JP2023507848A

JP2023507848A - 癌の治療のための療法

Info

Publication number: JP2023507848A
Application number: JP2022538737A
Authority: JP
Inventors: ブラッドレイジェームズスムラウ; モット－モースロスラ; ジョンマークウィギントン; エツィオボンビニ; ポールエー．ムーア; スコットケーニヒ; シャオユジャン
Original assignee: マクロジェニクス，インコーポレーテッド
Priority date: 2019-12-23
Filing date: 2020-12-18
Publication date: 2023-02-27
Also published as: IL294207A; WO2021133653A8; US20230056230A1; BR112022012437A2; MX2022007790A; CN114901306A; EP4081248A4; TW202138387A; AU2020412595A1; KR20220119694A; CA3165839A1; ZA202206743B; WO2021133653A1; EP4081248A1

Abstract

本発明は、癌の治療のために、ＰＤ‐１又はＰＤ‐Ｌ１とＬＡＧ‐３とに結合する１つ以上の抗体系分子（例えばＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）を、単独で、又は腫瘍抗原（ＴＡ）に結合する抗体系分子と組み合わせて、投与するためのレジメンを対象とする。本発明は特に、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子と組み合わせた上記レジメンの使用に関する。本発明は、上記分子の使用、並びに上記分子を含有し、癌の治療における上記投薬レジメンの使用を促進する、医薬組成物及び医薬キットの使用を対象とする。
【選択図】図１０

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、米国特許出願第６３／１２３，５８１号（２０２０年１２月１０日出願；係属中）、米国特許出願第６３／０３１，４５３号（２０２０年５月２８日出願；係属中）、米国特許出願第６３／０２１，５５６号（２０２０年５月７日出願；係属中）、米国特許出願第６３／０１９，８５７号（２０２０年５月４日出願；係属中）、米国特許出願第６２／９５２，８７８号（２０１９年１２月２３日出願；係属中）、及び米国特許出願第６２／９５２，８５９号（２０１９年１２月２３日出願；係属中）に対する優先権を主張するものであり、上記出願はそれぞれ、参照によりその全体が本出願に援用される。

配列表の参照
本出願は、連邦規則法典第３７巻第１．８２１節以下による１つ以上の配列表を含み、これらの配列表は、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１３０１＿０１６６ＰＣＴ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０２０年１２月１８日作成、サイズ：７０，０４２バイト）において開示されており、上記ファイルは、参照によりその全体が本出願に援用される。

本発明は、癌の治療のために、ＰＤ‐１又はＰＤ‐Ｌ１とＬＡＧ‐３とに結合する１つ以上の抗体系分子（例えばＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）を、単独で、又は腫瘍抗原（Tumor Antigen：ＴＡ）に結合する抗体系分子と組み合わせて、投与するためのレジメンを対象とする。本発明は特に、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子と組み合わせた上記レジメンの使用に関する。本発明は、上記分子の使用、並びに上記分子を含有し、癌の治療における上記投薬レジメンの使用を促進する、医薬組成物及び医薬キットの使用を対象とする。

Ｉ．細胞仲介性免疫応答
抗原に対する免疫応答を最適に仲介するＴ細胞の能力は、２つの別個のシグナリング相互作用を必要とする（非特許文献１、２）。まず、抗原提示細胞（Antigen‐Presenting Cell：ＡＰＣ）の表面上に存在する抗原を、抗原特異性ナイーブＣＤ４⁺Ｔ細胞に対して提示する必要がある。このような提示により、提示された抗原に対して特異的となる免疫応答を開始するようにＴ細胞に指示するＴ細胞受容体（T‐Cell Receptor：ＴＣＲ）を介して、シグナルが送達される。次に、ＡＰＣと別個のＴ細胞表面分子との間の相互作用によって仲介される一連の刺激及び阻害シグナルが、まずＴ細胞の活性化及び増殖を、最終的にはＴ細胞の阻害をトリガする。従って、第１のシグナルは免疫応答に対して特異性を付与し、第２のシグナルは、上記応答の性質、強さ及び持続時間を決定する役割を果たす。免疫応答は、共刺激及び共阻害性リガンドと、「免疫チェックポイント」と呼ばれることが多い受容体とによって、厳密に制御される（非特許文献３、４）。これらの分子は、Ｔ細胞活性化のための第２のシグナルを提供し、また免疫応答を調節して感染症及び癌に対する保護を提供するポジティブ及びネガティブシグナルの平衡ネットワークを提供する。しかしながら、一部の癌細胞は、Ｔ細胞が持続的な抗原及び／又は炎症性シグナルにさらされるＴ細胞枯渇の状態を引き起こすことによって、免疫系から逃れることができる（非特許文献５）。Ｔ細胞枯渇に関与する２つの免疫チェックポイント分子、即ちプログラム細胞死‐１（Programmed Death‐1：「ＰＤ‐１」）及びリンパ球活性化遺伝子３（Lymphocyte Activation Gene 3：ＬＡＧ‐３）（非特許文献６）について、以下で更に詳細に説明する。

ＩＩ．プログラム細胞死‐１（「ＰＤ‐１」）
プログラム細胞死‐１（「ＰＤ‐１」、「ＣＤ２７９」としても公知）は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞及び単球の表面で発現される免疫チェックポイントタンパク質である。これは、免疫応答を幅広く下方制御するＴ細胞制御因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ‐４ファミリーの、およそ３１ｋＤのＩ型膜タンパク質メンバーである（非特許文献７、特許文献１～９）。ＰＤ‐１は、膜貫通タンパク質リガンド：プログラム細胞死‐リガンド１（「ＰＤ‐Ｌ１」、「Ｂ７‐Ｈ１」としても公知）及びプログラム細胞死‐リガンド２（「ＰＤ‐Ｌ２」、「Ｂ７‐ＤＣ」としても公知）に結合することによって、その免疫系の阻害を仲介する（非特許文献８、特許文献１０～１７）。通常の状況では、免疫チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞の過剰活性化を阻害するための作用標的として機能し、従って自己免疫損傷を防止する役割を果たす。しかしながら、そのリガンドが腫瘍細胞によって発現される場合、結合は、免疫系細胞が腫瘍に接近するのを防止するよう機能し、従って免疫系の、腫瘍細胞を認識して破壊する能力を弱める（非特許文献９）。従って、腫瘍細胞でのＰＤ‐Ｌ１の過剰発現は多くの場合、不良な予後と関連付けられる。

Ｔ細胞活性化及び増殖の阻害におけるＰＤ‐１リガンドの相互作用の役割は、これらの生体分子が、炎症及び癌の治療のための治療標的として機能し得ることを示唆している。従って、感染及び腫瘍の治療並びに適応免疫応答の上方調節のための、ＰＤ‐１及びそのリガンド、特にＰＤ‐Ｌ１に対する抗体の使用が提案されている（非特許文献１０～１２、特許文献１８～２０、特許文献２、特許文献２１～２６を参照）。ＰＤ‐１及びＰＤ‐Ｌ１に特異的に結合できる抗体が報告されている（例えば非特許文献１３、１４、特許文献２７～３６、特許文献２５、特許文献３７～３９、特許文献２６、特許文献４０～４４を参照）。

ＩＩＩ．リンパ球活性化遺伝子３（「ＬＡＧ‐３」）
リンパ球活性化遺伝子３（「ＬＡＧ‐３」、「ＣＤ２２３」としても公知）は、活性化されたＣＤ４⁺及びＣＤ８⁺Ｔ細胞並びにＮＫ細胞が発現する細胞表面受容体タンパク質であり、形質細胞様樹状細胞によって恒常的に発現される。ＬＡＧ‐３はＢ細胞、単球又は試験された他のいずれの細胞タイプによって発現されない（非特許文献１６～２０）。

研究により、ＬＡＧ‐３は、Ｔ細胞増殖、機能及びホメオスタシスの下方制御、並びにＴ細胞枯渇において、重要な役割を果たすことが示されている（非特許文献１６～２０）。

研究により、抗体遮断によるＬＡＧ‐３機能の阻害は、ＬＡＧ‐３仲介性免疫系阻害を逆転でき、エフェクタ機能を部分的に復元できることが示唆されている（（非特許文献２１、２２）。ＬＡＧ‐３に特異的に結合できる抗体が報告されている（例えば特許文献４５～５１を参照）。

ＩＶ．二重特異性分子
二重特異性分子（例えば二重特異性抗体、二重特異性ダイアボディ等）の提供によって、単一特異性天然抗体を上回る重要な利点、即ち異なる複数のエピトープを発現する細胞を共連結及び共局在化する能力が提供される。よって二重特異性分子は、療法を含む幅広い用途を有する。二重特異性は、様々な用途における設計及び操作に高い柔軟性をもたらすことができ、多量体抗原への強化された結合活性、異なる複数の抗原の架橋、及び両標的抗原の存在に依存する特定の細胞タイプに対する指向性標的化が提供される。癌及び／又は病原体に関連付けられた疾患の治療に使用するためのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、特許文献５２～５７に記載されている。特に、新規のＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３結合ドメインを有するＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディ、並びに例示的な活性は、特許文献５８に記載されている。

Ｖ．腫瘍抗原
腫瘍抗原（「ＴＡ」）は、腫瘍細胞上のみに存在し、他のいずれの細胞上には存在しない、細胞膜タンパク質を含む（即ち腫瘍特異性抗原）か、又は腫瘍細胞上に特徴的に存在するが、特定の正常細胞上にも存在する、細胞膜タンパク質を含む（即ち腫瘍関連抗原）。腫瘍抗原は、抗体が標的とすることができ、またこれを用いて免疫系の細胞を刺激することにより、腫瘍の逃避を克服するため、並びに腫瘍の監視及びクリアランスにおいて新たな役割を果たすために、使用できる（非特許文献９；非特許文献２３～２６）。

米国公開特許第２００７／０２０２１００号米国公開特許第２００８／０３１１１１７号米国公開特許第２００９／００１１０６６７号米国特許第６，８０８，７１０号米国特許第７，１０１，５５０号米国特許第７，４８８，８０２号米国特許第７，６３５，７５７号米国特許第７，７２２，８６８号国際公開第０１／１４５５７号米国特許第６，８０３，１９２号米国特許第７，７９４，７１０号米国公開特許第２００５／００５９０５１号米国公開特許第２００９／００５５９４４号米国公開特許第２００９／０２７４６６６号米国公開特許第２００９／０３１３６８７号国際公開第０１／３９７２２号国際公開第０２／０８６０８３号米国公開特許第２０１０／００４０６１４号米国公開特許第２０１０／００２８３３０号米国公開特許第２００４／０２４１７４５号米国公開特許第２００９／０２１７４０１号米国特許第７，５２１，０５１号米国特許第７，５６３，８６９号米国特許第７，５９５，０４８号国際公開第２００４／０５６８７５号国際公開第２００８／０８３１７４号米国特許第８，００８，４４９号米国特許第８，５５２，１５４号米国公開特許第２００７／０１６６２８１号米国公開特許第２０１２／０１１４６４８号米国公開特許第２０１２／０１１４６４９号米国公開特許第２０１３／００１７１９９号米国公開特許第２０１３／０２３０５１４号米国公開特許第２０１４／００４４７３８号国際公開第２００３／０９９１９６号国際公開第２００４／００４７７１号国際公開第２００４／０７２２８６号国際公開第２００６／１２１１６８号国際公開第２００７／００５８７４号国際公開第２００９／０１４７０８号国際公開第２００９／０７３５３３号国際公開第２０１２／１３５４０８号国際公開第２０１２／１４５５４９号国際公開第２０１３／０１４６６８号国際公開第２０１４／１４０１８０号国際公開第２０１５／１３８９２０号国際公開第２０１５／１１６５３９号国際公開第２０１６／０２８６７２号国際公開第２０１６／１２６８５８号国際公開第２０１６／２００７８２号国際公開第２０１７／０１５５６０号国際公開第２０１５／２００１１９号国際公開第２０１７／０２５４９８号国際公開第２０１８／０８３０８７号国際公開第２０１８／１８５０４３号国際公開第２０１８／１３４２７９号国際公開第２０１８／２１７９４０号国際公開第２０１７／０１９８４６号

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本明細書で提供されるのは、癌細胞を攻撃するように、身体の免疫系に更に強力に指示できるレジメンである。というのは、適応免疫系は、癌及び疾患に対する強力な防護機構であり得るものの、ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１相互作用によって、又はＬＡＧ‐３の阻害活性によって仲介される、腫瘍の微環境中の免疫抑制／回避メカニズムによって妨げられる場合があるためである。本明細書中で提供されるように、このような免疫抑制／回避メカニズムは、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与によって克服できる。本明細書中で更に提供されるように、ＰＤ／ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３チェックポイント経路のデュアルチェックポイント阻害は、ＴＡ結合分子（特に増強されたＡＤＣＣ活性を有するもの）の抗腫瘍活性と相乗的に作用できる。

本発明は、癌の治療のために、ＰＤ‐１又はＰＤ‐Ｌ１とＬＡＧ‐３とに結合する１つ以上の抗体系分子（例えばＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）を、単独で、又は腫瘍抗原（ＴＡ）に結合する抗体系分子と組み合わせて、投与するためのレジメンを対象とする。本発明は特に、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子と組み合わせた上記レジメンの使用に関する。本発明は、上記分子の使用、並びに上記分子を含有し、癌の治療における上記投薬レジメンの使用を促進する、医薬組成物及び医薬キットの使用を対象とする。

本発明は特に、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を、それを必要とする被験者に投与するステップを含む、癌を治療する方法に関し、上記方法は、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を約１２０ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量で上記被験者に投与するステップを含む。

本発明は更に、上記癌が腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とし、上記方法が、腫瘍抗原（ＴＡ）結合分子（ＴＡ結合分子）を上記被験者に投与するステップを更に含む、上記方法の実施形態に関する。

本発明は更に、被験者の癌を治療する方法に関し、上記癌はＴＡの発現を特徴とし、上記方法は、上記被験者に、ＴＡ結合分子と：
（ａ）二重特異性分子（ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）；又は
（ｂ）ＰＤ‐１に免疫特異的に結合する分子（ＰＤ‐１結合分子）と、ＬＡＧ‐３に免疫特異的に結合する分子（ＬＡＧ‐３結合分子）との組み合わせ；又は
（ｃ）ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３の両方に免疫特異的に結合する二重特異性分子（ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）；又は
（ｄ）ＰＤ‐Ｌ１に免疫特異的に結合する分子（ＰＤ‐Ｌ１結合分子）と、ＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせと
を投与するステップを含む。

本発明は更に、上記ＴＡ結合分子がＡＤＣＣ増強（ＡＤＣＣ‐Ｅｎｈａｎｃｅｄ）Ｆｃドメインを含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に：
（ａ）各上記分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｂ）各上記分子は同一の組成物中にあるか；又は
（ｃ）上記ＰＤ‐１結合分子及び上記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、上記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｄ）上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子及び上記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、上記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にある、
上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＴＡ結合分子が抗体である、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１結合分子が抗体であり、上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子が抗体であり、上記ＬＡＧ‐３結合分子が抗体である、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記方法が、上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を投与するステップを含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインが：
（Ａ）人工グリコフォーム；及び／又は
（Ｂ）野生型Ｆｃ領域に関連するアミノ酸置換
を含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインが：
（Ａ）フコースを含有しない及び／若しくはバイセクトＯ‐ＧｌｃＮＡｃを含む複合型Ｎ‐グリコシド結合糖鎖である、人工グリコフォーム；並びに／又は
（Ｂ）以下からなる群から選択されるアミノ酸置換：
（ａ）以下からなる群から選択される１つの置換：
Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、及びＰ３９６Ｌ；
（ｂ）以下からなる群から選択される２つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ及びＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ及びＲ２９２Ｐ；
（３）Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；並びに
（４）Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ；
（ｃ）以下からなる群から選択される３つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（４）Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
（ｄ）以下からなる群から選択される４つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；若しくは
（ｅ）以下からなる群から選択される５つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ
を含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインが、アミノ酸置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に：
（Ａ）上記ＴＡが表６Ａ若しくは表６Ｂから選択され；及び／又は
（Ｂ）上記ＴＡ結合分子が、表７から選択される抗体のＶＬ及びＶＨドメインを含む、
上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に：
（Ａ）上記ＰＤ‐１結合分子が：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン；
（ｂ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体であり；
（Ｂ）上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子が：
（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＬドメイン、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＨドメイン；
（ｂ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体であり；
（Ｃ）上記ＬＡＧ‐３結合分子が：
（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン；
（ｂ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン、若しくは表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；並びに／又は
（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン、若しくは表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表４～５から選択される二重特異性抗体系分子
を含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が：
（ａ）上記ＰＤ‐１結合ドメインのうちの２つ；及び
（ｂ）上記ＬＡＧ‐３結合ドメインのうちの２つ
を含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が、配列番号３５のＰＤ‐１ＶＬドメイン、配列番号３９のＰＤ‐１ＶＨドメイン、配列番号５１のＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のＬＡＧ‐３ＶＨドメインを含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が、Ｆｃ領域及びヒンジドメインを含む、上述の方法の実施形態、並びに上記Ｆｃ領域及び上記ヒンジドメインがいずれもＩｇＧ４アイソタイプのものであり、上記ヒンジドメインが安定化変異を含む、実施形態に関する。

本発明は更に、上記Ｆｃ領域が、変異型Ｆｃ領域であって：
（ａ）ＦｃγＲに対する上記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する、１つ以上のアミノ酸修飾；及び／又は
（ｂ）上記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する１つ以上のアミノ酸修飾
を含む変異型Ｆｃ領域である、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に：
（ａ）ＦｃγＲに対する上記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する上記修飾が、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；又はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み；
（ｂ）上記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する上記修飾が、Ｍ２５２Ｙ；Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；又はＫ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋの置換を含み、
番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が、配列番号５９の２つのポリペプチド鎖、及び配列番号６０の２つのポリペプチド鎖を含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が約３００ｍｇの一律用量で投与される、上述の方法の実施形態、及び上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が約６００ｍｇの一律用量で投与される実施形態に関する。

本発明は更に、上記一律用量が約２週間に１回投与される、上述の方法の実施形態、及び上記一律用量が約３週間に１回投与される実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が、約６００ｍｇの一律用量で約２週間に１回投与される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回投与される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が静脈内（ＩＶ）注入によって投与される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記癌が：副腎癌、エイズ関連癌、歯槽軟部肉腫、肛門癌（肛門管扁平上皮癌（ＳＣＡＣ）を含む）、膀胱癌、骨癌、脳及び脊髄癌、乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌、又はトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む）、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎明細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／又はＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、ユーイング肉腫、骨格外粘液型軟骨肉腫、胆嚢癌又は胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、胃癌（gastric cancer）、食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む）、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病（急性骨髄性白血病を含む）、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、肺癌（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む）、髄芽腫、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫（中皮咽頭癌を含む）、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌（転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）を含む）、後部ブドウ膜黒色腫、腎転移癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、小児期の小円形青色細胞腫瘍（神経芽腫、及び横紋筋肉腫を含む）、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、並びに子宮癌からなる群から選択される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記癌が：肛門癌、乳癌、胆管癌（bile duct cancer）、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、及び前立腺癌からなる群から選択される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記癌が：ＨＥＲ２⁺乳癌、ＴＮＢＣ、胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）、ＨＰＶ関連子宮頸癌、ＳＣＣＨＮ、ＨＣＣ、ＳＣＬＣ又はＮＳＣＬＣ、ＮＨＬ、前立腺癌、胃癌（gastric cancer）、及びＧＥＪ癌からなる群から選択される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＴＡ結合分子が、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、ＨＥＲ２結合分子であり：
（Ａ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）が、配列番号６１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含むマルゲツキシマブの軽鎖可変ドメインであり、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）が、配列番号６６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むマルゲツキシマブの重鎖可変ドメインであるか；
（Ｂ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）がトラスツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）がトラスツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；
（Ｃ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）がペルツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）がペルツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；又は
（Ｄ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）がｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）がｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、
上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＨＥＲ２結合分子が抗ＨＥＲ２抗体である、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記抗ＨＥＲ２抗体がマルゲツキシマブであり、上記方法が、マルゲツキシマブを、約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回投与するステップを含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記方法が化学療法剤を投与するステップを更に含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記癌がＨＥＲ２発現性癌であり、特に上記ＨＥＲ２発現性癌が：乳癌、転移性乳癌、膀胱癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、卵巣癌、膵臓癌、及び胃癌（stomach cancer）からなる群から選択される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＴＡ結合分子が、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＢ７‐Ｈ３結合ドメインを含む、Ｂ７‐Ｈ３結合分子であり：
上記ＶＬが配列番号７１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記ＶＨが配列番号７６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＴＡ結合分子がエノブリツズマブであり、上記方法が、エノブリツズマブを約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回投与するステップを含む、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記癌がＢ７‐Ｈ３発現性癌であり、特に上記Ｂ７‐Ｈ３発現性癌が：肛門癌、ＳＣＡＣ、乳癌、ＴＮＢＣ、頭頸部癌、ＳＣＣＨＮ、肺癌、ＮＳＣＬＣ、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、前立腺癌、及びｍＣＲＰＣからなる群から選択される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、上記ＴＡ結合分子が静脈内（ＩＶ）注入によって投与される、上述の方法の実施形態に関する。

本発明は更に、ＬＡＧ‐３を発現する細胞が、治療前の癌の生検中に存在する、上述の方法の実施形態、及びＰＤ‐１を発現する細胞が、治療前の癌の生検中に存在する実施形態に関する。

本発明は更に、治療前の癌の生検中でのＬＡＧ‐３及びＰＤ‐１の同時発現が、患者が本方法の候補であることの指標である、上述の方法の実施形態、並びに発現が遺伝子発現である実施形態に関する。

本発明は更に、治療前の癌の細胞の表面におけるＰＤ‐Ｌ１の発現が、合計陽性スコア（Combined Positive Score：ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（Tumor Proportion Scorｅ：ＴＰＳ）を用いて判定した場合に１％未満である、上述の方法の実施形態に関する。

図１は、２ペアのポリペプチド鎖（即ち合計４つのポリペプチド鎖）からなる４つのエピトープ結合部位を有する、代表的な共有結合した４価ダイアボディの概略図である。各ペアの一方のポリペプチドは、Ｅコイルヘテロ二量体促進ドメインを有し、各ペアの他方のポリペプチドは、Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメインを有する。図示されているように、システイン残基リンカー中及び／又はヘテロ二量体促進ドメイン中に存在してよい。各ペアの一方のポリペプチドは、連結した鎖がＦｃ領域の全体又は一部を形成するように、システインを含むリンカー（このリンカーはヒンジ領域の全体又は一部分を含んでよい）、並びにＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインを有する。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。（図示されているように）２ペアのポリペプチド鎖が同一であり、かつＶＬ及びＶＨドメインが異なるエピトープを認識する実施形態では、得られた分子は４つのエピトープ結合部位を有し、二重特異性であり、結合する各エピトープに対して２価である。あるいは、上記２ペアのポリペプチドが異なっており、ポリペプチドの各ペアのＶＬ及びＶＨドメインが異なるエピトープを認識する実施形態では、得られた分子は４つのエピトープ結合部位を有し、四重特異性であり、結合する各エピトープに対して１価である。図２は、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子ＤＡＲＴ‐Ｉの、１ｍｇ～１２００ｍｇの用量範囲にわたる、観察されたＰＫプロファイル及びモデルに当てはめたＰＫプロファイルを示す。記号は個々の患者で観察されたデータを示し、実線は、用量グループに関するモデル当てはめ中央値曲線を表す。水平な破線は、他のＰＤ‐１標的剤での臨床経験に基づく標的閾値濃度を表す。図３Ａ～３Ｄは、サイクル１（図３Ａ、３Ｂ）又はサイクル２（図３Ｃ、３Ｄ）の１日目の、ＤＡＲＴ‐Ｉの投与の終了時、及び当該サイクルの次の用量の投与の前における、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子ＤＡＲＴ‐ＩによるＣＤ４＋細胞（図３Ａ、３Ｃ）及びＣＤ８＋細胞（図３Ｂ、３Ｄ）の平均（ＳＤ）パーセント受容体占有率（receptor occupancy：ＲＯ）をプロットしている。ＥＯＩ＝サイクル１又はサイクル２の最初の用量の投与後の、注入の終了時（end of infusion）。ＰＲＥ＝サイクル１又はサイクル２の次の用量の投与の前の前用量（pre-dose）。エラーバーがない場合はＮ＝１を示す。図４Ａ～４Ｃは、Ｑ２Ｗ（図４Ａ）、Ｑ３Ｗ（図４Ｂ）、及びＱ４Ｗ（図３Ｃ）レジメンを用いた、４００、６００、８００、１０００、及び１２００ｍｇの一律用量のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子ＤＡＲＴ‐Ｉの投与に関する、シミュレーションされた複数回投薬中央値ＰＫプロファイルを示す。上側の水平な破線は、他のＰＤ‐１標的剤での臨床経験に基づく、２３μｇ／ｍＬの標的閾値トラフ濃度を表し、真ん中の水平な破線はＲＯＥＣ₅₀×１００を表し、下側の水平な破線はＲＯＥＣ₅₀×１０を表す。図５は、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子ＤＡＲＴ‐Ｉで治療された、応答評価可能なコホート拡大患者の間の、標的病変の減少率のウォーターフォールプロット（ベースラインからの％変化としてプロット）を、腫瘍タイプごとに提示する。図６Ａ～６Ｅは、後向き免疫化学アッセイからＬＡＧ‐３及びＰＤ‐Ｌ１スコアをプロットしている。ＴＮＢＣ、ＥＯＣ、及びＮＳＣＬＣコホートからの個々の患者のＬＡＧ‐３（図６Ａ）及びＰＤ‐Ｌ１（図６Ｂ）スコアを、高いものから低いものへと順にプロットする。ＴＮＢＣ、ＥＯＣ、及びＮＳＣＬＣコホートからのＬＡＧ‐３スコアの集計を、臨床応答ごとにプロットする（図６Ｃ）。ＤＬＢＣＬコホートからの個々の患者のＬＡＧ‐３（図６Ｄ）スコアを、高いものから低いものへと順にプロットし、ＰＤ‐Ｌ１スコアをその下に提供する。ＤＬＢＣＬコホートからのＬＡＧ‐３スコアの集計を、臨床応答ごとにプロットする（図６Ｅ）。ＰＲ＝部分奏効；ＳＤ＝安定した病状；ＰＤ＝進行性疾患；ＣＲ＝完全奏効。図７は、後向きＮａｎｏＳｔｒｉｎｇＰａｎＣａｎｃｅｒＩＯ３６０（商標）アッセイからの、ＬＡＧ‐３対ＰＤ‐１（ＰＤＣＤ１）の遺伝子発現をプロットしている。癌のタイプは以下のように示されている：丸（●）＝ＮＳＣＬＣ；ひし形（◆）＝Ｐ‐ＮＳＣＬＣ；三角形（△）＝ＥＯＣ；及び正方形（■）＝ＴＮＢＣ。臨床応答は以下のように示されている：「Ｒ」＝応答患者（部分奏効）；「Ｐ」＝進行性疾患；「Ｓ」＝安定した病状；記号のみは不明／未判定を示す。図８は、後向きＮａｎｏＳｔｒｉｎｇＰａｎＣａｎｃｅｒＩＯ３６０（商標）アッセイからのＩＦＮ‐γ遺伝子シグネチャスコアを、臨床応答（ＰＲ‐部分奏効；ＳＤ‐安定した病状；ＰＤ‐進行性疾患）ごとにプロットしている。癌のタイプは以下のように示されている：丸（●）＝ＮＳＣＬＣ；ひし形（◆）＝Ｐ‐ＮＳＣＬＣ；三角形（△）＝ＥＯＣ；及び正方形（■）＝ＴＮＢＣ。図９は、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン又は野生型Ｆｃドメインを有するＴＡ結合分子への曝露によって調質されたＮＫ細胞の表面上でのチェックポイント分子の発現の変化の比較を提示する。それぞれ０．００５μｇ／ｍｌ又は０．０５μｇ／ｍｌの緩衝液（‐）、マルゲツキシマブ（ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有する抗ＨＥＲ２抗体）、又はｒトラスツズマブ（野生型Ｆｃドメインを有する抗ＨＥＲ２抗体）の存在下での、Ｎ８７ＨＥＲ２＋標的細胞と共にインキュベートされたＰＢＭＣ由来のＮＫ細胞における、ＣＤ１３７（最も上の行）、ＬＡＧ‐３（第２の行）、ＰＤ‐１（第３の行）、及びＰＤ‐Ｌ１（最も下の行）の発現のフローサイトメトリー分析。ポジティブな細胞（四角で囲まれている）のパーセンテージが示されている。図１０は、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン又は野生型Ｆｃドメインを有するＴＡ結合分子への曝露によって予備調質されたＰＢＭＣの細胞傷害性を示す。プロットされているのは、０．００５μｇ／ｍｌ若しくは０．０５μｇ／ｍｌ（白及び黒の正方形）のマルゲツキシマブ、０．００５μｇ／ｍｌ若しくは０．０５μｇ／ｍｌ（白及び黒の三角形）のｒトラスツズマブ、又は緩衝液（黒の丸）で予備調質されたＮＫ細胞によって主に仲介された、Ｋ５６２標的細胞に対する細胞傷害性曲線である。図１１は、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有するＴＡ結合分子への曝露によって調質されたＮＫ細胞、単球、ＣＤ４⁺、及びＣＤ８⁺Ｔ細胞の表面上でのチェックポイント分子の発現の変化の比較を提示する。それぞれ０．５μｇ／ｍｌのマルゲツキシマブ（ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有する抗ＨＥＲ２抗体）、又は対照抗体の存在下での、Ｎ８７ＨＥＲ２＋標的細胞と共にインキュベートされたＰＢＭＣ中に存在する様々な免疫細胞タイプにおける、ＬＡＧ‐３（最も上の行）、ＰＤ‐１（第２の行）、ＰＤ‐Ｌ１（第３の行）、及びＣＤ１３７（最も下の行）の発現のフローサイトメトリー分析。ポジティブな細胞（四角で囲まれている）のパーセンテージが示されている。図１２は、抗ＰＤ‐１抗体（レチファンリマブ）又はＰＤ‐１×ＬＡＧ３二重特異性分子（ＤＡＲＴ‐Ｉ）の存在下又は不在下で、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン（マルゲツキシマブ）又は野生型Ｆｃドメイン（ｒトラスツズマブ）を有するＴＡ結合分子を用いて予備調質されたＰＢＭＣの、Ｋ５６２標的細胞に対する細胞傷害性を示す（細胞傷害性は主にＮＫ細胞によって仲介される）。図１３は、ＰＤ‐１×ＬＡＧ３二重特異性分子（ＤＡＲＴ‐Ｉ）の存在下又は不在下で、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子（マルゲツキシマブ）又は対照を用いて予備調質されたＰＢＭＣの、Ｋ５６２（ＨＥＲ２ネガティブ）又はＮ８７（ＨＥＲ２⁺⁺⁺）標的細胞に対する細胞傷害性を示す（細胞傷害性は主にＮＫ細胞によって仲介される）。図１４は、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子ＤＡＲＴ‐Ｉ、及びＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子マルゲツキシマブを用いて治療された、２８人の評価可能な患者に関する、予備的な臨床結果のウォーターフォールプロットを示す。腫瘍のタイプが示されている。塗りつぶされたバーは、６００ｍｇのＤＡＲＴ‐Ｉ＋１５ｍｇ／ｋｇを投与された患者における応答を表し、縞模様になったバーは、３００ｍｇのＤＡＲＴ‐Ｉ＋１５ｍｇ／ｋｇを投与された患者における応答を表す。図１５Ａ～１５Ｃは、マルゲツキシマブ及びＤＡＲＴ‐Ｉで処理されたコホートにおける１９のベースライン生検試料からの、ＬＡＧ３及びＰＤ‐１（ＰＤＣＤ１）のベースライン遺伝子発現をプロットしている。ベースラインにおけるデュアルＬＡＧ３／ＰＤＣＤ１発現が図１５Ａにプロットされている。ＬＡＧ‐３（図１５Ｂ）及びＰＤＣＤ１（図１５Ｃ）のベースラインでの発現と、これに対する１つ以上の標的病変での％変化とがプロットされている。ＣＲ＝完全奏効；ＰＲ＝部分奏効；ＳＤ＝安定した病状；ＰＤ＝進行性疾患。

