JP2023032631A - 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体 - Google Patents

抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体 Download PDF

Info

Publication number
JP2023032631A
JP2023032631A JP2021138882A JP2021138882A JP2023032631A JP 2023032631 A JP2023032631 A JP 2023032631A JP 2021138882 A JP2021138882 A JP 2021138882A JP 2021138882 A JP2021138882 A JP 2021138882A JP 2023032631 A JP2023032631 A JP 2023032631A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
seq
substituted
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021138882A
Other languages
English (en)
Inventor
俊介 渡辺
Shunsuke Watanabe
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
PROTEIN EXPRESS KK
Original Assignee
PROTEIN EXPRESS KK
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by PROTEIN EXPRESS KK filed Critical PROTEIN EXPRESS KK
Priority to JP2021138882A priority Critical patent/JP2023032631A/ja
Publication of JP2023032631A publication Critical patent/JP2023032631A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

【課題】ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する結合活性及び中和活性を有する単ドメイン抗体を提供する。【解決手段】以下の（ａ）～（ｃ）のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、単ドメイン抗体：（ａ）特定のアミノ酸配列を有するポリペプチド；（ｂ）前記ポリペプチドのアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するポリペプチド；（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含むポリペプチド。【選択図】なし

Description

本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和するための単ドメイン抗体に関する。
コロナウイルスは、ニドウイルス目コロナウイルス科オルソコロナウイルス亜科よりなるＲＮＡウイルスの一群である。コロナウイルスは、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノムと、らせん対称のヌクレオカプシドを持つエンベロープウイルスであり、カプシド表面からこん棒型の突起が突き出た特徴的な形状を有する。コロナウイルスは、ＲＮＡウイルスの中でも大型のウイルスであり、そのゲノムサイズは約２６～３２キロベースである。
コロナウイルスは、哺乳類、鳥類等に感染性疾患を引き起こすＲＮＡウイルスとして知られ、特に、軽度～重篤の気道感染症を引き起こすことが知られる。ヒトにおいては、コロナウイルスは、軽症の場合は一般的な風邪の原因ウイルス（風邪の原因ウイルスは、コロナウイルス以外にも多数知られる）となるが、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ等の一部のコロナウイルスは、より致命的な症状を引き起こすことが知られる。特に、２０１９年に中国で発見された新型コロナウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、短期間に全世界に蔓延し、有効な治療薬が存在しなかったという背景もあり、多数の感染者及び死者を出すこととなった。現在も、その数は増え続けており、早急にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療薬の開発と普及が達成されることが望まれている。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２には、そのウイルス表面に、宿主細胞の受容体に結合するスパイクタンパク質が存在する。このスパイクタンパク質は、三量体構造を有する糖タンパク質であり、各ポリペプチド鎖は、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）、Ｓ１ドメイン及びＳ２ドメインから構成される。Ｓ１ドメイン上の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）には、「ダウン型構造」と「アップ型構造」があり、アップ型構造のＲＢＤが宿主細胞表面のアンジオテンシン変異酵素ＩＩ（ＡＣＥ２）受容体に結合することが明らかにされている（非特許文献１）。
単ドメイン抗体は、重鎖のみで構成される抗体（免疫グロブリン）の可変領域からなる抗体であり、ラクダ科哺乳類でみられるＶＨＨ、サメ科でみられるＶＮＡＲが知られる。単ドメイン抗体は、単鎖抗体、ナノボディ（登録商標）とも称される。単ドメイン抗体は、通常の抗体と同様の抗原結合性を有する一方で、耐酸性や耐熱性に優れ、一度変性しても再度生理的な条件下におくことでその抗原結合性が復活することで知られる。単ドメイン抗体の分子量は１２～１５ｋＤａ程度であり、大腸菌、酵母等の組換え微生物による生産が比較的容易である。これらの特徴から、抗体医薬としての利用が期待されており、既に、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）を標的とする単ドメイン抗体を用いた後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）治療薬が市販されている（非特許文献２）。
D. Wrapp et al., Science, Vol. 367, pp. 1260-1263 (2020) F. Peyvandi et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, Vol. 15, pp. 1448-1452 (2017)
多くの機関でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症（Ｃｏｖｉｄ－１９）治療薬の開発が進められており、抗体医薬の実用化もなされているが、現在のところ、単ドメイン抗体を主成分とするＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症治療のための承認薬は存在しない。本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する結合活性及び中和活性を有する単ドメイン抗体を提供することを目的とする。また、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療及び／又は予防に有用な医薬組成物、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の診断補助に有用な、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する試薬及び方法、並びに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防に有効な衛生用品を提供することを目的とする。
本明細書によれば、以下の発明が提供される。
（１）以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、単ドメイン抗体：
（ａ）配列番号１～７のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含む、ポリペプチド。
