JP2023522788A - 標的化されたゲノム組込みによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを矯正するためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ９療法 - Google Patents

標的化されたゲノム組込みによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを矯正するためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ９療法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023522788A
JP2023522788A JP2022565596A JP2022565596A JP2023522788A JP 2023522788 A JP2023522788 A JP 2023522788A JP 2022565596 A JP2022565596 A JP 2022565596A JP 2022565596 A JP2022565596 A JP 2022565596A JP 2023522788 A JP2023522788 A JP 2023522788A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
exon
sequence
seq
grna
dystrophin gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022565596A
Other languages
English (en)
Inventor
チャールズ エイ ガーズバック
オリヴァー エイドリアン ピッカー
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Duke University
Original Assignee
Duke University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Duke University filed Critical Duke University
Publication of JP2023522788A publication Critical patent/JP2023522788A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4707—Muscular dystrophy
    • C07K14/4708—Duchenne dystrophy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/40—Systems of functionally co-operating vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Abstract

ジストロフィン機能を復元することによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを処置するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集組成物及び方法が、本明細書において開示される。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系は、突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含むドナー配列とを含み得る。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月２７日に出願された米国仮特許出願第６３／０１６，２８２号及び２０２１年３月１２日に出願された米国仮特許出願第６３／１６０，５５１号の優先権を主張し、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けた研究に関する記述
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより授与された付与番号Ｒ０１ＡＲ０６９０８５のもとに、政府の支援によりなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
本開示は、ジストロフィン機能を復元することによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを処置するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集組成物及び方法を対象とする。
序説
デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）は、およそ５０００人の新生児男児に１人に発生するもっとも一般的な致死性の遺伝性小児疾患である。２０代中頃での患者の死亡をもたらす進行性筋力低下は、ジストロフィン遺伝子における突然変異の結果である。ほとんどの症例（約６０％）では、突然変異は、ジストロフィン遺伝子の７９個のエクソンのうちの１つ又は複数における欠失からなり、リーディングフレームの破壊をもたらす。これまでの治療戦略は、典型的には、ＤＭＤと比べて症状が軽度であるベッカー型筋ジストロフィーに対応する遺伝子型を再現する、短縮されているが部分的に機能性のジストロフィンタンパク質の発現をもたらすことを目指したものである。例えば、いくつかのグループは、培養ヒトＤＭＤ細胞及びＤＭＤのｍｄｘマウスモデルにおいて、特定のエクソンを欠失させることによってジストロフィンリーディングフレームを復元するための遺伝子編集に、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術を採用している。しかしながら、完璧な完全機能性ジストロフィンタンパク質を復元するための遺伝子編集戦略を開発する必要性が残っている。
ある態様において、本開示は、組成物をコードする１つ又は複数のベクターを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、組成物が、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）であって、突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、ｇＲＮＡと、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列であって、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、ドナー配列とを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系に関する。
さらなる態様において、本開示は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）であって、突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、ｇＲＮＡと、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列であって、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、ドナー配列とを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系に関する。
本開示の別の態様は、組成物をコードする１つ又は複数のベクターを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系を提供する。組成物は、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列とを含み得る。
本開示の別の態様は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系を提供する。この系は、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列とを含み得る。
いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、配列番号１２８又は配列番号１５６のポリヌクレオチド配列内の標的配列にハイブリダイズする。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、配列番号５３のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントは、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接している。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５１とエクソン５２との間にあるイントロンを標的とする。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物の複数のエクソンを含む。
いくつかの実施形態において、ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物のエクソン５２、エクソン５３、エクソン５４、エクソン５５、エクソン５６、エクソン５７、エクソン５８、エクソン５９、エクソン６０、エクソン６１、エクソン６２、エクソン６３、エクソン６４、エクソン６５、エクソン６６、エクソン６７、エクソン６８、エクソン６９、エクソン７０、エクソン７１、エクソン７２、エクソン７３、エクソン７４、エクソン７５、エクソン７６、エクソン７７、エクソン７８、及びエクソン７９から選択される１つ又は複数のエクソンを含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物のエクソン５２～７９を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物のエクソン４５～７９を含む。いくつかの実施形態において、突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５２は、突然変異しているか、若しくはジストロフィン遺伝子から少なくとも部分的に欠失しているか、又は突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５２は、欠失しており、イントロンが、対応する野生型ジストロフィン遺伝子において欠失したエクソン５２が存在するであろう場所に並置されている。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、（ａ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、（ｂ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列のフラグメント、（ｃ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列若しくはそのフラグメントの相補体、（ｄ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列若しくはその相補体に実質的に同一である、核酸、又は（ｅ）ストリンジェントな条件下において、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、その相補体、若しくはそれらに実質的に同一である配列にハイブリダイズする、核酸を含む、ポリヌクレオチド配列に結合し、それを標的とする。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択されるポリヌクレオチド配列、又はそのバリアントに結合し、それを標的とするか、又はそれによってコードされる。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡスペーサーは、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列を含む。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、配列番号６４～８６、８８、１７１～１８４から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、配列番号３５、４０、及び４４から選択されるポリヌクレオチド配列に結合するか若しくはそれによってコードされるか、又はｇＲＮＡは、配列番号７０、７５、及び７９から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、配列番号５３～５６、１５４、及び１５５から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、配列番号５５のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、配列番号５６のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｃａｓタンパク質は、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus pyogenes）Ｃａｓ９タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）Ｃａｓ９タンパク質である。いくつかの実施形態において、Ｃａｓタンパク質は、配列番号１８又は配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、又はＡＡＶｒｈ．７４ベクターである。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のベクターのうちの１つは、配列番号５７～６０及び１２９～１３０から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡとドナー配列との間のモル比は、１：１、又は１：５、又は５：１～１：１０、又は１：１～１：５である。
本開示の別の態様は、ドナー配列をコードする組換えポリヌクレオチドであって、ドナー配列が、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接している、組換えポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、ジストロフィン遺伝子のエクソン５２、エクソン５３、エクソン５４、エクソン５５、エクソン５６、エクソン５７、エクソン５８、エクソン５９、エクソン６０、エクソン６１、エクソン６２、エクソン６３、エクソン６４、エクソン６５、エクソン６６、エクソン６７、エクソン６８、エクソン６９、エクソン７０、エクソン７１、エクソン７２、エクソン７３、エクソン７４、エクソン７５、エクソン７６、エクソン７７、エクソン７８、及びエクソン７９から選択される１つ又は複数のエクソンを含む。いくつかの実施形態において、ジストロフィン遺伝子は、ヒトジストロフィン遺伝子である。
いくつかの実施形態において、系は、配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、ヒトジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９を含むポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、配列番号５５又は配列番号５６のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、組換えポリヌクレオチドは、配列番号５７～６０から選択される配列を含む。
本開示の別の態様は、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。
本開示の別の態様は、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド又は本明細書において詳述されるベクターを含む、細胞を提供する。
本開示の別の態様は、突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞において、ジストロフィン機能を復元するための組成物であって、本明細書において詳述される系、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド、又は本明細書において詳述されるベクターを含む、組成物を提供する。
本開示の別の態様は、本明細書において詳述される系、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド、又は本明細書において詳述されるベクター、又は本明細書において詳述される組成物を含む、キットを提供する。
本開示の別の態様は、突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するための方法を提供する。本方法は、細胞又は対象を、本明細書において詳述される系、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド、又は本明細書において詳述されるベクター、又は本明細書において詳述される組成物と接触させるステップを含み得る。いくつかの実施形態において、本方法は、配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす。
本開示の別の態様は、１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンによって引き起こされる破壊されたジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元する方法を提供する。本方法は、細胞又は対象を、本明細書において詳述される系、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド、又は本明細書において詳述されるベクター、又は本明細書において詳述される組成物と接触させるステップを含み得る。いくつかの実施形態において、本方法は、配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす。いくつかの実施形態において、ジストロフィン機能は、１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンに対応するジストロフィン遺伝子の１つ又は複数の野生型エクソンを挿入することによって、復元される。いくつかの実施形態において、対象は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーに罹患している。
本開示の別の態様は、ジストロフィン遺伝子を矯正するためのゲノム編集系を提供する。系は、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９又はエクソン４５～７９を含む、ドナー配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ゲノム編集系は、ホーミングエンドヌクレアーゼ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、及びＣａｓタンパク質から選択されるヌクレアーゼをさらに含む。
本開示は、以下の詳細な説明及び添付の図面を踏まえて明らかとなるであろう他の態様及び実施形態を提供する。
図１は、ジストロフィンタンパク質の概略図である。 図２は、ジストロフィンタンパク質をコードするエクソン及び細胞における様々な相互作用の概略図である。 図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃ、図３Ｄ、図３Ｅは、ＨＩＴＩに媒介されるエクソン５２の挿入が、ヒト化ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ初代筋線維において、全長ジストロフィンを復元することを示す。（図３Ａ）ＨＩＴＩベースのエクソン５２の組込み及びｈＤＭＤΔ５２突然変異の矯正のための二重ＡＡＶベクターアプローチの概略図である。オレンジ色の五角形は、Ｃａｓ９／ｇＲＮＡ標的配列である。オレンジ色の三角形は、ＰＡＭを有するＣａｓ９切断部位である。（図３Ｂ）初代筋芽細胞を、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ骨格筋から単離し、１：１及び１：５（Ｃａｓ９：ｇＲＮＡ－ドナー）のベクターゲノム比でＡＡＶ２ベクターを共形質導入し、筋線維に分化させた。（図３Ｃ）ゲノムＰＣＲによる正しい遺伝子ノックインの検証である。（図３Ｄ）ｃＤＮＡ ＰＣＲによる、正しいドナーｍＲＮＡスプライシングの検証である。（図３Ｅ）ジストロフィン及びＣａｓ９のウエスタンブロットは、全長ジストロフィン発現の復元を示す。 図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ、図４Ｄ、図４Ｅ、図４Ｆ、図４Ｇ、図４Ｈ、図４Ｉ、図４Ｊは、ＡＡＶ－ＣＲＩＳＰＲによって標的化されるエクソン５２の組込みが、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス骨格筋において、全長ジストロフィンを復元することを示す。（図４Ａ）成体ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ雄性マウスに、１：１及び１：５（Ｃａｓ９：ｇＲＮＡ－ドナー）のベクターゲノム比でＡＡＶ９ベクターをＴＡ筋に共注射した。（図４Ｂ）ＴＡ組織における二倍体ゲノム当たりのＡＡＶウイルスゲノム（ｖｇ／ｄｇ）の定量化に、対応する処置群間で有意差はなかった。（図４Ｃ）ゲノムＰＣＲによる、ＴＡ組織における正しい遺伝子ノックインの検証である。黒色の三角形は、検出されたインタクトなＡＡＶ－ドナー組込みである。（図４Ｄ）標的化ＤＮＡ切断によりもたらされた、可能性のあるオンターゲットゲノム編集の概略図である。（図４Ｅ）ＴＡ組織における様々なオンターゲットゲノム編集の不偏的なＴｎ５タグメンテーションベースのシーケンシング分析である。（図４Ｆ）ＴＡ組織における全オンターゲットゲノム編集の不偏的なＴｎ５タグメンテーションベースのシーケンシング定量化である。（図４Ｇ）ｃＤＮＡ ＰＣＲによる、ＴＡ組織における正しいドナーｍＲＮＡスプライシングの検証である。（図４Ｈ）ｄｄＰＣＲによって定量化したｇ７－Ｅｘ５２処置マウスのＴＡ組織における高いレベルの矯正されたジストロフィン転写産物である。（図４Ｉ）ジストロフィン及びＣａｓ９発現に関するウエスタンブロットは、ジストロフィン発現の復元を示す。（図４Ｊ）ジストロフィン免疫蛍光染色は、ｇ７－Ｅｘ５２処置マウスにおいて、より高いパーセンテージのジストロフィン陽性線維を示す（スケールバー、２００μｍ、それぞれの点は、マウス１匹当たり５つの画像の平均を表す）。一元配置ＡＮＯＶＡに続き、テューキーの事後多重比較検定（＊＊Ｐ＜０．０１及び＊Ｐ＜０．０５、平均±標準誤差；ｎ＝４匹のマウス）。 図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃ、図５Ｄ、図５Ｅ、図５Ｆは、ＨＩＴＩに媒介されるスーパーエクソンの挿入が、ヒト化ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ初代筋線維において、全長ジストロフィンを復元することを示す。（図５Ａ）ＨＩＴＩベースのスーパーエクソンの組込み及びｈＤＭＤΔ５２突然変異の矯正のための二重ＡＡＶベクターアプローチの概略図である。五角形（黒色の星付き）は、Ｃａｓ９／ｇＲＮＡ標的配列である。三角形は、ＰＡＭを有するＣａｓ９切断部位である。黒色の六角形は、終止コドンである。（図５Ｂ）初代筋芽細胞を、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ骨格筋から単離し、１：１及び１：５（Ｃａｓ９：ｇＲＮＡ－ドナー）のベクターゲノム比でＡＡＶ２ベクターを共形質導入し、筋線維に分化させた。（図５Ｃ）ゲノムＰＣＲによる正しい遺伝子ノックインの検証である。（図５Ｄ）ｃＤＮＡ ＰＣＲによる、正しいドナーｍＲＮＡスプライシングの検証である。（図５Ｅ）３ｘ終止のためのゲノム特異的プライマー（ＧＳＰ）を用いた３’ ＲＡＣＥを使用したスーパーエクソンにより矯正されるポリＡ尾部の特徴付けである。（図５Ｆ）ジストロフィン及びＣａｓ９のウエスタンブロットは、Ｅｘ５２及びスーパーエクソンで処置したサンプルについて、ジストロフィン発現の復元を示す。 図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｅ、図６Ｆは、ＡＡＶ－ＣＲＩＳＰＲによって標的化されるスーパーエクソンの組込みが、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス骨格筋において、全長ジストロフィンを復元することを示す。（図６Ａ）成体ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ雄性マウスに、１：１及び１：５（Ｃａｓ９：ｇＲＮＡ－ドナー）のベクターゲノム比でＡＡＶ９ベクターをＴＡ筋に共注射した。（図６Ｂ）ＴＡ組織における二倍体ゲノム当たりのＡＡＶベクターゲノム（ｖｇ／ｄｇ）の定量化に、対応する処置群間で有意差はなかった。（図６Ｃ）ＴＡ組織における様々なオンターゲットゲノム編集の不偏的なＴｎ５タグメンテーションベースのシーケンシング分析である。（図６Ｄ）ｄｄＰＣＲによる、ＴＡ組織における矯正されたジストロフィン転写産物の定量化である。（図６Ｅ）ジストロフィン及びＣａｓ９に関するウエスタンブロットは、ジストロフィン発現の復元を示す。（図６Ｆ）ジストロフィン免疫蛍光染色は、ｇ７－Ｅｘ５２処置マウスにおいて、スクランブル非標的化ドナー対照マウスと比較して、ジストロフィン陽性線維のパーセンテージの有意な増加を示す（スケールバー、２００μｍ、それぞれの点は、マウス１匹当たり５つの画像の平均を表す）。一元配置ＡＮＯＶＡに続き、テューキーの事後多重比較検定（＊＊Ｐ＜０．０１及び＊Ｐ＜０．０５、平均±標準誤差；ｎ＝６匹のマウス）。 図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ、図７Ｅ、図７Ｆ、図７Ｇ、図７Ｈは、ＡＡＶ－ＣＲＩＳＰＲによって標的化される全身送達の組込み戦略が、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス心筋において、全長ジストロフィンを復元することを示す。（図７Ａ）Ｐ２新生児ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ雄性マウスにおける１：１及び１：５（Ｃａｓ９：ｇＲＮＡ－ドナー）のベクターゲノム比でのＡＡＶ９ベクターの全身的な顔面静脈共注射である。（図７Ｂ）心臓（cardiac）（心臓（heart））又は骨格（横隔膜及びＴＡ）組織における二倍体ゲノム当たりのＡＡＶベクターゲノム（ｖｇ／ｄｇ）の定量化に、対応する処置群間で有意差はなかった。（図７Ｃ）様々なオンターゲットゲノム編集の不偏的なＴｎ５タグメンテーションベースのシーケンシング分析は、心臓組織においてバックグラウンドを上回るレベルで矯正された組込みを示す。（図７Ｄ）ｄｄＰＣＲによって定量化した処置マウスの心臓組織における高いレベルの矯正されたジストロフィン転写産物である。（図７Ｅ）様々なオンターゲット心臓ｃＤＮＡの不偏的なＴｎ５タグメンテーションベースのシーケンシング分析は、異常なスプライシングを含む多様な転写産物結果を示す。（図７Ｆ）ジストロフィン及びＣａｓ９に関するウエスタンブロットは、心臓組織におけるジストロフィン発現の復元を示す。（図７Ｇ）心臓組織におけるジストロフィン免疫蛍光染色は、すべての処置マウスにおいて、ジストロフィン陽性線維の検出を示し、ｇ７－スーパーエクソン（１：１）処置マウスにおいて、スクランブル非標的化ドナー対照マウスと比較して、ジストロフィン陽性線維のパーセンテージの有意な増加があった（スケールバー、２００μｍ、それぞれの点は、マウス１匹当たり５つの画像の平均を表す）。（図７Ｈ）血清クレアチンキナーゼレベルは、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ処置マウスにおいて、罹患ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘスクランブル非標的化ドナー対照マウスと比較して、減少を示す。一元配置ＡＮＯＶＡに続き、テューキーの事後多重比較検定（＊＊Ｐ＜０．０１及び＊Ｐ＜０．０５、平均±標準誤差；ｎ＝６匹のマウス）。 図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄは、ｇＲＮＡスクリーニング及びＨＩＴＩに媒介される組込みの検証を示す。（図８Ａ）２１ｎｔのスペーサーを有して設計された、エクソン５２の上流のイントロン５１内を標的とするＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡの概略図である。（図８Ｂ）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＳａＣａｓ９プラスミドとコトランスフェクトした個々のｇＲＮＡによるインデルの形成を、Ｓｕｒｖｅｙｏｒアッセイによって測定し、それが、ｇ３、ｇ６、及びｇ７でもっとも高い編集活性を示した。（図８Ｃ）ＤＭＤ患者の筋芽細胞におけるＳａＣａｓ９プラスミドとコトランスフェクトした、１９～２３ｎｔのスペーサーを有するクローニングされた個々のｇＲＮＡによるインデルの形成を、Ｓｕｒｖｅｙｏｒアッセイによって測定した。（図８Ｄ）ＳａＣａｓ９及びｇＲＮＡ ＡＡＶプラスミドを用いたｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ初代筋芽細胞のエレクトロポレーションは、ＰＣＲ及びサンガーシーケンシングによる遺伝子ノックインの検出をもたらした。 図９Ａ、図９Ｂは、処置したｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ ＴＡ組織の不偏的なゲノムＤＮＡ編集の特徴付けを示す。（図９Ａ）それぞれのｇＲＮＡ標的部位の上流をプライミングするゲノム特異的プライマー（ＧＳＰ）を使用した、１つのＰＢＳ対照及びすべての処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られたＴＡ組織におけるｇＤＮＡ編集事象の全編集定量化の積み上げ表示である。（図９Ｂ）１つのＰＢＳ対照及びすべての処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られたＴＡ組織における、矯正、インデル、逆位組込み、及びＡＡＶ組込みのｇＤＮＡ編集事象の編集定量化である。 図１０は、ｇ７ ｇＲＮＡの全ゲノム特異性分析を示す。可能性のある上位のヒトオフターゲット部位の特定を、ｇ７での全ゲノムインビトロゲノムＤＮＡ消化及びＣＨＡＮＧＥ－ｓｅｑ分析によって測定した。標的部位に一致するヌクレオチドが、点で示されている。標的とは異なるヌクレオチドが、それぞれの部位について示されている。観察されたオンターゲット及びオフターゲット配列のリードカウント、ｇＲＮＡ配列（スペーサー及びＰＡＭ）、並びにヒトゲノム（ｈｇ１９）座標が、提供されている。 図１１Ａ、図１１Ｂは、処置したｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ ＴＡ組織の不偏的なゲノムＤＮＡ編集の特徴付けを示す。（図１１Ａ）処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られたＴＡ組織におけるｇＤＮＡ編集事象の全編集定量化の積み上げ表示である。（図１１Ｂ）すべての処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られたＴＡ組織における、矯正、インデル、逆位組込み、及びＡＡＶ組込みのｇＤＮＡ編集事象の編集定量化である。 図１２Ａ、図１２Ｂは、全身注射後の処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスの不偏的なゲノムＤＮＡ編集の特徴付けを示す。（図１２Ａ）処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られた心臓、横隔膜、及びＴＡ組織におけるｇＤＮＡ編集事象の全編集定量化の積み上げ表示である。（図１２Ｂ）すべての処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られた心臓、横隔膜、及びＴＡ組織における、矯正、インデル、逆位組込み、及びＡＡＶ組込みのｇＤＮＡ編集事象の組合せの編集定量化である。 図１３Ａ、図１３Ｂは、処置したｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ心臓組織の不偏的な転写産物編集の特徴付けを示す。（図１３Ａ）１つの非標的化ドナー対照及びすべての処置ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスから得られた心臓組織における転写産物編集事象の定量化である。（図１３Ｂ）ＡＡＶ－ＳａＣａｓ９コンストラクト配列でのオンターゲットの異常なスプライシングを示し、アライメントされたＣａｓ９コーディング配列を含む対応する心臓ゲノムリードで確認された、高頻度のＳａＣａｓ９を含む転写産物リードの概略図である。 図１４は、心臓組織における全長ジストロフィン復元に関するネスト型定量化及び代表的な免疫蛍光染色を示す。すべてのジストロフィン陽性線維定量化については、５つのランダム化された画像を、それぞれのマウスサンプルについて取得し、ヒトジストロフィン陽性線維及び総線維（抗ラミニン）を、計数した。心臓組織の代表的な画像が、それぞれの処置マウスについて提供されている。ネスト型定量値は、統計学的分析のために使用した（スケールバー、２００μｍ、それぞれの点は、マウス１匹当たりの単一の定量化の平均を表す）。一元配置ＡＮＯＶＡに続いてテューキーの事後多重比較検定（＊Ｐ＜０．０５、平均±標準誤差；ｎ＝６匹のマウス）。
ジストロフィン機能を復元することによってデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）を処置するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子／ゲノム編集組成物及び方法が、本明細書に記載される。ＤＭＤは、典型的には、リーディングフレームを破壊するジストロフィン遺伝子における欠失によって引き起こされる。ＤＭＤを処置するための多くの戦略は、追加のエクソンを除去するか又はそれをスキップすることによって、リーディングフレームを復元することを目的としているが、これは、内部が短縮されたジストロフィンタンパク質が依然として部分的に機能性となり得ることが示されているためである。ジストロフィン遺伝子を矯正するためのＡＡＶベースの相同性非依存性標的化組込み（ＨＩＴＩ）に媒介される遺伝子編集療法が、本明細書において詳述される。具体的には、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集技術を、ジストロフィン遺伝子への失われているエクソンの標的化挿入を誘導するように適応させた。治療的に関連する標的として、ＨＩＴＩに媒介されるゲノム編集戦略を、全長ヒトジストロフィン遺伝子を有するマウスのエクソン５２が除去されているＤＭＤのヒト化マウスモデル（ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス）において、最適化した。標的化組込みを達成するために、エクソン５２、又はいくつかの場合にはエクソン５２～７９、又はいくつかの場合にはエクソン４５～７９を含む欠失したゲノム配列を含むＡＡＶベクターを、骨格筋及び心筋における全長ジストロフィンの復元を達成するために、Ｃａｓ９／ｇＲＮＡ発現カセットをコードするＡＡＶベクターと共送達する。ＡＡＶ送達系を使用して、Ｃａｓ９及びｇＲＮＡを発現させて、標的化ゲノムＤＳＢを生成し、切断部位におけるＮＨＥＪに媒介される組込みのドナー鋳型を送達する。培養細胞におけるエクソンの標的化組込みを、確認する。ＡＡＶ送達と組み合わせて、失われているエクソンの標的化挿入のためのＨＩＴＩに媒介される戦略は、全長ジストロフィンを復元し、機能的結果を改善するための方法を提供する。
１．定義
別途定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。矛盾が生じた場合には、定義を含め、本文書が優先される。好ましい方法及び材料が、以下に記載されているが、本明細書に記載されるものに類似するか又はそれと同等の方法及び材料を、本発明の実施又は試験において使用することができる。本明細書において記載されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、及び実施例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。
本明細書において使用される「含む（comprise）」、「含む（include）」、「有する（having）」）、「有する（has）」、「できる（can）」、「含む（contain）」、及びこれらの変化形は、追加の動作又は構造の可能性を排除しない、拡張可能な移行句、用語、又は言葉であることが意図される。単数形の「１つの（a）」、「及び（and）」、及び「その（the）」は、文脈により別途明確に示されない限り、複数形の参照物を含む。本開示は、明示的に記載されているかどうかにかかわらず、本明細書に提示される実施形態又は要素「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」他の実施形態も企図する。
本明細書における数値範囲の記述について、その間のそれぞれの介在する数値が、同じ精度で明示的に企図される。例えば、６～９の範囲については、６及び９に加えて、７及び８という数が企図され、６．０～７．０の範囲については、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０という数が、明示的に企図される。
目的の１つ又は複数の値に適用される、本明細書において使用される「約」又は「およそ」という用語は、言及された参照値に類似であるか、又は当業者によって判定される特定の値に対する許容可能な誤差の範囲内である値を意味し、これは、部分的に、その値が、どのように測定又は判定されるか、すなわち、測定システムの制限に依存するであろう。ある特定の態様において、「約」という用語は、別途示されない限り又は文脈から明らかでない限り、言及された参照値のいずれかの方向での（より大きいか又は小さい）２０％以内、１９％以内、１８％以内、１７％以内、１６％以内、１５％以内、１４％以内、１３％以内、１２％以内、１１％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、又はそれ以下に入る値の範囲を指す（ただし、かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。或いは、「約」は、当該技術分野における慣例に従い、３又は３を上回る標準偏差以内を意味し得る。或いは、生物学的系又はプロセスに関するものなど、「約」という用語は、ある値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。
本明細書において互換可能に使用される「アデノ随伴ウイルス」又は「ＡＡＶ」は、ヒト及びいくつかの他の霊長類種に感染する、パルボウイルス（Parvoviridae）科ディペンドウイルス（Dependovirus）属に属する小型のウイルスを指す。ＡＡＶは、現時点では疾患を引き起こすことは知られておらず、結果として、このウイルスは、非常に軽度な免疫応答を引き起こす。
本明細書において使用される「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び非天然の合成アミノ酸、並びに天然に存在するアミノ酸に類似の様式で機能するアミノ酸アナログ及びアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるものである。「アミノ酸」は、本明細書において、一般的に知られている三文字記号又はＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている一文字記号のいずれかで参照され得る。アミノ酸は、側鎖及びポリペプチド骨格部分を含む。
本明細書において使用される「結合領域」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系によって認識及び結合される、標的領域内の領域を指す。
本明細書において互換可能に使用される「クラスター化され規則的に間隔が空いた短い回文構造の反復配列」及び「ＣＲＩＳＰＲ」は、シーケンシングされた細菌のおよそ４０％及びシーケンシングされた古細菌の９０％のゲノムにおいて見出される、複数の短い直接反復配列を含む遺伝子座を指す。
本明細書において使用される「コーディング配列」又は「核酸をコードする」とは、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸（ＲＮＡ又はＤＮＡ分子）を意味する。コーディング配列は、核酸が投与される個体又は哺乳動物の細胞において発現を誘導することができる、プロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された開始及び終結シグナルをさらに含む。コーディング配列は、コドン最適化されていてもよい。
本明細書において使用される「相補体」又は「相補的」とは、核酸が、核酸分子のヌクレオチド間又はヌクレオチドアナログ間においてワトソンクリック（例えば、Ａ－Ｔ／Ｕ及びＣ－Ｇ）又はフーグスティーン塩基対合し得ることを意味する。「相補性」は、２つの核酸配列を互いに逆平行にアライメントした場合に、それぞれの位置におけるヌクレオチド塩基が相補的となるような、２つの核酸配列間で共有される特性を指す。
「対照」、「参照レベル」、及び「参照物」という用語は、本明細書において互換可能に使用される。参照レベルは、測定された結果を評価するためのベンチマークとして利用される、所定の値又は範囲であり得る。本明細書において使用される「対照群」は、対照対象の群を指す。所定のレベルは、対照群から得られたカットオフ値であってもよい。所定のレベルは、対照群から得られた平均であってもよい。カットオフ値（又は所定のカットオフ値）は、Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｉｎｄｅｘ Ｍｏｄｅｌ（ＡＩＭ）手法によって判定することができる。カットオフ値（又は所定のカットオフ値）は、患者群の生物学的サンプルから受信者動作曲線（ＲＯＣ）分析によって判定してもよい。ＲＯＣ分析は、生物学の分野において一般に知られているように、例えば、ＣＲＣを有する患者を特定する際のそれぞれのマーカーの性能を判定するための、１つの状態を別のものと区別する試験の能力の判定である。ＲＯＣ分析の説明は、P.J. Heagerty et al. (Biometrics 2000, 56, 337-44）に提供されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。或いは、カットオフ値は、患者群の生物学的サンプルの四分位分析によって判定してもよい。例えば、カットオフ値は、２５～７５パーセンタイルの範囲にある任意の値に対応する値、好ましくは、２５パーセンタイル、５０パーセンタイル、又は７５パーセンタイルに対応する値、より好ましくは、７５パーセンタイルに対応する値を選択することによって、判定され得る。そのような統計学的分析は、当該技術分野において公知の任意の方法を使用して行うことができ、任意の数の市販入手可能なソフトウェアパッケージ（例えば、Ａｎａｌｙｓｅ－ｉｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｌｔｄ．、Ｌｅｅｄｓ、ＵＫ；ＳｔａｔａＣｏｒｐ ＬＰ、Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｓｔａｔｉｏｎ、ＴＸ；ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ、ＮＣ．からのもの）を通じて実装することができる。標的又はタンパク質活性の健常又は正常なレベル又は範囲は、標準的な慣例に従って定義され得る。対照は、本明細書において詳述される組成物を用いていない対象又は細胞であり得る。対照は、疾患状態が判明している対象又はそれから得られるサンプルであり得る。対象又はそれから得られるサンプルは、健常体、罹患体、処置前の罹患体、処置中の罹患体、若しくは処置後の罹患体、又はこれらの組合せであり得る。
本明細書において使用される「矯正すること」、「遺伝子編集」、及び「復元すること」とは、全長機能性又は部分的全長機能性タンパク質の発現が得られるように、機能不全のタンパク質若しくは短縮型タンパク質をコードするか、又はタンパク質をまったくコードしない、突然変異体遺伝子を変化させることを指す。突然変異体遺伝子を矯正又は復元することには、突然変異を有する遺伝子の領域を置き換えること、又は修復機序、例えば、相同組換え修復（ＨＤＲ）を用いて、突然変異体遺伝子全体を突然変異を有さない遺伝子のコピーと置き換えることが含まれ得る。突然変異体遺伝子を矯正又は復元することには、未成熟終止コドン、異常なスプライスアクセプター部位又は異常なスプライスドナー部位を引き起こすフレームシフト突然変異を、遺伝子において二本鎖切断を生成した後にそれを非相同末端結合（ＮＨＥＪ）を使用して修復することによって、修復することもまた、含まれ得る。ＮＨＥＪは、修復中に少なくとも１つの塩基対を付加し得るか、又は欠失させ得、それによって、適切なリーディングフレームを復元し、未成熟終止コドンを排除し得る。突然変異体遺伝子を矯正するか又は復元することには、異常なスプライスアクセプター部位又はスプライスドナー配列を破壊することも含まれ得る。突然変異体遺伝子を矯正又は復元することには、２つのヌクレアーゼ標的部位間のＤＮＡを除去し、ＮＨＥＪによってＤＮＡ切断を修復することによって、適切なリーディングフレームを復元するために、同じＤＮＡ鎖に対する２つのヌクレアーゼの同時作用によって、非必須遺伝子セグメントを欠失させることも含まれ得る。
本明細書において互換可能に使用される「ドナーＤＮＡ」、「ドナー鋳型」、及び「修復鋳型」は、目的の遺伝子の少なくとも一部分を含む、二本鎖ＤＮＡフラグメント又は分子を指す。ドナーＤＮＡは、完全機能性タンパク質又は部分的機能性タンパク質をコードし得る。
本明細書において互換可能に使用される「デュシェンヌ型筋ジストロフィー」又は「ＤＭＤ」は、筋変性及び最終的な死をもたらす、劣性遺伝の致死性Ｘ連鎖障害を指す。ＤＭＤは、一般的な一遺伝子遺伝性の疾患であり、３５００人の男性に１人に生じる。ＤＭＤは、ジストロフィン遺伝子におけるナンセンス突然変異又はフレームシフト突然変異を引き起こす遺伝性又は自然発生性の突然変異の結果である。ＤＭＤを引き起こすジストロフィン突然変異の大半は、エクソンの欠失であり、それによってリーディングフレームが破壊され、ジストロフィン遺伝子における未成熟翻訳終結が引き起こされる。ＤＭＤ患者は、典型的には、小児期に自身を物理的に支える能力を失い、１０代の間に進行的に衰弱し、２０代で死亡する。
本明細書において記載される「ジストロフィン」は、細胞膜を通じて筋線維の細胞骨格を周囲の細胞外マトリックスに接続するタンパク質複合体の一部である、円錐形の細胞質タンパク質を指す。ジストロフィンは、筋細胞の完全性及び機能の調節を担う細胞膜のジストログリカン複合体に構造安定性を提供する。本明細書において互換可能に使用されるジストロフィン遺伝子又は「ＤＭＤ遺伝子」は、Ｘｐ２１遺伝子座の２．２メガ塩基である。一次転写は、約２，４００ｋｂであり、成熟ｍＲＮＡは、約１４ｋｂである。７９個のエクソンが、３５００個を上回るアミノ酸のタンパク質をコードする。
本明細書において使用される「エンハンサー」は、複数の活性化因子及びリプレッサー結合部位を含む、非コーディングＤＮＡ配列を指す。エンハンサーは、長さが２００ｂｐ～１ｋｂの範囲に及び、プロモーターに対して５’上流若しくは調節される遺伝子の第１のイントロン内である近位側、又は隣接する遺伝子のイントロン若しくは遺伝子座から離れた遺伝子間領域内である遠位側のいずれかにあり得る。ＤＮＡルーピングを通じて、活性なエンハンサーは、コアＤＮＡ結合モチーフプロモーター特異性に応じて、プロモーターと接触する。４～５個のエンハンサーが、プロモーターと相互作用し得る。同様に、エンハンサーは、連結の制限を伴うことなく１つを上回る遺伝子を調節し得、隣接する遺伝子を「スキップ」して、より遠位にあるものを調節してもよい。転写調節は、プロモーターが存在するものとは異なる染色体に位置するエレメントが関係し得る。隣接する遺伝子の近位のエンハンサー又はプロモーターは、より遠位にあるエレメントを導入するためのプラットフォームとしての機能を果たし得る。
本明細書において互換可能に使用される「フレームシフト」又は「フレームシフト突然変異」は、１つ又は複数のヌクレオチドの付加又は欠失が、ｍＲＮＡにおけるコドンのリーディングフレームのシフトを引き起こす、１つのタイプの遺伝子突然変異を指す。リーディングフレームのシフトは、タンパク質翻訳時のアミノ酸配列の変更、例えば、ミスセンス突然変異又は未成熟終止コドンをもたらし得る。
本明細書において使用される「機能性」及び「完全機能性」は、生物学的活性を有するタンパク質について説明する。「機能性遺伝子」、はｍＲＮＡに転写され、機能性タンパク質へと翻訳される、遺伝子を指す。
本明細書において使用される「融合タンパク質」は、もともとは別個のタンパク質をコードしていた２つ又はそれ以上の遺伝子の結合を通じて作製される、キメラタンパク質を指す。融合遺伝子の翻訳は、もともとのタンパク質のそれぞれに由来する機能的特性を有する単一のポリペプチドをもたらす。
本明細書において互換可能に使用される「相同組換え修復」又は「ＨＤＲ」は、多くは細胞周期のＧ２及びＳ期において、相同ＤＮＡ片が核内に存在する場合に二本鎖ＤＮＡ病変部を修復するための細胞における機序を指す。ＨＤＲは、ドナーＤＮＡ鋳型を使用して、修復をガイドし、全遺伝子の標的化付加を含む、ゲノムに特定の配列変化を作出するために使用することができる。ドナー鋳型が、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系とともに提供される場合、細胞内機序は、相同組換えによって切断を修復し、これが、ＤＮＡ切断の存在下では数桁増強される。相同ＤＮＡ片が不在である場合、非相同末端結合が、代わりに起こり得る。
本明細書において使用される「遺伝子コンストラクト」は、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ又はＲＮＡ分子を指す。コーディング配列は、核酸分子が投与される個体の細胞において発現を誘導することができるプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された開始及び終結シグナルを含む。本明細書において使用される場合、「発現可能な形態」という用語は、個体の細胞に存在する場合に、コーディング配列が発現されるように、タンパク質をコードするコーディング配列に作動可能に連結された必要な調節エレメントを含む、遺伝子コンストラクトを指す。
本明細書において使用される「ゲノム編集」又は「遺伝子編集」は、遺伝子を変化させることを指す。ゲノム編集には、突然変異体遺伝子を矯正若しくは復元すること、又は追加の突然変異を付加することが含まれ得る。ゲノム編集には、遺伝子、例えば、突然変異体遺伝子又は正常な遺伝子をノックアウトすることが含まれ得る。ゲノム編集は、目的の遺伝子を変化させることによって、疾患を処置するか、又は例えば筋修復を増強させるために使用され得る。いくつかの実施形態において、本明細書において詳述される組成物及び方法は、生殖細胞系列の細胞ではなく、体細胞において使用するためのものである。
本明細書において使用される「異種」という用語は、核酸が、自然界において互いに同じ関係性で見出されることがない２つ又はそれ以上の部分配列を含むことを指す。例えば、組換えで産生される核酸は、典型的に、新しい機能性核酸を作製するように合成で配置される無関係の遺伝子に由来する２つ又はそれ以上の配列、例えば、１つの供給源に由来するプロモーター及び別の供給源に由来するコーディング領域を有する。２つの核酸は、したがって、この状況において、互いに異種である。細胞に添加される場合、組換え核酸はまた、細胞の内在性遺伝子に対して異種である。したがって、染色体において、異種核酸は、染色体に組み込まれている非天然の（天然に存在しない）核酸、又は非天然の（天然に存在しない）染色体外核酸を含むであろう。同様に、異種タンパク質は、タンパク質が、自然界において互いに同じ関係では見出されない２つ又はそれ以上の部分配列を含むことを示す（例えば、２つの部分配列が、単一の核酸配列によってコードされる場合の「融合タンパク質」）。
２つ又はそれ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の文脈で本明細書において使用される「同一」又は「同一性」は、配列が、指定された領域にわたって同じである、指定されたパーセンテージの残基を有することを意味する。パーセンテージは、２つの配列を最適にアライメントし、２つの配列を指定された領域にわたって比較し、両方の配列において同一の残基が生じる位置の数を判定して、一致する位置の数を得、一致する位置の数を指定された領域内の位置の総数で除算し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって、計算され得る。２つの配列が、異なる長さのものであるか、又はアライメントにより１つ若しくは複数の不揃いな末端が生じ、指定される比較の領域が単一の配列のみを含む場合、単一の配列の残基は、計算の分子ではなく分母として含まれる。ＤＮＡ及びＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）は、同等であると考えることができる。同一性は、手作業で行ってもよく、又はコンピュータ配列アルゴリズム、例えば、ＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴ ２．０を使用して行ってもよい。
本明細書において互換可能に使用される「突然変異体遺伝子」又は「突然変異した遺伝子」は、検出可能な突然変異を受けている遺伝子を指す。突然変異体遺伝子は、変化、例えば、遺伝子材料の喪失、獲得、又は交換を受けており、この変化は、遺伝子の正常な伝達及び発現に影響を及ぼす。本明細書において使用される「破壊された遺伝子」は、未成熟終止コドンを引き起こす突然変異を有する突然変異体遺伝子を指す。破壊された遺伝子産物は、全長の破壊されていない遺伝子産物と比べて、短縮されている。
本明細書において使用される「非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路」は、相同性鋳型を必要とすることなく、切断末端を直接的にライゲーションすることによって、ＤＮＡにおける二本鎖切断を修復する経路を指す。ＮＨＥＪによるＤＮＡ末端の鋳型非依存性再ライゲーションは、ＤＮＡ切断点においてランダムなマイクロ挿入及びマイクロ欠失（インデル）を導入する、確率的なエラーが生じやすい修復プロセスである。この方法は、標的とされる遺伝子配列のリーディングフレームを意図的に破壊、欠失、又は変更するために使用され得る。ＮＨＥＪは、典型的に、修復をガイドするために、マイクロホモロジーと称される短い相同ＤＮＡ配列を使用する。これらのマイクロホモロジーは、二本鎖切断の末端上の一本鎖オーバーハングに存在することが多い。オーバーハングが、完全に適合性である場合、ＮＨＥＪは、通常、切断を正確に修復するとはいえ、ヌクレオチドの喪失につながる不正確な修復もまた発生し得るが、これは、オーバーハングが適合性でない場合にはより一般的である。
本明細書において使用される「正常な遺伝子」は、変化、例えば、遺伝子材料の喪失、獲得、又は交換を受けていない遺伝子を指す。正常な遺伝子は、正常な遺伝子伝達及び遺伝子発現を受ける。例えば、正常な遺伝子は、野生型遺伝子であり得る。
本明細書において使用される「核酸」又は「オリゴヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド」は、少なくとも２つのヌクレオチドが共有結合的に一緒に連結されていることを意味する。一本鎖の記述はまた、相補鎖の配列を定義する。したがって、ポリヌクレオチドはまた、示される一本鎖の相補鎖も包含する。ポリヌクレオチドの多数のバリアントが、所与のポリヌクレオチドと同じ目的に使用され得る。したがって、ポリヌクレオチドは、実質的に同一なポリヌクレオチド及びその相補体を包含する。一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下において標的配列にハイブリダイズすることができるプローブを提供する。したがって、ポリヌクレオチドはまた、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下においてハイブリダイズするプローブも包含する。ポリヌクレオチドは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、又は二本鎖及び一本鎖の両方の配列の部分を含んでもよい。ポリヌクレオチドは、核酸、天然若しくは合成、ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、又はハイブリッドであり得、ここで、ポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドの組合せ、並びに例えばウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシン、及びイソグアニンを含む塩基の組合せを含み得る。ポリヌクレオチドは、化学合成方法によって、又は組換え方法によって、得ることができる。
「オープンリーディングフレーム」は、開始コドンで始まり、終止コドンで終わる、コドンのストレッチを指す。複数のエクソンを有する真核生物遺伝子において、イントロンが除去され、エクソンが、次いで、転写後一緒に結合されて、タンパク質翻訳のための最終的なｍＲＮＡが得られる。オープンリーディングフレームは、コドンの連続的なストレッチであり得る。いくつかの実施形態において、オープンリーディングフレームは、タンパク質の発現については、スプライシングされたｍＲＮＡにのみ適用され、ゲノムＤＮＡには適用されない。
本明細書において使用される「作動可能に連結された」とは、遺伝子の発現が、それが空間的に接続されているプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下にある遺伝子の５’（上流）又は３’（下流）に配置され得る。プロモーターと遺伝子との間の距離は、プロモーターが由来する遺伝子における、プロモーターとそれが制御する遺伝子との間の距離とおよそ同じであり得る。当該技術分野において公知のように、この距離の変動は、プロモーター機能の喪失を伴うことなく、適応され得る。核酸又はアミノ酸配列は、互いに機能的関係性におかれている場合に、「作動可能に連結されている」（又は「動作可能に連結されている」）。例えば、プロモーター又はエンハンサーは、それが、コーディング配列の転写を調節するか、転写のモジュレーションに寄与する場合、コーディング配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、典型的には、連続しており、作動可能に連結されたアミノ酸配列は、典型的に、連続しており、同じリーディングフレーム内にある。しかしながら、エンハンサーは、一般に、プロモーターとは最大で数キロベース以上離れて機能し、イントロン配列は可変の長さのものであり得るため、一部のポリヌクレオチドエレメントは、作動可能に連結されているが、連続的でない場合がある。同様に、一次ポリペプチド配列において非連続的であるある特定のアミノ酸配列は、いずれにせよ、例えば、ポリペプチド鎖のフォールディングに起因して、作動可能に連結され得る。融合ポリペプチドに関して、「動作可能に連結された」及び「作動可能に連結された」という用語は、構成要素のそれぞれが、他の構成要素と連結した状態で、そのように連結されていない場合に行うであろう機能と同じ機能を行うという事実を指し得る。
本明細書において使用される「部分的に機能性」とは、突然変異体遺伝子によってコードされるタンパク質が、機能性タンパク質よりも低いが、非機能性タンパク質よりも高い生物学的活性を有することを説明する。
「ペプチド」又は「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって連結された２つ又はそれ以上のアミノ酸の連結された配列である。ポリペプチドは、天然、合成、又は天然及び合成の改変形態若しくは組合せであり得る。ペプチド及びポリペプチドは、タンパク質、例えば、結合性タンパク質、受容体、及び抗体を含む。「ポリペプチド」、「タンパク質」、及び「ペプチド」という用語は、本明細書において互換可能に使用される。「一次構造」は、特定のペプチドのアミノ酸配列を指す。「二次構造」は、ポリペプチド内の局所的に整列した三次元構造を指す。これらの構造は、ドメイン、例えば、酵素ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、細孔ドメイン、及び細胞質尾部ドメインとして広く知られている。「ドメイン」は、ポリペプチドの小型ユニットを形成するポリペプチドの部分であり、典型的には、１５～３５０個のアミノ酸の長さである。例示的なドメインとしては、酵素活性又はリガンド結合活性を有するドメインが挙げられる。典型的なドメインは、より小さな構成の区画、例えば、ベータシート及びアルファヘリックスのストレッチから構成される。「三次構造」は、ポリペプチドモノマーの完全な三次元構造を指す。「四次構造」は、独立した三次ユニットの非共有結合的会合によって形成される、三次元構造を指す。「モチーフ」は、ポリペプチド配列の一部分であり、少なくとも２つのアミノ酸を含む。モチーフは、２～２０個、２～１５個、又は２～１０個のアミノ酸の長さであり得る。いくつかの実施形態において、モチーフは、３個、４個、５個、６個、又は７個の連続したアミノ酸を含む。ドメインは、同じタイプの一連のモチーフから構成されてもよい。
本明細書において互換可能に使用される「未成熟終止コドン」又は「フレーム外終止コドン」は、ＤＮＡの配列におけるナンセンス突然変異を指し、これは、野生型遺伝子においては通常見出されない位置に終止コドンをもたらす。未成熟終止コドンは、タンパク質が、タンパク質の全長バージョンと比較して短縮されるか又は短くなることを引き起こし得る。
本明細書において使用される「プロモーター」は、細胞における核酸の発現を付与、活性化、又は増強させることができる、合成又は天然に由来する分子を意味する。プロモーターは、発現をさらに増強させる、並びに／又はその空間的発現及び／若しくは時間的発現を変更するために、１つ又は複数の特定の転写調節配列を含み得る。プロモーターはまた、転写開始部位から数千塩基対程度離れて配置され得る、遠位エンハンサー又はリプレッサーエレメントも含み得る。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫、及び動物を含む供給源に由来し得る。プロモーターは、遺伝子成分の発現を、構成的に調節してもよく、或いは発現が生じる細胞、組織、若しくは器官に関して、又は発現が生じる発生段階に関して、又は外部刺激、例えば、生理学的ストレス、病原体、金属イオン、若しくは誘導剤に応答して、差次的に調節してもよい。プロモーターの代表的な例としては、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレーター－プロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ－ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶ ＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター若しくはＳＶ４０後期プロモーター、ヒトＵ６（ｈＵ６）プロモーター、並びにＣＭＶ ＩＥプロモーターが挙げられる。筋肉特異的幹細胞を標的とするプロモーターとしては、例えば、ＣＫ８プロモーター、Ｓｐｃ５－１２プロモーター、及びＭＨＣＫ７プロモーターを挙げることができる。
例えば、細胞、核酸、タンパク質、又はベクターを参照して使用される場合の「組換え」という用語は、細胞、核酸、タンパク質、又はベクターが、異種核酸若しくはタンパク質の導入、又は天然の核酸若しくはタンパク質の変更によって改変されていること、或いは、細胞が、そのように改変された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然の（天然に存在する）形態内では見出されない遺伝子を発現するか、又はそれ以外の場合には正常若しくは異常に発現される、発現下にある、若しくはまったく発現されない、天然の遺伝子の第２のコピーを発現する。
本明細書において使用される「サンプル」又は「試験サンプル」は、標的の存在及び／又はレベルを検出若しくは判定しようとする任意のサンプル、又は本明細書において詳述されるＤＮＡ標的化若しくは遺伝子編集系又はその成分を含む任意のサンプルを意味し得る。サンプルとしては、液体、溶液、エマルション、又は懸濁液を挙げることができる。サンプルには、医療サンプルが含まれ得る。サンプルとしては、任意の生物学的流体若しくは組織、例えば、血液、全血、血液画分、例えば、血漿及び血清、筋肉、間質液、汗、唾液、尿、涙液、関節液、骨髄、脳脊髄液、鼻分泌液、喀痰、羊水、気管支肺胞洗浄液、胃洗浄液、嘔吐、糞便、肺組織、末梢血単核細胞、全白血球、リンパ節細胞、脾臓細胞、扁桃細胞、がん細胞、腫瘍細胞、胆汁、消化液、皮膚、又はこれらの組合せを挙げることができる。いくつかの実施形態において、サンプルは、アリコートを含む。他の実施形態において、サンプルは、生物学的流体を含む。サンプルは、当該技術分野において公知の任意の手段によって得ることができる。サンプルは、患者から得られた状態で直接的に使用することができるか、又は本明細書において考察されるか若しくはそれ以外の場合には当該技術分野において公知であるなんらかの様式でサンプルの特徴を改変するように、濾過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、干渉成分の不活性化、試薬の添加などによって、事前処置してもよい。
本明細書において互換可能に使用される「対象」及び「患者」は、本明細書に記載される組成物又は方法を要望するか、又はそれを必要とする哺乳動物が挙げられるがこれに限定されない、任意の脊椎動物を指す。対象は、ヒトであってもよく、又は非ヒトであってもよい。対象は、脊椎動物であり得る。対象は、哺乳動物であり得る。哺乳動物は、霊長類であってもよく、又は非霊長類であってもよい。哺乳動物は、非霊長類、例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ハリネズミ、アリクイ、カモノハシ、ゾウ、アルパカ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、及びマウスであり得る。哺乳動物は、霊長類、例えば、ヒトであり得る。哺乳動物は、非ヒト霊長類、例えば、サル、カニクイザル、アカゲザル、チンパンジー、ゴリラ、オランウータン、及びテナガザルなどであり得る。対象は、任意の年齢又は発達段階、例えば、成体、青年期、又は幼児であり得る。対象は、雄性であり得る。対象は、雌性であり得る。いくつかの実施形態において、対象は、特定の遺伝子マーカーを有する。対象は、他の形態の処置を受けていてもよい。
「実質的に同一」とは、第１及び第２のアミノ酸又はポリヌクレオチド配列が、それぞれ、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、２００個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、９００個、１０００個、１１００個のアミノ酸又はヌクレオチドの領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であることを意味し得る。
本明細書において使用される「標的遺伝子」は、判明しているか又は推定上の遺伝子産物をコードする任意のヌクレオチド配列を指す。標的遺伝子は、遺伝子疾患に関与する突然変異した遺伝子であり得る。標的遺伝子は、矯正することが意図されるか、又はその発現をモジュレートすることが意図される、判明しているか又は推定上の遺伝子産物をコードし得る。ある特定の実施形態において、標的遺伝子は、ジストロフィン遺伝子又はその一部分である。
本明細書において使用される「標的領域」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集又は標的化系が結合するように設計される、標的遺伝子の領域を指す。
本明細書において使用される「導入遺伝子」は、１つの生物から単離されており、別の生物に導入される、遺伝子配列を含む遺伝子又は遺伝子材料を指す。ＤＮＡのこの非天然のセグメントは、トランスジェニック生物においてＲＮＡ若しくはタンパク質を産生させる能力を保持し得るか、又はトランスジェニック生物の遺伝子コードの正常な機能を変更し得る。導入遺伝子の導入は、生物の表現型を変化させる可能性を有する。
「転写調節エレメント」又は「調節エレメント」は、核酸配列の発現を制御することができる、例えば、発現を活性化、増強、若しくは減少させることができるか、又は核酸配列の空間的及び／若しくは時間的発現を変更することができる、遺伝子エレメントを指す。調節エレメントの例としては、例えば、プロモーター、エンハンサー、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、及び終結シグナルが挙げられる。調節エレメントは、それが作動可能に連結される遺伝子に対して、「内在性」、「外来性」、又は「異種」であり得る。「内在性」調節エレメントは、ゲノムにおいて所与の遺伝子と天然に連結されているものである。「外来性」又は「異種」調節エレメントは、所与の遺伝子と通常は連結されていないが、遺伝子操作によって遺伝子との作動可能な連結におかれたものである。
疾患からの対象の保護に言及する場合、「処置」又は「処置すること」又は「処置」は、疾患の進行を抑制すること、鎮静すること、逆転させること、緩和すること、改善すること、若しくは阻害すること、又は疾患を完全に排除することを意味する。処置は、急性又は慢性のいずれの様式で行われてもよい。この用語は、疾患又はそのような疾患と関連する症状の重症度を、疾患の罹患前に低減させることを指す。疾患を予防することは、疾患の発症前に、本発明の組成物を対象に投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の誘導後であるがその臨床的顕在化の前に、本発明の組成物を対象に投与することを含む。疾患を鎮静又は改善することは、疾患の臨床的顕在化の後に、本発明の組成物を対象に投与することを含む。本明細書において使用される場合、「遺伝子療法」という用語は、患者を処置する方法であって、特定の遺伝子活性及び／又は発現がモジュレートされるように、ポリペプチド又は核酸配列を患者の細胞に移入する、方法を指す。ある特定の実施形態において、遺伝子の発現は、抑制される。ある特定の実施形態において、遺伝子の発現は、増強される。ある特定の実施形態において、遺伝子の発現の時間的又は空間的パターンが、モジュレートされる。
ポリヌクレオチドに関して本明細書に置いて使用される「バリアント」は、（ｉ）参照されるヌクレオチド配列の一部分若しくはフラグメント、（ｉｉ）参照されるヌクレオチド配列若しくはその一部分の相補体、（ｉｉｉ）参照される核酸若しくはその相補体に実質的に同一である核酸、又は（ｉｖ）ストリンジェントな条件下において、参照される核酸、その相補体、若しくはそれに実質的に同一である配列とハイブリダイズする、核酸を意味する。
アミノ酸の挿入、欠失、又は保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持する、ペプチド又はポリペプチドに関する「バリアント」。バリアントはまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照されるタンパク質に実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質も意味する。「生物学的活性」の代表的な例としては、特定の抗体若しくはポリペプチドが結合するか、又は免疫応答を促進する、能力が挙げられる。バリアントは、その機能性フラグメントを意味し得る。バリアントは、ポリペプチドの複数のコピーも意味し得る。複数のコピーは、タンデムであってもよく、又はリンカーによって分離されていてもよい。アミノ酸の保存的置換、例えば、アミノ酸を、特性（例えば、親水性、荷電領域の程度及び分布）が類似する異なるアミノ酸と置き換えることは、当該技術分野において、典型的には軽微な変化をもたらすとして認識されている。これらの軽微な変化は、部分的に、当該技術分野において理解されるように、アミノ酸の疎水性親水性インデックス（hydropathic index）を考慮することによって特定され得る（Kyte et al., J. Mol. Biol. 1982, 157, 105-132）。アミノ酸の疎水性親水性インデックスは、その疎水性及び電荷の考察に基づく。類似の疎水性親水性インデックスのアミノ酸は、置換することができ、依然としてタンパク質の機能を保持し得ることが、当該技術分野において公知である。一態様において、±２の疎水性親水性インデックスを有するアミノ酸が、置換される。また、アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらすであろう置換を明らかにするために使用され得る。ペプチドの文脈におけるアミノ酸の親水性の考察は、そのペプチドの最大の局所平均親水性の計算を可能にする。置換は、互いの±２以内の親水性値を有するアミノ酸で行われ得る。アミノ酸の疎水性インデックス及び親水性値のいずれも、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。その観察と一致して、生物学的機能と適合性であるアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、及び他の特性によって明らかなように、アミノ酸、特に、アミノ酸の側鎖の相対的な類似性に依存することが、理解される。
本明細書において使用される「ベクター」は、複製起点を含む核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体、又は酵母人工染色体であり得る。ベクターは、ＤＮＡ又はＲＮＡベクターであり得る。ベクターは、自己複製染色体外ベクターであってもよく、好ましくは、ＤＮＡプラスミドである。例えば、ベクターは、Ｃａｓ９タンパク質及び少なくとも１つのｇＲＮＡ分子をコードし得る。
本明細書において別途定義されない限り、本開示と関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。例えば、本明細書において記載される細胞及び組織の培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子学、並びにタンパク質及び核酸の化学及びハイブリダイゼーションと関連して使用される任意の命名法、並びにそれらの技法は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されているものである。用語の意味及び趣旨は、明確であるべきだが、しかしながら、なんらかの潜在的曖昧さがある場合には、本明細書に提供される定義が、任意の辞書又は外部の定義よりも優先される。さらに、文脈によって別途必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
２．ジストロフィン
ジストロフィンは、円錐形の細胞質タンパク質であり、細胞膜を通じて筋線維の細胞骨格を周囲の細胞外マトリックスに接続するタンパク質複合体の一部である（図１）。ジストロフィンは、細胞膜のジストログリカン複合体に構造安定性を提供する。ジストロフィン遺伝子は、Ｘｐ２１遺伝子座の２．２メガ塩基である。一次転写は、約２，４００ｋｂであり、成熟ｍＲＮＡは、約１４ｋｂである。７９個のエクソンには、およそ２２０万個のヌクレオチドが含まれ、３５００個を上回るアミノ酸のタンパク質をコードする（図２）。ジストロフィン遺伝子の大きなサイズ、並びにその反復的エレメントにより、遺伝子は組換えを受けやすくなっており、１つ又は複数のエクソンの欠失が生じる。正常な骨格筋組織は、わずかな量のジストロフィンしか含まないが、異常な発現のその不在は、重度の治癒不能な症状の発生につながる。ジストロフィン遺伝子におけるいくつかの突然変異は、欠損したジストロフィンの産生、及び罹患した患者では重度のジストロフィー性表現型をもたらす。ジストロフィン遺伝子におけるいくつかの突然変異は、部分的機能性ジストロフィンタンパク質、及び罹患した患者でははるかに軽度なジストロフィー性表現型をもたらす。
ＤＭＤは、ジストロフィン遺伝子におけるナンセンス突然変異又はフレームシフト突然変異を引き起こす遺伝性又は自然発生性の突然変異の結果である。ＤＭＤは、もっとも一般的な致死性の遺伝性小児疾患であり、５，０００人の新生児男児に１人が罹患する。ＤＭＤは、進行性筋衰弱によって特徴付けられ、機能性ジストロフィン遺伝子の欠如に起因して、２０代中頃での対象の死亡をもたらすことが多い。ほとんどの突然変異は、リーディングフレームを破壊するジストロフィン遺伝子における欠失である。天然に存在する突然変異及びそれらの結果は、ＤＭＤに関して比較的よく理解されている。錐体ドメイン（rod domain）内に含まれるエクソン４５～５５領域において生じるインフレーム欠失は、高度に機能性のジストロフィンタンパク質をもたらし得、多くの保因者は、無症状であるか、又は軽度の症状を示す。ジストロフィンのエクソン４５～５５は、突然変異のホットスポットである。さらに、患者の６０％よりも多くが、ジストロフィン遺伝子のこの領域におけるエクソンを標的とすることによって、処置することができる。ＤＭＤ患者において、ｍＲＮＡスプライシング中に非必須エクソンをスキップして（例えば、エクソン４５スキッピング）、内部が欠失しているが機能性のジストロフィンタンパク質を産生させるによって、破壊されたジストロフィンリーディングフレームを復元する試みが、行われている。１つの治療目標は、ＤＭＤと比べて軽度な症状を伴うベッカー型筋ジストロフィー（ＢＭＤ）におけるＤＭＤ遺伝子の産物に類似する、短縮されているが、部分的に機能性のジストロフィンタンパク質の発現をもたらすことであり得る。内部ジストロフィンエクソンの欠失（例えば、エクソン４５の欠失）は、適切なリーディングフレームを保持し得、内部が短縮されているが、部分的に機能性のジストロフィンタンパク質を生成することができる。ジストロフィンのエクソン４５～５５の間の欠失は、ＤＭＤと比較してはるかに軽度である表現型をもたらし得る。
ジストロフィン遺伝子は、突然変異体ジストロフィン遺伝子であり得る。ジストロフィン遺伝子は、野生型ジストロフィン遺伝子であり得る。ジストロフィン遺伝子は、野生型ジストロフィン遺伝子に機能的に同一である配列を有し得、例えば、配列は、コドン最適化されていてもよいが、依然として、野生型ジストロフィンと同じタンパク質をコードする。突然変異体ジストロフィン遺伝子は、野生型ジストロフィン遺伝子と比べて１つ又は複数の突然変異を含み得る。突然変異としては、例えば、ヌクレオチド欠失、置換、付加、転換、又はこれらの組合せが挙げられる。突然変異は、１つ又は複数のエクソン及び／又はイントロンにおけるものであり得る。突然変異は、少なくとも１つのイントロン及び／又はエクソンのすべて又は一部の欠失を含み得る。突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソンは、突然変異されていてもよく、又はジストロフィン遺伝子から少なくとも部分的に欠失していてもよい。突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソンは、完全に欠失していてもよい。突然変異体ジストロフィン遺伝子は、野生型ジストロフィン遺伝子における対応する配列に対応する一部分又はそのフラグメントを有し得る。いくつかの実施形態において、欠失又は突然変異したエクソンによって引き起こされる破壊されたジストロフィン遺伝子は、対応する野生型エクソンを再度付加することによって、ＤＭＤ患者において復元することができる。いくつかの実施形態において、例えば、欠失又は突然変異したエクソン５２にとって引き起こされる破壊されたジストロフィンは、野生型エクソン５２を再度付加することによって、ＤＭＤ患者において復元することができる。ある特定の実施形態において、ジストロフィン遺伝子のエクソン５２は、ジストロフィン遺伝子の５２番目のエクソンを指す。エクソン５２は、ＤＭＤ患者において、フレームを破壊する欠失に隣接していることが多い。エクソン５２を付加してリーディングフレームを復元することにより、欠失突然変異を有するＤＭＤ対象を含め、ＤＭＤ対象において表現型が改善され得る。ある特定の実施形態において、１つ又は複数のエクソンが、破壊されたジストロフィン遺伝子に付加及び挿入され得る。ジストロフィンにおける対応する突然変異又は欠失したエクソンを復元するために、１つ又は複数のエクソンが、付加及び挿入され得る。１つ又は複数のエクソンは、エクソン５２を再度付加及び挿入することに加えて、破壊されたジストロフィン遺伝子に付加及び挿入され得る。いくつかの実施形態において、破壊されたジストロフィン遺伝子に付加及び挿入される１つ又は複数のエクソンには、エクソン５２～７９が含まれる。いくつかの実施形態において、破壊されたジストロフィン遺伝子に付加及び挿入される１つ又は複数のエクソンには、エクソン４５～７９が含まれる。
３． ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系
本明細書において詳述される組成物及び方法は、２つの標的化ヌクレアーゼが組み合わされてゲノムに欠失を作出する、任意の遺伝子編集系又はツールに好適であり得る。遺伝子編集系としては、例えば、ホーミングエンドヌクレアーゼ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びクラスター化され規則的に間隔が空いた短い回文構造の反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）－ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質（Ｃａｓタンパク質）、例えば、Ｃａｓ９を含むものを挙げることができる。ホーミングエンドヌクレアーゼは、一般に、それらのＤＮＡ基質を二量体として切断し、異なる結合及び切断ドメインを有さない。ＺＦＮは、ＦｏｋＩ切断ドメインによって認識される５塩基対～７塩基対（ｂｐ）のスペーサー配列に隣接する２つの亜鉛フィンガー結合部位からなる標的部位を認識する。ＴＡＬＥＮは、ＦｏｋＩ切断ドメインによって認識される１２～２０ｂｐのスペーサー配列に隣接する２つのＴＡＬＥ ＤＮＡ結合部位からなる標的部位を認識する。いくつかの実施形態において、本明細書において詳述される組成物及び方法は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系とともに使用され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系が、本明細書において提供される。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、ジストロフィン遺伝子機能を復元するために使用され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、Ｃａｓ９タンパク質又は融合タンパク質、及び少なくとも１つのｇＲＮＡを含み得る。
本明細書において互換可能に使用される「クラスター化され規則的に間隔が空いた短い回文構造の反復配列」及び「ＣＲＩＳＰＲ」は、シーケンシングされた細菌のおよそ４０％及びシーケンシングされた古細菌の９０％のゲノムにおいて見出される、複数の短い直接反復配列を含む遺伝子座を指す。ＣＲＩＳＰＲ系は、獲得免疫の一形態を提供する、侵入ファージ及びプラスミドに対する防御に関与する微生物ヌクレアーゼ系である。微生物宿主におけるＣＲＩＳＰＲ遺伝子座は、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）遺伝子の組合せ、並びにＣＲＩＳＰＲに媒介される核酸切断の特異性をプログラムすることができる非コーディングＲＮＡエレメントを含む。スペーサーと称される外来ＤＮＡの短いセグメントが、ＣＲＩＳＰＲ反復配列間のゲノムに組み込まれ、過去の曝露の「メモリー」としての機能を果たす。Ｃａｓ９は、ｓｇＲＮＡ（本明細書において互換可能に「ｇＲＮＡ」と称され得る）の３’末端と複合体を形成し、タンパク質－ＲＮＡ対は、ｓｇＲＮＡ配列の５’末端と、プロトスペーサーとして知られる事前に定義される２０ｂｐのＤＮＡ配列との間の相補的な塩基対合によって、そのゲノム標的を認識する。この複合体は、ｃｒＲＮＡ内のコードされる領域、すなわちプロトスペーサー、及び病原体ゲノム内のプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）を介して病原体ＤＮＡの相同遺伝子座に指向される。非コーディングＣＲＩＳＰＲアレイは、転写され、直接反復配列内で個々のスペーサー配列を含む短いｃｒＲＮＡに切断され、これが、Ｃａｓヌクレアーゼを標的部位へと指向させる（プロトスペーサー）。発現されるｓｇＲＮＡの２０ｂｐの認識配列を単純に交換することによって、Ｃａｓ９ヌクレアーゼを、新しいゲノム標的へと指向させることができる。ＣＲＩＳＰＲスペーサーは、真核生物におけるＲＮＡｉに類似の様式で、外来性遺伝子エレメントを認識し、それをサイレンシングするために使用される。
３つのクラスのＣＲＩＳＰＲ系（Ｉ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型エフェクター系）が、公知である。ＩＩ型エフェクター系は、４つの連続的なステップで、標的化されたＤＮＡ二本鎖切断を実行し、単一のエフェクター酵素Ｃａｓ９を使用して、ｄｓＤＮＡを切断する。複数の異なるエフェクターが複合体として作用することを必要とするＩ型及びＩＩＩ型エフェクター系と比較して、ＩＩ型エフェクター系は、代替的な状況、例えば、真核生物細胞において、機能し得る。ＩＩ型エフェクター系は、スペーサーを含むＣＲＩＳＰＲ遺伝子座から転写される長いプレ－ｃｒＲＮＡ、Ｃａｓ９タンパク質、及びプレ－ｃｒＲＮＡプロセシングに関与するｔｒａｃｒＲＮＡからなる。ｔｒａｃｒＲＮＡは、プレ－ｃｒＲＮＡのスペーサーを分離する反復領域にハイブリダイズし、したがって、内在性ＲＮａｓｅ ＩＩＩによるｄｓＲＮＡ切断を開始させる。この切断に続いて、Ｃａｓ９によってそれぞれのスペーサー内で第２の切断事象が生じ、ｔｒａｃｒＲＮＡ及びＣａｓ９と会合したままの成熟ｃｒＲＮＡが産生され、Ｃａｓ９：ｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体が形成される。
Ｃａｓ９：ｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体は、ＤＮＡ二重鎖をほどき、ｃｒＲＮＡに一致する配列を探して切断する。標的認識は、標的ＤＮＡにおける「プロトスペーサー」配列と、ｃｒＲＮＡにおける残存スペーサー配列との間の相補性の検出により生じる。Ｃａｓ９は、正しいプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）が、プロトスペーサーの３’末端にも存在している場合に、標的ＤＮＡの切断を媒介する。プロトスペーサー標的化のために、配列には、ＤＮＡ切断に必要とされるＣａｓ９ヌクレアーゼによって認識される短い配列であるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）がすぐ後に続いていなければならない。異なるＩＩ型系は、異なるＰＡＭ要件を有する。
Ｓ．ピオゲネスのＩＩ型エフェクター系の操作された形態は、ゲノム操作のためにヒト細胞において機能することが示されている。この系において、Ｃａｓ９タンパク質は、一般に、ＲＮａｓｅ ＩＩＩ及びｃｒＲＮＡプロセシングの必要性を除去するｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡ融合体である、合成で再構成された「ガイドＲＮＡ」（「ｇＲＮＡ」、本明細書においてキメラ一本鎖ガイドＲＮＡ（「ｓｇＲＮＡ」）としても互換可能に使用される）によって、ゲノム標的部位へと指向されていた。遺伝子編集及び遺伝子疾患の処置において使用するためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの操作された系が、本明細書において提供される。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの操作された系は、例えば、遺伝子疾患、加齢、組織再生、又は創傷治癒に関与する遺伝子を含む、任意の遺伝子を標的とするように設計することができる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、Ｃａｓ９タンパク質又はＣａｓ９融合タンパク質を含み得る。
ａ． Ｃａｓ９タンパク質
Ｃａｓ９タンパク質は、核酸を切断し、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座によってコードされ、ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系に関与する、エンドヌクレアーゼである。Ｃａｓ９タンパク質は、ストレプトコッカス・ピオゲネス、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．アウレウス）、アシドボラクス・アバナエ（Acidovorax avenae）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Actinobacillus pleuropneumoniae）、アクチノバチルス・スクシノゲン（Actinobacillus succinogenes）、アクチノバチルス・スイス（Actinobacillus suis）、アクチノマイセス種（Actinomyces sp.）、シクリフィリスデニトリフィカンス（cycliphilus denitrificans）、アミノモナス・パウシボランス（Aminomonas paucivorans）、バチルス・セレウス（Bacillus cereus）、バチルス・スミシイ（Bacillus smithii）、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）、バクテロイデス種（Bacteroides sp.）、ブラストピレルラ・マリナ（Blastopirellula marina）、ブラディリゾビウム種（Bradyrhizobium sp.）、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）、カンピロバクター・コライ（Campylobacter coli）、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）、カンピロバクター・ラリ（Campylobacter lari）、カンジダタス・プニセイスピリルム（Candidatus Puniceispirillum）、クロストリジウム・セルロリティカム（Clostridium cellulolyticum）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium perfringens）、コリネバクテリウム・アコレンス（Corynebacterium accolens）、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphtheria）、コリネバクテリウム・マツルコチイ（Corynebacterium matruchotii）、ジノロゼオバクター・シバエ（Dinoroseobacter shibae）、ユーバクテリウム・ドリカム（Eubacterium dolichum）、ガンマプロテオバクテリウム（gamma proteobacterium）、グルコナセトバクター・ジアゾトロフィカス（Gluconacetobacter diazotrophicus）、ヘモフィルス・パラインフルエンゼ（Haemophilus parainfluenzae）、ヘモフィルス・スプトラム（Haemophilus sputorum）、ヘリコバクター・カナデンシス（Helicobacter canadensis）、ヘリコバクター・シナエジ（Helicobacter cinaedi）、ヘリコバクター・ムステラエ（Helicobacter mustelae）、イリオバクター・ポリトロパス（Ilyobacter polytropus）、キンゲラ・キンゲ（Kingella kingae）、ラクトバチルス・クリスパタス（Lactobacillus crispatus）、リステリア・イバノビイ（Listeria ivanovii）、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）、リステリア科（Listeriaceae）の細菌、メチロシスチス種（Methylocystis sp.）、メチロサイナス・トリコスポリウム（Methylosinus trichosporium）、モビルンカス・ムリエリス（Mobiluncus mulieris）、ナイセリア・バチリフォルミス（Neisseria bacilliformis）、ナイセリア・シネレア（Neisseria cinerea）、ナイセリア・フラベセンス（Neisseria flavescens）、ナイセリア・ラクタマイカ（Neisseria lactamica）、ナイセリア種（Neisseria sp.）、ナイセリア・ワズワーシイ（Neisseria wadsworthii）、ニトロソモナス種（Nitrosomonas sp.）、パルビバクラム・ラバメンチボラス（Parvibaculum lavamentivorans）、パスツレラ・ムルトシダ（Pasteurella multocida）、ファスコラルクトバクテリウム・スクシナツテンス（Phascolarctobacterium succinatutens）、ラルストニア・シジギイ（Ralstonia syzygii）、ロドシュードモナス・パルストリス（Rhodopseudomonas palustris）、ロドブラム種（Rhodovulum sp.）、シモンシエラ・ムエレリ（Simonsiella muelleri）、スフィンゴモナス種（Sphingomonas sp.）、スポロラクトバチルス・ビネエ（Sporolactobacillus vineae）、スタフィロコッカス・ルグデュネシス（Staphylococcus lugdunensis）、ストレプトコッカス種（Streptococcus sp.）、サブドリグラヌルム種（Subdoligranulum sp.）、ティストレラ・モビリス（Tistrella mobilis）、トレポネーマ種（Treponema sp.）、又は、ベルミネフロバクター・エイセニエ（Verminephrobacter eiseniae）を含むがこれらに限定されない、任意の細菌又は古細菌種に由来し得る。ある特定の実施形態において、Ｃａｓ９分子は、ストレプトコッカス・ピオゲネスＣａｓ９分子（本明細書において「ＳｐＣａｓ９」とも称される）である。ＳｐＣａｓ９は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み得る。ある特定の実施形態において、Ｃａｓ９分子は、スタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９分子（本明細書において「ＳａＣａｓ９」とも称される）である。ＳａＣａｓ９は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み得る。
Ｃａｓ９分子又はＣａｓ９融合タンパク質は、１つ又は複数のｇＲＮＡ分子と相互作用し得、ｇＲＮＡ分子とともに、標的ドメイン、及びある特定の実施形態においてはＰＡＭ配列を含む部位に局在化し得る。Ｃａｓ９タンパク質は、ｇＲＮＡの３’末端と複合体を形成する。ＰＡＭ配列を認識するＣａｓ９分子又はＣａｓ９融合タンパク質の能力は、例えば、当該技術分野において公知の形質転換アッセイを使用することによって、判定することができる。
ＣＲＩＳＰベースの系の特異性は、標的配列及びプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）の２つの因子に依存し得る。標的化配列は、ｇＲＮＡの５’末端に位置し、プロトスペーサー又は標的配列として公知の正しいＤＮＡ配列で、宿主ＤＮＡの塩基対と結合するように設計される。ｇＲＮＡの認識配列を単純に交換することによって、Ｃａｓ９タンパク質を、新しいゲノム標的へと指向させることができる。ＰＡＭ配列は、変更しようとするＤＮＡに位置し、Ｃａｓ９タンパク質によって認識される。Ｃａｓ９タンパク質のＰＡＭ認識配列は、種特異的であり得る。
ある特定の実施形態において、標的核酸と相互作用し、それを切断する、Ｃａｓ９分子又はＣａｓ９融合タンパク質の能力は、ＰＡＭ配列依存性である。ＰＡＭ配列は、標的核酸内の配列である。ある特定の実施形態において、標的核酸の切断は、ＰＡＭ配列から上流で生じる。異なる細菌種に由来するＣａｓ９分子は、異なる配列モチーフ（例えば、ＰＡＭ配列）を認識し得る。Ｓ．ピオゲネスのＣａｓ９分子は、ＮＲＧのＰＡＭ配列を認識し得る（５’－ＮＲＧ－３’、Ｒは、任意のヌクレオチド残基であり、いくつかの実施形態において、Ｒは、Ａ又はＧのいずれかである、配列番号１）。ある特定の実施形態において、Ｓ．ピオゲネスのＣａｓ９分子は、天然に、配列モチーフＮＧＧ（配列番号２）を優先し、それを認識し得、その配列から１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的核酸配列の切断を誘導し得る。いくつかの実施形態において、Ｓ．ピオゲネスのＣａｓ９分子は、操作された系における他のＰＡＭ配列、例えば、ＮＡＧ（配列番号３）を許容する（Hsu et al., Nature Biotechnology 2013 doi:10.1038/nbt.2647）。ある特定の実施形態において、Ｓ．サーモフィラス（S. thermophilus）のＣａｓ９分子は、配列モチーフＮＧＧＮＧ（配列番号４）及び／又はＮＮＡＧＡＡＷ（Ｗ＝Ａ若しくはＴ）（配列番号５）を認識し、これらの配列から１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的核酸配列の切断を誘導する。ある特定の実施形態において、Ｓ．ミュータンス（S. mutans）のＣａｓ９分子は、配列モチーフＮＧＧ（配列番号２）及び／又はＮＡＡＲ（Ｒ＝Ａ若しくはＧ）（配列番号６）を認識し、この配列の１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的は核酸配列の切断を誘導する。ある特定の実施形態において、Ｓ．アウレウスのＣａｓ９分子は、配列モチーフＮＮＧＲＲ（Ｒ＝Ａ又はＧ）（配列番号７）を認識し、その配列から１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的核酸配列の切断を誘導する。ある特定の実施形態において、Ｓ．アウレウスのＣａｓ９分子は、配列モチーフＮＮＧＲＲＮ（Ｒ＝Ａ又はＧ）（配列番号８）を認識し、その配列から１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的核酸配列の切断を誘導する。ある特定の実施形態において、Ｓ．アウレウスのＣａｓ９分子は、配列モチーフＮＮＧＲＲＴ（Ｒ＝Ａ又はＧ）（配列番号９）を認識し、その配列から１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的核酸配列の切断を誘導する。ある特定の実施形態において、Ｓ．アウレウスのＣａｓ９分子は、配列モチーフＮＮＧＲＲＶ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｖ＝Ａ又はＣ又はＧ）（配列番号１０）を認識し、その配列から１～１０、例えば、３～５ｂｐ上流での標的核酸配列の切断を誘導する。ナイセリア・メニンギティディス（Neisseria meningitidis）に由来するＣａｓ９分子（ＮｍＣａｓ９）は、通常、ＮＮＮＮＧＡＴＴ（配列番号１１）の天然のＰＡＭを有するが、高度縮重ＮＮＮＮＧＮＮＮ ＰＡＭ（配列番号１２）を含む様々なＰＡＭにわたって活性を有し得る（Esvelt et al. Nature Methods 2013 doi:10.1038/nmeth.2681）。前述の実施形態において、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのいずれかであり得る。Ｃａｓ９分子は、Ｃａｓ９分子のＰＡＭ特異性を変更するように操作することができる。
いくつかの実施形態において、Ｃａｓ９タンパク質は、ＮＧＧ（配列番号２）、又はＮＧＡ（配列番号１３）、又はＮＮＮＲＲＴ（Ｒ＝Ａ若しくはＧ）（配列番号１４）、又はＡＴＴＣＣＴ（配列番号１５）、又はＮＧＡＮ（配列番号１６）、又はＮＧＮＧ（配列番号１７）のＰＡＭ配列、又はそれを含むＰＡＭ配列を認識する。いくつかの実施形態において、Ｃａｓ９タンパク質は、Ｓ．アウレウスのＣａｓ９タンパク質であり、配列モチーフＮＮＧＲＲ（Ｒ＝Ａ若しくはＧ）（配列番号７）、ＮＮＧＲＲＮ（Ｒ＝Ａ若しくはＧ）（配列番号８）、ＮＮＧＲＲＴ（Ｒ＝Ａ若しくはＧ）（配列番号９）、又はＮＮＧＲＲＶ（Ｒ＝Ａ若しくはＧ）（Ｖ＝Ａ若しくはＧ若しくはＣ）（配列番号１０）を認識する。前述の実施形態において、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、ＰＡＭ配列は、ＡＴＴＣＣＴ（配列番号１５）を含む。
追加として、又は代替的に、Ｃａｓ９分子又はＣａｓ９ポリペプチドをコードする核酸は、核局在化配列（ＮＬＳ）を含み得る。核局在化配列は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＳＶ４０ ＮＬＳ（Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ、配列番号６１である。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＣａｓ９分子は、突然変異体Ｃａｓ９分子である。Ｃａｓ９タンパク質は、ヌクレアーゼ活性が不活性化されるように、突然変異することができる。エンドヌクレアーゼ活性を有さない不活性化されたＣａｓ９タンパク質（「ｉＣａｓ９」、「ｄＣａｓ９」とも称される）は、立体障害を通じて遺伝子発現をサイレンシングするように、ｇＲＮＡによって細菌、酵母、及びヒト細胞における遺伝子へと標的化される。Ｓ．ピオゲネスＣａｓ９配列に関して、ヌクレアーゼ活性を不活性化する例示的な突然変異としては、Ｄ１０Ａ、Ｅ７６２Ａ、Ｈ８４０Ａ、Ｎ８５４Ａ、Ｎ８６３Ａ、およ／又はＤ９８６Ａが挙げられる。Ｄ１０Ａ突然変異を有するＳ．ピオゲネスＣａｓ９タンパク質は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み得る。Ｄ１０Ａ及びＨ８４９Ａ突然変異を有するＳ．ピオゲネスＣａｓ９タンパク質は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み得る。Ｓ．アウレウスＣａｓ９配列に関して、ヌクレアーゼ活性を不活性化する例示的な突然変異としては、Ｄ１０Ａ及びＮ５８０Ａが挙げられる。ある特定の実施形態において、突然変異体Ｓ．アウレウスＣａｓ９分子は、Ｄ１０Ａ突然変異を含む。この突然変異体Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１３３に記載されている。ある特定の実施形態において、突然変異体Ｓ．アウレウスＣａｓ９分子は、Ｎ５８０Ａ突然変異体を含む。この突然変異体Ｓ．アウレウスＣａｓ９分子をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１３４に記載されている。
いくつかの実施形態において、Ｃａｓ９タンパク質は、ＶＱＲバリアントである。Ｃａｓ９のＶＱＲバリアントは、Kleinstiver, et al. (Nature 2015, 523, 481-485、参照により本明細書に組み込まれる）に詳述されるように、異なるＰＡＭ認識を有する突然変異体である。
Ｃａｓ９分子をコードするポリヌクレオチドは、合成ポリヌクレオチドであり得る。例えば、合成ポリヌクレオチドは、化学的に改変されていてもよい。合成ポリヌクレオチドは、コドン最適化されていてもよく、例えば、少なくとも１つの一般的でないコドン又はあまり一般的でないコドンが、一般的なコドンによって置き換えられている。例えば、合成ポリヌクレオチドは、最適化されたメッセンジャーｍＲＮＡ、例えば、本明細書に記載されるように、哺乳動物発現系における発現のために最適化されたものの合成を誘導することができる。Ｓ．ピオゲネスのＣａｓ９分子をコードするコドン最適化された例示的な核酸配列は、配列番号２０に記載されている。Ｓ．アウレウスのＣａｓ９分子をコードし、核局在化配列（ＮＬＳ）を含んでもよい、コドン最適化された例示的な核酸配列は、配列番号２１～２７に記載されている。Ｓ．アウレウスのＣａｓ９分子をコードするコドン最適化された別の例示的な核酸配列は、配列番号２８のヌクレオチド１２９３～４４５１を含む。
ｂ． Ｃａｓ融合タンパク質
代替的に、又は追加として、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、融合タンパク質を含み得る。融合タンパク質は、２つの異種ポリペプチドドメインを含み得る。第１のポリペプチドドメインは、Ｃａｓ９タンパク質又は突然変異体Ｃａｓ９タンパク質を含む。第１のポリペプチドドメインは、少なくとも１つの第２のポリペプチドドメインに融合される。第２のポリペプチドドメインは、Ｃａｓ９タンパク質に内在性であるものとは異なる活性を有する。例えば、第２のポリペプチドドメインは、転写活性化活性、転写抑制活性、転写放出因子活性、ヒストン改変活性、ヌクレアーゼ活性、核酸会合活性、メチラーゼ活性、デメチラーゼ活性、アセチル化活性、及び／又は脱アセチル化活性などの活性を有し得る。第２のポリペプチドドメインの活性は、直接的であっても間接的であってもよい。第２のポリペプチドドメインは、このアッセイ自体を有してもよく（直接的）、又はそれが、この活性を有するポリペプチドドメインを動員する、及び／若しくはそれと相互作用してもよい（間接的）。第２のポリペプチドドメインは、第１のポリペプチドドメインのＣ末端側にあってもよく、又は第１のポリペプチドドメインのＮ末端側にあってもよく、又はその組合せであってもよい。融合タンパク質は、１つの第２のポリペプチドドメインを含み得る。融合タンパク質は、２つの第２のポリペプチドドメインを含み得る。例えば、融合タンパク質は、第１のポリペプチドドメインのＮ末端側に第２のポリペプチドドメインを含んでもよく、同様に、第１のポリペプチドドメインのＣ末端側に第２のポリペプチドドメインを含んでもよい。他の実施形態において、融合タンパク質は、単一の第１のポリペプチドドメイン、及び１つを上回る（例えば、２つ又は３つの）第２のポリペプチドドメインを、タンデムに含んでもよい。
第１のポリペプチドドメインから第２のポリペプチドドメインへの連結は、可逆的若しくは不可逆的な共有結合的連結を通じたものであってもよく、又は非共有結合的連結を通じたものであってもよいが、リンカーが、第２のポリペプチドドメインの機能を妨害しない場合に限る。例えば、Ｃａｓポリペプチドは、融合タンパク質の一部として、第２のポリペプチドドメインに連結され得る。別の例として、それらは、可逆的な非共有結合的相互作用、例えば、アビジン（若しくはストレプトアビジン）－ビオチン相互作用、ヒスチジン－二価金属イオン相互作用（例えば、Ｎｉ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ｆｅ）、多量体形成（例えば、二量体形成）ドメイン間の相互作用、又はグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）－グルタチオン相互作用を通じて連結され得る。さらに別の例として、それらは、リンカー、例えば、ジブロモマレイミド（ＤＢＭ）又はアミノ－チオールコンジュゲーションなどのリンカーを用いて共有結合的であるが可逆的に連結され得る。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも１つのリンカーを含む。リンカーは、融合タンパク質のポリペプチド配列内の任意の場所、例えば、第１のポリペプチドドメインと第２のポリペプチドドメインとの間に含まれ得る。リンカーは、融合タンパク質における成分の移動性を促進又は制限するような任意の長さ及び設計のものであり得る。リンカーは、約２～約１００個、約５～約８０個、約１０～約６０個、又は約２０～約５０個のアミノ酸の任意のアミノ酸配列を含み得る。リンカーは、少なくとも約２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、又は３０個のアミノ酸のアミノ酸配列を含み得る。リンカーは、約１００個未満、９０個未満、８０個未満、７０個未満、６０個未満、５０個未満、又は４０個未満のアミノ酸のアミノ酸配列を含み得る。リンカーは、２～２０個のアミノ酸の長さであるアミノ酸配列の連続的又はタンデムの反復を含み得る。リンカーとしては、例えば、ＧＳリンカー（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎを挙げることができ、ここで、ｎは、０～１０の整数である（配列番号１３５）。ＧＳリンカーにおいて、ｎは、リンカーの長さを最適化し、機能性ドメインの適切な分離を達成するように、調節され得る。リンカーの他の例としては、例えば、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１３６）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１３７）、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリッチリンカー、例えば、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ（配列番号１３８）、又はＧｌｙ／Ａｌａリッチリンカー、例えば、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ（配列番号１３９）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドドメインは、ヌクレアーゼ活性を有する。ヌクレアーゼ活性を有する第２のポリペプチドドメインは、例えば、ＦｏｋＩ又はＴｅｖＩを含み得る。
ｉ）転写活性化活性
第２のポリペプチドドメインは、転写活性化活性、例えば、トランス活性化ドメインを有し得る。例えば、内在性哺乳動物遺伝子、例えば、ヒト遺伝子の遺伝子発現は、第１のポリペプチドドメイン、例えば、ｄＣａｓ９、及びトランス活性化ドメインの融合タンパク質を、ｇＲＮＡの組合せを介して哺乳動物プロモーターへと標的化することによって、達成することができる。トランス活性化ドメインとしては、ＶＰ１６タンパク質、複数のＶＰ１６タンパク質、例えば、ＶＰ４８ドメイン又はＶＰ６４ドメイン、ＮＦカッパＢ転写活性化因子活性のｐ６５ドメイン、ＴＥＴ１、ＶＰＲ、ＶＰＨ、Ｒｔａ、及び／又はｐ３００を挙げることができる。例えば、融合タンパク質は、ｄＣａｓ９－ｐ３００を含み得る。いくつかの実施形態において、ｐ３００は、配列番号１４０又は配列番号１４１のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。他の実施形態において、融合タンパク質は、ｄＣａｓ９－ＶＰ６４を含む。他の実施形態において、融合タンパク質は、ＶＰ６４－ｄＣａｓ９－ＶＰ６４を含む。ＶＰ６４－ｄＣａｓ９－ＶＰ６４は、配列番号１４３のポリヌクレオチドによってコードされる、配列番号１４２のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。ＶＰＨは、配列番号１４５のポリヌクレオチドによってコードされる、配列番号１４４のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。ＶＰＲは、配列番号１４７のポリヌクレオチドによってコードされる、配列番号１４６のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み得る。
ｉｉ）転写抑制活性
第２のポリペプチドドメインは、転写抑制活性を有し得る。リプレッサーの非限定的な例としては、Ｋｒｕｐｐｅｌ関連ボックス活性、例えば、ＫＲＡＢドメイン若しくはＫＲＡＢ、ＭＥＣＰ２、ＥＥＤ、ＥＲＦリプレッサードメイン（ＥＲＤ）、Ｍａｄ ｍＳＩＮ３相互作用ドメイン（ＳＩＤ）若しくはＭａｄ－ＳＩＤリプレッサードメイン、ＳＩＤ４Ｘリプレッサードメイン、Ｍｘｉｌリプレッサードメイン、ＳＵＶ３９Ｈ１、ＳＵＶ３９Ｈ２、Ｇ９Ａ、ＥＳＥＴ／ＳＥＴＢＤ１、Ｃｉｒ４、Ｓｕ（ｖａｒ）３－９、Ｐｒ－ＳＥＴ７／８、ＳＵＶ４－２０Ｈ１、ＰＲ－ｓｅｔ７、Ｓｕｖ４－２０、Ｓｅｔ９、ＥＺＨ２、ＲＩＺ１、ＪＭＪＤ２Ａ／ＪＨＤＭ３Ａ、ＪＭＪＤ２Ｂ、ＪＭＪ２Ｄ２Ｃ／ＧＡＳＣ１、ＪＭＪＤ２Ｄ、Ｒｐｈ１、ＪＡＲＩＤ１Ａ／ＲＢＰ２、ＪＡＲＩＤ１Ｂ／ＰＬＵ－１、ＪＡＲＩＤ１Ｃ／ＳＭＣＸ、ＪＡＲＩＤ１Ｄ／ＳＭＣＹ、Ｌｉｄ、Ｊｈｎ２、Ｊｍｊ２、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ８、Ｒｐｄ３、Ｈｏｓ１、Ｃｉｒ６、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９、Ｈｄａ１、Ｃｉｒ３、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、Ｓｉｒ２、Ｈｓｔ１、Ｈｓｔ２、Ｈｓｔ３、Ｈｓｔ４、ＨＤＡＣ１１、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３ａ／３ｂ、ＤＮＭＴ３Ａ－３Ｌ、ＭＥＴ１、ＤＲＭ３、ＺＭＥＴ２、ＣＭＴ１、ＣＭＴ２、ラミニンＡ、ラミニンＢ、ＣＴＣＦ、及び／又はＴＡＴＡボックス結合タンパク質活性を有するドメイン、或いはこれらの組合せが挙げられる。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドドメインは、ＫＲＡＢドメイン活性、ＥＲＦリプレッサードメイン活性、Ｍｘｉｌリプレッサードメイン活性、ＳＩＤ４Ｘリプレッサードメイン活性、Ｍａｄ－ＳＩＤリプレッサードメイン活性、ＤＮＭＴ３Ａ若しくはＤＮＭＴ３Ｌ、又はこれらの融合の活性、ＬＳＤ１ヒストンデメチラーゼ活性、又はＴＡＴＡボックス結合タンパク質活性を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドドメインは、ＫＲＡＢを含む。例えば、融合タンパク質は、Ｓ．ピオゲネスｄＣａｓ９－ＫＲＡＢ（ポリヌクレオチド配列、配列番号１４８；タンパク質配列、配列番号１４９）であり得る。融合タンパク質は、Ｓ．アウレウスｄＣａｓ９－ＫＲＡＢ（ポリヌクレオチド配列、配列番号１５０；タンパク質配列、配列番号１５１）であり得る。
ｉｉｉ）転写放出因子活性
第２のポリペプチドドメインは、転写放出因子活性を有し得る。第２のポリペプチドドメインは、真核生物放出因子１（ＥＲＦ１）活性又は真核生物放出因子３（ＥＲＦ３）活性を有し得る。
ｉｖ）ヒストン改変活性
第２のポリペプチドドメインは、ヒストン改変活性を有し得る。第２のポリペプチドドメインは、ヒストンデアセチラーゼ、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ、ヒストンデメチラーゼ、又はヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を有し得る。ヒストンアセチルトランスフェラーゼは、ｐ３００若しくはＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＢＰ）タンパク質、又はそのフラグメントであり得る。例えば、融合タンパク質は、ｄＣａｓ９－ｐ３００であり得る。いくつかの実施形態において、ｐ３００は、配列番号１４０又は配列番号１４１のポリペプチドを含む。
ｖ）ヌクレアーゼ活性
第２のポリペプチドドメインは、Ｃａｓ９タンパク質のヌクレアーゼ活性とは異なるヌクレアーゼ活性を有し得る。ヌクレアーゼ、又はヌクレアーゼ活性を有するタンパク質は、核酸のヌクレオチドサブユニット間のホスホジエステル結合を切断することができる酵素である。ヌクレアーゼは、通常、エンドヌクレアーゼ及びエクソヌクレアーゼにさらに分割されるが、いくつかの酵素は、両方のカテゴリーに含まれ得る。周知のヌクレアーゼとしては、デオキシリボヌクレアーゼ及びリボヌクレアーゼが挙げられる。ヌクレアーゼ活性を有する第２のポリペプチドドメインは、例えば、ＦｏｋＩ及び／又はＴｅｖＩを含み得る。
ｖｉ）核酸会合活性
第２のポリペプチドドメインは、核酸会合活性又は核酸結合性タンパク質－ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）を有し得る。ＤＢＤは、二本鎖又は一本鎖ＤＮＡを認識する少なくとも１つのモチーフを含む、独立してフォールディングされるタンパク質ドメインである。ＤＢＤは、特定のＤＮＡ配列（認識配列）を認識し得るか、又はＤＮＡに対して通常の親和性を有し得る。核酸会合領域は、ヘリックス－ターン－ヘリックス領域、ロイシンジッパー領域、翼状ヘリックス領域、翼状ヘリックス－ターン－ヘリックス領域、ヘリックス－ループ－ヘリックス領域、免疫グロブリンフォールド、Ｂ３ドメイン、亜鉛フィンガー、ＨＭＧ－ボックス、Ｗｏｒ３ドメイン、及びＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインから選択され得る。
ｖｉｉ）メチラーゼ活性
第２のポリペプチドドメインは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、小分子、シトシン、又はアデニンへのメチル基の移行を含む、メチラーゼ活性を有し得る。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドドメインは、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼを含む。
ｖｉｉｉ）デメチラーゼ活性
第２のポリペプチドドメインは、デメチラーゼ活性を有し得る。第２のポリペプチドドメインは、核酸、タンパク質（特に、ヒストン）、及び他の分子からメチル（ＣＨ３－）基を除去する酵素を含み得る。或いは、第２のポリペプチドは、ＤＮＡを脱メチル化するための機序において、メチル基をヒドロキシメチルシトシンに変換させることができる。第２のポリペプチドは、この反応を触媒し得る。例えば、この反応を触媒する第２のポリペプチドは、Ｔｅｔ１ＣＤ（１０－１１転座メチルシトシンジオキシゲナーゼ１、ポリヌクレオチド配列、配列番号１５２；アミノ酸配列、配列番号１５３）としても知られるＴｅｔ１であり得る。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドドメインは、ヒストンデメチラーゼ活性を有する。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドドメインは、ＤＮＡデメチラーゼ活性を有する。
ｃ．ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系は、少なくとも１つのｇＲＮＡ分子を含む。例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系は、２つのｇＲＮＡ分子を含み得る。少なくとも１つのｇＲＮＡ分子は、標的領域に結合し、それを認識することができる。ｇＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系の標的化を提供する。ｇＲＮＡは、ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡの２つの非コーディングＲＮＡの融合体である。ｇＲＮＡは、ＩＩ型エフェクター系に関与する天然に存在するｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ二重鎖を模倣する。例えば、４２個のヌクレオチドのｃｒＲＮＡ及び７５個のヌクレオチドのｔｒａｃｒＲＮＡを含み得るこの二重鎖は、Ｃａｓ９が標的核酸に結合し、いくつかの場合にはそれを切断するためのガイドとしての機能を果たす。ｇＲＮＡは、所望されるＤＮＡ標的との相補的な塩基対合を通じて標的化特異性を付与するプロトスペーサーをコードする配列を交換することによって、任意の所望されるＤＮＡ配列を標的とすることができる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、少なくとも１つのｇＲＮＡを含み得、ｇＲＮＡは、異なるＤＮＡ配列を標的とする。標的ＤＮＡ配列は、オーバーラップしてもよい。「標的領域」、又は「標的配列」、又は「プロトスペーサー」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系が標的とし、結合又はハイブリダイズする、標的遺伝子の領域を指す。ゲノム内の標的配列を標的とするｇＲＮＡの部分は、「標的化配列」、又は「標的化部分」、又は「標的化ドメイン」と称され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、少なくとも１つのｇＲＮＡを含み得、ｇＲＮＡは、異なるＤＮＡ配列を標的とするか、又はそれにハイブリダイズする。標的ＤＮＡ配列は、オーバーラップしてもよい。ｇＲＮＡは、その５’末端に、例えば、標的領域に続いて適切なプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）がある場合に標的遺伝子の標的領域の約１０～約２０個のヌクレオチドにハイブリダイズすることができるように、標的領域に十分に相補的である標的化ドメインを含み得る。標的配列又はプロトスペーサーには、ゲノム内の標的配列又はプロトスペーサーの３’末端にＰＡＭ配列が続く。異なるＩＩ型系は、上記に詳述されるように、異なるＰＡＭ要件を有する。
「プロトスペーサー」又は「ｇＲＮＡスペーサー」は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系が標的とし、結合又はハイブリダイズする、標的配列の領域を指し得、「プロトスペーサー」又は「ｇＲＮＡスペーサー」はまた、ゲノム内の標的とされる配列に相補的であるｇＲＮＡの部分も指し得る。プロトスペーサーは、例えば、１８個のヌクレオチド若しくは塩基対、１９個のヌクレオチド若しくは塩基対、２０個のヌクレオチド若しくは塩基対、２１個のヌクレオチド若しくは塩基対、２２個のヌクレオチド若しくは塩基対、２３個のヌクレオチド若しくは塩基対、２４個のヌクレオチド若しくは塩基対、２５個のヌクレオチド若しくは塩基対、２６個のヌクレオチド若しくは塩基対、又は２７個のヌクレオチド若しくは塩基対の長さであり得る。
ｇＲＮＡは、ｇＲＮＡスキャフォールドを含み得る。ｇＲＮＡスキャフォールドは、Ｃａｓ９のｇＲＮＡへの結合を促進し、エンドヌクレアーゼ活性を促進し得る。ｇＲＮＡスキャフォールドは、ｇＲＮＡが標的とする配列に対応するｇＲＮＡの部分に続くポリヌクレオチド配列である。まとめると、ｇＲＮＡ標的化部分及びｇＲＮＡスキャフォールドは、１つのポリヌクレオチドを形成する。ｇＲＮＡの定常領域は、配列番号６３の配列（ＲＮＡ）を含み得、これは、配列番号６２を含む配列（ＤＮＡ）によってコードされる。
ｇＲＮＡの標的化ドメインは、標的ＤＮＡの標的領域に完全に相補的である必要はない。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡの標的化ドメインは、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、又は２０個のヌクレオチドなどの長さにわたって、標的領域に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は少なくとも９９％相補的である（又はそれと比較して１つ、２つ、若しくは３つのミスマッチを有する）。例えば、ｇＲＮＡのＤＮＡ標的化ドメインは、標的領域に少なくとも１８個のヌクレオチドにわたって少なくとも８０％相補的であり得る。標的領域は、標的ＤＮＡのいずれかの鎖にあり得る。
ｇＲＮＡは、ジストロフィン遺伝子の領域又はフラグメントを標的とし得、それに結合又はハイブリダイズし得る。ｇＲＮＡは、突然変異体ジストロフィン遺伝子の領域又はフラグメントを標的とし得、それに結合又はハイブリダイズし得る。ｇＲＮＡは、野生型ジストロフィン遺伝子の領域又はフラグメントを標的とし得、それに結合又はハイブリダイズし得る。ｇＲＮＡは、イントロンを標的とし得る。ｇＲＮＡは、ジストロフィン遺伝子のエクソンに並置されているか又はそれに隣接するイントロンを標的とし得る。ｇＲＮＡは、突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソンに並置されているか又はそれに隣接するイントロンを標的とし得る。フラグメントは、約５～約２００個、約１０～約２００個、約５～約３００個、又は約１０～約３００個のヌクレオチドの長さであり得る。フラグメントは、少なくとも約５個、少なくとも約１０個、少なくとも約１５個、少なくとも約２０個、少なくとも約３０個、少なくとも約４０個、少なくとも約５０個、又は少なくとも約１００個のヌクレオチドの長さであり得る。ｇＲＮＡは、突然変異若しくは欠失を含むジストロフィン遺伝子のフラグメント若しくはその一部分、又はそれに近接若しくは隣接しているか若しくは並置されている配列を標的とし得る。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、イントロン５１を標的とする。ヒトジストロフィン遺伝子のイントロン５１は、配列番号１２８のポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡは、イントロン４４を標的とする。ヒトジストロフィン遺伝子のイントロン４４は、配列番号１５６のポリヌクレオチド配列を含み得る。
ｇＲＮＡは、配列番号２９～５１及び８７のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態を標的とし得、かつ／又はそれに結合及び／若しくはハイブリダイズし得る。ｇＲＮＡは、配列番号２９～５１及び８７のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態によってコードされ得る。ｇＲＮＡは、配列番号２９～５１及び８７のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態を含み得る。ｇＲＮＡは、配列番号６４～８６、８８のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態を含み得る。ｇＲＮＡスペーサーは、配列番号２９～５１、８７のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態を含み得る。ｇＲＮＡスペーサーは、配列番号２９～５１、８７のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態によってコードされ得る。短縮形態は、参照配列よりも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、又は９個のヌクレオチド短くあり得る。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡスキャフォールドは、配列番号５２のポリヌクレオチド配列、又はその相補体によってコードされる。
ｇＲＮＡは、配列番号１５７～１７０のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態を標的とし得、かつ／又はそれに結合及び／若しくはハイブリダイズし得る。ｇＲＮＡは、配列番号１５７～１７０のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態によってコードされ得る。ｇＲＮＡは、配列番号１７１～１８４のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのバリアント、又はその短縮形態を含み得る。短縮形態は、参照配列よりも１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、又は９個のヌクレオチド短くあり得る。
上述のように、ｇＲＮＡ分子は、標的化ドメイン（標的化配列とも称される）を含み、これは、標的ＤＮＡ配列に相補的なポリヌクレオチド配列である。ｇＲＮＡは、標的化ドメイン又は相補的ポリヌクレオチド配列の５’末端に「Ｇ」を含み得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、様々な配列及び長さのｇＲＮＡを使用し得る。ｇＲＮＡ分子の標的化ドメインは、ＰＡＭ配列が続く標的ＤＮＡ配列の少なくとも１０塩基対、少なくとも１１塩基対、少なくとも１２塩基対、少なくとも１３塩基対、少なくとも１４塩基対、少なくとも１５塩基対、少なくとも１６塩基対、少なくとも１７塩基対、少なくとも１８塩基対、少なくとも１９塩基対、少なくとも２０塩基対、少なくとも２１塩基対、少なくとも２２塩基対、少なくとも２３塩基対、少なくとも２４塩基対、少なくとも２５塩基対、少なくとも３０塩基対、又は少なくとも３５塩基対の相補的なポリヌクレオチド配列を含み得る。ある特定の実施形態において、ｇＲＮＡ分子の標的化ドメインは、１９～２５個のヌクレオチドの長さを有する。ある特定の実施形態において、ｇＲＮＡ分子の標的化ドメインは、２０個のヌクレオチドの長さである。ある特定の実施形態において、ｇＲＮＡ分子の標的化ドメインは、２１個のヌクレオチドの長さである。ある特定の実施形態において、ｇＲＮＡ分子の標的化ドメインは、２２個のヌクレオチドの長さである。ある特定の実施形態において、ｇＲＮＡ分子の標的化ドメインは、２３個のヌクレオチドの長さである。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系に含まれ得るｇＲＮＡ分子の数は、少なくとも１個のｇＲＮＡ、少なくとも２個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも３個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも６個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも７個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも９個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１１個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１２個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１３個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１４個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１６個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１７個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１８個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１８個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも２０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも２５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも３０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも３５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４５個の異なるｇＲＮＡ、又は少なくとも５０個の異なるｇＲＮＡであり得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系に含まれ得るｇＲＮＡ分子の数は、５０個未満の異なるｇＲＮＡ、４５個未満の異なるｇＲＮＡ、４０個未満の異なるｇＲＮＡ、３５個未満の異なるｇＲＮＡ、３０個未満の異なるｇＲＮＡ、２５個未満の異なるｇＲＮＡ、２０個未満の異なるｇＲＮＡ、１９個未満の異なるｇＲＮＡ、１８個未満の異なるｇＲＮＡ、１７個未満の異なるｇＲＮＡ、１６個未満の異なるｇＲＮＡ、１５個未満の異なるｇＲＮＡ、１４個未満の異なるｇＲＮＡ、１３個未満の異なるｇＲＮＡ、１２個未満の異なるｇＲＮＡ、１１個未満の異なるｇＲＮＡ、１０個未満の異なるｇＲＮＡ、９個未満の異なるｇＲＮＡ、８個未満の異なるｇＲＮＡ、７個未満の異なるｇＲＮＡ、６個未満の異なるｇＲＮＡ、５個未満の異なるｇＲＮＡ、４個未満の異なるｇＲＮＡ、３個未満の異なるｇＲＮＡ、又は２個未満の異なるｇＲＮＡであり得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系に含まれ得るｇＲＮＡの数は、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも５０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも４５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも４０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも３５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも３０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも２５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも２０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも１６個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも１２個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも１個のｇＲＮＡ～少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも５０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも４５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも４０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも３５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも３０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも２５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも２０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも１６個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも１２個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも４個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも５０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも４５個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも４０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも３５個の異なるｇＲＮＡ、８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも３０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも２５個の異なるｇＲＮＡ、８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも２０個の異なるｇＲＮＡ、少なくとも８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも１６個の異なるｇＲＮＡ、又は８個の異なるｇＲＮＡ～少なくとも１２個の異なるｇＲＮＡであり得る。
ｄ．ドナー配列
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、少なくとも１つのドナー配列を含み得る。ドナー配列は、ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含み得る。ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含み得る。例えば、ドナー配列は、ジストロフィン遺伝子のエクソン又はエクソンの任意の組合せをコードする核酸配列を含み得る。ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物のエクソンを含み得る。ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物の１つ又は複数のエクソンを含み得る。ドナー配列は、野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物の１つ又は複数のエクソン及び／又はイントロンを含み得る。ドナー配列は、エクソン５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、及び７９、又はこれらの組合せ、又はこれらの機能的同等物から選択される野生型ジストロフィン遺伝子の１つ又は複数のエクソンを含み得る。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、エクソン５２を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、エクソン５２～７９を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、エクソン４５～７９を含む。いくつかの実施形態において、エクソン５２～７９は、スーパーエクソンと称される。いくつかの実施形態において、エクソン４５～７９は、スーパーエクソンと称される。ドナー配列は、挿入しようとするエクソンの周囲又はその近傍のイントロン配列に対応する少なくとも１つの追加のポリヌクレオチドをさらに含み得る。ドナー配列は、エクソン５２の周囲又はその近傍のイントロン配列に対応する少なくとも１つの追加のポリヌクレオチドをさらに含み得る。ドナー配列は、配列番号５３～５６及び１５４～１５５から選択されるポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、エクソン５２～７９を含み、ドナー配列は、配列番号５３～５６から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ドナー配列は、エクソン４５～７９を含み、ドナー配列は、配列番号１５４～１５５から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
ドナー配列は、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接していてもよい。ドナー配列は、５’末端及び３’末端に、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が隣接していてもよい。ドナー配列に隣接するｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系からドナーフラグメントを切断又は切除するようにＣａｓ９タンパク質を誘導する。これによって、ドナー配列がゲノムへの挿入のために遊離され得る。いくつかの実施形態において、ｇＲＮＡの標的化領域は、ドナー配列に隣接するｇＲＮＡスペーサーに相補的である。ｇＲＮＡスペーサーは、配列番号２９～５１及び８７及び１５７～１７０から選択されるポリヌクレオチドを含み得るか、又はそれによってコードされ得る。
ｇＲＮＡ及びドナー配列は、様々なモル比で存在し得る。ｇＲＮＡとドナー配列との間のモル比は、１：１、又は１：５、又は５：１～１：１０、又は１：１～１：５であり得る。ｇＲＮＡとドナー配列との間のモル比は、少なくとも１：１、少なくとも１：２、少なくとも１：３、少なくとも１：４、少なくとも１：５、少なくとも１：６、少なくとも１：７、少なくとも１：８、少なくとも１：９、少なくとも１：１０、少なくとも１：１５、又は少なくとも１：２０であり得る。ｇＲＮＡとドナー配列との間のモル比は、２０：１未満、１５：１未満、１０：１未満、９：１未満、８：１未満、７：１未満、６：１未満、５：１未満、４：１未満、３：１未満、２：１未満、又は１：１未満であり得る。
ｅ．修復経路
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、標的とされるゲノム遺伝子座、例えば、ジストロフィン遺伝子のイントロン又はエクソンにおいて、部位特異的二本鎖切断を導入するために使用され得る。部位特異的二本鎖切断は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系が、標的ＤＮＡ配列に結合すると作成され、それによって標的ＤＮＡの切断が許容される。このＤＮＡ切断は、天然のＤＮＡ修復機序を刺激し、相同組換え修復（ＨＤＲ）又は非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路という２つの可能性のある修復経路のうちの１つをもたらす。
ｉ）相同組換え修復（ＨＤＲ）
遺伝子からのタンパク質発現の復元は、相同組換え修復（ＨＤＲ）を含み得る。ドナー鋳型が、細胞に投与され得る。ドナー鋳型には、完全機能性タンパク質又は部分的機能性タンパク質をコードするヌクレオチド配列が含まれ得る。そのような実施形態においてドナー鋳型は、突然変異体遺伝子を復元するための完全機能性遺伝子コンストラクト、又は相同組換え修復後に突然変異体遺伝子の復元をもたらす遺伝子のフラグメントを含み得る。他の実施形態において、ドナー鋳型は、遺伝子の阻害性調節エレメントの突然変異型バージョンをコードするヌクレオチド配列を含み得る。突然変異としては、例えば、ヌクレオチド置換、挿入、欠失、又はこれらの組合せを挙げることができる。そのような実施形態において、遺伝子の阻害性調節エレメントに導入される突然変異は、阻害性調節エレメントの転写又はそこへの結合を低減させ得る。
ｉｉ）ＮＨＥＪ
遺伝子からのタンパク質発現の復元は、鋳型を用いないＮＨＥＪに媒介されるＤＮＡ修復を通じたものであってもよい。ある特定の実施形態において、ＮＨＥＪは、ヌクレアーゼに媒介されるＮＨＥＪであり、これは、ある特定の実施形態において、Ｃａｓ９分子が二本鎖ＤＮＡを切断すると開始されるＮＨＥＪを指す。本方法は、本明細書に開示されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系又はその組成物を、遺伝子編集のために、対象に投与するステップを含む。
ヌクレアーゼに媒介されるＮＨＥＪは、突然変異した標的遺伝子を矯正し、ＨＤＲ経路よりも優れたいくつかの可能性のある利点を提供し得る。例えば、ＮＨＥＪは、非特異的挿入突然変異生成を引き起こし得るドナー鋳型を必要としない。ＨＤＲとは対照的に、ＮＨＥＪは、細胞周期のすべての段階で効率的に作動し、したがって、細胞周期の間及び有糸分裂の後の両方の細胞、例えば、筋線維において効果的に利用され得る。これは、オリゴヌクレオチドベースのエクソンスキッピング又は薬理学的に強制される終止コドンのリードスルーに対する、強固で恒久的な遺伝子復元の代替手法を提供し、理論上は必要とし得る薬物処置が１回程度と少なくてよい。
４．遺伝子コンストラクト
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、１つ又は複数の遺伝子コンストラクトによってコードされ得るか、又はその中に含まれ得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、１つ又は複数の遺伝子コンストラクトを含み得る。遺伝子コンストラクト、例えば、プラスミド又は発現ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系並びに／又はｇＲＮＡ及び／若しくはドナー配列のうちの少なくとも１つをコードする核酸を含み得る。ある特定の実施形態において、遺伝子コンストラクトは、１つのｇＲＮＡ分子、すなわち、第１のｇＲＮＡ分子をコードし、Ｃａｓ９分子又は融合タンパク質をコードしてもよい。いくつかの実施形態において、遺伝子コンストラクトは、２つのｇＲＮＡ分子、すなわち、第１のｇＲＮＡ分子及び第２のｇＲＮＡ分子をコードし、Ｃａｓ９分子又は融合タンパク質をコードしてもよい。いくつかの実施形態において、第１の遺伝子コンストラクトは、１つのｇＲＮＡ分子、すなわち、第１のｇＲＮＡ分子をコードし、Ｃａｓ９分子又は融合タンパク質をコードしてもよく、第２の遺伝子コンストラクトは、１つのｇＲＮＡ分子、すなわち、第２のｇＲＮＡ分子をコードし、Ｃａｓ９分子又は融合タンパク質をコードしてもよい。いくつかの実施形態において、第１の遺伝子コンストラクトは、１つのｇＲＮＡ分子及び１つのドナー配列をコードし、第２の遺伝子コンストラクトは、Ｃａｓ９分子又は融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態において、第１の遺伝子コンストラクトは、１つのｇＲＮＡ分子及びＣａｓ９分子又は融合タンパク質をコードし、第２の遺伝子コンストラクトは、１つのドナー配列をコードする。
遺伝子コンストラクトは、ポリヌクレオチド、例えば、ベクター及びプラスミドを含み得る。遺伝子コンストラクトは、セントロメア、テロメア、又はプラスミド若しくはコスミドを含む、線形ミニ染色体であり得る。ベクターは、Sambrook et al., Molecular Cloning and Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor (1989)を含む、日常的な技法及び容易に入手可能な出発材料によってタンパク質を産生させるための発現ベクター又は系であってもよく、この文献は、参照により全体が組み込まれる。コンストラクトは、組換えであり得る。遺伝子コンストラクトは、組換えレンチウイルス、組換えアデノウイルス、及び組換えアデノウイルス随伴ウイルスを含む、組換えウイルスベクターのゲノムの一部であってもよい。遺伝子コンストラクトは、核酸のコーディング配列の遺伝子発現のための調節エレメントを含み得る。調節エレメントは、プロモーター、エンハンサー、開始コドン、終止コドン、又はポリアデニル化シグナルであり得る。
遺伝子コンストラクトは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系をコードする異種核酸を含み得、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系コーディング配列の上流にあり得る開始コドン、及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系コーディング配列の下流にあり得る終止コドンをさらに含み得る。遺伝子コンストラクトは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系コーディング配列の下流にあり得る、１つを上回る終止コドンを含み得る。いくつかの実施形態において、遺伝子コンストラクトは、１個、２個、３個、４個、又は５個の終止コドンを含む。いくつかの実施形態において、遺伝子コンストラクトは、ドナー配列をコードする配列の下流に１個、２個、３個、４個、又は５個の終止コドンを含む。終止コドンは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系において、コーディング配列とインフレームであり得る。例えば、１つ又は複数の終止コドンは、ドナー配列とインフレームであってもよい。遺伝子コンストラクトは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系においてコーディング配列のフレーム外にある１つ又は複数の終止コドンを含み得る。例えば、１つの終止コドンは、ドナー配列とインフレームであってもよく、他の２つの可能性のあるリーディングフレーム内にある２つの他の終止コドンが、含まれてもよい。遺伝子コンストラクトは、３つすべての可能性のあるリーディングフレームについて終止コドンを含み得る。開始コドン及び終止コドンは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系コーディング配列とインフレームであってもよい。
ベクターはまた、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系コーディング配列に作動可能に連結されているプロモーターも含み得る。プロモーターは、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、抑制性プロモーター、又は調節性プロモーターであってもよい。プロモーターは、遍在性プロモーターであってもよい。プロモーターは、組織特異的プロモーターであってもよい。組織特異的プロモーターは、筋肉特異的プロモーターであり得る。組織特異的プロモーターは、皮膚特異的プロモーターであり得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系は、遺伝子／ゲノム編集の空間及び時間における動的制御を可能にするために、光誘導性又は化学物質誘導性制御下にあってもよい。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系コーディング配列に作動可能に連結されたプロモーターは、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）に由来するプロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、例えば、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、例えば、ＣＭＶ最初期プロモーター、イプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、又はラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターであり得る。プロモーターはまた、ヒト遺伝子、例えば、ヒトユビキチンＣ（ｈＵｂＣ）、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン、又はヒトメタロチオネインに由来するプロモーターであってもよい。天然又は合成の組織特異的プロモーター、例えば、筋肉又は皮膚特異的プロモーターの例は、米国特許出願公開第ＵＳ２００４０１７５７２７号に記載されており、この内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。プロモーターは、例えば、ＣＫ８プロモーター、Ｓｐｃ５１２プロモーター、ＭＨＣＫ７プロモーターであり得る。
遺伝子コンストラクトはまた、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系の下流にあり得る、ポリアデニル化シグナルを含み得る。ポリアデニル化シグナルは、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ＬＴＲポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化シグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化シグナル、又はヒトβ－グロビンポリアデニル化シグナルであり得る。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）に由来するポリアデニル化シグナルであり得る。
遺伝子コンストラクトにおけるコーディング配列は、安定性及び高いレベルの発現のために最適化されていてもよい。いくつかの事例において、コドンは、分子内結合に起因して形成されるものなどのＲＮＡの二次構造形成を低減させるように選択される。
遺伝子コンストラクトはまた、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系又はｇＲＮＡの上流のエンハンサーを含み得る。エンハンサーは、ＤＮＡ発現に必要であり得る。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン、又はウイルスエンハンサー、例えば、ＣＭＶ、ＨＡ、ＲＳＶ、若しくはＥＢＶに由来するものであり得る。ポリヌクレオチド機能エンハンサーは、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，９６２，４２８号、及び国際公開第ＷＯ９４／０１６７３７号に記載されており、それぞれの内容は、参照により全体が組み込まれる。遺伝子コンストラクトはまた、ベクターを染色体外に維持し、細胞においてベクターの複数のコピーを産生させるために、哺乳動物複製起点を含み得る。遺伝子コンストラクトはまた、ベクターが投与される哺乳動物又はヒト細胞における遺伝子発現に十分に適したものであり得る、調節配列も含み得る。遺伝子コンストラクトはまた、レポーター遺伝子、例えば、緑色蛍光タンパク質（「ＧＦＰ」）及び／又は選択可能なマーカー、例えば、ハイグロマイシン（「Ｈｙｇｒｏ」）も含み得る。
遺伝子コンストラクトは、細胞にＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系をコードする核酸をトランスフェクトするのに有用であり得、この形質転換された宿主細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系の発現が生じる条件下において培養及び維持される。遺伝子コンストラクトは、細胞に形質転換又は形質導入され得る。遺伝子コンストラクトは、細胞への送達のために、例えば、ウイルスベクター、レンチウイルス発現、ｍＲＮＡエレクトロポレーション、及び脂質に媒介されるトランスフェクションを含む、任意の好適なタイプの送達ビヒクルに製剤化され得る。遺伝子コンストラクトは、細胞において生存する減弱化された生微生物又は組換え微生物ベクターにおける遺伝子材料の一部であり得る。遺伝子コンストラクトは、機能性染色体外分子として細胞に存在してもよい。
本明細書において詳述される系又はその成分が形質転換又は形質導入された細胞が、本明細書においてさらに提供される。好適な細胞型は、本明細書において詳述されている。いくつかの実施形態において、細胞は、幹細胞である。幹細胞は、ヒト幹細胞であってもよい。いくつかの実施形態において、細胞は、胚性幹細胞である。幹細胞は、ヒト多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であってもよい。幹細胞由来のニューロン、例えば、本明細書において詳述されるＤＮＡ標的化系又はその成分が形質転換又は形質導入されたｉＰＳＣに由来するニューロンが、さらに提供される。
ａ．ウイルスベクター
遺伝子コンストラクトは、ウイルスベクターであってもよい。ウイルス送達系が、本明細書においてさらに提供される。ウイルス送達系としては、例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、ｍＲＮＡエレクトロポレーション、又はナノ粒子を挙げることができる。いくつかの実施形態において、ベクターは、改変されたレンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態において、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。ＡＡＶベクターは、ヒト及びいくつかの他の霊長類種に感染する、パルボウイルス科ディペンドウイルス属に属する小型のウイルスを指す。
ＡＡＶベクターは、様々なコンストラクト構成を使用して、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系を送達するために使用され得る。例えば、ＡＡＶベクターは、Ｃａｓ９又は融合タンパク質、及びｇＲＮＡ発現カセットを、別個のベクター又は同じベクターで、送達し得る。或いは、スタフィロコッカス・アウレウス又はナイセリア・メニンギティディスなどの種に由来する小型のＣａｓ９タンパク質又は融合タンパク質が使用される場合、Ｃａｓ９及び最大で２つのｇＲＮＡ発現カセットの両方が、単一のＡＡＶベクターにおいて組み合わされてもよい。いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターは、４．７ｋｂのパッケージング限界を有する。
いくつかの実施形態において、ＡＡＶベクターは、改変されたＡＡＶベクターである。改変されたＡＡＶベクターは、増強された心筋及び／又は骨格筋組織指向性を有し得る。改変されたＡＡＶベクターは、哺乳動物の細胞にＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系を送達及び発現させることが可能であり得る。例えば、改変されたＡＡＶベクターは、ＡＡＶ－ＳＡＳＴＧベクターであり得る（Piacentino et al. Human Gene Therapy 2012, 23, 635-646）。改変されたＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９を含む、いくつかのキャプシドタイプのうちの１つ又は複数に基づき得る。改変されたＡＡＶベクターは、全身及び局所送達によって骨格筋又は心筋に効率的に形質導入するＡＡＶ２／１、ＡＡＶ２／６、ＡＡＶ２／７、ＡＡＶ２／８、ＡＡＶ２／９、ＡＡＶ２．５、及びＡＡＶ／ＳＡＳＴＧベクターなど、代替的な筋指向性ＡＡＶキャプシドを有するＡＡＶ２シュードタイプに基づき得る（Seto et al. Current Gene Therapy 2012, 12, 139-151）。改変されたＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２ｉ８Ｇ９であり得る（Shen et al. J. Biol. Chem. 2013, 288, 28814-28823）。
遺伝子コンストラクトは、配列番号５７～６０から選択されるポリヌクレオチド配列を含み得る。遺伝子コンストラクトは、配列番号２９～５１、５３～５６、８７、１５４～１５５、１５７～１６９、及び１７０から選択されるポリヌクレオチド配列、又はその相補体、又はそのフラグメントを含み得る。
５．医薬組成物
上述の遺伝子コンストラクト又は遺伝子編集系を含む、医薬組成物が、本明細書においてさらに提供される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系をコードする、約１ｎｇ～約１０ｍｇのＤＮＡを含み得る。本明細書において詳述される系若しくは遺伝子コンストラクト、又はその少なくとも１つの成分は、医薬の分野における当業者に周知の標準的な技法に従って、医薬組成物に製剤化され得る。医薬組成物は、使用しようとする投与様式に応じて製剤化することができる。医薬組成物が、注射用医薬組成物である場合には、それらは、滅菌で、発熱物質を含まず、粒子を含まない。好ましくは、等張性製剤が、使用される。一般に、等張性のための添加剤としては、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースを挙げることができる。いくつかの場合には、等張溶液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水が、好ましい。安定化剤としては、ゼラチン及びアルブミンが挙げられる。いくつかの実施形態において、血管収縮剤が、製剤に添加される。
組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、ビヒクル、アジュバント、担体、又は希釈剤としての機能性分子であり得る。「薬学的に許容される担体」という用語は、非毒性で、不活性の固体、半固体、又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル封入材料、又は任意のタイプの製剤補助剤であり得る。薬学的に許容される担体としては、例えば、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、着色剤、香味剤、甘味剤、抗酸化剤、保存剤、滑剤、溶媒、懸濁化剤、湿潤剤、界面活性剤、軟化剤、噴射剤、保水剤、粉末、ｐＨ調節剤、及びこれらの組合せが挙げられる。薬学的に許容される賦形剤は、トランスフェクション促進剤であり得、これには、表面活性剤、例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、ＬＰＳアナログ、例えば、モノホスホリルリピドＡ、ムラミルペプチド、キノンアナログ、小胞、例えば、スクアレン及びスクアレン、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、若しくはナノ粒子、又は他の公知のトランスフェクション促進剤を挙げることができる。トランスフェクション促進剤は、ポリアニオン、ポリカチオン、例えば、ポリ－Ｌ－グルタメート（ＬＧＳ）、又は脂質であり得る。トランスフェクション促進剤は、ポリ－Ｌ－グルタメートであり得、より好ましくは、ポリ－Ｌ－グルタメートは、骨格筋又は心筋における遺伝子編集のための組成物中に、６ｍｇ／ｍＬ未満の濃度で存在し得る。
６．投与
本明細書において詳述される系若しくは遺伝子コンストラクト、又はその少なくとも１つの成分は、細胞に投与又は送達され得る。核酸を宿主細胞に導入する方法は、当該技術分野において公知であり、任意の公知の方法を使用して、核酸（例えば、発現コンストラクト）を細胞に導入することができる。好適な方法としては、例えば、ウイルス又はバクテリオファージ感染、トランスフェクション、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、ポリカチオン又は脂質：核酸コンジュゲート、リポフェクション、エレクトロポレーション、ヌクレオフェクション、イムノリポソーム、リン酸カルシウム沈降、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）に媒介されるトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストランに媒介されるトランスフェクション、リポソームに媒介されるトランスフェクション、粒子銃技術、リン酸カルシウム沈降、直接的マイクロインジェクション、ナノ粒子に媒介される核酸送達などが挙げられる。いくつかの実施形態において、組成物は、ｍＲＮＡ送達及びリボヌクレオチドタンパク質（ＲＮＰ）複合体送達によって、送達され得る。系、遺伝子コンストラクト、又はそれを含む組成物は、ＢｉｏＲａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ Ｘｃｅｌｌ若しくはＡｍａｘａ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ ＩＩｂデバイス又は他のエレクトロポレーションデバイスを使用して、エレクトロポレーションされ得る。ＢｉｏＲａｄエレクトロポレーション溶液、Ｓｉｇｍａリン酸緩衝生理食塩水製品番号Ｄ８５３７（ＰＢＳ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＯｐｔｉＭＥＭ Ｉ （ＯＭ）、又はＡｍａｘａ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ溶液Ｖ（Ｎ．Ｖ．）を含む、いくつかの異なる緩衝液が、使用され得る。トランスフェクションは、トランスフェクション試薬、例えば、リポフェクタミン２０００を含み得る。
本明細書において詳述される系若しくは遺伝子コンストラクト、又はその少なくとも１つの成分、又はそれを含む医薬組成物は、対象に投与され得る。そのような組成物は、年齢、性別、体重、及び具体的な対象の状態、及び投与の経路などの要因を考慮して、医薬の分野における当業者に周知の投薬量及び技法によって、投与することができる。本明細書に開示される系、又はその少なくとも１つの成分、遺伝子コンストラクト、又はそれを含む組成物は、経口、非経口、舌下、経皮、直腸、経粘膜、局所、鼻内、膣内、吸入を介して、頬内投与を介して、胸膜内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、皮内、表皮、筋肉内、鼻内、髄腔内、頭蓋内、及び関節内、又はこれらの組合せを含む、異なる経路によって対象に投与され得る。ある特定の実施形態において、系、遺伝子コンストラクト、又はそれを含む組成物は、筋肉内、静脈内、又はこれらの組合せで、対象に投与される。系、遺伝子コンストラクト、又はそれを含む組成物は、インビボエレクトロポレーションあり及びなしでのＤＮＡ注射（ＤＮＡワクチン接種とも称される）、リポソーム媒介型、ナノ粒子促進型、組換えベクター、例えば、組換えレンチウイルス、組換えアデノウイルス、及び組換えアデノウイルス随伴ウイルスを含む、いくつかの技術によって、対象に送達され得る。組成物は、脳、又は中枢神経系の他の構成要素に、注射され得る。組成物は、骨格筋又は心筋に注射され得る。例えば、組成物は、前脛骨筋又は尾部に注射され得る。獣医学的使用については、系、遺伝子コンストラクト、又はそれを含む組成物は、通常の獣医学的慣例に従って好適に許容される製剤として、投与され得る。獣医であれば、特定の動物にもっとも適している投薬レジメン及び投与経路を容易に決定することができる。系、遺伝子コンストラクト、又はそれを含む組成物は、従来的なシリンジ、無針注射デバイス、「微粒子銃（microprojectile bombardment gone guns）」、又は他の物理的な方法、例えば、エレクトロポレーション（「ＥＰ」）、「流体力学的方法」、若しくは超音波によって投与され得る。或いは、非ウイルス若しくは非組込みウイルス遺伝子移入、又は精製されたタンパク質及び細胞透過性モチーフを含むｇＲＮＡの直接的な送達による、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベース系の一過性インビボ送達により、外来ＤＮＡの組込みの危険性が最小限であるか又はそれをまったく伴わずに、インサイチュにおける高度に特異的な矯正及び／又は復元が可能となり得る。
本明細書において詳述される、本開示の系若しくは遺伝子コンストラクト、又はその少なくとも１つの成分、又はそれを含む医薬組成物が送達され、ベクターが対象の細胞に送達されると、トランスフェクトされた細胞は、ｇＲＮＡ分子及びＣａｓ９分子又は融合タンパク質を発現し得る。
ａ．細胞型
本明細書において詳述される送達方法及び／又は投与経路のいずれも、多数の細胞型で利用することができる。本明細書において詳述される系又はその成分が形質転換又は形質導入された細胞が、本明細書においてさらに提供される。例えば、本明細書において詳述されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む細胞が、本明細書において提供される。好適な細胞型、例えば、細胞ベースの治療法に関して現在調査されている細胞型が、本明細書において詳述されており、これには、不死化筋芽細胞、例えば、野生型及びＤＭＤ患者に由来する株、初代ＤＭＤ皮膚線維芽細胞、幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞、骨髄由来始原細胞、骨格筋始原細胞、ＤＭＤ患者に由来するヒト骨格筋芽細胞、ＣＤ １３３＋細胞、中胚葉血管芽細胞（mesoangioblast）、心筋細胞、肝細胞、軟骨細胞、間葉始原細胞、造血幹細胞、平滑筋細胞、及びＭｙｏＤ若しくはＰａｘ７形質導入細胞、又は他の筋原性始原細胞が挙げられるが、これらに限定されない。細胞は、ヒト幹細胞であり得る。幹細胞は、ヒト人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であってもよい。細胞は、筋細胞であり得る。ヒト筋原性細胞の不死化は、遺伝子矯正された筋原性細胞のクローン誘導に使用することができる。細胞は、遺伝子矯正又は復元されたジストロフィン遺伝子を含み、ゲノムのタンパク質コーディング領域内に他のヌクレアーゼに誘導される突然変異を含まない、不死化ＤＭＤ筋芽細胞のクローン集団を単離及び拡大するように、エキソビボで改変させることができる。
７．キット
突然変異したジストロフィン遺伝子を矯正し、かつ／又はジストロフィン機能を復元するために使用することができる、キットが、本明細書において提供される。キットは、上述のように、ジストロフィン機能を復元するための遺伝子コンストラクト又はそれを含む組成物と、前記組成物を使用するための説明書とを含む。いくつかの実施形態において、キットは、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、そのバリアント、若しくはそのフラグメントを含むか、若しくはそれにハイブリダイズするか、若しくはそれを標的化するか、若しくはそれによってコードされる、少なくとも１つのｇＲＮＡ、並びに／又は配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、そのバリアント、若しくはそのフラグメントを含むか若しくはそれによってコードされる、少なくとも１つのｇＲＮＡスペーサー、並びに／又は配列番号６４～８６、８８、１７１～１８４から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、そのバリアント、若しくはそのフラグメントを含む少なくとも１つのｇＲＮＡ、並びに／又は配列番号５３～５６、１５４、及び１５５から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、そのバリアント、若しくはそのフラグメントを含むドナー配列を含む。キットは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系を使用するための説明書をさらに含み得る。
キットに含まれる説明書は、パッケージング材料に貼付されていてもよく、又は添付文書として含まれてもよい。説明書は、典型的に、印刷物に書かれたものであるが、そのようなものに限定されない。そのような説明を記憶し、それらをエンドユーザーに伝えることができる任意の媒体が、本開示によって企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（たとえば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（たとえば、ＣＤ ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において使用される場合、「説明書」という用語には、説明書を提供するインターネットサイトのアドレスが含まれ得る。
ジストロフィン機能を復元するための遺伝子コンストラクト又はそれを含む組成物は、上述のように、ジストロフィン遺伝子の領域に特異的に結合し、それを切断する、ｇＲＮＡ分子及びＣａｓ９タンパク質又は融合タンパク質を含む、改変されたＡＡＶベクターを含み得る。上述のように、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースの遺伝子編集系は、遺伝子における特定の領域、例えば、エクソン５２、又はイントロン５１、又はイントロン４４に特異的に結合し、それを標的とするために、キット内に含まれ得る。
８．方法
ａ．ジストロフィン機能を復元するための方法
本明細書において提供されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、ジストロフィン機能を復元するために使用され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系は、１つ又は複数のエクソンを付加してジストロフィンのリーディングフレームを復元することによって、ジストロフィン機能を復元し得る。標的筋肉に送達される本明細書において開示されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ベースの遺伝子編集系の使用は、例えば、遺伝子全体又は突然変異を含む領域を置き換えることができる修復鋳型又はドナーＤＮＡを用いて、完全機能性又は部分的機能性タンパク質の発現を復元し得る。
ジストロフィン機能を復元する方法が、本明細書において提供される。本方法は、突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するために使用され得る。本方法は、細胞又は対象を、本明細書において詳述される系、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド、又は本明細書において詳述されるベクターと接触させるステップを含み得る。いくつかの実施形態において、ジストロフィン機能は、ドナー配列の挿入、例えば、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９又はエクソン４５～７９の挿入によって、復元される。いくつかの実施形態において、対象は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーに罹患している。
本方法は、１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンによって引き起こされる破壊されたジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するために使用され得る。本方法は、細胞又は対象を、本明細書において詳述される系、本明細書において詳述される組換えポリヌクレオチド、又は本明細書において詳述されるベクターと接触させるステップを含み得る。いくつかの実施形態において、ジストロフィン機能は、１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンに対応するジストロフィン遺伝子の１つ又は複数の野生型エクソンを挿入することによって、復元される。いくつかの実施形態において、ジストロフィン機能は、ドナー配列の挿入、例えば、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９又はエクソン４５～７９の挿入によって、復元される。いくつかの実施形態において、対象は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーに罹患している。
９．実施例
例示目的で提示され、本発明の範囲を制限することを意図するものではない、以下の実施例を参照することによって、前述の内容がより良好に理解され得る。本開示は、付随する非限定的な実施例によって例示される複数の態様及び実施形態を有する。
（実施例１）
材料及び方法
プラスミド設計及びＡＡＶ産生。ＩＴＲを含むスタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９（ｐＡＡＶ－ＳａＣａｓ９）発現プラスミドを、ギブソンクローニング戦略を使用して、ＳａＣａｓ９のカルボキシル末端に３ｘＨＡエピトープを付加することによって生成した。ＣＭＶ－ＳａＣａｓ９－３ｘＨＡ－ポリＡを、細胞培養実験において安定性のためにＩＴＲなしで新しいプラスミド（ｐＳａＣａｓ９）に移入した。ｈＵ６作動性ガイドＲＮＡカセット（Nelson, C. E., et al. Science 2016, 351, 403-407）を有する別個のプラスミド（ｐＵ６－ｇＲＮＡ）を、インビトロでガイドをスクリーニングするためにＢｂｓＩクローニングで使用した。ＡＡＶ－ｇＲＮＡ－ドナープラスミド（ｐＡＡＶ－ｇ１２－Ｅｘ５２、ｐＡＡＶ－ｇ７－Ｅｘ５２、及びｐＡＡｖ－ｇ７－スーパーエクソン）については、遺伝子ブロックを、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ技術（ＩＤＴ）によって合成し、ギブソンクローニング戦略によってＩＴＲを含むプラスミドに組み込んだ。インタクトなＩＴＲを、ＳｍａＩ消化によって検証した後に、すべてのベクターにおいてＡＡＶ産生を行った。ＡＡＶ２及びＡＡＶ９の複数のバッチを、Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙにおいて産生した。力価を、プラスミド標準曲線を用いてｑＰＣＲによって測定した。
インビトロｇＲＮＡスクリーニング。ｇＲＮＡのパネル（表１）を、ヒトＤＭＤ遺伝子のイントロン５１を標的とするように設計し、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞及びＤＭＤ患者筋芽細胞において、ＳｕｒｖｅｙｏｒアッセイによってＳａＣａｓ９活性に関して比較した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ、Ｇｉｂｃｏ）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において維持した。不死化ＤＭＤ患者８０３６筋芽細胞（ＤＭ８０３６細胞株、ＤＭＤ遺伝子におけるエクソン４８～５０が欠失している）（Mamchaoui, K., et al. Skelet. Muscle 2011, 1, 34）を、２０％ ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、５０μｇ／ｍＬフェチュイン（Ｓｉｇｍａ）、１０ｎｇ／ｍＬヒト上皮成長因子（Ｓｉｇｍａ）、１ｎｇ／ｍＬヒト塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ、Ｓｉｇｍａ）、１０μｇ／ｍＬヒトインスリン（Ｓｉｇｍａ）、４００ｎｇ／ｍＬデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）、１％ ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び１％ Ｐ／Ｓを含む骨格筋培地（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）において維持した。細胞を、３７℃、５％ ＣＯ2でインキュベートした。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、製造業者のプロトコールに従って、リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、３７５ｎｇのｐＳａＣａｓ９及び１２５ｎｇのｐＵ６－ｇＲＮＡプラスミドをトランスフェクトした。ＤＭＤ筋芽細胞に、事前に最適化した条件を使用して、ＰＢＳにおいてＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ ＸＣｅｌｌ（ＢｉｏＲＡＤ）で１０μｇのｐＳａＣａｓ９及び１０μｇのｐＵ６－ｇＲＮＡプラスミドをエレクトロポレーションした（Ousterout, D. G., et al. Mol. Ther. 2015, 23, 523-532）。細胞を、７２時間インキュベートし、ゲノムＤＮＡを、ＤＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）で単離した。インデルを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＡｃｃｕＰｒｉｍｅ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＰＣＲキットを使用して実行した目的の領域のＰＣＲによって特定し（表２に提供されるＳｕｒｖｅｙｏｒ Ｐｒｉｍｅｒｓ）、続いて、Ｓｕｒｖｅｙｏｒ Ｎｕｃｌｅａｓｅとともにインキュベートし、以前に説明されているように、ＴＢＥゲル（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で電気泳動させた（Nelson, C. E., et al. Science 2016, 351, 403-407、Guschin, D. Y., et al. Methods Mol. Biol. 2010, 649, 247-256）。
Figure 2023522788000002

