JP2023530435A

JP2023530435A - Ｒｓｖワクチン組成物、方法、およびその使用

Info

Publication number: JP2023530435A
Application number: JP2022576440A
Authority: JP
Inventors: リアン，ペン; リアン，ジョシュア
Original assignee: シチュアンクロバーバイオファーマシューティカルズ，インク．
Priority date: 2020-06-10
Filing date: 2021-06-10
Publication date: 2023-07-18
Also published as: EP4164686A1; EP4164686A4; CN115989036A; WO2021249009A1; WO2021249452A1; US20230256076A1

Abstract

提供されるのは、呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）ウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む組換えペプチドおよびタンパク質を含む免疫原性組成物である。免疫原性組成物は、インフレームでジスルフィド結合連結三量体融合タンパク質に結合された可溶性ＲＳＶウィルス抗原を含む分泌融合タンパク質を含む。免疫原性組成物は、例えば、ＲＳＶ感染症を治療または予防するための免疫応答を生成するために有用である。免疫原性組成物を、例えば、予防および／または治療ワクチンの一部として、ワクチン組成物に使用し得る。また、本明細書で提供されるのは、組換えペプチドおよびタンパク質の製造方法、予防、治療、および／または診断法、ならびに関連キットである。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年６月１０日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／０９５２９５号、および２０２１年４月１３日に出願された同第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／０８７０４５号の優先権および利益を主張し、これらの開示内容は、本出願において、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列表のＡＳＣＩＩテキストファイルとしての提出
次のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１６５７６２０００２４２ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日付：２０２１年６月９日、サイズ：２２９ＫＢ）。

いくつかの態様では、本開示は、呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）ウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む組換えペプチドおよびタンパク質を含む、ＲＳＶ感染症を治療および／または予防するための、免疫原性組成物に関する。

呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）は、成人および子供の気道感染症を引き起こし、下気道感染症および乳児期および小児期中の入院の主要な原因である。ＲＳＶの高い感染率にもかかわらず、予防薬、治療薬、およびワクチンを含む治療法は、限られているか、または利用できない。ＲＳＶの治療のための改善された手法が必要である。本明細書で提供されるのは、このようなおよび他のニーズを満たす組成物、方法、使用、および製品である。

ＲＳＶの高い感染率にもかかわらず、予防薬、治療薬、およびワクチンを含む治療法は、限られているか、または利用できず、ＲＳＶの治療のための改善された手法が必要である。本願発明では、このようなおよび他のニーズを満たす組成物、方法、使用、および製品を提供する。

一態様では、本明細書で提供されるのは、複数の組換えポリペプチドを含み、各組換えポリペプチドが、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに結合した呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープを含むタンパク質であり、組換えポリペプチドのＣ末端プロペプチドはポリペプチド間ジスルフィド結合を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶは、サブタイプＡまたはサブタイプＢである。いくつかの実施形態では、エピトープは、線形エピトープまたは立体構造エピトープである。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、ジスルフィド結合連結ホモ三量体を形成できるコラーゲンのＣ－プロペプチドにインフレームで融合されるＲＳＶＦタンパク質またはそのフラグメントの外部ドメイン（例えば、膜貫通および細胞質ドメインなしに）を含む組換え型のサブユニットワクチンである。得られた組換えＦ三量体などのサブユニットワクチンは、遺伝子導入細胞から発現および精製でき、三量体型の天然様の立体構造であると予測される。これは、膜貫通および／または細胞質ドメインなしに、それが可溶型の組換えペプチドまたはタンパク質として発現される場合に、よく発生するウィルス抗原のミスフォールディングの問題を解決する。このようなミスフォールドしたウィルス抗原は、天然のウィルス抗原立体構造を正確に保持せず、中和抗体を惹起できないことが多い。

いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、Ｆ１サブユニットペプチド、Ｆ２サブユニットペプチド、またはこれらの任意の組み合わせを含み、タンパク質は、３個の組換えポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、シグナルペプチド、７アミノ酸繰り返しＣ（ＨＲＣ）ペプチド、ｐｅｐ２７ペプチド、融合ペプチド（ＦＰ）、７アミノ酸繰り返しＡ（ＨＲＡ）ペプチド、ドメインＩペプチド、ドメインＩＩペプチド、または７アミノ酸繰り返しＢ（ＨＲＢ）ペプチド、またはこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットを含むが、Ｆ２サブユニットを含まない、またはその逆の場合もある。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットおよびＦ２サブユニットを含み、任意選択で、ｐｅｐ２７を欠き、ならびに任意選択で、Ｆ１サブユニットおよびＦ２サブユニットは、ジスルフィド結合または人為的に導入されたリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、膜貫通（ＴＭ）ドメインペプチドおよび／または細胞質（ＣＰ）ドメインペプチドを含まない。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、プロテアーゼ切断部位を含み、プロテアーゼは任意選択でフューリン、トリプシン、第Ｘａ因子、トロンビン、またはカテプシンＬである。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、プロテアーゼ切断部位を含まず、プロテアーゼは任意選択でフューリン、トリプシン、第Ｘａ因子、トロンビン、またはカテプシンＬである。

いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、可溶性であるか、または脂質二重層、例えば、膜またはウィルスエンベロープに直接結合しない。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、タンパク質の組換えポリペプチド間で同じまたは異なる。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドは、Ｃ末端プロペプチドに直接融合されるか、またはグリシン－Ｘ－Ｙリピートを含むリンカーなどのリンカーを介してＣ末端プロペプチドに結合され、ＸおよびＹは、独立に任意のアミノ酸、場合により、プロリンまたはヒドロキシプロリンである。

いくつかの実施形態では、タンパク質は、可溶性であるか、または脂質二重層、例えば、膜またはウィルスエンベロープに直接結合しない。いくつかの実施形態では、タンパク質は、Ｆタンパク質ペプチド三量体を含むロゼット様オリゴマーを形成できる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、対象の細胞表面接着因子または受容体に結合でき、適宜、対象は、霊長類、例えば、ヒトなどの哺乳動物である。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドはヒトコラーゲンである。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、ｐｒｏα１（Ｉ）、ｐｒｏα１（ＩＩ）、ｐｒｏα１（ＩＩＩ）、ｐｒｏα１（Ｖ）、ｐｒｏα１（ＸＩ）、ｐｒｏα２（Ｉ）、ｐｒｏα２（Ｖ）、ｐｒｏα２（ＸＩ）、またはｐｒｏα３（ＸＩ）のＣ末端ポリペプチド、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、組換えポリペプチド間で同じまたは異なる。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号４８～６３のいずれか、またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、各組換えポリペプチド中のＦタンパク質ペプチドは、融合前立体構造または融合後立体構造であり、任意選択で、タンパク質は、松葉杖形状ロッド（ｃｒｕｔｃｈ－ｓｈａｐｅｄｒｏｄ）としてＦタンパク質ペプチド三量体を含むロゼット様オリゴマーを含む。前述のいずれかの実施形態では、各組換えポリペプチド中のＦタンパク質ペプチドは、配列番号１７～４７のいずれか、またはそれと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み得る。

前述のいずれかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１～１６のいずれか、またはそれと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み得る。前述のいずれかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号４８～６３またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列に直接的または間接的に結合した配列番号１７～４７のいずれか、またはそれと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み得る。

また、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるタンパク質を含む免疫原である。本明細書で提供されるのは、ナノ粒子に直接的または間接的に結合した本明細書で提供されるタンパク質を含むタンパク質ナノ粒子である。本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるタンパク質を含むウィルス様粒子（ＶＬＰ）である。

また、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される１、２、３個またはそれ以上のタンパク質の組換えポリペプチドをコードする単離核酸である。いくつかの実施形態では、Ｆタンパク質ペプチドをコードするポリペプチドは、コラーゲンのＣ末端プロペプチドをコードするポリペプチドにインフレームで融合される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離核酸は、プロモーターに作動可能に連結されている。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離核酸は、ＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単離核酸は、ＲＮＡ分子、任意選択で、ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ、非増幅ｍＲＮＡ、自己増幅ｍＲＮＡ、またはトランス増幅ｍＲＮＡなどのｍＲＮＡ分子である。

また、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される単離核酸を含むベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターはウィルスベクターである。

いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるベクターを含む、ウィルス、偽ウィルス、または細胞であり、場合により、ウィルスまたは細胞は、組換えゲノムを有する。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、または細胞、および薬学的に許容可能な担体を含む免疫原性組成物である。

また、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される免疫原性組成物および任意選択で、アジュバントを含むワクチンであり、ワクチンは、任意に、サブユニットワクチンである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、予防および／または治療ワクチンである。

いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、タンパク質を産生する方法であり、該方法は、本明細書で提供される単離核酸またはベクターを宿主細胞中で発現し、本明細書で提供されるタンパク質を産生すること；およびそのタンパク質を精製することを含む。本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される方法により産生されるタンパク質である。

本明細書で提供されるのは、対象中でＲＳＶのＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに対する免疫応答を生成する方法であり、該方法は、有効量の本明細書で提供されるタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンを対象に投与し、免疫応答を生成させることを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、ＲＳＶによる感染を治療または予防するためのものである。いくつかの実施形態では、免疫応答の生成は、対象中のＲＳＶの複製を阻害または低減する。いくつかの実施形態では、免疫応答は、細胞媒介応答および／または体液性応答を含み、任意選択で、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体などの１種または複数の中和抗体の産生を含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は、ＲＳＶのＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープに対するものであるが、Ｃ末端プロペプチドに対するものではない。いくつかの実施形態では、対象への投与は、１回または複数回のＲＳＶへの事前暴露に起因する対象における抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）をもたらさない。いくつかの実施形態では、投与は、１回または複数回のＲＳＶへ引き続いて暴露される場合、対象における抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）をもたらさない。いくつかの実施形態では、方法は、プライミングステップおよび／または追加免疫ステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、投与ステップは、局所、経皮、皮下、皮内、経口、鼻腔内（例えば、鼻腔内噴霧）、気管内、舌下、頬側、直腸、腟、吸入、静脈内（例えば、静脈内注射）、動脈内、筋肉内（例えば、筋肉注射）、心臓内、骨内、腹腔内、経粘膜送達、硝子体内、網膜下、関節腔内、関節周囲、局部、または皮膚上投与を介して実施される。いくつかの実施形態では、有効量は、単一用量または１つまたは複数の間隔により分離された一連の用量で投与される。いくつかの実施形態では、有効量は、アジュバントなしに投与される。いくつかの実施形態では、有効量は、アジュバントと共に投与される。

本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される有効量のタンパク質を対象に投与し、対象中でＲＳＶに対する中和抗体または中和抗血清を生成することを含む。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物、任意選択で、ヒトまたは非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では、方法は、中和抗体または中和抗血清を対象から単離することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、有効量の単離中和抗体または中和抗血清を受動免疫を介してヒト対象に投与して、ＲＳＶによる感染を防止または治療することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶに対する中和抗体または中和抗血清は、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに対するポリクローナル抗体を含み、任意選択で、中和抗体または中和抗血清は、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに対する抗体を不含であるか、または実質的に不含である。いくつかの実施形態では、中和抗体は、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに対するモノクローナル抗体を含み、任意選択で、中和抗体は、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに対する抗体を不含であるか、または実質的に不含である。

いくつかの態様では、本明細書で提供されるタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンは、対象のＲＳＶに対する免疫応答の誘発に、および／またはＲＳＶによる感染症の治療または予防に使用するためのものである。

いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶに対する免疫応答の誘発のための、および／またはＲＳＶによる感染症の治療または予防ための、タンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンの使用である。いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶに対する免疫応答の誘発のための、および／またはＲＳＶによる感染症の治療または予防ための、薬物または予防薬の製造のための、タンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンの使用である。

また、本明細書で提供されるのは、試料の分析方法であり、該方法は、試料を本明細書で提供されるタンパク質と接触させて、タンパク質と、ＲＳＶのＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープと特異的結合できる分析物との間の結合を検出することを含む。いくつかの実施形態では、分析物は、Ｆタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープを認識する抗体、受容体、または細胞である。いくつかの実施形態では、結合は、試料中の分析物の存在、および／または試料が由来する対象のＲＳＶ感染を示す。

本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるタンパク質、およびタンパク質を含むか、または固定化する基材、パッドまたはバイアルを含むキットであり、任意選択で、キットは、ＥＬＩＳＡまたはラテラルフローアッセイキットである。

ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドの発現レベルおよび精製を示す。この図は、三量体化ペプチドに融合された細胞外Ｆドメインを含む例示的融合ペプチドの概略図である。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドの発現レベルおよび精製を示す。この図は、無血清流加バッチ細胞培養物由来の例示的融合ペプチド発現の８％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。１日目～１２日目の１０μＬの無細胞順化培地を、非還元条件下、およびこれに続く、クーマシーブルー染色で分離した。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドの発現レベルおよび精製を示す。この図は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによる例示的融合ペプチドの純度評価を示す図であり、例示的タンパク質のピーク面積は、ＯＤ_２８０検出で９４．６％であったことを示す。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的精製融合ペプチドのキャラクタリゼーションを示す。この図は、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的精製融合ペプチドの非還元条件および還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析の図である。コラーゲンのＦおよびプロペプチドに特異的な抗体を用いることにより、それぞれ、２μｇの精製タンパク質を８％ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるクーマシーブルー染色のためにロードし、および０．１μｇの精製タンパク質をウェスタンブロットのためにロードした。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的精製融合ペプチドのキャラクタリゼーションを示す。この図は、個々の、または大部分がロゼット様オリゴマーの形態の松葉杖形状分子を示すＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドタンパク質のネガティブ染色電子顕微鏡写真である。個々のおよびロゼット様分子の例は、それらの構造の図に付随して下に示される。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的精製融合ペプチドのキャラクタリゼーションを示す。この図は、パリビズマブおよびＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドのバイオレイヤー干渉法による結合試験の結果を示す。５μｇ／ｍＬのパリビズマブを最初にプロテインＡセンサー上に固定し、その後、センサーを種々の濃度の例示的融合ペプチド中に浸漬し、結合動力学を測定した。緩衝液基準液を減算して、得られた曲線を１：１結合モデルに当てはめることにより、Ｋ_ｏｎおよびＫ_ｄｉｓを得て、値を下表に示している。パリビズマブおよびＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドに対して得られたＫ_Ｄは、１ピコモル未満である。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドによる免疫化がＲＳＶ感染に対し保護することを示す。図３Ａは、実験手法の略図を示す：０日目および２１日目にマウスを免疫化し、続けて、血清採取後、４９日目に鼻腔内（ｉ．ｎ．）にＲＳＶ曝露を行った。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドによる免疫化がＲＳＶ感染に対し保護することを示す。図３Ｂは、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む精製した例示的融合ペプチドに対する血清抗ＦＩｇＧＥＬＩＳＡ力価を示すグラフである。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドによる免疫化がＲＳＶ感染に対し保護することを示す。図３Ｃは、ＲＳＶ感染に対するＣＰＥ形成の５０％の抑制をもたらす血清中和抗体の力価を示すウィルスマイクロ中和試験アッセイのグラフである。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドによる免疫化がＲＳＶ感染に対し保護することを示す。図３Ｄは、免疫化マウスの肺中のプラークアッセイによる曝露の５日後のＲＳＶの力価を示すグラフである。値は、肺組織のグラム当りのプラークを表す。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドによる免疫化がＲＳＶ感染に対し保護することを示す。図３Ｅは、パリビズマブの加熱不活性化したＲＳＶ（ＨＩ－ＲＳＶ）粒子への結合の５０％の抑制をもたらす血清試料の希釈により測定されたパリビズマブ競合的ＩｇＧ力価を示すグラフである。値は、ｌｏｇ_２および平均±ＳＥＭとして表す。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む例示的融合ペプチドによる免疫化が、ワクチン誘発性疾患増強から保護することを示す写真である。曝露の５日後に採取した肺組織を１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、パラフィン包埋し、５μｍの切片を作製し、Ｈ＆Ｅで染色して、写真を２００ｘ倍率で取得した。

いくつかの実施形態では、共有結合三量体型のＲＮＡウィルス由来の組換え可溶性表面抗原の組成物および使用方法が開示される。いくつかの実施形態では、得られた融合タンパク質は、ジスルフィド結合連結ホモ三量体として分泌され、これは、構造的により安定であり、同時に、天然様の三量体ウィルス抗原の立体構造を保存し、それにより、これらの危険な病原体に対するより効果的なワクチンとして使用できる。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、ウィルス感染症を防止するために、ワクチンまたは多価ワクチンの一部として、アジュバントなしに、またはアジュバントと共に、または２種以上のアジュバントと共に、筋肉内注入または鼻腔内投与を介して、任意選択で、ウィルス抗原三量体を使用する方法である。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、ウィルス抗原を認識する中和抗体などの抗体、例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧの検出によるウィルス感染症の診断のための抗原としてウィルス抗原三量体を使用する方法である。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、受動免疫に使用できるポリクローナルまたはモノクローナル抗体、例えば、乳幼児のＲＳＶ感染症を治療するための中和ｍＡｂ、を生成するための抗原としてウィルス抗原三量体を使用する方法である。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、ワクチンまたは多価ワクチンの一部としてのウィルス抗原三量体であり、ワクチンは、ウィルスの同じタンパク質のウィルス抗原を含む、または１種または複数のウィルスまたは同じウィルスの１種または複数の株の２種以上の異なるタンパク質を含む、複数の三量体サブユニットワクチンを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のウィルス抗原三量体を含む一価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のウィルス抗原三量体を含む二価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のウィルス抗原三量体を含む三価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のウィルス抗原三量体を含む四価ワクチンである。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のＦ三量体を含む一価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のＦ三量体を含む二価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、第１のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体および第２のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体を含む二価ワクチンである。いくつかの実施形態では、第１および第２のＦタンパク質抗原は、１種または複数のウィルス種もしくは株／サブタイプの同じＦタンパク質由来であるか、または１種または複数のウィルス種もしくは同じウィルス種の１種または複数の株／サブタイプの２種以上の異なるＦタンパク質由来である。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のＦ三量体を含む三価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、第１のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体および第２のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体、および第３のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体を含む三価ワクチンである。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３のＦタンパク質抗原は、１種または複数のウィルス種もしくは株／サブタイプの同じＦタンパク質由来であるか、または１種または複数のウィルス種または同じウィルス種の１種または複数の株／サブタイプの２種、３種、またはそれを超える異なるＦタンパク質由来である。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、本明細書で開示のＦ三量体を含む四価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるのは、第１のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体、第２のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体、第３のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体、および第４のＦタンパク質抗原を含む少なくとも１種のＦ三量体を含む四価ワクチンである。いくつかの実施形態では、第１、第２、第３、および第４のＦタンパク質抗原は、１種または複数のウィルス種もしくは株／サブタイプの同じＦタンパク質由来であるか、または１種または複数のウィルス種または同じウィルス種の１種または複数の株／サブタイプの２種、３種、４種またはそれを超える異なるＦタンパク質由来である。