（２）前記ポリペプチドが以下の３つの相補性決定基（ＣＤＲ）を含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｄ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（３）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｇ）配列番号９で示されるアミノ酸配列又は配列番号９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｈ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列又は配列番号１３で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｉ）配列番号１７で示されるアミノ酸配列又は配列番号１７で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（４）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｊ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｋ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｌ）配列番号１８で示されるアミノ酸配列又は配列番号１８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（５）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｍ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｎ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｏ）配列番号１９で示されるアミノ酸配列又は配列番号１９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（６）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｐ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｑ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｒ）配列番号２０で示されるアミノ酸配列又は配列番号２０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（７）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｓ）配列番号１０で示されるアミノ酸配列又は配列番号１０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｔ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列又は配列番号１４で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｕ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列又は配列番号２１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（８）前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、（１）に記載の単ドメイン抗体：
（ｖ）配列番号１１で示されるアミノ酸配列又は配列番号１１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｗ）配列番号１５で示されるアミノ酸配列又は配列番号１５で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｘ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
（９）（１）～（８）のいずれかに記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防のために使用される、医薬組成物。
（１０）（１）～（８）のいずれかに記載の単ドメイン抗体を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出試薬。
（１１）試料と、（１）～（８）のいずれかに記載の単ドメイン抗体とを接触させる工程を含む、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法。
（１２）前記試料が、対象から取り出した資料である、（１１）に記載の方法。
（１３）前記対象がヒトである、（１２）に記載の方法。
（１４）（１）～（８）のいずれかに記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防のために使用される、衛生用品。
（１５）（９）に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法。
（１６）前記対象がヒトである、（１５）に記載の方法。
本発明によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する結合活性及び中和活性を有する単ドメイン抗体を提供することができる。また、本発明によれば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療及び／又は予防に有用な医薬組成物、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の診断補助に有用な、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する試薬及び方法、並びに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防に有効な衛生用品を提供することができる。
配列番号１～７で表されるアミノ酸配列を有するＶＨＨ抗体（Ａ０２、Ａ０３、Ａ１５、Ｂ０２、Ｂ０４、Ｂ１３及びＢ１６）のアラインメントを示す。 各抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ ＶＨＨ抗体のＲＢＤへの結合活性評価の結果を示すグラフである。試験はｎ＝４で実施した。使用した抗ＲＢＤ ＶＨＨ抗体のいずれもＲＢＤに対する結合活性を有することが確認された。特に、Ａ０２、Ａ０３及びＡ１５において高い結合活性が見られた。 各ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ ＶＨＨ抗体の中和活性評価の結果を示すグラフである。試験はｎ＝４で実施した。陽性対照区の平均吸光度をＡＣＥ２結合率１００％として、各測定区の平均吸光度よりＡＣＥ２結合率を算出した。実施例３で高いＲＢＤ結合活性を示したＡ０２、Ａ０３及びＡ１５で比較的高い中和活性が見られることが確認された。
［１］定義
本明細書において、「ポリペプチド」とは、複数のアミノ酸がペプチド結合することによって形成される分子をいう。構成するアミノ酸数が多いポリペプチド分子のみならず、アミノ酸数が少ない低分子量の分子（オリゴペプチド）も本発明のポリペプチドに包含される。
本明細書において、「抗体」とは、特定の物質（抗原）に特異的に結合するタンパク質を指す。本発明においては、抗原はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳ１ドメイン上の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）であり、抗体は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ抗体である。本発明の単ドメイン抗体は、対象の体内に存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤへの結合活性を有することから、ＲＢＤの宿主細胞表面のアンジオテンシン変異酵素ＩＩ（ＡＣＥ２）受容体への結合を阻害することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主への感染を抑制することが可能である。
