JP2023134550A - Erythropoietin production promoting composition - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、乳酸菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物に関する。 The present invention relates to a composition for promoting erythropoietin production containing lactic acid bacteria cells as an active ingredient.
エリスロポエチンは赤血球の産生を促進する造血因子の一つである。腎性貧血の治療薬として遺伝子組み換えエリスロポエチンが上市されており、２０１７年度の売り上げは８００億円を超える。 Erythropoietin is one of the hematopoietic factors that promotes the production of red blood cells. Genetically recombinant erythropoietin has been put on the market as a treatment for renal anemia, with sales exceeding 80 billion yen in fiscal 2017.
貧血気味の高齢者にエリスロポエチン製剤を投与することで、疲労感の改善ができることが報告されている（非特許文献１）。 It has been reported that fatigue can be improved by administering an erythropoietin preparation to elderly people with a tendency to anemia (Non-Patent Document 1).
一方で、エリスロポエチンは赤血球を増加させることで血中ヘモグロビン濃度が上昇するため、持久運動能力の向上に効果がある。そのため、エリスロポエチンの投与はスポーツ選手におけるドーピングのひとつとして問題視されている。 On the other hand, erythropoietin increases the blood hemoglobin concentration by increasing the number of red blood cells, so it is effective in improving endurance exercise capacity. Therefore, the administration of erythropoietin is considered a problem as a type of doping for athletes.
そこで、エリスロポエチンを投与することなく、体内のエリスロポエチンの産生を促進することができれば、ドーピングに該当しない持久力改善や疲労感軽減が達成できると考えられる。特許文献１では転写因子ＧＡＴＡの阻害によるエリスロポエチンの発現阻害解除によってエリスロポエチンの産生を誘導する化合物が示されている。 Therefore, if the production of erythropoietin in the body could be promoted without administering erythropoietin, it would be possible to improve endurance and reduce fatigue, which would not be associated with doping. Patent Document 1 discloses a compound that induces the production of erythropoietin by releasing the inhibition of erythropoietin expression by inhibiting the transcription factor GATA.
しかしながら、手軽に摂取できる食品で体内のエリスロポエチンの産生を誘導する事例はこれまでに報告されていない。 However, no case has been reported so far of inducing the production of erythropoietin in the body with easily ingested foods.
ところで、乳酸菌およびビフィズス菌は、古来より発酵食品の製造に使用される細菌であるが、近年の研究で様々な健康機能の増進に寄与することが明らかとなりつつある。乳酸菌が獣乳を分解することにより産生されるペプチドが、筋力増強および疲労感の軽減に効果があることが特許文献２で示されている。しかしながら、乳酸菌の菌体そのものがエリスロポエチンの産生促進に関与するか否かは、いずれの文献にも開示も示唆もされていない。 Incidentally, lactic acid bacteria and bifidobacteria are bacteria that have been used in the production of fermented foods since ancient times, but recent research has revealed that they contribute to the promotion of various health functions. Patent Document 2 shows that peptides produced by lactic acid bacteria decomposing animal milk are effective in increasing muscle strength and reducing fatigue. However, none of the literature discloses or suggests whether the lactic acid bacteria cells themselves are involved in promoting the production of erythropoietin.
本発明は、新規なエリスロポエチン産生促進用組成物を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a novel composition for promoting erythropoietin production.
上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討した結果、エリスロポエチン産生促進作用を有する乳酸菌を見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は乳酸菌を有効成分とする新規のエリスロポエチン産生促進用組成物を提供するものである。また、本発明は産業上利用可能な新規の乳酸菌株を提供するものである。
したがって、本発明は以下の構成を有する。
＜１＞ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属またはペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物、
＜２＞Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、ラクトバチルス ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ）、ラクトバチルス パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス バギナリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、リューコノストック メセンテロイデス サブスピーシーズ クレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、リューコノストック シュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ペディオコッカス ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする＜１＞に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物、
＜３＞Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０４）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする＜２＞に記載のエリスロポエチン産生促進用組成物、
＜４＞＜１＞～＜３＞のいずれかに記載のエリスロポエチン産生促進用組成物を含む、エリスロポエチン産生促進用飼料組成物、エリスロポエチン産生促進用医薬組成物、又はエリスロポエチン産生促進用食品組成物、
＜５＞新規乳酸菌ラクトバチルス ムコサエ ＳＢＴ２９５８、
＜６＞新規乳酸菌ラクトバチルス パラカゼイ ＳＢＴ０２２８、
＜７＞新規乳酸菌ラクトバチルス プランタラム ＳＢＴ００９２、
＜８＞新規乳酸菌ラクトバチルス ラムノーサス ＳＢＴ２４９０、
＜９＞新規乳酸菌ラクトバチルス バギナリス ＳＢＴ０３３７、
＜１０＞新規乳酸菌リューコノストック メセンテロイデス サブスピーシーズ クレモリス ＳＢＴ１３９５、
＜１１＞新規乳酸菌リューコノストック シュードメセンテロイデス ＳＢＴ０８３５、並びに
＜１２＞新規乳酸菌ペディオコッカス ペントサセウス ＳＢＴ３３１６。
In order to solve the above problems, the present inventors conducted extensive studies, and as a result, discovered lactic acid bacteria that have an effect of promoting erythropoietin production, and completed the present invention.