本明細書で提供されるのは、免疫原性組成物、方法、ならびにＲＳＶ感染症の治療、例えば、予防薬、治療薬のためのＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む融合ペプチドおよびタンパク質の使用である。呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）は、乳幼児および幼児の間の急性下気道感染症（ＡＬＲＴＩ）の主要な原因であると見なされており、毎年７，０００超～２０，０００人の子供の死亡の原因となる。ＲＳＶ感染症は、発展途上国世界における乳幼児死亡率の第２の最もよくある原因である。加えて、ＲＳＶは、高齢者および免疫無防備状態集団では、重篤な疾患に繋がる場合がある。ＲＳＶに起因する疾病負荷にもかかわらず、現在、承認されたワクチンは存在しない。効力の高い予防的ヒト化ｍＡｂであるパリビズマブ（シナジス（登録商標））は、ＲＳＶに罹患する危険性が高いこれらの乳幼児のための受動免疫手段として唯一入手できる。

数十年に及ぶ研究にもかかわらず、ＲＳＶワクチン開発は、多数の理由のために成功していない。例えば、ＲＳＶワクチン候補の製造、安定性、有効性の問題は、克服が困難であり、ホルマリン不活化ＲＳＶ（ＦＩ－ＲＳＶ）ワクチンが、ワクチン誘発性疾患増強（ＶＥＤ）を媒介することが認められたので、特に、安全性は、主要な懸念であった。

本明細書で提供されるＲＳＶウィルス抗原および免疫原を含む組換えポリペプチドおよび融合タンパク質を含むタンパク質は、効果的におよび安全にＲＳＶ感染症を治療する（例えば、治療的に、予防的に）ために有用である。例えば、本明細書で提供されるＲＳＶウィルス抗原および免疫原を含むタンパク質は、ＶＥＤおよび／または抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）の媒介なしに、ＲＳＶ感染症を治療する。加えて、本明細書で提供されるＲＳＶウィルス抗原および免疫原を含むタンパク質は、容易に製造され、例えば、高温、極端なｐＨ、ならびに高いおよび低いオスモル濃度などの高いストレス条件下で安定性を示す。従って、本明細書で提供されるタンパク質および免疫原性組成物は、ＲＳＶワクチン開発を妨げてきた製造、安定性、安全性、および有効性の問題を回避し、これらを満足させる。

いくつかの態様では、本明細書で提供されるＲＳＶウィルス抗原および免疫原は、ＲＳＶ糖タンパク質（Ｆ）を含み、本明細書では、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはペプチドとも呼ばれる。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、宿主細胞中への膜およびウィルス侵入を媒介するホモ三量体Ｉ型膜貫通タンパク質である。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、Ｆ０プロタンパク前駆体として合成され、フューリンにより２つの部位で切断後に、ジスルフィド結合Ｆ１およびＦ２成熟型に変換される。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、ＲＳＶＡとＢ株の間で高度に保存されている。パリビズマブなどの中和抗体は、Ｆの抗原部位を標的にし、ＲＳＶ感染症により引き起こされる呼吸器疾患に対して保護を提供する。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含むタンパク質、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、免疫応答、例えば、ＲＳＶＦペプチドタンパク質に対する免疫応答を生成できる。いくつかの実施形態では、免疫応答は、対象、例えば、患者中のＲＳＶの複製を阻害または低減する。いくつかの実施形態では、免疫応答は、ポリクローナルおよび／またはモノクローナル抗体などの１種または複数の中和抗体の産生を含む。いくつかの実施形態では、中和抗体は、対象、例えば、患者におけるＲＳＶの複製を阻害または低減する。いくつかの実施形態では、対象への、タンパク質の、例えば、免疫原性組成物としての投与は、ＲＳＶへの事前暴露に起因する対象における抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）をもたらさない。いくつかの態様では、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原を含むタンパク質、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、ワクチンとして使用される。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、タンパク質またはペプチドに結合され、融合タンパク質または組換えポリペプチドを形成する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原が結合されるタンパク質またはペプチドは、例えば、共有結合または非共有結合で、融合タンパク質または組換えポリペプチドのタンパク質またはペプチドなどのタンパク質またはペプチドと結合できる。従って、場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原が結合されるタンパク質またはペプチドは、多量体化ドメインである。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、コラーゲンのプロペプチドに、例えば、コラーゲンのプロペプチドのＣ末端で結合され、融合ペプチドまたは組換えポリペプチドを形成する。従って、いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるタンパク質は、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原、例えば、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに結合したＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープを含む組換えポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、コラーゲンのプロペプチドは、α１コラーゲンのヒトＣ－プロペプチドから誘導され、自己三量体化できる。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドの、コラーゲンのプロペプチドへの、例えば、コラーゲンのプロペプチドのＣ末端での結合は、タンパク質の免疫応答を生成する能力を支援する。例えば、組換えタンパク質の生成は、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドの三次および四次構造を保存し得、これは、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドの天然の立体構造の安定性に、さらには、免疫応答を誘発できるタンパク質、例えば、中和抗体の表面上の抗原部位の利用能にとって重要であり得る。さらに、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドの、自己三量体化できるタンパク質またはペプチドへの結合は、組換えタンパク質の凝集を可能にし、従って、ウィルスエンベロープ上のＲＳＶＦタンパク質ペプチドの天然のホモ三量体構造を模倣する。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドのコラーゲンのＣ末端プロペプチドへの結合は、自己三量体化組換えポリペプチドを生ずる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるタンパク質は、複数の自己三量体化ＲＳＶＦタンパク質ペプチドおよびコラーゲン組換えポリペプチドのプロペプチドを含み、任意選択で、複数の組換えタンパク質は構造、例えば、ロゼットを形成する（例えば、図２Ｂを参照）。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質の三量体の性質は、タンパク質の安定性に役立つ。いくつかの実施形態では、マクロ構造、例えば、複数の自己三量体化組換えタンパク質のロゼットは、タンパク質の安定性に役立つ。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質の三量体の性質および複数の自己三量体化組換えタンパク質のマクロ構造、例えば、ロゼットは、タンパク質の安定性に役立つ。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質の三量体の性質は、タンパク質の免疫応答を生成する能力を支援する。いくつかの実施形態では、マクロ構造、例えば、複数の自己三量体化組換えタンパク質のロゼットは、タンパク質の免疫応答を生成する能力を支援する。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質の三量体の性質および複数の自己三量体化組換えタンパク質のマクロ構造は、タンパク質の免疫応答を生成する能力を支援する。

また、本明細書で提供されるのは、本明細書で提供されるタンパク質を含む免疫原性組成物、本明細書で提供されるタンパク質の製造方法、本明細書で提供されるタンパク質および組成物で対象を治療する方法、ならびにキットである。

本出願で言及される、特許文献、科学論文およびデータベースを含む全ての出版物は、あたかも、それぞれ個別の出版物が個別に参照により組み込まれる場合と同程度に、本出願において、その全体が参照により組み込まれる。本明細書で記載される定義が、参照により本明細書に組み込まれる、特許、出願、出願公開および他の刊行物で記載の定義に反する、あるいは矛盾する場合には、本明細書で記載される定義が参照により組み込まれる定義より優先する。

本明細書で使用されるセクション見出しは、単に構成上の目的のためであり、記載主題を限定するものと解釈されるべきではない。

Ｉ．ウィルス抗原および免疫原
呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）は、乳幼児および幼児における急性下気道感染、および高齢者の主要な疾病負荷の最もよくある原因である。ＲＳＶウィルスは、半世紀前に特性が明らかにされたという事実にもかかわらず、現在、ＲＳＶのためのワクチンが存在せず、また、開発は、１９６０年代に、ホルマリン不活化ＲＳＶの子供への投与でのワクチンを介した疾患増強により阻まれてきた。抗原生産、純度、安定性、およびＲＳＶワクチン候補の効力の課題もまた、開発に対する障害となってきた。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるタンパク質は、ＲＳＶウィルス抗原および／または免疫原を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶウィルス抗原および／または免疫原は、細胞媒介応答および／または体液性応答を促進または刺激できる。いくつかの実施形態では、応答、例えば、細胞媒介または体液性応答は、抗体、例えば、中和抗体の産生を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原および／または免疫原に対する中和抗体（ＮＡｂ）は、罹患しやすい細胞の感染を遮断することにより、ＲＳＶ曝露に対する獲得免疫防御を提供する。いくつかの実施形態では、いくつかのウィルスに対するワクチンの効力は、ＮＡｂを誘発するそれらの能力に帰される、および／またはそれらの能力と相関する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、本明細書で開示のＲＳＶＦタンパク質ペプチドである。

ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）のエンベロープ糖タンパク質である。ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、単一前駆体ポリペプチド（Ｆ０と呼ばれる）として翻訳される。ＲＳＶＦタンパク質は、細胞中へのウィルスの侵入および細胞間の融合を媒介し、中和抗体の標的であり、ＲＳＶＡとＢ株の間で高度に保存されている。Ｆ０は、Ａｒｇ１０９およびＡｒｇ１３６で細胞フューリンにより３つのフラグメントに切断され得、Ｎ末端で１８アミノ酸融合ドメインを有するより長いＦ１ポリペプチドに２つのジスルフィドによりＮ末端で共有結合されたより短いＦ２ポリペプチド、およびＣ末端近くの疎水性膜貫通領域；介在する２７アミノ酸フラグメントが放出される。中和モノクローナル抗体パリビズマブおよびモタビズマブは、ＲＳＶＦ抗原部位ＩＩ（Ａｓｎ２５８～Ｖａｌ２７８）に結合し、高リスクおよび正期産児における下気道および上気道ＲＳＶ疾患の両方に対し保護することを示した。これらの中和抗体に結合するＲＳＶＦエピトープポリペプチドの構造は、直鎖ペプチドよりも大きく、パリビズマブは、ナノモルの親和性で、およびモタビズマブはピコモルの親和性でＲＳＶＦに結合する。モデル化は、パリビズマブおよびモタビズマブの完全な結合には、１個または２個のＲＳＶＦプロトマーからのアミノ酸をそれぞれ必要とすることを予測する。従って、ＲＳＶＦ三次および四次構造の保存は、この重要な中和領域の天然の立体構造を保存するために、ＲＳＶＦワクチン開発において重要であり得る。

いくつかの実施形態では、Ｆ０前駆体ポリペプチドは、配列番号３１で示されるように、５７４アミノ酸長さである。

いくつかの実施形態では、Ｆ０前駆体ポリペプチドは、配列番号３２で示されるように、５７４アミノ酸長さである。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基１０２にプロリンまたはアラニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０２に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基２１８にグルタミン酸またはアラニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基２１８に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基３７９にバリンまたはイソロイシンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基３７９に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基４４７にバリンまたはメチオニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基４４７に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基１０２のプロリンまたはアラニン、残基２１８のグルタミン酸またはアラニン、残基３７９のバリンまたはイソロイシン、および残基４４７のバリンまたはメチオニンのいずれか１個または複数に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０２、２１８、３７９、および４４７のいずれか１個に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２のその他の残基のいずれか１個または複数に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０６、１０７、１０８、および／または１０９に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基１０８および／または１０９にグルタミンまたはアスパラギンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基１０８および１０９にグルタミンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、残基１０８および１０９にアスパラギンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、および／または１３６に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、および／または１３６に、および／またはその近傍に、グリシン、アルギニン、グルタミンまたはアスパラギンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、および／または１３６に、グルタミンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３３、１３５、および１３６に、グルタミンを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０９、１３６、１６１、および／または２１５に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０９、１３６、１６１、および／または２１５のいずれか１個または複数に、アラニンまたはプロリンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０９に、アラニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３６に、アラニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０９および１３６に、アラニンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１６１に、プロリンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基２１５に、プロリンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１６１および２１５に、プロリンを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１０９および１３６にアラニンを、残基１６１および２１５にプロリンを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３１～１５４のいずれか１個または複数に、および／またはその近傍に、置換、欠失、および／または挿入を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３１～１５４の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８個またはそれを超える欠失を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３７～１５４のいずれか１個または複数の欠失を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３７～１４６のいずれか１個または複数の欠失を含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、配列番号３１または３２の残基１３３、１３５、および１３６にグルタミンを、および残基１３７～１４６に１個の欠失を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、シグナルペプチドＭＥＬＬＩＬＫＡＮＡＩＴＴＩＬＴＡＶＴＦＣＦＡＳＧ（配列番号３３）であるＦ０前駆体のアミノ酸１～２５を含む。いくつかの実施形態では、前駆体ポリペプチドＦ０は、前駆体三量体を形成する。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、１種または複数の細胞プロテアーゼにより、例えば保存されたフューリンコンセンサス切断部位で、タンパク分解的に切断されて、Ｐｅｐ２７ポリペプチド（ｐ２７とも呼ばれる）、Ｆ１ポリペプチドおよびＦ２ポリペプチドを産生する。いくつかの実施形態では、Ｐｅｐ２７ポリペプチド（例えば、Ｆ０前駆体のアミノ酸１１０～１３６）は、切除され、いくつかの態様では、成熟ＲＳＶＦ三量体の一部を形成しない。いくつかの実施形態では、Ｆ２ポリペプチド（あるいは、これは、本明細書において、「Ｆ２」または「Ｆ２サブユニットペプチド」とも呼ばれ得る）は、Ｆ０前駆体のアミノ酸残基２６～１０９を含む。いくつかの実施形態では、Ｆ１ポリペプチド（あるいは、これは、本明細書において、「Ｆ１」または「Ｆ１サブユニットペプチド」とも呼ばれ得る）は、Ｆ０前駆体のアミノ酸残基１３７～５７４を含み、細胞外領域（例えば、残基１３７～５２４）、膜貫通ドメイン（例えば、残基５２５～５５０）、および細胞質ドメイン（例えば、残基５５１～５７４）を含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、ジスルフィド結合で連結されて、ＲＳＶＦ「プロトマー」と呼ばれるヘテロダイマーを形成するＦ１およびＦ２ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、ＲＳＶＦ三量体（従って、これは３個のプロトマーのホモ三量体である）を形成する３個のプロトマーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、成熟ＲＳＶＦ三量体である。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、膜結合型である。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、膜結合型ではない。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは可溶性であり、膜貫通および細胞質領域またはそのフラグメントを欠く。例えば、可溶型への変換は、ＲＳＶＦタンパク質をアミノ酸５１３（アミノ酸５１４以降を取り除くことにより）、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、または５２４で切断することにより達成できる。天然では、成熟ＲＳＶＦ三量体は、ウィルスと細胞膜の融合を媒介する。成熟ＲＳＶＦ三量体の融合前立体構造（これは、本明細書では、「プレＦ」または融合前と呼ばれ得る）は、極めて不安定（準安定性）である。しかし、ＲＳＶウィルスが細胞膜と結合すると、ＲＳＶＦタンパク質三量体は、一連の立体構造変化および極めて安定な融合後（「ポストＦ」）立体構造への遷移を起こす。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、シグナルペプチド（ＳＰ）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸１～２２）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、７アミノ酸繰り返しＣ（ＨＲＣ）（例えば、Ｆ２で、これは、配列番号３１または３２のアミノ酸２３～１０９であり得る）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、フューリン切断部位（ＦＣＳ）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸１０９／１１０間の連結部の）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、２７マーフラグメント（ｐｅｐ２７）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸１１０～１３６）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、推定融合ペプチド（ＦＰ）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸１３７～１５５）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、７アミノ酸繰り返しＡ（ＨＲＡ）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸１５６～２１４）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、ドメインＩおよびＩＩ（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸２１５～４７６）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、７アミノ酸繰り返しＢ（ＨＲＢ）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸４７７～５２４）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、膜貫通（ＴＭ）（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸５２５～５５０）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列、および／または細胞質（ＣＰ）ドメイン（例えば、配列番号３１または３２のアミノ酸５５１～５７４）またはそのフラグメントおよび／または変異体配列を、任意の好適な組み合わせで含む。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、サブタイプＡのＲＳＶのＲＳＶＦタンパク質ペプチドである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、サブタイプＡ２のＲＳＶのＲＳＶＦタンパク質ペプチドである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、サブタイプＢのＲＳＶのＲＳＶＦタンパク質ペプチドである。場合によっては、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、ＲＳＶサブタイプ全体にわたり保存されている。

場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドのフラグメントである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドのエピトープである。いくつかの実施形態では、エピトープは、線形エピトープである。いくつかの実施形態では、エピトープは、立体構造エピトープである。いくつかの実施形態では、エピトープは、中和エピトープ部位、例えば、部位Ｉ、ＩＩ、またはＩＶである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントの全ての中和エピトープは、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原として存在する。

場合によっては、例えば、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原がＲＳＶＦタンパク質ペプチドのフラグメントである場合、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドの単一のサブユニットのみが存在する。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆ１サブユニットペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｆ１サブユニットペプチドは、野生型Ｆタンパク質のアミノ酸配列１３７～５７４であるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆ２サブユニットペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、シグナルペプチド、７アミノ酸繰り返しＣ（ＨＲＣ）ペプチド、ｐｅｐ２７ペプチド、融合ペプチド（ＦＰ）、７アミノ酸繰り返しＡ（ＨＲＡ）ペプチド、ドメインＩペプチド、ドメインＩＩペプチド、または７アミノ酸繰り返しＢ（ＨＲＢ）ペプチド、またはこれらの任意の組み合わせを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、シグナルペプチドを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、ｐｅｐ２７ペプチドを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、融合ペプチド（ＦＰ）（融合体ドメイン（ＦＤ）としても知られる）を含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、シグナルペプチド、ｐｅｐ２７ペプチド、および融合ペプチド（ＦＰ）を含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットおよびＦ２サブユニットを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆタンパク質のｐｅｐ２７ペプチドを欠き、Ｆ１サブユニットおよびＦ２サブユニットを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットペプチド、Ｆ２サブユニットペプチド、およびｐｅｐ２７ペプチドを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットペプチド、Ｆ２サブユニットペプチド、ｐｅｐ２７ペプチド、およびＦＰを含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。