本明細書において、抗体の「結合活性」とは、抗体が特定タンパク質（抗原）に特異的に結合する活性を指す。本発明における「結合活性」は、具体的には、抗体が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤに結合する活性をいう。本明細書において、抗体の「中和活性」とは、抗体が特定タンパク質（抗原）の活性を中和する活性を指す。本発明における「中和活性」は、具体的には、抗体が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤの宿主細胞のＡＣＥＩＩ受容体への結合活性を中和する活性をいう。
本明細書において、「単ドメイン抗体」とは、重鎖のみで構成される抗体の可変領域からなる抗体をいう。本発明の単ドメイン抗体としては、ＶＨＨ抗体、ＶＮＡＲ抗体等の公知の単ドメイン抗体をいずれも使用可能である。特にＶＨＨ抗体を好適に使用できる。ＶＨＨ抗体は、４つのフレーム領域（ＦＲ１～４）と３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１～３）を有し、ＦＲとＣＤＲが交互に連結された構造を有する。ＶＨＨ単量体の分子量は、１２～１５ｋＤａ程度である。ＶＨＨは単量体で使用してもよいが、リンカー等を用いて複数のＶＨＨをタンデムに連結して、二量体～四量体程度の大きさとして使用してもよい。
本明細書において、「相補性決定領域（ＣＤＲ）」とは、単ドメイン抗体において抗原と直接接する領域を指す。本発明の単ドメイン抗体には、ＣＤＲ１～３の３つのＣＤＲが存在する。本明細書において、ＣＤＲ１及びＣＤＲ３の位置は、Ｋａｂａｔナンバリングを用いて決定された位置を指す（Kabat EA et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, NIH (1991)）。また、ＣＤＲ２の位置は、ＩＧＭＴナンバリングを用いて決定された位置を指す(M.-P. Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27, 55-77 (2003))。本明細書において「フレーム領域（ＦＲ）」とは、単ドメイン抗体におけるＣＤＲ以外の部分を指す。
本明細書において「対象」とは、哺乳類及び鳥類を指す。鳥類は、脊索動物門脊椎動物亜門鳥綱に属する動物を指し、例えば、ニワトリ、アヒル、ウズラ、ガチョウ、カモ、シチメンチョウ、セキセイインコ、オウム、オシドリ、ハクチョウ等が挙げられる。哺乳類は、ヒト及びヒト以外を包含する、脊索動物門脊椎動物亜門哺乳網に属する動物を指し、例えば、ヒト、チンパンジーを含む霊長類、イヌ、ネコなどのペット動物、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギなどの家畜動物、マウス、ラットなどの齧歯類、動物園で飼育される哺乳類動物などが含まれる。本明細書における対象は、好ましくは、ヒトである。
本明細書において、アミノ酸配列の「配列同一性」は、ＢＬＡＳＴ（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）等のタンパク質検索システムを用いて、ギャップを導入して、又はギャップを導入しないで、決定することができる値をいう。また、本明細書において「数個」における「数」とは、２～１０の整数、好ましくは２～６の整数、２～４の整数、２若しくは３の整数、又は２の整数を表す。
本明細書において、「医薬組成物」とは、対象のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防を目的として対象に投与するための組成物を指す。
本明細書において、「検出試薬」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出するために使用する組成物等を指す。ここでいう試薬は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出が可能であれば、その形態は時に限定されず、組成物等の単剤であってもよいが、例えば、マイクロウェルプレート、磁性ビーズ等の固相、洗浄液、検出用試薬等の複数の組成物、基材等を含むキットの形態も包含する。
本明細書において、「衛生用品」とは、主に健康者であるヒトが、日常生活において、身体の清浄、室内の衛生維持、病気の予防等をすることにより、健康を保持するために使用する機械器具等でないものをいう。本明細書においては、薬機法（医薬品、医療機器等の品質、有効性及び安全性の確保等に関する法律）上の「医薬部外品」も「衛生用品」に含まれるものとする。例えば、衛生用品には、ガーゼ、シート、マスク、綿棒等が含まれる。また、例えば、ヒトやペットの身体を清拭する清拭材や、室内の拭き掃除等に使用される清掃シート等が含まれる。
［２］単ドメイン抗体
本発明の単ドメイン抗体は、以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、ことを特徴とする単ドメイン抗体である。
（ａ）配列番号１～７のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド；
（ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するポリペプチド；
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含む、ポリペプチド。
本発明の単ドメイン抗体は、上記の特徴を有することで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤへの結合活性及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤの中和活性を有する。
図１に配列番号１～７のアミノ酸配列のアラインメントを示す。
本発明の単ドメイン抗体の第１の態様は、以下の３つの相補性決定基（ＣＤＲ）を含む。
（ｄ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第１の態様は、配列番号１で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：RNTMH （配列番号８)；
ＣＤＲ２：ISSRGDWT （配列番号１２）；及び
ＣＤＲ３：YLWLLGGVY （配列番号１６）
を含む抗体（以下「Ａ０２」と表記する）、配列番号１で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、ＣＤＲ１～３のうち、１つ、２つ、又は３つが、それぞれ配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の単ドメイン抗体の第２の態様は、以下の３つのＣＤＲを含む。
（ｇ）配列番号９で示されるアミノ酸配列又は配列番号９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｈ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列又は配列番号１３で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｉ）配列番号１７で示されるアミノ酸配列又は配列番号１７で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第２の態様は、配列番号２で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：HNAMH （配列番号９)；
ＣＤＲ２：ISHVVYRT （配列番号１３）；及び
ＣＤＲ３：VALTDLRLY （配列番号１７）
を含む抗体（以下「Ａ０３」と表記する）、配列番号２で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、ＣＤＲ１～３のうち、１つ、２つ、又は３つが、それぞれ配列番号９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１３で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号１７で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の単ドメイン抗体の第３の態様は、以下の３つのＣＤＲを含む。
（ｊ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｋ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｌ）配列番号１８で示されるアミノ酸配列又は配列番号１８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第３の態様は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：RNTMH （配列番号８)；
