定量をグラフで示す（図５Ｆ）。図５Ｅに示すように、神経膠腫腫瘍増殖速度の顕著な阻害が抗体処置マウスにおいて認められた（Ｐ＝０．０４）。

実施例６． 抗ヘパラナーゼｍＡｂ Ａ５４は、マウス骨髄腫腫瘍増殖を減弱する.
免疫無防備状態のマウスモデルにおけるｍＡｂ Ａ５４の阻害効果を実証したので、次に同系（免疫適格性）マウスモデルにおける上記抗体の効果を調べた。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスにＭＰＣ－１１マウス骨髄腫細胞（０．５×１０^６）を接種した（ｓ．ｃ．）。ｍＡｂ Ａ５４（２５０又は５００μｇ／マウスを隔日）による処置を、細胞接種の２日後に開始した。対照細胞にはＰＢＳを投与した。異種移植片サイズを、ノギスを用いて二次元で腫瘍を外部から測定することによって週に２回決定し、腫瘍体積を計算した（図６Ａ）。実験の終了時（１４日目）に、異種移植片を取り出し、秤量し（図６Ｂ）、ホルマリン中で固定し、写真撮影した（図６Ｃ）。結果は、ｍＡｂ Ａ５４での処置が骨髄腫腫瘍増殖を顕著に（４倍）減弱し、より高い用量の抗体がより有効であったことを示す。以上の結果から、抗ヘパラナーゼｍＡｂ Ａ５４により原発性腫瘍の形成を抑制できることが示唆される。

実施例７． ｍＡｂ Ａ５４は、マウス乳癌の自然転移を減弱する．
その後の研究において、ヘパラナーゼ活性の特徴である癌転移に対するｍＡｂ Ａ５４の効果を検討した。ヒトにおけるシナリオに類似する同系乳癌モデルを適用した。簡潔には、ルシフェラーゼ標識４Ｔ１乳癌細胞（０．５×１０^５）を、Ｂａｌｂ／ｃマウスの第３乳腺脂肪体に同所的に注射した。マウスの処置（ＰＢＳ対照対ｍＡｂ Ａ５４；５００μｇ／マウス、３回／週）は、４Ｔ１細胞接種の３日後に開始した。１２日目に実施したＩＶＩＳイメージングは、原発性腫瘍によって生成されたルシフェラーゼシグナルに差異を示さなかった（図７Ａ及び７Ｂ）。研究の１５日目に、この原発性腫瘍を含む乳腺脂肪体を（２％イソフルラン麻酔下で）すべてのマウスから切除し、秤量した。Ａ５４処置マウス由来の腫瘍と未処置マウス由来の腫瘍との間に重量の差はなかった（図７Ｃ）。マウスを上記のようにｍＡｂ Ａ５４でさらに処置し、ＩＶＩＳ生物発光イメージングを３５日目（例えば乳房切除後２３日目）に行った。図７Ｅ及び７Ｆに示すように、Ａ５４処置マウス（１匹のマウスが実験の１５日目に死亡した）において明らかになったほとんど検出されないシグナルと比較して、５匹の未処置マウスのうちの２匹のみが肺転移を発症した。実験を繰り返したところ同様の結果が得られ、これは、このモデル系において肺コロニー形成のほぼ完全な阻害をさらに示す。

実施例８． Ａ５４ ｍＡｂとボルテゾミブとの組合せは骨髄腫腫瘍増殖を減弱する
その後の研究において、骨髄腫腫瘍増殖に対するボルテゾミブと組み合わせたｍＡｂ Ａ５４の効果を検討した。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（ｎ＝５）にＣＡＧルシフェラーゼ細胞（５×１０^６）を接種（ｉ．ｖ．）し、マウスをＡ５４ ｍＡｂ（３６０μｇ／マウス、２回／週）又はボルテゾミブ（Ｂｒｏｔ；０．５ｍｇ／ｋｇを週２回）又はＡ５４ ｍＡｂ＋ボルテゾミブ（記載のように）又は対照としてのＰＢＳで処置した。ＩＶＩＳイメージングによって腫瘍増殖を評価した（図８Ａ～Ｄ）。ルシフェラーゼシグナルの定量をグラフで示す（図８Ｅ）。これらの結果は、Ａ５４ ｍＡｂとボルテゾミブとの組合せによる骨髄腫の処置が腫瘍増殖を減弱することを示す。

