JP2023511236A - ＩＬ－１β受容体シグナル伝達に干渉する剤 - Google Patents

Abstract

本開示は、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）と特異的に結合し、これを中和する抗体、及びＩＬ－１β媒介性疾患及び障害の治療的処理のためのこのような抗体の用途に関する。

Description

優先権
本願は、２０２０年１月２１日出願の米国特許仮出願第６２／９６３，６５４号の優先権を主張し、この仮出願の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表であって、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年７月８日に作成され、１５２７１＿０００１－００３０４＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、サイズは５４，２８６バイトである。

背景
ヒトインターロイキン１β（ＩＬ－１β）は、感染及び炎症中に末梢免疫応答のメディエーターとして作用する炎症促進性サイトカインである。ＩＬ－１βは、当初、前駆体ペプチド（プロＩＬ－１β）の形態で合成され、これが、インフラマソーム複合体においてカスパーゼ－１によって切断されて、細胞外へと分泌される。ＩＬ－１βは、種々の細胞タイプによって放出され得る。

２種類のＩＬ－１受容体、ＩＬ－１ＲＩ及びＩＬ－１ＲＩＩがある。ＩＬ－１βは、受容体ＩＬ－１ＲＩを通じて標的細胞に対する作用を発揮する。調節不全のＩＬ－１β活性は、自己免疫疾患に特徴的であり、異常に増大したレベルのサイトカイン、又はＩＬ－１ＲＩ内在性アンタゴニストの質的又は量的欠陥のいずれかによって起こり得る。ＩＬ－１βは、いくつかの自己炎症性疾患に特異的に関係づけられている。

カナキヌマブ（イラリス、ＡＣＺ８８５）は、ノバルティス（Novartis）によって開発された、インターロイキン１βを標的とするヒトモノクローナル抗体である。カナキヌマブの作用モードは、ＩＬ－１βシグナル伝達の中和に基づいている（Alten, Gram ら、2008）。カナキヌマブは、２００９年にクリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）の治療について承認され、続いて２０１６年に３つの追加的な希少で重篤な自己炎症性疾患に関して承認された（Gram 2016）。

ゲボキズマブ（ＸＯＭＡ０５２）は、ゾーマ（XOMA）によって開発された、ＩＬ－１βを標的とする別のモノクローナル抗体である。ゲボキズマブは、そのＩＬ－１ＲＩ：ＩＬ－１ＲＡｃＰシグナル伝達複合体に対するアフィニティを低減することによりＩＬ－１β生物活性を調節する調節性治療抗体であると主張されている（Owyang, Issafrasら、2011） （Issafras, Corbinら、2013）。

近年、ＩＬ－１βは、他の心血管疾患修飾因子と同様、動脈硬化性プラークの発生におけるいくつかのステップに関連していることが見出されている（McCarty及びFrishman 2014）。この仮説は、これらの炎症性化学物質が、以前の心臓発作によるダメージから心臓が治癒するのを妨げる可能性があるというものである。２０１７年に、カナキヌマブを用いる第III相臨床試験により、心臓発作、脳卒中、心血管疾患による死亡を合計１５％低減したことが解明された。この試験では、肺がんの発生率及び死亡率が有意に低減することも解明された。

自己炎症性疾患、心臓発作及び肺がんにおける抗ＩＬ－１β抗体の有効性を考慮すると、改善された有効性及び薬物動態プロフィールを有するさらなる抗ＩＬ－１β抗体の開発の必要性がある。

概要
本開示は、特異的に結合し、ＩＬ－１βの少なくとも1つの活性を中和、阻害、遮断、抑制、低減する、又はそれに干渉するモノクローナル抗体及びその抗原結合フラグメントを提供する。本明細書において開示される抗体又はそのフラグメントによって中和、阻害、遮断、抑制、低減又は干渉され得るＩＬ－１βの活性としては、その受容体ＩＬ－１ＲＩのＩＬ－１β活性化の中和などが挙げられるがそれらに限らない。

本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む、ＴＡＶＯ３０４と名付けられた、ヒトＩＬ－１βに対するマウスモノクローナル抗体を提供する。

本開示は、それぞれ配列番号３、配列番号４及び配列番号５として示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と名付けられた３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、ＴＡＶＯ３０４の重鎖可変領域を提供する。

本開示は、それぞれ配列番号６、配列番号７及び配列番号８として示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と名付けられた３つのＣＤＲを含む、ＴＡＶＯ３０４の軽鎖可変領域を提供する。

本開示は、配列番号９として示されるアミノ酸配列を有する３０４ＶＨ１と名付けられたＴＡＶＯ３０４の１つのヒト化重鎖可変領域を提供する。

本開示は、それぞれ配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３として示されるアミノ酸配列を有する３０４ＶＬ１、３０４ＶＬ２、３０４ＶＬ３及び３０４ＶＬ４と名付けられた、ＴＡＶＯ３０４の４つのヒト化軽鎖可変領域を提供する。

本開示は、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１５として示される軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７３７６と名付けられた、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ１を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第一のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１６として示される軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７３７７と名付けられた、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ２を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第二のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１７として示される軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７３７８と名付けられた、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ３を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第三のヒト化抗体を提供する。

本開示は、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１８として示される軽鎖配列を含む、ＴＡＶＯ７３７９と名付けられた、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ４を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第四のヒト化抗体を提供する。

本明細書において開示される抗体は、全長ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４抗体であることができ、あるいは、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖフラグメントを含む抗原結合部分のみを含んでいてもよい。抗体骨格は、たとえば残存エフェクター機能を排除するために、機能性に影響を与えるように改変してもよい。

本開示は、親の野生型抗体と比較した場合、延長された半減期を有する単離された操作された抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体をも提供する。半減期の延長は、親の野生型抗体と比較した場合にＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ（残基の番号付けはＥＵインデックスに従っている）から選択される任意の１セットの突然変異を用いて抗体のＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインを操作することによって実現することができる。

本開示は、残基２２２～２３７（ＥＵ番号付け）で又はその間で野生型抗体を切断するプロテアーゼによるタンパク質分解に対して増強された抵抗性を有する単離された操作された抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体をも提供する。タンパク質分解に対する抵抗性は、親の野生型抗体と比較した場合にＧ２３６欠失を有しているヒンジ領域にＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ突然変異（残基の番号付けはＥＵインデックスに従っている）を操作することによって実現することができる。

本開示は、本明細書において開示された抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体及び抗原結合フラグメントのポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをも提供する。

本開示は、本明細書において開示されたポリヌクレオチドを含むベクターをも提供する。

本開示は、本明細書において開示されたベクターを含む宿主細胞をも提供する。

本開示は、本明細書において開示された抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体を製造する方法であって、本明細書において開示された宿主細胞をこの抗体が発現される条件下で培養し、この抗体を精製することを含む方法をも提供する。

本開示は、本明細書において開示された抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をも提供する。

本開示は、ＩＬ－１βに対する抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体の結合を検出する方法をも提供する。

本開示は、ＩＬ－１βに対する抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体によるその受容体ＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１βの結合を遮断する方法をも提供する。

本開示は、ＩＬ－１βに対する抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体によるその受容体ＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１βの機能的活性を中和する方法をも提供する。

本開示は、操作された抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体の半減期を測定する方法をも提供する。

本開示は、操作された抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体のタンパク質分解に対する抵抗性を測定する方法をも提供する。

本開示は、治療的有効量の抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体を投与することを含む、対象の抗炎症性疾患を治療する方法をも提供する。

本開示は、治療的有効量の抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体を投与することを含む、対象の心血管疾患を治療する方法をも提供する。

本開示は、治療的有効量の抗ＩＬ－１βモノクローナル抗体を投与することを含む、対象の肺がんを治療する方法をも提供する。

本開示の具体的な側面を記載する明細書の１つのセクションのみにおいて記載されたもの、及び実施例又は図面においてのみ記載されたものも含め、本明細書に記載された本開示のあらゆる実施態様は、明示的に否認されたか不適切であるものでない限り、任意の他の１以上の実施態様と組み合わせることができる。
図面の簡単な説明

マウスモノクローナル抗ヒトＩＬ－１β抗体ＴＡＶＯ３０４による、（Ａ）ヒト、（Ｂ）アカゲザル及び（Ｃ）マウスＩＬ－１βに対する結合。

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーターアッセイにおける、ヒト及びアカゲザルＩＬ－１βによる刺激に対してのレポーター遺伝子発現の応答。

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおける、ＴＡＶＯ３０４又は参照抗体ｒｅｆＡｂ－１（カナキヌマブ）による、（Ａ）ヒト又は（Ｂ）アカゲザルＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子活性化の中和。

ＴＡＶＯ３０４の重鎖及び軽鎖可変領域のヒト化ＶＨ及びＶＬ変異体との配列アラインメント。４つのヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ変異体（３０４ＶＨ１）を４つのヒト化ＶＬ変異体（３０４ＶＬ１、３０４ＶＬ２、３０４ＶＬ３、及び３０４ＶＬ４）と対合させることによって形成することができる。図４は、登場順に、配列番号２、１０～１３、１、及び９をそれぞれ開示する。

（Ａ）非還元条件下及び（Ｂ）還元条件下での４つのヒト化抗ＩＬ－１β ＩｇＧ１抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析。

４つのヒト化抗ＩＬ－１ｂ ＩｇＧ１抗体による、（Ａ）ヒト及び（Ｂ）アカゲザルＩＬ－１βへの結合。

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおける、４つのヒト化抗ＩＬ－１β ＩｇＧ１抗体による、（Ａ）ヒト及び（Ｂ）アカゲザルＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子活性化の中和。

ＭＲＣ－５サイトカイン放出アッセイにおける、４つのヒト化抗ＩＬ－１β ＩｇＧ１抗体又は参照抗体ｒｅｆＡｂ－１（カナキヌマブ）による、ヒト肺線維芽細胞ＭＲＣ－５細胞からのヒトＩＬ－１β駆動型ＩＬ－６放出の中和。

本開示の詳細な説明
＜定義＞
特許及び特許出願を含むがこれらに限定されない、本明細書で引用したすべての刊行物は、完全に記載されているかのように参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用される用語法は、特定の実施態様を説明する目的のみのためのものであり、限定することを意図していないことは理解されるべきである。別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

本明細書に記載されるものと同様又は等価の任意の方法及び材料が、本開示に関連する実施において使用されてもよいが、例示的な材料及び方法が本明細書に記載されている。

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形態の「ある」、「ひとつ（一つ）の」、及び「この（その）（前記）」（「a」、「an」及び「the」）は、そうでないことを内容が明確に示していない限り、複数の指示対象を含む。したがって、たとえば、「ある（一つの）細胞」（「a cell」）への参照は、２又はそれ以上の細胞の組み合わせ等を含む。

「抗体」は、広義で解釈され、マウス、ヒト、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体フラグメント、二特異性又は多特異性抗体、二量体、四量体又は多量体抗体、単鎖抗体、ドメイン抗体、及び要求される特異性の抗原結合部位を含むイムノグロブリン分子の任意の他の改変コンフィギュレーションを含む、イムノグロブリン分子を含む。