ＣＤＲ２：ISSRGDWT （配列番号１２）；及び
ＣＤＲ３：SVSAFGWLY （配列番号１８）
を含む抗体（以下「Ａ１５」と表記する）、配列番号３で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、ＣＤＲ１～３のうち、１つ、２つ、又は３つが、それぞれ配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号１８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の単ドメイン抗体の第４の態様は、以下の３つのＣＤＲを含む。
（ｍ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｎ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｏ）配列番号１９で示されるアミノ酸配列又は配列番号１９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第４の態様は、配列番号４で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：RNTMH （配列番号８)；
ＣＤＲ２：ISSRGDWT （配列番号１２）；及び
ＣＤＲ３：LLWNYGGVC （配列番号１９）
を含む抗体（以下「Ｂ０２」と表記する）、配列番号４で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号１９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の単ドメイン抗体の第５の態様は、以下の３つのＣＤＲを含む。
（ｐ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｑ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｒ）配列番号２０で示されるアミノ酸配列又は配列番号２０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第５の態様は、配列番号５で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：RNTMH （配列番号８)；
ＣＤＲ２：ISSRGDWT （配列番号１２）；及び
ＣＤＲ３：LLWHYGGVY （配列番号２０）
を含む抗体（以下「Ｂ０４」と表記する）、配列番号５で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号２０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の単ドメイン抗体の第６の態様は、以下の３つのＣＤＲを含む。
（ｓ）配列番号１０で示されるアミノ酸配列又は配列番号１０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｔ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列又は配列番号１４で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｕ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列又は配列番号２１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第６の態様は、配列番号６で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：HHTML （配列番号１０)；
ＣＤＲ２：ISFRGNWT （配列番号１４）；及び
ＣＤＲ３：HLWLLGGVY （配列番号２１）
を含む抗体（以下「Ｂ１３」と表記する）、配列番号６で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、配列番号１０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１４で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号２１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の単ドメイン抗体の第７の態様は、以下の３つのＣＤＲを含む。
（ｖ）配列番号１１で示されるアミノ酸配列又は配列番号１１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
（ｗ）配列番号１５で示されるアミノ酸配列又は配列番号１５で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
（ｘ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
言い換えれば、本発明の単ドメイン抗体の第７の態様は、配列番号７で示されるアミノ酸配列を有し、かつ、以下の３つのＣＤＲ：
ＣＤＲ１：HNAVH （配列番号１１)；
ＣＤＲ２：ISHLVHRT （配列番号１５）；及び
ＣＤＲ３：YLWLLGGVY （配列番号１６）
を含む抗体（以下「Ｂ１６」と表記する）、配列番号７で示されるアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドを含む抗体、及び／あるいは、配列番号１１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１５で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２、配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３に置換された抗体である。
本発明の抗体は、配列番号１～７のアミノ酸配列を有するポリペプチドをいずれも包含するが、これらに限定されず、配列番号１～７のアミノ酸配列と８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％以上の配列相同性を有するポリペプチドも包含する。あるいは、配列番号１～７のアミノ酸配列を有するポリペプチド中の１個又は数個のアミノ酸が改変されたポリペプチドも包含する。一般に、あるポリペプチドの中の２０％未満、特に１５％未満又は１０％未満のアミノ酸の改変、あるいは、１個、又は数個のアミノ酸の改変は、元のポリペプチドの機能に影響を及ぼさないと考えられ、場合によっては元のポリペプチドの所望の機能を強化することさえあると考えられている。実際、元のアミノ酸配列と比較して、１個、又は数個のアミノ酸残基が改変された（すなわち、置換、欠失、付加及び／又は挿入された）アミノ酸配列で構成される改変ポリペプチドは、元のポリペプチドの生物活性を保持することが知られている（Mark et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, pp. 5662-5666, Zoller and Smith, 1982, Nucleic Acids Res. 10 pp. 6487-6500, Dalbadie-McFarland et al., 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. USA.79, pp. 6409-6413）。
また、本発明のポリペプチドは、配列番号１～７のアミノ酸配列を有するポリペプチド（上記改変ポリペプチドを包含する）のみでなく、これを一部分として含むポリペプチドも包含する。あるいは、上記のポリペプチドのうち、同種の２～４個のポリペプチド、あるいは２～４種のポリペプチドの組み合わせをタンデムに連結した構造を有するポリペプチドであってもよい。