Figure 2023522788000003

Figure 2023522788000004
動物。動物が関与するすべての実験は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）の研究室動物の扱い及び使用に関するガイドラインに厳密に従って行った。すべての実験は、Ｄｕｋｅ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）によって承認を受けていた。ｈＤＭＤ／ｍｄｘマウス（t Hoen, P. A., et al. J. Biol. Chem. 2008, 283, 5899-5907）は、Ｌｅｉｄｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒの厚意により提供を受けた。ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスの発生は、Ｄｕｋｅ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｍｏｕｓｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙが完了させた。簡単に述べると、Ｂ６ＳＪＬＦ１／Ｊ雌性ドナーを、１日目に５ＩＵのＰＭＳＧ、及び３日目に５ＩＵのＨＣＧの腹腔内注射によって過排卵させ、続いて、繁殖能力のある雄性ｈＤＭＤ／ｍｄｘと交尾させた。４日目に、胚を採取し、Ｓ．ピオゲネスＣａｓ９をコードするｍＲＮＡ、並びにヒトイントロン５１（ＣＴＣＴＧＡＴＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＴＧＴＴ、配列番号９６）及びヒトイントロン５２（ＣＴＡＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＣＡＣＣＡＧＴＴＣＴ、配列番号９７）を標的とするｇＲＮＡを、注射した。注射した胚を、偽妊娠ＣＤ１雌性マウスに埋め込んだ。ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ゲノムＤＮＡをキメラ仔の耳パンチにより抽出し、エクソン５２の存在又は欠失に関してスクリーニングした。エクソン５２の喪失を有するマウスを、ｍｄｘマウスと交配させた。結果として得られた雄性ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ（ｈｅｔ；ｈｅｍｉ）マウスを、実験に使用した。
インビトロＡＡＶ形質導入。初代筋芽細胞を、以前に説明されているように（Springer, M. L., Rando, T. A. & Blau, H. M. Gene delivery to muscle. Curr. Protoc. Hum. Genet. Chapter 13, Unit13.14）、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスの前脛骨筋（ＴＡ）及び腓腹筋から単離し、２０％ ＦＢＳ、５ｎｇ／ｍＬ ｂＦＧＦ、及び１％ Ｐ／Ｓを補充したＦ１０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において維持した。細胞を、ウシＩ型コラーゲン（Ｓｉｇｍａ）でコーティングしたプレートで成長させ、３７℃、５％ ＣＯ2でインキュベートした。形質導入のために、細胞を、１．５時間播種した後、ＡＡＶ２－ＳａＣａｓ９及びＡＡＶ２－ｇＲＮＡ－ドナーベクターを合わせ、細胞当たり１×１０6の総ベクターというＭＯＩで、プレートに添加した。細胞を、即座に、３０００ｘｇで５分間遠心処理し、インキュベーターに戻した。細胞が７０％のコンフルエンシーに達した後、培地を、５％ウマ血清及び１％ Ｐ／Ｓを補充したＤＭＥＭに交換し、筋線維への分化のために、２日ごとに置き換えた。細胞を、１０日間分化させ、記載されるように、ゲノムＤＮＡ、全ＲＮＡ、及びタンパク質の分析のために処理した。
初代ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ筋芽細胞に由来するゲノムＤＮＡ及びＲＮＡの分析。ＤＮｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）を製造業者のプロトコールに従って使用して、ゲノムＤＮＡを単離した。ＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ及びＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、全ＲＮＡを単離した。ファーストストランドｃＤＮＡ合成を、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用し、サンプル１つ当たり５００ｎｇの全ＲＮＡを使用して行い、２５℃で１０分間、４２℃で２時間、８５℃で５分間、インキュベートした。ドナー組込みを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＡｃｃｕＰｒｉｍｅ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＰＣＲキットを製造業者のプロトコールに従って使用したＰＣＲ（プライマーは表２に提供されている）によって検出し、１％アガロースゲルで電気泳動させた。製造業者の説明書に従ってＰｒｏｇｒａｍ １を使用して、ｃＤＮＡ合成及び一次ＰＣＲ（プライマーは表２に提供されている）のために、ＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ５’／３’キット（Ｔａｋａｒａ）を使用して、３’ ＲＡＣＥをＲＮＡサンプルに実行した。
インビボＡＡＶ投与。成体６～８週齢マウスに、マウス１匹当たり４０μＬのＰＢＳ又はＡＡＶベクターを、前脛骨筋への筋肉内注射によって投与した。ドナー比較研究のために、１．５６ｅ１２総ｖｇを、１：１の処置群（７．８１ｅ１１ ＡＡＶ－Ｃａｓ９及び７．８１ｅ１１ ＡＡＶ－ドナー）に投与し、２．１３ｅ１２総ｖｇを、１：５の処置群（３．５５ｅ１１ ＡＡＶ－Ｃａｓ９及び１．７７ｅ１２ ＡＡＶ－ドナー）に投与した。ｇＮＲＡ比較研究のために、８．６４ｅ１１総ｖｇを、１：１の処置群（４．３２ｅ１１ ＡＡＶ－Ｃａｓ９及び４．３２ｅ１１ ＡＡＶ－ドナー）に投与し、７．００ｅ１１総ｖｇを、１：５の処置群（１．１７ｅ１１ ＡＡＶ－Ｃａｓ９及び５．８３ｅ１１ ＡＡＶ－ドナー）に投与した。２日齢（Ｐ２）の新生児マウスに、マウス１匹当たり４０μＬのＡＡＶベクターで、顔面静脈から静脈内注射によってＡＡＶを投与した（Gombash Lampe, et al. J. Vis. Exp. 2014, e52037）。１：１処置群については、８．６４ｅ１１総ｖｇを投与し（４．３２ｅ１１ ＡＡＶ－Ｃａｓ９及び４．３２ｅ１１ ＡＡＶ－ドナー）、１：５処置群については、７．００ｅ１１総ｖｇを投与した（１．１７ｅ１１ ＡＡＶ－Ｃａｓ９及び５．８３ｅ１１ ＡＡＶ－ドナー）。設定した時点で、マウスを安楽死させ、骨格筋、心筋、及び血清を採取した。
液滴デジタルＰＣＲ。ＷＸ２００ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲシステムを製造業者の説明書に従って使用して、定量的ｄｄＰＣＲを、ｃＤＮＡ及びｇＤＮＡサンプルに行った。矯正された転写産物のレベルを定量化するために、Ｑｉａｇｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌキットを使用して、ＲＮＡをマウス組織から抽出した。続いて、上述のようにサンプル１つ当たり５００ｎｇの全ＲＮＡを使用して、ファーストストランドｃＤＮＡ合成を行った。ｄＵＴＰなしのＱＸ２００ ｄｄＰＣＲ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｆｏｒ Ｐｒｏｂｅｓ（ＢｉｏＲａｄ）並びにヒトジストロフィンＥｘ５１－５２ジャンクション（矯正、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカスタムアッセイ識別子：ＡＰ２ＸＤＺ９）、ヒトジストロフィンＥｘ５１－５３ジャンクション（未編集、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカスタムアッセイ識別子：ＡＰ３２７Ｋ６）、及びヒトジストロフィンＥｘ５９－６０（入力正規化、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒカスタムアッセイ識別子：ＡＰ４７Ｚ６３）に結合するように設計されたプローブを有するＴａｑｍａｎアッセイ（表２）を使用して、エクソン５２を含む矯正されたｈＤＭＤ転写産物を検出した。ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、それぞれの反応における陽性液滴の数に基づいて、定量化を判定した。矯正又は未編集の転写産物レベルのｃＤＮＡインプットは、それぞれ、陽性液滴のＥｘ５１－５２又はＥｘ５１－５３の数を、それぞれの反応における陽性Ｅｘ５９－６０液滴の数で除算することによって、正規化した。矯正された転写産物のパーセンテージを、（正規化Ｅｘ５１－５２）／［（正規化Ｅｘ５１－５２）＋（正規化Ｅｘ５１－５３）］×１００として計算した。ベクターゲノム定量化のために、Ｑｉａｇｅｎ ＤＮｅａｓｙキットを使用して、ｇＤＮＡをマウス組織から抽出し、３７℃で１時間、ＨｉｎｄＩＩＩ－ＨＦで消化させた。ｄＵＴＰなしのＱＸ２００ ｄｄＰＣＲ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｆｏｒ Ｐｒｏｂｅｓ（ＢｉｏＲａｄ）、並びにＳａＣａｓ９（ＡＡＶ－ＳａＣａｓ９、ＢｉｏＲａｄ固有アッセイ識別子：ｄＣＮＳ１５９３８０９６５）、Ｕ６（ＡＡＶ－ｇＲＮＡ－ドナー、ＢｉｏＲａｄ固有アッセイ識別子：ｄＣＮＳ１１６６７６５２９）、及びマウスＥＥＦ２（入力正規化、ＢｉｏＲａｄ固有アッセイ識別子：ｄＭｍｕＣＮＳ７８１６８８８１３）に結合するように設計されたプローブを有するＢｉｏＲａｄアッセイ（表２）を使用して、エピソームを検出した。ＱｕａｎｔａＳｏｆｔ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアを使用して、それぞれの反応における陽性液滴の数に基づいて、定量化を判定した。エピソーム定量化は、ＳａＣａｓ９又はＵ６陽性液滴の数を、対応する反応におけるマウスＥＥＦ２陽性液滴の数で除算することによって、二倍体ゲノム当たりのウイルスゲノム（ｖｇ／ｄｇ）として計算した。
トランスポゾンに媒介される標的濃縮及びシーケンシング。Ｔｎ５トランスポサーゼタンパク質を、以前に説明されているように発現させ、精製した（Picelli, S., et al. Genome Res. 2014, 24, 2033-2040）。ゲノムＤＮＡのタグメンテーションは、固有の分子インデックス（ＵＭＩ）を含めるように以下の改変を用いて、以前に説明されているように完了させた（Giannoukos, G., et al. BMC Genomics 2018, 19, 212）。ＲＮＡ転写産物分析については、上述のようにサンプル１つ当たり５００ｎｇの全ＲＮＡを使用して、ファーストストランドｃＤＮＡ合成を行った。クレノウフラグメントＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）を使用して、セカンドストランド合成を行い、Ａｍｐｕｒｅビーズ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を１．８×で使用して精製した。すべてのプライマー配列は、表２に提供されている。簡単に述べると、リンカーオリゴヌクレオチド（Ｔｎ５－トップは、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ｉ７アダプター配列及び１０ヌクレオチドのＵＭＩを含み、Ｔｎ５－ボトムは、Ｔｎ５－ＭＥ配列を含む）をアニーリングし、Ｔｎ５でアセンブルした。ゲノムＤＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して定量化し、セカンドストランド産物を、Ｑｕｂｉｔ Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して定量化した。２００ｎｇのゲノムＤＮＡ又はセカンドストランド産物のタグメンテーションは、１：４０希釈のアセンブルしたＴｎ５を使用して行い、ＤＮＡ Ｃｌｅａｎ ａｎｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ－５カラム又は９６ウェルのキット（Ｚｙｍｏ）を使用して精製した。標的とされる配列を濃縮するために、ゲノム特異的プライマー（Ｔｎ５－ＧＳＰ、カスタムアダプターを含む）を使用した１回目のＰＣＲは、２５サイクルの間にトランスポゾンによって挿入されるｉ７アダプター配列に特異的なリバースプライマー（Ｔｎ５－ユニバーサル）とともに使用した。アンプリコンを、１．８ｘのＡｍｐｕｒｅビーズで精製した。カスタムアダプター配列に特異的なバーコードプライマー（Ｔｎ５－ＢＣ）を使用した２回目のＰＣＲを使用して、６ヌクレオチドの実験バーコードを付加し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ｉ５アダプターを、１５サイクルの間Ｔｎ５－ユニバーサルリバースプライマーとともに使用した。アンプリコンを、ゲル精製し、続いて、０．６ｘのＡｍｐｕｒｅビーズで精製して、２５０ｂｐを上回るフラグメントサイズを選択した。シーケンシングは、２５０／５０－サイクルペアエンドリードをカスタムリード１プライマー（Ｔｎ５－リード１）とともに使用してＩｌｌｕｍｉｎａ Ｍｉｓｅｑで、又は３００サイクルシングルエンドリードをカスタムリード１プライマー（Ｔｎ５－リード１）及びカスタムインデックス１プライマー（Ｔｎ５－インデックス１）とともに使用してＩｌｌｕｍｉｎａ Ｎｏｖａｓｅｑ ｖ１．５で、行った。Ｔｎ５ベースの方法は、アンプリコンのサイズに起因するＰＣＲ関連バイアスを低減させることが予測されるが、しかしながら、転位選択性に起因するなんらかのバイアスが残る場合がある（Giannoukos, G., et al. BMC Genomics 2018, 19, 212）。簡単に述べると、分析ステップは、以下の通りである：脱多重化する。それぞれのサンプルのバーコードの一覧を使用して、ｆａｓｔｑファイルを脱多重化する。トリミングする。Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃを使用して、３’アダプター及び低品質塩基を除去する。アライメント及び脱重複処理。ｂｗａ－ｍｅｍを使用して、リードを参照ゲノムにアライメントし（ｇＤＮＡを、マウスゲノム（ＧＲＣｍ３８）＋ヒトＤＭＤにアライメントし、ｃＤＮＡを、ヒトジストロフィンｃＤＮＡにアライメントする）、ＰＣＲ重複物に、Ｐｉｃａｒｄ ＭａｒｋＤｕｐｌｉｃａｔｅｓを使用して印をつけ、除去する。参照ビンの配列に対してアライメントする。標的とされる遺伝子座及び予測される編集にアライメントするための参照アンプリコンを構築する。誤ったプライミングに起因するリードを除去するために、ＧＳＰ予測配列に直接的に隣接する２０塩基を含まないリードをフィルタリング除去する。編集部位から十分に遠くに及んでいないリードを除去するために、ビンニングに必要とされる最小の長さよりも短いリードをフィルタリング除去する。オンサイトで脱重複処理したリードを、ｂｗａ－ｍｅｍを使用して参照アンプリコンにアライメントする。予測切断部位又はジャンクションにインデル±１５ｂｐが存在するリードを特定する。異なるＵＭＩの数を、それぞれの編集についてカウントする。
ウエスタンブロット。タンパク質を、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）を含むＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）においてＢｉｏＭａｓｈｅｒ ＩＩ Ｍｉｃｒｏ Ｔｉｓｓｕｅ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（ＶＷＲ）での破壊によって、筋組織から単離し、間欠的にボルテックスしながら氷上で３０分間インキュベートした。サンプルを、４℃で３０分間、１６，０００ｘｇで遠心処理し、上清を回収した。ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎアッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を製造業者のプロトコールに従って使用して、総タンパク質を定量化し、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ２ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒで測定した。サンプルを、ＮｕＰＡＧＥローディング緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び５％ β－メルカプトエタノールと混合し、３．１２５μｇのｈＤＭＤ／ｍｄｘタンパク質又は２５μｇのすべての他のタンパク質サンプルを、１００℃で１０分間加熱した。サンプルを、ＭＥＳ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む４～１２％ ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にロードし、氷上で４５分間、２００Ｖで電気泳動させた。タンパク質を、９０分間、４℃で４００ｍＡにおいて、０．０１％ ＳＤＳを含む１Ｘ トリス－グリシン移入緩衝液中で、ニトロセルロース膜に移した。ブロットを、５％ミルク－ＴＢＳＴ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０）において、４℃で一晩ブロッキングした。ブロットを切断し、抗ＭＡＮＤＹＳ１０６（１：５０希釈、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅクローン２Ｃ６）、抗ＨＡ（１：１０００希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄクローン１６Ｂ１２、又は抗ＧＡＰＤＨ（１：５０００希釈、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇクローン１４Ｃ１０）とともに、５％ミルク－ＴＢＳＴにおいて、室温で１時間インキュベートした。次いで、ブロットを、ＴＢＳ－Ｔ中で洗浄し、ヤギ抗マウスコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（１：２５００希釈、Ｓｉｇｍａ）又はヤギ抗ウサギコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼ（１：２５００希釈、Ｓｉｇｍａ）とともに、５％ミルク－ＴＢＳ－Ｔにおいて、室温で１時間インキュベートした。ブロットを、ＴＢＳＴ中で洗浄し、次いで、ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＸＲＳ＋ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）でＷｅｓｔｅｒｎ－Ｃ ＥＣＬ基質（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、可視化処理した。
組織学的分析。筋肉を切除し、ＯＣＴに埋め込んだか、液体窒素で冷却したイソペンタンを使用して瞬間凍結させた。続いて、１０μｍの切片を、クライオスタット（Ｌｅｉｃａ）を使用して、事前処理した組織学的スライドに切り出した。スライドを、ＰＢＳ中で洗浄し、５％ ＢＳＡ及び０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を補充したＰＢＳにおいてブロッキングした。スライドを、室温で１時間、ブロッキング緩衝液においてマウス抗ＭＡＮＤＹＳ１０６（１：２００希釈、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅクローン２Ｃ６）及びウサギ抗ラミニン（１：３００希釈、Ｓｉｇｍａ Ｌ９３９３）で染色した。スライドを、ＰＢＳで５分間、３回洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ２ａ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４（１：５００希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ－２１１３５）又はヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（１：５００希釈、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ａ－１１０３４）を、室温で１時間、ＤＡＰＩ（１：１０００希釈）とともに適用した。スライドを洗浄し、ＰｒｏＬｏｎｇ Ｇｏｌｄ Ａｎｔｉｆａｄｅ Ｍｏｕｎｔａｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で封入し、Ｚｅｉｓｓ ＡｘｉｏＯｂｓｅｒｖｅ ７顕微鏡でイメージングした。総線維（抗ラミニン）は、ＩｍａｇｅＪで粒子分析機能を使用してカウントし（Schindelin, J., et al. Nat. Methods 2012, 9, 676-682）、ヒトジストロフィン陽性線維（抗ＭＡＮＤＹＳ１０６）は、それぞれのサンプルについて、５つの一連のランダム化画像から手作業でカウントした。ジストロフィン陽性線維パーセントは、それぞれの画像のジストロフィン陽性線維を総線維で除算したものとして計算した。Ｐ値は、テューキーの多重比較事後検定を用いてネスト型グローバル一元配置ＡＮＯＶＡによって計算した。
オフターゲット分析。ＣＩＲＣＬＥ－ｓｅｑライブラリー（Tsai, S. Q., et al. Nat. Methods 2017, 14, 607-614）を、以前に説明されているように生成した（Kocak, D. D., et al. Nat. Biotechnol 2019, 37, 657-666）。およそ５０～１００μｇのＨＥＫ２９３Ｔ ｇＤＮＡを使用して、それぞれの反応についてサークルを生成した。４℃でＤｉａｇｅｎｏｄｅ Ｂｉｏｒｕｐｔｏｒ ＸＬ超音波処理装置を使用して、ｇＤＮＡを、アガロースゲル電気泳動によって判定される可視範囲２００～１０００ｂｐでおよそ５０ｂｐの平均サイズに超音波処理した。サークルを生成するための酵素手順を、以前に説明されているように実行した（Tsai, S. Q., et al. Nat. Methods 2017, 14, 607-614）。サークルのインビトロ消化のために、ｇＲＮＡを、ＩＤＴから合成し、ＳａＣａｓ９を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓから購入した。ライブラリー産生は、ＣＨＡＮＧＥ－ｓｅｑについて以前に説明されているように実行した（Lazzarotto, C. R., et al. Nat. Biotechnol. 2020, 38, 1317-1327）。ライブラリーを、ｑＰＣＲベースのＫＡＰＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＫＡＰＡ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって定量化し、プールし、１５０ｂｐのペアエンドリードでＩｌｌｕｍｉｎａ ＮｅｘｔＳｅｑ機器においてシーケンシングした。リードカウントは、ＣＨＡＮＧＥ－ｓｅｑについて以前に説明されている方法及びソフトウェアを使用して取得した（Lazzarotto, C. R., et al. Nat. Biotechnol. 2020, 38, 1317-1327）。分析パイプラインの実行には、以下のパラメーターを使用した：リード閾値４、ウインドウサイズ３、ｍａｐｑ閾値５０、開始閾値１、ギャップ閾値３、ミスマッチ閾値６、及びＮＮＧＲＲＮのＰＡＭ（配列番号８、Ran, F. A., et al. Nature 2015, 520, 186-191）。
クレアチンキナーゼアッセイ。Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｒｅａｔｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ｒｅａｇｅｎｔセット（Ｐｏｉｎｔｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造業者の説明書に従って使用して、血清クレアチンキナーゼを測定した。簡単に述べると、５μＬの血清を、４５μＬの滅菌ＰＢＳ中に希釈し、試薬とともに３７℃で２分間インキュベートした後、３４０ｎｍの読み取りに設定したナノドロップ分光光度計を使用して、吸光度測定を１分ごと３回の読み取りで行った。Ｕ／Ｌ単位での総クレアチンキナーゼの計算を、製造業者の説明に従って行った。
統計学的分析。すべてのデータは、４～６個の生物学的複製物で分析し、平均±標準誤差として提示した。すべてのｐ値は、テューキーの事後検定を用いたグローバル一元配置ＡＮＯＶＡによって計算した（α＝０．０５）。
（実施例２）
ＤＭＤのヒト化マウスモデルの矯正戦略
ｈＤＭＤ／ｍｄｘマウスは、特徴的なｍｄｘ突然変異に起因して、マウスジストロフィンが欠如しているが、マウス第５染色体上の全長ヒトＤＭＤ（ｈＤＭＤ）遺伝子によりヒトジストロフィンを産生する。これらのマウスを使用して、患者集団においては失われていることが知られているｈＤＭＤエクソンを除去し、それによってすべてのジストロフィン発現を排除することによって、ヒト化ＤＭＤマウスモデルを生成することができる。重要なことに、これらのヒト化モデルは、ヒトジストロフィン復元によりマウスジストロフィンの欠如を機能的に補うことができるため、治療戦略を試験するために使用することができる。様々な遺伝子編集治療戦略を研究するため、標的とされるｈＤＭＤ遺伝子からエクソン５２の欠失のために、ストレプトコッカス・ピオゲネスＣａｓ９（ＳｐＣａｓ９）及びｇＲＮＡをｈＤＭＤ／ｍｄｘ接合体に送達することによって、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスモデルを生成した。エクソン５２の欠失は、未成熟終止コドン、及びそれに続くジストロフィン発現の喪失を生じるフレーム外突然変異（図３Ａ）をもたらす。全長ジストロフィン発現を復元するために、このヒト化ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスモデルにおいて、エクソン５２を、ｈＤＭＤ遺伝子内の対応する位置に挿入するように、ＨＩＴＩベースのアプローチを開発した。この二重ＡＡＶベクターアプローチには、スタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９（ＳａＣａｓ９）発現カセットをコードする１つのＡＡＶベクター（Ran, F. A., et al. Nature 2015, 520, 186-191）、及びｈＤＭＤ遺伝子のイントロン５１において見出される同じｇＲＮＡ標的部位が隣接するエクソン５２ドナー配列（Ｅｘ５２）を有するｇＲＮＡ発現カセットをコードする第２のＡＡＶベクターが含まれる。両方のＡＡＶベクターの共送達後に、Ｃａｓ９及びｇＲＮＡを発現させ、ゲノム標的部位にＤＳＢを作成し、同様に、Ｅｘ５２ドナー配列をＡＡＶベクターから遊離させ、ＮＨＥＪベースの修復の後に、エクソン５２配列が標的部位に組み込まれ、全長ジストロフィン遺伝子を復元するようにした。正しいドナー組込みにより、ｇＲＮＡ標的配列が破壊され、さらなるＣａｓ９ベースの編集が妨げられるように、ｇＲＮＡ標的部位は、ゲノムＤＮＡ及びＡＡＶベクターにおいて反対の配向であった（図３Ａ）。
（実施例３）
ＨＩＴＩに媒介される組込みのスクリーニング及び検証
ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９系によるＤＮＡ切断の特異性は、このアプローチの安全性及び有効性を確保するために極めて重要である。可能性のあるオフターゲット作用を最小限に抑えるために、バイオインフォテック分析を使用して、マウス及びヒトゲノムにおける予測オフターゲット部位が限定されているｇＲＮＡを設計した。イントロン５１を標的とするＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡのパネル（図８Ａ、表１）をスクリーニングして、まず、Ｓｕｒｖｅｙｏｒアッセイ、続いてＨＥＫ２９３Ｔ細胞のプラスミドトランスフェクションを使用して、高い特異性及び活性を有する標的を特定した（図８Ｂ）。ＳａＣａｓ９活性は、スペーサーの長さの範囲にわたって変動し得るため、上位ｇＲＮＡの１９～２３ｎｔのスペーサーを生成し、ＤＭＤ患者の筋芽細胞へのプラスミドエレクトロポレーションの後にＳｕｒｖｅｙｏｒアッセイによって活性について個々にスクリーニングした（図８Ｃ）。もっとも高い活性レベル及びもっとも少ないオフターゲット部位を有する個々のｇＲＮＡ配列（ｇ１２及びｇ７）を、スクランブル非標的対照ｇＲＮＡ（ｇＳｃｂｌ）とともに、ｇＲＮＡ発現のためにＡＡＶベクタープラスミドにクローニングし、対応するスペーサー及びＰＡＭ標的配列は、ドナー配列に隣接して含まれた。
Ｅｘ５２ドナー配列の標的化組込みを検証するために、初代筋芽細胞を、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ骨格筋から単離した（図３Ｂ）。ＡＡＶプラスミドのエレクトロポレーション後に、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）におけるＥｘ５２の標的化組込みが、ｇ１２－Ｅｘ５２及びｇ７－Ｅｘ５２で処置したｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ初代筋芽細胞について、ＰＣＲ増幅ゲノム－ドナージャンクションのサンガーシーケンシングによって確認されたが、ｇＳｃｂｌ処置細胞では確認されなかった（図８Ｄ）。ＡＡＶに媒介される標的化組込み及びそれに続くジストロフィン転写産物の矯正及びタンパク質の復元を検証するために、初代筋芽細胞に、ＡＡＶ２を形質導入し、次いで、細胞を、ジストロフィン発現を上方調節する分化条件下において培養した（図３Ｂ）。両方のＡＡＶ２コンストラクトを同等の用量（１：１）で送達することに加えて、ＡＡＶ－Ｃａｓ９よりも５倍多いＡＡＶ－ドナー（１：５）の送達も、試験した。ＡＡＶ調製物の総量は、１：１及び１：５処置群で一貫しており、１：１処置群について、より多くのＡＡＶ－Ｃａｓ９ウイルスゲノムの送達がもたらされた。両方の送達比を使用して、Ｅｘ５２の標的化組込みが、ゲノム－ドナージャンクションのＰＣＲ増幅によってｇＤＮＡにおいて確認された（図３Ｃ）。より大きなアンプリコンの存在が検出され、これは、サンガーシーケンシングによって、インタクトなＡＡＶ－ドナーの組込みであると確認された（データは示されない）。加えて、Ｅｘ５２の存在が、ＰＣＲ増幅の後にジストロフィンｃＤＮＡにおいて観察され（図３Ｄ）、ジストロフィンタンパク質の復元がもたらされた（図３Ｅ）。１：１処置細胞において観察されたより高いＣａｓ９発現は、高いＡＡＶ－Ｃａｓ９ウイルス用量と相関していた。これらの結果により、Ｅｘ５２の標的化組込み及び全長ジストロフィンタンパク質復元について、ＡＡＶ－Ｃａｓ９ベースの戦略の活性が確認される。
（実施例４）
ＡＡＶ－Ｃａｓ９のエクソン５２組込みにより、インビボで全長ジストロフィンが復元される
ＡＡＶ９を、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系のｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス骨格筋及び心筋への送達に使用した。２つのＡＡＶベクターを成体ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ雄性マウスの前脛骨（ＴＡ）筋に共注射した後に（図４Ａ）、ｇ１２及びｇ７ベクターの両方について、同等レベルでの局所ＡＡＶベクター送達を、ＤＮＡベクターゲノムのデジタル液滴ＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）によって確認した（図４Ｂ）。Ｅｘ５２の標的化組込みは、両方のＡＡＶ送達比及びインタクトなＡＡＶ－ドナー組込みを使用したゲノム－ドナージャンクションのＰＣＲ増幅によって、ＴＡ組織に由来するｇＤＮＡにおいて確認された（図４Ｃ）。編集活性を定量化し、不偏的なアプローチにより可能性のあるゲノム編集結果を包括的にマッピングするために、Ｔｎ５－トランスポゾンベースのライブラリー調製方法（Nelson, C. E., et al. Nat. Med. 2019、Giannoukos, G., et al. BMC Genomics 2018, 19, 212）を適合させ、珍しい事象を定量化する精度を高めるためにＰＣＲ重複物を除去するための固有分子識別子（ＵＭＩ）を含めた。Ｔｎ５ベースの方法は、ｇＲＮＡ切断部位に隣接する単一のゲノム特異的プライマー（ＧＳＰ）を、Ｔｎ５が組み込まれたＤＮＡタグのトランスポゾン特異的プライマーと組み合わせて使用することによって、標的特異性及びアンプリコンの長さに関連するＰＣＲバイアスを排除した。正しい配向でのドナー組込みを定量化することに加えて、インデル、ドナー逆位組込み、及びＡＡＶ－ＩＴＲ組込みを含むゲノム編集事象を、測定した（図４Ｄ）。高い矯正及び全ゲノム編集事象が、ｇ７処置マウス（図４Ｅ、図４Ｆ、図９Ａ、及び図９Ｂ）において測定されたが、しかしながら、インデル及びＡＡＶ組込み編集はまた、ｇ１２処置マウス（図４Ｅ、図９Ａ、及び９Ｂ）においても観察された。矯正されたゲノムリードは、ｇ１２処置マウスにおいては検出されなかったが、すべての処置群について、エクソン５２の存在が、ＰＣＲ増幅後に、矯正されたジストロフィンｃＤＮＡにおいて観察され（図４Ｇ）、ｄｄＰＣＲによって定量化した（図４Ｈ）。全長ジストロフィン復元が、全ＴＡ組織ライセートのウエスタンブロットによって観察され（図４Ｉ）、ジストロフィン陽性線維を、免疫蛍光（ＩＦ）によって定量化した（図４Ｊ）。これらの結果により、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス骨格筋への局所注射後のＥｘ５２の標的化組込み及び全長ジストロフィンタンパク質復元について、ＡＡＶ－Ｃａｓ９ベースの戦略のインビボ活性が確認された。
ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ標的化特異性を評価することは、前臨床開発に重要であり得る。まとめると、より高いゲノム編集活性及び後続のジストロフィン復元が、ｇ７処置マウスについて観察され（図３Ａ～３Ｆ）、したがって、特異性分析は、ｇ７に焦点を当てた。不偏的な全ゲノムアッセイを用いてヒトゲノムにおけるｇ７の上位オフターゲット部位を経験的に判定するために、高スループットの全ゲノム編集定量化を行った（Tsai, S. Q., et al. Nat. Methods 2017, 14, 607-614、Lazzarotto, C. R., et al. Nat. Biotechnol. 2020, 38, 1317-1327）（図１０）。これらの分析により、オンターゲットｇＤＮＡ編集の編集活性が１．０７％以下である６個の可能性のあるオフターゲット部位が特定され、このｇ７ ｇＲＮＡの高い特異性が確認された。残りの研究については、ｇ７標的化全長ジストロフィン復元戦略に焦点を当てた。
（実施例５）
全長ジストロフィン復元のためのＡＡＶ－Ｃａｓ９スーパーエクソン戦略のインビトロ検証
ｇ７－Ｅｘ５２組込みアプローチは、Δ５２ ＤＭＤ患者の全長ジストロフィンを矯正し、Δ５２－５８、Δ５２－６１、及びΔ５２－７６患者突然変異について、短縮されたジストロフィンタンパク質を産生させるための適切なリーディングフレームを復元する。全長ジストロフィン矯正戦略をエクソン５１の下流の任意の遺伝子突然変異を処置するように拡張するために、ＡＡＶ－スーパーエクソンドナーベクターを操作した。このスーパーエクソンは、エクソン５２から７９を含め、エクソン５１の下流の完全ジストロフィンｃＤＮＡコーディング配列をコードするものであった。加えて、すべてのリーディングフレームにおいて確実に翻訳を終結するために、終止コドンを３ｘ終止と置き換え、ＳＶ４０ポリＡ配列を含め、ドナーカセットには以前に検証したｇ７標的部位を隣接させた（図５Ａ）。このｇ７－スーパーエクソンコンストラクトの標的化組込みにより、すべてのＤＭＤ患者のうちの２０％よりも多くにおいて、全長ジストロフィンを矯正することができた。
スーパーエクソンの組込み及びそれに続くジストロフィン転写産物の矯正及びタンパク質の復元を検証するために、初代筋芽細胞に、ＡＡＶ２を、１：１及び１：５のベクター比で形質導入し、次いで、細胞を、ジストロフィン発現を上方調節する分化条件下において培養した（図５Ｂ）。インタクトなＡＡＶ－ドナー組込みの検出に加えて、すべての処置サンプルについて、ゲノム－ドナージャンクションのＰＣＲ増幅によって、ｇＤＮＡにおいて標的化組込みが確認された（図５Ｃ）。両方のドナーからのエクソン５２の存在が、ＰＣＲ増幅の後にジストロフィンｃＤＮＡにおいて同等なレベルで観察された（図５Ｄ）。野生型ジストロフィン転写産物については、およそ２．７ｋｂの非翻訳領域（３’ ＵＴＲ）が、エクソン７９において、終止コドンの後に含まれた。スーパーエクソンドナーにおいては、この配列を、ＡＡＶのパッケージングサイズ制限（約４．７ｋｂ）に起因して短縮されたポリＡシグナルと置き換えた。この操作された３’ ＵＴＲを特徴付けるために、ＡＡＶを形質導入した細胞のｃＤＮＡを使用して、３’ ＲＡＣＥを行い、操作された３ｘ終止を認識するＧＳＰを使用して、スーパーエクソンにより矯正されたジストロフィン転写産物を増幅させた（図５Ｅ）。サンガーシーケンシングの後に、ポリＡ尾部の付加が、ＳＶ４０ポリＡシグナル配列内で観察された。次に、スーパーエクソンにより矯正されたジストロフィン転写産物が、ジストロフィンタンパク質の復元をもたらしたことを確認した（図５Ｆ）。これらの結果により、全長ジストロフィンタンパク質復元について、標的化されたＡＡＶ－Ｃａｓ９ベースのＥｘ５２－７９スーパーエクソン組込み戦略の活性が確認された。
（実施例６）
ＡＡＶ－Ｃａｓ９スーパーエクソン戦略により、骨格筋及び心筋における全長ジストロフィンが復元される
スーパーエクソン戦略をインビボで試験するために、ＡＡＶ９コンストラクトを、１：１及び１：５の比で、成体ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ雄性マウスのＴＡ筋に共注射した（図６Ａ）。スクランブル非標的ｇＲＮＡドナー（ｇＳｃｂｌ－Ｅｘ５２）が、追加の対照として含まれた。注射の８週間後に、ｄｄＰＣＲによって、処置群間で同等のＡＡＶベクターゲノムレベルが測定された（図６Ｂ）。Ｔｎ５ベースのライブラリー調製及び分析方法を使用して、標的化編集活性を定量化し、１：５処置マウスにおいて、もっとも高い編集レベルが得られた。このドナー比較研究において観察された低いｇ７－Ｅｘ５２編集レベル（図６Ｃ及び図１１Ａ～１１Ｂ）は、これまでのｇＲＮＡ比較研究（図４Ｅ及び図９Ａ～９Ｂ）とは対照的に、ベクターゲノム定量化における差によって示されるように、ＴＡにおける低いＡＡＶ形質導入に起因する可能性が高かった（図４Ｂ及び図６Ｂ）。Ｔｎ５分析によってバックグラウンドを上回る矯正されたｇＤＮＡレベルは検出されなかったが、矯正された転写産物のパーセントの増加が、すべての処置群について観察された（図６Ｄ）。加えて、全長ジストロフィン発現が、ウエスタンブロット（図６Ｅ）及びＩＦ（図６Ｆ）によって観察され、ジストロフィン陽性線維の定量化により、ｇ７－Ｅｘ５２処置マウスについて、スクランブル非標的化ドナー対照と比較して、有意な増加が得られた。これらの結果により、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウス骨格筋における局所注射後のスーパーエクソンの標的化組込み及び全長ジストロフィンタンパク質復元について、ＡＡＶ－Ｃａｓ９ベースの戦略のインビボ活性が確認された。
次に、これらの組込み戦略の矯正的治療能力を、全身送達後に評価した。心筋及び骨格筋の形質導入のために、ＡＡＶ９コンストラクトを、１：１及び１：５の比で、Ｐ２新生児ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘ雄性マウスの顔面静脈注射によって共送達した（図７Ａ）。注射の８週間後に、ｄｄＰＣＲによるベクターゲノム定量化により、心臓組織において、骨格（横隔膜及びＴＡ）組織よりも高い形質導入レベルが判明し（図７Ｂ）、処置マウスの心臓における高い編集活性の可能性が示唆された。実際に、Ｔｎ５ベースの定量化により、すべての定量化結果について、心臓ｇＤＮＡにおいて、横隔膜及びＴＡと比較して高い編集が判明し、ｇ７－スーパーエクソン処置群の心臓において、もっとも高いオンターゲット矯正が得られた（図７Ｃ及び図１２Ａ～１２Ｂ）。高いレベルの矯正されたジストロフィン転写産物が、ｇ７－スーパーエクソン処置群の心臓において観察され、マウスは、２５％を上回る矯正転写産物を達成した（図７Ｄ）。ｄｄＰＣＲベースの転写産物の定量化は、未編集（Ｅｘ５１－Ｅｘ５３ジャンクション）及び矯正（Ｅｘ５１－Ｅｘ５２ジャンクション）ｃＤＮＡ分子の検出に限定されていた。追加の心臓転写産物の特徴付けについては、推定上の異常なスプライシング事象を測定し、これには、逆位ドナー組込み、ＳａＣａｓ９コーディング配列でのスプライシング、環状ＲＮＡ形成（エクソン１～５１）、複数エクソンのスキッピング（エクソン５３～７９）、及び下流イントロン配列での選択的スプライシング（イントロン５１～５３）が含まれた（図７Ｅ）。ｄｄＰＣＲによって、Ｔｎ５ベースのディープシーケンシング戦略よりも高いレベルの編集が測定された。低いディープシーケンシング編集パーセンテージは、意図されない遺伝子編集結果を測定することにより生成される分母が大きいことに帰属し得る。ｃＤＮＡ分析については、高スループットのディープシーケンシング特徴付けにより、２匹の処置マウスにおいて、ＳａＣａｓ９コーディング配列での考慮すべき異常なスプライシングが判明した（図１３Ａ）。さらに調査すると、対応するゲノムマウスサンプルにおけるアライメント配列のゲノム組込みが、確認された（図１３Ｂ）。部分的なＳａＣａｓ９コーディング配列を含む、部分的なＡＡＶゲノムを含む転写産物アイソフォームは、不明な生物学的作用を有し、今後の研究で調査され得る。心臓組織において、全長ジストロフィン復元が、ウエスタンブロットによって確認され（図７Ｆ）、ジストロフィン陽性細胞が、すべての処置マウスにおいて検出された（図７Ｇ及び図１４）。スクランブル非標的化ｇＲＮＡドナー対照と比較して、ジストロフィン陽性細胞の有意な増加が、ｇ７－スーパーエクソン（１：１）処置マウスについて観察され、１匹のマウスについて、ほぼ５０％のジストロフィン陽性細胞が観察された。筋変性のマーカーである血清クレアチンキナーゼレベルは、対照ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスについて、ｈＤＭＤ／ｍｄｘマウスと比較して有意に高く、罹患ＤＭＤ表現型が示唆された（図７Ｈ）。加えて、血清クレアチンキナーゼレベルは、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスにおいて、すべての全身処置後に、低減され、復元された全長ジストロフィンタンパク質によって筋損傷からの保護が示された。
（実施例７）
考察
ＤＭＤ遺伝子療法戦略は、３０年近く調査されているが、全長ジストロフィンを矯正する戦略は欠如している。本研究において、ｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスにおける全長ヒトジストロフィン矯正及び復元のためのＨＩＴＩに媒介される導入遺伝子の標的化挿入の使用が、実証された。Ｃａｓ９標的化ゲノムＤＳＢを生成し、切断部位におけるＮＨＥＪに媒介される組込みのためのドナー配列を送達するために、二重ＡＡＶ送達系を使用した。本明細書において、骨格組織及び心臓組織における局所注射及び全身送達後のＮＨＥＪに媒介される組込みアプローチの治療能力が、実証された。加えて、ゲノム及び転写編集事象の特徴付け及び定量化のために、高スループットの不偏的シーケンシングを行った。
ＨＩＴＩに媒介される矯正の下流の結果としてジストロフィンタンパク質の復元がもたらされたが、ディープシーケンシング結果は、低いゲノム矯正効率を示す。高いジストロフィンタンパク質復元が低いゲノム編集効率から得られるという観察は、代替的なＤＭＤ遺伝子編集アプローチと一貫性がある。正常値の４％未満の低いジストロフィン発現レベルでさえも、潜在的な治療的利益が得られるが、ＨＩＴＩ効率を改善することは、ノックイン遺伝子療法戦略の臨床適用への移行に役立つであろう。本明細書において詳述される遺伝子編集戦略は、それが、標的とされる組織及び細胞への強力な送達を必要とするという点においては、他の遺伝子移入戦略と同様であり得る。ＡＡＶに媒介される組織特異的形質導入及び発現を改善するための方法、例えば、ＡＡＶキャプシド進化及びプロモーター操作により、遺伝子編集活性及び治療能力が改善され得る。加えて、分裂細胞及び非分裂細胞における標的化組込みは、ＮＨＥＪ調節因子を特定し、ＨＩＴＩに媒介される活性を増強させるための小分子標的の開発につなげることによって、増加し得る。或いは、マイクロホモロジーに媒介される末端結合（ＭＭＥＪ）、標的染色体への正確な組込み（ＰｉＴＣｈ、Precise Integration into Target Chromosome）、相同性に媒介される末端結合（ＨＭＥＪ）、及び細胞内線形化単一相同アームドナー媒介型イントロン標的化組込み（ＳＡＴＩ）を含む、他の標的化遺伝子ノックイン方法を、調査することができる。編集効率の継続的な進歩により、ＨＩＴＩに媒介される導入遺伝子ノックインは、矯正的遺伝子療法戦略の今後の開発に大いに有望である。
前臨床遺伝子編集研究は、ヒト化マウスモデルの使用により利益を得ることができるが、これは、それらが、特にヒト患者を処置するように設計された治療的アプローチの試験を許容するためである。ＨＩＴＩベースの遺伝子療法戦略を、患者において見出される突然変異を再現するＤＭＤ疾患モデルに適用するために、ＤＭＤ患者の突然変異ホットスポットであるエクソン４５～５５における遺伝子欠失を含むｈＤＭＤΔ５２／ｍｄｘマウスを利用した。失われているエクソン５２コーディング配列の標的化組込みの後に、全長タンパク質復元が示された。この矯正的遺伝子療法アプローチを、より大きな患者集団（＞２０％）に拡大するために、エクソン５１の後に位置するすべての患者突然変異を矯正することができる、エクソン５１の下流の完全ヒトジストロフィンｃＤＮＡコーディング配列をコードするスーパーエクソンを操作し、このアプローチを使用した全長タンパク質の復元が実証された。本研究は、全長ジストロフィンを恒久的に矯正する標的化遺伝子編集アプローチの初めての実証である。このアプローチを、例えば、ＳａＣａｓ９及びイントロン４４を標的とするｇＲＮＡをコードする１つのＡＡＶ、並びにエクソン４４の下流（エクソン４５～７９）のヒトジストロフィンｃＤＮＡコーディング配列を含む第２のドナーＡＡＶベクターを有する二重ＡＡＶベース系を用いて、エクソン４５～５５ホットスポット（すべての患者の５０％超）内及びその下流に突然変異を有するすべての患者まで拡張した。イントロン４４を標的とするｇＲＮＡの配列は、表３に示されている。ヒトジストロフィン遺伝子のエクソン４５～７９は、配列番号１５４のポリヌクレオチドによってコードされ得、エクソン４５～７９の挿入のためのドナー配列の例は、配列番号１５５に示されている。
Figure 2023522788000005
操作されたスーパーエクソンドナーは、矯正されたゲノム編集からのｍＲＮＡ生成の際の正しい転写シグナルを確保するために、短縮されたポリＡシグナルをコードする。３’ ＲＡＣＥ特徴付けにより、スーパーエクソンにより矯正された転写産物におけるポリＡ尾部の付加が確認された（図４Ｅ）。ｍＲＮＡ安定性のために最適化された３’ ＵＴＲを有するスーパーエクソンドナーを操作することを目指す今後の取り組みは、増強された治療能力をもたらし得る。ＨＩＴＩに媒介される単一エクソン及びスーパーエクソン遺伝子編集アプローチはまた、ＡＡＶ送達ベクターに完全にパッケージングするには大きすぎる場合があるか、又は血友病、嚢胞性線維症、及び１型神経線維腫症を含む広範な患者突然変異によって特徴付けることができる、ＤＭＤなどの遺伝子標的を有するものなどを含め、他の遺伝子疾患にも適用することができる。
これまでに、原理証明のＨＩＴＩに媒介される遺伝子矯正的戦略により、Ｓｕｒｖｅｙｏｒ分析、インアウトＰＣＲ増幅、ｄｄＰＣＲ、及びＴＯＰＯシーケンシングによる編集結果を特徴付けた。本研究において、多様なＨＩＴＩに媒介される編集結果のより良好な分解のために、Ｔｎ５－トランスポゾンベースのライブラリー調製方法及び不偏的ディープシーケンシング特徴付けを使用した。これらの方法を使用して、意図されるドナー矯正のゲノム部位特異的組込み、逆位ドナー挿入、インデル、ＡＡＶ－ＩＴＲ組込み、及びＡＡＶ－Ｃａｓ９コーディング配列を、検出した。ｃＤＮＡ編集の分析は、下流イントロンにおける意図されるドナーの包含、逆位ドナー配列、Ｃａｓ９コーディング配列、環状ＲＮＡ、複数エクソンスキップ、及び選択的スプライス部位を含む、オンターゲットの意図したスプライシング及び異常なスプライシングを示した。これらの結果は、すべて、ＡＡＶ－ＣＲＩＳＰＲを使用した意図されない編集結果のこれまでの観察と一貫性がある。
遺伝子編集技術は、遺伝子突然変異を矯正して健常な野生型遺伝子配列を復元する能力に関して、信じられないほどの熱意を集めている。しかしながら、現在臨床試験に進んでいる遺伝子編集戦略の大半は、遺伝子破壊、代償となる因子の活性化、治療用遺伝子を非天然の「セーフハーバー」遺伝子座に導入すること、又は短縮された部分的に機能性の遺伝子配列の作成を伴う。本明細書において詳述される組成物及び方法は、遺伝子疾患の根本的な原因を処置するゲノム編集の完全な能力を実現することへの重要なステップを意味する。
＊＊＊
特定の態様に関する前述の説明は、本開示の一般概念から逸脱することなく、当業者が技能の範囲内の知識を適用することによって、過度の実験を行うことなくそのような特定の態様を容易に修正する、及び／又は様々な用途に適応することができる、本発明の一般的な本質を完全に明らかにしようとするものである。したがって、そのような適応及び修正は、本明細書に提示される教示及び案内に基づいて、開示される態様の均等物の意味及び範囲内であることが意図される。本明細書における表現法又は語法は、説明を目的とするものであり、制限を目的とするものではなく、そのため、本明細書の語法又は表現法は、当業者が教示及び案内を踏まえて解釈すべきものであることを、理解されたい。
本開示の広さ及び範囲は、上述の例示的な態様のいずれによっても制限されるものではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの均等物にのみ従って定義されるものである。
本出願において引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、及び／又は他の文書は、それぞれ個々の公開、特許、特許出願、及び／又は他の文書があらゆる目的で参照により個々に組み込まれるのと同程度に、あらゆる目的で、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
完全性の理由から、本発明の様々な態様は、以下の番号付けされた付記に記載される。
付記１．組成物をコードする１つ又は複数のベクターを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、前記組成物が、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）であって、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、ｇＲＮＡと、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列であって、前記野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、ドナー配列とを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
付記２． ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）であって、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、ｇＲＮＡと、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列であって、前記野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、ドナー配列とを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
付記３．組成物をコードする１つ又は複数のベクターを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、前記組成物が、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列とを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
付記４． ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、（ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、（ｂ）Ｃａｓタンパク質又はＣａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、（ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列とを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
付記５．前記ｇＲＮＡが、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、付記３又は４に記載の系。
付記６．前記ｇＲＮＡが、配列番号１２８又は配列番号１５６のポリヌクレオチド配列内の標的配列にハイブリダイズする、付記１、２、又は５に記載の系。
付記７．前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、付記３～６のいずれか１つに記載の系。
付記８．ドナー配列が、配列番号５３のポリヌクレオチド配列を含む、付記１、２、又は７に記載の系。
付記９．前記野生型ジストロフィン遺伝子の前記フラグメントが、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接している、付記１～８のいずれか１つに記載の系。
付記１０．前記ｇＲＮＡが、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５１とエクソン５２との間にあるイントロンを標的とする、付記１～９のいずれか１つに記載の系。
付記１１．前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物の複数のエクソンを含む、付記１～１０のいずれか１つに記載の系。
付記１２．前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子若しくはその機能的同等物のエクソン５２、エクソン５３、エクソン５４、エクソン５５、エクソン５６、エクソン５７、エクソン５８、エクソン５９、エクソン６０、エクソン６１、エクソン６２、エクソン６３、エクソン６４、エクソン６５、エクソン６６、エクソン６７、エクソン６８、エクソン６９、エクソン７０、エクソン７１、エクソン７２、エクソン７３、エクソン７４、エクソン７５、エクソン７６、エクソン７７、エクソン７８、及びエクソン７９から選択される１つ若しくは複数のエクソンを含むか、又は前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子若しくはその機能的同等物のエクソン５２～７９を含むか、又は前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子若しくはその機能的同等物のエクソン４５～７９を含む、付記１～１１のいずれか１つに記載の系。
付記１３．前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５２が、突然変異しているか、若しくは前記ジストロフィン遺伝子から少なくとも部分的に欠失しているか、又は前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５２が、欠失しており、前記イントロンが、対応する野生型ジストロフィン遺伝子において前記欠失したエクソン５２が存在するであろう場所に並置されている、付記１～１２のいずれか１つに記載の系。
付記１４．前記ｇＲＮＡが、（ａ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、（ｂ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列のフラグメント、（ｃ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列若しくはそのフラグメントの相補体、（ｄ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列若しくはその相補体に実質的に同一である、核酸、又は（ｅ）ストリンジェントな条件下において、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、若しくはその相補体、若しくはそれらに実質的に同一である配列にハイブリダイズする、核酸を含む、ポリヌクレオチド配列に結合し、それを標的とする、付記１～１３のいずれか１つに記載の系。
付記１５．前記ｇＲＮＡが、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、又はそのバリアントに結合し、それを標的とするか、又はそれによってコードされる、付記１～１４のいずれか１つに記載の系。
付記１６．前記ｇＲＮＡスペーサーが、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、その相補体、又はそのバリアントを含む、付記９～１５のいずれか１つに記載の系。
付記１７．前記ｇＲＮＡが、配列番号６４～８６、８８、１７１～１８４から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、又はそのバリアントを含む、付記１～１６のいずれか１つに記載の系。
付記１８．前記ｇＲＮＡが、配列番号３５、４０、及び４４から選択されるポリヌクレオチド配列に結合するか若しくはそれによってコードされるか、又は前記ｇＲＮＡが、配列番号７０、７５、及び７９から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、付記１～１７のいずれか１つに記載の系。
付記１９．前記ドナー配列が、配列番号５３～５６、１５４、及び１５５から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、付記１～１８のいずれか１つに記載の系。
付記２０．前記ドナー配列が、配列番号５５のポリヌクレオチドを含む、付記１９に記載の系。
付記２１．前記ドナー配列が、配列番号５６のポリヌクレオチドを含む、付記１９に記載の系。
付記２２．前記Ｃａｓタンパク質が、ストレプトコッカス・ピオゲネスＣａｓ９タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９タンパク質である、付記１～２１のいずれか１つに記載の系。
付記２３．前記Ｃａｓタンパク質が、配列番号１８又は配列番号１９のアミノ酸配列を含む、付記１～２２のいずれか１つに記載の系。
付記２４．前記ベクターが、ウイルスベクターである、付記１、３、及び５～２３のいずれか１つに記載の系。
付記２５．前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、付記２４に記載の系。
付記２６．前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、又はＡＡＶｒｈ．７４ベクターである、付記２５に記載の系。
付記２７．前記１つ又は複数のベクターのうちの１つが、配列番号５７～６０及び１２９～１３０から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、付記２６に記載の系。
付記２８．ｇＲＮＡとドナー配列との間のモル比が、１：１、又は１：５、又は５：１～１：１０、又は１：１～１：５である、付記１～２７のいずれか１つに記載の系。
付記２９．ドナー配列をコードする組換えポリヌクレオチドであって、前記ドナー配列が、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接しており、前記ドナー配列が、ジストロフィン遺伝子のエクソン５２、エクソン５３、エクソン５４、エクソン５５、エクソン５６、エクソン５７、エクソン５８、エクソン５９、エクソン６０、エクソン６１、エクソン６２、エクソン６３、エクソン６４、エクソン６５、エクソン６６、エクソン６７、エクソン６８、エクソン６９、エクソン７０、エクソン７１、エクソン７２、エクソン７３、エクソン７４、エクソン７５、エクソン７６、エクソン７７、エクソン７８、及びエクソン７９から選択される１つ又は複数のエクソンを含む、組換えポリヌクレオチド。
付記３０．前記ジストロフィン遺伝子が、ヒトジストロフィン遺伝子である、付記１～２８のいずれか１つに記載の系、又は付記２９に記載の組換えポリヌクレオチド。
付記３１．前記系が、配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす、付記３０に記載の系又は組換えポリヌクレオチド。
付記３２．前記ドナー配列が、前記ヒトジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９を含むポリヌクレオチド配列を含む、付記３０又は３１に記載の系又は組換えポリヌクレオチド。
付記３３．前記ドナー配列が、配列番号５５又は配列番号５６のポリヌクレオチド配列を含む、付記３２に記載の系又は組換えポリヌクレオチド。
付記３４．配列番号５７～６０から選択される配列を含む、付記２９に記載の組換えポリヌクレオチド。
付記３５．付記２７～３２のいずれか１つに記載の組換えポリヌクレオチドを含む、ベクター。
付記３６．付記２９～３４のいずれか１つに記載の組換えポリヌクレオチド又は付記３５に記載のベクターを含む、細胞。
付記３７．突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞において、ジストロフィン機能を復元するための組成物であって、付記１～２８若しくは３０～３３のいずれか１つに記載の系、付記２９～３４のいずれか１つに記載の組換えポリヌクレオチド、又は付記３５に記載のベクターを含む、組成物。
付記３８．付記１～２８若しくは３０～３３のいずれか１つに記載の系、付記２９～３４のいずれか１つに記載の組換えポリヌクレオチド、又は付記３５に記載のベクター、又は付記３５に記載の組成物を含む、キット。
付記３９．突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するための方法であって、前記細胞又は対象を、付記１～２８若しくは３０～３３のいずれか１つに記載の系、付記２９～３４のいずれか１つに記載の組換えポリヌクレオチド、又は付記３５に記載のベクター、又は付記３７に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。
付記４０．配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす、付記３９に記載の方法。
付記４１．１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンによって引き起こされる破壊されたジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するための方法であって、前記細胞又は前記対象を、付記１～２８若しくは３０～３３のいずれか１つに記載の系、付記２９～３４のいずれか１つに記載の組換えポリヌクレオチド、又は付記３５に記載のベクター、又は付記３７に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。
付記４２．配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす、付記４１に記載の方法。
付記４３．ジストロフィン機能が、前記１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンに対応するジストロフィン遺伝子の１つ又は複数の野生型エクソンを挿入することによって復元される、付記４１又は４２に記載の方法。
付記４４．前記対象が、デュシェンヌ型筋ジストロフィーに罹患している、付記３９～４３のいずれか１つに記載の方法。
付記４５．ジストロフィン遺伝子を矯正するためのゲノム編集系であって、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９又はエクソン４５～７９を含むドナー配列を含む、ゲノム編集系。
付記４６．ホーミングエンドヌクレアーゼ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、及びＣａｓタンパク質から選択されるヌクレアーゼをさらに含む、付記４５に記載のゲノム編集系。
配列
配列番号１
ＮＲＧ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずかであり得る）
配列番号２
ＮＧＧ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号３
ＮＡＧ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号４
ＮＧＧＮＧ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずかであり得る）
配列番号５
ＮＮＡＧＡＡＷ（Ｗ＝Ａ又はＴ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号６
ＮＡＡＲ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号７
ＮＮＧＲＲ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号８
ＮＮＧＲＲＮ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号９
ＮＮＧＲＲＴ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号１０
ＮＮＧＲＲＶ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号１１
ＮＮＮＮＧＡＴＴ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号１２
ＮＮＮＮＧＮＮＮ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずかであり得る）
配列番号１３
ＮＧＡ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずかであり得る）
配列番号１４
ＮＮＮＲＲＴ（Ｒ＝Ａ又はＧ、Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号１５
ＡＴＴＣＣＴ
配列番号１６
ＮＧＡＮ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号１７
ＮＧＮＧ（Ｎは、任意のヌクレオチド残基、例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、又はＴのうちのいずれかであり得る）
配列番号１８
ストレプトコッカス・ピオゲネスＣａｓ９
ＭＤＫＫＹＳＩＧＬＤＩＧＴＮＳＶＧＷＡＶＩＴＤＥＹＫＶＰＳＫＫＦＫＶＬＧＮＴＤＲＨＳＩＫＫＮＬＩＧＡＬＬＦＤＳＧＥＴＡＥＡＴＲＬＫＲＴＡＲＲＲＹＴＲＲＫＮＲＩＣＹＬＱＥＩＦＳＮＥＭＡＫＶＤＤＳＦＦＨＲＬＥＥＳＦＬＶＥＥＤＫＫＨＥＲＨＰＩＦＧＮＩＶＤＥＶＡＹＨＥＫＹＰＴＩＹＨＬＲＫＫＬＶＤＳＴＤＫＡＤＬＲＬＩＹＬＡＬＡＨＭＩＫＦＲＧＨＦＬＩＥＧＤＬＮＰＤＮＳＤＶＤＫＬＦＩＱＬＶＱＴＹＮＱＬＦＥＥＮＰＩＮＡＳＧＶＤＡＫＡＩＬＳＡＲＬＳＫＳＲＲＬＥＮＬＩＡＱＬＰＧＥＫＫＮＧＬＦＧＮＬＩＡＬＳＬＧＬＴＰＮＦＫＳＮＦＤＬＡＥＤＡＫＬＱＬＳＫＤＴＹＤＤＤＬＤＮＬＬＡＱＩＧＤＱＹＡＤＬＦＬＡＡＫＮＬＳＤＡＩＬＬＳＤＩＬＲＶＮＴＥＩＴＫＡＰＬＳＡＳＭＩＫＲＹＤＥＨＨＱＤＬＴＬＬＫＡＬＶＲＱＱＬＰＥＫＹＫＥＩＦＦＤＱＳＫＮＧＹＡＧＹＩＤＧＧＡＳＱＥＥＦＹＫＦＩＫＰＩＬＥＫＭＤＧＴＥＥＬＬＶＫＬＮＲＥＤＬＬＲＫＱＲＴＦＤＮＧＳＩＰＨＱＩＨＬＧＥＬＨＡＩＬＲＲＱＥＤＦＹＰＦＬＫＤＮＲＥＫＩＥＫＩＬＴＦＲＩＰＹＹＶＧＰＬＡＲＧＮＳＲＦＡＷＭＴＲＫＳＥＥＴＩＴＰＷＮＦＥＥＶＶＤＫＧＡＳＡＱＳＦＩＥＲＭＴＮＦＤＫＮＬＰＮＥＫＶＬＰＫＨＳＬＬＹＥＹＦＴＶＹＮＥＬＴＫＶＫＹＶＴＥＧＭＲＫＰＡＦＬＳＧＥＱＫＫＡＩＶＤＬＬＦＫＴＮＲＫＶＴＶＫＱＬＫＥＤＹＦＫＫＩＥＣＦＤＳＶＥＩＳＧＶＥＤＲＦＮＡＳＬＧＴＹＨＤＬＬＫＩＩＫＤＫＤＦＬＤＮＥＥＮＥＤＩＬＥＤＩＶＬＴＬＴＬＦＥＤＲＥＭＩＥＥＲＬＫＴＹＡＨＬＦＤＤＫＶＭＫＱＬＫＲＲＲＹＴＧＷＧＲＬＳＲＫＬＩＮＧＩＲＤＫＱＳＧＫＴＩＬＤＦＬＫＳＤＧＦＡＮＲＮＦＭＱＬＩＨＤＤＳＬＴＦＫＥＤＩＱＫＡＱＶＳＧＱＧＤＳＬＨＥＨＩＡＮＬＡＧＳＰＡＩＫＫＧＩＬＱＴＶＫＶＶＤＥＬＶＫＶＭＧＲＨＫＰＥＮＩＶＩＥＭＡＲＥＮＱＴＴＱＫＧＱＫＮＳＲＥＲＭＫＲＩＥＥＧＩＫＥＬＧＳＱＩＬＫＥＨＰＶＥＮＴＱＬＱＮＥＫＬＹＬＹＹＬＱＮＧＲＤＭＹＶＤＱＥＬＤＩＮＲＬＳＤＹＤＶＤＨＩＶＰＱＳＦＬＫＤＤＳＩＤＮＫＶＬＴＲＳＤＫＮＲＧＫＳＤＮＶＰＳＥＥＶＶＫＫＭＫＮＹＷＲＱＬＬＮＡＫＬＩＴＱＲＫＦＤＮＬＴＫＡＥＲＧＧＬＳＥＬＤＫＡＧＦＩＫＲＱＬＶＥＴＲＱＩＴＫＨＶＡＱＩＬＤＳＲＭＮＴＫＹＤＥＮＤＫＬＩＲＥＶＫＶＩＴＬＫＳＫＬＶＳＤＦＲＫＤＦＱＦＹＫＶＲＥＩＮＮＹＨＨＡＨＤＡＹＬＮＡＶＶＧＴＡＬＩＫＫＹＰＫＬＥＳＥＦＶＹＧＤＹＫＶＹＤＶＲＫＭＩＡＫＳＥＱＥＩＧＫＡＴＡＫＹＦＦＹＳＮＩＭＮＦＦＫＴＥＩＴＬＡＮＧＥＩＲＫＲＰＬＩＥＴＮＧＥＴＧＥＩＶＷＤＫＧＲＤＦＡＴＶＲＫＶＬＳＭＰＱＶＮＩＶＫＫＴＥＶＱＴＧＧＦＳＫＥＳＩＬＰＫＲＮＳＤＫＬＩＡＲＫＫＤＷＤＰＫＫＹＧＧＦＤＳＰＴＶＡＹＳＶＬＶＶＡＫＶＥＫＧＫＳＫＫＬＫＳＶＫＥＬＬＧＩＴＩＭＥＲＳＳＦＥＫＮＰＩＤＦＬＥＡＫＧＹＫＥＶＫＫＤＬＩＩＫＬＰＫＹＳＬＦＥＬＥＮＧＲＫＲＭＬＡＳＡＧＥＬＱＫＧＮＥＬＡＬＰＳＫＹＶＮＦＬＹＬＡＳＨＹＥＫＬＫＧＳＰＥＤＮＥＱＫＱＬＦＶＥＱＨＫＨＹＬＤＥＩＩＥＱＩＳＥＦＳＫＲＶＩＬＡＤＡＮＬＤＫＶＬＳＡＹＮＫＨＲＤＫＰＩＲＥＱＡＥＮＩＩＨＬＦＴＬＴＮＬＧＡＰＡＡＦＫＹＦＤＴＴＩＤＲＫＲＹＴＳＴＫＥＶＬＤＡＴＬＩＨＱＳＩＴＧＬＹＥＴＲＩＤＬＳＱＬＧＧＤ
配列番号１９
スタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９分子
ＭＫＲＮＹＩＬＧＬＤＩＧＩＴＳＶＧＹＧＩＩＤＹＥＴＲＤＶＩＤＡＧＶＲＬＦＫＥＡＮＶＥＮＮＥＧＲＲＳＫＲＧＡＲＲＬＫＲＲＲＲＨＲＩＱＲＶＫＫＬＬＦＤＹＮＬＬＴＤＨＳＥＬＳＧＩＮＰＹＥＡＲＶＫＧＬＳＱＫＬＳＥＥＥＦＳＡＡＬＬＨＬＡＫＲＲＧＶＨＮＶＮＥＶＥＥＤＴＧＮＥＬＳＴＫＥＱＩＳＲＮＳＫＡＬＥＥＫＹＶＡＥＬＱＬＥＲＬＫＫＤＧＥＶＲＧＳＩＮＲＦＫＴＳＤＹＶＫＥＡＫＱＬＬＫＶＱＫＡＹＨＱＬＤＱＳＦＩＤＴＹＩＤＬＬＥＴＲＲＴＹＹＥＧＰＧＥＧＳＰＦＧＷＫＤＩＫＥＷＹＥＭＬＭＧＨＣＴＹＦＰＥＥＬＲＳＶＫＹＡＹＮＡＤＬＹＮＡＬＮＤＬＮＮＬＶＩＴＲＤＥＮＥＫＬＥＹＹＥＫＦＱＩＩＥＮＶＦＫＱＫＫＫＰＴＬＫＱＩＡＫＥＩＬＶＮＥＥＤＩＫＧＹＲＶＴＳＴＧＫＰＥＦＴＮＬＫＶＹＨＤＩＫＤＩＴＡＲＫＥＩＩＥＮＡＥＬＬＤＱＩＡＫＩＬＴＩＹＱＳＳＥＤＩＱＥＥＬＴＮＬＮＳＥＬＴＱＥＥＩＥＱＩＳＮＬＫＧＹＴＧＴＨＮＬＳＬＫＡＩＮＬＩＬＤＥＬＷＨＴＮＤＮＱＩＡＩＦＮＲＬＫＬＶＰＫＫＶＤＬＳＱＱＫＥＩＰＴＴＬＶＤＤＦＩＬＳＰＶＶＫＲＳＦＩＱＳＩＫＶＩＮＡＩＩＫＫＹＧＬＰＮＤＩＩＩＥＬＡＲＥＫＮＳＫＤＡＱＫＭＩＮＥＭＱＫＲＮＲＱＴＮＥＲＩＥＥＩＩＲＴＴＧＫＥＮＡＫＹＬＩＥＫＩＫＬＨＤＭＱＥＧＫＣＬＹＳＬＥＡＩＰＬＥＤＬＬＮＮＰＦＮＹＥＶＤＨＩＩＰＲＳＶＳＦＤＮＳＦＮＮＫＶＬＶＫＱＥＥＮＳＫＫＧＮＲＴＰＦＱＹＬＳＳＳＤＳＫＩＳＹＥＴＦＫＫＨＩＬＮＬＡＫＧＫＧＲＩＳＫＴＫＫＥＹＬＬＥＥＲＤＩＮＲＦＳＶＱＫＤＦＩＮＲＮＬＶＤＴＲＹＡＴＲＧＬＭＮＬＬＲＳＹＦＲＶＮＮＬＤＶＫＶＫＳＩＮＧＧＦＴＳＦＬＲＲＫＷＫＦＫＫＥＲＮＫＧＹＫＨＨＡＥＤＡＬＩＩＡＮＡＤＦＩＦＫＥＷＫＫＬＤＫＡＫＫＶＭＥＮＱＭＦＥＥＫＱＡＥＳＭＰＥＩＥＴＥＱＥＹＫＥＩＦＩＴＰＨＱＩＫＨＩＫＤＦＫＤＹＫＹＳＨＲＶＤＫＫＰＮＲＥＬＩＮＤＴＬＹＳＴＲＫＤＤＫＧＮＴＬＩＶＮＮＬＮＧＬＹＤＫＤＮＤＫＬＫＫＬＩＮＫＳＰＥＫＬＬＭＹＨＨＤＰＱＴＹＱＫＬＫＬＩＭＥＱＹＧＤＥＫＮＰＬＹＫＹＹＥＥＴＧＮＹＬＴＫＹＳＫＫＤＮＧＰＶＩＫＫＩＫＹＹＧＮＫＬＮＡＨＬＤＩＴＤＤＹＰＮＳＲＮＫＶＶＫＬＳＬＫＰＹＲＦＤＶＹＬＤＮＧＶＹＫＦＶＴＶＫＮＬＤＶＩＫＫＥＮＹＹＥＶＮＳＫＣＹＥＥＡＫＫＬＫＫＩＳＮＱＡＥＦＩＡＳＦＹＮＮＤＬＩＫＩＮＧＥＬＹＲＶＩＧＶＮＮＤＬＬＮＲＩＥＶＮＭＩＤＩＴＹＲＥＹＬＥＮＭＮＤＫＲＰＰＲＩＩＫＴＩＡＳＫＴＱＳＩＫＫＹＳＴＤＩＬＧＮＬＹＥＶＫＳＫＫＨＰＱＩＩＫＫＧ
配列番号２０
Ｓ．ピオゲネスＣａｓ９をコードする、コドン最適化されたポリヌクレオチド
Figure 2023522788000006

