JP2023122155A

JP2023122155A - （副作用が低減された）グリチルリチン酸誘導体

Info

Publication number: JP2023122155A
Application number: JP2022025655A
Authority: JP
Inventors: 利明牧野; Toshiaki Makino; 優奈田下; Yuna Tashimo; 展司吉川; Nobuji Yoshikawa
Original assignee: COKEY SYSTEMS CO Ltd; Nagoya City University
Current assignee: COKEY SYSTEMS CO Ltd; Nagoya City University
Priority date: 2022-02-22
Filing date: 2022-02-22
Publication date: 2023-09-01

Abstract

【課題】偽アルドステロン症を発症しないか又は発症しにくい、医薬品、医薬部外品、化粧品又は食品添加物原体を提供する。【解決手段】１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸、および１８－α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニドで示される化合物、その塩、およびそれらの溶媒和からなる群より選択される少なくとも１種を含む、医薬品、医薬部外品、化粧品又は食品添加物原体を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、副作用が低減されたグリチルリチン酸とその利用方法に関する

グリチルリチン酸は古くから医薬品として利用されてきたマメ科カンゾウ属植物（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓ，Ｇ．ｇｌａｂｒａあるいはＧ．ｉｎｆｌａｔａなど）の地下部に含まれる主たるサポニンである。現在では、カンゾウ属植物地下部から抽出精製されたグリチルリチン酸は、抗炎症・アレルギーあるいは抗慢性肝炎を適応とする医薬品、あるいは、その抗炎症・アレルギー作用を生かした医薬部外品や化粧品にも配合されている。さらに、その甘味を利用する食品添加物としても使われている。
これまで、グリチルリチン酸は、日本だけでも年間４００トン以上が使用されてきているが、安全性における問題があった。すなわち、グリチルリチン酸により惹起される偽アルドステロン症である。

そのため、グリチルリチン酸が含まれる漢方処方の場合、服用量に比例して副作用の発現が認められることが知られており（非特許文献１）、グリチルリチン酸を含む医薬品の添付文書には、副作用の発現可能性に留意する記述が求められている。

偽アルドステロン症は、高血圧症と低カリウム血症がその症状である。この副作用は、服用されたグリチルリチン酸の代謝物であるグリチルレチン酸、あるいはその硫酸抱合体であるグリチルレチン酸－３－硫酸エステルが、腎臓に存在する１１βヒドロキシステロイド脱水素酵素２型を阻害することに起因する。

すなわち、本酵素が阻害されることにより、グルココルチコイドの活性体であるコルチゾールが非活性体のコルチゾンに転換されずに、コルチゾールが蓄積される。増加したコルチゾールが尿細管の鉱質コルチコイド受容体に作用してナトリウムの再吸収を促進させ，カリウム排泄を増加させるため低カリウム血症を生じやすくなると考えられている。

低カリウム血症が著明になると，１．心伝導系および心収縮力に影響が現れ不整脈が生じやすくなり，２．ミオパチーによるクレアチニンキナーゼ値の上昇，３．消化器系への影響として平滑筋融解のための麻痺性腸閉塞，４．腎臓への影響として尿の濃縮力が障害されて多尿傾向となる。

また，偽アルドステロン症は，高血圧，低カリウム血症，代謝性アルカローシス，低カリウム血症性ミオパチーなどの原発性アルドステロン症様の症状・所見を示すが，血漿アルドステロン濃度はむしろ低下する症候群である。低カリウム血症を伴う高血圧症を示すことから，低カリウム血性ミオパチーによると思われる四肢の脱力と，血圧上昇に伴う頭重感などが主な症状となる。

このような状況を鑑み、副作用を惹起しない、あるいは副作用発現の可能性が低減されたグリチルリチン酸の誘導体が求められている。

ところで、グリチルリチン酸にはその分子における１８位の水素の配置に基づく異性体が存在している。通常、カンゾウ属植物が生産するグリチルリチン酸の９０％以上は、１８β体であるが、ごく一部は１８α体である。この１８α体の生理活性は、基本的には１８β体と共通しているところが多いが、１８β体よりも抗炎症・アレルギー作用における比活性が高いことから、１８α体を主成分とする医薬品が創製されている。また、１８α体は、１８β体とは物性において異なるところがある、すなわち、酸性溶液において、１８β体のようにゲル化することながないので、比較的酸性の化粧品への配合も可能であるとの優位性もある。

とはいえ、これまで知られている偽アルドステロン症発症の原因となる１１βヒドロキシステロイド脱水素酵素２型に対する１８α－グリチルレチン酸の阻害活性に関しては、充分な検討がなされておらず、不明なところがあった。