なお、天然のタンパク質を構成する２０種類のアミノ酸は、低極性側鎖を有する中性アミノ酸（Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ）、親水性側鎖を有する中性アミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｃｙｓ）、酸性アミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性アミノ酸（Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ）、芳香族アミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）のように類似の性質を有するものにグループ分けでき、これらの間での置換であればポリペプチドの性質が変化しないことが多いことが知られている。したがって、配列番号１～７のアミノ酸配列中のアミノ酸残基を置換する場合には、これらの各グループの間で置換することにより、結合活性及び中和活性を維持できる可能性が高くなる。
本発明のポリペプチドの調製方法は、特に限定されず、本技術分野で使用される公知のポリペプチド調製のための手法、例えば、Ｆｍｏｃ固相合成法、Ｂｏｃ固相合成法等のペプチド固相合成法等の化学合成法、大腸菌、ブレビバチルス菌、酵母、麹菌、昆虫細胞、哺乳動物細胞等を宿主とした遺伝子組換え技術による生成いずれも使用することができる。
［３］医薬組成物
本発明の医薬組成物は、「［２］単ドメイン抗体」の項に記載した本発明の単ドメイン抗体のうち、少なくとも１種類の単ドメイン抗体を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防のための医薬組成物である。本発明の医薬組成物は、本発明のポリペプチドを１種類のみ含んでいてもよく、また、複数種類含んでいてもよい。
本発明の医薬組成物の投与経路は、特に限定されず、経口、経鼻、舌下、皮下、筋肉内等の公知のいずれの投与経路としてもよい。
本発明の医薬組成物は、単ドメイン抗体に加えて、必要に応じて製薬上許容される担体を含有してもよい。ここでいう「製薬上許容可能な担体」とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤、滑沢剤等が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、必要に応じてさらに製薬上許容可能な担体を含むことができる。「製薬上許容可能な担体」とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、充填剤、乳化剤、流動添加調節剤、滑沢剤等が挙げられる。
賦形剤としては、単糖、二糖類、シクロデキストリン及び多糖類のような糖（より具体的には、限定はしないが、グルコース、スクロース、ラクトース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストリン、マルトデキストリン、デンプン及びセルロースを含む）、金属塩（例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム若しくはリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム）、クエン酸、酒石酸、グリシン、低、中、高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プルロニック、カオリン、ケイ酸、あるいはそれらの組み合わせが例として挙げられる。
結合剤としては、トウモロコシ、コムギ、コメ、若しくはジャガイモのデンプンを用いたデンプン糊、単シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック及び／又はポリビニルピロリドン等が例として挙げられる。
崩壊剤としては、前記デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が例として挙げられる。
充填剤としては、前記糖及び／又はリン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウム、若しくはリン酸水素カルシウム）が例として挙げられる。
乳化剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが例として挙げられる。
流動添加調節剤及び滑沢剤としては、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが例として挙げられる。
このような担体は、主として前記剤形形成を容易にし、また剤形及び薬理効果を維持するために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。上記の添加剤の他、必要であれば矯味矯臭剤、可溶化剤、懸濁剤、希釈剤、界面活性剤、安定剤、吸収促進剤、増量剤、付湿剤、保湿剤、吸着剤、崩壊抑制剤、コーティング剤、着色剤、保存剤、抗酸化剤、香料、風味剤、甘味剤、緩衝剤等を含むこともできる。
本発明の医薬組成物は、単ドメイン抗体の効果を失わない範囲において、他の薬剤を含有することもできる。例えば、注射剤の場合であれば、他の抗生物質を所定量含有していても良い。
本発明の医薬組成物の剤形は、有効成分である単ドメイン抗体、及び他の付加的な有効成分を不活化させない形態であれば特に限定しない。例えば、液体、固体又は半固体のいずれであってもよい。具体的な剤形としては、例えば、液剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、舌下剤、トローチ剤等の経口剤形、又は、注射剤、懸濁剤、乳剤、点眼剤、点鼻剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、シップ剤及び座剤等の非経口剤形が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、含有される有効成分が失活しない、あらゆる適当な方法で投与することができる。例えば、経口又は非経口（例えば、注射、エアロゾル、塗布、点眼、点鼻）のいずれであってもよい。
本発明の医薬組成物は、単ドメイン抗体を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療又は予防に効果的で、かつ、重篤な副作用が発生する可能性が極めて低い量で含むことが好ましい。単ドメイン抗体の投与量は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療又は予防に効果的で、かつ、重篤な副作用が発生する可能性が極めて低い量であれば特に限定されないが、例えば、合計で０．０１～３０ｍｇ／ｋｇ体重、特に０．０２～６ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整することができる。
本発明の医薬組成物の投与回数は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防の効果が十分に得られ、かつ重篤な副作用が生じない限り、特に限定しないが、例えば、３日に１回～１日５回、特に１日１回～１日３回とすることが好ましい。本発明の医薬組成物の投与期間は特に限定されないが、例えば、３日間～１ヶ月、特に１週間～２週間とすることができる。
本明細書はまた、本発明の医薬組成物を製造する方法を提供する。ここで開示される医薬組成物を製造する方法は、「［２］単ドメイン抗体」の項に記載した本発明の単ドメイン抗体のうち、少なくとも１種類の単ドメイン抗体を使用して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防のための医薬組成物を製造するための方法である。単ドメイン抗体の構造及び製造方法は、特に矛盾のない限り、「［２］単ドメイン抗体」の項に記載した通りである。また、製造される医薬組成物の原料、組成、性状等は、特に矛盾のない限り、「［３］医薬組成物」の項に記載した通りである。
［４］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出試薬及び検出方法
本発明の検出試薬は、「［２］単ドメイン抗体」の項に記載した本発明の単ドメイン抗体のうち、少なくとも１種類の単ドメイン抗体を含む、ことを特徴とする。また、本発明の試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法（以下、「本発明の検出方法」とも称する）は、試料と、「［２］単ドメイン抗体」の項に記載した本発明の単ドメイン抗体のうち、少なくとも１種類の単ドメイン抗体とを接触させる工程を含む、ことを特徴とする。本発明の検出試薬及び検出方法は、本発明の単ドメイン抗体を使用して、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を特異的に当該抗体に結合させることで、精度よくＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出を行うことが可能である。