いくつかの実施形態では、例えば、ウィルス抗原または免疫原が、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドのＦ１サブユニットペプチドおよびＦ２サブユニットペプチドの両方を含む場合、Ｆ１およびＦ２サブユニットは結合される。いくつかの実施形態では、Ｆ１およびＦ２サブユニットは、ジスルフィド結合により連結される。いくつかの実施形態では、Ｆ１およびＦ２サブユニットは、人為的に導入されたリンカーにより連結される。いくつかの実施形態では、Ｆ１およびＦ２サブユニットは、ｐｅｐ２７ペプチドを介して連結される。例えば、いくつかの実施形態では、ＮからＣ末端への配向は、Ｆ２－ｐｅｐ２７－Ｆ１であるか、またはこれを含む。いくつかの実施形態では、ＮからＣ末端への配向は、Ｆ２－ｐｅｐ２７－ＦＰ－Ｆ１（Ｆ２－ｐｅｐ２７－ＦＤ－Ｆ１）であるか、またはこれを含む。いくつかの実施形態では、ＦＰは、Ｆ１サブユニットペプチドの構造的特徴と見なされる。

場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、膜貫通（ＴＭ）ドメインペプチドを含まないＲＳＶＦタンパク質ペプチドである。場合によっては、ＲＳＶＦタンパク質は、細胞質（ＣＰ）ドメインペプチドを含まない。場合によっては、ＲＳＶＦタンパク質は、ＴＭドメインペプチドまたはＣＰドメインペプチドを含まない。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、プロテアーゼ切断部位を含むＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、プロテアーゼフューリンによる切断に特異的である。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、プロテアーゼトリプシンによる切断に特異的である。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、プロテアーゼ第Ｘａ因子による切断に特異的である。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、プロテアーゼカテプシンＬによる切断に特異的である。

場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、プロテアーゼ切断部位を含まないＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、プロテアーゼフューリンによる切断に特異的であるプロテアーゼ切断部位を含まないＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、プロテアーゼトリプシンによる切断に特異的であるプロテアーゼ切断部位を含まないＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、プロテアーゼ第Ｘａ因子による切断に特異的であるプロテアーゼ切断部位を含まないＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。場合によっては、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、プロテアーゼカテプシンＬによる切断に特異的であるプロテアーゼ切断部位を含まないＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、可溶性であるＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、可溶性ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、ＴＭドメインペプチドおよびＣＰドメインペプチドを欠く。いくつかの実施形態では、可溶性ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、脂質二重層、例えば、膜またはウィルスエンベロープに結合しない。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、コドン最適化された核酸配列から産生される。いくつかの実施形態では、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、コドン最適化されていない核酸配列から産生される。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、当該技術分野において既知の任意のＦタンパク質配列、例えば、米国特許第１０，０１７，５４３号で開示のものを含み得る。この特許は、本出願において、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、配列番号３１または３２のアミノ酸配列１～５２０を有するＲＳＶＦタンパク質ペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、配列番号３１または３２のアミノ酸配列２６～５２０を有するＲＳＶＦタンパク質ペプチドであるか、またはそれを含む。

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｆ２の配列、ｐｅｐ２７の配列、およびＦ１の配列であるか、またはそれらを含む（例えば、Ｆ２－ｐｅｐ２７－Ｆ１）。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、融合ペプチド曝露を含み、融合後立体構造を有する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、フューリン切断部位変異を含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、フューリン部位Ｉ変異（例えば、Ｒ１０９Ａ）および／またはフューリン部位ＩＩ変異（例えば、Ｒ１３６Ａ）を含み、これらの例のいくつかでは、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、融合後立体構造を有し、一方、他の例では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、融合前立体構造を有する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、フューリン部位Ｉ変異およびフューリン部位ＩＩ変異（例えば、Ｒ１０９Ａ／Ｒ１３６Ａ）を含み、これらの例のいくつかでは、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、融合ペプチド曝露を欠く完全長Ｆ０を含み、融合前立体構造を有する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、長いヘリックスの形成を防止し、および／またはα４－α５ヒンジループを安定化する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、融合前立体構造を保存する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、発現を改善する１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、位置１６１、１８２および２１５の置換（例えば、プロリンによる置換）は、より高い発現レベルをもたらし、Ｅ１６１ＰおよびＳ２１５Ｐはまた、タンパク質の安定性を高める。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｅ１６１Ｐおよび／またはＳ２１５Ｐを含み、融合前立体構造を有する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐおよび／またはＳ２１５Ｐを含み、融合前立体構造を有する。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号１７で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１７の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号１８で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１８の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号１９で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１９の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２０で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２０の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２１で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２１の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２２で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２２の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２３で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２３の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２４で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２４の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２５で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２５の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２６で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２６の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２７で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２７の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２８で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２８の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号２９で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２９の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３０で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３０の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３１で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３１の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３２で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３２の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３３で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３３の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３４で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３４の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３５で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３５の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３６で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３６の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３７で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３７の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３８で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３８の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号３９で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３９の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４０で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４０の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４１で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４１の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４２で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４２の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４３で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４３の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４４で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４４の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４５で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４５の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４６で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４６の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、配列番号４７で示される配列を含む。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４７の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書において、ウィルス抗原または免疫原は、ＲＳＶ糖タンパク質（Ｇ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶ小分子疎水性タンパク質（ＳＨ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶ融合タンパク質（Ｆ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶマトリックスタンパク質（Ｍ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶ核タンパク質（Ｎ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶリンタンパク質（Ｐ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶ「巨大」タンパク質（Ｌ）またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；Ｍ２－１タンパク質またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶＭ２－２タンパク質またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；ＲＳＶＮＳ－１タンパク質またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；またはＲＳＶＮｓ－２タンパク質またはそのフラグメント、バリアント、もしくは変異体；またはこれらの任意の組み合わせを含み得る。

いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、コドン最適化された核酸配列から産生される。いくつかの実施形態では、ウィルス抗原または免疫原は、コドン最適化されていない核酸配列から産生される。

いくつかの実施形態では、本明細書で示すように、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、前記ウィルス抗原または免疫原を含む組換えポリペプチドまたは融合ペプチドを含むことができる。用語のウィルス抗原または免疫原は、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含むタンパク質を意味するように使用され得る。特定の事例では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、本明細書で提供されるＲＳＶタンパク質ペプチドである。

ＩＩ．組換えペプチドおよびタンパク質
本明細書で提供されるＲＳＶウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチド（セクションＩ参照）は、他のタンパク質またはペプチドと組み合わせて、例えば、結合されて、融合ペプチドを含む、組換えポリペプチドを形成できると考えられる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される個別の組換えポリペプチド（例えば、単量体）は、結合して、組換えポリペプチドの多量体、例えば、三量体を形成する。いくつかの実施形態では、個別の組換えポリペプチド単量体の結合は、共有結合相互作用を介して起こる。いくつかの実施形態では、個別の組換えポリペプチド単量体の結合は、非共有結合相互作用を介して起こる。いくつかの実施形態では、例えば、共有結合または非共有結合相互作用は、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチド、が結合されるタンパク質またはペプチドにより行われる。いくつかの実施形態では、例えば、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原が本明細書で開示のＲＳＶＦタンパク質ペプチドである場合、それが結合されるタンパク質またはペプチドは、糖タンパク質の天然のホモ三量体構造が保存されるように、選択できる。これは、強力で効果的なＲＳＶＦタンパク質ペプチドに対する免疫原性応答を誘起するために好都合であり得る。例えば、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原（例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチド）の天然の立体構造の保存および／または維持は、免疫応答を生成できる抗原部位へのアクセスを改善またはそれを可能にし得る。場合によっては、本明細書で記載のＲＳＶＦタンパク質ペプチド（例えば、セクションＩを参照）を含む組換えポリペプチドは、本明細書では、代わりに、組換えＲＳＶＦ抗原、組換えＲＳＶＦ免疫原、または組換えＲＳＶＦタンパク質と呼ばれる。

場合によっては、組換えポリペプチドまたはその多量体化組換えポリペプチドは、凝集するか、または凝集して複数のＲＳＶウィルス抗原および／または免疫原組換えポリペプチドを含むタンパク質を形成できることがさらに考えられる。このようなタンパク質の形成は、ＲＳＶウィルス抗原および／または免疫原に対する強力で効果的な免疫原性応答を生成するために好都合であり得る。例えば、複数の組換えポリペプチド、および、従って、複数のＲＳＶウィルス抗原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含むタンパク質の形成は、ウィルス抗原の三次および／または四次構造を保存し、天然の構造に対して免疫応答を開始させることを可能にする。場合によっては、凝集は、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原の構造的安定性を付与し得、これは、次に、免疫応答を促進できる潜在的抗原部位へのアクセスを提供する。

１．融合ペプチドおよび組換えポリペプチド
いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、それらのＣ末端で（Ｃ末端結合）三量体化ドメインに結合し、単量体の三量体化を促進できる。いくつかの実施形態では、三量体化は、三量体配置において、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドの、膜近位側を安定化する。

可溶性組換えタンパク質の安定な三量体を促進する外来性多量体化ドメインの非限定的例としては、ＧＣＮ４ロイシンジッパー（Ｈａｒｂｕｒｙｅｔａｌ．１９９３Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１４０１－１４０７）、肺サーファクタントタンパク質由来の三量体化モチーフ（Ｈｏｐｐｅｅｔａｌ．１９９４ＦＥＢＳＬｅｔｔ３４４：１９１－１９５）、コラーゲン（ＭｃＡｌｉｎｄｅｎｅｔａｌ．２００３ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７８：４２２００－４２２０７）、およびファージＴ４フィブリチンフォルドン（Ｍｉｒｏｓｈｎｉｋｏｖｅｔａｌ．１９９８ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ１１：３２９－４１４）が挙げられ、これらのいずれかは、本明細書で記載のＲＳＶウィルス抗原または免疫原に結合し（例えば、ＲＳＶＦペプチドのＣ末端への結合により）、組換えウィルス抗原または免疫原の三量体化を促進できる。また、米国特許第７，２６８，１１６号；同７，６６６，８３７号、同７，６９１，８１５号、同１０，６１８，９４９号、同１０，９０６，９４４号、および同１０，９６０，０７０号、ならびに米国特許出願公開第２０２０／０００９２４４号も参照されたい。これらの特許は、本出願において、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、１種または複数のペプチドリンカー（ｇｌｙ－ｓｅｒリンカー、例えば、１０アミノ酸グリシン－セリンペプチドリンカーなど）を用いて、組換えウィルス抗原または免疫原を多量体化ドメインに結合できる。組換えウィルス抗原または免疫原三量体が望ましい特性（例えば、融合前立体構造）を保持する限り、三量体は、本明細書で提供されるいずれかの安定化変異（またはこれらの組み合わせ）を含み得る。

治療的に実施可能であるためには、生物学的薬物デザインのための所望の三量体化タンパク質部分は、以下の基準を満たす必要がある。理想的には、それは、循環中にも豊富に存在する（非毒性）ヒト起源（免疫原性を欠く）の、比較的安定で（長半減期）、効率的自己三量体化（これは、鎖間ジスルフィド共有結合により強化され、それにより、三量体化ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は構造的に安定である）ができる、免疫グロブリンＦｃのような、天然で分泌されるタンパク質の一部でなければならない。

コラーゲンは細胞外マトリクスの主要成分である繊維状タンパク質のファミリーである。それは、哺乳動物中で最も豊富なタンパク質であり、身体中の総タンパク質のほぼ２５％を構成する。コラーゲンは、骨、腱、皮膚、角膜、軟骨、血管、および歯の形成で主要な構造的役割を果たす。原線維タイプのコラーゲンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、およびＸＩは全て、プロコラーゲンと呼ばれる、より大きな三量体前駆体として合成され、その内部では、数百個の「Ｇ－Ｘ－Ｙ」リピート（またはグリシンリピート）からなる中央部の中断されていない三重ヘリカルドメインが、非コラーゲンドメイン（ＮＣ）、Ｎ－プロペプチドおよびＣ－プロペプチドにより隣接される。ＣおよびＮ末端の両方の延長部は、プロコラーゲンの分泌（不溶性の細胞マトリックスを形成するコラーゲン線維中への成熟タンパク質のアセンブリを始動するイベント）時にタンパク分解的にプロセッシングされる。ＢＭＰ－１は、コラーゲンのグリシンリピートとＣ－プロドメイン間の結合部近傍でプロコラーゲンの特異的ペプチド配列を認識し、プロペプチドの除去に関与するプロテアーゼである。脱落したＩ型コラーゲンの三量体Ｃ－プロペプチドは、通常の成人のヒト血清中、５０～３００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で検出され、子供は、遙かに高レベルを有し、これは活性骨形成を示す。高い血清濃度のＩ型コラーゲンのＣ－プロペプチドの家族性を有する人では、明らかな異常なしに、レベルが１～６μｇ／ｍＬもの高さになり得、Ｃ－プロペプチドは非毒性であることを示唆する。コラーゲンの三量体Ｃ－プロペプチドの構造的調査は、それは、３個全てのサブユニットがそれらのＮ末端近傍の結合領域で合流し、プロコラーゲン分子の残りに連結する三葉状構造であることを示唆した。一方向で融合されるべき突き出たタンパク質でのこのような形状は、Ｆｃ二量体のものと類似である。

Ｉ、ＩＶ、ＶおよびＸＩ型コラーゲンは、２本のα－１鎖と１本のα－２鎖（Ｉ、ＩＶ、Ｖ型の場合）、または３本の異なるａ鎖（ＸＩ型の場合）からなる、主にヘテロ三量体形状にアセンブリされ、これらは、配列が高度に相同である。ＩＩおよびＩＩＩ型コラーゲンは両方ともα－１鎖のホモ三量体である。最も豊富なコラーゲンの形態であるＩ型コラーゲンの場合、安定なα（Ｉ）ホモ三量体も形成され、異なる組織中に種々のレベルで存在する。ほとんどのこれらのコラーゲンＣ－プロペプチド鎖は、細胞中で単独で過剰発現される場合、ホモ三量体に自己集合できる。Ｎ－プロペプチドドメインは、最初に合成されるが、三量体コラーゲンへの分子アセンブリは、Ｃ－プロペプチドのｉｎ－ｒｅｇｉｓｔｅｒ（高い高次構造をとった）結合で始まる。Ｃ－プロペプチド複合体は鎖間ジスルフィド結合の形成により安定化されるが、適切な鎖登録のためのジスルフィド結合の必要性は明確ではないと考えられている。グリシンリピートの三重鎖ヘリックスは反復し、そのため、ジッパー様方式で結合Ｃ末端からＮ末端へ伝播する。この知識は、組換えＤＮＡ技術を用いた異なるコラーゲン鎖のＣ－プロペプチドの交換による非天然型のコラーゲンマトリックスの生成にがった。サイトカインおよび成長因子などの非コラーゲン性タンパク質は同様に、プロコラーゲンまたは成熟コラーゲンのＮ末端に融合され、新規コラーゲンマトリックス形成を可能とし、これは、細胞マトリックスからの非コラーゲン性タンパク質の徐放を可能にするのが目的である。しかし、両方の環境下で、Ｃ－プロペプチドは、不溶性の細胞マトリックスへの組換えコラーゲン線維アセンブリの前に、切断することが必要である。

大腸菌の細菌ファージＴ４およびアスパラギン酸トランスカルバモイラーゼ由来の酵母フィブリチン由来のＧＣＮ４からのものなどの他のタンパク質三量体化ドメインは、以前に、異種のタンパク質の三量体化を可能とすることが記載されたが、これらの三量体化タンパク質のいずれも、本来ヒトではなく、それらは天然に分泌されるタンパク質でもない。従って、いずれの三量体融合タンパク質も、細胞内で作製される必要があり、これは、可溶性受容体などの天然で分泌されるタンパク質の場合、誤って折り畳まれる可能性があるのみでなく、数千種の他の細胞内タンパク質からこのような融合タンパク質の精製を難しくもする。さらに、このような（例えば、酵母、細菌ファージおよび細菌由来の）非ヒトタンパク質三量体化ドメインの三量体生物学的薬物のための使用の致命的な欠点は、人体におけるそれらの推定される免疫原性であり、このような融合タンパク質を人体への注入直後に無効力にする。

本明細書で記載される組換えポリペプチド中のコラーゲンの使用は、従って、次記を含む、多くの利点を有する：（１）コラーゲンは、哺乳動物の身体中で分泌される最も豊富なタンパク質であり、身体中の総タンパク質のほぼ２５％を構成する；（２）コラーゲンの主要な形態は、天然では三量体ヘリックスとして発生し、それらの球状Ｃ－プロペプチドは、三量体化の開始に関与する；（３）成熟コラーゲンからタンパク分解により放出されるコラーゲンの三量体Ｃ－プロペプチドは、天然では、哺乳動物の血液中にサブマイクログラム／ｍＬのレベルで検出され、身体に対し有害であるとは認められていない；（４）コラーゲンの直鎖三重のヘリカル領域は、残基当り２．９Åの予測間隔のリンカーとして含めることができる、または融合タンパク質の一部として除去でき、それにより、三量体化されるタンパク質とコラーゲンのＣ－プロペプチドの間の距離が正確に調節でき、最適生物活性を得ることができる；（５）Ｃ－プロペプチドをプロコラーゲンから切断するＢＭＰ１の認識部位は、変異導入または欠失させて三量体融合タンパク質の破壊を防ぐことができる；（６）Ｃ－プロペプチドドメインは、ジスルフィド結合を介して自己三量体化し、それがユニバーサルアフィニティタグを提供し、これは、生成されたいずれかの分泌融合タンパク質の精製のために使用できる。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原、例えば、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドが結合するコラーゲンのＣ－プロペプチドは、可溶性の共有結合ホモ三量体融合タンパク質の組換え産生を可能とする

いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原および免疫原は、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに結合し、組換えポリペプチドを形成する。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドのＣ末端プロペプチドは、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成する。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質は、三量体を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原は、セクションＩで記載のＲＳＶＦタンパク質ペプチドである。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドはヒトコラーゲンである。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、ｐｒｏα１（Ｉ）、ｐｒｏα１（ＩＩ）、ｐｒｏα１（ＩＩＩ）、ｐｒｏα１（Ｖ）、ｐｒｏα１（ＸＩ）、ｐｒｏα２（Ｉ）、ｐｒｏα２（Ｖ）、ｐｒｏα２（ＸＩ）、またはｐｒｏα３（ＸＩ）のＣ末端ポリペプチド、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、ｐｒｏα１（Ｉ）のＣ末端ポリペプチドであるか、またはそれを含む。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号４８により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号４８の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号４９により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号４９の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５０により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５０の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を示す。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５１により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５１の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５２により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５２の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５３により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５３の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５４により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５４の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５５により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５５の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５６により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５６の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５７により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５７の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５８により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５８の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５９により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号５９の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６０により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６０の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６１により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６１の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６２により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６２の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６３により示されるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号６３の配列と少なくともまたは約８５％、９０％、９２％、９５％、または９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、ＢＭＰ－１部位でアスパラギン酸（Ｄ）のアスパラギン（Ｎ）への置換（例えば、ＲＡＤはＲＡＮに変異導入される）を有するコラーゲン三量体化ドメイン（例えば、ヒトα１（Ｉ）コラーゲンのＣ－プロペプチド）のアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、ＢＭＰ－１部位でアラニン（Ａ）のアスパラギン（Ｎ）への置換（例えば、ＲＡＤはＲＮＤに変異導入される）を有するコラーゲン三量体化ドメイン（例えば、ヒトα１（Ｉ）コラーゲンのＣ－プロペプチド）のアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、本明細書において、Ｃ末端プロペプチドは、変異ＢＭＰ－１部位、例えば、ＤＤＡＮではなくＲＳＡＮを含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書において、Ｃ末端プロペプチドは、ＢＭＰ－１部位を含み得、例えば、ＲＡＮ（例えば、ＲＡＮＤＡＮ）またはＲＮＤ（例えば、ＲＮＤＤＡＮ）ではなく、ＲＡＤ（例えば、ＲＡＤＤＡＮ）配列を含む配列が本明細書で開示の融合体ポリペプチドに使用され得る。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、配列番号４８～６３のいずれかのフラグメントであるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。