That is, the present invention provides a novel composition for promoting erythropoietin production containing lactic acid bacteria as an active ingredient. Furthermore, the present invention provides a novel lactic acid bacteria strain that can be used industrially.
Therefore, the present invention has the following configuration.
<1> A composition for promoting erythropoietin production containing as an active ingredient bacterial cells belonging to the genus Lactobacillus, the genus Leuconostoc, or the genus Pediococcus,
<2> Bacteria belonging to the Lactobacillus genus, Leuconostoc genus, or Pediococcus genus are Lactobacillus mucosae, Lactobacillus paracasei, and Lactobacillus paracasei Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus rhamnosus Bacillus vaginalis, Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Leuconostoc pse udomesenteroides), Pediococcus pentosaceus (Pediococcus pentosaceus) The composition for promoting erythropoietin production according to <1>, characterized in that
<3> Bacteria belonging to the Lactobacillus genus, Leuconostoc genus, or Pediococcus genus are Lactobacillus mucosae SBT2958 (NITE P-02803), Lactobacillus paracasei SBT02 28 (NITE P-02805), Lactobacillus plantarum SBT0092 (NITE P-02806), Lactobacillus rhamnosus SBT2490 ( NITE P-02807), Lactobacillus vaginalis SBT0337 (NITE P-02808), Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris SBT1395 (NITE P-02809), Leuconostoc pseudomesenteroides SBT0835 (NITE P-02810), Pediococcus pentosaceus SBT3316 (NITE Erythropoietin production promotion according to <2>, characterized in that the erythropoietin production promotion is one or more selected from P-02804) composition for
<4> A feed composition for promoting erythropoietin production, a pharmaceutical composition for promoting erythropoietin production, or a food composition for promoting erythropoietin production, comprising the composition for promoting erythropoietin production according to any one of <1> to <3>;
<5> New lactic acid bacterium Lactobacillus mucosae SBT2958,
<6> New lactic acid bacterium Lactobacillus paracasei SBT0228,
<7> New lactic acid bacterium Lactobacillus plantarum SBT0092,
<8> New lactic acid bacterium Lactobacillus rhamnosus SBT2490,
<9> New lactic acid bacterium Lactobacillus vaginalis SBT0337,
<10> New lactic acid bacteria Leuconostoc mesenteroides subspecies cremoris SBT1395,
<11> Novel lactic acid bacterium Leuconostoc pseudomesenteroides SBT0835, and <12> Novel lactic acid bacterium Pediococcus pentosaceus SBT3316.
本発明によれば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する乳酸菌の菌体を有効成分とするエリスロポエチン産生促進用組成物を提供することができる。また、本発明によれば、産業上利用可能な新規の乳酸菌株を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a composition for promoting erythropoietin production, which contains as an active ingredient the cells of lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Leuconostoc, and Pediococcus. can. Further, according to the present invention, it is possible to provide a novel lactic acid bacteria strain that can be used industrially.
（乳酸菌）
本発明の乳酸菌は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に分類される乳酸菌であればどのようなものでも用いることができる。
具体的には、ラクトバチルス ムコサエ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ）、ラクトバチルス パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス バギナリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、リューコノストック メセンテロイデス サブスピーシーズ クレモリス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、リューコノストック シュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ペディオコッカス ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）等を例示できるが、これらに限定されるものではない。
(lactic acid bacteria)
As the lactic acid bacteria of the present invention, any lactic acid bacteria classified into the genus Lactobacillus, Leuconostoc, and Pediococcus can be used.
