JP2023500277A - Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療におけるベト細胞の使用 - Google Patents

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Abstract

Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患を治療又は予防する方法を開示する。この方法は、（ａ）未熟造血細胞を対象に移植することと、（ｂ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することを含み、抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる。【選択図】 図１

Description

本願は、２０１９年１１月５日出願の米国仮特許出願第６２／９３０，６２１号の優先権の利益を主張するものであり、当該特許出願の全内容を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
本願の出願と同時に提出された、２０２０年１１月４日作成の２９７７バイトのＡＳＣＩＩファイル「８４７５１ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
本発明は、その幾つかの実施形態において、Ｔ細胞媒介（介在）性自己免疫疾患の治療における造血幹細胞移植の補助療法としての、セントラルメモリーＴリンパ球表現型を含む寛容誘導抗第三者（anti-third party）細胞の使用に関する。
自己反応性Ｔリンパ球は、自己免疫性１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）及びセリアック病等の自己免疫疾患において鍵を握っている。このような疾患では、重要な自己抗原に対する免疫寛容の破綻により、患者自身のＴ細胞による様々な器官への攻撃が引き起こされる。新しい免疫抑制の生物学的製剤の成功にもかかわらず、このような薬物はいずれも、薬物を使用しない疾患寛解の永続的な状態をもたらすことがなく、自己寛容の生理学的機構を回復させることもない。
例えば、Ｔ１ＤＭは、インスリン分泌β細胞に対する自己免疫攻撃とそれに続くインスリンの欠乏に起因する。Ｔ１ＤＭの治癒には、膵島移植又は内因性β細胞再生の増強によるインスリン分泌β細胞の再供給と自己免疫の回復が必要である。
膵臓自己抗原に対する寛容誘導は、Ｔ１ＤＭの治療における有望なアプローチである。この目標は、診断後すぐに免疫切除術を行い、その後、自家造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を行って糖尿病につながる免疫反応を少なくとも一時的に緩和することによって部分的に達成することができる。しかし、自家ＨＳＣＴを受けたＴ１ＤＭ患者の多くは最終的に再発する［Snarski E. et al., Bone marrow Transplantation (2016) 51, 398-402］。従って、同種異系ＨＳＣＴの方法を開発して永続的な非自己免疫ＴＣＲレパートリーを提供することは、そのようなプロトコルがドナー型キメリズムを安全に達成できるのであれば、有望な治療アプローチとなり得る。従って、毒性を最小限に抑え、ＧＶＨＤのリスクを低減させる穏やかな前処置下でのＴ細胞枯渇同種異系ＨＳＣＴ（ＴＤ－ＨＳＣＴ）の移植は魅力的な治療選択肢となる。しかし、Ｔ１ＤＭにおいて前処置軽減後の移植片拒絶反応を克服することは大きな課題である。
Reisnerとその共同研究者は、ドナー由来のベト細胞を使用してＴＤ－ＨＳＣＴの拒絶反応を防ぐことができることを野生型マウスで以前に実証した。ベト活性は、Millerによって最初に定義され［Miller, R. G, Nature (1980) 287; 544-54］、ベト細胞自身が提示する抗原に対する宿主ＣＴＬ前駆体（ＣＴＬｐ）を攻撃する特定の細胞集団の能力に基づいている。この応答によって、病原体を認識する細胞等、ベト細胞を標的としない細胞は温存される。文献に記載されている様々なベト細胞集団の中で、セントラルメモリーＣＤ８Ｔ細胞は移植時に最も強いベト活性を示すが、顕著な移植片対宿主（ＧＶＨ）活性も備えている。Reisnerとその共同研究者は、セントラルメモリー表現型の発現に適した培養条件下で、第三者ＭＨＣやウイルス抗原に対するナイーブ又はメモリーＣＤ８Ｔ細胞を増殖させることによってＧＶＨ反応性を克服した。このような抗第三者セントラルメモリーＣＤ８Ｔ細胞（Ｔｃｍ）は顕著なベト活性を備えているが、完全に不適合のレシピエントではＧＶＨ反応性を効果的に枯渇させる［Reisner Y, Or-Geva N. Semin. Hematol. (2019) 56(3): 173-182］。
ＧＶＨ反応性を有さない寛容誘導細胞を生成し、それをグラフト移植の補助療法として使用するための様々なアプローチが企図されているが、その幾つかを次にまとめる。
国際公開第２００１／０４９２４３号には、非アロ反応性抗第三者細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が開示されており、この非アロ反応性抗第三者ＣＴＬは、外因性ＩＬ－２の非存在下でドナーのＴリンパ球を第三者刺激物に対向させて生成する。このアプローチは、活性化した細胞傷害性Ｔリンパ球前駆体（ＣＴＬｐ）のみが初代培養におけるＩＬ－２欠乏に耐えることができるという観察に基づいている（ＩＬ－２飢餓は非誘導Ｔ細胞のアポトーシスをもたらす）。このような抗第三者ベトＣＴＬを（移植片と共に）レシピエントに導入すると、移植片ＧＶＨＤを引き起こすことなく移植片拒絶反応を防げた。
国際公開第２００７／０２３４９１号には、対象における非同系移植片の移植片拒絶反応を低減又は防止するための寛容原性細胞の使用が開示されている。開示されている寛容原性Ｔ制御性細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞）は、対象及び移植片の両方と非同系である任意のドナーから得ることができる（「第三者」寛容原性細胞）。移植片（例えば、骨髄）は、対象と同種異系又は異種である任意の移植片ドナーから得ることができる。
国際公開第２００２／１０２９７１号には、ドナーからレシピエントに移植された移植片に対する寛容性を誘導するための、強化されたベト活性を含む培養造血前駆細胞（ＨＰＣ）の使用が開示されている。開示されている寛容原生細胞は、好ましくはＣＤ３３を発現し、移植片（例えば、細胞又は移植臓器）の移植前、移植と同時又は移植後に投与される。
国際公開第２０１０／０４９９３５号及び第２０１２／０３２５２６号には、Ｔｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を含む単離細胞集団が開示されており、この細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる。具体的には、国際公開第２０１０／０４９９３５号及び第２０１２／０３２５２６号では、抗第三者Ｔｃｍ細胞と共に未熟造血幹細胞を同時移植することが教示されている。抗第三者Ｔｃｍ細胞の使用によって、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を伴わない未熟造血細胞の生着が可能になった。
国際公開第２０１３／０３５０９９号及び第２０１８／００２９２４号には、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞を含む単離細胞集団を生成する方法が開示されており、この細胞は寛容誘導細胞であり、及び／又は抗疾患活性を備えており、移植後にリンパ節にホーミングすることができる。
本発明の幾つかの実施形態の一様相によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患を治療又は予防する方法であって、（ａ）未熟造血細胞を対象に移植することと、（ｂ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することを含み、抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができ、それによって対象のＴ細胞媒介性自己免疫疾患を治療する方法が提供される。
本発明の幾つかの実施形態の一様相によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患の治療又は予防に使用するための、未熟造血細胞移植片、および治療有効量の非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団であって、当該細胞はセントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含み、寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる細胞の単離集団、が提供される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を未熟造血細胞移植片と同時投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を未熟造血細胞移植片の投与後に投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を未熟造血細胞移植片の投与後１～２０日目に投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を理想体重１ｋｇ当たり少なくとも０．５×１０６個のＣＤ８＋細胞の用量で投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を理想体重１ｋｇ当たり５×１０６～１０×１０６個のＣＤ８＋細胞の用量で投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を移植片拒絶反応の抑制及び／又はドナー特異的寛容の誘導のために使用する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を移植片拒絶反応の抑制及び／又はドナー特異的寛容の誘導のための補助療法として使用する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、
（ａ）サイトカインを除去した培養液中で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を１種又は複数種（以降、「１種以上」と記載）の第三者抗原と接触させ、抗原反応性細胞を富化させることと、
（ｂ）工程（ａ）で得た細胞をサイトカインの存在下で培養し、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞を増殖させ、それによって非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を生成すること
を含む方法によって、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団が生成される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、１種以上の第三者抗原と接触させる前にＰＢＭＣからＣＤ４＋及び／又はＣＤ５６＋発現細胞を枯渇させることを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、ＣＤ４５ＲＡ＋発現細胞を選択してＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ８＋表現型を発現するナイーブＴ細胞の集団を得ることを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、ＣＤ４５ＲＡ＋発現細胞を枯渇させてＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ８＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を富化させた集団を得ることを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、工程（ａ）の１種以上の抗原との接触はＩＬ－２１の存在下で行う。
本発明の幾つかの実施形態によれば、工程（ａ）で得た細胞をサイトカインの存在下で培養することは、細胞をＩＬ－１５の存在下で培養することを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、工程（ａ）で得た細胞をサイトカインの存在下で培養することは、細胞をＩＬ－２１、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７の存在下で培養することを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、１種以上の抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患関連抗原、タンパク質抽出物、精製タンパク質及び合成ペプチドから成る群より選択される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、１種以上の抗原は、自己抗原提示細胞、非自己抗原提示細胞、人工媒体又は人工抗原提示細胞によって提示される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、１種以上の抗原はＰＢＭＣと同じ起源の抗原提示細胞によって提示される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、１種以上の抗原は、末梢血リンパ球、脾臓又はリンパ節から精製された細胞、サイトカイン動員ＰＢＬ、インビトロ増殖抗原提示細胞（ＡＰＣ）、インビトロ増殖樹状細胞及び人工抗原提示細胞から成る群より選択される刺激細胞を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ＋シグネチャーを選択することを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、未熟造血細胞はＴ細胞枯渇未熟造血細胞を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、未熟造血細胞は対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、未熟造血細胞はＣＤ３＋及び／又はＣＤ１９＋発現細胞が枯渇している。
本発明の幾つかの実施形態によれば、未熟造血細胞は対象の理想体重１ｋｇ当たり５×１０５個未満のＣＤ３＋発現細胞を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、未熟造血細胞移植片は対象と非同系である。
本発明の幾つかの実施形態によれば、未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を同一のドナーから得る。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、（例えば、移植の前に）非骨髄破壊的前処置下で対象を前処置することを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、非骨髄破壊的前処置（例えば、移植前前処置）を更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非骨髄破壊的前処置は、全身照射（ＴＢＩ）、部分身照射（ＴＬＩ）、化学療法剤、抗体免疫療法又は共刺激遮断の内の少なくとも１種を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ＴＢＩは１～６Ｇｙの範囲内の照射線量（例えば、単回照射線量又は分割照射線量）を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ＴＢＩは移植の－３日目～０日目のいずれか１日に施される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ＴＢＩは移植前の－３日目～－１日目のいずれか１日に施される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ＴＢＩは移植の１日前又は２日前に施される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、化学療法剤は、エベロリムス、フルダラビン、シクロホスファミド、ブスルファン、トリスルファン、メルファラン又はチオテパの内の少なくとも１種を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、治療有効量のラパマイシンを対象に投与することを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、治療有効量のラパマイシンを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、対象の理想体重１キログラム当たり１日当たり少なくとも０．１ｍｇのラパマイシンを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ラパマイシンを移植の－１日目～＋４日目に対象に投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非骨髄破壊的前処置はＴ細胞減量を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、Ｔ細胞の減量（debulking）は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体又は抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体の内の少なくとも１種によって行う。
本発明の幾つかの実施形態によれば、非骨髄破壊的前処置は治療有効量のフルダラビンを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、治療有効量のシクロホスファミドを更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、治療有効量のシクロホスファミドは、対象の理想体重１キログラム当たり２５～２００ｍｇを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、シクロホスファミドを移植の＋３日目及び＋４日目に対象に投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、
（ａ）非骨髄破壊的前処置下で対象を前処置することにおいて、非骨髄破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）と免疫抑制剤を含み、ＴＢＩと免疫抑制剤を移植の－４日目～＋４日目に施す前処置と、
（ｂ）用量分のＴ細胞枯渇未熟造血細胞を対象に移植することにおいて、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む移植と、
（ｃ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することにおいて、抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる、投与と、
を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、免疫抑制剤はラパマイシンを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ラパマイシンを移植の－１日目～＋４日目に投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ＴＢＩを移植の－３日目～０日目に施す。
本発明の幾つかの実施形態によれば、ＴＢＩを移植前－１日目に施す。
本発明の幾つかの実施形態によれば、工程（ｂ）と工程（ｃ）を同時に行う。
本発明の幾つかの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の移植後１日目～２０日目に非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団を投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、
（ａ）非骨髄破壊的前処置下で対象を前処置することにおいて、非骨髄破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）と化学療法剤を含み、ＴＢＩと化学療法剤を移植の－６日目～０日目に施す前処置と、
（ｂ）用量分のＴ細胞枯渇未熟造血細胞を対象に移植することにおいて、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む移植と、
（ｃ）治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することにおいて、治療有効量のシクロホスファミドは対象の理想体重１キログラム当たり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含み、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の移植後＋３日目と＋４日目に２回投与で治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することと、
（ｄ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することにおいて、抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができ、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の移植後＋５日目～＋１０日目に非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団を投与することと
を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、化学療法剤はフルダラビンを含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、移植前－６日目～－３日目にフルダラビンを投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、移植前－１日目にＴＢＩを施す。
本発明の幾つかの実施形態によれば、本方法は、工程（ａ）の前にＴ細胞減量の実施を更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、移植前－９日目～－７日目に投与する抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）によってＴ細胞減量を行う。
本発明の幾つかの実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の移植後＋７日目に非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団を投与する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患は、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、橋本甲状腺炎、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、非感染性ぶどう膜炎、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、免疫性血小板紫斑病（ＩＴＰ）、慢性糸球体腎炎、重症筋無力症、全身性強皮症、多発性筋炎、及びアジソン病から成る群より選択される。
本発明の幾つかの実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）である場合、移植片は膵臓細胞又は組織移植片を更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、膵臓細胞又は組織移植片は、未熟造血細胞移植片及び／又は非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団と同一のドナーに由来する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が原発性胆汁性肝硬変又は自己免疫性肝炎である場合、移植片は肝細胞又は組織移植片を更に含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、肝細胞又は組織移植片は、未熟造血細胞移植片及び／又は非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団と同一のドナーに由来する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、対象はヒト対象である。
特に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術及び／又は科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様の又は等価な方法及び材料を、本発明の実施形態の実践又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び／又は材料を下に記載する。矛盾する場合、定義を含む特許明細書が優先する。加えて、材料、方法、及び実施例は単なる例示であり、必ずしも限定を意図するものではない。
本発明の幾つかの実施形態について、その例示のみを目的として添付の図面を参照して本明細書に記載する。以下、特に図面を詳細に参照して示す細部は、例示を目的とし、また本発明の実施形態の詳細な説明を目的とすることを強調する。同様に、図面と共に説明を見ることで、本発明の実施形態をどのように実践し得るかが当業者には明らかとなる。