いくつかの実施形態では、Ｃ末端プロペプチドは、グリシン－Ｘ－Ｙリピートを含む配列を含むことができ、式中、ＸおよびＹは、独立に、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成でき、および組換えポリペプチドを三量体化できる、任意のアミノ酸、または少なくともそれと８５％、９０％、９２％、９５％、もしくは９７％同一のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、ＸおよびＹは、独立にプロリンまたはヒドロキシプロリンである。

ＲＳＶＦペプチドタンパク質（例えば、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原、例えば、セクションＩ参照）がＣ末端プロペプチドに結合され、組換えポリペプチドを形成するいくつかの事例では、組換えポリペプチドは、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドのホモ三量体になる三量体を形成する。いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドは、Ｆタンパク質ペプチド三量体を松葉杖形状ロッドとして含む。いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドのＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、融合前立体構造である。いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドのＲＳＶＦタンパク質ペプチドは、融合後立体構造である。いくつかの実施形態では、確認状態は、Ｆタンパク質ペプチド上の異なる抗原部位へのアクセスを可能にする。いくつかの実施形態では、抗原部位は、線形エピトープまたは立体構造エピトープなどのエピトープである。記載のように、三量体化組換えポリペプチドを有する利点は、種々の潜在的および多様な抗原部位に対して免疫応答を開始できることである。

いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドは、同じウィルス抗原または免疫原を含む個別の組換えポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドは、それぞれ、他の組換えポリペプチド由来の異なるウィルス抗原または免疫原を含む個別の組換えポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドは、個別の組換えポリペプチドを含み、個別の組換えポリペプチドの１個は、他の組換えポリペプチドとは異なるウィルス抗原または免疫原を含む。いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドは、個別の組換えポリペプチドを含み、個別の組換えポリペプチドの２個は、同じウィルス抗原または免疫原を含み、ウィルス抗原または免疫原は、残りの組換えポリペプチド中に含まれるウィルス抗原または免疫原とは異なる。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、セクションＩで記載のいずれかのＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、本明細書に記載のコラーゲンのＣ末端プロペプチドに、本明細書で記載のように、連結されるセクションＩで記載のいずれかのＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドまたは融合タンパク質は、配列番号４８～６３のいずれかで示される第２の配列に結合された配列番号１７～４７のいずれかで示される第１の配列を含み、第１の配列のＣ末端は、第２の配列のＮ末端に直接結合される。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドまたは融合タンパク質は、配列番号４８～６３のいずれかで示される第２の配列に結合された配列番号１７～４７のいずれかで示される第１の配列を含み、第１の配列のＣ末端は、第２の配列のＮ末端に間接的に、例えば、リンカーを介して、結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン－Ｘ－Ｙリピートを含む配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号２で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号２の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号２のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号３で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号３の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号３のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号４で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号４の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号４のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号５で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号５の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号５のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号６で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号６の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号６のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号７で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号７の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号７のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号８で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号８の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号８のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号９で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号９の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号９のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１０で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１０の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１０のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１１で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１１の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１１のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１２で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１２の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１２のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１３で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１３の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１３のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１４で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１４の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１４のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１５で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１５の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１５のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１６で示される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、１０２、１０６、１０７、１０８、１０９、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１６１、２１５、２１８、３７９、または４４７（配列番号３１または３２に対するアミノ酸位置）またはこれらの任意の組み合わせなどの１個または複数のアミノ酸位置に置換、欠失、および／または挿入を含む配列を含む、配列番号１６の配列と少なくともまたは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号１６のバリアントであるか、またはそれを含み、バリアントは、Ｐ１０２Ａ、Ｒ１０９Ａ、Ｒ１３６Ａ、Ｅ１６１Ｐ、Ｅ２１８Ａ、Ｓ２１５Ｐ、Ｉ３７９Ａ、およびＭ４４７Ｖ、またはこれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるいずれか１、２、３、４、５個またはそれを超える変異を含む。

上記で示したように、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組換えポリペプチドは、三量体を形成するのみのために結合するのではなく、複数の組換えポリペプチドを含むタンパク質を生成するためにも凝集する、または凝集させられ得る。いくつかの実施形態では、形成されたタンパク質は、マクロ構造を有する。場合によっては、マクロ構造は、ＲＳＶウィルス抗原または免疫原組換えポリペプチドの構造的安定性を付与し得、これは、次に、免疫応答を促進できる潜在的抗原部位へのアクセスを提供する。

いくつかの実施形態では、三量体化組換えポリペプチドは、凝集して、複数の三量体化組換えポリペプチドを含むタンパク質を形成する。いくつかの実施形態では、複数の三量体化組換えポリペプチドは、マクロ構造を有するタンパク質を形成する。いくつかの実施形態では、タンパク質は、松葉杖形状ロッドとしてＦタンパク質ペプチド三量体を含むロゼット様オリゴマーを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、配列番号１～１６からなる群より選択される組換えポリペプチドまたはそのフラグメント、バリアント、または変異体を、任意の好適な組み合わせで含む複合体である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、配列番号１～１６からなる群より選択される組換えポリペプチドの三量体またはそのフラグメント、バリアント、または変異体を含む複合体であり、組換えポリペプチドは、ポリペプチド間ジスルフィド結合を介して三量体化され、三量体を形成する。

いくつかの実施形態では、複数の組換えポリペプチドを含む本明細書で記載のタンパク質は、免疫原である。いくつかの実施形態では、複数の組換えポリペプチドを含む本明細書で記載のタンパク質は、ナノ粒子中に包含される。例えば、いくつかの実施形態では、タンパク質は、ナノ粒子、例えば、タンパク質ナノ粒子に直接結合される。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ナノ粒子に間接的に結合される。いくつかの実施形態では、複数の組換えポリペプチドを含む本明細書で記載のタンパク質は、ウィルス様粒子（ＶＬＰ）中に包含される。

２．ポリヌクレオチドおよびベクター
また、提供されるのは、本明細書で提供されるＲＳＶ抗原または免疫原および組換えポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（核酸分子）ならびに、このようなＲＳＶ抗原または免疫原および組換えポリペプチドを発現するように細胞を遺伝子改変するためのベクターである。

いくつかの実施形態では、提供されるのは、本明細書で提供される組換えポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドをコードする核酸配列などの単一核酸配列を含む。その他の場合、ポリヌクレオチドは、特定のＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む組換えポリペプチドをコードする第１の核酸配列または異なるＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む組換えポリペプチドをコードする第２の核酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドの発現を制御するように動作可能に連結されている少なくとも１個のプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドの発現を制御するように動作可能に連結されている２個、３個またはそれを超えるプロモーターを含む。

いくつかの実施形態では、例えば、ポリヌクレオチドが２個以上の核酸コード配列、例えば、異なるＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む組換えポリペプチドをコードする配列を含む場合、少なくとも１個のプロモーターは、２個以上の核酸配列の発現を制御するために動作可能に連結される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、組換えポリペプチドの発現を制御するように動作可能に連結されている２個、３個またはそれを超えるプロモーターを含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドの発現は、誘導性または条件付きである。従って、いくつかの態様では、組換えポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、条件付きプロモーター、エンハンサー、またはトランス活性化因子を含む。いくつかのこのような態様では、条件付きプロモーター、エンハンサー、もしくはトランス活性化因子は、誘導性プロモーター、エンハンサー、もしくはトランス活性化因子または抑制性プロモーター、エンハンサー、もしくはトランス活性化因子である。例えば、いくつかの実施形態では、誘導性または条件付きプロモーターは、組換えポリペプチドの発現を特異的微小環境に制限するために使用できる。いくつかの実施形態では、誘導性または条件付きプロモーターにより促進される発現は、熱、照射、または薬物などの外来性の作用因への曝露により調節される。

ポリヌクレオチドが、組換えポリペプチドをコードする２個以上の核酸配列を含む場合には、ポリヌクレオチドは、１個または複数の核酸配列の間のペプチドをコードする核酸配列をさらに含み得る。場合によっては、核酸配列間に配置される核酸は、翻訳中またはその後に、核酸配列の翻訳産物を分離するペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ペプチドは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、自己切断ペプチド、またはＴ２Ａペプチドなどのリボソームスキッピングを起こすペプチドを含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、レトロウィルス形質導入、遺伝子導入、または形質転換などにより、培養細胞（例えば、宿主細胞）を含む組成物中に導入される。いくつかの実施形態では、これは、組換えポリペプチドの発現（例えば、産生）を可能にできる。いくつかの実施形態では、発現した組換えポリペプチドが精製される。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチド（核酸分子）は、本明細書で記載のＲＳＶウィルス抗原または免疫原をコードする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチド（核酸分子）は、本明細書で記載のＲＳＶウィルス抗原または免疫原、例えば、ＲＳＶＦペプチドタンパク質を含む組換えポリペプチドをコードする。

また、提供されるのは、本明細書で記載の核酸分子を含むベクターまたは構築物である。いくつかの実施形態では、ベクターまたは構築物は、組換えポリペプチドの発現を推進するように、それをコードする核酸分子に動作可能に連結されている１個または複数のプロモーターを含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、１個または２個以上の核酸分子、例えば、異なるＲＳＶウィルス抗原または免疫原を含む組換えポリペプチドをコードする核酸分子、に動作可能に連結されている。

いくつかの実施形態では、ベクターはウィルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターはレトロウィルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウィルスベクターはレンチウィルスベクターである。いくつかの実施形態では、レトロウィルスベクターはガンマレトロウィルスベクターである。

いくつかの実施形態では、ベクターまたは構築物は、１種または複数のポリヌクレオチドの核酸分子の発現を促進する単一プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、このようなプロモーターは、マルチシストロン性（２シストロン性または３シストロン性、例えば、米国特許第６，０６０，２７３号参照）であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、転写単位は、ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）含有２シストロン性単位として改変でき、これは、単一プロモーターからのメッセージにより遺伝子産物の同時発現（例えば、異なる組換えポリペプチドをコードする）を可能とする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、２シストロン性であり、ベクターが２種の核酸配列を含み、発現することを可能とする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、３シストロン性であり、ベクターが３種の核酸配列を含み、発現することを可能とする。

いくつかの実施形態では、単一プロモーターは、単一オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）中に、自己切断ペプチド（例えば、２Ａ配列）またはプロテアーゼ認識部位（例えば、フューリン）をコードする配列により相互から分離された２個または３個の遺伝子（例えば、キメラシグナル伝達受容体をコードする、および組換え受容体をコードする）を含むＲＮＡの発現を指示する。従って、ＯＲＦは、単一ポリペプチドをコードし、これは、翻訳中（２Ａの場合では）または翻訳後に、個別のタンパク質にプロセッシングされる。場合によっては、Ｔ２Ａなどのペプチドは、リボソームにペプチド結合の合成を２ＡエレメントのＣ末端でスキップさせる（リボソームスキッピング）ことができ、２Ａ配列末端と、次の下流ペプチドとの間で分離される（例えば、ｄｅＦｅｌｉｐｅ．ＧｅｎｅｔｉｃＶａｃｃｉｎｅｓａｎｄＴｈｅｒ．２：１３（２００４）ａｎｄｄｅＦｅｌｉｐｅｅｔａｌ．Ｔｒａｆｆｉｃ５：６１６－６２６（２００４）を参照）。多くの２Ａエレメントが当技術分野において既知である。本明細書で開示の方法および核酸中で使用できる２Ａ配列の例としては、限定されないが、米国特許出願公開第２００７０１１６６９０号に記載の、口蹄疫ウィルス由来の２Ａ配列（Ｆ２Ａ）、馬鼻炎Ａウィルス（Ｅ２Ａ）、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウィルス（Ｔ２Ａ）、およびブタテスコウィルス－１（Ｐ２Ａ）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、ベクターはウィルス中に含まれる。いくつかの実施形態では、ウィルスは、偽ウィルスである。いくつかの実施形態では、ウィルスは、ウィルス様粒子である。いくつかの実施形態では、ベクターは細胞中に含まれる。いくつかの実施形態では、ベクターまたはベクターが含まれる細胞は、組換えゲノムを含む。

ＩＩＩ．免疫原性組成物および製剤
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、配列番号１～１６からなる群より選択される配列を含む組換えポリペプチドの三量体またはいずれか２個以上の三量体の組み合わせを含む免疫原性組成物である。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物の単位用量は、約１０μｇ～約１００μｇのＲＳＶＦ抗原、好ましくは約２５μｇ～約７５μｇのＲＳＶＦ抗原、好ましくは約４０μｇ～約６０μｇのＲＳＶＦ抗原、または約５０μｇのＲＳＶＦ抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、用量は、３μｇのＲＳＶＦ抗原を含む。他の実施形態では、用量は、９μｇのＲＳＶＦ抗原を含む。さらなる実施形態では、用量は、３０μｇのＲＳＶＦ抗原を含む。

いくつかの事例では、開示免疫原を、他の薬剤に対し防御反応を誘導する他の医薬品（例えば、ワクチン）と組み合わせることが望ましい場合がある。例えば、本明細書で記載の組換えＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体またはタンパク質を含む組成物は、予防接種の実施に関する諮問委員会（ＡＣＩＰ；ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｖａｃｃｉｎｅｓ／ａｃｉｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）により対象年齢群（例えば、約１か月～６か月齢の乳幼児）に対して推奨される、インフルエンザワクチンまたは水痘帯状疱疹ワクチンなどの他のワクチンと同時に、または順次投与できる。従って、本明細書で記載の組換えＲＳＶＦ抗原を含む開示免疫原は、例えば、Ｂ型肝炎（ＨｅｐＢ）、ジフテリア、破傷風および百日咳（ＤＴａＰ）、肺炎球菌細菌（ＰＣＶ）、インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）、ポリオ、インフルエンザおよびロタウィルスに対するワクチンと同時にまたは順次に投与し得る。

多価または組み合わせワクチンは、複数の病原体に対する保護を提供する。いくつかの態様では、多価ワクチンは、同じ病原体の複数の株に対して保護できる。いくつかの態様では、破傷風、百日咳、およびジフテリアの株に対して保護する組み合わせワクチンＴｄａｐなどの多価ワクチンは、複数の病原体に対して保護する。多価ワクチンは、複数の病原体または病原性株に対して保護を付与するのに必要な免疫化の回数を最小化し、投与コストを減らし、接種率を高めるために非常に望ましい。これは、例えば、乳幼児または子供にワクチン接種する場合、特に有益である。

いくつかの実施形態では、例えば、本明細書で記載の免疫原性組成物を含むワクチンは、多価ワクチンである。いくつかの実施形態では、本発明の多価ワクチン組成物に組み込むための抗原性物質は、ＲＳＶＡ型またはＢ型、またはこれらの組み合わせ由来である。本発明の多価ワクチン組成物に組み込むための抗原は、１種のＲＳＶの株、またはより広い範囲の保護を提供するために、複数の株、例えば、２～５種の株由来であり得る。一実施形態では、本発明の多価ワクチン組成物に組み込むための抗原は、ＲＳＶウィルスの複数の株由来である。他の有用な抗原には、生、弱毒化および不活化ウィルス、例えば、不活化ポリオウィルス（Ｊｉａｎｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．，（１９８６）１４：１０３－９）、Ａ型肝炎ウィルスの弱毒化株（Ｂｒａｄｌｅｙｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．，（１９８４）１４：３７３－８６）、弱毒化麻疹ウィルス（Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，（１９９５）３３２：１２６２－６）、および百日咳ウィルスのエピトープ（例えば、ＡＣＥＬ－ＩＭＵＮＥｒＭ無細胞ＤＴＰ、Ｗｙｅｔｈ－Ｌｅｄｅｒｌｅワクチンおよび小児科ワクチン）が挙げられる。

いくつかの態様では、本明細書で提供されるワクチンは、ユニバーサルワクチンである。いくつかの実施形態では、ユニバーサルワクチンは、ＲＳＶの複数の株などの同じウィルスの複数の株に対して保護するワクチンである。効果的なユニバーサルＲＳＶワクチンの開発は、例えば、季節性のワクチン製剤を用いてコストおよび労力を低減し、より頑強なパンデミックの準備を可能にするであろう。

いくつかの態様では、ユニバーサルワクチンは、別個のウィルス株由来の複数のエピトープからなるものである。いくつかの態様では、ユニバーサルワクチンは、別個のウィルス株全体にわたり保存されている単一のエピトープからなる。例えば、ユニバーサルワクチンは、ＲＳＶＦタンパク質の比較的保存されたドメインをベースにすることができる。

開示免疫原（例えば、開示組換えＲＳＶＦ抗原または開示組換えＲＳＶＦ抗原のプロトマーをコードする核酸分子）および薬学的に許容可能な担体を含む免疫原性組成物も提供される。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供される三量体化組換えポリペプチド、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供される複数の三量体化組換えポリペプチドを含むタンパク質、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供されるタンパク質ナノ粒子、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供されるＶＬＰ、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供される単離核酸、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供されるベクター、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供されるウィルス、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供される偽ウィルス、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、本明細書で提供される細胞、および任意選択で、薬学的に許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のものなど免疫原性組成物は、ワクチンである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、予防ワクチンである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、治療ワクチンである。いくつかの実施形態では、ワクチンは、予防ワクチンおよび治療ワクチンである。このような医薬組成物は、当業者に既知の種々の投与方法、例えば、筋肉内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、関節内、腹腔内、鼻腔内、舌下、扁桃腺、口咽頭経路、または他の非経口の粘膜経路により対象に投与できる。いくつかの実施形態では、１種または複数の開示免疫原を含む医薬組成物は、免疫原性組成物である。投与可能な組成物を調製する実際の方法は、当業者に既知であるか、または明らかであり、ＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１９ｔｈＥｄ．，ＭａｃｋｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ，１９９５などの刊行物に、より詳細に記載されている。