Ｉ．抗体及び抗体系分子
抗体は、免疫グロブリン分子であって、該免疫グロブリン分子の可変領域に存在する少なくとも１つの「エピトープ結合ドメイン」を介して、分子の標的領域（「エピトープ（epitope）」）（腫瘍抗原（「ＴＡ」）のエピトープ、ＰＤ‐１のエピトープ、ＰＤ‐Ｌ１のエピトープ、又はＬＡＧ‐３のエピトープ等）に免疫特異的に結合できるエピトープ結合ドメインを含有する、免疫グロブリン分子である。このような分子は、いずれのアイソタイプクラス（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ₁、ＩｇＧ₂、ＩｇＧ₃、ＩｇＧ₄、ＩｇＡ₁及びＩｇＡ₂）、又はサブクラスのものであってよい。

本明細書中で使用される場合、用語「抗体（antibody及びantibodies）」は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ポリクローナル抗体、及びラクダ化抗体を含むことを意図している。本明細書中で使用される場合、用語「抗体系分子（antibody‐based molecule）」は、完全又はインタクトな抗体分子と、完全又はインタクトな抗体ではないものの、抗体（例えば単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）；単鎖抗体；Ｆａｂ断片；Ｆ（ａｂ’）断片；ジスルフィド結合二重特異性Ｆｖ（ｓｄＦｖ）；細胞内抗体；ダイアボディ、抗体のＶＬ、ＶＨ又はＶＬ、及びＶＨドメインを含む分子；並びに抗体の軽鎖ＣＤＲドメインのうちの１つ、２つ若しくは３つ、抗体の重鎖ＣＤＲドメインのうちの１つ、２つ若しくは３つ、抗体の軽鎖及び重鎖ＣＤＲドメインのうちのいずれの１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つ、又は抗体の軽鎖及び重鎖ＣＤＲドメインのうちの６つ全て）のエピトープ結合ドメインを含む分子との両方を指す。このような抗体系分子は、更なる成分、例えばペプチドリンカー、二量体化ドメイン等を含む融合タンパク質であってよい。

本発明の抗体系分子は、１つ以上の上述のようなエピトープ結合ドメインの存在により、エピトープに「免疫特異的に結合（immunospecifically binding）」できる。本明細書中で使用される場合、抗体又はそのエピトープ結合断片は、代替的なエピトープ（例えば１つ、２つ、３つ若しくは４つ以上のアミノ酸置換を含有する変異型エピトープ、又は５０％未満の同一性を有するか若しくは関連のないポリペプチド）に比べて、より頻繁に、より迅速に、より長期間、及び／又はより高い親和性若しくは結合活性で当該エピトープと反応又は連結する場合、別の分子のある領域（即ちエピトープ）に「免疫特異的に（immunospecifically）」結合する、と言い表される。この定義を読めば、例えば第１の標的に免疫特異的に結合する抗体系分子は、第２の標的に免疫特異的又は優先的に結合してもしなくてもよいことも理解される。エピトープ含有分子は、免疫学的活性を有することができ、これにより、動物における抗体産生応答を誘発する。このような分子を「抗原（antigen）」と呼ぶ。

天然抗体は、１つのエピトープ種のみに結合できる（即ちこれらは「単一特異性（monospecific）」である）が、上記種の複数の複製に結合できる（即ち「２価性（bivalency）」又は「多価性（multivalency）」を示す）。この点に関して、天然由来の完全又はインタクトなＩｇＧ抗体の基本構造単位は、４つの集合したポリペプチド鎖、即ち２つの長い「重鎖（Heavy Chain）」と複合体化した２つの短い「軽鎖（Light Chain）」で構成された、四量体である。各ポリペプチド鎖は、「可変ドメイン」を含むアミノ末端（「Ｎ末端」）部分と、少なくとも１つの「定常ドメイン」を含むカルボキシ末端（「Ｃ末端」）部分とからなる。ＩｇＧ軽鎖は、単一の「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬ」）と、単一の「軽鎖定常ドメイン」（「ＣＬ」）とからなる。よって、ＩｇＧ抗体の軽鎖の構造は、ｎ‐ＶＬ‐ＣＬ‐ｃである（ここでｎ及びｃはそれぞれ、ポリペプチド鎖のＮ末端及びＣ末端を表す）。ＩｇＧ重鎖は、単一の「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨ」）、３つの「重鎖定常ドメイン」（「ＣＨ１」、「ＣＨ２」及び「ＣＨ３」）、並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に位置する「ヒンジ」領域（「Ｈ」）からなる。そうでないことが具体的に注記されていない限り、本明細書に記載のタンパク質分子のドメインの順序は、Ｎ末端からＣ末端への方向である。よって、ＩｇＧ重鎖の構造は、ｎ‐ＶＨ‐ＣＨ１‐Ｈ‐ＣＨ２‐ＣＨ３‐ｃである（ここでｎ及びｃはそれぞれ、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端を表す）。インタクトで修飾されていない抗体（例えばＩｇＧ抗体）の、抗原のエピトープに結合する能力は、可変ドメインの存在及びその配列に左右される。

Ａ．定常ドメイン
１．軽鎖定常ドメイン
あるＣＬドメインは、ヒトＩｇＧＣＬκドメインである。代表的なヒトＣＬκドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１）：
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG
NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK
SFNRGEC
である。

別のＣＬドメインは、ヒトＩｇＧＣＬλドメインである。代表的なヒトＣＬλドメインのアミノ酸配列は、（配列番号２）：
QPKAAPSVTL FPPSSEELQA NKATLVCLIS DFYPGAVTVA WKADSSPVKA
GVETTPSKQS NNKYAASSYL SLTPEQWKSH RSYSCQVTHE GSTVEKTVAP
TECS
である。

２．重鎖ＣＨ１ドメイン
代表的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ１ＣＨ１ドメインである。代表的なヒトＩｇＧ１ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号３）：
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRV
である。

別の代表的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ２ＣＨ１ドメインである。代表的なヒトＩｇＧ２ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号４）：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTV
である。

別の代表的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ３ＣＨ１ドメインである。代表的なヒトＩｇＧ３ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５）：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YTCNVNHKPS NTKVDKRV
である。

別の代表的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ４ＣＨ１ドメインである。代表的なヒトＩｇＧ４ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号６）：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRV
である。

３．重鎖ヒンジ領域
代表的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域である。代表的なヒトＩｇＧ１ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号７）：
EPKSCDKTHT CPPCP
である。

別の代表的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域である。代表的なヒトＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号８）：
ERKCCVECPP CP
である。

別の代表的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ３ヒンジ領域である。代表的なヒトＩｇＧ３ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号９）：
ELKTPLGDTT HTCPRCPEPK SCDTPPPCPR CPEPKSCDTP PPCPRCPEPK
SCDTPPPCPR CP
である。

別の代表的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域である。代表的なヒトＩｇＧ４ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号１０）：
ESKYGPPCPS CP
である。

本明細書中で記載されるように、ＩｇＧ４ヒンジ領域は、（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによって番号付与した場合）Ｓ２２８Ｐ置換等の安定化突然変異を含んでよい。ある特定の安定化ＩｇＧ４ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号１１）：
ESKYGPPCPP CP
である。

４．重鎖ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン、並びにＦｃドメイン
２つの重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、相互作用してＩｇＧ抗体の「Ｆｃ領域（Ｆｃｒｅｇｉｏｎ）」を形成し、これは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）を含むがこれに受容されない細胞Ｆｃ受容体によって認識されるドメインである。本明細書中で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」は、ＩｇＧ重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。Ｆｃ領域の一部分（Ｆｃ領域全体を包含する一部分を含む）を、本明細書では「Ｆｃドメイン」と呼ぶ。Ｆｃドメインは、そのアミノ酸配列が、他のＩｇＧアイソタイプに対してよりも、あるＩｇＧアイソタイプに対して最も相同性が高い場合に、この特定のＩｇＧアイソタイプ、クラス又はサブクラスのものであると表現されるが、異なる複数のアイソタイプに由来する部分を含むハイブリッドＦｃドメインも考えられる。

代表的なヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１２）：
231 240 250 260 270 280
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
340 350 360 370 380
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
390 400 410 420 430
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
440 447
ALHNHYTQKS LSLSPGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

代表的なヒトＩｇＧ２のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３）：
231 240 250 260 270 280
APPVA-GPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA
340 350 360 370 380
PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDISVE
390 400 410 420 430
WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
440 447
ALHNHYTQKS LSLSPGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

代表的なヒトＩｇＧ３のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４）：
231 240 250 260 270 280
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFKWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQYNSTF RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
340 350 360 370 380
PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
390 400 410 420 430
WESSGQPENN YNTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NIFSCSVMHE
440 447
ALHNRFTQKS LSLSPGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

代表的なヒトＩｇＧ４のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１５）：
231 240 250 260 270 280
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS
340 350 360 370 380
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
390 400 410 420 430
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE
440 447
ALHNHYTQKS LSLSLGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

本明細書全体を通して、ＩｇＧ重鎖の定常領域の残基の番号付与は、Kabat et al.、Sequences of Proteins of Immunological Interest、5^th Ed. Public Health Service、NH1、MD (1991)、これは参照により明示的に本明細書に援用される）によるＥＵインデックスの番号付与である。用語「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス（EU index as in Kabat）」は、ヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の番号付与を指す。

多型は、抗体定常領域内の多数の異なる位置（例えばＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で１９２位、１９３位及び２１４位を含むがこれらに限定されないＣＨ１位置；２７０位、２７２位、３１２位、３１５位、３５６位及び３５８位を含むがこれらに限定されないＦｃ位置）において観察されており、従ってここで提示される配列と従来技術の配列との間にはわずかな差異が存在し得る。ヒト免疫グロブリンの多型形態は、十分に特性決定されている。現在、１８個のＧｍアロタイプが公知である：Ｇ１ｍ（１，２，３，１７）又はＧ１ｍ（ａ，ｘ，ｆ，ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）又はＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５，６，１０，１１，１３，１４，１５，１６，２１，２４，２６，２７，２８）又はＧ３ｍ（ｂ１，ｃ３，ｂ３，ｂ０，ｂ３，ｂ４，ｓ，ｔ，ｇ１，ｃ５，ｕ，ｖ，ｇ５）（Lefranc, et al., The human IgG subclasses: molecular analysis of structure, function and regulation. Pergamon, Oxford, pp. 43‐78 (1990); Lefranc, G. et al., 1979, Hum. Genet.: 50, 199‐211）。特に、本発明の抗体が、いずれの免疫グロブリン遺伝子のいずれのアロタイプ、アイソアロタイプ又はハプロタイプを組み込むことができ、本明細書中で提示される配列のアロタイプ、アイソアロタイプ又はハプロタイプに限定されないと考えられる。更に、発現系によっては、ＣＨ３ドメインのＣ末端アミノ酸残基（上記太字）は、翻訳後に除去できる。従ってＣＨ３ドメインのＣ末端残基は、本発明の分子の任意のアミノ酸残基である。本発明によって具体的に包含されるのは、ＣＨ３ドメインのＣ末端残基が欠けた分子である。また本発明によって具体的に包含されるのは、ＣＨ３ドメインのＣ末端リシン残基を含む分子である。

本発明のＦｃドメイン含有抗体系分子のＦｃドメインは、完全Ｆｃドメイン（例えば完全ＩｇＧＦｃ領域）であっても、Ｆｃ領域の一部分のみであってもよい。任意に、本発明のＦｃドメイン含有抗体系分子のＦｃドメインは、野生型ＩｇＧＣＨ３ドメインのＣ末端リシンアミノ酸残基を含まない。

従来の免疫機能において、抗体‐抗原複合体と免疫系の細胞との相互作用は、抗体依存性の細胞傷害性、肥満細胞の脱顆粒、及び食作用といったエフェクタ機能から、リンパ球増殖及び抗体分泌の調整といった免疫調節シグナルまでに及ぶ、幅広い応答をもたらす。これらの相互作用は全て、抗体又は免疫複合体のＦｃドメインが、造血細胞の特殊化された細胞表面受容体に結合することによって開始される。抗体及び免疫複合体によってトリガされる細胞応答の多様性は、３つのＦｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の構造的不均質性に起因する。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は活性化（即ち免疫系強化）受容体であり；ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は阻害（即ち免疫系減衰）受容体である。更に、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用は、エンドソームから細胞表面へのＩｇＧ分子の再循環、及び血中への放出を仲介する。代表的な野生型ＩｇＧ１（配列番号１２）、ＩｇＧ２（配列番号１３）、ＩｇＧ３（配列番号１４）、及びＩｇＧ４（配列番号１５）のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列が、上に提示されている。

Ｆｃドメインのアミノ酸配列を修飾することによって、表現型の変化、例えば血清半減期の変化、安定性の変化、細胞酵素に対する感受性の変化、エフェクタ機能の変化、又はこのような表現型の組み合わせを提供できる。特に本発明は、野生型Ｆｃドメイン、又は抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を仲介する能力を、修飾されていないＦｃドメインを含有する抗体系分子によって仲介されるＡＤＣＣに比べて強化するために修飾されたＦｃドメインを含む、抗体系分子を企図する。このような修飾されたＦｃドメインを、本明細書中では「ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン（ADCC-Enhanced Fc Domain）」と呼ぶ。本発明はまた、ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有しないＦｃドメインを含む抗体系分子も企図する。従って特定の実施形態では、本発明の抗体系分子は、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン、又はＡＤＣＣ活性をほとんど若しくは全く有しないＦｃドメインを含むように、操作されていてよい。本発明の抗体系分子のＦｃドメインは、１つ以上のＦｃ受容体（例えば１つ以上のＦｃγＲ）に結合できる能力を有してよいが、特定の実施形態では、上記Ｆｃドメインは、（このような修飾を含まないＦｃドメインが呈する結合に対して）ＦｃγＲＩＡ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）若しくはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）への結合が変化した、修飾されたＦｃドメインである。例えばこのような変異型Ｆｃドメインは、１つ以上の活性化受容体への結合が増強されており、及び／又は１つ以上の阻害性受容体に結合する能力が低下しているか若しくは上記能力を有さず、増強されたＡＤＣＣ活性を示す。あるいはこのような変異型Ｆｃドメインは、１つ以上の活性化受容体に結合する能力が大幅に低下しているか若しくは上記能力を有しない場合があり、及び／又は１つ以上の阻害受容体に対する結合が増強されており、ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く示さない。

ＦｃγＲ結合（及びＡＤＣＣ活性）を低減又は排除する修飾は、当該技術分野において公知であり、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で２３４及び２３５位のアミノ酸置換、２６５位の置換、又は２９７位の置換を含む（例えば米国特許第５，６２４，８２１号を参照）。一実施形態では、本発明の抗体系分子は、置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びＮ２９７Ｇのうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含む、ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有しないＦｃドメインを含む。ある具体的実施形態では、本発明の抗体系分子は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で、アラニンによる２３４位の置換、及びアラニンによる２３５の置換（２３４Ａ、２３５Ａ）を含む、ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有しないＦｃドメインを含む。あるいは、このような分子は、（野生型ＩｇＧ１Ｆｃドメインが示す結合及びエフェクタ機能に比べて）本質的にＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への結合が低下した（若しくは略結合しない）、及び／又はエフェクタ機能が低下した、天然由来のＦｃドメインを含んでよい。ある具体的実施形態では、本発明のＦｃ担持分子は、ＩｇＧ２Ｆｃドメイン（配列番号１３）又はＩｇＧ４Ｆｃドメイン（配列番号１５）を含む。ＩｇＧ４Ｆｃドメインが使用される場合、本発明は、上述のヒンジ領域のＳ２２８Ｐ置換（例えば配列番号１１を参照）等の安定化変異の導入も包含する。

本発明のＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、完全ＦｃドメインのＣＨ２ドメインの一部若しくは全て及び／又はＣＨ３ドメインの一部若しくは全てを含んでよく、あるいは（例えば完全ＦｃドメインのＣＨ２又はＣＨ３ドメインに対する１つ以上の置換及び／又は挿入及び／又は１つ以上の欠失を含んでよい）変異型ＣＨ２及び／又は変異型ＣＨ３配列を含んでよい。このようなＦｃドメインは、非Ｆｃポリペプチド部分を含んでよく、あるいは天然由来でないＦｃドメインの一部を含んでよく、あるいは天然のものではないＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの配向（例えば２つのＣＨ２ドメイン若しくは２つのＣＨ３ドメイン、又はＮ末端からＣ末端への方向に、ＣＨ３ドメインと、これが結合されたＣＨ２ドメイン等）を含んでよい。

エフェクタ機能（例えばＡＤＣＣ）を変化させるものとして特定されているＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、当該技術分野において公知であり、活性化Ｆｃ受容体（例えばＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））への結合を阻害Ｆｃ受容体（例えばＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ））に比べて増大させる修飾を含む（例えばStavenhagen, J.B. et al. (2007) “Fc Optimization Of Therapeutic Antibodies Enhances Their Ability To Kill Tumor Cells In Vitro And Controls Tumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors,” Cancer Res. 57(18):8882-8890)を参照）。ＡＤＣＣ活性を増強する多数の単一、二重、三重、四重、及び五重置換が説明されている（例えば米国特許第６，７３７，０５６号；米国特許第７，３１７，０９１号；米国特許第７，３５５，００８号；米国特許第７，９６０，５１２号；米国特許第８，２１７，１４７号；米国特許第８，６５２，４６６号を参照）。

一実施形態では、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で：Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｄ２７０Ｅ、Ｒ２９２Ｇ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、又はＰ３９６Ｌ置換から選択される、（野生型ＩｇＧＦｃドメインに対する）１つ以上のアミノ酸置換を含む、Ｆｃドメインを含む。これらのアミノ酸置換はヒトＩｇＧＦｃドメイン（例えばＩｇＧ１Ｆｃドメイン）中に、いずれの組み合わせで存在してよい。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧＦｃドメインは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ置換を含有する。別の実施形態では、変異型ヒトＩｇＧＦｃドメインは、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ置換を含有する。更なる実施形態では、変異型ヒトＩｇＧＦｃドメインは、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ２９６Ｌ置換を含有する。ある具体的実施形態では、このようなヒトＩｇＧＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは:
（ａ）以下からなる群から選択される１つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ；
（２）Ｒ２９２Ｐ；
（３）Ｙ３００Ｌ；
（４）Ｖ３０５Ｉ；
（５）Ｉ３３２Ｅ；及び
（６）Ｐ３９６Ｌ
（ｂ）以下からなる群から選択される２つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ及びＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ及びＲ２９２Ｐ；
（３）Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；並びに
（４）Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ
（ｃ）以下からなる群から選択される３つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（４）Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
（ｄ）以下からなる群から選択される４つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；又は
（ｅ）以下からなる群から選択される５つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ
を含むことになり、ここで番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである。

具体的実施形態では、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは以下を含むことになる：
（１）「ＦｃＭＴ１」ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインであって、上記ドメインはＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌ置換を含む。ＦｃＭＴ１変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む抗体系分子は、ヒトＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）への結合の、野生型ＩｇＧ１Ｆｃドメインで観察される結合に対して１０倍の増大を示し、またＣＤ１６‐１５８Ｐｈｅへの結合が、ＣＤ１６‐１５８Ｖａｌへの結合に比べて比例的に大きく増強される。「ＦｃＭＴ１」ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１６）：
APELLGGPSV FLLPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PPEEQYNSTL RVVSILTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPLVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である；
（２）「ＦｃＭＴ２」ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインであって、上記ドメインはＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ置換を含む。ＦｃＭＴ２変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインは、ＦｃＭＴ１変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインの更なる改良であり、同等のＣＤ１６Ａ結合特性を有しながら、ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合はより有利に減少している。「ＦｃＭＴ２」ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１７）：
APELVGGPSV FLLPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PPEEQYNSTL RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPLVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である；あるいは
（３）「ＦｃＭＴ３」ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインであって、上記ドメインはＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、及びＹ３００Ｌ置換を含む。ＦｃＭＴ３変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインは、ＦｃＭＴ１変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインの更なる改良であり、同等のＣＤ１６Ａ結合特性を有しながら、ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合はより有利に減少している。「ＦｃＭＴ３」ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１８）：
APELLGGPSV FLLPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PPEEQYNSTL RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
であり、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

代替実施形態では、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、フコースを含有しない及び／又はバイセクトＯ‐ＧｌｃＮＡｃを含む複合型Ｎ‐グリコシド結合糖鎖である、人工グリコフォームを含む。このようなグリコフォームは、フコシルトランスフェラーゼを含まない細胞株（例えばＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）細胞株、ＢｉｏＷａ，Ｉｎｃ．；Matsushita, T. (2011) “Engineered Therapeutic Antibodies With Enhanced Effector Functions: Clinical Application Of The Potelligent(R) Technology,” Korean J. Hematol. 46(3):148-150）、及び／又はＯ‐ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼを発現する細胞株（ＲｏｃｈｅＧｌｙｃＡｒｔＡＧ；Satoh, M. et al. (2006) “Non-Fucosylated Therapeutic Antibodies As Next-Generation Therapeutic Antibodies,” Exp. Opin. Biol. Ther. 6(11):1161-1173）中で、組み換えによって抗体系分子を発現させることによって、得ることができる。特定の実施形態では、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、１つ以上のアミノ酸置換及び１つの人工グリコフォームを含む。

更に、Ｆｃドメインを含む分子の血清半減期は、ＦｃＲｎに関するＦｃドメインの結合親和性を増大させることによって増大させることができる。本明細書において使用される場合、用語「半減期（half-life）」は、投与後の分子の平均生存時間の尺度となる、分子の薬物動態特性を意味する。半減期は、血清中で（即ち循環半減期）又は他の組織中で測定した場合に、分子の既知の量の５０パーセント（５０％）が被験者の身体（例えばヒト患者若しくは他の哺乳類）又はその特定の体腔から排除されるために必要な時間として表すことができる。一般に、半減期の増大は、投与される分子の循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増大につながる。Ｆｃドメイン含有分子の半減期を延長できる修飾は、当該技術分野において公知であり、例えばアミノ酸置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びこれらの組み合わせを含む。例えば米国特許第６，２７７，３７５号、米国特許第７，０８３，７８４号、米国特許第７，２１７，７９７号、及び米国特許第８，０８８，３７６号；米国公開特許第２００２／０１４７３１１号、及び米国公開特許第２００７／０１４８１６４号；並びに国際公開第９８／２３２８９号、国際公開第２００９／０５８４９２号、及び国際公開第２０１０／０３３２７９号に記載の修飾を参照。

一実施形態では、本発明の抗体系分子は変異型Ｆｃドメインを含み、上記変異型Ｆｃドメインは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で、チロシンによる２５２位の置換、トレオニンによる２５４位の置換、及びグルタミン酸による２５６の置換（２５２Ｙ、２５４Ｔ及び２５６Ｅ）を含む。

本発明はまた、Ｆｃドメインを含む本発明の抗体系分子を包含し、上記Ｆｃドメインは：
（ａ）エフェクタ機能及び／若しくはＦｃγＲ結合を変化させる１つ以上の変異；並びに／又は
（ｂ）血清半減期を延長する１つ以上の変異
を含む。

本発明はまた、Ｆｃドメインを含む本発明の抗体系分子を包含し、上記Ｆｃドメインは：
（ａ）ＡＤＣＣを低減若しくは排除する１つ以上の変異；及び／又は
（ｂ）血清半減期を延長する１つ以上の変異
を含む。

ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有さず、かつ血清半減期が延長された変異型Ｆｃドメインの、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインの代表的なＩｇＧ１配列は、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを含み（配列番号１９）：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

血清半減期が延長された変異型ＦｃドメインのＣＨ２及びＣＨ３ドメインの代表的なＩｇＧ４配列は、置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを含み（配列番号２０）：
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSLGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。

５．可変ドメイン
ＩｇＧ分子の可変ドメインは、エピトープと接触することになる抗体のアミノ酸残基を含有する３つの相補性決定領域（「ＣＤＲ（Complementarity‐Determining Region）」）、及びフレームワーク領域（「ＦＲ（Framework Region）」）と呼ばれる介在性非ＣＤＲセグメントからなり、上記フレームワークセグメントは、一般にＣＤＲ残基の構造を維持してＣＤＲの位置を決定することにより、このような接触を可能とする（ただし特定のフレームワーク残基もエピトープに接触し得る）。従って、ＶＬ及びＶＨドメインは、構造ｎ‐ＦＲ１‐ＣＤＲ１‐ＦＲ２‐ＣＤＲ２‐ＦＲ３‐ＣＤＲ３‐ＦＲ４‐ｃを有する。ＣＤＲのアミノ酸配列は、ある抗体がある特定のエピトープに結合できるかどうかを決定する。抗体軽鎖と抗体重鎖との相互作用、特に、それぞれ別個のポリペプチド上に存在するこれらのＶＬドメインとＶＨドメインとの相互作用は、抗体のエピトープ結合ドメインを形成する。

免疫グロブリンの成熟した重鎖及び軽鎖の可変ドメインからのアミノ酸は、鎖内でのアミノ酸の位置によって指定される。Ｋａｂａｔ（Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991)）は、抗体に関する多数のアミノ酸配列を記載し、各サブグループに関するアミノ酸コンセンサス配列を同定し、残基番号を各アミノ酸に割り当てており、またＣＤＲ及びＦＲは、Ｋａｂａｔによって定義されるように同定される（Chothia, C. & Lesk, A. M.(1987) “Canonical Structures For The Hypervariable Regions Of Immunoglobulins,” J. Mol. Biol. 196:901‐917）によって定義されるＣＤＲ_H１は、残基５個分前から始まることが理解されるだろう）。Ｋａｂａｔの番号付与スキームは、その大要に含まれていない抗体に対して、保存されたアミノ酸を参照して上記抗体をＫａｂａｔのコンセンサス配列のうちの１つと整列させることにより、拡張可能である。残基番号を割り当てるこの方法は、当該技術分野において標準的なものとなっており、キメラ変異型又はヒト化変異型を含む異なる抗体の同一の位置のアミノ酸が容易に同定される。例えば、ヒト抗体軽鎖の５０位のアミノ酸は、マウス抗体軽鎖の５０位のアミノ酸と同一位置を占める。従って、ＶＬ及びＶＨドメイン内における、これらのＣＤＲが始まる及び終わる位置は、明確に定義され、ＶＬ及びＶＨドメインの配列の検査によって確認できる（例えばMartin, C.R. (2010) “Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains,” In: Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann, R. and Dubel, S. (eds.), Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Chapter 3 (pages 33-51)を参照）。

抗体の軽鎖の第１、第２及び第３のＣＤＲである（又は第１、第２及び第３のＣＤＲとして機能し得る）ポリペプチドは、本明細書ではそれぞれＣＤＲ_L１ドメイン、ＣＤＲ_L２ドメイン及びＣＤＲ_L３ドメインと呼ばれる。同様に、抗体の重鎖の第１、第２及び第３のＣＤＲである（又は第１、第２及び第３のＣＤＲとして機能し得る）ポリペプチドは、本明細書ではそれぞれＣＤＲ_H１ドメイン、ＣＤＲ_H２ドメイン及びＣＤＲ_H３ドメインと呼ばれる。よって、ＣＤＲ_L１ドメイン、ＣＤＲ_L２ドメイン、ＣＤＲ_L３ドメイン、ＣＤＲ_H１ドメイン、ＣＤＲ_H２ドメイン、及びＣＤＲ_H３ドメインという用語は、あるタンパク質に組み込まれた場合に、当該タンパク質が、軽鎖及び重鎖若しくはダイアボディ若しくは単鎖結合分子（例えばｓｃＦｖ、ＢｉＴｅ等）を有する抗体であるか、又は別のタイプのタンパク質であるかにかかわらず、当該タンパク質を、特定のエピトープに結合できるようにする、ポリペプチドを対象としている。従って、本明細書中で使用される場合、用語「エピトープ結合ドメイン（ＥｐｉｔｏｐｅＢｉｎｄｉｎｇＤｏｍａｉｎ）」は、本発明の抗体系分子の、あるエピトープに免疫特異的に結合できる部分を指す。エピトープ結合ドメインは、抗体のＣＤＲドメインのうちの１、２、３、４若しくは５個を含有してよく、又は抗体のＣＤＲドメインのうちの６個全てを含有してよく、このようなエピトープに免疫特異的に結合できるものの、このような抗体のエピトープとは異なるエピトープに対する免疫特異性、親和性又は選択性を呈してもよい。しかしながら典型的には、エピトープ結合ドメインは、このような抗体のＣＤＲドメインのうちの６個全てを含有することになる。

エピトープ結合ドメインは、定常ドメインに融合する完全可変ドメイン、又は適切なフレームワーク領域にグラフトされたこのような可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）のみを含んでよい。エピトープ結合ドメインは野生型であってよく、又は１つ若しくは複数のアミノ酸置換によって修飾してよい。

抗体系分子のヒト化
本発明は特に、ヒト化抗体のＶＬ及び／又はＶＨドメインを含む抗体系分子を包含する。用語「ヒト化（humanized）」抗体は、キメラ分子であって、一般に組み換え技術を用いて調製され、非ヒト種からの免疫グロブリンのエピトープ結合ドメインと、残りの、ヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づく分子の免疫グロブリン構造とを有する、キメラ分子を指す。このような抗体の可変ドメインのポリヌクレオチド配列は、上記誘導体を生成するため及び上記抗体の親和性又は他の特徴を改善するための遺伝子操作のために使用できる。重鎖及び軽鎖両方の可変ドメインは、問題となる抗原に応答して変化して結合能力を決定する、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を内包することが知られており、上記フレームワーク領域は、ある所与の種において相対的に保存され、またＣＤＲのための足場を提供するものと推定される。ある特定の抗原に対して非ヒト抗体を調製する際、可変ドメインを「再成形」又は「ヒト化」できる。抗体をヒト化する際の一般原理は、抗体のエピトープ結合部分の塩基配列を保持しながら、抗体の非ヒト残部をヒト抗体配列と交換するステップを伴う。モノクローナル抗体をヒト化するためには、４つの一般的なステップが存在する。上記ステップは以下の通りである：（１）開始抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインのヌクレオチド及び予測されるアミノ酸配列を決定するステップ；（２）ヒト化抗体又はイヌ化抗体を設計するステップ、即ちヒト化又はイヌ化プロセス中に使用する抗体フレームワーク領域を決定するステップ；（３）実際のヒト化又はイヌ化法／技術；並びに（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現。例えば米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，８０７，７１５号；米国特許第５，８６６，６９２号；及び米国特許第６，３３１，４１５号；Lobuglio et al. (1989) “Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224 (1989)を参照。他の参照文献は、適切なヒト抗体定常ドメインと融合する前にヒト支持性フレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトされる、げっ歯類ＣＤＲについて説明している（例えば、Riechmann, L. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies for Therapy,” Nature 332:323-327;及びJones et al. (1986) “Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse,” Nature 321:522-525を参照）。抗体をヒト化するために利用してよい他の方法は、Daugherty et al. (1991) “Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, CDR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18 Component Of Leukocyte Integrins,” Nucl. Acids Res. 19:2471-2476並びに米国特許第６，１８０，３７７号；米国特許第６，０５４，２９７号；米国特許第５，９９７，８６７号；及び米国特許第５，８６６，６９２号によって開示されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は全てのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体からの６つのＣＤＲ全てを含有するヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、オリジナルの抗体に対して配列が異なる改変された１つ又は複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）を有する。