Specifically, Lactobacillus mucosae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus tobacillus rhamnosus), Lactobacillus vaginalis, Leuconostoc mesenteroides subspecies cremoris, Leuconostoc pseudomesenteroides, Pediococcus pentosaceus pentosaceus), but is not limited to these.
本発明の乳酸菌は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０４）であることが好ましい。 The lactic acid bacteria of the present invention include Lactobacillus mucosae SBT2958 (NITE P-02803), Lactobacillus paracasei SBT0228 (NITE P-02805), and Lactobacillus plantarum. SBT0092 (NITE P-02806), Lactobacillus rhamnosus SBT2490 (NITE P-02807), Lactobacillus vaginalis SBT0337 ( NITE P-02808), Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris SBT1395 (NITE P-02809), Leuconostoc pseudomesenteroides SBT0835 (NITE P-02810), Pediococcus pentosaceus SBT3316 (NITE P-02804) is preferred.
（乳酸菌の調製）
乳酸菌は、各菌の培養の常法に従って培養し、所望の量を調製すればよい。調製の一例を以下に示す。ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて培養し、得られた培養物を遠心分離により集菌することにより菌体を得る。得られた菌体をそのまま用いてもよいし、濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体を用いることもできる。菌体は死菌体にしたものを用いることもできる。死菌体は、例えば、加熱乾燥、酸処理、超音波破砕等により調製することができる。
(Preparation of lactic acid bacteria)
The lactic acid bacteria may be cultured according to a conventional method for culturing each type of bacteria, and the desired amount may be prepared. An example of preparation is shown below. Bacterial cells are obtained by culturing using MRS medium (Difco) and collecting the resulting culture by centrifugation. The obtained microbial cells may be used as they are, or microbial cells that have been subjected to concentration, drying, or freeze-drying may be used. Killed bacterial cells can also be used. Killed microbial cells can be prepared, for example, by heat drying, acid treatment, ultrasonic crushing, and the like.
（新規乳酸菌株）
本発明は、新規乳酸菌株に関するものである。これらの新規乳酸菌株とはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０４）である。以下、同乳酸菌株を「本発明の乳酸菌」、「本発明の乳酸菌株」、又は単にＳＢＴ２９５８、ＳＢＴ０２２８、ＳＢＴ００９２、ＳＢＴ２４９０、ＳＢＴ０３３７、ＳＢＴ１３９５、ＳＢＴ０８３５、ＳＢＴ３３１６株と記載することがある。
本発明の乳酸菌であるＳＢＴ２９５８、ＳＢＴ０３３７はヒト糞便を、ＳＢＴ０２２８はアルコール飲料を、ＳＢＴ００９２、ＳＢＴ２４９０、ＳＢＴ１３９５、ＳＢＴ０８３５は発酵乳を、ＳＢＴ３３１６は発酵食品を分離源として分離された。これらの乳酸菌株は、２０１８年１０月３１日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２－０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、ＳＢＴ２９５８はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０３、ＳＢＴ０２２８はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０５、ＳＢＴ００９２はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０６、ＳＢＴ２４９０はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０７、ＳＢＴ０３３７はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０８、ＳＢＴ１３９５はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０９、ＳＢＴ０８３５はＮＩＴＥ Ｐ－０２８１０、ＳＢＴ３３１６はＮＩＴＥ Ｐ－０２８０４の受託番号で寄託されている。
本発明の乳酸菌は、上記寄託乳酸菌株に制限されず、これらの寄託乳酸菌株と実質的に同等の乳酸菌株であってもよい。実質的に同等の乳酸菌株とは、ラクトバチルス ムコサエ、ラクトバチルス パラカゼイ、ラクトバチルス プランタラム、ラクトバチルス ラムノーサス、ラクトバチルス バギナリス、リューコノストック メセンテロイデス サブスピーシーズ クレモリス、リューコノストック シュードメセンテロイデス、ペディオコッカス ペントサセウスに属する乳酸菌株であって、寄託乳酸菌株と同程度の高いエリスロポエチン産生促進作用を有する乳酸菌株を言う。「寄託乳酸菌株と同程度の高いエリスロポエチン産生促進作用を有する乳酸菌株」とは、例えば、以下の手順１）～４）により測定したエリスロポエチン量が、各々の寄託乳酸菌株におけるエリスロポエチン量と有意差がない乳酸菌株を意味する。