図１は、Ｔ細胞枯渇骨髄移植の減量強度（強度減弱型）前処置（ＲＩＣ）プロトコルの概略図である。 図２Ａおよび図２Ｂは、ＮＯＤマウスにおけるＭＨＣ異種非骨髄破壊的骨髄移植（ＢＭＴ）後の糖尿病無しの生存と移植関連死亡率を示す。０日目に５×１０６個のＴｃｍと共にメガ用量のＮｕＢＭ（Ｈ－２ｂ）細胞をＮＯＤ（Ｈ－２ｄ）レシピエントマウスに移植。宿主を４．５ＧｙのＴＢＩで前処置し、－１日目～＋４日目にラパマイシン（１２．５ｍｇ／ｋｇ）で処理した。対照群には何の処理も行わなかったか、又は前処置はしたが移植は行わなかった。（図２Ａ）糖尿病無しの生存を示すカプランマイヤー曲線。（図２Ｂ）糖尿病に非関連の死亡率を示すカプランマイヤー曲線。 同上 図３のＡ～Ｊは、ＮＯＤマウスにおける減量強度骨髄移植によって生着を可能にし、糖尿病の発症を予防することを示す。０日目に５×１０６個のＴｃｍと共にメガ用量のＣ５７ＢＬ／６ヌードマウス（Ｈ－２ｂ）ＢＭ細胞をＮＯＤ（Ｈ－２ｄ）レシピエントマウスに移植してから６か月後のドナー型キメリズム。宿主を４．５ＧｙのＴＢＩで前処置し、－１日目～＋４日目にラパマイシン（１２．５μｇ／マウス）を注入した。対照群には前処置やＢＭ移植を行わなかった。（図３のＡ）末梢血中のドナー細胞の割合は、抗ドナー及び抗宿主（Ｈ－２ｄ及びＨ－２ｂ）抗体を使用したＦＡＣＳ散布図によって分析した。各ドットは該当群に属する１匹のマウスを表す。（図３のＢ～Ｆ）処理群（４．５Ｇｙ＋Ｒａｐａ＋ＢＭ＋Ｔｃｍ）と未処理マウスの脾臓及び血液由来のＣＤ４Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋）及びＢ細胞（ＣＤ４５＋ＣＤ３－ＣＤ１９＋）のフローサイトメトリー分析。（図３のＧ～Ｊ）処理群（４．５Ｇｙ＋Ｒａｐａ＋ＢＭ＋Ｔｃｍ）と未処理マウスの脾臓由来のＤＣ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣ－ＩＩ＋）とマクロファージ（ＣＤ４５＋ＣＤ１１ｂ＋Ｆ４／８０＋）のフローサイトメトリー分析（Ｎ≧３）。 同上 同上 同上 図４のＡ～Ｂは、ＮＯＤマウスにおける不適合ＭＨＣ非骨髄破壊的ＢＭＴ後の糖尿病無しの生存と移植関連死亡率を示す。０日目に５×１０６個のＴｃｍと共にメガ用量のＣ５７ＢＬ／６ヌードマウス（Ｈ－２ｂ）細胞をＮＯＤ（Ｈ－２ｄ）レシピエントマウスに移植。宿主を４．５ＧｙのＴＢＩで前処置し、－１日目～＋４日目にラパマイシン（１２．５μｇ／マウス）で処理した。対照群には何の処理も行わなかったか、又は前処置はしたが移植は行わなかった。（図４のＡ）糖尿病無しの生存を示すカプランマイヤー曲線。（図４のＢ）糖尿病に非関連の死亡率を示すカプランマイヤー曲線。 図５は、ＮＯＤマウスにおける不適合ＭＨＣ非骨髄破壊的ＢＭＴ後の糖尿病無しの生存、移植関連の死亡率及び疾患死亡率を示す表である。４種の独立した実験から得た詳細なデータを示す。 図６のＡ～Ｄは、ドナー型ＣＤ８＋ベト細胞が移植後１年経過しても宿主のリンパ器官で生存することを示す写真である。０日目に５×１０６個のＴｃｍ－ＧＰＦと共にメガ用量のＣ５７ＢＬ／６ヌードマウス（Ｈ－２ｂ）ＢＭ細胞をＮＯＤ（Ｈ－２ｄ）レシピエントマウスに移植してから１年後のＧＦＰ標識Ｔｃｍ細胞の存在。宿主を４．５ＧｙのＴＢＩで前処置し、－１日目～＋４日目にラパマイシン（１２．５μｇ／マウス）を注入した。３匹のマウスのリンパ器官を評価した。二光子レーザー走査型顕微鏡（Ｚｅｉｓ社）により撮像。（図６のＡ）膝窩リンパ節、（図６のＢ）膝窩リンパ節（拡大撮影）、（図６のＣ）腸間膜リンパ節、及び（図６のＤ）脾臓。 図７のＡ～Ｂは、Ｔ細胞レパートリー分析を示す。（図７のＡ）異なるマウス群で共通するｂ鎖配列のＣＤＲ３アミノ酸の数を示すベンプロットである。注目すべきは、処理したマウスでは共通するβ鎖配列のアミノ酸が少ないことである。（図７のＢ）Ｔ細胞型のＶβ使用－ＰＣ解析。ＰＣ１ではＣＤ４細胞、ＣＤ８細胞及びＣＤ２５細胞をそれぞれ分離する。ＰＣ２では処理マウスと未処理マウスのクローンを分離する。 図８は、移植後のＮＯＤマウスに自己免疫性ＴＣＲが見出されないことを示す表である。自己免疫に関連するＣＤＲ３βアミノ鎖は、糖尿病発症前後のＮＯＤマウスで示されたが、移植後のＮＯＤマウスでは見られなかった。
本発明は、その幾つかの実施形態において、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療における造血幹細胞移植の補助療法としてのセントラルメモリーＴリンパ球表現型を含む寛容誘導抗第三者細胞の使用に関する。
本発明の原理と作用は、図面とそれに付随する説明を参照することによってより良く理解することができる。
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、必ずしもその用途が、以下の記載に示すか又は実施例で例示する詳細に限定されるものではないことを理解するべきである。本発明は、他の実施形態が可能であり、また、様々な手段で実施又は実行することが可能である。また、本明細書で使用される語句や用語は、説明のためのものであり、限定的なものと見なされるべきではないことを理解されたい。
自己反応性Ｔリンパ球は、自己免疫性１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及びセリアック病等の自己免疫疾患において重要な役割を担っている。このような疾患では、重要な自己抗原に対する免疫寛容の破綻により、患者自身のＴ細胞による様々な器官への攻撃が引き起こされる。同種異系造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）は、自己免疫における免疫系を「リセット」できる可能性があり、永続的な非自己免疫性ＴＣＲレパートリーを提供することができるが、このようなプロトコルが、毒性を最小限に抑え、移植片拒絶反応とＧＶＨＤのリスクを低減させてドナー型キメリズムを安全に達成できるのであれば、有望な治療アプローチとなり得る。
本発明者らは、本発明を実用化する一方で、第三者刺激によって生成したドナー由来のベト細胞が、Ｔ１ＤＭ等のＴ細胞媒介性自己免疫疾患の治療における移植片拒絶反応やＨＳＣＴのＧＶＨＤの予防に対し安全且つ効率的に使用できることを明らかにした。
以下及び後述の実施例で示すように、本発明者らは、困難な実験を通じて、Ｔ細胞枯渇ＭＨＣ異種骨髄細胞と抗第三者ベトＴｃｍ細胞の移植を含む自己免疫性１型糖尿病の治療のための低毒性プロトコルを明らかにした（図１参照）。この治療プロトコルによれば、対象は先ず、－１日目の全身照射（ＴＢＩ）と－１日目～＋４日目の短期ラパマイシンを含む減量強度前処置によって処理し、その後、抗第三者ベトＴｃｍ細胞（０日目）と共にＴ細胞枯渇骨髄移植（０日目）を行う。このプロトコルにより、生着したマウスに移植片拒絶反応やＧＶＨＤがなく、糖尿病の無い長期生存が可能になった（図２Ａと２Ｂ、図３のＡ及び図４のＡ～Ｂを参照）。最小限の前処置を用いたが、移植マウスのキメリズム分析では、骨髄細胞、樹状細胞及びリンパ系細胞等、免疫系の様々な細胞型で多系列キメリズムが示され、これは宿主の免疫系が大きく変化したことを示唆している（図３のＢ～Ｊを参照）。注目すべきことに、ＧＦＰ同種異系Ｔｃｍを使用した処理ＮＯＤマウスのリンパ器官の分析によって、移植後１年まで脾臓や各種リンパ節でのＴｃｍの生存が分かった（図６のＡ～Ｄを参照）が、これは永続的な免疫寛容が得られたことを示している。更に、ＴＣＲ配列分析の結果、自己免疫性Ｔ細胞クローンに典型的な糖尿病自己免疫に関連する配列は処理マウスには見られなかった（図７のＡ～Ｂ参照）が、これは、移植マウスにおける疾患発症予防の根底には欠失ベースの機序があることを示唆している。配列分析の結果、処理マウスと未処理マウスではＣＤ８とＣＤ４のｖβ使用量が異なることも分かった（図８参照）。これらの結果から、ＢＭ多能性細胞は同一の胸腺で「生育された」にもかかわらず、骨髄移植時に異なるＴ細胞が生成され、自己免疫が妨げられたことが分かる。
以上をまとめると、抗第三者ベトＴｃｍ細胞は、ＧＶＨＤや移植片拒絶反応のない短期間の減量強度前処置に続いてＭＨＣ異種ＨＳＣＴの移植を可能にすることによって、Ｔ１ＤＭ等のＴ細胞媒介性自己免疫疾患の治療を提供する。
従って、本発明の一様相によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患を治療又は予防する方法であって、（ａ）未熟造血細胞を対象に移植することと、（ｂ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することを含み、抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる方法が提供される。
本発明の他の様相によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患の治療又は予防に使用するための、未熟造血細胞移植片と、治療有効量の非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団であって、当該細胞はセントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含み、寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる細胞の単離集団とが提供される。
本明細書で使用される「治療する」という用語は、病態の進行の抑止、実質的な阻害、遅延又は逆転、病態の臨床的又は審美的な症状の実質的な寛解、或いは病態の臨床的又は審美的な症状の悪化の実質的な予防を含む。
本明細書で使用される「予防する」という用語は、疾患又は障害のリスクがある可能性はあるが、疾患又は障害（例えば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患）を有するとまだ診断されていない対象において、疾患、障害又は病態が発症しないようにすることを意味する。
本明細書で使用される「対象」又は「～を必要とする対象」という用語は、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患している、又はＴ細胞媒介性自己免疫疾患を発症するリスクが高い（例えば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の遺伝的素因を有する）いずれかの年齢の哺乳動物、好ましくはヒト、男性又は女性を意味する。通常、対象は、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防のための未熟造血細胞の移植を必要としている（本明細書ではレシピエントとも称される）。
本明細書で使用される「Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患」という用語は、体内に通常存在するタンパク質や組織等の物質に応答してＴリンパ球が関与する免疫応答が生じ、そのような応答が（例えば、１種以上の自己抗原に対して）望ましくない疾患又は障害を意味する。
自己免疫疾患には、セリアック病等の外来抗原によって引き起こされる疾患も含まれることがある。
自己免疫疾患の非限定的な例としては、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、抗シンセターゼ症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性ポリエンドクリン症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性ぶどう膜炎（例えば、非感染性ぶどう膜炎）、ベーチェット病、セリアック病、慢性糸球体腎炎、寒冷凝集素病、クローン病、皮膚筋炎、皮膚筋炎、糖尿病１型（１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ））、好酸球性筋膜炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板性紫斑病（ＩＴＰ）、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ミラー・フィッシャー症候群、混合性結合組織病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、ナルコレプシー、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、再発性多発性軟骨炎、関節リウマチ（ＲＡ）、リウマチ熱、全身性強皮症、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、未分化結合組織病、血管炎、及びウェゲナー肉芽腫症が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患は自己免疫性１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）である。
１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）は、膵臓ランゲルハンス島のインスリン分泌β細胞の臓器特異的な自己免疫性破壊の結果であり、最終的には体内でインスリンが産生されなくなる。十分なインスリンがないと、ブドウ糖は細胞に取り込まれずに血流に蓄積し、体がこのブドウ糖をエネルギーとして使用できなくなる。
１型糖尿病は年齢に関係なく発症し得るが、小児、青年又は若年成人で診断されることが多い。β細胞の破壊は、疾患の症状が現れるかなり前から始まる。臨床的発症時には、β細胞は全体の１０％しか残っていないと推定されている。従って、この疾患が診断された際には、重大なβ細胞の枯渇とインスリン依存が既に起こっている可能性がある。
Ｔ１ＤＭの症状としては、強い喉の渇きと空腹感、頻尿、疲労、目のかすみ、足のしびれやうずき、意図しない体重減少、深く速い呼吸、皮膚や口の乾燥、顔の紅潮、果実のような口臭、吐き気や嘔吐、水分を抑えることができない、胃痛が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療は、対象へ未熟造血細胞を移植することで行われる（affected）。
本明細書で使用される「移植」という語句は、体細胞（例えば、単一細胞又は細胞群）を対象に投与することを意味する。
本明細書で使用される「未熟造血細胞」という語句は、前駆造血細胞（例えば、造血幹細胞）を含む造血組織又は細胞調製物を意味する。このような組織／細胞調製物は、生体試料、例えば、骨髄、動員末梢血（例えば、濃度を高めるための動員ＣＤ３４＋発現細胞）、臍帯血（例えば、臍帯）、胎児肝臓、卵黄嚢及び／又は胎盤を含むか、又はそれらに由来する。更に、精製ＣＤ３４＋細胞又はＣＤ１３１＋細胞等の他の造血幹細胞は、エクスビボ増殖の有無にかかわらず、本開示内容に従って使用することができる。
一実施形態によれば、未熟造血細胞はＴ細胞枯渇未熟造血細胞を含む。
本明細書で使用される「Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞」という語句は、Ｔリンパ球が枯渇した前駆造血細胞の集団を意味する。Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、例えば、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ３３＋細胞及び／又はＣＤ５６＋細胞を含んでもよい。Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞では、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ２＋細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、α／βＴ細胞、及び／又はγ／δＴ細胞が枯渇していてもよい。
一実施形態によれば、未熟造血細胞は、ＣＤ３４＋未熟造血細胞が富化されたＴ細胞枯渇動員血液細胞を含む。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇ当たり０．１×１０６～２０×１０６個のＣＤ３４＋細胞（例えば、１×１０６～１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞）を含む。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇ当たり少なくとも約０．１×１０６個、０．５×１０６個、１×１０６個、２×１０６個、３×１０６個、４×１０６個、５×１０６個、６×１０６個、７×１０６個、８×１０６個、９×１０６個、１０×１０６個、１５×１０６個又は２０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇ当たり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇ当たり少なくとも約６×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇ当たり少なくとも約８×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１ｋｇ当たり少なくとも約１０×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む。
一実施形態によれば、未熟造血細胞はＣＤ３＋細胞及び／又はＣＤ１９＋細胞が枯渇している。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり１×１０４～１×１０６個（例えば、１×１０５～５０×１０５個）未満のＣＤ３＋細胞を含む。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり約５０×１０５個未満、４０×１０５個未満、３０×１０５個未満、２０×１０５個未満、１５×１０５個未満、１０×１０５個未満、９×１０５個未満、８×１０５個未満、７×１０５個未満、６×１０５個未満、５×１０５個未満、４×１０５個未満、３×１０５個未満、２×１０５個未満、１×１０５個未満、０．５×１０５個未満、又は０．１×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり５×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり３×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり２×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり１×１０５個未満のＣＤ３＋細胞を含む。
一実施形態によれば、未熟造血細胞はＣＤ８＋細胞が枯渇している。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり１×１０４～１×１０６個（例えば、１×１０４～４×１０５個）未満のＣＤ８＋細胞を含む。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり約５０×１０５個未満、２５×１０５個未満、１５×１０５個未満、１０×１０５個未満、９×１０５個未満、８×１０５個未満、７×１０５個未満、６×１０５個未満、５×１０５個未満、４×１０５個未満、３×１０５個未満、２×１０５個未満、１×１０５個未満、９×１０４個未満、８×１０４個未満、７×１０４個未満、６×１０４個未満、５×１０４個未満、４×１０４個未満、３×１０４個未満、２×１０４個未満、又は１×１０４個未満のＣＤ８＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり４×１０５個未満のＣＤ８＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり１×１０３～１×１０６個（例えば、１×１０４～１×１０５個）未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β－細胞を含む。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり約１×１０６個未満、０．５×１０６個未満、１×１０５個未満、０．５×１０５個未満、１×１０４個未満、０．５×１０４個未満、１×１０３個未満、又は０．５×１０３個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β－細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり１×１０６個未満のＣＤ８＋ＴＣＲα／β－細胞を含む。
一実施形態によれば、未熟造血細胞はＢ細胞が枯渇している。
一実施形態によれば、未熟造血細胞はＢ細胞（ＣＤ１９＋細胞及び／又はＣＤ２０＋細胞）が枯渇している。
一実施形態によれば、未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり１×１０４～１×１０６個（例えば、１×１０５～５０×１０５個）未満のＣＤ１９＋細胞及び／又はＣＤ２０＋細胞を含む。
一実施形態によれば、未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり約５０×１０５個未満、４０×１０５個未満、３０×１０５個未満、２０×１０５個未満、１０×１０５個未満、９×１０５個未満、８×１０５個未満、７×１０５個未満、６×１０５個未満、５×１０５個未満、４×１０５個未満、３×１０５個未満、２×１０５個未満、又は１×１０５個未満のＣＤ１９＋細胞及び／又はＣＤ２０＋細胞を含む。
特定の実施形態によれば、未熟造血細胞は、対象の理想体重１キログラム当たり３×１０５個未満のＣＤ１９＋細胞及び／又はＣＤ２０＋細胞を含む。
Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３＋細胞、ＣＤ２＋細胞、ＴＣＲα／β＋細胞、ＣＤ４＋細胞及び／又はＣＤ８＋細胞）又はＢ細胞（例えば、ＣＤ１９＋細胞及び／又はＣＤ２０＋細胞）の枯渇は、特定の抗体を用いた根絶（例えば、死滅）又は親和性に基づく精製（例えば、磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーター及び／又は捕捉ＥＬＩＳＡ標識の使用）等、当技術分野で知られているいずれかの方法を用いて行うことができる。
このような方法は本明細書及びTHE HANDBOOK OF EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY, Volumes 1 to 4（D.N. Weir編)及びFLOW CYTOMETRY AND CELL SORTING（A. Radbruch編、Springer Verlag、1992）に記載されている。例えば、細胞は、フローサイトメトリーやＦＡＣＳ等によって選別することができる。従って、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用し、様々な程度のカラーチャネル、低角度及び鈍角の光散乱検出チャンネル、及びインピーダンスチャネルを有することができる。当技術分野で知られているリガンド依存性分離技術はいずれも、抗体親和性ではなく細胞の物性に依存するポジティブ分離技術とネガティブ分離技術（例えば、水簸や密度勾配遠心分離が挙げられるが、これらに限定されない）の両方と組み合わせて使用することができる。
他の細胞選別方法としては、例えば、パニングやアフィニティー技術を用いた分離等が挙げられ、プレート、ビーズ及びカラム等の固体支持体を用いた技術も含まれる。従って、生体試料は、固体マトリックス（例えば、プレート）に付着した抗体を用いた「パニング」によって分離することができる。
或いは、磁気分離技術によって細胞を選別／分離することができ、このような方法の幾つかでは磁気ビーズを利用する。様々な磁気ビーズを多くの供給元から入手することができ、例えば、Ｄｙｎａｌ社（ノルウェー国）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ社（米国、マサチューセッツ州、ケンブリッジ）、Ｉｍｍｕｎｃｏｎ社（米国、フィラデルフィア州）、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ社（フランス国、マルセイユ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社（米国）及びＣｅｌｌｐｒｏ社（米国）が挙げられる。或いは、抗体をビオチン化するか又はジゴキシゲニンと結合させ、アビジン又は抗ジゴキシゲニンでコートしたアフィニティーカラムと組み合わせて使用することができる。
一実施形態によれば、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社より入手可能）で細胞を処理することができる。
一実施形態によれば、様々な枯渇／分離方法を組み合わせることができ、例えば、磁気細胞選別をＦＡＣＳと組み合わせて分離の質を高めるか、又は複数のパラメータによる選別を可能にすることができる。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、ドナー対象（例えば、後述の非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を生成するために非動員ＰＢＭＣを採取するのと同一のドナー対象）から動員ＰＢＭＣを採取することを含む方法によって得られる。
一実施形態によれば、動員をＧ－ＣＳＦによって行う。
一実施形態によれば、動員をＧ－ＣＳＦとプレリキサフォルによって行う。
特定の実施形態によれば、動員ＰＢＭＣの採取は単回の採取で行う。
特定の実施形態によれば、動員ＰＢＭＣの採取は、毎日２回、３回、４回、５回又はそれ以上の採取、例えば、毎日３回の採取（例えば、連日又は数日以内の間隔で）で行う。
一実施形態によれば、ＣＤ３４＋発現細胞の富化は、ＰＢＭＣをＣＤ３４結合剤とインキュベートして行う。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３４結合剤は抗体、例えば、モノクローナル抗体である。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３４モノクローナル抗体は磁性粒子、例えば、超常磁性粒子に結合している。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３４＋標識細胞を（上で詳述したような）磁気分離技術によって選択する。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３４磁気標識細胞（即ち、ＣＤ３４＋発現細胞）を分離カラムによって保持し（即ち、ポジティブ選択）、ＣＤ３４－細胞を除去する。次に、ＣＤ３４＋細胞をカラムから放出して採取する。
一実施形態によれば、Ｔ細胞の枯渇は、ＰＢＭＣをＣＤ３、ＣＤ２、ＴＣＲα／β、ＣＤ４及び／又はＣＤ８結合剤とインキュベートすることによって行う。
一実施形態によれば、Ｂ細胞の枯渇は、ＰＢＭＣをＣＤ１９及び／又はＣＤ２０結合剤とインキュベートすることによって行う。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３、ＣＤ２、ＴＣＲα／β、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０結合剤は抗体、例えば、モノクローナル抗体である。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３、ＣＤ２、ＴＣＲα／β、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０モノクローナル抗体は磁性粒子、例えば、超常磁性粒子に結合している。
一実施形態によれば、ＣＤ３、ＣＤ２、ＴＣＲα／β、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０標識細胞を（上で詳述したような）磁気分離技術によって選択する。
特定の実施形態によれば、ＣＤ３、ＣＤ２、ＴＣＲα／β、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０磁気標識細胞（即ち、ＣＤ３、ＣＤ２、ＴＣＲα／β、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０発現細胞）を分離カラムによって保持し（即ち、ネガティブ選択）、ＣＤ３－細胞、ＣＤ２－細胞、ＴＣＲα／β－細胞、ＣＤ４－細胞、ＣＤ８－細胞、ＣＤ１９－細胞及び／又はＣＤ２０－細胞を採取する。
一実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞、及び非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の生成（即ち、後述のベト細胞の生成）に使用するＰＢＭＣは同一のドナー対象から得る。
用途に応じて、本方法は、レシピエント対象（例えば、同種異系）と同系又は非同系であるドナー細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の生成に使用するＰＢＭＣ及び／又は後述する非造血細胞）を用いて行うことができる。
本明細書で使用される「同系」細胞という用語は、対象又は対象の実質的に全てのリンパ球と実質的に遺伝的に同一である細胞を意味する。同系細胞の例としては、対象に由来する（当技術分野では「自己」とも称される）細胞、対象のクローンに由来する細胞、又は対象の一卵性双生児に由来する細胞が挙げられる。
本明細書で使用される「非同系」細胞という用語は、対象又は対象の実質的に全てのリンパ球と実質的に遺伝的に同一ではない細胞（例えば、同種異系細胞又は異種細胞）を意味する。
本明細書で使用される「同種異系」という用語は、レシピエント対象と同種であるが、レシピエント対象とは実質的に非クローン性であるドナー対象に由来する細胞を意味する。通常、同種の非近交系、非接合性の双子哺乳動物は互いに同種異系である。同種異系細胞は、レシピエント対象に対してＨＬＡ同一、部分的にＨＬＡ同一、又はＨＬＡ非同一（即ち、１種以上の異なるＨＬＡ決定基を提示）であり得ることが理解されよう。