Figure 2023522788000007
配列番号２１
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
Figure 2023522788000008

Figure 2023522788000009
配列番号２２
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
Figure 2023522788000010

Figure 2023522788000011
配列番号２３
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
Figure 2023522788000012

Figure 2023522788000013
配列番号２４
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
ａｔｇｇｃｃｃｃａａａｇａａｇａａｇｃｇｇａａｇｇｔｃｇｇｔａｔｃｃａｃｇｇａｇｔｃｃｃａｇｃａｇｃｃａａｇｃｇｇａａｃｔａｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｃｔｇｇａｃａｔｃｇｇｃａｔｃａｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｔａｃｇｇｃａｔｃａｔｃｇａｃｔａｃｇａｇａｃａｃｇｇｇａｃｇｔｇａｔｃｇａｔｇｃｃｇｇｃｇｔｇｃｇｇｃｔｇｔｔｃａａａｇａｇｇｃｃａａｃｇｔｇｇａａａａｃａａｃｇａｇｇｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃａａｇａｇａｇｇｃｇｃｃａｇａａｇｇｃｔｇａａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃａｔａｇａａｔｃｃａｇａｇａｇｔｇａａｇａａｇｃｔｇｃｔｇｔｔｃｇａｃｔａｃａａｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｃｃａｃａｇｃｇａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃａｔｃａａｃｃｃｃｔａｃｇａｇｇｃｃａｇａｇｔｇａａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｃａｇａａｇｃｔｇａｇｃｇａｇｇａａｇａｇｔｔｃｔｃｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｃｃｔｇｇｃｃａａｇａｇａａｇａｇｇｃｇｔｇｃａｃａａｃｇｔｇａａｃｇａｇｇｔｇｇａａｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃａａｃｇａｇｃｔｇｔｃｃａｃｃａｇａｇａｇｃａｇａｔｃａｇｃｃｇｇａａｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｔｇｇａａｇａｇａａａｔａｃｇｔｇｇｃｃｇａａｃｔｇｃａｇｃｔｇｇａａｃｇｇｃｔｇａａｇａａａｇａｃｇｇｃｇａａｇｔｇｃｇｇｇｇｃａｇｃａｔｃａａｃａｇａｔｔｃａａｇａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃｇｔｇａａａｇａａｇｃｃａａａｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｇｇｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｔａｃｃａｃｃａｇｃｔｇｇａｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｔｃｇａｃａｃｃｔａｃａｔｃｇａｃｃｔｇｃｔｇｇａａａｃｃｃｇｇｃｇｇａｃｃｔａｃｔａｔｇａｇｇｇａｃｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｔｔｃｇｇｃｔｇｇａａｇｇａｃａｔｃａａａｇａａｔｇｇｔａｃｇａｇａｔｇｃｔｇａｔｇｇｇｃｃａｃｔｇｃａｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａｇｇａａｃｔｇｃｇｇａｇｃｇｔｇａａｇｔａｃｇｃｃｔａｃａａｃｇｃｃｇａｃｃｔｇｔａｃａａｃｇｃｃｃｔｇａａｃｇａｃｃｔｇａａｃａａｔｃｔｃｇｔｇａｔｃａｃｃａｇｇｇａｃｇａｇａａｃｇａｇａａｇｃｔｇｇａａｔａｔｔａｃｇａｇａａｇｔｔｃｃａｇａｔｃａｔｃｇａｇａａｃｇｔｇｔｔｃａａｇｃａｇａａｇａａｇａａｇｃｃｃａｃｃｃｔｇａａｇｃａｇａｔｃｇｃｃａａａｇａａａｔｃｃｔｃｇｔｇａａｃｇａａｇａｇｇａｔａｔｔａａｇｇｇｃｔａｃａｇａｇｔｇａｃｃａｇｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｃｃｇａｇｔｔｃａｃｃａａｃｃｔｇａａｇｇｔｇｔａｃｃａｃｇａｃａｔｃａａｇｇａｃａｔｔａｃｃｇｃｃｃｇｇａａａｇａｇａｔｔａｔｔｇａｇａａｃｇｃｃｇａｇｃｔｇｃｔｇｇａｔｃａｇａｔｔｇｃｃａａｇａｔｃｃｔｇａｃｃａｔｃｔａｃｃａｇａｇｃａｇｃｇａｇｇａｃａｔｃｃａｇｇａａｇａａｃｔｇａｃｃａａｔｃｔｇａａｃｔｃｃｇａｇｃｔｇａｃｃｃａｇｇａａｇａｇａｔｃｇａｇｃａｇａｔｃｔｃｔａａｔｃｔｇａａｇｇｇｃｔａｔａｃｃｇｇｃａｃｃｃａｃａａｃｃｔｇａｇｃｃｔｇａａｇｇｃｃａｔｃａａｃｃｔｇａｔｃｃｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔｇｇｃａｃａｃｃａａｃｇａｃａａｃｃａｇａｔｃｇｃｔａｔｃｔｔｃａａｃｃｇｇｃｔｇａａｇｃｔｇｇｔｇｃｃｃａａｇａａｇｇｔｇｇａｃｃｔｇｔｃｃｃａｇｃａｇａａａｇａｇａｔｃｃｃｃａｃｃａｃｃｃｔｇｇｔｇｇａｃｇａｃｔｔｃａｔｃｃｔｇａｇｃｃｃｃｇｔｃｇｔｇａａｇａｇａａｇｃｔｔｃａｔｃｃａｇａｇｃａｔｃａａａｇｔｇａｔｃａａｃｇｃｃａｔｃａｔｃａａｇａａｇｔａｃｇｇｃｃｔｇｃｃｃａａｃｇａｃａｔｃａｔｔａｔｃｇａｇｃｔｇｇｃｃｃｇｃｇａｇａａｇａａｃｔｃｃａａｇｇａｃｇｃｃｃａｇａａａａｔｇａｔｃａａｃｇａｇａｔｇｃａｇａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇｃａｇａｃｃａａｃｇａｇｃｇｇａｔｃｇａｇｇａａａｔｃａｔｃｃｇｇａｃｃａｃｃｇｇｃａａａｇａｇａａｃｇｃｃａａｇｔａｃｃｔｇａｔｃｇａｇａａｇａｔｃａａｇｃｔｇｃａｃｇａｃａｔｇｃａｇｇａａｇｇｃａａｇｔｇｃｃｔｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｔｃｃｃｔｃｔｇｇａａｇａｔｃｔｇｃｔｇａａｃａａｃｃｃｃｔｔｃａａｃｔａｔｇａｇｇｔｇｇａｃｃａｃａｔｃａｔｃｃｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔｃｃｔｔｃｇａｃａａｃａｇｃｔｔｃａａｃａａｃａａｇｇｔｇｃｔｃｇｔｇａａｇｃａｇｇａａｇａａａａｃａｇｃａａｇａａｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｃｃｃｃａｔｔｃｃａｇｔａｃｃｔｇａｇｃａｇｃａｇｃｇａｃａｇｃａａｇａｔｃａｇｃｔａｃｇａａａｃｃｔｔｃａａｇａａｇｃａｃａｔｃｃｔｇａａｔｃｔｇｇｃｃａａｇｇｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｔｃａｇｃａａｇａｃｃａａｇａａａｇａｇｔａｔｃｔｇｃｔｇｇａａｇａａｃｇｇｇａｃａｔｃａａｃａｇｇｔｔｃｔｃｃｇｔｇｃａｇａａａｇａｃｔｔｃａｔｃａａｃｃｇｇａａｃｃｔｇｇｔｇｇａｔａｃｃａｇａｔａｃｇｃｃａｃｃａｇａｇｇｃｃｔｇａｔｇａａｃｃｔｇｃｔｇｃｇｇａｇｃｔａｃｔｔｃａｇａｇｔｇａａｃａａｃｃｔｇｇａｃｇｔｇａａａｇｔｇａａｇｔｃｃａｔｃａａｔｇｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃａｇｃｔｔｔｃｔｇｃｇｇｃｇｇａａｇｔｇｇａａｇｔｔｔａａｇａａａｇａｇｃｇｇａａｃａａｇｇｇｇｔａｃａａｇｃａｃｃａｃｇｃｃｇａｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａｔｃａｔｔｇｃｃａａｃｇｃｃｇａｔｔｔｃａｔｃｔｔｃａａａｇａｇｔｇｇａａｇａａａｃｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａａａａａｇｔｇａｔｇｇａａａａｃｃａｇａｔｇｔｔｃｇａｇｇａａａｇｇｃａｇｇｃｃｇａｇａｇｃａｔｇｃｃｃｇａｇａｔｃｇａａａｃｃｇａｇｃａｇｇａｇｔａｃａａａｇａｇａｔｃｔｔｃａｔｃａｃｃｃｃｃｃａｃｃａｇａｔｃａａｇｃａｃａｔｔａａｇｇａｃｔｔｃａａｇｇａｃｔａｃａａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｇｇｇｔｇｇａｃａａｇａａｇｃｃｔａａｔａｇａｇａｇｃｔｇａｔｔａａｃｇａｃａｃｃｃｔｇｔａｃｔｃｃａｃｃｃｇｇａａｇｇａｃｇａｃａａｇｇｇｃａａｃａｃｃｃｔｇａｔｃｇｔｇａａｃａａｔｃｔｇａａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｇａｃａａｇｇａｃａａｔｇａｃａａｇｃｔｇａａａａａｇｃｔｇａｔｃａａｃａａｇａｇｃｃｃｃｇａａａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｔａｃｃａｃｃａｃｇａｃｃｃｃｃａｇａｃｃｔａｃｃａｇａａａｃｔｇａａｇｃｔｇａｔｔａｔｇｇａａｃａｇｔａｃｇｇｃｇａｃｇａｇａａｇａａｔｃｃｃｃｔｇｔａｃａａｇｔａｃｔａｃｇａｇｇａａａｃｃｇｇｇａａｃｔａｃｃｔｇａｃｃａａｇｔａｃｔｃｃａａａａａｇｇａｃａａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇａｔｃａａｇａａｇａｔｔａａｇｔａｔｔａｃｇｇｃａａｃａａａｃｔｇａａｃｇｃｃｃａｔｃｔｇｇａｃａｔｃａｃｃｇａｃｇａｃｔａｃｃｃｃａａｃａｇｃａｇａａａｃａａｇｇｔｃｇｔｇａａｇｃｔｇｔｃｃｃｔｇａａｇｃｃｃｔａｃａｇａｔｔｃｇａｃｇｔｇｔａｃｃｔｇｇａｃａａｔｇｇｃｇｔｇｔａｃａａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａａｇａａｔｃｔｇｇａｔｇｔｇａｔｃａａａａａａｇａａａａｃｔａｃｔａｃｇａａｇｔｇａａｔａｇｃａａｇｔｇｃｔａｔｇａｇｇａａｇｃｔａａｇａａｇｃｔｇａａｇａａｇａｔｃａｇｃａａｃｃａｇｇｃｃｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔａｃａａｃａａｃｇａｔｃｔｇａｔｃａａｇａｔｃａａｃｇｇｃｇａｇｃｔｇｔａｔａｇａｇｔｇａｔｃｇｇｃｇｔｇａａｃａａｃｇａｃｃｔｇｃｔｇａａｃｃｇｇａｔｃｇａａｇｔｇａａｃａｔｇａｔｃｇａｃａｔｃａｃｃｔａｃｃｇｃｇａｇｔａｃｃｔｇｇａａａａｃａｔｇａａｃｇａｃａａｇａｇｇｃｃｃｃｃｃａｇｇａｔｃａｔｔａａｇａｃａａｔｃｇｃｃｔｃｃａａｇａｃｃｃａｇａｇｃａｔｔａａｇａａｇｔａｃａｇｃａｃａｇａｃａｔｔｃｔｇｇｇｃａａｃｃｔｇｔａｔｇａａｇｔｇａａａｔｃｔａａｇａａｇｃａｃｃｃｔｃａｇａｔｃａｔｃａａａａａｇｇｇｃａａａａｇｇｃｃｇｇｃｇｇｃｃａｃｇａａａａａｇｇｃｃｇｇｃｃａｇｇｃａａａａａａｇａａａａａｇ
配列番号２５
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
Figure 2023522788000014

Figure 2023522788000015
配列番号２６
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
ａｔｇｇｃｃｃｃａａａｇａａｇａａｇｃｇｇａａｇｇｔｃｇｇｔａｔｃｃａｃｇｇａｇｔｃｃｃａｇｃａｇｃｃａａｇｃｇｇａａｃｔａｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｃｔｇｇａｃａｔｃｇｇｃａｔｃａｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｔａｃｇｇｃａｔｃａｔｃｇａｃｔａｃｇａｇａｃａｃｇｇｇａｃｇｔｇａｔｃｇａｔｇｃｃｇｇｃｇｔｇｃｇｇｃｔｇｔｔｃａａａｇａｇｇｃｃａａｃｇｔｇｇａａａａｃａａｃｇａｇｇｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃａａｇａｇａｇｇｃｇｃｃａｇａａｇｇｃｔｇａａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃａｔａｇａａｔｃｃａｇａｇａｇｔｇａａｇａａｇｃｔｇｃｔｇｔｔｃｇａｃｔａｃａａｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｃｃａｃａｇｃｇａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃａｔｃａａｃｃｃｃｔａｃｇａｇｇｃｃａｇａｇｔｇａａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｃａｇａａｇｃｔｇａｇｃｇａｇｇａａｇａｇｔｔｃｔｃｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｃｃｔｇｇｃｃａａｇａｇａａｇａｇｇｃｇｔｇｃａｃａａｃｇｔｇａａｃｇａｇｇｔｇｇａａｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃａａｃｇａｇｃｔｇｔｃｃａｃｃａａａｇａｇｃａｇａｔｃａｇｃｃｇｇａａｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｔｇｇａａｇａｇａａａｔａｃｇｔｇｇｃｃｇａａｃｔｇｃａｇｃｔｇｇａａｃｇｇｃｔｇａａｇａａａｇａｃｇｇｃｇａａｇｔｇｃｇｇｇｇｃａｇｃａｔｃａａｃａｇａｔｔｃａａｇａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃｇｔｇａａａｇａａｇｃｃａａａｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｇｇｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｔａｃｃａｃｃａｇｃｔｇｇａｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｔｃｇａｃａｃｃｔａｃａｔｃｇａｃｃｔｇｃｔｇｇａａａｃｃｃｇｇｃｇｇａｃｃｔａｃｔａｔｇａｇｇｇａｃｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｔｔｃｇｇｃｔｇｇａａｇｇａｃａｔｃａａａｇａａｔｇｇｔａｃｇａｇａｔｇｃｔｇａｔｇｇｇｃｃａｃｔｇｃａｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａｇｇａａｃｔｇｃｇｇａｇｃｇｔｇａａｇｔａｃｇｃｃｔａｃａａｃｇｃｃｇａｃｃｔｇｔａｃａａｃｇｃｃｃｔｇａａｃｇａｃｃｔｇａａｃａａｔｃｔｃｇｔｇａｔｃａｃｃａｇｇｇａｃｇａｇａａｃｇａｇａａｇｃｔｇｇａａｔａｔｔａｃｇａｇａａｇｔｔｃｃａｇａｔｃａｔｃｇａｇａａｃｇｔｇｔｔｃａａｇｃａｇａａｇａａｇａａｇｃｃｃａｃｃｃｔｇａａｇｃａｇａｔｃｇｃｃａａａｇａａａｔｃｃｔｃｇｔｇａａｃｇａａｇａｇｇａｔａｔｔａａｇｇｇｃｔａｃａｇａｇｔｇａｃｃａｇｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｃｃｇａｇｔｔｃａｃｃａａｃｃｔｇａａｇｇｔｇｔａｃｃａｃｇａｃａｔｃａａｇｇａｃａｔｔａｃｃｇｃｃｃｇｇａａａｇａｇａｔｔａｔｔｇａｇａａｃｇｃｃｇａｇｃｔｇｃｔｇｇａｔｃａｇａｔｔｇｃｃａａｇａｔｃｃｔｇａｃｃａｔｃｔａｃｃａｇａｇｃａｇｃｇａｇｇａｃａｔｃｃａｇｇａａｇａａｃｔｇａｃｃａａｔｃｔｇａａｃｔｃｃｇａｇｃｔｇａｃｃｃａｇｇａａｇａｇａｔｃｇａｇｃａｇａｔｃｔｃｔａａｔｃｔｇａａｇｇｇｃｔａｔａｃｃｇｇｃａｃｃｃａｃａａｃｃｔｇａｇｃｃｔｇａａｇｇｃｃａｔｃａａｃｃｔｇａｔｃｃｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔｇｇｃａｃａｃｃａａｃｇａｃａａｃｃａｇａｔｃｇｃｔａｔｃｔｔｃａａｃｃｇｇｃｔｇａａｇｃｔｇｇｔｇｃｃｃａａｇａａｇｇｔｇｇａｃｃｔｇｔｃｃｃａｇｃａｇａａａｇａｇａｔｃｃｃｃａｃｃａｃｃｃｔｇｇｔｇｇａｃｇａｃｔｔｃａｔｃｃｔｇａｇｃｃｃｃｇｔｃｇｔｇａａｇａｇａａｇｃｔｔｃａｔｃｃａｇａｇｃａｔｃａａａｇｔｇａｔｃａａｃｇｃｃａｔｃａｔｃａａｇａａｇｔａｃｇｇｃｃｔｇｃｃｃａａｃｇａｃａｔｃａｔｔａｔｃｇａｇｃｔｇｇｃｃｃｇｃｇａｇａａｇａａｃｔｃｃａａｇｇａｃｇｃｃｃａｇａａａａｔｇａｔｃａａｃｇａｇａｔｇｃａｇａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇｃａｇａｃｃａａｃｇａｇｃｇｇａｔｃｇａｇｇａａａｔｃａｔｃｃｇｇａｃｃａｃｃｇｇｃａａａｇａｇａａｃｇｃｃａａｇｔａｃｃｔｇａｔｃｇａｇａａｇａｔｃａａｇｃｔｇｃａｃｇａｃａｔｇｃａｇｇａａｇｇｃａａｇｔｇｃｃｔｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｔｃｃｃｔｃｔｇｇａａｇａｔｃｔｇｃｔｇａａｃａａｃｃｃｃｔｔｃａａｃｔａｔｇａｇｇｔｇｇａｃｃａｃａｔｃａｔｃｃｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔｃｃｔｔｃｇａｃａａｃａｇｃｔｔｃａａｃａａｃａａｇｇｔｇｃｔｃｇｔｇａａｇｃａｇｇａａｇａａａａｃａｇｃａａｇａａｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｃｃｃｃａｔｔｃｃａｇｔａｃｃｔｇａｇｃａｇｃａｇｃｇａｃａｇｃａａｇａｔｃａｇｃｔａｃｇａａａｃｃｔｔｃａａｇａａｇｃａｃａｔｃｃｔｇａａｔｃｔｇｇｃｃａａｇｇｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｔｃａｇｃａａｇａｃｃａａｇａａａｇａｇｔａｔｃｔｇｃｔｇｇａａｇａａｃｇｇｇａｃａｔｃａａｃａｇｇｔｔｃｔｃｃｇｔｇｃａｇａａａｇａｃｔｔｃａｔｃａａｃｃｇｇａａｃｃｔｇｇｔｇｇａｔａｃｃａｇａｔａｃｇｃｃａｃｃａｇａｇｇｃｃｔｇａｔｇａａｃｃｔｇｃｔｇｃｇｇａｇｃｔａｃｔｔｃａｇａｇｔｇａａｃａａｃｃｔｇｇａｃｇｔｇａａａｇｔｇａａｇｔｃｃａｔｃａａｔｇｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃａｇｃｔｔｔｃｔｇｃｇｇｃｇｇａａｇｔｇｇａａｇｔｔｔａａｇａａａｇａｇｃｇｇａａｃａａｇｇｇｇｔａｃａａｇｃａｃｃａｃｇｃｃｇａｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａｔｃａｔｔｇｃｃａａｃｇｃｃｇａｔｔｔｃａｔｃｔｔｃａａａｇａｇｔｇｇａａｇａａａｃｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａａａａａｇｔｇａｔｇｇａａａａｃｃａｇａｔｇｔｔｃｇａｇｇａａａａｇｃａｇｇｃｃｇａｇａｇｃａｔｇｃｃｃｇａｇａｔｃｇａａａｃｃｇａｇｃａｇｇａｇｔａｃａａａｇａｇａｔｃｔｔｃａｔｃａｃｃｃｃｃｃａｃｃａｇａｔｃａａｇｃａｃａｔｔａａｇｇａｃｔｔｃａａｇｇａｃｔａｃａａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｇｇｇｔｇｇａｃａａｇａａｇｃｃｔａａｔａｇａｇａｇｃｔｇａｔｔａａｃｇａｃａｃｃｃｔｇｔａｃｔｃｃａｃｃｃｇｇａａｇｇａｃｇａｃａａｇｇｇｃａａｃａｃｃｃｔｇａｔｃｇｔｇａａｃａａｔｃｔｇａａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｇａｃａａｇｇａｃａａｔｇａｃａａｇｃｔｇａａａａａｇｃｔｇａｔｃａａｃａａｇａｇｃｃｃｃｇａａａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｔａｃｃａｃｃａｃｇａｃｃｃｃｃａｇａｃｃｔａｃｃａｇａａａｃｔｇａａｇｃｔｇａｔｔａｔｇｇａａｃａｇｔａｃｇｇｃｇａｃｇａｇａａｇａａｔｃｃｃｃｔｇｔａｃａａｇｔａｃｔａｃｇａｇｇａａａｃｃｇｇｇａａｃｔａｃｃｔｇａｃｃａａｇｔａｃｔｃｃａａａａａｇｇａｃａａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇａｔｃａａｇａａｇａｔｔａａｇｔａｔｔａｃｇｇｃａａｃａａａｃｔｇａａｃｇｃｃｃａｔｃｔｇｇａｃａｔｃａｃｃｇａｃｇａｃｔａｃｃｃｃａａｃａｇｃａｇａａａｃａａｇｇｔｃｇｔｇａａｇｃｔｇｔｃｃｃｔｇａａｇｃｃｃｔａｃａｇａｔｔｃｇａｃｇｔｇｔａｃｃｔｇｇａｃａａｔｇｇｃｇｔｇｔａｃａａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａａｇａａｔｃｔｇｇａｔｇｔｇａｔｃａａａａａａｇａａａａｃｔａｃｔａｃｇａａｇｔｇａａｔａｇｃａａｇｔｇｃｔａｔｇａｇｇａａｇｃｔａａｇａａｇｃｔｇａａｇａａｇａｔｃａｇｃａａｃｃａｇｇｃｃｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔａｃａａｃａａｃｇａｔｃｔｇａｔｃａａｇａｔｃａａｃｇｇｃｇａｇｃｔｇｔａｔａｇａｇｔｇａｔｃｇｇｃｇｔｇａａｃａａｃｇａｃｃｔｇｃｔｇａａｃｃｇｇａｔｃｇａａｇｔｇａａｃａｔｇａｔｃｇａｃａｔｃａｃｃｔａｃｃｇｃｇａｇｔａｃｃｔｇｇａａａａｃａｔｇａａｃｇａｃａａｇａｇｇｃｃｃｃｃｃａｇｇａｔｃａｔｔａａｇａｃａａｔｃｇｃｃｔｃｃａａｇａｃｃｃａｇａｇｃａｔｔａａｇａａｇｔａｃａｇｃａｃａｇａｃａｔｔｃｔｇｇｇｃａａｃｃｔｇｔａｔｇａａｇｔｇａａａｔｃｔａａｇａａｇｃａｃｃｃｔｃａｇａｔｃａｔｃａａａａａｇｇｇｃａａａａｇｇｃｃｇｇｃｇｇｃｃａｃｇａａａａａｇｇｃｃｇｇｃｃａｇｇｃａａａａａａｇａａａａａｇ
配列番号２７
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードする、コドン最適化された核酸配列
ａａｇｃｇｇａａｃｔａｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｃｔｇｇａｃａｔｃｇｇｃａｔｃａｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｔａｃｇｇｃａｔｃａｔｃｇａｃｔａｃｇａｇａｃａｃｇｇｇａｃｇｔｇａｔｃｇａｔｇｃｃｇｇｃｇｔｇｃｇｇｃｔｇｔｔｃａａａｇａｇｇｃｃａａｃｇｔｇｇａａａａｃａａｃｇａｇｇｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃａａｇａｇａｇｇｃｇｃｃａｇａａｇｇｃｔｇａａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃａｔａｇａａｔｃｃａｇａｇａｇｔｇａａｇａａｇｃｔｇｃｔｇｔｔｃｇａｃｔａｃａａｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｃｃａｃａｇｃｇａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃａｔｃａａｃｃｃｃｔａｃｇａｇｇｃｃａｇａｇｔｇａａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｃａｇａａｇｃｔｇａｇｃｇａｇｇａａｇａｇｔｔｃｔｃｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｃｃｔｇｇｃｃａａｇａｇａａｇａｇｇｃｇｔｇｃａｃａａｃｇｔｇａａｃｇａｇｇｔｇｇａａｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃａａｃｇａｇｃｔｇｔｃｃａｃｃａａａｇａｇｃａｇａｔｃａｇｃｃｇｇａａｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｔｇｇａａｇａｇａａａｔａｃｇｔｇｇｃｃｇａａｃｔｇｃａｇｃｔｇｇａａｃｇｇｃｔｇａａｇａａａｇａｃｇｇｃｇａａｇｔｇｃｇｇｇｇｃａｇｃａｔｃａａｃａｇａｔｔｃａａｇａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃｇｔｇａａａｇａａｇｃｃａａａｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｇｇｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｔａｃｃａｃｃａｇｃｔｇｇａｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｔｃｇａｃａｃｃｔａｃａｔｃｇａｃｃｔｇｃｔｇｇａａａｃｃｃｇｇｃｇｇａｃｃｔａｃｔａｔｇａｇｇｇａｃｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｔｔｃｇｇｃｔｇｇａａｇｇａｃａｔｃａａａｇａａｔｇｇｔａｃｇａｇａｔｇｃｔｇａｔｇｇｇｃｃａｃｔｇｃａｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａｇｇａａｃｔｇｃｇｇａｇｃｇｔｇａａｇｔａｃｇｃｃｔａｃａａｃｇｃｃｇａｃｃｔｇｔａｃａａｃｇｃｃｃｔｇａａｃｇａｃｃｔｇａａｃａａｔｃｔｃｇｔｇａｔｃａｃｃａｇｇｇａｃｇａｇａａｃｇａｇａａｇｃｔｇｇａａｔａｔｔａｃｇａｇａａｇｔｔｃｃａｇａｔｃａｔｃｇａｇａａｃｇｔｇｔｔｃａａｇｃａｇａａｇａａｇａａｇｃｃｃａｃｃｃｔｇａａｇｃａｇａｔｃｇｃｃａａａｇａａａｔｃｃｔｃｇｔｇａａｃｇａａｇａｇｇａｔａｔｔａａｇｇｇｃｔａｃａｇａｇｔｇａｃｃａｇｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｃｃｇａｇｔｔｃａｃｃａａｃｃｔｇａａｇｇｔｇｔａｃｃａｃｇａｃａｔｃａａｇｇａｃａｔｔａｃｃｇｃｃｃｇｇａａａｇａｇａｔｔａｔｔｇａｇａａｃｇｃｃｇａｇｃｔｇｃｔｇｇａｔｃａｇａｔｔｇｃｃａａｇａｔｃｃｔｇａｃｃａｔｃｔａｃｃａｇａｇｃａｇｃｇａｇｇａｃａｔｃｃａｇｇａａｇａａｃｔｇａｃｃａａｔｃｔｇａａｃｔｃｃｇａｇｃｔｇａｃｃｃａｇｇａａｇａｇａｔｃｇａｇｃａｇａｔｃｔｃｔａａｔｃｔｇａａｇｇｇｃｔａｔａｃｃｇｇｃａｃｃｃａｃａａｃｃｔｇａｇｃｃｔｇａａｇｇｃｃａｔｃａａｃｃｔｇａｔｃｃｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔｇｇｃａｃａｃｃａａｃｇａｃａａｃｃａｇａｔｃｇｃｔａｔｃｔｔｃａａｃｃｇｇｃｔｇａａｇｃｔｇｇｔｇｃｃｃａａｇａａｇｇｔｇｇａｃｃｔｇｔｃｃｃａｇｃａｇａａａｇａｇａｔｃｃｃｃａｃｃａｃｃｃｔｇｇｔｇｇａｃｇａｃｔｔｃａｔｃｃｔｇａｇｃｃｃｃｇｔｃｇｔｇａａｇａｇａａｇｃｔｔｃａｔｃｃａｇａｇｃａｔｃａａａｇｔｇａｔｃａａｃｇｃｃａｔｃａｔｃａａｇａａｇｔａｃｇｇｃｃｔｇｃｃｃａａｃｇａｃａｔｃａｔｔａｔｃｇａｇｃｔｇｇｃｃｃｇｃｇａｇａａｇａａｃｔｃｃａａｇｇａｃｇｃｃｃａｇａａａａｔｇａｔｃａａｃｇａｇａｔｇｃａｇａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇｃａｇａｃｃａａｃｇａｇｃｇｇａｔｃｇａｇｇａａａｔｃａｔｃｃｇｇａｃｃａｃｃｇｇｃａａａｇａｇａａｃｇｃｃａａｇｔａｃｃｔｇａｔｃｇａｇａａｇａｔｃａａｇｃｔｇｃａｃｇａｃａｔｇｃａｇｇａａｇｇｃａａｇｔｇｃｃｔｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｔｃｃｃｔｃｔｇｇａａｇａｔｃｔｇｃｔｇａａｃａａｃｃｃｃｔｔｃａａｃｔａｔｇａｇｇｔｇｇａｃｃａｃａｔｃａｔｃｃｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔｃｃｔｔｃｇａｃａａｃａｇｃｔｔｃａａｃａａｃａａｇｇｔｇｃｔｃｇｔｇａａｇｃａｇｇａａｇａａａａｃａｇｃａａｇａａｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｃｃｃｃａｔｔｃｃａｇｔａｃｃｔｇａｇｃａｇｃａｇｃｇａｃａｇｃａａｇａｔｃａｇｃｔａｃｇａａａｃｃｔｔｃａａｇａａｇｃａｃａｔｃｃｔｇａａｔｃｔｇｇｃｃａａｇｇｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｔｃａｇｃａａｇａｃｃａａｇａａａｇａｇｔａｔｃｔｇｃｔｇｇａａｇａａｃｇｇｇａｃａｔｃａａｃａｇｇｔｔｃｔｃｃｇｔｇｃａｇａａａｇａｃｔｔｃａｔｃａａｃｃｇｇａａｃｃｔｇｇｔｇｇａｔａｃｃａｇａｔａｃｇｃｃａｃｃａｇａｇｇｃｃｔｇａｔｇａａｃｃｔｇｃｔｇｃｇｇａｇｃｔａｃｔｔｃａｇａｇｔｇａａｃａａｃｃｔｇｇａｃｇｔｇａａａｇｔｇａａｇｔｃｃａｔｃａａｔｇｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃａｇｃｔｔｔｃｔｇｃｇｇｃｇｇａａｇｔｇｇａａｇｔｔｔａａｇａａａｇａｇｃｇｇａａｃａａｇｇｇｇｔａｃａａｇｃａｃｃａｃｇｃｃｇａｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａｔｃａｔｔｇｃｃａａｃｇｃｃｇａｔｔｔｃａｔｃｔｔｃａａａｇａｇｔｇｇａａｇａａａｃｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａａａａａｇｔｇａｔｇｇａａａａｃｃａｇａｔｇｔｔｃｇａｇｇａａａａｇｃａｇｇｃｃｇａｇａｇｃａｔｇｃｃｃｇａｇａｔｃｇａａａｃｃｇａｇｃａｇｇａｇｔａｃａａａｇａｇａｔｃｔｔｃａｔｃａｃｃｃｃｃｃａｃｃａｇａｔｃａａｇｃａｃａｔｔａａｇｇａｃｔｔｃａａｇｇａｃｔａｃａａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｇｇｇｔｇｇａｃａａｇａａｇｃｃｔａａｔａｇａｇａｇｃｔｇａｔｔａａｃｇａｃａｃｃｃｔｇｔａｃｔｃｃａｃｃｃｇｇａａｇｇａｃｇａｃａａｇｇｇｃａａｃａｃｃｃｔｇａｔｃｇｔｇａａｃａａｔｃｔｇａａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｇａｃａａｇｇａｃａａｔｇａｃａａｇｃｔｇａａａａａｇｃｔｇａｔｃａａｃａａｇａｇｃｃｃｃｇａａａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｔａｃｃａｃｃａｃｇａｃｃｃｃｃａｇａｃｃｔａｃｃａｇａａａｃｔｇａａｇｃｔｇａｔｔａｔｇｇａａｃａｇｔａｃｇｇｃｇａｃｇａｇａａｇａａｔｃｃｃｃｔｇｔａｃａａｇｔａｃｔａｃｇａｇｇａａａｃｃｇｇｇａａｃｔａｃｃｔｇａｃｃａａｇｔａｃｔｃｃａａａａａｇｇａｃａａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇａｔｃａａｇａａｇａｔｔａａｇｔａｔｔａｃｇｇｃａａｃａａａｃｔｇａａｃｇｃｃｃａｔｃｔｇｇａｃａｔｃａｃｃｇａｃｇａｃｔａｃｃｃｃａａｃａｇｃａｇａａａｃａａｇｇｔｃｇｔｇａａｇｃｔｇｔｃｃｃｔｇａａｇｃｃｃｔａｃａｇａｔｔｃｇａｃｇｔｇｔａｃｃｔｇｇａｃａａｔｇｇｃｇｔｇｔａｃａａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａａｇａａｔｃｔｇｇａｔｇｔｇａｔｃａａａａａａｇａａａａｃｔａｃｔａｃｇａａｇｔｇａａｔａｇｃａａｇｔｇｃｔａｔｇａｇｇａａｇｃｔａａｇａａｇｃｔｇａａｇａａｇａｔｃａｇｃａａｃｃａｇｇｃｃｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔａｃａａｃａａｃｇａｔｃｔｇａｔｃａａｇａｔｃａａｃｇｇｃｇａｇｃｔｇｔａｔａｇａｇｔｇａｔｃｇｇｃｇｔｇａａｃａａｃｇａｃｃｔｇｃｔｇａａｃｃｇｇａｔｃｇａａｇｔｇａａｃａｔｇａｔｃｇａｃａｔｃａｃｃｔａｃｃｇｃｇａｇｔａｃｃｔｇｇａａａａｃａｔｇａａｃｇａｃａａｇａｇｇｃｃｃｃｃｃａｇｇａｔｃａｔｔａａｇａｃａａｔｃｇｃｃｔｃｃａａｇａｃｃｃａｇａｇｃａｔｔａａｇａａｇｔａｃａｇｃａｃａｇａｃａｔｔｃｔｇｇｇｃａａｃｃｔｇｔａｔｇａａｇｔｇａａａｔｃｔａａｇａａｇｃａｃｃｃｔｃａｇａｔｃａｔｃａａａａａｇｇｇｃ
配列番号２８
Ｓ．アウレウスＣａｓ９をコードするコドン最適化された核酸配列をコードするベクター（ｐＤＯ２４２）
Figure 2023522788000016