「全長抗体分子」は、ジスルフィド結合によって相互連結された２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）、ならびにその多量体（たとえばＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインから構成される）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）で隔てられた相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる変動性の高い領域に、さらに分けられることがある。各ＶＨ及びＶＬは、それぞれ３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントから構成され、それらはアミノ末端からカルボキシル末端まで以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。

「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体における「抗原結合部位」である。ＣＤＲは、種々の用語を使用して定義され得る： （i）相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＨ中の３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ中の３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）は、配列可変性に基づいている（Wuら（1970）、J Exp Med 132: 211-50 （Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991）。（ii）「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」、ＶＨ中の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ中の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）は、Chothia及びLeskによって定義された構造において超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す（Chothiaら（1987）、J Mol Biol 196: 901-17）。インターナショナルイムノジェネティクス（International ImMunoGeneTics）（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準化された番号付け及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴ描写の対応は、Lefrancら（2003）、Dev Comp Immunol 27: 55-77において記載されている。本明細書において使用される「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、明細書において明示的に記載されている場合を除き、上記のKabat、Chothia又はＩＭＧＴに記載されたいずれかの方法によって定義されたＣＤＲを含む。

イムノグロブリンは、その重鎖定常領域アミノ酸配列に応じてIｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つの主要クラスに割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、さらにＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４アイソタイプとしてサブクラスに分けられる。あらゆる脊椎動物種の抗体軽鎖は、それらの定常領域のアミノ酸配列に基づいて２つのタイプ、すなわちカッパ（κ）及びラムダ（λ）の１つに割り当てることができる。

「抗体フラグメント」は、重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位、たとえば重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を保持するイムノグロブリン分子の部分を指す。抗体フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖフラグメント、ならびにドメイン抗体（ｄＡｂ）、たとえば１つのＶＨドメインからなるものが挙げられる。ＶＨ及びＶＬドメインは、合成リンカーを介して連結されて種々のタイプの単鎖抗体デザインを形成してもよく、ここでＶＨ／ＶＬドメインは分子内で対合してもよく、あるいはＶＨ及びＶＬドメインが別個の単鎖抗体構築物によって発現されるような場合には分子間で対合してもよく、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）のような一価抗原結合部位、又は二特異性抗体を形成してもよい。たとえば、国際公開公報ＷＯ１９９８／４４００１、ＷＯ１９８８／０１６４９、ＷＯ１９９４／１３８０４及びＷＯ１９９２／０１０４７に記載されている。

「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去のような周知の可能な変更を除き、各重鎖及び各軽鎖において単一のアミノ酸組成を有する抗体集団を指す。モノクローナル抗体は、二特異性モノクローナル抗体が２つの別個の抗原性エピトープに結合することを除き、典型的には１つの抗原性エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内で不均一なグリコシル化を有してもよい。モノクローナル抗体は、単一特異性であっても多特異性であってもよく、あるいは一価、二価又は多価であってもよい。二特異性抗体は、モノクローナル抗体の用語に含まれる。

「単離された抗体」は、異なる抗原特性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体フラグメントを指す。「単離された抗体」は、十分な純度まで単離された抗体、たとえば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の純度である抗体を包含する。

「ヒト化抗体」は、抗原結合部位が非ヒト種に由来し、可変領域フレームワークがヒトイムノグロブリン配列に由来する抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワーク内に置換を含んでいてもよく、フレームワークは発現されるヒトイムノグロブリン又はヒトイムノグロブリン生殖系列遺伝子配列の正確なコピーでなくてもよい。

「ヒト抗体」は、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来し、ヒト対象者に投与された場合に最小限の免疫応答を有するように最適化された重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域又は定常領域の部分を含む場合、その定常領域もまたヒト起源の配列に由来する。

本明細書全体を通じて抗体定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、そうでないことが明示的に記載されている場合を除き、Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. （1991）に記載されたＥＵインデックスに従う。

本明細書においては、表１に示すように、従来の１文字及び３文字のアミノ酸コードが使用される。

哺乳類ＩｇＧ重鎖の定常領域配列は、Ｃ_Ｈ１－ヒンジ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３として配列中に指定される。ＩｇＧの「ヒンジ」、「ヒンジ領域」又は「ヒンジドメイン」は、ＥＵインデックスに従ったヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６を含み、Ｐｒｏ２３０で終わるとして一般的に定義されるが、機能的には、鎖の柔軟性部分はＧｌｕ２１６からＧｌｙ２３７までのような上部及び下部ヒンジ領域と名付けられた付加的な残基を含むと考えられることがあり、下部ヒンジは、ＦｃγＲ結合が一般的に帰属するＦｃ領域の残基２３３～２３９を指す。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ－Ｓ結合を形成する最初及び最後のシステイン残基を置くことによってＩｇＧ１配列と整列させてもよい。ＥＵインデックスに従って番号付けされるため、境界は若干変動し得るが、Ｃ_Ｈ１ドメインは、Ｖ_Ｈドメインに隣合い、イムノグロブリン重鎖分子のヒンジ領域のアミノ末端側にあり、たとえばＥＵ位置約１１８～２１５から、イムノグロブリン重鎖の最初（最もアミノ末端側）の定常領域を含む。Ｆｃドメインは、アミノ酸２３１からアミノ酸４４７へ拡がる；Ｃ_Ｈ２ドメインは、Ａｌａ２３１あたりからＬｙｓ３４０又はＧｌｙ３４１まで、Ｃ_Ｈ３は、Ｇｌｙ３４１又はＧｌｎ３４２からＬｙｓ４４７まで、である。Ｃ_Ｈ１領域のＩｇＧ重鎖定常領域の残基は、Ｌｙｓで終わる。Ｆｃドメイン含有分子は、抗体定常領域の少なくともＣ_Ｈ２及びＣ_Ｈ３ドメインを含み、したがって、ＩｇＧ重鎖定常領域の少なくともＡｌａ２３１あたりからＬｙｓ４４７までの領域を含む。Ｆｃドメイン含有分子は、場合によってはヒンジ領域の少なくとも部分を含んでいてもよい。

「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。エピトープは、典型的にはアミノ酸又は多糖側鎖のような成分の活性な（極性、非極性又は疎水性のような）表面グループ化からなり、特異的な三次元構造特徴、ならびに特異的な電荷特徴を有していてもよい。エピトープは、立体配座空間単位を形成する連続及び／又は不連続アミノ酸から構成されていてもよい。不連続エピトープについては、抗原の線状配列の異なる部分からのアミノ酸が、抗原分子のフォールディングを通じて三次元空間において近接する。抗体「エピトープ」は、エピトープを同定するために使用される方法学に依存する。

本明細書において使用される「リーダー配列」は、哺乳類細胞によってプロセッシングされ得るあらゆるシグナルペプチドを含み、ヒトＢ２Ｍリーダーを含む。このような配列は、当該技術分野において周知である。

「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸の重合体形態を指し、これはコード化及び非コード化アミノ酸、化学的又は生化学的に改変された又は誘導体化されたアミノ酸、及び改変されたペプチド骨格を有するポリペプチドを含むことができる。これらの用語は、ポリペプチドの翻訳と同時の修飾（たとえばシグナルペプチド切断）及びたとえばジスルフィド結合形成、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、タンパク分解的切断などの翻訳後修飾を有するポリペプチドをも含む。

さらに、本明細書において使用される場合、「ポリペプチド」は、そのタンパク質が所望の活性を維持する限りにおいて、ネイティブ配列に対する欠失、付加、及び置換（たとえば、当業者に公知であろう保存的性質の）のような改変を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異導入法を通じたもののように意図的であることができ、あるいは、タンパク質を産生する宿主の突然変異を通じたものや、ＰＣＲ増幅又はその他の組換えＤＮＡ法によるエラーのように偶発的であることもできる。

核酸分子に関して本明細書において使用される「組換え（体）」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成、及び／又は合成起源のポリヌクレオチドであり、その起源又は操作により、それが本来伴っているポリヌクレオチド配列の全部又は部分を伴っていないものを意味する。タンパク質又はポリペプチドに関して本明細書において使用される「組換え（体）」という用語は、組換えポリヌクレオチドからの発現によって産生されるポリペプチドを指す。宿主細胞又はウイルスに関して使用される「組換え（体）」という用語は、その中に組換えポリヌクレオチドが導入されている宿主細胞又はウイルスを指す。組換え（体）は、物質（たとえば、細胞、核酸、タンパク質、又はベクター）に関して、その物質が不均一な物質（たとえば、細胞、核酸、タンパク質、又はベクター）の導入によって改変されていることを指すためにも本明細書において使用される。

「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸」及び「核酸分子」という用語は、本明細書において互換的に使用され、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドであるヌクレオチドの重合体形態を含む。この用語は、分子の一次構造のみを指す。

「ベクター」は、生物系内で複製されることができる又はこのような系間を移動させることができるポリヌクレオチドを指す。ベクターポリヌクレオチドは、典型的には、細胞、ウイルス、動物、植物、及びベクターを複製することができる生物成分を利用して再構成された生物系のような生物系においてこれらのポリヌクレオチドの複製又は維持を促進するように機能する、複製起点、ポリアデニル化シグナル、又は選択マーカーのような要素を含有する。ベクターポリヌクレオチドは、一本鎖（単鎖）又は二本鎖の、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子、ｃＤＮＡ、又はこれらのハイブリッドであってもよい。

「発現ベクター」は、生物系で又は再構成された生物系で、発現ベクターに存在するポリヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチドの翻訳を指示するために利用されることができるベクターを指す。

「価」は、分子内におけるある抗原に対して特異的な結合部位の特定の数の存在を指す。このように、「一価」「二価」「四価」及び「六価」という用語は、分子内におけるある抗原に対して特異的な結合部位がそれぞれ１つ、２つ、４つ及び６つ存在することを指す。

本明細書において使用される場合、核酸配列、タンパク質又はポリペプチドに関して使用される「異種」という用語は、これらの分子が、異種核酸配列、タンパク質又はポリペプチドが由来した細胞には天然に生じないことを意味する。たとえば、ヒト細胞ではない細胞中に挿入されたヒトポリペプチドをコードする核酸配列は、その特定の文脈において異種核酸配列である。異種核酸は、異なる生物又は動物種から由来してもよい一方、このような核酸は、異種であるために別の生物種から由来する必要はない。たとえば、いくつかの場合においては、合成核酸配列又はそこにコードされるポリペプチドは、その細胞が以前はその合成核酸を含有していなかったことにおいて、それが導入された細胞にとって異種であることができる。このように、たとえば、合成核酸配列又はそこにコードされるポリペプチドの１又はそれ以上の成分がもともとはヒト細胞に由来したとしても、合成核酸配列又はそこにコードされるポリペプチドは、ヒト細胞にとって異種であると考えられ得る。