一実施形態によれば、ドナーはヒトである。
本明細書で使用される「異種」という用語は、対象のリンパ球の実質的な部分に見られる抗原の種類と比べて、異なる種類の抗原を実質的に発現する細胞を意味する。通常、異なる種の非近交系哺乳動物は互いに異種である。
本発明は異種細胞が様々な種に由来することを企図している。従って、一実施形態によれば、細胞は任意の哺乳動物に由来することができる。細胞の起源として適した種には、主要な家畜動物及び霊長類が含まれる。そのような動物としては、ブタ科（例えば、ブタ）、ウシ科（例えば、雌ウシ）、ウマ科（例えば、ウマ）、ヒツジ科（例えば、ヤギ、ヒツジ）、ネコ科（例えば、Felis domestica）、イヌ科（例えば、Canis domestica）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター）、及び霊長類（例えば、チンパンジー、アカゲザル、マカクザル、マーモセット）が挙げられるが、これらに限定されない。異種起源（例えば、ブタ起源）の細胞は、ブタ内在性レトロウイルス等の人獣共通感染症を持たないことが知られている供給源から得ることが好ましい。同様に、ヒト由来の細胞又は組織は、実質的に病原体を持たない供給源から得ることが好ましい。
従って、細胞の供給源はその使用目的に対して決定し、特に本明細書に提供される詳細な開示に鑑みて十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明の幾つかの実施形態の未熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞）は、以下で詳述するように、細胞移植用の当技術分野で知られているいずれかの方法（例えば、細胞注入（例えば、Ｉ．Ｖ．）又は腹腔内経路を介する方法が挙げられるが、これらに限定されない）によって対象に移植することができる。
本発明の幾つかの実施形態の未熟造血細胞は、単回注入（例えば、０日目）、又は２回、３回、４回又はそれ以上の注入（例えば、連日又は数日以内の間隔、例えば、－１日目と０日目、又は０日目と１日目）で投与することができる。従って、本発明の幾つかの実施形態の未熟造血細胞は、毎日２回、３回、４回又はそれ以上の採取、例えば毎日２回の採取（例えば、連日又は数日以内の間隔）で得ることができる。
一実施形態によれば、未熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇）を移植予定日前の任意の時点で採取する。そのような細胞は、将来の使用のために保存することができる（例えば、凍結保存）。
本教示に従って未熟造血細胞を対象に移植した後、標準的な医療行為によれば、様々な標準的な技術のいずれかによって細胞の成長機能性や免疫適合性をモニターすることが望ましい。例えば、未熟造血細胞の細胞数は、標準的な血液及び骨髄検査（例えば、ＦＡＣＳ分析）によって対象においてモニターすることができる。
後述の実施例で示すように、抗第三者セントラルメモリーＴ細胞は特異的なベト活性を備えており、造血前駆細胞の非同系（例えば、同種異系）移植が確実に必要な状況で移植促進細胞として使用することができる。
一実施形態によれば、本発明の幾つかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞は、（上述のように）未熟造血細胞移植用の補助療法として使用することができる。
一実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を使用して、移植片拒絶反応、移植片対宿主病を回避、及び／又はドナー特異的寛容（即ち、未熟造血細胞の寛容）を誘導することができる。
従って、一実施形態によれば、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与するが、抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる。
「単離された」という用語は、その自然環境（例えば、人体）から単離された細胞を意味する。
一実施形態によれば、細胞の集団は不均一な細胞混合物を意味する。
本明細書で使用される「非移植片対宿主病」又は「非ＧＶＨＤ」という用語は、移植片対宿主（ＧＶＨ）を誘発する反応性が実質的に低下しているか、又は全くないことを意味する。従って、本発明の幾つかの実施形態の細胞は、移植後３０～１２０日の移植対象の生存、体重及び全体的な外観によって明らかとなる移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を有意に引き起こさないように生成する。ＧＶＨＤの抑制について対象を評価する方法は当業者には良く知られている。
一実施形態によれば、本発明の幾つかの実施形態の細胞は、本開示内容に従って生成されていない細胞と比較して、宿主に対する反応性が少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は更に１００％低下している。
本明細書で使用される「セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型」という語句は、リンパ節にホーミングするＴ細胞傷害性細胞のサブセットを意味する。Ｔｃｍ表現型を有する細胞は、ヒトにおいては通常、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋／ＣＤ６２Ｌ＋／ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ４５ＲＡ－シグネチャーを含む。Ｔｃｍ細胞は、単一の細胞で全てのシグネチャーマーカーを発現することもあり、単一の細胞でシグネチャーマーカーの一部のみを発現することもあることは理解されよう。細胞表現型の決定は、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）や捕捉ＥＬＩＳＡ標識等、当業者に知られているいずれの方法によっても行うことができる。
一実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は更に１００％はＴｃｍ細胞シグネチャーを有している。
特定の実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の約１０～２０％、約１０～３０％、約１０～４０％、約１０～５０％、約２０～３０％、約２０～４０％、約３０～５０％、約４０～６０％、約５０～７０％、約６０～８０％、約７０～９０％、約８０～１００％、又は約９０～１００％はＴｃｍ細胞シグネチャーを有している。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の１０～３０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の１０～５０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の２０～４０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の３０～５０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の５０～７０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の２０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の３０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の４０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の５０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の６０％を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する細胞は非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団の７０％を含む。
本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、本明細書では「Ｔｃｍ細胞」とも称される。
上述のように、Ｔｃｍ細胞は通常、移植後にリンパ節にホーミングする。幾つかの実施形態によれば、本発明の幾つかの実施形態の細胞の単離集団は、移植後にリンパ節のいずれか、例えば、末梢リンパ節や腸間膜リンパ節にホーミングすることができる。このような細胞のホーミング性質により、迅速且つ効率的にベト効果を発揮することができる。
本発明の幾つかの実施形態のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は寛容誘導細胞である。
本明細書で使用される「寛容誘導細胞」という語句は、寛容誘導細胞が投与されていないレシピエントの細胞の反応性と比較して、レシピエントの細胞（例えば、レシピエントのＴ細胞）と接触した際に、その反応性の低下を誘発する細胞を意味する。寛容誘導細胞としては、先に国際公開第２００１／０４９２４３号及び第２００２／１０２９７１号に記載されているようなベト細胞（即ち、宿主Ｔ細胞との接触によりそのアポトーシスをもたらすＴ細胞）が挙げられる。
「ベト活性」という用語は、ベト細胞を認識して結合すると抗ドナーレシピエントＴ細胞の不活性化をもたらす免疫細胞（例えば、ドナー由来Ｔ細胞）に関する。一実施形態によれば、この不活性化によって抗ドナーレシピエントＴ細胞のアポトーシスがもたらされる。
本発明のＴｃｍ表現型を含む非ＧＶＨＤ誘導細胞は、本明細書では「ベト細胞」とも称される。
本明細書で使用される「抗第三者細胞（anti-third party cells）」という語句は、（Ｔ細胞認識によって）１種以上の第三者抗原に対して向けられるＴリンパ球を意味する。
本明細書で使用される「１種以上（１種又は複数種）の第三者抗原」という語句は、以下に詳述するように、ドナー又はレシピエントのいずれにも存在しない可溶性又は不溶性（膜結合性等）の１種以上の抗原を意味する。
例えば、１種以上の抗原は、全細胞（例えば、生細胞又は死細胞）、細胞画分（例えば、溶解細胞）、細胞抗原（例えば、細胞表面抗原／タンパク質）、タンパク質抽出物、精製タンパク質（例えば、オバルブミン）又は合成ペプチドとすることができる。
一実施形態によれば、１種以上の第三者抗原は非自己抗原、即ち、ドナーの免疫系が自己抗原として認識しない１種以上の抗原である。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は非哺乳動物であり、例えば、非ヒト（例えば、非ヒト動物又は微生物、例えば、鳥、爬虫類、ウイルス、細菌、真菌起源のタンパク質又はペプチド）である。
一実施形態によれば、１種以上の抗原はウイルス抗原を含む。
ウイルス抗原の例としては、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス（Ａｄｖ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、感冒ウイルス、インフルエンザウイルス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペス、ＨＩＶ、インフルエンザ、日本脳炎、麻疹、ポリオ、狂犬病、呼吸器合胞体、風疹、天然痘、水痘帯状疱疹、ロタウイルス、西ナイルウイルス、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルス）、ジカウイルス、パルボウイルス（例えば、パルボウイルスＢ１９）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）の抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
ウイルス抗原の更なる特定の例として、ＢＫウイルス抗原としては、ＢＫＶ ＬＴ、ＢＫＶ（カプシドＶＰ１）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、アイソフォームＶＰ３）、ＢＫＶ（小Ｔ抗原）が挙げられるが、これらに限定されない。アデノウイルス抗原としては、Ａｄｖ－ペントン又はＡｄｖ－ヘキソンが挙げられるが、これらに限定されない。ＣＭＶ抗原としては、エンベロープ糖タンパク質Ｂ、ＣＭＶ ＩＥ－１及びＣＭＶ ｐｐ６５、ＵＬ２８、ＵＬ３２、ＵＬ３６、ＵＬ４０、ＵＬ４８、ＵＬ５５、ＵＬ８４、ＵＬ９４、ＵＬ９９、ＵＬ１０３、ＵＬ１５１、ＵＬ１５３、ＵＳ２９、ＵＳ３２が挙げられるが、これらに限定されない。ＥＢＶ抗原としては、ＥＢＶ ＬＭＰ２、ＥＢＶ ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ Ｐ１８及びＥＢＶ Ｐ２３が挙げられるが、これらに限定されない。肝炎抗原としては、Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、Ｍ、Ｌタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスのプレＳ抗原、ＨＢＣＡＧ ＤＥＬＴＡ、ＨＢＶ ＨＢＥ、Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡ、ＨＣＶ ＮＳ３及びＨＣＶ ＮＳ４が挙げられるが、これらに限定されない。単純ヘルペスウイルス抗原としては、即時型初期タンパク質及び糖タンパク質Ｄが挙げられるが、これらに限定されない。ＨＩＶ抗原としては、ＨＩＶ ｇｐ３２、ＨＩＶ ｇｐ４１、ＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＩＶ ｇｐ１６０、ＨＩＶ Ｐ１７／２４、ＨＩＶ Ｐ２４、ＨＩＶ Ｐ５５ ＧＡＧ、ＨＩＶ Ｐ６６ ＰＯＬ、ＨＩＶ ＴＡＴ、ＨＩＶ ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質及び逆転写酵素等、ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子の遺伝子産物が挙げられるが、これらに限定されない。インフルエンザ抗原としては、ヘマグルチニン及びノイラミニダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。日本脳炎ウイルス抗原としては、タンパク質Ｅ、Ｍ－Ｅ、Ｍ－Ｅ－ＮＳ１、ＮＳ１、ＮＳ１－ＮＳ２Ａ及び８０％Ｅが挙げられるが、これらに限定されない。麻疹抗原としては、麻疹ウイルス融合タンパク質が挙げられるが、これに限定されない。狂犬病抗原としては、狂犬病糖タンパク質及び狂犬病核タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。呼吸器合胞体ウイルス抗原としては、ＲＳＶ融合タンパク質及びＭ２タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。ロタウイルス抗原としては、ＶＰ７ｓｃが挙げられるが、これに限定されない。風疹抗原としては、タンパク質Ｅ１及びＥ２が挙げられるが、これらに限定されない。水痘帯状疱疹ウイルス抗原としては、ｇｐｌ及びｇｐｌｌが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態によれば、１種以上の抗原はウイルスペプチドを含む。
一実施形態によれば、ウイルスペプチドは、１～２５種類、１～２０種類、１～１５種類、１～１０種類、１～９種類、１～８種類、１～７種類、１～６種類、１～５種類、１～４種類、１～３種類、１～２種類、２～２０種類、２～１０種類、２～８種類、２～６種類、２～４種類、３～２０種類、３～１０種類、３～９種類、３～７種類、３～５種類、３～４種類、４～２０種類、４～１０種類、４～８種類又は４～６種類のウイルスペプチドを含む。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは４～１０種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは４～８種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは４～６種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
一実施形態によれば、ウイルスペプチドは１種類、２種類、３種類、４種類、５種類、６種類、７種類、８種類、９種類、１０種類、１１種類、１２種類、１３種類、１４種類、１５種類、１６種類、１７種類、１８種類、１９種類又は２０種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは４種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは５種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは６種類のウイルスペプチドを含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは単一生物由来（即ち、１ウイルス種由来）のペプチドを含む。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは２種以上の生物由来（即ち、２、３、４、５又はそれ以上のウイルス種由来の混合物）のペプチドを含む。
一実施形態によれば、ウイルスペプチドはＢＫウイルスペプチドを含む。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドはエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）ペプチド、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ペプチド、ＢＫウイルスペプチド及びアデノウイルス（Ａｄｖ）ペプチドを含む。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＥＢＶ－ＬＭＰ２、ＥＢＶ－ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１、ＥＢＶ－ＢＲＡＦ１、ＥＢＶ－ＢＭＬＦ１、ＥＢＶ－ＧＰ３４０／３５０ ＥＢＮＡ２、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ａ、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ｂ、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ｃ、ＣＭＶ－ｐｐ６５、ＣＭＶ－ＩＥ－１、Ａｄｖ－ペントン、Ａｄｖ－ヘキソン、ＢＫＶ ＬＴ、ＢＫＶ（カプシドＶＰ１）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２）、ＢＫＶ（カプシドタンパク質ＶＰ２、アイソフォームＶＰ３）及びＢＫＶ（小Ｔ抗原）の内の少なくとも１種を含む。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは、ＡｄＶ５ヘキソン、ｈＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶセレクト（後述）及びＢＫＶ ＬＴの内の少なくとも１種を含む。
専用のソフトウェアを使用して抗原配列を分析し、免疫原性短ペプチド、即ち、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ又はＭＨＣクラスＩＩとの関連で提示可能なペプチドを特定することができる。
特定の実施形態によれば、１種以上の抗原は、３種のウイルス（ＣＭＶ、ＥＢＶ及びアデノウイルス）のタンパク質配列全体に及ぶ重複ペプチドライブラリ（例えば、１１種のアミノ酸で重複する１５量体）であるペプミックスの混合物を含む（このようなペプミックスは、例えば、ドイツ国、ベルリンのＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社から商業的に購入することができる）。
特定の実施形態によれば、ウイルスペプチドは「ＥＢＶセレクト」、即ち、ＥＢＶの１３種の異なるタンパク質由来の４３種のＭＨＣクラス１及びクラス２制限ペプチドを含むＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社の市販品（例えば、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＰｅｐＴｉｖａｔｏｒ（登録商標）ＥＢＶセレクト、例えば、カタログ番号１７０－０７６－１４３）を含む。加えて、または代替として、ウイルスペプチドは「コレクションＥＢＶ」、即ち、１４種のＥＢＶ抗原由来のペプチド含有のペプミックスを含むＪＰＴ社の市販品を含む。加えて、または代替として、ウイルスペプチドは、ＪＰＴ社より市販されている、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（カプシド蛋白質ＶＰ１）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（カプシド蛋白質ＶＰ２）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（カプシド蛋白質ＶＰ２、アイソフォームＶＰ３）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（大Ｔ抗原）、ＰｅｐＭｉｘ（商標）ＢＫＶ（小Ｔ抗原）を含む。
他の特定の実施形態によれば、１種以上の抗原は、ＥＢＶ－ＬＭＰ２、ＥＢＶ－ＢＺＬＦ１、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１、ＣＭＶ－ｐｐ６５、ＣＭＶ－ＩＥ－１、Ａｄｖ－ペントン及びＡｄｖ－ヘキソンに及ぶ７種のペプミックスの混合物を、例えば、１００ｎｇ／ペプチド又は７００ｎｇ／７種のペプチド混合物の濃度で含む。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は、移植患者等の免疫含有対象に通常影響を及ぼす感染性生物（例えば、細菌、真菌生物）の１種以上の抗原を含む。
一実施形態によれば、抗原は細菌抗原（例えば、炭疽菌、グラム陰性桿菌、クラミジア、ジフテリア、haemophilus influenza、Helicobacter pylori、マラリア、結核菌、百日咳毒素、肺炎球菌、リケッチア、ブドウ球菌、連鎖球菌及び破傷風の抗原が挙げられるが、これらに限定されない）である。
細菌抗原の更なる特定の例として、炭疽菌抗原としては炭疽菌防御抗原が挙げられるが、これに限定されない。グラム陰性桿菌抗原としてはリポ多糖が挙げられるが、これに限定されない。haemophilus influenza抗原としては莢膜多糖類が挙げられるが、これに限定されない。ジフテリア抗原としてはジフテリア毒素が挙げられるが、これに限定されない。結核菌抗原としてはミコール酸、熱ショックタンパク質６５（ＨＳＰ６５）、３０ｋＤａの主要分泌タンパク質、及び抗原８５Ａが挙げられるが、これらに限定されない。百日咳毒素抗原としてはヘマグルチニン、パータクチン、ＦＩＭ２、ＦＩＭ３、及びアデニル酸シクラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。肺炎球菌抗原としてはニューモリシン及び肺炎球菌莢膜多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。リケッチア抗原としてはｒｏｍｐＡが挙げられるが、これに限定されない。連鎖球菌の抗原としてＭタンパク質が含まれるが、これに限定されない。破傷風抗原としては破傷風毒素が挙げられるが、これに限定されない。
一実施形態によれば、抗原はスーパーバグ抗原（例えば、多剤耐性細菌）である。スーパーバグの例としては、Enterococcus faecium、Clostridium difficile、Acinetobacter baumannii、Pseudomonas aeruginosa、Enterobacteriaceae（Escherichia coli、Klebsiella pneumoniae、Enterobacter spp.等）が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態によれば、抗原は真菌抗原である。真菌の例としては、カンジダ、コクシジオイデス、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、リーシュマニア、変形体、原虫、寄生虫、住血吸虫、白癬菌、トキソプラズマ、及びtrypanosoma cruziが挙げられるが、これらに限定されない。
細菌抗原の更なる特定の例として、コクシジオイデス抗原としては小球抗原が挙げられるが、これに限定されない。クリプトコッカス抗原としては莢膜多糖類が挙げられるが、これに限定されない。ヒストプラズマ抗原としては熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）が挙げられるが、これに限定されない。リーシュマニア抗原としてはｇｐ６３及びリポホスホグリカンが挙げられるが、これらに限定されない。熱帯熱マラリア原虫抗原としてはメロゾイト表面抗原、スポロゾイト表面抗原、スポロゾイト周囲抗原、生殖母細胞／配偶子表面抗原、血液ステージ抗原ｐｆ１５５／ＲＥＳＡ等の原虫及び他の寄生虫抗原が挙げられるが、これらに限定されない。住血吸虫抗原としてはグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ及びパラミオシンが挙げられるが、これらに限定されない。白癬菌抗原としてはトリコフィチンが挙げられるが、これに限定されない。トキソプラズマ抗原としてはＳＡＧ－１及びｐ３０が挙げられるが、これらに限定されない。trypanosoma cruzi抗原としては７５～７７ｋＤａ抗原及び５６ｋＤａ抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は悪性疾患に関連する抗原（例えば、腫瘍抗原）を含む。
一実施形態によれば、抗原は腫瘍細胞によって発現される抗原（又はその一部、例えば、抗原エピトープ）である。一実施形態によれば、抗原（又はその一部）は、造血組織（例えば、白血病抗原等の造血器悪性腫瘍）で発現するタンパク質又は固形腫瘍（例えば、メラノーマ、膵臓癌、肝臓癌、胃腸癌等）で発現するタンパク質由来である。