１） １０％ＦＢＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）に、ヒト肝臓癌由来細胞株ＨＥＰ－３Ｂを６×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し２４時間培養する。
２） 培地を取り除き、各種乳酸菌加熱死菌体を５０μｇ／ｍｌで懸濁した培地１５０μｌを細胞に添加して、４８時間培養し、培養上清を回収し、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心して細胞の破片などを取り除く。
３） 前記２）で得られた細胞培養上清５０μｌ原液をＨｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ＤｕｏＳｅｔ（登録商標） ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定する。具体的には、発色試薬としてＱｕａｎｔａＢｌｕＴＭ Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して、前記２）で得られた細胞培養上清５０μｌ中のエリスロポエチンタンパク質を発色させる。
４）発色後の溶液をＣｏｒｎｉｎｇＴＭ ９６－Ｗｅｌｌ Ｓｏｌｉｄ Ｗｈｉｔｅ Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移してプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）にてＥｘ．３２５ｎｍ、Ｅｍ．４２０ｎｍで蛍光強度を測定する。
本発明の乳酸菌は、前記手順１）～４）によりエリスロポエチン産生促進機能の評価を行った場合に、好ましくは、測定したエリスロポエチン量が、乳酸菌株を添加していないコントロールにおけるエリスロポエチン量よりも１．５倍以上多いものである。本発明の乳酸菌は、前記手順１）～４）によりエリスロポエチン産生促進機能の評価を行った場合に、測定されたエリスロポエチン量が、乳酸菌株を添加していないコントロールにおけるエリスロポエチン量よりも、好ましくは５ｍIU／ｍL、より好ましくは１０ｍIU／ｍL、さらに好ましくは１５ｍIU／ｍL以上多いものである。
なお、上記の評価方法に限定されず、当業者に公知であるエリスロポエチン産生促進作用評価方法を採用して、エリスロポエチン産生促進作用を評価可能であることは言うまでもない。
また、実質的に同等の乳酸菌株は、さらに、その１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託乳酸菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託乳酸菌株と同一の菌学的性質を有する。さらに、本発明の乳酸菌は、本発明の効果が損なわれない限り、寄託乳酸菌株、又はそれと実質的に同等の乳酸菌株から、変異処理、遺伝子組換え、自然変異株の選択等によって育種された乳酸菌株であってもよい。
(New lactic acid bacteria strain)
The present invention relates to a novel lactic acid bacteria strain. These new lactic acid bacteria strains are Lactobacillus mucosae SBT2958 (NITE P-02803), Lactobacillus paracasei SBT0228 (NITE P-02805), and Lactobacillus plantarum. SBT0092 (NITE P-02806), Lactobacillus rhamnosus SBT2490 (NITE P-02807), Lactobacillus vaginalis SBT0337 (NITE P-02808), Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris SBT1395 (NITE P-02809), Leuconostoc pseudomesenteroides SBT0835 (NITE P-02810), Pediococcus pentosaceus SBT3316 (NITE P-02804). Hereinafter, the same lactic acid bacteria strain may be referred to as "the lactic acid bacteria of the present invention", "the lactic acid bacteria strain of the present invention", or simply as SBT2958, SBT0228, SBT0092, SBT2490, SBT0337, SBT1395, SBT0835, and SBT3316 strains.
The lactic acid bacteria of the present invention, SBT2958 and SBT0337, were isolated from human feces, SBT0228 from alcoholic drinks, SBT0092, SBT2490, SBT1395, and SBT0835 from fermented milk, and SBT3316 from fermented foods. These lactic acid bacteria strains were transferred to SBT2958 on October 31, 2018 to the Patent Microbial Depositary Center, National Institute of Technology and Evaluation (Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, 292-0818). is NITE P-02803, SBT0228 is NITE P-02805, SBT0092 is NITE P-02806, SBT2490 is NITE P-02807, SBT0337 is NITE P-02808, SBT1395 is NITE P-02809, SB T0835 is NITE P-02810, SBT3316 is It has been deposited with accession number NITE P-02804.
