JP2023082660A - 分析方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】試料を分割しなくても、試料に含まれる複数の種類の目的物質をそれぞれ検出することができる分析方法を提供すること。【解決手段】目的物質７Ａ、７Ｂと結合する活性を有する結合物質３Ａ、３Ｂ、及び標識物５Ａ、５Ｂを備える融合体１Ａ、１Ｂと、前記目的物質を含む試料とを混合する。前記目的物質と結合していない前記融合体を除去する。前記目的物質と結合した前記融合体に含まれる前記標識物が生じさせる前記現象を検出することで、前記目的物質を分析する。前記融合体には複数の種類が存在する。前記融合体に結合する前記目的物質と、前記現象とは、前記融合体の種類ごとに異なる。【選択図】図３
Description
本開示は分析方法に関する。
特許文献１に、融合体を用いた目的物質の分析方法が開示されている。融合体は、結合物質及び標識物を備える。結合物質は、目的物質と結合する活性を有する。標識物は、観測可能な現象を生じる。
目的物質の分析方法では、目的物質を含む試料と、融合体とを混合する。次に、目的物質と結合していない融合体を除去する。次に、目的物質と結合した融合体が生じる現象を検出する。
試料に複数の種類の目的物質が含まれることがある。この場合、複数の種類の目的物質をそれぞれ検出するためには、まず、試料を複数に分割し、次に、分割された試料のそれぞれで、１つの目的物質を検出する必要があった。
しかしながら、試料を分割する場合、様々な問題が生じることがある。例えば、試料が微量である場合、分割することは困難である。また、試料を分割する作業は煩雑であり、試料を分割するための時間を要する。また、試料を正確に分割できない場合、分析の精度が低下する。
本開示の１つの局面では、試料を分割しなくても、試料に含まれる複数の種類の目的物質をそれぞれ検出することができる分析方法を提供することが好ましい。
本開示の１つの局面は、目的物質（７Ａ、７Ｂ）と結合する活性を有する結合物質（３Ａ、３Ｂ）、及び標識物（５Ａ、５Ｂ）を備える融合体（１Ａ、１Ｂ）と、前記目的物質を含む試料とを混合し、前記目的物質と結合していない前記融合体を除去し、前記目的物質と結合した前記融合体に含まれる前記標識物が生じさせる現象を検出する前記目的物質の分析方法である。
前記融合体には複数の種類が存在する。前記融合体に結合する前記目的物質と、前記現象とは、前記融合体の種類ごとに異なる。
本開示の１つの局面である分析方法によれば、試料を分割しなくても、試料に含まれる複数の種類の目的物質をそれぞれ検出することができる。
本開示の例示的な実施形態について図面を参照しながら説明する。
１．目的物質
目的物質とは、分析の対象となる物質である。目的物質として、例えば、タンパク質、糖、核酸、低分子化合物、脂質、抗原、ウイルス等が挙げられる。ウイルスとして、例えば、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ２分離株等が挙げられる。
１．目的物質
目的物質とは、分析の対象となる物質である。目的物質として、例えば、タンパク質、糖、核酸、低分子化合物、脂質、抗原、ウイルス等が挙げられる。ウイルスとして、例えば、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ２分離株等が挙げられる。
２．融合体
本開示の分析方法では、融合体を用いる。融合体は、結合物質と、標識物とを備える。結合物資は、目的物質と結合する活性を有する。結合物資は、例えば、特定の目的物質と特異的に結合する活性を有し、他の物質とは結合し難い。結合物質として、例えば、核酸から成る物質、アミノ酸から成る物質等が挙げられる。結合物質として、例えば、核酸アプタマー、低分子タンパク質製剤、ペプチドアプタマー、抗体、核酸等が挙げられる。例えば、結合物質の少なくとも一部は、核酸アプタマー、又は低分子タンパク質製剤である。融合体は、結合物質を備えることにより、目的物質と結合することができる。
本開示の分析方法では、融合体を用いる。融合体は、結合物質と、標識物とを備える。結合物資は、目的物質と結合する活性を有する。結合物資は、例えば、特定の目的物質と特異的に結合する活性を有し、他の物質とは結合し難い。結合物質として、例えば、核酸から成る物質、アミノ酸から成る物質等が挙げられる。結合物質として、例えば、核酸アプタマー、低分子タンパク質製剤、ペプチドアプタマー、抗体、核酸等が挙げられる。例えば、結合物質の少なくとも一部は、核酸アプタマー、又は低分子タンパク質製剤である。融合体は、結合物質を備えることにより、目的物質と結合することができる。
標識物は、観測可能な現象を生じさせる。観測可能な現象として、例えば、酸化還元、発色、蛍光、発光、燐光、吸熱、発熱、沈殿、及びイオン量の変化のうちの少なくとも１つが挙げられる。イオン量の変化におけるイオンは、例えば、水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、又は塩化物イオンのうちの少なくとも１つを含む。イオン量は、例えば、イオンの生産、消費、又は吸収等により変化する。
標識物は、例えば、イオンの生産、消費、又は吸収を誘発する。イオンの生産、消費、又は吸収を誘発する標識物は、例えば、酵素である。イオンの生産、消費、又は吸収を誘発する標識物として、例えば、1,3-プロパンジオールデヒドロゲナーゼ、15-ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ、1H-ピロール-2-カルボニル-[ペプチジル担体タンパク質]クロリナーゼ、2,4-ジクロロベンゾイル-CoAレダクターゼ、2,5-ジオキソ吉草酸デヒドロゲナーゼ、2-アミノベンゼンスルホン酸2,3-ジオキシゲナーゼ、2-イミノブタノエート/ 2-イミノプロパノエートデアミナーゼ、2-エン酸レダクターゼ、2'-デヒドロカナマイシンレダクターゼ、3,4-ジヒドロキシフェニルアラニン還元性デアミナーゼ、3α-ヒドロキシステロイド3-デヒドロゲナーゼ、3-アミノブチリル-CoAアンモニアリアーゼ、3-オキソ-5α-ステロイド4-デヒドロゲナーゼ、3-オキソステロイド-1-デヒドロゲナーゼ、3-クロロ-D-アラニンデヒドロクロリナーゼ、4-クロロフェニル酢酸3,4-ジオキシゲナーゼ、4-クロロベンゾイル-CoAデハロゲナーゼ、4-クロロ安息香酸デハロゲナーゼ、4-トリメチルアンモニオブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ、4-メチルアミノブタノエートオキシダーゼ、4-メチレングルタミン酸-アンモニアリガーゼ、5-ホスホオキシ-L-リジンホスホリアーゼ、7,8-ジデメチル-8-ヒドロキシ-5-デアザリボフラビンシンターゼ、7-カルボキシ-7-デアザグアニンシンターゼ、7-クロロ-L-トリプトファン6-ハロゲナーゼ、7-シアノ-7-デアザグアニンシンターゼ、AMPデアミナーゼ、CTPシンターゼ、DDT-デヒドロクロリナーゼ、dTDP-4-アミノ-4,6-ジデオキシ-D-グルコースアンモニアリアーゼ、D-アラビノース-1-デヒドロゲナーゼ、D-アルギニンデヒドロゲナーゼ、D-キシロースレダクターゼ、D-グルコサミネート-6-リン酸アンモニアリアーゼ、D-セリンアンモニアリアーゼ、D-乳酸デヒドロゲナーゼ、GDP-4-デヒドロ-6-デオキシ-α-D-マンノース3-デヒドラターゼ、GMPシンターゼ、L-2-アミノ-4-クロロペント-4-エノエートデヒドロクロリナーゼ、L-シスチンβ-リアーゼ、L-システインデスルフィダーゼ、L-システイン酸スルホリアーゼ、L-セリンアンモニアリアーゼ、L-トリプトファンアンモニアリアーゼ、L-リジンシクロデアミナーゼ、N1-アセチルポリアミンオキシダーゼ、N8-アセチルスペルミジンオキシダーゼ、NAD +-ジフタミドADP-リボシルトランスフェラーゼ、NAD +シンターゼ、NAD +-二窒素レダクターゼADP-D-リボシルトランスフェラーゼ、N-スクシンラルギニンジヒドロラーゼ、S-（ヒドロキシメチル）ミコチオールデヒドロゲナーゼ、S-カルボキシメチルシステインシンターゼ、UDP-2-アセトアミド-2,6-β-L-アラビノ-ヘキシル-4-オースレダクターゼ、UDP-N-アセチル-2-アミノ-2-デオキシグルクロネートデヒドロゲナーゼ、UDP-N-アセチル-D-マンノサミンデヒドロゲナーゼ、UDP-N-アセチル-α-D-キノボサミンデヒドロゲナーゼ、UDP-N-アセチルグルコサミン3-デヒドロゲナーゼ、UDP-N-アセチルグルコサミン6-デヒドロゲナーゼ、UDP-グルクロン酸デヒドロゲナーゼ、β-アラニル-CoAアンモニアリアーゼ、β-ウレイドプロピオナーゼ、β-ラクタマーゼ、γ-ブチロベタインジオキシゲナーゼ、アスパラギニル-tRNAシンターゼ、アスパラギンシンターゼ、アスパラギン酸アンモニアリアーゼ、アスパラギン酸-アンモニアリガーゼ、アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、アスパラギン酸デヒドロゲナーゼ、アデニリル硫酸塩-アンモニアアデニリルトランスフェラーゼ、アデノシルクロリドシンターゼ、アトラジンクロロヒドロラーゼ、アミノメチルトランスフェラーゼ、アラニンデヒドロゲナーゼ、アラントイン酸デイミナーゼ、アルカリフォスファターゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、アンモニアキナーゼ、アンモニアモノオキシゲナーゼ、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ、イミダゾールグリセロール-リン酸シンターゼ、ウリカーゼ、ウレアーゼ、ウレイドグリコレートアミドヒドロラーゼ、ウロン酸デヒドロゲナーゼ、エタノールアミンアンモニアリアーゼ、エリスロ-3-ヒドロキシ-L-アスパラギン酸アンモニアリアーゼ、オクトパミンデヒドラターゼ、