JP2022551718A - Ｃａｇ／ｃｔｇ伸長障害におけるバイオマーカーとしてのｒａｎタンパク質 - Google Patents
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Abstract
本開示の側面は、対象（例として、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患を有するかまたは有すると疑われる対象）においてある反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）を検出するための方法および組成物（例として、キット）に関する。いくつかの態様において、本開示によって記載される方法は、対象から得られた生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を、ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする１以上の抗体を使用する免疫アッセイによって検出することを含む。いくつかの態様において、本開示は、ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする１以上の抗体、および免疫アッセイプレートおよび／または試薬を含む、キットに関する。いくつかの態様において、本開示は、抗ＲＡＮタンパク質抗体を産生する方法を提供する。
Description
連邦政府支援研究
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金第ＮＳ０４０３８９の下、政府の支援によりなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金第ＮＳ０４０３８９の下、政府の支援によりなされた。政府は、本発明において一定の権利を有する。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介してテキストファイルとして提出された配列表への言及
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含有しており、およびその全体において参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年１０月９日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、U120270072WO00-SEQ-KZMと名付けられ、および１６．１キロバイトのサイズである。
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含有しており、およびその全体において参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年１０月９日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、U120270072WO00-SEQ-KZMと名付けられ、および１６．１キロバイトのサイズである。
関連出願
本出願は、35 U.S.C. § 119(e)の下、２０１９年１０月１０日に出願され、「RAN PROTEINS AS BIOMARKERS IN CAG/CTG EXPANSION DISORDERS」と題された、米国仮出願第６２／９１３，６６２の出願日の利益を主張し、この内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、35 U.S.C. § 119(e)の下、２０１９年１０月１０日に出願され、「RAN PROTEINS AS BIOMARKERS IN CAG/CTG EXPANSION DISORDERS」と題された、米国仮出願第６２／９１３，６６２の出願日の利益を主張し、この内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
背景
ＣＡＧ・ＣＴＧ反復伸長などのある伸長の突然変異は、複数のリーディングフレームにおいて生じ、および標準的なＡＵＧ開始コドンを必要としない、新規なタイプのタンパク質の翻訳を経ることが示されている。このタイプの翻訳は、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳と呼ばれ、産生されるタンパク質は、ＲＡＮタンパク質と呼ばれる。ＲＡＮタンパク質が毒性を有し、およびますます多くの疾患に寄与することの証拠が増えている。
ＣＡＧ・ＣＴＧ反復伸長などのある伸長の突然変異は、複数のリーディングフレームにおいて生じ、および標準的なＡＵＧ開始コドンを必要としない、新規なタイプのタンパク質の翻訳を経ることが示されている。このタイプの翻訳は、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳と呼ばれ、産生されるタンパク質は、ＲＡＮタンパク質と呼ばれる。ＲＡＮタンパク質が毒性を有し、およびますます多くの疾患に寄与することの証拠が増えている。
概要
本開示の側面は、試料中のホモポリマーの反復領域（例として、ポリロイシン反復領域、ポリセリン反復領域等）を有するＲＡＮタンパク質などのあるＲＡＮタンパク質を検出するための方法およびキットに関する。いくつかの態様において、免疫アッセイが、対象から得られた生体試料（例として、血清試料）中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルを検出または測定するために使用される。
本開示の側面は、試料中のホモポリマーの反復領域（例として、ポリロイシン反復領域、ポリセリン反復領域等）を有するＲＡＮタンパク質などのあるＲＡＮタンパク質を検出するための方法およびキットに関する。いくつかの態様において、免疫アッセイが、対象から得られた生体試料（例として、血清試料）中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルを検出または測定するために使用される。
本開示は、一部分において、ポリロイシン反復ＲＡＮタンパク質およびポリセリン反復ＲＡＮタンパク質などのあるＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする（例として、特異的に結合する）抗ＲＡＮタンパク質抗体に基づく。本明細書の他の箇所において記載されるように、ポリセリンおよびポリロイシンＲＡＮタンパク質が、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）などの神経変性疾患に関連するある遺伝子のＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長から翻訳されることが、驚くべきことに発見された。よって、本開示によって記載される組成物および方法は、いくつかの態様において、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患または障害を有するものとして対象を診断するのに有用である。いくつかの態様において、本開示の組成物および方法は、加えてまたは代替的に、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患または障害の処置のための１以上の治療剤を投与されたことのある、または投与されている対象における１以上のＲＡＮタンパク質（例として、ポリロイシン、ポリセリン等）のレベルをモニタリングする（例として、縦断的に測定する）のに有用であるだろう。
いくつかの側面において、本開示は、対象における１以上のＲＡＮタンパク質を検出するための方法に関する。いくつかの態様において、方法は、以下を含む：対象から得られた生体試料とＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体とを接触させて、抗ＲＡＮ抗体－標的ＲＡＮタンパク質複合体を形成すること；複合体と検出可能な剤とを接触させて、標識化複合体を形成すること；標識化複合体を検出すること；および標識化複合体の存在に基づき、対象がＣＡＧおよび／またはＣＴＧ伸長反復関連疾患を有することを同定すること。
いくつかの態様において、生体試料は、血液試料、血清試料、または組織試料である。いくつかの態様において、組織試料は、ＣＮＳ組織試料である。いくつかの態様において、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である。
いくつかの態様において、対象は、哺乳動物の対象である。いくつかの態様において、対象は、ヒトまたはマウスである。
いくつかの態様において、生体試料は、血液試料、血清試料、または組織試料である。いくつかの態様において、組織試料は、ＣＮＳ組織試料である。いくつかの態様において、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である。
いくつかの態様において、対象は、哺乳動物の対象である。いくつかの態様において、対象は、ヒトまたはマウスである。
いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ＲＡＮタンパク質のポリセリン反復領域またはポリロイシン反復領域を標的にする（例として、特異的に結合する）。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ポリクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ＲＡＮタンパク質のいずれの他の部分にも結合しない（例として、ＲＡＮタンパク質の非反復、Ｃ末端領域に結合しない）。
いくつかの態様において、伸長反復関連疾患は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、または筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）である。
いくつかの態様において、伸長反復関連疾患は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、または筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）である。
いくつかの態様において、検出可能な剤は、抗体、フルオロフォア、化学発光剤、または電気化学発光剤である。いくつかの態様において、検出することは、免疫アッセイ、例えば、免疫組織化学アッセイ、免疫蛍光アッセイ、電気化学発光アッセイ、またはウェスタンブロットを実施することを含む。いくつかの態様において、電気化学発光アッセイは、Meso Scale検出（ＭＳＤ）アッセイである。
いくつかの態様において、方法は、対象に治療剤を投与するステップをさらに含む。いくつかの態様において、治療剤は、小分子、抗体、ペプチド、または阻害性核酸である。いくつかの態様において、治療的な抗体は、抗ＲＡＮタンパク質抗体である。
いくつかの態様において、方法は、治療剤の投与後に対象から第２の生体試料を得るステップおよび第２の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出するステップをさらに含む。
いくつかの態様において、方法は、対象に治療剤を投与するステップをさらに含む。いくつかの態様において、治療剤は、小分子、抗体、ペプチド、または阻害性核酸である。いくつかの態様において、治療的な抗体は、抗ＲＡＮタンパク質抗体である。
いくつかの態様において、方法は、治療剤の投与後に対象から第２の生体試料を得るステップおよび第２の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出するステップをさらに含む。
いくつかの側面において、本開示は、対象におけるＲＡＮタンパク質レベルの薬物動態変化を測定するための方法に関する。いくつかの態様において、方法は、以下を含む：ＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた第１の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること；ＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた第２の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること、ここで第２の生体試料は、対象への治療剤の投与後に得られる；および第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量とは異なる場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらすことを決定すること。
いくつかの態様において、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量よりも多い場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらす。いくつかの態様において、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量よりも多い場合に、治療剤の投与が、停止される。
いくつかの態様において、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量未満である場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらす。いくつかの態様において、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量未満である場合に、治療剤の投与が、継続される。
いくつかの態様において、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量未満である場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらす。いくつかの態様において、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量未満である場合に、治療剤の投与が、継続される。
いくつかの態様において、第１および／または第２の生体試料は、血液試料、血清試料、または組織試料である。いくつかの態様において、組織試料は、ＣＮＳ組織試料である。いくつかの態様において、第１および／または第２の生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である。
いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ポリセリン反復領域またはポリロイシン反復領域を標的にする（例として、特異的に結合する）。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ポリクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、モノクローナル抗体である。
いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ポリセリン反復領域またはポリロイシン反復領域を標的にする（例として、特異的に結合する）。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ポリクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、モノクローナル抗体である。