The lactic acid bacteria of the present invention are not limited to the above deposited lactic acid bacteria strains, but may be lactic acid bacteria strains that are substantially equivalent to these deposited lactic acid bacteria strains. Substantially equivalent lactic acid bacteria strains are Lactobacillus mucosae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus vaginalis, Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Leuconostoc pseudomesenteroides, Pediococcus A lactic acid bacterium strain belonging to the genus Pentosaceus that has the same high erythropoietin production promoting effect as the deposited lactic acid bacterium strain. A "lactic acid bacteria strain having the same high erythropoietin production promoting effect as the deposited lactic acid bacteria strain" means, for example, that the amount of erythropoietin measured by the following steps 1) to 4) is significantly different from the amount of erythropoietin in each deposited lactic acid bacteria strain. means no lactic acid bacteria strain.
1) Human liver cancer-derived cell line HEP-3B was seeded at 6×10 4 cells/well in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) (Sigma) containing 10% FBS and 1% penicillin-streptomycin (Sigma) for 24 hours. Cultivate.
2) Remove the medium, add 150 μl of a medium containing heat-killed cells of various lactic acid bacteria suspended at 50 μg/ml to the cells, culture for 48 hours, collect the culture supernatant, and incubate at 12,000×g at 4°C. Centrifuge for 10 minutes to remove cell debris.
3) Measure 50 μl of the cell culture supernatant obtained in 2) above using Human Erythropoietin DuoSet (registered trademark) ELISA (R&D Systems). Specifically, the erythropoietin protein in 50 μl of the cell culture supernatant obtained in 2) above is colored using QuantaBlu ™ Fluorogenic Peroxidase Substrate Kit (Thermo) as a coloring reagent.
4) After color development, the solution was transferred to Corning TM 96-Well Solid White Polystyrene Microplates (Corning) and read using a plate reader (Biotek). 325 nm, Em. Measure fluorescence intensity at 420 nm.
When the lactic acid bacteria of the present invention are evaluated for their ability to promote erythropoietin production by the above procedures 1) to 4), preferably, the measured erythropoietin amount is 1. This is more than 5 times as many. When the lactic acid bacteria of the present invention are evaluated for their ability to promote erythropoietin production according to steps 1) to 4), the amount of erythropoietin measured is preferably 5 mIU higher than the amount of erythropoietin in the control to which no lactic acid bacteria strain is added. /mL, more preferably 10 mIU/mL, even more preferably 15 mIU/mL or more.
It goes without saying that the evaluation method is not limited to the above-mentioned evaluation method, and the erythropoietin production promoting effect can be evaluated by employing any method for evaluating the erythropoietin production promoting effect known to those skilled in the art.
Furthermore, the substantially equivalent lactic acid bacteria strain has a 16S rRNA gene base sequence that is 98% or more, preferably 99% or more, and more preferably 100% of the 16S rRNA gene base sequence of the deposited lactic acid bacteria strain. It has homology and preferably has the same mycological properties as the deposited lactic acid bacteria strain. Furthermore, the lactic acid bacteria of the present invention can be bred from the deposited lactic acid bacteria strain or a lactic acid bacteria strain substantially equivalent thereto by mutation treatment, genetic recombination, selection of natural mutant strains, etc., as long as the effects of the present invention are not impaired. It may also be a lactic acid bacteria strain.
（利用方法）
上記のとおり、本発明の組成物は濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体、有効成分とすることができることから、製剤、飲食品、飼料の原料として広く用いることができる。死菌体は、例えば、加熱乾燥、酸処理、超音波破砕等により調製することができる。
本発明の組成物の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ又はウサギ等）であっても良い。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、男女、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。
本発明の組成物の摂取量は、投与対象者の症状、年齢、及び性別などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、一日当たりの菌体の摂取量として、０．５－５０００ｍｇであればよく、０．５－５００ｍｇが望ましく、０．５－５０ｍｇが最も望ましい。
(How to Use)
As mentioned above, the composition of the present invention can be used as bacterial cells or active ingredients that have been subjected to concentration, drying, or freeze-drying treatment, and therefore can be widely used as a raw material for pharmaceutical preparations, food/beverage products, and feeds. Killed microbial cells can be prepared, for example, by heat drying, acid treatment, ultrasonic crushing, and the like.
The subject of administration of the composition of the present invention is not particularly limited, and it can be administered to humans, but the subject of administration may also be animals other than humans (for example, dogs, cats, horses, rabbits, etc.). When the administration target is a human, it can be administered to a minor under 20 years old, an adult, a man or woman, or an elderly person over 65 years old.