すなわち、Ｃｌａｓｓｅｎ－Ｈｏｕｂｅｎら（２００９）の論文によれば、１８α－グリチルレチン酸は、ラット由来１１βヒドロキシステロイド脱水素酵素２型を強く阻害するが、ヒト由来１１βヒドロキシステロイド脱水素酵素２型では、その阻害は弱い（非特許文献２）。一方、Ｓａｎｎａら（２０１６）の論文によれば、１８α－グリチルレチン酸は、ラット由来、ヒト由来何れの１１βヒドロキシステロイド脱水素酵素２型も同程度に阻害する（非特許文献３）。

このように相反する内容を記載した論文が存在していることもあり、これまで１８α－グリチルレチン酸やグリチルリチン酸の副作用に関する学界および産業界における明瞭な認識はなかった。また、種差による各異性体の該酵素阻害についても、これまで同様であった。

因みに、これまでの１８α－グリチルリチン酸の生理活性に関しての論文においても、その活性の強さだけが特長として記されており、副作用に関する言及はなかった（引用論文４－１８）。むしろ、１８α－グリチルリチン酸と、その代謝物である１８α－グリチルレチン酸などの体外排泄が早いことにより、体内蓄積性による副作用軽減が示唆されているに過ぎなかった（引用論文１９）。

発明の課題は、副作用のない、あるいは低減されたグリチルリチン酸の誘導体を提供することにある。

本発明者らは、前記課題を解決するために、通常使用されている１８β－グリチルリチン酸の異性体である１８α－グリチルリチン酸のアグリコンである１８α－グリチルレチン酸による１１βヒドロキシステロイド脱水素酵素２型阻害活性を改めて検討し、１８α－グリチルリチン酸の安全性を確認し、安全な医薬品、医薬部外品あるいは食品添加物原料となることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成した。また、１８α－グリチルリチン酸の糖部分を切り離したアグリコンだけからなる１８α－グリチルレチン酸、あるいは糖を一つだけ残した１８－α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニドにも、抗炎症・アレルギー作用などがあるので、これらも、本発明において利用することが出来る。すなわち、本発明は以下の通りである。

［１］以下の構造式：

で示される化合物、その塩、およびそれらの溶媒和からなる群より選択される少なくとも１種を含む、偽アルドステロン症を発症しないか又は発症しにくい、医薬品、医薬部外品、化粧品あるいは食品添加物原体。
[２] ヒトに適用するための、請求項１に記載の医薬品、医薬部外品、化粧品又は食品添加物原体。ヒトに適用するために用いられる、［１］に記載の医薬品、医薬部外品、化粧品あるいは食品添加物原体。
［３］［１］に記載の化合物を０．１～１％含む、抗炎症・抗アレルギーのための、医薬品、医薬部外品あるいは化粧品。
［４］［１］に記載の化合物を０．１～１％含む、甘味を有する食品添加物。

本発明によれば、生体に対する安全性がより高く、抗炎症・アレルギー作用などを生かした医薬品、医薬部外品、化粧品あるいはその甘味を生かした食品添加物を提供することが出来る。

本発明において、１８α－グリチルリチン酸、１８α－グリチルレチン酸および１８α－グリチルレチン酸－３－Ｏ－モノグルクロニドとは、カンゾウ属（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）に属する植物由来のサポニンである１８β－グリチルリチン酸から合成によって得られるサポニンをいう。

この１８α－グリチルリチン酸を１８β－グリチルリチン酸から製造するには、例えば特許公報（１６１０３００号：平成２年７月１５日登録）に記されているように、原料の１８β－グリチルリチン酸を、２～６Ｎ程度の水酸化ナトリウムあるいは水酸化カリウム水溶液中において、７０～２００℃に、常圧あるいは加圧下に加熱することによって行われる。異性化が６０～８０％に達したところで反応を打ち切り、その後、生した１８α－グリチルリチン酸と１８β－グリチルリチン酸とを分離する。それにより、所望の純度の１８α－グリチルリチン酸を得る。反応混合物から１８α－グリチルリチン酸を単離するには、１８α体と１８β体と共に、一先ず硫酸あるいは塩酸などの鉱酸によって、ｐＨを１～２にして沈殿させた後、沈殿物を濾取し、その後カラムクロマトグラフィーなどで分画することが出来る。あるいは、１８α体だけを単離する方法は、以下の通りである。

グリチルリチン酸混合物を濃度０．５～２％程度の希薄水溶液とし、これに鉱酸を加えてｐＨを約２にした後、爐紙でとかする。この場合、１８α体は結晶状に酸析されているから爐紙上に残り、一方、１８β体はゲル状に分離していて爐紙を通過するから濾液中に入る。爐紙上の沈殿物にはまだかなりの１８β体が混在するので、これを希アンモニア水に溶解した後、再び前記酸析・濾過による分離を行う。このような処理を繰り返すことにより、１８α体の純度は高まり、通常３～５回の繰り返し処理で、１８β体の除去は完了する。