従って、免疫原、例えば、本明細書で記載の組換えＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体、タンパク質は、薬学的に許容可能な担体と共に処方して、生物活性を保持し、同時に、許容可能な温度範囲内での貯蔵中に安定性を高めることもできる。可能性のある担体としては、限定されないが、生理学的に偏りのない培地、リン酸緩衝生理食塩溶液、水、エマルション（例えば、油／水または水／油エマルション）、様々な種類の湿潤剤、凍結防止添加剤または安定剤、例えば、タンパク質、ペプチドまたは加水分解物（例えば、アルブミン、ゼラチン）、糖類（例えば、スクロース、ラクトース、ソルビトール）、アミノ酸（例えば、グルタミン酸ナトリウム）、または他の保護剤が挙げられる。得られた水性溶液は、そのまま使用するように梱包、または凍結乾燥し得る。凍結乾燥製剤は、単回または複数回投与のために、投与の前に無菌溶液と混合される。

処方組成物、特に液体製剤は、貯蔵中の分解を防止するまたは最小化するために、限定されないが、有効濃度（通常１％ｗ／ｖ）のベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、クロロブタノール、メチルパラベン、および／またはプロピルパラベンを含む静菌薬を含み得る。静菌薬は、一部の患者には禁忌である場合があり、従って、凍結乾燥製剤がこのような成分を含む、または含まない溶液中で再構成され得る。

本開示の免疫原性組成物は、近似的生理的条件に適合するように、ｐＨ調整剤および緩衝剤、浸透圧調節剤、湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウラート、およびオレイン酸トリエタノールアミンなどを薬学的に許容可能なビークル物質として含むことができる。免疫原性組成物は、宿主の免疫応答を高めるために、アジュバントを任意に含んでもよい。好適なアジュバントは、例えば、トール様受容体アゴニスト、ミョウバン、ＡｌＰＯ_４、アルハイドロゲル、脂質－Ａおよびその誘導体またはバリアント、油エマルション、サポニン、中性リポソーム、ワクチンおよびサイトカインを含むリポソーム、非イオン性ブロックコポリマー、およびケモカインである。ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）およびポリオキシプロピレン（ＰＯＰ）を含む非イオン性ブロックポリマー、例えば、ＰＯＥ－ＰＯＰ－ＰＯＥブロックコポリマー、ＭＰＬ（登録商標）（３－Ｏ－脱アシル化モノホスホリルリピドＡ；Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｉｎｄ．）およびＩＬ－１２（ＧｅｎｅｔｉｃｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）は、当該技術分野において周知の多くの他の好適なアジュバントの中でも特に、アジュバントとして使用され得る（Ｎｅｗｍａｎｅｔａｌ．，１９９８，ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓｉｎＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＤｒｕｇＣａｒｒｉｅｒＳｙｓｔｅｍｓ１５：８９－１４２）。これらのアジュバントは、それらが免疫系を、非特異的に刺激するのを支援、従って、医薬品に対する免疫応答を高めるという点で利点を有する。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、２種以上のアジュバントを含み得るか、またはそれらと一緒に投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、２種のアジュバントを含み得るか、またはそれらと一緒に投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、複数種のアジュバントを含み得るか、それらと一緒に投与され得る。例えば、場合によっては、例えば、本明細書で提供される免疫原性組成物を含むワクチンは、複数種のアジュバントを含み得るか、それらと組み合わせて投与され得る。

ワクチン組成物に対して、好適なアジュバントの例には、例えば、水酸化アルミニウム、レシチン、フロイントアジュバント、ＭＰＬ（登録商標）およびＩＬ－１２が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示のワクチン組成物またはナノ粒子免疫原（例えば、ＲＳＶワクチン組成物）は、放出制御または持続放出製剤として処方できる。これは、徐放性ポリマーを含む組成物で、またはマイクロカプセル化送達系または生体付着性ゲルを介して、達成できる。種々の医薬組成物は、当該技術分野でよく知られている標準的手順に従って調製できる。

いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、水中油型エマルションの形態の代謝可能な油（例えば、スクアレン）およびαトコフェロールならびにポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ツイーン８０）を含むアジュバント製剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、アジュバント製剤は、約２％～約１０％のスクアレン、約２％～約１０％のαトコフェロール（例えば、Ｄ－α－トコフェロール）および約０．３％～約３％のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含み得る。いくつかの実施形態では、アジュバント製剤は、約５％のスクアレン、約５％のトコフェロール、および約０．４％のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含み得る。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、３脱－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ－ＭＰＬ）、および水中油型エマルションの形態のアジュバントを含み得、このアジュバントは、代謝可能油、αトコフェロール、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含む。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、ＱＳ２１（キラヤサポナリアモリナの抽出物：画分２１）、３Ｄ－ＭＰＬおよび水中油型エマルションを含み得、この水中油型エマルションは、代謝可能油、αトコフェロールおよびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを含む。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、ＱＳ２１、３Ｄ－ＭＰＬおよび水中油型エマルションを含み得、この水中油型エマルションは、次の組成：スクアレンなどの代謝可能油、αトコフェロールおよびツイーン８０を有する。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、リポソーム組成物の形態のアジュバントを含み得る。

いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、代謝可能油（例えば、スクアレン）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ツイーン８０）、およびＳｐａｎ８５を含むアジュバント製剤を含み得る。いくつかの実施形態では、アジュバント製剤は、約５％（ｗ／ｖ）のスクアレン、約０．５％（ｗ／ｖ）のポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、および約０．５％（ｗ／ｖ）のＳｐａｎ８５を含み得る。

いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、キラヤサポニン、コレステロール、およびリン脂質（ｐｈｏｓｐｈｏｒｌｉｐｉｄ）を、例えば、ナノ粒子組成物の形態で、含むアジュバント製剤を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、キラヤサポナリアモリナの別々に精製された画分の混合物を含み得、その後、コレステロールおよびリン脂質と共に処方される。

いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、ＭＦ５９（登録商標）、Ｍａｔｒｉｘ－Ａ（登録商標）、Ｍａｔｒｉｘ－Ｃ（登録商標）、Ｍａｔｒｉｘ－Ｍ（登録商標）、ＡＳ０１、ＡＳ０２、ＡＳ０３、およびＡＳ０４からなる群より選択されるアジュバントを含み得る。

いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、トール様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストを含み得、非メチル化シチジンホスホグアノシン（ＣｐＧまたはシトシンリン酸グアノシンとも呼ばれる）モチーフを含むＴＬＲ９アゴニストは、８～３５ヌクレオチド長さのオリゴヌクレオチドであり、ＲＳＶ抗原およびオリゴヌクレオチドは、それを必要としているヒト対象などの哺乳動物対象において、ＲＳＶ抗原に対する免疫応答を刺激するのに効果的な量で免疫原性組成物中に存在する。ＴＬＲ９（ＣＤ２８９）は、微生物ＤＮＡ中で検出される非メチル化シチジンホスホグアノシン（ＣｐＧ）モチーフを認識し、これは、合成ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を用いて模倣され得る。ＣｐＧ－ＯＤＮは、抗体産生を高め、ヘルパーＴ１（Ｔｈ１）細胞応答を刺激することが知られている（Ｃｏｆｆｍａｎｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３３：４９２－５０３，２０１０）。最適オリゴヌクレオチドＴＬＲ９アゴニストは、多くの場合、次の一般式の回文配列を含む：５’－プリン－プリン－ＣＧ－ピリミジン－ピリミジン－３’、または５’－プリン－プリン－ＣＧ－ピリミジン－ピリミジン－ＣＧ－３’。米国特許第６，５８９，９４０号、この特許は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは直鎖である。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは環状であり、またはヘアピンループを含む。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、修飾を含み得る。修飾には、限定されないが、３’ＯＨまたは５’ＯＨ基の修飾、ヌクレオチド塩基の修飾、ショ糖成分の修飾、およびリン酸基の修飾が挙げられる。修飾された塩基は、それがワトソン・クリック塩基対によりその天然の相補体に対し同じ特異性を維持する（例えば、回文部分がまだ自己相補的である）限り、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの回文配列中に組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは非標準の塩基を含む。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’－デオキシ－７－デアザグアノシン、２’－デオキシ－６－チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’－デオキシ－２’置換－アラビノグアノシン、および２’－Ｏ－置換－アラビノグアノシンからなる群より選択される。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、リン酸基の修飾を含み得る。例えば、リン酸ジエステル結合に加えて、リン酸修飾は、限定されないが、メチルホスホン酸、ホスホロチオエート、ホスホラミデート（架橋または非架橋）、ホスホトリエステルおよびジチオリン酸を含み、任意の組み合わせで使用され得る。他の非リン酸結合も同様に使用し得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはホスホロチオエート骨格のみを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはリン酸ジエステル骨格のみを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン酸骨格中にリン酸結合の組み合わせ、例えば、リン酸ジエステルおよびホスホロチオエート結合の組み合わせを含む。ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステル骨格を有するものより強い免疫原性であり得、宿主へ注入後に分解に対し、より高い抵抗性であるように見える（Ｂｒａｕｎｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ，１４１：２０８４－２０８９，１９８８；ａｎｄＬａｔｉｍｅｒｅｔａｌ．，ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，３２：１０５７－１０６４，１９９５）。本開示のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１、２または３個のヌクレオチド間ホスホロチオエートエステル結合を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の賦形剤を含む医薬組成物中に複数のＣｐＧオリゴヌクレオチド分子が存在する場合、ホスホロチオエートエステル結合の両方の立体異性体は、複数のＣｐＧオリゴヌクレオチド分子中に存在する。いくつかの実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合であるか、または別の言い方をすると、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート骨格を有する。

任意の好適なＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）またはこれらの組み合わせを本開示でアジュバントとして用いることができる。例えば、Ｋ型ＯＤＮ（Ｂ型とも呼ばれる）は、ホスホロチオエート骨格上に複数のＣｐＧモチーフをコードする。Ｋ型ＯＤＮは、次の配列ＴＣＣＡＴＧＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴをベースにし得る。ホスホロチオエートヌクレオチドの使用は、天然のリン酸ジエステルヌクレオチドと比較すると、ヌクレアーゼ消化に対する抵抗性を高め、実質的により長いインビボ半減期をもたらす。Ｋ型ＯＤＮは、ｐＤＣの分化およびＴＮＦαの産生、ならびにＢ細胞の増殖およびＩｇＭの分泌を引き起こす。Ｄ型ＯＤＮは、（Ａ型とも呼ばれる）は、混合リン酸ジエステル／ホスホロチオエート骨格から構築され、回文配列により挟まれた単一のＣｐＧモチーフを含み、３’および５’末端にポリＧテール（コンカテマーの形成を促進する構造モチーフ）を有する。Ｄ型ＯＤＮは、次の配列ＧＧＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧをベースにし得る。Ｄ型ＯＤＮは、ｐＤＣの成熟およびＩＦＮαの分泌を引き起こすが、Ｂ細胞に対する効果はない。Ｃ型ＯＤＮは、完全にホスホロチオエートヌクレオチドから構成される点でＫ型に類似するが、回文ＣｐＧモチーフを含む点ではＤ型に類似する。Ｃ型ＯＤＮは、次の配列ＴＣＧＴＣＧＴＴＣＧＡＡＣＧＡＣＧＴＴＧＡＴをベースにし得る。このクラスのＯＤＮは、Ｂ細胞を刺激し、ＩＬ－６を分泌させ、ｐＤＣにＩＦＮαを産生させる。Ｐ型ＯＤＮは、２個の回文配列を含み、それらに、より高次の構造を形成可能にする。Ｐ型ＯＤＮは、次の配列ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧをベースにし得る。Ｐ型ＯＤＮは、Ｂ細胞およびｐＤＣを活性化し、Ｃ型ＯＤＮに比較すると、実質的により多くのＩＦＮα産生を誘導する。本パラグラフでは、ＯＤＮ配列中の太字文字は、自己相補的回文構造を示し、ＣｐＧモチーフには下線をつけた。

例示的ＣｐＧＯＤＮ、例えば、ＣｐＧ７９０９（５′－ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ－３’）およびＣｐＧ１０１８（５’－ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ－３’）が知られており、米国特許第７，２５５，８６８号、同第７，４９１，７０６号、同第７，４７９，２８５号、同第７，７４５，５９８号、同第７，７８５，６１０号、同第８，００３，１１５号、同第８，１３３，８７４号、同第８，１１４，４１８号、同第８，２２２，３９８号、同第８，３３３，９８０号、同第８，５９７，６６５号、同第８，６６９，２３７号、同第９，０２８，８４５号、および同第１０，０５２，３７８号；米国特許出願公開第２０２０／０００２７０４号；およびＢｏｄｅｅｔａｌ．、“ＣｐＧＤＮＡａｓａｖａｃｃｉｎｅａｄｊｕｖａｎｔ”、ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＶａｃｃｉｎｅｓ（２０１１）、１０（４）：４９９－５１１で開示されている。これらは全て、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

１種または複数のアジュバントを組み合わせて使用し得、限定されないが、ミョウバン（アルミニウム塩）、水中油型エマルション、油中水型エマルション、リポソーム、およびポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）微粒子などの微粒子を含み得る（Ｓｈａｈｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ，１４９４：１－１４，２０１７）。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、ＲＳＶ抗原が吸着されるアルミニウム塩アジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、アルミニウム塩アジュバントは、非晶質ヒドロキシリン酸硫酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムおよび硫酸アルミニウムカリウムからなる群より選択される１種または複数を含む。いくつかの実施形態では、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムの一方または両方を含む。いくつかの実施形態では、アルミニウム塩アジュバントは、水酸化アルミニウムを含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物の単位用量は、約０．２５～約０．５０ｍｇのＡｌ^３＋、または約０．３５ｍｇのＡｌ^３＋を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、追加のアジュバントをさらに含む。他の好適なアジュバントとしては、限定されないが、水中スクアレンエマルション（例えば、ＭＦ５９またはＡＳ０３）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、ポリＩＣまたはポリＩＣＬＣ）、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）などの細菌性リポ多糖類誘導体、および／またはＡＳ０１またはＡＳ０２におけるようなＱｕｉｌＡまたはＱＳ－２１などのサポニン）、ＴＬＲ５アゴニスト（細菌性フラゲリン）、およびＴＬＲ７、ＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９（イミキモド、およびレシキモドなどのイミダゾキノリン誘導体）（Ｃｏｆｆｍａｎｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３３：４９２－５０３，２０１０）が挙げられる。いくつかの実施形態では、追加のアジュバントは、ＭＰＬおよびミョウバン（例えば、ＡＳ０４）を含む。獣医学用途および非ヒト動物中での抗体の産生には、フロイントアジュバント（完全および不完全の両方）の分裂促進的成分を使用できる。

いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、例えば、溶媒、増量剤、緩衝剤、浸透圧調節剤、および防腐剤などの薬学的に許容可能な賦形剤を含む（Ｐｒａｍａｎｉｃｋｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａＴｉｍｅｓ，４５：６５－７７，２０１３）。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、溶媒、増量剤、緩衝剤、および浸透圧調節剤の１種または複数として機能する（例えば、生理食塩水中の塩化ナトリウムは、水性のビークルおよび浸透圧調節剤の両方として機能し得る）賦形剤を含み得る。

いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、溶媒として水性ビークルを含む。好適なビークルには、例えば、滅菌水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、およびリンゲル溶液が挙げられる。いくつかの実施形態では、組成物は等張性である。

免疫原性組成物は、緩衝剤を含み得る。緩衝剤は、プロセッシング、貯蔵および任意選択で再構成中にｐＨを制御して、活性剤の分解を抑制する。好適な緩衝液には、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩または硫酸塩を含む塩が含まれる。他の好適な緩衝液には、例えば、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、およびリジンなどのアミノ酸が含まれる。緩衝剤は、塩酸または水酸化ナトリウムをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、６～９の範囲内で組成物のｐＨを維持する。いくつかの実施形態では、ｐＨは６、７、または８（下限値）より高い。いくつかの実施形態では、ｐＨは９、８、または７（上限値）より低い。すなわち、ｐＨは、約６～９の範囲にあり、この場合、下限値は、上限値より低い。

免疫原性組成物は、浸透圧調節剤を含み得る。好適な浸透圧調節剤には、例えば、デキストロース、グリセロール、塩化ナトリウム、グリセリンおよびマンニトールが挙げられる。

免疫原性組成物は、増量剤を含み得る。増量剤は、医薬組成物が投与の前に凍結乾燥される予定の場合に特に有用である。いくつかの実施形態では、増量剤は、凍結またはスプレー乾燥および／または貯蔵中の、活性剤の安定化および分解防止に役立つ保護剤である。好適な増量剤は、糖類（モノ、ジおよびポリサッカライド）、例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、グルコースおよびラフィノースである。

免疫原性組成物は、防腐剤を含み得る。好適な防腐剤には、例えば、酸化防止剤および抗菌剤を含む。しかし、好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、無菌条件下で調製され、単回使用容器に入れられ、従って、防腐剤の含有を不要にする。

いくつかの実施形態では、組成物は、無菌組成物として提供できる。医薬組成物は通常、有効量の開示免疫原を含み、従来技術により調製され得る。典型的には、免疫原性組成物の各投与量中の免疫原の量は、顕著な有害副作用なしに免疫応答を誘導する量として選択される。いくつかの実施形態では、組成物は、対象の免疫応答の誘導に使用するための単位剤形として提供できる。単位剤形は、対象に投与するために好適な単一の予め選択された投与量、または好適する標識または測定された２種以上の予め選択された単位投与量、および／または単位用量またはその倍数を投与するための計量機序を含む。他の実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。

ＩＶ．免疫応答の誘導方法
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶの表面抗原に対する免疫応答を生成する方法であって、該方法は、配列番号１～１６からなる群より選択される組換えポリペプチドを含む有効量の複合体を、対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶの表面抗原に対する免疫応答を生成する方法であって、表面抗原は、Ｆタンパク質またはその抗原フラグメントを含み、該方法は、配列番号１～１６からなる群より選択される組換えポリペプチドを含む有効量の複合体を、対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶの表面抗原に対する免疫応答を生成する方法であって、表面抗原は、配列番号１７～４７からなる群より選択される配列を含み、該方法は、配列番号１～１６からなる群より選択される組換えポリペプチドを含む有効量の複合体を、対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶの表面抗原に対する免疫応答を生成する方法であって、表面抗原は、ＲＳＶのＦタンパク質またはその抗原フラグメントを含み、任意選択で、表面抗原は、配列番号１７～４７のいずれか１個または複数の配列またはその抗原フラグメントを含み、該方法は、配列番号１～１６のいずれか１つで示される配列を含む組換えポリペプチドを含む有効量の複合体を、対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、対象のＲＳＶの表面抗原に対する免疫応答を生成する方法であって、表面抗原は、Ｆタンパク質またはその抗原フラグメントを含み、該方法は、配列番号１～１６からなる群より選択される配列を含む組換えポリペプチドを含む複合体、またはその複合体の任意の２種以上の組み合わせの有効量を対象に投与することを含む。