本明細書において使用される「宿主細胞」は、インビボ又はインビトロの真核細胞、又は単細胞体として培養された多細胞生物由来の細胞（たとえば、細胞株）を示し、この真核細胞は核酸（たとえば、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター）のレシピエントとして使用できる、又は使用されてきたものであり、その核酸によって遺伝的に改変されている元の細胞の子孫を含む。単一細胞の子孫は、天然、偶発的又は意図的な突然変異のため、形態、あるいはゲノム又は全ＤＮＡ相補性が元の親と完全に同一である必要は必ずしもないことは理解される。「組換え宿主細胞」（「遺伝子改変宿主細胞」ともいう）は、異種核酸、たとえば発現ベクターを導入されている宿主細胞である。たとえば、遺伝子改変真核宿主細胞は、好適な真核宿主細胞への異種核酸、たとえばその真核宿主細胞にとって異質の外来性核酸又はその真核宿主細胞に通常見いだされない組換え核酸の導入によって遺伝子改変されている。

「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「結合する」は、他の抗原に対するよりも高いアフィニティでの特異的抗原との抗体結合を指す。典型的には、抗体は、その結合についての平衡解離定数（ＫＤ）が、約１×１０^－８Ｍ以下、たとえば約１×１０^－９Ｍ以下、約１×１０^－１０Ｍ以下、約１×１０^－１１Ｍ以下、又は約１×１０^－１２Ｍ以下である場合、典型的には非特異的抗原（たとえばＢＳＡ、カゼイン）への結合についてのＫＤよりも少なくとも１００倍低いＫＤを有する場合、「特異的に結合する」。ＫＤは、標準的な手順を用いて測定することができる。

本明細書において使用される場合、「治療」、「治療する」などの用語は、所望の薬学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。この効果は、疾患又はその症状を完全に又は部分的に防止する意味で予防的であってもよく、及び／又は、疾患及び／又はその疾患に帰される悪影響についての部分的又は完全な治癒の意味で治療的であってもよい。本明細書において使用される「治療」は、哺乳類、たとえばヒトにおける疾患のあらゆる治療を包含し、（ａ）疾患の素因はあり得るが、まだ疾患と診断されていない対象において、疾患の発生を防止すること；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち疾患の進行を止めること；及び（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち疾患の退縮を引き起こすことを含む。

本明細書において互換的に使用される「個体」、「対象」、「宿主」及び「患者」という用語は、哺乳類を指し、ネズミ類（たとえば、ラット、マウス）、ウサギ類（たとえば、ウサギ）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ類、ネコ類、偶蹄類（たとえば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）などを含むがこれらに限定されない。

「治療的有効量」又は「効果的量」は、疾患の治療のために哺乳類又は他の対象に投与された場合、その疾患についてそのような治療をもたらすのに十分な、ある剤の量又は二剤の合計量を指す。「治療的有効量」は、その（それらの）剤、疾患及びその重症度、及び治療すべき対象の年齢、体重などに応じて変動するであろう。

本開示は、当然ながら変動し得る場合があるので、記載された特定の実施態様に限定されないことは理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語法は、特定の実施態様を説明する目的だけのものであり、限定することを意図していないことも理解されるべきである。

本明細書において、少なくとも１つのＩＬ－１βの活性、たとえば、その受容体ＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１βの機能的活性を、特異的に結合し、中和、阻害、遮断、抑制、低減、又は干渉する、モノクローナル抗体及びその抗原結合フラグメントが記載される。これらの抗ＩＬ－１β抗体及び抗原結合フラグメントは、ＩＬ－１β媒介性疾患を治療するために対象に治療的に投与することができる。
＜抗ＩＬ－１β抗体及び抗原結合フラグメントの組成＞

本開示は、マウスハイブリドーマスクリーニングから同定された、 特異的に結合してヒトインターロイキン１β（ＩＬ－１β）の少なくとも１つの活性を中和、阻害、遮断、抑制、低減、又は干渉する、ＴＡＶＯ３０４と名付けられたマウスモノクローナル抗体を提供する。ＴＡＶＯ３０４は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列、及び配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含む。ＴＡＶＯ３０４の重鎖可変領域は、それぞれ配列番号３、配列番号４及び配列番号５として示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と名付けられた３つの相補性決定領域を含む。ＴＡＶＯ３０４の軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６、配列番号７及び配列番号８として示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と名付けられた３つの相補性決定領域を含む。

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４の重鎖可変領域配列（配列番号１）

重鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４の軽鎖可変領域配列（配列番号２）

軽鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４のＨＣＤＲ１配列（配列番号３）

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４のＨＣＤＲ２配列（配列番号４）

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４のＨＣＤＲ３配列（配列番号５）

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４のＬＣＤＲ１配列（配列番号６）

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４のＬＣＤＲ２配列（配列番号７）

抗ヒトＩＬ－１βマウスモノクローナル抗体ＴＡＶＯ３０４のＬＣＤＲ３配列（配列番号８）

マウス抗ヒトＩＬ－１β抗体ＴＡＶＯ３０４は、ヒト生殖系列スキャフォールド上にマウスＣＤＲを移植することによってヒト化することができる。少数の鍵となるマウス残基は、免疫原性を最小限にする一方でより高い安定性とより良い発現を達成するために逆突然変異によって保存される。ＴＡＶＯ３０４については、１つのヒト化ＶＨ変異体（３０４ＶＨ１）がＩＧＨＶ３－４８^＊０１に基づいて設計され、４つのヒト化ＶＬ変異体が、ＩＧＫＶ１－３９^＊０１に基づく３０４ＶＬ１及び３０４ＶＬ２を用い、ＩＧＫＶ２－４０^＊０１に基づく３０４ＶＬ３及び３０４ＶＬ４を用いて、１組の逆突然変異を用いて設計される。

上記に基づいて、本開示は、配列番号９として示されるアミノ酸配列を有する、３０４ＶＨ１と名付けられたＴＡＶＯ３０４の１つのヒト化重鎖可変領域を提供する。

ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１配列（配列番号９）

ヒト化重鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

本開示は、それぞれ配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３として示されるアミノ酸配列を有する、３０４ＶＬ１、３０４ＶＬ２、３０４ＶＬ３及び３０４ＶＬ４と名付けられたＴＡＶＯ３０４の４つのヒト化軽鎖可変領域を提供する。

ヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ１配列（配列番号１０）

ヒト化軽鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

ヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ２配列（配列番号１１）

ヒト化軽鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

ヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ３配列（配列番号１２）

ヒト化軽鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

ヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ４配列（配列番号１３）

ヒト化軽鎖の３つのＣＤＲの配列に下線が付されている。

ヒト化３０４ＶＨ１重鎖を４つのヒト化軽鎖と対合させることによって、ＴＡＶＯ３０４に対する４つのヒト化抗体を生成することができる。本開示は、ＴＡＶＯ７３７６と名付けられた、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１５として示される軽鎖配列を含む、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ１を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する１つのヒト化ＩｇＧ１抗体を提供する。

本開示は、ＴＡＶＯ７３７７と名付けられた、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１６として示される軽鎖配列を含む、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ２を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第二のヒト化ＩｇＧ１抗体を提供する。

本開示は、ＴＡＶＯ７３７８と名付けられた、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１７として示される軽鎖配列を含む、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ３を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第三のヒト化ＩｇＧ１抗体を提供する。

本開示は、ＴＡＶＯ７３７９と名付けられた、配列番号１４として示される重鎖配列及び配列番号１８として示される軽鎖配列を含む、ヒト化重鎖可変領域３０４ＶＨ１及びヒト化軽鎖可変領域３０４ＶＬ４を含む、ＴＡＶＯ３０４に対する第四のヒト化ＩｇＧ１抗体を提供する。

３０４ＶＨ１に基づく抗ヒトＩＬ－１βヒト化ＩｇＧ１抗体重鎖（配列番号１４）

重鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。Ｋ４０９Ｒ突然変異は太字で示されている。

３０４ＶＬ１に基づく抗ヒトＩＬ－１βヒト化ＩｇＧ１抗体軽鎖（配列番号１５）

軽鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。

３０４ＶＬ２に基づく抗ヒトＩＬ－１βヒト化ＩｇＧ１抗体軽鎖（配列番号１６）

軽鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。

３０４ＶＬ３に基づく抗ヒトＩＬ－１βヒト化ＩｇＧ１抗体軽鎖（配列番号１７）

軽鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。

３０４ＶＬ４に基づく抗ヒトＩＬ－１βヒト化ＩｇＧ１抗体軽鎖（配列番号１８）

軽鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。

本開示は、配列番号９として示されるアミノ酸配列を有する３０４ＶＨ１と名付けられたＴＡＶＯ３０４の１つのヒト化重鎖可変領域を、それぞれ配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３として示されるアミノ酸配列を有する３０４ＶＬ１、３０４ＶＬ２、３０４ＶＬ３及び３０４ＶＬ４と名付けられたＴＡＶＯ３０４の４つのヒト化軽鎖可変領域の１つと共に含むＦａｂ又はｓｃＦｖドメインを有することにより、任意の２、３、又は４つのＩＬ－１βエピトープのエンゲージメントを含むことができる二特異性抗体又は多特異性抗体の調製をも提供する。たとえば、これは、３０４ＶＨ１と３０４ＶＬ１及び３０４ＶＨ１と３０４ＶＬ２；３０４ＶＨ１と３０４ＶＬ１及び３０４ＶＨ１と３０４ＶＬ３；３０４ＶＨ１と３０４ＶＬ１及び３０４ＶＨ１と３０４ＶＬ４；又はエンゲージメント２、３、又は４つのエピトープであることができるドメインの任意の他の順列を有するＦａｂ又はｓｃＦｖドメインを有する二特異性抗体であることができる。

本開示のＩＬ－１β結合抗体及びフラグメントは、ＩＬ－１βに対して特異的に結合する十分な能力を保持する抗原結合フラグメントを包含する。本明細書において使用されるＩＬ－１β結合フラグメントは、抗体の任意の３以上の連続アミノ酸（たとえば、４以上、５以上、６以上、８以上、又は１０以上の連続アミノ酸も）を含んでいてもよく、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦ（ｖ）フラグメント、又は個々の軽鎖もしくは重鎖可変領域又はそれらの部分を包含する。これらのフラグメントは、インタクトな抗体のＦｃフラグメントが欠如しており、循環からより迅速に排除され、インタクトな抗体よりも少ない非特異的組織結合を有することができる。これらのフラグメントは、周知の方法を使用して、たとえばパパイン （Ｆａｂフラグメントを製造するため）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを製造するため）のような酵素を用いるタンパク質分解的切断によって、インタクトな抗体から製造することができる。

本開示のＩＬ－１β結合抗体及びフラグメントは、二特異性抗体をも包含してもよく、これは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上での２つのドメイン間での対合を許さない短いリンカーを使用して、それによりドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を創設させる、二価抗体である。

本開示のＩＬ－１β結合抗体及びフラグメントは、ＩＬ－１βに結合する単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）をも包含してもよい。ｓｃＦｖは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域が一緒に又は個別にＩＬ－１βと結合する結合部位を形成する、抗体軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）に作動可能に連結された抗体重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。このようなＩＬ－１β結合フラグメントは、たとえば、抗体分子の重鎖及び軽鎖の可変部分及びアミノ酸Ｇｌｙ及びＳｅｒから構成される柔軟性タンパク質リンカーの合成又はＰＣＲ媒介性増幅のような当該技術分野において公知の方法によって調製することができる。得られるＤＮＡフラグメントは、発現のために大腸菌又は哺乳類細胞にクローニングされる。発現されたＩＬ－１β結合フラグメントは、宿主細胞から精製される。