Figure 2023522788000017

Figure 2023522788000018

Figure 2023522788000019
Figure 2023522788000020

Figure 2023522788000021


配列番号５２
ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド
ＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡ
配列番号５３
エクソン５２
ＧＣＡＡＣＡＡＴＧＣＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＴＣＣＣＣＡＧＴＴＧＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＡＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＣＧＧＡＴＣＧＡＡ
配列番号５４
エクソン５２を含むドナー配列
ＧＴＴＡＡＡＴＴＧＴＴＴＴＣＴＡＴＡＡＡＣＣＣＴＴＡＴＡＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＣＴＡＡＡＡＧＴＧＴＴＴＴＧＧＣＴＧＧＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＴＴＡＣＴＴＴＧＴＡＴＴＡＴＧＴＡＡＡＡＧＧＡＡＴＡＣＡＣＡＡＣＧＣＴＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＡＣＴＡＡＧＧＧＡＴＡＴＴＴＧＴＴＣＴＴＡＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＴＧＣＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＴＣＣＣＣＡＧＴＴＧＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＡＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＣＧＧＡＴＣＧＡＡＧＴＡＡＧＴＴＴＴＴＴＡＡＣＡＡＧＣＡＴＧＧＧＡＣＡＣＡＣＡＡＡＧＣＡＡＧＡＴＧＣＡＴＧＡＣＡＡＧＴＴＴＣＡＡＴＡＡＡＡＡＣＴＴＡＡＧＴＴＣＡＴＡＴＡＴＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＡＴＡＡＡＡＡＴＡＡＴＧＴＧＡＡＡＴＡＡＴＴＧＴＡＡＡＴＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＧＡＴＴＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＡＡＴＧＴＴＡＣＣＴＴＴＴＡＡＴＡＡＡＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＡＴＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＣ
配列番号５５
スーパーエクソン（エクソン５２～７９）
ＧＣＡＡＣＡＡＴＧＣＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＴＣＣＣＣＡＧＴＴＧＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＡＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＣＧＧＡＴＣＧＡＡＴＴＧＡＡＡＧＡＡＴＴＣＡＧＡＡＴＣＡＧＴＧＧＧＡＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＣＣＧＧＡＧＧＣＡＡＣＡＧＴＴＧＡＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＧＡＴＴＣＡＡＣＡＣＡＡＴＧＧＣＴＧＧＡＡＧＣＴＡＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＴＣＴＴＡＧＧＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＡＡＧＣＴＴＧＡＧＴＣＡＴＧＧＡＡＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＴＧＣＡＡＴＣＣＡＡＡＡＧＡＡＡＡＴＣＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＡＧＣＡＧＴＴＧＧＣＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＧＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＧＴＡＧＡＴＧＴＧＧＣＡＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＣＣＣＴＧＡＡＡＣＴＴＣＴＣＣＧＧＧＡＴＴＡＴＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＣＡＣＡＴＧＡＴＡＡＣＡＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＡＴＧＣＣＴＣＴＴＧＧＡＧＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＡＡＡＡＧＧＧＴＧＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＡＡＡＣＴＣＡＴＡＧＡＴＴＡＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＴＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＴＧＣＣＡＡＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＧＡＴＧＣＴＡＣＣＣＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＴＡＧＡＡＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＧＡＧＴＡＡＡＡＧＡＧＣＴＧＡＴＧＡＡＡＣＡＡＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＡＴＴＧＡＡＧＣＴＣＡＣＡＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＴＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＡＡＡＡＴＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＴＣＣＧＡＴＧＡＴＧＣＡＧＴＣＣＴＧＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＧＴＴＴＧＧＡＴＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＴＧＧＡＧＴＧＡＡＣＴＴＣＧＧＡＡＡＡＡＧＴＣＴＣＴＣＡＡＣＡＴＴＡＧＧＴＣＣＣＡＴＴＴＧＧＡＡＧＣＣＡＧＴＴＣＴＧＡＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＣＧＴＣＴＧＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＴＴＣＴＧＧＴＧＴＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＡＡＡＧＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＡＡＧＣＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＧＧＡＧＧＣＧＡＣＴＴＴＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＧＡＴＧＴＡＣＡＴＡＧＧＧＣＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＧＡＡＴＴＧＡＡＡＡＣＴＡＡＡＧＡＡＣＣＴＧＴＡＡＴＣＡＴＧＡＧＴＡＣＴＣＴＴＧＡＧＡＣＴＧＴＡＣＧＡＡＴＡＴＴＴＣＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＣＣＴＴＴＧＧＡＡＧＧＡＣＴＡＧＡＧＡＡＡＣＴＣＴＡＣＣＡＧＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＣＡＣＴＣＧＧＣＴＴＣＴＡＣＧＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＧＧＴＣＡＡＴＡＣＴＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＣＴＧＡＣＴＧＧＣＡＧＡＧＡＡＡＡＡＴＡＧＡＴＧＡＧＡＣＣＣＴＴＧＡＡＡＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＣＣＡＣＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＡＧＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＧＡＴＣＣＴＧＧＣＡＧＣＣＣＧＴＧＧＧＣＧＡＴＣＴＣＣＴＣＡＴＴＧＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣＴＣＧＡＧＡＡＡＧＴＣＡＡＧＧＣＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＣＧＣＣＴＣＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＣＴＴＧＣＴＣＧＣＣＡＧＣＴＴＡＣＣＡＣＴＴＴＧＧＧＣＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＣＣＧＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＡＧＴＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＡＴＣＴＣＡＧＣＡＣＴＴＴＣＴＴＴＣＣＡＣＧＴＣＴＧＴＣＣＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＴＣＴＣＧＣＣＡＡＡＣＡＡＡＧＴＧＣＣＣＴＡＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＡＣＧＡＧＡＣＴＣＡＡＡＣＡＡＣＴＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡＡＡＡＴＧＡＣＡＧＡＧＣＴＣＴＡＣＣＡＧＴＣＴＴＴＡＧＣＴＧＡＣＣＴＧＡＡＴＡＡＴＧＴＣＡＧＡＴＴＣＴＣＡＧＣＴＴＡＴＡＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＡＣＴＣＣＧＡＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＴＴＧＣＴＴＧＧＡＴＣＴＣＴＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＣＡＴＧＴＧＡＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＣＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＣＣＣＡＴＧＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＴＧＡＣＣＡＣＴＡＴＴＴＡＴＧＡＣＣＧＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＣＡＡＴＴＴＧＧＴＣＡＡＣＧＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＴＡＴＧＴＧＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＧＡＴＡＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＡＧＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＴＣＴＴＴＴＡＡＡＡＣＴＧＧＣＡＴＣＡＴＴＴＣＣＣＴＧＴＧＴＡＡＡＧＣＡＣＡＴＴＴＧＧＡＡＧＡＣＡＡＧＴＡＣＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＴＣＡＡＧＣＡＡＧＴＧＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＧＴＧＡＣＣＡＧＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＣＣＴＴＣＴＧＣＡＴＧＡＴＴＣＴＡＴＣＣＡＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＡＧＴＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＧＣＡＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＧＣＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＣＣＧＧＡＧＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＴＴＴＧＣＴＡＡＴＡＡＴＡＡＧＣＣＡＧＡＧＡＴＣＧＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＡＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＧＧＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＣＡＡＧＣＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＡＴＧＴＡＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＴＣＣＡＡＴＣＡＴＴＧＧＡＴＴＣＡＧＧＴＡＣＡＧＧＡＧＴＣＴＡＡＡＧＣＡＣＴＴＴＡＡＴＴＡＴＧＡＣＡＴＣＴＧＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＧＴＣＧＡＧＴＴＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＡＴＡＡＡＡＴＧＣＡＣＴＡＴＣＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＴＡＴＴＧＣＡＣＴＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＴＡＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＴＣＧＡＡＣＣＡＡＡＡＧＧＴＡＴＴＴＴＧＣＧＡＡＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＡＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＡＧＡＧＧＧＧＧＡＣＡＡＣＡＴＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＴＧＧＣＣＡＧＴＡＧＡＴＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＣＣＣＣＴＣＡＧＣＴＴＴＣＡＣＡＣＧＡＴＧＡＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＧＣＡＴＴＧＡＡＣＡＴＴＡＴＧＣＴＡＧＣＡＧＧＣＴＡＧＣＡＧＡＡＡＴＧＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＴＣＴＴＡＴＣＴＡＡＡＴＧＡＴＡＧＣＡＴＣＴＣＴＣＣＴＡＡＴＧＡＧＡＧＣＡＴＡＧＡＴＧＡＴＧＡＡＣＡＴＴＴＧＴＴＡＡＴＣＣＡＧＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＡＧＴＴＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＴＡＧＴＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＣＴＴＧＡＴＴＴＣＣＴＴＡＧＡＧＡＧＴＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧＧＧＧＡＧＣＴＡＧＡＧＡＧＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＧＡＴＣＴＴＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＡＣＣＧＴＣＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＡＣＡＴＡＡＡＧＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＣＴＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＴＣＣＣＣＧＧＧＡＴＧＣＴＧＡＧＣＴＣＡＴＴＧＣＴＧＡＧＧＣＣＡＡＧＣＴＡＣＴＧＣＧＴＣＡＡＣＡＣＡＡＡＧＧＣＣＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＣＡＣＡＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡＧＴＴＡＣＡＣＡＧＧＣＴＡＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＡＡＣＣＣＣＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＧＡＡＴＧＧＣＡＣＡＡＣＧＧＴＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＴＣＴＡＣＣＴＣＴＣＴＡＣＡＧＡＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＡＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＧＴＧＧＴＴＧＧＣＡＧＴＣＡＡＡＣＴＴＣＧＧＡＣＴＣＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＣＴＣＡＧＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＣＡＡＧＣＡＣＡＧＧＧＴＴＡＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＧＧＡＧＣＡＡＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＣＣＴＴＣＣＣＴＡＧＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＴＡＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＴＧＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＣＡＡＴＧＴＡＧ
配列番号５６
スーパーエクソン（エクソン５２～７９）を含むドナー配列
ｇＴＴＡＡｔＴＴＧｃｇＴＴＣＴＡｇｃｃＡＣＣｇａｇＡＴＡＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＣＴＡＡＡＡＧＴＧＴＴＴＴＧＧＣＴＧＧＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＴＴＡＣＴＴＴＧＴＡＴＴＡＴＧＴＡＡＡＡＧＧＡＡＴＡＣＡＣＡＡＣＧＣＴＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＴＡＣＴＡＡＧＧＧＡＴＡＴＴＴＧＴＴＣＴＴＡＣＡＧＧＣＡＡＣＡＡＴＧＣＡＧＧＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＡＧＧＣＧＴＣＣＣＣＡＧＴＴＧＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡＴＴＡＣＣＧＣＴＧＣＣＣＡＡＡＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＣＡＡＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＣＧＧＡＴＣＧＡＡＴＴＧＡＡＡＧＡＡＴＴＣＡＧＡＡＴＣＡＧＴＧＧＧＡＴＧＡＡＧＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＣＣＧＧＡＧＧＣＡＡＣＡＧＴＴＧＡＡＴＧＡＡＡＴＧＴＴＡＡＡＧＧＡＴＴＣＡＡＣＡＣＡＡＴＧＧＣＴＧＧＡＡＧＣＴＡＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＧＴＣＴＴＡＧＧＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＡＡＧＣＴＴＧＡＧＴＣＡＴＧＧＡＡＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＴＧＣＡＡＴＣＣＡＡＡＡＧＡＡＡＡＴＣＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＡＧＣＡＧＴＴＧＧＣＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＧＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＧＴＡＧＡＴＧＴＧＧＣＡＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＣＣＣＴＧＡＡＡＣＴＴＣＴＣＣＧＧＧＡＴＴＡＴＴＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＣＡＧＡＡＡＡＧＴＣＣＡＣＡＴＧＡＴＡＡＣＡＧＡＧＡＡＴＡＴＣＡＡＴＧＣＣＴＣＴＴＧＧＡＧＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＡＡＡＡＧＧＧＴＧＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＡＡＡＣＴＣＡＴＡＧＡＴＴＡＣＴＧＣＡＡＣＡＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＡＡＡＧＴＴＴＣＴＴＧＣＣＴＧＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＴＧＣＣＡＡＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＧＡＴＧＣＴＡＣＣＣＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＧＣＴＣＣＴＡＧＡＡＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＧＡＧＴＡＡＡＡＧＡＧＣＴＧＡＴＧＡＡＡＣＡＡＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＴＧＡＡＡＴＴＧＡＡＧＣＴＣＡＣＡＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＡＣＡＡＣＣＴＧＧＡＴＧＡＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＡＡＡＡＴＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＴＣＣＧＡＴＧＡＴＧＣＡＧＴＣＣＴＧＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＧＴＴＴＧＧＡＴＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＴＧＧＡＧＴＧＡＡＣＴＴＣＧＧＡＡＡＡＡＧＴＣＴＣＴＣＡＡＣＡＴＴＡＧＧＴＣＣＣＡＴＴＴＧＧＡＡＧＣＣＡＧＴＴＣＴＧＡＣＣＡＧＴＧＧＡＡＧＣＧＴＣＴＧＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＴＴＣＴＧＧＴＧＴＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＡＡＡＧＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＡＡＧＣＣＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＧＧＡＧＧＣＧＡＣＴＴＴＣＣＡＧＣＡＧＴＴＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＧＡＴＧＴＡＣＡＴＡＧＧＧＣＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＧＡＡＴＴＧＡＡＡＡＣＴＡＡＡＧＡＡＣＣＴＧＴＡＡＴＣＡＴＧＡＧＴＡＣＴＣＴＴＧＡＧＡＣＴＧＴＡＣＧＡＡＴＡＴＴＴＣＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＣＣＴＴＴＧＧＡＡＧＧＡＣＴＡＧＡＧＡＡＡＣＴＣＴＡＣＣＡＧＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＣＣＣＡＧＡＡＴＧＴＣＡＣＴＣＧＧＣＴＴＣＴＡＣＧＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＧＧＴＣＡＡＴＡＣＴＧＡＧＴＧＧＧＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＣＴＧＡＣＴＧＧＣＡＧＡＧＡＡＡＡＡＴＡＧＡＴＧＡＧＡＣＣＣＴＴＧＡＡＡＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＧＧＣＣＡＣＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＡＧＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＴＣＡＡＧＧＧＡＴＣＣＴＧＧＣＡＧＣＣＣＧＴＧＧＧＣＧＡＴＣＴＣＣＴＣＡＴＴＧＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣＴＣＧＡＧＡＡＡＧＴＣＡＡＧＧＣＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＣＧＣＣＴＣＴＧＡＡＡＧＡＧＡＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＣＴＴＧＣＴＣＧＣＣＡＧＣＴＴＡＣＣＡＣＴＴＴＧＧＧＣＡＴＴＣＡＧＣＴＣＴＣＡＣＣＧＴＡＴＡＡＣＣＴＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＣＴＧＣＡＧＧＴＧＧＣＣＧＴＣＧＡＧＧＡＣＣＧＡＧＴＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＡＣＡＧＧＧＡＣＴＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＡＴＣＴＣＡＧＣＡＣＴＴＴＣＴＴＴＣＣＡＣＧＴＣＴＧＴＣＣＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＴＣＴＣＧＣＣＡＡＡＣＡＡＡＧＴＧＣＣＣＴＡＣＴＡＴＡＴＣＡＡＣＣＡＣＧＡＧＡＣＴＣＡＡＡＣＡＡＣＴＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＴＣＣＣＡＡＡＡＴＧＡＣＡＧＡＧＣＴＣＴＡＣＣＡＧＴＣＴＴＴＡＧＣＴＧＡＣＣＴＧＡＡＴＡＡＴＧＴＣＡＧＡＴＴＣＴＣＡＧＣＴＴＡＴＡＧＧＡＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＡＣＴＣＣＧＡＡＧＡＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＴＴＧＣＴＴＧＧＡＴＣＴＣＴＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＣＡＴＧＴＧＡＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＣＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＣＣＣＡＴＧＧＡＴＡＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＴＧＡＣＣＡＣＴＡＴＴＴＡＴＧＡＣＣＧＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＣＡＡＴＴＴＧＧＴＣＡＡＣＧＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＴＡＴＧＴＧＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＡＴＧＴＴＴＡＴＧＡＴＡＣＧＧＧＡＣＧＡＡＣＡＧＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＴＣＴＴＴＴＡＡＡＡＣＴＧＧＣＡＴＣＡＴＴＴＣＣＣＴＧＴＧＴＡＡＡＧＣＡＣＡＴＴＴＧＧＡＡＧＡＣＡＡＧＴＡＣＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＴＣＡＡＧＣＡＡＧＴＧＧＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＧＴＧＡＣＣＡＧＣＧＣＡＧＧＣＴＧＧＧＣＣＴＣＣＴＴＣＴＧＣＡＴＧＡＴＴＣＴＡＴＣＣＡＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＡＧＴＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＧＣＡＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＧＣＡＧＴＡＡＣＡＴＴＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＣＣＧＧＡＧＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＴＴＴＧＣＴＡＡＴＡＡＴＡＡＧＣＣＡＧＡＧＡＴＣＧＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＡＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＣＴＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＴＣＣＡＴＧＧＴＧＴＧＧＣＴＧＣＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＡＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣＣＡＡＧＣＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＡＴＧＴＡＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＴＣＣＡＡＴＣＡＴＴＧＧＡＴＴＣＡＧＧＴＡＣＡＧＧＡＧＴＣＴＡＡＡＧＣＡＣＴＴＴＡＡＴＴＡＴＧＡＣＡＴＣＴＧＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＧＧＴＣＧＡＧＴＴＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＡＴＡＡＡＡＴＧＣＡＣＴＡＴＣＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＴＡＴＴＧＣＡＣＴＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＣＡＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＴＴＣＧＡＧＡＣＴＴＴＧＣＣＡＡＧＧＴＡＣＴＡＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＴＴＣＧＡＡＣＣＡＡＡＡＧＧＴＡＴＴＴＴＧＣＧＡＡＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＡＴＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＣＡＧＡＣＴＧＴＣＴＴＡＧＡＧＧＧＧＧＡＣＡＡＣＡＴＧＧＡＡＡＣＴＣＣＣＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＴＣＡＡＣＴＴＣＴＧＧＣＣＡＧＴＡＧＡＴＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＣＣＣＣＴＣＡＧＣＴＴＴＣＡＣＡＣＧＡＴＧＡＴＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＧＣＡＴＴＧＡＡＣＡＴＴＡＴＧＣＴＡＧＣＡＧＧＣＴＡＧＣＡＧＡＡＡＴＧＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＧＡＴＣＴＴＡＴＣＴＡＡＡＴＧＡＴＡＧＣＡＴＣＴＣＴＣＣＴＡＡＴＧＡＧＡＧＣＡＴＡＧＡＴＧＡＴＧＡＡＣＡＴＴＴＧＴＴＡＡＴＣＣＡＧＣＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＡＧＴＴＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＣＴＣＣＣＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＧＴＡＧＴＣＣＴＧＣＣＣＡＧＡＴＣＴＴＧＡＴＴＴＣＣＴＴＡＧＡＧＡＧＴＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧＧＧＧＡＧＣＴＡＧＡＧＡＧＡＡＴＣＣＴＡＧＣＡＧＡＴＣＴＴＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＡＣＣＧＴＣＴＡＡＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＡＣＡＴＡＡＡＧＧＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＣＴＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＴＧＣＣＣＡＣＣＴＣＴＣＣＣＣＡＧＡＧＴＣＣＣＣＧＧＧＡＴＧＣＴＧＡＧＣＴＣＡＴＴＧＣＴＧＡＧＧＣＣＡＡＧＣＴＡＣＴＧＣＧＴＣＡＡＣＡＣＡＡＡＧＧＣＣＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＣＡＣＡＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡＧＴＴＡＣＡＣＡＧＧＣＴＡＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＡＡＣＣＣＣＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＧＡＡＴＧＧＣＡＣＡＡＣＧＧＴＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＴＣＴＡＣＣＴＣＴＣＴＡＣＡＧＡＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＡＴＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＧＴＧＧＴＴＧＧＣＡＧＴＣＡＡＡＣＴＴＣＧＧＡＣＴＣＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＣＴＣＡＧＴＣＣＴＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＣＡＡＧＣＡＣＡＧＧＧＴＴＡＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＧＧＡＧＣＡＡＣＴＣＡＡＣＡＡＣＴＣＣＴＴＣＣＣＴＡＧＴＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＴＡＣＣＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＴＧＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＣＡＡＴＧＴＡＧＴＣＧＴＴＴＡＡＡＣＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴＡＴＴＧＣＡＧＣＴＴＡＴＡＡＴＧＧＴＴＡＣＡＡＡＴＡＡＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡＣＡＡＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣＴＧＣＡＴＴＣＴＡＧＴＴＧＴＧＧＴＴＴＧＴＣＣＡＡＡＣＴＣＡＴＣＡＡＴＧＴＡＴＣＴＴＡＧＴＡＡＧＴＴＴＴＴＴＡＡＣＡＡＧＣＡＴＧＧＧＡＣＡＣＡＣＡＡＡＧＣＡＡＧＡＴＧＣＡＴＧＡＣＡＡＧＴＴＴＣＡＡＴＡＡＡＡＡＣＴＴＡＡＧＴＴＣＡＴＡＴＡＴＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＴＴＴＡＴＡＡＡＡＡＴＡＡＴＧＴＧＡＡＡＴＡＡＴＴＧＴＡＡＡＴＧＡＴＡＡＣＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＧＡＴＴＴＴＣＡＧＴＣＣＡＴＡＡＴＧＴＴＡＣＣＴＴＴＴＡＡＴＡＡＡＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＡＴＡＧＡＡＧＡＡＡＴＡＣ
配列番号５７
ｇＲＮＡ７を有するバージョン１のエクソン５２ドナー配列のＡＡＶ発現カセット：
ＡＡＶ ＩＴＲ、Ｕ６プロモーター、ｇＲＮＡ７スペーサー、ＰＡＭ（ＡＴＴＣＣＴ）、ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド、ドナー配列、エクソン５２
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＧＡＴＣＴＧＡＡＴＴＣＧＧＴＡＣＣＴＴＣＣＴＡＧＧＧＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＡＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＡＴＴＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＡＡＣＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＣＡＴＴＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡｇｔｔａａａｔｔｇｔｔｔｔｃｔａｔａａａｃｃｃｔｔａｔａｃａｇｔａａｃａｔｃｔｔｔｔｔｔａｔｔｔｃｔａａａａｇｔｇｔｔｔｔｇｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｃａａｔｔｇｔａｃｔｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｔａｔｇｔａａａａｇｇａａｔａｃａｃａａｃｇｃｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇａｔａｃｔａａｇｇｇａｔａｔｔｔｇｔｔｃｔｔａｃａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａｔａｃＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡＧＣＴＡＧＣＴＣＧＧＡＧＡＧＡＣＧＡＣＡＴＣＴＡＧＡＡＴＴＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＴＡＴＣＧＡＴＴＡＣＴＡＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴＴＡＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＴＣＡＡＣＡＧＴＴＣＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＴＣＴＴＡＧＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＡＴＴＣＣＡＡＣＴＴＣＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＴＴＡＡＴＧＡＡＴＴＴＴＴＣＴＴＴＡＧＡＴＡＡＴＴＣＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＴＴＡＣＡＴＧＡＣＴＣＴＡＡＴＴＴＡＴＣＡＡＴＡＧＴＡＣＣＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＣＣＡＡＧＴＣＣＴＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＴＴＴＡＣＡＡＡＣＣＴＴＴＡＣＴＣＣＡＴＡＡＣＴＴＧＣＡＡＣＴＡＡＣＧＧＡＣＴＡＴＡＴＡＣＴＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＧＡＡＴＧＣＴＴＡＴＣＡＧＣＴＴＴＴＡＡＡＣＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＡＴＣＡＴＡＡＡＣＡＴＡＴＣＣＴＧＡＴＴＣＡＡＣＡＴＡＡＧＡＴＴＧＧＧＴＴＡＡＴＧＣＴＡＡＡＧＴＴＴＣＴＧＣＴＴＴＧＧＴＣＡＴＴＣＣＡＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＣＣＧＣＣＡＴＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＴＧＡＴＡＡＴＣＴＧＴＴＡＣＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＡＣＧＴＡＡＣＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＴＣＡＴＴＴＡＡＴＴＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＡＴＡＡＴＴＣＴＡＴＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＴＡＡＴＴＴＣＡＣＴＡＡＡＡＣＴＧＴＡＧＴＴＣＡＴＡＡＧＴＣＴＣＣＴＴＴＴＧＴＡＡＧＡＧＴＧＣＡＣＡＡＴＡＴＴＴＡＣＡＣＣＡＴＴＡＣＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＡＴＴＡＴＡＡＴＡＧＡＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＡＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴＴＴＴＴＧＡＴＡＡＡＡＡＴＡＡＣＡＡＡＧＴＴＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＧＡＡＴＡＡＡＴＡＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＧＧＡＴＧＡＴＧＡＧＴＴＧＡＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＡＧＴＡＡＡＴＧＣＴＡＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＧＣＡＴＧＣＡＧＣＡＴＴＴＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＡＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＡＴＡＡＧＡＧＧＴＡＴＴＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＣＧＴＴＴＡＣＡＣＴＧＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＡＣＴＡＴＴＧＣＡＴＴＴＧＣＡＧＡＡＴＴＡＴＴＡＡＡＡＣＡＡＡＡＴＴＡＣＣＣＡＡＡＴＡＧＧＴＴＧＡＡＴＧＡＴＧＧＡＡＴＡＧＴＴＧＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＧＴＣＡＴＡＡＴＴＣＴＡＡＡＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＧＴＴＧＴＡＧＣＣＧＡＡＧＴＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＡＴＡＧＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＴＴＡＧＡＡＴＴＴＧＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＣＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＡＡＡＣＴＡＡＴＧＡＡＧＴＣＡＧＴＴＧＴＴＡＡＡＧＡＣＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＴＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＴＧＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＡＧＧＡＡＣＡＡＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＡＧＣＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＡＣＧＣＧＡＧＴＴＡＣＴＡＡＡＡＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＡＡＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＴＣＴＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＣＴＡＡＡＧＴＴＡＴＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＴＴＴＴＡＴＡＡＡＧＧＴＣＡＴＡＧＡＡＴＡＴＡＡＴＡＴＴＴＴＡＧＣＡＴＧＴＧＴＡＴＴＴＴＧＴＧＴＧＣＴＣＡＴＴＴＡＣＡＡＣＣＧＴＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＣＣＡＣＡＡＣＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＣＡＴＴＡＴＡＡＧＣＴＧＣＡＡＴＡＡＡＣＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＴＴＧＣＡＴＴＣＡＴＴＴＴＡＴＧＴＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＧＧＴＴＴＴＴＴＡＧＴＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＣＣＣＡＧＣＧＴＣＴＴＧＴＣＡＴＴＧＧＣＧＡＡＴＴＣＧＡＡＣＡＣＧＣＡＧＡＴＧＣＡＧＴＣＧＧＧＧＣＧＧＣＧＣＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＴＣＧＣＡＴＡＴＴＡＡＧＧＴＧＡＣＧＣＧＴＧＴＧＧＣＣＴＣＧＡＡＣＡＣＣＧＡＧＣＧＡＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＡＴＡＴＧＧＧＡＴＣＧＧＣＣＡＴＴＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＧＣＡＣＧＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＣＧＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＴＡＴＴＣＧＧＣＴＡＴＧＡＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＧＴＴＣＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＣＣＴＧＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＧＧＣＴＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＧＣＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＣＧＡＣＧＴＴＧＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＣＴＡＴＴＧＧＧＣＧＡＡＧＴＧＣＣＧＧＧＧＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＡＴＧＣＡＡＴＧＣＧＧＣＧＧＣＴＧＣＡＴＡＣＧＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＡＡＣＡＴＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＧＴＡＣＴＣＧＧＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＴＣＴＴＧＴＣＧＡＴＣＡＧＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＣＧＣＣＡＧＣＣＧＡＡＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＧＧＣＧＣＧＣＡＴＧＣＣＣＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＴＧＣＣＴＧＣＴＴＧＣＣＧＡＡＴＡＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＡＡＴＧＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＴＣＡＧＧＡＣＡＴＡＧＣＧＴＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＧＧＣＧＧＣＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧＴＧＣＴＴＴＡＣＧＧＴＡＴＣＧＣＣＧＣＴＣＣＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＴＧＡＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＧＡＧＧＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＴＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
配列番号５８
ｇＲＮＡ１２を有するバージョン１のエクソン５２ドナー配列のＡＡＶ発現カセット：
ＡＡＶ ＩＴＲ、Ｕ６プロモーター、ｇＲＮＡ１２スペーサー、ＰＡＭ、ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド、ドナー配列、エクソン５２
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＧＡＴＣＴＧＡＡＴＴＣＧＧＴＡＣＣＴＴＣＣＴＡＧＧＧＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＡＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＡＴＴＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＡＡＣＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＴＡＡＧＴＡＡＴＣＣＧＡＧＧＴＡＣＴＣＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＡＴＴＣＣＴＧＡＧＴＡＣＣＴＣＧＧＡＴＴＡＣＴＴＡＡｇｔｔａａａｔｔｇｔｔｔｔｃｔａｔａａａｃｃｃｔｔａｔａｃａｇｔａａｃａｔｃｔｔｔｔｔｔａｔｔｔｃｔａａａａｇｔｇｔｔｔｔｇｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｃａａｔｔｇｔａｃｔｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｔａｔｇｔａａａａｇｇａａｔａｃａｃａａｃｇｃｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇａｔａｃｔａａｇｇｇａｔａｔｔｔｇｔｔｃｔｔａｃａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａｔａｃＡＴＴＣＣＴＧＡＧＴＡＣＣＴＣＧＧＡＴＴＡＣＴＴＡＡＧＣＴＡＧＣＴＣＧＧＡＧＡＧＡＣＧＡＣＡＴＣＴＡＧＡＡＴＴＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＴＡＴＣＧＡＴＴＡＣＴＡＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴＴＡＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＴＣＡＡＣＡＧＴＴＣＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＴＣＴＴＡＧＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＡＴＴＣＣＡＡＣＴＴＣＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＴＴＡＡＴＧＡＡＴＴＴＴＴＣＴＴＴＡＧＡＴＡＡＴＴＣＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＴＴＡＣＡＴＧＡＣＴＣＴＡＡＴＴＴＡＴＣＡＡＴＡＧＴＡＣＣＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＣＣＡＡＧＴＣＣＴＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＴＴＴＡＣＡＡＡＣＣＴＴＴＡＣＴＣＣＡＴＡＡＣＴＴＧＣＡＡＣＴＡＡＣＧＧＡＣＴＡＴＡＴＡＣＴＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＧＡＡＴＧＣＴＴＡＴＣＡＧＣＴＴＴＴＡＡＡＣＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＡＴＣＡＴＡＡＡＣＡＴＡＴＣＣＴＧＡＴＴＣＡＡＣＡＴＡＡＧＡＴＴＧＧＧＴＴＡＡＴＧＣＴＡＡＡＧＴＴＴＣＴＧＣＴＴＴＧＧＴＣＡＴＴＣＣＡＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＣＣＧＣＣＡＴＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＴＧＡＴＡＡＴＣＴＧＴＴＡＣＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＡＣＧＴＡＡＣＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＴＣＡＴＴＴＡＡＴＴＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＡＴＡＡＴＴＣＴＡＴＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＴＡＡＴＴＴＣＡＣＴＡＡＡＡＣＴＧＴＡＧＴＴＣＡＴＡＡＧＴＣＴＣＣＴＴＴＴＧＴＡＡＧＡＧＴＧＣＡＣＡＡＴＡＴＴＴＡＣＡＣＣＡＴＴＡＣＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＡＴＴＡＴＡＡＴＡＧＡＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＡＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴＴＴＴＴＧＡＴＡＡＡＡＡＴＡＡＣＡＡＡＧＴＴＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＧＡＡＴＡＡＡＴＡＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＧＧＡＴＧＡＴＧＡＧＴＴＧＡＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＡＧＴＡＡＡＴＧＣＴＡＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＧＣＡＴＧＣＡＧＣＡＴＴＴＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＡＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＡＴＡＡＧＡＧＧＴＡＴＴＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＣＧＴＴＴＡＣＡＣＴＧＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＡＣＴＡＴＴＧＣＡＴＴＴＧＣＡＧＡＡＴＴＡＴＴＡＡＡＡＣＡＡＡＡＴＴＡＣＣＣＡＡＡＴＡＧＧＴＴＧＡＡＴＧＡＴＧＧＡＡＴＡＧＴＴＧＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＧＴＣＡＴＡＡＴＴＣＴＡＡＡＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＧＴＴＧＴＡＧＣＣＧＡＡＧＴＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＡＴＡＧＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＴＴＡＧＡＡＴＴＴＧＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＣＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＡＡＡＣＴＡＡＴＧＡＡＧＴＣＡＧＴＴＧＴＴＡＡＡＧＡＣＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＴＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＴＧＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＡＧＧＡＡＣＡＡＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＡＧＣＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＡＣＧＣＧＡＧＴＴＡＣＴＡＡＡＡＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＡＡＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＴＣＴＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＣＴＡＡＡＧＴＴＡＴＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＴＴＴＴＡＴＡＡＡＧＧＴＣＡＴＡＧＡＡＴＡＴＡＡＴＡＴＴＴＴＡＧＣＡＴＧＴＧＴＡＴＴＴＴＧＴＧＴＧＣＴＣＡＴＴＴＡＣＡＡＣＣＧＴＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＣＣＡＣＡＡＣＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＣＡＴＴＡＴＡＡＧＣＴＧＣＡＡＴＡＡＡＣＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＴＴＧＣＡＴＴＣＡＴＴＴＴＡＴＧＴＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＧＧＴＴＴＴＴＴＡＧＴＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＣＣＣＡＧＣＧＴＣＴＴＧＴＣＡＴＴＧＧＣＧＡＡＴＴＣＧＡＡＣＡＣＧＣＡＧＡＴＧＣＡＧＴＣＧＧＧＧＣＧＧＣＧＣＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＴＣＧＣＡＴＡＴＴＡＡＧＧＴＧＡＣＧＣＧＴＧＴＧＧＣＣＴＣＧＡＡＣＡＣＣＧＡＧＣＧＡＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＡＴＡＴＧＧＧＡＴＣＧＧＣＣＡＴＴＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＧＣＡＣＧＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＣＧＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＴＡＴＴＣＧＧＣＴＡＴＧＡＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＧＴＴＣＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＣＣＴＧＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＧＧＣＴＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＧＣＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＣＧＡＣＧＴＴＧＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＣＴＡＴＴＧＧＧＣＧＡＡＧＴＧＣＣＧＧＧＧＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＡＴＧＣＡＡＴＧＣＧＧＣＧＧＣＴＧＣＡＴＡＣＧＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＡＡＣＡＴＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＧＴＡＣＴＣＧＧＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＴＣＴＴＧＴＣＧＡＴＣＡＧＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＣＧＣＣＡＧＣＣＧＡＡＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＧＧＣＧＣＧＣＡＴＧＣＣＣＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＴＧＣＣＴＧＣＴＴＧＣＣＧＡＡＴＡＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＡＡＴＧＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＴＣＡＧＧＡＣＡＴＡＧＣＧＴＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＧＧＣＧＧＣＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧＴＧＣＴＴＴＡＣＧＧＴＡＴＣＧＣＣＧＣＴＣＣＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＴＧＡＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＧＡＧＧＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＴＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
配列番号５９
ｇＲＮＡ７を有するバージョン２のエクソン５２ドナー配列のＡＡＶ発現カセット：
＊注記：バージョン２は、ディープシーケンシング分析による改善された検出のための改変されたドナー配列を指す（これらの改変されたヌクレオチドは、小文字で提供されている）
ＡＡＶ ＩＴＲ、Ｕ６プロモーター、ｇＲＮＡ７スペーサー、ＰＡＭ（ＡＴＴＣＣＴ）、ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド、ドナー配列、エクソン５２
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＧＡＴＣＴＧＡＡＴＴＣＧＧＴＡＣＣＴＴＣＣＴＡＧＧＧＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＡＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＡＴＴＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＡＡＣＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＣＡＴＴＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡｇｔｔａａｔｔｔｇｃｇｔｔｃｔａｇｃｃａｃｃｇａｇａｔａｃａｇｔａａｃａｔｃｔｔｔｔｔｔａｔｔｔｃｔａａａａｇｔｇｔｔｔｔｇｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｃａａｔｔｇｔａｃｔｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｔａｔｇｔａａａａｇｇａａｔａｃａｃａａｃｇｃｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇａｔａｃｔａａｇｇｇａｔａｔｔｔｇｔｔｃｔｔａｃａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａｔａｃＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡＧＣＴＡＧＣＴＣＧＧＡＧＡＧＡＣＧＡＣＡＴＣＴＡＧＡＡＴＴＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＴＡＴＣＧＡＴＴＡＣＴＡＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＣＡＧＣＧＡＴＴＡＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＡＴＣＡＡＣＡＧＴＴＣＣＡＧＴＡＡＣＡＴＣＴＣＴＴＡＧＴＧＣＡＴＡＣＡＴＴＴＴＴＴＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＴＧＣＴＣＡＴＴＣＣＡＡＣＴＴＣＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＴＴＡＡＴＧＡＡＴＴＴＴＴＣＴＴＴＡＧＡＴＡＡＴＴＣＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＴＴＡＣＡＴＧＡＣＴＣＴＡＡＴＴＴＡＴＣＡＡＴＡＧＴＡＣＣＡＣＣＡＧＴＴＡＣＴＣＣＡＡＧＴＣＣＴＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＴＴＴＡＣＡＡＡＣＣＴＴＴＡＣＴＣＣＡＴＡＡＣＴＴＧＣＡＡＣＴＡＡＣＧＧＡＣＴＡＴＡＴＡＣＴＡＡＡＣＴＴＧＴＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＧＡＡＴＧＣＴＴＡＴＣＡＧＣＴＴＴＴＡＡＡＣＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＡＣＡＴＣＡＴＡＡＡＣＡＴＡＴＣＣＴＧＡＴＴＣＡＡＣＡＴＡＡＧＡＴＴＧＧＧＴＴＡＡＴＧＣＴＡＡＡＧＴＴＴＣＴＧＣＴＴＴＧＧＴＣＡＴＴＣＣＡＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＣＣＧＣＣＡＴＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＴＧＡＴＡＡＴＣＴＧＴＴＡＣＡＴＴＡＴＴＴＴＴＡＡＣＧＴＡＡＣＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＴＣＡＴＴＴＡＡＴＴＴＣＴＴＣＡＧＣＴＧＡＴＡＡＴＴＣＴＡＴＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＴＡＡＴＴＴＣＡＣＴＡＡＡＡＣＴＧＴＡＧＴＴＣＡＴＡＡＧＴＣＴＣＣＴＴＴＴＧＴＡＡＧＡＧＴＧＣＡＣＡＡＴＡＴＴＴＡＣＡＣＣＡＴＴＡＣＴＣＴＴＴＣＴＡＣＴＡＴＡＴＴＡＴＡＡＴＡＧＡＡＴＡＧＡＣＡＴＡＴＡＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＧＴＴＴＴＴＧＡＴＡＡＡＡＡＴＡＡＣＡＡＡＧＴＴＴＡＴＡＧＴＧＡＡＴＧＡＡＴＡＡＡＴＡＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＧＧＡＴＧＡＴＧＡＧＴＴＧＡＡＡＡＧＣＣＴＴＴＴＡＧＴＡＡＡＴＧＣＴＡＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＴＴＧＣＡＴＧＣＡＧＣＡＴＴＴＧＡＡＧＧＡＡＴＡＧＡＧＴＴＡＧＡＡＴＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＡＴＡＡＧＡＧＧＴＡＴＴＣＴＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＣＣＴＧＧＡＡＧＡＴＴＴＡＡＣＧＴＴＴＡＣＡＣＴＧＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＡＣＴＡＴＴＧＣＡＴＴＴＧＣＡＧＡＡＴＴＡＴＴＡＡＡＡＣＡＡＡＡＴＴＡＣＣＣＡＡＡＴＡＧＧＴＴＧＡＡＴＧＡＴＧＧＡＡＴＡＧＴＴＧＴＴＧＧＴＣＡＴＧＡＴＡＡＣＣＧＴＣＡＴＡＡＴＴＣＴＡＡＡＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＧＴＴＧＴＡＧＣＣＧＡＡＧＴＴＴＴＡＴＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＡＴＡＧＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＴＴＡＧＡＡＴＴＴＧＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＡＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＣＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＣＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＡＡＡＣＴＡＡＴＧＡＡＧＴＣＡＧＴＴＧＴＴＡＡＡＧＡＣＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＴＡＡＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＴＡＧＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＴＴＧＡＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＡＧＧＡＡＣＡＡＧＴＧＧＴＧＧＡＧＴＡＧＣＴＡＴＴＡＴＴＡＡＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＡＡＣＡＡＣＧＣＧＡＧＴＴＡＣＴＡＡＡＡＣＴＡＧＣＧＴＴＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＧＣＴＣＡＴＴＴＴＴＡＴＴＡＡＡＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＴＣＴＡＡＴＴＡＴＴＧＡＴＡＣＴＡＡＡＧＴＴＡＴＴＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＴＴＴＴＡＴＡＡＡＧＧＴＣＡＴＡＧＡＡＴＡＴＡＡＴＡＴＴＴＴＡＧＣＡＴＧＴＧＴＡＴＴＴＴＧＴＧＴＧＣＴＣＡＴＴＴＡＣＡＡＣＣＧＴＣＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＴＣＣＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＣＣＡＣＡＡＣＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡＣＣＡＴＴＡＴＡＡＧＣＴＧＣＡＡＴＡＡＡＣＡＡＧＴＴＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＴＴＧＣＡＴＴＣＡＴＴＴＴＡＴＧＴＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＧＧＧＧＧＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＧＧＴＴＴＴＴＴＡＧＴＣＧＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＴＣＧＡＡＧＧＣＡＧＴＧＴＧＧＴＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＴＧＴＣＧＡＧＣＡＡＣＣＣＣＧＣＣＣＡＧＣＧＴＣＴＴＧＴＣＡＴＴＧＧＣＧＡＡＴＴＣＧＡＡＣＡＣＧＣＡＧＡＴＧＣＡＧＴＣＧＧＧＧＣＧＧＣＧＣＧＧＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＴＣＧＣＡＴＡＴＴＡＡＧＧＴＧＡＣＧＣＧＴＧＴＧＧＣＣＴＣＧＡＡＣＡＣＣＧＡＧＣＧＡＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＡＴＡＴＧＧＧＡＴＣＧＧＣＣＡＴＴＧＡＡＣＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＧＣＡＣＧＣＡＧＧＴＴＣＴＣＣＧＧＣＣＧＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＧＣＴＡＴＴＣＧＧＣＴＡＴＧＡＣＴＧＧＧＣＡＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＴＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＡＴＧＣＣＧＣＣＧＴＧＴＴＣＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＧＣＣＣＧＧＴＴＣＴＴＴＴＴＧＴＣＡＡＧＡＣＣＧＡＣＣＴＧＴＣＣＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＡＧＧＣＡＧＣＧＣＧＧＣＴＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＧＣＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＣＧＡＣＧＴＴＧＴＣＡＣＴＧＡＡＧＣＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＣＴＡＴＴＧＧＧＣＧＡＡＧＴＧＣＣＧＧＧＧＣＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＡＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＡＡＡＧＴＡＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＣＴＧＡＴＧＣＡＡＴＧＣＧＧＣＧＧＣＴＧＣＡＴＡＣＧＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＣＧＡＡＡＣＡＴＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＧＡＧＣＡＣＧＴＡＣＴＣＧＧＡＴＧＧＡＡＧＣＣＧＧＴＣＴＴＧＴＣＧＡＴＣＡＧＧＡＴＧＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＣＧＣＣＡＧＣＣＧＡＡＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＧＧＣＧＣＧＣＡＴＧＣＣＣＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＣＴＣＧＴＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＧＣＧＡＴＧＣＣＴＧＣＴＴＧＣＣＧＡＡＴＡＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＡＡＴＧＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＧＴＧＴＧＧＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＴＣＡＧＧＡＣＡＴＡＧＣＧＴＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＴＧＡＴＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＴＧＧＣＧＧＣＧＡＡＴＧＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧＴＧＣＴＴＴＡＣＧＧＴＡＴＣＧＣＣＧＣＴＣＣＣＧＡＴＴＣＧＣＡＧＣＧＣＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＡＴＣＧＣＣＴＴＣＴＴＧＡＣＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＧＡＧＧＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧＡＣＴＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
配列番号６０
ｇＲＮＡ７を有するスーパーエクソン（エクソン５２～エクソン７９）ドナー配列のＡＡＶ発現カセット：
＊注記：バージョン２は、ディープシーケンシング分析による改善された検出のための改変されたドナー配列を指す（これらの改変されたヌクレオチドは、小文字で提供されている）
ＡＡＶ ＩＴＲ、Ｕ６プロモーター、ｇＲＮＡ７スペーサー、ＰＡＭ（ＡＡＴＣＣＴ）、ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド、ドナー配列、エクソン５２～７９ ｃＤＮＡ配列、３ｘ終止、ＳＶ４０ポリ（Ａ）シグナル
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＣＡＧＡＴＣＴＧＡＡＴＴＣＧＧＴＡＣＣＴＴＣＣＴＡＧＧＧＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＡＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＡＴＴＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＡＡＣＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＣＡＴＴＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡｇｔｔａａｔｔｔｇｃｇｔｔｃｔａｇｃｃａｃｃｇａｇａｔａｃａｇｔａａｃａｔｃｔｔｔｔｔｔａｔｔｔｃｔａａａａｇｔｇｔｔｔｔｇｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｃａａｔｔｇｔａｃｔｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｔａｔｇｔａａａａｇｇａａｔａｃａｃａａｃｇｃｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇａｔａｃｔａａｇｇｇａｔａｔｔｔｇｔｔｃｔｔａｃａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｔｔｇａａａｇａａｔｔｃａｇａａｔｃａｇｔｇｇｇａｔｇａａｇｔａｃａａｇａａｃａｃｃｔｔｃａｇａａｃｃｇｇａｇｇｃａａｃａｇｔｔｇａａｔｇａａａｔｇｔｔａａａｇｇａｔｔｃａａｃａｃａａｔｇｇｃｔｇｇａａｇｃｔａａｇｇａａｇａａｇｃｔｇａｇｃａｇｇｔｃｔｔａｇｇａｃａｇｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｃｔｔｇａｇｔｃａｔｇｇａａｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔａｔａｃａｇｔａｇａｔｇｃａａｔｃｃａａａａｇａａａａｔｃａｃａｇａａａｃｃａａｇｃａｇｔｔｇｇｃｃａａａｇａｃｃｔｃｃｇｃｃａｇｔｇｇｃａｇａｃａａａｔｇｔａｇａｔｇｔｇｇｃａａａｔｇａｃｔｔｇｇｃｃｃｔｇａａａｃｔｔｃｔｃｃｇｇｇａｔｔａｔｔｃｔｇｃａｇａｔｇａｔａｃｃａｇａａａａｇｔｃｃａｃａｔｇａｔａａｃａｇａｇａａｔａｔｃａａｔｇｃｃｔｃｔｔｇｇａｇａａｇｃａｔｔｃａｔａａａａｇｇｇｔｇａｇｔｇａｇｃｇａｇａｇｇｃｔｇｃｔｔｔｇｇａａｇａａａｃｔｃａｔａｇａｔｔａｃｔｇｃａａｃａｇｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇａｃｃｔｇｇａａａａｇｔｔｔｃｔｔｇｃｃｔｇｇｃｔｔａｃａｇａａｇｃｔｇａａａｃａａｃｔｇｃｃａａｔｇｔｃｃｔａｃａｇｇａｔｇｃｔａｃｃｃｇｔａａｇｇａａａｇｇｃｔｃｃｔａｇａａｇａｃｔｃｃａａｇｇｇａｇｔａａａａｇａｇｃｔｇａｔｇａａａｃａａｔｇｇｃａａｇａｃｃｔｃｃａａｇｇｔｇａａａｔｔｇａａｇｃｔｃａｃａｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａｃａａｃｃｔｇｇａｔｇａａａａｃａｇｃｃａａａａａａｔｃｃｔｇａｇａｔｃｃｃｔｇｇａａｇｇｔｔｃｃｇａｔｇａｔｇｃａｇｔｃｃｔｇｔｔａｃａａａｇａｃｇｔｔｔｇｇａｔａａｃａｔｇａａｃｔｔｃａａｇｔｇｇａｇｔｇａａｃｔｔｃｇｇａａａａａｇｔｃｔｃｔｃａａｃａｔｔａｇｇｔｃｃｃａｔｔｔｇｇａａｇｃｃａｇｔｔｃｔｇａｃｃａｇｔｇｇａａｇｃｇｔｃｔｇｃａｃｃｔｔｔｃｔｃｔｇｃａｇｇａａｃｔｔｃｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔａｃａｇｃｔｇａａａｇａｔｇａｔｇａａｔｔａａｇｃｃｇｇｃａｇｇｃａｃｃｔａｔｔｇｇａｇｇｃｇａｃｔｔｔｃｃａｇｃａｇｔｔｃａｇａａｇｃａｇａａｃｇａｔｇｔａｃａｔａｇｇｇｃｃｔｔｃａａｇａｇｇｇａａｔｔｇａａａａｃｔａａａｇａａｃｃｔｇｔａａｔｃａｔｇａｇｔａｃｔｃｔｔｇａｇａｃｔｇｔａｃｇａａｔａｔｔｔｃｔｇａｃａｇａｇｃａｇｃｃｔｔｔｇｇａａｇｇａｃｔａｇａｇａａａｃｔｃｔａｃｃａｇｇａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｔｇｃｃｔｃｃｔｇａｇｇａｇａｇａｇｃｃｃａｇａａｔｇｔｃａｃｔｃｇｇｃｔｔｃｔａｃｇａａａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｇａｇｇｔｃａａｔａｃｔｇａｇｔｇｇｇａａａａａｔｔｇａａｃｃｔｇｃａｃｔｃｃｇｃｔｇａｃｔｇｇｃａｇａｇａａａａａｔａｇａｔｇａｇａｃｃｃｔｔｇａａａｇａｃｔｃｃａｇｇａａｃｔｔｃａａｇａｇｇｃｃａｃｇｇａｔｇａｇｃｔｇｇａｃｃｔｃａａｇｃｔｇｃｇｃｃａａｇｃｔｇａｇｇｔｇａｔｃａａｇｇｇａｔｃｃｔｇｇｃａｇｃｃｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｔｃｃｔｃａｔｔｇａｃｔｃｔｃｔｃｃａａｇａｔｃａｃｃｔｃｇａｇａａａｇｔｃａａｇｇｃａｃｔｔｃｇａｇｇａｇａａａｔｔｇｃｇｃｃｔｃｔｇａａａｇａｇａａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇｔｃａａｔｇａｃｃｔｔｇｃｔｃｇｃｃａｇｃｔｔａｃｃａｃｔｔｔｇｇｇｃａｔｔｃａｇｃｔｃｔｃａｃｃｇｔａｔａａｃｃｔｃａｇｃａｃｔｃｔｇｇａａｇａｃｃｔｇａａｃａｃｃａｇａｔｇｇａａｇｃｔｔｃｔｇｃａｇｇｔｇｇｃｃｇｔｃｇａｇｇａｃｃｇａｇｔｃａｇｇｃａｇｃｔｇｃａｔｇａａｇｃｃｃａｃａｇｇｇａｃｔｔｔｇｇｔｃｃａｇｃａｔｃｔｃａｇｃａｃｔｔｔｃｔｔｔｃｃａｃｇｔｃｔｇｔｃｃａｇｇｇｔｃｃｃｔｇｇｇａｇａｇａｇｃｃａｔｃｔｃｇｃｃａａａｃａａａｇｔｇｃｃｃｔａｃｔａｔａｔｃａａｃｃａｃｇａｇａｃｔｃａａａｃａａｃｔｔｇｃｔｇｇｇａｃｃａｔｃｃｃａａａａｔｇａｃａｇａｇｃｔｃｔａｃｃａｇｔｃｔｔｔａｇｃｔｇａｃｃｔｇａａｔａａｔｇｔｃａｇａｔｔｃｔｃａｇｃｔｔａｔａｇｇａｃｔｇｃｃａｔｇａａａｃｔｃｃｇａａｇａｃｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｃｔｔｔｇｃｔｔｇｇａｔｃｔｃｔｔｇａｇｃｃｔｇｔｃａｇｃｔｇｃａｔｇｔｇａｔｇｃｃｔｔｇｇａｃｃａｇｃａｃａａｃｃｔｃａａｇｃａａａａｔｇａｃｃａｇｃｃｃａｔｇｇａｔａｔｃｃｔｇｃａｇａｔｔａｔｔａａｔｔｇｔｔｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｔａｔｇａｃｃｇｃｃｔｇｇａｇｃａａｇａｇｃａｃａａｃａａｔｔｔｇｇｔｃａａｃｇｔｃｃｃｔｃｔｃｔｇｃｇｔｇｇａｔａｔｇｔｇｔｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔｇｃｔｇａａｔｇｔｔｔａｔｇａｔａｃｇｇｇａｃｇａａｃａｇｇｇａｇｇａｔｃｃｇｔｇｔｃｃｔｇｔｃｔｔｔｔａａａａｃｔｇｇｃａｔｃａｔｔｔｃｃｃｔｇｔｇｔａａａｇｃａｃａｔｔｔｇｇａａｇａｃａａｇｔａｃａｇａｔａｃｃｔｔｔｔｃａａｇｃａａｇｔｇｇｃａａｇｔｔｃａａｃａｇｇａｔｔｔｔｇｔｇａｃｃａｇｃｇｃａｇｇｃｔｇｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔｇｃａｔｇａｔｔｃｔａｔｃｃａａａｔｔｃｃａａｇａｃａｇｔｔｇｇｇｔｇａａｇｔｔｇｃａｔｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃａｇｔａａｃａｔｔｇａｇｃｃａａｇｔｇｔｃｃｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｃｃａａｔｔｔｇｃｔａａｔａａｔａａｇｃｃａｇａｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｃｃｃｔｃｔｔｃｃｔａｇａｃｔｇｇａｔｇａｇａｃｔｇｇａａｃｃｃｃａｇｔｃｃａｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔｇｃｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃａｇａｇｔｇｇｃｔｇｃｔｇｃａｇａａａｃｔｇｃｃａａｇｃａｔｃａｇｇｃｃａａａｔｇｔａａｃａｔｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｔｃｃａａｔｃａｔｔｇｇａｔｔｃａｇｇｔａｃａｇｇａｇｔｃｔａａａｇｃａｃｔｔｔａａｔｔａｔｇａｃａｔｃｔｇｃｃａａａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｔｔｃｔｇｇｔｃｇａｇｔｔｇｃａａａａｇｇｃｃａｔａａａａｔｇｃａｃｔａｔｃｃｃａｔｇｇｔｇｇａａｔａｔｔｇｃａｃｔｃｃｇａｃｔａｃａｔｃａｇｇａｇａａｇａｔｇｔｔｃｇａｇａｃｔｔｔｇｃｃａａｇｇｔａｃｔａａａａａａｃａａａｔｔｔｃｇａａｃｃａａａａｇｇｔａｔｔｔｔｇｃｇａａｇｃａｔｃｃｃｃｇａａｔｇｇｇｃｔａｃｃｔｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｔｇｔｃｔｔａｇａｇｇｇｇｇａｃａａｃａｔｇｇａａａｃｔｃｃｃｇｔｔａｃｔｃｔｇａｔｃａａｃｔｔｃｔｇｇｃｃａｇｔａｇａｔｔｃｔｇｃｇｃｃｔｇｃｃｔｃｇｔｃｃｃｃｔｃａｇｃｔｔｔｃａｃａｃｇａｔｇａｔａｃｔｃａｔｔｃａｃｇｃａｔｔｇａａｃａｔｔａｔｇｃｔａｇｃａｇｇｃｔａｇｃａｇａａａｔｇｇａａａａｃａｇｃａａｔｇｇａｔｃｔｔａｔｃｔａａａｔｇａｔａｇｃａｔｃｔｃｔｃｃｔａａｔｇａｇａｇｃａｔａｇａｔｇａｔｇａａｃａｔｔｔｇｔｔａａｔｃｃａｇｃａｔｔａｃｔｇｃｃａａａｇｔｔｔｇａａｃｃａｇｇａｃｔｃｃｃｃｃｃｔｇａｇｃｃａｇｃｃｔｃｇｔａｇｔｃｃｔｇｃｃｃａｇａｔｃｔｔｇａｔｔｔｃｃｔｔａｇａｇａｇｔｇａｇｇａａａｇａｇｇｇｇａｇｃｔａｇａｇａｇａａｔｃｃｔａｇｃａｇａｔｃｔｔｇａｇｇａａｇａａａａｃａｇｇａａｔｃｔｇｃａａｇｃａｇａａｔａｔｇａｃｃｇｔｃｔａａａｇｃａｇｃａｇｃａｃｇａａｃａｔａａａｇｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃａｃｔｇｃｃｇｔｃｃｃｃｔｃｃｔｇａａａｔｇａｔｇｃｃｃａｃｃｔｃｔｃｃｃｃａｇａｇｔｃｃｃｃｇｇｇａｔｇｃｔｇａｇｃｔｃａｔｔｇｃｔｇａｇｇｃｃａａｇｃｔａｃｔｇｃｇｔｃａａｃａｃａａａｇｇｃｃｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｇｇａｔｇｃａａａｔｃｃｔｇｇａａｇａｃｃａｃａａｔａａａｃａｇｃｔｇｇａｇｔｃａｃａｇｔｔａｃａｃａｇｇｃｔａａｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｇｇａｇｃａａｃｃｃｃａｇｇｃａｇａｇｇｃｃａａａｇｔｇａａｔｇｇｃａｃａａｃｇｇｔｇｔｃｃｔｃｔｃｃｔｔｃｔａｃｃｔｃｔｃｔａｃａｇａｇｇｔｃｃｇａｃａｇｃａｇｔｃａｇｃｃｔａｔｇｃｔｇｃｔｃｃｇａｇｔｇｇｔｔｇｇｃａｇｔｃａａａｃｔｔｃｇｇａｃｔｃｃａｔｇｇｇｔｇａｇｇａａｇａｔｃｔｔｃｔｃａｇｔｃｃｔｃｃｃｃａｇｇａｃａｃａａｇｃａｃａｇｇｇｔｔａｇａｇｇａｇｇｔｇａｔｇｇａｇｃａａｃｔｃａａｃａａｃｔｃｃｔｔｃｃｃｔａｇｔｔｃａａｇａｇｇａａｇａａａｔａｃｃｃｃｔｇｇａａａｇｃｃａａｔｇａｇａｇａｇｇａｃａｃａａｔｇｔａｇＴＣＧＴＴＴＡＡＡＣＣＧＣＴＧＡｔｃａｇｃｃｔｃｇａａａｃｔｔｇｔｔｔａｔｔｇｃａｇｃｔｔａｔａａｔｇｇｔｔａｃａａａｔａａａｇｃａａｔａｇｃａｔｃａｃａａａｔｔｔｃａｃａａａｔａａａｇｃａｔｔｔｔｔｔｔｃａｃｔｇｃａｔｔｃｔａｇｔｔｇｔｇｇｔｔｔｇｔｃｃａａａｃｔｃａｔｃａａｔｇｔａｔｃｔｔａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａｔａｃＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡＣＧＧＣＣＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＡＴＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
配列番号６１
ＳＶ４０ ＮＬＳ
Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ－Ｖａｌ
配列番号６２
ｇＲＮＡ定常領域のＤＮＡ配列
ｇｔｔｔａａｇａｇｃｔａｔｇｃｔｇｇａａａｃａｇｃａｔａｇｃａａｇｔｔｔａａａｔａａｇｇｃｔａｇｔｃｃｇｔｔａｔｃａａｃｔｔｇａａａａａｇｔｇｇｃａｃｃｇａｇｔｃｇｇｔｇｃ
配列番号６３
ｇＲＮＡ定常領域のＲＮＡ配列
ｇｕｕｕａａｇａｇｃｕａｕｇｃｕｇｇａａａｃａｇｃａｕａｇｃａａｇｕｕｕａａａｕａａｇｇｃｕａｇｕｃｃｇｕｕａｕｃａａｃｕｕｇａａａａａｇｕｇｇｃａｃｃｇａｇｕｃｇｇｕｇｃ
Figure 2023522788000022

Figure 2023522788000023


配列番号９６
ヒトイントロン５１を標的とするｇＲＮＡ
ＣＴＣＴＧＡＴＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＴＧＴＧＴＴ
配列番号９７
ヒトイントロン５２を標的とするｇＲＮＡ
ＣＴＡＧＡＣＣＡＴＴＴＣＣＣＡＣＣＡＧＴＴＣＴ
Figure 2023522788000024
配列番号１２８
ヒトジストロフィン遺伝子のイントロン５１
Figure 2023522788000025