オルニチンシクロデアミナーゼ、ガラクトースデヒドロゲナーゼ、カルバメートキナーゼ、カルバモイル-セリンアンモニアリアーゼ、カルバモイルリン酸シンターゼ、カルボニルレダクターゼ、ギ酸デヒドロゲナーゼ、グリシンレダクターゼ、グリセロール-3-リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、グルコキナーゼ、グルコサミネートアンモニアリアーゼ、グルコサミン-6-リン酸デアミナーゼ、グルタミニル-tRNAシンターゼ、グルタミンシンテターゼ、グルタミン酸シンターゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、クロトノベテニル-CoAヒドラターゼ、クロライドペルオキシダーゼ、コプロポルフィリノーゲンデヒドロゲナーゼ、コリンオキシダーゼ、コリンモノオキシゲナーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ジアセチルレダクターゼ、ジアミノピメリン酸デヒドロゲナーゼ、ジアミノプロピオン酸アンモニアリアーゼ、シキミ酸デヒドロゲナーゼ、シクロヘキサン-1,2-ジオールデヒドロゲナーゼ、ジクロロクロモピロレートシンターゼ、ジクロロメタンデハロゲナーゼ、シスタチオニンγ-リアーゼ、システイン-S-コンジュゲートβ-リアーゼ、ジヒドロリポイルデヒドロゲナーゼ、ジフチン-アンモニアリガーゼ、シンナモイル-補酵素A-レダクターゼ、スクシニルグルタミン酸-セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ、スタキドリンN-デメチラーゼ、スレオ-3-ヒドロキシ-D-アスパラギン酸アンモニアリアーゼ、スレオ-3-ヒドロキシ-L-アスパラギン酸アンモニアリアーゼ、スレオニンアンモニアリアーゼ、セリン硫酸アンモニアリアーゼ、チオレドキシンジスルフィドレダクターゼ、チロシンアンモニアリアーゼ、チロシンフェノールリアーゼ、テトラクロロエテン還元デハロゲナーゼ、テトラサイクリン7-ハロゲナーゼ、トリプトファナーゼ、トリプトファン5-ハロゲナーゼ、トリプトファン6-ハロゲナーゼ、トリプトファン7-ハロゲナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸-デヒドロゲナーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸-ヘムタンパク質レダクターゼ、ニトロゲナーゼ、バナジウム依存性ニトロゲナーゼ、ハパリンドール型アルカロイドクロリナーゼ、ヒスチジンアンモニアリアーゼ、ヒドラジンシンターゼ、ヒドラジンデヒドロゲナーゼ、ヒドロキシメチルビランシンターゼ、ヒドロキシルアミンレダクターゼ、ピリドキサール5'-リン酸シンターゼ、ヒ酸レダクターゼ、フェニルアラニン/チロシンアンモニアリアーゼ、フェニルアラニン2-モノオキシゲナーゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、フェレドキシン-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドりん酸レダクターゼ、フェレドキシン-亜硝酸還元酵素、フマル酸レダクターゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、ベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼ、ベタインレダクターゼ、ペルオキシダーゼ、ホモシステインデスルフヒドラーゼ、ホモスペルミジンシンターゼ、ホルムイミドイルテトラヒドロ葉酸シクロデアミナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、メタノールデヒドロゲナーゼ、メタンモノオキシゲナーゼ、メチオニンγ-リアーゼ、メチルアスパラギン酸アンモニアリアーゼ、メチルアミンデヒドロゲナーゼ、メチレンジ尿素デアミナーゼ、ラクトアルデヒドデヒドロゲナーゼ、リボース-5-リン酸-アンモニアリガーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ルブレドキシン-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドりん酸レダクターゼ、亜塩素酸塩O2-リアーゼ、亜硝酸レダクターゼ、亜硫酸デヒドロゲナーゼ、塩化物ペルオキシダーゼ、塩素酸レダクターゼ、脂質IIイソグルタミニルシンターゼ、炭酸アンヒドラーゼ、及び非特異的ポリアミンオキシダーゼのうちの少なくとも１つが挙げられる。
標識物は、例えば、酵素、ＤＮＡザイム、ＲＮＡザイム、磁気標識、蛍光標識、化学発光プローブ、及びナノ粒子のうちの少なくとも１つを含む。
結合物質と標識物とは、例えば、化学置換基又は核酸結合タンパク質を介して結合している。化学置換基として、例えば、ビオチン、一級アミン、アジド、アルキン、ジベンゾシクロオクチン、ビシクロノニン、2´-O-プロパルギル、2´-O-プロパルギル、チオール、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、N-ヒドロキシスクシンイミド、マレイミド、及び５－ハロウラシルのうちの少なくとも１つが挙げられる。核酸結合タンパク質として、例えば、ジンクフィンガー、ＣＲＩＳＰＲ等が挙げられる。５－ハロウラシルとして、例えば、５－ヨードウラシル、５－ブロモウラシル等が挙げられる。５－ハロウラシルは、ＵＶ架橋が可能な化学置換基である。
本開示の分析方法では、複数の種類の融合体を用いる。融合体に結合する目的物質と、観測可能な現象とは、融合体の種類ごとに異なる。
例えば、２つの融合体１Ａ、１Ｂを図１に示す。融合体１Ａは、結合物質３Ａと標識物５Ａとを備える。融合体１Ｂは、結合物質３Ｂと標識物５Ｂとを備える。
融合体１Ａ、１Ｂの種類が同じであれば、結合物質３Ａ、３Ｂの種類が同じである。結合物質３Ａ、３Ｂの種類が同じであれば、結合物質３Ａに結合する目的物質と、結合物質３Ｂに結合する目的物質とが同じである。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類が同じであれば、結合物質３Ａに結合する目的物質と、結合物質３Ｂに結合する目的物質とが同じである。
また、融合体１Ａ、１Ｂの種類が同じであれば、標識物５Ａ、５Ｂの種類が同じである。標識物５Ａ、５Ｂの種類が同じであれば、標識物５Ａが生じさせる、観測可能な現象と、標識物５Ｂが生じさせる、観測可能な現象とは同じである。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類が同じであれば、標識物５Ａが生じさせる、観測可能な現象と、標識物５Ｂが生じさせる、観測可能な現象とは同じである。
融合体１Ａ、１Ｂの種類が異なれば、結合物質３Ａ、３Ｂの種類が異なる。結合物質３Ａ、３Ｂの種類が異なれば、結合物質３Ａに結合する目的物質と、結合物質３Ｂに結合する目的物質とは異なる。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類が異なれば、結合物質３Ａに結合する目的物質と、結合物質３Ｂに結合する目的物質とは異なる。
また、融合体１Ａ、１Ｂの種類が異なれば、標識物５Ａ、５Ｂの種類が異なる。標識物５Ａ、５Ｂの種類が異なれば、標識物５Ａが生じさせる、観測可能な現象と、標識物５Ｂが生じさせる、観測可能な現象とは異なる。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類が異なれば、標識物５Ａが生じさせる、観測可能な現象と、標識物５Ｂが生じさせる、観測可能な現象とは異なる。
３．分析方法
本開示の分析方法では、複数の種類の融合体と、目的物質を含む試料とを混合する。このとき、融合体の少なくとも一部と、目的物質とが結合する。より詳しくは、融合体が備える結合物質と、目的物質とが結合する。
本開示の分析方法では、複数の種類の融合体と、目的物質を含む試料とを混合する。このとき、融合体の少なくとも一部と、目的物質とが結合する。より詳しくは、融合体が備える結合物質と、目的物質とが結合する。
複数の種類の融合体は、それぞれ、対応する目的物質が存在する場合は、対応する目的物質と結合する。対応する目的物質とは、融合体がその目的物質に対して結合する活性を有する目的物質である。
例えば、図１に示す融合体１Ａ、１Ｂと試料とを混合することができる。融合体１Ａ、１Ｂは異なる種類の融合体である。融合体１Ａと結合する目的物質を目的物質７Ａとし、融合体１Ｂと結合する目的物質を目的物質７Ｂとする。目的物質７Ａ、７Ｂは、異なる種類の物質である。
試料中に目的物質７Ａが含まれ、目的物質７Ｂは含まれていなかった場合、図２のＳＴＥＰ１に示すように、融合体１Ａ、１Ｂと試料とを混合したとき、目的物質７Ａは融合体１Ａと結合し、融合体１Ｂとは結合しない。融合体１Ｂは、目的物質と結合していない状態となる。
次に、目的物質と結合していない融合体を除去する処理を行うと、図２のＳＴＥＰ２に示すように、目的物質７Ａと結合している融合体１Ａは残り、融合体１Ｂは除去される。また、目的物質７Ａと結合していない融合体１Ａも除去される。目的物質と結合していない融合体を除去する方法として、例えば、限外ろ過や、担体を利用する方法が挙げられる。
次に、図２のＳＴＥＰ３に示すように、目的物質７Ａと結合した融合体１Ａが生じさせる、観測可能な現象（以下ではＡの現象とする）を検出する。Ａの現象は、例えば、標識物５Ａが含む酵素が機能する条件下において、基質９Ａから代謝物１１Ａが生じる現象である。
酵素が機能する条件は酵素種ごとに異なる。酵素が機能する条件として、例えば、温度が好適な範囲内であること、ｐHが好適な範囲内であること、酵素が機能するために必要な補酵素が溶液に含まれること等が挙げられる。
Ａの現象を検出することで、試料に目的物質７Ａが含まれていたと判断することができる。また、Ａの現象の程度により、目的物質７Ａの量や濃度を推測することができる。