本開示のＩＬ－１β結合抗体及びフラグメントは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む全長抗体を包含する。例示的なヒト又はヒト化抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ抗体を含む。本抗体は、任意のクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧＡ、ＩｇＤなど）又はアイソタイプであることができる。たとえば、ヒト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４の少なくとも１つのアイソタイプのような、ＩｇＧ Ｆｃドメインを含むことができる。

いくつかの場合において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号１９のＩｇＧ１ Ｆｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの場合において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号２０のＩｇＧ２ Ｆｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの場合において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号２１のＩｇＧ３ Ｆｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの場合において、ＩｇＧ Ｆｃドメインは、配列番号２２のＩｇＧ４ Ｆｃ配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

Ｓ２２８Ｐ突然変異は、ＩｇＧ４安定性を増強するためにＩｇＧ４抗体内に作製してもよい。

ＩｇＧ_１ Ｆｃ （配列番号１９）：

ＩｇＧ_２ Ｆｃ （配列番号２０）：

ＩｇＧ_３ Ｆｃ （配列番号２１）：

ＩｇＧ_４ Ｆｃ （配列番号２２）

本抗ＩＬ－１β抗体は、改変されたＦｃ領域が野生型Ｆｃ領域に関して少なくとも１つのアミノ酸改変を含む、改変されたＦｃ領域を含んでいてもよい。いくつかの実施態様において、本抗ＩＬ－１β抗体は、天然のＦｃ領域が、生物学的環境、たとえば、血清半減期又はインビトロアッセイによって測定される半減期において、親の野生型抗体と比較した場合、抗体の半減期が延長されるように改変されている、改変されたＦｃ領域を伴って提供される。

単一で又は組合せで作製してもよい例示的な突然変異は、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７Ｉ、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５Ａ及びＨ４３５Ｒ突然変異である。

ある種の実施態様において、半減期の延長は、配列番号２３のＩｇＧ１ ＦｃにおけるＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ突然変異（残基の番号付けはＥＵインデックスに従う）を操作することによって実現することができる（Dall'Acqua, Kienerら、2006）。

ある種の実施態様において、半減期の延長は、配列番号２４のＩｇＧ１ ＦｃにおけるＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ突然変異を操作することによって実現することもできる（Zalevsky, Chamberlainら、2010）。

ある種の実施態様において、半減期の延長は、配列番号２５のＩｇＧ１ ＦｃにおけるＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ突然変異を操作することによっても実現することができる（Hinton, Xiongら、2006）。

ある種の実施態様において、半減期の延長は、配列番号２６のＩｇＧ１ ＦｃにおけるＮ４３４Ａ突然変異を操作することによっても実現することができる（Shields, Namenukら、2001）。

ある種の実施態様において、半減期の延長は、配列番号２７のＩｇＧ１ ＦｃにおけるＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ突然変異を操作することによっても実現することができる（Petkova, Akileshら、2006）。

半減期の延長に対するＦｃ操作効果は、ネイティブのＩｇＧ Ｆｃを有する抗体に関してマウスにおけるＰＫ研究で評価することができる。

Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ突然変異を有するＩｇＧ_１ Ｆｃ（配列番号２３）

Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ突然変異を有するＩｇＧ_１ Ｆｃ（配列番号２４）

Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ突然変異を有するＩｇＧ_１ Ｆｃ（配列番号２５）

Ｎ４３４Ａ突然変異を有するＩｇＧ_１ Ｆｃ（配列番号２６）

Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ突然変異を有するＩｇＧ_１ Ｆｃ（配列番号２７）

いくつかの実施態様において、本抗ＩＬ－１β抗体は、天然のＦｃ領域が残基２２２～２３７（ＥＵ番号付け）で又はこの間で野生型抗体を切断するプロテアーゼによるタンパク質分解に対する抗体抵抗性を増強するように改変されている、改変されたＦｃ領域を伴って提供される。

ある種の実施態様において、タンパク質分解に対する抵抗性は、配列番号２８の親の野生型抗体と比較した場合Ｇ２３６が欠失しているヒンジ領域におけるＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ突然変異（残基の番号付けはＥＵインデックスに従う）を操作することによって実現することができる（Kinder, Greenplate ら、2013）。

Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ突然変異及びＧ２３６の欠失を有するＩｇＧ_１ Ｆｃ（配列番号２８）

エフェクターの機能性が望ましくない場合、本開示の抗体は、活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する抗体の結合を低減する、及び／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）又は食作用（ＡＤＣＰ）のようなＦｃエフェクター機能を低減する、抗体Ｆｃにおける少なくとも１つの突然変異を導入するようにさらに操作されていてもよい。

活性化ＦｃγＲに対する抗体の結合を低減し、続いてエフェクター機能を低減するように突然変異させてもよいＦｃ位置は、たとえば（Xu, Alegreら、2000） （Vafa, Gillilandら、2014） （Bolt, Routledgeら、1993） （Chu, Vostiarら、2008） （Shields, Namenukら、2001）に記載されているものである。

単一で又は組合せで作製してもよい例示的な突然変異は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４上でのＫ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６の欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ突然変異である。

ＡＤＣＣを低減するために作製してもよい例示的な組合せ突然変異は、ＩｇＧ１上でのＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ２上でのＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４上でのＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ４上でのＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４上でのＮ２９７Ａ、ＩｇＧ２上でのＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、ＩｇＧ１上でのＫ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、ＩｇＧ２上でのＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ１上でのＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ＩｇＧ１上でのＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、ＩｇＧ１上でのＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４上でのＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＩｇＧ４上でのＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓである。ＩｇＧ_２由来の残基１１７～２６０及びＩｇＧ_４由来の残基２６１～４４７を有するＦｃのようなハイブリッドＩｇＧ_２／４ Ｆｃドメインもまた使用してもよい。

いくつかの実施態様において、本抗ＩＬ－１β抗体は、天然のＦｃ領域がＦｃヘテロ二量体化による二特異性抗体の生成を促進するために改変されている、改変されたＦｃ領域を伴って提供される。

ある種の実施態様において、Ｆｃヘテロ二量体化は、２つの親抗体でのＦ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ突然変異の操作及びＦａｂアーム交換として知られるプロセスにおける二特異性抗体の生成によって実現することができる（Labrijn, Meestersら、2014）。

ある種の実施態様において、Ｆｃヘテロ二量体化は、ノブ・イン・ホール（Knob-in-Hole）戦略を促進するためのＦｃ突然変異によっても実現することができる（たとえば、国際公開公報ＷＯ２００６／０２８９３６を参照されたい）。小さい側鎖を有するアミノ酸（ホール）は、一方のＦｃドメインに導入され、大きい側鎖を有するアミノ酸（ノブ）は、他方のＦｃドメインに導入される。この２つの重鎖の共発現後、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果としてヘテロ二量体が形成される（Ridgway, Prestaら、1996）。

ノブ及びホールを形成する例示的なＦｃ突然変異対は以下のとおりである：Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ。

ある種の実施態様において、Ｆｃヘテロ二量体化は、静電的一致（electrostatically-matched）相互作用戦略を促進するためのＦｃ突然変異によっても実現することができる（Gunasekaran, Pentonyら、2010）。突然変異は、米国特許公開公報ＵＳ２０１０／００１５１３３；米国特許公開公報ＵＳ２００９／０１８２１２７；米国特許公開公報ＵＳ２０１０／０２８６３７又は米国特許公開公報ＵＳ２０１１／０１２３５３２に記載されているように、一方のＦｃドメインで正に荷電した残基及び他方のＦｃドメインで負に荷電した残基が生成されるように操作されていることができる。重鎖ヘテロ二量体化は、２つの突然変異させたＦｃ間の静電的一致相互作用によって形成されることができる。

保存的改変をさらに含む本開示の抗体は、本開示の範囲内である。

「保存的改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体の結合特性に有意に影響を与えたり変更しないアミノ酸改変を指す。保存的改変は、アミノ酸置換、付加及び欠失を含む。保存的置換は、アミノ酸が類似する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられている置換である。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、十分に定義されており、酸性側鎖（たとえば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（たとえば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（たとえば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（たとえば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（たとえば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（たとえば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（たとえば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（たとえば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び硫黄含有側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸を含む。さらに、アラニンスキャニング突然変異誘発法について従来記載されているように、ポリペプチド内の任意のネイティブ残基は、アラニンで置換してもよい（（MacLennan, Riceら、1998）; （Sasaki及びSutoh 1998））。本開示の抗体に対するアミノ酸置換は、たとえばＰＣＲ突然変異誘発法のような公知の方法によって作製してもよい（米国特許第４，６８３，１９５号）。あるいは、変異体のライブラリーは、たとえばランダム（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン、たとえば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドンを使用して生成してもよい。得られる抗体変異体は、本明細書において記載されているアッセイを使用してそれらの特性について試験してもよい。

本開示の抗体は、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化、又はポリエチレングリコール部分の付加（ペグ化）及び脂質化のような非天然共有結合性改変のようなプロセスによって、翻訳後修飾してもよい。このような改変は、インビボ又はインビトロで起こり得る。たとえば、本開示の抗体は、その薬物動態的プロフィールを改善するためにポリエチレングリコールとコンジュゲート化（ＰＥＧ化）してもよい。コンジュゲート化は、当業者に公知の技術によって実施してもよい。治療抗体のＰＥＧとのコンジュゲート化は、機能に干渉しない一方、薬力学を増強することが示されている（Leong, DeForgeら、2001, Yang, Basuら、2003, Knight, Jordanら、2004）。

本開示の抗体は、安定性、選択性、交差反応性、アフィニティ、免疫原性又は他の所望の生物学的もしくは生物物理学的特性を改善するために改変してもよく、それらは本開示の範囲内である。抗体の安定性は、多数の因子によって影響され、それらとしては（１）本質的な安定性に影響する個々のドメインのコアパッキング、（２）ＨＣ及びＬＣ対合にインパクトを有するタンパク質／タンパク質インターフェース相互作用、（３）極性及び荷電残基の埋没、（４）極性及び荷電残基についての水素結合ネットワーク、及び（５）他の分子内及び分子間力における表面電荷及び極性残基の分布が挙げられる（Worn及びPluckthun 2001）。残基を不安定化させる潜在的構造は、抗体の結晶構造に基づいて又はある場合においては分子モデリングによって同定してもよく、抗体安定性に対する残基の効果は、同定された残基に突然変異を持つ変異体を生成して評価することによって試験してもよい。抗体安定性を増大するための方法の一つは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって測定される熱転移中間点（Ｔｍ）を上げることである。一般に、タンパク質Ｔｍは、その安定性と相関し、タンパク質がアンフォールディングする傾向に依存する分解プロセスならびに溶液中でのアンフォールディング及び変性に対する感受性と逆に相関する（Remmele及びGombotz 2000）。多数の研究により、ＤＳＣによる熱的安定性として測定される製剤の物理的安定性のランキングと他の方法によって測定される物理的安定性との間の相関が見出されている（Maa及びHsu 1996、Remmele, Nightlingerら、1997、Gupta及びKaisheva 2003、Bedu-Addo, Johnsonら、2004、Zhang, Royら、2004）。製剤学的研究により、ＦａｂのＴｍは対応するｍＡｂの長期的な物理的安定性に関係することが示唆されている。