開示免疫原（例えば、本明細書で記載の組換えＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体、タンパク質、開示組換えＲＳＶＦ抗原、開示組換えＲＳＶＦ抗原を含むタンパク質ナノ粒子もしくはウィルス様粒子をコードする核酸分子（ＲＮＡ分子など）またはベクター）は、対象の対応するＲＳＶＦ抗原に対する免疫応答を誘導するために、対象に投与できる。特定の例では、対象はヒトである。免疫応答は、防御免疫応答、例えば、その後の対応するＲＳＶの感染を抑制する応答であり得る。免疫応答の誘発はまた、感染症および対応するＲＳＶに関連する疾病を治療または抑制するために使用できる。

ＲＳＶに感染している、または、例えば、ＲＳＶへの曝露または曝露の可能性の理由で、感染症を発生するリスクがある対象は、治療のために選択できる。開示免疫原の投与後に、対象は、感染症またはＲＳＶに関連する症状、または両方のために監視され得る。

本開示の治療薬および方法による治療を目的とする典型的な対象には、ヒト、ならびに非ヒト霊長類および他の動物が含まれる。本開示の方法による予防または治療のための対象を特定するために、認められているスクリーニング方法を用いて標的とするまたは疑わしい疾患または状態に関連するリスク因子が決定され、または対象の既存の疾患または状態の現況が特定される。これらのスクリーニング方法としては、例えば、環境上、家族性、職業上の、および他の標的とするまたは疑わしい疾患または状態に関連し得るリスク因子を特定するための通常の精密検査、ならびに、ＲＳＶ感染症を検出および／または特徴付けるための種々のＥＬＩＳＡおよび他のイムノアッセイ法などの診断法が挙げられる。これらおよび他の定型的方法は、臨床医が本開示の方法および医薬組成物を使用して治療が必要な患者を選択することを可能にする。これらの方法および原則に従って、組成物は、本明細書の教示、または他の従来の方法により、独立した予防または治療プログラムとして、または他の治療に対する追跡調査、補助剤または協調的治療法として投与できる。

開示免疫原、例えば、ＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体、タンパク質の投与は、予防または治療目的のためであり得る。予防的に投与される場合、開示治療薬は、いずれかの症状の前に、例えば、感染の前に、投与される。開示治療薬の予防的投与は、続いて発生するいずれかの感染症を防ぐ、または改善する役割をする。治療的に投与される場合、開示治療薬は、疾患または感染症の症状の発生時に、または発生後に、例えば、ＲＳＶＦ抗原に対応するＲＳＶの感染の症状の発生後に、またはＲＳＶ感染症の診断後に、投与される。治療薬は、従って、予測される感染症および／または関連疾患症状の重症度、期間または程度を減ずるように予測されるＲＳＶに対する曝露の前に、ウィルスに対する曝露もしくはウィルスへの疑われる曝露の後に、または感染症の実際の開始の後に、投与できる。

本明細書で記載の免疫原、およびその免疫原性組成物は、対象、好ましくはヒトのＲＳＶＦ抗原に対する免疫応答を誘導するまたは高めるための有効量で対象に投与される。開示免疫原の実際の投与量は、適応疾患および対象の特定の状態（例えば、対象の年齢、サイズ、適応度、症状の程度、感受性因子、など）、投与時間および経路、同時に投与されている他の薬物または治療、ならびに所望の活性または対象の生物学的応答を誘発する組成物の特異的薬理学などの因子に従って変化するであろう。投与計画を調節して最適な予防または治療応答を得ることができる。

１種または複数の開示免疫原を含む医薬組成物は、協調的（またはプライムブースト）ワクチン接種プロトコルまたは組み合わせ製剤に使用できる。特定の実施形態では、新規組み合わせ免疫原性組成物および協調的免疫化プロトコルは、それぞれ、ＲＳＶＦ抗原に対する免疫応答などの抗ウィルス免疫応答の誘発に対する別々の免疫原または製剤を用いる。抗ウィルス免疫応答を誘発する別々の免疫原性組成物は、単一の免疫化ステップで対象に投与される多価の免疫原性組成物に混合できる、またはそれらは、協調的（またはプライムブースト）免疫化プロトコルで別々に（一価免疫原性組成物で）投与できる。

いくつかのブーストであってよく、各ブーストは、異なる開示免疫原であってよい。いくつかの例では、ブーストは、別のブースト、または初回刺激と同じ免疫原であり得る。初回刺激およびブーストは、単回投与または複数回投与として投与でき、例えば、２回投与、３回投与、４回投与、５回投与、６回投与またはそれを越える投与により、数日間、数週間、または数ヶ月にわたり投与できる。１回～５回（例えば、１、２、３、４または５回のブースト）、またはそれを超える、複数回ブーストも、投与できる。異なる投与量を一連の逐次免疫化で使用できる。例えば、一次免疫で比較的大きな投与量の後に、比較的より小さい投与量でブーストを投与できる。

いくつかの実施形態では、ブーストは、初回刺激後、約２、約３～８週間、または約４週間、または初回刺激後、約数ヶ月間投与できる。いくつかの実施形態では、ブーストは、初回刺激後、または初回刺激後のおおよその時間で、約５、約６、約７、約８、約１０、約１２、約１８、約２４か月間、投与できる。周期的な追加のブーストも、適切な時点で使用して、対象の「免疫記憶」を強化できる。選択されたワクチン接種パラメーター、例えば、製剤、投与量、療法、などの妥当性は、対象から一定分量の血清を採取し、免疫化プログラムの過程中の抗体価をアッセイすることにより判定できる。加えて、対象の臨床状態の所望の効果、例えば、感染症の予防、または病状の改善（例えば、ウィルス量の低減）を監視できる。このような監視が、ワクチン接種が準最適であること示す場合には、対象を免疫原性組成物の追加の投与でブーストでき、ワクチン接種パラメーターを、免疫応答を増強することが予測される方式に変更できる。

いくつかの実施形態では、プライムブースト法は、対象に対するＤＮＡプライマーおよびタンパク質ブーストワクチン接種プロトコルを含み得る。方法は、核酸分子またはタンパク質の２回以上の投与を含み得る。

タンパク質治療薬の場合は、典型的には、各ヒト用量は、１～１０００μｇのタンパク質、例えば、約１μｇ～約１００μｇ、例えば、約１μｇ～約５０μｇ、例えば、約１μｇ、約２μｇ、約５μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、または約５０μｇのタンパク質を含む。

免疫原性組成物で利用される量は、対象集団（例えば、乳幼児または高齢者）に基づいて選択される。特定の組成物のための最適量は、対象における抗体価および他の応答の観察を含む標準的試験により確認できる。免疫原性組成物中の開示組換えＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体、タンパク質、ウィルスベクター、または核酸分子などの治療有効量の開示免疫原は、単一用量の投与により免疫応答を誘発するのに無効力であるが、例えば、プライムブースト投与プロトコルでの複数の投与量の投与時には効果的である量を含めることができることは理解される。

本開示の開示免疫原の投与時には、対象の免疫系は通常、免疫原中に含まれているＲＳＶＦタンパク質ペプチドに特異的な抗体を産生することにより免疫原性組成物に応答する。このような応答は、免疫学的に有効量が対象に送達されたことを意味する。

いくつかの実施形態では、対象の抗体応答は、有効投与量／免疫化プロトコルを評価する中で決定される。大抵の場合、それは、対象から得られた血清または血漿中の抗体価を評価することで十分である。ブースター接種を投与するか、および／または個体に投与される治療薬の量を変更するかどうかに関する決定は、少なくとも部分的に抗体価レベルに基づいてなされ得る。抗体価レベルは、例えば、組換えＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体、タンパク質を含む抗原に結合する、血清中の抗体の濃度を測定する免疫結合アッセイを基準にすることができる。

ＲＳＶ感染症は、方法が有効であるために、完全に除去または低減または予防される必要はない。例えば、１種または複数の開示免疫原によるＲＳＶに対する免疫応答の誘発は、ＲＳＶの感染を、所望の量だけ、例えば、免疫原の非存在でのＲＳＶの感染に比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、あるいは少なくとも１００％（検出可能な感染細胞の除去または阻止）だけ低減または抑制できる。追加の例では、ＲＳＶ複製は、開示方法により低減または抑制できる。ＲＳＶ複製は、方法が有効であるために、完全に除去される必要はない。例えば、１種または複数の開示免疫原を用い手誘発された免疫応答は、対応するＲＳＶの複製を、所望の量だけ、例えば、免疫原の非存在でのＲＳＶの複製に比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、あるいは少なくとも１００％（ＲＳＶの検出可能な複製の除去または阻止）だけ低減できる。

いくつかの実施形態では、開示免疫原は、対象に、アジュバントの投与と同時に投与される。他の実施形態では、開示免疫原は、アジュバントの投与後、対象に対し、免疫応答が誘導されるのに十分な時間以内に投与される。

核酸を投与する１つの手法は、哺乳動物発現プラスミドを用いるなどのプラスミドＤＮＡを用いた直接免疫化である。核酸構築物による免疫化は、当該技術分野において周知であり、例えば、米国特許第５，６４３，５７８号（これは、所望の抗原をコードするＤＮＡを導入することにより、脊椎動物を免疫化す方法を記載している）、および米国特許第５，５９３，９７２号および同第５，８１７，６３７号（これは、抗原をコードする核酸配列を操作可能なように発現を可能にする調節配列に連結することを記載する）で教示されている。米国特許第５，８８０，１０３号は、免疫原性ペプチドまたは他の抗原をコードする核酸の生物へのいくつかの送達方法を記載している。方法は、核酸（または合成ペプチドそれ自体）、および免疫刺激構築物、またはＩＳＣＯＭＳ（登録商標）、コレステロールおよびＱｕｉｌＡ（登録商標）の混合により自然に形成される３０～４０ｎｍのサイズの負に帯電しているケージ様構造体のリポソーム送達を含む。防御免疫は、ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）を抗原の送達担体として用いてトキソプラズマ症およびエプスタイン・バールウィルス誘導腫瘍を含む種々の感染症実験モデルで生成されている（ＭｏｗａｔａｎｄＤｏｎａｃｈｉｅ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１２：３８３，１９９１）。ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）中にカプセル化された、ただの１μｇの少ない抗原の投与量で、クラスＩ媒介ＣＴＬ応答を生成したことがわかった（Ｔａｋａｈａｓｈｉｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４４：８７３，１９９０）。

いくつかの実施形態では、プラスミドＤＮＡワクチンを使って、対象中で開示免疫原が発現される。例えば、開示免疫原をコードする核酸分子は、ＲＳＶＦ抗原に対する免疫応答を誘導するために、対象に投与できる。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ＤＮＡ免疫化のために、ｐＶＲＣ８４００ベクターなどのプラスミドベクターに組み込むことができる（Ｂａｒｏｕｃｈｅｔａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，７９，８８２８－８８３４，２００５に記載されている。この文献は参照により本明細書に組み込まれる）。

免疫化のための核酸の使用に関する別の手法では、開示組換えＲＳＶＦ抗原、例えば、三量体、タンパク質は、弱毒化ウィルス宿主またはベクターまたは細菌ベクターにより発現され得る。組換えワクシニアウィルス、アデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）、ヘルペスウィルス、レトロウィルス、サイトメガロ（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ）ウィルスまたは他のウィルスベクターを用いて、ペプチドまたはタンパク質を発現し、それにより、ＣＴＬ応答を誘発できる。例えば、免疫化プロトコルに有用なワクシニアベクターおよび方法は、米国特許第４，７２２，８４８号に記載されている。ＢＣＧ（カルメット・ゲラン菌）は、ペプチドの発現のための別のベクターを提供する（Ｓｔｏｖｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ３５１：４５６－４６０，１９９１参照）。

一実施形態では、開示組換えＲＳＶＦ抗原をコードする核酸は、細胞に直接導入される。例えば、核酸は、標準的な方法により金マイクロスフェア上に担持され、Ｂｉｏ－ＲａｄのＨＥＬＩＯＳ（登録商標）遺伝子銃などの装置により皮膚中に導入され得る。核酸は、強力なプロモーターの制御下で、プラスミドからなる「裸」であってよい。典型的には、ＤＮＡは、筋肉中に注入されるが、それは、他の部位に直接的に注入することも可能である。注入のための投与量は通常、約０．５μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、典型的には、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである（例えば、米国特許第５，５８９，４６６号を参照）。

例えば、核酸は、標準的な方法により金マイクロスフェア上に担持され、Ｂｉｏ－ＲａｄのＨＥＬＩＯＳ（登録商標）遺伝子銃などの装置により皮膚中に導入され得る。核酸は、強力なプロモーターの制御下で、プラスミドからなる「裸」であってよい。典型的には、ＤＮＡは、筋肉中に注入されるが、それは、他の部位に直接的に注入することも可能である。注入のための投与量は通常、約０．５μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、典型的には、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである（例えば、米国特許第５，５８９，４６６号を参照）。

別の実施形態では、ｍＲＮＡベース免疫化プロトコルを用いて、開示組換えＲＳＶＦ抗原をコードする核酸を、細胞に直接送達できる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡに基づく核酸ベースワクチンは、以前言及した手法の強力な代替法を提供し得る。ｍＲＮＡワクチンは、宿主ゲノム中へのＤＮＡ組み込みに関する安全性の懸念を排除し、宿主細胞質中に直接移動させる。さらに、ＲＮＡの単純な無細胞インビトロ合成は、ウィルスベクターに関連する製造の複雑さを回避する。開示組換えＲＳＶＦ抗原をコードする核酸を送達するために使用できるＲＮＡベースワクチン接種の２つの例示的形態には、従来の非増幅ｍＲＮＡ免疫化（例えば、Ｐｅｔｓｃｈｅｔａｌ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｉｎｖｉｔｒｏｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｓａｇａｉｎｓｔｉｎｆｌｕｅｎｚａＡｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，” Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３０（１２）：１２１０－６，２０１２を参照）および自己増幅ｍＲＮＡ免疫化（例えば、Ｇｅａｌｌｅｔａｌ．，“Ｎｏｎｖｉｒａｌｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｓｅｌｆ－ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｓ，” ＰＮＡＳ，１０９（３６）：１４６０４－１４６０９，２０１２；Ｍａｇｉｎｉｅｔａｌ．，“Ｓｅｌｆ－ＡｍｐｌｉｆｙｉｎｇｍＲＮＡＶａｃｃｉｎｅｓＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｌｔｉｐｌｅＣｏｎｓｅｒｖｅｄＩｎｆｌｕｅｎｚａＡｎｔｉｇｅｎｓＣｏｎｆｅｒＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔＨｏｍｏｌｏｇｏｕｓａｎｄＨｅｔｅｒｏｓｕｂｔｙｐｉｃＶｉｒａｌＣｈａｌｌｅｎｇｅ，” ＰＬｏＳＯｎｅ，１１（８）：ｅ０１６１１９３，２０１６；およびＢｒｉｔｏｅｔａｌ．，“Ｓｅｌｆ－ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇｍＲＮＡｖａｃｃｉｎｅｓ，” ＡｄｖＧｅｎｅｔ．，８９：１７９－２３３，２０１５を参照）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療有効量の１種または複数の開示免疫原の対象への投与は、対象において、中和免疫応答を誘導する。中和活性を評価するために、対象の免疫化後に、適切な時点で対象から血清を収集し、中和試験のために凍結、貯蔵できる。中和活性のアッセイ方法は、当業者に既知であり、また、本明細書でさらに記載され、限定されないが、プラーク減少中和（ＰＲＮＴ）アッセイ、マイクロ中和アッセイ、フローサイトメトリーベースアッセイ、単一サイクル感染症アッセイが挙げられる。いくつかの実施形態では、血清中和活性は、ＲＳＶ偽ウィルスのパネルを用いてアッセイできる。

いくつかの実施形態では、本明細書で開示の免疫原による中和免疫応答は、ＲＳＶに対する中和抗体を生成する。いくつかの実施形態では、本明細書の中和抗体は、ＲＳＶもしくはその成分の細胞受容体または共受容体に結合する。ヌクレオリンは、ＲＳＶに対するエントリー共受容体であり、また、インフルエンザ、パラインフルエンザウィルス、いくつかのエンテロウィルスおよび野兎病を引き起こす細菌の細胞内移行を媒介する。融合前ＲＳＶ－Ｆ糖タンパク質のインスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）との結合はまた、プロテインキナーゼＣゼータ（ＰＫＣζ）の活性化を引き起こし、細胞の核から細胞膜にヌクレオリンを局在化させて、ビリオン上のＲＳＶ－Ｆと結合させ得る。いくつかの実施形態では、ウィルス受容体または共受容体は、パラミクソウィルス受容体または共受容体、好ましくは肺炎ウィルス受容体または共受容体、より好ましくはヒトＲＳＶ受容体または共受容体である。例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５および／またはＣＣＲ８受容体は、ヒトＲＳＶ感染に関与し得る。ＲｈｏＡは、宿主細胞ＲＳＶ受容体または共受容体の別の例である。いくつかの実施形態では、本明細書の中和抗体は、インビトロ、インサイツおよび／またはインビボで、ＲＳＶ放出、ＲＳＶ受容体シグナル伝達、膜ＲＳＶ切断、ＲＳＶ活性、ＲＳＶ作製および／または合成などの、少なくとも１つのＲＳＶ活性もしくは結合、またはＲＳＶ受容体活性もしくは結合を、調節、低減、アンタゴナイズ、軽減、遮断、抑制、抑止、および／または妨害する。いくつかの実施形態では、本明細書の開示免疫原は、ヌクレオリン、ＩＧＦ１Ｒ、ＣＣＲ１，ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ８および／またはＲｈｏＡなどのＲＳＶ受容体または共受容体に対するＲＳＶ結合を調節、低減、アンタゴナイズ、軽減、遮断、抑制、抑止、および／または妨害する、ＲＳＶに対する中和抗体を誘導する。

Ｖ．製品またはキット
また、提供されるのは、提供された組換えポリペプチド、タンパク質、および免疫原性組成物を含む製品またはキットである。製品は、容器および容器上のまたは容器に添付されたラベルまたは添付文書を含み得る。好適な容器には、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、試験管、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。いくつかの実施形態では、容器は、無菌アクセスポートを有する。例示的容器には、注射用の針により貫通可能なストッパーを備えたものを含む、静脈注射溶液バッグ、バイアルが挙げられる。製品またはキットは、組成物が本明細書で記載の状態（例えば、ＲＳＶ感染症）などの特定の状態を治療するために使用できることを示す添付文書をさらに含み得る。代わりにまたは追加して、製品またはキットは、薬学的に許容可能な緩衝液を含む別のまたは同じ容器をさらに含み得る。他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、および／またはシリンジなどの他の資材をさらに含み得る。