試料中に目的物質７Ａ、７Ｂが含まれていた場合、図３のＳＴＥＰ１１に示すように、融合体１Ａ、１Ｂと試料とを混合したとき、目的物質７Ａは融合体１Ａと結合し、目的物質７Ｂは融合体１Ｂと結合する。
次に、目的物質と結合していない融合体を除去する処理を行うと、図３のＳＴＥＰ１２に示すように、目的物質７Ａと結合した融合体１Ａ、及び、目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂは残る。目的物質と結合していない融合体１Ａ、１Ｂは除去される。
次に、図３のＳＴＥＰ１３に示すように、目的物質７Ａと結合した融合体１Ａが生じさせるＡの現象と、目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂが生じさせる、観測可能な現象（以下ではＢの現象とする）とをそれぞれ検出する。
Ａの現象を検出することで、試料に目的物質７Ａが含まれていたと判断することができる。また、Ａの現象の程度により、目的物質７Ａの量や濃度を推測することができる。
Ｂの現象は、例えば、標識物５Ｂが含む酵素が機能する条件下において、基質９Ｂから代謝物１１Ｂが生じる現象である。
Ｂの現象は、例えば、標識物５Ｂが含む酵素が機能する条件下において、基質９Ｂから代謝物１１Ｂが生じる現象である。
酵素が機能する条件は酵素種ごとに異なる。酵素が機能する条件として、例えば、温度が好適な範囲内であること、ｐHが好適な範囲内であること、酵素が機能するために必要な補酵素が溶液に含まれること等が挙げられる。
Ｂの現象を検出することで、試料に目的物質７Ｂが含まれていたと判断することができる。また、Ｂの現象の程度により、目的物質７Ｂの量や濃度を推測することができる。Ａの現象とＢの現象とは異なる現象であるから、ユーザは、Ａの現象とＢの現象とを区別して検出することができる。
例えば、現象が水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、又は塩化物イオンの生産、消費、又は吸収である場合、例えば、ｐＨ計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて現象を検出することができる。
例えば、現象が発色、発光、蛍光、又は燐光である場合、例えば、受光デバイスを用いて現象を検出することができる。例えば、現象が吸熱、又は発熱である場合、例えば、熱分析機を用いて現象を検出することができる。例えば、現象が酸化還元である場合、例えば、電位計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて現象を検出することができる。例えば、現象が沈殿である場合、例えば、質量分析機、吸光光度計、又は分光光度計を用いて現象を検出することができる。
４．分析方法が奏する効果
（１Ａ）本開示の分析方法では、複数種類の融合体を使用することで、試料を分割することなく、複数種類の目的物質を検出できる。その理由は以下のとおりである。本開示の分析方法では、試料と、複数の種類の融合体とを混合することができる。試料に複数の種類の目的物質が含まれていた場合、複数の種類の目的物質は、それぞれ、対応する種類の融合体と結合する。例えば、複数の種類の目的物質７Ａ、７Ｂが試料に含まれていた場合、目的物質７Ａは融合体１Ａと結合し、目的物質７Ｂは融合体１Ｂと結合する。融合体１Ａ、１Ｂは異なる種類の融合体である。融合体１Ａは、目的物質７Ａと特異的に結合する活性を有する。融合体１Ｂは、目的物質７Ｂと特異的に結合する活性を有する。
（１Ａ）本開示の分析方法では、複数種類の融合体を使用することで、試料を分割することなく、複数種類の目的物質を検出できる。その理由は以下のとおりである。本開示の分析方法では、試料と、複数の種類の融合体とを混合することができる。試料に複数の種類の目的物質が含まれていた場合、複数の種類の目的物質は、それぞれ、対応する種類の融合体と結合する。例えば、複数の種類の目的物質７Ａ、７Ｂが試料に含まれていた場合、目的物質７Ａは融合体１Ａと結合し、目的物質７Ｂは融合体１Ｂと結合する。融合体１Ａ、１Ｂは異なる種類の融合体である。融合体１Ａは、目的物質７Ａと特異的に結合する活性を有する。融合体１Ｂは、目的物質７Ｂと特異的に結合する活性を有する。
目的物質７Ａと結合した融合体１Ａは、融合体１Ａの種類に特有のＡの現象を生じさせる。目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂは、融合体１Ｂの種類に特有のＢの現象を生じさせる。Ａの現象とＢの現象とは異なるから、Ａの現象とＢの現象とを区別して検出することができる。
Ａの現象を検出することにより、試料に目的物質７Ａが含まれていたと判断することができる。また、Ａの現象の程度により、目的物質７Ａの量や濃度を推測することができる。Ｂの現象を検出することにより、試料に目的物質７Ｂが含まれていたと判断することができる。また、Ｂの現象の程度により、目的物質７Ｂの量や濃度を推測することができる。
よって、本開示の分析方法によれば、試料を分割しなくても、試料に含まれる複数の種類の目的物質をそれぞれ検出することができる。
（１Ｂ）結合物質の少なくとも一部は、例えば、核酸、又は核酸アプタマーである。この場合、結合物質のサイズが低分子サイズとなるため、目的物質と結合物質との結合の際に立体構造的干渉を受け難く、目的物質と結合し易い。その結果、分析感度を向上させることができる。また、結合物質を人工的に合成することが容易である。
（１Ｃ）目的物質の少なくとも一部は、例えば、タンパク質、糖、核酸、低分子化合物、又は脂質である。本開示の分析方法によれば、多様な目的物質を検出できる。
（１Ｄ）本開示の分析方法では、例えば、試料と混合される融合体の種類の数は、試料に含まれる目的物質の種類の数以上である。この場合、試料に含まれる全ての種類の目的物質をそれぞれ検出することができる。
（１Ｅ）目的物質と結合した融合体が生じさせる、観測可能な現象は、例えば、酸化還元、発色、蛍光、発光、燐光、吸熱、発熱、沈殿、及びイオン量の変化のうちの少なくとも１つである。イオン量の変化におけるイオンは、例えば、水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、及び塩化物イオンのうちの少なくとも１つを含む。イオン量は、例えば、イオンの生産、消費、又は吸収により変化する。観測可能な現象がこれらのものである場合、試料に含まれる目的物質を検出することができる。
（１Ｆ）標識物は、例えば、イオンの生産、消費、又は吸収を誘発する標識物である。この場合、試料に含まれる目的物質を高感度に検出することができる。
（１Ｇ）標識物は、例えば、酵素、ＤＮＡザイム、ＲＮＡザイム、磁気標識、蛍光標識、化学発光プローブ、及びナノ粒子のうちの少なくとも１つを含む。この場合、試料に含まれる目的物質を検出することができる。
（１Ｈ）結合物質と標識物とは、例えば、化学置換基又は核酸結合タンパク質を介して結合している。核酸結合タンパク質として、例えば、ジンクフィンガー、ＣＲIＳＰＲ等が挙げられる。化学置換基は、例えば、ビオチン、一級アミン、アジド、アルキン、ジベンゾシクロオクチン、ビシクロノニン、2´-O-プロパルギル、2´-O-プロパルギル、チオール、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、N-ヒドロキシスクシンイミド、マレイミド、及び５－ハロウラシルのうちの少なくとも１つを含む。この場合、結合物質と標識物とが結合し易い。
５．実施例１
（５－１）融合体の合成
図４に示す方法で融合体１Ａ、１Ｂを合成した。まず、図４のＳ２１の工程では、結合物質３Ａ、３Ｂを、インビトロプロセスにより化学的に合成した。結合物質３Ａは、配列番号１の塩基配列を有し、５’末端をビオチン化修飾したＤＮＡアプタマーであった。結合物質３Ａの塩基配列は、「５’－ＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣ ＣＴＴＧＴＧＣＴＴＴ ＧＧＧＡＧＴＧＣＴＧ ＧＴＣＣＡＡＧＧＧＣ ＧＴＴＡＡＴＧＧＡＣ Ａ－３’」であった。配列番号１の塩基配列は、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２０２０，９２，９８９５－９９００（以下では文献１とする）に記載されている。
（５－１）融合体の合成
図４に示す方法で融合体１Ａ、１Ｂを合成した。まず、図４のＳ２１の工程では、結合物質３Ａ、３Ｂを、インビトロプロセスにより化学的に合成した。結合物質３Ａは、配列番号１の塩基配列を有し、５’末端をビオチン化修飾したＤＮＡアプタマーであった。結合物質３Ａの塩基配列は、「５’－ＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣ ＣＴＴＧＴＧＣＴＴＴ ＧＧＧＡＧＴＧＣＴＧ ＧＴＣＣＡＡＧＧＧＣ ＧＴＴＡＡＴＧＧＡＣ Ａ－３’」であった。配列番号１の塩基配列は、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２０２０，９２，９８９５－９９００（以下では文献１とする）に記載されている。
なお、文献１の記載によると、配列番号１の塩基配列を有するＤＮＡアプタマーは、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイク糖タンパク質におけるＲＢＤを目的物質とするＤＮＡアプタマーである。