本開示の抗体は、製造及び薬剤安定性を改善するＦｃ領域のアミノ酸置換を有していてもよい。ＩｇＧ_１についての一例は、ラジカルに誘導される切断を遮断するヒンジ２２１－ＤＫＴＨＴＣ－２２６（配列番号３３）（ＥＵ番号付け）中のＨ２２４Ｓ（又はＨ２２４Ｑ）である（Yates, Gunasekaranら、2010）；ＩｇＧ_４については、Ｓ２２８Ｐ突然変異が半抗体交換（half-antibody exchange）を遮断する（Angal, Kingら、1993、Labrijn, Buijsseら、2009）。
＜抗ＩＬ－１β抗体及びフラグメントの発現及び精製＞

本開示の抗ＩＬ－１β抗体及びフラグメントは、単一の核酸（たとえば、抗体の軽鎖及び重鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単一の核酸）によって、又は各々が抗体又は抗体フラグメントの異なる部分をコードする２以上の別個の核酸によって、コードされることができる。

非限定的な例として、本開示は、配列番号１４のＴＡＶＯ７３７８のＩｇＧ１重鎖配列をコードする配列番号２９の核酸配列、配列番号１７のＴＡＶＯ７３７８の軽鎖配列をコードする配列番号３０の核酸配列を提供する。

ＴＡＶＯ７３７８重鎖ヌクレオチド配列（配列番号２９）

ＴＡＶＯ７３７８軽鎖ヌクレオチド配列（配列番号３０）

本明細書において記載される核酸は、ベクター、たとえば、核酸発現ベクター及び／又はターゲティングベクターに挿入することができる。このようなベクターは、種々の方法で、たとえば細胞又はトランスジェニック動物におけるＩＬ－１β結合抗体又は抗体フラグメントの発現のために、使用することができる。ベクターは、典型的には、そのベクターが使用されることになる宿主細胞において機能的であるように選択される。ＩＬ－１β結合抗体又はフラグメントをコードする核酸分子は、原核、酵母、昆虫（バキュロウイルス系）及び／又は真核の宿主細胞において増幅／発現してもよい。宿主細胞の選択は、ＩＬ－１β結合抗体又はフラグメントが翻訳後修飾（たとえば、グリコシル化及び／又はリン酸化）されるべきか否かに部分的に依存するであろう。そうである場合、酵母、昆虫、又は哺乳類の宿主細胞が好ましい。発現ベクターは、典型的には以下の成分の１以上を含む：プロモーター、１以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナー及びアクセプタースプライシング部位を含む完全イントロン配列、分泌のためのリーダー配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現すべきポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、及び選択マーカー要素。

ほとんどの場合において、リーダー又はシグナル配列は、抗ＩＬ－１β抗体又はフラグメントのＮ末端で、その分泌をガイドするために操作されている。宿主細胞からの抗ＩＬ－１β抗体又はフラグメントの分泌は、抗体又はフラグメントからのシグナルペプチドの除去をもたらす。したがって、成熟抗体又はフラグメントは、あらゆるリーダー又はシグナル配列を欠くことになる。真核宿主細胞発現系においてグリコシル化が望ましい場合のように、いくつかの場合において、グリコシル化又は収率を改善するために種々のプレ配列を細工してもよい。たとえば、シグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を変更してもよく、又はグリコシル化に影響し得るプロ配列を付加してもよい。

本開示は、本開示の核酸又はベクターを含む細胞（たとえば、単離された又は精製された細胞）をさらに提供する。この細胞は、本開示の核酸又はベクターによりコードされるポリペプチドが産生されるように本開示の核酸又はベクターでトランスフォームすることができる任意のタイプの細胞であることができる。ＩＬ－１β結合抗体又はフラグメントを発現させるために、本明細書において記載されるように得られた部分的又は全長の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡは、それらの遺伝子が転写及び翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入される。

核酸及びベクターを単離された細胞に導入する方法及びトランスフォームした宿主細胞をインビトロで培養及び選択する方法は、当該技術分野において公知であり、塩化カルシウム媒介性トランスフォーメーション、形質導入、接合法、トリペアレンタルメイティング（三親接合法）、ＤＥＡＥ、デキストラン媒介性トランスフェクション、感染、リポソームを用いる膜融合、ＤＮＡコーティングされた微粒子銃を用いる高速照射、単一細胞への直接マイクロインジェクション、及びエレクトロポレーションの使用を含む。

本開示の核酸又はベクターを細胞に導入した後、その細胞を、コードされている配列の発現に好適な条件下で培養する。次に、抗体、抗原結合フラグメント、又は抗体の部分を、細胞から単離することができる。

ある種の実施態様において、ＩＬ－１β結合抗体又はその抗原結合フラグメントを一緒になってコードする２以上のベクターを、細胞に導入することができる。

細胞培地中に分泌されているＩＬ－１β結合抗体又はフラグメントの精製は、多様な技術を使用して達成することができ、それらにはアフィニティ、イムノアフィニティ又はイオン交換クロマトグラフィ、分子ふるいクロマトグラフィ、調製用ゲル電気泳動又は等電点電気泳動、クロマトフォーカシング、及び高圧液体クロマトグラフィが含まれる。たとえば、Ｆｃ領域を含む抗体は、Ｆｃ領域に選択的に結合するプロテインＡを用いるアフィニティクロマトグラフィによって精製してもよい。

抗体又は抗原結合フラグメントの改変形態は、そのカルボキシル又はアミノ末端にアフィニティタグであるヘキサヒスチジン（配列番号３４）又はＦＬＡＧ（Eastman Kodak Co., New Haven, Conn.）もしくはｍｙｃ（Invitrogen）のような他の小ペプチドを用いて調製し、ワンステップアフィニティカラムによって精製してもよい。たとえば、ポリヒスチジンは、高いアフィニティ及び特異性でニッケルに結合するため、ニッケルのアフィニティカラム（たとえばQiagen（登録商標）ニッケルカラム）は、ポリヒスチジンタグの付された選択的結合剤の精製のために使用することができる。いくつかの場合において、２以上の精製ステップを用いてもよい。
＜ＩＬ－１βに対する抗ＩＬ－１β抗体及びフラグメントの結合及び活性＞

本開示は、他の抗原に対するよりも高いアフィニティでＩＬ－１βに結合することにおいてＩＬ－１βに対して選択的に結合する抗ＩＬ－１β抗体及びフラグメントを包含する。これらの抗ＩＬ－１β抗体及びフラグメントは、ヒトＩＬ－１βに選択的に結合し得るが、非ヒトＩＬ－１βにも検出可能に結合し得る。代替的に又は付加的に、これらの抗体又はフラグメントは、ヒトＩＬ－１βに対して及び他の哺乳類のＩＬ－１βに対して結合し得る。たとえば、これらの抗体又はフラグメントは、げっ歯類ＩＬ－１β、霊長類ＩＬ－１β、イヌＩＬ－１β、及びウサギＩＬ－１β、又はモルモットＩＬ－１βの１以上に結合し得る。代替的に又は付加的に、これらのＩＬ－１β結合抗体又はＩＬ－１β結合フラグメントは、組換えヒトＩＬ－１β及び内在性ヒトＩＬ－１βに対して同じ又は実質的に同じ効力を有していてもよい。

インビトロ及び細胞ベースのアッセイは、ＩＬ－１受容体タイプＩ（ＩＬ－１Ｒ１）に対するＩＬ－１βの結合を決定することにおける使用について当該技術分野において十分に記載されている。たとえば、ＩＬ－１受容体タイプＩに対するＩＬ－１βの結合は、ＩＬ－１β結合性抗体を固定化し、この固定化抗体を用いてＩＬ－１βを捕捉してＩＬ－１βが抗体に結合したか否かを決定し、結合したＩＬ－１β／抗体複合体に可溶型のＩＬ－１ＲＩを接触させて可溶性ＩＬ－１ＲＩが複合体に結合したか否かを決定することによって、決定してもよい。プロトコールは、可溶性ＩＬ－１ＲＩが固定化抗体に結合しないことを確認するために、ＩＬ－１βと接触させる前に可溶性ＩＬ－１ＲＩを固定化抗体と接触させることをも含んでいてもよい。このプロトコールは、結合相互作用の動態解析のためにＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）装置を使用して実施することができる。このようなプロトコールは、ある抗体又は他の分子がＩＬ－１受容体タイプＩに対するＩＬ－１βの結合を許容又は遮断するか否かを決定するために用いることもできる。

他のＩＬ－１β/ＩＬ－１ＲＩ結合アッセイについては、ＩＬ－１受容体タイプＩに対するＩＬ－１β結合の許容又は遮断は、ＩＬ－１β抗体又はそのＩＬ－１β結合フラグメントの存在下又は不存在下でのＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１βの結合を比較することによって決定してもよい。遮断は、相当する緩衝液又は希釈剤を含むがＩＬ－１β抗体又はそのＩＬ－１β結合フラグメントを含まないコントロールサンプルと比較した場合の、抗ＩＬ－１β抗体又はそのＩＬ－１β結合フラグメントの存在下でのＩＬ－１受容体タイプＩに対するＩＬ－１β結合の指定された低減としてアッセイ読み出し情報において同定される。アッセイ読み出し情報は、遮断の有無を示すものとして定性的に見てもよく、又は、抗体又は抗体フラグメントの存在による結合の低減パーセント又は倍率を示すものとして定量的に見てもよい。ＩＬ－１β結合抗体又はＩＬ－１β結合フラグメントがＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１β結合を実質的に遮断する場合、ＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１β結合は、その抗体又はフラグメントの不存在下での同じ濃度のＩＬ－１β及びＩＬ－１ＲＩの結合と比較して、少なくとも１０倍、代替的には少なくとも約２０倍、代替的には少なくとも約５０倍、代替的には少なくとも約１００倍、代替的には少なくとも約１０００倍、代替的には少なくとも約１００００倍、又はそれ以上、低減する。

この開示において記載されるＩＬ－１β結合抗体又はフラグメントによって結合される鍵となるアミノ酸残基（エピトープ）は、たとえばＰｅｐＳｐｏｔ（商標）ペプチドアレイ（JPT Peptide Technologies, Berlin, Germany）のようなペプチドアレイを使用して決定してもよく、この場合、ＩＬ－１βアミノ酸配列全体にわたって、各ペプチドが前のペプチドと１１アミノ酸重複する１２アミノ酸のペプチドのスキャンを膜上に直接合成する。代替的に又は付加的に、抗体競合実験を実施してもよく、このようなアッセイは当該技術分野において周知である。