Ｂ．二重特異性分子
いくつかの実施形態では、本発明の抗体系分子は、二重特異性抗体又は二重特異性ダイアボディといった二重特異性のものである。このような二重特異性抗体系分子は、提供されたＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３のエピトープ結合ドメインを含んでよく（即ちＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）、又は提供されたＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３のエピトープ結合ドメインを含んでよい（即ちＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）。このような二重特異性抗体系分子の提供により、単一特異性抗体を上回る重要な利点、即ちＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３を、これらを同時発現する細胞上で共連結する、並びに／若しくはＰＤ‐１を発現する細胞とＬＡＧ‐３を発現する細胞とを共局在化する能力、又はＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３を、これらを同時発現する細胞上で共連結する、並びに／若しくはＰＤ‐Ｌ１を発現する細胞とＬＡＧ‐３を発現する細胞とを共局在化する能力が提供される。特定の実施形態では、このような二重特異性抗体系分子は、２つの異なるＴＡに結合してよい。

１．二重特異性抗体
広範な組み換え二重特異性抗体フォーマットが開発されており（例えば国際公開第２００８／００３１１６号、国際公開第２００９／１３２８７６号、国際公開第２００８／００３１０３号、国際公開第２００７／１４６９６８号、国際公開第２００９／０１８３８６号、国際公開第２０１２／００９５４４号、及び国際公開第２０１３／０７０５６５号を参照）、その大半は、更なるエピトープ結合断片（例えばｓｃＦｖ、ＶＬ、ＶＨ等）を抗体コア（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ）へ若しくは上記抗体コア内に融合させるため、又は複数のエピトープ結合断片（例えば２つのＦａｂ断片若しくはｓｃＦｖ）を融合させるために、リンカーペプチドを使用する。代替的なフォーマットは、エピトープ結合断片（例えばｓｃＦｖ、ＶＬ、ＶＨ等）を、ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン又は代替となるポリペプチド等の二量体化ドメインに融合させるために、リンカーペプチドを使用する（国際公開第２００５／０７０９６６号、国際公開第２００６／１０７７８６Ａ号、国際公開第２００６／１０７６１７Ａ号、及び国際公開第２００７／０４６８９３号）。国際公開第２０１３／１７４８７３号、国際公開第２０１１／１３３８８６号、及び国際公開第２０１０／１３６１７２号は、２つ以上の抗原に結合できるように、ＣＬ及びＣＨ１ドメインがそれぞれの自然位置から切り替わり、かつＶＬ及びＶＨドメインが多様化されている、三重特異性抗体を教示している（国際公開第２００８／０２７２３６号；国際公開第２０１０／１０８１２７号）。国際公開第２０１３／１６３４２７号及び国際公開第２０１３／１１９９０３号は、ＣＨ２ドメインを修飾して、結合ドメインを含む融合タンパク付加物を含有させるステップを開示している。国際公開第２０１０／０２８７９７号、国際公開第２０１００２８７９６号、及び国際公開第２０１０／０２８７９５号は、Ｆｃ領域が追加のＶＬ及びＶＨドメインで置換されて、３価結合分子を形成している、組み換え抗体を開示している。国際公開第２００３／０２５０１８号及び国際公開第２００３０１２０６９号は、個々の鎖がｓｃＦｖドメインを含有する組み換えダイアボディを開示している。国際公開第２０１３／００６５４４号は、単一のポリペプチド鎖として合成された後、タンパク質分解に供されることによってヘテロ二量体構造が得られる、多価ｆａｂ分子を開示している。国際公開第２０１４／０２２５４０号、国際公開第２０１３／００３６５２号、国際公開第２０１２／１６２５８３号、国際公開第２０１２／１５６４３０号、国際公開第２０１１／０８６０９１号、国際公開第２００８／０２４１８８号、国際公開第２００７／０２４７１５号、国際公開第２００７／０７５２７０号、国際公開第１９９８／００２４６３号、国際公開第１９９２／０２２５８３号、及び国際公開第１９９１／００３４９３号は、追加の結合ドメイン又は官能基を抗体又は抗体部分に付加するステップ（例えば抗体の軽鎖にダイアボディを付加するステップ、又は抗体の軽鎖及び重鎖に追加のＶＬ及びＶＨドメインを付加するステップ、又は異種融合タンパク質を互いに対して付加するステップ若しくは複数のＦａｂドメインを互いに対して連鎖させるステップ）を開示している。共有結合ダイアボディ、及びダイアボディ様ドメインを含む３価分子は、国際公開第２０１５／１８４２０７号、国際公開第２０１５／１８４２０３号、国際公開第２０１２／１６２０６８号、国際公開第２０１２／０１８６８７号、国際公開第２０１０／０８０５３８号、及び国際公開第２００６／１１３６６５号に記載されており、また本明細書で提供される。従って、本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、上述のフォーマットのうちのいずれかの構造を有してよく、また上述の方法のうちのいずれで製造することもできることが、特に企図される。

２．二重特異性ダイアボディ
本発明のダイアボディは、安定した、共有結合ヘテロ二量体非単一特異性ダイアボディであり、例えばChichili, G.R. et al. (2015) “A CD3xCD123 Bispecific DART For Redirecting Host T Cells To Myelogenous Leukemia: Preclinical Activity And Safety In Nonhuman Primates,” Sci. Transl. Med. 7(289):289ra82; Veri, M.C. et al. (2010) “Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIB (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold,” Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943; Moore, P.A. et al. (2011) “Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T cell Killing Of B-Cell Lymphoma,” Blood 117(17):4542-4551；米国公開特許第２００７／０００４９０９号；米国公開特許第２００９／００６０９１０号；米国公開特許第２０１０／０１７４０５３号；米国公開特許第２０１３０２９５１２１号；米国公開特許第２０１４／００９９３１８号；米国公開特許第２０１５／０１７５６９７号；米国公開特許第２０１６／００１７０３８号；米国公開特許第２０１６／０１９４３９６号；米国公開特許第２０１６／０２００８２７号；及び米国公開特許第２０１７／０２４７４５２号を参照されたい。このようなダイアボディは、２つ以上の共有結合で複合体化したポリペプチド鎖を含み、１つ又は複数のシステイン残基を、ジスルフィド結合を形成でき、これによって２つのポリペプチド鎖を共有結合させる、採用したポリペプチド種それぞれの中へと組み込むステップを伴う。例えば、このような構造のＣ末端へのシステイン残基の追加は、ポリペプチド鎖間のジスルフィド結合を可能とすることが分かっており、これは、２価分子の結合特性に干渉することなく、得られるヘテロ二量体を安定化させる。このようなダイアボディは、ポリペプチド鎖のヘテロ二量体化の促進に役立つドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン」）も含む。

本発明のダイアボディの構成は、ポリペプチドで構成された、共有結合で複合体化したダイアボディであり、２つ、３つ、４つ又は５つ以上のポリペプチド鎖からなってよい。本明細書中で使用される場合、用語「…からなる（composed of）」は、非制限的なものであることが意図されており、従って、２つのポリペプチド鎖からなる本発明のダイアボディは、更なるポリペプチド鎖を有してよい。このような鎖は、上記ダイアボディの別のポリペプチド鎖と同一の配列を有してよく、又は上記結合分子の他のいずれのポリペプチド鎖と異なる配列を有してよい。本発明のダイアボディは、Ｆｃドメインを含むように設計されていてよい。

特定の実施形態では、本発明のダイアボディは、第１のエピトープに対して特異的な２つの結合部位、第２のエピトープに対して特異的な２つの結合部位、Ｆｃドメイン、及びシステイン含有Ｅ／Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメインを有する、４鎖Ｆｃドメイン含有ダイアボディである。このようなダイアボディの全体的な構造が図１に提供されている。

本発明の二重特異性ダイアボディは、上記第１及び第２のポリペプチドが、その長さに沿ったシステイン残基を介して互いに共有結合するように、操作される。このようなシステイン残基は、ポリペプチドのＶＬドメインとＶＨドメインとを隔てる介在リンカー（リンカー１；例えばGGGSGGGG（配列番号２１））に導入できる。あるいは更に好ましくは、システイン残基を含む第２のペプチド（リンカー２）を、各ポリペプチド鎖に、例えば該ポリペプチド鎖のＶＬドメインに対するＮ末端又はＶＨドメインに対するＣ末端の位置において導入する。このようなリンカー２の好ましい配列は、配列番号２２：GGCGGGである。更に、又はあるいは、システイン残基を、以下に例が提供される他のドメインに導入してもよい。

特定の実施形態では、本発明のヘテロ二量体促進ドメインは、反対の電荷を有する、タンデム状に反復するコイルドメインを含むことになる。従って一実施形態では、ポリペプチド鎖のうちの一方は、ｐＨ７において負の電荷を形成する残基を有する「Ｅコイル」ドメイン（配列番号２３：EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK）を含有するように操作され、２つのポリペプチド鎖のうちの他方は、ｐＨ７において正の電荷を形成する残基を有する「Ｋコイル」ドメイン（配列番号２４：KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE）を含有するように操作される。このような荷電ドメインの存在により、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の会合が促進され、これによってヘテロ二量体化が促進される。第１又は第２のポリペプチド鎖にどちらのコイルが提供されるかは重要ではない。

別の実施形態では、配列番号２３の４つのタンデム「Ｅコイル」ヘリカルドメインのうちの１つがシステイン残基を含有するように修飾された、ヘテロ二量体促進ドメイン（例えばEVAACEK‐EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK（配列番号２５））が利用される。同様に別の実施形態では、配列番号２４の４つの「Ｋコイル」ヘリカルドメインのうちの１つがシステイン残基を含有するように修飾された、ヘテロ二量体促進ドメイン（例えばKVAACKE‐KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE（配列番号２６））が利用される。このような実施形態を有利に組み合わせることによって、配列番号２５のヘテロ二量体促進ドメインと配列番号２６のヘテロ二量体促進ドメインとを採用する。

従って、上記ダイアボディは、そのポリペプチド鎖のペアが、その長さに沿って位置決めされた１つ又は複数のシステイン残基を介して互いに対して共有結合して、共有結合分子複合体が生成されるよう、操作される。このようなシステイン残基は、上記ポリペプチドのＶＬドメインとＶＨドメインとを隔てる介在リンカーに導入できる。あるいは、１つ以上のリンカー（例えばリンカー２、リンカー３等）がシステイン残基を含有してよい。具体的実施形態では、コイル含有ヘテロ二量体促進ドメインの１つ又は複数のコイルドメインが、配列番号２５又は配列番号２６のようなシステイン残基を組み込んだアミノ酸置換を含む。代替の、システイン残基を含まないリンカー２配列は、配列番号２７：ASTKGであり、これは、ヘテロ二量体促進ドメインを含有するシステイン残基と共に使用してよい。

本発明の二重特異性ダイアボディは好ましくは、１つに複合体化することによってＦｃ領域を形成できるＩｇＧＣＨ２‐ＣＨ３ドメインを有するように、操作される。特定の実施形態では、本発明の二重特異性ダイアボディは、ヒトＩｇＧＣＨ２‐ＣＨ３ドメインを含む。代表的なヒトＩｇＧＣＨ２‐ＣＨ３ドメインは上で提供されており、これは、エフェクタ機能及び／又は血清半減期を変化させるよう操作されたＣＨ２‐ＣＨ３ドメインを含む。

特定の実施形態では、本発明の二重特異性ダイアボディは、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインをヘテロ二量体促進ドメインに連結する介在リンカーペプチド（リンカー３）によって操作される。好ましくは、リンカー３はヘテロ二量体促進ドメインに対してＣ末端の位置にある。本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディで採用できるリンカーとしては：GGGS（配列番号２８）、LGGGSG（配列番号２９）、ASTKG（配列番号２７）、LEPKSS（配列番号３０）、APSSS（配列番号３１）、APSSSPME（配列番号３２）、GGC、及びGGGが挙げられる。リンカー３は、ＩｇＧヒンジ領域の一部分を、単独で、又は他のリンカー配列に加えて含んでよい。代表的なヒンジ領域は：ＩｇＧ１由来のDKTHTCPPCP（配列番号３３）又はEPKSCDKTHTCPPCP（配列番号７）、ＩｇＧ２由来のERKCCVECPPCP（配列番号８）、ＩｇＧ４由来のESKYGPPCPSCP（配列番号１０）、及びESKYGPPCPPCP（配列番号１１）、ストランドの交換を低減するための安定化Ｓ２２８Ｐ置換を含むＩｇＧ４ヒンジ多様体を含む（（Lu et al., (2008) “The Effect Of A Point Mutation On The Stability Of IgG4 As Monitored By Analytical Ultracentrifugation,” J. Pharmaceutical Sciences 97:960-969）。特定の実施形態では、リンカー３は更に、GGG、例えばGGGDKTHTCPPCP（配列番号３４）を含んでよい。

ＩＩ．ＰＤ‐１（若しくはＰＤ‐Ｌ１）及び／又はＬＡＧ‐３に結合する抗体系分子
本発明は具体的には、以下を含む又は採用する組成物及び方法を企図する：
（１）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；
（２）単一特異性ＰＤ‐１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子；
（３）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（４）単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子
ここで上記単一特異性結合分子はインタクト抗体であり、上記二重特異性分子はダイアボディ又は二重特異性抗体である。

本発明に従って使用できる、ヒトＰＤ‐１に免疫特異的に結合する抗体系分子（例えば単一特異性ＰＤ‐１結合分子又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）は、ＰＤ‐１のエピトープに免疫特異的に結合する、少なくとも１つのエピトープ結合ドメイン（ＰＤ‐１結合ドメイン）を含むことになる。

本発明に従って使用できる、ヒトＰＤ‐Ｌ１に免疫特異的に結合する抗体系分子（例えば単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）は、ＰＤ‐Ｌ１のエピトープに免疫特異的に結合する、少なくとも１つのエピトープ結合ドメイン（ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン）を含むことになる。

本発明に従って使用できる、ヒトＬＡＧ‐３に免疫特異的に結合する抗体系分子（例えば単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子）は、ＬＡＧ‐３のエピトープに免疫特異的に結合する、少なくとも１つのエピトープ結合ドメイン（ＬＡＧ‐３結合ドメイン）を含むことになる。

特定の実施形態では、本発明は、ＰＤ‐１結合ドメイン、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、及び／又はＬＡＧ‐３結合ドメインを含み、これらが更にＦｃドメインを含む、抗体系分子を企図する。一実施形態では、このような分子のＦｃドメインは、野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃドメインである。

本発明は、ＰＤ‐１結合ドメイン、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、又はＬＡＧ‐３結合ドメインを含み、これらがＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有しない変異型Ｆｃドメインを含む、単一特異性抗体系分子を企図する。本発明はまた、ＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３に対して免疫特異的であるか又はＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３に対して免疫特異的であるエピトープ結合ドメインを含み、これらがＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有しないＦｃドメインを含む、二重特異性抗体系分子（例えばダイアボディ）を企図する。一実施形態では、このような分子は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で、アラニンによる２３４位の置換、及びアラニンによる２３５位の置換（２３４Ａ、２３５Ａ）を含む、変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む。別の実施形態では、このような分子はＩｇＧ４Ｆｃドメインを含み、また任意に安定化したＩｇＧ４ヒンジ領域（例えば配列番号１１を参照）を含む。

特定の実施形態では、ＰＤ‐１結合ドメイン、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、及び／又はＬＡＧ‐３結合ドメインを含む抗体系分子は、血清半減期を延長する１つ以上の変異を含む、変異型Ｆｃドメインを含む。一実施形態では、このような分子は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で、チロシンによる２５２位の置換、トレオニンによる２５４位の置換、及びグルタミン酸による２５６位の置換（２５２Ｙ、２５４Ｔ及び２５６Ｅ）を含む、変異型Ｆｃドメインを含む。

本発明はまた、ＰＤ‐１結合ドメイン、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、及び／又はＬＡＧ‐３結合ドメインを含み、これらが更にＦｃドメインを含む、抗体系分子も包含し、上記Ｆｃドメインは：
（ａ）ＡＤＣＣを低減若しくは排除する１つ以上の変異；及び／又は
（ｂ）血清半減期を延長する１つ以上の変異
を含む。

一実施形態では、抗体系分子は、ＰＤ‐１結合ドメイン、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、及び／又はＬＡＧ‐３結合ドメインを含み、これらは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で、置換：Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（配列番号１９）を含む、変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む。

別の実施形態では、抗体系分子は、ＰＤ‐１結合ドメイン、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、及び／又はＬＡＧ‐３結合ドメインを含み、これらは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付与で、置換：Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（配列番号２０）を含む、変異型ＩｇＧ４Ｆｃドメインを含む。

Ａ．ＰＤ‐１結合ドメイン及び分子
一実施形態では、ＰＤ‐１結合ドメインは、配列番号３５及び配列番号３９のＶＬ及びＶＨドメインのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ＰＤ‐１結合ドメインは、配列番号３６及び配列番号３９のヒト化ＶＬ及びＶＨドメインを含む。

このようなヒト化ＶＬ_PD‐1ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号３５）：
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGMSFMNWF QQKPGQPPKL
LIHAASNQGS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FCQQSKEVPY
TFGGGTKVEI K
である。

このようなＶＬ_PD‐1のＣＤＲは：
ＣＤＲ_L１配列番号３６：RASESVDNYGMSFMN；
ＣＤＲ_L２配列番号３７：AASNQGS；及び
ＣＤＲ_L３配列番号３８：QQSKEVPYT
である。

このようなヒト化ＶＨ_PD‐1ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号３９）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMNWVRQA PGQGLEWIGV
IHPSDSETWL DQKFKDRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREH
YGTSPFAYWG QGTLVTVSS
である。

このようなＶＨ_PD‐1ドメインのＣＤＲは：
ＣＤＲ_H１配列番号４０：SYWMN；
ＣＤＲ_H２配列番号４１：VIHPSDSETWLDQKFKD；及び
ＣＤＲ_H３配列番号４２：EHYGTSPFAY
である。

代替的なＰＤ‐１結合ドメイン、及びこれを含む分子は、既に説明されており、また表１に提示されているものを含むがこれらに限定されない。これらはここでは、一般名で呼ばれる場合もあり、ＩＮＮの呼称で呼ばれる場合もある。

本明細書で提示されるＰＤ‐１結合分子を本発明の方法にそのまま使用できる、又は配列若しくはポリペプチド鎖を代替的なＰＤ‐１結合分子若しくはＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の構築に採用できることが、特に企図される。

Ｂ．ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン及び分子
一実施形態では、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメインは、配列番号４３及び配列番号４７のＶＬ及びＶＨドメインのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメインは、配列番号４３及び配列番号４７のヒト化ＶＬ及びＶＨドメインを含む。

このようなヒト化ＶＬ_PD‐L1ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号４３）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW
ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYNTPLTFGQ
GTKVEIK
である。

このようなＶＬ_PD‐L1のＣＤＲは：
ＣＤＲ_L１配列番号４４：KASQDVNTAVA；
ＣＤＲ_L２配列番号４５：WASTRHT；及び
ＣＤＲ_L３配列番号４６：QQHYNTPLT
である。

このようなＶＨ_PD‐L1ヒト化ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号４７）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYTMSWVRQA PGKGLEWVAY
ISIGGGTTYY PDTVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMNSLKTED TAVYYCARQG
LPYYFDYWGQ GTLVTVSS
である。

このようなＶＨ_PD‐L1のＣＤＲは：
ＣＤＲ_H１配列番号４８：SYTM；
ＣＤＲ_H２配列番号４９：YISIGGGTTYYPDTVK；及び
ＣＤＲ_H３配列番号５０：QGLPYYFDY
である。

代替的なＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン、及びこれを含む分子は、既に説明されており、また表２に提示されているものを含むがこれらに限定されない。これらはここでは、一般名で呼ばれる場合もあり、ＩＮＮの呼称で呼ばれる場合もある。

本明細書で提示されるＰＤ‐Ｌ１結合分子を本発明の方法にそのまま使用できる、又は配列若しくはポリペプチド鎖を代替的なＰＤ‐Ｌ１結合分子若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の構築に採用できることが、特に企図される。

Ｃ．ＬＡＧ‐３結合ドメイン及び分子
一実施形態では、ＬＡＧ‐３結合ドメインは、配列番号５１及び配列番号５５のＶＬ及びＶＨドメインのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ＬＡＧ‐３結合ドメインは、配列番号５１及び配列番号５５のヒト化ＶＬ及びＶＨドメインを含む。

このようなヒト化ＶＬ_LAG‐3ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５１）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVSSVVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYSTPWTFGG
GTKLEIK
である。

このようなＶＬ_LAG‐3ドメインのＣＤＲは：
ＣＤＲ_L１配列番号５２：RASQDVSSVVA；
ＣＤＲ_L２配列番号５３：SASYRYT；及び
ＣＤＲ_L３配列番号５４：QQHYSTPWT
を含む。

このようなヒト化ＶＨ_LAG‐3ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５５）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMDWVRQA PGQGLEWMGD
INPDNGVTIY NQKFEGRVTM TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA
DYFYFDYWGQ GTTLTVSS
である。

このようなＶＨ_LAG‐3ドメインのＣＤＲは：
ＣＤＲ_H１配列番号５６：DYNMD；
ＣＤＲ_H２配列番号５７：DINPDNGVTIYNQKFEG；及び
ＣＤＲ_H３配列番号５８：EADYFYFDY
を含む。

代替的なＬＡＧ‐３結合ドメイン、及びこれを含む分子は、既に説明されており、また表３に提示されているものを含むがこれらに限定されない。これらはここでは、一般名で呼ばれる場合もあり、ＩＮＮの呼称で呼ばれる場合もある。

本明細書で提示されるＬＡＧ‐３結合分子を本発明の方法にそのまま使用できる、又は配列若しくはポリペプチド鎖を代替的なＬＡＧ‐３結合分子若しくはＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子の構築に採用できることが、特に企図される。

Ｄ．ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子
本発明に従って使用できる、ヒトＰＤ‐１（又はＰＤ‐Ｌ１）及びヒトＬＡＧ‐３の両方に免疫特異的に結合する抗体系分子（即ちＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）は、ＰＤ‐１（又はＰＤ‐Ｌ１）のエピトープに免疫特異的に結合する少なくとも１つのエピトープ結合ドメイン、及びＬＡＧ‐３のエピトープに免疫特異的に結合する少なくとも１つのエピトープ結合ドメインを含むことになる。

特定の実施形態では、本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（Ｉ）ＰＤ‐１特異的ＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含むＶＬドメイン（ＶＬ_PD‐1）と、ＰＤ‐１特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３ドメインを含むＶＨドメイン（ＶＨ_PD‐1）とを含む、ＰＤ‐１結合ドメイン；並びに
（ＩＩ）ＬＡＧ‐３特異的ＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３ドメインを含むＶＬドメイン（ＶＬ_LAG‐3）と、ＬＡＧ‐３特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３ドメインを含むＶＨドメイン（ＶＨ_LAG‐3）とを含む、ＬＡＧ‐３結合ドメイン
を含み、上記ＰＤ‐１結合ドメイン及び上記ＬＡＧ‐３結合ドメインは、表１及び３で提供されているものから選択される。

他の実施形態では、本発明のＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（Ｉ）ＰＤ‐Ｌ１特異的ＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含むＶＬドメイン（ＶＬ_PD‐L1）と、ＰＤ‐Ｌ１特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３ドメインを含むＶＨドメイン（ＶＨ_PD‐L1）とを含む、ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン；並びに
（ＩＩ）ＬＡＧ‐３特異的ＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３ドメインを含むＶＬドメイン（ＶＬ_LAG‐3）と、ＬＡＧ‐３特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３ドメインを含むＶＨドメイン（ＶＨ_LAG‐3）とを含む、ＬＡＧ‐３結合ドメイン
を含み、上記ＰＤ‐Ｌ１結合ドメイン及び上記ＬＡＧ‐３結合ドメインは、表２及び３で提供されているものから選択される。

本発明の一実施形態は、Ｆｃドメインを含むＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子に関する。一実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子は、ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有しないＦｃドメインを含む。一実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子は、ＡＤＣＣ活性をほとんど又は全く有さず、かつ血清半減期を延長する１つ以上の変異を含む、Ｆｃドメインを含む。

特定の実施形態では、本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＰＤ‐１に対して特異的な２つの結合部位、ＬＡＧ‐３に対して特異的な２つの結合部位、Ｆｃドメイン、及びシステイン含有Ｅ／Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメインを有する、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディ、好ましくは４鎖Ｆｃドメイン含有ダイアボディである。代表的なＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディの全体的な構造が図１に提供されている。このような分子は、ＰＤ‐１に結合する抗体のＶＬ及びＶＨドメイン（それぞれＶＬ_PD‐1及びＶＨ_PD‐1）と、ＬＡＧ‐３に結合する抗体のＶＬ及びＶＨドメイン（それぞれＶＬ_LAG‐3及びＶＨ_LAG‐3）とを含む。よって、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、ＰＤ‐１のエピトープ及びＬＡＧ‐３のエピトープに特異的に結合できる。

１．ＤＡＲＴ‐Ｉ
「ＤＡＲＴ‐Ｉ」（「ＭＧＤ０１３」及びテボテリマブとしても公知）は、本発明の代表的なＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子である。ＤＡＲＴ‐Ｉは、ＰＤ‐１に対して特異的な２つの結合部位、ＬＡＧ‐３に対して特異的な２つの結合部位、半減期を延長するために操作された変異型ＩｇＧ４Ｆｃドメイン、及びシステイン含有Ｅ／Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメインを含む、二重特異性４鎖Ｆｃドメイン含有ダイアボディである。ＤＡＲＴ‐Ｉは、表４にまとめられているアミノ酸配列を有する４つのポリペプチド鎖を含む。これらのアミノ酸配列について、以下で更に詳細に説明する。

ＤＡＲＴ‐Ｉの第１及び第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＬＡＧ‐３に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬ_LAG‐3）（配列番号５１）；介在リンカーペプチド（リンカー１：GGGSGGGG（配列番号２１））；ＰＤ‐１に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨ_PD‐1）（配列番号３９）；システイン含有介在リンカーペプチド（リンカー２：GGCGGG（配列番号２２））；システイン含有ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAACEK‐EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK（配列番号２５））；安定化ＩｇＧ４ヒンジ領域を含む介在リンカーペプチド（リンカー３）（配列番号１１）；置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを含み、かつＣ末端残基を含まない、変異型ＩｇＧ４ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（配列番号２０）；及びＣ末端を含む。

ＤＡＲＴ‐Ｉの第１及び第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号５９）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVS SVVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYSTPWTFGG
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYSFTSYWMN
WVRQAPGQGL EWIGVIHPSD SETWLDQKFK DRVTITVDKS TSTAYMELSS
LRSEDTAVYY CAREHYGTSP FAYWGQGTLV TVSSGGCGGG EVAACEKEVA
ALEKEVAALE KEVAALEKES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT
LYITREPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS
DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLG
である。

ＤＡＲＴ‐Ｉの第２及び第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＰＤ‐１に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬ_PD‐1）（配列番号３５）；介在リンカーペプチド（リンカー１：GGGSGGGG（配列番号２１））；ＬＡＧ‐３に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨ_LAG‐3）（配列番号５５）；システイン含有介在リンカーペプチド（リンカー２：GGCGGG（配列番号２２））；システイン含有ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAACKE‐KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE（配列番号２６））；及びＣ末端を含む。

ＤＡＲＴ‐Ｉの第２及び第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号６０）：
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGMSFMNWF QQKPGQPPKL
LIHAASNQGS GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY FCQQSKEVPY
TFGGGTKVEI KGGGSGGGGQ VQLVQSGAEV KKPGASVKVS CKASGYTFTD
YNMDWVRQAP GQGLEWMGDI NPDNGVTIYN QKFEGRVTMT TDTSTSTAYM
ELRSLRSDDT AVYYCAREAD YFYFDYWGQG TTLTVSSGGC GGGKVAACKE
KVAALKEKVA ALKEKVAALK E
である。

ＤＡＲＴ‐Ｉの多様体は、代替的なＶＨ／ＶＬドメイン、介在リンカー、Ｆｃドメインの組み込みによって、及び／又は１つ以上のアミノ酸置換、追加、若しくは欠失の導入によって、容易に生成できる。例えば、ＦｃγＲ結合及び／又はＡＤＣＣ活性を低減し／消失させ、半減期を延長するように操作された、変異型ＩｇＧ１Ｆｃドメインは、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（配列番号１９）を含むＣＨ２及びＣＨ３ドメインを配列番号２０の代わりに組み込むことによって、容易に生成される。このような変異型のリンカー３は、ＩｇＧ１ヒンジ（配列番号３３、配列番号３５、又は配列番号３４）を含んでよい。本発明の方法において使用できる更なるリンカー及びＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、特許文献５２に；及び特許文献５８（特に「ＤＡＲＴ‐Ａ」、「ＤＡＲＴ‐Ｂ」、「ＤＡＲＴ‐Ｃ」、「ＤＡＲＴ‐Ｄ」、「ＤＡＲＴ‐Ｅ」、「ＤＡＲＴ‐Ｆ」、及び「ＤＡＲＴ‐Ｇ」を参照；これらの配列は表１４に記載されている）に開示されている。

２．更なるＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子
本発明の方法において使用できる他のＰＤ‐１×ＬＡＧ３二重特異性分子は、既に説明されており、また表５に提示されているものを含むがこれらに限定されず、以下で更に説明される。

ＰＤ‐１×ＬＡＧ３二重特異性抗体‐リポカリンムテイン融合タンパク質は、特許文献５３及び５６に記載されている。このような抗体‐リポカリンムテイン融合タンパク質の例としては、重鎖のＣ末端に遺伝子融合したＬＡＧ‐３に結合するように操作された、リボカインムテインを有する抗ＰＤ‐１抗体が挙げられる。

ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性抗体‐ドメイン抗体（抗体‐ｄＡｂ）融合タンパク質は、特許文献５４に記載されている。このような抗体‐ｄＡｂ融合タンパク質の例としては、重鎖のＣ末端に遺伝子融合した抗ＰＤ‐１ｄＡｂを有する、抗ＬＡＧ‐３抗体が挙げられる。ＣＨｌ／Ｃｋドメインの交換（単独で、若しくはＶＨ／ＶＬの交換と組み合わせて）、及び／又はＣＨ１／ＣＬ境界における荷電アミノ酸置換を含む、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性抗体が、特許文献５５に記載されている。このような二重特異性抗体の例としては：（ＶＨ／ＶＬドメイン交換を伴う）ｃｒｏｓｓＦａｂを含む、１つのＰＤ‐１結合ドメイン及び１つのＬＡＧ‐３結合ドメイン（１＋１抗体）を有する４ポリペプチド鎖抗体；並びにＣＨ１／ＣＫに変異を有する２つのＦａｂドメインと、各重鎖のＣ末端で融合した２つのｃｒｏｓｓＦａｂドメインとを含む、３つの異なるポリペプチド鎖、２つのＰＤ‐１結合ドメイン及び２つのＬＡＧ‐３結合ドメイン（２＋２抗体）を有する３ポリペプチド鎖抗体が挙げられる。

３ポリペプチド鎖Ｆａｂ×ｓｃＦｖＦｃ構造、又は２ポリペプチド鎖ｓｃＦｖＦｃ×ｓｃＦｖＦｃ構造を有する、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性抗体は、国際公開第２０１８／２１７９４４号及び特許文献５７に記載されている。このような二重特異性抗体の例は、抗ＬＡＧ３ｓｃＦｖＦｃホールと対になった抗ＰＤｌｓｃＦｖＦｃ、及び抗ＬＡＧ３ハーフＩｇＧと対になった抗ＰＤ１ｓｃＦｖＦｃ（重鎖＋軽鎖）を含む。

本明細書で提示されるＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及びＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を、本発明の方法にそのまま使用できることが、特に企図される。本明細書で提供されるＰＤ‐１、ＰＤ‐Ｌ１、及びＬＡＧ‐３結合分子（例えば配列番号３５～５８、及び表１～５を参照）のいずれかの、６つのＣＤＲ（又はＶＬ及びＶＨドメイン）を含む、代替的なＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及びＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を生成できる。

ＩＩＩ．ＴＡに結合する抗体系分子
本発明に従って使用できる、腫瘍抗原（ＴＡ）に免疫特異的に結合する抗体系分子（即ちＴＡ結合分子）は、このようなＴＡのエピトープに免疫特異的に結合できる少なくとも１つのエピトープ結合ドメイン（ＴＡ結合ドメイン）を含むことになる。

特定の実施形態では、本発明は、Ｆｃドメインを更に含むＴＡ結合ドメインを含む、抗体系分子を企図する。一実施形態では、ＴＡ結合分子のＦｃドメインは野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃドメインである。別の実施形態では、ＴＡ分子のＦｃドメインはＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインである。

本発明はまた、Ｆｃドメインを含むＴＡ結合分子であって、上記Ｆｃドメインが：
（ａ）ＡＤＣＣを増強する１つ以上の変異及び／若しくは修飾；並びに／又は
（ｂ）血清半減期を延長する１つ以上の変異
を含む、ＴＡ結合分子を包含する。

一実施形態では、ＴＡ結合分子は、ＦｃＭＴ１ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン（配列番号１６）、ＦｃＭＴ２ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン（配列番号１７）、又はＦｃＭＴ３ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン（配列番号１８）を含む。

Ａ．腫瘍抗原
本発明は具体的には、ＴＡ結合分子及び以下を含む又は採用する組成物及び方法を企図する：
（１）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；
（２）単一特異性ＰＤ‐１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子；
（３）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（４）単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子
ここで上記単一特異性結合分子はインタクト抗体であり、上記二重特異性分子はダイアボディ又は二重特異性抗体である。特定の実施形態では、上記ＴＡ結合分子はＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む。

上記ＴＡ結合分子が結合できる腫瘍抗原は、限定するものではないが表６Ａ～６Ｂに提示されているものを含む。これらはここでは、一般名、略称、及び／又は遺伝子名で呼ばれる場合がある。

Ｂ．ＴＡ結合ドメイン及び分子
多数のＴＡ結合分子が公知であるか、又は本明細書に記載のものを含む公知の方法を用いて生成できる。ＴＡ結合分子は、単一特異性又は二重特異性であってよい。ＴＡ結合ドメインを含み、従ってその配列又はポリペプチド鎖を本発明のＴＡ結合分子（例えばＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子）の構築に採用できるか、又は本発明のＴＡ結合分子として使用できる、代表的なＴＡ結合分子は、表７に列挙されている。いくつかのＴＡ結合分子のＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬドメインを以下に提示する。

一実施形態では、本発明は、表７に列挙されているＴＡ結合分子のうちのいずれかのＣＤＲドメイン（又はＶＬ及びＶＨドメイン）を含む、ＴＡ結合分子に関する。更なる実施形態では、本発明は、表７に列挙されている又は以下で提供されるＴＡ結合分子のうちのいずれかを使用する。ある代替実施形態では、本発明は、表７に列挙されている抗体のうちのいずれかのＣＤＲドメイン（又はＶＬ及びＶＨドメイン）を含む、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子に関する。ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子の特定の例を以下に提供する。

特定の実施形態では、ＴＡ結合分子はＨＥＲ２ＴＡに結合する（「ＨＥＲ２結合分子」）。一実施形態では、本発明のＨＥＲ２結合分子は抗ＨＥＲ２抗体である。ヒトＨＥＲ２に結合する抗体としては、「マルゲツキシマブ」、「トラスツズマブ」、及び「ペルツズマブ」が挙げられる。マルゲツキシマブ（ｍｇＡＨ２２としても公知；ＣＡＳ登録番号１３５０６２４‐７５‐７、ＫＥＧＧＤ１０４４６、例えば米国特許第８，８０２，０９３号を参照）は、ＨＥＲ２に結合して、増強されたＡＤＣＣ活性を仲介する、Ｆｃ最適化モノクローナル抗体である。マルゲツキシマブの配列は以下で提供される。トラスツズマブ（ｒｈｕＭＡＢ４Ｄ５としても公知、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）として市販；ＣＡＳ登録番号１８０２８８‐６９‐１；米国特許第５，８２１，３３７号を参照）は、ＩｇＧ１／κ定常領域を有するヒト化抗体である。トラスツズマブのアミノ酸配列は、トラスツズマブエムタンシンに関して、WHO Drug Information, 2011, Recommended INN: List 65, 25(1):89‐90に見られる。ペルツズマブ（ｒｈｕＭＡＢ２Ｃ４としても公知、Ｐｅｒｊｅｔａ（商標）として市販；ＣＡＳ登録番号３８０６１０‐２７‐５；例えば国際公開第２００１／０００２４５号を参照）は、ＩｇＧ１／κ定常領域を有する別のヒト化抗体である。ペルツズマブのＦａｂドメインのアミノ酸配列は、ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．１ｌ７ｉに見られる。抗体「８Ｈ１１」は、マルゲツキシマブ、トラスツズマブ及びペルツズマブが認識するエピトープとは別個のＨＥＲ２のエピトープに結合する、マウス抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である（国際公開第２００１／０３６００５号）。抗体８Ｈ１１のヒト化多様体（「ｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１」と呼ばれる）は既に説明されており（例えば国際公開第２０１８／１５６７４０号を参照）、代表的なヒト化ＶＨ及びＶＬドメインが以下で提供される。上で特定されているＨＥＲ２結合分子に加えて、本発明は、以下のＨＥＲ２結合分子：１．４４．１；１．１４０；１．４３；１．１４．１；１．１００．１；１．９６；１．１８．１；１．２０；１．３９；１．２４；及び１．７１．３（米国特許第８，３５０，０１１号；米国特許第８，８５８，９４２号；及び国際公開第２００８／０１９２９０号で開示）；Ｆ５及びＣ１（米国特許第７，８９２，５５４号；米国特許第８，１７３，４２４号；米国特許第８，９７４，７９２号；並びに国際公開第９９／５５３６７号で開示）；並びに米国公開特許第２０１１／００９７３２３号、米国公開特許第２０１３／０１７１１４号、米国公開特許第２０１４／０３２８８３６号、米国公開特許第２０１６／０１３０３６０号、及び米国公開特許第２０１６／０２５７７６１号、並びに国際公開第２０１１／１４７９８６号のＨＥＲ２結合分子のうちのいずれかの使用を企図する。

特定の実施形態では、ＴＡ結合分子はＢ７‐Ｈ３ＴＡに結合する（「Ｂ７‐Ｈ３結合分子」）。一実施形態では、本発明のＢ７‐Ｈ３結合分子は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体である。ヒトＢ７‐Ｈ３に結合する抗体としては、「エノブリツズマブ」、「オンブルタマブ」、及び「ミルゾタマブ」が挙げられる。エノブリツズマブ（ｍｇＡＨ２２としても公知；ＣＡＳ登録番号１３５０６２４‐７５‐７、ＫＥＧＧＤ１１７５２、例えば米国特許第８，８０２，０９３号を参照）は、ＨＥＲ２に結合して、増強されたＡＤＣＣ活性を仲介する、Ｆｃ最適化モノクローナル抗体である。マルゲツキシマブの配列は以下で提供される。オンブルタマブ（８Ｈ９としても公知；ＣＡＳ登録番号１８９５０８３‐７５‐６、例えば米国特許第７，７３７，２５８号を参照）は、マウスモノクローナル抗体である。オンブルタマブのアミノ酸配列は、WHO Drug Information 2018, Proposed INN: List 119, 32(2):339‐340に見られる。８Ｈ９のヒト化バージョンは、国際公開第２０１６／０３３２２５号に開示されている。ミルゾタマブクレズトクラックス（ＡＢＢＶ‐１５５としても公知；ＣＡＳ登録番号２２２９８５９‐１２‐３、例えば国際公開第２０１７／２１４３２２号を参照）は、ＩｇＧ１／κ定常領域を有するヒト化抗体である。ミルゾタマブのアミノ酸配列は、WHO Drug Information 2019, Proposed INN: List 121, 33(2): 294‐6に見られる。上で特定されているＢ７‐Ｈ３結合分子に加えて、本発明は、以下のＢ７‐Ｈ３結合分子：ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ及びＰＲＣＡ１５７（国際公開第２０１１１０９４００号で開示）；Ｌ７、Ｌ８、Ｌ１１、Ｍ３０、及びＭ３１（米国公開特許第２０１３／００７８２３４号で開示）、ｈｍＡｂ‐Ｃ、並びにＢ７‐Ｈ３抗体ｈｍＡｂ‐Ｄ（国際公開第２０１７／１８０８１３号で開示）のうちのいずれかの使用を企図する。

Ｃ．ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子
１．マルゲツキシマブ
本発明は具体的には、マルゲツキシマブと以下とを含む又は採用する組成物及び方法を企図する：
（１）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；
（２）単一特異性ＰＤ‐１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子；
（３）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（４）単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子
ここで上記単一特異性結合分子はインタクト抗体であり、上記二重特異性分子はダイアボディ又は二重特異性抗体である。

マルゲツキシマブは、ＣＤ１６Ａ受容体への親和性の向上を示す変異型ヒトＦｃドメインを含む。抗体（ＩｇＧκ）の軽鎖は、Ｎ結合型グリコシル化部位を削除するために修飾されている（Ｎ６５Ｓ；以下の二重下線部）。

マルゲツキシマブのＶＬドメインは、配列番号６１のアミノ酸配列：
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGSRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQQ HYTTPPTFGG
GTKVEIK
を有する。

マルゲツキシマブのＶＬドメインのＣＤＲドメインは：
ＣＤＲ_L１配列番号６２：KASQDVNTAVA
ＣＤＲ_L２配列番号６３：SASFRYT、及び
ＣＤＲ_L３配列番号６４：QQHYTTPPT
である。

マルゲツキシマブの軽鎖は、配列番号６５のアミノ酸配列：
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGSRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQQ HYTTPPTFGG
GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
を有する。

マルゲツキシマブのＶＨドメインは、配列番号６６のアミノ酸配列：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS
を有する。

マルゲツキシマブのＶＨドメインのＣＤＲドメインは：
ＣＤＲ_H１配列番号６７：DTYIH
ＣＤＲ_H２配列番号６８： RIYPTNGYTRYDPKFQD、及び
ＣＤＲ_H３配列番号６９：WGGDGFYAMDY
である。

マルゲツキシマブの重鎖は、（Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ置換（下線部）を含む）ＦｃＭＴ２ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含み、これは、配列番号７０のアミノ酸配列：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK
DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT
YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPELVGG PSVFLLPPKP
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPPEEQYN
STLRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ
VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPLV
LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
を有する。

マルゲツキシマブの重鎖の多様体は、（Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌ置換（配列番号１６を参照）を含む）ＦｃＭＴ１ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む。マルゲツキシマブの重鎖の別の多様体は、（Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、及びＹ３００Ｌ置換（配列番号１８を参照）を含む）ＦｃＭＴ３ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む。

２．エノブリツズマブ
本発明は具体的には、エノブリツズマブと以下とを含む又は採用する組成物及び方法を企図する：
（１）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；
（２）単一特異性ＰＤ‐１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子；
（３）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（４）単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子
ここで上記単一特異性結合分子はインタクト抗体であり、上記二重特異性分子はダイアボディ又は二重特異性抗体である。

エノブリツズマブのＶＬドメインは、配列番号７１のアミノ酸配列：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
を有する。

エノブリツズマブのＶＬドメインのＣＤＲドメインは：
ＣＤＲ_L１配列番号７２：KASQNVDTNVA
ＣＤＲ_L２配列番号７３：SASYRYS、及び
ＣＤＲ_L３配列番号７４：QQYNNYPFT
である。

エノブリツズマブの軽鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
を有する。

エノブリツズマブのＶＨドメインは、配列番号７６のアミノ酸配列：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL
VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
QTYICNVNHK PSNTKVDKRV
を有する。

エノブリツズマブのＶＨドメインのＣＤＲドメインは：
ＣＤＲ_H１配列番号７７：SFGMH
ＣＤＲ_H２配列番号７８：YISSDSSAIYYADTVKG、及び
ＣＤＲ_H３配列番号７９：GRENIYYGSRLDY
である。

エノブリツズマブの重鎖は、（Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ置換（下線部）を含む）ＦｃＭＴ２ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含み、これは、配列番号８０のアミノ酸配列：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL
VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
QTYICNVNHK PSNTKVDKRV EPKSCDKTHT CPPCPAPELV GGPSVFLLPP
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPPEEQ
YNSTLRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
PQVYTLPPSR EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
LVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
GK
を有する。

エノブリツズマブの重鎖の多様体は、（Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、及びＰ３９６Ｌ置換（配列番号１６を参照）を含む）ＦｃＭＴ１ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む。エノブリツズマブの重鎖の別の多様体は、（Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、及びＹ３００Ｌ置換（配列番号１８を参照）を含む）ＦｃＭＴ３ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む。

３．他のＡＤＣＣ増強ＦｃＴＡ結合分子
本発明は具体的には、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子と以下とを含む又は採用する組成物及び方法を企図する：
（１）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；
（２）単一特異性ＰＤ‐１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子；
（３）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（４）単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子
ここで上記単一特異性結合分子はインタクト抗体であり、上記二重特異性分子はダイアボディ又は二重特異性抗体である。

一実施形態では、本発明は、表６Ａ～６Ｂに列挙されているＴＡのうちのいずれかに免疫特異的に結合するＴＡ結合ドメインを含む、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子に関する。

一実施形態では、本発明は、表７に列挙されている抗体のうちのいずれかのＣＤＲドメイン（又はＶＬ及びＶＨドメイン）を含む、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子に関する。このような分子は、本明細書で提供されるか又は公知の、強化されたＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含んでよい。

本発明は、以下を含むがこれらに限定されない、強化されたＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む他のＴＡ結合分子を含む又は採用する、組成物及び方法を特に企図する：抗ＣＤ２０抗体であるオビヌツズマブ（ＫＥＧＧＤ０９３２；Marcus, R. et al. (2017) “Obinutuzumab for the First-Line Treatment of Follicular Lymphoma,” N. Engl. J. Med. 377(14):1331-1344）及びＢＡＴ４３０６Ｆ（Yu, J.-C. et al. (2018) “Abstract 3823: Bat4306f, An Anti-CD20 Antibody Devoid Of Fucose Modification, Demonstrates Enhanced ADCC Effect And Potent In Vivo Efficacy,” Cancer Res. 78:(13 Supplement):3823）；ＥＧＦＲ-ｃＭＥＴ二重特異性抗体であるアミバンタマブ（ＫＥＧＧＤ１１８９４；Yun, et al. (2020) “Antitumor Activity of Amivantamab (JNJ-61186372), an EGFR-MET Bispecific Antibody, in Diverse Models of EGFR Exon 20 Insertion-Driven NSCLC” Cancer Discovery DOI: 10.1158/2159-8290.CD-20-0116）；並びに抗ＣＤ１９抗体であるタファシタマブ（ＭＯＲ２０８）（ＫＥＧＧＤ１１６０１；Kellner, C. et al. (2013) “The Fc-Engineered CD19 Antibody MOR208 (Xmab5574) Induces Natural Killer Cell-Mediated Lysis Of Acute Lymphoblastic Leukemia Cells From Pediatric And Adult Patients,” Leukemia 27(7):1595-1598）及びオベキセリマブ（ＫＥＧＧＤ１１４９６）。

ＩＶ．製造方法
本発明の抗体系分子は、組み換えによって作成でき、また組み換えタンパク質の製造に関して当該技術分野で公知のいずれの方法を用いて発現させることができる。例えば、このような結合分子のポリペプチド鎖をコードする核酸を構築し、発現ベクターに導入して、好適な宿主細胞で発現させることができる。上記結合分子は、細菌細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞）又は真核細胞（例えばＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ、ＮＳ０細胞）中で組み換えによって製造してよい。更に上記結合分子は、Ｐｉｃｈｉａ又はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ等の酵母細胞中で発現させることができる。

本発明の抗体系分子を製造するために、上記分子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入して、好適な宿主細胞で発現させてよい。標準的な分子生物学の技法を用いて、組み換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養して、上記分子を回収する（例えばGreen, M.R. et al., (2012), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 4th Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY及びAusubel et al. eds., (1998,) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY）。１つ以上の発現ベクターは、宿主細胞内での該ベクターの複製を可能とする特徴を有していなければならない。上記ベクターはまた、宿主細胞内での発現に必要なプロモータ及びシグナル配列を有していなければならない。このような配列は当該技術分野で公知である。このような結合分子をコードする１つ以上の核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、宿主細胞内でのベクターの複製を調節する配列（例えば複製の起点）、及び選択マーカー遺伝子といった、追加の配列を有してよい。植物（例えばタバコ）又はトランスジェニック動物中で組み換えによって上記結合分子を発現させるために使用できる好適な方法は、既に開示されている（例えばPeeters et al. (2001) “Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants,” Vaccine 19:2756；米国特許第５，８４９，９９２号；及び Pollock et al. (1999) “Transgenic Milk As A Method For The Production Of Recombinant Antibodies,” J. Immunol Methods 231:147-157を参照）。

本発明の抗体系分子を組み換えによって発現した後、これを宿主細胞の中又は外から（例えば培養培地から）、ポリペプチド又はポリプロテインの精製に関して当該技術分野で公知のいずれの方法によって精製してよい。抗体精製に一般的に使用される、単離及び精製のための方法（例えば抗原選択性をベースとした抗体精製スキーム）を、上記分子の単離及び精製に使用してよく、またこれはいずれの特定の方法に限定されない。例えばカラムクロマトグラフィ、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ‐ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析、及び再結晶。クロマトグラフィとしては例えば、イオン交換クロマトグラフィ、（任意に、タンパク質Ａの選択後（ここで抗体系分子はＦｃ領域又はそのタンパク質Ａ結合部分を含む）の）特に特定の抗原に対する親和性によるアフィニティクロマトグラフィ、サイジングカラムクロマトグラフィ、疎水クロマトグラフィ、ゲル濾過クロマトグラフィ、逆相クロマトグラフィ、及び吸着クロマトグラフィが挙げられる（Marshak et al. (1996) Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. (Eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY）。

Ｖ．医薬組成物
本発明の抗体系分子例えばＴＡに結合する抗体（任意にＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む）、ＰＤ‐１に結合する抗体、ＰＤ‐Ｌ１に結合する抗体、ＬＡＧ‐３に結合する抗体、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、組成物として処方できる。本発明の組成物は、癌又は他の疾患及び状態の治療のために被験者（例えばヒト患者又は他の哺乳類）に投与するために好適な医薬組成物の製造に使用できる、バルク薬物組成物（例えば純粋でない又は滅菌されていない組成物）を含む。上記医薬組成物は、１つ以上の抗体系分子（例えばＴＡに結合する抗体（任意にＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む）、ＰＤ‐１に結合する抗体、ＰＤ‐Ｌ１に結合する抗体、ＬＡＧ‐３に結合する抗体、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）と、１つ以上の薬学的に許容可能なキャリアを含み、任意に１つ以上の追加の治療剤を含んでよい。上記医薬組成物は例えば、薬学的に許容可能なキャリアを用いた再構成に特に適合された、又はこのようなキャリアを用いて再構成される、水溶液、凍結乾燥粉末、又は水非含有濃縮物として供給できる

本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に許容可能なキャリア（pharmaceutically acceptable carrier）」は、動物、より詳細にはヒトへの投与に好適であるものとして、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されている、又は米国薬局方若しくはその他の一般的に認められている薬局方に記載されている、希釈剤、溶媒、分散媒、抗菌剤及び抗真菌剤、賦形剤、又はビヒクルを意味する。このような薬学的キャリアは、石油、動物油脂、植物油、又は合成由来のものを含む、水及び油等の滅菌液体とすることができる。生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセロールの水溶液も、特に注射液のための液体キャリアとして採用できる。組成物は必要に応じて、微量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を含有することもできる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、徐放性製剤等の形態を取ることができる。

一般に、本発明の組成物の成分は、凍結乾燥粉末若しくは水非含有濃縮物として、又は活性剤の量が記されたバイアル、アンプル、若しくはサシェ等の気密コンテナ中の水溶液として、別個に、又は投与形態に混合された状態で、供給される。組成物が注入によって投与されるものである場合、組成物は、滅菌された医薬グレードの水又は生理食塩水を内包する輸液ボトルを用いて調合できる。組成物が注射によって投与される場合、注射用滅菌水、生理食塩水、又は他の希釈剤のアンプルを提供でき、これによって成分を投与前に混合できる。

ＶＩ．医薬キット
本発明はまた、本発明の医薬組成物と説明資料（例えば注意、添付文書、説明書等）とを内包する１つ以上のコンテナを含む、医薬キットを提供する。更に、疾患の治療に有用な１つ以上の他の予防又は治療剤も、医薬キットに含めることができる。このような医薬キットのコンテナは、１つ以上の気密バイアル、アンプル、サシェ等を含んでよく、これらには、これらが内包する活性剤の量が記されている。組成物が注入によって投与されるものである場合、コンテナは、滅菌された医薬グレードの溶液（例えば水、生理食塩水、緩衝液等）を内包した輸液ボトル、バッグであってよい。組成物が注射によって投与されるものである場合、医薬キットは、被験者（例えばヒト患者又は他の哺乳類）への投与のための医薬キットの構成要素の混合を容易にするために、注射用の滅菌水、生理食塩水、又は他の希釈剤のアンプルを内包してよい。

一実施形態では、このようなキットの医薬組成物は、気密コンテナ内の凍結乾燥滅菌粉末又は水非含有濃縮物として供給され、例えば水、生理食塩水、又は他の希釈剤を用いて、被験者への投与に適した濃度へと再構成できる。別の実施形態では、このようなキットの医薬組成物は、気密コンテナ内の水溶液として供給され、例えば水、生理食塩水、又は他の希釈剤を用いて、被験者への投与に適した濃度へと希釈できる。上記キットは更に、１つ以上のコンテナ内に、癌の治療に使用できる１つ以上の他の予防及び／若しくは治療剤を含むことができ；並びに／又は上記キットは更に、癌に関連する１つ以上の癌抗原に結合する１つ以上の細胞傷害性抗体を含むことができる。特定の実施形態では、上記他の予防又は治療剤は化学療法剤である。他の実施形態では、上記予防又は治療剤は生物療法剤又はホルモン療法剤である。

本発明の医薬キットに含まれる説明資料は例えば、医薬品又は生物学的製品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された内容及びフォーマットのものであってよく、ヒトへの投与及び／又はヒトの治療のための上記医薬組成物の製造、販売、又は使用の、上記機関による承認を示すものであってよい。上記説明資料は例えば、医薬組成物の含有用量、投与できる様式等に関する情報等を提供できる。

よって例えば、本発明の医薬キットに含まれる説明資料は、提供される医薬組成物を、同一の医薬キットで又は別個の医薬キットで提供され得る追加の作用剤と組み合わせて投与するように指示する場合がある。このような説明資料は、提供される医薬組成物を、約２週間に１回、約３週間に１回、又はそれより高い若しくは低い頻度で投与するように指示する場合がある。このような説明資料は、提供される医薬組成物が、約１２０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約６００ｍｇ、約８００ｍｇ、若しくは約８４０ｍｇ、若しくはそれより多い一律用量を含むか若しくは上記一律用量で投与するために再構成／希釈されるか、又は約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、若しくはそれより多い体重ベースの用量で投与するために再構成／希釈されるように、指示する場合がある。このような説明資料は、提供される医薬組成物が、単一の用量、若しくは２回以上の用量（例えば２用量、４用量、６用量、１２用量、２４用量等）を含む、又はこのような用量を含むように再構成／希釈されるように、指示する場合がある。医薬キットに含まれるこのような説明資料は、このような情報のいずれのセットを組み合わせることができる（例えば上記説明資料は、提供されるＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子含有医薬組成物が、約４００ｍｇ若しくは約６００ｍｇの用量を含み、若しくはこのような用量を含むように再構成／希釈され、かつこのような用量が約２週間に１回投与されるように、指示する場合があり；上記説明資料は、提供される医薬組成物が、約６００ｍｇ若しくは約８００ｍｇの用量を含み、若しくはこのような用量を含むように再構成され、かつこのような用量が約３週間に１回投与されるように、指示する場合があり；及び／又は上記説明資料は、提供されるＨＥＲ２若しくはＢ７‐Ｈ３結合分子含有医薬組成物が、約１５ｍｇ／ｋｇの用量を含み、若しくはこのような用量を含むように再構成され、かつこのような用量が約３週間に１回投与されるように、指示する場合がある）。このような説明資料は、含まれる医薬組成物の投与の様式に関して、例えば上記医薬組成物を静脈内（ＩＶ）注入によって投与するように指示する場合がある。医薬キットに含まれる説明資料は、上記投与の持続時間又はタイミングに関して、例えば含まれる組成物を、３０～２４０分の期間、３０～９０分の期間等にわたる静脈内（ＩＶ）注入によって投与するように指示する場合がある。

本発明の医薬キットに含まれる説明資料は、含まれる医薬組成物の適切な又は望ましい用途に関して、例えば上記医薬組成物（例えばＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）を癌の治療のために投与するように、指示する場合がある。特定の実施形態では、医薬キットに含まれる説明資料は、本発明のＰＤ‐１（若しくはＰＤ‐Ｌ１）結合分子、及びＬＡＧ‐３結合分子、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子の、１つ以上の医薬組成物を、ＴＡ（例えばＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３）が発現される癌の治療のために、（任意にＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有する）ＴＡ結合分子と組み合わせて投与するよう、指示する場合がある。治療できる癌としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：副腎癌、エイズ関連癌、歯槽軟部肉腫、肛門癌（肛門管扁平上皮癌（ＳＣＡＣ）を含む）、膀胱癌、骨癌、脳及び脊髄癌、乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌、又はトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む）、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎明細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／又はＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、ユーイング肉腫、骨格外粘液型軟骨肉腫、胆嚢癌又は胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、胃癌（gastric cancer）、食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む）、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病（急性骨髄性白血病を含む）、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、肺癌（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む）、髄芽腫、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫（中皮咽頭癌を含む）、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌（転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）を含む）、後部ブドウ膜黒色腫、腎転移癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、小児期の小円形青色細胞腫瘍（神経芽腫、及び横紋筋肉腫を含む）、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、並びに子宮癌。

ＶＩＩ．本発明の抗体系分子の使用
本明細書において提供されるように、本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を用いて、癌を含む多様な障害を治療又は予防できる。更に、本発明のＰＤ‐１結合（又はＰＤ‐Ｌ１結合）、ＬＡＧ‐３結合、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子を、（任意にＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有する）ＴＡ結合分子と組み合わせて使用して、このようなＴＡが発現される癌を治療できる。

従って本発明は、癌を治療する方法を提供し、上記方法は、それを必要とする被験者にＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を投与するステップを含む。

更に、本発明は、ＴＡ結合分子と：
（１）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；
（２）単一特異性ＰＤ‐１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子；
（３）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（４）単一特異性ＰＤ‐Ｌ１結合分子、及び単一特異性ＬＡＧ‐３結合分子
とを投与するステップを含む、癌を治療する方法を提供し、ここで上記単一特異性結合分子はインタクト抗体であり、上記二重特異性分子はダイアボディ又は二重特異性抗体であり、上記癌は上記ＴＡを発現する。特定の実施形態では、上記ＴＡ結合分子はＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む。

上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又は分子の組み合わせを、それを必要とする被験者に投与するための、特定の投薬レジメンが、本明細書において提供される。

本明細書中で使用される場合、用語「組み合わせて（in combination）」は、２つ以上の治療剤（例えば本発明の抗体系分子）の使用を指す。用語「組み合わせて」の使用は、個々の治療剤を、疾患又は障害を有する被験者（例えばヒト患者又は他の哺乳類）に投与するべき順序を制限するものではなく、またこれらの作用剤を同時に投与する又は同時に投与しなければならないことを意味するものでもなく、むしろ、これらの作用剤が他の方法で投与された場合に提供される利益よりも向上した利益を提供するように、これらの作用剤を被験者に並行して又はある時間間隔内で順番にすることを意味している。例えば各抗体系分子（例えばＴＡ結合分子、ＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）、及びＬＡＧ‐３結合分子；又はＴＡ結合分子及びＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子）は、同時に、又は異なる時点においていかなる順序で投与してよいが、同時に投与されない場合、これらは、所望の治療又は予防効果を提供できるよう、十分に近接した時点において投与する必要がある。投与される各作用剤は、いずれの適切な形態で、またいずれの好適な経路で、別個に投与でき、例えば１つを経口経路で、また１つを非経口経路等で投与できる。本発明の抗体系分子を、それを必要とする被験者に投与するための、特定の投薬レジメンが、本明細書において提供される。

ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又はＴＡ結合分子及びＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子；又はＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）とＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせの投与によって治療できる癌としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：副腎癌、エイズ関連癌、歯槽軟部肉腫、肛門癌（肛門管扁平上皮癌（ＳＣＡＣ）を含む）、膀胱癌、骨癌、脳及び脊髄癌、乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌、又はトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む）、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎明細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／又はＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、ユーイング肉腫、骨格外粘液型軟骨肉腫、胆嚢癌又は胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、胃癌（gastric cancer）、食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む）、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病（急性骨髄性白血病を含む）、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、肺癌（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む）、髄芽腫、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫（中皮咽頭癌を含む）、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌（転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）を含む）、後部ブドウ膜黒色腫、腎転移癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、小児期の小円形青色細胞腫瘍（神経芽腫、及び横紋筋肉腫を含む）、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、並びに子宮癌。

特定の実施形態では、本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌及び／又はＴＮＢＣを含む）、胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／又はＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、頭頸部癌（ＳＣＣＨＮを含む）、肝臓癌（ＨＣＣを含む）、肺癌（ＳＣＬＣ及び／又はＮＳＣＬＣを含む）、リンパ腫（ＮＨＬ及びＤＬＢＣＬを含む）、卵巣癌、前立腺癌の治療に使用できる。