いくつかの態様において、対象は、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ伸長反復疾患を有するとして特徴づけられる。いくつかの態様において、伸長反復関連疾患は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）から選択される。いくつかの態様において、対象は、哺乳動物である。いくつかの態様において、対象は、ヒトまたはマウスである。
いくつかの側面において、本開示は、ＲＡＮタンパク質のポリセリンまたはポリロイシン反復領域を標的にする１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体；および免疫アッセイプレートおよび／または試薬、を含むキットに関する。いくつかの態様において、キットは、対照試料をさらに含む。いくつかの態様において、対照試料は、１以上のＲＡＮタンパク質を含む。いくつかの態様において、対照試料は、１以上のＲＡＮタンパク質を含まない。いくつかの態様において、免疫アッセイプレートおよび／または試薬は、ＭＳＤアッセイプレートおよび／またはＭＳＤアッセイ試薬である。
いくつかの側面において、本開示は、抗ＲＡＮタンパク質抗体を産生する方法を提供する。本明細書に記載のとおりの抗体を産生する方法は、典型的には、細胞または対象に１以上のＲＡＮタンパク質ペプチド抗原を投与することを含む。よって、いくつかの側面において、本開示は、抗体を産生する方法を提供し、方法は、配列番号１７～２６のいずれか１つで表される配列を含むペプチド抗原を細胞または対象に投与することを含む。いくつかの態様において、抗体は、ポリ（Ｓｅｒ）ＲＡＮタンパク質またはポリ（Ｌｅｕ）ＲＡＮタンパク質へ特異的に結合する。いくつかの態様において、抗体を産生する方法は、対象から抗体を単離するステップをさらに含む。いくつかの態様において、対象は、哺乳動物の細胞である。いくつかの態様において、哺乳動物の細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの態様において、対象は、哺乳動物であり、任意にここで哺乳動物は、ヒト、ヤギ、ウサギ、モルモット、またはマウスである。
図面の簡単な記載
図１は、ＲＡＮタンパク質の発現によって特徴づけられる伸長反復関連障害を描く概略図を示す。
図２は、新規なＲＡＮタンパク質反復－領域標的化抗体の産生のためのストラテジー、および関連する利点を記載する概略図を示す（上から下に配列番号５～１０）。
図３は、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長障害を描く概略図を示す。
詳細な記載
本開示の側面は、試料中にホモポリマーの反復領域（例として、ポリロイシン反復領域、ポリセリン反復領域等）を有するＲＡＮタンパク質などの、あるＲＡＮタンパク質を検出するための方法およびキットに関する。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られた生体試料（例として、血清試料）中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルを検出または測定するのに使用される。
いくつかの側面において、本開示は、対象における１以上のＲＡＮタンパク質を検出するための方法に関する。いくつかの態様において、方法は、以下を含む：対象から得られた生体試料とＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体とを接触させて、抗ＲＡＮ抗体－標的ＲＡＮタンパク質複合体を形成すること；複合体と検出可能な剤とを接触させて標識化複合体を形成すること；標識化複合体を検出すること；および標識化複合体の存在に基づき、対象がＣＡＧおよび／またはＣＴＧ伸長反復関連疾患を有すると同定すること。
本開示の側面は、試料中にホモポリマーの反復領域（例として、ポリロイシン反復領域、ポリセリン反復領域等）を有するＲＡＮタンパク質などの、あるＲＡＮタンパク質を検出するための方法およびキットに関する。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られた生体試料（例として、血清試料）中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルを検出または測定するのに使用される。
いくつかの側面において、本開示は、対象における１以上のＲＡＮタンパク質を検出するための方法に関する。いくつかの態様において、方法は、以下を含む：対象から得られた生体試料とＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体とを接触させて、抗ＲＡＮ抗体－標的ＲＡＮタンパク質複合体を形成すること；複合体と検出可能な剤とを接触させて標識化複合体を形成すること；標識化複合体を検出すること；および標識化複合体の存在に基づき、対象がＣＡＧおよび／またはＣＴＧ伸長反復関連疾患を有すると同定すること。
本開示は、一部分において、ポリロイシン反復ＲＡＮタンパク質およびポリセリン反復ＲＡＮタンパク質などのあるＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする（例として、特異的に結合する）抗ＲＡＮタンパク質抗体に基づく。驚くべきことに、ポリセリンおよびポリロイシンＲＡＮタンパク質が、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）などの神経変性疾患に関連するある遺伝子のＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長から翻訳されることが発見された。
ＲＡＮタンパク質
いくつかの側面において、本開示は、対象から得られた生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出する（例として、１以上のＲＡＮタンパク質のレベルを検出する）方法に関する。
「ＲＡＮタンパク質（反復関連非ＡＴＧ翻訳タンパク質）」は、ＡＵＧ開始コドンの不在においてヌクレオチド伸長を担うｍＲＮＡ配列から翻訳されるポリペプチドである。ＲＡＮタンパク質は、１個のアミノ酸（ホモポリマーのアミノ酸反復と呼ばれる）、２個のアミノ酸（ジアミノ酸反復）、３個のアミノ酸（トリ－アミノ酸反復）、４個のアミノ酸（テトラ－アミノ酸反復）、または５個のアミノ酸（ペンタ－アミノ酸反復）の伸長反復を含んでもよい。
いくつかの側面において、本開示は、対象から得られた生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出する（例として、１以上のＲＡＮタンパク質のレベルを検出する）方法に関する。
「ＲＡＮタンパク質（反復関連非ＡＴＧ翻訳タンパク質）」は、ＡＵＧ開始コドンの不在においてヌクレオチド伸長を担うｍＲＮＡ配列から翻訳されるポリペプチドである。ＲＡＮタンパク質は、１個のアミノ酸（ホモポリマーのアミノ酸反復と呼ばれる）、２個のアミノ酸（ジアミノ酸反復）、３個のアミノ酸（トリ－アミノ酸反復）、４個のアミノ酸（テトラ－アミノ酸反復）、または５個のアミノ酸（ペンタ－アミノ酸反復）の伸長反復を含んでもよい。
一般に、ＲＡＮタンパク質は、約２と約１０，０００との間のアミノ酸反復を含んでもよい。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、２０と１００との間のアミノ酸反復、５０と２００との間のアミノ酸反復、１００と５００との間のアミノ酸反復、４００と８００との間のアミノ酸反復、７００と１０００との間のアミノ酸反復、８００と１５００との間のアミノ酸反復等を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、１０と５００との間のアミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸反復を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、２０と３００との間のアミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸反復を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、３０と２００との間のアミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸反復を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、４０と１００との間のアミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸反復を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、５０と９０との間のアミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、６０と８０との間のアミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸反復を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも２００アミノ酸残基の長さであるポリ－アミノ酸反復を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、２００より多くのアミノ酸残基（例として、５００、１０００、５０００、１０，０００等）の長さのポリ－アミノ酸反復を有する。いくつかの態様において、ホモポリマーの反復領域を含むＲＡＮタンパク質は、１以上の非反復領域（例として、Ｎ末端領域、Ｃ末端領域等）を含む。
いくつかの態様において、ホモポリマーの反復領域を含むＲＡＮタンパク質は、Ｃ末端領域を含む。ＲＡＮタンパク質の「Ｃ末端部分」または「Ｃ末端」は、センス転写産物についての遺伝子（例として、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫ等）のイントロン内のポリ－アミノ酸反復領域の下流にあるヌクレオチド配列によって、またはアンチセンス転写産物についての遺伝子（例として、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫ等）のイントロン内のポリ－アミノ酸反復領域の下流にあるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質のＣ末端部分は、ＲＡＮタンパク質のポリ－アミノ酸反復部分の直後のアミノ酸で始まり、および遺伝子（例として、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫ等）のセンス転写産物によってコードされる配列における１以上の連続したアミノ酸を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質のＣ末端部分は、ＲＡＮタンパク質のポリ－アミノ酸反復部分の直後のアミノ酸で始まり、および遺伝子（例として、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫ等）のアンチセンス転写産物によってコードされる配列における１以上の連続したアミノ酸を含む。
いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質のＣ末端部分は、ＲＡＮタンパク質のポリ－アミノ酸反復部分の直後のアミノ酸で始まる配列における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、または７５より多くの連続したアミノ酸を含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質のＣ末端部分は、ＲＡＮタンパク質のポリ－アミノ酸反復部分の直後のアミノ酸で始まる１～５、３～１０、５～１５、８～２０、１０～２５、１３～３０、１５～３５、１８～４０、２０～４５、２３～５０、２５～５５、２８～６０、３０～６５、３３～７０、３５～７５、または７５より多くの連続したアミノ酸を含む。
ＲＡＮタンパク質コード配列は、複数の遺伝子座で対象のゲノム（例として、ヒト対象のゲノム）において見出され得、これらに限定されないが、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫを包含する。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質は、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復によって翻訳される。いくつかの態様において、ＣＡＧ伸長反復は、約１０と約１０，０００との間のＣＡＧ反復（例として、約１０、２０、５０、１００、５００、１０００、２５００、５０００、または１００００のＣＡＧ反復）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＧ伸長反復は、１００００より多くのＣＡＧ反復を含む。いくつかの態様において、ＣＴＧ伸長反復は、約１０と約１０，０００との間のＣＴＧ反復（例として、約１０、２０、５０、１００、５００、１０００、２５００、５０００、または１００００のＣＴＧ反復）を含む。いくつかの態様において、ＣＴＧ伸長反復は、１００００より多くのＣＴＧ反復を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長によって引き起こされるＲＡＮタンパク質の翻訳は、１以上のホモポリマーのＲＡＮタンパク質、例えば、ポリ－グルタミン（ポリＧｌｎまたはポリＱ）に加えて、ポリアラニン、ポリセリン、ポリロイシン、またはポリシステイン（ポリＡｌａ、ポリＳｅｒ、ポリＬｅｕおよびポリＣｙｓ）の翻訳をもたらす。ホモポリマーのＲＡＮタンパク質の例は、を包含する「AAAAAAAAAAAAAAAAAAAA」（ポリ－アラニン）（配列番号１）、「LLLLLLLLLLLLLLLLLL」（ポリ－ロイシン）（配列番号２）、「SSSSSSSSSSSSSSSSSSSS」（ポリ－セリン）（配列番号３）、および「CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC」（ポリ－システイン）（配列番号４）を包含する。ＲＡＮタンパク質は、伸長反復のセンス鎖、伸長反復のアンチセンス鎖、または伸長反復のセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方から発現されてもよい。
ハンチントン病（ＨＤ）の文脈において、ＲＡＮタンパク質の翻訳は、Ｈｔｔ遺伝子におけるＣＡＧ・ＣＴＧ伸長によって引き起こされ、このことはポリ－グルタミン（ポリＧｌｎまたはポリＱ）に加えて、ポリアラニン、ポリセリン、ポリロイシン、およびポリシステイン（ポリＡｌａ、ポリＳｅｒ、ポリＬｅｕおよびポリＣｙｓ）のＲＡＮタンパク質の翻訳をもたらす。
ＳＣＡ８およびＤＭ１の文脈において、ＲＡＮタンパク質の翻訳は、ＣＴＧ・ＣＡＧ反復伸長によって引き起こされる。ＳＣＡ８伸長突然変異は、双方向で転写され、および伸長突然変異を越えた反対方向において発現する、ＣＵＧ（ＡＴＸＮ８ＯＳ）およびＣＡＧ（ＡＴＸＮ８）の両方の伸長ＲＮＡを産生する。ＣＵＧ伸長転写産物は、ＲＮＡ凝集体（RNA foci）を形成し、および反対方向において発現された伸長されたＣＡＧ ＡＴＸＮ８転写産物は、ＣＡＧ反復の直接の上流にＡＵＧ開始コドンを含有する異常に短いＯＲＦからほぼ純粋なポリＧｌｎタンパク質を産生する。このことは、ポリ－グルタミン（ポリＧｌｎまたはポリＱ）に加えて、ポリアラニン、ポリセリン、ポリロイシン、およびポリシステイン（ポリＡｌａ、ポリＳｅｒ、ポリＬｅｕおよびポリＣｙｓ）のＲＡＮタンパク質の翻訳をもたらす。