実施例９． Ａ５４ ｍＡｂは乳癌腫瘍増殖を減弱する．
その後の研究において、乳癌腫瘍増殖に対するｍＡｂ Ａ５４の効果を検討した。Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３）に、ＥＭＴ－６ルシフェラーゼ細胞（０．５×１０^６）を乳腺脂肪体に接種し、マウスを、Ａ５４ ｍＡｂ（３６０μｇ／マウス、２回／週）又は対照としてのＰＢＳで処置した。ＩＶＩＳイメージングによって腫瘍増殖を評価した（図９Ａ及び９Ｂ）。ルシフェラーゼシグナルの定量をグラフで示す（図９Ｃ）。実験の最後に、腫瘍を切除し、秤量した（図９Ｄ）。これらの結果は、Ａ５４ ｍＡｂ処置が乳癌の増殖を減弱することを示す。

実施例１０． Ａ５４ ｍＡｂはマウスをＬＰＳ誘導性敗血症から効果的に保護する．
その後の研究において、ＬＰＳ誘導性敗血症に対するｍＡｂ Ａ５４の効果を検討した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝８）を、Ａ５４ ｍＡｂ（５００μｇ／マウス）若しくはロネパルスタット（ＳＳＴ）（１．２ｍｇ／マウス）又は対照としてのＰＢＳで処置し、その３０分後にＬＰＳ注射（１５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を行った。ＬＰＳ投与の１６時間後にＳＳＴを再度与えた（１．２ｍｇ／マウス）。マウスの生存を１２時間毎に８日間モニタリングした（図１０）。結果は、Ａ５４ ｍＡｂがマウスをＬＰＳ誘導性敗血症から効果的に保護することを示す。

実施例１１． Ａ５４ ｍＡｂとゲムシタビンとの組合せは膵腫瘍増殖を減弱する．
膵腫瘍増殖に対するｍＡｂ Ａ５４の効果を検討した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝７）にＰａｎｃ０２細胞（１×１０^６）を接種（ｓ．ｃ．）し、マウスを、Ａ５４ ｍＡｂ（３６０μｇ／マウス、２回／週）、ゲムシタビン（Ｇｅｍ；３０ｍｇ／ｋｇを週に２回）、Ａ５４ ｍＡｂ＋ゲムシタビン（記載のように）又は対照としてのビヒクル単独（ＰＢＳ）で処置した。腫瘍形成を外部ノギス腫瘍測定から計算した（図１１Ａ）。３２日目の実験終了時に、腫瘍を切除し、写真撮影し（図１１Ｃ）、秤量した（図１１Ｂ）。結果は、Ａ５４ ｍＡｂとゲムシタビンとの組合せによる膵癌の処置が腫瘍増殖を減弱することを示す。

実施例１２． Ａ５４ ｍＡｂ及びヘパラナーゼの相互作用．
Ａ５４ ｍＡｂとヘパラナーゼとの相互作用をＸ線結晶学によって調べた。Ｆａｂ断片を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（サーモ・サイエンティフィック）マウスＩｇＧ１ Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２調製キット並びに標準的な製造業者のプロトコルを使用して、インタクトなＡ５４抗体から調製した。単離したＦａｂ断片をサイズ排除クロマトグラフィーによってさらに精製して夾雑物を除去し、緩衝液を２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴに交換した（図１２Ａ～１２Ｂ）。精製Ａ５４を精製ヘパラナーゼ（＝ＨＰＳＥ）と約２：１のＦａｂ：ＨＰＳＥ比で混合した。この混合物を室温で２時間インキュベートし、次いでサイズ排除クロマトグラフィーによって再度精製して、未結合のＦａｂ断片を除去した（図１２Ｃ）。

精製したＡ５４＋Ｆａｂ複合体を５．４ｍｇ／ｍＬに濃縮し、市販のスクリーンを使用して結晶化について試験した。結晶は、ＰＡＣＴ Ｐｒｅｍｉｅｒ結晶化スクリーン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ（モレキュラー・ディメンジョンズ））条件Ｅ５（０．２Ｍ硝酸ナトリウム、２０％ポリエチレングリコール３３５０）で見出された。結晶を凍結保護溶液（０．２Ｍ硝酸ナトリウム、２０％ポリエチレングリコール３３５０、２５％エチレングリコール）に移し、その後、Ｘ線データ収集のために回収し、液体窒素中でフラッシュ冷却した。