本発明の剤の生体に適用する用途：
用途としては、医薬品、医薬部外品、化粧品あるいは食品等が挙げられる。ただし、この場合の適用対象としては、望ましくはヒトである。例えば、ラットやマウスなどのげっ歯類の場合は、偽アルドステロン症を発症しないものの、該動物種由来11β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型の阻害を行うので、望ましくはない。また、ウシ、ウマ、ヒツジあるいはヤギなどの家畜については、これら動物種由来の酵素に対する阻害試験を行っていないので、適切性に関して判断はできない。

本発明の剤の形態は、特に限定されず、本発明の剤の用途に応じて、各用途において通常使用される形態を取ることが出来る。

形態としては、用途が医薬である場合は、注射剤あるいは経口剤を始め、多様な形態が考慮される。また、医薬部外品の場合は、歯磨き剤などへの添加が考えられる。化粧品の場合は、１８β－グリチルリチン酸ジカリウムのそれと同じように、様々な剤形のものへの添加が可能である。食品添加物の場合も、１８β体と同様の使用が見込まれる。

本発明の１８α－グリチルリチン酸の医薬品における投与量は、５～１２０ｍｇ／日／ヒト好ましくは、１０～６０ｍｇ／日／ヒトである。また、この場合、投与は一日に２回から３回までの間で、上記投与量を分割して実施することとなる。

被験物質のヒト１１β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素２型阻害測定方法の概要は、以下の通りである。
すなわち、ラット腎ミクロソーム画分（最終濃度２ｍｇ／ｍＬ）、1,2,6,7-『HJ-cortisol（Perkin Elmer、Waltham、MA、USA）２０ｎＭ、ＮＡＤ＋（富士フィルム）ｌ．２ｍＭ、各種サンプルを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）２５０μＬを調製した。ラット腎ミクロソーム画分（最終濃度２ｍｇ／ｍＬ）またはヒト腎ミクロソーム画分（SekisuiXenoTech、Kansas City、KA、USA）（最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬ）、1,2,6,7- [3H]-cortisol 20 nM、NAD+ 1.2 mM、各種サンプルを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０）２５μＬを調製した。それぞれの混合液を３７℃で３０分間インキュベートした後、１ｍｇ／ｍＬ cortisolおよび１ｍｇ／ｍＬ cortisone（ナカライテスク、京都）を含むメタノール２５μＬを反応液に加え、反応を停止させた。

この液体を薄層クロマトグラフィープレート（Silica Gel 60, Merck、Darmstadt、Germany）に２０μＬスポット、chloroform:methanol（9:1)で約１８ｃｍ展開し、cortisolとcortisoneを分離した。ＵＶランプで、cortisoneのスポット（Ｒｆ値約０．４３）を確認してかきとり、Clear-sol I（ナカライ）３ｍＬを入れたバイアルに移し、液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定した。各サンプルはｎ＝４で、その平均士標準偏差をデータとした。ＩＣ５０値は、阻害率で５０％を挟む３ポイントを用いて、対数濃度対阻害率の近似直線で５０％を示す濃度を算出した。

その結果、表１に記載されている結果が得られた。１８β－グリチルレチン酸の場合、ヒト由来およびラット由来酵素何れに対しても、０．２～０．４μＭレベルの濃度で５０％阻害率となった。それに対して、１８α－グリチルレチン酸の場合は、ラット由来酵素では１８β体の場合と同様の濃度で５０％阻害率となったが、ヒト由来酵素の場合は１５．１ｕＭと約７０倍高くなり、ヒトにおける偽アルドステロン症起因の恐れが低いことを確認することが出来た。

本発明の１８α－グリチルリチン酸は、ヒトに対する安全性が高く、より高活性なグリチルリチン酸誘導体として、医薬品、医薬部外品、化粧品あるいは食品添加物原料として有用である。

Claims

以下の構造式：

で示される化合物、その塩、およびそれらの溶媒和からなる群より選択される少なくとも１種を含む、偽アルドステロン症を発症しないか又は発症しにくい、医薬品、医薬部外品、化粧品又は食品添加物原体。
ヒトに適用するための、請求項１に記載の医薬品、医薬部外品、化粧品又は食品添加物原体。
請求項１に記載の化合物を０．１～１％含む、抗炎症・抗アレルギーのための、医薬品、医薬部外品あるいは化粧品。
請求項１に記載の化合物を０．１～１％含む、甘味を有する食品添加物。