本開示に従った使用に好ましいＩＬ－１β抗体又は抗体フラグメントは、一般に高いアフィニティで（たとえば、ＢＩＡＣＯＲＥを用いて決定する）ヒトＩＬ－１βに結合し、たとえば、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約５００ｐＭ以下、又はより好ましくは、約２５０ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、約２５ｐＭ以下、約１０ｐＭ以下、約５ｐＭ以下、約３ｐＭ以下、約１ｐＭ以下、約０．７５ｐＭ以下、約０．５ｐＭ以下、又は約０．３ｐＭ以下のＩＬ－１βについての平衡結合解離定数（ＫＤ）を有する。

本開示の抗体又はフラグメントは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定された場合、たとえば、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．７５ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．４ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、又は約０．２ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＩＬ－１βに結合してもよい。

好ましくは、本開示の抗体又は抗体フラグメントは、ＩＬ－１β以外の他のいかなる標的とも交差反応しない。たとえば、本発明の抗体及びフラグメントは、ＩＬ－１βに結合してもよいが、ＩＬ－１αに検出可能に結合しないか、又はそのＩＬ－１αの結合に関してそのＩＬ－１βの結合に少なくとも約１００倍（たとえば、少なくとも約１５０倍、少なくとも約２００倍、又は少なくとも約２５０倍も）高い選択性を有する。

本開示は、ＩＬ－１βの生物学的活性を中和するようにＩＬ－１βに結合する中和抗体又はその中和フラグメントも包含する。ＩＬ－１βの生物学的活性の中和は、レポーターアッセイにおけるＩＬ－１β刺激によるレポーター遺伝子発現、ヒト線維芽細胞又は他の細胞からのＩＬ－１β刺激によるＩＬ－６放出、ＩＬ－１β、又はＴヘルパー細胞のＩＬ－１β誘導による増殖のような、ＩＬ－１β生物学的活性の１以上のインジケーターについてアッセイによって評価することができる。ＩＬ－１βの生物学的活性の中和は、マウス関節炎モデルによってインビボで評価することもできる。好ましくは、本開示のＩＬ－１β結合抗体及びフラグメントは、ＩＬ－１βによって結合されたＩＬ－１受容体タイプＩ（ＩＬ－１ＲＩ）のシグナル伝達機能と関連するＩＬ－１βの生物学的活性を中和する。

一つの実施態様において、本開示の抗体又はそのフラグメントは、ＩＬ－１βの標的活性に直接関与するＩＬ－１βのエピトープへの結合によって、ＩＬ－１βの活性を中和、阻害、遮断、抑制、低減又は干渉することができる。別の実施態様において、本開示の抗体又はそのフラグメントは、ＩＬ－１βの標的活性に直接関与しないＩＬ－１βのエピトープへの結合によって、ＩＬ－１βの活性を中和、阻害、遮断、抑制、低減又は干渉することができるが、それに対する抗体又はフラグメント結合は、立体的に又はコンフォメーション的に、ＩＬ－１βの標的活性を阻害、遮断、抑制、低減又は干渉することができる。さらに別の実施態様において、本開示の抗体又はそのフラグメントは、ＩＬ－１βの標的活性に直接関与しないＩＬ－１βのエピトープに結合する（すなわち、非遮断抗体）が、それに対する抗体又はフラグメント結合は、ＩＬ－１βのクリアランスの増強をもたらす。

一般に、本開示の抗体及びフラグメントは、ＩＬ１受容体タイプＩへのＩＬ－１βの結合が遮断されるか否かにかかわらず、ＩＬ－１βの生物学的活性を中和、阻害、遮断、抑制、低減又は干渉することができる。より好ましくは、ＩＬ－１β結合抗体又はＩＬ－１β結合フラグメントは、その結合したＩＬ－１βのＩＬ－１受容体タイプＩへの結合を実質的に防止することなしに、ＩＬ－１βへの結合によってＩＬ－１βの生物学的活性を中和する。このような抗体及びフラグメントの潜在的な利点は、ＩＬ－１βがＩＬ－１ＲＩへ結合することをなお許容する一方で、ＩＬ－１βと結合し中和することができることである。これは、ＩＬ－１αが結合するための未結合のＩＬ－１ＲＩ部位がより少ないため、ＩＬ－１α生物学的活性ならびにＩＬ－１β生物学的活性の効果的な低減をもたらすことができる。したがって、本開示のＩＬ－１β結合抗体及びフラグメントは、ＩＬ－１のインビトロ及びインビボ生物学的活性を中和することが望ましい方法において有用である。

本発明の抗体又はフラグメントは、ＩＬ－１βの生物学的活性に影響するＩＬ－１βエピトープに特異的に結合する中和抗体又はフラグメントであってもよい。本発明の抗体又はフラグメントは、ＩＬ－１βの中和感受性（neutralization-sensitive）エピトープに結合することができる。ＩＬ－１βの中和感受性エピトープが本発明の抗体又はフラグメントの一つによって結合された場合、その結果は、そのエピトープを含むＩＬ－１βの生物学的活性の喪失である。
＜医薬組成物＞

本開示に従った使用のためのＩＬ－１β結合抗体及び抗体フラグメントは、本明細書での方法における使用のための組成物、特に医薬組成物に製剤化することができる。このような組成物は、好適な担体、たとえば薬学的に許容される剤との混合物に、治療的に又は予防的に有効な量の本開示のＩＬ－１β結合抗体又は抗体フラグメントを含む。典型的には、本開示のＩＬ－１β結合抗体及び抗体フラグメントは、医薬組成物への製剤化前に動物への投与のために十分に精製される。

薬学的に許容される剤としては、担体、賦形剤、希釈剤、酸化防止剤、保存料、着色料、香料及び希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶剤、充填剤、増量剤、緩衝液、送達ビヒクル、等張化剤、共溶剤、湿潤剤、複合体化剤、緩衝剤、抗菌剤、及び界面活性剤が挙げられる。

組成物は、液体形態で又は凍結乾燥もしくはフリーズドライ形態であることができ、１以上の凍結保護剤（lyoprotectants）、賦形剤、界面活性剤、高分子量構造用添加剤及び／又は増量剤を含んでいてもよい。

組成物は、非経口投与に好適であることができる。例示的な組成物は、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、病巣内、直腸内、経皮、経口及び吸入経路のような、当業者に利用可能な任意の経路による動物への注射又は点滴に好適である。

本明細書において記載される医薬組成物は、製品の局所濃度を提供する方式の（たとえば、ボーラス、デポ効果）制御送達又は持続性送達、徐放、及び／又は特定の局所環境における増大した安定性又は半減期のために製剤化することができる。
＜使用方法＞

本発明の抗体及びフラグメントは、ＩＬ－１β媒介性疾患又は医学的状態、たとえば、炎症状態、アレルギー及びアレルギー性の状態、過敏性反応、自己免疫疾患、重症感染症、及び器官又は組織移植の拒絶反応の、予防及び治療のために有用である。

本開示の抗体は、自己免疫疾患及び炎症状態、特に、骨量減少を伴う炎症状態及びリウマチ性疾患を含む関節炎（たとえば関節リウマチ、慢性関節炎、及び変形性関節炎）及びリウマチ性疾患のような自己免疫成分を含む病因を持つ炎症状態、炎症性疼痛、過敏症（気道過敏症及び皮膚過敏症の両方を含む）及びアレルギーの治療、予防又は改善のために、特に有用である。

本開示の抗体を用いてもよい具体的な自己免疫疾患としては、自己免疫性血液疾患（たとえば、溶血性貧血、再生不良性貧血、真正赤血球性貧血、及び特発性血小板減少症を含む）、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、浮腫性硬化症又は強皮症（sclerodoma）、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブンス・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（たとえば、潰瘍性大腸炎、クローン病及び過敏性腸症候群を含む）、内分泌性眼障害、バセドウ病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ぶどう膜炎（前眼部及び後眼部）、乾性角結膜炎及び春季角結膜炎、間質性肺線維症、乾癬性関節炎及び糸球体腎炎（ネフローゼ症候群の有無を問わず、たとえば、特発性ネフローゼ症候群又は微小変化型腎障害を含む）が挙げられる。

本開示の抗体は、喘息、気管支炎、じん肺、肺気腫、及びその他の気道の閉塞性又は炎症性疾患の治療、予防又は改善のためにも有用である。

本発明の抗体及びフラグメントは、移植片拒絶反応や異種移植片拒絶反応を含む心臓、肺、心肺複合体、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚又は角膜移植の治療レシピエントにおける使用のために、又は骨髄移植後などの移植片対宿主病又は器官移植に伴う動脈硬化の予防のためにも企図される。

本開示の抗体は、骨関節炎、骨粗鬆症及び他の炎症性関節炎を含む骨代謝の疾患、及び加齢関連の骨減少症を含む骨減少症全般、特に歯周病の治療のために特に有用である。

本開示の抗体は、心筋梗塞、脳卒中、心血管死（cardiovascular death）、うっ血性心不全、心停止、急性冠動脈症候群、狭心症、又は血行再建術を含む心血管イベント及び／又は心血管疾患の低減、予防又は治療のためにも有用である。

本開示の抗体は、肺がん、膵臓がん及び乳がんを含むがんの予防又は治療のためにも有用である。一つの実施態様において、本明細書において開示される抗ＩＬ－１β抗体又はそのフラグメントは、肺がんの治療及び／又は予防に関して有効な量で使用してもよい。別の実施態様において、本明細書において開示される抗ＩＬ－１β抗体又はそのフラグメントは、膵臓がんの治療及び／又は予防に関して有効な量で使用してもよい。別の実施態様において、本明細書において開示される抗ＩＬ－１β抗体又はそのフラグメントは、乳がんの治療及び／又は予防に関して有効な量で使用してもよい。

有効量の抗ＩＬ－１β抗体は、１型糖尿病、２型糖尿病、肥満、高血糖、高インスリン血症、インスリン抵抗性、及びインスリン抵抗性を特徴とする病態及び状態の治療及び／又は予防のために本開示において使用してもよい。このような方法は、２型糖尿病、１型糖尿病、肥満、高血糖、高インスリン血症、インスリン抵抗性、及びインスリン抵抗性を特徴とする病態及び状態を患う哺乳類対象（たとえば、ヒト）を治療するために、又はリスクのある対象においてそれらの発症を予防するために、使用してもよい。一つの実施態様において、本明細書において開示される抗ＩＬ－１β抗体又はそのフラグメントは、２型糖尿病の治療及び／又は予防のために有効な量で使用してもよい。

治療的使用に加えて、本発明の抗体及びフラグメントは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は組織免疫組織化学のようなイムノアッセイを使用して、ＩＬ－１β（たとえば、血清又は血漿のような生物学的サンプル中の）を検出するために診断方法において使用してもよい。

生物学的サンプル中のＩＬ－１βを検出するための方法は、１以上の本発明の抗体又はフラグメントに生物学的サンプルを接触させる工程、及びＩＬ－１βに結合した抗体もしくはフラグメント又は未結合の抗体もしくはフラグメントのいずれかを検出する工程を含むことができ、それによって生物学的サンプル中のＩＬ－１βを検出することができる。抗体又はフラグメントは、結合した又は未結合の抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接又は間接的に標識されていることができる。好適な検出可能な物質としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料及び放射性材料が挙げられる。