他の実施形態では、本発明のＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）及びＬＡＧ‐３結合分子、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子は、ＨＥＲ２結合分子（例えばマルゲツキシマブ）と組み合わせて：乳癌、転移性乳癌、膀胱癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、卵巣癌、膵臓癌、及び胃癌（stomach cancer）を含むＨＥＲ⁺癌の治療に使用できる。このような１つの実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子をＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２結合分子と組み合わせて使用する。別のこのような実施形態では、ＤＡＲＴ‐Ｉをマルゲツキシマブと組み合わせて使用する。

他の実施形態では、本発明のＰＤ‐１結合（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合）及びＬＡＧ‐３結合分子、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子は、Ｂ７‐Ｈ３結合分子（例えばエノブリツズマブ）と組み合わせて：肛門癌、ＳＣＡＣ、乳癌、ＴＮＢＣ、頭頸部癌、ＳＣＣＨＮ、肺癌、ＮＳＣＬＣ、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、前立腺癌、ｍＣＲＰＣを含むＢ７‐Ｈ３⁺癌の治療に使用できる。このような１つの実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子をＡＤＣＣ増強Ｂ７‐Ｈ３結合分子と組み合わせて使用する。別のこのような実施形態では、ＤＡＲＴ‐Ｉをエノブリツズマブと組み合わせて使用する。

特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又はＴＡ結合分子及びＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子；又はＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）とＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせは、癌の治療のための第一選択療法として投与される。他の実施形態では、上記分子は、１つ以上の過去の療法のラインの後に投与される。他の実施形態では、上記分子は、１つ以上の追加の療法と更に組み合わせて投与される。更に他の実施形態では、上記分子は、転移の発生を遅らせる、抑制する、又は予防するために、腫瘍の外科的除去時又は後のアジュバント療法として採用できる。このような分子はまた、腫瘍のサイズを縮小して、手術を可能にする若しくは単純化するため、手術中に組織を節約するため、及び／又は結果として生じるいずれの外見的な損傷を低減するために、手術の前に（例えばネオアジュバント療法として）投与できる。

一実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＴＡ結合分子（例えばＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３）と組み合わせて、癌の治療のための第一選択療法として投与される。他の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＴＡ結合分子と組み合わせて、１つ以上の過去の療法のラインの後に投与される。他の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＴＡ結合分子と組み合わせて、また更に１つ以上の追加の療法と組み合わせて投与される。更に他の実施形態では、本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＴＡ結合分子と組み合わせて、腫瘍の外科的除去時又は後のアジュバント療法として採用できる。本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子はまた、ＴＡ結合分子と組み合わせて、又は手術の前に投与できる。このような１つの実施形態では、ＴＡ結合分子はＨＥＲ２結合分子又はＢ７‐Ｈ３結合分子である。

本発明は特に、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又はＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）及びＬＡＧ‐３結合分子、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子とＴＡ結合分子との組み合わせを、現行の標準的及び実験的な化学療法、ホルモン療法、生物療法、免疫療法、放射線療法、又は手術を含むがこれらに限定されない、癌の治療又は予防に関して当業者に公知の１つ以上の他の療法と組み合わせて投与することを包含する。いくつかの実施形態では、ＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）とＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせ、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子を、ＴＡ結合分子（例えばＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子）と組み合わせて、また更に癌、特にＴＡ発現性癌（例えばＨＥＲ２^＋癌又はＢ７‐Ｈ３^＋癌）の治療及び／又は予防に関して当業者に公知の、治療有効量又は予防有効量の１つ以上の治療剤と組み合わせて投与する。ＨＥＲ２発現性癌の治療に一般的に使用されている化学療法剤としては、限定するものではないが、アントラサイクリン（特にダウノルビシン、ドキソルビシン及びエピルビシン）、カペシタビン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ロイコボリン、メトトレキサート、オキサリプラチン、タキサン（特にドセタキセル及びパクリタキセル）、５‐フルオロウラシル（５‐ＦＵ）が挙げられる。

本発明の別の態様は、治療の開始前に被験者の腫瘍細胞内でのＰＤ‐Ｌ１の発現の程度を測定することによって、このような治療に対する被験者の適合性を決定するための、改良された方法を伴う。腫瘍細胞の１０％超におけるＰＤ‐Ｌ１発現は、特定のＰＤ‐１結合（又はＰＤ‐Ｌ１結合）分子を用いた治療に関する、臨床的に妥当なカットオフポイントとして確立されている。ＰＤ‐Ｌ１の発現の程度を測定する方法は、当該技術分野において公知である（de Vicente, J.C. et al. (2018) “PD-L1 Expression in Tumor Cells Is an Independent Unfavorable Prognostic Factor in Oral Squamous Cell Carcinoma,” Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 28(3):546-554; Davis, A.A. et al. (2019) “The Role Of PD-L1 Expression As A Predictive Biomarker: An Analysis Of All US Food And Drug Administration (FDA) Approvals Of Immune Checkpoint Inhibitors,” J. ImmunoTher. Canc.7:278:1-8; Khozin, S. et al. (2017) “Rates Of PD-L1 Expression Testing In US Community-Based Oncology Practices (uSCPS) For Patients With Metastatic Non-Small Cell Lung Cancer (mNSCLC) Receiving Nivolumab (N) Or Pembrolizumab (P),” J. Clin. Oncol. 35(15_suppl):11596）。例えばこのような測定は、ＤａｋｏＥｎＶｉｓｉｏｎＦｌｅｘ＋ＶｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＤａｋｏＡｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ）を用いることにより、マウスモノクローナルＰＤ‐Ｌ１抗体（クローン２２Ｃ３、１：２００希釈；ＰＤ‐Ｌ１ＩＨＣ２２Ｃ３ｐｈａｒｍＤｘ；ＤａｋｏＳＫ００６）を用いて達成できる。このようなアッセイでは、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍生検試料を、モノクローナルマウス抗ＰＤ‐Ｌ１抗体（クローン２２Ｃ３）の存在下でインキュベートする。ＰＤ‐Ｌ１タンパク質の発現は、いずれの強度での部分的な若しくは完全な膜染色を示す生存腫瘍細胞のパーセンテージである、腫瘍比率スコア（ＴＰＳ）を用いて；又はＰＤ‐Ｌ１染色細胞（腫瘍細胞、リンパ球、マクロファージ）の個数を生存腫瘍細胞の総数で除算して１００を乗算したものである、合計陽性スコア（ＣＰＳ）によって、決定される。

治療前に被験者の腫瘍が（ＩＨＣ分析において合計陽性スコア（ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（ＴＰＳ）を用いて決定した場合に）１％未満のＰＤ‐Ｌ１の発現を示すことがわかると、これは、本発明の治療の方法、特にＰＤ‐１結合（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合）及びＬＡＧ‐３結合分子、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子をＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子と組み合わせて投与することを包含する方法に対する、患者の適合性の指標となる。上記適合性は、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子による治療を伴わないＰＤ‐１結合分子又はＰＤ‐Ｌ１結合分子による過去の治療を含む、少なくとも１つの過去の治療に対して、過去に応答しなかった、又は応答が不十分であった被験者においても、高められる。本発明は、ＴＡ結合分子と：ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（若しくはＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子；又はＰＤ‐１結合分子（若しくはＰＤ‐Ｌ１結合分子）とＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせとを、被験者に投与することによる、癌を治療する方法を包含し、ここで、上記治療の前の上記癌の細胞の表面でのＰＤ‐Ｌ１の発現は、合計陽性スコア（ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（ＴＰＳ）を用いて決定した場合に１％未満である。

ＶＩＩＩ．投与及び投薬量
本発明の抗体系分子（例えばＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）は、多様な方法で、被験者、例えばそれを必要とする被験者、例えばヒト患者に投与できる。多くの用途に関して、投与の経路は：静脈内注射又は注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内注射（ＩＰ）、又は筋肉内注射のうちの１つである。関節内送達の使用も可能である。他の様式の非経口投与の使用も可能である。このような様式の例としては：動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、並びに硬膜外及び胸骨内注射が挙げられる。

本発明の抗体系分子は、一律用量として、又は体重ベースの用量（例えばｍｇ／患者の体重（ｋｇ）の用量）として、投与できる。用量は、投与される抗体系分子に対する抗体の産生を低減又は回避するように選択することもできる。投薬レジメンは、所望の応答、例えば治療応答又は組み合わせ治療効果を提供するように調整される。一般に、バイオアベイラブルな量の作用剤を被験者に提供するために、複数用量の抗体系分子（及び任意に更なる作用剤）を使用できる。本明細書中で使用される場合、用語「用量（dose）」は、１回で行われる薬物治療の指定された量を指す。用語「投薬（dosage）」は、指定された期間にわたる、特定の量、回数、及び頻度の用量の投与を指し、従って用語「投薬」は、持続時間及び周期性といった時系列的特徴を含む。用量の投与（即ち投薬）のタイミングに関して、用語「約（about）」は、記載されている投与の±３日の範囲を指すことが意図されている。

本明細書中で使用される場合、用語「一律用量（flat dose）」は、患者の体重に依存しない用量を指し、治療対象の被験者に対する１回の用量として使用するのに好適な、投与される抗体系分子（例えばＴＡに結合する抗体、ＰＤ‐１に結合する抗体、ＰＤ‐Ｌ１に結合する抗体、ＬＡＧ‐３に結合する抗体、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子）の、物理的に個別の単位を含み、各上記単位は、薬学的キャリアと関連付けられた、また任意に更なる作用剤と関連付けられた、（所望の治療効果を生むように計算された）所定量の上記抗体系分子を含有する。単一又は複数の一律用量が投与され得る。本明細書中で使用される場合、用語「体重ベースの用量（weight-based dose）」は、患者の体重の単位あたりの、投与される本発明の分子の個別量、例えば被験者の体重１キログラムあたりの薬剤のミリグラム数（ｍｇ／ｋｇ体重；本明細書では「ｍｇ／ｋｇ」と略される）を指す。計算された用量は、ベースライン時の被験者の体重に基づいて投与される。典型的には、ベースライン又は確立されたプラトー体重からの、体重の有意な（１０％以上の）変化により、用量の再計算が促されることになる。単一又は複数の用量が、１つの投薬レジメンにおいて投与され得る。抗体系分子を含む組成物は、それを必要とする被験者に、注入によって投与され得る。

従っていくつかの実施形態では、ＴＡ（特にＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子）、ＰＤ‐１若しくはＰＤ‐Ｌ１、及び／又はＬＡＧ‐３に結合する抗体系分子は、一律用量又は体重ベースの用量が組み込まれていてよい、承認された処方投薬レジメンに従って、それを必要とする被験者に投与される。上記分子に関する承認された処方投薬レジメンは、既に説明されている（例えばトラスツズマブ、ペルツズマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、タファシタマブ等に関する添付文書は、U.S. National Library of Medicineウェブサイト：dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/から入手可能である）。特定の実施形態では、ＰＤ‐１、若しくはＰＤ‐Ｌ１、及び／又はＬＡＧ‐３に結合する抗体系分子は、それを必要とする被験者に、約１２０ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量で投与される。特定の実施形態では、ＴＡに結合する抗体系分子（例えばＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３に結合する抗体系分子）は、それを必要とする被験者に、約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの体重ベースの用量で投与される。

特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子（例えばＤＡＲＴ‐Ｉ）は、それを必要とする被験者に、約１２０ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量で投与される。特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、それを必要とする被験者は、約１２０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約６００ｍｇ、又は約８００ｍｇの一律用量で投与される。具体的実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、それを必要とする被験者に、約４００ｍｇの一律用量で投与される。別の具体的実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、それを必要とする被験者に、約６００ｍｇの一律用量で投与される。別の具体的実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、それを必要とする被験者に、約８００ｍｇの一律用量で投与される。特定の実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体（例えばレチファンリマブ）は、それを必要とする被験者に、約１２０ｍｇ～約７５０ｍｇの一律用量で投与される。特定の実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体は、それを必要とする被験者に、約３７５ｍｇ、約５００ｍｇ、又は約７５０ｍｇの一律用量で投与される。具体的実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体は、それを必要とする被験者に、約３７５ｍｇの一律用量で投与される。別の具体的実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体は、それを必要とする被験者に、約５００ｍｇの一律用量で投与される。特定の実施形態では、抗ＬＡＧ‐３抗体（例えばレラトリマブ）は、それを必要とする被験者に、約８０ｍｇ～約２００ｍｇの一律用量で投与される。特定の実施形態では、抗ＬＡＧ‐３抗体は、それを必要とする被験者に、約８０ｍｇ、約１００ｍｇ、又は約１６０ｍｇの一律用量で投与される。具体的実施形態では、抗ＬＡＧ‐３抗体は、それを必要とする被験者に、約１６０ｍｇの一律用量で投与される。一律用量又は一律投薬に関して、用語「約」は、記載されている用量の±１０％の範囲を指すことが意図されているため、例えば約６００ｍｇの用量は５４０ｍｇ～６６０ｍｇとなる。投薬に関して、用語「約」は、記載されている投与の±３日の範囲を指すことが意図されている。

特定の実施形態では、ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子（例えば抗ＨＥＲ２抗体、抗Ｂ７‐Ｈ３抗体）は、それを必要とする被験者に、約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの体重ベースの用量で投与される。特定の実施形態では、ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子は、それを必要とする被験者に、約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、又は約１８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。具体的実施形態では、ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子は、それを必要とする被験者に、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。他の具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子の第１の用量が、それを必要とする被験者に、約８ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いて上記ＨＥＲ２結合分子の１つ以上の追加の用量が、約６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。他の具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子の第１の用量が、それを必要とする被験者に、約４ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いて上記ＨＥＲ２結合分子の１つ以上の追加の用量が、約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。体重ベースの用量に関して、用語「約」は、記載されている用量の±１０％の範囲を指すことが意図されているため、例えば約１５ｍｇ／ｋｇの用量は１３．６ｍｇ／ｋｇ～１６．５ｍｇ／ｋｇとなる。

特定の実施形態では、ＨＥＲ２結合分子は、それを必要とする被験者に、約４２０ｍｇ～約１６５０ｍｇの一律用量で投与される。具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子は、それを必要とする被験者に、約４２０ｍｇの一律用量で投与される。別の具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子は、それを必要とする被験者に、約６００ｍｇの一律用量で投与される。他の具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子は、それを必要とする被験者に、約８４０ｍｇの一律用量で投与される。別の具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子は、それを必要とする被験者に、約１６５０ｍｇの一律用量で投与される。他の具体的実施形態では、ＨＥＲ２結合分子の第１の用量が、それを必要とする被験者に、約８４０ｍｇの一律用量で投与され、続いて上記ＨＥＲ２結合分子の１つ以上の追加の用量が、約４２０ｍｇの一律用量で投与される。

ある投薬量の抗体系分子（例えばある用量のＴＡに結合する抗体、ＰＤ‐１に結合する抗体、ＰＤ‐Ｌ１に結合する抗体、ＬＡＧ‐３に結合する抗体、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子）を、少なくとも２用量、少なくとも４用量、少なくとも６用量、少なくとも１２用量、又は少なくとも２４用量を包含するために十分な期間（治療経過）にわたって、周期的な間隔で投与できる。例えばある投薬量を、例えば１日１回若しくは２回、又は１週間に約１～４回投与してよい。特定の実施形態では、ある投薬量を、１週間に１回（「Ｑ１Ｗ」）、２週間に１回（「Ｑ２Ｗ」）、３週間に１回（「Ｑ３Ｗ」）、４週間に１回（「Ｑ４Ｗ」）等で投与してよい。このような周期的な投与を、ある期間にわたって、例えば約１～５２週間又は５２週間超にわたって継続してよい。このような治療経過は、例えば２～２４週間、約３～７週間、約４週間、又は約６週間、又は約８週間、又は約１２週間、又は約２４週間の、本明細書ではそれぞれ「サイクル（cycle）」と呼ばれる複数の増分に分割でき、その間に、設定された数の用量が投与される。投与の用量及び／又は頻度は、各サイクル中において同一であっても異なっていてもよい。被験者の効果的な治療に必要な投薬及びタイミングに影響し得る因子としては、例えば被験者の疾患若しくは障害の重篤度、処方、送達経路、過去の治療、総合的な健康状態、及び／又は年齢、並びに被験者の体内の他の疾患の存在が挙げられる。更に、治療有効量の化合物を用いた被験者の治療は、単一の治療、又は一連の複数の治療を含むことができる。

被験者に複数用量の抗体系分子（例えばＴＡに結合する抗体、ＰＤ‐１に結合する抗体、ＰＤ‐Ｌ１に結合する抗体、ＬＡＧ‐３に結合する抗体、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３（又はＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３）二重特異性分子）を提供することが企図される。このような各用量における各抗体系分子の量は、同一であっても、過去に投与された用量とは異なっていてもよい。従って例えば、療法は、上記抗体系分子の「第１の（first）」（又は「ローディング（loading）」）用量の投与、及びそれに続く、上記抗体系分子の少量の「第２の（second）」用量の投与を含んでよい。例えば、抗体系分子の第１の用量がおよそ８ｍｇ／ｋｇである場合、第２の用量は８ｍｇ／ｋｇ未満（例えば約６ｍｇ／ｋｇ）となる。いくつかの実施形態では、それ以降の用量は、上記第２の少量の用量と同一の濃度で投与される。いくつかの実施形態では、同一用量の抗体系分子を、治療経過全体にわたって投与する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２に結合するＴＡ結合分子を、約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、又は約８４０ｍｇの一律用量である第１の用量で投与し、これに続いて、第２の少量の用量を投与し、ここで上記第２の用量は、第１の用量の投与後、約３週間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、更なる後続の用量のＨＥＲ２結合分子が投与され、ここで上記後続の用量は、第２の用量の投与後、又は後続の用量のうちの１回前のものの後、約３週間投与される。

「投薬レジメン（dosing regimen）」は、患者に１つ以上の所定の周期性で、所定の頻度（又は複数のこのような頻度のセット）で、所定の用量（又は複数のこのような用量のセット）が投与される、投薬量の投与である。

代表的な投薬レジメンは、約１２０ｍｇの一律用量でＱ２Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子（例えばＤＡＲＴ‐Ｉ）の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約３００ｍｇの一律用量でＱ２Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。更に別の代表的な投薬レジメンは、約３００ｍｇの一律用量でＱ３Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約４００ｍｇの一律用量でＱ２Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約４００ｍｇの一律用量でＱ３Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約６００ｍｇの一律用量でＱ２Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。更に別の代表的な投薬レジメンは、約６００ｍｇの一律用量でＱ３Ｗの、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。他の代表的な投薬レジメンは、約８００ｍｇの一律用量でＱ２ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、又は約８００ｍｇの一律用量Ｑ３ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与を含む。本明細書において提供されるように、このような投薬レジメンは更に、ＴＡ結合分子の投与を含んでよい。一実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、承認された処方投薬レジメンに従って投与される、承認されたＴＡ結合分子（例えばトラスツズマブ、ペルツズマブ等）と組み合わせて、本明細書において提供される投薬レジメンに従って投与される。一実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、承認された処方投薬レジメンに従って投与される、承認されたＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子（例えばタファシタマブ等）と組み合わせて、本明細書において提供される投薬レジメンに従って投与される。上述の投薬レジメンの特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子はＤＡＲＴ‐Ｉである。１つのこのような実施形態では、ＤＡＲＴ‐Ｉは約６００ｍｇの一律用量で、Ｑ３Ｗで投与される。別のこのような実施形態では、ＤＡＲＴ‐Ｉは、承認された処方投薬レジメンに従って投与される、承認されたＴＡ結合分子（例えばトラスツズマブ、ペルツズマブ等）と組み合わせて、約６００ｍｇの一律用量で、Ｑ３Ｗで投与される。別のこのような実施形態では、ＤＡＲＴ‐Ｉは、承認された処方投薬レジメンに従って投与される、承認されたＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子（例えばタファシタマブ等）と組み合わせて、約６００ｍｇの一律用量で、Ｑ３Ｗで投与される。

別の代表的な投薬レジメンは、約３７５ｍｇの一律用量でＱ３Ｗの抗ＰＤ‐１抗体（例えばレチファンリマブ）の投与、及び約１６０ｍｇの一律用量でＱ４Ｗの抗ＬＡＧ‐３抗体（例えばレラトリマブ）の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約５００ｍｇの一律用量でＱ４Ｗの抗ＰＤ‐１抗体の投与、及び約１６０ｍｇの一律用量でＱ４Ｗの抗ＬＡＧ‐３抗体の投与を含む。更に別の代表的な投薬レジメンは、約７５０ｍｇの一律用量でＱ４Ｗの抗ＰＤ‐１抗体の投与、及び約１６０ｍｇの一律用量でＱ４Ｗの抗ＬＡＧ‐３抗体の投与を含む。本明細書において提供されるように、このような投薬レジメンは更に、ＴＡ結合分子の投与を含んでよい。一実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体及び抗ＬＡＧ‐３抗体は承認された処方投薬レジメンに従って投与される、承認されたＴＡ結合分子（例えばトラスツズマブ、ペルツズマブ等）と組み合わせて、本明細書において提供される投薬レジメンに従って投与される。一実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体及び抗ＬＡＧ‐３抗体は承認された処方投薬レジメンに従って投与される、承認されたＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子（例えばタファシタマブ等）と組み合わせて、本明細書において提供される投薬レジメンに従って投与される。上述の投薬レジメンの特定の実施形態では、抗ＰＤ‐１抗体はレチファンリマブであり、抗ＬＡＧ‐３抗体はレラトリマブである。１つのこのような実施形態では、レチファンリマブは約３７５ｍｇの一律用量で、Ｑ３Ｗで投与され、レラトリマブは約１６０ｍｇの一律用量で、Ｑ４Ｗで投与され、承認されたＴＡ結合分子（例えばトラスツズマブ、ペルツズマブ等）は、承認された処方投薬レジメンに従って投与される。別のこのような実施形態では、レチファンリマブは約５００ｍｇの一律用量で、Ｑ４Ｗで投与され、レラトリマブは約１６０ｍｇの一律用量で、Ｑ４Ｗで投与され、承認されたＴＡ結合分子（例えばトラスツズマブ、ペルツズマブ等）は、承認された処方投薬レジメンに従って投与される。別のこのような実施形態では、レチファンリマブは約３７５ｍｇの一律用量で、Ｑ３Ｗで投与され、レラトリマブは約１６０ｍｇの一律用量で、Ｑ４Ｗで投与され、承認されたＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子（例えばタファシタマブ等）は、承認された処方投薬レジメンに従って投与される。更に別のこのような実施形態では、レチファンリマブは約５００ｍｇの一律用量で、Ｑ４Ｗで投与され、レラトリマブは約１６０ｍｇの一律用量で、Ｑ４Ｗで投与され、承認されたＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子（例えばタファシタマブ等）は、承認された処方投薬レジメンに従って投与される。

一実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子と組み合わせて、本明細書において提供される投薬レジメンに従って投与される。代表的な組み合わせ投薬レジメンは、約１２０ｍｇの一律用量でＱ２ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子（例えばＤＡＲＴ‐Ｉ）の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子（例えばマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブ）の投与を含む。別の代表的な組み合わせ投薬レジメンは、約１２０ｍｇの一律用量でＱ３ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子（例えばＤＡＲＴ‐Ｉ）の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子（例えばマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブ）の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約３００ｍｇの一律用量でＱ２ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３の投与を含む。更に別の代表的な投薬レジメンは、約３００ｍｇの一律用量でＱ３ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、約４００ｍｇの一律用量でＱ２ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子の投与を含む。別の代表的な投薬レジメンは、４００ｍｇの一律用量でＱ３ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子の投与を含む。ある具体的な投薬レジメンは、約６００ｍｇの一律用量でＱ２ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子の投与を含む。別の具体的な投薬レジメンは、約６００ｍｇの一律用量でＱ３ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子の投与を含む。別の具体的な投薬レジメンは、約８００ｍｇの一律用量でＱ２ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子（例えばマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブ）の投与を含む。別の具体的な投薬レジメンは、約８００ｍｇの一律用量でＱ３ＷのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の投与、及び約２ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの用量でＱ３ＷのＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子の投与を含む。上述の投薬レジメンの特定の実施形態では、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子はＤＡＲＴ‐Ｉである。上述の投薬レジメンのいくつかの実施形態では、上記ＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２結合分子はマルゲツキシマブである。上述の投薬レジメンのいくつかの実施形態では、上記ＡＤＣＣ増強Ｂ７‐Ｈ３結合分子はエノブリツズマブである。

好ましくは上述の実施形態において、投与は、予定された用量の１～３日前、１～３日後、又は当日に投与が行われるように、所定の頻度又は周期性で、又は予定された間隔の１～３日以内に、例えば３週間（±３日）ごとに１回、行われる。典型的には、上述の実施形態において、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及びＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子は、２４時間の期間内にＩＶ注入で投与される。特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及びＡＤＣＣ増強ＨＥＲ２又はＢ７‐Ｈ３結合分子は、少なくとも１か月以上、少なくとも３か月以上、又は少なくとも６か月以上、又は少なくとも１２か月以上の持続時間（即ち治療経過）にわたって、上述の投薬レジメンのうちのいずれかに従って、ＩＶ注入で投与される。少なくとも６か月以上の、又は少なくとも１２か月以上にわたる、又は疾患若しくは管理不可能な毒性の寛解が観察されるまでの、治療持続時間が、特に企図される。特定の実施形態では、治療は疾患の寛解後、ある期間にわたって継続される。

特定の実施形態では、抗体系分子は、ＩＶ注入で投与される。従って抗体系分子は典型的には、好適な希釈剤、例えば０．９％塩化ナトリウムを含む輸液バッグ内で（別個に又は一緒に）希釈される。輸液反応又はアレルギー反応が発生する可能性があるため、このような輸液反応を防止するための事前薬物治療が推奨され、また抗体投与中にはアナフィラキシーの予防措置を遵守する必要がある。このようなＩＶ注入は３０分～２４時間の期間にわたって被験者に投与できる。特定の実施形態では、ＩＶ注入は、被験者が有害な注入反応の兆候又は症状を示さない場合、約３０～２４０分、約３０～１８０分、約３０～１２０分、若しくは約３０～９０分の期間にわたって、又は約６０～９０分の期間にわたって、又は約６０～７５分の期間にわたって、又はより短い期間にわたって、送達される。

上述のように、本発明に従って、それを必要とする被験者に抗体系分子を提供するために、様々な投薬及び投与経路を採用してよいものの、このような治療での使用のために、特定の組み合わせ、投薬及び投与経路が特に提供される。このような投薬及び投与における、抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体（例えばマルゲツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、及び／又はエノブリツズマブ）と組み合わされた本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディの使用について、特にここで説明する。

従って上述のような投薬レジメンは、約３００ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディと、約２ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの用量、及び／又は約４２０～８４０ｍｇの一律用量の抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体との投与を含み、ここでこれらの分子はＱ３Ｗ（±３日）で投与される。特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約６００ｍｇ、又は約８００ｍｇの一律用量で投与され、抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、又は約１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。他の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約６００ｍｇ、又は約８００ｍｇの一律用量で投与され、抗ＨＥＲ２抗体は、約４２０ｍｇ、又は約８４０ｍｇの一律用量で投与される。

（Ａ）特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、約３００ｍｇの一律用量で投与される。このような実施形態では、投与されることになる抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体がそれぞれマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブである場合、このようなマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。あるいはこのような実施形態において、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブである場合、トラスツズマブの第１の投薬は約８ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約６ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるか、又はトラスツズマブの第１の投薬は約４ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。あるいはこのような実施形態において、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである場合、ペルツズマブの第１の投薬は約８４０ｍｇの用量で投与され、続いてペルツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約４２０ｍｇの用量で投与される。

（Ｂ）特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体と共に、約４００ｍｇの一律用量で投与される。このような実施形態では、投与されることになる抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体がそれぞれマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブである場合、このようなマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。あるいはこのような実施形態において、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブである場合、トラスツズマブの第１の投薬は約８ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約６ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるか、又はトラスツズマブの第１の投薬は約４ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。あるいはこのような実施形態において、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである場合、ペルツズマブの第１の投薬は約８４０ｍｇの用量で投与され、続いてペルツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約４２０ｍｇの用量で投与される。

（Ｃ）特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、約６００ｍｇの一律用量で投与される。このような実施形態では、投与されることになる抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体がそれぞれマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブである場合、このようなマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。このような実施形態では、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブである場合、トラスツズマブの第１の投薬は約８ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約６ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるか、又はトラスツズマブの第１の投薬は約４ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。あるいはこのような実施形態において、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである場合、ペルツズマブの第１の投薬は約８４０ｍｇの用量で投与され、続いてペルツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約４２０ｍｇの用量で投与される。

（Ｄ）特定の実施形態では、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディは、約８００ｍｇの一律用量で投与される。このような実施形態では、投与されることになる抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体がそれぞれマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブである場合、このようなマルゲツキシマブ又はエノブリツズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。あるいは、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブである場合、トラスツズマブの第１の投薬は約８ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約６ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるか、又はトラスツズマブの第１の投薬は約４ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、続いてトラスツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。あるいは、投与されることになる抗ＨＥＲ２抗体がペルツズマブである場合、このようなペルツズマブの第１の投薬は約８４０ｍｇの用量で投与され、続いてペルツズマブの１つ以上の追加の投薬はそれぞれ約４２０ｍｇの用量で投与される。

上述の実施形態のいずれにおいて、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディ及び抗ＨＥＲ２又は抗Ｂ７‐Ｈ３抗体は、並行して、順次、若しくは交互に、又は異なる時点において、２４時間の期間内にＩＶ注入で投与される。上述の実施形態のいずれにおいて、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディはＤＡＲＴ‐Ｉである。

本発明はまた、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性ダイアボディを２つの異なる抗ＨＥＲ２抗体（例えばトラスツズマブ及びペルツズマブ）と組み合わせて投与する投薬レジメンを提供し、ここで各分子の投与は、上述の実施形態のいずれかに従っているか、又は承認された処方投薬レジメンに従っている。

ＩＸ．本発明の実施形態
ここまで本発明を概説してきたが、以下の番号付き実施形態（「ＥＡ」及び「ＥＢ」）を参照することにより、本発明は更に容易に理解されるだろう。これらの実施形態は例示として提供されており、そうでないことが明記されていない限り本発明を制限することを意図したものではない。

ＥＡ１．ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を、それを必要とする被験者に投与するステップを含む、癌を治療する方法であって、上記方法は、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を約１２０ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量で上記被験者に投与するステップを含む、方法。

ＥＡ２．上記癌は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とし、上記方法は、腫瘍抗原（ＴＡ）結合分子（ＴＡ結合分子）を上記被験者に投与するステップを更に含む、ＥＡ１の方法。

ＥＡ３．被験者の癌を治療する方法であって、上記癌はＴＡの発現を特徴とし、上記方法は、上記被験者にＴＡ結合分子を投与するステップを含み、更に上記被験者に：
（ａ）二重特異性分子（ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）；又は
（ｂ）ＰＤ‐１に免疫特異的に結合する分子（ＰＤ‐１結合分子）と、ＬＡＧ‐３に免疫特異的に結合する分子（ＬＡＧ‐３結合分子）との組み合わせ；又は
（ｃ）ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３の両方に免疫特異的に結合する二重特異性分子（ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）；又は
（ｄ）ＰＤ‐Ｌ１に免疫特異的に結合する分子（ＰＤ‐Ｌ１結合分子）と、ＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせと
を投与するステップを含む、方法。