Figure 2023522788000026

Figure 2023522788000027

Figure 2023522788000028

Figure 2023522788000029

Figure 2023522788000030

Figure 2023522788000031

Figure 2023522788000032

Figure 2023522788000033

Figure 2023522788000034

Figure 2023522788000035

Figure 2023522788000036

Figure 2023522788000037

Figure 2023522788000038

Figure 2023522788000039

Figure 2023522788000040

Figure 2023522788000041

Figure 2023522788000042

Figure 2023522788000043

Figure 2023522788000044

Figure 2023522788000045

Figure 2023522788000046

Figure 2023522788000047
配列番号１２９
Ｕ６－ｇ７発現カセット及びＥｘ５２ドナーを含む、ＡＡＶ部分：
Ｕ６プロモーター、ｇＲＮＡ７スペーサー、ＰＡＭ（ＡＴＴＣＣＴ）、ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド、ドナー配列、エクソン５２
ＡＧＧＧＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＡＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＡＴＴＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＡＡＣＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＣＡＴＴＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡｇｔｔａａｔｔｔｇｃｇｔｔｃｔａｇｃｃａｃｃｇａｇａｔａｃａｇｔａａｃａｔｃｔｔｔｔｔｔａｔｔｔｃｔａａａａｇｔｇｔｔｔｔｇｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｃａａｔｔｇｔａｃｔｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｔａｔｇｔａａａａｇｇａａｔａｃａｃａａｃｇｃｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇａｔａｃｔａａｇｇｇａｔａｔｔｔｇｔｔｃｔｔａｃａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａｔａｃＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡ
配列番号１３０
Ｕ６－ｇ７発現カセット及びスーパーエクソンドナーを含む、ＡＡＶ部分：
Ｕ６プロモーター、ｇＲＮＡ７スペーサー、ＰＡＭ（ＡＴＴＣＣＴ）、ＳａＣａｓ９ ｇＲＮＡスキャフォールド、ドナー配列、エクソン５２～７９ ｃＤＮＡコーディング配列、３ｘ終止、ＳＶ４０ポリ（Ａ）シグナル
ＡＧＧＧＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＴＣＡＴＡＴＴＴＧＣＡＴＡＴＡＣＧＡＴＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＴＡＧＡＧＡＧＡＴＡＡＴＴＧＧＡＡＴＴＡＡＴＴＴＧＡＣＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＡＴＡＴＴＡＧＴＡＣＡＡＡＡＴＡＣＧＴＧＡＣＧＴＡＧＡＡＡＧＴＡＡＴＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＧＴＡＧＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＡＡＴＧＧＡＣＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＴＴＡＣＣＧＴＡＡＣＴＴＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＧＡＴＴＴＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＣＧＴＣＡＴＴＴＡＴＡＡＴＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＡＣＴＡＡＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＴＧＴＴＴＡＴＣＴＣＧＴＣＡＡＣＴＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣＣＣＡＧＣＴＴＴＣＴＴＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＣＧＴＴＴＡＡＡＣＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡｇｔｔａａｔｔｔｇｃｇｔｔｃｔａｇｃｃａｃｃｇａｇａｔａｃａｇｔａａｃａｔｃｔｔｔｔｔｔａｔｔｔｃｔａａａａｇｔｇｔｔｔｔｇｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｃａａｔｔｇｔａｃｔｔｔａｃｔｔｔｇｔａｔｔａｔｇｔａａａａｇｇａａｔａｃａｃａａｃｇｃｔｇａａｇａａｃｃｃｔｇａｔａｃｔａａｇｇｇａｔａｔｔｔｇｔｔｃｔｔａｃａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｔｔｇａａａｇａａｔｔｃａｇａａｔｃａｇｔｇｇｇａｔｇａａｇｔａｃａａｇａａｃａｃｃｔｔｃａｇａａｃｃｇｇａｇｇｃａａｃａｇｔｔｇａａｔｇａａａｔｇｔｔａａａｇｇａｔｔｃａａｃａｃａａｔｇｇｃｔｇｇａａｇｃｔａａｇｇａａｇａａｇｃｔｇａｇｃａｇｇｔｃｔｔａｇｇａｃａｇｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｃｔｔｇａｇｔｃａｔｇｇａａｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔａｔａｃａｇｔａｇａｔｇｃａａｔｃｃａａａａｇａａａａｔｃａｃａｇａａａｃｃａａｇｃａｇｔｔｇｇｃｃａａａｇａｃｃｔｃｃｇｃｃａｇｔｇｇｃａｇａｃａａａｔｇｔａｇａｔｇｔｇｇｃａａａｔｇａｃｔｔｇｇｃｃｃｔｇａａａｃｔｔｃｔｃｃｇｇｇａｔｔａｔｔｃｔｇｃａｇａｔｇａｔａｃｃａｇａａａａｇｔｃｃａｃａｔｇａｔａａｃａｇａｇａａｔａｔｃａａｔｇｃｃｔｃｔｔｇｇａｇａａｇｃａｔｔｃａｔａａａａｇｇｇｔｇａｇｔｇａｇｃｇａｇａｇｇｃｔｇｃｔｔｔｇｇａａｇａａａｃｔｃａｔａｇａｔｔａｃｔｇｃａａｃａｇｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇａｃｃｔｇｇａａａａｇｔｔｔｃｔｔｇｃｃｔｇｇｃｔｔａｃａｇａａｇｃｔｇａａａｃａａｃｔｇｃｃａａｔｇｔｃｃｔａｃａｇｇａｔｇｃｔａｃｃｃｇｔａａｇｇａａａｇｇｃｔｃｃｔａｇａａｇａｃｔｃｃａａｇｇｇａｇｔａａａａｇａｇｃｔｇａｔｇａａａｃａａｔｇｇｃａａｇａｃｃｔｃｃａａｇｇｔｇａａａｔｔｇａａｇｃｔｃａｃａｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａｃａａｃｃｔｇｇａｔｇａａａａｃａｇｃｃａａａａａａｔｃｃｔｇａｇａｔｃｃｃｔｇｇａａｇｇｔｔｃｃｇａｔｇａｔｇｃａｇｔｃｃｔｇｔｔａｃａａａｇａｃｇｔｔｔｇｇａｔａａｃａｔｇａａｃｔｔｃａａｇｔｇｇａｇｔｇａａｃｔｔｃｇｇａａａａａｇｔｃｔｃｔｃａａｃａｔｔａｇｇｔｃｃｃａｔｔｔｇｇａａｇｃｃａｇｔｔｃｔｇａｃｃａｇｔｇｇａａｇｃｇｔｃｔｇｃａｃｃｔｔｔｃｔｃｔｇｃａｇｇａａｃｔｔｃｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔａｃａｇｃｔｇａａａｇａｔｇａｔｇａａｔｔａａｇｃｃｇｇｃａｇｇｃａｃｃｔａｔｔｇｇａｇｇｃｇａｃｔｔｔｃｃａｇｃａｇｔｔｃａｇａａｇｃａｇａａｃｇａｔｇｔａｃａｔａｇｇｇｃｃｔｔｃａａｇａｇｇｇａａｔｔｇａａａａｃｔａａａｇａａｃｃｔｇｔａａｔｃａｔｇａｇｔａｃｔｃｔｔｇａｇａｃｔｇｔａｃｇａａｔａｔｔｔｃｔｇａｃａｇａｇｃａｇｃｃｔｔｔｇｇａａｇｇａｃｔａｇａｇａａａｃｔｃｔａｃｃａｇｇａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｔｇｃｃｔｃｃｔｇａｇｇａｇａｇａｇｃｃｃａｇａａｔｇｔｃａｃｔｃｇｇｃｔｔｃｔａｃｇａａａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｇａｇｇｔｃａａｔａｃｔｇａｇｔｇｇｇａａａａａｔｔｇａａｃｃｔｇｃａｃｔｃｃｇｃｔｇａｃｔｇｇｃａｇａｇａａａａａｔａｇａｔｇａｇａｃｃｃｔｔｇａａａｇａｃｔｃｃａｇｇａａｃｔｔｃａａｇａｇｇｃｃａｃｇｇａｔｇａｇｃｔｇｇａｃｃｔｃａａｇｃｔｇｃｇｃｃａａｇｃｔｇａｇｇｔｇａｔｃａａｇｇｇａｔｃｃｔｇｇｃａｇｃｃｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｔｃｃｔｃａｔｔｇａｃｔｃｔｃｔｃｃａａｇａｔｃａｃｃｔｃｇａｇａａａｇｔｃａａｇｇｃａｃｔｔｃｇａｇｇａｇａａａｔｔｇｃｇｃｃｔｃｔｇａａａｇａｇａａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇｔｃａａｔｇａｃｃｔｔｇｃｔｃｇｃｃａｇｃｔｔａｃｃａｃｔｔｔｇｇｇｃａｔｔｃａｇｃｔｃｔｃａｃｃｇｔａｔａａｃｃｔｃａｇｃａｃｔｃｔｇｇａａｇａｃｃｔｇａａｃａｃｃａｇａｔｇｇａａｇｃｔｔｃｔｇｃａｇｇｔｇｇｃｃｇｔｃｇａｇｇａｃｃｇａｇｔｃａｇｇｃａｇｃｔｇｃａｔｇａａｇｃｃｃａｃａｇｇｇａｃｔｔｔｇｇｔｃｃａｇｃａｔｃｔｃａｇｃａｃｔｔｔｃｔｔｔｃｃａｃｇｔｃｔｇｔｃｃａｇｇｇｔｃｃｃｔｇｇｇａｇａｇａｇｃｃａｔｃｔｃｇｃｃａａａｃａａａｇｔｇｃｃｃｔａｃｔａｔａｔｃａａｃｃａｃｇａｇａｃｔｃａａａｃａａｃｔｔｇｃｔｇｇｇａｃｃａｔｃｃｃａａａａｔｇａｃａｇａｇｃｔｃｔａｃｃａｇｔｃｔｔｔａｇｃｔｇａｃｃｔｇａａｔａａｔｇｔｃａｇａｔｔｃｔｃａｇｃｔｔａｔａｇｇａｃｔｇｃｃａｔｇａａａｃｔｃｃｇａａｇａｃｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｃｔｔｔｇｃｔｔｇｇａｔｃｔｃｔｔｇａｇｃｃｔｇｔｃａｇｃｔｇｃａｔｇｔｇａｔｇｃｃｔｔｇｇａｃｃａｇｃａｃａａｃｃｔｃａａｇｃａａａａｔｇａｃｃａｇｃｃｃａｔｇｇａｔａｔｃｃｔｇｃａｇａｔｔａｔｔａａｔｔｇｔｔｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｔａｔｇａｃｃｇｃｃｔｇｇａｇｃａａｇａｇｃａｃａａｃａａｔｔｔｇｇｔｃａａｃｇｔｃｃｃｔｃｔｃｔｇｃｇｔｇｇａｔａｔｇｔｇｔｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔｇｃｔｇａａｔｇｔｔｔａｔｇａｔａｃｇｇｇａｃｇａａｃａｇｇｇａｇｇａｔｃｃｇｔｇｔｃｃｔｇｔｃｔｔｔｔａａａａｃｔｇｇｃａｔｃａｔｔｔｃｃｃｔｇｔｇｔａａａｇｃａｃａｔｔｔｇｇａａｇａｃａａｇｔａｃａｇａｔａｃｃｔｔｔｔｃａａｇｃａａｇｔｇｇｃａａｇｔｔｃａａｃａｇｇａｔｔｔｔｇｔｇａｃｃａｇｃｇｃａｇｇｃｔｇｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔｇｃａｔｇａｔｔｃｔａｔｃｃａａａｔｔｃｃａａｇａｃａｇｔｔｇｇｇｔｇａａｇｔｔｇｃａｔｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃａｇｔａａｃａｔｔｇａｇｃｃａａｇｔｇｔｃｃｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｃｃａａｔｔｔｇｃｔａａｔａａｔａａｇｃｃａｇａｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｃｃｃｔｃｔｔｃｃｔａｇａｃｔｇｇａｔｇａｇａｃｔｇｇａａｃｃｃｃａｇｔｃｃａｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔｇｃｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃａｇａｇｔｇｇｃｔｇｃｔｇｃａｇａａａｃｔｇｃｃａａｇｃａｔｃａｇｇｃｃａａａｔｇｔａａｃａｔｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｔｃｃａａｔｃａｔｔｇｇａｔｔｃａｇｇｔａｃａｇｇａｇｔｃｔａａａｇｃａｃｔｔｔａａｔｔａｔｇａｃａｔｃｔｇｃｃａａａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｔｔｃｔｇｇｔｃｇａｇｔｔｇｃａａａａｇｇｃｃａｔａａａａｔｇｃａｃｔａｔｃｃｃａｔｇｇｔｇｇａａｔａｔｔｇｃａｃｔｃｃｇａｃｔａｃａｔｃａｇｇａｇａａｇａｔｇｔｔｃｇａｇａｃｔｔｔｇｃｃａａｇｇｔａｃｔａａａａａａｃａａａｔｔｔｃｇａａｃｃａａａａｇｇｔａｔｔｔｔｇｃｇａａｇｃａｔｃｃｃｃｇａａｔｇｇｇｃｔａｃｃｔｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｔｇｔｃｔｔａｇａｇｇｇｇｇａｃａａｃａｔｇｇａａａｃｔｃｃｃｇｔｔａｃｔｃｔｇａｔｃａａｃｔｔｃｔｇｇｃｃａｇｔａｇａｔｔｃｔｇｃｇｃｃｔｇｃｃｔｃｇｔｃｃｃｃｔｃａｇｃｔｔｔｃａｃａｃｇａｔｇａｔａｃｔｃａｔｔｃａｃｇｃａｔｔｇａａｃａｔｔａｔｇｃｔａｇｃａｇｇｃｔａｇｃａｇａａａｔｇｇａａａａｃａｇｃａａｔｇｇａｔｃｔｔａｔｃｔａａａｔｇａｔａｇｃａｔｃｔｃｔｃｃｔａａｔｇａｇａｇｃａｔａｇａｔｇａｔｇａａｃａｔｔｔｇｔｔａａｔｃｃａｇｃａｔｔａｃｔｇｃｃａａａｇｔｔｔｇａａｃｃａｇｇａｃｔｃｃｃｃｃｃｔｇａｇｃｃａｇｃｃｔｃｇｔａｇｔｃｃｔｇｃｃｃａｇａｔｃｔｔｇａｔｔｔｃｃｔｔａｇａｇａｇｔｇａｇｇａａａｇａｇｇｇｇａｇｃｔａｇａｇａｇａａｔｃｃｔａｇｃａｇａｔｃｔｔｇａｇｇａａｇａａａａｃａｇｇａａｔｃｔｇｃａａｇｃａｇａａｔａｔｇａｃｃｇｔｃｔａａａｇｃａｇｃａｇｃａｃｇａａｃａｔａａａｇｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃａｃｔｇｃｃｇｔｃｃｃｃｔｃｃｔｇａａａｔｇａｔｇｃｃｃａｃｃｔｃｔｃｃｃｃａｇａｇｔｃｃｃｃｇｇｇａｔｇｃｔｇａｇｃｔｃａｔｔｇｃｔｇａｇｇｃｃａａｇｃｔａｃｔｇｃｇｔｃａａｃａｃａａａｇｇｃｃｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｇｇａｔｇｃａａａｔｃｃｔｇｇａａｇａｃｃａｃａａｔａａａｃａｇｃｔｇｇａｇｔｃａｃａｇｔｔａｃａｃａｇｇｃｔａａｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｇｇａｇｃａａｃｃｃｃａｇｇｃａｇａｇｇｃｃａａａｇｔｇａａｔｇｇｃａｃａａｃｇｇｔｇｔｃｃｔｃｔｃｃｔｔｃｔａｃｃｔｃｔｃｔａｃａｇａｇｇｔｃｃｇａｃａｇｃａｇｔｃａｇｃｃｔａｔｇｃｔｇｃｔｃｃｇａｇｔｇｇｔｔｇｇｃａｇｔｃａａａｃｔｔｃｇｇａｃｔｃｃａｔｇｇｇｔｇａｇｇａａｇａｔｃｔｔｃｔｃａｇｔｃｃｔｃｃｃｃａｇｇａｃａｃａａｇｃａｃａｇｇｇｔｔａｇａｇｇａｇｇｔｇａｔｇｇａｇｃａａｃｔｃａａｃａａｃｔｃｃｔｔｃｃｃｔａｇｔｔｃａａｇａｇｇａａｇａａａｔａｃｃｃｃｔｇｇａａａｇｃｃａａｔｇａｇａｇａｇｇａｃａｃａａｔｇｔａｇＴＣＧＴＴＴＡＡＡＣＣＧＣＴＧＡｔｃａｇｃｃｔｃｇａａａｃｔｔｇｔｔｔａｔｔｇｃａｇｃｔｔａｔａａｔｇｇｔｔａｃａａａｔａａａｇｃａａｔａｇｃａｔｃａｃａａａｔｔｔｃａｃａａａｔａａａｇｃａｔｔｔｔｔｔｔｃａｃｔｇｃａｔｔｃｔａｇｔｔｇｔｇｇｔｔｔｇｔｃｃａａａｃｔｃａｔｃａａｔｇｔａｔｃｔｔａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａｔａｃＡＴＴＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＴＧＴＡＴＴＡＴＡＡＡＴＧＡ
配列番号１３１
ストレプトコッカス・ピオゲネスＣａｓ９（Ｄ１０Ａを有する）
ＭＤＫＫＹＳＩＧＬＡＩＧＴＮＳＶＧＷＡＶＩＴＤＥＹＫＶＰＳＫＫＦＫＶＬＧＮＴＤＲＨＳＩＫＫＮＬＩＧＡＬＬＦＤＳＧＥＴＡＥＡＴＲＬＫＲＴＡＲＲＲＹＴＲＲＫＮＲＩＣＹＬＱＥＩＦＳＮＥＭＡＫＶＤＤＳＦＦＨＲＬＥＥＳＦＬＶＥＥＤＫＫＨＥＲＨＰＩＦＧＮＩＶＤＥＶＡＹＨＥＫＹＰＴＩＹＨＬＲＫＫＬＶＤＳＴＤＫＡＤＬＲＬＩＹＬＡＬＡＨＭＩＫＦＲＧＨＦＬＩＥＧＤＬＮＰＤＮＳＤＶＤＫＬＦＩＱＬＶＱＴＹＮＱＬＦＥＥＮＰＩＮＡＳＧＶＤＡＫＡＩＬＳＡＲＬＳＫＳＲＲＬＥＮＬＩＡＱＬＰＧＥＫＫＮＧＬＦＧＮＬＩＡＬＳＬＧＬＴＰＮＦＫＳＮＦＤＬＡＥＤＡＫＬＱＬＳＫＤＴＹＤＤＤＬＤＮＬＬＡＱＩＧＤＱＹＡＤＬＦＬＡＡＫＮＬＳＤＡＩＬＬＳＤＩＬＲＶＮＴＥＩＴＫＡＰＬＳＡＳＭＩＫＲＹＤＥＨＨＱＤＬＴＬＬＫＡＬＶＲＱＱＬＰＥＫＹＫＥＩＦＦＤＱＳＫＮＧＹＡＧＹＩＤＧＧＡＳＱＥＥＦＹＫＦＩＫＰＩＬＥＫＭＤＧＴＥＥＬＬＶＫＬＮＲＥＤＬＬＲＫＱＲＴＦＤＮＧＳＩＰＨＱＩＨＬＧＥＬＨＡＩＬＲＲＱＥＤＦＹＰＦＬＫＤＮＲＥＫＩＥＫＩＬＴＦＲＩＰＹＹＶＧＰＬＡＲＧＮＳＲＦＡＷＭＴＲＫＳＥＥＴＩＴＰＷＮＦＥＥＶＶＤＫＧＡＳＡＱＳＦＩＥＲＭＴＮＦＤＫＮＬＰＮＥＫＶＬＰＫＨＳＬＬＹＥＹＦＴＶＹＮＥＬＴＫＶＫＹＶＴＥＧＭＲＫＰＡＦＬＳＧＥＱＫＫＡＩＶＤＬＬＦＫＴＮＲＫＶＴＶＫＱＬＫＥＤＹＦＫＫＩＥＣＦＤＳＶＥＩＳＧＶＥＤＲＦＮＡＳＬＧＴＹＨＤＬＬＫＩＩＫＤＫＤＦＬＤＮＥＥＮＥＤＩＬＥＤＩＶＬＴＬＴＬＦＥＤＲＥＭＩＥＥＲＬＫＴＹＡＨＬＦＤＤＫＶＭＫＱＬＫＲＲＲＹＴＧＷＧＲＬＳＲＫＬＩＮＧＩＲＤＫＱＳＧＫＴＩＬＤＦＬＫＳＤＧＦＡＮＲＮＦＭＱＬＩＨＤＤＳＬＴＦＫＥＤＩＱＫＡＱＶＳＧＱＧＤＳＬＨＥＨＩＡＮＬＡＧＳＰＡＩＫＫＧＩＬＱＴＶＫＶＶＤＥＬＶＫＶＭＧＲＨＫＰＥＮＩＶＩＥＭＡＲＥＮＱＴＴＱＫＧＱＫＮＳＲＥＲＭＫＲＩＥＥＧＩＫＥＬＧＳＱＩＬＫＥＨＰＶＥＮＴＱＬＱＮＥＫＬＹＬＹＹＬＱＮＧＲＤＭＹＶＤＱＥＬＤＩＮＲＬＳＤＹＤＶＤＨＩＶＰＱＳＦＬＫＤＤＳＩＤＮＫＶＬＴＲＳＤＫＮＲＧＫＳＤＮＶＰＳＥＥＶＶＫＫＭＫＮＹＷＲＱＬＬＮＡＫＬＩＴＱＲＫＦＤＮＬＴＫＡＥＲＧＧＬＳＥＬＤＫＡＧＦＩＫＲＱＬＶＥＴＲＱＩＴＫＨＶＡＱＩＬＤＳＲＭＮＴＫＹＤＥＮＤＫＬＩＲＥＶＫＶＩＴＬＫＳＫＬＶＳＤＦＲＫＤＦＱＦＹＫＶＲＥＩＮＮＹＨＨＡＨＤＡＹＬＮＡＶＶＧＴＡＬＩＫＫＹＰＫＬＥＳＥＦＶＹＧＤＹＫＶＹＤＶＲＫＭＩＡＫＳＥＱＥＩＧＫＡＴＡＫＹＦＦＹＳＮＩＭＮＦＦＫＴＥＩＴＬＡＮＧＥＩＲＫＲＰＬＩＥＴＮＧＥＴＧＥＩＶＷＤＫＧＲＤＦＡＴＶＲＫＶＬＳＭＰＱＶＮＩＶＫＫＴＥＶＱＴＧＧＦＳＫＥＳＩＬＰＫＲＮＳＤＫＬＩＡＲＫＫＤＷＤＰＫＫＹＧＧＦＤＳＰＴＶＡＹＳＶＬＶＶＡＫＶＥＫＧＫＳＫＫＬＫＳＶＫＥＬＬＧＩＴＩＭＥＲＳＳＦＥＫＮＰＩＤＦＬＥＡＫＧＹＫＥＶＫＫＤＬＩＩＫＬＰＫＹＳＬＦＥＬＥＮＧＲＫＲＭＬＡＳＡＧＥＬＱＫＧＮＥＬＡＬＰＳＫＹＶＮＦＬＹＬＡＳＨＹＥＫＬＫＧＳＰＥＤＮＥＱＫＱＬＦＶＥＱＨＫＨＹＬＤＥＩＩＥＱＩＳＥＦＳＫＲＶＩＬＡＤＡＮＬＤＫＶＬＳＡＹＮＫＨＲＤＫＰＩＲＥＱＡＥＮＩＩＨＬＦＴＬＴＮＬＧＡＰＡＡＦＫＹＦＤＴＴＩＤＲＫＲＹＴＳＴＫＥＶＬＤＡＴＬＩＨＱＳＩＴＧＬＹＥＴＲＩＤＬＳＱＬＧＧＤ
配列番号１３２
ストレプトコッカス・ピオゲネスＣａｓ９（Ｄ１０Ａ、Ｈ８４９Ａを有する）
ＭＤＫＫＹＳＩＧＬＡＩＧＴＮＳＶＧＷＡＶＩＴＤＥＹＫＶＰＳＫＫＦＫＶＬＧＮＴＤＲＨＳＩＫＫＮＬＩＧＡＬＬＦＤＳＧＥＴＡＥＡＴＲＬＫＲＴＡＲＲＲＹＴＲＲＫＮＲＩＣＹＬＱＥＩＦＳＮＥＭＡＫＶＤＤＳＦＦＨＲＬＥＥＳＦＬＶＥＥＤＫＫＨＥＲＨＰＩＦＧＮＩＶＤＥＶＡＹＨＥＫＹＰＴＩＹＨＬＲＫＫＬＶＤＳＴＤＫＡＤＬＲＬＩＹＬＡＬＡＨＭＩＫＦＲＧＨＦＬＩＥＧＤＬＮＰＤＮＳＤＶＤＫＬＦＩＱＬＶＱＴＹＮＱＬＦＥＥＮＰＩＮＡＳＧＶＤＡＫＡＩＬＳＡＲＬＳＫＳＲＲＬＥＮＬＩＡＱＬＰＧＥＫＫＮＧＬＦＧＮＬＩＡＬＳＬＧＬＴＰＮＦＫＳＮＦＤＬＡＥＤＡＫＬＱＬＳＫＤＴＹＤＤＤＬＤＮＬＬＡＱＩＧＤＱＹＡＤＬＦＬＡＡＫＮＬＳＤＡＩＬＬＳＤＩＬＲＶＮＴＥＩＴＫＡＰＬＳＡＳＭＩＫＲＹＤＥＨＨＱＤＬＴＬＬＫＡＬＶＲＱＱＬＰＥＫＹＫＥＩＦＦＤＱＳＫＮＧＹＡＧＹＩＤＧＧＡＳＱＥＥＦＹＫＦＩＫＰＩＬＥＫＭＤＧＴＥＥＬＬＶＫＬＮＲＥＤＬＬＲＫＱＲＴＦＤＮＧＳＩＰＨＱＩＨＬＧＥＬＨＡＩＬＲＲＱＥＤＦＹＰＦＬＫＤＮＲＥＫＩＥＫＩＬＴＦＲＩＰＹＹＶＧＰＬＡＲＧＮＳＲＦＡＷＭＴＲＫＳＥＥＴＩＴＰＷＮＦＥＥＶＶＤＫＧＡＳＡＱＳＦＩＥＲＭＴＮＦＤＫＮＬＰＮＥＫＶＬＰＫＨＳＬＬＹＥＹＦＴＶＹＮＥＬＴＫＶＫＹＶＴＥＧＭＲＫＰＡＦＬＳＧＥＱＫＫＡＩＶＤＬＬＦＫＴＮＲＫＶＴＶＫＱＬＫＥＤＹＦＫＫＩＥＣＦＤＳＶＥＩＳＧＶＥＤＲＦＮＡＳＬＧＴＹＨＤＬＬＫＩＩＫＤＫＤＦＬＤＮＥＥＮＥＤＩＬＥＤＩＶＬＴＬＴＬＦＥＤＲＥＭＩＥＥＲＬＫＴＹＡＨＬＦＤＤＫＶＭＫＱＬＫＲＲＲＹＴＧＷＧＲＬＳＲＫＬＩＮＧＩＲＤＫＱＳＧＫＴＩＬＤＦＬＫＳＤＧＦＡＮＲＮＦＭＱＬＩＨＤＤＳＬＴＦＫＥＤＩＱＫＡＱＶＳＧＱＧＤＳＬＨＥＨＩＡＮＬＡＧＳＰＡＩＫＫＧＩＬＱＴＶＫＶＶＤＥＬＶＫＶＭＧＲＨＫＰＥＮＩＶＩＥＭＡＲＥＮＱＴＴＱＫＧＱＫＮＳＲＥＲＭＫＲＩＥＥＧＩＫＥＬＧＳＱＩＬＫＥＨＰＶＥＮＴＱＬＱＮＥＫＬＹＬＹＹＬＱＮＧＲＤＭＹＶＤＱＥＬＤＩＮＲＬＳＤＹＤＶＤＡＩＶＰＱＳＦＬＫＤＤＳＩＤＮＫＶＬＴＲＳＤＫＮＲＧＫＳＤＮＶＰＳＥＥＶＶＫＫＭＫＮＹＷＲＱＬＬＮＡＫＬＩＴＱＲＫＦＤＮＬＴＫＡＥＲＧＧＬＳＥＬＤＫＡＧＦＩＫＲＱＬＶＥＴＲＱＩＴＫＨＶＡＱＩＬＤＳＲＭＮＴＫＹＤＥＮＤＫＬＩＲＥＶＫＶＩＴＬＫＳＫＬＶＳＤＦＲＫＤＦＱＦＹＫＶＲＥＩＮＮＹＨＨＡＨＤＡＹＬＮＡＶＶＧＴＡＬＩＫＫＹＰＫＬＥＳＥＦＶＹＧＤＹＫＶＹＤＶＲＫＭＩＡＫＳＥＱＥＩＧＫＡＴＡＫＹＦＦＹＳＮＩＭＮＦＦＫＴＥＩＴＬＡＮＧＥＩＲＫＲＰＬＩＥＴＮＧＥＴＧＥＩＶＷＤＫＧＲＤＦＡＴＶＲＫＶＬＳＭＰＱＶＮＩＶＫＫＴＥＶＱＴＧＧＦＳＫＥＳＩＬＰＫＲＮＳＤＫＬＩＡＲＫＫＤＷＤＰＫＫＹＧＧＦＤＳＰＴＶＡＹＳＶＬＶＶＡＫＶＥＫＧＫＳＫＫＬＫＳＶＫＥＬＬＧＩＴＩＭＥＲＳＳＦＥＫＮＰＩＤＦＬＥＡＫＧＹＫＥＶＫＫＤＬＩＩＫＬＰＫＹＳＬＦＥＬＥＮＧＲＫＲＭＬＡＳＡＧＥＬＱＫＧＮＥＬＡＬＰＳＫＹＶＮＦＬＹＬＡＳＨＹＥＫＬＫＧＳＰＥＤＮＥＱＫＱＬＦＶＥＱＨＫＨＹＬＤＥＩＩＥＱＩＳＥＦＳＫＲＶＩＬＡＤＡＮＬＤＫＶＬＳＡＹＮＫＨＲＤＫＰＩＲＥＱＡＥＮＩＩＨＬＦＴＬＴＮＬＧＡＰＡＡＦＫＹＦＤＴＴＩＤＲＫＲＹＴＳＴＫＥＶＬＤＡＴＬＩＨＱＳＩＴＧＬＹＥＴＲＩＤＬＳＱＬＧＧＤ
配列番号１３３
スタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９のＤ１０Ａ突然変異体のポリヌクレオチド配列
Figure 2023522788000048