ラベルまたは添付文書は、組成物が個体のＲＳＶ感染症を治療するために使用されることを示し得る。容器上の、または容器に添付されたラベルまたは添付文書は、製剤の再構成および／または使用方法を示し得る。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体のＲＳＶ感染症を治療するために、皮下、静脈内、または他の投与方法に有用である、またはそれらの投与方法を対象としていることをさらに示し得る。

いくつかの実施形態では、容器は、単独の、または状態の治療、予防および／または診断に効果的な別の組成物と組み合わせた組成物を保持する。製品またはキットは、（ａ）免疫原性組成物またはタンパク質またはその組換えポリペプチド組成物（すなわち、第１の薬物）をその中に含有する第１の容器；および（ｂ）アジュバントあるいは、治療薬などのさらなる薬剤を含む組成物（すなわち、第２の薬物）をその中に含有する第２の容器を含み得、製品またはキットは、ラベルまたは添付文書上に、有効量の第２の薬物で対象を治療するための説明書をさらに含む。

用語法
特に断らない限り、本明細書で使用される全ての技術、表記法および他の技術的および科学用語または用語法は、請求主題が属する当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有することが意図されている。場合によっては、一般に理解されている意味を有する用語が、明確にするためにおよび／またはすぐに参照できるように、本明細書で定義され、このような本明細書での定義の包含は、当該技術分野において一般に理解されているものに対して必ずしも実質的差異を表すと解釈されるべきではない。

用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書では同じ意味で用いられ、アミノ酸残基のポリマーを意味し、最小長に限定されない。提供される受容体および他のポリペプチド、例えば、リンカーまたはペプチドを含むポリペプチドは、天然および／または非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸残基を含み得る。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアル化、アセチル化、およびリン酸化も含む。いくつかの態様では、ポリペプチドは、タンパク質が所望の活性を維持する限りにおいて、未処置のまたは天然配列に対する修飾を含み得る。これらの修飾は、部位特異的変異誘発によるような故意であってもよく、またはＰＣＲ増幅に起因してタンパク質またはエラーを生成する宿主の変異によるなどの偶発的であってもよい。

本明細書で使用される場合、「対象」はヒトなどの哺乳動物または他の動物であり、通常はヒトである。いくつかの実施形態では、対象、例えば、薬剤、細胞、細胞集団、または組成物が投与される患者は、哺乳動物、通常はヒトなどの霊長類である。いくつかの実施形態では、霊長類は、サルまたは類人猿である。対象は、男性または女性であり、乳幼児、若年、成人、および老人対象を含む任意の好適な年齢であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、げっ歯類などの非霊長類哺乳動物である。

本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（および「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などのその文法的変化）は、疾患もしくは状態もしくは障害、または症状、有害作用もしくは結果、またはそれに伴う表現型の完全なもしくは部分的な改善もしくは低減を意味する。治療の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的結果の減少、転移の防止、疾患進行速度の低下、病状の改善または緩和、および寛解または予後の改善が含まれる。この用語は、疾患の完全な治癒を意味するものでも、または全ての症状または結果に対する、いずれかの症状または影響の完全な除去を意味するものでもない。

本明細書で使用される場合、「疾患の発症の遅延」は、疾患（癌などの）の発症を先に延ばす、妨害する、緩慢にする、減速させる、安定させる、抑制するおよび／または遅らせることを意味する。この遅延化は、治療される疾患および／または個別の病歴に応じて時間の長さを変えることができる。いくつかの実施形態では、十分なまたは有意な遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、事実上、予防を包含する。例えば、転移発生などの後期段階の癌は、遅延化され得る。

本明細書で使用される場合、「防止（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、疾患に罹りやすいが未だ疾患と診断されていない対象における疾患の発生または再発に対する予防の提供を含む。いくつかの実施形態では、提供される細胞および組成物は、疾患の発症を遅らせる、または疾患の進行を遅らせるために使用される。

本明細書で使用される場合、機能または活性を「抑制する」は、目的の条件またはパラメーター以外は同じ条件である場合に比較して、あるいは別の条件に比較して、機能または活性を低減することである。例えば、腫瘍増殖を抑制する細胞は、その細胞の非存在下の腫瘍の成長速度に比べて、腫瘍の成長速度が低減する。

「有効量」の薬剤、例えば、医薬製剤、細胞、または組成物は、投与の状況において、治療または予防結果などの所望の結果を達成するための、必要な期間における、薬用量／量としての、効果的な量を意味する。

「治療有効量」の薬剤、例えば、医薬製剤、細胞は、投与の状況において、疾患、状態、または障害の治療、および／または治療の薬物動態学的または薬力学的効果に対する、所望の治療結果を達成するための、必要な期間における、薬用量としての、効果的な量を意味する。治療有効量は、投与される対象の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに投与される細胞の集団などの因子に応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、提供される方法は、有効量、例えば、治療有効量での細胞および／または組成物の投与を含む。

「予防有効量」は、必要な服用量で、所望の予防結果を達成するのに必要な用量および時間で効果的な量を意味する。必ずというわけではないが、通常は、予防的投与は、疾患の前、または初期段階の対象で使用されるので、予防有効量は、治療有効量未満であろう。より低い腫瘍負荷量の場合には、いくつかの態様では、予防有効量は、治療有効量より高くなるであろう。

本明細書で使用される場合、用語「約」は、当業者には容易に分かる、それぞれの値に対する通常の誤差範囲を意味する。本明細書において、値またはパラメーターに前置する「約」の言及は、その値またはパラメーターそれ自体に向けられる実施形態を含む（および記述する）。

本明細書中で使用される場合、単数形（「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」）は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数の参照物を包含する。例えば、「ａ」または「ａｎ」は、「少なくとも１つの」または「１つ以上の」を意味する。

本開示を通して、請求された主題の種々の態様が、範囲形式で提示される。範囲形式での記載は単に便宜上および簡潔化のためであり、請求された主題の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきでないことを理解されたい。従って、範囲の記載は、具体的に開示された可能なすべての部分範囲、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値を有すると見なされなければならない。例えば、値の範囲が提供される場合、その範囲の上限および下限の間の介在値と、その指定範囲の任意の他の指定値または介在値との間の各介在値は、請求された主題に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値と下限値は、独立に、より小さい範囲に含まれてもよく、また、指定範囲内のいずれかの特別に除外される範囲の存在を条件として、請求された主題の範囲内に包含される。指定範囲がその制限の１つまたは両方を含む場合、それらの包含される制限値のいずれかまたは両方を除外する範囲も請求された主題に含まれる。このことは、範囲の広さにかかわらず、適用される。

本明細書で使用される場合、組成物は、２種以上の製品、物質、または化合物の任意の混合物を意味し、細胞を含む。それは、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性溶液、非水性溶液またはこれらの任意の組み合わせであり得る。

本明細書で使用される場合、用語「ベクター」はそれが結合されている別の核酸を増殖することが可能である核酸分子を意味する。この用語は、自己複製する核酸構造体としてのベクターならびにそのベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが動作可能に連結された核酸の発現を指示することが可能である。このようなベクターは、本明細書では、「発現ベクター」と呼ばれる。

例示的実施形態
実施形態１．複数の組換えポリペプチドを含み、各組換えポリペプチドがコラーゲンのＣ末端プロペプチドに結合した呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）Ｆタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープを含み、組換えポリペプチドのＣ末端プロペプチドがポリペプチド間ジスルフィド結合を形成する、タンパク質。

実施形態２．ＲＳＶが、サブタイプＡまたはサブタイプＢである、実施形態１に記載のタンパク質。

実施形態３．エピトープが、線形エピトープまたは立体構造エピトープである、実施形態１または２に記載のタンパク質。

実施形態４．Ｆタンパク質ペプチドが、Ｆ１サブユニットペプチド、Ｆ２サブユニットペプチド、またはこれらの任意の組み合わせを含み、タンパク質が、３個の組換えポリペプチドを含む、実施形態１～３のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態５．Ｆタンパク質ペプチドが、シグナルペプチド、７アミノ酸繰り返しＣ（ＨＲＣ）ペプチド、ｐｅｐ２７ペプチド、融合ペプチド（ＦＰ）、７アミノ酸繰り返しＡ（ＨＲＡ）ペプチド、ドメインＩペプチド、ドメインＩＩペプチド、または７アミノ酸繰り返しＢ（ＨＲＢ）ペプチド、またはこれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１～４のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態６．Ｆタンパク質ペプチドが、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットを含むが、Ｆ２サブユニットを含まない、またはその逆の場合もある、実施形態１～５のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態７．Ｆタンパク質ペプチドは、Ｆタンパク質のＦ１サブユニットおよびＦ２サブユニットを含み、任意選択で、ｐｅｐ２７を欠き、ならびに任意選択で、Ｆ１サブユニットおよびＦ２サブユニットが、ジスルフィド結合または人為的に導入されたリンカーにより連結される、実施形態１～６のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態８．Ｆタンパク質ペプチドが、膜貫通（ＴＭ）ドメインペプチドおよび／または細胞質（ＣＰ）ドメインペプチドを含まない、実施形態１～７のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態９．Ｆタンパク質ペプチドが、プロテアーゼ切断部位を含み、プロテアーゼが任意選択でフューリン、トリプシン、第Ｘａ因子、またはカテプシンＬである、実施形態１～８のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１０．Ｆタンパク質ペプチドが、プロテアーゼ切断部位を含まず、プロテアーゼが任意選択でフューリン、トリプシン、第Ｘａ因子、またはカテプシンＬである、実施形態１～８のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１１．Ｆタンパク質ペプチドが、可溶性であるか、または脂質二重層、例えば、膜またはウィルスエンベロープに直接結合しない、実施形態１～１０のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１２．Ｆタンパク質ペプチドが、タンパク質の組換えポリペプチド間で同じまたは異なる、実施形態１～１１のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１３．Ｆタンパク質ペプチドが、Ｃ末端プロペプチドに直接融合されるか、またはグリシン－Ｘ－Ｙリピートを含むリンカーなどのリンカーを介してＣ末端プロペプチドに結合され、ＸおよびＹが、独立に任意のアミノ酸、任意選択で、プロリンまたはヒドロキシプロリンである、実施形態１～１２のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１４．可溶性であるか、または脂質二重層、例えば、膜またはウィルスエンベロープに直接結合しない、実施形態１～１３のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１５．タンパク質が、Ｆタンパク質ペプチド三量体を含むロゼット様オリゴマーを形成できる、実施形態１～１４のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１６．タンパク質が、対象の細胞表面接着因子または受容体に結合でき、適宜、対象が、霊長類、例えば、ヒトなどの哺乳動物である、実施形態１～１５のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１７．Ｃ末端プロペプチドがヒトコラーゲンである、実施形態１～１６のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１８．Ｃ末端プロペプチドが、ｐｒｏα１（Ｉ）、ｐｒｏα１（ＩＩ）、ｐｒｏα１（ＩＩＩ）、ｐｒｏα１（Ｖ）、ｐｒｏα１（ＸＩ）、ｐｒｏα２（Ｉ）、ｐｒｏα２（Ｖ）、ｐｒｏα２（ＸＩ）、またはｐｒｏα３（ＸＩ）のＣ末端ポリペプチド、またはそのフラグメントを含む、実施形態１～１７のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態１９．Ｃ末端プロペプチドが、組換えポリペプチド間で同じまたは異なる、実施形態１～１８のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２０．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号４８またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２１．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号４９またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２２．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号５０またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２３．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号５１またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２４．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号５２またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２５．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号５３またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２６．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号５４またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２７．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号５５～５９のいずれかまたはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２８．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号６０またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態２９．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号６１～６３のいずれかまたはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態３０．Ｃ末端プロペプチドが、ポリペプチド間ジスルフィド結合を形成して組換えポリペプチドを三量体化できる、配列番号４８～６３のいずれか、またはそれと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列のＮ末端に結合されたグリシン－Ｘ－Ｙリピートを含むアミノ酸配列を含み、式中ＸおよびＹは、独立に任意のアミノ酸、任意選択で、プロリンまたはヒドロキシプロリンである、実施形態１～２９のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態３１．いくつかの実施形態では、各組換えポリペプチド中のＦタンパク質ペプチドが、融合前立体構造または融合後立体構造であり、任意選択で、タンパク質が、松葉杖形状ロッド（ｃｒｕｔｃｈ－ｓｈａｐｅｄｒｏｄ）としてＦタンパク質ペプチド三量体を含むロゼット様オリゴマーを含む、実施形態１～３０のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態３２．各組換えポリペプチド中のＦタンパク質ペプチドが、配列番号１７～４７のいずれか、またはそれと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～３１のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態３３．組換えポリペプチドが、配列番号１～１６のいずれか、またはそれと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、実施形態１～３１のいずれかに記載のタンパク質。

実施形態３４．実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質を含む免疫原。

実施形態３５．直接的にまたは間接的にナノ粒子に結合した実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質を含むタンパク質ナノ粒子。

実施形態３６．実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質を含むウィルス様粒子（ＶＬＰ）。

実施形態３７．実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質の１、２、３個またはそれ以上の組換えポリペプチドをコードする単離核酸。

実施形態３８．Ｆタンパク質ペプチドをコードするポリペプチドが、コラーゲンのＣ末端プロペプチドをコードするポリペプチドにインフレームで融合される、実施形態３７に記載の単離核酸。

実施形態３９．プロモーターに動作可能に連結されている、実施形態３７または３８に記載の単離核酸。

実施形態４０．ＤＮＡ分子である、実施形態３７～３９のいずれかに記載の単離核酸。

実施形態４１．ＲＮＡ分子、任意選択で、ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ、非増幅ｍＲＮＡ、自己増幅ｍＲＮＡ、またはトランス増幅ｍＲＮＡなどのｍＲＮＡ分子である、実施形態３７～３９のいずれかに記載の単離核酸。

実施形態４２．実施形態３７～４１のいずれかに記載の単離核酸を含むベクター。

実施形態４３．ウィルスベクターである、実施形態４２に記載のベクター。

実施形態４４．実施形態４２または４３に記載のベクターを含み、任意選択で、ウィルスまたは細胞が組換えゲノムを有する、ウィルス、偽ウィルス、または細胞。

実施形態４５．実施形態１～４４のいずれか１つに記載の、タンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、または細胞、および薬学的に許容可能な担体を含む、免疫原性組成物。

実施形態４６．実施形態４５に記載の免疫原性組成物および任意選択で、アジュバントを含み、任意選択で、サブユニットワクチンであり、任意選択で、予防および／または治療ワクチンである、ワクチン。

実施形態４７．ワクチンが複数の異なるアジュバントを含む、実施形態４６に記載のワクチン。

実施形態４８．実施形態３７～４３のいずれか１つに記載の単離核酸またはベクターを宿主細胞中で発現させて、宿主細胞中で実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質を産生すること；およびそのタンパク質を精製することを含む、タンパク質を製造する方法。

実施形態４９．実施形態４８に記載の方法により製造されたタンパク質。

実施形態５０．対象中でＲＳＶのＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに対する免疫応答を生成する方法であって、実施形態１～４７および４９のいずれか１つに記載の有効量のタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンを対象に投与し、免疫応答を生成させることを含む、方法。

実施形態５１．ＲＳＶによる感染症を治療または予防するための、実施形態５０に記載の方法。

実施形態５２．免疫応答の生成が、対象中のＲＳＶの複製を阻害または低減する、実施形態５０または５１に記載の方法。

実施形態５３．免疫応答が、細胞媒介応答および／または体液性応答を含み、任意選択で、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体などの１種または複数の中和抗体の産生を含む、実施形態５０～５２のいずれかに記載の方法。

実施形態５４．免疫応答が、ＲＳＶのＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープに対するものであるが、Ｃ末端プロペプチドに対するものではない、実施形態５０～５３のいずれかに記載の方法。

実施形態５５．投与が、１回または複数回のＲＳＶへの事前暴露に起因する対象における抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）をもたらさない、実施形態５０～５４のいずれかに記載の方法。

実施形態５６．投与が、引き続いて行われる１回または複数回のＲＳＶへの暴露時に、対象における抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）をもたらさない、実施形態５０～５５のいずれかに記載の方法。

実施形態５７．プライミングステップおよび／または追加免疫ステップをさらに含む、実施形態５０～５６のいずれかに記載の方法。

実施形態５８．投与ステップが、局所、経皮、皮下、皮内、経口、鼻腔内（例えば、鼻腔内噴霧）、気管内、舌下、頬側、直腸、腟、吸入、静脈内（例えば、静脈内注射）、動脈内、筋肉内（例えば、筋肉注射）、心臓内、骨内、腹腔内、経粘膜送達、硝子体内、網膜下、関節腔内、関節周囲、局部、または皮膚上投与を介して実施される、実施形態５０～５７のいずれかに記載の方法。

実施形態５９．有効量が、単一用量または１つまたは複数の間隔により分離された一連の用量で投与される、実施形態５０～５８のいずれかに記載の方法。

実施形態６０．有効量が、アジュバントなしで投与される、実施形態５０～５９のいずれかに記載の方法。

実施形態６１．有効量が、アジュバントと共に投与される、実施形態５０～５９のいずれかに記載の方法。

実施形態６２．実施形態１～３３のいずれか１つに記載の有効量のタンパク質を対象に投与し、対象中でＲＳＶに対する中和抗体または中和抗血清を生成することを含む、方法。

実施形態６３．対象が哺乳動物、任意選択で、ヒトまたは非ヒト霊長類である、実施形態６２に記載の方法。

実施形態６４．中和抗体または中和抗血清を対象から単離することをさらに含む、実施形態６２または６３に記載の方法。

実施形態６５．有効量の単離中和抗体または中和抗血清を受動免疫を経由してヒト対象に投与して、ＲＳＶによる感染を防止または治療することをさらに含む、実施形態６４に記載の方法。

実施形態６６．ＲＳＶに対する中和抗体または中和抗血清が、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに対するポリクローナル抗体を含み、任意選択で、中和抗体または中和抗血清が、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに対する抗体を不含であるか、または実質的に不含である、実施形態６２～６５のいずれかに記載の方法。

実施形態６７．中和抗体が、ＲＳＶＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに対するモノクローナル抗体を含み、任意選択で、中和抗体は、コラーゲンのＣ末端プロペプチドに対する抗体を不含であるか、または実質的に不含である、実施形態６２～６５のいずれかに記載の方法。