結合物質３Ｂは、配列番号２の塩基配列を有し、５’末端をビオチン化修飾したＤＮＡアプタマーであった。結合物質３Ｂの塩基配列は、「５’－ＴＣＧＡＴＴＣＧＧＧＴＧＧＧＴＧＧＧＡＧＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＧＧＧＧＧＴＴＧＧＡＣＧＣＡＧＡＧＴＧＣ－３’」であった。配列番号２の塩基配列は、ＰＬｏＳ ＯＮＥ １０（４）：ｅ０１２５０６０．Ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．Ｐｏｎｅ．０１２５０６０（以下では文献２とする）に記載されている。なお、文献２の記載によると、配列番号２の塩基配列を有するＤＮＡアプタマーは、インフルエンザＡ型のヘマグルチニンを目的物質とするＤＮＡアプタマーである。
結合物質３Ａをリン酸緩衝液（以下では１ｘＰＢＳ／Ｔとする）に溶解し、結合物質３Ａ溶液を製造した。また、結合物質３Ｂを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、結合物質３Ｂ溶液を製造した。
結合物質３Ａ溶液における結合物質３Ａの濃度、及び、結合物質３Ｂ溶液における結合物質３Ｂの濃度は、それぞれ、１０μｍｏｌ／ｌであった。
１ｘＰＢＳ／Ｔは、１０ｘＰＢＳ／Ｔ（富士フイルム和光純薬社、製品番号ＭＢ－０７５－１０００）を超純水で１０倍に希釈したリン酸緩衝液であった。結合物質３Ａ溶液及び結合物質３Ｂ溶液を９５℃で加熱し、その後徐冷した。
次に、図４のＳ２２の工程では、標識物５Ａを用意した。標識物５Ａは、ストレプトアビジン－アルカリフォスファターゼ結合体（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、製品番号Ｓ９２１）であった。標識物５Ａは酵素であった。ストレプトアビジン－アルカリフォスファターゼ結合体は、アルカリフォスファターゼを、ストレプトアビジンで修飾することで得られる。ストレプトアビジンは、アルカリフォスファターゼを修飾する化学置換基である。標識物５Ａを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、標識物５Ａ溶液を製造した。標識物５Ａ溶液における標識物５Ａの濃度は、２０μｍｏｌ／ｌであった。
１００μＬの結合物質３Ａ溶液と、５μＬの標識物５Ａ溶液とを混合し、室温で１時間静置した。このとき、ビオチン－ストレプトアビジンの相互作用により、結合物質３Ａと標識物５Ａとが融合し、融合体１Ａが合成された。
また、図４のＳ２２の工程では、標識物５Ｂを用意した。標識物５Ｂは、ホースラディッシュペルオキシダーゼ―ストレプトアビジン結合体（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、製品番号４３－４３２３）であった。標識物５Ｂは酵素であった。ホースラディッシュペルオキシダーゼ―ストレプトアビジン結合体は、ホースラディッシュペルオキシダーゼを、ストレプトアビジンで修飾することで得られる。ストレプトアビジンは、ホースラディッシュペルオキシダーゼを修飾する化学置換基である。標識物５Ｂを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、標識物５Ｂ溶液を製造した。標識物５Ｂ溶液における標識物５Ｂの濃度は、２０μｍｏｌ／ｌであった。
１００μＬの結合物質３Ｂ溶液と、５μＬの標識物５Ｂ溶液とを混合し、室温で１時間静置した。このとき、ビオチン－ストレプトアビジンの相互作用により、結合物質３Ｂと標識物５Ｂとが融合し、融合体１Ｂが合成された。
次に、図４のＳ２３の工程では、融合体１Ａ、１Ｂを精製し、回収した。具体的には、標識物５Ａと融合しなかった結合物質３Ａを、限外濾過フィルターを用いて融合体１Ａから分離した。次に、１ｘＰＢＳ／Ｔで融合体１Ａを溶解することで、融合体１Ａを回収した。
また、標識物５Ｂと融合しなかった結合物質３Ｂを、限外濾過フィルターを用いて融合体１Ｂから分離した。次に、１ｘＰＢＳ／Ｔで融合体１Ｂを溶解することで、融合体１Ｂを回収した。
なお、結合物質３Ａ、３Ｂは、ＤＮＡアプタマー以外の結合物質であってもよい。結合物質３Ａ、３Ｂは、例えば、低分子タンパク質製剤、又は、ＲＮＡアプタマーであってもよい。低分子タンパク質製剤として、例えば、フラグメント抗体、一本鎖抗体、ディアボディ（Ｄｉａｂｏｄｙ）、ナノボディ（Ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ＶＨＨ、ペプチドアプタマー等が挙げられる。
また、結合物質３Ａ、３Ｂを構成するＤＮＡアプタマーの塩基配列は、配列番号１、２の塩基配列以外の塩基配列であってもよい。ＤＮＡアプタマーの塩基配列は、目的物質に応じて選定できる。また、結合物質３Ａと標識物５Ａとの融合、及び、結合物質３Ｂと標識物５Ｂとの融合は、ビオチン－ストレプトアビジンの相互作用に基づく融合以外の融合であってもよい。また、結合物質３Ａ、３Ｂとして核酸アプタマーを使用する場合、核酸アプタマーにおける５’末端以外の末端が標識物５Ａ、５Ｂと融合してもよい。
また、結合物質３Ａ、３Ｂとして低分子タンパク質製剤を使用する場合、低分子タンパク質製剤におけるＮ末端が標識物５Ａ、５Ｂと融合してもよいし、Ｃ末端が標識物５Ａ、５Ｂと融合してもよい。
融合体１Ａと融合体１Ｂとは、種類が異なる。すなわち、融合体１Ａに結合する目的物質７Ａと、融合体１Ｂに結合する目的物質７Ｂとは、異なる物質である。また、融合体１Ａが生じるＡの現象と、融合体１Ｂが生じるＢの現象とは異なる現象である。
（５－２）目的物質の分析方法の実施
図５に示すように、目的物質の分析方法を実施した。図５のＳ３１では、目的物質７Ａ、７Ｂを用意した。なお、本実施例１では、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は２である。目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数は２である。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は、目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数以上である。
図５に示すように、目的物質の分析方法を実施した。図５のＳ３１では、目的物質７Ａ、７Ｂを用意した。なお、本実施例１では、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は２である。目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数は２である。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は、目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数以上である。
目的物質７Ａは、ＳＡＲＳ―ＣｏＶ－２ （２０１９－ｎＣｏＶ） Ｓｐｉｋｅ Ｓ１－Ｈｉｓ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｓｉｎｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社、製品番号４０５９１－Ｖ０８Ｈ）であった。目的物質７Ａのアミノ酸配列はＲＢＤを含む。目的物質７Ａを１ｘＰＢＳ／Ｔで溶解し、目的物質７Ａ溶液を製造した。目的物質７Ａ溶液における目的物質７Ａの濃度は４μｇ／ｍＬであった。
目的物質７Ｂは、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｈ１Ｎ１ （Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０４／２００９） Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ／ ＨＡ０ Ｐｒｏｔｅｉｎ （ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社、製品番号１１０５５－ＶＮＡＢ）であった。目的物質７Ｂを１ｘＰＢＳ／Ｔで溶解し、目的物質７Ｂ溶液を製造した。目的物質７Ｂ溶液における目的物質７Ｂの濃度は４μｇ／ｍＬであった。
次に、２００μＬの目的物質７Ａ溶液と、２００μＬの目的物質７Ｂ溶液とを混合し、目的物質７ＡＢ溶液を製造した。目的物質７ＡＢ溶液における目的物質７Ａの濃度は２μｇ／ｍＬであり、目的物質７Ｂの濃度は２μｇ／ｍＬであった。
次に、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、１００μＬの目的物質７ＡＢ溶液とを混合し、常温で１時間静置し、融合体－目的物質７ＡＢ混合液を製造した。融合体－目的物質７ＡＢ混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、目的物質７Ａの濃度は１μｇ／ｍＬであり、目的物質７Ｂの濃度は１μｇ／ｍＬであった。
また、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、５０μＬの目的物質７Ａ溶液と、５０μＬの１ｘＰＢＳ／Ｔとを混合し、常温で１時間静置し、融合体－目的物質７Ａ混合液を製造した。融合体－目的物質７Ａ混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、目的物質７Ａの濃度は１μｇ／ｍＬであった。
また、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、５０μＬの目的物質７Ｂ溶液と、５０μＬの１ｘＰＢＳ／Ｔとを混合し、常温で１時間静置し、融合体－目的物質７Ｂ混合液を製造した。融合体－目的物質７Ｂ混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、目的物質７Ｂの濃度は１μｇ／ｍＬであった。
また、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、１００μＬの１ｘＰＢＳ／Ｔとを混合し、常温で１時間静置し、コントロール混合液を製造した。コントロール混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであった。