追加のＲＡＮタンパク質の例およびＲＡＮタンパク質を同定する方法は、例えば、２０２０年７月２日に出願された国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０４０７２５に記載されており、これらの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
追加のＲＡＮタンパク質の例およびＲＡＮタンパク質を同定する方法は、例えば、２０２０年７月２日に出願された国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０４０７２５に記載されており、これらの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
対象および生体試料
いくつかの態様において、生体試料は、ＲＡＮタンパク質の翻訳に関連する疾患を有するかまたは有すると疑われる対象から得られる。一般に、生体試料は、血液、血清（例として、凝固タンパク質が取り除かれた血漿）、または脳脊髄液（ＣＳＦ）であり得る。しかしながら、当業者は、ＣＮＳ組織（例として、脳組織、脊椎組織等）および細胞（例として、脳細胞、神経細胞、皮膚細胞等）などの他の好適な生体試料を認識するだろう。いくつかの態様において、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である。いくつかの態様において、生体試料は、血液試料または組織試料である。いくつかの態様において、血液試料は、全血の試料、血漿試料、または血清試料である。いくつかの態様において、組織試料は、ＣＮＳ組織試料である。いくつかの態様において、血液試料は、試料のバフィーコートなどの白血球細胞）（例として、白血球）を取り除くよう処理される。
いくつかの態様において、生体試料は、ＲＡＮタンパク質の翻訳に関連する疾患を有するかまたは有すると疑われる対象から得られる。一般に、生体試料は、血液、血清（例として、凝固タンパク質が取り除かれた血漿）、または脳脊髄液（ＣＳＦ）であり得る。しかしながら、当業者は、ＣＮＳ組織（例として、脳組織、脊椎組織等）および細胞（例として、脳細胞、神経細胞、皮膚細胞等）などの他の好適な生体試料を認識するだろう。いくつかの態様において、生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である。いくつかの態様において、生体試料は、血液試料または組織試料である。いくつかの態様において、血液試料は、全血の試料、血漿試料、または血清試料である。いくつかの態様において、組織試料は、ＣＮＳ組織試料である。いくつかの態様において、血液試料は、試料のバフィーコートなどの白血球細胞）（例として、白血球）を取り除くよう処理される。
いくつかの態様において、対象から得られた生体試料は、－８０℃と約２３℃との間の温度（例として、室温）で保管される。いくつかの態様において、対象から得られた生体試料は、０℃と約２３℃との間の温度（例として、約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３℃）で保管される。いくつかの態様において、対象から得られた生体試料は、２０℃と約２５℃との間の温度（例として、約２０、２１、２２、２３、２４、または２５℃）で保管される。
対象は、哺乳動物（例として、ヒト、マウス、ラット、ヤギ、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、またはブタ）であり得る。いくつかの態様において、対象は、ヒトである。いくつかの態様において、対象は、哺乳動物の対象である。いくつかの態様において、対象は、ヒトまたはマウスである。いくつかの態様において、対象は、マウスである。いくつかの態様において、対象は、Ｃ９－ＢＡＣマウスである。ＡＬＳのＣ９－ＢＡＣマウスモデルは、例えば、２０１４年３月１０日に出願され、ＷＯ２０１４／１５９２４７として公開された国際ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２２６７０、およびLiu, et al., (2016) Neuron 90(3):521-34に記載されており、これらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、対象は、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫから選択される遺伝子（例として、ヒト遺伝子またはそのオルソログ）中のＣＡＧ反復伸長および／またはＣＴＧ反復伸長によって特徴づけられる。一般に、ＲＡＮタンパク質は、反復伸長のセンス鎖、反復伸長のアンチセンス鎖、または反復伸長のセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方（例として、上記：Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫのいずれかのセンスおよび／またはアンチセンス鎖）から発現されてもよい。
いくつかの態様において、対象は、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復に関連する疾患を有するかまたは有すると疑われている。ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患の例は、これらに限定されないが、ハンチントン病（ＨＤ）、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）を包含する。
いくつかの態様において、対象は、ＲＡＮタンパク質の翻訳に関連する疾患の１以上の兆候または症状を呈する。例えば、「筋強直症ジストロフィーを有するかまたは有すると疑われる対象」（例として、筋強直症ジストロフィー１型（ＤＭ１）または筋強直症ジストロフィー２型（ＤＭ２））は、これらに限定されないが以下を包含する、ＤＭ１および／またはＤＭ２の１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：遅延した筋弛緩、筋力低下、持続的な不随意筋収縮、または筋肉の喪失；および／または正常でない心リズム、白内障、または嚥下困難。
「脊髄小脳失調症を有するかまたは有すると疑われる対象」（例として、脊髄小脳失調症１型、２型、３型、６型、７型、８型、１０型、１２型、１７型、３１型、または３６型）は、これらに限定されないが以下を包含する、脊髄小脳失調症の１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：発語および嚥下障害（swallowing difficulty）、筋硬直（例として、痙縮）、眼球運動を制御する筋肉における衰弱（例として、眼筋麻痺）、急速な、不随意の眼球運動（例として、眼振）、非協調運動およびバランスの不均衡（例として、運動失調）、筋肉の消耗、緩徐眼球運動、認知症、制御されない筋肉の緊張（例として、ジストニア）、こわばり、振戦、眼球突出、複視、腕における協調運動障害、進行性の視力低下、失明、感覚または反射における変化、体幹の不安定性、腱反射の機能亢進、長く引いた訥弁によって特徴づけられる構音障害、小脳性の運動失調、不安定歩行、上肢の運動失調、嚥下障害（dysphagia）、歩行機能障害、錐体外路の特色、錐体の衰弱、認知および行動障害、舞踏病、精神障害、感音性聴覚障害、損なわれた振動感覚、急速眼球運動（例として、サッケード）、目を左右交互に動かすことの不具合（例として、眼球運動失効）、および／または眼瞼下垂（例として、眼瞼下垂症）。
「球脊髄性筋萎縮症を有するかまたは有すると疑われる対象」は、これらに限定されないが以下を包含する、球脊髄性筋萎縮症の１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：発語障害、噛むことおよび嚥下することの困難、睡眠障害、呼吸困難、顔面筋力の低下、感情を伝達することの困難、腕および脚の筋肉の衰弱および萎縮、筋肉の単収縮および痙攣、拡大した乳房（男性対象において）、低減した生殖能力および睾丸の萎縮（例として、収縮）、男性ホルモンの正常でないプロセシング、筋肉の消耗、および／または歩行困難。
「歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）を有するかまたは有すると疑われる」対象は、これらに限定されないが以下を包含する、ＤＲＰＬＡの１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：運動失調、肢の制御不能な運動（例として、舞踏病アテトーゼ）、精神科的症状（例として、妄想）、および／または知的機能の劣化（例として、認知症）。
「ハンチントン病（ＨＤ）を有するかまたは有すると疑われる」対象は、これらに限定されないが以下を包含する、ＨＤの１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：異常歩行、増大した筋活動、不随意の運動、協調運動の問題、筋肉の喪失、筋痙攣、健忘、妄想、集中力の欠如、精神錯乱、活動の遅さ、思考および理解の困難、強迫行動、そわそわすること、怒りっぽいこと、慎みがないこと、せん妄、うつ病、幻覚、偏執病、不安、無気力、気分変動、発話困難、記憶喪失、振戦、および／または重量減少。
「ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）を有するかまたは有すると疑われる」対象は、これらに限定されないが以下を包含する、ＨＤＬ２の１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：進行性の運動障害（例として、パーキンソニズム、舞踏病）、認知および感情の減退（例として、認知症、精神障害）、てんかん発作（単数または複数）、および／またはＨＤに関連するいずれか他の兆候または症状。
「フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）を有するかまたは有すると疑われる」対象は、これらに限定されないが以下を包含する、ＦＥＣＤの１以上の兆候または症状を呈する対象であり得る：かすんだまたは曇った視覚（例として、全般的な視覚の明確さの欠如）、視力の揺動（例として、朝目が覚めた後により悪い症状であり、および日中徐々に改善する）、永続的な視力障害、まぶしさ、光の周囲に光輪が見える、および／または角膜の表面上の小水疱からの疼痛またはザラザラ感（grittiness）。
いくつかの態様において、「伸長反復関連疾患を有するかまたは有すると疑われる対象」は、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫから選択される遺伝子中に１９より多く（例として、２０、２５、３０、３５、またはそれより多く）の反復を有することが知られているか決定される対象であり得るか、またはこれらに限定されないが、運動機能障害（例として、痙縮）、筋萎縮、および／または精神神経の病気の徴候（例として、強迫行動、無気力、不安等）を包含する、神経変性疾患（例として、ＨＤ、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、ＤＲＰＬＡ、ＳＢＭＡ、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、ＤＭ１等）の兆候および症状を呈する対象であり得る。
治療剤
本開示の方法は、いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質の翻訳に関連する疾患または障害の動物モデルにおける治療剤（例として、治療剤候補）の効き目を調査するために有用である。「治療剤候補」は、一般には、細胞または対象におけるＲＡＮタンパク質の翻訳を低減するかまたは阻害する能力について試験されている剤（例として、小分子、干渉ＲＮＡ、タンパク質、ペプチド、抗体、ワクチン等）を指す。一般に、治療剤は、小分子（例として、メトホルミンまたはメトホルミン誘導体）、干渉ＲＮＡ（例として、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ａｍｉＲＮＡ、ＡＳＯ、アプタマー等）、タンパク質またはそのフラグメント、ペプチド、抗体（例として、抗ＲＡＮタンパク質抗体）等であり得る。いくつかの態様において、治療剤は、小分子、干渉核酸、修飾された干渉核酸、ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー、ペプチド、タンパク質、抗体、抗体薬物抱合体、他の巨大分子、遺伝子治療（他の列挙されたタイプの治療剤の１以上を送達するよう設計された遺伝子治療を包含する）、天然産物、または生薬である。いくつかの態様において、治療剤は、例えば、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）経路、ＥＩＦ２経路、またはＥＩＦ３経路などのＲＡＮタンパク質の発現を制御する経路を調節することによって、ＲＡＮタンパク質の発現を調節する。
本開示の方法は、いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質の翻訳に関連する疾患または障害の動物モデルにおける治療剤（例として、治療剤候補）の効き目を調査するために有用である。「治療剤候補」は、一般には、細胞または対象におけるＲＡＮタンパク質の翻訳を低減するかまたは阻害する能力について試験されている剤（例として、小分子、干渉ＲＮＡ、タンパク質、ペプチド、抗体、ワクチン等）を指す。一般に、治療剤は、小分子（例として、メトホルミンまたはメトホルミン誘導体）、干渉ＲＮＡ（例として、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ａｍｉＲＮＡ、ＡＳＯ、アプタマー等）、タンパク質またはそのフラグメント、ペプチド、抗体（例として、抗ＲＡＮタンパク質抗体）等であり得る。いくつかの態様において、治療剤は、小分子、干渉核酸、修飾された干渉核酸、ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー、ペプチド、タンパク質、抗体、抗体薬物抱合体、他の巨大分子、遺伝子治療（他の列挙されたタイプの治療剤の１以上を送達するよう設計された遺伝子治療を包含する）、天然産物、または生薬である。いくつかの態様において、治療剤は、例えば、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）経路、ＥＩＦ２経路、またはＥＩＦ３経路などのＲＡＮタンパク質の発現を制御する経路を調節することによって、ＲＡＮタンパク質の発現を調節する。
いくつかの態様において、小分子は、真核生物開始因子２（ｅＩＦ２）、真核生物開始因子３（ｅＩＦ３）、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）、ｐ６２（セクエストソーム－１またはユビキチン結合タンパク質）、ＬＣ３（微小管関連タンパク質１軽鎖３）Ｉサブユニット、ＬＣ３ＩＩサブユニット、またはトール様受容体３（ＴＬＲ３）の修飾因子である。いくつかの態様において、小分子は、メトホルミンまたはその薬学的に許容し得る塩、共結晶、互変異性体、立体異性体、溶媒和物、水和物、多形、同位体が濃縮された誘導体、もしくはプロドラッグである。いくつかの態様において、小分子は、ブホルミン、フェンホルミン、メトホルミン、またはその誘導体もしくは機能的類似体である。いくつかの態様において、小分子は、ＴＡＲＢＰ２などのＰＫＲのインヒビターである。