本発明の検出試薬及び検出方法は、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染が疑われる対象から取り出した試料について、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出することによって、対象のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の診断を補助するために使用される。本発明の検出試薬は、本発明の単ドメイン抗体が含まれ、かつ、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出が可能であれば、単独の組成物等の形態であってもよく、また、複数の組成物、基材等を含むキットの形態であってもよい。
試料は、対象から取り出した試料、例えば、鼻腔ぬぐい液、咽頭ぬぐい液、鼻汁、唾液、喀痰、うがい液、血液（例、全血、血清、血漿）、尿、糞便、乳汁、組織又は細胞抽出液、あるいはこれらの混合物とすることができる。あるいは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が含まれると推定される他の試料、例えば、下水、使用後の清掃シート等とすることができる。好ましくは、対象から取り出した試料であり、より好ましくは、鼻腔ぬぐい液又は唾液である。
本発明の検出試薬は、具体的には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤに対する単ドメイン抗体を使用する免疫測定のための試薬である。また、本発明の検出方法は、具体的には、対象から取り出した試料をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤに対する単ドメイン抗体と反応させる工程を有する、免疫測定のための方法である。このような免疫測定としては、例えば、直接競合法、間接競合法、及びサンドイッチ法が挙げられる。また、このような免疫測定としては、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）、化学発光イムノアッセイ（ＣＬＩＡ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（例、直接競合ＥＬＩＳＡ、間接競合ＥＬＩＳＡ、及びサンドイッチＥＬＩＳＡ）、放射イムノアッセイ（ＲＩＡ）、ラテックス凝集反応法、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）、及びイムノクロマトグラフィー法が挙げられる。上記の免疫測定の原理及び具体的な手法は、いずれも当業者にとって周知である。
本発明の検出試薬及び検出方法におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出は、定性的であっても定量的であってもよい。定性的手法としては、例えば、試料から得られるシグナルを予め設定したカットオフと比較することで、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存在の有無を判定する手法をとり得る。定量的手法としては、既知量の抗原ペプチド（ここではＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤに相当するペプチド）を含む標準液について、試料と同様に免疫測定を行い、試料と標準液より得られるシグナル強度を比較して試料中の抗原量を算出する手法をとり得る。この場合、本発明の検出試薬は、標準液を含んでいてもよい。また、本発明の検出方法は、標準液中の抗原を検出する工程、及び標準液の検出結果より試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を算出する工程を含んでいてもよい。
［５］衛生用品
本発明の衛生用品は、「［２］単ドメイン抗体」の項に記載した本発明の単ドメイン抗体のうち、少なくとも１種類の単ドメイン抗体を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の予防のために使用される、ことを特徴とする。
本発明の衛生用品は、例えば、紙、不織布、布、脱脂綿等に、有効成分として単ドメイン抗体を含む組成物を水溶液等の状態で含浸させた、湿潤物品（例えば、湿潤シート）とすることができる。また、紙、不織布、布、脱脂綿等に、単ドメイン抗体を含む組成物を水溶液等の状態で含浸させた後、乾燥させた物品（例えば、マスク、綿棒など）とすることができる。あるいは、本発明の衛生用品は、液状の組成物そのものであり（以下、「衛生組成物」と称する）、使用直前に、使用者が紙、不織布、布、脱脂綿等に当該組成物を噴霧するなどして含浸させてから使用してもよい。衛生用品に含浸させて使用する場合、衛生組成物における単ドメイン抗体の含有量は、ウイルス感染症予防効果が得られ、かつ、これを含侵させた衛生用品をヒトの皮膚等に接触させても発赤等の異常が生じにくい含有量とすることが好ましい。衛生組成物における単ドメイン抗体の含有量は、具体的な衛生用品の素材、形状、使用形態によって適宜調整できるが、例えば、０．０１ｐｇ／ｍＬ～０．１ｍｇ／ｍＬ、特に１ｐｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬとすることができる。
本発明の衛生用品には、単ドメイン抗体に加えて、エタノール、イソプロパノール、次亜塩素酸ナトリウム、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、ポピヨンヨード、乳化ナトリウム等の公知の抗菌剤、殺菌剤又は除菌剤が含まれていてもよい。
［６］ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法
本発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を治療又は予防する方法（以下、単に「本発明の治療方法」とも称する）は、「［３］医薬組成物」の項に記載した、本発明の医薬組成物を対象に投与する工程を含むことを特徴とする。
本発明の治療方法の対象、投与する医薬組成物の剤形、含有成分等の詳細な条件は、特に矛盾のない限り、「［３］医薬組成物」の項に記載の通りである。
以下、本発明をより詳細に説明するために実施例を示すが、本発明の範囲を実施例の範囲に限定することを意図するものではない。
［参考例１］抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＶＨＨ抗体のスクリーニング
ＶＨＨ抗体遺伝子ライブラリーは、特開２０１６－４４１２６号公報等に記載の方法を参照としたＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ＰＣＲ法により作製した。ライブラリーの多様性は約1010である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤタンパク質（Recombinant ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２, S1 Subunit Protein (RBD)、RayBiotech Life, Inc.より入手）を磁気ビーズに固相化し、大腸菌無細胞翻訳系を用いたｍＲＮＡディスプレイ法により、ＲＢＤタンパク質に特異的に結合するＶＨＨ抗体遺伝子を上記ライブラリーより選抜した。取得した７つのＶＨＨ抗体遺伝子の塩基配列（配列番号２２～２８）を表１に示す。
Figure 2023032631000001
Figure 2023032631000002
［実施例１］抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＶＨＨ抗体発現ベクターの構築
表１に示す各遺伝子を鋳型として、下記プライマーＡ、プライマーＢを用いてＰＣＲを行った。
プライマーＡ：CCCATGGCTTTCGCTGCAGGATCCCAAGTACAACTGGTAGAATCC （配列番号３０）
プライマーＢ：CCCCCGCATCCTGTTAAGCTTTTACTTATCGTCGTCGTCCTTATAG （配列番号３１）