The intake amount of the composition of the present invention is determined individually taking into account the symptoms, age, gender, etc. of the recipient, but usually for adults, the intake amount of bacterial cells per day is 0. The amount may be 5-5000 mg, preferably 0.5-500 mg, and most preferably 0.5-50 mg.
本発明の組成物は、腎性貧血及び貧血の予防又は改善の目的で対象に投与することができる。本発明の組成物は、既に腎性貧血及び貧血を罹患している対象に投与してもよく、未だ罹患していない健康な対象に、腎性貧血及び貧血の予防のために投与することもできる。
本発明の組成物は、疲労感の改善、持久運動能力向上、及び／又は筋力増強のために対象に投与することができる。投与タイミングとしては、運動を行う前、運動をしている最中、及び／又は運動の後に投与することができる。運動としては、例えば、ウオーキング、ランニング、サッカー、バスケットボール、バレーボール、水泳、自転車競技及びテニス等が挙げられる。
The composition of the present invention can be administered to a subject for the purpose of preventing or ameliorating renal anemia and anemia. The compositions of the present invention may be administered to subjects already suffering from renal anemia and anemia, and may be administered to healthy subjects who are not yet affected for the prevention of renal anemia and anemia. can.
The composition of the present invention can be administered to a subject to improve fatigue, improve endurance exercise ability, and/or increase muscle strength. The administration timing can be before exercising, during exercising, and/or after exercising. Examples of exercise include walking, running, soccer, basketball, volleyball, swimming, cycling, and tennis.
（エリスロポエチン産生促進）
「エリスロポエチン産生促進」は、例えば、前記手順１）～４）によりエリスロポエチン産生促進機能の評価を行った場合に、測定されたエリスロポエチン量が、コントロールにおけるエリスロポエチン量と比較して有意に多い場合を意味し、好ましくは、測定したエリスロポエチン量が乳酸菌株を添加していないコントロールにおけるエリスロポエチン量よりも１．５倍以上多いことを意味する。
(Promotion of erythropoietin production)
"Erythropoietin production promotion" means, for example, when the erythropoietin production promotion function is evaluated by the above steps 1) to 4), and the measured erythropoietin amount is significantly higher than the erythropoietin amount in the control. However, it preferably means that the measured amount of erythropoietin is 1.5 times or more greater than the amount of erythropoietin in a control to which no lactic acid bacteria strain is added.
（エリスロポエチン産生促進能の評価方法）
実施例に記載の方法で評価が可能である。すなわち、前記手順１）～４）により評価が可能である。
(Evaluation method for ability to promote erythropoietin production)
Evaluation can be performed by the method described in Examples. That is, evaluation can be performed by the above-mentioned steps 1) to 4).
以下、本発明の実施例をもとにさらに詳細に説明するが、本発明は係る実施例に限定して解釈されるものではない。なお、特に説明のない場合、％は重量％を示す。 EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples, but the present invention is not to be construed as being limited to these examples. In addition, unless otherwise specified, % indicates weight %.
（実施例品１）乳酸菌加熱死菌体
下記（１）の各供試菌を、ラクトバチルス属、リューコノストック属、ペディオコッカス属に属する乳酸菌はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて、ラクトコッカス属、ストレプトコッカス属に属する乳酸菌はＭ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）、ビフィドバクテリウム属に属するビフィズス菌は、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）を用いてそれぞれ培養した。培養物を、生理食塩水にて２回、滅菌水にて１回洗浄し、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。菌体粉末を１０ｍｇ/ｍｌになるように滅菌ＰＢＳ（－）で懸濁し、８０℃にて３０分間加熱して加熱死菌体を得た。加熱死菌体は５０μｇ/ｍｌとなるように１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）で希釈した。
(Example Product 1) Heat-killed Lactic Acid Bacterial Cells Each test bacterium in (1) below was prepared using MRS medium (Difco) for lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Leuconostoc, and Pediococcus. Lactic acid bacteria belonging to the genus Streptococcus were cultured in M17 medium (Difco), and bifidobacteria belonging to the genus Bifidobacterium were cultured in GAM broth containing 1% glucose (Nissui). The culture was washed twice with physiological saline and once with sterile water to obtain washed bacterial cells. The washed bacterial cells were freeze-dried to obtain bacterial powder. The bacterial cell powder was suspended in sterile PBS (-) to a concentration of 10 mg/ml and heated at 80° C. for 30 minutes to obtain heat-killed bacterial cells. The heat-killed cells were diluted to 50 μg/ml with DMEM (Sigma) containing 10% FBS (Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (Sigma).