腫瘍抗原の例としては、Ａ３３、ＢＡＧＥ、Ｂｃｌ－２、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＢＣＲ－ＡＢＬ、β－カテニン、癌精巣抗原（ＣＴＡ、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－Ａ２／Ａ３及びＮＹ－ＥＳＯ－１）、ＣＡｌ２５、ＣＡ１９－９、ＣＡ５０、ＣＡ２７．２９（ＢＲ２７．２９）、ＣＡ１５－３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳ－１、サイクリンＢ１、ＤＡＧＥ、ＥＢＮＡ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡ２、エフリンＢ２、エストロゲン受容体、ＦＡＰ、フェリチン、葉酸結合タンパク質、ＧＡＧＥ、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ－２、ＧＭ２、ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、ＨＡ－１、ＨＡ－２、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＨＭ１．２４、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ｈＴＥＲＴ、Ｋｉ－６７、ＬＲＰ、メソテリン、ムチン様癌関連抗原（ＭＣＡ）、ＭＵＣ１、ｐ５３、ＰＲ１、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＴＮ３、ＲＨＡＭＭ（ＣＤ１６８）、ＷＴ－１が挙げられるが、これらに限定されない。更なる腫瘍抗原は、Molldrem J. Biology of Blood and Marrow Transplantation (2006) 12:13-18、Alatrash G. and Molldrem J., Expert Rev Hematol. (2011) 4(1): 37-50、Renkvist et al., Cancer lmmunol lmmunother (2001) 50:3-15、van der Bruggen P, Stroobant V, Vigneron N, Van den Eynde B. Peptide database: T cell-defined tumor antigens. Cancer Immun (2013), www.cancerimmunity.org/peptide/、Rittenhouse, Manderino, and Hass, Laboratory Medicine (1985) 16(9) 556-560に記載されているが、これら文献の全てを本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は、抗原の混合物（例えば、上述のような抗原の１群の抗原の混合物（例えば、ウイルス抗原）又は抗原の様々な群の抗原の混合物（例えば、ウイルス抗原と細菌抗原、ウイルス抗原と腫瘍抗原））を含む。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は、ウイルスペプチドと腫瘍ペプチドの混合物を含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は、ウイルスペプチドと細菌ペプチドの混合物を含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は、ウイルスペプチドと真菌ペプチドの混合物を含む（例えば、単一処方又は数種の処方において）。
一実施形態によれば、第三者抗原（例えば、タンパク質抽出物、精製タンパク質又は合成ペプチド）は、それに感染した細胞（例えば、細胞株）によって提示されるか、或いは、これらのペプチド又はタンパク質を発現するようになり得る。
抗原提示細胞は、単一の細胞で全ての抗原を発現することもあり、単一の細胞で抗原の一部のみを発現することもあることが理解されよう。更に、異なる抗原提示細胞（例えば、同一調製物中）は異なる抗原を発現し得る。従って、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）は、不均一な細胞混合物を含む。
第三者抗原は、細胞、ウイルス又はバクテリアの表面に提示されるか、又はそこから誘導及び／又は精製することができる。更に、ウイルス又は細菌抗原は感染細胞に提示されることがあり、細胞抗原は人工媒体（例えば、リポソーム）、人工抗原提示細胞（例えば、１種以上の第三者抗原をトランスフェクトした白血病細胞株又は線維芽細胞株）、自己提示細胞、又は非自己提示細胞に提示されることがある。
本発明の幾つかの実施形態によれば、１種以上の抗原（例えば、ウイルスペプチド）は、Ｔ細胞、例えば、メモリーＣＤ８ Ｔ細胞（例えば、１種以上の抗原をトランスフェクトした細胞株）によって認識可能なＭＨＣ抗原（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称される）を示す遺伝子改変抗原提示細胞又は人工抗原提示細胞によって提示されることがある。
従って、抗原提示細胞、細胞株、人工媒体（リポソーム等）又は人工抗原提示細胞（例えば、１種以上の抗原をトランスフェクトした白血病細胞又は線維芽細胞）を使用して、それに融合又はロードされた短い合成ペプチドを提示したり、タンパク質抽出物又は精製タンパク質を提示したりすることができる。そのような短いペプチド、タンパク質抽出物又は精製タンパク質は、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原又は腫瘍抗原由来のペプチドであってもよく、他のいずれかの抗原を表すペプチドであってもよい。
一実施形態によれば、第三者細胞は、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）、脾臓又はリンパ節から精製された細胞、サイトカイン動員ＰＢＬ、インビトロ増殖抗原提示細胞（ＡＰＣ）、インビトロ増殖樹状細胞（ＤＣ）及び人工抗原提示細胞から成る群より選択される刺激細胞である。
一実施形態によれば、１種以上の抗原は、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の生成（即ち、後述のベト細胞の生成）に使用されるＰＢＭＣと同じ起源の抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）によって提示される。
一実施形態によれば、第三者細胞は樹状細胞を含む。
一実施形態によれば、第三者細胞は成熟樹状細胞を含む。
非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を生成するための刺激細胞として使用することができる第三者樹状細胞を生成する方法は、当技術分野において良く知られている。従って、非限定的な例として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を細胞ドナーから得ることができる。次に、ＣＤ１４＋発現細胞を選択し、サイトカインと増殖因子を補充したＤＣ細胞培地（例えば、Ｃｅｌｌｇｒｏ ＤＣ培地）を用いて（例えば、細胞培養プレート内で）培養する。使用するサイトカインや増殖因子の決定は当業者の技能の範囲内である。例えば、細胞培地にはＩＬ－４（例えば、２００～２０００ＩＵ／ｍＬ、例えば、１０００ＩＵ／ｍＬ）とＧＭ－ＣＳＦ（例えば、１０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、例えば、２０００ＩＵ／ｍＬ）を補充する。次に、細胞懸濁液を播種（例えば、細胞培養プレート、例えば、セルファクトリープレートに播種）し、３７℃、５％ＣＯ２で１２～３６時間、例えば、１６～２４時間、例えば、２４時間インキュベートする。
ＣＤ１４＋発現細胞の抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）への成熟を誘導するために、ＣＤ１４＋富化細胞調製物を成熟因子の存在下で培養する。使用する成熟因子の決定は当業者の技能の範囲内である。従って、一実施形態によれば、播種（例えば、細胞培養プレート、例えば、セルファクトリープレートに播種）したＣＤ１４＋富化細胞を、ＩＬ－４（例えば、２００～２０００ＩＵ／ｍＬ、例えば、１０００ＩＵ／ｍＬ）、ＧＭ－ＣＳＦ（例えば、１０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、例えば、２０００ＩＵ／ｍＬ）、ＬＰＳ（例えば、１０～１００ｎｇ／ｍＬ、例えば、４０ｎｇ／ｍＬ）及びＩＦＮ－γ（例えば、５０～５００ＩＵ／ｍＬ、例えば、２００ＩＵ／ｍＬ）の存在下、３７℃、５％ＣＯ２で１０～２４時間、例えば、１４～１８時間、例えば、１６時間培養する。
培養期間終了後、細胞培養物から抗原提示細胞（例えば、成熟樹状細胞、即ち、ｍＤＣ）を得る。一実施形態によれば、非付着細胞を除去し、抗原提示細胞（即ち、付着細胞）を培養プレートから剥離し、１種以上の抗原をロードする。
本明細書で使用される「ローディング」という語句は、抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えば、樹状細胞）の表面のＭＨＣペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩ又はＩＩ）への１種以上の抗原（例えば、上述のようなペプチド又はタンパク質）の付着を意味する。
特定の実施形態によれば、第三者細胞は照射樹状細胞を含む。
従って、一実施形態によれば、ＤＣに約５～１０Ｇｙ、約１０～２０Ｇｙ、約２０～３０Ｇｙ、約２０～４０Ｇｙ、約２０～５０Ｇｙ、約１０～５０Ｇｙを照射する。特定の実施形態によれば、ＤＣに約１０～５０Ｇｙ（例えば、３０Ｇｙ）を照射する。
細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、ウイルスペプチド提示細胞又は細菌ペプチド提示細胞を第三者抗原として利用することは、そのような第三者抗原が多様な配列の抗原決定基を含み、それ自体が多様な集団の抗第三者細胞の形成を指示するので特に有利であり、これは、例えば、致死的又は亜致死的照射や化学療法手順後に、Ｔ細胞の再構成が必要な場合に、より速い再構成をする上で更に役立つことができる。
従って、一実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞は、抗ウイルスＴｃｍ細胞、抗細菌Ｔｃｍ細胞、抗腫瘍Ｔｃｍ細胞等と称されることがある（即ち、これらの細胞を生成するために使用される１種以上の抗原に従う）。
幾つかの実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を含む本発明の幾つかの実施形態の非ＧＶＨＤ誘導細胞は、必要とされる用途（例えば、治療するＴ細胞媒介性自己免疫疾患の種類）に応じて、非遺伝子改変細胞又は遺伝子改変細胞（例えば、特定の遺伝子、マーカー又はペプチドを発現する又は発現しないように、或いは特定のサイトカインを分泌する又は分泌しないように遺伝子操作された細胞）とすることができる。このような決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
国際公開第２０１０／０４９９３５号、第２０１２／０３２５２６号、第２０１３／０３５０９９号、及び第２０１８／００２９２４号（これらを本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）で先に記載されたように、抗第三者Ｔｃｍ細胞を生成する任意の方法を本発明に従って用いることができる。
従って、例えば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、（ａ）サイトカインを除去した培養液中で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を１種以上の第三者抗原と接触させ、抗原反応性細胞を富化させることと、（ｂ）工程（ａ）で得た細胞をサイトカインの存在下で培養し、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞を増殖させることを含む方法によって生成することができる。
一実施形態によれば、ＩＬ－２１の非存在下で工程（ａ）のＰＢＭＣを１種以上の第三者抗原と接触させる。
一実施形態によれば、ＩＬ－２１の存在下で工程（ａ）のＰＢＭＣを１種以上の第三者抗原と接触させる。
一実施形態によれば、ＩＬ－２１のみを補充したサイトカイン除去の培養液中で工程（ａ）のＰＢＭＣを１種以上の第三者抗原と接触させる。
一実施形態によれば、ＩＬ－１５の存在下、工程（ａ）で得た細胞を、抗原のない環境下で（例えば、細胞培養物に抗原を添加せずに）培養する。
一実施形態によれば、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１及び／又はＩＬ－７の存在下、工程（ａ）で得た細胞を、抗原のない環境下で（例えば、細胞培養物に抗原を添加せずに）培養する。
本発明の抗第三者Ｔｃｍ細胞は通常、先ず、サイトカインを含まない培養液（即ち、サイトカインを添加しない）又はＩＬ－２１のみを補充した培養液において、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、例えば、未熟造血細胞と同一細胞ドナーの同系又は非同系）を１種以上の第三者抗原（例えば、上述の抗原）と接触させて生成する。このような培養条件では、１種以上の第三者抗原による刺激や活性化を受ける細胞（即ち、抗原反応性細胞）のみが生存及び富化することができるが、それは、このような細胞がその生存を可能にするサイトカイン（例えば、ＩＬ－２）を分泌するためである（残りの細胞は全てこの培養条件下で死滅する）。この工程は通常、約１２～２４時間、約１２～３６時間、約１２～７２時間、２４～４８時間、２４～３６時間、約２４～７２時間、約４８～７２時間、１～２日間、２～３日間、１～３日間、２～４日間、１～５日間、２～５日間、２～６日間、１～７日間、５～７日間、２～８日間、８～１０日間又は１～１０日間行い、抗原反応性細胞の富化を可能にする。
特定の実施形態によれば、１種以上の第三者抗原（例えば、上述の抗原）へのＰＢＭＣの接触は１～５日間（例えば、３日間）行う。
一実施形態によれば、１種以上の抗原を用いた培養はＩＬ－２１の存在下で行う。この工程は通常、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０～３０００ＩＵ／ｍＬ、１００～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１００～１０００ＩＵ／ｍＬ、２５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、５００～１０００ＩＵ／ｍＬ、７５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～５００ＩＵ／ｍＬ、５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１００ＩＵ／ｍＬ、１～１００ＩＵ／ｍＬ、１０～１００ＩＵ／ｍＬ、３０～１００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬ、１～５０ＩＵ／ｍＬ、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、２０～５０ＩＵ／ｍＬ、３０～５０ＩＵ／ｍＬ、１～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～３０ＩＵ／ｍＬ、２０～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～２０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０ＩＵ／ｍＬ、又は１～１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１の存在下で行う。
特定の実施形態によれば、ＩＬ－２１の濃度は５０～１５０ＩＵ／ｍＬ（例えば、１００ＩＵ／ｍＬ）である。
１種以上の第三者抗原（例えば、樹状細胞）とＰＢＭＣの比率は通常、約１：１～約１：２０、例えば、約１：２～約１：１０、例えば、約１：４、約１：６、約１：８又は約１：１０である。特定の実施形態によれば、１種以上の第三者抗原（例えば、樹状細胞）とＰＢＭＣの比率は、約１：２～約１：８（例えば、１：５）である。
次に、抗第三者細胞をＩＬ－１５の存在下（例えば、抗原のない環境下）、必要に応じてＩＬ－２１及び／又はＩＬ－７を補充して培養し、Ｔｃｍ表現型を含む細胞を増殖させる。この工程は通常、約１２～２４時間、約１２～３６時間、約１２～７２時間、２４～４８時間、２４～３６時間、約２４～７２時間、約４８～７２時間、１～２０日間、１～１５日間、１～１０日間、１～５日間、５～２０日間、５～１５日間、５～１０日間、１～２日間、２～３日間、１～３日間、２～４日間、２～５日間、２～８日間、２～１０日間、４～１０日間、４～８日間、６～８日間、８～１０日間、７～９日間、７～１１日間、７～１３日間、７～１５日間、１０～１２日間、１０～１４日間、１２～１４日間、１４～１６日間、１４～１８日間、１６～１８日間又は１８～２０日間行う。
特定の実施形態によれば、抗第三者細胞の培養は、ＩＬ－１５の存在下、必要に応じてＩＬ－２１及び／又はＩＬ－７を補充し、抗原のない環境下で（例えば、抗原を添加せずに）約７～１１日間（例えば、８日間）行う。
一実施形態によれば、ＩＬ－１５を用いた培養は通常、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０～３０００ＩＵ／ｍＬ、１００～３０００ＩＵ／ｍＬ、１２５～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１００～１０００ＩＵ／ｍＬ、１２５～１０００ＩＵ／ｍＬ、２５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、５００～１０００ＩＵ／ｍＬ、７５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～５００ＩＵ／ｍＬ、５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～５００ＩＵ／ｍＬ、１２５～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１２５～２５０ＩＵ／ｍＬ、１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１００ＩＵ／ｍＬ、１～１００ＩＵ／ｍＬ、１０～１００ＩＵ／ｍＬ、３０～１００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬ、１～５０ＩＵ／ｍＬ、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、２０～５０ＩＵ／ｍＬ、３０～５０ＩＵ／ｍＬ、１～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～３０ＩＵ／ｍＬ、２０～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～２０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０ＩＵ／ｍＬ、又は１～１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５濃度で行う。特定の実施形態によれば、ＩＬ－１５の濃度は１００～１５０ＩＵ／ｍＬ（例えば、１２５ＩＵ／ｍＬ）である。
一実施形態によれば、ＩＬ－１５へのＩＬ－２１の補充は通常、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０～３０００ＩＵ／ｍＬ、１００～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１００～１０００ＩＵ／ｍＬ、２５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、５００～１０００ＩＵ／ｍＬ、７５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～５００ＩＵ／ｍＬ、５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１００ＩＵ／ｍＬ、１～１００ＩＵ／ｍＬ、１０～１００ＩＵ／ｍＬ、３０～１００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬ、１～５０ＩＵ／ｍＬ、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、２０～５０ＩＵ／ｍＬ、３０～５０ＩＵ／ｍＬ、１～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～３０ＩＵ／ｍＬ、２０～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～２０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０ＩＵ／ｍＬ、又は１～１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１濃度で行う。特定の実施形態によれば、ＩＬ－２１の濃度は５０～１５０ＩＵ／ｍＬ（例えば、１００ＩＵ／ｍＬ）である。
一実施形態によれば、ＩＬ－１５へのＩＬ－７の補充は通常、約０．００１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０～３０００ＩＵ／ｍＬ、１００～３０００ＩＵ／ｍＬ、１０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、０．００１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．０１～１０００ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～１０００ＩＵ／ｍＬ、３０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１００～１０００ＩＵ／ｍＬ、２５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、５００～１０００ＩＵ／ｍＬ、７５０～１０００ＩＵ／ｍＬ、１０～５００ＩＵ／ｍＬ、３０～５００ＩＵ／ｍＬ、５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～５００ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１００ＩＵ／ｍＬ、１～１００ＩＵ／ｍＬ、１０～１００ＩＵ／ｍＬ、３０～１００ＩＵ／ｍＬ、５０～１００ＩＵ／ｍＬ、１～５０ＩＵ／ｍＬ、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、２０～５０ＩＵ／ｍＬ、３０～５０ＩＵ／ｍＬ、１～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～３０ＩＵ／ｍＬ、２０～３０ＩＵ／ｍＬ、１０～２０ＩＵ／ｍＬ、０．１～１０ＩＵ／ｍＬ、又は１～１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７濃度で行う。特定の実施形態によれば、ＩＬ－７の濃度は１０～５０ＩＵ／ｍＬ（例えば、３０ＩＵ／ｍＬ）である。
本発明者らは、困難な実験やスクリーニングを通じて、移植片対宿主（ＧＶＨ）反応性細胞を欠く、及び／又は抗疾患（例えば、ＧＶＬ）反応性細胞用に増強された、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む抗第三者細胞の増殖を改善するのに利用することができる多くの基準を収集した。
一実施形態によれば、ＰＢＭＣは、１種以上の第三者抗原と接触させる前にＣＤ４＋細胞（例えば、Ｔヘルパー細胞）及び／又はＣＤ５６＋細胞（例えば、ＮＫ細胞）が枯渇している。
ＣＤ４＋細胞及び／又はＣＤ５６＋細胞の枯渇は、親和性ベースの精製（例えば、ＭＡＣＳ（登録商標）ビーズ、ＦＡＣＳソーター及び／又は補足ＥＬＩＳＡ標識の使用）等、当技術分野で知られているいずれの方法によっても行うことができる。このような工程は、培養物内のＣＤ８＋細胞の純度を高めるため（即ち、細胞培養物中の他のリンパ球、例えば、ＴＣＤ４＋細胞やＮＫ細胞を排除するため）又はＣＤ８＋Ｔ細胞の数を増やすために有益となり得る。
一実施形態によれば、ＰＢＭＣはＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。
一実施形態によれば、ＰＢＭＣは、１種以上の第三者抗原と接触させる前にＣＤ４５ＲＡ＋細胞及び／又はＣＤ４５ＲＯ－細胞（即ち、ナイーブＴ細胞）について選択する。
ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞の選択は、ＣＤ４５ＲＡ＋発現細胞及び／又はＣＤ４５ＲＯ－発現細胞の選択によって行うことができ、親和性ベースの精製（例えば、ＭＡＣＳ（登録商標）ビーズ、ＦＡＣＳソーター及び／又は補足ＥＬＩＳＡ標識の使用）等、当技術分野で知られているいずれの方法によっても行うことができる。
一実施形態によれば、ＰＢＭＣはナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。
一実施形態によれば、ナイーブＴ細胞はＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ－表現型を含む。
一実施形態によれば、ナイーブＴ細胞はＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ＋表現型を含む。
他の実施形態によれば、ナイーブＴ細胞はＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ－ＣＤ４５ＲＡ＋表現型を含む。
特定の実施形態によれば、ナイーブＴ細胞を使用する場合、１種以上の抗原を用いた培養の最初の工程は通常、１～５日間（例えば、３日間）行い、ＩＬ－１５の存在下（抗原のない環境下）での培養は通常、６～１２日間（例えば、８日間）行う。
或いは、ＰＢＭＣは、１種以上の第三者抗原と接触させる前にＣＤ４５ＲＡ－細胞及び／又はＣＤ４５ＲＯ＋細胞（即ち、メモリーＴ細胞）について選択する。
本明細書で使用される「メモリーＴ細胞」という用語は、以前に抗原に遭遇して応答したＴリンパ球のサブセットを意味し、抗原経験Ｔ細胞とも称される。
メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の選択は、ＣＤ４５ＲＡ－発現細胞及び／又はＣＤ４５ＲＯ＋発現細胞の選択によって行うことができ、親和性ベースの精製（例えば、ＭＡＣＳ（登録商標）ビーズ、ＦＡＣＳソーター及び／又は補足ＥＬＩＳＡ標識の使用）等、当技術分野で知られているいずれの方法によっても行うことができる。
一実施形態によれば、ＰＢＭＣはメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。
一実施形態によれば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又はそれ以上がメモリーＴ細胞であるＣＤ８＋Ｔ細胞を含む細胞画分を得るように選択を行う。
一実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋表現型を含む。
他の実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－表現型を含む。
他の実施形態によれば、メモリーＴ細胞はＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ４５ＲＡ－表現型を含む。
特定の実施形態によれば、メモリーＴ細胞を使用する場合、１種以上の抗原を用いた培養の最初の工程は通常、１～５日間（例えば、３日間）行い、ＩＬ－１５の存在下（抗原のない環境下）での培養は通常、３～１０日間（例えば、６日間）行う。
本開示内容に従って行うことのできる追加工程では、ＩＬ－１５の存在下、必要に応じてＩＬ－２１及び／又はＩＬ－７を補充し、ＰＢＭＣ細胞を１種以上の第三者抗原と共に培養した後、細胞培養物からこの１種以上の第三者抗原を除去する（即ち、抗原のない環境を生成する）。この工程は通常、約１２～２４時間、約１２～３６時間、約１２～７２時間、２４～４８時間、２４～３６時間、約２４～７２時間、約４８～７２時間、１～２日間、２～３日間、１～３日間、２～４日間、１～５日間又は２～５日間行い、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５及びＩＬ－７の量を上述したのと同様にして行う。特定の実施形態によれば、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５及びＩＬ－７の存在下での１種以上の第三者抗原を用いたＰＢＭＣ細胞の培養は１２時間～４日間（例えば、１～２日間）行う。
加えて、または代替として、活性化細胞の選択と単離を可能にする追加の２工程プロセスを行うことができる。このような選択工程は、ＰＢＭＣが対象に対して非同系である状況では、潜在的な宿主反応性Ｔ細胞（例えば、アロ反応性細胞）を除去するのに役立つ。