このとき、図５のＳ３２に示すように、目的物質７Ａと、融合体１Ａとの結合体３３Ａ、又は、目的物質７Ｂと、融合体１Ｂとの結合体３３Ｂが形成された。すなわち、図６に示すように、融合体－目的物質７ＡＢ混合液では、目的物質７Ａと、融合体１Ａとの結合体３３Ａが形成されるとともに、目的物質７Ｂと、融合体１Ｂとの結合体３３Ｂが形成された。
また、図７に示すように、融合体－目的物質７Ａ混合液では、目的物質７Ａと、融合体１Ａとの結合体３３Ａが形成された。また、図８に示すように、融合体－目的物質７Ｂ混合液では、目的物質７Ｂと、融合体１Ｂとの結合体３３Ｂが形成された。また、図９に示すように、コントロール混合液では、結合体３３Ａ、３３Ｂは形成されなかった。
次に、図５のＳ３３では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから、限外濾過フィルターを用いて、目的物質７Ａ、７Ｂと結合していない融合体１Ａ、１Ｂを分離した。その結果、結合体３３Ａ、３３Ｂが回収された。
また、図５のＳ３３では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから回収された結合体を、２つのマイクロチューブに分注した。分注された２つの液を、第１液、第２液とする。
図５のＳ３４では、リン酸４－ニトロフェニル二ナトリウム六水和物（東京化成工業社、製品番号Ｎ０２４１）を用意した。リン酸４－ニトロフェニル二ナトリウム六水和物を、以下ではｐＮＰＰとする。ｐＮＰＰは、アルカリフォスファターゼが誘発する代謝の基質である。
次に、ｐＮＰＰを、炭酸塩ｐＨ標準液（富士フイルム和光純薬社、製品番号０３７－１６１４５）と硫酸マグネシウム（富士フイルム和光純薬社、製品番号１３７－１２３３５）とを含む溶液に溶解し、ｐＮＰＰ溶液を製造した。ｐＮＰＰ溶液におけるｐＮＰＰの濃度は１０ｍｍｏｌ／ｌであった。炭酸塩ｐＨ標準液と硫酸マグネシウムとを含む溶液は、１ｍｍｏｌ／ｌの炭酸塩ｐＨ標準液と、１ｍｍｏｌ／ｌの硫酸マグネシウムとを含んでいた。炭酸塩ｐＨ標準液と硫酸マグネシウムとを含む溶液のｐＨは、９．６となるように調整されていた。
なお、ｐＮＰＰを溶解する溶液は、炭酸塩ｐＨ標準液と硫酸マグネシウムとを含む溶液以外の溶液であってもよい。ｐＮＰＰを溶解する溶液として、例えば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、グッドバッファー等が挙げられる。グッドバッファーとして、例えば、ＭＥＳ、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＥＰＰＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｂｉｃｉｎｅ、ＴＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳＯ、ＣＡＰＳ等が挙げられる。
ｐＮＰＰを溶解する溶液のｐＨは９．６以外の値であってもよい。ｐＮＰＰを溶解する溶液は、弱アルカリ性の溶液であることが好ましい。ｐＮＰＰを溶解する溶液のｐＨは、８以上１１以下であることが好ましい。ｐＮＰＰを溶解する溶液が弱アルカリ性の溶液である場合、ｐＮＰＰを基質とする代謝に由来するｐＨの変化が大きくなる。ｐＮＰＰを溶解する溶液のｐＨが８以上１１以下である場合、ｐＮＰＰを基質とする代謝に由来するｐＨの変化が大きくなる。
また、図５のＳ３４では、１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、製品番号３４０２８）を用意した。１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡは、ホースラディッシュペルオキシダーゼが誘発する代謝の基質を含む。
次に、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得た第１液に、ｐＮＰＰ溶液を１００μＬ加え、３７℃で１５分間静置した。第１液が融合体１Ａを含む場合は、融合体１Ａが備えるアルカリフォスファターゼの酵素活性により、ｐＮＰＰを基質とする代謝が誘発され、ｐＮＰＰからリン酸基が分離する。その結果、無機リン酸と、ｐ－ニトロフェノールとが生成する。ｐ－ニトロフェノールの吸収極大波長は４０５ｎｍである。そのため、ｐ－ニトロフェノールを含む溶液は黄色に発色する。また、生成した無機リン酸は、溶液中において電離し、水素イオンを放出する。そのため、溶液のｐＨが低下する。
また、図５のＳ３４では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得た第２液に、１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡを１００μＬ加え、室温で１５分静置した。
次に、図５のＳ３５では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得た第１液に、０．５ｍｏｌ／ｌのエチレンジアミン四酢酸（富士フイルム和光純薬、製品番号３１１－９００７５）を５μＬ滴下し、アルカリフォスファターゼ酵素反応を停止した。
また、図５のＳ３５では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得た第２液に、１ｍｏｌ／ｌのＨ２ＳＯ４を５０μＬ加え、ホースラディッシュペルオキシダーゼ酵素反応を停止した。
次に、図５のＳ３６では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得た第１液において、４０５ｎｍでの吸光度を測定した。また、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得た第２液において、４５０ｎｍでの吸光度を測定した。
吸光度の測定結果を図１０に示す。図１０において「○」とは、コントロール混合液から得た第１液又は第２液での吸光度と比べて、吸光度が大きいことを意味する。「×」とは、コントロール混合液から得た第１液又は第２液での吸光度と比べて、吸光度が同じか小さいことを意味する。
吸光度の測定結果は、以下のことを示す。実施例１では、目的物質７Ａ、７Ｂを含む目的物質７ＡＢ溶液と、融合体１Ａ、１Ｂとを混合した。次に、目的物質７Ａ、７Ｂのいずれとも結合していない融合体１Ａ、１Ｂを除去した。目的物質７Ａと結合した融合体１Ａが生じるＡの現象、及び、目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂが生じるＢの現象を検出することができた。Ａの現象は、４０５ｎｍでの吸光度が大きいことである。Ｂの現象は、４５０ｎｍでの吸光度が大きいことである。よって、実施例１では、目的物質７Ａ、７Ｂを検出することができた。
また、実施例１では、目的物質７Ａを含む目的物質７Ａ溶液と、融合体１Ａ、１Ｂとを混合した。次に、目的物質７Ａと結合していない融合体１Ａ、１Ｂを除去した。目的物質７Ａと結合した融合体１Ａが生じるＡの現象を検出することができた。よって、実施例１では、目的物質７Ａを検出することができた。
また、実施例１では、目的物質７Ｂを含む目的物質７Ｂ溶液と、融合体１Ａ、１Ｂとを混合した。次に、目的物質７Ｂと結合していない融合体１Ａ、１Ｂを除去した。目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂが生じるＢの現象を検出することができた。よって、実施例１では、目的物質７Ｂを検出することができた。
また、融合体１Ａが備える標識物５Ａは、結合物質３Ａと融合した状態でもｐＮＰＰを基質とする代謝を誘発する酵素活性を有していた。また、融合体１Ａが備える結合物質３Ａは、標識物５Ａと融合した状態でも、目的物質７Ａに対する結合活性を有していた。
融合体１Ｂが備える標識物５Ｂは、結合物質３Ｂと融合した状態でも、基質の代謝を誘発する酵素活性を有していた。また、融合体１Ｂが備える結合物質３Ｂは、標識物５Ｂと融合した状態でも、目的物質７Ｂに対する結合活性を有していた。
また、結合物質３Ａは、目的物質７Ｂと結合しなかった。すなわち、結合物質３Ａは、目的物質７Ｂに対する結合活性を有していなかった。また、結合物質３Ｂは、目的物質７Ａと結合しなかった。すなわち、結合物質３Ｂは、目的物質７Ａに対する結合活性を有していなかった。
６．実施例２
（６－１）融合体１Ａの合成
図１１に示す方法で融合体１Ａを合成した。まず、図１１のＳ４１の工程では、結合物質３Ａを、インビトロプロセスにより化学的に合成した。結合物質３Ａは、実施例１における結合物質３Ａと同じであった。
（６－１）融合体１Ａの合成
図１１に示す方法で融合体１Ａを合成した。まず、図１１のＳ４１の工程では、結合物質３Ａを、インビトロプロセスにより化学的に合成した。結合物質３Ａは、実施例１における結合物質３Ａと同じであった。
結合物質３Ａを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、結合物質３Ａ溶液を製造した。結合物質３Ａ溶液における結合物質３Ａの濃度は、１０μｍｏｌ／ｌであった。結合物質３Ａ溶液を９５℃で加熱し、その後徐冷した。
次に、図１１のＳ４２の工程では、標識物５Ａを用意した。標識物５Ａは、実施例１における標識物５Ａと同一であった。標識物５Ａを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、標識物５Ａ溶液を製造した。標識物５Ａ溶液における標識物５Ａの濃度は、２０μｍｏｌ／ｌであった。
１００μＬの結合物質３Ａ溶液と、５μＬの標識物５Ａ溶液とを混合し、室温で１時間静置した。このとき、ビオチン－ストレプトアビジンの相互作用により、結合物質３Ａと標識物５Ａとが融合し、融合体１Ａが合成された。
次に、図１１のＳ４３の工程では、融合体１Ａを精製し、回収した。具体的には、標識物５Ａと融合しなかった結合物質３Ａを、限外濾過フィルターを用いて融合体１Ａから分離した。次に、１ｘＰＢＳ／Ｔで融合体１Ａを溶解することで、融合体１Ａを回収した。