（１）供試菌
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、の下記１１株を供試菌とした。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ ＳＢＴ２９５８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＳＢＴ０２２８（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０５）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ ＳＢＴ００９２（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０６）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ ＳＢＴ２４９０（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０７）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ ＳＢＴ０３３７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０８）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ ＳＢＴ１３９５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０９）、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ＳＢＴ０８３５（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８１０）、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｓｅｕｓ ＳＢＴ３３１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０４）、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓＪＣＭ５８０５Ｔ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＪＣＭ１７８３４Ｔ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ ｓｕｂｓｐ． ｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２１７Ｔ。
(1) Test bacteria Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Lactococcus, Streptococcus, Bifidobacterium bacterium) genus, The following 11 strains were used as test bacteria.
Lactobacillus mucosae SBT2958 (NITE P-02803), Lactobacillus paracasei SBT0228 (NITE P-02805), Lactobacillus plantarum SBT0092 (NITE P-02806), Lactobacillus rhamnosus SBT2490 (NITE P-02807), Lactobacillus vaginalis SBT0337 (NITE P-02808), Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris SBT1395 (NITE P-02809), Leuconostoc pseudomesenteroides SBT0835 (NITE P-02810), Pediococcus pentosaseus SBT3316 (NITE P-02804), Lactococcus lactis subsp. lactis JCM5805T, Streptococcus thermophilus JCM17834T, Bifidobacterium longum subsp. longumJCM1217T.
[試験例１]
乳酸菌によるエリスロポエチン産生促進効果に関する試験
実施例品１を以下の試験に供した。
４８ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（ＢＤ）に、ヒト肝臓癌由来細胞株ＨＥＰ－３Ｂを６×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）で２４時間培養した。培地を取り除いた後、試験群には各種菌体を５０μｇ／ｍｌで懸濁した培地を、コントロール群には菌体を含まない培地を１５０μｌ添加して、４８時間培養した。ポジティブコントロールとして、塩化コバルト（ＣｏＣｌ２、Ｓｉｇｍａ）を終濃度５０μＭで同様に添加した。その後、培養上清を回収し、１２，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心して細胞の破片などを取り除いた。
[Test example 1]
Test on the effect of promoting erythropoietin production by lactic acid bacteria Example product 1 was subjected to the following test.
Human liver cancer-derived cell line HEP-3B was seeded at 6×10 4 cells/well on a 48-well plate (BD), and DMEM (Sigma) containing 10% FBS (Gibco) and 1% penicillin-streptomycin (Sigma) was added. The cells were cultured for 24 hours. After removing the medium, a medium in which various bacterial cells were suspended at 50 μg/ml was added to the test group, and 150 μl of a medium containing no bacterial cells was added to the control group, and cultured for 48 hours. As a positive control, cobalt chloride (CoCl 2 , Sigma) was added in the same manner at a final concentration of 50 μM. Thereafter, the culture supernatant was collected and centrifuged at 12,000 xg and 4°C for 10 minutes to remove cell debris.
細胞培養上清中のエリスロポエチンタンパク質は、Ｈｕｍａｎ Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ ＤｕｏＳｅｔ（登録商標） ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定した。培養上清５０μｌ原液を測定サンプルとして使用した。発色試薬にＱｕａｎｔａＢｌｕＴＭ Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用した。発色後の溶液をＣｏｒｎｉｎｇＴＭ ９６－Ｗｅｌｌ Ｓｏｌｉｄ Ｗｈｉｔｅ Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移してプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）にてＥｘ．３２５ｎｍ、Ｅｍ．４２０ｎｍで蛍光強度を測定した。 Erythropoietin protein in the cell culture supernatant was measured by Human Erythropoietin DuoSet® ELISA (R&D Systems). A 50 μl stock solution of the culture supernatant was used as a measurement sample. QuantaBlu ™ Fluorogenic Peroxidase Substrate Kit (Thermo) was used as a coloring reagent. After color development, the solution was transferred to Corning TM 96-Well Solid White Polystyrene Microplates (Corning) and subjected to Ex. using a plate reader (Biotek). 325 nm, Em. Fluorescence intensity was measured at 420 nm.