いくつかの態様において、干渉核酸は、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、人工ｍｉＲＮＡ（ａｍｉＲＮＡ）、またはアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。いくつかの態様において、干渉核酸は、真核生物開始因子２（ｅＩＦ２）、真核生物開始因子３（ｅＩＦ３）、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）、ｐ６２、ＬＣ３Ｉサブユニット、ＬＣ３ＩＩサブユニット、またはトール様受容体３（ＴＬＲ３）の発現を改変する。いくつかの態様において、干渉核酸は、ｅＩＦ２ＡまたはｅＩＦ２αの発現を改変する。いくつかの態様において、干渉核酸は、ｅＩＦ３ａ、ｅＩＦ３ｂ、ｅＩＦ３ｃ、ｅＩＦ３ｄ、ｅＩＦ３ｅ、ｅＩＦ３ｆ、ｅＩＦ３ｇ、ｅＩＦ３ｈ、ｅＩＦ３ｉ、ｅＩＦ３ｊ、ｅＩＦ３ｋ、ｅＩＦ３ｌ、およびｅＩＦ３ｍからなる群から選択される１以上のｅＩＦ３サブユニットの発現を阻害する。いくつかの態様において、干渉核酸は、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）の発現を阻害する。いくつかの態様において、干渉核酸は、遺伝子（例として、Ｈｔｔ、ＨＤＬ２、ＡＴＸＮ１、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ３、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＡＴＸＮ７、ＡＴＸＮ８ＯＳ、およびＤＭＰＫ等）の発現を阻害する。いくつかの態様において、干渉核酸は、本明細書に記載のとおりの反復配列に直接結合する。
いくつかの態様において、タンパク質（例として、治療用タンパク質）は、真核生物開始因子２（ｅＩＦ２）、真核生物開始因子３（ｅＩＦ３）、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）、ｐ６２、ＬＣ３Ｉサブユニット、ＬＣ３ＩＩサブユニット、またはトール様受容体３（ＴＬＲ３）を修飾する。いくつかの態様において、タンパク質（例として、治療用タンパク質）は、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）のドミナントネガティブバリアントまたはＴＬＲ３タンパク質のドミナントネガティブバリアントである。いくつかの態様において、ドミナントネガティブバリアントは、アミノ酸位置２９６での突然変異を含む。いくつかの態様において、突然変異は、Ｋ２９６Ｒである。
いくつかの態様において、治療剤（例として、治療用タンパク質をコードする核酸、干渉核酸等）は、ベクターによって対象へ送達される。いくつかの態様において、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様において、ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）である。いくつかの態様において、ｒＡＡＶは、ＡＡＶ８カプシドタンパク質またはそのバリアントを含む。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質ペプチドワクチンは、ウイルスベクターによって送達される。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体またはそのフラグメントをコードする１以上のウイルスベクターは、ウイルスベクターによって送達される。
いくつかの態様において、治療剤候補は、抗体である。いくつかの態様において、抗体は、真核生物開始因子２（ｅＩＦ２）、真核生物開始因子３（ｅＩＦ３）、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）、ｐ６２、ＬＣ３Ｉサブユニット、ＬＣ３ＩＩサブユニット、またはトール様受容体３（ＴＬＲ３）を標的にする。かかる抗体は、当該技術分野において知られている（例として、Duffy et al. Cell Immunol. 2007 Aug; 248(2):103-14. PubMed PMID: 18048020を参照）。当業者は、列挙されたタンパク質標的に結合する抗体の作製のしかた、および標的タンパク質の機能の所望のモジュレーションについてのスクリーニングのしかたを理解するだろう。
いくつかの態様において、抗体は、抗ＲＡＮタンパク質抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ＲＡＮタンパク質のポリ－アミノ酸反復へ特異的に結合する。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ＲＡＮタンパク質の１以上のポリＬｅｕ反復へ特異的に結合する。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ＲＡＮタンパク質の１以上のポリＳｅｒ反復へ特異的に結合する。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ＲＡＮタンパク質のＣ末端へ特異的に結合する。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、配列番号１７～２６のいずれか１つを含むアミノ酸配列へ特異的に結合する。
いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ポリクローナル抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮ抗体は、新規な濃縮反復伸長突然変異の配列によって予測される、ＲＡＮタンパク質関連神経学的疾患において生じる新しく同定されたＲＡＮタンパク質への結合活性を有して生成される。いくつかの態様において、遺伝子座は、ＲＡＮタンパク質関連神経学的疾患についての既知のリスク因子を含み、１以上のタイプのＲＡＮタンパク質を産生することができる新規な反復伸長突然変異を含有するものとして目下同定されている。抗ＲＡＮ抗体の例は、例えば、２０２０年９月１８日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０５１６７１号、および米国公開第２０１３／０１１５６０３号において開示されており、これらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、治療剤候補は、対象における伸長反復から発現される１以上のＲＡＮタンパク質（例として、ポリＳｅｒ、ポリＬｅｕ等）に対して免疫応答を誘発するように構成されているワクチンである。１以上のＲＡＮタンパク質に対して免疫応答を誘発するように構成されているワクチンの例は、例えば、２０２０年９月１８日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０５１６７０号において記載されており、これらの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの態様において、治療剤候補は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。
いくつかの態様において、治療剤候補は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。
適切な追加の治療剤の同定および選択は、当業者の能力の内であり、および対象が患っている疾患に依存するだろう。例えば、いくつかの態様において、脆弱Ｘ症候群（例として、選択的セロトニン再取り込みインヒビター、カルバマゼピン、メチルフェニデート、トラゾドン、セルトラリン、メトホルミン、カンナビジオール（ＣＢＤ）、アカンプロサート、ロバスタチン、ミノサイクリン等）、脊髄小脳失調症（例として、バクロフェン、リルゾール、アマンタジン、バレニクリン等）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（例として、リルゾール等）、筋強直症ジストロフィー１型（チデグルシブ、メキシレチン等）、またはハンチントン病（テトラベナジン（Xenazine）、バクロフェン、デューテトラベナジン（Austedo）、ハロペリドール、クロルプロマジン、リスペリドン、クエチアピン、アマンタジン、レベチラセタム、クロナゼパム、シタロプラム、フルオキセチン、セルトラリン、オランザピン、バルプロ酸（alproate）、カルバマゼピン、ラモトリギン、システアミン、ＰＢＴ２、ＰＤＥ１０Ａインヒビター、プリドピジン、ラキニモド等）についての１以上の治療剤が、対象に投与される。
処置の投与は、当該技術分野において知られているいずれかの方法によって達成されるであろう（例として、Harrison’s Principle of Internal Medicine, McGraw Hill Inc.を参照）。投与は、局部であっても、または全身性であってもよい。治療剤は、腸内（例として、経口）、非経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、気管内、皮下、脳室内、経皮、皮内、眼、直腸、膣内、腹腔内、局所（粉末、軟膏、クリーム、および／または点滴薬によるものとして）、粘膜、経鼻、口腔内、舌下、気管内注入、気管支の点滴注入、吸入、経口スプレーとして、鼻腔用スプレーとして、および／またはエアロゾルとして、を包含するいずれかのルートによって投与され得る。全身性ルートは、経口および非経口を包含する。具体的に言うと、企図されるルートは、経口投与、静脈内投与（例として、全身性の静脈内注射）、血液および／またはリンパ液の供給を介しての局部の投与、および／または患部への直接投与である。いくつかの態様において、本開示によって記載されるとおりの処置は、筋肉内注射によって対象へ投与される。一般に、最も適切な投与のルートは、剤の性質（例として、胃腸管の環境におけるその安定性）、および／または対象の状態（例として、対象が、経口投与に耐えることができるか）を包含する様々な因子に依存するだろう。ある態様において、本明細書に記載の化合物または医薬組成物は、対象の目への局所投与に好適である。種々のルートの投与のための組成物は、当該技術分野において周知である（例として、E. W. Martin によるRemington's Pharmaceutical Sciencesを参照）。投薬量は、対象および投与のルートに依存するだろう。投薬量は、当業者によって決定され得る。
免疫アッセイ
いくつかの態様において、本開示によって記載される組成物および方法は、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患または障害を有するものとして対象を診断するのに有用である。いくつかの態様において、本開示によって記載される組成物および方法は、加えてまたは代替的に、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患または障害の処置のために１以上の治療剤を投与されたかまたは投与されている対象における、１以上のＲＡＮタンパク質（例として、ポリロイシン、ポリセリン等）のレベルのモニタリング（例として、縦断的に測定すること）に有用である。
いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の組織分布は、伸長反復関連疾患を有するものとして対象を診断するために使用され得る。いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の組織分布は、対象における伸長反復関連疾患の存在または重症度を検出するために使用され得る。
いくつかの態様において、本開示によって記載される組成物および方法は、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患または障害を有するものとして対象を診断するのに有用である。いくつかの態様において、本開示によって記載される組成物および方法は、加えてまたは代替的に、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ反復伸長に関連する疾患または障害の処置のために１以上の治療剤を投与されたかまたは投与されている対象における、１以上のＲＡＮタンパク質（例として、ポリロイシン、ポリセリン等）のレベルのモニタリング（例として、縦断的に測定すること）に有用である。
いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の組織分布は、伸長反復関連疾患を有するものとして対象を診断するために使用され得る。いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の組織分布は、対象における伸長反復関連疾患の存在または重症度を検出するために使用され得る。
本開示は、一部分において、対象から得られた生体試料（例として、血清）中の１以上のＲＡＮタンパク質（例として、ポリＳｅｒ、ポリＬｅｕなどのホモポリマーのＲＡＮタンパク質）を検出するために使用され得るある免疫アッセイ（例として、免疫組織化学アッセイ、電気化学発光をベースとした免疫アッセイ、ウェスタンブロット、免疫蛍光アッセイ）に基づく。いくつかの態様において、試料の処理時間および条件（例として、インキュベーション時間およびインキュベーション温度）は、所与の血液試料において観察されるバックグラウンドシグナルの量に影響する。例えば、血清試料が、対象から得られたのちに２４時間より長い間室温にインキュベートされた（例として、保持された、または保管された）場合に、いくつかの態様において、試料中のＲＡＮタンパク質のレベルは、高いバックグラウンドシグナルに起因して対照試料と識別不能である。
いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られた２日以内の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約１分と約４８時間の間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約１０分と約４５時間との間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約２０分と約４０時間との間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約３０分と約３２時間との間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約４０分と約３０時間との間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約５０分と約２６時間との間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約６０分と約２４時間との間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。いくつかの態様において、免疫アッセイは、対象から得られたのち約１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、６０分（例として、１時間）、９０分、１２０分（例として、２時間）、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２５時間、３０時間、４０時間、または４８時間の間の生体試料（例として、血液試料）に対して実施される。