（６－２）融合体１Ｂの合成
図１２に示す方法で融合体１Ｂを合成した。まず、図１２のＳ５１の工程では、結合物質３Ｂを、インビトロプロセスにより化学的に合成した。結合物質３Ｂは、配列番号２の塩基配列を有し、５’末端をアジド化修飾したＤＮＡアプタマーであった。
図１２に示す方法で融合体１Ｂを合成した。まず、図１２のＳ５１の工程では、結合物質３Ｂを、インビトロプロセスにより化学的に合成した。結合物質３Ｂは、配列番号２の塩基配列を有し、５’末端をアジド化修飾したＤＮＡアプタマーであった。
結合物質３Ｂを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、結合物質３Ｂ溶液を製造した。結合物質３Ｂ溶液における結合物質３Ｂの濃度は、１０μｍｏｌ／ｌであった。結合物質３Ｂ溶液を９５℃で加熱し、その後徐冷した。
図１２のＳ５２の工程では、以下のようにして標識物５Ｂを合成した。ウレアーゼ（富士フイルム和光純薬 製品番号２１０－００７８１）を用意した。ウレアーゼは酵素である。ウレアーゼを１ｘＰＢＳ／Ｔに溶解し、ウレアーゼ溶液を製造した。ウレアーゼ溶液におけるウレアーゼの濃度は、１００μｍｏｌ／ｌであった。
ＤｉｂｅｎｚｏｃｙｃｌｏｏｃｔｙｎｅーＮーｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ ｅｓｔｅｒ（Ｓｉｇｍａ社、 製品番号７６１５２４－５０ＭＧ）（以下はＤＢＣＯ－ＮＨＳとする）を用意した。ＤＢＣＯ－ＮＨＳを、０．１ｌｍｏｌ／ｌのＮａＨＣＯ３溶液に希釈し、ＤＢＣＯ－ＮＨＳ溶液を製造した。ＤＢＣＯ－ＮＨＳ溶液におけるＤＢＣＯ－ＮＨＳの濃度は１００μｍｏｌ／ｌであった。
８０μＬのＤＢＣＯ－ＮＨＳ溶液と２０μＬのウレアーゼ溶液とを混合し、常温で１時間静置した。この時、ＮＨＳとアミノ基との相互作用により、ＤＢＣＯ－ＮＨＳとウレアーゼとが結合し、ＤＢＣＯ－ＮＨＳで修飾されたウレアーゼが合成された。ＤＢＣＯ－ＮＨＳで修飾されたウレアーゼを標識物５Ｂとした。すなわち、標識物５Ｂは、ＤＢＣＯ－ＮＨＳ修飾酵素であった。
次に、図１２のＳ５３の工程では、標識物５Ｂを精製し、回収した。具体的には、ウレアーゼと融合しなかったＤＢＣＯ－ＮＨＳを、限外濾過フィルターを用いて標識物５Ｂから分離し、標識物５Ｂを回収した。
次に、図１２のＳ５４の工程では、１００μＬの結合物質３Ｂ溶液と、５μＬの標識物５Ｂとを混合し、室温で１時間静置した。このとき、Ａｚｉｄｅ－ＤＢＣＯのクリックケミストリーにより、結合物質３Ｂと標識物５Ｂとが融合し、融合体１Ｂが合成された。
次に、図１２のＳ５５の工程では、融合体１Ｂを精製し、回収した。具体的には、標識物５Ｂと融合しなかった結合物質３Ｂを、限外濾過フィルターを用いて融合体１Ｂから分離し、融合体１Ｂを回収した。
なお、結合物質３Ａ、３Ｂは、ＤＮＡアプタマー以外の結合物質であってもよい。結合物質３Ａ、３Ｂは、例えば、低分子タンパク質製剤、又は、ＲＮＡアプタマーであってもよい。低分子タンパク質製剤として、例えば、フラグメント抗体、一本鎖抗体、ディアボディ（Ｄｉａｂｏｄｙ）、ナノボディ（Ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ＶＨＨ、ペプチドアプタマー等が挙げられる。
また、結合物質３Ａ、３Ｂを構成するＤＮＡアプタマーの塩基配列は、配列番号１、２の塩基配列以外の塩基配列であってもよい。ＤＮＡアプタマーの塩基配列は、目的物質に応じて選定できる。また、結合物質３Ａと標識物５Ａとの融合は、ビオチン－ストレプトアビジンの相互作用に基づく融合以外の融合であってもよい。また、結合物質３Ｂと標識物５Ｂとの融合は、Ａｚｉｄｅ－ＤＢＣＯのクリックケミストリーに基づく融合以外の融合であってもよい。また、結合物質３Ａ、３Ｂとして核酸アプタマーを使用する場合、核酸アプタマーにおける５’末端以外の末端が標識物５Ａ、５Ｂと融合してもよい。
また、結合物質３Ａ、３Ｂとして低分子タンパク質製剤を使用する場合、低分子タンパク質製剤におけるＮ末端が標識物５Ａ、５Ｂと融合してもよいし、Ｃ末端が標識物５Ａ、５Ｂと融合してもよい。
融合体１Ａと融合体１Ｂとは、種類が異なる。すなわち、融合体１Ａに結合する目的物質７Ａと、融合体１Ｂに結合する目的物質７Ｂとは、異なる物質である。また、融合体１Ａが生じるＡの現象と、融合体１Ｂが生じるＢの現象とは異なる現象である。
（６－２）目的物質の分析方法の実施
図１３に示すように、目的物質の分析方法を実施した。図１３のＳ６１では、目的物質７Ａ、７Ｂを用意した。目的物質７Ａ、７Ｂは、実施例１における目的物質７Ａ、７Ｂと同一であった。なお、本実施例２では、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は２である。目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数は２である。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は、目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数以上である。
図１３に示すように、目的物質の分析方法を実施した。図１３のＳ６１では、目的物質７Ａ、７Ｂを用意した。目的物質７Ａ、７Ｂは、実施例１における目的物質７Ａ、７Ｂと同一であった。なお、本実施例２では、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は２である。目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数は２である。よって、融合体１Ａ、１Ｂの種類の数は、目的物質７Ａ、７Ｂの種類の数以上である。
目的物質７Ａを１ｘＰＢＳ／Ｔで溶解し、目的物質７Ａ溶液を製造した。目的物質７Ａ溶液における目的物質７Ａの濃度は４μｇ／ｍＬであった。また、目的物質７Ｂを１ｘＰＢＳ／Ｔで溶解し、目的物質７Ｂ溶液を製造した。目的物質７Ｂ溶液における目的物質７Ｂの濃度は４μｇ／ｍＬであった。
次に、２００μＬの目的物質７Ａ溶液と、２００μＬの目的物質７Ｂ溶液とを混合し、目的物質７ＡＢ溶液を製造した。目的物質７ＡＢ溶液における目的物質７Ａの濃度は２μｇ／ｍＬであり、目的物質７Ｂの濃度は２μｇ／ｍＬであった。
次に、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、１００μＬの目的物質７ＡＢ溶液とを混合し、常温で１時間静置し、融合体－目的物質７ＡＢ混合液を製造した。融合体－目的物質７ＡＢ混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、目的物質７Ａの濃度は１μｇ／ｍＬであり、目的物質７Ｂの濃度は１μｇ／ｍＬであった。
また、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、５０μＬの目的物質７Ａ溶液と、５０μＬの１ｘＰＢＳ／Ｔとを混合し、常温で１時間静置し、融合体－目的物質７Ａ混合液を製造した。融合体－目的物質７Ａ混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、目的物質７Ａの濃度は１μｇ／ｍＬであった。
また、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、５０μＬの目的物質７Ｂ溶液と、５０μＬの１ｘＰＢＳ／Ｔとを混合し、常温で１時間静置し、融合体－目的物質７Ｂ混合液を製造した。融合体－目的物質７Ｂ混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、目的物質７Ｂの濃度は１μｇ／ｍＬであった。
また、５０μＬの融合体１Ａ溶液と、５０μＬの融合体１Ｂ溶液と、１００μＬの１ｘＰＢＳ／Ｔとを混合し、常温で１時間静置し、コントロール混合液を製造した。コントロール混合液における融合体１Ａの濃度は５μｍｏｌ／ｌであり、融合体１Ｂの濃度は５μｍｏｌ／ｌであった。
このとき、図１３のＳ６２に示すように、目的物質７Ａと、融合体１Ａとの結合体３３Ａ、又は、目的物質７Ｂと、融合体１Ｂとの結合体３３Ｂが形成された。すなわち、図６に示すように、融合体－目的物質７ＡＢ混合液では、目的物質７Ａと、融合体１Ａとの結合体３３Ａが形成されるとともに、目的物質７Ｂと、融合体１Ｂとの結合体３３Ｂが形成された。
また、図７に示すように、融合体－目的物質７Ａ混合液では、目的物質７Ａと、融合体１Ａとの結合体３３Ａが形成された。また、図８に示すように、融合体－目的物質７Ｂ混合液では、目的物質７Ｂと、融合体１Ｂとの結合体３３Ｂが形成された。また、図９に示すように、コントロール混合液では、結合体３３Ａ、３３Ｂは形成されなかった。
次に、図１３のＳ６３では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから、限外濾過フィルターを用いて、目的物質７Ａ、７Ｂと結合していない融合体１Ａ、１Ｂを分離した。その結果、結合体３３Ａ、３３Ｂが回収された。
また、図１３のＳ６３では、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから回収された結合体を、２つのマイクロチューブに分注した。分注された２つの液を、第１液、第２液とする。
図１３のＳ６４、Ｓ６５、Ｓ６６は、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得られた第１液を用いて行う処理である。図１３のＳ６７、Ｓ６８、Ｓ６９は、融合体－目的物質７ＡＢ混合液、融合体－目的物質７Ａ混合液、融合体－目的物質７Ｂ混合液、及びコントロール混合液のそれぞれから得られた第２液を用いて行う処理である。