ＥＡ４．上記ＴＡ結合分子はＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む、ＥＡ２又はＥＡ３の方法。

ＥＡ５．（ａ）各上記分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｂ）各上記分子は同一の組成物中にあるか；又は
（ｃ）上記ＰＤ‐１結合分子及び上記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、上記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｄ）上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子及び上記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、上記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にある、ＥＡ２～ＥＡ４のいずれか１つの方法。

ＥＡ６．上記ＴＡ結合分子は抗体である、ＥＡ２～ＥＡ５のいずれか１つの方法。

ＥＡ７．上記ＰＤ‐１結合分子は抗体である、ＥＡ２～ＥＡ６のいずれか１つの方法。

ＥＡ８．上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子は抗体である、ＥＡ２～ＥＡ６のいずれか１つの方法。

ＥＡ９．上記ＬＡＧ‐３結合分子は抗体である、ＥＡ２～ＥＡ８のいずれか１つの方法。

ＥＡ１０．上記方法は、上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を投与するステップを含む、ＥＡ３～ＥＡ６のいずれか１つの方法。

ＥＡ１１．上記方法は、上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐１結合分子を、ＬＡＧ‐３結合分子と組み合わせて投与するステップを含む、ＥＡ３～ＥＡ９のいずれか１つの方法。

ＥＡ１２．上記方法は、上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を投与するステップを含む、ＥＡ３～ＥＡ６のいずれか１つの方法。

ＥＡ１３．上記方法は、上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子を、ＬＡＧ‐３結合分子と組み合わせて投与するステップを含む、ＥＡ３～ＥＡ９のいずれか１つの方法。

ＥＡ１４．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは：
（ａ）人工グリコフォーム；及び／又は
（ｂ）野生型Ｆｃ領域に関連するアミノ酸置換
を含む、ＥＡ４～ＥＡ１３のいずれか１つの方法。

ＥＡ１５．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、フコースを含有しない及び／又はバイセクトＯ‐ＧｌｃＮＡｃを含む複合型Ｎ‐グリコシド結合糖鎖である、人工グリコフォームを含む、ＥＡ１４の方法。

ＥＡ１６．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、及びＰ３９６Ｌから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む、ＥＡ１４又はＥＡ１５の方法。

ＥＡ１７．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸置換：
（ａ）以下からなる群から選択される１つの置換：
Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、及びＰ３９６Ｌ；
（ｂ）以下からなる群から選択される２つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ及びＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ及びＲ２９２Ｐ；
（３）Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；並びに
（４）Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ；
（ｃ）以下からなる群から選択される３つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（４）Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
（ｄ）以下からなる群から選択される４つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；若しくは
（ｅ）以下からなる群から選択される５つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ
を含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＡ１４～ＥＡ１６のいずれか１つの方法。

ＥＡ１８．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、アミノ酸置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＡ１４～ＥＡ１６のいずれか１つの方法。

ＥＡ１９．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、アミノ酸置換：Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＡ１４～ＥＡ１６のいずれか１つの方法。

ＥＡ２０．上記ＴＡは表６Ａ又は表６Ｂから選択される、ＥＡ２～ＥＡ１９のいずれか１つの方法。

ＥＡ２１．上記ＴＡ結合分子は、表７から選択される抗体のＶＬ及びＶＨドメインを含む、ＥＡ２～ＥＡ１９のいずれか１つの方法。

ＥＡ２２．上記ＰＤ‐１結合分子は：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン；
（ｂ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、ＥＡ３～ＥＡ７、ＥＡ９、ＥＡ１１、及びＥＡ１４～ＥＡ２１のいずれか１つの方法。

ＥＡ２３．上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子は：
（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＬドメイン、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＨドメイン；
（ｂ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、ＥＡ３～ＥＡ６、ＥＡ８～ＥＡ９、及びＥＡ１３～ＥＡ２１のいずれか１つの方法。

ＥＡ２４．上記ＬＡＧ‐３結合分子は：
（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン；
（ｂ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、ＥＡ３～ＥＡ９、ＥＡ１１、及びＥＡ１３～ＥＡ２３のいずれか１つの方法。

ＥＡ２５．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン、若しくは表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；並びに／又は
（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン、若しくは表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表４～５から選択される二重特異性抗体系分子
を含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、及びＥＡ１４～ＥＡ２１のいずれか１つの方法。

ＥＡ２６．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）配列番号３５のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_PD‐1）と、配列番号３９のＰＤ‐１特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ_PD‐1）とを含む、ＰＤ‐１結合ドメイン；並びに
（ｂ）配列番号５１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_LAG‐3）と、配列番号５５のＬＡＧ‐３特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ_LAG‐3）とを含む、ＬＡＧ‐３結合ドメイン
を含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、及びＥＡ１４～ＥＡ２１のいずれか１つの方法。

ＥＡ２７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）上記ＰＤ‐１結合ドメインのうちの２つ；及び
（ｂ）上記ＬＡＧ‐３結合ドメインのうちの２つ
を含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ２６のいずれか１つの方法。

ＥＡ２８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号３５のＶＬドメイン、及び配列番号３９のＶＨドメインを含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ２７のいずれか１つの方法。

ＥＡ２９．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号５１のＶＬドメイン、及び配列番号５５のＶＨドメインを含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ２８のいずれか１つの方法。

ＥＡ３０．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、Ｆｃ領域を含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１２、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ２９のいずれか１つの方法。

ＥＡ３１．上記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、ＥＡ３０の方法。

ＥＡ３２．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、更にヒンジドメインを含む、ＥＡ３０又はＥＡ３１の方法。

ＥＡ３３．上記Ｆｃ領域及び上記ヒンジドメインはいずれもＩｇＧ４アイソタイプのものであり、上記ヒンジドメインは安定化変異を含む、ＥＡ３２の方法。

ＥＡ３４．上記Ｆｃ領域は、変異型Ｆｃ領域であって：
（ａ）ＦｃγＲに対する上記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する、１つ以上のアミノ酸修飾；及び／又は
（ｂ）上記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する１つ以上のアミノ酸修飾
を含む変異型Ｆｃ領域である、ＥＡ３０～ＥＡ３３のいずれか１つの方法。

ＥＡ３５．ＦｃγＲに対する上記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する上記修飾は、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；又はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み、上記番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＡ３４の方法。

ＥＡ３６．上記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する上記修飾は、Ｍ２５２Ｙ；Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；又はＫ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋの置換を含み、上記番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＡ３４又はＥＡ３５の方法。

ＥＡ３７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号５９の２つのポリペプチド鎖、及び配列番号６０の２つのポリペプチド鎖を含む、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ３６のいずれか１つの方法。

ＥＡ３８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約１２０ｍｇの一律用量で投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ３７のいずれか１つの方法。

ＥＡ３９．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約３００ｍｇの一律用量で投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ３７のいずれか１つの方法。

ＥＡ４０．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約４００ｍｇの一律用量で投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ３７のいずれか１つの方法。

ＥＡ４１．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ３７のいずれか１つの方法。

ＥＡ４２．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約８００ｍｇの一律用量で投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ３７のいずれか１つの方法。

ＥＡ４３．上記一律用量は約２週間に１回投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ４２のいずれか１つの方法。

ＥＡ４４．上記一律用量は約３週間に１回投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ４２のいずれか１つの方法。

ＥＡ４５．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約４００ｍｇの一律用量で約２週間に１回投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、ＥＡ２５～ＥＡ３７、ＥＡ４０、及びＥＡ４３のいずれか１つの方法。

ＥＡ４６．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約２週間に１回投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、ＥＡ２５～ＥＡ３７、ＥＡ４１、及びＥＡ４３のいずれか１つの方法。

ＥＡ４７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、ＥＡ２５～ＥＡ３７、ＥＡ４１、及びＥＡ４４のいずれか１つの方法。

ＥＡ４８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約８００ｍｇの一律用量で約３週間に１回投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、ＥＡ２５～ＥＡ３７、ＥＡ４２、及びＥＡ４４のいずれか１つの方法。

ＥＡ４９．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は静脈内（ＩＶ）注入によって投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ４８のいずれか１つの方法。

ＥＡ５０．上記静脈内（ＩＶ）注入は３０～２４０分の期間にわたる、ＥＡ４９の方法。

ＥＡ５１．上記静脈内（ＩＶ）注入は約３０～９０分の期間にわたる、ＥＡ４９の方法。

ＥＡ５２．上記癌は：副腎癌、エイズ関連癌、歯槽軟部肉腫、肛門癌（肛門管扁平上皮癌（ＳＣＡＣ）を含む）、膀胱癌、骨癌、脳及び脊髄癌、乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌、若しくはトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む）、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎明細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／若しくはＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、ユーイング肉腫、骨格外粘液型軟骨肉腫、胆嚢癌若しくは胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、胃癌（gastric cancer）、食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む）、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病（急性骨髄性白血病を含む）、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、肺癌（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む）、髄芽腫、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫（中皮咽頭癌を含む）、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌（転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）を含む）、後部ブドウ膜黒色腫、腎転移癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、小児期の小円形青色細胞腫瘍（神経芽腫、及び横紋筋肉腫を含む）、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、又は子宮癌である、ＥＡ１～ＥＡ５１のいずれか１つの方法。

ＥＡ５３．上記癌は：肛門癌、乳癌、胆管癌（bile duct cancer）、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、又は前立腺癌である、ＥＡ５２の方法。

ＥＡ５４．上記癌はＨＥＲ２^＋乳癌又はＴＮＢＣである、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ５５．上記癌は胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）である、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ５６．上記癌はＨＰＶ関連子宮頸癌である、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ５７．上記癌はＳＣＣＨＮである、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ５８．上記癌はＨＣＣである、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ５９．上記癌はＳＣＬＣ又はＮＳＣＬＣである、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ６０．上記癌はＮＨＬである、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ６１．上記癌は前立腺癌である、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ６２．上記癌は胃癌（gastric cancer）である、ＥＡ５２又はＥＡ５３の方法。

ＥＡ６３．上記ＴＡ結合分子は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、ＨＥＲ２結合分子であり：
（Ａ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）は、配列番号６１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含むマルゲツキシマブの軽鎖可変ドメインであり、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）は、配列番号６６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むマルゲツキシマブの重鎖可変ドメインであるか；
（Ｂ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はトラスツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はトラスツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；
（Ｃ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はペルツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はペルツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；又は
（Ｄ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、ＥＡ２～ＥＡ６２のいずれか１つの方法。

ＥＡ６４．上記ＨＥＲ２結合分子は抗ＨＥＲ２抗体である、ＥＡ２～ＥＡ６３のいずれか１つの方法。

ＥＡ６５．上記抗ＨＥＲ２抗体はマルゲツキシマブであり、上記方法は、マルゲツキシマブを、約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回投与するステップを含む、ＥＡ６４の方法。

ＥＡ６６．マルゲツキシマブは：約６ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、及び約１８ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される用量で、約３週間に１回投与される、ＥＡ６５の方法。

ＥＡ６７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回投与され、マルゲツキシマブは、約１５ｍｇ／ｋｇの用量でおよそ３週間に１回投与される、ＥＡ６５又はＥＡ６６の方法。

ＥＡ６８．上記方法は、化学療法剤を投与するステップを更に含む、ＥＡ６３～ＥＡ６７のいずれか１つの方法。

ＥＡ６９．上記癌はＨＥＲ２発現性癌である、ＥＡ６３～ＥＡ６８のいずれか１つの方法。

ＥＡ７０．上記ＨＥＲ２発現性癌は、乳癌、転移性乳癌、膀胱癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、卵巣癌、膵臓癌、又は胃癌（stomach cancer）である、ＥＡ６９の方法。

ＥＡ７１．上記ＴＡ結合分子は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＢ７‐Ｈ３結合ドメインを含む、Ｂ７‐Ｈ３結合分子であり：
上記ＶＬは配列番号７１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、
上記ＶＨは配列番号７６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、ＥＡ２～ＥＡ６２のいずれか１つの方法。

ＥＡ７２．上記ＴＡ結合分子はエノブリツズマブである、ＥＡ２～ＥＡ６２、及びＥＡ７１のいずれか１つの方法。

ＥＡ７３．上記エノブリツズマブは、約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回投与される、ＥＡ７２の方法。

ＥＡ７４．エノブリツズマブは、約６ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、及び約１８ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される用量で、約３週間に１回投与される、ＥＡ７３の方法。

ＥＡ７５．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回投与され、エノブリツズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で約３週間に１回投与される、ＥＡ７３又はＥＡ７４に記載の方法。

ＥＡ７６．上記癌はＢ７‐Ｈ３発現性癌である、ＥＡ７１～ＥＡ７５のいずれか１つの方法。

ＥＡ７７．上記Ｂ７‐Ｈ３発現性癌は：肛門癌、ＳＣＡＣ、乳癌、ＴＮＢＣ、頭頸部癌、ＳＣＣＨＮ、肺癌、ＮＳＣＬＣ、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、前立腺癌、ｍＣＲＰＣである、ＥＡ７６の方法。

ＥＡ７８．上記ＴＡ結合分子は静脈内（ＩＶ）注入によって投与される、ＥＡ２～ＥＡ７７のいずれか１つの方法。

ＥＡ７９．上記ＩＶ注入は約３０～２４０分の期間にわたる、ＥＡ７８の方法。

ＥＡ８０．上記ＩＶ注入は約３０～９０分の期間にわたる、ＥＡ７８の方法。

ＥＡ８１．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及び上記ＴＡ結合分子は、別個の医薬組成物中で上記被験者に並行して投与され、別個の上記組成物は、２４時間の期間内に投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ８０のいずれか１つの方法。

ＥＡ８２．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及び上記ＴＡ結合分子は、別個の医薬組成物中で上記被験者に順次投与され、２番目に投与される上記組成物は、最初に投与される上記組成物の投与の少なくとも２４時間後に投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ８０のいずれか１つの方法。

ＥＡ８３．上記被験者はＣＡＲＴ細胞療法で過去に治療されている、ＥＡ１～ＥＡ８２のいずれか１つの方法。

ＥＡ８４．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＣＡＲＴ細胞療法による治療と並行して、又はＣＡＲＴ細胞療法による治療の後に、投与される、ＥＡ１～ＥＡ６、ＥＡ１０、ＥＡ１４～ＥＡ２１、及びＥＡ２５～ＥＡ８２のいずれか１つの方法。

ＥＡ８５．ＬＡＧ‐３を発現する細胞が、治療前の上記癌の生検中に存在する、ＥＡ１～ＥＡ８４のいずれか１つの方法。

ＥＡ８６．ＰＤ‐１を発現する細胞が、治療前の上記癌の生検中に存在する、ＥＡ１～ＥＡ８５のいずれか１つの方法。

ＥＡ８７．治療前の上記癌の生検中でのＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３の同時発現が、上記患者が上記方法の候補であることの指標である、ＥＡ１～ＥＡ８６のいずれか１つの方法。

ＥＡ８８．発現は遺伝子発現である、ＥＡ８７の方法。

ＥＡ８９．上記治療前の上記癌の細胞の表面におけるＰＤ‐Ｌ１の発現は、合計陽性スコア（ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（ＴＰＳ）を用いて判定した場合に１％未満である、ＥＡ１～ＥＡ８８のいずれか１つの方法。

ＥＡ９０．上記被験者は、少なくとも１つの過去の治療に対して、過去に応答しなかった、又は応答が不十分であった、ＥＡ１～ＥＡ８９のいずれか１つの方法。

ＥＡ９１．上記過去の治療のうちの少なくとも１つは、ＰＤ‐１結合分子又はＰＤ‐Ｌ１結合分子を用いた治療であった、ＥＡ９０の方法。

ＥＢ１．被験者の体内の癌を治療するために使用するための、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子であって、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約１２０ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量での投与のためのものである、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子。

ＥＢ２．上記癌はＴＡの発現を特徴とし、上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子はＴＡ結合分子と組み合わせて使用される、ＥＢ１のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子。

ＥＢ３．上記ＴＡの発現を特徴とする癌を治療するための：
（Ｉ）ＴＡ結合分子と；
（ＩＩ）（ａ）ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（ｂ）ＰＤ‐１結合分子とＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせ；又は
（ｃ）ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子；又は
（ｄ）ＰＤ‐Ｌ１結合分子とＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせと
の組み合わせ。

ＥＢ４．上記ＴＡ結合分子はＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む、ＥＢ２のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３の組み合わせ、又はＥＢ７の組み合わせ。

ＥＢ５．（ａ）各上記分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｂ）各上記分子は同一の組成物中にあるか；又は
（ｃ）上記ＰＤ‐１結合分子及び上記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、上記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｄ）上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子及び上記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、上記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にある、ＥＢ２若しくはＥＢ４のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ２～４のいずれか１つの組み合わせ、又はＥＢ７若しくは８の組み合わせ。

ＥＢ６．上記ＴＡ結合分子は抗体である、ＥＢ２及びＥＢ４～５のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～５のいずれか１つの組み合わせ、又はＥＢ７～ＥＢ９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ７．上記ＰＤ‐１結合分子は抗体である、ＥＢ３～ＥＢ６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８．上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子は抗体である、ＥＢ３～ＥＢ６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ９．上記ＬＡＧ‐３結合分子は抗体である、ＥＢ３～ＥＢ８のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１０．上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を使用する、ＥＢ３～ＥＢ６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１１．上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐１結合分子を、ＬＡＧ‐３結合分子と組み合わせて使用する、ＥＢ３～ＥＢ９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１２．上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を使用する、ＥＢ３～ＥＢ６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１３．上記ＴＡ結合分子及び上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子を、ＬＡＧ‐３結合分子と組み合わせて使用する、ＥＢ３～ＥＢ９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１４．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは：
（ａ）人工グリコフォーム；及び／又は
（ｂ）野生型Ｆｃ領域に関連するアミノ酸置換
を含む、ＥＢ４～ＥＢ６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ４～ＥＢ９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１５．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、フコースを含有しない及び／又はバイセクトＯ‐ＧｌｃＮＡｃを含む複合型Ｎ‐グリコシド結合糖鎖である、人工グリコフォームを含む、ＥＢ１４のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ１４の組み合わせ。

ＥＢ１６．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、及びＰ３９６Ｌから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む、ＥＢ１４若しくはＥＢ１５のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ１４若しくはＥＢ１５の組み合わせ。

ＥＢ１７．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、以下からなる群から選択されるアミノ酸置換：
（ａ）以下からなる群から選択される１つの置換：
Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、及びＰ３９６Ｌ；
（ｂ）以下からなる群から選択される２つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ及びＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ及びＲ２９２Ｐ；
（３）Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；並びに
（４）Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ；
（ｃ）以下からなる群から選択される３つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（４）Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
（ｄ）以下からなる群から選択される４つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；若しくは
（ｅ）以下からなる群から選択される５つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ
を含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＢ１４～ＥＢ１６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ１４～ＥＢ１６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１８．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、アミノ酸置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＢ１４～ＥＢ１６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ１４～ＥＢ１６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ１９．上記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、アミノ酸置換：Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅを含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＢ１４～ＥＢ１６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ１４～ＥＢ１６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２０．上記ＴＡは表６Ａ又は表６Ｂから選択される、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、及びＥＢ１４～ＥＢ１９のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ１９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２１．上記ＴＡ結合分子は、表７から選択される抗体のＶＬ及びＶＨドメインを含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、及びＥＢ１４～ＥＢ１９のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ１９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２２．上記ＰＤ‐１結合分子は：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン；
（ｂ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、ＥＢ３～ＥＢ７、ＥＢ９、ＥＢ１１、及びＥＢ１４～ＥＢ２１のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２３．上記ＰＤ‐Ｌ１結合分子は：
（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＬドメイン、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＨドメイン；
（ｂ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、ＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ８～ＥＢ９、及びＥＢ１３～ＥＢ２１のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２４．上記ＬＡＧ‐３結合分子は：
（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン；
（ｂ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、ＥＢ３～ＥＢ９、ＥＢ１１、及びＥＢ１３～ＥＢ２３のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２５．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン、若しくは表７から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；並びに／又は
（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン、若しくは表９から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表４～５から選択される二重特異性抗体系分子
を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、及びＥＢ１４～ＥＢ２１のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、及びＥＢ１４～ＥＢ２１のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２６．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）配列番号３５のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_PD‐1）と、配列番号３９のＰＤ‐１特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ_PD‐1）とを含む、ＰＤ‐１結合ドメイン；並びに
（ｂ）配列番号５１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_LAG‐3）と、配列番号５５のＬＡＧ‐３特異的ＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ_LAG‐3）とを含む、ＬＡＧ‐３結合ドメイン
を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、及びＥＢ１４～ＥＢ２１のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、及びＥＢ１４～ＥＢ２１のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）上記ＰＤ‐１結合ドメインのうちの２つ；及び
（ｂ）上記ＬＡＧ‐３結合ドメインのうちの２つ
を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号３５のＶＬドメイン、配列番号３９のＶＨドメインを含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ２９．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号５１のＶＬドメイン、及び配列番号３９のＶＨドメインを含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２８のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２８のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ３０．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、Ｆｃ領域を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２９のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ２～ＥＢ６、ＥＢ１０、１２、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ２９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ３１．上記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプのものである、ＥＢ３０のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３０の組み合わせ。

ＥＢ３２．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、更にヒンジドメインを含む、ＥＢ３０若しくはＥＢ３１のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３０若しくはＥＢ３１の組み合わせ。

ＥＢ３３．上記Ｆｃ領域及び上記ヒンジドメインはいずれもＩｇＧ４アイソタイプのものであり、上記ヒンジドメインは安定化変異を含む、ＥＢ３２のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３２の組み合わせ。

ＥＢ３４．上記Ｆｃ領域は、変異型Ｆｃ領域であって：
（ａ）ＦｃγＲに対する上記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する、１つ以上のアミノ酸修飾；及び／又は
（ｂ）上記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する１つ以上のアミノ酸修飾
を含む変異型Ｆｃ領域である、ＥＢ３０～ＥＢ３３のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３０～ＥＢ３３のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ３５．ＦｃγＲに対する上記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する上記修飾は、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；又はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＢ３４のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３４の組み合わせ。

ＥＢ３６．上記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する上記修飾は、Ｍ２５２Ｙ；Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；又はＫ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋの置換を含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、ＥＢ３４若しくはＥＢ３５のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３４若しくはＥＢ３５の組み合わせ。

ＥＢ３７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号５９の２つのポリペプチド鎖、及び配列番号６０の２つのポリペプチド鎖を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ３８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約１２０ｍｇの一律用量での投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ３９．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約３００ｍｇの一律用量での投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４０．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約４００ｍｇの一律用量での投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４１．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量での投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４２．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約８００ｍｇの一律用量での投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ３７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４３．上記一律用量は約２週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ４２のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ４２のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４４．上記一律用量は約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ４２のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ４２のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４５．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約４００ｍｇの一律用量で約２週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４０、及びＥＢ４３のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４０、及びＥＢ４３のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４６．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約２週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４１、及びＥＢ４３のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４１、及びＥＢ４３のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４１、及びＥＢ４４のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４１、及びＥＢ４４のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約８００ｍｇの一律用量で約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４２、及びＥＢ４４のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ３７、ＥＢ４２、及びＥＢ４４のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ４９．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は静脈内（ＩＶ）注入による投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ４８のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ４８のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ５０．上記静脈内（ＩＶ）注入は３０～２４０分の期間にわたる、ＥＢ４９のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ４９の組み合わせ。

ＥＢ５１．上記静脈内（ＩＶ）注入は約３０～９０分の期間にわたる、ＥＢ４９のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ４９の組み合わせ。

ＥＢ５２．上記癌は：副腎癌、エイズ関連癌、歯槽軟部肉腫、肛門癌（肛門管扁平上皮癌（ＳＣＡＣ）を含む）、膀胱癌、骨癌、脳及び脊髄癌、乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌、若しくはトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む）、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎明細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／若しくはＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、ユーイング肉腫、骨格外粘液型軟骨肉腫、胆嚢癌若しくは胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、胃癌（gastric cancer）、食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む）、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病（急性骨髄性白血病を含む）、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、肺癌（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む）、髄芽腫、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫（中皮咽頭癌を含む）、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌（転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）を含む）、後部ブドウ膜黒色腫、腎転移癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、小児期の小円形青色細胞腫瘍（神経芽腫、及び横紋筋肉腫を含む）、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、又は子宮癌である、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ５１のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ５１のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ５３．上記癌は：肛門癌、乳癌、胆管癌（bile duct cancer）、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、又は前立腺癌である、ＥＢ５２のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２の組み合わせ。

ＥＢ５４．上記癌はＨＥＲ２^＋乳癌又はＴＮＢＣである、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ５５．上記癌は胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）である、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ５６．上記癌はＨＰＶ関連子宮頸癌である、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ５７．上記癌はＳＣＣＨＮである、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ５８．上記癌はＨＣＣである、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ５９．上記癌はＳＣＬＣ又はＮＳＣＬＣである、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ６０．上記癌はＮＨＬである、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３組み合わせ。

ＥＢ６１．上記癌は前立腺癌である、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ６２．上記癌は胃癌（gastric cancer）である、ＥＢ５２若しくはＥＢ５３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ５２若しくはＥＢ５３の組み合わせ。

ＥＢ６３．上記ＴＡ結合分子は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、ＨＥＲ２結合分子であり：
（Ａ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）は、配列番号６１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含むマルゲツキシマブの軽鎖可変ドメインであり、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）は、配列番号６６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むマルゲツキシマブの重鎖可変ドメインであるか；
（Ｂ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はトラスツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はトラスツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；
（Ｃ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はペルツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はペルツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；又は
（Ｄ）上記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、上記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ６２のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６２のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ６４．上記ＨＥＲ２結合分子は抗ＨＥＲ２抗体である、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ６３のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６３のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ６５．上記抗ＨＥＲ２抗体はマルゲツキシマブであり、マルゲツキシマブは、約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ６４のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ６４の組み合わせ。

ＥＢ６６．マルゲツキシマブは：約６ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、及び約１８ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される用量で、約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ６５のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ６５の組み合わせ。

ＥＢ６７．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回の投与のためのものであり、マルゲツキシマブは、約１５ｍｇ／ｋｇの用量でおよそ３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ６５若しくはＥＢ６６のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ６５若しくはＥＢ６６の組み合わせ。

ＥＢ６８．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は上記組み合わせは、化学療法剤と共に投与するためのものである、ＥＢ６３～ＥＢ６７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ６３～ＥＢ６７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ６９．上記癌はＨＥＲ２発現性癌である、ＥＢ６３～ＥＢ６８のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ６３～ＥＢ６８のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ７０．上記ＨＥＲ２発現性癌は、乳癌、転移性乳癌、膀胱癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、卵巣癌、膵臓癌、又は胃癌（stomach cancer）である、ＥＢ６９のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ６９の組み合わせ。

ＥＢ７１．上記ＴＡ結合分子は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＢ７‐Ｈ３結合ドメインを含む、Ｂ７‐Ｈ３結合分子であり：
上記ＶＬは配列番号７１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、
上記ＶＨは配列番号７６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、若しくはＥＢ２５～ＥＢ６２のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６２のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ７２．上記ＴＡ結合分子はエノブリツズマブである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、ＥＢ２５～ＥＢ６２、及びＥＢ７１のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６２、及びＥＢ７１のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ７３．上記エノブリツズマブは、約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ７２のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７２の組み合わせ。

ＥＢ７４．エノブリツズマブは、約６ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、及び約１８ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される用量で、約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ７３のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７３の組み合わせ。

ＥＢ７５．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回の投与のためのものであり、エノブリツズマブは、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で約３週間に１回の投与のためのものである、ＥＢ７３若しくはＥＢ７４のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７３若しくはＥＢ７４の組み合わせ。

ＥＢ７６．上記癌はＢ７‐Ｈ３発現性癌である、ＥＢ７１～ＥＢ７５のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７１～ＥＢ７５のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ７７．上記Ｂ７‐Ｈ３発現性癌は：肛門癌、ＳＣＡＣ、乳癌、ＴＮＢＣ、頭頸部癌、ＳＣＣＨＮ、肺癌、ＮＳＣＬＣ、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、前立腺癌、ｍＣＲＰＣである、ＥＢ７６のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７６の組み合わせ。

ＥＢ７８．上記ＴＡ結合分子は静脈内（ＩＶ）注入による投与のためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ７７のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ７７のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ７９．上記ＩＶ注入は約３０～２４０分の期間にわたる、ＥＢ７８のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７８の組み合わせ。

ＥＢ８０．上記ＩＶ注入は約３０～９０分の期間にわたる、ＥＢ７８のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ７８の組み合わせ。

ＥＢ８１．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及び上記ＴＡ結合分子は、別個の医薬組成物中で上記被験者に並行して投与するためのものであり、別個の上記組成物は、２４時間の期間内に投与するためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８０のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８０のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８２．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子及び上記ＴＡ結合分子は、別個の医薬組成物中で上記被験者に順次投与するためのものであり、２番目に投与される上記組成物は、最初に投与される上記組成物の投与の少なくとも２４時間後に投与するためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８０のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８０のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８３．上記被験者はＣＡＲＴ細胞療法で過去に治療されている、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８２のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８２のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８４．上記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又は上記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、ＣＡＲＴ細胞療法による治療と並行して、又はＣＡＲＴ細胞療法による治療の後に、投与するためのものである、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８３のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ６、ＥＢ１０、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８２のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８５．ＬＡＧ‐３を発現する細胞が、治療前の上記癌の生検中に存在する、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８４のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ８４のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８６．ＰＤ‐１を発現する細胞が、治療前の上記癌の生検中に存在する、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８５のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ８５のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８７．治療前の上記癌の生検中でのＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３の同時発現が、上記患者が上記方法の候補であることの指標である、ＥＢ１～ＥＢ８６のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ８６のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ８８．発現は遺伝子発現である、ＥＢ８７のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ８７の組み合わせ。

ＥＢ８９．上記治療前の上記癌の細胞の表面におけるＰＤ‐Ｌ１の発現は、合計陽性スコア（ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（ＴＰＳ）を用いて判定した場合に１％未満である、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８８のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ８８のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ９０．上記被験者は、少なくとも１つの過去の治療に対して、過去に応答しなかった、又は応答が不十分であった、ＥＢ２、ＥＢ４～ＥＢ６、ＥＢ１４～ＥＢ２１、及びＥＢ２５～ＥＢ８９のいずれか１つのＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ３～ＥＢ８９のいずれか１つの組み合わせ。

ＥＢ９１．上記過去の治療のうちの少なくとも１つは、ＰＤ‐１結合分子又はＰＤ‐Ｌ１結合分子を用いた治療であった、ＥＢ９０のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子、又はＥＢ８８の組み合わせ。

以下の実施例は、請求対象の発明をよりよく説明するために提供されており、本発明の範囲を限定するものとして解釈してはならない。特定の材料に言及されている場合、これは単に説明を目的とするものであり、本発明を限定することを意図したものではない。当業者は、発明能力を行使することなく、また本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段又は反応物を開発できる。

実施例１
第Ｉ相試験
ＤＡＲＴ－Ｉ（ＭＧＤ０１３及びテボテリマブとしても公知の、ＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３に結合する二重特異性分子）に対する患者の忍容性を判断するために、第Ｉ相臨床研究を実施中である。この研究は、用量漸増段階及びコホート拡大段階を含む。この研究は、各臨床施設の治験審査委員会によって承認され、全ての患者が書面によるインフォームドコンセントに署名した。