Figure 2023522788000049
配列番号１３４
スタフィロコッカス・アウレウスＣａｓ９のＮ５８０Ａ突然変異体のポリヌクレオチド配列

Figure 2023522788000050

Figure 2023522788000051
配列番号１３５
ＧＳリンカー（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ、ここで、ｎは、０～１０の整数である
配列番号１３６
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ
配列番号１３７
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ
配列番号１３８
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ
配列番号１３９
Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ
配列番号１４０
ヒトｐ３００（Ｌ５５３Ｍ突然変異を有する）タンパク質
ＭＡＥＮＶＶＥＰＧＰＰＳＡＫＲＰＫＬＳＳＰＡＬＳＡＳＡＳＤＧＴＤＦＧＳＬＦＤＬＥＨＤＬＰＤＥＬＩＮＳＴＥＬＧＬＴＮＧＧＤＩＮＱＬＱＴＳＬＧＭＶＱＤＡＡＳＫＨＫＱＬＳＥＬＬＲＳＧＳＳＰＮＬＮＭＧＶＧＧＰＧＱＶＭＡＳＱＡＱＱＳＳＰＧＬＧＬＩＮＳＭＶＫＳＰＭＴＱＡＧＬＴＳＰＮＭＧＭＧＴＳＧＰＮＱＧＰＴＱＳＴＧＭＭＮＳＰＶＮＱＰＡＭＧＭＮＴＧＭＮＡＧＭＮＰＧＭＬＡＡＧＮＧＱＧＩＭＰＮＱＶＭＮＧＳＩＧＡＧＲＧＲＱＮＭＱＹＰＮＰＧＭＧＳＡＧＮＬＬＴＥＰＬＱＱＧＳＰＱＭＧＧＱＴＧＬＲＧＰＱＰＬＫＭＧＭＭＮＮＰＮＰＹＧＳＰＹＴＱＮＰＧＱＱＩＧＡＳＧＬＧＬＱＩＱＴＫＴＶＬＳＮＮＬＳＰＦＡＭＤＫＫＡＶＰＧＧＧＭＰＮＭＧＱＱＰＡＰＱＶＱＱＰＧＬＶＴＰＶＡＱＧＭＧＳＧＡＨＴＡＤＰＥＫＲＫＬＩＱＱＱＬＶＬＬＬＨＡＨＫＣＱＲＲＥＱＡＮＧＥＶＲＱＣＮＬＰＨＣＲＴＭＫＮＶＬＮＨＭＴＨＣＱＳＧＫＳＣＱＶＡＨＣＡＳＳＲＱＩＩＳＨＷＫＮＣＴＲＨＤＣＰＶＣＬＰＬＫＮＡＧＤＫＲＮＱＱＰＩＬＴＧＡＰＶＧＬＧＮＰＳＳＬＧＶＧＱＱＳＡＰＮＬＳＴＶＳＱＩＤＰＳＳＩＥＲＡＹＡＡＬＧＬＰＹＱＶＮＱＭＰＴＱＰＱＶＱＡＫＮＱＱＮＱＱＰＧＱＳＰＱＧＭＲＰＭＳＮＭＳＡＳＰＭＧＶＮＧＧＶＧＶＱＴＰＳＬＬＳＤＳＭＬＨＳＡＩＮＳＱＮＰＭＭＳＥＮＡＳＶＰＳＭＧＰＭＰＴＡＡＱＰＳＴＴＧＩＲＫＱＷＨＥＤＩＴＱＤＬＲＮＨＬＶＨＫＬＶＱＡＩＦＰＴＰＤＰＡＡＬＫＤＲＲＭＥＮＬＶＡＹＡＲＫＶＥＧＤＭＹＥＳＡＮＮＲＡＥＹＹＨＬＬＡＥＫＩＹＫＩＱＫＥＬＥＥＫＲＲＴＲＬＱＫＱＮＭＬＰＮＡＡＧＭＶＰＶＳＭＮＰＧＰＮＭＧＱＰＱＰＧＭＴＳＮＧＰＬＰＤＰＳＭＩＲＧＳＶＰＮＱＭＭＰＲＩＴＰＱＳＧＬＮＱＦＧＱＭＳＭＡＱＰＰＩＶＰＲＱＴＰＰＬＱＨＨＧＱＬＡＱＰＧＡＬＮＰＰＭＧＹＧＰＲＭＱＱＰＳＮＱＧＱＦＬＰＱＴＱＦＰＳＱＧＭＮＶＴＮＩＰＬＡＰＳＳＧＱＡＰＶＳＱＡＱＭＳＳＳＳＣＰＶＮＳＰＩＭＰＰＧＳＱＧＳＨＩＨＣＰＱＬＰＱＰＡＬＨＱＮＳＰＳＰＶＰＳＲＴＰＴＰＨＨＴＰＰＳＩＧＡＱＱＰＰＡＴＴＩＰＡＰＶＰＴＰＰＡＭＰＰＧＰＱＳＱＡＬＨＰＰＰＲＱＴＰＴＰＰＴＴＱＬＰＱＱＶＱＰＳＬＰＡＡＰＳＡＤＱＰＱＱＱＰＲＳＱＱＳＴＡＡＳＶＰＴＰＴＡＰＬＬＰＰＱＰＡＴＰＬＳＱＰＡＶＳＩＥＧＱＶＳＮＰＰＳＴＳＳＴＥＶＮＳＱＡＩＡＥＫＱＰＳＱＥＶＫＭＥＡＫＭＥＶＤＱＰＥＰＡＤＴＱＰＥＤＩＳＥＳＫＶＥＤＣＫＭＥＳＴＥＴＥＥＲＳＴＥＬＫＴＥＩＫＥＥＥＤＱＰＳＴＳＡＴＱＳＳＰＡＰＧＱＳＫＫＫＩＦＫＰＥＥＬＲＱＡＬＭＰＴＬＥＡＬＹＲＱＤＰＥＳＬＰＦＲＱＰＶＤＰＱＬＬＧＩＰＤＹＦＤＩＶＫＳＰＭＤＬＳＴＩＫＲＫＬＤＴＧＱＹＱＥＰＷＱＹＶＤＤＩＷＬＭＦＮＮＡＷＬＹＮＲＫＴＳＲＶＹＫＹＣＳＫＬＳＥＶＦＥＱＥＩＤＰＶＭＱＳＬＧＹＣＣＧＲＫＬＥＦＳＰＱＴＬＣＣＹＧＫＱＬＣＴＩＰＲＤＡＴＹＹＳＹＱＮＲＹＨＦＣＥＫＣＦＮＥＩＱＧＥＳＶＳＬＧＤＤＰＳＱＰＱＴＴＩＮＫＥＱＦＳＫＲＫＮＤＴＬＤＰＥＬＦＶＥＣＴＥＣＧＲＫＭＨＱＩＣＶＬＨＨＥＩＩＷＰＡＧＦＶＣＤＧＣＬＫＫＳＡＲＴＲＫＥＮＫＦＳＡＫＲＬＰＳＴＲＬＧＴＦＬＥＮＲＶＮＤＦＬＲＲＱＮＨＰＥＳＧＥＶＴＶＲＶＶＨＡＳＤＫＴＶＥＶＫＰＧＭＫＡＲＦＶＤＳＧＥＭＡＥＳＦＰＹＲＴＫＡＬＦＡＦＥＥＩＤＧＶＤＬＣＦＦＧＭＨＶＱＥＹＧＳＤＣＰＰＰＮＱＲＲＶＹＩＳＹＬＤＳＶＨＦＦＲＰＫＣＬＲＴＡＶＹＨＥＩＬＩＧＹＬＥＹＶＫＫＬＧＹＴＴＧＨＩＷＡＣＰＰＳＥＧＤＤＹＩＦＨＣＨＰＰＤＱＫＩＰＫＰＫＲＬＱＥＷＹＫＫＭＬＤＫＡＶＳＥＲＩＶＨＤＹＫＤＩＦＫＱＡＴＥＤＲＬＴＳＡＫＥＬＰＹＦＥＧＤＦＷＰＮＶＬＥＥＳＩＫＥＬＥＱＥＥＥＥＲＫＲＥＥＮＴＳＮＥＳＴＤＶＴＫＧＤＳＫＮＡＫＫＫＮＮＫＫＴＳＫＮＫＳＳＬＳＲＧＮＫＫＫＰＧＭＰＮＶＳＮＤＬＳＱＫＬＹＡＴＭＥＫＨＫＥＶＦＦＶＩＲＬＩＡＧＰＡＡＮＳＬＰＰＩＶＤＰＤＰＬＩＰＣＤＬＭＤＧＲＤＡＦＬＴＬＡＲＤＫＨＬＥＦＳＳＬＲＲＡＱＷＳＴＭＣＭＬＶＥＬＨＴＱＳＱＤＲＦＶＹＴＣＮＥＣＫＨＨＶＥＴＲＷＨＣＴＶＣＥＤＹＤＬＣＩＴＣＹＮＴＫＮＨＤＨＫＭＥＫＬＧＬＧＬＤＤＥＳＮＮＱＱＡＡＡＴＱＳＰＧＤＳＲＲＬＳＩＱＲＣＩＱＳＬＶＨＡＣＱＣＲＮＡＮＣＳＬＰＳＣＱＫＭＫＲＶＶＱＨＴＫＧＣＫＲＫＴＮＧＧＣＰＩＣＫＱＬＩＡＬＣＣＹＨＡＫＨＣＱＥＮＫＣＰＶＰＦＣＬＮＩＫＱＫＬＲＱＱＱＬＱＨＲＬＱＱＡＱＭＬＲＲＲＭＡＳＭＱＲＴＧＶＶＧＱＱＱＧＬＰＳＰＴＰＡＴＰＴＴＰＴＧＱＱＰＴＴＰＱＴＰＱＰＴＳＱＰＱＰＴＰＰＮＳＭＰＰＹＬＰＲＴＱＡＡＧＰＶＳＱＧＫＡＡＧＱＶＴＰＰＴＰＰＱＴＡＱＰＰＬＰＧＰＰＰＡＡＶＥＭＡＭＱＩＱＲＡＡＥＴＱＲＱＭＡＨＶＱＩＦＱＲＰＩＱＨＱＭＰＰＭＴＰＭＡＰＭＧＭＮＰＰＰＭＴＲＧＰＳＧＨＬＥＰＧＭＧＰＴＧＭＱＱＱＰＰＷＳＱＧＧＬＰＱＰＱＱＬＱＳＧＭＰＲＰＡＭＭＳＶＡＱＨＧＱＰＬＮＭＡＰＱＰＧＬＧＱＶＧＩＳＰＬＫＰＧＴＶＳＱＱＡＬＱＮＬＬＲＴＬＲＳＰＳＳＰＬＱＱＱＱＶＬＳＩＬＨＡＮＰＱＬＬＡＡＦＩＫＱＲＡＡＫＹＡＮＳＮＰＱＰＩＰＧＱＰＧＭＰＱＧＱＰＧＬＱＰＰＴＭＰＧＱＱＧＶＨＳＮＰＡＭＱＮＭＮＰＭＱＡＧＶＱＲＡＧＬＰＱＱＱＰＱＱＱＬＱＰＰＭＧＧＭＳＰＱＡＱＱＭＮＭＮＨＮＴＭＰＳＱＦＲＤＩＬＲＲＱＱＭＭＱＱＱＱＱＱＧＡＧＰＧＩＧＰＧＭＡＮＨＮＱＦＱＱＰＱＧＶＧＹＰＰＱＱＱＱＲＭＱＨＨＭＱＱＭＱＱＧＮＭＧＱＩＧＱＬＰＱＡＬＧＡＥＡＧＡＳＬＱＡＹＱＱＲＬＬＱＱＱＭＧＳＰＶＱＰＮＰＭＳＰＱＱＨＭＬＰＮＱＡＱＳＰＨＬＱＧＱＱＩＰＮＳＬＳＮＱＶＲＳＰＱＰＶＰＳＰＲＰＱＳＱＰＰＨＳＳＰＳＰＲＭＱＰＱＰＳＰＨＨＶＳＰＱＴＳＳＰＨＰＧＬＶＡＡＱＡＮＰＭＥＱＧＨＦＡＳＰＤＱＮＳＭＬＳＱＬＡＳＮＰＧＭＡＮＬＨＧＡＳＡＴＤＬＧＬＳＴＤＮＳＤＬＮＳＮＬＳＱＳＴＬＤＩＨ
配列番号１４１
ヒトｐ３００コアエフェクタータンパク質（配列番号１４０のアミノ酸１０４８～１６６４）
ＩＦＫＰＥＥＬＲＱＡＬＭＰＴＬＥＡＬＹＲＱＤＰＥＳＬＰＦＲＱＰＶＤＰＱＬＬＧＩＰＤＹＦＤＩＶＫＳＰＭＤＬＳＴＩＫＲＫＬＤＴＧＱＹＱＥＰＷＱＹＶＤＤＩＷＬＭＦＮＮＡＷＬＹＮＲＫＴＳＲＶＹＫＹＣＳＫＬＳＥＶＦＥＱＥＩＤＰＶＭＱＳＬＧＹＣＣＧＲＫＬＥＦＳＰＱＴＬＣＣＹＧＫＱＬＣＴＩＰＲＤＡＴＹＹＳＹＱＮＲＹＨＦＣＥＫＣＦＮＥＩＱＧＥＳＶＳＬＧＤＤＰＳＱＰＱＴＴＩＮＫＥＱＦＳＫＲＫＮＤＴＬＤＰＥＬＦＶＥＣＴＥＣＧＲＫＭＨＱＩＣＶＬＨＨＥＩＩＷＰＡＧＦＶＣＤＧＣＬＫＫＳＡＲＴＲＫＥＮＫＦＳＡＫＲＬＰＳＴＲＬＧＴＦＬＥＮＲＶＮＤＦＬＲＲＱＮＨＰＥＳＧＥＶＴＶＲＶＶＨＡＳＤＫＴＶＥＶＫＰＧＭＫＡＲＦＶＤＳＧＥＭＡＥＳＦＰＹＲＴＫＡＬＦＡＦＥＥＩＤＧＶＤＬＣＦＦＧＭＨＶＱＥＹＧＳＤＣＰＰＰＮＱＲＲＶＹＩＳＹＬＤＳＶＨＦＦＲＰＫＣＬＲＴＡＶＹＨＥＩＬＩＧＹＬＥＹＶＫＫＬＧＹＴＴＧＨＩＷＡＣＰＰＳＥＧＤＤＹＩＦＨＣＨＰＰＤＱＫＩＰＫＰＫＲＬＱＥＷＹＫＫＭＬＤＫＡＶＳＥＲＩＶＨＤＹＫＤＩＦＫＱＡＴＥＤＲＬＴＳＡＫＥＬＰＹＦＥＧＤＦＷＰＮＶＬＥＥＳＩＫＥＬＥＱＥＥＥＥＲＫＲＥＥＮＴＳＮＥＳＴＤＶＴＫＧＤＳＫＮＡＫＫＫＮＮＫＫＴＳＫＮＫＳＳＬＳＲＧＮＫＫＫＰＧＭＰＮＶＳＮＤＬＳＱＫＬＹＡＴＭＥＫＨＫＥＶＦＦＶＩＲＬＩＡＧＰＡＡＮＳＬＰＰＩＶＤＰＤＰＬＩＰＣＤＬＭＤＧＲＤＡＦＬＴＬＡＲＤＫＨＬＥＦＳＳＬＲＲＡＱＷＳＴＭＣＭＬＶＥＬＨＴＱＳＱＤ
配列番号１４２
ＶＰ６４－ｄＣａｓ９－ＶＰ６４タンパク質
ＲＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＶＮＰＫＫＫＲＫＶＧＲＧＭＤＫＫＹＳＩＧＬＡＩＧＴＮＳＶＧＷＡＶＩＴＤＥＹＫＶＰＳＫＫＦＫＶＬＧＮＴＤＲＨＳＩＫＫＮＬＩＧＡＬＬＦＤＳＧＥＴＡＥＡＴＲＬＫＲＴＡＲＲＲＹＴＲＲＫＮＲＩＣＹＬＱＥＩＦＳＮＥＭＡＫＶＤＤＳＦＦＨＲＬＥＥＳＦＬＶＥＥＤＫＫＨＥＲＨＰＩＦＧＮＩＶＤＥＶＡＹＨＥＫＹＰＴＩＹＨＬＲＫＫＬＶＤＳＴＤＫＡＤＬＲＬＩＹＬＡＬＡＨＭＩＫＦＲＧＨＦＬＩＥＧＤＬＮＰＤＮＳＤＶＤＫＬＦＩＱＬＶＱＴＹＮＱＬＦＥＥＮＰＩＮＡＳＧＶＤＡＫＡＩＬＳＡＲＬＳＫＳＲＲＬＥＮＬＩＡＱＬＰＧＥＫＫＮＧＬＦＧＮＬＩＡＬＳＬＧＬＴＰＮＦＫＳＮＦＤＬＡＥＤＡＫＬＱＬＳＫＤＴＹＤＤＤＬＤＮＬＬＡＱＩＧＤＱＹＡＤＬＦＬＡＡＫＮＬＳＤＡＩＬＬＳＤＩＬＲＶＮＴＥＩＴＫＡＰＬＳＡＳＭＩＫＲＹＤＥＨＨＱＤＬＴＬＬＫＡＬＶＲＱＱＬＰＥＫＹＫＥＩＦＦＤＱＳＫＮＧＹＡＧＹＩＤＧＧＡＳＱＥＥＦＹＫＦＩＫＰＩＬＥＫＭＤＧＴＥＥＬＬＶＫＬＮＲＥＤＬＬＲＫＱＲＴＦＤＮＧＳＩＰＨＱＩＨＬＧＥＬＨＡＩＬＲＲＱＥＤＦＹＰＦＬＫＤＮＲＥＫＩＥＫＩＬＴＦＲＩＰＹＹＶＧＰＬＡＲＧＮＳＲＦＡＷＭＴＲＫＳＥＥＴＩＴＰＷＮＦＥＥＶＶＤＫＧＡＳＡＱＳＦＩＥＲＭＴＮＦＤＫＮＬＰＮＥＫＶＬＰＫＨＳＬＬＹＥＹＦＴＶＹＮＥＬＴＫＶＫＹＶＴＥＧＭＲＫＰＡＦＬＳＧＥＱＫＫＡＩＶＤＬＬＦＫＴＮＲＫＶＴＶＫＱＬＫＥＤＹＦＫＫＩＥＣＦＤＳＶＥＩＳＧＶＥＤＲＦＮＡＳＬＧＴＹＨＤＬＬＫＩＩＫＤＫＤＦＬＤＮＥＥＮＥＤＩＬＥＤＩＶＬＴＬＴＬＦＥＤＲＥＭＩＥＥＲＬＫＴＹＡＨＬＦＤＤＫＶＭＫＱＬＫＲＲＲＹＴＧＷＧＲＬＳＲＫＬＩＮＧＩＲＤＫＱＳＧＫＴＩＬＤＦＬＫＳＤＧＦＡＮＲＮＦＭＱＬＩＨＤＤＳＬＴＦＫＥＤＩＱＫＡＱＶＳＧＱＧＤＳＬＨＥＨＩＡＮＬＡＧＳＰＡＩＫＫＧＩＬＱＴＶＫＶＶＤＥＬＶＫＶＭＧＲＨＫＰＥＮＩＶＩＥＭＡＲＥＮＱＴＴＱＫＧＱＫＮＳＲＥＲＭＫＲＩＥＥＧＩＫＥＬＧＳＱＩＬＫＥＨＰＶＥＮＴＱＬＱＮＥＫＬＹＬＹＹＬＱＮＧＲＤＭＹＶＤＱＥＬＤＩＮＲＬＳＤＹＤＶＤＡＩＶＰＱＳＦＬＫＤＤＳＩＤＮＫＶＬＴＲＳＤＫＮＲＧＫＳＤＮＶＰＳＥＥＶＶＫＫＭＫＮＹＷＲＱＬＬＮＡＫＬＩＴＱＲＫＦＤＮＬＴＫＡＥＲＧＧＬＳＥＬＤＫＡＧＦＩＫＲＱＬＶＥＴＲＱＩＴＫＨＶＡＱＩＬＤＳＲＭＮＴＫＹＤＥＮＤＫＬＩＲＥＶＫＶＩＴＬＫＳＫＬＶＳＤＦＲＫＤＦＱＦＹＫＶＲＥＩＮＮＹＨＨＡＨＤＡＹＬＮＡＶＶＧＴＡＬＩＫＫＹＰＫＬＥＳＥＦＶＹＧＤＹＫＶＹＤＶＲＫＭＩＡＫＳＥＱＥＩＧＫＡＴＡＫＹＦＦＹＳＮＩＭＮＦＦＫＴＥＩＴＬＡＮＧＥＩＲＫＲＰＬＩＥＴＮＧＥＴＧＥＩＶＷＤＫＧＲＤＦＡＴＶＲＫＶＬＳＭＰＱＶＮＩＶＫＫＴＥＶＱＴＧＧＦＳＫＥＳＩＬＰＫＲＮＳＤＫＬＩＡＲＫＫＤＷＤＰＫＫＹＧＧＦＤＳＰＴＶＡＹＳＶＬＶＶＡＫＶＥＫＧＫＳＫＫＬＫＳＶＫＥＬＬＧＩＴＩＭＥＲＳＳＦＥＫＮＰＩＤＦＬＥＡＫＧＹＫＥＶＫＫＤＬＩＩＫＬＰＫＹＳＬＦＥＬＥＮＧＲＫＲＭＬＡＳＡＧＥＬＱＫＧＮＥＬＡＬＰＳＫＹＶＮＦＬＹＬＡＳＨＹＥＫＬＫＧＳＰＥＤＮＥＱＫＱＬＦＶＥＱＨＫＨＹＬＤＥＩＩＥＱＩＳＥＦＳＫＲＶＩＬＡＤＡＮＬＤＫＶＬＳＡＹＮＫＨＲＤＫＰＩＲＥＱＡＥＮＩＩＨＬＦＴＬＴＮＬＧＡＰＡＡＦＫＹＦＤＴＴＩＤＲＫＲＹＴＳＴＫＥＶＬＤＡＴＬＩＨＱＳＩＴＧＬＹＥＴＲＩＤＬＳＱＬＧＧＤＳＲＡＤＰＫＫＫＲＫＶＡＳＲＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＩ
配列番号１４３
ＶＰ６４－ｄＣａｓ９－ＶＰ６４ ＤＮＡ
ｃｇｇｇｃｔｇａｃｇｃａｔｔｇｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｔｃｔｇｇａｔａｔｇｃｔｇｇｇａａｇｔｇａｃｇｃｃｃｔｃｇａｔｇａｔｔｔｔｇａｃｃｔｔｇａｃａｔｇｃｔｔｇｇｔｔｃｇｇａｔｇｃｃｃｔｔｇａｔｇａｃｔｔｔｇａｃｃｔｃｇａｃａｔｇｃｔｃｇｇｃａｇｔｇａｃｇｃｃｃｔｔｇａｔｇａｔｔｔｃｇａｃｃｔｇｇａｃａｔｇｇｔｔａａｃｃｃｃａａｇａａｇａａｇａｇｇａａｇｇｔｇｇｇｃｃｇｃｇｇａａｔｇｇａｃａａｇａａｇｔａｃｔｃｃａｔｔｇｇｇｃｔｃｇｃｃａｔｃｇｇｃａｃａａａｃａｇｃｇｔｃｇｇｃｔｇｇｇｃｃｇｔｃａｔｔａｃｇｇａｃｇａｇｔａｃａａｇｇｔｇｃｃｇａｇｃａａａａａａｔｔｃａａａｇｔｔｃｔｇｇｇｃａａｔａｃｃｇａｔｃｇｃｃａｃａｇｃａｔａａａｇａａｇａａｃｃｔｃａｔｔｇｇｃｇｃｃｃｔｃｃｔｇｔｔｃｇａｃｔｃｃｇｇｇｇａａａｃｃｇｃｃｇａａｇｃｃａｃｇｃｇｇｃｔｃａａａａｇａａｃａｇｃａｃｇｇｃｇｃａｇａｔａｔａｃｃｃｇｃａｇａａａｇａａｔｃｇｇａｔｃｔｇｃｔａｃｃｔｇｃａｇｇａｇａｔｃｔｔｔａｇｔａａｔｇａｇａｔｇｇｃｔａａｇｇｔｇｇａｔｇａｃｔｃｔｔｔｃｔｔｃｃａｔａｇｇｃｔｇｇａｇｇａｇｔｃｃｔｔｔｔｔｇｇｔｇｇａｇｇａｇｇａｔａａａａａｇｃａｃｇａｇｃｇｃｃａｃｃｃａａｔｃｔｔｔｇｇｃａａｔａｔｃｇｔｇｇａｃｇａｇｇｔｇｇｃｇｔａｃｃａｔｇａａａａｇｔａｃｃｃａａｃｃａｔａｔａｔｃａｔｃｔｇａｇｇａａｇａａｇｃｔｔｇｔａｇａｃａｇｔａｃｔｇａｔａａｇｇｃｔｇａｃｔｔｇｃｇｇｔｔｇａｔｃｔａｔｃｔｃｇｃｇｃｔｇｇｃｇｃａｔａｔｇａｔｃａａａｔｔｔｃｇｇｇｇａｃａｃｔｔｃｃｔｃａｔｃｇａｇｇｇｇｇａｃｃｔｇａａｃｃｃａｇａｃａａｃａｇｃｇａｔｇｔｃｇａｃａａａｃｔｃｔｔｔａｔｃｃａａｃｔｇｇｔｔｃａｇａｃｔｔａｃａａｔｃａｇｃｔｔｔｔｃｇａａｇａｇａａｃｃｃｇａｔｃａａｃｇｃａｔｃｃｇｇａｇｔｔｇａｃｇｃｃａａａｇｃａａｔｃｃｔｇａｇｃｇｃｔａｇｇｃｔｇｔｃｃａａａｔｃｃｃｇｇｃｇｇｃｔｃｇａａａａｃｃｔｃａｔｃｇｃａｃａｇｃｔｃｃｃｔｇｇｇｇａｇａａｇａａｇａａｃｇｇｃｃｔｇｔｔｔｇｇｔａａｔｃｔｔａｔｃｇｃｃｃｔｇｔｃａｃｔｃｇｇｇｃｔｇａｃｃｃｃｃａａｃｔｔｔａａａｔｃｔａａｃｔｔｃｇａｃｃｔｇｇｃｃｇａａｇａｔｇｃｃａａｇｃｔｔｃａａｃｔｇａｇｃａａａｇａｃａｃｃｔａｃｇａｔｇａｔｇａｔｃｔｃｇａｃａａｔｃｔｇｃｔｇｇｃｃｃａｇａｔｃｇｇｃｇａｃｃａｇｔａｃｇｃａｇａｃｃｔｔｔｔｔｔｔｇｇｃｇｇｃａａａｇａａｃｃｔｇｔｃａｇａｃｇｃｃａｔｔｃｔｇｃｔｇａｇｔｇａｔａｔｔｃｔｇｃｇａｇｔｇａａｃａｃｇｇａｇａｔｃａｃｃａａａｇｃｔｃｃｇｃｔｇａｇｃｇｃｔａｇｔａｔｇａｔｃａａｇｃｇｃｔａｔｇａｔｇａｇｃａｃｃａｃｃａａｇａｃｔｔｇａｃｔｔｔｇｃｔｇａａｇｇｃｃｃｔｔｇｔｃａｇａｃａｇｃａａｃｔｇｃｃｔｇａｇａａｇｔａｃａａｇｇａａａｔｔｔｔｃｔｔｃｇａｔｃａｇｔｃｔａａａａａｔｇｇｃｔａｃｇｃｃｇｇａｔａｃａｔｔｇａｃｇｇｃｇｇａｇｃａａｇｃｃａｇｇａｇｇａａｔｔｔｔａｃａａａｔｔｔａｔｔａａｇｃｃｃａｔｃｔｔｇｇａａａａａａｔｇｇａｃｇｇｃａｃｃｇａｇｇａｇｃｔｇｃｔｇｇｔａａａｇｃｔｔａａｃａｇａｇａａｇａｔｃｔｇｔｔｇｃｇｃａａａｃａｇｃｇｃａｃｔｔｔｃｇａｃａａｔｇｇａａｇｃａｔｃｃｃｃｃａｃｃａｇａｔｔｃａｃｃｔｇｇｇｃｇａａｃｔｇｃａｃｇｃｔａｔｃｃｔｃａｇｇｃｇｇｃａａｇａｇｇａｔｔｔｃｔａｃｃｃｃｔｔｔｔｔｇａａａｇａｔａａｃａｇｇｇａａａａｇａｔｔｇａｇａａａａｔｃｃｔｃａｃａｔｔｔｃｇｇａｔａｃｃｃｔａｃｔａｔｇｔａｇｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｃｃｇｇｇｇａａａｔｔｃｃａｇａｔｔｃｇｃｇｔｇｇａｔｇａｃｔｃｇｃａａａｔｃａｇａａｇａｇａｃｃａｔｃａｃｔｃｃｃｔｇｇａａｃｔｔｃｇａｇｇａａｇｔｃｇｔｇｇａｔａａｇｇｇｇｇｃｃｔｃｔｇｃｃｃａｇｔｃｃｔｔｃａｔｃｇａａａｇｇａｔｇａｃｔａａｃｔｔｔｇａｔａａａａａｔｃｔｇｃｃｔａａｃｇａａａａｇｇｔｇｃｔｔｃｃｔａａａｃａｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇｔａｃｇａｇｔａｃｔｔｃａｃａｇｔｔｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａｃｃａａｇｇｔｃａａａｔａｃｇｔｃａｃａｇａａｇｇｇａｔｇａｇａａａｇｃｃａｇｃａｔｔｃｃｔｇｔｃｔｇｇａｇａｇｃａｇａａｇａａａｇｃｔａｔｃｇｔｇｇａｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃａａｇａｃｇａａｃｃｇｇａａａｇｔｔａｃｃｇｔｇａａａｃａｇｃｔｃａａａｇａａｇａｃｔａｔｔｔｃａａａａａｇａｔｔｇａａｔｇｔｔｔｃｇａｃｔｃｔｇｔｔｇａａａｔｃａｇｃｇｇａｇｔｇｇａｇｇａｔｃｇｃｔｔｃａａｃｇｃａｔｃｃｃｔｇｇｇａａｃｇｔａｔｃａｃｇａｔｃｔｃｃｔｇａａａａｔｃａｔｔａａａｇａｃａａｇｇａｃｔｔｃｃｔｇｇａｃａａｔｇａｇｇａｇａａｃｇａｇｇａｃａｔｔｃｔｔｇａｇｇａｃａｔｔｇｔｃｃｔｃａｃｃｃｔｔａｃｇｔｔｇｔｔｔｇａａｇａｔａｇｇｇａｇａｔｇａｔｔｇａａｇａａｃｇｃｔｔｇａａａａｃｔｔａｃｇｃｔｃａｔｃｔｃｔｔｃｇａｃｇａｃａａａｇｔｃａｔｇａａａｃａｇｃｔｃａａｇａｇｇｃｇｃｃｇａｔａｔａｃａｇｇａｔｇｇｇｇｇｃｇｇｃｔｇｔｃａａｇａａａａｃｔｇａｔｃａａｔｇｇｇａｔｃｃｇａｇａｃａａｇｃａｇａｇｔｇｇａａａｇａｃａａｔｃｃｔｇｇａｔｔｔｔｃｔｔａａｇｔｃｃｇａｔｇｇａｔｔｔｇｃｃａａｃｃｇｇａａｃｔｔｃａｔｇｃａｇｔｔｇａｔｃｃａｔｇａｔｇａｃｔｃｔｃｔｃａｃｃｔｔｔａａｇｇａｇｇａｃａｔｃｃａｇａａａｇｃａｃａａｇｔｔｔｃｔｇｇｃｃａｇｇｇｇｇａｃａｇｔｃｔｔｃａｃｇａｇｃａｃａｔｃｇｃｔａａｔｃｔｔｇｃａｇｇｔａｇｃｃｃａｇｃｔａｔｃａａａａａｇｇｇａａｔａｃｔｇｃａｇａｃｃｇｔｔａａｇｇｔｃｇｔｇｇａｔｇａａｃｔｃｇｔｃａａａｇｔａａｔｇｇｇａａｇｇｃａｔａａｇｃｃｃｇａｇａａｔａｔｃｇｔｔａｔｃｇａｇａｔｇｇｃｃｃｇａｇａｇａａｃｃａａａｃｔａｃｃｃａｇａａｇｇｇａｃａｇａａｇａａｃａｇｔａｇｇｇａａａｇｇａｔｇａａｇａｇｇａｔｔｇａａｇａｇｇｇｔａｔａａａａｇａａｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａａａｔｃｃｔｔａａｇｇａａｃａｃｃｃａｇｔｔｇａａａａｃａｃｃｃａｇｃｔｔｃａｇａａｔｇａｇａａｇｃｔｃｔａｃｃｔｇｔａｃｔａｃｃｔｇｃａｇａａｃｇｇｃａｇｇｇａｃａｔｇｔａｃｇｔｇｇａｔｃａｇｇａａｃｔｇｇａｃａｔｃａａｔｃｇｇｃｔｃｔｃｃｇａｃｔａｃｇａｃｇｔｇｇａｔｇｃｃａｔｃｇｔｇｃｃｃｃａｇｔｃｔｔｔｔｃｔｃａａａｇａｔｇａｔｔｃｔａｔｔｇａｔａａｔａａａｇｔｇｔｔｇａｃａａｇａｔｃｃｇａｔａａａａａｔａｇａｇｇｇａａｇａｇｔｇａｔａａｃｇｔｃｃｃｃｔｃａｇａａｇａａｇｔｔｇｔｃａａｇａａａａｔｇａａａａａｔｔａｔｔｇｇｃｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｃｇｃｃａａａｃｔｇａｔｃａｃａｃａａｃｇｇａａｇｔｔｃｇａｔａａｔｃｔｇａｃｔａａｇｇｃｔｇａａｃｇａｇｇｔｇｇｃｃｔｇｔｃｔｇａｇｔｔｇｇａｔａａａｇｃｃｇｇｃｔｔｃａｔｃａａａａｇｇｃａｇｃｔｔｇｔｔｇａｇａｃａｃｇｃｃａｇａｔｃａｃｃａａｇｃａｃｇｔｇｇｃｃｃａａａｔｔｃｔｃｇａｔｔｃａｃｇｃａｔｇａａｃａｃｃａａｇｔａｃｇａｔｇａａａａｔｇａｃａａａｃｔｇａｔｔｃｇａｇａｇｇｔｇａａａｇｔｔａｔｔａｃｔｃｔｇａａｇｔｃｔａａｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｇａｔｔｔｃａｇａａａｇｇａｃｔｔｔｃａｇｔｔｔｔａｔａａｇｇｔｇａｇａｇａｇａｔｃａａｃａａｔｔａｃｃａｃｃａｔｇｃｇｃａｔｇａｔｇｃｃｔａｃｃｔｇａａｔｇｃａｇｔｇｇｔａｇｇｃａｃｔｇｃａｃｔｔａｔｃａａａａａａｔａｔｃｃｃａａｇｃｔｔｇａａｔｃｔｇａａｔｔｔｇｔｔｔａｃｇｇａｇａｃｔａｔａａａｇｔｇｔａｃｇａｔｇｔｔａｇｇａａａａｔｇａｔｃｇｃａａａｇｔｃｔｇａｇｃａｇｇａａａｔａｇｇｃａａｇｇｃｃａｃｃｇｃｔａａｇｔａｃｔｔｃｔｔｔｔａｃａｇｃａａｔａｔｔａｔｇａａｔｔｔｔｔｔｃａａｇａｃｃｇａｇａｔｔａｃａｃｔｇｇｃｃａａｔｇｇａｇａｇａｔｔｃｇｇａａｇｃｇａｃｃａｃｔｔａｔｃｇａａａｃａａａｃｇｇａｇａａａｃａｇｇａｇａａａｔｃｇｔｇｔｇｇｇａｃａａｇｇｇｔａｇｇｇａｔｔｔｃｇｃｇａｃａｇｔｃｃｇｇａａｇｇｔｃｃｔｇｔｃｃａｔｇｃｃｇｃａｇｇｔｇａａｃａｔｃｇｔｔａａａａａｇａｃｃｇａａｇｔａｃａｇａｃｃｇｇａｇｇｃｔｔｃｔｃｃａａｇｇａａａｇｔａｔｃｃｔｃｃｃｇａａａａｇｇａａｃａｇｃｇａｃａａｇｃｔｇａｔｃｇｃａｃｇｃａａａａａａｇａｔｔｇｇｇａｃｃｃｃａａｇａａａｔａｃｇｇｃｇｇａｔｔｃｇａｔｔｃｔｃｃｔａｃａｇｔｃｇｃｔｔａｃａｇｔｇｔａｃｔｇｇｔｔｇｔｇｇｃｃａａａｇｔｇｇａｇａａａｇｇｇａａｇｔｃｔａａａａａａｃｔｃａａａａｇｃｇｔｃａａｇｇａａｃｔｇｃｔｇｇｇｃａｔｃａｃａａｔｃａｔｇｇａｇｃｇａｔｃａａｇｃｔｔｃｇａａａａａａａｃｃｃｃａｔｃｇａｃｔｔｔｃｔｃｇａｇｇｃｇａａａｇｇａｔａｔａａａｇａｇｇｔｃａａａａａａｇａｃｃｔｃａｔｃａｔｔａａｇｃｔｔｃｃｃａａｇｔａｃｔｃｔｃｔｃｔｔｔｇａｇｃｔｔｇａａａａｃｇｇｃｃｇｇａａａｃｇａａｔｇｃｔｃｇｃｔａｇｔｇｃｇｇｇｃｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇｇｔａａｃｇａｇｃｔｇｇｃａｃｔｇｃｃｃｔｃｔａａａｔａｃｇｔｔａａｔｔｔｃｔｔｇｔａｔｃｔｇｇｃｃａｇｃｃａｃｔａｔｇａａａａｇｃｔｃａａａｇｇｇｔｃｔｃｃｃｇａａｇａｔａａｔｇａｇｃａｇａａｇｃａｇｃｔｇｔｔｃｇｔｇｇａａｃａａｃａｃａａａｃａｃｔａｃｃｔｔｇａｔｇａｇａｔｃａｔｃｇａｇｃａａａｔａａｇｃｇａａｔｔｃｔｃｃａａａａｇａｇｔｇａｔｃｃｔｃｇｃｃｇａｃｇｃｔａａｃｃｔｃｇａｔａａｇｇｔｇｃｔｔｔｃｔｇｃｔｔａｃａａｔａａｇｃａｃａｇｇｇａｔａａｇｃｃｃａｔｃａｇｇｇａｇｃａｇｇｃａｇａａａａｃａｔｔａｔｃｃａｃｔｔｇｔｔｔａｃｔｃｔｇａｃｃａａｃｔｔｇｇｇｃｇｃｇｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｔｃａａｇｔａｃｔｔｃｇａｃａｃｃａｃｃａｔａｇａｃａｇａａａｇｃｇｇｔａｃａｃｃｔｃｔａｃａａａｇｇａｇｇｔｃｃｔｇｇａｃｇｃｃａｃａｃｔｇａｔｔｃａｔｃａｇｔｃａａｔｔａｃｇｇｇｇｃｔｃｔａｔｇａａａｃａａｇａａｔｃｇａｃｃｔｃｔｃｔｃａｇｃｔｃｇｇｔｇｇａｇａｃａｇｃａｇｇｇｃｔｇａｃｃｃｃａａｇａａｇａａｇａｇｇａａｇｇｔｇｇｃｔａｇｃｃｇｃｇｃｃｇａｃｇｃｇｃｔｇｇａｃｇａｔｔｔｃｇａｔｃｔｃｇａｃａｔｇｃｔｇｇｇｔｔｃｔｇａｔｇｃｃｃｔｃｇａｔｇａｃｔｔｔｇａｃｃｔｇｇａｔａｔｇｔｔｇｇｇａａｇｃｇａｃｇｃａｔｔｇｇａｔｇａｃｔｔｔｇａｔｃｔｇｇａｃａｔｇｃｔｃｇｇｃｔｃｃｇａｔｇｃｔｃｔｇｇａｃｇａｔｔｔｃｇａｔｃｔｃｇａｔａｔｇｔｔａａｔｃ
配列番号１４４
ＶＰＨのタンパク質配列
ＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＬＰＳＡＳＶＥＦＥＧＳＧＧＰＳＧＱＩＳＮＱＡＬＡＬＡＰＳＳＡＰＶＬＡＱＴＭＶＰＳＳＡＭＶＰＬＡＱＰＰＡＰＡＰＶＬＴＰＧＰＰＱＳＬＳＡＰＶＰＫＳＴＱＡＧＥＧＴＬＳＥＡＬＬＨＬＱＦＤＡＤＥＤＬＧＡＬＬＧＮＳＴＤＰＧＶＦＴＤＬＡＳＶＤＮＳＥＦＱＱＬＬＮＱＧＶＳＭＳＨＳＴＡＥＰＭＬＭＥＹＰＥＡＩＴＲＬＶＴＧＳＱＲＰＰＤＰＡＰＴＰＬＧＴＳＧＬＰＮＧＬＳＧＤＥＤＦＳＳＩＡＤＭＤＦＳＡＬＬＳＱＩＳＳＳＧＱＧＧＧＧＳＧＦＳＶＤＴＳＡＬＬＤＬＦＳＰＳＶＴＶＰＤＭＳＬＰＤＬＤＳＳＬＡＳＩＱＥＬＬＳＰＱＥＰＰＲＰＰＥＡＥＮＳＳＰＤＳＧＫＱＬＶＨＹＴＡＱＰＬＦＬＬＤＰＧＳＶＤＴＧＳＮＤＬＰＶＬＦＥＬＧＥＧＳＹＦＳＥＧＤＧＦＡＥＤＰＴＩＳＬＬＴＧＳＥＰＰＫＡＫＤＰＴＶＳ
配列番号１４５
ＶＰＨのＤＮＡ配列
ｇａｔｇｃｔｔｔａｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｃｔｔａｇａｔａｔｇｃｔｔｇｇｔｔｃａｇａｃｇｃｇｔｔａｇａｃｇａｃｔｔｃｇａｃｃｔａｇａｃａｔｇｔｔａｇｇｃｔｃａｇａｔｇｃａｔｔｇｇａｃｇａｃｔｔｃｇａｔｔｔａｇａｔａｔｇｔｔｇｇｇｃｔｃｃｇａｔｇｃｃｃｔａｇａｔｇａｃｔｔｔｇａｔｃｔａｇａｔａｔｇｃｔａｇｇｇｔｃａｃｔａｃｃｃａｇｃｇｃｃａｇｃｇｔｃｇａｇｔｔｃｇａａｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｇｃｃｔｔｃａｇｇｇｃａｇａｔｃａｇｃａａｃｃａｇｇｃｃｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｃｃｃｃｔａｇｃｔｃｃｇｃｔｃｃａｇｔｇｃｔｇｇｃｃｃａｇａｃｔａｔｇｇｔｇｃｃｃｔｃｔａｇｔｇｃｔａｔｇｇｔｇｃｃｔｃｔｇｇｃｃｃａｇｃｃａｃｃｔｇｃｔｃｃａｇｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇａｃｃｃｃａｇｇａｃｃａｃｃｃｃａｇｔｃａｃｔｇａｇｃｇｃｃｃｃａｇｔｇｃｃｃａａｇｔｃｔａｃａｃａｇｇｃｃｇｇｃｇａｇｇｇｇａｃｔｃｔｇａｇｔｇａａｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃａｃｃｔｇｃａｇｔｔｃｇａｃｇｃｔｇａｔｇａｇｇａｃｃｔｇｇｇａｇｃｔｃｔｇｃｔｇｇｇｇａａｃａｇｃａｃｃｇａｔｃｃｃｇｇａｇｔｇｔｔｃａｃａｇａｔｃｔｇｇｃｃｔｃｃｇｔｇｇａｃａａｃｔｃｔｇａｇｔｔｔｃａｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｔｃａｇｇｇｃｇｔｇｔｃｃａｔｇｔｃｔｃａｔａｇｔａｃａｇｃｃｇａａｃｃａａｔｇｃｔｇａｔｇｇａｇｔａｃｃｃｃｇａａｇｃｃａｔｔａｃｃｃｇｇｃｔｇｇｔｇａｃｃｇｇｃａｇｃｃａｇｃｇｇｃｃｃｃｃｃｇａｃｃｃｃｇｃｔｃｃａａｃｔｃｃｃｃｔｇｇｇａａｃｃａｇｃｇｇｃｃｔｇｃｃｔａａｔｇｇｇｃｔｇｔｃｃｇｇａｇａｔｇａａｇａｃｔｔｃｔｃａａｇｃａｔｃｇｃｔｇａｔａｔｇｇａｃｔｔｔａｇｔｇｃｃｃｔｇｃｔｇｔｃａｃａｇａｔｔｔｃｃｔｃｔａｇｔｇｇｇｃａｇｇｇａｇｇａｇｇｔｇｇａａｇｃｇｇｃｔｔｃａｇｃｇｔｇｇａｃａｃｃａｇｔｇｃｃｃｔｇｃｔｇｇａｃｃｔｇｔｔｃａｇｃｃｃｃｔｃｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｇａｃａｔｇａｇｃｃｔｇｃｃｔｇａｃｃｔｔｇａｃａｇｃａｇｃｃｔｇｇｃｃａｇｔａｔｃｃａａｇａｇｃｔｃｃｔｇｔｃｔｃｃｃｃａｇｇａｇｃｃｃｃｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｃｇａｇｇｃａｇａｇａａｃａｇｃａｇｃｃｃｇｇａｔｔｃａｇｇｇａａｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｃｔａｃａｃａｇｃｇｃａｇｃｃｇｃｔｇｔｔｃｃｔｇｃｔｇｇａｃｃｃｃｇｇｃｔｃｃｇｔｇｇａｃａｃｃｇｇｇａｇｃａａｃｇａｃｃｔｇｃｃｇｇｔｇｃｔｇｔｔｔｇａｇｃｔｇｇｇａｇａｇｇｇｃｔｃｃｔａｃｔｔｃｔｃｃｇａａｇｇｇｇａｃｇｇｃｔｔｃｇｃｃｇａｇｇａｃｃｃｃａｃｃａｔｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇａｃａｇｇｃｔｃｇｇａｇｃｃｔｃｃｃａａａｇｃｃａａｇｇａｃｃｃｃａｃｔｇｔｃｔｃｃ
配列番号１４６
ＶＰＲのタンパク質配列
ＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＰＫＫＫＲＫＶＧＳＱＹＬＰＤＴＤＤＲＨＲＩＥＥＫＲＫＲＴＹＥＴＦＫＳＩＭＫＫＳＰＦＳＧＰＴＤＰＲＰＰＰＲＲＩＡＶＰＳＲＳＳＡＳＶＰＫＰＡＰＱＰＹＰＦＴＳＳＬＳＴＩＮＹＤＥＦＰＴＭＶＦＰＳＧＱＩＳＱＡＳＡＬＡＰＡＰＰＱＶＬＰＱＡＰＡＰＡＰＡＰＡＭＶＳＡＬＡＱＡＰＡＰＶＰＶＬＡＰＧＰＰＱＡＶＡＰＰＡＰＫＰＴＱＡＧＥＧＴＬＳＥＡＬＬＱＬＱＦＤＤＥＤＬＧＡＬＬＧＮＳＴＤＰＡＶＦＴＤＬＡＳＶＤＮＳＥＦＱＱＬＬＮＱＧＩＰＶＡＰＨＴＴＥＰＭＬＭＥＹＰＥＡＩＴＲＬＶＴＧＡＱＲＰＰＤＰＡＰＡＰＬＧＡＰＧＬＰＮＧＬＬＳＧＤＥＤＦＳＳＩＡＤＭＤＦＳＡＬＬＳＱＩＳＳＧＳＧＳＧＳＲＤＳＲＥＧＭＦＬＰＫＰＥＡＧＳＡＩＳＤＶＦＥＧＲＥＶＣＱＰＫＲＩＲＰＦＨＰＰＧＳＰＷＡＮＲＰＬＰＡＳＬＡＰＴＰＴＧＰＶＨＥＰＶＧＳＬＴＰＡＰＶＰＱＰＬＤＰＡＰＡＶＴＰＥＡＳＨＬＬＥＤＰＤＥＥＴＳＱＡＶＫＡＬＲＥＭＡＤＴＶＩＰＱＫＥＥＡＡＩＣＧＱＭＤＬＳＨＰＰＰＲＧＨＬＤＥＬＴＴＴＬＥＳＭＴＥＤＬＮＬＤＳＰＬＴＰＥＬＮＥＩＬＤＴＦＬＮＤＥＣＬＬＨＡＭＨＩＳＴＧＬＳＩＦＤＴＳＬＦ
配列番号１４７
ＶＰＲのＤＮＡ配列
ｇａｔｇｃｔｔｔａｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｃｔｔａｇａｔａｔｇｃｔｔｇｇｔｔｃａｇａｃｇｃｇｔｔａｇａｃｇａｃｔｔｃｇａｃｃｔａｇａｃａｔｇｔｔａｇｇｃｔｃａｇａｔｇｃａｔｔｇｇａｃｇａｃｔｔｃｇａｔｔｔａｇａｔａｔｇｔｔｇｇｇｃｔｃｃｇａｔｇｃｃｃｔａｇａｔｇａｃｔｔｔｇａｔｃｔａｇａｔａｔｇｃｔａｇｇｔａｇｔｃｃｃａａａａａｇａａｇａｇｇａａａｇｔｇｇｇａｔｃｃｃａｇｔａｔｃｔｇｃｃｃｇａｃａｃａｇａｔｇａｔａｇａｃａｃｃｇａａｔｃｇａａｇａｇａａａｃｇｃａａｇｃｇａａｃｇｔａｔｇａａａｃｃｔｔｃａａａｔｃｇａｔｃａｔｇａａｇａａａｔｃｇｃｃｃｔｔｃｔｃｇｇｇｔｃｃｇａｃｃｇａｔｃｃｃａｇｇｃｃｃｃｃａｃｃｇａｇａａｇｇａｔｔｇｃｇｇｔｃｃｃｇｔｃｃｃｇｃｔｃｇｔｃｇｇｃｃａｇｃｇｔｇｃｃｇａａｇｃｃｔｇｃｇｃｃｇｃａｇｃｃｃｔａｃｃｃｃｔｔｃａｃｇｔｃｇａｇｃｃｔｇａｇｃａｃａａｔｃａａｔｔａｔｇａｃｇａｇｔｔｃｃｃｇａｃｇａｔｇｇｔｇｔｔｃｃｃｃｔｃｇｇｇａｃａａａｔｃｔｃａｃａａｇｃｃｔｃｇｇｃｇｃｔｃｇｃａｃｃａｇｃｇｃｃｔｃｃｃｃａａｇｔｃｃｔｔｃｃｇｃａａｇｃｇｃｃｔｇｃｃｃｃａｇｃｇｃｃｔｇｃａｃｃｇｇｃａａｔｇｇｔｇｔｃｃｇｃｃｃｔｃｇｃａｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｃｇｃｃｃｇｔｃｃｃｃｇｔｇｃｔｃｇｃｇｃｃｔｇｇａｃｃｇｃｃｃｃａｇｇｃｇｇｔｃｇｃｔｃｃａｃｃｇｇｃｔｃｃｇａａｇｃｃｇａｃｇｃａｇｇｃｃｇｇａｇａｇｇｇａａｃａｃｔｃｔｃｃｇａａｇｃａｃｔｔｃｔｔｃａａｃｔｃｃａｇｔｔｔｇａｔｇａｃｇａｇｇａｔｃｔｔｇｇａｇｃａｃｔｃｃｔｔｇｇａａａｃｔｃｇａｃａｇａｃｃｃｔｇｃｇｇｔｇｔｔｔａｃｃｇａｃｃｔｃｇｃｇｔｃａｇｔａｇａｔａａｃｔｃｃｇａａｔｔｔｃａｇｃａｇｃｔｔｔｔｇａａｃｃａｇｇｇｔａｔｃｃｃｇｇｔｃｇｃｇｃｃａｃａｔａｃａａｃｇｇａｇｃｃｃａｔｇｔｔｇａｔｇｇａａｔａｃｃｃｃｇａａｇｃａａｔｃａｃｇａｇａｃｔｔｇｔｇａｃｇｇｇａｇｃｇｃａｇｃｇｇｃｃｔｃｃｃｇａｔｃｃｃｇｃａｃｃｃｇｃａｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃａｃｃｔｇｇｃｃｔｃｃｃｔａａｃｇｇａｃｔｔｔｔｇａｇｃｇｇｃｇａｃｇａｇｇａｔｔｔｃｔｃｃｔｃｃａｔｃｇｃｃｇａｔａｔｇｇａｔｔｔｃｔｃａｇｃｃｔｔｇｃｔｇｔｃａｃａｇａｔｔｔｃｃａｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｃｇｇｇａｔｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇａｔｇｔｔｔｔｔｇｃｃｇａａｇｃｃｔｇａｇｇｃｃｇｇｃｔｃｃｇｃｔａｔｔａｇｔｇａｃｇｔｇｔｔｔｇａｇｇｇｃｃｇｃｇａｇｇｔｇｔｇｃｃａｇｃｃａａａａｃｇａａｔｃｃｇｇｃｃａｔｔｔｃａｔｃｃｔｃｃａｇｇａａｇｔｃｃａｔｇｇｇｃｃａａｃｃｇｃｃｃａｃｔｃｃｃｃｇｃｃａｇｃｃｔｃｇｃａｃｃａａｃａｃｃａａｃｃｇｇｔｃｃａｇｔａｃａｔｇａｇｃｃａｇｔｃｇｇｇｔｃａｃｔｇａｃｃｃｃｇｇｃａｃｃａｇｔｃｃｃｔｃａｇｃｃａｃｔｇｇａｔｃｃａｇｃｇｃｃｃｇｃａｇｔｇａｃｔｃｃｃｇａｇｇｃｃａｇｔｃａｃｃｔｇｔｔｇｇａｇｇａｔｃｃｃｇａｔｇａａｇａｇａｃｇａｇｃｃａｇｇｃｔｇｔｃａａａｇｃｃｃｔｔｃｇｇｇａｇａｔｇｇｃｃｇａｔａｃｔｇｔｇａｔｔｃｃｃｃａｇａａｇｇａａｇａｇｇｃｔｇｃａａｔｃｔｇｔｇｇｃｃａａａｔｇｇａｃｃｔｔｔｃｃｃａｔｃｃｇｃｃｃｃｃａａｇｇｇｇｃｃａｔｃｔｇｇａｔｇａｇｃｔｇａｃａａｃｃａｃａｃｔｔｇａｇｔｃｃａｔｇａｃｃｇａｇｇａｔｃｔｇａａｃｃｔｇｇａｃｔｃａｃｃｃｃｔｇａｃｃｃｃｇｇａａｔｔｇａａｃｇａｇａｔｔｃｔｇｇａｔａｃｃｔｔｃｃｔｇａａｃｇａｃｇａｇｔｇｃｃｔｃｔｔｇｃａｔｇｃｃａｔｇｃａｔａｔｃａｇｃａｃａｇｇａｃｔｇｔｃｃａｔｃｔｔｃｇａｃａｃａｔｃｔｃｔｇｔｔｔ
配列番号１４８
ストレプトコッカス・ピオゲネスｄＣａｓ９－ＫＲＡＢをコードするポリヌクレオチド配列
ａｔｇｇａｃｔａｃａａａｇａｃｃａｔｇａｃｇｇｔｇａｔｔａｔａａａｇａｔｃａｔｇａｃａｔｃｇａｔｔａｃａａｇｇａｔｇａｃｇａｔｇａｃａａｇａｔｇｇｃｃｃｃｃａａｇａａｇａａｇａｇｇａａｇｇｔｇｇｇｃｃｇｃｇｇａａｔｇｇａｃａａｇａａｇｔａｃｔｃｃａｔｔｇｇｇｃｔｃｇｃｃａｔｃｇｇｃａｃａａａｃａｇｃｇｔｃｇｇｃｔｇｇｇｃｃｇｔｃａｔｔａｃｇｇａｃｇａｇｔａｃａａｇｇｔｇｃｃｇａｇｃａａａａａａｔｔｃａａａｇｔｔｃｔｇｇｇｃａａｔａｃｃｇａｔｃｇｃｃａｃａｇｃａｔａａａｇａａｇａａｃｃｔｃａｔｔｇｇｃｇｃｃｃｔｃｃｔｇｔｔｃｇａｃｔｃｃｇｇｇｇａａａｃｃｇｃｃｇａａｇｃｃａｃｇｃｇｇｃｔｃａａａａｇａａｃａｇｃａｃｇｇｃｇｃａｇａｔａｔａｃｃｃｇｃａｇａａａｇａａｔｃｇｇａｔｃｔｇｃｔａｃｃｔｇｃａｇｇａｇａｔｃｔｔｔａｇｔａａｔｇａｇａｔｇｇｃｔａａｇｇｔｇｇａｔｇａｃｔｃｔｔｔｃｔｔｃｃａｔａｇｇｃｔｇｇａｇｇａｇｔｃｃｔｔｔｔｔｇｇｔｇｇａｇｇａｇｇａｔａａａａａｇｃａｃｇａｇｃｇｃｃａｃｃｃａａｔｃｔｔｔｇｇｃａａｔａｔｃｇｔｇｇａｃｇａｇｇｔｇｇｃｇｔａｃｃａｔｇａａａａｇｔａｃｃｃａａｃｃａｔａｔａｔｃａｔｃｔｇａｇｇａａｇａａｇｃｔｔｇｔａｇａｃａｇｔａｃｔｇａｔａａｇｇｃｔｇａｃｔｔｇｃｇｇｔｔｇａｔｃｔａｔｃｔｃｇｃｇｃｔｇｇｃｇｃａｔａｔｇａｔｃａａａｔｔｔｃｇｇｇｇａｃａｃｔｔｃｃｔｃａｔｃｇａｇｇｇｇｇａｃｃｔｇａａｃｃｃａｇａｃａａｃａｇｃｇａｔｇｔｃｇａｃａａａｃｔｃｔｔｔａｔｃｃａａｃｔｇｇｔｔｃａｇａｃｔｔａｃａａｔｃａｇｃｔｔｔｔｃｇａａｇａｇａａｃｃｃｇａｔｃａａｃｇｃａｔｃｃｇｇａｇｔｔｇａｃｇｃｃａａａｇｃａａｔｃｃｔｇａｇｃｇｃｔａｇｇｃｔｇｔｃｃａａａｔｃｃｃｇｇｃｇｇｃｔｃｇａａａａｃｃｔｃａｔｃｇｃａｃａｇｃｔｃｃｃｔｇｇｇｇａｇａａｇａａｇａａｃｇｇｃｃｔｇｔｔｔｇｇｔａａｔｃｔｔａｔｃｇｃｃｃｔｇｔｃａｃｔｃｇｇｇｃｔｇａｃｃｃｃｃａａｃｔｔｔａａａｔｃｔａａｃｔｔｃｇａｃｃｔｇｇｃｃｇａａｇａｔｇｃｃａａｇｃｔｔｃａａｃｔｇａｇｃａａａｇａｃａｃｃｔａｃｇａｔｇａｔｇａｔｃｔｃｇａｃａａｔｃｔｇｃｔｇｇｃｃｃａｇａｔｃｇｇｃｇａｃｃａｇｔａｃｇｃａｇａｃｃｔｔｔｔｔｔｔｇｇｃｇｇｃａａａｇａａｃｃｔｇｔｃａｇａｃｇｃｃａｔｔｃｔｇｃｔｇａｇｔｇａｔａｔｔｃｔｇｃｇａｇｔｇａａｃａｃｇｇａｇａｔｃａｃｃａａａｇｃｔｃｃｇｃｔｇａｇｃｇｃｔａｇｔａｔｇａｔｃａａｇｃｇｃｔａｔｇａｔｇａｇｃａｃｃａｃｃａａｇａｃｔｔｇａｃｔｔｔｇｃｔｇａａｇｇｃｃｃｔｔｇｔｃａｇａｃａｇｃａａｃｔｇｃｃｔｇａｇａａｇｔａｃａａｇｇａａａｔｔｔｔｃｔｔｃｇａｔｃａｇｔｃｔａａａａａｔｇｇｃｔａｃｇｃｃｇｇａｔａｃａｔｔｇａｃｇｇｃｇｇａｇｃａａｇｃｃａｇｇａｇｇａａｔｔｔｔａｃａａａｔｔｔａｔｔａａｇｃｃｃａｔｃｔｔｇｇａａａａａａｔｇｇａｃｇｇｃａｃｃｇａｇｇａｇｃｔｇｃｔｇｇｔａａａｇｃｔｔａａｃａｇａｇａａｇａｔｃｔｇｔｔｇｃｇｃａａａｃａｇｃｇｃａｃｔｔｔｃｇａｃａａｔｇｇａａｇｃａｔｃｃｃｃｃａｃｃａｇａｔｔｃａｃｃｔｇｇｇｃｇａａｃｔｇｃａｃｇｃｔａｔｃｃｔｃａｇｇｃｇｇｃａａｇａｇｇａｔｔｔｃｔａｃｃｃｃｔｔｔｔｔｇａａａｇａｔａａｃａｇｇｇａａａａｇａｔｔｇａｇａａａａｔｃｃｔｃａｃａｔｔｔｃｇｇａｔａｃｃｃｔａｃｔａｔｇｔａｇｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｃｃｇｇｇｇａａａｔｔｃｃａｇａｔｔｃｇｃｇｔｇｇａｔｇａｃｔｃｇｃａａａｔｃａｇａａｇａｇａｃｃａｔｃａｃｔｃｃｃｔｇｇａａｃｔｔｃｇａｇｇａａｇｔｃｇｔｇｇａｔａａｇｇｇｇｇｃｃｔｃｔｇｃｃｃａｇｔｃｃｔｔｃａｔｃｇａａａｇｇａｔｇａｃｔａａｃｔｔｔｇａｔａａａａａｔｃｔｇｃｃｔａａｃｇａａａａｇｇｔｇｃｔｔｃｃｔａａａｃａｃｔｃｔｃｔｇｃｔｇｔａｃｇａｇｔａｃｔｔｃａｃａｇｔｔｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａｃｃａａｇｇｔｃａａａｔａｃｇｔｃａｃａｇａａｇｇｇａｔｇａｇａａａｇｃｃａｇｃａｔｔｃｃｔｇｔｃｔｇｇａｇａｇｃａｇａａｇａａａｇｃｔａｔｃｇｔｇｇａｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃａａｇａｃｇａａｃｃｇｇａａａｇｔｔａｃｃｇｔｇａａａｃａｇｃｔｃａａａｇａａｇａｃｔａｔｔｔｃａａａａａｇａｔｔｇａａｔｇｔｔｔｃｇａｃｔｃｔｇｔｔｇａａａｔｃａｇｃｇｇａｇｔｇｇａｇｇａｔｃｇｃｔｔｃａａｃｇｃａｔｃｃｃｔｇｇｇａａｃｇｔａｔｃａｃｇａｔｃｔｃｃｔｇａａａａｔｃａｔｔａａａｇａｃａａｇｇａｃｔｔｃｃｔｇｇａｃａａｔｇａｇｇａｇａａｃｇａｇｇａｃａｔｔｃｔｔｇａｇｇａｃａｔｔｇｔｃｃｔｃａｃｃｃｔｔａｃｇｔｔｇｔｔｔｇａａｇａｔａｇｇｇａｇａｔｇａｔｔｇａａｇａａｃｇｃｔｔｇａａａａｃｔｔａｃｇｃｔｃａｔｃｔｃｔｔｃｇａｃｇａｃａａａｇｔｃａｔｇａａａｃａｇｃｔｃａａｇａｇｇｃｇｃｃｇａｔａｔａｃａｇｇａｔｇｇｇｇｇｃｇｇｃｔｇｔｃａａｇａａａａｃｔｇａｔｃａａｔｇｇｇａｔｃｃｇａｇａｃａａｇｃａｇａｇｔｇｇａａａｇａｃａａｔｃｃｔｇｇａｔｔｔｔｃｔｔａａｇｔｃｃｇａｔｇｇａｔｔｔｇｃｃａａｃｃｇｇａａｃｔｔｃａｔｇｃａｇｔｔｇａｔｃｃａｔｇａｔｇａｃｔｃｔｃｔｃａｃｃｔｔｔａａｇｇａｇｇａｃａｔｃｃａｇａａａｇｃａｃａａｇｔｔｔｃｔｇｇｃｃａｇｇｇｇｇａｃａｇｔｃｔｔｃａｃｇａｇｃａｃａｔｃｇｃｔａａｔｃｔｔｇｃａｇｇｔａｇｃｃｃａｇｃｔａｔｃａａａａａｇｇｇａａｔａｃｔｇｃａｇａｃｃｇｔｔａａｇｇｔｃｇｔｇｇａｔｇａａｃｔｃｇｔｃａａａｇｔａａｔｇｇｇａａｇｇｃａｔａａｇｃｃｃｇａｇａａｔａｔｃｇｔｔａｔｃｇａｇａｔｇｇｃｃｃｇａｇａｇａａｃｃａａａｃｔａｃｃｃａｇａａｇｇｇａｃａｇａａｇａａｃａｇｔａｇｇｇａａａｇｇａｔｇａａｇａｇｇａｔｔｇａａｇａｇｇｇｔａｔａａａａｇａａｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａａａｔｃｃｔｔａａｇｇａａｃａｃｃｃａｇｔｔｇａａａａｃａｃｃｃａｇｃｔｔｃａｇａａｔｇａｇａａｇｃｔｃｔａｃｃｔｇｔａｃｔａｃｃｔｇｃａｇａａｃｇｇｃａｇｇｇａｃａｔｇｔａｃｇｔｇｇａｔｃａｇｇａａｃｔｇｇａｃａｔｃａａｔｃｇｇｃｔｃｔｃｃｇａｃｔａｃｇａｃｇｔｇｇａｔｇｃｃａｔｃｇｔｇｃｃｃｃａｇｔｃｔｔｔｔｃｔｃａａａｇａｔｇａｔｔｃｔａｔｔｇａｔａａｔａａａｇｔｇｔｔｇａｃａａｇａｔｃｃｇａｔａａａａａｔａｇａｇｇｇａａｇａｇｔｇａｔａａｃｇｔｃｃｃｃｔｃａｇａａｇａａｇｔｔｇｔｃａａｇａａａａｔｇａａａａａｔｔａｔｔｇｇｃｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｃｇｃｃａａａｃｔｇａｔｃａｃａｃａａｃｇｇａａｇｔｔｃｇａｔａａｔｃｔｇａｃｔａａｇｇｃｔｇａａｃｇａｇｇｔｇｇｃｃｔｇｔｃｔｇａｇｔｔｇｇａｔａａａｇｃｃｇｇｃｔｔｃａｔｃａａａａｇｇｃａｇｃｔｔｇｔｔｇａｇａｃａｃｇｃｃａｇａｔｃａｃｃａａｇｃａｃｇｔｇｇｃｃｃａａａｔｔｃｔｃｇａｔｔｃａｃｇｃａｔｇａａｃａｃｃａａｇｔａｃｇａｔｇａａａａｔｇａｃａａａｃｔｇａｔｔｃｇａｇａｇｇｔｇａａａｇｔｔａｔｔａｃｔｃｔｇａａｇｔｃｔａａｇｃｔｇｇｔｃｔｃａｇａｔｔｔｃａｇａａａｇｇａｃｔｔｔｃａｇｔｔｔｔａｔａａｇｇｔｇａｇａｇａｇａｔｃａａｃａａｔｔａｃｃａｃｃａｔｇｃｇｃａｔｇａｔｇｃｃｔａｃｃｔｇａａｔｇｃａｇｔｇｇｔａｇｇｃａｃｔｇｃａｃｔｔａｔｃａａａａａａｔａｔｃｃｃａａｇｃｔｔｇａａｔｃｔｇａａｔｔｔｇｔｔｔａｃｇｇａｇａｃｔａｔａａａｇｔｇｔａｃｇａｔｇｔｔａｇｇａａａａｔｇａｔｃｇｃａａａｇｔｃｔｇａｇｃａｇｇａａａｔａｇｇｃａａｇｇｃｃａｃｃｇｃｔａａｇｔａｃｔｔｃｔｔｔｔａｃａｇｃａａｔａｔｔａｔｇａａｔｔｔｔｔｔｃａａｇａｃｃｇａｇａｔｔａｃａｃｔｇｇｃｃａａｔｇｇａｇａｇａｔｔｃｇｇａａｇｃｇａｃｃａｃｔｔａｔｃｇａａａｃａａａｃｇｇａｇａａａｃａｇｇａｇａａａｔｃｇｔｇｔｇｇｇａｃａａｇｇｇｔａｇｇｇａｔｔｔｃｇｃｇａｃａｇｔｃｃｇｇａａｇｇｔｃｃｔｇｔｃｃａｔｇｃｃｇｃａｇｇｔｇａａｃａｔｃｇｔｔａａａａａｇａｃｃｇａａｇｔａｃａｇａｃｃｇｇａｇｇｃｔｔｃｔｃｃａａｇｇａａａｇｔａｔｃｃｔｃｃｃｇａａａａｇｇａａｃａｇｃｇａｃａａｇｃｔｇａｔｃｇｃａｃｇｃａａａａａａｇａｔｔｇｇｇａｃｃｃｃａａｇａａａｔａｃｇｇｃｇｇａｔｔｃｇａｔｔｃｔｃｃｔａｃａｇｔｃｇｃｔｔａｃａｇｔｇｔａｃｔｇｇｔｔｇｔｇｇｃｃａａａｇｔｇｇａｇａａａｇｇｇａａｇｔｃｔａａａａａａｃｔｃａａａａｇｃｇｔｃａａｇｇａａｃｔｇｃｔｇｇｇｃａｔｃａｃａａｔｃａｔｇｇａｇｃｇａｔｃａａｇｃｔｔｃｇａａａａａａａｃｃｃｃａｔｃｇａｃｔｔｔｃｔｃｇａｇｇｃｇａａａｇｇａｔａｔａａａｇａｇｇｔｃａａａａａａｇａｃｃｔｃａｔｃａｔｔａａｇｃｔｔｃｃｃａａｇｔａｃｔｃｔｃｔｃｔｔｔｇａｇｃｔｔｇａａａａｃｇｇｃｃｇｇａａａｃｇａａｔｇｃｔｃｇｃｔａｇｔｇｃｇｇｇｃｇａｇｃｔｇｃａｇａａａｇｇｔａａｃｇａｇｃｔｇｇｃａｃｔｇｃｃｃｔｃｔａａａｔａｃｇｔｔａａｔｔｔｃｔｔｇｔａｔｃｔｇｇｃｃａｇｃｃａｃｔａｔｇａａａａｇｃｔｃａａａｇｇｇｔｃｔｃｃｃｇａａｇａｔａａｔｇａｇｃａｇａａｇｃａｇｃｔｇｔｔｃｇｔｇｇａａｃａａｃａｃａａａｃａｃｔａｃｃｔｔｇａｔｇａｇａｔｃａｔｃｇａｇｃａａａｔａａｇｃｇａａｔｔｃｔｃｃａａａａｇａｇｔｇａｔｃｃｔｃｇｃｃｇａｃｇｃｔａａｃｃｔｃｇａｔａａｇｇｔｇｃｔｔｔｃｔｇｃｔｔａｃａａｔａａｇｃａｃａｇｇｇａｔａａｇｃｃｃａｔｃａｇｇｇａｇｃａｇｇｃａｇａａａａｃａｔｔａｔｃｃａｃｔｔｇｔｔｔａｃｔｃｔｇａｃｃａａｃｔｔｇｇｇｃｇｃｇｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｔｃａａｇｔａｃｔｔｃｇａｃａｃｃａｃｃａｔａｇａｃａｇａａａｇｃｇｇｔａｃａｃｃｔｃｔａｃａａａｇｇａｇｇｔｃｃｔｇｇａｃｇｃｃａｃａｃｔｇａｔｔｃａｔｃａｇｔｃａａｔｔａｃｇｇｇｇｃｔｃｔａｔｇａａａｃａａｇａａｔｃｇａｃｃｔｃｔｃｔｃａｇｃｔｃｇｇｔｇｇａｇａｃａｇｃａｇｇｇｃｔｇａｃｃｃｃａａｇａａｇａａｇａｇｇａａｇｇｔｇｇｃｔａｇｃｇａｔｇｃｔａａｇｔｃａｃｔｇａｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃｃｃｇｇａｃａｃｔｇｇｔｇａｃｃｔｔｃａａｇｇａｔｇｔｇｔｔｔｇｔｇｇａｃｔｔｃａｃｃａｇｇｇａｇｇａｇｔｇｇａａｇｃｔｇｃｔｇｇａｃａｃｔｇｃｔｃａｇｃａｇａｔｃｃｔｇｔａｃａｇａａａｔｇｔｇａｔｇｃｔｇｇａｇａａｃｔａｔａａｇａａｃｃｔｇｇｔｔｔｃｃｔｔｇｇｇｔｔａｔｃａｇｃｔｔａｃｔａａｇｃｃａｇａｔｇｔｇａｔｃｃｔｃｃｇｇｔｔｇｇａｇａａｇｇｇａｇａａｇａｇｃｃｃｔｇｇｃｔｇｇｔｇｇａｇａｇａｇａａａｔｔｃａｃｃａａｇａｇａｃｃｃａｔｃｃｔｇａｔｔｃａｇａｇａｃｔｇｃａｔｔｔｇａａａｔｃａａａｔｃａｔｃａｇｔｔｃｃｇａａａａａｇａａａｃｇｃａａａｇｔｔｔｇａ
配列番号１４９
ストレプトコッカス・ピオゲネスｄＣａｓ９－ＫＲＡＢタンパク質のポリペプチド配列
ＭＤＹＫＤＨＤＧＤＹＫＤＨＤＩＤＹＫＤＤＤＤＫＭＡＰＫＫＫＲＫＶＧＲＧＭＤＫＫＹＳＩＧＬＡＩＧＴＮＳＶＧＷＡＶＩＴＤＥＹＫＶＰＳＫＫＦＫＶＬＧＮＴＤＲＨＳＩＫＫＮＬＩＧＡＬＬＦＤＳＧＥＴＡＥＡＴＲＬＫＲＴＡＲＲＲＹＴＲＲＫＮＲＩＣＹＬＱＥＩＦＳＮＥＭＡＫＶＤＤＳＦＦＨＲＬＥＥＳＦＬＶＥＥＤＫＫＨＥＲＨＰＩＦＧＮＩＶＤＥＶＡＹＨＥＫＹＰＴＩＹＨＬＲＫＫＬＶＤＳＴＤＫＡＤＬＲＬＩＹＬＡＬＡＨＭＩＫＦＲＧＨＦＬＩＥＧＤＬＮＰＤＮＳＤＶＤＫＬＦＩＱＬＶＱＴＹＮＱＬＦＥＥＮＰＩＮＡＳＧＶＤＡＫＡＩＬＳＡＲＬＳＫＳＲＲＬＥＮＬＩＡＱＬＰＧＥＫＫＮＧＬＦＧＮＬＩＡＬＳＬＧＬＴＰＮＦＫＳＮＦＤＬＡＥＤＡＫＬＱＬＳＫＤＴＹＤＤＤＬＤＮＬＬＡＱＩＧＤＱＹＡＤＬＦＬＡＡＫＮＬＳＤＡＩＬＬＳＤＩＬＲＶＮＴＥＩＴＫＡＰＬＳＡＳＭＩＫＲＹＤＥＨＨＱＤＬＴＬＬＫＡＬＶＲＱＱＬＰＥＫＹＫＥＩＦＦＤＱＳＫＮＧＹＡＧＹＩＤＧＧＡＳＱＥＥＦＹＫＦＩＫＰＩＬＥＫＭＤＧＴＥＥＬＬＶＫＬＮＲＥＤＬＬＲＫＱＲＴＦＤＮＧＳＩＰＨＱＩＨＬＧＥＬＨＡＩＬＲＲＱＥＤＦＹＰＦＬＫＤＮＲＥＫＩＥＫＩＬＴＦＲＩＰＹＹＶＧＰＬＡＲＧＮＳＲＦＡＷＭＴＲＫＳＥＥＴＩＴＰＷＮＦＥＥＶＶＤＫＧＡＳＡＱＳＦＩＥＲＭＴＮＦＤＫＮＬＰＮＥＫＶＬＰＫＨＳＬＬＹＥＹＦＴＶＹＮＥＬＴＫＶＫＹＶＴＥＧＭＲＫＰＡＦＬＳＧＥＱＫＫＡＩＶＤＬＬＦＫＴＮＲＫＶＴＶＫＱＬＫＥＤＹＦＫＫＩＥＣＦＤＳＶＥＩＳＧＶＥＤＲＦＮＡＳＬＧＴＹＨＤＬＬＫＩＩＫＤＫＤＦＬＤＮＥＥＮＥＤＩＬＥＤＩＶＬＴＬＴＬＦＥＤＲＥＭＩＥＥＲＬＫＴＹＡＨＬＦＤＤＫＶＭＫＱＬＫＲＲＲＹＴＧＷＧＲＬＳＲＫＬＩＮＧＩＲＤＫＱＳＧＫＴＩＬＤＦＬＫＳＤＧＦＡＮＲＮＦＭＱＬＩＨＤＤＳＬＴＦＫＥＤＩＱＫＡＱＶＳＧＱＧＤＳＬＨＥＨＩＡＮＬＡＧＳＰＡＩＫＫＧＩＬＱＴＶＫＶＶＤＥＬＶＫＶＭＧＲＨＫＰＥＮＩＶＩＥＭＡＲＥＮＱＴＴＱＫＧＱＫＮＳＲＥＲＭＫＲＩＥＥＧＩＫＥＬＧＳＱＩＬＫＥＨＰＶＥＮＴＱＬＱＮＥＫＬＹＬＹＹＬＱＮＧＲＤＭＹＶＤＱＥＬＤＩＮＲＬＳＤＹＤＶＤＡＩＶＰＱＳＦＬＫＤＤＳＩＤＮＫＶＬＴＲＳＤＫＮＲＧＫＳＤＮＶＰＳＥＥＶＶＫＫＭＫＮＹＷＲＱＬＬＮＡＫＬＩＴＱＲＫＦＤＮＬＴＫＡＥＲＧＧＬＳＥＬＤＫＡＧＦＩＫＲＱＬＶＥＴＲＱＩＴＫＨＶＡＱＩＬＤＳＲＭＮＴＫＹＤＥＮＤＫＬＩＲＥＶＫＶＩＴＬＫＳＫＬＶＳＤＦＲＫＤＦＱＦＹＫＶＲＥＩＮＮＹＨＨＡＨＤＡＹＬＮＡＶＶＧＴＡＬＩＫＫＹＰＫＬＥＳＥＦＶＹＧＤＹＫＶＹＤＶＲＫＭＩＡＫＳＥＱＥＩＧＫＡＴＡＫＹＦＦＹＳＮＩＭＮＦＦＫＴＥＩＴＬＡＮＧＥＩＲＫＲＰＬＩＥＴＮＧＥＴＧＥＩＶＷＤＫＧＲＤＦＡＴＶＲＫＶＬＳＭＰＱＶＮＩＶＫＫＴＥＶＱＴＧＧＦＳＫＥＳＩＬＰＫＲＮＳＤＫＬＩＡＲＫＫＤＷＤＰＫＫＹＧＧＦＤＳＰＴＶＡＹＳＶＬＶＶＡＫＶＥＫＧＫＳＫＫＬＫＳＶＫＥＬＬＧＩＴＩＭＥＲＳＳＦＥＫＮＰＩＤＦＬＥＡＫＧＹＫＥＶＫＫＤＬＩＩＫＬＰＫＹＳＬＦＥＬＥＮＧＲＫＲＭＬＡＳＡＧＥＬＱＫＧＮＥＬＡＬＰＳＫＹＶＮＦＬＹＬＡＳＨＹＥＫＬＫＧＳＰＥＤＮＥＱＫＱＬＦＶＥＱＨＫＨＹＬＤＥＩＩＥＱＩＳＥＦＳＫＲＶＩＬＡＤＡＮＬＤＫＶＬＳＡＹＮＫＨＲＤＫＰＩＲＥＱＡＥＮＩＩＨＬＦＴＬＴＮＬＧＡＰＡＡＦＫＹＦＤＴＴＩＤＲＫＲＹＴＳＴＫＥＶＬＤＡＴＬＩＨＱＳＩＴＧＬＹＥＴＲＩＤＬＳＱＬＧＧＤＳＲＡＤＰＫＫＫＲＫＶＡＳＤＡＫＳＬＴＡＷＳＲＴＬＶＴＦＫＤＶＦＶＤＦＴＲＥＥＷＫＬＬＤＴＡＱＱＩＬＹＲＮＶＭＬＥＮＹＫＮＬＶＳＬＧＹＱＬＴＫＰＤＶＩＬＲＬＥＫＧＥＥＰＷＬＶＥＲＥＩＨＱＥＴＨＰＤＳＥＴＡＦＥＩＫＳＳＶＰＫＫＫＲＫＶ
配列番号１５０
スタフィロコッカス・アウレウスｄＣａｓ９－ＫＲＡＢタンパク質のポリヌクレオチド配列