図１３のフローチャートでは、説明の便宜上、Ｓ６３の処理の後、Ｓ６４、Ｓ６５、Ｓ６６の処理と、Ｓ６７、Ｓ６８、Ｓ６９の処理とが分岐するように記載されている。例えば、Ｓ６４、Ｓ６５、Ｓ６６の処理を先に行い、次に、Ｓ６７、Ｓ６８、Ｓ６９の処理を行ってもよい。
図１３のＳ６４では、ｐＮＰＰを、炭酸塩ｐＨ標準液（富士フイルム和光純薬社、製品番号０３７－１６１４５）と硫酸マグネシウム（富士フイルム和光純薬社、製品番号１３７－１２３３５）とを含む溶液に溶解し、ｐＮＰＰ溶液を製造した。ｐＮＰＰ溶液におけるｐＮＰＰの濃度は１０ｍｍｏｌ／ｌであった。炭酸塩ｐＨ標準液と硫酸マグネシウムとを含む溶液は、１ｍｍｏｌ／ｌの炭酸塩ｐＨ標準液と、１ｍｍｏｌ／ｌの硫酸マグネシウムとを含んでいた。炭酸塩ｐＨ標準液と硫酸マグネシウムとを含む溶液のｐＨは、９．６となるように調整されていた。
なお、ｐＮＰＰを溶解する溶液は、炭酸塩ｐＨ標準液と硫酸マグネシウムとを含む溶液以外の溶液であってもよい。ｐＮＰＰを溶解する溶液として、例えば、トリス緩衝液、リン酸緩衝液、グッドバッファー等が挙げられる。グッドバッファーとして、例えば、ＭＥＳ、Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＥＰＰＳ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、Ｂｉｃｉｎｅ、ＴＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳＯ、ＣＡＰＳ等が挙げられる。
ｐＮＰＰを溶解する溶液のｐＨは９．６以外の値であってもよい。ｐＮＰＰを溶解する溶液は、弱アルカリ性の溶液であることが好ましい。ｐＮＰＰを溶解する溶液のｐＨは、８以上１１以下であることが好ましい。ｐＮＰＰを溶解する溶液が弱アルカリ性の溶液である場合、ｐＮＰＰを基質とする代謝に由来するｐＨの変化が大きくなる。ｐＮＰＰを溶解する溶液のｐＨが８以上１１以下である場合、ｐＮＰＰを基質とする代謝に由来するｐＨの変化が大きくなる。
次に、第１液にｐＮＰＰ溶液を１００μＬ加え、３７℃で１５分間静置した。第１液が融合体１Ａを含む場合は、融合体１Ａが備えるアルカリフォスファターゼの酵素活性により、ｐＮＰＰを基質とする代謝が誘発され、ｐＮＰＰからリン酸基が分離する。その結果、無機リン酸と、ｐ－ニトロフェノールとが生成する。ｐ－ニトロフェノールの吸収極大波長は４０５ｎｍである。そのため、ｐ－ニトロフェノールを含む溶液は黄色に発色する。また、生成した無機リン酸は、溶液中において電離し、水素イオンを放出する。そのため、溶液のｐＨが低下する。
次に、図１３のＳ６５では、第１液に、０．５ｍｏｌ／ｌのエチレンジアミン四酢酸（富士フイルム和光純薬、製品番号３１１－９００７５）を５μＬ滴下し、アルカリフォスファターゼ酵素反応を停止した。
次に、図１３のＳ６６では、第１液において、４０５ｎｍでの吸光度を測定した。
図１３のＳ６７では、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＡｓｓａｙ ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、製品番号ＤＵＲＥ－１００）を用意した。ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔには、ウレアーゼが誘発する代謝の基質が含まれている。
次に、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔに含まれる、ウレア（Ｕｒｅａ）を第２液に１０μＬ加え、１０分間静置した。
次に、図１３のＳ６８では、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔに含まれるＲｅａｇｅｎｔＡを第２液に１００μＬ加え、よく混合した。さらにＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔに含まれるＲｅａｇｅｎｔＢを第２液に５０μＬ加え、よく混合した後に、暗所で３０分間静置した。ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔに含まれるウレアは、ウレアーゼによって代謝された後に、ＱｕａｎｔｉＣｈｒｏｍ Ｕｒｅａｓｅ Ａｓｓａｙ ＫｉｔのＲｅａｇｅｎｔＡ、さらにはＲｅａｇｅｎｔＢを加えると、６７０ｎｍの吸収波長をもつ生成物に変化する。また、生成したアンモニアによって溶液のｐHが上昇する。
次に、図１３のＳ６９では、第２液において、６７０ｎｍでの吸光度を測定した。吸光度の測定結果を図１４に示す。図１４において「○」とは、コントロール混合液から得た第１液又は第２液での吸光度と比べて、吸光度が大きいことを意味する。「×」とは、コントロール混合液から得た第１液又は第２液での吸光度と比べて、吸光度が同じか小さいことを意味する。
吸光度の測定結果は、以下のことを示す。実施例２では、目的物質７Ａ、７Ｂを含む目的物質７ＡＢ溶液と、融合体１Ａ、１Ｂとを混合した。次に、目的物質７Ａ、７Ｂのいずれとも結合していない融合体１Ａ、１Ｂを除去した。目的物質７Ａと結合した融合体１Ａが生じるＡの現象、及び、目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂが生じるＢの現象を検出することができた。Ａの現象は、４０５ｎｍでの吸光度が大きいことである。Ｂの現象は、６７０ｎｍでの吸光度が大きいことである。よって、実施例２では、目的物質７Ａ、７Ｂを検出することができた。また、Ａの現象とＢの現象とは異なるから、Ａの現象とＢの現象とを区別して検出することができた。
また、実施例２では、目的物質７Ａを含む目的物質７Ａ溶液と、融合体１Ａ、１Ｂとを混合した。次に、目的物質７Ａと結合していない融合体１Ａ、１Ｂを除去した。目的物質７Ａと結合した融合体１Ａが生じるＡの現象を検出することができた。よって、実施例２では、目的物質７Ａを検出することができた。
また、実施例２では、目的物質７Ｂを含む目的物質７Ｂ溶液と、融合体１Ａ、１Ｂとを混合した。次に、目的物質７Ｂと結合していない融合体１Ａ、１Ｂを除去した。目的物質７Ｂと結合した融合体１Ｂが生じるＢの現象を検出することができた。よって、実施例２では、目的物質７Ｂを検出することができた。
また、融合体１Ａが備える標識物５Ａは、結合物質３Ａと融合した状態でもｐＮＰＰを基質とする代謝を誘発する酵素活性を有していた。また、融合体１Ａが備える結合物質３Ａは、標識物５Ａと融合した状態でも、目的物質７Ａに対する結合活性を有していた。
融合体１Ｂが備える標識物５Ｂは、結合物質３Ｂと融合した状態でも、基質の代謝を誘発する酵素活性を有していた。また、融合体１Ｂが備える結合物質３Ｂは、標識物５Ｂと融合した状態でも、目的物質７Ｂに対する結合活性を有していた。
また、結合物質３Ａは、目的物質７Ｂと結合しなかった。すなわち、結合物質３Ａは、目的物質７Ｂに対する結合活性を有していなかった。また、結合物質３Ｂは、目的物質７Ａと結合しなかった。すなわち、結合物質３Ｂは、目的物質７Ａに対する結合活性を有していなかった。
７．他の実施形態
以上、本開示の実施形態について説明したが、本開示は上述の実施形態に限定されることなく、種々変形して実施することができる。
以上、本開示の実施形態について説明したが、本開示は上述の実施形態に限定されることなく、種々変形して実施することができる。
（１）試料と混合する融合体の種類の数は特に限定されず、例えば、２、３、４、５、６、７、８・・・とすることができる。試料に含まれる目的物質の種類の数は特に限定されず、例えば、２、３、４、５、６、７、８・・・とすることができる。
（２）試料を分割し、分割された一部の試料に対し、本開示の分析方法を実施してもよい。
（３）上記実施形態における１つの構成要素が有する複数の機能を、複数の構成要素によって実現したり、１つの構成要素が有する１つの機能を、複数の構成要素によって実現したりしてもよい。また、複数の構成要素が有する複数の機能を、１つの構成要素によって実現したり、複数の構成要素によって実現される１つの機能を、１つの構成要素によって実現したりしてもよい。また、上記実施形態の構成の一部を省略してもよい。また、上記実施形態の構成の少なくとも一部を、他の上記実施形態の構成に対して付加又は置換してもよい。
（４）上述した分析方法の他、融合体、複数の種類の融合体から成る群、融合体の製造方法、融合体の群の製造方法等、種々の形態で本開示を実現することもできる。
［本明細書が開示する技術思想］
［項目１］
目的物質（７Ａ、７Ｂ）と結合する活性を有する結合物質（３Ａ、３Ｂ）、及び標識物（５Ａ、５Ｂ）を備える融合体（１Ａ、１Ｂ）と、前記目的物質を含む試料とを混合し、
前記目的物質と結合していない前記融合体を除去し、
前記目的物質と結合した前記融合体に含まれる前記標識物が生じさせる現象を検出する前記目的物質の分析方法であって、
前記融合体には複数の種類が存在し、
前記融合体に結合する前記目的物質と、前記現象とは、前記融合体の種類ごとに異なる、
分析方法。
［項目２］
項目１に記載の分析方法であって、
前記結合物質は、核酸及びアミノ酸のうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。
［項目３］
項目１又は２に記載の分析方法であって、
前記結合物質の少なくとも一部は、核酸アプタマー、又は低分子タンパク質製剤である、
分析方法。
［項目４］
項目１～３のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記目的物質の少なくとも一部が、タンパク質、糖、核酸、低分子化合物、又は脂質である、
分析方法。
［項目５］
項目１～４のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記標識物は、酵素、ＤＮＡザイム、ＲＮＡザイム、磁気標識、蛍光標識、化学発光プローブ、及びナノ粒子のうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。