Ｘ線回折データをＤｉａｍｏｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（ダイヤモンド・ライト・ソース）、英国のビームラインＩ０４－１上で収集し、ＸＤＳ２及びＳＴＡＲＡＮＩＳＯ３パイプラインを使用して３．５４Åに処理した。構造は、非リガンド化ＨＰＳＥ（ＰＤＢアクセッションコード５Ｅ８Ｍ）及び無関係のマウスＩｇＧ Ｆａｂ断片（ＰＤＢアクセッションコード１ＡＥ６）の構造を用いた分子置換によって位相決定した。構造は、それぞれＣＯＯＴ及びＲＥＦＭＡＣ５を使用した手動モデル構築及び最大尤度精密化（ｍａｘｉｍｕｍ－ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）の反復ラウンドによってさらに改善した。精密化は、参照モデルとして５Ｅ８Ｍ及び１ＡＥ６を使用して、ＴＬＳ拘束、ｊｅｌｌｙ ｂｏｄｙ拘束、及びＰｒｏｓｍａｒｔ拘束を使用して実施した。ｗｗＰＤＢ検証サーバーを用いて最終モデルをチェックした。

結晶学的データは、Ａ５４ Ｆａｂが、ＨＢＤ－ＩＩ（Ｇｌｎ２７０－Ｌｙｓ２８０；図１４Ａ及び１４Ｂ）の真上の（β／α）_８－バレルドメイン上でＨＰＳＥに結合することを示す。この相互作用は、ＨＰＳＥがそのＨＳ基質に結合するのを酵素結合溝の立体閉塞によって防止する（図１５Ｆに描く）。タンパク質表面電荷を検討すると、Ａ５４－ＨＰＳＥ相互作用に対する大きい静電的寄与が示される。ＨＢＤ－ＩＩは実質的に正に帯電しているのに対して、Ａ５４の結合交接部は負に帯電している（図１４Ｃ）。

この結果は、Ａ５４－ＨＰＳＥ交接部（界面）におけるＨＰＳＥの単一の最重要領域がＨＢＤ－ＩＩであることを示す。いくつかの負に帯電したＡ５４アミノ酸（Ａｓｐ１２３ＶＨ、Ａｓｐ１２５ＶＨ、Ｇｌｕ７８ＶＨ、Ａｓｐ２０ＶＬ、Ｇｌｕ１１６ＶＬ、Ａｓｐ１１７ＶＬ）は、Ａ５４－ＨＰＳＥ交接部でクラスター化し、結合相互作用を強く安定化する塩橋のネットワークを形成する。Ｔｙｒ１２４ＶＨ及びＴｙｒ５５ＶＬも強い電荷成分を有するが、このＴｙｒ１２４ＶＨ及びＴｙｒ５５ＶＬが関与する陽イオン－π相互作用も優勢である。予想通り、ＣＤＲループは、ほぼすべてのＡ５４－ＨＰＳＥ結合相互作用を媒介する。図１３は、Ａ５４ ＣＤＲループの三次Ｆａｂ構造の概略図である。各ＣＤＲループ相互作用は、以下により詳細に記載される。

Ｈ１相互作用
Ａ５４ Ｈ１ループは、ＨＰＳＥと何らの相互作用も有さない。

Ｈ２相互作用（図１５Ａ）
Ｈ２（Ｔｙｒ６８－Ａｓｐ８５）は、Ｔｙｒ２９８－Ａｓｐ３０９あたりのＨＰＳＥ領域、及びいくつかの近くの残基（Ｔｙｒ３４８、Ｌｙｓ２３１）と相互作用する。Ａ５４ Ｌｙｓ９３は、厳密にはＨ２ループに属さないが、空間的にＨ２相互作用に近いように見える。この領域における特に重要な相互作用には、Ｇｌｕ７８_Ａ５４とＬｙｓ２３１_ＨＰＳＥとの間、及びＬｙｓ２９３_Ａ５４とＡｓｐ３０９_ＨＰＳＥとの間の塩橋が含まれる。

Ｈ３相互作用（図１５Ｂ）
Ｈ３（Ｇｌｙ１１８－Ｔｙｒ１３２）は、Ａｓｎ３１２－Ｌｙｓ３２５あたりのＨＰＳＥα－ヘリックス及びＨＢＤ－ＩＩのいくつかの残基（Ｐｒｏ２７１－Ａｌａ２７６）と相互作用する。Ａｓｐ１２３_Ａ５４とＬｙｓ３２５_ＨＰＳＥとの間、及びＡｓｐ１２５_Ａ５４とＡｒｇ２７３_ＨＰＳＥとの間に明らかな静電相互作用がある。