本開示によって記載される免疫アッセイ方法のいくつかの態様において、試料（例として、生体試料）は、試料内の１以上の抗原を検出剤（例として、抗体）にアクセス可能にするために抗原回復プロセスにより処理される。本明細書に使用されるとき、「抗原回復」（エピトープ回復、または抗原案マスキングとも称される）は、生体試料（例として、血液、血清、ＣＳＦ等）が、プロセス前には、検出剤（例として、抗体、アプタマー、および他の結合分子）にこれまでアクセス不可能であった抗原（例として、エピトープ）を露出する条件下で処理されるプロセスを指す。一般に、抗原回復方法は、これらに限定されないが、加熱、圧力処理、酵素消化、還元剤での処理、酸化剤での処理、架橋剤での処理、変性剤（例として、洗浄剤、エタノール、酸）での処理、またはｐＨの変化、または上記のいずれかの組み合わせを包含するステップを含む。いくつかの抗原回復方法は、当該技術分野において知られており、これらに限定されないが、プロテアーゼ誘発エピトープ回復（ＰＩＥＲ）および熱誘発エピトープ回復（ＨＩＥＲ）を包含する。いくつかの態様において、抗原回復の手順は、バックグラウンドシグナルを低減し、および検出技法（例として、免疫組織化学（ＩＨＣ）、イムノブロット（ウェスタンブロットなど）、ＥＬＩＳＡ等）の感度を増大させる。
例えば、いくつかの態様において、抗原回復技法は、偽陰性の場合を低減することによって、ＲＡＮタンパク質の検出の再現性を増大させる。このことは、さもなければ「陽性」として同定されないであろう低レベルの標的タンパク質での「陽性の」試料の検出を可能とする。いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の検出（例として、ウェスタンブロット、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡなどのイムノブロットによる検出）の前に、抗原回復プロセスが生体試料に対して実施される。
いくつかの態様において、生体試料中のＲＡＮタンパク質の検出は、ウェスタンブロットによって実施される。ウェスタンブロットは、一般に検出剤またはプローブの使用を採用して、タンパク質またはペプチドの存在を同定する。いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の検出は、免疫ブロット（例として、ドットブロット、２－Ｄゲル電気泳動等）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、またはＥＬＩＳＡによって実施される。いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の検出は、電気化学発光をベースとした免疫アッセイによって実施される。いくつかの態様において、１以上のＲＡＮタンパク質の検出は、免疫蛍光アッセイによって実施される。
一般に、「電気化学発光をベースとした免疫アッセイ」は、生体試料中に存在する１以上のＲＡＮタンパク質のマイクロプレートなどの基質へと結合されている１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体（例として、ポリＳｅｒ反復またはポリＬｅｕ反復などのＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域に特異的に結合する抗ＲＡＮタンパク質抗体）への結合が、電気化学発光ラベル（例として、適切な化学的環境（例として、トリプロピルアミン、ＴＰｒＡの存在下）における電気によって刺激されるときに光を放射する検出可能な部分）を使用して検出される、生物学的アッセイを指す。電気化学発光のラベルは、例えば、Muzyka (2014) Biosens Bioelectron 15(54):393-407に記載される。
いくつかの態様において、電気化学発光をベースとした免疫アッセイは、Meso Scale検出（ＭＳＤ）アッセイである。本明細書に使用されるとき、用語「meso scale検出（ＭＳＤ）アッセイ」は、電気化学発光（例として、電気化学的刺激の際に光を放出するSULFO-TAG（商標）ラベル（例として、１以上のルテニウム複合体を含むラベル）などの１以上の検出可能な試薬を使用する）によってアナライトの検出のために使用される免疫アッセイを指し、例えば、Moxness et al. (2005) Clin. Chem. 51(10):1983-5、およびＭＳＤアッセイステップのその記載に関して参照により組み込まれている米国特許第７，００８，７９６号に記載される通りである。
一般に、ＭＳＤアッセイは、固体基質、例えば、基質に取り付けられた１以上の標的抗体（例として、抗ポリＬＥＵ、抗ポリＳＥＲなどの１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体）を含むマルチウェルアッセイプレートと、生体試料（例として、ホモポリマーの反復領域を有する１以上のＲＡＮタンパク質を含有する対象から得られた血液試料）とを、抗ＲＡＮタンパク質抗体が１以上のＲＡＮタンパク質に結合して、複合体を形成する条件下で接触させること、および続いて複合体と１以上の検出可能な試薬と抱合されている二次抗体（例として、抗ヒト抗体、抗マウス抗体、抗ウサギ抗体などの複合体の抗ＲＡＮタンパク質抗体部分に結合する抗体）とを接触させること、を含む。
検出可能な試薬は、蛍光ラベル、化学発光ラベル、放射ラベル、または電気化学発光のラベルであってもよい。いくつかの態様において、検出可能な試薬は、電気化学発光部分、例えば、米国特許第５，３１０，６８７号に記載される通りのものを含み、これは、このような電気化学発光部分に関する開示に関して参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様において、検出可能な試薬は、ルテニウム複合体、例えば、［Ｒｕ（Ｂｐｙ）３］＋２とも称されるルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジン－（４－メチルスルホン）、またはその塩を含む。
検出可能な試薬（例として、検出可能な部分、例えば、SULFO-TAG（商標）などのルテニウム複合体は、一般に二次抗体に抱合されている。いくつかの態様において、二次抗体は、検出抗体である。いくつかの態様において、検出抗体は、抗ＲＡＮタンパク質抗体または、抗ヒト抗体、抗マウス抗体、抗ラット抗体、抗モルモット抗体などの、試料が得られた種に存在する抗原に結合する抗体である。
検出可能な試薬（例として、検出可能な部分、例えば、SULFO-TAG（商標）などのルテニウム複合体は、一般に二次抗体に抱合されている。いくつかの態様において、二次抗体は、検出抗体である。いくつかの態様において、検出抗体は、抗ＲＡＮタンパク質抗体または、抗ヒト抗体、抗マウス抗体、抗ラット抗体、抗モルモット抗体などの、試料が得られた種に存在する抗原に結合する抗体である。
抗体
本開示の側面は、１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体（例として、ポリＳｅｒ反復またはポリＬｅｕ反復などのＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域に特異的に結合する抗ＲＡＮタンパク質抗体）を使用することによって、生体試料中のホモポリマーのＲＡＮタンパク質を検出するための方法に関する。本開示のさらなる側面は、ポリＳｅｒまたはポリＬｅｕ反復含有タンパク質から選択されるジアミノ酸反復含有タンパク質（例として、ＲＡＮタンパク質）に特異的な抗ＲＡＮタンパク質抗体に関する。抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ジアミノ酸反復含有タンパク質の領域（単数または複数）（反復配列またはＣ末端など）を認識してもよく、またはジアミノ酸反復含有タンパク質全体を認識してもよい。
本開示の側面は、１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体（例として、ポリＳｅｒ反復またはポリＬｅｕ反復などのＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域に特異的に結合する抗ＲＡＮタンパク質抗体）を使用することによって、生体試料中のホモポリマーのＲＡＮタンパク質を検出するための方法に関する。本開示のさらなる側面は、ポリＳｅｒまたはポリＬｅｕ反復含有タンパク質から選択されるジアミノ酸反復含有タンパク質（例として、ＲＡＮタンパク質）に特異的な抗ＲＡＮタンパク質抗体に関する。抗ＲＡＮタンパク質抗体は、ジアミノ酸反復含有タンパク質の領域（単数または複数）（反復配列またはＣ末端など）を認識してもよく、またはジアミノ酸反復含有タンパク質全体を認識してもよい。
いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、抗ポリセリンまたは抗ポリロイシン抗体である。いくつかの態様において、抗ＲＡＮ抗体は、ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする（例として、特異的に結合する）。いくつかの態様において、抗ＲＡＮ抗体は、ポリアミノ酸反復を含まないＲＡＮタンパク質のいかなる部分も標的にしない（例として、特異的に結合しない）。いくつかの態様において、抗ＲＡＮ抗体のセット（または組み合わせ）（例として、抗ポリＬＥＵおよび抗ポリＳＥＲなどの２以上の抗ＲＡＮ抗体の組み合わせ）は、生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出するために使用される。
いくつかの態様において、本開示は、抗ＲＡＮタンパク質抗体を産生する方法を提供する。本明細書に記載のとおりの抗体を産生する方法は、典型的には、細胞または対象に１以上のＲＡＮタンパク質ペプチド抗原を投与することを含む。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質ペプチド抗原は、ＣＡＧ／ＣＴＧ反復伸長によってコードされるＲＡＮタンパク質のユニークなＣ末端領域を含む。いくつかの態様において、抗ＲＡＮタンパク質抗体は、抗ポリＳｅｒ抗体または抗ポリＬｅｕ抗体である。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質ペプチド抗原は、配列番号１７～２６のいずれか１つで表される配列を含む。いくつかの態様において、対象は、哺乳動物の細胞、例えば、Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞である。いくつかの態様において、対象は、哺乳動物、例えば、霊長目の非ヒト動物、齧歯類の動物（例として、マウス、ラット、モルモット等）、またはヒトである。
抗ＲＡＮ抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。典型的には、ポリクローナル抗体は、マウス、ウサギまたはヤギなどの好適な哺乳動物の接種によって産生される。より大きな哺乳動物は、収集され得る血清の量がより大きくなるものとしてしばしば好ましい。抗原は、哺乳動物内に注射される。このことは、Ｂリンパ球が抗原に特異的なＩｇＧ免疫グロブリンを産生するよう誘導する。このポリクローナルＩｇＧは、哺乳動物の血清から精製される。一般にモノクローナル抗体は、単細胞株（例として、ハイブリドーマ細胞株）によって産生される。いくつかの態様において、抗ＲＡＮ抗体は、精製される（例として、血清から単離される）。抗ＲＡＮ抗体の例は、例えば、２０２０年９月１８日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０５１６７１号、および米国公開第２０１３／０１１５６０３号において開示され、これらの各々の内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
無数の方法が、抗ＲＡＮ抗体を得るために使用されるであろう。例えば、抗体は、組換えＤＮＡ方法を使用して産生され得る。モノクローナル抗体は、既知の方法に従ったハイブリドーマの生成（例として、Kohler and Milstein (1975) Nature, 256: 495-499を参照）によって産生されてもまたよい。このやり方で形成されたハイブリドーマは、次いで、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および表面プラズモン共鳴（例として、ＯＣＴＥＴまたはＢＩＡＣＯＲＥ）分析などの表人的な方法を使用してスクリーニングされ、特定された抗原と特異的に結合する抗体を産生する１以上のハイブリドーマを同定する。特定された抗原（例として、ＲＡＮタンパク質）のいずれかの形態は、免疫原、例として、組換え抗原、天然に存在する形態、いずれかのバリアントまたはそれらのフラグメントとして使用されてもよい。抗体を作製する１つの例示の方法は、抗体またはそのフラグメント（例として、ｓｃＦｖ）を発現するスクリーニングタンパク質発現ライブラリ、例として、ファージまたはリボソームディスプレーライブラリを誘導する。ファージディスプレーは、例えば、Ladner et al.の米国特許第５，２２３，４０９号；Smith (1985) Science 228:1315-1317；Clackson et al. (1991) Nature, 352: 624-628；Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222: 581-597；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９に記載される。
ディスプレーライブラリの使用に加えて、特定された抗原(例として、１以上のＲＡＮタンパク質)は、非ヒト動物、例として、齧歯類の動物、例として、マウス、ハムスター、またはラットの免疫化に使用され得る。一態様において、非ヒト動物は、マウスである。
別の態様において、モノクローナル抗体は、非ヒト動物から得られ、および次いで当該技術分野において知られている組換えＤＮＡ技法を使用して改変、例として、キメラを作製される。キメラ抗体を作製するための様々なアプローチが記載されている。例として、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851, 1985；Takeda et al., Nature 314:452, 1985、Cabilly et al.の米国特許第４，８１６，５６７号；Boss et al.の米国特許第４，８１６，３９７号；Tanaguchi et al.の欧州特許公開第ＥＰ１７１４９６号；欧州特許公開第０１７３４９４号、英国特許第ＧＢ２１７７０９６Ｂ号を参照。
抗体はまた、当該技術分野において知られている方法によってヒト化され得る。例えば、所望される結合特異性を有するモノクローナル抗体は、商業的にヒト化され得る（Scotgene、Scotland；およびOxford Molecular、Palo Alto、Calif.）。トランスジェニック動物において発現するものなどの完全ヒト化抗体は、本発明の範囲内である（例として、Green et al. (1994) Nature Genetics 7, 1３；および米国特許第５，５４５，８０６号および第５，５６９，８２５号を参照）。