従って、活性化細胞の単離は２工程のアプローチで行うことができる。第１工程では、ＩＬ－１５の存在下で細胞を培養する前に活性化細胞を選択する。この第１工程は通常、ＰＢＭＣを１種以上の第三者抗原と最初に接触させた後に行う。この選択プロセスは、第三者抗原によって活性化された（例えば、以下に記載の活性化マーカーを発現する）細胞のみを選択し、通常はＰＢＭＣを１種以上の第三者抗原と最初に接触させてから、約１２～２４時間後、約２４～３６時間後、約１２～３６時間後、約３６～４８時間後、約１２～４８時間後、約４８～６０時間後、約１２～６０時間後、約６０～７２時間後、約１２～７２時間後、約７２～８４時間後、約１２～８４時間後、約８４～９６時間後、約１２～９６時間後に行う。特定の実施形態によれば、選択プロセスは、ＰＢＭＣを１種以上の第三者抗原と最初に接触させてから約１２～２４時間後（例えば、１４時間後）に行う。
活性化細胞の単離は、親和性ベースの精製（例えば、ＭＡＣＳ（登録商標）ビーズ、ＦＡＣＳソーター及び／又は補足ＥＬＩＳＡ標識の使用）によって行うことができ、細胞表面マーカー（ＣＤ６９、ＣＤ４４、ＣＤ２５、ＣＦＳＥ、ＣＤ１３７等が挙げられるが、これらに限定されない）や非細胞表面マーカー（ＩＦＮ－γ及びＩＬ－２等が挙げられるが、これらに限定されない）等の任意の活性化マーカーに向けて行うことができる。また、活性化細胞の単離は、当技術分野で知られているいずれかの方法（例えば、ＦＡＣＳによる）を用いた形態ベースの精製（例えば、大型細胞の単離）によって行うこともできる。通常、活性化細胞はＣＤ８＋細胞の発現についても選択される。更に、上述の方法の任意の組み合わせを用いて活性化細胞を効率的に単離することができる。
本発明の一実施形態によれば、活性化細胞の選択はＣＤ１３７＋細胞及び／又はＣＤ２５＋細胞の選択によって行う。
活性化細胞単離の第２工程は通常、培養の最後に（即ち、抗原を添加せずにＩＬ－１５を用いて培養した後に）行う。この工程では、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）を照射宿主抗原提示細胞（ＡＰＣ、例えば、樹状細胞）と接触させた後、活性化された細胞を枯渇させてアロ反応性細胞を枯渇させる。上述のように、活性化細胞の単離は、親和性ベースの精製（例えば、ＭＡＣＳ（登録商標）ビーズ、ＦＡＣＳソーター及び／又は補足ＥＬＩＳＡ標識の使用）によって行うことができ、細胞表面マーカー（ＣＤ６９、ＣＤ４４、ＣＤ２５、ＣＦＳＥ、ＣＤ１３７等が挙げられるが、これらに限定されない）や非細胞表面マーカー（ＩＦＮ－γ及びＩＬ－２等が挙げられるが、これらに限定されない）等の任意の活性化マーカーに向けて行うことができる。
本発明の一実施形態によれば、アロ反応性細胞の枯渇は、ＣＤ１３７＋細胞及び／又はＣＤ２５＋細胞の枯渇及び／又はＩＦＮγ捕捉によって行う。
一実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は通常、２０～１００％のＴｃｍ細胞を含む。
一実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％又はそれ以上のＴｃｍ細胞を含む。
特定の実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は、少なくとも約３０％のＴｃｍ細胞を含む。
特定の実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は、少なくとも約４０％のＴｃｍ細胞を含む。
特定の実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は、少なくとも約５０％のＴｃｍ細胞を含む。
特定の実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は、少なくとも約６０％のＴｃｍ細胞を含む。
特定の実施形態によれば、本方法によって生成した非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団は、少なくとも約７０％のＴｃｍ細胞を含む。
従って、本発明のセントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する抗第三者細胞は天然には存在せず、自然の産物ではない。このような細胞は通常、エクスビボ操作（即ち、特定のサイトカインの非存在下又は存在下で１種以上の第三者抗原に曝露すること）によって産生する。
一実施形態によれば、未熟造血細胞とＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞は、同一のドナー（例えば、ヒト）から得る。
一実施形態によれば、未熟造血細胞とＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞は、異なるドナー（例えば、ヒト）から得る。
一実施形態によれば、未熟造血細胞とＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞（即ち、ベト細胞）は同時に投与する、即ち（例えば、同じ時間に又は同じ日、例えば、１２～２４時間以内）に同時投与する。
或いは、Ｔｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞（即ち、ベト細胞）は、未熟造血細胞の移植後に投与することができる。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、未熟造血細胞の移植の１～３０日後（例えば、１～２５日後、例えば、１～２０日後、例えば、１～１０日後、例えば、４～１０日後、例えば、１～５日後）に投与することができる。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、未熟造血細胞の移植の１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後、１４日後、１５日後、１６日後、１７日後、１８日後、１９日後、２０日後、２１日後、２５日後又は３０日後（例えば３日後、５日後、７日後、１０日後）に投与することができる。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、未熟造血細胞の移植の８日後に投与することができる。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、未熟造血細胞の移植の７日後に投与することができる。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、未熟造血細胞の移植の６日後に投与することができる。
特定の実施形態によれば、Ｔｃｍ表現型を有する抗第三者細胞は、未熟造血細胞の移植の５日後に投与することができる。
一実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞は、単回投与で対象に投与することができる。或いは、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞は、２回以上の投与（例えば、３回、４回、５回又はそれ以上）で対象に投与することができる。
このような決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患は通常、組織又は器官の損傷を引き起こすため、本発明の実施形態では、損傷した組織又は器官を再生することができる非造血細胞を対象へ移植することを企図している。
本明細書で使用される「非造血細胞」という用語は、造血系統ではない体細胞を意味する。このような細胞には、分化細胞だけでなく、前駆細胞や幹細胞も含まれる。
本明細書で使用される「分化細胞」という語句は最終分化した細胞を意味する。本開示内容に従って移植できる細胞の例としては、肝臓細胞、膵臓細胞、脾臓細胞、腎臓細胞、心臓細胞、肺細胞、皮膚細胞、腸細胞、卵管細胞、卵巣細胞、神経細胞又は脳細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態によれば、分化細胞は成体組織（即ち、出生後の任意の時期の生物の組織）から得る。
一実施形態によれば、分化細胞は（後述するように）胎児組織から得る。
本発明の一実施形態によれば、非造血細胞は前駆細胞又は幹細胞を含む。
本明細書で使用する「幹細胞」という語句は、特定の特殊な機能を有する他の細胞型に分化することができる細胞（例えば、十分に分化した細胞）を意味する。例としては、全能性細胞、多能性細胞、又は多分化能細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
全能性幹細胞は、全能性細胞よりも分化した「前駆細胞」を生み出す。このような細胞は、内皮系統、上皮系統又は間葉系統等の特定の細胞系統に分化することができる。
一実施形態によれば、前駆細胞は、肝前駆細胞、膵臓前駆細胞、心筋前駆細胞、脳前駆細胞、神経前駆細胞、腎前駆細胞、卵巣前駆細胞、脾臓前駆細胞又は肺前駆細胞を含む。
用途及び利用可能な供給源に応じて、本発明の非造血細胞は、出生前生物、出生後生物、成人又は死体ドナーから得ることができる。このような決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
一実施形態によれば、細胞を器官又は組織から得ることができる。
一実施形態によれば、器官又は組織は胎児生体に由来する。胎児生体は、ヒト又は異種起源（例えば、ブタ）のいずれかであってもよく、妊娠の任意の段階であってもよい。このような決定は当業者の能力の範囲内である。
一実施形態によれば、胎児器官又は組織は、胎児肺組織、胎児膵臓組織、胎児腎臓組織、胎児肝組織、胎児心臓組織、胎児神経組織、胎児脳組織、胎児脾臓組織、胎児腸組織、胎児皮膚組織、胎児卵管組織、及び胎児卵巣組織を含む。
様々な方法を用いて胎児生体から器官又は組織を得ることができる。従って、例えば、組織（例えば、肝臓組織又は膵臓組織）を得ることは、ヒトの妊娠１４～２４週に相当する妊娠の段階で、例えば、外科的処置によって、発育中の胎児から組織を採取して行うことができる。生物の妊娠段階は、生物を生成する卵母細胞の受精後に経過した期間であることは当業者には理解されよう。
同様に、様々な方法を用いて成体（例えば、生体又は死体）から器官又は組織を得ることができる。従って、例えば、組織（例えば、肝臓組織又は膵臓組織）を得ることは、外科的処置（例えば、開腹術又は腹腔鏡検査）によって臓器提供者から組織を採取して行うことができる。
或いは、細胞、器官又は組織のインビトロ培養又はエクスビボ培養によって組織を得ることができる。このような細胞、組織又は臓器の制御されたインビトロ分化は、例えば、胚性幹細胞株の培養によって所望の系統の細胞／組織／器官を含む培養物を生成することにより、日常的に行っている。本発明の非造血細胞は、新鮮又は凍結（例えば、凍結保存）された調製物とすることができることは理解されよう。
一実施形態によれば、非造血細胞は懸濁状態にある。従って、非造血細胞は、その自然環境（例えば、人体）から単離し、生存能を維持しながら組織／器官から抽出するが、注射可能（静脈内投与等）であるような組織構造を維持しない（即ち、血管新生組織構造を有しない）。特定の実施形態によれば、懸濁液中の細胞は固体支持体に付着していない。
一実施形態によれば、本発明の未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を使用して器官又は組織の全体又は一部の移植をサポートすることができる。本開示内容に従って移植することができる器官又は組織の例としては、肺器官又は組織、膵臓器官又は組織、腎臓器官又は組織、肝臓器官又は組織、心臓器官又は組織、脳器官又は組織、脾臓器官又は組織、腸器官又は組織、皮膚組織、卵管器官又は組織、卵巣器官又は組織が挙げられるが、これらに限定されない。器官又は組織は（上述のように）胎児又は成体から得ることができることは理解されよう。
特定の実施形態によれば、器官又は組織はレシピエント対象と同系又は非同系（例えば、同種異系）である。
特定の実施形態によれば、器官又は組織は、未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞（即ち、ベト細胞）に対して同系である。
特定の実施形態によれば、器官又は組織、未熟造血細胞及びＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞（即ち、ベト細胞）は、同一ドナー（例えば、ヒト）に由来する。特定の実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が膵臓に関わる場合（例えば、自己免疫性１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ））、移植片は膵臓細胞、組織又は器官移植片を更に含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が肝臓に関わる場合（例えば、自己免疫性肝炎）、移植片は肝細胞、組織又は器官移植片を更に含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が腎臓に関わる場合（例えば、糸球体腎炎）、移植片は腎臓細胞、組織又は器官移植片を更に含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が腸に関わる場合（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ））、移植片は腸細胞、組織又は器官移植片を更に含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が中枢神経系に関わる場合（例えば、多発性硬化症）、移植片は神経細胞又は組織移植片を更に含む。
本発明の幾つかの実施形態の未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞、組織又は器官は、それ自体を生物に投与するか、又は適切な担体又は賦形剤と混合し医薬組成物として投与することができる。
本明細書で使用される「医薬組成物」とは、本明細書に記載の１種以上の有効成分と生理学的に適切な担体や賦形剤等の他の化学成分とから成る調製物を意味する。医薬組成物の目的は化合物の生物への投与を容易にすることである。
本明細書において「有効成分」という用語は、生物学的効果に対して責任を負う未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞を意味する。
以下、互換的に使用される「生理学的に許容される担体」と「薬学的に許容される担体」という語句は、生物に対して重大な刺激を引き起こさず、投与された化合物の生物学的活性及び特性を抑制しない担体又は希釈剤を意味する。このような語句にはアジュバントが含まれている。
本明細書において「賦形剤」という用語は、医薬組成物に添加して有効成分の投与を更に容易にする不活性物質を意味する。賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖及び各種デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油及びポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
薬物の処方と投与の技法については、“Remington’s Pharmaceutical Sciences,” Mack Publishing Co., Easton, PA, latest edition（本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）に記載されている。
未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞の対象への投与は、例えば、細胞型、レシピエントの疾患（例えば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患）の種類、段階又は重症度、対象に特異的な身体的又は生理的パラメータ、及び／又は望ましい治療成績等の種々のパラメータに応じて多くの方法で行うことができる。
例えば、用途や目的に応じて、未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞の投与は、気管内、気管支内、肺胞内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、皮下、髄内、髄腔内、心室内、心臓内、筋肉内、漿膜内、粘膜内、経粘膜、経鼻、直腸内及び腸管内から成る群より選択される経路によって行うことができる。
一実施形態によれば、投与は静脈内経路によって行う。
或いは、未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞、組織又は器官の対象への投与は、治療効果があるような種々の適切な解剖学的位置に投与して行うことができる。従って、用途や目的に応じて、同所性の解剖学的位置（細胞の器官又は組織型について正常な解剖学的部位）、又は異所性の解剖学的位置（細胞の器官又は組織型について異常な解剖学的部位）に細胞を投与することができる。
従って、用途や目的に応じて、腎被膜下、或いは腎臓、精巣脂肪、皮下組織、網、門脈、肝臓、脾臓、心腔、心臓、胸腔、肺、膵臓、皮膚及び／又は腹腔内空間に細胞、組織又は器官を植え込む（例えば、移植する）。
例えば、肝臓に関わるＴ細胞媒介性自己免疫疾患（例えば、自己免疫性肝炎）の治療の場合、非造血細胞を肝臓、門脈、腎被膜、皮下、網、脾臓及び腹腔内空間に移植することができる。同様に、膵臓に関わるＴ細胞媒介性自己免疫疾患（例えば、自己免疫性１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ））の治療の場合、本発明に係る非造血性細胞の移植は、門脈、肝臓、膵臓、精巣脂肪、皮下、網、腸係蹄（小腸のＵ係蹄の漿膜下組織）及び／又は腹腔内空間へ細胞を移植して行うことができる。同様に、例えば、腸、結腸、胃、脳及び脊髄（中枢神経系）に関わるＴ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患したレシピエントを治療する目的で、非造血細胞の移植を行うことができる。
必要に応じて、欠損又は損傷した器官を有する対象に本発明の非造血細胞、組織又は器官を移植する場合、一実施形態に係る機能不全の器官を先ず対象から少なくとも部分的に除去して移植片の最適な発育を可能にし、対象の生体構造／生理機能と移植片の構造的／機能的統合を可能にする。
非造血細胞、組織又は器官の移植は、造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を用いた治療と同時に又は治療後に行うことができる。例えば、非造血細胞、組織又は臓器の投与は、造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を用いた治療から、例えば、１～３０日後、３０～６０日後、６０～９０日後、９０～１２０日後、１２０～１８０日後、例えば、６～１２ヶ月後、例えば、１２～２４ヶ月又はそれ以上後に行うことができる。このような決定は十分に当業者の能力の範囲内であり、治療する疾患、疾患の重症度、対象の年齢等に依存する。
本発明の幾つかの実施形態の医薬組成物は、当技術分野で良く知られたプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、粉末化（levigating）、乳化、カプセル化、封入又は凍結乾燥プロセスによって製造することができる。
従って、本発明の幾つかの実施形態に従って使用する医薬組成物は、薬学的に使用可能な調製物への有効成分の処理を容易にする、賦形剤及び助剤を含む１種以上の生理学的に許容される担体を使用して従来の方法で処方することができる。適切な製剤は選択する投与経路によって決まる。
注射の場合、医薬組成物の有効成分は、水溶液、好ましくは、ハンクス液、リンゲル液、又は生理食塩緩衝液等の生理的に適合性のある緩衝液に処方することができる。経粘膜投与の場合、浸透するバリアに適した浸透剤を処方に使用する。そのような浸透剤は当技術分野では一般に知られている。
経口投与の場合、医薬組成物は、活性化合物を当技術分野で良く知られた薬学的に許容される担体と組み合わせて容易に処方することができる。そのような担体によって、患者が経口摂取できるように医薬組成物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤等として処方することができる。経口使用のための薬理学的調製物は固体賦形剤を使用して作製し、必要に応じて得られた混合物を粉砕し、必要に応じて適切な助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して錠剤又は糖衣錠コアを得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール又はソルビトールを含む糖等の充填剤、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロース等のセルロース調製物、及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の生理学的に許容されるポリマーである。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸又はその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）等の崩壊剤を添加することができる。
糖衣錠コアには適切なコーティングを設ける。この目的のために、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合物を必要に応じて含み得る濃縮糖溶液を使用することができる。染料又は顔料を錠剤又は糖衣錠コーティングに添加して識別に用いたり、活性化合物用量の様々な組み合わせを特徴付けたりすることができる。
経口使用可能な医薬組成物としては、ゼラチンで形成されたプッシュフィットカプセルや、ゼラチンとグリセロールやソルビトール等の可塑剤で形成されたソフトシールカプセルが挙げられる。プッシュフィットカプセルには、有効成分と混合させて、ラクトース等の充填剤、デンプン等のバインダー、タルク又はステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、及び必要に応じて安定剤を配合することができる。ソフトカプセルにおいては、有効成分を適切な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール）に溶解又は懸濁させることができる。更に安定剤を添加することができる。経口投与用の全ての製剤は、選択した投与経路に適した投与形態とすべきである。
口腔内投与の場合、組成物は従来の方法で処方された錠剤又はトローチの形態をとることができる。
経鼻吸入による投与の場合、本発明の幾つかの実施形態に係る使用のための有効成分は、適切な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン又は二酸化炭素）を使用して、加圧パック又はネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で簡便に送達する。加圧エアロゾルの場合、計量された量を送達するバルブを設けることによって投与単位を決定することができる。ディスペンサーで使用する、例えば、ゼラチンのカプセル及び薬包は、化合物と適切な粉末基剤（例えば、ラクトースやデンプン）との粉末混合物を含むように処方することができる。
本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、ボーラス注射又は持続注入による非経口投与用に処方することができる。注射用製剤は単位剤形、例えば、アンプルで供給するか、又は必要に応じて防腐剤を添加した複数回投与容器で供給することができる。組成物は油性媒体又は水性媒体中の懸濁液、溶液又は乳濁液とすることができ、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤などの調合剤を含むことができる。
非経口投与用の医薬組成物には水溶性の活性製剤の水溶液が含まれる。更に、有効成分の懸濁液は適切な油性又は水ベースの注射懸濁液として調製することができる。適切な親油性溶媒又は媒体としては、ゴマ油等の脂肪油、又はオレイン酸エチル、トリグリセリド又はリポソーム等の合成脂肪酸エステルが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストラン等の懸濁液の粘度を上昇させる物質を含むことができる。必要に応じて、懸濁液は、有効成分の溶解度を上昇させて高濃度溶液の調製を可能にする適切な安定剤又は薬剤を含むこともできる。
或いは、有効成分は、使用前に適切な媒体（例えば、無菌でパイロジェンフリーの水ベース溶液）で構成するための粉末形態とすることができる。
本発明の幾つかの実施形態の医薬組成物は、例えば、カカオバターや他のグリセリド等の従来の坐剤基剤を使用して坐剤又は保持浣腸等の直腸組成物に処方することもできる。
本発明の幾つかの実施形態の状況での使用に適した医薬組成物としては、本来の目的を達成するのに有効な量の有効成分を含む組成物が挙げられる。より具体的には、治療有効量とは、障害（例えば、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患）の症状を予防、緩和又は改善するか、又は治療される対象の生存を延長するのに有効な有効成分（未熟造血細胞及び／又はＴｃｍ表現型を有する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞）の量を意味する。
治療有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示を考慮して、十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明の方法で使用される任意の調製物の場合、治療有効量又は用量は先ずインビトロ及び細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、動物モデルにおいて用量を処方して所望の濃度又は力価を得ることができる。このような情報を用いてヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。