Ｌ１相互作用（図１５Ｃ）
Ｌ１（Ａｒｇ４３－Ａｓｎ５７）相互作用は、主にＨＰＳＥのＨＢＤ－ＩＩ領域（Ａｒｇ２７２－Ｓｅｒ２８１）及びいくつかの近くの残基との相互作用である。Ａ５４のＡｓｐ２０－Ｉｌｅ２１も、それらがＬ１ループの近くにあるので、含まれる。Ｌ１相互作用に関与する明らかな塩橋又はＨ結合は存在しないが、Ｔｙｒ５５はＡｒｇ２７３と陽イオン－π相互作用を起こすように良好に配置される。

Ｌ２相互作用
Ａ５４ Ｌ２ループは、ＨＰＳＥと何らの相互作用も有さない。

Ｌ３相互作用（図１５Ｄ）
Ｌ３（Ｇｌｎ１１１－Ｔｈｒ１２０）相互作用は、主にＨＰＳＥのＨＢＤ－ＩＩ領域（Ａｒｇ２７２－Ｓｅｒ２８１）との相互作用である。重要な塩橋は、Ｇｌｕ１１６_Ａ５４とＬｙｓ２７７_ＨＰＳＥ、及びＡｓｐ１１７_Ａ５４とＡｒｇ２７３_ＨＰＳＥとの間で形成される。

図１５Ｅは、ＨＰＳＥ ＨＢＤ－ＩＩ残基（青）とＡ５４ ＶＨ（緑）及びＶＬ（赤）由来の残基との間の相互作用を示す概略図である。

図１５Ｆは、ＰＤＢ ５Ｅ９Ｃ由来のｄｐ４四糖（シアン）とＡ５４－ＨＰＳＥ複合体との重なりを表示する概略図であり、Ａ５４がＨＰＳＥ結合溝をどのように立体的に閉塞するかを示す。Ａ５４は、ｄｐ４の位置に非常に近いＨＰＳＥに結合する。ｄｐ４の位置を超えて延在する天然のＨＳ基質は、ＨＰＳＥ活性部位の溝（赤矢印）への接近を立体的にブロックされるであろう。

相互作用の概要
表２及び表３は、ＰＩＳＡ５分析によって決定した、結合交接部に関与するＡ５４及びＨＰＳＥの残基を要約する。分析は抗体鎖によって分類される。表２は重鎖（ＶＨ）相互作用を提示し、表３は軽鎖（ＶＬ）相互作用を提示する。いくつかのＨＰＳＥ残基は、ＶＨ及びＶＬの両方と相互作用するので、両方の表に現れる。このＨＰＳＥモデルは、このタンパク質の５０ｋＤａ（Ａ）及び８ｋＤａ（Ｂ）鎖に対応する２つの鎖を含有する。結合に関与するＨＰＳＥ残基は鎖Ａ由来である。Ａ５４残基は、残基のＣＤＲループに従ってグループ分けされる。いくつかのＡ５４相互作用残基は、ＣＤＲループに属さない。

残基がＨ結合又は塩橋相互作用に関与するか否か（Ｈ／Ｓ）、相互作用の推定接近可能表面積／埋没表面積（ＡＳＡ／ＢＳＡ）、及び結合エネルギーに対する推定寄与（ΔＧ）も示す。
１． ＡＳＡ：接近可能表面積 － 溶媒に接近可能なモノマー単位、残基又は原子の面積。ＡＳＡは平方オングストロームで測定される。
２． ＢＳＡ：埋没表面積 － 例えばタンパク質の折り畳み時又は交接部形成の過程で溶媒に接近できなくなる表面積。平方オングストロームで測定される。
３． ΔＧ：交接部形成時の溶媒和エネルギー増加、ｋｃａｌ／ｍｏｌ。溶媒和エネルギー（ＳＥ）は、溶媒和効果に起因するモノマー単位、残基又は原子の結合状態と非結合状態との間のエネルギー差である。結合（交接）状態では、構造の表面の一部は溶媒に接近できなくなる。結合した表面が正の溶媒和効果を有する場合、総エネルギーは結合時に減少し、これは疎水性相互作用として知られている。