追加の抗体産生技法について、Antibodies: A Laboratory Manual, Second Editionを参照されたい。Edward A. Greenfield（Dana-Farber Cancer Institute）によって2014年に編集された。本開示は、必ずしも抗体のいずれかの具体的な供給源、産生の方法、または他の特別な特徴に限定されるものではない。
また本開示に網羅されるものは、ポリＳｅｒまたはポリＬｅｕから選択されるジアミノ酸反復含有タンパク質、本明細書に記載のとおりのジアミノ酸反復含有タンパク質のＣ末端ペプチド、および／またはそれらの２以上の組み合わせに特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株である。
また本開示に網羅されるものは、ポリＳｅｒまたはポリＬｅｕから選択されるジアミノ酸反復含有タンパク質、本明細書に記載のとおりのジアミノ酸反復含有タンパク質のＣ末端ペプチド、および／またはそれらの２以上の組み合わせに特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株である。
方法
本開示の側面は、ある神経変性疾患、例えばＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患を有するかまたは発症するリスクがあるものとして対象（例として、ヒト対象）を同定するための方法に関する。いくつかの態様において、本開示は、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患を有するものとして対象を同定するための方法を提供し、該方法は、ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域へ結合する抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること；および生体試料中の抗ＲＡＮタンパク質抗体の存在に基づいて対象が疾患を有すると決定すること、を含む。
本開示の側面は、ある神経変性疾患、例えばＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患を有するかまたは発症するリスクがあるものとして対象（例として、ヒト対象）を同定するための方法に関する。いくつかの態様において、本開示は、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患を有するものとして対象を同定するための方法を提供し、該方法は、ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域へ結合する抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること；および生体試料中の抗ＲＡＮタンパク質抗体の存在に基づいて対象が疾患を有すると決定すること、を含む。
本開示は、いくつかの側面において、例えば、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、ＳＣＡ１７等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）等、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復に関連する疾患について治療的処置の経過をモニタリングする方法に関する。いくつかの側面において、本開示は、増大したＲＡＮタンパク質の翻訳を呈する（例として、ＲＡＮタンパク質の翻訳に関連する疾患または障害を有さない対象と比べて）と決定された対象に有効量の治療剤を投与すること、および本明細書に記載のとおりの免疫アッセイによって測定される１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体のレベルを決定すること（例として、検出すること）、を含む、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復に関連する疾患を処置する方法を提供する。
いくつかの態様において、対象は、これまでに治療剤を投与されている（例として、決定することの前に）。いくつかの態様において、本発明の方法に従って対象に投与される治療剤は、これまでに投与された治療剤とは異なる。いくつかの態様において、対象は、免疫アッセイによって測定される生体試料中のＲＡＮタンパク質の上昇した、または低減したレベルの検出に基づき、治療剤の増大した、または減少した用量を投与される。
本開示によって記載される方法およびキットは、特定の期間にわたって（例として、処置の経過にわたって縦断的に）対象におけるＲＡＮタンパク質のレベルを測定することを可能にし、それによってある処置（例として、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患を処置するための治療剤）の治療効果の査定を提供する。
いくつかの側面において、本開示は、対象におけるＲＡＮタンパク質レベルの薬物動態変化を測定するための方法に関する。いくつかの態様において、方法は、ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた第１の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること；ＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた第２の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること、ここで第２の生体試料は、対象への治療剤の投与後に得られる；および対象への治療剤の投与が、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量とは異なる場合に、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらすと決定すること、を含む。いくつかの態様において、対象への治療剤の投与は、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量未満である場合に、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらす。対象への治療剤の投与は、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量よりも多い場合に、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらす。
いずれの具体的な理論によっても拘束されることは望まないが、生体試料中の検出（例として、ＲＡＮタンパク質レベルの定量化）は、試料が得られる対象における治療剤またはレジメンの有効性を決定するために使用され得る。例えば、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患の処置のための治療剤の投与後の対象における１以上のＲＡＮタンパク質の減少したレベル（例として、投与前の対象において測定されたＲＡＮタンパク質のレベルと比べて）を測定することは、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患について治療剤が対象を有効に処置することを指示する。ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患の処置のための治療剤の投与後の対象における１以上のＲＡＮタンパク質の上昇したレベル（例として、投与前の対象において測定されたＲＡＮタンパク質のレベルと比べて）を測定することは、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患について治療剤が対象を有効に処置しないことを指示する。
本明細書に使用されるとき、「変わりがないかまたは上昇した」は、生体試料（例として、血清試料）中に存在する１以上のＲＡＮタンパク質のレベルが、既定の閾値または対照試料中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルなどの対照レベル以上である（例として、それより多い）ことを意味する。対照および対照レベルは、ＲＡＮタンパク質の発現、翻訳、および／または蓄積に関連する疾患または障害（例として、ＨＤ、ＳＣＡ、ＤＭ１等）を有しないかまたは有すると疑われていない対象から得られた（例として、検出された）ＲＡＮタンパク質レベルを包含する。いくつかの態様において、対照または対照レベルは、治療剤（例として、抗ＲＡＮタンパク質抗体）の投与前のＲＡＮタンパク質レベルを包含する。変わりがないレベルは、対照レベルと同じであるレベルである。上昇したレベルは、例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、または５００％超対照レベルを上回るレベルを包含する。上昇したレベルはまた、現象がゼロ状態（例として、ＲＡＮタンパク質発現またはレベルがないかまたは検出不能である）から非ゼロ状態（例として、ＲＡＮ抗体発現または存在のレベルがいくらかあるかまたは検出可能である）まで増大することを包含する。いくつかの態様において、変化の欠如または増大（例として、対照または前の試料と比べての試料中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルの変化の欠如または増大）は、治療剤の治療効果の欠如（例として、試料が得られた対象における治療効果の欠如）を指示し得る。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質の発現、翻訳、および／または蓄積に関連する疾患または障害（例として、ＨＤ、ＳＣＡ、ＤＭ１等）の処置のための治療剤の投与後の対象において１以上のＲＡＮタンパク質の変化の欠如したまたは上昇したレベル（例として、投与前の対象において測定されたＲＡＮタンパク質のレベルと比べて）を測定することは、ＲＡＮタンパク質の発現、翻訳、および／または蓄積に関連する疾患または障害について治療剤が対象を有効に処置しないことを指示する。
本明細書に使用されるとき、「減少した」は、１以上のＲＡＮタンパク質のレベルが、既定の閾値または対照試料中の１以上のＲＡＮタンパク質のレベルなどの対照レベルを下回る（例として、未満である）ことを意味する。対照および対照レベルは、ＲＡＮタンパク質の発現、翻訳、および／または蓄積に関連する疾患または障害（例として、ＨＤ、ＳＣＡ、ＤＭ１等）を有しないかまたは有すると疑われていない対象から得られた（例として、検出された）ＲＡＮタンパク質レベルを包含する。いくつかの態様において、対照または対照レベルは、治療剤（例として、抗ＲＡＮタンパク質抗体）の投与前のＲＡＮタンパク質レベルを包含する。減少したレベルは、例えば、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、または５００％超対照レベルを下回るレベルを包含する。減少したレベルはまた、現象が非ゼロ状態（例として、ＲＡＮタンパク質の発現または存在がいくらかあるか検出可能である）からゼロ状態（例として、ＲＡＮタンパク質の発現または存在がないかまたは検出不能である）まで減少することを包含する。いくつかの態様において、減少（例として、対照または前の試料と比べて試料中の１以上のＲＡＮタンパク質レベルのレベルにおける減少）は、治療剤の治療効果（例として、試料が得られた対象における治療効果）を指示し得る。いくつかの態様において、ＲＡＮタンパク質の発現、翻訳、および／または蓄積に関連する疾患または障害（例として、ＨＤ、ＳＣＡ、ＤＭ１等）の処置のための治療剤の投与後の対象において１以上のＲＡＮタンパク質の減少したレベル（例として、投与前の対象において測定されたＲＡＮタンパク質のレベルと比べて）を測定することは、ＲＡＮタンパク質の発現、翻訳、および／または蓄積に関連する疾患または障害について治療剤が対象を有効に処置することを指示する。
本明細書に使用されるとき、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの「変化」は、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量とは異なる場合に生じる。第１の生体試料と比べて、１以上のＲＡＮタンパク質の上昇したレベルかまたは減少したレベルのいずれかが、第２の生体試料中で観察されたときに、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量は、第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量とは「異なる」とみなされる。
いくつかの態様において、処置後の試料において検出されるＲＡＮタンパク質のレベル（例として、量）が、処置前のＲＡＮタンパク質のレベル（例として、量）と比べて減少した場合、治療レジメンは、成功である。いくつかの態様において、処置後の試料において検出されるＲＡＮタンパク質のレベル（例として、量）が、処置前のＲＡＮタンパク質のレベル（例として、量）と比べて変わりがないかまたは増大した場合、治療レジメンは、成功ではない。いくつかの態様において、対象から得られた生体試料（例として、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０よりも多い試料）中のＲＡＮタンパク質のレベルは、治療レジメンの間絶え間なくモニタリングされる（例として、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０よりも多い別個の時に対して測定される）。
第１の生体試料と第２の生体試料とが得られる間の時間は、変更されてもよい。いくつかの態様において、第１の生体試料は、治療剤の投与（例として、治療剤の第１の投与）前１週間と１分との間に得られる。いくつかの態様において、第１の生体試料は、治療剤の投与（例として、治療剤の第１の投与）前１日（例として、２４時間）と１分との間に得られる。いくつかの態様において、第２の生体試料は、治療剤の投与（例として、治療剤の第１の投与）後１分と６月との間に対象から得られる。いくつかの態様において、第２の生体試料は、治療剤の投与（例として、治療剤の第１の投与）後１日と１週間との間に対象から得られる。いくつかの態様において、第２の生体試料は、治療剤の投与（例として、治療剤の直近または最後の投与）後１日と１週間との間に対象から得られる。
いくつかの態様において、第２の生体試料は、治療剤の投与の約１時間、５時間、１０時間、２４時間（例として、１日）、４８時間（例として、２日）、１２０時間（例として、５日）、３０日、４５日、または６月後に収集されてもよい。いくつかの態様において、いくつかの生体試料（例として、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多くの生体試料）が、例えば、特定された時間枠（例として、治療経過の間）にわたって対象から得られ、および１以上のＲＡＮタンパク質が、検出される。