ブレバチルス菌用発現ベクターｐＲＯＸｂ３（株式会社プロテイン・エクスプレス社製）を制限酵素ＢａｍＨＩ及びＨｉｎｄＩＩＩで切断して直鎖化し、上記の各ＰＣＲ産物をギブソン・アセンブリ法により導入して、ＶＨＨ抗体発現ベクターを構築した。その際、各ＶＨＨ抗体遺伝子のＣ末端にＨｉｓタグ、ＦＬＡＧタグを付加した。陰性対象として、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）結合性のＶＨＨ抗体遺伝子（表１の配列番号２９、M. H. Kubala et al., Protein Sci. 19(12), pp. 2389-2401 (2010)を参照）を人工合成して同様に発現ベクターを構築した。
［実施例２］ＶＨＨ抗体タンパク質の調製
実施例１で構築した各発現ベクターを用いて、エレクトロポレーション法によりブレビバチルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｈｏｓｈｉｎｅｎｓｉｓ）ＨＰＤ３１株の形質転換を行った（H. Takagi et al., Agric. Biol. Chem. 53(11) 3099-3100 (1989)を参照）。各形質転換体をＴＭＮ培地（１％ポリペプトン、０．５％肉エキス、０．２％酵母エキス、０．００１％硫酸鉄（ＩＩ）七水和物、０．００１％硫酸マンガン（ＩＩ）五水和物、０．０００１％硫酸亜鉛七水和物、１％グルコース、５０μｇ／ｍＬ ネオマイシン）にて３０℃で６６時間培養した。培養終了後、１０，０００ｇ、１０分間の遠心により培養上清を回収し、０．２μｍのフィルターでろ過滅菌を行った。滅菌後の培養上清から、Ｎｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｃｙｔｉｖａ）を用いて、分泌生産されたＶＨＨ抗体タンパク質の精製を行い、ＰＢＳに溶媒置換したものをＶＨＨ抗体溶液とした。
［実施例３］各ＶＨＨ抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤへの結合活性評価
９６ウェルマイクロウェルプレートに、炭酸バッファーに懸濁したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤタンパク質を５０ｎｇ／ウェルとなるように添加し、４℃で一晩静置した。タンパク質溶液を除去した後、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／ＰＢＳ溶液を加え、室温で２時間静置して、ウェルのブロッキングを行った。０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ溶液にてウェルを３回洗浄した後に、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液で希釈した各ＶＨＨ抗体を５０ｎｇ／ウェルとなるように加え、室温で２時間反応させた。ブランク区には、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液のみを加えた。ウェルを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ溶液にて３回洗浄した後に、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液にて１００００倍希釈した抗ＦＬＡＧ抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ＡＮＴＩ－ＦＬＡＧ Ｍ２ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｍｏｕｓｅ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡより入手）を加え、室温で１時間反応させた。ウェルを３回洗浄した後に、３％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液にて５０００倍希釈したＨＲＰ標識抗マウス抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＨＲＰ 複合体、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．より入手）を加え、室温で１時間反応させた。ウェルを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ溶液にて３回洗浄した後に、ＴＭＢパーオキシダーゼＥＩＡ複合体基質キット（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．より入手）を用いて発色反応を行った。３％硫酸で反応を停止させた後に、４５０ｎｍでの吸光度を測定することで、取得したＶＨＨ抗体のＳ１タンパク質（ＲＢＤ）に対する結合活性を評価した。試験はｎ＝４で行った。
図２に、上記の各ＶＨＨ抗体のＲＢＤへの結合活性評価の結果を示す。使用した抗ＲＢＤ ＶＨＨ抗体のいずれもＲＢＤに対する結合活性を有することが確認された。特に、Ａ０２、Ａ０３及びＡ１５において高い結合活性が見られた。
［実施例４］各ＶＨＨ抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤ中和活性評価
各ＶＨＨ抗体の中和活性を、ＡＣＥ２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｉｋｅ Ｓ１－Ｂｉｏｔｉｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．より入手）を用いて実施した。キットの添付文書に従い、プレートにＡＣＥ２タンパク質を固相化、ブロッキングを行った。その後、Ｓ１タンパク質－ビオチン複合体と共にＶＨＨ抗体（ウェル当たり４ｎｇ）を添加、室温で１時間反応させた。ウェルを洗浄後、ストレプトアビジン－ＨＲＰを添加、ＥＬＩＳＡと同様にＴＭＢパーオキシダーゼＥＩＡ複合体基質キットを用いた発色反応を行った。陽性対照区はＶＨＨ抗体非添加、ブランク区はＳ１タンパク質－ビオチン複合体非添加とした。試験はｎ＝４で行った。
図３に、各ＶＨＨ抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤの中和活性評価の結果を示す。陽性対照区の平均吸光度をＡＣＥ２結合率１００％として、各測定区の平均吸光度よりＡＣＥ結合率を算出した。実施例３で高いＲＢＤ結合活性を示したＡ０２、Ａ０３及びＡ１５で比較的高い中和活性が見られることが確認された。

Claims (14)

  1. 以下の（ａ）～（ｃ）に記載のポリペプチド群から選択されるポリペプチドを含む、単ドメイン抗体：
    （ａ）配列番号１～７のいずれかで示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド；
    （ｂ）前記（ａ）に記載のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するポリペプチド；
    （ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を部分配列として含む、ポリペプチド。
  2. 前記ポリペプチドが以下の３つの相補性決定基（ＣＤＲ）を含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｄ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｆ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  3. 前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｇ）配列番号９で示されるアミノ酸配列又は配列番号９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｈ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列又は配列番号１３で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｉ）配列番号１７で示されるアミノ酸配列又は配列番号１７で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  4. 前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｊ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｋ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｌ）配列番号１８で示されるアミノ酸配列又は配列番号１８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  5. 