特定の実施形態の上述の説明は、本発明の一般的性質を完全に明らかにするので、当業者は、現在の知識を適用することによって、過度の実験を行うことなく、かつ包括的な概念から逸脱しない範囲で、そのような特定の実施形態を容易に改変及び／又は様々な応用に適合させることができ、それゆえ、そのような適合例及び改変例は、開示される実施形態の均等物の意味及び範囲内に包含されるべきであり、そのように意図されている。本明細書で用いられる表現又は用語は、説明を目的とするものであり、限定を目的とするものではないことを理解されたい。様々な開示された機能を実行するための手段、材料、及び工程は、本発明から逸脱しない範囲で、様々な代替形態をとってもよい。

Claims (25)

1. ヘパラナーゼ酵素に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体であって、前記抗体、その抗原結合断片、類似体又は誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体。
2. ヘパラナーゼ酵素のＨＢＤ－ＩＩ領域（ヘパリン結合ドメイン２）に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体であって、前記抗体、その抗原結合断片、類似体又は誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体。
3. 少なくとも３つの異なるＣＤＲを含み、前記３つの異なるＣＤＲが、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号２のアミノ酸配列、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む請求項１又は請求項２に記載の抗体。
4. 少なくとも３つの異なるＣＤＲを含み、前記３つの異なるＣＤＲが、配列番号４のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸配列、及び配列番号６のアミノ酸配列を含む請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の抗体。
5. 前記抗体又は断片が、マウス若しくはヒトの抗体若しくは断片であるか、又はヒト化抗体又はヒト化断片である請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の抗体。
6. 配列番号７のアミノ酸配列を含む請求項５に記載の抗体。
7. 配列番号８のアミノ酸配列を含む請求項５又は請求項６に記載の抗体。
8. 前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、ｄＡｂ、単離ＣＤＲ領域、単鎖抗体、ダイアボディ、及び線状抗体からなる群から選択される請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の抗体。
9. 請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離されたポリヌクレオチド配列。
10. 配列番号１１から配列番号１３のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む請求項９に記載の単離されたポリヌクレオチド配列。
11. 配列番号９に示されるヌクレオチド配列を含む請求項９又は請求項１０に記載の単離されたポリヌクレオチド配列。
12. 配列番号１４から配列番号１６のいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を含む請求項９から請求項１１のいずれか１項に記載の単離されたポリヌクレオチド配列。
13. 配列番号１０に示されるヌクレオチド配列を含む請求項９から請求項１２のいずれか１項に記載の単離されたポリヌクレオチド配列。
14. 請求項９から請求項１３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
15. 請求項１に記載の抗体、請求項９に記載の単離されたポリヌクレオチド配列、又は請求項１４に記載のベクターを含む細胞。
16. 請求項１又は請求項２に記載の抗体、請求項９に記載の単離されたポリヌクレオチド配列、請求項１４に記載のベクター、又は請求項１５に記載の細胞と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
17. 必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患若しくは障害を阻害又は治療する方法であって、前記対象に治療有効量のヘパラナーゼ酵素に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体を投与する工程を含み、前記抗体、又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む方法。
18. 必要とする対象においてヘパラナーゼ活性に関連する疾患若しくは障害を阻害又は治療する方法であって、前記対象に治療有効量のヘパラナーゼ酵素のＨＢＤ－ＩＩ領域（ヘパリン結合ドメイン２）に向けられた抗体又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体を投与する工程を含み、前記抗体、又はその抗原結合断片、類似体若しくは誘導体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＣＤＲは、配列番号１から配列番号６、又はこれらの組合せを含む方法。
19. 前記疾患又は障害が悪性増殖性疾患である請求項１７又は請求項１８に記載の方法。
20. 前記悪性増殖性疾患が、癌腫、肉腫、黒色腫、又はこれらの組合せを含む請求項１９に記載の方法。
21. 前記悪性増殖性疾患が血液悪性腫瘍を含む請求項１９に記載の方法。
22. 腫瘍進行を阻害すること、腫瘍転移を阻害すること、又はこれらの組合せを含む請求項１８から請求項２１のいずれか１項に記載の方法。
23. さらなる抗癌治療を前記対象に投与することをさらに含む請求項１８から請求項２２のいずれか１項に記載の方法。
24. 前記さらなる抗癌治療が、化学療法、放射線療法、又はその両方を含む請求項２３に記載の方法。
25. 前記疾患又は障害が、１型糖尿病、炎症性障害、腎疾患、又はこれらの組合せである請求項１８に記載の方法。

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