いくつかの態様において、本開示によって記載される方法は、生体試料（例として、第２の生体試料）中に検出されるＲＡＮタンパク質のレベルが、対照試料（例として、第１の生体試料）中に検出されるＲＡＮタンパク質のレベルと比べて変化する場合に、対象へ治療剤（例として、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患の処置のための剤）を、投与するステップ、投与し続けるステップ、または投与を停止するステップ、を含む。いくつかの態様において、本開示によって記載される方法は、生体試料（例として、第２の生体試料）中に検出されるＲＡＮタンパク質のレベルが、対照試料（例として、第１の生体試料）中に検出されるＲＡＮタンパク質のレベルと比べて減少した場合（例として、検出されるＲＡＮタンパク質のレベルが、治療剤の投与に続いて変化しないかまたは減少した場合）に、対象へ治療剤（例として、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患の処置のための剤）を投与するステップ、または投与し続けるステップを含む。いくつかの態様において、本開示によって記載される方法は、生体試料（例として、第２の生体試料）中に検出されるＲＡＮタンパク質のレベルが、対照試料（例として、第２の生体試料）中に検出されるＲＡＮタンパク質のレベルと比べて上昇した場合（例として、検出されるＲＡＮタンパク質のレベルが、治療剤の投与に続いて増大した場合）に、対象への治療剤（例として、ＣＡＧ・ＣＴＧ伸長反復関連疾患の処置のための剤）の投与を停止するステップを含む。
本明細書に使用されるとき、「処置する」または「処置」は、（ａ）ＲＡＮタンパク質に関連する疾患または障害の発病を予防または遅延させること；（ｂ）ＲＡＮタンパク質に関連する疾患または障害の重症度を低減させること；（ｃ）ＲＡＮタンパク質に関連する疾患または障害に特徴的な症状の発症を低減または予防すること；（ｄ）ＲＡＮタンパク質に関連する疾患または障害に特徴的な症状が悪化するのを予防すること；および／または（ｅ）これまでにＲＡＮタンパク質に関連する疾患または障害の症状を示していた対象において症状の再発を低減または予防すること、を指す。
例えば、ＨＤの文脈において、「処置する」または「処置」は、（ａ）ＨＤの発病を予防または遅延させること；（ｂ）ＨＤの重症度を低減すること；（ｃ）ＨＤに特徴的な症状の発症を低減または予防すること；（ｄ）ＨＤに特徴的な症状の悪化を予防すること；および／または（ｅ）これまでにＨＤの症状を示していた対象においてＨＤの症状の再発を低減または予防すること、を指す。
例えば、ＨＤの文脈において、「処置する」または「処置」は、（ａ）ＨＤの発病を予防または遅延させること；（ｂ）ＨＤの重症度を低減すること；（ｃ）ＨＤに特徴的な症状の発症を低減または予防すること；（ｄ）ＨＤに特徴的な症状の悪化を予防すること；および／または（ｅ）これまでにＨＤの症状を示していた対象においてＨＤの症状の再発を低減または予防すること、を指す。
対象は、治療的に有効な量の１以上の治療剤を投与されてもよい。本明細書に使用されるとき、「有効量」は、ＲＡＮタンパク質の翻訳または蓄積に関連する疾患または障害（例として、神経変性疾患）によって引き起こされる１以上の兆候または症状の処置または回復などの医学的に所望の結果を提供するのに充分な治療剤の投薬量である。
ある態様において、有効量は、ＲＡＮタンパク質のレベルを、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％低減する（例として、治療剤が投与されていない細胞または対象におけるＲＡＮタンパク質のレベルと比べてのＲＡＮタンパク質のレベル）のに有効な量である。ある態様において、有効量は、ＲＡＮタンパク質の翻訳を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％低減する（例として、治療剤を投与されていない細胞または対象におけるＲＡＮタンパク質のレベルと比べてのＲＡＮタンパク質のレベル）のに有効な量である。ある態様において、有効量は、ＲＡＮタンパク質の発現を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％低減する（例として、治療剤が投与されていない細胞または対象におけるＲＮＡタンパク質のレベルと比べてのＲＡＮタンパク質のレベル）のに有効な量である。ある態様において、有効量は、ＲＡＮタンパク質の凝集を、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％低減する（例として、治療剤を投与されていない細胞または対象におけるＲＡＮタンパク質のレベルと比べてのＲＡＮタンパク質のレベル）のに有効な量である。
有効量は、処置される対象の齢および体調、対象における疾患または障害の重症度（例として、ＲＡＮタンパク質の蓄積の量、またはかかる蓄積によって引き起こされる細胞毒性）、処置の期間、いずれかの併用治療の性質、特定の投与ルート健康実践者の知識および見解内の同様の因子によって変わるだろう。いくつかの態様において、治療的に有効な量は、対象において抗ＲＡＮタンパク質抗体の産生を誘発するのに充分なワクチンの量である。
キット
いくつかの側面において、本開示は、本明細書に記載のとおりの１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体を含有する第１の容器、および１以上の検出可能な試薬を含有する第２の容器を含む、キットを提供する。いくつかの態様において、１以上の抗ＲＡＮ抗体は、ＲＡＮタンパク質の１以上のホモポリマーの反復領域、例えば、ポリロイシン反復領域またはポリセリン反復領域に結合する。いくつかの態様において、１以上の検出可能な試薬は、ルテニウム複合体、例えば、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジン－（４－メチルスルホン）（［Ｒｕ（Ｂｐｙ）３］＋２とも称される）、またはその塩を含む。いくつかの態様において、キットは、対照試料を含有する第３の容器を含む。対照試料は、陰性対照試料（例として、１以上のＲＡＮタンパク質を含有しないかまたは欠いている対照試料）であっても、または陽性対照試料（例として、１以上のＲＡＮタンパク質を含む対照試料であって、任意にここで試料中の１以上のＲＡＮタンパク質の量は既知である）であってもよい。
いくつかの側面において、本開示は、本明細書に記載のとおりの１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体を含有する第１の容器、および１以上の検出可能な試薬を含有する第２の容器を含む、キットを提供する。いくつかの態様において、１以上の抗ＲＡＮ抗体は、ＲＡＮタンパク質の１以上のホモポリマーの反復領域、例えば、ポリロイシン反復領域またはポリセリン反復領域に結合する。いくつかの態様において、１以上の検出可能な試薬は、ルテニウム複合体、例えば、ルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジン－（４－メチルスルホン）（［Ｒｕ（Ｂｐｙ）３］＋２とも称される）、またはその塩を含む。いくつかの態様において、キットは、対照試料を含有する第３の容器を含む。対照試料は、陰性対照試料（例として、１以上のＲＡＮタンパク質を含有しないかまたは欠いている対照試料）であっても、または陽性対照試料（例として、１以上のＲＡＮタンパク質を含む対照試料であって、任意にここで試料中の１以上のＲＡＮタンパク質の量は既知である）であってもよい。
例
この例は、対象の生体試料中の反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）タンパク質の翻訳の検出を記載する。ＲＡＮタンパク質は、図１に示されるとおり、いくつかの神経変性疾患に関連する伸長反復領域から翻訳されるであろう。いくつかの態様において、伸長反復領域は、ＣＡＧ反復伸長および／またはＣＴＧ反復伸長を含む。ポリセリンおよびポリロイシンＲＡＮタンパク質などのＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする新規な抗体（例として、ポリクローナル抗体）が、産生された。反復領域を標的にする抗体は、本明細書において、「抗ポリＳＥＲ」および「抗ポリＬＥＵ」と呼ばれる。ホモポリマーの反復領域を標的にする抗体は、様々なＣＡＧ・ＣＴＧ反復関連疾患において産生されるＲＡＮタンパク質を検出することができるという利点を提供する（図３）。しかしながら、ホモポリマーの反復タンパク質は、しばしば宿主生物において免疫原性応答を誘発するために必要とされる構造上の複雑さを欠いているために、かかる抗体を産生することは一般に困難である。
この例は、対象の生体試料中の反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）タンパク質の翻訳の検出を記載する。ＲＡＮタンパク質は、図１に示されるとおり、いくつかの神経変性疾患に関連する伸長反復領域から翻訳されるであろう。いくつかの態様において、伸長反復領域は、ＣＡＧ反復伸長および／またはＣＴＧ反復伸長を含む。ポリセリンおよびポリロイシンＲＡＮタンパク質などのＲＡＮタンパク質のホモポリマーの反復領域を標的にする新規な抗体（例として、ポリクローナル抗体）が、産生された。反復領域を標的にする抗体は、本明細書において、「抗ポリＳＥＲ」および「抗ポリＬＥＵ」と呼ばれる。ホモポリマーの反復領域を標的にする抗体は、様々なＣＡＧ・ＣＴＧ反復関連疾患において産生されるＲＡＮタンパク質を検出することができるという利点を提供する（図３）。しかしながら、ホモポリマーの反復タンパク質は、しばしば宿主生物において免疫原性応答を誘発するために必要とされる構造上の複雑さを欠いているために、かかる抗体を産生することは一般に困難である。
図４～２１は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）などのいくつかの神経変性疾患におけるポリセリンＲＡＮタンパク質の検出を記載する。ＲＡＮタンパク質は、免疫組織化学、免疫蛍光顕微鏡法、およびウェスタンブロットによってトランスフェクトされた細胞および患者由来の試料の両方において検出された。
図２２～３２は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）（例として、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８等）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）などのいくつかの神経変性疾患におけるポリロイシンＲＡＮタンパク質の検出を記載する。ＲＡＮタンパク質は、免疫組織化学、免疫蛍光顕微鏡法、およびウェスタンブロットによってトランスフェクトされた細胞および患者由来の試料の両方において検出された。
図３３および３４は、図１～３２に示される代表的なデータの概要を提供する。
本明細書に含有されるデータは、新規なポリＬｅｕおよびポリＳｅｒタンパク質が、７つのＣＡＧ／ＣＴＧ伸長障害においてセンスおよびアンチセンス転写産物から作製されることを実証する。ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒタンパク質が、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＨＤＬ２、およびＤＭ１患者のヒト剖検脳において凝集することもまた実証された。ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒタンパク質の両方は、罹患した脳領域－ＳＣＡについての小脳、ＤＭ１についての前頭皮質、およびＨＤＬ２についての線条体、において頻繁に染色することを示す。図面に示されるとおり、連続切片染色は、ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒ反復が、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、およびＤＭ１の白質変化を有する領域に存在し、ＤＭ１においては確立された病原性異常を有することを示す。ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒが、ミクログリアの活性化を有する領域において見出されることもまた本明細書において示される。
本明細書に含有されるデータは、新規なポリＬｅｕおよびポリＳｅｒタンパク質が、７つのＣＡＧ／ＣＴＧ伸長障害においてセンスおよびアンチセンス転写産物から作製されることを実証する。ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒタンパク質が、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＨＤＬ２、およびＤＭ１患者のヒト剖検脳において凝集することもまた実証された。ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒタンパク質の両方は、罹患した脳領域－ＳＣＡについての小脳、ＤＭ１についての前頭皮質、およびＨＤＬ２についての線条体、において頻繁に染色することを示す。図面に示されるとおり、連続切片染色は、ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒ反復が、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、およびＤＭ１の白質変化を有する領域に存在し、ＤＭ１においては確立された病原性異常を有することを示す。ポリＬｅｕおよびポリＳｅｒが、ミクログリアの活性化を有する領域において見出されることもまた本明細書において示される。
図３５Ａ～３５Ｄは、ＳｅｒおよびＬｅｕ反復モチーフに対する新規な反復抗体の検証を示す。ｆｌａｇタグ付けされたポリＳｅｒおよびポリＬｅｕ反復タンパク質を発現するために使用されたコンストラクトを、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。図３５Ａおよび３５Ｂは、α－Ｆｌａｇ（円で囲われた）および矢印で示される新しく開発された反復抗体：α－ポリＳｅｒ（図３５Ａ）およびα－ポリＬｅｕ（図３５Ｂ）の共局在化を実証する、トランスフェクトされた細胞の免疫蛍光を示す。空のベクターをトランスフェクトされた細胞（中段、図３５Ａおよび３５Ｂ）または免疫前血清を一次抗体として使用したとき（下段、図３５Ａおよび３５Ｂ）においては、シグナルは検出されなかった。図３５Ｃおよび３５Ｄは、これまでに検証されたＨＤポリＳｅｒおよびＨＤポリＬｅｕ Ｃ末端抗体を使用して得られたそれらを有するそれらのシグナルと比べることによって、新しく生成された反復抗体の特異性を検証する、ＨＤの前頭皮質に対する免疫組織化学的実験を示す。シグナル（矢印）は、ＨＤ試料においては特異的に検出されたが（上段、図３５Ｃおよび３５Ｄ）、対照試料については検出されなかった（下段、図３５Ｃおよび３５Ｄ）。
図３６は、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、およびＳＣＡ５（陰性対照）のヒト小脳におけるＲＡＮ－ポリＳｅｒ染色を示す。免疫組織化学は、小脳にわたるポリＳｅｒの蓄積を示す。陽性領域は、歯状核の周囲のバーグマングリア、白質（ＷＭ）、および深部白質（ＤＷＭ）領域を包含する。非罹患者またはＳＣＡ５陰性対照においてシグナルは検出されなかった。＊矢印（
）＝陽性染色、矢印（→）＝核の対比染色。