初期用量漸増及び用量拡大コホートについては、ＤＡＲＴ‐Ｉを２週間に１回（Ｑ２Ｗ）投与した。この研究の目的のために、８週間（５６日）のサイクルを使用し、ここではＤＡＲＴ‐Ｉを、最初のサイクルの２週間の期間それぞれの１日目から始めてＱ２Ｗで投与し（即ち１日目、並びに１５±１日目、２９±１日目、及び４３±１日目に投与し）、またそれ以降の各サイクルの１±１日目から始めてＱ２Ｗで投与する。患者は、この研究の治療に対する忍容性及び応答に応じて、複数回の８週間Ｑ２Ｗ治療サイクルを受けてよい。

更なる拡大コホートでは、ＤＡＲＴ‐Ｉを３週間に１回（Ｑ３Ｗ）投与する。この研究の目的のために、３週間のサイクル（それぞれ２１日）を使用する。ＤＡＲＴ‐Ｉは、最初のサイクルの１日目、及びそれ以降の各サイクルの１±３日目に投与される。患者は、この研究の治療に対する忍容性及び応答に応じて、複数回の３週間（Ｑ３Ｗ）治療サイクルを受けてよい。

組み合わせ拡大コホートでは、ＤＡＲＴ‐Ｉと、抗ＨＥＲ２抗体であるマルゲツキシマブ（ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有するＴＡ結合分子）とを、いずれも３週間に１回（Ｑ３Ｗ）投与する。この研究の目的のために、３週間のサイクル（それぞれ２１日）を使用し、ここではＤＡＲＴ‐Ｉ及びマルゲツキシマブを、最初のサイクルの１日目、及びそれ以降の各サイクルの１±３日目に投与する。患者は、この研究の治療に対する忍容性及び応答に応じて、複数回の３週間Ｑ３Ｗ治療サイクルを受けてよい。

これらの研究において、ＤＡＲＴ‐Ｉの用量は、生理食塩水中で０．１２ｍｇ／ｍＬ～６．４ｍｇ／ｍＬの濃度範囲に希釈され、約６０～７５分にわたって、市販のシリンジ又は輸液ポンプを用いてＩＶラインを介して投与される。

これらの研究において、マルゲツキシマブの用量は、生理食塩水中で２．４～７．２ｍｇ／ｍＬの濃度範囲に希釈され、市販のシリンジ又は輸液ポンプを用いて、およそ３０～１２０分にわたるＩＶ注入によって投与される。

抗腫瘍活性は：従来の「固形腫瘍における反応評価基準（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors：ＲＥＣＩＳＴ）」、バージョン１．１（Eisenhauer, E.A., et al. (2009) “New Response Evaluation Criteria In Solid Tumours: Revised RECIST Guideline (Version 1.1)” Eur. J. Cancer. 45(2):228-247）；「免疫関連固形腫瘍における反応評価基準（immune‐related Response Evaluation Criteria in Solid Tumors：ｉｒＲＥＣＩＳＴ）」（Wolchok, J.D., et al., (2009) “Guidelines For The Evaluation Of Immune Therapy Activity In Solid Tumors: Immune-Related Response Criteria.” Clin. Cancer Res, 15:7412-7420）；又は該当する場合は応答評価のための改訂版国際ワーキンググループ基準（Revised International Working Group criteria）（即ちＬｕｇａｎｏ分類；Cheson, B.D., et al., (2014) “Recommendations For Initial Evaluation, Staging, And Response Assessment Of Hodgkin And Non-Hodgkin Lymphoma: The Lugano Classification.” J. Clin. Oncol, 32:3059-3068）を用いて、評価される。

用量漸増段階では、１ｍｇから最大１２００ｍｇまで順次漸増する一律用量を、１～６人の患者の連続したコホートにＱ２Ｗで投与し、それぞれを評価した（表８）。様々な用量レベルにおいて、用量漸増の目的で評価できないと評価された患者を差し替えた。追加の患者も、関心対象の複数の用量レベルに登録して、追加の臨床的経験を得た。用量漸増段階では、組織学的特徴を問わず切除不能な、局所進行性又は転移性固形腫瘍を有する患者が登録された。４７人の患者（４９％がチェックポイントを経験）を用量漸増で処置し、最大忍容用量は定義されなかった。

観察された臨床活性、末梢受容体占有率、及び薬物動態（pharmacokinetics：ＰＫ）を含むがこれらに限定されない、用量漸増段階からの臨床データ全体に基づいて、６００ｍｇの用量のＱ２Ｗでの投与を、コホート拡大段階で評価される投薬レジメンとして最初に選択した。

別個の悪性疾患（ＮＳＣＬＣ（事前チェックポイント治療後のコホート、及びチェックポイントナイーブのコホート）；ＳＣＣＨＮ（事前チェックポイント治療後のコホート、及びチェックポイントナイーブのコホート）；ＳＣＬＣ；胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）；ＨＣＣ；子宮頸癌；ＴＮＢＣ；上皮性卵巣癌（epithelial ovarian cancer：ＥＯＣ）；ＤＬＢＣＬ；並びに胃癌（gastric cancer）を含む）に罹患した患者を、コホート拡大段階の初期コホートにおいて、６００ｍｇの一律用量でＱ２Ｗで投与されるＤＡＲＴ‐Ｉで治療する。以下で詳述する薬物動態（ＰＫ）及び受容体占有率（ＲＯ）データに部分的に基づいて、コホート拡大段階の更なるコホート（最初は胃癌（gastric cancer）又はＥＯＣに罹患した患者）を、６００ｍｇの一律用量でＱ３Ｗで投与されるＤＡＲＴ‐Ｉで治療する。

ＨＥＲ２腫瘍抗原を発現する進行性又は転移性固形腫瘍（即ちＨＥＲ２＋固形腫瘍、特にＨＥＲ２＋胃癌（gastric cancer）又は乳癌）に罹患した患者を登録する別のコホートは、ＤＡＲＴ‐Ｉ及びマルゲツキシマブを同じ日に順次投与される。ＤＡＲＴ‐Ｉ（３００ｍｇ又は６００ｍｇ）の投与と、これに続くマルゲツキシマブ（１５ｍｇ／ｋｇ）の投与とを、Ｑ３Ｗで行う。このコホートは、３００ｍｇの用量レベルのＤＡＲＴ‐Ｉにおいて３人の患者を登録することから始めて、その後に６００ｍｇの用量レベルのＤＡＲＴ‐Ｉで治療される患者が続く、従来の３＋３アプローチに従った。

薬物動態（ＰＫ）
進行中の研究において、１～１２００ｍｇかつＱ２Ｗの投薬レジメン範囲におけるＤＡＲＴ‐Ｉの薬物動態プロファイルが評価された。血清ＰＫ試料を、サイクル１～２の１日目の最初の用量に関して、（ｉ）投薬前、（ｉｉ）注入終了時（end of infusion：ＥＯＩ）、及び（ｉｉｉ）注入開始の２、４、２４、７２、１６８時間後に収集した。更なる血清ＰＫ試料をサイクル１～２中に投与される追加の用量ごとに、投薬前及びＥＯＩに収集し、ヒト血清中のＤＡＲＴ‐Ｉの濃度を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。簡潔に述べると、アッセイプレートを、２μｇ／ｍＬの捕捉抗体（ＤＡＲＴ‐ＩのＬＡＧ‐３ドメインを認識する抗イディオタイプ抗体、「抗ＩＤ」）で一晩コーティングした。非特異的部位を、０．１％のＴｗｅｅｎ‐２０を含む１Ｘリン酸緩衝生理食塩水（phosphate buffered saline：ＰＢＳ）中の０．５％ウシ血清アルブミン（bovine serum albumin：ＢＳＡ）でブロックした後、上記プレートを、ＤＡＲＴ‐Ｉ標準キャリブレータ、品質管理（quality control）、及び試験試料と共にインキュベートする。不動化された抗ＩＤ抗体は、標準キャリブレータ、品質管理、及び試験試料中に存在するＤＡＲＴ‐Ｉを捕捉する。捕捉されたＤＡＲＴ‐Ｉは、０．２５μｇ／ｍＬの２Ａ５‐ビオチン（ビオチン化抗ＥＫコイル抗体）の順次添加によって検出した後、ストレプトアビジン‐ＨＲＰの１：１０，０００の希釈を行う。結合したＨＲＰの活性を、ＥＬＩＳＡＰＩＣＯ基質によるルミネセンス光生成によって定量化する。ルミネセンス光の強度を、ＶｉｃｔｏｒＸ４プレートリーダーを用いて、相対光単位（relative light unit：ＲＬＵ）として測定する。ＤＡＲＴ‐Ｉ標準からのＲＬＵシグナルを４パラメータのロジスティックモデルに当てはめることによって、標準曲線を生成する。血清試料中のＤＡＲＴ‐Ｉの濃度を、上記光強度をＤＡＲＴ‐Ｉの濃度に関連付ける１／ｙ^２加重を伴う４パラメータ曲線当てはめを用いた、標準曲線からの補間によって決定する。

ＷｉｎＮｏｎｌｉｎＰＫ分析プログラム（Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）６４ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）、Ｖｅｒｓｉｏｎ８．０、ＣｅｒｔａｒａＩｎｃ．（ニュージャージー州プリンストン））を用いてデータを分析するために、予備的なＰＫの区画モデル化アプローチを使用した。使用されたモデルは、使用したモデルは、開いた１つ又は２つのコンパートメントであり、加重係数は予測濃度の逆数の２乗である。このモデルをサイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１）の最初の用量データに当てはめ、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎによって初期の推定を生成した。

（全員Ｑ２Ｗで投薬を受けた）４５人の被験者が、予備的なＰＫの分析のために評価可能であった（１及び３ｍｇでＱ２Ｗの投薬それぞれについて１人の患者、１０ｍｇでＱ２Ｗの投薬において４人の患者、３０ｍｇでＱ２Ｗの投薬において５人の患者、１２０ｍｇでＱ２Ｗの投薬において６人の患者、４００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において９人の患者、６００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において８人の患者、８００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において７人の患者、並びに１２００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において４人の患者）。ＰＫプロファイルは図２に提示されている。

ＰＫパラメータは、治療ごとに表９にまとめられている。これらの結果は、最初の用量のＤＡＲＴ‐Ｉへの曝露が、用量に関連して増大したことを示している。１～１２００ｍｇの用量範囲にわたって、ＤＡＲＴ‐ＩＣ_maxは用量に比例して増大し（勾配：０．９８５［９０％信頼区間（confidence interval：ＣＩ）：０．９４９～１．０２２］）、最初の用量のＡＵＣ_(INF)は、用量に比例した増大よりも大きく増大した（勾配：１．３４５［９０％ＣＩ：１．２９４～１．３９７］）。１～１２００ｍｇの用量範囲にわたって、全身クリアランス（ｃｌｅａｒａｎｃｅ：ＣＬ）値は、用量の増大に伴って低下し、定常状態の分布容積（Ｖ_ss）、及び排泄半減期（ｔ_1/2）値はいずれも、用量の増大に伴って増大した。しかしながら、４００～１２００ｍｇの用量範囲にわたって、ＣＬ、Ｖ_ss、及びｔ_1/2は用量に依存しないようであった。ただし用量の増大に伴ってわずかな傾向が認められた。ＤＡＲＴ‐Ｉの平均半減期はおよそ１１日であり、分布容積は、ＤＡＲＴ‐Ｉ分布が血液量に限定されていることを示している。

略語：ＡＵＣ（ＩＮＦ）＝血清中薬物濃度‐時間曲線下面積（時点ゼロ～無限大）；Ｃ１Ｄ１＝サイクル１の１日目；Ｃｍａｘ＝観察された最高血清中濃度；ＣＬ＝全身クリアランス；ＣＶ＝変動係数；ＧｅｏＭｅａｎ＝幾何平均；Ｎ＝患者の人数；ＮＲ＝報告なし；Ｑ２Ｗ＝２週間に１回；ＳＤ＝標準偏差；ｔ１／２＝排泄半減期；Ｖｓｓ＝定常状態の分布容積

薬力学（Pharmacodynamics：ＰＤ）
用量範囲１～１２００ｍｇかつＱ２ＷでのＤＡＲＴ‐Ｉの受容体占有率（ＲＯ）プロファイルを評価した。各試料におけるＤＡＲＴ‐ＩのＲＯを、蛍光活性化セルソーティング（fluorescence‐activated cell sorting：ＦＡＣＳ）によって決定した。簡潔に述べると、試料ごとに５つの全血のアリコートを、５本の１２×７５ｍｍチューブに分配する。これらのアリコートのうちの２つがＤＡＲＴ‐Ｉでスパイクされ、スパイクされた１つの試料を、各ＲＯパネルに使用する。室温（ＲＴ）で３０分のインキュベーション後、全てのアリコートを、室温かつ暗所で１５分間、赤血球溶解緩衝液（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて処理し、続いて１２００ｒｐｍで５分間遠心分離する。上清を除去し、白血球含有細胞ペレットを、２ｍｌのＦＢＳ染色緩衝液（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で洗浄する。２つのアリコート（１つはスパイクされている）を抗体パネル１で染色し、２つのアリコート（１つはスパイクされている）を抗体パネル２で染色し（表１０を参照）、１つのアリコートは、室温かつ暗所で３０分間、総体積１００μＬの適切なアイソタイプ対照で染色する。試料を２ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄する。０．２μｇのストレプトアビジン、Ｒ‐フィコエリトリンコンジュゲート（ＳＡＰＥ、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を抗体パネル２のアリコートに添加し、これらを混合してＲＴかつ暗所で３０分間インキュベートした後、２ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄した。細胞を、ＤＡＰＩ（０．１μｇ／ｍＬ）を含む（パネル１及び２の試料）又はＤＡＰＩを含まない（アイソタイプ試料）２００μＬの染色緩衝液中に再懸濁し、１０分後にＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩで取得する。幾何平均蛍光強度（Geometric Mean Fluorescent Intensity：ｇＭＦＩ）を、全ての時点のＩｇＧ４又はＥＫチャネルのＣＤ４＋又はＣＤ８＋集団全体に関して記録する。サイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１）の投薬前試料をバックグラウンドと見なし、全ての試料から差し引く（Ｃ１Ｄ１投薬前試料データが利用できない場合はアイソタイプ試料を使用する）。パーセント（％）で表される受容体占有率（ＲＯ）を、以下の式を用いて計算する。

（全員Ｑ２Ｗで投薬を受けた）５６人の被験者が、予備的なＰＤの分析のために評価可能であった（１及び３ｍｇでＱ２Ｗの投薬それぞれについて１人の患者、１０ｍｇでＱ２Ｗの投薬において３人の患者、３０ｍｇでＱ２Ｗの投薬において５人の患者、１２０ｍｇでＱ２Ｗの投薬において７人の患者、４００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において９人の患者、６００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において１６人の患者、８００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において８人の患者、並びに１２００ｍｇでＱ２Ｗの投薬において６人の患者）。ＥＯＩ（サイクル１又はサイクル２の最初の用量の投与後の、注入の終了時）、並びにＰＲＥ（次の用量の投与の前）における、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞のパーセント受容体占有率（ＲＯ）が、図３Ａ～３Ｄに提示されている。ＤＡＲＴ‐Ｉ濃度とＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞への結合との間の関係を、Ｅｍａｘモデル：Ｅ＝（Ｅｍａｘ＊Ｃ）／（ＥＣ５０＋Ｃ）を用いて調査した。ここでＥ＝％結合、Ｅｍａｘ＝最大％結合、ＥＣ５０＝半数効果濃度、及びＣ＝ＤＡＲＴ‐Ｉの濃度である。ＤＡＲＴ‐Ｉは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞に関してそれぞれ０．０４５及び０．０１１μｇ／ｍＬのＥＣ₅₀で強力なＲＯを示すことが分かった。最大ＲＯは、Ｑ２Ｗ投薬間隔全体にわたって１２０ｍｇ以上の用量で観察され、最大ＲＯの９０％が、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞に関してそれぞれ０．６及び０．１μｇ／ｍＬで達成される。

ＰＫ及び標的濃度のモデル化
４００ｍｇ～１２００ｍｇかつＱ２Ｗの投薬レジメンで投薬を受けた患者（ｎ＝２８）の血清中濃度データに基づく、更なるＰＫシミュレーション（データ分析及びモデル化に関する詳細については上記を参照）を、１区画：Ｖ及びＣＬ、並びに２区画：Ｖ１、Ｖ２、ＣＬ及びＣＬＤについて実施した。Ｑ２Ｗ、Ｑ３Ｗ、及びＱ４Ｗ（４週間に１回）レジメンを用いて４００、６００、８００、１０００、及び１２００ｍｇに関してシミュレートされた複数用量中央値ＰＫプロファイルを、それぞれ図４Ａ、４Ｂ、及び４Ｃに示す。図４Ａ～４Ｃに示されているように、中央値ＰＫプロファイルは、Ｑ２Ｗを用いた４００ｍｇ以上の投与、及びＱ３Ｗレジメンを用いた６００ｍｇ以上のＤＡＲＴ‐Ｉの投与によって、２３μｇ／ｍＬ以上のＤＡＲＴ‐Ｉ標的トラフ濃度（Ｃ_trough）が得られることを示した。更に、シミュレートされた全てのＤＡＲＴ‐Ｉ用量及びレジメンで、４．５μｇ／ｍＬの１００×ＲＯＥＣ₅₀以上の、ＤＡＲＴ‐ＩＣ_troughが得られる。

これらの研究は、多くの用量及びレジメンが、標的閾値トラフ濃度（２３μｇ／ｍＬ）を達成することを裏付ける。これらの研究は、約４００ｍｇ以上の本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の、Ｑ２Ｗでの投与を含む投薬レジメンの有効性、特に約６００ｍｇの本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の、Ｑ２Ｗでの投与を含む投薬レジメンの有効性を裏付ける。またこれらの研究は特に、約６００ｍｇ以上の本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の、Ｑ３Ｗでの投与を含む投薬レジメンの有効性を裏付ける。更に上述のように、最大ＲＯは、Ｑ２Ｗ投薬レジメン全体にわたって１２０ｍｇ以上の用量で観察された。従ってこれらの研究は、最大ＲＯの達成に十分な本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の標的トラフ濃度を提供するための、約１２０ｍｇ以上かつＱ２Ｗでの投与を含む投薬レジメンの有効性を裏付ける。

初期臨床所見の概要
最初の１８８人の患者（Ｑ２Ｗ用量漸増での４７人の患者（４９％がチェックポイントを経験）、及びこれに続くＱ２Ｗコホート拡大での１４１人の患者（３３％がチェックポイントを経験）の治療後の所見が提供される。治療関連有害事象（treatment-related adverse event：ＴＲＡＥ）は、１１７人／１８８人（６２．２％）の患者で発生し、最も一般的なのは疲労（ｎ＝３３）及び吐き気（ｎ＝２０）であった。グレード３以上のＴＲＡＥの割合は１９．７％であった。免疫関連有害事象は、抗ＰＤ‐１抗体で観察された事象と一致していた。平均半減期はおよそ１１日であり；末梢血フローサイトメトリーにより、１２０ｍｇ以上の用量での治療中に完全かつ持続的なオンターゲット結合が確認された。

１～１２００ｍｇの用量範囲かつＱ２ＷでのＤＡＲＴ‐Ｉ単剤療法で治療された、最初の３９人の応答評価可能な用量漸増患者のうち、ＲＥＣＩＳＴ１．１によると、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、中皮腫、又は胃癌（gastric cancer）の患者で３人の部分奏効（ＰＲ）が確認され、１９人の患者は病状が安定していた。研究は進行中であり、データは完成途上であるが、図５は、６００ｍｇかつＱ２ＷでのＤＡＲＴ‐Ｉ単剤療法を受けた、１２０人の応答評価可能なコホート拡大患者の、標的病変の減少のパーセントを示す、ウォーターフォールプロットを提示する。単剤療法の固形腫瘍拡大コホート（即ちびまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫［ＤＬＢＣＬ］を除く）では、ＲＥＣＩＳＴ１．１による７人の奏効がこれまでに観察され（３人が確認済み／４人が未確認）、これは６人のＰＲ（卵巣、ＮＳＣＬＣ、及びＴＮＢＣ［それぞれｎ＝２］と、１人の完全奏効［ＣＲ］（ＮＳＣＬＣ）とが含まれていた。５１人の患者は病状が安定していた。ＴＮＢＣ、ＥＯＣ、ＮＳＣＬＣ（チェックポイント阻害剤（checkpoint inhibitor：ＣＰＩ）ナイーブ、及び事前ＰＤ‐１チェックポイント治療後）拡大コホートの７５人の応答評価可能な患者からの更なる結果を、表１１にまとめる。

ＤＬＢＣＬ拡大コホートでは、２人の評価可能な患者のうち、Ｌｕｇａｎｏ分類によって１人のＣＲ及び１人のＰＲが観察された。特に、ＤＬＢＣＬ患者、ステータス：ＣＤ１９標的ＣＡＲＴ細胞、再発は、１回のＤＡＲＴ‐Ｉ注入（６００ｍｇ）後にＣＲを示した。チェックポイント阻害剤ナイーブＮＳＣＬＣ患者（肺葉切除及びカルボプラチン＋ペメトレキセド治療後）は、８週間サイクル（６００ｍｇ、Ｑ２ＷでのＤＡＲＴ‐Ｉの４回の投与）後にＣＲを示した。ＤＬＢＣＬ拡大コホートの１３人の応答評価可能な患者からの更なる結果を、表１２にまとめる。より大きなこのグループでは、活性化Ｂ細胞（ａｃｔｉｖａｔｅｄＢ‐ｃｅｌｌ：ＡＢＣ）、胚中心Ｂ細胞（ｇｅｒｍｉｎａｌｃｅｎｔｅｒＢ‐ｃｅｌｌ：ＧＣＢ）、及びダブルヒット（ＭＹＣ／ＢＣＬ２）分子サブタイプを包含する７人の患者が応答した。応答の期間は１（２回目のスキャンデータは保留中）～１６８日であり、７人中６人の応答患者が応答中であった。単剤療法は一般に、強い予備治療を受けたＲ／ＲＤＬＢＣＬ患者において忍容性が良好である。注入関連反応は管理可能であり、腫瘍溶解症候群のエビデンスは存在しなかった。これらの結果は、様々な分子サブタイプを示す、ＣＡＲＴ細胞治療を受けた及びＣＡＲナイーブのＲ／ＲＤＬＢＣＬ患者の抗腫瘍活性を実証しており、予備的なＯＲＲは５３．８％である。

ＤＡＲＴ‐Ｉと抗ＨＥＲ‐２抗体（マルゲツキシマブ）との組み合わせで治療された、ＨＥＲ‐２＋腫瘍を有する患者のコホートでは、治療を受けた最初の５人の評価可能な患者のうち、２人のＨＥＲ２＋乳癌患者が部分奏効（ＰＲ）を示した（１人が確認済み、１人が未確認）。特に、広範な胸壁病変並びに肝臓及び肺への転移を伴う、強い予備治療を受けた乳癌の患者は、最初の治療中疾患評価においてＰＲが示された上で、上記組み合わせの１回の投与の２週間後に、劇的な疾患の退行を示した。更に、事前抗ＰＤ‐１療法後の数人の患者において、奏効を観察した。組み合わせコホートに関する更なる結果を以下で提供する。

ＬＡＧ‐３発現及びＰＤ‐Ｌ１発現の両方に関して、治療前腫瘍生検試料を評価した。簡潔に述べると、ＬＡＧ‐３発現を、ＶｅｎｔａｎａＤｉｓｃｏｖｅｒｙＵｌｔｒａプラットフォームでのＬＡＧ‐３ＡｂクローンＥＰＲ４３９２（２）（Ａｂｃａｍ）ＩＨＣアッセイを用いて調査した。陽性は、倍率４０倍のホットスポットフィールド（hot spot field：ＨＳＦ）あたり少なくとも１つのＬＡＧ‐３＋ｖｅ腫瘍浸潤リンパ球（ｔｕmor‐infiltrating lymphocyte：ＴＩＬ）として定義した。ＰＤ‐Ｌ１ＴＰＳ／ＣＰＳ発現は、ＡｇｉｌｅｎｔＰＤ‐Ｌ１（２２Ｃ３）ｐｈａｒｍＤｘキットの説明書に従って決定された。本明細書中で使用される場合、「－ｖｅ」は「ネガティブ」を示し、「＋ｖｅ」は「ポジティブ」を示す。

後向き免疫組織化学（immunohistochemistry：ＩＨＣ）を実施した。簡潔に述べると、ＴＮＢＣ、ＥＯＣ、及びＮＳＣＬＣ拡大コホートからのアーカイブ生検を、ＩＨＣによって、ＬＡＧ‐３（Ｎ＝４６）又はＰＤ‐Ｌ１（Ｎ＝４５）に関して分析した。ＬＡＧ‐３ＡｂクローンＥＰＲ４３９２（２）（Ａｂｃａｍ）ＩＨＣアッセイを、ＶｅｎｔａｎａＤｉｓｃｏｖｅｒｙＵｌｔｒａプラットフォームで実施した。ＬＡＧ‐３スコアは、５つのＬＡＧ‐３＋ホットスポットにわたる倍率４０倍のフィールドあたりのＬＡＧ‐３＋細胞の平均値を計算することによって、決定された。ＰＤ‐Ｌ１発現はＡｇｉｌｅｎｔＰＤ‐Ｌ１（２２Ｃ３）ｐｈａｒｍＤｘキットによって決定され、ＴＰＳ（ＮＳＣＬＣ）は解釈マニュアルに従って計算され、ＣＰＳ（ＥＯＣ、ＴＮＢＣ）は以下に従って計算された：ＰＤ‐Ｌ１＋細胞（腫瘍及び免疫）の数／生存腫瘍細胞の総数×１００。ＣＰＳ＜１又はＴＰＳ＜１％をネガティブとみなした。臨床応答が示された個々の患者のＬＡＧ‐３及びＰＤ‐Ｌ１スコアが、それぞれ図６Ａ及び６Ｂにプロットされている。臨床応答によってプロットされたＬＡＧ‐３スコアが、図６Ｃにプロットされている。

更に、単一用量のＤＡＲＴ‐Ｉの後に完全奏効を示したＤＬＢＣＬ患者（ＣＤ１９標的ＣＡＲＴ細胞治療後、再発）から得られた生検に対して、ＩＨＣ分析を実施した。ＣＡＲＴ細胞治療（予備ＤＡＲＴ‐Ｉ治療）の前及び後のリンパ節生検を、ＣＤ３（Ｔ細胞マーカー）、ＣＤ７９ａ（Ｂ細胞マーカー）、並びにＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３の発現に関して、ＨＡＬＯ（登録商標）画像分析プラットフォームを使用し、多重ＩＦ（蛍光）染色によって評価した。ＤＡＰＩ染色を用いて、細胞総数、及び各マーカーに関してポジティブである細胞の個数を決定した。ＤＡＰＩ染色された細胞の％としての、単一、二重、及び三重ポジティブ細胞の個数は、表１３に提示されており、ＰＤ‐１及び／又はＬＡＧ‐３及び／又はＣＤ３に関してポジティブである細胞の個数が、ＣＡＲＴ細胞治療の後で有意に高かったことを示している。この分析で調査された生検では、ＬＡＧ‐３の発現が最も多く観察された。

基本的には上述のようなＩＨＣによって、ＤＬＢＣＬ拡大コホート（Ｎ＝１１）から得られた更なる治療前生検を、ＬＡＧ‐３及びＰＤ‐Ｌ１発現に関して分析した。結果を図６Ｄ及び６Ｅに示す。図６Ｄは、ＬＡＧ‐３発現が高い方から低い方への順番に、個々の患者をプロットしており、ＬＡＧ‐３発現範囲あたりの応答患者数を右側に示している。更に、ＰＤ‐Ｌ１スコア（ＣＰＳ）がプロットの下のボックス内に示されている。図６Ｅは、奏効ごとにＬＡＧ‐３発現をプロットしている。これらの結果は、より高いＬＡＧ‐３のベースラインレベルを示すＤＬＢＣＬ患者が、改善された応答を示すようであることを示している。

ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇＰａｎＣａｎｃｅｒＩＯ３６０（商標）アッセイを用いて、ＥＯＣ（Ｎ＝１４）、ＮＳＣＬＣ（Ｎ＝２５、事前予備チェックポイント治療後（Ｐ‐ＮＳＣＬＣ）を含む）、及びＴＮＢＣ（Ｎ＝１３）拡大コホートからのアーカイブ生検からの、豊富な１４の免疫細胞型及び３２の免疫腫瘍学的シグネチャを含む、遺伝子発現を調査した。ＬＡＧ‐３対ＰＤ‐１（ＰＤＣＤ１）の発現が図７にプロットされており、これは、応答する患者が、（点線の丸で示されている）ＬＡＧ‐３及びＰＤ‐１両方の高いレベルの発現を示すことを示している。ＩＦＮ‐γ遺伝子シグネチャ（ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣ１１、ＳＴＡＴ１）スコアは臨床応答ごとに図８にプロットされており、これは、部分奏効を示す患者が、高いＩＦＮ‐γ遺伝子シグネチャスコアを有することを示している。これらの研究は、奏効が、高ベースラインＬＡＧ‐３／ＰＤ‐１発現及びＩＦＮ‐γ遺伝子シグネチャスコアと関連していることを示している。

これらのデータは、（ＤＡＲＴ‐Ｉを例とする）本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子が、許容可能な安全性プロファイルを示し、また、特に比較的高レベルのＬＡＧ‐３発現を示す腫瘍を有する患者、及び比較的高いＩＦＮ‐γ遺伝子シグネチャスコアを有する患者における、抗腫瘍活性の有望なエビデンスを示したことを示す。これらのデータは、約４００ｍｇ以上の上記分子（特にＤＡＲＴ‐Ｉ）のＱ２Ｗでの（特に約４００ｍｇかつＱ２Ｗ、又は約６００ｍｇかつＱ２Ｗでの）、及び約６００ｍｇ以上の上記分子（特にＤＡＲＴ‐Ｉ）のＱ３Ｗでの（特に約６００ｍｇかつＱ３Ｗ、又は約８００ｍｇかつＱ３Ｗでの）投与を含む、上記分子に関する（特にＤＡＲＴ‐Ｉの）複数の投薬レジメンが、２３μｇ／ｍＬ以上の標的Ｃ_troughを達成することを裏付ける。代替的な投薬レジメンとしては、１００×ＲＯＥＣ₅₀以上の標的Ｃ_troughを達成するための、約１２０ｍｇ以上の上記分子のＱ２Ｗでの投与が挙げられる。これらの研究は更に、ＨＥＲ２発現性（ＨＥＲ２＋）癌の治療のための、上述の用量及びレジメンのいずれに従った本発明のＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子の、ＴＡ結合分子、特にＨＥＲ２結合分子（例えば抗ＨＥＲ２抗体）と組み合わせての投与を裏付ける。特に、Ｑ３Ｗレジメンを用いた約６００ｍｇ以上の上記分子（特にＤＡＲＴ‐Ｉ）の投与と、これもまたＱ３Ｗレジメンを用いて投与してよいＨＥＲ２結合分子等のＴＡ結合分子（例えば１５ｍｇ／ｋｇかつＱ３Ｗで投与されるマルゲツキシマブ）との組み合わせ。