ａｔｇｇｃｃｃｃａａａｇａａｇａａｇｃｇｇａａｇｇｔｃｇｇｔａｔｃｃａｃｇｇａｇｔｃｃｃａｇｃａｇｃｃａａｇｃｇｇａａｃｔａｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｃｔｇｇｃｃａｔｃｇｇｃａｔｃａｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｔａｃｇｇｃａｔｃａｔｃｇａｃｔａｃｇａｇａｃａｃｇｇｇａｃｇｔｇａｔｃｇａｔｇｃｃｇｇｃｇｔｇｃｇｇｃｔｇｔｔｃａａａｇａｇｇｃｃａａｃｇｔｇｇａａａａｃａａｃｇａｇｇｇｃａｇｇｃｇｇａｇｃａａｇａｇａｇｇｃｇｃｃａｇａａｇｇｃｔｇａａｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇｃａｔａｇａａｔｃｃａｇａｇａｇｔｇａａｇａａｇｃｔｇｃｔｇｔｔｃｇａｃｔａｃａａｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｃｃａｃａｇｃｇａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃａｔｃａａｃｃｃｃｔａｃｇａｇｇｃｃａｇａｇｔｇａａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｃａｇａａｇｃｔｇａｇｃｇａｇｇａａｇａｇｔｔｃｔｃｔｇｃｃｇｃｃｃｔｇｃｔｇｃａｃｃｔｇｇｃｃａａｇａｇａａｇａｇｇｃｇｔｇｃａｃａａｃｇｔｇａａｃｇａｇｇｔｇｇａａｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃａａｃｇａｇｃｔｇｔｃｃａｃｃａａａｇａｇｃａｇａｔｃａｇｃｃｇｇａａｃａｇｃａａｇｇｃｃｃｔｇｇａａｇａｇａａａｔａｃｇｔｇｇｃｃｇａａｃｔｇｃａｇｃｔｇｇａａｃｇｇｃｔｇａａｇａａａｇａｃｇｇｃｇａａｇｔｇｃｇｇｇｇｃａｇｃａｔｃａａｃａｇａｔｔｃａａｇａｃｃａｇｃｇａｃｔａｃｇｔｇａａａｇａａｇｃｃａａａｃａｇｃｔｇｃｔｇａａｇｇｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｔａｃｃａｃｃａｇｃｔｇｇａｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｔｃｇａｃａｃｃｔａｃａｔｃｇａｃｃｔｇｃｔｇｇａａａｃｃｃｇｇｃｇｇａｃｃｔａｃｔａｔｇａｇｇｇａｃｃｔｇｇｃｇａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｔｔｃｇｇｃｔｇｇａａｇｇａｃａｔｃａａａｇａａｔｇｇｔａｃｇａｇａｔｇｃｔｇａｔｇｇｇｃｃａｃｔｇｃａｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａｇｇａａｃｔｇｃｇｇａｇｃｇｔｇａａｇｔａｃｇｃｃｔａｃａａｃｇｃｃｇａｃｃｔｇｔａｃａａｃｇｃｃｃｔｇａａｃｇａｃｃｔｇａａｃａａｔｃｔｃｇｔｇａｔｃａｃｃａｇｇｇａｃｇａｇａａｃｇａｇａａｇｃｔｇｇａａｔａｔｔａｃｇａｇａａｇｔｔｃｃａｇａｔｃａｔｃｇａｇａａｃｇｔｇｔｔｃａａｇｃａｇａａｇａａｇａａｇｃｃｃａｃｃｃｔｇａａｇｃａｇａｔｃｇｃｃａａａｇａａａｔｃｃｔｃｇｔｇａａｃｇａａｇａｇｇａｔａｔｔａａｇｇｇｃｔａｃａｇａｇｔｇａｃｃａｇｃａｃｃｇｇｃａａｇｃｃｃｇａｇｔｔｃａｃｃａａｃｃｔｇａａｇｇｔｇｔａｃｃａｃｇａｃａｔｃａａｇｇａｃａｔｔａｃｃｇｃｃｃｇｇａａａｇａｇａｔｔａｔｔｇａｇａａｃｇｃｃｇａｇｃｔｇｃｔｇｇａｔｃａｇａｔｔｇｃｃａａｇａｔｃｃｔｇａｃｃａｔｃｔａｃｃａｇａｇｃａｇｃｇａｇｇａｃａｔｃｃａｇｇａａｇａａｃｔｇａｃｃａａｔｃｔｇａａｃｔｃｃｇａｇｃｔｇａｃｃｃａｇｇａａｇａｇａｔｃｇａｇｃａｇａｔｃｔｃｔａａｔｃｔｇａａｇｇｇｃｔａｔａｃｃｇｇｃａｃｃｃａｃａａｃｃｔｇａｇｃｃｔｇａａｇｇｃｃａｔｃａａｃｃｔｇａｔｃｃｔｇｇａｃｇａｇｃｔｇｔｇｇｃａｃａｃｃａａｃｇａｃａａｃｃａｇａｔｃｇｃｔａｔｃｔｔｃａａｃｃｇｇｃｔｇａａｇｃｔｇｇｔｇｃｃｃａａｇａａｇｇｔｇｇａｃｃｔｇｔｃｃｃａｇｃａｇａａａｇａｇａｔｃｃｃｃａｃｃａｃｃｃｔｇｇｔｇｇａｃｇａｃｔｔｃａｔｃｃｔｇａｇｃｃｃｃｇｔｃｇｔｇａａｇａｇａａｇｃｔｔｃａｔｃｃａｇａｇｃａｔｃａａａｇｔｇａｔｃａａｃｇｃｃａｔｃａｔｃａａｇａａｇｔａｃｇｇｃｃｔｇｃｃｃａａｃｇａｃａｔｃａｔｔａｔｃｇａｇｃｔｇｇｃｃｃｇｃｇａｇａａｇａａｃｔｃｃａａｇｇａｃｇｃｃｃａｇａａａａｔｇａｔｃａａｃｇａｇａｔｇｃａｇａａｇｃｇｇａａｃｃｇｇｃａｇａｃｃａａｃｇａｇｃｇｇａｔｃｇａｇｇａａａｔｃａｔｃｃｇｇａｃｃａｃｃｇｇｃａａａｇａｇａａｃｇｃｃａａｇｔａｃｃｔｇａｔｃｇａｇａａｇａｔｃａａｇｃｔｇｃａｃｇａｃａｔｇｃａｇｇａａｇｇｃａａｇｔｇｃｃｔｇｔａｃａｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｔｃｃｃｔｃｔｇｇａａｇａｔｃｔｇｃｔｇａａｃａａｃｃｃｃｔｔｃａａｃｔａｔｇａｇｇｔｇｇａｃｃａｃａｔｃａｔｃｃｃｃａｇａａｇｃｇｔｇｔｃｃｔｔｃｇａｃａａｃａｇｃｔｔｃａａｃａａｃａａｇｇｔｇｃｔｃｇｔｇａａｇｃａｇｇａａｇａａｇｃｃａｇｃａａｇａａｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｃｃｃｃａｔｔｃｃａｇｔａｃｃｔｇａｇｃａｇｃａｇｃｇａｃａｇｃａａｇａｔｃａｇｃｔａｃｇａａａｃｃｔｔｃａａｇａａｇｃａｃａｔｃｃｔｇａａｔｃｔｇｇｃｃａａｇｇｇｃａａｇｇｇｃａｇａａｔｃａｇｃａａｇａｃｃａａｇａａａｇａｇｔａｔｃｔｇｃｔｇｇａａｇａａｃｇｇｇａｃａｔｃａａｃａｇｇｔｔｃｔｃｃｇｔｇｃａｇａａａｇａｃｔｔｃａｔｃａａｃｃｇｇａａｃｃｔｇｇｔｇｇａｔａｃｃａｇａｔａｃｇｃｃａｃｃａｇａｇｇｃｃｔｇａｔｇａａｃｃｔｇｃｔｇｃｇｇａｇｃｔａｃｔｔｃａｇａｇｔｇａａｃａａｃｃｔｇｇａｃｇｔｇａａａｇｔｇａａｇｔｃｃａｔｃａａｔｇｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃａｇｃｔｔｔｃｔｇｃｇｇｃｇｇａａｇｔｇｇａａｇｔｔｔａａｇａａａｇａｇｃｇｇａａｃａａｇｇｇｇｔａｃａａｇｃａｃｃａｃｇｃｃｇａｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａｔｃａｔｔｇｃｃａａｃｇｃｃｇａｔｔｔｃａｔｃｔｔｃａａａｇａｇｔｇｇａａｇａａａｃｔｇｇａｃａａｇｇｃｃａａａａａａｇｔｇａｔｇｇａａａａｃｃａｇａｔｇｔｔｃｇａｇｇａａａａｇｃａｇｇｃｃｇａｇａｇｃａｔｇｃｃｃｇａｇａｔｃｇａａａｃｃｇａｇｃａｇｇａｇｔａｃａａａｇａｇａｔｃｔｔｃａｔｃａｃｃｃｃｃｃａｃｃａｇａｔｃａａｇｃａｃａｔｔａａｇｇａｃｔｔｃａａｇｇａｃｔａｃａａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｇｇｇｔｇｇａｃａａｇａａｇｃｃｔａａｔａｇａｇａｇｃｔｇａｔｔａａｃｇａｃａｃｃｃｔｇｔａｃｔｃｃａｃｃｃｇｇａａｇｇａｃｇａｃａａｇｇｇｃａａｃａｃｃｃｔｇａｔｃｇｔｇａａｃａａｔｃｔｇａａｃｇｇｃｃｔｇｔａｃｇａｃａａｇｇａｃａａｔｇａｃａａｇｃｔｇａａａａａｇｃｔｇａｔｃａａｃａａｇａｇｃｃｃｃｇａａａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｔａｃｃａｃｃａｃｇａｃｃｃｃｃａｇａｃｃｔａｃｃａｇａａａｃｔｇａａｇｃｔｇａｔｔａｔｇｇａａｃａｇｔａｃｇｇｃｇａｃｇａｇａａｇａａｔｃｃｃｃｔｇｔａｃａａｇｔａｃｔａｃｇａｇｇａａａｃｃｇｇｇａａｃｔａｃｃｔｇａｃｃａａｇｔａｃｔｃｃａａａａａｇｇａｃａａｃｇｇｃｃｃｃｇｔｇａｔｃａａｇａａｇａｔｔａａｇｔａｔｔａｃｇｇｃａａｃａａａｃｔｇａａｃｇｃｃｃａｔｃｔｇｇａｃａｔｃａｃｃｇａｃｇａｃｔａｃｃｃｃａａｃａｇｃａｇａａａｃａａｇｇｔｃｇｔｇａａｇｃｔｇｔｃｃｃｔｇａａｇｃｃｃｔａｃａｇａｔｔｃｇａｃｇｔｇｔａｃｃｔｇｇａｃａａｔｇｇｃｇｔｇｔａｃａａｇｔｔｃｇｔｇａｃｃｇｔｇａａｇａａｔｃｔｇｇａｔｇｔｇａｔｃａａａａａａｇａａａａｃｔａｃｔａｃｇａａｇｔｇａａｔａｇｃａａｇｔｇｃｔａｔｇａｇｇａａｇｃｔａａｇａａｇｃｔｇａａｇａａｇａｔｃａｇｃａａｃｃａｇｇｃｃｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔａｃａａｃａａｃｇａｔｃｔｇａｔｃａａｇａｔｃａａｃｇｇｃｇａｇｃｔｇｔａｔａｇａｇｔｇａｔｃｇｇｃｇｔｇａａｃａａｃｇａｃｃｔｇｃｔｇａａｃｃｇｇａｔｃｇａａｇｔｇａａｃａｔｇａｔｃｇａｃａｔｃａｃｃｔａｃｃｇｃｇａｇｔａｃｃｔｇｇａａａａｃａｔｇａａｃｇａｃａａｇａｇｇｃｃｃｃｃｃａｇｇａｔｃａｔｔａａｇａｃａａｔｃｇｃｃｔｃｃａａｇａｃｃｃａｇａｇｃａｔｔａａｇａａｇｔａｃａｇｃａｃａｇａｃａｔｔｃｔｇｇｇｃａａｃｃｔｇｔａｔｇａａｇｔｇａａａｔｃｔａａｇａａｇｃａｃｃｃｔｃａｇａｔｃａｔｃａａａａａｇｇｇｃａａａａｇｇｃｃｇｇｃｇｇｃｃａｃｇａａａａａｇｇｃｃｇｇｃｃａｇｇｃａａａａａａｇａａａａａｇｇｇａｔｃｃｇａｔｇｃｔａａｇｔｃａｃｔｇａｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃｃｃｇｇａｃａｃｔｇｇｔｇａｃｃｔｔｃａａｇｇａｔｇｔｇｔｔｔｇｔｇｇａｃｔｔｃａｃｃａｇｇｇａｇｇａｇｔｇｇａａｇｃｔｇｃｔｇｇａｃａｃｔｇｃｔｃａｇｃａｇａｔｃｃｔｇｔａｃａｇａａａｔｇｔｇａｔｇｃｔｇｇａｇａａｃｔａｔａａｇａａｃｃｔｇｇｔｔｔｃｃｔｔｇｇｇｔｔａｔｃａｇｃｔｔａｃｔａａｇｃｃａｇａｔｇｔｇａｔｃｃｔｃｃｇｇｔｔｇｇａｇａａｇｇｇａｇａａｇａｇｃｃｃｔｇｇｃｔｇｇｔｇｇａｇａｇａｇａａａｔｔｃａｃｃａａｇａｇａｃｃｃａｔｃｃｔｇａｔｔｃａｇａｇａｃｔｇｃａｔｔｔｇａａａｔｃａａａｔｃａｔｃａｇｔｔｃｃｇａａａａａｇａａａｃｇｃａａａｇｔｔ
配列番号１５１
スタフィロコッカス・アウレウスｄＣａｓ９－ＫＲＡＢタンパク質のポリペプチド配列
ＭＡＰＫＫＫＲＫＶＧＩＨＧＶＰＡＡＫＲＮＹＩＬＧＬＡＩＧＩＴＳＶＧＹＧＩＩＤＹＥＴＲＤＶＩＤＡＧＶＲＬＦＫＥＡＮＶＥＮＮＥＧＲＲＳＫＲＧＡＲＲＬＫＲＲＲＲＨＲＩＱＲＶＫＫＬＬＦＤＹＮＬＬＴＤＨＳＥＬＳＧＩＮＰＹＥＡＲＶＫＧＬＳＱＫＬＳＥＥＥＦＳＡＡＬＬＨＬＡＫＲＲＧＶＨＮＶＮＥＶＥＥＤＴＧＮＥＬＳＴＫＥＱＩＳＲＮＳＫＡＬＥＥＫＹＶＡＥＬＱＬＥＲＬＫＫＤＧＥＶＲＧＳＩＮＲＦＫＴＳＤＹＶＫＥＡＫＱＬＬＫＶＱＫＡＹＨＱＬＤＱＳＦＩＤＴＹＩＤＬＬＥＴＲＲＴＹＹＥＧＰＧＥＧＳＰＦＧＷＫＤＩＫＥＷＹＥＭＬＭＧＨＣＴＹＦＰＥＥＬＲＳＶＫＹＡＹＮＡＤＬＹＮＡＬＮＤＬＮＮＬＶＩＴＲＤＥＮＥＫＬＥＹＹＥＫＦＱＩＩＥＮＶＦＫＱＫＫＫＰＴＬＫＱＩＡＫＥＩＬＶＮＥＥＤＩＫＧＹＲＶＴＳＴＧＫＰＥＦＴＮＬＫＶＹＨＤＩＫＤＩＴＡＲＫＥＩＩＥＮＡＥＬＬＤＱＩＡＫＩＬＴＩＹＱＳＳＥＤＩＱＥＥＬＴＮＬＮＳＥＬＴＱＥＥＩＥＱＩＳＮＬＫＧＹＴＧＴＨＮＬＳＬＫＡＩＮＬＩＬＤＥＬＷＨＴＮＤＮＱＩＡＩＦＮＲＬＫＬＶＰＫＫＶＤＬＳＱＱＫＥＩＰＴＴＬＶＤＤＦＩＬＳＰＶＶＫＲＳＦＩＱＳＩＫＶＩＮＡＩＩＫＫＹＧＬＰＮＤＩＩＩＥＬＡＲＥＫＮＳＫＤＡＱＫＭＩＮＥＭＱＫＲＮＲＱＴＮＥＲＩＥＥＩＩＲＴＴＧＫＥＮＡＫＹＬＩＥＫＩＫＬＨＤＭＱＥＧＫＣＬＹＳＬＥＡＩＰＬＥＤＬＬＮＮＰＦＮＹＥＶＤＨＩＩＰＲＳＶＳＦＤＮＳＦＮＮＫＶＬＶＫＱＥＥＡＳＫＫＧＮＲＴＰＦＱＹＬＳＳＳＤＳＫＩＳＹＥＴＦＫＫＨＩＬＮＬＡＫＧＫＧＲＩＳＫＴＫＫＥＹＬＬＥＥＲＤＩＮＲＦＳＶＱＫＤＦＩＮＲＮＬＶＤＴＲＹＡＴＲＧＬＭＮＬＬＲＳＹＦＲＶＮＮＬＤＶＫＶＫＳＩＮＧＧＦＴＳＦＬＲＲＫＷＫＦＫＫＥＲＮＫＧＹＫＨＨＡＥＤＡＬＩＩＡＮＡＤＦＩＦＫＥＷＫＫＬＤＫＡＫＫＶＭＥＮＱＭＦＥＥＫＱＡＥＳＭＰＥＩＥＴＥＱＥＹＫＥＩＦＩＴＰＨＱＩＫＨＩＫＤＦＫＤＹＫＹＳＨＲＶＤＫＫＰＮＲＥＬＩＮＤＴＬＹＳＴＲＫＤＤＫＧＮＴＬＩＶＮＮＬＮＧＬＹＤＫＤＮＤＫＬＫＫＬＩＮＫＳＰＥＫＬＬＭＹＨＨＤＰＱＴＹＱＫＬＫＬＩＭＥＱＹＧＤＥＫＮＰＬＹＫＹＹＥＥＴＧＮＹＬＴＫＹＳＫＫＤＮＧＰＶＩＫＫＩＫＹＹＧＮＫＬＮＡＨＬＤＩＴＤＤＹＰＮＳＲＮＫＶＶＫＬＳＬＫＰＹＲＦＤＶＹＬＤＮＧＶＹＫＦＶＴＶＫＮＬＤＶＩＫＫＥＮＹＹＥＶＮＳＫＣＹＥＥＡＫＫＬＫＫＩＳＮＱＡＥＦＩＡＳＦＹＮＮＤＬＩＫＩＮＧＥＬＹＲＶＩＧＶＮＮＤＬＬＮＲＩＥＶＮＭＩＤＩＴＹＲＥＹＬＥＮＭＮＤＫＲＰＰＲＩＩＫＴＩＡＳＫＴＱＳＩＫＫＹＳＴＤＩＬＧＮＬＹＥＶＫＳＫＫＨＰＱＩＩＫＫＧＫＲＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡＫＫＫＫＧＳＤＡＫＳＬＴＡＷＳＲＴＬＶＴＦＫＤＶＦＶＤＦＴＲＥＥＷＫＬＬＤＴＡＱＱＩＬＹＲＮＶＭＬＥＮＹＫＮＬＶＳＬＧＹＱＬＴＫＰＤＶＩＬＲＬＥＫＧＥＥＰＷＬＶＥＲＥＩＨＱＥＴＨＰＤＳＥＴＡＦＥＩＫＳＳＶＰＫＫＫＲＫＶ
配列番号１５２
Ｔｅｔ１ＣＤのポリヌクレオチド配列
ＣＴＧＣＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＴＴＧＡＴＣＧＡＧＴＴＡＴＡＣＡＡＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＣＣＣＡＴＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＣＣＴＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＣＡＡＧＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＴＧＧＡＧＡＡＴＡＧＧＴＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＡＧＧＡＡＡＣＧＣＡＡＴＡＡＧＧＡＴＡＧＡＡＡＴＡＧＴＡＧＴＧＴＡＣＡＣＣＧＧＴＡＡＡＧＡＡＧＧＧＡＡＡＡＧＣＴＣＴＣＡＴＧＧＧＴＧＴＣＣＡＡＴＴＧＣＴＡＡＧＴＧＧＧＴＴＴＴＡＡＧＡＡＧＡＡＧＣＡＧＴＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＡＡＧＴＴＣＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＴＡＣＡＧＧＣＣＡＣＣＡＣＴＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＴＧＴＧＡＴＧＧＴＧＧＴＧＣＴＣＡＴＣＡＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＧＧＣＡＴＣＣＣＴＣＴＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＧＡＣＣＧＧＣＴＡＴＡＣＡＣＡＧＡＧＣＴＣＡＣＡＧＡＧＡＡＴＣＴＡＡＡＧＴＣＡＴＡＣＡＡＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＡＣＣＧＡＣＡＧＡＡＧＡＴＧＣＡＣＣＣＴＣＡＡＴＧＡＡＡＡＴＣＧＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＴＧＴＣＡＡＧＧＡＡＴＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＡＣＴＴＧＴＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＴＣＴＣＴＴＴＴＧＧＣＴＧＴＴＣＡＴＧＧＡＧＴＡＴＧＴＡＣＴＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧＴＡＡＧＴＴＴＧＧＴＡＧＡＡＧＣＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＡＴＴＴＡＧＡＡＴＴＧＡＴＣＣＡＡＧＣＴＣＴＣＣＣＴＴＡＣＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣＴＴＧＡＡＧＡＴＡＡＣＴＴＡＣＡＧＡＧＴＴＴＧＧＣＴＡＣＡＣＧＡＴＴＡＧＣＴＣＣＡＡＴＴＴＡＴＡＡＧＣＡＧＴＡＴＧＣＴＣＣＡＧＴＡＧＣＴＴＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＡＴＡＴＧＡＡＡＡＴＧＴＴＧＣＣＣＧＡＧＡＡＴＧＴＣＧＧＣＴＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＡＡＧＧＴＣＧＡＣＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＡＣＴＧＣＴＴＧＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＴＧＴＧＣＴＣＡＴＣＣＣＣＡＣＡＧＧＧＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＴＡＡＴＧＧＡＡＧＣＡＣＴＧＴＧＧＴＴＴＧＴＡＣＣＴＴＡＡＣＴＣＧＡＧＡＡＧＡＴＡＡＣＣＧＣＴＣＴＴＴＧＧＧＴＧＴＴＡＴＴＣＣＴＣＡＡＧＡＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＴＧＣＴＡＣＣＴＣＴＴＴＡＴＡＡＧＣＴＴＴＣＡＧＡＣＡＣＡＧＡＴＧＡＧＴＴＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＧＡＡＧＧＡＡＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＧＡＴＣＡＡＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＴＣＧＡＧＧＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡＡＡＧＡＡＣＧＴＧＴＴＴＣＡＣＴＣＡＧＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＧＴＴＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＴＧＣＧＡＴＧＡＴＧＡＣＡＧＡＧＧＴＴＣＴＴＧＣＡＣＡＴＡＡＧＡＴＡＡＧＧＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＡＣＣＴＡＴＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＡＴＡＡＣＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＡＡＧＣＣＴＴＣＧＴＣＡＣＴＧＣＣＡＡＣＣＴＴＡＧＧＧＡＧＴＡＡＣＡＣＴＧＡＧＡＣＣＧＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＴＡＡＡＡＡＧＴＧＡＡＡＣＣＧＡＡＣＣＣＣＡＴＴＴＴＡＴＣＴＴＡＡＡＡＡＧＴＴＣＡＧＡＣＡＡＣＡＣＴＡＡＡＡＣＴＴＡＴＴＣＧＣＴＧＡＴＧＣＣＡＴＣＣＧＣＴＣＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＧＡＡＡＧＡＧＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＣＣＣＧＡＡＧＡＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＣＡＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＣＧＣＡＡＣＡＧＣＣＴＣＡＴＧＣＧＧＧＴＴＴＴＣＡＧＡＡＡＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＣＣＣＡＣＴＧＴＡＣＧＡＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＡＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＧＴＧＣＣＡＡＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＧＣＣＣＴＧＧＣＡＴＴＴＣＡＣＡＧＣＴＴＧＧＣＧＡＡＧＴＧＧＣＴＣＣＴＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＴＧＡＴＧＧＡＧＣＣＣＣＴＣＡＴＴＡＡＴＴＣＴＧＡＧＣＣＴＴＣＣＡＣＴＧＧＴＧＴＧＡＣＴＧＡＧＣＣＧＣＴＡＡＣＧＣＣＴＣＡＴＣＡＧＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＡＧＣＣＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＡＡＧＡＣＣＴＴＧＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＡＡＴＧＧＡＡＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＴＣＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＧＡＧＣＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＣＧＡＡＣＣＣＣＴＡＴＣＴＧＡＴＧＡＣＣＣＣＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＣＣＣＣＡＣＡＴＴＧＡＴＧＡＧＴＡＴＴＧＧＴＣＡＧＡＣＡＧＴＧＡＧＣＡＣＡＴＣＴＴＴＴＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＴＡＴＴＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＣＣＡＴＣＧＣＡＣＣＴＧＣＴＣＡＣＧＧＣＴＣＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＧＡＧＴＧＴＧＣＣＣＧＧＣＧＡＧＡＧＣＴＧＣＡＣＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＴＧＴＴＧＡＧＣＡＣＣＣＣＡＡＣＣＧＴＡＡＴＣＡＴＣＣＡＡＣＣＣＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＴＧＴＣＴＴＴＴＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＡＡＡＣＣＴＡＡＡＴＡＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＡＣＡＡＧＡＴＴＡＡＧＴＴＴＧＡＧＧＣＴＡＡＡＧＡＡＧＣＴＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＡＡＡＴＧＡＡＧＧＣＣＴＣＡＧＡＧＣＡＡＡＡＡＧＡＣＣＡＧＧＣＡＧＣＴＡＡＴＧＡＡＧＧＴＣＣＡＧＡＡＣＡＧＴＣＣＴＣＴＧＡＡＧＴＡＡＡＴＧＡＡＴＴＧＡＡＣＣＡＡＡＴＴＣＣＴＴＣＴＣＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＴＴＡＡＣＣＣＡＴＧＡＣＡＡＴＧＴＴＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＣＣＣＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＡＣＡＣＡＣＧＴＴＧＣＧＧＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＣＣＡＴＴＧＧＧＴＣ
配列番号１５３
Ｔｅｔ１ＣＤのポリペプチド配列
ＬＰＴＣＳＣＬＤＲＶＩＱＫＤＫＧＰＹＹＴＨＬＧＡＧＰＳＶＡＡＶＲＥＩＭＥＮＲＹＧＱＫＧＮＡＩＲＩＥＩＶＶＹＴＧＫＥＧＫＳＳＨＧＣＰＩＡＫＷＶＬＲＲＳＳＤＥＥＫＶＬＣＬＶＲＱＲＴＧＨＨＣＰＴＡＶＭＶＶＬＩＭＶＷＤＧＩＰＬＰＭＡＤＲＬＹＴＥＬＴＥＮＬＫＳＹＮＧＨＰＴＤＲＲＣＴＬＮＥＮＲＴＣＴＣＱＧＩＤＰＥＴＣＧＡＳＦＳＦＧＣＳＷＳＭＹＦＮＧＣＫＦＧＲＳＰＳＰＲＲＦＲＩＤＰＳＳＰＬＨＥＫＮＬＥＤＮＬＱＳＬＡＴＲＬＡＰＩＹＫＱＹＡＰＶＡＹＱＮＱＶＥＹＥＮＶＡＲＥＣＲＬＧＳＫＥＧＲＰＦＳＧＶＴＡＣＬＤＦＣＡＨＰＨＲＤＩＨＮＭＮＮＧＳＴＶＶＣＴＬＴＲＥＤＮＲＳＬＧＶＩＰＱＤＥＱＬＨＶＬＰＬＹＫＬＳＤＴＤＥＦＧＳＫＥＧＭＥＡＫＩＫＳＧＡＩＥＶＬＡＰＲＲＫＫＲＴＣＦＴＱＰＶＰＲＳＧＫＫＲＡＡＭＭＴＥＶＬＡＨＫＩＲＡＶＥＫＫＰＩＰＲＩＫＲＫＮＮＳＴＴＴＮＮＳＫＰＳＳＬＰＴＬＧＳＮＴＥＴＶＱＰＥＶＫＳＥＴＥＰＨＦＩＬＫＳＳＤＮＴＫＴＹＳＬＭＰＳＡＰＨＰＶＫＥＡＳＰＧＦＳＷＳＰＫＴＡＳＡＴＰＡＰＬＫＮＤＡＴＡＳＣＧＦＳＥＲＳＳＴＰＨＣＴＭＰＳＧＲＬＳＧＡＮＡＡＡＡＤＧＰＧＩＳＱＬＧＥＶＡＰＬＰＴＬＳＡＰＶＭＥＰＬＩＮＳＥＰＳＴＧＶＴＥＰＬＴＰＨＱＰＮＨＱＰＳＦＬＴＳＰＱＤＬＡＳＳＰＭＥＥＤＥＱＨＳＥＡＤＥＰＰＳＤＥＰＬＳＤＤＰＬＳＰＡＥＥＫＬＰＨＩＤＥＹＷＳＤＳＥＨＩＦＬＤＡＮＩＧＧＶＡＩＡＰＡＨＧＳＶＬＩＥＣＡＲＲＥＬＨＡＴＴＰＶＥＨＰＮＲＮＨＰＴＲＬＳＬＶＦＹＱＨＫＮＬＮＫＰＱＨＧＦＥＬＮＫＩＫＦＥＡＫＥＡＫＮＫＫＭＫＡＳＥＱＫＤＱＡＡＮＥＧＰＥＱＳＳＥＶＮＥＬＮＱＩＰＳＨＫＡＬＴＬＴＨＤＮＶＶＴＶＳＰＹＡＬＴＨＶＡＧＰＹＮＨＷＶ
配列番号１５４
ヒトＤＭＤのスーパーエクソン（エクソン４５～７９）をコードするＤＮＡ
ｇａａｃｔｃｃａｇｇａｔｇｇｃａｔｔｇｇｇｃａｇｃｇｇｃａａａｃｔｇｔｔｇｔｃａｇａａｃａｔｔｇａａｔｇｃａａｃｔｇｇｇｇａａｇａａａｔａａｔｔｃａｇｃａａｔｃｃｔｃａａａａａｃａｇａｔｇｃｃａｇｔａｔｔｃｔａｃａｇｇａａａａａｔｔｇｇｇａａｇｃｃｔｇａａｔｃｔｇｃｇｇｔｇｇｃａｇｇａｇｇｔｃｔｇｃａａａｃａｇｃｔｇｔｃａｇａｃａｇａａａａａａｇａｇｇｃｔａｇａａｇａａｃａａａａｇａａｔａｔｃｔｔｇｔｃａｇａａｔｔｔｃａａａｇａｇａｔｔｔａａａｔｇａａｔｔｔｇｔｔｔｔａｔｇｇｔｔｇｇａｇｇａａｇｃａｇａｔａａｃａｔｔｇｃｔａｇｔａｔｃｃｃａｃｔｔｇａａｃｃｔｇｇａａａａｇａｇｃａｇｃａａｃｔａａａａｇａａａａｇｃｔｔｇａｇｃａａｇｔｃａａｇｔｔａｃｔｇｇｔｇｇａａｇａｇｔｔｇｃｃｃｃｔｇｃｇｃｃａｇｇｇａａｔｔｃｔｃａａａｃａａｔｔａａａｔｇａａａｃｔｇｇａｇｇａｃｃｃｇｔｇｃｔｔｇｔａａｇｔｇｃｔｃｃｃａｔａａｇｃｃｃａｇａａｇａｇｃａａｇａｔａａａｃｔｔｇａａａａｔａａｇｃｔｃａａｇｃａｇａｃａａａｔｃｔｃｃａｇｔｇｇａｔａａａｇｇｔｔｔｃｃａｇａｇｃｔｔｔａｃｃｔｇａｇａａａｃａａｇｇａｇａａａｔｔｇａａｇｃｔｃａａａｔａａａａｇａｃｃｔｔｇｇｇｃａｇｃｔｔｇａａａａａａａｇｃｔｔｇａａｇａｃｃｔｔｇａａｇａｇｃａｇｔｔａａａｔｃａｔｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｔｔａｔｃｔｃｃｔａｔｔａｇｇａａｔｃａｇｔｔｇｇａａａｔｔｔａｔａａｃｃａａｃｃａａａｃｃａａｇａａｇｇａｃｃａｔｔｔｇａｃｇｔｔｃａｇｇａａａｃｔｇａａａｔａｇｃａｇｔｔｃａａｇｃｔａａａｃａａｃｃｇｇａｔｇｔｇｇａａｇａｇａｔｔｔｔｇｔｃｔａａａｇｇｇｃａｇｃａｔｔｔｇｔａｃａａｇｇａａａａａｃｃａｇｃｃａｃｔｃａｇｃｃａｇｔｇａａｇａｇｇａａｇｔｔａｇａａｇａｔｃｔｇａｇｃｔｃｔｇａｇｔｇｇａａｇｇｃｇｇｔａａａｃｃｇｔｔｔａｃｔｔｃａａｇａｇｃｔｇａｇｇｇｃａａａｇｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔａｇｃｔｃｃｔｇｇａｃｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｇｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｔａｃｔｃａｇａｃｔｇｔｔａｃｔｃｔｇｇｔｇａｃａｃａａｃｃｔｇｔｇｇｔｔａｃｔａａｇｇａａａｃｔｇｃｃａｔｃｔｃｃａａａｃｔａｇａａａｔｇｃｃａｔｃｔｔｃｃｔｔｇａｔｇｔｔｇｇａｇｇｔａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃａｇａｔｔｔｃａａｃｃｇｇｇｃｔｔｇｇａｃａｇａａｃｔｔａｃｃｇａｃｔｇｇｃｔｔｔｃｔｃｔｇｃｔｔｇａｔｃａａｇｔｔａｔａａａａｔｃａｃａｇａｇｇｇｔｇａｔｇｇｔｇｇｇｔｇａｃｃｔｔｇａｇｇａｔａｔｃａａｃｇａｇａｔｇａｔｃａｔｃａａｇｃａｇａａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｔｔｇａａａｇａａｔｔｃａｇａａｔｃａｇｔｇｇｇａｔｇａａｇｔａｃａａｇａａｃａｃｃｔｔｃａｇａａｃｃｇｇａｇｇｃａａｃａｇｔｔｇａａｔｇａａａｔｇｔｔａａａｇｇａｔｔｃａａｃａｃａａｔｇｇｃｔｇｇａａｇｃｔａａｇｇａａｇａａｇｃｔｇａｇｃａｇｇｔｃｔｔａｇｇａｃａｇｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｃｔｔｇａｇｔｃａｔｇｇａａｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔａｔａｃａｇｔａｇａｔｇｃａａｔｃｃａａａａｇａａａａｔｃａｃａｇａａａｃｃａａｇｃａｇｔｔｇｇｃｃａａａｇａｃｃｔｃｃｇｃｃａｇｔｇｇｃａｇａｃａａａｔｇｔａｇａｔｇｔｇｇｃａａａｔｇａｃｔｔｇｇｃｃｃｔｇａａａｃｔｔｃｔｃｃｇｇｇａｔｔａｔｔｃｔｇｃａｇａｔｇａｔａｃｃａｇａａａａｇｔｃｃａｃａｔｇａｔａａｃａｇａｇａａｔａｔｃａａｔｇｃｃｔｃｔｔｇｇａｇａａｇｃａｔｔｃａｔａａａａｇｇｇｔｇａｇｔｇａｇｃｇａｇａｇｇｃｔｇｃｔｔｔｇｇａａｇａａａｃｔｃａｔａｇａｔｔａｃｔｇｃａａｃａｇｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇａｃｃｔｇｇａａａａｇｔｔｔｃｔｔｇｃｃｔｇｇｃｔｔａｃａｇａａｇｃｔｇａａａｃａａｃｔｇｃｃａａｔｇｔｃｃｔａｃａｇｇａｔｇｃｔａｃｃｃｇｔａａｇｇａａａｇｇｃｔｃｃｔａｇａａｇａｃｔｃｃａａｇｇｇａｇｔａａａａｇａｇｃｔｇａｔｇａａａｃａａｔｇｇｃａａｇａｃｃｔｃｃａａｇｇｔｇａａａｔｔｇａａｇｃｔｃａｃａｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａｃａａｃｃｔｇｇａｔｇａａａａｃａｇｃｃａａａａａａｔｃｃｔｇａｇａｔｃｃｃｔｇｇａａｇｇｔｔｃｃｇａｔｇａｔｇｃａｇｔｃｃｔｇｔｔａｃａａａｇａｃｇｔｔｔｇｇａｔａａｃａｔｇａａｃｔｔｃａａｇｔｇｇａｇｔｇａａｃｔｔｃｇｇａａａａａｇｔｃｔｃｔｃａａｃａｔｔａｇｇｔｃｃｃａｔｔｔｇｇａａｇｃｃａｇｔｔｃｔｇａｃｃａｇｔｇｇａａｇｃｇｔｃｔｇｃａｃｃｔｔｔｃｔｃｔｇｃａｇｇａａｃｔｔｃｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔａｃａｇｃｔｇａａａｇａｔｇａｔｇａａｔｔａａｇｃｃｇｇｃａｇｇｃａｃｃｔａｔｔｇｇａｇｇｃｇａｃｔｔｔｃｃａｇｃａｇｔｔｃａｇａａｇｃａｇａａｃｇａｔｇｔａｃａｔａｇｇｇｃｃｔｔｃａａｇａｇｇｇａａｔｔｇａａａａｃｔａａａｇａａｃｃｔｇｔａａｔｃａｔｇａｇｔａｃｔｃｔｔｇａｇａｃｔｇｔａｃｇａａｔａｔｔｔｃｔｇａｃａｇａｇｃａｇｃｃｔｔｔｇｇａａｇｇａｃｔａｇａｇａａａｃｔｃｔａｃｃａｇｇａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｔｇｃｃｔｃｃｔｇａｇｇａｇａｇａｇｃｃｃａｇａａｔｇｔｃａｃｔｃｇｇｃｔｔｃｔａｃｇａａａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｇａｇｇｔｃａａｔａｃｔｇａｇｔｇｇｇａａａａａｔｔｇａａｃｃｔｇｃａｃｔｃｃｇｃｔｇａｃｔｇｇｃａｇａｇａａａａａｔａｇａｔｇａｇａｃｃｃｔｔｇａａａｇａｃｔｃｃａｇｇａａｃｔｔｃａａｇａｇｇｃｃａｃｇｇａｔｇａｇｃｔｇｇａｃｃｔｃａａｇｃｔｇｃｇｃｃａａｇｃｔｇａｇｇｔｇａｔｃａａｇｇｇａｔｃｃｔｇｇｃａｇｃｃｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｔｃｃｔｃａｔｔｇａｃｔｃｔｃｔｃｃａａｇａｔｃａｃｃｔｃｇａｇａａａｇｔｃａａｇｇｃａｃｔｔｃｇａｇｇａｇａａａｔｔｇｃｇｃｃｔｃｔｇａａａｇａｇａａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇｔｃａａｔｇａｃｃｔｔｇｃｔｃｇｃｃａｇｃｔｔａｃｃａｃｔｔｔｇｇｇｃａｔｔｃａｇｃｔｃｔｃａｃｃｇｔａｔａａｃｃｔｃａｇｃａｃｔｃｔｇｇａａｇａｃｃｔｇａａｃａｃｃａｇａｔｇｇａａｇｃｔｔｃｔｇｃａｇｇｔｇｇｃｃｇｔｃｇａｇｇａｃｃｇａｇｔｃａｇｇｃａｇｃｔｇｃａｔｇａａｇｃｃｃａｃａｇｇｇａｃｔｔｔｇｇｔｃｃａｇｃａｔｃｔｃａｇｃａｃｔｔｔｃｔｔｔｃｃａｃｇｔｃｔｇｔｃｃａｇｇｇｔｃｃｃｔｇｇｇａｇａｇａｇｃｃａｔｃｔｃｇｃｃａａａｃａａａｇｔｇｃｃｃｔａｃｔａｔａｔｃａａｃｃａｃｇａｇａｃｔｃａａａｃａａｃｔｔｇｃｔｇｇｇａｃｃａｔｃｃｃａａａａｔｇａｃａｇａｇｃｔｃｔａｃｃａｇｔｃｔｔｔａｇｃｔｇａｃｃｔｇａａｔａａｔｇｔｃａｇａｔｔｃｔｃａｇｃｔｔａｔａｇｇａｃｔｇｃｃａｔｇａａａｃｔｃｃｇａａｇａｃｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｃｔｔｔｇｃｔｔｇｇａｔｃｔｃｔｔｇａｇｃｃｔｇｔｃａｇｃｔｇｃａｔｇｔｇａｔｇｃｃｔｔｇｇａｃｃａｇｃａｃａａｃｃｔｃａａｇｃａａａａｔｇａｃｃａｇｃｃｃａｔｇｇａｔａｔｃｃｔｇｃａｇａｔｔａｔｔａａｔｔｇｔｔｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｔａｔｇａｃｃｇｃｃｔｇｇａｇｃａａｇａｇｃａｃａａｃａａｔｔｔｇｇｔｃａａｃｇｔｃｃｃｔｃｔｃｔｇｃｇｔｇｇａｔａｔｇｔｇｔｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔｇｃｔｇａａｔｇｔｔｔａｔｇａｔａｃｇｇｇａｃｇａａｃａｇｇｇａｇｇａｔｃｃｇｔｇｔｃｃｔｇｔｃｔｔｔｔａａａａｃｔｇｇｃａｔｃａｔｔｔｃｃｃｔｇｔｇｔａａａｇｃａｃａｔｔｔｇｇａａｇａｃａａｇｔａｃａｇａｔａｃｃｔｔｔｔｃａａｇｃａａｇｔｇｇｃａａｇｔｔｃａａｃａｇｇａｔｔｔｔｇｔｇａｃｃａｇｃｇｃａｇｇｃｔｇｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔｇｃａｔｇａｔｔｃｔａｔｃｃａａａｔｔｃｃａａｇａｃａｇｔｔｇｇｇｔｇａａｇｔｔｇｃａｔｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃａｇｔａａｃａｔｔｇａｇｃｃａａｇｔｇｔｃｃｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｃｃａａｔｔｔｇｃｔａａｔａａｔａａｇｃｃａｇａｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｃｃｃｔｃｔｔｃｃｔａｇａｃｔｇｇａｔｇａｇａｃｔｇｇａａｃｃｃｃａｇｔｃｃａｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔｇｃｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃａｇａｇｔｇｇｃｔｇｃｔｇｃａｇａａａｃｔｇｃｃａａｇｃａｔｃａｇｇｃｃａａａｔｇｔａａｃａｔｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｔｃｃａａｔｃａｔｔｇｇａｔｔｃａｇｇｔａｃａｇｇａｇｔｃｔａａａｇｃａｃｔｔｔａａｔｔａｔｇａｃａｔｃｔｇｃｃａａａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｔｔｃｔｇｇｔｃｇａｇｔｔｇｃａａａａｇｇｃｃａｔａａａａｔｇｃａｃｔａｔｃｃｃａｔｇｇｔｇｇａａｔａｔｔｇｃａｃｔｃｃｇａｃｔａｃａｔｃａｇｇａｇａａｇａｔｇｔｔｃｇａｇａｃｔｔｔｇｃｃａａｇｇｔａｃｔａａａａａａｃａａａｔｔｔｃｇａａｃｃａａａａｇｇｔａｔｔｔｔｇｃｇａａｇｃａｔｃｃｃｃｇａａｔｇｇｇｃｔａｃｃｔｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｔｇｔｃｔｔａｇａｇｇｇｇｇａｃａａｃａｔｇｇａａａｃｔｃｃｃｇｔｔａｃｔｃｔｇａｔｃａａｃｔｔｃｔｇｇｃｃａｇｔａｇａｔｔｃｔｇｃｇｃｃｔｇｃｃｔｃｇｔｃｃｃｃｔｃａｇｃｔｔｔｃａｃａｃｇａｔｇａｔａｃｔｃａｔｔｃａｃｇｃａｔｔｇａａｃａｔｔａｔｇｃｔａｇｃａｇｇｃｔａｇｃａｇａａａｔｇｇａａａａｃａｇｃａａｔｇｇａｔｃｔｔａｔｃｔａａａｔｇａｔａｇｃａｔｃｔｃｔｃｃｔａａｔｇａｇａｇｃａｔａｇａｔｇａｔｇａａｃａｔｔｔｇｔｔａａｔｃｃａｇｃａｔｔａｃｔｇｃｃａａａｇｔｔｔｇａａｃｃａｇｇａｃｔｃｃｃｃｃｃｔｇａｇｃｃａｇｃｃｔｃｇｔａｇｔｃｃｔｇｃｃｃａｇａｔｃｔｔｇａｔｔｔｃｃｔｔａｇａｇａｇｔｇａｇｇａａａｇａｇｇｇｇａｇｃｔａｇａｇａｇａａｔｃｃｔａｇｃａｇａｔｃｔｔｇａｇｇａａｇａａａａｃａｇｇａａｔｃｔｇｃａａｇｃａｇａａｔａｔｇａｃｃｇｔｃｔａａａｇｃａｇｃａｇｃａｃｇａａｃａｔａａａｇｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃａｃｔｇｃｃｇｔｃｃｃｃｔｃｃｔｇａａａｔｇａｔｇｃｃｃａｃｃｔｃｔｃｃｃｃａｇａｇｔｃｃｃｃｇｇｇａｔｇｃｔｇａｇｃｔｃａｔｔｇｃｔｇａｇｇｃｃａａｇｃｔａｃｔｇｃｇｔｃａａｃａｃａａａｇｇｃｃｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｇｇａｔｇｃａａａｔｃｃｔｇｇａａｇａｃｃａｃａａｔａａａｃａｇｃｔｇｇａｇｔｃａｃａｇｔｔａｃａｃａｇｇｃｔａａｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｇｇａｇｃａａｃｃｃｃａｇｇｃａｇａｇｇｃｃａａａｇｔｇａａｔｇｇｃａｃａａｃｇｇｔｇｔｃｃｔｃｔｃｃｔｔｃｔａｃｃｔｃｔｃｔａｃａｇａｇｇｔｃｃｇａｃａｇｃａｇｔｃａｇｃｃｔａｔｇｃｔｇｃｔｃｃｇａｇｔｇｇｔｔｇｇｃａｇｔｃａａａｃｔｔｃｇｇａｃｔｃｃａｔｇｇｇｔｇａｇｇａａｇａｔｃｔｔｃｔｃａｇｔｃｃｔｃｃｃｃａｇｇａｃａｃａａｇｃａｃａｇｇｇｔｔａｇａｇｇａｇｇｔｇａｔｇｇａｇｃａａｃｔｃａａｃａａｃｔｃｃｔｔｃｃｃｔａｇｔｔｃａａｇａｇｇａａｇａａａｔａｃｃｃｃｔｇｇａａａｇｃｃａａｔｇａｇａｇａｇｇａｃａｃａａｔｇｔａｇ
配列番号１５５
ヒトＤＭＤのスーパーエクソン（エクソン４５～７９）を含むドナー配列
ｔｇｇｇｃａｔｇｔｃａｇｔｔｔｃａｔａｇｇｇａａａｔｔｔｔｃａｃａｔｇｇａｇｃｔｔｔｔｇｔａｔｔｔｃｔｔｔｃｔｔｔｇｃｃａｇｔａｃａａｃｔｇｃａｔｇｔｇｇｔａｇｃａｃａｃｔｇｔｔｔａａｔｃｔｔｔｔｃｔｃａａａｔａａａａａｇａｃａｔｇｇｇｇｃｔｔｃａｔｔｔｔｔｇｔｔｔｔｇｃｃｔｔｔｔｔｇｇｔａｔｃｔｔａｃａｇｇａａｃｔｃｃａｇｇａｔｇｇｃａｔｔｇｇｇｃａｇｃｇｇｃａａａｃｔｇｔｔｇｔｃａｇａａｃａｔｔｇａａｔｇｃａａｃｔｇｇｇｇａａｇａａａｔａａｔｔｃａｇｃａａｔｃｃｔｃａａａａａｃａｇａｔｇｃｃａｇｔａｔｔｃｔａｃａｇｇａａａａａｔｔｇｇｇａａｇｃｃｔｇａａｔｃｔｇｃｇｇｔｇｇｃａｇｇａｇｇｔｃｔｇｃａａａｃａｇｃｔｇｔｃａｇａｃａｇａａａａａａｇａｇｇｃｔａｇａａｇａａｃａａａａｇａａｔａｔｃｔｔｇｔｃａｇａａｔｔｔｃａａａｇａｇａｔｔｔａａａｔｇａａｔｔｔｇｔｔｔｔａｔｇｇｔｔｇｇａｇｇａａｇｃａｇａｔａａｃａｔｔｇｃｔａｇｔａｔｃｃｃａｃｔｔｇａａｃｃｔｇｇａａａａｇａｇｃａｇｃａａｃｔａａａａｇａａａａｇｃｔｔｇａｇｃａａｇｔｃａａｇｔｔａｃｔｇｇｔｇｇａａｇａｇｔｔｇｃｃｃｃｔｇｃｇｃｃａｇｇｇａａｔｔｃｔｃａａａｃａａｔｔａａａｔｇａａａｃｔｇｇａｇｇａｃｃｃｇｔｇｃｔｔｇｔａａｇｔｇｃｔｃｃｃａｔａａｇｃｃｃａｇａａｇａｇｃａａｇａｔａａａｃｔｔｇａａａａｔａａｇｃｔｃａａｇｃａｇａｃａａａｔｃｔｃｃａｇｔｇｇａｔａａａｇｇｔｔｔｃｃａｇａｇｃｔｔｔａｃｃｔｇａｇａａａｃａａｇｇａｇａａａｔｔｇａａｇｃｔｃａａａｔａａａａｇａｃｃｔｔｇｇｇｃａｇｃｔｔｇａａａａａａａｇｃｔｔｇａａｇａｃｃｔｔｇａａｇａｇｃａｇｔｔａａａｔｃａｔｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｔｔａｔｃｔｃｃｔａｔｔａｇｇａａｔｃａｇｔｔｇｇａａａｔｔｔａｔａａｃｃａａｃｃａａａｃｃａａｇａａｇｇａｃｃａｔｔｔｇａｃｇｔｔｃａｇｇａａａｃｔｇａａａｔａｇｃａｇｔｔｃａａｇｃｔａａａｃａａｃｃｇｇａｔｇｔｇｇａａｇａｇａｔｔｔｔｇｔｃｔａａａｇｇｇｃａｇｃａｔｔｔｇｔａｃａａｇｇａａａａａｃｃａｇｃｃａｃｔｃａｇｃｃａｇｔｇａａｇａｇｇａａｇｔｔａｇａａｇａｔｃｔｇａｇｃｔｃｔｇａｇｔｇｇａａｇｇｃｇｇｔａａａｃｃｇｔｔｔａｃｔｔｃａａｇａｇｃｔｇａｇｇｇｃａａａｇｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔａｇｃｔｃｃｔｇｇａｃｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｇｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｔａｃｔｃａｇａｃｔｇｔｔａｃｔｃｔｇｇｔｇａｃａｃａａｃｃｔｇｔｇｇｔｔａｃｔａａｇｇａａａｃｔｇｃｃａｔｃｔｃｃａａａｃｔａｇａａａｔｇｃｃａｔｃｔｔｃｃｔｔｇａｔｇｔｔｇｇａｇｇｔａｃｃｔｇｃｔｃｔｇｇｃａｇａｔｔｔｃａａｃｃｇｇｇｃｔｔｇｇａｃａｇａａｃｔｔａｃｃｇａｃｔｇｇｃｔｔｔｃｔｃｔｇｃｔｔｇａｔｃａａｇｔｔａｔａａａａｔｃａｃａｇａｇｇｇｔｇａｔｇｇｔｇｇｇｔｇａｃｃｔｔｇａｇｇａｔａｔｃａａｃｇａｇａｔｇａｔｃａｔｃａａｇｃａｇａａｇｇｃａａｃａａｔｇｃａｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇａｇｇｃｇｔｃｃｃｃａｇｔｔｇｇａａｇａａｃｔｃａｔｔａｃｃｇｃｔｇｃｃｃａａａａｔｔｔｇａａａａａｃａａｇａｃｃａｇｃａａｔｃａａｇａｇｇｃｔａｇａａｃａａｔｃａｔｔａｃｇｇａｔｃｇａａｔｔｇａａａｇａａｔｔｃａｇａａｔｃａｇｔｇｇｇａｔｇａａｇｔａｃａａｇａａｃａｃｃｔｔｃａｇａａｃｃｇｇａｇｇｃａａｃａｇｔｔｇａａｔｇａａａｔｇｔｔａａａｇｇａｔｔｃａａｃａｃａａｔｇｇｃｔｇｇａａｇｃｔａａｇｇａａｇａａｇｃｔｇａｇｃａｇｇｔｃｔｔａｇｇａｃａｇｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｃｔｔｇａｇｔｃａｔｇｇａａｇｇａｇｇｇｔｃｃｃｔａｔａｃａｇｔａｇａｔｇｃａａｔｃｃａａａａｇａａａａｔｃａｃａｇａａａｃｃａａｇｃａｇｔｔｇｇｃｃａａａｇａｃｃｔｃｃｇｃｃａｇｔｇｇｃａｇａｃａａａｔｇｔａｇａｔｇｔｇｇｃａａａｔｇａｃｔｔｇｇｃｃｃｔｇａａａｃｔｔｃｔｃｃｇｇｇａｔｔａｔｔｃｔｇｃａｇａｔｇａｔａｃｃａｇａａａａｇｔｃｃａｃａｔｇａｔａａｃａｇａｇａａｔａｔｃａａｔｇｃｃｔｃｔｔｇｇａｇａａｇｃａｔｔｃａｔａａａａｇｇｇｔｇａｇｔｇａｇｃｇａｇａｇｇｃｔｇｃｔｔｔｇｇａａｇａａａｃｔｃａｔａｇａｔｔａｃｔｇｃａａｃａｇｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇａｃｃｔｇｇａａａａｇｔｔｔｃｔｔｇｃｃｔｇｇｃｔｔａｃａｇａａｇｃｔｇａａａｃａａｃｔｇｃｃａａｔｇｔｃｃｔａｃａｇｇａｔｇｃｔａｃｃｃｇｔａａｇｇａａａｇｇｃｔｃｃｔａｇａａｇａｃｔｃｃａａｇｇｇａｇｔａａａａｇａｇｃｔｇａｔｇａａａｃａａｔｇｇｃａａｇａｃｃｔｃｃａａｇｇｔｇａａａｔｔｇａａｇｃｔｃａｃａｃａｇａｔｇｔｔｔａｔｃａｃａａｃｃｔｇｇａｔｇａａａａｃａｇｃｃａａａａａａｔｃｃｔｇａｇａｔｃｃｃｔｇｇａａｇｇｔｔｃｃｇａｔｇａｔｇｃａｇｔｃｃｔｇｔｔａｃａａａｇａｃｇｔｔｔｇｇａｔａａｃａｔｇａａｃｔｔｃａａｇｔｇｇａｇｔｇａａｃｔｔｃｇｇａａａａａｇｔｃｔｃｔｃａａｃａｔｔａｇｇｔｃｃｃａｔｔｔｇｇａａｇｃｃａｇｔｔｃｔｇａｃｃａｇｔｇｇａａｇｃｇｔｃｔｇｃａｃｃｔｔｔｃｔｃｔｇｃａｇｇａａｃｔｔｃｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔａｃａｇｃｔｇａａａｇａｔｇａｔｇａａｔｔａａｇｃｃｇｇｃａｇｇｃａｃｃｔａｔｔｇｇａｇｇｃｇａｃｔｔｔｃｃａｇｃａｇｔｔｃａｇａａｇｃａｇａａｃｇａｔｇｔａｃａｔａｇｇｇｃｃｔｔｃａａｇａｇｇｇａａｔｔｇａａａａｃｔａａａｇａａｃｃｔｇｔａａｔｃａｔｇａｇｔａｃｔｃｔｔｇａｇａｃｔｇｔａｃｇａａｔａｔｔｔｃｔｇａｃａｇａｇｃａｇｃｃｔｔｔｇｇａａｇｇａｃｔａｇａｇａａａｃｔｃｔａｃｃａｇｇａｇｃｃｃａｇａｇａｇｃｔｇｃｃｔｃｃｔｇａｇｇａｇａｇａｇｃｃｃａｇａａｔｇｔｃａｃｔｃｇｇｃｔｔｃｔａｃｇａａａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｇａｇｇｔｃａａｔａｃｔｇａｇｔｇｇｇａａａａａｔｔｇａａｃｃｔｇｃａｃｔｃｃｇｃｔｇａｃｔｇｇｃａｇａｇａａａａａｔａｇａｔｇａｇａｃｃｃｔｔｇａａａｇａｃｔｃｃａｇｇａａｃｔｔｃａａｇａｇｇｃｃａｃｇｇａｔｇａｇｃｔｇｇａｃｃｔｃａａｇｃｔｇｃｇｃｃａａｇｃｔｇａｇｇｔｇａｔｃａａｇｇｇａｔｃｃｔｇｇｃａｇｃｃｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｔｃｃｔｃａｔｔｇａｃｔｃｔｃｔｃｃａａｇａｔｃａｃｃｔｃｇａｇａａａｇｔｃａａｇｇｃａｃｔｔｃｇａｇｇａｇａａａｔｔｇｃｇｃｃｔｃｔｇａａａｇａｇａａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇｔｃａａｔｇａｃｃｔｔｇｃｔｃｇｃｃａｇｃｔｔａｃｃａｃｔｔｔｇｇｇｃａｔｔｃａｇｃｔｃｔｃａｃｃｇｔａｔａａｃｃｔｃａｇｃａｃｔｃｔｇｇａａｇａｃｃｔｇａａｃａｃｃａｇａｔｇｇａａｇｃｔｔｃｔｇｃａｇｇｔｇｇｃｃｇｔｃｇａｇｇａｃｃｇａｇｔｃａｇｇｃａｇｃｔｇｃａｔｇａａｇｃｃｃａｃａｇｇｇａｃｔｔｔｇｇｔｃｃａｇｃａｔｃｔｃａｇｃａｃｔｔｔｃｔｔｔｃｃａｃｇｔｃｔｇｔｃｃａｇｇｇｔｃｃｃｔｇｇｇａｇａｇａｇｃｃａｔｃｔｃｇｃｃａａａｃａａａｇｔｇｃｃｃｔａｃｔａｔａｔｃａａｃｃａｃｇａｇａｃｔｃａａａｃａａｃｔｔｇｃｔｇｇｇａｃｃａｔｃｃｃａａａａｔｇａｃａｇａｇｃｔｃｔａｃｃａｇｔｃｔｔｔａｇｃｔｇａｃｃｔｇａａｔａａｔｇｔｃａｇａｔｔｃｔｃａｇｃｔｔａｔａｇｇａｃｔｇｃｃａｔｇａａａｃｔｃｃｇａａｇａｃｔｇｃａｇａａｇｇｃｃｃｔｔｔｇｃｔｔｇｇａｔｃｔｃｔｔｇａｇｃｃｔｇｔｃａｇｃｔｇｃａｔｇｔｇａｔｇｃｃｔｔｇｇａｃｃａｇｃａｃａａｃｃｔｃａａｇｃａａａａｔｇａｃｃａｇｃｃｃａｔｇｇａｔａｔｃｃｔｇｃａｇａｔｔａｔｔａａｔｔｇｔｔｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｔａｔｇａｃｃｇｃｃｔｇｇａｇｃａａｇａｇｃａｃａａｃａａｔｔｔｇｇｔｃａａｃｇｔｃｃｃｔｃｔｃｔｇｃｇｔｇｇａｔａｔｇｔｇｔｃｔｇａａｃｔｇｇｃｔｇｃｔｇａａｔｇｔｔｔａｔｇａｔａｃｇｇｇａｃｇａａｃａｇｇｇａｇｇａｔｃｃｇｔｇｔｃｃｔｇｔｃｔｔｔｔａａａａｃｔｇｇｃａｔｃａｔｔｔｃｃｃｔｇｔｇｔａａａｇｃａｃａｔｔｔｇｇａａｇａｃａａｇｔａｃａｇａｔａｃｃｔｔｔｔｃａａｇｃａａｇｔｇｇｃａａｇｔｔｃａａｃａｇｇａｔｔｔｔｇｔｇａｃｃａｇｃｇｃａｇｇｃｔｇｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｔｇｃａｔｇａｔｔｃｔａｔｃｃａａａｔｔｃｃａａｇａｃａｇｔｔｇｇｇｔｇａａｇｔｔｇｃａｔｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃａｇｔａａｃａｔｔｇａｇｃｃａａｇｔｇｔｃｃｇｇａｇｃｔｇｃｔｔｃｃａａｔｔｔｇｃｔａａｔａａｔａａｇｃｃａｇａｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｃｃｃｔｃｔｔｃｃｔａｇａｃｔｇｇａｔｇａｇａｃｔｇｇａａｃｃｃｃａｇｔｃｃａｔｇｇｔｇｔｇｇｃｔｇｃｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃａｇａｇｔｇｇｃｔｇｃｔｇｃａｇａａａｃｔｇｃｃａａｇｃａｔｃａｇｇｃｃａａａｔｇｔａａｃａｔｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｔｃｃａａｔｃａｔｔｇｇａｔｔｃａｇｇｔａｃａｇｇａｇｔｃｔａａａｇｃａｃｔｔｔａａｔｔａｔｇａｃａｔｃｔｇｃｃａａａｇｃｔｇｃｔｔｔｔｔｔｔｃｔｇｇｔｃｇａｇｔｔｇｃａａａａｇｇｃｃａｔａａａａｔｇｃａｃｔａｔｃｃｃａｔｇｇｔｇｇａａｔａｔｔｇｃａｃｔｃｃｇａｃｔａｃａｔｃａｇｇａｇａａｇａｔｇｔｔｃｇａｇａｃｔｔｔｇｃｃａａｇｇｔａｃｔａａａａａａｃａａａｔｔｔｃｇａａｃｃａａａａｇｇｔａｔｔｔｔｇｃｇａａｇｃａｔｃｃｃｃｇａａｔｇｇｇｃｔａｃｃｔｇｃｃａｇｔｇｃａｇａｃｔｇｔｃｔｔａｇａｇｇｇｇｇａｃａａｃａｔｇｇａａａｃｔｃｃｃｇｔｔａｃｔｃｔｇａｔｃａａｃｔｔｃｔｇｇｃｃａｇｔａｇａｔｔｃｔｇｃｇｃｃｔｇｃｃｔｃｇｔｃｃｃｃｔｃａｇｃｔｔｔｃａｃａｃｇａｔｇａｔａｃｔｃａｔｔｃａｃｇｃａｔｔｇａａｃａｔｔａｔｇｃｔａｇｃａｇｇｃｔａｇｃａｇａａａｔｇｇａａａａｃａｇｃａａｔｇｇａｔｃｔｔａｔｃｔａａａｔｇａｔａｇｃａｔｃｔｃｔｃｃｔａａｔｇａｇａｇｃａｔａｇａｔｇａｔｇａａｃａｔｔｔｇｔｔａａｔｃｃａｇｃａｔｔａｃｔｇｃｃａａａｇｔｔｔｇａａｃｃａｇｇａｃｔｃｃｃｃｃｃｔｇａｇｃｃａｇｃｃｔｃｇｔａｇｔｃｃｔｇｃｃｃａｇａｔｃｔｔｇａｔｔｔｃｃｔｔａｇａｇａｇｔｇａｇｇａａａｇａｇｇｇｇａｇｃｔａｇａｇａｇａａｔｃｃｔａｇｃａｇａｔｃｔｔｇａｇｇａａｇａａａａｃａｇｇａａｔｃｔｇｃａａｇｃａｇａａｔａｔｇａｃｃｇｔｃｔａａａｇｃａｇｃａｇｃａｃｇａａｃａｔａａａｇｇｃｃｔｇｔｃｃｃｃａｃｔｇｃｃｇｔｃｃｃｃｔｃｃｔｇａａａｔｇａｔｇｃｃｃａｃｃｔｃｔｃｃｃｃａｇａｇｔｃｃｃｃｇｇｇａｔｇｃｔｇａｇｃｔｃａｔｔｇｃｔｇａｇｇｃｃａａｇｃｔａｃｔｇｃｇｔｃａａｃａｃａａａｇｇｃｃｇｃｃｔｇｇａａｇｃｃａｇｇａｔｇｃａａａｔｃｃｔｇｇａａｇａｃｃａｃａａｔａａａｃａｇｃｔｇｇａｇｔｃａｃａｇｔｔａｃａｃａｇｇｃｔａａｇｇｃａｇｃｔｇｃｔｇｇａｇｃａａｃｃｃｃａｇｇｃａｇａｇｇｃｃａａａｇｔｇａａｔｇｇｃａｃａａｃｇｇｔｇｔｃｃｔｃｔｃｃｔｔｃｔａｃｃｔｃｔｃｔａｃａｇａｇｇｔｃｃｇａｃａｇｃａｇｔｃａｇｃｃｔａｔｇｃｔｇｃｔｃｃｇａｇｔｇｇｔｔｇｇｃａｇｔｃａａａｃｔｔｃｇｇａｃｔｃｃａｔｇｇｇｔｇａｇｇａａｇａｔｃｔｔｃｔｃａｇｔｃｃｔｃｃｃｃａｇｇａｃａｃａａｇｃａｃａｇｇｇｔｔａｇａｇｇａｇｇｔｇａｔｇｇａｇｃａａｃｔｃａａｃａａｃｔｃｃｔｔｃｃｃｔａｇｔｔｃａａｇａｇｇａａｇａａａｔａｃｃｃｃｔｇｇａａａｇｃｃａａｔｇａｇａｇａｇｇａｃａｃａａｔｇｔａｇｔｃｇｔｔｔａａａｃｃｇｃｔｇａｔｃａｇｃｃｔｃｇａａａｃｔｔｇｔｔｔａｔｔｇｃａｇｃｔｔａｔａａｔｇｇｔｔａｃａａａｔａａａｇｃａａｔａｇｃａｔｃａｃａａａｔｔｔｃａｃａａａｔａａａｇｃａｔｔｔｔｔｔｔｃａｃｔｇｃａｔｔｃｔａｇｔｔｇｔｇｇｔｔｔｇｔｃｃａａａｃｔｃａｔｃａａｔｇｔａｔｃｔｔａｇｔａａｇｔｔｔｔｔｔａａｃａａｇｃａｔｇｇｇａｃａｃａｃａａａｇｃａａｇａｔｇｃａｔｇａｃａａｇｔｔｔｃａａｔａａａａａｃｔｔａａｇｔｔｃａｔａｔａｔｃｃｃｃｃｔｃａｃａｔｔｔａｔａａａａａｔａａｔｇｔｇａａａｔａａｔｔｇｔａａａｔｇａｔａａｃａａｔｔｇｔｇｃｔｇａｇａｔｔｔｔｃａｇｔｃｃａｔａａｔｇｔｔａｃｃｔｔｔｔａａｔａａａｔｇａａｔｇｔａａｔｔｃｃａｔｔｇａａｔａｇａａｇａａａ
ｔａｃ
配列番号１５６
ヒトＤＭＤのイントロン４４配列
Figure 2023522788000052