図３７Ａ～３７Ｕは、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、およびＳＣＡ５（陰性対照）のヒト小脳におけるポリＳｅｒＲＡＮタンパク質を示す。α－Ｓｅｒ抗体を用いた免疫組織化学的染色は、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、およびＳＣＡ７の小脳性の領域における核および細胞質の強く頻出するシグナルを示す。ポリＳｅｒ凝集体は、バーグマングリア（図３７Ｄ、３７Ｇ、３７Ｊ、３７Ｍ、３７Ｐ）、皮質白質領域（図３７Ｅ、３７Ｈ、３７Ｋ、３７Ｎ、３７Ｑ）の周囲、およびより頻繁には歯状核付近の深部白質領域（図３７Ｆ、３７Ｉ、３７Ｌ、３７Ｏ、３７Ｒ）において、疾患間およびケース間でのいくらかのばらつきと共に顕著に検出される。健常な対照（図３７Ａ～３７Ｃ）およびＳＣＡ５（図３７Ｓ～３７Ｕ）のケースは、ポリＬｅｕシグナルについて陰性である。
図３８Ａ～３８Ｕは、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、およびＳＣＡ５（陰性対照）の小脳におけるＲＡＮポリＳｅｒの蓄積を示す。ポリＬｅｕ反復モチーフに対する抗体を使用する免疫染色は、頻出するポリＬｅｕ凝集体を示す。ポリＬｅｕ陽性領域は、プルキンエ細胞およびバーグマングリア（図３８Ｄ、３８Ｇ、３８Ｊ、３８Ｍ、３８Ｐ）、皮質白質（図３８Ｅ、３８Ｈ、３８Ｋ、３８Ｎ、３８Ｑ）、および歯状核の周囲のニューロンならびにグリア細胞（図３８Ｆ、３８Ｉ、３８Ｌ、３８Ｏ、３８Ｒ）を包含する。ポリＬｅｕの蓄積は、白質領域においてより顕著である。ポリＬｅｕ凝集体は、核、細胞質、またはニューロピルにおいてあり得る。陰性対照は、健常（図３８Ａ～３８Ｃ）およびＳＣＡ５（図３８Ｓ～３８Ｕ）のケースを包含する。
図３９Ａ～３９Ｕは、ＲＡＮポリＬｅｕ凝集体がＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、およびＳＣＡ５（陰性対照）のケースの小脳において蓄積することを示す。免疫組織化学は、ポリＬｅｕの蓄積パターンおよび頻度を示す。ポリＬｅｕは、核の、細胞質の、またはニューロピルの凝集体として蓄積する。ポリＬｅｕ陽性領域は、プルキンエ細胞およびバーグマングリア（図３９Ｄ、３９Ｇ、３９Ｊ、３９Ｍ、３９Ｐ）、皮質白質（図３９Ｅ、３９Ｈ、３９Ｋ、３９Ｎ、３９Ｑ）、および歯状核の周囲のニューロンおよびグリア細胞（図３９Ｆ、３９Ｉ、３９Ｌ、３９Ｏ、３９Ｒ）を包含する。陰性対照は、健常（図３９Ａ～３９Ｃ）およびＳＣＡ５（図３９Ｓ～３９Ｕ）のケースを包含する。
図４０Ａ～４０Ｊは、患者の小脳におけるＣ末端抗体を使用したポリＳｅｒおよびポリＬｅｕＲＡＮタンパク質の検出を示す。免疫組織化学は、各タンパク質についてユニークなＣ末端領域に対する抗体を使用した、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、およびＳＣＡ７の小脳の白質領域におけるポリＳｅｒ（図４０Ａ、４０Ｃ、４０Ｅ、４０Ｇ、４０Ｉ）およびポリＬｅｕ（図４０Ｂ、４０Ｄ、４０Ｆ、４０Ｈ、４０Ｊ）の蓄積を示す。各抗体についてのエピトープは、灰色の枠、および以下の配列識別子によって指し示す：図４０Ａ（配列番号１７）；図４０Ｂ（配列番号１８）；図４０Ｃ（配列番号１９）；図４０Ｄ（配列番号２０）；図４０Ｅ（配列番号２１）；図４０Ｆ（配列番号２２）；図４０Ｇ（配列番号２３）；図４０Ｈ（配列番号２４）；図４０Ｉ（配列番号２５）；および図４０Ｊ（配列番号２６）。Ｃ末端抗体を使用した免疫組織化学は、反復抗体を使用した免疫組織化学的実験において検出されるものと同様のシグナルおよびＲＡＮタンパク質の蓄積パターンを実証する。
図４１Ａ～４１Ｈは、ポリＳｅｒおよびポリＬｅｕＲＡＮタンパク質がＳＣＡ１、ＳＣＡ３およびＨＤマウスにおいて蓄積することを示す。ＳＣＡ３（図４１Ａ）およびＳＣＡ１（図４１Ｂ）マウスの皮質領域の免疫組織化学的染色は、斑点状の凝集体としてポリＳｅｒの蓄積を示す。図４１Ｃおよび４１Ｄは、ポリＳｅｒが、プルキンエ細胞において導入遺伝子を特異的に発現する、pcp2-Atxn1 82Qマウスに対して検出されない一方で、これらの細胞におけるポリＧｌｎの検出は、非常に確固たるものであることを示す。図４１Ｅおよび４１Ｆは、ポリＳｅｒ陽性細胞が、ＨＤノックインマウスの皮質において検出されることを示す。対立遺伝子のシリーズに対する免疫組織化学は、ポリＳｅｒの蓄積が、より長いＣＡＧ反復でより明白であり（図４１Ｅ）、およびマウスの齢と共に増加する（図４１Ｆ）ことを示す。アンチセンスＲＡＮポリＬｅｕ凝集体は、ＳＣＡ３（図４１Ｇ）およびＨＤマウス（図４１Ｈ）において検出される。
図４２Ａ～４２Ｙは、ポリＳｅｒおよびポリＬｅｕＲＡＮタンパク質が病的状態のマーカーを示す領域において蓄積することを示す。連続切片の免疫組織化学は、Ｉｂａ１染色で指し示されるように、豊富なＲＡＮタンパク質の蓄積を有する白質領域が増大したミクログリアの増殖（網目状）および活性化（アメーバ状）を有することを示す（図４２Ｖ～４２Ｙ）。ポリＳｅｒおよびポリＬｅｕＲＡＮの顕著な蓄積を有する領域は、ルクソール・ファスト・ブルー染色（ＬＦＢ）で指し示されるように、白質の完全性の喪失を提示する（図４２Ｑ－４２Ｔ）。ポリＧｌｎ凝集体は、稀である（１Ｃ２染色；図４２Ｂ～４２Ｅ）。図４２Ａ～４２Ｅは、対照（図４２Ａ）、ＳＣＡ１（図４２Ｂ）、ＳＣＡ２（図４２Ｃ）、ＳＣＡ３（図４２Ｄ）、およびＳＣＡ７（図４２Ｅ）の組織のＩＣ２染色を示す。図４２Ｆ～４２Ｊは、（図４２Ｆ）、ＳＣＡ１（図４２Ｇ）、ＳＣＡ２（図４２Ｈ）、ＳＣＡ３（図４２Ｉ）、およびＳＣＡ７（図４２Ｊ）のポリＳｅｒ染色を示す。図４２Ｋ～４２Ｏは、対照（図４２Ｋ）、ＳＣＡ１（図４２Ｌ）、ＳＣＡ２（図４２Ｍ）、ＳＣＡ３（図４２Ｎ）、およびＳＣＡ７（図４２Ｏ）のポリＬｅｕ染色を示す。図４２Ｐ～４２Ｔは、対照（図４２Ｐ）、ＳＣＡ１（図４２Ｑ）、ＳＣＡ２（図４２Ｒ）、ＳＣＡ３（図４２Ｓ）、およびＳＣＡ７（図４２Ｔ）のＬＦＢ染色を示す。図４２Ｕ～４２Ｙは、対照（図４２Ｕ）、ＳＣＡ１（図４２Ｖ）、ＳＣＡ２（図４２Ｗ）、ＳＣＡ３（図４２Ｘ）、およびＳＣＡ７（図４２Ｙ）のＩｂａ１染色を示す。
図４３Ａ～４３Ｙは、ポリＳｅｒおよびポリＬｅｕＲＡＮタンパク質が、病的状態のマーカーを示す領域に蓄積することを示す。画像は、ＲＡＮポリＳｅｒおよびＲＡＮポリＬｅｕ凝集体の頻度、ミクログリア陽性細胞、白質損傷の程度、および少量のポリＧｌｎ凝集体を示す低倍率のフィールドを示す。図４３Ａ～４３Ｅは、対照（図４３Ａ）、ＳＣＡ１（図４３Ｂ）、ＳＣＡ２（図４３Ｃ）、ＳＣＡ３（図４３Ｄ）、およびＳＣＡ７（図４３Ｅ）の組織のＩＣ２染色を示す。図４３Ｆ～４３Ｊは、対照（図４３Ｆ）、ＳＣＡ１（図４３Ｇ）、ＳＣＡ２（図４３Ｈ）、ＳＣＡ３（図４３Ｉ）、およびＳＣＡ７（図４３Ｊ）のポリＳｅｒ染色を示す。図４３Ｋ～４３Ｏは、対照（図４３Ｋ）、ＳＣＡ１（図４３Ｌ）、ＳＣＡ２（図４３Ｍ）、ＳＣＡ３（図４３Ｎ）、およびＳＣＡ７（図４３Ｏ）のＬｅｕ染色を示す。図４３Ｐ～４３Ｔは、対照（図４３Ｐ）、ＳＣＡ１（図４３Ｑ）、ＳＣＡ２（図４３Ｒ）、ＳＣＡ３（図４３Ｓ）、およびＳＣＡ７（図４３Ｔ）のＬＦＢ染色を示す。図４３Ｕ～４３Ｙは、対照（図４３Ｕ）、ＳＣＡ１（図４３Ｖ）、ＳＣＡ２（図４３Ｗ）、ＳＣＡ３（図４３Ｘ）、およびＳＣＡ７（図４３Ｙ）のＩｂａ１染色を示す。
図４４Ａ～４４Ｆは、ポリＳｅｒおよびポリＬｅｕ凝集体が、疾患の進行と共に増大することを示す。ＳＣＡ６のヒト脳橋の免疫染色は、脳橋の白質路の周囲のＲＡＮポリＳｅｒおよびポリＬｅｕタンパク質の凝集体を示す（図４４Ａ、４４Ｂ、４４Ｄ、および４４Ｅ）。ポリＳｅｒおよびポリＬｅｕ凝集体は、サイズが可変であり、および後期の疾患の検死のケースにおいて頻繁に見出される（図４４Ａおよび４４Ｄ）。対照的に、疾患に先立つ早期死亡が文書で記録されている検死のケースは、稀に、より小さな凝集体を示す（図４４Ｂおよび４４Ｅ）。健常な対照は、いずれのシグナルも示さなかった（図４４Ｃおよび４４Ｆ）。
Claims (36)
- 対象における１以上のＲＡＮタンパク質を検出するための方法であって、以下：
（ｉ）対象から得られた生体試料とＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体とを接触させて、抗ＲＡＮ抗体－標的ＲＡＮタンパク質複合体を形成すること；
（ｉｉ）複合体と検出可能な剤とを接触させて、標識化複合体を形成すること；
（ｉｉｉ）標識化複合体を検出すること；および
（ｉｖ）標識化複合体の存在に基づき、対象が、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ伸長反復関連疾患を有することを同定すること、
を含む、前記方法。 - 生体試料が、血液試料、血清試料、または組織試料であって、任意にここで組織試料が、ＣＮＳ組織試料または脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である、請求項１に記載の方法。
- 対象が、哺乳動物の対象であり、任意にここで対象が、ヒトまたはマウスである、請求項１または２に記載の方法。
- 抗ＲＡＮタンパク質抗体が、ポリセリン反復領域またはポリロイシン反復領域を標的にする、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
- 抗ＲＡＮタンパク質抗体が、ポリクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
- 抗ＲＡＮタンパク質抗体が、ＲＡＮタンパク質のいずれの他の部分にも結合しない、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
- 伸長反復関連疾患が、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、または筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
- 検出可能な剤が、抗体、フルオロフォア、化学発光剤、または電気化学発光剤である、請求項７に記載の方法。
- 検出することが、免疫組織化学アッセイ、免疫蛍光アッセイ、電気化学発光アッセイ、またはウェスタンブロットを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
- 電気化学発光アッセイが、Meso Scale検出（ＭＳＤ）アッセイである、請求項９に記載の方法。
- 対象へ治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
- 治療剤が、小分子、抗体、ペプチド、または阻害性核酸である、請求項１１に記載の方法。
- 抗体が、抗ＲＡＮタンパク質抗体である、請求項１２に記載の方法。
- 治療剤の投与後に対象から第２の生体試料を得るステップおよび第２の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出するステップ、を含む請求項１１～１３のいずれか一項に記載の方法。
- 対象におけるＲＡＮタンパク質レベルの薬物動態変化を測定するための方法であって、以下：
（ｉ）ＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた第１の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること；
（ｉｉ）ＲＡＮタンパク質ホモポリマーの反復を標的にする抗ＲＡＮタンパク質抗体を含む免疫アッセイを使用して、対象から得られた第２の生体試料中の１以上のＲＡＮタンパク質を検出すること、ここで第２の生体試料は、対象への治療剤の投与後に得られる；および
（ｉｉｉ）第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量とは異なる場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらすことを決定すること、
を含む、前記方法。 - 第１の生体試料および／または第２の生体試料が、血液試料、血清試料、または組織試料であり、任意にここで組織試料が、ＣＮＳ組織試料または脳脊髄液（ＣＳＦ）試料である、請求項１５に記載の方法。
- 抗ＲＡＮタンパク質抗体が、ポリセリン反復領域またはポリロイシン反復領域を標的にし、任意にここで抗ＲＡＮタンパク質抗体が、ポリクローナル抗体である、請求項１５または１６に記載の方法。
- 対象が、ＣＡＧおよび／またはＣＴＧ伸長反復疾患を有するとして特徴づけられる、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ）、ハンチントン病（ＨＤ）、ハンチントン病類縁疾患２型（ＨＤＬ２）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）、フックス角膜内皮ジストロフィー（ＦＥＣＤ）、および筋強直症ジストロフィー（ＤＭ１）から選択される伸長反復関連疾患を有する、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、哺乳動物、任意にヒトである、請求項１５～１９のいずれか一項に記載の方法。
- 以下：
（ｉ）ＲＡＮタンパク質のポリセリンまたはポリロイシン反復領域を標的にする１以上の抗ＲＡＮタンパク質抗体；および
（ｉｉ）免疫アッセイプレートおよび／または試薬、
を含むキット。 - 免疫アッセイプレートおよび／または試薬が、ＭＳＤアッセイプレートおよび／またはＭＳＤアッセイ試薬である、請求項２１に記載のキット。
- ＳＣＡが、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、ＳＣＡ８、ＳＣＡ１２、またはＳＣＡ１７のいずれか１つである、請求項７または１９に記載の方法。
- 第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量未満である場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質の変化がもたらすことを決定することを含む、請求項１５に記載の方法。
- 第２の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量が、第１の生体試料中に検出されたＲＡＮタンパク質の量よりも多い場合に、対象への治療剤の投与が、対象における１以上のＲＡＮタンパク質レベルの変化をもたらすことを決定することを含む、請求項１５に記載の方法。
- 治療剤の投与を継続することをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
- 治療剤の投与を停止することをさらに含む、請求項２５に記載の方法。
- （ｉｉｉ）対照試料をさらに含む、請求項２１に記載のキット。
- 対照試料が、１以上のＲＡＮタンパク質を含む、請求項２３に記載のキット。
- 対照試料が、１以上のＲＡＮタンパク質を含まない、請求項２３に記載のキット。
- 抗体を産生する方法であって、配列番号１７～２６のいずれか１つで表される配列を含むペプチド抗原を細胞または対象に投与することを含む、前記方法。
- 抗体が、ポリ（Ｓｅｒ）ＲＡＮタンパク質またはポリ（Ｌｅｕ）ＲＡＮタンパク質へ特異的に結合する、請求項３１に記載の方法。
- 対象から抗体を単離するステップをさらに含む、請求項３１または３２に記載の方法。
- 対象が、哺乳動物の細胞である、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の方法。
- 哺乳動物の細胞が、Ｂ細胞である、請求項３４に記載の方法。
- 対象が、哺乳動物、任意にここで哺乳動物が、ヒト、ヤギ、ウサギ、モルモット、またはマウスである、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の方法。
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