例えば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）の数は、１×１０４個／Ｋｇ理想体重超とする必要がある。レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は通常、１×１０３個／Ｋｇ理想体重～１×１０４個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０４個／Ｋｇ理想体重～１×１０５個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０４個／Ｋｇ理想体重～１×１０６個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０４個／Ｋｇ理想体重～１×１０７個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０４個／Ｋｇ理想体重～１×１０８個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０３個／Ｋｇ理想体重～１×１０５個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０４個／Ｋｇ理想体重～１×１０６個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０６個／Ｋｇ理想体重～１×１０７個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０５個／Ｋｇ理想体重～１×１０７個／Ｋｇ理想体重の範囲、１×１０６個／Ｋｇ理想体重～１×１０８個／Ｋｇ理想体重の範囲、又は１×１０６個／Ｋｇ理想体重～１×１０９個／Ｋｇ理想体重の範囲とする必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、０．５×１０６個／Ｋｇ理想体重～１×１０８個／Ｋｇ理想体重の範囲とする必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、１×１０５個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重～１×１０８個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重の範囲とする必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、少なくとも０．５×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重を含む必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、少なくとも１×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重を含む必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、少なくとも２．５×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重を含む必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、少なくとも５×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重を含む必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、少なくとも７．５×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重を含む必要がある。
特定の実施形態によれば、レシピエントに注入する非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞の数は、少なくとも１０×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／Ｋｇ理想体重を含む必要がある。
未熟造血細胞（例えば、Ｔ細胞枯渇型未熟造血細胞）の治療有効量については上で詳述されている。
本明細書で使用される「理想体重」という用語は、薬物投与量を調整し、（肥満患者等における）腎機能及び薬物動態の推定に役立つように臨床的に使用される測定値を意味する。
理想体重（ｋｇ）推定する式は以下の通りである。
男性：ＩＢＷ＝５０ｋｇ＋５フィート超でインチ毎に２．３ｋｇ。
女性：ＩＢＷ＝４５．５ｋｇ＋５フィート超でインチ毎に２．３ｋｇ。
理想体重についてはPeterson et al.［Am J Clin Nutr 2016;103:1197-203］（本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する）に詳述されている。
本明細書に記載の有効成分の毒性及び治療効果は、細胞培養物又は実験動物においてインビトロでの標準的な製薬手順によって確認することができる。このようなインビトロ及び細胞培養アッセイ及び動物試験から得たデータを用いて、ヒトで使用する一連の投与量を処方することができる。投与量は使用する剤形及び利用する投与経路に応じて変わり得る。正確な処方、投与経路及び投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択することができる（例えば、“The Pharmacological Basis of Therapeutics”第１章、１頁内のFingl, et al., 1975を参照）。
投与量と投与間隔は個別に調整して、生物学的効果を誘発又は抑制するのに十分な有効成分のレベル（最小有効濃度、ＭＥＣ）を得ることができる。ＭＥＣは調製毎に変わるが、インビトロデータから推定することができる。ＭＥＣを得るのに必要な投与量は、個々の特性と投与経路によって決まる。検出アッセイを用いて血漿中濃度を確認することができる。
当然のことながら、投与する組成物の量は、治療する対象、苦痛の重症度、投与方法、処方医師の判断等に依存する。
非同系（例えば、同種異系）細胞は、対象に投与すると免疫反応を誘発する可能性が高いため、非同系細胞の拒絶反応の可能性を低減するための数種のアプローチが開発されてきた。このようなアプローチには、レシピエントの免疫系を抑制することや、移植前に非自己細胞を免疫隔離性の半透膜でカプセル化することが挙げられる。或いは、トランスジェニック動物（例えば、ブタ）で開発された細胞等、異種表面抗原を発現しない細胞を使用することができる。
本開示内容に従って未熟造血細胞及び／又は非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞及び／又は非造血細胞、組織又は器官を対象に移植した後、標準的な医療行為により、細胞の生存と機能性をモニターすると共に、移植片拒絶反応及び／又は移植片対宿主病の発症をモニターすることが望ましい。このような方法は当業者には良く知られている。例えば、未熟造血細胞の細胞数は、標準的な血液及び骨髄検査（例えば、ＦＡＣＳ分析）によって対象においてモニターすることができる。移植片拒絶反応やＧＶＨＤは、血液検査、身体検査（例えば、皮膚の発疹、黄色い変色、腹部の腫れ、嘔吐、下痢、腹部痙攣、吐き気、目の乾燥／刺激の増加のモニタリング）、生検（例えば、肝臓や肺の生検）によってモニターすることができる。例えば、膵臓細胞の機能性は、移植後に標準的な膵臓機能試験（例えば、インスリンの血清レベルの分析）によってモニターすることができる。同様に、肝細胞移植片は、移植後に標準的な肝機能検査（例えば、アルブミン、総タンパク質、ＡＬＴ、ＡＳＴ及びビリルビンの血清レベルの分析、及び血液凝固時間の分析）によってモニターすることができる。非造血細胞の構造発達は、コンピュータ断層撮影法や超音波画像法によってモニターすることができる。
更に、本開示内容に従って未熟造血細胞及び／又は非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を対象に移植した後、Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患症状の回復をモニターすることが望ましい。例えば、１型糖尿病の症状としては、例えば、非常に喉が渇く、空腹感、疲労、目のかすみ、足のしびれやうずき、意図せず体重が減少する等が挙げられる。橋本甲状腺炎の症状としては、例えば、首の肥大又は甲状腺腫の存在、疲労、脱毛、寒さへの不耐性、矮小又は収縮した甲状腺、関節のこわばり、意図しない体重増加、顔の腫れが挙げられる。ＭＳの症状としては、例えば、疲労、平衡感覚の喪失、筋肉の痙攣、あらゆる部位のしびれや異常な感覚、腕や脚の運動障害、歩行障害、協調運動や細かい動作の障害、片腕（両腕）や片足（両足）の震え、片腕（両腕）や片足（両足）の衰弱、視力喪失、顔面痛、聴力喪失、不明瞭又は理解困難な発声、咀嚼や嚥下の問題が挙げられる。このような症状は、身体検査、超音波検査、ＭＲＩ、血液検査等によってモニターすることができる。このような確認作業は十分に当業者の能力の範囲内である。
Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患を治療し、未熟造血細胞の生着を促進するために、本方法は、亜致死的、致死的又は超致死的条件下で対象に前処置を行うことを更に含むことができる。
本明細書において、本発明の対象の前処置に関して使用される「亜致死」、「致死」及び「超致死」という用語はそれぞれ、対象の代表的集団に適用した場合に、通常は、集団の実質的に全メンバーに対して非致死的であるか、集団の一部のメンバーに対しては致死的であるが全てのメンバーに対しては致死的ではない、又は通常の無菌条件下で集団の実質的に全メンバーに対して致死的となる骨髄毒性及び／又はリンパ球毒性の処理を意味する。
本発明の幾つかの実施形態によれば、亜致死的、致死的又は超致死的な前処置は、全身照射（ＴＢＩ）、全身リンパ節照射（ＴＬＩ、即ち、全てのリンパ節、胸腺及び脾臓の曝露）、部分身照射（例えば、肺、腎臓、脳等の特定の曝露）、骨髄破壊的前処置及び／又は非骨髄破壊的前処置を、例えば、様々な組み合わせ（共刺激遮断、化学療法剤及び／又は抗体免疫療法が挙げられるが、これらに限定されない）と共に含む。本発明の幾つかの実施形態によれば、前処置は上述の前処置プロトコルのいずれかの組み合わせ（例えば、化学療法剤とＴＢＩ、共刺激遮断と化学療法剤、抗体免疫療法と化学療法剤）を含む。
一実施形態によれば、前処置は、骨髄破壊的条件下（即ち、骨髄細胞が破壊される強力な前処置レジメン）等の超致死的条件下で対象を前処置して行う。
或いは、前処置は、致死的条件又は亜致死的条件下で対象を前処置する、例えば、それぞれ骨髄減少的条件又は非骨髄破壊的条件（即ち、侵襲性の低い前処置レジメンである減量強度前処置）で対象を前処置して行うことができる。
特定の実施形態によれば、前処置は非骨髄破壊的前処置（例えば、減量強度前処置レジメン）を含む。
一実施形態によれば、減量強度前処置は最大２週間（例えば、１～１０日間又は１～７日間）行う。
特定の実施形態によれば、非骨髄破壊的前処置は化学療法剤とＴＢＩ／ＴＬＩを含む。
一実施形態によれば、ＴＢＩは、０．５～１Ｇｙ、０．５～１．５Ｇｙ、０．５～２Ｇｙ、０．５～２．５Ｇｙ、０．５～５Ｇｙ、０．５～７．５Ｇｙ、０．５～１０Ｇｙ、０．５～１５Ｇｙ、１～１．５Ｇｙ、１～２Ｇｙ、１～２．５Ｇｙ、１～３Ｇｙ、１～３．５Ｇｙ、１～４Ｇｙ、１～４．５Ｇｙ、１～５Ｇｙ、１～５．５Ｇｙ、１～６Ｇｙ、１～７Ｇｙ、１～７．５Ｇｙ、１～１０Ｇｙ、２～３Ｇｙ、２～４Ｇｙ、２～５Ｇｙ、２～６Ｇｙ、２～７Ｇｙ、２～８Ｇｙ、２～９Ｇｙ、２～１０Ｇｙ、３～４Ｇｙ、３～５Ｇｙ、３～６Ｇｙ、３～７Ｇｙ、３～８Ｇｙ、３～９Ｇｙ、３～１０Ｇｙ、４～５Ｇｙ、４～６Ｇｙ、４～７Ｇｙ、４～８Ｇｙ、４～９Ｇｙ、４～１０Ｇｙ、５～６Ｇｙ、５～７Ｇｙ、５～８Ｇｙ、５～９Ｇｙ、５～１０Ｇｙ、６～７Ｇｙ、６～８Ｇｙ、６～９Ｇｙ、６～１０Ｇｙ、７～８Ｇｙ、７～９Ｇｙ、７～１０Ｇｙ、８～９Ｇｙ、８～１０Ｇｙ、１０～１２Ｇｙ又は１０～１５Ｇｙの範囲内の照射線量（例えば、単回照射線量又は分割照射線量）を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、１～７．５Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、１～６Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、１～５Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、６Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、５Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、４Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、３Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
一実施形態によれば、ＴＢＩ処理は移植の１～１０日前（例えば、１～３日前、例えば、１日前）に対象に施される。一実施形態によれば、移植の１日前、２日前、３日前又は４日前（例えば、１日前）に対象にＴＢＩで１回前処置を行う。一実施形態によれば、移植の当日（即ち、０日目）にＴＢＩを施す。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、－３日目～－１日目（即ち、移植前）の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、－２日目～－１日目（即ち、移植前）の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＢＩは、－１日目（即ち、移植の１日前）の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、０．５～１Ｇｙ、０．５～１．５Ｇｙ、０．５～２．５Ｇｙ、０．５～５Ｇｙ、０．５～７．５Ｇｙ、０．５～１０Ｇｙ、０．５～１５Ｇｙ、１～１．５Ｇｙ、１～２Ｇｙ、１～２．５Ｇｙ、１～３Ｇｙ、１～３．５Ｇｙ、１～４Ｇｙ、１～４．５Ｇｙ、１～５Ｇｙ、１～５．５Ｇｙ、１～６Ｇｙ、１～７Ｇｙ、１～１．５Ｇｙ、１～７．５Ｇｙ、１～１０Ｇｙ、２～３Ｇｙ、２～４Ｇｙ、２～５Ｇｙ、２～６Ｇｙ、２～７Ｇｙ、２～８Ｇｙ、２～９Ｇｙ、２～１０Ｇｙ、３～４Ｇｙ、３～５Ｇｙ、３～６Ｇｙ、３～７Ｇｙ、３～８Ｇｙ、３～９Ｇｙ、３～１０Ｇｙ、４～５Ｇｙ、４～６Ｇｙ、４～７Ｇｙ、４～８Ｇｙ、４～９Ｇｙ、４～１０Ｇｙ、５～６Ｇｙ、５～７Ｇｙ、５～８Ｇｙ、５～９Ｇｙ、５～１０Ｇｙ、６～７Ｇｙ、６～８Ｇｙ、６～９Ｇｙ、６～１０Ｇｙ、７～８Ｇｙ、７～９Ｇｙ、７～１０Ｇｙ、８～９Ｇｙ、８～１０Ｇｙ、１０～１２Ｇｙ、１０～１５Ｇｙ、１０～２０Ｇｙ、１０～３０Ｇｙ、１０～４０Ｇｙ、１０～５０Ｇｙ、０．５～２０Ｇｙ、０．５～３０Ｇｙ、０．５～４０Ｇｙ又は０．５～５０Ｇｙの範囲内の照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、１～１２Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、１～７．５Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、１～６Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、１～５Ｇｙの範囲内の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、６Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、５Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、４Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、３Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量を含む。
一実施形態によれば、ＴＬＩ処理は移植の１～１０日前（例えば、１～３日前、例えば、１日前）に対象に施される。一実施形態によれば、移植の１日前、２日前、３日前又は４日前（例えば、１日前）に対象にＴＬＩで１回前処置を行う。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、－３日目～－１日目（即ち、移植前）の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、－２日目～－１日目（即ち、移植前）の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
特定の実施形態によれば、ＴＬＩは、－１日目（即ち、移植の１日前）の単回照射線量又は分割照射線量を含む。
一実施形態によれば、前処置は化学療法剤を含む。化学療法剤の例としては、ブスルファン、ブスルフェクス、シクロホスファミド、エベロリムス、フルダラビン、メルファラン、ミレラン、トリスルファン及びチオテパが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態によれば、前処置は免疫抑制剤（例えば、ラパマイシンが挙げられるが、これに限定されない）を含む。
化学療法剤及び／又は免疫抑制剤は、移植前又は移植後に単回投与又は複数回投与、例えば２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回又はそれ以上の投与（例えば、毎日投与）で対象に投与することができる。
特定の実施形態によれば、対象にラパマイシンを投与する。
ラパマイシン（シロリムスやラパミューンとしても知られている）は、例えば、ファイザー社から市販されている。ラパマイシン類似体としては、例えば、ＣＣＩ－７７９、ＲＡＤ００１、ＡＰ２３５７３が挙げられる。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、０．０１ｍｇ／日／ｋｇ～３ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重、０．０２ｍｇ／日／ｋｇ～１．５ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重、例えば、０．０５ｍｇ／日／ｋｇ～１．０ｍｇ／日／Ｋｇ、例えば、０．１ｍｇ／日／ｋｇ～０．３ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約０．１ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約０．３ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約０．５ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約０．７ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約１ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約２ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約２．５ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、治療有効量のラパマイシンは、約３ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重を含む。
一実施形態によれば、ラパマイシンは３～１０日間（例えば、３日間、４日間、５日間又は６日間）投与する。例えば、ラパマイシンは、－４日目～＋１０日目、例えば、－１日目～＋４日目（例えば、未熟造血細胞移植の－１日目、０日目、＋１日目、＋２日目、＋３日目及び＋４日目）に投与することができる。
一実施形態によれば、ラパマイシンは４日、５日、６日又は７日を超えて投与しない。
特定の実施形態によれば、ラパマイシンの投与は、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）の投与前、投与と同時又は投与後（例えば、ベト細胞投与の１日前、同日、又は翌日）に行うことができる。従って、特定の実施形態によれば、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）を０日目、即ち、未熟造血細胞と共に投与し、ラパマイシンを－４日目～＋４日目、例えば、－１日目～＋４日目（例えば、未熟造血細胞移植の－１日目、０日目、＋１日目、＋２日目、＋３日目及び＋４日目）に投与する。他の特定の実施形態によれば、未熟造血細胞を０日目に投与し、非ＧＶＨＤ誘導性抗第３者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）を＋７日目に投与し、ラパマイシンを－４日～＋４日、例えば、－１日目～＋４日目（例えば、未熟造血細胞移植の－１日目、０日目、＋１日目、＋２日目、＋３日目及び＋４日目）に投与する。
特定の実施形態によれば、ラパマイシンを－１日目に０．３ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重の用量で投与し、その後＋４日目まで（例えば、未熟造血細胞移植の０日目、＋１日目、＋２日目、＋３日目及び＋４日目に）０．１ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重の用量で投与する。
特定の実施形態によれば、ラパマイシンと非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）との組み合わせを用いて、移植片拒絶反応とＧＶＨＤをなくした造血細胞移植を可能にする。
特定の実施形態によれば、ラパマイシン、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）及び照射（例えば、ＴＢＩ又はＴＬＩ）の組み合わせを用いて、移植片拒絶反応とＧＶＨＤをなくした造血細胞移植を可能にする。
特定の実施形態によれば、移植プロトコルは－３日目～－１日目（例えば、－１日目）の１～７．５Ｇｙ（例えば、４．５～５ＧｙのＴＢＩ）の単回照射線量又は分割照射線量を含み、０日目に未熟造血細胞を投与し（例えば、メガ用量のＴ細胞枯渇、例えば、対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）、非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）を０日目～＋２０日目、例えば、０～１０日目、例えば、＋７日目に投与し（例えば、少なくとも約０．５×１０６個／Ｋｇ理想体重の用量、例えば、２．５～１０×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／ｋｇ理想体重の用量、例えば、５×１０６個（ＣＤ８＋細胞）／ｋｇ理想体重の用量）で投与し、ラパマイシンを約０．１～３ｍｇ／日／Ｋｇ理想体重の用量で、－４日目～＋４日目、例えば－１日目～＋４日目（例えば、未熟造血細胞移植の－１日目、０日目、＋１日目、＋２日目、＋３日目及び＋４日目）に投与する。
一実施形態によれば、前処置はインビボＴ細胞の減量を含む。
幾つかの実施形態によれば、インビボＴ細胞の減量を抗体によって行う。
幾つかの実施形態によれば、インビボＴ細胞の減量をＴＢＩ又はＴＬＩの前に行う。
本発明の幾つかの実施形態によれば、抗体は、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体又はその両方を含む。
本発明の幾つかの実施形態によれば、抗体は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体又は抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体を含む。
抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体は、例えば、Ｇｅｎｚｙｍｅ社やＰｆｉｚｅｒ社から、例えば、商品名Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ及びＡｔｇａｍで市販されている。
特定の実施形態によれば、移植前に対象をＡＴＧで処置しない。
ＡＴＧを使用しないか、又は低用量のＡＴＧを使用する（例えば、単回投与又は２回投与、例えば、各々理想体重１ｋｇ当たり約２ｍｇの用量）場合、より高い放射線量を非骨髄破壊的前処置プロトコルの一部として使用することができる（例えば、３～５Ｇｙ、例えば、３Ｇｙ、４Ｇｙ又は５Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量のＴＢＩ）ことが理解されよう。
特定の実施形態によれば、対象にシクロホスファミドを投与する。
一実施形態によれば、本方法は、シクロホスファミドの移植後投与を含む。
一実施形態によれば、移植から１日後、２日後、３日後、４日後、５日後（即ち、＋１日目、＋２日目、＋３日目、＋４日目、＋５日目）にシクロホスファミドを対象に投与する。
特定の実施形態によれば、移植から３日後と４日後にシクロホスファミドを対象に２回投与する。
一実施形態によれば、本発明は、移植後の投与に加えて、移植前（例えば、移植の６日前、５日前、４日前又は３日前、即ち、－６日目～－３日目）のシクロホスファミドの投与を更に企図している。
例えば、未熟造血細胞移植の場合、治療有効量のシクロホスファミドは、対象の理想体重１キログラム当たり約１～２５ｍｇ、１～５０ｍｇ、１～７５ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～１０００ｍｇ、５～５０ｍｇ、５～７５ｍｇ、５～１００ｍｇ、５～２５０ｍｇ、５～５００ｍｇ、５～７５０ｍｇ、５～１０００ｍｇ、１０～５０ｍｇ、１０～７５ｍｇ、１０～１００ｍｇ、１０～２５０ｍｇ、１０～５００ｍｇ、１０～７５０ｍｇ、１０～１０００ｍｇ、２５～５０ｍｇ、２５～７５ｍｇ、２５～１００ｍｇ、２５～１２５ｍｇ、２５～２００ｍｇ、２５～３００ｍｇ、２５～４００ｍｇ、２５～５００ｍｇ、２５～７５０ｍｇ、２５～１０００ｍｇ、５０～７５ｍｇ、５０～１００ｍｇ、５０～１２５ｍｇ、５０～１５０ｍｇ、５０～１７５ｍｇ、５０～２００ｍｇ、５０～２５０ｍｇ、５０～５００ｍｇ、５０～１０００ｍｇ、７５～１００ｍｇ、７５～１２５ｍｇ、７５～１５０ｍｇ、７５～２５０ｍｇ、７５～５００ｍｇ、７５～１０００ｍｇ、１００～１２５ｍｇ、１００～１５０ｍｇ、１００～２００ｍｇ、１００～３００ｍｇ、１００～４００ｍｇ、１００～５００ｍｇ、１００～１０００ｍｇ、１２５～１５０ｍｇ、１２５～２５０ｍｇ、１２５～５００ｍｇ、１２５～１０００ｍｇ、１５０～２００ｍｇ、１５０～３００ｍｇ、１５０～５００ｍｇ、１５０～１０００ｍｇ、２００～３００ｍｇ、２００～４００ｍｇ、２００～５００ｍｇ、 ２００～７５０ｍｇ、２００～１０００ｍｇ、２５０～５００ｍｇ、２５０～７５０ｍｇ、２５０～１０００ｍｇ含む。
特定の実施形態によれば、シクロホスファミドの治療有効量は、対象の理想体重１キログラム当たり約２５～２００ｍｇである。
一実施形態によれば、シクロホスファミドを単回投与で投与する。
一実施形態によれば、シクロホスファミドを複数回、例えば、２回、３回、４回、５回又はそれ以上の回数で投与する。
特定の実施形態によれば、シクロホスファミドを２回投与で投与する。
特定の実施形態によれば、シクロホスファミドを１回、２回、３回、４回又は５回を超える投与回数で（例えば、１日間、２日間、３日間、４日間又は５日間を超えて）投与することはない。
各シクロホスファミド投与の用量は、対象の理想体重１キログラム当たり約５ｍｇ、７．５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ又は５００ｍｇを含むことができる。
特定の実施形態によれば、シクロホスファミドの各用量は、対象の理想体重１キログラム当たり５０ｍｇである。
シクロホスファミドは、例えば、Ｚｙｄｕｓ社（Ｇｅｒｍａｎ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ社）、Ｒｏｘａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ－Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ社、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ－Ｍｅａｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏ、及びＰｆｉｚｅｒ－Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆ Ｕｐｊｏｈｎ社から、エンドキサン、シトキサン、ネオサール、プロシトックス及びRevImmuneの商品名で市販されている。
特定の実施形態によれば、シクロホスファミドの投与後（例えば、シクロホスファミド投与の２～５日後）にベト細胞を投与する。従って、特定の実施形態によれば、未熟造血細胞を０日目に投与し、シクロホスファミドを＋３日目と＋４日目に投与し、ベト細胞を＋７日目に投与する。
特定の実施形態によれば、対象にフルダラビンを投与する。
一実施形態によれば、フルダラビンを３～１０日間（例えば、３日間、４日間、５日間又は６日間、例えば、４日間）投与する。例えば、フルダラビンを－１０日目～－７日目、例えば、－８日目～－５日目、例えば、－６日目～－３日目（例えば、未熟造血細胞移植前の－６日目、－５日目、－４日目、－３日目）に投与することができる。
一実施形態によれば、フルダラビンを３日、４日、５日、６日又は７日を超えて投与しない。