実施例
以下の例は、本開示をより詳細に説明するために提供される。これらは、本開示を説明することを意図するものであり、限定する意図のものではない。
＜実施例１： マウス抗ＩＬ－１β抗体ＴＡＶＯ３０４に対するＩＬ－１β結合アフィニティ＞

ハイブリドーマスクリーニングによって、ＴＡＶＯ３０４を、マウス抗ヒトＩＬ－１β抗体として同定した。ＥＬＩＳＡベース結合アッセイを用いて、組換えヒトＩＬ－１βに対するＴＡＶＯ３０４結合を評価した。このアッセイにおいて、１μｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－１β（R&D systems）をＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。増大する濃度のＴＡＶＯ３０４抗体をこのプレートに適用し、組換えヒトＩＬ－１βに対するその結合を、ＨＲＰコンジュゲート化抗マウス二次抗体によって検出した。ＴＡＶＯ３０４は、用量依存的に組換えヒトＩＬ－１βと結合し、３．６ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有することが観察された（図１）。

マウス及びアカゲザルＩＬ－１βに対するＴＡＶＯ３０４の結合も、それぞれマウス及びアカゲザルＩＬ－１βをプレートにコーティングすることにより同様のＥＬＩＳＡアッセイにおいて評価した。ＴＡＶＯ３０４は、マウスＩＬ－１βに対して有意な結合アフィニティを示さなかった（図１）。これに対して、アカゲザルＩＬ－１βに対して良好な結合アフィニティを示し、１２．２ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有していた。
＜実施例２: ＴＡＶＯ３０４によるＩＬ－１β中和についてのインビトロアッセイ＞

ＩＬ－１βの機能的活性を評価するためにＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーターアッセイを開発した。このアッセイにおいては、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１β細胞（Invivogen）は、ＩＬ－１β受容体ＩＬ－１Ｒと、５つのＮＦ－κＢ及び５つのＡＰ－１結合部位に融合されたＩＦＮ－βミニマルプロモーターの制御下の分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１β細胞の表面での受容体ＩＬ－１Ｒに対するＩＬ－１βの結合は、シグナル伝達カスケードの引き金を引き、ＮＦ－κＢの活性化及び後続するＳＥＡＰの産生をもたらす（図２）。

ＩＬ－１βに対するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーター細胞株の応答を、このアッセイを使用して評価した。ヒトＩＬ－１β及びアカゲザルＩＬ－１βの両方が用量依存的にレポーター遺伝子発現を誘導することができ、それぞれ１．１４ｎｇ／ｍＬ及び０．１６ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を有していることが観察された（図２）。

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーターアッセイを、次に、ヒトＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子発現の遮断においてＴＡＶＯ３０４を評価するために使用した。増大する濃度の抗体を、１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－１βと共にＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーター細胞に適用した。一晩インキュベートした後、ＳＥＡＰレポーター遺伝子発現を定量した。ＴＡＶＯ３０４はＩＬ－１β媒介性レポーター遺伝子発現を用量依存的に中和し、ＩＣ５０は０．１２μｇ／ｍＬ（図３）で、ＩＬ－１β阻害における参照抗体ｒｅｆＡｂ－１よりもはるかに強力である（＞６倍）ことが観察された。

同じアッセイをアカゲザルＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子発現の遮断においてＴＡＶＯ３０４を評価するためにも使用した。増大する量の抗体を、０．２５ｎｇ／ｍＬのアカゲザルＩＬ－１βと共にＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーター細胞に適用した。ＴＡＶＯ３０４は、アカゲザルＩＬ－１β媒介性レポーター遺伝子発現を用量依存的に中和し、ＩＣ５０は３．６ｎｇ／ｍＬであることが観察された（図３）。
＜実施例３: マウス抗ヒトＩＬ－１β抗体ＴＡＶＯ３０４のヒト化＞

マウス抗ヒトＩＬ－１β抗体ＴＡＶＯ３０４を、ヒト生殖系列スキャフォールド上へマウスＣＤＲを移植することによってヒト化した。鍵となる少数のマウス残基は、免疫原性を最小限にする一方でより高い安定性及びより良い発現を達成するために逆突然変異によって保存した。ＴＡＶＯ３０４については、１つのヒト化ＶＨ変異体（３０４ＶＨ１）がＩＧＨＶ３－４８^＊０１に基づいて設計され、４つのヒト化ＶＬ変異体はＩＧＫＶ１－３９^＊０１に基づいて３０４ＶＬ１及び３０４ＶＬ２を用いて、及びＩＧＫＶ２－４０^＊０１に基づいて３０４ＶＬ３及び３０４ＶＬ４を用いて設計され、２個の逆突然変異を有した（図４）。ヒト化ＶＨ変異体と４つのヒト化ＶＬ変異体との組み合わせにより、ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８、ＴＡＶＯ７３７９と名付けられた、ＩｇＧ１ Ｆｃを有する４つのヒト化ＴＡＶＯ３０４抗体が、それぞれ３０４ＶＬ１、３０４ＶＬ２、３０４ＶＬ３及び３０４ＶＬ４と対合する３０４ＶＨ１変異体を用いて生成された（図４）。
＜実施例４: ヒト化ＴＡＶＯ３０４の発現及び精製＞

ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８、ＴＡＶＯ７３７９の重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドを、トランスフェクションキットの指示書に従って（Thermo Scientific）Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞に共トランスフェクションした。細胞は、トランスフェクションの５日後に遠心分離して沈降させ、その上清を０．２μｍフィルターに通した。上清中の発現された抗体の精製は、プロテインＡアガロースカラム（GE Healthcare Life Sciences）上でのアフィニティクロマトグラフィによって行った。精製された抗体は、透析によってＤＰＢＳ、ｐＨ７．２にバッファー交換し、タンパク質濃度を２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって決定した。

精製されたＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析に供した（図５）。還元条件下で、４つの抗体はすべて、期待された分子量を有する重鎖及び軽鎖を有していた。非還元条件下で、４つの抗体はすべて、１５０ｋＤａ近辺の分子量を有する主要なタンパク質バンドとして移動した。
＜実施例５: ヒト化ＴＡＶＯ３０４によるＩＬ－１βへの結合＞

ＥＬＩＳＡベース結合アッセイを用いて、組換えヒトＩＬ－１βに対するヒト化ＴＡＶＯ３０４結合を評価した。このアッセイにおいては、１μｇ／ｍｌの組換えヒトＩＬ－１β（R&D systems）をＥＬＩＳＡプレートにコーティングした。増大する濃度のヒト化ＴＡＶＯ３０４抗体をこのプレートに適用し、組換えヒトＩＬ－１βに対するその結合を、ＨＲＰコンジュゲート化抗マウス二次抗体によって検出した。４つのヒト化抗体ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９はすべて、同様の効力で用量依存的に組換えヒトＩＬ－１βに結合し、マウス抗体ＴＡＶＯ３０４に匹敵することが観察された（図６）。

アカゲザルIＬ－１βに対する４つのヒト化抗体の結合も、アカゲザルIＬ－１βをプレートにコーティングすることにより同様のＥＬＩＳＡアッセイにおいて評価した。４つのヒト化抗体ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９はすべて、同様の効力で用量依存的に組換えアカゲザルＩＬ－１βに結合した（図６）。

結合特異性を評価するために、ＩＬ－１αのようなＩＬ－１βと相同のサイトカインを、精製された組換えタンパク質を用いてＥＬＩＳＡベース結合アッセイにおいてヒト化抗体への結合について評価した。４つのヒト化抗体ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９はすべて、ＥＬＩＳＡベース結合アッセイにおいて１μｇ／ｍＬでヒトＩＬ－１αに対して有意な結合を示さず、これらのヒト化抗体についてＩＬ－１β結合の特異性が示された。

固定化組換えＩＬ－１βに対するヒト化抗体の結合をさらに測定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合アッセイを、Ｂｉａｃｏｒｅを使用して行う。このアッセイは、結合アフィニティだけでなく、動態速度定数（kinetic rate constants）及び結合の熱力学をも測定することができる。
＜実施例６: ヒト化ＴＡＶＯ３０４によるＩＬ－１β中和についてのインビトロレポーターアッセイ＞

ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーターアッセイを用いて、ヒトＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子発現の遮断におけるＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９を評価した。増大する量の抗体を１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－１βと共にＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーター細胞に適用した。一晩インキュベートした後、ＳＥＡＰレポーター遺伝子発現を定量した。４つのヒト化抗体はすべて、同様の効力で（ＩＣ５０は０．０９μｇ／ｍＬ近辺、図７）ＩＬ－１β媒介性レポーター遺伝子発現を用量依存的に中和したことが観察された。ヒトＩＬ－１βの中和におけるこれらの効力は、ＴＡＶＯ３０４のそれと同様であり、参照抗体ｒｅｆＡｂ－１よりもはるかに強力であった。

同じアッセイを用いて、アカゲザルＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子発現の遮断において４つのヒト化抗体を評価した。増大する量の抗体を、０．２５ｎｇ／ｍＬのアカゲザルIＬ－１βと共にＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーター細胞に適用した。ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９抗体は、同様の効力で（ＩＣ５０は０．０１８μｇ／ｍＬ近辺、図７）アカゲザルIＬ－１β媒介性レポーター遺伝子発現を用量依存的に中和したことが観察された。
＜実施例７: ヒト化ＴＡＶＯ３０４によるＩＬ－１β中和についてのインビトロＭＲＣ－５細胞ベースサイトカイン放出アッセイ＞

ＩＬ－１βは、ヒト肺線維芽細胞細胞株ＭＲＣ－５の活性化を駆動し、ＩＬ－６放出を刺激することができる。ＩＬ－１β媒介性ＭＲＣ－５細胞活性化の中和におけるヒト化ＴＡＶＯ３０４抗体を測定するために、インビトロアッセイを準備した。増大する量の抗体を、１ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－１βと共にＭＲＣ－５細胞（ＡＴＣＣ）に２４時間適用し、細胞からの誘導されたＩＬ－６放出は、ＩＬ－６アッセイキット（R&D systems）によって定量することができる。ＴＡＶＯ７３７６、ＴＡＶＯ７３７７、ＴＡＶＯ７３７８及びＴＡＶＯ７３７９抗体は、同様の効力で（ＩＣ５０は５０ｎｇ／ｍＬ近辺、図８）ＭＲＣ－５細胞からのヒトＩＬ－１β媒介性ＩＬ－６放出を用量依存的に遮断し、ＩＬ－１β阻害における参照抗体ｒｅｆＡｂ－１よりも強力であったことが観察された。
＜実施例８: 延長された半減期、低減されたエフェクター機能及びタンパク質分解抵抗性のためのヒト化抗体のＦｃ操作＞