実施形態６８．本明細書で提供される対象のＲＳＶに対する免疫応答の誘発に、および／またはＲＳＶによる感染症の治療または予防に使用するための、実施形態１～４７および４９のいずれか１つに記載のタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチン。

実施形態６９．対象のＲＳＶに対する免疫応答の誘発のための、および／またはＲＳＶによる感染症の治療または予防のための、実施形態１～４７および４９のいずれか１つに記載のタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンの使用。

実施形態７０．対象のＲＳＶに対する免疫応答の誘発のための、および／またはＲＳＶによる感染症の治療または予防のための薬物または予防薬の製造のための、実施形態１～４７および４９のいずれか１つに記載のタンパク質、免疫原、タンパク質ナノ粒子、ＶＬＰ、単離核酸、ベクター、ウィルス、偽ウィルス、細胞、免疫原性組成物、またはワクチンの使用。

実施形態７１．試料を、実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質と接触させること、およびそのタンパク質と、ＲＳＶのＦタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープに特異的結合できる分析物との間の結合を検出すること、を含む試料の分析方法。

実施形態７２．分析物が、Ｆタンパク質ペプチドまたはそのフラグメントまたはエピトープを認識する抗体、受容体、または細胞である、実施形態７１に記載の方法。

実施形態７３．結合が、試料中の分析物の存在、および／または試料が由来する対象のＲＳＶ感染を示す、実施形態７１または７２に記載の方法。

実施形態７４．実施形態１～３３のいずれかに記載のタンパク質、およびタンパク質を含むか、または固定化する基材、パッドまたはバイアルを含み、任意選択で、ＥＬＩＳＡまたはラテラルフローアッセイキットである、キット。

下記実施例は、例示的目的のみのために収載するものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

実施例１：ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む組換えポリペプチドの生成
ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを候補ワクチンとして含む分泌型の組換えポリペプチドを生成した。

ＲＳＶＦ糖タンパク質構築物をＲＳＶＡ２株（受入番号ＡＡＣ５５９７０）から得た。Ｆタンパク質ペプチドの残基１～５２０をコードする配列をコドン最適化し、合成して、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｇｌＩＩ部位で、α１コラーゲンのヒトＣ－プロペプチドをコードした哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。図１Ａは、例示的組換えポリペプチドの略図を示す。

組換えプラスミドをＧＨ－ＣＨＯ（ｄｆｈｒ－）細胞に遺伝子導入し、ヒポキサンチンチミン（ＨＴ）なしで選択し（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、無血清培養下での融合タンパク質の高い力価発現のために、ＣＤ００７－４ＴＭ１培地（ＪｉａｎｓｈｕｎＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、漸増濃度のＭＴＸ（Ｓｉｇｍａ）で段階的に遺伝子増幅した。例示的組換えポリペプチドは最初に、塩勾配溶出を用いてＥｎｄｏ１８０に対する親和性結合を介して精製し、スーパーデックス２００ゲル濾過カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）でさらに精製した。ＲＳＶＦペプチドを含む例示的組換えポリペプチドの純度は、製造業者の説明書（ＳｅｐａｘＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）により測定した。

ジスルフィド結合連結融合ペプチド（例えば、三量体）の製品力価は、無血清流加培養法で、最大約０．１５ｇ／Ｌであることが明らかになった（図１Ｂ）。三量体化組換えポリペプチドを含む培養上清は、最初に、Ｆｃ標識コラーゲン受容体ｕＰＡＲＡＰ／Ｅｎｄｏ１８０（マンノース受容体ファミリーのメンバー）への親和性結合を介して精製した（Ｔｈｏｍａｓｅｔａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０，２２５９６－２２６０５））。これは、プロテインＡクロマトグラフィーカラムにより予備捕捉し、続けて、ゲル濾過クロマトグラフィーを行った。ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析は、例示的組換えポリペプチド三量体の純度が約９５％であることを示した（図１Ｃ）。

精製された例示的三量体化組換えポリペプチド（０．１μｇ）を非還元または還元条件下で８％ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離し、ＰＶＤＦ膜に転写した。ＰＢＳ中の５％無脂肪乳でブロック後、膜をマウス抗ＲＳＶＦモノクローナル抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）またはパリビズマブ（ＡｂｂＶｉｅ）およびＩ型プロコラーゲン（ＣＩＣＰ）ポリクローナル抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）のウサギ抗Ｃ－プロペプチドと共に、インキュベートした。２μｇの精製された例示的組換えポリペプチド三量体をクーマシーブルー染色に供した。図２Ａは、融合体ペプチドが共有結合連結三量体タンパク質として発現されることを示す。

この精製組換えポリペプチドの構造的特徴および健全性をＦおよび三量体化ペプチドに特異的な抗体を用いて、ウェスタンブロット分析によりさらに確認した（図２Ａ）。

精製組換えポリペプチド三量体をネガティブ染色電子顕微鏡観察により分析した。精製組換えポリペプチドを５０ｕｇ／ｍＬに希釈し、１２ｍＡで２０秒間グロー放電させた炭素コート４００ＣＵメッシュグリッドに５秒間適用した。グリッドを１％（ｗ／ｖ）のギ酸ウラニルで２０秒間、ネガティブ染色した。試料を、１２０ＫｅＶで稼働するＦＥＩＴｅｃｎａｉｓｐｉｒｉｔ電子顕微鏡により収集し、顕微鏡写真を１８０，０００ｘ倍率で取得した。図２Ｂは、タンパク質中で凝集した組換えポリペプチド三量体を示し、マクロ構造は、主にロゼット様オリゴマーの形態であり、これは、完全長Ｆタンパク質で行われた観察に類似する（Ｃａｌｄｅｒｅｔａｌ．，（２０００）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２７１，１２２－１３１；Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．，（２０１２）ＰｌｏＳＯｎｅ７，ｅ５０８５２）。ロゼット中の分子は、松葉杖形状ロッドであり、中心から離れるように突出するそれらのより広がった端部を有し、これは、報告されたＦの融合後立体構造と一致した（Ｓｗａｎｓｏｎｅｔａｌ．，（２０１１）Ｐｒｏｔ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０８，９６１９－９６２４）。

モノクローナル抗体パリビズマブの例示的組換えポリペプチド三量体への親和性結合を、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を用いてｆｏｒｔｅｂｉｏＯＣＴＥＴＱＫｅｓｙｓｔｅｍ（Ｐａｌｌ）により測定した。５μｇ／ｍＬのパリビズマブをプロテインＡセンサーに直接固定した後、ＰＢＳ中でバランスさせ、２倍希釈の融合ペプチドを含むウェル中に置いた（２０μｇ／ｍＬで開始）。ＰＢＳ中に浸漬することにより解離を実施し、１：１結合モデルに対するＤａｔａＡｎａｌｙｚｅソフトウェアを用いて、緩衝液基準を差し引くことにより、データを処理した。

パリビズマブの精製された例示的組換えポリペプチドの結合親和性は、１ピコモルより小さいＫ_Ｄを示し（図２Ｃ）、抗原部位ＩＩが例示的融合ペプチド上に露出されていることを示す。

実施例２：ＲＳＶＦタンパク質ペプチドを含む組換えポリペプチドの機能キャラクタリゼーション
実施例１に記載のように精製された例示的組換えポリペプチドの免疫原性および保護の有効性を評価するために、ランダムに群化したＢＡＬＢ／ｃマウスを、１日目および２１日目に、ミョウバン吸収（Ｉｍｊｅｃｔａｌｕｍａｄｊｕｖａｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｃ））の有無の場合の例示的融合ペプチドの３種の投与量（１、６および３０μｇ）の内の１種で、筋肉内注射により２回免疫化した。ＰＢＳで免疫化した追加の群を対照として用いた。血清を４９日目に採取した後、鼻腔内（ｉ．ｎ．）に、１ｘ１０^６ｐｆｕＲＳＶＡ２株を投与した（図３Ａ）。動物を毎日観察し、５４日目に肺組織採取のために安楽死させた。

血清を酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で評価した。手短に説明すると、９６ウェルプレートを２μｇ／ｍＬの精製例示的融合ペプチド（ＰＢＳ中の）を用いて４℃で一晩コートし、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡでブロックした。プレートをＰＢＳＴで洗浄し、その後、血清の系列２倍希釈（１：６４から１：２６２，１４４）と共に室温で２時間インキュベートした。結合抗体をＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）により室温で１時間検出した。酵素反応をＴＭＢ（Ｔｈｅｒｍｏ）で発色させて、２ＭのＨＣｌの添加によって停止させ、４５０ｎｍでの吸光度を記録した。ＰＢＳ免疫マウスの血清を同じ希釈での陰性対照として使用し、抗体価を、２．０のＲＳＶＦ三量体のＯＤと、ＰＢＳのＯＤとの比率を生じる血清希釈として定義した。

血清分析により、例示的組換えポリペプチドで免疫された全ての群が高レベルのＲＳＶＦタンパク質ペプチド特異的抗体を有し、投与量およびアジュバント依存性を示すことが明らかになった（図３Ｂ）。抗Ｆ抗体の中和活性は、マイクロ中和試験アッセイにより測定された。

ＲＳＶマイクロ中和試験アッセイは、ＨｅＬａ細胞およびＲＳＶＡ２株を用いて実施された。血清を５６℃で３０分間加熱不活化し、９６ウェル培養プレート（５０μＬ／ウェル）中の無血清ＤＭＥＭ中で系列希釈した。等体積のウィルス（無血清ＤＭＥＭ中で調製された１，０００ｐｆｕ／ｍＬ）をプレートに添加し、血清／ウィルス混合物を３７℃で１時間インキュベートした。１００μＬの１０％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ中の約５ｘ１０^４個のＨｅＬａ細胞をプレート中に加え、陽性対照（ウィルスのみ）ウェルが、１００％ＣＰＥを示すまで、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳＴで洗浄し、ＰＢＳ中８０％の予冷却アセトンで１０分間固定した。１００ｎｇ／ｍＬのパリビズマブをウェルに加え、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡにより１時間ブロッキング後、室温で２時間インキュベートした３回洗浄後、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を加えて酵素反応を発色させ、４５０ｎｍのＯＤを記録した。ＣＰＥ形成の５０％阻害を生じる希釈を中和抗体価として特定した。

マイクロ中和試験アッセイは、例示的組換えポリペプチド誘導抗Ｆ抗体は、効力の高いＲＳＶ中和活性を有し、ミョウバンアジュバントの同時注入は、同じ投与量の例示的組換えポリペプチドより高い中和抗体価を誘発することを示した。これらの結果は、抗Ｆ抗体の結果と一致した（図３Ｃ）。

例示的組換えポリペプチドの保護有効性を、ウィルス投与後５日目の肺中のウィルス複製の測定により評価した。マウスを鼻腔内のＲＳＶ投与の５日後に屠殺し、採取した左肺を秤量し、１ｍＬの無血清ＤＭＥＭ中でホモジナイズした。ホモジネートを１，０００ｘｇ、４℃で１０分間の遠心分離により清澄化し、前述の方法に従ってプラークアッセイにより肺試料中のウィルスの力価を測定した。

結果は、例示的組換えポリペプチド免疫されたマウスが、ＲＳＶ複製から完全に保護され、ウィルスが検出できなかったが、一方、ＰＢＳ免疫された対照群は、高レベルのウィルス量を呈することを示した（図３Ｄ）。

抗原部位ＩＩは、例示的組換えポリペプチド上に露出されているので（実施例１および図２Ｃ参照）、パリビズマブ競合的ＥＬＩＳＡを実施して、例示的組換えポリペプチドにより誘発された抗体がこの部位に対するものであるかどうかを判定した。

５ｘ１０^６ｐｆｕ／ｍＬの加熱不活性化ＲＳＶ（５０ｍＭ炭酸塩－重炭酸塩緩衝液、ｐＨ９．２中のＨＩ－ＲＳＶ）でコートした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを用いて、パリビズマブ競合ＥＬＩＳＡを実施し、４℃で一晩インキュベートした。非コート表面を１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡでブロッキングした。１００ｎｇ／ｍＬのパリビズマブを含む２倍希釈（１：３２から１：４，０９６）の血清混合物をウェルに加え、室温で２時間インキュベートした。結合パリビズマブをＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）およびＴＭＢ基質を用いて検出した。免疫されたマウスの血清を含むウェルは、非競合陽性対照とし、阻害のパーセントを（（ＰＢＳのＯＤ－ＲＳＶＦ三量体のＯＤ）／ＰＢＳのＯＤ）ｘ１００％として計算した。競合的結合力価を、５０％阻害を生じる希釈として表した。

加熱不活性化したＲＳＶ（ＨＩ－ＲＳＶ）粒子へのパリビズマブ結合の阻害を、ミョウバンアジュバントの有無の場合のＲＳＶＦ三量体で免疫したマウスから採取した全ての血清試料で観察した（図３Ｅ）。これらの結果は、例示的融合ペプチド免疫化により誘発された中和抗体は、少なくともウィルスの標的化抗原部位ＩＩを介して投与されたマウスの肺中のＲＳＶ複製を効果的に防止し得ることを示した。

ＦＩ－ＲＳＶワクチン接種は、意外にも、疾患重症度を高めた（Ｋｉｍｅｔａｌ．，（１９６９）Ａｍ．Ｊ，Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．８９，４２２－４３４；Ｃｈｉｎｅｔａｌ．，（１９６９）Ａｍ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．８９，４４９－４６３）ので、安全性モニタリングは、ＲＳＶ候補ワクチン開発で最優先事項である（Ｍｕｒａｔａ，Ｙ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．２９，７２５－７３９）。抗原投与の５日後に免疫されたマウスから得た肺組織の組織学的検査を実施して、例示的組換えポリペプチドの安全性を評価した。

病理組織学的評価のために、採取した肺組織を１０％の中性緩衝ホルマリン中で固定し、パラフィン包埋し、５μｍの切片を作製し、Ｈ＆Ｅで染色した。Ｎｉｋｏｎ顕微鏡下で、２００ｘ倍率で写真を取得した。

Ｈ＆Ｅ染色により、ＰＢＳ免疫された対照群はある程度の肺胞炎、細気管支周囲炎および血管周囲炎を示し、顕著な炎症細胞浸潤が付随して起こることが明らかになった（図４）。対照的に、ミョウバンアジュバントの有り無しにかかわらず、例示的組換えポリペプチド免疫された動物のいずれの投与量でも、限定的な免疫細胞浸潤が起こり、明らかな病理学的変化が生じなかった（図４）。この結果は、ＲＳＶ感染症後のワクチン関連疾患増強現象から保護するための、例示的組換えポリペプチド免疫化を指示する。

本発明は、特定の開示実施形態に対する範囲に限定する意図はなく、これらは、例えば、本発明の種々の対象を例示するために提供されている。記載された組成物および方法に対する種々の変形は、本明細書の記述および教示から明らかになろう。このような変形は、本開示の真の範囲および趣旨から解離することなく実施し得、これらは、本開示の範囲内に入ることが意図されている。

Claims

哺乳動物における呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）による感染症を予防する方法であって、哺乳動物を、ジスルフィド結合連結三量体融合タンパク質を形成するために、コラーゲンのＣ末端部分へのインフレーム融合により結合された可溶性ＲＳＶウィルス表面抗原を含む組換えサブユニットワクチンの有効量で免疫化することを含む、方法。
前記ＲＳＶが、サブタイプＡまたはサブタイプＢである、請求項１に記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、Ｆタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１または２に記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、Ｆ１ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１～３のいずれかに記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、Ｆ２ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１～４のいずれかに記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、Ｆ１ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープ、およびＦ２ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１～５のいずれかに記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、変異体Ｆタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１～６のいずれかに記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、変異体Ｆ１ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
前記ＲＳＶウィルス表面抗原が、変異体Ｆ２ペプチドまたはそのフラグメントもしくはエピトープを含む、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号１で示される配列を含む、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号３で示される配列を含む、請求項１～１０のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号５で示される配列を含む、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号７で示される配列を含む、請求項１～１２のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号９で示される配列を含む、請求項１～１３のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号１１で示される配列を含む、請求項１～１４のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号１３で示される配列を含む、請求項１～１５のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号１５で示される配列を含む、請求項１～１６のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号３７で示される配列を含む、請求項１～１７のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号４０で示される配列を含む、請求項１～１８のいずれかに記載の方法。
前記融合タンパク質が、配列番号４８～６３のいずれかで示される第２の配列に結合された配列番号１７～４７のいずれかで示される第１の配列を含み、前記第１の配列のＣ末端が直接または間接的に前記第２の配列のＮ末端に結合される、請求項１～１９のいずれかに記載の方法。
前記組換えサブユニットワクチンが、筋肉注射を介して投与される、請求項１～２０のいずれかに記載の方法。
前記組換えサブユニットワクチンが、鼻内噴霧を介して投与される、請求項１～２１のいずれかに記載の方法。
前記組換えサブユニットワクチンが、数週間または数ヶ月間の間隔により分離された単一用量または一連の用量で投与される、請求項１～２２のいずれかに記載の方法。
前記組換えサブユニットワクチンが、アジュバントなしで投与される、請求項１～２３のいずれかに記載の方法。
前記組換えサブユニットワクチンが、アジュバントと共に投与される、請求項１～２３のいずれかに記載の方法。
前記組換えサブユニットワクチンが、２種以上のアジュバントと共に投与される、請求項１～２３のいずれかに記載の方法。
哺乳動物の血清由来の呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）に対する抗体を検出する方法であって、ジスルフィド結合連結三量体融合タンパク質を形成するために、前記血清を、コラーゲンのＣ末端部分へのインフレーム融合により結合された可溶性ＲＳＶ表面抗原と接触させるステップを含む、方法。
前記可溶性ＲＳＶ表面抗原がＦタンパク質またはペプチドである、請求項２７に記載の方法。
呼吸器多核体ウィルス（ＲＳＶ）由来の可溶性表面抗原を含み、ジスルフィド結合連結三量体融合タンパク質を形成するために、コラーゲンのＣ末端部分へのインフレーム融合により結合される、組換えサブユニットワクチンを使用する方法であって、哺乳動物を免疫化し、生成された中和抗体を精製すること、および前記ＲＳＶに感染した患者を、前記中和抗体を使用する受動免疫を介して治療すること、を含む、方法。
前記中和抗体がポリクローナル抗体を含む、請求項２９に記載の方法。
前記中和抗体がモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の方法。
前記中和抗体が、Ｆタンパク質またはペプチドに対してモノクローナル抗体である、請求項２９に記載の方法。
前記中和抗体が、Ｆ１ペプチドに対して、モノクローナル抗体である、請求項２９に記載の方法。
前記中和抗体が、Ｆ２ペプチドに対して、モノクローナル抗体である、請求項２９に記載の方法。