［項目６］
項目１～５のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記融合体の種類の数は、前記試料に含まれる前記目的物質の種類の数以上であり、
前記現象は、酸化還元、発色、蛍光、発光、燐光、吸熱、発熱、沈殿、及びイオン量の変化のうちの少なくとも１つであり、
前記イオン量の変化におけるイオンは、水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、及び塩化物イオンのうち少なくとも１つを含み、
前記イオン量は、前記イオンの生産、消費、又は吸収により変化する、
分析方法。
［項目７］
項目１～６のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記結合物質と前記標識物とは、化学置換基又は核酸結合タンパク質を介して結合しており、
前記化学置換基は、ビオチン、一級アミン、アジド、アルキン、ジベンゾシクロオクチン、ビシクロノニン、２´－Ｏ－プロパルギル、２´－Ｏ－プロパルギル、チオール、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、マレイミド、及び５－ハロウラシルのうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。
［項目８］
項目１～７のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記現象が水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、又は塩化物イオンの生産、消費、又は吸収である場合、ｐＨ計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて前記現象を検出し、
前記現象が発色、発光、蛍光、又は燐光である場合、受光デバイスを用いて前記現象を検出し、
前記現象が吸熱、又は発熱である場合、熱分析機を用いて前記現象を検出し、
前記現象が酸化還元である場合、電位計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて前記現象を検出し、
前記現象が沈殿である場合、質量分析機、吸光光度計、又は分光光度計を用いて前記現象を検出する、
分析方法。
［項目１］
目的物質（７Ａ、７Ｂ）と結合する活性を有する結合物質（３Ａ、３Ｂ）、及び標識物（５Ａ、５Ｂ）を備える融合体（１Ａ、１Ｂ）と、前記目的物質を含む試料とを混合し、
前記目的物質と結合していない前記融合体を除去し、
前記目的物質と結合した前記融合体に含まれる前記標識物が生じさせる現象を検出する前記目的物質の分析方法であって、
前記融合体には複数の種類が存在し、
前記融合体に結合する前記目的物質と、前記現象とは、前記融合体の種類ごとに異なる、
分析方法。
［項目２］
項目１に記載の分析方法であって、
前記結合物質は、核酸及びアミノ酸のうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。
［項目３］
項目１又は２に記載の分析方法であって、
前記結合物質の少なくとも一部は、核酸アプタマー、又は低分子タンパク質製剤である、
分析方法。
［項目４］
項目１～３のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記目的物質の少なくとも一部が、タンパク質、糖、核酸、低分子化合物、又は脂質である、
分析方法。
［項目５］
項目１～４のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記標識物は、酵素、ＤＮＡザイム、ＲＮＡザイム、磁気標識、蛍光標識、化学発光プローブ、及びナノ粒子のうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。
［項目６］
項目１～５のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記融合体の種類の数は、前記試料に含まれる前記目的物質の種類の数以上であり、
前記現象は、酸化還元、発色、蛍光、発光、燐光、吸熱、発熱、沈殿、及びイオン量の変化のうちの少なくとも１つであり、
前記イオン量の変化におけるイオンは、水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、及び塩化物イオンのうち少なくとも１つを含み、
前記イオン量は、前記イオンの生産、消費、又は吸収により変化する、
分析方法。
［項目７］
項目１～６のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記結合物質と前記標識物とは、化学置換基又は核酸結合タンパク質を介して結合しており、
前記化学置換基は、ビオチン、一級アミン、アジド、アルキン、ジベンゾシクロオクチン、ビシクロノニン、２´－Ｏ－プロパルギル、２´－Ｏ－プロパルギル、チオール、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、マレイミド、及び５－ハロウラシルのうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。
［項目８］
項目１～７のいずれか１つの項目に記載の分析方法であって、
前記現象が水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、又は塩化物イオンの生産、消費、又は吸収である場合、ｐＨ計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて前記現象を検出し、
前記現象が発色、発光、蛍光、又は燐光である場合、受光デバイスを用いて前記現象を検出し、
前記現象が吸熱、又は発熱である場合、熱分析機を用いて前記現象を検出し、
前記現象が酸化還元である場合、電位計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて前記現象を検出し、
前記現象が沈殿である場合、質量分析機、吸光光度計、又は分光光度計を用いて前記現象を検出する、
分析方法。
１Ａ、１Ｂ…融合体、３Ａ、３Ｂ…結合物質、５Ａ、５Ｂ…標識物、７Ａ、７Ｂ…目的物質、９Ａ、９Ｂ…基質、１１Ａ、１１Ｂ…代謝物、３３Ａ、３３Ｂ…結合体
Claims (8)
- 目的物質（７Ａ、７Ｂ）と結合する活性を有する結合物質（３Ａ、３Ｂ）、及び標識物（５Ａ、５Ｂ）を備える融合体（１Ａ、１Ｂ）と、前記目的物質を含む試料とを混合し、
前記目的物質と結合していない前記融合体を除去し、
前記目的物質と結合した前記融合体に含まれる前記標識物が生じさせる現象を検出する前記目的物質の分析方法であって、
前記融合体には複数の種類が存在し、
前記融合体に結合する前記目的物質と、前記現象とは、前記融合体の種類ごとに異なる、
分析方法。 - 請求項１に記載の分析方法であって、
前記結合物質は、核酸及びアミノ酸のうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。 - 請求項１又は２に記載の分析方法であって、
前記結合物質の少なくとも一部は、核酸アプタマー、又は低分子タンパク質製剤である、
分析方法。 - 請求項１又は２に記載の分析方法であって、
前記目的物質の少なくとも一部が、タンパク質、糖、核酸、低分子化合物、又は脂質である、
分析方法。 - 請求項１又は２に記載の分析方法であって、
前記標識物は、酵素、ＤＮＡザイム、ＲＮＡザイム、磁気標識、蛍光標識、化学発光プローブ、及びナノ粒子のうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。 - 請求項１又は２に記載の分析方法であって、
前記融合体の種類の数は、前記試料に含まれる前記目的物質の種類の数以上であり、
前記現象は、酸化還元、発色、蛍光、発光、燐光、吸熱、発熱、沈殿、及びイオン量の変化のうちの少なくとも１つであり、
前記イオン量の変化におけるイオンは、水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、及び塩化物イオンのうち少なくとも１つを含み、
前記イオン量は、前記イオンの生産、消費、又は吸収により変化する、
分析方法。 - 請求項１又は２に記載の分析方法であって、
前記結合物質と前記標識物とは、化学置換基又は核酸結合タンパク質を介して結合しており、
前記化学置換基は、ビオチン、一級アミン、アジド、アルキン、ジベンゾシクロオクチン、ビシクロノニン、２´－Ｏ－プロパルギル、２´－Ｏ－プロパルギル、チオール、アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、マレイミド、及び５－ハロウラシルのうちの少なくとも１つを含む、
分析方法。 - 請求項１又は２に記載の分析方法であって、
前記現象が水素イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、アンモニウムイオン、又は塩化物イオンの生産、消費、又は吸収である場合、ｐＨ計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて前記現象を検出し、
前記現象が発色、発光、蛍光、又は燐光である場合、受光デバイスを用いて前記現象を検出し、
前記現象が吸熱、又は発熱である場合、熱分析機を用いて前記現象を検出し、
前記現象が酸化還元である場合、電位計測機、又はイオン感応性電界効果トランジスタを用いて前記現象を検出し、
前記現象が沈殿である場合、質量分析機、吸光光度計、又は分光光度計を用いて前記現象を検出する、
分析方法。
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