ヒト化抗体のＰＫプロフィールを改善するために、Ｆｃ突然変異をＩｇＧ１抗体に導入し、抗体半減期を延長することができる。具体的には、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ突然変異は、ＦｃＲｎ結合アフィニティを増大することによって抗体半減期を延長することが明らかにされている（Booth, Ramakrishnanら、2018）。さらに、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ Ｆｃ突然変異は、ＩｇＧ１抗体のＡＤＣＣ及びＣＤＣエフェクター機能を消失させることができる（Hezareh, Hessellら、2001）。したがって、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（ＡＡＬＳ）突然変異を有する３０４ＶＨ１ベースのヒト化ＩｇＧ１重鎖を生成し、これは配列番号３１として示される配列を含む。このＦｃ操作された３０４ＶＨ１重鎖を配列番号１７として示されるヒト化３０４ＶＬ３軽鎖と対合させることによって、延長された半減期及び低減されたエフェクター機能を有するヒト化ＴＡＶＯ３０４抗体を生成し、ＴＡＶＯ１１８７８と名付けた。

ＡＡＬＳ突然変異を有する３０４ＶＨ１重鎖（配列番号３１）

重鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。ＡＡＬＳ突然変異は太字で示されている。

Ｆｃ操作された抗体が改善されたＦｃＲｎ結合アフィニティを有するか否かを研究するために、ＴＡＶＯ１１８７８及びＴＡＶＯ７３７８によるマウスＦｃＲｎに対する結合を、ＥＬＩＳＡベース結合アッセイにおいて評価する。１μｇ／ｍＬの組換えマウスＦｃＲｎ（R&D systems）をＥＬＩＳＡプレートにコーティングする。増大する濃度のＴＡＶＯ１１８７８及びＴＡＶＯ７３７８抗体をこのプレートに適用し、ｐＨ６．０での組換えＦｃＲｎに対するそれらの結合をＨＲＰコンジュゲート化抗マウス二次抗体によって検出する。

操作された抗ＩＬ－１β抗体のＰＫプロフィールを研究するために、ＴＡＶＯ１１８７８及びＴＡＶＯ７３７８をカニクイザルＰＫモデルに供する。ネイティブＩｇＧ_１ Ｆｃを有する抗体に対して改善されたＰＫプロフィールに対するＦｃ操作のあらゆる効果を評価する。

ヒト化抗体のインビボ安定性を改善するために、ＩｇＧ１抗体にさらなるＦｃ突然変異を導入して、タンパク質分解に対する抗体抵抗性を増強することができる。多くのプロテアーゼは、野生型ＩｇＧ抗体を残基２２２～２３７（ＥＵ番号付け）で又はその間で切断することができる。タンパク質分解に対する抵抗性は、Ｇ２３６の欠失を伴うＥ２３３Ｐ突然変異（残基の番号付けはＥＵインデックスに従う）を操作することによって実現することができる。したがって、Ｇ２３６欠失を伴うＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ突然変異を有する３０４ＶＨ１に基づくヒト化ＩｇＧ１重鎖を生成し、これは配列番号３２として示される配列を含む。このＦｃ操作された３０４ＶＨ１重鎖を配列番号１７として示されるヒト化３０４ＶＬ３軽鎖と対合させることによって、タンパク質分解に対する抵抗性、延長された半減期及び低減されたエフェクター機能を有するヒト化ＴＡＶＯ３０４抗体を生成し、ＴＡＶＯ１８３７８と名付けた。

Ｇ２３６欠失を伴うＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ突然変異を有する３０４ＶＨ１重鎖（配列番号３２）

重鎖の可変ドメインの配列に下線が付されている。Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ突然変異は太字で示されている。

これらのＦｃ突然変異を有する操作された抗ＩＬ－１β抗体が改善されたタンパク質分解に対する抵抗性を有するか否かを研究するために、ＴＡＶＯ１８３７８を組換えＩｇＧプロテアーゼＩｄｅＺ（New England Biolabs）による３７℃で３０分間の消化に供し、続いて還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析を行い、その重鎖の完全性を評価する。ＩｇＧプロテアーゼＩｄｅＺに加えて、ＴＡＶＯ１８３７８を、組換えマトリックスメタロプロテイナーゼ３、ＭＭＰ３（Enzo Life Sciences）による３７℃で２４時間の消化にも供し、続いて還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥを行い、その重鎖の完全性を評価する。ヒンジ領域より下の上述のＦｃ突然変異は、ＩｄｅＺ及びＭＭＰ３を含むプロテアーゼによる分解に対するＦｃ操作された抗ＩＬ－１β抗体の抵抗性を促進することができることが期待される。
＜実施例９: 関節炎に対するヒト化抗ＩＬ－１β抗体のインビボ有効性＞

Ｆｃ操作された抗ＩＬ－１β抗体のインビボ有効性を研究するために、ＴＡＶＯ１８３７８を、マウス関節炎モデルにおいて評価する。マウスＩＬ－１受容体は、ヒトＩＬ－１βによって活性化されることができ、したがって、マウス関節炎モデルは、インビボでヒトＩＬ－１βを遮断することにおける抗体の有効性を評価するために使用することができる（Alten, Gramら、2008）。

高レベルのヒトＩＬ－１βを安定に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞株は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞をヒトＩＬ－１β発現構築物でトランスフェクションすることによって樹立され、高レベル発現細胞クローンが選択される。マウス関節炎症モデルは、ＤＢＡ－１マウスの右膝関節内へのＮＩＨ３Ｔ３：ｈＩＬ－１β細胞の関節内注射によって準備する。投薬後、関節の膨張、プロテオグリカン合成、及び関節の組織病理学に対する抗体の有効性を評価する。

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本明細書で引用したすべての文献（これらの文献／刊行物の開示全体を含む）、及び本明細書で言及したすべての特許、特許出願公報及び書籍は、参照によりその全体が本願に組み込まれるものとする。

Claims (44)

1. ＩＬ－１βと特異的に結合し、ＩＬ－１βの活性を中和、阻害、遮断、抑制、低減、又は干渉する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
2. 前記抗体又はフラグメントが、配列番号１として示される重鎖可変領域及び配列番号２として示される軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体又は抗体フラグメントである、請求項１記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
3. 前記抗体又はフラグメントが、それぞれ配列番号３、配列番号４及び配列番号５として示される重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、請求項１記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
4. 前記抗体又はフラグメントが、それぞれ配列番号６、配列番号７及び配列番号８として示される軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む、請求項１記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
5. 前記抗体又はフラグメントが、ヒト化抗体又は抗体フラグメントである、請求項１記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
6. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号９として示される重鎖可変領域を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
7. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１０として示される軽鎖可変領域を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
8. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１１として示される軽鎖可変領域を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
9. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１２として示される軽鎖可変領域を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
10. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１３として示される軽鎖可変領域を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
11. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１４として示されるヒトＩｇＧ１重鎖配列を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
12. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１５として示されるヒト軽鎖配列を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
13. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１６として示されるヒト軽鎖配列を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
14. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１７として示されるヒト軽鎖配列を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
15. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号１８として示されるヒト軽鎖配列を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
16. 前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１～１８記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
17. 前記抗体が、親の野生型抗体と比較して操作された抗体の半減期を延長する１以上のＦｃ突然変異を有する、請求項１～１８記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
18. 前記抗体が、親の野生型抗体と比較して操作された抗体のプロテアーゼによるタンパク質分解に対する抵抗性を増強する１以上のＦｃ突然変異を有する、請求項１～１８記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
19. 前記抗体が、親の野生型抗体と比較して操作された抗体のエフェクター機能を低減又は排除する１以上のＦｃ突然変異を有する、請求項１～１８記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
20. 前記抗体が、親の野生型抗体と比較して操作された抗体の半減期を延長し、エフェクター機能を低減するＥＵインデックスに従った残基番号付けでＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４ＳのＦｃ突然変異を有する、請求項１～１８記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
21. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号３１として示されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４ＳのＦｃ突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
22. 前記抗体が、親の野生型抗体と比較して操作された抗体の半減期を延長し、エフェクター機能を低減し、タンパク質分解に抵抗するＥＵインデックスに従った残基番号付けでＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、Ｍ４２８Ｌ、及びＮ４３４ＳのＦｃ突然変異及びＧ２３６の欠失を有する、請求項１～１８記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
23. 前記ヒト化抗体又はフラグメントが、配列番号３２として示されるＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４ＳのＦｃ突然変異及びＧ２３６の欠失を有するヒトＩｇＧ１重鎖を含む、請求項５記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
24. 前記抗体又はフラグメントが、その受容体ＩＬ－１ＲＩに対するヒトＩＬ－１βの結合を遮断する、請求項１～２３記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
25. 前記抗体又はフラグメントが、その受容体ＩＬ－１ＲＩに対するサルＩＬ－１βの結合を遮断する、請求項１～２３記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
26. 前記抗体又はフラグメントが、その受容体ＩＬ－１ＲＩに対するＩＬ－１βの機能的活性を中和、低減、又は干渉する、請求項１～２３記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
27. 前記抗体又はフラグメントが、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βレポーターアッセイにおいてＩＬ－１β駆動型レポーター遺伝子活性化を中和する、請求項１～２３記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
28. 前記抗体又はフラグメントが、サイトカイン放出アッセイにおいてヒト線維芽細胞ＭＲＣ－５からのＩＬ－１β駆動型ＩＬ－６放出を阻害する、請求項１～２３記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
29. 前記抗体又はフラグメントが、マウス関節炎モデルにおいてＩＬ－１β駆動型膝関節関節炎を阻害する、請求項１～２３記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
30. 請求項１～２３のとおりの抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体をコードする単離されたポリヌクレオチド。
31. 請求項３０記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
32. 発現ベクターである、請求項３１記載のベクター。
33. 請求項３１又は３２記載のベクターを含む宿主細胞。
34. 請求項１～２３記載の抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントを製造する方法であって、請求項３３記載の宿主細胞を、抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントが発現される条件下で培養する工程、及び前記抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントを単離する工程を含む方法。
35. 請求項１～２３記載の抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントの半減期を測定する方法。
36. 請求項１～２３記載の抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントのタンパク質分解に対する抵抗性を測定する方法。
37. 請求項１～２３記載の抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントのエフェクター機能を測定する方法。
38. 治療を必要とする対象においてＩＬ－１β媒介性疾患又は障害を治療する方法であって、前記対象に、有効量の請求項１～２３記載の抗ＩＬ－１β ＩｇＧ抗体又はフラグメントを投与することを含む方法。
39. 前記ＩＬ－１β媒介性疾患又は障害が、炎症性疾患である、請求項３８記載の方法。
40. 前記ＩＬ－１β媒介性疾患又は障害が、心血管疾患である、請求項３８記載の方法。
41. 前記ＩＬ－１β媒介性疾患又は障害が、肺がんである、請求項３８記載の方法。
42. 前記ＩＬ－１β媒介性疾患又は障害が、２型糖尿病である、請求項３８記載の方法。
43. 前記ＩＬ－１β媒介性疾患又は障害が、乳がんである、請求項３８記載の方法。
44. 前記ＩＬ－１β媒介性疾患又は障害が、膵臓がんである、請求項３８記載の方法。
    
    
    

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