（試験結果）
ＨＥＰ－３Ｂ細胞に、乳酸菌１１株のいずれかを添加して４８時間培養した時の、培養上清中へのエリスロポエチンタンパク質産生量を図１に示した。その結果、８株の乳酸菌（ＳＢＴ２９５８、ＳＢＴ０２２８、ＳＢＴ００９２、ＳＢＴ２４９０、ＳＢＴ０３３７、ＳＢＴ１３９５、ＳＢＴ０８３５、ＳＢＴ３３１６）がエリスロポエチン産生を亢進した。一方、３株の乳酸菌基準株（ＪＣＭ５８０５Ｔ、ＪＣＭ１７８３４Ｔ、ＪＣＭ１２１７Ｔ）はエリスロポエチン産生を亢進しなかった。
これらの結果から、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する乳酸菌がエリスロポエチンの産生を亢進することが明らかとなった。
(Test results)
Figure 1 shows the amount of erythropoietin protein produced in the culture supernatant when HEP-3B cells were cultured for 48 hours with the addition of any of the 11 strains of lactic acid bacteria. As a result, 8 strains of lactic acid bacteria (SBT2958, SBT0228, SBT0092, SBT2490, SBT0337, SBT1395, SBT0835, SBT3316) enhanced erythropoietin production. On the other hand, three lactic acid bacteria reference strains (JCM5805T, JCM17834T, and JCM1217T) did not enhance erythropoietin production.
These results revealed that lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Leuconostoc, and Pediococcus enhance the production of erythropoietin.
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属およびペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の菌体を有効成分とする、エリスロポエチン産生促進用組成物を提供することができる。 A composition for promoting erythropoietin production can be provided, which contains as an active ingredient bacterial cells of bacteria belonging to the genus Lactobacillus, Leuconostoc, and Pediococcus.
＜寄託生物材料への言及＞
（１）ラクトバチルス ムコサエ ＳＢＴ２９５８
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０３
（２）ラクトバチルス パラカゼイ ＳＢＴ０２２８
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０５
（３）ラクトバチルス プランタラム ＳＢＴ００９２
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０６
（４）ラクトバチルス ラムノーサス ＳＢＴ２４９０
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０７
（５）ラクトバチルス バギナリス ＳＢＴ０３３７
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０８
（６）リューコノストック メセンテロイデス サブスピーシーズ クレモリス ＳＢＴ１３９５
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０９
（７）リューコノストック シュードメセンテロイデス ＳＢＴ０８３５
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８１０
（８）ペディオコッカス ペントサセウス ＳＢＴ３３１６
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年１０月３１日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０２８０４
<Reference to deposited biological materials>
(1) Lactobacillus mucosae SBT2958
(a) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material concerned: National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depositary Center, Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan (zip code 292-0818)
Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number NITE P-02803 assigned by the Depository of Japan regarding the deposit
(2) Lactobacillus paracasei SBT0228
(a) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material concerned: National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depositary Center, Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan (zip code 292-0818)
Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number NITE P-02805 assigned by the Depository of Japan regarding the deposit
(3) Lactobacillus plantarum SBT0092
(a) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material concerned: National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depositary Center, Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan (zip code 292-0818)
Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number given by the Depository of Japan regarding the deposit NITE P-02806
(4) Lactobacillus rhamnosus SBT2490
(a) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material concerned: National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depositary Center, Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan (zip code 292-0818)
Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number NITE P-02807 given by the Depository of Japan regarding the deposit
(5) Lactobacillus vaginalis SBT0337
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Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number given by the Depository of Japan regarding the deposit NITE P-02808
(6) Leuconostoc mesenteroides subspecies cremoris SBT1395
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Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number given by the Depository of Japan regarding the deposit NITE P-02809
(7) Leuconostoc pseudomesenteroides SBT0835
(a) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material concerned: National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depositary Center, Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan (zip code 292-0818)
Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number assigned by the Depository of Japan regarding the deposit NITE P-02810
(8) Pediococcus pentosaceus SBT3316
(a) Name and address of the depositary institution that deposited the biological material concerned: National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depositary Center, Room 122, 2-5-8 Kazusa Kamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan (zip code 292-0818)
Date of deposit of biological materials with the Depositary of Japan October 31, 2018 Accession number assigned by the Depository of Japan regarding the deposit NITE P-02804
Claims (7)
Leuconostoc mesenteroides subsp.cremoris)SBT1395。 Novel lactic acid bacteria Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris (
Leuconostoc mesenteroides subsp.cremoris)SBT1395.
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