実施例２
ＴＡ結合分子は、チェックポイントの発現及びＮＫ細胞活性の変化を仲介した
ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメイン及び野生型Ｆｃドメインを含むＴＡ結合分子の、免疫エフェクタ細胞、特にＮＫ細胞の表面でのチェックポイント分子の発現の変化を仲介する能力を、インビトロで評価した。更に、インビトロ細胞傷害活性（特にＮＫ細胞の細胞傷害活性）に対する影響を評価した。簡潔に述べると、マルゲツキシマブ（ＨＥＲ２のエピトープに結合し、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む、ＴＡ結合分子、即ちＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子）、トラスツズマブの複製（ＨＥＲ２と同じエピトープに結合するが、野生型Ｆｃドメインを含む、「ｒトラスツズマブ」）、又はＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）のみの存在下で、ＰＢＭＣエフェクタ細胞（０．５×１０⁶／ｍｌ）を、ＴＡＨＥＲ２に対してポジティブであるＮ８７標的細胞（ＨＥＲ２⁺⁺⁺胃癌（gastric cancer）細胞株）（０．０５×１０⁶／ｍｌ）と共にコインキュベートした（Ｅ：Ｔ比は１０：１であった）。抗体は０．００５μｇ／ｍｌ及び０．０５μｇ／ｍｌで使用され、２０ｕ／ｍｌのＩＬ‐２が培養物に添加された。１０％ＦＢＳ、１０ｍＭＨＥＰＥ緩衝液、及びペニシリン‐ストレプトマイシンが補充された、Ｌ‐グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０培地を、培養培地として使用した。

３日目に各試料の一部分を取り出し、ＮＫ細胞上でのチェックポイントタンパク質：ＣＤ１３７、ＬＡＧ‐３、ＰＤ‐１、及びＰＤ‐Ｌ１の細胞表面発現を、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）で調査した。免疫細胞サブセット、及び細胞表面でのチェックポイントタンパク質の発現を定義するために、以下のＡｂを使用した：ＣＤ３‐Ｖ５００、ＣＤ４‐ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＣＤ８‐ＦＩＴＣ、ＣＤ５６‐ＰＥ、Ｌａｇ‐３‐ＰＥ‐Ｃｙ７、ＰＤＬ‐１‐ＡＰＣ、ＣＤ１３７‐ＢＶ４２１、ＰＤ‐１‐ＢＶ６５０。細胞をＡｂのカクテルと共に、ＦＡＣＳ緩衝液中で４℃で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄することによって、細胞表面染色を実施し、続いて標識された細胞をＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。ＦＡＣＳ試料は、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメトリーを用いて取得され、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析された。代表的なＦＡＣＳプロットが図１１に示されており、チェックポイントポジティブＮＫ細胞が四角で囲まれており、パーセントが示されている。図１１で確認されるように、マルゲツキシマブは、ＣＤ１３７、ＬＡＧ‐３及びＰＤ‐Ｌ１の発現を、ｒトラスツズマブよりも大幅に上方制御した。

６日目に残りの試料の一部分を用いて、ＰＫＨ２６赤色標識Ｋ５６２細胞（ＨＥＲ２骨髄性白血病細胞株）を標的細胞としてＥ：Ｔ比０．３：１、１：１、３：１及び１０：１で使用する細胞傷害性アッセイに、エフェクタ細胞を供給した。４時間のインキュベーションの後、細胞を収集し、細胞傷害性を、製造元の説明書に従って、生細胞、アポトーシス細胞、及び死細胞を区別するためのマーカーとしての７‐ＡＡＤ及びＡｎｎｅｘｉｎＶのＦＡＣＳ分析によって決定した。各Ｅ：Ｔ比で観察されたパーセント細胞傷害性が、図１２にプロットされている。Ｋ５６２標的細胞はＨＥＲ２を発現しないため、このアッセイにおける殺滅は、Ｋ５６２標的細胞に対する抗ＨＥＲ２抗体の結合によって直接仲介されるのではなく、ＴＡポジティブ標的細胞の存在下での抗ＨＥＲ２抗体への過去の曝露によって仲介された細胞傷害活性（主にＮＫ細胞）の増強を反映したものである。図１２に示されているように、マルゲツキシマブはｒトラスツズマブに比べて、ＮＫ細胞の細胞傷害活性のより強力な増強を仲介する。これらの結果は、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含むＴＡ結合分子が、ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３発現、並びに細胞傷害活性（主にＮＫ細胞）の、より強力な仲介因子であることを示している。

ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子の、更なる免疫細胞タイプの表面上でのチェックポイント分子の発現の変化を仲介する能力を、調査した。簡潔に述べると、マルゲツキシマブ（０．５μｇ／ｍｌ）又は対照抗体（ＭＧＡＷＮ１、０．５μｇ／ｍｌ）の存在下で、ＰＢＭＣエフェクタ細胞（１．５×１０⁶／ｍｌ）を、Ｎ８７標的細胞（ＨＥＲ２⁺⁺⁺胃癌（gastric cancer）細胞株）と、E：T比１５：１で共にコインキュベートした。１０％ＦＢＳ、１０ｍＭＨＥＰＥ緩衝液、及びペニシリン‐ストレプトマイシンが補充された、Ｌ‐グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０培地を、培養培地として使用した。２日目及び３日目に、ＮＫ細胞（３日目）、単球（２日目）、ＣＤ４⁺（３日目）、及びＣＤ８⁺Ｔ細胞（３日目）上でのチェックポイントタンパク質：ＣＤ１３７、ＬＡＧ‐３、ＰＤ‐１、及びＰＤ‐Ｌ１の細胞表面発現を、ＦＡＣＳで調査した。免疫細胞サブセット、及び細胞表面でのチェックポイントタンパク質の発現を定義するために、以下の抗体（Ａｂ）を使用した：ＣＤ３‐Ｖ５００、ＣＤ４‐ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、ＣＤ８‐ＦＩＴＣ、ＣＤ１４‐ＦＩＴＣ、ＣＤ５６‐ＰＥ、Ｌａｇ‐３‐ＰＥ‐Ｃｙ７、ＰＤＬ‐１‐ＡＰＣ、ＣＤ１３７‐ＢＶ４２１、ＰＤ‐１‐ＢＶ６５０。細胞をＡｂのカクテルと共に、ＦＡＣＳ緩衝液中で４℃で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄することによって、細胞表面染色を実施し、続いて標識された細胞をＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。ＦＡＣＳ試料は、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメトリーを用いて取得され、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析された。代表的なＦＡＣＳプロットが図１３に示されており、チェックポイントポジティブ免疫細胞が四角で囲まれており、パーセントが示されている。図１３で確認されるように、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブは、調査した全ての細胞においてＬＡＧ‐３及びＰＤ‐Ｌ１発現の上方制御を仲介し、最も強力な上方制御は、単球、ＮＫ細胞、及びＣＤ８Ｔ細胞において観察された。ＣＤ１３７はＮＫで上方制御され、ＰＤ‐１はＣＤ４⁺及びＣＤ８⁺Ｔ細胞両方で上方制御された。

実施例３
インビトロ組み合わせ研究
上述のように、ＴＡ結合分子は全体として、また特にＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有するものは、チェックポイント分子ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３の上方制御を協力に仲介することが分かった。ＬＡＧ‐３及び／又はＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１阻害性チェックポイント経路をブロックするチェックポイント阻害剤と組み合わされた、ＴＡ結合分子の活性を、インビトロで調査した。簡潔に述べると、ＴＡ結合分子である（ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む）マルゲツキシマブ、若しくは（野生型Ｆｃドメインを含む）ｒトラスツズマブ、対照抗体（ＭＧＡＷＮ１、野生型ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む抗ＷＮＶｍＡｂ）、若しくはＰＢＳのみの存在下で、又はレチファンリマブ（ＰＤ‐１結合分子）、ＤＡＲＴ‐Ｉ（ＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３の両方に結合する二重特異性分子）と組み合わせて、ＰＢＭＣエフェクタ細胞（０．５×１０⁶／ｍｌ）を、Ｎ８７標的細胞（ＨＥＲ２⁺⁺⁺胃癌（gastric cancer）細胞株）と、２０：１の比で共にコインキュベートした。アッセイは、外因性ＩＬ‐２（２０ｕ／ｍｌ）を用いて又は用いずに（最適条件及び準最適条件を表す）、実施された。抗ＨＥＲ２抗体は０．００５μｇ／ｍｌ及び／又は０．０５μｇ／ｍｌで使用され、抗ＰＤ‐１抗体であるレチファンリマブは５μｇ／ｍｌで使用され、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子であるＤＡＲＴ‐Ｉは５μｇ／ｍｌで使用された。６日目に細胞をエフェクタとして収集し、Ｋ５６２標的細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）に対する細胞傷害性を、基本的に上述のように、生細胞、アポトーシス細胞、及び死細胞を区別するためのマーカーとしての７‐ＡＡＤ及びＡｎｎｅｘｉｎＶを用いたＦＡＣＳによって、決定した。代表的なドナーからの準最適条件について観察されたパーセント細胞傷害性が、図１４にプロットされている。

図１４に示されているように、このアッセイでは、ｒトラスツズマブとＰＤ‐１チェックポイント阻害剤であるレチファンリマブ、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３デュアルチェックポイント阻害剤であるＤＡＲＴ‐Ｉとの組み合わせによって、細胞傷害性の最小限の増強が観察された。対照的に、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３デュアルチェックポイント阻害剤であるＤＡＲＴ‐Ｉは、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有するＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブとの組み合わせにおいて、細胞傷害性を増強した。一部のドナーでは、ＰＤ‐１チェックポイント阻害剤であるレチファンリマブも、マルゲツキシマブの細胞傷害性を増強することが観察された。

別の研究では、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブの、単独での、又はＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３デュアルチェックポイント阻害剤であるＤＡＲＴ‐Ｉと組み合わせた場合の活性を、更に調査した。
簡潔に述べると、ＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブ（０．００５μｇ／ｍｌ）、若しくは対照抗体（ＭＧＡＷＮ１、０．００５μｇ／ｍｌ）のみの存在下で、又はＤＡＲＴ‐Ｉ（５μｇ／ｍｌ）と組み合わせて、ＰＢＭＣエフェクタ細胞（１×１０⁶／ｍｌ）を、Ｎ８７標的細胞（ＨＥＲ２⁺⁺⁺胃癌（gastric cancer）細胞株）と、１５：１の比で共にコインキュベートした。アッセイは、外因性ＩＬ‐２（２０ｕ／ｍｌ）を用いて又は用いずに（最適条件及び準最適条件を表す）、実施された。７日目に細胞をエフェクタとして収集し、ＰＫＨ２６赤色標識Ｋ５６２標的細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）に対する細胞傷害性を、製造元の説明書に従って、生細胞、アポトーシス細胞、及び死細胞を区別するためのマーカーとしての７‐ＡＡＤ及びＡｎｎｅｘｉｎＶを用いたＦＡＣＳによって、決定した。ルシフェラーゼ発現性Ｎ８７細胞（Ｅ：Ｔ＝３：１）に対する細胞傷害性を、Ｓｔｅａｄｙ‐ＧｌｏＬｕｃｉｆｅｒａｓｅＡｓｓａｙＳｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて残りの細胞ルシフェラーゼ活性を評価することによって、決定した。代表的なドナーからの準最適条件について観察されたパーセント細胞傷害性が、図１５にプロットされている。図１５に示されているように、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブを用いて調質されたＰＢＭＣは、対照Ａｂを用いて調質されたＰＢＭＣと比較して、マルゲツキシマブでオプソニン化されたＫ５６２細胞及びＨＥＲ２⁺⁺⁺Ｎ８７細胞両方に対して高い細胞傷害活性（主にＮＫ細胞）を示した。上述のように、ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子であるＤＡＲＴ‐Ｉは、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブとの組み合わせにおいて、細胞傷害性を増強した。これらの研究を合わせると、ＰＤ／ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３チェックポイント経路のデュアルチェックポイント阻害が、ＴＡ結合分子（特に増強されたＡＤＣＣ活性を有するもの）の抗腫瘍活性と相乗効果を発揮できることが示される。

実施例４
第Ｉ相臨床研究‐ＨＥＲ２＋Ａｒｍ
上述のように、進行中の第Ｉ相臨床研究では、進行性又は転移性ＨＥＲ２＋固形腫瘍（特にＨＥＲ２＋胃癌（gastric cancer）又は乳癌）に罹患した患者のコホートは、ＤＡＲＴ‐Ｉ（ＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３に結合する二重特異性分子）、並びにマルゲツキシマブ（ＨＥＲ２に結合し、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有する、ＴＡ結合分子）を投与される。

ＨＥＲ２＋固形腫瘍を有する２８人の評価可能な患者（上述の最初の５人の患者を含む）の臨床結果を、図１６にまとめる。奏効率（objective response rate：ＯＲＲ）（未確認の奏効を有する患者を含む）は、２８．６％（８／２８）であり、疾患制御率は５０％（１４／２８）であった。表１４は、これらの患者の奏効率を癌のタイプごとにまとめたものである。２８．６５％のＯＲＲは、有利なことに、ＨＥＲ２＋ｍＢＣにおけるペムブロリズマブ＋トラスツズマブの単一群多施設Ｐｈ．１ｂ／２試験で１１．５％のＯＲＲ（ｎ＝５２）が報告されている（ＨＥＲ２＋ｍＢＣ（ＰＤ‐Ｌ１ポジティブにおいて１５％のＯＲＲ（ｎ＝６／４０）；及びＰＤ‐Ｌ１ネガティブにおいて０％のＯＲＲ（ｎ＝０／１２））万能薬の研究（Loi, et al. 2019 Lancet Oncol. Mar;20(3):371-382. doi: 10.1016/S1470-2045(18)30812-X.）に匹敵するものである。治療は忍容性が良好であり、応答した患者には治療が継続され、ＨＥＲ２＋腫瘍特異的コホートへの更なる登録が進行中である。

ＬＡＧ‐３発現及びＰＤ‐Ｌ１発現の両方に関して、利用可能な治療前腫瘍生検試料を評価した。簡潔に述べると、ＬＡＧ‐３発現を、ＶｅｎｔａｎａＤｉｓｃｏｖｅｒｙＵｌｔｒａプラットフォームでのＬＡＧ‐３ＡｂクローンＥＰＲ４３９２（２）（Ａｂｃａｍ）ＩＨＣアッセイを用いて調査した。陽性は、倍率４０倍のホットスポットフィールド（ｈｏｔｓｐｏｔｆｉｅｌｄ：ＨＳＦ）あたり少なくとも１つのＬＡＧ‐３＋ｖｅ腫瘍浸潤リンパ球（tumor‐infiltrating lymphocyte：ＴＩＬ）として定義した。ＰＤ‐Ｌ１ＴＰＳ／ＣＰＳ発現は、ＡｇｉｌｅｎｔＰＤ‐Ｌ１（２２Ｃ３）ｐｈａｒｍＤｘキットの説明書に従って決定された。ＩＨＣによるＬＡＧ‐３発現は患者間で異なり、応答との相関は認められなかった。応答した患者の大半は、ＩＨＣによると、ＰＤ‐Ｌ１ネガティブ（ＰＤ‐Ｌ１発現が１以下）の腫瘍を有していたことが観察された。ＰＤ‐１及びＬＡＧ‐３デュアルチェックポイント阻害を、ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを有するＴＡ結合分子と組み合わせて利用した、この組み合わせ研究における、ＰＤ‐Ｌ１ネガティブ患者の高い応答率は、公表されているデータとは対照的であり（例えばLoi, S. et al. (2019) “Pembrolizumab Plus Trastuzumab In Trastuzumab-Resistant, Advanced, HER2-positive Breast Cancer (PANACEA): a Single-Arm, Multicentre, Phase 1b-2 Trial,” Lancet Oncol. 20(3):371-382を参照）、上記公表されているデータは、トラスツズマブ＋抗ＰＤ‐１又は抗ＰＤ‐Ｌ１抗体で治療されたＨＥＲ２＋乳癌患者の応答率は、ＰＤ‐Ｌ１ネガティブ患者では０％であり、ＰＤ‐Ｌ１ポジティブ患者でもわずか１５％であることを示している。高い応答は、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子と、ＰＤ／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント経路及びＬＡＧ‐３チェックポイント経路のデュアルチェックポイント阻害との組み合わせの相乗効果を反映している可能性がある。

ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇＰａｎＣａｎｃｅｒＩＯ３６０（商標）アッセイを用いて、マルゲツキシマブ及びＤＡＲＴ‐Ｉで治療された１９人のＨＥＲ２＋進行性固形腫瘍コホートのアーカイブ生検からの、豊富な１４の免疫細胞型及び３２の免疫腫瘍学的シグネチャを含む、遺伝子発現を調査した。ＬＡＧ‐３の正規化された発現スコア（０～１００で標準化）を、ＰＤＣＤ１に対してプロットした（図１７Ａ）。標準化されたＬＡＧ‐３及びＰＤＣＤ１発現レベルの、ベースラインからの標的病変の最良のパーセント変化に対する相関が、それぞれ図１７Ｂ及び１７Ｃにプロットされている。この遺伝子発現分析は、奏功を示した患者が、ベースラインの生検試料において、ＬＡＧ‐３及びＰＤＣＤ１ｍＲＮＡ両方の、より高い発現を示すことを示している。

この臨床試験コホートでは、ＡＤＣＣ増強ＴＡ結合分子であるマルゲツキシマブと組み合わされた、デュアルチェックポイント阻害剤であるＤＡＲＴ‐Ｉは、ＤＡＲＴ‐Ｉ単剤療法と一致する安全性プロファイルで、全体として忍容性が良好であった。ＨＥＲ２腫瘍抗原を発現する様々な腫瘍タイプ（即ちＨＥＲ２＋腫瘍）の難治性患者において、抗腫瘍活性のエビデンスが観察された。ベースラインのＬＡＧ‐３及びＰＤ‐１ｍＲＮＡ発現は、臨床応答に関連しているように見えるが、応答した患者の大半は、ベースラインのＰＤ‐Ｌ１発現が１以下（ＩＨＣによる）である。

要約すると、ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント経路及びＬＡＧ‐３チェックポイント経路の、ＤＡＲＴ‐Ｉ等の分子によるデュアルチェックポイント阻害は、ＴＡ結合分子（特にマルゲツキシマブのような、増強されたＡＤＣＣ活性を有するもの）の抗腫瘍活性と相乗効果を発揮できる。このような組み合わせは、ＴＡ結合分子を単独で、又はＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１経路のみのチェックポイント阻害と組み合わせて用いた治療よりも有効であると思われ、ＰＤ‐Ｌ１ネガティブ患者の治療に有用である。

本明細書において言及されている全ての公刊物及び特許は、個々の公刊物又は特許出願それぞれの全体が参照により本明細書に援用されていることが具体的かつ独立に指示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用されている。本発明をその具体的実施形態に関して説明したが、更なる修正形態が可能であり、本出願は、本発明が属する分野の公知の方法又は慣例の範囲内であるような、及びこれまでに挙げた必須の特徴に適用できるような、本開示からの逸脱を含む、本発明の原理に概ね従う本発明のいずれの変形、使用又は改変を包含することを意図していることを理解されたい。

Claims

ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を、それを必要とする被験者に投与するステップを含む、癌を治療する方法であって、前記方法は、前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を約１２０ｍｇ～約８００ｍｇの一律用量で前記被験者に投与するステップを含む、方法。
前記癌は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とし、前記方法は、腫瘍抗原（ＴＡ）結合分子（ＴＡ結合分子）を前記被験者に投与するステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
被験者の癌を治療する方法であって、前記癌はＴＡの発現を特徴とし、前記方法は、前記被験者に、ＴＡ結合分子と：
（ａ）二重特異性分子（ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）；又は
（ｂ）ＰＤ‐１に免疫特異的に結合する分子（ＰＤ‐１結合分子）と、ＬＡＧ‐３に免疫特異的に結合する分子（ＬＡＧ‐３結合分子）との組み合わせ；又は
（ｃ）ＰＤ‐Ｌ１及びＬＡＧ‐３の両方に免疫特異的に結合する二重特異性分子（ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子）；又は
（ｄ）ＰＤ‐Ｌ１に免疫特異的に結合する分子（ＰＤ‐Ｌ１結合分子）と、ＬＡＧ‐３結合分子との組み合わせと
を投与するステップを含む、方法。
前記ＴＡ結合分子はＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインを含む、請求項２又は３に記載の方法。
（ａ）各前記分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｂ）各前記分子は同一の組成物中にあるか；又は
（ｃ）前記ＰＤ‐１結合分子及び前記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、前記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にあるか；又は
（ｄ）前記ＰＤ‐Ｌ１結合分子及び前記ＬＡＧ‐３結合分子は同一の組成物中にあり、前記ＴＡ結合分子は別個の組成物中にある、請求項２～４のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＡ結合分子は抗体である、請求項２～５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１結合分子は抗体であり、前記ＰＤ‐Ｌ１結合分子は抗体であり、前記ＬＡＧ‐３結合分子は抗体である、請求項２～６のいずれか１項に記載の方法。
前記方法は、前記ＴＡ結合分子及び前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子を投与するステップを含む、請求項３～６のいずれか１項に記載の方法。
前記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは：
（Ａ）人工グリコフォーム；及び／又は
（Ｂ）野生型Ｆｃ領域に関連するアミノ酸置換
を含む、請求項４～８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは：
（Ａ）フコースを含有しない及び／若しくはバイセクトＯ‐ＧｌｃＮＡｃを含む複合型Ｎ‐グリコシド結合糖鎖である、人工グリコフォーム；並びに／又は
（Ｂ）以下からなる群から選択されるアミノ酸置換：
（ａ）以下からなる群から選択される１つの置換：
Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ｉ３３２Ｅ、及びＰ３９６Ｌ；
（ｂ）以下からなる群から選択される２つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ及びＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ及びＲ２９２Ｐ；
（３）Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；並びに
（４）Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅ；
（ｃ）以下からなる群から選択される３つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（４）Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；
（ｄ）以下からなる群から選択される４つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；若しくは
（ｅ）以下からなる群から選択される５つの置換：
（１）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ３９６Ｌ；並びに
（２）Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌ
を含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、請求項９に記載の方法。
前記ＡＤＣＣ増強Ｆｃドメインは、アミノ酸置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ及びＰ３９６Ｌを含み、番号付与はＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、請求項９又は１０に記載の方法。
（Ａ）前記ＴＡが表６Ａ若しくは表６Ｂから選択され；及び／又は
（Ｂ）前記ＴＡ結合分子が、表７から選択される抗体のＶＬ及びＶＨドメインを含む、
請求項２～１１のいずれか１項に記載の方法。
（Ａ）前記ＰＤ‐１結合分子は：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン；
（ｂ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体であり；
（Ｂ）前記ＰＤ‐Ｌ１結合分子は：
（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＬドメイン、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＰＤ‐Ｌ１ＶＨドメイン；
（ｂ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表２から選択される抗ＰＤ‐Ｌ１抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体であり；
（Ｃ）前記ＬＡＧ‐３結合分子は：
（ａ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン；
（ｂ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体の軽鎖及び重鎖
を含む抗体である、請求項３～７及び９～１２のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＬドメイン、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＰＤ‐１ＶＨドメイン、若しくは表１から選択される抗ＰＤ‐１抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；並びに／又は
（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＡＧ‐３ＶＨドメイン、若しくは表３から選択される抗ＬＡＧ‐３抗体のＶＨ及びＶＬドメイン；又は
（ｃ）表４～５から選択される二重特異性抗体系分子
を含む、請求項１～６、８、及び９～１２のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は：
（ａ）前記ＰＤ‐１結合ドメインのうちの２つ；及び
（ｂ）前記ＬＡＧ‐３結合ドメインのうちの２つ
を含む、請求項１～６、８、９～１２、及び１４のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号３５のＰＤ‐１ＶＬドメイン、配列番号３９のＰＤ‐１ＶＨドメイン、配列番号５１のＬＡＧ‐３ＶＬドメイン、及び配列番号５５のＬＡＧ‐３ＶＨドメインを含む、請求項１～６、８、９～１２、及び１４～１５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は前記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、Ｆｃ領域及びヒンジドメインを含む、請求項１～６、８、９～１２、及び１４～１６のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｆｃ領域及び前記ヒンジドメインはいずれもＩｇＧ４アイソタイプのものであり、前記ヒンジドメインは安定化変異を含む、請求項１７に記載の方法。
前記Ｆｃ領域は、変異型Ｆｃ領域であって：
（ａ）ＦｃγＲに対する前記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する、１つ以上のアミノ酸修飾；及び／又は
（ｂ）前記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する１つ以上のアミノ酸修飾
を含む変異型Ｆｃ領域である、請求項１７又は１８に記載の方法。
（ａ）ＦｃγＲに対する前記変異型Ｆｃ領域の親和性を低減する前記修飾は、Ｌ２３４Ａ；Ｌ２３５Ａ；又はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み；
（ｂ）前記変異型Ｆｃ領域の血清半減期を延長する前記修飾は、Ｍ２５２Ｙ；Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；又はＫ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋの置換を含み、
番号付与は前記Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである、請求項１９に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、配列番号５９の２つのポリペプチド鎖、及び配列番号６０の２つのポリペプチド鎖を含む、請求項１～６、９～１２、及び１４～２０のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は前記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約３００ｍｇの一律用量で投与される、請求項１～６、９～１２、及び１４～２１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は前記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で投与される、請求項１～６、９～１２、及び１４～２１のいずれか１項に記載の方法。
前記一律用量は約２週間に１回投与される、請求項１～６、９～１２、及び１４～２３のいずれか１項に記載の方法。
前記一律用量は約３週間に１回投与される、請求項１～６、９～１２、及び１４～２３のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は前記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約２週間に１回投与される、請求項１～６、９～１２、１４～２１、２３、及び２４のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は前記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、約６００ｍｇの一律用量で約３週間に１回投与される、請求項１～６、９～１２、１４～２１、２３、及び２５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤ‐１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子又は前記ＰＤ‐Ｌ１×ＬＡＧ‐３二重特異性分子は、静脈内（ＩＶ）注入によって投与される、請求項１～６、９～１２、及び１４～２７のいずれか１項に記載の方法。
前記癌は：副腎癌、エイズ関連癌、歯槽軟部肉腫、肛門癌（肛門管扁平上皮癌（ＳＣＡＣ）を含む）、膀胱癌、骨癌、脳及び脊髄癌、乳癌（ＨＥＲ２⁺乳癌、又はトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を含む）、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌（ＨＰＶ関連子宮頸癌を含む）、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎明細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、子宮内膜癌（選択されていない子宮内膜癌、ＭＳＩ‐ｈｉｇｈ子宮内膜癌、ｄＭＭＲ子宮内膜癌、及び／又はＰＯＬＥエキソヌクレアーゼドメイン変異ポジティブ子宮内膜癌を含む）、ユーイング肉腫、骨格外粘液型軟骨肉腫、胆嚢癌又は胆管癌（bile duct cancer）（胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）を含む）、胃癌（gastric cancer）、食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌（頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含む）、血液悪性腫瘍、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病（急性骨髄性白血病を含む）、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ）を含む）、リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、肺癌（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む）、髄芽腫、黒色腫（ブドウ膜黒色腫を含む）、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫（中皮咽頭癌を含む）、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌（転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）を含む）、後部ブドウ膜黒色腫、腎転移癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、小児期の小円形青色細胞腫瘍（神経芽腫、及び横紋筋肉腫を含む）、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、並びに子宮癌からなる群から選択される、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
前記癌は：肛門癌、乳癌、胆管癌（bile duct cancer）、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、卵巣癌、及び前立腺癌からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
前記癌は：ＨＥＲ２⁺乳癌、ＴＮＢＣ、胆管癌（cholangiocarcinoma bile duct cancer）、ＨＰＶ関連子宮頸癌、ＳＣＣＨＮ、ＨＣＣ、ＳＣＬＣ又はＮＳＣＬＣ、ＮＨＬ、前立腺癌、胃癌（gastric cancer）、及びＧＥＪ癌からなる群から選択される、請求項２８又は２９に記載の方法。
前記ＴＡ結合分子は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）を含むＨＥＲ２結合ドメインを含む、ＨＥＲ２結合分子であり：
（Ａ）前記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）は、配列番号６１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含むマルゲツキシマブの軽鎖可変ドメインであり、前記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）は、配列番号６６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むマルゲツキシマブの重鎖可変ドメインであるか；
（Ｂ）前記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はトラスツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、前記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はトラスツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；
（Ｃ）前記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はペルツズマブのＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、前記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はペルツズマブのＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含むか；又は
（Ｄ）前記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ_HER2）はｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、前記重鎖可変ドメイン（ＶＨ_HER2）はｈＨＥＲ２ＭＡＢ‐１のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、
請求項２～３１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＨＥＲ２結合分子は抗ＨＥＲ２抗体である、請求項２～３２のいずれか１項に記載の方法。
前記抗ＨＥＲ２抗体はマルゲツキシマブであり、前記方法は、マルゲツキシマブを、約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回投与するステップを含む、請求項３３に記載の方法。
前記方法は化学療法剤を投与するステップを更に含む、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の方法。
前記癌はＨＥＲ２発現性癌である、請求項２～３５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＨＥＲ２発現性癌は：乳癌、転移性乳癌、膀胱癌、胃癌（gastric cancer）、ＧＥＪ癌、卵巣癌、膵臓癌、及び胃癌（stomach cancer）からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
前記ＴＡ結合分子は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含むＢ７‐Ｈ３結合ドメインを含む、Ｂ７‐Ｈ３結合分子であり：
前記ＶＬは配列番号７１のＣＤＲ_L１、ＣＤＲ_L２、及びＣＤＲ_L３を含み、前記ＶＨは配列番号７６のＣＤＲ_H１、ＣＤＲ_H２、及びＣＤＲ_H３を含む、請求項２～３１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＡ結合分子はエノブリツズマブであり、前記方法は、エノブリツズマブを約６ｍｇ／ｋｇ～約１８ｍｇ／ｋｇの投薬量で約３週間に１回投与するステップを含む、請求項２～３１及び３８のいずれか１項に記載の方法。
前記癌はＢ７‐Ｈ３発現性癌である、請求項２～３１及び３８～３９のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｂ７‐Ｈ３発現性癌は：肛門癌、ＳＣＡＣ、乳癌、ＴＮＢＣ、頭頸部癌、ＳＣＣＨＮ、肺癌、ＮＳＣＬＣ、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、前立腺癌、及びｍＣＲＰＣからなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
前記ＴＡ結合分子は静脈内（ＩＶ）注入によって投与される、請求項２～４１のいずれか１項に記載の方法。
ＬＡＧ‐３を発現する細胞は、前記治療前の前記癌の生検中に存在する、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。
ＰＤ‐１を発現する細胞は、治前記療前の前記癌の生検中に存在する、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
前記治療前の前記癌の細胞の表面におけるＰＤ‐Ｌ１の発現は、合計陽性スコア（ＣｏｍｂｉｎｅｄＰｏｓｉｔｉｖｅＳｃｏｒｅ：ＣＰＳ）又は腫瘍比率スコア（ＴｕｍｏｒＰｒｏｐｏｒｔｉｏｎＳｃｏｒｅ：ＴＰＳ）を用いて判定した場合に１％未満である、請求項２～４４のいずれか１項に記載の方法。