特定の実施形態によれば、移植前に（例えば、－６日目～－３日目に）フルダラビンを約５～１００ｍｇ／ｍ２／日、例えば、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で、３日、４日、５日又は６日連続（例えば、４日連続）で投与する。
フルダラビンは、例えば、Ｓａｎｏｆｉ Ｇｅｎｚｙｍｅ社、Ｂａｙｅｒ社及びＴｅｖａ社から、例えば、フルダラの商品名で市販されている。
特定の実施形態によれば、移植前の－６～－３日目に対象をフルダラビンで毎日処置（例えば、約３０ｍｇ／ｍ２の用量で処置）した後、前処置レジメンとして、移植前の－３～０日目、例えば、－１日目に低線量ＴＢＩ（例えば、１～５Ｇｙ、例えば３Ｇｙの単回照射線量又は分割照射線量）を行うことができる。未熟造血細胞を０日目に投与（例えば、ＩＶによる注入）する（例えば、メガ用量Ｔ細胞枯渇、例えば、対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも約５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む）。シクロホスファミド（Ｃｙ）を未熟造血細胞移植後に２回投与し（例えば、＋３日目と＋４日目に、例えば、対象の理想体重１キログラム当たり２５～１００ｍｇの用量で投与）、その後、抗第３者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）を＋５日目～＋１０日目に（例えば、未熟造血細胞移植後の＋７日目）に、例えば、理想体重１ｋｇあたり２．５～１０×１０６個のＣＤ８＋細胞（例えば理想体重１ｋｇ当たり５×１０６個のＣＤ８＋細胞）の用量で注入する。必要に応じて、対象におけるＴ細胞減量を誘導するように、移植前の－９日目～－７日目にＡＴＧを毎日投与することができる（例えば、理想体重１Ｋｇ当たり約２ｍｇの用量で）。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の移植の当日、例えば、－１日目又は０日目の朝にＴＢＩを投与し、移植を同日、例えば、－１日目の夕方に行う。特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の２回目の投与は翌日（例えば、０日目）に行う。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は新鮮な細胞を含む。
特定の実施形態によれば、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は、前もって入手し、凍結保存し、移植当日に解凍した細胞を含む。
一実施形態によれば、対象を追加の支持薬、例えば、化学療法アジュバントで処置する。
一実施形態によれば、シクロホスファミドの初回投与の直前（例えば、シクロホスファミドの初回投与の２時間前、１時間前、３０分前、１５分前）に用量分のメスナ（例えば、１０ｍｇ／ｋｇの静脈内ピギーバック（ＩＶＰＢ））で対象を処置する。一実施形態によれば、メスナの投与は４時間毎に繰り返し、合計１０回投与する。
メスナは、例えば、でＢａｘｔｅｒ社からＵｒｏｍｉｔｅｘａｎ及びＭｅｓｎｅｘの商品名で市販されている。
一実施形態によれば、シクロホスファミド（Ｃｙ）の各投与の前にオンダンセトロン（又は他の制吐薬）で対象を処置する。
一実施形態によれば、対象を免疫抑制剤で処置しない（例えば、本明細書に記載のラパマイシンとベト細胞、又はシクロホスファミドとベト細胞は別とする）。
特定の実施形態によれば、対象を長期ＧＶＨＤ予防（例えば、免疫抑制剤）で、例えば、移植後７～１４日超に亘って、例えば、移植から７日後、８日後、９日後、１０日後、１１日後、１２日後、１３日後又は１４日後に処置することはない。
一実施形態によれば、対象を免疫抑制剤で処置する。
免疫抑制剤の例としては、タクロリムス（ＦＫ－５０６又はフジマイシンとも称される、商品名：プログラフ、アドバグラフ、プロトピック）、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム、プレドニゾン、メトトレキサート、シクロホスファミド、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン（スルファサラゾピリン）、金塩、Ｄ－ペニシラミン、レフルノミド、アザチオプリン、アナキンラ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、エタネルセプト、ＴＮＦα阻害剤、炎症性サイトカインを標的とする生物学的薬剤、及び非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が挙げられるが、これらに限定されない。ＮＳＡＩＤの例としては、アセチルサリチル酸、サリチル酸コリンマグネシウム、ジフルニサル、サリチル酸マグネシウム、サルサラート、サリチル酸ナトリウム、ジクロフェナク、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラク、メクロフェナム酸、ナプロキセン、ナブメトン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、Ｃｏｘ－２阻害剤、トラマドールが挙げられるが、これらに限定されない。これらの薬剤は個々に投与してもよく、組み合わせて投与してもよい。
一実施形態によれば、副腎皮質ステロイドをベト細胞の前処置として投与しない。
本出願に基づく（maturing from）特許の存続期間中に、多くの関連する非骨髄破壊的前処置剤が開発されることが予想されるが、非骨髄破壊的前処置剤という用語の範囲は、そのような全ての新技術を先験的に包含することを意図する。
本明細書で使用される「約」という用語は±１０％を意味する。
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及びその活用形は、「限定されるものではないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味する。
「から成る」という用語は、「含み、限定される」ことを意味する。
「から実質的に成る」という用語は、組成物、方法又は構造が追加の成分、工程及び／又は部分を含み得ることを意味する。但しこれは、追加の成分、工程及び／又は部分が、請求項に記載の組成物、方法又は構造の基本的且つ新規な特性を実質的に変更しない場合に限られる。
本明細書において、単数形を表す「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数をも対象とする。例えば、「化合物（a compound）」又は「少なくとも１種の化合物」には、複数の化合物が含まれ、それらの混合物をも含み得る。
本願全体を通して、本発明の様々な実施形態は範囲形式にて示され得る。範囲形式での記載は、単に利便性及び簡潔さのためであり、本発明の範囲の柔軟性を欠く制限ではないことを理解されたい。従って、範囲の記載は、可能な下位の範囲の全部、及びその範囲内の個々の数値を特異的に開示していると考えるべきである。例えば、１～６といった範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６等の部分範囲のみならず、その範囲内の個々の数値、例えば１、２、３、４、５及び６も具体的に開示するものとする。これは、範囲の大きさに関わらず適用される。
本明細書において数値範囲を示す場合、それは常に示す範囲内の任意の引用数（分数又は整数）を含むことを意図する。第１の指示数と第２の指示数「との間の範囲」という表現と、第１の指示数「から」第２の指示数「までの範囲」という表現は、本明細書で代替可能に使用され、第１の指示数及び第２の指示数と、それらの間の分数及び整数の全部を含むことを意図する。
本明細書で使用する「方法」という用語は、所定の課題を達成するための様式、手段、技術及び手順を意味し、化学、薬理学、生物学、生化学及び医療の各分野の従事者に既知のもの、又は既知の様式、手段、技術及び手順から従事者が容易に開発できるものが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する「治療する」という用語は、病態の進行の抑止、実質的な阻害、遅延又は逆転、病態の臨床的又は審美的な症状の実質的な寛解、或いは病態の臨床的又は審美的な症状の悪化の実質的な予防を含む。
明確さのために別個の実施形態に関連して記載した本発明の所定の特徴はまた、１つの実施形態において、これら特徴を組み合わせて提供され得ることを理解されたい。逆に、簡潔さのために１つの実施形態に関連して記載した本発明の複数の特徴はまた、別々に、又は任意の好適な部分的な組み合わせ、又は適当な他の記載された実施形態に対しても提供され得る。様々な実施形態に関連して記載される所定の特徴は、その要素なしでは特定の実施形態が動作不能でない限り、その実施形態の必須要件であると捉えてはならない。
上述したように、本明細書に記載され、特許請求の範囲に請求される本発明の様々な実施形態及び態様は、以下の実施例によって実験的に支持されるものである。
ここで、上記の記載と共に本発明を限定することなく説明する以下の実施例に参照する。
一般に、本明細書で使用される命名法や本発明で利用される実験手順には、分子、生化学、微生物学及び組換えＤＮＡ技術が含まれる。そのような技術は文献で十分に説明されている。例えば、"Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989)、"Current Protocols in Molecular Biology" Volumes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994)、Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989)、Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, New York (1988)、Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, New York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Vols. 1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998)、米国特許第４，６６６，８２８号、第４，６８３，２０２号、第４，８０１，５３１号、第５，１９２，６５９号及び第５，２７２，０５７号に記載の方法、"Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volumes I-III Cellis, J. E., ed. (1994)、"Current Protocols in Immunology" Volumes I-III Coligan J. E., ed. (1994)、Stites et al. (eds), "Basic and Clinical Immunology" (8th Edition), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994)、Mishell and Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman and Co., New York (1980)、利用可能なイムノアッセイは特許及び科学文献に広く記載されている（例えば、米国特許第３，７９１，９３２号、第３，８３９，１５３号、第３，８５０，７５２号、第３，８５０，５７８号、第３，８５３，９８７号、第３，８６７，５１７号、第３，８７９，２６２号、第３，９０１，６５４号、第３，９３５，０７４号、第３，９８４，５３３号、第３，９９６，３４５号、第４，０３４，０７４号、第４，０９８，８７６号、第４，８７９，２１９号、第５，０１１，７７１号及び第５，２８１，５２１号参照）、"Oligonucleotide Synthesis" Gait, M. J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., and Higgins S. J., eds. (1985)、"Transcription and Translation" Hames, B. D., and Higgins S. J., Eds. (1984)、"Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986)、"Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986)、"A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984)並びに"Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press、"PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990)、Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization - A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996)。これら文献の全てを本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。他の一般的な参考文献はこの文書全体で提供される。そこに記載の手順は、当技術分野で周知であると考えられており、読者の便宜のために提供される。そこに含まれる全ての情報を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
一般材料と実験手順
動物
使用したマウスは、次の系統：Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ）、ＦＶＢ（Ｈ－２ｑ）の６～１２週齢のマウスであり、Ｈａｒｌａｎ Ｉｓｒａｅｌ社（イスラエル国、レホヴォト）から購入した。Ｂ６ヌード（Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｊ、Ｈ－２ｂ）マウスとβ－アクチン－ＧＦＰ（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンド）マウスは、ジャクソン研究所から購入し、ワイツマン研究所の動物施設で飼育した。ＮＯＤ／ＬｔＪ（Ｈ－２Ｋｄ／Ｈ－２Ｄｂ）マウスは、ワイツマン研究所の動物施設で飼育されている。全てのマウスを小型ケージに入れ、ワイツマン研究所の施設内動物管理使用委員会で承認された条件下、ＳＰＦ環境で滅菌食品と酸性水を与えた。
宿主非反応性ドナー抗第三者ベト細胞の調製
セントラルメモリー表現型（ＣＤ８＋ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌ＋）を有する抗第三者Ｔｃｍを、［Ophir E. at al., Blood (2010) 115(10): 2095-104］に先に記載されているように調製した。即ち、ドナーマウスの脾細胞を、照射第三者脾細胞に対してサイトカイン欠乏下で６０時間培養した。次に、磁性粒子（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社製）を用いてＣＤ８細胞をポジティブ選択し、Ａｇのない環境下で培養した。ｒｈＩＬ－１５（２０ｎｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を１日置きに添加した。精製集団を得るために、培養の最後（１６日目）に、ＣＤ６２Ｌ発現について細胞をポジティブ選択し（磁気活性化細胞選別－ＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社製）、ＦＡＣＳ分析用に細胞を回収した。
骨髄調製
Ｂ６ヌード（Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｊ、Ｈ－２ｂ）マウス（７～１２週齢）から長骨を採取した。骨を粉砕して単一細胞懸濁液を得ることによって骨髄を抽出した。骨髄をカウントし、適切な濃度にした後、マウスの尾静脈に静脈内注射した。
ＢＭ同種移植用の減量前処置モデル
ＮＯＤ／ＬｔＪ（Ｈ－２Ｋｄ／Ｈ－２Ｄｂ）雌マウス（８週齢）に対し、－１日目に指示線量（例えば、４．５Ｇｙ）で亜致死的ＴＢＩを施した。翌日（例えば、０日目）に、５×１０６個の抗第三者ベト細胞（Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ）Ｔｃｍ）の存在下又は非存在下で、マウスに「メガ用量」のＢ６ヌード（Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｊ、Ｈ－２ｂ）マウスＢＭ細胞（２５×１０６個）を移植した。また、宿主には１２．５μ／マウス／日のラパマイシン（ラパミューン）の皮下注射も行った（－１日目～＋４日目）。移植後、マウスの全体的な外観、体重を毎週評価し、採血し、血糖値を検査して高血糖の検出を行った。血糖値の測定値が２回連続で２００ｍｇ／ｄＬを超えた場合に病的状態であると定義した。キメリズム分析を定期的（３０日毎）に行なった。
キメリズム分析
キメリズム分析は定期的に行い、フローサイトメトリーで判定した。末梢血は後眼窩出血によって採取した。フィコール・パック（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡＢ製、）で細胞を分取し、各マウスの単離単核細胞を、ドナー及び宿主表面マーカーに対する直接免疫蛍光標識抗体によって二重染色した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析は、改変Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ Ｉを使用して行った。ＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ４４、ＣＤ６２Ｌ、Ｈ２Ｄｄ、Ｈ２Ｋｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製、ＢＤ社製、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社製）に特異的な標識抗体で細胞を染色した。ＦＡＣＳＤｉｖａ８．０．ソフトウェアとＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．２ソフトウェアを使用してデータを分析した。
フローサイトメトリー分析
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析は、改変Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ Ｉを使用して行った。ＣＤ３－ＰＥ／ＦＩＴＣ／ＡＰＣ、ＣＤ４－ＡＰＣ／ＰＢ、ＣＤ８α－ＰＥ／ＦＩＴＣ／ＡＰＣ／ＡＰＣ－Ｃｙ７、ＣＤ１９－ＰＥ／ＦＩＴＣ／ＡＰＣ／ＰＥ－Ｃｙ７、ＣＤ６２Ｌ－ＰＥ／ＦＩＴＣ／ＡＰＣ、ＣＤ４４－ＰＥ／ＦＩＴＣ／ＡＰＣ、ＣＤ４５－ＡＰＣ－Ｃｙ７、ＣＤ１１ｂ－ＰｅＣｙ７、Ｌｙ６Ｇ－ＰＢ、Ｌｙ６Ｃ－ＰｅｒＣＰ、Ｈ２Ｋｂ－ＰＥ／ＦＩＴＣ、Ｈ２Ｄｄ－ＰＥ／ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ社製、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ社製、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ社製）に特異的な標識抗体で細胞を染色した。ＦＡＣＳＤｉｖａ８．０．ソフトウェアとＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．２ソフトウェアを使用してデータを分析した。
ＴＣＲライブラリー調製
全ての実験群のマウスから採取した脾臓を処理し、フィコール・パックＰＬＵＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ社製）を用いた密度勾配遠心分離によって細胞を単離した。その後、Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズ（磁気活性化細胞選別－ＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社製）を用いたポジティブ選択を製造元の説明書に従って行った。最初にＣＤ８ポジティブ選択、次にＣＤ８ネガティブ画分からＣＤ４ポジティブ選択、次にＣＤ４ネガティブ画分からＣＤ２５ポジティブ選択を行った。選別した細胞集団は別々に溶解し、ＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ社製）にて製造元の説明書に従ってＲＮＡを安定化させた。ＲＮｅａｓｙ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用い、製造元の説明書に従ってＲＮＡを単離し、－８０℃で保存した。ライブラリー調製は、定量的ＴＣＲ配列決定用のプロトコルに基づいて行った。本方法の全詳細は、先に公表されている［Oakes T et al. Front Immunol. (2017), 8:1267］。具体的には、Ｔ細胞集団から高品質の全ＲＮＡを定量化した。次に、各試料をデオキシリボヌクレアーゼで処理し、ｃＤＮＡ生成のために逆転写を行った。次に、Ｖ定常領域にプライマーと固有分子識別子（ＵＭＩ）を連結し、増幅ＰＣＲを行った。最後に、試料を精製し、配列決定を行った。パイプライン分析によってデータを評価した。
二光子レーザー走査型顕微鏡による画像取得
上で詳述したプロトコルに従って、Ｂ６ヌード（Ｆｏｘｎ１ｎｕ／Ｊ、Ｈ－２ｂ）マウスＢＭ細胞（２５×１０６個）と５×１０６個の抗第三者ＧＦＰポジティブＣ５７ＢＬ／６バックグラウンド（Ｈ－２ｂ）ＴｃｍをＮＯＤマウスに移植した。移植の１年後に宿主を屠殺し、器官を採取して顕微鏡で観察した。
Ｃｏｈｅｒｅｎｔ Ｃｈａｍｅｌｅｏｎ Ｖｉｓｉｏｎレーザーを備えたＺｅｉｓｓ ＬＳＭ８８０正立顕微鏡を生体内イメージング実験に使用した。９４０ｎｍに調整したフェムト秒パルス二光子レーザーを用いて画像を取得した。顕微鏡には５６５ＬＰＸＲを含むフィルターキューブを取り付けて、発光をＰＭＴ検出器（ｔｄＴｏｍａｔｏ蛍光用の５７９～６３１ｎｍフィルター付き）に分割し、更に５０５ＬＰＸＲミラーを取り付けて、発光を２個のＧａＡｓｐ検出器（ＧＦＰ蛍光用の５００～５５０ｎｍフィルター付き）に分割した。膝窩ＬＮのＧＣ ＬＺ（ＮＰ－ｔｄＴｏｍａｔｏで標識）又はＤＺ（傍皮質に面し、自家蛍光マクロファージを含む）を８２０ｎｍで光活性化した。タイル画像は１００～２００μｍのＺスタックとして、各Ｚ面間５μｍステップで取得した。ズームは１．５に設定し、５１２×５１２のｘ－ｙ解像度で画像を取得した。
統計分析
生存データの分析はカプランマイヤー曲線（ログランク検定）を使用して行った。平均値の比較はスチューデントのｔ検定を用いて行った。０．０５未満のＰ値は統計的に有意であると見なした。
減量強度前処置後のベトＴｃｍ細胞とＴ細胞枯渇骨髄移植片を用いたＴ細胞媒介性糖尿病の治療
本研究では、サイトカイン欠乏下で照射第三者脾細胞（ＦＶＢ、Ｈ－２ｑ）に対して培養したＣ５７ＢＬ／６ドナー（Ｈ－２ｂ）から得た脾細胞からＴｃｍベト細胞を生成した。このような条件下で第三者刺激因子に対してＣＤ８マウスＴ細胞を選択的に増殖すると、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を媒介する可能性のあるバイスタンダー抗宿主Ｔ細胞クローンの選択的な「無視による死」がもたらされるが、このような細胞は、ＩＬ－１５存在下での更なる培養中に、抗第三者Ｔクローンのその後の増殖によって更に希釈される。このような培養条件では、ＧＶＨ反応性Ｔ細胞の選択的消失が引き起こされることに加え、インビボでの強いベト活性に重要であることが示されているセントラルメモリー表現型が誘導される。
糖尿病治療に対するこのような移植片の安全性と有効性を評価するために、８週齢のＮＯＤ（Ｈ－２ｄ）マウス（糖尿病発症前、即ち、糖尿病の症状を発症する前）に対して－１日目に４．５ＧｙのＴＢＩ前処置を行い、その後０日目に抗第三者ベトＴｃｍとメガ用量のヌード骨髄（ＮｕＢＭ）を移植した（図１）。前処置の毒性を軽減するために、ラパマイシンによる短期処理を行ったが、これは、４．５ＴＢＩ後にベト細胞と組み合わせた場合にキメリズム誘導を可能にすることが既に見出されている［Ophir E et al, Blood (2013) 121(7):1220-1228］。従って、ラパマイシン処理を－１日目～＋４日目まで行った（図１）。未処理のもの、又は移植をせずに前処置を施したものを対照とした。４種の独立した実験（移植群のＮＯＤマウス、ｎ＝３５）では、移植から６か月後に全ての移植マウスで８３．５％～９９．６％の高いキメリズムが見られた。このような結果は４種の独立した実験において一貫していた。注目すべきは、キメリズムが達成されなかったマウスは、糖尿病の発症によってその時点以前に死亡したことである（図３のＡ）。
次に、ＦＡＣＳ分析によってキメリズムの性質をより深く評価した結果、リンパ球、骨髄系細胞、樹状細胞等の様々な細胞型で多系統キメリズムが確認された（図３のＢ～Ｊ）。
２５０日間の経過観察において、未処理の対照群では７２．４％のマウス、前処置群（ＴＢＩとラパマイシンのみで処置）では９５％が糖尿病で死亡したが、十分な前処置とＴｃｍ投与を行った移植マウスでは糖尿病関連の死亡率はわずか８．５％又は１１．４％であった（それぞれ図２Ａ、図４のＡ）。これに対し、治療群の８８．５％は生存し、糖尿病を発症しなかった（図５）。更に、移植マウスではＧＶＨＤや他の移植関連の死亡は観察されず（図２Ｂ及び４のＢ）、この治療方式の安全性がしっかりと確認された。
これらの結果は、１型糖尿病における非骨髄破壊的同種異系ＴＤ－ＨＳＣＴの安全性と有効性のコンセプトを実証している。
移植ＮＯＤマウスにおけるベトＴｃｍ持続性
レシピエントＮＯＤマウスにおけるＴｃｍの生存に関する問題は、寛容の持続性を評価する上でも、このようなベト細胞の将来の応用にとっても大きな関心事である。そのため、ＧＦＰマウス（Ｃ５７ＢＬバックグラウンド）からＴｃｍベト細胞を生成した。図１に記載のものと同じプロトコルに従って細胞を移植した（例えば、４．５Ｇｙ照射、－１日目～＋４日目にラパマイシン処理、０日目にベト細胞と共に大用量のＢ６ヌード骨髄移植）。移植から１年後、マウスを屠殺し、二光子レーザー走査型顕微鏡でリンパ器官を評価した。図６に示すように、評価した３匹のマウスでは、脾臓と数種類のリンパ節にＧＦＰ＋Ｔｃｍ細胞が存在していた。
キメラＮＯＤマウスにおける糖尿病予防に関するＴ細胞レパートリー分析は、欠失に基づく機序を支持している
糖尿病発症予防の根底にある機序を探るためにＴ細胞レパートリー分析を行った。マウスのＴ細胞受容体の可変相補性決定領域（ＣＤＲ３）を比較すると、図７のＡに示すように、若い未処理マウスでは共通するアミノ酸レベルが高いことが示された。これに対し、処理マウスでは共通する配列のレベルが低かった。
Ｖβ使用量の評価によって、予想通り、ＣＤ４とＣＤ８では使用量が異なることが分かった。注目すべきは、処理マウスのＣＤ８Ｖβ使用量が、未処理マウスのＣＤ８Ｖβ使用量と異なっていたことである（図７のＢ）。ＣＤ４とＣＤ２５のＶβ使用量の違いも、処理マウスと未処理マウスを比較した際に見られた。
次に、Ｉ型糖尿病に関連する公知のＣＤＲ３配列［Gioia L. et al. Sci Immunol (2019) 4(38):10; Baker RL et al. Diabetes (2018) 67(9):1836-1846］を検索し、今回のデータにそれが存在するかどうか評価した。図８に示すように、糖尿病発症前後のＮＯＤマウスには、これらの成分に対するＴ細胞受容体を表すインスリンやＧＡＤ６５に関連する配列が見られる。注目すべきは、これらの配列が処理マウスでは見られなかったことであり、これは、同種異系骨髄移植プロトコルによってこれらのクローンが欠失したことを強く示している。
ヒト治療用プロトコル
Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患のヒト矯正用治療プロトコルを評価するために、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、フルダラビン（Ｆｕ）及び低線量全身照射（ＴＢＩ）を含む減量強度前処置レジメンが企図される。このレジメンは、メガ用量のＴ細胞枯渇骨髄、移植後シクロホスファミド及びベト細胞を更に含む。
治療プロトコルは以下の通りである。
－９：ＡＴＧ（サイモグロブリン）理想体重１ｋｇ当たり２ｍｇ
－８：ＡＴＧ（サイモグロブリン）理想体重１ｋｇ当たり２ｍｇ
－７：ＡＴＧ（サイモグロブリン）理想体重１ｋｇ当たり２ｍｇ
－６：フルダラビン３０ｍｇ／ｍ２
－５：フルダラビン３０ｍｇ／ｍ２
－４：フルダラビン３０ｍｇ／ｍ２
－３：フルダラビン３０ｍｇ／ｍ２
－２：安静（治療なし）
－１：ＴＢＩ ３Ｇｙ（単回）
（－１：必要に応じて、ＴＢＩの６～１６時間後にメガ用量のＴ細胞枯渇未熟造血細胞を初回注入）
０：メガ用量のＴ細胞枯渇未熟造血細胞を注入（即ち、理想体重１ｋｇ当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を１回又は２回注入して対象に投与する）
＋３：シクロホスファミド（ＣＹ）５０ｍｇ／ｋｇ理想体重／日（静脈内）
＋４：シクロホスファミド（ＣＹ）５０ｍｇ／ｋｇ理想体重／日（静脈内）
＋７：抗第三者Ｔｃｍ細胞（即ち、ベト細胞）を理想体重１ｋｇ当たり５×１０６～１０×１０６個のＣＤ８＋細胞の用量で注入。
本発明をその特定の実施形態との関連で説明したが、多数の代替、修正及び変種が当業者には明らかであろう。従って、そのような代替、修正及び変種の全ては、添付の特許請求の範囲の趣旨及び広い範囲内に含まれることを意図するものである。
本明細書で言及した全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許及び特許出願のそれぞれについて具体的且つ個別に本明細書に援用する場合と同程度に、それらの全体を本明細書の一部を構成するものとして援用する。加えて、本願における如何なる参考文献の引用又は特定は、このような参考文献が本発明の先行技術として使用できることの容認として解釈されるべきではない。また、各節の表題が使用される範囲において、必ずしも限定として解釈されるべきではない。更に、本出願の優先権書類は、その全体が本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
配列番号１： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号２： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号３： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号４： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号５： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号６： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号７： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号８： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号９： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号１０： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列
配列番号１１： ＣＤＲ３ベータのアミノ酸配列

Claims (60)

  1. Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患を治療又は予防する方法であって、
    （ａ）未熟造血細胞を対象に移植することと、
    （ｂ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性の抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することを含み、前記抗第三者細胞が寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができ、それによって対象のＴ細胞媒介性自己免疫疾患を治療する、方法。
  2. Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患の治療又は予防を必要とする対象においてその疾患の治療又は予防に使用するための、未熟造血細胞移植片、および治療有効量の非ＧＶＨＤ誘導性の抗第三者細胞の単離集団であって、前記抗第三者細胞がセントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含み、寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる細胞の単離集団である、未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  3. 前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団が、前記未熟造血細胞移植片と同時に投与されるものである、請求項１に記載の方法、又は請求項２に記載する使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  4. 前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団が、前記未熟造血細胞移植片の投与後に投与されるものである、請求項１に記載の方法、又は請求項２に記載する使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  5. 前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団が、前記未熟造血細胞移植片の投与後１～２０日目に投与されるものである、請求項１又は４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２又は４のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  6. 前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団が、理想体重１ｋｇ当たり少なくとも０．５×１０６個のＣＤ８＋細胞の用量で投与されるものである、請求項１又は３～５のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～５のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  7. 前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を、移植片拒絶反応の抑制及び／又はドナー特異的寛容の誘導のために使用する、請求項１又は３～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団を、移植片拒絶反応の抑制及び／又はドナー特異的寛容の誘導のための補助療法として使用する、請求項２～６のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  9. （ａ）サイトカインを除去した培養液中で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を１種以上の第三者抗原と接触させ、抗原反応性細胞を富化させることと、
    （ｂ）工程（ａ）で得た前記細胞をサイトカインの存在下で培養し、セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を含む細胞を増殖させ、それによって非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞を生成すること
    を含む方法によって前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団が生成される、請求項１又は３～７のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  10. 前記１種以上の第三者抗原と接触させる前に前記ＰＢＭＣからＣＤ４＋及び／又はＣＤ５６＋発現細胞を枯渇させることを更に含む、請求項９に記載の方法、又は請求項９に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  11. ＣＤ４５ＲＡ＋発現細胞を選択してＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ８＋表現型を発現するナイーブＴ細胞の集団を得ることを更に含む、請求項９～１０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１０のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  12. ＣＤ４５ＲＡ＋発現細胞を枯渇させてＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ８＋表現型を発現するメモリーＴ細胞を富化させた集団を得ることを更に含む、請求項９～１０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１０のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  13. 工程（ａ）における前記１種以上の抗原との前記接触をＩＬ－２１の存在下で行う、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１２のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  14. 工程（ａ）で得た前記細胞のサイトカインの存在下での培養が、前記細胞をＩＬ－１５の存在下で培養することを含む、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１３のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  15. 工程（ａ）で得た前記細胞のサイトカインの存在下での培養が、前記細胞をＩＬ－２１、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－７の存在下で培養することを含む、請求項９～１４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１４のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  16. 前記１種以上の抗原が、ウイルス抗原、細菌抗原、腫瘍抗原、自己免疫疾患関連抗原、タンパク質抽出物、精製タンパク質及び合成ペプチドから成る群より選択される、請求項９～１５のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１５のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  17. 前記１種以上の抗原が、自己抗原提示細胞、非自己抗原提示細胞、人工媒体又は人工抗原提示細胞によって提示されるものである、請求項９～１６のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１６のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  18. 前記１種以上の抗原が、前記ＰＢＭＣと同じ起源の抗原提示細胞によって提示されるものである、請求項９～１７のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１７のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  19. 前記１種以上の抗原が、末梢血リンパ球、脾臓又はリンパ節から精製された細胞、サイトカイン動員ＰＢＬ、インビトロ増殖抗原提示細胞（ＡＰＣ）、インビトロ増殖樹状細胞及び人工抗原提示細胞から成る群より選択される刺激細胞を含む、請求項９～１８のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１８のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  20. ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ＋シグネチャーを選択することを更に含む、請求項９～１９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項９～１９のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  21. 前記未熟造血細胞が、Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞を含む、請求項１、３～７又は９～２０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８～２０のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  22. 前記未熟造血細胞が、対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１、３～７又は９～２１のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８～２１のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  23. 前記未熟造血細胞が、ＣＤ３＋及び／又はＣＤ１９＋発現細胞を枯渇している、請求項１、３～７又は９～２２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８～２２のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  24. 前記未熟造血細胞が、対象の理想体重１ｋｇ当たり５×１０５個未満のＣＤ３＋発現細胞を含む、請求項１、３～７又は９～２３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８～２３のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  25. 前記未熟造血細胞移植片が、対象と非同系である、請求項１、３～７又は９～２４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８～２４のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  26. 前記未熟造血細胞移植片と前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団とが、同一のドナーから得たものである、請求項１、３～７又は９～２５のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６又は８～２５のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  27. 非骨髄破壊的前処置下で対象を前処置することを更に含む、請求項１、３～７又は９～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 非骨髄破壊的前処置を更に含む、請求項２～６又は８～２６のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  29. 前記非骨髄破壊的前処置は、全身照射（ＴＢＩ）、部分身照射（ＴＬＩ）、化学療法剤、抗体免疫療法又は共刺激遮断の内の少なくとも１種を含む、請求項２７に記載の方法、又は請求項２８に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  30. 前記ＴＢＩが１～６Ｇｙの範囲内の照射線量を含む、請求項２９に記載の方法、又は請求項２９に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  31. 前記ＴＢＩが前記移植の－３日目～０日目のいずれか１日に施される、請求項２９～３０のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２９～３０のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  32. 前記ＴＢＩが前記移植の１日前又は２日前に施される、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２９～３１のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  33. 前記化学療法剤が、エベロリムス、フルダラビン、シクロホスファミド、ブスルファン、トリスルファン、メルファラン又はチオテパの内の少なくとも１種を含む、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２９～３２のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  34. 治療有効量のラパマイシンを対象に投与することを更に含む、請求項１、３～７、９～２７又は２９～３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 治療有効量のラパマイシンを更に含む、請求項２～６、８～２６又は２８～３３のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  36. 前記治療有効量のラパマイシンが、対象の理想体重１キログラム当たり１日当たり少なくとも０．１ｍｇのラパマイシンを含む、請求項３４に記載の方法、又は請求項３５に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  37. 前記ラパマイシンを前記移植の－１日目～＋４日目に対象に投与する、請求項３４又は３６のいずれか一項に記載の方法、又は請求項３５～３６のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  38. 前記非骨髄破壊的前処置がＴ細胞の減量を含む、請求項２７又は２９～３３のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２８～３３のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  39. 前記Ｔ細胞の減量が、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）抗体、抗ＣＤ５２抗体又は抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体の内の少なくとも１種によって行なわれる、請求項３８に記載の方法、又は請求項３８に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  40. 前記非骨髄破壊的前処置が治療有効量のフルダラビンを含む、請求項２７、２９～３３又は３８～３９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２８～３３又は３８～３９のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  41. 治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することを更に含む、請求項１、３～７、９～２７、２９～３３又は３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 治療有効量のシクロホスファミドを更に含む、請求項２～６、８～２６、２８～３３又は３８～４０のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  43. 前記治療有効量のシクロホスファミドが、対象の理想体重１キログラム当たり２５～２００ｍｇを含む、請求項４１に記載の方法、又は請求項４２に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  44. 前記シクロホスファミドを前記移植の＋３日目及び＋４日目に対象に投与する、請求項４１又は４３に記載の方法、又は請求項４２～４３のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  45. （ａ）非骨髄破壊的前処置下で対象を前処置することにおいて、前記非骨髄破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）と免疫抑制剤を含み、前記ＴＢＩと前記免疫抑制剤を移植の－４日目～＋４日目に施す前処置と、
    （ｂ）用量分のＴ細胞枯渇未熟造血細胞を対象に移植することにおいて、前記Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む移植と、
    （ｃ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することにおいて、前記抗第三者細胞細胞が寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができる、投与と
    を含む、請求項１、３～７又は９～２７のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記工程（ｂ）と工程（ｃ）を同時に行う、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の前記移植後１日目～２０日目に前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団を投与する、請求項４５に記載の方法。
  48. 前記免疫抑制剤がラパマイシンを含み、前記ラパマイシンを前記移植の－１日目～＋４日目に投与する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記ＴＢＩを前記移植の－１日目に施す、請求項４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. （ａ）非骨髄破壊的前処置下で対象を前処置することにおいて、前記非骨髄破壊的前処置は全身照射（ＴＢＩ）と化学療法剤を含み、前記ＴＢＩと前記化学療法剤を移植の－６日目～０日目に施す前処置と、
    （ｂ）用量分のＴ細胞枯渇未熟造血細胞を対象に移植することにおいて、前記Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞は対象の理想体重１キログラム当たり少なくとも５×１０６個のＣＤ３４＋細胞を含む移植と、
    （ｃ）治療有効量のシクロホスファミドを対象に投与することにおいて、前記治療有効量の前記シクロホスファミドは対象の理想体重１キログラム当たり２５～２００ｍｇのシクロホスファミドを含み、前記Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の前記移植後＋３日目と＋４日目に２回投与で前記治療有効量の前記シクロホスファミドを対象に投与することと、
    （ｄ）セントラルメモリーＴリンパ球（Ｔｃｍ）表現型を有する細胞を含む非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団の治療有効量を対象に投与することにおいて、前記抗第三者細胞は寛容誘導細胞であり、移植後にリンパ節にホーミングすることができ、前記Ｔ細胞枯渇未熟造血細胞の前記移植後＋５日目～＋１０日目に前記非ＧＶＨＤ誘導細胞の単離集団を投与することと
    を含む、請求項１、３～７又は９～２７のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記化学療法剤がフルダラビンを含み、前記フルダラビンを前記移植前の－６日目～－３日目に投与する、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記ＴＢＩを前記移植前の－１日目に施す、請求項５０～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 工程（ａ）の前にＴ細胞減量の実施を更に含む、請求項５０～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記移植前－９日目～－７日目に投与する抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）によって前記Ｔ細胞減量を行う、請求項５３に記載の方法。
  55. Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）、橋本甲状腺炎、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、非感染性ぶどう膜炎、エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、免疫性血小板紫斑病（ＩＴＰ）、慢性糸球体腎炎、重症筋無力症、全身性強皮症、多発性筋炎、及びアジソン病から成る群より選択される、請求項１、３～７、９～２７、２９～３４、３６～４１又は４３～５４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６、８～２６、２８～３３、３５～４０又は４２～４４のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  56. Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）である場合、移植片は膵臓細胞又は組織移植片を更に含む、請求項５５に記載の方法、又は請求項５５に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  57. 前記膵臓細胞又は組織移植片が、前記未熟造血細胞移植片及び／又は前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団と同一のドナーに由来する、請求項５６に記載の方法、又は請求項５６に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  58. Ｔ細胞媒介性自己免疫疾患が原発性胆汁性肝硬変又は自己免疫性肝炎である場合、移植片は肝細胞又は組織移植片を更に含む、請求項５５に記載の方法、又は請求項５５に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  59. 前記肝細胞又は組織移植片が、前記未熟造血細胞移植片及び／又は前記非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団と同一のドナーに由来する、請求項５８に記載の方法、又は請求項５８に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
  60. 対象はヒト対象である、請求項１、３～７、９～２７、２９～３４、３６～４１又は４３～５９のいずれか一項に記載の方法、又は請求項２～６、８～２６、２８～３３、３５～４０、４２～４４又は５５～５９のいずれか一項に記載の使用のための未熟造血細胞移植片および非ＧＶＨＤ誘導性抗第三者細胞の単離集団。
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