Figure 2023522788000053

Figure 2023522788000054

Figure 2023522788000055

Figure 2023522788000056

Figure 2023522788000057

Figure 2023522788000058

Figure 2023522788000059

Figure 2023522788000060

Figure 2023522788000061

Figure 2023522788000062

Figure 2023522788000063

Figure 2023522788000064

Figure 2023522788000065

Figure 2023522788000066

Figure 2023522788000067

Figure 2023522788000068

Figure 2023522788000069

Figure 2023522788000070

Figure 2023522788000071

Figure 2023522788000072

Figure 2023522788000073

Figure 2023522788000074

Figure 2023522788000075

Figure 2023522788000076

Figure 2023522788000077

Figure 2023522788000078

Figure 2023522788000079

Figure 2023522788000080

Figure 2023522788000081

Figure 2023522788000082

Figure 2023522788000083

Figure 2023522788000084

Figure 2023522788000085

Figure 2023522788000086

Figure 2023522788000087

Figure 2023522788000088

Figure 2023522788000089

Figure 2023522788000090

Figure 2023522788000091

Figure 2023522788000092

Figure 2023522788000093

Figure 2023522788000094

Figure 2023522788000095

Figure 2023522788000096

Figure 2023522788000097

Figure 2023522788000098

Figure 2023522788000099

Figure 2023522788000100

Figure 2023522788000101

Figure 2023522788000102

Figure 2023522788000103

Figure 2023522788000104

Figure 2023522788000105

Figure 2023522788000106

Figure 2023522788000107

Figure 2023522788000108

Figure 2023522788000109

Figure 2023522788000110

Figure 2023522788000111

Figure 2023522788000112

Figure 2023522788000113

Figure 2023522788000114

Figure 2023522788000115

Figure 2023522788000116

Figure 2023522788000117

Figure 2023522788000118

Figure 2023522788000119

Figure 2023522788000120

Figure 2023522788000121

Figure 2023522788000122

Figure 2023522788000123

Figure 2023522788000124

Figure 2023522788000125

Figure 2023522788000126

Figure 2023522788000127

Figure 2023522788000128

Figure 2023522788000129

Figure 2023522788000130

Figure 2023522788000131

Figure 2023522788000132

Figure 2023522788000133

Figure 2023522788000134

Figure 2023522788000135

Figure 2023522788000136

Figure 2023522788000137

Figure 2023522788000138

Figure 2023522788000139

Figure 2023522788000140

Figure 2023522788000141

Figure 2023522788000142

Figure 2023522788000143

Figure 2023522788000144

Figure 2023522788000145

Figure 2023522788000146

Figure 2023522788000147

Figure 2023522788000148

Figure 2023522788000149

Figure 2023522788000150

Figure 2023522788000151

Figure 2023522788000152

Figure 2023522788000153

Figure 2023522788000154

Figure 2023522788000155

Figure 2023522788000156

Figure 2023522788000157

Figure 2023522788000158

Figure 2023522788000159

Figure 2023522788000160

Figure 2023522788000161

Figure 2023522788000162

Figure 2023522788000163

Figure 2023522788000164

Figure 2023522788000165

Figure 2023522788000166

Figure 2023522788000167

Figure 2023522788000168

Figure 2023522788000169

Figure 2023522788000170

Figure 2023522788000171

Figure 2023522788000172

Figure 2023522788000173

Figure 2023522788000174

Figure 2023522788000175

Figure 2023522788000176
Figure 2023522788000177

Claims (46)

  1. 組成物をコードする１つ又は複数のベクターを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、前記組成物が、
    （ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）であって、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、ｇＲＮＡと、
    （ｂ）Ｃａｓタンパク質又は前記Ｃａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、
    （ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列であって、前記野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、ドナー配列と
    を含む、
    ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
  2. ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、
    （ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）であって、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、ｇＲＮＡと、
    （ｂ）Ｃａｓタンパク質又は前記Ｃａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、
    （ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列であって、前記野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、ドナー配列と
    を含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
  3. 組成物をコードする１つ又は複数のベクターを含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、前記組成物が、
    （ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、
    （ｂ）Ｃａｓタンパク質又は前記Ｃａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、
    （ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列と、
    を含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
  4. ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系であって、
    （ａ）突然変異体ジストロフィン遺伝子のフラグメントを標的とする、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）と、
    （ｂ）Ｃａｓタンパク質又は前記Ｃａｓタンパク質を含む融合タンパク質と、
    （ｃ）野生型ジストロフィン遺伝子のフラグメントを含む、ドナー配列と、
    を含む、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓベースのゲノム編集系。
  5. 前記ｇＲＮＡが、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のイントロン５１又はイントロン４４内の標的配列にハイブリダイズする、請求項３又は４に記載の系。
  6. 前記ｇＲＮＡが、配列番号１２８又は配列番号１５６のポリヌクレオチド配列内の標的配列にハイブリダイズする、請求項１、２、又は５に記載の系。
  7. 前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２を含む、請求項３～６のいずれか１項に記載の系。
  8. ドナー配列が、配列番号５３のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１、２、又は７に記載の系。
  9. 前記野生型ジストロフィン遺伝子の前記フラグメントが、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接している、請求項１～８のいずれか１項に記載の系。
  10. 前記ｇＲＮＡが、前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５１とエクソン５２との間にあるイントロンを標的とする、請求項１～９のいずれか１項に記載の系。
  11. 前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子又はその機能的同等物の複数のエクソンを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の系。
  12. 前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子若しくはその機能的同等物のエクソン５２、エクソン５３、エクソン５４、エクソン５５、エクソン５６、エクソン５７、エクソン５８、エクソン５９、エクソン６０、エクソン６１、エクソン６２、エクソン６３、エクソン６４、エクソン６５、エクソン６６、エクソン６７、エクソン６８、エクソン６９、エクソン７０、エクソン７１、エクソン７２、エクソン７３、エクソン７４、エクソン７５、エクソン７６、エクソン７７、エクソン７８、及びエクソン７９から選択される１つ若しくは複数のエクソンを含むか、又は前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子若しくはその機能的同等物のエクソン５２～７９を含むか、又は前記ドナー配列が、前記野生型ジストロフィン遺伝子若しくはその機能的同等物のエクソン４５～７９を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の系。
  13. 前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５２が、突然変異しているか、若しくは前記ジストロフィン遺伝子から少なくとも部分的に欠失しているか、又は前記突然変異体ジストロフィン遺伝子のエクソン５２が、欠失しており、前記イントロンが、対応する野生型ジストロフィン遺伝子において前記欠失したエクソン５２が存在するであろう場所に並置されている、請求項１～１２のいずれか１項に記載の系。
  14. 前記ｇＲＮＡが、
    （ａ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、
    （ｂ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列のフラグメント、
    （ｃ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列若しくはそのフラグメントの相補体、
    （ｄ）配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列若しくはその相補体に実質的に同一である、核酸、又は
    （ｅ）ストリンジェントな条件下において、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、その相補体、若しくはそれに実質的に同一である配列にハイブリダイズする、核酸
    を含むポリヌクレオチド配列に結合し、それを標的とする、請求項１～１３のいずれか１項に記載の系。
  15. 前記ｇＲＮＡが、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、又はそのバリアントに結合し、それを標的とするか、又はそれによってコードされる、請求項１～１４のいずれか１項に記載の系。
  16. 前記ｇＲＮＡスペーサーが、配列番号２９～５１、８７、１５７～１７０から選択される配列、その相補体、又はそのバリアントを含む、請求項９～１５のいずれか１項に記載の系。
  17. 前記ｇＲＮＡが、配列番号６４～８６、８８、１７１～１８４から選択されるポリヌクレオチド配列、その相補体、又はそのバリアントを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の系。
  18. 前記ｇＲＮＡが、配列番号３５、４０、及び４４から選択されるポリヌクレオチド配列に結合するか若しくはそれによってコードされるか、又は前記ｇＲＮＡが、配列番号７０、７５、及び７９から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の系。
  19. 前記ドナー配列が、配列番号５３～５６、１５４、及び１５５から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の系。
  20. 前記ドナー配列が、配列番号５５のポリヌクレオチドを含む、請求項１９に記載の系。
  21. 前記ドナー配列が、配列番号５６のポリヌクレオチドを含む、請求項１９に記載の系。
  22. 前記Ｃａｓタンパク質が、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus pyogenes）Ｃａｓ９タンパク質、又はスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）Ｃａｓ９タンパク質である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の系。
  23. 前記Ｃａｓタンパク質が、配列番号１８又は配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の系。
  24. 前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１、３、及び５～２３のいずれか１項に記載の系。
  25. 前記ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項２４に記載の系。
  26. 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、又はＡＡＶｒｈ．７４ベクターである、請求項２５に記載の系。
  27. 前記１つ又は複数のベクターのうちの１つが、配列番号５７～６０及び１２９～１３０から選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の系。
  28. ｇＲＮＡとドナー配列との間のモル比が、１：１、又は１：５、又は５：１～１：１０、又は１：１～１：５である、請求項１～２７のいずれか１項に記載の系。
  29. ドナー配列をコードする組換えポリヌクレオチドであって、前記ドナー配列が、ｇＲＮＡスペーサー及び／又はＰＡＭ配列が両側に隣接しており、前記ドナー配列が、ジストロフィン遺伝子のエクソン５２、エクソン５３、エクソン５４、エクソン５５、エクソン５６、エクソン５７、エクソン５８、エクソン５９、エクソン６０、エクソン６１、エクソン６２、エクソン６３、エクソン６４、エクソン６５、エクソン６６、エクソン６７、エクソン６８、エクソン６９、エクソン７０、エクソン７１、エクソン７２、エクソン７３、エクソン７４、エクソン７５、エクソン７６、エクソン７７、エクソン７８、及びエクソン７９から選択される１つ又は複数のエクソンを含む、組換えポリヌクレオチド。
  30. 前記ジストロフィン遺伝子が、ヒトジストロフィン遺伝子である、請求項１～２８のいずれか１項に記載の系、又は請求項２９に記載の組換えポリヌクレオチド。
  31. 前記系が、配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす、請求項３０に記載の系又は組換えポリヌクレオチド。
  32. 前記ドナー配列が、前記ヒトジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９を含むポリヌクレオチド配列を含む、請求項３０又は３１に記載の系又は組換えポリヌクレオチド。
  33. 前記ドナー配列が、配列番号５５又は配列番号５６のポリヌクレオチド配列を含む、請求項３２に記載の系又は組換えポリヌクレオチド。
  34. 配列番号５７～６０から選択される配列を含む、請求項２９に記載の組換えポリヌクレオチド。
  35. 請求項２７～３２のいずれか１項に記載の組換えポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  36. 請求項２９～３４のいずれか１項に記載の組換えポリヌクレオチド又は請求項３５に記載のベクターを含む、細胞。
  37. 突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞において、ジストロフィン機能を復元するための組成物、又は請求項１～２８若しくは３０～３３のいずれか１項に記載の系、若しくは請求項２９～３４のいずれか１項に記載の組換えポリヌクレオチド、若しくは請求項３５に記載のベクターを含む、前記組成物。
  38. 請求項１～２８若しくは３０～３３のいずれか１項に記載の系、又は請求項２９～３４のいずれか１項に記載の組換えポリヌクレオチド、又は請求項３５に記載のベクター、又は請求項３５に記載の組成物を含む、キット。
  39. 突然変異体ジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するための方法であって、前記細胞又は対象を、請求項１～２８若しくは３０～３３のいずれか１項に記載の系、又は請求項２９～３４のいずれか１項に記載の組換えポリヌクレオチド、又は請求項３５に記載のベクター、又は請求項３７に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。
  40. 配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす、請求項３９に記載の方法。
  41. １つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンによって引き起こされる破壊されたジストロフィン遺伝子を有する細胞又は対象において、ジストロフィン機能を復元するための方法であって、前記細胞又は前記対象を、請求項１～２８若しくは３０～３３のいずれか１項に記載の系、又は請求項２９～３４のいずれか１項に記載の組換えポリヌクレオチド、又は請求項３５に記載のベクター、又は請求項３７に記載の組成物と接触させるステップを含む、方法。
  42. 配列番号５３又は配列番号５５の配列を含むエクソンと接合されたエクソン５１をその間のイントロンとともに含むインフレーム転写産物をコードするジストロフィン遺伝子をもたらす、請求項４１に記載の方法。
  43. ジストロフィン機能が、前記１つ又は複数の欠失又は突然変異したエクソンに対応するジストロフィン遺伝子の１つ又は複数の野生型エクソンを挿入することによって復元される、請求項４１又は４２に記載の方法。
  44. 前記対象が、デュシェンヌ型筋ジストロフィーに罹患している、請求項３９～４３のいずれか１項に記載の方法。
  45. ジストロフィン遺伝子を矯正するためのゲノム編集系であって、野生型ジストロフィン遺伝子のエクソン５２～７９又はエクソン４５～７９を含むドナー配列を含む、ゲノム編集系。
  46. ホーミングエンドヌクレアーゼ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮ、及びＣａｓタンパク質から選択されるヌクレアーゼをさらに含む、請求項４５に記載のゲノム編集系。
JP2022565596A 2020-04-27 2021-04-27 標的化されたゲノム組込みによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを矯正するためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ９療法 Pending JP2023522788A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063016282P 2020-04-27 2020-04-27
US63/016,282 2020-04-27
US202163160551P 2021-03-12 2021-03-12
US63/160,551 2021-03-12
PCT/US2021/029424 WO2021222268A1 (en) 2020-04-27 2021-04-27 Crispr/cas9 therapies for correcting duchenne muscular dystrophy by targeted genomic integration

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023522788A true JP2023522788A (ja) 2023-05-31

Family

ID=78332169

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022565596A Pending JP2023522788A (ja) 2020-04-27 2021-04-27 標的化されたゲノム組込みによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを矯正するためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ９療法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230257723A1 (ja)
EP (1) EP4126073A1 (ja)
JP (1) JP2023522788A (ja)
WO (1) WO2021222268A1 (ja)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2996001A1 (en) 2015-08-25 2017-03-02 Duke University Compositions and methods of improving specificity in genomic engineering using rna-guided endonucleases
EP4089175A1 (en) 2015-10-13 2022-11-16 Duke University Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells
US20230357795A1 (en) * 2020-09-15 2023-11-09 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Aav-mediated homology-independent targeted integration gene editing for correction of diverse dmd mutations in patients with muscular dystrophy
WO2023165597A1 (en) * 2022-03-04 2023-09-07 Epigenic Therapeutics , Inc. Compositions and methods of genome editing
WO2023206088A1 (en) * 2022-04-26 2023-11-02 Huigene Therapeutics Co., Ltd. Rna base editor for treating dmd-associated diseases
CN115806989B (zh) * 2022-11-25 2023-08-08 昆明理工大学 针对DMD基因5号外显子突变的sgRNA及载体和应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7943374B2 (en) * 2005-08-21 2011-05-17 Markus Hildinger Super-size adeno-associated viral vector harboring a recombinant genome larger than 5.7 kb
JP2019507579A (ja) * 2015-10-28 2019-03-22 クリスパー セラピューティクス アーゲー デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置のための材料および方法
WO2017180915A2 (en) * 2016-04-13 2017-10-19 Duke University Crispr/cas9-based repressors for silencing gene targets in vivo and methods of use
WO2018017754A1 (en) * 2016-07-19 2018-01-25 Duke University Therapeutic applications of cpf1-based genome editing
TW202100748A (zh) * 2019-04-14 2021-01-01 美國公爵大學 恢復肌縮蛋白功能之基於ｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ之基因組編輯組合物

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021222268A1 (en) 2021-11-04
EP4126073A1 (en) 2023-02-08
US20230257723A1 (en) 2023-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7313055B2 (ja) Ｒｎａガイド遺伝子編集及び遺伝子調節
EP3452498B1 (en) Crispr/cas-related compositions for treating duchenne muscular dystrophy
US20190345483A1 (en) AAV Split Cas9 Genome Editing and Transcriptional Regulation
JP2023522788A (ja) 標的化されたゲノム組込みによってデュシェンヌ型筋ジストロフィーを矯正するためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ９療法
US20230159927A1 (en) Chromatin remodelers to enhance targeted gene activation
IL259100B2 (en) Therapeutic targets for human dystrophin gene repair using gene editing and methods for use
US20220177879A1 (en) Crispr/cas-based base editing composition for restoring dystrophin function
TW202100748A (zh) 恢復肌縮蛋白功能之基於ｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ之基因組編輯組合物
JP2020527030A (ja) 肝臓において目的のタンパク質を発現するためのプラットフォーム
US20230349888A1 (en) A high-throughput screening method to discover optimal grna pairs for crispr-mediated exon deletion
US20230348870A1 (en) Gene editing of satellite cells in vivo using aav vectors encoding muscle-specific promoters
US20230383270A1 (en) Crispr/cas-based base editing composition for restoring dystrophin function
WO2021222328A1 (en) Targeted genomic integration to restore neurofibromin coding sequence in neurofibromatosis type 1 (nf1)
US20230392132A1 (en) Dual aav vector-mediated deletion of large mutational hotspot for treatment of duchenne muscular dystrophy
WO2023164670A2 (en) Crispr-cas9 compositions and methods with a novel cas9 protein for genome editing and gene regulation
WO2023200998A2 (en) Effector domains for crispr-cas systems
WO2023212677A2 (en) Identification of tissue-specific extragenic safe harbors for gene therapy approaches
WO2024081937A2 (en) Cas12a fusion proteins and methods of using same