前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｍ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｎ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｏ）配列番号１９で示されるアミノ酸配列又は配列番号１９で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  6. 前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｐ）配列番号８で示されるアミノ酸配列又は配列番号８で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｑ）配列番号１２で示されるアミノ酸配列又は配列番号１２で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｒ）配列番号２０で示されるアミノ酸配列又は配列番号２０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  7. 前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｓ）配列番号１０で示されるアミノ酸配列又は配列番号１０で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｔ）配列番号１４で示されるアミノ酸配列又は配列番号１４で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｕ）配列番号２１で示されるアミノ酸配列又は配列番号２１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  8. 前記ポリペプチドが以下の３つのＣＤＲを含む、請求項１に記載の単ドメイン抗体：
    （ｖ）配列番号１１で示されるアミノ酸配列又は配列番号１１で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ１；
    （ｗ）配列番号１５で示されるアミノ酸配列又は配列番号１５で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ２；及び
    （ｘ）配列番号１６で示されるアミノ酸配列又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列のうち、１個若しくは２個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるＣＤＲ３。
  9. 請求項１～８のいずれか１項に記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療又は予防のために使用される、医薬組成物。
  10. 請求項１～８のいずれか１項に記載の単ドメイン抗体を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出試薬。
  11. 試料と、請求項１～８のいずれか１項に記載の単ドメイン抗体とを接触させる工程を含む、試料中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法。
  12. 前記試料が、対象から取り出した試料である、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記対象がヒトである、請求項１２に記載の方法。
  14. 請求項１～８のいずれか１項に記載の単ドメイン抗体を有効成分として含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防のために使用される、衛生用品。
JP2021138882A 2021-08-27 2021-08-27 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体 Pending JP2023032631A (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021138882A JP2023032631A (ja) 2021-08-27 2021-08-27 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021138882A JP2023032631A (ja) 2021-08-27 2021-08-27 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023032631A true JP2023032631A (ja) 2023-03-09

Family

ID=85415911

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021138882A Pending JP2023032631A (ja) 2021-08-27 2021-08-27 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2023032631A (ja)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2020141708A (ja) 偽アレルギー薬物反応を検出するためおよび有害反応を予防する遮断薬を同定するためのｍｒｇｐｒｘ２／ｍｒｇｐｒｂ２発現細胞ベースのアッセイ
JP6671069B2 (ja) 炎症性疾患の予防又は治療剤
US20140205611A1 (en) Monoclonal antibodies that bind to hgm-csf and medical compositions comprising same
JP6844864B2 (ja) ヒト化抗ｃｃｒ７受容体抗体
JP2015015957A (ja) Ｉｌ−１８受容体抗原結合タンパク質
CN101668773A (zh) 人工程化抗b因子抗体
US11981725B2 (en) Antigen binding molecules targeting SARS-CoV-2
CN103917557A (zh) 具有降低的与抗药物抗体结合的经修饰的单可变结构域抗体
CN102264764B (zh) 抗体
EP1558646A2 (en) Single domain antibodies directed against interferon- gamma and uses thereof
JP7186266B2 (ja) 細胞内抗原に対して向けられた単一ドメイン抗体
CN101072795A (zh) 针对流感病毒m2蛋白的人单克隆抗体及其制备和使用方法
KR20160119196A (ko) IgA 다중-특이적 결합 분자
US11987616B2 (en) Antigen binding molecules targeting SARS-CoV-2
US20230357367A1 (en) Antigen Binding Molecules Targeting SARS-CoV-2
US20230279081A1 (en) Antigen Binding Molecules Targeting SARS-CoV-2
CN115066435A (zh) 针对lilrb2的单域抗体
JP2023032631A (ja) 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２単ドメイン抗体
WO2023087016A1 (en) Methods to reverse treml1-induced immune suppression
TW202323276A (zh) 用於治療長qt症候群之組成物及方法
US20230391854A1 (en) Monoclonal antibody for coronavirus spike protein, and use thereof
TW202115112A (zh) 抗-angpt2抗體
JP6014706B2 (ja) ｈＧＭ−ＣＳＦに結合するモノクローナル抗体および前記抗体を含む医薬組成物
JP5476310B2 (ja) ｈＧＭ−ＣＳＦに結合するモノクローナル抗体および前記抗体を含む医薬組成物
CN116635410A (zh) 靶向SARS-CoV-2的抗原结合分子

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240311